特許 6174690 ヒアルロン酸に基づく組成物の調製方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6174690

(24)【登録日】2017年7月14日

(45)【発行日】2017年8月2日

(54)【発明の名称】ヒアルロン酸に基づく組成物の調製方法

(51)【国際特許分類】

   C08J 3/24 20060101AFI20170724BHJP

   C08J 3/12 20060101ALI20170724BHJP

   C08L 5/08 20060101ALI20170724BHJP

   A61K 47/36 20060101ALI20170724BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20170724BHJP

   A61P 23/02 20060101ALI20170724BHJP

   A61P 9/06 20060101ALI20170724BHJP

   A61K 8/73 20060101ALI20170724BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20170724BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20170724BHJP

   A61K 31/167 20060101ALI20170724BHJP

   A61K 31/245 20060101ALI20170724BHJP

【ＦＩ】

   C08J3/24CEP

   C08J3/12 A

   C08L5/08

   A61K47/36

   A61K9/06

   A61P23/02

   A61P9/06

   A61K8/73

   A61Q19/00

   A61P17/00

   A61K31/167

   A61K31/245

【請求項の数】17

【全頁数】31

(21)【出願番号】特願2015-516514(P2015-516514)

(86)(22)【出願日】2013年6月14日

(65)【公表番号】特表2015-526537(P2015-526537A)

(43)【公表日】2015年9月10日

(86)【国際出願番号】EP2013001782

(87)【国際公開番号】WO2013185934

(87)【国際公開日】20131219

【審査請求日】2016年1月26日

(31)【優先権主張番号】61/660,269

(32)【優先日】2012年6月15日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】12004962.2

(32)【優先日】2012年7月4日

(33)【優先権主張国】EP

(31)【優先権主張番号】13000961.6

(32)【優先日】2013年2月26日

(33)【優先権主張国】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】512042433

【氏名又は名称】メルツ ファーマ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ウント コンパニー コマンディト ゲゼルシャフト アウフ アクティーン

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100077517

【弁理士】

【氏名又は名称】石田 敬

(74)【代理人】

【識別番号】100087871

【弁理士】

【氏名又は名称】福本 積

(74)【代理人】

【識別番号】100087413

【弁理士】

【氏名又は名称】古賀 哲次

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100150810

【弁理士】

【氏名又は名称】武居 良太郎

(74)【代理人】

【識別番号】100164563

【弁理士】

【氏名又は名称】佐々木 貴英

(72)【発明者】

【氏名】ハイコ バルク

(72)【発明者】

【氏名】ヨーゼフ フリードリヒ

(72)【発明者】

【氏名】ボルフガンク リーベトラウ

(72)【発明者】

【氏名】ロバート ジー．ボイツ

(72)【発明者】

【氏名】ティム スティーブン リグマン

【審査官】 赤澤 高之

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１１−５２９７６２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１１−５２９７６３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１２−０２５９５５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０４−２６１６６４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００６−５２２８５１（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０８Ｊ ３／００− ３／２８；９９／００

Ｃ０８Ｊ ５／００− ５／２４

Ｃ０８Ｌ ５／０８

Ａ６１Ｋ ８／７３

Ａ６１Ｋ ９／０６

Ａ６１Ｋ ３１／１６７

Ａ６１Ｋ ３１／２４５

Ａ６１Ｋ ４７／３６

Ａ６１Ｐ ９／０６

Ａ６１Ｐ １７／００

Ａ６１Ｐ ２３／０２

Ａ６１Ｑ １９／００

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ゲル形態の組成物の調製方法であって、前記組成物は、架橋された第一のポリマー；場合により存在する第二のポリマーであって、架橋されていてもよいし、又は非架橋であってもよい、前記第二のポリマー；及び水を含み、ここで前記第一のポリマー及び第二のポリマーは多糖類から選択され、前記方法は少なくとも工程（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｖ）、並びに場合により工程(iii)：
（ｉ）第一のポリマー及び水を含む混合物を架橋すること；
（ｉｉ）工程（ｉ）の架橋に続いて、架橋を停止すること；
（ｉｉｉ）場合により、工程（ｉｉ）で得られた製品を第二のポリマーとブレンドすること；
（ｉｖ）工程（ｉｉ）又は工程（ｉｉｉ）で得られた製品を透析に付すこと；
を含み、ここで透析工程（ｉｖ）が、工程（ｉｖ．１）〜（ｉｖ．３）
（ｉｖ．１）工程（ｉｉ）又は工程（ｉｉｉ）で得られた製品を第一のふるいを通して押出し、続いて、第一のふるいからの押出品を第二のふるいを通して押出すること、ここで、第二のふるいのメッシュサイズは第一のふるいのメッシュサイズよりも小さい、又は、
工程（ｉｉ）又は（ｉｉｉ）で得られた製品を第一のふるいを通して押出し、続いて、第一のふるいからの押出品を第二のふるいを通して押出し、続いて、第二のふるいからの押出品を第三のふるいを通して押出すること、ここで、第二のふるいのメッシュサイズは第一のふるいのメッシュサイズよりも小さく、そして、第三のふるいのメッシュサイズは第二のふるいのメッシュサイズよりも小さい、
（ｉｖ．２）工程（ｉｖ．１）で得られた製品を透析膜に充填すること、及び
（ｉｖ．３）工程（ｉｖ．２）で得られた充填された膜を透析液に付すこと、
を含む、組成物の調製方法。

【請求項2】

工程（ｉｉ）で得られた製品を第二のポリマーとブレンドする工程（iii）が行われる、請求項１に記載の調製方法。

【請求項3】

前記第一のポリマー及び第二のポリマーは同一であっても、又は、互いに異なっていてもよい、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項4】

前記第二のポリマーは非架橋である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

前記第一のポリマー及び第二のポリマーはヒアルロン酸及び／又はそのナトリウム塩から選ばれる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

工程（ｉ）で使用される第一のポリマーは、分子量Ｍｗが２．５ＭＤａ以上３．０ＭＤａ未満である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

工程（ｉｉｉ）で使用される第二のポリマーは、分子量が少なくとも３．０ＭＤａである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

前記第一のポリマーの質量を基準とした前記第二のポリマーの質量は、５％未満である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

工程（ｖ）：
（ｖ）工程（ｉｖ）で得られた製品に、麻酔薬及び／又は抗不整脈薬を混合することをさらに含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

前記麻酔薬及び／又は抗不整脈薬が、リドカイン、塩酸リドカイン、リドカイン塩酸塩一水和物、テトラカイン、又はリドカイン及びテトラカインからなる群から選ばれる、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

工程（ｖｉ）：
（ｖｉ）工程（ｉｖ）又は工程（ｖ）で得られた製品をシリンジに充填し、それを滅菌することをさらに含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項12】

工程（ｉｉ）は、工程（ｉｉ．１）、又は工程（ｉｉ．１）及び（ｉｉ．２）：
（ｉｉ．１）工程（ｉ）で得られた製品を酸に付すこと、
（ｉｉ．２）工程（ｉｉ．１）で得られた製品を押出することを含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法により得られうるゲル形態の組成物。

【請求項14】

シリンジ及び請求項１３に記載の組成物を含む、キット。

【請求項15】

請求項１３に記載の組成物の化粧用途としての使用。

【請求項16】

皮膚科フィラーとして使用するための、請求項１３に記載の組成物。

【請求項17】

医薬としての使用のための、請求項１３に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

発明の分野
本発明はヒアルロン酸などの多糖類に基づくゲルなどの組成物の調製方法、そのような組成物、シリンジ及び該組成物を含むキット、及び、該組成物の皮膚科フィラーとしての使用に関する。

【背景技術】

【0002】

発明の背景
多糖類及び水に基づくハイドロゲルなどのゲルを皮膚科フィラーとして使用することが知られている。このようなゲルは、一般に、水性媒体中で、それぞれの多糖類の化学的架橋を含む方法によって調製される。好適な多糖類は、例えば、ヒアルロン酸に基づいており、その理由は、ヒアルロン酸は、各生物中に同一又は類似の組成で存在するからである。例えば、ヒアルロン酸は組織修復に関与する皮膚の主要な成分である。したがって、副作用を最小限に抑制し、安全な適用を可能にする。

【0003】

EP1818344は、１０ｗ／ｖ％以上のヒアルロン酸、架橋剤及び水を含む混合物を、酸性又はアルカリ性条件下で攪拌及び混合することを含む、架橋ヒアルロン酸ゲルの調製方法に関する。

【0004】

EP2054039（WO 2008/018796）は、立体錯体の相互作用により互いに相互作用することができる第一の微粒子及び第二の微粒子を含む粘弾性ハイドロゲル組成物であって、前記第一の微粒子は架橋した第一の親水性ポリマーを含み、前記第一の微粒子は第一のキラル領域を含む第一のオリゴマーもしくはコオリゴマーの外部グラフトを含み、前記第一のキラル領域は第一のキラルモノマーを含み、そして、前記第二の微粒子は架橋した第二の親水性ポリマーを含み、前記第二の微粒子は第二のキラル領域を含む第二のオリゴマーもしくはコオリゴマーの外部グラフトを含み、前記第二のキラル領域は第二のキラルモノマーを含み、前記第二のキラルモノマーは前記第一のキラルモノマーのキラリティーと反対のキラリティーを有し、前記第一のキラル領域及び第二のキラル領域は互いに非共有結合的に相互作用する粘弾性ハイドロゲル組成物に関する。親水性ポリマーはヒアルロン酸であることができる。

【0005】

EP 2178923（WO2009/018076）は、架橋ヒアルロン酸の調製方法であって、該方法はポリエチレングリコール系架橋剤とヒアルロン酸とを接触させることを含む方法に関する。

【0006】

WO2011/119468はゼロ長さ架橋部分を有する架橋生体適合性ポリマー、及び、場合により、前記架橋生体適合性ポリマー中に取り込まれた少なくとも１つの他の活性成分を含む、軟組織増強のためのハイドロゲルに関する。

【0007】

EP 2152329（WO2008/068297）は架橋ヒアルロン酸及びその生理学上許容される塩の一つからなるゲルを含む単相ハイドロゲルの形態で皮下又は皮内注射することができるインプラントに関する。

【0008】

EP 2170961（WO2009/021526）は分散相が架橋ヒアルロン酸から製造された粒子を含み、そして連続相が直鎖状ヒアルロン酸を実質的に含む、美容医学及び整形外科で使用するためのヒアルロン酸分散体に関する。

【0009】

EP 1699500（WO2005/067994）は、架橋された水不溶性水和ヒアルロン酸ゲル粒子を含むヒアルロン酸組成物に関する。この組成物は組織増強を必要とする患者において組織を増強させるために使用することができ、該特許出願は、局所麻酔薬を含む生理学上適合性の水溶液によって、水和性水不溶性脱水架橋ＨＡを含む架橋ＨＡを安定化させる方法であって、ここで、安定化された組成物の貯蔵弾性率Ｇ’の値が安定化されていない組成物のＧ’の値の少なくとも約１１０％である方法、及び、安定化されたＨＡ組成物に関する。

【0010】

WO2010/015900は、ヒアルロン酸及びその医薬上許容される塩に基づく軟組織フィラー、例えば、皮膚及び皮下フィラーに関し、ここで、ヒアルロン酸に基づく組成物は治療有効量の少なくとも１種の麻酔薬、例えば、リドカインを含むことができる。リドカインを含むヒアルロン酸に基づく組成物は、例えば、滅菌技術を施し又は長期間保存した場合に、リドカインを含む従来の組成物に比べて向上した安定性を有する。このようなヒアルロン酸に基づく組成物の調製方法及びプロセスも提供される。

