特許 6170494 ピロロベンゾジアゼピン

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6170494

(24)【登録日】2017年7月7日

(45)【発行日】2017年7月26日

(54)【発明の名称】ピロロベンゾジアゼピン

(51)【国際特許分類】

   C07D 519/00 20060101AFI20170713BHJP

   A61K 38/05 20060101ALI20170713BHJP

   A61K 31/5517 20060101ALI20170713BHJP

   C07K 5/062 20060101ALI20170713BHJP

   C07K 5/065 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 19/08 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 37/00 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 21/04 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 5/14 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 5/38 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 7/06 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 5/18 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 7/04 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 17/14 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 11/02 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 33/12 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 33/10 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 31/10 20060101ALI20170713BHJP

   A61P 17/04 20060101ALI20170713BHJP

【ＦＩ】

   C07D519/00 311

   C07D519/00CSP

   A61K38/05

   A61K31/5517

   C07K5/062

   C07K5/065

   A61P35/00

   A61P37/06

   A61P43/00 105

   A61P35/02

   A61P17/06

   A61P19/08

   A61P9/10 101

   A61P29/00 101

   A61P19/02

   A61P25/00

   A61P37/08

   A61P27/02

   A61P37/00

   A61P21/04

   A61P5/14

   A61P13/12

   A61P1/16

   A61P1/04

   A61P3/10

   A61P17/00

   A61P21/00

   A61P5/38

   A61P7/06

   A61P5/18

   A61P7/04

   A61P17/14

   A61P11/02

   A61P11/06

   A61P11/00

   A61P9/00

   A61P33/12

   A61P33/10

   A61P31/10

   A61P17/04

【請求項の数】16

【全頁数】85

(21)【出願番号】特願2014-531224(P2014-531224)

(86)(22)【出願日】2012年9月20日

(65)【公表番号】特表2014-527974(P2014-527974A)

(43)【公表日】2014年10月23日

(86)【国際出願番号】EP2012068506

(87)【国際公開番号】WO2013041606

(87)【国際公開日】20130328

【審査請求日】2015年9月17日

(31)【優先権主張番号】61/536,669

(32)【優先日】2011年9月20日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】508098350

【氏名又は名称】メドイミューン・リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ

(74)【代理人】

【識別番号】110000523

【氏名又は名称】アクシス国際特許業務法人

(72)【発明者】

【氏名】フィリップ・ウィルソン・ハワード

【審査官】 緒形 友美

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１３−５２３８９７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１０／０４３８８０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２００７−５２５５３５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１４−５１９４９２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００５／１１０４２３（ＷＯ，Ａ２）

【文献】 国際公開第２００４／０８７７１７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２００９−５２４６３６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１４−５２８４８８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 Tiberghien, Arnaud C.，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，２００４年，14(20)，5041-5044

【文献】 Jeffrey, S. C. et al，Journal of Medicinal Chemistry ，２００５年，48(5)，1344-1358

【文献】 Burke, P J. et al，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，２００９年，19(10)，2650-2653

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ ５１９／００

Ａ６１Ｋ ３１／５５１７

Ａ６１Ｋ ３８／０５

Ａ６１Ｐ １／００ − ４３／００

Ｃ０７Ｋ ５／００ − ５／０６５

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

次式Ｉの化合物：

【化1】

式中：
Ｒ²は、次式ＩＩのものであり：

【化2】

ここで、Ｑは、ＯＨ、ＳＨ及びＮＨＲ^Nから選択され、Ｒ^Nは、Ｈ、メチル及びエチルから選択され；
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在する場合には、Ｒ¹²は次のものから選択される：
（ｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、Ｃ_1-7アルキル、Ｃ_3-7ヘテロシクリル及びビスオキシ−Ｃ_1-3アルキレンよりなる群から選択される１個以上の置換基により置換されていてよいＣ_5-10アリール基；
（ｉｂ）Ｃ_1-5飽和脂肪族アルキル；
（ｉｃ）Ｃ_3-6飽和シクロアルキル；
（ｉｄ）

【化3】

（ここで、Ｒ²¹、Ｒ²²及びＲ²³の各々は、独立して、Ｈ、Ｃ_1-3飽和アルキル、Ｃ_2-3アルケニル、Ｃ_2-3アルキニル及びシクロプロピルから選択され、ここで、Ｒ¹²基における炭素原子の総数は５以下である）；
（ｉｅ）

【化4】

（ここで、Ｒ^25a及びＲ^25bの一方はＨであり、他方はフェニル（該フェニルは、ハロ、メチル、メトキシで置換されていてよい）、ピリジル及びチオフェニルから選択される）；及び
（ｉｆ）

【化5】

ここで、Ｒ²⁴は次のものから選択される：Ｈ；Ｃ_1-3飽和アルキル；Ｃ_2-3アルケニル；Ｃ_2-3アルキニル；シクロプロピル；ハロ、メチル、メトキシから選択される基で置換されていてよいフェニル；ピリジル；及びチオフェニル；
Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在する場合には、
Ｒ¹²は

【化6】

であり、ここで、Ｒ^26a及びＲ^26bは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃ_1-4飽和アルキル、Ｃ_2-3アルケニルから選択され、このアルキル及びアルケニル基は、Ｃ_1-4アルキルアミド及びＣ_1-4アルキルエステルから選択される基で置換されていてよく；又はＲ^26a及びＲ^26bの一方がＨである場合、他方はニトリル及びＣ_1-4アルキルエステルから選択され；
Ｒ⁶及びＲ⁹は、独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ₂、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから選択され；
Ｒ及びＲ’は、独立して、置換されていてもよいＣ_1-12アルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクリル及びＣ_5-20アリール基から選択され；
Ｒ⁷は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ₂、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから選択され；
（ａ）Ｒ¹⁰はＨであり、そしてＲ¹¹はＯＨ、ＯＲ^A（ここでＲ^AはＣ_1-4アルキルである）であり；
（ｂ）Ｒ¹⁰及びＲ¹¹は、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に窒素−炭素二重結合を形成するか；又は
（ｃ）Ｒ¹⁰はＨであり、Ｒ¹¹はＳＯ_zＭ（ここで、ｚは２又は３であり、Ｍは一価の薬学的に許容される陽イオンである）であり；
Ｒ”はＣ_3-12アルキレン基であり、この鎖は、１個以上のヘテロ原子及び／又は芳香族環によって中断されていてよく；
Ｙ及びＹ’は、Ｏ、Ｓ又はＮＨから選択され；
Ｒ^6’、Ｒ^7’、Ｒ^9’は、それぞれＲ⁶、Ｒ⁷及びＲ⁹と同じ基から選択され、Ｒ^10’及びＲ^11’は、Ｒ¹⁰及びＲ¹¹と同じであり、ここで、Ｒ¹¹及びＲ^11’がＳＯ_zＭである場合には、Ｍは薬学的に許容できる２価の陽イオンであることができる。

【請求項2】

Ｒ⁷がＣ_1-4アルキルオキシ基である、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

ＹがＯであり、及び／又はＲ”がＣ_3-7アルキレンである、請求項１又は２に記載の化合物。

【請求項4】

Ｒ⁹がＨであり、及び／又は、Ｒ⁶がＨ及びハロから選択される、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物。

【請求項5】

ＱがＮＨＲ^Nであり、Ｒ^NがＨ又はメチルである、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。

【請求項6】

ＱがＯＨ又はＳＨである、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。

【請求項7】

Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在する場合には、Ｒ¹²が

【化7】

であり、
（ｉ）Ｒ^26a及びＲ^26bが両方ともＨであり；又は
（ｉｉ）Ｒ^26a及びＲ^26bが両方ともメチルであり；又は
（ｉｉｉ）Ｒ^26a及びＲ^26bの一方がＨであり、他方がＣ_1-4飽和アルキル、Ｃ_2-3アルケニルから選択され、該アルキル及びアルケニル基は置換されていてもよい、
請求項１〜６のいずれかに記載の化合物。

【請求項8】

Ｃ２’とＣ３’との間には二重結合が存在し、Ｒ¹²がフェニルである、請求項１〜６のいずれかに記載の化合物。

【請求項9】

Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ¹²が
（ｉ）メチル、エチル又はプロピル；
（ｉｉ）シクロプロピル；
（ｉｉｉ）次式の基：

【化8】

（該Ｒ¹²基中の炭素原子の総数は４以下である。）；
（ｉｖ）次式の基：

【化9】

及び
（ｖ）次式の基：

【化10】

（式中、Ｒ²⁴はＨ、メチル、エチル、エテニル及びエチニルから選択される。）
から選択される、請求項１〜６のいずれかに記載の化合物。

【請求項10】

Ｒ¹⁰とＲ¹¹とが窒素−炭素二重結合を形成する、請求項１〜９のいずれかに記載の化合物。

【請求項11】

Ｒ^6’、Ｒ^7’、Ｒ^9’、Ｒ¹⁰’、Ｒ^11’及びＹ’が、それぞれＲ⁶、Ｒ⁷、Ｒ⁹、Ｒ¹⁰、Ｒ¹¹及びＹと同一である、請求項１〜１０のいずれかに記載の化合物。

【請求項12】

増殖性疾患の治療に使用するための請求項１〜１１のいずれかに記載の化合物。

【請求項13】

次式ＩＩの化合物：

【化11】

式中、Ｒ²、Ｒ⁶、Ｒ^6’、Ｒ⁷、Ｒ^7’、Ｒ⁹、Ｒ^9’、 Ｒ¹²、Ｒ^” 、Ｙ及びＹ’は請求項１〜１１のいずれかにおいて定義されたとおりであり、
（ａ）Ｒ¹⁰は、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルであり、Ｒ¹¹はｔ−ブチルジメチルシリルオキシであるか；又は
（ｂ）Ｒ¹⁰は、２−（トリメチルシリル）エトキシメチルアセタールであり、Ｒ¹¹はオキソ基であるか
のいずれかであり、
Ｒ^10’及びＲ^11’は、それぞれＲ¹⁰及びＲ¹¹と同一である。

【請求項14】

次式ＩＩＩを有する結合体：
Ｌ−（ＬＵ−Ｄ）_p （ＩＩＩ）
式中：
Ｌは抗体、抗体の抗原結合断片又は環状ポリペプチドから選択されるリガンド単位であり、
ＬＵはリンカー単位−Ａ¹−Ｌ¹−であり、
ここで、Ａ¹は

【化12】

（ここで、アスタリスクは、Ｌ¹への結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、そしてｎは０〜６である）；

【化13】

（ここで、アスタリスクは、Ｌ¹への結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、そしてｎは０〜６である）；

【化14】

（ここで、アスタリスクは、Ｌ¹への結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは、０又は１であり、そしてｍは０〜３０である）；及び

【化15】

（ここで、アスタリスクは、Ｌ¹への結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは、０又は１であり、そしてｍは０〜３０である）
から選択され、
Ｌ¹はジペプチドを含み；
ｐは１〜２０であり、そして
Ｄは、請求項１〜１１のいずれかに記載の化合物であり、ここで、ＬＵは、Ｒ²のＱ置換基を介してＤに結合する。

【請求項15】

Ｌ¹が、バリン−アラニン、バリン−シトルリン及びフェニルアラニン−リシンよりなる群から選択される、請求項１４に記載の結合体。

【請求項16】

増殖性疾患又は自己免疫疾患を治療するための、請求項１４又は１５に記載の結合体。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、特に、Ｃ２−Ｃ３二重結合と、１個の単量体単位においてＣ２位にプロパルギル基とを有するピロロベンゾジアゼピン及び標的結合体におけるそれらの介在に関する。

【背景技術】

【0002】

発明の背景
いくつかのピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）には、ＤＮＡの特定の配列を認識して結合する能力がある。好ましい配列はＰｕＧＰｕである。最初のＰＢＤ抗腫瘍抗生物質であるアントラマイシンは、１９６５年に発見された（Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，外，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７，５７９３−５７９５（１９６５）；Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ外，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７，５７９１−５７９３（１９６５））。それ以来、天然に存在する多数のＰＢＤが報告されており、多数の合成経路が様々なアナログに対して開発されている（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ外，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９４，４３３−４６５（１９９４）；Ａｎｔｏｎｏｗ，Ｄ．及びＴｈｕｒｓｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２０１１ １１１（４），２８１５−２８６４）。ファミリーには、アブベイマイシン（Ｈｏｃｈｌｏｗｓｋｉ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４０，１４５−１４８（１９８７）），キカマイシン（Ｋｏｎｉｓｈｉ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３７，２００−２０６（１９８４）），ＤＣ−８１（特開昭５８−１８０４８７号公報；Ｔｈｕｒｓｔｏｎ外，Ｃｈｅｍ．Ｂｒｉｔ．，２６，７６７−７７２（１９９０）；Ｂｏｓｅ外，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，４８，７５１−７５８（１９９２））、マゼトラマイシン（Ｋｕｍｉｎｏｔｏ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３３，６６５−６６７（１９８０））、ネオトラマイシンＡ及びＢ（Ｔａｋｅｕｃｈｉ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２９，９３−９６（１９７６））、ポロトラマイシン（Ｔｓｕｎａｋａｗａ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，１３６６−１３７３（１９８８））、プロトラカルシン（Ｓｈｉｍｉｚｕ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２９，２４９２−２５０３（１９８２）；Ｌａｎｇｌｅｙ及びＴｈｕｒｓｔｏｎ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５２，９１−９７（１９８７））、シバノミシン（ＤＣ−１０２）（Ｈａｒａ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，７０２−７０４（１９８８）；Ｉｔｏｈ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，１２８１−１２８４（１９８８））、シビロマイシン（Ｌｅｂｅｒ外，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１０，２９９２−２９９３（１９８８））及びトママイシン（Ａｒｉｍａ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２５，４３７−４４４（１９７２））が含まれる。ＰＢＤは次の一般構造のものである：

【化1】

これらのものは、それらの芳香族Ａ環及びピロロＣ環の両方における置換基の数、種類及び位置、並びにＣ環の飽和度が相違する。Ｂ環中には、ＤＮＡのアルキル化を担当する求電子性中心であるＮ１０−Ｃ１１位にイミン（Ｎ＝Ｃ）、カルビノールアミン（ＮＨ−ＣＨ（ＯＨ））、又はカルビノールアミンメチルエーテル（ＮＨ−ＣＨ（ＯＭｅで））のいずれかが存在する。既知の天然物の全ては、キラルＣ１１ａ位に（Ｓ）−配置を有し、これはＣ環からＡ環の方に見て右回りのねじれを与える。これは、これらに、それらにＢ型ＤＮＡの副溝とのイソヘリシティーに好適な三次元形状を与え、これにより結合部位にぴたりと嵌ることになる（Ｋｏｈｎ，Ｉｎ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ＩＩＩ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３−１１（１９７５）；Ｈｕｒｌｅｙ及びＮｅｅｄｈａｍ−ＶａｎＤｅｖａｎｔｅｒ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，１９，２３０−２３７（１９８６））。副溝に付加物を形成する能力は、それらがＤＮＡプロセシングを妨害すること、すなわちそれらを抗腫瘍剤として使用することを可能にする。

【0003】

この分子の生物活性は、柔軟なアルキレンリンカーを介してそれらのＣ８／Ｃ’−ヒドロキシル官能基によって２個のＰＢＤ単位を結合させることにより増強できることが以前に開示された（Ｂｏｓｅ，Ｄ．Ｓ．外，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１４，４９３９−４９４１（１９９２）；Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．外，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６１，８１４１−８１４７（１９９６））。ＰＢＤ二量体は、パリンドローム５’−ＰｕＧＡＴＣ−Ｐｙ−３’鎖間架橋などの配列選択的ＤＮＡ損傷を形成すると考えられており（Ｓｍｅｌｌｉｅ，Ｍ．外，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４２，８２３２−８２３９（２００３）；Ｍａｒｔｉｎ，Ｃ．外，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４４，４１３５−４１４７）、これは、主としてそれらの生物学的活性に関与すると考えられる。ＰＢＤ二量体の一例であるＳＧ２０００（ＳＪＧ−１３６）：

【化2】

は、近年癌領域において第ＩＩ期臨床試験に入っている（Ｇｒｅｇｓｏｎ，Ｓ．外，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４４，７３７−７４８（２００１）；Ａｌｌｅｙ，Ｍ．Ｃ．外，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６４，６７００−６７０６（２００４）；Ｈａｒｔｌｅｙ，Ｊ．Ａ．外，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６４，６６９３−６６９９（２００４））。

【0004】

さらに近年、本発明者は、ＷＯ２００５／０８５２５１号において、Ｃ₂アリール置換基を有するＰＢＤ二量体化合物、例えばＳＧ２２０２（ＺＣ−２０７）：

【化3】

及びＷＯ２００６／１１１７５９号においてこのようなＰＢＤ化合物の重亜硫酸塩、例えばＳＧ２２８５（ＺＣ−４２３）を開示した：

【化4】

【0005】

これらの化合物は、非常に有用な細胞毒性剤であることが示されている（Ｈｏｗａｒｄ， Ｐ．Ｗ．外，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００９），１９（２２），６４６３−６４６６，ｄｏｉ：０．１０１６／ｊ．ｂｍｃｌ．２００９．０９．０１２）。

【0006】

これらの非常に効能のある化合物が架橋ＤＮＡに作用する態様のため、これらの分子は対称的に作製されてきた。これは、すでに二量体結合を形成した複数のＰＢＤ部分を同時に構築することによって、又は二量体結合基によりすでに構築されたＰＢＤ部分を反応させることによって、簡単な合成を提供する。

【0007】

ＷＯ２０１０／０４３８８０号には、置換基を有する各単量体のＣ２位に複数のアリール基を有する非対称二量体ＰＢＤ化合物が記載され、ここで、これらの基の１つは、別の部分に化合物を結合するためのアンカーを与えるように設計された置換基を有する。ＷＯ２０１１／１３０６１３号として公開された２０１１年４月１５日出願の同時係属国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０３２６６４号には、標的結合体中におけるこれらの化合物の介在が記載されている。ＷＯ２０１１／１３０６１６号として公開された２０１１年４月１５日に出願の同時係属国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０３２６６８号には、非対称二量体ＰＢＤ化合物が記載され、この化合物は、この化合物を別の部分に結合させるためのアンカーを与えるように設計された置換基を有する一方の単量体のＣ２位にアリール基を有し、他方の単量体は、Ｃ２位に非芳香族基を有する。また、標的結合体におけるこれらの化合物の介在も記載されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0008】

【特許文献1】特開昭５８−１８０４８７号公報

【特許文献2】国際公開第２００５／０８５２５１号パンフレット

【特許文献3】国際公開第２００６／１１１７５９号パンフレット

【特許文献4】国際公開第２０１０／０４３８８０号パンフレット

【特許文献5】国際公開第２０１１／１３０６１３号パンフレット

【特許文献6】国際公開第２０１１／１３０６１６号パンフレット

【非特許文献】

【0009】

【非特許文献1】Ｔｈｕｒｓｔｏｎ外，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９４，４３３−４６５（１９９４）

【非特許文献2】Ａｎｔｏｎｏｗ，Ｄ．及びＴｈｕｒｓｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２０１１ １１１（４），２８１５−２８６４

【非特許文献3】Ｈｏｃｈｌｏｗｓｋｉ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４０，１４５−１４８（１９８７）

【非特許文献4】Ｋｏｎｉｓｈｉ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３７，２００−２０６（１９８４）

【非特許文献5】Ｔｈｕｒｓｔｏｎ外，Ｃｈｅｍ．Ｂｒｉｔ．，２６，７６７−７７２（１９９０）

【非特許文献6】Ｂｏｓｅ外，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，４８，７５１−７５８（１９９２）、

【非特許文献7】Ｋｕｍｉｎｏｔｏ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３３，６６５−６６７（１９８０）

【非特許文献8】Ｔａｋｅｕｃｈｉ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２９，９３−９６（１９７６）、

【非特許文献9】Ｔｓｕｎａｋａｗａ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，１３６６−１３７３（１９８８）

【非特許文献10】Ｓｈｉｍｉｚｕ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２９，２４９２−２５０３（１９８２）

【非特許文献11】Ｌａｎｇｌｅｙ及びＴｈｕｒｓｔｏｎ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５２，９１−９７（１９８７）

【非特許文献12】Ｈａｒａ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，７０２−７０４（１９８８）

【非特許文献13】Ｉｔｏｈ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，１２８１−１２８４（１９８８）

【非特許文献14】Ｌｅｂｅｒ外，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１０，２９９２−２９９３（１９８８）

【非特許文献15】Ａｒｉｍａ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２５，４３７−４４４（１９７２）

【非特許文献16】Ｋｏｈｎ，Ｉｎ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ＩＩＩ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３−１１（１９７５）

【非特許文献17】Ｈｕｒｌｅｙ及びＮｅｅｄｈａｍ−ＶａｎＤｅｖａｎｔｅｒ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，１９，２３０−２３７（１９８６）

【非特許文献18】Ｂｏｓｅ，Ｄ．Ｓ．外，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１４，４９３９−４９４１（１９９２）

【非特許文献19】Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．外，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６１，８１４１−８１４７（１９９６）

【非特許文献20】Ｓｍｅｌｌｉｅ，Ｍ．外，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４２，８２３２−８２３９（２００３）

【非特許文献21】Ｍａｒｔｉｎ，Ｃ．外，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４４，４１３５−４１４７

【非特許文献22】Ｇｒｅｇｓｏｎ，Ｓ．外，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４４，７３７−７４８（２００１）

【非特許文献23】Ａｌｌｅｙ，Ｍ．Ｃ．外，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６４，６７００−６７０６（２００４）

【非特許文献24】Ｈａｒｔｌｅｙ，Ｊ．Ａ．外，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６４，６６９３−６６９９（２００４）

【非特許文献25】Ｈｏｗａｒｄ， Ｐ．Ｗ．外，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００９），１９（２２），６４６３−６４６６

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0010】

発明の開示
本発明者は、アンカーを有するアリール基の必要性を排除し、標的結合体に介在させるための非対称ＰＢＤ二量体化合物をさらに開発した。本発明において別の部分に化合物を結合させるためのアンカーを提供するように設計された置換基を有するC2基は、プロパルギル基である。

【課題を解決するための手段】

【0011】

本発明は、次式Ｉを有する化合物を含む：

【化5】

式中：
Ｒ² は、式ＩＩのものであり：

【化6】

ここで、Ｑは、ＯＨ、ＳＨ及びＮＲ^Nから選択され、Ｒ^Nは、Ｈ、メチル及びエチルから選択され；
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在する場合には、Ｒ¹²は次のものから選択される：
（ｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、Ｃ_1-7アルキル、Ｃ_3-7ヘテロシクリル及びビスオキシ−Ｃ_1-3アルキレンよりなる群から選択される１個以上の置換基により置換されていてよいＣ_5-10アリール基；
（ｉｂ）Ｃ_1-5飽和脂肪族アルキル；
（ｉｃ）Ｃ_3-6飽和シクロアルキル；
（ｉｄ）

【化7】

（ここで、Ｒ²¹、Ｒ²²及びＲ²³の各々は、独立して、Ｈ、Ｃ_1-3飽和アルキル、Ｃ_2-3アルケニル、Ｃ_2-3アルキニル及びシクロプロピルから選択され、ここで、Ｒ¹²基における炭素原子の総数は５以下である）；
（ｉｅ）

【化8】

、（ここで、Ｒ^25a及びＲ^25bの一方はＨであり、他方はフェニル（該フェニルは、ハロ、メチル、メトキシで置換されていてよい）、ピリジル及びチオフェニルから選択される）；
（ｉｆ）

【化9】

、（ここで、Ｒ²⁴は、：Ｈ、Ｃ_1-3飽和アルキル、Ｃ_2-3アルケニル、Ｃ_2-3アルキニル、シクロプロピル、フェニル（このフェニルは、ハロ、メチル、メトキシから選択される基により置換されていてよい）、ピリジル及びチオフェニルから選択される）；
Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在する場合には，
Ｒ¹²は、

