特許 6208736 健康的な老化に関するバイオマーカーとしての１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）４０：１

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6208736

(24)【登録日】2017年9月15日

(45)【発行日】2017年10月4日

(54)【発明の名称】健康的な老化に関するバイオマーカーとしての１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）４０：１

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/50 20060101AFI20170925BHJP

   G01R 33/465 20060101ALI20170925BHJP

   G01N 27/62 20060101ALI20170925BHJP

   G01R 33/32 20060101ALN20170925BHJP

   G01N 24/12 20060101ALN20170925BHJP

【ＦＩ】

   G01N33/50 D

   G01N24/08 510Q

   G01N27/62 B

   !G01N24/02 530Z

   !G01N24/12 510C

【請求項の数】18

【全頁数】29

(21)【出願番号】特願2015-500821(P2015-500821)

(86)(22)【出願日】2013年3月5日

(65)【公表番号】特表2015-511020(P2015-511020A)

(43)【公表日】2015年4月13日

(86)【国際出願番号】EP2013054332

(87)【国際公開番号】WO2013139582

(87)【国際公開日】20130926

【審査請求日】2016年1月22日

(31)【優先権主張番号】12160735.2

(32)【優先日】2012年3月22日

(33)【優先権主張国】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】599132904

【氏名又は名称】ネステク ソシエテ アノニム

(74)【代理人】

【識別番号】100088155

【弁理士】

【氏名又は名称】長谷川 芳樹

(74)【代理人】

【識別番号】100107456

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 成人

(74)【代理人】

【識別番号】100162352

【弁理士】

【氏名又は名称】酒巻 順一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100140453

【弁理士】

【氏名又は名称】戸津 洋介

(74)【代理人】

【識別番号】100140888

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 欣乃

(72)【発明者】

【氏名】コリーノ， セバスティアーノ

(72)【発明者】

【氏名】モントリュー ロウラ， アイヴァン

(72)【発明者】

【氏名】マーティン， フランソワ−ピエール

(72)【発明者】

【氏名】ガイ， フィリップ アレクサンダー

(72)【発明者】

【氏名】レッツィ， セルジュ アンドレ ドミニク

【審査官】 草川 貴史

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１１／０１２５５３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１１／０６３４７０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 Jurk, D et al.，Chronic inflammation induces telomere dysfunction and accelerates ageing in mice，Nature communications，２０１３年，5:4172，1-13

【文献】 Candore, G et al.，Inflammation, genetic background and longevity，Biogerontology，２０１０年，11，565-573

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｇ０１Ｎ３３／４８−３３／９８

Ｇ０１Ｎ ２７／６２

Ｇ０１Ｎ ２４／１２

Ｇ０１Ｒ ３３／３２

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするライフスタイルを判断する方法（医師による診断方法を除く）であって、
対象から得られた血清サンプル中の１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）４０：１レベルを測定するステップと、
対象のＰＣ−Ｏ ４０：１レベルを事前に決定された参照値と比較するステップと、
を含み、
前記事前に決定された参照値が、対照集団のＰＣ−Ｏ ４０：１平均血清レベルに基づき、並びに
前記サンプル中のＰＣ−Ｏ ４０：１血清レベルが、前記事前に決定された参照値と比較して低減した場合、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避の可能性が高いことを示す、方法。

【請求項2】

サンプル中のヒドロキシスフィンゴミエリン（ＳＭ−ＯＨ）２２：１、リソホスファチジルコリン（ＬＰＣ）１８：０、スフィンゴミエリン（ＳＭ）２４：０、ＰＣ−Ｏ ３４：１、ヒドロキシオクタデカジエン酸（９−ＨＯＤＥ）、９−オキソ−オクタデカジエン酸（９−オキソ−ＯＤＥ）又はロイコトリエンＥ４（ＬＴＥ４）のうち、少なくとも１つのレベルを測定するステップと、
対象のＳＭ−ＯＨ ２２：１、ＬＰＣ １８：０、ＳＭ ２４：０、ＰＣ−Ｏ ３４：１、９−ＨＯＤＥ、９−オキソ−ＯＤＥ、又はＬＴＥ４のうち、少なくとも１つのレベルを事前に決定された参照値と比較するステップと、
を更に含み、
前記事前に決定された参照値が、対照集団のＳＭ−ＯＨ ２２：１、ＬＰＣ １８：０、ＳＭ ２４：０、ＰＣ−Ｏ ３４：１、９−ＨＯＤＥ、９−オキソ−ＯＤＥ、若しくはＬＴＥ４の平均血清レベルに基づき、並びに
前記事前に決定された参照値と比較して、前記サンプル中のＰＣ−Ｏ ４０：１血清レベルが低減した場合、及び／若しくは前記サンプル中のＳＭ−ＯＨ ２２：１、ＬＰＣ １８：０、ＳＭ ２４：０、ＰＣ−Ｏ ４０：１、９−ＨＯＤＥ、若しくは９−オキソ−ＯＤＥの血清濃度が低い場合、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／若しくは回避の可能性が高いことを示し、並びに／又は
前記サンプル中の血清ＬＴＥ４、ＰＣ−Ｏ ３４：１レベルが、前記事前に決定された参照値と比較して増加した場合、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／若しくは回避の可能性が高いことを示す、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

予め得られた参照値と比較して、１つ若しくは複数の下記のバイオマーカー、ＰＣ−Ｏ ３２：１、１５−ヒドロキシエイコサテトラエン酸（１５−ＨｐＥＴＥ）、ロイコトリエンＢ４（ＬＴＢ４）、８，９−エポキシエイコサトリエン酸（８，９−ＥｐＥＴｒＥ）が血清中で増加しているか、及び／又は１つ若しくは複数の下記のバイオマーカー、ＰＣ−Ｏ ３４：３、ＰＣ−Ｏ ３６：４、ＰＣ−Ｏ ３６：２、１１，１２−エポキシエイコサトリエン酸（１１，１２−ＤｉＨＥＴｒＥ）が減少しているかも評価することにより、判断精度が高まる、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項4】

健康的な老化を可能にするライフスタイルを判断する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

長寿命を判断するための、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

事前に決定された参照値が、ライフスタイル変更前に対象から得た血清レベルに基づく、より健全なライフスタイルを判断するための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

ライフスタイルの変更が、食事の変更である、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

食事の変更が、以前に摂取されなかった又は異なる量で摂取された少なくとも１つの栄養製品の使用である、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

新規栄養療法の有効性を試験するための、請求項７又は８に記載の方法。

【請求項10】

ＰＣ−Ｏ ４０：１レベルが、サンプル及び参照において１Ｈ−ＮＭＲ及び／又は質量分析法により測定される、請求項１〜９項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

事前に決定された平均参照値が、
ＰＣ−Ｏ ３２：１の場合、２μＭ、
ＰＣ−Ｏ ３４：１の場合、７．８０μＭ、
１５−ＨｐＥＴＥの場合、１．２５μｇ／血清１００μｌ、
ＬＴＥ４の場合、０．０１３μｇ／血清１００μｌ、
ＬＴＢ４の場合、０．０２０μｇ／血清１００μｌ、及び／又は
８，９−ＥｐＥＴｒＥの場合、０．０７０μｇ／血清１００μｌ、
ＳＭ−ＯＨ ２２：１の場合、１６．０７μＭ、
ＬＰＣ １８：０の場合、５２．００μＭ、
ＳＭ ２４：０の場合、２５．００μＭ、
ＰＣ−Ｏ ３４：３の場合、５．０７μＭ、
ＰＣ−Ｏ ３６：４の場合、１４．３０μＭ、
ＰＣ−Ｏ ４０：１の場合、１．４１μＭ、
ＰＣ−Ｏ ３６：２の場合、１０．００μＭ、
９−ＨＯＤＥの場合、０．３４μｇ／血清１００μｌ、
９−オキソ−ＯＤＥの場合、０．０４３μｇ／１００μｌ、及び／又は
１１，１２−ＤｉＨＥＴｒＥの場合、０．０１７μｇ／血清１００μｌである、より健全なライフスタイルを判断するための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

老化慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするライフスタイルの診断のための、１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）４０：１であるバイオマーカー。

【請求項13】

血清中で検出される、請求項１２に記載のバイオマーカー。

【請求項14】

対象から得られた尿サンプル中のフェニルアセチルグルタミン（ＰＡＧ）及び／又はｐ−クレゾール硫酸塩（ＰＣＳ）のレベルを測定するステップと、
対象のＰＡＧ及び／又はＰＣＳのレベルを事前に決定された参照値と比較するステップと、
を更に含み、
前記事前に決定された参照値が、対照集団のＰＡＧ及び／又はＰＣＳの平均尿レベルに基づき、並びに前記サンプル中のＰＡＧ及び／又はＰＣＳの尿レベルが、前記事前に決定された参照値と比較して上昇した場合、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避の可能性が高いことを示す、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

（ｉ）老化関連の慢性炎症性障害を発症しやすいライフスタイル、（ｉｉ）健康的な老化を妨げる可能性があるライフスタイル、及び／又は（ｉｉｉ）生存期間が短縮するリスクを判断する方法（医師による診断方法を除く）であって、
対象から得られた血清サンプル中の１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ） ４０：１レベルを測定するステップと、
対象のＰＣ−Ｏ ４０：１レベルを事前に決定された参照値と比較するステップと、
を含み、
前記事前に決定された参照値が、対照集団のＰＣ−Ｏ ４０：１平均血清レベルに基づき、並びに
前記サンプル中のＰＣ−Ｏ ４０：１血清レベルが、前記事前に決定された参照値と比較して増加した場合、（ｉ）老化関連の慢性炎症性障害を発症しやすいライフスタイル、（ｉｉ）健康的な老化を妨げる可能性があるライフスタイル、及び／又は（ｉｉｉ）生存期間が短縮するリスクが高いことを示す、方法。

【請求項16】

（ｉ）老化関連の慢性炎症性障害の発症を遅延させる、回避する、及び／又は予防する、（ｉｉ）健康的な老化を促進する、（ｉｉｉ）長寿命を促進する、並びに／或いは（ｉｖ）生存期間が短縮するリスクを低下させるための方法であって、
（ａ）請求項１５に記載の方法を行うステップと、
（ｂ）対象が、（ｉ）老化関連の慢性炎症性障害の発症について高い可能性、（ｉｉ）健康的な老化を妨げる可能性があるライフスタイル、及び／又は（ｉｉｉ）生存期間の短縮について高いリスクを有する場合には、前記対象のライフスタイルの修正を行うステップと、を含む、方法。

【請求項17】

対象のライフスタイルの修正が、食事の変更を含む、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

食事の変更が、健康的な老化及び／又は老化関連の慢性炎症性障害の回避に効果を有する少なくとも１つの栄養製品を前記対象に投与するステップを含む、請求項１７に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、一般的には、健全なライフスタイル及び老化関連の慢性障害予防に関連する。詳細には、本発明は、バイオマーカー、及びライフスタイルの改善を検出するためのその利用と関連する。従って、本発明は、例えばバイオマーカーとしての１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）４０：１、及びライフスタイル診断方法を提供し、バイオマーカーの１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）４０：１を使用する当該方法は、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にする。

