特許 6234908 エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸含有組成物の製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6234908

(24)【登録日】2017年11月2日

(45)【発行日】2017年11月22日

(54)【発明の名称】エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸含有組成物の製造方法

(51)【国際特許分類】

   C11C 1/00 20060101AFI20171113BHJP

   A23L 33/10 20160101ALN20171113BHJP

【ＦＩ】

   C11C1/00

   !A23L33/10

【請求項の数】8

【全頁数】17

(21)【出願番号】特願2014-199852(P2014-199852)

(22)【出願日】2014年9月30日

(65)【公開番号】特開2015-91940(P2015-91940A)

(43)【公開日】2015年5月14日

【審査請求日】2017年2月14日

(31)【優先権主張番号】特願2013-203261(P2013-203261)

(32)【優先日】2013年9月30日

(33)【優先権主張国】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】301049744

【氏名又は名称】日清ファルマ株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110000084

【氏名又は名称】特許業務法人アルガ特許事務所

(74)【代理人】

【識別番号】100077562

【弁理士】

【氏名又は名称】高野 登志雄

(74)【代理人】

【識別番号】100096736

【弁理士】

【氏名又は名称】中嶋 俊夫

(74)【代理人】

【識別番号】100117156

【弁理士】

【氏名又は名称】村田 正樹

(74)【代理人】

【識別番号】100111028

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 博人

(72)【発明者】

【氏名】原田 昌卓

(72)【発明者】

【氏名】伊藤 瑞恵

(72)【発明者】

【氏名】野中 信吾

【審査官】 吉田 邦久

(56)【参考文献】

【文献】 特開平０４−２４３８４９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０４−１０３５５８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０４−２１８５９６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１０−０６４９７４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１３−５４２９２７（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ１１Ｃ １／００

Ａ２３Ｌ ３３／１０

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸含有組成物の製造方法であって：
（１）エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸を含む高度不飽和脂肪酸のアルキルエステルを含有する原料を、銀塩を含む水性溶液と接触させること；
（２）該水性溶液を５〜３０℃に維持しながら、有機溶媒と接触させ、次いで水相を回収すること；ならびに
（３）該水相に有機溶媒を添加した後、有機溶媒相を回収すること、
を含み、
該工程（２）において、該有機溶媒の量が、該水性溶液１００体積部に対して３〜３００体積部である、方法。

【請求項2】

前記原料が、エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸を全脂肪酸の量に対して１５質量％以上含有する、請求項１記載の方法。

【請求項3】

前記工程（２）における有機溶媒がヘキサン及びシクロヘキサンから選択される１種以上である、請求項１又は２記載の方法。

【請求項4】

前記工程（２）において、前記水性溶液の温度が１０〜２５℃に維持される、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。

【請求項5】

前記工程（２）において、前記水性溶液の温度が工程（１）の温度に対して＋５〜−１０℃の範囲に維持される、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。

【請求項6】

前記工程（１）の反応温度が５℃以上８０℃以下である、請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。

【請求項7】

前記工程（３）において有機溶媒相を回収した後に残った水相に含まれる銀塩を含有する銀塩水性溶液を用いて上記工程（１）〜（３）を繰り返すことを含む、請求項１〜６のいずれか１項記載の方法。

【請求項8】

エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸を含む高度不飽和脂肪酸のアルキルエステルと銀との錯体から、エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸のアルキルエステルと銀との錯体を分離するための方法であって、エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸を含む高度不飽和脂肪酸のアルキルエステルと銀との錯体を含む水性溶液を、５〜３０℃に維持しながら、有機溶媒と接触させ、次いで水相を回収することを含み、該有機溶媒の量が、該水性溶液１００体積部に対して３〜３００体積部である、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸含有組成物の製造方法に関する。

【背景技術】

【0002】

高度不飽和脂肪酸であるエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）は、近年その薬理効果が明らかとなり、医薬品や健康食品の原料として利用されている。高度不飽和脂肪酸は、二重結合を複数有するため、化学合成によって得ることは容易ではない。したがって、工業利用される高度不飽和脂肪酸のほとんどは、高度不飽和脂肪酸を豊富に含む海洋生物由来原料、例えば魚油などから抽出又は精製することによって製造されている。しかしながら、生物由来原料は、炭素数、二重結合の数や位置、さらには立体異性体の構成比などが異なる多種の脂肪酸の混合物であるため、目的とするＥＰＡやＤＨＡの含有量は必ずしも高くない。

【0003】

そのため、従来、生物由来原料からＥＰＡやＤＨＡを選択的に精製することが求められていた。特に、食品や医薬品の原料としてＥＰＡやＤＨＡを用いる場合、極力不純物がない高純度のＥＰＡやＤＨＡが求められている。また、海洋生物由来原料から精製したＥＰＡやＤＨＡは、微量でも不純物を含有すると強い魚臭を発散するため、従来のＥＰＡやＤＨＡを含有する食品や医薬品は、ＥＰＡやＤＨＡをカプセルに密封したり、マスキング剤とともに製剤化するなど、臭いの対策を施す必要があった。したがって、医薬品や健康食品の原料となり得る、ＥＰＡやＤＨＡを高純度に含有する組成物を簡便に製造することができる方法が求められている。

