特許 6188810 ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子の使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6188810

(24)【登録日】2017年8月10日

(45)【発行日】2017年8月30日

(54)【発明の名称】ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子の使用

(51)【国際特許分類】

   C12Q 1/68 20060101AFI20170821BHJP

   C12N 15/09 20060101ALI20170821BHJP

   G01N 33/50 20060101ALI20170821BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20170821BHJP

   G01N 33/15 20060101ALI20170821BHJP

   A61P 39/02 20060101ALN20170821BHJP

   A61K 31/145 20060101ALN20170821BHJP

【ＦＩ】

   C12Q1/68 AZNA

   C12N15/00 A

   G01N33/50 Z

   G01N33/53 M

   G01N33/15 Z

   !A61P39/02

   !A61K31/145

【請求項の数】12

【全頁数】13

(21)【出願番号】特願2015-537106(P2015-537106)

(86)(22)【出願日】2013年6月18日

(65)【公表番号】特表2016-503287(P2016-503287A)

(43)【公表日】2016年2月4日

(86)【国際出願番号】CN2013000714

(87)【国際公開番号】WO2014063433

(87)【国際公開日】20140501

【審査請求日】2016年4月22日

(31)【優先権主張番号】201210407149.2

(32)【優先日】2012年10月23日

(33)【優先権主張国】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】514151166

【氏名又は名称】シャントン プロヴィンシャル インスティテュート オブ ダーマトロジー アンド ベネレオロジー

(74)【代理人】

【識別番号】100107515

【弁理士】

【氏名又は名称】廣田 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100107733

【弁理士】

【氏名又は名称】流 良広

(74)【代理人】

【識別番号】100115347

【弁理士】

【氏名又は名称】松田 奈緒子

(72)【発明者】

【氏名】チャン・フレン

(72)【発明者】

【氏名】チェン・シュウミン

(72)【発明者】

【氏名】リウ・ホン

【審査官】 安居 拓哉

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００５−５０３１５２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００２−５３９４５０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２００５／０１００９２６（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 Lin, M., et al.，Association of HLA class I with severe acute respiratory syndrome coronavirus infection，BMC Medical Genetics，２００３年，4（9）

【文献】 Lin, L, et al.，Both HLA-B*1301 and B*1302 Exist in Asian Populations and Are Associated with Differnt Haplotypes，Human Immunology，１９９５年，43，51-56

【文献】 Li, H., et al.，HLA-B*1301 as a Biomarker for Genetic Susceptibility to Hypersensitiviity Dermatitis Induced by Trichloroethylene among Workers in China，Environmental Health Perspectives，２００７年，115(11)，1553-1556

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ１２Ｑ １／６８

Ｃ１２Ｎ １５／０９

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトにおけるダプソンに応答して生じる有害な薬物反応のリスクを検出又は評価するための、前記ヒトがＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子、又はＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーを有しているかどうかを検出するためのプライマーの使用であって、
前記検出が、ＤＮＡ特異的ハイブリダイゼーション、ＰＣＲに基づくＨＬＡ配列決定、又はＨＬＡ血清型判定のうちの少なくとも１つによって行われ、
前記ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーが、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子の存在を示すことを特徴とする使用。

【請求項2】

ダプソンに応答して生じる有害な薬物反応が、ダプソン過敏症症候群である請求項１に記載の使用。

【請求項3】

ダプソン過敏症症候群をスクリーニングするための、ヒトがＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子、又はＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーを有しているかどうかを検出するためのプライマーの使用であって、
前記検出が、ＤＮＡ特異的ハイブリダイゼーション、ＰＣＲに基づくＨＬＡ配列決定、又はＨＬＡ血清型判定のうちの少なくとも１つによって行われ、
前記ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーが、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子の存在を示すことを特徴とする使用。

【請求項4】

前記プライマーが、ＰＣＲに基づくＨＬＡ配列決定のためのＰＣＲプライマーを含む、請求項１から３のいずれかに記載の使用。

【請求項5】

前記プライマーが、配列番号１及び配列番号２に記載する配列からなるプライマー対１、及び/又は、配列番号３及び配列番号４に記載する配列からなるプライマー対２を含む、請求項１から３のいずれかに記載の使用。

【請求項6】

ヒトにおけるダプソンに応答して生じる有害な薬物反応のリスクを検出又は評価する方法であって、ヒトがＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しているかどうかを検出することを含み、前記ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有するヒトの方が、前記ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しないヒトよりもダプソンを投与した際のダプソンに応答して生じる有害な薬物反応のリスクが高く、一対の相同染色体の両方の染色体に前記ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有するヒトの方が、一対の相同染色体の片方にのみ前記ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有するヒトよりもダプソンを投与した際のダプソンに応答して生じる有害な薬物反応のリスクが高いことを特徴とする方法。

