特許 6228186 交差反応性黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6228186

(24)【登録日】2017年10月20日

(45)【発行日】2017年11月8日

(54)【発明の名称】交差反応性黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）抗体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/09 20060101AFI20171030BHJP

   C07K 16/12 20060101ALI20171030BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20171030BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20171030BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20171030BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20171030BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20171030BHJP

   G01N 33/569 20060101ALI20171030BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20171030BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20171030BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20171030BHJP

【ＦＩ】

   C12N15/00 AZNA

   C07K16/12

   C12N1/15

   C12N1/19

   C12N1/21

   C12N5/10

   C12P21/08

   G01N33/569 E

   A61K39/395 R

   A61P31/04

   A61P11/00

【請求項の数】27

【全頁数】51

(21)【出願番号】特願2015-506230(P2015-506230)

(86)(22)【出願日】2013年4月17日

(65)【公表番号】特表2015-515479(P2015-515479A)

(43)【公表日】2015年5月28日

(86)【国際出願番号】EP2013058022

(87)【国際公開番号】WO2013156534

(87)【国際公開日】20131024

【審査請求日】2016年4月14日

(31)【優先権主張番号】12164506.3

(32)【優先日】2012年4月17日

(33)【優先権主張国】EP

(31)【優先権主張番号】13151010.9

(32)【優先日】2013年1月11日

(33)【優先権主張国】EP

【微生物の受託番号】DSMZ  DSM 26747

【微生物の受託番号】DSMZ  DSM 26748

(73)【特許権者】

【識別番号】514264606

【氏名又は名称】アルサニス・バイオサイエンスズ・ゲゼルシャフト・ミト・ベシュレンクテル・ハフツング

(74)【代理人】

【識別番号】100140109

【弁理士】

【氏名又は名称】小野 新次郎

(74)【代理人】

【識別番号】100075270

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 泰

(74)【代理人】

【識別番号】100101373

【弁理士】

【氏名又は名称】竹内 茂雄

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100162455

【弁理士】

【氏名又は名称】辻本 典子

(72)【発明者】

【氏名】ナギー，エスター

(72)【発明者】

【氏名】バダラウ，アドリアナ

(72)【発明者】

【氏名】ルーハ，ハラルド

(72)【発明者】

【氏名】ストゥリク，ルーカス

(72)【発明者】

【氏名】ナギー，ガーボル

(72)【発明者】

【氏名】ミルキナ，イリーナ

(72)【発明者】

【氏名】マギヤリックス，ゾルターン

(72)【発明者】

【氏名】ヴィスラム，ツェーラ

(72)【発明者】

【氏名】イェーゲルホーファー，ミカエラ

(72)【発明者】

【氏名】ゼルブス，マニュエル

(72)【発明者】

【氏名】ドレジルコバ，イヴァナ

(72)【発明者】

【氏名】テウベンバチャール，アストリッド

(72)【発明者】

【氏名】バトルズ，マイケル・ベンジャミン

(72)【発明者】

【氏名】プリンツ，ビアンカ・ドミニク

【審査官】 戸来 幸男

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００９−５３９９７９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００８／００４５３６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１１／０１８２０８（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｋ １６／００−１６／４６

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ／

ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＰｕｂＭｅｄ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）のアルファ毒素（Ｈｌａ）および少なくとも１つの二成分毒素に結合する、少なくとも１つの多重特異性結合部位を含む、交差中和性抗体。

【請求項2】

前記二成分毒素が、ガンマ溶血素、ＰＶＬ毒素およびＰＶＬ様毒素のいずれかのＦおよびＳ成分の同族（ｃｏｇｎａｔｅ）および非同族対からなる群より選択される、請求項１に記載の抗体。

【請求項3】

前記二成分毒素が、ＨｌｇＡＢ、ＨｌｇＣＢ、ＬｕｋＳＦ、ＬｕｋＥＤ、ＬｕｋＧＨ、ＬｕｋＳ−ＨｌｇＢ、ＬｕｋＳＤ、ＨｌｇＡ−ＬｕｋＤ、ＨｌｇＡ−ＬｕｋＦ、ＬｕｋＧ−ＨｌｇＡ、ＬｕｋＥＦ、ＬｕｋＥ−ＨｌｇＢ、ＨｌｇＣ−ＬｕｋＤまたはＨｌｇＣ−ＬｕｋＦである、請求項２に記載の抗体。

【請求項4】

前記結合部位が、少なくとも２つまたは少なくとも３つの二成分毒素に結合する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項5】

前記結合部位が、ＨｌｇＡＢ、ＨｌｇＣＢ、ＬｕｋＳＦおよびＬｕｋＥＤのいずれかの少なくとも２つまたは３つに結合する、請求項４に記載の抗体。

【請求項6】

前記結合部位が、ＨｌｇＡＢ、ＨｌｇＣＢ、ＬｕｋＳＦおよびＬｕｋＥＤに結合する、請求項５に記載の抗体。

【請求項7】

前記結合部位が、ＣＤＲ結合部位である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項8】

前記ＣＤＲ結合部位が、ＶＨおよび／またはＶＬ結合部位のＣＤＲ配列を含む部位である、請求項７に記載の抗体。

【請求項9】

全長モノクローナル抗体、または結合部位を取り込んでいる少なくとも１つの抗体ドメインを含むその抗体断片である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項10】

前記モノクローナル抗体またはその抗体断片が、１０^−８Ｍ未満、または１０^−９Ｍ未満のＫｄで、毒素の各々に結合するアフィニティを有する、請求項９に記載の抗体。

【請求項11】

＃ＡＢ−２４と称される抗体の６つのＣＤＲ配列を含む抗体である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗体であって、
該＃ＡＢ−２４と称される抗体が、
（ａ）ＤＳＭ２６７４８の下に寄託されている宿主細胞にコード配列が含まれる、＃ＡＢ−２４−ＬＣと称される抗体軽鎖；および
（ｂ）ＤＳＭ２６７４７の下に寄託されている宿主細胞にコード配列が含まれる、＃ＡＢ−２４−ＨＣと称される抗体重鎖；
を含む、上記抗体。

【請求項12】

ＤＳＭ２６７４７およびＤＳＭ２６７４８の下に寄託されている宿主細胞によって産生される抗体由来である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体、あるいは機能的に活性であるその変異体。

【請求項13】

（ａ）抗体軽鎖がＤＳＭ２６７４８の下に寄託されている宿主細胞によって産生され；そして
（ｂ）抗体重鎖がＤＳＭ２６７４７の下に寄託されている宿主細胞によって産生されるか；
（ｃ）あるいは（ａ）および（ｂ）の機能的に活性である変異体を使用する、
請求項１２に記載の抗体又はその変異体。

【請求項14】

ＤＳＭ２６７４８の下に寄託されている宿主細胞に含まれる、＃ＡＢ−２４−ＬＣと称される抗体軽鎖をコードし；そして／または
ＤＳＭ２６７４７の下に寄託されている宿主細胞に含まれる、＃ＡＢ−２４−ＨＣと称される抗体重鎖をコードする
ヌクレオチド配列を含むプラスミド。

【請求項15】

請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体の軽鎖および／または重鎖を発現するコード配列を含む発現カセットであって、発現カセットまたはコード配列が請求項１４に記載のプラスミド由来である、前記発現カセット。

【請求項16】

請求項１４に記載のプラスミドまたは請求項１５に記載の発現カセットを含む、宿主細胞。

【請求項17】

請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体を産生する方法であって、請求項１６に記載の宿主細胞を、前記抗体を産生する条件下で培養するかまたは維持する、前記方法。

【請求項18】

候補防御抗体を同定する方法であって：
（ａ）抗体または抗体産生細胞を含有する試料を提供し；そして
（ｂ）黄色ブドウ球菌のアルファ毒素および少なくとも１つの二成分毒素への結合に関して、試料中のまたは試料によって産生される抗体と、＃ＡＢ−２４と称される抗体との交差競合を評価する、ここで交差競合することが、候補防御抗体として抗体を同定し、該＃ＡＢ−２４と称される抗体が、
（ｉ）ＤＳＭ２６７４８の下に寄託されている宿主細胞にコード配列が含まれる、＃ＡＢ−２４−ＬＣと称される抗体軽鎖；および
（ｉｉ）ＤＳＭ２６７４７の下に寄託されている宿主細胞にコード配列が含まれる、＃ＡＢ−２４−ＨＣと称される抗体重鎖；
を含む、
前記方法。

【請求項19】

候補防御抗体を同定する方法であって：
（ａ）抗体または抗体産生細胞を含有する試料を提供し；そして
（ｂ）試料中のまたは試料によって産生される抗体と、黄色ブドウ球菌のアルファ毒素および少なくとも１つの二成分毒素の結合に関して評価する、ここで抗体ならびに黄色ブドウ球菌のアルファ毒素および少なくとも１つの二成分毒素の間の陽性反応が、候補防御抗体として抗体を同定する
前記方法。

【請求項20】

請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体を産生する方法であって
（ａ）請求項１８または１９にしたがって同定される候補防御抗体を提供し；そして
（ｂ）モノクローナル抗体、あるいは該候補防御抗体のヒト化型またはヒト型、あるいは候補防御抗体と同じエピトープ結合特異性を持つその誘導体を産生する
工程を含む、前記方法。

【請求項21】

黄色ブドウ球菌感染のリスクがあるかまたは該感染を患っている被験体を治療する際に使用するための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体であって、治療が、被験体における感染を限定するのに有効な量の抗体を被験体に投与して、前記感染から生じる疾患状態を寛解させるか、または黄色ブドウ球菌肺炎病変形成を阻害する工程を含む、前記抗体。

【請求項22】

請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体の薬学的調製物であって、場合によって薬学的に許容されうるキャリアーまたは賦形剤を含有する、前記調製物。

【請求項23】

非経口または粘膜配合物を含む、請求項２２に記載の薬学的調製物。

【請求項24】

高毒素産生ＭＲＳＡ感染を含むいかなる黄色ブドウ球菌感染、ならびにフルンケル症およびカルブンケル症における毒素産生を検出するための診断に使用するための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項25】

前記黄色ブドウ球菌感染が壊死性肺炎である、請求項２４に記載の抗体。

【請求項26】

請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体の診断調製物であって、場合によって標識を含む抗体および／または標識を含むさらなる診断試薬を含有する、前記調製物。

【請求項27】

請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体をコードする、単離核酸。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

重要なヒト病原体である黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）は、赤血球、好中性顆粒球および他の免疫細胞、ならびに肺または皮膚の上皮細胞を含む、いくつかの異なる細胞タイプを殺しうる多数の分泌毒素（外毒素）を発現する。さらに、これらの毒素の大部分は、免疫細胞を活性化し、そして強力な炎症誘発シグナルとして作用する。

【0002】

黄色ブドウ球菌細胞毒の主なメンバーは、アルファ溶血素（Ｈｌａ）であり、これはヒト肺上皮および内皮細胞、リンパ球およびマクロファージに対して細胞溶解機能を発揮する。これはまた、ウサギ赤血球（ＲＢＣ）を溶解することも可能であるが、ヒトＲＢＣに対するよりはるかに毒性が低い。Ｈｌａは、黄色ブドウ球菌肺炎病変形成において、重要な病原性因子であると見なされており、そして肺上皮細胞の溶解および非常に多量の免疫細胞の補充を通じた組織損傷の原因となる。補充される食細胞は、主に好中性顆粒球であり、これは疾患中、黄色ブドウ球菌によって産生される他の細胞毒のターゲットとなる。最も強力な毒素は、一つのＳ（緩慢に溶出）成分、および１つのＦ（迅速に溶出）成分によって形成される、二成分細胞溶解素、またはロイコシジンである。すべての黄色ブドウ球菌株によって普遍的に発現されるガンマ溶血素（Ｈｌｇ）遺伝子産物は、２つの毒素：ＨｌｇＡＢおよびＨｌｇＣＢ（サブユニットＢはＦ成分である）を形成可能であり、これらはどちらも、ヒト免疫細胞：ＰＭＮ、リンパ球およびマクロファージの殺傷において非常に強力である。前者はまた、ヒトＲＢＣに対する非常に強力な溶血素である。

【0003】

ＬｕｋＳＦとも呼ばれるパントン・バレンタイン型ロイコシジン（ＰＶＬ）は、二成分毒素を最適に特徴付ける。これは、ファージ由来遺伝子要素によって保持され、そして患者から単離された黄色ブドウ球菌株のおよそ５〜１０％によって産生されるが、ＰＶＬ発現株の率は、疾患のタイプに応じて、皮膚および軟組織感染において、５０〜９３％と報告されている（Ｌｉｎａ， Ｃｌｉｎ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ， １９９９：１１２８）。ＬｕｋＥＤ（ＬｕｋＤはＦ成分である）は、より強力でないロイコシジンであるが、臨床的黄色ブドウ球菌単離体の大部分に存在することが確認されている（Ｓｈｕｋｌａ， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ， ２０１０：３５８２）。最初は、その役割は、皮膚感染のみに関連付けられたが、二成分毒素の中でより特徴付けられておらず、黄色ブドウ球菌感染の他のタイプへの寄与は排除できない。ＬｕｋＥＤは、近年、黄色ブドウ球菌感染のネズミモデルにおける血流感染に関与することが報告されてきている（Ａｌｏｎｚｏ， Ｍｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ， ２０１２：４２３）。これらの２つの遺伝子対は、互いに有意な相同性を共有する（６８〜８２％のアミノ酸同一性）が、最近同定されたロイコシジンＬｕｋＧＨ（ＬｕｋＧはＦ成分である）は、より低い相同性を有し、同一性は３３〜４０％である（Ｖｅｎｔｕｒａ， ＰｌｏＳ ＯＮＥ， ２０１０：ｅ１１６３４； ＤｕＭｏｎｔ， Ｍｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ， ２０１１：８１４）。

【0004】

Ｈｌａ、ＬｕｋＳ、ＬｕｋＦ、ＨｌｇＡおよびＨｌｇＢの結晶構造が決定されてきており、そしてＨｌａおよび二成分毒素サブユニット間のアミノ酸相同性が１６〜２８％アミノ酸同一性という低レベルであるにも関わらず、ある程度の構造相同性が明らかになった（Ｇａｌｄｉｅｒｏ， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ， ２００４：１５０３； Ｐｅｄｅｌａｃｑ， Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ， １９９９：２７７； Ｍｅｎｅｓｔｒｉｎａ， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ， ２００３：５４）。すべてのこれらの毒素は、オリゴマー化サブユニットによって形成される環状構造を形成し、細胞膜内の孔形成およびそれに続く細胞溶解を導く。Ｈｌａの場合、孔は七量体であることが示されてきているが、二成分毒素に関しては、六量体（Ｃｏｍａｉ， Ｍｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ， ２００２：１２５１）、七量体および八量体（Ｙａｍａｓｈｉｔａ， ＰＮＡＳ， ２０１１：１７３１４）ヘテロオリゴマーが報告されており、科学コミュニティ内での議論を導いてきた（Ｋａｎｅｋｏ， Ｂｉｏｓｃｉ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ， ２００４：９８１に詳細に概説される）。

【0005】

この毒素ファミリーの異なるＦ成分およびＳ成分は、同族（ｃｏｇｎａｔｅ）対（これらは： ＬｕｋＳ−ＬｕｋＦ、ＬｕｋＥ−ＬｕｋＤ、ＨｌｇＣ−ＨｌｇＢ、ＨｌｇＡ−ＨｌｇＢおよびＬｕｋＨ−ＬｕｋＧである）のみ形成可能なのではなく、非同族対もまた形成可能であり、こうした対の多くがＧｒａｖｅｔら（Ｇｒａｖｅｔ， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ， １９９８：２０２）によって、そしてガンマ溶血素およびＬｕｋＳに関して、Ｄａｌｌａ Ｓｅｒｒａら（Ｄａｌｌａ Ｓｅｒｒａ， Ｊ Ｃｈｅｍ Ｉｎｆ Ｍｏｄｅｌ， ２００５：１５３９）によって報告されている。この毒素ファミリーの重複性および乱交雑な性質のため、単一の成分を不活性化しても、黄色ブドウ球菌感染と戦うには有効ではない可能性が高い。この知見は、単一の二成分毒素を中和しても、表現型には部分的な影響しかないという文献に報告される観察によって裏付けられる（例えば、Ｖｅｎｔｕｒａ， ＰｌｏＳ ＯＮＥ， ２０１０：ｅ１１６３４； Ｍａｌａｃｈｏｗａ， ＰｌｏＳ ＯＮＥ， ２０１１：ｅ１８６１７）。動物研究によって、ｉｎ ｖｉｖｏ実験に使用したモデルまたは用いた種に応じて、生存に対する多様な二成分毒素の示差的な影響が示されている。多数の毒素を欠失させた際、例えば毒素発現の包括的な制御因子であるａｇｒクオラムセンシング系が不活性化されている黄色ブドウ球菌のノックアウト株を用いた感染のウサギモデルにおけるように、疾患重症度の最も顕著な減少が観察された（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ， ２０１１：２０４）。したがって、より多くの毒素を中和する抗体カクテルは、単一毒素に対するｍＡｂよりも有意な利点を提供することが期待される。しかし、３より多い成分を含むモノクローナル抗体（ｍＡｂ）カクテルは、開発が困難である。

【0006】

アルファ溶血素および任意の二成分毒素の間で交差反応する単一抗体を発見する可能性は、Ｈｌａおよび二成分毒素間の配列相同性が低い（＜３０％）ことに基づいて、低いと見なされた。Ｓ成分およびＦ成分間で交差反応性である単一抗体を発見する機会は、ＬｕｋＧＨを除いて、配列相同性がより高いレベルであるため、より高いことが期待される。ＬｕｋＳで免疫された動物由来の過免疫血清がＨｌｇＣを認識可能であることが記載されてきているが、これは、ポリクローナル血清において異なる特異性が存在するためである。Ｌａｖｅｎｔｉｅら（Ｌａｖｅｎｔｉｅ， ＰＮＡＳ， ２０１１：１６４０４）は、ＬｕｋＳおよびＨｌｇＣに対する二重特異性中和抗体を記載した。しかし、このタイプの抗体は、同族抗原上の単一の結合部位のため、強力な相互作用を形成不能である。こうした二重特異性ｍＡｂの交差反応性は、通常、２つの特異性に限定され、すなわち、広い交差中和の潜在能力を提供しない。要約すると、異なる二成分黄色ブドウ球菌毒素に対する、またはアルファ溶血素および二成分毒素のいずれかに対する交差反応性ｍＡｂは、今日まで報告されてきていない。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0007】

【非特許文献1】Ｌｉｎａ， Ｃｌｉｎ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ， １９９９：１１２８

【非特許文献2】Ｓｈｕｋｌａ， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ， ２０１０：３５８２

【非特許文献3】Ａｌｏｎｚｏ， Ｍｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ， ２０１２：４２３

【非特許文献4】Ｖｅｎｔｕｒａ， ＰｌｏＳ ＯＮＥ， ２０１０：ｅ１１６３４

【非特許文献5】ＤｕＭｏｎｔ， Ｍｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ， ２０１１：８１４

【非特許文献6】Ｇａｌｄｉｅｒｏ， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ， ２００４：１５０３

【非特許文献7】Ｐｅｄｅｌａｃｑ， Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ， １９９９：２７７

【非特許文献8】Ｍｅｎｅｓｔｒｉｎａ， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ， ２００３：５４

【非特許文献9】Ｃｏｍａｉ， Ｍｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ， ２００２：１２５１

【非特許文献10】Ｙａｍａｓｈｉｔａ， ＰＮＡＳ， ２０１１：１７３１４

【非特許文献11】Ｋａｎｅｋｏ， Ｂｉｏｓｃｉ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ， ２００４：９８１

【非特許文献12】Ｇｒａｖｅｔ， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ， １９９８：２０２

【非特許文献13】Ｄａｌｌａ Ｓｅｒｒａ， Ｊ Ｃｈｅｍ Ｉｎｆ Ｍｏｄｅｌ， ２００５：１５３９

【非特許文献14】Ｍａｌａｃｈｏｗａ， ＰｌｏＳ ＯＮＥ， ２０１１：ｅ１８６１７

【非特許文献15】Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ， ２０１１：２０４

【非特許文献16】Ｌａｖｅｎｔｉｅ， ＰＮＡＳ， ２０１１：１６４０４

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

本発明の目的は、交差反応能および交差中和能を持つ、異なる黄色ブドウ球菌細胞毒に対して向けられる抗体を提供することである。

【0009】

この目的は、本発明の主題によって解決される。

【課題を解決するための手段】

【0010】

本発明にしたがって、黄色ブドウ球菌のアルファ毒素（Ｈｌａ）および少なくとも１つの二成分毒素に結合する、少なくとも１つの多重特異性結合部位を含む、交差中和性抗体を提供する。