【背景技術】

【0002】

老化は、機能的能力及びストレス抵抗性の時間依存性の減退として定義され、疾病率及び死亡率のリスク増加と関連している。更に、ヒトの老化表現型は非常に多様であり、また様々な環境的、確率論的、及び遺伝的−後成的な変数の相互作用に起因して、複雑なモザイクとして記載することができる。老化について数十年にわたり研究が行われ、数百もの遺伝子及び老化プロセスと関連する多くの生物学的プロセスが見出されたが、同時に、多くの基本的な疑問はなおも未解決である、又は白熱した論議の対象となっている。

【0003】

このような疑問については、単一の遺伝子又は単一の経路を調べることでは対処できない場合が多いが、複雑な多因子的プロセスとして老化を捉えれば、全身レベルでより適切に対処することがきる。更に、老化は、炎症促進プロセスと炎症抑制プロセスの間の不均衡に起因する慢性的で低グレードの炎症状態を伴うが、これは、年齢関連の主要な慢性疾患、例えばアテローム性動脈硬化症、２型糖尿病、及び神経変性等の発現において重要であることが明らかにされた病態である。

【0004】

こうした観点から、後天的な健康的な老化及び長寿命は、炎症反応を蓄積する傾向が低いことの他、効率的な抗炎症ネットワークの発達の反映でもあり得る。更に、腸の微生物叢に変化が生ずると、それが宿主哺乳動物系に影響を及ぼし、インシュリン抵抗性、クローン病、過敏性腸症候群、肥満、及び循環器疾患等のいくつかの疾患の病因において直接的な影響を呈したことから、そのような変化の重要性について認識が高まっている。

【0005】

メタボノミクスは、環境、薬物、食事構成、ライフスタイル、遺伝学、及びミクロビオームを含む、様々な内因性及び外因性のパラメーターに対する協調的な生理学的反応に起因する代謝表現型を特徴づける定評のあるシステムアプローチと今日考えられている。生理学的変化のポテンシャルを示す遺伝子発現データやプロテオミックデータとは異なり、細胞、組織、及び臓器内での代謝物及びその動力学的濃度変化は、生理学的な制御プロセスの真のエンドポイントを表す。

【0006】

メタボロミクスは、マウス、イヌ、及びヒト以外の霊長類におけるカロリー制限誘発性の代謝変化を含む、栄養介入後の老化プロセスの調節を試験するのに問題なく適用されてきた。特に、イヌ母集団における腸の微生物叢代謝の顕著な変化が、老化と関連した。これらの所見にもかかわらず、老化プロセスに影響を及ぼす分子機構に関する網羅的なプロファイリングはまだ報告されていない。更に、長寿命の代謝表現型はいまだ存在しない。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

従って、容易に検出可能であり、並びに健康的な老化を可能にし得るライフスタイルの診断を可能にし、特に老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするバイオマーカーを当技術分野に提供することが、本発明の目的であった。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明者らは、本明細書の独立請求項の主題により本発明の目的を実現し得ることが判明し、驚嘆した。本明細書の従属請求項は、本発明のアイディアを更に発展させる。

【0009】

尿を対象とするホリスティックな^１Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光測定アプローチ、並びに血清における標的質量分析法（ＭＳ）及びリピドミックアプローチの併用により、本発明者らは、１００歳以上の高齢者、高齢者、及び若年成人を含む十分に定義された老化コホートの代謝プロファイルにおける変化を検出することができた。

【0010】

選択された老化群は、若年成人（平均３１歳）、高齢者（７０歳）、及び１００歳以上の高齢者（１００歳）を含む北部イタリア地域に限定された均一母集団を表す。３老化群のうち、１００歳以上の高齢者は、健康的な老化及び長寿命に関する十分に受け入れられているモデルであり［Ｓａｎｓｏｎｉ Ｐ．ら、Ｅｘｐ Ｇｅｒｏｎｔｏｌ．２００８年；第４３巻：６１〜６５頁；Ｆｒａｎｃｅｓｃｈｉ Ｃ．ら、Ｍｅｃｈ Ａｇｅｉｎｇ Ｄｅｖ．２００７年；第１２８巻：９２〜１０５頁；Ｃｅｖｅｎｉｎｉ Ｅ．ら、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．２００８年；第８巻：１３９３〜１４０５頁］、またその者の後天的な適正な老化は、炎症促進力と炎症抑制力の間の最適な平衡によりもたらされると思われる［Ｆｒａｎｃｅｓｃｈｉ Ｃ．ら、Ｍｅｃｈ Ａｇｅｉｎｇ Ｄｅｖ．２００７年；第１２８巻：９２〜１０５頁］。

【0011】

本発明者らは、高齢者の表現型と１００歳以上の高齢者の表現型との間で顕著な差異を見出し、驚嘆したが、この場合腸内微生物叢と宿主との間の相互作用の動力学、及び炎症反応のニュートラルバランス化が、長寿命表現型において更に際立っている。

【0012】

本発明者らは、相補的なＮＭＲ−ＭＳに基づくメタボロミクス及びリピドミックアプローチを用いることにより、尿及び血清の両方において老化及び長寿命の代謝表現型（メタボ型）について特徴づけを行った。

【0013】

１００歳以上の高齢者は、その人生の後期まで疾患及び能力障害を遅らせる独特の能力を有することから、ヒトの生存期間の最長期まで到達する。古典的な臨床パラメーター（表１）は、１００歳以上の高齢者は、インシュリン抵抗性の発生率が非常に低く、その年齢にとって最適である人体測定学上の数値（ＢＭＩ）、代謝数値（コレステロール、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、トリグリセリド）を有することを指し示している。更に、１００歳以上の高齢者の認知機能を、ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）を用いて計測したが、重度の認知低下の発生率が低いことを指し示している。

【0014】

特に、１００歳以上の高齢者は、独特な代謝表現型を呈する。尿の代謝プロファイリングにより、長寿命表現型は、フェニルアセチルグルタミン（ＰＡＧ）、ｐ−クレゾール硫酸塩（ＰＣＳ）の排泄がより高いことから指し示されるように、腸のミクロビオームの影響を強く受けることが明らかにされた。本発明者らは、腸の微生物叢は、タンパク質及びフェニルアラニン及びチロシンを含む芳香族アミノ酸を広範に異化して、フェニルアセチルグルタミン及びｐ−クレゾール硫酸塩を形成するものと仮定する。

【0015】

網羅的なＭＳに基づく標的型メタボノミクス分析により、長寿命及び健康的な老化と関連する重要な生物学的変化が、血清中で明らかにされた。更に、３年齢群間で、１００歳以上の高齢者は、その人生の後期まで疾患及び能力障害を遅らせる独特の能力を有することから、ヒトの生存期間の最長期まで到達するものとして特徴づけられる魅力的な長寿命モデルである。加齢と共に、本発明者らはリソホスファチジルコリン（lysophospatidylcholine）（ＬＰＣ １８：２、ＬＰＣ ２０：４）の減少を認めたが、その濃度は、１００歳以上の高齢者ではより低下している。特に、ＬＰＣ １８：０の減少は、１００歳以上の高齢者に特有と思われる。ＬＰＣは、脂肪酸の鎖長及び飽和度に基づき異なる種を有し、物理的性質及び生物学的性質も異なることを指摘しておかなければならないが、リン脂質（phopsholipid）は、一般的に炎症促進性であり［Ａｉｙａｒ Ｎ．ら、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００７年；第２９５巻：１１３〜１２０頁］、アテローム生成性質を有し［Ｓｃｈｍｉｔｚ Ｇ．ら、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．２０１０年；第２０８巻：１０〜１８頁］、またそのレベル増加は、２型糖尿病患者で多く認められる［Ｒａｂｉｎｉ ＲＡら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ．１９９４年；第４３巻：９１５〜９１９頁］。

【0016】

１００歳以上の高齢者に関しては、いくつかのアシルエーテルＰＣ種について、バランスの取れた濃度変化を呈し、３つのＰＣ−Ｏ種、すなわちＰＣ−Ｏ ３４：３、ＰＣ−Ｏ ３６：４、ＰＣ−Ｏ ４０：１の含有量は有意に減少し、また２つのエーテルＰＣ種、すなわちＰＣ−Ｏ ３２：１、ＰＣ−Ｏ ３４：１は有意に高めである。エーテルリン脂質の生理学的役割はあまり理解されていないが、ｓｎ−１脂肪族鎖をグリセロール骨格に連結するビニルエーテル結合を含有するプラスマロゲンが、最も豊富なエーテルリン脂質である。この場合、酸化的損傷の取り扱いが異なることに起因して、アシルエーテルホスファチジルコリン種のレベルも異なると考えられる。

【0017】

加齢と共に、スフィンゴミエリン（ＳＭ）種の増加が認められ、１００歳以上の高齢者においてＳＭ ２４：１及びＳＭ１６：０の増加が顕著である。なおも、本発明者らは、１００歳以上の高齢者で、ＳＭ ２４：０及びＳＭ−ＯＨ ２２：１濃度の特異的低下を見出した。ＳＭ種は、構築、代謝、及び輸送においてコレステロールと緊密に関連する重要な細胞膜の構成成分で、脂質ラフト内に濃縮している。ＳＭの生理学的役割は、ＳＭレベル上昇とアテローム性動脈硬化症との間の関連性を明らかにした過去の研究［Ｋｕｍｍｅｒｏｗ ＦＡら、Ｊ Ｎｕｔｒ Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００１年；第１２巻：６０２〜６０７頁］のようには依然として明確ではないが、一方その他の研究では、血漿スフィンゴミエリンレベルは、ＣＶＤイベントのリスク増加とは関連しないことが指し示された。最後に、ほとんどのジアシルホスファチジルコリン種（ＰＣ−Ｏ）のレベルについて、その有意な変化はないが、１００歳以上の高齢者は、ＰＣ−Ｏ ３６：２の個々のレベルにおける変動を呈している。

【0018】

ＰＣ及びＰＣ−Ｏ含有量の変化は、宿主の生理学的反応の重要なメディエーター及び制御物質であり、酸化ストレス、アポトーシス、及び免疫調節、及び炎症機能に関係するアラキドン酸代謝合成物（プロスタグランジン、トロンボキサン、ロイコトリエン）の活性に影響を与え得る。確かに、１００歳以上の高齢者は、炎症抑制及び炎症促進特性の両方を備える脂質メディエーターについて、独特のバランスが取れたネットワークも呈した。

【0019】

高齢者と比較して、より高濃度のロイコトリエン（leukotrines）、ＬＴＢ−４、及びＬＴＥ−４が認められた。１００歳以上の高齢者では、１５−リポオキシゲナーゼ（１５−ＬＯＸ）酵素の主要な生成物である１５−ヒドロキシエイコサテトラエン酸（１５−ＨＥＴＥ）がより高濃度で認められる。１５−ＨＥＴＥは、５−リポオキシゲナーゼの形成を阻害し、ロイコトリエンＢ４及び１２−ＨＥＴＥの生成を減少させ、また免疫反応を抑制する。高齢者と比較して、ＣＹＰ経路の高活性化も、１００歳以上の高齢者で認められ、８，９−ＥｐＥＴｒＥ産生が増加する一方、１１，１２−ＤｉＨＥＴｒＥ濃度は低下している。ＥｐＥＴｒＥは、心臓組織及び心臓外組織の両方における多くの細胞内シグナリングの重要な成分である。いくつかの研究から、ＥｐＥＴｒＥは、核内因子（ＮＦ）−κＢ−媒介型遺伝子転写の活性化を阻害することにより抗炎症効果を呈することが明らかにされた。更に、ＥｐＥＴｒＥは、血管構造内で血栓溶解及び血管形成特性を呈する。ＥｐＥＴｒＥは、可溶性エポキシドヒドロラーゼ（ｓＥＨ）によりジヒドロキシエイコサトリエン酸（ＤｉＨＥＴｒＥ）に更に代謝され得る。

