特許 6194036 分取液体クロマトグラフィ方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6194036

(24)【登録日】2017年8月18日

(45)【発行日】2017年9月6日

(54)【発明の名称】分取液体クロマトグラフィ方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 30/16 20060101AFI20170828BHJP

   G01N 30/80 20060101ALI20170828BHJP

【ＦＩ】

   G01N30/16 L

   G01N30/80 C

【請求項の数】4

【全頁数】21

(21)【出願番号】特願2016-30857(P2016-30857)

(22)【出願日】2016年2月22日

(62)【分割の表示】特願2012-85026(P2012-85026)の分割

【原出願日】2012年4月3日

(65)【公開番号】特開2016-95322(P2016-95322A)

(43)【公開日】2016年5月26日

【審査請求日】2016年2月22日

(73)【特許権者】

【識別番号】391048533

【氏名又は名称】山善株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100120019

【弁理士】

【氏名又は名称】八木 敏安

(72)【発明者】

【氏名】大倉 喜八郎

【審査官】 高田 亜希

(56)【参考文献】

【文献】 特開２００２−３４０８７４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開昭６２−０２７６６１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２００６／０２１３８２２（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 特開２００７−１６３１５３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００２−２５７８０５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００１−３５６１１５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０２−２６９９６４（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｇ０１Ｎ ３０／００−３０／８０

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

シリカゲルを使用した分離カラムの前にインジェクターを接続して行う分取液体クロマトグラフィ方法であって、
前記インジェクターは、充填剤が充填されたシリンダーを有し、前記充填剤は乾燥シリカであり、
試料溶液が極性有機溶媒溶液であり、
上記極性有機溶媒は、インジェクターにトラップされ分離カラムに流入しない
ことを特徴とする分取液体クロマトグラフィ方法。

【請求項2】

充填剤は、使用する極性有機溶媒の体積に対して４〜１００倍の乾燥体積である請求項１記載の分取液体クロマトグラフィ方法。

【請求項3】

シリンダーは、極性有機溶媒トラップ体積が表示されたものである請求項１又は２記載の分取液体クロマトグラフィ方法。

【請求項4】

Ｖ_ｍａｘ：極性有機溶媒トラップ体積
Ｖ_ｉｎｊ：インジェクター容量
ａ，ｂ：極性有機溶媒種と充填剤種により決まる定数
でインジェクターの極性有機溶媒トラップ体積を算出し、極性有機溶媒トラップ体積より少ない極性有機溶媒量の試料溶液となるようにすることを特徴とする請求項１，２又は３記載の分取液体クロマトグラフィ方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、液体クロマトグラフィ方法に関するものである。

【背景技術】

【0002】

液体クロマトグラフィは、固定相が充填された分離カラムに、複数の成分を有する試料、及び、所定の混合比で混合された複数の溶媒からなる移動相に相当する溶離液を流すことにより、試料中の複数の成分を分離するものである。試料は、溶離液とともにカラムに流入し、カラムに充填された固定相に吸着しつつ溶離液の流下に伴って移動する。その際に、各成分の固定相との相互作用が異なることから、それぞれ所定時間後にカラムから排出され、これによって複数の成分を分離することができる。

【0003】

このような液体クロマトグラフィによる分離を効率よく行うための条件決定支援装置が特許文献１に記載されている。このような装置を使用することで、液体クロマトグラフィの負荷量（１回の操作で分離することができるサンプル量）やカラムサイズの決定を適切に行うことができ、効率のよい作業を行うことができる。

【0004】

しかしながら、溶解能が低い試料を液体クロマトグラフィによって分離する場合は、試料を溶解するために使用される極性有機溶媒が分離に悪影響を与えてしまうという問題がある。すなわち、極性有機溶媒が存在する状態であると、試料中の成分の固定相との相互作用が低下し、短時間でカラムから排出されやすくなってしまう。特許文献１に記載されたような条件決定支援装置においては、このようなサンプルを溶解させるための極性有機溶媒の影響を考慮していないものであることから、条件を充分に予測できなくなる場合がある。

【0005】

また、液体クロマトグラフィの分離カラムへの試料液及び溶媒の導入に際して使用される直載せ用のインジェクターが公知である（引用文献２）。このようなインジェクターは効率よく試料液を液体クロマトグラフィへ導入することができるものであるが、上述したような極性有機溶媒を試料の溶解に使用した場合の問題を改善するために用いられるものではなかった。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【特許文献1】特開平２００７−１６３１５３号公報

【特許文献2】特開平２００２−２５７８０５号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

本発明は上記に鑑み、試料の溶解に極性有機溶媒を使用した場合にも有効に使用することができる条件決定支援装置を提供すること、及び、極性有機溶媒による液体クロマトグラフィの分離能への悪影響を抑えることができるインジェクターを提供することを目的とするものである。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明は、分離カラムの前にインジェクターを接続して行う液体クロマトグラフィ方法であって、前記インジェクターは、充填剤が充填されたシリンダーを有し、極性有機溶媒吸着能を有する乾燥充填剤であり、試料溶液が極性有機溶媒溶液であることを特徴とする液体クロマトグラフィ方法である。

【0009】

前記充填剤は、使用する極性有機溶媒の体積に対して４〜１００倍の乾燥体積であることが好ましい。
前記シリンダーは、極性有機溶媒トラップ体積が表示されたものであることが好ましい。

【発明の効果】

【0010】

本発明の液体クロマトグラフィ方法は、極性有機溶媒による液体クロマトグラフィの分離能への悪影響を抑えることができるものである。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】薄層クロマトグラフィによって各成分の移動度を実測する方法を示す説明図。

