特許 6265313 ＫＣＮＱ２〜５チャネル活性化剤の結晶多形

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B1)

(11)【特許番号】6265313

(24)【登録日】2018年1月5日

(45)【発行日】2018年1月24日

(54)【発明の名称】ＫＣＮＱ２〜５チャネル活性化剤の結晶多形

(51)【国際特許分類】

   C07D 213/61 20060101AFI20180115BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20180115BHJP

   A61P 13/10 20060101ALI20180115BHJP

   A61K 31/44 20060101ALI20180115BHJP

【ＦＩ】

   C07D213/61CSP

   A61P43/00 111

   A61P13/10

   A61K31/44

【請求項の数】20

【全頁数】30

(21)【出願番号】特願2017-546923(P2017-546923)

(86)(22)【出願日】2017年4月21日

(86)【国際出願番号】JP2017016109

【審査請求日】2017年9月5日

(31)【優先権主張番号】特願2016-86239(P2016-86239)

(32)【優先日】2016年4月22日

(33)【優先権主張国】JP

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】000185983

【氏名又は名称】小野薬品工業株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100150810

【弁理士】

【氏名又は名称】武居 良太郎

(74)【代理人】

【識別番号】100164563

【弁理士】

【氏名又は名称】佐々木 貴英

(72)【発明者】

【氏名】八代 健太郎

(72)【発明者】

【氏名】木嶋 秀臣

(72)【発明者】

【氏名】若松 大将

(72)【発明者】

【氏名】斎藤 哲二

【審査官】 伊藤 幸司

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１６−５０８９６０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１５−５１４７２８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１０−５３５２４４（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ

Ａ６１Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、少なくとも１５．３±０．２、１６．９±０．２、１７．４±０．２、１９．３±０．２および１９．６±０．２度２θにピークを有する、１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの結晶。

【請求項2】

粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、７．０±０．２および９．２±０．２度２θにピークを有さない、請求項１記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの結晶。

【請求項3】

粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、１１．３±０．２、１１．６±０．２、１１．９±０．２、１２．８±０．２、１３．９±０．２、１５．３±０．２、１６．４±０．２、１６．９±０．２、１７．４±０．２、１８．１±０．２、１９．３±０．２、１９．６±０．２、２０．５±０．２、２１．１±０．２、２２．２±０．２、２２．８±０．２、２３．５±０．２、２３．８±０．２、２４．３±０．２および２４．７±０．２度２θにピークを有する、請求項１または請求項２記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの結晶。

【請求項4】

図３に示される粉末Ｘ線回折スペクトルチャートを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの結晶。

【化1】

【請求項5】

示差走査熱量測定において、オンセット温度が１６６±２℃またはピーク温度が１６７±２℃である吸熱ピークを有する、１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの結晶。

【請求項6】

図４に示される示差走査熱量測定チャートを特徴とする、請求項５記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの結晶。

【化2】

【請求項7】

１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの水和物の結晶。

【請求項8】

粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、少なくとも１３．０±０．２、１４．５±０．２、１８．３±０．２、１９．０±０．２および２１．７±０．２度２θにピークを有する、請求項７記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの水和物の結晶。

【請求項9】

粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、７．０±０．２および９．２±０．２度２θにピークを有さない、請求項８記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの水和物の結晶。

【請求項10】

粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、６．５±０．２、８．６±０．２、１１．４±０．２、１１．７±０．２、１３．０±０．２、１４．５±０．２、１５．１±０．２、１６．３±０．２、１８．３±０．２、１９．０±０．２、１９．４±０．２、２０．１±０．２、２０．５±０．２、２１．７±０．２、２１．９±０．２、２２．３±０．２、２３．０±０．２、２３．５±０．２、２３．８±０．２、２４．２±０．２および２４．５±０．２度２θにピークを有する、請求項８または請求項９記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの水和物の結晶。

【請求項11】

図７に示される粉末Ｘ線回折スペクトルチャートを特徴とする、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの水和物の結晶。

【化3】

【請求項12】

示差走査熱量測定において、オンセット温度が３２±２℃またはピーク温度が４８±２℃である吸熱ピークを有する、請求項７記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの水和物の結晶。

【請求項13】

図８に示される示差走査熱量測定チャートを特徴とする、請求項１２記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの水和物の結晶。

【化4】

【請求項14】

請求項１〜１３のいずれか１項に記載の結晶と薬学的に許容される担体とを含有してなる医薬組成物。

【請求項15】

ＫＣＮＱ２〜５チャネル関連疾患の予防および／または治療剤である、請求項１４記載の医薬組成物。

【請求項16】

ＫＣＮＱ２〜５チャネル関連疾患が排尿障害である、請求項１５記載の医薬組成物。

【請求項17】

排尿障害が過活動膀胱である、請求項１６記載の医薬組成物。

【請求項18】

請求項１〜１３のいずれか１項に記載の結晶を含有する、ＫＣＮＱ２〜５チャネル関連疾患の予防および／または治療剤。

【請求項19】

ＫＣＮＱ２〜５チャネル関連疾患の予防および／または治療のための請求項１〜１３のいずれか１項に記載の結晶。

【請求項20】

ＫＣＮＱ２〜５チャネル関連疾患の予防および／または治療剤の製造のための請求項１〜１３のいずれか１項に記載の結晶の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレア（以下、化合物Ｉと略記する場合がある。）の新規な結晶形に関する。

【背景技術】

【0002】

ＫＣＮＱチャネルには、ＫＣＮＱ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＱ４及びＫＣＮＱ５の５種類のサブタイプが認められている。このうち、ＫＣＮＱ１以外のＫＣＮＱ２〜５は、脊髄後根神経節や脊髄などの侵害性の感覚神経系（ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ ｓｅｎｓｏｒｙ ｓｙｓｔｅｍ）に発現しており、ＫＣＮＱ２〜５チャネルの活性化は、侵害性のシグナル経路内の神経細胞の過分極を引き起こす。

【0003】

ＫＣＮＱ２〜５チャネル活性化剤はてんかん、疼痛、片頭痛及び不安症を含むニューロン興奮性の異常を特徴とする多数の障害の治療に有用であると報告されており（非特許文献１参照）、実際にＫＣＮＱ２〜５チャネル活性化剤であるレチガビンは、抗てんかん薬として既に上市されている。

【0004】

また、近年レチガビンが膀胱障害（過活動膀胱など）の治療に有用であることも報告されている（非特許文献２、３参照）。

【0005】

過活動膀胱は、潜在的な排尿筋過活動状態に起因していると考えられることから、その治療には主に膀胱収縮抑制作用を有するムスカリン受容体拮抗薬が広く用いられてきた。しかしながら、ムスカリン受容体は、膀胱以外に唾液腺、腸管および毛様体筋などにも存在し、機能的役割も伴っているため、口内乾燥、便秘および霧視などの副作用を伴うことがあること、ムスカリン受容体拮抗薬の膀胱収縮抑制作用による排尿困難、残尿量の増加および尿閉などの副作用も懸念され、必ずしも満足な治療効果をあげているとは言い切れない。また、ムスカリン受容体拮抗薬の問題点を克服する薬剤として、選択的β３アドレナリン受容体作動薬が２０１１年に日本で上市された。選択的β３アドレナリン受容体作動薬は、膀胱弛緩作用により蓄尿機能を亢進させる一方、排尿機能に影響を及ぼしにくいことが示唆され、収縮刺激に依らない膀胱弛緩作用を発揮することから、幅広い患者層での効果が期待されている。一方で、増量に伴いＱＴ延長リスクが増大することや心臓のβ受容体に作用することで心拍数増加作用を示すことから、それらが用量の制限因子となっている。

【0006】

以上のことから、本領域では、収縮刺激に依らない膀胱弛緩作用を有し、副作用懸念のない薬剤が望まれており、ＫＣＮＱ２〜５チャネル活性化剤はそのアンメットメディカルニーズに応える薬剤として期待される。

