特許 6202984 細胞分取方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6202984

(24)【登録日】2017年9月8日

(45)【発行日】2017年9月27日

(54)【発明の名称】細胞分取方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 1/28 20060101AFI20170914BHJP

【ＦＩ】

   G01N1/28 G

   G01N1/28 J

【請求項の数】5

【全頁数】12

(21)【出願番号】特願2013-221356(P2013-221356)

(22)【出願日】2013年10月24日

(65)【公開番号】特開2015-81899(P2015-81899A)

(43)【公開日】2015年4月27日

【審査請求日】2016年7月5日

(73)【特許権者】

【識別番号】000000376

【氏名又は名称】オリンパス株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100118913

【弁理士】

【氏名又は名称】上田 邦生

(74)【代理人】

【識別番号】100112737

【弁理士】

【氏名又は名称】藤田 考晴

(72)【発明者】

【氏名】堀 邦夫

【審査官】 東松 修太郎

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１２／０６６８２７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開２００９−０６４９０５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００７−２４２９８８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２０１３／０２５００９０（ＵＳ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｇ０１Ｎ １／００− １／４４

Ｈ０１Ｌ ２１／７８−２１／８０

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

伸展性のシートに貼り付けられた基板に組織切片を貼り付け、前記シートの伸展によって前記基板を表面方向に引っ張ることによって前記基板と前記組織切片とを一緒に分割し、分割された基板のチップのうち一部を前記シートから剥離して採取する細胞分取方法において、
伸展された前記シート上に隙間を空けて分布する前記チップのマップ画像を取得する画像取得工程と、
該画像取得工程において取得された前記マップ画像内から前記チップの像を抽出する抽出工程と、
該抽出工程において抽出された前記チップの像をつなぎ合わせることによって分割前の前記組織切片の像を復元する復元工程と、
該復元工程において復元された前記組織切片の像を表示する復元像表示工程と、
該復元像表示工程において表示された前記復元された組織切片の像に基づいて、採取すべき１つ以上の前記チップを選択する選択工程と、
該選択工程において選択されたチップを前記シートから採取する採取工程とを含む細胞分取方法。

【請求項2】

前記復元工程において、互いに隣接する前記チップの像の、対向する辺同士が一致するように、前記チップの像をつなぎ合わせる請求項１に記載の細胞分取方法。

【請求項3】

前記マップ画像を、前記選択工程において選択された前記チップの像に標識を付して表示するマップ画像表示工程を含む請求項１または請求項２に記載の細胞分取方法。

【請求項4】

前記復元工程において、各前記チップの像の移動距離および移動方向に基づいて、前記マップ画像内における各前記チップの像の絶対位置を取得し、
前記採取工程において、前記復元工程において取得された前記絶対位置に基づいて、前記選択されたチップの位置を調整する請求項１から請求項３のいずれかに記載の細胞分取方法。

【請求項5】

前記復元工程において、各前記チップの像の移動距離および移動方向に基づいて、前記マップ画像内における前記チップの像同士の相対位置を取得し、
前記採取工程において、前記復元工程において取得された前記相対位置に基づいて、前
記選択されたチップの位置を調整する請求項１から請求項３のいずれかに記載の細胞分取方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、細胞分取方法に関するものである。

【背景技術】

【0002】

従来、生体組織から切り出した組織切片を小さな多数の断片に分割し、所望の細胞を含む特定の断片のみを採取する方法が知られている（例えば、特許文献１参照。）。特許文献１では、伸展性シートに貼り付けられた基板上に組織切片を貼り付け、シートを伸展させて基板を引っ張ることによって基板と一緒に組織切片を分割し、所望の断片が付着した基板のチップをシートから採取している。このときに、シートを伸展させてチップ間に隙間を空けた状態でチップの採取が行われる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0003】