【図2】液体クロマトグラフの模式図及びブロック図。

【図3】液体クロマトグラフの制御用パーソナルコンピュータにおいて、条件決定支援プログラムが実現する機能を示すブロック図。

【図4】条件決定支援プログラムがディスプレイに表示するウインドウを示す図。

【図5】条件決定支援プログラムが各サイズのカラムに対する負荷量の計算結果を表示した様子を示す図。

【図6】条件決定支援プログラムにおけるインジェクトカラム選択支援にかかるプログラムがディスプレイに表示するウインドウを示す図。

【図7】条件決定支援プログラムが算出したインジェクトカラムの極性有機溶媒トラップ体積の結果を表示した様子を示す図。

【図8】Ｌサイズのカラムを用いた場合の、負荷量と、分離度Ｒs＝１を実現するために必要な理論段数との関係を二次元的に示す図。

【図9】理論段数Ｎ、極性有機溶媒量Ｖ_０及び負荷量の関係を三次元的に示す図。

【図10】式１２で示される関係を示す図である。

【図11】式１４，１５で示される関係を示す図である。

【図12】インジェクトカラムにおけるＶ_ｍａｘ＝ａＶ_ｉｎｊの関係を示す図。

【図13】実施例におけるガスクロマトグラフの結果を示す図。

【図14】比較例におけるガスクロマトグラフの結果を示す図。

【発明を実施するための形態】

【0012】

以下に、本発明を詳細に説明する。
（インジェクター）
本発明のインジェクターは、充填剤が充填されたシリンダーを有し、充填剤として極性有機溶媒吸着能を有する乾燥充填剤を使用するものである。すなわち、このような乾燥充填剤によって極性有機溶媒を吸着することで、極性有機溶媒の分離カラムへの流入を防止し、極性有機溶媒の分離能への影響を防止するものである。

【0013】

本発明で使用される極性有機溶媒吸着能を有する乾燥充填剤としては、シリカ等を挙げることができる。また、２種以上を混合して使用するものであってもよい。

【0014】

上記乾燥充填剤は、溶媒を含まず乾燥した状態でシリンダー中に充填されたものであり、更に、乾燥した状態で試料溶液を導入するものである。乾燥した状態で試料液を導入し、その後、溶媒を導入することで、極性有機溶媒が効率よくインジェクターシリンダー中の充填剤に吸着される。

【0015】

このようなインジェクターは、幾つかの種類のサイズのインジェクトカラムを準備し、使用する極性有機溶媒の体積に応じて適正なサイズのインジェクターを選択して使用するものであってもよい。
すなわち、インジェクトカラムに吸着可能な極性有機溶媒の量は予測される量であることから、試料液の体積に応じて使用するインジェクターのサイズを選択することで、より好適な分離を図ることができる。

【0016】

試料の溶解に極性有機溶媒を使用した場合、インジェクターを用いることで極性有機溶媒がトラップされる結果、分離カラムの理論段数低下を抑えることができる。このとき、シリンダーに使用できる極性有機溶媒の体積の最大量（以下、これを極性有機溶媒トラップ体積と記す）は、インジェクターの容量と一次関数の関係となることが決まっており、具体的には以下の関係式となる。

【数3】

Ｖ_ｍａｘ：極性有機溶媒トラップ体積
Ｖ_ｉｎｊ：インジェクター容量
ａ，ｂ：極性有機溶媒種と充填剤種により決まる定数
なお、このような関係を示すグラフを図１２に示した。

【0017】

本発明の態様においては、例えば、このような計算式に基づいて使用する極性有機溶媒種及び体積に応じて上記式に基づいて極性有機溶媒トラップ体積を使用のたびに算出するものであってもよいし、予め極性有機溶媒トラップ体積を算出しておいて、インジェクター毎の特数値として明確化しておいてもよい。

【0018】

使用する極性有機溶媒種に応じて、上記式に基づいて極性有機溶媒トラップ体積を算出する場合は、以下、詳述する液体クロマトグラフィの条件決定支援装置によって、極性有機溶媒トラップ体積を算出してもよい。このような態様とすることで、使用する極性有機溶媒ごとの極性有機溶媒トラップ体積の相違等を考慮することも容易であるし、正確な値を算出することができる点で好ましい。このような態様を取る場合において、インジェクター上部に注入された極性有機溶媒の体積がすぐに分かるように、充填部の上端部から注入された極性有機溶媒の体積を示すための目盛を表示したものであってもよい。試料液をインジェクターのシリンダーに注入すると、乾燥していた充填剤が湿ることによって、注入した試料液量を目視で観察することができる。

【0019】

また、上述した式によってインジェクターの極性有機溶媒トラップ体積を予め算出しておき、シリンダーに極性有機溶媒トラップ体積を表示したものであってもよい。例えば、注入した極性有機溶媒の注入限界量の部位に、シリンダー径方向に線を設け、これによって注入した極性有機溶媒の量が過大になっていないかどうかを容易に確認することができる。

【0020】

本発明のインジェクターは、使用する溶媒の種類によって、上述した極性有機溶媒トラップ体積が変化する場合もある。よって、同一のインジェクトカラムを使用した場合であっても、使用する溶媒によって極性有機溶媒トラップ体積が変化する場合がある。このような場合に対応するために、使用する極性有機溶媒に応じて上述した極性有機溶媒の体積の最大値を示すものであってもよい。

【0021】

上記乾燥充填剤は、使用できる極性有機溶媒の体積に対して４〜１００倍の乾燥体積を有するような充填量として使用することが好ましい。上述したように極性有機溶媒トラップ体積は計算によって値を求めることができるが、一応の目安として想定される極性有機溶媒体積の４〜１００倍となるような乾燥体積を有するような充填量とすることが好ましい。充分な乾燥体積がなければ、本発明のインジェクターによる極性有機溶媒吸着の効果が充分に得られない場合がある。上記乾燥空隙の量は、７〜２０倍であることがより好ましい。

【0022】

本発明のインジェクターは、分離カラムの前に接続して使用するものである。すなわち、本発明のインジェクターより流出した流出液は、次いで液体クロマトグラフィの分離カラムに流出させて、そこで各成分の分離を行うものである。

【0023】

本発明のインジェクターの構造や形状は特に限定されるものではないが、例えば、特開平２００２−２５７８０５号公報に記載したような形状を有するもの等を挙げることができる。

【0024】

本発明のインジェクターは、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、メタノール、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド等の極性有機溶媒を溶媒とする試料液を液体クロマトグラフィによって分離する際に特に好適に使用することができるものである。

【0025】

（液体クロマトグラフィの条件決定支援装置）
本発明の液体クロマトグラフィの条件決定支援装置は、負荷量算出手段及び負荷量算出手段で求められた負荷量を出力する負荷量出力手段を備え、前記負荷量算出手段は分離カラムの理論段数と負荷量との関係の極性有機溶媒量による変化をパラメータとして含むものである。すなわち、上述したような、試料液中に存在する極性有機溶媒による負荷量への影響を考慮して負荷量を算出することで、より高精度で液体クロマトグラフィの条件決定の支援を行うことができるものである。

