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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】6181341
(24)【登録日】2017年7月28日
(45)【発行日】2017年8月16日
(54)【発明の名称】バブルの製造方法
(51)【国際特許分類】
B01F 3/04 20060101AFI20170807BHJP
B01F 11/00 20060101ALI20170807BHJP
A61K 49/22 20060101ALN20170807BHJP
【ＦＩ】
B01F3/04 Z
B01F11/00 C
!A61K49/22
【請求項の数】5
【全頁数】20
(21)【出願番号】特願2017-511028(P2017-511028)
(86)(22)【出願日】2016年4月6日
(86)【国際出願番号】JP2016061294
(87)【国際公開番号】WO2016163415
(87)【国際公開日】20161013
【審査請求日】2017年3月13日
(31)【優先権主張番号】特願2015-79625(P2015-79625)
(32)【優先日】2015年4月8日
(33)【優先権主張国】JP
【早期審査対象出願】
(73)【特許権者】
【識別番号】515093504
【氏名又は名称】ＳｏｎｏＣｏｒｅ株式会社
(73)【特許権者】
【識別番号】598015084
【氏名又は名称】学校法人福岡大学
(74)【代理人】
【識別番号】100137095
【弁理士】
【氏名又は名称】江部 武史
(74)【代理人】
【識別番号】100173532
【弁理士】
【氏名又は名称】井上 彰文
(74)【代理人】
【識別番号】100091627
【弁理士】
【氏名又は名称】朝比 一夫
(72)【発明者】
【氏名】立花 克郎
【審査官】
神田 和輝
(56)【参考文献】
【文献】
特表平１１−５０７８７３（ＪＰ，Ａ）
【文献】
土屋好司，"界面活性剤（３）−ナノバブルとその医療分野への応用"，色材協会誌，日本，社団法人色材協会，２０１０年 ２月２０日，Vol.83, No.2，pp.30-36
(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）
Ａ６１Ｋ ４９／００−４９／０４
Ｂ０１Ｆ １／００−５／２６
Ｂ０１Ｆ ９／００−１３／１０
Ｂ０１Ｊ １３／００−１３／０４
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
水性液体と気体とを混合しつつ、これらに振動を付与して、前記水性液体中に前記気体で構成される複数のバブルを生成させるのに際して、
前記水性液体へ添加する添加物の種類および／または量を変更することにより、生成する前記バブルの径を調整するバブルの製造方法であって、
前記バブルの製造方法は、前記水性液体と前記気体とを長尺状の容器内に収納し、前記水性液体が前記容器の内面に繰り返し衝突するように、前記容器を振動させる工程を有し、
前記容器を振動させる工程は、前記容器の長手方向への往復運動および／または前記長手方向を主方向とする回転運動によって、前記容器を振動させる工程を含み、
前記容器の高さをＸ（ｍｍ）としたとき、前記容器の前記長手方向の振動幅は、０．７Ｘ〜１．５Ｘ（ｍｍ）であり、
前記添加物は、タンパク質、塩類および糖類のうちの少なくとも１種であり、
前記タンパク質として、アルブミンまたはグロブリンを用い、前記塩類として、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４、ＫＨ２ＰＯ４またはＣ３Ｈ５ＮａＯ３を用い、前記糖類として、グルコース、スクロースまたはデキストリンを用いて、
前記添加物の量を０〜４０ｗ／ｖ％の範囲とすることにより、生成する前記バブルの径分布を示すグラフにおけるピークが１０〜４００ｎｍの範囲に存在するように調整することを特徴とするバブルの製造方法。
前記水性液体へ添加する添加物の種類および／または量を変更することにより、生成する前記バブルの径を調整するバブルの製造方法であって、
前記バブルの製造方法は、前記水性液体と前記気体とを長尺状の容器内に収納し、前記水性液体が前記容器の内面に繰り返し衝突するように、前記容器を振動させる工程を有し、
前記容器を振動させる工程は、前記容器の長手方向への往復運動および／または前記長手方向を主方向とする回転運動によって、前記容器を振動させる工程を含み、
前記容器の高さをＸ（ｍｍ）としたとき、前記容器の前記長手方向の振動幅は、０．７Ｘ〜１．５Ｘ（ｍｍ）であり、
前記添加物は、タンパク質、塩類および糖類のうちの少なくとも１種であり、
前記タンパク質として、アルブミンまたはグロブリンを用い、前記塩類として、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４、ＫＨ２ＰＯ４またはＣ３Ｈ５ＮａＯ３を用い、前記糖類として、グルコース、スクロースまたはデキストリンを用いて、
前記添加物の量を０〜４０ｗ／ｖ％の範囲とすることにより、生成する前記バブルの径分布を示すグラフにおけるピークが１０〜４００ｎｍの範囲に存在するように調整することを特徴とするバブルの製造方法。
【請求項2】
前記水性液体へ前記添加物を添加した場合、前記バブルの表面である前記気体と前記水性液体との気液界面の一部に、前記添加物の分子および／または前記添加物由来の成分が存在している請求項１に記載のバブルの製造方法。
【請求項3】
さらに、前記容器の短手方向への往復運動および／または前記短手方向を主方向とする回転運動によって、前記容器を振動させる請求項１または２に記載のバブルの製造方法。
【請求項4】
前記容器内を１．０ａｔｍより大きい圧力にした状態で、前記容器を振動させる請求項１ないし３のいずれかに記載のバブルの製造方法。
【請求項5】
５０００ｒｐｍ以上の回転数で、前記容器を振動させる請求項１ないし４のいずれかに記載のバブルの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、バブルの製造方法に関する。【背景技術】
【0002】
近年、医療、食品、魚介類の養殖、排水処理等の様々な分野において、マイクロサイズ（数百マイクロメートル程度）、または、ナノサイズ（数百ナノメートル程度）のサイズを有するバブルの利用が検討されている。一般に、バブルは、タンパク質や脂質等から構成された外殻と、外殻内に封入されたガスとで構成されている。【0003】
特に、医療分野では、かかるバブルを超音波造影剤として用いて、胸部や腹部等の診断対象部位を診断する超音波診断が知られている。超音波診断では、バブルを血管内へ注入し、バブルが集積した診断対象部位に超音波を照射して、診断対象部位からの反射波（反射エコー）を画像化して診断する。【0004】