【0007】

これまでに、単環アミド骨格を有するＫＣＮＱ活性化剤としては、例えば、一般式（ａ）

【化1】

（式中、ＺａがＯまたはＳであり；ｑａが０または１であり；Ｒ^a1およびＲ^a2がそれぞれ、ハロゲン、シアノ、アミノ、Ｃ_1-6−アルキル（アルケニル／アルキニル）等からなる群から独立して選択され；Ｒ^a3がＣ_1-8−アルキル（アルケニル／アルキニル）、Ｃ_3-8−シクロアルキル（シクロアルケニル）、Ｃ_3-8−シクロアルキル（シクロアルケニル）−Ｃ_1-6−アルキル（アルケニル／アルキニル）、アリール−Ｃ_1-6−アルキル（アルケニル／アルキニル）、アリール−Ｃ_3-8−シクロアルキル（シクロアルケニル）等からなる群から選択され；Ｒ^a4がハロゲン、シアノ、Ｃ_1-6−アルキル（アルケニル／アルキニル）、Ｃ_3-8−シクロアルキル（シクロアルケニル）、Ｃ_3-8−シクロアルキル（シクロアルケニル）−Ｃ_1-6−アルキル（アルケニル／アルキニル）等からなる群から選択される（基の定義は一部抜粋した。）。）で示される化合物（特許文献１参照）が知られている。化合物Ｉは特許文献１の一般式（ａ）には含まれないし、特許文献１には、特許文献１に記載の化合物から化合物Ｉに至る手法についての記載も示唆もない。

【0008】

また、国際公開第２０１６／０６３９９０号（以下、特許出願２と略記する場合がある。）には、化合物ＩがＫＣＮＱ活性化剤として記載されている。しかしながら、特許出願２には化合物Ｉに関して結晶多形が存在することの記載はない。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0009】

【特許文献1】国際公開第２００６／０２９６２３号

【特許文献2】国際公開第２０１６／０６３９９０号

【非特許文献】

【0010】

【非特許文献1】カレント・トピックス・イン・メディシナル・ケミストリー（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、６巻、９９９〜１０２３頁、２００６年

【非特許文献2】ザ・ジャーナル・オブ・ウロロジー（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｕｒｏｌｏｇｙ）、１７２巻、２０５４〜２０５８頁、２００４年

【非特許文献3】ユーロピアン・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）、６３８巻、１２１〜１２７頁、２０１０年

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0011】

本発明の課題は、ＫＣＮＱ２〜５チャネルに対し強い開口作用を有する化合物を提供することである。

【0012】

また、結晶性化合物には、結晶多形が存在する場合がある。結晶多形が存在する場合、結晶形によって、溶解度、溶解速度、または熱、光、湿度等に対する安定性等が異なる。したがって、医薬品の製造において、その適応疾患や剤形に最も適した原薬の結晶形を選択することは、非常に重要な課題である。

【課題を解決するための手段】

【0013】

本発明者らは、化合物Ｉに、上記特許出願２の実施例２５（５）で製造した化合物Ｉの結晶形（Ｍ晶）以外に、他の結晶形が存在することを見出した。そこで、化合物Ｉの結晶多形について鋭意検討したところ、化合物Ｉの新たな結晶形としてＡ晶、Ｗ晶を同定し、さらに化合物Ｉの水和物の結晶（Ｈ晶）を同定した（これら新規結晶形を本発明の結晶形と略記する場合がある。）。

【0014】

すなわち、本発明は、
（１）粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、少なくとも約１５．３、１６．９、１７．４、１９．３および１９．６度２θにピークを有する、１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの結晶、
（２）粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、約７．０および９．２度２θにピークを有さない、前記（１）記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの結晶、
（３）粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、約１１．３、１１．６、１１．９、１２．８、１３．９、１５．３、１６．４、１６．９、１７．４、１８．１、１９．３、１９．６、２０．５、２１．１、２２．２、２２．８、２３．５、２３．８、２４．３および２４．７度２θにピークを有する、前記（１）または前記（２）記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの結晶、
（４）図３に示される粉末Ｘ線回折スペクトルチャートを特徴とする、前記（１）〜（３）のいずれか１つに記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの結晶、
（５） 示差走査熱量測定において、オンセット温度が約１６６℃またはピーク温度が約１６７℃である吸熱ピークを有する、１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの結晶、
（６）図４に示される示差走査熱量測定チャートを特徴とする、前記（５）記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの結晶、
（７）１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの水和物の結晶、
（８）粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、少なくとも約１３．０、１４．５、１８．３、１９．０および２１．７度２θにピークを有する、前記（７）記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの水和物の結晶、
（９）粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、約７．０および９．２度２θにピークを有さない、前記（８）記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの水和物の結晶、
（１０）粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、約６．５、８．６、１１．４、１１．７、１３．０、１４．５、１５．１、１６．３、１８．３、１９．０、１９．４、２０．１、２０．５、２１．７、２１．９、２２．３、２３．０、２３．５、２３．８、２４．２および２４．５度２θにピークを有する、前記（８）または前記（９）記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの水和物の結晶、
（１１）図７に示される粉末Ｘ線回折スペクトルチャートを特徴とする、前記（８）〜（１０）のいずれか１つに記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの水和物の結晶、
（１２）示差走査熱量測定において、オンセット温度が約３２℃またはピーク温度が約４８℃である吸熱ピークを有する、前記（７）記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの水和物の結晶、
（１３）図８に示される示差走査熱量測定チャートを特徴とする、前記（１２）記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの水和物の結晶、
（１４）粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、約１０．６、１５．２、１９．６、２０．７、２２．４および２４．１度２θにピークを有する、１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの結晶、
（１５）粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、約７．０および９．２度２θにピークを有さない、前記（１４）記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの結晶、
（１６）図５に示される粉末Ｘ線回折スペクトルチャートを特徴とする、前記（１４）または前記（１５）記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの結晶、
（１７）示差走査熱量測定において、オンセット温度が約８９℃またはピーク温度が約９４℃である吸熱ピークを有する、前記（１４）〜（１６）のいずれか１つに記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの結晶、
（１８）図６に示される示差走査熱量測定チャートを特徴とする、前記（１７）記載の１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの結晶、
（１９）前記（１）〜（１８）のいずれか１つに記載の結晶と薬学的に許容される担体とを含有してなる医薬組成物、
（２０）ＫＣＮＱ２〜５チャネル関連疾患の予防および／または治療剤である、前記（１９）記載の医薬組成物、
（２１）ＫＣＮＱ２〜５チャネル関連疾患が排尿障害である、前記（２０）記載の医薬組成物、
（２２）排尿障害が過活動膀胱である、前記（２１）記載の医薬組成物、
（２３）前記（１）〜（１８）のいずれか１つに記載の結晶を含有する、ＫＣＮＱ２〜５チャネル関連疾患の予防および／または治療剤、
（２４）前記（１）〜（１８）のいずれか１つに記載の結晶の有効量を哺乳動物に投与することを特徴とするＫＣＮＱ２〜５チャネル関連疾患の予防および／または治療方法、
（２５）ＫＣＮＱ２〜５チャネル関連疾患の予防および／または治療のための前記（１）〜（１８）のいずれか１つに記載の結晶、
（２６）ＫＣＮＱ２〜５チャネル関連疾患の予防および／または治療剤の製造のための前記（１）〜（１８）のいずれか１つに記載の結晶の使用等に関する。

【発明の効果】

【0015】

化合物Ｉは、ＫＣＮＱ２〜５チャネル関連疾患の予防および／または治療剤として有用である。また、本発明の結晶形は、医薬品の原薬として有用である。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】図１は、化合物ＩのＭ晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートを示す。

【図2】図２は、化合物ＩのＭ晶の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）チャートを示す。

【図3】図３は、化合物ＩのＡ晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートを示す。

【図4】図４は、化合物ＩのＡ晶のＤＳＣチャートを示す。

【図5】図５は、化合物ＩのＷ晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートを示す。

【図6】図６は、化合物ＩのＷ晶のＤＳＣチャートを示す。

【図7】図７は、化合物Ｉの水和物の結晶（Ｈ晶）の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートを示す。

