特許 6162795 リシン−グルタミン酸ジペプチド誘導体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6162795

(24)【登録日】2017年6月23日

(45)【発行日】2017年7月12日

(54)【発明の名称】リシン−グルタミン酸ジペプチド誘導体

(51)【国際特許分類】

   C07C 271/22 20060101AFI20170703BHJP

   C07K 5/072 20060101ALI20170703BHJP

   C07C 269/06 20060101ALI20170703BHJP

【ＦＩ】

   C07C271/22CSP

   C07K5/072

   C07C269/06

【請求項の数】12

【全頁数】16

(21)【出願番号】特願2015-512007(P2015-512007)

(86)(22)【出願日】2013年5月13日

(65)【公表番号】特表2015-518821(P2015-518821A)

(43)【公表日】2015年7月6日

(86)【国際出願番号】EP2013059759

(87)【国際公開番号】WO2013171135

(87)【国際公開日】20131121

【審査請求日】2016年5月12日

(31)【優先権主張番号】12168119.1

(32)【優先日】2012年5月15日

(33)【優先権主張国】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】591003013

【氏名又は名称】エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー

【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ−ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ

(74)【代理人】

【識別番号】110001508

【氏名又は名称】特許業務法人 津国

(74)【代理人】

【識別番号】100078662

【弁理士】

【氏名又は名称】津国 肇

(74)【代理人】

【識別番号】100116528

【弁理士】

【氏名又は名称】三宅 俊男

(74)【代理人】

【識別番号】100146031

【弁理士】

【氏名又は名称】柴田 明夫

(74)【代理人】

【識別番号】100122736

【弁理士】

【氏名又は名称】小國 泰弘

(74)【代理人】

【識別番号】100122747

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 洋子

(74)【代理人】

【識別番号】100132540

【弁理士】

【氏名又は名称】生川 芳徳

(72)【発明者】

【氏名】プエンテナー，クルト

【審査官】 福山 則明

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１３／０９２７０３（ＷＯ，Ａ２）

【文献】 特表２００３−５２５９０８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０００−５００５０５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１１／００６４９７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１０／０７０２５１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 中国特許出願公開第１０２２８６０９２（ＣＮ，Ａ）

【文献】 Journal of Medicinal Chemistry，２０１１年，Vol. 54，pp. 1490-1510

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｃ ２７１／２２

Ｃ０７Ｃ ２６９／０６

Ｃ０７Ｋ ５／０７２

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式：

【化15】

［式中、
Ｒ^１及びＲ^２は、同一又は異なっており、水素又はフェニルで場合により置換されているＣ_１−４−アルキル、Ｃ_２−４−アルケニル、ピペリジニル又はジメチルアミノボラニルを示し、
Ｒ^３は、水素又は９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルであり、そして
Ｒ^４は、Ｃ_{１２−２０}−アルキルである］
で表される化合物又はそのエナンチオマー、ジアステレオマーもしくは塩、
ただし、化合物：（Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサン酸を除く。

【請求項2】

Ｒ^１が、水素又はＣ_１−４−アルキルであり、そして、Ｒ^２が、水素又はＣ_２−４−アルケニルである、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

Ｒ^１が、ｔ−ブチルであり、そして、Ｒ^２が、水素又はアリルである、請求項１又は２に記載の化合物。

【請求項4】

Ｒ^３が、９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項5】

Ｒ^４が、Ｃ_{１４−１６}−アルキルである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項6】

式：

【化16】

［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４は、上記のとおりである］
で表される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物又はそのエナンチオマー、ジアステレオマーもしくは塩。

【請求項7】

式：

【化17】

［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４は、上記のとおりである］
で表される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物又はそのエナンチオマー、ジアステレオマーもしくは塩。

【請求項8】

Ｒ^１が、ｔ−ブチルであり、Ｒ^２が、水素であり、Ｒ^３が、９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルであり、そして、Ｒ^４が、Ｃ_１５−アルキルである；又は
Ｒ^１が、ｔ−ブチルであり、そして、Ｒ^２が、アリルであり、Ｒ^３が、９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルであり、そして、Ｒ^４が、Ｃ_１５−アルキルである
請求項６又は７に記載の化合物。