また、近年では、バブルを用いた超音波治療も検討されている（例えば、特許文献１）。超音波治療では、遺伝子や薬剤（薬物）を封入したバブルを血管内へ注入し、血流により患部にまで搬送する。そして、バブルが患部付近に到達した際に、超音波をバブルに照射して、バブルを破裂させる。これにより、バブルに封入された薬物を患部に選択的に供給することができる。【0005】
バブルの製造方法としては、過飽和バブル発生法、気液２相流旋回法が知られている。過飽和バブル発生法は、バブルの構成材料と生理食塩水とを含む混合液中にガスを高圧下で溶解させた後、減圧することにより混合液中にバブルを生成させる方法である。また、気液２相流旋回法は、上記混合液を高速で攪拌することにより、混合液の渦流を発生させて、渦流の中に十分にガスを巻き込んだ後、この渦流の発生を停止することにより混合液中にバブルを生成させる方法である。【0006】
しかしながら、これらの方法では、目的のサイズを有するバブルを製造するためには、バブルの製造条件を厳密に制御する必要があった。また、バブルの製造条件を厳密に設定しても、外的要因により生成するバブルのサイズが容易に変動してしまい、その制御が極めて困難であった。【先行技術文献】
【特許文献】
【0007】
【特許文献1】特開２００２−２０９８９６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
本発明の目的は、生成するバブルの径（サイズ）を容易かつ確実に調整可能なバブルの製造方法を提供することにある。【課題を解決するための手段】
【0009】
このような目的は以下の（１）〜（１０）の本発明により達成される。（１） 水性液体と気体とを混合しつつ、これらに外力を付与して、前記水性液体中に前記気体で構成される複数のバブルを生成させるのに際して、
前記水性液体へ添加する添加物の種類および／または量を変更することにより、生成する前記バブルの径を調整することを特徴とするバブルの製造方法。
【0010】
（２） 前記水性液体へ添加する前記添加物は、タンパク質、塩類および糖類のうちの少なくとも１種を含む上記（１）に記載のバブルの製造方法。【0011】
（３） 前記水性液体へ添加する前記添加物の量は、０〜５０ｗ／ｖ％である上記（１）または（２）に記載のバブルの製造方法。【0012】
（４） 前記水性液体へ前記添加物を添加した場合、前記バブルの表面である前記気体と前記水性液体との気液界面の一部に、前記添加物の分子および／または前記添加物由来の成分が存在している上記（１）ないし（３）のいずれかに記載のバブルの製造方法。【0013】
（５） 前記外力は、振動である上記（１）ないし（４）に記載のバブルの製造方法。【0014】
（６） 前記水性液体と前記気体とを容器内に収納し、前記水性液体が前記容器の内面に繰り返し衝突するように、前記容器を振動させる上記（５）に記載のバブルの製造方法。【0015】
（７） 前記容器は、長尺状をなし、前記容器の長手方向への往復運動および／または前記長手方向を主方向とする回転運動によって、前記容器を振動させる上記（６）に記載のバブルの製造方法。
【0016】
（８） 前記容器は、長尺状をなし、前記容器の短手方向への往復運動および／または前記短手方向を主方向とする回転運動によって、前記容器を振動させる上記（６）または（７）に記載のバブルの製造方法。
【0017】
（９） 前記容器内を１．０ａｔｍより大きい圧力にした状態で、前記容器を振動させる上記（６）ないし（８）のいずれかに記載のバブルの製造方法。【0018】
（１０） ５０００ｒｐｍ以上の回転数で、前記容器を振動させる上記（６）ないし（９）のいずれかに記載のバブルの製造方法。【発明の効果】
【0019】
本発明によれば、水性液体へ添加する添加物の種類および／または量を変更するという簡単な操作で、生成するバブルの径を確実に調整することができる。【図面の簡単な説明】
【0020】
【発明を実施するための形態】
【0021】
以下、本発明のバブルの製造方法を添付図面に示す好適な実施形態に基づいて説明する。【0022】
＜第１実施形態＞まず、本発明のバブルの製造方法の第１実施形態について説明する。
図１は、本発明のバブルの製造方法の第１実施形態を説明するためのフローチャートであり、図２（ａ）〜（ｄ）は、本発明のバブルの製造方法の第１実施形態を説明するための図（バブル製造用容器の断面を示す。）であり、図３は、図２（ｃ）に示す工程において、水性液体と容器の内面（上面）とが激しく衝突した状態を説明するための図である。
なお、以下の説明では、図２（ａ）〜（ｄ）および図３中の上側を「上」と言い、図２（ａ）〜（ｄ）および図３中の下側を「下」と言う。
【0023】
本実施形態のバブルの製造方法は、図１に示すように、工程［Ｓ１］〜工程［Ｓ５］の５つの工程を有する。工程［Ｓ１］は、水性液体を注入するためのバブル製造用容器（以下、単に「製造容器」という）を準備する工程である。工程［Ｓ２］は、この水性液体を製造容器の所定の高さまで注入する工程である。工程［Ｓ３］は、製造容器内にガス（気体）を充填させた状態で製造容器を密閉する工程である。工程［Ｓ４］は、水性液体が容器の内面に繰り返し衝突するように、所定の回転数で製造容器を振動させる工程である。工程［Ｓ５］は、製造容器を静置する工程である。【0024】
以下、これらの工程について順次説明する。［Ｓ１］ 準備工程
まず、水性液体１０を準備する。水性液体１０としては、例えば、蒸留水、純粋、超純水、イオン交換水、ＲＯ水等の水が挙げられる。なお、水性液体１０は、若干量のアルコール類を含有してもよい。
【0025】
次に、製造容器２０（本実施形態のバブル製造用容器）を準備する。製造容器２０は、水性液体１０を収容する容器本体２１と、容器本体２１を密閉するための蓋２２とを有している。
容器本体２１は、特に限定されないが、図２（ａ）に示すような有底円筒状をなしていることが好ましい。
【0026】
本実施形態では、容器本体２１として、容量が０．５〜２０ｍｌ程度のバイアル瓶を用いる。バブルの製造方法では、容器本体２１として、このような容量の小さなバイアル瓶を用いた場合であっても、容器本体２１を蓋２２で密閉した際に、容器本体２１内の密閉空間で適切な圧力が水性液体１０に付与されるので、均一な径（サイズ）のバブル１を安定的に得ることができる。【0027】
特に、容量が０．５〜１．５ｍｌ程度のバイアル瓶であれば、１つの製造容器２０内に、１回の超音波診断に必要となる０．３〜０．６ｍｌ程度のバブル１を含有する液（以下、単に「バブル含有液」という）を製造することができる。この場合、超音波診断の際に、１つの製造容器２０内のバブル含有液を使い切ることができるため、製造されるバブル１（バブル含有液）の無駄をなくすことができる。このように容量の小さいバイアル瓶（容量：０．５〜２０ｍｌ程度）の寸法は、長手方向の長さＸが、３５〜６０ｍｍ程度であり、外径Ｒが、１０〜４０ｍｍ程度である。
【0028】
