特許 6189980 ＩＬ−１結合タンパク質

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6189980

(24)【登録日】2017年8月10日

(45)【発行日】2017年8月30日

(54)【発明の名称】ＩＬ−１結合タンパク質

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/09 20060101AFI20170821BHJP

   C07K 16/24 20060101ALI20170821BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20170821BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20170821BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20170821BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20170821BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20170821BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20170821BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20170821BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20170821BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20170821BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20170821BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20170821BHJP

【ＦＩ】

   C12N15/00 AZNA

   C07K16/24

   C07K16/46

   C12N1/21

   C12N1/15

   C12N1/19

   C12N5/10

   C12P21/08

   A61K39/395 U

   A61K45/00

   A61P37/02

   A61P29/00 101

   A61P19/02

   A61K39/395 N

【請求項の数】13

【全頁数】192

(21)【出願番号】特願2016-16871(P2016-16871)

(22)【出願日】2016年2月1日

(62)【分割の表示】特願2014-85634(P2014-85634)の分割

【原出願日】2011年5月13日

(65)【公開番号】特開2016-136945(P2016-136945A)

(43)【公開日】2016年8月4日

【審査請求日】2016年2月26日

(31)【優先権主張番号】61/334,917

(32)【優先日】2010年5月14日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/425,701

(32)【優先日】2010年12月21日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】512212195

【氏名又は名称】アッヴィ・インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】特許業務法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】チュヨンビン・ウー

(72)【発明者】

【氏名】ドミニク・ジェイ・アンブロシ

(72)【発明者】

【氏名】チュン−ミン・シエ

(72)【発明者】

【氏名】タリク・ガユール

【審査官】 布川 莉奈

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００９−５０４１９１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００９／１４９１８９（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ１２Ｎ １５／００−１５／９０

Ｃ０７Ｋ １／００−１９／００

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

第１および第２のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
第１のポリペプチド鎖が、第１のＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ［式中、
ＶＤ１は、第１の重鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は、第２の重鎖可変ドメインであり；
Ｃは、重鎖定常ドメインであり；
Ｘ１は、ＣＨ１ではないリンカーであり；
Ｘ２は、Ｆｃ領域であり；
ｎは独立に、０または１である］
を含み、
第２のポリペプチド鎖が、第２のＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ［式中、
ＶＤ１は、第１の軽鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は、第２の軽鎖可変ドメインであり；
Ｃは、軽鎖定常ドメインであり；
Ｘ１は、ＣＨ１ではないリンカーであり；
Ｘ２は、Ｆｃ領域を含まず；
ｎは独立に、０または１である］
を含み、
前記の第１のポリペプチド鎖中、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２は、配列番号２１２を含み、および、前記の第１のポリペプチド鎖中Ｃ−（Ｘ２）ｎは配列番号２１４を含み；
前記の第２のポリペプチド鎖中、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２は、配列番号２１５を含み、および、前記の第２のポリペプチド鎖中Ｃ−（Ｘ２）ｎは配列番号５を含み；
結合タンパク質が、ヒトＩＬ−１βおよびヒトＩＬ−１αと結合する、前記結合タンパク質。

【請求項2】

２つの第１のポリペプチド鎖および２つの第２のポリペプチド鎖を含む、請求項１に記載の結合タンパク質。

【請求項3】

可変および定常領域の配列が、以下：
タンパク質領域 配列識別子
可変重鎖（ＶＨ） 配列番号２１２
定常重鎖（ＣＨ） 配列番号２１４
可変軽鎖（ＶＬ） 配列番号２１５
定常軽鎖（ＣＬ） 配列番号５
の通り定義される、二重可変（ｄｕａｌ−ｖａｒｉａｂｌｅ）ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ）結合タンパク質Ｅ２６．１３−ＳＳ−Ｘ３。

【請求項4】

請求項１から３のいずれか一項に記載の結合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。

【請求項5】

少なくとも１つのさらなる薬剤をさらに含む、請求項４に記載の医薬組成物。

【請求項6】

請求項１から３のいずれか一項に記載の結合タンパク質のポリペプチド鎖アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸分子。

【請求項7】

請求項６に記載の１つまたは複数の単離された核酸分子を含むベクター。

【請求項8】

請求項７に記載のベクターを含む単離宿主細胞。

【請求項9】

結合タンパク質を製造するのに十分な条件下、培養培地中で請求項８に記載の宿主細胞を培養するステップを含む、結合タンパク質を製造する方法。

【請求項10】

ヒトＩＬ−１α活性を低下させるための薬剤の製造における、請求項１から３のいずれか一項に記載の結合タンパク質の使用。

【請求項11】

ＩＬ−１活性が有害である障害を患うヒト被験体においてヒトＩＬ−１活性を低下させるための薬剤の製造における、請求項１から３のいずれか一項に記載の結合タンパク質の使用。

【請求項12】

ＩＬ−１活性が有害である障害を治療するための薬剤の製造における、請求項１から３のいずれか一項に記載の結合タンパク質の使用。

【請求項13】

前記障害が、関節リウマチ；変形性関節症；若年性慢性関節炎；化膿性関節炎；ライム関節炎；乾癬性関節炎；および反応性関節炎からなる群から選択される、請求項１１または１２のいずれか一項に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０１０年５月１４日に出願された米国仮出願第６１／３３４，９１７号および２０１０年１２月２１日に出願された米国仮出願第６１／４２５，７０１号の優先権の利益を主張し、その全内容を、参照により本明細書に組み込む。

【0002】

本発明は、ＩＬ−１結合タンパク質、具体的には、関節リウマチ、変形性関節症、乾癬、多発性硬化症およびその他の自己免疫疾患などの急性および慢性免疫疾患の予防および／または治療におけるその使用に関する。

【背景技術】

【0003】

インターロイキン−１（ＩＬ−１）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのサイトカインは、炎症プロセスのメディエーターである単球およびマクロファージなどの種々の細胞によって産生される分子である。インターロイキン−１は、発熱、プロスタグランジン合成（例えば、線維芽細胞、筋肉細胞および内皮細胞における）、Ｔ−リンパ球活性化およびインターロイキン−２産生を始めとする、幅広い生物学的効果および生理学的効果を有するサイトカインである。

【0004】

ＩＬ−１スーパーファミリーの元のメンバーは、ＩＬ−１α、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１Ｒａ、ＩＬ−１ＲＡ、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−１Ｒα）である。ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βは、感染に対する免疫防御に関与している炎症誘発性サイトカインである。ＩＬ−１Ｒαは、受容体結合について、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βと競合し、免疫活性化におけるその役割を阻止する分子である。近年、ＩＬ−１８（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏら、ＦＡＳＥＢ Ｊ．、８（１５）：１３１４−３２２５頁（１９９４年）；Ｈｕｉｓｉｎｇら、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２８（５）：３９５−４１３頁（２００４年）参照のこと）およびＩＬ−１α、ＩＬ−１βまたはＩＬ−１ＲＡに対して構造相同性を有する６種のさらなる遺伝子を始めとする、その他の分子のＩＬ−１スーパーファミリーへの追加が見られた。これらの後者の６種のメンバーは、ＩＬ１Ｆ５、ＩＬ１Ｆ６、ＩＬ１Ｆ７、ＩＬ１Ｆ８、ＩＬ１Ｆ９およびＩＬ１Ｆ１０と名づけられている。したがって、ＩＬ−１α、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１ＲＡは、それぞれ、ＩＬ−１Ｆ１、ＩＬ−１Ｆ２およびＩＬ−１Ｆ３と再度名づけられた（Ｓｉｍｓら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２２（１０）：５３６−５３７頁（２００１年）；Ｄｕｎｎら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２２（１０）：５３３−５３６頁（２００１年）参照のこと）。ＩＬ−３３またはＩＬ−１Ｆ１１と呼ばれるＩＬ−１ファミリーのさらなる推定メンバーが記載されているが、この名称は、ＨＧＮＣ遺伝子ファミリー命名法データベースでは公式には承認されていない。

【0005】

ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βは両方とも、マクロファージ、単球および樹状細胞によって産生される。それらは、感染に対する身体の炎症反応の重要な部分を形成する。これらのサイトカインは、内皮細胞上の接着因子の発現を増大させて感染部位への白血球、病原体と戦う細胞の遊出および視床下部体温調節中枢の再設定を可能にし、発熱として現れる体温の上昇につながる。したがって、ＩＬ−１は、内因性発熱物質と呼ばれる。体温の上昇は、身体の免疫系が感染と戦うのを補助する。ＩＬ−１はまた、造血発生の調節においても重要である。末梢組織におけるＩＬ−１β産生はまた、発熱を伴う痛覚過敏症（疼痛に対する感受性の増大）と関連している（Ｍｏｒｇａｎら、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．、１０２２（１−２）：９６−１００頁（２００４年））。大抵の場合、ＩＬ−１のこれらの２種の形態は、同じ細胞受容体と結合する。この受容体は、細胞内シグナルを特定のその他の受容体と大部分共有している経路によって伝達する、２つの関連しているが同一ではないサブユニットからなる。これらは、自然免疫受容体のＴｏｌｌファミリーおよびＩＬ−１８の受容体を含む。ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βはまた、発熱の誘導、徐波睡眠および好中球増加症、Ｔ−およびＢ−リンパ球活性化、繊維芽細胞増殖、特定の細胞の細胞毒性、コラゲナーゼの誘導、肝臓急性期タンパク質の合成ならびにコロニー刺激因子およびコラーゲンの産生の増大を始めとする、同様の生物学的特性を有する。

【0006】

ＩＬ−１の２種の別個の形態をコードするｃＤＮＡは、単離および発現されている；これらのｃＤＮＡは、ＩＬ−１β（Ａｕｒｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：７９０７−７９１１頁（１９８４年））およびＩＬ−１α（Ｌｏｍｅｄｉｃｏら、Ｎａｔｕｒｅ、３１２：４５８−４６２頁（１９８４年））と呼ばれる２種の異なる遺伝子産物に相当する。ＩＬ−１βは、ｍＲＮＡおよびタンパク質レベルの両方でヒト単球によって産生される主な（ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ）形態である。ヒトＩＬ−１の２つの形態は、２６％のアミノ酸相同性しか共有しない。ＩＬ−１の２つの形態は、その別個のポリペプチド配列にもかかわらず、アミノ酸相同性は、ＩＬ−１分子の別個の領域に限局されるので、構造類似性を有する（Ａｕｒｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２：１６９−１７７頁（１９８５年））。

【0007】

ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βは、前駆体ペプチドとして産生される。言い換えれば、それらは、長いタンパク質として作られ、次いで、それが、成熟タンパク質と呼ばれる、より短い、活性な分子を放出するよう処理される。例えば、成熟したＩＬ−１βは、カスパーゼ−１またはインターロイキン−１変換酵素（ＩＣＥ）と呼ばれる、カスパーゼファミリーのタンパク質の特定のメンバーによる切断後にＰｒｏ−ＩＬ−１βから放出される。ヒトＩＬ−１スーパーファミリーの各メンバーの成熟形態の３次元構造は、１２−１４のβ鎖からなり、バレル型タンパク質を生成する。

【0008】

この重要な炎症誘発性サイトカインの発見以来、過去２０年の研究においてＩＬ−１に対する種々の抗体が記載されているが、炎症反応および自己免疫障害においてＩＬ−１の活性を効率的に媒介または中和でき、試料および組織中のＩＬ−１βの検出において使用するための改善された抗体が未だ必要である。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0009】

【非特許文献1】Ｄｉｎａｒｅｌｌｏら、ＦＡＳＥＢ Ｊ．、８（１５）：１３１４−３２２５頁（１９９４年）

【非特許文献2】Ｈｕｉｓｉｎｇら、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２８（５）：３９５−４１３頁（２００４年）

【非特許文献3】Ｓｉｍｓら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２２（１０）：５３６−５３７頁（２００１年）

【非特許文献4】Ｄｕｎｎら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２２（１０）：５３３−５３６頁（２００１年）

【非特許文献5】Ｍｏｒｇａｎら、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．、１０２２（１−２）：９６−１００頁（２００４年）

【非特許文献6】Ａｕｒｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：７９０７−７９１１頁（１９８４年）

【非特許文献7】ＩＬ−１α（Ｌｏｍｅｄｉｃｏら、Ｎａｔｕｒｅ、３１２：４５８−４６２頁（１９８４年）

【非特許文献8】Ａｕｒｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２：１６９−１７７頁（１９８５年）

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0010】

（発明の要旨）
本発明は、ヒトＩＬ−１αおよびＩＬ−１βと結合するタンパク質に関する。本発明の結合タンパク質は、それだけには限らないが、抗体、その抗原結合部分およびヒトＩＬ−１αおよびＩＬ−１βと結合できるＤＶＤ−Ｉｇ（商標）結合タンパク質などの多価、多重特異性結合タンパク質を含む。本発明はまた、本明細書に記載されるＩＬ−１αおよびＩＬ−１β結合タンパク質ならびに試料中のＩＬ−１αおよびＩＬ−１βを検出する方法において、またはＩＬ−１活性と関連している、または関連していると疑われる個体において障害を治療または予防する方法において使用され得る種々の組成物を製造および使用する方法を提供する。

【課題を解決するための手段】

【0011】

一実施形態では、本発明は、第１のポリペプチド鎖が、第１のＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ［式中、
ＶＤ１は、第１の重鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は、第２の重鎖可変ドメインであり；
Ｃは、重鎖定常ドメインであり；
Ｘ１は、ＣＨ１ではないという条件で、リンカーであり；
Ｘ２は、Ｆｃ領域であり；
ｎは独立に、０または１である］
を含み、
第２のポリペプチド鎖が、第２のＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ［式中、
ＶＤ１は、第１の軽鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は、第２の軽鎖可変ドメインであり；
Ｃは、軽鎖定常ドメインであり；
Ｘ１は、ＣＨ１ではないという条件で、リンカーであり；
Ｘ２は、Ｆｃ領域を含まず；
ｎは独立に、０または１である］
を含み、
前記の第１のポリペプチド鎖中、ＶＤ１は、配列番号６０−１４８、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８および２１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＤ２は、配列番号２１３および２２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記の第２のポリペプチド鎖中、ＶＤ１は、配列番号１４９−１８９、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９および２１１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＤ２は、配列番号２１６および２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
結合タンパク質が、ヒトＩＬ−１βおよびヒトＩＬ−１αと結合する、
第１および第２のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質を提供する。

【0012】

一実施形態では、上記の結合タンパク質は、配列番号２１２、２１７、２２６、２３０、２３２、２３４および２３６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖を含む。

【0013】

別の実施形態では、上記の結合タンパク質は、配列番号２１５、２１８、２２８、２３１、２３３、２３５および２３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含む。

【0014】

本発明の別の態様では、結合タンパク質は、第１および第２のポリペプチド鎖を含み、これでは、前記の第１のポリペプチド鎖は、第１のＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ［式中、
ＶＤ１は、第１の重鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は、第２の重鎖可変ドメインであり；
Ｃは、重鎖定常ドメインであり；
Ｘ１は、ＣＨ１ではないという条件で、リンカーであり；
Ｘ２は、Ｆｃ領域であり；
ｎは独立に、０または１である］
を含み、
第２のポリペプチド鎖は、第２のＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ［式中、
ＶＤ１は、第１の軽鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は、第２の軽鎖可変ドメインであり；
Ｃは、軽鎖定常ドメインであり；
Ｘ１は、ＣＨ１ではないという条件で、リンカーであり；
Ｘ２は、Ｆｃ領域を含まず；
ｎは独立に、０または１である］
を含み、
前記の第１のポリペプチド鎖中、ＶＤ１は、配列番号２１３および２２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＤ２は、配列番号６０−１４８、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８および２１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記の第２のポリペプチド鎖中、ＶＤ１は、配列番号２１６および２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＤ２は、配列番号１４９−１８９、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９および２１１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
結合タンパク質は、ヒトＩＬ−１βおよびヒトＩＬ−１αと結合する。
を含む。

【0015】

別の実施形態では、上記の結合タンパク質は、配列番号２１９および２２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖を含む。

【0016】

別の実施形態では、上記の結合タンパク質は、配列番号２２０および２２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含む。

【0017】

別の態様では、本発明は、
前記の第１のポリペプチド鎖が、配列番号２１２のアミノ酸配列を含む場合に、前記の第２のポリペプチド鎖が、配列番号２１５、２２８、２３１、２３３および２３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記の第１のポリペプチド鎖が、配列番号２１７のアミノ酸配列を含む場合に、前記の第２のポリペプチド鎖が、配列番号２１８および２３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記の第１のポリペプチド鎖が、配列番号２１９のアミノ酸配列を含む場合に、前記の第２のポリペプチド鎖が、配列番号２２０のアミノ酸配列を含み；
前記の第１のポリペプチド鎖が、配列番号２２１のアミノ酸配列を含む場合に、前記の第２のポリペプチド鎖が、配列番号２２２のアミノ酸配列を含み；
前記の第１のポリペプチド鎖が、配列番号２２６のアミノ酸配列を含む場合に、前記の第２のポリペプチド鎖が、配列番号２２８、２１５、２３１、２３３および２３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記の第１のポリペプチド鎖が、配列番号２３０のアミノ酸配列を含む場合に、前記の第２のポリペプチド鎖が、配列番号２３１、２１５、２２８、２３３および２３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記の第１のポリペプチド鎖が、配列番号２３２のアミノ酸配列を含む場合に、前記の第２のポリペプチド鎖が、配列番号２３３、２１５、２２８、２３１および２３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記の第１のポリペプチド鎖が、配列番号２３４のアミノ酸配列を含む場合に、前記の第２のポリペプチド鎖が、配列番号２３５、２１５、２２８、２３１および２３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記の第１のポリペプチド鎖が、配列番号２３６のアミノ酸配列を含む場合に、前記の第２のポリペプチド鎖が、配列番号２３７のアミノ酸配列を含む
上記の結合タンパク質を提供する。

【0018】

別の態様では、本発明は、
前記の第１のポリペプチド鎖が、配列番号２１２を含み、前記の第２のポリペプチド鎖が、配列番号２１５を含む；または
前記の第１のポリペプチド鎖が、配列番号２１７を含み、前記の第２のポリペプチド鎖が、配列番号２１８を含む；または
前記の第１のポリペプチド鎖が、配列番号２１９を含み、前記の第２のポリペプチド鎖が、配列番号２２０を含む；または
前記の第１のポリペプチド鎖が、配列番号２２１を含み、前記の第２のポリペプチド鎖が、配列番号２２２を含む；または
前記の第１のポリペプチド鎖が、配列番号２２６を含み、前記の第２のポリペプチド鎖が、配列番号２２８を含む；または
前記の第１のポリペプチド鎖が、配列番号２３０を含み、前記の第２のポリペプチド鎖が、配列番号２３１を含む；または
前記の第１のポリペプチド鎖が、配列番号２３２を含み、前記の第２のポリペプチド鎖が、配列番号２３３を含む；または
前記の第１のポリペプチド鎖が、配列番号２３４を含み、前記の第２のポリペプチド鎖が、配列番号２３５を含む；または
前記の第１のポリペプチド鎖が、配列番号２３６を含み、前記の第２のポリペプチド鎖が、配列番号２３７を含む
上記のタンパク質を提供する。

【0019】

一実施形態では、上記の、本発明の結合タンパク質は、２つの第１のポリペプチド鎖および２つの第２のポリペプチド鎖を含む。

【0020】

別の態様では、上記の結合タンパク質Ｘ１またはＸ２は、配列番号２６−５７、２３３、２２４および２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列である。

【0021】

別の実施形態では、本発明は、Ｆｃ領域が、天然配列Ｆｃ領域および変異体配列Ｆｃ領域からなる群から選択される、上記の結合タンパク質を提供する。別の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥおよびＩｇＤ由来のＦｃ領域からなる群から選択される。

【0022】

別の実施形態では、本発明は、上記の結合タンパク質を含み、薬剤をさらに含む結合タンパク質コンジュゲートを提供する。このような薬剤として、それだけには限らないが、免疫接着分子、造影剤、治療薬および細胞傷害性薬剤が挙げられる。好ましい造影剤として、それだけには限らないが、放射標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁性標識およびビオチンが挙げられる。好ましい放射標識として、それだけには限らないが、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３５Ｓ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１１１Ｉｎ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１７７Ｌｕ、^１６６Ｈｏおよび^１５３Ｓｍが挙げられる。好ましい治療薬または細胞傷害性薬剤として、それだけには限らないが、抗代謝生成物、アルキル化剤、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、血管新生抑制薬、有糸分裂阻害剤、アントラサイクリン、毒素およびアポトーシス薬が挙げられる。

【0023】

本発明はまた、抗原結合ドメインを含む結合タンパク質を提供し、ここで、結合タンパク質は、ヒトＩＬ−１βと結合でき、抗原結合ドメインは、６つのＣＤＲ、すなわち、以下に定義されるＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３を含む：
ＣＤＲ−Ｈ１：Ｘ_１−Ｙ−Ｄ−Ｍ−Ｓ（配列番号１９０）［式中、
Ｘ_１は、Ｓ、ＫまたはＲである］；
ＣＤＲ−Ｈ２：Ｙ−Ｘ_２−Ｓ−Ｘ_４−Ｇ−Ｇ−Ｘ_７−Ｇ−Ｔ−Ｙ−Ｙ−Ｐ−Ｄ−Ｘ_１４−Ｘ_１５−Ｋ−Ｇ（配列番号１９１）［式中、
Ｘ_２は、ＩまたはＶであり；
Ｘ_４は、ＳまたはＨであり；
Ｘ_７は、ＧまたはＡであり；
Ｘ_１４は、ＴまたはＳであり；
Ｘ_１５は、ＶまたはＡである］；
ＣＤＲ−Ｈ３：Ｇ−Ｇ−Ｖ−Ｘ_４−Ｋ−Ｇ−Ｘ_７−Ｆ−Ｄ−Ｘ_１０（配列番号１９２）、［式中、
Ｘ_４はＴまたはＹであり；
Ｘ_７はＹまたはＣであり；
Ｘ_１０はＶ、Ｅ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、またはＹである］；
ＣＤＲ−Ｌ１：Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｇ−Ｎ−Ｉ−Ｘ_７−Ｘ_８−Ｘ_９−Ｌ−Ｘ_１１（配列番号１９３）、［式中、
Ｘ_７はＨ、Ｙ、またはＷであり；
Ｘ_８はＮ、Ｇ、Ｔ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｄ、またはＫであり；
Ｘ_９はＹまたはＷであり；
Ｘ_１１はＴ、Ａ、またはＮである］；
ＣＤＲ−Ｌ２：Ｘ_１−Ａ−Ｋ−Ｘ_４−Ｌ−Ｘ_６−Ｘ_７（配列番号１９４）、［式中、
Ｘ_１はＮ、Ｑ、またはＤであり；
Ｘ_４はＴ、Ｎ、Ｉ、Ｅ、またはＳであり；
Ｘ_６はＡ、Ｍ、またはＥであり；
Ｘ_７はＤ、Ｅ、Ｓ、またはＡである］；
および
ＣＤＲ−Ｌ３：Ｑ−Ｘ_２−Ｆ−Ｗ−Ｘ_５−Ｘ_６−Ｐ−Ｘ_８−Ｘ_９（配列番号１９５）、［式中、
Ｘ_２はＨまたはＱであり；
Ｘ_５はＳ、Ｎ、Ｔ、Ｋ、Ｒ、またはＭであり；
Ｘ_６はＩまたはＬであり；
Ｘ_８はＹまたはＡであり；
Ｘ_９はＴ、Ｉ、およびＮである］
（ただし、ＣＤＲ−Ｈ１が、Ｓ−Ｙ−Ｄ−Ｍ−Ｓ（配列番号１７）である場合には、
ＣＤＲ−Ｈ２は、Ｙ−Ｉ−Ｓ−Ｓ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｙ−Ｙ−Ｐ−Ｄ−Ｔ−Ｖ−Ｋ−Ｇ（配列番号１８）ではあり得ず；
ＣＤＲ−Ｈ３は、Ｇ−Ｇ−Ｖ−Ｔ−Ｋ−Ｇ−Ｙ−Ｆ−Ｄ−Ｖ（配列番号１９）ではあり得ず；
ＣＤＲ−Ｌ１は、Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｇ−Ｎ−Ｉ−Ｈ−Ｎ−Ｙ−Ｌ−Ｔ（配列番号２０）ではあり得ず；
ＣＤＲ−Ｌ２は、Ｎ−Ａ−Ｋ−Ｔ−Ｌ−Ａ−Ｄ（配列番号２１）ではあり得ず；
ＣＤＲ−Ｌ３は、Ｑ−Ｈ−Ｆ−Ｗ−Ｓ−Ｉ−Ｐ−Ｙ−Ｔ（配列番号２２）ではあり得ない）。

【0024】

一実施形態では、単離された上記の結合タンパク質は、

【0025】

【表1】

からなるＣＤＲ配列の群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１つのＣＤＲを含む。

【0026】

別の実施形態では、上記の結合タンパク質は、少なくとも３つのＣＤＲを含み、ここで、３つのＣＤＲは、

【0027】

【表2】

からなるＣＤＲセットの群から選択されるＣＤＲセットに由来するものである。

【0028】

一実施形態では、上記の結合タンパク質は、上記のＣＤＲセットの群から選択される２つのＣＤＲセットに由来するＣＤＲを含む。

【0029】

別の実施形態では、本発明は、上記の群に由来する２つのＣＤＲセットに由来するＣＤＲを含む結合タンパク質を提供し、ここで、２つのＣＤＲセットは、

【0030】

【表3】

からなる群から選択される。

【0031】

別の実施形態では、上記の結合タンパク質は、ヒトアクセプターフレームワークをさらに含む。好ましくは、ヒトフレームワークは、配列番号７−１０、１３−１６、２５、２４０−３１６および３１７−３８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、本発明の結合タンパク質は、配列番号７−１０および１３−１６からなる群から選択されるヒトフレームワーク配列を含む。

【0032】

本発明の結合タンパク質として、少なくとも１つのフレームワーク領域アミノ酸置換を含むヒトアクセプターフレームワークを含むものが挙げられ、これでは、フレームワークのアミノ酸配列は、前記ヒトアクセプターフレームワークの配列と少なくとも６５％同一であり、前記ヒトアクセプターフレームワークと同一である少なくとも７０個のアミノ酸残基を含む。

【0033】

別の実施形態では、本発明の結合タンパク質は、ヒトアクセプターフレームワークを含み、ここで、前記アクセプターフレームワークは、鍵となる残基で、少なくとも１つのフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、前記の鍵となる残基は、ＣＤＲに隣接する残基；グリコシル化部位残基；稀な残基；ヒトＩＬ−１βと相互作用できる残基；ＣＤＲと相互作用できる残基；標準残基；重鎖可変領域と軽鎖可変領域間の接触残基；バーニアゾーン内の残基；コチア（Ｃｈｏｔｈｉａ）による定義の重鎖可変鎖ＣＤＲ１およびカバット（Ｋａｂａｔ）による定義の第１の重鎖フレームワーク間で重複する領域中の残基からなる群から選択される。例示的な一実施形態では、本発明の結合タンパク質は、２Ｈ、４Ｈ、２４Ｈ、２６Ｈ、２７Ｈ、２９Ｈ、３４Ｈ、３５Ｈ、３７Ｈ、３９Ｈ、４４Ｈ、４５Ｈ、４７Ｈ、４８Ｈ、４９Ｈ、５０Ｈ、５１Ｈ、５８Ｈ、５９Ｈ、６０Ｈ、６３Ｈ、６７Ｈ、６９Ｈ、７１Ｈ、７３Ｈ、７６Ｈ、７８Ｈ、９１Ｈ、９３Ｈ、９４Ｈ、２Ｌ、４Ｌ、２５Ｌ、２９Ｌ、２７ｂＬ、３３Ｌ、３４Ｌ、３６Ｌ、３８Ｌ、４３Ｌ、４４Ｌ、４６Ｌ、４７Ｌ、４８Ｌ、４９Ｌ、５５Ｌ、５８Ｌ、６２Ｌ、６４Ｌ、７１Ｌ、８７Ｌ、８９Ｌ、９０Ｌ、９１Ｌ、９４Ｌ、９５Ｌ（すべてカバット番号付け）からなる群から選択される、鍵となる残基を含む。本発明の結合タンパク質のヒト化のためのこれらの残基の例示的なサブセットは、２７Ｈ、４８Ｈ、６７Ｈ、６９Ｈ、９３Ｈ、３６Ｌ、４３Ｌ、４６Ｌ、４７Ｌ、４９Ｌ、５８Ｌ、７１Ｌおよび８７Ｌからなる。

【0034】

別の実施形態では、本発明の結合タンパク質は、コンセンサスヒト可変ドメインを含む。

【0035】

一実施形態では、本発明のＩＬ−１β結合タンパク質は、配列番号６０−１８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１つの可変ドメインを含む。

【0036】

別の実施形態では、本発明の結合タンパク質は、配列番号６０−１４８、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８および２１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１つの重鎖可変鎖（ＶＨ）領域（またはドメイン）を含む。

【0037】

別の実施形態では、本発明の結合タンパク質は、配列番号１４９−１８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１つの軽鎖可変鎖（ＶＬ）領域（またはドメイン）を含む。

【0038】

さらに別の実施形態では、本発明の結合タンパク質は、配列番号６０−１４８、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８および２１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１つのＶＨ領域と、配列番号１４９−１８９、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９および２１１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１つのＶＬ領域とを含む。

【0039】

一実施形態では、本発明の結合タンパク質は、

【0040】

【表4】

からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、２つの可変ドメインを含む。

【0041】

別の実施形態では、本明細書に記載されたＩＬ−１β結合タンパク質は、免疫グロブリン分子、ｓｃＦｖ、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖおよびジスルフィド結合されたＦｖからなる群から選択される。

【0042】

本発明の一態様では、本明細書に記載された結合タンパク質は、ＩＬ−１の生物学的機能を調節できる。別の態様では、本明細書に記載された結合タンパク質は、ＩＬ−１を中和できる。

【0043】

一実施形態では、本明細書に記載された結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定される、少なくとも約１０^２Ｍ^−１ｓ^−１；少なくとも約１０^３Ｍ^−１ｓ^−１；少なくとも約１０^４Ｍ^−１ｓ^−１；少なくとも約１０^５Ｍ^−１ｓ^−１および少なくとも約１０^６Ｍ^−１ｓ^−１からなる群から選択される、ＩＬ−１βとの結合速度定数（Ｋ_ｏｎ）を有する。

【0044】

別の実施形態では、本明細書に記載された結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定される、最大で約１０^−３ｓ^−１；最大で約１０^−４ｓ^−１；最大で約１０^−５ｓ^−１および最大で約１０^−６ｓ^−１からなる群から選択される、ＩＬ−１βとの解離速度定数（Ｋ_ｏｆｆ）を有する。

【0045】

別の実施形態では、本明細書に記載される結合タンパク質は、最大で約１０^−７Ｍ；最大で約１０^−８Ｍ；最大で約１０^−９Ｍ；最大で約１０^−１０Ｍ；最大で約１０^−１１Ｍ；最大で約１０^−１２Ｍおよび最大で１０^−１３Ｍからなる群から選択される、ＩＬ−１βとの解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。

【0046】

一態様では、本発明は、本明細書に記載される結合タンパク質を含み、リンカーまたは免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む、結合タンパク質構築物を提供する。一実施形態では、結合タンパク質構築物は、免疫グロブリン分子、ジスルフィド結合されたＦｖ、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト化抗体、ダイアボディー、ヒト化抗体、多重特異性抗体、Ｆａｂ、二重特異性抗体、Ｆａｂ’、二特異性抗体およびＦ（ａｂ’）_２、ＤＶＤ−Ｉｇ（商標）およびＦｖからなる群から選択される結合タンパク質を含む。

【0047】

一実施形態では、結合タンパク質構築物は、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメインおよびヒトＩｇＧ３定常ドメインならびにヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。

【0048】

別の実施形態では、結合タンパク質構築物は、配列番号３、配列番号４、配列番号５および配列番号６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン定常ドメインを含む。

【0049】

本発明はまた本明細書に記載された結合タンパク質構築物を含み、免疫接着分子、造影剤、治療薬および細胞傷害性薬剤からなる群から選択される薬剤をさらに含む結合タンパク質コンジュゲートを提供する。本明細書に記載された結合タンパク質コンジュゲート中の薬剤部分として有用である造影剤として、それだけには限らないが、放射標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁性標識およびビオチンが挙げられる。一実施形態では、放射標識は、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３５Ｓ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１１１Ｉｎ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１７７Ｌｕ、^１６６Ｈｏおよび^１５３Ｓｍからなる群から選択される。

【0050】

別の実施形態では、結合タンパク質コンジュゲートは、抗代謝生成物、アルキル化剤、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、血管新生抑制薬、有糸分裂阻害剤、アントラサイクリン、毒素およびアポトーシス薬からなる群から選択される、治療薬または細胞傷害性薬剤である薬剤を含む。

【0051】

一実施形態では、本明細書に記載された結合タンパク質、結合タンパク質構築物または結合タンパク質コンジュゲートは、ヒトグリコシル化パターンを有する。

【0052】

本明細書に記載された結合タンパク質、結合タンパク質構築物および結合タンパク質コンジュゲートは、可溶性タンパク質として、または結晶として存在し得る。一実施形態では、このような結晶は、担体を含まない薬剤制御放出結晶である。別の実施形態では、本明細書に記載された結合タンパク質、結合タンパク質構築物または結合タンパク質コンジュゲート結晶形態は、その可溶性対応物よりも長いインビボ半減期を有する。別の実施形態では、本明細書に記載された結合タンパク質、結合タンパク質構築物または結合タンパク質コンジュゲートの結晶は、その可溶性対応物の生物活性を保持する。

【0053】

本発明の組成物は、
（ａ）結晶化された、本明細書に記載された結合タンパク質、結合タンパク質構築物または結合タンパク質コンジュゲートおよびその成分を含む製剤と、
（ｂ）少なくとも１種のポリマー担体と
を含む、結晶化された、本明細書に記載された結合タンパク質、結合タンパク質構築物または結合タンパク質コンジュゲートを放出するための組成物を含む。

【0054】

本発明の組成物において有用なポリマー担体として、制限するものではないが、以下がある。ポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリレート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体またはＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシ酪酸（ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｒｙａｔｅ））、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、マレイン酸無水物−アルキルビニルエーテル共重合体、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギン酸塩、セルロースおよびセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリコサミノグリカン（ｇｌｙｃａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｓ）、硫酸化多糖、それらのブレンドおよび共重合体からなる群のうち１種または複数。

【0055】

別の態様では、本発明の組成物の成分は、アルブミン、スクロース、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される。

【0056】

本発明はまた、本明細書に記載された結合タンパク質、結合タンパク質構築物または結合タンパク質コンジュゲートと、医薬上許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、少なくとも１種のさらなる薬剤をさらに含み得る。一実施形態では、このようなさらなる薬剤として、それだけには限らないが、治療薬、造影剤、細胞傷害性薬剤、血管新生抑制薬；キナーゼ阻害剤；共刺激分子遮断薬；接着分子遮断薬；抗サイトカイン抗体またはその機能的断片；メトトレキサート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能な標識またはリポーター；ＴＮＦアンタゴニスト；抗リウマチ薬；筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、抗乾癬薬、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫処置、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン置換薬、放射性医薬品、抗鬱薬、抗精神病薬、刺激薬、喘息薬物、βアゴニスト、吸入されたステロイド、エピネフリンまたは類似体、サイトカインおよびサイトカインアンタゴニストが挙げられる。

【0057】

一実施形態では、本発明の医薬組成物は、医薬上許容される担体を含み、ここで、担体はまた、組成物中の結合タンパク質、結合タンパク質構築物または結合タンパク質コンジュゲートの吸収または分散を高めるためのアジュバントとしても働く。例示的アジュバントとして、ヒアルロニダーゼがある。

【0058】

別の実施形態では、医薬組成物は、ＩＬ−１β活性が有害である障害を治療するための少なくとも１種のさらなる治療薬をさらに含む。

【0059】

一実施形態では、本発明は、本明細書に記載された結合タンパク質の１種または複数のアミノ酸配列をコードする単離された核酸を提供する。このような核酸は、種々の遺伝子分析を実施するために、または本明細書に記載された結合タンパク質の１つまたは複数の特性を発現する、特性決定する、もしくは改善するために、ベクター中に挿入され得る。ベクターは、本明細書に記載された結合タンパク質の１種または複数のアミノ酸配列をコードする１種または複数の核酸分子を含む場合もあり、これでは、１種または複数の核酸分子が、ベクターを保持する特定の宿主細胞における結合タンパク質の発現を可能にする適当な転写および／または翻訳配列に作動可能に連結されている。本明細書に記載された結合タンパク質のアミノ酸配列をコードする核酸をクローニングまたは発現させるためのベクターの例として、制限されるものではないが、ｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ、ｐＴＴ３、ｐＥＦＢＯＳ、ｐＢＶ、ｐＪＶおよびｐＢＪが挙げられる。

【0060】

本発明はまた、本明細書に記載された結合タンパク質の１種または複数のアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクターを含む宿主細胞を提供する。本発明において有用な宿主細胞は、原核細胞であっても、真核細胞であってもよい。例示的な原核生物の宿主細胞として、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）がある。本発明における宿主細胞として有用である真核細胞として、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞および真菌細胞が挙げられる。例示的真菌細胞として、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）を始めとする酵母細胞がある。本発明の宿主細胞として有用である例示的動物細胞として、それだけには限らないが、哺乳類細胞、鳥類細胞および昆虫細胞が挙げられる。好ましい哺乳類細胞として、ＣＨＯおよびＣＯＳ細胞が挙げられる。本発明の宿主細胞として有用である昆虫細胞として、昆虫Ｓｆ９細胞がある。

【0061】

別の態様では、本発明は、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βを結合できる結合タンパク質を製造するのに十分な条件下、培養培地中で結合タンパク質をコードするベクターを含む宿主細胞を培養することを含む、本明細書に記載された結合タンパク質を製造する方法を提供する。そのように製造されたタンパク質は、単離され、本明細書に記載された種々の組成物および方法において使用され得る。

【0062】

別の実施形態では、本発明は、ヒトＩＬ−１を、本明細書に記載された結合タンパク質と接触させ、その結果、ヒトＩＬ−１活性が低減されることを含むヒトＩＬ−１活性を低減する方法を提供する。

【0063】

本発明の別の実施形態は、被験体に本明細書に記載された結合タンパク質を投与し、その結果、治療が達成されることによって、障害について被験体を治療する方法を提供する。

【0064】

別の実施形態では、本明細書に記載された結合タンパク質は、糖尿病；ブドウ膜炎；神経因性疼痛；骨関節炎性疼痛；炎症性疼痛；関節リウマチ；変形性関節症；若年性慢性関節炎；化膿性関節炎；ライム関節炎；乾癬性関節炎；反応性関節炎；脊椎関節症；全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）；クローン病；潰瘍性大腸炎；炎症性腸疾患；自己免疫性糖尿病；インスリン依存性糖尿病；甲状腺炎；喘息；アレルギー性疾患；乾癬；皮膚炎；強皮症；移植片対宿主病；臓器移植拒絶；臓器移植と関連する急性免疫疾患；臓器移植と関連する慢性免疫疾患；サルコイドーシス；アテローム性動脈硬化症；播種性血管内凝固（ＤＩＣ）；川崎病；グレーブス病；ネフローゼ症候群；慢性疲労症候群；ウェジナー肉芽腫症；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；腎臓の顕微鏡的血管炎；慢性活動性肝炎；自己免疫性ブドウ膜炎；敗血性ショック；毒素性ショック症候群；敗血症症候群；悪液質；感染性疾患；寄生虫症；急性横断性脊髄炎；ハンチントン舞踏病；パーキンソン病；アルツハイマー病；卒中；原発性胆汁性肝硬変；溶血性貧血；悪性腫瘍；心不全；心筋梗塞；アジソン病；弧発性多腺性欠乏症Ｉ型；多腺性欠乏症ＩＩ型（シュミット症候群）；急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）；脱毛症；円形脱毛症；血清反応陰性関節症；関節症；ライター病；乾癬性関節症；潰瘍性大腸炎性関節症；腸炎性滑膜炎；クラミジア；エルシニアおよびサルモネラ菌属関連関節症；脊椎関節症；アテローム性疾患／動脈硬化症；アトピー性アレルギー；自己免疫性水疱症；尋常性天疱瘡；落葉状天疱瘡；類天疱瘡；リニアＩｇＡ病；自己免疫性溶血性貧血；クームス陽性溶血性貧血；後天性悪性貧血；若年性悪性貧血；筋痛性脳炎／ロイヤルフリー病（Ｒｏｙａｌ Ｆｒｅｅ ｄｉｓｅａｓｅ）；慢性粘膜皮膚カンジダ症；巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ）；原発性硬化性肝炎；原因不明自己免疫性肝炎；後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）；後天性免疫不全関連病；Ｂ型肝炎；Ｃ型肝炎；一般的な多様な免疫不全（分類不能型低ガンマグロブリン血症）；拡張型心筋症；女性不妊症；卵巣機能不全；未熟卵巣機能不全；線維性肺疾患；原因不明線維性肺胞炎；炎症後間質性肺疾患；間質性肺炎；結合組織病関連間質性肺疾患；混合性結合組織病関連肺疾患；全身性硬化症関連間質性肺疾患；関節リウマチ関連間質性肺疾患；全身性紅斑性狼瘡関連肺疾患；皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患；シェーグレン病関連肺疾患；強直性脊椎炎関肺疾患；血管炎性びまん性肺疾患；ヘモジデリン沈着症関連肺疾患；薬物誘発性間質性肺疾患；繊維症；放射線線維症；閉塞性細気管支炎；慢性好酸球性肺炎；リンパ性浸潤性肺疾患；感染後間質性肺疾患；痛風性関節炎；自己免疫性肝炎；１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性またはルポイド肝炎）；２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）；自己免疫媒介性低血糖；黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性；副甲状腺機能低下症；変形性関節症；原発性硬化性胆管炎；１型乾癬；２型乾癬；特発性白血球減少症；自己免疫性好中球減少症；腎疾患ＮＯＳ；糸球体腎炎（ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｄｅｓ）；腎臓の顕微鏡的血管炎；ライム病；円板状エリテマトーデス；特発性男性不妊症；一酸化窒素関連男性不妊症；精子自己免疫性；多発性硬化症（原発進行性の、続発進行性の、再発寛解型を含めたすべてのサブタイプ）；交感性眼炎；結合組織病に続発する肺高血圧症；グッドパスチャー症候群；結節性多発性動脈炎の肺の徴候；急性リウマチ熱；リウマチ性脊椎炎；スチル病；全身性硬化症；シェーグレン症候群；高安病／動脈炎；自己免疫性血小板減少症（ＡＩＴＰ）；特発性血小板減少症；自己免疫性甲状腺疾患；甲状腺機能亢進症；甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）；萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症；原発性粘液水腫；水晶体起因性ブドウ膜炎；原発性血管脈管炎；白斑；急性肝疾患；慢性肝疾患；アルコール性硬変；アルコール誘発性肝臓傷害；胆汁うっ滞；特異体質肝臓疾患；薬物誘発性肝炎；非アルコール性脂肪性肝炎；アレルギー；Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染；精神病（例えば、鬱病および統合失調症）；Ｔｈ２型およびＴｈ１型媒介性疾患；急性および慢性疼痛（種々の形態の疼痛）；癌（例えば、肺、乳房、胃、膀胱、結腸、膵臓、卵巣、前立腺および直腸癌）；造血器悪性腫瘍；白血病；リンパ腫；無βリポタンパク質血症；先端チアノーゼ；急性および慢性寄生虫または感染過程；急性白血病；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；Ｔ細胞ＡＬＬ；ＦＡＢ ＡＬＬ；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；急性または慢性細菌感染；急性膵炎；急性腎不全；腺癌；心房性異所性拍動；ＡＩＤＳ痴呆合併症；アルコール誘発性肝炎；アレルギー性結膜炎；アレルギー性接触皮膚炎；アレルギー性鼻炎；同種移植片拒絶；α１−アンチトリプシン欠乏症；筋萎縮性側索硬化症；貧血；狭心症；前角細胞変性；抗ＣＤ３治療；抗リン脂質症候群；抗受容体過敏症反応；大動脈および末梢動脈瘤；大動脈解離；動脈性高血圧症；動脈硬化症；動静脈の瘻孔；運動失調；心房細動（持続性または発作性）；心房粗動；房室ブロック；Ｂ細胞リンパ腫；骨移植片拒絶；骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶；脚ブロック；バーキットリンパ腫；火傷；心不整脈；心機能不全（ｃａｒｄｉａｃ ｓｔｕｎ）症候群；心臓腫瘍；心筋症；心肺バイパス炎症反応；軟骨移植拒絶；小脳皮質変性；小脳障害；無秩序または多源性心房性頻脈；化学療法関連障害；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；慢性アルコール依存症；慢性感染性炎症性病態；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；慢性サリチル酸中毒；結腸直腸癌腫；鬱血性心不全；結膜炎；接触皮膚炎；胚性心；冠動脈疾患；クロイツフェルト・ヤコブ病；培養陰性敗血症；嚢胞性繊維症；サイトカイン治療関連障害；ボクサー痴呆；脱髄疾患；デング出血熱発熱；皮膚炎；皮膚科学的状態；糖尿病；糖尿病性動脈硬化性疾患；びまん性レビー小体病；拡張型うっ血性心筋症；大脳基底核の障害；中年におけるダウン症候群；ＣＮＳドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発される薬物誘発性運動障害；薬物感受性；湿疹；脳脊髄炎；心内膜炎；内分泌疾患；喉頭蓋炎；エプスタイン−バーウイルス感染；紅痛症；錐体外路および小脳の障害；家族性血球貪食性リンパ組織球症；胎児胸腺インプラント拒絶；フリードライヒ失調症；機能性末梢動脈性障害；真菌敗血症；ガス壊疽；胃潰瘍；糸球体腎炎；任意の器官または組織の移植片拒絶；グラム陰性敗血症；グラム陽性敗血症；細胞内生物による肉芽腫；ヘアリー細胞白血病；ハラーホルデン・スパッツ疾患；橋本甲状腺炎；枯草熱；心臓移植拒絶；ヘモクロマトーシス；血液透析；溶血性尿毒症症候群／血栓溶解性血小板減少性紫斑病；出血；Ａ型肝炎；ヒス束不整脈；ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害；ホジキン病；過剰運動性運動障害；過敏症反応；過敏性間質性肺炎；高血圧症；運動不足性運動障害；視床下部−下垂体−副腎皮質系評価；特発性アジソン病；特発性肺繊維症（ＩＰＦ）；抗体媒介性細胞毒性；無力症；乳児脊髄性筋萎縮症；大動脈の炎症；インフルエンザ；イオン化放射線曝露；虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎；虚血−再潅流傷害；虚血性卒中；若年性関節リウマチ；若年性脊髄性筋萎縮症；カポジ肉腫；腎臓移植拒絶；レジオネラ；リーシュマニア症；らい病；皮質脊髄系の病変；脂肪性浮腫；肝臓移植拒絶；リンパ浮腫；マラリア；悪性リンパ腫；悪性の組織球増殖症；悪性黒色腫；髄膜炎；髄膜炎菌血症；メタボリックシンドローム片頭痛；特発性片頭痛；ミトコンドリア性多系統障害；混合性結合組織病；モノクローナル高ガンマグロブリン血症；多発性骨髄腫；多系統変性症（Ｍｅｎｚｅｌ；デジェリーヌ・トーマス；シャイ・ドレーガー；およびマシャド・ジョセフ）；重症筋無力症；マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ（ｍｉｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）；マイコバクテリア結核；骨髄異形成症候群；心筋梗塞；心筋虚血障害；鼻咽頭癌腫；新生児慢性肺疾患；腎炎；ネフローゼ；神経変性性疾患；神経発生性Ｉ筋萎縮症；好中球減少性発熱；非ホジキンリンパ腫；腹部大動脈およびその枝分かれの閉塞；閉塞性動脈性障害；ＯＫＴ３（登録商標）治療；精巣炎／精巣上体炎；精巣炎／精管復元術手順；臓器肥大；骨粗鬆症；膵臓移植拒絶；膵臓癌腫；悪性の腫瘍随伴症候群／高カルシウム血症；副甲状腺移植拒絶；骨盤炎症性疾患；多年生鼻炎；心膜疾患；末梢アテローム硬化性疾患；末梢血管障害；腹膜炎；悪性貧血；ニューモシスチス・カリニ肺炎；肺炎；ＰＯＥＭＳ症候群（多発ニューロパチー、臓器肥大、内分泌疾患、モノクローナル高ガンマグロブリン血症および皮膚変化症候群）；灌流後症候群；ポンプ後症候群；ＭＩ開心術後症候群；子癇前症；進行性の核上性麻痺；原発性肺高血圧症；放射線療法；レイノー現象；レイノー病；レフサム病；規則的狭ＱＲＳ頻脈；腎血管性高血圧症；再潅流傷害；拘束型心筋症；肉腫；老人性舞踏病；レビー小体型老年痴呆；血清反応陰性関節症；ショック；鎌形赤血球貧血；皮膚同種移植片拒絶；皮膚変化症候群；小腸移植拒絶；固形腫瘍；特定の不整脈；脊髄運動失調；脊髄小脳変性症；連鎖球菌性筋炎；小脳の構造的病変；亜急性硬化性全脳炎；失神；心血管系の梅毒；全身性アナフィラキシー；全身性炎症反応症候群；全身型若年性関節リウマチ；毛細血管拡張症；閉塞性血栓血管炎；血小板減少症；毒性；移植；外傷／出血；ＩＩＩ型過敏性反応；ＩＶ型過敏性；不安定狭心症；尿毒症；尿路性敗血症；じんま疹；弁膜症性心疾患；静脈瘤；脈管炎；静脈性疾患；静脈血栓症；心室細動；ウイルスおよび心筋感染；ウイルス性脳炎／無菌性髄膜炎；ウイルス関連血球貪食性症候群；ウェルニッケ・コルサコフ症候群；ウィルソン病；任意の臓器または組織の異種移植片拒絶；急性冠動脈症候群；急性特発性多発神経炎；急性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；急性虚血；成人スチル病；円形脱毛症；アナフィラキシー；抗リン脂質抗体症候群；再生不良性貧血；動脈硬化症；アトピー性湿疹；アトピー性皮膚炎；自己免疫性皮膚炎；連鎖球菌感染と関係する自己免疫性障害；自己免疫性腸疾患；自己免疫性難聴；自己免疫性リンパ球増殖性症候群（ＡＬＰＳ）；自己免疫性心筋炎；自己免疫性未熟卵巣機能不全；眼瞼炎；気管支拡張症；水疱性類天疱瘡；心血管疾患；破局的抗リン脂質症候群；セリアック病；頸椎症；慢性虚血；瘢痕性類天疱瘡；多発性硬化症のリスクを有する臨床分離症候群（ＣＩＳ）；結膜炎；小児型精神障害；涙嚢炎；皮膚筋炎；糖尿病性網膜症；椎間板ヘルニア；椎間板逸脱症；薬物誘発性免疫溶血性貧血；心内膜炎；子宮内膜症；眼内炎；上強膜炎；多形性紅斑；重症多形性紅斑；妊娠性類天疱瘡；ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）；枯草熱；ヒューズ症候群；特発性パーキンソン病；特発性間質性肺炎；ＩｇＥ−媒介性アレルギー；免疫溶血性貧血；封入体筋炎；感染性眼炎症性疾患；炎症性脱髄疾患；炎症性心疾患；炎症性腎臓病；虹彩炎；角膜炎；乾性角結膜炎；クスマウル病またはクスマウル−マイヤー病；ランドリー麻痺；ランゲルハンス細胞組織球増殖症；網状皮斑；黄斑変性症；顕微鏡的多発血管炎；ベテレフ病；運動ニューロン障害；粘膜類天疱瘡；多臓器不全；重症筋無力症；骨髄異形成症候群；心筋炎；神経根障害；神経障害；非Ａ非Ｂ肝炎；視神経炎；骨溶解症；少関節型ＪＲＡ；末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）；末梢血管疾患（ＰＶＤ）；末梢動脈；疾患（ＰＡＤ）；静脈炎；結節性多発性動脈炎（または結節性動脈周囲炎）；多発性軟骨炎；リウマチ性多発性筋痛；白毛；多関節型ＪＲＡ；ポリエンドクリン欠乏症候群；多発性筋炎；リウマチ性多発性筋痛（ＰＭＲ）；ポンプ後症候群；原発性パーキンソニズム；続発性パーキンソニズム；前立腺炎；赤芽球ろう；原発性副腎不全症；再発性視神経脊髄炎；再狭窄；リウマチ性心疾患；ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、ざ瘡、膿疱症、骨増殖症および骨炎）；続発性アミロイドーシス；ショック肺；強膜炎；坐骨神経痛；続発性副腎不全症；シリコーン関連結合組織病；スネドン−ウィルキンソン皮膚疾患；強直性脊椎炎；スチーブ
ンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）；全身炎症反応症候群；側頭動脈炎；トキソプラズマ網膜炎；中毒性表皮壊死症；横断性脊髄炎；ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体１型（ＴＮＦＲ）関連周期性症候群）；黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性；１型アレルギー反応；ＩＩ型糖尿病；じんま疹；通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）；春季カタル；ウイルス性網膜炎；フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）；滲出型黄斑変性；創傷治癒；エルシニアおよびサルモネラ菌属関連関節症からなる群から選択される障害を治療するのに有用である。

【0065】

本明細書に記載された治療法のさらなる実施形態では、本明細書に記載された結合タンパク質または結合タンパク質構築物または結合タンパク質コンジュゲートを被験体へ投与するステップは、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、関節内（ｉｎｔｒａ−ａｒｔｉｃｕｌａｒ）、気管支内、腹腔内、関節内（ｉｎｔｒａｃａｐｓｕｌａｒ）、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸部内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、経膣、直腸、頬側、舌下、鼻腔内および経皮から選択される少なくとも１つの様式によってである。

【0066】

本発明の別の態様は、本明細書において上記で記載された結合タンパク質、結合タンパク質構築物または結合タンパク質コンジュゲートを、第２の薬剤の投与と同時に、またはその後で投与するステップを含む、ＩＬ−１が有害である障害を患っている患者を治療する方法であり、ここで、第２の薬剤は、吸入ステロイド；β−アゴニスト；短時間作用型または長時間作用型β−アゴニスト；ロイコトリエンまたはロイコトリエン受容体のアンタゴニスト；ＡＤＶＡＩＲ；ＩｇＥ阻害剤；抗ＩｇＥ抗体；（ゾレア（ＸＯＬＡＩＲ）；ホスホジエステラーゼ阻害剤；ＰＤＥ４阻害剤；キサンチン；抗コリン薬；肥満細胞安定化剤；クロモリン；ＩＬ−４阻害剤；ＩＬ−５阻害剤；エオタキシン／ＣＣＲ３阻害剤；ヒスタミンまたはＨ１、Ｈ２、Ｈ３およびＨ４を始めとするその受容体のアンタゴニスト；プロスタグランジンＤまたはその受容体ＤＰ１およびＣＲＴＨ２のアンタゴニスト；ＴＮＦアンタゴニスト；ＴＮＦ受容体の可溶性断片；エンブレル（ＥＮＢＲＥＬ）（登録商標）；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト；ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤；ムスカリン性受容体アンタゴニスト；ＴＧＦ−βアンタゴニスト；インターフェロンγ；ペルフェニドン（ｐｅｒｆｅｎｉｄｏｎｅ）；化学療法薬、メトトレキサート；レフルノミド；シロリムス（ラパマイシン）またはその類似体、ＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ２またはｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；免疫調節物質；ｐ３８阻害剤；ＴＰＬ−２、ＭＫ−２およびＮＦｋＢ阻害剤；ブデノシド（ｂｕｄｅｎｏｓｉｄｅ）；上皮成長因子；副腎皮質ステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチル酸；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化物質；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１β抗体；抗ＩＬ−６抗体；増殖因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦまたはＰＤＧＦの抗体またはアゴニスト；ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはそのリガンドの抗体；ＦＫ５０６；ラパマイシン；ミコフェノール酸モフェチル；イブプロフェン；プレドニゾロン；ホスホジエステラーゼ阻害剤；アデノシンアゴニスト；抗血栓薬；補体阻害剤；アドレナリン作動性薬剤；ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤；ＩＬ−１β変換酵素阻害剤；ＴＮＦ−α変換酵素阻害剤；Ｔ−細胞シグナル伝達阻害剤；メタロプロテイナーゼ阻害剤；６−メルカプトプリン；アンジオテンシン変換酵素阻害剤；可溶性サイトカイン受容体；可溶性ｐ５５ ＴＮＦ受容体；可溶性ｐ７５ ＴＮＦ受容体；ｓＩＬ−１ＲＩ；ｓＩＬ−１ＲＩＩ；ｓＩＬ−６Ｒ；および抗炎症性サイトカイン；ＩＬ−４；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；およびＴＧＦ−βからなる群から選択される。

【0067】

本発明の別の態様は、本明細書に記載された少なくとも１つのＩＬ−１結合タンパク質に対する少なくとも１つのＩＬ−１抗イディオタイプ抗体を提供する。抗イディオタイプ抗体は、免疫グロブリン分子の少なくとも一部、例えば、それだけには限らないが、本発明の結合タンパク質に組み込まれ得る、重鎖または軽鎖またはそのリガンド結合部分の少なくとも１つのＣＤＲ、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域またはそれらの任意の部分を含む分子を含有する任意のタンパク質またはペプチドが挙げられる。

【発明を実施するための形態】

【0068】

本発明は、それだけには限らないが、ＩＬ−１βおよびその他の標的と結合するＤＶＤ−Ｉｇ（商標）などの、ＩＬ−１βおよび多価、多重特異性結合タンパク質と結合する抗ＩＬ−１β抗体またはその抗原結合部分を始めとするＩＬ−１β結合タンパク質に関する。本発明の種々の態様は、抗体および抗体断片、ＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質およびその医薬組成物、ならびに抗体、ＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質およびその断片を含めたこのようなＩＬ−１β結合タンパク質を製造するための核酸、組換え発現ベクターおよび宿主細胞に関する。インビトロまたはインビボのいずれかで、ヒトＩＬ−１βを検出するために、ヒトＩＬ−１βを阻害するために、ならびに遺伝子発現を調節するために、本発明のＩＬ−１β結合タンパク質を使用する方法も本発明によって包含される。

【0069】

本発明はまた、本明細書に記載されたＩＬ−１β結合タンパク質と競合することができる任意の結合タンパク質または抗体も包含する。

【0070】

本明細書において別段の定義のない限り、本発明に関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解されている意味を有する。用語の意味および範囲は、明確でなければならないが、任意の潜在的に曖昧な事象では、本明細書において提供される定義は、任意の辞書の定義または外因性の定義を超える先例を取る。さらに、文脈によって別段に必要とされない限り、単数の用語は、複数を含むものとし、複数の用語は、単数を含むものとする。本出願では、「または」の使用は、別段の記述のない限り、「および／または」を意味する。さらに、用語「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などのその他の形態の使用は、限定的ではない。また、「要素」または「成分」などの用語は、別段の記述のない限り、１つのユニットを含む要素および成分ならびに２以上のサブユニットを含む要素および成分の両方を包含する。

【0071】

一般に、本明細書に記載される細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝子およびタンパク質および核酸化学ならびにハイブリダイゼーションに関連して使用される命名法ならびにその技術は、当技術分野で周知のものであり、当技術分野でよく使用されるものである。本発明の方法および技術は、別段の指示のない限り、当技術分野で周知の従来法に従って、また、本明細書を通じて引用され、論じられる種々の一般的な参考文献およびより特定の参考文献に記載されるように一般に実施される。酵素反応および精製技術は、製造業者の仕様書に従って、当技術分野で一般に遂行されるように、または本明細書に記載されるように実施される。本明細書に記載される分析化学、合成有機化学および医薬品および製薬化学に関連して使用される命名法ならびにその実験室手順および技術は、当技術分野で周知のものであり、当技術分野でよく使用されるものである。標準技術は、化学合成、化学分析、医薬品、製剤および送達ならびに患者の治療のために使用されている。

【0072】

本発明がより容易に理解され得るように、選択用語が以下に定義される。

【0073】

用語「ポリペプチド」とは、アミノ酸の任意のポリマー鎖を指す。用語「ペプチド」および「タンパク質」は、用語ポリペプチドと同義的に使用され、アミノ酸のポリマー鎖も指す。用語「ポリペプチド」は、天然または人工タンパク質、タンパク質断片およびタンパク質配列のポリペプチド類似体を包含する。ポリペプチドは、単量体であってもポリマーであってもよい。用語「ポリペプチド」は、文脈によって別段に異なることが指示されない限り、ポリペプチドおよびその断片および変異体（変異体の断片を含む）を包含する。抗原性ポリペプチドについては、ポリペプチドの断片は、場合により、ポリペプチドの少なくとも１つの連続するまたは非直線エピトープを含有する。少なくとも１つのエピトープ断片の正確な境界は、当技術分野で通常の技術を使用して確認され得る。断片は、少なくとも約５個の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも約１０個の連続するアミノ酸、少なくとも約１５個の連続するアミノ酸または少なくとも約２０個の連続するアミノ酸を含む。ポリペプチドの変異体は、本明細書に記載されるとおりである。

【0074】

用語「単離されたタンパク質」または「単離されたポリペプチド」は、その起源または供給源に基づいて、その天然状態でそれに付随する天然に会合している成分と会合していないタンパク質またはポリペプチドであり、実質的に、同一種に由来するその他のタンパク質を含まず、異なる種に由来する細胞によって発現されるか、または天然には生じない。したがって、化学的に合成されたまたはそれが天然に生じる細胞とは異なる細胞系において合成されたポリペプチドは、その天然に会合している成分から「単離」される。タンパク質はまた、当技術分野で周知のタンパク質精製技術を使用する単離によって天然に会合している成分を実質的に含まないようにされ得る。

【0075】

用語「回収すること」とは、例えば、当技術分野で周知のタンパク質精製技術を使用する単離によって、ポリペプチドなどの化学種を、天然に会合している成分を実質的に含まないようにすることを指す。

【0076】

用語「ヒトＩＬ−１α」（本明細書においてｈＩＬ−１αまたはＩＬ−１αと略される）は、種々の免疫応答、炎症プロセスおよび造血発生に関与している多面性サイトカインを含む。例えば、ＩＬ−１αは、活性化マクロファージによって製造されるヒトサイトカインを含み、それは、ＩＬ−２放出、Ｂ細胞成熟および増殖ならびに繊維芽細胞増殖因子活性を誘導することによって胸腺細胞増殖を刺激する。用語ヒトＩＬ−１αは、標準組換え発現法によって調製され得る組換えヒトＩＬ−１α（ｒｈ ＩＬ−１α）を含むものとする。

【0077】

用語「ヒトＩＬ−１β」（本明細書においてｈＩＬ−１βまたはＩＬ−１βとして略される）は、種々の免疫応答、炎症プロセスおよび造血発生に関与している多面性サイトカインを含む。用語ヒトＩＬ−１βは、標準組換え発現法によって調製され得る組換えヒトＩＬ−１β（ｒｈ ＩＬ−１β）を含む。

【0078】

ヒトＩＬ−１αおよびＩＬ−１βのアミノ酸配列を、表１に示す。

【0079】

【表5】

【0080】

用語「生物活性」とは、ＩＬ−１サイトカイン、例えば、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βのすべての固有の生物学的特性を指す。ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βの生物学的特性として、それだけには限らないが、ＩＬ−１受容体との結合が挙げられる。

