特許 6242350 Ｐ７５ＮＴＲニューロトロフィン結合タンパク質の治療用途

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6242350

(24)【登録日】2017年11月17日

(45)【発行日】2017年12月6日

(54)【発明の名称】Ｐ７５ＮＴＲニューロトロフィン結合タンパク質の治療用途

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/18 20060101AFI20171127BHJP

   A61K 38/38 20060101ALI20171127BHJP

   A61K 38/40 20060101ALI20171127BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20171127BHJP

   C07K 14/71 20060101ALI20171127BHJP

   C07K 14/76 20060101ALI20171127BHJP

   C07K 14/79 20060101ALI20171127BHJP

   C07K 16/00 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 25/04 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 25/08 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 25/06 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 31/22 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 13/10 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 1/18 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 1/02 20060101ALI20171127BHJP

   A61P 27/16 20060101ALI20171127BHJP

   C12N 15/09 20060101ALN20171127BHJP

【ＦＩ】

   A61K38/18

   A61K38/38

   A61K38/40

   C07K19/00ZNA

   C07K14/71

   C07K14/76

   C07K14/79

   C07K16/00

   A61P25/04

   A61P25/00

   A61P25/16

   A61P25/08

   A61P25/06

   A61P29/00

   A61P19/02

   A61P29/00 101

   A61P3/10

   A61P17/00

   A61P31/22

   A61P1/00

   A61P15/00

   A61P13/10

   A61P1/18

   A61P21/00

   A61P9/00

   A61P9/10

   A61P1/02

   A61P27/16

   !C12N15/00 A

【請求項の数】14

【全頁数】36

(21)【出願番号】特願2014-561516(P2014-561516)

(86)(22)【出願日】2013年3月14日

(65)【公表番号】特表2015-511490(P2015-511490A)

(43)【公表日】2015年4月20日

(86)【国際出願番号】GB2013050632

(87)【国際公開番号】WO2013136078

(87)【国際公開日】20130919

【審査請求日】2016年2月22日

(31)【優先権主張番号】61/610,682

(32)【優先日】2012年3月14日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】514194897

【氏名又は名称】レヴィセプト エルティーディー

【氏名又は名称原語表記】ＬＥＶＩＣＥＰＴ ＬＴＤ

(74)【代理人】

【識別番号】100113376

【弁理士】

【氏名又は名称】南条 雅裕

(74)【代理人】

【識別番号】100179394

【弁理士】

【氏名又は名称】瀬田 あや子

(74)【代理人】

【識別番号】100185384

【弁理士】

【氏名又は名称】伊波 興一朗

(74)【代理人】

【識別番号】100137811

【弁理士】

【氏名又は名称】原 秀貢人

(72)【発明者】

【氏名】ウエストブルック サイモン

【審査官】 厚田 一拓

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２００７／０２６５６７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 中国特許出願公開第１０２２３３１２８（ＣＮ，Ａ）

【文献】 特表平０６−５０４１９２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２０１０／００６１９８１（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 特開２０１２−０６７０８１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 JOURNAL OF ORTHOPAEDIC RESEARCH，２０１０年，Vol.28, No.3，pp.279-283

【文献】 NEURAL DEVELOPMENT，２０１０年，Vol.5, No.30，pp.1-9

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ１２Ｎ １５／００ − １５／９０

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

疼痛を治療するための医薬組成物であって、配列番号２の配列のｐ７５ＮＴＲニューロトロフィン結合タンパク質ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、および、薬学的に許容できる担体および／または賦形剤を含む、医薬組成物。

【請求項2】

請求項１に記載の医薬組成物であって、
前記ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）が、
（ａ）トランスフェリンまたはその部分、
（ｂ）アルブミンまたはその部分、
（ｃ）免疫グロブリンＦｃまたはその部分、および
（ｄ）ポリエチレングリコールポリマー鎖、
から選択される１つまたは複数の補助分子に結合されたｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）を含むことを特徴とする、
医薬組成物。

【請求項3】

請求項２に記載の医薬組成物であって、
前記ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）が、１つまたは複数のリンカーを介して、前記の１つまたは複数の補助分子に結合されていることを特徴とする、
医薬組成物。

【請求項4】

請求項３に記載の医薬組成物であって、
前記リンカーが：
（ａ）共有結合、
（ｂ）非共有結合、
（ｃ）ペプチド結合、または
（ｄ）１アミノ酸、またはペプチドを含む複数アミノ酸、
から選択されることを特徴とする、
医薬組成物。

【請求項5】

請求項２から４のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、
前記ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）が、１よりも多い補助分子に結合されており、
各補助分子が、同一または異なるもののいずれかであることを特徴とする、
医薬組成物。

【請求項6】

請求項５に記載の医薬組成物であって、
前記の、１よりも多い補助分子が、リンカーを介してｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）に結合された補助分子の多量体を含み、
各分子は、同一のものであっても異なるものであってもよい、
医薬組成物。

【請求項7】

請求項１から６のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、
前記ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、
（ａ）配列番号２の配列のｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、および、
（ｂ）免疫グロブリンＦｃ
から構成されることを特徴とする、
医薬組成物。

【請求項8】

請求項７に記載の医薬組成物であって、
前記免疫グロブリンＦｃは、配列番号１２、配列番号１５または配列番号１６から選択される、
ことを特徴とする、
医薬組成物。

【請求項9】

請求項７または８に記載の医薬組成物であって、
前記ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、（ｃ）リンカーをさらに含む、
医薬組成物。

【請求項10】

請求項９に記載の医薬組成物であって、
前記リンカーは、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９から選択されることを特徴とする、
医薬組成物。

【請求項11】

請求項１から１０のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、
前記疼痛は：
（ａ）急性疼痛および／または自発痛、
（ｂ）慢性疼痛およびまたは進行中の疼痛、
（ｃ）関節痛、変形性関節症または関節リウマチから生じる疼痛、炎症性腸疾患から生じる疼痛のいずれか一つを含む炎症性疼痛、
（ｄ）侵害受容性疼痛、
（ｅ）有痛性糖尿病性神経障害または帯状疱疹後神経痛と関連する疼痛を含む、神経障害性疼痛、
（ｆ）痛覚過敏、
（ｇ）アロディニア、
（ｈ）中枢痛、中枢性卒中後痛、多発性硬化症から生じる疼痛、脊髄損傷から生じる疼痛、またはパーキンソン病またはてんかんから生じる疼痛、
（ｉ）癌性疼痛、
（ｊ）術後疼痛、
（ｋ）消化性内臓痛および非消化性内臓痛を含む内臓痛、胃腸（ＧＩ）障害に起因する疼痛、機能性腸疾患（ＦＢＤ）から生じる疼痛、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）から生じる疼痛、月経困難、骨盤痛、膀胱炎、間質性膀胱炎または膵炎から生じる疼痛、
（ｌ）筋骨格痛、筋肉痛、線維筋痛、脊椎炎、血清陰性（非リウマチ性）関節障害、関節外リウマチ、ジストロフィン異常症、グリコーゲン分解、多発性筋炎、化膿性筋炎、
（ｍ）心臓または血管性疼痛、狭心症、心筋梗塞、僧帽弁狭窄、心膜炎、レイノー現象、浮腫性硬化症、浮腫性硬化症または骨格筋虚血に起因する疼痛、
（ｎ）片頭痛、前兆を伴う片頭痛、前兆を伴わない片頭痛、群発頭痛、緊張型頭痛を含む、頭痛、
（ｏ）歯痛、顎関節筋膜痛または耳鳴りを含む、口腔顔面痛、または
（ｐ）背痛、滑液包炎、月経痛、片頭痛、関連痛、三叉神経痛、超増感、脊椎の外傷および／または変性または脳卒中から生じる疼痛、
から選択されることを特徴とする、
医薬組成物。

【請求項12】

請求項１から１１のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、
第２の薬理学的に活性の化合物と組み合わせて、別々に、連続して、または同時に使用されるものであることを特徴とする、
医薬組成物。