【特許文献1】国際公開第２０１１／１４９００９号

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

採取するチップの選択は、操作者が、シート上に分布する断片から分割前の組織切片の全体像を想像し、組織切片内の所望の領域に対応する断片を特定することによって行われる。しかしながら、隙間を空けて分布する多数の小さな断片から、分割前の組織切片の全体像を正確に想像することは難しく、採取するチップを適切に選択することが難しいという問題がある。また、分割前の組織切片の画像を参照して採取する領域を特定し、特定した領域に対応するチップを採取する方法もあるが、特定した領域が、多数のチップのうちのいずれに対応しているかを目視で判別することが難しいという問題がある。特に、組織切片の分割位置は、分割してみるまでは分からず、組織切片の各部分がいずれのチップに分配されたかを分割前の組織切片の画像から正確に知ることは難しい。

【0005】

本発明は、上述した事情に鑑みてなされたものであって、組織切片を基板と一緒に分割した後に、組織切片の多数の断片の内、組織切片内の所望の部分の断片が付着したチップを容易にかつ正確に選択することができる細胞分取方法を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0006】

上記目的を達成するため、本発明は以下の手段を提供する。
本発明は、伸展性のシートに貼り付けられた基板に組織切片を貼り付け、前記シートの伸展によって前記基板を表面方向に引っ張ることによって前記基板と前記組織切片とを一緒に分割し、分割された基板のチップのうち一部を前記シートから剥離して採取する細胞分取方法において、伸展された前記シート上に隙間を空けて分布する前記チップのマップ画像を取得する画像取得工程と、該画像取得工程において取得された前記マップ画像内から前記チップの像を抽出する抽出工程と、該抽出工程において抽出された前記チップの像をつなぎ合わせることによって分割前の前記組織切片の像を復元する復元工程と、該復元工程において復元された前記組織切片の像を表示する復元像表示工程と、該復元像表示工程において表示された前記復元された組織切片の像に基づいて、採取すべき１つ以上の前記チップを選択する選択工程と、該選択工程において選択されたチップを前記シートから採取する採取工程とを含む細胞分取方法を提供する。

【0007】

本発明によれば、まず、画像取得工程において、シートの伸展によって分割された基板および組織切片のマップ画像が取得され、次に、抽出工程において、マップ画像内からチップの像が抽出され、次に、復元工程において、チップの像を繋ぎ合わせることによって、ばらばらに分割された断片が１つにつなぎ合わされ、次に、復元像表示工程において、復元された分割前の組織切片の像が表示される。したがって、操作者は、分割後の断片から構成された組織切片の像に基づいて、組織切片内の各部分がいずれのチップに分配されたかを正確に知ることができ、多数の断片の内、組織切片内の所望の部分の断片が付着したチップを容易にかつ正確に選択することができる。

【0008】

上記発明においては、前記復元工程において、互いに隣接する前記チップの像の、対向する辺同士が一致するように、前記チップの像をつなぎ合わせてもよい。
このようにすることで、基板の切れ目である辺同士を一致させることによって、チップの像を精度良く繋ぎ合わせ、分割前の組織切片の像をより正確に復元することができる。

【0009】

また、上記発明においては、前記復元像表示工程において表示された前記復元された組織切片の像に基づいて、採取すべき１つ以上の前記チップを選択する選択工程と、該選択工程において選択されたチップを前記シートから採取する採取工程とを含む。
このようにすることで、組織切片内の所望の部分の断片が付着しているチップを採取することができる。

【0010】

また、上記発明においては、前記マップ画像を、前記選択工程において選択された前記チップの像に標識を付して表示するマップ画像表示工程を含んでいてもよい。
このようにすることで、採取工程を操作者が手動で行う場合に、採取したいチップの位置に標識が付されたマップ画像を参照することによって、操作者は、シート上の多数のチップの内、採取すべきチップを容易に特定することができる。

【0011】

また、上記発明においては、前記復元工程において、各前記チップの像の移動距離および移動方向に基づいて、前記マップ画像内における各前記チップの像の絶対位置または前記チップの像同士の相対位置を取得し、前記採取工程において、前記復元工程において取得された前記絶対位置または前記相対位置に基づいて、前記選択されたチップの位置を調整してもよい。
このようにすることで、採取工程を自動制御によって行う場合に、復元工程における各チップの像の移動を利用してシート上の各チップの位置情報を取得し、取得された位置情報を用いて実在のチップの位置を制御することができる。