【0011】

特に、二成分毒素は、ガンマ溶血素（ＨｌｇＡＢＣ）、ＰＶＬ毒素（ＬｕｋＳＦ）およびＰＶＬ様毒素、好ましくはＨｌｇＡＢ、ＨｌｇＣＢ、ＬｕｋＳＦ、ＬｕｋＥＤ、ＬｕｋＧＨ、ＬｕｋＳ−ＨｌｇＢ、ＬｕｋＳＤ、ＨｌｇＡ−ＬｕｋＤ、ＨｌｇＡ−ＬｕｋＦ、ＬｕｋＧ−ＨｌｇＡ、ＬｕｋＥＦ、ＬｕｋＥ−ＨｌｇＢ、ＨｌｇＣ−ＬｕｋＤまたはＨｌｇＣ−ＬｕｋＦのいずれかのＦおよびＳ成分の同族および非同族対からなる群より選択される。

【0012】

好ましくは、結合部位は、少なくとも２つまたは少なくとも３つの二成分毒素、好ましくは、ＨｌｇＡＢ、ＨｌｇＣＢ、ＬｕｋＳＦおよびＬｕｋＥＤ、好ましくはＨｌｇＡＢ、ＨｌｇＣＢ、ＬｕｋＳＦおよびＬｕｋＥＤのいずれかの少なくとも２つまたは３つに結合する。

【0013】

特定の態様にしたがって、結合部位は、ＣＤＲ結合部位、好ましくはＶＨおよび／またはＶＬ結合部位のＣＤＲ配列を含む部位である。

【0014】

特に、抗体は、全長モノクローナル抗体、または結合部位を取り込んでいる少なくとも１つの抗体ドメインを含むその抗体断片、好ましくはネズミ、キメラ、ヒト化またはヒト抗体、重鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆｄ、ｓｃＦｖおよびＶＨ、ＶＨＨまたはＶＬのような単一ドメイン抗体、好ましくはヒトＩｇＧ１抗体からなる群より選択される抗体である。

【0015】

抗体は、好ましくは１０^−８Ｍ未満、好ましくは１０^−９Ｍ未満のＫｄで、毒素の各々に結合するアフィニティを有する。

【0016】

特定の側面にしたがって、抗体は、５０：１ ｍＡｂ：毒素比（ｍｏｌ／ｍｏｌ）未満、好ましくは１０：１未満、より好ましくは１：１未満のＩＣ５０で、細胞に基づくアッセイにおけるｉｎ ｖｉｔｒｏ中和能を示す。

【0017】

さらなる特定の側面にしたがって、抗体は、ヒトおよび非ヒト動物の両方を含む動物において、ターゲティングされる毒素を中和し、そしてｉｎ ｖｉｖｏで黄色ブドウ球菌病変形成、好ましくは肺炎、菌血症または敗血症、腹膜炎および骨髄炎の任意のモデルを阻害する。

【0018】

特定の態様にしたがって、抗体は、＃ＡＢ−２４と称される抗体と同じエピトープに結合する。

【0019】

さらなる特定の態様にしたがって、抗体は、＃ＡＢ−２４と称される抗体と同じ結合部位を含む。

【0020】

さらなる特定の態様にしたがって、抗体は、＃ＡＢ−２４と称される抗体と同じエピトープに結合する。

【0021】

特に、抗体は、ＤＳＭ２６７４７および／またはＤＳＭ２６７４８の下に寄託されている宿主細胞によって産生される抗体、あるいはその機能的に活性である変異体であるか、またはこれら由来である。

【0022】

特に、抗体は
（ａ）ＤＳＭ２６７４８の下に寄託されている宿主細胞によって産生される抗体軽鎖；および／または
（ｂ）ＤＳＭ２６７４７の下に寄託されている宿主細胞によって産生される抗体重鎖；
（ｃ）あるいは（ａ）および／または（ｂ）の機能的に活性である変異体
を含む。

【0023】

さらなる側面にしたがって、本発明は、
ＤＳＭ２６７４８の下に寄託されている宿主細胞に含まれる、＃ＡＢ−２４−ＬＣと称される抗体軽鎖をコードし；そして／または
ＤＳＭ２６７４７の下に寄託されている宿主細胞に含まれる、＃ＡＢ−２４−ＨＣと称される抗体重鎖をコードする
ヌクレオチド配列を含むプラスミドを提供する。

【0024】

さらなる側面にしたがって、本発明は、本発明記載の抗体を発現するコード配列を含む発現カセットであって、発現カセットまたはコード配列が本発明のプラスミド由来である、前記発現カセットを提供する。

【0025】

さらなる側面にしたがって、本発明は、本発明の抗体を産生する方法であって、宿主細胞を本発明のプラスミドまたは本発明の発現カセットで形質転換する、前記方法を提供する。

【0026】

特に好ましいのは、宿主細胞およびこうした宿主細胞を使用する産生法であって、ここで宿主細胞は
抗体軽鎖を発現するコード配列を取り込む、本発明のプラスミドまたは発現カセット；および
抗体重鎖を発現するコード配列を取り込む、本発明のプラスミドまたは発現カセット
を含む。

【0027】

本発明のさらなる側面にしたがって、本発明は、本発明のプラスミドまたは本発明の発現カセットを含む宿主細胞を提供する。

【0028】

特に、本発明は、ＤＳＭ２６７４７またはＤＳＭ２６７４８の下で寄託されている、宿主細胞を指す。こうした宿主細胞は、本発明のプラスミドで形質転換されている大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）宿主細胞である。特に、ＤＳＭ２６７４８の下に寄託されている宿主細胞は、＃ＡＢ−２４−ＬＣと称される抗体軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含むプラスミドで形質転換され；そしてＤＳＭ２６７４７の下に寄託されている宿主細胞は、＃ＡＢ−２４−ＨＣと称される抗体重鎖をコードするヌクレオチド配列を含むプラスミドで形質転換されている。

【0029】

さらなる側面にしたがって、本発明は、本発明の抗体を産生する方法であって、本発明の宿主細胞を、前記抗体を産生する条件下で培養するかまたは維持する、前記方法を提供する。

【0030】

さらなる側面にしたがって、本発明は、候補防御抗体を同定する方法であって：
（ａ）抗体または抗体産生細胞を含有する試料を提供し；そして
（ｂ）試料中のまたは試料によって産生される抗体と、＃ＡＢ−２４と称される抗体によって認識されるエピトープの結合に関して評価する、ここで抗体およびエピトープの間の陽性反応が、候補防御抗体として抗体を同定する
前記方法を提供する。

【0031】

さらなる側面にしたがって、本発明は、候補防御抗体を同定する方法であって：
（ａ）抗体または抗体産生細胞を含有する試料を提供し；そして
（ｂ）試料中のまたは試料によって産生される抗体と、黄色ブドウ球菌のアルファ毒素および少なくとも１つの二成分毒素の結合に関して評価する、ここで抗体および毒素の間の陽性反応が、候補防御抗体として抗体を同定する
前記方法を提供する。

【0032】

さらなる側面にしたがって、本発明は、本発明の抗体を産生する方法であって
（ａ）本発明の同定法にしたがって同定される候補防御抗体を提供し；そして
（ｂ）モノクローナル抗体、あるいは該候補防御抗体のヒト化型またはヒト型、あるいは該候補防御抗体と同じエピトープ結合特異性を持つその誘導体を産生する
工程を含む、前記方法を提供する。

【0033】

さらなる側面にしたがって、本発明は、本発明の抗体を産生する方法であって
（ａ）＃ＡＢ−２４と称される抗体によって認識されるエピトープで、非ヒト動物を免疫し；
（ｂ）単離Ｂ細胞から不死化細胞株を形成し；
（ｃ）ｂ）で得られた細胞株をスクリーニングして、エピトープに結合するモノクローナル抗体を産生する細胞株を同定し；そして
（ｄ）モノクローナル抗体、あるいは該抗体のヒト化型またはヒト型、あるいは該モノクローナル抗体と同じエピトープ結合特異性を持つその誘導体を産生する
工程を含む、前記方法を提供する。

【0034】

さらなる側面にしたがって、本発明は、本発明の抗体を産生する方法であって
（ａ）黄色ブドウ球菌のアルファ毒素および少なくとも１つの二成分毒素で、非ヒト動物を免疫し、そして抗体を産生するＢ細胞を単離し；
（ｂ）単離Ｂ細胞から不死化細胞株を形成し；
（ｃ）細胞株をスクリーニングして、黄色ブドウ球菌のアルファ毒素および少なくとも１つの二成分毒素に結合するモノクローナル抗体を産生する細胞株を同定し；そして
（ｄ）モノクローナル抗体、あるいは該抗体のヒト化型またはヒト型、あるいは該モノクローナル抗体と同じエピトープ結合特異性を持つその誘導体を産生する
工程を含む、前記方法を提供する。

【0035】

さらなる側面にしたがって、本発明は、ヒト医学的および獣医学的使用を含む、医学的使用のための本発明の抗体を提供する。具体的には、抗体は、黄色ブドウ球菌感染のリスクがあるかまたは該感染を患っている被験体を治療する際に使用するために提供され、治療は、被験体における感染を限定するのに有効な量の抗体を被験体に投与して、前記感染から生じる疾患状態を寛解させるか、または黄色ブドウ球菌肺炎病変形成を阻害する工程を含む。

【0036】

具体的には、抗体は、黄色ブドウ球菌感染に対して防御するために提供される。

【0037】

特定の側面にしたがって、黄色ブドウ球菌感染のリスクがあるかまたは該感染を患っている被験体を治療する方法であって、被験体における感染を限定するのに有効な量の抗体を被験体に投与して、前記感染から生じる疾患状態を寛解させるか、または黄色ブドウ球菌肺炎病変形成を阻害する工程を含む、前記方法をさらに提供する。

【0038】

具体的には、病原性黄色ブドウ球菌に対して防御するための治療法を提供する。

【0039】

特定の態様にしたがって、非経口または粘膜配合物中で抗体を投与する。

【0040】

さらなる側面にしたがって、本発明は、本発明の抗体の薬学的調製物であって、好ましくは、非経口または粘膜配合物を含み、場合によって薬学的に許容されうるキャリアーまたは賦形剤を含有する、前記調製物を提供する。

【0041】

さらなる側面にしたがって、本発明は、高毒素産生ＭＲＳＡ感染を含むいかなる黄色ブドウ球菌感染も、例えば壊死性肺炎、ならびにフルンケル症およびカルブンケル症における毒素産生も検出するための診断使用のための本発明の抗体を提供する。

【0042】

具体的には、本発明にしたがって使用するための抗体であって、該抗体と被験体の体液試料を接触させることによって、該被験体における黄色ブドウ球菌での全身感染がｅｘ ｖｉｖｏで決定される、ここで抗体の特異的免疫反応が感染を決定する、前記抗体を提供する。

【0043】

特定の側面にしたがって、被験体において、高毒素産生ＭＲＳＡ感染を含む黄色ブドウ球菌感染、例えば壊死性肺炎、ならびにフルンケル症およびカルブンケル症における毒素産生を診断する方法をさらに提供する。

【0044】

具体的には、該抗体と被験体の体液試料を接触させることによって、該被験体における黄色ブドウ球菌での全身感染がｅｘ ｖｉｖｏで決定される、ここで抗体の特異的免疫反応が感染を決定する、診断法を提供する。

【0045】

さらなる側面にしたがって、本発明は、本発明の抗体の診断調製物であって、場合によって標識を含む抗体および／または標識を含むさらなる診断試薬を含有する、前記調製物を提供する。

【0046】

さらなる側面にしたがって、本発明は、＃ＡＢ−２４と称される抗体によって認識される、単離コンホメーションエピトープを提供する。こうしたエピトープは、＃ＡＢ−２４と称される抗体によって各々認識される、エピトープ変異体を含む単一エピトープまたはエピトープ混合物からなることも可能である。

【0047】

さらなる側面にしたがって、本発明は：
（ａ）本発明のエピトープ；
（ｂ）場合によって、（ａ）の前記エピトープと天然には関連しないさらなるエピトープ；および
（ｃ）キャリアー
を含む、免疫原を提供する。

【0048】

具体的には、キャリアーは、薬学的に許容されうるキャリアーであり、好ましくは緩衝剤および／またはアジュバント物質を含む。

【0049】

本発明の免疫原は、好ましくは、ワクチン配合物中で、好ましくは非経口使用のために提供される。

【0050】

具体的には、本発明の免疫原は、医学的使用のために、特に、黄色ブドウ球菌感染から被験体を防御するか、前記感染から生じる疾患状態を防止するか、または黄色ブドウ球菌肺炎病変形成を阻害するのに有効な量の前記免疫原を投与することによって、被験体を治療する際に使用するために提供される。

【0051】

具体的には、本発明の免疫原は、防御免疫反応を誘発するために提供される。

【0052】

特定の側面にしたがって、黄色ブドウ球菌感染のリスクがある被験体を治療する治療法であって、被験体における感染を防止する、特に病原性黄色ブドウ球菌に対して防御するのに有効な量の免疫原を被験体に投与する工程を含む、前記方法をさらに提供する。

【0053】

さらなる側面にしたがって、本発明は、本発明の抗体をコードするか、または本発明のエピトープをコードする、単離核酸を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0054】

【図1】ｍＡｂスクリーニングのため、組換え型で産生される毒素成分を示す模式図。

【図2A】実施例３に記載するような、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのモノクローナル抗体のＨｌａ中和能の決定。 Ａ：ウサギ赤血球を用いる Ｂ：ヒト肺上皮細胞（Ａ５４９細胞株（ＡＴＣＣから））を用いる

【図2B】実施例３に記載するような、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのモノクローナル抗体のＨｌａ中和能の決定。 Ａ：ウサギ赤血球を用いる Ｂ：ヒト肺上皮細胞（Ａ５４９細胞株（ＡＴＣＣから））を用いる

【図3】実施例３に記載するような、中和能を持つ無感作およびアフィニティ成熟Ｈｌａ特異的ｍＡｂのアフィニティ（Ｋｄ）。

【図4】実施例３に記載するような、交差中和性Ｈｌａ ｍＡｂ ＃ＡＢ−２４（名称＃９０２８）を含む、アフィニティ成熟Ｈｌａ ｍＡｂのｉｎ ｖｉｔｒｏ中和能。

【図5】実施例３に記載するような、ロイコシジンのＦ成分に対する広域交差中和性Ｈｌａ ｍＡｂ ＃ＡＢ−２４（名称＃９０２８）のアフィニティ（Ｋｄ）。

【図6A】＃７６６７系譜のｉｎ ｖｉｔｒｏ中和能。実施例４に記載するような、Ａ５４９細胞に対するアルファ溶血素中和アッセイ（Ａ）、ヒト好中球に対する、ＬｕｋＳ−ＬｕｋＦ（Ｂ）、ＨｌｇＣ−ＨｌｇＢ（Ｃ）、およびＬｕｋＥ−ＬｕｋＤ（Ｄ）の中和。注：＃ＡＢ−２４は、ここでは＃９０２８と称される。

【図6B】＃７６６７系譜のｉｎ ｖｉｔｒｏ中和能。実施例４に記載するような、Ａ５４９細胞に対するアルファ溶血素中和アッセイ（Ａ）、ヒト好中球に対する、ＬｕｋＳ−ＬｕｋＦ（Ｂ）、ＨｌｇＣ−ＨｌｇＢ（Ｃ）、およびＬｕｋＥ−ＬｕｋＤ（Ｄ）の中和。注：＃ＡＢ−２４は、ここでは＃９０２８と称される。

【図6C】＃７６６７系譜のｉｎ ｖｉｔｒｏ中和能。実施例４に記載するような、Ａ５４９細胞に対するアルファ溶血素中和アッセイ（Ａ）、ヒト好中球に対する、ＬｕｋＳ−ＬｕｋＦ（Ｂ）、ＨｌｇＣ−ＨｌｇＢ（Ｃ）、およびＬｕｋＥ−ＬｕｋＤ（Ｄ）の中和。注：＃ＡＢ−２４は、ここでは＃９０２８と称される。

【図6D】＃７６６７系譜のｉｎ ｖｉｔｒｏ中和能。実施例４に記載するような、Ａ５４９細胞に対するアルファ溶血素中和アッセイ（Ａ）、ヒト好中球に対する、ＬｕｋＳ−ＬｕｋＦ（Ｂ）、ＨｌｇＣ−ＨｌｇＢ（Ｃ）、およびＬｕｋＥ−ＬｕｋＤ（Ｄ）の中和。注：＃ＡＢ−２４は、ここでは＃９０２８と称される。

【図7】実施例５に記載するような、モノクローナル抗体での治療による、致死性毒素曝露からのマウスの保護。注：＃ＡＢ−２４は、ここでは＃９０２８と称される。Ａ：鼻内Ｈｌａ曝露 Ｂ：静脈内ＨｌｇＡＢ曝露。

【図8】実施例６に記載するような、Ｆｏｒｔｅ−Ｂｉｏにおいて決定されるＨｌａ ｍＡｂ間の競合。

【図9A】実施例１に記載するように得られる黄色ブドウ球菌毒素配列。 配列番号１ ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＨｌａヌクレオチド配列（Ｇｅｎｂａｎｋ、寄託番号ＣＰ０００７３０） 配列番号２： ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＨｌａアミノ酸配列 配列番号３ ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＬｕｋＳヌクレオチド配列 配列番号４： ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＬｕｋＳアミノ酸配列

【図9B】実施例１に記載するように得られる黄色ブドウ球菌毒素配列。 配列番号５ ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＬｕｋＦヌクレオチド配列 配列番号６： ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＬｕｋＦアミノ酸配列 配列番号７ ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＬｕｋＥヌクレオチド配列 配列番号８： ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＬｕｋＥアミノ酸配列

【図9C】実施例１に記載するように得られる黄色ブドウ球菌毒素配列。 配列番号９ ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＬｕｋＤヌクレオチド配列 配列番号１０： ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＬｕｋＤアミノ酸配列 配列番号１１ ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＨｌｇＡヌクレオチド配列 配列番号１２： ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＨｌｇＡアミノ酸配列

【図9D】実施例１に記載するように得られる黄色ブドウ球菌毒素配列。 配列番号１３ ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＨｌｇＣヌクレオチド配列 配列番号１４： ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＨｌｇＣアミノ酸配列 配列番号１５ ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＨｌｇＢヌクレオチド配列 配列番号１６： ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＨｌｇＢアミノ酸配列

【図9E】実施例１に記載するように得られる黄色ブドウ球菌毒素配列。 配列番号１７： ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＬｕｋＨヌクレオチド配列 配列番号１８： ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＬｕｋＨアミノ酸配列 配列番号１９ ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＬｕｋＧヌクレオチド配列 配列番号２０： ＵＳＡ３００ ＴＣＨ１５１６株のＬｕｋＧアミノ酸配列

【図9F】実施例１に記載するように得られる黄色ブドウ球菌毒素配列。 配列番号２１ ＭＲＳＡ２５２株のＬｕｋＨヌクレオチド配列（Ｇｅｎｂａｎｋ、寄託番号ＢＸ５７１８５６） 配列番号２２： ＭＲＳＡ２５２株のＬｕｋＨアミノ酸配列 配列番号２３ ＭＲＳＡ２５２株のＬｕｋＧヌクレオチド配列 配列番号２４： ＭＲＳＡ２５２株のＬｕｋＧアミノ酸配列

【図9G】実施例１に記載するように得られる黄色ブドウ球菌毒素配列。 配列番号２５ ＭＳＨＲ１１３２株のＬｕｋＨヌクレオチド配列（Ｇｅｎｂａｎｋ、寄託番号ＦＲ８２１７７７） 配列番号２６： ＭＳＨＲ１１３２株のＬｕｋＨアミノ酸配列 配列番号２７ ＭＳＨＲ１１３２株のＬｕｋＧヌクレオチド配列 配列番号２８： ＭＳＨＲ１１３２株のＬｕｋＧアミノ酸配列

【発明を実施するための形態】

【0055】

用語「抗体」は、本明細書において、抗体ドメインからなるかまたは抗体ドメインを含むポリペプチドまたはタンパク質を指すものとし、抗体ドメインは、リンカー配列を伴うまたは伴わない、免疫グロブリンの重鎖および／または軽鎖の定常および／または可変ドメインと理解される。ポリペプチドは、ループ配列によって連結される抗体ドメイン構造の少なくとも２つのベータ鎖からなるベータ−バレル構造を含むならば、抗体ドメインと理解される。抗体ドメインは、天然構造でもよいし、あるいは突然変異誘発または誘導体化によって修飾されて、例えば抗原結合特性または任意の他の特性、例えば安定性または機能特性、例えばＦｃ受容体ＦｃＲｎおよび／またはＦｃガンマ受容体への結合が修飾されてもよい。