【0004】

特許文献１〜４には、ＥＰＡ等の高度不飽和脂肪酸を含む原料に銀塩を含む水溶液を混合して高度不飽和脂肪酸と銀塩との錯体を形成させた後、水相を分離し、次いで有機溶媒を用いて抽出するか（特許文献１）、加温して錯体を解離させるか（特許文献２）、液膜に透過させるか（特許文献３）、又は希釈攪拌若しくは錯体解離剤や銀イオン還元剤の添加（特許文献４）によって、高度不飽和脂肪酸やそのエステル等を取得する方法が記載されている。

【0005】

特許文献５には、高度不飽和脂肪酸又はそのアルキルエステルを含む原料を、３段以上の蒸留塔を用いて段階的に蒸留することによる、濃度８０％以上のＥＰＡ又はそのエステルを製造する方法が記載されている。特許文献６には、ＥＰＡ等の高度不飽和脂肪酸を含む原料を真空精密蒸留処理し、得られたＥＰＡやその低級アルコールエステルを含む留分を、硝酸銀水溶液と混合することにより、高純度エイコサペンタエン酸又はその低級アルコールエステルを精製する方法が記載されている。

【0006】

しかしながら、上記特許文献１〜４に記載の方法では、ＥＰＡやＤＨＡ以外の高度不飽和脂肪酸も同時に錯体を形成してしまうため、純度の高いＥＰＡやＤＨＡを得ることが難しかった。また、特許文献５に記載されるような蒸留による分離、さらに特許文献６に記載されるような蒸留と硝酸銀水溶液による分離とを組み合わせた方法でも、ＥＰＡと物性が似ているアラキドン酸（ＡＡ）やエイコサテトラエン酸（ＥＴＡ）等の他の高度不飽和脂肪酸との分離が困難であり、高純度のＥＰＡやＤＨＡを得ることは簡単ではなかった。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0007】

【特許文献1】特許第３００１９５４号公報

【特許文献2】特許第２７８６７４８号公報

【特許文献3】特許第２９３５５５５号公報

【特許文献4】特許第２８９５２５８号公報

【特許文献5】特許第３００５６３８号公報

【特許文献6】特開平７−２４２８９５号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

本発明は、高度不飽和脂肪酸を含有する原料から、ＥＰＡ及び／又はＤＨＡをより選択的に精製することができる方法を提供することに関する。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本発明者らは、多くの研究の結果、ＥＰＡやＤＨＡ等の高度不飽和脂肪酸と銀塩との錯体を含む水溶液を、特定の温度条件下で有機溶媒に接触させると、ＥＰＡやＤＨＡの錯体は水相に残留し、一方、それ以外の目的物でない高度不飽和脂肪酸は有機溶媒相に移動することを見出した。この知見に基づいて、本発明者らは、高度不飽和脂肪酸のアルキルエステルを、銀塩を含む水性溶液と混合し、該混合液を、特定温度に維持しながら有機溶媒と接触させ、その後有機相を廃棄して水相を回収すれば、ＥＰＡやＤＨＡの錯体を他の高度不飽和脂肪酸から選択的に分離することができること、さらに当該分離されたＥＰＡやＤＨＡの錯体を解離させれば、ＥＰＡやＤＨＡを高純度に含有する組成物を得ることができることを見出した。

【0010】

すなわち、本発明は、エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸含有組成物の製造方法であって：
（１）エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸を含む高度不飽和脂肪酸のアルキルエステルを含有する原料を、銀塩を含む水性溶液と接触させること；
（２）該水性溶液を５〜３０℃に維持しながら、有機溶媒と接触させ、次いで水相を回収すること；ならびに
（３）該水相に有機溶媒を添加した後、有機溶媒相を回収すること、
を含む方法を提供する。

【0011】

また本発明は、エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸を含む高度不飽和脂肪酸のアルキルエステルと銀との錯体から、エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸のアルキルエステルと銀との錯体を分離するための方法であって、エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸を含む高度不飽和脂肪酸のアルキルエステルと銀との錯体を含む水性溶液を、５〜３０℃に維持しながら、有機溶媒と接触させ、次いで水相を回収することを含む方法を提供する。

【発明の効果】

【0012】

本発明の方法によれば、ＥＰＡ及びＤＨＡを選択的に精製することが可能になり、ＥＰＡやＤＨＡ以外の高度不飽和脂肪酸含量が少ない、高純度のＥＰＡやＤＨＡ含有組成物を得ることができる。本発明の方法によれば、目的とするＥＰＡ及びＤＨＡを、他の高度不飽和脂肪酸、特に、従来の方法では分離が困難であったアラキドン酸（ＡＡ）やエイコサテトラエン酸（ＥＴＡ）等とも容易に分離することが可能になる。また本発明の方法は、錯体生成に用いた銀塩を多くの回数で再使用することを可能にするため、経済的である。