【請求項9】

Ｒ^１が、ｔ−ブチルであり、そして、Ｒ^２が、水素であり、Ｒ^３が、９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルであり、そして、Ｒ^４が、ペンタデシルである；又は
Ｒ^１が、ｔ−ブチルであり、そして、Ｒ^２が、アリルであり、Ｒ^３が、９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルであり、そして、Ｒ^４が、ペンタデシルである
請求項８に記載の化合物。

【請求項10】

式Ｉ：

【化21】

（式中、Ｒ^１は、水素又はフェニルで場合により置換されているＣ_１−４−アルキル、Ｃ_２−４−アルケニル、ピペリジニル又はジメチルアミノボラニルであり、
Ｒ^２は、水素であり、
Ｒ^３は、水素又は９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルであり、そして
Ｒ^４は、Ｃ_{１２−２０}−アルキルである）
の化合物の調製のためのプロセスであって、以下の工程を含むプロセス：
ａ）式：

【化18】

［式中、Ｒ^１及びＲ^４は、上記のとおりである］
で表されるグルタミン酸誘導体又はその塩を、式：

【化19】

［式中、Ｒ^２’は、エステル保護基であり、そして、Ｒ^３は、上記のとおりである］
で表されるリシン誘導体又はその塩とカップリングさせて、式：

【化20】

［式中、Ｒ^１、Ｒ^２’、Ｒ^３及びＲ^４は、上記のとおりである］
で表される化合物を形成する工程、及び
ｂ）エステル保護基Ｒ^２’を除去する工程。

【請求項11】

ペプチド鎖のＬｙｓ部分に連結されたＧｌｕ−脂肪族アルキル側鎖構成単位を含むペプチドの固相ペプチド合成における、請求項１に記載の式Ｉの化合物の使用。

【請求項12】

固相ペプチド合成が、ＦＭＯＣ固相ペプチド合成である、請求項１１に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、式：

【化1】

［式中、
Ｒ^１及びＲ^２は、同一又は異なっており、水素又はエステル保護基を示し、
Ｒ^３は、水素又はアミノ保護基であり、そして
Ｒ^４は、Ｃ_{１２−２０}−アルキルである］
で表される化合物ならびにそのエナンチオマー、ジアステレオマー及び塩に関する。

【0002】

本発明は、さらなる実施態様において、式Ｉの化合物の調製のためのプロセス及び固相ペプチド合成における式Ｉの化合物の使用に関する。

【0003】

本発明の化合物は、ペプチド鎖のＬｙｓ部分に連結されたＧｌｕ−脂肪族アルキル側鎖構成単位を含むペプチド薬の固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）用の汎用的なペプチド中間体であることが見いだされた。例えば、ＧＬＰ−１類似体２型糖尿病ペプチド薬であるリラグルチドを挙げることができる。リラグルチドは、Ｇｌｕ−ヘキサデカノイル側鎖構成単位をＬｙｓ^２６位に有する（Wikipedia, the free encyclopedia of 30.04.2012）。

【0004】

本発明の目的は、Ｇｌｕ−脂肪族アルキル側鎖を有し、かつＳＰＰＳに容易に挿入することができる新規ペプチド中間体を提供することである。

【0005】

式：

【化2】

［式中、
Ｒ^１及びＲ^２は、同一又は異なっており、水素又はエステル保護基を示し、
Ｒ^３は、水素又はアミノ保護基であり、そして
Ｒ^４は、Ｃ_{１２−２０}−アルキルである］
で表される本発明の化合物ならびにそのエナンチオマー、ジアステレオマー及び塩が非常によくこの目的にかなう可能性を有することが見いだされた。

【0006】

置換基Ｒ^４について使用される用語「Ｃ_{１２−２０}アルキル」は、１２〜２０個の炭素原子の分岐鎖又は直鎖の一価の飽和脂肪族炭化水素基、特に、直鎖の一価の飽和脂肪族炭化水素基を指す。この用語は、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル及びエイコサニル基によって例示することができる。