【発明の効果】

【0012】

本発明によれば、組織切片を基板と一緒に分割した後に、組織切片の多数の断片の内、組織切片内の所望の位置の断片が付着したチップを容易にかつ正確に選択することができるという効果を奏する。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】本発明の第１の実施形態に係る細胞分取方法に用いられる基板および組織切片を示す平面図である。

【図2】図１の基板および組織切片の分割後を示す平面図である。

【図3】本発明の第１の実施形態に係る細胞分取方法を実施する細胞分取システムの全体構成図である。

【図4】本発明の第１の実施形態に係る細胞分取方法を示すフローチャートである。

【図5】図２の基板および組織切片を撮影したマップ画像である。

【図6】図５のマップ画像を用いて復元した分割前の組織切片の像を示す図である。

【図7】チップ領域同士をつなぎ合わせる方法を説明する図である。

【図8】図６の組織切片の像を元の状態に戻したマップ画像である。

【図9】各チップ領域の絶対位置の計算方法を説明する図である。

【図10】各チップ領域の相対位置の計算方法を説明する図である。

【図11】本発明の第２の実施形態に係る細胞分取方法の採取工程を示すフローチャートである。

【発明を実施するための形態】

【0014】

（第１の実施形態）
以下に、本発明の第１の実施形態に係る細胞分取方法について図１から図１０を参照して説明する。
まず、本実施形態に係る細胞分取方法の概要について説明する。本実施形態に係る細胞分取方法は、生体組織から切り出した薄い組織切片１を多数の小さな断片１ａに分割し、所望の細胞（例えば、癌化した細胞）を含む一部の断片１ａを採取する方法である。

【0015】

組織切片１は、例えば、ミクロトームによって薄切されたパラフィン包埋切片または凍結切片である。組織切片１は、図１に示されるように、シート２上に貼り付けられた、カバーガラスのような基板３の表面に貼り付けられる。シート２は、伸展性を有し、粘着性の接着剤によって基板３が剥離可能に貼り付けられている。基板３は、表面に沿う方向に並ぶ格子状の溝４が形成されており、図２に示されるように、シート２を表面方向に伸展することによって、溝４に沿って複数のチップ３ａに分割可能に構成されている。このときに、基板３上の組織切片１も、基板３と一緒に溝４に沿って多数の断片１ａに分割される。そして、所望の断片１ａが付着したチップ３ａをシート２から剥離および回収することによって、組織切片１から、特定の領域を選択的に採取することができる。

【0016】

図３は、シート２からチップ３ａを剥離および回収するための細胞分取システム１００を示している。細胞分取システム１００は、図３に示されるように、シート２を水平に支持するステージ１０と、該ステージ１０上の基板３を下側から観察する観察部２０と、ステージ１０の上側に設けられた採取部３０と、ステージ１０の下側に設けられた回収部４０と、観察部２０によって取得された静止画像を処理する画像処理部５０と、観察部２０によって取得されたライブ画像と画像処理部５０によって処理された静止画像とを並列に表示する表示部６０とを備えている。

【0017】

ステージ１０は、鉛直方向に貫通する窓１０ａを中央部に有している。シート２は、この窓１０ａに基板３が位置するように、基板３を下側に向けてステージ１０上に配置される。観察部２０は、窓１０ａの位置の物体を観察する対物レンズと、該対物レンズによって取得された光学像を撮影するデジタルカメラとを有し、ステージ１０に載置されたシート２上のチップ３ａの配列の像を撮影する。このときに撮影される像は、チップ３ａの配列の全体像であってもよく、一部の像であってもよい。観察部２０によって撮影されたライブ画像は表示部６０に表示される。採取部３０は、細長い直棒状の針部材３１と、該針部材３１を先端を鉛直下方に向けて保持すると共に針部材３１を鉛直方向に移動可能な移動機構３２とを備えている。

【0018】

操作者は、表示部６０上のライブ画像を観察しながら、所望のチップ３ａが針部材３１の鉛直下方の採取位置に配置されるようにステージ１０を移動させる。次いで、操作者は、針部材３１を移動機構３２によって鉛直下方に移動させ、採取位置のチップ３ａの裏面をシート２を介して針部材３１の先端で突く。これによって、当該チップ３ａをシート２から剥離および落下させてマイクロチューブのような回収部４０に回収することができる。

