特許 6185102 トリプルネガティブおよび基底様乳癌の治療におけるＥＲＢＢ３阻害剤の使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6185102

(24)【登録日】2017年8月4日

(45)【発行日】2017年8月23日

(54)【発明の名称】トリプルネガティブおよび基底様乳癌の治療におけるＥＲＢＢ３阻害剤の使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20170814BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20170814BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20170814BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20170814BHJP

   A61K 31/337 20060101ALI20170814BHJP

【ＦＩ】

   A61K39/395 TZNA

   A61P35/00

   A61K45/00

   A61P43/00 121

   A61K31/337

【請求項の数】17

【全頁数】29

(21)【出願番号】特願2016-45111(P2016-45111)

(22)【出願日】2016年3月9日

(62)【分割の表示】特願2012-557285(P2012-557285)の分割

【原出願日】2011年3月11日

(65)【公開番号】特開2016-166203(P2016-166203A)

(43)【公開日】2016年9月15日

【審査請求日】2016年4月8日

(31)【優先権主張番号】61/312,895

(32)【優先日】2010年3月11日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】508044829

【氏名又は名称】メリマック ファーマシューティカルズ インコーポレーティッド

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100102118

【弁理士】

【氏名又は名称】春名 雅夫

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100114889

【弁理士】

【氏名又は名称】五十嵐 義弘

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(72)【発明者】

【氏名】モヨ ビクター

(72)【発明者】

【氏名】ガルシア ガブリエラ

【審査官】 伊藤 基章

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１０／０１９９５２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 Cancer Investigation，２００９年，Vol. 27，No. 6，Pages 613-623

【文献】 SCHOEBERL BIRGIT，AN ERBB3 ANTIBODY MM-121,IS ACTIVE IN CANCERS WITH LIGAND-DEPENDENT ACTIVATION，CANCER RESEARCH，２０１０年 ３月 ９日，V70 N6，P2485-2494

【文献】 SCHNEIDER B P，TRIPLE-NEGATIVE BREAST CANCER: RISK FACTORS TO POTENTIAL TARGETS，CLINICAL CANCER RESEARCH，米国，THE AMERICAN ASSOCIATION FOR CANCER RESEARCH，２００８年１２月１５日，V14 N24，P8010-8018

【文献】 HARRIS LYNDSAY N，MOLECULAR SUBTYPES OF BREAST CANCER IN RELATION TO PACLITAXEL RESPONSE AND OUTCOMES 以下備考，BREAST CANCER RESEARCH，英国，CURRENT SCIENCE，２００６年１１月２７日，V8 N6，P R66，IN WOMEN WITH METASTATIC DISEASE: RESULTS FROM CALGB 9342

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３９／３９５

Ａ６１Ｐ ３５／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＥｒｂＢ３阻害剤を含む、トリプルネガティブ乳癌を治療するための薬学的組成物であって、前記ＥｒｂＢ３阻害剤が、抗ＥｒｂＢ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、前記抗ＥｒｂＢ３抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号３のＶ_ＨＣＤＲ１配列、配列番号４のＶ_ＨＣＤＲ２配列、および配列番号５のＶ_ＨＣＤＲ３配列、ならびに配列番号６のＶ_ＬＣＤＲ１配列、配列番号７のＶ_ＬＣＤＲ２の配列、および配列番号８のＶ_ＬＣＤＲ３配列を含み、配列番号４１の残基９２〜１０４の全部または一部に結合する、前記薬学的組成物。

【請求項2】

前記抗ＥｒｂＢ３抗体が、配列番号１に示されるＶ_Ｈ配列と配列番号２に示されるＶ_Ｌ配列とを含む抗体と同じエピトープに結合する、請求項１に記載の薬学的組成物。

【請求項3】

前記抗ＥｒｂＢ３抗体が、配列番号１に示されるＶ_Ｈ配列および配列番号２に示されるＶ_Ｌ配列を含む、請求項１または２に記載の薬学的組成物。

【請求項4】

トリプルネガティブ乳癌腫瘍の成長を抑制する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の薬学的組成物。

【請求項5】

前記トリプルネガティブ乳癌が、基底様発現型を有すると病理組織学的に特徴付けられる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項6】

前記トリプルネガティブ乳癌が、基底様以外の発現型を有すると病理組織学的に特徴付けられる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項7】

さらに少なくとも１つの追加の抗癌剤と組み合わせて使用される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。

【請求項8】

前記少なくとも１つの追加の抗癌剤が、白金系化学療法薬、タキサン、チロシンキナーゼ阻害剤、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥｒｂＢ２抗体、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項７に記載の薬学的組成物。

【請求項9】

前記少なくとも１つの追加の抗癌剤がタキサンであり、前記タキサンがパクリタキセルである、請求項８に記載の薬学的組成物。

【請求項10】

前記少なくとも１つの追加の抗癌剤が、ＥＧＦＲ阻害剤を含む、請求項７に記載の薬学的組成物。

【請求項11】

前記ＥＧＦＲ阻害剤が、抗ＥＧＦＲ抗体を含む、請求項１０に記載の薬学的組成物。

【請求項12】

前記抗ＥＧＦＲ抗体が、セツキシマブ、マツズマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、およびｍＡｂ８０６から成る群から選択される、請求項１１に記載の薬学的組成物。

【請求項13】

前記ＥＧＦＲ阻害剤が、ゲフィチニブ、ラパチニブ、カネルチニブ、ペリチニブ、およびエルロチニブＨＣＬから成る群から選択されるＥＧＦＲシグナル伝達の小分子阻害剤である、請求項１０に記載の薬学的組成物。

【請求項14】

前記少なくとも１つの追加の抗癌剤が、ＶＥＧＦ阻害剤を含む、請求項７に記載の薬学的組成物。

【請求項15】

前記ＶＥＧＦ阻害剤が、ベバシズマブを含む、請求項１４に記載の薬学的組成物。

【請求項16】

前記トリプルネガティブ乳癌腫瘍が、エストロゲン受容体（ＥＲ）およびプロゲステロン受容体に関してネガティブのスコアを取り、ポリクローナル抗ＨＥＲ２一次抗体を使用する半定量的免疫組織化学的アッセイを使用して、０、１＋、または２＋の試験結果を得る腫瘍である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。

【請求項17】

前記腫瘍が、ＨＥＲ２遺伝子増幅に関して蛍光インサイツハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）ネガティブである、請求項１６に記載の薬学的組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１０年３月１１日に出願された米国特許仮出願第６１／３１２８９５号、表題「Ｕｓｅ ｏｆ ＥｒｂＢ３ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｒｉｐｌｅ Ｎｅｇａｔｉｖｅ ａｎｄ Ｂａｓａｌ−Ｌｉｋｅ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒｓ」に対する優先権を主張し、ここで参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

女性において、乳癌は、最も一般的な癌の１つであり、癌による死亡の５番目に一般的な原因である。乳癌の不均質性に起因して、１０年の無進行生存率は、ステージおよび型によって９８％〜１０％まで広く変動し得る。乳癌の異なる形態は、顕著に異なる生物学的特徴および臨床的挙動を有する場合がある。したがって、患者の乳癌の分類は、治療レジメンを決定するために重要な要素となる。例えば、現在、ホルモン受容体またはＨＥＲ２受容体を標的とするいくつかの治療様式が使用可能であるため、組織学的な型およびグレードの分類に加えて、現在、乳癌は日常的に、ホルモン受容体（エストロゲン受容体（ＥＲ）およびプロゲステロン受容体（ＰＲ））の発現、およびＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）の発現について評価される。ＥＲおよびＰＲはいずれも、核受容体であり（大部分が細胞核に位置するが、細胞膜においても認めることができる）、ＥＲおよび／またはＰＲを標的とする小分子阻害剤が開発されている。ＨＥＲ２、またはヒト上皮成長因子受容体２型は、通常、細胞表面上に位置する受容体であり、ＨＥＲ２を標的とする抗体が治療薬として開発されている。ＨＥＲ２は、それ自体で活性化リガンドに結合することができないＥＧＦＲファミリー（ＨＥＲ１（ＥＧＦＲ）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）、およびＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４）も含む）の唯一のメンバーである。したがって、ＨＥＲ２は、ＨＥＲ３等の別のＥＧＦＲファミリーメンバーとのヘテロ二量体受容体複合体に組み込まれるときに、受容体として機能するに過ぎない。エストロゲン受容体を発現するとして分類される癌（エストロゲン受容体ポジティブ、またはＥＲ^＋腫瘍）は、タモキシフェン等のＥＲアンタゴニストで治療されることがある。同様に、高レベルのＨＥＲ２受容体を発現するとして分類される乳癌は、トラスツズマブ等の抗ＨＥＲ２抗体、またはラパチニブ等のＨＥＲ２活性受容体チロシンキナーゼ阻害剤で治療されることがある。

【0003】

トリプルネガティブ（ＴＮ）乳癌は、すべての乳癌症例の約１５％を占める、十分に定義された臨床的に関連する乳癌の亜型を指定するために使用される用語である。ＴＮ腫瘍は、ＥＲおよびＰＲの発現についてネガティブのスコアを取り（すなわち、従来の病理組織学的方法および基準を使用して）、増幅レベルのＨＥＲ２を発現しない（すなわち、それらはＥＲ⁻、ＰＲ⁻、ＨＥＲ２⁻である）。ＴＮ乳癌は、これに限らないが、主に基底様（ＢＬ）亜型として知られる乳癌の分子的および病理組織学的に明確な亜型を含む。ＢＬ亜型はまた、サイトケラチン（例えば、ＣＫ、ＣＫ５／６、ＣＫ１４、ＣＫ１７）および乳房の正常な基底／筋上皮細胞において認められる他のタンパク質の発現によって特徴付けられる。しかしながら、ＢＬ亜型に加えて、いくつかの「正常乳房様」、化生性癌、髄様癌、および唾液腺様腫瘍を含む、乳癌の特定の他の型もまた、トリプルネガティブ（ＴＮ）発現型を呈することができる。さらに、ＴＮ乳癌は、ＢＲＣＡ１変異の存在下、およびアフリカ系アメリカ人またはヒスパニック系の閉経前の女性において、より頻繁に発生する。ＴＮ腫瘍は、通常、非常に攻撃的な挙動を示し、他の乳癌型に対して、再発後の生存は短く、全体的な生存率が不良である。

【0004】

すべてのＢＬ乳癌がＴＮであるとは限らない。基底様乳房腫瘍は、すべての乳癌の最大１５％を占める、不均質腫瘍型であり、治療の成功を特に困難にする、攻撃的な臨床的挙動を呈する。ＢＬ乳癌の大部分は、ＥＲ−、ＰＲ−、およびＨＥＲ２低（ＨＥＲ２^１＋またはＨＥＲ２ネガティブ）である。さらに、それらは通常、正常な乳房基底（筋上皮）細胞において認められるタンパク質を発現する。これらは、高分子量サイトケラチン（例えば、５／６、８、１４、１７、および１８）、ｐ−カドヘリン、カベオリン１および２、ネスチン、αＢ結晶質、およびＥＧＦＲを含む。さらに、ＢＬ腫瘍細胞は、通常、適格な相同的組み換えＤＮＡ修復の能力を欠く。