【0020】

一般的に、ＥｐＥＴｒＥがｓＥＨによりＤｉＨＥＴｒＥに代謝されると、ＥｐＥＴｒＥの生物学的活性は、あまり際立たなくなり、従ってこの場合、１１，１２−ＤＨＥＴ濃度が減少することから、ｓＥＨがその前駆体１１，１２−ＥｐＥＴｒＥに及ぼす効果の減少として明らかとなり得る。１００歳以上の高齢者では、生物学的活性分子で脂質過酸化のマーカーである９−ＨＯＤＥ、及びリノール酸の安定な酸化生成物である９−オキソ−ＨＯＤＥの顕著な減少を呈するが、これらの産生は酸化ストレスが増加すると増加する。

【0021】

１００歳以上の高齢者では、リノール酸の安定な酸化生成物である９−オキソ−ＨＯＤＥの顕著な減少を呈するが、これらの産生は酸化ストレスが増加すると増加する。ほとんどのリノール酸は、ＰＣ及びコレステリルリノレートとしてエステル化された形態で存在するが、両者はＬＤＬの主要な成分であり、また多くの種類の酸化ストレスに連続的に曝露されてヒドロキシ種及びヒドロペルオキシ種を生成する。

【0022】

９−オキソ ＯＤＥ等の脂質酸化生成物のレベル増加は、リウマチ性関節炎及び関節硬化症に罹患している患者の血漿サンプル中にこれまで検出された。

【0023】

更に、高齢者と比較して１００歳以上の高齢者では、エイコサペンタノン酸（ＥＰＡ）の枯渇が認められる。ＥＰＡは、ヒトではα−リノール酸から合成可能、又は油分の多い魚又は魚油サプリメントからより多量に直接合成可能であるが、ＥＰＡは、多様な機能を有するｎ−３エイコサノイドに転換可能である。ＥＰＡの枯渇は、ｎ−３エイコサノイドの生合成の増加を呈し得る。

【0024】

従って本発明は、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするライフスタイルを診断する方法と一部関連し、同法は
対象から血清サンプルを得るステップと、
前記サンプル中の１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）４０：１レベルを測定するステップと、
対象のＰＣ−Ｏ ４０：１レベルを事前に決定された参照値と比較するステップと
を含み、
前記事前に決定された参照値が、対照集団のＰＣ−Ｏ ４０：１平均血清レベルに基づき、並びに前記サンプル中のＰＣ−Ｏ ４０：１血清レベルが、前記事前に決定された参照値と比較して低減した場合、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避の可能性が高いことを示す。

【0025】

この方法は、例えば対象から血清を得るのは十分に確立された手順であるという長所を有する。実際の診断法は、身体外部の血清サンプル中で実施可能である。

【0026】

サンプル中のＰＣ−Ｏ ４０：１レベルは、当技術分野において公知の任意の手段により検出及び定量可能である。例えば、質量分光測定法、例えばＵＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ、又はＮＭＲ分光測定法、例えば^１Ｈ−ＮＭＲ分光測定法が使用可能である。その他の方法、例えばその他の分光測定法、クロマトグラフィー法、標識法、又は定量化学的方法等も使用可能である。

【0027】

事前に決定された参照値は、対照集団のＰＣ−Ｏ ４０：１平均血清レベルに基づく。対照集団は、遺伝的背景、年齢、及び平均的な健康状態が類似した少なくとも３名、好ましくは少なくとも１０名、より好ましくは少なくとも５０名からなる群であり得る。

【0028】

対照集団は同一人であってもよく、従って事前に決定された参照値は、同一の対象から事前に得られる。この数値は、例えば現在のライフスタイルを以前のライフスタイルと直接比較できるようにし、改善を直接評価できる。

【0029】

代表的な老化関連の慢性炎症性障害は当業者に周知されている。大部分の老化表現型は、炎症ネットワークと炎症抑制ネットワークの間の不均衡により説明され、この不均衡により、老化の低グレード慢性炎症促進状態「炎症性の老化（ｉｎｆｌａｍｍ−ａｇｅｉｎｇ）」が引き起こされる（Ｃａｎｄｏｒｅ Ｇ．ら、Ｂｉｏｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ．２０１０年１０月；第１１巻（５）：５６５〜７３頁）。

【0030】

したがって、本発明の方法は、炎症性の老化の診断に使用することができる。

【0031】

代表的な年齢関連の炎症性障害として、例えばアテローム性動脈硬化症、関節炎、痴呆、２型糖尿病、骨粗鬆症、及び循環器疾患が挙げられる。例えば、これらの疾患の場合、炎症は、老化と結びついた分子変質に対する考え得る潜在的基盤、及び年齢関連の病理学的プロセスとして認められる（Ｃｈｕｎｇら、ＡＮＴＩＯＸＩＤＡＮＴＳ ＆ ＲＥＤＯＸ ＳＩＧＮＡＬＩＮＧ、第８巻、３＆４号、２００６年、５７２〜５８１頁）。

【0032】

ＰＣ−Ｏ ４０：１は、本発明の目的のための唯一のマーカーとして使用可能である。

【0033】

単独のマーカーとしてのＰＣ−Ｏ ４０：１は、本発明の診断法のためのツールとして効果的であるが、診断がちょうど１つを超えるマーカーに依拠する場合、前記診断の質及び／又は予知力は改善する。

【0034】

従って、１つ又は複数のその他のマーカーが、ＰＣ−Ｏ ４０：１と併用して、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避の可能性のために使用可能である。

【0035】

本発明者らは、その他のバイオマーカーも老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避の可能性を検出するのに使用可能であることを認め、驚嘆した。

【0036】

このように、本発明者らは、
１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）３２：１、
１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）３４：１、
１５−ヒドロキシエイコサテトラエン酸（１５−ＨｐＥＴＥ）、
ロイコトリエンＥ４（ＬＴＥ４）、
ロイコトリエンＢ４（４ＬＴＢ）、及び／又は
８，９−エポキシエイコサトリエン酸（８，９ ＥｐＥＴｒｅ）
の血清濃度増加から、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするライフスタイルの診断が可能となること、一方
ヒドロキシスフィンゴミエリン（ＳＭ−ＯＨ）２２：１、
リソホスファチジルコリン（ＬＰＣ）１８：０、
スフィンゴミエリン（ＳＭ）２４：０、
１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）３４：３、
１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）３６：４、
ホスファチジルコリン（ＰＣ）３６：２、
ヒドロキシオクタデカジエン酸（９−ＨＯＤＥ）、
９−オキソ−オクタデカジエン酸（９−オキソ−ＨＯＤＥ）
及び／又は
１１，１２−エポキシエイコサトリエン酸（１１，１２−ＤｉＨＥＴｒｅ）
の血清濃度減少からは、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするライフスタイルの診断が可能となることを識別した。

【0037】

個々の脂質種について以下のように注解した：
［脂質クラス］［総炭素原子数］：［二重結合の総数］。例えば、ＰＣ３４：１は、炭素原子３４個及び二重結合１個を含むホスファチジルコリン種を表す。

【0038】

従って、本発明の方法では、予め得られた参照値とｆ比較して、１つ若しくは複数の下記のバイオマーカー、ＰＣ−Ｏ ３２：１、ＰＣ−Ｏ ３４：１、１５−ＨｐＥＴＥ、ＬＴＥ４、ＬＴＢ４、８，９ＥｐＥＴｒｅの血清濃度が増加しているか、及び／又は１つ若しくは複数の下記のバイオマーカー、ＳＭ−ＯＨ ２２：１、ＬＰＣ １８：０、ＳＭ ２４：０、ＰＣ−Ｏ ３４：３、ＰＣ−Ｏ ３６：４、ＰＣ ３６：２、９−ＨＯＤＥ、９−オキソ−ＨＯＤＥ、１１，１２−ＤｉＨＥＴｒｅの血清濃度が減少しているかも評価することにより、診断精度は高まる可能性がある。

【0039】

本発明の方法は、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、又は少なくとも８個のバイオマーカーの評価を含み得る。

【0040】

例えば、ＰＣ−Ｏ ４０：１は、ＳＭ−ＯＨ ２２：１と共に評価可能である。
ＰＣ−Ｏ ４０：１は、ＳＭ ２４：０と共にやはり評価可能である。
ＰＣ−Ｏ ４０：１は、ＬＰＣ １８：０と共にやはり評価可能である。
ＰＣ−Ｏ ４０：１は、ＬＴＥ４と共に評価可能である。
ＰＣ−Ｏ ４０：１は、ＰＣ−Ｏ ３４：１と共に評価可能である。
ＰＣ−Ｏ ４０：１は、ＳＭ−ＯＨ ２２：１及びＳＭ ２４：０と共に評価可能である。
ＰＣ−Ｏ ４０：１は、ＳＭ−ＯＨ ２２：１、ＳＭ ２４：０、及びＰＣ−Ｏ ４０：１と共に評価可能である。
ＰＣ−Ｏ ４０：１は、ＳＭ−ＯＨ ２２：１、ＳＭ ２４：０、ＰＣ−Ｏ ４０：１、及び９−ＨＯＤＥと共に評価可能である。
ＰＣ−Ｏ ４０：１は、ＳＭ−ＯＨ ２２：１、ＳＭ ２４：０、ＰＣ−Ｏ ４０：１、９−ＨＯＤＥ、及び９−オキソ−ＨＯＤＥと共に評価可能である。
ＰＣ−Ｏ ４０：１は、ＳＭ−ＯＨ ２２：１、ＳＭ ２４：０、ＰＣ−Ｏ ４０：１、９−ＨＯＤＥ、９−オキソ−ＨＯＤＥ、及びＬＰＣ １８：０と共に評価可能である。
ＰＣ−Ｏ ４０：１は、ＳＭ−ＯＨ ２２：１、ＳＭ ２４：０、ＰＣ−Ｏ ３４：１、９−ＨＯＤＥ、９−オキソ−ＨＯＤＥ、ＬＰＣ １８：０、及びＬＴＥ４と共に評価可能である。

【0041】

２つ以上のバイオマーカーを評価する長所は、より多くのバイオマーカーを判断すれば、診断がより信頼できるようになることにある。例えば、１、２、３、４、５、６、又は７個よりも多くのバイオマーカーが、上記のような濃度の上昇又は減少を見せた場合には、これは、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避の可能性が高いことの有力な指標である。