【発明を実施するための形態】

【0013】

本発明のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及び／又はドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）含有組成物の製造方法において、原料としては、主として天然物由来の油脂混合物であって、ＥＰＡやＤＨＡとともに、ＥＰＡやＤＨＡ以外の高度不飽和脂肪酸が含まれているものが挙げられる。当該ＥＰＡやＤＨＡ以外の高度不飽和脂肪酸としては、アラキドン酸（ＡＡ）、エイコサテトラエン酸（ＥＴＡ）、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）などを挙げることができる。そのような原料としては、魚類等の海産動物やプランクトン由来の油脂、藻類等の微生物由来の油脂などが挙げられ、中でもイワシ、ハマチ等の魚類由来の油脂、及び藻類由来の油脂が好ましい。

【0014】

上記原料は、目的のＥＰＡ及び／又はＤＨＡを、含有する脂肪酸の全量に対して、１５質量％以上含有する油脂であることが好ましく、さらに好ましくは４０質量％以上含有する。なお、当該原料としては、ＥＰＡ及び／又はＤＨＡの含有量が高い原料を用いてもよいが、コストや入手しやすさの点からは、ＥＰＡ及び／又はＤＨＡ含有量が、含有する全脂肪酸中、好ましくは６０質量％以下、より好ましくは５５質量％以下、さらに好ましくは５０質量％以下であればよい。ＥＰＡ及び／又はＤＨＡは、当該原料中に遊離脂肪酸の形態で存在していてもよく、又はモノ、ジ若しくはトリグリセリド等の脂肪酸鎖の形態で存在していてもよい。本発明の製造方法においては、全含有脂肪酸中における目的の高度不飽和脂肪酸の含量が１５質量％以上の原料を用いることにより、最終的に、目的とするＥＰＡ及び／又はＤＨＡの濃度が、全含有脂肪酸中７０質量％以上、好ましくは７５質量％の組成物を効率よく得ることができる。

【0015】

本発明の製造方法において、上記原料中の目的のＥＰＡ及び／又はＤＨＡは、アルキルエステル化されている。好ましくは、ＥＰＡ及び／又はＤＨＡ以外の高度不飽和脂肪酸もアルキルエステル化されている。原料中の高度不飽和脂肪酸をアルキルエステル化することにより、本発明の組成物の製造過程において、目的とするＥＰＡ及び／又はＤＨＡから、それ以外の高度不飽和脂肪酸を効率よく除去することができる。

【0016】

上記高度不飽和脂肪酸のアルキルエステルを構成するアルキル基としては、炭素数１〜６の直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基が挙げられ、好ましくはメチル基又はエチル基であり、より好ましくはエチル基である。当該高度不飽和脂肪酸アルキルエステルは、高度不飽和脂肪酸を含有する油脂と所望のアルキル基を有する酸とを公知の方法によりエステル化反応させることにより製造することができる。例えば、高度不飽和脂肪酸のトリグリセリドを含有する油脂をけん化処理することによって、簡便に高度不飽和脂肪酸のアルキルエステル化物を得ることができる。アルキルエステル化の程度は高いほど好適であり、原料中に含まれる目的の高度不飽和脂肪酸（遊離体を含む）の全量のうち、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上がアルキルエステル化されているとよい。

【0017】

本発明の製造方法において原料となる、上記高度不飽和脂肪酸やそのアルキルエステルを含有する油脂としては、市販されている油脂類を用いてもよい。前述の本発明が目的とする高度不飽和脂肪酸やそのアルキルエステルを高含量で得るという観点からは、含有する高度不飽和脂肪酸の種類や量が規格化された市販の魚油由来の油脂類などを用いるのが好ましい。

【0018】

以下に示す、本発明のＥＰＡ及び／又はＤＨＡ含有組成物の製造方法の各工程において、上記原料は、液体の形態で適用されることが好ましい。当該原料は、各工程での反応温度において液体の形態である場合は、そのまま本発明の各工程に適用され得る。各工程での反応温度において固体の形態である場合は、当該原料は、適宜有機溶媒や他の油に溶解又は希釈して適用され得る。当該有機溶媒としては、下記工程（１）を遂行するために、水と分離可能な有機溶媒が使用され、例えば、酢酸エチル、クロロホルム、四塩化炭素、ジエチルエーテル、ヘキサン等が挙げられる。下記工程（１）で原料の溶解又は希釈に用いられる有機溶媒は、下記工程（２）で用いる有機溶媒と同一の有機溶媒であっても、異なる有機溶媒であってもよい。

【0019】

本発明のＥＰＡ及び／又はＤＨＡ含有組成物の製造方法は、次の工程を含む：
（１）ＥＰＡ及び／又はＤＨＡを含む高度不飽和脂肪酸のアルキルエステルを含有する原料を、銀塩を含む水性溶液と接触させること；
（２）該水性溶液を５〜３０℃に維持しながら、有機溶媒と接触させ、次いで水相を回収すること；ならびに
（３）該水相に有機溶媒を添加した後、有機溶媒相を回収すること。