【0056】

本明細書記載の抗体は、１またはそれより多い抗原、あるいはこうした抗原の１またはそれより多いエピトープに結合する、特異的結合部位を有し、特に単一可変抗体ドメインのＣＤＲ結合部位、例えばＶＨ、ＶＬまたはＶＨＨ、あるいは可変抗体ドメイン対の結合部位、例えばＶＬ／ＶＨ対、ＶＬ／ＶＨドメイン対および定常抗体ドメインを含む抗体、例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）、（Ｆａｂ）_２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、あるいは全長抗体を含む。

【0057】

用語「抗体」は、本明細書において、特に、単一可変抗体ドメイン、例えばＶＨ、ＶＬまたはＶＨＨ、あるいは連結配列またはヒンジ領域を伴うまたは伴わない、可変および／または定常抗体ドメインの組み合わせを含む、あるいはこれらからなる、抗体形式を指すものとし、可変抗体ドメイン対、例えばＶＬ／ＶＨ対、ＶＬ／ＶＨドメイン対および定常抗体ドメインを含むかまたはこれらからなる抗体、例えば重鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）、（Ｆａｂ）_２、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、Ｆｖ、または全長抗体、例えばＩｇＧタイプ（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブタイプ）、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭ抗体が含まれる。用語「全長抗体」を用いて、Ｆｃドメインの少なくとも大部分、および天然存在抗体単量体に一般的に見られる他のドメインを含む、任意の抗体分子を指すことも可能である。この句は、本明細書において、特定の抗体分子が抗体断片でないことを強調するために用いられる。

【0058】

用語「抗体」には、特に、異なるターゲット抗原に対して向けられるか、または抗体ドメインの異なる構造配置を含む、他の抗体を実質的に含まない、単離型の抗体が含まれるものとする。なお、単離抗体は、例えば少なくとも１つの他の抗体、例えば異なる特異性を有するモノクローナル抗体または抗体断片を含む、単離抗体の組み合わせを含有する、組み合わせ調製物に含まれることも可能である。

【0059】

用語「抗体」は、ヒト種を含む動物起源、例えばヒト、ネズミ、ウサギ、ヤギ、ラマ（ｌａｍａ）、ウシおよびウマ、または鳥類、例えば雌鶏（ｈｅｎ）を含む哺乳動物の抗体に適用されるものとする。

【0060】

用語「抗体」は、さらに、異なる種起源の配列、例えばネズミおよびヒト起源の配列を持つキメラ抗体に適用される。

【0061】

用語「キメラ」は、抗体に関して用いられる際、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列各々の１つの部分が、特定の種に由来するかまたは特定のクラスに属する抗体中の対応する配列に相同である一方、鎖の残りのセグメントが、別の種またはクラスの対応する配列に相同である抗体を指す。典型的には、軽鎖および重鎖両方の可変領域は、哺乳動物の１種由来の抗体可変領域を模倣し、一方、定常部分は、別の種由来の抗体配列に相同である。例えば、可変領域は、例えばヒト細胞調製物由来の定常領域と組み合わせて、非ヒト宿主生物由来の、容易に入手可能なＢ細胞またはハイブリドーマを用いて、現在知られる供給源から得られうる。

【0062】

用語「抗体」は、さらに、ヒト化抗体に適用される。

【0063】

用語「ヒト化」は、抗体に関して用いた際、非ヒト種由来の免疫グロブリンから実質的に得られる抗原結合部位を有する分子を指し、ここで、分子の残りの免疫グロブリン構造は、ヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づく。抗原結合部位は、定常ドメインに融合した完全可変ドメイン、または可変ドメイン中の適切なフレームワーク領域上に移植された相補性決定領域（ＣＤＲ）のみのいずれかを含むことも可能である。抗原結合部位は、野生型でもよいし、あるいは例えば１またはそれより多いアミノ酸置換によって、修飾されていてもよく、好ましくは、ヒト免疫グロブリンにより近く似るように修飾される。ヒト化抗体のいくつかの型は、すべてのＣＤＲ配列を保持する（例えば、マウス抗体由来の６つすべてのＣＤＲを含有するヒト化マウス抗体）。他の型は、元来の抗体に関して改変されている１またはそれより多いＣＤＲを有する。

【0064】

用語「抗体」は、さらにヒト抗体に適用される。

【0065】

用語「ヒト」は、抗体に関して用いられる際、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変および定常領域を有する抗体を含むと理解される。本発明のヒト抗体には、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えばランダムまたは部位特異的突然変異誘発によってｉｎ ｖｉｔｒｏで、あるいは体細胞突然変異によってｉｎ ｖｉｖｏで導入される突然変異）が含まれてもよい。ヒト抗体には、ヒト免疫グロブリンライブラリーから、あるいは１またはそれより多いヒト免疫グロブリンに関してトランスジェニックである動物から、単離される抗体が含まれる。

【0066】

該用語は、特に、任意のクラスまたはサブクラスの抗体に適用される。重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、抗体は、抗体ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭの主要なクラスに割り当て可能であり、そしてこれらのいくつかは、さらに、サブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、およびＩｇＡ２に分けられうる。

【0067】

該用語は、さらに、モノクローナルまたはポリクローナル抗体、特に組換え抗体に適用され、こうした用語には、組換え手段によって調製されるか、発現されるか、生成されるかまたは単離されるすべての抗体および抗体構造が含まれ、例えば、異なる起源由来の遺伝子または配列を含む、例えば動物、例えばヒトを含む哺乳動物から生じる抗体、例えばキメラ、ヒト化抗体、またはハイブリドーマ由来抗体が含まれる。さらなる例は、抗体を発現するよう形質転換された宿主細胞から単離される抗体、あるいは抗体または抗体ドメインの組換えコンビナトリアルライブラリーから単離される抗体、あるいは他のＤＮＡ配列に抗体遺伝子配列をスプライシングする工程を含む、任意の他の手段によって、調製されるか、発現されるか、生成されるか、または単離される抗体を指す。

【0068】

用語「抗体」はまた、抗体の誘導体、特に機能的に活性である誘導体も指すと理解される。抗体誘導体は、１またはそれより多い抗体ドメインまたは抗体および／または融合タンパク質の任意の組み合わせと理解され、ここで、抗体の任意のドメインを、例えば他の抗体、例えばＣＤＲループを含む結合構造、受容体ポリペプチドであってもよいが、またリガンド、足場タンパク質、酵素、毒素等でもよい、１またはそれより多い他のタンパク質の任意の位で、融合させてもよい。多様な化学的技術、例えば共有カップリング、静電相互作用、ジスルフィド結合等による、他の物質への会合または結合によって、抗体の誘導体を得てもよい。抗体に結合する他の物質は、脂質、炭水化物、核酸、有機および無機分子またはその任意の組み合わせ（例えばＰＥＧ、プロドラッグまたは薬剤）であってもよい。特定の態様において、抗体は、生物学的に許容されうる化合物との特異的相互作用を可能にするさらなるタグを含む誘導体である。本発明で使用可能なタグに関しては、抗体のターゲットへの結合に対して、まったく負の影響がないかまたは許容されうる負の影響しかない限り、特別な制限はない。適切なタグの例には、Ｈｉｓタグ、Ｍｙｃタグ、ＦＬＡＧタグ、Ｓｔｒｅｐタグ、カルモジュリン・タグ、ＧＳＴタグ、ＭＢＰタグ、およびＳタグが含まれる。別の特定の態様において、抗体は、標識を含む誘導体である。用語「標識」は、本明細書において、「標識」抗体を生成するような、抗体に直接または間接的にコンジュゲート化された、検出可能な化合物または組成物を指す。標識は、それ自体検出可能であってもよく、例えば放射性同位体標識または蛍光標識であってもよく、あるいは酵素標識の場合、検出可能な基質化合物または組成物の化学的改変を触媒してもよい。

【0069】

本明細書に記載するような好ましい誘導体は、抗原結合に関して機能的に活性であり、好ましくは黄色ブドウ球菌を中和する能力を有し、そして／または防御抗体である。

【0070】

用語「抗体」はまた、抗体の変異体も指すと理解される。

【0071】

用語「変異体」は、特に、例えば突然変異誘発法によって、特に特定の抗体アミノ酸配列または領域を欠失させ、交換し、該領域内に挿入物を導入するか、あるいはアミノ酸配列を化学的に誘導体化して、例えば定常ドメインにおいて、抗体安定性、エフェクター機能または半減期を操作するか、あるいは可変ドメインにおいて、例えば当該技術分野において利用可能なアフィニティ成熟技術によって抗原結合特性を改善して、得られる突然変異抗体または抗体断片などの抗体を指すものとする。任意の既知の突然変異誘発法が使用可能であり、これには、例えばランダム化技術によって得られる、望ましい位での点突然変異が含まれる。いくつかの場合、位は、例えば任意のありうるアミノ酸または抗体配列をランダム化するために好ましいアミノ酸の選択のいずれかを用いて、ランダムに選択される。用語「突然変異誘発」は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列を改変するための、任意の当該技術分野に認識される技術を指す。好ましいタイプの突然変異誘発には、エラープローンＰＣＲ突然変異誘発、飽和突然変異誘発、または他の部位特異的突然変異誘発が含まれる。

【0072】

用語「変異体」は、特に、機能的に活性である変異体を含むものとする。

【0073】

用語、抗体の「機能的に活性である変異体」は、本明細書において、１またはそれより多いアミノ酸の挿入、欠失または置換、あるいはアミノ酸配列中の１またはそれより多いアミノ酸残基、あるいはヌクレオチド配列内のヌクレオチド、あるいは配列の遠位端のいずれかまたは両方の化学的誘導体化から生じる配列であって、そしてこうした修飾がこの配列の活性に影響を及ぼさない（特に損なわない）、前記配列を意味する。選択されるターゲット抗原に特異性を有する結合部位の場合、抗体の機能的に活性である変異体は、なお、あらかじめ決定された結合特異性を有するであろうが、これを変化させてもよく、例えば特定のエピトープに対する優れた特異性、アフィニティ、アビディティ、ＫｏｎまたはＫｏｆｆ速度等を変化させてもよい。特に、本発明の抗体の機能的に活性である変異体は、本明細書にさらに記載するように、黄色ブドウ球菌のＨｌａおよび少なくとも１つの二成分毒素に結合する、多重特異性結合部位を有する。

【0074】

機能的に活性である変異体は、例えば親抗体の配列を変化させることによって得られることも可能であり、例えば＃ＡＢ−２４と称される抗体と同じ結合部位を含むが、結合部位に加えて抗体領域内に修飾を含む抗体、あるいは抗原結合を損なわず、そして好ましくは、黄色ブドウ球菌または黄色ブドウ球菌毒素をターゲットとする特異的結合アッセイまたは機能試験によって決定されるように、特定の強度で、例えば実質的に同じ生物学的活性で、黄色ブドウ球菌の毒素に結合し、そして／または黄色ブドウ球菌を中和する能力を含めて、親抗体と類似の生物学的活性を有するであろう修飾によって、＃ＡＢ−２４抗体である親抗体に由来する抗体がある。用語「実質的に同じ生物学的活性」は、本明細書において、親抗体に関して決定されるような活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、またはさらに少なくとも１００％、または少なくとも１１０％、または少なくとも１２０％、または少なくとも１３０％、または少なくとも１４０％、または少なくとも１５０％、または少なくとも１６０％、または少なくとも１７０％、または少なくとも１８０％、または少なくとも１９０％、例えば最大２００％である、実質的に同じ活性によって示されるような活性を指す。

【0075】

好ましい態様において、親抗体の機能的に活性である変異体は
ａ）抗体の生物学的活性断片であり、該断片は、分子の配列の少なくとも５０％を含み、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、さらにより好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、そして最も好ましくは少なくとも９７％、９８％または９９％を含み；
ｂ）少なくとも１つのアミノ酸置換、付加および／または欠失によって、抗体から得られ、ここで、機能的に活性である変異体は、分子またはその部分に配列同一性を有し、例えば少なくとも５０％の配列同一性、好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、さらにより好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、そして最も好ましくは少なくとも９７％、９８％または９９％の配列同一性を有し；そして／または
ｃ）抗体またはその機能的に活性である変異体、およびポリペプチドまたはヌクレオチド配列に対して異種であるさらに少なくとも１つのアミノ酸またはヌクレオチドからなる。

【0076】

本発明の１つの好ましい態様において、本発明記載の抗体の機能的に活性である変異体は、本質的には、上記の変異体と同一であるが、異なる種の相同配列から得られている点で、それぞれ、そのポリペプチドまたはヌクレオチド配列とは異なる。これらは、天然存在変異体または類似体と称される。

【0077】

用語「機能的に活性である変異体」にはまた、天然存在アレル変異体、ならびに突然変異体または任意の他の非天然存在変異体も含まれる。当該技術分野に知られるように、アレル変異体は、ポリペプチドの生物学的機能を本質的には改変しない、１またはそれより多いアミノ酸の置換、欠失または付加を有すると特徴付けられる、（ポリ）ペプチドの代替型である。

【0078】

機能的に活性である変異体は、例えば１またはそれより多い点突然変異によって、ポリペプチドまたはヌクレオチド配列中の配列改変によって得られることも可能であり、ここで、配列改変は、本発明と組み合わせて用いられた際、改変されないポリペプチドまたはヌクレオチド配列の機能を保持する。こうした配列改変には、限定されるわけではないが、（保存的）置換、付加、欠失、突然変異および挿入が含まれうる。

【0079】

特定の機能的に活性である変異体は、ＣＤＲ変異体である。ＣＤＲ変異体には、ＣＤＲ領域中の少なくとも１つのアミノ酸によって修飾されたアミノ酸配列が含まれ、ここで、前記修飾は、アミノ酸配列の化学的または部分的改変であってもよく、修飾は、変異体が非修飾配列の生物学的特性を保持することを可能にする。ＣＤＲアミノ酸配列の部分的改変は、１から数個のアミノ酸、例えば１、２、３、４または５アミノ酸の欠失または置換によるか、あるいは１から数個のアミノ酸、例えば１、２、３、４または５アミノ酸の付加または挿入、あるいは１から数個のアミノ酸、例えば１、２、３、４または５アミノ酸の化学的誘導体化、あるいはその組み合わせであってもよい。アミノ酸残基における置換は、保存的置換、例えば１つの疎水性アミノ酸の別の疎水性アミノ酸に関する置換であってもよい。

【0080】

保存的置換は、側鎖および化学的特性において関連するアミノ酸ファミリー内で行われる置換である。こうしたファミリーの例は、塩基性側鎖、酸性側鎖、非極性脂肪族側鎖、非極性芳香族側鎖、非荷電極性側鎖、小側鎖、巨大側鎖等を含むアミノ酸である。

【0081】

点突然変異は、特に、１またはそれより多い単一の（非保存的）または二つ組のアミノ酸の異なるアミノ酸に関する置換または交換、欠失または挿入において、操作されないアミノ酸配列と異なるアミノ酸配列の発現を生じる、ポリヌクレオチドの操作と理解される。

【0082】

好ましい点突然変異は、同じ極性および／または電荷のアミノ酸の交換を指す。これに関連して、アミノ酸は、６４の３つ組コドンによってコードされる２０の天然存在アミノ酸を指す。これらの２０アミノ酸は、中性電荷、陽性電荷、および陰性電荷を有するものに分けられうる。

【0083】

「中性」アミノ酸を、それぞれの３文字および１文字コードおよび極性とともに、以下に示す：
アラニン：（Ａｌａ、Ａ）非極性、中性；
アスパラギン：（Ａｓｎ、Ｎ）極性、中性；
システイン：（Ｃｙｓ、Ｃ）非極性、中性；
グルタミン：（Ｇｌｎ、Ｑ）極性、中性；
グリシン：（Ｇｌｙ、Ｇ）非極性、中性；
イソロイシン：（Ｉｌｅ、Ｉ）非極性、中性；
ロイシン：（Ｌｅｕ、Ｌ）非極性、中性；
メチオニン：（Ｍｅｔ、Ｍ）非極性、中性；
フェニルアラニン：（Ｐｈｅ、Ｆ）非極性、中性；
プロリン：（Ｐｒｏ、Ｐ）非極性、中性；
セリン：（Ｓｅｒ、Ｓ）極性、中性；
スレオニン：（Ｔｈｒ、Ｔ）極性、中性；
トリプトファン：（Ｔｒｐ、Ｗ）非極性、中性；
チロシン：（Ｔｙｒ、Ｙ）極性、中性；
バリン：（Ｖａｌ、Ｖ）非極性、中性；および
ヒスチジン：（Ｈｉｓ、Ｈ）極性、陽性（１０％）中性（９０％）。

【0084】

「陽性」荷電アミノ酸は以下の通りである：
アルギニン：（Ａｒｇ、Ｒ）極性、陽性；および
リジン：（Ｌｙｓ、Ｋ）極性、陽性。

【0085】

「陰性」荷電アミノ酸は以下の通りである：
アスパラギン酸：（Ａｓｐ、Ｄ）極性、陰性；および
グルタミン酸：（Ｇｌｕ、Ｅ）極性、陰性。

【0086】

「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、抗体配列および本明細書記載の相同体に関して、配列を整列させ、そして最大配列同一性パーセントを達成するために、必要であればギャップを導入した後、そしていかなる保存的置換も配列同一性の一部とは見なさずに、特定のポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基の割合と定義される。当業者は、整列を測定するための適切なパラメータを決定することが可能であり、これには、比較しようとする配列の全長に渡って、最大整列を達成するために必要ないかなるアルゴリズムも含まれる。

【0087】

抗体変異体は、機能性であり、そして機能的同等物として働きうる、例えば特定のターゲットに結合し、そして機能的特性を持つ、例えば糖鎖工学によって産生される、特異的グリコシル化パターンを持つ相同体、類似体、断片、修飾または変異体を含むと特に理解される。本明細書に記載するような好ましい変異体は、抗原結合に関して機能的に活性であり、好ましくは黄色ブドウ球菌を中和する能力を有し、そして／または防御抗体である。

【0088】

本発明の抗体は、Ｆｃエフェクター機能を示してもよいし、または示さなくてもよい。作用様式は、主に、Ｆｃエフェクター機能を持たない中和抗体によって仲介されるが、Ｆｃは、補体を補充し、そして免疫複合体の形成を通じて、循環からのターゲット抗原、例えば毒素の除去を補助することも可能である。

【0089】

特異的抗体は、活性Ｆｃ部分を欠き、したがって、抗体のＦｃ部分を含有しないか、またはＦｃガンマ受容体結合部位を含有しない抗体ドメインで構成されるかいずれかであってもよいし、あるいは例えばＦｃエフェクター機能を減少させる、特にＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を無効にするかまたは減少させる修飾によって、Ｆｃエフェクター機能を欠く抗体ドメインを含んでもよい。代替抗体を操作して、Ｆｃエフェクター機能を増加させる、特にＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を増進させる修飾を取り込むことも可能である。

【0090】

こうした修飾は、突然変異誘発、例えばＦｃガンマ受容体結合部位の突然変異によって、あるいは抗体形式のＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性に干渉する誘導体または剤によって、達成可能であり、こうしてＦｃエフェクター機能の減少または増加を達成することも可能である。

【0091】

Ｆｃエフェクター機能の有意な減少は、典型的には、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性によって測定されるような、非修飾（野生型）形式の１０％未満のＦｃエフェクター機能、好ましくは５％未満のＦｃエフェクター機能を指すと理解される。

【0092】

Ｆｃエフェクター機能の有意な増加は、典型的には、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性によって測定されるような、非修飾（野生型）形式の少なくとも１０％、好ましくは少なくとも２０％、３０％、４０％または５０％のＦｃエフェクター機能の増加を指すと理解される。

【0093】

用語「糖鎖操作（ｇｌｙｃｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）」変異体は、抗体配列に関して、糖鎖操作の結果として、修飾された免疫原性特性、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣを有するグリコシル化変異体を指すものとする。すべての抗体は、重鎖定常領域において、保存された位で炭水化物構造を含有し、各アイソタイプは、Ｎ連結炭水化物構造の異なるアレイを所持し、これはタンパク質アセンブリ、分泌または機能活性に多様に影響を及ぼす。ＩｇＧ１タイプの抗体は、各ＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に保存されたＮ連結グリコシル化部位を有する糖タンパク質である。Ａｓｎ２９７に付着した２つの複雑な二分岐オリゴ糖は、ＣＨ２ドメインの間に包埋され，ポリペプチド主鎖との広範な接触を形成し、そしてその存在は、抗体が抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）などのエフェクター機能を仲介するために必須である。例えば、Ｎ２９７の例えばＡへの突然変異、またはＴ２９９を通じて、Ｎ２９７のＮ−グリカンを除去すると、典型的には、ＡＤＣＣが減少した無グリコシル化抗体形式が生じる。