【0005】

組織学的に、大部分のＢＬ乳癌は、ＩＤＣ−ＮＳＴ型の高い組織学的段階にあり、非常に高い有糸分裂指数を呈する。それらはまた、通常、中心壊死または線維化領域、境界の押し出し、顕著なリンパ球浸潤、および定型／非定型髄質特徴を有し、一般に、頭頸部のヒト乳頭腫ウイルス誘発扁平上皮癌と類似する特徴を呈する。

【0006】

乳房の髄質および非定型髄質、化生性、分泌、筋上皮、および腺様嚢胞癌の大部分もまた、ＢＬ特徴を呈する。

【0007】

ホルモン受容体の発現の欠如、またはＴＮ乳癌細胞中の相当量のＨＥＲ２を考慮すると、腫瘍がＥＲ（例えば、タモキシフェン、アロマターゼ阻害剤）またはＨＥＲ２（例えば、トラスツズマブ）を標的とする治療に反応しないため、治療オプションは非常に限定される。代わりに、これらの腫瘍は、有効性が限定され、多くの細胞毒性副作用を有する、従来のネオアジュバントおよびアジュバント化学療法レジメンで治療されている。さらに、そのような化学療法レジメンは、腫瘍における薬物耐性をもたらす可能性があり、ＴＮ乳癌の疾病再発リスクは、治療の最初の３年以内で他の乳癌型よりも高い。

【0008】

基底様乳癌はまた、治療が困難であり、不良な予後と関連付けられるが、ＢＬアデノイド腺様嚢胞癌は、一般に、良好な臨床転帰と関連付けられる。製造のためのその使用

【0009】

前述に照らして、トリプルネガティブ乳癌およびＢＬ乳癌を治療するための追加の治療オプションおよび方法が依然として必要とされる。

【発明の概要】

【0010】

本明細書では、トリプルネガティブ乳癌（例えば、腫瘍）および基底様乳癌（例えば、腫瘍）を治療するための方法、ならびにそのような方法で使用することができる、薬学的組成物が提供される。本方法および組成物は、少なくとも部分的に、ＥｒｂＢ３阻害がＴＮ乳癌細胞およびＢＬ乳癌細胞の成長を抑制することができるという発見に基づいている。特に、抗ＥｒｂＢ３抗体の投与は、ＴＮ乳癌細胞の成長を生体内で抑制することが証明されている。

【0011】

したがって、ＴＮまたはＢＬ乳癌を治療するためのＥｒｂＢ３阻害剤の使用（例えば、薬剤を製造するためのその使用）が提供される。別の態様では、ＴＮ乳癌腫瘍またはＢＬ乳癌腫瘍の成長を抑制する方法が提供され、本方法は、腫瘍を有効量のＥｒｂＢ３阻害剤と接触させることを含む。別の態様では、患者においてＴＮ乳癌腫瘍またはＢＬ乳癌腫瘍の成長を抑制する方法が提供され、本方法は、有効量のＥｒｂＢ３阻害剤を患者に投与することを含む。さらに別の態様では、患者のＴＮ乳癌またはＢＬ乳癌腫瘍を治療する方法が提供され、本方法は、有効量のＥｒｂＢ３阻害剤を患者に投与することを含む。さらに別の態様では、患者の乳癌腫瘍またはＢＬ乳癌腫瘍を治療する方法が提供され、本方法は、トリプルネガティブ乳癌腫瘍またはＢＬ乳癌腫瘍のある患者を選択することと、有効量のＥｒｂＢ３阻害剤を患者に投与することと、を含む。

【0012】

典型的な実施形態では、ＥｒｂＢ３阻害剤は、抗ＥｒｂＢ３抗体である。典型的な抗ＥｒｂＢ３抗体は、ＭＭ−１２１（Ａｂ＃６）であり、それぞれ配列番号１および２に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含む。別の典型的な抗ＥｒｂＢ３抗体は、任意にアミノ末端からカルボキシ末端の順で、それぞれ配列番号３〜５に示されるＶ_Ｈ ＣＤＲ１、２、および３配列と、任意にアミノ末端からカルボキシ末端の順で、それぞれ配列番号６〜８に示されるＶ_Ｌ ＣＤＲ１、２、および３配列と、を含む、抗体である。他の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体は、Ａｂ＃３（それぞれ配列番号９および１０に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含む）、Ａｂ＃１４（それぞれ配列番号１７および１８に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含む）、Ａｂ＃１７（それぞれ配列番号２５および２６に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含む）、またはＡｂ＃１９（それぞれ配列番号３３および３４に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含む）である。さらに他の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体は、ｍＡｂ １Ｂ４Ｃ３、ｍＡｂ２Ｄ１Ｄ１２、ＡＭＧ−８８８、およびヒト化ｍＡｂ８Ｂ８から成る群から選択される。別の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体の投与は、腫瘍の成長または侵襲性もしくは転移を阻害する。

【0013】

本明細書に提供される方法は、様々な異なる病理組織学的発現型のＴＮ乳癌の治療において使用することができる。例えば、一実施形態では、トリプルネガティブ乳癌腫瘍は、基底様発現型を有すると病理組織学的に特徴付けられる。別の実施形態では、ＴＮ乳癌腫瘍は、ＢＬ以外の発現型を有すると病理組織学的に特徴付けられる。

【0014】

前述の方法および組成物のそれぞれでは、ＥｒｂＢ３阻害剤は、薬学的に許容される担体を含む製剤に含まれてもよい。

【0015】

別の態様では、本明細書に提供される治療方法は、ＥｒｂＢ３阻害剤ではない少なくとも１つの追加の抗癌剤を患者に投与することをさらに含む。一実施形態では、少なくとも１つの追加の抗癌剤は、白金系化学療法薬、タキサン、チロシンキナーゼ阻害剤、およびそれらの複合から成る群から選択される薬物等の少なくとも１つの化学療法薬を含む。ＨＥＲ２^２＋を試験するＴＮ乳癌のサブセットにおいて、現在、トラスツズマブ、ペルツズマブ、またはラパチニブ等の抗ＨＥＲ２剤による治療は、抗ＥｒｂＢ３抗体と併用されるとき、利益を提供し得ることが認められている。したがって、別の態様では、本明細書に提供される治療方法は、抗ＨＥＲ２剤である少なくとも１つの追加の抗癌剤の有効量を患者に投与することをさらに含む。そのような抗ＨＥＲ２剤はよく知られており、米国特許第５，９７７，３２２号に記載されるＣ６．５（およびその多数の誘導体）等の抗ＥｒｂＢ２抗体、米国特許第６，０５４，２９７号に記載されるトラスツズマブ、および米国特許第６，９４９，２４５号に記載されるペルツズマブ、ならびにラパチニブ（ＥＧＦＲチロシンキナーゼも阻害する）およびＡＧ８７９等の小分子抗ＨＥＲ２剤のうちの１つまたは複数を含んでもよい。

【0016】

別の実施形態では、少なくとも１つの追加の抗癌剤は、抗ＥＧＦＲ抗体等のＥＧＦＲ阻害剤、またはＥＧＦＲシグナル伝達の小分子阻害剤を含む。典型的な抗ＥＧＦＲ抗体は、セツキシマブを含む。抗ＥＧＦＲ抗体の他の例としては、マツズマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、およびｍＡｂ８０６が挙げられる。典型的なＥＧＦＲシグナル伝達の小分子阻害剤は、ゲフィチニブを含む。ＥＧＦＲシグナル伝達の有用な小分子阻害剤の他の例としては、ラパチニブ、カネルチニブ、エルロチニブＨＣＬ、ペリチニブ、ＰＫＩ−１６６、ＰＤ１５８７８０、およびＡＧ１４７８が挙げられる。

【0017】

さらに別の実施形態では、少なくとも１つの追加の抗癌剤は、ＶＥＧＦ阻害剤を含む。典型的なＶＥＧＦ阻害剤は、ベバシズマブ抗体等の抗ＶＥＧＦ抗体を含む。

【0018】

別の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体および少なくとも１つの追加の抗癌剤の投与は、腫瘍の成長または侵襲性もしくは転移を阻害する。

【0019】

別の態様では、患者のＴＮ乳癌またはＢＬ乳癌を治療する方法は、ＭＭ−１２１およびパクリタキセルを含む複合をその患者に投与することを含む。一実施形態では、複合は、ＴＮまたはＢＬ乳癌の治療において治療的相乗効果を呈する。いくつかの実施例では、複合は、少なくとも２．８、少なくとも２．９、または少なくとも３．０のｌｏｇ_１０細胞死滅をもたらす。他の態様では、複合の単剤それぞれから得られる向上と比較して、複合は、少なくとも付加的な腫瘍成長阻害の向上をもたらす。

【0020】

別の実施形態では、ＭＭ−１２１およびパクリタキセルの複合を含む組成物が提供され、本複合は、ＴＮまたはＢＬ乳癌の治療において治療的相乗効果を呈する。いくつかの実施例では、本組成物は、少なくとも２．８、少なくとも２．９、または少なくとも３．０のｌｏｇ_１０細胞死滅をもたらす。