【0026】

液体クロマトグラフィの分離カラムに対して試料液中の極性有機溶媒が流入した場合、試料中の分離対象成分の流出速度が変化してしまい、従来の条件決定支援装置では充分な支援を行うことができなくなるおそれがあることは上述したとおりである。よって、本発明においては、負荷量の算出において、分離カラムの理論段数と負荷量との関係の極性有機溶媒量による変化をパラメータとして考慮することを特徴とするものである。なお、上記極性有機溶媒は、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、メタノール、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド等を指す。

【0027】

本発明の液体クロマトグラフィの条件決定支援装置の具体的な態様について、以下に詳述し、その後、本発明の特徴である負荷量算出手段について説明する。
本発明の液体クロマトグラフは、複数の成分について、薄層クロマトグラフィを行ったときの各成分の移動度Ｒ_f値の実測値を入力するための実測値入力手段と、この実測値入力手段で入力された移動度Ｒ_f値における、液体クロマトグラフィのカラムへの試料の負荷量を求めるための負荷量算出手段と、この負荷量算出手段で求められた負荷量を出力する負荷量出力手段と、を備えるものであることが好ましい。

【0028】

この構成により、薄層クロマトグラフィで得られた移動度の結果（Ｒ_f値）から適切な負荷量を計算してユーザに呈示することができ、ユーザ側としてはこれを参考にしながら条件を決定することで、分離等の作業効率を向上させることができる。

【0029】

前記の液体クロマトグラフィの条件決定支援装置においては、以下のように構成することが好ましい。即ち、前記負荷量算出手段は、前記実測値入力手段で入力された移動度Ｒ_f値から、当該複数の成分を所定の分離度で分離可能とするために必要な理論段数を求める第１演算手段と、前記理論段数と、液体クロマトグラフィのカラムへの試料の負荷量との関係を予め記憶しておくための記憶手段と、この記憶手段に記憶された関係に基づいて、前記第１演算手段で求められた理論段数から負荷量を求めるための第２演算手段と、を備える。

【0030】

この構成により、適切な分離度を実現するための負荷量をユーザに提示できるので、良好なクロマトグラフィ結果が容易に得られる。

【0031】

前記の液体クロマトグラフィの条件決定支援装置においては、以下のように構成することが好ましい。即ち、前記負荷量算出手段は、前記移動度Ｒ_f値及び使用する極性有機溶媒の体積から、液体クロマトグラフィの複数種類のカラムについて、前記負荷量を当該カラムの種類ごとに求めるものとする。前記負荷量出力手段は、前記カラムのそれぞれの種類について負荷量を出力するように構成されている。

【0032】

この構成により、例えば分離したい試料の負荷量が決まっている場合に、それを好適に分離できるカラムを複数種類の中から適切に選定できるよう、ユーザの条件決定過程を支援できる。

【0033】

前記の液体クロマトグラフィの条件決定支援装置においては、以下のように構成することが好ましい。即ち、前記実測値入力手段は、ディスプレイ装置の表示画像の任意の点を指示可能なポインティング装置を含む。前記移動度Ｒ_f値の実測値は、前記ディスプレイ装置に描画された薄層板の画像上の点を前記ポインティング装置で指示することにより入力可能である。

【0034】

この構成により、事前に行われた薄層クロマトグラフィでの薄層板の状態をそのまま入力するかのような直感的で優れた操作性を提供でき、容易な操作で的確に移動度Ｒ_f値を入力できる。

【0035】

本発明の第２の観点によれば、以下のように構成する、液体クロマトグラフィの条件決定支援プログラムが提供される。即ち、コンピュータを、複数の成分について、薄層クロマトグラフィを行ったときの各成分の移動度Ｒ_f値の実測値及び極性有機溶媒の使用体積を入力するための実測値入力手段、この実測値入力手段で入力された移動度Ｒ_f値における、液体クロマトグラフィのカラムへの試料の負荷量を求めるための負荷量算出手段、及び、この負荷量算出手段で求められた負荷量を出力する負荷量出力手段として機能させる。

【0036】

この構成により、薄層クロマトグラフィで得られた移動度Ｒ_f値の結果から適切な負荷量を計算してユーザに呈示することができ、ユーザ側としてはこれを参考にしながら条件を決定することで、分離等の作業効率を向上させることができる。

【0037】

前記の液体クロマトグラフィの条件決定支援プログラムにおいては、以下のように構成することが好ましい。即ち、前記負荷量算出手段は、前記実測値入力手段で入力された移動度Ｒ_f値から、当該複数の成分を所定の分離度で分離可能とするために必要な理論段数を求める第１演算手段と、前記理論段数と、液体クロマトグラフィのカラムへの試料の負荷量との関係を予め記憶しておくための記憶手段と、この記憶手段に記憶された関係に基づいて、前記第１演算手段で求められた理論段数から負荷量を求めるための第２演算手段と、を備える。

【0038】

この構成により、適切な分離度を実現するための負荷量をユーザに提示できるので、良好なクロマトグラフィ結果が容易に得られる。

【0039】

前記の液体クロマトグラフィの条件決定支援プログラムにおいては、以下のように構成することが好ましい。即ち、前記負荷量算出手段は、前記移動度Ｒ_f値から、液体クロマトグラフィの複数種類のカラムについて、前記負荷量を当該カラムの種類ごとに求めるものとする。前記負荷量出力手段は、前記カラムのそれぞれの種類について負荷量を出力するように構成されている。

【0040】

この構成により、例えば分離したい試料の負荷量が決まっている場合に、それを好適に分離できるカラムを複数種類から適切に選定できるよう、ユーザの条件決定過程を支援できる。

【0041】

前記の液体クロマトグラフィの条件決定支援プログラムにおいては、前記実測値入力手段において、前記移動度Ｒ_f値の実測値は、コンピュータのディスプレイ装置に描画された薄層板の画像上の点をポインティング装置で指示することにより入力可能であることが好ましい。

【0042】

この構成により、事前に行われた薄層クロマトグラフィでの薄層板の状態をそのまま入力するかのような直感的で優れた操作性を提供でき、容易な操作で的確に移動度Ｒ_f値を入力できる。

【0043】

本発明の液体クロマトグラフィの条件決定支援プログラムにおいては、更に、インジェクターの選択に関する支援を行うことができるよう構成されているものであってもよい。

【0044】

また、本発明の他の観点によれば、上記の構成の液体クロマトグラフィの条件決定支援装置を備える液体クロマトグラフが提供される。

【0045】

次に、発明の実施の形態を説明する。図１は薄層クロマトグラフィによって各成分の移動度Ｒ_f値を実測する方法を示す説明図である。

【0046】

まず図１を参照して、液体クロマトグラフィを行う前段階の工程としての薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）について説明する。この薄層クロマトグラフィは、分離する試料の各成分１，２の移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2を実測するために行われるものである。