【0094】

抗体グリコシル化の大きな相違は細胞株間で生じ、そして異なる培養条件下で増殖する所定の細胞株に関してであってもわずかな相違が見られる。細菌細胞における発現は、典型的には、無グリコシル化抗体を提供する。テトラサイクリンが制御する、二分ＧｌｃＮＡｃの形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼであるβ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）の発現を伴うＣＨＯ細胞は、改善されたＡＤＣＣ活性を有すると報告された（Ｕｍａｎａら， １９９９， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ． １７：１７６−１８０）。宿主細胞の選択に加えて、抗体の組換え産生中のグリコシル化に影響を及ぼす要因には、増殖様式、培地配合、培養密度、酸素添加、ｐＨ、精製スキーム等が含まれる。

【0095】

用語「抗原結合部位」または「結合部位」は、抗原結合に関与する抗体部分を指す。抗原結合部位は、重（「Ｈ」）鎖および／または軽（「Ｌ」）鎖のＮ末端可変（「Ｖ」）領域、あるいはその可変ドメインのアミノ酸残基によって形成される。「超可変領域」と称される、重鎖および軽鎖のＶ領域内の３つの非常に多様なストレッチは、フレームワーク領域として知られる、より保存された隣接ストレッチの間に挿入される。抗原結合部位は、結合するエピトープまたは抗原の三次元表面に相補的な表面を提供し、そして超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と称される。ＣＤＲ中に取り込まれる結合部位は、本明細書において、また、「ＣＤＲ結合部位」とも称される。

【0096】

用語「抗原」は、本明細書において、用語「ターゲット」または「ターゲット抗原」と交換可能に用いられ、全ターゲット分子または抗体結合部位によって認識されるこうした分子の断片を指すものとする。具体的には、免疫学的に適切である、一般的に「エピトープ」、例えばＢ細胞エピトープまたはＴ細胞エピトープと称される、抗原の部分構造、例えばポリペプチドまたは炭水化物構造は、こうした結合部位によって認識されうる。

【0097】

用語「エピトープ」は、本明細書において、特に、抗体の結合部位に対する特異的結合パートナーを完全に構成してもよいし、または特異的結合パートナーの一部であってもよい、分子構造を指すものとする。エピトープは、炭水化物、ペプチド性構造、脂肪酸、有機、生化学的または無機物質またはその誘導体、およびその任意の組み合わせのいずれで構成されてもよい。エピトープが、ペプチド性構造、例えばペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質で構成される場合、通常、これには、少なくとも３アミノ酸、好ましくは５〜４０アミノ酸、そしてより好ましくは約１０〜２０の間のアミノ酸が含まれるであろう。エピトープは直鎖またはコンホメーションエピトープのいずれかであってもよい。直鎖エピトープは、ポリペプチドまたは炭水化物鎖の一次配列の単一セグメントで構成される。直鎖エピトープは近接していてもまたは重複していてもよい。コンホメーションエピトープは、ポリペプチドをフォールディングして、三次構造を形成することによって寄せ集められたアミノ酸または炭水化物で構成され、そしてアミノ酸は、直鎖配列においては、互いに必ずしも隣接しない。具体的には、そしてポリペプチド抗原に関しては、コンホメーションエピトープまたは不連続エピトープは、一次配列中では分離されているが、ポリペプチドが天然タンパク質／抗原にフォールディングした際には分子表面上の一貫した構造に集合する、２またはそれより多い分散したアミノ酸残基の存在によって特徴付けられる。

【0098】

本明細書において、用語「エピトープ」は、特に、抗体に認識される単一のエピトープ、または各々、交差反応性抗体によって認識されるエピトープ変異体を含むエピトープ混合物を指すものとする。

【0099】

用語「発現」は、以下のように理解される。発現産物、例えば本明細書に記載するような抗体の望ましいコード配列を含有する核酸分子、および機能可能であるように連結された制御配列、例えばプロモーターを、発現目的のために用いてもよい。これらの配列で形質転換されたかまたはトランスフェクションされた宿主は、コードされるタンパク質を産生可能である。形質転換を達成するため、発現系はベクター中に含まれていてもよい；が、適切なＤＮＡはまた宿主染色体内に組み込まれてもよい。具体的には、該用語は、例えばベクターによって所持され、そして宿主細胞に導入される、外来（ｆｏｒｅｉｇｎ）ＤＮＡによってコードされるタンパク質の発現のために適切な条件下にある、宿主細胞および適合するベクターを指す。

【0100】

コードＤＮＡは、例えば抗体のような特定のポリペプチドまたはタンパク質のための特定のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列である。プロモーターＤＮＡは、コードＤＮＡの発現を開始するか、制御するか、あるいは別の方式で仲介するかまたは調節するＤＮＡ配列である。プロモーターＤＮＡおよびコードＤＮＡは、同じ遺伝子由来であってもよいし、または異なる遺伝子由来であってもよく、そして同じまたは異なる生物由来であってもよい。組換えクローニングベクターには、しばしば、クローニングまたは発現のための１またはそれより多い複製系、宿主における選択のための１またはそれより多いマーカー、例えば抗生物質耐性、および１またはそれより多い発現カセットが含まれるであろう。

【0101】

「ベクター」は、本明細書において、適切な宿主生物において、クローニングされた組換えヌクレオチド配列、すなわち組換え遺伝子の転写、およびそのｍＲＮＡの翻訳に必要な、ＤＮＡ配列と定義される。

【0102】

「発現カセット」は、定義される制限部位でベクター内に挿入可能な発現産物をコードする、ＤＮＡコード配列またはＤＮＡセグメントを指す。カセット制限部位は、適切なリーディングフレームでのカセットの挿入を確実にするよう設計される。一般的に、外来ＤＮＡは、ベクターＤＮＡの１またはそれより多い制限部位で挿入され、そして次いで、ベクターによって、伝達性ベクターＤＮＡとともに、宿主細胞内に運ばれる。挿入されたまたは付加されたＤＮＡを有するＤＮＡのセグメントまたは配列、例えば発現ベクターはまた、「ＤＮＡ構築物」とも称されうる。

【0103】

発現ベクターは発現カセットを含み、そしてさらに通常、宿主細胞またはゲノム組込み部位における自立複製起点、１またはそれより多い選択可能マーカー（例えばアミノ酸合成遺伝子、あるいは抗生物質、例えばゼオシン、カナマイシン、Ｇ４１８またはハイグロマイシンに対する耐性を与える遺伝子）、いくつかの制限酵素切断部位、適切なプロモーター配列および転写終結因子を含み、これらの成分は、機能可能であるように共に連結される。用語「ベクター」には、本明細書において、自律性複製ヌクレオチド配列、ならびにゲノム組込みヌクレオチド配列が含まれる。ベクターの一般的なタイプは「プラスミド」であり、これは一般的に、さらなる（外来）ＤＮＡを容易に受け入れ可能であり、そして適切な宿主細胞内に容易に導入可能である、二本鎖ＤＮＡの自己完結型分子である。プラスミドベクターは、しばしば、コードＤＮＡおよびプロモーターＤＮＡを含有し、そして外来ＤＮＡを挿入するのに適した１またはそれより多い制限部位を有する。具体的には、用語「ベクター」または「プラスミド」は、宿主を形質転換し、そして導入した配列の発現（例えば転写および翻訳）を促進するように、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列（例えば外来遺伝子）が宿主細胞内に導入可能であるビヒクルを指す。

【0104】

用語「宿主細胞」は、本明細書において、特定の組換えタンパク質、例えば本明細書記載の抗体を産生するよう形質転換された一次対象細胞、およびその任意の子孫を指すものとする。すべての子孫が親細胞と正確に同一ではないが（計画的なまたは偶発性の突然変異、あるいは環境の相違による）、こうした改変された子孫は、子孫が元来形質転換された細胞のものと同じ機能性を保持する限り、これらの用語に含まれることが理解されなければならない。用語「宿主細胞株」は、組換え抗体などの組換えポリペプチドを産生する組換え遺伝子を発現するために用いられるような宿主細胞の細胞株を指す。用語「細胞株」は、本明細書において、長期間に渡って増殖する能力を獲得した、特定の細胞タイプの樹立されたクローンを指す。こうした宿主細胞または宿主細胞株を細胞培養中に維持し、そして／またはこれを培養して組換えポリペプチドを産生することも可能である。

【0105】

組成物、例えば、抗原またはエピトープを含む、本明細書において「免疫原」とも称される免疫原性組成物、あるいは本明細書に記載するようなワクチンに対する「免疫反応」は、関心対象の組成物またはワクチンに対する、細胞および／または抗体仲介性免疫反応の、宿主または被験体における発展である。通常、こうした反応は、関心対象の組成物またはワクチン中に含まれる単数または複数の抗原に対して特異的に向けられる、被験体が産生する抗体、Ｂ細胞、ヘルパーＴ細胞、サプレッサーＴ細胞、および／または細胞傷害性Ｔ細胞からなる。

【0106】

「防御免疫反応」は、非免疫集団のものに比較して、誘導されたかまたは天然の感染または毒素曝露の、有意により優れた結果を提供する免疫反応と理解される。毒素に対する防御免疫反応は、主に、高いアフィニティを有する、例えば１０^−８Ｍ未満のＫｄを持つ中和抗体によって仲介される。毒素中和の利点は、ターゲット細胞の保護および炎症の防止である。Ｆｃ仲介性免疫複合体形成は、循環から毒素を除去する（ＲＥＳ細胞を介する）ことによってもまた寄与しうる。

【0107】

免疫原または免疫原性組成物は、通常、抗原またはエピトープおよびキャリアーを含み、キャリアーは特にアジュバントを含んでもよい。用語「アジュバント」は、抗原と組み合わせて投与された際、抗原に対する免疫反応を増大し、そして／または再指示するが、単独で投与された際には、抗原に対する免疫反応を生じない化合物を指す。アジュバントは、リンパ球補充、Ｂおよび／またはＴ細胞刺激、ならびにマクロファージ刺激を含む、いくつかの機構によって、免疫反応を増大させうる。例示的なキャリアーは、リポソームまたは陽イオン性ペプチドであり；例示的なアジュバントは、リン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム、ＭＦ５９またはＣｐＧオリゴヌクレオチドである。

【0108】

用語「単離された」または「単離」は、本明細書において、核酸、抗体または他の化合物に関して、「実質的に純粋な」型で存在するように、こうした化合物が天然に会合するであろう環境から十分に分離されている化合物を指すものとする。「単離された」は、他の化合物または物質との人工的なまたは合成混合物、あるいは基本的活性に干渉せず、そして例えば不完全な精製のために存在しうる不純物の存在の排除を必ずしも意味しない。特に、本発明の単離された核酸分子はまた、化学的に合成されたものも含むよう意図される。

【0109】

本発明の核酸に関連して、用語「単離された核酸」が時に用いられる。この用語は、ＤＮＡに適用された際、由来する生物の天然存在ゲノムにおいて直ちに隣接する配列から分離されたＤＮＡ分子を指す。例えば「単離された核酸」は、ベクター、例えばプラスミドまたはウイルスベクター内に挿入されたか、あるいは原核または真核細胞または宿主生物のゲノムＤＮＡ内に組み込まれたＤＮＡ分子を含むことも可能である。ＲＮＡに適用された際、用語「単離された核酸」は、主に、上に定義するような単離されたＤＮＡ分子にコードされるＲＮＡ分子を指す。あるいは、該用語は、天然状態で（すなわち細胞または組織において）会合するであろう他の核酸から十分に分離されているＲＮＡ分子を指すものとする。「単離された核酸」（ＤＮＡまたはＲＮＡいずれか）は、さらに、生物学的または合成的手段によって直接産生され、そしてその産生中に存在する他の成分から分離されている分子を指すことも可能である。

【0110】

ポリペプチドまたはタンパク質、例えば本発明の抗体またはエピトープに関連して、用語「単離された」は、特に、例えば天然環境において、あるいはこうした調製がｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで実施される組換えＤＮＡ技術による場合、調製される環境（例えば細胞培養）において、ともに見られる他の化合物などの、天然に会合している物質を含まないかまたは実質的に含まない、化合物を指す。単離された化合物を、希釈剤またはアジュバントとともに配合してもよく、そしてなお、単離される実際的な目的のため、例えば、診断または療法に用いる際には、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを薬学的に許容されうるキャリアーまたは賦形剤と混合してもよい。

【0111】

用語「中和性」または「中和」は、本明細書において、最も広い意味で用いられ、そして中和が達成される機構に関わらず、病原体、例えば黄色ブドウ球菌に、被験体が感染するのを阻害するか、または病原体が強力なタンパク質毒素を産生することによって感染を促進するのを阻害するか、または毒素が被験体においてターゲット細胞を損傷するのを阻害する、任意の分子を指す。中和は、例えば、ターゲット細胞上の同族受容体と黄色ブドウ球菌毒素（単数または複数）の結合および／または相互作用を阻害する抗体によって、達成可能である。特定の態様において、本明細書記載の抗体は、毒素活性を中和させることも可能であり、ここで、毒素およびターゲット細胞、例えば赤血球の間の相互作用のｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ効果は、減少するかまたは排除される。中和はさらに、活性毒素の形成を阻害することによって、例えば黄色ブドウ球菌二成分細胞溶解素の場合、ＳおよびＦ成分の結合、または細胞膜におけるオリゴマー性孔の形成の阻害によって、起こることも可能である。

【0112】

細胞溶解性毒素に対する抗体の中和能は、典型的には、所定の毒素に感受性である細胞の増加した生存度または機能性を測定することによって、標準アッセイにおいて決定される。中和は、抗体を含むおよび含まない生存細胞のパーセントによって表されうる。非常に強力な抗体に関しては、中和強度を表す好ましい方式は、抗体：毒素モル比であり、ここで、より低い値はより高い強度に対応する。１未満の値は非常に高い強度を定義する。

【0113】

用語「交差中和性」は、本明細書において、いくつかの毒素、例えば交差反応性または多重特異性抗体によって認識される交差反応性エピトープを取り込む毒素の中和を指すものとする。

【0114】

用語「黄色ブドウ球菌」または「Ｓ．アウレウス」または「病原性黄色ブドウ球菌」は、以下のように理解される。黄色ブドウ球菌細菌は、通常、人間および動物の皮膚上または鼻中に見られる。該細菌は、切り傷または他の創傷を通じて体内に進入しない限り、一般的には無害である。典型的には、感染は、健康な人々においては、重要でない皮膚の問題である。歴史的には、感染は、広域抗生物質、例えばメチシリンによって治療された。しかし、現在、メチシリンおよび他のベータ−ラクタム抗生物質、例えばペニシリンおよびセファロスポリンに耐性である特定の株が出現してきている。これらはメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（また、多剤耐性黄色ブドウ球菌、または「ＭＲＳＡ」としても知られる）と称される。

【0115】

重要なヒト病原体である黄色ブドウ球菌は、多数の分泌毒素（外毒素）を発現する。これらは、赤血球、好中性顆粒球および他の免疫細胞、ならびに肺または皮膚の上皮細胞を含む、多様な宿主細胞タイプを攻撃しうる。黄色ブドウ球菌毒素の主なメンバーは、リンパ球、マクロファージ、肺上皮細胞および肺内皮細胞に対して細胞溶解機能を発揮する、アルファ溶血素（Ｈｌａ）である。

【0116】

ＭＲＳＡを含む黄色ブドウ球菌感染は、一般的には、面疱、おできまたはクモの咬傷に似た小さな赤い隆起として始まる。これらの隆起または傷（ｂｌｅｍｉｓｈｅｓ）は、急速に、外科的排出を必要とする、深く有痛性の膿瘍に変わりうる。細菌は時に皮膚に限定されたままである。場合によって、これらは体の深部に掘り進まれて、皮膚、軟組織、骨、関節、外科的創傷、血流、心臓弁、肺、または他の臓器を含む、広い範囲のヒト組織において、潜在的に生命の危険を伴う感染を引き起こしうる。したがって、黄色ブドウ球菌感染は、潜在的に致死性の疾患、例えば壊死性筋膜炎、心内膜炎、敗血症、毒素性ショック症候群、および壊死性肺炎を含む多様な型の肺炎、ならびにフルンケル症およびカルブンケル症における毒素産生である、関連する疾患状態を生じうる。ＭＲＳＡ感染は、患者が開放性創傷、侵襲性デバイス、および弱った免疫系のリスクにあるか、またはこうしたものに対する傾向があり、そしてしたがって、一般社会よりも感染のリスクがより大きい、病院または老人ホーム設定においては、特に厄介である。

【0117】

黄色ブドウ球菌毒素を中和する抗体は、病原体および病原性反応に干渉し、したがって、感染を限定するかまたは防止し、そして／またはこうした感染から生じる疾患状態を寛解させるか、あるいは黄色ブドウ球菌病変形成、特に肺炎病変形成を阻害することが可能である。これに関連して、「防御抗体」は、本明細書において、能動免疫または受動免疫において観察される感染性病原体に対する免疫を担う中和抗体と理解される。特に、本明細書に記載するような防御抗体は、分泌される病原性因子（外毒素）の毒性効果（例えば細胞溶解、ターゲット細胞による炎症誘発性サイトカイン発現の誘導）を中和することが可能であり、そしてしたがって、黄色ブドウ球菌の病変形成能に干渉する。

【0118】

用語「組換え」は、本明細書において、「遺伝子操作によって調製されるかまたは遺伝子操作の結果」を意味するものとする。組換え宿主は、特に、発現ベクターまたはクローニングベクターを含むか、あるいは特に宿主に対して外来性であるヌクレオチド配列を使用して、組換え核酸配列を含有するよう遺伝子操作されている。組換えタンパク質は、宿主においてそれぞれの組換え核酸を発現することによって産生される。用語「組換え抗体」には、本明細書において、組換え手段によって調製されるか、発現されるか、生成されるか、または単離される抗体、例えば（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックであるかまたはトランス染色体性（ｔｒａｎｓｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ）である動物（例えばマウス）あるいはそこから調製されたハイブリドーマから単離された抗体、（ｂ）抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えばトランスフェクトーマから単離された抗体、（ｃ）組換えコンビナトリアル・ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、および（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う、任意の他の手段によって調製されるか、発現されるか、生成されるかまたは単離される抗体が含まれる。こうした組換え抗体は、例えば抗体成熟中に生じる再編成および突然変異を含むよう操作される抗体を含む。

【0119】

本明細書において、用語「特異性」または「特異的結合」は、分子の不均一集団において、関心対象の同族リガンドの決定要因である結合反応を指す。したがって、明示される条件（例えばイムノアッセイ条件）下で、抗体は，特定のターゲットに特異的に結合し、そして試料中に存在する他の分子には、有意な量では結合しない。特異的結合は、結合が、選択されるように、ターゲット同一性、高い、中程度または低い結合アフィニティまたはアビディティに関して選択性であることを意味する。選択的結合性は、通常、結合定数または結合動力学が少なくとも１０倍異なる場合、好ましくは相違が少なくとも１００倍である場合、そしてより好ましくは少なくとも１０００倍である場合、達成される。

【0120】

該用語はまた、例えば抗体が、いくつかの抗原に交差反応性である特定のエピトープに特異的である場合にも適用可能であり、この場合、特異的抗体は、交差反応性エピトープを所持する多様な抗原に結合可能であろう。抗体のこうした結合部位または交差反応性エピトープに結合する特異性を持つ抗体はまた、それぞれ、多重特異性または交差特異性結合部位および抗体とも称される。例えば、抗体は、エピトープ内の配列相同性および／または構造的類似性を持ち、本質的に同じ構造のコンホメーションエピトープを提供する、多くの異なる抗原と交差反応性である、例えば少なくとも黄色ブドウ球菌のＨｌａおよび二成分毒素に交差反応性であるエピトープに特異的に結合する、多重特異性結合部位を有してもよい。

【0121】

交差反応性結合配列に抗体が示す、抗体の免疫特異性、その結合能および付随するアフィニティは、抗体が免疫反応する（結合する）交差反応性結合配列によって決定される。交差反応性結合配列特異性は、少なくとも部分的に、抗体の免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸残基によって、および／または軽鎖可変領域アミノ酸残基配列によって、定義されうる。