蓋２２は、図２（ｂ）〜（ｄ）に示すように、容器本体２１の瓶口に密着する円盤状のゴム栓（セプタム）２２１と、ゴム栓２２１を容器本体２１の瓶口に固定する締付部２２２とを備えている。ゴム栓２２１は、特に限定されないが、例えば、シリコン製のゴム栓を用いることができる。
【0029】
締付部２２２は、ゴム栓２２１の縁部を覆うように構成されている。また、締付部２２２の瓶口側の内周面および容器本体２１の瓶口側の外周面には、互いに螺合可能に形成されるネジ溝が、それぞれ形成されており（図示せず）、これらを螺合させることにより、ゴム栓２２１が容器本体２１の瓶口と密着した状態で固定される。また、締付部２２２を容器本体２１の瓶口にしめることで、ゴム栓２２１が容器本体２１の瓶口と密着した状態で、容器本体２１と締付部２２２とを固定することもできる。【0030】
［Ｓ２］ 水性液体を製造容器に注入する工程次に、水性液体１０を容器本体２１（製造容器２０）の所定の高さまで注入する。本実施形態では、図２（ａ）に示すように、Ｙ［ｍｍ］まで注入する。したがって、図２（ａ）に示すように、水性液体１０が注入された状態の容器本体２１は、その上部に空隙部１１を有する。
【0031】
本実施形態では、水性液体１０が注入された容器本体２１（製造容器２０）を水平に静置した状態において、容器本体２１の高さ（長手方向の長さ）をＸ［ｍｍ］とし、容器本体２１における水性液体１０の液面の高さをＹ［ｍｍ］としたとき、０．２≦Ｙ／Ｘ≦０．７の関係を満足するのが好ましい。上記関係を満足することにより、十分な大きさの空隙部１１が存在するので、工程［Ｓ４］において、水性液体１０を製造容器２０の上下面および側面（特に、上下面）により勢いよく衝突させることができる。この衝突により、水性液体１０中に衝撃波が生じ、水性液体１０中にバブル１を容易に形成することができる。【0032】
なお、前記関係は、０．３≦Ｙ／Ｘ≦０．５の関係を満足するのがより好ましく、０．３５≦Ｙ／Ｘ≦０．４の関係を満足するのがさらに好ましい。これにより、工程［Ｓ４］において、水性液体１０中にバブル１をより容易に形成することができる。【0033】
［Ｓ３］ 製造容器を密閉する工程次に、容器本体２１にガス（気体）３を充填させた状態で密閉する（図２（ｂ）参照）。具体的には、水性液体１０が注入された容器本体２１の空隙部１１を、ガス３でパージした後、蓋２２を容器本体２１の開口部（瓶口）に締付ける。これにより、製造容器２０内に水性液体１０とガス３とが密閉される。
【0034】
より具体的には、水性液体１０が注入された容器本体２１をチャンバー内に移動させ、その後、チャンバー内を減圧する。次に、チャンバー内にガス３を送り込み、ガス３の雰囲気下で蓋２２を容器本体２１の開口部に締付けることにより、製造容器２０内に水性液体１０とガス３とを密閉することができる。【0035】
ガス３としては、特に限定されないが、例えば、空気、窒素、酸素、二酸化炭素、水素、ヘリウム、アルゴン、キセノン、クリプトンのような不活性ガス、六フッ化硫黄、十フッ化二硫黄、トリフルオロメチル硫黄ペンタフルオリドのようなフッ化硫黄、メタン、エタン、プロパン、ブタン、ペンタン、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、エチレン、プロピレン、プロパジエン、ブテン、アセチレン、プロピン、パーフルオロプロパン、パーフルオロブタン、パーフルオロペンタンのような低分子量炭化水素類またはこれらのハロゲン化物、ジメチルエーテルのようなエーテル類、ケトン類、エステル類等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。【0036】
これらの物質の中でも、特に、六フッ化硫黄、パーフルオロプロパン、パーフルオロブタン、パーフルオロペンタンが好ましい。これらのガス３で構成されるバブル１は、体内において安定性が高く、血管を通して患部（治療対象部位）または診断対象部位までより確実に搬送される。【0037】
［Ｓ４］ 製造容器を振動させる工程次に、水性液体１０が、製造容器２０の上下面および側面（特に、上下面）に繰り返し衝突するように、製造容器２０を振動させる。本実施形態では、図２（ｃ）に示すように、製造容器２０が、略その長手方向（図２（ｃ）では、鉛直方向）に往復運動するように、製造容器２０を振動させる。
【0038】
本工程では、工程［Ｓ３］で密閉した製造容器２０（図２（ｃ）の下図）を上方向に振動させる（図２（ｃ）の真中の図）。これにより、水性液体１０は、製造容器２０の中間付近に移動する。更に製造容器２０を上方向に振動させると、水性液体１０が製造容器２０の上部に移動して、蓋２２の下面（ゴム栓２２１）に衝突する（図２（ｃ）の上図）。この際に、図３に示すように、衝撃波が発生する。【0039】
一方、製造容器２０（図２（ｃ）の上図）を下方向に振動させる（図２（ｃ）の真中の図）。これにより、水性液体１０は、製造容器２０の中間付近に移動する。更に製造容器２０を下方向に振動させると、水性液体１０が製造容器２０の下部に移動して、製造容器２０の下面に衝突する（図２（ｃ）の下図）。この時も、図３に示すように、衝撃波が発生する。また、製造容器２０を鉛直方向に振動させる際に、水性液体１０は、製造容器２０の内側の側面とも衝突する。この時も、図３に示すように、衝撃波が発生する。
【0040】
このようにして、水性液体１０とガス３とを混合しつつ、これらに振動（外力）を付与して、この振動により生じる衝撃波の圧力により、ガス３を水性液体１０中に微分散させる。これにより、水性液体１０中にガス３で構成される複数のバブル１を生成させることができる。以上の操作を繰り返し行うことによって、水性液体１０中に均一な径のバブル１を多量に安定的に生成させることができる。
【0041】
バブルの製造方法では、十分に微細で、均一な径のバブル１を得るために、製造容器２０を５０００ｒｐｍ以上で振動させることが好ましい。これにより、水性液体１０と製造容器２０とが衝突する際に発生する衝撃波の大きさ（圧力）が十分に大きくなり、水性液体１０中に生じるバブル１が微細化され、その径を均一にすることができる。また、製造容器２０の回転数を上記範囲内で低めに設定した場合には、発生する衝撃波の大きさが小さくなるので、比較的径の大きなバブル１を生成することができる。また、回転数を高めに設定した場合には、発生する衝撃波の大きさが大きくなるので、比較的径の小さいバブル１を生成することができる。【0042】
なお、本明細書において、製造容器２０の「回転数」とは、単位時間当たりに、製造容器２０がその全振動経路を移動する回数を意味する。例えば、製造容器２０が５０００ｒｐｍで振動するとは、製造容器２０が、１分間に全振動経路を５０００回移動（振動）することを意味する。【0043】