【0047】

薄層クロマトグラフィの方法を説明すると、先ず、固定相としてのシリカゲル粉末を細長い平板（例えば、ガラス板）の表面上に薄く均一に塗布して、シリカゲル薄層板１１を作成する。そして、このシリカゲル薄層板１１上のシリカゲルに、分離したい試料を１滴滴下し、試料スポット１２を形成させておく。この滴下する試料は、少なくとも２つの成分（成分１と成分２）が混合したものである。

【0048】

次に、このシリカゲル薄層板１１の下部を、図１の左側に示すように、容器１３に貯溜した溶離液１４に浸漬する。すると、薄層板１１上のシリカゲル薄層に溶離液１４が毛管現象によって吸い上げられてゆく。これに伴い、試料スポット１２も上方へ移動するが、試料に含まれた各成分が上昇する速度は、溶離液１４との親和性や固定相としてのシリカゲルとの相互作用等に依存し、成分ごとに異なる。従って、所定の時間が経過すると、図１の右側に示すように、試料スポット１２に含まれていた成分１は１２ａの位置まで、成分２は１２ｂの位置まで、それぞれ移動することになる。このようにして２つの成分の分離が実現される。

【0049】

以上の状態で、薄層板１１を溶離液１４に浸漬する前の試料スポット１２の位置から、吸い上げられた溶離液１４の上端位置までの距離Ｌ₀を測定するとともに、試料の各成分の移動距離Ｌ_r1，Ｌ_r2を併せて測定する。そして、各成分の移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2を、Ｒ_f1＝Ｌ_r1／Ｌ₀，Ｒ_f2＝Ｌ_r2／Ｌ₀の式に従って求める。求めた値は、後述する液体クロマトグラフのパーソナルコンピュータへ入力するために、適宜記録しておく。

【0050】

次に、図２及び図３を参照して液体クロマトグラフを説明する。図２は液体クロマトグラフの模式図及びブロック図、図３は液体クロマトグラフの制御用パーソナルコンピュータにおいて、条件決定支援プログラムが実現する機能を示すブロック図である。

【0051】

この液体クロマトグラフ２１は、２つの容器３１・３２と、これらの容器３１・３２からそれぞれ延びる送液経路の相互接続箇所に設けられる電磁弁３３と、ポンプ３６と、溶離液３４が貯溜される混合器３５と、ポンプ３７と、インジェクタ３８と、カラム３９と、検出器４０と、フラクションコレクタ４１とが、送液方向に従って上記の順に配置されている。また、液体クロマトグラフ２１はパーソナルコンピュータ５１を備えており、このパーソナルコンピュータ５１は、上記の各装置を所望のクロマトグラフィ条件に従って制御する制御装置としての機能と、当該クロマトグラフィ条件をユーザが決定する際にそれを支援する条件決定支援装置としての機能を備えている。

【0052】

容器３１には溶媒Ａが貯溜され、容器３２には溶媒Ｂが貯溜されている。なお、用いられる溶媒はＡ，Ｂの２種類に限定されず、使用状態や目的に応じて数を増やしても良い。一般に、溶媒Ａ及び溶媒Ｂとしては、非極性分子と極性分子との組み合わせが用いられる。

【0053】

前記ポンプ３６は、電磁弁３３を介して溶媒Ａ，Ｂを汲み上げるように構成している。電磁弁３３は、前記パーソナルコンピュータ５１からの制御信号に基づいて、汲み上げられる溶媒を溶媒Ａ又は溶媒Ｂから選択し、かつその選択時間の割合を調整することで、所定の混合比の溶離液３４とする。なお、この溶離液３４は、上記の薄層クロマトグラフィ（図１）において使用された溶離液１４と同じ種類のものが使用される。

【0054】

インジェクター３８は試料を保持しており、混合器３５からポンプ３７により吸引され吐出された溶離液３４がインジェクター３８を通過することで、試料を送出するように構成されている。なお、当該インジェクターは、上述したような極性有機溶媒吸着能を有する乾燥充填剤を充填したものであってもよいし、それ以外のものであってもよい。

【0055】

カラム３９は内部に固定相が充填された管状容器とされており、この固定相を試料が前記溶離液３４とともに通過することで液体クロマトグラフィが行われる。この固定相としては、薄層クロマトグラフィ（図１）において薄層板１１に積層されたものと同じものを使用することとし、本実施形態ではシリカゲルを使用している。

【0056】

なお、このカラム３９は、カラム寸法（カラム径やカラム長さ）や前記固定相の種類等が異なる複数種類のものが用意されており、これらから１種類を適宜選択して液体クロマトグラフ２１にセットして使用できるように構成している。

【0057】

検出器４０は、前記カラム３９の下流側に配置されており、当該カラム３９で行われる液体クロマトグラフィの結果を検出するものである。この検出結果は、上記パーソナルコンピュータ５１へ送信されるようになっている。また、フラクションコレクタ４１は複数の試験管を備えており、検出器４０の分析結果に基づいて、試料に含まれる成分ごとに各試験管に分取できるように構成されている。

【0058】

前記パーソナルコンピュータ５１は汎用のものを使用しており、図２に示すように、ＣＰＵ５２と、メモリ５３と、ハードディスク５４と、外部とのインターフェース５５と、キーボード５６と、マウス（ポインティング装置）５７と、ディスプレイ装置５８と、を備えている。

【0059】

そして、前記パーソナルコンピュータ５１は、前記薄層クロマトグラフィを行ったときの各成分の移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2の実測値入力手段６１と、実測値入力手段６１で入力された移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2における、液体クロマトグラフィのカラム３９への試料の負荷量を算出する負荷量算出手段６２と、この負荷量算出手段６２で求められた負荷量を出力する負荷量出力手段６３と、を備えている。

【0060】

また、負荷量算出手段６２は、実測値入力手段６１で入力された前記移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2から、当該２つの成分を所定の分離度Ｒsで分離可能とするために必要な理論段数Ｎを求める第１演算手段６４や、前記理論段数Ｎと、前記カラム３９への試料の負荷量との関係を記憶可能な記憶手段６５や、この記憶手段６５に記憶された関係に基づいて、前記第１演算手段６４で求められた理論段数Ｎから負荷量を求める第２演算手段６６を備えている。更に、使用したインジェクトカラム種及び使用した溶媒種に応じて、インジェクトカラムの極性有機溶媒トラップ体積を算出するための演算手段も備えたものであってもよい。