【請求項7】

ダプソンに応答して生じる有害な薬物反応が、ダプソン過敏症症候群である請求項６に記載の方法。

【請求項8】

ダプソンに応答して生じる有害な薬物反応を治療するための候補薬物の同定及びスクリーニング方法であって、
ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子、又はＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーを発現している単離細胞を、候補薬物と接触させる工程であって、前記ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーが、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子の存在を示す工程、及び、
ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子又はＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーに結合し、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子又はＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーの発現及び/又は機能を阻害する候補薬物を同定及び/又はスクリーニング工程を含み、
前記ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子又はＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーに結合し、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子又はＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーの発現及び/又は機能を阻害する候補薬物が、ダプソンに応答して生じる有害な薬物反応を治療するための候補薬物として、同定又は選択されることを特徴とする方法。

【請求項9】

ダプソン過敏症症候群を治療するための候補薬物の同定及びスクリーニング方法であって、
ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子、又はＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーを発現している単離細胞を、候補薬物と接触させる工程であって、前記ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーが、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子の存在を示す工程、及び、
ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子又はＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーに結合し、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子又はＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーの発現及び/又は機能を阻害する候補薬物を同定及び/又はスクリーニング工程を含み、
前記ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子又はＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーに結合し、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子又はＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーの発現及び/又は機能を阻害する候補薬物が、ダプソン過敏症症候群を治療するための候補薬物として、同定又は選択されることを特徴とする方法。

【請求項10】

プライマーが、前記単離細胞におけるＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子又はＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーの検出のために使用される請求項６から９のいずれかに記載の方法。

【請求項11】

前記プライマーが、ＰＣＲに基づくＨＬＡ配列決定のためのＰＣＲプライマーを含む、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記プライマーが、配列番号１及び配列番号２に記載する配列からなるプライマー対１、及び/又は、配列番号３及び配列番号４に記載する配列からなるプライマー対２を含む、請求項１０から１１のいずれかに記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子の使用、具体的には、ダプソン症候群のリスクの遺伝子マーカーとしてのＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

ＭＨＣ（主要組織適合遺伝子複合体）は、移植片拒絶に関する遺伝子複合体である。ヒトＭＨＣは、ＨＬＡ（ヒト白血球Ａ系）と呼ばれる。多形が多く存在することが、ＨＬＡ遺伝子系の非常に重要な特徴である。ヒト集団では、ＨＬＡ複合体の多くの遺伝子座にＤＮＡ配列の様々な変異体が存在し、これら変異体は、対立遺伝子と呼ばれる。ＨＬＡ対立遺伝子系は、６番染色体上に位置する。ヒトは、ランダムに交配するヘテロ接合型集団であるので、各個体について２つのＨＬＡ対立遺伝子が完全に同じである可能性は非常に低い。このことから、ＨＬＡがヒトの体内において最も多数の多形を有する系となるだけではなく、各個体におけるＨＬＥ対立遺伝子及びその産物は、この個体が保有する独自性の生物学的「身分証明書」、即ち、個体性のマーカーとなる。ＨＬＡ系の多形により、集団の継続が保証され且つその安定性が維持されるように、様々な病原体に対する集団の好適な免疫反応が確保される。多くのＨＬＡ分子は、様々な集団における薬物反応に関連していることが見出されている。例えば、中国人集団及びタイ人集団におけるＨＬＡ−Ｂ＊１５０２対立遺伝子、又は白人集団及び日本人集団におけるＨＬＡ−Ａ＊３１０１対立遺伝子は、カルバマゼピンによって生じる薬物過敏性反応に関連しており、白人集団におけるＨＬＡ−Ｂ＊５７０１対立遺伝子は、アバカビルによって生じる薬物反応に関連しており、中国人集団におけるＨＬＡ−Ｂ＊５８０１は、アロプリノールによって生じる薬物反応に関連している。ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子に関連する薬物反応は現在まで見出されていないが、この遺伝子座がトリクロロエチレン（工業溶剤）によって生じるアレルギー性皮膚炎に関連していることは既に報告されている（非特許文献１）。

【0003】

１９０８年に合成されたダプソン（４，４’−ジアミノジフェニルスルホン、ＤＤＳ）は、抗感染剤及び抗炎症剤である。この薬物は、単独で又は他の薬物と組み合わせて、感染性疾患（例えば、ハンセン病、マラリア、放線菌感染によって誘発される疾患、及びＨＩＶ感染に起因するニューモシスティスカリニ肺炎）の治療、又は好中球若しくは好酸球の異常浸潤を特徴とする慢性炎症性疾患（例えば、自己免疫性水疱疾患、持久性隆起性紅斑、膿疱性乾癬、壊疽性膿皮症、ざ瘡）の治療において広く用いることができる。更に、この薬物は、関節リウマチを治療すると同時に、急性虚血性脳卒中患者の神経をある程度保護する機能を更に有する場合がある。