【化10】

、（ここで、Ｒ^26a及びＲ^26bは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃ_1-4飽和アルキル、Ｃ_2-3アルケニルから選択され、このアルキル及びアルケニル基は、Ｃ_1-4アルキルアミド及びＣ_1-4アルキルエステルから選択される基で置換されていてよく、又はＲ^26a及びＲ^26bの一方がＨである場合、他方はニトリル及びＣ_1-4アルキルエステルから選択される）であり；
Ｒ⁶及びＲ⁹は、独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ₂、ＮＨＲ、ＭＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから選択される；
Ｒ及びＲ’は、独立して、置換されていてもよいＣ_1-12アルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクリル及びＣ_5-20アリール基から選択される；
Ｒ⁷は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ₂、ＮＨＲ、ＮＨＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから選択され；
次のいずれか：
（ａ）Ｒ¹⁰はＨであり、そしてＲ¹¹はＯＨ、ＯＲＡ（ここでＲＡはＣ１〜４アルキルである）であり；
（ｂ）Ｒ¹⁰及びＲ¹¹は、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に窒素−炭素二重結合を形成し；又は
（ｃ）Ｒ¹⁰はＨであり、Ｒ¹¹はＳＯｚＭ（ここで、ｚは２又は３であり、Ｍは一価の薬学的に許容される陽イオンである）であり；
Ｒ”は、鎖が１個以上のヘテロ原子、例えば、Ｏ、Ｓによって中断されていてもよいＣ３〜１２アルキレン基、ＮＲ^N2（ここで、Ｒ^N2はＨ又はＣ_1-4アルキルである）、及び／又は芳香環、例えばベンゼン又はピリジンである；
Ｙ及びＹ’は、Ｏ、Ｓ又はＮＨから選択され；
Ｒ^6’、Ｒ^7’、Ｒ^9’は、それぞれＲ⁶、Ｒ⁷及びＲ⁹と同じ基から選択され、Ｒ^10’及びＲ^11’は、Ｒ¹⁰及びＲ¹¹と同じであり、ここで、Ｒ¹¹及びＲ^11’がＳＯ_zＭである場合には、Ｍは薬学的に許容できる２価の陽イオンであることができる。

【0012】

本発明の第二の態様は、増殖性疾患を治療するための医薬の製造における、本発明の第一の態様の化合物の使用を提供する。また、第二の態様は、増殖性疾患の治療に使用するための本発明の第一の態様の化合物も提供する。

【0013】

当業者であれば、候補結合体が任意の特定の細胞型のための増殖状態を処置するかどうかを容易に決定することができる。例えば、特定の化合物により与えられる活性を評価するために好都合に使用できるアッセイを以下の実施例に記載している。

【0014】

本発明の第三の態様は、次式ＩＩの化合物を含む：

【化11】

式中：
Ｒ²は、式ＩＩのものであり：

【化12】

、ここで、Ｑは、ＯＨ、ＳＨ及びＮＲ^Nから選択され、Ｒ^Nは、Ｈ、メチル及びエチルから選択され；
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在する場合には、Ｒ¹²は次のものから選択される：
（ｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、Ｃ_1-7アルキル、Ｃ_3-7ヘテロシクリル及びビスオキシＣ_1-3アルキレンよりなる群から選択される１個以上の置換基により置換されていてよいＣ_5-10アリール基；
（ｉｂ）Ｃ_1-5飽和脂肪族アルキル；
（ｉｃ）Ｃ_3-6飽和シクロアルキル；
（ｉｄ）

【化13】

（ここで、Ｒ²¹、Ｒ²²及びＲ²³の各々は、独立して、Ｈ、Ｃ_1-3飽和アルキル、Ｃ_2-3アルケニル、Ｃ_2-3アルキニル及びシクロプロピルから選択され、ここで、Ｒ¹²基における炭素原子の総数は５以下である）；
（ｉｅ）

【化14】

（ここで、Ｒ^25a及びＲ^25Bの一方はＨであり、他方はフェニル（該フェニルは、ハロ、メチル、メトキシで置換されていてよい）、ピリジル及びチオフェニルから選択される）；
（ｉｆ）

【化15】

（ここで、Ｒ²⁴は、Ｈ、Ｃ_1-3飽和アルキル、Ｃ_2-3アルケニル、Ｃ_2-3アルキニル、シクロプロピル、フェニル（このフェニルは、ハロ、メチル、メトキシから選択される基により置換されていてよい）、ピリジル及びチオフェニルから選択される）；
Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在する場合には、
Ｒ¹²は、

【化16】

であり、ここで、Ｒ^26a及びＲ^26bは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃ_1-4飽和アルキル、Ｃ_2-3アルケニルから選択され、このアルキル及びアルケニル基は、Ｃ_1-4アルキルアミド及びＣ_1-4アルキルエステルから選択される基で置換されていてよく、又はＲ^26a及びＲ^26bの一方がＨである場合、他方はニトリル及びＣ_1-4アルキルエステルから選択される；
Ｒ⁶及びＲ⁹は、独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ₂、ＮＨＲ、ＭＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから選択され；
Ｒ及びＲ’は、独立して、置換されていてもよいＣ_1-12アルキル、Ｃ_3-20ヘテロシクリル及びＣ_5-20アリール基から選択される；
Ｒ⁷は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ₂、ＮＨＲ、ＮＨＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから選択され；
次のいずれか：
（ａ）Ｒ⁷は、Ｒ¹⁰は、カルバメート窒素保護基であり、Ｒ¹¹はＯ−Ｐｒｏｔ^Oであり（Ｐｒｏｔ^Oは酸素保護基である）；
（ｂ）Ｒ¹⁰はヘミアミナール窒素保護基であり、Ｒ¹¹はオキソ基である；
Ｒ”は、鎖が１個以上のヘテロ原子、例えば、Ｏ、Ｓによって中断されていてもよいＣ_3-12アルキレン基、ＮＲ^N2（ここで、Ｒ^N2はＨ又はＣ_1-4アルキルである）、及び／又は芳香環、例えばベンゼン又はピリジンである；
Ｙ及びＹ’は、Ｏ、Ｓ又はＮＨから選択され；
Ｒ^6’、Ｒ^7’、Ｒ^9’は、それぞれＲ⁶、Ｒ⁷及びＲ⁹と同じ基から選択され、Ｒ^10’及びＲ^11’は、Ｒ¹⁰及びＲ¹¹と同じである。

【0015】

本発明の第四の態様は、イミン結合の脱保護により、式ＩＩの化合物から式Ｉの化合物を製造する方法を含む。

【0016】

本発明の非対称二量体ＰＢＤ化合物は、対称二量体ＰＢＤ化合物の製造に従来使用されていたのとは異なる戦略によって作製される。特に、本発明者は、個別の方法の工程において対称ＰＢＤ二量体コアに各Ｃ２置換基を付加させることを伴う方法を開発した。したがって、本発明の第五の態様は、以下に記載の方法の工程の少なくとも一つを含む、本発明の第一又は第三の態様の化合物を製造する方法を提供する。

【0017】

第六の態様では、本発明は、標的化剤に結合したＰＢＤ二量体を含む結合体に関し、ここで、該ＰＢＤは、式Ｉ（前出）の二量体である。

【0018】

いくつかの実施形態では、結合体は、次式ＩＩＩを有する：
Ｌ −（ＬＵ−Ｄ）_p （ＩＩＩ）
式中：Ｌはリガンド単位（すなわち、標的化剤）であり、ＬＵはリンカー単位であり、ＤはＰＢＤ二量体（以下参照）である薬剤単位である。下付文字ｐは、１〜２０の整数である。したがって、結合体は、リンカー単位によって少なくとも１個の薬剤単位に共有結合したリガンド単位を含む。以下でより詳細に説明するリガンド単位は、標的部分に結合する標的化剤である。リガンド単位は、例えば、細胞成分（細胞結合剤）又は関心のある他の標的分子に特異的に結合できる。したがって、本発明は、例えば種々の癌及び自己免疫疾患の治療方法も提供する。これらの方法は、リガンド単位が、標的分子に特異的に結合する標的化剤である結合体を使用することを含む。リガンド単位は、例えば、抗体、抗体の抗原結合断片又はＦｃ融合タンパク質といった他の結合剤などのタンパク質、ポリペプチド又はペプチドであることができる。

【0019】

ＰＢＤ二量体Ｄは、式Ｉのものであるが、ただし、ＱはＯ、Ｓ、ＮＲ^Nよりなる群から選択され、ここで、Ｒ^Nは、Ｈ及びＣ_1-2アルキルからなる群から選択される。

【発明を実施するための形態】

【0020】

定義
薬学的に許容できる陽イオン
薬学的に許容できる一価及び二価陽イオンの例は、Ｂｅｒｇｅ外，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６，１−１９（１９７７）で議論されている。この文献を参照により本明細書に含める。

【0021】

薬学的に許容できる陽イオンは、無機又は有機であることができる。

【0022】

薬学的に許容できる一価の無機陽イオンの例としては、Ｎａ⁺及びＫ⁺などのアルカリ金属イオンが挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に許容できる二価の無機陽イオンの例としては、Ｃａ²⁺及びＭｇ²⁺などのアルカリ土類陽イオンが挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に許容できる有機陽イオンの例としては、アンモニウムイオン（すなわちＮＨ₄⁺）及び置換アンモニウムイオン（例えばＮＨ₃Ｒ⁺、ＮＨ₂Ｒ₂⁺、ＮＨＲ₃⁺、ＮＲ₄⁺）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの好適な置換アンモニウムイオンの例は、次のものから誘導されるものである：エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン及びトロメタミン、並びにリジン及びアルギニンなどのアミノ酸。一般的な第四級アンモニウムイオンの例はＮ（ＣＨ₃）₄⁺である。

【0023】

置換基
本明細書で使用するときに、「置換されていてよい」という語句は、非置換であってもよく又は置換されていてもよい親基に関連する。

【0024】

特に断らない限り、本発明で使用する「置換された」という用語は、１個以上の置換基を有する親基に関する。用語「置換基」は、ここでは従来の意味で使用され、共有結合している化学的部分又は適切な場合には、親基に融合された化学的部分を意味する。多種多様な置換基がよく知られており、様々な親基へのそれらの形成及び導入方法もよく知られている。

【0025】

置換基の例を以下で詳しく説明する。

【0026】

Ｃ_1-12アルキル：本明細書で使用される用語「Ｃ_1-12アルキル」とは、脂肪族又は脂環式であってよくかつ飽和又は不飽和であってもよい（例えば、部分的に不飽和、完全に不飽和）、１〜１２個の炭素原子を有する炭化水素化合物の炭素原子から水素原子を除去することにより得られる一価部分をいう。したがって、用語「アルキル」には、以下に説明するサブクラスのアルケニル、アルキニル、シクロアルキルなどが含まれる。

【0027】

飽和アルキル基の例としては、メチル（Ｃ₁）、エチル（Ｃ₂）、プロピル（Ｃ₃）、ブチル（Ｃ₄）、ペンチル（Ｃ₅）、ヘキシル（Ｃ₆）及びヘプチル（Ｃ₇）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0028】

飽和直鎖アルキル基の例としては、メチル（Ｃ₁）、エチル（Ｃ₂）、ｎ−プロピル（Ｃ₃）、ｎ−ブチル（Ｃ₄）、ｎ−ペンチル（アミル）（Ｃ₅）、ｎ−ヘキシル（Ｃ₆）及びｎ−ヘプチル（Ｃ₇）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0029】

飽和分枝鎖アルキル基の例としては、イソプロピル（Ｃ₃）、イソブチル（Ｃ₄）、ｓ−ブチル（Ｃ₄）、ｔ−ブチル（Ｃ₄）、イソ − ペンチル（Ｃ₅）、及びネオペンチル（Ｃ₅）が挙げられる。

【0030】

本明細書で使用する用語「Ｃ_2-12アルケニル」とは、１個以上の炭素−炭素二重結合を有するアルキル基を意味する。

【0031】

不飽和アルケニル基の例としては、エチニル（ビニル、−ＣＨ＝ＣＨ₂）、１−プロペニル（−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₃）、２−プロペニル（アリル、−ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ₂）、イソプロペニル（１−メチルビニル、−Ｃ（ＣＨ₃）＝ＣＨ₂）、ブテニル（Ｃ₄）、ペンテニル（Ｃ₅）及びヘキセニル（Ｃ₆）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0032】

Ｃ_2-12アルキニル：本明細書で使用する用語「Ｃ_2-12アルキニル」は、１個以上の炭素−炭素三重結合を有するアルキル基を意味する。

【0033】

不飽和アルキニル基の例としては、エチニル（−Ｃ≡ＣＨ）及び２−プロピニル（プロパルギル、−ＣＨ₂−Ｃ≡ＣＨ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0034】

Ｃ_3-12シクロアルキル：ここで使用するときに、用語「Ｃ_3-12シクロアルキル」とは、シクリル基でもあるアルキル基をいう；すなわち、環状炭化水素（炭素環式）化合物の脂環式環原子から水素原子を除去することによって得られる一価の部分であって、該部分が３〜７個の環原子を含めて３〜７個の炭素原子を有するものである。

【0035】

シクロアルキル基の例としては、次のものから誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない：
飽和単環式炭化水素化合物：
シクロプロパン（Ｃ₃）、シクロブタン（Ｃ₄）、シクロペンタン（Ｃ₅）、シクロヘキサン（Ｃ₆）、シクロヘプタン（Ｃ₇）、メチルシクロプロパン（Ｃ₄）、ジメチルシクロプロパン（Ｃ₅）、メチルシクロブタン（Ｃ₅）、ジメチルシクロブタン（Ｃ₆）、メチルシクロペンタン（Ｃ₆）ジメチルシクロペンタン（Ｃ₇）、メチルシクロヘキサン（Ｃ₇）；
不飽和単環式炭化水素化合物：
シクロプロペン（Ｃ₃）、シクロブテン（Ｃ₄）、シクロペンテン（Ｃ₅）、シクロヘキセン（Ｃ₆）、メチルシクロプロペン（Ｃ₄）、ジメチルシクロプロペン（Ｃ₅）、メチルシクロブテン（Ｃ₅）、ジメチルシクロブテン（Ｃ₆）、メチルシクロペンテン（Ｃ₆）、ジメチルシクロペンテン（Ｃ₇）及びメチルシクロヘキセン（Ｃ₇）；及び
飽和多環式炭化水素化合物：
ノルカラン（Ｃ₇）、ノルピナン（Ｃ₇）、ノルボルナン（Ｃ₇）。

【0036】

Ｃ_3-20ヘテロシクリル：本明細書で使用するときに、用語「Ｃ_3-20ヘテロシクリル」とは、複素環式化合物の環原子から水素原子を除去することにより得られる一価部分であって、その部分が３〜２０個の環原子を有し、そのうち１〜１０個が環ヘテロ原子であるものをいう。好ましくは、各環は３〜７個の環原子を有し、そのうちの１〜４個は環ヘテロ原子である。

【0037】

本明細書において、接頭辞（例えばＣ_3-20、Ｃ_3-7、Ｃ_5-6など）は、炭素原子かヘテロ原子かどうかを問わず、環原子の数又は環原子の数の範囲を示す。例えば、本明細書で使用する用語「Ｃ_5-6ヘテロシクリル」とは、５又は６個の環原子を有するヘテロシクリル基をいう。

【0038】

単環式ヘテロシクリル基の例としては、次のものから誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない：
Ｎ₁：アジリジン（Ｃ₃）、アゼチジン（Ｃ₄）、ピロリジン（テトラヒドロピロール）（Ｃ₅）、ピロリン（例えば、３−ピロリン、２，５−ジヒドロピロール）（Ｃ₅）、２Ｈ−ピロール又は３Ｈ−ピロール（イソピロール、イソアゾール）（Ｃ₅）、ピペリジン（Ｃ₆）、ジヒドロピリジン（Ｃ₆）、テトラヒドロピリジン（Ｃ₆）、アゼピン（Ｃ₇）；
Ｏ₁：オキシラン（Ｃ₃）、オキセタン（Ｃ₄）、オキソラン（テトラヒドロフラン）（Ｃ₅）、オキソール（ジヒドロフラン）（Ｃ₅）、オキサン（テトラヒドロピラン）（Ｃ₆）、ジヒドロピラン（Ｃ₆）、ピラン（Ｃ₆）、オキセピン（Ｃ₇）；
S₁：チイラン（Ｃ₃）、チエタン（Ｃ₄）、チオラン（テトラヒドロチオフェン）（Ｃ₅）、チアン（テトラヒドロチオピラン）（Ｃ₆）、チエパン（Ｃ₇）；
Ｏ₂：ジオキソラン（Ｃ₅）、ジオキサン（Ｃ₆）、及びジオキセパン（Ｃ₇）；
Ｏ₃：トリオキサン（Ｃ₆）；
Ｎ₂：イミダゾリジン（Ｃ₅）、ピラゾリジン（ジアゾリジン）（Ｃ₅）、イミダゾリン（Ｃ₅）、ピラゾリン（ジヒドロピラゾール）（Ｃ₅）、ピペラジン（Ｃ₆）；
Ｎ₁Ｏ₁：ヒドロオキサゾール（Ｃ₅）、ジヒドロオキサゾール（Ｃ₅）、テトラヒドロイソオキサゾール（Ｃ₅）、ジヒドロイソオキサゾール（Ｃ₅）、モルホリン（Ｃ₆）、テトラヒドロオキサジン（Ｃ₆）、ジヒドロオキサジン（Ｃ₆）、オキサジン（Ｃ₆）；
Ｎ₁Ｓ₁：チアゾリン（Ｃ₅）、チアゾリジン（Ｃ₅）、チオモルホリン（Ｃ₆）；
Ｎ₂Ｏ₁：オキサジアジン（Ｃ₆）；
Ｏ₁Ｓ₁：オキサチオール（Ｃ₅）及びオキサチアン（チオキサン）（Ｃ₆）；並びに
Ｎ₁Ｏ₁Ｓ₁：オキサチアジン（Ｃ₆）。

【0039】

置換単環式ヘテロシクリル基の例としては、環状の形態の糖類から誘導されるもの、例えば、アラビノフラノース、リキソフラノース、リボフラノース及びキシロフラノースなどのフラノース（Ｃ₅）並びにアロピラノース、アルトロピラノース、グルコピラノース、マンノピラノース、ガラクトピラノース、イドピラノース、ガラクトピラノース及びタロピラノースなどのピラノース（Ｃ₆）が挙げられる。

【0040】

Ｃ_5-20アリール：本明細書で使用するときに、用語「Ｃ_5-20アリール」とは、芳香族化合物の芳香環原子から水素原子を除去することにより得られる一価部分であって、その部分が３〜２０個の環原子を有するものを意味する。好ましくは、各環は５〜７個の環原子を有する。

【0041】

本明細書において、接頭辞（例えばＣ_3-20、Ｃ_5-7、Ｃ_5-6など）は、炭素原子又はヘテロ原子かどうかを問わず、環原子の数又は環原子の数の範囲を示す。例えば、本明細書で使用する用語「Ｃ_5-6アリール」とは、５又は６個の環原子を有するアリール基をいう。

【0042】

環原子は、「カルボアリール基」のように、全て炭素原子である。
カルボアリール基の例としては、ベンゼン（すなわちフェニル）（Ｃ₆）、ナフタレン（Ｃ₁₀）、アズレン（Ｃ₁₀）、アントラセン（Ｃ₁₄）、フェナントレン（Ｃ₁₄）、ナフタセン（Ｃ₁₈）及びピレン（Ｃ₁₆）から誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない。

【0043】

複数の縮合環であってそのうちの少なくとも一つが芳香環であるものを有するアリール基の例としては、次のものから誘導される基が挙げられるが、これらに限定されない：インダン（例：２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン）（Ｃ₉）、インデン（Ｃ₉）、イソインデン（Ｃ₉）、テトラリン（１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン（Ｃ₁₀）、アセナフテン（Ｃ₁₂）、フルオレン（Ｃ₁₃）、フェナレン（Ｃ₁₃）、アセフェナントレン（Ｃ₁₅）及びアセアントレン（Ｃ₁₆）。

【0044】

あるいは、環原子は、「ヘテロアリール基」のように、1個以上のヘテロ原子を含むことができる。単環式ヘテロアリール基の例としては、次のものから誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない：
Ｎ₁：ピロール（アゾール）（Ｃ₅）、ピリジン（アジン）（Ｃ₆）；
Ｏ₁：フラン（オキソール）（Ｃ₅）；
Ｓ₁：チオフェン（チオール）（Ｃ₅）；
Ｎ₁Ｏ₁：オキサゾール（Ｃ₅）、イソオキサゾール（Ｃ₅）、イソオキサジン（Ｃ₆）；
Ｎ₂Ｏ₁：オキサジアゾール（フラザン）（Ｃ₅）；
Ｎ₃Ｏ₁：オキサトリアゾール（Ｃ₅）；
Ｎ₁Ｓ₁：チアゾール（Ｃ₅）、イソチアゾール（Ｃ₅）；
Ｎ₂：イミダゾール（１，３−ジアゾール）（Ｃ₅）、ピラゾール（１，２−ジアゾール）（Ｃ₅）、ピリダジン（１，２−ジアジン）（Ｃ₆）、ピリミジン（１，３−ジアジン）（Ｃ₆）（例えば、シトシン、チミン、ウラシル）、ピラジン（１，４−ジアジン）（Ｃ₆）；
Ｎ₃：トリアゾール（Ｃ₅）、トリアジン（Ｃ₆）；及び
Ｎ₄：テトラゾール（Ｃ₅）。

【0045】

縮合環を含むヘテロアリールの例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：
次のものから誘導されるＣ₉（２個の縮合環を有する）：ベンゾフラン（Ｏ₁）、イソベンゾフラン（Ｏ₁）、インドール（Ｎ₁）、イソインドール（Ｎ₁）、インドリジン（Ｎ₁）、インドリン（Ｎ₁）、イソインドリン（Ｎ₁）、プリン（Ｎ₄）（例えば、アデニン、グアニン）ベンズイミダゾール（Ｎ₂）、インダゾール（Ｎ₂）、ベンゾオキサゾール（Ｎ₁Ｏ₁）、ベンズイソオキサゾール（Ｎ₁Ｏ₁）、ベンゾジオキソール（Ｏ₂）、ベンゾフラザン（Ｎ₂Ｏ₁）、ベンゾトリアゾール（Ｎ₃）、ベンゾチオフラン（Ｓ₁）、ベンゾチアゾール（Ｎ₁Ｓ₁）、ベンゾチアジアゾール（Ｎ₂Ｓ）；
次のものから誘導されるＣ₁₀（２個の縮合環を有する）：クロメン（Ｏ₁）、イソクロメン（Ｏ₁）、クロマン（Ｏ₁）、イソクロマン（Ｏ₁）、ベンゾジオキサン（Ｏ₂）、キノリン（Ｎ₁）、イソキノリン（Ｎ₁）、キノリジン（Ｎ₁）、ベンゾオキサジン（Ｎ₁Ｏ₁）、ベンゾジアジン（Ｎ₂）、ピリドピリジン（Ｎ₂）、キノキサリン（Ｎ₂）、キナゾリン（Ｎ₂）、シンノリン（Ｎ₂）、フタラジン（Ｎ₂）、ナフチリジン（Ｎ₂）、プテリジン（Ｎ₄）；
ベンゾジアゼピン（Ｎ₂）から誘導されるＣ₁₁（２個の縮合環を有する）；
カルバゾール（Ｎ₁）、ジベンゾフラン（Ｏ₁）、ジベンゾチオフェン（Ｓ₁）、カルボリン（Ｎ₂）、ペリミジン（Ｎ₂）、ピリドインドール（Ｎ₂）から誘導されるＣ₁₃（３個の縮合環を有する）；及び
次のものから誘導されるＣ₁₄（３個の縮合環を有する）：アクリジン（Ｎ₁）、キサンテン（Ｏ₁）、チオキサンテン（Ｓ₁）、オキサントレン（Ｏ₂）、フェノキサチイン（Ｏ₁Ｓ₁）、フェナジン（Ｎ₂）、フェノキサジン（Ｎ₁Ｏ₁）、フェノチアジン（Ｎ₁Ｓ₁）、チアントレン（Ｓ₂）、フェナントリジン（Ｎ₁）フェナントロリン（Ｎ₂）、フェナジン（Ｎ₂）。