【請求項13】

請求項１２に記載の医薬組成物であって、
組み合わせる前記の第２の薬理学的に活性の化合物は；
・モルヒネ、ヘロイン、ヒドロモルフォン、オキシモルフォン、レボルファノール、レバロルファン、メタドン、メペリジン、フェンタニル、コカイン、コデイン、ジヒドロコデイン、オキシコドン、ヒドロコドン、プロポキシフェン、ナルメフェン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブトルファノール、ナルブフィンおよびペンタゾシンからなる群から選択されるオピオイド鎮痛薬；
・アスピリン、ジクロフェナク、ジフルシナル（ｄｉｆｌｕｓｉｎａｌ）、エトドラク、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルフェニサル、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラック、メクロフェナム酸、メフェナム酸、メロキシカム、ナブメトン、ナプロキセン、ニメスリド、ニトロフルルビプロフェン、オルサラジン、オキサプロジン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スルファサラジン、スリンダク、トルメチンおよびゾメピラックからなる群から選択される非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）；
・アモバルビタール、アプロバルビタール、ブタバルビタール、ブタルビタール（ｂｕｔａｂｉｔａｌ）、メホバルビタール、メタルビタール、メトヘキシタール、ペントバルビタール、フェノバルビタール（ｐｈｅｎｏｂａｒｔｉｔａｌ）、セコバルビタール、タルブタール、チアミラール（ｔｈｅａｍｙｌａｌ）およびチオペンタールからなる群から選択されるバルビツレート鎮静剤；
・クロルジアゼポキシド、クロラゼペート、ジアゼパム、フルラゼパム、ロラゼパム、オキサゼパム、テマゼパムおよびトリアゾラムからなる群から選択される鎮静作用を有するベンゾジアゼピン；
・ジフェンヒドラミン、ピリラミン、プロメタジン、クロルフェニラミンおよびクロルシクリジンからなる群から選択される鎮静作用を有するＨ_１拮抗薬；
・グルテチミド、メプロバメート、メタカロンおよびジクロラルフェナゾンからなる群から選択される鎮静剤；
・バクロフェン、カリソプロドール、クロルゾキサゾン、シクロベンザプリン、メトカルバモールおよびオルフレナジンからなる群から選択される骨格筋弛緩薬；
・デキストロメトルファン（（＋）−３−ヒドロキシ−Ｎ−メチルモルフィナン）またはその代謝物デキストロルファン（（＋）−３−ヒドロキシ−Ｎ−メチルモルフィナン）、ケタミン、メマンチン、ピロロキノリンキニン、シス−４−（ホスホノメチル）−２−ピペリジンカルボン酸、ブジピン、ＥＮ−３２３１（ＭｏｒｐｈｉＤｅｘ（登録商標）、モルヒネおよびデキストロメトルファンの組み合わせ製剤）、トピラマート、ネラメキサン、および、ペルジンホテル、およびイフェンプロジル、トラキソプロジルおよび（−）−（Ｒ）−６−｛２−［４−（３−フルオロフェニル）−４−ヒドロキシ−１−ピペリジニル］−１−ヒドロキシエチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−キノリノンからなる群から選択されるＮＲ２Ｂ拮抗薬、からなる群から選択されるＮＭＤＡ受容体拮抗薬；
・ドキサゾシン、タムスロシン、クロニジン、グアンファシン、デキスメタトミジン（ｄｅｘｍｅｔａｔｏｍｉｄｉｎｅ）、モダフィニル、および４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−（５−メタン−スルホンアミド−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノール−２−イル）−５−（２−ピリジル）キナゾリンからなる群から選択されるα−アドレナリン作用薬；
・デシプラミン、イミプラミン、アミトリプチリンおよびノルトリプチリンからなる群から選択される三環系抗うつ薬；
・カルバマゼピン、ラモトリジン、トピラマート（ｔｏｐｉｒａｔｍａｔｅ）およびバルプロエートからなる群から選択される抗痙攣薬；
・（αＲ，９Ｒ）−７−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−８，９，１０，１１−テトラヒドロ−９−メチル−５−（４−メチルフェニル）−７Ｈ−［１，４］ジアゾシノ［２，１−ｇ］［１，７］−ナフチリジン−６−１３−ジオン（ＴＡＫ−６３７）、５−［［（２Ｒ，３Ｓ）−２−［（１Ｒ）−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ−３−（４−フルオロフェニル）−４−モルホリニル］−メチル］−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−１，２，４−トリアゾル−３−オン（ＭＫ−８６９）、アプレピタント、ラネピタント、ダピタントおよび３−［［２−メトキシ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］−メチルアミノ］−２−フェニルピペリジン（２Ｓ，３Ｓ）からなる群から選択される、タキキニン（ＮＫ）拮抗薬、またはＮＫ−３、ＮＫ−２またはＮＫ−１拮抗薬；オキシブチニン、トルテロジン、プロピベリン、塩化トロスピウム（ｔｒｏｐｓｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ダリフェナシン、ソリフェナシン、テミベリンおよびイプラトロピウムからなる群から選択されるムスカリン拮抗薬；
・セレコキシブ、ロフェコキシブ、パレコキシブ、バルデコキシブ、デラコキシブ、エトリコキシブ、およびルミラコキシブからなる群から選択されるＣＯＸ−２選択的阻害剤；
・パラセタモール；
・ドロペリドール、クロルプロマジン、ハロペリドール、ペルフェナジン、チオリダジン、メソリダジン、トリフルオペラジン、フルフェナジン、クロザピン、オランザピン、リスペリドン、ジプラシドン、クエチアピン、セルチンドール、アリピプラゾール、ソネピプラゾール、ブロナンセリン、イロペリドン、ペロスピロン、ラクロプリド、ゾテピン、ビフェプルノックス、アセナピン、ルラシドン、アミスルプリド、バラペリドン、パリンドール、エプリバンセリン、オサネタント、リモナバン、メクリネルタント、Ｍｉｒａｘｉｏｎ（登録商標）およびサリゾタンからなる群から選択される神経遮断薬；
・レシニフェラトキシンまたはカプサゼピン；
・プロプラノロール；
・メキシレチン；
・デキサメタゾン；
・エレトリプタン、スマトリプタン、ナラトリプタン、ゾルミトリプタンおよびリザトリプタンからなる群から選択される、５−ＨＴ受容体アゴニストまたは拮抗薬、または５−ＨＴ_{１Ｂ／１Ｄ}アゴニスト；
・Ｒ（＋）−α−（２，３−ジメトキシ−フェニル）−１−［２−（４−フルオロフェニルエチル）］−４−ピペリジンメタノール（ＭＤＬ−１００９０７）；
・イスプロニクリン（ＴＣ−１７３４）、（Ｅ）−Ｎ−メチル−４−（３−ピリジニル）−３−ブテン−１−アミン（ＲＪＲ−２４０３）、（Ｒ）−５−（２−アゼチジニルメトキシ）−２−クロロピリジン（ＡＢＴ−５９４）およびニコチンからなる群から選択されるコリン作用性（ニコチン性）鎮痛剤；
・トラマドール（登録商標）；
・５−［２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニル−スルホニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）、（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’：６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（ＩＣ−３５１またはタダラフィル）、２−［２−エトキシ−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル−１−スルホニル）−フェニル］−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−オン（バルデナフィル）、５−（５−アセチル−２−ブトキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（１−エチル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、５−（５−アセチル−２−プロポキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（１−イソプロピル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−［２−メトキシエチル］−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、４−［（３−クロロ−４−メトキシベンジル）アミノ］−２−［（２Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル］−Ｎ−（ピリミジン−２−イルメチル）ピリミジン−５−カルボキサミド、および３−（１−メチル−７−オキソ−３−プロピル−６、７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）−Ｎ−［２−（１−メチルピロリジン−２−イル）エチル］−４−プロポキシベンゼンスルホンアミドからなる群から選択されるＰＤＥＶ阻害剤；
・カンナビノイド；
・代謝型グルタミン酸受容体サブタイプ１（ｍＧｌｕＲ１）拮抗薬；
・セルトラリン、セルトラリン代謝物デメチルセルトラリン、フルオキセチン、ノルフルオキセチン（フルオキセチンデスメチル代謝物）、フルボキサミン、パロキセチン、シタロプラム、シタロプラム代謝物デスメチルシタロプラム、エスシタロプラム、ｄ，ｌ−フェンフルラミン、フェモキセチン、イフォキセチン、シアノドチエピン、リトキセチン、ダポキセチン、ネファゾドン、セリクラミンおよびトラゾドンからなる群から選択されるセロトニン再取り込み阻害剤；
・マプロチリン、ロフェプラミン、ミルタザピン（ｍｉｒｔａｚｅｐｉｎｅ）、オキサプロチリン、フェゾラミン、トモキセチン、ミアンセリン、ブプロプリオン、ブプロプリオン代謝物ヒドロキシブプロプリオン、ノミフェンシンおよびビロキサジン（Ｖｉｖａｌａｎ（登録商標））、レボキセチン、および（Ｓ，Ｓ）−レボキセチンからなる群から選択されるノルアドレナリン（ノルエピネフリン）再取り込み阻害剤；
・ベンラファキシン、ベンラファキシン代謝物Ｏ−デスメチルベンラファキシン、クロミプラミン、クロミプラミン代謝物デスメチルクロミプラミン、デュロキセチン、ミルナシプランおよびイミプラミンからなる群から選択される二重セロトニン−ノルアドレナリン再取り込み阻害剤；
・Ｓ−［２−［（１−イミノエチル）アミノ］エチル］−Ｌ−ホモシステイン、Ｓ−［２−［（１−イミノエチル）−アミノ］エチル］−４，４−ジオキソ−Ｌ−システイン、Ｓ−［２−［（１−イミノエチル）アミノ］エチル］−２−メチル−Ｌ−システイン、（２Ｓ，５Ｚ）−２−アミノ−２−メチル−７−［（１−イミノエチル）アミノ］−５−ヘプテン酸、２−［［（１Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−４−ヒドロキシ−１−（５−チアゾリル）−ブチル］チオ］−５−クロロ−３−ピリジンカルボニトリル；２−［［（１Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−４−ヒドロキシ−１−（５−チアゾリル）ブチル］チオ］−４−クロロベンゾニトリル、（２Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−４−［［２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］チオ］−５−チアゾールブタノール、２−［［（１Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−４−ヒドロキシ−１−（５−チアゾリル）ブチル］チオ］−６−（トリフルオロメチル）−３ピリジンカルボニトリル、２−［［（１Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−４−ヒドロキシ−１−（５−チアゾリル）ブチル］チオ］−５−クロロベンゾニトリル、Ｎ−［４−［２−（３−クロロベンジルアミノ）エチル］フェニル］チオフェン−２−カルボキサミジン、およびグアニジノエチルジスルフィドからなる群から選択される誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）阻害剤；
・ドネペジル；
・Ｎ−［（｛２−［４−（２−エチル−４，６−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−１−イル）フェニル］エチル｝アミノ）−カルボニル］−４−メチルベンゼンスルホンアミドおよび４−［（１Ｓ）−１−（｛［５−クロロ−２−（３−フルオロフェノキシ）ピリジン−３−イル］カルボニル｝アミノ）エチル］安息香酸からなる群から選択されるプロスタグランジンＥ_２サブタイプ４（ＥＰ４）拮抗薬；
・１−（３−ビフェニル−４−イルメチル−４−ヒドロキシ−クロマン−７−イル）−シクロペンタンカルボン酸（ＣＰ−１０５６９６）、５−［２−（２−カルボキシエチル）−３−［６−（４−メトキシフェニル）−５Ｅ−ヘキセニル］オキシフェノキシ］−吉草酸（ＯＮＯ−４０５７）およびＤＰＣ−１１８７０からなる群から選択されるロイコトリエンＢ４拮抗薬、
・ジレウトン、６−［（３−フルオロ−５−［４−メトキシ−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル］）フェノキシ−メチル］−１−メチル−２−キノロン（ＺＤ−２１３８）、および２，３，５−トリメチル−６−（３−ピリジルメチル）、１，４−ベンゾキノン（ＣＶ−６５０４）からなる群から選択される５−リポキシゲナーゼ阻害剤；
・リドカイン；および
・オンダンセトロン；
および、それらの薬学的に許容できる塩および溶媒和物
から選択されることを特徴とする、
医薬組成物。

【請求項14】

請求項１から１３のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、
疼痛の発生を予防する、改善する、制御する、減少させる、または、疼痛の症状の発達または進行を遅らせる、のいずれか１つまたは複数での使用のための、
医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、疼痛および／または疼痛の症状の治療での使用のための、ｐ７５ＮＴＲニューロトロフィン結合タンパク質、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）に関する。

【背景技術】

【0002】

ニューロトロフィンである神経栄養成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン３（ＮＴ−３）、およびニューロトロフィン４／５（ＮＴ−４／５）は、４つの受容体：低親和性ｐ７５神経栄養受容体（ｐ７５ＮＴＲ）および高親和性チロシンキナーゼ受容体；ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、およびＴｒｋＣを介して作用する。低親和性受容体ｐ７５ＮＴＲは、４つのニューロトロフィンの全てに結合して活性化され、他の受容体から独立して機能することが報告されている。しかしながら、Ｔｒｋ受容体はより選択的に活性化され、すなわちＮＧＦはＴｒｋＡに対する選択的なリガンドであり、ＢＤＮＦはＴｒｋＢに対するリガンドであり、そして、ＮＴ−３、ＮＴ−４／５はＴｒｋＣに対するリガンドである。加えて、ｐ７５ＮＴＲとＴｒｋタンパク質が共発現されると、それらは複合体を形成し、両方の受容体のシグナリングを変えることが報告されている（ＨｕａｎｇおよびＲｅｉｃｈａｒｄｔ，２００３）。実際に、ｐ７５ＮＴＲは、各ニューロトロフィン（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｎ）のそれぞれのＴｒｋ受容体に対する選択性を促進することが示唆されている。

【0003】

ｐ７５ＮＴＲは、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲ−ＳＦ）のメンバーであり、このスーパーファミリーの完全に特徴付けられた最初のメンバーであった。スーパーファミリー（ヒトでは約３０の遺伝子によりコードされる）は、ｐ７５ＮＴＲにおいて初めて同定された（Ｊｏｈｎｓｏｎら、１９８６；Ｒａｄｅｋｅら、１９８７）、４０アミノ酸のシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）の１つまたは複数の（典型的に４つ）の繰り返しからなるリガンド結合ドメインにより定義づけられる。対照的に、全てのＴＮＦＲ−ＳＦファミリーメンバーの細胞内ドメインで共通する配列モチーフはない。その結果として、ＴＮＦＲ−ＳＦタンパク質のシグナリングメカニズムは非常に多様性がある。

【0004】

ｐ７５ＮＴＲの構造の独特な特徴は、膜貫通ドメイン内のシステイニル残基を介して形成された、ジスルフィド結合のｐ７５ＮＴＲ二量体の存在である。このジスルフィド結合は、ｐ７５ＮＴＲによる効果的なニューロトロフィン依存性シグナリングに必要であり、細胞内および細胞外ドメインの形成において重要な役割を果たす（Ｖｉｌａｒら、２００９ｂ）。ニューロトロフィンは、生理学的に、非共有結合的に関連する二量体として（Ｂｏｔｈｗｅｌｌ ａｎｄ Ｓｈｏｏｔｅｒ，１９７７）、およそ５分の分布相半減期で（Ｔｒｉａら、１９９４）、存在する。ニューロトロフィン依存性ｐ７５ＮＴＲの活性化は、ｐ７５ＮＴＲ二量体の２つの細胞外ドメインのＣＲＤ２〜４とニューロトロフィン二量体の関連性に関与する（Ｈｅ ａｎｄ Ｇａｒｃｉａ，２００４）。最近の研究は、ニューロトロフィン結合が、ｐ７５ＮＴＲ二量体の２つの細胞外ドメインを共により近くに動かし、ジスルフィド結合を中心としたスネイルトング様の動きの中で細胞内ドメインを広げて離れさせて、シグナリングアダプタータンパク質ＮＲＩＦおよびＴＲＡＦ６と細胞内ドメインとを関連させるモデルを支持する（Ｖｉｌａｒら、２００９ａ，２００９ｂ）。ｐ７５ＮＴＲに存在するような内部膜貫通ドメインのジスルフィド結合は、他のＴＮＦＲ−ＳＦファミリーメンバーまたは任意の他の膜タンパク質では、これまで開示されていない。

【0005】

ｐ７５ＮＴＲは、α−セクレターゼとγ−セクレターゼの活性およびマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）により連続的にタンパク質分解的に切断され、Ｎｏｔｃｈとβ−アミロイド前駆体タンパク質の切断依存的シグナリングパスウェイに似た様式で、その細胞内ドメイン（ＩＣＤ）を細胞質内に放出する（Ｊｕｎｇら、２００３；Ｋａｎｎｉｎｇら、２００３）。このパスウェイによるｐ７５ＮＴＲ ＩＣＤの細胞質放出は、関連するＮＲＩＦによるシグナリングを促進する（Ｋｅｎｃｈａｐｐａら、２００６）。α−セクレターゼとγ−セクレターゼの活性およびＭＭＰによるタンパク質分解的な切断の後の、ｐ７５ＮＴＲの細胞外ドメインの役割は、完全には理解されていない。

【0006】

ＮＧＦおよび他のニューロトロフィン（ＢＤＮＦ、ＮＴ−３およびＮＴ−４／５）が、変形性関節症、膵炎、関節リウマチ、乾癬、掻痒症および多発性硬化症に起因する疼痛などの病変において、重大な役割を果たすことが示されている（Ｗａｔａｎａｂｅら、２０１０；Ｒａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉら、２０１１；Ｂａｒｔｈｅｌら、２００９；Ｔｒｕｚｚｉら、２０１１；ＭｃＤｏｎａｌｄら、２０１１；Ｙａｍａｏｋａら、２００７）。ＮＧＦまたはＢＤＮＦのいずれか、ＮＴ−３、およびＮＴ−４／５の、任意のニューロトロフィン（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｎ）に対する選択的抗体が、著しく疼痛を軽減させることが示されている。さらに、ニューロトロフィン受容体ｐ７５ＮＴＲ Ｔｒｋ Ａ、Ｔｒｋ ＢまたはＴｒｋ Ｃに対する抗体もまた、疼痛モデルに有効であることが示されている（Ｏｒｉｔａ Ｓら、２０１０；Ｓｖｅｎｓｓｏｎ Ｐら、２０１０；Ｉｗａｋｕｒａら、２０１０；Ｃｉｒｉｌｉｏら、２０１０；Ｐｅｚｅｔら、２０１０；Ｈａｙａｓｈｉら、２０１１；Ｃｈｕら、２０１１；Ｕｅｄａら、２０１０；Ｇｈｉｌａｒｄｉら、２０１０；Ｆｕｋｕｉら、２０１０）。疼痛モデルでのＦｕｋｕｉら（２０１０）（坐骨神経挫滅に続く機械的アロディニア）は、抗ｐ７５ＮＴＲ抗体での治療の後の、疼痛に関連するエンドポイントに対する重大な有効性を示した。この研究から、ｐ７５ＮＴＲ阻害抗体での治療は、ＣＧＲＰおよびｐ７５ＮＴＲ発現を減少させて、疼痛を非常に減少させることが結論付けられた。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