【図8】図８は、化合物Ｉの水和物の結晶（Ｈ晶）のＤＳＣチャートを示す。

【図9】図９は、化合物Ｉの水和物の結晶（Ｈ晶）の水蒸気吸着／脱着等温線を示す。横軸は相対湿度（ＲＨ（％））を、縦軸は乾燥時（０％ＲＨ）を基準とした各湿度での重量の変化率（Ｃｈａｎｇｅ ｉｎ Ｍａｓｓ（％）−Ｒｅｆ）を表す。

【図10】図１０は、化合物Ｉの水和物の結晶（Ｈ晶）の粉末Ｘ線回折−示差走査熱量同時測定を示す。

【発明を実施するための形態】

【0017】

本発明において、化合物Ｉは、以下の構造：

【化2】

で示される化合物である。

【0018】

本発明において、化合物Ｉの新たな結晶形として、Ａ晶およびＷ晶の２種類の無水和物結晶およびＨ晶の水和物の結晶を同定した。結晶形の相違は、特に、粉末Ｘ線回折スペクトルまたは／および示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって区別される。

【0019】

化合物ＩのＡ晶は、以下の（ａ）および（ｂ）の少なくとも一つの物理化学データによって特徴づけられる。好ましくは、（ａ）および（ｂ）の両方の物理化学データによって特徴づけられる。（ａ）以下の図３に示される粉末Ｘ線回折スペクトルチャート、以下の表２に示される回折角（２θ）、または粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて少なくとも約１５．３、１６．９、１７．４、１９．３および１９．６度２θにピークを有する（さらに好ましくは約７．０および／または９．２度２θにピークを有さない）、（ｂ）以下の図４に示されるＤＳＣチャート、またはＤＳＣにおいてオンセット温度が約１６６℃および／またはピーク温度が約１６７℃である吸熱ピークを有する。

【0020】

化合物ＩのＷ晶は、以下の（ｃ）および（ｄ）の少なくとも一つの物理化学データによって特徴づけられる。好ましくは、（ｃ）および（ｄ）の両方の物理化学データによって特徴づけられる。（ｃ）以下の図５に示される粉末Ｘ線回折スペクトルチャートまたは以下の表３に示される回折角（２θ）（さらに好ましくは約７．０および／または９．２度２θにピークを有さない）、（ｄ）以下の図６に示されるＤＳＣチャートまたはＤＳＣにおいてオンセット温度が約８９℃および／またはピーク温度が約９４℃である吸熱ピークを有する。

【0021】

化合物Ｉの水和物の結晶であるＨ晶は、以下の（ｅ）および（ｆ）の少なくとも一つの物理化学データによって特徴づけられる。好ましくは、（ｅ）および（ｆ）の両方の物理化学データによって特徴づけられる。（ｅ）以下の図７に示される粉末Ｘ線回折スペクトルチャート、以下の表４に示される回折角（２θ）、または粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて少なくとも約１３．０、１４．５、１８．３、１９．０、２１．７度２θにピークを有する（さらに好ましくは約７．０および／または９．２度２θにピークを有さない）、（ｆ）以下の図８に示されるＤＳＣチャート、またはＤＳＣにおいてオンセット温度が約３２℃および／またはピーク温度が約４８℃である吸熱ピークを有する。

【0022】

一方、上記特許出願２に記載された化合物ＩのＭ晶は、（ｇ）図１に示される粉末Ｘ線回折スペクトルチャートまたは以下の表１に示される回折角（２θ）、および／または（ｈ）図２に示されるＤＳＣチャート（オンセット温度：約９０℃、ピーク温度：約１００℃）の物理化学データによって特徴づけられる。

【0023】

本発明において、化合物Ｉの各結晶形は、本明細書に記載された物理化学データによって特定されるものであるが、各スペクトルデータは、その性質上多少変わり得るものであるから、厳密に解されるべきではない。

【0024】

例えば、粉末Ｘ線回折スペクトルデータは、その性質上、結晶の同一性の認定においては、回折角（２θ）や全体的なパターンが重要であり、相対強度は結晶成長の方向、粒子の大きさ、測定条件によって多少変わり得る。

【0025】

また、ＤＳＣデータにおいても、結晶の同一性の認定においては、全体的なパターンが重要であり、測定条件によって多少変わり得る。

【0026】

したがって、本発明の結晶形において、粉末Ｘ線回折スペクトルまたはＤＳＣとパターンが、それぞれ全体的に類似するものは、本発明の結晶形に含まれるものである。

【0027】

本明細書中、粉末Ｘ線回折パターンにおける回折角（２θ（度））及びＤＳＣ分析における吸熱ピークのオンセット温度（℃）及びピーク温度（℃）の記載は、当該データ測定法において通常許容される誤差範囲を含むことを意味し、おおよそその回折角及び吸熱ピークのオンセット温度及びピーク温度であることを意味する。例えば、粉末Ｘ線回折における回折角（２θ（度））の「約」は、ある態様としては±０．２度であり、さらに別の態様としては、±０．１度である。ＤＳＣ分析における吸熱ピークのオンセット温度（℃）またはピーク温度（℃）の「約」は、ある態様としては±２℃であり、さらに別の態様としては、±１℃である。また、最初の数字の前の「約」は、そのあとの数字にもかかる。例えば、約１５．３、１６．９、１７．４、１９．３および１９．６度２θは、約１５．３、約１６．９、約１７．４、約１９．３および約１９．６度２θを意味する。

【0028】

本発明の一実施形態において、化合物Ｉの各結晶形は実質的に純粋である。「実質的に純粋である」への言及は、特定の結晶形が、存在する化合物のうちの少なくとも５０％を占めることを意味する。また、別の一実施形態において、各結晶形は、存在する化合物Ｉのうちの少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または約９４％〜９８％を占める。

【0029】

本発明において、化合物Ｉの水和物の結晶としては、０．５水和物ないし５水和物が挙げられる。本発明の一実施形態において、水和物は０．５水和物、１水和物、１．５水和物、２水和物、２．５水和物である。本発明の一実施形態において、水和物は０．５水和物ないし１．０水和物であり、特定の実施形態において０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１水和物である。

【0030】

本発明において、水和物とは、医薬品が通常保存−使用される環境下（温度、相対湿度など）で、安定して相当量の水分を保持する結晶であれば特に限定されない。例えば、ここで、１水和物とは、医薬品が通常保存−使用される環境下（温度、相対湿度など）で、安定して１当量の水分を保持する結晶である。

【0031】

本発明において、本発明の結晶形は、例えば以下に示す方法、これらに準ずる方法または実施例に従って製造することが出来る。なお、再結晶を行う際、種晶は、使用しても、または使用しなくてもよい。

【0032】

化合物ＩのＡ晶は、例えば特許出願２の実施例２５（５）と同様に製造した化合物Ｉから、例えば下記の方法によって製造することができる。

【0033】

化合物Ｉを溶媒（例えば、エタノール）、または混合溶媒（例えば、エタノールと水の混合溶媒）に溶解し、その後冷却することで、化合物ＩのＡ晶を得ることができる。

【0034】

化合物Ｉの水和物の結晶であるＨ晶は、例えば特許出願２の実施例２５（５）と同様に製造した化合物Ｉ、または後述の実施例１０と同様に製造した化合物Ｉから、例えば下記の方法によって製造することができる。

【0035】

化合物Ｉを、溶媒（例えば、水）または混合溶媒（例えば、アセトンと水の混合溶媒）に加え２５〜４０℃で１週間以上撹拌することで、化合物Ｉの水和物の結晶であるＨ晶を得ることができる。