【0061】

具体的には、液体クロマトグラフィの制御プログラムや条件決定支援プログラム等を含む各種のソフトウェアがパーソナルコンピュータ５１のハードディスク５４に記憶されている。そして、上記ハードウェア及びソフトウェアが組み合わされることによって、図２に示す上記の各手段６１〜６６が構築されている。

【0062】

なお、上記のソフトウェアは、当該プログラムを記録したＣＤ−ＲＯＭ、ＦＤ、ＭＯ等の記録媒体を用いてインストールすることで、パーソナルコンピュータ５１のハードディスク５４に記憶させることができる。あるいは、上記インストールは、インターネット等のネットワークを介して行うことも可能である。

【0063】

上記のパーソナルコンピュータ５１を用いて液体クロマトグラフィの条件設定を行うのであるが、この条件には、例えば、溶離液３４の混合比や、カラム３９へ流入させる溶離液３４の流量等が含まれる。パーソナルコンピュータ５１はこれらの条件に基づいて電磁弁３３やポンプ３６・３７等を制御し、液体クロマトグラフィを行う。また、パーソナルコンピュータ５１は、検出器４０からの検出信号を解析し、ディスプレイ装置５８に流出曲線を描画させたり、ハードディスク５４等に結果を保存したりできるようになっている。

【0064】

ここで、上記液体クロマトグラフィの条件には、前述した複数種類のカラム３９のうちどのカラムを選択して用いるのか、及び、前記インジェクタ３８にセットする試料の量（負荷量）が含まれている。そして本実施形態では、上記の条件決定支援プログラムによって、ユーザが行うカラム３９の種類の選択や負荷量を適切に決定できるよう、その決定過程を支援するようになっている。

【0065】

以下、この条件決定支援プログラムについて説明する。図４は条件決定支援プログラムがディスプレイに表示するウインドウを示す図、図５は各サイズのカラムに対する負荷量の計算結果を表示した様子を示す図、図８はＬサイズのカラムを用いた場合の、負荷量と、分離度Ｒs＝１を実現するために必要な理論段数との関係を示す図である。

【0066】

この条件決定支援プログラムが実行されると、上記ディスプレイ装置５８には、例えば図４のようなＧＵＩ（グラフィカルユーザインタフェース）を備えたウインドウ７１が表示される。このウインドウ７１には、上記の薄層クロマトグラフィで実測した移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2の数値を入力するためのテキストボックス７２，７３と、薄層クロマトグラフィのシリカゲル薄層板１１でのスポット位置を画面上で指示することで移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2を指定するためのスポット指示領域７４と、極性有機溶媒量を入力するためのテキストボックス８４と、計算された負荷量の結果を表示する結果表示領域７５と、負荷量の計算を指示するＯＫボタン７６と、ウインドウ７１を閉じて条件決定支援プログラムの実行を終了するためのキャンセルボタン７７と、が配置されている。その他必要に応じて、極性有機溶媒種を入力するためのテキストボックス８３、インジェクトカラムサイズを入力するテキストボックス８５を設けてもよい。

【0067】

以上の画面構成で、ユーザはウインドウ７１のテキストボックス７２，７３の部分にマウスポインタ８０を合わせるようにマウス５７を操作してクリックし、移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2の数値を「０．５」や「０．３」等と、キーボード５６から入力する。同様にテキストボックス８３，８４，８５にもそれぞれ必要な値を記入する。これらのテキストボックス７２，７３に値を入力した後は、ＯＫボタン７６をクリックする。すると、試料の負荷量が後述する手順に従って計算され、その計算結果が結果表示領域７５に表示される。

【0068】

この結果表示領域７５はテーブル形式になっており、複数あるカラム３９の種類のそれぞれについて、対応する負荷量の数値を一覧形式で出力できるようになっている。本実施形態では、「サイズ」の列にカラム３９の種類（本実施形態の液体クロマトグラフ２１では、Ｓ，Ｍ，Ｌ，２Ｌ，３Ｌ，４Ｌ，５Ｌとサイズの異なる計７つの種類のカラム３９をセット可能である）を表示し、「ｇ」の列に、当該サイズのカラム３９を用いた場合に試料を何グラムセットすべきか（負荷量）を、各サイズについてそれぞれ表示する。例えば図５に示すように、「Ｍ」の行に「０．０５」と表示され、「Ｌ」の行に「０．２５」と表示される。

【0069】

この図５の表示から、ユーザは、例えば０．２５グラムの試料を分取したい場合はＬサイズのカラム３９を用いれば良好な結果が得られるだろうという情報を得ることができる。従って、ユーザはこの情報を参考にして適切なカラム３９のサイズを選定できるので、液体クロマトグラフィに無用に長い時間を要したり、分取がうまくいかずに分離をやり直したりすることがなくなり、分析作業を顕著に効率化できる。

【0070】

更に、別途、インジェクトカラムの選択支援のための表示領域を有するものであってもよい。例えば、上記ディスプレイ装置５８には、例えば図６のようなＧＵＩ（グラフィカルユーザインタフェース）を備えたウインドウが表示される。図6に示したウインドウにおいては、サンプル溶媒、インジェクトカラムサイズ、メインカラム種選択するためのテキストボックスが表示される。タブによって使用する極性有機溶媒、インジェクトカラムサイズ、メインカラムサイズを選択すると、コンピューターによって自動的に計算された極性有機溶媒トラップ体積が示される。これによって、インジェクトカラムの選択の支援も行うことができる。

【0071】

なお、前記移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2の入力は、テキストボックス７２，７３を用いてキーボード５６から直接入力するのではなく、スポット指示領域７４を用いて、マウス５７の操作で行うこともできる。このスポット指示領域７４には、前記薄層クロマトグラフィでの薄層板１１を模した図形８１が描かれ、この図形８１内に、前記成分１，成分２のスポット位置１２ａ，１２ｂに対応する円状の２つのスポット図形８２ａ，８２ｂが描かれている。スポット指示領域７４の下部の長い横線は、移動前の試料スポット１２の位置に対応しており、上部の長い横線は、吸い上げられた溶離液１４の位置に対応している。即ち、上下の長い横線の間の距離が、図１で図示する距離Ｌ₀に対応している。

