特許 6231882 放射性コンジュゲーション方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6231882

(24)【登録日】2017年10月27日

(45)【発行日】2017年11月15日

(54)【発明の名称】放射性コンジュゲーション方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 51/08 20060101AFI20171106BHJP

   C07B 59/00 20060101ALI20171106BHJP

   C07K 7/06 20060101ALI20171106BHJP

   C07K 7/08 20060101ALI20171106BHJP

【ＦＩ】

   A61K51/08 200

   C07B59/00

   C07K7/06ZNA

   C07K7/08

【請求項の数】13

【全頁数】25

(21)【出願番号】特願2013-541350(P2013-541350)

(86)(22)【出願日】2011年12月1日

(65)【公表番号】特表2014-500883(P2014-500883A)

(43)【公表日】2014年1月16日

(86)【国際出願番号】EP2011071506

(87)【国際公開番号】WO2012072736

(87)【国際公開日】20120607

【審査請求日】2014年11月28日

【審判番号】不服2016-14633(P2016-14633/J1)

【審判請求日】2016年9月30日

(31)【優先権主張番号】1020314.9

(32)【優先日】2010年12月1日

(33)【優先権主張国】GB

(31)【優先権主張番号】61/476,805

(32)【優先日】2011年4月19日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】1106593.5

(32)【優先日】2011年4月19日

(33)【優先権主張国】GB

(73)【特許権者】

【識別番号】305040710

【氏名又は名称】ジーイー・ヘルスケア・リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100137545

【弁理士】

【氏名又は名称】荒川 聡志

(74)【代理人】

【識別番号】100105588

【弁理士】

【氏名又は名称】小倉 博

(74)【代理人】

【識別番号】100129779

【弁理士】

【氏名又は名称】黒川 俊久

(74)【代理人】

【識別番号】100113974

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 拓人

(72)【発明者】

【氏名】インドレヴォール、バード

【合議体】

【審判長】 田村 聖子

【審判官】 大久保 元浩

【審判官】 渡邉 潤也

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２００９／１０６５６６（ＷＯ，Ａ２）

【文献】 Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００９年，Ｖｏｌ．４８，Ｎｏ．１４，ｐ２５７６−２５７９

【文献】 Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８年，Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．４，ｐ９５１−９５７

【文献】 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８年，Ｖｏｌ．７３，Ｎｏ．３，ｐ９８３−９９１

【文献】 Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１０年 ９月，Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．１８，ｐ５４２２−５４２５

【文献】 Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｉｎｇ，２００８年，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．５，ｐ１００８−１０１８

【文献】 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００８年，Ｖｏｌ．４９，Ｎｏ．８，ｐ１３４５−１３５２

【文献】 Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００６年，Ｖｏｌ．４５，Ｎｏ．４５，ｐ７５８１−７５８４

【文献】 Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｏｓｉｔｒｏｎ Ｉｍａｇｉｎｇ，１９９９年，Ｖｏｌ．２，Ｎｏ．５，ｐ２３３−２５３

【文献】 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９７年，Ｖｏｌ．９４，Ｎｏ．５，ｐ１６２９−１６３３

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

A61K 31/00-51/12

C07K 1/00-19/00

ＣＡＰｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＥＭＢＡＳＥ／（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

生体ターゲティング分子の放射性標識方法であって、
（ｉ）以下の式（ＩＡ）の保護化合物を用意するステップと、
［ＢＴＭ］−Ｘ¹ （ＩＡ）
（ｉｉ）ステップ（ｉ）の式（ＩＡ）の保護化合物を脱保護して以下の式（ＩＩＡ）のアミノオキシ化合物を得るステップと、
［ＢＴＭ］−Ｏ−ＮＨ₂ （ＩＩＡ）
（ｉｉｉ）式（ＩＩＡ）のアミノオキシ化合物と以下の式（ＩＩＩＡ）のカルボニル化合物との縮合によって、以下の式（ＩＶＡ）の放射性標識コンジュゲートを得るステップと
Ｑ−［リンカー］−（Ｃ＝Ｏ）Ｙ¹ （ＩＩＩＡ）
［ＢＴＭ］−Ｏ−Ｎ＝（ＣＹ¹）−［リンカー］−Ｑ （ＩＶＡ）
を含む方法。
式中、
［ＢＴＭ］は、生体ターゲティング分子であり、
Ｘ¹は、次式の保護アミノオキシ基であり、

【化1】

（式中、Ｒ¹及びＲ²はＣ_1-3アルキル、Ｃ_1-3フルオロアルキル又はＣ_4-6アリールから独立に選択される。）
ＱはインビボでのＰＥＴ又はＳＰＥＣＴイメージングに適した放射性同位体を含む基であり、
Ｙ¹はＨ、Ｃ_1-6アルキル又はＣ_4-10アリールであり、
［リンカー］はリンカー基である。

【請求項2】

Ｒ¹及びＲ²が独立にＣ_1-2アルキルである、請求項１記載の方法。

【請求項3】

Ｙ¹がＨである、請求項１又は請求項２記載の方法。

【請求項4】

Ｑが¹⁸Ｆ、¹²³Ｉ、^99mＴｃ、⁶⁸Ｇａ又は⁶⁴Ｃｕから選択される、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の方法。

【請求項5】

Ｑが¹⁸Ｆである、請求項４記載の方法。

【請求項6】

ＢＴＭが単一アミノ酸、３〜１００残基ペプチド、酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト、酵素阻害剤又はレセプター結合化合物を含む、請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載の方法。

【請求項7】

ＢＴＭが、ブドウ球菌プロテインＡのＩｇＧ結合性ドメインの１つから誘導された５８アミノ酸残基ドメインに基づく改変タンパク質を含む、請求項６記載の方法。

【請求項8】

ＢＴＭが、以下で定義されるペプチドＡ、ペプチドＢ、ペプチドＣ及びペプチドＤから選択される３〜１００残基ペプチドを含む、請求項６記載の方法。
（ｉ）ペプチドＡ＝Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド、
（ｉｉ）ペプチドＢ＝次式のフラグメントを含むＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド、

【化2】

（ｉｉｉ）ペプチドＣ＝次のアミノ酸配列を含むｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチド、
−Ｃｙｓ^a−Ｘ¹−Ｃｙｓ^c−Ｘ²−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ³−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ^d−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ^b−Ｔｙｒ−Ｘ⁴−Ｘ⁵−Ｘ⁶−
（式中、Ｘ¹はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、
Ｘ²はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
Ｘ³はＴｈｒ又はＡｒｇであり、
Ｘ⁴はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、
Ｘ⁵はＳｅｒ又はＴｈｒであり、
Ｘ⁶はＡｓｐ又はＧｌｕであり、
Ｃｙｓ^a-dの各々はシステイン残基であって、残基ａ及びｂ並びに残基ｃ及びｄは環化して２つの独立したジスルフィド結合を形成している。）
（ｉｖ）ペプチドＤ＝次式のランチビオティックペプチド、
Ｃｙｓ^a−Ｘａａ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ^b−Ｃｙｓ^c−Ｓｅｒ^d−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ^c−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ^b−（ＨＯ−Ａｓｐ）−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ^a−Ｌｙｓ^d
（式中、
ＸａａはＡｒｇ又はＬｙｓであり、
Ｃｙｓ^a−Ｔｈｒ^a、Ｓｅｒ^b−Ｃｙｓ^b及びＣｙｓ^c−Ｔｈｒ^cはチオエーテル結合を介して共有結合しており、
Ｓｅｒ^d−Ｌｙｓ^dはリシノアラニン結合を介して共有結合しており、
ＨＯ−Ａｓｐはβ−ヒドロキシアスパラギン酸である。）。

【請求項9】

ステップ（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）が同時に実施される、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の方法。

【請求項10】

縮合ステップ（ｉｉｉ）がアニリンの存在下で実施される、請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載の方法。

【請求項11】

自動合成装置を用いて実施される、請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載の方法。

【請求項12】

自動合成装置が、前駆体を含む単回使用の使い捨てカセットを含んでおり、前駆体が式（ＩＡ）の保護化合物を滅菌状態で含んでいる、請求項１１記載の方法。

【請求項13】

放射性医薬組成物の製造方法であって、放射性医薬組成物が請求項１乃至請求項８のいずれか１項で定義された式（ＩＶＡ）の放射性標識コンジュゲートを生体適合性担体と共に哺乳類への投与に適した形態で含んでおり、当該製造方法が請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の放射性標識方法を含んでいる、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、インビボイメージングのための放射性医薬品の分野、特に生体ターゲティング分子を放射性同位体で標識する方法に関する。本発明の方法は自動合成装置で使用するのに特に適している。また、滅菌形態の前駆体、及びその方法に有用なかかる前駆体を含むカセットも提供する。

【背景技術】

【0002】

国際公開第２００４／０８０４９２号には、以下の式（Ｉ）の化合物と式（ＩＩ）の化合物との反応又は式（ＩＩＩ）の化合物と式（ＩＶ）の化合物との反応によってそれぞれ以下の式（Ｖ）又は（ＶＩ）のコンジュゲートを得ることを含む生体ターゲティングベクターの放射性フッ素化法が開示されている。