【0036】

または、化合物Ｉをアセトンと水の混合溶媒に溶解し、その後冷却することで、化合物Ｉの水和物の結晶であるＨ晶を得ることができる。

【0037】

化合物ＩのＷ晶は、例えば特許出願２の実施例２５（５）、または後述の実施例１０と同様に製造した化合物Ｉから、例えば下記の方法によって製造することができる。

【0038】

化合物Ｉを、溶媒（例えば、メタノール）または混合溶媒（例えば、メタノールと水の混合溶媒）に４０〜６０℃で溶解させ、その後冷却することで、化合物ＩのＷ晶を得ることができる。

【0039】

または、化合物Ｉを溶媒（例えば、メタノール）または混合溶媒（例えば、メタノールと水の混合溶媒）に加え、室温で８時間以上撹拌することで、化合物ＩのＷ晶を得ることができる。

【0040】

［毒性］
化合物Ｉの毒性は十分に低いものであり、医薬品として安全に使用することができる。

【0041】

［医薬品への適用］
化合物Ｉは、ＫＣＮＱ２〜５チャネル関連疾患の予防および／または治療に適している。

【0042】

化合物Ｉは、ＫＣＮＱ２〜５チャネル関連疾患を予防および／または治療するために使用されうる。かかる疾患としては、例えば、てんかん、疼痛性障害（例えば、神経因性疼痛、片頭痛）、糖尿病性末梢神経障害、不安障害、気分適応障害、統合失調症、薬物依存、注意適応障害、睡眠障害、脳卒中、耳鳴、記憶障害（例えば、アルツハイマー病、認知症）、筋委縮性側索硬化症、運動障害（例えば、パーキンソン病、ジストニアに関連する運動障害）、排尿障害（例えば、過活動膀胱、頻尿、夜間頻尿、尿意切迫感、切迫性尿失禁、腹圧性尿失禁、間質性膀胱炎、慢性前立腺炎、前立腺肥大症）、難聴、喘息、慢性閉塞性肺疾患、咳嗽、肺高血圧症、視覚器官の神経変性疾患（例えば、緑内障、進行性糖尿病網膜症、加齢に伴う黄斑症、網膜色素変性症）、真性糖尿病、早期陣痛・切迫早産、機能性ディスペプシア、過敏性腸症候群等が挙げられる。

【0043】

化合物Ｉは、好ましくは排尿障害の予防および／または治療に適している。

【0044】

化合物Ｉは、より好ましくは過活動膀胱の予防および／または治療に適している。

【0045】

過活動膀胱は、尿意切迫感を必須とし、通常は頻尿と夜間頻尿を伴い、切迫性尿失禁を伴うこともある症状症候群である。

【0046】

化合物Ｉは、
１）予防および／または治療効果の補完および／または増強、
２）動態・吸収改善、投与量の低減、および／または
３）副作用の軽減のために、他の薬物と組み合わせて、併用薬として投与してもよい。

【0047】

化合物Ｉと１種以上の他の薬物の併用薬は、１つの製剤中に全成分を配合した配合剤の形態で投与してもよく、また別々の製剤にして投与する形態をとってもよい。この別々の製剤にして投与する場合には、同時投与および時間差による投与が含まれる。また、時間差による投与は、化合物Ｉを先に投与し、他の薬物を後に投与してもよいし、他の薬物を先に投与し、化合物Ｉを後に投与してもよい。それぞれの投与方法は同じでも異なっていてもよい。

【0048】

上記併用薬により、予防および／または治療効果を奏する疾患は特に限定されず、化合物Ｉの予防および／または治療効果を補完および／または増強する疾患であればよい。

【0049】

化合物Ｉの過活動膀胱に対する予防および／または治療効果の補完および／または増強のための他の薬物としては、例えば、（１）ムスカリン性受容体アンタゴニスト（例えば、トルテロジン、オキシブチニン、ヒヨスチアミン、プロパンテリン、プロピベリン、トロスピウム、ソリフェナシン、ダリフェナシン、イミダフェナシン、フェソテロジン、テミベリン、フラボキサート、タラフェナシン（ｔａｒａｆｅｎａｃｉｎ）、アファシフェナシン（ａｆａｃｉｆｅｎａｃｉｎ）、ＴＨＶＤ−１０１、ＴＨＶＤ−２０１）等）、（２）β３アドレナリン受容体作動薬（ミラベグロン、ＫＲＰ−１１４Ｖ、ソラベグロン（Ｓｏｌａｂｅｇｒｏｎ）、ＴＲＫ−３８０等）、（３）ＮＫ−１または−２アンタゴニスト（例えば、アプレピタント、シゾリルチ等）、（４）遺伝子組換えボツリヌス毒素（センレボターゼ（ｓｅｎｒｅｂｏｔａｓｅ）等）、（５）オピオイドμ受容体作動薬（ＴＲＫ−１３０等）、（６）α４β２ニコチン性アセチルコリン受容体アンタゴニスト（デックスメカミラミン（ｄｅｘｍｅｃａｍｙｌａｍｉｎｅ）等）、（７）Ｃ線維阻害剤（ベシピルジン（Ｂｅｓｉｐｉｒｄｉｎｅ）等）、（８）ＴＲＰＶ１アンタゴニスト（ＸＥＮ−Ｄ０５０１等）、（９）ＥＰ１アンタゴニスト（ＫＥＡ−０４４７等）、（１０）中枢神経薬（ＲＥＣ−１８１９等）（１１）α１アドレナリン受容体アンタゴニスト（例えば、タムスロシン、シロドシン、ナフトピジル、ウラピジル等）、（１２）５α還元酵素阻害剤（デュタステリド、フィナステリド等）、（１３）ホスホジエステラゼー５阻害剤（シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル）、（１４）バソプレシンＶ２受容体作動薬（デスモプレシン）等が挙げられる。

【0050】

前記他の薬物の投与量は、臨床上用いられている用量を基準として適宜選択することができる。また、化合物Ｉと他の薬剤の配合比は、投与対象の年齢及び体重、投与方法、投与時間、対象疾患、症状、組み合わせ等により適宜選択することができる。例えば、化合物Ｉ１質量部に対し、他の薬剤を０．０１乃至１００質量部用いればよい。他の薬剤は任意の２種以上を適宜の割合で組み合わせて投与してもよい。また、前記他の薬物には、現在までに見出されているものだけでなく今後見出されるものも含まれる。

【0051】

化合物Ｉまたは化合物Ｉと他の薬剤の併用剤を上記の目的で用いるには、通常、薬学的に許容される担体とともに適当な医薬組成物として製剤化したうえで、全身的または局所的に、経口または非経口の形で投与される。

【0052】

化合物Ｉは、薬学的有効量で哺乳動物（好ましくはヒト、より好ましくは患者）へ投与される。

【0053】

化合物Ｉの投与量は年令、体重、症状、望まれる治療効果、投与の経路、治療の期間等に依存するため、必然的に変動が生じる。一般的に、患者一人当たり、一回につき、０．１ｍｇから１０００ｍｇの範囲で一日１回から数回経口投与されるか、または患者一人当たり、一回につき、０．０１ｍｇから１００ｍｇの範囲で一日１回から数回非経口投与されるか、または一日１時間から２４時間の範囲で静脈内に持続投与される。

【0054】

もちろん前記したように、投与量は、種々の条件によって変動するので、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、また範囲を越えて必要な場合もある。

【0055】

化合物Ｉ又は化合物Ｉと他の薬剤の併用剤を投与する際には、経口投与のための内服用固形剤若しくは内服用液剤、経口投与における徐放性製剤、放出制御製剤、または非経口投与のための注射剤、外用剤、吸入剤若しくは坐剤等として用いられる。