【0020】

本発明の製造工程（１）は、高度不飽和脂肪酸の二重結合部に銀塩が錯体を形成することにより、抽出溶媒への溶解性が変わることを利用した精製技術であり、高度不飽和脂肪酸アルキルエステルを分離精製する工程である。より詳細には、炭素数が２０以上である高度不飽和脂肪酸、例えば、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、アラキドン酸（ＡＡ）、エイコサテトラエン酸（ＥＴＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）のアルキルエステルを効率よく分離精製することができる。該工程は、例えば、特許文献１〜４等に記載されている方法に従って行うことができる。

【0021】

より詳細には、ＥＰＡ及び／又はＤＨＡ、ならびにその他の高度不飽和脂肪酸のアルキルエステルを含む原料に、銀塩を含む水性溶液を添加し、５分〜４時間、好ましくは１０分〜２時間程度攪拌する。このときの反応温度は、当該工程（１）の生成物が完全に液体となる温度を上限とし、好ましくは約８０℃以下であり、下限としては５℃以上とする。好ましくは、反応温度は室温（１５〜３０℃）付近である。上記反応により、当該水性溶液中に、銀と高度不飽和脂肪酸との錯体が生成される。当該錯体は、水性溶液の相に溶解するので、溶液から当該錯体を含む水相を回収して、次の工程（２）に供してもよい。水相を回収すると、錯体を形成しなかった高度不飽和脂肪酸以外の脂肪酸等の不純物を簡便に除去することができる。一方で、上記銀塩との錯体は、不飽和脂肪酸の不飽和結合との間に形成されるので、目的とするＥＰＡ及び／又はＤＨＡ以外の高度不飽和脂肪酸も錯体となり、水相に回収される。

【0022】

銀塩としては、高度不飽和脂肪酸の不飽和結合と錯体を形成し得るものであれば特に制限されないが、硝酸銀、過塩素酸銀、四フッ化ホウ素酸銀、酢酸銀等を用いることができる。このうち、硝酸銀が好ましい。水性溶液の溶媒としては、水、又は水とグリセリンやエチレングリコール等の水酸基を有する化合物との混合媒体が挙げられるが、好ましくは水が用いられる。水性溶液中の銀塩濃度は、０．１ｍｏｌ／Ｌ以上であればよいが、好ましくは１〜１２ｍｏｌ／Ｌ程度とする。高度不飽和脂肪酸と銀塩とのモル比は、１：１００〜１００：１、好ましくは１：５〜１：１程度である。

【0023】

本発明の製造方法の工程（２）は、工程（１）において生成された高度不飽和脂肪酸と銀塩の錯体を含む水性溶液を有機溶媒と接触させ、次いで、当該水性溶液と有機溶媒との混合溶液から水相を回収する工程である。有機溶媒との接触の間、当該水性溶液は、目的とするＥＰＡ及び／又はＤＨＡの錯体が解離しない温度に維持される。具体的には、工程（２）における当該水性溶液の温度は、好ましくは５〜３０℃、より好ましくは１０〜２５℃に維持される。より好ましくは、工程（２）における当該水性溶液の温度は、上記温度範囲内であることに加えて、工程（１）での反応温度、すなわち工程（１）で銀−高度不飽和脂肪酸錯体が生成した温度に対して＋２０〜−１５℃の範囲、好ましくは＋５〜−１０℃の範囲であり、より好ましくは、工程（１）の温度より低温かつ−１０℃以内の温度であるのがよい。

【0024】

工程（２）において、上記高度不飽和脂肪酸アルキルエステルの錯体を含む水性溶液に添加する有機溶媒としては、ヘキサン又はシクロヘキサンが好ましく、シクロヘキサンがより好ましい。当該水性溶液と有機溶媒の量としては、体積比として、１００：３〜３００が好ましく、１００：３〜２００がより好ましい。また好ましくは、工程（２）においては、当該水性溶液と有機溶媒とを、上記温度条件下で、上記体積比となるよう混合し、混合液を５分〜４時間、好ましくは１０分〜２時間程度、より好ましくは３０分〜２時間程度攪拌する。攪拌終了後に混合液を静置すると、水相と有機溶媒相が分離するので、有機溶媒相を除去し、水相を回収する。さらに、回収した水相に新たな有機溶媒を添加して工程（２）を繰り返してもよい。

【0025】

工程（１）で得られた高度不飽和脂肪酸と銀塩の錯体を含む水性溶液には、ＥＰＡ及び／又はＤＨＡアルキルエステルの錯体と、ＥＰＡ及び／又はＤＨＡ以外の他の高度不飽和脂肪酸のアルキルエステルの錯体とが混在している。この水性溶液を、上述した特定の温度条件下で有機溶媒と接触させると、当該他の高度不飽和脂肪酸の錯体は解離して、脂肪酸が有機溶媒相に移動するが、一方、ＥＰＡ及び／又はＤＨＡは、錯体のまま水相中に維持される。したがって、工程（２）において、上記水性溶液と有機溶媒とを上記温度条件下で接触させた後、水相を回収すれば、ＥＰＡ及び／又はＤＨＡを他の高度不飽和脂肪酸から分離することができる。なお、前述のように本発明の方法においては、原料の溶解又は希釈のために、工程（１）においても有機溶媒が用いられることがある。しかし、工程（１）において、原料を有機溶媒に溶解又は希釈した後で、これに銀塩を含む水性溶液を添加し、その後水相を回収しても、工程（２）でなされるように他の高度不飽和脂肪酸を効果的に除去することはできない。