【0011】

FR2919999は、ヒアルロン酸及び二価カチオンを含む化粧品組成物又は医薬組成物に関する。組成物はしわを処理するために使用することができる。

【0012】

EP 2254584（WO 2009/098127）は、亜鉛及び／又は少なくとも１種の亜鉛の形態での糖塩を解放することができる生体適合性注射可能製品、該製品を含む組成物、及び、特に、生体組織の充填又は生体組織の体積の増加、又は、生体液を交換し又は補充するための、その使用に関する。

【0013】

EP 2155212（WO 2008/139122）はヒトの皮膚科及び整形手術で使用することが特に意図された、ヒアルロン酸及びヒアルロン酸分解の少なくとも１種の阻害剤の組み合わせに関する。

【0014】

EP 0839159 B1は、架橋生体適合性多糖類ゲル組成物の調製方法を開示している。その方法は多官能性架橋剤の存在下での多糖類の架橋を含み、ここで、粘弾性ゲルが形成される。

【0015】

EP 1711552 B1は生体適合性ポリマーを架橋し、該架橋ポリマーを非架橋ポリマーにより希釈し、そして架橋反応を停止する工程を含む、生体適合性架橋ゲルの製造方法に関する。

【0016】

EP 0466300 B1は生体適合性粘弾性ゲルスラリーを得る方法であって、例えば、架橋ヒアルロン酸を含む生体適合性ゲルを、例えば、ヒアルロン酸であってもよい第二のポリマーと混合して、二相混合物を形成することを含む、方法、及び、そのようなゲル化に関する。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0017】

発明の目的
本発明の１つの目的は、皮膚科フィラーとして使用することができる、多糖類に基づくゲルなどの組成物の調製方法を提供することであって、該組成物は優れた安定性を有するべきであり、すなわち、適用後にその特性を変化させず、特に、その粘弾性特性を変化させず、かつ皮膚科学的要件にあつらえるようにして調整することができる。さらに、ゲルは皮膚組織との優れた適合性を有するべきである。

【課題を解決するための手段】

【0018】

発明の要旨
この目的は、架橋された第一のポリマー、架橋又は非架橋であることができる、場合により存在する第二のポリマー、及び、水を含み、前記第一のポリマー及び第二のポリマーは多糖類から選ばれる、ゲルなどの組成物の調製方法、及び、前記方法に従って調製される組成物によって達成される。

【0019】

具体的には、第一の態様によれば、本発明は組成物、例えばゲルの調製方法であって、前記組成物は、架橋された第一のポリマー；場合により存在する第二のポリマーであって、架橋されていてもよいし、又は非架橋であってもよい、前記第二のポリマー；及び水を含み、ここで前記第一のポリマー及び第二のポリマーは多糖類から選択され、前記方法は少なくとも工程（ｉ）〜（ｉｖ）：
（ｉ）第一のポリマー及び水を含む混合物を架橋すること；
（ｉｉ）工程（ｉ）の架橋に続いて、架橋を停止すること；
（ｉｉｉ）場合により、工程（ｉｉ）で得られた製品を第二のポリマーとブレンドすること；
（ｉｖ）工程（ｉｉ）又は工程（ｉｉｉ）で得られた製品を透析に付すこと；
を含む、組成物の調製方法に関する。

【0020】

１つの実施形態において、第二のポリマーの存在は必須である。この実施形態では、方法は、工程（ｉｉ）で得られた製品を工程（ｉｉｉ）に係る第二のポリマーとブレンドすることを必要とする。

【0021】

１つの実施形態において、第二のポリマーの存在は必要ではない。この実施形態では、方法は、工程（ｉｉ）で得られた製品を工程（ｉｉｉ）に係る第二のポリマーとブレンドすることを必要としない。

【0022】

１つの実施形態において、第一のポリマー及び第二のポリマーは同一であることができる。

【0023】

１つの実施形態において、第一のポリマー及び第二のポリマーは互いに異なっていてもよい。

【0024】

１つの実施形態において、第一のポリマーは架橋されており、そして第二のポリマーは非架橋である。

【0025】

１つの実施形態において、第一のポリマー及び第二のポリマーはヒアルロン酸及びその塩から選ばれる。

【0026】

１つの実施形態において、第一のポリマー及び第二のポリマーはヒアルロン酸又はその塩から選ばれる。

【0027】

１つの実施形態において、ヒアルロン酸の塩はナトリウム塩である。

【0028】

１つの実施形態において、工程（ｉ）で用いられる第一のポリマーは、分子量Ｍｗが１．５ ＭＤａ以上３．５ＭＤａ未満、又は、２．０ＭＤａ以上３．５ＭＤａ未満、又は、２．５ＭＤａ以上３．０ＭＤａ未満である。

【0029】

１つの実施形態において、工程（ｉｉｉ）で用いられる第二のポリマーは分子量が少なくとも３．０ＭＤａであり、又は、少なくとも３．５ＭＤａである。

【0030】

１つの実施形態において、第一のポリマーの質量に基づく第二ポリマーの質量は５％未満又は４％未満であり、例えば、０．０１％〜５％の範囲にあり、又は、０．１〜４％の範囲にあり、又は、０．１〜２．５％、又は、０．２〜２．０％、又は、０．５〜１．５％の範囲にある。

【0031】

１つの実施形態において、方法は工程（ｉｖ）の後に、さらなる工程（ｖ）：
（ｖ）工程（ｉｖ）で得られた製品に、リドカイン又は塩酸リドカイン、又は、リドカイン塩酸塩一水和物、又は、テトラカインなどの麻酔薬又は抗不整脈薬を混合すること、を含む。

【0032】

１つの実施形態において、方法は、工程（ｉｖ）の後に、又は、工程（ｖ）の後に、さらなる工程（ｖｉ）：
（ｖｉ）工程（ｉｖ）又は工程（ｖ）で得られた製品をシリンジに充填し、それを滅菌することを含む。

【0033】

１つの実施形態において、工程（ｉ）の混合物はアルカリ性リン酸緩衝液をさらに含む。

【0034】

１つの実施形態において、前記第二ポリマーは工程（ｉｉｉ）において、リン酸緩衝液との混合物の形態で提供される。

【0035】

１つの実施形態において、工程（ｖ）で提供されるリドカイン又はテトラカインなどの前記麻酔薬又は抗不整脈薬はリン酸緩衝液との混合物の形態で提供される。

【0036】

１つの実施形態において、工程（ｉ）における反応温度は０〜４０℃、例えば、１５〜４０℃、又は、２５〜３５℃、又は、２５〜３０℃、又は、３０〜３５℃である。

【0037】

１つの実施形態において、工程（ｉｉ）における反応温度は、０〜３０℃、例えば、０〜１０℃、又は、３〜７℃である。

【0038】

１つの実施形態において、工程（ｉｉｉ）における反応温度は０〜３０℃、例えば、０〜１０℃、又は、３〜７℃である。

【0039】

１つの実施形態において、工程（ｉｖ）における反応温度は、０〜３０℃、例えば、０〜１０℃、又は、３〜７℃である。

【0040】

１つの実施形態において、工程（ｉ）において、ジグリシジルエーテルは架橋剤として使用される。

【0041】

１つの実施形態において、工程（ｉ）において、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）は架橋剤として使用される。

【0042】

１つの実施形態において、工程（ｉｉ）は工程（ｉｉ．１）：
（ｉｉ．１）工程（ｉ）で得られた製品を酸に付すことを含む。

【0043】

１つの実施形態において、工程（ｉｉ）は工程（ｉｉ．１）及び（ｉｉ．２）：
（ｉｉ．１）工程（ｉ）で得られた製品を酸に付すこと、
（ｉｉ．２）工程（ｉｉ．１）で得られた製品を押出するか、又は、
工程（ｉｉ．１）で得られた製品をふるいを通して押出するか、又は、
５００〜６００μｍの範囲のメッシュサイズを有するふるいを通して工程（ｉｉ．１）で得られた製品を押出すること、
を含む。

【0044】

１つの実施形態において、工程（ｉｖ）に係る前記透析工程は工程（ｉｖ．１）〜（ｉｖ．３）：
（ｉｖ．１）工程（ｉｉｉ）で得られた製品を第一のふるいを通して押出し、続いて、第一のふるいからの押出品を第二のふるいを通して押出すること、ここで、第二のふるいのメッシュサイズは第一のふるいのメッシュサイズよりも小さい、又は、
工程（ｉｉｉ）で得られた製品を第一のふるいを通して押出し、続いて、第一のふるいからの押出品を第二のふるいを通して押出し、続いて、第二のふるいからの押出品を第三のふるいを通して押出すること、ここで、第二のふるいのメッシュサイズは第一のふるいのメッシュサイズよりも小さく、そして、第三のふるいのメッシュサイズは第二のふるいのメッシュサイズよりも小さい、
（ｉｖ．２）工程（ｉｖ．１）で得られた製品を透析膜に充填すること、
（ｉｖ．３）工程（ｉｖ．２）で得られた充填された膜を透析液に付すこと、
をさらに含む。

【0045】

１つの実施形態において、工程（ｉｖ）に係る前記透析工程は工程（ｉｖ．１）〜（ｉｖ．３）：
（ｉｖ．１）工程（ｉｉｉ）で得られた製品を、メッシュサイズが３２５〜４２５μｍの範囲にある第一のふるいを通して押出し、続いて、第一のふるいからの押出品を、メッシュサイズが１７５〜２２５μｍの範囲にある第二のふるいを通して押出し、続いて、第二のふるいからの押出品を、メッシュサイズが１１０〜１７０μｍの範囲にある第三のふるいを通して押出すること、
（ｉｖ．２）工程（ｉｖ．１）で得られた製品を、分子量カットオフが１２，０００〜１４，０００Ｄａの範囲にある透析膜に充填すること、
（ｉｖ．３）工程（ｉｖ．２）で得られた充填された膜を透析液に付すこと、
をさらに含む。

【0046】

上記の実施態様のいずれかの実施形態を、上記の実施形態から選択される少なくとも1つのさらなる実施形態と組み合わせてよい。

【0047】

第二の態様によると、本発明は、本明細書中に規定される第一の態様に従った方法、又は、第一の態様及び任意の実施形態に従った方法、又は、少なくとも２つの実施形態の任意の組み合わせに従った方法により得られる組成物、例えばゲルであって、架橋された第一のポリマー；場合により存在する第二のポリマーであって、架橋されていてもよいし、又は非架橋であってもよい、前記第二のポリマー；及び水を含み、ここで前記第一のポリマー及び第二のポリマーは多糖類から選択される、前記組成物に関する。

【0048】

第三の態様によると、本発明は、シリンジ及び第二の態様に係る組成物又は第一の態様の方法に係る方法により調製される組成物を含む、キットに関する。

【0049】

第四の態様によると、本発明は、化粧用途における、第二の態様に係る組成物の使用又は第一の態様により調製される組成物の使用に関する。

【0050】

１つの実施形態において、組成物は皮膚科フィラーとして使用される。

【0051】

第五の態様によると、本発明は、医薬としての使用のための第二の態様に係るゲルなどの組成物に関する。

【発明を実施するための形態】

【0052】

発明の詳細な説明
第一の態様によると、本発明は、組成物の調製方法に関し、該組成物は、架橋された第一のポリマー；架橋又は非架橋であることができる、場合により存在する第二のポリマー；及び、水を含み、第一のポリマー及び第二のポリマーは多糖類から選ばれ、該方法は、少なくとも工程（ｉ）〜（ｉｖ）、
（ｉ）第一のポリマー及び水を含む混合物を架橋すること、
（ｉｉ）工程（ｉ）の架橋に続いて、架橋を停止すること、
（ｉｉｉ）場合により、工程（ｉｉ）で得られた製品を第二のポリマーとブレンドすること、
（ｉｖ）工程（ｉｉ）又は工程（ｉｉｉ）で得られた製品を透析に付すこと、
を含む。