【0019】

次に、本実施形態に係る細胞分取方法について詳細に説明する。
本実施形態に係る細胞分取方法は、図４に示されるように、組織切片１を基板３に貼り付ける貼付工程Ｓ１と、シート２を伸展させることによって組織切片１を基板３と一緒に分割する分割工程Ｓ２と、シート２上に分布するチップ３ａの配列のマップ画像Ａを取得する画像取得工程Ｓ３と、マップ画像Ａ内から個々のチップ３ａの像を抽出する抽出工程Ｓ４と、抽出されたチップ３ａの像をつなぎ合わせて分割前の組織切片１の像（復元像）Ｂを復元する復元工程Ｓ５と、復元像Ｂを表示する復元像表示工程Ｓ６と、表示されている復元像Ｂに基づいて採取すべきチップ３ａを選択する選択工程Ｓ７と、選択されたチップ３ａを標識したマップ画像Ａを表示するマップ画像表示工程Ｓ８と、選択されたチップ３ａを採取する採取工程Ｓ９とを含んでいる。

【0020】

貼付工程Ｓ１においては、上述した通り、図１に示されるように、シート２上の基板３の表面に組織切片１を貼り付ける。
分割工程Ｓ２においては、シート２を全方向に等方的に伸展させることによって、基板３および組織切片１を溝４に沿って分割する。シート２の伸展には、例えば、半導体プロセスにおいてダイシングシートの伸展に使用されるエキスパンダが好適に用いられる。基板３および組織切片１の分割後は、グリップリング等によってシート２を伸展状態に保持する。これにより、図２に示されるように、チップ３ａ間に隙間が空いた状態となる。

【0021】

画像取得工程Ｓ３においては、伸展状態のシート２を、チップ３ａを下側に向けてステージ１０上に載置する。これにより、シート２上に隙間を空けて分布している多数のチップ３ａのライブ画像が表示部６０に表示される。観察部２０によってこれらチップ３ａの配列の静止画像を取得することで、図５に示されるように、マップ画像Ａを生成する。静止画像の取得は、例えば、操作者の指示に従い行ってもよい。生成されたマップ画像Ａは、観察部２０から画像処理部５０を介して表示部６０に送信されて該表示部６０に表示される。

【0022】

抽出工程Ｓ４および復元工程Ｓ５は、画像処理部５０によって実行される。
抽出工程Ｓ４において、画像処理部５０は、観察部２０から受信したマップ画像Ａから画像処理によってチップ３ａの像の輪郭を検出し、該輪郭によって囲まれたチップ領域３ａ’をマップ画像Ａから切り出す。輪郭の検出は、例えば、画素の輝度値を、マップ画像Ａの横軸方向および縦軸方向に１次微分し、得られた微分値が所定の閾値よりも大きい位置を検出することによって行われる。このときに、輝度値を２値化したマップ画像Ａを用いてもよい。また、チップ３ａの寸法および形状が既知である場合には、画像処理によって検出された輪郭を、既知のチップ３ａの寸法および形状と一致するように補正してもよい。

【0023】

次に、復元工程Ｓ５においては、抽出工程Ｓ４において切り出したチップ領域３ａ’をマップ画像Ａ内で移動させて互いにつなぎ合わせることによって、図６に示されるように、分割前の組織切片１および基板３の像を復元した復元像Ｂを生成する。このときに、隣接する２つのチップ領域３ａ’の、互いに隣接する辺同士が一致するように、チップ領域３ａ’を移動することによって、チップ領域３ａ’同士を正確につなぎ合わせることができる。

【0024】

具体的には、矩形の各チップ領域３ａ’が有する４つの角の、マップ画像Ａ内における位置座標を取得する。そして、図７に示されるように、互いに隣接するチップ領域３ａ’の、対応する２つの角の位置が一致するように、チップ領域３ａ’を移動させる。これにより、シート２の各方向の伸展量が不均一となってチップ領域３ａ’の配列が不規則であっても、チップ領域３ａ’を正確につなぎ合わせることができる。ここで、画像処理部５０は、各チップ領域３ａ’の移動量および移動方向を表わす移動ベクトルを記録しておく。記録された移動ベクトルは、後述するマップ画像表示工程Ｓ８において、各チップ領域３ａ’を元の位置へ戻す処理に用いられる。