【0042】

従って、本発明の方法は、サンプル中のＳＭ−ＯＨ ２２：１、ＬＰＣ １８：０、ＳＭ ２４：０、ＰＣ−Ｏ ３４：１、９−ＨＯＤＥ、９−オキソ−ＨＯＤＥ、又はＬＴＥ４のうち、少なくとも１つのレベルを測定するステップ、及び対象のＳＭ−ＯＨ ２２：１、ＬＰＣ １８：０、ＳＭ ２４：０、ＰＣ−Ｏ ３４：１、９−ＨＯＤＥ、９−オキソ−ＨＯＤＥ、又はＬＴＥ４のうち、少なくとも１つのレベルを事前に決定された参照値と比較するステップを更に含むことができ、前記事前に決定された参照値が、対照集団のＳＭ−ＯＨ ２２：１、ＬＰＣ １８：０、ＳＭ ２４：０、ＰＣ−Ｏ ３４：１、９−ＨＯＤＥ、９−オキソ−ＨＯＤＥ、若しくはＬＴＥ４の平均血清レベルに基づき、並びに前記事前に決定された参照値と比較して、前記サンプル中のＰＣ−Ｏ ４０：１血清レベルが低い場合、及び／若しくは前記サンプル中のＳＭ−ＯＨ ２２：１、ＬＰＣ １８：０、ＳＭ ２４：０、ＰＣ−Ｏ ３４：１、９−ＨＯＤＥ、若しくは９−オキソ−ＨＯＤＥの血清レベルが低い場合、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／若しくは回避の可能性が高いことを示し、並びに／又は前記サンプル中の血清ＬＴＥ４、ＰＣ−Ｏ ３４：１レベルが、前記事前に決定された参照値と比較して上昇した場合、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／若しくは回避の可能性が高いことを示す。

【0043】

本発明の診断精度は、予め得られた参照値と比較して、１つ若しくは複数の下記のバイオマーカー、ＰＣ−Ｏ ３２：１、１５−ＨｐＥＴＥ、ＬＴＢ４、８，９ＥｐＥＴｒｅが血清中で増加しているか、及び／又は１つ若しくは複数の下記のバイオマーカー、ＰＣ−Ｏ ３４：３、ＰＣ−Ｏ ３６：４、ＰＣ ３６：２、１１，１２−ＤｉＨＥＴｒｅが血清中で減少しているかも評価することにより、更に高まる可能性がある。
本発明の方法は、健康的な及び／又はより健康的な老化を可能にするライフスタイルを診断するために、付加的又は二者択一的に使用可能である。

【0044】

より健康的な老化は、実際のＰＡＧ及び／又はＰＣＳレベルを、同一の対象から予め得られた、事前に決定された参照値と比較することにより診断可能である。従って、この場合、同一の対象は対照集団の役目を果たし、そしてライフスタイルの改善を直接的に認めることができる一方、その他の平均的な対照集団について認められるわずかに異なる状態に由来する不確定要素は排除される。

【0045】

本発明の方法は、長寿命及び／又は長寿命の可能性について診断するのにも使用可能である。これは、より健全なライフスタイルの結果を直接検出可能であり、健全なライフスタイルの維持についてモニタリングが可能であり、また不健全なライフスタイルは、不健全なライフスタイルの最初の臨床症状が発現する前に矯正可能であるという長所を有する。

【0046】

本発明の方法は、より健全な腸の微生物叢−宿主相互作用を二者択一的及び／又は付加的に診断するのに更に使用可能である。腸のミクロビオームは、非常に多くの重要な生化学的機能を宿主のために行い、ミクロビオームの障害は多数の及び多様なヒト疾患プロセスと関連する（Ｋｉｎｒｏｓｓら、Ｇｅｎｏｍｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２０１１年、第３巻：１４頁）。好ましくない腸の微生物叢−宿主相互作用は、全身性の病態、例えば肥満及び循環器疾患、又は腸の状態、例えば炎症性の腸疾患等の多くの臨床症状を有し得る。

【0047】

腸の微生物叢−宿主相互作用は、あらゆる対象で診断可能であるが、成人又は高齢者の健全な微生物叢−宿主相互作用をモニタリングすることが特に重要であり得る。従って、より健全な腸の微生物叢−宿主相互作用は、高齢者を対象に診断され得る。

【0048】

対象は、その出身国の平均予想生存期間の最初の半分を過ぎた場合、好ましくはその出身国の平均予想生存期間の最初から２／３を過ぎた場合、より好ましくはその出身国の平均予想生存期間の最初から３／４を過ぎた場合、最も好ましくはその出身国の平均予想生存期間の最初から４／５を過ぎた場合には「高齢」と考えられる。

【0049】

例えば、対象がヒトの場合には、本発明の方法は、少なくとも４５歳、少なくとも６０歳、又は少なくとも７５歳の成人を対象に実施され得る。

【0050】

本発明の方法で試験される対象は、例えばヒト又は動物、特に哺乳類であり得る。代表的な動物は、例えば家畜のネコ又はイヌ等の愛玩動物であり得る。

【0051】

本発明の方法は、ライフスタイル変更の結果を付加的又は二者択一的に検出するのに使用可能である。この際、ＰＣ−Ｏ ３４：１レベル及び任意選択的に本明細書で言及したその他のバイオマーカーレベルを、対象から事前に、例えばライフスタイル変更前又はライフスタイル変更期間中の初期に得られたＰＣ−Ｏ ３４：１レベル及び任意選択的にその他のバイオマーカーレベルと比較する場合、有利であり得る。

【0052】

従って、本発明の方法は、より健全なライフスタイルの診断を可能にし、事前に決定された参照値は、ライフスタイル変更前の対象から得られたＰＣ−Ｏ ４０：１血清レベル、及び任意選択的にその他のバイオマーカー血清レベルに基づく。

【0053】

ライフスタイルの変更は、例えば職業の変更、睡眠の延長、飲酒の節制、やりがいの増加、ストレスの抑制、喫煙の節制、スポーツの増加、仕事の変更、及び／又は生活環境等のあらゆる変更であり得る。

【0054】

ライフスタイルの変更は、食事の変更でもあり得る。

【0055】

食事の変更は、例えば以前に摂取されなかった、又は異なる量で摂取された少なくとも１つの栄養製品の使用であり得る。

【0056】

従って、本発明の方法は、新規栄養療法、栄養製品、及び／又は薬剤の有効性を試験するのに使用可能である。

【0057】

栄養製品は、例えば健康的な老化及び／又は老化関連の慢性炎症性障害の回避に効果を有すると謳う生成物であり得る。

【0058】

典型的に、栄養製品は、食料品、飲料、ペット用食料品、食品サプリメント、機能性食品、食品添加物又は栄養製剤であり得る。

【0059】

バイオマーカーレベル、例えばサンプル中のＬＰＣ １８：０レベル及び任意選択的にその他のバイオマーカーレベルは、当技術分野において公知の任意の手段により検出及び定量可能である。事例として、質量分光測定法、例えばＵＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ、又はＮＭＲ分光測定法、例えば^１Ｈ−ＮＭＲ分光測定法が使用可能である。

【0060】

その他の方法、例えばその他の分光測定法、クロマトグラフィー法、標識法、又は定量化学的方法も使用可能である。

【0061】

本発明の方法は、試験対象のＰＣ−Ｏ ４０：１レベル及び任意選択的にその他のバイオマーカー濃度を、血清中のＰＣ−Ｏ ４０：１レベル、及び任意選択的に比較の対照となる対象からのその他のバイオマーカーのレベルに由来し得る事前に決定された参照値と比較するステップを含む。

【0062】

対象のＰＣ−Ｏ ４０：１レベル及び任意選択的にその他のバイオマーカーレベルと対応する対照値との間の差異の程度も、リスクの程度を特徴づけるのに有用であり、こうしてどの対象がある特定の療法から最も利益を享受するか測定する。

【0063】

ＰＣ−Ｏ ４０：１及び任意選択的にその他のバイオマーカーに対応する参照値は、試験対象から得られたＬＰＣ １８：０及び任意選択的にその他のバイオマーカーのレベルを特徴づけるのに用いられる同一の単位を用いて計測するのが好ましい。従って、ＰＣ−Ｏ ４０：１及び任意選択的にその他のバイオマーカーのレベルが絶対値である、例えばＰＣ−Ｏ ４０：１の単位がμｍｏｌ／ｌ（μＭ）である場合には、参照値もやはり、一般母集団又は対象の選択された対照集団に含まれる個人のμｍｏｌ／ｌ（μＭ）であるＰＣ−Ｏ ３４：１の単位に基づく。

【0064】

更に、参照値は、単一のカットオフ値、例えばメジアン又は平均値等であり得る。得られた血清サンプル中のＰＣ−Ｏ ４０：１及び任意選択的にその他のバイオマーカーの参照値、例えば平均レベル、メジアンレベル、又は「カットオフ」レベル等は、本明細書に参考として援用するＫｎａｐｐ、Ｒ．Ｇ．、及びＭｉｌｌｅｒ、Ｍ．Ｃ．（１９９２年）のＣｌｉｎｉｃａｌ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ．Ｗｉｌｌｉａｍ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｈａｒｕａｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．Ｍａｌｖｅｒｎ、Ｐａ．の記載に従い、一般母集団又は選択された母集団に含まれる個人からなる大規模なサンプルをアッセイし、そして統計モデル、例えば陽性基準を選択する適中率法（predictive value method）又は最適な特異性（最高の真陰性率）及び感度（最高の真陽性率）を定義する受信者操作特性曲線（receiver operator characteristic curve）を用いることにより確立され得る。

【0065】

参照値は、例えば性別、人種、遺伝形質、健康状態、又は年齢により変わるが、当業者は正しい参照値を割り振る方法を知っている。

【0066】

例えば、事前に決定された平均参照値は、
１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）３２：１の場合、２μＭ
１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）３４：１の場合、７．８０μＭ
１５−ヒドロキシエイコサテトラエン酸（１５−ＨｐＥＴＥ）の場合、１．２５μｇ／血清１００μｌ
ロイコトリエンＥ４（ＬＴＥ４）の場合、０．０１３μｇ／血清１００μｌ
ロイコトリエンＢ４（４ＬＴＢ）の場合、０．０２０μｇ／血清１００μｌ、及び／又は
８，９−エポキシエイコサトリエン酸（８，９ＥｐＥＴｒｅ）の場合、０．０７０μｇ／血清１００μｌ
ヒドロキシスフィンゴミエリン（ＳＭ−ＯＨ）２２：１の場合、１６．０７μＭ
リソホスファチジルコリン（ＬＰＣ）１８：０の場合、５２．００μＭ
スフィンゴミエリン（ＳＭ）２４：０の場合、２５．００μＭ
１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）３４：３の場合、５．０７μＭ
１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）３６：４の場合、１４．３０μＭ
１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）４０：１の場合、１．４１μＭ
ホスファチジルコリン（ＰＣ）３６：２の場合、１０．００μＭ
ヒドロキシオクタデカジエン酸（９−ＨＯＤＥ）の場合、０．３４μｇ／血清１００μｌ
９−オキソ−オクタデカジエン酸（９−オキソ−ＨＯＤＥ）の場合、０．０４３μｇ／血清１００μｌ、及び／又は
１１，１２−エポキシエイコサトリエン酸（１１，１２−ＤｉＨＥＴｒｅ）の場合、０．０１７μｇ／血清１００μｌ
であり得る。

【0067】

上で詳記したように、より高い値又は低い値は、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避の可能性が高いことを示す。

【0068】

本発明者らは、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするライフスタイルを診断するための尿中バイオマーカーをも更に見出し驚嘆した。