【0056】

本発明の結晶形は、上記医薬品の原薬として使用される。

【実施例】

【0057】

以下、実施例によって本発明を詳述するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

【0058】

クロマトグラフィーによる分離の箇所およびＴＬＣに示されているカッコ内の溶媒は、使用した溶出溶媒または展開溶媒を示し、割合は体積比を表す。

【0059】

本発明において、シリカゲルカラムクロマトグラフィーには、富士シリシア化学社製クロマトレックス（登録商標）、山善ハイフラッシュカラム（商品名）等を使用し、精製装置としては、例えば、山善社製中圧分取クロマトグラフＷ−ｐｒｅｐ ２ＸＹ（商品名）を使用した。

【0060】

ＮＭＲデータは特に記載しない限り、¹Ｈ−ＮＭＲのデータである。

【0061】

ＮＭＲの箇所に示されているカッコ内は測定に使用した溶媒を示す。

【0062】

本明細書中に用いた化合物名は、一般的にＩＵＰＡＣの規則に準じて命名を行なうコンピュータプログラム、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ社のＡＣＤ／Ｎａｍｅ（登録商標）を用いるか、または、ＩＵＰＡＣ命名法に準じて命名したものである。

【0063】

実施例１
２−（４−ブロモフェニル）−１，１，１−トリフルオロ−２−プロパノール
アルゴン雰囲気下、減圧下で加熱乾燥した塩化セリウム（５１ｇ）をテトラヒドロフラン（３１６ｍＬ）に懸濁させ、室温で１時間撹拌した後、−７０℃に冷却した。メチルリチウム（３．０Ｍジエチルエーテル溶液、１８５ｍＬ）を滴下し、−７０℃で３０分撹拌した後、１−（４−ブロモフェニル）−２，２，２−トリフルオロエタノン（４０ｇ）（ＣＡＳ登録番号：１６１８４−８９−７）のテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）溶液を加え、室温で１．５時間撹拌した。反応液を飽和塩化アンモニウム水溶液（５００ｍＬ）と氷水（５００ｍＬ）の混合液中へ注いだ後、混合物の色が薄黄色になるまで１Ｎ塩酸を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮することにより、以下の物性値を有する標題化合物を得た（５１ｇ）。
ＴＬＣ：Ｒｆ ０．５９（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）；
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ 1.77, 2.42, 7.44-7.47, 7.52-7.55。

【0064】

実施例２
（２Ｓ）−２−（４−ブロモフェニル）−１，１，１−トリフルオロ−２−プロパニル［（１Ｓ）−１−（１−ナフチル）エチル］カルバメート
実施例１で製造した化合物（４３ｇ）のジクロロメタン（２３７ｍＬ）溶液に氷冷下でジメチルアミノピリジン（２３．２ｇ）と４−ニトロフェニルクロロホルメート（３５．１ｇ）を加えた後、室温で１時間撹拌した。反応溶液を再び氷冷し、（１Ｓ）−１−（１−ナフチル）エチルアミン（３３．２ｍＬ）（ＣＡＳ登録番号：１０４２０−８９−０）を加えた後、室温で１時間撹拌した。反応混合物にｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（５００ｍＬ）を加え、析出物を濾過濾別し、ヘキサン／酢酸エチル（１／１）で洗浄した。濾液と洗浄液を合わせ、約半量まで減圧濃縮した後、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１５０ｍＬ×４回）、１Ｎ塩酸（２００ｍＬ）、水（１５０ｍＬ）、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０→８０：２０）で精製することにより、標題化合物のジアステレオマー混合物を得た（７０ｇ）。ジアステレオマー混合物はシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル＝８０：２０）で分離精製することにより、以下の物性値を有する標題化合物（３３ｇ）を得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ ０．５８（ヘキサン：ジイソプロピルエーテル＝２：１）；
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ 1.69, 2.17, 5.25, 5.49-5.58, 7.22-7.25, 7.43-7.58, 7.80-7.95。

【0065】

実施例３
（２Ｓ）−２−（４−ブロモフェニル）−１，１，１−トリフルオロ−２−プロパノール
実施例２で製造した化合物（５０ｇ）の１，４−ジオキサン（５４０ｍＬ）溶液に水酸化リチウム１水和物（４５ｇ）の水（２７０ｍＬ）溶液を加え、５５℃で１時間撹拌した。反応混合物を１０℃に冷却した後、２Ｎ塩酸（５４０ｍＬ）を加えてｐＨ＝３とし、酢酸エチルで抽出した。有機層を炭酸水素ナトリウム水溶液、水、塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０→８０：２０）で精製することにより、以下の物性値を有する標題化合物を得た（２７ｇ）。
ＴＬＣ：Ｒｆ ０．５９（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）；
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ 1.78, 2.42, 7.43-7.56。

【0066】

実施例４
２−メチル−２−プロパニル｛４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝カルバメート
実施例３で製造した化合物（３０ｇ）、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメート（１７ｇ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（２．５ｇ）、４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（９．７ｇ）、炭酸セシウム（５５ｇ）、１，４−ジオキサン（２２５ｍＬ）の混合物をアルゴン雰囲気下、１００℃で１．５時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却した後、水（２５０ｍＬ）と酢酸エチル（２５０ｍＬ）を加えてセライト（商品名）で濾過した。濾液に水（２５０ｍＬ）を加えて二層を分離した後、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせて、塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０→２０：８０）で精製することにより、以下の物性値を有する標題化合物を得た（３１ｇ）。
ＴＬＣ：Ｒｆ ０．３１（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）；
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ 1.52, 1.77, 2.56, 6.57, 7.37-7.40, 7.48-7.51。

【0067】

実施例５
（２Ｓ）−２−（４−アミノフェニル）−１，１，１−トリフルオロ−２−プロパノール
実施例４で製造した化合物（３１ｇ）のジクロロメタン（２００ｍＬ）溶液にトリフルオロ酢酸（１０２ｍＬ）を加えて室温で２時間撹拌した。反応混合物にトルエンを加え減圧濃縮した。得られた残渣に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（３００ｍＬ）を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル−ヘキサン（１：１、６０ｍＬ）に６０℃で溶解させ、５℃まで冷却し、析出した固体を濾別した。濾液を濃縮することにより、以下の物性値を有する標題化合物を得た（１５ｇ）。
ＴＬＣ：Ｒｆ ０．３７（ヘキサン：酢酸エチル＝３：２）；
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ 1.74, 2.38, 3.77, 6.67-6.70, 7.33-7.36。

【0068】

実施例６
（２Ｓ）−２−（４−アミノフェニル）−１，１，１−トリフルオロ−２−プロパノール塩酸塩
実施例５で製造した化合物（１３ｇ）のｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（１２７ｍＬ）溶液を氷水浴で冷却した後、４Ｎ塩化水素／１，４−ジオキサン溶液（１９ｍＬ）を加えて撹拌した。生じた析出物を濾取し、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルで洗浄した。得られた固体にアセトニトリル（２００ｍＬ）を加え、８０℃で撹拌し、溶解後、室温まで冷却し終夜撹拌した。析出した結晶を濾取し、アセトニトリルで順次洗浄した後、乾燥することにより、以下の物性値を有する標題化合物（１２．７ｇ）を得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ ０．３４（ヘキサン：酢酸エチル＝３：２）；
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ1.64, 3.57, 6.61, 7.19-7.22, 7.58-7.61。

【0069】

実施例７
４−｛（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−[（トリメチルシリル）オキシ]−２−プロパニル｝アニリン
実施例６で製造した化合物（１２．７ｇ）をメタノール（１０ｍＬ）と酢酸エチル（７０ｍＬ）に溶解し、撹拌しながら飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１５０ｍＬ）を数回に分けて加えた後、反応混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣にテトラヒドロフラン（２１０ｍＬ）溶液を加え、氷水浴で冷却した後、イミダゾール（２０ｇ）とクロロトリメチルシラン（３３．４ｍＬ）を加え、室温で１５時間撹拌した。反応混合物を水（４００ｍＬ）中に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を水と飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮することにより、以下の物性値を有する標題化合物を得た（１４．４ｇ）。
ＴＬＣ：Ｒｆ ０．５２（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）；
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ 0.12, 1.77, 3.69, 6.64-6.67, 7.29-7.32。