また、製造容器２０の回転数は、５５００ｒｐｍ以上であることがより好ましく、６０００〜２００００ｒｐｍであることがさらに好ましい。製造容器２０の回転数を上記範囲内とすることにより、振動により生成したバブル１同士が、衝突により崩壊したり、合体して粗大化するのをより確実に防止することができる。これにより、バブル１の径を微細化しつつ、より均一な径のバブル１を多量に水性液体１０中に生成させることができる。【0044】
上記のような回転数で製造容器２０を振動させることができる装置としては、例えば、ビーズ方式の高速細胞破砕システム（ホモジナイザー）を用いることができる。具体例としては、バーティンテクノロジーズ（ｂｅｒｔｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）社製のプレセリーズ（Ｐｒｅｃｅｌｌｙｓ）等を用いることができる。【0045】
また、水性液体１０と製造容器２０とが衝突する際に発生する衝撃波の圧力は、４０ｋＰａ〜１ＧＰａとなることが好ましい。水性液体１０と製造容器２０との衝突時に発生する衝撃波の圧力が上記範囲内となることにより、水性液体１０中に生じるバブル１をより微細化し、その径をより均一にすることができる。特に、水性液体１０と製造容器２０との衝突時に発生する衝撃波の圧力が大きくなるほど、より微細なバブル１を生成することができる。【0046】
製造容器２０を振動させる際に、製造容器２０の長手方向の振動幅は、０．７Ｘ〜１．５Ｘ［ｍｍ］程度であるのが好ましく、０．８Ｘ〜１Ｘ［ｍｍ］程度であるのがより好ましい。これにより、製造容器２０の振動時に、水性液体１０と製造容器２０の下面および蓋２２とを確実に衝突させることができ、水性液体１０と製造容器２０の下面および蓋２２との衝突回数を十分に多くすることができる。また、このように十分な振動幅で製造容器２０を振動させることにより、水性液体１０が製造容器２０内を移動する速度が大きくなる。そのため、水性液体１０と製造容器２０の下面および蓋２２との衝突時に発生する衝撃波の大きさが十分に大きくなる。結果として、水性液体１０中に微細なバブル１を多量に生成させることができる。【0047】
また、製造容器２０を鉛直方向に往復運動させる際に、製造容器２０は、その短手方向（水平方向）にも振動させるのが好ましい。これにより、製造容器２０の内側の側面にも水性液体１０が衝突するので、水性液体１０に衝撃波をより多く発生させることができる。製造容器２０の短手方向への振動幅は、０．３Ｘ〜０．８Ｘ［ｍｍ］程度であるのが好ましく、０．５Ｘ〜０．７Ｘ［ｍｍ］程度であるのがより好ましい。これにより、上述した効果はより顕著となる。【0048】
また、本工程では、水性液体１０を製造容器２０の上下面および側面に衝突させる際における製造容器２０と水性液体１０との瞬間相対速度が４０ｋｍ／ｈ以上となるように製造容器２０を振動させることが好ましい。また、かかる瞬間相対速度が５０ｋｍ／ｈ以上となるように製造容器２０を振動させることがより好ましい。上記条件を満足することにより、水性液体１０と製造容器２０とが衝突する際に生じる衝撃波の圧力を十分に大きくすることができる。その結果、水性液体１０中に生じるバブル１をより微細化し、その径をより均一にすることができる。【0049】
なお、製造容器２０を上記条件で振動させる時間は、１０〜１２０秒程度であるのが好ましく、３０〜６０秒程度であるのがより好ましい。製造容器２０の振動時間を上記範囲内とすることにより、水性液体１０が製造容器２０と衝突する回数が十分に多くなるため、水性液体１０中に、多量のバブル１を生成させることができる。なお、製造容器２０の振動時間を上記範囲内で長く設定することにより、水性液体１０中に生成されるバブル１の量をより多くすることができる。【0050】
なお、水性液体１０中に生成されるバブル１の径は、後述するような水性液体１０へ添加する添加物の種類および／または量を変更することに加えて、製造容器２０の回転数を前述した範囲内で変更することにより調整することができる。本実施形態では、水性液体１０として、上述したような水を用いることにより、おおよそ１０〜１０００ｎｍの径のバブル１を安定的に生成させることができる。【0051】
なお、本実施形態では、製造容器２０が、ほぼその長手方向に往復運動するように、製造容器２０を振動させているが、製造容器２０を振動させる方法は、これに限定されない。例えば、製造容器２０が、その短手方向および／または長手方向を主方向として回転運動するように、製造容器２０を振動させてもよい。この場合であっても、製造容器２０内の水性液体１０は、製造容器２０の上下面および側面に繰り返し衝突することにより、衝撃波が発生する。このような振動方法を用いても、水性液体１０中に、均一な径のバブル１を多量に安定的に生成することができる。【0052】
［Ｓ５］ 製造容器を静置する工程上記条件で製造容器２０を振動させた後、製造容器２０を静置する（図２（ｄ）参照）。これにより、製造容器２０内に均一な径のバブル１を多量に安定的に製造することができる。
【0053】
なお、上述した工程［Ｓ２］と、工程［Ｓ３］と、工程［Ｓ４］とは、水性液体１０の温度を一定に維持するようにして行われるのが好ましい。これにより、バブルの製造過程で水性液体１０の特性（粘性等）が安定するため、水性液体１０中に均一な径のバブル１を安定的に生成させることができる。水性液体１０の温度を一定に維持するための方法としては、例えば、上述した各工程［Ｓ２］〜［Ｓ４］をグローブボックスや恒温槽内で行う方法が挙げられる。【0054】
特に、本実施形態では、工程［Ｓ４］において、製造容器２０を高速で振動させるため、水性液体１０と製造容器２０の内面との衝突により製造容器２０が発熱し易い。しかし、恒温槽内で製造容器２０を振動させることにより、水性液体１０の温度が上昇するのを確実に防止することができる。その結果、水性液体１０中に均一な径のバブル１をより安定的に生成させることができる。【0055】
以上の工程［Ｓ１］〜工程［Ｓ５］を経て、１０〜１０００ｎｍ程度の径を有するバブル１が製造される。このようなバブル１では、その表面（ガス３と水性液体１０との間の気液界面）に存在する水分子のクラスター構造に起因して、安定化が図られるものと考えられる。水分子のクラスター構造は、主として水分子で構成され、水分子の一部が電離することで生じた若干量の水素イオン（Ｈ＋）および水酸化物イオン（ＯＨ−）を含んでいる。これらのイオン（特に、水酸化物イオン）の影響で、バブル１は、帯電しており、これにより、バブル１同士は、電気的な反発力により合体することが防止され、各バブル１は、安定化するものと考えられる。【0056】
そこで、本発明者は、バブル１の表面に何らかの分子、イオン、ラジカル等を存在させることにより、バブル１の強度の向上が図れるものと考え、バブル１を製造する際に、水性液体１０中に各種の添加物を添加する実験を重ねた。その結果、本発明者の予測の通り、バブル１の安定性（保存安定性）が高まる傾向にあったが、予期せぬことに、同一の製造条件（例えば、添加物の量、製造容器２０の回転数等）であっても、添加物の種類に応じて、径（平均径）の異なるバブル１が生成することが明らかとなった。さらには、同一の添加物を用いても、その添加量に応じて、径（平均径）の異なるバブル１が生成することも明らかとなった。【0057】