【0081】

用語「特異的結合」または「特異的に結合すること」は、抗体、タンパク質またはペプチドの、第２の化学種との相互作用に関連して、相互作用が、化学種上の特定の構造（例えば、抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存していること、例えば、抗体が、広くタンパク質とではなく、特定のタンパク質構造を認識し、結合することを意味する。抗体が、エピトープ「Ａ」に対して特異的である場合には、標識された「Ａ」および抗体を含有する反応物中のエピトープＡ（または遊離の、標識されていないＡ）を含有する分子の存在は、抗体と結合している標識されたＡの量を低減する。

【0082】

用語「抗体」とは、４つのポリペプチド鎖、２つの重（Ｈ）鎖、および２つの軽（Ｌ）鎖からなる任意の免疫グロブリン（Ｉｇ）分子またはＩｇ分子の本質的なエピトープ結合特徴を保持する、その任意の機能的断片、突然変異体、変異体または誘導体を広く指す。このような突然変異体、変異体または誘導体抗体形式は、当技術分野で公知である。その限定されない実施形態は以下に論じられている。

【0083】

全長抗体では、各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書において、ＨＣＶＲまたはＶＨと略される）および重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書において、ＬＣＶＲまたはＶＬと略される）および軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬからなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散財している、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細かく分けることができる。各ＶＨおよびＶＬは、以下の順でアミノ末端からカルボキシ末端に配置される、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。免疫グロブリン分子は、任意の種類のもの（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであり得る。

【0084】

用語「Ｆｃ領域」は、無傷の抗体のパパイン消化によって生じ得る免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するよう使用される。Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または変異体Ｆｃ領域であり得る。免疫グロブリンのＦｃ領域は、一般に、２つの定常ドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含み、場合により、１つのＣＨ４ドメインを含む。抗体エフェクター機能を変更するためのＦｃ部分の中のアミノ酸残基の置換は、当技術分野で公知である（Ｗｉｎｔｅｒら、米国特許第５，６４８，２６０号および同５，６２４，８２１号）。抗体のＦｃ部分は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、サイトカイン誘導、ＡＤＣＣ、食作用、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）ならびに抗体および抗原抗体複合体の半減期／クリアランス速度を媒介する。いくつかの場合には、これらのエフェクター機能は、治療用抗体にとって望ましいものであるが、その他の場合には、治療対象に応じて、不必要であるまたは有害である場合さえある。特定のヒトＩｇＧアイソタイプ、特に、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、それぞれ、ＦｃγＲｓおよび補体Ｃ１ｑとの結合によるＡＤＣＣおよびＣＤＣを媒介する。新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、抗体の循環半減期を決定する重要な成分である。さらに別の実施形態では、抗体のエフェクター機能が変更されるよう、抗体の定常領域、例えば、抗体のＦｃ領域において少なくとも１個のアミノ酸残基が置換される。免疫グロブリンの２つの同一の重鎖の二量体化は、ＣＨ３ドメインの二量体化によって媒介され、ヒンジ領域内のジスルフィド結合によって安定化される（Ｈｕｂｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２６４：４１５−４２０頁（１９７６年）；Ｔｈｉｅｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２９３：６７−７９頁（１９９９年））。重鎖−重鎖ジスルフィド結合を妨げるためのヒンジ領域内のシステイン残基の突然変異は、ＣＨ３ドメインの二量体化を不安定化する。ＣＨ３二量体化に関与する残基は同定されている（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３７： ９２６６−９２７３頁（１９９８年））。したがって、一価の半Ｉｇを作製することが可能である。興味深いことに、これらの一価の半分子型Ｉｇは、ＩｇＧおよびＩｇＡサブクラス両方について天然に見出されている（Ｓｅｌｉｇｍａｎｎら、Ａｎｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２９Ｃ：８５５−７０頁（１９７８年）；Ｂｉｅｗｅｎｇａら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、５１：３９５−４００頁（１９８３年））。ＦｃＲｎ：Ｉｇ Ｆｃ領域の化学量論は、２：１であると決定されており（Ｗｅｓｔら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３９：９６９８−９７０８頁（２０００年））、半Ｆｃは、ＦｃＲｎ結合を媒介するのに十分である（Ｋｉｍら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４：５４２−５４８頁（１９９４年））。ＣＨ３二量体化にとって重要な残基は、ＣＨ３ ｂシート構造の内側界面上に位置するのに対し、ＦｃＲｎ結合に関与する領域はＣＨ２−ＣＨ３ドメインの外側の界面上に位置するので、ＣＨ３ドメインの二量体化を混乱させる突然変異が、そのＦｃＲｎ結合に対してより大きな有害効果を有する可能性はない。しかし、半分子型Ｉｇは、通常の抗体のものより小さい大きさのために組織浸透において特定の利点を有し得る。一実施形態では、重鎖の二量体化が乱され、その結果、半分子型ＤＶＤ Ｉｇ分子が得られるよう、本発明の結合タンパク質の定常領域、例えば、Ｆｃ領域中の少なくとも１個のアミノ酸残基が置換されている。ＩｇＧの抗炎症活性は、ＩｇＧ Ｆｃ断片のＮ連結型グリカンのシアリル化に完全に依存している。抗炎症活性のための正確なグリカン必要条件は決定されており、その結果、適当なＩｇＧ１ Ｆｃ断片が作製され、それによって、大幅に増強された効力を有する完全に組換えられたシアリル化ＩｇＧ１ Ｆｃが作製され得る（Ａｎｔｈｏｎｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、３２０：３７３−３７６頁（２００８年））。

【0085】

用語抗体の「抗原−結合部分」とは、抗原と（例えば、ｈＩＬ−１β）特異的に結合する能力を保持する抗体の１以上の断片を指す。抗体の抗原−結合機能は、全長抗体の断片によって実施され得るということがわかっている。このような抗体実施形態はまた、２種以上の異なる抗原（例えば、ｈＩＬ−１βならびにｈＩＬ−１βおよびｈＩＬ−１αなどの異なる抗原分子）と特異的に結合する、二特異性、二重特異性または多重特異性形式であり得る。用語抗体の「抗原−結合部分」内に包含される結合断片の例として、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）_２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）単一の可変ドメインを含むｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ、３４１：５４４−５４６頁（１９８９年）；ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９０／０５１４４）；および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、組換え法を使用し、ＶＬおよびＶＨ領域対が一価分子を形成する単一のタンパク質鎖（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）としても知られる；例えば、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３−４２６頁（１９８８年）；およびＨｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ、８５：５８７９−５８８３頁（１９８８年）参照のこと）として製造されることを可能にする合成リンカーによって結合され得る。このような一本鎖抗体もまた、用語抗体の「抗原−結合部分」内に包含されるものとする。ダイアボディーなどの一本鎖抗体のその他の形態も包含される。ダイアボディーは、ＶＨおよびＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上に発現されるが、同一鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用し、それによって、ドメインが別の鎖の相補的ドメインと対形成するようにし、２つの抗原結合部位を作製する、二価の、二特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４−６４４８頁（１９９３年）； Ｐｏｌｊａｋ、Ｒ．Ｊ．、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、２：１１２１−１１２３頁（１９９４年）参照のこと）。このような抗体結合部分は、当技術分野で公知である（ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ編、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ （Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ． Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２００１年）、７９０頁（ＩＳＢＮ ３−５４０−４１３５４−５））。さらに、一本鎖抗体はまた、相補的軽鎖ポリペプチドと一緒になって、１対の抗原結合領域を形成する１対のタンデムＦｖセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む「直鎖抗体」も含む（Ｚａｐａｔａら Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、８（１０）：１０５７−１０６２頁（１９９５年）；および米国特許第５，６４１，８７０号）。

【0086】

免疫グロブリン定常（Ｃ）ドメインとは、重鎖（ＣＨ）または軽鎖（ＣＬ）定常ドメインを指す。マウスおよびヒトＩｇＧ重鎖および軽鎖定常ドメインアミノ酸配列は、当技術分野で公知である。

【0087】

用語「ＩＬ−１β結合タンパク質構築物」（または「結合タンパク質構築物」）とは、リンカーまたは免疫グロブリン定常ドメインと連結された本発明の抗原結合部分の１以上を含むポリペプチドを指す。「リンカーポリペプチド」は、ペプチド結合によって結合された２個以上のアミノ酸残基を含み、１つまたは複数の抗原結合部分を連結するために使用される。このようなリンカーポリペプチドは、当技術分野で周知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４−６４４８頁（１９９３年）；Ｐｏｌｊａｋ、Ｒ．Ｊ．、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、２：１１２１−１１２３頁（１９９４年）参照のこと）。免疫グロブリン定常ドメインとは、重鎖または軽鎖定常ドメインを指す。ヒトＩｇＧ重鎖および軽鎖定常ドメインアミノ酸配列は、当技術分野で公知であり、表２に表されている。

【0088】

【表6】

【0089】

さらに、抗体またはその抗原−結合部分などのＩＬ−１β結合タンパク質は、抗体または抗原−結合部分の１以上のその他のタンパク質またはペプチドとの共有または非共有結合によって形成された、より大きな免疫接着分子の一部であり得る。このような免疫接着分子の例として、四量体ｓｃＦｖ分子を製造するためのストレプトアビジンコア領域の使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖら、Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ、６：９３−１０１頁（１９９５年））ならびに二価の、ビオチン化ｓｃＦｖ分子を製造するためのシステイン残基、マーカーペプチドおよびＣ末端ポリヒスチジンタグの使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３１：１０４７−１０５８頁（１９９４年））が挙げられる。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片などの抗体部分は、全抗体のそれぞれパパインまたはペプシン消化などの従来技術を使用して全抗体から調製され得る。さらに、抗体、その抗原−結合部分および免疫接着分子は、本明細書に記載され、標準の組換えＤＮＡ技術を使用して得られる。

【0090】

「単離された抗体」とは、異なる抗原特異性を有するその他の抗体を実質的に含まない抗体を指すものとする（例えば、ｈＩＬ−１βと特異的に結合する単離された抗体は、ｈＩＬ−１β以外の抗原と特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかし、ｈＩＬ−１βと特異的に結合する単離された抗体は、その他の種に由来するＩＬ−１β分子などのその他の抗原に対して交差反応性を有し得る。さらに、単離された抗体は、その他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まない場合がある。

【0091】

用語「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、集団を含む個々の抗体は、少量で存在し得る、可能性ある天然に存在する突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原に対して向けられている。さらに、通常、種々の決定基（エピトープ）に対して向けられる種々の抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各ｍＡｂは、抗原上の単一の決定基に対して向けられる。修飾語句「モノクローナル」とは、任意の特定の方法による抗体の製造を必要とすると解釈されるべきではない。

【0092】

用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含む。本発明のヒト抗体は、例えば、ＣＤＲ、特に、ＣＤＲ３中に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでランダムおよび部位特異的突然変異誘発によって、またはインビボ体細胞突然変異によって誘発される突然変異）を含み得る。しかし、用語「ヒト抗体」は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列にグラフトされている抗体を含まない。

【0093】

用語「組換えヒト抗体」は、組換え手段によって調製、発現、作製もしくは単離されたすべてのヒト抗体、例えば、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体（以下の節ＩＩＣにさらに記載される）、組換え、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ、Ｈ．Ｒ．、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１５：６２−７０頁（１９９７年）；ＡｚｚａｚｙおよびＨｉｇｈｓｍｉｔｈ、Ｃｌｉｎ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．、３５：４２５−４４５頁（２００２年）；ＧａｖｉｌｏｎｄｏおよびＬａｒｒｉｃｋ、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、２９：１２８−１４５頁（２０００年）；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＣｈａｍｅｓ、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ、２１：３７１−３７８頁（２０００年））、ヒト免疫グロブリン遺伝子とってトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２０：６２８７−６２９５頁（１９９２年）；ＫｅｌｌｅｒｍａｎｎおよびＧｒｅｅｎ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１３：５９３−５９７頁（２００２年）；Ｌｉｔｔｌｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ、２１：３６４−３７０頁（２０００年）参照のこと）；またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列のその他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意のその他の手段によって調製、発現、作製もしくは単離された抗体を含む。このような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域および定常領域を有する。しかし、特定の実施形態では、このような組換えヒト抗体は、インビトロ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列にとってトランスジェニックの動物が使用される場合には、インビボ体細胞突然変異誘発）に付され、したがって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、それと関連している一方で、インビボにおけるヒト抗体生殖系列レパートリー内には天然に存在しない配列である。

【0094】

用語「キメラ抗体」とは、ある種に由来する重鎖および軽鎖可変領域配列ならびに別の種に由来する定常領域配列を含む抗体、例えば、ヒト定常領域と連結しているマウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体を指す。

【0095】

用語「ＣＤＲグラフト化抗体」とは、１つの種に由来するが、ＶＨおよび／またはＶＬの１つまたは複数のＣＤＲ領域の配列が、別の種のＣＤＲ配列で置換されている重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体、例えば、１つまたは複数のマウスＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ３）がヒトＣＤＲ配列で置換されている、マウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体を指す。

【0096】

用語「ＣＤＲ」とは、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖および軽鎖の可変領域の各々中に３つのＣＤＲがあり、これらは、可変領域の各々のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と呼ばれる。本明細書において、用語「ＣＤＲセット」とは、抗原と結合することができる単一の可変領域中に生じる３つのＣＤＲの群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は異なるシステムに従って異なって定義されている。カバットによって記載されたシステム（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ （Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８７年）および（１９９１年））は、抗体の任意の可変領域に適用可能な明白な残基番号付けシステムを提供するだけでなく、３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界も提供する。これらのＣＤＲは、「カバットＣＤＲ」と呼ばれることもある。Ｃｈｏｔｈｉａおよび共同研究者（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１−９１７頁（１９８７年）；ならびにＣｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７７−８８３頁（１９８９年））は、カバットＣＤＲ内の特定の下位部分が、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格立体構造をとることを見出した。これらの下位部分は、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３またはＨ１、Ｈ２およびＨ３と示され、ここで、「Ｌ」および「Ｈ」は、軽鎖および重鎖領域をそれぞれ示す。これらの領域は、「コチア（Ｃｈｏｔｈｉａ）ＣＤＲ」と呼ばれることもあり、これは、カバットＣＤＲと重複する境界を有する。カバットＣＤＲと重複するＣＤＲを定義するその他の境界は、Ｐａｄｌａｎら、（ＦＡＳＥＢ Ｊ．、９：１３３−１３９頁（１９９５年））およびＭａｃＣａｌｌｕｍら、（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２６２（５）：７３２−７４５頁（１９９６年））によって記載されている。さらにその他のＣＤＲ境界定義は、本明細書のシステムの１つを厳密にたどらない場合もあるが、それでも、カバットＣＤＲと重複するが、それらは、特定の残基または残基の群または全ＣＤＲでさえ、抗原結合に大幅に影響を与えないという予測または実験的知見を踏まえて、短くされる場合も、長くされる場合もある。本明細書において使用される方法は、これらのシステムのいずれかに従って定義されたＣＤＲを使用し得るが、例示的な一実施形態は、カバットまたはコチアによって定義されるＣＤＲを使用する。

【0097】

用語「カバット番号付け」、「カバット定義」および「カバット標識」は、本明細書において同義的に使用される。当技術分野で認識されるこれらの用語は、抗体の重鎖および軽鎖可変領域中のその他のアミノ酸残基よりも可変（すなわち、超可変）であるアミノ酸残基またはその抗原結合部分を番号付けるシステムを指す（Ｋａｂａｔら、Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、１９０：３８２−３９１頁（１９７１年）；およびＫａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ第９１−３２４２（１９９１年））。重鎖可変領域について、超可変領域は、ＣＤＲ１のアミノ酸位置３１−３５、ＣＤＲ２のアミノ酸位置５０−６５およびＣＤＲ３のアミノ酸位置９５−１０２の範囲である。軽鎖可変領域については、超可変領域は、ＣＤＲ１のアミノ酸位置２４−３４、ＣＤＲ２のアミノ酸位置５０−５６およびＣＤＲ３のアミノ酸位置８９−９７の範囲である。

【0098】

過去２０年にわたる重鎖可変および軽鎖領域のアミノ酸配列の大規模な公開データベースの成長および分析が、可変領域配列内のフレームワーク領域（ＦＲ）およびＣＤＲ配列間の通常の境界の理解につながり、この分野の当業者が、カバット番号付け、コチア番号付けまたはその他のシステムに従ってＣＤＲを正確に決定することが可能となった。例えば、第３１章、ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ編、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ、２００１年）中、特に４３２−４３３頁、Ｍａｒｔｉｎ、「Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ」参照のこと。重鎖可変（ＶＨ）および軽鎖可変（ＶＬ）領域のアミノ酸配列内のカバットＣＤＲのアミノ酸配列の配列を決定する有用な方法が以下に提供される。

【0099】

ＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列を同定するために：
ＶＬ領域のアミノ末端からおよそ２４個のアミノ酸残基を出発し；
ＣＤＲ−Ｌ１配列の前の残基は、常にシステイン（Ｃ）であり；
ＣＤＲ−Ｌ１配列の後ろの残基は、常にトリプトファン（Ｗ）残基、通常、Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ（Ｗ−Ｙ−Ｑ）、またＴｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ（Ｗ−Ｌ−Ｑ）、Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ（Ｗ−Ｆ−Ｑ）およびＴｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ（Ｗ−Ｙ−Ｌ）であり；
長さは、通常、１０−１７個のアミノ酸残基である。

【0100】

ＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列を同定するために：
常に、ＣＤＲ−Ｌ１の末端の後ろの１６個の残基を出発し；
ＣＤＲ−Ｌ２配列の前の残基は、一般に、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（Ｉ−Ｙ）、またＶａｌ−Ｔｙｒ（Ｖ−Ｙ）、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ（Ｉ−Ｋ）およびＩｌｅ−Ｐｈｅ（Ｉ−Ｆ）であり；
長さは、常に７個のアミノ酸残基である。

【0101】

ＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列を同定するために：
常に、ＣＤＲ−Ｌ２の末端の後ろの３３個のアミノ酸を出発し；
ＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列の前の残基は、常に、システイン（Ｃ）であり；
ＣＤＲ−Ｌ３配列の後ろの残基は、常に、Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ（Ｆ−Ｇ−Ｘ−Ｇ）（配列番号１１）（式中、Ｘは、任意のアミノ酸である）であり；
長さは、通常、７−１１個のアミノ酸残基である。

【0102】

ＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列を同定するために：
ＶＨ領域のアミノ末端からおよそ３１個のアミノ酸残基および常に、システイン（Ｃ）の後ろの９個の残基を出発し；
ＣＤＲ−Ｈ１配列の前の残基は、常に、Ｃｙｓ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｘ（配列番号１２）（式中、Ｘは、任意のアミノ酸である）であり；
ＣＤＲ−Ｈ１配列の後ろの残基は、常にＴｒｐ（Ｗ）、通常、Ｔｒｐ−Ｖａｌ（Ｗ−Ｖ）、またＴｒｐ−Ｉｌｅ（Ｗ−Ｉ）およびＴｒｐ−Ａｌａ（Ｗ−Ａ）であり；
長さは、通常、５−７個のアミノ酸残基である。

【0103】

ＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列を同定するために：
常に、ＣＤＲ−Ｈ１の末端の後ろの１５個のアミノ酸残基を出発し；
ＣＤＲ−Ｈ２配列の前の残基は、通常、Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ（Ｌ−Ｅ−Ｗ−Ｉ−Ｇ）（配列番号２３）、またその他の変化でもあり；
ＣＤＲ−Ｈ２配列の後ろの残基は、Ｌｙｓ／Ａｒｇ−Ｌｅｕ／Ｉｌｅ／Ｖａｌ／Ｐｈｅ／Ｔｈｒ／Ａｌａ−Ｔｈｒ／Ｓｅｒ／Ｉｌｅ／Ａｌａ（Ｋ／Ｒ−Ｌ／Ｉ／Ｖ／Ｆ／Ｔ／Ａ−Ｔ／Ｓ／Ｉ／Ａ）であり；
長さは、通常、１６−１９個のアミノ酸残基である。

【0104】

ＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列を同定するために：
常に、ＣＤＲ−Ｈ２の末端の後ろの３３個のアミノ酸残基および常に、システイン（Ｃ）の後ろの３個を出発し、
ＣＤＲ−Ｈ３配列の前の残基は、常に、Ｃｙｓ−Ｘ−Ｘ（Ｃ−Ｘ−Ｘ）（式中、Ｘは、任意のアミノ酸である）、通常、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ａｒｇ（Ｃ−Ａ−Ｒ）であり；
ＣＤＲ−Ｈ３配列の後ろの残基は、常に、Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ（Ｗ−Ｇ−Ｘ−Ｇ）（配列番号２４）（式中、Ｘは、任意のアミノ酸である）であり；
長さは、通常、３−２５個のアミノ酸残基である。

【0105】

本明細書において、用語「標準」残基とは、両方とも参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｈｏｔｈｉａら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１−９１７頁（１９８７年））およびＣｈｏｔｈｉａら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：７９９−８１７頁（１９９２年））による定義の特定の標準ＣＤＲ構造を規定するＣＤＲまたはフレームワーク中の残基を指す。Ｃｈｏｔｈｉａらによれば、多数の抗体のＣＤＲの重要な部分は、アミノ酸配列のレベルでの大きな多様性にもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格確認（ｃｏｎｆｉｒｍａｔｉｏｎｓ）を有する。各標準構造は、ループを形成するアミノ酸残基の連続セグメントの１セットのペプチド骨格ねじれ角を主に規定する。

【0106】

「親和性成熟」抗体とは、変更（複数可）を有さない親抗体と比較して、標的抗原に対する抗体の親和性において改善をもたらす、１つまたは複数のそのＣＤＲ中に１つまたは複数の変更を有する抗体である。例示的親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモルの親和性、またはさらにピコモルの親和性さえ有する。親和性成熟抗体を製造するための種々の手順は、当技術分野で公知である。例えば、Ｍａｒｋｓら、ＢｉｏＴｅｃｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９−７８３頁（１９９２年）には、ＶＨおよびＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟が記載されている。ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は、Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９１：３８０９−３８１３頁（１９９４年）；Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ、１６９：１４７−１５５頁（１９９５年）；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５：１９９４−２００４頁（１９９５年）；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４（７）：３３１０−３３１９頁（１９９５年）；Ｈａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２６：８８９−８９６頁（１９９２年）によって記載されている。選択的突然変異誘発位置での、およびアミノ酸残基を増強する活性を有する接触位置または高頻度突然変異位置での選択的突然変異は、米国特許第６，９１４，１２８ Ｂ１号に記載されている。

【0107】

用語「多価結合タンパク質」とは、２以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質を示す。多価結合タンパク質は、好ましくは、３以上の抗原結合部位を有するよう操作され、一般に、天然に存在しない抗体である。用語「多重特異性結合タンパク質」とは、２種以上の関連する標的または関連していない標的と結合できる結合タンパク質を指す。本発明の「二重可変ドメイン」（「ＤＶＤ」）結合タンパク質は、２以上の抗原結合部位を含み、四価または多価結合タンパク質である。ＤＶＤは、単一特異性であり得る、すなわち、１種の抗原と結合できる、または多重特異性であり得る、すなわち、２種以上の抗原と結合できる。２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むＤＶＤ結合タンパク質は、「ＤＶＤ免疫グロブリン」または「ＤＶＤ−Ｉｇ」と呼ばれる。ＤＶＤ−Ｉｇの半分は各々、重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび軽鎖ＤＶＤポリペプチドならびに２以上の抗原結合部位を含む。結合部位は各々、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含み、抗原結合部位あたり、抗原結合中に関与する合計６つのＣＤＲを有する。

【0108】

ＤＶＤ−Ｉｇ分子の設計、発現および特性決定の説明は、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００７／０２４７１５；米国特許第７，６１２，１８１号およびＷｕら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２５：１２９０−１２９７頁（２００７年）に提供されている。このようなＤＶＤ−Ｉｇ分子の好ましい例は、構造式ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ［式中、ＶＤ１は、第１の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の重鎖可変ドメインであり、Ｃは、重鎖定常ドメインであり、Ｘ１は、リンカーであり（ただし、ＣＨ１ではない）、Ｘ２は、Ｆｃ領域であり、ｎは、０または１であるが、好ましくは、１である］を含む重鎖および構造式ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ［式中、ＶＤ１は、第１の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは、軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１は、リンカーであり（ただし、ＣＨ１ではない）、Ｘ２は、Ｆｃ領域を含まず、ｎは、０または１であるが、好ましくは、１である］を含む軽鎖を含む。このようなＤＶＤ−Ｉｇは、２つのこのような重鎖および２つのこのような軽鎖を含むことがあり、ここで、各鎖は、可変領域の間に介在する定常領域を有さず、タンデムに結合された可変ドメインを含み、重鎖および軽鎖は、会合して、タンデムの機能性抗原結合部位を形成し、１対の重鎖および軽鎖は、別の対の重鎖および軽鎖と会合して、４つの抗原結合部位を有する四量体結合タンパク質を形成し得る。別の例では、ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、可変領域の間に介在する定常領域を有さず、タンデムに連結された３つの可変ドメイン（ＶＤ１、ＶＤ２、ＶＤ３）を各々含む重鎖および軽鎖を含むことがあり、ここで、１対の重鎖および軽鎖は、会合して、３つの抗原結合部位を形成し得、１対の重鎖および軽鎖は、別の対の重鎖および軽鎖と会合して、６つの抗原結合部位を有する四量体結合タンパク質を形成し得る。

【0109】

ＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質は、ＩＬ−１βの１以上のエピトープと結合し得る。ＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質はまた、ＩＬ−１βのエピトープおよびＩＬ−１βポリペプチド以外の第２の標的抗原のエピトープと結合し得る。

【0110】

本明細書において、用語「二特異性抗体」とは、クアドローマ技術によって（Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３０５（５９３４）：５３７−５４０頁（１９８３年））、２種の異なるモノクローナル抗体の化学的コンジュゲーションによって（Ｓｔａｅｒｚら、Ｎａｔｕｒｅ、３１４：６２８−６３１頁（１９８５年））、またはＦｃ領域中の突然変異を誘発するノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ）もしくは同様のアプローチ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０（１４）：６４４４−６４４８頁（１９９３年）も参照のこと）によって作製され、その結果、複数の異なる免疫グロブリン種が得られる全長抗体を指し、そのうち１種のみが、機能性二特異性抗体である。分子機能によって、二特異性抗体は、その２つの結合アーム（ＨＣ／ＬＣの１対）のうち一方の１種の抗原（またはエピトープ）と結合し、その第２のアーム（ＨＣ／ＬＣの異なる対）上の異なる抗原（またはエピトープ）と結合する。この定義によって、二特異性抗体は、２つの別個の抗原結合アーム（特異性およびＣＤＲ配列の両方において）を有し、それが結合する各抗原に対して一価である。

【0111】

本明細書において、用語「二重特異性抗体」とは、その２つの結合アーム（ＨＣ／ＬＣの対）の各々中の２種の異なる抗原（またはエピトープ）と結合できる全長抗体を指す（ＰＣＴ公開第ＷＯ０２／０２７７３参照のこと）。したがって、二重特異性結合タンパク質は、同一の特異性および同一のＣＤＲ配列を有する２つの同一の抗原結合アームを有し、それが結合する各抗原に対して二価である。

【0112】

結合タンパク質の「機能的抗原結合部位」は、標的抗原と結合できるものである。抗原結合部位の抗原結合親和性は、必ずしも、抗原結合部位が由来する親抗体と同程度には強くないが、抗原と結合する能力は、抗原と結合する抗体を評価するための種々の公知の方法のいずれか１種を使用して測定可能でなければならない。さらに、本明細書における多価抗体の抗原結合部位の各々の抗原結合親和性は、定量的に同一である必要はない。

【0113】

用語「サイトカイン」は、１つの細胞集団から放出され、細胞間メディエーターとして別の細胞集団に対して作用するタンパク質の一般用語である。このようなサイトカインの例として、リンホカイン、モノカインおよび従来のポリペプチドホルモンがある。サイトカインの中に、成長ホルモン、例えば、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；糖タンパク質ホルモン、例えば、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）および黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝臓増殖因子；繊維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）および腫瘍壊死因子−ベータ（ＴＮＦ−β）などの腫瘍壊死因子；ミュラー管抑制因子；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−アルファ（ＮＧＦ−α）などの神経成長因子；血小板−増殖因子；胎盤増殖因子；ＴＧＦ−アルファ（ＴＧＦ−α）およびＴＧＦ−ベータ（ＴＧＦ−β）などのトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様成長因子−１および−１１；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン−アルファ（ＩＦＮ−α）、インターフェロン−ベータ（ＩＦＮ−β）およびインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）などのインターフェロン；マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３３などのインターロイキン（ＩＬ）；ならびにＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ）を始めとするその他のポリペプチド因子がある。本明細書において、用語サイトカインは、天然供給源に由来するタンパク質または組換え細胞培養に由来するタンパク質および天然配列サイトカインの生物学的に活性な同等物を含む。

【0114】

本明細書において、用語「ドナー」および「ドナー抗体」とは、１つまたは複数のＣＤＲを提供する抗体を指す。例示的な一実施形態では、ドナー抗体は、フレームワーク領域が得られるまたはそれに由来する抗体とは異なる種に由来する抗体である。ヒト化抗体との関連で、用語「ドナー抗体」とは、１つまたは複数のＣＤＲを提供する非ヒト抗体を指す。

【0115】

本明細書において、用語「フレームワーク」または「フレームワーク配列」とは、ＣＤＲを引いた可変領域の残りの配列を指す。ＣＤＲ配列の正確な定義は、種々のシステムによって決定できるので、フレームワーク配列の意味は、相応に異なる解釈次第である。６つのＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、−Ｌ２および−Ｌ３ならびに重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、−Ｈ２および−Ｈ３）はまた、軽鎖および重鎖上のフレームワーク領域を各鎖上の４つの小領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）に分け、これでは、ＣＤＲ１はＦＲ１およびＦＲ２の間に位置し、ＣＤＲ２は、ＦＲ２およびＦＲ３の間、ＣＤＲ３は、ＦＲ３およびＦＲ４の間に位置する。ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３またはＦＲ４として特定の小領域を規定するものではなく、その他のものによって呼ばれるフレームワーク領域は、単一の天然に存在する免疫グロブリン鎖の可変領域内の組み合わせたＦＲｓを表す。本明細書において、ＦＲは、４つの小領域のうち１つを表し、ＦＲｓは、フレームワーク領域を構成する４つの小領域のうち２以上を表す。

【0116】

本明細書において、用語「アクセプター」および「アクセプター抗体」とは、１つまたは複数のフレームワーク領域のアミノ酸配列の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％を提供する抗体またはコードする核酸配列を指す。いくつかの実施形態では、用語「アクセプター」とは、定常領域（複数可）を提供する抗体アミノ酸またはコードする核酸配列を指す。さらに別の実施形態では、用語「アクセプター」とは、１つまたは複数のフレームワーク領域および定常領域（複数可）を提供する抗体アミノ酸またはコードする核酸配列を指す。特定の実施形態では、用語「アクセプター」とは、１つまたは複数のフレームワーク領域のアミノ酸配列の少なくとも８０％、好ましくは、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％を提供するまたはコードするヒト抗体アミノ酸または核酸配列を指す。この実施形態と一致して、アクセプターは、ヒト抗体の１つまたは複数の特定の位置では生じない少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個または少なくとも１０個のアミノ酸残基を含有し得る。アクセプターフレームワーク領域および／またはアクセプター定常領域（複数可）は、例えば、生殖系列抗体遺伝子、成熟した抗体遺伝子、機能性抗体（例えば、当技術分野で周知の抗体、開発中の抗体または市販の抗体）に由来するまたはそれらから得られる。

【0117】

ヒト重鎖および軽鎖アクセプター配列は、当技術分野で公知である。本発明の一実施形態では、ヒト重鎖および軽鎖アクセプター配列は、Ｖ−ｂａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｖｂａｓｅ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／）から、またはＩＭＧＴ（登録商標）、ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／ｔｅｘｔｅｓ／ＩＭＧＴｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ／ＬｏｃｕｓＧｅｎｅｓ／）から列挙される配列から選択される。本発明の別の実施形態では、ヒト重鎖および軽鎖アクセプター配列は、表３および表４に記載される配列から選択される。

【0118】

【表7】

【0119】

【表8】

【0120】

本明細書において、用語「生殖系列抗体遺伝子」または「遺伝子断片」とは、特定の免疫グロブリンの発現のための遺伝子再配列および突然変異につながる成熟プロセスを受けていない、非リンパ系細胞によってコードされる免疫グロブリン配列を指す（例えば、Ｓｈａｐｉｒｏら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２２（３）：１８３−２００頁（２００２年）；Ｍａｒｃｈａｌｏｎｉｓら、Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．、４８４：１３−３０頁（２００１年）参照のこと）。本発明の種々の実施形態によって提供される利点の１つは、生殖系列抗体遺伝子は、成熟抗体遺伝子よりも、種において個体の特徴を示す必須アミノ酸配列構造を保存する可能性が高く、したがって、その種において治療上使用される場合に外来供給源に由来すると認識される可能性が低いという認識から生じる。

【0121】

本明細書において、用語「重要な残基」とは、抗体、特に、ヒト化抗体の結合特異性および／または親和性に対してより影響を与える可変領域内の特定の残基を指す。重要な残基として、それだけには限らないが、以下：ＣＤＲに隣接している残基、可能性あるグリコシル化部位（Ｎ−またはＯ−グリコシル化部位のいずれかであり得る）、稀な残基、抗原と相互作用できる残基、ＣＤＲと相互作用できる残基、標準残基、重鎖可変領域および軽鎖可変領域間の接触残基、バーニアゾーン内の残基および可変重鎖ＣＤＲ１のコチア定義および第１の重鎖フレームワークのカバット定義間で重複する領域中の残基のうち１種または複数が挙げられる。

【0122】

用語「ヒト化抗体」とは、非ヒト種（例えば、マウス）に由来する重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨおよび／またはＶＬ配列の少なくとも一部が、より「ヒト様」である、すなわち、ヒト生殖系列可変配列により類似しているよう変更されている抗体を指す。ヒト化抗体の１つの種類は、ヒトＣＤＲ配列が、対応する非ヒトＣＤＲ配列を置換するよう非ヒトＶＨおよびＶＬ配列中に導入されているＣＤＲグラフト化抗体である。また、「ヒト化抗体」は、対象とする抗原と免疫特異的に結合し、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域および非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体またはその変異体、誘導体、類似体または断片である。本明細書において、ＣＤＲに関連して、用語「実質的に」とは、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のものに対応し、フレームワーク領域のすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである、少なくとも１つの、通常、２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）のすべてを実質的に含む。一実施形態では、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、通常、ヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖ならびに重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含有する。抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４領域を含み得る。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含有する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含有する。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖および／またはヒト化重鎖のヒト化可変ドメインのみを含有する。

【0123】

ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを始めとする免疫グロブリンの任意のクラス、ならびに制限するものではないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を始めとする任意のアイソタイプから選択され得る。ヒト化抗体は、２以上のクラスまたはアイソタイプ由来の配列を含んでもよく、特定の定常ドメインは、当技術分野で周知の技術を使用して、所望のエフェクター機能を最適化するよう選択され得る。

【0124】

ヒト化抗体のフレームワークおよびＣＤＲ領域は、親配列と正確に対応する必要はなく、例えば、ドナー抗体ＣＤＲまたはコンセンサスフレームワークは、少なくとも１個のアミノ酸残基の置換、挿入および／または欠失によって突然変異され、その結果、その部位でのＣＤＲまたはフレームワーク残基が、ドナー抗体またはコンセンサスフレームワークのいずれかと対応しなくてもよい。しかし、例示的な実施形態では、このような突然変異は、大規模なものではない。普通、ヒト化抗体残基の少なくとも８０％、好ましくは、少なくとも８５％、より好ましくは、少なくとも９０％、最も好ましくは、少なくとも９５％は、親のＦＲおよびＣＤＲ配列のものと対応する。本明細書において、用語「コンセンサスフレームワーク」とは、コンセンサス免疫グロブリン配列中のフレームワーク領域を指す。本明細書において、用語「コンセンサス免疫グロブリン配列」とは、関連免疫グロブリン配列のファミリーにおいて最も頻繁に生じるアミノ酸（またはヌクレオチド）から形成される配列を指す（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ、Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ１９８７年参照のこと）。免疫グロブリンのファミリーでは、コンセンサス配列中の各位置は、ファミリーにおいてその位置で最も頻繁に生じるアミノ酸によって占められている。２個のアミノ酸が等しく頻繁に生じる場合には、いずれかがコンセンサス配列中に含まれ得る。

【0125】

ＤＶＤ−Ｉｇまたはその他の結合タンパク質分子を構築することに関して、「リンカー」は、単一のアミノ酸またはペプチド結合によって結合されている２個以上のアミノ酸残基を含むポリペプチド（「リンカーポリペプチド」）を示すよう使用され、１つまたは複数の抗原結合部分を連結するために使用される。このようなリンカーポリペプチドは、当技術分野で周知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４−６４４８頁（１９９３年）；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、２：１１２１−１１２３頁（１９９４年））。例示的リンカーとして、それだけには限らないが、ＧＧＧＧＳＧ（配列番号２６）、ＧＧＳＧＧ（配列番号２７）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２８）、ＧＧＳＧＧＧＧＳＧ（配列番号２２３）、ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号２９）、ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号３１）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３２）、ＡＳＴＫＧＰ（配列番号３３）、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号３４）、ＴＶＡＡＰ（配列番号３５）、ＲＴＶＡＡＰ（配列番号２２４）、ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号３６）、ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号２２５）、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ（配列番号３７）、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号３８）、ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号３９）、ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号４０）、ＳＡＫＴＴＰ（配列番号４１）、ＲＡＤＡＡＰ（配列番号４２）、ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ（配列番号４３）、ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ（配列番号４４）、ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４５）、ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号４６）、ＡＤＡＡＰ（配列番号４７）、ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ（配列番号４８）、ＱＰＫＡＡＰ（配列番号４９）、ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ（配列番号５０）、ＡＫＴＴＰＰ（配列番号５１）、ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ（配列番号５２）、ＡＫＴＴＡＰ（配列番号５３）、ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ（配列番号５４）、ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ（配列番号５５）、ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ（配列番号５６）、およびＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳ（配列番号５７）が挙げられる。

【0126】

本明細書において、「バーニア」ゾーンとは、参照により本明細書に組み込む、ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ、（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２４：４８７−４９９頁（１９９２年））によって記載される、ＣＤＲ構造を調整し、抗原に対する適合度を微調整し得るフレームワーク残基のサブセットを指す。バーニアゾーン残基は、ＣＤＲの根底をなす層を形成し、ＣＤＲの構造および抗体の親和性に対して影響を及ぼし得る。

【0127】

本明細書において、用語「中和する」とは、結合タンパク質が抗原と特異的に結合すると、抗原（例えば、サイトカインＩＬ−１β）の生物活性を中和することを指す。好ましくは、本明細書に記載された中和結合タンパク質は、ｈ ＩＬ−１βと結合し、ｈ ＩＬ−１βの生物活性の阻害をもたらす。好ましくは、中和結合タンパク質は、ｈ ＩＬ−１βと結合し、ｈ ＩＬ−１βの生物活性を少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％またはそれ以上低減する。中和結合タンパク質によるｈ ＩＬ−１βの生物活性の阻害は、当技術分野で周知のｈ ＩＬ−１β生物活性の１つまたは複数の指標を測定することによって評価され得る。例えば、ＨＳ２７細胞におけるＩＬ−１β誘導によるヒトＩＬ−６分泌の阻害。

【0128】

用語「活性」は、抗原、例えば、ＩＬ−１β抗原と結合する抗ｈ ＩＬ−１β抗体に対する抗体の結合特異性／親和性および／または抗体、例えば、ｈ ＩＬ−１βとのその結合がｈ ＩＬ−１βの生物活性を阻害する抗ＩＬ−１β抗体の中和力などの活性、例えば、ＨＳ２７細胞におけるＩＬ−１β誘導によるヒトＩＬ−１６分泌の阻害を含む。

【0129】

用語「エピトープ」は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体と特異的に結合することができる任意のポリペプチド決定基を含む。特定の実施形態では、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニルなどの分子の化学的に活性な表面配置を含み、特定の実施形態では、特定の３次元構造的特徴および／または特定の荷電特徴を有し得る。エピトープは、抗体によって結合される抗原の領域である。特定の実施形態では、抗体は、タンパク質および／または高分子の複雑な混合物中のその標的抗原を優先的に認識する場合に、抗原と特異的に結合するといわれる。抗体は、抗体が交差競合する（一方がもう一方の結合または調節効果を妨げる）場合に「同一のエピトープと結合する」といわれる。さらに、エピトープの構造定義（重複する、同様の、同一の）は、情報を与えるものであるが、機能的定義は、それらが構造的（結合）および機能的（調節、競合）パラメーターを包含するので、より関連があることが多い。

【0130】

本明細書において、用語「表面プラズモン共鳴」とは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ ａｎｄ Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化の検出によってリアルタイム生体特異的相互作用の分析を可能にする光学現象を指す。さらなる説明のためには、Ｊｏｎｓｓｏｎら、Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．、５１：１９−２６頁（１９９３年）；Ｊｏｎｓｓｏｎら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、１１：６２０−６２７頁（１９９１年）；Ｊｏｈｎｓｓｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．、８：１２５−１３１頁（１９９５年）；およびＪｏｈｎｓｓｏｎら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１９８：２６８−２７７頁（１９９１年）参照のこと。

【0131】

用語「Ｋ_ｏｎ」（または「Ｋｏｎ」、「ｋｏｎ」）とは、本明細書において、当技術分野で公知の、会合複合体（例えば、抗体／抗原）を形成するための、結合タンパク質（例えば、抗体）の抗原との会合の結合速度（ｏｎ ｒａｔｅ）定数を指すものとする。「Ｋ_ｏｎ」はまた、本明細書において同義的に使用される、用語「結合速度定数」または「ｋ_ａ」によって知られている。抗体のその標的抗原との結合速度または抗体および抗原間の複合体形成の速度を示すこの値は、以下の方程式：
抗体 （「Ａｂ」） ＋ 抗原（「Ａｇ」）→Ａｂ−Ａｇ
によって示すとおりである。

【0132】

用語「Ｋ_ｏｆｆ」（同様に、「Ｋｏｆｆ」、「ｋｏｆｆ」）は、本明細書において、当技術分野で公知の、会合複合体（例えば、抗体／抗原複合体）からの結合タンパク質（例えば、抗体）の解離についての解離速度定数または「解離速度定数」を指すものとする。この値は、以下の方程式によって示される、抗体のその標的抗原からの解離速度またはＡｂ−Ａｇ複合体の遊離抗体および抗原への経時的な分離を示す：
Ａｂ＋Ａｇ←Ａｂ−Ａｇ
本明細書において、「Ｋ_Ｄ」（同様に、「Ｋ_ｄ」）は、「平衡解離定数」を指し、平衡での力価測定において、または解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を結合速度定数（Ｋｏｎ）によって除することによって得られる値を指す。結合速度定数（Ｋｏｎ）、解離速度定数（Ｋｏｆｆ）および平衡解離定数（Ｋ）は、抗体の抗原との結合親和性を表すために使用される。結合および解離速度定数を測定する方法は、当技術分野で周知である。蛍光ベースの技術を使用することで、平衡にある生理学的バッファー中の試料を調べるための高い感受性および能力が提供される。ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）（生体分子相互作用分析）アッセイなどのその他の実験アプローチおよび機器（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＡＢ、ａ ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ｃｏｍｐａｎｙ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎから入手可能な機器）が使用され得る。さらに、Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ、Ｉｄａｈｏ）から入手可能である、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ）アッセイも使用され得る。

【0133】

用語「標識」および「検出可能な標識」とは、例えば、特異的結合対のメンバー、例えば、抗体および分析物間の反応を検出可能にするために、特異的結合パートナー、例えば、抗体または分析物と結合している部分を意味する。そのように標識された、特異的結合パートナー、例えば、抗体または分析物は、「検出可能に標識された」と呼ばれる。したがって、本明細書において、用語「標識された結合タンパク質」とは、結合タンパク質の同定を提供する標識が組み込まれたタンパク質を指す。一実施形態では、標識は、目視によるまたは機器による手段、例えば、放射標識されたアミノ酸の組み込みまたは印をつけたアビジンまたはストレプトアビジン（例えば、蛍光マーカーまたは光学的方法もしくは比色法によって検出され得る酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出され得るビオチニル部分のポリペプチドとの結合によって、検出可能であるシグナルを生じることができる検出可能なマーカーである。ポリペプチドのための標識の例として、それだけには限らないが、以下：放射性同位体また放射性核種（例えば、^３Ｈ_、^１４Ｃ_、^３５Ｓ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１１１Ｉｎ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１７７Ｌｕ、^１６６Ｈｏおよび^１５３Ｓｍ）、色素原、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニドホスホール（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｓ））、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光マーカー、ビオチニル基、第２のリポーター（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメインおよびエピトープタグ）によって認識される所定のポリペプチドエピトープ；および磁性物質（例えば、ガドリニウムキレート）が挙げられる。イムノアッセイのために使用されることの多い標識の代表的な例として、光を生じる部分、例えば、アクリジニウム化合物および蛍光を生じる部分、例えば、フルオレセインが挙げられる。その他の標識は、本明細書に記載される。この関連で、部分自体が検出可能に標識されない場合もあるが、さらに別の部分との反応の際に検出可能になる場合もある。用語「検出可能に標識された」の使用は、後者のタイプの検出可能な標識を包含するものとする。

【0134】

用語「ＩＬ−１β結合タンパク質コンジュゲート」とは、治療用または細胞傷害性薬剤などの第２の化学部分と化学的に連結された本明細書に記載されるＩＬ−１β結合タンパク質を指す。用語「薬剤」とは、本明細書において、化合物、化合物の混合物、生体高分子または生体物質から作られている抽出物を示すよう使用される。好ましくは、治療用または細胞傷害性薬剤として、それだけには限らないが、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにその類似体または相同体が挙げられる。ＩＬ−１β結合タンパク質コンジュゲートは、イムノアッセイとの関連で使用される場合、検出可能に標識された抗体であり得、検出抗体として使用される。

【0135】

本明細書において、用語「結晶」および「結晶化された」とは、結晶の形態で存在する結合タンパク質（例えば、抗体）またはその抗原結合部分を指す。結晶は、物質の固体状態の１種の形態であり、非晶質固体状態または液晶状態などのその他の形態とは別個である。結晶は、原子、イオン、分子（例えば、抗体などのタンパク質）または分子集合体（例えば、抗原／抗体複合体）の、規則正しい、反復する３次元の配置からなる。これらの３次元配置は、この分野で十分に理解されている特定の数学的関係に従って配列される。結晶中で反復される基本単位またはビルディングブロックは、非対称単位と呼ばれる。所与の、十分に定義された結晶学的対称と一致する配列中の非対称単位の反復は、結晶の「単位格子」を提供する。３次元すべてにおける規則正しい並進による単位格子の反復は結晶を提供する。Ｇｉｅｇｅら、第１章、Ｉｎ Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、第２版、（ＤｕｃｒｕｉｘおよびＧｉｅｇｅ編）（Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９９年）中、１−１６頁参照のこと。

【0136】

用語「ポリヌクレオチド」とは、リボヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドいずれかまたはいずれかの種類のヌクレオチドの修飾された形態の２つ以上のヌクレオチドのポリマー形態を意味する。この用語は、ＤＮＡの一本鎖および二本鎖形態を含む。

【0137】

用語「単離されたポリヌクレオチド」とは、その起源によって、ポリヌクレオチド（例えば、ゲノム、ｃＤＮＡの、または合成起源の、またはそれらのいくつかの組合せ）を意味するものとし、「単離されたポリヌクレオチド」は、天然に「単離されたポリヌクレオチド」が、それとともに見られるポリヌクレオチドのすべてまたは一部と会合しておらず；天然には連結していないポリヌクレオチドと作動可能に連結され；またはより長い配列の一部として天然には生じない。

【0138】

本明細書において、用語「ベクター」は、連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すものとする。ベクターの１つの種類は、「プラスミド」であり、その中にさらなるＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る環状の二本鎖ＤＮＡループを指す。別の種類のベクターは、ウイルスベクターであり、これでは、さらなるＤＮＡセグメントがウイルスゲノム中にライゲーションされ得る。特定のベクターは、それらが導入されている宿主細胞において自己複製できる（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。その他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入の際に宿主細胞のゲノム中に組み込まれることができ、それによって、宿主ゲノムとともに複製される。さらに、特定のベクターは、それらが作動可能に連結されている遺伝子の発現を指示できる。このようなベクターは、本明細書において、「組換え発現ベクター」（または簡単、「発現ベクター」）と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、プラスミドの形態であることが多い。本明細書では、「プラスミド」および「ベクター」は、プラスミドが、ベクターの最もよく使用される形態であるので同義的に使用され得る。しかし、本発明は、同等の機能を果たす、ウイルスベクター（例えば、複製欠陥レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）などの発現ベクターのこのようなその他の形態を含むものとする。

【0139】

用語「作動可能に連結された」とは、記載された成分が、それらがその意図される方法で機能するのを可能にする関係にある近位を指す。コード配列に「作動可能に連結された」制御配列は、コード配列の発現が、制御配列に適合する条件下で達成されるような方法でライゲーションされる。「作動可能に連結された」配列は、対象とする遺伝子と連続している発現制御配列およびトランスで作用するまたは対象とする遺伝子からある距離をおいて制御する発現制御配列の両方を含む。本明細書において、用語「発現制御配列」とは、それらがライゲーションされているコード配列の発現およびプロセシングを達成するために必須であるポリヌクレオチド配列を指す。発現制御配列として、適当な転写開始、終結、プロモーターおよびエンハンサー配列；スプライシングおよびポリアデニル化シグナルなどの効率的なＲＮＡプロセシングシグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳効率を増強する配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）；タンパク質安定性を増強する配列；および望ましい場合には、タンパク質分泌を増強する配列が挙げられる。このような制御配列の性質は、宿主生物に応じて異なり；原核生物では、このような制御配列は、一般に、プロモーター、リボソーム結合部位および転写終結配列を含み；真核生物では、一般に、このような制御配列は、プロモーターおよび転写終結配列を含む。用語「制御配列」は、その存在が、発現およびプロセシングにとって不可欠である成分を含むものとし、また、その存在が有利であるさらなる成分、例えば、リーダー配列および融合パートナー配列も含み得る。

【0140】

本明細書において定義される「形質転換」とは、それによって外因性ＤＮＡが宿主細胞に入る任意のプロセスを指す。形質転換は、当技術分野で周知の種々の方法を使用して自然条件または人口条件下で起こり得る。形質転換は、原核細胞または真核細胞の宿主細胞中に外来核酸配列を挿入するための任意の公知の方法に依存し得る。方法は、形質転換されている宿主細胞に基づいて選択され、それだけには限らないが、ウイルス感染、エレクトロポレーション、リポフェクションおよび微粒子銃を挙げることができる。このような「形質転換された」細胞は、挿入されたＤＮＡが、自己複製プラスミドとして、または宿主染色体の一部としてのいずれかで複製できる安定に形質転換された細胞を含む。それらはまた、挿入されたＤＮＡまたはＲＮＡを限定された期間、一時的に発現する細胞を含む。

【0141】

用語「組換え宿主細胞」（または簡単に「宿主細胞」）とは、外因性ＤＮＡが導入されている細胞を指すものとする。一実施形態では、例えば、米国特許第７，２６２，０２８号に記載される宿主細胞などの宿主細胞は、抗体をコードする２以上（例えば、複数）の核酸を含む。このような用語は、特定の対象細胞だけでなくこのような細胞の後代をも指すものとする。突然変異または環境の影響のいずれかによって後継の世代では特定の修飾が起こり得るので、このような後代は、実際は、親細胞と同一でない場合もあるが、本明細書において、依然として用語「宿主細胞」の範囲内に含まれる。一実施形態では、宿主細胞は、生物界のいずれかから選択される原核細胞および真核細胞を含む。別の実施形態では、真核細胞は、原生生物、真菌、植物および動物細胞を含む。別の実施形態では、宿主細胞として、それだけには限らないが、原核生物細胞株大腸菌；哺乳動物細胞株ＣＨＯ、ＨＥＫ ２９３、ＣＯＳ、ＮＳ０、ＳＰ２およびＰＥＲ．Ｃ６；昆虫細胞株Ｓｆ９；および真菌細胞サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）が挙げられる。

【0142】

標準技術が、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成および組織培養および形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）のために使用され得る。酵素反応および精製技術は、製造業者の使用説明書に従って、または当技術分野でよく達成されるように、または本明細書に記載されるように実施され得る。前述の技術および手順は、当技術分野で周知の従来の方法に従って、本明細書を通じて引用され論じられる種々の一般的参考文献およびより特定の参考文献に記載されるように概して実施され得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８９年）参照のこと。

【0143】

当技術分野で公知の「トランスジェニック生物」は、導入遺伝子を含有する細胞を有する生物を指し、ここで、生物（または生物の先祖）に導入された導入遺伝子は、生物では天然に発現されないポリペプチドを発現する。「導入遺伝子」は、トランスジェニック生物が発達する細胞のゲノム中に安定に、作動可能に組み込まれ、トランスジェニック生物の１種または複数の細胞種または組織においてコードされた遺伝子産物の発現を指示するＤＮＡ構築物である。

【0144】

用語「調節する（ｒｅｇｕｌａｔｅ）」および「調節する（ｍｏｄｕｌａｔｅ）」は、本明細書において、同義的に使用され、対象とする分子の活性（例えば、ｈＩＬ−１βの生物活性）における変化または変更を指す。調節（ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）は、対象とする分子の特定の活性または機能の規模の増大または減少であり得る。分子の例示的活性および機能として、それだけには限らないが、結合特徴、酵素活性、細胞受容体活性化およびシグナル変換が挙げられる。

【0145】

相応して、本明細書において、用語「モジュレーター」とは、対象とする分子の活性または機能（例えば、ｈＩＬ−１βの生物活性）を変化または変更できる化合物である。例えば、モジュレーターは、モジュレーターの不在下で観察された活性または機能の規模と比較して、分子の特定の活性または機能の規模の増大または減少を引き起こし得る。特定の実施形態では、モジュレーターは、分子の少なくとも１種の活性または機能の規模を減少させる阻害剤である。例示的阻害剤として、それだけには限らないが、タンパク質、ペプチド、抗体、ペプチボディー（ｐｅｐｔｉｂｏｄｉｅｓ）、炭水化物または小さい有機分子が挙げられる。ペプチボディー（ｐｅｐｔｉｂｏｄｉｅｓ）は記載されている。例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／８３５２５。

【0146】

本明細書において、用語「アゴニスト」とは、対象とする分子と接触させると、アゴニストの不在下で観察された活性または機能の規模と比較して、分子の特定の活性または機能の規模の増大を引き起こすモジュレーターを指す。対象とする特定のアゴニストとして、それだけには限らないが、ＩＬ−１βポリペプチド、核酸、炭水化物またはｈＩＬ−１βと結合する任意のその他の分子を挙げることができる。

【0147】

本明細書において、用語「アンタゴニスト」および「阻害剤」とは、対象とする分子と接触させると、アンタゴニストの不在下で観察された活性または機能の規模と比較して、分子の特定の活性または機能の規模の減少を引き起こすモジュレーターを指す。対象とする特定のアンタゴニストとして、ヒトＩＬ−１βの生物学的活性または免疫学的活性を遮断または調節するものが挙げられる。ヒトＩＬ−１βのアンタゴニストおよび阻害剤として、それだけには限らないが、タンパク質、核酸、炭水化物またはヒトＩＬ−１βと結合する任意のその他の分子を挙げることができる。

【0148】

本明細書において、用語「有効量」とは、障害もしくは１種もしくは複数のその症状の重篤度および／もしくは期間を低減もしくは寛解させる；障害の前進を防止する；障害の退縮を引き起こす；障害と関連している１種もしくは複数の症状の再発、発生、発症もしくは進行を防止する；障害を検出する；または別の治療（例えば、予防薬または治療薬）の予防的効果または治療的効果（複数可）を増強もしくは改善するのに十分である治療の量を指す。

【0149】

「患者」および「被験体」は、本明細書において同義的に使用され得、霊長類（例えば、ヒト、サルおよびチンパンジー）、非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ラクダ、ラマ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラット、マウス、クジラ）を含めた哺乳動物、トリ（例えば、アヒルまたはガチョウ）およびサメなどの動物を指す。好ましくは、患者または被験体は、疾患、障害または状態について治療または評価されているヒト；疾患、障害または状態のリスクのあるヒト；疾患、障害または状態を有するヒト；および／または疾患、障害または状態について治療されているヒトなどのヒトである。

【0150】

本明細書において、用語「試料」とは、その広い意味で使用される。本明細書において、「生体試料」とは、それだけには限らないが、生物または以前は生きていた物に由来する物質の任意の量を含む。このような生物として、それだけには限らないが、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、サル、イヌ、ウサギおよびその他の動物が挙げられる。このような物質として、それだけには限らないが、血液、（例えば、全血）、血漿、血清、尿、羊水、滑液、内皮細胞、白血球、単球、その他の細胞、臓器、組織、骨髄、リンパ節および脾臓が挙げられる。

【0151】

「成分」、「複数の成分」および「少なくとも１種の成分」とは、一般に、本明細書に記載される方法および当技術分野で公知のその他の方法に従って、試験試料、例えば、患者尿、血清または血漿試料をアッセイするためにキット中に含まれ得る、捕獲抗体、検出またはコンジュゲート抗体、対照、校正器、一連の校正器、感度パネル、容器、バッファー、希釈液、塩、酵素、酵素の補助因子、検出試薬、前処理試薬／溶液、基質（例えば、溶液として）、停止溶液などを指す。したがって、本開示内容との関連で、「少なくとも１種の成分」、「成分」および「複数の成分」は、ポリペプチドまたは上記のその他の分析物、例えば、固相支持体上に抗分析物（例えば、抗ポリペプチド）抗体との結合などによって場合によって固定化されている、ポリペプチドなどの分析物を含む組成物を含み得る。いくつかの成分は、溶液中にあり、またはアッセイにおいて使用するために再構成するために凍結乾燥され得る。

【0152】

「対照」とは、分析物を含有しないとわかっている組成物（「陰性対照」）または分析物を含有すると分かっている組成物（「陽性対照」）を指す。陽性対照は、既知濃度の分析物を含み得る。「対照」、「陽性対照」および「標準物質」は、既知濃度の分析物を含む組成物を指すよう本明細書において同義的に使用され得る。「陽性対照」は、アッセイパフォーマンス特性を確立するよう使用され得、試薬（例えば、分析物）の完全性の有用な指標である。

【0153】

「所定のカットオフ」および「所定のレベル」とは、一般に、所定のカットオフ／レベルが、すでに、種々の臨床パラメーター（例えば、疾患の重篤度、進行／非進行／改善など）と連結または関連している場合に、所定のカットオフ／レベルに対するアッセイ結果を比較することによって、診断／予後／治療効力結果を評価するために使用されるアッセイカットオフ値を指す。本開示内容は、例示的な所定のレベルを提供し得るが、カットオフ値が、イムノアッセイの性質（例えば、使用される抗体など）に応じて変わり得ることは周知である。さらに、本開示内容に基づいてその他のイムノアッセイのイムノアッセイ特異的カットオフ値を得るために、本明細書における本開示内容をその他のイムノアッセイに適合させることは十分に当業者の範囲内にある。アッセイ間で所定のカットオフ／レベルの正確な値は変わり得るが、一般に、本明細書に記載された補正が（もしあれば）適用されるはずである。

【0154】

「前処理試薬」、例えば、本明細書に記載された診断アッセイにおいて使用されるような溶解試薬、沈殿試薬および／または可溶化試薬は、任意の細胞を溶解する、および／または試験試料中に存在している任意の分析物を可溶化するものである。前処理は、本明細書にさらに記載されるように、すべての試料に必要というわけではない。中でも、分析物（例えば、対象とするポリペプチド）を可溶化することは、試料中に存在する任意の内因性結合タンパク質からの分析物の放出を引き起こす。前処理試薬は、均一である（分離ステップを必要としない）である場合も、不均一（分離ステップを必要とする）場合もある。不均一な前処理試薬を用いると、試験試料から任意の沈殿した分析物結合タンパク質を回収し、その後、アッセイの次のステップに進む。

【0155】

本明細書に記載されたイムノアッセイおよびキットに関連して「品質管理試薬」とは、それだけには限らないが、標準物質、対照および感受性パネルを含む。抗体または分析物などの分析物の濃度の補間のための較正（標準）曲線を確立するために、「標準物質」または「標準」（例えば、多数などの１種または複数の）が通常使用される。あるいは、所定の陽性／陰性カットオフに近い単一の標準物質が使用され得る。「感受性パネル」を含むよう、複数の標準物質（すなわち、２種以上の標準物質または変動量の標準物質）が併用される場合もある。

【0156】

「リスク」とは、現在生じているまたは将来のある時点で生じている特定の事象可能性または見込みを指す。「リスクの層化」とは、医師が、患者を、特定の疾患、障害または状態を発症する低、中、高または最高のリスクに分類するのを可能にする既知の臨床リスク因子のアレイを指す。

【0157】

特異的結合対（例えば、抗原（またはその断片）および抗体（またはその抗原的に反応性の断片））のメンバー間の相互作用との関連で「特異的」および「特異性」とは、相互作用の選択的反応性を指す。語句「特異的に結合する」および類似の語句は、抗体（またはその抗原的に反応性の断片）の、分析物（またはその断片）と特異的に結合し、その他の実体とは特異的に結合しない能力を指す。

【0158】

「特異的結合パートナー」とは、特異的結合対のメンバーである。特異的結合対は、化学的または物理的手段によって互いに特異的に結合する２種の異なる分子を含む。したがって、抗原および共通のイムノアッセイの抗体特異的結合対に加えて、その他の特異的結合対として、ビオチンおよびアビジン（またはストレプトアビジン）、炭水化物およびレクチン、相補的ヌクレオチド配列、エフェクターおよび受容体分子、補助因子および酵素、酵素阻害剤および酵素などが挙げられる。さらに、特異的結合対として、元の特異的結合メンバーの類似体であるメンバー、例えば、分析物類似体を挙げることができる。免疫反応特異的結合メンバーとして、単離されているか組換えによって製造されたかにかかわらず、抗原、抗原断片およびモノクローナルおよびポリクローナル抗体を含めた抗体、ならびにその複合体、断片および変異体（変異体の断片を含む）が挙げられる。