【0003】

【化1】

式中、
Ｒ１は、アルデヒド基、ケトン基、アセタールのような保護アルデヒド、ケタールのような保護ケトン、或いは酸化剤を用いてアルデヒド又はケトンに迅速かつ効率的に酸化することのできる官能基（例えばジオール又はＮ末端セリン残基）であり、
Ｒ２は、第一アミン、第二アミン、ヒドロキシルアミン、ヒドラジン、ヒドラジド、アミノオキシ、フェニルヒドラジン、セミカルバジド及びチオセミカルバジドから選択される基であって、好ましくはヒドラジン、ヒドラジド又はアミノオキシ基であり、
Ｒ３は、第一アミン、第二アミン、ヒドロキシルアミン、ヒドラジン、ヒドラジド、アミノオキシ、フェニルヒドラジン、セミカルバジド又はチオセミカルバジドから選択される基であって、好ましくはヒドラジン、ヒドラジド又はアミノオキシ基であり、
Ｒ４はアルデヒド基、ケトン基、アセタールのような保護アルデヒド、ケタールのような保護ケトン、或いは酸化剤を用いてアルデヒド又はケトンに迅速かつ効率的に酸化することのできる官能基（例えばジオール又はＮ末端セリン残基）である。

【0004】

【化2】

式中、Ｘは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＮＨＣＯＮＨ−又は−ＮＨＣＳＮＨ−であって、好ましくは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−又は−Ｏ−であり、ＹはＨ、アルキル又はアリール置換基であり、
式（ＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）及び（ＶＩ）のリンカー基は以下のものから選択される。

【0005】

【化3】

式中、ｎは０〜２０の整数であり、ｍは１〜１０の整数であり、ｐは０又は１の整数であり、ＺはＯ又はＳである。

【0006】

Ｐｏｅｔｈｋｏ他［Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，４５（５），８９２−９０２（２００４）］には、放射性同位体¹⁸Ｆによるペプチドの放射性標識法であって、以下に示すように、アミノオキシ官能化ペプチドを［¹⁸Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドと縮合させてオキシムエーテル結合を有する標識ペプチドを得る方法が開示されている。

【0007】

【化4】

Ｓｃｈｏｔｔｅｌｉｕｓ他［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１９（６），１２５６−１２６８（２００８）］には、Ｐｏｅｔｈｋｏ他の方法のさらなる展開が記載されている。Ｓｃｈｏｔｔｅｌｉｕｓ他は、アミノオキシ基のアミンをＮ−Ｂｏｃ（Ｂｏｃ＝ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）保護基で保護したアミノオキシ官能化ペプチドを用いている。所望のアミノオキシ官能化ペプチドは、［¹⁸Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドの存在下、酸性ｐＨ（ｐＨ＝２）、７５℃でのＮ−Ｂｏｃ基の脱保護によってインサイチュで生成する。Ｓｃｈｏｔｔｅｌｉｕｓ他は、脱保護が反応条件下で定量的ではなかったので、５倍モル過剰のＢｏｃ保護前駆体を使用している。

【0008】

Ｍｅｚｏ他［Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｓｃｉ．，１７，３９−４６（２０１０）］には、Ｂｏｃ保護アミノオキシ官能化ペプチドの上述のオキシムライゲーション化学に関する幾つかの問題について記載されている。例えば、最初に形成される遊離アミノオキシペプチドが未反応のＢｏｃ保護アミノオキシペプチドをアシル化して望ましくない副生物を生じかねないることが知られている。また、官能化ペプチドの遊離アミノオキシ基のカルボニル化合物に対する反応性が高いことも知られている。その結果、不要な縮合が起こるおそれがあり、反応混合物又は後段の精製ステップで偶発的なアルデヒド又はケトンが存在し得る。かかるアルデヒド又はケトンは、用いた溶媒中に存在するアセトンの痕跡、又はホルムアルデヒド（例えば可塑剤に由来する）であり得る。Ｍｅｚｏ他は抗癌剤及び［¹⁸Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドとペプチドとのコンジュゲーションのためにこの問題を解決することに関心をもっている。Ｍｅｚｏ他では、この問題を解決するため、「カルボニル捕獲剤」としての１０倍モル過剰の遊離（アミノオキシ）酢酸（Ａｏａ）の存在下でＢｏｃ−アミノオキシペプチドの脱保護を行っている。次に、脱保護アミノオキシペプチドと過剰のＡｏａを凍結乾燥し、４℃で貯蔵する。オキシムライゲーション反応の直前に、凍結乾燥混合物を再構成し、過剰のＡｏａをＨＰＬＣ又はＳｅｐ−ＰａｋプラスＣ１８カートリッジで分離する。Ｍｅｚｏ他には、この技術を用いて非放射性（¹⁹Ｆ）４−フルオロベンズアルデヒドをアミノオキシ官能化ソマトスタチンペプチドとコンジュゲートした例が記載されている。Ｍｅｚｏ他には、¹⁸Ｆ−放射性標識に関するデータは記載されていない。

【0009】

そこで、ペプチドその他の生体ターゲティング分子の放射性標識するための改良法が依然として必要とされている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0010】

【特許文献1】国際公開第２００４／０８０４９２号

【発明の概要】

【0011】

本発明
本発明は、アミノオキシ官能基を介して生体ターゲティング分子（ＢＴＭ）を放射性標識するための改良方法を提供する。本発明は、
（ｉ）４℃での長期保存を伴う「カルボニル捕獲剤」、
（ｉｉ）Ｎ−Ｂｏｃアミノオキシで保護された保護基を除去するための強酸性条件、
（ｉｉｉ）過剰のＮ−Ｂｏｃアミノオキシ保護出発物質の使用
を必要とすることなく、従来技術で認識されている不純物の問題を克服する保護基アプローチを提供する。

【0012】

選択肢（ｉ）は、カルボニル捕獲試薬が関与する副反応を防ぐために過剰のカルボニル捕獲試薬を前もって完全に除去しなければならないので、放射性標識目的には魅力的でない。その除去ステップには分取クロマトグラフィーなどが必要とされる。加えて、４℃における前駆体の貯蔵の必要性は理想的ではない。

【0013】

従来技術はまた、Ｂｏｃ保護アミノオキシ前駆体を使用することができることも教示している−選択肢（ｉｉ）。このアプローチに伴う問題は、Ｂｏｃ脱保護には、いずれも室温の、９５％水性トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）又は２５〜５０％ＴＦＡ／有機溶媒（例えばＤＣＭ）のような強酸性条件が必要とされることである。また、幾つかの刊行物は、６０〜７５℃に加熱することを示唆している。かかる強酸及び／又は加熱は生体ターゲティング分子を損傷し得る。また、過剰の強酸を追加のステップで、通例ＴＦＡの蒸発によって除去する必要があり、これには時間がかかる可能性がある。しかし、トリフルオロ酢酸は塩も生成する可能性があり、これは蒸発によって除去されず、通例除去するのに摩砕(trｉturatｉon)を必要とする。本発明の方法は、室温で水性の希酸（例えば２．５％水性ＴＦＡ又は０．０１Ｍ水性塩酸）、又は６０℃で０．１％水性ＴＦＡを使用するのみで完全な脱保護を達成する。かかる条件はＢＴＭに対してより適合性であり、追加の精製ステップを必要としない。ｓ．
第三に、従来技術は、５倍モル過剰のＢｏｃ保護アミノオキシ−ＢＴＭ前駆体を使用するべきであることを教示している−選択肢（ｉｉｉ）。これは、Ｂｏｃ−脱保護が不完全であり、［¹⁸Ｆ］−フルオロベンズアルデヒド反応物質の全てを消費することが重要であるからである。このアプローチは放射性医薬品目的には望ましくない。なぜなら、製品中に過剰の未標識ＢＴＭ前駆体が存在すると、インビボで生物学的に重要な部位において放射性標識ＢＴＭと競合する可能性が高く、従って目的とする造影剤の取り込みを阻害する危険性がある。その結果、使用前に過剰の非放射性前駆体を放射性標識生成物から除去するのが必要になろう。対照的に、本発明の方法では温和な条件下で効率的で完全な脱保護が可能になるので、保護出発物質を過剰に使用する必要がない。

【0014】

本発明の保護ＢＴＭは脱保護及び放射性標識中過剰のアシル化が抑制されるという利点を有する。

【0015】

本発明の方法は必要とされるステップ数がより少なく、従来技術のクロマトグラフィー精製ステップの幾つかの必要性が回避されるので、より効率的であり、かつ例えば自動合成装置を用いる自動化が可能である。

【0016】

本発明の保護基の別の利点は、中性及び塩基性のｐＨにおいて５０％以下の酢酸水溶液中で安定であるので、保護前駆体が、０．１％の水性酢酸を移動相として用いるＨＰＬＣクロマトグラフィーで精製することができるということである。従って、本発明のアプローチを用いたＢＴＭ保護は、ＢＴＭの安定性に適合させることができる様々な条件下で精製することができる。