【0053】

用語「組成物」は、本開示において使用されるときに、架橋された第一のポリマー、架橋又は非架橋であることができる、場合により存在する第二のポリマー、及び、水を含む、製品を包含する。

【0054】

１つの実施形態において、組成物はハイドロゲルなどのゲルである。用語「ゲル」は、本明細書中に使用されるときに、粘性及び弾性の両方の特性を有する製品を包含する。従って、この用語は粘弾性製品を包含する。大衆的な科学では、ゲルは、しばしば、ゼリー状材料として特徴付けられる。ゲルの粘弾性特性は、ゲルの損失弾性率及び貯蔵弾性率を決定することによって決定することができる。

【0055】

損失弾性率Ｇ”及び貯蔵弾性率Ｇ’の比は損失係数tanδ=G”/G’で表現することができる。損失係数が高いほど、製品の特性はニュートン流動に近づく。製品の粘度は、η^*の用語で表現することができる。tanδ及びη^*を決定するための適切な方法は当該技術分野で知られている。

【0056】

本発明に係る組成物又はゲルなどの組成物は、本発明の方法において、第一のポリマーとして多糖類の使用を強制的に必要とし、そしてもしも第二のポリマーを使用するならば、第二のポリマーとしても多糖類の使用を必要とする。

【0057】

本明細書中に使用されるときに、用語「多糖類」はグリコシド結合によって結合された繰り返しモノマー単位からなり又は含む炭水化物分子を包含する。一般的には、多糖類は１０個より多くの単糖単位を含む。多糖類の例はデンプン、グリコーゲン、セルロース、キチン又はヒアルロン酸などの多糖類、又は、それらの混合物である。

【0058】

好ましい実施形態において、多糖類はヒアルロン酸である。ヒアルロン酸は、ナトリウム塩などの塩の形態で提供することができる。酸及びナトリウム塩などの塩の混合物を提供することも可能である。

【0059】

従って、用語「ヒアルロン酸」は、本明細書中に使用されるときに、「ヒアルロナン」又は「ヒアルロネート」などの用語と同義語として使用される。以下では、ヒアルロン酸は用語「ＨＡ」と略記することがある。

【0060】

ＨＡは二糖類の非架橋ポリマーである。それは、２５．０００の長さのまでの二糖類単位を有することができる。ＨＡの分子量は、５，０００〜２０，０００，０００Ｄａの範囲であることができる。

【0061】

ＨＡは当該技術分野でよく認識されている意味を有する。それは異なる分子量（Ｍｗ）及び／又は異なる分子量分布を有するグレードで市販されている。本発明による方法の工程（ｉ）において出発材料として使用されるときに、非架橋形態で入手可能である。

【0062】

工程（ｉ）
工程（ｉ）は第一のポリマー及び水を含む混合物の架橋を必要とする。

【0063】

用語「架橋」は、本明細書中に使用されるときに、単数の化学結合又は複数の化学結合により多糖類の少なくとも２つの異なるポリマー鎖の結合を包含する。結果として、第一ポリマーの分子量が増加し、したがって、粘度及び／又は弾性が増加される。

【0064】

１つの実施形態において、架橋は架橋剤により行われる。

【0065】

ヒアルロン酸などの多糖類を架橋するための適切な架橋剤は当該技術分野で知られている。

【0066】

１つの実施形態において、エポキシド構造に基づく架橋剤は本発明に係る方法において使用することができる。

【0067】

１つの実施形態において、ジグリシジルエーテルは架橋のために使用される。

【0068】

１つの実施形態において、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）は架橋のために使用される。この化合物は市販されている。

【0069】

１つの実施形態において、架橋剤は５〜１５％（架橋剤の体積／ヒアルロン酸の質量）、例えば、６〜１４％（ｖ／ｗ）、又は、７〜１２％（ｖ／ｗ）の量で使用される。

【0070】

有利には、工程（ｉ）に係る架橋反応における温度は制御される。

【0071】

１つの実施形態において、工程（ｉ）に係る架橋は０〜４０℃の温度範囲で行われる。

【0072】

別の実施形態において、工程（ｉ）における温度は、１５〜４０℃の温度範囲で進行するように制御される。

【0073】

１つの実施形態において、工程（ｉ）における温度は２５〜３５℃である。

【0074】

１つの実施形態において、工程（ｉ）における温度は２５〜３０℃の温度範囲で架橋が進行するように制御される。

【0075】

別の実施形態において、工程（ｉ）における温度は３０℃〜３５℃、又は、３０を超え、３５℃までの温度範囲で架橋が進行するように制御される。

【0076】

このような温度又は温度範囲は、可能なかぎり、不均一な粒子を避け、非常に均一な架橋を確保することができる。さらに、１つの実施形態において、温度の制御は、本発明に係る組成物の粘弾性特性のテーラーメイド調整を可能にする。

【0077】

１つの実施形態において、工程（ｉ）に係る架橋がより高い温度、例えば、３０を超え、３５℃までの温度範囲で行われるならば、ゲルなどの得られる組成物の粘弾性特性は、架橋がより低い温度、例えば、２５〜３０℃の温度で行われた組成物と比較して、より強い。このような差異は、当該技術分野で公知の方法により組成物の貯蔵弾性率及び損失弾性率を決定することによって特徴付けることができる。したがって、１つの実施形態において、工程（ｉ）における反応温度の適切な選択は異なる粘弾性特性を有するゲルなどの組成物の調製を可能にする。

【0078】

用語「混合物」は、本明細書中に使用されるときに、互いに混合されているが、化学結合されていない２種以上の物質の組み合わせを包含する。従って、用語「混合物」は、多糖類である第一のポリマーと、水との物理的組み合わせを指す。混合物は、溶液、又は、懸濁液、又は、コロイドの形態で提供されうる。

【0079】

第一のポリマー、すなわち、第一の多糖類、すなわち、ＨＡは、一般に、分子量Ｍｗが１．０〜４．０ＭＤａ、又は、１．５ＭＤａ〜３．５ＭＤａ未満、又は、２．０ＭＤａ〜３．５ＭＤａ未満の範囲である。分子量Ｍｗのこれらの範囲は、それぞれ、架橋前の範囲に関するものである。

【0080】

１つの実施形態において、第一の多糖類は、ここでも架橋の前に、分子量Ｍｗが２．５ＭＤａ〜３．０ＭＤａ未満である。

【0081】

水は、パイプ水、蒸留水又は脱イオン水の形態で提供することができる。

【0082】

１つの実施形態において、工程（ｉ）で使用される混合物は緩衝液をさらに含む。

【0083】

１つの実施形態において、緩衝液はリン酸緩衝液である。

【0084】

１つの実施形態において、前記リン酸緩衝液は塩化ナトリウム、二塩基性無水リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム二水和物及び水から作られている。

【0085】

１つの実施形態において、緩衝液はアルカリ性緩衝液である。

【0086】

１つの実施形態において、緩衝液のｐＨは６．８〜７．６、又は、７．０〜７．４、又は、７．１〜７．３である。

【0087】

１つの実施形態において、本発明の方法に従って調製される最終組成物のｐＨは６．５〜７．５、例えば、６．７〜７．２、又は、６．８〜７．１、又は、６．８〜６．９の範囲に調整されている。このようなｐＨは皮膚組織との組成物の適合性を支持することができる。前記ｐＨの調整のために、１つの実施形態において、前記緩衝液が使用される。

【0088】

１つの実施形態において、工程（ｉ）は、第一のポリマー、水、架橋剤、及び、場合により、緩衝液を混合し、そして所定の時間、混合物を撹拌することによって行うことができ、ここで、温度は所定の設定点を超えないように制御する。

【0089】

工程（ｉｉ）
工程（ｉｉ）は工程（ｉ）で行われる架橋の停止を必要とする。

【0090】

工程（ｉｉ）に係る架橋反応の停止は強制的に要求される。というのは、さもなければ、皮膚科フィラーとしての適切な使用を可能にするには高すぎる粘度又は粘弾性を有した組成物又はゲルを得ることになりえ、組成物又はゲルの粘性又は粘弾性は、工程（ｉ）において使用される架橋剤などの架橋をもたらすことができる化合物を含むかぎり、一定ではないからである。

【0091】

基本的に、架橋剤と反応して、それを不活性化することができる各化合物は、架橋反応を停止させるために使用することができる。

【0092】

１つの実施形態において、エポキシド型の架橋剤は、工程（ｉ）で使用されているので、架橋の停止は、化合物の添加という手段により行うことができ、かかる化合物は、多糖類中の適切な基でのさらなる架橋を起こすことができないようにエポキシド部分を開裂させる。

【0093】

１つの実施形態において、工程（ｉ）におけるエポキシドの開裂及びそれによる架橋の停止は酸によって行うことができる。有機酸ならびに無機酸は架橋を停止するために使用することができる。

【0094】

１つの実施形態において、塩酸などの無機酸を使用する。

【0095】

架橋反応の停止のために使用される化合物は、緩衝液、例えば、工程（ｉ）における緩衝液中に適用することができる。

【0096】

このような溶液は「クエンチ溶液」と呼ぶことができる。従って、工程（ｉｉ）による停止は工程（ｉ）により得られた架橋済み混合物をクエンチすることによって行うことができる。

【0097】

１つの実施形態において、工程（ｉｉ）による架橋の停止は、０℃〜３０℃の温度範囲で行われる。

【0098】

別の実施形態において、工程（ｉｉ）における温度は、２０℃又は１５℃の温度を超えないように制御される。

【0099】

１つの実施形態において、工程（ｉｉ）における温度は０〜１０℃、又は、３〜７℃、例えば、５℃である。

【0100】

工程（ｉｉ）による停止は、停止のために使用される化合物を、工程（ｉ）による混合物に添加すること、及び、例えば、所定時間攪拌することにより行うことができる。

【0101】

架橋反応の停止は本発明に係る方法にとって重要である。というのは、このように得られる組成物又はゲルは優れた安定性を有し、すなわち、適用後に、例えば、皮膚組織における皮膚科フィラーとしての使用後に、特性、特に、その粘度又は粘弾性特性を変化させないからである。

【0102】

１つの実施形態において、工程（ｉ）において得られる架橋品を工程（ｉｉ）において押出すること、例えば、ふるいを通して製品を押出することによりさらに支持されることができる。理論に束縛されないが、押出の間に加えられる高せん断力は、架橋剤及び架橋反応の停止のために使用される化合物を組成物又はゲル中で徹底的に混合するものと考えられる。結果として、架橋剤は完全に又はほぼ完全に不活性化され、このようにして、さらなる架橋を防止し、このようにして、分子量及び粘度及び／又は粘弾性のより一層の望ましくない増加を防止する。

【0103】

用語「ふるいを通して押出すること」は、「ふるいを通して通過させた」、又は、「ふるいを通してプレス加工した」、又は、「ふるいを通して誘導された」、又は、「ろ過された」などの用語を包含する。

【0104】

したがって、１つの実施形態において、工程（ｉｉ）は工程（ｉｉ．１）：
（ｉｉ．１）工程（ｉ）において得られた製品を酸に付すこと、
を含む。

【0105】

別の実施形態において、工程（ｉｉ）は工程（ｉｉ．１）及び（ｉｉ．２）：
（ｉｉ．１）工程（ｉ）において得られた架橋製品を酸に付すこと、
（ｉｉ．２）工程（ｉｉ．１）で得られた製品を押出すること、又は、
工程（ｉｉ．１）で得られた製品をふるいを通して押出すること、
を含む。

【0106】

別の実施形態において、工程（ｉｉ）は工程（ｉｉ．１）及び（ｉｉ．２）：
（ｉｉ．１）工程（ｉ）で得られた製品を酸に付すこと、
（ｉｉ．２）工程（ｉｉ．１）で得られた製品を押出するか、又は、
工程（ｉｉ．１）で得られた製品をふるいを通して押出するか、又は、
５００〜６００μｍの範囲のメッシュサイズを有するふるいを通して工程（ｉｉ．１）で得られた製品を押出すること、
を含む。