【0069】

すなわち、本発明者らは、フェニルアセチルグルタミン（ＰＡＧ）及び／又はｐ−クレゾール硫酸塩（ＰＣＳ）の尿中濃度が増加すれば、その増加は、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするライフスタイルの診断を可能にすることを識別した。

【0070】

フェニルアセチルグルタミン（ＰＡＧ）及び／又はｐ−クレゾール硫酸塩（ＰＣＳ）は、本発明の方法の後に評価可能であり、尿サンプルが用いられることが唯一異なる。

【0071】

尿サンプルは非侵襲的に得られる及び分析可能であるという点で長所を有する。

【0072】

ＰＡＧ及びＰＣＳに関する事前に決定された参照値は、当業者により測定することができ、また最大値は状況に応じて変化する。例えば、代表的な参照値は、ＰＣＳの場合、尿中クレアチニン６３μｍｏｌ／ｍｍｏｌ、及びＰＡＧの場合、尿中クレアチニン８１μｍｏｌ／ｍｍｏｌであり得る。これより高い数値は、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避の可能性が高いことを示す。

【0073】

また本発明は、老化慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするライフスタイルの診断で使用可能である新規バイオマーカーの発見にも拡張される。

【0074】

従って、本発明は、老化慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするライフスタイルを診断するためのバイオマーカーを含み、前記バイオマーカーはＰＣ−Ｏ ４０：１である。

【0075】

このバイオマーカーは、血清中で検出され得るが、これは、試験されるサンプルは容易に得ることができ、他の目的の血清を分析する間に可能であるという長所を有する。

【0076】

当業者は、本明細書に記載する本発明のすべての特徴を、開示するような本発明の範囲から逸脱せずに自由に組み合わせることができると理解するであろう。特に、本発明の方法について記載する特徴は、本発明のバイオマーカーに適用可能であり、またその逆も同様である。

【0077】

また当業者は、バイオマーカー及び診断法におけるその適用は、
老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするライフスタイルを診断する、
健康的な老化を可能にするライフスタイルを診断する、
長寿命を診断する、及び／又は
より健全な腸の微生物叢−宿主相互作用を診断する
こととして本明細書に記載されるが、
バイオマーカーは、
老化関連の慢性炎症性障害を発症しやすいライフスタイルを診断する、
健康的な老化を妨げる可能性があるライフスタイルを診断する、
生存期間が短縮するリスクを診断する、及び／又は
より不健全な腸の微生物叢−宿主相互作用を診断する
方法にも同様に好適に適用可能であると理解するであろう。

【0078】

更なる態様では、本発明は、
老化関連の慢性炎症性障害の発症を遅延させ、回避する、及び／又は予防する、
健康的な老化を促進する、
長寿命を促進する、
生存期間が短縮するリスクを低下させる、
より健全な腸の微生物叢−宿主相互作用を促進する、及び／又は
より不健全な腸の微生物叢−宿主相互作用を予防する
方法を提供する。

【0079】

典型的に、かかる方法は、対象に対して本明細書に記載するような診断法を行うステップ及びその結果に基づき対象のライフスタイルを修正するステップを含む。例えば、診断ステップの結果が、対象において
老化関連の慢性炎症性障害の発症について高い可能性、
健康的な老化を妨げる可能性があるライフスタイル、
生存期間の短縮に関するリスク、及び／又は
より不健全な腸の微生物叢−宿主相互作用
を示す場合には、方法は対象のライフスタイルを修正するステップを含み得る。

【0080】

対象のライフスタイルの修正は、本明細書に記載するようなあらゆる変更、例えば食事の変更、職業の変更、睡眠の延長、飲酒の節制、やりがいの増加、ストレスの抑制、喫煙の節制、スポーツの増加、仕事の変更、及び／又は生活環境等であり得る。

【0081】

変更は、以前に摂取されなかった、又は異なる量で摂取された少なくとも１つの栄養製品、例えば健康的な老化及び／又は老化関連の慢性炎症性障害の回避に効果を有する栄養製品（食料品、飲料、ペット用食料品、食品サプリメント、機能性食品、食品添加物、又は栄養製剤を含む）の使用であるのが好ましい。

【0082】

対象のライフスタイルの修正には、対象が自身のライフスタイルを変更する必要性を示すステップ、例えば上記のようなライフスタイルの変更を対象に対して処方、促進、及び／又は提案するステップも含まれる。例えば、方法は対象に対して上記のような少なくとも１つの栄養製品を投与又は提供するステップを含み得る。

【0083】

更に、本発明の長所及び特徴は、下記の表、実施例、及び図から明らかである。

【0084】

表１は、募集した老化コホートの人口統計学、臨床的特徴を表す表である。数値は、括弧内の範囲と共に、平均値（±ＳＤ）として提示する。^１ＢＭＩ＝肥満指数、^２糖尿病：糖尿病歴、空腹時血漿血糖値≧１２６ｍｇ／ｄｌ、^３ＨＤＬ＝高密度リポタンパク質、^４ＬＤＬ＝低密度リポタンパク質、^５ＭＭＳＥ＝ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）を用いた認知機能指標。分析で用いたスコアは、老人について年齢及び教育年数により補正した。高齢者の認知障害に関するＭＭＳＥは、重度（スコア０〜１７）、軽度（スコア１８〜２３）、又は無し（スコア２４〜３０）として等級化した。１００歳以上の高齢者のＭＭＳＥが≧２０の場合、重度の認知低下はなかったが、＜１２の場合、重度の認知低下があった。^６ＣＲＰ＝Ｃ反応性タンパク質、^７Ａ−ＳＡＡ＝血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）タンパク質。

【0085】

表２は、選択された老化群間の判別モデルについて、特徴及びモデルの概要を指し示す表である。

【0086】

表３は、^１Ｈ−ＮＭＲにより検出した、３年齢群の有意に制御された全尿中代謝物を表す表である。半定量情報を得るために、これらの３代謝物についてオリジナルのスペクトル内のピーク面積を積分し、そして統計的有意性のある差異を、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ順位和検定を用いて確認し、＊ｐ＜０．０５．、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１のようにマークした。

【0087】

表４は、ＬＣ−ＭＳにより検出した、３年齢群の有意に制御された全血清代謝物を指し示す表である。数値は、平均値±ＳＤとして表現し、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１のようにマークした。

【0088】

表５は、３年齢群について、ＵＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳにより分析した炎症性マーカーの血清濃度レベル（ｎｇ／１００μｌ）を指し示す表であり、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１のようにマークした。

【図面の簡単な説明】

【0089】

【図1】老化コホートによる代表的な尿の６００Ｍｈｚプロファイルを表す図であり、主要な低分子量の分子、例えばケトン体、有機酸、アミノ酸、並びに哺乳動物の代謝及び腸の微生物の代謝の両方に由来する代謝物（ＰＡＧ及びＰＣＳ）から生じたピークを指し示す。

【図2】高齢者及び１００歳以上の高齢者（Ａ）から得られた、並びに若年成人及び１００歳以上の高齢者（Ｂ）から得られた尿の^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルによるＯＰＬＳ−ＤＡスコアを表す図である。

【図3】高齢者及び１００歳以上の高齢者から得られた尿の^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルに由来する係数プロットを表す図である。

【図4】ＰＡＧ及びＰＣＳについてのオリジナルスペクトル中のピーク面積（曲線下面積）に由来する半定量情報に関する箱ひげ図を表す図である。統計的有意性は、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ順位和検定を用いて確認し、表３に挙げた。

【図5a】標的型ＵＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳメタボノミクス分析により計測した３つの老化時点間のリピドミックプロファイル（平均脂質濃度）の差異を表す図である。箱ひげ図は変化を表し、左から右の順に１００歳以上の高齢者、高齢者、及び若年の個人を意味する。濃度はμＭである。３つの老化群について標的型ＭＳから得られた平均値±ＳＤ及び統計的有意性は、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ順位和検定を用いて確認し、表４に挙げた。有意差のみを指し示し、マンホイットニーのＵ検定により評価した。

【図5b】標的型ＵＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳメタボノミクス分析により計測した３つの老化時点間のリピドミックプロファイル（平均脂質濃度）の差異を表す図である。箱ひげ図は変化を表し、左から右の順に１００歳以上の高齢者、高齢者、及び若年の個人を意味する。濃度はμＭである。３つの老化群について標的型ＭＳから得られた平均値±ＳＤ及び統計的有意性は、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ順位和検定を用いて確認し、表４に挙げた。有意差のみを指し示し、マンホイットニーのＵ検定により評価した。

【図6】標的型ＵＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳメタボノミクス分析により計測した、３つの老化時点間のリピドミックプロファイル（結果をｎｇ／１００μｌで表現し、また平均脂質濃度を表す）の差異を表す図である。箱ひげ図は変化を指し示し、左から右の順に１００歳以上の高齢者、高齢者、及び若年の個人を意味する。３老化群について標的型ＭＳから得られた平均値±ＳＤ及び統計的有意性は、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ順位和検定を用いて確認し、表５に挙げた。有意差のみを指し示し、マンホイットニーのＵ検定により評価した。