【発明を実施するための形態】

【0017】

本発明は、第１の態様では、生体ターゲティング分子の放射性標識方法であって、
（ｉ）以下の式（ＩＡ）又は（ＩＢ）の保護化合物を用意するステップと、
［ＢＴＭ］−Ｘ¹ （ＩＡ）
Ｑ−［リンカー］−Ｘ¹ （ＩＢ）
（ｉｉ）ステップ（ｉ）の式（ＩＡ）又は（ＩＢ）の保護化合物を脱保護してそれぞれ以下の式（ＩＩＡ）又は（ＩＩＢ）のアミノオキシ化合物を得るステップと、
［ＢＴＭ］−Ｏ−ＮＨ₂ （ＩＩＡ）
Ｑ−［リンカー］−Ｏ−ＮＨ₂ （ＩＩＢ）
（ｉｉｉ）式（ＩＩＡ）のアミノオキシ化合物と以下の式（ＩＩＩＡ）のカルボニル化合物との縮合又は式（ＩＩＢ）のアミノオキシ化合物と以下の式（ＩＩＩＢ）のカルボニル化合物との縮合によって、それぞれ以下の式（ＩＶＡ）又は（ＩＶＢ）の放射性標識コンジュゲートを得るステップと
Ｑ−［リンカー］−（Ｃ＝Ｏ）Ｙ¹ （ＩＩＩＡ）
［ＢＴＭ］−（Ｃ＝Ｏ）Ｙ¹ （ＩＩＩＢ）
［ＢＴＭ］−Ｏ−Ｎ＝（ＣＹ¹）−［リンカー］−Ｑ （ＩＶＡ）
［ＢＴＭ］−（ＣＹ¹）＝Ｎ−Ｏ−［リンカー］−Ｑ （ＩＶＢ）
を含む方法を提供する。
式中、
［ＢＴＭ］は生体ターゲティング分子であり、
Ｘ¹は次式の保護アミノオキシ基であり、

【0018】

【化5】

（式中、Ｒ¹及びＲ²は、Ｃ_1-3アルキル、Ｃ_1-3フルオロアルキル又はＣ_4-6アリールから独立に選択される。）
ＱはインビボでのＰＥＴ又はＳＰＥＣＴイメージングに適した放射性同位体を含む基であり、
Ｙ¹は、Ｈ、Ｃ_1-6アルキル又はＣ_4-10アリールであり、
［リンカー］は、リンカー基である。

【0019】

行為を表す「放射性標識」という用語は、その通常の意味をもち、放射性同位体を（本発明ではＢＴＭに）共有結合するプロセスを意味する。

【0020】

「生体ターゲティング部分」（ＢＴＭ）という用語は、投与後に、インビボで哺乳類の身体の特定の部位に選択的に取り込まれるか或いは局在化する化合物を意味する。かかる部位は、例えば、特定の病態に関係していることもあるし、臓器又は代謝過程がいかに機能しているかの指標となることもある。

【0021】

「脱保護」という用語は化学分野及び／又は放射化学分野におけるその通常の意味をもち、保護基の除去を意味する。
「保護基」（Ｐ^GPと略す。）という用語は、望ましくない化学反応を阻止又は抑制するが、分子の残部を変質させない程度に温和な条件下で問題の官能基から脱離させるのに十分な反応性を有するように設計された基を意味する。脱保護後には所望の生成物が得られる。保護基の使用については、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ Ｗ． Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ． Ｍ． Ｗｕｔｓ，［Ｗｉｌｅｙ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，（２００６）］に記載されている。

【0022】

「アミノオキシ基」という用語は、その通常の意味をもち、式−Ｏ−ＮＨ₂の置換基、好ましくは−ＣＨ₂Ｏ−ＮＨ₂をいう。

【0023】

「放射性同位体を含む基」という用語は、ある官能基が放射性同位体を含んでいるか、或いは放射性同位体が追加の化学種として結合していることを意味する。ある官能基が放射性同位体を含んでいる場合、これは、その化学元素が化学構造に既に含まれており、その元素の放射性同位体がその天然存在比を超えるレベルで存在することを意味する。このような同位体の増大又は濃縮レベルは好適には５倍以上、好ましくは１０倍以上、最も好ましくは２０倍以上であり、理想的にはその同位体の天然存在比の５０倍以上であるか或いは同位体の濃縮度が９０〜１００％となるレベルで存在する。かかる官能基の例としては、高レベルの¹⁸Ｆを有するフルオロアルキル基であって¹⁸Ｆ原子が化学構造に存在するものが挙げられる。放射性同位体が^99mＴｃ、⁶⁸Ｇａ又は⁶⁴Ｃｕのような放射性金属である場合、「追加の化学種」は通例キレート化剤である。放射性同位体が放射性ヨウ素である場合、追加の化学種はフェニル又はビニル基であり、当技術分野で公知の通り、インビボ代謝脱ヨウ素化に対して炭素−ヨウ素結合を安定化する。

【0024】

「ＰＥＴ」及び「ＳＰＥＣＴ」という用語は、放射性医薬分野におけるそれらの通常の意味を有し、それぞれ陽電子放射断層撮影及び単光子放射断層撮影をいう。

【0025】

「リンカー基」という用語は、式−（Ａ）_m−の二価基を意味する。式中、各Ａは独立に−ＣＲ₂−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ₂ＣＯ₂−、−ＣＯ₂ＣＲ₂−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ₂ＮＲ−、−ＮＲＳＯ₂−、−ＣＲ₂ＯＣＲ₂−、−ＣＲ₂ＳＣＲ₂−、−ＣＲ₂ＮＲＣＲ₂−、Ｃ_4-8シクロヘテロアルキレン基、Ｃ_4-8シクロアルキレン基、Ｃ_5-12アリーレン基又はＣ_3-12ヘテロアリーレン基であり、各Ｒは独立にＨ、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_2-4アルケニル、Ｃ_2-4アルキニル、Ｃ_1-4アルコキシアルキル又はＣ_1-4ヒドロキシアルキルから選択され、ｍは１〜２０の整数である。

【0026】

式ＩＡにおいて、Ｘ¹基は好適には後述の通りＢＴＭの官能基に結合している。

【0027】

好ましい特徴
第１の態様では、Ｒ¹及びＲ²は好ましくはいずれも独立にＣ_1-2アルキルである。さらに好ましくは、Ｒ¹及びＲ²はメチル及びエチルから選択され、最も好ましくはＲ¹がメチルでＲ²がエチルのもの、すなわちエトキシエチリジン（「Ｅｅｉ」）保護基である。

【0028】

第１の態様の方法は、好ましくは、ステップ（ｉ）で式（ＩＡ）の化合物を使用し、ステップ（ｉｉ）のアミノオキシ化合物が式（ＩＩＡ）のものであり、放射性標識コンジュゲートが式（ＩＶＡ）のものであるように実施される。これは、式（ＩＩＩＢ）のカルボニル（すなわちアルデヒド又はケトン基）よりもアミノオキシ基の方がＢＴＭへの選択的導入が簡単であるからである。

【0029】

第１の態様では、Ｙ¹は好ましくはＨであり、すなわち式（ＩＩＩＡ）又は（ＩＩＩＢ）のカルボニル化合物がアルデヒドである。

【0030】

第１の態様では、Ｑは好ましくは¹⁸Ｆ、¹²³Ｉ、^99mＴｃ、⁶⁸Ｇａ又は⁶⁴Ｃｕから選択される。さらに好ましくは、Ｑは¹⁸Ｆである。Ｑが¹⁸Ｆである場合、式（ＩＩＩＡ）の好ましいカルボニル化合物は¹⁸Ｆ−４−フルオロベンズアルデヒドである。

【0031】

第１の態様の方法のステップ（ｉｉｉ）の後、生成物の式（ＩＶＡ）又は（ＩＶＢ）のコンジュゲートを好ましくはクロマトグラフィーのような標準的技術を用いて分離及び／又は精製してもよい。

【0032】

ＢＴＭは合成品でも天然品であってもよいが、好ましくは合成品である。「合成品」という用語はその通常の意味を有し、つまり、天然の起源（例えば、哺乳類の身体）から単離したものではなく、人工のものをいう。かかる化合物は、その製造及び不純物プロファイルを十分に制御できるという利点を有する。従って、天然由来のモノクローナル抗体及びそのフラグメントは、本明細書で用いる「合成品」という用語の範疇には属さない。ＢＴＭの分子量は好ましくは３００００ダルトン以下である。さらに好ましくは、分子量は２００〜２００００ダルトン、最も好ましくは３００〜１８０００ダルトンの範囲内にあり、４００〜１６０００ダルトンが特に好ましい。ＢＴＭが非ペプチドである場合、ＢＴＭの分子量は好ましくは３０００ダルトン以下、さらに好ましくは２００〜２５００ダルトン、最も好ましくは３００〜２０００ダルトンであり、４００〜１５００ダルトンが特に好ましい。