【0025】

復元像Ｂが生成されたマップ画像Ａは、復元像表示工程Ｓ６において表示部６０に表示される。ここで、復元工程Ｓ５においては、各チップ領域３ａ’が、図５に示される元の位置から、図６に示される位置へ移動する過程を、アニメーションで表示部６０に表示してもよい。これにより、操作者は、各断片１ａの、組織切片１内における位置を、さらに容易に把握することができる。なお、これに代えて、図５に示されるマップ画像Ａをそのまま表示し続け、該マップ画像Ａとは別に復元像Ｂを表示してもよい。

【0026】

次に、選択工程Ｓ７においては、操作者が、表示部６０に表示された組織切片１および基板３の復元像Ｂを観察し、採取するチップ３ａを決定する。そして、操作者は、決定したチップ３ａのチップ領域３ａ’を、復元像Ｂに対して指定する。指定するチップ領域３ａ’の数は、１つであってもよく、複数であってもよい。チップ領域３ａ’の指定には、例えば、画像処理部５０に設けられた、タッチパネル等のグラフィカルユーザインタフェースが使用される。画像処理部５０は、操作者によって指定されたチップ領域３ａ’に標識５を付す。図６には、標識５として、指定された順番を示す数字が示されているが、標識５の形態は、これに限定されるものではなく、任意であってよい。

【0027】

次に、マップ画像表示工程Ｓ８において、画像処理部５０は、復元工程Ｓ５において記録しておいた移動ベクトルに従って各チップ領域３ａ’を元の位置に戻すことによって、図８に示されるように、マップ画像Ａを復元し、復元されたマップ画像Ａを表示部６０に再表示させる。このときに、画像処理部５０は、選択工程Ｓ７において指定されたチップ領域３ａ’を、標識５と一緒に移動させる。これにより、操作者は、自身が選択したチップ３が、再表示されたマップ画像Ａ内のいずれのチップ３ａであるかを標識５に基づいて容易に認識することができる。

【0028】

マップ画像表示工程Ｓ８においても、復元工程Ｓ５と同様に、１つにつなぎ合わされた各チップ領域３ａ’が元の位置に移動する過程を、アニメーションで表示してもよい。これにより、操作者は、自身が選択したチップ３の、マップ画像Ａ内における位置をさらに容易に認識することができる。

【0029】

次に、採取工程Ｓ９において、操作者は、表示部６０に表示されたマップ画像Ａとライブ画像とを比較し、標識５されているチップ領域３ａ’と対応するシート２上の実在のチップ３ａが採取位置に配置されるようにステージ１０の位置を調整し、採取部３０を操作して選択したチップ３ａをシート２から剥離および落下させる。このときに、表示部６０上のマップ画像Ａとライブ画像とを比較しやすいように、マップ画像Ａおよびライブ画像の表示倍率を同一にすることが好ましい。

【0030】

この場合に、本実施形態によれば、分割後の断片１ａの像をつなぎ合わせて分割前の組織切片１の像を復元することによって、操作者は、組織切片１の分割後であっても、分割前の組織切片１の正確な像に基づいて採取すべき断片１ａを容易に選択することができる。特に、組織切片１の各部分がいずれのチップ３ａに分配されたかを復元像Ｂに基づいて正確に知ることができるので、採取すべき断片１ａと該断片１ａが付着したチップ３ａとを正確に選択することができる。さらに、操作者が復元像Ｂに基づいて選択したチップ３ａが、実際のシート２上の多数のチップ３ａの内のいずれであるかを、再表示されたマップ画像Ａの標識５に基づいて容易に認識し、選択したチップ３ａを正確に採取することができる。

【0031】

なお、本実施形態においては、採取工程Ｓ９において、操作者がステージ１０および採取部３０を手動で操作してチップ３ａを採取することとしたが、これに代えて、細胞分取システム１００が、指定されたチップ３ａを自動で採取してもよい。この場合、ステージ１０および移動機構３２は、画像処理部５０からの信号に従って駆動する電動式であり、選択されたチップ３ａが採取位置に配置されるようにステージ１０が移動し、次に、移動機構３２が針部材３１を下降させてチップ３ａの採取を実行する。このように、煩雑なステージ１０の位置合わせを自動化することによって、操作者の負担を効果的に低減することができる。