【0004】

これまでの疫学的研究により、ＤＤＳ治療を受けた患者のうちの約０．５％〜約３％が薬物過敏症症候群に罹患している場合があり、死亡率は約１１％〜約１３％であることが示されている。１９４９年には早くもＬｏｗｅがこの現象に気付いており、この疾患は、１９５１年に正式に「ダプソン過敏症症候群（ＤＨＳ）」と命名された。薬物に対する個体の重篤な異種反応であるＤＨＳは、ＤＤＳ治療の４週間〜６週間後に生じることが多く、高熱、発疹、及び内臓障害（通常、肝臓及び血液系の障害）、更には重篤な状態の臓器不全を含む臨床症状を伴う。ハンセン病の併用化学療法及びＨＩＶ感染に起因するニューモシスティスカリニ肺炎の予防的化学療法においてＤＤＳが世界中で使用されているので、ＤＨＳの発症率は劇的に増加している。刊行された疫学論文についての最近のシステマティックレビューには、ＤＨＳの有病率は約１．４％であると要約されている。しかし、ＤＨＳのリスクを予測するために利用可能な信頼性の高い検出方法は未だ存在しない。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0005】

【非特許文献1】Ｌｉ Ｈ，Ｄａｉ Ｙ，Ｈｕａｎｇ Ｈ，ｅｔ ａｌ． ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１ ａｓ ａ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｅｔｈｙｌｅｎｅ ａｍｏｎｇ ｗｏｒｋｅｒｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ．Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｈｅａｌｔｈ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ２００７；１１５：１５５３−６

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明が解決しようとする技術的課題は、ダプソン症候群のリスクの遺伝子マーカーとしてのＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子の新規使用を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明によって提供される新規使用は、以下のうちの少なくとも１つである。
１）ヒトにおけるダプソンに応答して生じる有害な薬物反応のリスクを検出又は評価する製品の調製における、ヒトがＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しているかどうかを検出するための物質の使用；
２）ヒトにおけるダプソン過敏症症候群のリスクを検出又は評価する製品の調製における、ヒトがＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しているかどうかを検出するための物質の使用；
３）ダプソン過敏症症候群をスクリーニングする製品の調製における、ヒトがＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しているかどうかを検出するための物質の使用；
４）ヒトにおけるダプソンに応答して生じる有害な薬物反応のリスクを検出又は評価する方法であって、ヒトがＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しているかどうかを検出することを含み、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有するヒトの方が、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しないヒトよりもダプソンを用いた際の有害な薬物反応のリスクが高く、一対の相同染色体の両方の染色体にＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有するヒトの方が、一対の相同染色体の片方にのみＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有するヒトよりもダプソンを用いた際の有害な薬物反応のリスクが高い方法；
５）ヒトにおけるダプソン過敏症候群を発症するリスクを検出又は評価する方法であって、ヒトがＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しているかどうかを検出することを含み、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有するヒトの方が、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しないヒトよりもダプソンを用いた際のダプソン過敏症候群のリスクが高く、一対の相同染色体の両方の染色体にＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有するヒトの方が、一対の相同染色体の片方にのみＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有するヒトよりもダプソンを用いた際のダプソン過敏症候群のリスクが高い方法；
６）ダプソンに応答して生じる有害な薬物反応を治療するために開発された方法であって、ターゲットとしてＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を用いる検出方法を用いて候補薬物を同定及び／又はスクリーニングすることを含む方法；
７）ダプソン過敏症症候群を治療するために開発された方法であって、ターゲットとしてＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を用いる検出方法を用いて候補薬物を同定及び／又はスクリーニングすることを含む方法；
８）ヒトにおけるダプソンに応答して生じる有害な薬物反応を発現するリスクを検出又は評価する製品であって、ヒトがＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しているかどうかを検出するための物質を含む製品。

【0008】

上記１）、２）、３）、及び８）においてヒトがＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しているかどうかを検出するための物質は、対立遺伝子の存在を検出するための当技術分野で公知である方法のいずれかにおいて使用されている試薬、キット、及び／又は装置であってよい。例えば、以下の方法のうちの少なくとも１つによってＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子の存在を判定するために使用される試薬、キット、及び／又は装置である：ＤＮＡ特異的ハイブリダイゼーション、ＰＣＲに基づくＨＬＡ配列決定、及びＨＬＡ血清型判定。ここで、ＰＣＲに基づくＨＬＡ配列決定において使用するＰＣＲプライマーは、具体的には、プライマー対１及び／又はプライマー対２であってよい。プライマー対１は、配列番号１及び配列番号２に記載する一本鎖ＤＮＡからなり、プライマー対２は、配列番号３及び配列番号４に記載する一本鎖ＤＮＡからなる。本発明の１つの実施例では、上記１）、２）、３）、及び８）におけるヒトがＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しているかどうかを検出するための物質は、プライマー対１及び／又はプライマー対２であるか、或いは前記プライマー対１及び／又はプライマー対２を含むキットである。