【0107】

１つの実施形態において、工程（ｉｉ．２）において使用されるふるいのメッシュサイズは約５６０μｍであり、例えば、５５８．８μｍ（０．０２２”）である。

【0108】

工程（ｉｉｉ）
場合により行う工程（ｉｉｉ）は工程（ｉｉ）で得られた製品を第二のポリマーとブレンドすることを必要とする。

【0109】

１つの実施形態において、第二のポリマーの存在は必要なく、そしてこのため、工程（ｉｉｉ）を工程（ｉ）〜（ｉｖ）の反応シーケンスにおいて省略する。

【0110】

別の実施形態において、第二のポリマーの存在は必要であり、このため、工程（ｉｉｉ）を工程（ｉ）〜（ｉｖ）の反応シーケンスにおいて必ず行う。

【0111】

用語「ブレンドすること」は、本明細書中で使用されるときに、工程（ｉｉ）で得られた架橋ポリマーを、工程（ｉｉｉ）で使用される第二のポリマーと混合することを包含し、ここで、前記架橋された第一ポリマー及び架橋されていてもよいが、非架橋形態で提供されてもよい第二ポリマーを含む得られたブレンドは、第一のポリマー及び第二のポリマーについて異なる物理的特性を有する。

【0112】

第二のポリマーも多糖類である。このポリマーは、第一ポリマーと同じポリマーであってもよく、又は、それと異なっていてもよい。

【0113】

したがって、１つの実施形態において、第二のポリマーは、工程（ｉ）において使用される第一のポリマーと同一のＨＡであり、又は、工程（ｉ）において使用されるＨＡとは異なるＨＡである。

【0114】

１つの実施形態において、第一のポリマーは分子量が第二のポリマーと同一である。別の実施形態において、分子量は互いに異なっている。前記第二のポリマーの用語「分子量」は、前記第二のポリマーをブレンドしそして場合により架橋する前の前記ポリマーのそれぞれの分子量を指す。

【0115】

１つの実施形態において、第二のポリマーは分子量が少なくとも３．０ＭＤａ、又は、少なくとも３．５ＭＤａ、又は、少なくとも４．０ＭＤａである。

【0116】

１つの実施形態において、第二のポリマーは分子量が少なくとも３．０ＭＤａであり、上限値は、それぞれ、２０ＭＤａ、又は、１０ＭＤａ、又は、８ＭＤａ、又は、６ＭＤａ、又は４ＭＤａである。

【0117】

１つの実施形態において、第二のポリマーは分子量が少なくとも３．５ＭＤａであり、上限値は、それぞれ、２０ＭＤａ、又は、１０ＭＤａ、又は、８ＭＤａ、又は、６ＭＤａ、又は、４ＭＤａである。

【0118】

１つの実施形態において、第二のポリマーは分子量が少なくとも４．０ＭＤａであり、上限値は、それぞれ、２０ＭＤａ、又は、１０ＭＤａ、又は、８ＭＤａ、又は、６ＭＤａ、又は、４ＭＤａである。

【0119】

１つの実施形態において、第二のポリマーは、緩衝液、例えば、工程（ｉ）又は工程（ｉｉ）において使用できる緩衝液中で提供される。

【0120】

１つの実施形態において、工程（ｉｉｉ）に係るブレンディングは０℃〜４０℃、又は、０℃〜３０℃の温度範囲で行われる。

【0121】

別の実施形態において、工程（ｉｉｉ）における温度は、２０℃又は１５℃の温度を超えないように制御される。

【0122】

１つの実施形態において、工程（ｉｉｉ）における温度は０〜１０℃、又は、３〜７℃、例えば５℃である。

【0123】

１つの実施形態において、工程（ｉｉｉ）に係るブレンディングは、架橋が工程（ｉｉ）により停止された架橋された製品を第二のポリマーとともに撹拌することによって実施される。

【0124】

１つの実施形態において、第一ポリマーの質量に基づく第二のポリマーの質量は、５％未満、又は、４％未満であり、例えば、０．０１〜５％の範囲、又は、０．１〜４％の範囲、又は、０．１〜２．５％の範囲、又は、０．２〜２．０％、又は、０．５〜１．５％である。

【0125】

１つの実施形態において、工程（ｉｉｉ）は皮膚科フィラーとして使用するのに不可欠である、目標組成物又はゲルの粘弾性及び粘性又は弾性に関する特性のオーダーメイドの調整を可能にする。このような特性は、工程（ｉ）において適切な温度範囲、及び／又は、工程（ｉｉｉ）において第一のポリマー及び第二のポリマーの質量比、及び／又は、工程（ｉ）において使用され、場合により第二のポリマーのために使用される架橋剤の量を選択することにより達成でき、ただし、第二のポリマーは工程（ｉｉｉ）において使用され、そして架橋された形態で使用される。

【0126】

さらに、工程（ｉｉｉ）における第二のポリマーの使用は、ふるい掛け工程が行われた場合に、ふるいを通した組成物の流動性を改良することがある。その後、一般に、前記第二のポリマーを含有しない組成物と比較して、前記ふるい（単数又は複数）を通した組成物を押出するためにより低い押出力が必要である。さらに、非架橋形態における、第二のポリマーの使用は、化粧用途で組成物を適用するために使用されるシリンジの針を通して本発明に係る組成物の流動性を有利に改良することができる。よって、前記針を通して組成物を押出するために、より弱い力を使用することができる。

【0127】

工程（ｉｖ）
工程（ｉｖ）は工程（ｉｉ）又は（ｉｉｉ）において得られた製品を透析に付すことを要求する。

【0128】

１つの実施形態において、この工程は工程（ｉｉｉ）で得られたゲルから外来化合物又は粒子を除去するために役立つ。外来化合物又は粒子がゲルなどの組成物の物性に悪影響を及ぼすことがあり、及び／又は、組成物又はゲルの皮膚組織との適合性に悪影響を及ぼすことがある。このように、１つの実施形態において、工程（ｉｖ）は、本発明に係る組成物を皮膚組織中に注入したときに、可能な炎症反応を低減し又は避けるのに役立つ。

【0129】

別の実施形態において、この工程は工程（ｉｉ）又は工程（ｉｉｉ）で得られたゲルの膨潤性を調節するのに役立つ。

【0130】

用語「膨潤」又は「膨潤性」は、本明細書中で使用されるときに、ゲルの水吸収性を包含する。

【0131】

１つの実施形態において、工程（ｉｉｉ）で得られたゲルの膨潤率は、工程（ｉｖ）に付したときに、すなわち、透析の間の吸水率は、例えば、ゲルの合計質量を基準として、５〜２５％、例えば、６〜２３％、又は、７〜２２％、又は、９〜２１％である。

【0132】

別の実施形態において、膨潤率又は膨潤化能は７〜１８％、又は、８〜１５％である。

【0133】

１つの実施形態において、このような膨潤率又は膨潤化能は膨潤圧を形成し、ＨＡマトリックスが、皮膚組織に注入されそして前記皮膚組織が圧縮力にさらされたときなどの圧縮力に耐えるのを可能にする。

【0134】

１つの実施形態において、工程（ｉｖ）は、工程（ｉｉ）又は工程（ｉｉｉ）で得られたゲルからの外来化合物又は粒子の除去のために役立ち、そして工程（ｉｉ）又は工程（ｉｉｉ）で得られたゲルの膨潤性を調節するために役立つ。

【0135】

このように、工程（ｉｖ）は、とりわけ、当技術分野で知られている製品と比較して、さらに改良されたＨＡ組成物を提供するために役立つ。

【0136】

このように、工程（ｉｉ）（架橋の停止）の他に、工程（ｉｖ）（透析）は本発明に係るゲルなどの組成物を調製するために必要な一連の工程でさらなる重要な反応工程である。特に、本発明に係る反応順序で工程（ｉｉ）及び工程（ｉｖ）の組み合わせにより、提起された問題に応じて達成されるべき特性を有するゲルなどの組成物を提供することができる。

【0137】

１つの実施形態において、所定の分子量カットオフを有する透析膜を用いて透析を行う。このような透析膜は市販されている。

【0138】

用語「分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）」は、本明細書中で使用されるときに、溶質の規定百分率が透析のために使用される膜によって保持される最小分子量溶質（ダルトンで）を指し、又は、アナライトの規定百分率が膜拡散することが阻止される分子量を指す。

【0139】

市販の透析膜は、典型的には、１，０００〜１００，０００Ｄａの範囲のＭＷＣＯを有する。

【0140】

１つの実施形態において、使用される透析膜は１２，０００〜１４，０００Ｄａの範囲のＭＷＣＯを有する。

【0141】

１つの実施形態において、透析は緩衝液を含む透析液を使用して行われる。

【0142】

１つの実施形態において、緩衝液は工程（ｉ）で使用され、又は、工程（ｉｉ）で使用され、又は工程（ｉｉｉ）で使用される緩衝液である。

【0143】

１つの実施形態において、工程（ｉｖ）に係る透析は０℃〜３０℃の温度範囲で行われる。

【0144】

別の実施形態において、工程の温度（ｉｖ）は、２０℃又は１５℃の温度を超えないように制御される。

【0145】

１つの実施形態において、、工程（ｉｖ）における温度は、０〜１０℃、又は、３〜７℃、例えば、５℃である。

【0146】

１つの実施形態において、本発明に係る方法は、それぞれ工程（ｉ）における温度が２５〜３５℃であり、工程（ｉｉ）〜（ｉｖ）における温度が０〜１０℃であるようにして行われ、又は、本発明に係る方法は、それぞれ工程（ｉ）における温度が２５〜３５℃であり、工程（ｉｉ）〜（ｉｖ）における温度が３〜７℃、例えば、５℃であるようにして行われる。

【0147】

１つの実施形態において、工程（ｉｉｉ）において得られた製品を透析に付す前に、製品を１つのふるい掛け工程又は幾つかのふるい掛け工程に付し、それにより、それぞれ製品を均一化し、皮膚科フィラーとしての使用に悪影響を及ぼすことがある不均一な粒子又はいかなるさらなる粒子をも除去する。

【0148】

１つの実施形態において、前記透析工程（ｉｖ）は工程（ｉｖ．１）〜（ｉｖ．３）：
（ｉｖ．１）工程（ｉｉ）又は工程（ｉｉｉ）で得られた製品を第一のふるいを通して押出し、続いて、第一のふるいからの押出品を第二のふるいを通して押出すること、ここで、第二のふるいのメッシュサイズは第一のふるいのメッシュサイズよりも小さい、又は、
工程（ｉｉ）又は工程（ｉｉｉ）で得られた製品を第一のふるいを通して押出し、続いて、第一のふるいからの押出品を第二のふるいを通して押出し、続いて、第二のふるいからの押出品を第三のふるいを通して押出すること、ここで、第二のふるいのメッシュサイズは第一のふるいのメッシュサイズよりも小さく、そして、第三のふるいのメッシュサイズは第二のふるいのメッシュサイズよりも小さい、
（ｉｖ．２）工程（ｉｖ．１）で得られた製品を透析膜に充填すること、
（ｉｖ．３）工程（ｉｖ．２）で得られた充填された膜を透析液に付すこと、
を含む。

【0149】

透析前のふるいの使用は透析工程の有効性をさらに支持することができる。ふるいのメッシュサイズを適切に選択することは、製品の所望の均一性に悪影響を及ぼす外来化合物及びゲル化粒子などの粒子を除去するのをさらに支持する。したがって、１つの実施形態において、本発明に係る方法において使用される１つのふるい掛け工程又は幾つかのふるい掛けの工程により、特に均一な組成物の調製、すなわち、第一のポリマー、場合により存在する第二のポリマー、及び、水を含む、特に均一なゲルの調製を可能にする。均一性は、本発明の方法に従って得られる組成物の所望の特性であり、化粧又は医療用途の組成物の適用などの意図された適用を支持しそして改良する。