【0072】

図４の表示例では、上側のスポット図形８２ａはＲ_f1＝０．５の位置に描かれ、下側のスポット図形８２ｂはＲ_f2＝０．３の位置に描かれている。これを変更するには、例えば下側のスポット図形８２ｂにマウスポインタ８０を合わせた状態でマウスボタンを押し下げ、この状態でマウスポインタを上方へ動かして、所望の位置でマウスボタンを離す。すると、スポット図形８２ｂを上側、例えばＲ_f2＝０．４の位置へ移動させることができる（そのようにプログラムされている）。この移動と同時に、テキストボックス７３に入力されている数値は、新しいスポット図形８２ｂの位置に対応する数値（０．４）に自動的に変更される。また、成分１の移動度Ｒ_f1についても、上側のスポット図形８２ａを上記と同様にドラッグ操作することで、容易に設定することができる。

【0073】

以上により、図１の薄層クロマトグラフィ結果のスポット位置１２ａ，１２ｂをそのままディスプレイ装置５８の画面上で指定する感覚で各成分の移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2を指定でき、直感的で優れた操作性が実現されている。また、移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2のマウス５７による指示を更に容易とするために、スポット指示領域７４には、前記の距離Ｌ₀を適宜の間隔で等分する目盛７８が描かれるとともに、スポット指示領域７４の脇の位置には、操作方法を説明する説明文７９が表示されている。

【0074】

なお、テキストボックス７２，７３から移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2を直接数値で入力すると、その数値に対応した位置に、前記スポット指示領域７４のスポット図形８２ａ，８２ｂが自動的に移動するようになっている。これにより、ユーザは移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2の入力値の確認を容易に行うことができ、入力ミスが防止される。

【0075】

（負荷量の算出）
従来技術においては、理論段数Ｎを算出した後に負荷量との関係を求める際、理論段数Ｎと負荷量を求めていた。すなわち、２次元的な解析によって負荷量を求めていた。本発明においては、これらに加えて極性有機溶媒量Ｖ_０を加えた三次元的な解析によって負荷量を求める点が特徴となる（図７）。以下、より具体的に、本発明においての負荷量の算出方法について詳述する。

【0076】

一般に試料の液体クロマトグラフィにおいて、当該試料の成分である成分１と成分２との分離の度合いを表す指標（流出曲線におけるピーク、バンドの接近度）として分離度Ｒsがあり、この分離度Ｒsは以下の式（１）のように表せることが知られている。

【数4】

なお、上記の式において、Ｎは理論段数、αは選択性因子、ｋ’は保持比である。

【0077】

ここで前記保持比ｋ’は、溶離液３４とともに試料がカラム３９に流入し始めてから溶離液３４がカラム３９から流出するまでの時間（所謂ボイドタイム）をｔ₀とし、溶離液３４とともに試料がカラム３９に流入し始めてからカラム３９から流出するまでの時間をｔ_rとすると、下記の式（２）で表される。

【数5】

【0078】

そして、本実施形態の液体クロマトグラフ２１では、目的物質のピーク時間ｔ_rが上記ボイドタイムｔ₀のほぼ４倍の値になるように、パーソナルコンピュータ５１でクロマトグラフィ条件を適宜自動設定するよう構成している（ｔ_r＝４×ｔ₀）。この条件を上記の式（２）に当てはめると、ｋ’＝３になる。

【0079】

また、本実施形態の液体クロマトグラフ２１では、前記フラクションコレクタ４１での各試験管への分取を好適に行うために必要十分な分離度の具体的な値として、Ｒs＝１を設定している。従って、上記の式（１）にＲs＝１、ｋ’＝３を代入し、更にＮ＝の形に変形することで、分離度Ｒs＝１を実現するために必要な理論段数Ｎの式を下記の式（３）のように導くことができる。

【数6】

【0080】

そして、前記の選択性因子αは、具体的には下記の式（４）で表される。

【数7】

【0081】

上記の式（４）において、ｋ₁’及びｋ₂’は、成分１及び成分２についての個別の保持比である。即ち、液体クロマトグラフィ開始から成分１のピークが現れるまでの時間をｔ_r1、成分２のピークが現れるまでの時間をｔ_r2としたときに、ｋ₁’及びｋ₂’は、下記の式（５）で表される。

【数8】

【0082】

ここで、上述した薄層クロマトグラフィにおける各成分の移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2は、固定相内の各成分の移動速度の溶離液移動速度に対する比として捉えることができる。一方、液体クロマトグラフィにおいては、固定相内の各成分の移動速度の溶離液移動速度に対する比は、上記のボイドタイムｔ₀を、カラム３９内を各成分が移動するのに要した時間ｔ_r1、ｔ_r2でそれぞれ除することで得られる。従って、各成分について、薄層クロマトグラフィでの移動速度の比（移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2）と液体クロマトグラフィでの保持時間の比（ｔ₀／ｔ_r1，ｔ₀／ｔ_r2）とをそれぞれ等しいとおくことで、下記の式（６）を導くことができる。

【数9】

上記の式は、薄層クロマトグラフィと液体クロマトグラフィとを具体的に関係付ける重要な式として知られている。

【0083】

そして、上述の式（５）を変形することで、ｋ₁’及びｋ₂’を、移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2を用いて下記の式（７）のように表すことができる。

【数10】

【0084】

この式（７）の関係を式（４）へ代入し、得られたαを更に式（３）へ代入することで、下記の式（８）が導かれる。

【数11】

【0085】

ここで２５６／９≒２８であり、またａ＝１／Ｒ_f1とおくことで、上記の式（８）は下記の式（９）のように変形できる。

【数12】

【0086】

以上により、分離度Ｒs＝１を実現するために必要な理論段数Ｎと、移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2の関係が得られる。即ち、上記の条件決定支援プログラムでは、上記のＯＫボタン７６がクリックされると、テキストボックス７２，７３、８４に入力されているＲ_f1，Ｒ_f2、上記の式（９）を用いて、Ｒs＝１を実現するために必要な理論段数Ｎを求めるようになっている。以上により、図３に示す第１演算手段６４の機能が実現されている。例えば、図４のウインドウでの入力例に示すようにＲ_f1＝０．５，Ｒ_f2＝０．３が指定されたとすると、式（９）から、Ｎ≒８６が得られる。

【0087】

従来の技術においては、このようにして算出した理論段数Ｎに基づいてｌｏｇＮと負荷量との関係に基づいて、負荷量を求めていた。本発明においては、更に極性有機溶媒量Ｖ_０を更にもう一つのパラメータとして加えた三次元的な関係図に基づいて負荷量を求めるものである。これを図８〜１２を参照しつつ、説明する。