【0007】

特定の実施態様において、Ｒ^４は、Ｃ_{１４−１６}アルキル、さらにより特定すると、Ｃ_１５アルキルを指す。

【0008】

より特定すると、Ｒ^４は、テトラデシル、ペンタデシル又はヘキサデシルであるが、特に、ペンタデシルである。

【0009】

置換基Ｒ^３について使用される用語「アミノ保護基」は、アミノ基の反応性を妨害するために従来使用される一般的な置換基を指す。適切なアミノ保護基は、デジタル印刷された"Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis - A Practical Approach" W.C.Chan & P.D. White, Oxford University Press, 2000, reprinted 2004 に記載されている。

【0010】

特定すると、Ｒ^３は、Ｆｍｏｃ（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニル）である。

【0011】

置換基Ｒ^１及びＲ^２について使用される用語「エステル保護基」は、ヒドロキシ基の反応性を妨害するために従来使用される任意の置換基を指す。適切なヒドロキシ保護基は、Green T., "Protective Groups in Organic Synthesis", Chapter 1 , John Wiley and Sons, Inc., 1991, 10-142 に記載されており、これは、フェニルで場合により置換されているＣ_１−４−アルキル、Ｃ_２−４−アルケニル、ピペリジニル又はジメチルアミノボラニルから選択することができる。Ｒ^１及びＲ^２についての特定のエステル保護基は、Ｃ_１−４−アルキル又はＣ_２−４−アルケニルである。

【0012】

より特定すると、Ｒ^１は、ｔ−ブチルであり、そして、Ｒ^２は、アリルである。

【0013】

本発明の化合物に関連した用語「塩」は、当業者にとって慣用的な塩を包含し、塩酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩又はギ酸塩（formiate）などが適用される。

【0014】

本発明の特定の実施態様において、Ｒ^１は、水素又はＣ_１−４−アルキルであり、そして、Ｒ^２は、水素又はＣ_２−４−アルケニルである。

【0015】

本発明の別のより特定の実施態様において、Ｒ^１は、ｔ−ブチルであり、そして、Ｒ^２は、水素又はアリルである。

【0016】

本発明の特定の実施態様において、式Ｉの化合物は、式：

【化3】

［式中、
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４は、上記のとおりである］
ならびにそのエナンチオマー、ジアステレオマー及び塩を有する。

【0017】

以下に示すような置換パターンを有する式Ｉａ又はＩｂの化合物が、本発明のさらにより特定の実施態様である：
・ Ｒ^１ ｔ−ブチル、Ｒ^２ 水素、Ｒ^３ Ｆｍｏｃ、Ｒ^４ Ｃ_１５−アルキル、特定すると、ペンタデシル。
・ Ｒ^１ ｔ−ブチル、Ｒ^２ アリル、Ｒ^３ Ｆｍｏｃ、Ｒ^４ Ｃ_１５−アルキル、特定すると、ペンタデシル。

【0018】

より特定の実施態様において、式Ｉの化合物は、式Ｉａを有する。

【0019】

本発明の化合物は、原理的には、ペプチド合成の当業者に公知であるプロセスで調製することができる。

【0020】

式Ｉ（式中、Ｒ^２は、水素である）の化合物の調製について、当該プロセスは、以下の工程を含む：
ａ）式：

【化4】

［式中、Ｒ^１及びＲ^４は、上記のとおりである］
で表されるグルタミン酸誘導体又はその塩を、式：

【化5】

［式中、Ｒ^２’は、エステル保護基であり、そして、Ｒ^３は、上記のとおりである］
で表されるリシン誘導体又はその塩とカップリングさせて、式：

【化6】

［式中、Ｒ^１、Ｒ^２’、Ｒ^３及びＲ^４は、上記のとおりである］
で表される化合物を形成する工程、及び
ｂ）エステル保護基Ｒ^２’を除去する工程。

【0021】

工程ａ）
工程ａ）は、式ＩＩのグルタミン酸誘導体と式ＩＩＩのリシン誘導体のカップリングを要する。

【0022】

式ＩＩのグルタミン酸誘導体は、以下のスキーム１に従って、市販の出発物質から調製することができる。

【0023】

【化7】

【0024】

適切な市販の式ＩＩのグルタミン酸誘導体は、（Ｓ）−５−ベンジル １−tert−ブチル２−アミノ−ペンタンジオエート塩酸塩である。

【0025】

式ＩＩＩのリシン誘導体は、市販されている。適切には、（Ｓ）−アリル ６−アミノ−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−アミノヘキサノエートが使用される。