【0159】

本明細書において、「変異体」とは、アミノ酸の付加（例えば、挿入）、欠失または保存的置換によって、アミノ酸配列において所与のポリペプチド（例えば、ＩＬ−１β、ＢＮＰ、ＮＧＡＬまたはＨＩＶポリペプチドまたは抗ポリペプチド抗体）とは異なるが、所与のポリペプチドの生物活性を保持するポリペプチドを意味する（例えば、変異体ＩＬ−１βは、ＩＬ−１βへの結合について抗ＩＬ−１β抗体と競合し得る）。アミノ酸の保存的置換、すなわち、アミノ酸を、同様の特性（例えば、親水性および荷電領域の程度および分布）の異なるアミノ酸と置換することは、当技術分野で、通常、微小変化を含むと認識されている。これらの微小変化は、幾分かは、当技術分野で理解されるように、アミノ酸の疎水性親水性指数を考慮することによって同定され得る（例えば、Ｋｙｔｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１５７：１０５−１３２頁（１９８２年））。アミノ酸の疎水性親水性指数は、その疎水性および電荷を考慮することに基づいている。同様の疎水性親水性指数のアミノ酸は置換され、タンパク質機能を依然として保持し得るということは当技術分野で公知である。一態様では、±２の疎水性親水性指数を有するアミノ酸は置換される。アミノ酸の親水性はまた、生物学的機能を保持するタンパク質をもたらす置換を明らかにするために使用され得る。ペプチドとの関連でアミノ酸の親水性を考慮することによって、そのペプチドの最大の局所平均親水性、抗原性および免疫原性と十分に相関すると報告されている有用な尺度を算出することが可能となる（例えば、米国特許第４，５５４，１０１号参照のこと）。当技術分野で理解されるように、同様の親水性値を有するアミノ酸の置換は、生物活性、例えば、免疫原性を保持するペプチドをもたらし得る。一態様では、置換は、互いに±２内の親水性値を有するアミノ酸を用いて実施される。アミノ酸の疎水性指数および親水性値の両方とも、アミノ酸の特定の側鎖によって影響を受ける。その知見と一致して、疎水性、親水性、電荷、大きさおよびその他の特性によって明らかにされるように、生物学的機能と適合するアミノ酸置換は、アミノ酸、特に、それらのアミノ酸の側鎖の相対類似性に左右されると理解される。「変異体」はまた、タンパク質分解、リン酸化またはその他の翻訳後修飾などによって異なって処理されているが、その生物活性または抗原反応性、例えば、ＩＬ−１βと結合する能力を保持するポリペプチドまたはその断片を説明するために使用され得る。本明細書において、「変異体」の使用は、文脈によって別段に異なることが指示されない限り、変異体の断片を包含するものとする。
Ｉ．ヒトＩＬ−１βと結合する抗体
本発明の一態様は、高親和性、遅い解離速度および高い中和能を有するＩＬ−１βと結合する、単離されたマウスモノクローナル抗体またはその抗原結合部分を提供する。本発明の第２の態様は、ＩＬ−１βと結合するキメラ抗体を提供する。本発明の第３の態様は、ＩＬ−１βと結合する、ＣＤＲグラフト化抗体またはその抗原結合部分を提供する。本発明の第４の態様は、ＩＬ−１βと結合するヒト化抗体またはその抗原結合部分を提供する。本発明の第５の態様は、ＩＬ−１βおよび１種のその他の標的と結合する二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ（商標））分子を提供する。抗体またはその部分は、単離された抗体であることが好ましい。本発明の抗体は、中和ヒト抗ＩＬ−１β抗体であることが好ましい。

【0160】

Ａ．抗ＩＬ−１β抗体を作製する方法
本発明の抗ＩＬ−１β抗体は、当技術分野で公知のいくつかの技術のうちいずれかによって作製され得る。

【0161】

１．ハイブリドーマ技術を使用する抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマの使用、組換えおよびファージディスプレイ技術またはそれらの組合せを含めた、当技術分野で公知のさまざまな技術を使用して調製され得る。例えば、モノクローナル抗体は、当技術分野で公知のものおよび例えば、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら編、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ」、Ｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第３巻（Ｊ．Ｌ． Ｔｕｒｋ、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｄｉｔｏｒ）（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８１年）５６３−５８７頁（その全文が参照により組み込まれた前記の参考文献）に教示されるものを始めとするハイブリドーマ法を使用して製造され得る。本明細書において、用語「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術によって製造される抗体に制限されないということも留意されたい。用語「モノクローナル抗体」とは、任意の真核生物クローン、原核生物クローンまたはファージクローンを含めた単一クローンに由来する抗体を指すのであって、それによって製造される方法を指すのではない。

【0162】

ハイブリドーマ技術を使用して特異的抗ＩＬ−１β抗体を製造し、スクリーニングする方法は、日常的なものであり、当技術分野で周知である。一実施形態では、本発明は、モノクローナル抗体を作製する方法ならびに本発明の抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養することを含む方法によって製造された抗体を提供し、これでは、好ましくは、ハイブリドーマが、本発明の抗原を用いて免疫処置されたマウスから単離された脾細胞を、骨髄腫細胞と融合すること、次いで、融合から得られたハイブリドーマを、本発明のポリペプチドと結合できる抗体を分泌するハイブリドーマクローンについてスクリーニングすることによって作製される。手短には、マウスは、ＩＬ−１β抗原を用いて免疫処置され得る。例示的な一実施形態では、ＩＬ−１β抗原は、免疫応答を刺激するようアジュバントとともに投与される。このようなアジュバントとして、完全または不完全フロイントアジュバント、ＲＩＢＩ（ムラミルジペプチド）またはＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）が挙げられる。このようなアジュバントは、ポリペプチドを局所沈着に隔離することによって、それが迅速分散することから保護し得る、またはそれらは、宿主を、マクロファージおよび免疫系のその他の成分にとって走化性である因子を分泌するよう刺激する物質を含有し得る。好ましくは、ポリペプチドが投与される場合には、免疫処置スケジュールは、数週間にわたって広がっているポリペプチドの２回以上の投与を含む。

【0163】

ＩＬ−１β抗原を用いて動物を免疫処置した後、抗体および／または抗体を製造する細胞が動物から得られ得る。抗ＩＬ−１β抗体を含有する血清が、動物を出血させるまたは屠殺することによって動物から得られる。動物から得られると血清が使用され得、免疫グロブリン画分が血清から得られ得るまたは抗ＩＬ−１β抗体が血清から精製され得る。この方法で得られた血清または免疫グロブリンは、ポリクローナルであり、したがって、不均一な特性のアレイを有する。

【0164】

免疫応答が検出されると、例えば、抗原ＩＬ−１βに対して特異的な抗体を、マウス血清において検出し、マウス脾臓を回収し、脾細胞を単離する。次いで、周知の技術によって脾細胞を任意の適した骨髄腫細胞、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ）から入手可能である細胞株ＳＰ２０から得た細胞に融合する。ハイブリドーマを選択し、限界希釈によってクローニングする。次いで、ハイブリドーマクローンを、ＩＬ−１βと結合できる抗体を分泌する細胞について当技術分野で公知の方法によってアッセイする。一般に、高レベルの抗体を含有する腹水を、陽性ハイブリドーマクローンを用いてマウスを免疫処置することによって作製できる。

【0165】

別の実施形態では、抗体を産生する不死化されたハイブリドーマは、免疫処置された動物から調製され得る。免疫処置後、当技術分野で周知であるように、動物を屠殺し、脾臓Ｂ細胞を不死化された骨髄腫細胞と融合する。例えば、Ｈａｒｌｏｗら、前掲参照のこと。例示的な一実施形態では、骨髄腫細胞は、免疫グロブリンポリペプチドを分泌しない（非分泌細胞株）。融合し、抗生物質選択した後ハイブリドーマを、ＩＬ−１βまたはその部分またはＩＬ−１βを発現する細胞を使用してスクリーニングする。例示的な一実施形態では、初期スクリーニングは、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、好ましくは、ＥＬＩＳＡを使用して実施される。ＥＬＩＳＡスクリーニングの例は、参照により本明細書に組み込む、ＰＣＴ公開番号ＷＯ００／３７５０４に提供されている。

【0166】

抗ＩＬ−１β抗体を産生するハイブリドーマを選択し、クローニングし、以下にさらに論じられる、頑強なハイブリドーマ増殖、高い抗体産生および望ましい抗体特徴と含めた望ましい特徴についてさらにスクリーニングする。ハイブリドーマは、培養され、同系動物において、免疫系を欠く動物、例えば、ヌードマウスにおいてインビボで、またはインビトロで細胞培養において拡大され得る。ハイブリドーマを選択、クローニングおよび拡大する方法は、当業者に周知である。

【0167】

例示的な一実施形態では、ハイブリドーマは、上記されるマウスハイブリドーマである。別の好ましい実施形態では、ハイブリドーマは、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシまたはウマなどの非ヒト、非マウス種において産生される。別の実施形態では、ハイブリドーマは、ヒトハイブリドーマであり、これでは、ヒト非分泌性骨髄腫が、抗ＩＬ−１β抗体を発現するヒト細胞と融合される。

【0168】

特定のエピトープを認識する抗体断片は、公知の技術によって作製され得る。例えば、本発明のＦａｂおよびＦ（ａｂ’）_２断片は、パパイン（Ｆａｂ断片を製造するよう）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）_２断片を製造するよう）などの酵素を使用する免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断によって製造され得る。Ｆ（ａｂ’）_２断片は、可変領域、軽鎖定常領域および重鎖のＣＨＩドメインを含有する。

【0169】

２．ＳＬＡＭを使用する抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体
本発明の別の態様では、組換え抗体は、米国特許第５，６２７，０５２号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０２５５１；およびＢａｂｃｏｏｋら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９３：７８４３−７８４８頁１９９６年）に記載される、選択されたリンパ球抗体法（ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｍｅｔｈｏｄ）（ＳＬＡＭ）と当技術分野で呼ばれる手順を使用して、単一の、単離されたリンパ球から作製される。この方法では、１の節に記載される、対象とする抗体を分泌する単細胞、例えば、免疫処置された動物のいずれか１種から得られたリンパ球は、抗原特異的溶血プラークアッセイを使用してスクリーニングされ、これでは、抗原ＩＬ−１β、ＩＬ−１βのサブユニットまたはその断片が、ビオチンなどのリンカーを使用してヒツジ赤血球にカップリングされ、ＩＬ−１βに対して特異性を有する抗体を分泌する単細胞を同定するために使用される。対象とする抗体を分泌する細胞を同定した後、重鎖および軽鎖可変領域（ＶＨおよびＶＬ）ｃＤＮＡが逆転写酵素−ＰＣＲによって細胞からレスキューされ、次いで、これらの可変領域が、ＣＯＳまたはＣＨＯ細胞などの哺乳動物宿主細胞において、適当な免疫グロブリン定常領域（例えば、ヒト定常領域）との関連で発現され得る。インビボで選択されたリンパ球から得られた増幅された免疫グロブリン配列を用いてトランスフェクトされた宿主細胞は、インビトロでさらなる分析および選択を、例えば、トランスフェクトされた細胞をパニングし、ＩＬ−１βに対する抗体を発現する細胞を単離することによって受け得る。増幅された免疫グロブリン配列は、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２９１３１およびＰＣＴ公開番号ＷＯ００／５６７７２に記載されているインビトロ親和性成熟法などによってインビトロでさらに操作され得る。

【0170】

３．トランスジェニック動物を使用する抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体
本発明の別の実施形態では、ＩＬ−１β抗原を用いて非ヒト動物を免疫処置することによって、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の一部またはすべてを含む抗体が産生される。例示的な一実施形態では、非ヒト動物は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウス、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の大きな断片を含み、マウス抗体産生に欠陥のある操作されたマウス株である。例えば、Ｇｒｅｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、７：１３−２１頁（１９９４年）および米国特許第５，９１６，７７１号；同５，９３９，５９８号；同５，９８５，６１５号；同５，９９８，２０９号；同６，０７５，１８１号；同６，０９１，００１号；同６，１１４，５９８号；および同６，１３０，３６４号参照のこと。１９９１年７月２５日に発行されたＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／１０７４１；１９９４年２月３日に発行されたＷＯ９４／０２６０２；どちらも１９９６年１０月３１日に発行されたＷＯ９６／３４０９６およびＷＯ９６／３３７３５；１９９８年４月２３日に発行されたＷＯ９８／１６６５４；１９９８年６月１１日に発行されたＷＯ９８／２４８９３；１９９８年１１月１２日に発行されたＷＯ９８／５０４３３；１９９９年９月１０日に発行されたＷＯ９９／４５０３１；１９９９年１０月２１日に発行されたＷＯ９９／５３０４９；２０００年２月２４日に発行されたＷＯ００／０９５６０；および２０００年６月２９日に発行されたＷＯ００／３７５０４も参照のこと。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスは、十分なヒト抗体の成人様ヒトレパートリーを産生し、抗原特異的ヒトＭａｂを作製する。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスは、ヒト重鎖遺伝子座およびｘ軽鎖遺伝子座のメガベースサイズの、生殖系列立体配置ＹＡＣ断片の導入によってヒト抗体レパートリーのおよそ８０％を含有する。その開示内容を参照により本明細書に組み込む、Ｍｅｎｄｅｚら、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、１５：１４６−１５６頁（１９９７年）；ならびにＧｒｅｅｎおよびＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１８８：４８３−４９５頁（１９９８年）参照のこと。

【0171】

４．組換え抗体ライブラリーを使用する抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体
本発明の抗体を作製するためにインビトロ法も使用され得、ここで、所望の結合特異性を有する抗体を同定するために、抗体ライブラリーがスクリーニングされる。このような組換え抗体ライブラリーをスクリーニングする方法は、当技術分野で周知であり、例えば、Ｌａｎｄｅｒら、米国特許第５，２２３，４０９号；Ｋａｎｇら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１８６１９；Ｄｏｗｅｒら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／１７２７１；Ｗｉｎｔｅｒら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／２０７９１；Ｍａｒｋｌａｎｄら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１５６７９；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９３／０１２８８；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０１０４７；Ｇａｒｒａｒｄら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０９６９０；Ｆｕｃｈｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｎｏｌｏｇｙ、９：１３６９−１３７２頁（１９９１年）；Ｈａｙら、Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ、３：８１−８５頁（１９９２年）；Ｈｕｓｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４６：１２７５−１２８１頁（１９８９年）；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２−５５４頁（１９９０年）；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、ＥＭＢＯ Ｊ．、１２：７２５−７３４頁（１９９３年）；Ｈａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２６：８８９−８９６頁（１９９２年）；Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４−６２８頁（１９９１年）；Ｇｒａｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：３５７６−３５８０頁（１９９２年）；Ｇａｒｒａｒｄら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、９：１３７３−１３７７頁（１９９１年）；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９：４１３３−４１３７頁（１９９１年）；ならびにＢａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８８：７９７８−７９８２頁（１９９１年）；米国公開第２００３／０１８６３７４号；およびＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２９１３１に記載される方法が挙げられ、各々の開示内容を参照により本明細書に組み込む。

【0172】

組換え抗体ライブラリーは、ＩＬ−１βまたはＩＬ−１βの部分を用いて免疫処置された被験体に由来するものであり得る。または、組換え抗体ライブラリーは、ヒトＩＬ−１βを用いて免疫処置されていないヒト被験体から得たヒト抗体ライブラリーなど、天然被験体すなわち、ＩＬ−１βを用いて免疫処置されていないものに由来し得る。本発明の抗体は、ヒトＩＬ−１βを含むペプチドを用いて組換え抗体ライブラリーをスクリーニングし、それによってＩＬ−１βを認識する抗体を選択することによって選択される。このようなスクリーニングおよび選択を実施する方法は、前述の段落における参考文献に記載されるなど、当技術分野で周知である。特定のＫ_ｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１βから解離するものなど、ヒトＩＬ−１βに対して特定の結合親和性を有する本発明の抗体を選択するために、表面プラズモン共鳴の当技術分野で公知の方法が使用されて、所望のＫ_ｏｆｆ速度定数を有する抗体が選択され得る。特定のＩＣ_５０を有するものなど、ヒトＩＬ−１βに対して特定の中和活性を有する本発明の抗体を選択するために、ヒトＩＬ−１β活性の阻害を評価するための当技術分野で公知の標準法が使用され得る。

【0173】

一態様では、本発明は、ヒトＩＬ−１βと結合する単離された抗体またはその抗原結合部分に関する。好ましくは、抗体は、中和抗体である。種々の実施形態では、抗体は、組換え抗体またはモノクローナル抗体である。

【0174】

例えば、本発明の抗体はまた、当技術分野で公知の種々のファージディスプレイ法を使用して作製され得る。ファージディスプレイ法では、機能的抗体ドメインは、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保持するファージ粒子の表面にディスプレイされる。特に、このようなファージは、レパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から発現される抗原結合ドメインをディスプレイするために利用され得る。対象とする抗原と結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原を用いて、例えば、標識された抗原または固体表面もしくはビーズに結合もしくは捕獲された抗原を使用して選択または同定され得る。これらの方法において使用されるファージは、通常、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩタンパク質のいずれかに組換えによって融合された、Ｆａｂ、Ｆｖまたはジスルフィドによって安定化されたＦｖ抗体ドメインを有するファージから発現されるｆｄおよびＭ１３結合ドメインを含む糸状ファージである。本発明の抗体を作製するために使用され得るファージディスプレイ法の例として、それぞれを参照によりその全体を本明細書に組み込む、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１８２：４１−５０頁（１９９５年）；Ａｍｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１８４：１７７−１８６頁（１９９５年）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４：９５２−９５８頁（１９９４年）；Ｐｅｒｓｉｃら、Ｇｅｎｅ、１８７：９−１８頁（１９９７年）；Ｂｕｒｔｏｎら、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、５７：１９１−２８０頁（１９９４年）；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９０／０２８０９；ＷＯ９１／１０７３７；ＷＯ９２／０１０４７（ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４）；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９３／１１２３６；ＷＯ９５／１５９８２；ＷＯ９５／２０４０１；および米国特許第５，６９８，４２６号；同５，２２３，４０９号；同５，４０３，４８４号；同５，５８０，７１７号；同５，４２７，９０８号；同５，８２１，０４７号；同５，５７１，６９８号；同５，４２７，９０８号；同５，５１６，６３７号；同５，７８０，２２５号；同５，６５８，７２７号；同５，７３３，７４３号；および同５，９６９，１０８号に開示されるものが挙げられる。

【0175】

上記の参考文献に記載されるように、ファージ選択後、ファージから抗体コーディング領域が単離され、ヒト抗体または任意のその他の所望の抗原結合断片を含む全抗体を作製するために使用され、例えば、以下に詳細に記載される哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細菌を含めた任意の所望の宿主において発現され得る。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）_２断片を組換え製造するための技術も、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、１２（６）：８６４−８６９頁（１９９２年）；およびＳａｗａｉら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３４：２６−３４頁（１９９５年）；およびＢｅｔｔｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４０：１０４１−１０４３頁（１９８８年）（前記文献を、参照によりその全体を本明細書に組み込む）に開示されるものなど、当技術分野で公知の方法を使用して使用され得る。一本鎖Ｆｖおよび抗体を製造するために使用され得る技術の例として、米国特許第４，９４６，７７８号および同５，２５８，４９８号；Ｈｕｓｔｏｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．、２０３：４６−８８頁（１９９１年）；Ｓｈｕら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：７９９５−７９９９頁（１９９３年）；およびＳｋｅｒｒａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４０：１０３８−１０４１頁（１９８８年）に記載されるものが挙げられる。

【0176】

ファージディスプレイによる組換え抗体ライブラリーのスクリーニングの代替として、大きなコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングするための当技術分野で公知のその他の方法論が、本発明の二重特異性抗体の同定に適用され得る。代替発現系の１つの種類として、ＳｚｏｓｔａｋおよびＲｏｂｅｒｔｓによるＰＣＴ公開番号ＷＯ９８／３１７００に、ならびにＲｏｂｅｒｔｓおよびＳｚｏｓｔａｋ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９４：１２２９７−１２３０２頁（１９９７年）に記載される、組換え抗体ライブラリーが、ＲＮＡ−タンパク質融合物として発現されるものがある。この系では、ピューロマイシン、ペプチジルアクセプター抗生物質を３’末端に保持する合成ｍＲＮＡのインビトロ翻訳によって、ｍＲＮＡおよびそれがコードするペプチドまたはタンパク質間の共有結合融合物が作製される。したがって、特異的ｍＲＮＡは、コードされたペプチドまたはタンパク質、例えば、抗体またはその部分の特性、例えば、抗体またはその部分の二重特異性抗原との結合に基づいて、ｍＲＮＡの複雑な混合物（例えば、コンビナトリアルライブラリー）から濃縮され得る。このようなライブラリーのスクリーニングから回収される抗体またはその部分をコードする核酸配列は、上記の組換え手段によって（例えば、哺乳動物宿主細胞において）発現され得、さらに、突然変異が、最初に選択された配列（複数可）中に導入されているｍＲＮＡ−ペプチド融合物のスクリーニングのさらなるラウンドによって、または上記の組換え抗体のインビトロでの親和性成熟のためのその他の方法によってのいずれかで、さらなる親和性成熟に付され得る。

【0177】

別のアプローチでは、本発明の抗体はまた、当技術分野で公知の酵母ディスプレイ法を使用して作製され得る。酵母ディスプレイ法では、抗体ドメインを酵母細胞壁に繋ぎ止め、それらを酵母の表面上にディスプレイするために遺伝学的方法が使用される。特に、このような酵母は、レパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から発現される抗原結合ドメインをディスプレイするために利用され得る。本発明の抗体を作製するために使用され得る酵母ディスプレイ法の例として、参照により本明細書に組み込むＷｉｔｔｒｕｐら、米国特許第６，６９９，６５８号に開示されるものが挙げられる。

【0178】

Ｂ．組換えＩＬ−１β抗体の製造
本発明の抗体は、当技術分野で公知のいくつかの技術のいずれかによって製造され得る。例えば、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクター（複数可）が、標準技術によって宿主細胞中にトランスフェクトされている宿主細胞からの発現。用語「トランスフェクション」の種々の形態は、外因性ＤＮＡを原核生物または真核生物の宿主細胞に導入するためによく使用されるさまざまな技術、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを包含するものとする。原核生物または真核生物の宿主細胞のいずれかにおいて、本発明の抗体を発現することが可能であるが、真核細胞における抗体の発現が好ましく、哺乳動物宿主細胞においてが最も好ましいが、これは、このような真核細胞（特に、哺乳動物細胞）は、原核細胞よりも、適切に折り畳まれた免疫学的に活性な抗体を組み立て、分泌する可能性が高いためである。

【0179】

本発明の組換え抗体を発現するための好ましい哺乳動物宿主細胞として、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、ＫａｕｆｍａｎおよびＳｈａｒｐ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１５９：６０１−６２１頁（１９８２年）に記載されたＤＨＦＲ選択マーカーとともに使用される、ＵｒｌａｕｂおよびＣｈａｓｉｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：４２１６−４２２０頁（１９８０年）に記載されたｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞が挙げられる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞に導入される場合、抗体は、宿主細胞における抗体の発現、より好ましくは、宿主細胞が増殖される培養培地への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間、宿主細胞を培養することによって製造される。抗体は、標準タンパク質精製法を使用して培養培地から回収され得る。

【0180】

宿主細胞はまた、機能的抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片またはｓｃＦｖ分子を製造するために使用され得る。上記の手順に対する変法は、本発明の範囲内にあるということは理解されよう。例えば、本発明の抗体の軽鎖および／または重鎖のいずれかの機能的断片をコードするＤＮＡを用いて、宿主細胞をトランスフェクトすることが望ましいものであり得る。組換えＤＮＡ技術はまた、対象とする抗原との結合にとって必須ではない、軽鎖および重鎖のいずれかまたは両方をコードするＤＮＡの一部またはすべてを除去するためにも使用され得る。このような末端切断型ＤＮＡ分子から発現された分子もまた、本発明の抗体によって包含される。さらに、標準化学的架橋法によって本発明の抗体を第２の抗体に架橋することによって、一方の重鎖および一方の軽鎖が本発明の抗体でありもう一方の重鎖および軽鎖が対象の抗原以外の抗原に対して特異的である二機能性抗体も製造され得る。

【0181】

抗体またはその抗原結合部分を組換え発現するための例示的系では、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターが、リン酸カルシウム媒介トランスフェクションによってｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入される。組換え発現ベクター内では、抗体重鎖および軽鎖遺伝子は、各々、この遺伝子の高レベルの転写を駆動するためにＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントに作動可能に連結されている。組換え発現ベクターはまた、メトトレキサート選択／増幅を使用してベクターでトランスフェクトされているＣＨＯ細胞の選択を可能にするＤＨＦＲ遺伝子を保持する。選択された形質転換体宿主細胞は、抗体重鎖および軽鎖の発現を可能にするよう培養され、無傷の抗体が培養培地から回収される。組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培養培地から抗体を回収するために、標準分子生物学技術が使用される。さらに、本発明は、本発明の宿主細胞を、本発明の組換え抗体が合成されるまで適した培養培地中で培養することによって、本発明の組換え抗体を合成する方法を提供する。この方法は、培養培地から組換え抗体を単離することをさらに含み得る。

【0182】

１．抗ヒトＩＬ−１βキメラ抗体
キメラ抗体は、マウスモノクローナル抗体およびヒト免疫グロブリン定常領域に由来する可変領域を有する抗体などの抗体の異なる部分が異なる動物種に由来する分子である。キメラ抗体を製造する方法は、当技術分野で公知であり、実施例の節に詳細に論じられている。例えば、その全文が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｓ．Ｌ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：１２０２−１２０７頁（１９８５年）；Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、４：２１４−２２１頁（１９８６年）；Ｇｉｌｌｉｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１２５：１９１−２０２頁（１９８９年）；米国特許第５，８０７，７１５号；同４，８１６，５６７号および同４，８１６，３９７号参照のこと。さらに、適当な生物活性のヒト抗体分子に由来する遺伝子と一緒に、適当な抗原特異性のマウス抗体分子から遺伝子をスプライシングすることによって「キメラ抗体」を製造するために開発された技術が使用され得る。例えば、参照によりその全文が本明細書に組み込まれる、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１−６８５５頁（１９８４年）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、３１２：６０４−６０８頁（１９８４年）；Ｔａｋｅｄａら、Ｎａｔｕｒｅ、３１４：４５２−４５４頁（１９８５年）参照のこと。

【0183】

一実施形態では、本発明のキメラ抗体は、節１において記載されたマウスモノクローナル抗ヒトＩＬ−１β抗体の重鎖定常領域をヒトＩｇＧ１定常領域で置換することによって製造される。

【0184】

２．抗ＩＬ−１βＣＤＲグラフト化抗体
本発明のＣＤＲグラフト化抗体は、ヒト抗体に由来する重鎖および軽鎖可変領域配列を含み、ここで、Ｖ_Ｈおよび／またはＶ_ＬのＣＤＲ領域のうち１つまたは複数が本発明のマウス抗体のＣＤＲ配列で置換されている。任意のヒトに由来するフレームワーク配列は、ＣＤＲグラフト化のための鋳型として働き得る。しかし、このようなフレームワーク上の直鎖置換は、抗原に対する結合親和性の幾分かの喪失につながる。元のヒト抗体に対して、より相同なヒト抗体であるほど、マウスＣＤＲをヒトフレームワークと組み合わせることが、親和性を低減し得るＣＤＲ中の歪みを導入する可能性が低い。したがって、ＣＤＲは別として、ヒト可変フレームワークを置換するよう選択されているヒト可変フレームワークが、ヒト抗体可変領域フレームワークと少なくとも６５％の配列同一性を有することが好ましい。ヒトおよびマウス可変領域が、ＣＤＲは別として、ヒト抗体可変領域フレームワークと少なくとも７０％の配列同一性を有することがより好ましい。ヒトおよびマウス可変領域が、ＣＤＲは別として、ヒト抗体可変領域フレームワークと少なくとも７５％の配列同一性を有することがさらにより好ましい。ヒトおよびマウス可変領域が、ＣＤＲは別として、ヒト抗体可変領域フレームワークと少なくとも８０％の配列同一性を有することが最もより好ましい。キメラ抗体を製造する方法は、当技術分野で公知である。例えば、欧州特許番号ＥＰ０２３９４００；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３９号；同５，５３０，１０１号および５，５８５，０８９号参照のこと）。抗体のベニヤリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）または再表面形成（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）については、例えば、欧州特許番号ＥＰ０５９２１０６およびＥＰ０５１９５９６；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２８（４／５）：４８９−４９８頁（１９９１年）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、７（６）：８０５−８１４頁（１９９４年）およびＲｏｇｕｓｋａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９１：９６９−９７３頁（１９９４年）参照のこと）。抗体鎖シャッフリング（ｃｈａｉｎ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）に関しては、例えば、米国特許第５，５６５，３５２号参照のこと。

【0185】

３．抗ＩＬ−１βヒト化抗体
ヒト化抗体は、非ヒト種抗体に由来する１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびヒト免疫グロブリン分子に由来するフレームワーク領域を有する所望の抗原と結合する非ヒト種抗体に由来する抗体分子である。既知ヒトＩｇ配列は、例えば、ワールドワイドウェブサイト：ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ−／ｑｕｅｒｙ．ｆｃｇｉ；ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／ｐｈａｇｅ／ｈｄｂ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｓｃｉｑｕｅｓｔ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｂｃａｍ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／ｏｎｌｉｎｅｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｐｕｂｌｉｃ．ｉａｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｐｅｄｒｏ−／ｒｅｓｅａｒｃｈ＿ｔｏｏｌｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｍｇｅｎ．ｕｎｉｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．ｄｅ／ＳＤ／ＩＴ／ＩＴ．ｈｔｍｌ；ｗｈｆｒｅｅｍａｎ．ｃｏｍ／ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−／ＣＨ０５／ｋｕｂｙ０５．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｌｉｂｒａｒｙ．ｔｈｉｎｋｑｕｅｓｔ．ｏｒｇ／１２４２９／Ｉｍｍｕｎｅ／Ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｈｈｍｉ．ｏｒｇ／ｇｒａｎｔｓ／ｌｅｃｔｕｒｅｓ／１９９６／ｖｌａｂ／；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．−ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｍｉｋｅｉｍａｇｅｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／；ｍｃｂ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ＢｉｏＬｉｎｋｓ−／Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．ｈｔｍｌ．ｗｗｗ．ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｌｉｎｋ．ｃｏｍ／；ｐａｔｈｂｏｘ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｅｎｔｅｒ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏ−ｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｌ／；ｗｗｗ．ｐｅｂｉｏ．ｃｏｍ／ｐａ／３４０９１３−／３４０９１３．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｎａｌ．ｕｓｄａ．ｇｏｖ／ａｗｉｃ／ｐｕｂｓ／ａｎｔｉｂｏｄｙ／；ｗｗｗ．ｍ．ｅｈｉｍｅｕ．ａｃｊｐ／．ａｂｏｕｔ．ｙａｓｕｈｉｔｏ−／Ｅｌｉｓａ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ．ｃｏｍ／ｔａｂｌｅ．ａｓｐ；ｗｗｗ．ｉｃｎｅｔ．ｕｋ／ａｘｐ／ｆａｃｓ／ｄａｖｉｅｓ／ｌｉｎ−ｋｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ−／．ａｂｏｕｔ．ｆｃｃｌ／ｐｒｏｔｏｃｏｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｓａｃ−ｎｅｔ．ｏｒｇ／ｓｉｔｅｓ＿ｇｅｏ．ｈｔｍｌ；ａｘｉｍｔｌ．ｉｍｔ．ｕｎｉ−ｍａｒｂｕｒｇ．ｄｅ／．ａｂｏｕｔ．ｒｅｋ／ＡＥＰ−Ｓｔａｒｔ．ｈｔｍｌ；ｂａｓｅｒｖ．ｕｃｉ．ｋｕｎ．ｎｌ／．ａｂｏｕｔ．ｊｒａａｔｓ／ｌｉｎｋｓｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｒｅｃａｂ．ｕｎｉ−ｈｄ．ｄｅ／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ／；ｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｉｍｔ−ｄｏｃ／ｐｕｂｌｉｃ／ＩＮＴＲＯ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／−ｖｉｒ／Ｖ＿ｍｉｃｅ．ｈｔｍｌ；ｉｍｇｔ．ｃｎｕｓｃ．ｆｒ：８１０４／；ｗｗｗ．ｂｉｏｃｈｅｍ．ｕｃｌ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍａｒｔｉｎ／ａｂｓ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ａｎｔｉ−ｂｏｄｙ．ｂａｔｈ．ａｃ．ｕｋ／；ａｂｇｅｎ．ｃｖｍ．ｔａｍｕ．ｅｄｕ／ｌａｂ／ｗｗｗａｂｇｅｎ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｕｎｉｚｈ．ｃｈ／．ａｂｏｕｔ．ｈｏｎｅｇｇｅｒ／ＡＨＯ−ｓｅｍｉｎａｒ／Ｓｌｉｄｅ０１．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｂｋ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｕｂｃｇ０７ｓ／；ｗｗｗ．ｎｉｍｒ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ／ＣＣ／ｃｃａｅｗｇ／ｃｃａｅｗｇ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｈｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ／ＴＡＨＨＰ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／ｓｔａｔ＿ａｉｍ．−ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｓｃｉ．ｍｉｓｓｏｕｒｉ．ｅｄｕ／ｓｍｉｔｈｇｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｉｏｃ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｆｍｏｌｉｎａ／Ｗｅｂｐａｇｅｓ−／Ｐｅｐｔ／ｓｐｏｔｔｅｃｈ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｊｅｒｉｎｉ．ｄｅ／ｆｒｒｏｄｕｃｔｓ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｅｎｔｓ．ｉｂｍ．ｃｏｍ／ｉｂｍ．ｈｔｍｌに開示されている。参照により本明細書に各々、全文が組み込まれる、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐｔ． Ｈｅａｌｔｈ （１９８３年）。免疫原性を低減するまたは結合、親和性、結合速度、解離速度、アビディティー、特異性、半減期もしくは当技術分野で公知の任意のその他の適した特徴を低減、増強もしくは改変するために、このような移入された配列が使用され得る。

【0186】

ヒトフレームワーク領域中のフレームワーク（ＦＲ）残基は、抗原結合を変更、好ましくは、改善するためにＣＤＲドナー抗体に由来する対応する残基で置換され得る。これらのフレームワーク置換は、当技術分野で周知の方法によって、例えば、抗原結合にとって重要であるフレームワーク残基を同定するためのＣＤＲおよびフレームワーク残基の相互作用のモデリングおよび特定の位置の通常のフレームワーク残基を同定するための配列比較によって同定される（例えば、参照によってその全文が本明細書に組み込まれる、Ｑｕｅｅｎら、米国特許第５，５８５，０８９号；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３−３２７頁（１９８８年）参照のこと）。３次元免疫グロブリンモデルはよく利用され、当業者にはよく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列のあり得る３次元立体構造を例示し、示すコンピュータプログラムが利用可能である。これらのディスプレイの観察によって、候補免疫グロブリン配列の機能における残基のあり得る役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンのその抗原と結合する能力に影響を及ぼす残基の分析が可能になる。このようにして、ＦＲ残基は、標的抗原（複数可）に対する親和性の増大などの所望の抗体特徴が達成されるようにコンセンサス配列および移入配列から選択され、組み合わされ得る。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合に影響を及ぼすことに直接に、最も実質的に関与する。抗体は、それだけには限らないが、それに列挙される参考文献を含め、参照によって各々全文が組み込まれる、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２−５２５頁（１９８６年）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４−１５３６頁（１９８８年）、Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１：２２９６−２３０８頁（１９９３年）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１−９１７頁（１９８７年）、Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：４２８５−４２８９頁（１９９２年）；Ｐｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１：２６２３−２６３２頁（１９９３年）、Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２８（４／５）：４８９−４９８頁（１９９１年）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、７（６）：８０５−８１４頁（１９９４年）；Ｒｏｇｕｓｋａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９１：９６９−９７３頁（１９９４年）；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／０９９６７、ＷＯ９０／１４４２３；ＷＯ９０／１４４２４；ＷＯ９０／１４４３０；ＷＯ９９／０６８３４（ＰＣＴ／ＵＳ９８／１６２８０）、ＷＯ９７／２００３２（ＰＣＴ／ＵＳ９６／１８９７８）、ＷＯ９２／１１２７２（ＰＣＴ／ＵＳ９１／０９６３０）、ＷＯ９２／０３４６１（ＰＣＴ／ＵＳ９１／０５９３９）、ＷＯ９４／１８２１９（ＰＣＴ／ＵＳ９４／０１２３４）、ＷＯ９２／０１０４７（ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４）；およびＷＯ９３／０６２１３（ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１７５５）；欧州特許番号ＥＰ０５９２１０６；ＥＰ０５１９５９６およびＥＰ０２３９４００；米国特許第５，５６５，３３２号；同５，７２３，３２３号；同５，９７６，８６２号；同５，８２４，５１４号；同５，８１７，４８３号；同５，８１４，４７６号；同５，７６３，１９２号；同５，７２３，３２３号；同５，７６６，８８６号；同５，７１４，３５２号；同６，２０４，０２３号；同６，１８０，３７０号；同５，６９３，７６２号；同５，５３０，１０１号；同５，５８５，０８９号；同５，２２５，５３９号；および同４，８１６，５６７号に記載されるものなど当技術分野で公知の種々の技術を使用してヒト化され得る。

【0187】

５．抗ＩＬ−１β ＤＶＤ−Ｉｇ（商標）結合タンパク質
また、ＩＬ−１βの１種または複数のエピトープと結合する二重可変ドメイン免疫グロブリン結合タンパク質（ＤＶＤ−Ｉｇ）も提供される。ＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質はまた、ＩＬ−１βのエピトープおよびＩＬ−１βポリペプチド以外の第２の標的抗原のエピトープとも結合し得る。このようなＤＶＤ−Ｉｇ分子の例示的な一実施形態は、構造式ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ［式中、ＶＤ１は、第１の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の重鎖可変ドメインであり、Ｃは、重鎖定常ドメインであり、Ｘ１は、リンカーであり（ただし、ＣＨ１ではない）、Ｘ２は、Ｆｃ領域であり、ｎは、０または１であるが、好ましくは、１である］を含む重鎖および構造式ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ［式中、ＶＤ１は、第１の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは、軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１は、リンカーであり（ただし、ＣＨ１ではない）、Ｘ２は、Ｆｃ領域を含まず；ｎは０または１であるが、好ましくは、１である］を含む軽鎖を含む。このようなＤＶＤ−Ｉｇは、２つのこのような重鎖および２つのこのような軽鎖を含むことがあり、ここで、各鎖は、可変領域の間に介在する定常領域を有さず、タンデムに結合された可変ドメインを含み、重鎖および軽鎖は、会合して、２つのタンデムの抗原結合部位を形成し、１対の重鎖および軽鎖は、別の対の重鎖および軽鎖と会合して、４つの抗原結合部位を有する四量体結合タンパク質を形成し得る。別の実施形態では、ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、可変ドメインの間に介在する定常領域を有さず、タンデムに連結された３つの可変ドメイン、例えば、ＶＤ１、ＶＤ２、ＶＤ３を各々含む重鎖および軽鎖を含むことがあり、ここで、１対の重鎖および軽鎖は、会合して、３つの抗原結合部位を形成し得、１対の重鎖および軽鎖は、別の対の重鎖および軽鎖と会合して、６つの抗原結合部位を有する四量体結合タンパク質を形成し得る。

【0188】

ＤＶＤ−Ｉｇ中の各可変ドメイン（ＶＤ）は、１種または複数の所望の抗原またはエピトープ、例えば、ＩＬ−１βおよび／またはＩＬ−１α抗原またはエピトープと結合する、１種または複数の「親」モノクローナル抗体から得られる場合もある。

【0189】

Ａ．親モノクローナル抗体の作製
ＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質の可変ドメインは、対象とする抗原と結合できるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を含めた親抗体から得ることができる。これらの抗体は、天然に存在するであっても、組換え技術によって作製されたものであってもよい。所望の標的抗原またはエピトープと結合する抗体がポリクローナルである場合は、ＤＶＤ−Ｉｇの作製において使用するために、ポリクローナル集団から単一の抗体の、すなわち、ポリクローナル集団の単一のモノクローナルメンバーの抗原結合部位の可変ドメインを得ることがさらに必要であるということは理解されよう。モノクローナル抗体は、本明細書に記載されたものを含め、種々の当技術分野で公知の方法のいずれによって作製されてもよい（上記の節Ａ．１．からＡ．４．参照のこと）。

【0190】

Ｂ．親モノクローナル抗体を選択するための判定基準
本発明の一実施形態は、ＤＶＤ−Ｉｇ分子において望まれる少なくとも１つ以上の特性を有する親抗体を選択することに関する。一実施形態では、所望の特性は、１種または複数の抗体パラメーターから選択される。別の実施形態では、抗体パラメーターは、抗原特異性、抗原に対する親和性、効力、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、溶解度、製造効率、免疫原性、薬物動態、バイオアベイラビリティ、組織交差反応性およびオルソロガス抗原結合からなる群から選択される。

【0191】

Ｂ１．抗原に対する親和性
治療用ｍＡｂの所望の親和性は、抗原の性質および所望の治療のエンドポイントに応じて変わり得る。一実施形態では、モノクローナル抗体は、サイトカイン−サイトカイン受容体相互作用を遮断する場合に、このような相互作用が、通常、高親和性相互作用（例えば、＜ｐＭ−＜ｎＭの範囲）であるので高い親和性を有する（Ｋｄ＝０．０１−０．５０ｐＭ）。このような例では、その標的に対するｍＡｂ親和性は、その受容体に対するサイトカイン（リガンド）の親和性と同等またはそれよりも高くなくてはならない。他方、より低い親和性（＞ｎＭ範囲）しか有さないｍＡｂは、例えば、循環している病原性である可能性があるタンパク質の除去においては治療上有効であり得る、例えば、Ａ−βアミロイドなどの標的抗原の循環種を結合、捕捉および排除するモノクローナル抗体。その他の例では、潜在的な副作用を避けるために、位置指定突然変異誘発によって既存の高親和性ｍＡｂの親和性を低下させることまたはその標的に対して低い親和性を有するｍＡｂを使用することが使用され得る。例えば、高親和性ｍＡｂは、その意図される標的のすべてを捕捉または中和し、それによって標的とされたタンパク質の機能を完全に枯渇／排除し得る。この状況では、低親和性ｍＡｂは、疾患症状（病的レベルまたは過剰産生レベル）に関与している可能性のある標的の一部分を捕捉／中和し、したがって、標的の一部分がその正常な生理学的機能を発揮し続けることを可能にし得る。したがって、用量を調節する、および／または副作用を低減するために、Ｋｄを低下させることが可能であり得る。親ｍＡｂの親和性は、細胞表面分子を適宜ターゲッティングして、所望の治療成績を達成することにおいて役割を果たし得る。例えば、標的が、高密度の癌細胞および低密度の正常細胞上で発現される場合には、低親和性ｍＡｂは、正常細胞よりも腫瘍細胞上の多数の標的と結合し、その結果、ＡＤＣＣまたはＣＤＣによる腫瘍細胞排出をもたらし、したがって、治療上望ましい効果を有し得る。したがって、所望の親和性を有するｍＡｂを選択することは、可溶性および表面標的の両方と関連し得る。

【0192】

そのリガンドとの相互作用の際の受容体を介したシグナル伝達は、受容体−リガンド相互作用の親和性に応じて変わり得る。同様に、表面受容体に対するｍＡｂの親和性が、細胞内シグナル伝達の性質およびｍＡｂがアゴニストまたはアンタゴニストシグナルを送達し得るかどうかを決定し得るということが考えられる。ｍＡｂ媒介性シグナル伝達の親和性に基づいた性質は、副作用プロフィールに影響を与え得る。したがって、治療用モノクローナル抗体の所望の親和性および所望の機能は、インビトロおよびインビボ実験によって注意深く決定される必要がある。

【0193】

結合タンパク質（例えば、抗体）の所望のＫｄは、所望の治療成績に応じて実験的に決定され得る。一実施形態では、特定の抗原に対して、同じ抗原に対するＤＶＤ−Ｉｇの所望の親和性と等しい、またはそれ以上の親和性（Ｋｄ）を有する親抗体が選択される。抗原結合親和性および速度論は、Ｂｉａｃｏｒｅまたは別の同様の技術によって評価される。一実施形態では、各親抗体は、最大で約１０^−７Ｍ；最大で約１０^−８Ｍ；最大で約１０^−９Ｍ；最大で約１０^−１０Ｍ；最大で約１０^−１１Ｍ；最大で約１０^−１２Ｍ；および最大で１０^−１３Ｍからなる群から選択される、その抗原との解離定数（Ｋｄ）を有する。ＶＤ１が得られる第１の親抗体およびＶＤ２が得られる第２の親抗体は、それぞれの抗原に対して同様の親和性（Ｋ_Ｄ）を有していても異なる親和性（Ｋ_Ｄ）を有してもよい。各親抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定される、少なくとも約１０^２Ｍ^−１ｓ^−１；少なくとも約１０^３Ｍ^−１ｓ^−１；少なくとも約１０^４Ｍ^−１ｓ^−１；少なくとも約１０^５Ｍ^−１ｓ^−１；および少なくとも約１０^６Ｍ^−１ｓ^−１からなる群から選択される、抗原との結合速度定数（Ｋｏｎ）を有する。例えば、ＶＤ１が得られる第１の親抗体およびＶＤ２が得られる第２の親抗体は、それぞれの抗原に対して、同様の結合速度定数（Ｋｏｎ）を有していても、異なる結合速度定数（Ｋｏｎ）を有していてもよい。一実施形態では、各親抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定される、最大で約１０^−３ｓ^−１；最大で約１０^−４ｓ^−１；最大で約１０^−５ｓ^−１；および最大で約１０^−６ｓ^−１からなる群から選択される、抗原との解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。ＶＤ１が得られる第１の親抗体およびＶＤ２が得られる第２の親抗体は、それぞれの抗原に対して、同様の解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を有していても、異なる解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を有していてもよい。

【0194】

Ｂ２．効力
親モノクローナル抗体の所望の親和性／効力は、所望の治療成績に応じて変わる。例えば、受容体−リガンド（Ｒ−Ｌ）相互作用について、親和性（ｋｄ）は、Ｒ−Ｌ ｋｄ（ｐＭ範囲）と等しいか、それ以上である。病的循環タンパク質の簡単なクリアランスのためには、Ｋｄは、低いｎＭ範囲であり得る、例えば、循環するＡ−βペプチドの種々の種のクリアランス。さらに、Ｋｄはまた、標的が、同一エピトープの複数のコピーを発現するかどうかに応じて変わる、例えば、ｍＡｂがターゲッティングするＡβオリゴマー中の立体構造エピトープ。

【0195】

ＶＤＩおよびＶＤ２が、同一抗原であるが別個のエピトープと結合する場合には、ＤＶＤ−Ｉｇは、同一抗原の結合部位を含有し、ひいては、結合力、それによってＤＶＤ−Ｉｇの見かけのＫｄを増大させる。一実施形態では、ＤＶＤ−Ｉｇにおいて望まれるものと等しい、またはより低いＫｄを有する親抗体が選択される。親ｍＡｂの親和性を考慮することもまた、ＤＶＤ−Ｉｇが４つ以上の同一の抗原結合部位を含有するかどうか（すなわち、単一ｍＡｂ由来のＤＶＤ−Ｉｇ）に応じて変わり得る。この場合には、見かけのＫｄは、結合力のためにｍＡｂより高い。このようなＤＶＤ−Ｉｇは、表面受容体の架橋、中和効力の増強、病的タンパク質のクリアランスの増大などために使用され得る。

【0196】

別の実施形態では、特定の抗原に対して、同一の抗原に対するＤＶＤ−Ｉｇの所望の中和能と等しい、またはより高い中和効力を有する親抗体が選択される。中和効力は、適当な種類の細胞が、標的刺激に応じて測定可能なシグナルを生じ（すなわち、増殖またはサイトカイン産生）、ｍＡｂによる標的中和がシグナルを用量依存的に低減し得る、標的依存性生物検定法によって評価され得る。

【0197】

Ｂ３．生物学的機能
モノクローナル抗体は、いくつかの機能を潜在的に発揮できる。これらの機能のうちいくつかが表５に列挙されている。これらの機能は、インビトロアッセイ（例えば、細胞ベースのアッセイおよび生化学的アッセイ）およびインビボ動物モデルの両方によって評価され得る。

【0198】

【表9】

【0199】

本明細書において実施例および表５に記載される別個の機能を有するＭＡｂは、所望の治療成績を達成するよう選択され得る。単一のＤＶＤ−Ｉｇ分子において２つの別個の機能を達成するよう、２種以上の選択された親モノクローナル抗体がＤＶＤ−Ｉｇ形式において使用され得る。例えば、ＤＶＤ−Ｉｇは、ＩＬ−１βなどの特定のサイトカインの機能を中和する親ｍＡｂを選択すること、および病的タンパク質のクリアランスを増強する親ｍＡｂを選択することによって作製され得る。同様に、２種の異なる細胞表面受容体を認識する２種の親ｍＡｂ、一方の受容体上でアゴニスト機能を有する一方のｍＡｂと異なる受容体上でアンタゴニスト機能を有するもう一方のｍＡｂが選択され得る。これらの２種の選択されたｍＡｂ、別個の機能を有する各々は、単一分子中で選択されたモノクローナル抗体の２種の別個の機能（アゴニストおよびアンタゴニスト）を有する単一のＤＶＤ−Ｉｇ分子を構築するために使用され得る。同様に、各々、それぞれの受容体リガンド（例えば、ＥＧＦおよびＩＧＦ）の結合を遮断する、細胞表面受容体に対する２種のアンタゴニスト性ｍＡｂが、ＤＶＤ−Ｉｇ形式で使用され得る。反対に、アンタゴニスト性抗受容体ｍＡｂ（例えば、抗ＥＧＦＲ）および中和抗可溶性メディエーター（例えば、抗ＩＧＦ１／２）ｍＡｂが、ＤＶＤ−Ｉｇを作製するために選択され得る。

【0200】

Ｂ４．エピトープ認識：
タンパク質の異なる領域は、異なる機能を発揮し得る。例えば、ＩＬ−１βなどのサイトカインの特定の領域は、サイトカイン受容体と相互作用して受容体活性化を引き起こすのに対し、タンパク質のその他の領域は、サイトカインを安定化するために必要とされている可能性がある。この場合には、サイトカイン上の受容体相互作用領域（複数可）と特異的に結合するｍＡｂを選択し、それによって、サイトカイン−受容体相互作用を遮断してもよい。いくつかの場合、例えば、複数のリガンドと結合する特定のケモカイン受容体では、１種のリガンドのみと相互作用するエピトープ（ケモカイン受容体の領域）と結合するｍＡｂが選択され得る。その他の例では、モノクローナル抗体は、タンパク質の生理学的機能に直接的に関与していないが、これらの領域とのｍＡｂの結合がタンパク質の生理学的機能を干渉する（立体障害）か、コンホメーションを変更するかのいずれかであり、その結果、タンパク質が機能できない標的上のエピトープと結合し得る（受容体コンホメーションを変更し、その結果、リガンドのいずれも結合できなくなる、ｍＡｂ対複数のリガンドを有する受容体）。サイトカインのその受容体との結合を遮断しないが、シグナル伝達を遮断する抗サイトカインモノクローナル抗体も同定されている（例えば、１２５−２Ｈ、抗ＩＬ−１８ｍＡｂ）。

【0201】

エピトープおよびｍＡｂ機能の例として、それだけには限らないが、受容体−リガンド（Ｒ−Ｌ）相互作用を遮断すること（Ｒ−相互作用部位と結合する中和ｍＡｂ）；Ｒ−結合の減少または消失をもたらす立体障害が挙げられる。抗体は、受容体結合部位以外の部位で標的と結合するが、コンホメーション変化を誘導することによって標的の受容体結合および機能を依然として干渉し、機能を排除する場合もあり（例えば、ゾレア（登録商標）オマリズマブ、Ｇｅｎｅｔｅｃｈ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、Ｒと結合するが、シグナル伝達を遮断する場合もある（１２５−２Ｈ ｍＡｂ）。

【0202】

一実施形態では、親ｍＡｂは、最大有効性のために適当なエピトープを標的とする必要がある。このようなエピトープは、ＤＶＤ−Ｉｇ中で保存されなければならない。ｍＡｂの結合エピトープは、共結晶学、ｍＡｂ−抗原複合体の制限されたタンパク質分解および質量分析ペプチドマッピングを含めたいくつかのアプローチによって決定され得る（Ｌｅｇｒｏｓら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．、９：１００２−１０１０頁（２０００年））、ファージディスプレイペプチドライブラリー（Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．、２９９：２１−３５頁（２００５年））ならびに変異原性（Ｗｕ Ｃ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１７０：５５７１−５５７７頁（２００３年））。
Ｂ５．物理化学的および製薬的（ｐａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）特性
抗体を用いる治療的処置は、高用量、時には、数ｍｇ／ｋｇの投与を必要とすることが多い（通常、大きな分子量の結果としての質量ベースでの低い効力のために）。患者のコンプライアンスに適応させ、慢性疾患治療および外来患者治療に適切に対処するために、治療用ｍＡｂの皮下（ｓ．ｃ．）または筋肉内（ｉ．ｍ．）投与が望ましい。例えば、ｓ．ｃ．投与のための最大の望ましい容積は、約１．０ｍＬであり、したがって、用量あたりの注射数を制限するには＞１００ｍｇ／ｍＬの濃度が望ましい。一実施形態では、治療用抗体は、一用量で投与される。しかしながら、このような製剤の開発は、タンパク質間相互作用（例えば、免疫原性のリスクを増大させる可能性がある凝集）によって、ならびに処理および送達の際の制限によって（例えば、粘度）によって制約されている。結果として、臨床的有効性および関連する開発のために必要な多量のものによって、抗体製剤および高用量計画でのｓ．ｃ．投与の可能性の完全な利用に制限が強いられる。タンパク質分子およびタンパク質溶液の物理化学的特性および製薬的特性、例えば、安定性、溶解度および粘度特徴が最重要のものであることは明らかである。

【0203】

Ｂ５．１．安定性
「安定な」抗体製剤は、その中で抗体が、保存の際にその物理的安定性および／または化学安定性および／または生物活性を本質的に保持するものである。安定性は、選択された温度で選択された期間の間、測定され得る。一実施形態では、製剤中の抗体は、室温で（約３０℃）または４０℃で少なくとも１ヶ月安定である、および／または約２−８℃で少なくとも１年間、例えば少なくとも２年間安定である。さらに、一実施形態では、製剤は、本明細書において以下、「凍結／解凍サイクル」と呼ばれる、製剤の凍結（例えば、−７０℃への）および解凍後に安定である。別の実施例では、「安定な」製剤は、製剤中で約１０％未満および約５％未満のタンパク質が、凝集体として存在するものであり得る。

【0204】

長期間、種々の温度でインビトロで安定なＤＶＤ−Ｉｇが望ましい。これは、インビトロで、高温下で、例えば、４０℃で２−４週間安定な親ｍＡｂの迅速なスクリーニングによって達成でき、ついで、安定性を評価できる。２−８℃での保存の間に、タンパク質は、少なくとも１２ヶ月、例えば、少なくとも２４ヶ月の安定性を示す。安定性（単量体の、無傷の分子の％）は、陽イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、ＳＤＳ−ＰＡＧＥならびに生物活性試験などの種々の技術を使用して評価され得る。共有結合修飾およびコンホメーション修飾を分析するために使用され得る分析技術のより包括的なリストについては、Ｊｏｎｅｓ、Ａ．Ｊ．Ｓ．、「Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍｓ」、第２章、Ｉｎ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ、第１版、（Ｃｌｅｌａｎｄ ａｎｄ Ｌａｎｇｅｒ編）（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｄ．Ｃ．、１９９４年）２２−４５頁；およびＰｅａｒｌｍａｎ ａｎｄ Ｎｇｕｙｅｎ、「Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｒｕｇｓ」、第６章、Ｉｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ、第１版［Ｉｎ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第４巻］（Ｌｅｅ、Ｖ．Ｈ．編）（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９１年）２４７−３０１頁参照のこと。

【0205】

不均一性および凝集体形成：抗体の安定性は、凝集体として存在する製剤が、ＧＭＰ抗体物質中に、約１０％未満、一実施形態では、約５％未満、別の実施形態では、約２％未満、または一実施形態では、０．５％から１．５％以下の範囲内を示し得るようなものであり得る。サイズ排除クロマトグラフィーは、タンパク質凝集体の検出において高感度の、再現性のある、極めて頑強な方法である。

【0206】

一実施形態では、抗体は、低い凝集体レベルに加えて、化学的に安定でなくてはならない。化学安定性は、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、陽イオンまたは陰イオン交換クロマトグラフィー）、疎水性相互作用クロマトグラフィーまたは等電点電気泳動もしくはキャピラリー電気泳動などのその他の方法によって決定され得る。例えば、抗体の化学安定性は、２−８℃で少なくとも１２ヶ月保存した後に、陽イオン交換クロマトグラフィーにおける修飾されていない抗体に相当するピークが、保存試験の前の抗体溶液と比較して、２０％以下、一実施形態では、１０％以下、または別の実施形態では、５％以下増大し得るようなものであり得る。

【0207】

一実施形態では、親抗体は、構造的完全性；正しいジスルフィド結合形成および正しいフォールディングを示す。抗体の二次または三次構造の変化による化学的不安定性は、抗体活性に影響を及ぼし得る。例えば、抗体の活性によって示される安定性は、２−８℃で少なくとも１２ヶ月の保存後に、抗体の活性が、保存試験前の抗体溶液と比較して５０％以下、一実施形態では、３０％以下、さらに、１０％以下、または一実施形態では、５％もしくは１％以下低下し得るようなものであり得る。抗体活性を決定するために、適した抗原−結合アッセイが使用され得る。

【0208】

Ｂ５．２．溶解度
ｍＡｂの「溶解度」は、正しくフォールディングされた単量体のＩｇＧの生成と相関する。したがって、ＩｇＧの溶解度は、ＨＰＬＣによって評価され得る。例えば、可溶性（単量体）ＩｇＧは、ＨＰＬＣクロマトグラフ上に単一のピークを生じさせるのに対し、不溶性（例えば、多量体および凝集した）は、複数のピークを生じさせる。したがって、当業者は、日常的なＨＰＬＣ技術を使用してＩｇＧの溶解度の増大または低下を検出できる。溶解度を分析するために使用され得る分析技術のより包括的なリストについては、（Ｊｏｎｅｓ、Ａ．Ｇ．、Ｄｅｐ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．、Ｕｎｉｖ．Ｃｏｌｌ． Ｌｏｎｄｏｎ、「Ｐａｒｔｉｃｌｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ」、第４章、Ｉｎ Ｐｒｏｃｅｓｓ． Ｓｏｌｉｄ−Ｌｉｑｕｉｄ Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ、（Ｐ． Ａｙａｚｉ Ｓｈａｍｌｏｕ編）（Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ−Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ、Ｏｘｆｏｒｄ、ＵＫ、１９９３年）９３−１１７頁；およびＰｅａｒｌｍａｎ ａｎｄ Ｎｇｕｙｅｎ、「Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｒｕｇｓ」、第６章、Ｉｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ、第１版［Ｉｎ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第４巻］（Ｌｅｅ、Ｖ．Ｈ．編）（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９１年）２４７−３０１頁参照のこと）。治療用ｍＡｂの溶解度は、適切な投薬のために必要とされることが多い高濃縮物への製剤にとって重要である。本明細書において概説されたように、効率的な抗体投薬に適応させるために＞１００ｍｇ／ｍＬの溶解度が必要である場合もある。例えば、抗体溶解度は、初期研究相では約５ｍｇ／ｍＬ以上、一実施形態では、高度処理科学段階において、約２５ｍｇ／ｍＬ以上、または一実施形態では、約１００ｍｇ／ｍＬ以上、または一実施形態では、約１５０ｍｇ／ｍＬ以上であり得る。タンパク質分子の固有の特性は、タンパク質溶液の物理化学的特性、例えば、安定性、溶解度、粘度にとって重要である。しかし、当業者ならば、最終タンパク質製剤の特徴に有益に影響を及ぼすために、添加剤として使用され得る広範な賦形剤が存在するということは理解する。これらの賦形剤として、（ｉ）液体溶媒、共溶媒（例えば、エタノールなどのアルコール）；（ｉｉ）緩衝剤（例えば、リン酸バッファー、酢酸バッファー、クエン酸バッファー、アミノ酸バッファー）；（ｉｉｉ）糖または糖アルコール（例えば、スクロース、トレハロース、フルクトース、ラフィノース、マンニトール、ソルビトール、デキストラン）；（ｉｖ）界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０、４０、６０、８０、ポロキサマー）；（ｖ）等張性修飾因子（例えば、ＮａＣｌなどの塩、糖、糖アルコール）；および（ｖｉ）その他のもの（例えば、保存料、キレート化剤、抗酸化物質、キレート化物質（例えば、ＥＤＴＡ）、生分解性ポリマー、担体分子（例えば、ＨＳＡ、ＰＥＧ））を挙げることができる。

【0209】

粘度は、抗体製造および抗体処理（例えば、ダイアフィルトレーション／限外濾過）、フィル−フィニッシュ（ｆｉｌｌ−ｆｉｎｉｓｈ）処理（ポンピング局面、濾過局面）および送達局面（注射針通過性（ｓｙｒｉｎｇｅａｂｉｌｉｔｙ）、高性能の装置送達）に関して重要度が高いパラメーターである。低粘度が、高濃度を有する抗体の液体溶液を可能にする。これによって、同一用量がより少ない容積で投与されることが可能になる。少ない注射容積は、注射の際のより少ない疼痛という利点を提供し、患者において注射時の疼痛を低減するために溶液は、必ずしも等張性である必要はない。抗体溶液の粘度は、１００（１／ｓ）のずりせん断速度で、抗体溶液粘度が２００ｍＰａ ｓ未満、一実施形態では、１２５ｍＰａ ｓ未満、別の実施形態では、７０ｍＰａ ｓ未満、さらに別の実施形態では、２５ｍＰａ ｓ未満またはさらに１０ｍＰａ ｓ未満であるようなものであり得る。

【0210】

Ｂ５．３．製造効率
チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）などの哺乳動物細胞において効率的に発現されるＤＶＤ−Ｉｇの作製は、一実施形態では、哺乳動物細胞においてそれら自体が効率的に発現される２種の親モノクローナル抗体を必要とする。安定な哺乳動物系列（すなわち、ＣＨＯ）からの製造収率は、０．５ｇ／Ｌを超える、一実施形態では、約１ｇ／Ｌを超える、別の実施形態では、約２から約５ｇ／Ｌ以上の範囲であるはずである（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖら、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１２：１７３−２０１頁（１９９９年）；Ｃａｒｒｏｌｌら、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．、４：１８２１−１８２９頁（２００４年））。

【0211】

哺乳動物細胞における抗体およびＩｇ融合タンパク質の製造は、いくつかの因子によって影響を受ける。強力なプロモーター、エンハンサーおよび選択マーカーの組み込みによる発現ベクターの遺伝子操作は、組み込まれたベクターコピーからの対象とする遺伝子の転写を最大にし得る。高レベルの遺伝子転写を許容するベクター組込み部位の同定は、ベクターからのタンパク質発現を増強し得る（Ｗｕｒｍ、Ｆ．Ｍ．、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２２（１１）：１３９３−１３９８頁（２００４年））。さらに、製造のレベルは、抗体重鎖および軽鎖の比およびタンパク質アセンブリーおよび分泌のプロセスにおける種々のステップによって影響を受ける（Ｊｉａｎｇら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．、２２（１）：３１３−３１８頁（２００６年））。

【0212】

Ｂ６．免疫原性
治療用ｍＡｂの投与は、特定の発生率の免疫応答（すなわち、治療用ｍＡｂに向けられた内因性抗体の形成）をもたらし得る。免疫原性を誘導し得る潜在的要素は、親モノクローナル抗体の選択の間に分析されなければならず、このようなリスクを低減する段階は、ＤＶＤ−Ｉｇ構成に先立って親モノクローナル抗体を最適化するようとられ得る。マウス由来抗体は、患者において高度に免疫原性であるとわかっている。マウス可変およびヒト定常領域からなるキメラ抗体の作製は、治療用抗体の免疫原性を低減するための論理的な次のステップを示す（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ｓｃｈｌｏｍ、「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、第１章、Ｉｎ Ｉｍｐｏｒｔａｎｔ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １９９０年（Ｊ．Ｂ． Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、１９９０年）３−１８頁）。あるいは、免疫原性は、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３−３２７頁（１９８８年）によって治療用抗体について記載されたように、マウスＣＤＲ配列をヒト抗体フレームワーク中に移すことによって低減され得る（再形成（ｒｅｓｈａｐｉｎｇ）／ＣＤＲグラフティング／ヒト化）。別の方法は、「再表面形成（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」または「ベニヤリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）」と呼ばれ、げっ歯類軽鎖可変および重鎖ドメインを用いて出発し、表面に到達可能なフレームワークアミノ酸のみがヒトのものに変更され、一方でＣＤＲおよび埋没したアミノ酸は、親のげっ歯類抗体由来のままである（Ｒｏｇｕｓｋａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、９（１０）：８９５−９０４頁（１９９６年））。別の種類のヒト化では、全ＣＤＲのグラフティングの代わりに、ある技術は、抗体のその標的との結合に関与しているＣＤＲ残基のサブセットとして定義される「特異性決定領域（ＳＤＲ）」のみを移植する（Ｋａｓｈｍｉｒｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ、３６（１）：２５−３４頁（２００５年））。これは、抗体−標的複合体の入手可能な三次元構造の分析またはどれが標的と相互作用するかを決定するための抗体ＣＤＲ残基の変異解析のいずれかによるＳＤＲの同定を必要とする。あるいは、完全ヒト抗体は、マウス、キメラまたはヒト化抗体と比較して低減した免疫原性を有し得る。