かかる知見に基づいて、本発明者は、本発明のバブルの製造方法を完成するに至った。すなわち、本発明のバブルの製造方法は、水性液体１０へ添加する添加物の種類および／または量を変更することにより、生成するバブル１の径を調整することを特徴とする。【0058】
水性液体１０中へ添加する添加物は、タンパク質、塩類および糖類のうちの少なくとも１種を含むことが好ましい。これらの添加物を用いることにより、バブル１のより確実な安定化を図ることができる。なお、生成するバブル１は、ガス３で構成され、その表面（気液界面）の一部に、添加物の分子および／または添加物由来の成分（例えば、イオン、ラジカル等）が吸着（存在）した状態となっていると考えられる。すなわち、バブル１の表面は、添加物の分子および／または添加物由来の成分により完全に覆われた状態となっていないと考えられる。【0059】
タンパク質としては、例えば、アルブミン、グロブリン等が挙げられる。塩類としては、例えば、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４、ＫＨ２ＰＯ４、Ｃ３Ｈ５ＮａＯ３等が挙げられる。また、糖類（多糖類を含む）としては、例えば、グルコース、スクロース、デキストリン等が挙げられる。【0060】
なお、塩類が添加された水性液体１０としては、例えば、生理食塩水（０．９ｗ／ｖ％のＮａＣｌ水溶液）、ＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）を用いることができる。また、塩類および糖類が添加された水性液体１０としては、例えば、１〜４号輸液（電解質溶液）を用いることができる。また、タンパク質が添加された水性液体１０としては、例えば、アルブミン製剤、グロブリン製剤等を用いることができる。これらは、製剤として市販されているため、そのまま用いることで、バブル１の製造工程の簡略化および製造コストの低減を図ることができる。【0061】
上述したようなバブルの製造方法によれば、水性液体１０へ添加物を添加しなくても比較的安定なバブル１を製造することが可能であるため、水性液体１０へ添加する添加物の量としては、０〜５０ｗ／ｖ％程度であるのが好ましく、０．１〜４０ｗ／ｖ％程度であるのがより好ましく、０．５〜３０ｗ／ｖ％程度あるのがさらに好ましく、１〜２０ｗ／ｖ％程度あるのが特に好ましい。水性液体１０へ添加する添加物の量を、かかる範囲に設定することにより、添加物の種類にもよるが、高い安定性を有するとともに、より均一な径のバブル１を製造することができる。【0062】
このようなバブルの製造方法によれば、大掛かりなシステムを必要とせず、バブル１を容易かつ大量に製造することができる。また、バブル１の製造に密閉容器（気密容器）を用いるため、水性液体１０およびガス３を密閉容器内に充填した後、例えばγ線滅菌等による滅菌処理を施しておけば、バブル１を滅菌環境下で製造することができる。したがって、このようにして製造されたバブル１は、食品分野や医療分野等に好適に用いることができる。【0063】
また、得られたバブル１は、水性液体１０中で安定的に存在することができる。そのため、得られたバブル１を収納した密閉容器は、室温にて６〜２４か月間もの長期間にわたって保存することができる。また、長期間保存後も、水性液体１０中のバブル１の数が実質的に減少しないため、使用前に、再度、密閉容器を振動させたりする必要がない。よって、かかるバブル１を収納した密閉容器は、医療機関等にとっては取扱い易い。また、容量が小さい密閉容器を用いることができるので、密閉容器の単価を抑えることもできる。【0064】
得られたバブル１（バブル含有液）は、患者の超音波診断に用いられる。具体的には、まず、注射器の注射針を密閉容器のゴム栓に刺通する。次に、密閉容器内からバブル含有液を注射器内に吸引する。注射針をゴム栓から抜去した後、患者の血管（例えば静脈）に穿刺して、バブル含有液を血管内に注入する。これにより、バブル１は、血流により患部（診断対象部位）に搬送される。
【0065】
次いで、バブル１が診断対象部位に到達するタイミングで、バブル１が破裂しない程度の周波数および強度を有する診断用超音波をバブル１に照射（放射）する。その後、診断対象部位から反射される信号（反射エコー）を受信して、データ処理することにより、診断対象部位を画像化する。これにより、超音波診断を行うことができる。なお、超音波の照射およびバブル１からの反射波を受信するデバイスとしては、公知の超音波探触子を用いることができる。
【0066】
また、バブル１は、超音波診断以外にも、様々な分野で用いることができる。例えば、バブル１は、水や食材に対する殺菌効果を有するとともに、食材の鮮度を維持する効果を有する。さらに、バブル１、水および油分（疎水性成分）を含む水性液体中では、水に対して多量の油分を混合することができる。この効果を利用して、食材中の水分と油分との分離を抑制して調理することも可能である。したがって、バブル１を含有するバブル含有液を食品分野に用いることも可能である。【0067】
前述したように、バブル１は、１０〜１０００ｎｍ程度の径を有する。上記範囲の径を有するバブル１は、注射により血管内に注入した際に、血流により血管内を円滑に搬送される。特に、２００〜３００ｎｍ程度の径を有するバブル１（ナノバブル）は、血管内での安定性が高いため、ほぼ消滅することなく、目的の部位まで確実に搬送される。【0068】
一般的に、気体で構成されるバブルは、気体と液体との界面において効率良く超音波を反射する性質を有している。そのため、上記範囲の径を有するバブル１は、ガス３と水性液体１０との界面の面積が十分に大きく、超音波造影剤として有効に用いられる。特に、ナノバブルは、安定性が十分に高いため、超音波造影剤としての用途のみならず、上述したような様々な分野で積極的に用いることができる。【0069】
ここで、癌細胞が存在する患部では、その周囲の正常血管から癌細胞へと、正常血管よりも細径の新生血管が伸びているが、ナノバブルであれば、新生血管内をも円滑に搬送され、癌細胞にまで到達させることができる。その後、バブル１を破裂させることができる周波数および強度を有する治療用超音波をバブル１に照射することにより、癌細胞を死滅させることができる。すなわち、かかるナノバブルは、癌治療に好適に用いることができる。また、一部のナノバブルを、血管壁を通過させて、癌細胞に取り込ませることもできる。【0070】
また、６００〜９００ｎｍ程度の径を有するバブル１は、脳の血管内を円滑に搬送させるとともに、その位置を超音波画像において確実に特定することができる。すなわち、かかるバブル１は、脳治療（例えば、脳血管内治療等）に好適に用いることができる。【0071】