【発明を実施するための形態】

【0090】

本発明は、下記の番号付けされたパラグラフに開示するような更なる実施形態も提供する：
１．老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするライフスタイルを診断する方法であって、
対象から血清サンプルを得るステップと、
前記サンプル中の９−オキソ−ＨＯＤＥレベルを測定するステップと、
対象の９−オキソ−ＨＯＤＥレベルを事前に決定された参照値と比較するステップと
を含み、
前記事前に決定された参照値が、対照集団の９−オキソ−ＨＯＤＥ平均血清レベルに基づき、並びに前記サンプル中の９−オキソ−ＨＯＤＥ血清レベルが、前記事前に決定された参照値と比較して減少した場合、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避の可能性が高いことを示す方法。
２．老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするライフスタイルを診断する方法であって、
対象から血清サンプルを得るステップと、
前記サンプル中のＳＭ−ＯＨ ２２：１レベルを測定するステップと、
対象のＳＭ−ＯＨ ２２：１レベルを事前に決定された参照値と比較するステップと
を含み、
前記事前に決定された参照値が、対照集団のＳＭ−ＯＨ ２２：１平均血清レベルに基づき、並びに前記サンプル中のＳＭ−ＯＨ ２２：１血清レベルが前記事前に決定された参照値と比較して低い場合、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避の可能性が高いことを示す方法。
３．サンプル中のＰＣ−Ｏ ４０：１、ＳＭ−ＯＨ ２２：１、ＬＰＣ １８：０、ＳＭ ２４：０、ＰＣ−Ｏ ３４：１、９−ＨＯＤＥ、９−オキソ−ＨＯＤＥ、又はＬＴＥ４のうち少なくとも１つのレベルを測定するステップと、
対象のＰＣ−Ｏ ４０：１、ＳＭ−ＯＨ ２２：１、ＬＰＣ １８：０、ＳＭ ２４：０、ＰＣ−Ｏ ３４：１、９−ＨＯＤＥ、９−オキソ−ＨＯＤＥ、又はＬＴＥ４のうち少なくとも１つのレベルを事前に決定された参照値と比較するステップと、
を更に含み、
前記事前に決定された参照値が、対照集団のＰＣ−Ｏ ４０：１、ＳＭ−ＯＨ ２２：１、ＬＰＣ １８：０、ＳＭ ２４：０、ＰＣ−Ｏ ３４：１、９−ＨＯＤＥ、９−オキソ−ＨＯＤＥ、若しくはＬＴＥ４の平均血清レベルに基づき、並びに
前記事前に決定された参照値と比較して、前記サンプル中のＰＣ−Ｏ ４０：１、ＳＭ−ＯＨ ２２：１、ＬＰＣ １８：０、ＳＭ ２４：０、ＰＣ−Ｏ ４０：１、９−ＨＯＤＥ、及び／若しくは９−オキソ−ＨＯＤＥの血清レベルが減少した場合、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／若しくは回避の可能性が高いことを示し、並びに／又は
前記サンプル中のＬＴＥ４及び／若しくはＰＣ−Ｏ ３４：１の血清濃度が、前記事前に決定された参照値と比較して高い場合、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／若しくは回避の可能性が高いことを示す、パラグラフ１又はパラグラフ２に記載の方法。
４．予め得られた参照値と比較して、１つ若しくは複数の下記のバイオマーカー、ＰＣ−Ｏ ３２：１、１５−ＨｐＥＴＥ、ＬＴＢ４、８，９ ＥｐＥＴｒｅが血清中で増加しているか、及び／又は１つ若しくは複数の下記のバイオマーカー、ＰＣ−Ｏ ３４：３、ＰＣ−Ｏ ３６：４、ＰＣ ３６：２、１１，１２−ＤｉＨＥＴｒｅが減少しているかも評価することにより、診断精度が高まる、パラグラフ１〜３のいずれか一つに記載の方法。
５．老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするライフスタイルをｉｎ ｖｉｔｒｏで診断する方法であって、
対象から尿サンプルを得るステップと、
前記サンプル中のｐ−クレゾール硫酸塩（ＰＣＳ）レベルを測定するステップと、
対象のＰＣＳレベルを事前に決定された参照値と比較するステップと、
を含み、
事前に決定された参照値が、対照集団のＰＣＳ平均尿レベルに基づき、並びに
前記サンプル中のＰＣＳ尿レベルが、前記事前に決定された参照値と比較して上昇した場合、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避の可能性が高いことを示す方法。
６．サンプル中のフェニルアセチルグルタミン（ＰＡＧ）レベルを測定するステップと、
前記対象のＰＡＧレベルを事前に決定された参照値と比較するステップと、
を更に含み、
前記事前に決定された参照値が、対照集団のＰＡＧ平均尿レベルに基づき、並びに
前記サンプル中のＰＣＳ及びＰＡＧの尿レベルが、前記事前に決定された参照値と比較して上昇した場合、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避の可能性が高いことを示す、パラグラフ５に記載の方法。
７．老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするライフスタイルを診断する非侵襲的方法であって、
対象から尿サンプルを得るステップと、
前記サンプル中のフェニルアセチルグルタミン（ＰＡＧ）レベルを測定するステップと、
対象のフェニルアセチルグルタミン（ＰＡＧ）レベルを事前に決定された参照値と比較するステップと、
を含み、
前記事前に決定された参照値が、対照集団のＰＡＧ平均尿レベルに基づき、並びに
前記サンプル中のＰＡＧ尿レベルが、前記事前に決定された参照値と比較して上昇した場合、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避の可能性が高いことを示す、非侵襲的方法。
８．サンプル中のｐ−クレゾール硫酸塩（ＰＣＳ）レベルを測定するステップと、
対象のＰＣＳレベルを事前に決定された参照値と比較するステップと、
を更に含み、
前記事前に決定された参照値が、対照集団のＰＣＳ平均尿レベルに基づき、並びに
前記サンプル中のＰＡＧ及びＰＣＳの尿レベルが、前記事前に決定された参照値と比較して上昇した場合、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避の可能性が高いことを示す、パラグラフ７に記載の方法。
９．健康的な老化を可能にするライフスタイルを診断するための、パラグラフ１〜８のいずれか一つに記載の方法。
１０．長寿命を診断するための、パラグラフ１〜９のいずれか一つに記載の方法。
１１．より健全な腸の微生物叢−宿主相互作用を診断するための、パラグラフ１〜１０のいずれか一つに記載の方法。
１２．より健全な腸の微生物叢−宿主相互作用が、高齢者を対象に診断されるパラグラフ１１に記載の方法。
１３．事前に決定された参照値が、ライフスタイルの変更前に前記対象から得られた血清又は尿のレベルに基づく、より健全なライフスタイルを診断するための、パラグラフ１〜１２のいずれか一つに記載の方法。
１４．ライフスタイルの変更が、食事の変更である、パラグラフ１３に記載の方法。
１５．食事の変更が、以前に摂取されなかった、又は異なる量で摂取された少なくとも１つの栄養製品の使用である、パラグラフ１４に記載の方法。
１６．新規栄養療法の有効性を試験するための、パラグラフ１４又は１５に記載の方法。
１７．バイオマーカーレベルが、前記サンプル及び参照における^１Ｈ−ＮＭＲ及び／又は質量分析法により測定される、パラグラフ１〜１６のいずれか一つに記載の方法。
１８．事前に決定された平均参照値が、
１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）３２：１の場合、２μＭ、
１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）３４：１の場合、７．８０μＭ、
１５−ヒドロキシエイコサテトラエン酸（１５−ＨｐＥＴＥ）の場合、１．２５μｇ／血清１００μｌ、
ロイコトリエンＥ４（ＬＴＥ４）の場合、０．０１３μｇ／血清１００μｌ、
ロイコトリエン Ｂ４（４ＬＴＢ）の場合、０．０２０μｇ／血清１００μｌ、及び／又は
８，９−エポキシエイコサトリエン酸（８，９ ＥｐＥＴｒｅ）の場合、０．０７０μｇ／血清１００μｌ、
ヒドロキシスフィンゴミエリン（ＳＭ−ＯＨ）２２：１の場合、１６．０７μＭ、
リソホスファチジルコリン（ＬＰＣ）１８：０の場合、５２．００μＭ、
スフィンゴミエリン（ＳＭ）２４：０の場合、２５．００μＭ、
１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）３４：３の場合、５．０７μＭ、
１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）３６：４の場合、１４．３０μＭ、
１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロホスホコリン（ＰＣ−Ｏ）４０：１の場合、１．４１μＭ、
ホスファチジルコリン（ＰＣ）３６：２の場合、１０．００μＭ、
ヒドロキシオクタデカジエン酸（９−ＨＯＤＥ）の場合、０．３４μｇ／血清１００μｌ、
９−オキソ−オクタデカジエン酸（９−オキソ−ＨＯＤＥ）の場合、０．０４３μｇ／１００μｌ、及び／又は
１１，１２−エポキシエイコサトリエン酸（１１，１２−ＤｉＨＥＴｒｅ）の場合、０．０１７μｇ／血清１００μｌである、より健全なライフスタイルを診断するための、パラグラフ１〜１７のいずれか一つに記載の方法。
１９．対象から尿サンプルを得るステップと、
前記サンプル中のフェニルアセチルグルタミン（ＰＡＧ）及び／又はｐ−クレゾール硫酸塩（ＰＣＳ）のレベルを測定するステップと、
対象のフェニルアセチルグルタミン（ＰＡＧ）及び／又はＰＣＳの濃度を事前に決定された参照値と比較するステップと、
を更に含み、
前記事前に決定された参照値が、対照集団のＰＡＧ及び／又はＰＣＳの平均尿レベルに基づき、並びに前記サンプル中のＰＡＧ及び／又はＰＣＳの尿レベルが、前記事前に決定された参照値と比較して上昇した場合、老化関連の慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避の可能性が高いことを示す、パラグラフ１〜１８のいずれかに一つに記載の方法。
２０．老化慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするライフスタイルを診断するための、９−オキソ−ＨＯＤＥであるバイオマーカー。
２１．老化慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするライフスタイルを診断するための、ＳＭ−ＯＨ ２２：１であるバイオマーカー。
２２．血清中で検出される、パラグラフ２０又は２１に記載のバイオマーカー。
２３．老化慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするライフスタイルを診断するための、フェニルアセチルグルタミン（ＰＡＧ）であるバイオマーカー。
２４．老化慢性炎症性障害の遅延及び／又は回避を可能にするライフスタイルを診断するための、ｐ−クレゾール硫酸塩（ＰＣＳ）であるバイオマーカー。
２５．尿中で検出される、パラグラフ２３又は２４に記載のバイオマーカー。
２６．（ｉ）老化関連の慢性炎症性障害を発症しやすいライフスタイル、（ｉｉ）健康的な老化を妨げる可能性があるライフスタイル、（ｉｉｉ）生存期間が短縮するリスク、及び／又は（ｉｖ）より不健全な腸の微生物叢−宿主相互作用を診断する方法であって、
対象から血清サンプルを得るステップと、
前記サンプル中の９−オキソ−ＨＯＤＥ及び／又はＳＭ−ＯＨ ２２：１レベルを測定するステップと、
対象の９−オキソ−ＨＯＤＥ及び／又はＳＭ−ＯＨ ２２：１レベルを、事前に決定された参照値と比較するステップと、
を含み、
前記事前に決定された参照値が、対照集団の９−オキソ−ＨＯＤＥ及び／又はＳＭ−ＯＨ ２２：１の平均血清レベルに基づき、並びに
前記サンプル中の９−オキソ−ＨＯＤＥ及び／又はＳＭ−ＯＨ ２２：１の血清レベルが、前記事前に決定された参照値と比較して高い場合、それは（ｉ）老化関連の慢性炎症性障害を発症しやすいライフスタイル、（ｉｉ）健康的な老化を妨げる可能性があるライフスタイル、（ｉｉｉ）生存期間が短縮するリスクが高いこと、及び／又は（ｉｖ）より不健全な腸の微生物叢−宿主相互作用を示す、方法。
２７．（ｉ）老化関連の慢性炎症性障害を発症しやすいライフスタイル、（ｉｉ）健康的な老化を妨げる可能性があるライフスタイル、（ｉｉｉ）生存期間が短縮するリスク、及び／又は（ｉｖ）より不健全な腸の微生物叢−宿主相互作用を診断する方法であって、
対象から尿サンプルを得るステップと、
前記サンプル中のＰＡＧ及び／又はＰＣＳのレベルを測定するステップと、
対象のＰＡＧ及び／又はＰＣＳのレベルを事前に決定された参照値と比較するステップと、
を含み、
前記事前に決定された参照値が、対照集団のＰＡＧ及び／又はＰＣＳの平均尿レベルに基づき、並びに
前記サンプル中のＰＡＧ及び／又はＰＣＳの尿レベルが、前記事前に決定された参照値と比較して低い場合、それは（ｉ）老化関連の慢性炎症性障害を発症しやすいライフスタイル、（ｉｉ）健康的な老化を妨げる可能性があるライフスタイル、（ｉｉｉ）生存期間が短縮するリスクが高いこと、及び／又は（ｉｖ）より不健全な腸の微生物叢−宿主相互作用を示す、方法。
２８．（ｉ）老化関連の慢性炎症性障害の発症を遅延させる、回避する、及び／又は予防する、（ｉｉ）健康的な老化を促進する、（ｉｉｉ）長寿命を促進する、（ｉｖ）生存期間が短縮するリスクを低下させる、（ｖ）より健全な腸の微生物叢−宿主相互作用を促進する、及び／又は（ｖｉ）より不健全な腸の微生物叢−宿主相互作用を予防するための方法であって、
対象が、（ｉ）老化関連の慢性炎症性障害の発症について高い可能性、（ｉｉ）健康的な老化を妨げる可能性があるライフスタイル、（ｉｉｉ）生存期間の短縮について高いリスク、及び／又は（ｉｖ）より不健全な腸の微生物叢−宿主相互作用を有する場合には、
（ａ）パラグラフ２６又は２７に記載する診断法を行うステップと、
（ｂ）前記対象のライフスタイルを修正するステップと、を含む方法。
２９．対象のライフスタイルを修正するステップが、食事の変更を含む、パラグラフ２８に記載の方法。
３０．食事の変更が、健康的な老化及び／又は老化関連の慢性炎症性障害の回避に効果を有する、少なくとも１つの栄養製品を前記対象に投与するステップを含む、パラグラフ２９に記載の方法。