【0213】

治療用抗体の免疫原性を低減するための別のアプローチは、免疫原性であると予測される特定の特異的配列の排除である。１つのアプローチでは、第１世代の生物製剤が、ヒトにおいて試験され、許容しがたく免疫原性であるとわかった後、Ｂ細胞エピトープがマッピングされ、次いで、免疫検出を避けるよう変更され得る。別のアプローチは、潜在的なＴ細胞エピトープを予測および除去する方法を使用する。ＭＨＣタンパク質と結合する潜在力を有する生物学的治療薬のペプチド配列をスキャンし、同定するための計算法が開発された（Ｄｅｓｍｅｔら、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、５８：５３−６９頁（２００５年））。あるいは、潜在的タンパク質アレルゲンにおいてＣＤ４^＋ Ｔ細胞エピトープを同定するためにヒト樹状細胞ベースの方法が使用され得る（Ｓｔｉｃｋｌｅｒら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、２３：６５４−６６０頁（２０００年）；ＭｏｒｒｉｓｏｎおよびＳｃｈｌｏｍ、Ｉｍｐｏｒｔａｎｔ Ａｄｖ． Ｏｎｃｏｌ．（１９９０年）３−１８頁；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら「Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｎａｔｕｒｅ． ３３２：３２３−３２７頁（１９８８年）；Ｒｏｇｕｓｋａら、「Ａ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｗｏ ｍｕｉｒｎｅ ｍＡｂｓ ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ｂｙ ＣＤＲ−ｇｒａｆｔｉｎｇ ａｎｄ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎ ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ」、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、９：８９５−９０４頁（１９９６年）；Ｋａｓｈｍｉｒｉら、「ＳＤＲ ｇｒａｆｔｉｎｇ−−ａ ｎｅｗ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ」、Ｍｅｔｈｏｄｓ、３６（１）：２５−３４頁（２００５年）；Ｄｅｓｍｅｔら、「Ａｎｃｈｏｒ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｏｆ ＨＬＡ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅｓ： ａｎａｌｙｓｉｓ ｂｙ ａ ｎｏｖｅｌ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｓｃｏｒｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ」、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、５８：５３−６９頁（２００５年）；Ｓｔｉｃｋｌｅｒら、「ＣＤ４＋ Ｔ−ｃｅｌｌ ｅｐｉｔｏｐｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｕｎｅｘｐｏｓｅｄ ｈｕｍａｎ ｄｏｎｏｒ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ」、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、２３：６５４−６６０頁（２０００年））。

【0214】

Ｂ７．インビボ有効性
所望のインビボ有効性を有するＤＶＤ−Ｉｇ分子を作製するためには、組み合わせて与えられる場合に、同様に所望のインビボ有効性を有するｍＡｂを作製および選択することが重要である。しかし、いくつかの例では、ＤＶＤ−Ｉｇは、２種の別個のｍＡｂの組合せでは達成され得ないインビボ有効性を示し得る。例えば、ＤＶＤ−Ｉｇは、２種の標的を近接させ、それが、２種の別個のｍＡｂの組合せでは達成され得ない活性につながり得る。さらなる望ましい生物学的機能が本明細書において節Ｂ３に記載されている。薬物動態半減期（ｔ^１／２）；組織分布；可溶性対細胞表面標的；および標的濃度−可能性／密度−表面などの因子に基づいて、ＤＶＤ−Ｉｇ分子において望ましい特徴を有する親抗体が選択され得る。

【0215】

Ｂ８．インビボ組織分布
所望のインビボ組織分布を有するＤＶＤ−Ｉｇ分子を作製するためには、一実施形態では、同様に所望のインビボ組織分布プロフィールを有する親ｍＡｂが選択されなければならない。あるいは、二重特異性ターゲッティング戦略の機序に基づいて、別の機会には、組み合わせて与えられる場合に、同様に所望のインビボ組織分布を有する親ｍＡｂを選択することが必要ではないこともある。例えば、１種の結合成分がＤＶＤ−Ｉｇを特定の部位にターゲッティングし、それによって第２の結合成分を同じ標的部位にもたらすＤＶＤ−Ｉｇの場合。例えば、ＤＶＤ−Ｉｇの一方の結合特異性は、膵臓（島細胞）を標的とすることができ、もう一方の特異性は、ＧＬＰ１を膵臓へもたらし、インスリンを誘導することができる。

【0216】

Ｂ９．アイソタイプ
それだけには限らないが、アイソタイプ、エフェクター機能および循環半減期を始めとする所望の特性を有するＤＶＤ−Ｉｇ分子を作製するには、治療的有用性および所望の治療のエンドポイントに応じて適当なＦｃ−エフェクター機能を有する親ｍＡｂが選択される。５種の主な重鎖のクラスまたはアイソタイプがあり、この一部は、いくつかのサブタイプを有し、これらが、抗体分子のエフェクター機能を決定する。これらのエフェクター機能は、抗体分子のヒンジ領域、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインにある。しかし、抗体分子のその他の部分の中の残基はさらに、エフェクター機能に対して効果を有し得る。ヒンジ領域Ｆｃ−エフェクター機能として、（ｉ）抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、（ｉｉ）補体（Ｃ１ｑ）結合、活性化および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、（ｉｉｉ）抗原−抗体複合体の食作用／クリアランスおよび（ｉｖ）時には、サイトカイン放出が挙げられる。これらの抗体分子のＦｃ−エフェクター機能は、Ｆｃ領域のクラス特異的細胞表面受容体のセットとの相互作用によって媒介される。ＩｇＧ１アイソタイプの抗体は、最も活性であるのに対し、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４は、エフェクター機能が最小限である、または無い。ＩｇＧ抗体のエフェクター機能は、３種の構造的に相同な細胞性Ｆｃ受容体の種類（およびサブタイプ）（ＦｃｇＲ１、ＦｃｇＲＩＩおよびＦｃｇＲＩＩＩ）との相互作用によって媒介される。ＩｇＧ１のこれらのエフェクター機能は、ＦｃｇＲおよびＣ１ｑ結合にとって必要である下部ヒンジ領域中の特定のアミノ酸残基（例えば、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）を突然変異させることによって排除され得る。Ｆｃ領域、特に、ＣＨ２−ＣＨ３ドメイン中のアミノ酸残基はまた、抗体分子の循環半減期を決定する。このＦｃ機能は、酸性リソソームから全身循環へと戻す抗体分子のリサイクルに関与している、Ｆｃ領域の新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）との結合によって媒介される。

【0217】

ｍＡｂが活性または不活性のアイソタイプを有するべきであるかどうかは、抗体についての所望の治療のエンドポイントに応じて変わる。アイソタイプおよび所望の治療成績の使用法のいくつかの例が以下に列挙される：
１．所望のエンドポイントが、可溶性サイトカインの機能的中和である場合は、不活性のアイソタイプが使用され得る；
２．所望の成績が、病的タンパク質のクリアランスである場合は、活性なアイソタイプが使用され得る；
３．所望の成績が、タンパク質凝集体のクリアランスである場合は、活性なアイソタイプが使用され得る；
４．所望の成績が、表面受容体を拮抗することである場合は、不活性のアイソタイプが使用される（Ｔｙｓａｂｒｉ、ＩｇＧ４；ＯＫＴ３（登録商標）、突然変異されたＩｇＧ１）；
５．所望の成績が標的細胞を排除することである場合は、活性なアイソタイプが使用される（ヘルセプチン、ＩｇＧ１（増強されたエフェクター機能を有する）；および
６．所望の成績が、循環からタンパク質を取り除き、ＣＮＳへの進入が起こらないことである場合は、ＩｇＭアイソタイプが使用され得る（例えば、循環Ａｂペプチド種を取り除くこと）。

【0218】

親ｍＡｂのＦｃエフェクター機能は、当技術分野で周知の種々のインビトロ法によって決定され得る。

【0219】

論じられたように、アイソタイプおよびそれによるエフェクター機能の選択は、所望の治療のエンドポイントに応じて変わる。循環標的の簡単な中和、例えば、受容体−リガンド相互作用を遮断することが望まれる場合には、エフェクター機能は必要ではない場合もある。このような例では、エフェクター機能を排除するアイソタイプまたは抗体のＦｃ領域中の突然変異が望ましい。標的細胞の排出、例えば、腫瘍細胞の排出が治療のエンドポイントであるその他の例では、エフェクター機能を増強するＦｃ領域におけるアイソタイプまたは突然変異または脱フコシル化が望ましい（Ｐｒｅｓｔａ、Ｌ．Ｇ．、Ａｄｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｌ． Ｒｅｖ．、５８：６４０−６５６頁（２００６年）；Ｓａｔｏｈら、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．、６：１１６１−１１７３頁（２００６年）。同様に、治療的有用性に応じて、抗体分子の循環半減期は、Ｆｃ領域中に特異的突然変異を導入することによって抗体−ＦｃＲｎ相互作用を調節することによって低減／延長され得る（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８１：２３５１４−２３５２４頁（２００６年）；Ｐｅｔｋｏｖａら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１８：１７５９−１７６９頁（２００６年）；Ｖａｃｃａｒｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ、１０３：１８７０９−１８７１４頁（２００６年）。

【0220】

正常な治療用ｍＡｂの種々のエフェクター機能に影響を及ぼす種々の残基に関する公開された情報が、ＤＶＤ−Ｉｇについて確認される必要があり得る。ＤＶＤ−Ｉｇ形式では、モノクローナル抗体エフェクター機能の調節のために同定されたもの以外のさらなる（異なる）Ｆｃ領域残基が重要であり得るということが可能であり得る。

【0221】

全体に、どのＦｃ−エフェクター機能（アイソタイプ）が、最終的なＤＶＤ−Ｉｇ形式において重要であるかについての決定は、疾患適応症、治療標的、所望の治療のエンドポイントおよび安全性の考慮に応じて変わる。以下を含めた例示的な適当な重鎖および軽鎖定常領域が以下に列挙されるがそれだけには限らない：ＩｇＧ１−アロタイプ：Ｇ１ｍｚ；ＩｇＧ１突然変異株−Ａ２３４、Ａ２３５；ＩｇＧ２−アロタイプ：Ｇ２ｍ（ｎ−）；κ−Ｋｍ３；およびλ。

【0222】

Ｆｃ受容体およびＣ１ｑ研究：細胞膜上の任意の過剰発現された標的との抗体複合体化による不要の抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の可能性は、（例えば、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）ヒンジ領域突然変異によって抑制され得る。ｍＡｂのＩｇＧ１ヒンジ領域中に存在するこれらの置換アミノ酸は、ＦｃｇＲ結合が、ＩｇＧ１ヒンジ領域上の重複部位内で生じると考えられるので、ｍＡｂのヒトＦｃ受容体（しかし、ＦｃＲｎではない）との結合の減少をもたらすと予測される。ｍＡｂのこの特徴が、野生型ＩｇＧを含有する抗体を超える安全性プロフィールの改善につながり得る。ｍＡｂのヒトＦｃ受容体との結合は、細胞株（例えば、ＴＨＰ−１、Ｋ５６２）およびＦｃｇＲＩＩｂ（またはその他のＦｃｇＲ）を発現する遺伝子操作されたＣＨＯ細胞株を使用するフローサイトメトリー実験によって決定され得る。ＩｇＧ１対照モノクローナル抗体、ｍＡｂと比較すると、ＦｃｇＲＩおよびＦｃｇＲＩＩａとの結合の減少を示すのに対して、ＦｃｇＲＩＩｂとの結合は影響を受けない。抗原／ＩｇＧ免疫複合体によるＣ１ｑの結合および活性化が、古典的な補体カスケードを始動させ、結果として生じる炎症性および／または免疫調節性応答を伴う。ＩｇＧ上のＣ１ｑ結合部位は、ＩｇＧヒンジ領域内の残基に局在化されている。漸増濃度のｍＡｂとのＣ１ｑ結合が、Ｃ１ｑ ＥＬＩＳＡによって評価された。結果は、野生型対照ＩｇＧ１の結合と比較した場合に予測されたように、ｍＡｂは、Ｃ１ｑと結合できないことを実証する。全体として、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａヒンジ領域突然変異は、ｍＡｂのＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａおよびＣ１ｑとの結合を消滅させるが、ＦｃｇＲＩＩｂとの相互作用に影響を与えない。これらのデータは、突然変異体Ｆｃを有するインビボｍＡｂは、阻害性ＦｃｇＲＩＩｂと正常に相互作用するが、活性化ＦｃｇＲＩおよびＦｃｇＲＩＩａ受容体またはＣ１ｑとは相互作用できない可能性が高いということを示唆する。

【0223】

ヒトＦｃＲｎ結合：新生児受容体（ＦｃＲｎ）は、胎盤を越え、ＩｇＧ分子の異化半減期を制御するためのＩｇＧの輸送に関与している。有効性を改善するため、投与の用量または頻度を低減するため、または標的の局在性を改善するためには、抗体の末端半減期を増大させることが望ましいものであり得る。あるいは、全身曝露を低減するためまたは標的対非標的結合割合を改善するために、逆をすること、すなわち、抗体の末端半減期を減少させることが有利であり得る。ＩｇＧおよびそのサルベージ受容体、ＦｃＲｎ間の相互作用を目的に合わせることによって、ＩｇＧの末端半減期を増大または減少させる方法が提供される。ＩｇＧを始めとする循環中のタンパク質は、特定の細胞、例えば、血管内皮のものによるマイクロピノサイトーシスによって液相中に取り込まれる。ＩｇＧは、わずかに酸性の条件（ｐＨ６．０−６．５）下でエンドソーム中でＦｃＲｎと結合し得、細胞表面にリサイクルし得、そこで、ほぼ中性条件（ｐＨ７．０−７．４）下で放出される。ＦｃＲｎ８０、１６、１７上のＦｃ領域結合部位のマッピングによって、種を越えて保存されている２個のヒスチジン残基、Ｈｉｓ３１０およびＨｉｓ４３５がこの相互作用のｐＨ依存に関与していることが示された。ファージディスプレイ技術を使用して、ＦｃＲｎとの結合を増大させ、マウスＩｇＧの半減期を延長するマウスＦｃ領域突然変異が同定された（Ｇｈｅｔｉｅら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１５（７）：６３７−６４０頁（１９９７年）参照のこと）。ｐＨ６．０でＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧの結合親和性を増大させるが、ｐＨ７．４では増大させないＦｃ領域突然変異も同定された（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６９（９）：５１７１−５１８０頁（２００２年）参照のこと）。さらに、ある場合には、アカゲザルＦｃＲｎについて、結合における同様のｐＨ依存性増大（最大２７倍）もまた観察され、これは親ＩｇＧと比較してアカゲザルにおいて血清半減期の２倍の増大をもたらした（Ｈｉｎｔｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７９（８）：６２１３−６２１６頁（２００４年）参照のこと）。これらの知見は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎとの相互作用を目的に合わせることによって、抗体治療薬の血漿半減期を延長することが実現可能であるということを示す。反対に、ＦｃＲｎとの相互作用を減弱するＦｃ領域突然変異は、抗体半減期を減少させ得る。

【0224】

Ｂ．１０．薬物動態（ＰＫ）
所望の薬物動態プロフィールを有するＤＶＤ−Ｉｇ分子を作製するために、一実施形態では、同様の所望の薬物動態プロフィールを有する親ｍＡｂが選択される。１つ考慮すべきことは、モノクローナル抗体に対する免疫原性反応（すなわち、「ＨＡＨＡ」、ヒト抗ヒト抗体反応；「ＨＡＣＡ」、ヒト抗キメラ抗体反応）がこれらの治療薬の薬物動態をさらに複雑にすることである。一実施形態では、ＤＶＤ−Ｉｇ分子を構築するために、最小の免疫原性しか有さないか、免疫原性を有さないモノクローナル抗体が使用され、その結果、得られたＤＶＤ−Ｉｇもまた、最小の免疫原性しか有さない、または免疫原性を有さない。ｍＡｂのＰＫを決定する因子の一部として、それだけには限らないが、ｍＡｂの固有の特性（ＶＨアミノ酸配列）；免疫原性；ＦｃＲｎ結合およびＦｃ機能が挙げられる。

【0225】

選択された親モノクローナル抗体のＰＫプロフィールは、げっ歯類におけるＰＫプロフィールは、カニクイザルおよびヒトにおけるモノクローナル抗体のＰＫプロフィールと相関する（または厳密に予測する）ので、げっ歯類では容易に決定され得る。

【0226】

所望のＰＫ特徴（および本明細書において論じられるその他の所望の機能的特性）を有する親モノクローナル抗体が選択された後、ＤＶＤ−Ｉｇが構築される。ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、２種の親モノクローナル抗体に由来する２種の抗原−結合ドメインを含有するので、ＤＶＤ−ＩｇのＰＫ特性は同様に評価される。したがって、ＤＶＤ−ＩｇのＰＫ特性を決定しながら、２種の親モノクローナル抗体に由来する両抗原−結合ドメインの機能性に基づいてＰＫプロフィールを決定するＰＫアッセイが使用され得る。ＤＶＤ−ＩｇのＰＫプロフィールは決定され得る。ＤＶＤ−ＩｇのＰＫプロフィールに影響を及ぼし得るさらなる因子として、抗原−結合ドメイン（ＣＤＲ）配向、リンカーの大きさおよびＦｃ／ＦｃＲｎ相互作用が挙げられる。親抗体のＰＫ特徴は、パラメーター：吸収、分布、代謝および排泄に従って評価され得る。

【0227】

吸収：これまで、治療用モノクローナル抗体の投与は、非経口経路（例えば、静脈内［ＩＶ］、皮下［ＳＣ］または筋肉内［ＩＭ］）によってである。間質空間からの、ＳＣまたはＩＭ投与のいずれかの後の全身循環へのｍＡｂの吸収は、主に、リンパ経路を介してである。飽和性、プレシステミック（ｐｒｅｓｙｓｔｅｍｉｃ）のタンパク質分解は、管外投与後に可変性の絶対バイオアベイラビリティをもたらし得る。普通、モノクローナル抗体の増大する用量に伴う絶対バイオアベイラビリティの増大は、高用量で飽和タンパク質分解能によって観察され得る。ｍＡｂの吸収プロセスは、リンパ液がゆっくりと血管系中に排出し、吸収期間が数時間から数日にかけて生じ得るので普通極めて遅い。ＳＣ投与後のモノクローナル抗体の絶対バイオアベイラビリティは、一般に、５０％から１００％の範囲である。ＤＶＤ−Ｉｇ構築物によってターゲッティングされる血液脳関門（ＢＢＢ）での輸送媒介性構造の場合には、血漿中の循環時間は、ＤＶＤ−Ｉｇが遊離されて、その第２の抗原認識部位による相互作用を可能にするＣＮＳコンパートメント中への、血液脳関門（ＢＢＢ）での経細胞輸送の増強によって低減され得る。

【0228】

分布：ＩＶ投与後、モノクローナル抗体は、普通、急速な分布相で始まり、それに遅い排出相が続く、二相性血清（または血漿）濃度−時間プロフィールをたどる。一般に、双指数関数的薬物動態モデルが、この種の薬物動態プロフィールを最もよく表す。ｍＡｂの中枢コンパートメント（Ｖｃ）中の分布容積は、普通、血漿容量（２−３リットル）と等しい、またはわずかに大きい。血清（血漿）濃度対時間プロフィールにおける別個の二相性パターンは、血清（血漿）濃度−時間曲線の分布相が、長い吸収部分によって隠されるので、ＩＭまたはＳＣなどのその他の非経口経路の投与を用いては明らかではない場合もある。物理化学的特性、部位特異的および標的に向けられた受容体媒介性取り込み、組織の結合能およびｍＡｂ用量を始めとする多数の因子が、ｍＡｂの体内分布に影響を及ぼし得る。これらの因子のいくつかが、ｍＡｂの体内分布における非線形性に寄与し得る。

【0229】

代謝および排泄：分子の大きさのために、無傷のモノクローナル抗体は、腎臓によって尿中に排泄されない。それらは主に、代謝（例えば、異化作用）によって不活化される。ＩｇＧに基づく治療用モノクローナル抗体について、半減期は、通常、数時間または１−２日から２０日超の範囲である。ｍＡｂの排出は、それだけには限らないが、ＦｃＲｎ受容体の親和性、ｍＡｂの免疫原性、ｍＡｂのグリコシル化度、タンパク質分解に対するｍＡｂの感受性および受容体媒介性排出を始めとする多数の因子によって影響を受け得る。
Ｂ．１１． ヒトおよび毒性試験種での組織交差反応性パターン
同一の染色パターンは、潜在的ヒト毒性は、毒性試験種において評価され得ることを示唆する。毒性試験種は、無関係の毒性が研究される動物である。

【0230】

個々の抗体は、２つの判定基準を満たすよう選択される：（１）抗体標的の既知発現に適した組織染色および（２）同一臓器由来のヒトおよび毒性試験種組織間の同様の染色パターン。

【0231】

基準１：免疫処置および／または抗体選択は、通常、組換え抗原または合成抗原（タンパク質、炭水化物またはその他の分子）を使用する。天然の対応物との結合および無関係の抗原に対するカウンタースクリーニングは、治療用抗体のスクリーニング漏斗（ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｆｕｎｎｅｌ）の一部であることが多い。しかし、多数の抗原に対するスクリーニングは、非実用的であることが多い。したがって、すべての主要な臓器に由来するヒト組織を用いる組織交差反応性研究は、抗体の任意の無関係の抗原との不要な結合を除外するのに役立つ。

【0232】

基準２：ヒトおよび毒性試験種組織（カニクイザル、イヌ、場合により、げっ歯類およびその他、ヒト研究においてと同一の３６または３７種の組織が試験されている。）を用いる比較組織交差反応性研究は、毒性試験種の選択を検証するのに役立つ。凍結組織切片での通常の組織交差反応性研究では、治療用抗体は、既知抗原との、および／またはより少ない結合で、低レベルの相互作用のいずれか（非特異的結合、同様の抗原との低レベルの結合、低レベルの荷電に基づく相互作用など）に基づいた組織との予想された結合を実証し得る。いずれの場合にも、最も関連する毒性学動物種は、ヒトおよび動物組織との結合の最高度の一致を有するものである。

【0233】

組織交差反応性研究は、ＥＣ ＣＰＭＰガイドラインＩＩＩ／５２７１／９４「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｍＡｂｓ」および１９９７年 ＵＳ ＦＤＡ／ＣＢＥＲ「Ｐｏｉｎｔｓ ｔｏ Ｃｏｎｓｉｄｅｒ ｉｎ ｔｈｅ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｕｓｅ」を始めとする適当な規制ガイドラインに従う。剖検または生検で得られたヒト組織の凍結切片（５μｍ）を、対物レンズ上で固定し、乾燥させた。アビジン−ビオチンシステムを使用して組織切片のペルオキシダーゼ染色を実施した。ＦＤＡのガイドライン「Ｐｏｉｎｔｓ ｔｏ Ｃｏｎｓｉｄｅｒ ｉｎ ｔｈｅ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｕｓｅ」。関連参考文献として、Ｃｌａｒｋｅ，Ｊ．（２００４年）、Ｂｏｏｎ，Ｌ．（２００２ａ）、Ｂｏｏｎ，Ｌ．（２００２ｂ）、Ｒｙａｎ，Ａ．（１９９９年）が挙げられる。

【0234】

組織交差反応性研究は、２段階で行われることが多く、１人のヒトドナーから得た３２種の組織（通常：副腎、消化管、前立腺、膀胱、心臓、骨格筋、血液細胞、腎臓、皮膚、骨髄、肝臓、脊髄、乳房、肺、脾臓、小脳、リンパ節、精巣、大脳皮質、卵巣、胸腺、結腸、膵臓、甲状腺、内皮、副甲状腺、尿管、眼、下垂体、子宮、卵管および胎盤）の凍結切片を含む第１の段階を有する。第２相では、３人の無関係の成人から得た最大３８種の組織（副腎、血液、血管、骨髄、小脳、大脳、子宮頸部、食道、眼、心臓、腎臓、大腸、肝臓、肺、リンパ節、乳房乳腺、卵巣、卵管、膵臓、副甲状腺、末梢神経、下垂体、胎盤、前立腺、唾液腺、皮膚、小腸、脊髄、脾臓、胃、横紋筋、精巣、胸腺、甲状腺、扁桃腺、尿管、膀胱および子宮を含む。）を用いて完全交差反応性研究が実施される。研究は、通常、最小２種の用量レベルで実施される。

【0235】

治療用抗体（すなわち、被験物質）およびアイソタイプが対応する対照抗体が、アビジン−ビオチン複合体（ＡＢＣ）検出のためにビオチン化され得る；その他の検出法として、ＦＩＴＣ（またはそうではないもの）標識被験物質の三次抗体検出または非標識被験物質のための標識された抗ヒトＩｇＧとの事前複合体化を挙げることができる。

【0236】

手短には、剖検または生検で得られたヒト組織の凍結切片（約５μｍ）を、対物レンズ上で固定し乾燥させる。アビジン−ビオチンシステムを使用して組織切片のペルオキシダーゼ染色を実施する。まず（事前複合体化検出システムの場合には）、被験物質を、二次ビオチン化抗ヒトＩｇＧとともにインキュベートし、免疫複合体に発展させる。２および１０μｇ／ｍＬの被験物質の最終濃度の免疫複合体を、対物レンズ上の組織切片上に加え、次いで、組織切片をアビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼキットを用いて３０分間反応させた。続いて、ＤＡＢ（３，３’−ジアミノベンジジン）、ペルオキシダーゼ反応の基質を組織染色のために４分間適用した。抗原−セファロースビーズを陽性対照組織切片として使用する。

【0237】

任意の特異的染色を、問題の標的抗原の既知発現に基づいて、予想された（例えば、抗原発現と一致する）または予想されない反応性のいずれかであると判定する。特異的と判定されたいずれの染色も、強度および頻度についてスコア化する。観察された染色が特異的であるか、非特異的であるかの決定では、抗原または血清競合または遮断研究がさらに補助し得る。

【0238】

２種の選択された抗体が、選択判定基準−適当な組織染色、ヒトおよび毒性学動物特異的組織間の対応する染色を満たすと見出される−それらはＤＶＤ−Ｉｇ作製のため選択され得る。

【0239】

組織交差反応性研究は、最終ＤＶＤ−Ｉｇ構築物を用いて反復されなければならないが、これらの研究は、本明細書に概説される同じプロトコールをたどるものの、いずれの結合も、２種の親抗体のいずれにも由来し得、いずれの説明のできない結合も複雑な抗原競合研究を用いて確認される必要があるので、それらは評価することがより複雑である。

【0240】

ＤＶＤ−Ｉｇのような多重特異性分子を用いる組織交差反応性研究の複雑な仕事は、２種の親抗体が、（１）予想されない組織交差反応性の知見がないおよび（２）対応するヒトおよび毒性学動物種組織間の組織交差反応性の知見の適当な類似性について選択される場合には大幅に簡略化されるということは容易にわかる。

【0241】

Ｂ．１２．特異性および選択性
所望の特異性および選択性を有するＤＶＤ−Ｉｇ分子を作製するには、同様に所望の特異性および選択性プロフィールを有する親ｍＡｂを作製し、選択する必要がある。

【0242】

ＤＶＤ−Ｉｇを用いる、特異性および選択性についての結合研究は、４以上の結合部位、各抗原につき各２つのために複雑であり得る。手短には、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡｃｏｒｅ、ＫｉｎＥｘＡを使用する結合研究またはその他のＤＶＤ−Ｉｇを用いる相互作用研究は、１種、２種またはそれ以上の抗原のＤＶＤ−Ｉｇ分子との結合をモニタリングする必要がある。ＢＩＡｃｏｒｅ技術は、複数の抗原の経時的な、独立した結合を分離できるが、ＥＬＩＳＡを始めとするより伝統的な方法またはＫｉｎＥｘＡのようなより現代的な技術ではできない。したがって、各親抗体の注意深い特性決定が重要である。各個々の抗体が特異性について特性決定された後には、ＤＶＤ−Ｉｇ分子中の個々の結合部位の特異性保持の確認は大幅に簡略化される。

【0243】

ＤＶＤ−Ｉｇの特異性を決定することの複雑な仕事は、２種の親抗体が、ＤＶＤ−Ｉｇ中に組み合わされる前に特異性について選択される場合には大幅に簡略化されるということは容易にわかる。

【0244】

抗原−抗体相互作用研究は、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）、質量分析、化学的架橋、光散乱を用いるＳＥＣ、平衡透析、ゲル透過、限外濾過、ゲルクロマトグラフィー、大区域分析用ＳＥＣ、微小調製用超遠心（沈降平衡）、分光学的方法、滴定マイクロカロリメトリー、沈降平衡（分析用超遠心機における）、沈降速度（分析用遠心機における）、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅを含む）を始めとする多数の古典的なタンパク質タンパク質相互作用研究を含め、多数の形態をとり得る。関連参考文献として、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、第３巻、第１９および２０章、（Ｃｏｌｉｇａｎら編）（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．）およびそれに含まれる参考文献；ならびにＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、（Ｃｏｌｉｇａｎら編）（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．）およびそれに含まれる関連参考文献が挙げられる。

【0245】

全血におけるサイトカイン放出：ｍＡｂのヒト血液細胞との相互作用は、サイトカイン放出アッセイによって調査され得る（Ｗｉｎｇら、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２（４）：１８３−１９０頁（１９９５年）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、（Ｅｎｎａら編）（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．）；Ｍａｄｈｕｓｕｄａｎら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、１０（１９）：６５２８−６５３４頁（２００４年）；Ｃｏｘら、Ｍｅｔｈｏｄｓ、３８（４）：２７４−２８２頁（２００６年）；Ｃｈｏｉら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３１（１）：９４−１０６頁（２００１年））。手短には、種々の濃度のｍＡｂを、ヒト全血とともに２４時間インキュベートする。試験される濃度は、患者における通常の血液レベルを摸倣する最終濃度（それだけには限らないが、１００ｎｇ／ｍｌ−１００μｇ／ｍｌを含む）を含めた広い範囲に及ぶ。インキュベーション後、上清および細胞溶解物を、ＩＬ−１Ｒα、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６およびＩＬ−８の存在について分析する。ｍＡｂについて作製されたサイトカイン濃度プロフィールを、陰性ヒトＩｇＧ対照および陽性ＬＰＳまたはＰＨＡ対照によって製造されたプロフィールと比較する。細胞上清および細胞溶解物の両方から得られたｍＡｂによって示されたサイトカインプロフィールを、対照ヒトＩｇＧを使用するものと比較する。一実施形態では、モノクローナル抗体は、ヒト血液細胞と相互作用して、炎症性サイトカインを自発的に放出しない。

【0246】

ＤＶＤ−Ｉｇのサイトカイン放出研究は、４以上の結合部位、各抗原につき各２つのために複雑である。手短には、本明細書に記載されるサイトカイン放出研究は、全血またはその他の細胞系に対する全ＤＶＤ−Ｉｇ分子の効果を測定するが、分子のどの部分がサイトカイン放出を引き起こすかを解くことはできない。サイトカイン放出が検出されると、ＤＶＤ−Ｉｇ調製物の純度が確認されなければならないが、これは、一部の同時精製細胞性構成要素が、それ自体でサイトカイン放出を引き起こし得るからである。純度が問題でなければ、任意の観察結果の絡まりを解くために、ＤＶＤ−Ｉｇのフラグメンテーション（それだけには限らないが、Ｆｃ部分の除去、結合部位の分離などを含む）、結合部位突然変異誘発またはその他の方法が使用されることが必要であり得る。２種の親抗体が、ＤＶＤ−Ｉｇに組み合わされる前にサイトカイン放出がないことについて選択される場合には、この複雑な仕事が大幅に簡略化されることは容易にわかる。

【0247】

Ｂ．１３．毒性学的研究のためのその他の種との交差反応性
一実施形態では、適当な毒性試験種、例えば、カニクイザルに対して十分な交差反応性を有する個々の抗体が選択される。親抗体は、オルソロガス種標的（すなわち、カニクイザル）と結合し、適当な反応（調節、中和、活性化）を誘発する必要がある。一実施形態では、オルソロガス種標的との交差反応性（親和性／効力）は、ヒト標的の１０倍以内でなくてはならない。実際には、親抗体は、マウス、ラット、イヌ、サル（およびその他の非ヒト霊長類）ならびに疾患モデル種（すなわち、喘息モデルのためのヒツジ）を含めた複数の種について評価される。毒性試験親モノクローナル抗体に由来する種との許容される交差反応性によって、同一種におけるＤＶＤ−Ｉｇの将来の毒性学研究が可能となる。その理由のために、２種の親モノクローナル抗体は、一般的な毒性試験種に対して、許容される交差反応性を有し、したがって、同一種におけるＤＶＤ−Ｉｇの毒性学研究を可能にしなくてはならない。

【0248】

親ｍＡｂは、標的に特異的な結合をし得、当技術分野で周知である種々のｍＡｂから選択され得る。これらとして、それだけには限らないが、ＩＬ−１β、抗ＴＮＦ抗体（米国特許第６，２５８，５６２号）、抗ＩＬ−１２および／または抗ＩＬ−１２ｐ４０抗体（米国特許第６，９１４，１２８号）；抗ＩＬ−１８抗体（米国特許出願公開第２００５／０１４７６１０ Ａ１号）、抗Ｃ５、抗ＣＢＬ、抗ＣＤ１４７、抗ｇｐ１２０、抗ＶＬＡ−４、抗ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１８、抗ＶＥＧＦ、抗ＣＤ４０Ｌ、抗ＣＤ−４０（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００７／１２４２９９参照のこと）抗Ｉｄ、抗ＩＣＡＭ−１、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＤ２、抗ＥＧＦＲ、抗ＴＧＦ−β２、抗ＨＧＦ、抗ｃＭｅｔ、抗ＤＬＬ−４、抗ＮＰＲ１、抗ＰＬＧＦ、抗ＥｒｂＢ３、抗Ｅ−セレクチン、抗Ｆａｃｔ ＶＩＩ、抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、抗Ｆｇｐ、抗ＣＤ１１／１８、抗ＣＤ１４、抗ＩＣＡＭ−３、抗ＲＯＮ、抗ＣＤ−１９、抗ＣＤ８０（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００３／０３９４８６参照のこと）、抗ＣＤ４、抗ＣＤ３、抗ＣＤ２３、抗β２−インテグリン、抗α４β７、抗ＣＤ５２、抗ＨＬＡ ＤＲ、抗ＣＤ２２（例えば、米国特許第５，７８９，５５４号参照のこと）、抗ＣＤ２０、抗ＭＩＦ、抗ＣＤ６４（ＦｃＲ）、抗ＴＣＲαβ、抗ＣＤ２、抗Ｈｅｐ Ｂ、抗ＣＡ １２５、抗ＥｐＣＡＭ、抗ｇｐ１２０、抗ＣＭＶ、抗ｇｐＩＩｂＩＩＩａ、抗ＩｇＥ、抗ＣＤ２５、抗ＣＤ３３、抗ＨＬＡ、抗ＩＧＦ１，２、抗ＩＧＦＲ、抗ＶＮＲインテグリン、抗ＩＬ−１α、抗ＩＬ−１β、抗ＩＬ−１受容体、抗ＩＬ−２受容体、抗ＩＬ−４、抗ＩＬ−４受容体、抗ＩＬ５、抗ＩＬ−５受容体、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−６Ｒ、ＲＡＮＫＬ、ＮＧＦ、ＤＫＫ、αＶβ３、抗ＩＬ−８、抗ＩＬ−９、抗ＩＬ−１３、抗ＩＬ−１３受容体および抗ＩＬ−２３；ＩＬ−２３ｐ１９；（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．Ｇ．、「Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１１６：７３１−７３６頁（２００５年）およびワールドワイドウェブサイトｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／−ｍｒｃ７／ｈｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ／ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．ｈｔｍｌ参照のこと）が挙げられる。

【0249】

親ｍＡｂはまた、臨床試験において、または臨床使用のための開発において使用するために承認された種々の治療用抗体から選択され得る。このような治療用抗体として、それだけには限らないが、リツキシマブ（リツキサン（登録商標）、ＩＤＥＣ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）（例えば、米国特許第５，７３６，１３７号参照のこと）、非ホジキンリンパ腫を治療するために承認されたキメラ抗ＣＤ２０抗体；ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｇｅｎｍａｂによって現在開発されている抗ＣＤ２０、米国特許第５，５００，３６２号に記載された抗ＣＤ２０抗体、ＡＭＥ−１３３（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）、ｈＡ２０（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、ＨｕｍａＬＹＭ（Ｉｎｔｒａｃｅｌ）およびＰＲＯ７０７６９（「Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｖａｒｉａｎｔｓ ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ」と題された、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００４／０５６３１２（ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０４０４２６））、トラスツズマブ（ヘルセプチン（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（例えば、米国特許第５，６７７，１７１号参照のこと）、乳癌を治療するために承認されたヒト化抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ抗体；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって現在開発されている、ペルツズマブ（ｒｈｕＭａｂ−２Ｃ４、Ｏｍｎｉｔａｒｇ（登録商標））；米国特許第４，７５３，８９４号に記載された抗Ｈｅｒ２抗体；セツキシマブ（アービタックス（登録商標）、ＩｍＣｌｏｎｅ）（米国特許第４，９４３，５３３号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９６／４０２１０）、種々の癌のための臨床試験におけるキメラ抗ＥＧＦＲ抗体；Ａｂｇｅｎｉｘ−Ｉｍｍｕｎｅｘ−Ａｍｇｅｎによって現在開発されているＡＢＸ−ＥＧＦ（米国特許第６，２３５，８８３号）；Ｇｅｎｍａｂによって現在開発されている、ＨｕＭａｘ−ＥＧＦｒ（ＵＳ２００３／００９１５６１、現在米国特許第７，２４７，３０１号として公開されている米国特許出願番号第１０／１７２，３１７号）；４２５、ＥＭＤ５５９００、ＥＭＤ６２０００およびＥＭＤ７２０００（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ）（米国特許第５，５５８，８６４号；Ｍｕｒｔｈｙら、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．、２５２（２）：７７３−７８３頁（１９９１年））；ＩＣＲ６２（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）ＰＣＴ公開番号ＷＯ９５／２００４５；５４９−５６０頁（１９８７年）；Ｒｏｄｅｃｋら、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．、３５（４）：３１５−３２０頁（１９８７年）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、４（７）：Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｐｈｙｓ．、２２（１−３）：１２９−１４６頁（１９９３年）；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、６７（２）：２４７−２５３頁（１９９３年）；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、７３（２）：２２８−２３５頁（１９９６年）；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、１０５（２）：２７３−２８０頁（２００３年））；ＴｈｅｒａＣＩＭ ｈＲ３（ＹＭ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｃａｎａｄａ ａｎｄ Ｃｅｎｔｒｏ ｄｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉａ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ、Ｃｕｂａ（米国特許第５，８９１，９９６号；米国特許第６，５０６，８８３号；Ｍａｔｅｏら、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、３（１）：７１−８１頁（１９９７年））；ｍＡｂ−８０６（Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ）（Ｊｕｎｇｂｌｕｔｈら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．、１００（２）：６３９−６４４頁（２００３年））；ＫＳＢ−１０２（ＫＳ Ｂｉｏｍｅｄｉｘ）；ＭＲ１−１（ＩＶＡＸ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（ＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／６２９３１）；およびＳＣ１００（Ｓｃａｎｃｅｌｌ）（ＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／８８１３８）；アレムツズマブ（キャンパス（登録商標）、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ）、Ｂ−細胞慢性リンパ性白血病の治療のために現在承認されたヒト化ｍＡｂ；ムロモナブ−ＣＤ３（Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ ＯＫＴ３（登録商標））、Ｏｒｔｈｏ Ｂｉｏｔｅｃｈ／Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎによって開発された抗ＣＤ３抗体、イブリツモマブ・ティウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））、ＩＤＥＣ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧによって開発された抗ＣＤ２０抗体、ゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ（登録商標））、Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｗｙｅｔｈによって開発された抗ＣＤ３３（ｐ６７タンパク質）抗体、アレファセプト（Ａｍｅｖｉｖｅ（登録商標））、Ｂｉｏｇｅｎによって開発された抗ＬＦＡ−３ Ｆｃ融合物）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ／Ｌｉｌｌｙによって開発されたアブシキマブ（ＲｅｏＰｒｏ（登録商標））、Ｎｏｖａｒｔｉｓによって開発されたバシリキシマブ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標））、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅによって開発されたパリビズマブ（Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標））、インフリキシマブ（レミケード（登録商標））、Ｃｅｎｔｏｃｏｒによって開発された抗ＴＮＦα抗体、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによって開発された抗ＴＮＦα抗体、Ｈｕｍｉｃａｄｅ（登録商標）、Ｃｅｌｌｔｅｃｈによって開発された抗ＴＮＦα抗体、ゴリムマブ（ＣＮＴＯ−１４８）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒによって開発された完全ヒトＴＮＦ抗体、エタネルセプト（エンブレル（登録商標））、Ｉｍｍｕｎｅｘ／Ａｍｇｅｎによって開発されたｐ７５ＴＮＦ受容体Ｆｃ融合物、レネルセプト、Ｒｏｃｈｅによってこれまでに開発されたｐ５５ＴＮＦ受容体Ｆｃ融合物、ＡＢＸ−ＣＢＬ、Ａｂｇｅｎｉｘによって開発されている抗ＣＤ１４７抗体、ＡＢＸ−ＩＬ８、Ａｂｇｅｎｉｘによって開発されている抗ＩＬ８抗体、ＡＢＸ−ＭＡ１、Ａｂｇｅｎｉｘによって開発されている抗ＭＵＣ１８抗体、ペンツモマブ（Ｐｅｍｔｕｍｏｍａｂ）（Ｒ１５４９、９０Ｙ−ｍｕＨＭＦＧ１）、Ａｎｔｉｓｏｍａによって開発中の抗ＭＵＣ１、セレックス（Ｔｈｅｒｅｘ）（Ｒ１５５０）、Ａｎｔｉｓｏｍａによって開発されている抗ＭＵＣ１抗体、Ａｎｔｉｓｏｍａによって開発されているＡｎｇｉｏＭａｂ（ＡＳ１４０５）、Ａｎｔｉｓｏｍａによって開発されているＨｕＢＣ−１、Ａｎｔｉｓｏｍａによって開発されているチオプラチン（Ｔｈｉｏｐｌａｔｉｎ）（ＡＳ１４０７）、アンテグレン（Ａｎｔｅｇｒｅｎ）（登録商標）（ナタリズマブ）、Ｂｉｏｇｅｎによって開発されている抗α−４−β−１（ＶＬＡ−４）およびα−４−β−７抗体、ＶＬＡ−１ ｍＡｂ、Ｂｉｏｇｅｎによって開発されている抗ＶＬＡ−１インテグリン抗体、ＬＴＢＲ ｍＡｂ、Ｂｉｏｇｅｎによって開発されている抗リンホトキシンβ受容体（ＬＴＢＲ）抗体、ＣＡＴ−１５２、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙによって開発されている抗ＴＧＦ−β２抗体、ＡＢＴ ８７４（Ｊ６９５）、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによって開発されている抗ＩＬ−１２ ｐ４０抗体、ＣＡＴ−１９２、ＣａｍｂｒｉｄｇｅＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙによって開発されている抗ＴＧＦβ１抗体およびＧｅｎｚｙｍｅ、ＣＡＴ−２１３、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙによって開発されている抗Ｅｏｔａｘｉｎ１抗体、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙおよびＨｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．によって開発されているＬｙｍｐｈｏＳｔａｔ−Ｂ（登録商標）抗Ｂｌｙｓ抗体、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１ｍＡｂ、ＣａｍｂｒｉｄｇｅＡｎｔｉｂｏｄｙ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙおよびＨｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｉｎｃ．によって開発されている抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ１抗体、アバスチン（登録商標）ベバシズマブ、ｒｈｕＭＡｂ−ＶＥＧＦ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって開発されている抗ＶＥＧＦ抗体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって開発されている抗ＨＥＲ受容体ファミリー抗体、抗組織因子（ＡＴＦ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって開発されている抗組織因子抗体、ゾレア（登録商標）（Ｏｍａｌｉｚｕｍａｂ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって開発されている抗ＩｇＥ抗体、Ｒａｐｔｉｖａ（登録商標）（エファリツマブ）、ＧｅｎｅｎｔｅｃｈおよびＸｏｍａによって開発されている抗ＣＤ１１ａ抗体、ＧｅｎｅｎｔｅｃｈおよびＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されているＭＬＮ−０２抗体（以前はＬＤＰ−０２）、ＨｕＭａｘ ＣＤ４、Ｇｅｎｍａｂによって開発されている抗ＣＤ４抗体、ＨｕＭａｘ−ＩＬ１５、ＧｅｎｍａｂおよびＡｍｇｅｎによって開発されている抗ＩＬ１５抗体、ＧｅｎｍａｂおよびＭｅｄａｒｅｘによって開発されているＨｕＭａｘ−Ｉｎｆｌａｍ、ＨｕＭａｘ−Ｃａｎｃｅｒ、ＧｅｎｍａｂおよびＭｅｄａｒｅｘおよびＯｘｆｏｒｄ ＧｃｏＳｃｉｅｎｃｅｓによって開発されている抗ヘパラナーゼＩ抗体、ＧｅｎｍａｂおよびＡｍｇｅｎによって開発されているＨｕＭａｘ−Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｇｅｎｍａｂによって開発されているＨｕＭａｘ−ＴＡＣ、ＩＤＥＣ−１３１およびＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されている抗ＣＤ４０Ｌ抗体、ＩＤＥＣ−１５１（クレノリキシマブ）、ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されている抗ＣＤ４抗体、ＩＤＥＣ−１１４、ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されている抗ＣＤ８０抗体、ＩＤＥＣ−１５２、ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されている抗ＣＤ２３、ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されている抗マクロファージ遊走因子（ＭＩＦ）抗体、ＢＥＣ２、ＩｍＣｌｏｎｅによって開発されている抗イディオタイプ抗体、ＩＭＣ−１Ｃ１１、ＩｍＣｌｏｎｅによって開発されている抗ＫＤＲ抗体、ＤＣ１０１、ＩｍＣｌｏｎｅによって開発されている抗ｆｌｋ−１抗体、ＩｍＣｌｏｎｅによって開発されている抗ＶＥカドヘリン抗体、ＣＥＡ−Ｃｉｄｅ（登録商標）（ラベツズマブ）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓによって開発されている抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体、ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（登録商標）（エピラツズマブ）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓによって開発されている抗ＣＤ２２抗体、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓによって開発されているＡＦＰ−Ｃｉｄｅ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓによって開発されているＭｙｅｌｏｍａＣｉｄｅ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓによって開発されているＬｋｏＣｉｄｅ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓによって開発されているＰｒｏｓｔａＣｉｄｅ、ＭＤＸ−０１０、Ｍｅｄａｒｅｘによって開発されている抗ＣＴＬＡ４抗体、ＭＤＸ−０６０、Ｍｅｄａｒｅｘによって開発されている抗ＣＤ３０抗体、Ｍｅｄａｒｅｘによって開発されているＭＤＸ−０７０、Ｍｅｄａｒｅｘによって開発されているＭＤＸ−０１８、Ｏｓｉｄｅｍ（登録商標）（ＩＤＭ−１）およびＭｅｄａｒｅｘおよびＩｍｍｕｎｏ−Ｄｅｓｉｇｎｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓによって開発されている抗Ｈｅｒ２抗体、ＨｕＭａｘ（登録商標）−ＣＤ４、ＭｅｄａｒｅｘおよびＧｅｎｍａｂによって開発されている抗ＣＤ４抗体、ＨｕＭａｘ−ＩＬ１５、ＭｅｄａｒｅｘおよびＧｅｎｍａｂによって開発されている抗ＩＬ１５抗体、ＣＮＴＯ１４８、ＭｅｄａｒｅｘおよびＣｅｎｔｏｃｏｒ／Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎによって開発されている抗ＴＮＦα抗体、ＣＮＴＯ１２７５、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ／Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎによって開発されている抗サイトカイン抗体、ＭＯＲ１０１およびＭＯＲ１０２、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓによって開発されている抗細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）（ＣＤ５４）抗体、ＭＯＲ２０１、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓによって開発されている抗繊維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ−３）抗体、Ｎｕｖｉｏｎ（登録商標）（ビジリズマブ）、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓ
ｉｇｎ Ｌａｂｓによって開発されている抗ＣＤ３抗体、ＨｕＺＡＦ（登録商標）、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓによって開発されている抗γインターフェロン抗体、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓによって開発されている抗α５β１インテグリン、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓによって開発されている抗ＩＬ−１２、ＩＮＧ−１、Ｘｏｍａによって開発されている抗Ｅｐ−ＣＡＭ抗体、ＧｅｎｅｎｔｅｃｈおよびＮｏｖａｒｔｉｓによって開発されたゾレア（登録商標）（オマリズマブ）ヒト化抗ＩｇＥ抗体およびＭＬＮ０１、Ｘｏｍａによって開発されている抗β２インテグリン抗体が挙げられる。別の実施形態では、治療薬として、ＫＲＮ３３０（Ｋｉｒｉｎ）；ｈｕＡ３３抗体（Ａ３３、Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）；ＣＮＴＯ ９５（αＶインテグリン、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；ＭＥＤＩ−５２２（αＶβ３インテグリン、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；ボロシキシマブ（αＶβ１インテグリン、Ｂｉｏｇｅｎ／ＰＤＬ）；ヒトｍＡｂ２１６（Ｂ細胞グリコシル化（ｇｌｙｃｏｓｏｌａｔｅｄ）エピトープ、ＮＣＩ）；ＢｉＴＥ ＭＴ１０３（二特異性ＣＤ１９ ｘ ＣＤ３、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；４Ｇ７ｘＨ２２（二特異性Ｂ細胞ｘＦｃｇａｍｍａＲ１、Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｍｅｒｃｋ ＫＧａ）；ｒＭ２８（二特異性ＣＤ２８ ｘ ＭＡＰＧ、欧州特許番号ＥＰ１４４４２６８）；ＭＤＸ４４７（ＥＭＤ８２６３３）（二特異性ＣＤ６４ ｘ ＥＧＦＲ、Ｍｅｄａｒｅｘ）；カツマキソマブ（レモバブ）（二特異性 ＥｐＣＡＭ ｘ 抗ＣＤ３、Ｔｒｉｏｎ／Ｆｒｅｓ）；エルツマキソマブ（Ｅｒｔｕｍａｘｏｍａｂ）（二特異性ＨＥＲ２／ＣＤ３、Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）；オレゴボマブ（ＯｖａＲｅｘ）（ＣＡ−１２５、ＶｉＲｅｘｘ）；レンカレックス（Ｒｅｎｃａｒｅｘ）（登録商標）（ＷＸ Ｇ２５０）（炭酸脱水酵素ＩＸ、Ｗｉｌｅｘ）；ＣＮＴＯ ８８８（ＣＣＬ２、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；ＴＲＣ１０５（ＣＤ１０５（エンドグリン）、Ｔｒａｃｏｎ）；ＢＭＳ−６６３５１３（ＣＤ１３７アゴニスト、Ｂｒｙｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）；ＭＤＸ−１３４２（ＣＤ１９、Ｍｅｄａｒｅｘ）；シプリズマブ（ＭＥＤＩ−５０７）（ＣＤ２、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；オファツムマブ（Ｈｕｍａｘ−ＣＤ２０）（ＣＤ２０、Ｇｅｎｍａｂ）；リツキシマブ（リツキサン）（ＣＤ２０、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；ベルツズマブ（ｈＡ２０）（ＣＤ２０、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；エピラツズマブ（ＣＤ２２、Ａｍｇｅｎ）；ルミリキシマブ（ＩＤＥＣ １５２）（ＣＤ２３、Ｂｉｏｇｅｎ）；ムロモナブ−ＣＤ３（ＣＤ３、Ｏｒｔｈｏ）；ＨｕＭ２９１（ＣＤ３ ｆｃ受容体、ＰＤＬ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）；ＨｅＦｉ−１、ＣＤ３０、ＮＣＩ）；ＭＤＸ−０６０（ＣＤ３０、Ｍｅｄａｒｅｘ）；ＭＤＸ−１４０１（ＣＤ３０、Ｍｅｄａｒｅｘ）；ＳＧＮ−３０（ＣＤ３０、Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｎｔｉｃｓ）；ＳＧＮ−３３（Ｌｉｎｔｕｚｕｍａｂ）（ＣＤ３３、Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｎｔｉｃｓ）；ザノリムマブ（ＨｕＭａｘ−ＣＤ４）（ＣＤ４、Ｇｅｎｍａｂ）；ＨＣＤ１２２（ＣＤ４０、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＳＧＮ−４０（ＣＤ４０、Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｎｔｉｃｓ）；キャンパス１ｈ（アレムツズマブ）（ＣＤ５２、Ｇｅｎｚｙｍｅ）；ＭＤＸ−１４１１（ＣＤ７０、Ｍｅｄａｒｅｘ）；ｈＬＬ１（ＥＰＢ−１）（ＣＤ７４．３８、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；ガリキシマブ（ＩＤＥＣ−１４４）（ＣＤ８０、Ｂｉｏｇｅｎ）；ＭＴ２９３（ＴＲＣ０９３／Ｄ９３）（切断されたコラーゲン、Ｔｒａｃｏｎ）；ＨｕＬｕｃ６３（ＣＳ１、ＰＤＬ Ｐｈａｒｍａ）；イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０）（ＣＴＬＡ４、Ｂｒｙｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）；トレメリムマブ（チシリムマブ、ＣＰ−６７５，２）（ＣＴＬＡ４、Ｐｆｉｚｅｒ）；ＨＧＳ−ＥＴＲ１（マパツズマブ）（ＤＲ４ ＴＲＡＩＬ−Ｒ１アゴニスト、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ／Ｇｌａｘｏ Ｓｍｉｔｈ Ｋｌｉｎｅ）；ＡＭＧ−６５５（ＤＲ５、Ａｍｇｅｎ）；アポマブ（Ａｐｏｍａｂ）（ＤＲ５、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；ＣＳ−１００８（ＤＲ５、Ｄａｉｉｃｈｉ Ｓａｎｋｙｏ）；ＨＧＳ−ＥＴＲ２（レクサツムマブ）（ＤＲ５ ＴＲＡＩＬ−Ｒ２アゴニスト、ＨＧＳ）；セツキシマブ（アービタックス）（ＥＧＦＲ、ＩｍＣｌｏｎｅ）；ＩＭＣ−１１Ｆ８、（ＥＧＦＲ、ＩｍＣｌｏｎｅ）；ニモツズマブ（ＥＧＦＲ、ＹＭ Ｂｉｏ）；パニツムマブ（Ｖｅｃｔａｂｉｘ）（ＥＧＦＲ、Ａｍｇｅｎ）；ザルツムマブ（ＨｕＭａｘＥＧＦｒ）（ＥＧＦＲ、Ｇｅｎｍａｂ）；ＣＤＸ−１１０（ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＡＶＡＮＴ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；アデカツムマブ（ＭＴ２０１）（Ｅｐｃａｍ 、Ｍｅｒｃｋ）；エドレコロマブ（Ｐａｎｏｒｅｘ、１７−１Ａ）（Ｅｐｃａｍ、Ｇｌａｘｏ／Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；ＭＯＲＡｂ−００３（葉酸受容体ａ、Ｍｏｒｐｈｏｔｅｃｈ）；ＫＷ−２８７１（ガングリオシドＧＤ３、Ｋｙｏｗａ）；ＭＯＲＡｂ−００９（ＧＰ−９、Ｍｏｒｐｈｏｔｅｃｈ）；ＣＤＸ−１３０７（ＭＤＸ−１３０７）（ｈＣＧｂ、Ｃｅｌｌｄｅｘ）；トラスツズマブ（ヘルセプチン）（ＨＥＲ２、Ｃｅｌｌｄｅｘ）；ペルツズマブ（ｒｈｕＭＡｂ ２Ｃ４）（ＨＥＲ２（ＤＩ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；アポリズマブ（ＨＬＡ−ＤＲβ鎖、ＰＤＬ Ｐｈａｒｍａ）；ＡＭＧ−４７９（ＩＧＦ−１Ｒ、Ａｍｇｅｎ）；抗ＩＧＦ−１Ｒ Ｒ１５０７（ＩＧＦ１−Ｒ、Ｒｏｃｈｅ）；ＣＰ ７５１８７１（ＩＧＦ１−Ｒ、Ｐｆｉｚｅｒ）；ＩＭＣ−Ａ１２（ＩＧＦ１−Ｒ、ＩｍＣｌｏｎｅ）；ＢＩＩＢ０２２（ＩＧＦ−１Ｒ、Ｂｉｏｇｅｎ）；Ｍｉｋ−β−１（ＩＬ−２Ｒｂ（ＣＤ１２２）、Ｈｏｆｆｍａｎ ＬａＲｏｃｈｅ）；ＣＮＴＯ ３２８（ＩＬ６、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；抗ＫＩＲ（１−７Ｆ９）（キラー細胞Ｉｇ様受容体（ＫＩＲ）、Ｎｏｖｏ）；Ｈｕ３Ｓ１９３（Ｌｅｗｉｓ（ｙ）、Ｗｙｅｔｈ、Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）；ｈＣＢＥ−１１（ＬＴｓＲ、Ｂｉｏｇｅｎ）；ＨｕＨＭＦＧ１（ＭＵＣ１、Ａｎｔｉｓｏｍａ／ＮＣＩ）；ＲＡＶ１２（Ｎ結合型炭水化物エピトープ、Ｒａｖｅｎ）；ＣＡＬ（副甲状腺ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨ−ｒＰ）、カリフォルニア大学）；ＣＴ−０１１（ＰＤ１、ＣｕｒｅＴｅｃｈ）；ＭＤＸ−１１０６（ｏｎｏ−４５３８）（ＰＤ１、Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｏｎｏ）；ＭＡｂ ＣＴ−０１１（ＰＤ１、Ｃｕｒｅｔｅｃｈ）；ＩＭＣ−３Ｇ３（ＰＤＧＦＲａ、ＩｍＣｌｏｎｅ）；バビツキシマブ（ｂａｖｉｔｕｘｉｍａｂ）（ホスファチジルセリン、Ｐｅｒｅｇｒｉｎｅ）；ｈｕＪ５９１（ＰＳＭＡ、Ｃｏｒｎｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ）；ｍｕＪ５９１（ＰＳＭＡ、Ｃｏｒｎｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ）；ＧＣ１００８（ＴＧＦｂ（汎）阻害剤（ＩｇＧ４）、Ｇｅｎｚｙｍｅ）；インフリキシマブ（レミケード）（ＴＮＦａ、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；Ａ２７．１５（トランスフェリン受容体、Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ＩＮＳＥＲＭ、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００５／１１１０８２）；Ｅ２．３（トランスフェリン受容体、Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）；ベバシズマブ（アバスチン）（ＶＥＧＦ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；ＨｕＭＶ８３３（ＶＥＧＦ、Ｔｓｕｋｕｂａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂ、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０００／０３４３３７、テキサス大学）；ＩＭＣ−１８Ｆ１（ＶＥＧＦＲ１、ＩｍＣｌｏｎｅ）；ＩＭＣ−１１２１（ＶＥＧＦＲ２、ＩｍＣｌｏｎｅ）が挙げられる。

【0250】

Ｃ． ＤＶＤ−Ｉｇ（商標）結合タンパク質の構築
多価多重特異性二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ（商標））結合タンパク質は、組換えＤＮＡ技術によって、２種の異なる親モノクローナル抗体に由来する２種の異なる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が、タンデムに直接的に、または短いリンカーを介して、続いて、軽鎖定常ドメインが連結されるように設計される。同様に、重鎖は、タンデムに連結された２種の異なる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、続いて定常ドメインＣＨ１およびＦｃ領域を含む。

【0251】

可変ドメインは、本明細書に記載された方法のいずれかによって親抗体から作製された組換えＤＮＡ技術を使用して得られ得る。一実施形態では、可変ドメインは、マウス重鎖または軽鎖可変ドメインである。別の実施形態では、可変ドメインは、ＣＤＲグラフト化またはヒト化重鎖可変もしくは軽鎖ドメインである。一実施形態では、可変ドメインは、ヒト重鎖または軽鎖可変ドメインである。

【0252】

一実施形態では、第１および第２の可変ドメインは、組換えＤＮＡ技術を使用して互いに直接的に連結される。別の実施形態では、可変ドメインは、リンカー配列を介して連結される。一実施形態では、２種の可変ドメインが連結される。３つ以上の可変ドメインもまた、直接的に、またはリンカー配列を介して連結され得る。可変ドメインは、同一抗原と結合する場合も、異なる抗原と結合する場合もある。本発明のＤＶＤ−Ｉｇ分子は、１つの免疫グロブリン可変ドメインおよび１つの非免疫グロブリン可変ドメイン、例えば、受容体のリガンド結合ドメイン、酵素の活性ドメインを含み得る。ＤＶＤ−Ｉｇ分子はまた、２つ以上の非Ｉｇドメインを含み得る。

【0253】

リンカー配列は、単一のアミノ酸またはペプチド結合によって結合された２個以上のアミノ酸残基を含むリンカーポリペプチドであり得る。一実施形態では、リンカー配列は、ＧＧＧＧＳＧ（配列番号２６）、ＧＧＳＧＧ（配列番号２７）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２８）、ＧＧＳＧＧＧＧＳＧ（配列番号２２３）、ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号２９）、ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号３１）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３２）、ＡＳＴＫＧＰ（配列番号３３）、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号３４）、ＴＶＡＡＰ（配列番号３５）、ＲＴＶＡＡＰ（配列番号２２４）、ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号３６）、ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号２２５）、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ（配列番号３７）、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号３８）、ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号３９）、ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号４０）、ＳＡＫＴＴＰ（配列番号４１）、ＲＡＤＡＡＰ（配列番号４２）、ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ（配列番号４３）、ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ（配列番号４４）、ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４５）、ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号４６）、ＡＤＡＡＰ（配列番号４７）、ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ（配列番号４８）、ＱＰＫＡＡＰ（配列番号４９）、ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ（配列番号５０）、ＡＫＴＴＰＰ（配列番号５１）、ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ（配列番号５２）、ＡＫＴＴＡＰ（配列番号５３）、ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ（配列番号５４）、ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ（配列番号５５）、ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ（配列番号５６）およびＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳ（配列番号５７）からなる群から選択される。リンカー配列の選択は、いくつかのＦａｂ分子の結晶構造解析に基づいている。Ｆａｂまたは抗体分子構造中の可変ドメインとＣＨ１／ＣＬ定常ドメインの間には、天然の可動性結合がある。この天然の結合は、ＶドメインのＣ末端に由来する４−６個の残基およびＣＬ／ＣＨ１ドメインのＮ末端に由来する４−６個の残基によって与えられる、およそ１０−１２個のアミノ酸残基を含む。本明細書に記載されるＤＶＤ−Ｉｇは、それぞれ、ＤＶＤ−Ｉｇの軽鎖および重鎖においてリンカーとしてＣＬまたはＣＨ１のＮ末端の５−６個のアミノ酸残基または１１−１２個のアミノ酸残基を使用して作製され得る。ＣＬまたはＣＨ１ドメインのＮ末端残基、特に、最初の５−６個のアミノ酸残基は、ループコンホメーションをとり、強い二次構造を伴わず、したがって、２つの可変ドメイン間の可動性リンカーとして作用し得る。ＣＬまたはＣＨ１ドメインのＮ末端残基は、それらはＩｇ配列の一部であるので可変ドメインの天然の伸長であり、したがって、リンカーおよび接合部から生じる可能性のある任意の免疫原性をかなりの程度に最小化する。