【0033】

ＢＴＭは、好ましくは、３〜８０残基のペプチド、ペプチド類似体、ペプトイド又はペプチド模倣体（これらは線状ペプチド、環状ペプチド又はこれらの組合せであってもよい。）、単一のアミノ酸、酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト（部分アゴニストを含む。）又は酵素阻害剤、レセプター結合化合物（レセプター基質、アンタゴニスト、アゴニスト又は基質を含む。）、オリゴヌクレオチド、或いはオリゴＤＮＡフラグメント又はオリゴＲＮＡフラグメントからなる。さらに好ましくは、ＢＴＭはＡｆｆｉｂｏｄｙ（商標）又は単一アミノ酸、３〜１００残基ペプチド、酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト、酵素阻害剤又はレセプター結合化合物を含む。

【0034】

「ペプチド」という用語は、ペプチド結合（つまり、あるアミノ酸のアミンと別のアミノ酸のカルボキシルとを連結するアミド結合）で連結した２以上のアミノ酸（以下で定義）を含む化合物を意味する。「ペプチド模倣体」又は「模倣体」という用語は、ペプチド又はタンパク質の生物活性を模倣するが、化学的性状がペプチドでない（つまり、ペプチド結合（アミノ酸間のアミド結合）を含まない）生物活性化合物をいう。ここでは、ペプチド模倣体という用語は広義に用いられ、性状が完全にはペプチドでない分子（例えば、プソイドペプチド、セミペプチド及びペプトイド）を包含する。「ペプチド類似体」という用語は、以下に記載する１種以上のアミノ酸類似体を含むペプチドをいう。Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ， Ｍ． Ｇｏｏｄｍａｎ ｅｔ ａｌ， Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ Ｖｏｌ Ｅ２２ｃ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｔｈｉｅｍｅ （２００４）参照。

【0035】

「アミノ酸」という用語は、Ｌ−又はＤ−アミノ酸、アミノ酸類似体（例えば、ナフチルアラニン）或いはアミノ酸模倣体を意味し、これらは天然のもの又は純粋に合成由来のものであってよく、光学的に純粋なもの（即ち、単一の鏡像異性体）、従ってキラルなものであるか、或いは鏡像異性体の混合物であってよい。本明細書中では、アミノ酸に関する通常の三文字略語又は一文字略語を用いる。好ましくは、本発明のアミノ酸は光学的に純粋なものである。「アミノ酸模倣体」という用語は、アイソスター（即ち、天然化合物の立体構造及び電子構造を模倣するように設計されたもの）である天然アミノ酸の合成類似体を意味する。かかるアイソスターは当業者に公知であり、特に限定されないが、デプシペプチド、レトロ−インベルソペプチド、チオアミド、シクロアルカン又は１，５−二置換テトラゾールが挙げられる［Ｍ．Ｇｏｏｄｍａｎ，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２４，１３７（１９８５）参照］。チロシン、ヒスチジン又はプロリンのような放射性標識アミノ酸は有用なインビボイメージング剤であることが知られている。

【0036】

Ａｆｆｉｂｏｄｙ（商標）分子は、ブドウ球菌プロテインＡのＩｇＧ結合性ドメインの１つから誘導された５８アミノ酸残基ドメインに基づく。Ａｆｆｉｂｏｄｙは単量体又は二量体の形態で使用でき、Ｎｙｇｒｅｎ［ＦＥＢＳ Ｊ．，２７５，２６６８−２６７６（２００８）］及びＮｉｌｓｓｏｎ他［Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃ．Ｄｅｖ．，１０，１６７−１７５（２００７）］による総説がある。これらのＡｆｆｉｂｏｄｙはサイズが比較的小さいので、１０〜２０倍も大きな抗体（〜１５０ｋＤａ）と比べて標的組織浸透及び血液クリアランスが優れているはずである。Ａｆｆｉｂｏｄｙは、あるｐＨ域条件（ｐＨ５．５〜１１）で安定であるという利点も有する。

【0037】

ＢＴＭが酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト、酵素阻害剤又はレセプター結合化合物である場合、好ましくは非ペプチドであり、さらに好ましくは合成品である。「非ペプチド」という用語は、ペプチド結合（つまり２つのアミノ酸残基間のアミド結合）を含まない化合物を意味する。好適な酵素基質、アンタゴニスト、アゴニスト又は阻害剤には、グルコース及びグルコース類似体、脂肪酸、或いはエラスターゼ、アンギオテンシンＩＩ又はメタロプロテイナーゼ阻害剤がある。好適な合成レセプター結合化合物には、エストラジオール、エストロゲン、プロゲスチン、プロゲステロンその他のステロイドホルモン、ドーパミンＤ−１又はＤ−２レセプター用リガンド又はトロパンのようなドーパミン輸送体用リガンド、並びにセロトニンレセプター用リガンドがある。

【0038】

ＢＴＭは、最も好ましくは３〜１００残基ペプチド又はペプチド類似体である。ＢＴＭがペプチドである場合、好ましくは４〜３０残基ペプチドであり、最も好ましくは５〜２８残基ペプチドである。

【0039】

ＢＴＭが酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト又は酵素阻害剤である場合、本発明の好ましいかかる生体ターゲティング分子は合成薬物様低分子（即ち、医薬品分子）である。好ましいのは、トロパンのようなドーパミン輸送体リガンド、脂肪酸、ドーパミンＤ−２レセプターリガンド、ベンズアミド類、アンフェタミン類、ベンジルグアニジン類、イオマゼニル、ベンゾフラン（ＩＢＦ）又は馬尿酸である。

【0040】

ＢＴＭがペプチドである場合、好ましいかかるペプチドとしては、後で定義するペプチドＡ、ペプチドＢ、ペプチドＣ及びペプチドＤの他に、以下のものがある。
−ソマトスタチン、オクトレオチド及び類似体。
−ＳＴレセプターに結合するペプチド（ここで、ＳＴとは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）その他の微生物によって産生される耐熱性毒素をいう。）。
−ボンベシン。
−血管作用性小腸ペプチド。
−ニューロテンシン。
−ラミニンフラグメント、例えば、ＹＩＧＳＲ、ＰＤＳＧＲ、ＩＫＶＡＶ、ＬＲＥ及びＫＣＱＡＧＴＦＡＬＲＧＤＰＱＧ。
−白血球集積部位をターゲティングするためのＮ−ホルミル走化性ペプチド。
−血小板第４因子（ＰＦ４）及びそのフラグメント。
−ＲＧＤ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）含有ペプチド。例えば、血管新生をターゲティングし得るもの。［Ｒ．Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １９９７ Ｊｕｎ；１５（６）：５４２−６］、［Ｅ． Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ， Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ． １９９７ Ｍａｙ；５１（５）：１４１３−７］。
−α₂−抗プラスミン、フィブロネクチン、β−カゼイン、フィブリノーゲン又はトロンボスポンジンのペプチドフラグメント。α₂−抗プラスミン、フィブロネクチン、β−カゼイン、フィブリノーゲン又はトロンボスポンジンのアミノ酸配列は、以下の参考文献に見出すことができる。α₂−抗プラスミン前駆体［Ｍ．Ｔｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，１０２，１０３３（１９８７）］、β−カゼイン［Ｌ．Ｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｅ，１３９，１９３（１９９４）］、フィブロネクチン［Ａ．Ｇｕｔｍａｎ ｅｔ ａｌ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，２０７，１４５（１９９６）］、トロンボスポンジン１前駆体［Ｖ．Ｄｉｘｉｔ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８３，５４４９（１９８６）］、Ｒ．Ｆ．Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５３，１９５（１９８４）。
−アンギオテンシンＩＩ：Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ（Ｅ．Ｃ．Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９７９，Ｖｏｌ ２２，９，１０３８−１０４４）及び［Ｓａｒ，Ｉｌｅ］アンギオテンシンＩＩ：Ｓａｒ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ（Ｒ．Ｋ．Ｔｕｒｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７２，１７７，１２０３）のようなアンギオテンシンの基質又は阻害剤であるペプチド。
−アンギオテンシンＩ：Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ。

【0041】

さらに好ましいＢＴＭペプチドは以下の通り定義されるペプチドＡ、ペプチドＢ、ペプチドＣ及びペプチドＤから選択される。
（ｉ）ペプチドＡ＝Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド。
（ｉｉ）ペプチドＢ＝次式のフラグメントを含むＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド。

【0042】

【化6】

（ｉｉｉ）ペプチドＣ＝以下のアミノ酸配列を含むｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチド。

【0043】

−Ｃｙｓ^a−Ｘ¹−Ｃｙｓ^c−Ｘ²−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ³−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ^d−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ^b−Ｔｙｒ−Ｘ⁴−Ｘ⁵−Ｘ⁶−
（式中、Ｘ¹はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、
Ｘ²はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
Ｘ³はＴｈｒ又はＡｒｇであり、
Ｘ⁴はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、
Ｘ⁵はＳｅｒ又はＴｈｒであり、
Ｘ⁶はＡｓｐ又はＧｌｕであり、
Ｃｙｓ^a-dの各々はシステイン残基であって、残基ａ及びｂ並びに残基ｃ及びｄは環化して２つの独立したジスルフィド結合を形成している。）。
（ｉｖ）ペプチドＤ＝次式のランチビオティックペプチド。