【0046】

上記の基は、単独か別の置換基の一部かどうかを問わず、それら自体がそれら自体及び以下に示す追加の置換基から選択される1個以上の基で随意に置換されていてもよい。

【0047】

ハロ：−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ及び−Ｉ。

【0048】

ヒドロキシ：−ＯＨ。

【0049】

エーテル：−ＯＲ、ここで、Ｒは、エーテル置換基、例えば、Ｃ_1-7アルキル基（以下に述べるＣ_1-7アルコキシ基ともいう）、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基（Ｃ_3-20ヘテロシクリルオキシ基ともいう）又はＣ_5-20アリール基（Ｃ_5-20アリールオキシ基ともいう）であり、好ましくはＣ_1-7アルキル基である。

【0050】

アルコキシ：−ＯＲ、ここで、Ｒは、アルキル基、例えばＣ１〜７アルキル基である。Ｃ１〜７アルコキシ基の例としては、−ＯＭｅ（メトキシ）、−ＯＥｔ（エトキシ）、−Ｏ（ＮＰＲ）（ｎ−プロポキシ）、−Ｏ（ｉＰｒ）（イソプロポキシ）、−Ｏ（ｎＢｕ）（ｎ−ブトキシ）、−Ｏ（ｓＢｕ）（ｓ−ブトキシ）、−Ｏ（ｉＢｕ）（イソブトキシ）及び−Ｏ（ｔＢｕ）（ｔ−ブトキシ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0051】

アセタール：−ＣＨ（ＯＲ¹）（ＯＲ²）、式中：Ｒ¹及びＲ²は、独立して、アセタール置換基は、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＣ_1-7アルキル基であり、或いは、「環状」アセタール基の場合には、Ｒ¹及びＲ²は、それらが結合している２個の酸素原子及びそれらが結合している炭素原子と一緒になって、４〜８個の環原子を有する複素環を形成する。アセタール基の例としては、−ＣＨ（ＯＭｅ）₂、−ＣＨ（ＯＥｔ）₂及び−ＣＨ（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0052】

ヘミアセタール：−ＣＨ（ＯＨ）（ＯＲ¹）、式中：Ｒ¹は、ヘミアセタールの置換基、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＣ_1-7アルキル基である。ヘミアセタール基の例としては、−ＣＨ（ＯＨ）（ＯＭｅ）及び−ＣＨ（ＯＨ）（ＯＥｔ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0053】

ケタール：−ＣＲ（ＯＲ¹）（ＯＲ²）、ここで、Ｒ¹及びＲ²は、アセタールについて定義したとおりのものであり、Ｒは水素以外のケタールの置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＣ_1-7アルキル基である。ケタールとしては次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＭｅ）₂、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＥｔ）₂、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）、−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＭｅ）₂、−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＥｔ）₂及び−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）。

【0054】

ヘミケタール：−ＣＲ（ＯＨ）（ＯＲ¹）、ここで、Ｒ¹はヘミアセタールについて定義したとおりのものであり、Ｒは水素以外のヘミケタールの置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＣ_1-7アルキル基である。ヘミアセタール基の例としては、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＨ）（ＯＭｅ）、−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＨ）（ＯＭｅ）、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＨ）（ＯＥｔ）及び−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＨ）（ＯＥｔ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0055】

オキソ（ケト−オン）：＝Ｏ。

【0056】

チオン（チオケトン）：＝Ｓ。

【0057】

イミノ（イミン）：＝ＮＲ、ここで、Ｒはイミノ置換基、例えば、水素、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基又はＣ_5-20アリール基、好ましくは水素又はＣ_1-7アルキル基である。エステル基の例としては、＝ＮＨ、＝ＮＭｅ、＝ＮＥｔ及び＝ＮＰｈが挙げられるが、これらに限定されない。

【0058】

ホルミル（カルボアルデヒド、カルボキシアルデヒド）：−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ。

【0059】

アシル（ケト）：−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、式中：Ｒは、アシルの置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基（Ｃ_1-7アルキルアシル若しくはＣ_1-7アルカノイルともいう）、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基（Ｃ_3-20ヘテロシクリルともいう）又はＣ_5-20アリール基（Ｃ_5-20アリールアシルともいう）、好ましくは、Ｃ_1-7アルキル基である。アシル基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ₃（アセチル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ₂ＣＨ₃（プロピオニル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ₃）₃（ｔ−ブチリル）及び−Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈ（ベンゾイル、フェノン）。

【0060】

カルボキシ（カルボン酸）：−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ。

【0061】

チオカルボキシ（チオカルボン酸）：−Ｃ（＝Ｓ）ＳＨ。

【0062】

チオロカルボキシ（チオロカルボン酸）：−Ｃ（＝Ｏ）ＳＨ。

【0063】

チオノカルボキシ（チオノカルボン酸）：−Ｃ（＝Ｓ）ＯＨ。

【0064】

イミド酸：−Ｃ（＝ＮＨ）ＯＨ。

【0065】

ヒドロキサム酸：−Ｃ（＝ＮＯＨ）ＯＨ。

【0066】

エステル（カルボキシレート、カルボン酸エステル、オキシカルボニル）：−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ、ここで、Ｒはエステルの置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＣ_1-7アルキル基である。エステル基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ₃、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ₂ＣＨ₃、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ（ＣＨ₃）₃及び−Ｃ（＝Ｏ）ＯＰｈ。

【0067】

アシルオキシ（逆エステル）：−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ、ここで、Ｒはアシルオキシの置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＣ_1-7アルキル基である。アシルオキシ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ₃（アセトキシ）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ₃）₃、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｐｈ及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ₂Ｐｈ。

【0068】

オキシカルボイルオキシ：−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ、ここで、Ｒはエステルの置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＣ_1-7アルキル基である。エステル基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ₃、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ₂ＣＨ₃、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣ（ＣＨ₃）₃及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＰｈ。

【0069】

アミノ：−ＮＲ¹Ｒ²、ここで、Ｒ¹及びＲ²は独立してアミノ置換基であり、例えば、水素、Ｃ_1-7アルキル基（Ｃ_1-7アルキルアミノ若しくはジ−Ｃ_1-7アルキルアミノともいう）、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基、若しくはＣ_5-20アリール基、好ましくはＨ若しくはＣ_1-7アルキル基、又は、「環状」アミノ基の場合には、Ｒ¹とＲ²は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、４〜８個の環原子を有する複素環を形成する。アミノ基は、第一級（−ＮＨ₂）、第二級（−ＮＨＲ¹）又は第三級（−ＮＨＲ¹Ｒ²）であることができ、また、陽イオン形態では、第四級（−⁺ＮＲ¹Ｒ²Ｒ³）であることができる。アミノ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＮＨ₂、−ＮＨＣＨ₃、−ＮＨＣ（ＣＨ₃）₂、−Ｎ（ＣＨ₃）₂、−Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂及び−ＮＨＰｈ。環状アミノ基の例としては、アジリジノ、アゼチジノ、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノ、モルホリノ、及びチオモルホリノが挙げられるが、これらに限定されない。

【0070】

アミド（カルバモイル、カルバミル、アミノカルボニル、カルボキシアミド）：−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ¹Ｒ²、ここで、Ｒ¹及びＲ²は、独立して、アミノ基について定義したアミノ置換基である。アミノ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ₂、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ₃、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ₃）₂、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ₂ＣＨ₃及び−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂、並びにＲ¹及びＲ²が、それらが結合している窒素原子と一緒になって、例えば、ピペリジノカルボニル、モルホリノカルボニル、チオモルホリノカルボニル及びピペラジノカルボニルのような複素環構造を形成するアミド基。

【0071】

チオアミド（チオカルバミル）：−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ¹Ｒ²、ここで、Ｒ¹及びＲ²は、独立して、アミノ基について定義したアミノ置換基である。アミノ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ₂、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ₃、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（ＣＨ₃）₂及び−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ₂ＣＨ₃。

【0072】

アシルアミド（アシルアミノ）：−ＮＲ¹Ｃ（＝Ｏ）Ｒ²、式中、Ｒ¹はアミドの置換基であり、例えば、水素、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基、又はＣ_5-20アリール基、好ましくは水素又はＣ_1-7アルキル基であり、Ｒ²は、アシルの置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基又はＣ_5-20アリール基、好ましくは水素又はＣ_1-7アルキル基である。アシルアミド基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ₃、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ₂ＣＨ₃及び−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｐｈ。Ｒ¹及びＲ²は一緒になって、例えば、スクシンイミジル、マレイミジル、及びフタルイミジルのように環状構造を形成してもよい：

【化17】

【0073】

アミノカルボニル：−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ¹Ｒ²、ここで、Ｒ１及びＲ２は、独立して、アミノ基について定義したアミノ置換基である。アミノカルボニルオキシ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ₂、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨＭｅ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＭｅ₂及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＥｔ₂。

【0074】

ウレイド：−Ｎ（Ｒ¹）ＣＯＮＲ²Ｒ³、ここで、Ｒ²及びＲ³は、独立に、アミノ基について定義したとおりのアミノの置換基であり、Ｒ¹は、ウレイドの置換基であり、例えば、水素、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基、又はＣ_5-20アリール基、好ましくは水素又はＣ_1-7アルキル基である。ウレイド基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＮＨＣＯＮＨ₂、−ＮＨＣＯＮＨＭｅ、−ＮＨＣＯＮＨＥｔ、−ＮＨＣＯＮＭｅ₂、−ＮＨＣＯＮＥｔ₂、−ＮＭｅＣＯＮＨ₂、−ＮＭｅＣＯＮＨＭｅ、−ＮＭｅＣＯＮＨＥｔ、−ＮＭｅＣＯＮＭｅ₂及び−ＮＭｅＣＯＮＥｔ₂。

【0075】

グアニジノ：−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ₂。

【0076】

テトラゾリル：４個の窒素原子及び１個の炭素原子を有する芳香族５員環

【化18】

【0077】

イミノ：＝ＮＲ、ここで、Ｒは、イミノの置換基であり、例えば水素、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基、又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＨ又はＣ_1-7アルキル基である。イミノ基の例としては、＝ＮＨ、＝ＮＭｅ及び＝ＮＥｔが挙げられるが、これらに限定されない。

【0078】

アミジン（アミジノ）：−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ₂、ここで、各Ｒはアミジンの置換基であり、例えば、水素、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基、又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＨ又はＣ_1-7アルキル基である。アミジン基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ₂、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＭｅ₂及び−Ｃ（＝ＮＭｅ）ＮＭｅ₂。

【0079】

ニトロ：−ＮＯ₂。

【0080】

ニトロソ：−ＮＯ。

【0081】

アジド：−Ｎ₃。

【0082】

シアノ（ニトリル、ニトリル）：−ＣＮ。

【0083】

イソシアノ：−ＮＣ。

【0084】

シアナト：−ＯＣＮ。

【0085】

イソシアナト：−ＮＣＯ。

【0086】

チオシアノ（チオシアナト）：−ＳＣＮ。

【0087】

イソチオシアノ（イソチオシアナト）：−ＮＣＳ。

【0088】

スルフヒドリル（チオール、メルカプト）：−ＳＨ。

【0089】

チオエーテル（スルフィド）：−ＳＲ、ここで、Ｒはチオエーテルの置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基（Ｃ_1-7アルキルチオ基ともいう）、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基、又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＣ_1-7アルキル基である。Ｃ_1-7アルキルチオ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＳＣＨ₃及び−ＳＣＨ₂ＣＨ₃。

【0090】

ジスルフィド：−ＳＳ−Ｒ、ここで、Ｒは、ジスルフィドの置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基、又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＣ_1-7アルキル基（ここでは、Ｃ_1-7アルキルジスルフィドともいう）である。Ｃ_1-7アルキルジスルフィド基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＳＳＣＨ₃及び−ＳＳＣＨ₂ＣＨ₃。

【0091】

スルフィン（スルフィニル、スルホキシド）：−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、ここで、Ｒは、スルフィンの置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＣ_1-7アルキル基である。スルフィン置換基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ₃及び−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ₂ＣＨ₃。

【0092】

スルホン（スルホニル）：−Ｓ（＝Ｏ）₂Ｒ、ここで、Ｒは、スルホンの置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基、又はＣ_5-20アリール基、好ましくは、フッ素化又は過フッ素化Ｃ_1-7アルキル基を含めてＣ_1-7アルキル基である。スルホン基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｓ（＝Ｏ）₂ＣＨ₃（メタンスルホニル、メシル）、−Ｓ（＝Ｏ）₂ＣＦ₃（トリフリル）、−Ｓ（＝Ｏ）₂ＣＨ₂ＣＨ₃（エシル）、−Ｓ（＝Ｏ）₂Ｃ₄Ｆ₉（ノナフリル）、−Ｓ（＝Ｏ）₂ＣＨ₂ＣＦ₃（トレシル）、−Ｓ（＝Ｏ）₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ₂（タウリル）、−Ｓ（＝Ｏ）₂Ｐｈ（フェニルスルホニル、ベシル）、４−メチルフェニルスルホニル（トシル）、４−クロロフェニルスルホニル（クロシル）、４−ブロモフェニル（ブロシル）、４−ニトロフェニル（ノシル）、２−ナフタレン（ナプシル）及び５−ジメチルアミノナフタレン−１−イルスルホネート（ダンシル）。

【0093】

スルフィン酸（スルフィノ）：−Ｓ（＝Ｏ）ＯＨ、−ＳＯ₂Ｈ。

【0094】

スルホン酸（スルホ）：−Ｓ（＝Ｏ）₂ＯＨ、−ＳＯ₃Ｈ。

【0095】

スルフィネート（スルフィン酸エステル）：−Ｓ（＝Ｏ）ＯＲ；ここで、Ｒは、スルフィネートの置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＣ_1-7アルキル基である。スルフィネート基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｓ（＝Ｏ）ＯＣＨ₃（メトキシスルフィニル；スルフィン酸メチル）及び−Ｓ（＝Ｏ）ＯＣＨ₂ＣＨ₃（エトキシスルフィニル、スルフィン酸エチル）。

【0096】

スルホネート（スルホン酸エステル）：−Ｓ（＝Ｏ）₂ＯＲ、ここで、Ｒは、スルホネート置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＣ_1-7アルキル基である。スルホネート基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｓ（＝Ｏ）₂ＯＣＨ₃（メトキシスルホニル；スルホン酸メチル）及び−Ｓ（＝Ｏ）₂ＯＣＨ₂ＣＨ₃（エトキシスルホニル；スルホン酸エチル）。

【0097】

スルフィニルオキシ：−ＯＳ（＝Ｏ）Ｒ、ここで、Ｒは、スルフィニルオキシ置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＣ_1-7アルキル基である。スルフィニル基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＳ（＝Ｏ）ＣＨ₃及び−ＯＳ（＝Ｏ）ＣＨ₂ＣＨ₃。

【0098】

スルホニルオキシ：−ＯＳ（＝Ｏ）₂Ｒ、ここで、Ｒは、スルホニルオキシの置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＣ_1-7アルキル基である。スルホニルオキシ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＳ（＝Ｏ）₂ＣＨ₃（メシレート）及び−ＯＳ（＝Ｏ）₂ＣＨ₂ＣＨ₃（エシレート）。

【0099】

スルフェート：−ＯＳ（＝Ｏ）₂ＯＲ；ここで、Ｒは、スルフェートの置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＣ_1-7アルキル基である。スルフェート基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＳ（＝Ｏ）₂ＯＣＨ₃及び−ＳＯ（＝Ｏ）₂ＯＣＨ₂ＣＨ₃。

【0100】

スルファミル（スルファモイル；スルフィン酸アミド、スルフィンアミド）：−Ｓ（＝Ｏ）ＮＲ¹Ｒ²、ここで、Ｒ¹及びＲ²は、独立して、アミノ基について定義したアミノ置換基である。スルファミル基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ₂、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ₃）、−Ｓ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ₃）₂、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ₂ＣＨ₃）、−Ｓ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂及び−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨＰｈ。

【0101】

スルホンアミド（スルフィナモイル；スルホン酸アミド；スルホンアミド）：−Ｓ（＝Ｏ）₂ＮＲ¹Ｒ²、ここで、Ｒ¹及びＲ²は、独立して、アミノ基について定義したアミノ置換基である。スルホンアミド基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｓ（＝Ｏ）₂ＮＨ₂、−Ｓ（＝Ｏ）₂ＮＨ（ＣＨ₃）、−Ｓ（＝Ｏ）₂Ｎ（ＣＨ₃）₂、−Ｓ（＝Ｏ）₂ＮＨ（ＣＨ₂ＣＨ₃）、−Ｓ（＝Ｏ）₂Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂及び−Ｓ（＝Ｏ）₂ＮＨＰｈ。

【0102】

スルファミノ：−ＮＲ¹Ｓ（＝Ｏ）₂ＯＨ、ここで、Ｒ¹は、アミノ基について定義したとおりのアミノ置換基である。スルファミノ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＮＨＳ（＝Ｏ）₂ＯＨ及び−Ｎ（ＣＨ₃）Ｓ（＝Ｏ）₂ＯＨ。

【0103】

スルホンアミノ：−ＮＲ¹Ｓ（＝Ｏ）₂Ｒ、ここで、Ｒ¹は、アミノ基について定義したとおりのアミノ置換基であり、Ｒは、スルホンアミノ置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＣ_1-7アルキル基である。スルホンアミノ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＮＨＳ（＝Ｏ）₂ＣＨ₃及び−Ｎ（ＣＨ₃）Ｓ（＝Ｏ）₂Ｃ₆Ｈ₅。

【0104】

スルフィンアミノ：−ＮＲ¹Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、ここで、Ｒ¹は、アミノ基について定義したとおりのアミノ置換基であり、Ｒはスルフィンアミノ置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＣ_1-7アルキル基である。スルフィンアミノ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＮＨＳ（＝Ｏ）ＣＨ₃及び−Ｎ（ＣＨ₃）Ｓ（＝Ｏ）Ｃ₆Ｈ₅。

【0105】

ホスフィノ（ホスフィン）：−ＰＲ₂、ここで、Ｒは、ホスフィノ置換基であり、例えば、−Ｈ、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基、又はＣ_5-20アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ_1-7アルキル基又はＣ_5-20アリール基である。ホスフィノ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＰＨ₂、−Ｐ（ＣＨ₃）₂、−Ｐ（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂、−Ｐ（ｔ−Ｂｕ）₂及び−Ｐ（Ｐｈ）₂。

【0106】

ホスホ：−Ｐ（＝Ｏ）₂。

【0107】

ホスフィニル（ホスフィンオキシド）：−Ｐ（＝Ｏ）Ｒ₂、ここで、Ｒはホスフィニル置換基であり、例えば、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基、又はＣ_5-20アリール基、好ましくはＣ_1-7アルキル基又はＣ_5-20アリール基である。ホスフィニル基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｐ（＝Ｏ）（ＣＨ₃）₂、−Ｐ（＝Ｏ）（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂、−Ｐ（＝Ｏ）（ｔ−Ｂｕ）₂及び−Ｐ（＝Ｏ）（Ｐｈ）₂。

【0108】

ホスホン酸（ホスホノ）：−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）₂。

【0109】

ホスホネート（ホスホノエステル）：−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）₂Ｒは、ホスホネートの置換基であり、例えば、−Ｈ、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基、又はＣ_5-20アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ_1-7アルキル基又はＣ_5-20アリール基である。ホスホネート基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＣＨ₃）₂、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＣＨ₂ＣＨ₃）₂、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）₂及び−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＰｈ）₂。

【0110】

リン酸（ホスホノオキシ）：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）₂。

【0111】

ホスフェート（ホスホノオキシエステル）：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）₂Ｒは、ホスフェートの置換基であり、例えば、−Ｈ、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基、又はＣ_5-20アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ_1-7アルキル基又はＣ_5-20アリール基である。ホスフェート基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ₃）₂、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ₂ＣＨ₃）₂、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）₂及び−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＰｈ）₂。

【0112】

亜リン酸：−ＯＰ（ＯＨ）₂。

【0113】

ホスファイト：−ＯＰ（ＯＲ）₂Ｒは、ホスファイトの置換基であり、例えば、−Ｈ、Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基、又はＣ_5-20アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ_1-7アルキル基又はＣ_5-20アリール基である。ホスファイト基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＰ（ＯＣＨ₃）₂、−ＯＰ（ＯＣＨ₂ＣＨ₃）₂、−ＯＰ（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）₂及び−ＯＰ（ＯＰｈ）₂。

【0114】

ホスホラミダイト：−ＯＰ（ＯＲ¹）−ＮＲ²₂、Ｒ¹及びＲ²は、ホスホラミダイトの置換基であり、例えば、−Ｈ、（随意に置換された）Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基、又はＣ_5-20アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ_1-7アルキル基又はＣ_5-20アリール基である。ホスホラミダイト基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＰ（ＯＣＨ₂ＣＨ₃）−Ｎ（ＣＨ₃）₂、−ＯＰ（ＯＣＨ₂ＣＨ₃）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）₂及び−ＯＰ（ＯＣＨ₂ＣＨ₂ＣＮ）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）₂。

【0115】

ホスホラミデート：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ¹）−ＮＲ²₂、Ｒ¹及びＲ²は、ホスホラミデートの置換基であり、例えば、−Ｈ、（随意に置換された）Ｃ_1-7アルキル基、Ｃ_3-20ヘテロシクリル基、又はＣ_5-20アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ_1-7アルキル基又はＣ_5-20アリール基である。ホスホラミデート基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ₂ＣＨ₃）−Ｎ（ＣＨ₃）₂、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ₂ＣＨ₃）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）₂及び−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ₂ＣＨ₂ＣＮ）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）₂。

【0116】

アルキレン
Ｃ_3-12アルキレン：ここで使用するときに、用語「Ｃ_3-12アルキレン」とは、脂肪族又は脂環式であることができ、かつ、飽和、部分的に不飽和又は完全に不飽和であることができる３〜１２個の炭素原子を有する炭化水素化合物（特に断らない限り）の２個の水素原子（両方とも同じ炭素原子からのもの又は２個の異なる炭素原子のいずれかからのもの）を除去することにより得られる二座部分をいう。したがって、「アルキレン」という用語には、以下に説明するサブクラスのアルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレンなどが含まれる。

【0117】

直鎖飽和Ｃ_3-12アルキレン基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−（ＣＨ₂）_n−（ここで、ｎは３〜１２の整数である）、例えば、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂−（プロピレン）、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂−（ブチレン）、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂−（ペンチレン）及び−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂−（ヘプチレン）。

【0118】

分岐飽和Ｃ_3-12アルキレン基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂−、−ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₂−、−ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂−、−ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂−、−ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₂−、−ＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₃）−、−ＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₃）ＣＨ₂−及び−ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₃）ＣＨ₂−。

【0119】

直鎖部分不飽和Ｃ_3-12アルキレン基（Ｃ_3-12アルケニレン及びアルキニレン基）の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−、−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ₂−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−及び−ＣＨ₂−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ₂−。

【0120】

分岐部分不飽和Ｃ_3-12アルキレン基（Ｃ_3-12アルケニレン及びアルキニレン基）の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｃ（ＣＨ₃）＝ＣＨ−、−Ｃ（ＣＨ₃）＝ＣＨ−ＣＨ₂−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ（ＣＨ₃）−及び−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ（ＣＨ₃）−。

【0121】

脂環式飽和Ｃ_3-12アルキレン基（Ｃ₃〜Ｃ₁₂シクロアルキレン）の例としては、シクロペンチレン（例えば、１，３−シクロペンチレン）及びシクロヘキシレン（例えば１，４−シクロヘキシレン）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0122】

脂環式部分不飽和Ｃ_3-12アルキレン基（Ｃ_3-12シクロアルキレン）の例としては、シクロペンテニレン（例えば、４−シクロペンテン−１，３−イレン）、シクロヘキセニレン（例えば、２−シクロヘキセン−１，４−イレン；３−シクロヘキセン−１，２−イレン；２，５−シクロヘキサジエン−１，４−イレン）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0123】

酸素保護基：用語「酸素保護基」とは、ヒドロキシ基をマスクする部分をいい、これらは当該分野において周知である。多数の適切な基が、グリーン，ＴＷ及びウッツ，ＧＭ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社，１９９９年の２３〜２００頁に記載されている。これを参照により本明細書に含める。特に関心のある部類としては、シリルエーテル（例えば、ＴＭＳ、ＴＢＤＭＳ）、置換メチルエーテル（例えばＴＨＰ）及びエステル（例えば酢酸エステル）が挙げられる。