【0088】

図８には、理論段数の対数ｌｏｇＮと負荷量の対数ｌｏｇｘとの関係が二次元的に示されている。図８に示されたグラフは、特定の理論段数に対して最大限の負荷量の値を示すグラフである。当該グラフより上の範囲においては充分な分離を行うことができず、下の範囲においては良好な分離を行うことができる。

【0089】

このようなグラフは実験結果に基づく経験的な知見から知られたものであり、一定の領域においてはグラフはｘ軸に対して平行となる

【数13】

（式中、Ｍはカラム毎によって決まる定数である）
の直線となり、ある値から

【数14】

（式中、Ｍ_ｘおよびｍはカラム毎によって決まる定数である）
の関係を満たすものとなる。

【0090】

当該関係式中のＭ，Ｍ_ｘ，ｍは、カラムによる分離実験を行った実験結果から求めることができ、カラムごとの特性値となる。
上述した式（１０）、式（１１）で示した関係式は、極性有機溶媒量の影響を考慮しないものである。しかし、現実には試料液が極性有機溶媒を含有する場合、この関係式への影響を生じてしまうものである。図８に示したように、極性有機溶媒を試料液において使用しない場合はグラフ９１のような関係を示すカラムにおいて、例えば、極性有機溶媒２ｍｌを使用した場合、グラフ９２のような関係を示すものとなる。

【0091】

そこで、本発明においては理論段数Ｎから負荷量ｘを算出するための計算式において、極性有機溶媒量Ｖ_０量をパラメータをして含む計算式を使用し、これによってより適切なカラム選択を行うものである。このようなカラム選択は、各カラム毎に極性有機溶媒によるカラムの分離能への影響を実験によって明らかにすることによって可能となったものである。以下にこのような式の一例を示す。

【0092】

本発明者の検討により明らかとなった理論段数Ｎ、負荷量ｘ、極性有機溶媒量Ｖ_０との関係を三次元的に示すグラフを図９に示した。図９のうち、まずグラフ１０１、１０２、１０３に基づいて説明を行う。まず、関係式のうち、上述した式（１０）は、下記式（１２）

【数15】

（ｌ_ａは、カラム種及び極性有機溶媒種によって決まる比例定数。Ｍ_０は、極性有機溶媒を使用しない場合の式（１）におけるＭである）
と修正することができる。
この関係を図１０として示す。図１０は、図８、９に示したような負荷量と理論段数との関係を示すグラフにおいて、グラフが負荷量を示す軸と平行になる領域における理論段数Ｎの対数値と極性有機溶媒量Ｖ_０との関係を示すものである。

【0093】

すなわち、図８においてｘ軸に平行な直線の位置を示す値は、極性有機溶媒量を増加させるに従って値が小さくなるものである。

【0094】

更に、式（１１）は、下記式（１３）

【数16】

（ｌ_ｂは、カラム種及び極性有機溶媒種によって決まる比例定数）
と修正することができる。

【0095】

このようにして、図８に示したような極性有機溶媒の使用による理論段数Ｎと負荷量ｘとの関係の変化を数式化することができる。したがって、各カラム及び使用した極性有機溶媒の種類ごとに上述した式のｌ_ａ、ｌ_ｂ、ｍ、Ｍ_ｘ、Ｍの定数を保管しておけば、入力された事項に応じてこれらの定数を呼び出すことで条件に合ったｌｏｇＮとｌｏｇｘとの関係式を得ることができる。このようにして得られた関係式と上述した算出式に得られたＮの値に基づいて負荷量ｘの値を求めることができるものである。

【0096】

これを図８，９に基づいて更に具体的に説明する。
図９のグラフにおいてＶ_０＝２ｍｌの場合、式（１２）（１３）にＶ_０＝２ｍｌを代入することで、極性有機溶媒量による修正を加えた所定の式を求めることができる。これをグラフとして表わすと、図８中の破線で示されたグラフ１０２のような関係であることが明らかとなる。このような関係に基づいて理論段数（上述した例の場合はＮ＝８６）に対応した負荷量（上述した例の場合は０．２５ｇ）を知ることができる。

【0097】

（インジェクターを使用した場合の負荷量の計算）
本発明の条件決定支援装置においては、第１の本発明のインジェクターを使用した場合の負荷量への影響も考慮して算出式を得ることもできる。
上述したように、本発明のインジェクターは、極性有機溶媒を吸着することによって分離カラムの分離能力低下を防止するという効果を有するものである。よって、このようなインジェクターの機能もまた、上記式に対して影響を与えるものであることから、この点も考慮する必要がある。

【0098】

本発明者らの検討によって、上記インジェクターを使用した場合の式（１２）は、

【数17】

（式中、Ｖ_ｍａｘは、インジェクターが吸着することができる有機溶媒の最大量を示す）
であることが明らかとなった。この場合のＮとＶ_０との関係を示すグラフを図１１に示した。なお、図１１には、Ｖ_ｍａｘ＝２ｍｌである場合について示している。図１１は、図１０と同様、図８、９に示したような負荷量と理論段数との関係を示すグラフにおいて、グラフが負荷量を示す軸と平行になる領域における理論段数Ｎの対数値と極性有機溶媒量Ｖ_０との関係を示すものである。

【0099】

更に、本発明者らの検討によって、上記インジェクターを使用した場合の式（１２）は、

【数18】

と修正することができることが明らかとなった。
このような関係について、図９においてグラフ１０４，１０５，１０６としてＶ_ｍａｘ＝２ｍｌの場合の関係式を示した。

【0100】

上記式中のＶ_ｍaxは、使用したインジェクターの種類及び使用した極性有機溶媒種によって決定される値である。したがって、あらかじめ測定することによって得られたインジェクターの種類と極性有機溶媒種とＶ_ｍaxとの関係を保管しておき、入力されたインジェクターの種類及び極性有機溶媒種に応じてＶ_ｍaxを呼び出すことによって、インジェクター種による補正を加えた式（１６）（１７）を得ることができ、これによって、ＮとＸとの関係を数式化することができ、より適切なカラムクロマトグラフィの条件設定を行うことができる。

【0101】

上述したように、Ｖ_ｍａｘは、Ｖ_ｉｎｊとの間に、

【数19】

との関係式が成立する。よって、上記式をパーソナルコンピュータ５１中に保管し、入力された極性有機溶媒種及びインジェクトカラムの種類に応じて極性有機溶媒トラップ体積を算出し、画面に表示するものとしてもよい。また、このような式によって算出されたＶ_ｍａｘを式１４、式１５におけるＶ_ｍａｘとして使用し、負荷量の算出を行うようなシステムとしてもよい。