【0026】

したがって、本発明の一実施形態は、工程（１）で得られたＥＰＡ及び／又はＤＨＡを含む種々の高度不飽和脂肪酸のアルキルエステルと銀との錯体の混合物から、ＥＰＡ及び／又はＤＨＡアルキルエステルと銀との錯体を分離することを意図して、工程（２）を行うことであり得る。工程（２）で回収された水相からは、目的としない高度不飽和脂肪酸が除去されているので、これを後述する工程（３）に供すれば、高純度のＥＰＡ及び／又はＤＨＡアルキルエステルを回収することができる。

【0027】

本発明の製造方法の工程（３）は、上記工程（２）で回収した水相に有機溶媒を添加し、次いで有機溶媒相を回収する工程である。工程（３）では、有機溶媒の添加により、該水相中のＥＰＡ及び／又はＤＨＡアルキルエステルの錯体を解離させ、解離したＥＰＡ及び／又はＤＨＡのアルキルエステルを有機溶媒相に抽出させる。次いで当該有機溶媒相を回収すれば、目的とするＥＰＡ及び／又はＤＨＡアルキルエステルを回収することができる。当該工程は、例えば、特許文献１〜４等に記載されている方法に従って行うことができる。

【0028】

工程（３）において、上記水相に添加する有機溶媒としては、ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、酢酸ブチル、クロロホルム、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、キシレン等の、ＥＰＡ及び／又はＤＨＡのアルキルエステルの溶解性が高く、且つ水と分離可能な溶媒が挙げられる。

【0029】

工程（３）において、ＥＰＡ及び／又はＤＨＡの錯体の解離を容易にするためには、好ましくは、水相に有機溶媒を添加し、得られた混合液を、上記工程（１）での反応温度、すなわち工程（１）での銀−高度不飽和脂肪酸錯体の生成温度よりも高い温度になるよう加温する。より好ましくは、上記工程（１）での反応温度に対して１５℃よりも高い温度、さらに好ましくは２０℃以上高い温度にする。次いで水相を除去し、ＥＰＡ及び／又はＤＨＡのアルキルエステルを含有する有機溶媒相を回収する。又は回収した有機溶媒相をさらにシリカゲル、活性炭、二酸化ケイ素などの吸着剤に通液することにより、残留する銀イオンをさらに除去してもよい。

【0030】

上記工程（３）で除去された水相は、工程（１）で銀−高度不飽和脂肪酸錯体の生成に用いた銀塩を含有する水溶液である。したがって、工程（３）で除去された水相を回収し、再び本発明の方法の工程（１）の銀塩水溶液として使用することができる。従来の方法においても、錯体から高度不飽和脂肪酸を解離させた後に残った銀塩水溶液は、回収され、高度不飽和脂肪酸の精製に再使用されていた。しかし、この銀塩水溶液は、繰り返しの使用につれて、不純物の含有量が増えるなど徐々に劣化するため、銀塩水溶液の繰り返し使用は、精製される高度不飽和脂肪酸の品質の低下をもたらし得る。一方、本発明の方法で使用された後の硝酸銀水溶液は、従来の方法に比べて、不純物の含有量が低いため、再使用しても精製されるＥＰＡやＤＨＡ含有組成物の品質を低下させることが少ない。

【0031】

したがって、本発明の一実施形態は、上記工程（３）で有機溶媒相を回収した後に残った水相に含まれる銀塩を含有する銀塩水性溶液を用いて、新たなＥＰＡ及び／又はＤＨＡを含む高度不飽和脂肪酸のアルキルエステルを含有する原料をもとに、上記工程（１）〜（３）を繰り返すことを含む、ＥＰＡ及び／又はＤＨＡ含有組成物の製造方法であり得る。本方法において、工程の繰り返しの回数は、２回以上であればよいが、好ましくは１０回以上、より好ましくは２０回以上、さらに好ましくは５０回以上、なお好ましくは１０〜７０回であり得る。また本方法において、工程（３）で除去された水相は、そのまま工程（１）に再使用してもよいが、銀塩の濃度を適宜調製してから再使用してもよい。

【0032】

本発明の製造方法により製造されたＥＰＡ及び／又はＤＨＡのアルキルエステル含有組成物は、含有する全脂肪酸中に、目的のＥＰＡ及び／又はＤＨＡのアルキルエステルを７０質量％以上、好ましくは７５質量％以上含有する。該組成物中に含まれる目的のＥＰＡ及び／又はＤＨＡのアルキルエステルは、好ましくはＥＰＡのアルキルエステルである。本発明のＥＰＡ及び／又はＤＨＡのアルキルエステル含有組成物は、ＥＰＡやＤＨＡと沸点が近く、蒸留による精製操作においては分離しにくい高度不飽和脂肪酸、例えばＡＡやＥＴＡ等の含有量が少ないため、蒸留等の操作によりさらに高純度のＥＰＡ及び／又はＤＨＡ含有組成物を調製する場合の原料としても好適である。したがって、本発明のＥＰＡ及び／又はＤＨＡのアルキルエステル含有組成物を用いることによって、より簡便に高純度のＥＰＡ及び／又はＤＨＡを製造することができる。また本発明によれば、銀−高度不飽和脂肪酸錯体の生成に用いた銀塩をより多くの回数で再使用することが可能になるので、高度不飽和脂肪酸精製に要するコストを低減することができる。