【0124】

カルバメート窒素保護基：用語「カルバメート窒素保護基」とは、イミン結合における窒素をマスクする部分をいい、これらは、当該分野において周知である。これらの基は、次の構造を有する：

【化19】

式中、Ｒ^’10は、上で定義したＲである。多数の好適な基が、グリーン，ＴＷ及びウッツ，ＧＭ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社，１９９９年の５０３〜５４９頁に記載されている。この文献を参照により本明細書に含める。

【0125】

ヘミアミナール窒素保護基：用語「ヘミアミナール窒素保護基」とは、以下の構造を有する基を意味する。

【化20】

式中：Ｒ^’10は、上で定義したＲである。アミド保護基として多数の好適な基がグリーン，ＴＷ及びウッツ，ＧＭ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社，１９９９年の６３〜６４７頁に記載されている。この文献を参照により本明細書に含める。

【0126】

結合体
本発明は、リンカー単位を介してリガンド単位に結合されたＰＢＤ二量体を含む結合体を提供する。一実施形態では、リンカー単位は、ストレッチャー単位（Ａ）、特異性単位（Ｌ¹）及びスペーサー単位（Ｌ²）を含む。リンカー単位は、一方の末端でリガンド単位に結合され、かつ、他方の末端でＰＢＤ二量体化合物に結合されている。

【0127】

一態様では、このような結合体は、次式ＩＩＩａで示される：
Ｌ−（Ａ¹_a−Ｌ¹_s−Ｌ²_y−Ｄ）_p(IIIa)
式中：
Ｌはリガンド単位であり；及び
−Ａ¹_a−Ｌ¹_s−Ｌ²_y−は、リンカー単位（ＬＵ）であり、式中：
−Ａ¹−は、ストレッチャー単位であり、
ａは１又は２であり、
−Ｌ¹−は、特異性単位であり、
ｓは１〜１２の範囲の整数であり、
−Ｌ²−はスペーサー単位であり、
ｙは０、１又は２であり；
−ＤはＯＢＤ二量体であり；及び
ｐは１〜２０である。

【0128】

別の態様では、このような結合体を次式ＩＩＩｂで示す：

【化21】

【0129】

また、次のとおり例示される：
Ｌ−（Ａ¹_a−Ｌ²_y（−Ｌ¹_s）−Ｄ）_p (Ib)
式中：
Ｌはリガンド単位であり；及び
−Ａ¹_a−Ｌ¹_s（Ｌ²_y）はリンカー単位（ＬＵ）であり、式中：
−Ａ¹−は、ストレッチャー単位（Ｌ２）に結合したストレッチャー単位であり、
ａは１又は２であり、
−Ｌ¹−は、ストレッチャー単位（Ｌ２）に結合した特異性単位であり、
ｓは０〜１２の範囲の整数であり、
−Ｌ²−はスペーサー単位であり、
ｙは０、１又は２であり；
−ＤはＯＢＤ二量体であり；及び
ｐは１〜２０である。

【0130】

優先
次の優先は、上記本発明の全ての態様に適用される場合もあり又は単一の態様に関連する場合もある。これらの優先事項を任意の組み合わせで互いに組み合わせることができる。

【0131】

一実施形態では、結合体は、次式を有する：
Ｌ−（Ａ¹_a−Ｌ¹_s−Ｌ²_y−Ｄ）_p
式中：Ｌ、Ａ¹、ａ、Ｌ¹_、ｓ、Ｌ²、Ｄ及びｐは、上記のとおりである。

【0132】

一実施形態では、リガンド単位（Ｌ）は、標的細胞の表面上の標的分子に特異的に結合する細胞結合剤（ＣＢＡ）である。代表的な式を以下に示す：

【化22】

ここで、アスタリスクは、薬物単位（Ｄ）への結合点を示し、ＣＢＡは細胞結合剤であり、Ｌ¹は特異性単位であり、Ａ¹は、Ｌ¹を細胞結合剤に結合させるストレッチャー単位であり、Ｌ²は、共有結合、自壊性基であり又は−ＯＣ（＝Ｏ）−と一緒になって自壊性基を形成するスペーサー単位であり、Ｌ²は随意である。

【0133】

別の実施形態では、リガンド単位（Ｌ）は、標的細胞の表面上の標的分子に特異的に結合する細胞結合剤（ＣＢＡ）である。代表的な式を以下に示す：
ＣＢＡ−Ａ¹_a−Ｌ¹_s−Ｌ²_y−^*
ここで、アスタリスクは、薬物単位（Ｄ）への結合点を示し、ＣＢＡは細胞結合剤であり、Ｌ¹は特異性単位であり、Ａ¹は、Ｌ¹を細胞結合剤に結合させるストレッチャー単位であり、Ｌ²は共有結合又は自壊性基であるスペーサー単位であり、ａは１又は２であり、ｓは０、１又は２であり、そして、ｙは０又は１又は２である。

【0134】

上で例示した実施形態では、Ｌ¹は、切断可能特異性単位とすることができ、自壊性基が存在する場合、切断されたときに自壊性基（又は複数の自己犠牲基）Ｌ²を活性化する「トリガー」と呼ぶことができる。特異性単位Ｌ¹が切断されると又はＬ¹とＬ²との間の結合（すなわち、共有結合）が切断されると、自壊性基は、薬物単位（Ｄ）を放出する。

【0135】

別の実施形態では、リガンド単位（Ｌ）は、標的細胞の表面上の標的分子に特異的に結合する細胞結合剤（ＣＢＡ）である。代表的な式を以下に示す。

【化23】

ここで、アスタリスクは薬剤（Ｄ）への結合点を示し、ＣＢＡは細胞結合剤であり、Ｌ¹は、Ｌ²に結合した特異性単位であり、Ａ¹は、細胞結合剤にＬ²を結合させるストレッチャー単位であり、Ｌ²は自壊性基であり、ａは１又は２であり、ｓは１又は２であり、そしてｙは１又は２である。

【0136】

本明細書で論じる様々な実施形態では、Ｌ¹及びＬ²の性質は、広範に変化し得る。これらの基は、結合体が送達される部位での状態によって部分的に必要とされ得るそれらの特性に基づいて選択される。特異性単位Ｌ１が切断可能である場合、Ｌ¹の構造及び／又は配列は、それが標的部位（例えば、標的細胞）に存在する酵素の作用によって切断されるように選択される。また、ｐＨ値（例えば、酸又は塩基に不安定）、温度の変化又は照射により（例えば、光解離性）切断可能なＬ¹単位を使用することもできる。また、還元又は酸化条件下で切断可能なＬ１単位も結合体で使用することもできる。

【0137】

いくつかの実施形態では、Ｌ¹は、１個のアミノ酸又は複数のアミノ酸の連続配列を含むことができる。アミノ酸配列は、酵素のための標的基質であることができる。

【0138】

一実施形態では、Ｌ¹は、酵素の作用によって切断可能である。一実施形態では、酵素は、エステラーゼ又はペプチダーゼである。例えば、Ｌ¹は、カテプシンなどのリソソームプロテアーゼにより切断できる。

【0139】

一実施形態では、Ｌ²が存在し、そして−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−と一緒になって自壊性基又は複数の自壊性基を形成する。いくつかの実施形態では、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−は自壊性基でもある。

【0140】

一実施形態では、Ｌ¹が酵素の作用によって切断可能であり、かつ、Ｌ²が存在する場合、酵素は、Ｌ¹とＬ²との間の結合を切断し、それによって自壊性基（単数又は複数）が薬物単位を放出する。

【0141】

Ｌ¹及びＬ²は、存在する場合には、次のものから選択される結合によって結合できる：
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ及び
−Ｏ−（グリコシド結合）。

【0142】

Ｌ²に結合するＬ¹のアミノ基は、アミノ酸のＮ−末端であることができ、又は、アミノ酸側鎖、例えば、リジンアミノ酸側鎖のアミノ基から誘導できる。

【0143】

Ｌ²に結合するＬ¹のカルボキシル基は、アミノ酸のＣ末端であることができ、又は、例えば、アミノ酸側鎖、グルタミン酸アミノ酸側鎖のカルボキシル基から誘導できる。

【0144】

Ｌ²に結合するＬ¹のヒドロキシ基は、アミノ酸側鎖、例えば、セリンアミノ酸側鎖のヒドロキシル基から誘導できる。

【0145】

一実施形態では、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−及びＬ²は、一緒になって次の基を形成する：

【化24】

ここで、ここで、アスタリスクは、薬物単位への結合点を示し、波線はＬ¹への結合点を示し、Ｙは−Ｎ（Ｈ）−、−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）−又は−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−であり、ｎは０〜３である。フェニレン環は、ここで記載される1、2又は3個の置換基で置換されていてよい。

【0146】

一実施形態では、ＹはＮＨである。
一実施形態では、ｎは０又は１であり、好ましくは、ｎは０である。

【0147】

ＹがＮＨであり、ｎが０である場合には、自壊性基をｐ−アミノベンジルカルボニルリンカー（ＰＡＢＣ）と呼ぶことができる。

【0148】

自壊性基は、リンカー内のリモート部位が活性化され、以下に示す線に沿って進む（ｎ＝０のため）ときに、薬物単位（すなわち、非対称ＰＢＤ）の放出を可能にする。

【化25】

ここで、アスタリスクは薬物への結合を示し、L^*は、リンカーの残りの部分の活性化形態であり、薬物放出単位は図示しない。これらの基は、薬物から活性化部位を分離するという利点を有する。

【0149】

別の実施形態では、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−及びＬ²は、一緒になって次のものから選択される基を形成する：

【化26】

ここで、アスタリスク、波線、Ｙ、及びｎは、上で定義したとおりのものである。各フェニレン環は、ここで記載した１個、２個又は３個の置換基で置換されていていよい。一実施形態では、Ｙ置換基を有するフェニレン環は、随意に置換されており、Ｙ置換基を有しないフェニレン環は置換されていない。

【0150】

別の実施形態では、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−及びＬ²は、一緒になって次のものから選択される基を形成する：

【化27】

ここで、アスタリスク、波線、Ｙ及びｎは上で定義したとおりであり、ＥはＯ、Ｓ又はＮＲであり、ＤはＮ、ＣＨ又はＣＲであり、ＦはＮ、ＣＨ又はＣＲである。

【0151】

一実施形態では、ＤはＮである。
一実施形態では、ＤはＣＨである。
一実施形態では、ＥはＯ又はＳである。
一実施形態では、ＦはＣＨである。

【0152】

好ましい実施形態では、Ｌ¹とＬ²との間の共有結合は、カテプシンの弱い（例えば、切断可能な）結合である。

【0153】

一実施形態では、Ｌ¹は、ジペプチドを含む。ジペプチド中のアミノ酸は、天然アミノ酸及び非天然アミノ酸の任意の組合せとすることができる。いくつかの実施形態では、ジペプチドは、天然アミノ酸を含む。リンカーがカテプシン不安定リンカーである場合には、ジペプチドは、カテプシン仲介切断のための作用部位である。この場合、ジペプチドは、カテプシンのための認識部位である。

【0154】

一実施形態では、ジペプチド−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯ−中の基−Ｘ₁−Ｘ₂−は、次のものから選択される：
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ａｌａ−、
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−，
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、
−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−、
−Ｌｅｕ−Ｃｉｔ−、
−Ｉｌｅ−Ｃｉｔ−、
−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−及び
−Ｔｒｐ−Ｃｉｔ−；
ここで、ＣＩＴはシトルリンである。このようなジペプチドにおいて、−ＮＨ−はＸ₁のアミノ基であり、ＣＯはＸ₂のカルボニル基である。

【0155】

好ましくは、ジペプチド−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯ−中の基−Ｘ₁−Ｘ₂−は、次のものから選択される：
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ａｌａ−、
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−及び
−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−。

【0156】

最も好ましくは、ジペプチド−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯ−中における基−Ｘ₁−Ｘ₂−は、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、Ｖａｌ−Ｃｉｔ又は−Ｖａｌ−Ａｌａ−である。

【0157】

関心のある他のジペプチドの組み合わせとしては、次のものが挙げられる：
−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−、
−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−及び
−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−。

【0158】

Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ外（参照によりここに含める）により記載されたものを含めて、他のジペプチドの組み合わせを使用することができる。

【0159】

一実施形態では、アミノ酸側鎖は、適宜化学的に保護される。この側鎖保護基は、以下に説明するような基であることができる。保護されたアミノ酸配列は、酵素によって切断可能である。例えば、Ｂｏｃで側鎖保護されたＬｙｓ残基を含むジペプチド配列はカテプシンにより切断可能である。

【0160】

アミノ酸の側鎖のための保護基は、当技術分野で周知であり、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社のカタログに記載されている。追加の保護基戦略が、グリーン及びウッツのＯｒｇａｎｉｃ ＳｙｎｔｈｅｓｉｓにおけるＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐｓに記載されている。

【0161】

可能な側鎖保護基を、反応性側鎖官能基を有するアミノ酸について以下に示す：
Ａｒｇ：Ｚ、Ｍｔｒ、Ｔｏｓ；
Ａｓｎ：Ｔｒｔ、Ｘａｎ；
Ａｓｐ：Ｂｚｌ、ｔ−Ｂｕ；
Ｃｙｓ：Ａｃｍ、Ｂｚｌ、Ｂｚｌ−ＯＭｅ、Ｂｚｌ−Ｍｅ、Ｔｒｔ；
Ｇｌｕ：Ｂｚｌ、ｔ−Ｂｕ；
Ｇｌｎ：Ｔｒｔ、Ｘａｎ；
Ｈｉｓ：Ｂｏｃ、Ｄｎｐ、Ｔｏｓ、Ｔｒｔ；
Ｌｙｓ：Ｂｏｃ、Ｚ−Ｃｌ、Ｆｍｏｃ、Ｚ；
Ｓｅｒ：Ｂｚｌ、ＴＢＤＭＳ、ＴＢＤＰＳ；
Ｔｈｒ：Ｂｚ；
Ｔｒｐ：Ｂｏｃ；
Ｔｙｒ：Ｂｚｌ、Ｚ、Ｚ−Ｂｒ。

【0162】

一実施形態では、−Ｘ₂−は、薬物単位に間接的に結合されている。このような実施形態では、スペーサー単位のＬ²が存在する。

【0163】

一実施形態では、ジペプチドは、自壊性基（単数又は複数）（スペーサー単位）と組み合わせて使用される。自壊性基は、−Ｘ₂−に結合できる。

【0164】

自壊性基が存在する場合には、−Ｘ₂−は自壊性基に直接結合している。一実施形態では、−Ｘ₂−は、自壊性基の基Ｙに結合している。好ましくは、基−Ｘ₂−ＣＯ−はＹに結合し、ここで、ＹはＮＨである。

【0165】

−Ｘ₁−は、Ａ¹に直接結合する。一実施形態では、−Ｘ₁−は、Ａ¹に直接結合する。好ましくは、基ＮＨ−Ｘ₁−（Ｘ１のアミノ末端）はＡ¹に結合する。Ａ¹は、官能基−ＣＯ−を含み、それによって−Ｘ₁−とアミド結合を形成することができる。

【0166】

一実施形態では、Ｌ¹及びＬ²は、−ＯＣ（＝Ｏ）−と共に、基−Ｘ₁−Ｘ₂−ＰＡＢＣ−を含む。ＰＡＢＣ基は薬物単位に直接結合する。一例では、自壊基及びジペプチドは、一緒になって以下に示す基−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢＣ−を形成する：

【化28】

ここで、アスタリスクは薬物単位への結合点を示し、波線はＬ¹の残りの部分への結合点又はＡ¹への結合点を示す。好ましくは、波線はＡ¹への結合点を示す。

【0167】

或いは、自壊性基及びジペプチドは一緒になって以下に例示する基−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢＣ−を形成する。

【化29】

ここで、アスタリスク及び波線は上で定義したとおりである。

【0168】

ここで、別の実施形態では、Ｌ¹及びＬ²は、−ＯＣ（＝Ｏ）−と共に次のものを表す：

【化30】

ここで、アスタリスクは薬物単位への結合点を示し、波線はＡ¹への結合点を示し、Ｙは共有結合又は官能基であり、そして、Ｅは、切断されやすく、それによって自壊基を活性化しやすい基である。

【0169】

Ｅは、その基が、例えば光によって又は酵素の作用によって切断に影響を受けやすいように選択される。ＥはＮＯ₂又はグルクロン酸（例えば、β−グルクロン酸）とすることができる。前者はニトロレダクターゼの作用に影響を受けやすく、後者はβ−ガラクトシダーゼの作用に影響を受けやすい場合がある。

【0170】

基Ｙは共有結合とすることができる。

【0171】

基Ｙは、次のものから選択される官能基であることができる：
−Ｃ（＝Ｏ）−、
−ＮＨ−、
−Ｏ−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＳＯ₂及び
−Ｓ−。

【0172】

基Ｙは、好ましくは−ＮＨ−、−ＣＨ₂−、−Ｏ−及び−Ｓ−である。

【0173】

いくつかの実施形態では、Ｌ¹及びＬ²は、−ＯＣ（＝Ｏ）と共に次のものを表す：

【化31】

ここで、アスタリスクは薬物単位への結合点を示し、波線はＡへの結合点を示し、Ｙは共有結合又は官能基であり、Ｅはグルクロン酸（例えば、β−グルクロン酸）である。Ｙは、好ましくは−ＮＨ−から選択される官能基である。

【0174】

いくつかの実施形態では、Ｌ¹及びＬ²は一緒になって次のものを表す：

【化32】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²の残部又は薬物単位への結合点を示し、波線はＡ¹への結合点を示し、Ｙは共有結合又は官能基であり、Ｅはグルクロン酸（例えば、β−グルクロン酸）である。Ｙは、好ましくは−ＮＨ−、−ＣＨ₂−、−Ｏ−及び−Ｓ−から選択される官能基である。

【0175】

いくつかの追加の実施形態では、Yは、上記の官能基であり、官能基はアミノ酸に結合し、そして、アミノ酸はストレッチャー単位A1に結合する。いくつかの実施形態では、アミノ酸はβ-アラニンである。このような実施形態では、このアミノ酸は、ストレッチャー単位であると同等にみなされる。

【0176】

特異性ユニットＬ¹及びリガンド単位は、ストレッチャー単位を介して間接的に結合されている。

【0177】

Ｌ¹及びＡ¹は、次のものから選択される結合によって結合できる：
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−及び
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ−。

【0178】

一実施形態では、基Ａ¹は次のとおりである：

【化33】

ここで、アスタリスクは、Ｌ¹への結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0179】

一実施形態では、基Ａ¹は次のとおりである：

【化34】

ここで、アスタリスクは、Ｌ¹への結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0180】

一実施形態では、基Ａ¹は次のとおりである：

【化35】

ここで、アスタリスクは、Ｌ¹への結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは、０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0181】

一実施形態では、基Ａ¹は次のとおりである：

【化36】

ここで、アスタリスクは、Ｌ¹への結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは、０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0182】

一実施形態では、基Ａ¹は次のとおりである：

【化37】

ここで、アスタリスクは、Ｌ¹への結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0183】

一実施形態では、基Ａ¹は次のとおりである：

【化38】

ここで、アスタリスクは、Ｌ¹への結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0184】

一実施形態では、基Ａ¹は次のとおりである：

【化39】

ここで、アスタリスクは、Ｌ¹への結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは、０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0185】

一実施形態では、基Ａ¹は次のとおりである：

【化40】

ここで、アスタリスクは、Ｌ¹への結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは、０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0186】

一実施形態では、リガンド単位とＡ¹との間の結合は、リガンド単位のチオール残基とＡ¹のマレイミド基とを介する。

【0187】

一実施形態では、リガンド単位とＡ¹との間の結合は、次のとおりである：

【化41】

ここで、アスタリスクは、Ａ¹、Ｌ¹、Ｌ²又はＤの残りの部分への結合点を示し、そして、波線は、リガンド単位の残りの部分への結合点を示す。この実施形態では、Ｓ原子は、典型的にはリガンド単位に由来する。

【0188】

上記各実施形態では、別の官能基を以下に示すマレイミド誘導基の代わりに使用できる：

【化42】

ここで、波線は、前述のようにリガンド単位への結合点を示し、そして、アスタリスクは、Ａ¹基の残りの部分への結合又はＬ¹、Ｌ²若しくはＤへの結合を示す。

【0189】

一実施形態では、マレイミド誘導基は、次の基で置換される：

【化43】

ここで、波線はリガンド単位への結合点を示し、そして、アスタリスクは、Ａ¹基の残りの部分への結合又はＬ¹、Ｌ²若しくはＤへの結合を示す。

【0190】

一実施形態では、マレイミド誘導基は、適宜リガンド単位（例えば、細胞結合剤）と共に、次のものから選択される基で置換される：
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−Ｓ−、
−Ｓ−Ｓ−、
−ＣＨ₂Ｃ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ₂−、
＝Ｎ−ＮＨ−及び
−ＮＨ−Ｎ＝。

【0191】

一実施形態では、マレイミド誘導基は、適宜リガンド単位と共に、次のものから選択される基で置換される：

【化44】

ここで、波線は、リガンド単位との結合点又はＡ¹基の残りの部分への結合のいずれかを示し、そして、アスタリスクは、リガンド単位への結合点又はＡ¹基の残りの部分への結合の他のものを示す。

【0192】

Ｌ¹を細胞結合剤に結合させるのに好適な他の基は、ＷＯ２００５／０８２０２３に記載されている。

【0193】

一実施形態では、ストレッチャー単位Ａ¹が存在し、特異性単位Ｌ¹が存在し、そしてスペーサー単位Ｌ²は存在しない。したがって、Ｌ¹と薬物単位とは、結合により直接連結している。同様に、この実施形態では、Ｌ²は結合である。

【0194】

Ｌ¹及びＤは、以下から選択される結合によって結合できる：
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−及び
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ−。

【0195】

一実施形態では、Ｌ¹とＤは、好ましくは以下から選択される結合によって結合する：
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−及び
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−。

【0196】

一実施形態では、Ｌ¹はジペプチドを含み、このジペプチドの一方の末端がＤに結合する。上記のように、ジペプチド中のアミノ酸は、天然アミノ酸及び非天然アミノ酸の任意の組合せとすることができる。いくつかの実施形態では、ジペプチドは、天然アミノ酸を含む。リンカーがカテプシン不安定リンカーである場合には、ジペプチドは、カテプシン仲介切断のための作用部位である。この場合、ジペプチドは、カテプシンのための認識部位である。

【0197】

一実施形態では、ジペプチド−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯ−中の基−Ｘ₁−Ｘ₂−は、次のものから選択される：
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ａｌａ−、
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、
−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−、
−Ｌｅｕ−Ｃｉｔ−、
−Ｉｌｅ−Ｃｉｔ−、
−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−及び
−Ｔｒｐ−Ｃｉｔ−；
ここで、ＣＩＴはシトルリンである。このようなジペプチドにおいて、−ＮＨ−はＸ₁のアミノ基であり、ＣＯはＸ₂のカルボニル基である。

【0198】

好ましくは、ジペプチド−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯ−中の基−Ｘ₁−Ｘ₂−は、次のものから選択される：
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ａｌａ−、
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−及び
−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−。

【0199】

最も好ましくは、ジペプチド−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯ−における基−Ｘ₁−Ｘ₂−は、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−又は−Ｖａｌ−Ａｌａ−である。

【0200】

関心のある他のジペプチドの組み合わせとしては、次のものが挙げられる：
−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−、
−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−及び
−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−。

【0201】

一実施形態では、Ｌ¹−Ｄは次のとおりである：

【化45】

ここで、−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯはジペプチドであり、−ＮＨ−は薬物単位の一部であり、アスタリスクは、薬物単位残りの部分への結合点を示し、そして、波線は、Ｌ¹の残りの部分への結合点又はＡ¹への結合点を示す。好ましくは、波線はＡ¹への結合点を示す。