【0026】

次いで、式ＩＩのグルタミン酸誘導体と式ＩＩＩのリシン誘導体のカップリングを、ペプチド合成用の古典的な技術を適用して実施することができる。

【0027】

従って、式ＩＩのグルタミン酸誘導体は、当技術分野において慣用的な活性化剤、例えば、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）又はジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）から選択されるカルボジイミド、あるいは、例えば、１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）又は１−ヒドロキシ−７−アザ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）から選択されるトリアゾールで最初に活性化される。

【0028】

適切な有機溶媒（例えば、ジクロロメタンのような）中に適用したＣＤＩ（１，１’−カルボニルジイミダゾール）で最良の結果が達成された。

【0029】

次いで、カップリングを、トリエチルアミンなどの有機塩基の存在下、通常室温で、式ＩＩＩのリシン誘導体を用いて行うことができる。

【0030】

得られた式Ｉｂのジペプチド化合物は、有機相から、溶媒の蒸発、その後の、適切な有機溶媒、例えば、ジエチルエーテル中での残留物の結晶化によって得ることができる。

【0031】

上記の式Ｉａの亜属（subgenus）としての式Ｉｂの化合物が、本発明の特定の実施態様である。

【0032】

式Ｉｂの化合物の特定の代表例は、（Ｓ）−アリル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサノエート（Ｒ^１＝ｔ−ブチル、Ｒ^２’＝アリル、Ｒ^３＝Ｆｍｏｃ及びＲ^４＝ペンタデシルを有する）である。

【0033】

工程ｂ）
工程ｂ）は、式Ｉａの化合物を形成するためのエステル保護基Ｒ^２’の除去を要する。

【0034】

この反応は、当業者によく知られている。

【0035】

アリル基を除去するための適切な系は、例えば、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン又はメチルテトラヒドロフランなどの有機溶媒中の、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）のようなＰｄ源及びフェニルシランの溶液である。

【0036】

反応は、室温で行うことができる。

【0037】

得られた式Ｉａのジペプチドは、有機相から、溶媒の蒸発、その後の、適切な有機溶媒、例えば、ヘプタン及び／又はヘプタン／ジクロロメタンの混合物による粗生成物の温浸によって得ることができる。

【0038】

上記のように、式Ｉの化合物は、固相ペプチド合成、特に、ペプチド鎖のＬｙｓ部分に連結されたＧｌｕ−脂肪族アルキル側鎖構成単位を含むペプチドの合成において、汎用的な中間体として使用することができる。

【0039】

さらにより特定すると、式Ｉの化合物は、そのようなペプチドのＦＭＯＣ固相ペプチド合成において使用することができる。

【0040】

実施例
略語：
ｒ．ｔ．＝室温、ＤＣＭ＝ジクロロメタン、ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン、ＴＢＭＥ＝tert−ブチルメチルエーテル、ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル、ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー。

【0041】

実施例１
（Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサン酸
ａ）（Ｓ）−５−ベンジル １−tert−ブチル ２−パルミトアミドペンタンジオエート

【化8】

２００mLの３口フラスコ中、（Ｓ）−５−ベンジル １−tert−ブチル ２−アミノ−ペンタンジオエート塩酸塩（５．００ｇ、１４．９mmol）、トリエチルアミン（３．１２ｇ、３０．７mmol）及びテトラヒドロフラン（１００mL）の混合物を０〜５℃で１５分間撹拌した。この懸濁液に、パルミトイルクロリド（４．３５ｇ、１５．５mmol）を１０分以内にシリンジで加えた。反応混合物を０〜５℃でさらに３０分間撹拌した。ＴＬＣ（ＥＥ／ヘプタン １：１、出発物質のＲ_Ｆ＝０．１、生成物のＲ_Ｆ＝０．６、２５４nmでKomarowsky試薬によって検出した（cf. P. Stevens, J. Chromatog. 1964, 14, 269)）に関しては、変換は完了していた。反応混合物に、水（６０mL）及びtert−ブチルメチルエーテル（７０mL）を加え、混合物をｒ．ｔ．で５分間撹拌した。有機層を分離し、ブライン（１２０mL）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固して、（Ｓ）−５−ベンジル １−tert−ブチル ２−パルミトアミドペンタンジオエート（８．２１ｇ、＞９９％）を白色の固体として９８．９％の化学純度（ＬＣ法は、以下を参照されたい）で得た。
Ｍ．ｐ．４７℃；ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝５３１．３９（Ｍ＋Ｈ）^＋