【0070】

実施例８
２，６−ジクロロ−４−｛（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−［（トリメチルシリル）オキシ］−２−プロパニル｝アニリン
実施例７で製造した化合物（１４．４ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１４４ｍＬ）溶液にＮ−クロロスクシンイミド（１３．８ｇ）を加えて室温で１５時間撹拌した後、４０℃でさらに５時間撹拌した。反応混合物を水（５００ｍＬ）中に注ぎ、ヘキサン−酢酸エチル（１：２、１５０ｍＬ×３回）で抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０→５０：５０）で精製することにより、以下の物性値を有する標題化合物を得た（１７．４ｇ）。
ＴＬＣ：Ｒｆ ０．５６（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）；
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ 0.15, 1.75, 4.51, 7.33。

【0071】

実施例９
１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアのＭ晶

【化3】

実施例８で製造した化合物（２５０ｍｇ）のテトラヒドロフラン（３．６ｍＬ）溶液にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１３７μＬ）とトリホスゲン（２３５ｍｇ）を加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌した後、減圧濃縮した。得られた残渣をテトラヒドロフラン（３．６ｍＬ）に溶解し、（５−クロロピリジン−２−イル）メタンアミン塩酸塩（１８６ｍｇ）（ＣＡＳ登録番号：８７１８２６−１３−０）とトリエチルアミン（２４１μＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣にメタノール（３．６ｍＬ）とトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、室温で５時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝６０：４０→１０：９０）によって精製することにより、以下の物性値を有する標題化合物（２４３ｍｇ）を得た。本発明の実施例は、特許出願２の実施例２５（５）と同じ製法で製造している。
ＴＬＣ：Ｒｆ ０．２２（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）；
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ 1.69, 4.36, 6.93, 7.06, 7.38, 7.64, 7.94, 8.37, 8.55。

【0072】

下記の条件で測定した該結晶の粉末Ｘ線回析スペクトルチャートを図１に、ＤＳＣチャートを図２にそれぞれ示す。
（１）粉末Ｘ線回折スペクトル
装置：リガク製 ＳｍａｒｔＬａｂ
ターゲット：Ｃｕ
電圧：４５ｋＶ
電流：２００ｍＡ
走査速度：５度／ｍｉｎ

【0073】

Ｃｕ−Ｋα線を使用した粉末Ｘ線回折スペクトル法で得られた回折角（２θ）（度）および相対強度（％）の結果を表１に示す。

【表1】

【0074】

（２）示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
装置：メトラー・トレド製 ＤＳＣ８２２ｅ 示差走査熱量分析装置
試料量：１．１８ｍｇ
試料セル：アルミニウムスタンダード４０μＬ
窒素ガス流量：４０ｍＬ／ｍｉｎ
昇温速度：１０℃／ｍｉｎ（２５〜２００℃）

【0075】

ＤＳＣチャートにおいて、２つの吸熱ピークと１つの発熱ピークが観察された。第１吸熱ピークがＭ晶の融解によるものである。
第１吸熱ピーク：オンセット温度８９．８℃、ピーク温度１００．０℃
第２吸熱ピーク：オンセット温度１５７．５℃、ピーク温度１６３．８℃
発熱ピーク：オンセット温度１１４．２℃、ピーク温度１２１．５℃

【0076】

実施例１０
１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアのＡ晶
実施例９で製造した化合物（１０ｍｇ）にエタノール５０μＬを加えて、４０〜６０℃で溶解させた。この溶液を室温で一晩撹拌して得られた固体をろ取、乾燥することにより、以下の物性値を有する結晶性の白色固体（Ａ晶）を得た。

【0077】

下記の条件で測定した該結晶の粉末Ｘ線回析スペクトルチャートを図３に、ＤＳＣチャートを図４にそれぞれ示す。

【0078】

（１）粉末Ｘ線回折スペクトル
装置：リガク製 ＳｍａｒｔＬａｂ
ターゲット：Ｃｕ
電圧：４５ｋＶ
電流：２００ｍＡ
走査速度：５度／ｍｉｎ
Ｃｕ−Ｋα線を使用した粉末Ｘ線回折スペクトル法で得られた回折角（２θ）（度）および相対強度（％）の結果を表２に示す。

【表2】

【0079】

（２）示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
装置：メトラー・トレド製 ＤＳＣ８２２ｅ 示差走査熱量分析装置
試料量：１．８ｍｇ
試料セル：アルミニウムスタンダード４０μＬ
窒素ガス流量：４０ｍＬ／ｍｉｎ
昇温速度：１０℃／ｍｉｎ（２５〜１８０℃）

【0080】

ＤＳＣチャートにおいて、Ａ晶の融解による吸熱ピーク（オンセット温度１６６．０℃、ピーク温度１６７．３℃）が観察された。

【0081】

実施例１１
１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアのＷ晶
実施例９で製造した化合物（１０ｍｇ）にメタノール３０〜４０μＬを加えて、４０〜６０℃で溶解させた。この溶液を室温で一晩撹拌して得られた固体をろ取、乾燥することにより、以下の物性値を有する結晶性の白色固体（Ｗ晶）を得た。

【0082】

下記の条件で測定した該結晶の粉末Ｘ線回析スペクトルチャートを図５に、ＤＳＣチャートを図６にそれぞれ示す。

【0083】

（１）粉末Ｘ線回折スペクトル
装置：リガク製 ＳｍａｒｔＬａｂ
ターゲット：Ｃｕ
電圧：４５ｋＶ
電流：２００ｍＡ
走査速度：２０度／ｍｉｎ

【0084】

Ｃｕ−Ｋα線を使用した粉末Ｘ線回折スペクトル法で得られた回折角（２θ）（度）および相対強度（％）の結果を表３に示す。

【表3】

【0085】

（２）示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
装置：メトラー・トレド製 ＤＳＣ８２２ｅ 示差走査熱量分析装置
試料量：０．７１ｍｇ
試料セル：アルミニウムスタンダード４０μＬ
窒素ガス流量：４０ｍＬ／ｍｉｎ
昇温速度：１０℃／ｍｉｎ（２５〜１８０℃）

【0086】

ＤＳＣチャートにおいて、２つの吸熱ピークと１つの発熱ピークが観察された。第１吸熱ピークがＷ晶の融解によるものである。
第１吸熱ピーク：オンセット温度８８．６℃、ピーク温度９４．３℃
第２吸熱ピーク：オンセット温度１６５.１℃、ピーク温度１６７．０℃
発熱ピーク：オンセット温度１１３．０℃、ピーク温度１１９．０℃

【0087】

実施例１２
１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアの水和物の結晶（H晶）
実施例１０で製造した化合物（２０ｍｇ）に水４００μＬを加えて、２５〜４０℃で１５日〜一か月撹拌して得られた固体をろ取することにより、以下の物性値を有する結晶性の白色固体（Ｈ晶）を得た。

【0088】

下記の条件で測定した該結晶の粉末Ｘ線回析スペクトルチャートを図７に、ＤＳＣチャートを図８にそれぞれ示す。

【0089】

（１）粉末Ｘ線回折スペクトル
装置：リガク製 ＳｍａｒｔＬａｂ
ターゲット：Ｃｕ
電圧：４５ｋＶ
電流：２００ｍＡ
走査速度：５度／ｍｉｎ

【0090】

Ｃｕ−Ｋα線を使用した粉末Ｘ線回折スペクトル法で得られた回折角（２θ）（度）および相対強度（％）の結果を表４に示す。

【表4】

【0091】

（２）示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
装置：メトラー・トレド製 ＤＳＣ８２２ｅ 示差走査熱量分析装置
試料量：０．６８ｍｇ
試料セル：アルミニウムスタンダード４０μＬ
窒素ガス流量：４０ｍＬ／ｍｉｎ
昇温速度：１０℃／ｍｉｎ（２５〜１８０℃）