本発明は、ｐ７５ＮＴＲの細胞外ドメインが、細胞膜からの外因性または内因性の切断後に、ニューロトロフィン結合タンパク質またはニューロトロフィンＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ−３およびＮＴ−４／５のそれぞれに対する可溶性受容体として働き、そして、機能、生理機能、およびニューロトロフィン機能の恒常性において重大な役割を果たすことを示す。さらに、我々は、例えば静的アロディニアおよび温痛覚過敏のモデルでの、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ−３およびＮＴ４／５を含む神経栄養因子の病理学的作用を調節または中和するための、ｐ７５ＮＴＲの細胞外ドメインの用途を示す。したがって、ｐ７５ＮＴＲニューロトロフィン結合タンパク質は、疼痛および他の神経栄養因子に関連する病変、例えば、乾癬、湿疹、関節リウマチ、膀胱炎、子宮内膜症および変形性関節症の治療での用途を見いだす。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明の第１態様によれば、疼痛の治療での使用のため、または、疼痛および／または疼痛の症状の予防および／または治療のため、または、疼痛および／または疼痛の症状の発生を改善、制御、減少させるため、または、疼痛および／または疼痛の症状の発達または進行を遅らせるための、ｐ７５ＮＴＲニューロトロフィン結合タンパク質（ＮＢＰ）が提供される。本発明の第２態様によれば、第１態様による使用のためのｐ７５ＮＴＲニューロトロフィン結合タンパク質であって、前記ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）が、１つまたは複数の補助分子に結合されたｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）を含むことを特徴とする、ｐ７５ＮＴＲニューロトロフィン結合タンパク質が提供される。好ましくは、前記ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、１つまたは複数のリンカーを介して、前記の１つまたは複数の補助分子に結合している。本発明の第３態様によれば、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）または第１または第２態様によるｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の１つまたは複数の補助分子に結合されたｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）をコードする核酸分子が提供され、核酸分子は、シグナル配列をコードするものをさらに含んでよい。疼痛の治療のための核酸分子の使用もまた、提供される。本発明の第４態様によれば、細胞をトランスフェクトするための複製可能な発現ベクターが提供され、前記ベクターは第３態様の核酸分子を含み、好ましくは、前記ベクターはウイルスベクターである。疼痛の治療のためのベクターの使用もまた、提供される。本発明の第５態様によれば、第３または第４態様のいずれかの核酸分子を保有する宿主細胞が提供される。本発明の第６態様によれば、第１または第２態様、またはそれらの好ましい実施態様による使用のためのｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、または、第３および第４態様による使用のための核酸またはベクターが提供され、ここで、前記ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）または前記核酸分子またはベクターは、第２の薬理学的に活性の化合物と組み合わせて、別々に、連続して、または同時に使用するためのものである。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1】ニューロトロフィン結合ドメインであるｐ７５ＮＴＲ細胞外ドメイン配列は、太字でハイライトされている。

【図2】ｐ７５ＮＢＰＰペプチドの標準的なフラグメント、および、ヒト血漿でのｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）−ＮＧＦ複合体を示すｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）とＮＧＦの共免疫沈降。

【図3】図２に示すＷＡＤＡＥＣＥＥＩＰＧＲ（配列番号７）ピークのＭＳ／ＭＳ配列の確認。

【図4】ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、ＴｒｋＡを発現するＵ２０Ｓ細胞株、および、ＴｒｋＡとｐ７５ＮＴＲを共発現するＵ２０Ｓ細胞株において、ＮＧＦ機能を阻害する。

【図5】可溶性ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、ＴｒｋＡを発現するＵ２０Ｓ細胞株、および、ＴｒｋＡとｐ７５ＮＴＲを共発現するＵ２０Ｓ細胞株において、ＢＤＮＦ機能を阻害する。

【図6】ＢＤＮＦへのｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の結合、および、抗ＢＤＮＦとｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）との間の競合を示す、バイオコアデータ。

【図7】ＰＣ１２細胞における、ＮＧＦ活性のｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）阻害。

【図8】ニューロトロフィン結合タンパク質ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、神経興奮性モデルにおいて、ＢＤＮＦの疼痛効果を阻害する。

【図9】ニューロトロフィン結合タンパク質ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、ＵＶＩＨモデルにおいて、痛覚過敏を阻害する。

【図10】配列番号１ ヒトｐ７５ＮＴＲの全アミノ酸配列

【図11】配列番号２ シグナル配列を含むヒトｐ７５ＮＴＲ細胞外ドメイン

【図12】配列番号３ シグナル配列を含まないヒトｐ７５ＮＴＲ細胞外ドメイン

【図13】配列番号４ ヒトｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）ニューロトロフィン結合ドメイン１

【図14】配列番号５ ヒトｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）ニューロトロフィン結合ドメイン２

【図15】配列番号６ ヒトｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）ニューロトロフィン結合ドメイン３

【図16】配列番号７ ヒトｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）ニューロトロフィン結合ドメイン４

【図17】配列番号８ ヒトｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）ニューロトロフィン結合ドメイン５

【図18】配列番号９ ヒトトランスフェリン

【図19】配列番号１０ ヒトアルブミン

【図20】配列番号１１ ヒトＦｃ ＩｇＧ１

【図21】配列番号１２ ヒトＦｃ ＩｇＧ２

【図22】配列番号１３ ヒトＦｃ ＩｇＧ３

【図23】配列番号１４ ヒトＦｃ ＩｇＧ４

【図24】配列番号１５ 血清半減期を延長する改変がされたヒトＦｃフラグメント

【図25】配列番号１６ エフェクター機能を欠損する改変がされたヒトＦｃフラグメント

【図26】配列番号１７ ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）−Ｆｃリンカー

【図27】配列番号１８ ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）−Ｆｃリンカー

【図28】配列番号１９ ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）−Ｆｃリンカー

【発明を実施するための形態】

【0010】

本発明の第１の態様によれば、疼痛の治療での使用のため、または、疼痛および／または疼痛の症状の予防および／または治療のため、または、疼痛および／または疼痛の症状の発生を改善、制御、減少させ、または、疼痛および／または疼痛の症状の発達または進行を遅らせるための、ｐ７５ＮＴＲニューロトロフィン結合タンパク質（ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ））が提供される。好ましくは、ｐ７５ＮＴＲニューロトロフィン結合タンパク質ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、ペグ化されており、さらに好ましくは、グリコシル化されている。

【0011】

ｐ７５ＮＴＲニューロトロフィン結合タンパク質ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、好ましくは、（ａ）ニューロトロフィン結合ドメイン１［配列番号４］、ニューロトロフィン結合ドメイン２［配列番号５］、ニューロトロフィン結合ドメイン３［配列番号６］、ニューロトロフィン結合ドメイン４［配列番号７］またはニューロトロフィン結合ドメイン５［配列番号８］の１つまたは複数を含む。さらに好ましくは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、（ｂ）ニューロトロフィン結合ドメイン１［配列番号４］、ニューロトロフィン結合ドメイン２［配列番号５］、ニューロトロフィン結合ドメイン４［配列番号７］およびニューロトロフィン結合ドメイン５［配列番号８］のそれぞれ、または、（ｃ）ニューロトロフィン結合ドメイン１［配列番号４］、ニューロトロフィン結合ドメイン３［配列番号６］、ニューロトロフィン結合ドメイン４［配列番号７］およびニューロトロフィン結合ドメイン５［配列番号８］のそれぞれを含む。さらに好ましくは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、細胞外ドメイン２［配列番号３］、または、上記の（ａ）、（ｂ）または（ｃ）を含むその部分を含む。さらに好ましくは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、細胞外ドメイン１［配列番号２］、または、上記の（ａ）、（ｂ）または（ｃ）を含むその部分を含む。

【0012】

好ましくは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、ニューロトロフィンＮＧＦ、ＮＴ３、ＢＤＮＦおよびＮＴ４／５、好ましくはヒトＮＧＦ、ＮＴ３、ＢＤＮＦおよびＮＴ４／５のそれぞれに結合する。さらに好ましくは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、好ましくは天然のｐ７５ＮＴＲ配列全長［配列番号１］と同等または同一の結合定数で、ニューロトロフィンＮＧＦ、ＮＴ３、ＢＤＮＦおよびＮＴ４／５、好ましくはヒトＮＧＦ、ＮＴ３、ＢＤＮＦおよびＮＴ４／５のそれぞれに結合する。結合定数は、本明細書に記載のアッセイを用いて、例えば、２０℃での表面プラズモン共鳴の使用により決定することができ、天然のタンパク質の結合定数のためのアッセイは公知であり、当技術分野で知られている細胞に基づくアッセイを含む。好ましくは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、インビトロまたはインビボで、１つまたは複数の前述のニューロトロフィンが血漿中または他の体液中で分解されることから守り、および／または、それらの生物学的に自由な形態と比較して、１つまたは複数の前述のニューロトロフィンの恒常性バランスを維持する。

【0013】

本発明のｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、好ましくは、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ３またはＮＴ４／５のうちの任意の１つまたは複数と、約０．１ｎＭ〜約５０ｎＭの間の結合親和性（Ｋ_ｄ）で結合する。一部の好ましい実施態様では、結合親和性（Ｋ_ｄ）は、本明細書に記載のＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ３またはＮＴ４／５に関するインビトロ結合アッセイにより測定すると、好ましくは２０℃での表面プラズモン共鳴により測定すると、約０．１ｎＭと、約０．２ｎＭ、０．５ｎＭ、１ｎＭ、１．５ｎＭ、２ｎＭ、２．５ｎＭ、３ｎＭ、３．５ｎＭ、４ｎＭ、４．５ｎＭ、５ｎＭ、５．５ｎＭ、６ｎＭ、６．５ｎＭ、７ｎＭ、７．５ｎＭ、８ｎＭ、８．５ｎＭ、９ｎＭ、９．５ｎＭ、１０ｎＭ、１５ｎＭ、２０ｎＭ、２５ｎＭ、３０ｎＭ、３５ｎＭ、４０ｎＭ、４５ｎＭまたは５０ｎＭのいずれかとの間である。一部のさらに好ましい実施態様では、結合親和性（Ｋ_ｄ）は、本明細書に記載のニューロトロフィンとのｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）に関するインビトロ結合アッセイで測定すると、好ましくは２０℃での表面プラズモン共鳴により測定すると、約２５０ｐＭ、３００ｐＭ、３５０ｐＭ、４００ｐＭ、４５０ｐＭ、５００ｐＭ、５５０ｐＭ、６００ｐＭ、６５０ｐＭ、７００ｐＭ、７５０ｐＭ、８００ｐＭ、８５０ｐＭ、９５０ｐＭまたは１ｎＭのいずれか、またはそれ未満である。さらにより好ましい実施態様では、結合親和性（Ｋ_ｄ）は、本明細書に記載のニューロトロフィンとｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）に関するインビトロ結合アッセイで測定すると、好ましくは２０℃での表面プラズモン共鳴により測定すると、約０．３ｎＭまたは約１ｎＭである。

【0014】

さらに好ましくは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、前述のニューロトロフィンＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ３またはＮＴ４／５の機能性活性（ニューロトロフィンの機能性活性の調節または上方制御または下方制御として定義される）、例えば、それらのそれぞれの受容体とのそれらの相互作用により結果として生じる前述のニューロトロフィンの機能性活性をもたらす。

【0015】

好ましくは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、神経細胞およびシナプスの増殖および分化、神経細胞培養での生存および分化、Ｔｒｋシグナリング、軸索伸長の刺激（インビトロまたはインビボ）のいずれかの機能性アッセイにより評価されるように、ＢＤＮＦの機能性活性をもたらす。

【0016】

好ましくは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、ＮＧＦの、ＴｒｋＡに対する結合および活性化を測定することにより評価され、古典的な神経細胞生存アッセイ（例えば、Ｃｏｗａｎ，Ｗ．Ｍ．，Ｈａｍｂｕｒｇｅｒ，Ｖ．，Ｌｅｖｉ−Ｍｏｎｔａｌｃｉｎｉ，Ｒ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００１；２４：５５１−６００に記載される）に示されるように、ＮＧＦの機能性活性をもたらす。

【0017】

好ましくは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、ＮＴ３の、内因性Ｔｒｋ受容体に対する結合および内因性Ｔｒｋ受容体活性の活性化を測定することにより評価され、Ｔｒｋ受容体リン酸化、分裂促進因子により活性化されるタンパク質キナーゼリン酸化レポーターアッセイ、または、細胞生存および軸索伸長のアッセイに示されるように、ＮＴ３の機能性活性をもたらす。