【0254】

その他のリンカー配列は、任意の長さのＣＬ／ＣＨ１ドメインの任意の配列を含み得るが、ＣＬ／ＣＨ１ドメインのすべての残基、例えば、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの最初の５−１２個のアミノ酸残基は含まず；軽鎖リンカーは、ＣκまたはＣλに由来するものであり得る；重鎖リンカーは、Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｃγ４、Ｃα１、Ｃα２、Ｃδ、ＣεおよびＣμを始めとする任意のアイソタイプのＣＨ１に由来し得る。リンカー配列は、Ｉｇ様タンパク質などのその他のタンパク質（例えば、ＴＣＲ、ＦｃＲ、ＫＩＲ）；Ｇ／Ｓベースの配列；ヒンジ領域由来の配列；およびその他のタンパク質に由来するその他の天然配列に由来するものであり得る。

【0255】

一実施形態では、定常ドメインは、組換えＤＮＡ技術を使用して２つの連結した可変ドメインに連結される。一実施形態では、タンデムに連結された重鎖可変ドメインを含む配列が、重鎖定常ドメインに連結され、タンデムに連結された軽鎖可変ドメインを含む配列が、軽鎖定常ドメインに連結される。一実施形態では、定常ドメインは、それぞれ、ヒト重鎖定常ドメインおよびヒト軽鎖定常ドメインである。一実施形態では、ＤＶＤ重鎖は、Ｆｃ領域にさらに連結される。Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または変異体Ｆｃ領域であり得る。別の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域である。別の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥまたはＩｇＤに由来するＦｃ領域を含む。

【0256】

最も好ましい実施形態では、２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドが組み合わされ、ＤＶＤ−Ｉｇ分子を形成する。ＩＬ−１βなどの特異的標的抗原と結合できる特定のＤＶＤ−Ｉｇ分子およびそれを作製する方法の詳細な説明は、以下の実施例の節において提供される。

【0257】

Ｄ．ＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質の製造
本発明のＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質は、例えば、標準技術によって、ＤＶＤ−Ｉｇ重鎖およびＤＶＤ−Ｉｇ軽鎖をコードする発現ベクター（複数可）が、宿主細胞にトランスフェクトされる宿主細胞からの発現を含めた、当技術分野で公知のいくつかの技術のいずれかによって製造され得る。用語「トランスフェクション」の種々の形態は、外因性ＤＮＡを原核細胞または真核細胞の宿主細胞に導入するためによく使用されるさまざまな技術、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを包含するものとする。原核細胞または真核細胞の宿主細胞のいずれかにおいて本発明のＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を発現することは可能であるが、ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、真核細胞、例えば、哺乳動物宿主細胞において発現されるが、これは、このような真核細胞（特に、哺乳動物細胞）は、原核細胞よりも、適切にフォールディングされ、免疫学的に活性なＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を組み立て、分泌する可能性が高い。

【0258】

本発明の組換え抗体を発現するための例示的哺乳動物宿主細胞として、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、ＫａｕｆｍａｎおよびＳｈａｒｐ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１５９：６０１−６２１頁（１９８２年）に記載されるように、ＤＨＦＲ選択マーカーとともに使用される、ＵｒｌａｕｂおよびＣｈａｓｉｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：４２１６−４２２０頁（１９８０年）に記載されたｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞、ＳＰ２およびＰＥＲ．Ｃ６細胞が挙げられる。ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質をコードする組換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞に導入される場合には、ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、宿主細胞を、宿主細胞におけるＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の発現または宿主細胞を増殖させた培養培地中へのＤＶＤタンパク質の分泌を可能にするのに十分な時間、培養することによって製造される。ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、標準タンパク質精製法を使用して培養培地から回収され得る。

【0259】

本発明のＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の組換え発現のための例示的系では、ＤＶＤ−Ｉｇ重鎖およびＤＶＤ−Ｉｇ軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターが、リン酸カルシウム媒介性トランスフェクションによってｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞中に導入される。組換え発現ベクター内では、ＤＶＤ−Ｉｇ重鎖および軽鎖遺伝子は、遺伝子の高レベルの転写を駆動するためにＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントに各々作動可能に連結されている。組換え発現ベクターはまた、メトトレキサート選択／増幅を使用してベクターでトランスフェクトされているＣＨＯ細胞の選択を可能にするＤＨＦＲ遺伝子を保持する。選択された形質転換体宿主細胞は、ＤＶＤ−Ｉｇ重鎖および軽鎖および無傷のＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の発現を可能にするよう培養され、培養培地から回収される。組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培養培地からＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を回収するために、標準分子生物学技術が使用される。さらに、本発明は、本発明の宿主細胞を、本発明のＤＶＤ−Ｉｇタンパク質が合成されるまで適した培養培地中で培養することによって、本発明のＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を合成する方法を提供する。この方法は、培養培地からＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を単離することをさらに含み得る。

【0260】

ＤＶＤ−Ｉｇの重要な特徴は、従来の抗体と同様の方法で製造および精製され得ることである。ＤＶＤ−Ｉｇの製造は、定常領域の配列修飾または任意の種類の化学修飾を全く含まない、所望の二重特異性活性を有する均一な、単一の主要な生成物をもたらす。「二特異性」、「多重特異性」および「多重特異性多価」全長結合タンパク質を作製するための、その他のこれまでに記載された方法は、単一の主要生成物につながらず、代わりに、組み立てられた不活性の、単一特異性、多重特異性、多価、全長結合タンパク質および異なる結合部位の組合せを有する多価全長結合タンパク質の混合物の細胞内製造または分泌製造につながる。一例として、ＭｉｌｌｅｒおよびＰｒｅｓｔａ（ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００１／０７７３４２によって記載された設計に基づいて、重鎖および軽鎖の１６の可能性ある組合せがある。結果として、６．２５％のタンパク質のみが、所望の活性形態であり、他の１５の可能性ある組合せと比較して、単一の主要な生成物または単一の主要生成物としてではないようである。通常、大規模製造において使用される標準クロマトグラフィー技術を使用する、所望の完全に活性な形態のタンパク質の、不活性および部分活性形態のタンパク質からの分離は、まだ実証されなければならない。

【0261】

驚くべきことに、本発明の「二重特異性多価全長結合タンパク質」の設計は、主に、所望の「二重特異性多価全長結合タンパク質」へ組み立てられる二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖につながる。

【0262】

組み立てられ、発現されたＤＶＤ−Ｉｇ分子の少なくとも５０％、少なくとも７５％および少なくとも９０％が、所望の二重特異性四価タンパク質である。本発明のこの態様は、本発明の商業的有用性を特に増強する。したがって、本発明は、「二重特異性四価全長結合タンパク質」の単一の主要生成物につながる、単細胞において二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現する方法を含む。

【0263】

本発明は、「主要生成物」が、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を含むすべての組み立てられたタンパク質の５０％を超える、「二重特異性、四価、全長結合タンパク質」の「主要生成物」につながる、単細胞において二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現する方法を提供する。

【0264】

本発明は、「主要生成物」が、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を含むすべての組み立てられたタンパク質の７５％を超える、「二重特異性、四価、全長結合タンパク質」の単一の「主要生成物」につながる、単細胞において二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現する方法を提供する。

【0265】

本発明は、「主要生成物」が、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を含むすべての組み立てられたタンパク質の９０％を超える、「二重特異性、四価、全長結合タンパク質」の単一の「主要生成物」につながる、単細胞において二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現する方法を提供する。

【0266】

６． ＩＬ−１β結合タンパク質および結合タンパク質産生細胞株の製造
好ましくは、抗ＩＬ−１β抗体を含む本発明のＩＬ−１β結合タンパク質は、例えば、当技術分野で公知のいくつかのインビトロおよびインビボアッセイのいずれか１種によって評価される、ＩＬ−１β活性を低減または中和する高い能力を示す。好ましくは、本発明のＩＬ−１β結合タンパク質はまた、ＩＬ−１β活性を低減または中和する高い能力を示す。

【0267】

好ましい実施形態では、結合タンパク質またその抗原結合部分は、ヒトＩＬ−１βと結合し、これでは、結合タンパク質もしくはその抗原結合部分が、表面プラズモン共鳴によって決定される約０．１ｓ^−１以下のＫ_ｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１βから解離するまたは約１×１０^−６Ｍ以下のＩＣ_５０でヒトＩＬ−１β活性を阻害する。または、結合タンパク質またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０^−２ｓ^−１以下のＫ_ｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１βから解離し得るまたは約１×１０^−７Ｍ以下のＩＣ_５０でヒトＩＬ−１β活性を阻害し得る。または、結合タンパク質もしくはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって決定される、約１×１０^−３ｓ^−１以下のＫ_ｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１βから解離し得るまたは約１×１０^−８Ｍ以下のＩＣ_５０でヒトＩＬ−１βを阻害し得る。または、結合タンパク質もしくはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０^−４ｓ^−１以下のＫ_ｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１βから解離し得るまたは約１×１０^−９Ｍ以下のＩＣ_５０でヒトＩＬ−１β活性を阻害し得る。または、結合タンパク質もしくはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０^−５ｓ^−１以下のＫ_ｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１βから解離し得るまたは約１×１０^−１０Ｍ以下のＩＣ_５０でヒトＩＬ−１β活性を阻害し得る。または、結合タンパク質もしくはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０^−５ｓ^−１以下のＫ_ｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１βから解離し得るまたは約１×１０^−１１Ｍ以下のＩＣ_５０でヒトＩＬ−１β活性を阻害し得る。

【0268】

特定の実施形態では、結合タンパク質は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ定常領域などの重鎖定常領域を含む。好ましくは、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１重鎖定常領域またはＩｇＧ４重鎖定常領域である。さらに、抗体は、軽鎖定常領域、κ軽鎖定常領域またはλ軽鎖定常領域のいずれかを含み得る。好ましくは、抗体は、κ軽鎖定常領域を含む。または、抗体部分は、例えば、Ｆａｂ断片または一本鎖Ｆｖ断片であり得る。

【0269】

抗体エフェクター機能を変更するためのＦｃ部分中のアミノ酸残基の置換は、当技術分野で公知である（Ｗｉｎｔｅｒら、米国特許第５，６４８，２６０号および同５，６２４，８２１号）。抗体のＦｃ部分は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、サイトカイン誘導、ＡＤＣＣ、食作用、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）ならびに抗体および抗原抗体複合体の半減期／クリアランス速度を媒介する。いくつかの場合には、これらのエフェクター機能は、治療用抗体にとって望ましいものであるが、別の場合には、治療目的によって、不必要またはさらに有害であることもある。特定のヒトＩｇＧアイソタイプ、特に、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、それぞれ、ＦｃγＲｓおよび補体Ｃ１ｑとの結合によって、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを媒介する。新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、抗体の循環半減期を決定する重要な成分である。さらに別の実施形態では、抗体のエフェクター機能が変更されるよう抗体の定常領域、例えば、抗体のＦｃ領域において少なくとも１個のアミノ酸残基が置換される。

【0270】

一実施形態は、本発明の抗体または抗体部分が、誘導体化されるまたは別の機能的分子（例えば、別のペプチドまたはタンパク質）に連結されている、標識された結合タンパク質を提供する。例えば、本発明の標識された結合タンパク質は、本発明の抗体または抗体部分を（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合による会合またはその他によって）抗体または抗体部分の、別の分子（例えば、ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグ）との会合を媒介し得る、１つまたは複数のその他の分子実体、例えば、別の抗体（例えば、二特異性抗体またはダイアボディー）、検出可能な薬剤、細胞傷害性薬剤、医薬品および／またはタンパク質またはペプチドと機能的に連結することによって誘導体化され得る。

【0271】

それを用いて本発明の抗体または抗体部分などの結合タンパク質が誘導体化され得る有用な検出可能な薬剤として、蛍光化合物が挙げられる。例示的蛍光検出可能薬剤として、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニルクロリド、フィコエリトリンなどが挙げられる。抗体はまた、検出可能な酵素、例えば、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼなどを用いて誘導体化され得る。抗体は検出可能な酵素で誘導体化される場合には、酵素が使用して、検出可能な反応生成物を生じるさらなる試薬を加えることによって検出される。例えば、検出可能な薬剤西洋ワサビペルオキシダーゼが存在する場合には、過酸化水素およびジアミノベンジジンの添加が、着色された反応生成物につながり、これは、検出可能である。抗体はまた、ビオチンで誘導体化され、アビジンまたはストレプトアビジン結合の間接的測定によって検出され得る。

【0272】

本発明の別の実施形態は、結晶化結合タンパク質を提供する。好ましくは、本発明は、本明細書に開示される、全抗ＩＬ−１β抗体およびその断片の結晶、このような結晶を含む製剤および組成物に関する。一実施形態では、結晶化結合タンパク質は、結合タンパク質の可溶性対応物よりも、インビボで長い半減期を有する。別の実施形態では、結合タンパク質は、結晶化後に生物活性を保持する。

【0273】

本発明の結晶化結合タンパク質は、当技術分野で公知の、参照により本明細書に組み込むＰＣＴ公開番号ＷＯ０２／０７２６３６に開示される方法に従って製造され得る。

【0274】

本発明の別の実施形態は、グリコシル化結合タンパク質を提供し、これでは、抗体またはその抗原結合部分は、１個または複数の炭水化物残基を含む。新生インビボタンパク質製造は、翻訳後修飾として知られるさらなるプロセシングを受け得る。特に、糖（グリコシル）残基が、酵素的に添加され得る、グリコシル化として知られるプロセス。共有結合によって連結しているオリゴ糖側鎖を有する得られたタンパク質は、グリコシル化タンパク質または糖タンパク質として知られる。

【0275】

天然に存在する抗体は、Ｆｃドメインならびに可変ドメイン中に１個以上の炭水化物残基を有する糖タンパク質である。Ｆｃドメイン中の炭水化物残基は、Ｆｃドメインのエフェクター機能に対して重要な効果を有するが、抗原結合または抗体の半減期に対しては最小の効果しか有さない（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ、Ｒ．、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．、２１：１１−１６頁（２００５年））。対照的に、可変ドメインのグリコシル化は、抗体の抗原結合活性に対して効果を有し得る。可変ドメイン中のグリコシル化は、おそらくは立体障害のために、抗体結合親和性に対して負の効果を有するか（Ｃｏら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３０：１３６１−１３６７頁（１９９３年））、または抗原に対する親和性の増大をもたらし得る（Ｗａｌｌｉｃｋら．、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１６８：１０９９−１１０９頁（１９８８年）；Ｗｒｉｇｈｔら、ＥＭＢＯ Ｊ．、１０：２７１７−２７２３頁（１９９１年））。

【0276】

本発明の一態様は、結合タンパク質のＯ−またはＮ−結合型グリコシル化部位が突然変異されているグリコシル化部位突然変異体の作製を対象とする。当業者ならば、標準的な周知の技術を使用してこのような突然変異体を作製できる。生物活性を保持するが、結合活性が増大または低下しているグリコシル化部位突然変異体が、本発明の別の目的である。

【0277】

さらに別の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合部分のグリコシル化が修飾される。例えば、脱グリコシル化抗体が作製され得る（すなわち、抗体がグリコシル化を欠く）。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を増大させるよう変更され得る。このような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内のグリコシル化の１以上の部位を変更することによって達成され得る。例えば、１以上の可変領域グリコシル化部位の排除、それによるその部位でのグリコシル化の排除をもたらす１以上のアミノ酸置換がなされ得る。このような脱グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増大させ得る。このようなアプローチは、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００３／０１６４６６および米国特許第５，７１４，３５０号および同６，３５０，８６１号にさらに詳細に記載されている。

【0278】

さらに、またはあるいは、フコシル残基の量が低減されている低フコシル化（ｈｙｐｏｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体（Ｋａｎｄａら、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１３０（３）：３００−３１０頁（２００７年）参照のこと）または二分するＧｌｃＮＡｃ構造が増大している抗体などの、変更された種類のグリコシル化を有する本発明の修飾された結合タンパク質が作製され得る。このように変更されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能を高めると実証されている。このような炭水化物修飾は、例えば、グリコシル化機構が変更された宿主細胞において抗体を発現させることによって達成され得る。グリコシル化機構が変更された細胞は、当技術分野で記載されており、本発明の組換え抗体を発現させ、それによって、グリコシル化が変更された抗体を製造する宿主細胞として使用され得る。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７７：２６７３３−２６７４０頁（２００２年）；Ｕｍａｎａら、「Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｇｌｙｃｏｆｏｒｍｓ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ ＩｇＧ１ ｗｉｔｈ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ」、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１７：１７６−１８０頁（１９９９年）ならびに欧州公開番号ＥＰ１１７６１９５；ＰＣＴ公開番号ＷＯ０３／０３５８３５およびＷＯ９９／５４３４２参照のこと。

【0279】

タンパク質グリコシル化は、対象とするタンパク質のアミノ酸配列ならびにタンパク質が発現される宿主細胞に応じて変わる。種々の生物が、種々のグリコシル化酵素（例えば、グリコシルトランスフェラーゼおよびグリコシダーゼ）を産生し、入手可能な種々の基質（ヌクレオチド糖）を有し得る。このような因子のために、タンパク質グリコシル化パターンおよびグリコシル残基の組成物は、特定のタンパク質が発現される宿主系に応じて異なり得る。本発明において有用なグリコシル残基として、それだけには限らないが、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、ｎ−アセチルグルコサミンおよびシアル酸が挙げられる。好ましくは、グリコシル化結合タンパク質は、グリコシル化パターンがヒトであるようなグリコシル残基を含む。

【0280】

異なるタンパク質グリコシル化が、異なるタンパク質特徴をもたらし得ることは、当業者にとって公知である。例えば、酵母などの微生物宿主において製造され、酵母内因性経路を利用してグリコシル化された治療用タンパク質の有効性は、ＣＨＯ細胞株などの哺乳動物細胞において発現された同一タンパク質のものと比較して、低減され得る。このような糖タンパク質はまた、ヒトにおいて免疫原性であり得、投与後のインビボ半減期の減少を示す。ヒトおよびその他の動物における特定の受容体は、特定のグリコシル残基を認識し、血流からのタンパク質の迅速なクリアランスを促進し得る。その他の有害作用として、タンパク質フォールディングにおける変化、溶解度、プロテアーゼに対する感受性、輸送、運搬、区画化、分泌、その他のタンパク質または因子による認識、抗原性またはアレルゲン性が挙げられる。したがって、開業医は、特定の組成およびグリコシル化のパターン、例えば、ヒト細胞においてまたは意図される対象動物の種特異的細胞において産生されるものと同一のまたは少なくとも同様のグリコシル化組成およびパターンを有する治療用タンパク質を好み得る。

【0281】

宿主細胞のものとは異なるグリコシル化タンパク質を発現することは、異種グリコシル化酵素を発現するよう宿主細胞を遺伝的に修飾することによって達成され得る。開業医は、当技術分野で公知の技術を使用して、ヒトタンパク質グリコシル化を示す抗体またはその抗原結合部分を作製し得る。例えば、酵母株は、天然に存在しないグリコシル化酵素を発現するよう遺伝的に修飾されており、その結果、これらの酵母株において産生されたグリコシル化されたタンパク質（糖タンパク質）は、動物細胞、特に、ヒト細胞のものと同一であるタンパク質グリコシル化を示す（米国公開第２００４／００１８５９０号および同２００２／０１３７１３４号）。

【0282】

本発明はまた、結合タンパク質に加えて、このような本発明の結合タンパク質に特異的な抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体を対象とする。抗Ｉｄ抗体とは、一般に、別の抗体の抗原結合領域と関連している独特の決定基を認識する抗体である。抗Ｉｄは、結合タンパク質またはそのＣＤＲ含有領域を用いて動物を免疫処理することによって調製され得る。免疫処理された動物は、免疫化抗体のイディオタイプの決定基を認識し、それに応じて抗Ｉｄ抗体を産生する。ＤＶＤ−Ｉｇ分子中に組み込まれた２種以上の親抗体に対する抗イディオタイプ抗体を作製することがより容易であり得るということは容易にわかり、当技術分野で十分に認識された方法による結合研究（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ、ＥＬＩＳＡ）を確認して、各親抗体のイディオタイプに特異的な抗イディオタイプ抗体はまた、ＤＶＤ−Ｉｇとの関連でイディオタイプ（例えば、抗原結合部位も認識することを検証する。ＤＶＤ−Ｉｇの２以上の抗原結合部位の各々に特異的な抗イディオタイプ抗体は、患者血清中のヒトＤＶＤ−ＩｇのＤＶＤ−Ｉｇ濃度を測定するための理想的な試薬を提供する。例えば、ＤＶＤ−Ｉｇ濃度アッセイは、固相上にコーティングされた第１の抗原結合領域に対する抗体を用い（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅチップ、ＥＬＩＳＡプレートなど）、すすぎバッファーですすぎ、血清試料とともにインキュベートし、別のすすぎステップおよび結合反応の定量化のための酵素でそれ自体が標識された、他の抗原結合部位に対する別の抗イディオタイプ抗体とともに最終的にインキュベートする「サンドイッチアッセイＥＬＩＳＡ形式」を使用して確立され得る。一実施形態では、２以上の異なる結合部位を有するＤＶＤ−Ｉｇには、２つの最外側の結合部位（定常領域から最も遠位および近位）に対する抗イディオタイプ抗体は、ヒト血清中のＤＶＤ−Ｉｇ濃度の決定において役立つだけでなく、インビボで分子の完全性も実証する。各抗Ｉｄ抗体はまた、いわゆる抗抗Ｉｄ抗体を産生するさらに別の動物において免疫応答を誘発する「免疫原」として使用され得る。

【0283】

さらに、対象とするタンパク質は、種々のグリコシル化酵素を発現し、その結果、ライブラリーのメンバー宿主細胞が、変異体グリコシル化パターンを有する対象とするタンパク質を産生するよう遺伝子操作された宿主細胞のライブラリーを使用して発現され得るということは当業者によって理解されよう。次いで、開業医は、特定の新規グリコシル化パターンを有する対象とするタンパク質を選択および単離し得る。好ましくは、特に選択された新規グリコシル化パターンを有するタンパク質は、生物学的特性の改善または変更を示す。

【0284】

７．ＩＬ−１β結合タンパク質の使用
ヒトＩＬ−１βと結合するその能力を考えると、生物試料中の（例えば、生体試料、例えば、血清もしくは血漿中の）ＩＬ−１βを検出または測定するために、従来のイムノアッセイ、例えば、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または組織免疫組織化学を使用して、本発明のＩＬ−１β結合タンパク質またはその抗原結合部分が使用され得る。本発明は、生物試料を本発明の結合タンパク質またはその抗原結合部分と接触させ、ならびにＩＬ−１βと結合している結合タンパク質（または抗原結合部分）または結合していない結合タンパク質（または結合部分）のいずれかを検出し、その結果、試料中のヒトＩＬ−１βを検出することを含む、生物試料中のＩＬ−１βを検出するための方法を提供する。結合タンパク質は、結合しているまたは結合していない抗体の検出を促進するために、検出可能な物質で直接または間接的に標識され得る。適した検出可能な物質として、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質および放射性物質が挙げられる。適した酵素の例として、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ；適した補欠分子族複合体の例として、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられ；適した蛍光物質の例として、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが挙げられ；発光物質の例として、ルミノールが挙げられ；適した放射性物質の例として、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３５Ｓ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１１１Ｉｎ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１７７Ｌｕ、^１６６Ｈｏまたは^１５３Ｓｍが挙げられる。

【0285】

結合タンパク質を標識することの代替として、ヒトＩＬ−１βを、検出可能な物質で標識されたｒｈＩＬ−１β標準および標識されていないＩＬ−１β結合タンパク質を利用する競合イムノアッセイによって生体液においてアッセイし得る。このアッセイでは、生体試料、標識されたｒｈＩＬ−１β標準およびＩＬ−１β結合タンパク質が組み合わされ、標識されていない抗体と結合している標識されたｒｈＩＬ−１β標準の量が決定される。生体試料中のヒトＩＬ−１βの量は、ＩＬ−１β結合タンパク質と結合している標識されたｒｈＩＬ−１β標準の量と反比例する。同様に、ヒトＩＬ−１βはまた、検出可能な物質で標識されたｒｈＩＬ−１β標準および標識されていないヒトＩＬ−１β結合タンパク質を利用する競合イムノアッセイによって、生体液においてアッセイされ得る。

【0286】

本発明の結合タンパク質およびＩＬ−１βは、インビトロおよびインビボの両方で、ヒトＩＬ−１β活性を中和できることが好ましい。したがって、本発明のこのような結合タンパク質およびそのＩＬ−１β結合タンパク質は、例えば、ヒトＩＬ−１βを含有する細胞培養物において、本発明の抗体が交差反応するＩＬ−１βを有する、ヒト被験体において、またはその他の哺乳動物被験体においてヒトＩＬ−１β活性を阻害するために使用され得る。一実施形態では、本発明は、ヒトＩＬ−１βを、ＩＬ−１β結合タンパク質または本発明のその結合部分と接触させ、その結果、ヒトＩＬ−１β活性が阻害されることを含む、ヒトＩＬ−１β活性を阻害する方法を提供する。例えば、ヒトＩＬ−１βを含有する、または含有すると疑われる細胞培養では、培養物においてヒトＩＬ−１β活性を阻害するために、本発明のＩＬ−１β結合タンパク質またはその結合部分が培養培地に添加され得る。

【0287】

別の実施形態では、本発明は、被験体において、有利なことに、ＩＬ−１β活性が有害である疾患または障害を患っている被験体からＩＬ−１β活性を低下させる方法を提供する。本発明は、このような疾患または障害を患っている被験体においてヒトＩＬ−１β活性を低下させる方法を提供し、この方法は、被験体に、本発明の抗体または抗体部分を投与し、その結果、被験体におけるＩＬ−１β活性が低下されることを含む。好ましくは、ＩＬ−１βは、ヒトＩＬ−１βであり、被験体は、ヒト被験体である。または、被験体は、本発明の抗体が結合できるＩＬ−１βを発現する哺乳動物であり得る。さらに、被験体は、ＩＬ−１βが導入されている（例えば、ＩＬ−１βの投与によってまたはＩＬ−１β導入遺伝子の発現によって）哺乳動物であり得る。抗体またはその他の本発明のＩＬ−１β結合タンパク質は、治療目的でヒト被験体に投与され得る。さらに、本発明の結合タンパク質は、獣医学的目的で、またはヒト疾患の動物モデルとして、抗体が結合できるＩＬ−１βを発現する非ヒト哺乳動物に投与され得る。後者に関して、このような動物モデルは、抗体の治療効力を評価するのに有用であり得る（例えば、投与量のおよび投与の経時的推移の試験）。

【0288】

本明細書において、用語「ＩＬ−１β活性は有害である障害」とは、疾患および障害を患っている被験体におけるＩＬ−１β活性の存在が、障害の病態生理に関与するまたは障害の悪化の一因である因子であるとわかっているまたはその疑いがあるその他の障害を含むものとする。したがって、ＩＬ−１β活性が有害である障害とは、ＩＬ−１β活性の低下が、症状および／または障害の進行を軽減すると期待される障害である。このような障害は、例えば、上記の抗ＩＬ−１β抗体を使用して検出され得る、障害を患っている被験体の体液におけるＩＬ−１β濃度（例えば、被験体の血清、血漿、滑液などにおける、ＩＬ−１β濃度）の増大によって証明され得る。本発明の抗体を用いて治療され得る障害の限定されない例として、本発明の抗体の医薬組成物に関する以下の節において論じられた障害が挙げられる。

【0289】

本発明のＤＶＤ−Ｉｇは、ＩＬ−１β単独とまたは複数の抗原（例えば、ヒトＩＬ−１βおよび別の非ＩＬ−１β抗原）と結合し得る。したがって、ＤＶＤ−Ｉｇは、ｈｕ ＩＬ−１βの活性および別の標的抗原の活性を遮断または低減し得る。このようなその他の標的抗原として、可溶性標的（例えば、ＩＬ−１α）および細胞表面受容体標的（例えば、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ）を挙げることができる。

【0290】

このようなその他の抗原として、それだけには限らないが、公的に利用可能なデータベースに列挙される標的が挙げられ、このデータベースは、ワールドワイドウェブで入手可能であるものを含み、参照により本明細書に組み込まれる。これらの標的データベースとして、以下が挙げられる：
治療標的（ｈｔｔｐ：／／ｘｉｎ．ｃｚ３．ｎｕｓ．ｅｄｕ．ｓｇ／ｇｒｏｕｐ／ｃｊｔｔｄ／ｔｔｄ．ａｓｐ）；
サイトカインおよびサイトカイン受容体（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｙｔｏｋｉｎｅｗｅｂｆａｃｔｓ．ｃｏｍ／、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｏｐｅｗｉｔｈｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．ｄｅ／ｃｏｐｅ．ｃｇｉおよび
ｈｔｔｐ：／／ｃｍｂｉ．ｂｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／ｃｍｂｉｄａｔａ／ｃｇｆ／ＣＧＦ＿Ｄａｔａｂａｓｅ／ｃｙｔｏｋｉｎｅ．ｍｅｄｉｃ．ｋｕｍａｍｏｔｏ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ＣＦＣ／ｉｎｄｅｘＲ．ｈｔｍｌ）；
ケモカイン（ｈｔｔｐ：／／ｃｙｔｏｋｉｎｅ．ｍｅｄｉｃ．ｋｕｍａｍｏｔｏ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ＣＦＣ／ＣＫ／Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ．ｈｔｍｌ）；
ケモカイン受容体およびＧＰＣＲ（ｈｔｔｐ：／／ｃｓｐ．ｍｅｄｉｃ．ｋｕｍａｍｏｔｏ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ＣＳＰ／Ｒｅｃｅｐｔｏｒ．ｈｔｍｌ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｐｃｒ．ｏｒｇ／７ｔｍ／）；
嗅覚 受容体（ｈｔｔｐ：／／ｓｅｎｓｅｌａｂ．ｍｅｄ．ｙａｌｅ．ｅｄｕ／ｓｅｎｓｅｌａｂ／ＯＲＤＢ／ｄｅｆａｕｌｔ．ａｓｐ）；
受容体（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｕｐｈａｒ−ｄｂ．ｏｒｇ／ｉｕｐｈａｒ−ｒｄ／ｌｉｓｔ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍ）；
癌標的（ｈｔｔｐ：／／ｃｇｅｄ．ｈｇｃ．ｊｐ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｉｎｐｕｔ．ｃｇｉ）；
可能性ある抗体標的としての分泌タンパク質（ｈｔｔｐ：／／ｓｐｄ．ｃｂｉ．ｐｋｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／）；
プロテインキナーゼ（ｈｔｔｐ：／／ｓｐｄ．ｃｂｉ．ｐｋｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／）および
ヒトＣＤマーカー（ｈｔｔｐ：／／ｃｏｎｔｅｎｔ．ｌａｂｖｅｌｏｃｉｔｙ．ｃｏｍ／ｔｏｏｌｓ／６／１２２６／ＣＤ＿ｔａｂｌｅ＿ｆｉｎａｌ＿ｌｏｃｋｅｄ．ｐｄｆ）および（Ｚｏｌａら、「ＣＤ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２００５：ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ」、Ｂｌｏｏｄ、１０６：３１２３−３１２６頁（２００５年））。

【0291】

ＤＶＤ−Ｉｇは、２種以上の異なる標的、すなわち、ヒトＩＬ−１βおよび１種以上のその他の非ＩＬ−１β標的抗原を同時に遮断して、有効性／安全性を増強し、および／または患者適用範囲を増大させるための治療薬として有用である。このような標的として、可溶性標的（ＴＮＦ）および細胞表面受容体標的（ＶＥＧＦＲおよびＥＧＦＲ）を挙げることができる。

【0292】

さらに、本発明のＤＶＤ−Ｉｇは、細胞内送達（内部移行受容体および細胞内分子をターゲッティングする）、脳内に送達すること（血液脳関門を通過するためにトランスフェリン受容体およびＣＮＳ疾患メディエーターをターゲッティングする）を含めた、組織特異的送達（局所ＰＫの増強、ひいては、より高い有効性および／またはより低い毒性のために組織マーカーおよび疾患メディエーターを標的とする）に使用され得る。ＤＶＤ−Ｉｇはまた、抗原を、その抗原の非中和エピトープとの結合を介して特定の位置に送達するための、また、抗原の半減期を増大させるための担体タンパク質としても役立ち得る。さらに、ＤＶＤ−Ｉｇは、患者に埋め込まれた医療装置に物理的に連結されるようにするか、またはこれらの医療装置を標的とするようにするかのいずれかに設計され得る（Ｂｕｒｋｅら、「Ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ ｅｌｕｔｉｎｇ ｓｔｅｎｔｓ」、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．、５８（３）：４３７−４４６頁（２００６年）；Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄら、「Ｓｕｒｆａｃｅ ｃｏａｔｉｎｇｓ ｆｏｒ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｄｉｃａｌ ｄｅｖｉｃｅｓ」、Ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｄ Ｃｏａｔｉｎｇｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２００（２２−２３）：６３１８−６３２４頁（２００６年）；Ｗｕら、「Ｄｒｕｇ／ｄｅｖｉｃｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｌｏｃａｌ ｄｒｕｇ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ａｎｄ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ」、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、２７：２４５０−２４６７頁（２００６年）；Ｍａｒｑｕｅｓら、「Ｍｅｄｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎｅｔｗｏｒｋ ｉｎ ｔｈｅ Ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃ Ｄｅｖｉｃｅｓ」、第２１章、Ｉｎ Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ ｉｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、（Ｒｅｉｓら編）（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ ＬＬＣ、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、２００５年）３７７−３９７頁）。手短には、適当な種類の細胞を、医療インプラントの部位に向けることが、治癒および正常な組織機能の回復を促進し得る。あるいは、装置に連結された、または装置を標的とするＤＶＤ−Ｉｇによる、装置移植の際に放出されたメディエーター（それだけには限らないが、サイトカインを含む）の阻害も提供される。例えば、インターベンショナル心臓病学において、遮断された動脈を治療するために、および心臓筋肉への血液の流れを改善するために、何年もの間ステントが使用されている。しかし、従来のベアメタルステントは、一部の患者では、再狭窄（治療された領域における動脈の再狭窄）を引き起こすことが分かっており、血栓につながり得る。最近、血液中を循環している内皮前駆体細胞（ＥＰＣ）を捕獲することによって、再狭窄を低減し、血栓が生じることを防ぐ、抗ＣＤ３４抗体でコーティングされたステントが記載された。内皮細胞は、血管の内側を覆う細胞であり、血液が、滑らかに流れることを可能にする。ＥＰＣは、ステントの硬い表面に接着し、平滑な層を形成し、これは、治癒を促進するだけでなく、再狭窄および血栓、ステントの使用にこれまで伴われていた合併症も防ぐ（Ａｏｋｉら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．、４５（１０）：１５７４−１５７９頁（２００５年））。ステントを必要とする患者の治療成績の改善に加え、心血管バイパス手術を必要とする患者のための意味もある。例えば、抗ＥＰＣ抗体でコーティングされた人工血管導管（人工動脈）は、バイパス手術移植のために患者の脚または腕から得た動脈を使用する必要性をなくす。これは、手術および麻酔時間を低減し、さらには、冠動脈手術による死亡を低減する。ＤＶＤ−Ｉｇは、それが細胞表面マーカー（ＣＤ３４など）、ならびに細胞動員を促進するために埋め込まれた装置上にコーティングされたタンパク質（またはそれだけには限らないが、タンパク質、脂質および多糖を含めた任意の種類のエピトープ）と結合するような方法で設計される。このようなアプローチはまた、その他の医療インプラントに概して適用され得る。あるいは、ＤＶＤ−Ｉｇは、医療装置上に、移植および装置からすべてのＤＶＤを放出した時点（またはすでに負荷されたＤＶＤ−Ｉｇの加齢および変性を始めとする、さらなる新鮮なＤＶＤ−Ｉｇを必要とし得る任意のその他の必要性）でコーティングされ得、装置は、患者への新鮮なＤＶＤ−Ｉｇの全身投与によって再負荷され得、これでは、ＤＶＤ−Ｉｇは、対象とする標的（サイトカイン、１セットの結合部位を有する細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ３４）など）と、および装置上にコーティングされた、その他のものを有する標的（タンパク質、それだけには限らないが、脂質、多糖およびポリマーを含めた任意の種類のエピトープを始めとする）と結合するよう設計される。この技術は、コーティングされたインプラントの実用性を拡大するという利点を有する。

【0293】

Ａ．種々の疾患におけるＤＶＤ−Ｉｇの使用
本発明のＤＶＤ−Ｉｇ分子はまた、種々の疾患を治療するための治療用分子として有用である。このようなＤＶＤ分子は、特定の疾患に関与している１種または複数の標的と結合し得る。種々の疾患におけるこのような標的の例が、以下に記載される。

【0294】

ヒト自己免疫および炎症反応
一態様では、本発明のＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質は、ヒトＩＬ−１βおよび一般的な自己免疫および炎症反応に関与している１種または複数の抗原、例えば、Ｃ５、ＣＣＬ１（Ｉ−３０９）、ＣＣＬ１１（エオタキシン）、ＣＣＬ１３（ｍｃｐ−４）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−１ｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ−４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２（ｍｃｐ−１）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａ）、ＣＣＬ２１（ＭＩＰ−２）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ−１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−１ａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１ｂ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ｍｃｐ−３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ−ＴＡＣ／ＩＰ−９）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ−７８／ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ−２）、ＣＸＣＬ９、ＩＬ１３、ＩＬ８、ＣＣＬ１３（ｍｃｐ−４）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸ３ＣＲ１、ＩＬ８ＲＡ、ＸＣＲ１（ＣＣＸＣＲ１）、ＩＦＮＡ２、ＩＬ１０、ＩＬ１３、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ１Ｆ５、ＩＬ１Ｆ６、ＩＬ１Ｆ７、ＩＬ１Ｆ８、ＩＬ１Ｆ９、ＩＬ２２、ＩＬ５、ＩＬ８、ＩＬ９、ＬＴＡ、ＬＴＢ、ＭＩＦ、ＳＣＹＥ１（内皮単球活性化サイトカイン）、ＳＰＰ１、ＴＮＦ、ＴＮＦＳＦ５、ＩＦＮＡ２、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＡＢＣＦ１、ＢＣＬ６、Ｃ３、Ｃ４Ａ、ＣＥＢＰＢ、ＣＲＰ、ＩＣＥＢＥＲＧ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ８ＲＢ、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＯＬＬＩＰ、ＦＡＤＤ、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＭＹＤ８８、ＮＣＫ２、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ４、ＴＲＡＦ５、ＴＲＡＦ６、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ１Ｂ、ＡＣＶＲ２、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＡＣＶＲＬ１、ＣＤ２８、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３Ｚ、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＮＲ１、ＣＴＬＡ４、ＣＹＳＬＴＲ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＦＣＧＲ３Ａ、ＧＰＲ４４、ＨＡＶＣＲ２、ＯＰＲＤ１、Ｐ２ＲＸ７、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＢＬＲ１、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ４、ＧＰＲ２、ＳＣＹＥ１、ＳＤＦ２、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＡＭＨ、ＡＭＨＲ２、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＭＰＲ２、Ｃ１９ｏｒｆ１０（ＩＬ２７ｗ）、ＣＥＲ１、ＣＳＦ１、ＣＳＦ２、ＣＳＦ３、ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８、ＦＧＦ２、ＧＦＩ１、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ＩＧＦ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１１、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１５、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒ、ＩＬ１８、ＩＬ１８Ｒ１、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＫＩＴＬＧ、ＬＥＰ、ＬＴＡ、ＬＴＢ、ＬＴＢ４Ｒ、ＬＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ、ＭＩＦ、ＮＰＰＢ、ＰＤＧＦＢ、ＴＢＸ２１、ＴＤＧＦ１、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＧＦＢＩ、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３、ＴＨ１Ｌ、ＴＮＦ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＳＦ４、ＴＮＦＳＦ５、ＴＮＦＳＦ６、ＴＮＦＳＦ１１、ＶＥＧＦ、ＺＦＰＭ２、およびＲＮＦ１１０（ＺＮＦ１４４）と結合できる。

【0295】

喘息
アレルギー性喘息は、好酸球増加症、杯細胞異形成、上皮細胞変化、気道過敏性（ＡＨＲ）ならびにＴｈ２およびＴｈ１サイトカイン発現の存在、ならびに血清ＩｇＥレベルの上昇を特徴とする。現在、気道炎症が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、好酸球、肥満細胞およびマクロファージなどの炎症細胞の、およびサイトカインおよびケモカインを始めとするその分泌されたメディエーターの複雑な相互作用を巻き込む、喘息の病理発生の根底にある重要な因子であることは広く受け入れられている。副腎皮質ステロイドは、今日、喘息の最も重要な抗炎症治療であるが、その作用機序は、非特異的であり、特に、若年性患者の集団においては安全性の懸念が存在する。したがって、より特異的で、ターゲッティングされた治療の開発が必要とされる。

【0296】

炎症およびＡＨＲの両方が評価され得る、ＯＶＡ誘発喘息マウスモデルなどの動物モデルは、当技術分野で公知であり、種々のＤＶＤ−Ｉｇ分子の、喘息を治療する能力を決定するために使用され得る。喘息を研究するための動物モデルは、Ｃｏｆｆｍａｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、２０１（１２）：１８７５−１８７９頁（２００５年）；Ｌｌｏｙｄら、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、７７：２６３−２９５頁（２００１年）；Ｂｏｙｃｅら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、２０１（１２）：１８６９−１８７３頁（２００５年）；およびＳｎｉｂｓｏｎら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ、３５（２）：１４６−１５２頁（２００５年）に開示されている。これらの標的対の日常的な安全性評価に加え、免疫抑制度についての特定の試験が必要とされ、最良の標的対の選択において役立ち得る（Ｌｕｓｔｅｒら、Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ、９２（１−３）：２２９−２４３頁（１９９４年）；Ｄｅｓｃｏｔｅｓ，Ｊ．、Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ．、７７：９９−１０２頁（１９９２年）；Ｈａｒｔら、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１０８（２）：２５０−２５７頁（２００１年）参照のこと）。

【0297】

本発明の一態様は、ＩＬ−１βならびに１種または複数の、例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−１８、ＩＬ−５Ｒ（α）、ＴＮＦＳＦ４、ＩＬ−４Ｒ（α）、インターフェロンα、エオタキシン、ＴＳＬＰ、ＰＡＲ−２、ＰＧＤ２およびＩｇＥからなる群から選択される２種の標的と結合できるＤＶＤ−Ｉｇ分子に関する。一実施形態は、喘息の治療にとって有益な治療薬として二重特異性抗ＩＬ−１β／ＩＬ−１α ＤＶＤ−Ｉｇを含む。

【0298】

関節リウマチ（ＲＡ）
関節リウマチ（ＲＡ）、全身性疾患は、関節の滑膜における慢性炎症反応を特徴とし、軟骨の変性および傍関節骨のびらんを伴う。罹患関節では、ＴＮＦを始めとする多数の炎症誘発性サイトカイン、ケモカインおよび増殖因子が発現される。ＲＡのマウスモデルへの抗ＴＮＦ抗体またはｓＴＮＦＲ融合タンパク質の全身投与は、抗炎症性および関節保護性であることがわかった。ＩＬ−１βを含めた種々のサイトカインが、ＲＡに関与している。静脈内投与されたインフリキシマブ（Ｈａｒｒｉｍａｎら、「Ｓｕｍｍａｒｙ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｕｓｉｎｇ ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ，ａｎ ａｎｔｉ−ＴＮＦａｌｐｈａ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ」、Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．、５８（付録１）：Ｉ６１−Ｉ６４（１９９９年））、キメラ抗ＴＮＦ ｍＡｂを用いて、ＲＡ患者においてＴＮＦの活性が遮断された臨床的検討によって、ＴＮＦは、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＭＣＰ−１およびＶＥＧＦ産生、免疫および炎症細胞の関節への動員、血管新生およびマトリックスメタロプロテイナーゼ−１および−３の血液レベルの低下を調節するというエビデンスが提供された。関節リウマチにおける炎症経路の良好な理解は、関節リウマチに関与しているその他の治療標的の同定につながった。インターロイキン−６アンタゴニスト（Ｃｈｕｇａｉ、Ｒｏｃｈｅによって開発されたＩＬ−６受容体抗体ＭＲＡ（Ｎｉｓｈｉｍｏｔｏら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、５０（６）： １７６１−１７６９（２００４）参照のこと）、ＣＴＬＡ４Ｉｇ（アバタセプト、Ｇｅｎｏｖｅｓｅら、「Ａｂａｔａｃｅｐｔ ｆｏｒ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｔｏ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ａｌｐｈａ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ」、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３５３：１１１４−１１２３頁（２００５年））および抗Ｂ細胞治療（リツキシマブ、Ｏｋａｍｏｔｏら、「Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ ｆｏｒ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ」、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３５１：１９０９頁（２００４年））などの有望な治療は、この１年の無作為化比較試験においてすでに試験されている。ＩＬ−１βならびにＩＬ−１５およびＩＬ−１８などのその他のサイトカインは、ＲＡ動物モデルを使用して役割を果たすと同定されている（治療用抗体 ＨｕＭａｘ−ＩＬ＿１５、ＡＭＧ ７１４ Ｂａｓｌｕｎｄら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、５２（９）：２６８６−２６９２頁（２００５年）参照のこと）。抗ＴＮＦおよびＩＬ−１βのような別のメディエーターを含む二重特異性抗体治療は、臨床有効性および／または患者適用範囲の増強において大きな可能性を持っている。例えば、ＴＮＦおよびＶＥＧＦの両方を遮断することは、両方ともＲＡの病態生理に関与している炎症および血管新生を根絶する可能性があり得る。ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βを遮断できるＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質が考慮される。これらの標的対の日常的な安全性評価に加え、免疫抑制度についての特定の試験が必要とされ、最良の標的対の選択において役立ち得る（Ｌｕｓｔｅｒら、Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ、９２（１−３）：２２９−２４３頁（１９９４年）；Ｄｅｓｃｏｔｅｓら、Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ．、７７：９９−１０２頁（１９９２年）；Ｈａｒｔら、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１０８（２）：２５０−２５７頁（２００１年）参照のこと）。ＤＶＤ−Ｉｇ分子が、関節リウマチの治療にとって有用であるかどうかは、コラーゲン誘発関節炎マウスモデルなどの前臨床動物ＲＡモデルを使用して評価され得る。その他の有用なモデルはまた、当技術分野で周知である（Ｂｒａｎｄ，Ｄ．Ｄ．、Ｃｏｍｐ．Ｍｅｄ．、５５：１１４−１２２頁（２００５年）参照のこと）。ヒトおよびマウスオルソログの親抗体の交差反応性（例えば、ヒトおよびマウスＴＮＦ、ヒトおよびマウスＩＬ−１５の反応性など）に基づいて、マウスＣＩＡモデルにおける検証研究がＤＶＤ−Ｉｇ分子に由来する「対応させたサロゲート抗体」を用いて実施され得る。手短には、２種（またはそれ以上）のマウス標的特異的抗体に基づいたＤＶＤ−Ｉｇは、可能な限り、ヒトＤＶＤ−Ｉｇ構築に使用された親のヒトまたはヒト化抗体の特徴（類似の親和性、類似の中和効力、類似の半減期など）に対応させられ得る。

【0299】

一実施形態では、ヒトＩＬ−１βおよび別の非ＩＬ−１β標的と結合する本発明のＤＶＤ−Ｉｇはまた、ＩＬ−１βが働くその他の疾患を治療するために使用され得る。このような疾患として、それだけには限らないが、ＳＬＥ、多発性硬化症（ＭＳ）、敗血症、種々の神経疾患および癌（子宮頸部の、乳房の、胃のを含む）が挙げられる。ＩＬ−１βが役割を果たす疾患および障害のより広範なリストも以下に提供される。

【0300】

本発明の一実施形態は、ヒトＩＬ−１βおよびＩＬ−１α、ＴＮＦα、ＩＬ−１２、ＴＷＥＡＫ、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１３、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−１８、ＶＥＧＦ、ＶＬＡ−４、ＴＮＦβ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ２００、ＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、Ｃ５、ＣＤ５２、スクレロスチンおよびＣＣＲ２からなる群から選択される１種または複数の標的と結合できるＤＶＤ−Ｉｇ分子に関する。

【0301】

全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）
ＳＬＥ免疫病原性特徴は、ポリクローナルＢ細胞活性化であり、これが高グロブリン血症、自己抗体製造および免疫複合体形成につながる。基本的な異常は、全身性Ｔ細胞調節不全による禁止Ｂ細胞クローンを抑制するＴ細胞の不全であると思われる。さらに、ＢおよびＴ細胞相互作用は、ＩＬ−１０などのいくつかのサイトカインならびにＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ、Ｂ７およびＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４などの同時刺激分子によって促進され、これが第２のシグナルを開始する。これらの相互作用は、免疫複合体およびアポトーシス物質の損なわれた食作用性クリアランスと一緒になって、免疫応答を永続化させ、その結果、組織損傷が起こる。

【0302】

一態様では、本発明のＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質は、ヒトＩＬ−１βおよびＳＬＥと関与している以下の抗原のうち１種または複数と結合できる：Ｂ細胞がターゲッティングされる治療：ＣＤ−２０、ＣＤ−２２、ＣＤ−１９、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８０、ＨＬＡ−ＤＲＡ、ＩＬ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＮＦＳＦ５、ＴＮＦＳＦ６、ＢＬＲ１、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ＩＣＯＳＬ、ＩＧＢＰ１、ＭＳ４Ａ１、ＲＧＳ１、ＳＬＡ２、ＣＤ８１、ＩＦＮＢ１、ＩＬ１０、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＳＦ５、ＡＩＣＤＡ、ＢＬＮＫ、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ−６ＳＴ、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ４、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＫＬＦ６、ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＤＰＰ４、ＦＣＥＲ２、ＩＬ２ＲＡ、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＲ２、ＩＬ１Ｒ２、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＭＳ４Ａ１、ＳＴ６ＧＡＬ１、ＣＤ１Ｃ、ＣＨＳＴ１０、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＤＲＡおよびＮＴ５Ｅ．；同時刺激シグナル：ＣＴＬＡ４またはＢ７．１／Ｂ７．２；Ｂ細胞生存の阻害：ＢｌｙＳ、ＢＡＦＦ；補体不活性化：Ｃ５；サイトカイン調節：基本原理は、任意の組織における正味の生物学的反応は、炎症誘発性または抗炎症性サイトカインの局所レベル間のバランスの結果であるということである（Ｓｆｉｋａｋｉｓら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．、１７：５５０−５５７頁（２００５年））。ＳＬＥは、血清ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０の上昇が確認されたＴｈ−２によって駆動される疾患であると考えられる。ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＦＮ−αおよびＴＮＦ−αからなる群から選択される１種または複数の標的と結合できるＤＶＤ−Ｉｇも考慮される。本明細書において論じられた標的の組合せは、いくつかのループス前臨床モデルにおいて試験され得るＳＬＥのための治療効力を増強する（Ｐｅｎｇ Ｓ．Ｌ．、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、１０２：２２７−２７２頁（２００４年）参照のこと）。ヒトおよびマウスオルソログに対する親抗体の交差反応性（例えば、ヒトおよびマウスＣＤ２０、ヒトおよびマウスインターフェロンαの反応性など）に基づいて、マウスループスモデルにおける検証研究は、ＤＶＤ−Ｉｇ分子に由来する「対応させたサロゲート抗体」を用いて実施され得る。手短には、ＤＶＤ−Ｉｇに基づく２種（またはそれ以上）のマウス標的特異的抗体は、可能な限り、ヒトＤＶＤ−Ｉｇ構築に使用された親のヒトまたはヒト化抗体の特徴（類似の親和性、類似の中和効力、類似の半減期など）に対応させられ得る。

【0303】

多発性硬化症（ＭＳ）
多発性硬化症（ＭＳ）は、主に未知の病因論を有する複雑なヒト自己免疫型の疾患である。神経系中のミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）の免疫額的破壊が、多発性硬化症の主要な病態である。ＭＳは、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞による浸潤を含む複雑な病態の、中枢神経系内の反応の疾患である。サイトカイン、反応性窒素種および共刺激分子のＣＮＳにおける発現は、ＭＳにおいてすべて記載されている。自己免疫の発生の一因となっている免疫学的機序が大きく考慮される。特に、抗原発現、サイトカインおよび白血球相互作用およびＴｈ１およびＴｈ２細胞などのその他のＴ細胞の平衡を保つ／調節するのに役立つ調節性Ｔ細胞が、治療標的同定にとって重要な領域である。

【0304】

ＩＬ−１２は、ＡＰＣによって産生され、Ｔｈ１エフェクター細胞の分化を促進する炎症誘発性サイトカインである。ＩＬ−１２は、ＭＳを有する患者の病変の発生において、ならびにＥＡＥに罹患した動物において産生される。これまでに、ＩＬ−１２経路の干渉は、げっ歯類においてＥＡＥを効率的に防ぐことおよび抗ＩＬ−１２ｍＡｂを使用するＩＬ−１２ｐ４０のインビボ中和は、コモンマーモセットにおけるミエリン誘発ＥＡＥモデルにおいて有益な効果を有することがわかっている。

【0305】

ＴＷＥＡＫは、ＴＮＦファミリーのメンバーであり、中枢神経系（ＣＮＳ）において構成的に発現され、細胞種に応じて炎症誘発効果、増殖効果またはアポトーシス効果を有する。その受容体、Ｆｎ１４は、内皮細胞、反応性星状細胞およびニューロンによってＣＮＳにおいて発現される。ＴＷＥＡＫおよびＦｎ１４ ｍＲＮＡ発現は、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の際に脊髄において増大した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるミエリン乏突起神経膠細胞糖タンパク質（ＭＯＧ）誘発ＥＡＥにおける抗ＴＷＥＡＫ抗体治療は、誘導相の後にマウスが治療された場合に、疾患の重篤度および白血球浸潤の低減をもたらした。

【0306】

本発明の一態様は、ＩＬ−１βならびにＩＬ−１２、ＴＷＥＡＫ、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１３、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−１８、ＶＥＧＦ、ＶＬＡ−４、ＴＮＦ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ２００、ＩＦＮγ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、Ｃ５、ＣＤ５２、オステオポンチンおよびＣＣＲ２からなる群から選択される１種または複数の、例えば、２種の標的と結合できるＤＶＤ−Ｉｇ分子に関する。一実施形態は、ＭＳの治療にとって有益な治療薬として二重特異性抗ＩＬ−１β／ＴＷＥＡＫ ＤＶＤ−Ｉｇを含む。

【0307】

ＭＳを治療するためのＤＶＤ−Ｉｇ分子の有用性を評価するためのいくつかの動物モデルは、当技術分野で公知である（Ｓｔｅｉｎｍａｎら．、Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２６（１１）：５６５−５７１頁（２００５年）；Ｌｕｂｌｉｎら、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．、８（３）：１９７−２０８頁（１９８５年）；Ｇｅｎａｉｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、７５（３）：１８７−１９７頁（１９９７年）；Ｔｕｏｈｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１８９（７）：１０３３−１０４２頁（１９９９年）；Ｏｗｅｎｓら、Ｎｅｕｒｏｌ．Ｃｌｉｎ．、１３（１）：５１−７３頁（１９９５年）；および’ｔ Ｈａｒｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１７５（７）：４７６１−４７６８頁（２００５年）参照のこと）。ヒトおよび動物種オルソログに対する親抗体の交差反応性（例えば、ヒトおよびマウスＩＬ−１β、ヒトおよびマウスＴＷＥＡＫなどの反応性）に基づいて、マウスＥＡＥモデルにおける検証研究は、ＤＶＤ−Ｉｇ分子に由来する「対応させたサロゲート抗体」を用いて実施され得る。手短には、ＤＶＤ−Ｉｇに基づく２種（ｔｏ）（またはそれ以上）のマウス標的特異的抗体は、可能な限り、ヒトＤＶＤ−Ｉｇ構築に使用された親のヒトまたはヒト化抗体の特徴（類似の親和性、類似の中和効力、類似の半減期など）に対応させられ得る。その他の非げっ歯類種において、同じ概念が動物モデルに当てはまり、これでは、ＤＶＤ−Ｉｇに由来する「対応させたサロゲート抗体」は、予想された薬理学およびおそらくは安全性研究について選択される。これらの標的対の日常的な安全性評価に加え、免疫抑制度についての特定の試験が必要とされ、最良の標的対の選択において役立ち得る（Ｌｕｓｔｅｒら、Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ、９２（１−３）：２２９−２４３頁（１９９４年）；Ｄｅｓｃｏｔｅｓら、Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ．、７７：９９−１０２頁（１９９２年）；Ｊｏｎｅｓ，Ｒ．、「Ｒｏｖｅｌｉｚｕｍａｂ−ＩＣＯＳ Ｃｏｒｐ」、ＩＤｒｕｇｓ、３（４）：４４２−４４６頁（２０００年）参照のこと）。

【0308】

敗血症
敗血症の病態生理は、グラム陰性生物（リポ多糖類［ＬＰＳ］、脂質Ａ、エンドトキシン）およびグラム陽性生物（リポテイコ酸、ペプチドグリカン）両方の外膜成分によって開始される。これらの外膜成分は、単球の表面上のＣＤ１４受容体と結合できる。最近記載されたｔｏｌｌ様受容体のおかげで、次いで、シグナルが細胞に伝達され、炎症誘発性サイトカイン腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）およびインターロイキン−１（ＩＬ−１）の最終的な製造につながる。圧倒的な炎症および免疫応答が、敗血性ショックの本質的な特徴であり、敗血症によって誘導される組織損傷、多臓器不全および死亡の病理発生における中心的な役割を果たす。サイトカイン、特に、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）およびインターロイキン（ＩＬ−１）は、敗血性ショックの重要なメディエーターであることがわかっている。これらのサイトカインは、組織に対して直接的な毒性効果を有し。それらはまた。ホスホリパーゼＡ２を活性化する。これらおよびその他の効果は、血小板活性化因子の濃度の増大、一酸化窒素合成酵素活性の促進、好中球による組織浸潤の促進および好中球活性の促進につながる。

【0309】

敗血症および敗血性ショックの治療は、依然として、臨床の難問のままであり、炎症反応に向けられた生物反応修飾物質（すなわち、抗ＴＮＦ、抗ＭＩＦ）を用いる最近のプロスペクティブ試験は、ごく限られた臨床上の利益しか示さなかった。最近、興味が、免疫抑制の付随する期間を逆転されることに向けられた治療へと移った。実験動物および重病の患者における研究によって、リンパ器官および一部の柔組織のアポトーシスの増大が、この免疫抑制、アネルギーおよび器官系の機能障害の一因となっていることが実証された。敗血症症候群の際には、ＩＬ−２がないことによって、またはグルココルチコイド、グランザイムまたはいわゆる「死亡」サイトカイン：腫瘍壊死因子αまたはＦａｓリガンドの放出によって、リンパ球アポトーシスが誘発され得る。アポトーシスは、Ｂｃｌ−２ファミリーのアポトーシス促進性および抗アポトーシスメンバーによって影響を受け得る、細胞質および／またはミトコンドリアカスパーゼの自己活性化によって進行する。実験動物では、アポトーシスの阻害剤を用いる治療は、リンパ球系細胞アポトーシスを防ぐことができるだけでなく、治療成績も改善し得る。抗アポトーシス薬を用いる臨床試験は、大部分は、その投与および組織ターゲッティングと関連する技術的な問題上のために、依然として遠いままであるが、リンパ球アポトーシスの阻害は、敗血症患者にとって魅力的な治療標的に相当する。同様に、炎症性メディエーターおよびアポトーシスメディエーターの両方をターゲッティングする二重特異性薬剤は、付加価値を有する。本発明の一態様は、ＩＬ−１βならびにＴＮＦ、ＩＬ−１、ＭＩＦ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１８、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＦａｓＬ、ＬＰＳ、Ｔｏｌｌ様受容体、ＴＬＲ−４、組織因子、ＭＩＰ−２、ＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＡＳＰ１、ＣＡＳＰ４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１Ｂ、ＮＦＫＢ１、ＰＲＯＣ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＣＳＦ３、ＣＣＲ３、ＩＬ１ＲＮ、ＭＩＦ、ＮＦＫＢ１、ＰＴＡＦＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＧＰＲ４４、ＨＭＯＸ１、ＨＭＧ−Ｂ１、ミッドカイン、ＩＲＡＫ１、ＮＦＫＢ２、ＳＥＲＰＩＮＡ１、ＳＥＲＰＩＮＥ１およびＴＲＥＭ１からなる群から選択される敗血症に関与している１種または複数の標的と結合できるＤＶＤ−Ｉｇに関する。敗血症に対するこのようなＤＶＤ−Ｉｇの有効性は、当技術分野で公知の前臨床動物モデルにおいて評価され得る（Ｂｕｒａｓら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．、４（１０）：８５４−８６５頁（２００５年）；およびＣａｌａｎｄｒａら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．、６（２）：１６４−１７０頁（２０００年）参照のこと）。

【0310】

神経疾患および神経変性性疾患
神経変性性疾患は、慢性（この場合には、普通、年齢依存性である）または急性（例えば、卒中、外傷性脳損傷、脊髄損傷など）のいずれかである。それらは、神経機能の進行性の喪失（神経細胞死、脱髄）、運動性の喪失および記憶の喪失を特徴とする。慢性神経変性性疾患（例えば、アルツハイマー病、ＡＤ）の根底にある機序の新たな知識によって、複雑な病因論および種々の因子、例えば、年齢、血糖状態、アミロイド産生および多量体化、その受容体ＲＡＧＥ（ＡＧＥの受容体）と結合する最終糖化産物（ＡＧＥ）の蓄積、脳の酸化ストレスの増大、大脳の血流の減少、炎症性サイトカインおよびケモカインの放出を始めとする神経炎症、神経機能障害およびミクログリア活性化が、その発生および進行の一因であると認識されていることが示されている。したがって、これらの慢性神経変性性疾患は、複数の細胞種およびメディエーター間の複雑な相互作用に相当する。このような疾患の治療戦略は、限定され、ほとんど非特異的抗炎症薬（例えば、副腎皮質ステロイド、ＣＯＸ阻害剤）を用いて炎症プロセスを遮断することまたはニューロンおよび／またはシナプス機能の喪失を防ぐための薬剤のいずれかとなる。これらの治療は、疾患進行を停止できない。最近の研究によって、可溶性Ａβペプチド（Ａβオリゴマーの形態を含む）に対する抗体などの、よりターゲッティングされた治療は、疾患進行を停止できるだけでなく、さらに記憶の維持にも役立ち得ることが示唆されている。これらの予備所見は、２種以上の疾患メディエーター（例えば、ＡβおよびＴＮＦなどの炎症誘発性サイトカイン）をターゲッティングする特異的治療は、慢性神経変性性疾患に対して、単一の疾患機序（例えば、可溶性Ａβ単独）をターゲッティングする観察されたものよりもさらに良好な治療効力を提供し得ることを示唆している（Ｓｈｅｐｈｅｒｄら、Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．、３１：５０３−５１１頁（２００５年）；Ｎｅｌｓｏｎ，Ｒ．Ｂ．、Ｃｕｒｒ． Ｐｈａｒｍ． Ｄｅｓ．、１１：３３３５−３３５２頁（２００５年）；Ｋｌｅｉｎ，Ｗ．Ｌ．、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ． Ｉｎｔ．、４１：３４５−３５２頁（２００２年）；Ｊａｎｅｌｓｉｎｓら、「Ｅａｒｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏｇｌｉａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ−ａｌｐｈａ ａｎｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｉ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｅｎｔｏｒｈｉｎａｌ ｃｏｒｔｅｘ ｏｆ ｔｒｉｐｌｅ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｍｉｃｅ」、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ、２（２３）：１−１２頁（２００５年）；Ｓｏｌｏｍａｎ，Ｂ．、Ｃｕｒｒ． Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ． Ｒｅｓ．、１：１４９−１６３頁（２００４年）；Ｋｌｙｕｂｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．、１１：５５６−５６１頁（２００５年）；Ａｒａｎｃｉｏら、ＥＭＢＯ Ｊ．、２３：４０９６−４１０５頁（２００４年）；Ｂｏｒｎｅｍａｎｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．、１５８：６３−７３頁（２００１年）；Ｄｅａｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．、９：９０７−９１３頁（２００３年）；およびＭａｓｌｉａｈら、Ｎｅｕｒｏｎ、４６：８５７−８６８頁（２００５年）参照のこと）。