【0202】

一実施形態では、ジペプチドはバリン-アラニンであり、そしてＬ¹−Ｄは次のとおりである：

【化46】

ここで、アスタリスク、−ＮＨ−及び波線は上で定義したとおりである。

【0203】

一実施形態では、ジペプチドはフェニルアラニン-リジンであり、そしてＬ¹−Ｄは次のとおりである：

【化47】

ここで、アスタリスク、−ＮＨ−及び波線は上で定義したとおりである。

【0204】

一実施形態では、ジペプチドはバリン-シトルリンである。

【0205】

一実施形態では、基Ａ¹−Ｌ¹は以下のとおりである：

【化48】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0206】

一実施形態では、基Ａ¹−Ｌ¹は以下のとおりである：

【化49】

ここで、アスタリスクはＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0207】

一実施形態では、基Ａ¹−Ｌ¹は以下のとおりである：

【化50】

ここで、アスタリスクはＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは、０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0208】

一実施形態では、基Ａ¹−Ｌ¹は以下のとおりである：

【化51】

ここで、アスタリスクはＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは、０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、そして、ｍは、０〜１０、１〜７、好ましくは３〜７、最も好ましくは３又は７である。

【0209】

一実施形態では、基Ａ¹−Ｌ¹は以下のとおりである：

【化52】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0210】

一実施形態では、基Ａ¹−Ｌ¹は以下のとおりである：

【化53】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0211】

一実施形態では、基Ａ¹−Ｌ¹は以下のとおりである：

【化54】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは、０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0212】

一実施形態では、基Ａ¹−Ｌ¹は次のとおりである：

【化55】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0213】

一実施形態では、基Ｌ−Ａ¹−Ｌ¹は次のとおりである：

【化56】

ここで、アスタリスクはＤへの結合点を示し、Ｓはリガンド単位の硫黄基であり、波線はリガンド単位の残りの部分への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0214】

一実施形態では、基Ｌ−Ａ¹−Ｌ¹は次のとおりである：

【化57】

ここで、アスタリスクはＤへの結合点を示し、Ｓはリガンド単位の硫黄基であり、波線はリガンド単位の残部への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0215】

一実施形態では、基Ｌ−Ａ¹−Ｌ¹は次のとおりである：

【化58】

ここで、アスタリスクはＤへの結合点を示し、Ｓはリガンド単位の硫黄基であり、波線はリガンド単位の残部への結合点を示し、ｎは０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0216】

一実施形態では、基Ｌ−Ａ¹−Ｌ¹は次のとおりである：

【化59】

ここで、アスタリスクはＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは、０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは、０〜１０、１〜７、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0217】

一実施形態では、基Ｌ−Ａ¹−Ｌ¹は次のとおりである：

【化60】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線はリガンド単位の残部への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0218】

一実施形態では、基Ｌ−Ａ¹−Ｌ¹は次のとおりである：

【化61】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線はリガンド単位の残部への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0219】

一実施形態では、基Ｌ−Ａ¹−Ｌ¹は次のとおりである：

【化62】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線はリガンド単位の残部への結合点を示し、ｎは、０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0220】

一実施形態では、基Ｌ−Ａ¹−Ｌ¹は次のとおりである：

【化63】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線はリガンド単位の残部への結合点を示し、ｎは、０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0221】

一実施形態では、ストレッチャー単位は次式を有するアセトアミド単位である：

【化64】

ここで、アスタリスクは、ストレッチャー単位、Ｌ¹又はＤの残りの部分への結合点を示し、そして、波線はリガンド単位への結合点を示す。

【0222】

リンカー・薬剤
他の実施形態では、リンカー・薬剤化合物は、リガンド単位への結合のために提供される。一実施形態では、リンカー・薬剤化合物は、細胞結合剤への結合のために設計される。

【0223】

一実施形態では、薬剤リンカー化合物は次式を有する：

【化65】

ここで、アスタリスクは、薬剤単位（上で定義されるようなＤ）への結合点を示し、Ｇ¹は、リガンド単位への結合を形成するためのストレッチャー基（Ａ¹）であり、Ｌ¹は特異性単位であり、Ｌ²（スペーサー単位）は、共有結合であり又は−ＯＣ（＝Ｏ）−と一緒になって自壊性基（単数又は複数）を形成する。

【0224】

別の実施形態では、薬剤リンカー化合物は次式を有する：
G¹-L¹-L²-_*
ここで、アスタリスクは、薬物単位（Ｄ）への結合点を示し、Ｇ¹は、リガンド単位への結合を形成するためのストレッチャー単位（Ａ¹）であり、Ｌ¹は特異性単位であり、Ｌ²（スペーサー単位）は、共有結合であり又は自壊性基（複数若しくは単数）である。

【0225】

Ｌ¹及びＬ²は上で定義したとおりである。ここで、Ａ¹への結合に対する参照は、Ｇ¹への結合を指すものと解釈できる。

【0226】

一実施形態では、Ｌ¹がアミノ酸を含む場合、そのアミノ酸の側鎖は保護されていてもよい。任意の好適な保護基を使用できる。一実施形態では、側鎖保護基は、この化合物中の他の保護基（存在する場合）で除去可能である。他の実施形態では、保護基は、分子中に存在する他の保護基（存在する場合）に対して直角であることができる。

【0227】

アミノ酸側鎖の適当な保護基としては、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社のカタログ２００６／２００７に記載された基が挙げられる。また、カテプシン不安定性リンカーで使用するための保護基もＤｕｂｏｗｃｈｉｋ外で議論されている。

【0228】

本発明の所定の実施形態では、基Ｌ¹は、Ｌｙｓアミノ酸残基を含む。このアミノ酸の側鎖はＢｏｃ又はＡｌｌｏｃ保護基で保護できる。Ｂｏｃ保護基が最も好ましい。

【0229】

官能基Ｇ¹はリガンド単位（例えば、細胞結合剤）との反応時に結合基を形成する。

【0230】

一実施形態では、官能基Ｇ¹は、リガンド単位上の適切な基との反応のためにアミノ、カルボン酸、ヒドロキシ、チオール若しくはマレイミド基であり又はそれを含む。好ましい実施形態では、Ｇ¹はマレイミド基を含む。

【0231】

一実施形態では、基Ｇ¹はアルキルマレイミド基である。この基は、細胞結合剤中に存在する、例えば抗体中に存在するチオール基、特にシステインチオール基との反応に好適である。

【0232】

一実施形態では、基Ｇ¹は次のとおりである：

【化66】

ここで、アスタリスクは、Ｌ¹、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0233】

一実施形態では、基Ｇ¹は次のとおりである：

【化67】

ここで、アスタリスクは、Ｌ¹、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0234】

一実施形態では、基Ｇ¹は次のとおりである：

【化68】

ここで、アスタリスクは、Ｌ¹への結合点を示し、ｎは、０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜２、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0235】

一実施形態では、基Ｇ¹は次のとおりである：

【化69】

ここで、アスタリスクは、Ｌ¹への結合点を示し、ｎは０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは、０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0236】

一実施形態では、基Ｇ¹は次のとおりである：

【化70】

ここで、アスタリスクは、Ｌ¹、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0237】

一実施形態では、基Ｇ¹は次のとおりである：

【化71】

ここで、アスタリスクは、Ｌ¹、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0238】

一実施形態では、基Ｇ¹は次のとおりである：

【化72】

ここで、アスタリスクは、Ｌ¹への結合点を示し、ｎは、０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは、０〜１０、１〜２、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0239】

一実施形態では、基Ｇ¹は次のとおりである：

【化73】

ここで、アスタリスクは、Ｌ¹への結合点を示し、ｎは０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは、０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0240】

上記実施形態のそれぞれにおいて、別な官能基を以下に示すマレイミド基の代わりに使用できる：

【化74】

ここで、アスタリスクは、Ｇ基の残りの部分への結合を示す。

【0241】

一実施形態では、マレイミド誘導基は、次の基で置換される：

【化75】

ここで、アスタリスクは、Ｇ基の残りの部分への結合を示す。

【0242】

一実施形態では、マレイミド基は、次のものから選択される基で置換される：
−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、
−ＯＨ、
−ＮＨ₂、
−ＳＨ、
−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ₂Ｘ（ここで、ＸはＣｌ、Ｂｒ又はＩである）、
−ＣＨＯ、
−ＮＨＮＨ_2、
−Ｃ≡ＣＨ及び
−Ｎ₃（アジド）。

【0243】

一実施形態では、Ｌ¹は存在し、そしてＧ¹は−ＮＨ₂、−ＮＨＭｅ、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ又は−ＳＨである。

【0244】

一実施形態では、Ｌ¹が存在する場合、Ｇ¹は−ＮＨ₂又は−ＮＨＭｅである。いずれかの基がＬ¹アミノ酸配列のＮ末端であることができる。

【0245】

一実施形態では、Ｌ¹は存在し、Ｇ¹は−ＮＨ₂であり、Ｌ¹は上で定義した−Ｘ₁−Ｘ₂−アミノ酸配列である。

【0246】

一実施形態では、Ｌ¹は存在し、Ｇ¹はＣＯＯＨである。この基は、Ｌ¹アミノ酸配列のＣ末端であることができる。

【0247】

一実施形態では、Ｌ¹は存在し、Ｇ¹はＯＨである。
一実施形態では、Ｌ¹は存在し、Ｇ¹はＳＨである。

【0248】

基Ｇ¹は、一方の官能基から別方のものに変換可能であることができる。一実施形態では、Ｌ¹は存在し、Ｇ¹は−ＮＨ₂である。この基は、マレイミド基を含む別のグループＧ¹に変換できる。例えば、基−ＮＨ₂を、上で示したマレイミドを含むＧ¹基の酸又は活性化酸（例えば、Ｎ−スクシンイミド形態）と反応させることができる。

【0249】

したがって、基Ｇ¹は、リガンド単位との反応により適切な官能基に変換できる。

【0250】

上述したように、一実施形態では、Ｌ¹は存在し、Ｇ¹は−ＮＨ₂、−ＮＨＭｅ、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ又は−ＳＨである。さらなる実施形態では、これらの基は、化学的に保護された形態で与えられる。したがって、化学的に保護された形態は、官能基を備えるリンカーに対する前駆体である。

【0251】

一実施形態では、Ｇ¹は、化学的に保護された形態の−ＮＨ₂である。この基は、カルバメート保護基で保護できる。カルバメート保護基は、以下のものよりなる群から選択できる：
Ａｌｌｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ｔｒｏｃ、Ｔｅｏｃ、Ｃｂｚ及びＰＮＺ。
好ましくは、Ｇ¹が−ＮＨ₂である場合、このものはＡｌｌｏｃ又はＦｍｏｃ基で保護される。

【0252】

一実施形態では、Ｇ¹が−ＮＨ₂の場合には、このものはＦｍｏｃ基で保護される。

【0253】

一実施形態では、保護基は、キャッピング基のカルバメート保護基と同一である。

【0254】

一実施形態では、保護基は、キャッピング基のカルバメート保護基と同一ではない。この実施形態では、保護基は、キャッピング基のカルバメート保護基を除去しない条件下で除去可能であることが好ましい。

【0255】

化学保護基を除去して、リガンド単位への結合を形成するための官能基を与えることができる。任意に、その後、この官能基を上記のような他の官能基に変換することができる。

【0256】

一実施形態では、活性基はアミンである。このアミンは、好ましくはペプチドのＮ末端アミンであり、かつ、本発明の好ましいジペプチドのＮ末端アミンであることができる。

【0257】

活性基を反応させて、リガンド単位への結合を形成させることを目的とする官能基を生じさせることができる。

【0258】

他の実施形態では、リンカー単位は、活性基を有するリンカー単位に対する前駆体である。この実施形態では、リンカー単位は、保護基を介して保護される活性基を含む。保護基を除去して、活性基を有するリンカー単位を与えることができる。

【0259】

活性基がアミンである場合、保護基は、グリーン及びウッツが記載するようなアミン保護基とすることができる。

【0260】

保護基は、好ましくは、リンカー単位中の他の保護基（存在する場合）に対して直交する。

【0261】

一実施形態では、保護基は、キャッピング基に対して直交する。したがって、活性基保護基は、キャッピング基を保持しながら除去可能である。他の実施形態では、保護基及びキャッピング基は、キャッピング基を除去するために使用したのと同じ条件下で除去可能である。

【0262】

一実施形態では、リンカー単位は次のとおりである：

【化76】

ここで、アスタリスクは薬物単位への結合点を示し、そして、波線は、場合に応じて、リンカー単位の残りの部分への結合点又はＧ¹への結合点を示す。好ましくは、波線はＧ¹への結合点を示す。

【0263】

一実施形態では、リンカー単位は次のとおりである：

【化77】

ここで、アスタリスク及び波線は上で定義したとおりである。

【0264】

Ｌ¹及び細胞結合剤との間に結合を形成させる際に使用するのに適した他の官能基は、ＷＯ２００５／０８２０２３に記載されている。

【0265】

リガンド単位
リガンド単位は、いかなる種類のものであることができ、標的分子に特異的に結合するタンパク質、ポリペプチド、ペプチド及び非ペプチド剤を含むことができる。いくつかの実施形態では、リガンド単位は、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドであることができる。いくつかの実施形態では、リガンド単位は、環状ポリペプチドであることができる。これらのリガンド単位は、抗体、又は少なくとも一つの標的分子結合部位、リンホカイン、ホルモン、成長因子又は標的に特異的に結合することができる任意の他の細胞結合分子若しくは物質を含有する抗体のフラグメントを含むことができる。

【0266】

用語「特異的に結合する」及び「特異的結合」とは、所定の分子（例えば、抗原）に対する抗体又は他のタンパク質、ポリペプチド又はペプチドの結合をいう。典型的には、抗体又は他の分子は、少なくとも約１×１０⁷Ｍ^-1の親和性で結合し、かつ、所定の分子又は密接に関連する分子以外の非特異的分子（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合に対するその親和性よりも少なくとも２倍大きい親和性で所定の分子に結合する。

【0267】

リガンド単位の例としては、ＷＯ２００７／０８５９３０（本明細書に含める）で使用するために記載された薬剤が挙げられる。

【0268】

いくつかの実施形態では、リガンド単位は、細胞上の細胞外標的に結合する細胞結合剤である。このような細胞結合剤は、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド又は非ペプチド剤であることができる。いくつかの実施形態では、細胞結合剤は、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドであることができる。いくつかの実施形態では、細胞結合剤は、環状ポリペプチドであることができる。また、細胞結合剤は、抗体又は抗体の抗原結合断片であることもできる。したがって、一実施形態では、本発明は、抗体−薬剤結合体（ＡＤＣ）を提供する。

【0269】

一実施形態では、抗体はモノクローナル抗体;キメラ抗体;ヒト化抗体;完全ヒト抗体;又は一本鎖抗体である。一実施形態では、抗体は、生物学的活性を有するこれらの抗体の一つの断片である。そのような断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片が挙げられる。

【0270】

抗体は二重特異性抗体、ドメイン抗体（ＤＡＢ）又は一本鎖抗体とすることができる。

【0271】

一実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。

【0272】

本発明で使用するための抗体としては、ＷＯ２００５／０８２０２３（本明細書に含める）に記載された抗体が挙げられる。特に好ましいのは、腫瘍関連抗原に対する抗体である。当技術分野で知られているこれらの抗原の例としては、ＷＯ２００５／０８２０２３示された腫瘍関連抗原が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、４１〜５５頁を参照されたい。

【0273】

いくつかの実施形態では、結合体は、腫瘍細胞をそれらの細胞表面抗原を介して標的とするように設計される。抗原は、過剰発現又は異常な時間若しくは細胞型で発現される細胞表面抗原とすることができる。好ましくは、標的抗原は、増殖性細胞（好ましくは、腫瘍細胞）上でのみ発現する；しかしながら、これは実際にはほとんど見られない。その結果、標的抗原は、通常、増殖性組織と健康な組織との間の示差的発現に基づいて選択される。

【0274】

抗体は、次のものを含む特異的腫瘍関連抗原を標的とするように作製された：
Ｃｒｉｐｔｏ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、糖タンパク質ＮＭＢ、ＣａｎＡｇ、Ｈｅｒ２（ＥｒｂＢ２／Ｎｅｕ）、ＣＤ５６（ＮＣＡＭ）、ＣＤ７０、ＣＤ７９、ＣＤ１３８、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＢＣＭＡ、Ｅ−セレクチン、ＥｐｈＢ２、メラノトランスフェリン、ＭＵＣ１６及びＴＭＥＦＦ２。

【0275】

リガンド単位は、リンカー単位に結合する。一実施形態では、リガンド単位は、存在する場合には、リンカー単位のＡに結合する。

【0276】

一実施形態では、リガンド単位とリンカー単位の間の結合は、チオエーテル結合によるものである。
一実施形態では、リガンド単位とリンカー単位の間の結合は、ジスルフィド結合によるものである。
一実施形態では、リガンド単位とリンカー単位の間の結合は、アミド結合によるものである。
一実施形態では、リガンド単位とリンカー単位の間の結合は、エステル結合によるものである。

【0277】

一実施形態では、リガンド単位とリンカーとの間の結合は、リガンド単位のシステイン残基のチオール基とリンカー単位のマレイミド基との間で形成される。

【0278】

リガンド単位のシステイン残基は、結合を形成するためにリンカー単位の官能基との反応に利用可能とすることができる。他の実施形態では、例えばリガンド単位が抗体である場合には、抗体のチオール基は、鎖間ジスルフィド結合に関与することができる。これらの鎖間結合は、例えば、リンカー単位の官能基との反応前にＤＴＴで抗体を処理することによって遊離チオール基に変換できる。

【0279】

いくつかの実施形態では、システイン残基は、抗体の重鎖又は軽鎖に導入される。抗体の重鎖又は軽鎖における置換によるシステイン挿入のための位置としては、米国特許出願公開第２００７−００９２９４０号及び国際特許公開ＷＯ２００８０７０５９３号（これらを本明細書に含める）に記載されているものが挙げられる。

【0280】

治療方法
本発明の化合物は、治療方法に使用できる。また、提供されるのは、治療を必要とする被験体に、治療に有効な量の式Ｉの化合物を投与することを含む治療方法である。「治療に有効な量」という用語とは、患者に利益を示すのに十分な量のことである。このような利益は少なくとも一つの症状の少なくとも改善であることができる。実際の投与量及び投与の割合と時間経過は、治療されるものの性質及び重症度に依存する。治療の処方、例えば、投与量の決定は、一般開業医及び他の医師の責任の範囲内である。

【0281】

化合物は、治療される状態に応じて同時に又は連続的に、単独で又は他の治療と組み合わせて投与できる。治療及び療法の例としては、化学療法（例えば薬物を含めた活性剤の投与、手術及び放射線治療）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0282】

本発明に係る医薬組成物及び本発明に従って使用するための医薬組成物は、活性成分、すなわち式Ｉの化合物に加えて、薬学的に許容される賦形剤、担体、緩衝剤、安定剤又は当業者に周知の他の材料を含むことができる。このような材料は、非毒性であるべきであり、活性成分の有効性を妨害してはならない。担体その他の材料の正確な性質は、経口又は注射、例えば、皮膚、皮下又は静脈内であることができる投与経路に依存する。

【0283】

経口投与用の医薬組成物は、錠剤、カプセル、粉末又は液体形態とすることができる。錠剤は、固体担体又はアジュバントを含むことができる。液体医薬組成物は、一般に、水、石油、動物油又は植物油、鉱油又は合成油などの液体担体を含む。生理食塩溶液、デキストロース又は他の糖類溶液又はエチレングリコール、プロピレングリコール若しくはポリエチレングリコールなどのグリコールを含むことができる。カプセルは、ゼラチンなどの固体担体を含むことができる。

【0284】

静脈内、皮膚若しくは皮下注射又は罹患部位での注射について、活性成分は、発熱物質を含まず、かつ、適切なｐＨ、等張性及び安定性を有する非経口的に許容できる水溶液の形態である。当業者は、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、乳酸リンゲル注射液などの等張性ビヒクル用いて適切な溶液をうまく調製することができる。必要に応じて、保存剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤及び／又は他の添加剤を含むことができる。

【0285】

化合物及び結合体を使用して、増殖性疾患及び自己免疫疾患を治療することができる。用語「増殖性疾患」とは、試験管内か生体内かを問わず、腫瘍性成長又は過形成などの望ましくない過剰又は異常細胞の望ましくない又は制御されない細胞増殖に関係する。

【0286】

増殖性症状の例としては、新生物及び腫瘍（例えば、組織球、神経膠腫、星状細胞腫、骨腫）、癌（例えば肺癌、細胞肺癌、肺小細胞癌、胃腸癌、大腸癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、肝臓癌、腎臓癌、膀胱癌、膵臓癌、脳癌、肉腫、骨肉腫、カポジ肉腫、黒色腫）、白血病、乾癬、骨疾患、線維増殖性疾患（例えば結合組織）及びアテローム性動脈硬化症（これらに限定されない）を含めて、良性前がん状態及び悪性細胞増殖が挙げられるが、これらに限定されない。関心のある他の癌としては、血液学的なもの；白血病及びリンパ腫、例えば非ホジキンリンパ腫などの悪性腫瘍及びDLBCL、辺縁帯、外套帯、濾胞、ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病などのサブタイプ並びにB又はT細胞由来の他の癌が挙げられるが、これらに限定されない。

【0287】

自己免疫疾患の例としては次のものが挙げられる：関節リウマチ、自己免疫性脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、アレルギー性脳脊髄炎）、乾癬性関節炎、内分泌性眼症、ブドウ膜網膜炎、全身性エリテマトーデス、重症筋無力症、グレーブス病、糸球体腎炎、自己免疫性肝疾患、炎症性腸疾患（例えば、クローン病）、アナフィラキシー、アレルギー反応、シェーグレン症候群、１型糖尿病、原発性胆汁性肝硬変、ウェゲナー肉芽腫症、線維筋痛症、多発性筋炎、皮膚筋炎、多発性内分泌障害、シュミット症候群、自己免疫性ブドウ膜炎、アジソン病、副腎炎、甲状腺炎、橋本甲状腺炎、自己免疫性甲状腺疾患、悪性貧血、胃萎縮症、慢性肝炎、ルポイド肝炎、アテローム性動脈硬化症、亜急性皮膚エリテマトーデス、副甲状腺機能低下症、ドレスラー症候群、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少性紫斑病、溶血性貧血、尋常性天疱瘡、天疱瘡、疱疹状皮膚炎、円形脱毛症、疱瘡、強皮症、進行性全身性硬化症、ＣＲＥＳＴ症候群（石灰沈着、レイノー現象、食道運動障害、強指症、及び毛細血管拡張）、男性及び女性の自己免疫性不妊、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、混合性結合組織病、結節性多発動脈炎、全身性壊死性血管炎、アトピー性皮膚炎、アトピー性鼻炎、グッドパスチャー症候群、シャーガス病、サルコイドーシス、リウマチ熱、喘息、再発性流産、抗リン脂質症候群、農夫肺、多形性紅斑、心切開術後症候群、クッシング症候群、自己免疫性慢性活動性肝炎、トリ愛好者肺、中毒性表皮壊死症、アルポート症候群、肺胞炎、アレルギー性肺胞炎、線維化性肺胞炎、間質性肺疾患、結節性紅斑、壊疽性膿皮症、輸血反応、高安動脈炎、リウマチ性多発筋痛、側頭動脈炎、住血吸虫症、巨細胞性動脈炎、回虫症、アスペルギルス症、Ｓａｍｐｔｅｒ症候群、湿疹、リンパ腫様肉芽腫症、ベーチェット病、カプラン症候群、川崎病、デング熱、脳脊髄炎、心内膜炎、心内膜心筋線維症、眼内炎、持久性隆起性紅斑、乾癬、胎児赤芽球症、胎児赤芽球症、シャルマン症候群、フェルティ症候群、フィラリア症、毛様体炎、慢性毛様体炎、異虹彩色性毛様体炎、フックス毛様体炎、ＩｇＡ腎症、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、移植片対宿主病、移植拒絶反応、心筋症、イートン・ランバート症候群、再発性多発性軟骨炎、クリオグロブリン血症、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、エバンス症候群、及び自己免疫性性腺機能不全。