【0044】

Ｃｙｓ^a−Ｘａａ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ^b−Ｃｙｓ^c−Ｓｅｒ^d−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ^c−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ^b−（ＨＯ−Ａｓｐ）−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ^a−Ｌｙｓ^d
（式中、
ＸａａはＡｒｇ又はＬｙｓであり、
Ｃｙｓ^a−Ｔｈｒ^a、Ｓｅｒ^b−Ｃｙｓ^b及びＣｙｓ^c−Ｔｈｒ^cはチオエーテル結合を介して共有結合しており、
Ｓｅｒ^d−Ｌｙｓ^dはリシノアラニン結合を介して共有結合しており、
ＨＯ−Ａｓｐはβ−ヒドロキシアスパラギン酸である。）。

【0045】

特に好ましいＢＴＭペプチドはペプチドＢ、ペプチドＣ及びペプチドＤである。

【0046】

最も好ましいかかるペプチドＢペプチドは次式（Ａ）のものである。

【0047】

【化7】

式中、Ｘ¹は−ＮＨ₂又は次式のものである。

【0048】

【化8】

式中、ａは１〜１０の整数である。

【0049】

式Ａにおいて、ａは好ましくは１である。

【0050】

好ましいｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドは以下の配列を有する。
Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ^a−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ^c−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ^d−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ^b−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ。

【0051】

ＢＴＭがペプチドである場合、ペプチドの一端又は両端（好ましくは両端）に代謝阻害基（Ｍ^IG）が結合している。このように両方のペプチド末端を保護することは、インビボイメージング用途で重要である。さもないと、急速な代謝が起こって、ＢＴＭペプチドに対する選択的結合親和性が失われてしまうと予想されるからである。「代謝阻害基（Ｍ^IG）」という用語は、アミノ末端又はカルボキシ末端でのＢＴＭペプチドの酵素（特にカルボキシペプチダーゼのようなペプチダーゼ）代謝を阻害又は抑制する生体適合性基を意味する。かかる基はインビボ用途で特に重要であり、当業者に周知であり、好適には、ペプチドアミン末端に関してはＮ−アシル化基−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^G（式中、アシル基−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^Gは、Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_3-10アリールから選択されるＲ^Gを有しているか或いは及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成ブロックを含む。）から選択される。かかるアミノ末端Ｍ^IG基として好ましいのはアセチル、ベンジルオキシカルボニル又はトリフルオロアセチルであり、最も好ましくはアセチルである。

【0052】

ペプチドカルボキシル末端に適した代謝阻害基には、カルボキサミド、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、ベンジルエステル、シクロヘキシルエステル、アミノアルコール及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成ブロックがある。ＢＴＭペプチドのカルボキシ末端アミノ酸残基に適したＭ^IG基は、アミノ酸残基の末端アミンをＣ_1-4アルキル基（好ましくはメチル基）でＮ−アルキル化したものである。かかるＭ^IG基として好ましいのはカルボキサミド又はＰＥＧであり、最も好ましい基はカルボキサミドである。

【0053】

第１の態様の方法は好ましくは、ステップ（ｉｉ）と（ｉｉｉ）を同時に行うように実施する。そのようにすると、式（ＩＩＡ）又は（ＩＩＢ）の遊離アミノオキシ化合物がその場で生成し、従って生成する反応媒体中に既に存在する式（ＩＩＩＡ）又は（ＩＩＩＢ）のカルボニル化合物と反応することができる。これは、比較的に反応性の遊離アミノオキシ化合物の副反応の機会が最小化されるので、所望の放射性コンジュゲート生成物の収率を改良することが期待される。

【0054】

第１の態様の縮合ステップ（ｉｉｉ）は好ましくはアニリン又はその塩（例えばアニリン塩酸塩）の存在下で行う。オキシムライゲーションにアニリンを使用すると、全体の反応速度を増大するのに効果的であり、かかる反応をより弱い酸性ｐＨ値で起こさせることができるということが示された［Ｄｉｒｋｓｅｎ他，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，４５，７５８１−７５８４（２００６）］。

【0055】

第１の態様の方法は好ましくは、式（ＩＶＡ）又は（ＩＶＢ）の放射性標識コンジュゲートが、哺乳類への投与に適した形態で、さらに好ましくは第２の態様（後記）で記載するようにインビボイメージング用の放射性医薬品として使用するのに適した形態で得られるように行われる。

【0056】

第１の態様の方法は好ましくは、第２及び第４の態様（後記）で記載されるように自動合成装置を用いて行われる。

【0057】

Ｎ−（１−エトキシエチリデン）−２−アミノオキシ酢酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルはＩｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ社（ドイツ、９５６１５、マルクトレドヴィッツ、ヴァルダーショーファー・シュトラーセ４９−５１）から市販されている。このＥｅｉ保護アミノ−オキシ活性エステルは、アミンを含有するＢＴＭ（例えばＬｙｓ残基を有する）に直接コンジュゲートさせて式（ＩＡ）の保護化合物を得ることができる。Ｅｅｉ保護ペプチドを得る別の経路がＤｕｌｅｒｙ他［Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，６３，１１９５２−１１９５８（２００７）］及びＦｏｉｌｌａｒｄ他［Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，７３，９８３−９９１（２００８）］により記載されている。Ｄｕｌｅｒｙ及びＦｏｉｌｌａｒｄはまたＥｅｉ保護基の脱保護に適した条件も記載している。

【0058】

式ＩＢのアミノオキシ化合物は次のようにして得ることができる。（４−アミノフェニル）トリメチルアンモニウムとＮ−（１−エトキシエチリデン）−２−アミノオキシ酢酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルを有機溶媒中第三塩基の存在下で反応させて（Ｚ）−４−（２−（（（１−エトキシエチリデン）アミノ）オキシ）アセトアミド）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルベンゼンアミニウムを形成する。（Ｚ）−４−（２−（（（１−エトキシエチリデン）アミノ）オキシ）アセトアミド）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルベンゼンアミニウムを、標準的な¹⁸Ｆ−標識条件を用いて¹⁸Ｆで標識して、次式の（Ｚ）−エチル Ｎ−２−（（４−フルオロフェニル）アミノ）−２−オキソエトキシアセトイミデートを得る。

【0059】

【化9】

式ＩＩＩＡのカルボニル化合物は次のようにして得ることができる。¹⁸Ｆ−フッ素化アルデヒドは¹⁸Ｆ−フルオロベンズアルデヒド又はｐ−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−¹⁸Ｆ−フルオロシリル）ベンズアルデヒド（¹⁸Ｆ−ＳｉＦＡ−Ａ）であり得る。式¹⁸Ｆ（ＣＨ₂）₂Ｏ［ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ］_qＣＨ₂ＣＨＯ（ここで、ｑは３である）の¹⁸Ｆ−標識脂肪族アルデヒドはＧｌａｓｅｒ他の方法によって得ることができる［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１９（４），９５１−９５７（２００８）］。¹⁸Ｆ−フルオロベンズアルデヒドはＧｌａｓｅｒ他の方法によって得ることができる［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，５２，３２７−３３０（２００９）］。¹⁸Ｆ−フルオロベンズアルデヒドの前駆体、すなわちＭｅ₃Ｎ⁺−Ｃ₆Ｈ₄−ＣＨＯ．ＣＦ₃ＳＯ₃^-はＨａｋａ他の方法によって得ることができる［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２７，８２３−８３３（１９８９）］。

【0060】

¹²³Ｉ−ベンズアルデヒドは、Ｔｈｕｍｓｈｉｒｎ他によって記載されている対応するトリメチルスズ前駆体から製造することができる［Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．，９，２７１７−２７２５（２００３）］。

【0061】

ＢＴＭがモノクローナル抗体である場合、式ＩＩＩＢのカルボニル基は、例えば過ヨウ素酸塩を用いた抗体の糖部分の酸化により導入することができる［Ｋｕｒｔｈ他及びその引用文献、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３６，１２５５−１２６１（１９９３）］。アルデヒド側鎖を有するアミノ酸はＴｅｔ．Ｌｅｔｔ．，４３（１２），ｐ．２３０３−２３０６（２００２）に記載されている方法によってペプチド配列中に導入することができる。

【0062】

式ＩＩＩＡ又はＩＩＩＢのカルボニル化合物は、場合により、適切な保護誘導体の脱保護によってその場で生成し得る。カルボニル保護基の使用は、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ及びＰｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，［Ｗｉｌｅｙ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，（２００６）］に記載されている。

【0063】

第２の態様では、本発明は、放射性医薬組成物の製造方法を提供し、ここで放射性医薬組成物は第１の態様で定義された式（ＩＶＡ）又は（ＩＶＢ）の放射性標識コンジュゲートを生体適合性担体と共に哺乳類への投与に適した形態で含み、製造方法は第１の態様の放射性標識方法を含む。