【0311】

本発明のＤＶＤ−Ｉｇ分子は、ＩＬ−１βならびにアルツハイマー病などの慢性神経変性性疾患に関与している１種または複数の標的と結合し得る。このような標的として、それだけには限らないが、ＡＤ病理発生に関与する可溶性または細胞表面、任意のメディエーター、例えば、ＡＧＥ（Ｓ１００ Ａ、アンホテリシン）、炎症誘発性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１）、ケモカイン（例えば、ＭＣＰ １）、神経再生を阻害する分子（例えば、Ｎｏｇｏ、ＲＧＭ Ａ）、神経突起成長を増強する分子（ニューロトロフィン）および血液脳関門で輸送を媒介し得る分子（例えば、トランスフェリン受容体、インスリン受容体またはＲＡＧＥ）が挙げられる。ＤＶＤ−Ｉｇ分子の有効性は、アミロイド前駆体タンパクまたはＲＡＧＥを過剰発現し、アルツハイマー病様の症状を発生するトランスジェニックマウスなどの前臨床動物モデルにおいて検証され得る。さらに、ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、構築され、動物モデルにおいて有効性について試験され得、ヒト患者における試験のために最良の治療用ＤＶＤ−Ｉｇが選択され得る。ＤＶＤ−Ｉｇ分子はまた、その他の神経変性性疾患、例えば、パーキンソン病の治療のために使用され得る。α−シヌクレインは、パーキンソンの病態に関与している。ＩＬ−１βおよびＬＩＮＧＯ−１、α−シヌクレインならびに／またはＴＮＦ、ＩＬ−１７、ＭＣＰ−１などの炎症性メディエーターをターゲッティングできるＤＶＤ−Ｉｇは、パーキンソン病の有効な治療を証明し得、本明細書において発明において考慮される。

【0312】

ニューロン再生および脊髄損傷
病理的機序の知識の増大にもかかわらず、脊髄損傷（ＳＣＩ）は、依然として壊滅的な状態であり、高度な医学的必要性を特徴とする医療適用に相当する。ほとんどの脊髄損傷は、挫傷または圧迫損傷であり、普通、一次的損傷に、続発的損傷機序（炎症性メディエーター、例えば、サイトカインおよびケモカイン）が続き、これが初期損傷を悪化させ、病変領域の相当な、時には、１０倍を超える拡大をもたらす。ＳＣＩにおけるこれらの一次および続発性機序は、その他の手段、例えば、卒中によって引き起こされた脳損傷におけるものと極めて類似している。満足のいく治療は存在せず、メチルプレドニゾロン（ＭＰ）の高用量ボーラス注射が、損傷後８時間という狭い時間枠内で唯一使用される治療である。しかし、この治療は、続発性損傷を防ぐことだけを意図するものであって、相当な機能回復は引き起こさない。絶対的な有効性がないことおよび重篤な副作用、その後の感染を伴う免疫抑制のようなものおよび重篤な病理組織的筋肉変化について厳しく批判されている。内因性再生能を刺激する薬物、生物製剤または小分子は承認されていないが、有望な治療原理および薬物候補は、近年、ＳＣＩの動物モデルにおいて有効性を示している。ヒトＳＣＩにおいて機能回復がないことは、かなりの程度、病変部位で、瘢痕組織において、ミエリンにおいて、ならびに損傷関連細胞上で神経突起成長を阻害する因子によって引き起こされる。このような因子は、ミエリン関連タンパク質ＮｏｇｏＡ、ＯＭｇｐおよびＭＡＧ、ＲＧＭ Ａ、瘢痕関連ＣＳＰＧ（コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）および反応性星状細胞（一部のセマフォリンおよびエフリン）に対する阻害性因子である。しかし、病変部位では、成長阻害性分子が見られるだけでなく、ニューロトロフィン、ラミニン、Ｌ１およびその他のもののような神経突起成長刺激因子も見られる。神経突起成長阻害性および成長促進性分子のこのアンサンブルによって、阻害性影響の低減が成長阻害から成長促進へとバランスを移動させ得るので、ＮｏｇｏＡまたはＲＧＭ Ａのような単一の因子を遮断することが、げっ歯類ＳＣＩモデルにおいて大幅な機能的回復をもたらしたことを説明できる。しかし、単一の神経突起成長阻害性分子を阻害することで観察された回復は、完全ではなかった。より迅速な、より明白な回復を達成するために、２種の神経突起成長阻害性分子、例えば、ＮｏｇｏおよびＲＧＭ Ａを遮断すること、または神経突起成長阻害性分子を遮断することおよび神経突起成長増強分子の機能を増強すること、例えば、Ｎｏｇｏおよびニューロトロフィン、または神経突起成長阻害性分子、例えば、Ｎｏｇｏおよび炎症誘発性分子、例えば、ＴＮＦを遮断することが望ましいものであり得る（ＭｃＧｅｅら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、２６：１９３−１９８頁（２００３年）；Ｄｏｍｅｎｉｃｏｎｉら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．、２３３：４３−４７頁（２００５年）；Ｍａｋｗａｎａら、ＦＥＢＳ Ｊ．、２７２：２６２８−２６３８頁（２００５年）；Ｄｉｃｋｓｏｎ，Ｂ．Ｊ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２９８：１９５９−１９６４頁（２００２年）；Ｔｅｎｇら、Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．、７９：２７３−２７８頁（２００５年）；Ｋａｒｎｅｚｉｓら、Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、７：７３６頁（２００４年）；Ｘｕら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．、９１：１０１８−１０２３頁（２００４年）参照のこと）。

【0313】

一態様では、ヒトＩＬ−１βと結合するＤＶＤ−Ｉｇはまた、ＮｇＲおよびＲＧＭ Ａ；ＮｏｇｏＡおよびＲＧＭ Ａ；ＭＡＧおよびＲＧＭ Ａ；ＯＭｇｐおよびＲＧＭ Ａ；ＲＧＭ ＡおよびＲＧＭ Ｂ；ＣＳＰＧおよびＲＧＭ Ａ；アグリカン、ミッドカイン、ニューロカン、バーシカン、ホスファカン、Ｔｅ３８およびＴＮＦ−αなどの標的対の一方または両方と結合し得、樹状突起および軸策発芽を促進する抗体と組み合わされたＡβグロブロマー（ｇｌｏｂｕｌｏｍｅｒ）特異的抗体が提供される。ＡＤの樹状突起病態は極めて初期の兆候であり、ＮＯＧＯ Ａが樹状突起成長を制限することがわかっている。このような種類のａｂを、ＳＣＩ候補（ミエリン−タンパク質）Ａｂのいずれかと組み合わせることができる。その他のＤＶＤ−Ｉｇ標的は、ＮｇＲ−ｐ７５、ＮｇＲ−Ｔｒｏｙ、ＮｇＲ−Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇｏ）、ＮｇＲ−Ｌｉｎｇｏ、Ｌｉｎｇｏ−Ｔｒｏｙ、Ｌｉｎｇｏ−ｐ７５、ＭＡＧまたはＯＭｇｐの任意の組合せを含み得る。さらに、標的はまた、神経突起の阻害に関与する可溶性または細胞表面、任意のメディエーター、例えば、Ｎｏｇｏ、ＯＭｇｐ、ＭＡＧ、ＲＧＭ Ａ、セマフォリン、エフリン、可溶性Ａβ、炎症誘発性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１）、ケモカイン（例えば、ＭＩＰ １ａ）、神経再生を阻害する分子を含み得る。抗ｎｏｇｏ／抗ＲＧＭ Ａまたは同様のＤＶＤ−Ｉｇ分子の有効性は、脊髄損傷の前臨床動物モデルにおいて検証され得る。さらに、これらのＤＶＤ−Ｉｇ分子は、構築され、動物モデルにおいて有効性について試験され得、ヒト患者における試験のために最良の治療用ＤＶＤ−Ｉｇが選択され得る。さらに、単一の受容体、例えば、３つのリガンドＮｏｇｏ、ＯＭｇｐおよびＭＡＧと結合するＮｏｇｏ受容体上の２種の別個のリガンド結合部位ならびにＡβおよびＳ１００ Ａと結合するＲＡＧＥを標的とするＤＶＤ−Ｉｇ分子が構築され得る。さらに、神経突起成長阻害剤、例えば、ｎｏｇｏおよびｎｏｇｏ受容体はまた、多発性硬化症のような免疫疾患において神経再生を妨げるのに役割を果たす。ｎｏｇｏ−ｎｏｇｏ受容体相互作用の阻害は、多発性硬化症の動物モデルにおいて回復を増強することがわかっている。したがって、１種の免疫メディエーター、例えば、ＩＬ−１２のようなサイトカインと、神経突起成長阻害剤分子、例えば、ＮｏｇｏまたはＲＧＭの機能を遮断できるＤＶＤ−Ｉｇ分子は、免疫または神経突起成長阻害剤分子のいずれか単独を遮断することよりも迅速な、大きな有効性を提供し得る。

【0314】

一般に、抗体は、血液脳関門（ＢＢＢ）を効率的な方法および関連する方法で通過しない。しかし、特定の神経性疾患、例えば、卒中、外傷性脳損傷、多発性硬化症などでは、ＢＢＢが損なわれている場合があり、脳内へのＤＶＤ−Ｉｇおよび抗体の浸透の増大を可能にする。ＢＢＢ漏出が生じていないその他の神経性状態では、グルコースおよびアミノ酸担体などの担体媒介性輸送およびＢＢＢの血管内皮で細胞構造／受容体を媒介する受容体媒介性経細胞輸送を始めとする内因性輸送系のターゲッティングを使用してもよく、ひいては、ＤＶＤ−ＩｇのＢＢＢを超える輸送が可能となる。このような輸送を可能にするＢＢＢでの構造として、それだけには限らないが、インスリン受容体、トランスフェリン受容体、ＬＲＰおよびＲＡＧＥが挙げられる。さらに、戦略によって、ＤＶＤ−Ｉｇの、低分子量薬物、ナノ粒子および核酸を始めとする可能性ある薬物をＣＮＳ中に輸送するシャトルとしての使用も可能になる（Ｃｏｌｏｍａら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．、１７（３）：２６６−２７４頁（２０００年）；Ｂｏａｄｏら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．、１８（２）：４４７−４５５頁（２００７年））。

【0315】

腫瘍学的傷害
モノクローナル抗体治療は、癌の重要な治療様式として現れた（ｖｏｎ Ｍｅｈｒｅｎら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．、５４：３４３−３６９頁（２００３年））。抗体は、アポトーシス、向け直された細胞傷害性を誘導すること、リガンド−受容体相互作用を干渉することまたは腫瘍性表現型にとって重要であるタンパク質の発現を妨げることによって、抗腫瘍効果を発揮し得る。さらに、抗体は、腫瘍微小環境の成分を標的とし、腫瘍関連脈管構造の形成などの重要な構造を乱すことができる。抗体はまた、上皮成長因子受容体などの、そのリガンドが増殖因子である受容体を標的とし得る。したがって、抗体は、細胞成長を刺激する天然リガンドを、標的とされる腫瘍細胞との結合から阻害する。あるいは、抗体は、抗イディオタイプネットワーク、補体媒介性細胞傷害性または抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導し得る。２種の別個の腫瘍メディエーターを標的とする二重特異性抗体の使用は、単一特異性治療と比較して、さらなる利益を与える可能性が高い。

【0316】

別の実施形態では、本発明のヒトＩＬ−１βと結合するＤＶＤ−Ｉｇはまた、腫瘍学的疾患に関与している別の標的、例えば、それだけには限らないが：ＩＧＦＲ、ＩＧＦ、ＶＧＦＲ１、ＰＤＧＦＲｂ、ＰＤＧＦＲａ、ＩＧＦ１，２、ＥＲＢ３、ＣＤＣＰ、１ＢＳＧ２、ＥｒｂＢ３、ＣＤ５２、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＢＭＰ６、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ２４、ＩＮＨＡ、ＴＮＦ、ＴＮＦＳＦ１０、ＢＭＰ６、ＥＧＦ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＧＲＰ、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＮＨＡ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＶＥＧＦ、ＣＤＫ２、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ２、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２、ＢＣＬ２、ＣＤ１６４、ＣＤＫＮ１Ａ、ＣＤＫＮ１Ｂ、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＤＫＮ２Ｂ、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＣＤＫＮ３、ＧＮＲＨ１、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＯＤＺ１、ＰＡＷＲ、ＰＬＧ、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＡＲ、ＢＲＣＡ１、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７、ＣＤＫ９、Ｅ２Ｆ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＯ１、ＥＲＢＢ２、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ２、ＩＮＳＬ４、ＭＹＣ、ＮＯＸ５、ＮＲ６Ａ１、ＰＡＰ、ＰＣＮＡ、ＰＲＫＣＱ、ＰＲＫＤ１、ＰＲＬ、ＴＰ５３、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ９、ＩＧＦＢＰ３、ＩＬ２、ＩＮＨＡ、ＫＬＫ６、ＴＰ５３、ＣＨＧＢ、ＧＮＲＨ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＮＨＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＰＲＬ、ＫＬＫ６、ＳＨＢＧ、ＮＲ１Ｄ１、ＮＲ１Ｈ３、ＮＲ１Ｉ３、ＮＲ２Ｆ６、ＮＲ４Ａ３、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、ＮＲ０Ｂ１、ＮＲ０Ｂ２、ＮＲ１Ｄ２、ＮＲ１Ｈ２、ＮＲ１Ｈ４、ＮＲ１Ｉ２、ＮＲ２Ｃ１、ＮＲ２Ｃ２、ＮＲ２Ｅ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲ２Ｆ１、ＮＲ２Ｆ２、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲ４Ａ１、ＮＲ４Ａ２、ＮＲ５Ａ１、ＮＲ５Ａ２、ＮＲ６Ａ１、ＰＧＲ、ＲＡＲＢ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ６、ＫＬＫ３、ＫＲＴ１、ＡＰＯＣ１、ＢＲＣＡ１、ＣＨＧＡ、ＣＨＧＢ、ＣＬＵ、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ６Ａ１、ＥＧＦ、ＥＲＢＢ２、ＥＲＫ８、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＧＮＲＨ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ２４、ＩＮＨＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１２、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、ＫＬＫ１５、ＫＬＫ３、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ９、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＳＭＢ、ＮＴＮ４、ＯＤＺ１、ＰＡＰ、ＰＬＡＵ、ＰＲＬ、ＰＳＡＰ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＳＨＢＧ、ＴＧＦＡ、ＴＩＭＰ３、ＣＤ４４、ＣＤＨ１、ＣＤＨ１０、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２０、ＣＤＨ７、ＣＤＨ９、ＣＤＨ１、ＣＤＨ１０、ＣＤＨ１３、ＣＤＨ１８、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２０、ＣＤＨ７、ＣＤＨ８、ＣＤＨ９、ＲＯＢＯ２、ＣＤ４４、ＩＬＫ、ＩＴＧＡ１、ＡＰＣ、ＣＤ１６４、ＣＯＬ６Ａ１、ＭＴＳＳ１、ＰＡＰ、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＡＧＲ２、ＡＩＧ１、ＡＫＡＰ１、ＡＫＡＰ２、ＣＡＮＴ１、ＣＡＶ１、ＣＤＨ１２、ＣＬＤＮ３、ＣＬＮ３、ＣＹＢ５、ＣＹＣ１、ＤＡＢ２ＩＰ、ＤＥＳ、ＤＮＣＬ１、ＥＬＡＣ２、ＥＮＯ２、ＥＮＯ３、ＦＡＳＮ、ＦＬＪ１２５８４、ＦＬＪ２５５３０、ＧＡＧＥＢ１、ＧＡＧＥＣ１、ＧＧＴ１、ＧＳＴＰ１、ＨＩＰ１、ＨＵＭＣＹＴ２Ａ、ＩＬ２９、Ｋ６ＨＦ、ＫＡＩ１、ＫＲＴ２Ａ、ＭＩＢ１、ＰＡＲＴ１、ＰＡＴＥ、ＰＣＡ３、ＰＩＡＳ２、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＰＩＤ、ＰＲ１、ＰＳＣＡ、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ２、ＴＰＭ１、ＴＰＭ２、ＴＲＰＣ６、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＰＥＰ、ＥＣＧＦ１、ＥＲＥＧ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＩＧＦ、ＦＬＴ１、ＪＡＧ１、ＫＤＲ、ＬＡＭＡ５、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＰＧＦ、ＰＬＸＤＣ１、ＳＴＡＢ１、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＣ、ＡＮＧＰＴＬ３、ＢＡＩ１、ＣＯＬ４Ａ３、ＩＬ８、ＬＡＭＡ５、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＳＴＡＢ１、ＡＮＧＰＴＬ４、ＰＥＣＡＭ１、ＰＦ４、ＰＲＯＫ２、ＳＥＲＰＩＮＦ１、ＴＮＦＡＩＰ２、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ９、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ６、ＭＤＫ、ＥＤＧ１、ＥＦＮＡ１、ＥＦＮＡ３、ＥＦＮＢ２、ＥＧＦ、ＥＰＨＢ４、ＦＧＦＲ３、ＨＧＦ、ＩＧＦ１、ＩＴＧＢ３、ＰＤＧＦＡ、ＴＥＫ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢＲ１、ＣＣＬ２、ＣＤＨ５、ＣＯＬ１８Ａ１、ＥＤＧ１、ＥＮＧ、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＢ３、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＢＡＤ、ＢＡＧ１、ＢＣＬ２、ＣＣＮＡ１、ＣＣＮＡ２、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＣＣＮＥ２、ＣＤＨ１（Ｅ−カドヘリン）、ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７Ｋｉｐ１）、ＣＤＫＮ２Ａ（ｐ１６ＩＮＫ４ａ）、ＣＯＬ６Ａ１、ＣＴＮＮＢ１（ｂ−カテニン）、ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ−２）、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、Ｆ３（ＴＦ）、ＦＯＳＬ１（ＦＲＡ−１）、ＧＡＴＡ３、ＧＳＮ（ゲルゾリン）、ＩＧＦＢＰ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ（糖タンパク質１３０）、ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）、ＪＵＮ、ＫＬＫ５、ＫＲＴ１９、ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ−Ｊｕｎ）、ＭＫＩ６７（Ｋｉ−６７）、ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）、ＰＧＲ、ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）、ＰＴＥＮ、ＳＥＲＰＩＮＢ５（マスピン）、ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ−１）、ＴＧＦＡ、ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン−１）、ＴＩＥ（Ｔｉｅ−１）、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼ Ｉｉａ）、ＴＰ５３、ＡＺＧＰ１（亜鉛−ａ−糖タンパク質）、ＢＰＡＧ１（プレクチン）、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）、ＣＬＤＮ７（クローディン−７）、ＣＬＵ（クラスタリン）、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ−２）、ＦＧＦ１、ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）、ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）、ＧＮＡＳ１、ＩＤ２、ＩＴＧＡ６（ａ６ インテグリン）、ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）、ＫＬＦ５（ＧＣ Ｂｏｘ ＢＰ）、ＫＲＴ１９（ケラチン１９）、ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的ＩＩ型ケラチン）、ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ、ＭＴ３（メタロチオネクチン−ＩＩＩ）、ＭＵＣ１（ムチン）、ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ−２）、ＲＡＣ２（ｐ２１Ｒａｃ２）、Ｓ１００Ａ２、ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）、ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）、ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）、ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒ１）、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＴＨＢＳ４およびＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）、ＲＯＮ、ｃ−Ｍｅｔ、ＣＤ６４、ＤＬＬ４、ＰＬＧＦ、ＣＴＬＡ４、ホスファチジルセリン、ＲＯＢＯ４、ＣＤ８０、ＣＤ２２、ＣＤ４０、ＣＤ２３、ＣＤ２８、ＣＤ５５、ＣＤ３８、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ３０、ＣＤ１３８、ＣＤ５６、ＣＤ３３、ＣＤ２、ＣＤ１３７、ＤＲ４、ＤＲ５、ＲＡＮＫＬ、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ１、ＭＴＳＰ１、ＭＳＰ、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＡ１、ＥＰＨＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＰＧＥ２、ＮＫＧ２Ｄ、ＬＰＡ、ＳＩＰ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＭＡＰＧ、ＦＬＴ３、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＲＯＲ１、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＳＣＤ１およびＣＤ５９とも結合できる。

【0317】

Ｄ．医薬組成物
本発明はまた、本発明の抗体（本明細書に記載されたＤＶＤ−Ｉｇを含む）またはその抗原−結合部分と、医薬上許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。本発明の抗体を含む医薬組成物は、それだけには限らないが、障害の診断、検出またはモニタリングにおいて；障害またはその１つもしくは複数の症状の予防、治療、管理または寛解において、および／または研究において使用される。特定の実施形態では、組成物は、本発明の１種または複数の抗体を含む。別の実施形態では、ＩＬ−１β活性が有害である障害を治療するための医薬組成物は、本発明の１種または複数の抗体および本発明の抗体以外の１種または複数の予防薬または治療薬を含む。一実施形態では、障害またはその１種もしくは複数の症状の予防、治療、管理または寛解のために有用であるとわかっている、またはそれにおいて使用されていた、または現在使用されている予防薬または治療薬。これらの実施形態に一致して、組成物は、担体、希釈液または賦形剤をさらに含み得る。

【0318】

本発明の抗体または抗体部分は、被験体に投与するのに適した医薬組成物中に組み込まれ得る。通常、医薬組成物は、本発明の抗体または抗体部分および薬学的に許容される担体を含む。本明細書において、「薬学的に許容される担体」としては、生理学的に適合される、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌薬および抗真菌薬、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。薬学的に許容される担体の例として、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどならびにそれらの組合せのうち１種または複数が挙げられる。多くの場合、組成物中に、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコールまたは塩化ナトリウムを含むことが好ましい。薬学的に許容される担体は、抗体または抗体部分の有効期間または有効性を増強する、湿潤剤または乳化剤、保存料またはバッファーなどの微量の補助物質をさらに含み得る。

【0319】

種々の送達系が公知であり、本発明の１種もしくは複数の抗体または本発明の１種もしくは複数の抗体の組合せおよび障害または１種もしくは複数のその症状を予防、管理、治療または寛解するのに有用な予防薬または治療薬、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルにおけるカプセル封入、抗体または抗体断片を発現できる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシス（例えば、ＷｕおよびＷｕ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６２：４４２９−４４３２頁（１９８７年））、レトロウイルスまたはその他のベクターの一部としての核酸の構築物を投与するために使用され得る。本発明の予防薬または治療薬を投与する方法として、それだけには限らないが、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内の、腹腔内、静脈内および皮下）、硬膜外投与、腫瘍内投与および粘膜投与（例えば、鼻腔内および経口経路）が挙げられる。さらに、肺の投与は、例えば、吸入器または噴霧器およびエアロゾル化剤を有する製剤の使用によって使用され得る。例えば、参照によりその全文が本明細書に各々、組み込まれる、米国特許第６，０１９，９６８号；同５，９８５，３２０号；同５，９８５，３０９号；同５，９３４，２７２号；同５，８７４，０６４号；同５，８５５，９１３号および同５，２９０，５４０号；およびＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１９２４４、ＷＯ９７／３２５７２、ＷＯ９７／４４０１３、ＷＯ９８／３１３４６およびＷＯ９９／６６９０３参照のこと。一実施形態では、本発明の抗体または抗体部分、併用療法または本発明の組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ ＡＩＲ（登録商標）肺薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ、ＵＳ）を使用して投与される。特定の実施形態では、本発明の予防薬または治療薬は、筋肉内に、静脈内に、腫瘍内に、経口によって、鼻腔内に、肺にまたは皮下に投与される。予防薬または治療薬は、任意の従来経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または皮膚粘膜内層を通る吸収によって（例えば、経口粘膜、直腸および腸管粘膜など）投与され得、またその他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与され得る。投与は、全身であっても局所であってもよい。

【0320】

一実施形態では、腫瘍細胞をターゲッティングするために、インビトロでの抗体がカップリングされたカーボンナノチューブ（ＣＮＴ）の、腫瘍細胞との特異的結合と、それに続く、近赤外（ＮＩＲ）光を用いる、その高度に特異的な切断が使用され得る。例えば、安定な、生体適合性の、非細胞傷害性ＣＮＴ分散物を調製するためにビオチン化極性脂質が使用され、それは、次いで、１種または複数の腫瘍抗原（例えば、ＣＤ２２）に対する、１種または２種の異なるニュートラライトアビジン誘導体化ＤＶＤ−Ｉｇと結合され得る（Ｃｈａｋｒａｖａｒｔｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０５：８６９７−８７０２頁（２００８年））。

【0321】

特定の実施形態では、本発明の予防薬または治療薬を、治療を必要とする領域に局所的に投与することが望ましいものであり得；これは、例えば、制限するものではないが、局所注入として、注射によって、またはインプラントによって達成され得、前記インプラントは、サイラスティックメンブラン、ポリマー、繊維性マトリックス（例えば、Ｔｉｓｓｕｅｌ（登録商標））またはコラーゲンマトリックスなどのメンブランおよびマトリックスを含めた多孔性または非多孔性材料である。一実施形態では、有効量の本発明の１種または複数の抗体アンタゴニストが、障害またはその症状を予防、治療、管理および／または寛解させるために被験体に罹患領域に局所的に投与される。別の実施形態では、有効量の本発明の１種または複数の抗体が、有効量の本発明の抗体以外の１種または複数の治療（例えば、１種または複数の予防薬または治療薬）と組み合わせて、障害またはその１種もしくは複数の症状を予防、治療、管理および／または寛解させるために被験体の罹患領域に局所的に投与される。

【0322】

別の実施形態では、予防薬または治療薬は、制御放出または持続放出系で送達され得る。一実施形態では、制御放出または持続放出を達成するためにポンプが使用され得る（Ｌａｎｇｅｒ、上記；Ｓｅｆｔｏｎ、Ｍ．Ｖ．、ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．、１４：２０１−２４０頁（１９８７年）；Ｂｕｃｈｗａｌｄら、Ｓｕｒｇｅｒｙ、８８：５０７−５１６頁（１９８０年）；Ｓａｕｄｅｋら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３２１：５７４−５７９頁（１９８９年）を参照のこと）。別の実施形態では、本発明の治療の制御放出または持続放出を達成するためにポリマー材料が使用され得る（例えば、第６章、Ｇｏｏｄｓｏｎ、Ｊ．Ｍ、Ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、第ＩＩ巻、Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｓ、（ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ編）、（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、１９８４年）中１１５−１３８頁；ＬａｎｇｅｒおよびＰｅｐｐａｓ、Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．、Ｃ２３（１）：６１−１２６頁（１９８３年）を参照のこと）；Ｌｅｖｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２８：１９０−１９２頁（１９８５年）；Ｄｕｒｉｎｇら、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．、２５：３５１−３５６頁（１９８９年）；Ｈｏｗａｒｄら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．、７１：１０５−１１２頁（１９８９年）；米国特許第５，６７９，３７７号；同５，９１６，５９７号；同５，９１２，０１５号；同５，９８９，４６３号；同５，１２８，３２６号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／１５１５４；および同ＷＯ９９／２０２５３も参照のこと。持続放出製剤において使用されるポリマーの例として、それだけには限らないが、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）およびポリオルトエステルが挙げられる。例示的な一実施形態では、持続放出製剤において使用されるポリマーは、不活性であり、漏出性の不純物を含まず、保存に対して安定であり、無菌であり、生分解性である。さらに別の実施形態は、制御放出または持続放出系は、予防標的または治療標的に近接して配置され得、したがって、全身用量の画分のみを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、Ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、上記、２巻、１１５−１３８頁（１９８４年）参照のこと）。

【0323】

制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒによる概説（Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９：１５２７−１５３３頁（１９９０年））において論じられている。本発明の１種または複数の治療薬を含む持続放出製剤を製造するために当業者に公知の任意の技術が使用され得る。例えば、各々参照によりその全文が本明細書に組み込まれる、米国特許第４，５２６，９３８号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／０５５４８、同ＷＯ９６／２０６９８；Ｎｉｎｇら、「Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ａ Ｈｕｍａｎ Ｃｏｌｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ Ｕｓｉｎｇ Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ Ｇｅｌ」、Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ Ｏｎｃｏｌ．、３９：１７９−１８９頁（１９９６年）；Ｓｏｎｇら、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｌｕｎｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｌｏｎｇ−Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ」ＰＤＡ Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．、５０：３７２−３７７頁（１９９６年）；Ｃｌｅｅｋら、「Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｆｏｒ ａ ｂＦＧＦ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ」、Ｐｒｏｃｅｅｄ．Ｉｎｔｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．、２４：８５３−８５４頁（１９９７年）およびＬａｍら、「Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ Ｌｏｃａｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｐｒｏｃｅｅｄ．Ｉｎｔｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．：２４：７５９−７６０頁（１９９７年）参照のこと。

【0324】

特定の実施形態では、本発明の組成物が、予防薬または治療薬をコードする核酸である場合には、そのコードされる予防薬または治療薬の発現を促進するために、適当な核酸発現ベクターの一部として構築することおよび細胞内になるようにそれを投与することによって、例えば、レトロウイルスベクターを使用することによって（米国特許第４，９８０，２８６号参照のこと）、または直接注射によって、または微粒子銃を使用することによって（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ（登録商標）、ＤｕＰｏｎｔ）、または脂質もしくは細胞表面受容体もしくはトランスフェクト剤を用いてコーティングすることによって、または核に入ると知られているホメオボックス様ペプチドと関連して投与することによって（例えば、Ｊｏｌｉｏｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８８：１８６４−１８６８頁（１９９１年）参照のこと）、核酸はインビボで投与され得る。または、核酸は、相同組換えによる発現のために細胞内に導入され、宿主細胞ＤＮＡ内に組み込まれ得る。

【0325】

本発明の医薬組成物は、その意図される投与経路と適合するよう製剤される。投与経路の例として、それだけには限らないが、非経口（例えば、静脈内の）、皮内、皮下、経口、鼻腔内（例えば、吸入）、経皮（例えば、局所）、経粘膜および直腸投与が挙げられる。特定の実施形態では、組成物は、ヒトへの静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内または局所投与に適している医薬組成物として、常法に従って製剤される。通常、静脈内投与用の組成物は、滅菌等張性水性バッファー中の溶液である。必要に応じて、組成物はまた、可溶化剤および注射の部位での疼痛を和らげるためリグノカムン（ｌｉｇｎｏｃａｍｎｅ）などの局所麻酔薬も含み得る。

【0326】

本発明の組成物が、局所的に投与される場合には、組成物は、軟膏、クリーム、経皮パッチ、ローション、ゲル、シャンプー、スプレー、エアゾール、溶液、エマルジョンの形態または当業者に周知のその他の形態で製剤され得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ、第１９版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ（１９９５年）参照のこと。噴霧できない局所投与形には、局所適用に適合する担体または１種もしくは複数の賦形剤を含み、好ましくは、水より大きい動粘性係数を有する粘性から半固体または固体形態が、通常使用される。適した製剤として、制限するものではなく、溶液、懸濁液、エマルジョン、クリーム、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、散剤、リニメント剤、軟膏（ｓａｌｖｅｓ）などが挙げられ、これらは、必要に応じて、例えば、浸透圧などの種々の特性に影響を及ぼすために、滅菌され、または補助剤（例えば、保存料、安定化剤、湿潤剤、バッファーまたは塩）と混合される。その他の適した局所投与形として、好ましくは、固体または液体不活性担体と組み合わせた有効成分が、加圧された揮発性物質（例えば、ガス状噴射剤、例えば、ＦＲＥＯＮ（登録商標））との混合物中にまたはスクイーズボトル中にパッケージされている噴霧性エアゾール製剤が挙げられる。必要に応じて、保湿剤または保水剤も、医薬組成物および投与形に添加され得る。このようなさらなる成分の例は、当技術分野で周知である。

【0327】

本発明の方法が、組成物の鼻腔内投与を含む場合には、組成物は、エアゾール形態、スプレー、ミストまたは液滴の形態で製剤され得る。特に、本発明に従って使用するための予防薬または治療薬は、適した噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素またはその他の適したガス）を使用して、加圧パックまたは噴霧器からエアゾールスプレーの体裁という形態で送達され得ることが好都合である。加圧エアゾールの場合には、投与単位は、定量を送達するためのバルブを提供することによって決定され得る。化合物およびラクトースまたはデンプンなどの適した散剤基剤の散剤ミックスを含有する、吸入器（ｉｎｈａｌｅｒ）または吸入器（ｉｎｓｕｆｆｌａｔｏｒ）において使用するためのカプセル剤およびカートリッジ（例えば、ゼラチンからなる）が製剤され得る。

【0328】

本発明の方法が、経口投与を含む場合には、組成物は、錠剤、カプセル剤、カシェ剤、ジェルキャップ、溶液、懸濁液などの形態で経口的に製剤され得る。錠剤またはカプセル剤は、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；増量剤（例えば、ラクトース、微晶質セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはグリコール酸ナトリウムデンプン）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容される賦形剤を用い、従来の手段によって調製され得る。錠剤は、当技術分野で周知の方法によってコーティングされてもよい。経口投与のための液体製剤は、それだけには限らないが、溶液、シロップ剤または懸濁液の形態をとり得る、またはそれらは使用前に水もしくはその他の適した媒体で構成するための乾燥製剤として調製され得る。このような液体製剤は、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体、または硬化食用脂肪）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアラビアガム）；非水性媒体（例えば、アーモンドオイル、油性エステル、エチルアルコールまたは精留植物油）；および保存料（例えば、メチルまたはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸）などの薬学的に許容される添加剤を用い、従来の手段によって調製され得る。製剤はまた、必要に応じて、バッファー塩、矯味剤、着色剤および甘味剤も含有し得る。経口投与用製剤は、予防薬または治療薬（複数可）の徐放、制御放出または持続放出のために適宜製剤され得る。

【0329】

本発明の方法は、例えば、エアロゾル化剤を用いて製剤された組成物の吸入器または噴霧器の使用による肺の投与を含み得る。例えば、参照によりその全文が本明細書に組み込まれる、米国特許第６，０１９，９６８号；同５，９８５，３２０号；同５，９８５，３０９号；同５，９３４，２７２号；同５，８７４，０６４号；同５，８５５，９１３号；および同５，２９０，５４０号；およびＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１９２４４、ＷＯ９７／３２５７２、ＷＯ９７／４４０１３、ＷＯ９８／３１３４６およびＷＯ９９／６６９０３参照のこと。特定の実施形態では、本発明の抗体、併用療法および／または本発明の組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ ＡＩＲ（登録商標）肺薬剤送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を使用して投与される。

【0330】

本発明の方法は、注射による（例えば、ボーラス注射または連続注入による）非経口投与用に製剤された組成物の投与を含み得る。注射用製剤は、防腐剤を加えた単位投与形で（例えば、アンプル中で、または複数用量容器中で）提示され得る。組成物は、油性または水性媒体中の懸濁液、溶液またはエマルジョンなどの形態をとり得、懸濁剤、安定化剤および／または分散剤などの処方剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ ａｇｅｎｔｓ）を含有し得る。または、有効成分は、使用前に適した媒体（例えば、滅菌発熱物質不含水）を用いて構成するための散剤形態であり得る。

【0331】

本発明の方法は、デポー製剤として製剤された組成物の投与をさらに含み得る。このような長時間作用型製剤は、移植（例えば、皮下に、または筋肉内に）によって、または筋肉注射によって投与され得る。したがって、例えば、組成物は、適したポリマー物質または疎水性物質を用いて（例えば、許容されるオイル中のエマルジョンとして）またはイオン交換樹脂を用いて、または難溶性誘導体として（例えば、難溶性塩として）製剤され得る。

【0332】

本発明の方法は、中性のまたは塩の形態として製剤された組成物の投与を包含する。薬学的に許容される塩として、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などから誘導されるものなどの陰イオンを用いて形成されるもの、ならびにナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなどの陽イオンを用いて形成されるものが挙げられる。

【0333】

一般に、組成物の成分は、別個に、または単位投与形中に一緒に混合されて、例えば、活性薬剤の量を示すアンプルまたはサシェなどの密閉された容器中の無水凍結乾燥散剤または無水濃縮物として供給される。投与様式が注入である場合には、組成物は、滅菌医薬等級水または生理食塩水を含有する注入ビンを用いて分配され得る。投与様式が注射によってである場合には、滅菌注射水または生理食塩水のアンプルは、成分が投与に先立って混合され得るように提供され得る。

【0334】

特に、本発明はまた、本発明の予防薬または治療薬または医薬組成物のうち１種または複数が、薬剤の量を示すアンプルまたはサシェなどの密閉された容器中にパッケージングされることを提供する。一実施形態では、本発明の予防薬または治療薬または医薬組成物のうち１種または複数が、密閉された容器中の無水滅菌凍結乾燥散剤または無水濃縮物として供給され、（例えば、水または生理食塩水を用いて）被験体に投与するための適当な濃度に再構成され得る。好ましくは、本発明の予防薬または治療薬または医薬組成物のうち１種または複数は、少なくとも５ｍｇ、より好ましくは、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇまたは少なくとも１００ｍｇの単位投与量で密閉された容器中の無水滅菌凍結乾燥散剤として供給される。本発明の凍結乾燥予防薬または治療薬または医薬組成物は、その元の容器中で、２℃から８℃の間で保存されなくてはならず、本発明の予防薬または治療薬または医薬組成物は、再構成された後、１週間以内に、好ましくは、５日以内に、７２時間以内に、４８時間以内に、２４時間以内に、１２時間以内に、６時間以内に、５時間以内に、３時間以内にまたは１時間以内に投与されなくてはならない。代替の実施形態では、本発明の予防薬または治療薬または医薬組成物のうち１種または複数が、薬剤の量および濃度を示す密閉された容器中の液体形態で供給される。投与される組成物の液体形態は、密閉された容器中で、少なくとも０．２５ｍｇ／ｍｌ供給されることが好ましく、より好ましくは、少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２．５ｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７５ｍｇ／ｍｌまたは少なくとも１００ｍｇ／ｍｌである。液体形態は、その元の容器中で、２℃から８℃の間で保存されなくてはならない。

【0335】

本発明の抗体および抗体部分は、非経口投与に適した医薬組成物中に組み込まれ得る。好ましくは、抗体または抗体部分は、０．１−２５０ｍｇ／ｍｌの抗体を含有する注射用溶液として調製される。注射用溶液は、フリントまたはアンバーバイアル、アンプルまたは薬剤充填済みシリンジ中の液体または凍結乾燥投与形のいずれかからなり得る。バッファーは、ｐＨ５．０から７．０（最適には、ｐＨ６．０）のＬ−ヒスチジン（１−５０ｍＭ）、最適には、５−１０ｍＭであり得る。その他の適したバッファーとして、それだけには限らないが、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムが挙げられる。溶液の毒性を改変するために、塩化ナトリウムが、０−３００ｍＭ（最適には、液体投与形には１５０ｍＭ）の濃度で使用され得る。凍結乾燥投与形には、凍結保護物質、主に０−１０％スクロース（最適には、０．５−１．０％）が含まれ得る。その他の適した凍結保護物質として、トレハロースおよびラクトースが挙げられる。凍結乾燥投与形には、充填剤、主に、１−１０％マンニトール（最適には、２−４％）も含まれ得る。液体および凍結乾燥投与形の両方において、安定化剤、主に、１−５０ｍＭ Ｌ−メチオニン（最適には、５−１０ｍＭ）も使用され得る。その他の適した充填剤として、グリシン、アルギニンが挙げられ、０−０．０５％ポリソルベート−８０（最適には、０．００５−０．０１％）として含まれ得る。さらなる界面活性剤として、それだけには限らないが、ポリソルベート２０およびＢＲＩＪ界面活性剤が挙げられる。非経口投与用の注射用溶液として調製された本発明の抗体または抗体部分を含む医薬組成物は、アジュバントとして有用である薬剤、例えば、吸収を増大させるよう使用されるものまたは治療用タンパク質（例えば、抗体）の分散物をさらに含み得る。特に有用なアジュバントとして、ヒアルロニダーゼ（Ｈｙｌｅｎｅｘ（登録商標）組換えヒトヒアルロニダーゼなど）がある。注射用溶液におけるヒアルロニダーゼの添加は、非経口投与、特に、皮下投与後のヒトバイオアベイラビリティを改善する。また、少ない疼痛および不快感しか伴わない、より大きな注射部位容積（すなわち、１ｍｌ超）および注射部位反応の最小の発生率を可能にする（ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００４／０７８１４０および米国特許出願第２００６／１０４９６８号を参照のこと）。

【0336】

本発明の組成物は、種々の形態であり得る。これらとして、例えば、液体溶液（例えば、注射用溶液および注入用溶液）、分散物または懸濁液、錠剤、丸剤、散剤、リポソームおよび坐剤などの液体、半固体および固体投与形が挙げられる。好ましい形態は、意図される投与様式および治療適用に応じて変わる。通常好ましい組成物は、その他の抗体を用いるヒトの受動免疫処置に使用されるものと類似の組成物などの注射用溶液または注入用溶液の形態である。好ましい投与様式は、非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。例示的な一実施形態では、抗体は、静脈内注入または注射によって投与される。別の好ましい実施形態では、抗体は、筋肉内注射または皮下注射によって投与される。

【0337】

治療用組成物は、通常、無菌で、製造および保存の条件下で安定でなくてはならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散物、リポソームまたは高い薬物濃度に適したその他の秩序構造として製剤され得る。滅菌注射用溶液は、適当な溶媒中の必要な量で活性化合物（すなわち、抗体または抗体部分）を、必要に応じて上記で列挙された成分のうち１種またはそれらの組合せとともに組み込むこと、続いて、濾過滅菌することによって調製され得る。一般に、分散物は、活性化合物を、基本分散媒および上記で列挙されたもののうち必要なその他の成分を含有する滅菌媒体に組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌凍結乾燥散剤の場合には、好ましい調製方法は、真空乾燥ならびに有効成分および先に滅菌濾過したその溶液に由来する任意のさらなる所望の成分の散剤が得られる噴霧乾燥である。溶液の適切な流動度は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散物の場合には必要な粒径を維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持され得る。注射用組成物の長期吸収は、組成物中に、吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを含めることによってもたらされ得る。

【0338】

多くの治療適用にとって、好ましい投与経路／様式は、皮下注射、静脈内注射または注入であるが、本発明の結合タンパク質は、当技術分野で公知の種々の方法によって投与され得る。投与の経路および／または様式は、所望の結果に応じて変わるということは、当業者ならば理解されよう。特定の実施形態では、活性化合物は、化合物を迅速放出から保護する担体を用い、例えば、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化送達系を含めた制御放出製剤として調製され得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーは使用され得る。このような製剤を調製するための多数の方法が、特許権が取られているか、当業者には一般的に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、（Ｊ．Ｒ． Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編）（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９７８年）参照のこと。

【0339】

特定の実施形態では、本発明の抗体または抗体部分は、例えば、不活性希釈液または同化食用担体とともに経口投与され得る。化合物（および必要に応じて、その他の成分）はまた、ハードまたはソフトシェルゼラチンカプセル剤中に封入される、錠剤に打錠される、または被験体の食事に直接組み込まれ得る。経口治療的投与には、化合物は、賦形剤とともに組み込まれ、摂取可能な錠剤、頬側錠剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、ウェーハなどの形態で使用され得る。本発明の化合物を、非経口投与以外によって投与するには、化合物をその不活化を防ぐ物質とコーティングするまたは化合物をその不活化を防ぐ物質と同時投与する必要があり得る。

【0340】

補足の活性化合物もまた、組成物中に組み込まれ得る。特定の実施形態では、本発明の抗体または抗体部分は、ＩＬ−１β活性が有害である障害を治療するために有用である１種または複数のさらなる治療薬と同時製剤および／または同時投与される。例えば、本発明の抗ヒトＩＬ−１β抗体または抗体部分は、その他の標的と結合する１種または複数のさらなる抗体（例えば、その他のサイトカインと結合する抗体または細胞表面分子と結合する抗体）と同時製剤および／または同時投与され得る。さらに、本発明の１種または複数の抗体は、前述の治療薬のうち２種以上と組み合わせて使用され得る。このような併用療法は、投与される治療薬の低い投与量を、したがって、種々の単剤療法と関連している潜在的な毒性または複雑性を避けながら利用することが有利であり得る。

【0341】

特定の実施形態では、ＩＬ−１βへの抗体またはその断片は、当技術分野で公知の半減期延長媒体と連結される。このような媒体として、それだけには限らないが、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコールおよびデキストランが挙げられる。このような媒体は、例えば、いかなる目的に対しても参照により本明細書に組み込む（現在は米国特許第６，６６０，８４３号）米国公開第０９／４２８０８２号に記載されている。

【0342】

特定の実施形態では、本発明の抗体または本発明の別の予防薬または治療薬をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列が、遺伝子療法によって、障害またはその１種もしくは複数の症状を治療、予防、管理または寛解させるために投与される。遺伝子療法とは、発現されたまたは発現可能な核酸を被験体に投与することによって実施される治療を指す。本発明のこの実施形態では、核酸はそのコードされた抗体または予防効果もしくは治療効果を媒介する本発明の予防薬もしくは治療薬を生成する。

【0343】

当技術分野で入手可能な遺伝子療法のための方法のいずれかも、本発明に従って使用され得る。遺伝子療法の方法の一般的な概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍ．、１２：４８８−５０５頁（１９９３年）；Ｗｕら、「Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ、３：８７−９５頁（１９９１年）；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ、Ｐ．、Ａｎｎ． Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．、３２：５７３−５９６頁（１９９３年）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ、Ｒ．Ｃ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６０：９２６−９３２頁（１９９３年）；およびＭｏｒｇａｎ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ、「Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、６２：１９１−２１７頁（１９９３年）；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ、Ｃ．、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１１（５）：１５５頁（１９９３年）を参照のこと。使用され得る組換えＤＮＡ技術の当技術分野でよく知られている方法は、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９３年）；およびＫｒｉｅｇｌｅｒ、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９０年）に記載されている。遺伝子療法の種々の方法の詳細な説明は、参照により本明細書に組み込む、米国公開第２００５００４２６６４ Ａ１号に開示されている。

【0344】

ＩＬ−１ファミリーメンバー（ＩＬ−１βおよびＩＬ−１α）は、免疫および炎症要素が絡む種々の障害と関連する病態において重要な役割を果たしている。本明細書に記載されたＩＬ−１結合タンパク質は、このような障害を治療するために個体に投与され得る。一実施形態では、被験体に、本明細書に記載されたＩＬ−１結合タンパク質を投与することを含む本発明の方法によって治療され得る障害として、それだけには限らないが、糖尿病；ブドウ膜炎；神経因性疼痛；骨関節炎性疼痛；炎症性疼痛；関節リウマチ；変形性関節症；若年性慢性関節炎；化膿性関節炎；ライム関節炎；乾癬性関節炎；反応性関節炎；脊椎関節症；全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）；クローン病；潰瘍性大腸炎；炎症性腸疾患；自己免疫性糖尿病；インスリン依存性糖尿病；甲状腺炎；喘息；アレルギー性疾患；乾癬；皮膚炎；強皮症；移植片対宿主病；臓器移植拒絶；臓器移植と関連する急性免疫疾患；臓器移植と関連する慢性免疫疾患；サルコイドーシス；アテローム性動脈硬化症；播種性血管内凝固（ＤＩＣ）；川崎病；グレーブス病；ネフローゼ症候群；慢性疲労症候群；ウェジナー肉芽腫症；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；腎臓の顕微鏡的血管炎；慢性活動性肝炎；自己免疫性ブドウ膜炎；敗血性ショック；毒素性ショック症候群；敗血症症候群；悪液質；感染性疾患；寄生虫症；急性横断性脊髄炎；ハンチントン舞踏病；パーキンソン病；アルツハイマー病；卒中；原発性胆汁性肝硬変；溶血性貧血；悪性腫瘍；心不全；心筋梗塞；アジソン病；弧発性多腺性欠乏症Ｉ型；多腺性欠乏症ＩＩ型（シュミット症候群）；急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）；脱毛症；円形脱毛症；血清反応陰性関節症；関節症；ライター病；乾癬性関節症；潰瘍性大腸炎性関節症；腸炎性滑膜炎；クラミジア；エルシニアおよびサルモネラ菌属関連関節症；脊椎関節症；アテローム性疾患／動脈硬化症；アトピー性アレルギー；自己免疫性水疱症；尋常性天疱瘡；落葉状天疱瘡；類天疱瘡；リニアＩｇＡ病；自己免疫性溶血性貧血；クームス陽性溶血性貧血；後天性悪性貧血；若年性悪性貧血；筋痛性脳炎／ロイヤルフリー病；慢性粘膜皮膚カンジダ症；巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ）；原発性硬化性肝炎；原因不明自己免疫性肝炎；後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）；後天性免疫不全関連病；Ｂ型肝炎；Ｃ型肝炎；一般的な多様な免疫不全（分類不能型低ガンマグロブリン血症）；拡張型心筋症；女性不妊症；卵巣機能不全；未熟卵巣機能不全；線維性肺疾患；原因不明線維性肺胞炎；炎症後間質性肺疾患；間質性肺炎；結合組織病関連間質性肺疾患；混合性結合組織病関連肺疾患；全身性硬化症関連間質性肺疾患；関節リウマチ関連間質性肺疾患；全身性紅斑性狼瘡関連肺疾患；皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患；シェーグレン病関連肺疾患；強直性脊椎炎関肺疾患；血管炎性びまん性肺疾患；ヘモジデリン沈着症関連肺疾患；薬物誘発性間質性肺疾患；繊維症；放射線線維症；閉塞性細気管支炎；慢性好酸球性肺炎；リンパ性浸潤性肺疾患；感染後間質性肺疾患；痛風性関節炎；自己免疫性肝炎；１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性またはルポイド肝炎）；２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）；自己免疫媒介性低血糖；黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性；副甲状腺機能低下症；変形性関節症；原発性硬化性胆管炎；１型乾癬；２型乾癬；特発性白血球減少症；自己免疫性好中球減少症；腎疾患ＮＯＳ；糸球体腎炎（ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｄｅｓ）；腎臓の顕微鏡的血管炎；ライム病；円板状エリテマトーデス；特発性男性不妊症；一酸化窒素関連男性不妊症；精子自己免疫性；多発性硬化症（原発進行性の、続発進行性の、再発寛解型を含めたすべてのサブタイプ）；交感性眼炎；結合組織病に続発する肺高血圧症；グッドパスチャー症候群；結節性多発性動脈炎の肺の徴候；急性リウマチ熱；リウマチ性脊椎炎；スチル病；全身性硬化症；シェーグレン症候群；高安病／動脈炎；自己免疫性血小板減少症（ＡＩＴＰ）；特発性血小板減少症；自己免疫性甲状腺疾患；甲状腺機能亢進症；甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）；萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症；原発性粘液水腫；水晶体起因性ブドウ膜炎；原発性血管脈管炎；白斑；急性肝疾患；慢性肝疾患；アルコール性硬変；アルコール誘発性肝臓傷害；胆汁うっ滞；特異体質肝臓疾患；薬物誘発性肝炎；非アルコール性脂肪性肝炎；アレルギー；Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染；精神病（例えば、鬱病および統合失調症）；Ｔｈ２型およびＴｈ１型媒介性疾患；急性および慢性疼痛（種々の形態の疼痛）；癌（例えば、肺、乳房、胃、膀胱、結腸、膵臓、卵巣、前立腺および直腸癌）；造血器悪性腫瘍；白血病；リンパ腫；無βリポタンパク質血症；先端チアノーゼ；急性および慢性寄生虫または感染過程；急性白血病；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；Ｔ細胞ＡＬＬ；ＦＡＢ ＡＬＬ；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；急性または慢性細菌感染；急性膵炎；急性腎不全；腺癌；心房性異所性拍動；ＡＩＤＳ痴呆合併症；アルコール誘発性肝炎；アレルギー性結膜炎；アレルギー性接触皮膚炎；アレルギー性鼻炎；同種移植片拒絶；α１−アンチトリプシン欠乏症；筋萎縮性側索硬化症；貧血；狭心症；前角細胞変性；抗ＣＤ３治療；抗リン脂質症候群；抗受容体過敏症反応；大動脈および末梢動脈瘤；大動脈解離；動脈性高血圧症；動脈硬化症；動静脈の瘻孔；運動失調；心房細動（持続性または発作性）；心房粗動；房室ブロック；Ｂ細胞リンパ腫；骨移植片拒絶；骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶；脚ブロック；バーキットリンパ腫；火傷；心不整脈；心機能不全症候群；心臓腫瘍；心筋症；心肺バイパス炎症反応；軟骨移植拒絶；小脳皮質変性；小脳障害；無秩序または多源性心房性頻脈；化学療法関連障害；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；慢性アルコール依存症；慢性感染性炎症性病態；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；慢性サリチル酸中毒；結腸直腸癌腫；鬱血性心不全；結膜炎；接触皮膚炎；胚性心；冠動脈疾患；クロイツフェルト・ヤコブ病；培養陰性敗血症；嚢胞性繊維症；サイトカイン治療関連障害；ボクサー痴呆；脱髄疾患；デング出血熱発熱；皮膚炎；皮膚科学的状態；糖尿病；糖尿病性動脈硬化性疾患；びまん性レビー小体病；拡張型うっ血性心筋症；大脳基底核の障害；中年におけるダウン症候群；ＣＮＳドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発される薬物誘発性運動障害；薬物感受性；湿疹；脳脊髄炎；心内膜炎；内分泌疾患；喉頭蓋炎；エプスタイン−バーウイルス感染；紅痛症；錐体外路および小脳の障害；家族性血球貪食性リンパ組織球症；胎児胸腺インプラント拒絶；フリードライヒ失調症；機能性末梢動脈性障害；真菌敗血症；ガス壊疽；胃潰瘍；糸球体腎炎；任意の器官または組織の移植片拒絶；グラム陰性敗血症；グラム陽性敗血症；細胞内生物による肉芽腫；ヘアリー細胞白血病；ハラーホルデン・スパッツ疾患；橋本甲状腺炎；枯草熱；心臓移植拒絶；ヘモクロマトーシス；血液透析；溶血性尿毒症症候群／血栓溶解性血小板減少性紫斑病；出血；Ａ型肝炎；ヒス束不整脈；ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害；ホジキン病；過剰運動性運動障害；過敏症反応；過敏性間質性肺炎；高血圧症；運動不足性運動障害；視床下部−下垂体−副腎皮質系評価；特発性アジソン病；特発性肺繊維症（ＩＰＦ）；抗体媒介性細胞毒性；無力症；乳児脊髄性筋萎縮症；大動脈の炎症；インフルエンザ；イオン化放射線曝露；虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎；虚血−再潅流傷害；虚血性卒中；若年性関節リウマチ；若年性脊髄性筋萎縮症；カポジ肉腫；腎臓移植拒絶；レジオネラ；リーシュマニア症；らい病；皮質脊髄系の病変；脂肪性浮腫；肝臓移植拒絶；リンパ浮腫；マラリア；悪性リンパ腫；悪性の組織球増殖症；悪性黒色腫；髄膜炎；髄膜炎菌血症；メタボリックシンドローム片頭痛；特発性片頭痛；ミトコンドリア性多系統障害；混合性結合組織病；モノクローナル高ガンマグロブリン血症；多発性骨髄腫；多系統変性症（Ｍｅｎｚｅｌ；デジェリーヌ・トーマス；シャイ・ドレーガー；およびマシャド・ジョセフ）；重症筋無力症；マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ；マイコバクテリア結核；骨髄異形成症候群；心筋梗塞；心筋虚血障害；鼻咽頭癌腫；新生児慢性肺疾患；腎炎；ネフローゼ；神経変性性疾患；神経発生性Ｉ筋萎縮症；好中球減少性発熱；非ホジキンリンパ腫；腹部大動脈およびその枝分かれの閉塞；閉塞性動脈性障害；ＯＫＴ３（登録商標）治療；精巣炎／精巣上体炎；精巣炎／精管復元術手順；臓器肥大；骨粗鬆症；膵臓移植拒絶；膵臓癌腫；悪性の腫瘍随伴症候群／高カルシウム血症；副甲状腺移植拒絶；骨盤炎症性疾患；多年生鼻炎；心膜疾患；末梢アテローム硬化性疾患；末梢血管障害；腹膜炎；悪性貧血；ニューモシスチス・カリニ肺炎；肺炎；ＰＯＥＭＳ症候群（多発ニューロパチー、臓器肥大、内分泌疾患、モノクローナル高ガンマグロブリン血症および皮膚変化症候群）；灌流後症候群；ポンプ後症候群；ＭＩ開心術後症候群；子癇前症；進行性の核上性麻痺；原発性肺高血圧症；放射線療法；レイノー現象；レイノー病；レフサム病；規則的狭ＱＲＳ頻脈；腎血管性高血圧症；再潅流傷害；拘束型心筋症；肉腫；老人性舞踏病；レビー小体型老年痴呆；血清反応陰性関節症；ショック；鎌形赤血球貧血；皮膚同種移植片拒絶；皮膚変化症候群；小腸移植拒絶；固形腫瘍；特定の不整脈；脊髄運動失調；脊髄小脳変性症；連鎖球菌性筋炎；小脳の構造的病変；亜急性硬化性全脳炎；失神；心血管系の梅毒；全身性アナフィラキシー；全身性炎症反応症候群；全身型若年性関節リウマチ；毛細血管拡張症；閉塞性血栓血管炎；血小板減少症；毒性；移植；外傷／出血；ＩＩＩ型過敏性反応；ＩＶ型過敏性；不安定狭心症；尿毒症；尿路性敗血症；じんま疹；弁膜症性心疾患；静脈瘤；脈管炎；静脈性疾患；静脈血栓症；心室細動；ウイルスおよび心筋感染；ウイルス性脳炎／無菌性髄膜炎；ウイルス関連血球貪食性症候群；ウェルニッケ・コルサコフ症候群；ウィルソン病；任意の臓器または組織の異種移植片拒絶；急性冠動脈症候群；急性特発性多発神経炎；急性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；急性虚血；成人スチル病；円形脱毛症；アナフィラキシー；抗リン脂質抗体症候群；再生不良性貧血；動脈硬化症；アトピー性湿疹；アトピー性皮膚炎；自己免疫性皮膚炎；連鎖球菌感染と関係する自己免疫性障害；自己免疫性腸疾患；自己免疫性難聴；自己免疫性リンパ球増殖性症候群（ＡＬＰＳ）；自己免疫性心筋炎；自己免疫性未熟卵巣機能不全；眼瞼炎；気管支拡張症；水疱性類天疱瘡；心血管疾患；破局的抗リン脂質症候群；セリアック病；頸椎症；慢性虚血；瘢痕性類天疱瘡；多発性硬化症のリスクを有する臨床分離症候群（ＣＩＳ）；結膜炎；小児型精神障害；涙嚢炎；皮膚筋炎；糖尿病性網膜症；椎間板ヘルニア；椎間板逸脱症；薬物誘発性免疫溶血性貧血；心内膜炎；子宮内膜症；眼内炎；上強膜炎；多形性紅斑；重症多形性紅斑；妊娠性類天疱瘡；ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）；枯草熱；ヒューズ症候群；特発性パーキンソン病；特発性間質性肺炎；ＩｇＥ−媒介性アレルギー；免疫溶血性貧血；封入体筋炎；感染性眼炎症性疾患；炎症性脱髄疾患；炎症性心疾患；炎症性腎臓病；虹彩炎；角膜炎；乾性角結膜炎；クスマウル病またはクスマウル−マイヤー病；ランドリー麻痺；ランゲルハンス細胞組織球増殖症；網状皮斑；黄斑変性症；顕微鏡的多発血管炎；ベテレフ病；運動ニューロン障害；粘膜類天疱瘡；多臓器不全；重症筋無力症；骨髄異形成症候群；心筋炎；神経根障害；神経障害；非Ａ非Ｂ肝炎；視神経炎；骨溶解症；少関節型ＪＲＡ；末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）；末梢血管疾患（ＰＶＤ）；末梢動脈；疾患（ＰＡＤ）；静脈炎；結節性多発性動脈炎（または結節性動脈周囲炎）；多発性軟骨炎；リウマチ性多発性筋痛；白毛；多関節型ＪＲＡ；ポリエンドクリン欠乏症候群；多発性筋炎；リウマチ性多発性筋痛（ＰＭＲ）；ポンプ後症候群；原発性パーキンソニズム；続発性パーキンソニズム；前立腺炎；赤芽球ろう；原発性副腎不全症；再発性視神経脊髄炎；再狭窄；リウマチ性心疾患；ＳＡＰＨＯ（滑
膜炎、ざ瘡、膿疱症、骨増殖症および骨炎）；続発性アミロイドーシス；ショック肺；強膜炎；坐骨神経痛；続発性副腎不全症；シリコーン関連結合組織病；スネドン−ウィルキンソン皮膚疾患；強直性脊椎炎；スチーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）；全身炎症反応症候群；側頭動脈炎；トキソプラズマ網膜炎；中毒性表皮壊死症；横断性脊髄炎；ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体１型（ＴＮＦＲ）関連周期性症候群）；黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性；１型アレルギー反応；ＩＩ型糖尿病；じんま疹；通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）；春季カタル；ウイルス性網膜炎；フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）；滲出型黄斑変性；創傷治癒；エルシニアおよびサルモネラ菌属関連関節症が挙げられる。

【0345】

本発明の結合タンパク質は、自己免疫疾患、特に、炎症、関節リウマチ（ＲＡ）、変形性関節症、乾癬、多発性硬化症（ＭＳ）およびその他の自己免疫疾患と関連するものを患うヒトを治療するために使用され得る。

【0346】

本発明の抗体または抗体部分はまた、自己免疫および炎症性疾患の治療において有用な、１種または複数のさらなる治療薬とともに投与され得る。

【0347】

一実施形態では、本発明の組成物および方法を用いて治療または診断され得る疾患として、それだけには限らないが、乳房、結腸、直腸、肺、中咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢および胆管、小腸、尿路（腎臓、膀胱および尿路上皮を含む）、女性生殖器（子宮頸部、子宮および卵巣ならびに絨毛癌および妊娠性絨毛性疾患を含む）、男性生殖器（前立腺、精嚢、精巣および生殖細胞腫瘍を含む）、内分泌線（甲状腺、副腎および脳下垂体を含む）および皮膚の癌腫ならびに血管腫、黒色腫、肉腫（骨および軟組織に由来するものならびにカポジ肉腫を含む）、脳、神経、眼部および髄膜の腫瘍（星状細胞腫、神経膠腫、膠芽腫、網膜芽細胞腫、神経腫、神経芽腫、シュワン腫および髄膜腫を含む）、白血病およびリンパ腫（ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫の両方）などの造血悪性腫瘍由来の固形腫瘍含めた原発性癌および転移性癌が挙げられる。