【0018】

好ましくは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、例えばミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）リン酸化アッセイにおいて、または代わりに、インビボの血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）／塩基性線維芽細胞増殖因子により誘導される血管新生のマトリゲル血管新生アッセイにおいて、ＮＴ４／５のインビトロまたはインビボのリン酸化および活性化アッセイを測定することにより評価されるように、ＮＴ４／５の機能性活性をもたらす。

【0019】

好ましくは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、Ｈｅ ａｎｄ Ｇａｒｃｉａ（２００１）Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０１，８７０〜８０５頁に示される、ニューロトロフィンＮＧＦ、ＮＴ３、ＢＤＮＦおよびＮＴ４／５のうちの１つまたは複数の接触残基に結合する。

【0020】

好ましくは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は可溶性であり、好ましくは水性溶液に可溶性であり、好ましくは生物学的流体、例えば血清、血漿、血液に可溶性である。

【0021】

本発明の第２態様によれば、第１態様による使用のためのｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）が提供され、ここで、前記ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、好ましくは１つまたは複数の補助分子に結合された第１態様のｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）を含む。好ましくは、前記ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、１つまたは複数のリンカーを介して、前記の１つまたは複数の補助分子に結合されている。

【0022】

好ましくは、前記の１つまたは複数の補助分子は；（ａ）トランスフェリンまたはその部分、好ましくは、トランスフェリンはヒトトランスフェリンであり、好ましくは配列番号９である、（ｂ）アルブミンまたはその部分、好ましくは、アルブミンはヒトアルブミンであり、好ましくは配列番号１０である、（ｃ）免疫グロブリンＦｃまたはその部分、好ましくは、免疫グロブリンＦｃはヒト免疫グロブリンＦｃである、（ｄ）ポリエチレングリコールポリマー鎖、（ｅ）糖鎖、から選択される。

【0023】

本明細書において用いられる用語、「免疫グロブリンＦｃ」または「Ｉｇ Ｆｃ」は、免疫グロブリン鎖定常領域のカルボキシル末端部分、好ましくは免疫グロブリン重鎖定常領域、またはその部分を意味すると理解される。好ましくは、免疫グロブリンＦｃは、１）場合により免疫グロブリンヒンジ領域を伴う、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、および、ＣＨ３ドメイン、２）場合により免疫グロブリンヒンジ領域を伴う、ＣＨ１ドメインおよびＣＨ２ドメイン、３）場合により免疫グロブリンヒンジ領域を伴う、ＣＨ１ドメインおよびＣＨ３ドメイン、４）場合により免疫グロブリンヒンジ領域を伴う、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン、または、５）場合により免疫グロブリンヒンジ領域と組み合わされた、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から選択される２またはそれ以上のドメインの組み合わせを含む。好ましくは、免疫グロブリンＦｃは、少なくとも、免疫グロブリンヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメイン、および場合によりＣＨ１ドメインを含む。好ましくは、免疫グロブリンＦｃは、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、さらに好ましくは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ｓＩｇＡ、さらに好ましくはＩｇＧ２またはＩｇＧ４、最も好ましくはＩｇＧ２から選択されるアイソタイプの免疫グロブリンのＦｃまたはＦｃ部分を含む、またはからなる。場合により、免疫グロブリンＦｃはまた、補体結合または抗体依存性の細胞の細胞毒性を最小限化する働きをする、またはＦｃ受容体に対する結合の親和性を改善する、アミノ酸変異、欠失、置換または化学修飾も含む。

【0024】

さらに好ましくは、免疫グロブリンＦｃは、（ａ）ＣＨ２ドメインまたはその部分、および、ＣＨ３ドメインまたはその部分、（ｂ）ＣＨ２ドメインまたはその部分、または、（ｃ）ＣＨ３ドメインまたはその部分のいずれかを含み、またはからなり、ここで、前記免疫グロブリンＦｃまたはその部分は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、さらに好ましくは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ｓＩｇＡ、さらに好ましくはＩｇＧ２またはＩｇＧ４、最も好ましくはＩｇＧ２から選択されるアイソタイプである。

【0025】

好ましくは、免疫グロブリンＦｃは、免疫グロブリン重鎖のカルボキシ末端領域を含み、またはからなり、ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＤ抗体アイソタイプ由来のＣＨ２および／またはＣＨ３ドメイン、またはそれらの部分、または、ＩｇＭまたはＩｇＥ由来のＣＨ２および／またはＣＨ３および／またはＣＨ４ドメイン、またはそれらの部分を含んでよい。好ましくは、免疫グロブリンＦｃは、主としてＣＨ３を含みＣＨ２をごく一部含むＦｃのフラグメントを含み、またはからなり、免疫グロブリンのペプシン消化により生じさせることができる。好ましくは、免疫グロブリンＦｃは、Ｆｃ全領域を含み、またはからなり、ＣＨ２およびＣＨ３を含み、さらに無傷の免疫グロブリンにおいてＣＨ１およびＣＨ２領域を連結する重鎖の短いセグメントであるヒンジ領域に結合され、免疫グロブリンのパパイン消化により生産され得る。好ましくは、免疫グロブリンヒンジ領域は、ＩｇＧ、好ましくはヒトＩｇＧ、さらに好ましくはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される、最も好ましくはＩｇＧ１に由来する、ヒンジ領域またはヒンジ領域部分を含む、またはからなる、または代わりに、前述のヒンジ領域の具体例の種または対立遺伝子多型である。ヒンジ領域または免疫グロブリンのヒンジ領域部分は、Ｆｃ領域のＣ末端またはＮ末端、好ましくはＮ末端に存在してよい。

【0026】

本発明の好ましい実施態様によれば、免疫グロブリンＦｃは、好ましくはＦｃのエフェクター機能を減少させる、ＣＨ２領域の野生型配列の１つまたは複数のアミノ酸変異を含む免疫グロブリンのＦｃまたは免疫グロブリンのＦｃの一部分を、含む、またはからなる。好ましくは、これらの変異は、Ａ３３０、Ｐ３３１〜Ｓ３３０、Ｓ３３１である（野生型ＩｇＧ２配列に関するアミノ酸のナンバリングであり、ＣＨ２領域はヒト重鎖ＩｇＧ２定常領域に存在する：［Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３−２６２４］。好ましくは、免疫グロブリンＦｃはグリコシル化されて生理学的ｐＨで高電荷であり、それ故に、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）を可溶化するのを助ける。また、Ｆｃ領域は、例えば診断目的での、抗−ＦｃのＥＬＩＳＡによるｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の検出を可能にする。本発明のｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、好ましくは通常のグリコシル化部位でＩｇ Ｆｃをグリコシル化する細胞内で、好ましくは合成される。

【0027】

好ましくは、免疫グロブリンＦｃは、配列番号１１、１２、１３、１４、１５または１６から選択されるアミノ酸配列のヒト免疫グロブリンＦｃ領域またはそれらの種または対立遺伝子多型、または、配列番号１１、１２、１３、１４、１５または１６に由来するＣＨ２およびまたはＣＨ３ドメインまたはそれらの部分を含む、またはからなる。

【0028】

本発明によれば、１つまたは複数の補助分子に結合されたｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、好ましくは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の溶解性および／またはｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の安定性の改善、および／または、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の血清半減期の改善の、有利な生物学的特性を示す。溶解性の改善は、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の生物学的利用性が投与の際に最大化されて、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の正確な用量を決定および実行することができるため、望ましい。溶解性の改善は、インビボの送達において望ましくない疼痛を引き起こしかつ潜在的炎症につながる凝集体の問題を、克服するのに有利である。血清半減期の改善は、送達されるｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の同等または維持された治療効果を達成するために、治療のための使用の間、必要投与量のレベルの低減または頻度の低減を容易にする、利点を有する。血液中または血清中での延長された半減期およびより高い安定性は、より低い頻度の投与および／またはより少ない投与レベルの用量計画を可能にする利点を有し、それ故に、インビボでの潜在的な毒性または副作用を減少させる。この場合、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）はその治療効果においてより強力であり、および／または、循環においてより安定である。結果として生じる、より低い、または、より少ない頻度の投与量は、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）投与と関連する可能性のある任意の潜在的な毒性作用または副作用を最小限化する点で有利である。１つまたは複数の補助分子に結合したｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の分子量は、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）単独よりも増加しており、このこともまた、静脈内投与されたときに分子が血液循環中に良く維持されて、中枢神経系などの望ましくない部位への透過性の危険を減らし、分子が標的組織中に維持または集中されるのを適切にするという利点を有する。

【0029】

好ましくは、１つまたは複数の補助分子に結合されたｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、そのように結合されていないｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）と比較して、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の溶解性の改善、および／または、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の安定性の改善、および／または、血清半減期の改善を示す。好ましくは、溶解性の改善は、バッファーなど、好ましくは賦形剤および／または好ましくは生理学的ｐＨ、好ましくはｐＨ５〜ｐＨ８の間、好ましくは約ｐＨ７の塩を有する、水などの水性溶液中での溶解性であり、または、血清または血液などの生物学的流体中での溶解性である。好ましくは、安定性の改善は、保管期間またはその後の凍結融解の間の、長年にわたる変性、酸化、フラグメント化、または凝集の効果に起因する、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）タンパク質の活性または構造的一体性の安定性である。構造的安定性は、変性、酸化、凝集または凝集の標準的な測定により判定することができ、活性の安定性は、本明細書に記載の結合または機能性アッセイにより測定することができ、タンパク質の血清半減期を測定する方法は公知である。

【0030】

好ましくは、１つまたは複数の補助分子に結合されたｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、様々な哺乳類の宿主細胞から高レベルで発現させて単一種を生産することができ、アフィニティクロマトグラフィーにより、例えば黄色ブドウ球菌プロテインＡに対する結合により、効率的に精製することができる。好ましくは、１つまたは複数の補助分子に結合されたｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、二量体化することができ、好ましくは、その二量体は、そのように結合されていないｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）と比較して、ニューロトロフィンＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ３またはＮＴ４／５に対する親和性が増加する。よりタイトな結合は、例えば本明細書に記載のニューロトロフィン機能性アッセイにより判定されるｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の効果により判断されるように、より高い効能およびより高い治療有効性の利点を有する。より高い効能は、より低い用量でｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）を使用して同一の治療有効性を達成することができ、それ故に、インビボでの潜在的な毒性または副作用を減少させるという利益を有する。

【0031】

好ましくは、本発明のｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、インビボで、約２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８または２１０時間＋／−１時間のいずれか、またはこれを超える半減期を有し、さらに好ましくは、本発明のｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、インビボで、約２４時間またはこれを超える半減期を有する。

【0032】

さらに好ましくは、本発明のｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）はインビトロで、約２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８または２１０日＋／−１日のいずれか、またはこれを超える半減期を有し、さらに好ましくは、本発明のｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、インビトロで、約６日またはこれを超える半減期を有する。好ましくは、安定性は、だいたい生理学的なｐＨでの緩衝水溶液中で、好ましくは２０℃または３７℃で測定される。

【0033】

前述の好ましい実施態様によれば、好ましくは、インビボの半減期は、ラットでの半減期またはヒトでの半減期、さらに好ましくはヒトでの半減期である。好ましくは、半減期は、例えば静脈内または皮下注入によるインビボでの投与の後に、本発明のｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）のレベルの血清測定より決定される。

【0034】

−さらに本発明の第２態様によれば、リンカーは、好ましくは、（ａ）共有結合、（ｂ）非共有結合、（ｃ）ペプチド結合、（ｄ）１アミノ酸、またはペプチドを含む複数アミノ酸から選択される。好ましくは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、１つよりも多い補助分子に結合しており、場合により、各補助分子は、同一または異なるもののいずれか、または同一および異なるものの混合物である。さらに好ましくは、前記の１つよりも多い補助分子は、リンカーを介してｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）に結合された多量体または複数の補助分子を含み、各分子は、同一または異なるもの、または、同一および異なるものの混合物であり得る。

【0035】

好ましくは、リンカーは、１つまたは複数のアミノ酸を含み、またはからなり、または、アミノ酸、好ましくは約１〜約２５アミノ酸、好ましくは、１、２、３、４、５、６、７、８、または９アミノ酸のいずれか、さらに好ましくは約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１ ２２、２３または２４アミノ酸のいずれか、最も好ましくは１３アミノ酸のポリペプチド配列を含む、またはからなる。

【0036】

好ましくは、リンカーは、αへリックス、β鎖、３_１０へリックスおよびｐｉへリックス、ポリプロリンヘリックス、αシートなどの任意の安定な二次構造が欠損した、アミノ酸のポリペプチド配列を含む、またはからなる。好ましくは、リンカー領域は、可動性または動的または不定形のポリペプチド、例えばフレキシブルループ、ランダムコイルまたはフレキシブルターンなどを定義するアミノ酸のポリペプチド配列を含み、またはからなり、そのような不定形のポリペプチドは、大きなタンパク質分子における二次構造の結合領域にしばしば見られる。