【0150】

１つの実施形態において、前記透析工程（ｉｖ）は工程（ｉｖ．１）〜（ｉｖ．３）：
（ｉｖ．１）工程（ｉｉ）又は工程（ｉｉｉ）で得られた製品を、メッシュサイズが３２５〜４２５μｍの範囲にある第一のふるいを通して押出し、続いて、第一のふるいからの押出品を、メッシュサイズが１７５〜２２５μｍの範囲にある第二のふるいを通して押出し、続いて、第二のふるいからの押出品を、メッシュサイズが１１０〜１７０μｍの範囲にある第三のふるいを通して押出すること、
（ｉｖ．２）工程（ｉｖ．１）で得られた製品を、分子量カットオフが１２，０００〜１４，０００Ｄａの範囲にある透析膜に充填すること、
（ｉｖ．３）工程（ｉｖ．２）で得られた充填された膜を透析液に付すこと、
を含む。

【0151】

１つの実施形態において、工程（ｉｉ）又は（ｉｉｉ）で得られたゲルを、メッシュサイズが約３８０μｍ、例えば３８１μｍ（０．０１５”）である第一のふるい又はスクリーンを通して押出し、その後、メッシュサイズが約２００μｍ、例えば２０３μｍ（０．００８”）である第二のふるい又はスクリーンを通して押出し、その後、メッシュサイズが約１４０μｍ、例えば１３９．７μｍ（０．００５５”）である第三のふるい又はスクリーンを通して押出し、透析膜へ入れる。充填された透析膜又は充填された膜を、次に、工程（ｉ）に関しての本発明の第一の態様に従って使用される緩衝液などの適切な透析液を含む容器に入れる。

【0152】

１つの実施形態において、ブレンディング工程（ｉｉｉ）を工程（ｉｉ）の後でかつ透析工程（ｉｖ）の前に行う場合には、工程（ｉｉｉ）は、工程（ｉｖ．１）に係る工程（ｉｖ）の後に行うふるい掛け工程を容易にする。

【0153】

１つの実施形態において、透析は容器の内容物を攪拌することにより行われる。１つの実施形態において、透析液を新鮮な透析液で一回又は少なくとも２回交換することができる。１つの実施形態において、交換の間隔は８〜１８時間であり、又は、１０〜１４時間であり、例えば１２±２時間である。１つの実施形態において、工程（ｉｖ）に係る透析は３０〜４５時間、又は、３５〜３９時間、例えば３７±２時間進行させることができる。

【0154】

１つの実施形態において、工程（ｉｖ）で得られた組成物のtanδは、０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して０．１〜０．９の範囲であり、例えば、０．１〜０．５、又は、０．２〜０．４の範囲である。

【0155】

別の実施形態において、工程（ｉｖ）で得られた組成物のtanδは、０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して０．１〜３．５の範囲である。

【0156】

１つの実施形態において、η^*は、０．７ヘルツの周波数及び３０℃で２，０００ｍＰａ＊ｓ〜２００，０００ｍＰａ＊ｓの範囲であり、ここで、tanδは０．１〜０．９であり、例えば、０．１〜０．５、又は、０．２〜０．４の範囲である。

【0157】

１つの実施形態において、工程（ｉｖ）で得られた組成物のtanδは、０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して０．１０〜３．５の範囲である。１つの実施形態において、対応する粘度η^*は２，５００ｍＰａ＊ｓ〜１４５，０００ｍＰａ＊ｓ、又は、４，０００〜１４５，０００ｍＰａ＊ｓの範囲である。

【0158】

１つの実施形態において、工程（ｉｖ）で得られた組成物のtanδは０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して０．１０〜３．５の範囲である。１つの実施形態において、工程（ｉｖ）で得られた組成物のtanδは０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して０．１０〜０．２５の範囲である。

【0159】

工程（ｖ）
本発明に係る組成物はできる限り有害な皮膚反応を回避する使用を可能とするが、１つの実施形態において、局所麻酔薬及び／又は抗不整脈薬は、必要又は所望ならば、工程（ｉｖ）で得られた本発明に係る組成物又はゲルに添加することができる。このような薬剤は、本発明に係る組成物又はゲルが皮膚組織内に注入されたときに皮膚の炎症から生じることがある、かゆみ、バーニング及び痛みを和らげることができる。

【0160】

適切な薬剤は当該技術分野で公知である。

【0161】

１つの実施形態において、リドカインは局所麻酔薬及び／又は抗不整脈薬として使用される。この薬は、歯科麻酔薬として、又は、小手術用局所麻酔薬として、例えば、注入用で知られている。

【0162】

１つの実施形態において、リドカインは塩酸塩などの塩の形態で及び／又は一水和物などの水和物の形態で使用される。

【0163】

したがって、用語「リドカイン」は、本明細書で使用されるときに、その塩及び水和物を包含する。

【0164】

１つの実施形態において、リドカインは、組成物又はゲルの質量を基準として０〜１質量％、又は、０〜０．５ｗｔ％の量で使用される。

【0165】

１つの実施形態において、質量は０．３％〜０．３５％である。

【0166】

１つの実施形態において、質量は０．３％、又は、０．３５％である。

【0167】

別の実施形態において、テトラカインを使用する。用語「テトラカイン」は、本明細書中で使用されるときに、その塩及び水和物を包含する。テトラカインは、リドカインと同じ量で使用することができる。

【0168】

別の実施形態において、リドカイン及びテトラカインの混合物は使用される。

【0169】

したがって、１つの実施形態において、本発明に係る方法は、工程（ｉｖ）の後に工程（ｖ）：
（ｖ）工程（ｉｖ）で得られた製品に、麻酔薬又は抗不整脈薬、あるいは、麻酔薬及び抗不整脈薬を混合すること、
をさらに含む。

【0170】

１つの実施形態において、本発明による方法は、工程（ｉｖ）の後に工程（ｖ）：
（ｖ）工程（ｉｖ）で得られた製品に、リドカイン又は塩酸リドカイン又はリドカイン塩酸塩一水和物を混合すること、又は、工程（ｉｖ）で得られた製品に、テトラカインを混合すること、又は、工程（ｉｖ）で得られた製品に、リドカイン及びテトラカインを混合すること、
をさらに含む。

【0171】

１つの実施形態において、工程（ｖ）で得られた組成物のtanδは０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して０．１〜０．９、例えば、０．１〜０．５又は０．２〜０．４の範囲である。

【0172】

別の実施形態において、工程（ｖ）で得られた組成物のtanδは０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して０．１〜３．５又は０．１５〜３．４の範囲である。

【0173】

１つの実施形態において、η^*は、０．７ヘルツの周波数及び３０℃で２，０００ｍＰａ＊ｓ〜２００，０００ｍＰａ＊ｓの範囲であり、ここで、tanδは０．１〜０．９であり、例えば、０．１〜０．５、又は、０．２〜０．４の範囲である。

【0174】

１つの実施形態において、工程（ｖ）で得られた組成物のtanδは、０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して０．１０〜３．５の範囲である。１つの実施形態において、対応する粘度η^*は２，５００ｍＰａ＊ｓ〜１４５，０００ｍＰａ＊ｓ、又は、４，０００〜１４５，０００ｍＰａ＊ｓの範囲である。

【0175】

１つの実施形態において、工程（ｖ）で得られた組成物のtanδは、０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して０．１０〜３．５の範囲である。１つの実施形態において、工程（ｖ）で得られた組成物のtanδは、０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して０．１０〜０．２５の範囲である。

【0176】

１つの実施形態において、工程（ｖ）で得られた組成物のtanδは、０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して０．１〜３．５の範囲である。１つの実施形態において、対応するη^*は、２，０００ｍＰａ＊ｓ〜１５０，０００ｍＰａ＊ｓの範囲である。１つの実施形態において、工程（ｖ）で得られた組成物のtanδは、０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して０．１５〜３．５の範囲である。１つの実施形態において、対応する粘度η^*は２，５００ｍＰａ＊ｓ〜１４５，０００ｍＰａ＊ｓ、又は、４，０００〜１４５，０００ｍＰａ＊ｓの範囲である。

【0177】

１つの実施形態において、工程（ｖ）で得られた組成物のtanδは、０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して０．１５〜０．２５の範囲である。１つの実施形態において、対応する粘度η^*は１５，０００ｍＰａ＊ｓ〜２８，０００ｍＰａ＊ｓの範囲である。

【0178】

工程（ｖｉ）
最後に、１つの実施形態において、工程（ｉｖ）又は工程（ｖ）で得られた製品はシリンジに充填することができる。これは、本発明に係る方法で得られた製品は適用のために注入されることが意図されているからである。

【0179】

１つの実施形態において、工程（ｉｖ）又は工程（ｖ）で得られた製品はシリンジに充填され、そして滅菌される。

【0180】

したがって、１つの実施形態において、本発明に係る方法は、工程（ｉｖ）又は工程（ｖ）の後に工程（ｖｉ）：
（ｖｉ）工程（ｉｖ）又は工程（ｖ）で得られた製品をシリンジ中に充填し、それを滅菌すること、
をさらに含む。

【0181】

１つの実施形態において、工程（ｉｖ）又は工程（ｖ）で得られた製品をシリンジ中に押出し、それにより、充填が行われる。

【0182】

滅菌は当該技術分野に公知の方法により行うことができる。用語「滅菌」は、本明細書中に使用されるときに、シリンジの表面上及び／又は本発明の方法により調製された組成物又はゲル中に存在するすべての形態の微生物（伝播性剤（例えば、真菌、細菌、ウイルス、胞子形態など）を含む）をなくし又は除去し又は殺生する任意の方法を包含する。滅菌は熱、薬品、放射線、高圧もしくはろ過又はそれらの組み合わせを課すことなどの当該技術分野で公知の方法により行うことができる。

【0183】

１つの実施形態において、滅菌は工程（ｖｉ）による充填の前に、すなわち、工程（ｉｖ）で得られた又は工程（ｖ）で得られた組成物又はゲル及びシリンジは互いに独立に滅菌される。

【0184】

別の実施形態において、滅菌は工程（ｖｉ）による充填の間に行われる。

【0185】

別の実施形態において、滅菌は工程（ｖｉ）による充填の後に行われる。

【0186】

１つの実施形態において、ゲルなどの最終組成物中のＨＡの全体としての含有量は組成物の合計質量を基準として、１〜５質量％の範囲にある。別の実施形態において、全体としての含有量は１．５〜４質量％又は２〜２．５質量％の範囲である。

【0187】

１つの実施形態において、工程（ｉｖ）により得られる、又は、工程（ｖ）により得られる、又は、工程（ｖｉ）により得られる製品は等張性で無菌性で粘弾性のゲルなどの組成物である。本組成物又はゲルは注入可能であり、そして皮膚組織の体積を増加させる、すなわち、増大させるためのインプラントとして作用しうる。

【0188】

１つの実施形態において、工程（ｉｖ）により得られる、又は、工程（ｖ）により得られる、又は、工程（ｖｉ）により得られる製品は、顔の皮膚組織などの体積を増加させ、又は、中程度の又は深いしわを矯正するための等張性で無菌性で粘弾性の注入可能なゲル又はインプラントである。