【0021】

複合薬学的組成物を含有するキットも提供される。
[本発明1001]
トリプルネガティブ乳癌の治療のための薬剤を製造するための、ＥｒｂＢ3阻害剤の使用。
[本発明1002]
トリプルネガティブ乳癌細胞の成長を抑制する方法であって、前記細胞を有効量のＥｒｂＢ3阻害剤と接触させる工程を含む、方法。
[本発明1003]
患者のトリプルネガティブ乳癌腫瘍の成長を抑制する方法であって、有効量のＥｒｂＢ3阻害剤を前記患者に投与する工程を含む、方法。
[本発明1004]
患者のトリプルネガティブ乳癌腫瘍を治療する方法であって、有効量のＥｒｂＢ3阻害剤を前記患者に投与する工程を含む、方法。
[本発明1005]
トリプルネガティブ乳癌腫瘍のある患者を選択する工程と、
有効量のＥｒｂＢ3阻害剤を前記患者に投与する工程と
を含む、患者の乳癌腫瘍を治療する方法。
[本発明1006]
前記ＥｒｂＢ3阻害剤が、抗ＥｒｂＢ3抗体である、本発明1001〜1005のいずれかの方法。
[本発明1007]
前記抗ＥｒｂＢ3抗体が、ＭＭ−121である、本発明1006の方法。
[本発明1008]
前記抗ＥｒｂＢ3抗体が、
アミノ末端からカルボキシ末端の順で、それぞれ配列番号3〜5に示されるＶ_Ｈ ＣＤＲ1、2、および3の配列と、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、それぞれ配列番号6〜8に示されるＶ_Ｌ ＣＤＲ1、2、および3の配列とを含む抗体
を含む、本発明1006の方法。
[本発明1009]
前記抗ＥｒｂＢ3抗体が、
それぞれ配列番号9および10に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含むＡｂ＃3
を含む、本発明1006の方法。
[本発明1010]
前記抗ＥｒｂＢ3抗体が、
それぞれ配列番号17および18に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含むＡｂ＃14
を含む、本発明1006の方法。
[本発明1011]
前記抗ＥｒｂＢ3抗体が、
それぞれ配列番号25および26に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含むＡｂ＃17
を含む、本発明1006の方法。
[本発明1012]
前記抗ＥｒｂＢ3抗体が、
それぞれ配列番号33および34に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含むＡｂ＃19
を含む、本発明1006の方法。
[本発明1013]
前記抗ＥｒｂＢ3抗体が、ｍＡｂ1Ｂ4Ｃ3、ｍＡｂ2Ｄ1Ｄ12、およびヒト化ｍＡｂ8Ｂ8から成る群から選択される、本発明1006の方法。
[本発明1014]
前記トリプルネガティブ乳癌腫瘍が、基底様発現型を有すると病理組織学的に特徴付けられる、本発明1001〜1005のいずれかの方法。
[本発明1015]
前記トリプルネガティブ乳癌腫瘍が、基底様以外の発現型を有すると病理組織学的に特徴付けられる、本発明1001〜1005のいずれかの方法。
[本発明1016]
ＥｒｂＢ3阻害剤ではない少なくとも1つの追加の抗癌剤の有効量を前記患者に投与する工程をさらに含む、本発明1003〜1015のいずれかの方法。
[本発明1017]
前記少なくとも1つの追加の抗癌剤が、少なくとも1つの化学療法薬を含む、本発明1016の方法。
[本発明1018]
前記少なくとも1つの追加の抗癌剤が、白金系化学療法薬、タキサン、チロシンキナーゼ阻害剤、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥｒｂＢ2抗体、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される、本発明1017の方法。
[本発明1019]
前記少なくとも1つの化学療法薬が、パクリタキセルである、本発明1018の方法。
[本発明1020]
前記ＥｒｂＢ3阻害剤が、
それぞれ配列番号3、4、および5に示されるＶ_Ｈ ＣＤＲ1、2、および3の配列と、それぞれ配列番号6、7、および8に示されるＶ_Ｌ ＣＤＲ1、2、および3の配列とを含む抗ＥｒｂＢ3抗体
である、本発明1019の方法。
[本発明1021]
前記ＥｒｂＢ3阻害剤が、ＭＭ−121である、本発明1019の方法。
[本発明1022]
前記少なくとも1つの追加の抗癌剤が、ＥＧＦＲ阻害剤を含む、本発明1016の方法。
[本発明1023]
前記ＥＧＦＲ阻害剤が、抗ＥＧＦＲ抗体を含む、本発明1022の方法。
[本発明1024]
前記抗ＥＧＦＲ抗体が、セツキシマブを含む、本発明1023の方法。
[本発明1025]
前記抗ＥＧＦＲ抗体が、マツズマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、およびｍＡｂ806から成る群から選択される、本発明1023の方法。
[本発明1026]
前記ＥＧＦＲ阻害剤が、ＥＧＦＲシグナル伝達の小分子阻害剤である、本発明1022の方法。
[本発明1027]
前記ＥＧＦＲシグナル伝達の小分子阻害剤が、ゲフィチニブ、ラパチニブ、カネルチニブ、ペリチニブ、エルロチニブＨＣＬ、ＰＫＩ−166、ＰＤ158780、およびＡＧ1478から成る群から選択される、本発明1026の方法。
[本発明1028]
前記少なくとも1つの追加の抗癌剤が、ＶＥＧＦ阻害剤を含む、本発明1016の方法。
[本発明1029]
前記ＶＥＧＦ阻害剤が、抗ＶＥＧＦ抗体を含む、本発明1028の方法。
[本発明1030]
前記抗ＶＥＧＦ抗体が、ベバシズマブである、本発明1029の方法。
[本発明1031]
前記トリプルネガティブ乳癌腫瘍は、
腫瘍細胞が、エストロゲン受容体（ＥＲ）およびプロゲステロン受容体に関してマイナスの得点を取り、多クローン性抗ＨＥＲ2一次抗体を使用する半定量的免疫組織化学的アッセイを使用して、0または1＋の試験結果を得る腫瘍
である、本発明1001〜1005のいずれかの方法。
[本発明1032]
前記トリプルネガティブ乳癌腫瘍は、
腫瘍細胞が、エストロゲン受容体（ＥＲ）およびプロゲステロン受容体に関してマイナスの得点を取り、多クローン性抗ＨＥＲ2一次抗体を使用する半定量的免疫組織化学アッセイを使用して、2＋の試験結果を得る腫瘍
である、本発明1001〜1005のいずれかの方法。
[本発明1033]
前記腫瘍細胞が、ＨＥＲ2遺伝子増幅に関してＦＩＳＨネガティブである、本発明1032の方法。
[本発明1034]
基底様乳癌の治療のための薬剤を製造するための、ＥｒｂＢ3阻害剤の使用。
[本発明1035]
基底様乳癌細胞の成長を抑制する方法であって、前記細胞を有効量のＥｒｂＢ3阻害剤と接触させる工程を含む、方法。
[本発明1036]
患者の基底様乳癌腫瘍の成長を抑制する方法であって、有効量のＥｒｂＢ3阻害剤を前記患者に投与する工程を含む、方法。
[本発明1037]
基底様乳癌腫瘍について患者を治療する方法であって、有効量のＥｒｂＢ3阻害剤を前記患者に投与する工程を含む、方法。
[本発明1038]
基底様乳癌腫瘍のある患者を選択する工程と、
有効量のＥｒｂＢ3阻害剤を前記患者に投与する工程と
を含む、患者の乳癌腫瘍を治療する方法。
[本発明1039]
前記ＥｒｂＢ3阻害剤が、抗ＥｒｂＢ3抗体である、本発明1034〜1038のいずれかの方法。
[本発明1040]
前記抗ＥｒｂＢ3抗体が、ＭＭ−121である、本発明1039の方法。
[本発明1041]
前記抗ＥｒｂＢ3抗体が、
それぞれ配列番号3〜5に示されるＶ_Ｈ ＣＤＲ1、2、および3の配列と、それぞれ配列番号6〜8に示されるＶ_Ｌ ＣＤＲ1、2、および3の配列とを含む抗体
を含む、本発明1039の方法。
[本発明1042]
前記抗ＥｒｂＢ3抗体が、
それぞれ配列番号9および10に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含むＡｂ＃3
を含む、本発明1039の方法。
[本発明1043]
前記抗ＥｒｂＢ3抗体が、
それぞれ配列番号17および18に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含むＡｂ＃14
を含む、本発明1039の方法。
[本発明1044]
前記抗ＥｒｂＢ3抗体が、
それぞれ配列番号25および26に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含むＡｂ＃17
を含む、本発明1039の方法。
[本発明1045]
前記抗ＥｒｂＢ3抗体が、
それぞれ配列番号33および34に示されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含むＡｂ＃19
を含む、本発明1039の方法。
[本発明1046]
前記抗ＥｒｂＢ3抗体が、ｍＡｂ1Ｂ4Ｃ3、ｍＡｂ2Ｄ1Ｄ12、ＡＭＧ−888、およびヒト化ｍＡｂ8Ｂ8から成る群から選択される、本発明1039の方法。
[本発明1047]
ＥｒｂＢ3阻害剤ではない少なくとも1つの追加の抗癌剤の有効量を前記患者に投与する工程をさらに含む、本発明1035〜1040のいずれかの方法。
[本発明1048]
前記少なくとも1つの追加の抗癌剤が、パクリタキセルである、本発明1047の方法。
[本発明1049]
ＥｒｂＢ3阻害剤ではない少なくとも1つの追加の抗癌剤による基底様乳癌またはトリプルネガティブ乳癌の治療とともに、基底様乳癌またはトリプルネガティブ乳癌を治療するための薬剤を製造するための、ＥｒｂＢ3阻害剤の使用。
[本発明1050]
前記少なくとも1つの追加の抗癌剤が、パクリタキセルである、本発明1049の方法。
[本発明1051]
前記追加の抗癌剤が、トラスツズマブまたはペルツズマブである抗ＥｒｂＢ2抗体である、本発明1018または本発明1044の方法。
[本発明1052]
前記少なくとも1つの追加の抗癌剤が、ラパチニブである、本発明1018または本発明1047の方法。
[本発明1053]
前記半定量的免疫組織化学アッセイが、ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ（登録商標）キットを含むアッセイである、本発明1031または本発明1032の方法。

【図面の簡単な説明】

【0022】

【図1】ＭＭ−１２１または媒体対照で治療されたＮＭＲＩヌードマウスにおいて、時間（Ｘ軸−ランダム化後の日数）に対してプロットされた相対ＭＡＸＦ４４９異種移植片腫瘍体積（％）（Ｙ軸−初期腫瘍体積に対して正規化）を示すグラフである。ＴＧＩ＝２００％

【図2】ＭＭ−１２１または媒体対照で治療されたバルブ／ｃヌードマウスにおいて、時間（Ｘ軸−ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞注入後の日数）に対してプロットされたＭＤＡ−ＭＢ−２３１異種移植片腫瘍体積（Ｙ軸−初期腫瘍体積に対して正規化）のパーセント変化を示すグラフである。開いたタイムポイント正方形または丸を有する曲線は、ＭＭ−１２１で治療されたマウスを示す。塗りつぶされたタイムポイント正方形または丸を有する曲線は、媒体対照を示す。挿入図において、「ｍｐ」は、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞が乳房脂肪体の中に注入されたことを示し、「ｓｃ」は、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞が側腹部に皮下的に注入されたことを示す。

【図3】ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をバルブ／ｃヌードマウスの乳房脂肪体の中に注入した後２８日目に開始する、時間（Ｘ軸−日数）に対してプロットされたＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍体積（Ｙ軸−ｍｍ^３）を示すグラフである。治療には、ＭＭ−１２１（１５０μｇ／マウス）、パクリタキセル（５ｍｇ／ｋｇ）、ＭＭ−１２１（１５０μｇ／マウス）およびパクリタキセル（５ｍｇ／ｋｇ）、または媒体対照を用いた。図面において使用される「ｍｐｋ」はｍｇ／ｋｇである。