【0037】

好ましくは、リンカーは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）中の約５０％またはそれより多いグリシンおよび／またはアラニンおよび／またはセリン、さらに好ましくは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）中の約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％またはそれより多いグリシンおよび／またはアラニンおよび／またはセリンを含む、アミノ酸のポリペプチド配列である。好ましくは、リンカー領域は、グリシンおよびセリンの両方を、好ましくはセリンよりもグリシンが多い比率で含む、アミノ酸のポリペプチド配列を含み、またはからなり、好ましくは、リンカー領域は、可動性リンカー、配列番号１７（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜４）、またはらせん状のリンカー、配列番号１８（ＥＡＡＡＫ）ｎ（ｎ＝２〜５）、または、グリシン、セリン、アラニン、およびトレオニンから選択されるアミノ酸残基の各アミノ酸の１から１０までの繰り返しおよびそれらの任意の組み合わせを主に含む、ポリペプチドリンカーを含む、またはからなる。

【0038】

好ましくは、リンカーは、補助分子に結合されていないｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）と比較して、前述のニューロトロフィンの結合能力またはｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の生物学的活性を妨げる可能性のある、補助分子による立体障害を、克服または防ぐ。それ故に、リンカー領域は、例えば本明細書に記載の結合アッセイを用いたニューロトロフィンに対する結合により判定すると、そのように結合されていないフリーまたは天然のｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）と比較して、好ましくは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）と補助分子との間の自由度を与え、前述のｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の生物学的活性を維持または改善させる。

【0039】

さらに好ましくは、リンカーは免疫学的に不活性であり、したがって、補体媒介性の溶解を引き起こさず、抗体依存−細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を刺激せず、ミクログリアまたはＴ細胞を活性化しない。好ましくは、リンカー領域は、これらの活性の１つまたは複数が低下している。

【0040】

さらに好ましくは、リンカーは、構造分析または構造予測から、可動性または動的または不定形のポリペプチドであるか、または安定な二次構造を欠くと知られ、または予測されるポリペプチドを含む、またはからなる。

【0041】

最も好ましくは、リンカーは、配列番号１９（ＧＧＧＧＳ）の配列のポリペプチドを含む、またはからなる。

【0042】

本発明のｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）はまた、タンパク質分解の切断部位を、場合によりｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）と補助分子の間に挟んで含んでもよい。タンパク質分解の切断部位は、リンカー中、または、リンカーとｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）または／および補助分子のいずれかとの接合部に存在してよい。ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、場合により、治療目的のための製剤化およびまたは投与の前に、補助分子から切断されてよい。

【0043】

好ましくは、リンカーおよび／または１つまたは複数の補助分子は、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）について以下を害さないか、または著しく害さない：
（ａ）ニューロトロフィンＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ３またはＮＴ４／５の機能性活性に対する効果（ニューロトロフィンの機能性活性の調節または上方制御または下方制御として定義される）、
（ｂ）約０．１ｎＭ〜約５０ｎＭの間の結合親和性での、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ３またはＮＴ４／５のいずれかに対する結合親和性、
（ｃ）ニューロトロフィンＮＧＦ、ＮＴ３、ＢＤＮＦおよびＮＴ４／５、好ましくはヒトＮＧＦ、ＮＴ３、ＢＤＮＦおよびＮＴ４／５のそれぞれに対する結合能力。

【0044】

本発明の１および２の態様の好ましい実施態様によれば、本発明のｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）が提供され、疼痛の治療に用いるためのｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）が提供され、ここで、前記ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、（Ａ）配列番号３の配列のＰ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、および場合により、（Ｂ）免疫グロブリンＦｃ（さらに場合により、配列番号１１の配列からなる）、および場合により（Ｃ）リンカー（場合により配列番号１９からなる）からなる。

【0045】

−本発明の第３態様によれば、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、または、第１または第２態様による１つまたは複数の補助分子に結合されたｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）をコードする核酸分子が提供される。好ましくは、核酸分子は、疼痛の治療に用いるためのものである。

【0046】

本発明の好ましい実施態様によれば、核酸分子は、シグナル配列、好ましくはｐ７５ＮＴＲシグナル配列をコードする領域、例えばＤＮＡまたはＲＮＡ配列をさらに含んでよい。

【0047】

−本発明の第４態様によれば、細胞をトランスフェクトするための複製可能な発現ベクターが提供され、前記ベクターは、第３態様の核酸分子を含み、好ましくは、前記ベクターはウイルスベクターである。好ましくは、前記ベクター疼痛の治療で用いるためのものである。

【0048】

−さらに本発明の第３または第４態様によれば、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）または１つまたは複数の補助分子に結合されたｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）を生産または分泌するために、本発明の核酸分子またはベクターを発現する方法が提供される。好ましくは、前記方法は、核酸分子またはベクターを細胞内に導入すること、および、その中で核酸を発現させて、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、または、１つまたは複数の補助分子に結合されたｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）を、生産または分泌させることを含む。好ましくは、核酸分子またはベクターは、細胞インビトロあるいはインビボで細胞内に導入される。好ましくは、発現されるｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）または１つまたは複数の補助分子に結合されたｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、インビトロで発現されて、場合によりさらに分離および精製され、あるいは好ましくは、発現されるｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）または１つまたは複数の補助分子に結合されたｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、インビボで発現され、好ましくは、インビボでの発現は、遺伝子治療を構成する。好ましくは、ベクターは、複製可能な発現ベクターであり、場合により哺乳類の細胞をトランスフェクトするためのものであり、好ましくは、ベクターはウイルスベクターである。

【0049】

−本発明の第５態様によれば、第３または第４態様のいずれかの核酸分子またはベクターを保有する宿主細胞が提供され、好ましくは、前記細胞は哺乳類の細胞である。

【0050】

−本発明の第６態様によれば、第１または第２態様またはそれらの好ましい実施態様による使用のためのｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、または、第３および第４態様による使用のための核酸またはベクターが提供され、前記疼痛または疼痛の症状は：
（ａ）急性疼痛および／または自発痛、
（ｂ）慢性疼痛およびまたは進行中の疼痛、
（ｃ）関節痛、変形性関節症または関節リウマチから生じる疼痛、炎症性腸疾患、乾癬および湿疹から生じる疼痛のいずれかを含む炎症性疼痛、
（ｄ）侵害受容性疼痛、
（ｅ）有痛性糖尿病性神経障害または帯状疱疹後神経痛と関連する疼痛を含む、神経障害性疼痛
（ｆ）痛覚過敏、
（ｇ）アロディニア、
（ｈ）中枢痛、中枢性卒中後痛、多発性硬化症から生じる疼痛、脊髄損傷から生じる疼痛、またはパーキンソン病またはてんかんから生じる疼痛、
（ｉ）癌性疼痛、
（ｊ）術後疼痛、
（ｋ）消化性内臓痛および非消化性内臓痛を含む内臓痛、胃腸（ＧＩ）障害に起因する疼痛、機能性腸疾患（ＦＢＤ）から生じる疼痛、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）から生じる疼痛、月経困難、骨盤痛、膀胱炎、間質性膀胱炎または膵炎から生じる疼痛、
（ｌ）筋骨格痛、筋肉痛、線維筋痛、脊椎炎、血清陰性（非リウマチ性）関節障害、関節外リウマチ、ジストロフィン異常症、グリコーゲン分解、多発性筋炎、化膿性筋炎、
（ｍ）心臓または血管性疼痛、狭心症、心筋梗塞、僧帽弁狭窄、心膜炎、レイノー現象、浮腫性硬化症（ｓｃｌｅｒｅｄｏｍａ）、浮腫性硬化症または骨格筋虚血に起因する疼痛、
（ｎ）片頭痛、前兆を伴う片頭痛、前兆を伴わない片頭痛、群発頭痛、緊張型頭痛を含む、頭痛、
（ｏ）歯痛、顎関節筋膜痛または耳鳴りを含む、口腔顔面痛、または、
（ｐ）背痛、滑液包炎、月経痛、片頭痛、関連痛、三叉神経痛、超増感、脊椎の外傷および／または変性または脳卒中から生じる疼痛、
から選択される。