【0032】

ここで、チップ３ａの採取位置への位置合わせは、次のようにして行われる。
まず、マップ画像Ａ内の多数のチップ領域３ａ’のうち１つ、例えば、一番左上に位置するチップ領域３ａ’を基準用に決定し、基準用のチップ領域３ａ’の中心を原点に設定する。次に、設定された原点を有する直交座標系における、指定されたチップ領域３ａ’の中心位置を計算する。直交座標系において、マップ画像Ａの横軸がＸ軸、縦軸がＹ軸である。チップ領域３ａ’の中心は、例えば、復元工程Ｓ５において取得した、チップ領域３ａ’の４つの角の位置座標を用い、チップ領域３ａ’の対角線の交点として求める。これにより、原点に対する、指定されたチップ領域３ａ’の中心の絶対位置が算出される。

【0033】

なお、ここで用いる座標系は、各チップ領域３ａ’の、原点に対する絶対位置を定義できるものであればよく、直交座標系に代えて、極座標系等の他の種類の座標系を用いてもよい。また、チップ３ａの絶対位置または相対位置を用いてステージ１０を移動させる場合には、マップ画像Ａの撮像倍率を勘案し、ステージ１０の移動距離および移動方向を決定する必要があることはいうまでもない。

【0034】

次に、観察部２０によって観察されているライブ画像から、基準用のチップ領域３ａ’に対応する基準用のチップ３ａを検出し、該基準用のチップ３ａの中心をステージ１０の零点位置に設定する。これにより、ステージ１０とマップ画像Ａとの基準位置合わせが行われる。以上の処理は、画像処理部５０または図示しないコンピュータ等によって行われる。次に、指定されたチップ領域３ａ’の絶対位置に基づき、当該チップ領域３ａ’に対応するチップ３ａが採取位置に配置されるように、ステージ１０が移動する。なお、本変形例においては、ステージ１０とマップ画像Ａとの基準位置合わせまでを自動で行い、その後のステージ１０の移動は操作者が手動で行ってもよい。

【0035】

また、本変形例においては、チップ領域３ａ’の中心の絶対位置は、以下の方法に従って計算してもよい。
まず、１つのチップ領域３ａ’を基準用に決定し、基準用のチップ領域３ａ’の中心を原点に設定する。次に、図９に示されるように、原点から隣接するチップ領域３ａ’の中心まで、チップ領域３ａ’の辺の中心を通る経路を決定し、該経路の始点と終点とを結ぶベクトルを計算する。ここで、チップ領域３ａ’の中心および辺の中心の位置の計算には、復元工程Ｓ５において得られた位置座標を利用することができる。同様にして、他の隣接する２つのチップ領域３ａ’について、中心同士を結ぶベクトルを計算する。これにより、原点に対する任意のチップ領域３ａ’の絶対位置を、ベクトルの和として得ることができる。

【0036】

また、本変形例においては、操作者の手動操作によって、ステージ１０とマップ画像Ａとの基準位置合わせを行ってもよい。例えば、最初に採取するチップ３ａを採取位置に手動操作で配置し、このときのステージ１０の位置を零点位置として設定する。マップ画像Ａの原点は、当該チップ３ａに対応するチップ領域３ａ’の中心に設定すればよい。

【0037】

また、本変形例においては、チップ領域３ａ’の絶対位置に代えて、チップ領域３ａ’の相対位置に基づいてステージ１０が移動してもよい。この場合も、復元工程Ｓ５において取得した、チップ領域３ａ’の４つの角の位置座標、または、移動ベクトルを利用することができる。例えば、図１０に示されるように、指定された２つのチップ領域３ａ’の中心同士を結ぶベクトルを計算し、このベクトルに従ってステージ１０が移動することによって、選択された２つのチップ３ａを続けて採取することができる。