【0189】

１つの実施形態において、皮膚組織は唇の組織を含み又は唇の組織である。

【0190】

別の実施形態において、皮膚組織は中程度から重度のほうれい線などの顔面のしわ又はひだの皮膚組織を含み、又は、かかる皮膚組織である。

【0191】

１つの実施形態において、本発明の第一の態様により調製される組成物は安全かつ有効な生体適合性非免疫原性組成物であって、分配及び貯蔵が容易であり、そしてアレルギー試験を必要とすべきでない組成物を提供する。さらに、組成物は皮膚組織に適用されるときに、許容可能な残留性を有する。１つの実施形態において、本発明の方法により調製される組成物は皮膚に適用されるときに、かなりの時間安定である。

【0192】

したがって、１つの実施形態において、本発明は、本明細書中に記載される第一の態様に係る組成物の調製方法、又は、第一の態様の方法及び任意の実施形態、又は、少なくとも２つの実施形態の任意の組み合わせに係る組成物の調製方法に関し、ここで、工程（ｉｉｉ）で得られた組成物を工程（ｉｖ）でｐＨが６.５〜７.５、例えば、６．７〜７．２、又は、６．８〜７．１、又は、６．８〜６．９の範囲となるように透析する。

【0193】

１つの実施形態において、本発明は、本明細書中に記載される第一の態様に係る組成物の調製方法、又は、第一の態様の方法及び任意の実施形態、又は、少なくとも２つの実施形態の任意の組み合わせに係る組成物の調製方法に関し、ここで、工程（ｉｉｉ）で得られたゲルを膨潤率がゲルの合計質量を基準として５〜２５％、例えば、６〜２３％、又は、７〜２２％、又は、９〜２１％となるように透析する。

【0194】

１つの実施形態において、本発明は、本明細書中に記載される第一の態様に係る組成物の調製方法、又は、第一の態様の方法及び任意の実施形態、又は、少なくとも２つの実施形態の任意の組み合わせに係る組成物の調製方法に関し、ここで、工程（ｉｖ）又は工程（ｖ）で得られた組成物のtanδは０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して０．１〜０．９の範囲であり、及び／又は、粘度η^*は２，０００ｍＰａ＊ｓ〜１５０，０００ｍＰａ＊ｓの範囲であり、又は、０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して０．１〜３．５の範囲であり、及び／又は、粘度η^*は２，０００ｍＰａ＊ｓ〜１５０，０００ｍＰａ＊ｓの範囲であり、又は、工程（ｉｖ）又は工程（ｖ）で得られた組成物のtanδは、０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して０．１５〜３．５の範囲であり、及び／又は、粘度η^*は０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して２，１００ｍＰａ＊ｓ〜１４５，０００ｍＰａ＊ｓ、又は、２，５００〜１４５，０００ｍＰａ＊ｓ、又は、４，０００〜１４５，０００ｍＰａ＊ｓであり、又は、工程（ｉｖ）又は工程（ｖ）で得られた組成物のtanδは、０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して０．１０〜０．２５の範囲であり、及び／又は、粘度η^*は０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して１５，０００ｍＰａ＊ｓ〜２８，０００ｍＰａ＊ｓの範囲であり、又は、工程（ｉｖ）又は工程（ｖ）で得られた組成物のtanδは、０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して０．１０〜０．２５の範囲であり、及び／又は、粘度η^*は０．７ヘルツの周波数及び３０℃で測定して２２，０００ｍＰａ＊ｓ〜２８，０００ｍＰａ＊ｓの範囲である。

【0195】

１つの実施形態において、本発明は、本明細書中に記載される第一の態様に係る組成物の調製方法、又は、第一の態様の方法及び任意の実施形態、又は、少なくとも２つの実施形態の任意の組み合わせに係る組成物の調製方法に関し、ここで、組成物は、皮膚組織中に注入されたときに、少なくとも３か月安定であり、例えば、少なくとも４か月又は５か月又は６か月安定である。

【0196】

１つの実施形態において、本発明は、本明細書中に記載される第一の態様に係る組成物の調製方法、又は、第一の態様の方法及び任意の実施形態、又は、少なくとも２つの実施形態の任意の組み合わせに係る組成物の調製方法に関し、ここで、前記麻酔薬及び／又は抗不整脈薬、例えば、工程（ｖ）のリドカイン又はテトラカイン、リドカイン及びテトラカインは皮膚組織に注入されたときに放出され、そして組成物は無菌である。

【0197】

１つの実施形態において、本発明は、本明細書中に記載される第一の態様に係る組成物の調製方法、又は、第一の態様の方法及び任意の実施形態、又は、少なくとも２つの実施形態の任意の組み合わせに係る組成物の調製方法に関し、ここで、ゲルなどの最終組成物中のＨＡの全体としての含有量は組成物の合計質量を基準として１〜５質量％、例えば、１．５〜４質量％又は２〜２．５質量％の範囲である。

【0198】

１つの実施形態において、本発明は、本明細書中に記載される第一の態様に係る組成物の調製方法、又は、第一の態様の方法及び任意の実施形態、又は、少なくとも２つの実施形態の任意の組み合わせに係る組成物の調製方法に関し、ここで、組成物は皮膚組織中に注入されたときに、前記皮膚組織を刺激しない。

【0199】

１つの実施形態において、本発明は、本明細書中に記載される第一の態様に係る組成物の調製方法、又は、第一の態様の方法及び任意の実施形態、又は、少なくとも２つの実施形態の任意の組み合わせに係る組成物の調製方法に関し、ここで、組成物は注入可能な組織フィラーとして使用され、また、組成物はゲルの形態である。

【0200】

１つの実施形態において、本発明は、本明細書中に記載される第一の態様に係る組成物の調製方法、又は、第一の態様の方法及び任意の実施形態、又は、少なくとも２つの実施形態の任意の組み合わせに係る組成物の調製方法に関し、ここで、ヒアルロン酸、又は、ヒアルロン酸及び麻酔薬及び／又は抗不整脈薬は組成物の唯一の活性成分である。

【0201】

第二の態様によると、本発明は、架橋された第一のポリマー、場合により存在する、架橋又は非架橋であることができる第二のポリマー、及び、水を含む、ゲルなどの組成物に関し、ここで、第一のポリマー及び第二のポリマーはＨＡなどの多糖類から選ばれる。

【0202】

１つの実施形態において、架橋された第一のポリマー、場合により存在する、架橋又は非架橋であることができる第二のポリマー、及び、水を含む、ゲルなどの組成物であって、第一のポリマー及び第二のポリマーは多糖類から選ばれる組成物は本明細書中に記載される本発明の第一の態様に係る方法により得ることができ、又は、第一の態様及び任意の実施形態、又は、少なくとも２つの実施形態の組み合わせによる方法により得ることができる。

【0203】

１つの実施形態において、架橋された第一のポリマー、場合により存在する、架橋又は非架橋であることができる第二のポリマー、及び、水、及び、場合により存在する、麻酔薬及び／又は抗不整脈薬からなる、ゲルなどの組成物であって、ここで、第一のポリマー及び第二のポリマーは多糖類から選ばれる組成物は、本明細書中に記載される本発明の第一の態様に係る方法により得ることができ、又は、第一の態様及び任意の実施形態、又は、少なくとも２つの実施形態の組み合わせによる方法により得ることができる。

【0204】

第三の態様によると、本発明はシリンジ及び第二の態様に係るゲルなどの組成物、又は、シリンジ及び第一の態様に係る方法により調製されるゲルなどの組成物を含むキットに関する。

【0205】

第四の態様によると、本発明は、化粧用途における、第二の態様に係るゲルなどの組成物の使用、又は、第一の態様に係る方法により調製されるゲルなどの組成物に関する。

【0206】

１つの実施形態において、ゲルなどの組成物は皮膚科フィラーとして使用される。

【0207】

用語「皮膚科フィラー」は、本明細書中に使用されるときに、本発明により調製されるゲルなどの組成物は皮膚組織の体積を増加させる、すなわち、皮膚組織を増大させるのに適する。

【0208】

１つの実施形態において、ゲルなどの組成物は皮膚顔面組織などの皮膚組織を増大し及び／又は中程度の又は深いしわを矯正するために使用される。

【0209】

１つの実施形態において、組成物は注入可能な組成物であり、すなわち、組成物は適用されるときに皮膚組織中に注入される。

【0210】

さらなる態様によると、第二の態様に係る組成物は医薬組成物として又は医薬組成物中で使用されうる。

【0211】

１つの実施形態において、組成物はヒアルロン酸に基づくゲルなどの組成物の使用を要求する医療用途に使用される。

【0212】

このように、第五の態様によると、本発明は医薬としての使用のための第二の態様に係るゲルなどの組成物に関する。

【0213】

第六の態様によると、本発明は、架橋された第一のポリマー、場合により存在する、架橋又は非架橋であることができる第二のポリマー、及び、水を含み、第一のポリマー及び第二のポリマーは多糖類から選ばれるゲルなどの組成物の調製方法であって、少なくとも第一のふるい掛け工程（ａ）を含む方法に関する。

【0214】

用語「ふるい掛け工程」は、架橋されたヒアルロン酸などの架橋されたポリマー及び水をふるいを通して押出する工程を包含する。

【0215】

１つの実施形態において、用語「ふるい掛け工程」は、本発明の第一の態様に関して規定されるとおりの工程（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれかで得られた製品をふるいを通して押出する工程を包含する。例えば、本発明の第一の態様で言及されるような用語「ふるいを通して押出する」は用語「ふるいを通して通過させる」又は「ふるいを通してプレスする」又は「ふるいを通して進行させる」又は「ろ過する」を包含する。

【0216】

用語「ふるい」は用語「フィルター」を包含する。

【0217】

用語「ふるい」又は「フィルター」は液体が浸入することができる孔又は穴を有し、液体中に含まれることがある粒子を除去することができ、又は、ふるい又はフィルターの孔を通して適合するように粒子にせん断作用することができる任意の装置を包含する。このため、１つの実施形態において、粒子はふるい掛け又はろ過によりサイズ変更される。ふるいは金属ワイヤ又はプラスチック繊維などの繊維のネットの形態で提供されうる。適切なふるいはふるい掛け又はろ過の分野で知られている。

【0218】

１つの実施形態において、本方法は少なくとも第二のふるい掛け工程（ｂ）を含む。

【0219】

別の実施形態において、本方法は第一のふるい掛け工程（ａ）及び第二のふるい掛け工程（ｂ）以外に、少なくとも第三のふるい掛け工程（ｃ）を含む。

【0220】

別の実施形態において、本方法は第一のふるい掛け工程（ａ）及び第二のふるい掛け工程（ｂ）及び第三のふるい掛け工程（ｃ）以外に、少なくとも１つの更なるふるい掛け工程又は少なくとも２つの更なるふるい掛け工程又は少なくとも３つの更なるふるい掛け工程又は少なくとも４つの更なるふるい掛け工程を含む。

【0221】

１つの実施形態において、第二のふるい掛け工程（ｂ）は第一のふるい掛け工程（ａ）において使用される第一のふるいのメッシュサイズよりも小さいメッシュサイズを有する第二のふるいを用いて行われる。

【0222】

別の実施形態において、第三のふるい掛け工程（ｃ）は第二のふるい掛け工程（ｂ）において使用される第二のふるいのメッシュサイズよりも小さいメッシュサイズを有する第三のふるいを用いて行われる。

【0223】

別の実施形態において、第三のふるい掛け工程（ｃ）は第二のふるい掛け工程（ｂ）において使用される第二のふるいのメッシュサイズよりも小さいメッシュサイズを有する第三のふるいを用いて行われ、また、第二のふるいのメッシュサイズは第一のふるい掛け工程（ａ）において使用される第一のふるいのメッシュサイズよりも小さい。