なお、バブル１の径（平均径）は、例えば、レーザー回折・散乱法、ナノ粒子トラッキング解析法、電気抵抗法、ＡＦＭ（Ａｔｏｍｉｃ Ｆｏｒｃｅ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、レーザー顕微鏡による観測等により測定することができる。また、ＡＦＭを測定する装置としては、例えば、Ｍａｌｖｅｒｎ社製の共振式粒子計測システム（商品名：アルキメデス）を用いることができる。【0072】
上記の説明では、工程［Ｓ１］〜工程［Ｓ５］を行うことにより、製造容器２０内に均一な径のバブル１を多量に安定的に製造することができる。ただし、バブルの製造方法では、例えば、工程［Ｓ４］および工程［Ｓ５］を繰り返し行うようにしてもよい。これにより、より均一な径のバブル１をより安定的に生成させることができる。【0073】
＜第２実施形態＞次に、本発明のバブルの製造方法の第２実施形態について説明する。
図４は、本発明のバブルの製造方法の第２実施形態を説明するためのフローチャートである。図５（ａ）〜（ｄ）は、本発明のバブルの製造方法の第２実施形態を説明するための図（バブル製造用容器の断面を示す。）である。
なお、以下の説明では、図５（ａ）〜（ｄ）中の上側を「上」と言い、図５（ａ）〜（ｄ）中の下側を「下」と言う。
【0074】
以下、第２実施形態のバブルの製造方法について、前記第１実施形態のバブルの製造方法との相違点を中心に説明し、同様の事項については、その説明を省略する。本実施形態のバブルの製造方法は、図４に示すように、前述した第１実施形態の工程［Ｓ３］において、製造容器２０内にガス３を充填して、製造容器２０内を加圧した状態で製造容器２０を密閉するようにした以外は、前述した第１実施形態のバブルの製造方法と同様である。
【0075】
［Ｓ１］ 準備工程前述した第１実施形態の水性液体１０および製造容器２０を準備する。
［Ｓ２］ 水性液体を製造容器に注入する工程
次に、前述した第１実施形態と同様にして、製造容器２０内に水性液体１０を注入する。
［Ｓ３］ 製造容器を密閉する工程
次に、容器本体２１にガス３を充填させて、製造容器２０内を加圧した状態で密閉する（図５（ｂ）参照）。具体的には、水性液体１０が注入された容器本体２１の空隙部１１を、ガス３でパージした後、蓋２２を容器本体２１の開口部（瓶口）に締付ける。これにより、製造容器２０内に水性液体１０とガス３とが密閉される。
【0076】
次に、ガス３が充填された注射器を準備する。そして、注射器の注射針をゴム栓２２１に刺通する。その後、注射器から製造容器２０内にさらにガス３を加える。これにより、製造容器２０内が加圧される。その後、ゴム栓２２１から注射針を抜去することにより、その内部にガス３が加圧された状態で密閉された製造容器２０を得ることができる。【0077】
［Ｓ４］ 製造容器を振動させる工程次に、前述した第１実施形態と同様にして、水性液体１０が、製造容器２０の上下面および側面に繰り返し衝突するように、製造容器２０を振動させる。
［Ｓ５］ 製造容器を静置する工程
次に、前述した第１実施形態と同様にして、製造容器２０を静置する。
【0078】
本実施形態のバブルの製造方法では、工程［Ｓ３］において、製造容器２０内をガス３により加圧した状態とすることにより、ガス３の一部が水性液体１０に微分散または溶解した状態となる。このため、工程［Ｓ４］において、水性液体１０中にバブル１が発生し易くなり、前述した第１実施形態のバブルの製造方法よりも、均一な径のバブル１を多量に製造することができる。また、前記第１実施形態よりも小さい径のバブル１を生成させることもできる。【0079】
工程［Ｓ３］における製造容器２０内の圧力（空隙部１１に充填されたガス３の圧力）は、１．０ａｔｍより大きいのが好ましく、１．５〜１０ａｔｍであるのがより好ましく、２〜５ａｔｍであるのがさらに好ましい。これにより、多量のガス３を水性液体１０中に微分散または溶解させることができる。かかる第２実施形態のバブルの製造方法によっても、前記第１実施形態のバブルの製造方法と同様の作用・効果を生じる。
【0080】
＜第３実施形態＞次に、本発明のバブルの製造方法の第３実施形態について説明する。
図６は、本発明のバブルの製造方法の第３実施形態を説明するためのフローチャートである。
以下、第３実施形態のバブルの製造方法について、前記第１および第２実施形態のバブルの製造方法との相違点を中心に説明し、同様の事項については、その説明を省略する。
【0081】
本実施形態のバブルの製造方法は、図６に示すように、前述した第１実施形態の工程［Ｓ１］〜工程［Ｓ５］の後に、工程［Ｓ６］、工程［Ｓ７］を有している。工程［Ｓ６］は、製造容器内の圧力を変化させる工程である。工程［Ｓ７］は、製造容器を振動させる回転数を設定する工程である。【0082】
本実施形態のバブルの製造方法は、工程［Ｓ７］において、回転数を変化させない場合には（図６中、工程［Ｓ７］で「ＮＯ」を選択）、さらに、工程［Ｓ４’］および工程［Ｓ５’］を有している。一方、工程［Ｓ７］において、回転数を変化させる場合には（図６中、工程［Ｓ７］で「ＹＥＳ」を選択）、さらに、工程［Ｓ８］および工程［Ｓ９］を有している。さらに、本実施形態のバブルの製造方法は、製造容器内の圧力を変化させる工程［Ｓ１０］を有している。以下、工程［Ｓ６］以降の各工程について順次説明する。【0083】
［Ｓ６］ 製造容器内の圧力を変化させる工程前述した第２実施形態の工程［Ｓ５］後の製造容器２０内の圧力を変化させる。
（１）製造容器内の圧力を工程［Ｓ３］における圧力より高くする場合
製造容器２０内を、前述した工程［Ｓ３］と同様にして加圧する。なお、注入するガス３は、工程［Ｓ３］で用いたガス３と同じでも、異なっていてもよいが、最終的に生成されるバブルの安定性の観点から、同一のガス３を用いるのが好ましい。
【0084】
このような製造容器２０では、製造容器２０内が工程［Ｓ３］における製造容器２０内の圧力よりもさらに加圧さているため、水性液体１０中に微分散または溶解するガス３の量が、工程［Ｓ３］での水性液体１０に微分散または溶解したガス３の量よりも多くなる。そのため、後述する工程［Ｓ４’］または工程［Ｓ８］において製造容器２０を再振動させる際に、バブル１がより生成し易くなり、その結果、バブル１の生成量が多くなる。【0085】
また、工程［Ｓ４］で生成されるバブル１に加えられる圧力よりも大きい圧力が水性液体１０に加えられる。これにより、生成過程のバブル１がより大きな圧力で圧縮されるため、バブル１の径が小さくなりやすい。そのため、工程［Ｓ４］において生成されるバブル１よりも、より小さい径のバブル１を生成させることができる。【0086】
この場合、製造容器２０内の圧力は、工程［Ｓ３］における圧力よりも、０．５ａｔｍ以上高くするのが好ましく、１〜１０ａｔｍ高くするのがより好ましい。これにより、前述した工程［Ｓ４］において生成されるバブル１の径よりも小さい径のバブル１をより確実に生成させることができる。【0087】