【0102】

（その他）
以上に示すように、本実施形態の液体クロマトグラフ２１が備えるパーソナルコンピュータ５１は、複数の成分について、薄層クロマトグラフィを行ったときの各成分の移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2の実測値及び極性有機溶媒の使用体積Ｖ_０を入力するための実測値入力手段６１と、この実測値入力手段６１で入力された移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2，Ｖ_０から、液体クロマトグラフィのカラム３９への試料の負荷量を求めるための負荷量算出手段６２と、この負荷量算出手段６２で求められた負荷量を出力する負荷量出力手段６３と、を備える。

【0103】

負荷量の計算は上述したとおり各成分１，２の移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2に加えて、極性有機溶媒の量等を考慮して行われるので、負荷量を合理的に計算することができる。即ち、極性有機溶媒を試料液溶媒として使用したときの影響を入力してこの入力内容に基づいて算出するものであることから、試料液の種類による変化にも充分に対応した形で負荷量をユーザに提示することができる。

【0104】

また、負荷量算出手段６２は、前記実測値入力手段６１で入力された移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2から、当該複数の成分を所定の分離度（本実施形態ではＲs＝１）で分離可能とするために必要な理論段数Ｎを求める第１演算手段６４と、前記理論段数Ｎと、液体クロマトグラフィのカラム３９への試料の負荷量との関係（図７に例示する関係）を予め記憶しておくための記憶手段６５と、この記憶手段６５に記憶された関係に基づいて、前記第１演算手段６４で求められた理論段数Ｎから負荷量を求めるための第２演算手段６６と、を備える。

【0105】

従って、適切な分離度を実現するための条件をユーザに提示できるので、良好なクロマトグラフィ結果が容易に得られる。

【0106】

また、負荷量算出手段６２は、前記移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2から、液体クロマトグラフィのＳ，Ｍ，Ｌ，・・・の複数種類のカラム３９について、前記負荷量を当該カラム３９の種類ごとに求めている。そして、前記負荷量出力手段６３は、図５に示すように、前記カラム３９のそれぞれの種類（Ｓ，Ｍ，Ｌ，・・・）ごとに負荷量を出力するように構成されている。

【0107】

従って、例えば分離したい試料のグラム数が決まっている場合に、それを好適に分離できるサイズのカラム３９をＳ，Ｍ，Ｌ，・・・の中から適切に選定できるよう、ユーザの条件決定過程を支援できる。

【0108】

更に、前記実測値入力手段６１には、ディスプレイ装置５８の表示画像の任意の点を指示可能なマウス５７が含まれており、前記移動度Ｒ_f1，Ｒ_f2の実測値は、前記ディスプレイ装置５８のスポット指示領域７４に描画された薄層板図形８１上の点を前記マウス５７のドラッグ操作で指示することにより入力可能になっている。

【0109】

更に、前記実測値入力手段６１には、極性有機溶媒量入力領域８４において、極性有機溶媒量を入力することができるようになっている。また、極性有機溶媒種やインジェクトカラムサイズ等も反映させて液体クロマトグラフィの条件を決定する場合には、極性有機溶媒種入力領域８３、インジェクトカラムサイズ８５を設けるものであってもよい。

【0110】

以上に本発明の好適な実施形態を説明したが、以上は一例であって、例えば以下のように変更することができる。

【0111】

上記の実施形態ではサイズが異なる複数種類のカラムから適切なサイズのカラム３９を選択する場合を示したが、これに限らず、例えば内部の固定相が異なる複数種類のカラムから適切なカラムを選択する場合にも、上記の支援プログラムを適用することができる。

【0112】

上記の条件決定支援プログラムと制御プログラムとを連動させるように構成することができる。例えば、図５の結果表示領域７５において「Ｌ」の行をダブルクリックすれば、ウインドウ７１が閉じられて条件決定支援プログラムが終了するとともに、液体クロマトグラフィの制御プログラムにおいて、Ｌサイズのカラム３９を使用した場合に好適な条件パラメータが直ちに自動設定される、といったようにである。

【0113】

また、上述した負荷量の計算において、上記のＲs＝１、ｔ_r＝４×ｔ₀等の条件は、分析の目的等を考慮して適宜変更することができる。

【0114】

図４に示すように、ウインドウ７１が表示された当初の状態では、移動度Ｒ_f1のテキストボックス７２には最初から「０．５」の数値（所謂デフォルト値）が入力されている。これは、Ｒ_f1＝０．５とすると上記の式（９）でａ＝２となって計算が簡単になり、処理の都合が良いからである。ただし、デフォルト値を０．５にすることに限らず、他の値を採用しても構わない。

【0115】

（実施例）
シリンダー状のカラム中に１４ｍｌの乾燥シリカゲルを充填した。ここにカラム上部より１ｍｌのメタノール（極性有機溶媒）を流入させた。その後、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝７０：３０の混合溶媒を流速１０ｍｌ／ｍｉｎで流した。溶出してきた初流を４ｍｌ×３回分取し、これらについて、ガスクロマトグラフィによる分析を行った。その結果のチャートを図１３に示した。
その結果、メタノールに由来するピークは見出されずカラム中の乾燥シリカゲルに吸着されていることが明らかとなった。
なお、ガスクロマトグラフィは以下の条件で行ったものである。
測定機器：ＧＣ−１７Ａ（島津製作所社製）
使用カラム：島津ＣＢＰ−Ｍ２５−０２５（長さ ２５ｍ，内径 ０．２２ｍｍ，膜厚 ０．２５μｍ）
温度：４０℃
注入口温度：２５０℃
検出器温度：２８０℃
キャリアガス：Ｈｅ
スプリット比： １００：１
注入量：１．０μｍ
検出器：ＦＩＤ

【0116】

（比較例）
乾燥シリカゲルにかえてガラスビーズを使用した以外は完全に同一の方法で上記実施例と同じ試験を行った。その結果のチャートを図１３に示した。
その結果、メタノールに由来するピークが見られ、カラム中のガラスビーズではメタノールが吸着されないことが明らかとなった。

【産業上の利用可能性】

【0117】

本発明の液体クロマトグラフィ方法は、試料液の溶媒が極性有機溶媒である場合に、極性有機溶媒による影響を低下させ、良好な分離及び分離条件の正確な決定を行うことができるものである。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】