【0224】

なおも別の実施形態において、各々続いて使用されるふるいは先行のふるい掛け工程において使用されるふるいのメッシュサイズよりも小さいメッシュサイズを有する。

【0225】

１つの実施形態において、第一のふるいはメッシュサイズが２００〜６００μｍの範囲にある。

【0226】

別の実施形態において、第一のふるいはメッシュサイズが２００〜６００μｍの範囲にあり、第二のふるいはメッシュサイズが１００〜４００μｍの範囲にある。

【0227】

なおも別の実施形態において、第一のふるいはメッシュサイズが２００〜６００μｍの範囲にあり、第二のふるいはメッシュサイズが１００〜４００μｍの範囲にあり、第三のふるいはメッシュサイズが５０〜３００μｍの範囲にある。

【0228】

１つの実施形態において、第一のふるいはメッシュサイズが３００〜５００μｍの範囲にある。

【0229】

別の実施形態において、第一のふるいはメッシュサイズが３００〜５００μｍの範囲にあり、第二のふるいはメッシュサイズが１００〜３００μｍの範囲にある。

【0230】

なおも別の実施形態において、第一のふるいはメッシュサイズが３００〜５００μｍの範囲にあり、第二のふるいはメッシュサイズが１００〜３００μｍの範囲にあり、第三のふるいはメッシュサイズが５０〜２００μｍの範囲にある。

【0231】

１つの実施形態において、第一のふるいはメッシュサイズが３２５〜４２５μｍの範囲にある。

【0232】

別の実施形態において、第一のふるいはメッシュサイズが３２５〜４２５μｍの範囲にあり、第二のふるいはメッシュサイズが１７５〜２２５μｍの範囲にある。

【0233】

別の実施形態において、第一のふるいはメッシュサイズが３２５〜４２５μｍの範囲にあり、第二のふるいはメッシュサイズが１７５〜２２５μｍの範囲にあり、第三のふるいはメッシュサイズが１１０〜１７０μｍの範囲にある。

【0234】

１つの実施形態において、ふるい掛け工程（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）の少なくとも１つによるふるい掛け工程は５〜３０℃の温度、例えば、５〜２５℃又は５〜２０℃又は５〜１５℃又は５〜１０℃で行われる。

【0235】

１つの実施形態において、第一のふるい掛け工程（ａ）の前又はそれに続いて、第二のふるい掛け工程（ｂ）の前又はそれに続いて、又は、第三のふるい掛け工程（ｃ）の前又はそれに続いて、本方法は本発明の第一の態様に関して規定されるとおりの下記の工程（ｉ）〜（ｖｉ）の少なくとも１つを含む。

【0236】

したがって、第六の態様の１つの実施形態において、第一のふるい掛け工程（ａ）の前又はそれに続いて、第二のふるい掛け工程（ｂ）の前又はそれに続いて、又は、第三のふるい掛け工程（ｃ）の前又はそれに続いて、本方法は下記の工程（ｉ）〜（ｖｉ）：
（ｉ）第一のポリマー及び水を含む混合物を架橋すること、
（ｉｉ）工程（ｉ）の架橋に続いて、架橋を停止すること、
（ｉｉｉ）場合により、工程（ｉｉ）で得られた製品を第二のポリマーとブレンドすること、
（ｉｖ）工程（ｉｉ）又は工程（ｉｉｉ）で得られた製品を透析に付すこと、
（ｖ）工程（ｉｖ）で得られた製品に、リドカイン又は塩酸リドカイン、又は、リドカイン塩酸塩一水和物、又は、テトラカイン、又は、リドカイン及びテトラカインなどの麻酔薬又は抗不整脈薬を混合すること、
（ｖｉ）工程（ｖ）で得られた製品をシリンジに充填し、それを滅菌すること、
の少なくとも１つを含む。

【0237】

別の実施形態において、第一のふるい掛け工程（ａ）の前又はそれに続いて、第二のふるい掛け工程（ｂ）の前又はそれに続いて、又は、第三のふるい掛け工程（ｃ）の前又はそれに続いて、本方法は下記の工程（ｉ）〜（ｖｉ）：
（ｉ）第一のポリマー及び水を含む混合物を架橋すること、
（ｉｉ）工程（ｉ）の架橋に続いて、架橋を停止すること、
（ｉｉｉ）場合により、工程（ｉｉ）で得られた製品を第二のポリマーとブレンドすること、
（ｉｖ）工程（ｉ）又は工程（ｉｉ）又は工程（ｉｉｉ）で得られた製品を透析に付すこと、
（ｖ）工程（ｉ）又は工程（ｉｉ）又は工程（ｉｉｉ）又は工程（ｉｖ）で得られた製品に、リドカイン又は塩酸リドカイン、又は、リドカイン塩酸塩一水和物、又は、テトラカイン、又は、リドカイン及びテトラカインなどの麻酔薬又は抗不整脈薬を混合すること、
（ｖｉ）工程（ｉ）又は工程（ｉｉ）又は工程（ｉｉｉ）又は工程（ｉｖ）又は工程（ｖ）で得られた製品をシリンジに充填し、それを滅菌すること、
の少なくとも１つを含む。

【0238】

１つの実施形態において、第一のふるい掛け工程（ａ）は工程（ｉ）に続いて行う。

【0239】

別の実施形態において、第一のふるい掛け工程（ａ）及び第二のふるい掛け工程（ｂ）は工程（ｉ）に続いて行う。

【0240】

さらに別の実施形態において、第一のふるい掛け工程（ａ）及び第二のふるい掛け工程（ｂ）及び第三のふるい掛け工程（ｃ）は工程（ｉ）に続いて行う。

【0241】

別の実施形態において、第一のふるい掛け工程（ａ）は工程（ｉｉ）に続いて行う。

【0242】

さらに別の実施形態において、第一のふるい掛け工程（ａ）及び第二のふるい掛け工程（ｂ）は工程（ｉｉ）に続いて行う。

【0243】

さらに別の実施形態において、第一のふるい掛け工程（ａ）及び第二のふるい掛け工程（ｂ）及び第三のふるい掛け工程（ｃ）は工程（ｉｉ）に続いて行う。

【0244】

１つの実施形態において、第一のふるい掛け工程（ａ）は工程（ｉｉｉ）に続いて行う。

【0245】

別の実施形態において、第一のふるい掛け工程（ａ）及び第二のふるい掛け工程（ｂ）は工程（ｉｉｉ）に続いて行う。

【0246】

さらに別の実施形態において、第一のふるい掛け工程（ａ）及び第二のふるい掛け工程（ｂ）及び第三のふるい掛け工程（ｃ）は工程（ｉｉｉ）に続いて行う。

【0247】

別の実施形態において、第一のふるい掛け工程（ａ）は工程（ｉｖ）に続いて行う。

【0248】

別の実施形態において、第一のふるい掛け工程（ａ）及び第二のふるい掛け工程（ｂ）は工程（ｉｖ）に続いて行う。

【0249】

さらに別の実施形態において、第一のふるい掛け工程（ａ）及び第二のふるい掛け工程（ｂ）及び第三のふるい掛け工程（ｃ）は工程（ｉｖ）に続いて行う。

【0250】

１つの実施形態において、第一のふるい掛け工程（ａ）は工程（ｖ）に続いて行う。

【0251】

別の実施形態において、第一のふるい掛け工程（ａ）及び第二のふるい掛け工程（ｂ）は工程（ｖ）に続いて行う。

【0252】

さらに別の実施形態において、第一のふるい掛け工程（ａ）及び第二のふるい掛け工程（ｂ）及び第三のふるい掛け工程（ｃ）は工程（ｖ）に続いて行う。

【0253】

ふるいの使用は製品の所望の均一性に悪影響を及ぼしうる外来化合物及びゲル化粒子などの粒子の除去を支援し、又は、せん断力を加えることによりふるいの孔を通して粒子をサイズ変更するのを援助する。このため、１つの実施形態において、本発明に係る方法において使用される１つのふるい掛け工程又はいくつかのふるい掛け工程により、第一のポリマー、場合により存在する第二のポリマー、及び、水を含む、特に均一な組成物の調製が可能になり、すなわち、特に均一なゲルの調製が可能になる。均一性は、化粧又は医療用途における組成物の適用などの意図した用途を支援しそして改良する。

【0254】

第七の態様によると、本発明は、架橋された第一のポリマー、架橋又は非架橋であることができる、場合により存在する第二のポリマー、及び、水を含み、ここで、第一のポリマー及び第二のポリマーは多糖類から選ばれる、ゲルなどの組成物であって、本発明の第六の態様に規定されるとおりの方法、又は、第六の態様に規定される実施形態のいずれか、又は、少なくとも２つの実施形態のいずれかにより調製され又は得ることができる、ゲルなどの組成物に関する。

【0255】

第八の態様によると、本発明は、シリンジ、及び、本発明の第六の態様に規定されるとおりの方法、又は、第六の態様に規定される実施形態のいずれかにより調製され又は得ることができる組成物を含むキット、又は、シリンジ及び本発明の第七の態様に規定されるとおりの組成物を含むキットに関する。

【0256】

本発明の第九の態様によると、本発明は、化粧用途における、又は、皮膚科フィラーとしての、本発明の第六の態様に規定されるとおりの方法、又は、第六の態様に規定される実施形態のいずれか、又は、少なくとも２つの実施形態のいずれかにより調製され又は得ることができる組成物の使用、又は、本発明の第七の態様に規定されるとおりの組成物の使用に関する。

【0257】

第十の態様によると、本発明は、医薬としての使用のための、架橋された第一のポリマー、架橋又は非架橋であることができる、場合により存在する第二のポリマー、及び、水を含み、ここで、第一のポリマー及び第二のポリマーは多糖類から選ばれる、ゲルなどの組成物であって、本発明の第六の態様に規定されるとおりの方法、又は、第六の態様に規定される実施形態のいずれか、又は、少なくとも２つの実施形態のいずれかにより調製され又は得ることができる組成物、又は、本発明の第七の態様に規定されるとおりの組成物に関する。

【0258】

第十一の態様によると、本発明は、架橋されたヒアルロン酸及び水を含む組成物の調製における少なくとも１つのふるい又は少なくとも１つのふるい掛け工程の使用に関する。

【0259】

本使用の１つの実施形態において、少なくとも２つのふるい又は少なくとも２つのふるい掛け工程を使用する。

【0260】

本使用の別の実施形態において、少なくとも３つのふるい又は少なくとも３つのふるい掛け工程を使用する。

【実施例】

【0261】

例
例１
緩衝液の調製
水中で塩を溶解することにより、緩衝液を塩化ナトリウム、二塩基性無水リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム二水和物及び水から調製する。

【0262】

緩衝液中のＨＡの調製
緩衝液の調製に次いで、分子量が２．５ＭＤａ〜３．０ＭＤａ未満であるヒアルロン酸ナトリウムをクォート混合ボールに添加し、そして緩衝液の一部をそれに添加する。内容物をスターラを用いて２５０ｒｐｍで２．０〜２．５時間混合し、その間に、混合ボールに対するジャケット設定点を５０℃に設定する。混合に次いで、内容物を５〜７℃に冷却する。

【0263】

アルカリ溶液の添加
上記の緩衝液中に水酸化ナトリウムを溶解することにより、第一のアルカリ溶液を調製する。その後、上記の緩衝液中に水酸化ナトリウムを溶解することにより、第二のアルカリ溶液を調製する。その後、第一のアルカリ溶液を混合ボール中の内容物に添加し、そして内容物を５℃ジャケット設定点にて２５０ｒｐｍで３０〜４０分間混合する。

【0264】

架橋反応［工程（ｉ）］
第二のアルカリ緩衝液の一部分にＢＤＤＥを添加することにより、架橋溶液を調製する。架橋剤ＢＤＤＥを含むこのアルカリ溶液を混合ボール中の内容物に添加し、５℃ジャケット設定点にて５００ｒｐｍで１０〜１５分間混合させる。その後、混合速度を１００ｒｐｍに低下し、そして温度設定点を３０℃に変更する。２８℃に到達した後に、混合を停止し、そして内容物を約３時間硬化させる。