【0064】

第２の態様における式（ＩＶＡ）又は（ＩＶＢ）の放射性標識コンジュゲートの好ましい実施形態は第１の態様（上記）に記載した通りである。第２の態様の放射性標識コンジュゲートは好ましくは式（ＩＶＡ）のものである。

【0065】

「哺乳類への投与に適した形態」という記載は、無菌でパイロジェンフリーであり、毒性又は有害作用を生じる化合物を含まず、生体適合性ｐＨ（約ｐＨ４．０〜１０．５）で製剤化される組成物を意味する。かかる組成物は、インビボで塞栓を生じる危険性のある粒状物質を含んでおらず、しかも体液（例えば、血液）と接触しても沈殿を生じないように製剤化される。かかる組成物は、生物学的に適合性の賦形剤のみを含み、好ましくは等張性である。

【0066】

「生体適合性担体」とは、放射性コンジュゲートを懸濁又は好ましくは溶解できる流体、特に液体であって、組成物が生理学的に認容できるもの、つまり毒性も耐え難い不快感も伴わずに哺乳類の身体に投与することができるようなものである。生体適合性担体は好適には注射可能な担体液であり、例えば、パイロジェンフリーの注射用滅菌水、食塩液のような水溶液（これは注射用の最終製剤が等張性となるように調整するのに都合がよい）、生体適合性緩衝剤を含む水性緩衝液（例えばリン酸緩衝液）、１種以上の張度調節物質（例えば血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えばグルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えばソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えばグリセロール）その他の非イオン性ポリオール材料（例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液である。好ましくは、生体適合性担体はパイロジェンフリーの注射用水又は等張食塩水又はリン酸緩衝液である。

【0067】

放射性標識コンジュゲート及び生体適合性担体は各々、無菌健全性及び／又は放射能安全性、さらに適宜ヘッドスペースの不活性ガス（例えば、窒素又はアルゴン）を維持できるとともに、注射器又はカニューレでの溶液の添加及び吸引も行うことのできる密封容器からなる適当なバイアル又は容器に入れた状態で供給される。かかる容器として好ましいのは、セプタムシールバイアルであり、気密蓋をオーバーシール（通常はアルミニウム製）と共にクリンプオンする。蓋は、無菌健全性を維持したまま皮下注射針で１回又は複数回穿刺するのに適したもの（例えば、クリンプオン式セプタムシール蓋）である。かかる容器は、所望に応じて（例えばヘッドスペースガスの変更又は溶液の脱気のため）真空に蓋が耐えるとともに、酸素や水蒸気のような外部雰囲気ガスを侵入させずに減圧のような圧力変化に耐えるという追加の利点がある。

【0068】

好ましい多用量用容器は、患者の複数回分の用量を収容した単一バルクバイアル（例えば容積１０〜５０ｃｍ³のもの）からなり、臨床症状に応じて製剤の有効期間中様々な時間間隔で１回分の用量を臨床グレードの注射器に吸引することができる。プレフィルド型注射器は患者の１回分の用量つまり「単位用量」を収容するように設計され、そのため好ましくは使い捨てその他臨床用に適した注射器である。

【0069】

放射性医薬組成物は、抗菌保存剤、ｐＨ調整剤、充填剤、放射線防護剤、可溶化剤又はモル浸透圧濃度調整剤のような追加の添加剤を適宜含んでいてもよい。「放射線防護剤」という用語は、水の放射線分解で生じる含酸素フリーラジカルのような反応性の高いフリーラジカルを捕捉することによって、酸化還元反応のような分解反応を抑制する化合物を意味する。本発明の放射線防護剤は、好適には、アスコルビン酸、パラアミノ安息香酸（つまり４−アミノ安息香酸）、ゲンチシン酸（つまり２，５−ジヒドロキシ安息香酸）及びそれらの生体適合性陽イオンとの塩から選択される。「可溶化剤」という用語は、組成物に存在する添加剤であって、溶媒中での造影剤の溶解度を高める添加剤を意味する。かかる溶媒として好ましいのは水性媒質であり、従って可溶化剤は好ましくは水中での溶解度を高める。かかる可溶化剤として適したものとしては、Ｃ_1-4アルコール、グリセリン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノオレエート、ポリソルベート、ポリ（オキシエチレン）ポリ（オキシプロピレン）ポリ（オキシエチレン）ブロック共重合体（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（商標））、シクロデキストリン（例えば、α−、β−又はγ−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン或いはヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン）及びレシチンがある。

【0070】

「抗菌保存剤」という用語は、細菌、酵母又はカビなどの有害微生物の増殖を阻害する薬剤を意味する。抗菌保存剤は、使用する用量に応じてある程度の殺菌作用を示すこともある。本発明の抗菌保存剤の主な役割は、医薬組成物におけるこのような微生物の増殖を阻止することである。ただし、抗菌保存剤は、投与に先立って組成物の製造に使用されるキットの１種以上の成分における有害微生物の増殖の防止にも適宜使用できる。好適な抗菌保存剤には、パラベン類（即ち、メチル、エチル、プロピル又はブチルパラベン或いはこれらの混合物）、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールがある。好ましい抗菌保存剤はパラベン類である。

【0071】

「ｐＨ調整剤」という用語は、組成物のｐＨがヒト又は哺乳類への投与のための許容範囲（約ｐＨ４．０〜１０．５）内に確実に収まるようにするのに有用な化合物又は化合物混合物を意味する。好適なかかるｐＨ調整剤には、トリシン、リン酸塩又はＴＲＩＳ［即ち、トリス（ヒドロキシルメチル）アミノメタン］のような薬学的に許容される緩衝剤、及び炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物のような薬学的に許容される塩基がある。組成物をキットの形態で使用する場合には、キットのユーザーが多段操作の一部としてｐＨを調整できるように、ｐＨ調整剤を適宜別個のバイアル又は容器に入れて供給してもよい。

【0072】

「充填剤」という用語は、製造及び凍結乾燥時における材料の取扱いを容易にすることができる薬学的に許容される増量剤を意味する。好適な充填剤には、塩化ナトリウムのような無機塩、及びスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースのような水溶性の糖又は糖アルコールがある。

【0073】

第２の態様の方法は、次のような様々な方法で実施し得る。
ａ）クリーンルーム環境でステップを実施する無菌製造技術、
ｂ）第１の態様のステップ（ｉ）−（ｉｉｉ）を無菌製造を使用しないで実施し、その後最後のステップとして滅菌する［例えば、ガンマ線照射、オートクレーブ乾式加熱又は化学的処理（例えば酸化エチレン）］最終滅菌、
ｃ）式（ＩＡ）又は（ＩＩＩＢ）の適切な非放射性前駆体及び任意の添加物を含む無菌の非放射性キット製剤をそれぞれ式（ＩＩＩＡ）又は（ＩＢ）の放射性化合物と反応させるキット法、
ｄ）自動合成装置を用いてステップを実施する無菌製造技術。

【0074】

方法（ｄ）が好ましい。これは第４の態様（後記）で記載する。

【0075】

第３の態様では、本発明は第２の態様の方法に有用な前駆体を提供し、この前駆体は滅菌形態の式（ＩＡ）の保護化合物を含む。

【0076】

この第３の態様における式（ＩＡ）の化合物の好ましい実施形態については第１の態様（上記）で記載した。

【0077】

式（ＩＡ）の「前駆体」はＢＴＭの非放射性の誘導体を含む。かかる前駆体は合成であり、従来法で良好な化学的純度で得ることができる。この「前駆体」は場合によりさらに、生体ターゲティング分子のある種の官能基のための１以上の保護基（Ｐ^GP）も含み得る。Ｐ^GPは第１の態様（上記）で定義した通りである。

【0078】

式（ＩＡ）の保護化合物の好ましい滅菌形態は凍結乾燥された固体である。さらに好ましくは、滅菌前駆体は、第５の態様（後記）で記載するようにカセットの一部として供給される。

【0079】

滅菌化合物を得る方法は、第２の態様（上記）の放射性医薬組成物について記載した通りである。

【0080】

第４の態様では、本発明は、第１又は第２の態様の方法を実施するための自動合成装置の使用を提供する。

【0081】

第３の態様における第１の態様の方法の好ましい実施形態は第１の態様（上記）で記載した通りである。好ましくは、第４の態様は第２の態様の方法の実施、つまり放射性医薬組成物の製造に使用される。

【0082】

「自動合成装置」という用語は、Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙ他［Ｃｌｉｎ．Ｐｏｓｉｔｒ．Ｉｍａｇ．，２（５），２３３−２５３（１９９９）］に記載されているような単位操作の原理に基づく自動化モジュールを意味する。「単位操作」という用語は、複雑なプロセスが一連の簡単な操作又は反応に集約されることを意味し、広範な材料に適用できる。かかる自動合成装置は、本発明の方法、特に放射性医薬品生成物が所望される場合の本発明の方法に好ましい。これらは、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、ＣＴＩ社．、Ｉｏｎ Ｂｅａｍ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ社（ベルギー国、Ｂ−１３４８ルヴァン・ラ・ヌーブ、シュマン・デュ・シクロトロン３）、Ｒａｙｔｅｓｔ社（ドイツ）及びＢｉｏｓｃａｎ社（米国）を始めとする様々な供給業者から市販されている［Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙ他、上掲］。