【0348】

別の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、癌を治療するために、または腫瘍からの転移の防止において使用される。このような治療は、抗体またはその抗原結合部分の、単独での、または別の治療薬もしくは治療、例えば、放射線療法および／または化学療法薬と組み合わせた投与を含み得る。

【0349】

本発明の抗体またはその抗原結合部分は、それだけには限らないが、抗悪性腫瘍薬、放射線療法、ＤＮＡアルキル化剤、シスプラチン、カルボプラチン、抗チューブリン剤、パクリタキセル、ドセタキセル、タキソール、ドキソルビシン、ゲムシタビン、ジェムザール、アントラサイクリン、アドリアマイシン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、イリノテカン、受容体チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ）、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、キナーゼ阻害剤およびｓｉＲＮＡなどの化学療法を含む薬剤と組み合わされ得る。

【0350】

本発明の結合タンパク質はまた、種々の疾患の治療において有用な１種または複数のさらなる治療薬とともに投与され得る。

【0351】

本発明の抗体またはその抗原結合部分は、このような疾患を治療するために単独で、または組み合わせて使用され得る。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、単独でまたはさらなる薬剤、例えば、治療薬と組み合わせて使用される場合があり、例えば、前記のさらなる薬剤は、その意図される目的のために当業者によって選択されるということは理解されなくてはならない。例えば、さらなる薬剤は、本発明の抗体によって治療されている疾患または状態を治療するのに有用であると技術分野で認識されている治療薬であり得る。さらなる薬剤はまた、治療用組成物に有益な性質を付与する薬剤、例えば、組成物の粘性に影響を及ぼす薬剤であり得る。

【0352】

本発明内に含まれる組合せは、その意図される目的にとって有用な組合せであるということは理解されなければならない。以下に示された薬剤は例示目的であって、制限であるとは意図されない。本発明の一部である組合せは、本発明の抗体および以下の一覧から選択される少なくとも１種のさらなる薬剤であり得る。組合せはまた、形成された組成物がその意図される機能を遂行し得るようなものであれば、２種以上のさらなる薬剤、例えば、２種または３種のさらなる薬剤を含み得る。

【0353】

好ましい組合せとして、イブプロフェンのような薬物を含む、ＮＳＡＩＤＳとも呼ばれる非ステロイド系抗炎症薬（複数可）がある。その他の好ましい組合せとして、プレドニゾロンを始めとする副腎皮質ステロイドがある；ステロイド使用の周知の副作用は、本発明の抗ＩＬ−１β抗体と組み合わせて患者を治療する場合には、必要なステロイド用量を漸減することによって低減されるか、さらには排除され得る。本発明の抗体または抗体部分が組み合わせられ得る、関節リウマチのための治療薬の限定されない例として、それだけには限らないが、以下が挙げられ得る：サイトカイン抑制性抗炎症薬（複数可）（ＣＳＡＩＤ）；その他のヒトサイトカインまたは増殖因子に対する抗体またはアンタゴニスト、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、インターフェロン、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦ。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、ＣＴＬＡなどの細胞表面分子またはＣＤ１５４（ｇｐ３９またはＣＤ４０Ｌ）を始めとするそのリガンドに対する抗体と組み合わせられ得る。

【0354】

治療薬の好ましい組合せは、自己免疫およびその後の炎症カスケードにおける異なる点で干渉し得る；好ましい例として、キメラ、ヒト化またはヒトＴＮＦ抗体のようなＴＮＦアンタゴニスト、Ｄ２Ｅ７、（ＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２９１３１）、ＣＡ２（レミケード（商標））、ＣＤＰ５７１および可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体、その誘導体（ｐ７５ＴＮＦＲ１ｇＧ（エンブレル（Ｅｎｂｒｅｌ）（商標）またはｐ５５ＴＮＦＲ１ｇＧ（レネルセプト）およびまたＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤が挙げられる。同様に、ＩＬ−１阻害剤（インターロイキン−１−変換酵素阻害剤、ＩＬ−１ＲＡなど）が同じ理由で有効であり得る。その他の好ましい組合せとして、インターロイキン１１が挙げられる。さらに別の好ましい組合せは、ＩＬ−１β機能と平行して、それに依存して、またはそれと呼応して作用し得る自己免疫応答のその他のキープレーヤーである。さらに別の好ましい組合せとして、非枯渇性抗ＣＤ４阻害剤がある。さらにその他の好ましい組合せとして、抗体、可溶性受容体または拮抗性リガンドを含めた、同時刺激経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）またはＣＤ８６（Ｂ７．２）のアンタゴニストが挙げられる。

【0355】

本発明の抗体またはその抗原結合部分はまた、メトトレキサート、６−ＭＰ、アザチオプリンスルファサラジン、メサラジン、オルサラジンクロロキニン／ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン（ｐｅｎｃｉｌｌａｍｉｎｅ）、金チオリンゴ酸（筋肉内および経口）、アザチオプリン、コルヒチン、コルチコステロイド（経口、吸入および局所注射）、β−２アドレナリン受容体アゴニスト（サルブタモール、テルブタリン、サルメテラール（ｓａｌｍｅｔｅｒａｌ））、キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）、クロモグリク酸、ネドクロミル、ケトチフェン、イプラトロピウムおよびオキシトロピウム、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓薬、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、ＴＮＦαまたはＩＬ−１（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）などの炎症性サイトカインによるシグナル伝達を干渉する薬剤、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、Ｔ−細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、キナーゼ阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびその誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体および誘導体ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（レネルセプト）、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）、セレコキシブ、葉酸、硫酸ヒドロキシクロロキン、ロフェコキシブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、ナプロキセン、バルデコキシブ、スルファサラジン、メチルプレドニゾロン、メロキシカム、酢酸メチルプレドニゾロン、金チオリンゴ酸ナトリウム、アスピリン、トリアムシノロンアセトニド、ナプシル酸プロポキシフェン／アパップ、葉酸、ナブメトン、ジクロフェナク、ピロキシカム、エトドラック、ジクロフェナクナトリウム、オキサプロジン、オキシコドンｈｃｌ、酒石酸水素ヒドロコドン／アパップ、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フェンタニル、アナキンラ、ヒト組換え型、トラマドールｈｃｌ、サルサレート、スリンダック、シアノコバラミン／ｆａ／ピリドキシン、アセトアミノフェン、アレンドロネートナトリウム、プレドニゾロン、硫酸モルヒネ、塩酸リドカイン、インドメタシン、グルコサミンｓｕｌｆ／コンドロイチン、アミトリプチリンＨＣｌ、スルファジアジン、オキシコドンＨＣｌ／アセトアミノフェン、オロパタジンｈｃｌ、ミソプロストール、ナプロキセンナトリウム、オメプラゾール、シクロホスファミド、リツキシマブ、ＩＬ−１ ＴＲＡＰ、ＭＲＡ、ＣＴＬＡ４−ＩＧ、ＩＬ−１８ ＢＰ、抗ＩＬ−１８、抗ＩＬ１５、ＢＩＲＢ−７９６、ＳＣＩＯ−４６９、ＶＸ−７０２、ＡＭＧ−５４８、ＶＸ−７４０、ロフルミラスト、ＩＣ−４８５、ＣＤＣ−８０１およびメソプラムなどの薬剤と組み合わされ得る。好ましい組合せとして、メトトレキサートまたはレフルノミドおよび中程度または重篤な関節リウマチの場合には、シクロスポリンが挙げられる。

【0356】

関節リウマチ（ＲＡ）を治療するために結合タンパク質と組み合わせて使用され得る、限定されないさらなる薬剤として、それだけには限らないが、以下が挙げられる：非ステロイド系抗炎症薬（複数可）（ＮＳＡＩＤ）；サイトカイン抑制性抗炎症薬（複数可）（ＣＳＡＩＤ）；ＣＤＰ−５７１／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα抗体；Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｂａｙｅｒ）；ｃＡ２／インフリキシマブ（キメラ抗ＴＮＦα抗体；Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ／エタネルセプト（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質；Ｉｍｍｕｎｅｘ；例えば、Ｍｏｒｅｌａｎｄら（要約書第８１３号）、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、３７：Ｓ２９５（１９９４年）；Ｂａｕｍｇａｒｔｎｅｒら、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．、４４（３）：２３５Ａ（１９９６年３月）参照のこと；５５ｋｄＴＮＦ−ＩｇＧ（５５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質；Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ）；ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１／ＳＢ ２１０３９６（非枯渇性霊長類化抗ＣＤ４抗体；ＩＤＥＣ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ；例えば、Ｋａｉｎｅら（要約書第１９５号）、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、３８：Ｓ１８５（１９９５年）参照のこと）；ＤＡＢ ４８６−ＩＬ−２および／またはＤＡＢ ３８９−ＩＬ−２（ＩＬ−２融合タンパク質；Ｓｅｒａｇｅｎ；例えば、Ｓｅｗｅｌｌら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、３６（９）：１２２３−１２３３頁（１９９３年９月）参照のこと）；抗Ｔａｃ（ヒト化抗ＩＬ−２Ｒα；Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ／Ｒｏｃｈｅ）；ＩＬ−４（抗炎症性サイトカイン；ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１０（ＳＣＨ ５２０００；組換えＩＬ−１０、抗炎症性サイトカイン；ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−４；ＩＬ−１０および／またはＩＬ−４アゴニスト（例えば、アゴニスト抗体）；ＩＬ−１ＲＡ（ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；Ｓｙｎｅｒｇｅｎ／Ａｍｇｅｎ）；アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）／Ａｍｇｅｎ）；ＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦ（可溶性ＴＮＦ結合タンパク質；例えば、Ｅｖａｎｓら（要約書第１５４０号）、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．，３９（９）（付録）：Ｓ２８４（１９９６年））；Ｋａｐａｄｉａら、Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．−Ｈｅａｒｔ ａｎｄ Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、２６８：Ｈ５１７−Ｈ５２５（１９９５年）参照のこと）；ＲＰ７３４０１（ホスホジエステラーゼＩＶ型阻害薬；例えば、Ｃｈｉｋａｎｚａら（要約書第１５２７号）、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、３９（９）（付録）：Ｓ２８２（１９９６年）参照のこと）；ＭＫ−９６６（ＣＯＸ−２阻害薬；例えば、Ｅｒｉｃｈら（要約書第３２８号および同３２９号）、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、３９（９）（付録）：Ｓ８１（１９９６年）参照のこと）；イロプロスト（例えば、Ｓｃｈｏｌｚ，Ｐ．（要約書第３３６号）、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、３９（９）（付録）：Ｓ８２（１９９６年）参照のこと）；メトトレキサート；サリドマイド（例えば、Ｌｅｅら（要約書第１５２４号）、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、３９（９）（付録）：Ｓ２８２（１９９６年）参照のこと）およびサリドマイド関連薬（例えば、セルジェン（Ｃｅｌｇｅｎ））；レフルノミド（抗炎症性およびサイトカイン阻害薬；例えば、Ｆｉｎｎｅｇａｎら（要約書第６２７号）、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、３９（９）（付録）：Ｓ１３１（１９９６年））；Ｔｈｏｓｓら、Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ．、４５：１０３−１０７頁（１９９６年）参照のこと）；トラネキサム酸（プラスミノゲン活性化の阻害薬；例えば、Ｒｏｎｄａｙら（要約書第１５４１号）、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、３９（９）（付録）：Ｓ２８４（１９９６年）参照のこと）；Ｔ−６１４（サイトカイン阻害薬；例えば、Ｈａｒａら（要約書第１５２６号）、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、３９（９）（付録）：Ｓ２８２（１９９６年）参照のこと）；プロスタグランジンＥ１（例えば、Ｍｏｒｉｕｃｈｉら（要約書第１５２８号）、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、３９（９）（付録）：Ｓ２８２（１９９６年）参照のこと）；テニダップ（非ステロイド系抗炎症薬；例えば、Ｇｕｔｔａｄａｕｒｉａ，Ｍ．（要約書第１５１６号）、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、３９（９）（付録）：Ｓ２８０（１９９６年）参照のこと）；ナプロキセン（非ステロイド系抗炎症薬；例えば、Ｆｉｅｂｉｃｈら、Ｎｅｕｒｏ Ｒｅｐｏｒｔ、７：１２０９−１２１３頁（１９９６年）参照のこと）；メロキシカム（非ステロイド系抗炎症薬）；イブプロフェン（非ステロイド系抗炎症薬）；ピロキシカム（非ステロイド系抗炎症薬）；ジクロフェナク（非ステロイド系抗炎症薬）；インドメタシン（非ステロイド系抗炎症薬）；スルファサラジン（例えば、Ｆａｒｒら（要約書第１５１９号）、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、３９（９）（付録）：Ｓ２８１（１９９６年）参照のこと）；アザチオプリン（例えば、Ｈｉｃｋｅｙら（要約書第１５２１号）、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、３９（９）（付録）：Ｓ２８１（１９９６年）参照のこと）；ＩＣＥ阻害薬（酵素インターロイキン−１β変換酵素の阻害剤）；ｚａｐ−７０および／またはｌｃｋ阻害剤（チロシンキナーゼｚａｐ−７０またはｌｃｋの阻害剤）；ＶＥＧＦ阻害剤および／またはＶＥＧＦ−Ｒ阻害剤（血管内皮細胞増殖因子または血管内皮細胞増殖因子受容体の阻害剤；血管新生の阻害剤）；コルチコステロイド抗炎症薬（例えば、ＳＢ２０３５８０）；ＴＮＦ−変換酵素阻害剤；抗ＩＬ−１２抗体；抗ＩＬ−１８抗体；インターロイキン−１１（例えば、Ｋｅｉｔｈ Ｊｒ．ら（要約書第１６１３号）、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、３９（９）（付録）：Ｓ２９６（１９９６年）参照のこと）；インターロイキン−１３（例えば、Ｂｅｓｓｉｓら（要約書第１６８１号）、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、３９（９）（付録）：Ｓ３０８（１９９６年）参照のこと）；インターロイキン−１７阻害剤（例えば、Ｌｏｔｚら（要約書第５５９号）、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、３９（９）（付録）：Ｓ１２０（１９９６年）参照のこと）；金；ペニシラミン；クロロキン；クロラムブシル；ヒドロキシクロロキン；シクロスポリン；シクロホスファミド；全身リンパ節照射；抗胸腺細胞グロブリン；抗ＣＤ４抗体；ＣＤ５−毒素；経口投与ペプチドおよびコラーゲン；ロベンザリット二ナトリウム；サイトカイン調節剤（ＣＲＡ）ＨＰ２２８およびＨＰ４６６（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；ＩＣＡＭ−１アンチセンスホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ ２３０２；Ｉｓｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；可溶性補体レセプター１（ＴＰ１０；Ｔ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）；プレドニゾン；オルゴテイン；グリコサミノグリカンポリスルフェート；ミノサイクリン；抗ＩＬ２Ｒ抗体；海産脂質および植物脂質（魚類および植物種子脂肪酸；例えば、ＤｅＬｕｃａら、Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．、２１：７５９−７７７頁（１９９５年）参照のこと）；オーラノフィン；フェニールブタゾン；メクロフェナム酸；フルフェナム酸；静脈内免疫グロブリン；ジレウトン；アザリビン；ミコフェノール酸（ＲＳ−６１４４３）；タクロリムス（ＦＫ−５０６）；シロリムス（ラパマイシン）；アミプリロース（テラフェクチン）；クラドリビン（２−クロロデオキシアデノシン）；メトトレキサート；ｂｃｌ−２阻害剤（Ｂｒｕｎｃｋｏら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、５０（４）、６４１−６６２頁（２００７年）参照のこと）；抗ウイルスおよび免疫調節剤。

【0357】

一実施形態では、結合タンパク質またはその抗原−結合部分は、関節リウマチ（ＲＡ）の治療のために以下の薬剤のうち１種と組み合わせて投与される：ＫＤＲの小分子阻害剤、Ｔｉｅ−２の小分子阻害剤；メトトレキサート；プレドニゾン；セレコキシブ；葉酸；硫酸ヒドロキシクロロキン；ロフェコキシブ；エタネルセプト；インフリキシマブ；レフルノミド；ナプロキセン；バルデコキシブ；スルファサラジン；メチルプレドニゾロン；イブプロフェン；メロキシカム；酢酸メチルプレドニゾロン；金チオリンゴ酸ナトリウム；アスピリン；アザチオプリン；トリアムシノロンアセトニド；ナプシル酸プロポキシフェン／ａｐａｐ；葉酸；ナブメトン；ジクロフェナク；ピロキシカム；エトドラック；ジクロフェナクナトリウム；オキサプロジン；オキシコドンｈｃｌ；酒石酸水素ヒドロコドン／ａｐａｐ；ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール；フェンタニル；アナキンラ、ヒト組換え型；トラマドールｈｃｌ；サルサレート；スリンダック；シアノコバラミン／ｆａ／ピリドキシン；アセトアミノフェン；アレンドロネートナトリウム；プレドニゾロン；硫酸モルヒネ；塩酸リドカイン；インドメタシン；硫酸グルコサミン／コンドロイチン；シクロスポリン；アミトリプチリンｈｃｌ；スルファジアジン；オキシコドンｈｃｌ／アセトアミノフェン；オロパタジンｈｃｌ；ミソプロストール；ナプロキセンナトリウム；オメプラゾール；ミコフェノール酸モフェチル；シクロホスファミド；リツキシマブ；ＩＬ−１ ＴＲＡＰ；ＭＲＡ；ＣＴＬＡ４−ＩＧ；ＩＬ−１８ ＢＰ；ＩＬ−１２／２３；抗ＩＬ１８；抗ＩＬ１５；ＢＩＲＢ−７９６；ＳＣＩＯ−４６９；ＶＸ−７０２；ＡＭＧ−５４８；ＶＸ−７４０；ロフルミラスト；ＩＣ−４８５；ＣＤＣ−８０１；およびメソプラム。

【0358】

本発明の結合タンパク質が組み合わされ得る、炎症性腸疾患のための治療薬の限定されない例として以下が挙げられる：ブデノシド；上皮成長因子；コルチコステロイド；シクロスポリン、スルファサラジン；アミノサリチラート；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１βｍＡｂ；抗ＩＬ−６ｍＡｂ；増殖因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；その他のヒトサイトカインまたは増殖因子に対する抗体またはアンタゴニスト、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦ。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０などの細胞表面分子またはそのリガンドに対する抗体。本発明の抗体またはその抗原結合部分はまた、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどの副腎皮質ステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動性薬剤、ＴＮＦαまたはＩＬ−１（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）などの炎症誘発性サイトカインによってシグナル伝達を干渉する薬剤、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびその誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）および抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）およびｂｃｌ−２阻害剤などの薬剤と組み合わされ得る。

【0359】

結合タンパク質と組み合わされ得るクローン病の治療薬の例として、以下が挙げられる：ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体、アダリムマブ（ＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２９１３１；ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（エンブレル（登録商標））およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（レネルセプト（商標）））阻害剤およびＰＤＥ４阻害剤。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、副腎皮質ステロイド、例えば、ブデノシドおよびデキサメタゾンと組み合わされ得る。本発明の結合タンパク質またはその抗原結合部分はまた、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸およびオルサラジンなどの薬剤およびＩＬ−１などの炎症誘発性サイトカインの合成または作用を干渉する薬剤、例えば、ＩＬ−１変換酵素阻害剤およびＩＬ−１ｒａと組み合わされ得る。本発明の抗体またはその抗原結合部分はまた、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤６−メルカプトプリンとともに使用され得る。本発明の結合タンパク質またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１１と組み合わされ得る。本発明の結合タンパク質またはその抗原結合部分は、メサラミン、プレドニゾン、アザチオプリン、メルカプトプリン、インフリキシマブ、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ジフェノキシラート／硫酸アトロピン、塩酸ロペラミド、メトトレキサート、オメプラゾール、葉酸、シプロフロキサシン／デキストロース−水、酒石酸水素ヒドロコドン／アパップ、塩酸テトラサイクリン、フルオシノニド、メトロニダゾール、チメロサール／ホウ酸、コレスチラミン／スクロース、塩酸シプロフロキサシン、硫酸ヒヨスチアミン、塩酸メペリジン、塩酸ミダゾラム、オキシコドンｈｃｌ／アセトアミノフェン、塩酸プロメタジン、リン酸ナトリウム、スルファメトキサゾール／トリメトプリム、セレコキシブ、ポリカルボフィル、ナプシル酸プロポキシフェン、ヒドロコルチゾン、マルチビタミン、バルサラジド二ナトリウム、リン酸コデイン／アパップ、コレスベラムｈｃｌ、シアノコバラミン、葉酸、レボフロキサシン、メチルプレドニゾロン、ナタリズマブおよびインターフェロン−ガンマと組み合わされ得る。

【0360】

本発明の結合タンパク質が組み合わされ得る多発性硬化症（ＭＳ）のための治療薬の限定されない例として、以下が挙げられる：副腎皮質ステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；メトトレキサート；４−アミノピリジン；チザニジン；インターフェロン−β１ａ（ＡＶＯＮＥＸ；Ｂｉｏｇｅｎ）；インターフェロン−β１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）；インターフェロンα−ｎ３）（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｆｕｊｉｍｏｔｏ）、インターフェロン−α（Ａｌｆａ Ｗａｓｓｅｒｍａｎｎ／Ｊ＆Ｊ）、インターフェロンβ１Ａ−ＩＦ（Ｓｅｒｏｎｏ／Ｉｎｈａｌｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ペグインターフェロンα２ｂ（Ｅｎｚｏｎ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、共重合体１（Ｃｏｐ−１；ＣＯＰＡＸＯＮＥ；Ｔｅｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．）；高圧酸素；静脈内免疫グロブリン；クラブリビン（ｃｌａｂｒｉｂｉｎｅ）；その他のヒトサイトカインまたは増殖因子およびその受容体、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦに対する抗体またはアンタゴニスト。本発明の結合タンパク質は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０などの細胞表面分子およびそのリガンドに対する抗体と組み合わされ得る。本発明の結合タンパク質はまた、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤｓ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどの副腎皮質ステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、ＴＮＦαまたはＩＬ−１（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）などの炎症誘発性サイトカインによってシグナル伝達を干渉するアドレナリン作動性薬剤、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＡＣＥ阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびその誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）およびｂｃｌ−２阻害剤などの薬剤と組み合わされ得る。

【0361】

本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る、多発性硬化症のための治療薬の例として、インターフェロン−β、例えば、ＩＦＮβ１ａおよびＩＦＮβ１ｂ；コパキソン；副腎皮質ステロイド；カスパーゼ阻害剤、例えば、カスパーゼ−１の阻害剤；ＩＬ−１阻害剤；ＴＮＦ阻害剤；ならびにＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体が挙げられる。

【0362】

本発明の結合タンパク質はまた、アレムツズマブ、ドロナビノール、ユニメド（Ｕｎｉｍｅｄ）、ダクリツマブ、ミトキサントロン、塩酸キサリプロデン、ファムプリジン、酢酸グラチラマー、ナタリズマブ、シンンアビドール（ｓｉｎｎａｂｉｄｏｌ）、ａ−イムノカイン（ｉｍｍｕｎｏｋｉｎｅ）ＮＮＳＯ３、ＡＢＲ−２１５０６２、ＡｎｅｒｇｉＸ．ＭＳ、ケモカイン受容体アンタゴニスト、ＢＢＲ−２７７８、カラグアリン（ｃａｌａｇｕａｌｉｎｅ）、ＣＰＩ−１１８９、ＬＥＭ（リポソームカプセル化ミトキサントロン）、ＴＨＣ．ＣＢＤ（カンナビノイドアゴニスト）ＭＢＰ−８２９８、メソプラム（ＰＤＥ４阻害薬）、ＭＮＡ−７１５、抗ＩＬ−６受容体抗体、ニューロバックス（ｎｅｕｒｏｖａｘ）、ピルフェニドンアロトラップ（ａｌｌｏｔｒａｐ）１２５８（ＲＤＰ−１２５８）、ｓＴＮＦ−Ｒ１、タラムパネル（ｔａｌａｍｐａｎｅｌ）、テリフルノミド（ｔｅｒｉｆｌｕｎｏｍｉｄｅ）、ＴＧＦ−β２、チプリモチド（ｔｉｐｌｉｍｏｔｉｄｅ）、ＶＬＡ−４アンタゴニスト（例えば、ＴＲ−１４０３５、ＶＬＡ４ Ｕｌｔｒａｈａｌｅｒ、Ａｎｔｅｇｒａｎ−ＥＬＡＮ／Ｂｉｏｇｅｎ）、インターフェロンγアンタゴニスト、ＩＬ−４アゴニストなどの薬剤と組み合わされ得る。

【0363】

本発明の結合タンパク質が組み合わされ得る狭心症の治療薬の限定されない例として、以下が挙げられる：アスピリン、ニトログリセリン、一硝酸イソソルビド、コハク酸メトプロロール、アテノロール、酒石酸メトプロロール、ベシル酸アムロジピン、塩酸ジルチアゼム、二硝酸イソソルビド、重硫酸クロピドグレル、ニフェジピン、アトルバスタチンカルシウム、塩化カリウム、フロセミド、シンバスタチン、ベラパミルｈｃｌ、ジゴキシン、塩酸プロプラノロール、カルベジロール、リシノプリル、スピロノラクトン、ヒドロクロロチアジド、マレイン酸エナラプリル、ナドロール、ラミプリル、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、バルサルタン、塩酸ソタロール、フェノフィブラート、エゼチミブ、ブメタニド、ロサルタンカリウム、リシノプリル／ヒドロクロロチアジド、フェロジピン、カプトプリルおよびフマル酸ビソプロロール。

【0364】

本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る、強直性脊椎炎のための治療薬の限定されない例として、以下が挙げられる：イブプロフェン、ジクロフェナクおよびミソプロストール、ナプロキセン、メロキシカム、インドメタシン、ジクロフェナク、セレコキシブ、ロフェコキシブ、スルファサラジン、メトトレキサート、アザチオプリン、ミノサイクリン、プレドニゾン、エタネルセプト、インフリキシマブ。

【0365】

本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る、喘息のための治療薬の限定されない例として、以下が挙げられる：アルブテロール、サルメテロール／フルチカゾン、モンテルカストナトリウム、プロピオン酸フルチカゾン、ブデソニド、プレドニゾン、キシナホ酸サルメテロール、レバルブテロールｈｃｌ、硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、リン酸プレドニゾロンナトリウム、トリアムシノロンアセトニド、二プロピオン酸ベクロメタゾン、イプラトロピウムブロミド、アジスロマイシン、酢酸ピルブテロール、プレドニゾロン、テオフィリン無水物、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、クラリスロマイシン、ザフィルルカスト、フマル酸フォルモテロール、インフルエンザウイルスワクチン、メチルプレドニゾロン、アモキシシリン三水和物、フルニソリド、アレルギー注射、クロモリンナトリウム、塩酸フェキソフェナジン、フルニソリド／メントール、アモキシシリン／クラブラン酸、レボフロキサシン、吸入器補助装置、グアイフェネシン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、モキシフロキサシンｈｃｌ、塩酸ドキシサイクリン、グアイフェネシン／ｄ−メトルファン、ｐ−エフェドリン／ｃｏｄ／クロルフェニル（ｃｈｌｏｒｐｈｅｎｉｒ）、ガチフロキサシン、塩酸セチリシン、フロ酸モメタゾン、キシナホ酸サルメテロール、ベンゾナテート、セファレキシン、ｐｅ／ヒドロコドン／クロルフェニル、セチリシンｈｃｌ／プソイドエフェド、フェニレフリン／ｃｏｄ／プロメタジン、コデイン／プロメタジン、セフプロジル、デキサメタゾン、グアイフェネシン／プロイドエフェドリン、クロロフェニラミン／ヒドロコドン、ネドクロミルナトリウム、硫酸テルブタリン、エピネフリン、メチルプレドニゾロン、硫酸メタプロテレノール。

【0366】

本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る、ＣＯＰＤのための治療薬の限定されない例として、以下が挙げられる：硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、イプラトロピウムブロミド、サルメテロール／フルチカゾン、アルブテロール、キシナホ酸サルメテロール、プロピオン酸フルチカゾン、プレドニゾン、テオフィリン無水物、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、モンテルカストナトリウム、ブデソニド、フマル酸フォルモテロール、トリアムシノロンアセトニド、レボフロキサシン、グアイフェネシン、アジスロマイシン、二プロピオン酸ベクロメタゾン、レバルブテロールｈｃｌ、フルニソリド、セフトリアキソンナトリウム、アモキシシリン三水和物、ガチフロキサシン、ザフィルルカスト、アモキシシリン／クラブラン酸、フルニソリド／メントール、クロロフェニラミン／ヒドロコドン、硫酸メタプロテレノール、メチルプレドニゾロン、フロ酸モメタゾン、ｐ−エフェドリン／ｃｏｄ／クロルフェニル（ｃｈｌｏｒｐｈｅｎｉｒ）、酢酸ピルブテロール、ｐ−エフェドリン／ロラタジン、硫酸テルブタリン、チオトロピウムブロミド、（Ｒ，Ｒ）−フォルモテロール、ＴｇＡＡＴ、シロミラスト、ロフルミラスト。

【0367】

本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る、ＨＣＶのための治療薬の限定されない例として、以下が挙げられる：インターフェロン−α−２ａ、インターフェロン−α−２ｂ、インターフェロン−αｃｏｎ１、インターフェロン−α−ｎ１、ペグ化インターフェロン−α−２ａ、ペグ化インターフェロン−α−２ｂ、リバビリン、Ｐｅｇインターフェロンα−２ｂ＋リバビリン、ウルソデオキシコール酸、グリチルリチン酸、チマルファシン、マキサミン（Ｍａｘａｍｉｎｅ）、ＶＸ−４９７および以下の標的：ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶプロテアーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ ＩＲＥＳ（内部リボソーム侵入部位）の干渉によってＨＣＶを治療するために使用される任意の化合物。

【0368】

本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る、特発性肺繊維症のための治療薬の限定されない例として、以下が挙げられる：プレドニゾン、アザチオプリン、アルブテロール、コルヒチン、硫酸アルブテロール、ジゴキシン、γインターフェロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ロラゼパム、フロセミド、リシノプリル、ニトログリセリン、スピロノラクトン、シクロホスファミド、イプラトロピウムブロミド、アクチノマイシンｄ、アルテプラーゼ、プロピオン酸フルチカゾン、レボフロキサシン、硫酸メタプロテレノール、硫酸モルヒネ、オキシコドンｈｃｌ、塩化カリウム、トリアムシノロンアセトニド、タクロリムス無水物、カルシウム、インターフェロン−α、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、インターフェロン−γ−１β。

【0369】

本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る、心筋梗塞のための治療薬の限定されない例として、以下が挙げられる：アスピリン、ニトログリセリン、酒石酸メトプロロール、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、重硫酸クロピドグレル、カルベジロール、アテノロール、硫酸モルヒネ、コハク酸メトプロロール、ワルファリンナトリウム、リシノプリル、一硝酸イソソルビド、ジゴキシン、フロセミド、シンバスタチン、ラミプリル、テネクテプラーゼ、マレイン酸エナラプリル、トルセミド、レタバーゼ（ｒｅｔａｖａｓｅ）、ロサルタンカリウム、キナプリルｈｃｌ／炭酸マグネシウム、ブメタニド、アルテプラーゼ、エナラプリラート、塩酸アミオダロン、チロフィバンｈｃｌ一水和物、塩酸ジルチアゼム、カプトプリル、イルベサルタン、バルサルタン、塩酸プロプラノロール、ホシノプリルナトリウム、塩酸リドカイン、エプチフィバチド、セファゾリンナトリウム、硫酸アトロピン、アミノカプロン酸、スピロノラクトン、インターフェロン、塩酸ソタロール、塩化カリウム、ドキュセートナトリウム、ドブタミンｈｃｌ、アルプラゾラム、プラバスタチンナトリウム、アトルバスタチンカルシウム、塩酸ミダゾラム、塩酸メペリシン、二硝酸イソソルビド、エピネフリン、塩酸ドーパミン、ビバリルジン、ロスバスタチン、エゼチミブ／シンバスタチン、アバシミベ（ａｖａｓｉｍｉｂｅ）、カリポリド。

【0370】

本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る、乾癬のための治療薬の限定されない例として、以下が挙げられる：ＫＤＲの小分子阻害剤、Ｔｉｅ−２の小分子阻害剤、カルシポトリエン、プロピオン酸クロベタゾール、トリアムシノロンアセトニド、プロピオン酸ハロベタソール、タザロテン、メトトレキサート、フルオシノニド、ジプロピオン酸ベタメタゾン、フルオシノロンアセトニド、アシトレチン、タールシャンプー、吉草酸ベタメタゾン、フロ酸モメタゾン、ケトコナゾール、プラモキシン／フルオシノロン、吉草酸ヒドロコルチゾン、フルランドレノリド、尿素、ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール／エモル（ｅｍｏｌｌ）、プロピオン酸フルチカゾン、アジスロマイシン、ヒドロコルチゾン、保湿製剤、葉酸、デソニド、ピメクロリムス、コールタール、酢酸ジフロラゾン、葉酸エタネルセプト、乳酸、メトキサレン、ｈｃ／次没食子酸ビスマス／ｚｎｏｘ／ｒｅｓｏｒ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、日焼け止め、ハルシノニド、サリチル酸、アントラリン、ピバル酸クロコルトロン、石炭抽出物、コールタール／サリチル酸、コールタール／サリチル酸／硫黄、デスオキシメタゾン、ジアゼパム、皮膚軟化薬、フルオシノニド／皮膚軟化薬、鉱油／ヒマシ油／乳酸ナトリウム、鉱油／ピーナッツオイル、石油／ミリスチン酸イソプロピル、ソラレン、サリチル酸、石鹸／トリブロムサラン、チメロサール／ホウ酸、セレコキシブ、インフリキシマブ、シクロスポリン、アレファセプト、エファリツマブ、タクロリムス、ピメクロリムス、ＰＵＶＡ、ＵＶＢ、スルファサラジン。

【0371】

本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る、乾癬性関節炎のための治療薬の限定されない例として、以下が挙げられる：メトトレキサート、エタネルセプト、ロフェコキシブ、セレコキシブ、葉酸、スルファサラジン、ナプロキセン、レフルノミド、酢酸メチルプレドニゾロン、インドメタシン、ヒドロキシクロロキン硫酸塩、プレドニゾン、スリンダック、ジプロピオン酸ベタメタゾン、インフリキシマブ、メトトレキサート、葉酸、トリアムシノロンアセトニド、ジクロフェナク、ジメチルスルホキシド、ピロキシカム、ジクロフェナクナトリウム、ケトプロフェン、メロキシカム、メチルプレドニゾロン、ナブメトン、トルメチンナトリウム、カルシポトリエン、シクロスポリン、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フルオシノニド、硫酸グルコサミン、金チオリンゴ酸ナトリウム、酒石酸水素ヒドロコドン／ａｐａｐ、イブプロフェン、リセドロネートナトリウム、スルファジアジン、チオグアニン、バルデコキシブ、アレファセプト、エファリツマブおよびｂｃｌ−２阻害剤。

【0372】

本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る、再狭窄のための治療薬の限定されない例として、以下が挙げられる：シロリムス、パクリタキセル、エベロリムス、タクロリムス、ゾタロリムス、アセトアミノフェン。

【0373】

本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る、坐骨神経痛のための治療薬の限定されない例として、以下が挙げられる：酒石酸水素ヒドロコドン／ａｐａｐ、ロフェコキシブ、シクロベンザプリンｈｃｌ、メチルプレドニゾロン、ナプロキセン、イブプロフェン、オキシコドンｈｃｌ／アセトアミノフェン、セレコキシブ、バルデコキシブ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、リン酸コデイン／ａｐａｐ、トラマドールｈｃｌ／アセトアミノフェン、メタキサロン、メロキシカム、メトカルバモール、塩酸リドカイン、ジクロフェナクナトリウム、ガバペンチン、デキサメタゾン、カリソプロドール、ケトロラック トロメタミン、インドメタシン、アセトアミノフェン、ジアゼパム、ナブメトン、オキシコドンｈｃｌ、チザニジンｈｃｌ、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、ナプシル酸プロポキシフェン／ａｐａｐ、ａｓａ／ｏｘｙｃｏｄ／オキシコドンｔｅｒ、イブプロフェン／ヒドロコドンｂｉｔ、トラマドールｈｃｌ、エトドラック、プロポキシフェンｈｃｌ、アミトリプチリンｈｃｌ、カリソプロドール／コデインｐｈｏｓ／ａｓａ、硫酸モルヒネ、マルチビタミン剤、ナプロキセンナトリウム、クエン酸オルフェナドリン、テマゼパム。

【0374】

本発明の結合タンパク質と組み合わされ得る、ＳＬＥ（ループス）のための治療薬の例として、以下が挙げられる：ＮＳＡＩＤＳ、例えば、ジクロフェナク、ナプロキセン、イブプロフェン、ピロキシカム、インドメタシン；ＣＯＸ２阻害剤、例えば、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ；抗マラリア剤、例えば、ヒドロキシクロロキン；ステロイド、例えば、プレドニゾン、プレドニゾロン、ブデノシド、デキサメタゾン；細胞傷害剤、例えば、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキサート；ＰＤＥ４の阻害剤またはプリン合成阻害剤、例えば、Ｃｅｌｌｃｅｐｔ。本発明の結合タンパク質はまた、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸、オルサラジン、イムランおよびＩＬ−１などの炎症誘発性サイトカインの合成、産生または作用を干渉する薬剤、例えば、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤およびＩＬ−１ｒａのようなカスパーゼ阻害剤などの薬剤と組み合わされ得る。本発明の結合タンパク質はまた、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤；またはＴ細胞活性化分子を標的とする分子、例えば、ＣＴＬＡ−４−ＩｇＧまたは抗Ｂ７ファミリー抗体、抗ＰＤ−１ファミリー抗体とともに使用され得る。本発明の結合タンパク質は、ＩＬ−１１または抗サイトカイン抗体、例えば、フォノトリズマブ（ｆｏｎｏｔｏｌｉｚｕｍａｂ）（抗ＩＦＮｇ抗体）または抗受容体受容体抗体、例えば、抗ＩＬ−６受容体抗体およびＢ細胞表面分子に対する抗体と組み合わされ得る。トランスジェニックマウスにおいてｂｃｌ−２過剰発現は、ループス様表現型を引き起こすと実証されており（Ｍａｒｑｕｉｎａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１７２（１１）：７１７７−７１８５頁（２００４年））、したがって、阻害が治療効果を有すると予測されるので、本発明の抗体またはその抗原結合部分はまた、ＬＪＰ３９４（アベチムス（ａｂｅｔｉｍｕｓ））、Ｂ細胞を枯渇させるか、不活化する薬剤、例えば、リツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）、リンフォスタット（ｌｙｍｐｈｏｓｔａｔ）−Ｂ（抗ＢｌｙＳ抗体）、ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体、アダリムマブ（ＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２９１３１；ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、ＣＡ２（レミケード（登録商標））、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物、（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（エンブレル（登録商標））およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（レネルセプト（登録商標）））およびｂｃｌ−２阻害剤とともに使用され得る。

【0375】

本発明の医薬組成物は、本発明の抗体または抗体部分の「治療上有効な量」または「予防上有効な量」を含み得る。「治療上有効な量」とは、所望の治療結果を達成するのに必要な投与量で、期間で、有効な量を指す。抗体または抗体部分の治療上有効な量は、当業者によって決定され得、個体の病状、年齢、性別および体重ならびに個体における抗体または抗体部分の所望の反応を誘発する能力などの因子に従って変わり得る。治療上有効な量はまた、抗体または抗体部分の任意の毒性または有害な作用が、治療上有益な作用によって凌がれるものである。「予防上有効な量」とは、所望の予防結果を達成するのに必要な投与量で、期間で、有効な量を指す。通常、予防上の用量は、被験体において疾患に先立って、または疾患の初期段階で使用されるので、予防上有効な量は、治療上有効な量よりも少ないものとなる。

【0376】

投与計画は、最適な所望の反応（例えば、治療反応または予防反応）を提供するよう調整され得る。例えば、単回ボーラスが投与される場合も、いくつかの分割用量が経時的に投与される場合も、または治療状況の危急によって、用量が比例的に減少または増加される場合もある。投与の容易さおよび投与量の均一性のために、非経口組成物を単位投与形で製剤することは特に有利である。本明細書において、単位投与形とは、治療される哺乳動物被験体のための単位投与量として適合している、物理的に別個の単位を指し；各単位は、必要な医薬担体と関連して所望の治療効果を生じるよう算出された所定の量の活性化合物を含有する。本発明の単位投与形の仕様は、（ａ）活性化合物の独特の特徴および達成される特定の治療効果または予防効果および（ｂ）個体における感受性の治療のための、このような活性化合物の配合の技術分野に固有の制限によって決定され、それらによって直接的に依存する。

【0377】

投与量の値は、軽減される状態の種類および重篤度に応じて変わり得るということは留意されたい。任意の特定の被験体にとって、特定の投与計画は、個体の必要性および組成物を投与し、組成物の投与を監督している人の専門科の判断に従って、経時的に調整されなければならないということおよび本明細書に示される投与量範囲は、単に例示的なものであって、特許請求される組成物の範囲または実施を制限しようとするものではないということはさらに理解されなくてはならない。

【0378】

診断法
本明細書における開示内容はまた、診断的適用を提供する。これは、以下でさらに明らかにされる。本発明のＩＬ−１βと結合する抗体は、ＩＬ−１βをインビボ、インビトロまたはエキソビボで（すなわち、生存個体から得られ、手順に付され、次いで、個体に戻された細胞または組織において）で検出するための、種々の形式のいずれかで使用され得る。本発明のＤＶＤ−Ｉｇは、種々の診断および検出アッセイ形式において、ＩＬ−１βのエピトープならびにその他の抗原またはエピトープと結合できるというさらなる利点を提供する。

【0379】

Ｉ．アッセイ方法
本開示内容はまた、本明細書に記載されるＤＶＤ−Ｉｇを始めとする、少なくとも１種の抗ＩＬ−１β結合タンパク質またはその抗原結合部分を使用して、試験試料中のＩＬ−１βまたはその断片（「分析物」）の存在、量または濃度を決定するための方法を提供する。当技術分野で公知であるような任意の適したアッセイは、本方法において使用され得る。例として、それだけには限らないが、放射性同位元素検出（ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））および酵素検出（酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）または酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）（例えば、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡアッセイ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ））を含むサンドイッチイムノアッセイ（例えば、モノクローナル、ポリクローナルおよび／またはＤＶＤ−Ｉｇサンドイッチイムノアッセイまたはその任意の変法（例えば、モノクローナル／ＤＶＤ−Ｉｇ、ＤＶＤ−Ｉｇ／ポリクローナルなど）、競合阻害イムノアッセイ（例えば、フォワードおよびリバース）、蛍光偏光イムノアッセイ（ＦＰＩＡ）、酵素増倍イムノアッセイ技術（ｅｎｚｙｍｅ ｍｕｌｔｉｐｌｉｅｄ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）（ＥＭＩＴ）などのイムノアッセイ、生物発光共鳴エネルギー転移（ＢＲＥＴ）および均一な化学発光アッセイなどが挙げられる。ＳＥＬＤＩベースのイムノアッセイでは、対象とする分析物（またはその断片）と特異的に結合する捕獲試薬が、予備活性化タンパク質チップアレイなどの質量分析プローブの表面に結合される。次いで、分析物（またはその断片）は、バイオチップ上に特異的に捕獲され、捕獲された分析物（またはその断片）が、質量分析によって検出される。あるいは、分析物（またはその断片）は、捕獲試薬から溶出され、従来のＭＡＬＤＩ（マトリックス支援レーザー脱離法／イオン化）によって、またはＳＥＬＤＩによって検出され得る。化学発光微粒子イムノアッセイ、特に、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）自動分析機（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）を使用するものは、例示的イムノアッセイの一例である。

【0380】

例えば、本明細書に記載される抗ＩＬ−１β結合タンパク質が、免疫診断試薬として、および／または分析物イムノアッセイキットにおいて使用される場合には、本開示内容の実施では、尿、血液、血清および血漿およびその他の体液を回収し、取り扱い、処理するための当技術分野で周知の方法が使用される。試験試料は、対象とする分析物に加えて、抗体、抗原、ハプテン、ホルモン、薬物、酵素、受容体、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、オリゴヌクレオチドおよび／またはポリヌクレオチドなどのさらなる部分を含み得る。例えば、試料は、被験体から得られた全血試料であり得る。例えば、前処理試薬を用いて、本明細書に記載されるイムノアッセイに先立って、試験試料、特に、全血が処理される必要がある、または処理されることが望ましい場合がある。前処理が必要ではない場合においてさえ（例えば、ほとんどの尿試料）、前処理は、場合により行われ得る（例えば、市販のプラットフォームでのレジメンの一部として）。

【0381】

前処理試薬は、本発明のイムノアッセイおよびキットとともに使用するのに適当な任意の試薬であり得る。前処理は、場合により、（ａ）１種または複数の溶媒（例えば、メタノールおよびエチレングリコール）および場合により塩、（ｂ）１種または複数の溶媒および塩、および場合により、界面活性剤、（ｃ）界面活性剤または（ｄ）界面活性剤および塩を含む。前処理試薬は、当技術分野で公知であり、このような前処理は、例えば、文献に記載されるとおり、Ａｂｂｏｔｔ ＴＤｘ、ＡｘＳＹＭ（登録商標）およびＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）分析機（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）でのアッセイに使用されるように（例えば、Ｙａｔｓｃｏｆｆら、「Ａｂｂｏｔｔ ＴＤｘ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ａｓｓａｙ Ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｆｏｒ Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ ｉｎ Ｗｈｏｌｅ Ｂｌｏｏｄ」、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、３６：１９６９−１９７３頁（１９９０年）；およびＷａｌｌｅｍａｃｑら、「Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｅｗ ＡｘＳＹＭ Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａｓｓａｙ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ＴＤｘ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｗｈｏｌｅ Ｂｌｏｏｄ ａｎｄ ＥＭＩＴ Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａｓｓａｙｓ」、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、４５：４３２−４３５頁（１９９９年）参照のこと）、および／または市販されるように使用され得る。さらに、前処理は、Ａｂｂｏｔｔの米国特許第５，１３５，８７５号；欧州公開番号ＥＰ０４７１２９３；ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００８／０８２９８４；および米国特許公開番号第２００８／００２０４０１号（前処理に関するその教示のためにその全文が参照により組み込まれる）に記載のとおりに行われ得る。前処理試薬は、不均一な薬剤である場合も、均一な薬剤である場合もある。

【0382】

不均一な前処理試薬を用いると、前処理試薬は、試料中に存在する分析物結合タンパク質（例えば、分析物またはその断片と結合できるタンパク質）を沈殿させる。このような前処理ステップは、沈殿した分析物結合タンパク質から、試料へ前処理剤を添加することによって形成された混合物の上清を分離することによって、任意の分析物結合タンパク質を除去することを含む。このようなアッセイでは、任意の結合タンパク質が存在しない混合物の上清が、アッセイにおいて使用され、抗体捕獲ステップに直接進む。

【0383】

均一な前処理試薬を用いると、このような分離ステップはない。試験試料および前処理試薬の全混合物を、分析物（またはその断片）の標識された特異的結合パートナー、例えば、標識された抗分析物抗体（またはその抗原的に反応性の断片）と接触させる。このようなアッセイに使用される前処理試薬は、通常、第１の特異的結合パートナーによる捕獲の前またはその間のいずれかで、前処理された試験試料混合物で希釈される。このような希釈にもかかわらず、捕獲の際に、試験試料混合物中に特定の量の前処理試薬がさらに存在する（または残っている）。本発明によれば、例示的な標識された特異的結合パートナーは、ＤＶＤ−Ｉｇ（またはその断片、変異体または変異体の断片）であり得る。

【0384】

不均一な形式では、被験体から試験試料が得られた後に、第１の混合物が調製される。混合物は、分析物（またはその断片）について評価されている試験試料および第１の特異的結合パートナーを含有し、これでは、試験試料中に含有される第１の特異的結合パートナーおよび任意の分析物が、第１の特異的結合パートナー−分析物複合体を形成する。好ましくは、第１の特異的結合パートナーは、抗分析物抗体またはその断片である。第１の特異的結合パートナーは、本明細書に記載されるＤＶＤ−Ｉｇ（またはその断片、変異体または変異体の断片）であり得る。混合物を形成するために、試験試料および第１の特異的結合パートナーが添加される順序は、重要ではない。好ましくは、第１の特異的結合パートナーは、固相上に固定化されている。（第１の特異的結合パートナーおよび場合により、第２の特異的結合パートナーの）イムノアッセイに使用される固相は、それだけには限らないが、磁性粒子、ビーズ、試験管、マイクロタイタープレート、キュベット、メンブレン、足場分子、フィルム、濾紙、ディスクおよびチップなどの当技術分野で公知の任意の固相であり得る。

【0385】

第１の特異的結合パートナー−分析物複合体を含有する混合物が形成された後に、任意の結合していない分析物が、当技術分野で公知の任意の技術を使用して複合体から除去される。例えば、結合していない分析物は、洗浄することによって除去され得る。しかし、第１の特異的結合パートナーが、試験試料中に存在する任意の分析物を越えて存在し、その結果、試験試料中に存在するすべての分析物が第１の特異的結合パートナーによって結合されることが望ましい。

【0386】

任意の結合していない分析物が除去された後、第２の特異的結合パートナーが混合物に添加されて、第１の特異的結合パートナー−分析物−第２の特異的結合パートナー複合体を形成する。第２の特異的結合パートナーは、好ましくは、第１の特異的結合パートナーによって結合される分析物上のエピトープとは異なる、分析物上のエピトープと結合する抗分析物抗体である。さらに、また好ましくは、第２の特異的結合パートナーは、上記の検出可能な標識で標識されるか、それを含有する。第２の特異的結合パートナーは、本明細書に記載されるＤＶＤ−Ｉｇ（またはその断片、変異体または変異体の断片）であり得る。

【0387】

当技術分野で公知である、任意の適した検出可能な標識が使用され得る。例えば、検出可能な標識は、放射性標識（例えば、^３Ｈ、^１２５Ｉ、^３５Ｓ、^１４Ｃ、^３２Ｐおよび^３３Ｐ）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリペルオキシダーゼ、グルコース６−リン酸デヒドロゲナーゼなど）、化学発光標識（例えば、アクリジニウムエステル、チオエステルまたはスルホンアミド；ルミノール、イソルミノール、フェナントリジニウムエステルなど）、蛍光標識（例えば、フルオレセイン（例えば、５−フルオレセイン、６−カルボキシフルオセイン、３’６−カルボキシフルオセイン、５（６）−カルボキシフルオセイン、６−ヘキサクロロ−フルオレセイン、６−テトラクロロフルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネートなど））、ローダミン、フィコビリ（ｐｈｙｃｏｂｉｌｉ）タンパク質、Ｒ−フィコエリトリン、量子ドット（例えば、硫化亜鉛でキャップされたセレン化カドミウム）、温度測定標識またはイムノ−ポリメラーゼ連鎖反応標識であり得る。標識への導入、標識手順および標識の検出は、ＰｏｌａｋおよびＶａｎ Ｎｏｏｒｄｅｎ、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、Ｎ．Ｙ．（１９９７年）およびＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇｏｎによって刊行された複合ハンドブックおよびカタログであるＨａｕｇｌａｎｄ、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｂｅｓ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（１９９６年）に見出される。蛍光標識は、ＦＰＩＡにおいて使用され得る（例えば、米国特許第５，５９３，８９６号；同５，５７３，９０４号；同５，４９６，９２５号；同５，３５９，０９３号および同５，３５２，８０３号）。アクリジニウム化合物は、均一または不均一な化学発光アッセイにおいて検出可能な標識として使用され得る（例えば、Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１６：１３２４−１３２８頁（２００６年）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１４：２３１３−２３１７頁（２００４年）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１４：３９１７−３９２１頁（２００４年）；およびＡｄａｍｃｚｙｋら、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．、５：３７７９−３７８２頁（２００３年））。

【0388】

例示的アクリジニウム化合物として、アクリジニウム−９−カルボキサミドがある。アクリジニウム９−カルボキサミドを調製する方法は、Ｍａｔｔｉｎｇｌｙ、Ｊ．Ｂｉｏｌｕｍｉｎ． Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎ．、６：１０７−１１４頁（１９９１年）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６３：５６３６−５６３９頁（１９９８年）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、５５：１０８９９−１０９１４頁（１９９９年）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｏｒｇ． Ｌｅｔｔ．、１：７７９−７８１頁（１９９９年）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．、１１：７１４−７２４頁（２０００年）；ＡｄａｍｃｚｙｋおよびＭａｔｔｉｎｇｌｙ、Ｉｎ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ： Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ；（Ｄｙｋｅ、Ｋ．Ｖ．編）（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ：Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、２００２年）７７−１０５頁；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｏｒｇ． Ｌｅｔｔ．、５：３７７９−３７８２頁（２００３年）；および米国特許第５，４６８，６４６号、同５，５４３，５２４号および同５，７８３，６９９号に記載されている。別の好ましいアクリジニウム化合物として、アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルがある。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルの一例として、１０−メチル−９−（フェノキシカルボニル）アクリジニウム フルオロスルホネート（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ、Ｍｉｃｈｉｇａｎから入手可能）がある。アクリジニウム９−カルボキシレートアリールエステルを調製する方法は、ＭｃＣａｐｒａら、Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ． Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．、４：１１１１−２１頁（１９６５年）；Ｒａｚａｖｉら、Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、１５：２４５−２４９頁（２０００年）；Ｒａｚａｖｉら、Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、１５：２３９−２４４頁（２０００年）；および米国特許第５，２４１，０７０号に記載されている。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルおよびその使用に関するさらなる詳細は、米国特許出願公開第２００８／０２４８４９３号に示されている。

【0389】

化学発光アッセイ（例えば、上記のアクリジニウムまたはその他の化学発光剤を使用する）は、Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ａｎａｌ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ、５７９（１）：６１−６７頁（２００６年）に記載された方法に従って実施され得る。いずれの適したアッセイ形式も使用され得るが、マイクロプレートケミルミノメーター（Ｍｉｔｈｒａｓ ＬＢ−９４０、Ｂｅｒｔｈｏｌｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＵＳＡ．、ＬＬＣ、Ｏａｋ Ｒｉｄｇｅ、Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ）によって、迅速な、小容積の複数の試料のアッセイが可能となる。

【0390】

化学発光アッセイのための混合物を形成するために、試験試料および特異的結合パートナー（複数可）が添加される順序は、重要ではない。第１の特異的結合パートナーが、アクリジニウム化合物などの化学発光剤を用いて検出可能に標識される場合には、検出可能に標識された第１の特異的結合パートナー−分析物複合体が形成する。あるいは、第２の特異的結合パートナーが使用され、第２の特異的結合パートナーが、アクリジニウム化合物などの化学発光剤を用いて検出可能に標識される場合には、検出可能に標識された第１の特異的結合パートナー−分析物−第２の特異的結合パートナー複合体が形成する。標識されていようと標識されていなかろうと、任意の結合していない特異的結合パートナーは、洗浄などの当技術分野で公知の任意の技術を使用して混合物から除去され得る。

【0391】

過酸化水素は、上記のアクリジニウム化合物の添加の前に、添加と同時に、または添加後に、混合物中でその場で生成され得る、または混合物に提供もしくは供給され得る（例えば、過酸化水素の供給源は、過酸化水素を含有することがわかっている１種または複数のバッファーまたはその他の溶液である。）。過酸化水素は、当業者に明らかであるようないくつかの方法でその場で生成され得る。

【0392】

試料への少なくとも１種の基本溶液の同時添加または逐次添加の際に、検出可能なシグナル、すなわち、分析物の存在を示す化学発光シグナルが生成する。基本溶液は、少なくとも１種の塩基を含有し、１０以上の、好ましくは、１２以上のｐＨを有する。塩基性溶液の例として、それだけには限らないが、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化アンモニウム、水酸化マグネシウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化カルシウム、炭酸カルシウムおよび重炭酸カルシウムが挙げられる。試料に添加される塩基性溶液の量は、塩基性溶液の濃度に応じて変わる。使用される塩基性溶液の濃度に基づいて、当業者ならば、試料に添加する塩基性溶液の量を容易に決定できる。

【0393】

生成する化学発光シグナルは、当業者に公知の日常的な技術を使用して検出され得る。生成したシグナルの強度に基づいて、試料中の分析物の量は定量化され得る。具体的には、試料中の分析物の量は、生成したシグナルの強度に比例する。存在する分析物の量は、生成した光の量を、分析物の標準曲線と比較することによって、または参照標準に対する比較によって定量化され得る。標準曲線は、質量分光、重量測定法および当技術分野で公知のその他の技術によって、分析物の段階希釈または既知濃度の溶液を使用して作成され得る。上記のものは、化学発光剤としてアクリジニウム化合物の使用に重点を置いて記載されているが当業者ならば、この記載をその他の化学発光剤の使用に容易に適応させることができる。

【0394】

分析物イムノアッセイは、一般に、当技術分野で公知の任意の形式、それだけには限らないが、サンドイッチ形式などを使用して実施され得る。具体的には、あるイムノアッセイ形式では、試料中の分析物、例えば、ヒト分析物またはその断片を分離し、定量化するために、少なくとも２種の抗体が使用される。さらに詳しくは、少なくとも２種の抗体が、分析物上の異なるエピトープ（またはその断片）と結合し、免疫複合体を形成し、これが「サンドイッチ」と呼ばれる。一般に、イムノアッセイでは、試験試料中の分析物（またはその断片）を捕獲するために１種または複数の抗体が使用され得（これらの抗体は、「捕獲」抗体（複数可）と呼ばれることが多い）、サンドイッチの検出可能な（すなわち、定量可能な）標識と結合するために、１種または複数の抗体が使用され得る（これらの抗体は、「検出抗体（複数可）」、「コンジュゲート（複数可）」と呼ばれることが多い。）。したがって、サンドイッチイムノアッセイ形式との関連で、本明細書に記載されるＤＶＤ−Ｉｇ（またはその断片、変異体または変異体の断片）は捕獲抗体、検出抗体または両方として使用され得る。例えば、分析物上の第１のエピトープ（またはその断片）と結合できるドメインを有するある種のＤＶＤ−Ｉｇは、捕獲抗体として使用され得、および／または分析物上の第２のエピトープ（またはその断片）と結合できるドメインを有する別のＤＶＤ−Ｉｇは、検出抗体として使用される。これに関連して、分析物上の第１のエピトープ（またはその断片）と結合できる第１のドメインと、分析物上の第２のエピトープ（またはその断片）と結合できる第２のドメインとを有するＤＶＤ−Ｉｇは、捕獲抗体および／または検出抗体として使用され得る。あるいは、第１の分析物上のエピトープ（またはその断片）と結合できる第１のドメインと、第２の分析物上のエピトープ（またはその断片）と結合できる第２のドメインとを有するある種のＤＶＤ−Ｉｇは、２種以上の分析物を検出、および場合により、定量化するための捕獲抗体および／または検出抗体として使用され得る。万一、分析物が試料中に、単量体形態およびホモマーまたはヘテロマーであり得る二量体／多量体形態などの２種以上の形態で存在し得る場合には、単量体形態上にのみ曝露されるエピトープと結合できるドメインを有するある種のＤＶＤ−Ｉｇおよび二量体／多量体形態の異なる部分上のエピトープと結合できるドメインを有する別のＤＶＤ−Ｉｇが、捕獲抗体および／または検出抗体として使用され得、それによって、所与の分析物の異なる形態の検出および場合により、定量化が可能となる。さらに、単一のＤＶＤ−Ｉｇ内および／またはＤＶＤ−Ｉｇ間で差次的親和性を有するＤＶＤ−Ｉｇを使用することは、結合力の利点を提供し得る。本明細書に記載されるイムノアッセイとの関連で、ＤＶＤ−Ｉｇの構造内に１種または複数のリンカーを組み込むことは、一般に、役立ち得る、または望ましいものであり得る。存在する場合には、最適には、リンカーは、内部ドメインによるエピトープの結合ならびに外部ドメインによる別のエピトープの結合を可能にするために、十分な長さの、構造的に柔軟なものでなくてはならない。これに関連して、ＤＶＤ−Ｉｇが、２種の異なる分析物と結合し得、一方の分析物が他方よりも長い場合には、長いほうの分析物が外部ドメインによって結合されることが望ましい。

【0395】

一般的に言えば、ＩＬ−１βタンパク質（またはその断片）について試験されている試料（例えば、含有している疑いがある）は、少なくとも１種の捕獲抗体（複数可）および少なくとも１種の検出抗体（例えば、捕獲および／または検出抗体が複数の抗体を含む場合の、第２の検出抗体または第３の検出抗体またはさらに続いて番号をつけられた抗体であり得る）と、同時に、または任意の順序で逐次のいずれかで接触され得る。例えば、試験試料は、少なくとも１種の捕獲抗体と最初に、次いで（連続的に）、少なくとも１種の検出抗体と接触され得る。あるいは、試験試料は、最初に、少なくとも１種の検出抗体と、次いで（連続して）少なくとも１種の捕獲抗体と接触され得る。さらに別の代替法では、試験試料は、捕獲抗体および検出抗体と同時に接触され得る。

【0396】

サンドイッチアッセイ形式では、ＩＬ−１β（またはその断片）を含有している疑いがある試料を、第１の結合タンパク質／ＩＬ−１β複合体の形成を可能にする条件下で少なくとも１種の第１の捕獲結合タンパク質（例えば、ＩＬ−１β抗体）と最初に接触させる。２種以上の捕獲結合タンパク質が使用される場合には、２種以上の捕獲結合タンパク質を含む、第１の捕獲結合タンパク質／ＩＬ−１β複合体が形成される。サンドイッチアッセイでは、結合タンパク質、すなわち、好ましくは、少なくとも１種の捕獲結合タンパク質が、試験試料中の予測されるＩＬ−１β分析物（またはその断片）の最大量のモル過剰量で使用される。例えば、バッファー（例えば、微粒子コーティングバッファー）１ｍＬあたり約５μｇから約１ｍｇの抗体が使用され得る。

【0397】

１種のみの抗体による結合が必要であるので、小さい分析物を測定するために使用されることが多い競合阻害イムノアッセイは、逐次的な、古典的な形式を含む。逐次競合阻害イムノアッセイでは、ＩＬ−１βに対する捕獲結合タンパク質が、マイクロタイタープレートまたはその他の固相支持体のウェル上にコーティングされる。ＩＬ−１βを含有する試料がウェルに添加されると、ＩＬ−１βが捕獲結合タンパク質と結合する。洗浄した後、既知量の標識された（例えば、ビオチンまたは西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ））ＩＬ−１βがウェルに添加される。シグナルを生成するには、酵素標識の基質が必要である。ＨＲＰの適した基質の一例として、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）がある。洗浄した後、標識された分析物によって生成したシグナルが測定され、これは、試料中のＩＬ−１βの量に反比例する。古典的な競合阻害イムノアッセイでは、ＩＬ−１βに対する結合タンパク質が、固相支持体（例えば、マイクロタイタープレートのウェル）上にコーティングされる。しかし、逐次競合阻害イムノアッセイとは異なり、試料および標識されたＩＬ−１βがウェルに同時に添加される。試料中のＩＬ−１βはいずれも、捕獲結合タンパク質との結合について標識されたＩＬ−１βと競合する。洗浄した後、標識されたＩＬ−１βによって生成したシグナルが測定され、これは、試料中のＩＬ−１βの量に反比例する。

【0398】

場合により、試験試料を、少なくとも１種の捕獲結合タンパク質（例えば、第１の捕獲抗体）と接触させる前に、少なくとも１種の捕獲結合タンパク質が、固相支持体に結合されることがあり、これは、試験試料からの第１の結合タンパク質／ＩＬ−１β（またはその断片）複合体の分離を促進する。捕獲結合タンパク質が結合される基質は、試料からの捕獲抗体−分析物複合体の分離を促進する、任意の適した固相支持体または固相であり得る。