【0265】

架橋反応の停止のためのクエンチ溶液の調製
１ｍ ＨＣｌ溶液を、緩衝液の一部分に添加し、クエンチ溶液を形成する。

【0266】

クエンチ反応［工程（ｉｉ）］
ジャケットの温度設定点を５℃に設定し、そしてクエンチ溶液をボール内容物に添加する。その後、内容物を５００ｒｐｍで１０〜１５分間混合する。

【0267】

架橋ＨＡの処理
工程（ｉｉ）から得られたポリマーを、その後、小片に切断し、それをチャンク又はストリップに成形することができる。チャンク又はストリップのサイズは１．２７ｃｍ×１．２７ｃｍ×１．２７ｃｍ（０．５×０．５×０．５インチ)以下であることができる。チャンク又はストリップを、その後、約２．５〜３．０時間、１５０ｒｐｍで５℃ジャケット設定点で混合する。混合に次いで、混合した製品を５５８．８μｍ(０．０２２”)スクリーンを通して押出し、そして混合ボールに戻し、２．０〜２．５時間、１５０ｒｐｍで５℃ジャケット設定点でさらに混合する。

【0268】

第二のポリマーの提供
Ｍｗ≧３．０ＭＤａであるＨＡ(ナトリウム塩)を緩衝液の一部分に添加する。内容物をオーバーヘッドミキサーで短時間混合する。

【0269】

ゲルの調製[工程（ｉｉｉ）]
緩衝液中の第二のポリマー（１％ ｗ/ｗ）の一部分をクォートミキサー中の内容物に添加する。内容物を１〜５分間、２５０ｒｐｍで混合する。

【0270】

透析反応[工程（ｉｖ）]
ＭＷＣＯが１２，０００〜１４，０００Ｄａである透析膜を無菌水中で水和する。その後、工程（ｉｉｉ）で得られたゲルをメッシュサイズが約３８０μｍ、例えば３８１μｍ（０．０１５”）であるスクリーンを通して押出し、その後、メッシュサイズが２００μｍ、例えば２０３．２μｍ（０．００８”）であるスクリーンを通して押出し、その後、メッシュサイズが約１４０μｍ、例えば１３９．７μｍ(０．００５５”)であるスクリーンを通して透析膜中に押出する。透析膜は充填され、そして有効長さ約２０．３ｃｍ（８インチ）及び全体長さ約２５．４ｃｍ（１０インチ）を有する。その後、膜を、上記緩衝液を含む容器に入れる。容器を５℃設定点に冷却し、そして内容物を撹拌する。透析液を１２±２時間の間隔で２回交換する。透析を３７±２時間行う。

【0271】

工程（ｉｖ）で得られた製品の押出[工程（ｖｉ）]
透析後、膜を合わせ、混合し、そしてメッシュサイズが約１４０μｍ、例えば１３９．７μｍ（０．００５５”）であるふるいを通して２回押出し、その後、真空下に３０〜４０分間混合する。得られた材料をシリンジ中に押出し、そしてスチーム滅菌する。

【0272】

工程（ｉｖ）の後に得られ、工程（ｖｉ）後にシリンジ中に含まれる製品は等張性で無菌で粘弾性の注射可能なゲルである。このゲルは、例えば、顔面皮膚組織の体積を増加させる、すなわち皮膚組織を増大し及び／又は皮膚の中程度の又は深いしわを矯正するのに適したインプラントとして使用することができる。

【0273】

例２
例１により反応を行うが、架橋工程（ｉ）における差異を伴う。

【0274】

第二のアルカリ緩衝液の一部分にＢＤＤＥを添加することにより、架橋溶液を調製する。架橋剤ＢＤＤＥを含むこのアルカリ溶液を混合ボール中の内容物に添加し、１０〜１５分間、５００ｒｐｍにて５℃ジャケット設定点で混合させる。その後、混合速度を１００ｒｐｍに低下し、温度設定点を３３．３３℃の温度に変更する。３１．３３℃の温度に到達した後に、混合を停止し、そして内容物を約３時間硬化させる。

【0275】

工程（ｉｖ）後に得られ、そして工程（ｖｉ）後にシリンジ中に含まれる製品は等張性で無菌で粘弾性の注射可能なゲルである。このゲルは、例えば、顔面皮膚組織の体積を増加させる、すなわち皮膚組織を増大し及び／又は皮膚の中程度の又は深いしわを矯正するのに適したインプラントとして使用することができる。このゲルは例１によるゲルよりも粘弾性が高い。

【0276】

例３
例１により反応を行うが、リドカインなどの麻酔薬及び抗不整脈薬を工程（ｉｉｉ）の後に得られたゲルに添加するという差異を伴う。

【0277】

リドカイン添加[工程（ｖ）]
リドカインＨＣｌ一水和物の溶液を緩衝液中に溶解し、それを、ゲルを基準として０．３５ｗｔ％の量で工程（ｉｉｉ）により調製されたゲルを含む透析膜に添加する。内容物を、メッシュサイズが約１４０μｍ、例えば１３９．７μｍ（０．００５５”）であるふるいを通して２回押出し、その後、真空下に３０〜４０分間さらに混合する。

【0278】

工程（ｖ）で得られ、そして工程（ｖｉ）後にシリンジ中に含まれる製品は等張性で無菌で粘弾性の注射可能なゲルである。このゲルは、例えば、顔面皮膚組織の体積を増加させる、すなわち皮膚組織を増大し及び／又は皮膚の中程度の又は深いしわを矯正するのに適したインプラントとして使用することができる。

【0279】

例４
例１により反応を行うが、架橋工程（ｉ）における差異を伴う。

【0280】

第二のアルカリ緩衝液の一部分にＢＤＤＥを添加することにより、架橋溶液を調製する。架橋剤ＢＤＤＥを含むこのアルカリ溶液を混合ボール中の内容物に添加し、１０〜１５分間、５００ｒｐｍにて５℃ジャケット設定点で混合させる。その後、混合速度を１００ｒｐｍに低下し、温度設定点を２７℃の温度に変更する。２５℃の温度に到達した後に、混合を停止し、そして内容物を約３時間硬化させる。

【0281】

工程（ｉｖ）後に得られ、そして工程（ｖｉ）後にシリンジ中に含まれる製品は等張性で無菌で粘弾性の注射可能なゲルである。このゲルは、例えば、顔面皮膚組織の体積を増加させる、すなわち皮膚組織を増大し及び／又は皮膚の中程度の又は深いしわを矯正するのに適したインプラントとして使用することができる。このゲルは例１によるゲルよりも粘弾性が低い。

【0282】

例５
例１により反応を行うが、架橋工程（ｉ）及びブレンディング工程（ｉｉｉ）における差異を伴う。

【0283】

第二のアルカリ緩衝液の一部分にＢＤＤＥを添加することにより、架橋溶液を調製する。架橋剤ＢＤＤＥを含むこのアルカリ溶液を混合ボール中の内容物に添加し、１０〜１５分間、５００ｒｐｍにて５℃ジャケット設定点で混合させる。その後、混合速度を１００ｒｐｍに低下し、温度設定点を３０℃の温度に変更する。２７℃の温度に到達した後に、混合を停止し、そして内容物を約３時間硬化させる。

【0284】

第二のポリマーの提供
Ｍｗ≧３．０ＭＤａであるＨＡ(ナトリウム塩)を緩衝液の一部分に添加する。内容物をオーバーヘッドミキサーで短時間混合する。

【0285】

ゲルの調製[工程（ｉｉｉ）]
緩衝液中の第二のポリマー（３％ ｗ/ｗ）の一部分をクォートミキサー中の内容物に添加する。内容物を１〜５分間、２５０ｒｐｍで混合する。

【0286】

工程（ｉｖ）後に得られ、そして工程（ｖｉ）後にシリンジ中に含まれる製品は等張性で無菌で粘弾性の注射可能なゲルである。このゲルは、例えば、顔面皮膚組織の体積を増加させる、すなわち皮膚組織を増大し及び／又は皮膚の中程度の又は深いしわを矯正するのに適したインプラントとして使用することができる。

【0287】

例６
例１により反応を行うが、架橋工程（ｉ）及びブレンディング工程（ｉｉｉ）における差異を伴う。

【0288】

第二のアルカリ緩衝液の一部分にＢＤＤＥを添加することにより、架橋溶液を調製する。架橋剤ＢＤＤＥを含むこのアルカリ溶液を混合ボール中の内容物に添加し、１０〜１５分間、５００ｒｐｍにて５℃ジャケット設定点で混合させる。その後、混合速度を１００ｒｐｍに低下し、温度設定点を２５℃の温度に変更する。２２℃の温度に到達した後に、混合を停止し、そして内容物を約３時間硬化させる。

【0289】

第二のポリマーの提供
Ｍｗ≧３．０ＭＤａであるＨＡ(ナトリウム塩)を緩衝液の一部分に添加する。内容物をオーバーヘッドミキサーで短時間混合する。次いで、工程（ｉ）で使用した架橋溶液の一部分を緩衝液中の第二のポリマーに添加する。

【0290】

ゲルの調製[工程（ｉｉｉ）]
緩衝液中の架橋された第二のポリマー（１％ ｗ/ｗ）の一部分をクォートミキサー中の内容物に添加する。内容物を１〜５分間、２５０ｒｐｍで混合する。

【0291】

工程（ｉｖ）後に得られ、そして工程（ｖｉ）後にシリンジ中に含まれる製品は等張性で無菌で粘弾性の注射可能なゲルである。このゲルは、例えば、顔面皮膚組織の体積を増加させる、すなわち皮膚組織を増大し及び／又は皮膚の中程度の又は深いしわを矯正するのに適したインプラントとして使用することができる。

【0292】

例７
例２により反応を行うが、リドカインなどの麻酔薬及び抗不整脈薬を工程（ｉｉｉ）の後に得られたゲルに添加するという差異を伴う。

【0293】

リドカイン添加[工程（ｖ）]
リドカインＨＣｌ一水和物の溶液を緩衝液中に溶解し、それを、ゲルを基準として０．３５ｗｔ％の量で工程（ｉｉｉ）により調製されたゲルを含む透析膜に添加する。内容物を、メッシュサイズが約１４０μｍ、例えば１３９．７μｍ（０．００５５”）であるふるいを通して２回押出し、その後、真空下に３０〜４０分間さらに混合する。

【0294】

工程（ｖ）で得られ、そして工程（ｖｉ）後にシリンジ中に含まれる製品は等張性で無菌で粘弾性の注射可能なゲルである。このゲルは、例えば、顔面皮膚組織の体積を増加させる、すなわち皮膚組織を増大し及び／又は皮膚の中程度の又は深いしわを矯正するのに適したインプラントとして使用することができる。

【0295】

例８
例１により反応を行うが、工程（ｉｉ）後にブレンディング工程（ｉｉｉ）を省略するという差異を伴う。

【0296】

工程（ｉｖ）後にそれぞれ得られ、そして工程（ｖｉ）後にシリンジ中に含まれる製品は等張性で無菌で粘弾性の注射可能なゲルである。このゲルは、例えば、顔面皮膚組織の体積を増加させる、すなわち皮膚組織を増大し及び／又は皮膚の中程度の又は深いしわを矯正するのに適したインプラントとして使用することができる。

【0297】

例９〜１４
例２〜７により反応を行うが、工程（ｉｉ）後にブレンディング工程（ｉｉｉ）を省略するという差異を伴う。

【0298】

工程（ｉｖ）後に得られ、そして工程（ｖｉ）後にシリンジ中に含まれる製品は等張性で無菌で粘弾性の注射可能なゲルである。このゲルは、例えば、顔面皮膚組織の体積を増加させる、すなわち皮膚組織を増大し及び／又は皮膚の中程度の又は深いしわを矯正するのに適したインプラントとして使用することができる。