【0009】

更に、上記１）、２）、３）、及び８）におけるヒトがＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しているかどうかを検出するための物質は、その存在がＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子の存在を示すＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーをヒトが有しているかどうかを検出するための方法において用いられている試薬、キット、及び／又は装置であってもよい。更に、上記４）及び５）におけるヒトがＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しているかどうかの検出は、その存在がＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子の存在を示すＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子と等価な遺伝子マーカーを検出することによって行ってもよい。等価な遺伝子マーカーは、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子に連結している遺伝子マーカーである。等価な遺伝子マーカーは、一塩基多形（ＳＮＰと略される）、単純反復配列（ＳＳＲ）マーカー等であってよく、例えば、ｒｓ１１４７４０５４５、ｒｓ１１６１１１３０１、ｒｓ１１５９０１４７３、ｒｓ１１５０８７９５４、ｒｓ１１５６７５６００、ｒｓ１８７２８０５２４、ｒｓ１１４２４２７０７、ｒｓ１１７９０１６８６、ｒｓ１４４２９５４６８、ｒｓ１１６６７０００２、ｒｓ１１４０２５７８１、ｒｓ１５０５７８６０１、ｒｓ１８４６６３５３８、ｒｓ１４７４３６７８９、ｒｓ１１６７２７４７４、ｒｓ１８１１３４８１４、ｒｓ１１４７３８０３７、ｒｓ１１６５５９９５５、ｒｓ１４００１９４４２、ｒｓ１１５０９９１６０、ｒｓ１１４２６９１１８、ｒｓ１１６７０２３７６、ｒｓ１１４０４４１８９、ｒｓ７５０３１０１１、ｒｓ１１４７０３５７３、ｒｓ１１６９９０８６５、ｒｓ１１６３５２５２８、ｒｓ１１５４６７８２１、ｒｓ１１４５５７５４３、ｒｓ１１５１６９４６９、ｒｓ１１４１７４１６０、ｒｓ１４８９３３０００、ｒｓ１３９２３２７４９、ｒｓ１９１７８１６７８、ｒｓ１１６２９９０４５、ｒｓ１１５９１９６５８、ｒｓ１８４８０４６８４、ｒｓ１１５３１４０１０、ｒｓ１１４５６０７４０、ｒｓ１１６６６４４４９、ｒｓ１１６５９０２３６、ｒｓ１１４０４２８０８、ｒｓ１１５２８２１６２、ｒｓ１９１３５１７４５、ｒｓ１４２４４９６６８、ｒｓ１３８４７６０１２、ｒｓ１１６７９１９１８、ｒｓ１１４６１９８７９、ｒｓ１４５５７４７０１、ｒｓ１８６０１３２５１、ｒｓ１１６３９４７５６、ｒｓ１４４９５７７７３、ｒｓ１４９８６８９２３、ｒｓ１１７０１５３２７、ｒｓ１４６９３８５６４、ｒｓ１４４５１９２１１、ｒｓ１１６８００６０９、ｒｓ１１５４３８０４７、ｒｓ１１６２３８７５６、ｒｓ１１５５７９８９５、ｒｓ１１４９３４５５７、ｒｓ１１５６４４１１６、ｒｓ１８４２７８６１４、ｒｓ１１５５１２３９７、ｒｓ１１７６７４２６７、ｒｓ１１７３５７７６５、ｒｓ１８７２８５４２４、ｒｓ１１５９３８２１７、ｒｓ１４４１１２５５８、ｒｓ１４３３１０３８６、ｒｓ１１７９４８２３３、ｒｓ１１６１４３５９７、ｒｓ１１５６１８３９３、ｒｓ１１８０６９７１１、ｒｓ１１４５５８９７９、ｒｓ１１４４３０３９１、ｒｓ１１６５４５２２７、ｒｓ１１４８７１１２０、ｒｓ１８６７７６４５６、ｒｓ１１５１４４１９４、ｒｓ１１４４６６８８８、ｒｓ１１６０５０３６４、ｒｓ１１７５５４５３５、ｒｓ１３８８９０４１９、ｒｓ１１７４１６４１２、ｒｓ１８７０５３２８６、ｒｓ１３８５８５２０２、ｒｓ１１４７９０４６０、ｒｓ１８２３０７９８１、ｒｓ１１６７９９５９４、ｒｓ１１７１７７８３５、ｒｓ１１５４９３４２８、ｒｓ１４７４２０５２９、ｒｓ１４３５１０９１９、ｒｓ１１５２７１４６５、ｒｓ１４８８１４２００、ｒｓ１４６６６７６０４、ｒｓ１４５８４８７６６、ｒｓ１１６１８２８８８、ｒｓ１３９７５３００５、ｒｓ１５１０５５５９７、ｒｓ１４２８７６１５４、ｒｓ１１４５９６５６０、ｒｓ１４７１８７７３９、ｒｓ１１７８８２７５９、ｒｓ１５０３１２１４１、ｒｓ１３８５２５７０３、ｒｓ１５０００９１１７、ｒｓ１１４９５５２６９、ｒｓ１４１６９０２９０、ｒｓ１１４６７３４５９、ｒｓ１１５４６１０７７、ｒｓ１９０７１５６５２、ｒｓ１１６２７００７８、ｒｓ１８９４０５０６４、ｒｓ１１５８４０４２２、ｒｓ１４１６２９２６９、ｒｓ１４５１９４７２４、ｒｓ１４９９５６１２１、ｒｓ１３９２２０７４３、ｒｓ１９３１２７７０２、ｒｓ１１６３０９５５４、ｒｓ１１４３４２０７６、ｒｓ１３９９３００００、ｒｓ１４５９５９０７４、ｒｓ１４２４５９４２５、ｒｓ１８２６３４３１４、ｒｓ１３７８８２１９８、ｒｓ１１５７０９２９９、ｒｓ１４９６３６７１５、ｒｓ１５００６４３１９、ｒｓ１９０２２０７２６、ｒｓ１１４４８６４３６、ｒｓ１３９２６１７０４、ｒｓ１４２０３５１５４、ｒｓ１４６５０９５１１、ｒｓ１８８２６７７９２、ｒｓ１８３２９１４６９、ｒｓ１１４４９５９８７、ｒｓ１１６６９０４６３、ｒｓ１４２７１６６１２、ｒｓ１１５３２６３４９、ｒｓ１１４２１５１７２、ｒｓ１１５３０５１１１、ｒｓ１５０５２８３８０、ｒｓ１１４８４２１６４、ｒｓ１１５７６６０５７、ｒｓ１１６７６６３５９、ｒｓ１１４４６３１１４、ｒｓ１５０１０５１９５、ｒｓ１４２４４７０８１、ｒｓ１１４２１２９０６、ｒｓ１１４４７５４３４、ｒｓ１１５８２７７３９、ｒｓ１８９１１１１１５、ｒｓ１１５６８１０００、ｒｓ１１６２５５５９３、ｒｓ１１５１３０１４０、ｒｓ１１６６１９３０２、ｒｓ１１５６６０２７４、ｒｓ１１５０６８４９２、ｒｓ１１５６８３４９４、ｒｓ１１６１９３６２０、ｒｓ１１４２３３８３１、ｒｓ１１５６５５５４６、ｒｓ１１６８１２５５５、ｒｓ１１５５８６０３８、ｒｓ１１５９６７８９５、ｒｓ１１５８３７２９４、ｒｓ１８５８４８３４２、ｒｓ１１７６５２７２９、ｒｓ１９２１１８７５６、ｒｓ１８９２５３５６９、ｒｓ１１６４２９４２０、ｒｓ１１５２１２２４９、ｒｓ１１６５９９５６８、ｒｓ１１５５８８１４１、ｒｓ１１７１６８９９７、ｒｓ１１６２０８２６１、ｒｓ１１５３７２２４４、ｒｓ１１８００５８４９、ｒｓ１１７２４６８３６、ｒｓ１１７２００５７７、ｒｓ１１４６１８１６２、ｒｓ１１１８４１０９８、ｒｓ１１４３７０５４８、ｒｓ１１５７８８１８７、ｒｓ１３７８８４１９６、ｒｓ１１４２５１９８３、ｒｓ１１５６９０６０５、ｒｓ１１６８１５３９２、ｒｓ１１４９９９９８０、ｒｓ１１６２３４３６８、ｒｓ１１７６０４４５２、ｒｓ１１５６４６３５８である。