【0042】

ＬＣ法：X-BridgeフェニルカラムＮｏ．８２３、５０×４．６mm、ＩＤ２．５μm；移動相、Ａ：水／ＮＣＭｅ（９５：５）、Ｂ：ＮＣＭｅ、Ｃ：水／グリシン（ｐＨ９）；流速：３ml／分；５０／４／５５（Ａ／Ｂ／Ｃ）〜７／８８／５（Ａ／Ｂ／Ｃ）の勾配で２分以内、７／８８／５（Ａ／Ｂ／Ｃ）の定組成で０．８分間。保持時間：０．５４分（（Ｓ）−及び（Ｒ）−５−ベンジル １−tert−ブチル ２−アミノ−ペンタンジオエート）、２．１７分（（Ｓ）−及び（Ｒ）−５−ベンジル １−tert−ブチル ２−パルミトアミドペンタンジオエート）。

【0043】

ｂ）（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタン酸

【化9】

２５０mLの３口フラスコ中、粗（Ｓ）−５−ベンジル １−tert−ブチル ２−パルミトアミドペンタンジオエート（１３．２ｇ、２４．８mmol）、１０％パラジウム炭素（１．３１ｇ、１．２０mmol）及びＴＨＦ（１５０mL）の混合物を、水素雰囲気下、室温で撹拌した。ＴＬＣ（ＥＥ／ヘプタン １：１、出発物質のＲ_Ｆ＝０．５、生成物のＲ_Ｆ＝０．２、Komarowsky試薬によって検出した（cf. P. Stevens, J. Chromatog. 1964, 14, 269)）に関しては、２３時間後に変換は完了していた。黒色の懸濁液をガラス繊維フィルターに通し、得られた無色の濾液を蒸発乾固して粗生成物（１１．３ｇ）を得て、次いで、これをヘプタンから結晶化させることによって精製して、（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタン酸（８．７８ｇ、収率７６％）を白色の固体として９７．７％の化学純度（ＬＣ法は、以下を参照されたい）で得た。
Ｍ．ｐ．６３℃；ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４４０．３３（Ｍ−Ｈ）⁻

【0044】

ＬＣ法：X-BridgeフェニルカラムＮｏ．８２３、５０×４．６mm、ＩＤ２．５μm；移動相、Ａ：水／ＮＣＭｅ（９５：５）、Ｂ：ＮＣＭｅ、Ｃ：水／グリシン（ｐＨ９）；流速：３ml／分；５０／４／５５（Ａ／Ｂ／Ｃ）〜７／８８／５（Ａ／Ｂ／Ｃ）の勾配で２分以内、７／８８／５（Ａ／Ｂ／Ｃ）の定組成で０．８分間。保持時間：０．７７分（（Ｓ）−及び（Ｒ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタン酸）、２．１７分（（Ｓ）−及び（Ｒ）−５−ベンジル １−tert−ブチル ２−パルミトアミドペンタンジオエート）。