【0122】

用語「同じ特異性を有する」、「同じ結合部位を有する」または「同じエピトープに結合する」の使用は、同等のモノクローナル抗体が、同じまたは本質的に同じ、すなわち類似の免疫反応（結合）特性を示し、そしてあらかじめ選択されたターゲット結合配列への結合に関して競合することを示す。特定のターゲットに対する抗体分子の相対的特異性は、競合アッセイによって、例えばＨａｒｌｏｗら， ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ： Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．， １９８８に記載されるように、相対的に決定可能である。

【0123】

用語「被験体」は、本明細書において、温血哺乳動物、特にヒトまたは非ヒト動物を指すものとする。ＭＲＳＡは、非常に重要なヒト病原体であり、これはまた、獣医学においても新たに発生している懸念である。該細菌は、広い範囲の非ヒト動物種に存在する。したがって、用語「被験体」はまた、イヌ、ネコ、ウサギ、ウマ、ウシ、ブタおよび家禽を含む動物もまた特に指す可能性もある。特に、本発明の医学的使用またはそれぞれの治療法は、黄色ブドウ球菌感染に関連する疾患状態の予防または治療が必要な被験体に適用される。被験体は、黄色ブドウ球菌感染のリスクがあるか、あるいは初期または後期疾患を含む疾患を患っている患者であってもよい。用語「患者」には、予防的または療法的治療のいずれかを受けているヒトおよび他の哺乳動物被験体が含まれる。用語「治療」は、したがって、予防的および療法的治療の両方を含むよう意図される。

【0124】

被験体は、例えば、黄色ブドウ球菌疾患状態の予防または療法のために治療される。特に、感染の、あるいはこうした疾患または疾患再発を発展させるかいずれかのリスクがある被験体、あるいはこうした感染および／またはこうした感染に関連する疾患を患う被験体が治療される。

【0125】

特に、用語「予防」は、病変形成の開始の防止または病変形成のリスクを減少させる予防的手段を含むよう意図される、防御手段を指す。

【0126】

特に、本明細書に記載するような被験体における疾患状態を治療するか、防止するか、または遅延させるための方法は、状態の原因病原体としての黄色ブドウ球菌の病変形成に干渉することにより、ここで病変形成には、例えば特定の病原性因子または毒素による、被験体の細胞膜上に孔を形成する工程が含まれる。

【0127】

用語「毒素」は、本明細書において、黄色ブドウ球菌のアルファ毒素（Ｈｌａ）および二成分毒素を指すものとする。

【0128】

黄色ブドウ球菌の病原性は、細菌が真核細胞膜に接着することを可能にする表面会合タンパク質、オプソニン化貪食作用から細菌を保護する莢膜多糖類、およびいくつかの外毒素を含む、多くの病原性因子の組み合わせによる。黄色ブドウ球菌は、主に、分泌される病原性因子、例えば溶血素、エンテロトキシンおよび毒素性ショック症候群毒素の産生を通じて疾患を引き起こす。これらの分泌される病原性因子は、宿主における多くの免疫学的機構を不活性化させることによって、免疫反応を抑制し、そして組織破壊を引き起こし、そして感染確立を補助する。後者は、孔形成毒素群によって達成され、このうち最も顕著なものが、黄色ブドウ球菌肺炎の重要な病原性因子であるＨｌａである。

【0129】

黄色ブドウ球菌は、この細菌が異なる種類の免疫細胞、特に体の主な防御系を構成する白血球の下位集団による攻撃を中和し、そしてこれに抵抗することを可能にする、多様なアレイのさらなる病原性因子および毒素を産生する。これらの病原性因子および毒素の産生は、黄色ブドウ球菌が感染状態を維持することを可能にする。これらの病原性因子のうち、黄色ブドウ球菌は、いくつかの二成分ロイコトキシンを産生し、これは、２つの関連しないタンパク質またはサブユニットの相乗作用によって、宿主防御細胞および赤血球の膜を損傷する。これらの二成分毒素のうち、ガンマ溶血素（ＨｌｇＡＢおよびＨｌｇＣＢ）およびパントン−バレンタイン・ロイコシジン（ＰＶＬ）が最もよく特徴付けられている。

【0130】

哺乳動物細胞に対するロイコシジンの毒性は、二成分の作用を伴う。最初のサブユニットはクラスＳ成分と称され、そして第二のサブユニットはクラスＦ成分と称される。ＳおよびＦサブユニットは相乗的に作用して、単球、マクロファージ、樹状細胞および好中球（集合的に、食細胞として知られる）を含む白血球上に孔を形成する。黄色ブドウ球菌によって産生される二成分ロイコトキシンのレパートリーは、ＦおよびＳ成分の同族および非同族対を含むことが知られ、これには、例えば本明細書に記載するような好ましいターゲットである、ガンマ溶血素、ＰＶＬ毒素およびＰＶＬ様毒素が含まれ、ＨｌｇＡＢ、ＨｌｇＣＢ、ＬｕｋＳＦ、ＬｕｋＥＤ、ＬｕｋＧＨ、ＬｕｋＳ−ＨｌｇＢ、ＬｕｋＳＤ、ＨｌｇＡ−ＬｕｋＤ、ＨｌｇＡ−ＬｕｋＦ、ＬｕｋＧ−ＨｌｇＡ、ＬｕｋＥＦ、ＬｕｋＥ−ＨｌｇＢ、ＨｌｇＣ−ＬｕｋＤまたはＨｌｇＣ−ＬｕｋＦが含まれる。図１は、いくつかの主な二成分毒素の概観を提供する。

【0131】

用語「実質的に純粋」または「精製された」は、本明細書において、少なくとも５０％（ｗ／ｗ）、好ましくは少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％または９５％の化合物、例えば核酸分子または抗体を含む調製物を指すものとする。純度は、化合物に適した方法によって測定される（例えばクロマトグラフィ法、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、ＨＰＬＣ分析等）。

【0132】

用語「療法的に有効な量」は、本明細書において、用語、化合物、例えば本発明の抗体または免疫原の「有効量」または「十分量」のいずれとも交換可能に用いられ、被験体に投与された際、有益なまたは望ましい、臨床的な結果を含む結果を達成するのに十分な量または活性であり、そしてこうしたものとして、有効量またはその同義語は、適用される背景に応じる。

【0133】

有効量は、こうした疾患または障害を治療するか、防止するかまたは阻害するのに十分である化合物の量を意味するよう意図される。疾患の背景において、本明細書に記載するような抗体の療法的有効量は、特に、黄色ブドウ球菌または黄色ブドウ球菌病変形成の阻害から利益を受ける、疾患または状態を治療するか、調節するか、減弱させるか、逆転させるか、または影響を及ぼすように用いられる。

【0134】

こうした有効量に対応するであろう化合物の量は、多様な要因、例えば所定の薬剤または化合物、薬学的配合物、投与経路、疾患または障害のタイプ、治療される被験体または宿主の同一性等に応じて多様であろうが、にもかかわらず、当業者によってルーチンに決定可能である。

【0135】

本発明の抗体または免疫原を予防的に用いて、黄色ブドウ球菌感染の開始を阻害するか、または黄色ブドウ球菌感染、特に抵抗性であることが知られるか、または特定の被験体の場合、他の慣用的な抗生物質療法での治療に抵抗性であることが立証されている、ＭＲＳＡなどの黄色ブドウ球菌感染を治療することも可能である。

【0136】

治療の必要があるヒト患者に提供されるような、本明細書記載の抗体の療法的有効量は、特に、０．５〜５００ｍｇ、好ましくは１〜４００ｍｇ、さらにより好ましくは最大３００ｍｇ、最大２００ｍｇ、最大１００ｍｇまたは最大１０ｍｇの範囲であることも可能であるが、例えば、急性疾患状態を治療するために、より高い用量が示されうる。

【0137】

さらに、療法的有効量の本発明の抗体での被験体の治療または防止投与計画は、単回投与からなることも可能であるし、あるいは一連の適用を含んでもよい。例えば、抗体を少なくとも１年に１回、少なくとも半年に１回または少なくとも１ヶ月に１回投与してもよい。しかし、別の態様において、所定の治療のため、週あたり約１回からほぼ毎日の投与で、抗体を被験体に投与してもよい。治療期間の長さは、多様な要因、例えば疾患の重症度、急性または慢性疾患であるか、患者の年齢、抗体形式の濃度および活性に応じる。治療または予防に用いられる有効投薬量は、特定の治療または予防投与計画の経過に渡って増加させてもまたは減少させてもよいこともまた、認識されるであろう。投薬量変化は、当該技術分野に知られる標準的診断アッセイによって生じ、そして明らかになりうる。いくつかの例では、長期投与が必要でありうる。

【0138】

黄色ブドウ球菌感染と関連する疾患状態を発展させるリスクがある患者に提供されるものなどの、本明細書に記載するような免疫原の有効量は、特に、用量あたり、１〜１５ｍｇ／ｋｇの範囲であることも可能である。

【0139】

例えば、プライム−ブースト免疫スキームにしたがって、免疫原を最初の用量として投与して、その後、特定の時間枠内で、１またはそれより多いブースター用量（単数または複数）を投与して、黄色ブドウ球菌感染に対する長期持続性の有効な免疫反応を誘導してもよい。好ましいワクチン接種スケジュールは、３回の用量、例えば第０日の最初の用量、第５〜４０日の第二の用量、および第１０〜１００日の第三の用量、好ましくは第０日、第２８日および第９０日の投与を含むであろう。好ましい加速スケジュールにしたがって、投与は第０日、第７日および第１４日であってもよい。加速スケジュールは、予防のため、例えば待機手術に直面している患者のために示されうる。通常、ミョウバンがアジュバントとして、例えばリン酸塩または水酸化物として、用いられる。

【0140】

したがって、本発明は特に、２０〜２８％の配列相同性で、黄色ブドウ球菌のアルファ溶血素および二成分毒素の両方を交差中和するモノクローナル抗体を指す。配列相同性が低レベルであるため、これは驚くべきことであった。Ｈｌａおよび少なくとも１つの二成分毒素を交差中和するｍＡｂが生じる可能性は、低いと予期された。

【0141】

詳細な作用様式は解明すべきままであるが、＃ＡＢ−２４（＃９０２８）に関して得られたデータは、大きな潜在的値であり、そしてアルファ溶血素および多数の二成分毒素もまた中和する単一抗体の最初の概念証明を提供する。

【0142】

多重二成分特異性抗体を記載する最初の刊行物（Ｌａｖｅｎｔｉｅ， ＰＮＡＳ， ２０１１：１６４０４）は、ＬｕｋＳおよびＨｌｇＣに対する二重特異性が、２つの異なる結合部位を利用する二重特異性抗体を設計することによって生成されたため、本発明とは関連しないと見なされる。対照的に、本発明は、異なる毒素、例えば４つの異なる毒素：アルファ毒素およびガンマ溶血素のＦ成分、パンテン・バレンタイン・ロイコシジン（ＰＶＬ、ＬｕｋＳＦ）およびＬｕｋＥＤに結合可能な同じ結合部位を指す。ＬｕｋＥＤおよびＬｕｋＳＦに対する高いアミノ酸相同性に基づいて、四重反応性ｍＡｂがまた、ウシＬｕｋＭロイコシジンにも結合する可能性が高い。

【0143】

いくつかの態様において、Ｈｌａ上のエピトープを認識し、そしてＨｌｇＡと交差反応する本発明の抗体は、ＨｌｇＣ、ＬｕｋＳ−ＰＶＬ、ＬｕｋＨＬｕｋＳ−Ｉ、ＬｕｋＥ、ＬｕｋＥｖ、およびＬｕｋＭなどの、他のブドウ球菌ロイコシジンＳ成分とさらに交差反応性を有することも可能である。同様に、いくつかの態様において、Ｈｌａ上のエピトープを認識し、そしてＨｌｇＢと交差反応する本発明の抗体は、ＬｕｋＦ’−ＰＶ、ＬｕｋＦ−ＰＶ、ＬｕｋＤｖ、ＬｕｋＤ、ＬｕｋＦ−Ｉ、およびＬｕｋＧなどの、他のブドウ球菌ロイコシジンＦ成分とさらに交差反応性を有することも可能である。本発明の交差反応性抗ＨｌｇＡおよび／または抗ＨｌｇＢ抗体は、それぞれ、ＨｌｇＡ活性およびＨｌｇＢ活性を阻害するかまたは減少させることも可能である。いくつかの態様において、交差反応性抗ＨｌｇＡおよび／または抗ＨｌｇＢ抗体は、それぞれ、ＨｌｇＡおよびＨｌｇＢ活性を中和する、例えば実質的に除去する。

【0144】

特定の側面にしたがって、同じエピトープに結合する抗体を提供し、該用語には、＃ＡＢ−２４と称される抗体と本質的に同じエピトープに結合するか、または同じ結合部位を含む変異体が含まれ、該用語には、＃ＡＢ−２４と称される抗体と本質的に同じ結合部位を含む変異体が含まれる。＃ＡＢ−２４抗体および機能的に活性である変異体は、Ｈｌａを強力に中和し、そしてＬｕｋＳ−ＬｕｋＦ、ＬｕｋＥ−ＬｕｋＤ、およびＨｌｇＢ−ＨｌｇＣの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つの同族毒素対、ならびに場合によってさらに二成分毒素を交差中和する結合部位を特に含むであろう。

【0145】

抗体は、所定の時点で１つの抗体のみがエピトープに結合可能であるように、抗体が交差競合する場合、すなわち１つの抗体が他方の結合または調節効果を防止する場合、「同じエピトープに結合する」か、または「同じ結合部位を含む」か、または「本質的に同じ結合を有する」と言われる。

【0146】

用語「競合する」または「交差競合する」は、本明細書において、抗体に関して用いられる場合、同族エピトープと第一の抗体の結合の結果が、第二の抗体の非存在下での第一の抗体の結合に比較して、第二の抗体の存在下で、検出可能に減少するように、第一の抗体、またはその抗原結合部分が、第二の抗体、またはその抗原結合部分の結合に十分に類似の方式でエピトープに結合することを意味する。これとは別に、エピトープへの第二の抗体の結合がまた、第一の抗体の存在下でやはり検出可能に減少する場合もありうるが、そうである必要はない。すなわち、第一の抗体は、第二の抗体がそれぞれのエピトープに対する第一の抗体の結合を阻害することを伴わずに、そのエピトープへの第二の抗体の結合を阻害可能である。しかし、各抗体が、同じ、より高いまたはより低い度合いのいずれであっても、同族エピトープとの他の抗体の結合を検出可能に阻害する場合、抗体は、それぞれのエピトープ（単数または複数）の結合に関して互いに「交差競合する」と言われる。競合および交差競合抗体はどちらも、本発明に含まれる。

【0147】

本明細書の競合は、例えば実施例セクションに記載されるように、競合ＥＬＩＳＡ分析によって決定した際、約３０％より大きい相対阻害を意味する。特定の背景において、例えば競合分析を用いて、黄色ブドウ球菌のさらなるまたは他の毒素の結合の意図される機能を持つように設計される新規抗体に関して選択するかまたはスクリーニングする場合、何が競合の適切なレベルであるかの基準として、相対阻害のより高い閾値を設定することが望ましい可能性もある。したがって、例えば、競合結合に関して、基準を設定することが可能であり、ここで、抗体が十分に競合性であると見なされる前に、少なくとも４０％の相対阻害が検出されるか、あるいは少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％またはさらに少なくとも１００％が検出される。

【0148】

具体的には、＃ＡＢ−２４と称される抗体の可変領域、特にＣＤＲ配列の少なくとも１つ、好ましくはＣＤＲ配列の少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つまたは少なくとも６つ、あるいは機能的に活性であるそのＣＤＲ変異体を含む抗体を提供する。より具体的には、＃ＡＢ−２４と称される抗体を提供する。

【0149】

具体的には、寄託される物質、例えば寄託されるプラスミドの１つまたは両方ならびに／あるいは寄託される宿主細胞の１つまたは両方を使用して、＃ＡＢ−２４抗体または任意のその機能的に活性である変異体を産生してもよい。

【0150】

特定の側面にしたがって、本発明のプラスミドにコードされる抗体から、例えば寄託される物質の部分配列を使用して、＃ＡＢ−２４抗体またはその任意の機能的に活性である変異体を操作して、抗体を得てもよい。

【0151】

さらなる特定の側面にしたがって、ＤＳＭ２６７４７および／またはＤＳＭ２６７４８の下に寄託される宿主細胞によって産生される抗体から、例えば寄託される物質の部分配列を使用して、＃ＡＢ−２４抗体またはその任意の機能的に活性である変異体を操作して、＃ＡＢ−２４抗体または任意のその機能的に活性である変異体を得てもよい。

【0152】

具体的には、＃ＡＢ−２４変異体は、例えばＣＤＲ配列の少なくとも１つに部分的改変を伴い、機能的に活性であるＣＤＲ変異体である。

【0153】

特定の側面において、本発明は、重鎖および軽鎖を含み、任意の重鎖またはＶＨ可変領域またはそれぞれのＣＤＲが、それぞれの寄託されるプラスミドから、そして／またはそれぞれの寄託される宿主細胞から得られるようなアミノ酸配列を含む、こうした変異体抗体、好ましくはモノクローナル抗体、最も好ましくはヒト抗体を提供する。

【0154】

特定の側面において、本発明は、重鎖および軽鎖を含み、任意の軽鎖またはＶＬ可変領域またはそれぞれのＣＤＲが、それぞれの寄託されるプラスミドから、そして／またはそれぞれの寄託される宿主細胞から得られるようなアミノ酸配列を含む、こうした変異体抗体、好ましくはモノクローナル抗体、最も好ましくはヒト抗体を提供する。

【0155】

特定の側面において、本発明は、重鎖および軽鎖を含み、任意の重鎖および軽鎖、またはＶＨ／ＶＬ可変領域、またはそれぞれのＣＤＲが、それぞれの寄託されるプラスミドから、そして／またはそれぞれの寄託される宿主細胞から得られるようなアミノ酸配列を含む、こうした変異体抗体、好ましくはモノクローナル抗体、最も好ましくはヒト抗体を提供する。

【0156】

特定の側面において、本発明はまた、それぞれの結合配列、例えば寄託される物質から得られるような可変配列および／またはＣＤＲ配列を含む、こうした変異体抗体も提供し、ここで結合配列は、寄託される物質から得られるようなアミノ酸配列に、少なくとも７０％、または少なくとも８０％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有する配列を含み、そして変異体は機能的に活性である変異体である。

【0157】

本明細書に記載するように、１つの側面において、本発明は、例えば、Ｈｌａ、ＬｕｋＳＦ、ＬｕｋＥＤおよびＨｉｇＣＢに対する結合に関して、モノクローナル抗体＃ＡＢ−２４と競合する能力によって特徴付けられる抗体分子を提供する。＃ＡＢ−２４は、本発明者らが単離し、そして特徴付けた、ヒトＩｇＧ１抗体である。＃ＡＢ−２４の成熟重鎖可変鎖は、例えば、ＤＳＭ２６７４７の宿主細胞を使用して産生される。＃ＡＢ−２４の成熟軽鎖可変鎖は、例えば、ＤＳＭ２６７４８の宿主細胞を使用して産生される。

【0158】

本発明の好ましい抗体は、前記の個々の抗原に、高いアフィニティで、特に高いオンおよび／または低いオフ速度で、あるいは結合の高いアビディティで、結合する。抗体の結合アフィニティは、通常、解離定数（ＫｄまたはＫ_Ｄ）として知られる、抗原結合部位の半数が占有される抗体濃度に関して特徴付けられる。通常、結合剤は、Ｋｄ＜１０^−８Ｍ、好ましくはＫｄ＜１０^−９Ｍの高アフィニティ結合剤と見なされ、さらにより好ましくはＫｄは＜１０^−１０Ｍである。

【0159】

にもかかわらず、特定の好ましい態様において、個々の抗原結合アフィニティは、例えば少なくとも２つの抗原に結合する際、例えば１０^−６未満であり、そして最大１０^−８ＭであるＫｄで、中程度のアフィニティである。