【0288】

いくつかの実施形態では、自己免疫性疾患は、Bリンパ球の疾患（例えば、全身性エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、関節リウマチ及び１型糖尿病）、Ｔｈ１−リンパ球の疾患（例えば、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、グレーブス疾患、原発性胆汁性肝硬変、ウェゲナー肉芽腫症、結核又は移植片対宿主病）、又はＴｈ２−リンパ球の疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス、アトピー性喘息、鼻結膜炎、アレルギー性鼻炎、オーメン症候群、全身性硬化症若しくは慢性移植片対宿主病）である。一般的には、樹状細胞が関与する疾患は、Ｔｈ１リンパ球又はＴｈ２リンパ球の障害を伴う。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、Ｔ細胞仲介免疫疾患である。

【0289】

いくつかの実施形態では、結合体の投与量は、用量当たり約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲にある。いくつかの実施形態では、結合体の投与量は、用量当たり約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇの範囲内にある。いくつかの実施形態では、結合体の投与量は、用量当たり約０．０５〜約５ｍｇ／ｋｇの範囲内にある。いくつかの実施形態では、結合体の投与量は、用量当たり約０．１〜約５ｍｇ／ｋｇの範囲内である。いくつかの実施形態では、結合体の投与量は、用量当たり約０．１〜約４ｍｇ／ｋｇの範囲内にある。いくつかの実施形態では、結合体の投与量は、用量当たり約０．０５〜約３ｍｇ／ｋｇの範囲内にある。いくつかの実施形態では、結合体の投与量は、用量当たり約０．１〜約３ｍｇ／ｋｇの範囲内にある。いくつかの実施形態では、結合体の投与量は、用量当たり約０．１〜約２ｍｇ／ｋｇの範囲内にある。

【0290】

他の形態の包含
特に断らない限り、上に含まれるのは、周知のイオン、塩、溶媒和物及びこれらの置換基の保護された形態である。例えば、カルボン酸（−ＣＯＯＨ）への言及には、陰イオン性（カルボキシレート）型（−ＣＯＯ^-）、その塩又は溶媒和物のみならず、通常の保護された形態が含まれる。同様に、アミノ基に対する言及には、アミノ基のプロトン化形態（−Ｎ⁺ＨＲ¹Ｒ²）、塩又は溶媒和物、例えば、塩酸塩のみならず、アミノ基の通常の保護形態が含まれる。同様に、ヒドロキシル基に対する言及には、陰イオン形態（−Ｏ^-）、塩又は溶媒和物のみならず、従来の保護形態が含まれる。

【0291】

塩
活性化合物の対応する塩、例えば、薬学的に許容される塩を調製し、精製し及び／又は取り扱うことが便利又は望ましい場合がある。薬学的に許容される塩の例は、Ｂｅｒｇｅ外，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６，１−１９（１９７７）で議論されている。

【0292】

化合物が陰イオン性である又は陰イオン性であることができる官能基を有する場合（例えば、−ＣＯＯＨは、−ＣＯＯ^-であることができる）、適切な陽イオンで塩が形成され得る。適切な無機陽イオンの例としては、Ｎａ⁺及びＫ⁺などのアルカリ金属イオン、Ｃａ²⁺及びＭｇ²⁺などのアルカリ土類陽イオン、及びＡｌ⁺³などの他の陽イオンが挙げられるが、これらに限定されない。好適な有機カチオンの例としては、アンモニウムイオン（すなわちＮＨ₄⁺）及び置換アンモニウムイオン（例えばＮＨ₃Ｒ⁺、ＮＨ₂Ｒ₂⁺、ＮＨＲ₃⁺、ＮＲ₄⁺）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの好適な置換アンモニウムイオンの例は、次のものから誘導されるものである：エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン及びトロメタミン、並びにリジン及びアルギニンなどのアミノ酸。一般的な第四級アンモニウムイオンの例はＮ（ＣＨ₃）₄⁺である。

【0293】

化合物が陽イオン性である又は陽イオン性であることのできる官能基を有する場合（例えば−ＮＨ₂は−ＮＨ₃⁺であることができる）、適切な陰イオンで塩を形成させることができる。好適な無機陰イオンの例としては、以下の無機酸から誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない：塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、亜硝酸、リン酸、及び亜リン酸。

【0294】

好適な有機アニオンの例としては、限定以下の有機酸から誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない：2−アセトキシ安息香酸、酢酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、桂皮酸、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフタレンカルボン酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、粘液酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、フェニルスルホン酸、プロピオン酸、ピルビン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、酒石酸、トルエンスルホン酸、及び吉草酸。好適な高分子有機陰イオンの例としては、以下のポリマー酸から誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない：タンニン酸、カルボキシメチルセルロース。

【0295】

溶媒和物
活性化合物の対応する溶媒和物を調製、精製、及び/又は処理することが好都合又は望ましい場合がある。用語「溶媒和物」は、ここでは、溶質（例えば、活性化合物、活性化合物の塩）と溶媒との複合体をいうために従来の意味で使用される。溶媒が水である場合、溶媒和物は、簡便に水和物、例えば、一水和物、二水和物、三水和物などと呼ぶことができる。

【0296】

カルビノールアミン
本発明は、溶媒が水又はアルコール（Ｒ^AＯＨ、ここでＲ^Aは、Ｃ_1-4アルキルである）である場合に、以下に示されるＰＢＤ部分のイミン結合にわたって溶媒が付加する化合物を含む：

【化78】

これらの形態は、ＰＢＤのカルビノールアミン及びカルビノールアミンエーテル形態と呼ぶことができる。これらの平衡のバランスは、化合物が見出される条件のみならず、その部分自体の性質にも依存する。

【0297】

これらの特定の化合物は、例えば凍結乾燥によって固体状態で単離できる。

【0298】

式Ｉの化合物の単離
理論に束縛されることを望まないが、式Ｉの化合物（ここで、Ｒ¹⁰及びＲ¹¹は、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に窒素−炭素二重結合を形成する。）は、単離中に可逆的に二量体化する傾向があることが分かった。この可逆的二量体化は、別の化合物のイミン結合による１個の分子上のＱの可逆的付加のために生じると考えられる。例えば１時間にわたるメタノールでの処理が、式Ｉの化合物の単量体形態の分離に役立つ場合がある。

【0299】

異性体
所定の化合物は、１種以上の特定の幾何、光学、エナンチオマー、ジアステレオマー、エピマー、アトロプ、立体異性、互変異性、立体配座又はアノマー形態で存在でき、これらのものとしては限定されないが、シス及びトランス型；Ｅ−及びＺ型；ｃ、ｔ及びｒ型；エンド及びエキソ型；Ｒ、Ｓ及びメソ型；Ｄ及びＬ型；ｄ及びｌ型；（＋）及び（−）型；ケト、エノール及びエノラート型；ｓｙｎ型及びアンチ型；向斜及び背斜型；α及びβ型；軸及び赤道型；舟、椅子、ねじれ、エンベロープ及びいす型；並びにこれらの組み合わせが挙げられ、以下、まとめて「異性体」（又は「異性体型」）と呼ぶ。

【0300】

互変異性型について以下で説明される場合を除き、ここで使用するときに用語「異性体」から具体的に除外されるのは、構造異性体（すなわち、単に空間的な原子の位置ではなく原子間の結合が異なる異性体）であることに注意されたい。例えば、メトキシ基−ＯＣＨ₃に対する言及は、その構造異性体、ヒドロキシメチル基ＣＨ₂ＯＨに対する言及であると解釈すべきではない。同様に、オルト−クロロフェニルに対する言及は、その構造異性体であるメタ−クロロフェニルに対する言及であると解釈すべきではない。しかし、構造の種類に対する言及は、その種類内に入る構造的異性体を含むことができる（例えば、Ｃ_1-7アルキルは、ｎ−プロピル及びイソプロピルを含み；ブチルは、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル及びｔ−ブチルを含み；メトキシフェニルは、オルト−、メタ−及びパラ−メトキシフェニルを含む）。

【0301】

上記の除外は、例えば、次の互変異性体対と同様に、互変異性形態、例えばケト、エノール及びエノラート型には関連しない：ケト/エノール（下記に示す）、イミン/エナミン、アミド/イミノアルコール、アミジン/アミジン、ニトロソ/オキシム、チオケトン/エンチオール、Ｎ−ニトロソ/ヒドロキシアゾ及びニトロ/アシ−ニトロ。

【化79】

用語「異性体」に具体的に含まれるのは、一つ以上の同位体置換を有する化合物である。例えば、Ｈは¹Ｈ、²Ｈ（Ｄ）及び³Ｈ（Ｔ）を含めた任意の同位体形態であることができ；Ｃは¹²Ｃ、¹³Ｃ及び¹⁴Ｃを含めた任意の同位体形態であることができ；Ｏは¹⁶Ｏ及び¹⁸Ｏを含めた任意の同位体形態などであることができる。

【0302】

特に明記しない限り、特定の化合物への言及には、（全体的又は部分的に）そのラセミ体及び他の混合物を含めて、そのようなすべての異性体が含まれる。このような異性体形態の調製（例えば不斉合成）及び分離（例えば分別結晶及びクロマトグラフィー手段）のための方法は、当技術分野で知られており、又はここで教示した方法若しくは既知の方法を既知の態様で適合させることによって容易に得られる。

【0303】

一般的な合成経路
ＰＢＤ化合物の合成は、次の文献で広く議論されておる。この議論を引用により本明細書に含める：
（ａ）ＷＯ００／１２５０８（第１４〜３０頁）；
（ｂ）ＷＯ２００５／０２３８１４（第３〜１０頁）；
（ｃ）ＷＯ２００４／０４３９６３（第２８〜２９頁）；及び
（ｄ）ＷＯ２００５／０８５２５１（第３０〜３９頁）。

【0304】

合成経路
本発明の化合物（Ｒ¹⁰及びＲ¹¹は、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に窒素−炭素二重結合を形成する）は、次式２の化合物から合成できる：

【化80】

ここで、Ｒ²、Ｒ⁶、Ｒ⁷、Ｒ⁹、Ｒ^6’、Ｒ^7’、Ｒ^9’、Ｒ¹²、Ｘ、Ｘ’及びＲ”は、式Ｉの化合物について定義した通りであり、Ｐｒｏｔ^Nは、合成のための窒素保護基であり、そしてＰｒｏｔ^Oは、合成のための保護酸素基又は標準的な方法によってイミン結合を脱保護することによるオキソ基である。

【0305】

生成された化合物は、使用する溶媒に応じて、そのカルビノールアミン又はカルビノールアミンエーテルの形態にあることができる。例えば、Ｐｒｏｔ^NがＴｒｏｃであり、かつ、Ｐｒｏｔ^Oが合成のための酸素保護基である場合には、脱保護は、式（Ｉ）の化合物を生じさせるためにＣｄ／Ｐｂ対を使用して実施される。Ｐｒｏｔ^NがＳＥＭ又は類似の基であり、かつ、Ｐｒｏｔ^Oがオキソ基である場合には、オキソ基は還元よって除去でき、これにより、保護されたカルビノールアミン中間体が生じ、続いてこのものを処理してＳＥＭ保護基を除去し、その後水を除去することができる。式２の化合物の還元は、例えば、ｓｕｐｅｒｈｙｄｒｉｄｅ又はリチウムテトラボロヒドリドによって達成できる一方、ＳＥＭ保護基を除去するのに好適な手段は、シリカゲルによる処理である。

【0306】

Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在する式２の化合物は、次式３ａの化合物：

【化81】

（ここで、Ｒ²、Ｒ⁶、Ｒ⁷、Ｒ⁹、Ｒ^6’、Ｒ^7’、Ｒ^9’、Ｘ、Ｘ’及びＲ”は、式２の化合物について定義した通りである。）から有機ホウ素誘導体などのＲ¹²を含む有機金属誘導体をカップリングさせることによって合成できる。この有機ホウ素誘導体は、ボロネート又はボロン酸とすることができる。

【0307】

式２の化合物は、式３ｂの化合物から：

【化82】

（ここで、Ｒ¹²、Ｒ⁶、Ｒ⁷、Ｒ⁹、Ｒ^6’、Ｒ^7’、Ｒ^9’、Ｘ、Ｘ’及びＲ”は、式２の化合物について定義した通りである。）次式IIaのアルキンをカップリングさせることによって：

【化83】

ソノガシラカップリングにより合成できる。

【0308】

Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在する式３ａ及び３ｂの化合物は、次式４の化合物から：

【化84】

（ここで、Ｒ²、Ｒ⁶、Ｒ⁷、Ｒ⁹、Ｒ^6’、Ｒ^7’、Ｒ^9’、Ｘ、Ｘ’及びＲ”は、式２の化合物について定義した通りである。）Ｒ¹²を含む有機ホウ素誘導体などの有機金属誘導体の約単一の当量（０．９又は１〜１．１又は１．２）をカップリングさせて式３ｂの化合物を作製するか、又は式IIａのアルキンのおよそ単一当量（例えば０．９又は１〜１．１又は１．２）をカップリングさせることにより：

【化85】

ソノガシラカップリングにより式３ａの化合物を作製することで合成できる。

【0309】

上記有機ホウ素誘導体などの有機金属誘導体のカップリングは、通常、パラジウム触媒、例えば、Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄、Ｐｄ（ＯＣＯＣＨ₃）₂、ＰｄＣｌ₂、Ｐｄ₂（ｄｂａ）₃の存在下で実施される。カップリングは、標準的な条件下で実施することや、マイクロ波条件下で実施することもできる。

【0310】

ソノガシラカップリングは、次の２つの触媒を使用して実施される：ゼロ価パラジウム錯体及び銅（Ｉ）のハロゲン化物塩。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）などのホスフィン−パラジウム錯体をこの反応のために使用するが、パラジウム（ＩＩ）錯体を使用することもできる。というのは、これらは、反応媒体中において末端アルキンの消費によりパラジウム（０）種に還元されるからである。また、トリフェニルホスフィンの酸化トリフェニルホスフィンへの酸化も、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリドなどの触媒を使用する場合にはその場でのＰｄ（０）の形成をもたらすことができる。対照的に、ハロゲン化銅（Ｉ）は、末端アルキンと反応し、そしてカップリング反応のための活性種として作用する銅（Ｉ）アセチリドを生成する。

【0311】

反応媒体は、このカップリング反応の副生成物として生成されるハロゲン化水素を中和するために塩基性でなければならず、そのため、トリエチルアミン、ジエチルアミン又はピペリジンなどのアルキルアミン化合物が溶媒として使用される場合があるが、DMF又はエーテルも溶媒として使用することができる。例えば、炭酸カリウム又は炭酸セシウムのような他の塩基が使用される場合もある。

【0312】

２回のカップリング工程は、通常、連続的に実施される。これらの工程は、これら２回の工程間に精製しながら又は精製することなく実施できる。精製が実施されない場合には、２回の工程は、同じ反応容器中で実施できる。精製は、通常、第二のカップリング工程の後に必要となる。望ましくない副生成物からの化合物の精製は、カラムクロマトグラフィー又はイオン交換分離によって実施できる。

【0313】

Ｐｒｏｔ^Oがオキソ基であり、かつ、Ｐｒｏｔ^NがＳＥＭである式４の化合物の合成は、参照によりに含められるＷＯ００／１２５０８号に詳細に記載されている。特に、上記の化合物を中間体Ｐと示している第２４頁のスキーム７を参照されたい。この合成方法は、ＷＯ２００４／０４３９６３に記載されている。

【0314】

Ｐｒｏｔ^Oが合成のための保護酸素基である式４の化合物の合成は、ＷＯ２００５／０８５２５１に記載されており、その合成を引用によりここに含めるものとする。

【0315】

Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在する式３ｂの化合物は、次式５ａの化合物から：

【化86】

Ｃ２ケト基のトリフレート化による式４の化合物の合成のための上記の参考文献に記載された方法の適応によって合成できる。

【0316】

式５ａの化合物は、次式６の化合物から：

【化87】

適切なアルケン形成試薬、例えばウィッティヒ試薬（イリドなど）、テッベ試薬及びホーナー・エモンズ・ ワズワース試薬の約単一当量（０．９又は１〜１．１又は１．２）との反応により合成できる。参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１０／０４３８７７号の第１６頁の議論を参照されたい。

【0317】

また、Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在する式３ｂの化合物は、式５ｂの化合物から：

【化88】

上記のような適切なアルケン形成試薬との反応により合成できる。

【0318】

式５ｂの化合物は、式６の化合物から、トリフレート化剤の単一の当量（例えば０．９又は１〜１．１又は１．２）を用いて選択的トリフレート化によって合成できる。

【0319】

また、式５ｂの化合物を使用して式3cの化合物：

【化89】

を式ＩＩａのアルキンのソノガシラカップリングによって合成することもできる。続いて、これらの化合物を使用して、上記のような適切なアルケン形成試薬との反応により、Ｃ２’とＣ３’の間に単結合が存在する式２の化合物を合成することができる。

【0320】

Ｒ¹⁰及びＲ¹⁰’がＨであり、かつ、Ｒ¹¹とＲ^11’がＳＯ_zＭである式Ｉの化合物は、式Ｉの化合物（ここで、Ｒ¹⁰及びＲ¹¹は、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に窒素−炭素二重結合を形成する。）から、適切な重亜硫酸塩又はスルフィン酸塩の添加、その後の適切な精製工程によって合成できる。さらなる方法は、本明細書中に参照として援用されるＧＢ２０５３８９４に記載されている。

【0321】

合成のための窒素保護基
合成のための窒素保護基は当該技術分野でよく知られている。本発明において、特に関心のある保護基は、カルバメート窒素保護基及びヘミアミナール窒素保護基である。

【0322】

カルバメート窒素保護基は、次の構造を有する：

【化90】

式中、Ｒ^’10は、上で定義したＲである。多数の好適な基が、グリーン，ＴＷ及びウッツ，ＧＭ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社，１９９９年の５０３〜５４９頁に記載されている。この文献を参照により本明細書に含める。

【0323】

特に好ましい保護基としては、Ｔｒｏｃ、Ｔｅｏｃ、Ｆｍｏｃ、ＢＯＣ、Ｄｏｃ、Ｈｏｃ、ＴｃＢＯＣ、１−Ａｄｏｃ及び２−Ａｄｏｃが挙げられる。

【0324】

可能な他の基は、ニトロベンジルオキシカルボニル（例えば、4−ニトロベンジルオキシカルボニル及び２−（フェニルスルホニル）エトキシカルボニルである。

【0325】

パラジウム触媒を用いて除去することができる保護基、例えばＡｌｌｏｃは、好ましくない。

【0326】

ヘミアミナール窒素保護基は、次の構造を有する：

【化91】

式中：Ｒ^’10は、上で定義したＲである。アミド保護基として多数の好適な基がグリーン，ＴＷ及びウッツ，ＧＭ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社，１９９９年の６３〜６４７頁に記載されている。この文献を参照により本明細書に含める。ここで開示された基を本発明の化合物に適用することができる。このような基としては、ＳＥＭ、ＭＯＭ、ＭＴＭ、ＭＥＭ、ＢＯＭ、ニトロ又はメトキシ置換ＢＯＭ、−Ｃ_l3ＣＣＨ₂ＯＣＨ₂が挙げられるが、これらに限定されない。

【0327】

合成のための保護酸素基
合成のための保護酸素基は当該技術分野でよく知られている。多数の好適な酸素保護基がグリーン，ＴＷ及びウッツ，ＧＭ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社，１９９９年の第２３〜２００頁に記載されている。

【0328】

特に関心のある部類としては、シリルエーテル、メチルエーテル、アルキルエーテル、ベンジルエーテル、エステル、アセテート、ベンゾエート、カーボネート及びスルホネートが挙げられる。

【0329】

好ましい酸素保護基としては、アセテート、ＴＢＳ及びＴＨＰが挙げられる。

【0330】

薬剤結合体の合成
結合体は先に記載したように調製できる。マレイミジル基（Ａ）、ペプチド基（Ｌ¹）と自壊性基（Ｌ²）を有するリンカーは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６２１４３４５号に記載のように調製できる。マレイミジル基（Ａ）及びペプチド基（Ｌ¹）を有するリンカーは、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００９／０１１７５３１号に記載されるように調製できる。他のリンカーは、ここで引用した参考文献に従って又は当業者に知られているように調製できる。

【0331】

リンカー・薬剤化合物は、当技術分野に公知の方法に従って調製できる。リンカー単位の活性基への（ＰＤＢ二量体薬物単位の）アミン系Ｘ置換基の結合は、米国特許第６２１４３４５号及び同７４９８２９８号並びにＷＯ２００９−０１１７５３１号に一般的に記載された方法に従って、又はさもなければに当業者に知られている方法に従って実施できる。

【0332】

抗体は、Ｄｏｒｏｎｉｎａ外，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００３，２１，７７８−７８４に記載されるようにリンカー・薬剤化合物に結合できる。簡単にいうと、ｐＨ７．４の５０ｍＭのホウ酸ナトリウムを含有するＰＢＳ中の抗体（４〜５ｍｇ／ｍＬ）を、３７℃でトリス（カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）により還元させる。鎖間ジスルフィドを減少させる反応の進行を、５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）との反応によって監視し、そしてチオール／ｍＡｂの所望のレベルが達成されるまで進行させる。次いで、還元された抗体を０℃に冷却し、そして抗体のチオール当たり１．５当量のマレイミド薬剤・リンカーでアルキル化する。１時間後、反応を５当量のＮ−アセチルシステインの添加によりクエンチする。クエンチされた薬剤リンカーを、ＰＤ−１０カラムによるゲル濾過によって除去する。続いて、ＡＤＣを０．２２μｍのシリンジフィルターを通して滅菌濾過する。タンパク質濃度を、それぞれ２８０ｎｍ及び３２９ｎｍでのスペクトル分析により、２８０ｎｍでの薬物吸光度の寄与を補正して決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィーを使用して抗体の凝集の程度を決定することができ、また、ＲＰ−ＨＰＬＣを使用して、ＮＡＣ−クエンチ薬剤・リンカーの残留レベルを決定するができる。

【0333】

追加の優先
次の優先は、上記本発明の全ての態様に適用される場合もあり又は単一の態様に関連する場合もある。これらの優先事項を任意の組み合わせで互いに組み合わせることができる。

【0334】

いくつかの実施形態では、Ｒ^6’、Ｒ^7’、Ｒ^9’、Ｒ^10’、Ｒ^11’及びＹ’は、好ましくは、それぞれＲ⁶、Ｒ⁷、Ｒ⁹、Ｒ¹⁰、Ｒ¹¹及びＹと同一である。

【0335】

二量体結合
Ｙ及びＹ’は、好ましくはＯである。

【0336】

Ｒ”は好ましくは置換基を有しないＣ_3-7アルキレン基である。より好ましくは、Ｒ”は、Ｃ₃、Ｃ₅、又はＣ₇アルキレンである。最も好ましくは、Ｒ”はＣ₃又はＣ₅アルキレンである。

【0337】

Ｒ⁶〜Ｒ⁹
Ｒ⁹は、好ましくはＨである。

【0338】

Ｒ⁶は、好ましくは、ＯＨ、Ｈ、ＯＲ、ＳＨ、ＮＨ₂、ニトロ及びハロから選択され、より好ましくは、Ｈ又はハロであり、最も好ましくはＨである。

【0339】

Ｒ⁷は、好ましくはＯＨ、Ｈ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ₂、ＮＨＲ、ＮＲＲ’及びハロから選択され、より好ましくは独立して、Ｈ、ＯＨ及びＯＲから選択され、ここで、Ｒは、好ましくは、置換されていてよいＣ_1-7アルキル、Ｃ_3-10ヘテロシクリル及びＣ_5-10アリール基から選択される。Ｒは、より好ましくは、置換されていても置換されていなくてもよいＣ_1-4アルキル基であることができる。関心のある置換基は、Ｃ_5-6アリール基（例えばフェニル）である。７位での特に好ましい置換基はＯＭｅ及びＯＣＨ₂Ｐｈである。特に関心のある他の置換基は、ジメチルアミノ（すなわち、−ＮＭｅ₂）；−（ＯＣ₂Ｈ₄）_qＯＭｅ（ここで、ｑは０〜２である。）；モルホリノ、ピペリジニル及びＮ−メチル−ピペラジニルを含めた窒素含有Ｃ₆ヘテロシクリルである。