【0010】

実際には、Ｒｏｃｈｅ ４５４ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓによって開発されたＧｅｎｏｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｒ ＦＬＸシステム及びＰＣＲ−ＳＳＯＰ−Ｌｕｍｉｎｅｘ（主装置は、ＵＳ Ｌｕｍｉｎｅｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製のＬｕｍｉｎｅｘ１００、２００、３Ｄ ｆｌｏｗ Ｌｕｍｉｎｅｘｓである）等の第二世代シーケンサ、ＰＣＲ−ＳＳＰ、Ｓａｎｇｅｒ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ（ＡＢＩ社製の第一世代シーケンサ、３１３０、３１３０ＸＬ、３７３０、３７３０ＸＬ）等を用いて、ヒトがＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しているかどうかを検出することができる。

【0011】

上記１）、２）、３）、及び８）における製品は、試薬又はキット、更には試薬又はキットと装置との複合製品であってよい。

【0012】

上記４）及び５）におけるヒトがＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しているかどうかの検出では、ＤＮＡ特異的ハイブリダイゼーション、ＰＣＲに基づくＨＬＡ配列決定、及び／又はＨＬＡ血清型判定等、対立遺伝子の存在を検出するための当技術分野で公知である方法のいずれを使用してもよい。

【0013】

上記使用では、検出しようとしているヒトの末梢血から調製されるＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質、細胞、又は血清を用いて、ヒトがＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しているかどうかを検出することができる。

【0014】

上記６）及び７）では、具体的には、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を発現している単離細胞を試験する薬物と接触させ、次いで、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子の発現及び／又は機能を阻害する傾向のあるＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子に結合している薬物を候補薬物として用いて、ダプソン過敏症症候群等ダプソンに応答して生じる有害な薬物反応を治療する効果について更に試験してよい。