【0160】

本発明にしたがって、好ましくは、必要であればアフィニティ成熟プロセスと組み合わせて、中程度のアフィニティの結合剤を提供してもよい。

【0161】

アフィニティ成熟は、ターゲット抗原に対して増加したアフィニティを持つ抗体が産生されるプロセスである。本明細書に開示する、本発明の多様な態様にしたがって、アフィニティ成熟抗体を生成するため、当該技術分野で入手可能なアフィニティ成熟ライブラリーを調製し、そして／または用いる、任意の１またはそれより多い方法を使用してもよい。例示的なこうしたアフィニティ成熟法および使用法、例えばランダム突然変異誘発、細菌ミューテーター株継代、部位特異的突然変異誘発、突然変異ホットスポットターゲティング、簡潔（ｐａｒｓｉｍｏｎｉｏｕｓ）突然変異誘発、抗体シャフリング、軽鎖シャフリング、重鎖シャフリング、ＣＤＲ１および／またはＣＤＲ１突然変異誘発、ならびに本明細書に開示する本発明の多様な態様にしたがった方法および使用の実施を受け入れ可能なアフィニティ成熟ライブラリーを産生し、そして用いる方法には、例えば：Ｐｒａｓｓｌｅｒら（２００９）； Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ， Ｖｏｌ． １（４）， ｐｐ． ５７１−５８３； Ｓｈｅｅｄｙら（２００７）， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ａｄｖ．， Ｖｏｌ． ２５（４）， ｐｐ． ３３３−３５２； ＷＯ２０１２／００９５６８； ＷＯ２００９／０３６３７９； ＷＯ２０１０／１０５２５６； ＵＳ２００２／０１７７１７０； ＷＯ２００３／０７４６７９に開示されるものが含まれる。

【0162】

アミノ酸突然変異誘発、または免疫グロブリン遺伝子セグメントにおける体細胞突然変異の結果を含む、抗体の構造変化と共に、抗原に対する結合部位の変異体を産生し、そしてより高いアフィニティに関して選択する。アフィニティ成熟抗体は、親抗体より数対数倍（ｌｏｇｆｏｌｄ）大きいアフィニティを示しうる。単一の親抗体をアフィニティ成熟に供してもよい。ターゲット抗原に対して類似の結合アフィニティを持つ抗体の別のプールは、アフィニティ成熟単一抗体またはこうした抗体のアフィニティ成熟プールを得るために変動する親構造と見なされうる。

【0163】

本発明記載の抗体の好ましいアフィニティ成熟変異体は、結合アフィニティの少なくとも１０倍増加、好ましくは少なくとも１００倍増加を示す。親分子のそれぞれのライブラリーを使用する選択キャンペーンの経過において、結合アフィニティＫｄ＜１０^−８Ｍの特異的ターゲット結合特性を有する本発明の抗体を得るため、中程度の結合アフィニティを有する抗体いずれかとともにアフィニティ成熟を使用してもよい。あるいは、本発明にしたがった抗体のアフィニティ成熟によって、アフィニティをさらにより増加させて、１０^−９Ｍ未満、好ましくは１０^−１０Ｍ未満、またはさらに１０^−１１Ｍ未満、最も好ましくはピコモル範囲のＫｄに対応する高い値を得ることも可能である。

【0164】

補体の活性化を使用する別の経路を通じて、食細胞性エフェクター細胞を活性化してもよい。微生物上の表面抗原に結合する抗体は、Ｆｃ領域との補体カスケードの最初の成分を誘引し、そして「古典的」補体系の活性化を開始する。これらは、食細胞性エフェクター細胞の刺激を生じ、これは最終的に、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）によってターゲットを殺す。

【0165】

特異的な態様にしたがって、本発明の抗体は、標準的ＡＤＣＣまたはＣＤＣアッセイにおいて測定されるように、免疫エフェクター細胞の存在下で、細胞傷害性活性を有する。対照に比較した際、細胞溶解の割合に有意な増加があれば、ＡＤＣＣまたはＣＤＣアッセイのいずれかによって決定されるような細胞傷害活性を、本発明の抗体に関して示してもよい。ＡＤＣＣまたはＣＤＣに関連する細胞傷害活性は、好ましくは、絶対パーセント増加として測定され、これは好ましくは５％より高く、より好ましくは１０％より高く、さらにより好ましくは２０％より高い。

【0166】

本発明は、特に、多重特異性を持つ中和抗体を同定するプロセスによって、例えば交差反応性発見選択スキームによって得られる、交差反応性抗体を提供する。したがって、２つのターゲット、ターゲットＡおよびＢとの反応性を示す抗体を含む抗体ライブラリーをまず、ターゲットの１つ、例えばターゲットＡとの反応性に関して選択し、その後、もう一方のターゲット、例えばターゲットＢとの反応性に関して選択してもよい。各連続選択周期は、生じるプールの反応強度を、両方のターゲットに向けて強化する。したがって、この方法は、２つの異なるターゲットに向けられる交差反応性、および病原体を交差中和する能力を持つ抗体を同定するために特に有用である。該方法を拡張して、さらなるターゲット（単数または複数）に向かう濃縮のさらなる周期を含めることによって、さらなるターゲットに向かって反応性を示す抗体を同定することも可能である。

【0167】

交差反応性抗体は、いくつかの例で、単一の抗原に対するスクリーニングを通じて出現する。交差反応性クローンを単離する可能性を増加させるため、多数の抗原に対する前進性のスクリーニングによって、多数の選択圧を適用するであろう。特別なｍＡｂ選択戦略は、交互の様式で、異なる毒素成分を使用する。例えば、最も強力な中和抗Ｈｌａ ｍＡｂを、次いで、黄色ブドウ球菌感染中の二成分毒素の主なターゲットを代表する、ヒト好中球上のＰＶＬおよびＰＶＬ様毒素への結合に関して試験する。

【0168】

抗体ライブラリー、例えば酵母ディスプレイ抗体ライブラリーから抗体を選択するために組換え毒素を用いてもよい。

【0169】

どちらの場合でも、交差反応性は、当該技術分野に知られる抗体最適化法によって、さらに改善されうる。例えば、本明細書記載の免疫グロブリン鎖の可変領域の特定の領域を、軽鎖シャフリング、目的地（ｄｅｓｔｉｎａｔｉｏｎａｌ）突然変異誘発、ＣＤＲ融合（ａｍａｌｇａｍａｔｉｏｎ）、ならびに選択したＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域の定方向突然変異誘発を含む、１またはそれより多い最適化戦略に供してもよい。

【0170】

望ましい中和特性を持つ抗体を同定するためのスクリーニング法は、ターゲット細胞への毒素結合の阻害、二量体またはオリゴマー形成の阻害、孔形成の阻害、細胞溶解の阻害、サイトカイン、リンホカイン、および任意の炎症誘発性シグナル伝達の誘導の阻害、ならびに／あるいは動物に対するｉｎ ｖｉｖｏ効果（死亡、溶血、オーバーシュート炎症、臓器不全）の阻害であってもよい。例えば標準アッセイを用いて、望ましい毒素への直接結合に基づいて、反応性を評価してもよい。

【0171】

ひとたび望ましい特性を持つ交差中和抗体が同定されたら、抗体によって認識される単数または複数のドミナントエピトープを決定してもよい。エピトープマッピングのための方法が、当該技術分野に周知であり、そして例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ， ＷｅｓｔｗｏｏｄおよびＨａｙ監修， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， ２００１に開示される。

【0172】

エピトープマッピングは、抗体が結合するエピトープの同定に関する。タンパク質上のエピトープの位置を決定するために当業者に知られる多くの方法があり、これには、抗体−抗原複合体の結晶学分析、競合アッセイ、遺伝子断片発現アッセイ、および合成ペプチドに基づくアッセイが含まれる。参照抗体と「同じエピトープに結合する」抗体は、本明細書において、以下の方式で理解される。２つの抗体が、同一であるかまたは立体的に重複するエピトープを認識する場合、抗体は、同じまたは本質的に同じ、あるいは実質的に同じエピトープと結合すると称される。２つの抗体が、同一のまたは立体的に重複するエピトープに結合するかどうかを決定するための、一般的に用いられる方法は、競合アッセイであり、該方法は、標識抗原または標識抗体のいずれかを用いて、多くの異なる形式のすべてに設置可能である。通常、抗原を９６ウェルプレート上に固定して、そして放射性または酵素標識を用いて、非標識抗体が、標識抗体の結合を遮断する能力を測定する。

【0173】

ひとたび、望ましい交差中和特性を持つ抗体が同定されたら、抗体断片を含むこうした抗体を、当該技術分野に周知の方法によって産生させることも可能であり、例えば、こうした方法には、ハイブリドーマ技術または組換えＤＮＡ技術が含まれる。

【0174】

ハイブリドーマ法において、マウスまたは他の適切な宿主動物、例えばハムスターを免疫して、免疫に用いたタンパク質に特異的に結合するであろう抗体を産生するかまたは産生することが可能なリンパ球を誘発する。あるいは、リンパ球をｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫してもよい。次いで、適切な融合剤、例えばポリエチレングリコールを用いて、リンパ球を骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する。

【0175】

ハイブリドーマ細胞が増殖している培地を、抗原に対して向けられるモノクローナル抗体の産生に関してアッセイする。好ましくは、免疫沈降によって、またはｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイ、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって、ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性を決定する。

【0176】

組換えモノクローナル抗体は、例えば、必要な抗体鎖をコードするＤＮＡを単離し、そして周知の組換え発現ベクター、例えば抗体配列をコードするヌクレオチド配列を含む本発明のプラスミドまたは発現カセット（単数または複数）を用いて、発現のためのコード配列で、組換え宿主細胞をトランスフェクションすることによって産生可能である。組換え宿主細胞は、上に記載するものなどの原核および真核細胞であることも可能である。

【0177】

特定の側面にしたがって、遺伝子操作のためにヌクレオチド配列を用いて、抗体をヒト化するか、あるいは抗体のアフィニティまたは他の特性を改善することも可能である。例えば、抗体を臨床試験およびヒトにおける治療に用いる場合、定常領域を操作して、免疫反応を回避するために、ヒト定常領域により似せてもよい。抗体配列を遺伝子操作して、ターゲット毒素に対するより高いアフィニティおよび黄色ブドウ球菌に対するより高い有効性を得ることが望ましい可能性もある。当業者には、１またはそれより多いポリヌクレオチド変化を抗体に作製して、そしてなお、ターゲット毒素に対する結合能を維持することが可能であることが明らかであろう。

【0178】

多様な手段による抗体分子産生は、一般的によく理解される。米国特許６３３１４１５（Ｃａｂｉｌｌｙら）は、例えば、単一細胞において、単一のベクターから、または２つの別個のベクターから、同時に重鎖および軽鎖が発現される、抗体の組換え産生のための方法を記載する。Ｗｉｂｂｅｎｍｅｙｅｒら（１９９９， Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １４３０（２）：１９１−２０２）、ならびにＬｅｅおよびＫｗａｋ（２００３， Ｊ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０１ ：１８９−１９８）は、大腸菌の別個の培養において発現されるプラスミドを用いた、別個に産生される重鎖および軽鎖からのモノクローナル抗体の産生を記載する。抗体産生に適した多様な他の技術は、例えば、Ｈａｒｌｏｗら， ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ： Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．， （１９８８）に提供される。

【0179】

望ましい場合、本発明の抗体、例えば＃ＡＢ−２４抗体を配列決定し、そして次いで、発現または増殖のため、ポリヌクレオチド配列をベクター内にクローニングしてもよい。抗体をコードする配列を宿主細胞中のベクターにおいて維持してもよいし、そして次いで、宿主細胞株を拡大して、そして将来の使用のために凍結してもよい。細胞培養における組換えモノクローナル抗体の産生は、当該技術分野に知られる手段によって、Ｂ細胞からの抗体遺伝子のクローニングを通じて実施可能である。

【0180】

別の側面において、本発明は、本発明の組換え抗体の産生のためにコードする配列を含む単離核酸を提供する。

【0181】

別の側面において、本発明は、本発明の組換えエピトープの産生のためにコードする配列を含む単離核酸、または本発明のこうしたエピトープを含む分子を提供する。しかし、本発明のエピトープはまた、例えば当該技術分野に周知の合成法のいずれかを通じて、合成的に産生されてもよい。

【0182】

核酸をコードする抗体またはエピトープは、任意の適切な特性を有し、そして任意の適切な特徴またはその組み合わせを含むことも可能である。したがって、例えば、抗体またはエピトープをコードする核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはそのハイブリッドの形であってもよく、そしてこれには、非天然存在塩基、修飾主鎖、例えば核酸の安定性を促進するホスホロチオエート主鎖、またはその両方が含まれてもよい。核酸は、好適には、ターゲット宿主細胞（単数または複数）における望ましい発現、複製、および／または選択を促進する特徴を含む、本発明の発現カセット、ベクターまたはプラスミド中に取り込まれてもよい。こうした特徴の例には、複製起点成分、選択遺伝子成分、プロモーター成分、エンハンサー要素成分、ポリアデニル化配列成分、終結成分等が含まれてもよく、これらの多くの適切な例が知られる。

【0183】

本開示はさらに、１またはそれより多い本明細書記載のヌクレオチド配列を含む組換えＤＮＡ構築物を提供する。これらの組換え構築物を、任意の開示する抗体をコードするＤＮＡ分子が挿入されているベクター、例えばプラスミド、ファージミド、ファージまたはウイルスベクターと組み合わせて用いる。

【0184】

培養中の連続細胞株によって抗体分子を産生する任意の方法を用いて、モノクローナル抗体を産生する。モノクローナル抗体を調製するために適した方法の例には、Ｋｏｈｌｅｒらのハイブリドーマ法（１９７５， Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７）およびヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（Ｋｏｚｂｏｒ， １９８４， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３３：３００１；およびＢｒｏｄｅｕｒら， １９８７， Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， （Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）， ｐｐ． ５１−６３）が含まれる。

【0185】

本発明はさらに、本明細書に記載するような抗体または免疫原および薬学的に許容されうるキャリアーまたは賦形剤を含む、薬学的組成物を提供する。これらの薬学的組成物を、ボーラス注射または注入として、あるいは連続注入によって、本発明にしたがって投与してもよい。投与のこうした手段を促進するのに適した薬学的キャリアーが当該技術分野に周知である。

【0186】

薬学的に許容されうるキャリアーには、一般的に、本発明によって提供される抗体または関連組成物または組み合わせと生理学的に適合する、あらゆる適切な溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤等が含まれる。薬学的に許容されうるキャリアーのさらなる例には、無菌水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール等、ならびにそのいずれかの組み合わせが含まれる。

【0187】

１つのこうした側面において、抗体を、所望の投与経路に適した１またはそれより多いキャリアーと組み合わせてもよく、抗体を、例えば、ラクトース、スクロース、デンプン、アルカン酸のセルロースエステル、ステアリン酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウムおよびカルシウム塩、アラビアゴム、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリジン、ポリビニルアルコールのいずれかと混合してもよく、そして場合によって、慣用的投与のため、さらに錠剤化する（ｔａｂｌｅｔｔｅｄ）かまたは被包してもよい。あるいは、抗体を、生理食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロースコロイド性溶液、エタノール、コーン油、ピーナツ油、綿実油、ゴマ油、トラガカントゴム、および／または多様な緩衝剤中に溶解してもよい。他のキャリアー、アジュバント、および投与様式は、薬学業において周知である。キャリアーには、徐放物質または時間遅延物質、例えばモノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルのみ、またはワックスと合わせたもの、あるいは当該技術分野に周知の他の物質が含まれてもよい。

【0188】

さらなる薬学的に許容されうるキャリアーが当該技術分野に知られ、そして例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳに記載される。液体配合物は、溶液、エマルジョンまたは懸濁物であることも可能であり、そしてこれには、懸濁剤、安定化剤、界面活性剤、保存剤、およびキレート剤などの賦形剤が含まれてもよい。

【0189】

本発明の抗体または免疫原および１またはそれより多い療法活性剤が配合される薬学的組成物が意図される。望ましい度合いの純度を有する前記免疫グロブリンを、場合によって薬学的に許容されうるキャリアー、賦形剤または安定化剤と、凍結乾燥配合物または水溶液の形で混合することによって、本発明の抗体または免疫原の安定配合物を保存のために調製する。ｉｎ ｖｉｖｏ投与に用いようとする配合物は、特に、無菌であり、好ましくは無菌水溶液の形である。これは、無菌濾過膜または他の方法を通じた濾過によって容易に達成される。本明細書に開示する抗体および他の療法活性剤はまた、イムノリポソームとして配合され、そして／または微小カプセル中に捕捉されることも可能である。

【0190】

本発明の抗体または免疫原を含む薬学的組成物の投与を、経口、皮下、静脈内、鼻内、耳内（ｉｎｔｒａｏｔｉｃａｌｌｙ）、経皮、粘膜、例えばジェル、軟膏（ｓａｌｖｅｓ）、ローション、クリーム等で局所、腹腔内、筋内、例えば吸入技術または肺送達系を使用して肺内、膣内、非経口、直腸、または眼内を含む多様な経路で行ってもよい。

【0191】

非経口投与に用いられるような例示的な配合物には、例えば無菌溶液、エマルジョンまたは懸濁物のような、皮下、筋内または静脈内注射に適したものが含まれる。

【0192】

１つの態様において、本発明の抗体または免疫原は、例えば疾患を修飾するかまたは防止する単一療法として、被験体に投与される、唯一の療法活性剤である。

【0193】

あるいは、本発明の抗体または免疫原を、限定されるわけではないが、標準的治療、例えば抗生物質、ステロイドおよび炎症の非ステロイド阻害剤、および／または例えば抗細菌または抗炎症剤を使用する、他の抗体に基づく療法を含めて、１またはそれより多い他の療法剤または予防剤と組み合わせて投与する。

【0194】

併用療法は、特に、例えばＭＲＳＡ感染を治療するのに用いられるような、標準的な投与計画を使用する。これには、抗生物質、例えばチゲサイクリン、リネゾリド、メチシリンおよび／またはバンコマイシンが含まれうる。

【0195】

併用療法において、抗体を混合物として、あるいは１またはそれより多い他の療法投与計画と組み合わせて、例えば同時療法の前に、同時に、または後にのいずれかで投与してもよい。

【0196】

いくつかの場合、免疫原の予防的投与は、本発明の免疫原を含むワクチン、すなわち一価ワクチンを使用してもよい。にもかかわらず、同じまたは異なるターゲット病原体に対する免疫反応を誘導するため、異なる免疫原を含む多価ワクチンを使用してもよい。

【0197】

本発明の抗体、免疫原またはそれぞれの薬学的調製物の生物学的特性を、細胞、組織、および全生物実験において、ｅｘ ｖｉｖｏで特徴付けてもよい。当該技術分野に知られるように、薬剤はしばしば、疾患または疾患モデルに対する治療に関する薬剤の有効性を測定するため、あるいは薬剤の薬物動態学、薬力学、毒性、および他の特性を測定するため、限定されるわけではないが、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、およびサルを含む動物において、ｉｎ ｖｉｖｏで試験される。動物は、疾患モデルと称されることも可能である。療法剤は、しばしば、限定されるわけではないが、ヌードマウス、ＳＣＩＤマウス、異種移植マウス、およびトランスジェニックマウス（ノックインおよびノックアウトを含む）を含むマウスで試験される。こうした実験は、抗体が、能動または受動免疫療法に際して、適切な半減期、エフェクター機能、（交差）中和活性および／または免疫反応を伴う療法剤としてまたは予防剤として、使用される能力の決定のための意義あるデータを提供しうる。任意の生物、好ましくは哺乳動物が、試験に使用可能である。例えば、ヒトに対する遺伝的類似性のため、霊長類、サルが適切な療法モデルである可能性もあり、そしてしたがって、これらを用いて、対象の剤または組成物の有効性、毒性、薬物動態学、薬力学、半減期、または他の特性を試験することも可能である。ヒトにおける試験は、最終的には、薬剤としての認可に必要であり、そしてしたがって、もちろん、これらの実験が意図される。したがって、本発明の抗体、免疫原およびそれぞれの薬学的組成物を、ヒトにおいて試験して、療法的または予防的有効性、毒性、免疫原性、薬物動態学、および／または他の臨床特性を決定してもよい。

【0198】

本発明はまた、診断目的のため、例えば生物学的液体試料中の免疫試薬またはターゲットとしての毒素または抗体を検出し、そしてその濃度を定量的に決定する方法において使用するための、本発明の対象抗体も提供する。

【0199】

本発明はまた、生物学的試料、例えば体液において、毒素または黄色ブドウ球菌感染のレベルを検出するための方法であって、本発明の抗体と試料を接触させる工程を含む、前記方法も提供する。本発明の抗体を、任意の既知のアッセイ法、例えば競合的結合アッセイ、直接および間接的サンドイッチアッセイ、免疫沈降アッセイ、ならびに酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）において使用してもよい。