【0340】

これらの優先は、それぞれ、Ｒ^9’、Ｒ^6’及びＲ^7’に適用される。

【0341】

Ｒ²
Ｒ²は、式ＩＩのものである：

【化92】

ここで、Ｑは、ＯＨ、ＳＨ及びＮＲＮから選択され、ＲＮは、Ｈ、メチル及びエチルから選択される。

【0342】

いくつかの実施形態では、ＱはＮＲＮであることが好ましい。他の実施形態では、ＱはＯＨである。さらなる実施形態では、ＲはＳＨである。

【0343】

Ｒ^Nは、好ましくは、Ｈ及びメチルから選択される。ある種の実施形態では、Ｒ^NはＨである。他の実施形態では、Ｒ^Nはメチルである。

【0344】

Ｒ¹²
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在する場合には、Ｒ¹²は次のものから選択される：
（ａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、Ｃ_1-7アルキル、Ｃ_3-7ヘテロシクリル及びビスオキシ−Ｃ_1-3アルキレンよりなる群から選択される１個以上の置換基により置換されていてよいＣ_5-10アリール基；
（ｂ）Ｃ_1-5飽和脂肪族アルキル；
（ｃ）Ｃ_3-6飽和シクロアルキル；
（ｄ）

【化93】

（ここで、Ｒ²¹、Ｒ²²及びＲ²³の各々は、独立して、Ｈ、Ｃ_1-3飽和アルキル、Ｃ_2-3アルケニル、Ｃ_2-3アルキニル及びシクロプロピルから選択され、ここで、Ｒ¹²基における炭素原子の総数は５以下である）;
（ｅ）

【化94】

（ここで、Ｒ^25a及びＲ^25bの一方はＨであり、他方はフェニル（該フェニルは、ハロ、メチル、メトキシで置換されていてよい）、ピリジル及びチオフェニルから選択される）；及び
（ｆ）

【化95】

（ここで、Ｒ²⁴は、Ｈ、Ｃ_1-3飽和アルキル、Ｃ_2-3アルケニル、Ｃ_2-3アルキニル、シクロプロピル、フェニル（このフェニルは、ハロ、メチル、メトキシから選択される基により置換されていてよい）、ピリジル及びチオフェニルから選択される）。

【0345】

Ｒ¹²がＣ_5-10のアリール基である場合には、このものはＣ_5-7のアリール基であることができる。Ｃ_5-7アリール基は、フェニル基又はＣ_5-7ヘテロアリール基、例えば、フラニル、チオフェニル及びピリジルであることができる。いくつかの実施形態では、Ｒ¹²は、好ましくはフェニルである。他の実施形態では、Ｒ¹²は、好ましくチオフェニル、例えば、チオフェン−２−イル及びチオフェン−３−イルである。

【0346】

Ｒ¹²がＣ_5-10のアリール基の場合には、このものは、Ｃ_8-10アリール、例えば、キノリニル又はイソキノリニル基であることができる。キノリニル又はイソキノリニル基は、任意の利用可能な環位置を介してＰＢＤコアに結合できる。例えば、キノリニルは、キノリン−２−イル、キノリン−３−イル、キノリン−４−イル、キノリン−５−イル、キノリン−６−イル、キノリン−７−イル及びキノリン−８−イルであることができる。これらのうち、キノリン−３−イル及びキノリン−６−イルが好ましい場合がある。イソキノリニルは、イソキノリン−１−イル、イソキノリン−３−イル、イソキノリン−４−イル、イソキノリン−５−イル、イソキノリン−６−イル、イソキノリン−７−イル及びイソキノリン−８−イルであることができる。これらのなかでは、イソキノリン−３−イル及びイソキノリン−６−イルが好ましい場合がある。

【0347】

Ｒ¹²がＣ_5-10のアリール基である場合には、このものは任意の数の置換基を有することができる。このものは、好ましくは１〜３個の置換基を保持し、１〜２個がより好ましく、単独で置換された基が最も好ましい。置換基は任意の位置であることができる。

【0348】

Ｒ¹²がＣ_5-7アリール基である場合には、単一の置換基は、好ましくは、化合物の残部への結合に隣接していない環原子上にある、すなわち、このものは、好ましくは、化合物の残部への結合に対してβ又はγである。したがって、Ｃ_5-7アリール基がフェニルの場合には、その置換基は、好ましくはメタ又はパラ位にあり、より好ましくはパラ位にある。

【0349】

Ｒ¹²がＣ_8-10のアリール基、例えばキノリニル又はイソキノリニルである場合には、このものは、キノリン又はイソキノリン環の任意の位置に任意の数の置換基を保持できる。いくつかの実施形態では、このものは、１個、２個又は３個の置換基を保持し、これらのものは、近位及び遠位の環又は両方（１個以上の置換基の場合）にあることができる。

【0350】

Ｒ¹²がＣ_5-10のアリール基である場合の置換基Ｒ¹²
Ｒ¹²がＣ_5-10のアリール基であるＲ¹²の置換基がハロである場合には、このものは、好ましくＦ又はＣｌ、より好ましくはＣｌである。

【0351】

Ｒ¹²がＣ_5-10のアリール基であるＲ¹²上の置換基がエーテルである場合には、このものは、いくつかの実施形態では、アルコキシ基、例えば、Ｃ_1-7アルコキシ基（例えばメトキシ、エトキシ）であることができ、又はいくつかの実施形態では、Ｃ_5-7アリールオキシ基（例えばフェノキシ、ピリジルオキシ、フラニルオキシ）であることができる。アルコキシ基は、例えばアミノ基（例えばジメチルアミノ）によってそれ自体さらに置換されていてもよい。

【0352】

Ｒ¹²がＣ_5-10のアリール基である場合のＲ¹²上の置換基がＣ_1-7アルキルである場合には、このものは、好ましくはＣ_1-4アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル）であることができる。

【0353】

Ｒ¹²がＣ_5-10のアリール基であるＲ¹²上の置換基がＣ_3-7ヘテロシクリルである場合には、このものは、いくつかの実施形態ではＣ₆窒素含有ヘテロシクリル基、例えば、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペリジニル、ピペラジニルであることができる。これらの基は、窒素原子を介して、ＰＢＤ部分の残部に結合できる。これらの基は、例えばＣ_1-4アルキル基によってさらに置換されていてもよい。Ｃ₆窒素含有ヘテロシクリル基がピペラジニルである場合には、該さらなる置換基は、第２の窒素環原子上にあることができる。

【0354】

Ｒ¹²がＣ_5-10のアリール基である場合のＲ¹²上の置換基がビスオキシＣ_1-3アルキレンである場合には、このものは、好ましく、ビスオキシメチレン又はビスオキシエチレンである。

【0355】

Ｒ¹²がＣ_5-10アリール基であるときの特に好ましい置換基としては、メトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビスオキシメチレン、メチルピペラジニル、モルホリノ及びメチルチオフェニルが挙げられる。Ｒ¹²についての特に好ましい別の置換基はジメチルアミノプロピルである。

【0356】

Ｒ¹²がＣ_5-10のアリール基である場合に特に好ましい置換Ｒ¹²基としては、４−メトキシフェニル、３−メトキシフェニル、４−エトキシフェニル、３−エトキシフェニル、４−フルオロフェニル、４−クロロフェニル、３，４−ビスオキシメチレンフェニル、４−メチルチオフェニル、４−シアノフェニル、４−フェノキシフェニル、キノリン−３−イル及びキノリン−６−イル、イソキノリン−３−イル及びイソキノリン−６−イル、２−チエニル、２−フラニル、メトキシナフチル及びナフチルが挙げられるが、これらに限定されない。別の可能な置換基Ｒ¹²は、４−ニトロフェニルである。特に関心のあるＲ¹²基としては、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル及び３，４−ビスオキシメチレンフェニルが挙げられる。

【0357】

Ｒ¹²がＣ_1-5飽和脂肪族アルキルである場合には、このものは、メチル、エチル、プロピル、ブチル又はペンチルであることができる。いくつかの実施形態では、このものは、メチル、エチル又はプロピル（ｎ−ペンチル又はイソプロピル）であることができる。これらの実施形態のいくつかでは、このものはメチルであることができる。他の実施形態では、このものは、直鎖状又は分岐状であることができるブチル又はペンチルであることができる。

【0358】

Ｒ¹²がＣ_3-6飽和シクロアルキルである場合には、これは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル又はシクロヘキシルであることができる。いくつかの実施形態では、これはシクロプロピルであることができる。

【0359】

Ｒ¹²が

【化96】

の場合には、Ｒ²¹、Ｒ²²及びＲ²³のそれぞれは、独立して、Ｈ、Ｃ_1-3飽和アルキル、Ｃ_2-3アルケニル、Ｃ_2-3アルキニル及びシクロプロピルから選択され、ここで、Ｒ¹²基中における炭素原子の総数はせいぜい５にすぎない。いくつかの実施形態では、Ｒ¹²基中の炭素原子の総数は４以下又３以下である。

【0360】

いくつかの実施形態では、Ｒ²¹、Ｒ²²及びＲ²³の一つはＨであり、他の２つの基は、Ｃ_1-3飽和アルキル、Ｃ_2-3アルケニル、Ｃ_2-3アルキニル及びシクロプロピルから選択される。

【0361】

他の実施形態では、Ｒ²¹、Ｒ²²及びＲ²³の二つはＨであり、他の基は、Ｃ_1-3飽和アルキル、Ｃ_2-3アルケニル、Ｃ_2-3アルキニル及びシクロプロピルから選択される。

【0362】

いくつかの実施形態では、Ｈではない基は、メチル及びエチルから選択される。これらの実施形態のいくつかでは、Ｈではない基はメチルである。

【0363】

いくつかの実施形態では、Ｒ²¹はＨである。

【0364】

いくつかの実施形態では、Ｒ²²はＨである。

【0365】

いくつかの実施形態では、Ｒ²³はＨである。

【0366】

いくつかの実施形態では、Ｒ²¹及びＲ²²はＨである。

【0367】

いくつかの実施形態では、Ｒ²¹及びＲ²³はＨである。

【0368】

いくつかの実施形態では、Ｒ²²及びＲ²³はＨである。

【0369】

特に関心のあるＲ¹²基は次のものである：

【化97】

【0370】

Ｒ¹²が

【化98】

である場合には、Ｒ^25a及びＲ^25bの一方はＨであり、他方は、ハロ、メチル、メトキシから選択される基により置換されていてよいフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｈでない基は、置換されていてよいフェニルである。任意のフェニル置換基がハロである場合には、これは好ましくはフルオロである。ある種の実施形態では、フェニル基は、非置換である。

【0371】

Ｒ¹²が

【化99】

の場合には、Ｒ²⁴は、Ｈ；Ｃ_1-3飽和アルキル；Ｃ_2-3アルケニル；Ｃ_2-3アルキニル；シクロプロピル；ハロ、メチル、メトキシから選択される基で置換されていてよいフェニル；ピリジル及びチオフェニルから選択される。任意のフェニル置換基がハロである場合には、これは好ましくはフルオロである。ある種の実施形態では、フェニル基は、非置換である。
いくつかの実施形態では、Ｒ²⁴はＨ、メチル、エチル、エテニル及びエチニルから選択される。これらの実施形態のいくつかでは、Ｒ²⁴はＨ及びメチルから選択される。

【0372】

Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在する場合には、
Ｒ¹²は

【化100】

であり、ここで、Ｒ^26a及びＲ^26bは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃ_1-4飽和アルキル、Ｃ_2-3アルケニルから選択され、このアルキル及びアルケニル基は、Ｃ_1-4アルキルアミド及びＣ１〜４アルキルエステルから選択される基で置換されていてよく；又はＲ^26a及びＲ^26bの一方がＨである場合、他方はニトリル及びＣ_1-4アルキルエステルから選択される。

【0373】

いくつかの実施形態では、Ｒ^26a及びＲ^26bが両方ともＨであることが好ましい。

【0374】

他の実施形態では、Ｒ^26a及びＲ^26bが両方ともメチルであることが好ましい。

【0375】

さらなる実施形態では、Ｒ^26a及びＲ^26bの一方がＨであり、他方がＣ_1-4飽和アルキル、Ｃ_2-3アルケニルから選択されることが好ましく、このアルキル及びアルケニル基は置換されていてよい。これらのさらなる実施形態では、Ｈではない基がメチル及びエチルから選択されることがさらに好ましい場合がある。

【0376】

Ｍ及びｚ
Ｍ及びＭ’は、一価の薬学的に許容できる陽イオンであり、好ましくはＮａ⁺であることが好ましい。

【0377】

ｚは、好ましくは３である。

【0378】

本発明の特に好ましい化合物は、次式Ｉａのものである：

【化101】

ここで、
ｎは１又は３であり；
Ｒ^1aはメチル又はフェニルであり；
Ｒ^NはＨ、メチル又はエチルであり；
Ｒ^12aは次のものから選択される：
（ａ）

【化102】

（ｂ）

【化103】

（ｃ）

【化104】

（ｄ）

【化105】

（ｅ）

【化106】

（ｆ）

【化107】

。

【0379】

Ｒ^12aについての追加の基は次のものであることができる：
(g）

【化108】

；及び
(h）

【化109】

。

【0380】

本発明の特に好ましい他の化合物は、式Ｉｂのものである：

【化110】

ここで、
ｎは１又は３であり；
Ｒ^1bはメチル又はフェニルであり；及び
Ｒ^NはＨ、メチル又はエチルである。

【0381】

第３の態様
第１の態様について上記した優先は適宜この態様の化合物にも適用できる。

【0382】

Ｒ¹⁰がカルバメート窒素保護基である場合には、これは、好ましくはＴｅｏｃ、Ｆｍｏｃ及びＴｒｏｃであることができ、より好ましくはＴｒｏｃであることができる。

【0383】

Ｒ¹¹がＯ−Ｐｒｏｔ^O（ここで、Ｐｒｏｔ^Oは酸素保護基である）である場合には、Ｐｒｏｔ^Oは、好ましくはＴＢＳ又はＴＨＰであることができ、より好ましくはＴＢＳであることができる。

【0384】

Ｒ¹⁰がヘミアミナール窒素保護基である場合には、これは、好ましくはＭＯＭ、ＢＯＭ又はＳＥＭであることができ、より好ましくはＳＥＭであることができる。

【0385】

式Ｉの化合物についての優先は、適宜、本発明の第６の態様におけるＤにも適用される。

【実施例】

【0386】

実施例
例１のための一般的な実験方法
旋光度は、ＡＤＰ２２０旋光計（スタンリー・ベーリング社）で測定し、濃度（ｃ）はｇ／１００ｍＬで与える。融点はデジタル融点装置（電熱）を用いて測定した。ＩＲスペクトルは、パーキン − エルマー・スペクトラム１００ＦＴ ＩＲ分光計で記録した。¹Ｈ及び¹³Ｃ ＮＭＲスペクトルは、ブルカーアバンスＮＭＲ分光計をそれぞれ４００及び１００ＭＨｚで用いて３００Ｋで得た。化学シフトをＴＭＳ（δ＝０．０ｐｐｍ）に対して報告し、そしてシグナルを、Ｓ（一重項）、ｄ（二重項）、ｔ（三重項）、ＤＴ（二重三重項）、ｄｄ（二重項の二重項）、ＤＤＤ（二重項の二重二重項）又はｍ（多重項）として示し、カップリング定数をヘルツ（Ｈｚ）で与える。質量分析（ＭＳ）データは、Ｗａｔｅｒｓ２９９６ ＰＤＡを有するＷａｔｅｒｓ２６９５ ＨＰＬＣに連結されたＷａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱ装置を用いて収集した。使用したＷａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱパラメーターは、毛細管（ｋＶ）、３．３８；コーン（Ｖ）、３５；エクストラクター（Ｖ）、３．０；源温度（℃）、１００；脱溶媒和温度（℃）、２００；コーン流量（Ｌ／ｈ）、５０；脱溶媒和流量（Ｌ／ｈ）、２５０であった。高分解能質量分析（ＨＲＭＳ）データを、器具にサンプルを導入するために金属被覆されたホウケイ酸ガラスのチップを用いてＷａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＱＴＯＦグローバルによりポジティブＷモードで記録した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）をシリカゲルアルミニウムプレート（メルク６０、Ｆ₂₅₄）上で実施し、そしてフラッシュクロマトグラフィーは、シリカゲル（メルク６０、２３０〜４００メッシュＡＳＴＭ）を用いた。ＨＯＢｔ（ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ社）及び固体担持試薬（アルゴノート社）を除き、他の全ての化学物質及び溶媒は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入し、さらに精製することなく供給されたまま使用した。無水溶媒を、適切な乾燥剤の存在下に乾燥窒素雰囲気下で蒸留することによって調製し、４Åモレキュラーシーブ又はナトリウムワイヤを通して保存した。石油エーテルとは、４０〜６０℃で沸騰する留分をいう。

【0387】

化合物１を、ＷＯ２０１０／０４３８８０号（化合物１７）に記載されたとおりに合成した。この文献を引用によりここに含める。

【0388】

一般的なＬＣ／ＭＳ条件：ＨＰＬＣ（ウォーターズ・アライアンス２６９５）を、水（Ａ）（ギ酸０．１％）及びアセトニトリル（Ｂ）（ギ酸０．１％）の移動相を用いて行った。勾配：１．０分にわたり初期組成５％、続いて３分以内に５％Ｂから９５％Ｂ。この組成を９５％Ｂで０．５分間保持し、次いで０．３分で５％Ｂに戻した。総勾配実行時間は５分に相当する。流速は３．０ｍＬ／分であり、４００μＬを、質量分析計に入るゼロのデッドボリュームのティーピースを介して分割した。波長検出範囲：２２０〜４００ｎｍ。機能種別：ダイオードアレイ（５３５スキャン）。カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（商標）オニキスモノリシックＣ１８５０×４．６０ｍｍ。

【0389】

例１

【化111】

（ａ）（Ｓ）−７−メトキシ−８−（３−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（３−（メチルアミノ）−１−プロピン−１−イル）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−２−（４−メトキシフェニル）−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５，１１（１０Ｈ，１１ａＨ）−ジオン（２）
１（０．４３３ｇ、０．４０ｍｍｏｌ）と、ＣｕＩ（０．００８ｇ、０．０４ｍｍｏｌ、０．１当量）と、Ｎ−メチル−Ｎ−（２−プロピニル）アミン（０．１０ｍＬ、１．２０ｍｍｏｌ、３当量）と、ＰＰｈ₃（０．０２１ｇ、０．０８ｍｍｏｌ、０．２当量）との混合物を、アルゴン雰囲気下でモレキュラーシーブの存在下に無水ピペリジン（５ｍＬ）に溶解させた。Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄（０．０４６ｇ、０．０４ｍｍｏｌ、０．１当量）をこの混合物に添加し、そして反応物を６０℃に温め、一晩撹拌した。溶媒を減圧下で回転蒸発により除去し、得られた褐色の固体をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配９６％ＤＣＭ−４％メタノール）により精製した。化合物２を褐色の固体（０．２１３グラム、５３％）として得た；Ｒｆ０．３２［ＤＣＭ中１０％メタノール］；ＬＣ−ＭＳ（５分）３．３５分、ＥＳ⁺９９５．３５。

【0390】

（ｂ）（Ｓ）−２−（（Ｚ）−（（（Ｅ）−４−メトキシ−３−（３−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−２−ブテン−１−イル）イミノ）メチル）−４−（３−（メチルアミノ）−１−プロピン−１−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルバルデヒド（３）
化合物２（０．０４１ｇ、０．０４ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で無水ＴＨＦ（３．８ｍＬ）に溶解し、そしてアセトン−ドライアイス浴中で−７８℃に冷却した。ＬｉＥｔ₃ＢＨ（ＴＨＦ中１Ｍ溶液の０．２５ｍＬ、０．３５ｍｍｏｌ、６当量）をこの混合物に添加し、そして反応物を４０分間にわたり−７８℃で撹拌した。反応物を、Ｈ₂Ｏ（３ｍＬ）でクエンチし、そしてブライン（３ｍＬ）を添加した後、水相を抽出し（ＤＣＭ、９ｍＬ−メタノール１ｍＬ）、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、そして溶媒を減圧下で回転蒸発により除去した。この粗生成物をエタノール（３ｍＬ）と、ＤＣＭ（１．５ｍＬ）と、Ｈ₂Ｏ（１．５ｍＬ）との混合物に溶解し、そしてシリカゲルをこの混合物に添加した。この反応物をアルゴン雰囲気下において室温で４日間撹拌した。この混合物を、ＤＭＣ（１４０ｍＬ）とメタノール（１５ｍＬ）との混合物で洗浄して焼結漏斗で濾過した。有機相をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）させ、そして溶媒を減圧下で回転蒸発により除去した。得られた褐色の固体をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配９０％ＤＣＭ−１０％メタノール）によって精製した。化合物３を褐色の固体（０．０２９ｇ、５９％）として得た；Ｒｆ０．１１［ＤＣＭ中８％メタノール］；ＬＣ−ＭＳ（５分）２．４７分、ＥＳ⁺７０２．２８。

【0391】

次の例のための一般的な実験法
ＬＣＭＳデータを、エレクトロスプレーイオン化と共にＡｇｉｌｅｎｔ６１１０四重極ＭＳを備えたＡｇｉｌｅｎｔ１２００シリーズＬＣ／ＭＳを用いて得た。移動相Ａ−水中０．１％酢酸。移動相Ｂ−アセトニトリル中０．１％。１．００ｍＬ／分の流量。勾配を３分かけて５％Ｂから９５％Ｂに上昇させ、１分間にわたって９５％Ｂで保持し、次いで６秒間で５％Ｂまで落とす。総実行時間は５分である。カラム：フェノメネックスジェミニ−ＮＸ３μｍＣ１８、３０Ｘ２．００ｍｍ。クロマトグラムは２５４ｎｍでのＵＶ検出に基づく。質量スペクトルを、ＭＳをポジティブモードで用いて達成した。プロトンＮＭＲ化学シフト値を、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶ４００を用いて４００ＭＨｚでデルタスケールで測定した。以下の略語を用いた：ｓは一重項、ｄは二重項、ｔは三重項、ｑは四重項、ｍは多重項；ｂｒはブロードである。カップリング定数はＨｚで報告する。特に明記しない限り、（フラッシュ法による）カラムクロマトグラフィーは、Ｍｅｒｃｋ Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌシリカ（Ａｒｔ．９３８５）で行った。質量分析（ＭＳ）データは、Ｗａｔｅｒｓ２７９５ ＨＰＬＣ分離モジュールに連結されたＷａｔｅｒｓマイクロマスＬＣＴ機器を用いて収集した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）をシリカゲルアルミニウムプレート（メルク６０、Ｆ₂₅₄）で行った。他の全ての化学物質及び溶媒は、シグマ・オルドリッチ社又はフィッシャーサイエンティフィック社から購入し、さらに精製することなく供給されたまま使用した。

【0392】

旋光度は、ＡＤＰ２２０旋光計（スタンリー・ベーリング社）で測定し、濃度（ｃ）はｇ／１００ｍＬで与える。融点はデジタル融点装置（電熱）を用いて測定した。ＩＲスペクトルは、パーキン−エルマー・スペクトラム１００ＦＴ ＩＲ分光計で記録した。¹Ｈ及び¹³Ｃ ＮＭＲスペクトルは、ブルカーアバンスＮＭＲ分光計をそれぞれ４００及び１００ＭＨｚで用いて３００Ｋで得た。化学シフトをＴＭＳ（δ＝０．０ｐｐｍ）に対して報告し、そしてシグナルを、Ｓ（一重項）、ｄ（二重項）、ｔ（三重項）、ＤＴ（二重三重項）、ｄｄ（二重項の二重項）、ＤＤＤ（二重項の二重二重項）又はｍ（多重項）として示し、カップリング定数をヘルツ（Ｈｚ）で与える。質量分析（ＭＳ）データは、Ｗａｔｅｒｓ２９９６ ＰＤＡを有するＷａｔｅｒｓ２６９５ ＨＰＬＣに連結されたＷａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱ装置を用いて収集した。使用したＷａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱパラメーターは、毛細管（ｋＶ）、３．３８；コーン（Ｖ）、３５；エクストラクター（Ｖ）、３．０；源温度（℃）、１００；脱溶媒和温度（℃）、２００；コーン流量（Ｌ／ｈ）、５０；脱溶媒和流量（Ｌ／ｈ）、２５０であった。高分解能質量分析（ＨＲＭＳ）データを、器具にサンプルを導入するために金属被覆されたホウケイ酸ガラスのチップを用いてＷａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＱＴＯＦグローバルによりポジティブＷモードで記録した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）をシリカゲルアルミニウムプレート（メルク６０、Ｆ₂₅₄）上で実施し、そしてフラッシュクロマトグラフィーは、シリカゲル（メルク６０、２３０〜４００メッシュＡＳＴＭ）を用いた。ＨＯＢｔ（ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ社）及び固体担持試薬（アルゴノート社）を除き、他の全ての化学物質及び溶媒は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入し、さらに精製することなく供給されたまま使用した。無水溶媒を、適切な乾燥剤の存在下に乾燥窒素雰囲気下で蒸留することによって調製し、４Åモレキュラーシーブ又はナトリウムワイヤを通して保存した。石油エーテルとは、４０〜６０℃で沸騰する留分をいう。