【0015】

前記薬物反応は、意図しない不所望の薬物作用であり、かかる有害な反応は、疾患を予防、診断、又は治療するための用量で生じる。ある患者が有害な薬物反応を発現する可能性が一般集団よりも高い場合、この患者は、有害な薬物反応を発現するリスクがある。

【0016】

本願の１つの実施例では、ＤＨＳ患者７６人及び非ＤＨＳ臨床対照１，０３４人からなる集団に対する研究の結果は、１つのＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有する（一対の相同染色体の片方にのみＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有する）ヒトは、ＤＤＳの投与後、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しないヒトの３７．５３倍ＤＨＳのリスクが高く（信頼水準０．９５；信頼区間（１８．８０，７４．９４））、２つのＨＬＡ−Ｂ＊１３０１リスク対立遺伝子を有する（一対の相同染色体が両方ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有する）ヒトは、ＤＤＳの投与後、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しないヒトの１１０．８倍ＤＨＳのリスクが高い（信頼水準０．９５；信頼区間（２５．８５，４７４．５４）ことを示す。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】図１は、ＨＬＡ領域の相関シグナルを示す。Ａは、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１（矢印によって示す）が、ＭＨＣ領域において最も著しく相関している対立遺伝子であることを示す。組み換え率は、薄青色のピーク図で表される。導入したときのＳＮＰ、対立遺伝子、及びアミノ酸を円形で示し、分類後のＳＮＰを菱形で示す。ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１遺伝子座とこれらＳＮＰ、対立遺伝子、及びアミノ酸との相関度を異なる色で表す。赤色：相関係数＞０．８；オレンジ色：相関係数＝０．５〜０．８；黄色：相関係数＝０．２〜０．５；灰色：相関係数＜０．２；及び白色：相関係数＝０。Ｂは、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１遺伝子座を制御することによる状態解析後のＭＨＣ領域における相関シグナルチャートを示す。残留相関シグナルは観察されず、これは、この領域に個々のシグナルＨＬＡ−Ｂ＊１３０１が１つしか存在しないことを示す。

【図2】図２は、予測マーカーとしてＨＬＡ−Ｂ＊１３０１を用いてＤＨＳに対して実施したリスク予測の受信者動作特性曲線である。

【発明を実施するための形態】

【0018】

以下の実施例は、本発明を限定することを意図するものではなく、本発明をより深く理解することができるように提供するものである。以下の実施例で用いられる全ての実験方法は、特に指示しない限り従来の方法である。

【0019】

以下の実施例で用いられる全ての材料、試薬等は、特に指示しない限り、市販されているものである。

【実施例】

【0020】

実施例１． ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子は、ダプソン過敏症症候群のリスクの遺伝子マーカーである
Ｉ． サンプル
サンプルは、症例サンプル、臨床対照サンプル、及び健常対照サンプルを含むヒトから採取した末梢血であった。

【0021】

１． 症例サンプル
７６人の中国人ＤＨＳ患者（探索的研究３９人、検証的研究３７人）が研究に参加した。これら７６人の患者には、ハンセン病に対する併用化学療法を受けたときにＤＤＳが投与されていた。患者の男性対女性比は、１．６：１であり、平均年齢は３８歳であった。ＤＤＳの最初の投与からＤＨＳ臨床症状の発生まで、２週間〜８週間（平均３２．７９日間）かかった。最も一般的な皮膚病変は、斑丘疹（５７．７％）、続発性剥脱性皮膚炎（３８．５％）、猩紅熱様紅斑（７．７％）、及び口内びらん（１．３％）であった。系に関連する症状としては、発熱（８３．１％）、肝機能異常（７４．４％）、及びリンパ腺肥大（３４．６％）が含まれていた。臨床検査結果は、血清中の肝酵素レベルが異常に上昇していたことを示した。５８人の患者でアラニントランスアミナーゼレベルが著しく上昇しており、４９人の患者でアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼレベルが著しく上昇しており、３７人の患者でヘモグロビンレベルが低下しており、３５人の患者で血清ビリルビンレベルが異常に増加していた。ＤＨＳの診断は、患者の病歴、臨床所見、及び臨床検査に基づいて行った。

【0022】

２． 臨床対照サンプル
この研究の臨床対照サンプルには、非ＤＨＳ患者１，０３４人（探索段階８３３人、検証段階２０１人）が含まれていた。これら１，０３４人の非ＤＨＳ患者は、各々、ハンセン病に罹患しており、ハンセン病の治療のために併用化学療法レジメンの一部としてＤＤＳを投与されていた。これら臨床対照サンプルのいずれにおいても、ＤＨＳの臨床症状又は異常な生物学的指標はみられなかった。

【0023】

これら臨床対照サンプル及び症例サンプルは、地理学的にも民族学的にも概ね一致していた。

【0024】

３． 健常対照サンプル
この研究の健常対照サンプルには、中国人集団におけるＨＬＡ−Ｂ＊１３０１の頻度を評価するために１，９４４人の健常対照が含まれており、９５１人は広東省、５２３人は山東省、４７０人は雲南省出身であった。