【実施例】

【0091】

対象及び試験群
各個人及びその家族について、研究の実施のための説明と同意を得た。ボローニャ、フィレンツェ、パルマ、ミラノを含む北イタリアで、異なる年齢群に属する全体で５４１例の対象がこの研究に参加した。１００歳以上の高齢者は、１５６名（女性１２５名、及び男性３１名）より構成され、高齢者群は、３６３名より構成され（女性２０５名、及び男性１５８名）、若年成人群は、２２名（女性１０名、及び男性１２名）より構成された。

【0092】

治験実施計画書は、Ｓａｎｔ’Ｏｒｓｏｌａ−Ｍａｌｐｉｇｈｉ大学病院（ボローニャ、イタリア）の倫理委員会より承認を受けた。得られた生体試料（血清及び尿）をメタボロミック分析まで−８０℃で保管した。

【0093】

臨床化学
オートアナライザー（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｈｉｔａｃｈｉ ９１７、Ｈｉｔａｃｈｉ Ｌｔｄ、東京、日本）を用いて、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓの各酵素的キットで血清総高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ）濃度及びトリグリセリド濃度を計測した。低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ）濃度を、Ｆｒｉｅｄｅｗａｌｄの式（Ｆｒｉｅｄｅｗａｌｄ ＷＴら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第１８巻（６）：４９９〜５０２頁）を用いて計算した。マウスインターフェロンγ（ＩＦＮγ）、インターロイキン１β（ＩＬ−１β）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１２ ｐ７０（ＩＬ−１２ ｐ７０）、ケラチノサイト誘導ケモカイン（ＫＣ）、及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）を含むサイトカインを、マウス炎症促進マルチプレックスキット（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｉｅｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、Ｍａｒｙｌａｎｄ、米国）を用いて計測した。アッセイを製造業者のマニュアルに従い実施した。高感度Ｃ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）を、高感度二重抗体サンドイッチ ＥＬＩＳＡを用いて、ウサギ抗ヒトＣＲＰ及びペルオキシダーゼ結合ウサギ抗ヒトＣＲＰにより計測した。

【0094】

^１Ｈ ＮＭＲ分光測定法のためのサンプル調製。３老化群から採取した尿サンプル１ｍｌを凍結乾燥装置（Ｆｒｅｅｚｅ−Ｄｒｙｅｒ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）内で乾燥し、１ｍＭの３−トリメチルシリル−［２，２，３，３−２Ｈ４］−１−プロピオン酸ナトリウム（ＴＳＰ）を含有するリン酸バッファー溶液（ＫＨ２ＰＯ４、最終濃度０．２Ｍ）、５８０μＬを用いてｐＨ６．８に調整し、そして５ｍｍのＮＭＲチューブに入れた。代謝プロファイルを、インバース５ｍｍ低温プローブを備えたＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＩＩＩ ６００ＭＨｚ分光計を用い、３００Ｋで計測した（Ｂｒｕｋｅｒ Ｂｉｏｓｐｉｎ、Ｒｈｅｉｎｓｔｅｔｔｅｎ、ドイツ）。尿サンプル毎に１Ｈ ＮＭＲスペクトルを、標準１Ｈ検出を含め、パルスシーケンスを用いて水抑制を行い登録した。緩和遅延４ｓ及び混合時間ｔｍ、１００ｍｓで標準スペクトルを取得した。取得した１Ｈ ＮＭＲスペクトルをＴｏｐｓｐｉｎソフトウェアパッケージ（バージョン２．１；Ｂｒｕｋｅｒ Ｂｉｏｓｐｉｎ、Ｒｈｅｉｎｓｔｅｔｔｅｎ、ドイツ）を用いて処理し、δ＝０．０の標準（ＴＳＰ）と参照比較した。特異的な代謝物に対するピークのアサインメントを、社内化合物ライブラリー及び文献を用いて実現し、選択したサンプルについて標準２次元ＮＭＲ分光測定法（ＪＲＥＳ、ＴＯＣＳＹ、ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣ）により確認した。統計分析の際には、すべてのＮＭＲスペクトルをδ０．４〜１０．０の範囲で１２Ｋデータポイントに変換し、そしてＭＡＴＬＡＢソフトウェア（バージョン７．１１．０（Ｒ２０１０ｂ）；Ｔｈｅ ＭａｔｈＷｏｒｋｓ Ｉｎｃ．、Ｎａｔｉｃｋ、ＭＡ）に、水残渣（水δ＝４．７１２０〜４．８４）を除いてインポートした。スペクトルを、所定範囲内の全強度の総和に対して標準化した。

【0095】

Ｂｉｏｃｒａｔｅｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＡｂｓｏｌｕｔｅＩＤＱＴＭキット分析のためのサンプル調製
Ｂｉｏｃｒａｔｅｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＡｂｓｏｌｕｔｅＩＤＱＴＭキットを、これまでに公表されたように、選択された老化コホートから採取した血清サンプルに用いた（Ｒｏｍｉｓｃｈ−Ｍａｒｇｌ， Ｗ．、Ｃ． Ｐｒｅｈｎ、Ｒ． Ｂｏｇｕｍｉｌ、Ｃ． Ｒｏｈｒｉｎｇ、Ｋ． Ｓｕｈｒｅ、Ｊ． Ａｄａｍｓｋｉ、Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｆｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｓａｍｐｌｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｍｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓ． Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓ、２０１１年． Ｏｎｌｉｎｅ Ｆｉｒｓｔ）。ウェルプレートの調製及びサンプルの適用及び抽出を、製造業者の指示書に従い実施した。最終容積１０μｌの血清を、同位体標識された内部標準を含有する提供された９６ウェルプレートにロードした。液体クロマトグラフィーを、電子スプレイイオン化（ＥＳＩ）モードで稼働するＴｕｒｂｏＶイオンソースを装備する３２００Ｑトラップ質量分析計（ＡＢ Ｓｃｉｅｘ； Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ、米国）に連結されているＤｉｏｎｅｘ Ｕｌｔｉｍａｔｅ ３０００超高圧液体クロマトグラフィー（ＵＨＰＬＣ）システム（Ｄｉｏｎｅｘ ＡＧ、Ｏｌｔｅｎ、スイス）で実行した。サンプル抽出物（２０μｌ）を、０〜２．４分：３０μｌ／分、２．４〜２．８分：２００μｌ／分、２．９〜３分：３０μｌ／分のグラジエント流速を用いて、直接輸液法により２回注入した（陽性及び陰性ＥＳＩモードで）。ＭＳソースパラメーターを、脱溶媒和温度（ＴＥＭ）：２００℃、高電圧：−４５００Ｖ（ＥＳＩ−）、５５００Ｖ（ＥＳＩ＋）、カーテン（ＣＵＲ）及びネブライザー（ＧＳ１及びＧＳ２）ガス：窒素；それぞれ２０、４０、及び５０ｐｓｉ；窒素衝突気体圧力：５ｍＴｏｒｒに設定した。ＭＳ／ＭＳの取得は、本アッセイでスクリーニングの対象とした１６３種類の代謝物について最適化したデクラスタリングポテンシャル値を用いて、スケジュール化反応モニタリング（ＳＲＭ）モードで実行した。生データファイル（アナリストソフトウェア、バージョン１．５．１；ＡＢ Ｓｃｉｅｘ、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ、米国）を、提供された分析ソフトウェアＭｅｔＩＱにインポートして、代謝物濃度を計算した。検出可能な全代謝物のリストが、Ｂｉｏｃｒａｔｅｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、オーストリア（ｈｔｔｐ：／／ｂｉｏｃｒａｔｅｓ．ｃｏｍ）より入手可能である。サンプル調製、及び同位体希釈技法を用いたＵＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳによる炎症マーカーの定量。

【0096】

これまでに公表された研究（Ｎａｇａら、ＰＲＯＧ．ＬＩＰＩＤ ＲＥＳＥＡＲＣＨ、２００１年、第４０巻、１９９〜２９９頁）に基づき、６３個の炎症性マーカーからなるパネルを計測する方法を社内開発した。３年齢群（１００歳以上の高齢者ｎ＝１５、高齢者ｎ＝３０、若年成人ｎ＝５０）から入手可能な残りの生体試料による血清サンプル３００μｌを、ＢＨＴ−バッファー（ブチルヒドロキシトルエン；７９．２ｍｇ／ｍｌ ＰＢＳ）１０μｌと共に、ファストプレップ（ＦａｓｔＰｒｅｐ）（登録商標）２４システムを用いてホモジナイズした。サンプル毎に、合計５０μｌの血清を、５μｌの内部標準溶液（０．１ｎｇ／μｌ）と混合した。クエン酸（１Ｎ）１５μｌを添加して混合物を酸性化した。タンパク質を析出させるために、容積が５５０μｌのメタノール／エタノール（１：１、ｖ：ｖ）を添加し、そしてサンプルを４℃で１５分間混合した後、遠心分離（３５００ｒｐｍ、１０分、４℃）した。一定の窒素流下で有機相を蒸発乾固させ、残渣物を水８０μｌで可溶化し、これに続いてアセトニトリル２０μＬを添加した後、４℃、１分間、３５００ｒｐｍで遠心分離した。分析前に上清をＬＣ−ＭＳバイアルに移した。分析をタンデム型質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）に連結されている液体クロマトグラフィーにより実施した。ＬＣをＤｉｏｎｅｘ Ｕｌｔｉｍａｔｅ ３０００超高圧液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）システム（Ｄｉｏｎｅｘ ＡＧ、Ｏｌｔｅｎ、スイス）で実行した。ＭＳの検出を、ＥＳＩモードで稼働する５５００ Ｑトラップ質量分析計（ＡＢ Ｓｃｉｅｘ；Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ、米国）で実施した。グラジエントクロマトグラフィー分離を、Ａｃｑｕｉｔｙ ＢＥＨ Ｃ１８カラム（２．１×１５０ｍｍ、１．７μｍ；Ｗａｔｅｒｓ、Ｍｉｌｆｏｒｄ、米国）で行った。注入量は５μｌであり、カラムを５０℃に維持した。移動相は、１％酢酸水溶液（溶離液Ａ）及びアセトニトリル水溶液（溶離液Ｂ）からなり、４５０μｌ／分の一定流速に設定した。グラジエント溶出を２０％Ｂで開始し、６分の時点で５０％Ｂ、１３分の時点で５０％から９５％Ｂまで直線的に増加させ、９５％Ｂに３分間保持した後、１６．１分の時点で２０％Ｂに戻し、そして更に１１分間カラムの再平衡化を行った。分析ソフトウェア（バージョン１．５．１；ＡＢ Ｓｃｉｅｘ、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ、米国）に設けられたスケジュール化選択反応モニタリング（スケジュール化ＳＲＭ）モードで、分析をモニタリングした。全質量変化及びＭＳソースパラメーターを補足データに堤示する。目標スキャン時間を０．５秒として、ＳＲＭ検出ウィンドウ時間を１２０秒に設定した。カーテン及び脱溶媒和ガスとして窒素を用い、各圧力はＣＵＲ：２０、ＧＳ１：７０、ＧＳ２：２０（任意単位）であった。各電圧をＩＳＶ：−４０００Ｖ、ＥＰ：−１０Ｖ、ＣＸＰ：−５Ｖとして、ブロックソース温度を６００℃に維持した。サンプル分析の前に、異なる希釈の標準液（０〜１０ｎｇ）を測って、１５ポイントの校正曲線を実行した。分析ソフトウェア（バージョン１．５．１；ＡＢ Ｓｃｉｅｘ、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ、米国）用いてデータ処理を実行した。各分析対象物とこれに対応する内部標準、又は代用マーカーのピーク面積比を計算した。ＰＧＪ２、ＰＧＦ２ａ、ＰＧＥ２、ＰＧＥ１、１５−オキソ−ＨＥＴＥ、１５−デオキシ−Δ１２，１４−ＰＧＪ２、６−ケトＰＧＦ１ａ、及び５−オキソ−ＥＴＥは、血清サンプルではその検出限界未満であり、従って統計分析で考慮しなかったことは言及に値する。