【図4A】ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をバルブ／ｃヌードマウスの乳房脂肪体の中に注入した後２８日目に開始する、時間（Ｘ軸−日数）に対してプロットされたＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍体積（Ｙ軸−ｍｍ^３）を示すグラフを表す。ＭＭ−１２１、セツキシマブまたはパクリタキセル、ＭＭ−１２１およびセツキシマブ、ならびにＭＭ−１２１と、セツキシマブと、パクリタキセルとのトリプル複合による治療を表す。

【図4B】ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をバルブ／ｃヌードマウスの乳房脂肪体の中に注入した後２８日目に開始する、時間（Ｘ軸−日数）に対してプロットされたＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍体積（Ｙ軸−ｍｍ^３）を示すグラフを表す。ＭＭ−１２１、エルロチニブ、ＭＭ−１２１およびエルロチニブ、またはＭＭ−１２１と、エルロチニブと、パクリタキセルとのトリプル複合による治療を表す。

【発明を実施するための形態】

【0023】

詳細な説明
本明細書では、トリプルネガティブおよび基底様乳癌を治療するための方法、ならびにそのような方法を実施する際に使用することができる薬学的組成物が提供される。実施例でさらに説明されるように、現在、ＥｒｂＢ３阻害剤、特に抗ＥｒｂＢ３抗体が、生体内でＴＮ乳癌細胞の成長を抑制できることが証明されている。したがって、本明細書では、ＥｒｂＢ３阻害剤を使用して、患者においてＴＮ乳癌およびＢＬ乳癌の成長を抑制するための方法、ならびにそのような乳癌を治療する方法が提供される。

【0024】

定義：
本明細書で使用する、「トリプルネガティブ」または「ＴＮ」という用語は、腫瘍（例えば、癌）、通常、乳房腫瘍を指し、腫瘍細胞は、エストロゲン受容体（ＥＲ）およびプロゲステロン受容体（ＰＲ）についてネガティブのスコアを取り（すなわち、従来の病理組織学的方法を使用して）、いずれも核受容体であり（すなわち、それらは主に細胞核に位置する）、腫瘍細胞は、上皮成長因子受容体２型（ＨＥＲ２またはＥｒｂＢ２）について増幅せず、受容体は、通常、細胞表面上に位置する。腫瘍細胞は、標準免疫組織化学的技法を使用して、腫瘍細胞核の５％未満がＥＲおよびＰＲ発現について染色される場合、ＥＲおよびＰＲの発現についてネガティブであると考えられる。腫瘍細胞は、ＨＥＲ２（「ＨＥＲ２^３＋」）について、大幅に増幅すると考えられる。ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ（商標）キット（コードＫ５２０４、Ｄａｋｏ Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａ，Ｉｎｃ．、Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ ＣＡ）を用いて、ポリクローナル抗ＨＥＲ２一次抗体を使用する半定量的免疫組織化学アッセイを試験するとき、蛍光インサイツハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）によって、試験結果スコア３＋または試験ＨＥＲ２ポジティブを生じる。本明細書で使用する、腫瘍細胞は、それらが試験結果スコア０、１＋、または２＋を生じる場合、またはそれらがＨＥＲ２ＦＩＳＨネガティブである場合、ＨＥＲ２の過剰発現についてネガティブであると考えられる。

【0025】

さらに、「トリプルネガティブ乳癌」または「ＴＮ乳癌」という用語は、異なる病理組織学的発現型の癌を包含する。例えば、あるＴＮ乳癌は、「基底様」（「ＢＬ」）として分類され、新生細胞は、通常、乳房の正常な基底／筋上皮細胞において認められる遺伝子、例えば、高分子量基底サイトケラチン（ＣＫ、ＣＫ５／６、ＣＫ１４、ＣＫ１７）、ビメンチン、ｐ−カドヘリン、αＢ結晶質、ファシン、ならびにカベオリン１および２を発現する。しかしながら、特定の他のＴＮ乳癌は、異なる病理組織学的発現型を有し、その例としては、特定型のない高度侵襲性管癌、化生性癌、髄様癌、および乳房の唾液腺様腫瘍が挙げられる。

【0026】

本明細書で同義的に使用する、「ＥｒｂＢ３」、「ＨＥＲ３」、「ＥｒｂＢ３受容体」、および「ＨＥＲ３受容体」という用語は、米国特許第５，４８０，９６８号に記載されるヒトＥｒｂＢ３タンパク質を指す。

【0027】

本明細書で使用する、「ＥｒｂＢ３阻害剤」という用語は、ＥｒｂＢ３の活性を阻害、下方調節、抑制、または下方制御する治療薬を含むことが意図される。本用語は、小分子阻害剤等の化学化合物、および抗体、干渉ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ）可溶性受容体等の生物学的薬剤を含むことが意図される。典型的なＥｒｂＢ３阻害剤は、抗ＥｒｂＢ３抗体である。

【0028】

本明細書で使用する「抗体」は、免疫グロブリン遺伝子または免疫グロブリン遺伝子のフラグメントによって実質的にコードされる結合ドメインを含む、１つまたは複数のポリペプチドで構成されるタンパク質であり、タンパク質は、免疫特異的に抗原に結合する。認識される免疫グロブリン遺伝子としては、κ、λ、α、γ、δ、ε、およびμ定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が挙げられる。軽鎖は、κまたはλのいずれかとして分類される。重鎖は、γ、μ、α、δ、またはεとして分類され、順に、それぞれ免疫グロブリンのクラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを定義する。典型的な免疫グロブリン構造単位は、同一の２対のポリペプチド鎖から成る四量体を含み、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤ）を含む。「Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈ」は、それぞれこれらの軽鎖および重鎖を指す。

【0029】

抗体は、正常な免疫グロブリンならびにその抗原結合フラグメントを含み、様々なペプチダーゼでの消化によって生成されるか、または化学的に、もしくは組み換えＤＮＡ発現技法を使用してデノボ合成されてもよい。そのようなフラグメントとしては、例えば、Ｆ（ａｂ）_２二量体およびＦａｂ単量体が挙げられる。有用な抗体としては、単鎖抗体（単一のポリペプチド鎖として存在する抗体）、例えば、単鎖Ｆｖ抗体（ｓｃＦｖ）が挙げられ、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ鎖が一緒に結合されて（直接またはペプチドリンカーを通じて）連続ポリペプチドを形成する。

【0030】

「免疫特異的」または「免疫特異的に」とは、免疫グロブリン遺伝子または免疫グロブリン遺伝子のフラグメントによって実質的にコードされたドメインを介して、関心対象のタンパク質の１つまたは複数のエピトープに結合するが、抗原分子の混合集団を含有する試料において、他の分子を実質的に認識および結合しない抗体を指す。通常、抗体は、表面プラズモン共鳴アッセイまたは細胞結合アッセイによって測定される、５０ｎＭ以下の値を有するＫ_ｄで、同種抗原に免疫特異的に結合する。そのようなアッセイの使用は、本技術分野においてよく知られており、以下の実施例３に記載される。

【0031】

「抗ＥｒｂＢ３抗体」は、ＥｒｂＢ３の細胞外ドメインに免疫特異的に結合する抗体であり、「抗ＥｒｂＢ２抗体」は、ＥｒｂＢ２の細胞外ドメインに免疫特異的に結合する抗体である。抗体は、単離抗体であってもよい。ＥｒｂＢ３またはＥｒｂＢ２に対するそのような結合は、表面プラズモン共鳴アッセイまたは細胞結合アッセイによって測定される、５０ｎＭ以下の値を有するＫ_ｄを呈する。抗ＥｒｂＢ３抗体は、単離抗体であってもよい。典型的な抗ＥｒｂＢ３抗体は、ＥｒｂＢ３のＥＧＦ様リガンド媒介のリン酸化を阻害する。ＥＧＦ様リガンドとしては、ＥＧＦ、ＴＧＦα、βセルリン、ヘパリン結合上皮成長因子、ビレグリン、エピゲン、エピレグリン、およびアンフィレグリンが挙げられ、通常、ＥｒｂＢ１に結合し、ＥｒｂＢ１とＥｒｂＢ３とのヘテロ二量化を誘導する。

【0032】

本明細書で使用する、「ＥＧＦＲ阻害剤」という用語は、ＥＧＦＲシグナル伝達活性を阻害、下方調節、抑制、または下方制御する治療薬を含むことが意図される。本用語は、小分子阻害剤（例えば、小分子チロシンキナーゼ阻害剤）等の化学化合物、および抗体、干渉ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ）、可溶性受容体等の生物学的薬剤を含むことが意図される。

【0033】

本明細書で使用する、「ＶＥＧＦ阻害剤」という用語は、ＶＥＧＦシグナル伝達活性を阻害、下方調節、抑制、または下方制御する治療薬を含むことが意図される。本用語は、小分子阻害剤（例えば、小分子チロシンキナーゼ阻害剤）等の化学化合物、および抗体、干渉ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ）、可溶性受容体等の生物学的薬剤を含むことが意図される。

【0034】

本明細書で同義的に使用する、「抑制する」、「抑制」、「阻害する」、および「阻害」という用語は、活性の完全遮断を含む、生物活性（例えば、腫瘍細胞成長）のあらゆる統計的に有意な減少を指す。例えば、「阻害」とは、生物活性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％の減少を指すことができる。

【0035】

「患者」という用語は、予防的または治療的療法のいずれかを受けるヒトまたは他の哺乳動物を含む。

【0036】

本明細書で使用する、「治療する」、「治療している」、および「治療」という用語は、本明細書に記載されるもの等の治療的または予防的措置を指す。「治療」の方法は、疾患または障害あるいは再発疾患または障害の１つまたは複数の症状を予防、治癒、遅延、重篤度の低下、または軽減するため、またはそのような治療の非存在下で予想されるものを超えて患者の生存を延長するために、本明細書に提供されるＥｒｂＢ３阻害剤を患者、例えば、ＴＮまたはＢＬ乳癌腫瘍を有する患者に投与する。