【0025】

以下の４つの診断基準のうちの２以上又は３番目のルールに基づいてハンセン病患者の診断を確定した：１．感覚障害及び無発汗、又は麻痺領域を伴う皮膚病変；２．対応する機能障害を伴う太い神経幹として表される末梢神経障害；３．皮膚病変の組織切片又は組織液塗抹においてらい菌が検出された；４．病理学的に明らかな特徴的変化。

【0026】

健常対照の診断基準：ハンセン病及び他の感染性疾患の病歴がなく且つ他の自己免疫疾患の病歴及び家族歴もない。

【0027】

ＩＩ． 方法
１． 探索段階
Ｉｌｌｕｍｉｎａ−６６０ｃｈｉｐ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｈｕｍａｎ ６６０Ｗ−Ｑｕａｄ ｂｅａｄｃｈｉｐ）を用いて、症例サンプルのＤＨＳ患者３９人及び臨床対照サンプルの非ＤＨＳ患者８３３人の遺伝子型を決定した。ＤＨＳ患者３９人及び非ＤＨＳ患者８３３人で見つかった合計４３０，２７６個のＳＮＰを、ゲノムワイドスキャンの探索段階におけるデータ解析で用いた。

【0028】

症例サンプルのＤＨＳ患者３９人及び臨床対照サンプルの非ＤＨＳ患者８３３人の各個体に対して、アジア人のＨＡＰＭＡＰ（国際ＨａｐＭａｐ計画）のレファレンス配列（北京出身の漢民族、東京出身の中国人、及び日本人を含む合計１７８人の個体）を用いてＨＬＡ対立遺伝子（二対立遺伝子及び四対立遺伝子）及びアミノ酸の導入解析を実施した。合計６６個の典型的なＨＬＡの二対立遺伝子、１１８個の典型的なＨＬＡの四対立遺伝子、４９７個の多形アミノ酸位置、及び４，２０６個のＳＮＰを導入し、これを、分類から得られた４，６３６個のＳＮＰと共に相関解析に付した。相関解析の結果（図１のＡ）に示されている通り、６番染色体のＭＨＣ領域に位置する一塩基多形部位（物理的距離：２６，０００，０００〜３４，０００，０００）（ＮＣＢＩ ｂｕｌｉｄ ３７）は、ダプソンの臨床使用の際に生じたダプソン過敏症症候群と相関していた。

【0029】

ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１及びＨＬＡ−Ｃ＊０３０４遺伝子座における正相関シグナルを定義するために、この領域に対してロジスティック回帰解析を行った。これら２つの遺伝子座間の相関係数は、０．７４であった。更に、ＨＬＡ−Ｂ＊１３二対立遺伝子及び４９７個の多形アミノ酸位置に対して実施した相関解析では、これらの間に相関シグナルは存在しているが、各シグナルは、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１よりも弱いことが示された。ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１を制御したとき、ＭＨＣ領域において他の独立シグナルはみられなかった（図１のＢ）。要するに、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１がＤＨＳリスクの主対立遺伝子であることが示された。ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１（Ｐ＝２．０４×１０^−１６、ＯＲ＝２１．６７、信頼水準０．９５、信頼区間（１０．４１，４５．１２））。

【0030】

２． 検証段階
ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子の相関を更に検証するために、４５４シークエンシングプラットフォーム（Ｒｏｃｈｅ ４５４ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓによって開発されたＧｅｎｏｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｒ ＦＬＸシステム）を用いて、症例サンプルの別のＤＨＳ患者３７人及び臨床対照サンプルの別の非ＤＨＳ患者２０１人（合計１，０８９人の検証対照から無作為に選択した）に対してＨＬＡ分類を実施した。ここでは、各々プライマー対１及びプライマー対２を用いて、サンプルの末梢血から単離したゲノムＤＮＡに対してＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子のＰＣＲ増幅を実施した。プライマー対１は、配列番号１及び配列番号２に記載する一本鎖ＤＮＡからなり、プライマー対２は、配列番号３及び配列番号４に記載する一本鎖ＤＮＡからなる。

【0031】

ＨＬＡ Ｃａｌｌｅｒソフトウェアを用いてＧＡＴＫでＨＬＡ対立遺伝子の再検査を実施した。次いで、ロジスティック回帰解析と共に相関解析を実施した。結果は、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１（ＯＲ＝２３．５４、信頼水準０．９５、信頼区間（８．７１，６３．６２）；Ｐ＝４．７４×１０^−１０）を示した。

【0032】

３． 組み合わせ分析
探索段階のデータと検証段階のデータとを組み合わせて解析したところ、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子は、ＤＨＳと強く相関していることが見出された（ＯＲ＝２２．３２、信頼水準０．９５、信頼区間（１２．４０，４０．２８）；Ｐ＝６．３２×１０^−２５）。