【0051】

−本発明の第７態様によれば、第１または第２態様またはそれらの好ましい実施態様による使用のためのｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、または、第３および第４態様による使用のための核酸分子またはベクターが提供され、前記のｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）または核酸分子またはベクターは、第２の薬理学的に活性の化合物と組み合わせて、別々に、連続して、または同時に使用するためのものである。好ましくは、組み合わせる前記の第２の薬理学的に活性の化合物は；
・オピオイド鎮痛薬、例えばモルヒネ、ヘロイン、ヒドロモルフォン、オキシモルフォン、レボルファノール、レバロルファン、メタドン、メペリジン、フェンタニル、コカイン、コデイン、ジヒドロコデイン、オキシコドン、ヒドロコドン、プロポキシフェン、ナルメフェン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブトルファノール、ナルブフィンまたはペンタゾシン；
・非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えばアスピリン、ジクロフェナク、ジフルシナル（ｄｉｆｌｕｓｉｎａｌ）、エトドラク、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルフェニサル、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラック、メクロフェナム酸、メフェナム酸、メロキシカム、ナブメトン、ナプロキセン、ニメスリド、ニトロフルルビプロフェン、オルサラジン、オキサプロジン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スルファサラジン、スリンダク、トルメチンまたはゾメピラック；
・バルビツレート鎮静剤、例えばアモバルビタール、アプロバルビタール、ブタバルビタール、ブタルビタール（ｂｕｔａｂｉｔａｌ）、メホバルビタール、メタルビタール、メトヘキシタール、ペントバルビタール、フェノバルビタール（ｐｈｅｎｏｂａｒｔｉｔａｌ）、セコバルビタール、タルブタール、チアミラール（ｔｈｅａｍｙｌａｌ）またはチオペンタール；
・鎮静作用を有するベンゾジアゼピン、例えばクロルジアゼポキシド、クロラゼペート、ジアゼパム、フルラゼパム、ロラゼパム、オキサゼパム、テマゼパムまたはトリアゾラム；
・鎮静作用を有するＨ１拮抗薬、例えばジフェンヒドラミン、ピリラミン、プロメタジン、クロルフェニラミンまたはクロルシクリジン；
・鎮静剤、例えばグルテチミド、メプロバメート、メタカロンまたはジクロラルフェナゾン；
・骨格筋弛緩薬、例えばバクロフェン、カリソプロドール、クロルゾキサゾン、シクロベンザプリン、メトカルバモールまたはオルフレナジン；
・ＮＭＤＡ受容体拮抗薬、例えばデキストロメトルファン（（＋）−３−ヒドロキシ−Ｎ−メチルモルフィナン）またはその代謝物デキストロルファン（（＋）−３−ヒドロキシ−Ｎ−メチルモルフィナン）、ケタミン、メマンチン、ピロロキノリンキニン、シス−４−（ホスホノメチル）−２−ピペリジンカルボン酸、ブジピン、ＥＮ−３２３１（ＭｏｒｐｈｉＤｅｘ（登録商標）、モルヒネおよびデキストロメトルファンの組み合わせ製剤）、トピラマート、ネラメキサン、または、ＮＲ２Ｂ拮抗薬を含むペルジンホテル、例えばイフェンプロジル、トラキソプロジルまたは（−）−（Ｒ）−６−｛２−［４−（３−フルオロフェニル）−４−ヒドロキシ−１−ピペリジニル］−１−ヒドロキシエチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−キノリノン；
・α−アドレナリン作用薬、例えばドキサゾシン、タムスロシン、クロニジン、グアンファシン、デキスメタトミジン（ｄｅｘｍｅｔａｔｏｍｉｄｉｎｅ）、モダフィニル、または４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−（５−メタン−スルホンアミド−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノール−２−イル）−５−（２−ピリジル）キナゾリン；
・三環系抗うつ薬、例えばデシプラミン、イミプラミン、アミトリプチリンまたはノルトリプチリン；
・抗痙攣薬、例えばカルバマゼピン、ラモトリジン、トピラマート（ｔｏｐｉｒａｔｍａｔｅ）またはバルプロエート；
・タキキニン（ＮＫ）拮抗薬、特にＮＫ−３、ＮＫ−２またはＮＫ−１拮抗薬、例えば（αＲ，９Ｒ）−７−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−８，９，１０，１１−テトラヒドロ−９−メチル−５−（４−メチルフェニル）−７Ｈ−［１，４］ジアゾシノ［２，１−ｇ］［１，７］−ナフチリジン−６−１３−ジオン（ＴＡＫ−６３７）、５−［［（２Ｒ，３Ｓ）−２−［（１Ｒ）−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ−３−（４−フルオロフェニル）−４−モルホリニル］−メチル］−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−１，２，４−トリアゾル−３−オン（ＭＫ−８６９）、アプレピタント、ラネピタント、ダピタントまたは３−［［２−メトキシ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］−メチルアミノ］−２−フェニルピペリジン（２Ｓ，３Ｓ）；
・ムスカリン拮抗薬、例えばオキシブチニン、トルテロジン、プロピベリン、塩化トロスピウム（ｔｒｏｐｓｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ダリフェナシン、ソリフェナシン、テミベリンおよびイプラトロピウム；
・ＣＯＸ−２選択的阻害剤、例えばセレコキシブ、ロフェコキシブ、パレコキシブ、バルデコキシブ、デラコキシブ、エトリコキシブ、またはルミラコキシブ；
・コールタール鎮痛剤、特にパラセタモール；
・神経遮断薬、例えばドロペリドール、クロルプロマジン、ハロペリドール、ペルフェナジン、チオリダジン、メソリダジン、トリフルオペラジン、フルフェナジン、クロザピン、オランザピン、リスペリドン、ジプラシドン、クエチアピン、セルチンドール、アリピプラゾール、ソネピプラゾール、ブロナンセリン、イロペリドン、ペロスピロン、ラクロプリド、ゾテピン、ビフェプルノックス、アセナピン、ルラシドン、アミスルプリド、バラペリドン、パリンドール、エプリバンセリン、オサネタント、リモナバン、メクリネルタント、Ｍｉｒａｘｉｏｎ（登録商標）またはサリゾタン；
・バニロイド受容体アゴニスト（例えばレシニフェラトキシン）または拮抗薬（例えばカプサゼピン）；
・β−アドレナリン作用薬、例えばプロプラノロール；
・局部麻酔薬、例えばメキシレチン；
・コルチコステロイド、例えばデキサメタゾン；
・５−ＨＴ受容体アゴニストまたは拮抗薬、特に５−ＨＴ_{１Ｂ／１Ｄ}アゴニスト、例えばエレトリプタン、スマトリプタン、ナラトリプタン、ゾルミトリプタンまたはリザトリプタン；
・５−ＨＴ_２Ａ受容体拮抗薬、例えばＲ（＋）−α−（２，３−ジメトキシ−フェニル）−１−［２−（４−フルオロフェニルエチル）］−４−ピペリジンメタノール（ＭＤＬ−１００９０７）；
・コリン作用性（ニコチン性）鎮痛剤、例えばイスプロニクリン（ＴＣ−１７３４）、（Ｅ）−Ｎ−メチル−４−（３−ピリジニル）−３−ブテン−１−アミン（ＲＪＲ−２４０３）、（Ｒ）−５−（２−アゼチジニルメトキシ）−２−クロロピリジン（ＡＢＴ−５９４）またはニコチン；
・トラマドール（登録商標）；
・ＰＤＥＶ阻害剤、例えば５−［２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニル−スルホニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）、（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’：６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（ＩＣ−３５１またはタダラフィル）、２−［２−エトキシ−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル−１−スルホニル）−フェニル］−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−オン（バルデナフィル）、５−（５−アセチル−２−ブトキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（１−エチル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、５−（５−アセチル−２−プロポキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（１−イソプロピル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−［２−メトキシエチル］−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、４−［（３−クロロ−４−メトキシベンジル）アミノ］−２−［（２Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル］−Ｎ−（ピリミジン−２−イルメチル）ピリミジン−５−カルボキサミド、３−（１−メチル−７−オキソ−３−プロピル−６、７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）−Ｎ−［２−（１−メチルピロリジン−２−イル）エチル］−４−プロポキシベンゼンスルホンアミド；
・カンナビノイド；
・代謝型グルタミン酸受容体サブタイプ１（ｍＧｌｕＲ１）拮抗薬；
・セロトニン再取り込み阻害剤、例えばセルトラリン、セルトラリン代謝物デメチルセルトラリン、フルオキセチン、ノルフルオキセチン（フルオキセチンデスメチル代謝物）、フルボキサミン、パロキセチン、シタロプラム、シタロプラム代謝物デスメチルシタロプラム、エスシタロプラム、ｄ，ｌ−フェンフルラミン、フェモキセチン、イフォキセチン、シアノドチエピン、リトキセチン、ダポキセチン、ネファゾドン、セリクラミンおよびトラゾドン；
・ノルアドレナリン（ノルエピネフリン）再取り込み阻害剤、例えばマプロチリン、ロフェプラミン、ミルタザピン（ｍｉｒｔａｚｅｐｉｎｅ）、オキサプロチリン、フェゾラミン、トモキセチン、ミアンセリン、ブプロプリオン、ブプロプリオン代謝物ヒドロキシブプロプリオン、ノミフェンシンおよびビロキサジン（Ｖｉｖａｌａｎ（登録商標））、特に選択的ノルアドレナリン再取り込み阻害剤、例えばレボキセチン、特に（Ｓ，Ｓ）−レボキセチン；
・二重セロトニン−ノルアドレナリン再取り込み阻害剤、例えばベンラファキシン、ベンラファキシン代謝物Ｏ−デスメチルベンラファキシン、クロミプラミン、クロミプラミン代謝物デスメチルクロミプラミン、デュロキセチン、ミルナシプランおよびイミプラミン；
・誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）阻害剤、例えばＳ−［２−［（１−イミノエチル）アミノ］エチル］−Ｌ−ホモシステイン、Ｓ−［２−［（１−イミノエチル）−アミノ］エチル］−４，４−ジオキソ−Ｌ−システイン、Ｓ−［２−［（１−イミノエチル）アミノ］エチル］−２−メチル−Ｌ−システイン、（２Ｓ，５Ｚ）−２−アミノ−２−メチル−７−［（１−イミノエチル）アミノ］−５−ヘプテン酸、２−［［（１Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−４−ヒドロキシ−１−（５−チアゾリル）−ブチル］チオ］−５−クロロ−３−ピリジンカルボニトリル；２−［［（１Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−４−ヒドロキシ−１−（５−チアゾリル）ブチル］チオ］−４−クロロベンゾニトリル、（２Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−４−［［２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］チオ］−５−チアゾールブタノール、２−［［（１Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−４−ヒドロキシ−１−（５−チアゾリル）ブチル］チオ］−６−（トリフルオロメチル）−３ピリジンカルボニトリル、２−［［（１Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−４−ヒドロキシ−１−（５−チアゾリル）ブチル］チオ］−５−クロロベンゾニトリル、Ｎ−［４−［２−（３−クロロベンジルアミノ）エチル］フェニル］チオフェン−２−カルボキサミジン、またはグアニジノエチルジスルフィド；
・アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、例えばドネペジル；
・プロスタグランジンＥ_２サブタイプ４（ＥＰ４）拮抗薬、例えばＮ−［（｛２−［４−（２−エチル−４，６−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−１−イル）フェニル］エチル｝アミノ）−カルボニル］−４−メチルベンゼンスルホンアミドまたは４−［（１Ｓ）−１−（｛［５−クロロ−２−（３−フルオロフェノキシ）ピリジン−３−イル］カルボニル｝アミノ）エチル］安息香酸；
・ロイコトリエンＢ４拮抗薬；例えば１−（３−ビフェニル−４−イルメチル−４−ヒドロキシ−クロマン−７−イル）−シクロペンタンカルボン酸（ＣＰ−１０５６９６）、５−［２−（２−カルボキシエチル）−３−［６−（４−メトキシフェニル）−５Ｅ−ヘキセニル］オキシフェノキシ］−吉草酸（ＯＮＯ−４０５７）またはＤＰＣ−１１８７０、
・５−リポキシゲナーゼ阻害剤、例えばジレウトン、６−［（３−フルオロ−５−［４−メトキシ−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル］）フェノキシ−メチル］−１−メチル−２−キノロン（ＺＤ−２１３８）、または２，３，５−トリメチル−６−（３−ピリジルメチル）、１，４−ベンゾキノン（ＣＶ−６５０４）；
・ナトリウムチャンネルブロッカー、例えばリドカイン；または
・５−ＨＴ３拮抗薬、例えばオンダンセトロン；
および、それらの薬学的に許容できる塩および溶媒和物、
から選択される。

【0052】

−本発明の第８態様によれば、個体での、疼痛または任意の前述の疼痛および／または疼痛の症状の発生を治療する、予防する、改善する、制御する、減少させる、または、疼痛または任意の前述の疼痛および／または疼痛の症状の発達または進行を遅らせる方法であって、第１、第２または第７態様またはそれらの好ましい実施態様によるｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、または、第３および第４態様による核酸分子またはベクターの有効量での個体への投与を含む方法が提供される。

【0053】

好ましくは、前記個体は、哺乳類、例えばウマ、ネコまたはイヌなどのコンパニオン動物、または、ヒツジ、ウシまたはブタなどの家畜である。最も好ましくは、前記哺乳類はヒトである。

【0054】

−本発明の第９態様によれば、疼痛または任意の前述の疼痛／または症状の発生を治療する、予防する、改善する、制御する、減少させる、または疼痛または任意の前述の疼痛／または症状の発達または進行を遅らせる、いずれか１つまたは複数のための医薬組成物であって、第１、第２または第７態様またはそれらの好ましい実施態様によるｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、または、第３および第４態様による核酸分子またはベクターおよび薬学的に許容できる担体および／または賦形剤を含む医薬組成物が提供される。

【0055】

好ましくは、第１、第２または第７態様またはそれらの好ましい実施態様によるｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、または、第３および第４態様による核酸分子またはベクター、または、第９態様の医薬組成物は、経口、舌下、口腔内、局所、直腸内、吸入、経皮、皮下、静脈内、動脈内、筋肉内、心臓内、骨内、皮内、腹腔内、経粘膜、膣内、硝子体内、関節内、関節周囲、局所または皮膚上の投与のために調製され、またはそれらの投与に適切である。

【0056】

好ましくは、第１、第２または第７態様またはそれらの好ましい実施態様によるｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、または、第３および第４態様による核酸分子またはベクター、または、第９態様の医薬組成物は、疼痛発症前および／または疼痛発症中および／または疼痛発症後の投与のために、または、そのような使用のために、調製され、またはそれらの投与に適切である。

【0057】

好ましくは、第１、第２または第７態様またはそれらの好ましい実施態様によるｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、または第３および第４態様による核酸分子またはベクターまたは第９態様の医薬組成物は、１週間あたり１回〜７回、さらに好ましくは１ヶ月あたり１回〜４回、さらに好ましくは６ヶ月の期間で１回〜６回、さらに好ましくは１年あたり１回〜１２回の投与のためであり、またはそのような投与のために調製される。好ましくは、薬剤は、１日に１回、２日、３日、４日、５日または６日ごとに１回、毎週、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、毎月、２ヶ月ごとに１回、３ヶ月ごとに１回、４ヶ月ごとに１回、５ヶ月ごとに１回、６ヶ月ごとに１回、７ヶ月ごとに１回、８ヶ月ごとに１回、９ヶ月ごとに１回、１０ヶ月ごとに１回、１１ヶ月ごとに１回または毎年から選択される期間で、末梢に投与されるものであり、または、投与されるために調製される。

【0058】

さらに好ましくは、第１、第２または第７態様またはそれらの好ましい実施態様によるｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、または第３および第４態様による核酸分子またはベクター、または第９態様の医薬組成物は、経口で、舌下に、口腔に、局所的に、直腸に、吸入を介して、経皮的に、皮下で、静脈内に、動脈内に、または筋肉内に、心臓内投与を介して、骨内に、皮内に、腹腔内に、経粘膜的に、経膣的に、硝子体内に、皮膚上に、関節内に、関節周囲に、または局所的に、１つまたは複数から選択される経路を介して末梢に投与されるものであり、または投与されるために調製される。

【0059】

好ましくは、第１、第２または第７態様またはそれらの好ましい実施態様によるｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、または第３および第４態様による核酸分子またはベクター、または第９態様の医薬組成物は、約０．１〜約２００ｍｇ／ｍｌの間；好ましくは約０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０または２００ｍｇ／ｍｌ＋／−約１０％誤差のいずれか、最も好ましくは約５０ｍｇ／ｍｌの濃度での投与のためであり、または、投与のために調製される。

【0060】

好ましくは、第１、第２または第７態様またはそれらの好ましい実施態様によるｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、または第３および第４態様による核酸分子またはベクター、または第９態様の医薬組成物は、約０．１〜約２００ｍｇ／ｋｇ体重の間；好ましくは約０．５、１、５、１０、１５２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０または約２００ｍｇ／ｋｇ体重＋／−約１０％誤差のいずれか、最も好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇの濃度での投与のためであり、または、投与のために調製される。

【0061】

−本発明の第１０態様によれば：
（ａ）第１、第２または第７態様またはそれらの好ましい実施態様によるｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、または第３および第４態様による核酸分子またはベクター、または第９態様の医薬組成物；および、
（ｂ）疼痛および／または疼痛の症状の予防または治療のいずれか１つまたは複数のための、または、疼痛および／または疼痛の症状の発生を改善する、制御する、減少させる、または、疼痛および／または疼痛の症状の発達または進行を遅らせるための、個体への有効量の前記ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、核酸分子、ベクターまたは医薬組成物の投与に関する指示書
を含むキットが提供される。

【0062】

キットは、本明細書に記載のｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、核酸、ベクターまたは医薬組成物を含んだ１つまたは複数の容器、および、本発明の方法および用途のいずれかによる使用に関する指示書を含んでよい。キットは、個体が疼痛または疼痛の兆候を有する、または、そのようなものを有するリスクがあるかどうかの同定に基づいて、治療に適切な個体を選択する説明書をさらに含んでよい。医薬組成物の投与に関する指示書は、用量、投与スケジュール、および、意図する治療のための投与経路に関する情報を含んでよい。

【0063】

本発明の第１１態様によれば、予防または治療の任意の１または複数での使用のための、または、ニューロトロフィンＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ−３、ＮＴ−４／５のいずれか１つまたは複数と関連する状態または状態の症状の発生を改善する、制御する、減少させるための、または、ニューロトロフィンＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ−３、ＮＴ−４／５のいずれか１つまたは複数と関連する状態または状態の症状の発達または進行を遅らせるための、第１、第２または第７態様またはそれらの好ましい実施態様によるｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、または、第３および第４態様による核酸分子またはベクター、または第９態様の医薬組成物が提供される。