（２）製造容器内の圧力を１．０ａｔｍよりも大きくしつつ、工程［Ｓ３］における圧力より低くする場合まず、空の注射器を準備する。次に、注射器の注射針でゴム栓２２１を刺通して、注射器に製造容器２０内のガス３を吸引する。これにより、製造容器２０内が減圧され、その内部の圧力を低くすることができる。その後、ゴム栓２２１から注射針を抜去する。
【0088】
このような製造容器２０では、後述する工程［Ｓ４’］または工程［Ｓ８］において製造容器２０を再振動させた際に、水性液体１０に加えられる圧力は、工程［Ｓ４］で生成される水性液体１０に加えられる圧力よりも小さい。これにより、生成過程のバブル１を圧縮する程度が小さくなり、バブル１の径が大きくなりやすい。そのため、工程［Ｓ４］において生成されるバブル１よりも、より大きい径のバブル１を生成させることができる。この場合、製造容器２０内の圧力は、１．０ａｔｍより大きく、工程［Ｓ３］における圧力よりも低い圧力までの範囲内で適宜調整される。
【0089】
［Ｓ７］ 製造容器を振動させる回転数の設定工程上記のようにして製造容器２０内の圧力を変化させた後、製造容器２０を再振動させる際の回転数を設定する。
容器を再振動させる際の回転数は、前述した工程［Ｓ４］と同様に、５０００ｒｐｍ以上に設定される。
【0090】
工程［Ｓ７］において、製造容器２０を再振動させる際の回転数を工程［Ｓ４］における回転数から変えない場合、すなわち、図６中の工程［Ｓ７］で「ＮＯ」を選択した場合、以下の工程［Ｓ４’］を行う。一方、工程［Ｓ７］において、製造容器２０を再振動させる際の回転数を工程［Ｓ４］における回転数から変える場合、すなわち、図６中の工程［Ｓ７］で「ＹＥＳ」を選択した場合、以下の工程［Ｓ８］を行う。
【0091】
［Ｓ４’］ 製造容器を再振動させる工程上記のようにして、圧力を変化させた製造容器２０を、前述した工程［Ｓ４］と同じ回転数で再振動させる。これにより、工程［Ｓ４］において生成されるバブル１とは異なる径のバブル１が水性液体１０中に生成される。
【0092】
本工程では、工程［Ｓ４］と同じ回転数で製造容器２０を再振動させるため、本実施形態で新たに生成するバブル１の径は、工程［Ｓ６］において変化させた圧力に応じて変化する。すなわち、圧力を変化させることによって、バブル１の径を調整することができるため、水性液体へ添加する添加物の種類および／または量を変更することと相俟って、所望の異なる径（平均径）を有するバブル１を再現性良く製造することができる。また、製造容器２０を振動させる装置の設定を変更する必要がないため、より簡易的に異なる径を有するバブル１を製造することができる。【0093】
［Ｓ５’］製造容器を静置する工程上記条件で製造容器２０を振動させた後、工程［Ｓ５］と同様にして製造容器２０を静置する。これにより、製造容器２０内に異なるサイズのバブル１を安定的に多量に製造することができる。
静置後、工程［Ｓ１０］が行われる。
【0094】
［Ｓ８］ 製造容器を再振動させる工程圧力を変化させた製造容器２０を、前述した工程［Ｓ４］とは異なる回転数で再振動させる。これにより、工程［Ｓ４］において生成されるバブル１とは異なる径のバブル１が水性液体１０中に生成される。
【0095】
（１）製造容器を工程［Ｓ４］よりも高い回転数で再振動させる場合製造容器２０を振動させる回転数を、工程［Ｓ４］での回転数よりも高くする以外は、前述した工程［Ｓ４］と同様にして、製造容器２０を再振動させる。
【0096】
この場合、製造容器２０の回転数は、工程［Ｓ４］での回転数よりも高くする限り、特に限定されないが、６０００〜２００００ｒｐｍであるのが好ましく、７０００〜２００００ｒｐｍであるのがより好ましい。これにより、工程［Ｓ４］での回転数よりも大きい回転数で製造容器２０を振動させるため、工程［Ｓ４］で生成されたバブル１よりも小さい径のバブル１を生成させることができる。また、製造容器２０の回転数を上記範囲内とすることにより、工程［Ｓ４］および本工程で生成したバブル１同士が、衝突により崩壊したり、合体して粗大化するのをより確実に防止することができる。これにより、工程［Ｓ４］において生成されたバブル１と、工程［Ｓ４］において生成されたバブル１よりも小さい径のバブル１とを製造することができる。【0097】
（２）製造容器を工程［Ｓ４］よりも低い回転数で再振動させる場合製造容器２０を振動させる回転数を、工程［Ｓ４］での回転数よりも低くする以外は、前述した工程［Ｓ４］と同様にして、製造容器２０を再振動させる。
【0098】
この場合、製造容器２０の回転数は、工程［Ｓ４］での回転数よりも低くする限り、特に限定されないが、５０００〜９０００ｒｐｍであるのが好ましく、５５００〜７５００ｒｐｍであるのがより好ましい。これにより、工程［Ｓ４］での回転数よりも低い回転数で製造容器２０を振動させるため、工程［Ｓ４］で生成されたバブル１よりも大きい径のバブル１を生成させることができる。また、製造容器２０の回転数を上記範囲内とすることにより、工程［Ｓ４］および本工程で生成したバブル１同士が、衝突により崩壊したり、合体して粗大化するのをより確実に防止することができる。これにより、工程［Ｓ４］において生成されたバブル１と、工程［Ｓ４］において生成されたバブル１よりも大きい径のバブル１とを製造することができる。【0099】
本工程では、工程［Ｓ４］と異なる回転数で製造容器２０を再振動させるため、本実施形態で新たに生成するバブル１の径は、製造容器２０内の圧力の変化および再振動時の回転数によって変化する。このように、製造容器２０内の圧力および再振動時の回転数のいずれも変化させることにより、前述した第２実施形態で得られる径とは大きく異なる径のバブル１を製造することができる。したがって、平均径が大きく異なるバブル１を製造する際には、本工程は有利である。【0100】
［Ｓ９］ 製造容器を静置する工程工程［Ｓ８］で製造容器２０を振動させた後、工程［Ｓ５］と同様にして製造容器２０を静置する。これにより、製造容器２０内に異なる径のバブル１を安定的に製造することができる。
静置後、工程［Ｓ１０］が行われる。
【0101】
［Ｓ１０］ 製造容器内の圧力を再度変化させる工程製造容器２０内の圧力を変化させない場合、すなわち、図６中の工程［Ｓ１０］で「ＮＯ」を選択した場合、本実施形態のバブルの製造方法は終了する。これにより、平均径が１０〜１０００ｎｍの範囲で、それぞれ異なる平均径を有する２種類のバブル１が製造される。
【0102】
一方、製造容器２０内の圧力を変化させる場合、すなわち、図６中の工程［Ｓ１０］で「ＹＥＳ」を選択した場合、工程［Ｓ７］が行われる。その後、上述した工程［Ｓ４’］、［Ｓ５’］および［Ｓ１０］、または工程［Ｓ８］、［Ｓ９］および［Ｓ１０］が繰り返し行われる。これにより、平均径が１０〜１０００ｎｍの範囲で、互いに異なる複数の平均径を有するバブル１を製造することができる。【0103】