【0200】

本発明にしたがって用いられるような体液には、被験体の生物学的試料、例えば組織抽出物、尿、血液、血清、便および痰が含まれる。

【0201】

１つの態様において、方法は、固体支持体を、ターゲット、例えば本発明の抗体によってターゲットとされる毒素の少なくとも１つとの複合体を特異的に形成する、特定のタイプの抗体断片の過剰量と、抗体が固体支持体表面に付着するのを可能にする条件下で、接触させる工程を含む。抗体が付着している、生じた固体支持体を、次いで、生物学的液体中のターゲットが抗体に結合し、そしてターゲット−抗体複合体を形成するように、生物学的液体試料と接触させる。複合体を検出可能マーカーで標識してもよい。あるいは、複合体の形成前に、ターゲットまたは抗体のいずれかを標識してもよい。例えば、検出可能マーカー（標識）を抗体にコンジュゲート化してもよい。次いで、複合体を検出し、そして定量的に決定し、それによって、生物学的液体試料中のターゲットを検出し、そしてその濃度を定量的に決定することも可能である。

【0202】

特定の適用のため、本発明の抗体を、有機分子、酵素標識、放射性標識、着色標識、蛍光標識、色素原標識、発光標識、ハプテン、ジゴキシゲニン、ビオチン、金属複合体、金属、コロイド性金およびその混合物からなる群より選択される、標識またはレポーター分子にコンジュゲート化する。標識またはレポーター分子にコンジュゲート化された抗体を、例えばアッセイ系または診断法において用いて、例えば黄色ブドウ球菌感染またはそれに関連する疾患状態を診断してもよい。

【0203】

本発明の抗体を、例えば結合アッセイ（例えばＥＬＩＳＡ）および結合研究において、前記コンジュゲートの単純な検出を可能にする他の分子にコンジュゲート化してもよい。

【0204】

本発明の別の側面は、１またはそれより多い抗体に加えて、多様な診断または療法剤を含んでもよい、抗体を含むキットを提供する。キットにはまた、診断または療法において使用するための使用説明書も含まれてもよい。こうした使用説明書は、例えば、キット中に含まれているデバイス、例えば診断目的のために生物学的試料を調製する、例えば、疾患を診断しようとするそれぞれの毒素（単数または複数）を決定する前に、細胞および／またはタンパク質含有分画を分離するためのツールまたはデバイス上に含まれてもよい。好適には、こうしたキットには、１またはそれより多くの本明細書記載の多様な診断法において使用可能な抗体および診断剤または試薬が含まれる。別の好ましい態様において、キットには、使用前に混合して近い将来の投与のための注射可能組成物を形成可能な薬学的に許容されうるキャリアー（単数または複数）と組み合わせて、例えば凍結乾燥型の抗体が含まれる。

【0205】

＃ＡＢ−２４（本明細書において、＃９０２８ともまた称される）と称される抗体、特に抗体軽鎖および／または重鎖は、本明細書に示すような寄託番号の下に、ＤＳＭＺ−Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ， Ｍａｓｃｈｅｒｏｄｅｒ Ｗｅｇ １ｂ／ Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒａβｅ ７Ｂ， ３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ（ＤＥ）に寄託される生物学的物質によって、さらに特徴付けられる。

【0206】

ＤＳＭ ２６７４７は、＃ＡＢ−２４重鎖（ＡＢ−２４−ＨＣ）のコード配列を含むプラスミドで形質転換された大腸菌宿主細胞：大腸菌ＤＨ５アルファＡＢ−２４−ＨＣ＝ＤＳＭ ２６７４７、寄託日： ２０１３年１月８日；寄託者： Ａｒｓａｎｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＧｍｂＨ， オーストリア・ウィーンである。

【0207】

ＤＳＭ ２６７４８は、＃ＡＢ−２４軽鎖（ＡＢ−２４−ＬＣ）のコード配列を含むプラスミドで形質転換された大腸菌宿主細胞：大腸菌ＤＨ５アルファＡＢ−２４−ＬＣ＝ＤＳＭ ２６７４８、寄託日： ２０１３年１月８日；寄託者： Ａｒｓａｎｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＧｍｂＨ， オーストリア・ウィーンである。

【0208】

以下の定義の主題は、本発明の態様と見なされる：
１． 黄色ブドウ球菌のアルファ毒素（Ｈｌａ）および少なくとも１つの二成分毒素に結合する少なくとも１つの多重特異性結合部位を含む、交差中和性抗体。

【0209】

２． 前記二成分毒素が、ガンマ溶血素、ＰＶＬ毒素およびＰＶＬ様毒素、好ましくはＨｌｇＡＢ、ＨｌｇＣＢ、ＬｕｋＳＦ、ＬｕｋＥＤ、ＬｕｋＧＨ、ＬｕｋＳ−ＨｌｇＢ、ＬｕｋＳＤ、ＨｌｇＡ−ＬｕｋＤ、ＨｌｇＡ−ＬｕｋＦ、ＬｕｋＧ−ＨｌｇＡ、ＬｕｋＥＦ、ＬｕｋＥ−ＨｌｇＢ、ＨｌｇＣ−ＬｕｋＤまたはＨｌｇＣ−ＬｕｋＦのいずれかのＦおよびＳ成分の同族および非同族対からなる群より選択される、定義１記載の抗体。

【0210】

３． 前記結合部位が、少なくとも２つまたは少なくとも３つの二成分毒素、好ましくは、ＨｌｇＡＢ、ＨｌｇＣＢ、ＬｕｋＳＦおよびＬｕｋＥＤ、好ましくはＨｌｇＡＢ、ＨｌｇＣＢ、ＬｕｋＳＦおよびＬｕｋＥＤのいずれかの少なくとも２つまたは３つに結合する、定義１または２記載の抗体。

【0211】

４． 前記結合部位が、ＣＤＲ結合部位、好ましくはＶＨおよび／またはＶＬ結合部位のＣＤＲ配列を含む部位である、定義１〜３のいずれか記載の抗体。

【0212】

５． 全長モノクローナル抗体、または結合部位を取り込んでいる少なくとも１つの抗体ドメインを含むその抗体断片であって、好ましくはネズミ、キメラ、ヒト化またはヒト抗体、重鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆｄ、ｓｃＦｖ、およびＶＨ、ＶＨＨまたはＶＬのような単一ドメイン抗体からなる群より選択される抗体、好ましくはヒトＩｇＧ１抗体である、定義１〜４のいずれか記載の抗体。

【0213】

６． １０^−８Ｍ未満、好ましくは１０^−９Ｍ未満のＫｄで、毒素の各々に結合するアフィニティを有する、定義１〜５のいずれか記載の抗体。

【0214】

７． 細胞に基づくアッセイにおいて、５０：１未満のｍＡｂ：毒素比（ｍｏｌ／ｍｏｌ）、好ましくは１０：１未満、より好ましくは１：１未満のＩＣ５０の、ｉｎ ｖｉｔｒｏ中和強度を示す、定義１〜６のいずれか記載の抗体。

【0215】

８． 動物においてターゲティングされた毒素を中和し、そしてｉｎ ｖｉｖｏで黄色ブドウ球菌病変形成、好ましくは肺炎、菌血症または敗血症、腹膜炎および骨髄炎のいずれかを阻害する、定義１から７のいずれか記載の抗体。

【0216】

９． ＃ＡＢ−２４と称される抗体と同じエピトープに結合する、定義１〜８のいずれか記載の抗体。

【0217】

１０． ＃ＡＢ−２４と称される抗体と同じ結合部位を含む、定義１〜９のいずれか記載の抗体。

【0218】

１１． ＤＳＭ２６７４７および／またはＤＳＭ２６７４８の下に寄託されている宿主細胞によって産生される抗体、またはその機能的に活性である変異体由来である、定義１〜１０のいずれか記載の抗体。

【0219】

１２． 定義１１記載の抗体であって、
（ａ）ＤＳＭ２６７４８の下に寄託されている宿主細胞によって産生される抗体軽鎖；および／または
（ｂ）ＤＳＭ２６７４７の下に寄託されている宿主細胞によって産生される抗体重鎖；
（ｃ）あるいは（ａ）および／または（ｂ）の機能的に活性である変異体
を含む、前記抗体。

【0220】

１３． ＤＳＭ２６７４８の下に寄託されている宿主細胞に含まれる、＃ＡＢ−２４−ＬＣと称される抗体軽鎖をコードし；そして／または
ＤＳＭ２６７４７の下に寄託されている宿主細胞に含まれる、＃ＡＢ−２４−ＨＣと称される抗体重鎖をコードする
ヌクレオチド配列を含むプラスミド。

【0221】

１４． 定義１〜１２のいずれか記載の抗体の軽鎖および／または重鎖を発現するコード配列を含む発現カセットであって、発現カセットまたはコード配列が定義１３記載のプラスミド由来である、前記発現カセット。

【0222】

１５． 宿主細胞を、定義１３のプラスミドまたは定義１４記載の発現カセットで形質転換する、定義１〜１２のいずれか記載の抗体を産生する方法。

【0223】

１６． 定義１３記載のプラスミドまたは定義１４記載の発現カセットを含む、宿主細胞。

【0224】

１７． ＤＳＭ２６７４７またはＤＳＭ２６７４８の下に寄託されている、定義１６記載の宿主細胞。

【0225】

１８． 定義１〜１２のいずれか記載の抗体を産生する方法であって、定義１６または１７記載の宿主細胞を、前記抗体を産生する条件下で培養するかまたは維持する、前記方法。

【0226】

１９． 候補防御抗体を同定する方法であって：
（ａ）抗体または抗体産生細胞を含有する試料を提供し；そして
（ｂ）試料中のまたは試料によって産生される抗体と、＃ＡＢ−２４と称される抗体によって認識されるエピトープの結合に関して評価する、ここで抗体およびエピトープの間の陽性反応が、候補防御抗体として抗体を同定する
前記方法。

【0227】

２０． 候補防御抗体を同定する方法であって：
（ａ）抗体または抗体産生細胞を含有する試料を提供し；そして
（ｂ）試料中のまたは試料によって産生される抗体と、黄色ブドウ球菌のアルファ毒素および少なくとも１つの二成分毒素の結合に関して評価する、ここで抗体および毒素の間の陽性反応が、候補防御抗体として抗体を同定する
前記方法。

【0228】

２１． 定義１〜１２のいずれか記載の抗体を産生する方法であって
（ａ）定義１９または２０にしたがって同定される候補防御抗体を提供し；そして
（ｂ）モノクローナル抗体、あるいは該候補防御抗体のヒト化型またはヒト型、あるいは候補防御抗体と同じエピトープ結合特異性を持つその誘導体を産生する
工程を含む、前記方法。

【0229】

２２． 定義１〜１２のいずれか記載の抗体を産生する方法であって
（ａ）＃ＡＢ−２４と称される抗体によって認識されるエピトープで、非ヒト動物を免疫し；
（ｂ）単離されたＢ細胞から不死化細胞株を形成し；
（ｃ）ｂ）において得られた細胞株をスクリーニングして、エピトープに結合するモノクローナル抗体を産生する細胞株を同定し；そして
（ｄ）モノクローナル抗体、あるいは該抗体のヒト化型またはヒト型、あるいはモノクローナル抗体と同じエピトープ結合特異性を持つその誘導体を産生する
工程を含む、前記方法。

【0230】

２３． 定義１〜１２のいずれか記載の抗体を産生する方法であって、
（ａ）黄色ブドウ球菌のアルファ毒素および少なくとも１つの二成分毒素で、非ヒト動物を免疫し、そして抗体を産生するＢ細胞を単離し；
（ｂ）単離Ｂ細胞から不死化細胞株を形成し；
（ｃ）細胞株をスクリーニングして、黄色ブドウ球菌のアルファ毒素および少なくとも１つの二成分毒素に結合するモノクローナル抗体を産生する細胞株を同定し；そして
（ｄ）モノクローナル抗体、あるいは該抗体のヒト化型またはヒト型、あるいは該モノクローナル抗体と同じエピトープ結合特異性を持つその誘導体を産生する
工程を含む、前記方法。

【0231】

２４． 黄色ブドウ球菌感染のリスクがあるかまたは該感染を患っている被験体を治療する際に使用するための、定義１〜１２のいずれか記載の抗体であって、治療が、被験体における感染を限定するのに有効な量の抗体を被験体に投与して、前記感染から生じる疾患状態を寛解させるか、または黄色ブドウ球菌肺炎病変形成を阻害する工程を含む、前記抗体。

【0232】

２５． 黄色ブドウ球菌感染に対して防御するための、定義２５記載の使用のための抗体。

【0233】

２６． 抗体を非経口または粘膜配合物中で投与する、定義２４または２５記載の使用のための抗体。

【0234】

２７． 定義１〜１２のいずれか記載の抗体の薬学的調製物であって、好ましくは、非経口または粘膜配合物を含み、場合によって薬学的に許容されうるキャリアーまたは賦形剤を含有する、前記調製物。

【0235】

２８． 高毒素産生ＭＲＳＡ感染を含むいかなる黄色ブドウ球菌感染、例えば壊死性肺炎、ならびにフルンケル症およびカルブンケル症における毒素産生を検出するための診断に使用するための定義１〜１２のいずれか記載の抗体。

【0236】

２９． 定義２８記載の使用のための抗体であって、該抗体と被験体の体液試料を接触させることによって、該被験体における黄色ブドウ球菌での全身感染がｅｘ ｖｉｖｏで決定される、ここで抗体の特異的免疫反応が感染を決定する、前記抗体。

【0237】

３０． 定義１〜１２のいずれか記載の抗体の診断調製物であって、場合によって標識を含む抗体および／または標識を含むさらなる診断試薬を含有する、前記調製物。

【0238】

３１． ＃ＡＢ−２４と称される抗体によって認識される、単離コンホメーションエピトープ。

【0239】

３２． （ａ）定義３１記載のエピトープ；
（ｂ）場合によって、（ａ）の前記エピトープと天然には関連しないさらなるエピトープ；および
（ｃ）キャリアー
を含む、免疫原。

【0240】

３３． 前記キャリアーが、薬学的に許容されうるキャリアーであり、好ましくは緩衝剤および／またはアジュバント物質である、定義３２記載の免疫原。

【0241】

３４． ワクチン配合物中で、好ましくは非経口使用のためである、定義３２または３３記載の免疫原。

【0242】

３５． 黄色ブドウ球菌感染から被験体を防御するか、前記感染から生じる疾患状態を防止するか、または黄色ブドウ球菌肺炎病変形成を阻害するのに有効な量の前記免疫原を投与することによって、被験体を治療する際に使用するための、定義３２〜３４記載の免疫原。

【0243】

３６． 防御免疫反応を誘発するための、定義３５記載の免疫原。

【0244】

３７． 定義１〜１２のいずれか記載の抗体または定義３１記載のエピトープをコードする、単離核酸。

【0245】

前述の説明は、以下の実施例を参照すると、より完全に理解されるであろう。こうした例は、しかし、単に、本発明の１またはそれより多い態様を実施する方法の代表であり、そして本発明の範囲を限定すると理解してはならない。

【実施例】

【0246】

実施例１：組換え毒素の生成
１０の黄色ブドウ球菌毒素−Ｈｌａ、ＬｕｋＦ、ＬｕｋＤ、ＬｕｋＳ、ＬｕｋＥ、ＨｌｇＡ、ＨｌｇＣ、ＨｌｇＢ、ＬｕｋＧおよびＬｕｋＨを、大腸菌（ＢＬ２１、ＲｏｓｅｔｔａまたはＴｕｎｅｒ ＤＥ３）中で組換え的に産生した（図１）。成熟タンパク質のための毒素遺伝子（ＳｉｇｎａｌＰ ４．１ Ｓｅｒｖｅｒ； ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＳｉｇｎａｌＰ／を用いて決定）を大腸菌発現のためにコドン最適化して、そして黄色ブドウ球菌株ＵＳＡ３００＿ＴＣＨ１５１６、ＭＲＳＡ２５２およびＭＳＨＲ１３１４の公表されるゲノム配列に基づいた遺伝子合成によって生成した（配列番号１〜２８、図９）。ＬｕｋＧおよびＬｕｋＨを除くすべての毒素を、タンパク質分解的に除去される、Ｎ末端ＮｕｓＡ／Ｈｉｓ_６タグを含む可溶型で発現した。精製は、典型的には、３つのクロマトグラフィ工程、１）ＩＭＡＣ（固定金属アフィニティカラム）、２）陽イオン交換またはＩＭＡＣ、および３）サイズ排除クロマトグラフィからなった。ＬｕｋＧおよびＬｕｋＨは、不溶性型でタグを伴わずに発現され、タンパク質は封入体から再フォールディングされて、そして精製され；精製は、ＬｕｋＨに関してはサイズ排除カラム上の２工程から、そしてＬｕｋＧに関しては、陽イオン交換上の１工程およびｐＨ１０．２〜１１．０での陰イオン交換上の１工程からなった。

【0247】

純度（ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる）および単量体状態（サイズ排除による）に関してタンパク質をアッセイし、そして二次構造（円二色性によって決定）を、入手可能な場合は文献データと比較した。すべてのタンパク質を、アミノ反応性試薬スルホ−ＮＨＳ−ＬＣビオチンで標識した。

【0248】

実施例２：毒素結合性ヒトモノクローナル抗体の選択
ＷＯ２００９／０３６３７９Ａ２、ＷＯ２０１２００９５６８およびＷＯ２０１０１０５２５６にしたがって発展させた酵母表面ディスプレイライブラリーによって、毒素結合抗体を選択した。毒素分子を組換え大腸菌産生タンパク質として発現させ、そしてビオチンで標識した。高純度および完全性に関して、そしてまた機能性に関して、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイで、そして実施例３に記載するようなマウスの毒素曝露によってｉｎ ｖｉｖｏで、すべての毒素を試験した。

【0249】

およそ１０^９〜１０の多様性で、全長ヒトＩｇＧ１抗体を発現するよう操作された酵母細胞のライブラリーを、異なる濃度のビオチン標識毒素とインキュベーションした。磁気ビーズ選択、およびいくつかの連続する（最大５回）選択周期で、ストレプトアビジン二次試薬を使用する蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）によって、毒素への結合能を持つ抗体を発現している酵母細胞を単離した。次いで、選択した酵母クローンによって抗体を産生し、そしてプロテインＡアフィニティクロマトグラフィによって精製した。ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ装置［Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ］を用いたインターフェロメトリー測定によって、異なる毒素への個々の可溶性ｍＡｂの結合を確認し；ビオチン化抗原または抗体をセンサー上に固定し、そして抗体Ｆａｂ断片のまたは抗原の会合および解離を、それぞれ（典型的には２００ｎＭ）、溶液中で、測定した。測定した動力学パラメータ（ｋｏｎおよびｋｏｆｆ）に基づいて、アフィニティ（Ｋｄ値）を計算した。

【0250】

実施例３：多数のブドウ球菌外毒素を中和することが可能なヒトｍＡｂの同定。

【0251】

まず、ユニークなＣＤＲ配列を持つ１２のＨｌａ結合ｍＡｂを、ウサギ赤血球またはヒト肺上皮細胞株Ａ５４９のいずれかを用いた２つの異なるｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、Ｈｌａ中和に関して試験した。ヒト肺上皮細胞（Ａ５４９、ＨＰＡＣＣ ＃８６０１２８０４）を用いた毒素阻害アッセイのため、細胞をトリプシン処理し、そして前日に、ウェル（９６ウェル半面積発光プレート、Ｇｒｅｉｎｅｒ、オーストリア）あたり２０，０００細胞の密度で、１０％ＦＣＳおよびＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐを補ったＦ１２Ｋ培地（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）中でプレーティングした。別個の希釈プレートにおいて、５％ＦＣＳおよびＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐを補ったＦ１２Ｋ培地（＝Ａ５４９細胞培地）中で、抗体を連続希釈して、そして固定された濃度［３．０３ｎＭ］で、細菌培養上清から精製されたアルファ溶血素（Ｈｌａ）と混合した。室温での１時間のプレインキュベーション工程の後、接着性Ａ５４９細胞上の植え付け培地を廃棄し、そしてｍＡｂ−毒素混合物によって置換した。細胞を３７℃＋５％ＣＯ２で６時間中毒させ、そして次いで、製造者の指示にしたがって、商業的に入手可能なキット（Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存度アッセイ；Ｐｒｏｍｅｇａ、米国）を用いて、生存度を測定した。偽処理対照に比較して、％生存度を計算した。以下の式：％阻害＝［（毒素のみの生存度−阻害された活性）／（毒素のみの生存度）］ｘ１００を用いて、毒素活性の％阻害を計算した。