【0037】

本明細書で使用する、「有効量」という用語は、患者に投与されるとき、ＴＮまたはＢＬ乳癌の治療、予後、または診断を行うために十分なＥｒｂＢ３阻害剤、例えば、抗ＥｒｂＢ３抗体等の薬剤の量を指す。治療有効量は、患者および治療される病状、患者の体重および年齢、病状の重篤度、投与方法等に応じて異なり、当業者は容易に決定することができる。投与の用量は、例えば、本明細書に提供される抗体またはその抗原結合部分の約１ｎｇ〜約１０，０００ｍｇ、約５ｎｇ〜約９，５００ｍｇ、約１０ｎｇ〜約９，０００ｍｇ、約２０ｎｇ〜約８，５００ｍｇ、約３０ｎｇ〜約７，５００ｍｇ、約４０ｎｇ〜約７，０００ｍｇ、約５０ｎｇ〜約６，５００ｍｇ、約１００ｎｇ〜約６，０００ｍｇ、約２００ｎｇ〜約５，５００ｍｇ、約３００ｎｇ〜約５，０００ｍｇ、約４００ｎｇ〜約４，５００ｍｇ、約５００ｎｇ〜約４，０００ｍｇ、約１μｇ〜約３，５００ｍｇ、約５μｇ〜約３，０００ｍｇ、約１０μｇ〜約２，６００ｍｇ、約２０μｇ〜約２，５７５ｍｇ、約３０μｇ〜約２，５５０ｍｇ、約４０μｇ〜約２，５００ｍｇ、約５０μｇ〜約２，４７５ｍｇ、約１００μｇ〜約２，４５０ｍｇ、約２００μｇ〜約２，４２５ｍｇ、約３００μｇ〜約２，０００、約４００μｇ〜約１，１７５ｍｇ、約５００μｇ〜約１，１５０ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約１，１２５ｍｇ、約１ｍｇ〜約１，１００ｍｇ、約１．２５ｍｇ〜約１，０７５ｍｇ、約１．５ｍｇ〜約１，０５０ｍｇ、約２．０ｍｇ〜約１，０２５ｍｇ、約２．５ｍｇ〜約１，０００ｍｇ、約３．０ｍｇ〜約９７５ｍｇ、約３．５ｍｇ〜約９５０ｍｇ、約４．０ｍｇ〜約９２５ｍｇ、約４．５ｍｇ〜約９００ｍｇ、約５ｍｇ〜約８７５ｍｇ、約１０ｍｇ〜約８５０ｍｇ、約２０ｍｇ〜約８２５ｍｇ、約３０ｍｇ〜約８００ｍｇ、約４０ｍｇ〜約７７５ｍｇ、約５０ｍｇ〜約７５０ｍｇ、約１００ｍｇ〜約７２５ｍｇ、約２００ｍｇ〜約７００ｍｇ、約３００ｍｇ〜約６７５ｍｇ、約４００ｍｇ〜約６５０ｍｇ、約５００ｍｇ、または約５２５ｍｇ〜約６２５ｍｇに変動させることができる。投薬は、例えば、毎週、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、または６週間毎であってもよい。投薬計画は、最適な治療反応を提供するように調整されてもよい。有効量はまた、薬剤のあらゆる毒性または有害作用（副作用）が最小化され、および／または有益な効果が上回る量である。ＭＭ−１２１の場合、投与は、正確に、または約６ｍｇ／ｋｇもしくは１２ｍｇ／ｋｇを毎週、または１２ｍｇ／ｋｇまたは２４ｍｇ／ｋｇを隔週静脈内投与してもよい。追加の投薬計画は、以下に説明される。

【0038】

「抗癌剤」および「抗腫瘍薬」という用語は、癌性増殖等の悪性腫瘍を治療するために使用される薬物を指す。薬物療法は、単独で、または外科手術もしくは放射線療法等の他の治療と併せて使用されてもよい。

【0039】

様々な態様および実施形態は、以下の小節でさらに詳述される。

【0040】

Ｉ．ＥｒｂＢ３阻害剤
本明細書でさらに詳述されるように、本明細書に提供される方法および組成物は、１つまたは複数のＥｒｂＢ３阻害剤の使用を伴う。

【0041】

一実施形態では、ＥｒｂＢ３阻害剤は、抗ＥｒｂＢ３抗体、例えば、モノクローナル抗体である。例示的な抗ＥｒｂＢ３モノクローナル抗体は、国際特許第ＷＯ２００８／１００６２４号および米国特許第７，８４６，４４０号においてさらに説明される、ＭＭ−１２１であり、それぞれ配列番号１および２において示される、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を有する。あるいは、抗ＥｒｂＢ３モノクローナル抗体は、ＥｒｂＢ３に結合するために、ＭＭ−１２１と競合する抗体である。別の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体は、ＭＭ−１２１のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ ＣＤＲ配列を含む抗体であり、それぞれ配列番号３〜５（Ｖ_Ｈ ＣＤＲ１、２、３）および６〜８（Ｖ_Ｌ ＣＤＲ１、２、３）において示される。抗ＥｒｂＢ３抗体の他の例は、Ａｂ＃３、Ａｂ＃１４、Ａｂ＃１７、およびＡｂ＃１９を含み、国際特許第ＷＯ２００８／１００６２４号においてもさらに説明され、それぞれ配列番号９および１０、１７および１８、２５および２６、ならびに３３および３４において示される、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を有する。別の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体は、Ａｂ＃３のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ ＣＤＲ配列を含む抗体であるか（それぞれ配列番号１１〜１３および１４〜１８において示される）、またはＡｂ＃１４のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ ＣＤＲ配列を含む抗体であるか（それぞれ配列番号１９〜２１および２２〜２４において示される）、またはＡｂ＃１７のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ ＣＤＲ配列を含む抗体であるか（それぞれ配列番号２７〜２９および３０〜３２において示される）、またはＡｂ＃１９のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ ＣＤＲ配列を含む抗体である（それぞれ配列番号３５〜３７および３８〜４０において示される）。

【0042】

あるいは、抗ＥｒｂＢ３抗体は、配列番号４１の残基９２〜１０４を含む、ヒトＥｒｂＢ３のエピトープを結合する、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分であり、ＥｒｂＢ３を発現する癌細胞の増殖の阻害によって特徴付けられる。癌細胞は、ＭＡＬＭＥ−３Ｍ細胞、ＡｄｒＲ細胞、またはＡＣＨＮ細胞であってもよく、増殖は、対照に対して少なくとも１０％減少され得る。追加の実施形態では、この単離したモノクローナル抗体またはその抗原結合部分が、配列番号４１の残基９２〜１０４および１２９を含むエピトープを結合する。

【0043】

有用な抗ＥｒｂＢ３抗体の他の例としては、いずれもＵｌｌｒｉｃｈらによる米国特許出願公開第２００４０１９７３３２号において説明される、抗体１Ｂ４Ｃ３および２Ｄ１Ｄ１２（Ｕ３ Ｐｈａｒｍａ ＡＧ）、およびＡｋｉｔａらによる米国特許第５，９６８，５１１号において説明される、ＡＭＧ−８８８（Ｕ３ Ｐｈａｒｍａ ＡＧおよびＡｍｇｅｎ）等のモノクローナル抗体（そのヒト化型を含む）が挙げられる。

【0044】

さらに別の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体は、２つ以上の抗ＥｒｂＢ３抗体の混合またはカクテルを含むことができ、それぞれがＥｒｂＢ３上の異なるエピトープに結合する。一実施形態では、混合またはカクテルは、３つの抗ＥｒｂＢ３抗体を含み、それぞれがＥｒｂＢ３上の異なるエピトープに結合する。

【0045】

別の実施形態では、ＥｒｂＢ３阻害剤は、ＥｒｂＢ３の発現または活性を阻害する、ＲＮＡ分子等の核酸分子を含む。ＥｒｂＢ３のＲＮＡアンタゴニストは、本技術分野において説明されている（例えば、米国特許出願公開第２００８０３１８８９４号を参照）。さらに、ＥｒｂＢ３の発現および／または活性を特に阻害する、ｓｈＲＮＡまたはｓｉＲＮＡ等のＥｒｂＢ３に特異的な干渉ＲＮＡが、本技術分野において説明されている。

【0046】

さらに別の実施形態では、ＥｒｂＢ３阻害剤は、ＥｒｂＢ３経路を通るシグナル伝達を阻害する、可溶性形態のＥｒｂＢ３受容体を含む。そのような可溶性ＥｒｂＢ３分子は、本技術分野において説明されている（例えば、それぞれＭａｉｈｌｅらによる、米国特許第７，３９０，６３２号、米国特許出願公開第２００８０２７４５０４号、および米国特許出願公開第２００８０２６１２７０号、ならびにＺｈｏｕによる米国特許出願公開第２００８００５７０６４号を参照）。

【0047】

ＩＩ．方法
一態様では、ＴＮ乳癌またはＢＬ乳癌の治療用の薬剤を製造するためのＥｒｂＢ３阻害剤の使用が提供される。

【0048】

別の態様では、トリプルネガティブ乳癌細胞の成長を抑制する方法が提供され、本方法は、細胞を有効量のＥｒｂＢ３阻害剤と接触させる工程を含む。

【0049】

別の態様では、患者のＴＮまたはＢＬ乳癌腫瘍の成長を抑制する方法が提供され、本方法は、有効量のＥｒｂＢ３阻害剤を患者に投与する工程を含む。

【0050】

さらに別の態様では、患者のＴＮまたはＢＬ乳癌腫瘍を治療する方法が提供され、本方法は、有効量のＥｒｂＢ３阻害剤を患者に投与する工程を含む。

【0051】

さらに別の態様では、患者の乳癌腫瘍を治療する方法が提供され、本方法は、
ＴＮまたはＢＬ乳癌腫瘍のある患者を選択する工程と、
有効量のＥｒｂＢ３阻害剤を患者に投与する工程とを含む。

【0052】

別の態様では、ＴＮまたはＢＬ乳癌腫瘍のある患者は、係属中の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０５４０５１号に開示される選択方法の使用によってさらに選択された患者である。

【0053】

トリプルネガティブ乳癌細胞、またはトリプルネガティブ乳癌腫瘍を有する患者の識別は、本技術分野においてよく知られている標準的な方法を通じて達成することができる。例えば、免疫組織化学的（ＩＨＣ）染色は、生検分析において日常的に使用され、ホルマリン固定されたパラフィン包埋組織（例えば、組織学的評価のために日常的に処理される乳癌組織）から得た切片内のＥＲ、ＰＲ、およびＨＥＲ２の検出、局在化、および相対定量を可能にする。ＴＮ腫瘍を識別する文脈において、腫瘍細胞核の５％未満の染色は、ＥＲおよびＰＲのそれぞれについてネガティブであると考えられる。ＥＲのＩＨＣ染色に使用される一次抗体は、例えば、１Ｄ５である（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ、Ｔｅｍｅｃｕｌａ ＣＡ、カタログ＃ＩＨＣ２０５５）。ＰＲのＩＨＣ染色に使用される一次抗体は、例えば、ＰｇＲ６３６（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｆｒｅｍｏｎｔ ＣＡ、カタログ＃ＭＳ−１８８２−Ｒ７）またはＰｇＲ１２９４（Ｄａｋｏ Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａ，Ｉｎｃ．、Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ ＣＡ、コードＭ３５６８）である。使用されるＥｒｂＢ２ ＩＨＣアッセイは、例えば、ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ（商標）キット（Ｄａｋｏ Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａ，Ｉｎｃ．、Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ ＣＡ、コードＫ５２０４）、ポリクローナル抗ＨＥＲ２一次抗体を使用して、組織学的評価のために日常的に処理された乳癌組織において、ＨＥＲ２タンパク質の過剰発現を決定する、半定量的ＩＨＣアッセイであり、製造者の指示によって使用される。ＴＮ腫瘍を識別するという文脈において、０〜１＋の試験結果は、Ｈｅｒ２ネガティブであると考えられる。