【0097】

多変量データ分析（ＭＶＡ）
いくつかのソフトウェア環境でＭＶＡを行った。従って、１Ｈ ＮＭＲデータ及び標的型ＭＳデータの両方に関するデータインポート及び前処理ステップは、ＭＡＴＬＡＢ（バージョン７．１１．０、Ｔｈｅ Ｍａｔｈｗｏｒｋｓ Ｉｎｃ．、Ｎａｔｉｃｋ、ＭＡ、米国）で書かれた「社内」ルーチンを用いて行った。ＮＭＲデータ分析では、ＯＰＬＳ−ＤＡモデルは、ＳＩＭＣＡ−Ｐ＋ソフトウェア（バージョン１２．０、Ｕｍｅｔｒｉｃｓ ＡＢ、Ｕｍｅａ、スウェーデン）を用いて実施した。標的型ＭＳデータは、パッケージ「ｒａｎｄｏｍＦｏｒｅｓｔ」を用いて、ランダムフォレスト（Ｒａｎｄｏｍ Ｆｏｒｅｓｔｓ）により分析した（Ａ．Ｌｉａｗ ａｎｄ Ｍ．Ｗｉｅｎｅｒ（２００２年）．Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｒａｎｄｏｍＦｏｒｅｓｔ．Ｒ Ｎｅｗｓ第２巻（３）、１８〜２２頁） ｒｕｎｎｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ Ｒ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ （Ｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｏｒｅ Ｔｅａｍ （２０１１年）．Ｒ：Ａ ｌａｎｇｕａｇｅ ａｎｄ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｆｏｒ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ．Ｒ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ、ウィーン、オーストリア．ＩＳＢＮ ３−９０００５１−０７−０、ＵＲＬ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．Ｒ−ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／．）。最後に、確認のために単変量有意検定も、老化コホートのＲ．臨床的特徴において行った。

【0098】

老化コホートの物理的特徴及び生化学的特徴を、表１に表す。ＢＭＩ（ｐ＜０．００１）、ホメオスタシスモデル評価（ＨＯＭＡ）（ｐ＜０．００１）、総コレステロール（ｐ＝０．００１）、トリグリセリド（ｐ＝０．００４）、ＨＤＬ（ｐ＝０．００１）、及びＬＤＬ（ｐ＝０．０４）は、高齢者と比較して１００歳以上の高齢者で低めであり、一方、血清アミロイドＡ（Ａ−ＳＡＡ）タンパク質（ｐ＜０．００１）、及びＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）（ｐ＜０．００１）は、１００歳以上の高齢者で高めである。高齢者は、若年の個人と比較してこれよりも高めのＢＭＩ（ｐ＜０．００１）、総コレステロール（ｐ＜０．００１）、トリグリセリド（ｐ＜０．００１）、ＬＤＬ（ｐ＜０．０５）、及びＣＲＰ（ｐ＜０．００１）を呈する。

【0099】

３老化群（１００歳以上の高齢者９２例、高齢者の２８３例、及び若年成人２１例）の入手可能サンプルから得た尿の６００ＭＨｚ ^１Ｈ−ＮＭＲを代謝プロファイリングで用いた。３年齢群間における年齢誘発性の変化及び代謝的差異を探索し、またあらゆる無意味な代謝物のばらつきの効果を最低限に抑えるために、尿ＮＭＲプロファイリングの監視下の計量化学分析を、３つの時点から設定したフル解像度ＮＭＲデータセットに適用した。潜在構造上への直角投影（Ortohogonal Projection）−判別分析法（ＯＰＬＳ−ＤＡ）を単位分散スケール化データについて実施した（図２）。１００歳以上の高齢者群と若年成人群との間の判別モデルから、分類指標（ＲＯＣ曲線下面積、ＡｕＲＯＣとして表現される（Ｆａｗｃｅｔｔ，Ｔ．、Ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ ＲＯＣ ａｎａｌｙｓｉｓ、Ｐａｔｔｅｒｎ Ｒｅｃｏｇｎ． Ｌｅｔｔ．、２００６年、第２７巻：８６１〜８７４頁））のバリデーションエラーが、スペクトル分散（Ｒ^２Ｘ）の１３．７％を用いることにより、１．０と求められた（表２）。同様に、１００歳以上の高齢者群と高齢者群の間のモデルから、０．９３のＡｕＲＯＣバリデーションエラーを有するモデルが、再度、総Ｘ分散の１３．７％を用いることにより生成された（表２）。年齢群間の差異と関連する代謝サイン（metabolic signature）を測定するために、ＯＰＬＳ−ＤＡモデルの第１予測成分のローディング物を用い、変数の相関係数に応じてカラーコード化した［３０］（図３）。従って、１００歳以上の高齢者と高齢の個人との間の尿判別モデルでは、比較的高めの量のフェニルアセチルグルタミン（ＰＡＧ）、ｐ−クレゾール−硫酸塩（ＰＣＳ）を呈する。半定量情報を得るために、これらの３代謝物についてオリジナルのスペクトル内のピーク面積を積分し、そして統計的有意性のある差異を、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ順位和検定を用いて確認した（図４、表３）。総じて、結果は、腸の微生物が長寿命プロセスと大いに関わっていることを指し示している。標的型及び定量的ＬＣ−ＭＳメタボノミクスによって、老化関連の血清代謝変化が指し示された。

【0100】

血清において年齢関連の代謝的差異を測定するために、標的型ＬＣ−ＭＳ／ＭＳメタボノミクスアプローチを３老化群（１００歳以上の高齢者１４３例、高齢者９０例、及び若年成人２０例）から入手可能な生体試料に適用した。アミノ酸、糖、アシルカルニチン、スフィンゴリピド、及びグリセロホスホリピドを含む１６０種類の代謝物に関する前処理された半定量データに、ランダムフォレスト（ＲＦ（商標））（Ｂｒｅｉｍａｎ、Ｌ．、Ｒａｎｄｏｍ Ｆｏｒｅｓｔｓ、Ｍａｃｈｉｎｅ Ｌｅａｒｎｉｎｇ、２００１年、第４５巻：５〜３２頁）を用いて、多変量データ分析を行った。ＲＦ（商標）に導入された可変の重要な特徴を用いれば、３老化群をより適切に判別する代謝サインを測定することが可能であった。前記サインの各成分について個々の判別能力を評価するために、各年齢群を対象にＷｉｌｃｏｘｏｎ順位和検定を行った（有意に制御されるすべての代謝物を表４に挙げる）。グリセロールホスホリピド及びスフィンゴリピドの全体的な濃度は、脂肪酸組成に応じて増減するが、一貫した３つの傾向が明らかとなっている：年齢と共に（統計的に妥当に）増加又は減少する一連の化合物、例えばリソホスファチジルコリン（lysophospatidylcholine）（ＬＰＣ １８：２、ＬＰＣ ２０：４）の濃度減少、ＰＣ ３２：０のレベル増加、及びスフィンゴミエリン（ＳＭ ２４：１、ＳＭ １６：０）の濃度増加；（ｉｉ）高齢者と若年の個人との間で統計的変化はない、１００歳以上の高齢者に特有の一連の化合物、例えばスフィンゴミエリン及び特異的グリセロホスホリピド（ＳＭ−ＯＨ ２２：１、ＬＰＣ １８：０、ＳＭ ２４：０、ＰＣ−Ｏ ３４：３、ＰＣ−Ｏ ３６：４、ＰＣ−Ｏ ４０：１、ＰＣ ３６：２）の減少、及び特異的グリセロホスホリピド（ＰＣ−Ｏ ３２：１、ＰＣ−Ｏ ３４：１）の増加。

【0101】

更に、３老化群（１００歳以上の高齢者１２例、高齢者３７例、及び若年成人１８例）から入手可能な血清サンプルについて、エイコサノイド合成における濃度変化を調査するために、標的型ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法を採用した。この場合、定量的データに関するＲＦ（商標）では、３年齢群において統計的に意義のある変化が指し示された（図６）。年齢群間の統計的有意性をＷｉｌｃｏｘｏｎ順位和検定により評価した（有意に制御を受けるすべての代謝物を補助的な表５に挙げる）。１００歳以上の高齢者では、１１，１２−ジヒドロキシエイコサトリエン酸（１１，１２−ＤｉＨＥＴｒＥ）、９−ヒドロキシオクタデカジエン酸（９−ＨＯＤＥ）、及び９−オキソ−オクタデカジエン酸（９−オキソ−ＨＯＤＥ）について低めの濃度、同時に１５−ヒドロキシエイコサテトラエン酸（１５−ＨＥＴＥ）、及びロイコトリエンＥ４（ＬＴＥ４）の濃度増加を呈する。高齢者の濃度と比較して、１００歳以上の高齢者では、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）レベルが減少した。更に、１００歳以上の高齢者と高齢者との間のペアワイズＭＲＣ分析を、これらの２年齢群の変化を最大化するために適用し、１００歳以上の高齢者において、８，９−エポキシエイコサトリエン酸（８，９−ＥＥＴ）及びロイコトリエンＢ４（ＬＴＢ４）の血清濃度レベル増加を呈した。

【0102】

【表1】

【0103】

【表2】

【0104】

【表3】

【0105】

【表4】

【0106】

【表5】

【図1】

【図2-1】

【図2-2】

【図3】

【図4】

【図5a】

【図5b】

【図6】