【実施例】

【0033】

以下、実施例を挙げて、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例にのみ限定されるものではない。

【0034】

以下の実施例において、高度不飽和脂肪酸の組成分析方法は次のとおりである。
測定試料１０ｍｇをｎ−ヘキサン１０ｍＬに希釈し、ガスクロマトグラフィー分析装置（Type 6890 GC；Agilent Technologies製）を用いて、以下の条件にて全脂肪酸中における各脂肪酸の含有比を分析した。結果は、クロマトグラムの面積から換算した質量％として表した。
＜カラム条件＞
カラム：Ｊ＆Ｗ社製ＤＢ−ＷＡＸ 0.25 mm×30 m、カラム温度：210℃
Ｈｅ流量：1.0 ml/min、Ｈｅ圧力：20 PSI
＜検出条件＞
Ｈ₂流量：40 ml/min、Ａｉｒ流量：450 ml/min
Ｈｅ流量：1.00 ml/min、ＤＥＴ温度：260℃

【0035】

また、以下の実施例において、ＥＰＡアルキルエステル（ＥＰＡ−Ｅ）及びＤＨＡアルキルエステル（ＤＨＡ−Ｅ）の回収率の算出方法は次のとおりである。

【0036】

【数1】

【0037】

組成物の不純物比は、組成物中における目的とするＥＰＡ及びＤＨＡの含有量に対する、不純物（クロマトグラフィー法等の従来の方法で分離が困難なアラキドン酸アルキルエステル（ＡＡ−Ｅ）及びエイコサテトラエン酸アルキルエステル（ＥＴＡ−Ｅ））の含有量として、下記式に従って計算した。
不純物比（％）
＝（ＡＡ−ＥとＥＴＡ−Ｅの合計含量／ＥＰＡ−ＥとＤＨＡ−Ｅの合計含量）×１００

【0038】

組成物の評価では、下記表１の基準に従って、不純物比及びＥＰＡ−Ｅ及びＤＨＡ−Ｅの回収率に基づいて各組成物の組成スコア及び回収率スコアを求めた。さらにそれらの合計スコアに基づいて組成物の総合評価を行った。

【0039】

【表1】

【0040】

（参考例１）原料Ａ
イワシ油１ｋｇに、水酸化ナトリウム５０ｇを溶解させた無水エタノール１０００ｍＬを加え、７０〜８０℃にて１時間混合攪拌後、さらに水５００ｍＬを加えてよく混合し、１時間静置した。分離した水層を除去し、油層を数回水洗して洗液を中性にし、エチルエステル化イワシ油（以下、「原料Ａ」とする）８２０ｇを得た。
上記原料Ａは、表２に示すとおり、全脂肪酸中に、アラキドン酸（ＡＡ）２．１４質量％、エイコサテトラエン酸（ＥＴＡ）１．７０質量％、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）４２．９６質量％、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）７．７１質量％を含有していた。

【0041】

（参考例２）原料Ｂ
上記で調製した原料Ａ １ｋｇにｎ−ヘキサン６００ｍＬを加えてよく攪拌混合し、溶解させた。ここに硝酸銀５０質量％の水溶液２５００ｍＬを加え、２０℃の条件下で１時間攪拌した。静置後に水相を分離し、残った有機層を濃縮し、エチルエステル化イワシ油（以下、「原料Ｂ」とする）５５０ｇを得た。
上記原料Ｂは、表２に示すとおり、全脂肪酸中に、ＡＡ ３．７２質量％、ＥＴＡ ２．７３質量％、ＥＰＡ １８．６５質量％、ＤＨＡ ０．９１質量％を含有していた。

【0042】

（参考例３）原料Ｃ
参考例２と同様にしてエチルエステル化イワシ油（以下、「原料Ｃ」とする）５５０ｇを得た。
上記原料Ｃは、表２に示すとおり、全脂肪酸中に、ＡＡ ３．８１質量％、ＥＴＡ ２．７５質量％、ＥＰＡ ２０．４６質量％、ＤＨＡ １．２３質量％を含有していた。

【0043】

【表2】

【0044】

（実施例１）
工程（１）：原料Ａ ３０ｇにシクロヘキサン５ｍＬを加えてよく攪拌混合し、溶解させた。ここに硝酸銀５０質量％の水溶液８０ｍＬを加え、２０℃の条件下で１時間攪拌した。溶液を静置後、分離した有機相を除去し、水相を回収した。
工程（２）：工程（１）で得た水相を２０℃に維持したまま、シクロヘキサン５ｍＬを添加し３０分間攪拌した。混合液を静置後、分離した有機相を除去し、水相を回収した。
工程（３）：工程（２）で得た水相を６０℃にし、シクロヘキサン１５０ｍＬを追加し、６０℃の条件下で３０分間攪拌して、水相中の脂肪酸エチルエステルを有機相に抽出した。混合液を静置後、分離した有機相を回収、濃縮し、脂肪酸エチルエステル含有組成物を得た。