【0399】

例として、マイクロタイタープレートなどのプレートのウェル、試験管、多孔質ゲル（例えば、シリカゲル、アガロース、デキストランまたはゼラチン）、ポリマーフィルム（例えば、ポリアクリルアミド）、ビーズ（例えば、ポリスチレンビーズまたは磁性ビーズ）、フィルターのストリップ／メンブレン（例えば、ニトロセルロースまたはナイロン）、微粒子（例えば、ラテックス粒子、磁化可能な微粒子（例えば、酸化第二鉄または酸化クロムコアおよびホモ−またはヘテロ−ポリマーコートおよび約１−１０ミクロンの半径を有する微粒子）が挙げられる。基質は、抗原と結合するための適した表面親和性および検出抗体による接近を可能にする十分な多孔度を有する適した多孔質材料を含み得る。微小孔性材料は概して好ましいが、水和状態のゼラチン質物質が使用され得る。このような多孔質物質は、約０．０１から約０．５ｍｍ、好ましくは、約０．１ｍｍの厚さを有するシートの形態であることが好ましい。ポアサイズはかなり変わり得るが、ポアサイズは、約０．０２５から約１５ミクロンであることが好ましく、約０．１５から約１５ミクロンがより好ましい。このような基質の表面は、抗体の基質との共有結合を引き起こす化学的プロセスによって活性化され得る。一般に、抗原または抗体の疎水性力による吸着による、基質との不可逆的結合が生じる。あるいは、抗体を基質と共有結合によって結合するために、このような結合が、抗体の分析物と結合する能力を干渉しないという条件で、化学的カップリング剤またはその他の手段が使用され得る。あるいは、抗体は、前もって、ストレプトアビジン（例えば、ＤＹＮＡＬ（登録商標）Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｂｅａｄｓ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）またはビオチン（例えば、Ｐｏｗｅｒ−ＢｉｎｄＴＭ−ＳＡ−ＭＰ ストレプトアビジンコートされた微粒子（Ｓｅｒａｄｙｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｄｉａｎａ）を使用して）または抗種特異的モノクローナル抗体を用いてコーティングされている微粒子を用いて結合され得る。基質は、必要に応じて、抗体上の種々の官能基との反応性を可能にするよう誘導体化され得る。このような誘導体化は、特定のカップリング剤の使用を必要とし、その例として、それだけには限らないが、無水マレイン酸、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドおよび１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドが挙げられる。必要に応じて、各々、分析物（複数可）に対して特異的である、抗体（またはその断片）などの１種または複数の捕獲試薬は、異なる物理的位置またはアドレス可能な位置で（例えば、バイオチップ配置でなど）固相に付着され得る（例えば、米国特許第６，２２５，０４７号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／５１７７３；米国特許第６，３２９，２０９号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ００／５６９３４；および米国特許第５，２４２，８２８号参照のこと）。捕獲試薬が固相支持体としての質量分析プローブに付着される場合には、プローブに結合される分析物の量は、レーザー脱離法イオン化質量分析によって検出され得る。あるいは、単一のカラムに、１種または複数の捕獲試薬を用いて誘導体化されている異なるビーズが詰められ、それによって単一の場所で分析物を捕獲し得る（抗体によって誘導体化された、ビーズに基づく技術、例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（Ａｕｓｔｉｎ、Ｔｅｘａｓ）のｘＭＡＰ技術を参照のこと）。

【0400】

分析物（またはその断片）についてアッセイされている試験試料を、少なくとも１種の捕獲抗体（例えば、第１の捕獲抗体）と接触させた後、第１の抗体（または複数の抗体）−分析物（またはその断片）複合体の形成を可能にするよう混合物をインキュベートする。インキュベーションは、約４．５から約１０．０のｐＨで、約２℃から約４５℃の温度で、少なくとも約１分から約１８時間、好ましくは、約１から約２４分、最も好ましくは、約４から約１８分の間実施され得る。本明細書に記載されたイムノアッセイは、一段階で（試験試料、少なくとも１つの捕獲抗体および少なくとも１種の検出抗体がすべて、反応容器に、逐次または同時に添加されることを意味する）、または２以上の段階、例えば、二段階、三段階などで実施され得る。

【0401】

（第１の、または複数の）捕獲抗体／分析物（またはその断片）複合体の形成後、複合体は、（第１の、または複数の）捕獲抗体／分析物（またはその断片）／第２の検出抗体複合体）の形成を可能にする条件下で少なくとも１種の検出抗体と接触させられる。明確にするために、「第２の」抗体（例えば、第２の検出抗体）と説明がつけられるが、実際には、捕獲および／または検出に複数の抗体が使用される場合は、少なくとも１種の検出抗体が、イムノアッセイにおいて使用される第２、第３、第４などの抗体であり得る。捕獲抗体／分析物（またはその断片）複合体が、２種以上の検出抗体と接触させられる場合には、（第１の、または複数の）捕獲抗体／分析物（またはその断片）／（複数の）検出抗体複合体が形成される。捕獲抗体（例えば、第１の捕獲抗体）と同様に、少なくとも１種の（例えば、第２の、および任意のその後の）検出抗体が、捕獲抗体／分析物（またはその断片）複合体と接触させられると、（第１の、または複数の）捕獲抗体／分析物（またはその断片）／（第２の、または複数の）検出抗体複合体の形成には、上記のものと同様の条件下でのインキュベーション期間が必要である。好ましくは、少なくとも１種の検出抗体は、検出可能な標識を含有する。（第１の、または複数の）捕獲抗体／分析物（またはその断片）／（第２の、または複数の）検出抗体複合体の形成の前に、形成と同時に、または形成後に、検出可能な標識が、少なくとも１種の検出抗体（例えば、第２の検出抗体）に結合され得る。当技術分野で公知の任意の検出可能な標識が使用され得る（ＰｏｌａｋおよびＶａｎ Ｎｏｏｒｄｅｎ（１９９７年）およびＨａｕｇｌａｎｄ（１９９６年）参考文献を含めた、上記の考察を参照のこと）。

【0402】

検出可能な標識は、直接的に、またはカップリング剤を介して抗体に結合され得る。使用され得るカップリング剤の一例として、ＥＤＡＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、塩酸塩）があり、これは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉから市販されている。使用され得るその他のカップリング剤は、当技術分野で公知である。検出可能な標識を抗体と結合する方法は、当技術分野で公知である。さらに、検出可能な標識の抗体とのカップリングを促進する末端基をすでに含有する、多数の検出可能な標識、例えば、ＣＰＳＰ−アクリジニウムエステル（すなわち、９−［Ｎ−トシル−Ｎ−（３−カルボキシプロピル）］−１０−（３−スルホプロピル）アクリジニウムカルボキサミド）またはＳＰＳＰ−アクリジニウムエステル（すなわち、Ｎ１０−（３−スルホプロピル）−Ｎ−（３−スルホプロピル）−アクリジニウム−９−カルボキサミド）は、購入または合成され得る。

【0403】

（第１の、または複数の）捕獲抗体／分析物／（第２の、または複数の）検出抗体複合体は、標識の定量化の前に、試験試料の残部から分離され得るが、分離されなくてもよい。例えば、少なくとも１種の捕獲抗体（例えば、第１の捕獲抗体）が、ウェルまたはビーズなどの固相支持体に結合される場合には、固相支持体との接触から（試験試料の）流体を除去することによって分離が達成され得る。あるいは、少なくとも第１の捕獲抗体が固相支持体に結合される場合には、分析物含有試料および少なくとも１種の第２の検出抗体と同時に接触され、第１の（複数の）抗体／分析物／第２の（複数の）抗体複合体を形成し、続いて、固相支持体との接触から流体（試験試料）を除去し得る。少なくとも１種の第１の捕獲抗体が、固相支持体に結合されない場合には、標識の量の定量化のために、（第１の、または複数の）捕獲抗体／分析物／（第２の、または複数の）検出抗体複合体は、試験試料から除去されなくてもよい。

【0404】

標識された捕獲抗体／分析物／検出抗体複合体（例えば、第１の捕獲抗体／分析物／第２の検出抗体複合体）の形成後、複合体中の標識の量が、当技術分野で公知の技術を使用して定量化される。例えば、酵素標識が使用される場合には、標識された複合体は、色の発色などの定量可能な反応を生じる標識のために、基質と反応させられる。標識が放射性標識である場合は、標識は、シンチレーションカウンターなどの適当な手段を使用して定量化される。標識が蛍光標識である場合は、標識は、標識を、ある色の光（「励起波長」として知られる）で刺激することおよび刺激に応じて標識によって放出される別の色（「発光波長」として知られる）を検出することによって定量化される。標識が化学発光標識である場合は、標識は、放出された光を、視覚的に、またはルミノメーター、Ｘ線フィルム、高感度写真用フィルム、ＣＣＤカメラなどを使用することによってのいずれかで検出することによって定量化される。複合体中の標識の量が定量化されると、既知濃度の分析物またはその断片の段階希釈を使用して作成されている標準曲線の使用によってなど、適当な手段によって試験試料中の分析物またはその断片の濃度が決定される。分析物またはその断片の段階希釈を使用すること以外に、標準曲線は、質量分析によって、および当技術分野で公知のその他の技術によって重量測定的に作成され得る。

【0405】

ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）分析機を使用する化学発光微粒子アッセイでは、コンジュゲート希釈液ｐＨは、約６．０＋／−０．２でなければならず、微粒子コーティングバッファーは、ほぼ室温（すなわち、約１７℃から約２７℃）で維持されなければならず、微粒子コーティングバッファーｐＨは、約６．５＋／−０．２でなければならず、微粒子希釈液ｐＨは、約７．８＋／−０．２でなければならない。固体は、約０．２％未満、例えば、約０．１５％未満、約０．１４％未満、約０．１３％未満、約０．１２％未満または約０．１１％未満、例えば、約０．１０％であることが好ましい。

【0406】

ＦＰＩＡは、競合結合イムノアッセイの原理に基づいている。蛍光標識された化合物は、直線偏光によって励起されると、その回旋速度に反比例した偏光度を有する蛍光を発光する。蛍光標識されたトレーサー−抗体複合体が直線偏光によって励起される場合には、発光光は高度に偏光したままであるが、これは、フルオロフォアが、光が吸収される時間と光が発光される時間の間、回旋が制約されるためである。「遊離」トレーサー化合物（すなわち、抗体に結合されていない化合物）が直線偏光によって励起されると、その回旋は、競合結合イムノアッセイにおいて生じた対応するトレーサー−抗体コンジュゲートよりもかなり速い。ＦＰＩＡは、特別な取り扱いおよび廃棄を必要とする放射性物質がないために、ＲＩＡを上回って有利である。さらに、ＦＰＩＡは、容易に、迅速に実施され得る均一なアッセイである。

【0407】

上記を考慮して、試験試料中の分析物（またはその断片）の存在、量または濃度を調べる方法が提供される。この方法は、（ｉ）（ｉ’）分析物と結合できる少なくとも１種の抗体、抗体の断片、分析物と結合できる抗体の変異体、分析物と結合できる抗体の変異体の断片および分析物と結合できるＤＶＤ−Ｉｇ（またはその断片、変異体または変異体の断片）と、（ｉｉ’）少なくとも１種の検出可能な標識とを使用し、（ｉｉ）試験試料中の分析物（またはその断片）の存在、量または濃度の直接または間接指標として検出可能な標識によって生じたシグナルを、対照または標準物質中の分析物（またはその断片）の存在、量または濃度の直接または間接指標として生じたシグナルと比較することを含むアッセイによって、分析物（またはその断片）について試験試料をアッセイすることを含む。標準物質は、場合により、標準物質の各々が、分析物の濃度によってその他の標準物質と異なる一連の標準物質の一部である。

【0408】

本方法は、（ｉ）分析物と結合できる抗体、抗体の断片、分析物と結合できる抗体の変異体、分析物と結合できる変異体の断片および分析物と結合できるＤＶＤ−Ｉｇ（またはその断片、変異体または変異体の断片）からなる群から選択される分析物（またはその断片）のために、試験試料を少なくとも１種の第１の特異的結合パートナーと接触させて、第１の特異的結合パートナー／分析物（またはその断片）複合体を形成すること、（ｉｉ）分析物と結合できる検出可能に標識された抗分析物抗体、検出可能に標識された抗分析物抗体の断片、分析物と結合できる検出可能に標識された抗分析物抗体の変異体、分析物と結合できる検出可能に標識された抗分析物抗体の変異体の断片および検出可能に標識されたＤＶＤ−Ｉｇ（またはその断片、変異体または変異体の断片）からなる群から選択される分析物（またはその断片）のために、第１の特異的結合パートナー／分析物（またはその断片）複合体を、少なくとも１種の第２の特異的結合パートナーと接触させて、第１の特異的結合パートナー／分析物（またはその断片）／第２の特異的結合パートナー複合体を形成すること、および（ｉｉｉ）（ｉｉ）において形成された第１の特異的結合パートナー／分析物（またはその断片）／第２の特異的結合パートナー複合体中の検出可能な標識によって生じたシグナルを検出または測定することによって、試験試料中の分析物の存在、量または濃度を調べることを含み得る。分析物（またはその断片）の少なくとも１種の第１の特異的結合パートナーおよび／または分析物（またはその断片）の少なくとも１種の第２の特異的結合パートナーが、本明細書に記載されるＤＶＤ−Ｉｇ（またはその断片、変異体または変異体の断片）である方法が好ましいものであり得る。

【0409】

あるいは、本明細書において方法は、分析物と結合できる抗体、抗体の断片、分析物と結合できる抗体の変異体、分析物と結合できる抗体の変異体の断片およびＤＶＤ−Ｉｇ（またはその断片、変異体または変異体の断片）からなる群から選択されるＩＬ−１β分析物（またはその断片）のために、試験試料を少なくとも１種の第１の特異的結合パートナーと接触させること、ならびに同時に、またはいずれかの順序で逐次、試験試料を、少なくとも１種の第１の特異的結合パートナーとの結合について分析物（またはその断片）と競合し得、第１の特異的結合パートナーと結合できる検出可能に標識された分析物、検出可能に標識された分析物の断片、第１の特異的結合パートナーと結合できる検出可能に標識された分析物の変異体および第１の特異的結合パートナーと結合できる検出可能に標識された分析物の変異体の断片からなる群から選択される、少なくとも１種の第２の特異的結合パートナーと接触させることを含み得る。試験試料中に存在する任意のＩＬ−１β（またはその断片）および少なくとも１種の第２の特異的結合パートナーは、互いに競合して、それぞれ、第１の特異的結合パートナー／分析物（またはその断片）複合体および第１の特異的結合パートナー／第２の特異的結合パートナー複合体を形成する。本方法は、（ｉｉ）に形成された第１の特異的結合パートナー／第２の特異的結合パートナー複合体中の検出可能な標識によって生じたシグナルを検出または測定することによって、試験試料中の分析物の存在、量または濃度を調べることをさらに含み、ここで、第１の特異的結合パートナー／第２の特異的結合パートナー複合体中の検出可能な標識によって生じたシグナルは、試験試料中の分析物の量または濃度に反比例する。

【0410】

上記の方法は、診断すること、予防することまたは試験試料が得られた患者の治療的／予防的処置の有効性を評価することさらに含み得る。本方法が、試験試料が得られた患者の治療的／予防的処置の有効性を評価することをさらに含む場合には、本方法は、場合により、有効性を改善するよう必要に応じて、患者の治療的／予防的処置を改変することをさらに含む。本方法は、自動化システムまたは半自動化システムにおいて使用するために適応され得る。

【0411】

アッセイ法（およびそのためのキット）に関して、市販の抗分析物抗体または文献に記載される抗分析物の製造方法を使用することは可能であり得る。種々の抗体の商業的供給業者（ｓｕｐｐｌｉｅｓ）として、それだけには限らないが、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）、ＧｅｎＷａｙ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）およびＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（ＲＤＳ；Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）が挙げられる。

【0412】

一般に、例えば、疾患または疾患のリスクを検出するために、分析物またはその断片について試験試料を評価する際に得られた結果を、それに対して評価するためのベンチマークとして、所定のレベルが使用され得る。一般に、このような比較では、特定のアッセイを、分析物の存在、量または濃度を、疾患、障害または状態の特定の段階またはエンドポイントと、または特定の臨床兆候とつなげるまたは関連づけることができるような、十分な時間および適当な条件下で行うことによって所定のレベルが得られる。通常、所定のレベルは、参照被験体（または被験体の集団）のアッセイを用いて得られる。測定される分析物は、その断片、その分解生成物および／またはその酵素切断生成物を含み得る。

【0413】

特に、疾患進行および／または治療をモニタリングするために使用されるような所定のレベルに関しては、分析物またはその断片の量または濃度は、「変化しない」、「好ましい」（または「好ましく変化した」）、または「好ましくない」（または「好ましくなく変化した」）ものであり得る。「上昇した」または「増大した」とは、通常もしくは正常のレベルもしくは範囲（例えば、所定のレベル）よりも高い、または別の参照レベルもしくは範囲（例えば、初期のまたはベースラインの試料）よりも高い、試験試料中の量または濃度を指す。用語「低下した」または「減少した」とは、通常もしくは正常のレベルもしくは範囲（例えば、所定のレベル）よりも低い、または別の参照レベルもしくは範囲（例えば、初期のまたはベースラインの試料）よりも低い、試験試料中の量または濃度を指す。用語「変化した」とは、通常もしくは正常のレベルもしくは範囲（例えば、所定のレベル）を超えて、または別の参照レベルもしくは範囲（例えば、初期のまたはベースラインの試料）を超えて変化した（増大したまたは減少した）試料中の量または濃度を指す。

【0414】

分析物の通常または正常のレベルまたは範囲は、標準的な実施にしたがって定義される。いくつかの場合では、分析物のレベルは極めて低いので、いわゆる変化したレベルまたは変化は、実験エラーまたは試料の変動によっては説明され得ない、通常もしくは正常レベルもしくは範囲または参照レベルもしくは範囲と比較した、任意の正味の変化がある場合に生じたと考えられ得る。したがって、特定の試料において測定されたレベルが、いわゆる正常な被験体から得た同様の試料において決定されたレベルまたはレベルの範囲と比較される。これに関連して、「正常な被験体」とは、検出可能な疾患のない個体であり、例えば、「正常な」（時には、「対照」と呼ばれる）患者または集団は、例えば、それぞれ、検出可能な疾患を示さないものである。さらに、分析物が、ヒト集団の大部分において高レベルで日常的には見出されないならば、「正常な被験体」は、実質的に検出可能な増大または上昇した分析物の量または濃度を有さない個体と考えられ得、「正常」（時には、「対照」と呼ばれる）患者または集団は、実質的に検出可能な増大または上昇した分析物の量または濃度を示さないものである。「見かけ正常な被験体」とは、分析物がまだ評価されていない、または現在評価されているものである。分析物のレベルは、分析物が正常には検出可能ではない（例えば、正常レベルがゼロであるか、正常集団の約２５から約７５パーセンタイルの範囲内である）が、試験試料では検出される場合に、ならびに試験試料中に分析物が正常よりも高いレベルで存在する場合に、「上昇した」といわれる。したがって、とりわけ、本開示内容は、特定の疾患、障害または状態を有するか、有するリスクがある被験体についてスクリーニングする方法を提供する。本アッセイ方法はまた、その他のマーカーなどのアッセイを含み得る。

【0415】

したがって、本明細書に記載される方法はまた、被験体が、所与の疾患、障害または状態を有するか、発症するリスクにあるかどうかを調べるために使用され得る。具体的には、このような方法は、
（ａ）ＩＬ−１β（またはその断片）の、被験体から得た試験試料中の濃度または量を調べるステップ（例えば、本明細書に記載される方法または当技術分野で公知の方法を使用して）と、
（ｂ）ステップ（ａ）で決定されたＩＬ−１β（またはその断片）の濃度または量を、所定のレベルと比較するステップと
を含み得、ここで、ステップ（ａ）で決定された分析物の濃度または量が、所定のレベルに対して好ましいものである場合には、被験体は、所与の疾患、障害または状態を有さないか、そのリスクにないと決定される。しかし、ステップ（ａ）で決定されたＩＬ−１βの濃度または量が、所定のレベルに対して好ましくない場合は、被験体は、所与の疾患、障害または状態を有するか、そのリスクにあると決定される。

【0416】

さらに、被験体における疾患の進行をモニタリングする方法が本明細書において提供される。最適には、本明細書において方法は、
（ａ）ＩＬ−１βの、被験体から得た試験試料中の濃度または量を調べるステップと、
（ｂ）ＩＬ−１βの、被験体から得た、後の試験試料中の濃度または量を調べるステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）において決定される分析物の濃度または量を、ステップ（ａ）において決定されたＩＬ−１βの濃度または量と比較するステップと
を含み、ステップ（ａ）で決定されたＩＬ−１βの濃度または量と比較した場合に、ステップ（ｂ）において決定された濃度または量が、変化しない、または好ましくない場合に、被験体における疾患が継続、進行または悪化していると決定される。比較することによって、ステップ（ａ）において決定されるＩＬ−１βの濃度または量と比較された場合にステップ（ｂ）において決定されるＩＬ−１βの濃度または量が好ましい場合に、被験体における疾患は、中断、消失または改善していると決定される。

【0417】

場合により、本方法は、ステップ（ｂ）において決定されるＩＬ−１β分析物の濃度または量を、例えば、所定のレベルと比較することをさらに含む。さらに、場合により、本方法は、比較が、ステップ（ｂ）において決定される分析物の濃度または量が、例えば、所定のレベルに対して好ましくなく変化していることを示す場合に、被験体を１種または複数の医薬組成物を用いて一定期間治療することを含む。

【0418】

さらに、本方法は、１種または複数の医薬組成物を用いて治療を受けている被験体において治療をモニタリングするために使用され得る。具体的には、このような方法は、被験体が１種または複数の医薬組成物を投与される前に被験体から得た第１の試験試料を提供することを含む。次いで、ＩＬ−１βの、被験体から得た第１の試験試料中の濃度または量が決定される（例えば、本明細書に記載された方法または当技術分野で公知の方法を使用して）。ＩＬ−１βの濃度または量が決定された後、場合により、次いで、ＩＬ−１βの濃度または量が所定のレベルと比較される。第１の試験試料において決定されるＩＬ−１βの濃度または量が、所定のレベルよりも低い場合に、被験体は、１種または複数の医薬組成物を用いて治療されない。しかし、第１の試験試料において決定されるＩＬ−１βの濃度または量が所定のレベルよりも高い場合に、被験体は、１種または複数の医薬組成物を用いて、一定期間治療される。被験体が１種または複数の医薬組成物を用いて治療される期間は、当業者によって決定され得る（例えば、期間は、約７日から約２年、好ましくは、約１４日から約１年であり得る）。

【0419】

１種または複数の医薬組成物を用いる治療の経過の間に、被験体から第２の、およびその後の試験試料が入手される。試験試料の数および前記の試験試料が被験体から入手された時間は重要ではない。例えば、被験体が１種または複数の医薬組成物を最初に投与された７日後に第２の試験試料が、入手され得、第３の試験試料が、被験体が１種または複数の医薬組成物を最初に投与された２週間後に入手され得、第４の試験試料が、被験体が１種または複数の医薬組成物を最初に投与された３週間後に入手され得、第５の試験試料が、被験体が１種または複数の医薬組成物を最初に投与された４週間後に入手され得るなど。

【0420】

第２の、またはそれに続く試験試料各々が被験体から入手された後、第２の、またはそれに続く試験試料中のＩＬ−１β分析物の濃度または量が調べられる（例えば、本明細書に記載された方法または当技術分野で公知の方法を使用して）。第２の、およびそれに続く試験試料各々において決定されるＩＬ−１βの濃度または量が、第１の試験試料（例えば、最初に、場合により、所定のレベルと比較された試験試料）において決定される分析物の濃度または量と比較される。ステップ（ａ）において決定される分析物の濃度または量と比較した場合に、ステップ（ｃ）において決定されるＩＬ−１βの濃度または量が、好ましい場合には、被験体における疾患は、中断、消失または改善していると決定され、被験体は、ステップ（ｂ）の１種または医薬組成物を投与され続けなければならない。しかし、ステップ（ａ）において決定される分析物の濃度または量と比較された場合に、ステップ（ｃ）において決定された濃度または量が、変化しない、または好ましくない場合には、被験体における疾患が継続、進行または悪化していると決定され、被験体は、ステップ（ｂ）において被験体に投与される、より高濃度の１種または複数の医薬組成物を用いて治療されなければならない、または被験体は、ステップ（ｂ）において被験体に投与された１種または複数の医薬組成物とは異なる、１種または複数の医薬組成物を用いて治療されなければならない。具体的には、被験体は、被験体が、前記の被験体の分析物レベルを低減または低下させるために、これまでに投与された１種または複数の医薬組成物とは異なる１種または複数の医薬組成物を用いて治療され得る。

【0421】

一般に、反復試験が行われるアッセイ（例えば、疾患進行および／または治療に対する反応をモニタリングすること）のために、第１の試験試料が被験体から入手された後、一定期間で、第２の、またはそれに続く試験試料が、入手される。具体的には、被験体から得た第２の試験試料は、被験体から第１の試験試料が入手された後、数分、数日、数週間または数年で入手され得る。例えば、第２の試験試料は、被験体から第１の試験試料が入手された後、約１分、約５分、約１０分、約１５分、約３０分、約４５分、約６０分、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、約２２週間、約２３週間、約２４週間、約２５週間、約２６週間、約２７週間、約２８週間、約２９週間、約３０週間、約３１週間、約３２週間、約３３週間、約３４週間、約３５週間、約３６週間、約３７週間、約３８週間、約３９週間、約４０週間、約４１週間、約４２週間、約４３週間、約４４週間、約４５週間、約４６週間、約４７週間、約４８週間、約４９週間、約５０週間、約５１週間、約５２週間、約１．５年、約２年、約２．５年、約３．０年、約３．５年、約４．０年、約４．５年、約５．０年、約５．５年、約６．０年、約６．５年、約７．０年、約７．５年、約８．０年、約８．５年、約９．０年、約９．５年または約１０．０年で被験体から入手され得る。

【0422】

疾患進行をモニタリングするために使用される場合には、上記のアッセイは、急性状態を患っている被験体において疾患の進行をモニタリングするために使用され得る。救命救急状態としても知られる急性状態は、急性の、命を脅かす疾患または例えば、心血管系もしくは排泄系が絡むその他の重大な医学的状態を指す。通常、救命救急状態とは、病院での環境（それだけには限らないが、緊急治療室、集中治療室、外傷センターまたはその他の緊急治療環境を含む）における迅速な医学的介入または診療補助者またはその他の現場ベースの医療関係者による投与を必要とする状態を指す。救命救急状態については、反復モニタリングは、一般に、より短い時間枠、すなわち、数分、数時間または数日（例えば、約１分、約５分、約１０分、約１５分、約３０分、約４５分、約６０分、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日または約７日）内で行われ、初期アッセイも同様に、一般に、より短い時間枠、例えば、疾患または状態の発生の約数分、数時間または数日内で行われる。

【0423】

アッセイはまた、慢性または非急性状態を患っている被験体における疾患の進行をモニタリングするために使用され得る。非救命救急または非急性状態とは、急性の、命を脅かす疾患または例えば、心血管系および／もしくは排泄系が絡むその他の重大な医学的状態以外の状態を指す。通常、非急性状態は、長期のまたは慢性の期間のものを含む。非急性状態については、反復モニタリングは、一般に、より長い時間枠、例えば、数時間、数日、数週間、数ヶ月または数年（例えば、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、約２２週間、約２３週間、約２４週間、約２５週間、約２６週間、約２７週間、約２８週間、約２９週間、約３０週間、約３１週間、約３２週間、約３３週間、約３４週間、約３５週間、約３６週間、約３７週間、約３８週間、約３９週間、約４０週間、約４１週間、約４２週間、約４３週間、約４４週間、約４５週間、約４６週間、約４７週間、約４８週間、約４９週間、約５０週間、約５１週間、約５２週間、約１．５年、約２年、約２．５年、約３．０年、約３．５年、約４．０年、約４．５年、約５．０年、約５．５年、約６．０年、約６．５年、約７．０年、約７．５年、約８．０年、約８．５年、約９．０年、約９．５年または約１０．０年）内で行われ、初期アッセイも同様に、一般に、より長い時間枠、例えば、疾患または状態の発生の約数時間、数日、数ヶ月または数年内で行われる。

【0424】

さらに、上記のアッセイは、被験体から得られた第１の試験試料を使用して実施され得、ここで、第１の試験試料が、１種の供給源、例えば、尿、血清または血漿から入手される。場合により、上記のアッセイは、次いで、被験体から入手された第２の試験試料を使用して反復され得、これでは、第２の試験試料は、別の供給源から入手される。例えば、第１の試験試料が尿から入手された場合は、第２の試験試料は血清または血漿から入手され得る。第１の試験試料および第２の試験試料を使用するアッセイから得られた結果が比較され得る。比較は、被験体における疾患または状態の現状を評価するために使用され得る。

【0425】

さらに、本開示内容はまた、所与の疾患、障害または状態を患う傾向があるか、患っている被験体が、治療から恩恵を受けるかどうかを調べる方法に関する。特に、本開示内容は、分析物コンパニオン診断法および製剤に関する。したがって、本明細書に記載される「被験体における疾患の治療をモニタリング」する方法は、さらに最適には、治療の候補を選択または同定することを包含し得る。

【0426】

したがって、特定の実施形態では、本開示内容はまた、所与の疾患、障害または状態を有する、またはそのリスクにある被験体が、治療の候補であるかどうかを決定する方法を提供する。一般に、被験体は、所与の疾患、障害または状態のいくつかの症状を経験したものまたは実際に、所与の疾患、障害または状態を有する、またはそのリスクにあると診断されているものおよび／または本明細書に記載される分析物またはその断片の好ましくない濃度または量を示すものである。

【0427】

本方法は、場合により、ＩＬ−１βが、１種または複数の医薬組成物（例えば、特に、分析物が絡む作用機序と関連している医薬）を用いる、免疫抑制治療を用いる、または免疫吸収（ｉｍｍｕｎｏａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ）治療による、被験体の治療の前および後に評価される、または分析物がこのような治療の後に評価され、分析物の濃度または量が、所定のレベルに対して比較される本明細書に記載されるアッセイを含む。治療後に観察されたＩＬ−１βの好ましくない濃度または量によって、被験体が、さらなる治療または継続治療を受けることから恩恵を受けないことが確認されるのに対し、治療後に観察された分析物の好ましい濃度または量によって、被験体が、さらなる治療または継続治療を受けることから恩恵を受けることが確認される。この確認によって、臨床研究の管理および改善された患者のケアの提供が支援される。

【0428】

言うまでもないが、本明細書に論じられる所与の疾患、障害または状態を評価するために使用される場合に本明細書における特定の実施形態は有利であるが、その他の疾患、障害または状態において分析物を評価するために、本アッセイおよびキットが使用され得る。アッセイ法はまた、その他のマーカーなどのアッセイを含む。

【0429】

アッセイ法はまた、所与の疾患、障害または状態を寛解させる化合物を同定するために使用され得る。例えば、分析物を発現する細胞は、候補化合物と接触させられ得る。化合物と接触させられる細胞中の分析物の発現のレベルは、本明細書に記載されるアッセイ法を使用して対照細胞中のものと比較され得る。

【0430】

ＩＩ．キット
試験試料中の分析物（またはその断片）の存在、量または濃度について、試験試料をアッセイするキットがまた、提供される。本キットは、試験試料をＩＬ−１β（またはその断片）についてアッセイするための少なくとも１種の成分と、試験試料を分析物（またはその断片）についてアッセイするための説明書とを含む。試験試料を分析物（またはその断片）についてアッセイするための少なくとも１種の成分は、本明細書に記載される、抗ＩＬ−１β結合タンパク質、例えば、モノクローナル抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ（またはその断片、変異体または変異体の断片）を含む組成物を含み得、場合により、固相上に固定化されている。

【0431】

本キットは、イムノアッセイ、例えば、化学発光微粒子イムノアッセイによって試験試料をＩＬ−１β分析物についてアッセイするための少なくとも１種の成分と、イムノアッセイ、例えば、化学発光微粒子イムノアッセイによって試験試料をＩＬ−１β分析物についてアッセイするための説明書とを含み得る。例えば、本キットは、ＩＬ−１βの少なくとも１種の特異的結合パートナー、例えば、抗ＩＬ−１βモノクローナル／ポリクローナル抗体（またはＩＬ−１β分析物と結合できるその断片、分析物と結合できるその変異体または分析物と結合できる変異体の断片）または抗ＩＬ−１βＤＶＤ−Ｉｇ（またはその断片、変異体または変異体の断片）を含み得、それらのいずれかが検出可能に標識され得る。あるいは、またはさらに、キットは、抗分析物モノクローナル／ポリクローナル抗体（または分析物と結合できるその断片、分析物と結合できるその変異体または分析物と結合できる変異体の断片）または抗分析物ＤＶＤ−Ｉｇ（またはその断片、変異体または変異体の断片）との結合について、試験試料中の任意の分析物と競合し得る、検出可能に標識されたＩＬ−１β分析物（または抗分析物と結合できるその断片、モノクローナル／ポリクローナル抗体または抗分析物ＤＶＤ−Ｉｇ（またはその断片、変異体または変異体の断片））を含み得、それらのいずれかが、固相支持体上に固定化され得る。本キットは、標準物質または対照、例えば、単離または精製分析物を含み得る。本キットは、アッセイを実施するための、少なくとも１種の容器（例えば、すでに、第１の特異的結合パートナーでコーティングされている場合がある、例えば、チューブ、マイクロタイタープレートまたはストリップ）および／またはバッファー、例えば、アッセイバッファーもしくは洗浄バッファーを含み得、それらのいずれか１種が、検出可能な標識（例えば、酵素標識）のための濃縮溶液、基質溶液または停止溶液として提供され得る。好ましくは、本キットは、アッセイを実施するために必要であるすべての成分、すなわち、試薬、標準、バッファー、希釈剤などを含む。説明書は、紙の形態であっても、コンピュータで読み取り可能な形態、例えば、ディスク、ＣＤ、ＤＶＤなどであってもよい。

【0432】

任意の結合タンパク質、例えば、抗ＩＬ−１β結合タンパク質または抗分析物ＤＶＤ−Ｉｇまたはトレーサーは、本明細書に記載される検出可能な標識、例えば、フルオロフォア、放射性部分、酵素、ビオチン／アビジン標識、発色団、化学発光標識などを組み込むことができ、または本キットは、検出可能な標識を実施するための試薬を含み得る。抗体、標準物質および／または対照は、別個の容器で提供されるか、適当なアッセイ形式、例えば、マイクロタイタープレート中に予め分配され得る。

【0433】

所望により、本キットは、品質管理成分（例えば、感受性パネル、標準物質および陽性対照）を含む。品質管理試薬の調製は、当技術分野で周知であり、種々の免疫診断薬について挿入シート上に記載されている。感受性パネルメンバーは、アッセイパフォーマンス特性を確立するために場合により使用され、さらに場合により、イムノアッセイキット試薬の完全性およびアッセイの標準化の有用な指標である。

【0434】

本キットはまた、診断アッセイを実施するのに、または品質管理評価を容易にするのに必要なその他の試薬、例えば、バッファー、塩、酵素、酵素補助因子、酵素基質、検出試薬などを場合により含み得る。試験試料の単離および／または処理のためのバッファーおよび溶液などのその他の成分（例えば、前処理試薬）も、本キットに含まれ得る。本キットは、１種または複数のその他の対照をさらに含み得る。本キットの成分の１種または複数は、凍結乾燥され得、この場合には、本キットは、凍結乾燥成分の再構成に適した試薬をさらに含み得る。

【0435】

本キットの種々の成分は、場合により、必要に応じて適した容器、例えば、マイクロタイタープレート中で提供される。本キットは、試料を入れる、または保存するための容器（例えば、尿試料用の容器またはカートリッジ）をさらに含み得る。必要に応じて、本キットはまた、場合により、反応容器、混合容器および試薬または試験試料の調製を容易にするその他の成分を含有し得る。本キットはまた、試験試料を入手することを支援するための１種または複数の機器、例えば、シリンジ、ピペット、鉗子、計量スプーンなどを含み得る。

【0436】

検出可能な標識が、少なくとも１種のアクリジニウム化合物である場合は、本キットは、少なくとも１種のアクリジニウム−９−カルボキサミド、少なくとも１種のアクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルまたはその任意の組合せを含み得る。検出可能な標識が、少なくとも１種のアクリジニウム化合物である場合は、本キットはまた、過酸化水素の供給源、例えば、バッファー、溶液および／または少なくとも１種の塩基性溶液を含み得る。必要に応じて、本キットは、固相、例えば、磁性粒子、ビーズ、試験管、マイクロタイタープレート、キュベット、メンブレン、足場分子、フィルム、濾紙、ディスクまたはチップを含有し得る。

【0437】

ＩＩＩ．キットおよび方法の適応
本キット（またはその成分）ならびに本明細書に記載されるイムノアッセイなどのアッセイによって、試験試料中の分析物の存在、量または濃度を調べる方法は、例えば、米国特許第５，０８９，４２４号および同５，００６，３０９号に記載され、例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）としてＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）によって市販されるような、種々の自動化および半自動化システム（固相が微粒子を含むものを含む）における使用に適応され得る。

【0438】

非自動化システム（例えば、ＥＬＩＳＡ）と比較される、自動化または半自動化システム間の相違の一部として、第１の特異的結合パートナー（例えば、抗分析物、モノクローナル／ポリクローナル抗体（またはその断片、その変異体またはその変異体の断片）または抗分析物ＤＶＤ−Ｉｇ（またはその断片、その変異体またはその変異体の断片）が付着され、どちらにしても、サンドイッチ形成および分析物反応性は影響され得る）基質ならびに捕獲、検出および／または任意の任意選択の洗浄ステップの長さおよびタイミングが挙げられる。ＥＬＩＳＡなどの非自動化形式は、試料および捕獲試薬とともの相対的に長いインキュベーション時間（例えば、約２時間）を必要とし得るが、自動化または半自動化形式（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）は、相対的に短いインキュベーション時間（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）のおよそ１８分）を有し得る。同様に、ＥＬＩＳＡなどの非自動化形式は、コンジュゲート試薬などの検出抗体を、比較的長いインキュベーション時間の間（例えば、約２時間）インキュベートし得るが、自動化または半自動化形式（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標））は、相対的に短いインキュベーション時間（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）のおよそ４分）を有し得る。

【0439】

Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手できるその他のプラットフォームとして、それだけには限らないが、ＡｘＳＹＭ（登録商標）、ＩＭｘ（登録商標）（例えば、米国特許第５，２９４，４０４号参照のこと）、ＰＲＩＳＭ（登録商標）、ＥＩＡ（ビーズ）およびＱｕａｎｔｕｍ（商標）ＩＩならびにその他のプラットフォームが挙げられる。さらに、アッセイ、キットおよびキット成分は、その他の形式で、例えば、電気化学的またはその他のハンドヘルドまたはポイントオブケアアッセイシステムで使用され得る。本開示内容は、例えば、市販のＡｂｂｏｔｔ Ｐｏｉｎｔ ｏｆ Ｃａｒｅ（ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）サンドイッチイムノアッセイを実施する電気化学的イムノアッセイシステムに適用できる。イムノセンサーならびに使い捨て試験装置におけるその製造方法および操作方法が、例えば、米国特許第５，０６３，０８１号、米国特許出願公開第２００３／０１７０８８１号、米国特許出願公開第２００４／００１８５７７号、米国特許出願公開第２００５／００５４０７８号および米国特許出願公開第２００６／０１６０１６４号に記載されている。

【0440】

特に、分析物アッセイのＩ−ＳＴＡＴ（登録商標）システムへの適応に関して、以下の配置が好ましい。微細加工シリコンチップは、一対の金アンペロメトリー作用電極および銀−塩化銀参照電極を用いて製造される。作用電極の一方上で、固定化された抗分析物、モノクローナル／ポリクローナル抗体（またはその断片、その変異体またはその変異体の断片）または抗分析物ＤＶＤ−Ｉｇ（またはその断片、その変異体またはその変異体の断片）を有するポリスチレンビーズ（直径０．２ｍｍ）が、電極上のパターン化されたポリビニルアルコールのポリマーコーティングに接着される。このチップは、イムノアッセイに適した流体形式でＩ−ＳＴＡＴ（登録商標）カートリッジに組み立てられる。カートリッジの試料を入れたチャンバーの壁の一部上に、抗分析物、モノクローナル／ポリクローナル抗体（または分析物と結合できるその断片、その変異体またはその変異体の断片）または抗分析物ＤＶＤ−Ｉｇ（または分析物と結合できるその断片、その変異体またはその変異体の断片）などの分析物の特異的結合パートナーを含む層があり、それらのいずれかが、検出可能に標識され得る。カートリッジの流体袋内に、ｐ−アミノフェノールホスフェートを含む水性試薬がある。

【0441】

運転中、試験カートリッジの保持チャンバーに、分析物を含有すると疑われる試料が添加され、Ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）リーダー中にカートリッジが挿入される。分析物の特異的結合パートナーが、試料に溶解された後、カートリッジ内のポンプ要素が試料を、チップを含有するコンジット中に入れる。ここで、サンドイッチの形成を促進するために振動させられる。アッセイの最後から２番目のステップでは、流体が袋から出され、コンジット中に入れられて、チップから試料を廃棄チャンバー中に洗浄除去する。アッセイの最後のステップでは、アルカリホスファターゼ標識は、ｐ−アミノフェノールホスフェートと反応して、ホスフェート基を切断し、遊離ｐ−アミノフェノールが作用電極で電気化学的に酸化されることを可能にする。測定された電流に基づいて、リーダーは、内蔵されたアルゴリズムおよび工場によって決定された較正曲線によって試料中の分析物の量を算出できる。

【0442】

さらに言うまでもないが、本明細書に記載される方法およびキットは、その他の試薬およびイムノアッセイを実施する方法を必ず包含する。例えば、当技術分野で公知のものならびに／またはコンジュゲート希釈液、微粒子希釈液として、および／もしくは標準物質希釈液として、例えば、洗浄に使用されるよう容易に調製もしくは最適化され得るものなどの種々のバッファーが包含される。例示的コンジュゲート希釈液は、特定のキット（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）において使用され、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、塩、タンパク質遮断薬、抗菌剤および界面活性剤を含有するＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）コンジュゲート希釈液である。例示的標準物質希釈液として、ＭＥＳ、その他の塩、タンパク質遮断薬および抗菌剤を含有するバッファーを含む、特定のキット（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）において使用されるＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）ヒト標準物質希釈液がある。さらに、米国特許出願第１２／６５０，２４１号（米国特許出願公開第２０１０／０１６７３０１号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１０／０７８４４３も参照のこと）に記載されるように、例えば、シグナル増幅器としてシグナル抗体と連結された核酸配列を使用して、Ｉ−Ｓｔａｔカートリッジ形式で、シグナル生成が改善され得る。

【0443】

本明細書に記載された本発明の方法のその他の適した改変および適合は、明らかであり、本発明の範囲または本明細書に記載された実施形態から逸脱することなく、適した等価物を使用して行われ得るということは、当業者には容易に明らかとなる。

【0444】

ここで、本発明を詳細に記載したが、これは、単に例示目的で含まれるのであって、本発明を制限するものではない以下の実施例を参照することによってより明確に理解される。

【実施例】

【0445】

実施例１：クローンＥ２６からの親和性成熟されたヒト化ＩＬ−１β抗体の作製
表６は、ヒト化マウスＥ２６抗体（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９５／０１９９７）のＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列を提供する。各ＶＨおよびＶＬ配列の個々のＣＤＲのアミノ酸残基は太字で示されている。

【0446】

【表10】

【0447】

親和性成熟されたヒト化マウスＥ２６抗体は以下のように得た。１種の軽鎖ライブラリーを、以下の残基で制限された突然変異誘発を含有するよう構築した：ＣＤＲＬ１：３０、３１、３２；ＣＤＲＬ２：５０、５３、５５、５６；ＣＤＲＬ３：９２、９３、９４、９６および９７（Ｋａｂａｔ番号付け）。２種の重鎖ライブラリーを、ＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２中、残基３１、３３、５０、５２ａ、５５、５６、５７、５８および６０（Ｋａｂａｔ番号付け）で、または、ＣＤＲＨ３中、残基９５、９６、９７、９８、９９、１００、１００ａ、１００ｂおよび１０２で制限された突然変異誘発を含有するよう製造した。重鎖ライブラリーはまた、ライブラリー選択の際のフレームワーク生殖系列化（ｇｅｒｍ−ｌｉｎｉｎｇ）を可能にするよう、残基２３（Ａ／Ｓ）、２４（Ａ／Ｓ）、６２（Ｔ／Ｓ）、８４（Ｐ／Ａ）、８８（Ｇ／Ａ）、９１（Ｆ／Ｙ）および１０８（Ｐ／Ｌ）で二元性多様性を含有していた。カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＩＬ−１βの濃度を低下させることによって、全部で３種のライブラリーを別個に選択した。次いで、すべて突然変異誘発したＣＤＲ配列を、ＶＨ ＣＤＲのみに突然変異を有する１種のライブラリーおよび６つすべてのＣＤＲ中に突然変異を有する別のライブラリー中に組み合わせた。これら２種の組み合わせたライブラリーを、ヒトおよびｃｙｎｏＩＬ−１βを用いる、よりストリンジェントな選択条件に付し、その後、個々の抗体をさらなる特性決定のために、ＩｇＧタンパク質として同定および発現させた。

【0448】

表７は、ヒト化Ｅ２６由来の親和性成熟されたＩＬ−１β抗体のＶＨ領域のアミノ酸配列のリストを提供する。各ＶＨ配列の個々のＣＤＲのアミノ酸残基は、太字で示されている。

【0449】

【表11】

【0450】

表８は、Ｅ２６に由来する親和性成熟されたヒト化ＩＬ−１β抗体のＶＬ領域のアミノ酸配列のリストを提供する。各ＶＬ配列の個々のＣＤＲのアミノ酸残基は、太字で示されている。以下の表８において親和性成熟されたＶＬ配列の一部において見られるＮ末端Ｄ（Ａｓｐ）からＧ（Ｇｌｙ）への突然変異は、ライブラリー構築の際に実施したポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）の際に生じた意図されない突然変異誘発の結果である可能性が最も高かった。Ｎ末端Ｇ残基は、これらの領域がＩｇＧ分子の構築に使用される場合に、因果関係はないが除去され得る。

【0451】

【表12】

上記の表中のヒト化Ｅ２６に由来する親和性成熟されたＩＬ−１β抗体のＶＨおよびＶＬ領域の個々のＣＤＲの配列の配列をアラインして、表９中のものなどのコンセンサスＣＤＲ配列を提供できる。

【0452】

【表13】

【0453】

表１０中の配列を、さらなる特性決定のためにＩｇＧに変換した。クローンＥ２６．１３は、それぞれ、Ｅ２６．１３ ＪＭ ＶＨおよびＥ２６．１３ ＪＭ ＶＬと呼ばれる、重鎖可変および軽鎖領域のＪ−領域中で突然変異させて、非生殖系列フレームワーク突然変異を除去した。個々のＣＤＲのアミノ酸残基は、太字で示されている。

【0454】

【表14】

【0455】

実施例２：ＩＬ−１β抗体の機能的特性決定
実施例２．１：ＩＬ−１β酵素結合免疫吸着測定プロトコール
抗ＩＬ−１β ｍＡｂが、ヒトＩＬ−１βと結合するかどうかを調べるために、ＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ、ＭａｘｉＳｏｒｐ、Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を、２μｇ／ｍｌのＰｉｅｒｃｅ Ｃｏａｔバッファー（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）で希釈した抗ヒトＦｃ抗体とともに４℃で一晩インキュベートした。プレートを、洗浄バッファー（０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０を含有するＰＢＳ）で５回洗浄し、ウェルあたり２００μｌのｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋブロッキングバッファー（Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｎｏ． ３７５１５）とともに２５℃で１時間ブロッキングした。プレートを軽くたたくことによってブロッキングバッファーを除去し、ウェルに、１０％ Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ、０．５％ Ｔｗｅｅｎ−２０を含有するＰＢＳ中、各抗体２μｇ／ｍｌを、１００μｌ／ウェルで加え、２５℃で１時間インキュベートした。ウェルを１×ＰＢＳＴで５回洗浄し、１：６の段階希釈で１μｇ／ｍｌのビオチン化抗原を滴定した（１０％ Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０を含有するＰＢＳ中、μｇからｐｇの範囲について）。次いで、プレートに抗原の各希釈物を加え、２５℃で１時間インキュベートした。ウェルを１×ＰＢＳＴで５回洗浄し、ポリＨＲＰストレプトアビジン（ＫＰＬ番号４７４−３０００、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、Ｍａｒｙｌａｎｄ）とともに２５℃で１時間インキュベートした。ウェルを１×ＰＢＳＴで５回洗浄し、ウェルあたりＵＬＴＲＡ−ＴＭＢ ＥＬＩＳＡ（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）１００μｌを加えた。色の発色後、１Ｎ ＨＣＬを用いて反応を停止させ、４５０ｎＭでの吸光度を測定した。結果は、表１１に示されており、数値は、抗ＩＬ−１β抗体のヒトＩＬ−１βとの結合を示す。

【0456】

【表15】

【0457】

実施例２．２：ＩＬ−１β抗体の中和効力
本発明における抗ヒトＩＬ−１β抗体の機能活性を調べるために、抗体のＩＬ−１β活性を阻害する能力を測定するＭＲＣ−５アッセイにおいて抗体を使用した。ＭＲＣ−５細胞株は、ヒトＩＬ−１βに応じて用量依存的にＩＬ−８を産生するヒト肺繊維芽細胞株である。この細胞株はまた、カニクイザルＩＬ−１β（ｃｙｎｏ ＩＬ−１β）に応じてもＩＬ−８を産生する。ＭＲＣ−５細胞は、最初はＡＴＣＣから入手し、１０％ ＦＢＳ完全ＭＥＭで継代培養し、３７℃、５％ ＣＯ_２インキュベーター中で増殖させた。抗体のＩＬ−１βに対する中和効力を調べるために、９６ウェルプレートに抗体（５０μｌ）を加え（１Ｅ−７から１Ｅ−１５ Ｍ最終濃度範囲）、５０μｌのヒトまたはｃｙｎｏ ＩＬ−１β（５０ｐｇ／ｍＬ最終濃度）とともに３７℃、５％ ＣＯ_２で１時間プレインキュベートした。次いで、ＭＲＣ−５細胞（１００μｌ細胞／ウェルで１Ｅ５／ｍｌの濃度で２４時間前にプレーティングした）に抗原抗体複合体（１００μＬ）を加えた。アッセイプレートを、５％ ＣＯ_２インキュベーター中、３７℃で一晩インキュベートした。抗体効力を、ＩＬ−８産生を阻害するその能力によって調べた。ヒトＩＬ−８産生は、化学発光ベースのアッセイによって測定した。表１２には、ヒトおよびｃｙｎｏＩＬ−１βに対する抗体効力が要約されている。

【0458】

【表16】

【0459】

実施例２．３：表面プラズモン共鳴によるＩＬ−１β抗体の親和性測定
ＢＩＡＣＯＲＥアッセイ（Ｂｉａｃｏｒｅ、Ｉｎｃ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）は、結合速度および解離速度定数の動態測定を用いて抗体の親和性を決定する。抗体の、組換え精製ヒトＩＬ−１βおよびカニクイザルＩＬ−１βとの結合は、２５℃でランニングＨＢＳ−ＥＰ（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ［ｐＨ７．４］、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡおよび０．００５％界面活性剤Ｐ２０）を使用するＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）３０００機器（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を用いる表面プラズモン共鳴ベースの測定によって決定された。すべての化学物質はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）から入手するか、そうでなければ、本明細書に記載される異なる供給源から入手した。１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）で希釈した、およそ５０００ＲＵのヤギ抗マウスＩｇＧ、（Ｆｃγ）、断片特異的ポリクローナル抗体（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）を、標準アミンカップリングキットを、２５μｇ／ｍｌで製造業者の説明書および手順に従って使用してＣＭ５研究等級バイオセンサーチップのいたるところに直接的に固定化した。バイオセンサー表面上の未反応部分を、エタノールアミンを用いてブロッキングした。フローセル２および４中の修飾されたカルボキシメチルデキストラン表面を、反応表面として使用した。フローセル１および３中のヤギ抗マウスＩｇＧを有さない未修飾のカルボキシメチルデキストランを、参照表面として使用した。動態解析のために、１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデルから導いた速度方程式を、Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎ４．０．１ソフトウェアを使用して８回のインジェクションすべての会合および解離相に同時にフィッティングした（グローバルフィット解析を使用して）。精製抗体を、ヤギ抗ヒトＩｇＧ特異的反応表面のいたるところでの捕獲のためにＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水で希釈した。リガンドとして捕獲される抗体（２５μｇ／ｍｌ）を、５μｌ／分の流速で反応マトリックス上にインジェクションした。会合および解離速度定数、ｋ_ｏｎ（単位Ｍ^−１ｓ^−１）およびｋ_ｏｆｆ（単位ｓ^−１）を２５μｌ／分の連続流速下で決定した。速度定数は、１０−２００ｎＭの範囲の１０種の異なる抗原濃度で動態結合測定値を作製することによって導いた。次いで、抗体および標的抗原間の反応の平衡解離定数（単位Ｍ）を、以下の式：Ｋ_Ｄ＝ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎによって動態速度定数から算出した。結合を時間の関数として記録し、動態速度定数を算出する。このアッセイでは、１０^６Ｍ^−１ｓ^−１ほども速い結合速度および１０^−６ｓ^−１ほども遅い解離速度が測定され得る。表１３は、ヒト抗ＩＬ−１β抗体の親和性測定値を示す。

【0460】

【表17】

【0461】

実施例３：ＩＬ−１α／β ＤＶＤ−Ｉｇ（商標）分子の作製
実施例３．１：ＩＬ−１α／β ＤＶＤ−Ｉｇ ＤＮＡ構築物の構成
介在リンカーＤＮＡ配列を用いるオーバーラップＰＣＲ増幅によって、抗ＩＬ−１α抗体（「Ｘ３」；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９５／１４７８０参照のこと）可変ドメインを、複数のＩＬ−１β抗体可変ドメインとＤＶＤ−Ｉｇ形式に組み合わせた（Ｗｕら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２５：１２９０−１２９７頁（２００７年）；ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００７／０２４７１５ Ａ２）。Ｘ３はまた、それぞれ、Ｘ３ ＪＭ ＶＨおよびＸ３ ＪＭ ＶＬと呼ばれる、重鎖可変および軽鎖領域のＪ−領域中で突然変異させて、非生殖系列フレームワーク突然変異を除去した。増幅されたＰＣＲ産物をＨＥＫ２９３細胞における一過性発現に適した発現ベクターにサブクローニングし、ＤＶＤ−Ｉｇ発現の前に配列決定することによってオープンリーディングフレーム領域を確認した。

【0462】

実施例３．２：ＩＬ−１α／β ＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質の発現および製造
ＤＮＡ配列確認後、すべてのＤＶＤ−Ｉｇ ＤＮＡ構築物を大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）において増殖させ、Ｑｉａｇｅｎ Ｈｉｓｐｅｅｄ Ｍａｘｉ Ｐｒｅｐ（カタログ番号１２６６２、ＱＩＡＧＥＮ）を使用してＤＮＡを精製した。０．２μｇ／ｍｌ重鎖ＤＮＡおよび０．３μｇ／ｍｌ軽鎖ＤＮＡを有する、２：１の割合のＰＥＩおよびＤＮＡを混合することによって、ＤＶＤ−Ｉｇ ＤＮＡを対数期２９３Ｅ細胞にトランスフェクトした（０．５×１０^６個／ｍｌ、生存力＞９５％）。ＴＣフード中、室温で１５分間、ＤＮＡ：ＰＥＩ複合体を形成させ、その後、２９３Ｅ細胞に添加した。２４後、２９３Ｅ細胞に０．５％ ＴＮ１を添加した。５日目に、ヒトＩｇＧ１力価測定のために上清を採取した。７日目に細胞上清を回収し、０．２μＭ ＰＥＳフィルターを通して濾過した。上清を、プロテインＡセファロースアフィニティークロマトグラフィーを製造業者の説明書に従って使用することによって精製した。精製されたＤＶＤ−Ｉｇを０．１Ｍグリシン（ｐＨ２．９９）によってカラムから溶出し、直ちに１５ｍＭヒスチジンバッファー（ｐＨ６．０）に透析した。Ａ２８０によって結合タンパク質を定量化し、質量分析およびＳＥＣによって分析した。

【0463】

実施例３．３：ＩＬ−１α／β ＤＶＤ−Ｉｇ構築物の配列
ヒトＩＬ−１βおよびヒトＩＬ−１αと結合できる ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を決定した。ＩＬ−１α／β ＤＶＤ−Ｉｇ 結合タンパク質の重鎖可変鎖（ＶＨ）、軽鎖可変鎖（ＶＬ）、定常軽鎖（ＣＬ）および定常重鎖（ＣＨ）領域のアミノ酸配列が、以下の表１４に示されている。表１４では、Ｅ２６．１３およびＥ２６．３５ＶＬ領域のアミノ酸配列は、Ｃ末端アルギニン（Ｒ）残基を含むことを説明するために、先に表１０において示されたような配列番号２０５および配列番号２０９の代わりに、それぞれ、配列番号２３８および配列番号２３９と表されている。このＣ末端アルギニン残基は、抗体エンジニアリングの当業者によって、ＩｇＧ分子中のＶＬおよびＣＬκ領域の接合部のアミノ酸残基であり、ＣＬ領域中に含まれることも、または以下の表１４におけるように、ＶＬ領域中に含まれることもあると理解される。

【0464】

【表18】

【0465】

実施例４：ＩＬ−１α／β ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の機能的特性決定
実施例４．１：ＩＬ−１α／β酵素結合免疫吸着測定プロトコール
ＩＬ−１β／α ＤＶＤ−Ｉｇ結合タンパク質によるＩＬ−１βおよびＩＬ−１α結合をＥＬＩＳＡ（上記の実施例２．１に記載されるアッセイ）によって評価した。結果が表１５に示されている。

【0466】

【表19】

【0467】

実施例４．２：ＩＬ−１α／βバイオアッセイおよび中和アッセイ
ＭＲＣ５細胞を、１００μＬの容量中、ウェルあたり１．５−２×１０^４個細胞でプレーティングし、３７℃、５％ ＣＯ_２で一晩インキュベートした。完全ＭＥＭ培地で、２０μｇ／ｍＬのＤＶＤ−Ｉｇ（４×濃縮された）の作業ストックを調製した。Ｍａｒｓｈ希釈プレート中で、完全ＭＥＭで８点段階希釈を実施した（５μｇ／ｍＬ−０．０００３μｇ／ｍＬ）。９６ウェルｖ底（Ｃｏｓｔａｒ番号３８９４）プレートに６５μＬ／ウェルの各抗体希釈物を４連で添加し、ＩＬ−１αまたはＩＬ−１βの６５μＬの２００ｐｇ／ｍＬ溶液または５０ｐｇ／ｍＬのＩＬ−１αおよびＩＬ−１β両方の溶液を含有する６５μＬの混合溶液を添加した。対照ウェルには、ＩＬ−１αまたはＩＬ−１βの６５μＬの２００ｐｇ／ｍｌまたは５０ｐｇ／ｍＬ混合ＩＬ−１α／β（４×濃縮された）および６５μＬ ＭＥＭ培地を入れ、および培地対照ウェルには１３０μＬの培地を入れた。１時間インキュベートした後、ＭＲＣ５細胞に１００μＬのＤＶＤ−Ｉｇ／Ａｇ混合物を添加した。すべてのウェル容量は２００μＬに相当した。そこで、すべてのプレート試薬は、１×濃縮されていた。１６−２０時間インキュベートした後、ウェル内容物（１５０μＬ）を９６ウェル丸底プレート（Ｃｏｓｔａｒ番号３７９９）に移し、−２０℃の冷凍庫に入れた。ヒトＩＬ−８ ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）またはＭＳＤ ｈＩＬ−８（化学発光キット）を使用することによって、上清を、ｈＩＬ−８レベルについて試験した。ＩＬ−１α、ＩＬ−１βまたはＩＬ−１α／β単独対照値に対する阻害パーセントを算出することによって中和効力を調べた（表１６）。

【0468】

【表20】

【0469】

実施例４．３：ＩＬ−１α／β ＤＶＤ−Ｉｇ分子の親和性測定
実施例２．３に記載される表面プラズモン共鳴を使用して、ＩＬ−１α／β ＤＶＤ−Ｉｇの、精製組換えヒトＩＬ−１βおよびＩＬ−１αならびにカニクイザルＩＬ−１βおよびＩＬ−１αとの結合を調べ、結果が表１７に示されている。

【0470】

【表21】

【0471】

参考による組み込み
本発明は、参照により、分子生物学および薬物送達の分野において周知であるその全技術を組み込む。これらの技術として、それだけには限らないが、以下の刊行物に記載された技術が挙げられる：Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ＮＹ（１９９３年）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら編、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（第４版１９９９年）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ＮＹ．（ＩＳＢＮ ０−４７１−３２９３８−Ｘ）。Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ、ＳｍｏｌｅｎおよびＢａｌｌ（編）、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４年）；Ｇｉｅｇｅら、第１章、Ｉｎ Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、第２版、（ＤｕｃｒｕｉｘおよびＧｉｅｇｅ編）（Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９９年）１−１６頁；Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｊ．Ｍ．、第６章、Ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、第ＩＩ巻、Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ、（ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ編）（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、１９８４年）、１１５−１３８頁；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら編．「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ」、Ｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第３巻（Ｊ．Ｌ．Ｔｕｒｋ、一般編集者）（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８１年）、５６３−５８７頁；Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、第２版 １９８８年）；Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９８７年）；Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１年） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ刊行物第９１−３２４２号；ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ編、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１年） Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ． Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ． ７９０頁（ＩＳＢＮ ３−５４０−４１３５４−５）；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ（１９９０年）；ＬｕおよびＷｅｉｎｅｒ編、Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００１年） ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ Ｐｒｅｓｓ． Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ、Ｍａｓｓ． ２９８頁（ＩＳＢＮ １−８８１２９９−２１−Ｘ）；Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｊ．Ｍ．、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、（ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ編）（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、１９７４年）；Ｏｌｄ ａｎｄ Ｐｒｉｍｒｏｓｅ、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ： Ａｎ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｏ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（第３版１９８５年） Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｂｏｓｔｏｎ；Ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖ．２：４０９頁（ＩＳＢＮ ０−６３２−０１３１８−４）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版１９８９年） Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ． 第１−３巻（ＩＳＢＮ ０−８７９６９−３０９−６）；Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、（Ｊ．Ｒ． Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編）（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９７８年）；Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ、Ｅ．Ｌ． Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ Ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ： Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｏ Ｇｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９８７年）ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎ．Ｙ．（Ｈｏｒｓｔ Ｉｂｅｌｇａｕｆｔｓによって翻訳された）、６３４頁（ＩＳＢＮ ０−８９５７３−６１４−４）。

【0472】

本出願を通して引用されているすべての引用文献（参考文献、特許、特許出願およびウェブサイトを含む）の内容は、文献がその場所に引用されているように、その全体が本明細書において参照により明確に組み込まれている。本発明の実施は、特に断りのない限り、当技術分野で周知である、免疫学、分子生物学および細胞生物学の従来技術を使用する。

【0473】

等価物
本発明は、その精神または本質的特徴から逸脱することなく他の特定の形態に具体化できる。したがって、前述の実施形態は、あらゆる点で、本明細書に記載の発明の限定ではなくむしろ例示と考えられる。故に、本発明の範囲は、前述の記載によってではなくむしろ添付の特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲と同等の意味および範囲内に入るすべての変形は、したがって本明細書に包含されることが意図される。

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]