【0054】

一実施形態では、トリプルネガティブ乳癌腫瘍は、基底様発現型を有すると病理組織学的に特徴付けられる。別の実施形態では、トリプルネガティブ乳癌腫瘍は、基底様以外の発現型を有すると病理組織学的に特徴付けられる。ＢＬ以外のＴＮ乳癌病理組織学的発現型の例としては、特別な型ではない高度浸潤性乳管癌、化生性癌、髄様癌、および乳房の唾液腺様腫瘍が挙げられる。

【0055】

一態様では、ＥｒｂＢ３阻害剤で治療されるＴＮまたはＢＬ乳癌は、ＥｒｂＢ１（ＥＧＦＲ）、ＥｒｂＢ３、およびヘレグリン（ＨＲＧ）を共発現する。ＥＧＦＲおよびＨＲＧの発現は、ＲＴ−ＰＣＲまたは標準免疫アッセイ技法、例えば、ホルマリン固定されたパラフィン包埋組織（例えば、組織学的評価のために日常的に処理された乳癌組織）のＥＬＩＳＡアッセイまたは免疫組織化学的染色によって、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥｒｂＢ３抗体、または抗ＨＲＧ抗体を使用して識別することができる。本明細書の開示による治療用の腫瘍に関する追加の特徴は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０５４０５１号に対する優先権を主張する、係属中の米国特許公開第２０１１００２７２９１号において説明される。

【0056】

一実施形態では、患者に投与されるＥｒｂＢ３阻害剤は、抗ＥｒｂＢ３抗体である。典型的な抗ＥｒｂＢ３抗体は、それぞれ配列番号１および２に示される、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を含むＭＭ−１２１、またはそれぞれ配列番号３〜５に示される、Ｖ_Ｈ ＣＤＲ１、２、および３と、それぞれ配列番号６〜８に示される、Ｖ_Ｌ ＣＤＲ１、２、および３とを含む抗体である（すなわち、ＭＭ−１２１のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ ＣＤＲ）。追加の限定されない典型的な抗ＥｒｂＢ３抗体およびＥｒｂＢ３阻害剤の他の型は、上記の小節Ｉで詳述される。

【0057】

ＥｒｂＢ３阻害剤は、患者に対する阻害剤の効果的な送達に適したあらゆる経路によって、患者に投与することができる。例えば、多くの小分子阻害剤は、経口投与に適している。抗体および他の生物学的薬剤は、通常、非経口的、例えば、静脈内、腹腔内、皮下的、または筋肉内投与される。本明細書に提供される方法で使用するのに適した様々な投与経路、用量、および薬学的製剤が、以下でさらに詳述される。

【0058】

ＩＩＩ．薬学的組成物
別の態様では、本明細書に開示される方法で使用することができる薬学的組成物、すなわち、ＴＮまたはＢＬ乳癌腫瘍を治療するための薬学的組成物が提供される。

【0059】

一実施形態では、ＴＮ乳癌を治療するための薬学的組成物は、ＥｒｂＢ３阻害剤および薬学的担体を含む。ＥｒｂＢ３阻害剤は、薬学的担体を用いて、薬学的組成物に製剤化することができる。さらに、薬学的組成物は、例えば、ＴＮまたはＢＬ乳癌腫瘍の患者を治療するための組成物の使用に関する指示を含むことができる。

【0060】

一実施形態では、組成物中のＥｒｂＢ３阻害剤は、抗ＥｒｂＢ３抗体、例えば、ＭＭ−１２１またはＥｒｂＢ３の免疫特異的結合を提供するように、ＭＭ−１２１に存在するため、同一の相対順序で抗体内に位置付けられたＭＭ−１２１のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ ＣＤＲを含む抗体である。追加の限定されない典型的な抗ＥｒｂＢ３抗体およびＥｒｂＢ３阻害剤の他の形態は、上記の小節Ｉに詳述される。

【0061】

本明細書で使用する、「薬学的に許容される担体」は、任意およびすべての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤、緩衝剤、ならびに生理学的に適合する他の賦形剤を含む。好ましくは、担体は、非経口、経口、または局所投与に適している。投与経路に応じて、活性化合物、例えば、小分子または生物学的薬剤は、酸および化合物を不活性化し得る他の自然状態の作用から化合物を保護するように、材料でコーティングされてもよい。

【0062】

薬学的に許容される担体は、滅菌水溶液または分散液、および滅菌注入溶液または分散液を即時調製するための滅菌粉末、ならびに錠剤、ピル、カプセル等を調製するための従来の賦形剤を含む。薬学的に活性な物質を製剤化するためのそのような媒体および薬剤の使用は、本技術分野において知られている。あらゆる従来の媒体または薬剤が、活性化合物と適合しない限りを除いて、本明細書に提供される薬学的組成物におけるそれらの使用が検討される。補助活性化合物もまた、組成物に組み込むことができる。

【0063】

薬学的に許容される担体は、薬学的に許容される抗酸化剤を含むことができる。薬学的に許容される抗酸化剤の例としては、（１）水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等、（２）油溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロール等、および（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸等が挙げられる。

【0064】

本明細書に提供される薬学的組成物に用いられてもよい適切な水性および非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、およびそれらの適切な混合、ならびにオレイン酸エチル等の注入可能な有機エステルが挙げられる。必要であれば、例えば、レシチン等のコーティング材料の使用によって、分散剤の場合は必要な粒径を維持することによって、および界面活性剤の使用によって、適切な流動性を維持することができる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、砂糖、マンニトール等のポリアルコール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含むことが有用となる。注入可能な組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含めることによってもたらすことができる。

【0065】

これらの組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤等の機能的賦形剤を含有してもよい。

【0066】

治療組成物は、通常、製造および保管の条件下で滅菌、非発熱性、および安定していなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または高い薬物濃度に適した他の秩序構造として製剤化することができる。

【0067】

滅菌注入溶液は、上に列挙される成分の１つまたは複合とともに、適切な溶媒中に必要な量で活性化合物を組み込み、必要に応じて、その後に滅菌、例えば、精密ろ過することによって調製することができる。一般に、分散液は、基本の分散媒体および上に列挙されるものから必要な他の成分を含有する、滅菌媒体に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注入溶液を調製するための滅菌粉末の場合、調製方法は、真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）を含み、活性成分の粉末に加えて、任意の追加の望ましい成分を事前に滅菌ろ過されたその溶液から産生する。活性剤は、滅菌条件下で追加の薬学的に許容される担体および必要とされ得る任意の保存剤、緩衝剤、または推進剤と混合されてもよい。

【0068】

微生物の存在を防止することは、上記の滅菌手順および様々な抗菌剤と抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、ソルビン酸フェノール等の包含によって保証されてもよい。砂糖、塩化ナトリウム等の等張剤を組成物に含めることが望ましい場合もある。さらに、注入可能な薬学的形態の長期吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン等の吸収を遅延させる薬剤の包含によってもたらされてもよい。

【0069】

ＥｒｂＢ３阻害剤を含む薬学的組成物は、単独または複合療法で投与することができる。例えば、複合療法は、ＥｒｂＢ３阻害剤と、少なくとも１つまたは複数の追加の治療薬、例えば、以下の小節ＩＶでさらに詳述される、本技術分野において知られている１つまたは複数の化学療法薬とを含む、本明細書に提供される組成物を含むことができる。薬学的組成物はまた、放射線療法および／または外科手術と併せて投与することもできる。

【0070】

投薬レジメンは、最適な望ましい反応（例えば、治療反応）を提供するように調製される。例えば、単一のボーラスが投与されてもよく、いくつかの分割用量が長期間に渡って投与されてもよく、または治療状況の要件によって示されるように、用量を比例的に増減させてもよい。

【0071】

抗体投与の典型的な用量範囲としては、１０〜１０００ｍｇ（抗体）／ｋｇ（患者の体重）、１０〜８００ｍｇ／ｋｇ、１０〜６００ｍｇ／ｋｇ、１０〜４００ｍｇ／ｋｇ、１０〜２００ｍｇ／ｋｇ、３０〜１０００ｍｇ／ｋｇ、３０〜８００ｍｇ／ｋｇ、３０〜６００ｍｇ／ｋｇ、３０〜４００ｍｇ／ｋｇ、３０〜２００ｍｇ／ｋｇ、５０〜１０００ｍｇ／ｋｇ、５０〜８００ｍｇ／ｋｇ、５０〜６００ｍｇ／ｋｇ、５０〜４００ｍｇ／ｋｇ、５０〜２００ｍｇ／ｋｇ、１００〜１０００ｍｇ／ｋｇ、１００〜９００ｍｇ／ｋｇ、１００〜８００ｍｇ／ｋｇ、１００〜７００ｍｇ／ｋｇ、１００〜６００ｍｇ／ｋｇ、１００〜５００ｍｇ／ｋｇ、１００〜４００ｍｇ／ｋｇ、１００〜３００ｍｇ／ｋｇ、および１００〜２００ｍｇ／ｋｇが挙げられる。典型的な投薬スケジュールとしては、３日毎に１回、５日毎に１回、７日毎に１回（すなわち、週に１回）、１０日毎に１回、１４日毎に１回（すなわち、２週間毎に１回）、２１日毎に１回（すなわち、３週間毎に１回）、２８日毎に１回（すなわち、４週間毎に１回）、および１ヶ月に１回が挙げられる。

【0072】

投与の容易性および用量の均一性のために、単位用量形態の非経口製剤を製剤化することが有利であり得る。本明細書で使用する単位用量形態は、治療される患者の単一用量として適切な物理的に個別の単位を指し、各単位は、任意の必要な薬学的担体に随伴する望ましい治療効果をもたらすように計算された既定量の活性薬剤を含有する。単位用量形態の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特徴および達成される特定治療効果、ならびに（ｂ）個人の感受性を治療するためにそのような活性化合物を複合する技術に固有の制限によって決定され、それらに直接依存する。

【0073】

本明細書に開示される薬学的組成物中の活性成分の実際の用量レベルは、患者に毒性となることなく、特定の患者、組成、および投与形態に望ましい治療反応を達成するために有効な量の活性成分を得るように、変動されてもよい。本明細書で使用する「非経口」とは、投与の文脈において、腸内および局所投与以外の、通常、注入による投与形態を意味し、これらに限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮膚内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、髄腔内、硬膜外、および胸骨内注射および注入が挙げられる。

【0074】

本明細書で使用する、「非経口投与」および「非経口的に投与される」という表現は、腸内（すなわち、消化管を介する）および局所投与以外の投与形態、通常、注射または注入によるものを指し、これらに限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮膚内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、髄腔内、硬膜外、および胸骨内注射および注入が挙げられる。静脈内注射および注入は、（これに限らないが）抗体投与に使用される場合が多い。