【0045】

ｃ）（Ｓ）−アリル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサノエート

【化10】

５００mLの３口フラスコ中、（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタン酸（８．７７ｇ、１９．４mmol）、１，１’−カルボニルジイミダゾール（３．３０ｇ、２０．４mmol）及びＤＣＭ（１２５mL）の混合物を室温で９０分間撹拌した。得られた白色の懸濁液に、ＤＣＭ（５０mL）中の（Ｓ）−アリル ６−アミノ−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−アミノヘキサノエート（８．６８ｇ、１９．５mmol）及びトリエチルアミン（１．９６ｇ、１９．４mmol）の溶液を１５分以内に加えた。反応混合物をｒ．ｔ．でさらに９０分間撹拌して変換を完了した（ＴＬＣ（ＥＥ／ヘプタン １：１、出発物質のＲ_Ｆ＝０、生成物のＲ_Ｆ＝０．５、Komarowsky試薬によって検出した（cf. P. Stevens, J. Chromatog. 1964, 14, 269)）によって決定した）。次に、ＤＣＭ（５０mL）及び水（４０mL）を混合物に加え、層を分離した。水層をＤＣＭ（２０mL）で抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒の蒸発後、残留した粗生成物（１６．０ｇ）をジエチルエーテルから結晶化することによって精製して、（Ｓ）−アリル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサノエート（１５．２ｇ、９１％）を白色の固体として９６．５％の化学純度（ＬＣ法は、以下を参照されたい）ならびに＞９９．９％のエナンチオマー及びジアステレオマー純度（キラルＬＣ法は、以下を参照されたい）で得た。
Ｍ．ｐ．１１８℃；ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝８３２．５５（Ｍ＋Ｈ）^＋

【0046】

ＬＣ法：X-Bridgeフェニルカラム、５０×４．６mm、ＩＤ２．５μm；移動相、Ａ：水／ＮＣＭｅ（９５：５）、Ｂ：ＮＣＭｅ、Ｃ：０．１％ギ酸水溶液；流速：２ml／分；６５／２５／１０（Ａ／Ｂ／Ｃ）〜１０／８０／１０（Ａ／Ｂ／Ｃ）の勾配で１０分以内、１０／８０／１０（Ａ／Ｂ／Ｃ）の定組成で２分間。保持時間：９．５９分（（Ｓ）−アリル２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサノエート））。

【0047】

キラルＬＣ法：Chiracel OD-RHカラムＮｏ．７４５＆Ｎｏ．７０２、１５０×４．６mm、ＩＤ５μm；移動相、Ａ：ＮＣＭｅ、Ｂ：水／ＨＣｌＯ_４（ｐＨ２）；流速：１ml／分、６８：３２（Ａ／Ｂ）の定組成で３２分間、６８／３２（Ａ／Ｂ）〜７５／２５（Ａ／Ｂ）の勾配で０．５分以内、７５／２５（Ａ／Ｂ）の定組成で２９．５分間。保持時間：４５．３９分（（Ｒ）−アリル２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｒ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサノエート）、４７．７５分（（Ｒ）−アリル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサノエート）、５１．９８分（（Ｓ）−アリル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｒ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサノエート）、５５．６６分（（Ｓ）−アリル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサノエート）。

【0048】

実施例２
（Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサン酸

【化11】

５００mLの３口フラスコ中、（Ｓ）−アリル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサノエート（１０．０ｇ、１１．４mmol）、フェニルシラン（７．０２ｇ、６２．９mmol）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１．００ｇ、０．８５mmol）及びＤＣＭ（２５０mL）の混合物を室温で撹拌した。ＴＬＣ（ＥＥ／ヘプタン ３：１、出発物質のＲ_Ｆ＝０．２、生成物のＲ_Ｆ＝０、２５４nmでのＵＶで検出した）に関しては、１１分後に変換は完了していた。反応混合物をＤＣＭ（５０mL）で希釈し、水（５０mL）、ジエチルジチオカルバミン酸ナトリウム水溶液（０．５％、３０mL）及びブライン（３０mL）で連続して洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させて、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固した。残留した粗生成物を、ｒ．ｔ．で、最初にヘプタン（２５mL）で、その後、ヘプタン／ＤＣＭ（９：１）で温浸して、濾過及び乾燥後、粗（Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサン酸（８．９２ｇ）を７７．２％の化学純度（ＬＣ法は、以下を参照されたい）で得た。粗生成物は、主要不純物としてトリフェニルホスフィンオキシドを１１％含有していた。粗生成物の試料１ｇの分取超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ法、以下を参照されたい）は、純粋な（Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサン酸（０．７５ｇ、７２％）を白色の固体として９６．７％の化学純度（ＬＣ法は、以下を参照されたい）、９８．０％のエナンチオマー純度及び９９．８％のジアステレオマー純度（キラルＬＣ法は、以下を参照されたい）で与えた。
Ｍ．ｐ．１１９℃；ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７９２．５２（Ｍ＋Ｈ）^＋