【0393】

一般的なＬＣ／ＭＳ条件：ＨＰＬＣ（ウォーターズ・アライアンス２６９５）を、水（Ａ）（ギ酸０．１％）及びアセトニトリル（Ｂ）（ギ酸０．１％）の移動相を用いて行った。勾配：１．０分にわたり初期組成５％、続いて３分以内に５％Ｂから９５％Ｂ。この組成を９５％Ｂで０．５分間保持し、次いで０．３分で５％Ｂに戻した。総勾配実行時間は５分に相当する。流速は３．０ｍＬ／分であり、４００μＬを、質量分析計に入るゼロのデッドボリュームのティーピースを介して分割した。波長検出範囲：２２０〜４００ｎｍ。機能種別：ダイオードアレイ（５３５スキャン）。カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（商標）オニキスモノリシックＣ１８５０×４．６０ｍｍ。

【0394】

重要な中間体の合成
化合物４をＷＯ２０１０／０４３８８０（化合物６ａ）に記載されたとおりにを合成した。この文献を引用により本明細書に含める。

【化112】

（ａ）１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［（１１ａＳ）−１１−スルホ−７−メトキシ−２−オキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）１，２，３，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］］（５）
ジオール４（２５．６０ｇ、２９．９ｍｍｏｌ、１．０当量）、ＮａＯＡｃ（６．９０ｇ、８４．１ｍｍｏｌ、２．８当量）及びＴＥＭＰＯ（１８８ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、０．０４当量）を窒素下でＤＣＭ（３２６ｍＬ）に溶解した。これを−８℃に冷却し、そしてＴＣＣＡ（９．７０ｇ、４１．７ｍｍｏｌ、１．４０当量）を２０分かけて少しずつ添加し、その間に、溶液は濃い褐色に変化し、これは反応が進行するにつれて明るくなった。３０分後、冷ＤＣＭ（２００ｍＬ）を添加し、そして混合物をセライトを通して濾過し、次いで飽和炭酸水素ナトリウム／チオ硫酸ナトリウムの溶液（１：１ｖ／ｖ、２００ｍＬ×２）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、そして減圧下で濃縮して橙色／黄色のスポンジ（２５．５ｇ、１００％）としてのビスケトン５を得た。ＬＣ／ＭＳ（３．１７３分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：８５４．２０［Ｍ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃）δ７．３２（ｓ，２Ｈ）、７．２５（ｓ，２Ｈ）、５．５０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ）、４．７５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ）、４．６０（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．９，３．１Ｈｚ）、４．３１−４．１８（ｍ，６Ｈ）、３．８９−３．８４（ｍ，８Ｈ）、３．７８−３．６２（ｍ，４Ｈ）、３．５５（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１９．３，３．０Ｈｚ）、２．７６（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１８．６，１０．２Ｈｚ）、２．４２（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ）、０．９８−０．９１（ｍ，４Ｈ）、０．００（ｓ，１８Ｈ）。

【0395】

（ｂ）１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス（１１ａＳ）−７−メトキシ−２−［［（トリフルオロメチル）スルホニル］オキシ］−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］ （６）
無水２，６−ルチジン（１．９８４ｇ、１７．８６４ｍｍｏｌ、６．２２当量）を、ビスケトン５（２．４５ｇ、２．９７７ｍｍｏｌ、１．００当量）の乾燥ＤＣＭ（９０ｍＬ）への激しく攪拌した溶液に窒素雰囲気下において−４５℃（ドライアイス／アセトニトリル）で一度に注入した。無水２，６−ルチジン（１．９８４ｇ、１７．８６４ｍｍｏｌ、６．２２当量）を、ビスケトン５（２．４５ｇ、２．９７７ｍｍｏｌ、１．００当量）の乾燥ＤＣＭ（９０ｍＬ）への激しく攪拌した溶液に窒素雰囲気下において−４５℃（ドライアイス／アセトニトリル）で一度に注入した。反応混合物を１時間にわたって−４５℃で撹拌し、この時点で、ＴＬＣ（５０／５０ｖ／ｖのｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）及びＬＣＭＳにより出発物質の完全な消費が明らかになった。この冷却反応混合物を直ちにＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、そして激しく振盪しながら、水（１×５０ｍＬ）、５％クエン酸溶液（１×１００ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（１００ｍＬ）、飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、そして硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濾過し、濃縮して粗生成物を得、これをフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配溶出９０：１０のｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（ｖ／ｖ）〜６０：４０のｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（ｖ／ｖ））により精製して、ビスエノールトリフレート６を黄色の泡状物として得た（２．０９７ｇ、６３％）。ＬＣ／ＭＳ（３．９１６分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：１１１７．２４［Ｍ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃）δ７．３３（ｓ，２Ｈ）、７．２６（ｓ，２Ｈ）、７．１４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ）、５．５１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ）、４．７６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ）、４．６２（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１１．０，３．６Ｈｚ）、４．３２−４．２３（ｍ，４Ｈ）、３．９４−３．９０（ｍ，８Ｈ）、３．８１−３．６４（ｍ，４Ｈ）、３．１６（ｄｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１６．４，１１．１，２．３Ｈｚ）、２．４３（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ）、１．２３−０．９２（ｍ，４Ｈ）、０．０２（ｓ，１８Ｈ）。

【0396】

例２

【化113】

【0397】

（ａ）化合物７ａ〜ｅ
（ｉ）化合物７ｃ−ｄの一般的調製
ボロン酸（１．０当量）、トリエチルアミン（４．０当量）及び（１１ａＳ，１１ａ’Ｓ）−８，８’−（プロパン−１，３−ジイルビス（オキシ））ビス（７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８，２−ジイル）ビス（トリフルオロメタンスルホネート）（６）（１．０当量）を、窒素雰囲気下でエタノール、トルエン及び水の混合物［３：６：１］（０．０１Ｍ）に溶解させた。この反応混合物を、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０４当量）を添加したときに５分間にわたって窒素下で脱気した。この反応混合物を１時間にわたって６０℃〜７０℃で撹拌した。ジクロロメタンを添加し、そして水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、そして減圧下で濃縮した。残留物をシリカに吸着させ、そしてフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配溶出、８０／２０〜２０／８０ｖ／ｖのヘキサン／酢酸エチル）で精製して、回収した出発物質と、生成物と、ビス置換不純物との混合物を得た。

【0398】

（Ｓ）−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イルトリフルオロメタンスルホネート（７ｃ）
６の２．０６ｇ（１．８４ｍｍｏｌ）は次の混合物を与えた：
褐色の固体として７ｃの０．４４６ｇ（２４％）。ＬＣ／ＭＳ（３．８８５分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：１００９．３１［Ｍ］⁺。
６の０．０５７グラム。ＬＣ／ＭＳ（３．９２０分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：１１１７．２４［Ｍ］⁺。
褐色の固体としてのビス置換不純物の０．５０４ｇ。ＬＣ／ＭＳ（３．８５４分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：９０１．４１［Ｍ］⁺。

【0399】

（Ｓ）−８−（３−（（Ｓ）−２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イルトリフルオロメタンスルホネート （７ｄ）
６の０．２００ｇ（０．１７９ｍｍｏｌ）は次の混合物を与えた：
褐色の固体としての７ｄの０．０７５ｇ（３８％）。ＬＣ／ＭＳ（３．８５１分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：１０８９．２８［Ｍ］⁺．
６の０．０２４ｇ。ＬＣ／ＭＳ（３．９２０分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：１１１７．２４［Ｍ］⁺．
褐色の固体としてのビス置換不純物の０．０５２ｇ。ＬＣ／ＭＳ（３．７７４分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：１０６１．３８［Ｍ］⁺。

【0400】

（ｉｉ）（Ｓ）−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イルトリフルオロメタンスルホネート（７ｅ）
（１１ａＳ，１１ａ’Ｓ）−８，８’−（プロパン−１，３−ジイルビス（オキシ））ビス（７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８，２−ジイル）ビス（トリフルオロメタンスルホネート）（６）（２．００ｇ、１．７９０ｍｍｏｌ、１．０当量）、（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルボロン酸（０．３９４ｇ、１．７９０ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．５７４ ｍＬ、４．１１７ｍｍｏｌ、２．３当量）を窒素雰囲気下でトルエン／エタノール／Ｈ₂Ｏ混合物（６：３：１）（１００ｍＬ）に溶解させた。この反応物を窒素でフラッシュし、そしてパラジウムテトラキストリフェニルホスフィン（２０．７ｍｇ、０．０１７９ｍｍｏｌ、０．０１当量）を添加した。反応物を窒素でフラッシュし、１６時間にわたって３０℃で攪拌した。その後、すべての揮発物を減圧下で除去し、そして固体残留物をＨ₂Ｏ（２００ ｍＬ）と酢酸エチル（２００ｍＬ）とで分配した。水性層を酢酸エチル（２×２００ｍＬ）でさらに２回抽出してから、一緒にした有機物をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、そして揮発分を減圧下で除去した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ₃ １００〜９５：５ｖ／ｖのＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ）で精製して、回収した出発物質と、生成物と、ビス置換不純物との混合物を得た。

【0401】

褐色の固体としての７ｅの０．６６９ｇ（３３％）。ＬＣ／ＭＳ（２．７５１分（ＥＳ⁺））、ｍ／ｚ：１１４４．２［Ｍ＋Ｈ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃）δ７．３７（ｓ，１Ｈ）、７．３３−７．２８ｍ，４Ｈ）、７．１２（ｍ，１Ｈ）、６．８８（ｄ，Ｊ＝８．８Hz,２Ｈ）、５．５１−５．４９（ｄ，Ｊ＝１０．０Hz,２Ｈ）、４．７６−４．７３（ｄｄ，Ｊ＝１０．０，４．０Hz,２Ｈ）、４．６２−４．５６（ｍ，２Ｈ）、４．３０−４．２２（ｍ，４Ｈ）、３．９４−３．８６（ｍ，９Ｈ）、３．８１−３．７１（ｍ，３Ｈ）、３．７０−３．６２（ｍ，２Ｈ）、３．２６−３．２２（ｍ，４Ｈ）、３．１７−３．０７（ｍ，２Ｈ）、２．６６−２．５５（ｍ，４Ｈ）、２．４６−２．３８（ｍ，２Ｈ）、２．３５（ｓ， ３Ｈ）、０．９９−０．９３（ｍ，４Ｈ）、０．００（ｓ，１８Ｈ）。
６の１．０９３ｇ。ＬＣ／ＭＳ（３．９１７分（ＥＳ⁺））。
褐色の固体としてのビス置換不純物の０．０９４ｇ。ＬＣ／ＭＳ（２．１５０分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：１０６１．３８［Ｍ］⁺。

【0402】

（ｂ）化合物８ａ〜ｅの一般的調製
工程（ａ）からの適切なモノトリフレート（１．０当量）とトリフェニルホスフィン（０．２当量）との混合物を窒素雰囲気下で４Åモレキュラーシーブの存在下に無水ピペリジン（０．０５Ｍ）に溶解させた。その後、プロパルギルアミン（６．０当量）、ヨウ化銅（０．１当量）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．１当量）をこの混合物に添加し、そして反応物を０．５時間〜１時間にわたって５０℃〜６０℃に温めた。混合物を室温まで冷却し、溶媒を減圧下で回転蒸発により除去した。得られた褐色油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した（ＤＣＭ１００〜９０：１０ｖ／ｖのＤＣＭ／メタノール〜８５：１５ｖ／ｖのＤＣＭ／メタノール）。

【0403】

（ｉ）（Ｓ）−２−（３−アミノ−１−プロピニル）−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５，１１（１０Ｈ，１１ａＨ）−ジオン（８ｃ）
７ｃの０．４１８ｇ（０．４１４ミリモル）は、生成物０．１５０ｇ（４０％）を褐色固体として生じさせた。ＬＣ／ＭＳ（２．５７６分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：９１４．４２［Ｍ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃）δ７．３５−７．３２（ｍ，３Ｈ）、６．８４（ｓ，１Ｈ）、６．２５−６．２１（ｄ，Ｊ＝１４．９Ｈｚ，１Ｈ）、５．７２−５．６５（ｍ，１Ｈ）、５．５０−５．４８（ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，２Ｈ）、４．７３−４．７１（ｍ，２Ｈ）、４．５１−４．４８（ｍ，２Ｈ）、４．３１−４．２３（ｍ，４Ｈ）、３．９３−３．８６（ｍ，７Ｈ）、３．８１−３．７２（ｍ，３Ｈ）、３．７０−３．６０（ｍ，５Ｈ）、３．４９−３．４２（ｍ，１Ｈ）、２．９５−２．８３（ｍ，２Ｈ）、２．４６−２．３８（ｍ，２Ｈ）、１．８３（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）、１．７６−１．６９（ｍ，２Ｈ）、１．００−０．９２（ｍ，４Ｈ）、０．００（ｓ，１８Ｈ）。

【0404】

（ｉｉ）（Ｓ）−２−（３−アミノ−１−プロピニル）−８−（３−（（Ｓ）−２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５，１１（１０Ｈ，１１ａＨ）−ジオン（８ｄ）
７ｄの１．１２０ｇ（１．０３ｍｍｏｌ）は生成物０．５０７ｇ（５０％）を褐色固体として生じさせた。ＬＣ／ＭＳ（２．５９６分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：９４４．２［Ｍ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃）δ７．３８（ｓ，１Ｈ）、７．３４（ｓ，１Ｈ）、７．３０（ｍ，１Ｈ）、７．０９（ｍ，１Ｈ）、６．９４（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．８９（ｄｄ，Ｊ＝８．１， １．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．７８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、５．９７（ｓ，２Ｈ）、５．５２−５．４９（ｄｄ，Ｊ＝１０．０，４．３Ｈｚ，２Ｈ）、４．７７−４．７３（ｄｄ，Ｊ＝１０．１， ６．１Ｈｚ，２Ｈ）、４．６１−４．５８（ｄｄ，Ｊ＝１０．６， ３．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．５３−４．４９（ｄｄ，Ｊ＝１０．６，３．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．３１−４．２４（ｍ，４Ｈ）、３．９１−３．８６（ｍ，９Ｈ）、３．８１−３．７４（ｍ，２Ｈ）、３．７３−３．５７（ｍ，５Ｈ）、３．１４−３．０７（ｍ，１Ｈ）、２．９４−２．８７（ｍ，１Ｈ）、２．４６−２．３９（ｍ，２Ｈ）、１．８５−１．６８（ｍ，２Ｈ）、１．０２−０．９３（ｍ，４Ｈ）、０．００（ｓ，１８Ｈ）。

【0405】

（ｉｉｉ）（Ｓ）−２−（３−アミノ−１−プロピニル）−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５，１１（１０Ｈ，１１ａＨ）−ジオン（８ｅ）
７ｅの０．８１２ｇ（０．７１０ｍｍｏｌ）は生成物０．２２７ｇ（３０％）を褐色固体として生じさせた。ＬＣ／ＭＳ（２．１０９分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：１０４９．４８［Ｍ＋Ｈ］⁺。

【0406】

（ｃ）化合物９ａ〜ｅの一般的調製
工程（ｂ）からの適切なＳＥＭのジラクタム（１．０当量）をＴＨＦ（０．０２Ｍ）に溶解し、そして窒素雰囲気下で−７８℃に冷却した。スーパーハイドライド溶液（ＴＨＦ中１Ｍ、２．０４当量）を５分間かけて滴下した。２０分後、アリコートをＬＣＭＳ及びＴＬＣ分析のために水で洗浄した。３０分後、水を加え冷浴を除去した。有機層をＥｔＯＡｃで抽出し（２×）、そして一緒にした有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を減圧下で除去した。粗生成物をＭｅＯＨ／ ＤＣＭ／水（６：３：１）（０．０１Ｍ）及び濃厚攪拌懸濁液を形成するのに十分なシリカゲルに溶解した。

【0407】

５日後、懸濁液を焼結漏斗を通して濾過し、生成物が完全に溶出するまでＤＣＭ／ＭｅＯＨ９：１で洗浄した。有機層をブライン（２×）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、そして減圧下で溶媒を除去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ₃の１００〜９０：１０ｖ／ｖのＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ）による精製によって生成物を得た。

【0408】

（ｉ）（Ｓ）−２−（３−アミノ−１−プロピニル）−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（９ｃ）
８ｃの０．１５０ｇ（０．１６４ｍｍｏｌ）は生成物０．２９ｇ（２８％）を褐色の固体として生じさせた。ＬＣ／ＭＳ（２．７５９分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：１２４３．５０［２Ｍ］⁺。

【0409】

（ｉｉ）（Ｓ）−２−（３−アミノ−１−プロピニル）−８−（３−（（Ｓ）−２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（９ｄ）
８ｄの０．２５０ｇ（０．２５１ｍｍｏｌ）は生成物０．０２６ｇ（１５％）を暗褐色固体として生じさせた。ＬＣ／ＭＳ（２．７５８分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：１４０２．７９［２Ｍ］⁺。

【0410】

（ｉｉｉ）（Ｓ）−２−（３−アミノ−１−プロピニル）−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（９ｅ）
８ｅの０．２２７ｇ（０．２１７ｍｍｏｌ）は生成物０．０２８ｇ（１７％）を生じさせた。ＬＣ／ＭＳ（２．７５９分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：６５７．４［Ｍ−ピペラジン］⁺ 。

【0411】

これらの化合物は、概して、単離されたときに二量体の形態であることが分かった（上記の議論を参照のこと）。メタノール中で１時間にわたって攪拌することによる処理により、化合物の単量体型の検出が可能になった。９ｃ：ＬＣ／ＭＳ（１．５２分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：６２２．４［Ｍ＋Ｈ］⁺；９ｄ：ＬＣ／ＭＳ（１．５１分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：７０２．５［Ｍ＋Ｈ］⁺。

【0412】

例３

【化114】

【0413】

（ａ）化合物１０ａ〜ｅ
（ｉ）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（Ｓ）−１−（（Ｓ）−１−（３−（（Ｓ）−８−（３−（（Ｓ）−２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）−２−プロピニルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イルカルバメート（１０ｄ）
１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．０１９３ｇ、０．１０１ｍｍｏｌ、１．０当量）を、８ｄ（０．１００ｇ、０．１０１ｍｍｏｌ、１．０当量）及びＨＯ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｆｍｏｃ（０．０４１５ｇ、０．１０１ｍｍｏｌ、１．０当量）の乾燥ジクロロメタン（６ｍＬ）への溶液に室温で添加した。３０分後、反応物をジクロロメタン（２０ｍＬ）で希釈し、水（１０ｍＬ）及びブライン（１０ｍＬ）で順次洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、そして過剰のジクロロメタンを減圧下で回転蒸発により除去した。得られた残留物にフラッシュカラムクロマトグラフィーを施した（シリカゲル；７０：１ｖ／ｖのＤＣＭ／ＭｅＯＨ〜５０：１ｖ／ｖのＤＣＭ／ＭｅＯＨ）。純粋な画分を集めて一緒にし、そして過剰な溶離液を減圧下で回転蒸発により除去して生成物を黄色固体として得た（０．０４３ｇ、３１％）。
ＬＣ／ＭＳ（３．７８５分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：１３８５．０１［Ｍ−Ｈ］⁺。

【0414】

（ｂ）化合物１１ａ〜ｅ
（ｉ）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（Ｒ）−１−（（Ｓ）−１−（３−（（Ｓ）−８−（３−（（Ｓ）−２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）−２−プロピニルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イルカルバメート（１１ｄ）
ＳＥＭジラクタム１０Ｄ（０．０６３ｇ、０．０４５５ｍｍｏｌ、１．０当量）をＴＨＦ（２．７）に溶解し、そして窒素雰囲気下で−７８℃に冷却した。スーパーハイドライド溶液（ＴＨＦ中１Ｍ、０．０９３ｍＬ、２．０４当量）を５分間かけて滴下した。２０分後、アリコートをＬＣＭＳ及びＴＬＣ分析のために水で洗浄した。３０分後、水を加え冷浴を除去した。有機層をＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で抽出し、そして一緒にした有機抽出物をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、そして減圧下で溶媒を除去した。粗生成物をＭｅＯＨ／ＤＣＭ／水（６：３：１）（０．０１Ｍ）及び濃厚攪拌懸濁液を形成するのに十分なシリカゲルに溶解した。

【0415】

５日後、懸濁液を焼結漏斗を通して濾過し、生成物が完全に溶出するまでＤＣＭ／ＭｅＯＨ９：１で洗浄した。有機層をブライン（２×）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、そして減圧下で溶媒を除去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ₃の１００〜９０：１０ｖ／ｖのＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ）による精製によって生成物を得た。

【0416】

（ｃ）化合物１２ａ〜ｅ
（ｉ）（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（３−（（Ｓ）−８−（３−（（Ｓ）−２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）−２−プロピニルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）−３−メチルブタンアミド（１２ｄ）
過剰のピペリジン（０．０１ｍＬの、０．１ｍｍｏｌ）をＳＥＭ−ジラクタム１１ｄ（１ｍｇ、０．０００９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．１ ｍＬ）への溶液に加えた。この混合物を２０分間室温で撹拌させ、この時点で反応が完了した（ＬＣ／ＭＳにより監視した）。反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（１ ｍＬ）で希釈し、そして有機相をピペリジンの完全除去までＨ₂Ｏ（３×）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、そして過剰の溶媒を減圧下で回転蒸発により除去して粗製材料１２ｄを得た。ＬＣ／ＭＳ（１．９１７分（ＥＳ⁺））。ｍ／ｚ：８７２．２［Ｍ＋Ｈ］⁺。

【0417】

例４：試験管内での細胞毒性の決定
Ｋ５６２ヒト慢性骨髄性白血病細胞を、５％ＣＯ₂を含む加湿雰囲気中において３７℃で１０％ウシ胎児血清及び２ｍＭグルタミンを補充したＲＰＭ１１６４０培地中で保持し、そして３７℃で９６時間にわたり暗所で特定の用量の薬物と共にインキュベートした。インキュベーション（５分間３００ｇ）を遠心分離により終了させ、そして細胞を薬物を含まない培地で１回洗浄した。適切な薬剤処理後に、細胞を９６ウェルマイクロタイタープレート（ウェル当たり１０４細胞、サンプル当たり８ウェル）に移した。次いで、プレートを５％ＣＯ₂を含む加湿雰囲気中において３７℃で暗所に保存した。このアッセイは、黄色の水溶性テトラゾリウム塩である３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ、シグマアルドリッチ社）を、不溶性の紫色のホルマザン沈殿物に還元させる生存細胞の能力に基づくものである。４日にわたるインキュベーション後（対照細胞数を約１０倍増加させるため）、２０μＬのＭＴＴ溶液（リン酸緩衝生理食塩水中５ｍｇ／ｍＬ）を各ウェルに加え、そしてプレートをさらに５時間インキュベートした。次いで、プレートを３００ｇで５分間遠心分離し、そして培地の大部分をウェル当たり１０〜２０μＬを残して細胞ペレットからピペットで移した。ＤＭＳＯ（２００μＬ）を各ウェルに添加し、そしてサンプルを完全な混合を確実にするために攪拌した。その後、光学密度をタイターテックマルチスキャンＥＬＩＳＡプレートリーダーにより５５０ｎｍの波長で読み取り、そして用量応答曲線を作成した。それぞれの曲線について、ＩＣ₅₀値を、最終光学密度を対照値の５０％に減少させるのに必要な用量として読み取った。

【0418】

化合物１３は、このアッセイでは０．５ｎＭのＩＣ₅₀を有する。