【0083】

市販の自動合成装置は、放射性医薬品の製造の結果として生じる液体放射性廃棄物用の適当な容器も提供する。自動合成装置は、適切に設計された放射能作業セル内で使用するように設計されているので、通例、放射線遮蔽が設けられていない。放射能作業セルは、潜在的な放射線量からオペレーターを保護するのに適した放射線遮蔽をもたらすとともに、化学薬品蒸気及び／又は放射性蒸気を除去するための換気装置を与える。自動合成装置は、好ましくはカセットを備える。

【0084】

「カセット」という用語は、合成装置の可動部材の機械的運動がカセットの外側から（つまり外部から）カセットの動作を制御するように、自動合成装置（上述）に着脱自在かつ交換可能に装着できるように設計された装置を意味する。好適なカセットは直線状に並んだ弁の列を含み、その各々は倒立セプタムシールバイアルの針穿刺又は気密連結継手によって試薬又はバイアルを装着することができるポートに結合している。各弁は、自動合成装置の対応する可動アームとかみ合うはめ込み型継手を有している。カセットを自動合成装置に装着した場合、アームの外部回転が弁の開閉を制御する。自動合成装置の追加の可動部材は、注射器のプランジャー先端をつかみ、注射器外筒を上昇又は降下させるように設計されている。

【0085】

カセットは汎用性であって、通例は試薬を装着することができる複数の位置、及び試薬のシリンジバイアル又はクロマトグラフィーカートリッジ（例えば、固相抽出（ＳＰＥ））を装着するのに適した複数のポートを有している。カセットは常に反応容器を含んでいる。かかる反応容器は好ましくは１〜１０ｃｍ³、最も好ましくは２〜５ｃｍ³の容積を有しており、カセットの様々なポートから試薬又は溶媒を移送できるように、カセットの３以上のポートが反応容器に連結されるように構成されている。好ましくは、カセットは直線状に並んだ１５〜４０個の弁、最も好ましくは２０〜３０個の弁を有しており、２５個の弁が特に好ましい。カセットの弁は好ましくは各々同一であり、最も好ましくは三方弁である。本発明のカセットは放射性医薬品の製造に適するように設計され、医薬グレードの材料であって理想的には放射線分解にも耐える材料で製造される。

【0086】

本発明の好ましい自動合成装置は、放射性フッ素化された放射性医薬品の所定バッチの製造を実施するのに必要なすべての試薬、反応容器及び機器を含むディスポーザブルつまり使い捨てカセットを備える。かかるカセットは、単にカセットを交換するだけで、自動合成装置が相互汚染のリスクを最小限に抑えながら各種の放射性医薬品を製造できる柔軟性をもつことを意味する。カセットアプローチには、装置構成の単純化とそれに伴うオペレーターエラーのリスクの低減、ＧＭＰ（Good Manufacturing Practice）コンプライアンスの向上、マルチトレーサー能力、生産作業間の迅速な変更、カセット及び試薬の作業前自動診断検査、実施すべき合成と化学試薬との自動バーコードクロスチェック、試薬のトレーサビリティ、使い捨てであり、そのため相互汚染のリスクがなく、改竄及び誤用を防ぐことができるという利点がある。

【0087】

第５の態様では、本発明は、第４の態様で定義された自動合成装置で使用するのに適した単回使用の使い捨てカセットを提供し、カセットは第３の態様の前駆体を含む。

【0088】

第５の態様における自動合成装置及びカセットの好ましい態様は第４の態様（上記）で記載した通りである。第５の態様における前駆体の好ましい態様は第３の態様（上記）で記載した通りである。

【0089】

第６の態様では、本発明は、式（ＩＡ）の保護化合物を提供し、ここでそのＸ¹及びその好ましい態様は第１の態様で定義した通りであり、ＢＴＭは第１の態様（上記）で定義したＡｆｆｉｂｏｄｙ、又はペプチドＡ、ペプチドＢ、ペプチドＣ若しくはペプチドＤ、及びその好ましい態様である。

【0090】

第７の態様では、本発明は式（ＩＢ）の保護化合物を提供し、ここでＸ¹及びＱ並びにその好ましい態様は第１の態様で定義した通りである。

【0091】

第８の態様では、本発明は、第１の態様で定義された式（ＩＡ）又は（ＩＢ）の保護化合物の、第１の態様で定義された生体ターゲティング分子（ＢＴＭ）の放射性標識における使用を提供する。第８の態様における式（ＩＡ）又は（ＩＢ）の化合物及びＢＴＭの好ましい態様は第１の態様（上記）に記載した通りである。

【実施例】

【0092】

以下に詳細を示す非限定例により本発明を例証する。実施例１は、本発明のｃ−Ｍｅｔターゲティングペプチド（「ペプチド１」）の合成を提供する。実施例１は、アミノオキシ官能基が本発明の保護基（Ｅｅｉ）で保護されたアミノオキシ官能化ペプチド１（「化合物１」）の合成を提供する。実施例３は、化合物１を脱保護して遊離アミノオキシペプチド１（「化合物２」）を得る例を提供する。実施例４は、化合物１のその場で（すなわちワンポット）の脱保護及びアルデヒドコンジュゲーションでコンジュゲート（「化合物３」）を得る例を提供する。実施例５は本発明の別のＥｅｉ保護ペプチドの合成を、実施例６はその脱保護を提供する。

【0093】

略号
従来のアミノ酸の一文字又は三文字略語を使用する。
Ａｃ：アセチル
Ａｃｍ：アセトアミドメチル
ＡＣＮ：アセトニトリル
ＡｃＯＨ：酢酸
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
ｔＢｕ：第三−ブチル
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
Ｅｅｉ：エトキシエチリジン；
Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＢＴＵ：Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＮＨＳ：Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド
ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン
ＮＭＰ：１−メチル−２−ピロリジノン
Ｐｂｆ：２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル
ｔＢｕ：ｔｅｒｔ−ブチル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン
Ｔｒｔ：トリチル。

【0094】

【表1】

実施例１：ペプチド１の合成
ステップ（ａ）：保護前駆体線状ペプチドの合成
前駆体の線状ペプチドは次の構造を有する。
Ａｃ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂
０．１ｍｍｏｌのＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ Ｎｏｖａｇｅｌ樹脂から出発してＦｍｏｃ化学を用いてＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４３３Ａペプチド合成装置でペプチジル樹脂Ｈ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｈｒ（Ψ^Me,Meｐｒｏ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ポリマーを組み立てた。過剰の１ｍｍｏｌの予備活性化アミノ酸（ＨＢＴＵを用いる）をカップリングステップに適用した。Ｇｌｕ−Ｔｈｒプソイドプロリン（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ ０５−２０−１１２２）を配列中に導入した。樹脂を窒素バブラー装置に移し、ＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した無水酢酸（１ｍｍｏｌ）とＮＭＭ（１ｍｍｏｌ）の溶液で６０ｍｉｎ処理した。無水物溶液を濾過により除去し、樹脂をＤＣＭで洗浄し、窒素流下で乾燥した。

【0095】

樹脂からのペプチドの開裂と同時の側鎖保護基の除去を、２．５％のＴＩＳ、２．５％の４−チオクレゾール及び２．５％の水を含有するＴＦＡ（１０ｍＬ）中で２時間３０ｍｉｎ行った。樹脂を濾過により除去し、ＴＦＡを真空中で除去し、ジエチルエーテルを残渣に加えた。生成した沈殿をジエチルエーテルで洗浄し、風乾して２６４ｍｇの粗ペプチドを得た。

【0096】

粗ペプチドの分取ＨＰＬＣ（勾配：２０〜３０％Ｂ、４０ｍｉｎ、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：１０ｍＬ／ｍｉｎ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２） ２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３０ｍｉｎ）による精製で、１００ｍｇの純粋なペプチド１線状前駆体を得た。純粋な生成物を分析用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％Ｂ、１０ｍｉｎ、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：０．３ｍＬ／ｍｉｎ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２） ５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ ２１４ｎｍ、生成物保持時間：６．５４ｍｉｎ）で分析した。さらに生成物の特性決定を、エレクトロスプレー質量分析（ＭＨ₂²⁺計算値：１４６４．６、ＭＨ₂²⁺実測値：１４６５．１）を用いて行った。

【0097】

ステップ（ｂ）：単環式Ｃｙｓ４−１６ジスルフィド架橋の生成
Ｃｙｓ４−１６；Ａｃ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂
ステップ（ａ）の線状前駆体（１００ｍｇ）を５％ＤＭＳＯ／水（２００ｍＬ）に溶解し、アンモニアを用いて溶液をｐＨ６に調整した。反応混合物を５日攪拌した。次に、溶液をＴＦＡを用いてｐＨ２に調整し、殆どの溶媒を真空中で蒸発により除去した。残渣（４０ｍＬ）を生成物精製のために少しずつ分取ＨＰＬＣカラムに注入した。