【0045】

（実施例２）
工程（１）：原料Ｂ ３０ｇにｎ−ヘキサン１５ｍＬを加えてよく攪拌混合し、溶解させた。ここに硝酸銀５０質量％の水溶液６０ｍＬを加え、２５℃の条件下で１時間攪拌した。溶液を静置後、分離した有機相を除去し、水相を回収した。
工程（２）：工程（１）で得た水相を２５℃に維持したまま、ｎ−ヘキサン５０ｍＬを添加し３０分間攪拌した。混合液を静置後、分離した有機相を除去し、水相を回収した。
工程（３）：工程（２）で得た水相を６０℃にし、ｎ−ヘキサン１５０ｍＬを追加し、６０℃の条件下で３０分間攪拌して、水相中の脂肪酸エチルエステルを有機相に抽出した。混合液を静置後、分離した有機相を回収、濃縮し、脂肪酸エチルエステル含有組成物を得た。

【0046】

（比較例１）
工程（２）を行わなかった以外は、実施例１と同様にして脂肪酸エチルエステル含有組成物を得た。

【0047】

（比較例２）
工程（２）を行わなかった以外は、実施例２と同様にして脂肪酸エチルエステル含有組成物を得た。

【0048】

実施例１〜２及び比較例１〜２の組成物における、全脂肪酸に対する各脂肪酸の組成比を分析した。さらに不純物比、ＥＰＡ−Ｅ及びＤＨＡ−Ｅの回収率を求め、各組成物の組成スコア、回収率スコア、及び総合評価を求めた。結果を表３に示す。

【0049】

【表3】

【0050】

工程（２）を行わずに得られた比較例の組成物に比べて、実施例の組成物は、不純物であるＡＡやＥＴＡの含量が大幅に低下し、目的とするＥＰＡ及びＤＨＡの純度が向上した。比較例の組成物は、工程が少ない分ＥＰＡ及びＤＨＡの回収率は高くなったが、ＡＡやＥＴＡの含量が多く、ＥＰＡ及びＤＨＡの純度には劣るものであった。

【0051】

（製造例１〜６）
工程（２）の温度を表４のとおりにして行った以外は、実施例２と同様にして脂肪酸エチルエステル含有組成物を得た。

【0052】

製造例１〜６の組成物における、全脂肪酸に対する各脂肪酸の組成比、不純物比、ＥＰＡ−Ｅ及びＤＨＡ−Ｅの回収率、ならびに評価結果を表４に示す。なお、表４には実施例２の結果を再掲する。
工程（２）の温度が低温になると、得られた組成物におけるＥＰＡ及びＤＨＡの含量が低下するとともに、不純物（ＡＡ及びＥＴＡ）の含量が増加する傾向があった。工程（２）の温度が５℃〜３０℃の範囲であれば、不純物含量は許容できる範囲であった。一方高温で工程（２）を行うと、ＥＰＡ、ＤＨＡの含量は増加するものの、回収率が低下する傾向があった。工程（２）の温度が工程（１）の温度に対して＋５℃〜−１０℃の範囲である製造例４〜５、実施例２では、不純物比とＥＰＡ−Ｅ及びＤＨＡ−Ｅの回収率とのバランスが良かった。

【0053】

【表4】

【0054】

（製造例７〜１４）
参考例Ｃの原料を用い、工程（１）及び（２）の温度をそれぞれ変えた以外は、製造例１〜６と同様にして、脂肪酸エチルエステル含有組成物を得た。

【0055】

製造例７〜１４の組成物における、全脂肪酸に対する各脂肪酸の組成比、不純物比、ＥＰＡ−Ｅ及びＤＨＡ−Ｅの回収率、ならびに評価結果を表５に示す。
１０℃で工程（１）及び工程（２）を行った製造例７では、不純物（ＡＡ及びＥＴＡ）の含量が増加した。一方、１０℃で工程（１）、３０℃で工程（２）を行った製造例８では、不純物の含量は低下したものの、ＥＰＡ−Ｅ及びＤＨＡ−Ｅの回収率が低下した。さらに、３５℃で工程（２）を行った製造例１４では、回収率が大幅に低下した。工程（２）の温度が５℃〜３０℃の範囲であれば、ＥＰＡ−Ｅ及びＤＨＡ−Ｅの回収率は許容できる範囲であった。さらに、工程（２）の温度が工程（１）の温度に対して＋５℃〜−１０℃の範囲であると、ＥＰＡ−Ｅ及びＤＨＡ−Ｅの回収率がより高くなる傾向があった。