【0064】

−ＮＧＦ（神経成長因子）は、少なくとも２つのクラスの受容体：ｐ７５ＮＴＲおよびＴｒｋＡ、膜貫通チロシンキナーゼと結合し、軸索の成長、分岐および伸長に関与する。ＮＧＦと関連する状態および症状は公知である。ＮＧＦは、炎症性疾患および疼痛において発現されて、炎症性疾患および疼痛と関連する［タンパク質配列ＮＰ＿００２４９７．２、ＮＰ＿０３８６３７］。また、ＮＧＦは、数々の心血管系の疾患、例えば冠動脈アテローム性動脈硬化、肥満、２型糖尿病、およびメタボリック症候群において、および多発性硬化症において、役割を果たすことが示されている。ＮＧＦの血漿レベルの減少は（およびＢＤＮＦの血漿レベルの減少もまた）、急性冠動脈症候群およびメタボリック症候群と関連している。ＮＧＦはまた、様々な神経障害、例えば認知症、うつ病、神経分裂症、自閉症、レット症候群、神経性食欲不振、および神経性過食症とも関連し、そして、アルツハイマー病および神経変性疾患の発達にも関与している。ＮＧＦはまた、創傷治癒を促進することも示されており、皮膚の潰瘍および角膜の潰瘍の治療に役立ち得ることができる証拠が存在し、ラットにおいて、神経変性を減らし、末梢神経の再生を促進することが示されている。

【0065】

−ＢＤＮＦ（脳由来神経栄養因子）はニューロトロフィンであり、神経系の発達中の神経の生存および伸長をサポートする［タンパク質配列ＮＰ＿００１１３７２７７．１、ＮＰ＿００１０４１６０４］。ＢＤＮＦは、細胞表面受容体ＴｒｋＢおよびｐ７５ＮＴＲに結合し、また、α−７ニコチン性受容体の活性を調節する。ＢＤＮＦと関連する状態および症状は公知である。ＢＤＮＦは、生理学的および病理学的疼痛の伝達において、特に、ＢＤＮＦの合成が非常に増加することが認められている急性痛、炎症性疼痛および神経障害性疼痛のモデルにおいて、重大な役割を果たすことが示されていて；また、ＢＤＮＦは、慢性痛の症状において、およびさらに湿疹および乾癬などの症状において、上方制御されることが示されている。ＢＤＮＦの下方制御は、うつ病、神経分裂症、強迫性障害、アルツハイマー病、ハンチントン病、レット症候群、および認知症、ならびに、神経性食欲不振および神経性過食症でみられる。

【0066】

−ニューロトロフィン−５（ＮＴ−５）としても知られるニューロトロフィン−４（ＮＴ−４）は、主にｐ７５ＮＴＲおよびＴｒｋＢ受容体を介してシグナル伝達して、末梢知覚交感神経細胞の生存を促進する神経栄養因子である。このタンパク質の成熟ペプチドは、ヒト、ブタ、ラットおよびマウスを含む調べられた全ての哺乳類において同一である［タンパク質配列ＮＰ＿００６１７０、ＮＰ＿９３７８３３］。ＮＴ−４は、後根神経節（ＤＲＧ）の主な神経細胞、および、傍脊椎および椎前の交感神経節、背側および腹角の脊椎の神経細胞により生成され、前立腺、胸腺、胎盤および骨格筋を含む多くの組織において発現が見られる。ＮＴ−４／５と関連する状態および症状は公知である。ＮＴ４／５における異常は、原発性開放隅角緑内障に対する感受性と関連する。また、ニューロトロフィン４は、乳がん細胞の生存に寄与することも示されており、腫瘍増殖を阻害する標的である。ＮＴ−４／５は、疼痛とシグナリング系、例えば侵害受容性疼痛に関与することが知られており、また、ＮＴ−４／５の上方制御は、皮膚の慢性炎症性疾患、例えば皮膚炎、湿疹、アトピー性皮膚炎の痒疹病変にも見られる。ＮＴ−４／５の下方制御は、アルツハイマー病、ハンチントン病に見られる。

【0067】

−ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）は、構造的に、β−ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、およびＮＴ−４に関連し、哺乳類の神経細胞の生存と分化および成人の神経系の維持を調節するニューロトロフィンであり、ヒト胎盤で発現されると、胚での神経細胞の発達に影響し得る。ＮＴ３と関連する状態および症状は公知である。遺伝子ターゲッティングにより生産されたＮＴＦ３−欠損マウスは、手足の重度な運動障害を示す。ＮＴ−３は、Ｔｒｋ受容体を介してシグナル伝達し、神経およびグリア細胞の増殖および生存を促進する［タンパク質配列ＮＰ＿００１０９６１２４．１およびＮＰ＿０３２７６８］。ヒト、マウスおよびラットのＮＴ−３アミノ酸配列は同一である。ＮＴ３およびその同起源受容体、チロシンキナーゼＣ（ＴｒｋＣ）は、神経障害性疼痛と侵害受容性疼痛、および、侵害受容と自己受容性感覚（ｐｒｏｐｏｒｉｏｃｅｐｔｉｏｎ）の機能を調節することが知られており、例えば、ＮＴ３発現は、神経障害性動物の小型ＤＲＧ細胞内で増加している。また、ＮＴ３発現は、神経障害、例えば糖尿病性多発性神経障害およびＨＩＶ関連の神経障害、萎縮を含む大径繊維神経障害（ｌａｒｇｅ ｆｉｂｅｒ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）とも関連し、さらに、痛覚過敏の進行（通常の侵害性刺激の閾値が減少する）、アロディニア（非侵害性刺激が侵害性になる）、および自発痛（明らかに刺激が不存在下での疼痛）に関与し、公知の筋肉痛のモジュレーターである。

【0068】

ここで、本発明は、本発明を説明するために提供されるが制限はしない以下の実施例を参照することにより、記載される。

【0069】

以下の実施例は、本発明を説明するために提供され、本発明を制限しない。

【実施例】

【0070】

（実施例１）内因性ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）−神経栄養（Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ）複合体は、ヒト血漿に対して検出される。
磁気ビーズを土台としたＮＧＦ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐ；ＭＡ）を用いたアッセイおよびビオチン化ヤギポリクローナル抗ヒトＮＧＦ抗体（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ；ＣＯ）を用いた免疫沈降の後に、ＳＩＳＣＡＰＡ（Ｓｉｓｃａｐａ ｈｔｔｐ：／／ｓｉｓｃａｐａ．ｃｏｍ／ｈｏｍｅ．ｈｔｍｌ）を行ない、それから続けて、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（ＬＬＯＱ ７ｐｇ／ｍｌ）中で判定して、ヒト血漿中にｐ７５ＮＴＲ／ＮＧＦ複合体が存在することの直接の証拠が得られた。ポリクローナル抗ＮＧＦ抗体は、ヒト血清／血漿におけるフリーのＮＧＦを定量するために用いた。

【0071】

ｐ７５ＮＴＲの細胞外ドメインのペプチド配列（ＣＡＹＧＹＹＱＤＥＴＴＧＲ（配列番号４） ＶＣＥＡＧＳＧＬＶＦＳＣＱＤＫ（配列番号６） ＷＡＤＡＥＣＥＥＩＰＧＲ（配列番号７））（図２に示す）を、ｐ７５ＮＴＲのキメラ消化の後に、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより、ｐ７５ＮＴＲのスタンダードとして選択した。全てのＮＧＦアッセイ（上述のとおり）で検出されたｐ７５ＮＴＲの共免疫沈降は、ｐ７５ＮＴＲコントロールペプチドの存在を示すことができ、ヒト血清における可溶性ｐ７５−ＮＧＦ複合体の証拠を提供した。ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）と、ＢＤＮＦ、ＮＴ−３およびＮＴ４／５の同様の相互作用もまた、ＢＤＮＦ、ＮＴ−３およびＮＴ４／５それぞれの抗体との共免疫沈降を用いて判定した。これらの試験は、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ−３およびＮＴ４／５のいずれかに結合したヒト血漿中の可溶性ｐ７５神経栄養（Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ）結合タンパク質の存在を示す。

【0072】

図２に示すデータは、可溶性ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）ペプチドのスタンダードフラグメント、および、ヒト血漿におけるｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）−ＮＧＦ複合体を示すｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）とＮＧＦの共免疫沈降を示す。ニューロトロフィン−ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）複合体での結合に関与するキーとなるペプチドは、ＷＡＤＡＥＣＥＥＩＰＧＲ（配列番号７）、ＣＡＹＧＹＹＱＤＥＴＴＧＲ（配列番号４）、ＶＣＥＡＧＳＧＬＶＦＳＣＱＤＫ（配列番号６）であることが、ヒト血漿でのｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）−ＮＧＦ共免疫沈降試験の知見から明らかであり、加えて我々は、配列ＬＤＳＶＴＳＤＶＶＳＡＴＥＰＣＫＰ（配列番号８）もまた、結合に重要であると決定した。

【0073】

ＢＤＮＦおよびＮＴ−３でこの試験を繰り返したところ、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の同一のキーとなる結合領域の重要性が示され、そして、ＢＤＮＦおよびＮＴ−３とのｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の共免疫沈降が証明され、これはヒト血漿でのｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）−ＢＤＮＦおよびｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）−ＮＴ−３複合体を示している。

【0074】

（実施例２）可溶性ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、ＴｒｋＡを発現するＵ２０Ｓ細胞株において、および、ＴｒｋＡおよびｐ７５ＮＴＲを共発現するＵ２０Ｓ細胞株において、ＮＧＦ機能を阻害する。
ＮＧＦ機能に対するｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の効果を、ＴｒｋＡを発現するＵ２０Ｓ細胞において、および、ＴｒｋＡおよびｐ７５ＮＴＲを共発現するＵ２０Ｓ細胞において、調べた（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｘ Ｃｏｒｐ ＣＡ）。アッセイは、ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒの方法論（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｘ Ｃｏｒｐ ＣＡ）に従って実施し、要するに、ＴｒｋＡおよびＴｒｋＡ＋ｐ７５ＮＴＲを発現するＵ２０Ｓ細胞を、ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入した。ＴｒｋＡを発現するＵ２０Ｓ細胞、および、ＴｒｋＡ＋ｐ７５ＮＴＲを共発現する細胞を、最小必須培地（ＭＥＭ；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）＋０．５％ウマ血清（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）に、４０，０００細胞／ウェルの密度で蒔いて、３７℃で一晩培養した。プレートを、使用の３０分前にインキュベーターから取り出して、室温で保管した。

【0075】

ＮＧＦα（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）およびｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）−Ｆｃ（ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）（配列番号２）をＩｇＧ−Ｆｃ（配列番号１２）にリンカー（配列番号１７）を用いてつなげる）、またはｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）（ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）（配列番号２）、またはアルブミン（配列番号１０）に結合されたｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、またはトランスフェリン（配列番号９）に結合されたｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）（ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）（配列番号２））を、ハンクス平衡食塩水バッファー（ＨＢＳＳ Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）＋０．２５％ ＢＳＡ中に希釈した。ＮＧＦを連続的に希釈して、０ｎＭ〜２００ｎＭの範囲の濃度を得た。Ｆｃ ＩｇＧ、アルブミンまたはトランスフェリンのいずれかに結合されたＰ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）をＨＢＳＳ中に希釈して、１００ｎｇ／ｍｌの濃度のｐ７５ＮＴＲを得た。

【0076】

それぞれの濃度（０〜２００ｎＭ）のＮＧＦを５μｌと、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）＋／−担体を５μｌとを、各ウェルに加えた。事前のインキュベーションに対する影響を理解するために、この混合物１０μｌを各ウェルに加える前に、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）＋／−担体およびＮＧＦを室温で２０分間インキュベートした。ＮＧＦおよびｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）＋／−担体を加えた直後に、１２μｌの検出溶液（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｘ Ｃｏｒｐ ＣＡ）を各ウェルに加えて、Ｐａｒｋａｒｄ Ｖｉｃｔｏｒ ２ プレートリーダーで読み取る前に、プレートを室温で６０分間インキュベートした。用量反応曲線およびｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の添加に応答した曲線変動を観測した。用いた担体にかかわらず、担体無しのｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）−Ｆｃ、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）−アルブミンまたはｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）−トランスフェリンの、ＮＧＦ用量反応曲線における抑制および変動が観測された（図４参照）。

【0077】

（実施例３）ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、ＴｒｋＢを発現するＵ２０Ｓ細胞株において、および、ＴｒｋＢおよびｐ７５ＮＴＲを共発現するＵ２０Ｓ細胞株において、ＢＤＮＦ機能を阻害する。
ＢＤＮＦ機能に対するｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の効果を、ＴｒｋＢを発現するＵ２０Ｓ細胞において、および、ＴｒｋＢおよびｐ７５ＮＴＲを共発現するＵ２０Ｓ細胞において、調べた（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｘ Ｃｏｒｐ ＣＡ）。アッセイは、ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒの方法論（ＤｉｓｃｏｖｅｒｘＣｏｒｐＣＡ）に従って実施し、要するに、ＴｒｋＢおよびＴｒｋＢ＋ｐ７５ＮＴＲを発現するＵ２０Ｓ細胞を、ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入した。ＴｒｋＢを発現するＵ２０Ｓ細胞、および、ＴｒｋＢ＋ｐ７５ＮＴＲを共発現する細胞を、最小必須培地（ＭＥＭ；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）＋０．５％ウマ血清（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）に、４０，０００細胞／ウェルの密度で蒔いて、３７℃で一晩培養した。プレートを、使用の３０分前にインキュベーターから取り出して、室温で保管した。