【0075】

本明細書に提供される薬剤が調剤としてヒトまたは動物に投与されるとき、それらは単独で付与するか、または例えば、活性成分の０．００１〜９０％（例えば、０．００５〜７０％、例えば、０．０１〜３０％）を含有する薬学的組成物として、薬学的に許容される担体と併せて付与することができる。

【0076】

ＩＶ．複合療法
ある実施形態では、ＴＮ乳癌細胞の成長を抑制するため、またはＴＮ乳房腫瘍もしくはＢＬ乳房腫瘍のある患者を治療するための本明細書に提供される方法および使用は、ＥｒｂＢ３阻害剤、およびＥｒｂＢ３阻害剤ではない少なくとも１つの追加の抗癌剤の投与を含み得る。

【0077】

一実施形態では、少なくとも１つの追加の抗癌剤は、少なくとも１つの化学療法薬を含む。そのような化学療法薬の非限定例としては、白金系化学療法薬（例えば、シスプラチン、カルボプラチン）、タキサン（例えば、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、ＥｎｄｏＴＡＧ−１（商標）（正荷電脂質系複合体で被包されたパクリタキセル製剤、ＭｅｄｉＧｅｎｅ）、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（アルブミンに結合されたパクリタキセル製剤）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、イマチニブ／Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）、スニチニブ／Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）、ダサチニブ／Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標）、およびそれらの組み合わせが挙げられる。

【0078】

別の実施形態では、少なくとも１つの追加の抗癌剤は、抗ＥＧＦＲ抗体またはＥＧＦＲシグナル伝達の小分子阻害剤等のＥＧＦＲ阻害剤を含む。典型的な抗ＥＧＦＲ抗体は、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））である。セツキシマブは、ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄから市販されている。抗ＥＧＦＲ抗体の他の例としては、マツズマブ（ＥＭＤ７２０００）、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）、ニモツズマブ（ＴｈｅｒａＣＩＭ（登録商標））、およびｍＡｂ８０６が挙げられる。ＥＧＦＲシグナル伝達経路の典型的な小分子阻害剤は、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａおよびＴｅｖａから市販されている、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））である。ＥＧＦＲシグナル伝達経路の小分子阻害剤の他の例としては、エルロチニブＨＣＬ（ＯＳＩ−７７４、Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）、ＯＳＩ Ｐｈａｒｍａ）、ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標）、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、カネルチニブ（カネルチニブ二塩酸塩、Ｐｆｉｚｅｒ）、ペリチニブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＰＫＩ−１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＰＤ１５８７８０、およびＡＧ１４７８（４−（３−クロロアニリノ）−６，７−ジメトキシキナゾリン）が挙げられる。

【0079】

さらに別の実施形態では、少なくとも１つの追加の抗癌剤は、ＶＥＧＦ阻害剤を含む。典型的なＶＥＧＦ阻害剤は、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔａｔｉｎ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）等の抗ＶＥＧＦ抗体を含む。

【0080】

さらに別の実施形態では、少なくとも１つの追加の抗癌剤は、抗ＥｒｂＢ２抗体を含む。適切な抗ＥｒｂＢ２抗体は、トラスツズマブおよびペルツズマブを含む。

【0081】

一態様では、本発明による併用の有効性の向上は、治療的相乗効果を達成することによって証明することができる。

【0082】

「治療的相乗効果」という用語は、指定用量での２つの製品の併用が、同一用量での最善の２つの製品それぞれの単独使用よりも有効であるときを指す。一実施例では、治療的相乗効果は、腫瘍体積パラメータに関する反復測定による変数（例えば、時間因子）の二元分散分析から得られた推定値を使用して、併用と最善の単一薬剤とを比較することによって評価することができる。

【0083】

「付加的」という用語は、指定用量での２つ以上の製品の併用が、２つ以上の製品のそれぞれを用いて得られる有効性の総和よりも等しく有効であるときを指し、一方「超付加的」という用語は、併用が、２つ以上の製品のそれぞれを用いて得られる有効性の総和よりも有効であるときを指す。

【0084】

有効性（併用の有効性を含む）を定量化することができる別の方法は、以下の等式によって決定される、ｌｏｇ_１０細胞死滅を計算することによる。
ｌｏｇ_１０細胞死滅＝Ｔ−Ｃ（日数）／３．３２ｘＴ_ｄ
式中、Ｔ−Ｃは、細胞成長の遅延を表し、治療群（Ｔ）の腫瘍および対照群（Ｃ）の腫瘍が、既定値（例えば、１ｇまたは１０ｍＬ）に到達するまでの平均時間（日数）であり、Ｔ_ｄは、対照動物において腫瘍の体積を二倍にするために必要な時間（日数）を表す。この方法を適用するとき、製品は、ｌｏｇ_１０細胞死滅が０．７以上である場合に活性であると考えられ、ｌｏｇ_１０細胞死滅が２．８を超えると非常に活性であると考えられる。

【0085】

この方法を使用すると、組成成分のそれぞれが一般にその最大耐量以下の用量で存在する、その独自の最大耐量で使用される併用は、ｌｏｇ_１０細胞死滅が、単独で投与されるときの最善組成成分のｌｏｇ_１０細胞死滅の値よりも優れているときに治療的相乗効果を呈する。典型的な例では、併用のｌｏｇ_１０細胞死滅は、少なくとも１つのｌｏｇ細胞死滅によって、併用の最善組成成分のｌｏｇ_１０細胞死滅の値を超える。

【実施例】

【0086】

実施例１：ＭＭ−１２１がトリプルネガティブヒト乳癌異種移植片ＭＡＸＦ４４９に及ぼす効果
担癌マウスのＭＭ−１２１治療の抗腫瘍有効性および耐性に関する分析は、ＮＭＲＩヌードマウスにおいて、トリプルネガティブヒト乳癌異種移植片ＭＡＸＦ４４９（ＯＮＣＯＴＥＳＴ ＧｍｂＨ、Ｆｒｉｅｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して行われる。ＭＡＸＦ４４９は、ヌードマウスの連続継代において皮下注射を介して確立された、ヒト腫瘍外植片である（外植片に関して、固形の侵襲性管として組織学的に説明され、明らかに定義されていない）。これらの実験で使用されるＭＡＸＦ４４９細胞は、２２回継代された。ＮＭＲＩヌードマウスは、Ｔａｃｏｎｉｃ ｆａｒｍｓ、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌまたはＨａｒｌａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから取得される。マウスは、温度と湿度が調整された部屋にある、個別に換気されたＴｅｃｎｉｐｌａｓｔポリカーボネート（Ｍａｃｒｏｌｏｎ）ケージ（ＩＶＣ）セットに収容され、食餌と酸性水に自由にアクセスできる。

【0087】

単剤療法における抗腫瘍有効性を調査するために、ＭＭ−１２１または媒体対照（１００μＬ）を、３日毎に腹腔内注射によって、６００μｇ／マウス（ＰＢＳ中の６ｍｇ／ｍＬ溶液としてのＭＭ−１２１）で担癌マウスに与えた。対照マウスは、ＰＢＳ媒体のみを受容する。有効性は、抗体治療されたマウスと媒体対照マウスとの間の腫瘍成長を比較することによって決定され、相対腫瘍体積の中央値の実験対対照比（Ｔ／Ｃ値）として表される。５０％を下回る最小Ｔ／Ｃ値は、治療が有効であると評価するための前提条件である。対照群および実験群は、それぞれ１つの腫瘍を担持する１０匹のマウスを含む。ランダム化のために、同様のサイズの腫瘍を担持するマウスを３０匹得るために、腫瘍当たり４０匹のマウスが片側に移植される。

【0088】

マウスをランダム化し、十分な数の個別の腫瘍が約２００ｍｍ^３の体積に成長したら治療を開始する。デジタルカリパス測定によって腫瘍を測定し（ＬｘＷ）、式Ｐｉ／６（Ｗ２ｘＬ）を使用して腫瘍体積を計算する。最初の用量は、０日目（ランダム化の日）または１日後のいずれかに投与する。

【0089】

最終用量の投与から約２４時間後、すべてのマウスを出血させて血清を調製し、さらに急速冷凍およびＦＦＰＥ用に同一マウスから腫瘍を収集する（それぞれ１／２腫瘍）。

【0090】

動物実験の規則に従って、腫瘍体積が１８００ｍｍ^３を超える場合（１腫瘍／マウス）、マウスを犠牲死させる。マウスは、それらの腫瘍がそのサイズに成長するまでであるが、６０日を超えない間で監視し、投薬する。その後、試料収集のために犠牲死させる。

【0091】

研究の最後、最終用量の投与から約２４時間後、研究対象のすべてのマウスを舌下出血させて、血清調製のための最大量の血液を得る。それぞれ約２５０μＬの２つの試験管に血清を分注する。

【0092】

さらに、液体窒素中で急速冷凍するため（１／２腫瘍、試料を保存するためのＣＯＶＡＲＩＳバッグが提供される）、および１０％緩衝ホルマリン中で２４時間未満固定した後、脱水およびパラフィン包埋するために（ＦＦＰＥ、１／２腫瘍）すべてのマウスから得た腫瘍を即刻切除する。

【0093】

動物の体重および腫瘍の直径（ＷおよびＬ）を１週間に２回測定し、式Ｐｉ／６（Ｗ２ｘＬ）を使用して腫瘍体積を計算する。腫瘍成長曲線をプロットする。２および４倍増時間の腫瘍阻害および絶対成長遅延を計算する。

【0094】

実質的に記載のとおり実行した実験の結果は、図１に提示される。ＭＭ−１２１治療は、腫瘍成長を阻害または停止し、いくつかの例では、腫瘍サイズを減少させた。これらのヒトトリプルネガティブ腫瘍異種移植片におけるＴＧＩ（腫瘍成長阻害）は、約２００％であると計算された。

【0095】

実施例２：ＭＭ−１２１がトリプルネガティブヒト乳癌異種移植片ＭＤＡ−ＭＢ−２３１に及ぼす効果
一般的な麻酔下、バルブ／ｃヌードマウスに１０^７ＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒトトリプルネガティブ乳癌細胞（ＡＴＣＣ）を、側腹部に皮下的に、または乳房脂肪体の中のいずれかに注射する。次に、確立された腫瘍のあるマウス（すなわち、細胞注射に続く腫瘍成長の７〜１０日後）を、実施例１に記載されるように、ＰＢＳまたはＭＭ−１２１のいずれかを用いて、３日毎に６００μｇ ＭＭ−１２１／マウスで腹腔内治療する。実施例１に記載されるように、腫瘍体積を１週間に２回測定する。

【0096】

実質的に記載のとおり実行した実験の結果は、図２に提示される。ＭＭ−１２１治療は、これらの実験において、ヒトトリプルネガティブ乳癌腫瘍の成長を本質的に完全に停止させた。