【0056】

【表5】

【0057】

（製造例１５）
工程（１）：原料Ｂ ３０ｇにｎ−ヘキサン１５ｍＬを加えてよく攪拌混合し、溶解させた。ここに硝酸銀５０質量％の水溶液６０ｍＬを加え、２０℃の条件下で１時間攪拌した。溶液を静置後、分離した有機相を除去し、水相を回収した。
工程（２）：工程（１）で得た水相を２０℃に維持したまま、ｎ−ヘキサン５０ｍＬを添加し、３０分間攪拌した。混合液を静置後、分離した有機相を除去し、水相を回収した。回収した水相を２０℃に維持したまま、再度ｎ−ヘキサン５０ｍＬを添加し、３０分間攪拌し、静置後に分離した有機相を除去し、水相を回収した。
工程（３）：工程（２）で得た水相を６０℃にし、ｎ−ヘキサン１５０ｍＬを追加し、６０℃の条件下で３０分間攪拌して、水相中の脂肪酸エチルエステルを有機相に抽出した。混合液を静置後、分離した有機相を回収、濃縮し、脂肪酸エチルエステル含有組成物を得た。

【0058】

（製造例１６〜１７）
工程（２）で用いる有機溶媒をヘプタン（製造例１６）又は酢酸エチル（製造例１７）に変更した以外は、製造例１５と同様にして脂肪酸エチルエステル含有組成物を得た。

【0059】

製造例１５〜１７の組成物における、全脂肪酸に対する各脂肪酸の組成比、不純物比、ＥＰＡ−Ｅ及びＤＨＡ−Ｅの回収率、ならびに評価結果を表６に示す。製造例１５〜１７の組成物におけるＥＰＡ及びＤＨＡの純度はいずれも同様に高かったが、工程（２）でヘキサンを用いた製造例１５では、製造例１６や１７と比べてＥＰＡ−Ｅ及びＤＨＡ−Ｅの回収率がより向上した。

【0060】

【表6】

【0061】

（製造例１８〜２２）
工程（１）：原料Ａ ３０ｇにシクロヘキサン５ｍＬを加えてよく攪拌混合し、溶解させた。ここに硝酸銀５０質量％の水溶液８０ｍＬを加え、２０℃の条件下で１時間攪拌した。溶液を静置後、分離した有機相を除去し、水相を回収した。
工程（２）：工程（１）で得た水相を２０℃に維持したまま、シクロヘキサンを表７に記載の量で添加して３０分間攪拌した。混合液を静置後、分離した有機相を除去し、水相を回収した。
工程（３）：工程（２）で得た水相を６０℃にし、新しいシクロヘキサン１５０ｍＬを加えて６０℃の条件下で３０分間攪拌して、水相中の脂肪酸エチルエステルを有機相に抽出した。混合液を静置後、分離した有機相を回収、濃縮し、脂肪酸エチルエステル含有組成物を得た。

【0062】

（製造例２３〜２７）
工程（１）：原料Ｂ ３０ｇにシクロヘキサン１５ｍＬを加えてよく攪拌混合し、溶解させた。ここに硝酸銀５０質量％の水溶液５０ｍＬを加え、１５℃の条件下で１時間攪拌した。溶液を静置後、分離した有機相を除去し、水相を回収した。
工程（２）：工程（１）で得た水相を１５℃に維持したまま、シクロヘキサンを表７に記載の量で添加して３０分間攪拌し、静置後に分離した有機相を除去し、水相を回収した。
工程（３）：工程（２）で得た水相を６０℃にし、新しいシクロヘキサン１５０ｍＬを加えて６０℃の条件下で３０分間攪拌して、水相中の脂肪酸エチルエステルを有機相に抽出した。混合液を静置後、分離した有機相を回収、濃縮し、脂肪酸エチルエステル含有組成物を得た。

【0063】

製造例１８〜２７の組成物における、全脂肪酸に対する各脂肪酸の組成比、不純物比、ＥＰＡ−Ｅ及びＤＨＡ−Ｅの回収率、ならびに評価結果を表７に示す。工程（２）において水相に対する有機溶媒の添加量が少ない製造例１８では不純物含量が増加した。

【0064】

【表7】

【0065】

（製造例２８〜３０）
工程（３）において有機相を回収した後の残りの水相、すなわち硝酸銀水溶液、を繰り返し使用する検討を行った。実施例１と同様にして工程（１）〜（３）を行い、有機相と分離された硝酸銀水溶液を回収した。回収した溶液を工程（１）の硝酸銀水溶液として新たに用意した原料に加えて、同様に工程（１）〜（３）を行い、再度硝酸銀水溶液を回収した。これを表８の回数繰り返して、脂肪酸エチルエステル含有組成物を得た。
得られた組成物における、全脂肪酸に対する各脂肪酸の組成比、不純物比、ＥＰＡ−Ｅ及びＤＨＡ−Ｅの回収率、ならびに評価結果を表８に示す。なお、表８には実施例１の結果を再掲する。硝酸銀の繰り返し使用によっても、得られた組成物におけるＥＰＡ及びＤＨＡの純度、ならびにＥＰＡ−Ｅ及びＤＨＡ−Ｅの回収率は変わらなかった。本発明の方法によれば、硝酸銀水溶液を繰り返し使用しても、高純度のＥＰＡ−Ｅ及びＤＨＡ−Ｅを効率よく製造することができる。

【0066】

【表8】