なお、工程［Ｓ１０］において、繰り返し圧力を変化させる場合には、圧力を変化させる回数に応じた数の互いに異なる複数の平均径を有するバブル１を製造することができる。【0104】
以上のようにして、水性液体１０中に異なる径のバブル１を含有するバブル含有液が得られる。バブル１は、径の違いにより血管内の通過のし易さ、また、運搬される部位も変わってくる（例えば、径が小さいバブル１ほど、毛細血管の先端まで搬送される。）ため、上記のようにして得られたバブル含有液は、超音波診断および／または超音波治療の目的に合わせて多面的に用いることが可能である。かかる第３実施形態のバブルの製造方法によっても、前記第１および第２実施形態のバブルの製造方法と同様の作用・効果を生じる。
【実施例】
【0105】
１．バブルの製造（実施例１）
以下のようにして、バブルを製造した。
【0106】
［準備工程］まず、蒸留水（水性液体）を１２ｍｌ準備した。また、１５ｍｌのバイアル瓶（高さＸ：５０ｍｍ、外径Ｒ：２５ｍｍ）を準備した。なお、このバイアル瓶は、図２に示す製造容器２０と同様の形状をなしている。
［蒸留水を容器に注入する工程］
準備したバイアル瓶内に、蒸留水を注入した。なお、蒸留水の液面の高さＹは、２５ｍｍであった。
【0107】
［容器を密閉する工程］次に、蒸留水が注入されたバイアル瓶内の空隙をパーフルオロプロパン（気体）でパージした後、バイアル瓶の瓶口に図２に示す蓋２２と同様の形状の蓋を挿着した。次に、パーフルオロプロパンが充填された注射器を準備した。注射器の注射針で蓋のゴム栓を刺通して、注射器からバイアル瓶内にさらに２ｍｌのパーフルオロプロパンを加えた。これにより、内部の圧力が２ａｔｍの密閉バイアル瓶を得た。
【0108】
［容器を振動させる工程］次に、ｂｅｒｔｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製のＰｒｅｃｅｌｌｙｓ（高速細胞破砕システム）を用いて、密閉バイアル瓶を回転数６５００ｒｐｍで３０秒間振動させた。その際、密閉バイアル瓶は、上下方向に往復運動し、蒸留水がバイアル瓶の上下面に繰り返し衝突することを確認した。
なお、密閉バイアル瓶を振動させる際に、密閉バイアル瓶の鉛直方向の振動幅を４０ｍｍであり、密閉バイアル瓶の水平方向の振動幅を２０ｍｍに設定することにより、バイアル瓶と蒸留水との瞬間相対速度が４０ｋｍ／ｈ以上となるようにした。
【0109】
［容器を静置させる工程］振動後、密閉バイアル瓶を静置させ、蒸留水中にパーフルオロプロパンで構成されたバブルを含有するバブル含有液を得た。
【0110】
（実施例２）蒸留水を１ｗ／ｖ％のデキストリン水溶液に変更した以外は、前記実施例１と同様にしてバブルを生成させ、バブル含有液を製造した。
（実施例３）
蒸留水をＰＢＳに変更した以外は、前記実施例１と同様にしてバブルを生成させ、バブル含有液を製造した。
【0111】
（実施例４）蒸留水をソルデム３Ａ輸液（テルモ株式会社製）に変更した以外は、前記実施例１と同様にしてバブルを生成させ、バブル含有液を製造した。
（実施例５）
蒸留水をソルデム１輸液（テルモ株式会社製）に変更した以外は、前記実施例１と同様にしてバブルを生成させ、バブル含有液を製造した。
【0112】
（実施例６）蒸留水を生理食塩水（０．９ｗ／ｖ％のＮａＣｌ水溶液）に変更した以外は、前記実施例１と同様にしてバブルを生成させ、バブル含有液を製造した。
（実施例７）
蒸留水を０．２５ｗ／ｖ％のアルブミン水溶液に変更した以外は、前記実施例１と同様にしてバブルを生成させ、バブル含有液を製造した。
【0113】
（実施例８）蒸留水を２０ｗ／ｖ％のグルコール水溶液に変更した以外は、前記実施例１と同様にしてバブルを生成させ、バブル含有液を製造した。
（実施例９）
蒸留水を５ｗ／ｖ％のグルコール水溶液に変更した以外は、前記実施例１と同様にしてバブルを生成させ、バブル含有液を製造した。
【0114】
（実施例１０）蒸留水を１０ｗ／ｖ％のグルコール水溶液に変更した以外は、前記実施例１と同様にしてバブルを生成させ、バブル含有液を製造した。
（実施例１１）
蒸留水を４０ｗ／ｖ％のグルコール水溶液に変更した以外は、前記実施例１と同様にしてバブルを生成させ、バブル含有液を製造した。
（実施例１２）
蒸留水を５０ｗ／ｖ％のグルコール水溶液に変更した以外は、前記実施例１と同様にしてバブルを生成させ、バブル含有液を製造した。
【0115】
２．バブルの径分布測定上記のようにして得られたバブル含有液をバブル測定装置（ナノ粒子解析システム ｎａｎｏｓｉｇｈｔ）にセットして、バブル含有液（水性液体）中に含まれるバブルの径分布測定を行った。その結果を、図７および図８に示す。
【0116】
図７に示すように、水性液体への添加物の有無によって、生成するバブルの径が変化することが判る。また、水性液体へ添加する添加物の種類および量の違いによっても、生成するバブルの径が変化することが判る。【0117】
また、図８に示すように、同一の添加物（グルコース）を用いた場合において、水性液体に添加する添加物の量を変更することによっても、生成するバブルの径が変化することが判る。なお、図示は省略したが、異なる添加物を同一の量で水性液体に添加した場合も、すなわち、添加物の種類のみの変更によっても、生成するバブルの径が変化することを、本発明者は確認している。【0118】
また、前記第１実施形態のように、容器を密閉する工程において、密閉バイアル瓶内を加圧状態としない場合、生成するバブルの径が大きくなる傾向を示した。さらに、前記第３実施形態と同様にしてバブルを製造しても、水性液体に添加する添加物の種類および／または量に応じて、生成するバブルの径を変更することができた。【0119】
以上、本発明のバブルの製造方法を図示の実施形態に基づいて説明したが、本発明は、これに限定されるものではない。例えば、本発明のバブルの製造方法は、任意の目的の１以上の追加の工程を含んでいてもよい。
また、前記実施形態の工程［Ｓ４］では、水性液体１０およびガス３に対して超音波を供給することにより、振動（外力）を付与するようにしてもよい。この場合、超音波の周波数は、２０ｋＨｚ〜１０ＭＨｚ程度（特に、２００ｋＨｚ〜１ＭＨｚ程度）、その強度は、１０ｍＷ／ｃｍ２〜１０００Ｗ／ｃｍ２程度（特に、１００ｍＷ／ｃｍ２〜１００Ｗ／ｃｍ２程度）であるのが好ましい。
【産業上の利用可能性】
【0120】
本発明のバブルの製造方法は、水性液体と気体とを混合しつつ、これらに外力を付与して、前記水性液体中に前記気体で構成される複数のバブルを生成させるのに際して、前記水性液体へ添加する添加物の種類および／または量を変更することにより、生成する前記バブルの径を調整することを特徴とする。これにより、生成するバブルの径を容易かつ確実に調整可能なバブルの製造方法を提供することができる。したがって、本発明は、産業上の利用可能性を有する。【符号の説明】
【0121】
１…バブル ３…ガス １０…水性液体 １１…空隙部 ２０…製造容器 ２１…容器本体 ２２…蓋 ２２１…ゴム栓 ２２２…締付部