【0033】

４５４シークエンシングプラットフォーム（Ｒｏｃｈｅ ４５４ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓによって開発されたＧｅｎｏｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｒ ＦＬＸシステム）を用いて、症例サンプルのＤＨＳ患者７６人及び臨床対照サンプルの非ＤＨＳ患者１，０３４人に対してＨＬＡ分類を実施した。分類結果を表１に示す。

【表1】

表１：ＨＬＡ分類結果
注記：第１列に記載されているＮは、サンプルの合計数を意味し、第２列及び第３列における括弧外の数値は、サンプル数を表し、括弧内の百分率は、サンプルの合計数に対する括弧外の数値の割合を表す。

【0034】

表１の結果から分かる通り、ＤＨＳ患者７６人のうち、真陽性サンプル（ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１保有者）数は６６であり、偽陰性サンプル（ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１非保有者）数は１０であった。非ＤＨＳ患者１，０３４人のうち、真陰性サンプル（ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１非保有者）数は８８６であり、偽陽性サンプルＨＬＡ−Ｂ＊１３０１保有者）数は１４８であった。予測マーカーとしてＨＬＡ−Ｂ＊１３０１を用いてＤＨＳに対するリスク予測を実施したところ、感度は８６．８４％であり、特異度は８５．６９％であった（図２）。ここで、感度＝真陽性サンプル数／（真陽性サンプル数＋偽陰性サンプル数）×１００％であり、特異度＝真陰性サンプル数／（真陰性サンプル数＋偽陽性サンプル数）×１００％である。ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１ヘテロ保有者のＤＨＳのリスクは、ＯＲ_ｈｅｔ＝６１×８８６／１０×１４４＝３７．５３（信頼水準０．９５；信頼区間（１８．８０，７４．９４））であり；ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１ホモ保有者のＤＨＳのリスクは、ＯＲ_ｈｏｍ＝５×８８６／１０×４＝１１０．７５（信頼水準０．９５；信頼区間（２５．８５，４７４．５４））であった。上記から分かる通り、ＤＨＳ患者の８６．８％（６６／７６）がＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を保有していたが、非ＤＨＳ患者では僅か１４．３％（１４８／１，０３４）であった。結果によって示されている通り、個体がＨＬＡ−Ｂ＊１３０１リスク対立遺伝子を１つ有している場合（ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１ヘテロ保有者）、この個体は、ＤＤＳ投与後、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しない個体の３７．５３倍ＤＨＳのリスクが高く（信頼水準０．９５；信頼区間（１８．８，７４．９））、個体がＨＬＡ−Ｂ＊１３０１リスク対立遺伝子を２つ有している場合（ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１ホモ保有者）、この個体は、ＤＤＳの投与後、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子を有しない個体の１１０．８倍ＤＨＳのリスクが高い（信頼水準０．９５；信頼区間（２５．９，４７４．５）。

【0035】

アジア人集団に関する最近の概説では、ＤＨＳの有病率は１．４％であると推測されている（Ｌｏｒｅｎｚ，Ｗｏｚｅｌ ｅｔ ａｌ．２０１２）。この有病率に基づいて計算すると、陽性予測値は７．９％であり、陰性予測値は９９．８％であり、陽性尤度比は６．０７であり、陰性尤度比は０．１５３６であった。陽性尤度比６．０７によれば、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１を有する個体におけるＤＨＳのリスクは７．９％に上昇し、陰性尤度比０．１５３６によれば、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１を有する個体におけるＤＨＡの発症率は、１．４％から０．２％に低下するであろう。ＤＤＳ治療を必要としている患者に対してＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子のスクリーニングを行うことにより、薬物を投与することなしに陽性保有者におけるＤＨＳの発症率を１．４％から０．２％に大きく低下させられることが示された。

【0036】

（山東省、広東省、及び雲南省出身の）健常対照サンプルの健常対照１，９４４人から得られたデータによれば、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子の頻度は、山東省サンプルにおいて３．３％であり、雲南省サンプルにおいて７．１％であり、広東省サンプルにおいて８．２％であった。これは、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子の中国北部集団における頻度が２％〜５％であり、中国南部集団における頻度が５％〜２０％であるという対立遺伝子データベースにおける報告と一致していた。中国人集団及び幾つかのアジアの国々におけるこの遺伝子座の相対有病率を鑑みて、ＤＤＳ投与前のＨＬＡ−Ｂ＊１３０１のスクリーニング及びリスク評価は、非常に有益であろう。

【産業上の利用可能性】

【0037】

実際に、ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１対立遺伝子の有無を検出して、ＤＤＳ治療を必要としている患者がＤＨＳに罹患するかどうかを予測することができる。リスク予測は、検出結果に基づいて行うことができる。ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１を有する個体には、薬物過敏反応を導く可能性があるＤＤＳ治療の代わりに他の薬物で治療することが提案される。ＨＬＡ−Ｂ＊１３０１を有しない個体は、ＤＤＳ治療によって薬物過敏反応が生じる可能性が非常に低いので、ＤＤＳを用いても安全である。

【図1】

【図2】

【配列表】

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