【0049】

ＬＣ法：X-BridgeフェニルカラムＮｏ．８２３、５０×４．６mm、ＩＤ２．５μm；移動相、Ａ：水／ＮＣＭｅ（９５：５）、Ｂ：ＮＣＭｅ、Ｃ：０．１％ギ酸水溶液；流速：２ml／分；６５／２５／１０（Ａ／Ｂ／Ｃ）〜１０／８０／１０（Ａ／Ｂ／Ｃ）の勾配で１０分以内、１０／８０／１０（Ａ／Ｂ／Ｃ）の定組成で２分間。保持時間：８．６５分（（Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサン酸）、９．５９分（（Ｓ）−アリル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサノエート））。

【0050】

キラルＬＣ法：Chiracel OD-RHカラムＮｏ．７４５＆Ｎｏ．７０２、１５０×４．６mm、ＩＤ５μm；移動相、Ａ：ＮＣＭｅ、Ｂ：水／ＨＣｌＯ_４（ｐＨ２）；流速：１ml／分、６８：３２（Ａ／Ｂ）の定組成で３２分間、６８／３２（Ａ／Ｂ）〜７５／２５（Ａ／Ｂ）の勾配で０．５分以内、７５／２５（Ａ／Ｂ）の定組成で２９．５分間。保持時間：２１．５６分（（Ｒ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｒ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサン酸）、２３．５２分（（Ｒ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサン酸）、２５．６８分（（Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｒ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサン酸）、２８．３２分（（Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサン酸）。

【0051】

分取ＳＦＣ法：Viridis２−エチルピリジンＯＢＤカラム、１５０×３０mm、ＩＤ５μm；カラム温度５０℃；移動相、Ａ：ＣＯ_２、Ｂ：ＭｅＯＨ；流速：６０ml／分、８０：２０（Ａ／Ｂ）〜６０／４０（Ａ／Ｂ）の勾配で１０分以内。

【0052】

実施例３
（Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサン酸

【化12】

２５０mLの３口フラスコ中、（Ｓ）−アリル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサノエート（１２．０ｇ、１３．７mmol）、フェニルシラン（２．２８ｇ、２０．４mmol）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（９６．０mg、０．０８mmol）及びＤＣＭ（１２０mL）の混合物をｒ．ｔ．で撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９：１、出発物質のＲ_Ｆ＝０．９、生成物のＲ_Ｆ＝０．３、２５４nmでのＵＶで検出した）に関しては、３時間後に変換は完了していた。次いで、反応混合物を、ジエチルジチオカルバミン酸ナトリウム水溶液（０．５％、２０mL）及びブライン（７５mL）で連続して洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させて、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固して、粗（Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサン酸（１１．６ｇ）を９３．５％の化学純度（ＬＣ法は、実施例２を参照されたい）、＞９９．９％のエナンチオマー純度及び９９．７％のジアステレオマー純度（キラルＬＣ法は、実施例２を参照されたい）で得た（残留トリフェニルホスフィンオキシドを１．２％含有していた）。次いで、粗生成物をヘプタン（２３０mL）にｒ．ｔ．で１時間懸濁し、混合物を濾過し、フィルターケーキをヘプタン（５０mL）で洗浄して、（Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサン酸（１０．９ｇ、収率９７％）を帯黄色の固体として９６．２％の化学純度（ＬＣ法は、実施例２を参照されたい）、＞９９．９％のエナンチオマー純度及び９９．８％のジアステレオマー純度（キラルＬＣ法は、実施例２を参照されたい）で得た（残留トリフェニルホスフィンオキシドを０．８％含有していた）。
Ｍ．ｐ．１１９℃；ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７９２．５２（Ｍ＋Ｈ）^＋