【0092】

ＤＳＣチャートにおいて、２つの吸熱ピークが観察された。第１吸熱ピークは水和物（Ｈ晶）の脱水によるものである。
第１吸熱ピーク：オンセット温度３１．７℃、ピーク温度４８.２℃
第２吸熱ピーク：オンセット温度１６５.３℃、ピーク温度１６６．８℃

【0093】

続いて、Ｈ晶の水蒸気吸着／脱着等温線およびＸ線回折−示差走査熱量同時測定（ＸＲＤ−ＤＳＣ同時測定）の結果を図９および図１０に示す。

【0094】

（３）水蒸気吸着／脱着等温線測定
装置：ＳＭＳ製 ＤＶＳ Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ
試料量：５．５ｍｇ
温度：２５℃
相対湿度の変化：０％〜９５％（５％ＳＴＥＰ）
ＳＴＥＰ移行時の基準：重量変化率０．００２％／ｍｉｎ

【0095】

２５℃で、段階的（相対湿度０％ＲＨ〜９５％ＲＨ）に湿度を変化させた時の重量変化を経時的に記録し、各湿度での平衡重量を求めた。次に、乾燥時（０％ＲＨ）を基準とし、各湿度での重量の変化率及び水和数を求めた。

【0096】

その結果を図９に示す。相対湿度を段階的に増加させた際、３０％付近から重量変化が認められ、相対湿度５０％ＲＨで平衡に達し、相対湿度５０％ＲＨ以上における重量変化率は一定の４％であった。続けて、相対湿度を段階的に減少させた場合、１５％付近まで重量変化率は一定の４％であった。１水和物の理論上の水含量は４％であることから、本試験の結果は、Ｈ晶が１水和物である可能性を示している。

【0097】

（４）粉末Ｘ線回折−示差走査熱量同時測定（ＰＸＲＤ−ＤＳＣ同時測定）
装置：リガク製 ＳｍａｒｔＬａｂ
ターゲット：Ｃｕ
電圧：４５ｋＶ
電流：２００ｍＡ
走査速度：２０°／ｍｉｎ
昇温速度：２℃／ｍｉｎ（室温〜１５０℃）

【0098】

４０〜５０℃付近で、結晶構造変化に伴う、脱水に伴う吸熱ピーク、およびＸ線回折スペクトルチャートにおけるパターンの変化が認められた。

【0099】

比較例１
１−［４−（１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル）フェニル］−３−｛［５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］メチル｝ウレア

【化4】

特許出願２の比較例１と同様の操作を行って、以下の物性値を有する標題化合物を得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ ０．２５（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）；
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ 1.63, 4.49, 6.42, 6.86, 7.41, 7.57, 8.18, 8.90。

【0100】

比較例２
Ｎ−（２−ブロモ−４，６−ジクロロフェニル）−２−（４−フルオロフェニル）アセタミド（特許文献１ 実施例１ｇ）

【化5】

特許出願２の比較例２と同様の操作を行って、以下の物性値を有する標題化合物（１．２８ｇ）を得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ ０．４３（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）；
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）：δ 3.72, 7.02-7.08, 7.38-7.43, 7.58, 7.69。

【0101】

化合物Ｉの効果は以下の実験によって証明することができるが、これに限定されるものではない。

【0102】

（１）生物学的実施例１：脱分極刺激によるＫＣＮＱ２／３チャネルに対する開口作用
ヒトＫＣＮＱ２／３の発現細胞（ＣＨＯ−ＤＨＦＲ−細胞）を３８４穴プレート（コラーゲンコート、黒、クリアボトム）１穴あたり０．５×１０⁴個／５０μＬずつ播種し、ＭＥＭ ＡＬＰＨＡ培地（１０ｖｏｌ％非働化（５６℃、３０ｍｉｎ）済みＦｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ及び１００ＩＵ／ｍＬ Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ−１００μｇ／ｍＬ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ−２ｍＭ Ｌ−Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ含有）を用いて、３７℃にて５％ＣＯ₂下で１８〜２４時間培養した。プレート内の培地を除去した後、ローディングバッファー（ＦｌｕｘＯＲ Ｔｈａｌｌｉｕｍ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｆ１００１６、Ｆ１００１７）のマニュアルに記載された方法で調製）中でインキュベーション（室温、６０分、遮光）した。ＦＬＩＰＲ ＴＥＴＲＡ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）で脱分極刺激（５ｍＭカリウム及び０．５ｍＭタリウム）によるＫＣＮＱ２／３チャネル開口作用（細胞内タリウム流入）を測定した。化合物Ｉは脱分極刺激５分前に処置し、脱分極刺激で誘発される反応を１８０秒間経時的に測定した。化合物Ｉのチャネル開口作用は、脱分極刺激前から１８０秒後までの蛍光強度変化量で評価し、本実験条件下におけるレチガビンの最大反応（１０μＭ処置時）の蛍光強度変化の５０％を満たす濃度（ＥＣｒｔｇ５０）を算出した。

【0103】

その結果、化合物ＩのＫＣＮＱ２／３チャネルに対する開口作用（ＥＣｒｔｇ５０値）は、０．６μＭであった。一方、比較例１のＥＣｒｔｇ５０値は＞１０μＭ、比較例２のＥＣｒｔｇ５０値は０．２μＭであった。

【0104】

また、上記方法においてヒトＫＣＮＱ２／３の発現細胞の代わりに、ヒトＫＣＮＱ４またはヒトＫＣＮＱ５の発現細胞を使用し、当業者の通常の知識に基づいて上記条件を適宜変更することで、ヒトＫＣＮＱ４チャネルまたはヒトＫＣＮＱ５チャネルに対する開口作用を測定することができる。

【0105】

（２）生物学的実施例２：ラット摘出膀胱に対する弛緩作用
ペントバルビタール（ソムノペンチル、シェーリング・プラウ アニマルヘルス社）を雌性Ｊｃｌ：Ｗｉｓｔａｒラット（日本クレア、使用時体重：１７０〜２００ｇ）に約４０ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与することで麻酔を施し、放血致死させた。腹部を切開して膀胱を摘出し、直ちに混合ガス（９５％Ｏ₂，５％ＣＯ₂）で飽和させた氷冷Ｋｒｅｂｓ ｂｕｆｆｅｒ（炭酸水素ナトリウム（終濃度：１５ｍＭ）及び塩化カルシウム（終濃度：２．５ｍＭ）を添加したＫｒｅｂｓ Ｒｉｎｇｅｒ ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｌｉｃｈ Ｃｏ．））に浸した。

【0106】

ラット摘出膀胱の体部を縦長の短冊状（約１０×３ｍｍ）となるよう氷上にて標本を作製した。直ちに混合ガスで通気したＫｒｅｂｓ ｂｕｆｆｅｒ（３７℃）で満たしたマグヌス管中に５００ｍｇの張力負荷をかけ、懸垂した。なお、標本は組織摘出後２４時間以内に作製した。

【0107】

標本の張力変化は、等尺性トランスデューサー（ＵＦＥＲ ＵＭ−２０３，いわしや岸本医科産業株式会社）及びアンプ（ＵＦＥＲ ＡＰ−５，いわしや岸本医科産業株式会社）を装備したマグヌス装置システムを介して、データ収集システム（ＮＲ−１０００，キーエンス株式会社）に記録し、レコーダ解析ソフトＷＡＶＥ ＴＨＥＲＭＯ １０００（キーエンス株式会社）にてコンピュータ上に表示させた。標本を懸垂して１時間以上経過した後、２．５Ｍ ＫＣｌを終濃度１００ｍＭとなるよう添加し、収縮反応が確認できた標本を使用した。

【0108】

１μＭの濃度でカルバコール（収縮惹起物質）収縮を惹起させた。収縮の程度が群間で差がないように、また同一個体から採取する標本が同一群とならないように任意に各群に割り付けた。収縮反応が安定した後に生理食塩液あるいは化合物Ｉを終濃度１，１０，１００ｎＭ，１及び１０μＭとなるよう低濃度から累積的に添加した。