【0252】

ウサギ赤血球溶血阻害のため、ニュージーランド・ホワイト・ウサギ（Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃｓ ＧｍｂＨ、ドイツ）からウサギＥＤＴＡ−全血を得た。血液を、１：１で、ＰＢＳ Ｃａ／Ｍｇ不含（ＰＡＡ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、オーストリア）で希釈し、そして５０ｍｌポリプロピレン試験管中、１５ｍｌ ＬＳＭ １０７７（ＰＡＡ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、オーストリア）上に１５ｍｌ希釈血液を重層することによって、勾配を調製した。６８０ｘｇ（ＲＴ、ブレーキなし）での遠心分離後、血小板、血漿、ＰＢＭＣおよびＦｉｃｏｌｌを吸引によって除去し、そして廃棄した。残ったＲＢＣペレットを４０ｍｌ ＰＢＳ Ｃａ／Ｍｇ不含で、２回洗浄し（６８０ｘｇで遠心分離、ＲＴ、ブレーキなし）、そして最後に、２０ｍｌ ＰＢＳ Ｃａ／Ｍｇ不含に再懸濁した。赤血球の完全性および細胞数を標準的血球計数器で決定した。モノクローナル抗体を用いた中和アッセイのため、抗体をＰＢＳ中で連続希釈し、そして固定された濃度［１２．１２ｎＭ］で、アルファ溶血素と混合した。溶血アッセイを、１時間のプレインキュベーション工程の後に開始して、抗体−毒素結合を可能にした。ＰＢＳ Ｃａ／Ｍｇ不含中で希釈したウェルあたり５ｘ１０Ｅ７のウサギ赤血球を添加した。以下の式：％阻害＝［（毒素のみの溶血−阻害された活性）／（毒素のみの溶血）］ｘ１００を用いて、毒素活性の％阻害を計算した。

【0253】

１２のｍＡｂのうち７つは、非常に強力なものから弱く中和するものまでの範囲で、試験した濃度で、中和活性を示した（図２）。これらの７つの抗体は、Ｋｄ＝９→３００ｎｍ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ［Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ］によって測定）の範囲のアフィニティ、およびアフィニティと強く相関する中和強度を有した。

【0254】

Ｈｌａ（無感作ライブラリー選択に用いたものよりも低い濃度）で再び調べるアフィニティ成熟ライブラリーの最初のシリーズを生成するために、これらの７つのｍＡｂのＣＤＲ配列を用いて、より高いアフィニティの子孫抗体を選択した。各系譜から、最高のアフィニティの子孫を、第二のシリーズのアフィニティ精製によって、さらにアフィニティ成熟させた。７つの系譜から生じた４２のｍＡｂは、最大１０，０００倍増加したアフィニティおよび中和強度を有した。多くのｍＡｂは、Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ ２４００装置（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を用いた高感度ＭＳＤ法を用いても、アフィニティ測定の限界に到達した。典型的には、２０ｐＭのビオチン化抗原を、多様な濃度のＦａｂまたはＩｇＧと、室温で１６時間インキュベーションして、そして未結合抗原を固定ＩｇＧ上に捕捉した；ＦａｂまたはＩｇＧ濃度に対する未結合抗原のプロットは、解離定数Ｋｄを生じ（Ｋｄ ４ｐＭ、図３）、そしてこのうち大部分はまた、ｍＡｂ対毒素比（１：４）と表される、０．２５のＩＣ５０で、ｉｎ ｖｉｔｒｏ中和アッセイの理論的限界に到達した（図４）。

【0255】

実施例４：Ｈｌａ毒素選択ｍＡｂの交差中和強度を決定するアッセイ
二成分毒素との交差反応性に関して、７つの系譜由来の４２のＨｌａ ｍＡｂを試験すると、Ｈｌａ、ＨｌｇＢおよびＬｕｋＦに対するピコモル結合アフィニティを示し、そしてＬｕｋＤに一桁のｎＭの結合アフィニティを示す、最も弱い中和無感作クローンから得られる単一の子孫が明らかになった（図５）。これらの遠く関連する毒素に対する結合は、対応する二成分毒素ＨｌｇＢ−ＨｌｇＣ、ＨｌｇＢ−ＨｌｇＡ、ＬｕｋＳＦ（ＰＶＬ）およびＬｕｋＥＤの非常に強力な中和を生じた（図６）。

【0256】

まさに同じ広域交差中和性ｍＡｂ（＃ＡＢ−２４）が、ＨｌａおよびＦ成分での代替スクリーニングを用いて、酵母ライブラリーから同定された。

【0257】

Ｈｌａに対する＃７６６７系譜の中和能を、実施例３に記載するように、Ａ５４９細胞（図６Ａ）上で、そしてウサギ赤血球上で決定した。この系譜のすべてのｍＡｂは、アルファ溶血素活性を阻害可能であった。強度は、成熟状態とよく相関した。最も弱い中和活性が無感作クローン＃７６６７で観察され、最も強い防御がクローン＃９０２４、＃ＡＢ−２４、＃９０２９および＃９０３０で見られ、これらは、第二のシリーズのアフィニティ成熟ライブラリーを用いて生成された。最初のアフィニティ成熟ライブラリーを使用した成熟によって生成されたｍＡｂ ＃８２６８クローンは、中間の中和活性を示した。

【0258】

二成分毒素ＬｕｋＥ−ＬｕｋＤ、ＨｌｇＢ−ＨｌｇＣおよびＬｕｋＳ−ＬｕｋＦに対する交差中和活性を、ヒト好中球を用いた生存度アッセイにおいて評価した（図６Ｂ〜Ｄ）。この目的のため、赤十字から得る（ヘパリン処理）か、またはＫ−ＥＤＴＡバキュテナーチューブ（ＢＤ、米国）中で、正常で健康なボランティアから静脈穿刺によって得るか、いずれかで、新鮮なヒト白血球から好中球を単離した。赤血球を凝集させるため、１部分のＨｅｔａＳｅｐ溶液（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、フランス）を５部分の血液に添加し、混合し、そして血漿／赤血球界面（ｉｎｔｅｒｐｈａｓｅ）が総体積のおよそ５０％になるまで、３７℃でインキュベーションした。白血球濃縮血漿層を、２工程Ｐｅｒｃｏｌｌ勾配（ＨＢＳＳ中で希釈された７３％および６３％ Ｐｅｒｃｏｌｌ Ｐｌｕｓ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に注意深く重層し、そして６８０ｘｇ、ＲＴで３０分間、ブレーキなしで遠心分離した。回転後の勾配の最初の層および第二の層（主に血清および単球）を吸引によって除去した。好中球を第二の不透明層から採取し、そして５０ｍｌ ＨＢＳＳ（Ｇｉｂｃｏ、米国）＋１０ｍＭグルコース中で２回洗浄した。血球計数器中、トリパンブルー色素排除を用いて、生存細胞数を計数した。記載する単離法は、通常、５０ｍｌ全血から、生存度≧９５％の１〜５ｘ１０Ｅ８の好中球を生じた。生存度アッセイのため、１０％ＦＣＳ、Ｌ−グルタミンおよびＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐを補ったＲＰＭＩ １６４０（ＰＡＡ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、オーストリア）（＝好中球培地）中に細胞を再懸濁した。モノクローナル抗体を、好中球培地中で連続希釈し、そして細胞生存度を≧９５％減少させる固定濃度の毒素と混合した［ＬｕｋＳ−ＬｕｋＦおよびＨｌｇＣ−ＨｌｇＢに関しては２．９４ｎＭ、ＬｕｋＥ−ＬｕｋＤに関しては７．３５ｎＭ］。１時間のプレインキュベーション工程後、生存度アッセイを開始して、抗体−毒素結合を可能にした。ウェルあたり２５，０００細胞を添加し、そして反応を３７℃、＋５％ＣＯ_２で４時間インキュベーションした。次いで、製造者の指示にしたがって、商業的に入手可能なキット（Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存度アッセイ；Ｐｒｏｍｅｇａ、米国）を用いて、ＰＭＮの生存度を調べた。偽処理対照に比較して、％生存度を計算した。以下の式：％阻害＝［（毒素のみの生存度−阻害された活性）／（毒素のみの生存度）］ｘ１００を用いて、毒素活性の％阻害を計算した。以下の対照ｍＡｂが含まれた：＃８２４７（別の系譜（＃７６６０）由来のＨｌａ単一特異的ｍＡｂ）、＃８２０７（ＬｕｋＥ−ＬｕｋＤアッセイにおける単一特異性ＬｕｋＤ ｍＡｂ）、＃８２１０（ＬｕｋＳ−ＬｕｋＦアッセイにおける単一特異性ＬｕｋＦ ｍＡｂ）、＃８１８２（ＨｌｇＣ−ＨｌｇＢアッセイにおける単一特異性ＨｌｇＢ ｍＡｂ）および＃７３３５（すべてのアッセイにおける雌鶏卵リゾチームに対して生成された陰性対照ｍＡｂ）。

【0259】

第一のアフィニティ成熟ライブラリーを用いた成熟によって生成される無感作ｍＡｂ ＃７６６７および子孫ｍＡｂ ＃８２６８は、任意の同族二成分毒素に対して検出可能な中和活性を示さないが、第二のアフィニティ成熟ライブラリーを用いた成熟によって生成される、対応する子孫ｍＡｂ ＃ＡＢ−２４は、ヒト好中球に対するＬｕｋＥ−ＬｕｋＤ、ＨｌｇＣ−ＨｌｇＢおよびＬｕｋＳ−ＬｕｋＦの強力な阻害剤であることが見出された（図６Ｂ〜Ｄ）。Ｈｌａ中和活性において匹敵するが、第二のアフィニティ成熟ライブラリーを用いて成熟させた同じ系譜の他の成熟ｍＡｂは、このアッセイにおいて、すべての３つの二成分毒素を交差中和することが不可能であった。しかし、＃９０２９は、ＬｕｋＥ−ＬｕｋＤ中和において、＃ＡＢ−２４よりも匹敵する強度を有することが見出された。ｉｎ ｖｉｔｒｏ中和アッセイの結果は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ ｋＤ測定にしたがって、＃ＡＢ−２４は、Ｈｌａ ｘ ＨｌｇＢ ｘ ＬｕｋＤ ｘ ＬｕｋＦへの結合を示し、そして＃９０２９は、Ｈｌａ ｘ ＬｕｋＤ結合剤であることが見出された。

【0260】

実施例５：生物学的活性を決定するアッセイ
ｉｎ ｖｉｔｒｏ強度は、ｉｎ ｖｉｖｏ有効性を予測することが証明された。＃ＡＢ−２４ ｍＡｂでマウスを処置すると、ＨｌａまたはＨｌｇＡＢ毒素での致死性曝露に対して、非常によく保護された（図７）。ｍＡｂ ＃ＡＢ−２４のｉｎ ｖｉｖｏ交差中和能を多様なマウスモデルにおいて試験した。パイロット研究において、関心対象の精製毒素の最小致死性濃度を、連続希釈の投与、およびそれに続く１４日間の生存監視によって、決定した。Ｈｌａの鼻内滴下の場合、最小致死性用量は、０．３２μｇ／マウスであることが見出された。ＨｌｇＡＢの多様な用量の静脈内注射後、（両成分の）０．３７５μｇの最小致死性用量を決定した。

【0261】

これらの結果に基づいて、ｍＡｂによる受動免疫の防御能を試験する目的の曝露実験において、以下の曝露用量を用いた：鼻内適用するＨｌａに関しては０．４μｇ、そして静脈内投与されるＨｌｇＡＢの各成分に関しては０．５μｇであった。

【0262】

ｍＡｂ ＃ＡＢ−２４での受動免疫を、毒素による致死性曝露の４時間前（Ｈｌａ曝露）または２４時間前（ＨｌｇＡＢ曝露）のいずれかで、腹腔内で行った。５匹のマウスの群に、ＰＢＳ中に溶解した個々のｍＡｂの多様な用量を投与した。対照群は、ＰＢＳのみ、またはアイソタイプマッチした非特異的ｍＡｂの最高用量を投与された。精製毒素での曝露後、マウスの致死性を７日間監視した。

【0263】

図７Ａにおいて、Ｈｌａ曝露実験の結果を示す。Ｌｌ対照マウスは、２４時間以内に毒素曝露に屈し、一方、ｍＡｂ ＃ＡＢ−２４は、１００μｇ ｍＡｂ／マウス用量で反復して有意な防御を提供した（６０〜１００％）。まさに同じ抗体はまた、マウスを致死性ＨｌｇＡＢ曝露からも保護し（図７Ｂ）、そして２００および５０μｇ／マウス用量で、それぞれ、８０％および４０％のマウスをレスキューした。

【0264】

これらの実験は、構造的に関連するが、一次アミノ酸配列レベルで非常に遠くでしかない（２７％アミノ酸同一性）、２つの最も重要なブドウ球菌細胞毒素の２つに関する、＃ＡＢ−２４の交差保護能を立証した。

【0265】

実施例６：Ｈｌａ ｍＡｂの競合を決定するアッセイ
Ｈｌａ ｍＡｂ間の競合を、インターフェロメトリー（Ｆｏｒｔｅ−Ｂｉｏ）によって研究した。典型的なセットアップにおいて、Ｈｌａ［緩衝液（１％ＢＳＡを加えたＰＢＳ）中、５μｇ／ｍｌ］を、ストレプトアビジンセンサー（Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上に固定した。次いで、センサーを一次抗体（または緩衝液のみ）で、その後、二次抗体（各１０μｇ／ｍｌ）で、典型的には各１０分間、処理した（緩衝剤のみの条件は、Ｈｌａに対する二次抗体の１００％結合に対応する反応を提供した）。各一次抗体に関して、二次抗体結合の阻害パーセントを計算した（図８）。

【0266】

図８に示す３つの抗体に関して、自己阻害は、８１〜９１％で多様であり、一方、異なる抗体間の阻害は、３０〜７６％で多様であった。抗体間を細かく区別する目的のため、そしてさらなるＨｌａ抗体でのデータに基づいて、８０％の阻害限界がこの研究で設定された。したがって、第二の抗体の結合を８０％阻害することが可能な任意の抗体は、前記の二次抗体と競合していると見なされ、一方、阻害が８０％未満である場合、抗体は十分に競合性ではない。
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）のアルファ毒素（Ｈｌａ）および少なくとも１つの二成分毒素に結合する、少なくとも１つの多重特異性結合部位を含む、交差中和性抗体。
［態様２］前記二成分毒素が、ガンマ溶血素、ＰＶＬ毒素およびＰＶＬ様毒素、好ましくはＨｌｇＡＢ、ＨｌｇＣＢ、ＬｕｋＳＦ、ＬｕｋＥＤ、ＬｕｋＧＨ、ＬｕｋＳ−ＨｌｇＢ、ＬｕｋＳＤ、ＨｌｇＡ−ＬｕｋＤ、ＨｌｇＡ−ＬｕｋＦ、ＬｕｋＧ−ＨｌｇＡ、ＬｕｋＥＦ、ＬｕｋＥ−ＨｌｇＢ、ＨｌｇＣ−ＬｕｋＤまたはＨｌｇＣ−ＬｕｋＦのいずれかのＦおよびＳ成分の同族（ｃｏｇｎａｔｅ）および非同族対からなる群より選択される、態様１記載の抗体。
［態様３］前記結合部位が、少なくとも２つまたは少なくとも３つの二成分毒素、好ましくは、ＨｌｇＡＢ、ＨｌｇＣＢ、ＬｕｋＳＦおよびＬｕｋＥＤ、好ましくはＨｌｇＡＢ、ＨｌｇＣＢ、ＬｕｋＳＦおよびＬｕｋＥＤのいずれかの少なくとも２つまたは３つに結合する、態様１または２記載の抗体。
［態様４］前記結合部位が、ＣＤＲ結合部位、好ましくはＶＨおよび／またはＶＬ結合部位のＣＤＲ配列を含む部位である、態様１〜３のいずれか記載の抗体。
［態様５］全長モノクローナル抗体、または結合部位を取り込んでいる少なくとも１つの抗体ドメインを含むその抗体断片であって、好ましくは１０^−８Ｍ未満、好ましくは１０^−９Ｍ未満のＫｄで、毒素の各々に結合するアフィニティを有する、態様１〜４のいずれか記載の抗体。
［態様６］＃ＡＢ−２４と称される抗体と同じエピトープに結合し、好ましくは＃ＡＢ−２４と称される抗体と同じ結合部位を含む、態様１〜５のいずれか記載の抗体。
［態様７］ＤＳＭ２６７４７および／またはＤＳＭ２６７４８の下に寄託されている宿主細胞によって産生される抗体由来である、態様１〜６のいずれか記載の抗体、あるいは機能的に活性であるその変異体であって、好ましくは
（ａ）抗体軽鎖がＤＳＭ２６７４８の下に寄託されている宿主細胞によって産生され；そして／または
（ｂ）抗体重鎖がＤＳＭ２６７４７の下に寄託されている宿主細胞によって産生されるか；
（ｃ）あるいは（ａ）および／または（ｂ）の機能的に活性である変異体を使用する
前記抗体。
［態様８］ＤＳＭ２６７４８の下に寄託されている宿主細胞に含まれる、＃ＡＢ−２４−ＬＣと称される抗体軽鎖をコードし；そして／または
ＤＳＭ２６７４７の下に寄託されている宿主細胞に含まれる、＃ＡＢ−２４−ＨＣと称される抗体重鎖をコードする
ヌクレオチド配列を含むプラスミド。
［態様９］態様１〜７のいずれか記載の抗体の軽鎖および／または重鎖を発現するコード配列を含む発現カセットであって、発現カセットまたはコード配列が態様８記載のプラスミド由来である、前記発現カセット。
［態様１０］態様８記載のプラスミドまたは態様９記載の発現カセットを含む、宿主細胞。
［態様１１］態様１〜７のいずれか記載の抗体を産生する方法であって、態様１０記載の宿主細胞を、前記抗体を産生する条件下で培養するかまたは維持する、前記方法。
［態様１２］候補防御抗体を同定する方法であって：
（ａ）抗体または抗体産生細胞を含有する試料を提供し；そして
（ｂ）試料中のまたは試料によって産生される抗体と、＃ＡＢ−２４と称される抗体によって認識されるエピトープの結合に関して評価する、ここで抗体およびエピトープの間の陽性反応が、候補防御抗体として抗体を同定する
前記方法。
［態様１３］候補防御抗体を同定する方法であって：
（ａ）抗体または抗体産生細胞を含有する試料を提供し；そして
（ｂ）試料中のまたは試料によって産生される抗体と、黄色ブドウ球菌のアルファ毒素および少なくとも１つの二成分毒素の結合に関して評価する、ここで抗体および毒素の間の陽性反応が、候補防御抗体として抗体を同定する
前記方法。
［態様１４］態様１〜７のいずれか記載の抗体を産生する方法であって
（ａ）態様１２または１３にしたがって同定される候補防御抗体を提供し；そして
（ｂ）モノクローナル抗体、あるいは該候補防御抗体のヒト化型またはヒト型、あるいは候補防御抗体と同じエピトープ結合特異性を持つその誘導体を産生する
工程を含む、前記方法。
［態様１５］黄色ブドウ球菌感染のリスクがあるかまたは該感染を患っている被験体を治療する際に使用するための、態様１〜７のいずれか記載の抗体であって、治療が、被験体における感染を限定するのに有効な量の抗体を被験体に投与して、前記感染から生じる疾患状態を寛解させるか、または黄色ブドウ球菌肺炎病変形成を阻害する工程を含む、前記抗体。
［態様１６］態様１〜７のいずれか記載の抗体の薬学的調製物であって、好ましくは、非経口または粘膜配合物を含み、場合によって薬学的に許容されうるキャリアーまたは賦形剤を含有する、前記調製物。
［態様１７］高毒素産生ＭＲＳＡ感染を含むいかなる黄色ブドウ球菌感染、例えば壊死性肺炎、ならびにフルンケル症およびカルブンケル症における毒素産生を検出するための診断に使用するための、態様１〜７のいずれか記載の抗体。
［態様１８］態様１〜７のいずれか記載の抗体の診断調製物であって、場合によって標識を含む抗体および／または標識を含むさらなる診断試薬を含有する、前記調製物。
［態様１９］＃ＡＢ−２４と称される抗体によって認識される、単離コンホメーションエピトープ。
［態様２０］（ａ）態様１９記載のエピトープ；
（ｂ）場合によって、（ａ）の前記エピトープと天然には関連しないさらなるエピトープ；および
（ｃ）キャリアー
を含む、免疫原。
［態様２１］黄色ブドウ球菌感染から被験体を防御するか、前記感染から生じる疾患状態を防止するか、または黄色ブドウ球菌肺炎病変形成を阻害するのに有効な量の前記免疫原を投与することによって、被験体を治療する際に使用するための、態様２０記載の免疫原。
［態様２２］態様１〜７のいずれか記載の抗体または態様１９記載のエピトープをコードする、単離核酸。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図7】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図9D】

【図9E】

【図9F】

【図9G】

【配列表】

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