【0098】

残渣の分取ＨＰＬＣ（勾配：０％Ｂで１０ｍｉｎ、次に０〜４０％Ｂで４０ｍｉｎ、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：１０ｍＬ／ｍｉｎ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２） ２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ ２１４ｎｍ、生成物保持時間：４４ｍｉｎ）による精製で、７２ｍｇの純粋なペプチド１単環式前駆体を得た。純粋な生成物（異性体Ｐ１〜Ｐ３の混合物）を分析用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％Ｂ、１０ｍｉｎ、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：０．３ｍＬ／ｍｉｎ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２） ５０×２ ｍｍ、検出：ＵＶ ２１４ｎｍ、生成物保持時間：５．３７ｍｉｎ（Ｐ１）；５．６１ｍｉｎ（Ｐ２）；６．０５ｍｉｎ（Ｐ３））で分析した。さらにエレクトロスプレー質量分析（ＭＨ₂²⁺計算値：１４６３．６、ＭＨ₂²⁺実測値：１４６４．１ Ｐ１）；１４６４．４（Ｐ２）；１４６４．３（Ｐ３））を用いてを用いて生成物の特性決定を行った。

【0099】

ステップ（ｃ）：第２のＣｙｓ６−１４ジスルフィド架橋（ペプチド１）の生成
ステップ（ｂ）の単環式前駆体（７２ｍｇ）を窒素雰囲気下で７５％ＡｃＯＨ／水（７２ｍＬ）に溶解した。１ＭのＨＣｌ（７．２ｍＬ）及びＡｃＯＨ（４．８ｍＬ）中の０．０５ＭのＩ２をこの順に加え、混合物を４５ｍｉｎ攪拌した。１Ｍアスコルビン酸（１ｍＬ）を加えて無色の混合物を得た。溶媒の殆どを真空中で蒸発させ、残渣（１８ｍＬ）を水／０．１％ＴＦＡ（４ｍＬ）で希釈しし、生成物を分取ＨＰＬＣで精製した。残渣の分取ＨＰＬＣ（勾配：０％Ｂで１０ｍｉｎ、次いで２０〜３０％Ｂで４０ｍｉｎ、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：１０ｍＬ／ｍｉｎ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２） ２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ ２１４ｎｍ、生成物保持時間：４３−５３ｍｉｎ）による精製で５２ｍｇの純粋なペプチド１を得た。純粋な生成物を分析用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％Ｂ、１０ｍｉｎ、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：０．３ｍＬ／ｍｉｎ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２） ５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ ２１４ｎｍ、生成物保持時間：６．５４ｍｉｎ）で分析した。さらにエレクトロスプレー質量分析（ＭＨ₂²⁺計算値：１３９１．５、ＭＨ₂²⁺実測値：１３９２．５）を用いて生成物を特性決定した。

【0100】

実施例２：ペプチド１のＥｅｉ保護アミノオキシコンジュゲート（化合物１）の合成
ペプチド１（０．６０ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）及びＥｅｉ−ＡＯＡｃ−Ｏｓｕ（ＩＲＩＳ Ｂｉｏｔｅｃｈ；８３ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（７５μＬ、２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を３０ｍｉｎ振盪した。ＤＩＰＥＡの第２の試料（７５μＬ、２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１ｈｒ振盪した。次に、反応混合物を１０％ＡＣＮ／水／０．ｌ％酢酸アンモニウム（１０ｍＬ）で希釈し、生成物を分取ＨＰＬＣで精製した。純粋な生成物を含有する画分を合わせ、生成物を凍結乾燥して５５０ｍｇ（８９％収率）の化合物１を得た。

【0101】

純粋な生成物を分析用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％Ｂ、５ｍｉｎ、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：０．６ｍＬ／ｍｉｎ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２） ２０×２ ｍｍ、検出：ＵＶ ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３．５６ｍｉｎ）で分析した。さらにエレクトロスプレー質量分析（ＭＨ₂²⁺計算値：１４６３．１、ＭＨ₂²⁺実測値：１４６３．２）を用いて生成物を特性決定した。

【0102】

実施例３：ペプチド１のアミノオキシコンジュゲート（化合物２）を得るための脱保護
化合物１（実施例２；４６１ｍｇ、１５８μｍｏｌ）を２．５％ＴＦＡ／水（４６ｍＬ）の溶液に懸濁させ、溶液を６０ｍｉｎ振盪／超音波処理した。懸濁液を水（４１４ｍＬ）で希釈し、溶液を凍結乾燥して４７２ｍｇ（１０５％）の化合物２を得た。

【0103】

純粋な生成物を分析用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％Ｂ、５ｍｉｎ、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：０．６ｍＬ／ｍｉｎ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２） ２０×２ｍｍ、検出：ＵＶ ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３．００ｍｉｎ）で分析した。さらに、エレクトロスプレー質量分析（ＭＨ₂²⁺計算値：１４２８．１、ＭＨ₂²⁺実測値：１４２８．６）を用いて生成物を特性決定した。

【0104】

実施例４：化合物１とアルデヒドのワンポットコンジュゲーション
エタノール（０．５ｍＬ）中のアセトアルデヒド（１μＬ、１７μｍｏｌ）を１Ｍ ＨＣｌ（０．５ｍＬ）中の化合物１（実施例２；５ｍｇ、１．７μｍｏｌ）の混合物に加え、反応混合物を３０ｍｉｎ振盪／超音波処理した。次に、反応混合物を１０％ＡＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ（７ｍＬ）で希釈し、生成物を半調製用ＨＰＬＣで精製して３．８ｍｇ（７８％）の化合物３を得た。

【0105】

純粋な生成物を分析用ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％Ｂ、５ｍｉｎ、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：０．６ｍＬ／ｍｉｎ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２） ２０×２ｍｍ、検出：ＵＶ ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３．２２ｍｉｎ）で分析した。さらにエレクトロスプレー質量分析（ＭＨ₂²⁺計算値：１４４１．１、ＭＨ₂²⁺実測値：１４４１．４）を用いて生成物を特性決定した。

【0106】

実施例５：（Ｅｅｉ−アミノオキシ）アセチル−ズラマイシン（化合物４）の合成

【0107】

【化10】

ズラマイシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ；５０ｍｇ、２５μｍｏｌ）、（Ｅｅｉ−アミノオキシ）酢酸ＮＨＳエステル（Ｉｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，５．１ｍｇ、２０μｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１７μＬ、１００μｍｏｌ）をＮＭＰ（１ｍＬ）に溶解した。反応混合物を４５ｍｉｎ振盪した。次に混合物を水／０．１％酢酸（８ｍＬ）で希釈し、生成物を分取ＨＰＬＣで精製した。

【0108】

分取ＨＰＬＣ（実施例１と同じ、勾配１４−４５％Ｂ、４０ｍｉｎ、Ａ＝水／０．１％酢酸、Ｂ＝ＡＣＮ）で精製して１４ｍｇの純粋な化合物４を得た（収率２６％）。精製した物質をＬＣ−ＭＳ（勾配：２０〜５０％Ｂ、５ｍｉｎ、ｔＲ：２．５、２．７ｍｉｎ、実測値ｍ／ｚ：１０７８．８、予測値ＭＨ₂²⁺：１０７８．５）で分析した。

【0109】

（Ｅｅｉ−アミノオキシ）アセチル−ズラマイシン位置異性体のクロマトグラフ分離は０．１％ＴＦＡを用いて分析用ＨＰＬＣで達成できた。しかし、Ｅｅｉ保護基は０．１％ＴＦＡ中で不安定であるので分取分離は実行できなかった。位置異性体は０．１％酢酸で分離されなかった。

【0110】

実施例６：アミノオキシアセチル−ズラマイシン（化合物５）の合成

【0111】

【化11】

化合物４（実施例５；１４ｍｇ）をアルゴン下で４０ｍｉｎ２．５％ＴＦＡ／水（２．８ｍＬ）で処理した。反応混合物を水（３１ｍＬ）で希釈し、生成物を凍結乾燥して（イソプロパノール／ドライアイスを用いてアルゴン下で凍結）、１８ｍｇの化合物５を得た。凍結乾燥した生成物をＬＣ−ＭＳ（勾配：２０〜５０％Ｂ、５ｍｉｎ、ｔＲ：２．５及び２．１ｍｉｎ、実測値ｍ／ｚ：１０４３．８、予測値ＭＨ₂²⁺：１０４３．５）で分析した。

【0112】

化合物５位置異性体のクロマトグラフ分離は分析用ＨＰＬＣで０．１％ＴＦＡを用いて達成できなかった。しかし、溶媒及び環境中の痕跡量のケトン及びアルデヒドに対する遊離アミノオキシ基の高い反応性のため、位置異性体を分離する試みは行わなかった。

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]