【0038】

（第２の実施形態）
次に、本発明の第２の実施形態に係る細胞分取方法について図１１を参照して説明する。
本実施形態においては、上述した第１の実施形態と異なる点において主に説明し、第１の実施形態と共通する構成については同一の符号を付して説明を省略する。
第１の実施形態においては、採取工程Ｓ９において、ライブ画像を観察しながらステージ１０の位置を調整することとした。これに対し、本実施形態においては、ライブ画像を用いずにチップ３ａの採取を行う点において、第１の実施形態と異なっている。したがって、本実施形態においては、採取工程について主に説明する。図１１は、本実施形態の採取工程の詳細を示すフローチャートである。

【0039】

図１１に示されるように、採取工程において、採取位置が、観察部２０によって取得される画像の中央に配されるように、観察部２０と採取部３０との位置合わせを行う（ステップＳ９１’）。次に、マップ画像Ａを静止画像として取得し（ステップＳ９２’）、このときのステージ１０の位置座標（Ｘ_ｓ，Ｙ_ｓ）を記録する（ステップＳ９３’）。次に、マップ画像Ａの中央位置を原点とし、マップ画像Ａ内における基準用のチップ領域３ａ’の位置座標（ｘ_ｔ，ｙ_ｔ）を取得する（ステップＳ９４’）。そして、マップ画像Ａの倍率（Ｚ倍）を勘案して、下式に示されるように、ステージ１０の位置座標（Ｘ_ｓ，Ｙ_ｓ）にチップ領域３ａ’の位置座標（ｘ_ｔ，ｙ_ｔ）を加算することによって、ステージ１０の座標系における基準チップ３ａの位置座標（Ｘ_ｔ，Ｙ_ｔ）を得る（ステップＳ９５’）。
（Ｘ_ｔ，Ｙ_ｔ）＝（Ｘ_ｓ，Ｙ_ｓ）＋（ｘ_ｔ，ｙ_ｔ）／Ｚ

【0040】

次に、位置座標（Ｘ_ｔ，Ｙ_ｔ）に、所望のチップ領域３ａ’の、基準用のチップ領域３ａ’からのベクトル成分（ｄｘ，ｄｙ）を加算することによって、ステージ１０の座標系における所望のチップ領域３ａ’の位置座標（Ｘ_ｔ’，Ｙ_ｔ’）を得る（ステップＳ９６’）。このベクトル成分（ｄｘ，ｄｙ）は、マップ画像Ａの倍率を勘案したものであることは言うまでもない。次に、得られた位置座標（Ｘ_ｔ’，Ｙ_ｔ’）にステージ１０を位置合わせすることで、所望のチップ３ａを採取位置に配置することができる（ステップＳ９７’）。

【0041】

また、マップ画像Ａを取得する際のステージ１０の位置を原点（０，０）とした場合には、基準用のチップ領域３ａ’のステージ１０の座標系における位置座標を（ｘ_０／Ｚ，ｙ_０／Ｚ）とすることができる。所望のチップ領域３ａ’の基準用のチップ領域３ａ’からのベクトル成分を（ｄｘ，ｄｙ）とすると、所望のチップ領域３ａ’の、ステージ１０の座標系における位置合わすべき位置座標は（ｄｘ＋ｘ_０／Ｚ，ｄｙ＋ｙ_０／Ｚ）となる。この位置にステージ１０を合わせることで、針部材３１によって所望のチップ３ａを採取することができる。なお、ステージ１０の移動は、手動であってもよく、自動であってもよい。

【0042】

本実施形態においても、上述したステップＳ９１’〜Ｓ９７’の計算や各部の操作を、予め記憶されたプログラム等に従って細胞分取システム１００が自動で行ってもよく、操作者自身が手動で行ってもよい。

【符号の説明】

【0043】

１ 組織切片
１ａ 断片
２ シート
３ 基板
３ａ チップ
３ａ’ チップ領域（チップの像）
４ 溝
１０ ステージ
２０ 観察部
３０ 表示部
４０ 採取部
５０ 回収部
６０ 画像処理部
１００ 細胞分取システム
Ｓ１ 貼付工程
Ｓ２ 分割工程
Ｓ３ 画像取得工程
Ｓ４ 抽出工程
Ｓ５ 復元工程
Ｓ６ 復元像表示工程
Ｓ７ 選択工程
Ｓ８ マップ画像表示工程
Ｓ９ 採取工程

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】