【0097】

実施例３：結合親和性の測定（Ｋ_Ｄ）
抗ＥｒｂＢ抗体の解離定数は、表面プラズモン共鳴アッセイおよび細胞結合アッセイという２つの独立した技法のいずれか、または両方を使用して測定されてもよい。

【0098】

表面プラズモン共鳴アッセイ
表面プラズモン共鳴アッセイは、Ｗａｓｓａｆら（２００６）のＡｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．，３５１：２４１〜２５３に記載のとおり行う。１つの実装では、組み換えＥｒｂＢタンパク質を検体として、および抗ＥｒｂＢ抗体をリガンドとして使用するＢＩＡＣＯＲＥ３０００器具（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用する。Ｋ_Ｄ値は、式Ｋ_Ｄ＝Ｋ_ｄ／Ｋ_ａに基づいて計算する。

【0099】

細胞結合アッセイ
ＭＡＬＭＥ−３Ｍ細胞（ＡＴＣＣ）を使用して、ＥｒｂＢ３結合について細胞結合アッセイを行う。アッセイは、実質的に以下のとおり行う。

【0100】

２ｍＬトリプシン−ＥＤＴＡ＋２ｍＬ ＲＭＰＩ＋５ｍＭ ＥＤＴＡを用いて、室温で５分間、細胞を分離する。完全ＲＰＭＩ（１０ｍＬ）をトリプシン化した細胞に即時添加し、ゆっくり再懸濁させて、Ｂｅｃｋｍａｎ卓上遠心分離機において１１００ｒｐｍで５分間沈降させる。ＢＤ染色緩衝液中（ＰＢＳ＋２％ ＦＢＳ＋０．１％アジ化ナトリウム、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）、２ｘ１０^６細胞／ｍＬで細胞を再懸濁させ、５０μＬ（１ｘ１０^５細胞）アリコートを９６ウェル滴定プレートに載置する。

【0101】

ＢＤ染色緩衝液中１５０μＬの２００ｎＭ抗ＥｒｂＢ抗体溶液を調製し、７５μＬのＢＤ染色緩衝液に連続的に２倍希釈する。希釈した抗体の濃度は、２００ｎＭ〜０．４ｎＭの範囲であった。次に、５０μＬアリコートの異なるタンパク質希釈液を、５０μＬの細胞懸濁液に直接添加して、最終濃度１００ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２ｎＭ、６ｎＭ、３ｎＭ、１．５ｎＭ、０．８ｎＭ、０．４ｎＭ、および０．２ｎＭの抗体を得る。

【0102】

９６ウェルプレート内の分注細胞を、タンパク質希釈液を用いて室温で３０分間、プラットフォーム攪拌器上でインキュベートし、３００μＬ ＢＤ染色緩衝液で３回洗浄する。次に、１００μＬの二次抗体（例えば、ＢＤ染色緩衝液中のＡｌｅｘａ６４７標識化ヤギ抗ヒトＩｇＧの１：７５０希釈液）を用いて、冷室で４５分間、プラットフォーム攪拌器上で細胞をインキュベートする。最後に、細胞を２回洗浄し、ペレットして、２５０μＬ ＢＤ染色緩衝液＋０．５μｇ／ｍＬヨウ化プロピジウム中で再懸濁させる。ＦＬ４チャネルを使用し、ＦＡＣＳＣＡＬＩＢＵＲフローサイトメーター内で１０，０００細胞の分析を行う。ＭＦＩ値および対応する抗ＥｒｂＢ抗体の濃度を、それぞれｙ軸およびｘ軸上にプロットする。分子のＫ_Ｄは、非線形回帰曲線の一部位結合モデルを使用し、ＧｒａｐｈＰａｄ ＰＲＩＳＭソフトウェアを使用して決定する。

【0103】

Ｋ_Ｄ値は、式Ｙ＝Ｂｍａｘ^＊ Ｘ／Ｋ_Ｄ ＋Ｘに基づいて計算する（Ｂｍａｘ：飽和蛍光、Ｘ：抗体濃度、Ｙ：結合の程度）。

【0104】

実施例４：ＭＭ−１２１およびパクリタキセルでの複合療法による生体内腫瘍成長の阻害
方法：
バルブ／ｃヌードマウス（雌、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂからの４〜５週齢）の乳房体に１０ｘ１０６個の細胞を同所移植する。腫瘍のサイズを平均１００ｍｍ^３に到達させた後、同様の腫瘍サイズ分布を有するマウスを含む、１０匹のマウスの４群にランダム化する。各群のマウスは、１）ＭＭ−１２１（１５０μｇ／マウス、腹腔内、Ｑ３Ｄ）、２）媒体対照（ＰＢＳ、腹腔内）、３）パクリタキセル（５ｍｇ／ｋｇ ＬＣ Ｌａｂ）、または４）パクリタキセル（５ｍｇ／ｋｇ）およびＭＭ−１２１（１５０μｇ／マウス）で治療する。治療は４週間継続する。１週間に２回腫瘍を測定し、腫瘍体積は、ｐ／６ｘ長さｘ幅^２として計算する（幅は短い方の測定値である）。

【0105】

結果：
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１トリプルネガティブ乳癌異種移植片モデルにおいて、上記の方法またはそのマイナー変化を使用して、ＭＭ−１２１とパクリタキセルの複合を生体内で調査した。マウスを準最適用量のＭＭ−１２１、パクリタキセル、ＭＭ−１２１およびパクリタキセルの複合、または媒体対照で治療する（図３）。ＭＭ−１２１およびパクリタキセルはいずれも、それぞれ生体内で腫瘍成長を阻害するが、ＭＭ−１２１およびパクリタキセルの複合療法を受けるマウスは、個別の治療のそれぞれから得られたものと比較して、腫瘍成長阻害の向上を呈した。腫瘍成長阻害の向上は、治療的相乗効果を呈し、複合の単剤それぞれから得られる向上と比較して、少なくともほぼ付加的であった。

【0106】

表１は、図３を生成するために使用されたデータを示す。表２は、初期腫瘍体積に正規化された、図３に示される同一実験から得たデータを使用して、腫瘍体積の平均％変化を示す。

【0107】

（表１）：図３を生成するために使用されたデータ−平均腫瘍体積（ｍｍ^３）

【0108】

実施例５：生体内の標的および化学療法とのＭＭ−１２１複合
方法：
バルブ／ｃヌードマウス（雌、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂからの４〜５週齢）の乳房体に１０ｘ１０６個の細胞を同所移植する。腫瘍のサイズを平均１５０ｍｍ^３に到達させた後、同様の腫瘍サイズ分布を有するマウスを含む、８匹のマウスの９群にランダム化する。各群のマウスを、１）ＭＭ−１２１（３００μｇ／マウス、腹腔内、Ｑ３Ｄ）、２）媒体対照（ＰＢＳ、腹腔内）、３）パクリタキセル（１０ｍｇ／ｋｇ ＬＣ Ｌａｂｓ）、４）エルロチニブ（５０ｍｇ／ｋｇ ＰＯ ５ＸＱＤ）、５）セツキシマブ（２ｍｇ／ｋｇ Ｑ３Ｄ）、６）エルロチニブ（５０ｍｇ／ｋｇ）およびＭＭ−１２１（３００μｇ／マウス）との複合療法、７）セツキシマブ（２ｍｇ／ｋｇ）およびＭＭ−１２１（３００μｇ／マウス）との複合療法、８）エルロチニブ（５０ｍｇ／ｋｇ）およびＭＭ−１２１（３００μｇ／マウス）およびパクリタキセル（１０ｍｇ／ｋｇ）との複合療法、または９）セツキシマブ（２ｍｇ／ｋｇ）およびＭＭ１２１（３００μｇ／マウス）およびパクリタキセル（１０ｍｇ／ｋｇ）の投与で治療する。治療は４週間継続する。１週間に２回腫瘍を測定し、腫瘍体積は、ｐ／６ｘ長さｘ幅^２として計算する（幅は短い方の測定値である）。

【0109】

結果：他の薬剤と併用されるとき、腫瘍成長を阻害するＭＭ−１２１の有効性を試験するために、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１トリプルネガティブ乳癌異種移植片モデルにおいて、上記の方法またはそのマイナー変化を使用して、これらの複合を生体内で試験した。ＭＭ−１２１（準最適用量で複合投与される）、セツキシマブ、パクリタキセル、ＭＭ−１２１およびセツキシマブ、ならびにＭＭ−１２１とセツキシマブとパクリタキセルとのトリプル複合を用いてマウスを治療した。図４Ａに示されるように、ＭＭ−１２１およびセツキシマブの複合療法は、いずれかの薬剤を単独使用するよりも大幅に腫瘍成長を阻害し、少なくとも３９日目まで、本質的に腫瘍成長を停止させた。成長率の減少は、治療的相乗効果を示し、ある例では、単剤療法のいずれかから得られた減少率と比較して、少なくともほぼ付加的な成長の減少を表した。パクリタキセルの添加は、ＭＭ−１２１およびセツキシマブの効果を強化しなかった。次に、ＭＭ−１２１、エルロチニブ、ＭＭ−１２１、およびエルロチニブ、またはＭＭ−１２１とエルロチニブとパクリタキセルとのトリプル複合を用いてマウスを治療した。図４Ｂに示されるように、ＭＭ−１２１とエルロチニブとの複合は、いずれかの薬剤を単独で用いる治療と比較して、腫瘍成長率に対して統計的に有意な効果を有しなかった。反対に、ＭＭ−１２１、エルロチニブ、およびパクリタキセルのトリプル複合を用いる治療は、腫瘍成長率の明らかな減少をもたらし、少なくとも３９日目まで、本質的に腫瘍成長を停止させた。成長率の減少は、治療的相乗効果を示し、ある例では、単剤療法または二剤療法のいずれかから得られた減少率と比較して、少なくともほぼ付加的な成長の減少を表した。

【0110】

表３は、図４Ａおよび４Ｂを生成するために使用されたデータを示す。表４は、初期腫瘍体積に正規化された、図４Ａおよび４Ｂに示される同一実験から得たデータを使用して、腫瘍体積の平均変化％を示す。

【0111】

（表２）図４Ａおよび４Ｂを生成するために使用されたデータ−平均腫瘍体積（ｍｍ^３）

【0112】

均等物
当業者であれば、単なる日常実験を使用して、本明細書に記載される特定実施形態の多くの均等物を認識するか、または確認することができるであろう。そのような均等物は、以下の請求項によって包含されるものとする。従属請求項に開示される実施形態のあらゆる組み合わせは、本発明の範囲内であると考えられる。

【0113】

参照による組み込み
本明細書で言及される発行済み特許、特許出願、および公開のそれぞれおよびすべては、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0114】

配列一覧の要約

【図1】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]