【0109】

摘出膀胱における張力（ｍｇ）を評価項目とした。張力は解析ソフトＷＡＶＥ ＴＨＥＲＭＯ １０００を用いて読み取った。収縮惹起物質添加後の張力を０％としたときの化合物Ｉ添加後の張力の変化率を張力変化率（％）とし、評価指標とした。張力変化率（％）は以下の式より算出する。

【0110】

張力変化率（％）＝｛化合物Ｉ等添加後の張力（ｍｇ）−収縮惹起物質添加前の張力（ｍｇ）｝／｛収縮惹起物質添加後の張力（ｍｇ）−収縮惹起物質添加前の張力（ｍｇ）｝×１００−１００

【0111】

張力変化率（％）が−２０％となる値をＩＣ₂₀として算出し、摘出膀胱弛緩作用の指標とした。

【0112】

その結果、化合物Ｉのラットマグヌス試験におけるＩＣ₂₀値は０．５μＭであった。化合物Ｉはラット摘出膀胱に対し弛緩作用を有するため、化合物Ｉは過活動膀胱治療剤として有用である。

【0113】

（３）溶解性試験
検量線溶液は、被験物質（１０ｍＭ ＤＭＳＯ溶液）をアセトニトリルで希釈し、内標準物質（カンデサルタン）を含むアセトニトリルを添加して０．１、０．４及び２μＭに調製した。

【0114】

試料溶液は、日本薬局方溶出試験第２液（ｐＨ＝６．８）４９５μＬに化合物Ｉ（１０ｍＭ ＤＭＳＯ溶液）５μＬを添加し、室温で５時間攪拌した後、溶液を溶解度用フィルタープレートに移し吸引ろ過してろ液２０μＬをアセトニトリルで希釈し、内標準物質（カンデサルタン）を含むアセトニトリルを添加して調製した。

【0115】

検量線および試料溶液５μＬをＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製 Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｍａｘ）に注入し定量した（定量範囲５〜１００μＭ）。定量範囲以下の値が得られた場合の溶解度は＜５μＭ、定量範囲以上の値が得られた場合の溶解度は１００μＭとした。

【0116】

その結果、化合物Ｉは、優れた溶解性（９８μＭ）を示した。それに対し、比較例２（特許文献１ 実施例１ｇ）の溶解度は検出限界以下（＜５μＭ）であり、比較例２の溶解性は低かった。

【0117】

（４）ヒト肝ミクロソーム中での安定性評価
被験化合物（１０ｍｍｏｌ／Ｌ ＤＭＳＯ溶液、５μＬ）を５０％アセトニトリル水溶液（１９５μＬ）で希釈し、０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ溶液を作製した。

【0118】

あらかじめ３７℃に温めた反応用容器に０．５ｍｇ／ｍＬヒト肝ミクロソーム（Ｘｅｎｏｔｅｃｈ社）およびＮＡＤＰＨ−Ｃｏ−ｆａｃｔｏｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）２４５μＬを添加して５分間プレインキュベーション後、先の被験化合物溶液（５μＬ）を加えて反応を開始した（最終濃度５μｍｏｌ／Ｌ）。開始直後に２０μＬを採取し、内部標準物質（ワルファリン）を含むアセトニトリル１８０μＬに添加して反応を停止した。この溶液２０μＬを除タンパク用フィルター付プレート上で５０％アセトニトリル水溶液１８０μＬと攪拌後、吸引ろ過してろ液を標準サンプルとした。

【0119】

先の反応溶液を３７℃にて１５分間インキュベーション後、２０μＬを冷アセトニトリル（内部標準物質ワルファリンを含む）１８０μＬに添加し、反応を停止した。この２０μＬを除タンパク用フィルター付プレート上で５０％アセトニトリル水溶液１８０μＬと攪拌後、吸引ろ過してろ液を反応サンプルとした。

【0120】

残存率（％）は、試料溶液１μＬをＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製 Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｍａｘ）に注入し、反応サンプルのピーク面積比（被験化合物のピーク面積／内部標準物質のピーク面積）を標準サンプルのピーク面積比で除した値を１００倍して算出した。

【0121】

その結果、化合物Ｉは、ヒト肝ミクロソームに対して高い安定性（８７％）を有しており、代謝安定性に優れていることが分かった。

【0122】

（５）ｈＥＲＧ ＩＫｒ電流に対する作用の評価
ヒト ｅｔｈｅｒ−ａ−ｇｏ−ｇｏ−ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ（ｈＥＲＧ）を過剰発現したＨＥＫ２９３細胞を用いて、脱分極パルスに続く再分極パルスによって誘導されるｈＥＲＧ ＩＫｒ電流の最大テール電流をパッチクランプ法で測定し、被験物質適用前の最大テール電流に対する被験物質適用１０分後の変化率（抑制率）を算出した（バイオフィジカル・ジャーナル、７４巻、２３０−２４１頁（１９９８年）参照）。その結果、化合物Ｉは、ｈＥＲＧチャネルの５０％阻害活性が＞１０μＭであり、薬物によるＱＴ延長を誘発する可能性が低い、安全性に優れた化合物であることが分かった。

【0123】

（６）化学的安定性試験
各種保管条件下で本発明の結晶形の安定性について検討を行った。保存後、ＨＰＬＣで−２０℃保存サンプルの面積百分率に対する各条件下保存サンプルの残存率（％）を算出した。また粉末Ｘ線回折スペクトルを用いてピークをサンプルと比較した。外観を目視で観察し、サンプルと比較した。

【0124】

＜保存条件およびサンプリングタイム＞
５℃：３か月
６０℃：１か月
２５℃−６０％ＲＨ（開封）：３か月
４０℃−７５％ＲＨ（開封）：３か月
２５００Ｌｕｘ：２０Ｄ（遮光、透明）

【0125】

＜Ａ晶＞
いずれの条件においても、残存率は９９．９％〜１００．１％であった。また、粉末Ｘ線回折スペクトルを用いた検討において、ピーク数の増加は認められず、目視による外観変化も認められなかった。したがって、Ａ晶は化学的安定性に優れた結晶形であることが分かった。

【0126】

［製剤例］
本発明に用いられる代表的な製剤例を以下に示す。
製剤例１
以下の各成分を常法により混合した後打錠して、一錠中に１０ｍｇの活性成分を含有する錠剤１万錠を得る。
・１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアのＡ晶（１００ｇ）；
・カルボキシメチルセルロースカルシウム（崩壊剤）（２０ｇ）；
・ステアリン酸マグネシウム（潤滑剤）（１０ｇ）；
・微結晶セルロース（８７０ｇ）。

【0127】

製剤例２
以下の各成分を常法により混合した後、除塵フィルターでろ過し、５ｍＬずつアンプルに充填し、オートクレーブで加熱滅菌して、１アンプル中２０ｍｇの活性成分を含有するアンプル１万本を得る。
・１−［（５−クロロ−２−ピリジニル）メチル］−３−｛２，６−ジクロロ−４−［（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−プロパニル］フェニル｝ウレアのＡ晶（２００ｇ）；
・マンニトール（２ｋｇ）；
・蒸留水（５０Ｌ）。

【産業上の利用可能性】

【0128】

化合物Ｉの毒性は十分に低く、医薬品として安全に使用することができ、ＫＣＮＱ２〜５チャネル関連疾患の治療剤として有用である。また本発明の結晶形は、医薬品の原薬として有用である。

【要約】

結晶性化合物には、結晶多形が存在する場合がある。結晶多形が存在する場合、結晶形によって、溶解度、溶解速度、または熱、光、湿度等に対する安定性等が異なる。したがって、医薬品の製造において、その適応疾患や剤形に最も適した原薬の結晶形を選択することは、非常に重要な課題である。本発明は、ＫＣＮＱ２〜５チャネルに対し強い開口作用を有する化合物Ｉの新規結晶形（Ａ晶、Ｗ晶および水和物結晶（Ｈ晶））に関する。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】