【0053】

実施例４
（（Ｒ）−アリル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサノエート

【化13】

２５mLの３口フラスコ中、（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタン酸（５００mg、１．１２mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１７５mg、１．１４mmol）、１，１’−カルボニルジイミダゾール（２００mg、１．２３mmol）及びＤＣＭ（１０mL）の混合物を室温で９０分間撹拌した。得られた白色の懸濁液に、ＤＣＭ（５mL）中の（Ｒ）−アリル６−アミノ−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−アミノヘキサノエート（５０７mg、１．１２mmol）及びトリエチルアミン（１１３mg、１．１２mmol）の溶液を５分以内に加えた。反応混合物を室温でさらに６０分間撹拌して、変換を完了した（ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９５：５、出発物質のＲ_Ｆ＝０、生成物のＲ_Ｆ＝０．２、２５４nmでのＵＶで検出した））によって決定した。次に、水（１０mL）を混合物に加え、層を分離した。水層をＤＣＭ（３０mL）で抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒の蒸発後、残留した粗生成物（９８３mg）をジエチルエーテルから結晶化することによって精製して、（Ｒ）−アリル２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサノエート（６８６mg、７０％）を白色の固体として９４．２％の化学純度（ＬＣ法は、以下を参照されたい）ならびに＞９９．９％のエナンチオマー及びジアステレオマー純度（キラルＬＣ法は、実施例１ｃを参照されたい）で得た。
Ｍ．ｐ．１１４℃；ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝８３２．５４（Ｍ＋Ｈ）^＋
ＬＣ法：X-Bridgeフェニルカラム、５０×４．６mm、ＩＤ２．５μm；移動相、Ａ：水／ＮＣＭｅ（９５：５）、Ｂ：ＮＣＭｅ、Ｃ：０．１％ギ酸水溶液；流速：２ml／分；６５／２５／１０（Ａ／Ｂ／Ｃ）〜１０／８０／１０（Ａ／Ｂ／Ｃ）の勾配で１０分以内、１０／８０／１０（Ａ／Ｂ／Ｃ）の定組成で２分間。保持時間：９．５５分（（Ｒ）−アリル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサノエート））。

【0054】

実施例５
（Ｒ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサン酸

【化14】

２５mLの３口フラスコ中、（Ｒ）−アリル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサノエート（６７５mg、０．７６mmol）、フェニルシラン（３５１mg、３．１４mmol）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２０．０mg、０．０２mmol）及びＤＣＭ（７mL）の混合物を１０℃で撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９５：５、出発物質のＲ_Ｆ＝０．８、生成物のＲ_Ｆ＝０．２、２５４nmでのＵＶで検出した）に関しては、２５分後に変換は完了していた。さらに１５分後、反応混合物をＤＣＭ（１０mL）で希釈し、水（１０mL）、ジエチルジチオカルバミン酸ナトリウム水溶液（０．５％、１０mL）及びブライン（１０mL）で連続して洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウムで乾燥させて、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固して、粗（Ｒ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサン酸（６３１mg）を８７．４の化学純度（ＬＣ法は、以下を参照されたい）、＞９９．９％のエナンチオマー純度及び９８．８％のジアステレオマー純度（キラルＬＣ法は、実施例２を参照されたい）で得た。粗生成物は、主要不純物としてトリフェニルホスフィンオキシドを６％含有していた。粗生成物の試料６０３mgの分取超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ法は、実施例２を参照されたい）は、純粋な（Ｒ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサン酸（３４８mg、５９％）を白色の固体として９８．７％の化学純度（ＬＣ法は、以下を参照されたい）、＞９９．９％のエナンチオマー純度及び９９．４％のジアステレオマー純度（キラルＬＣ法は、実施例２を参照されたい）で与えた。
Ｍ．ｐ．１２５℃；ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７９２．５２（Ｍ＋Ｈ）^＋

【0055】

ＬＣ法：X-Bridgeフェニルカラム、５０×４．６mm、ＩＤ２．５μm；移動相、Ａ：水／ＮＣＭｅ（９５：５）、Ｂ：ＮＣＭｅ、Ｃ：０．１％ギ酸水溶液；流速：２ml／分；６５／２５／１０（Ａ／Ｂ／Ｃ）〜１０／８０／１０（Ａ／Ｂ／Ｃ）の勾配で１０分以内、１０／８０／１０（Ａ／Ｂ／Ｃ）の定組成で２分間。保持時間：８．３３分（（Ｒ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサン酸）、９．３５分（（Ｒ）−アリル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（（Ｓ）−５−tert−ブトキシ−５−オキソ−４−パルミトアミドペンタンアミド）ヘキサノエート））。