【0078】

ＢＤＮＦα（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）およびｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）−Ｆｃ（ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）（配列番号２）をＩｇＧ−Ｆｃ（配列番号１２）にリンカー（配列番号１７）を用いてつなげる）、またはｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）（ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）（配列番号２）、またはアルブミン（配列番号１０）に結合されたｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、またはトランスフェリン（配列番号９）に結合されたｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）（ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）（配列番号２））を、ハンクス平衡食塩水バッファー（ＨＢＳＳ Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）＋０．２５％ ＢＳＡ中に希釈した。ＢＤＮＦを連続的に希釈して、０ｎＭ〜２００ｎＭの範囲の濃度を得た。Ｆｃ−ＩｇＧ、アルブミンまたはトランスフェリンのいずれかに結合されたＰ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）をＨＢＳＳ中に希釈して、１００ｎｇ／ｍｌの濃度のｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）を得た。

【0079】

それぞれの濃度（０〜２００ｎＭ）のＢＤＮＦを５μｌと、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）＋／−担体を５μｌとを、各ウェルに加えた。事前のインキュベーションに対する影響を理解するために、この混合物１０μｌを各ウェルに加える前に、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）＋／−担体およびＢＤＮＦを室温で２０分間インキュベートした。ＢＤＮＦおよびｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）＋／−担体を加えた直後に、１２μｌの検出溶液（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｘ Ｃｏｒｐ ＣＡ）を各ウェルに加えて、Ｐａｒｋａｒｄ Ｖｉｃｔｏｒ ２ プレートリーダーで読み取る前に、プレートを室温で６０分間インキュベートした。用量反応曲線およびｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の添加に応答した曲線変動を観測した。用いた担体にかかわらず、担体無しのｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）−Ｆｃ、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）−アルブミンまたはｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）−トランスフェリンの、ＢＤＮＦ用量反応曲線における抑制および変動が観測された（図５参照）。

【0080】

（実施例４）ＢＤＮＦに対するｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の結合、および、抗ＢＤＮＦとｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）との間の競合を示す、バイオコアデータ。Ｐ７５−Ｆｃ（ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）−Ｆｃ）、（５００μｇ／ｍｌ）を、１０ｍＭ 酢酸ｐＨ５．０中に２５μｇ／ｍｌの濃度まで希釈して、ランニングバッファーＨＢＳ−Ｐ（０．００５％ Ｐ２０）＋１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡを用いてバイオコアチップ上に固定した。ＨＢＳ−Ｐ（０．００５％ Ｐ２０）＋１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡバッファー中に、ＢＤＮＦ（Ｒ ａｎｄ Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ由来）２μＭのストック溶液を調製した。ＢＤＮＦの競合実験を、ｐ７５および以下の濃度でのＭＡＢ２４８（ＢＤＮＦ ａｎｔｉ−ｂｏｄｙ ＲａｎｄＤ ｓｙｓｔｅｍｓ）の存在下または不存在下で実施した：ｉ）ＭＡＢ２４８（５００ｎＭ）のみ、ｉｉ）ＢＤＮＦ（２０ｎＭ）＋ＭＡＢ２４８（５００ｎＭ）、ｉｉｉ）ＢＤＮＦ（２０ｎＭ）のみ、およびｉｖ）ＢＤＮＦ（２０ｎＭ）＋ＭＡＢ２４８（１００ｎＭ）。全てのサンプルはストック溶液から調製して、ランニングバッファー；ＨＢＳ−Ｐ（０．００５％ Ｐ２０）＋１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡに希釈した。全てのサンプルは、注入前に室温で３０分間放置した。手動センサーグラムを、５０μｌ／分の流速でバイオコアチップ全体にわたって開始した。各サンプルは、別々のセンサーグラムのサイクルで、上記に挙げた順番で３０秒間注入した。必要な場合は、５ｍＭ ＮａＯＨで、１２秒間（１０μｌ）サイクルで再生を行なった。図６に示すように、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）はＢＤＮＦに結合する。

【0081】

（実施例５）ＰＣ１２細胞における、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）によるＮＧＦ活性の阻害
ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、細胞表面上にＴｒｋＡおよび／またはＴｒｋＡ＋ｐ７５を発現するＰＣ−１２およびＮ２ＯＳ細胞において、ＮＧＦの活性を著しく阻害することが示された（図７）。

【0082】

低継代培養ＰＣ１２細胞（継代培養数２０〜２４）を、５％ウシ胎児血清および１０％熱不活化ウマ血清およびペニシリン−ストレプトマイシン（１０Ｕ／ｍｌ〜０．１ｍｇ／ｍｌ）で補充されたダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で、９６ウェルプレート上で直接増殖して、５％ ＣＯ２を含む加湿雰囲気中で、３７℃でインキュベートした。ＮＧＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）を増殖培地に加えて、ＰＣ１２細胞を分化させた。２００、１００、５０、２５、１２．５、６．２５、３．１、１．５、０．７８、０．３９、０．２、０．１ｎｇ／ｍｌの投与濃度のＰ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）を、プレート全体にわたって各ウェルに加えた。プレートを３７℃で２４時間インキュベートして、続いて、細胞数を細胞カウンターにより判定した。図８に示すように、培地へのｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の添加は、ＰＣ−１２細胞がそれらの軸索表現型に分化するのを著しく阻害した。ＮＧＦの存在下では、ＰＣ−１２細胞は、分化して神経様の表現型を形成する。これは、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）に応じた用量依存的な様式で阻害された。これらの試験から、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）はＮＧＦの作用を阻害することが結論付けられた。

【0083】

（実施例６）神経栄養（Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ）結合タンパク質ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、神経興奮性モデルでの無意識の痛覚過敏において、ＢＤＮＦの効果を阻害する。
雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを、イソフルラン（誘導には酸素中に５％、管理には酸素中に１．５〜２．０％）で麻酔した。腰部椎弓切除術により脊髄を露出して、脊髄のＬ４〜Ｌ６領域を露出させて、タングステン微小電極を背角に挿入して、分離された広ダイナミックレンジの神経細胞から記録した。記録ユニットのスパイク振幅がベースラインノイズのレベルの少なくとも３倍であるように、それぞれのＷＤＲ神経細胞を分離した。応答は、ｎｅｕｒｏｌｏｇ ＡＣ結合型増幅器を用いて増幅して、ＣＥＤ ｓｐｉｋｅ ２ ソフトウェアを用いて記録した。薬適用の前に、３つの安定したベースラインの応答（１０％未満の変動）を、自然な刺激（ブラシ、フォンフレイ（ｖｏｎ Ｆｒｅｙ）、ピンチおよび熱）の範囲まで取得した。ブラシ刺激は、きめの細かい綿の束で、末梢受容野の中央をストロークすることにより与えた。フォンフレイフィラメントおよび熱（４３度に設定した持続的なウォータージェットを用いる）は、１０秒間与えた。ピンチは５秒間与えた。安定したベースラインの応答が得られた時点で、ＢＤＮＦのみ（０．１％ ＢＳＡ中に５００ｎｇ）またはＢＤＮＦ（５００ｎｇ）＋ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）（５００ｎｇ、注入の前に４０分間、事前インキュベート）を、インスリンシリンジを用いて、２５μｌの容量で受容野の中央にアプライした。薬の効果を１５０分間フォローして、１０分間隔で試験を行なった。実験の終了時に、ラットを頚椎脱臼により屠殺した。

【0084】

図８に示すように、ＢＤＮＦは神経の興奮性を有意に増大させて、これは、後の刺激で増幅された。ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）の添加は、全ての刺激；生理食塩水、ＢＤＮＦ、ブラシおよびピンチに応答して、神経の興奮性を有意に減少させた。ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、神経の興奮性およびその後の疼痛を減少させることが明らかである。

【0085】

（実施例７）神経栄養（Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ）結合タンパク質Ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）は、ＵＶＩＨモデルでの痛覚過敏を阻害する。
<動物のＵＶ曝露>
Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒの雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（１７５〜２００ｇ）を、２％イソフルラン（ｉｓｏｆｌｕｏｒａｎｅ）Ｏ_２混合物で麻酔した。右後足の足底面が３００ｍＪ／ｃｍ^２のＵＶで照射される間、（Ｓａａｌｍａｎｎ ＣｕｐＣｕｂｅ ｓｙｓｔｅｍ，Ｓａａｌｍａｎｎ ＧｍｂＨ，Ｇｅｒｍａｎｙ；λ＝２８０−４００ｎｍ）ノーズコーンを介して麻酔を維持した。ＵＶ源に取り付けられた成形デリバリーカラー（８×１２ｍｍ）を用いて、ラットの後足の足底面に照射源を取り付けた（Ｐｆｉｚｅｒ施設管理およびエンジニアリングチーム）。ＵＶ源の強度は、ＳＥＬ００５／ＷＢＳ３２０／ＴＤフィルターを備えたＡＢＬＥ １４００Ａラジオメーターを用いて較正した（ＡＢＬＥ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｓ Ｌｔｄ）。使用したＵＶ曝露は、ナイーブラットにおいて皮膚の紅斑を生じさせ、他の有害事象は生じない（体重減少無し、ストレスの兆候または明らかな不快感無し）。

【0086】

<温痛覚過敏の評価>
Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓら（１９８８）の改変法の後にラット足底テスト（Ｕｇｏ Ｂａｓｉｌｅ，Ｉｔａｌｙ）を用いて、温痛覚過敏を評価した。テストの前にラットを装置に慣れさせた（１５〜３０分）。足底テストは、高架式ガラステーブル上の３つの個々のパースペックスのボックスで構成された。装置あたり６匹のラットを同時にテストできるように、２匹のラットを各ボックス内で飼った。

【0087】

モバイル赤外線熱源を、ラット後足の足底面の真下に当てた。足引込み潜伏時間（ｐａｗ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｌａｔｅｎｃｙ）（ＰＷＬ）を、ラットが熱源からその後足を退けるのにかかる時間（秒）として定義した。源は、未治療の動物に８〜１２秒の応答を与えるように調整した（１０５−１２０ｍＷ／ｃｍ^２）。組織ダメージを防ぐために、２０秒の自動カットオフポイントを設定した。

【0088】

ベースラインの測定（ＵＶ曝露前のナイーブラット、０日目）および痛覚過敏発症の確認（１日目）の間に、各ラットの後足から５つの記録を取った。１日あたり２セッションを、０日目および１日目に実施した。

【0089】

ベースライン、および、２日目、３日目および４日目（それぞれ、ＵＶ曝露後４８時間、７２時間および９６時間）での薬剤の効能の評価中の各テストポイントについては、代わりに、足ごとに３つの記録を収集した。無傷の足を常に最初に評価した。

【0090】

温痛覚過敏は、ＰＷＬの平均が５秒以下を示す動物として定義され、試験のために選択される。

【0091】

<静的アロディニアの評価>
アロディニアの評価の前に、底が針金のテストケージに動物を慣れさせる。フルアップダウンの測定が行われる前に、馴化の第１日目に１５ｇ、８ｇ＋４ｇのフィラメント、第２日目に４ｇのフィラメントの適用により、動物をフォンフレイヘアー（ｖｏｎ Ｆｒｅｙ Ｈａｉｒｓ）に慣れ親しませる。静的アロディニアは、後足の足底面に対して、昇順の力（０．６、１、１．４、２、４、６、８、１０、１５および２６グラム）で、フォンフレイヘアー（Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ，Ｗｏｏｄ Ｄａｌｅ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）の適用により評価する。各フォンフレイヘアーは、最大で６秒間、または引込み応答が起きるまで、足に適用する。フォンフレイヘアーに対する引込み応答が実証された時点で、引込みを生じたものより低いフィラメントでスタートして、続いて、残りのフィラメントで、降順の力で、引込みが生じなくなるまで、足を再試験する。最も強い力の２６ｇが足を持ち上げて応答を生じさせるので、カットオフポイントを示す。各動物は、この様式で両後足を試験される。応答を生じさせるために必要とされる最低量の力は、足引込み閾値（ｐａｗ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）（ＰＷＴ）としてグラムで記録される。静的アロディニアは、通常のラットでは刺激とならない４ｇまたはそれ未満の刺激に動物が反応する場合に、有りと定義される。

【0092】

テスト前に動物をベースライン化して、包含基準を満たすアロディニアを示すものをＰＷＬに基づいてランダム化して投与する。試験化合物を投与して、所定の時間に（試験化合物の薬物動態特性に依存する）、その後の投与測定を投与後の選択時間に行ない、全データを分析のために集める。図９に示されるように、ｐ７５ＮＴＲ（ＮＢＰ）１０ｍｇ／ｋｇ皮下に関するＰＷＬデータ（ＮＢＰＰ−Ｆｃと表す）が、コントロール、イブプロフェン１００ｍｇ／ｋｇ経口投与（ｐｏ）および抗ＮＧＦ抗体１０ｍｇ／ｋｇ皮下と比較して示され、温痛覚過敏の評価に関するデータは、各場合において同等の程度を示した。
［参考文献］

【図1】

【図2a】

【図2b】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]