特許 6266811 血管新生病の免疫療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6266811

(24)【登録日】2018年1月5日

(45)【発行日】2018年1月24日

(54)【発明の名称】血管新生病の免疫療法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/00 20060101AFI20180115BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20180115BHJP

   A61K 38/08 20060101ALI20180115BHJP

   A61K 38/10 20060101ALI20180115BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20180115BHJP

   C07K 7/04 20060101ALN20180115BHJP

   C07K 14/705 20060101ALN20180115BHJP

【ＦＩ】

   A61K39/00 H

   A61P27/02

   A61K38/08

   A61K38/10

   A61K38/16

   !C07K7/04ZNA

   !C07K14/705

【請求項の数】10

【全頁数】17

(21)【出願番号】特願2016-563738(P2016-563738)

(86)(22)【出願日】2015年12月10日

(86)【国際出願番号】JP2015084709

(87)【国際公開番号】WO2016093326

(87)【国際公開日】20160616

【審査請求日】2017年7月10日

(31)【優先権主張番号】特願2014-251208(P2014-251208)

(32)【優先日】2014年12月11日

(33)【優先権主張国】JP

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】505443953

【氏名又は名称】株式会社癌免疫研究所

(74)【代理人】

【識別番号】100081422

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 光雄

(74)【代理人】

【識別番号】100084146

【弁理士】

【氏名又は名称】山崎 宏

(74)【代理人】

【識別番号】100122301

【弁理士】

【氏名又は名称】冨田 憲史

(72)【発明者】

【氏名】杉山 治夫

【審査官】 小森 潔

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２００５／０４５０２７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１０／１２３０６５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１４／０９８０１２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２００２−５２５０９９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００９／０７２６１０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００７／０９７３５８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００８／０８１７０１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開２０１４−１６９２８２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１４−１６９２７６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００８年，Ｖｏｌ．２７，Ｎｏ．２６，ｐ３６６２−３６７２

【文献】 Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２００４年，Ｖｏｌ．１６４，Ｎｏ．５，ｐ１８２７−１８３５

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３９／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＷＴ１ペプチドまたは変異型ＷＴ１ペプチドを含む、眼内血管新生病（腫瘍を除く）の治療及び予防のいずれか又は両方のための医薬組成物、ここに変異型ＷＴ１ペプチドは、天然型のＷＴ１ペプチドのアミノ酸配列において１個ないし２個のアミノ酸が置換、欠失または付加されているアミノ酸配列を含むものであり、天然型のＷＴ１ペプチドと同様の眼内血管新生病（腫瘍を除く）の治療効果を有するものである。

【請求項2】

ＷＴ１ペプチドまたは変異型ＷＴ１ペプチドにより誘導または活性化された抗原提示細胞またはキラーＴ細胞またはヘルパーＴ細胞を含む、眼内血管新生病（腫瘍を除く）の治療及び予防のいずれか又は両方のための医薬組成物。

【請求項3】

ＷＴ１ペプチドまたは変異型ＷＴ１ペプチドがＨＬＡ分子との結合能を有するものである、請求項１または２のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項4】

ＷＴ１ペプチドまたは変異型ＷＴ１ペプチドがキラーＴ細胞またはヘルパーＴ細胞を活性化するものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項5】

ＷＴ１ペプチドの長さが７〜３０アミノ酸である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項6】

ＷＴ１ペプチドが以下のアミノ酸配列：
（ａ）配列番号：１〜配列番号：３９で示されるいずれかのアミノ酸配列、または
（ｂ）上記（ａ）のアミノ酸配列において１個ないし２個のアミノ酸が置換、欠失または付加されているアミノ酸配列
を含むものである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬組成物、ここに（ｂ）のアミノ酸配列を含むＷＴ１ペプチドは、（ａ）のアミノ酸配列を含むＷＴ１ペプチドと同様の眼内血管新生病（腫瘍を除く）の治療効果を有するものである。

【請求項7】

ＷＴ１ペプチドが以下のアミノ酸配列：
（ａ）Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｌｅｕ （配列番号：１）、
（ｂ）Ｃｙｓ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｔｒｐ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｌｅｕ （配列番号：１９）
（ｃ）Ａｌａ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ （配列番号：２７）
（ｄ）Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｈｉｓ （配列番号：３２）、または
（ｅ）（ａ）〜（ｄ）のいずれかのアミノ酸配列において１個ないし２個のアミノ酸が置換、欠失または付加されているアミノ酸配列
を含むものである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物、ここに（ｅ）のアミノ酸配列を含むＷＴ１ペプチドは、（ａ）〜（ｄ）のいずれかのアミノ酸配列を含むＷＴ１ペプチドと同様の眼内血管新生病（腫瘍を除く）の治療効果を有するものである。

【請求項8】

眼内血管新生病（腫瘍を除く）が、滲出型加齢黄斑変性、近視性黄斑変性、網膜色素線条症、中心性漿液性脈絡網膜症、種々の網膜色素上皮症、コロイデレミア、脈絡膜骨腫、糖尿病網膜症、未熟児網膜症、血管新生緑内障および角膜血管新生からなる群より選択される疾患である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項9】

皮内投与、皮下投与、経皮投与または経粘膜投与により投与される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項10】

血管新生病の治療および予防のいずれかまたは両方に用いられる医薬と併用される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、血管新生病の免疫療法に関する。

【背景技術】

【0002】

様々な癌、多発性骨髄腫、関節リウマチ、乾癬、滲出型加齢黄斑変性などの眼内血管新生病、アテローム硬化型プラーク、血管奇形、血管膠着、卵巣肥大症候群、多嚢胞卵巣、肉芽腫、血管腫、肥大性痕、ケロイド、強皮症、いぼなどの血管新生病に対して、プロタミン、ステロイドとヘパリンの併用、ステロイドとヘキスロニル・ヘキソサミノグリカン・サルフェートの併用、ミトキサントロン、エンドスタチン、フィブロネクチンのヘパリン結合断片、プロスタグランジン・シンセターゼ阻害剤、γ−インターフェロン、金化合物、リンホトキシン、Ｄ−ペニシラミン、ステロイドとβ−サイクロデキストリン・テトライカサルフェートの併用、プロテアーゼ阻害剤、メソトレキセート、インターフェロンα２ａ、抗ＶＥＧＦ薬等を用いた治療が行われている。

【0003】

血管新生病のなかでも典型的なものとして、滲出型加齢黄斑変性などの眼内血管新生病が挙げられる。眼内血管新生病の治療法としては、抗ＶＥＧＦ薬を眼内に注射して用いる方法が一般的である。しかし、抗ＶＥＧＦ薬を用いる治療法では、高額の費用がかかるうえに一定間隔での反復注射が必要であり、眼に注射針を刺されることに対する患者の心理的恐怖感は非常に大きく、さらには、注射によって、対処が非常に困難な眼内感染症や注射の刺激等による眼内炎や網膜剥離等を引き起こすなど、重篤な合併症を発するリスクも大きい。また、抗ＶＧＥＦ薬による治療により一定期間は視力の改善が見られることが多いが、治療を継続していても長期的には視力は再び悪化してしまうとの報告もある。すなわち、現行の治療で用いられる抗ＶＥＧＦ薬は高コストであるにもかかわらず、危険性もあり、その効果に鑑みると必ずしも十分な治療満足度が得られているわけではない。他の治療法としては、光線力学的療法、レーザー光凝固術、新生血管抜去術などの外科的方法があるが、これらの方法も費用や治療満足度の点で問題があり、侵襲性が高く、入院が必要な場合もある。結局のところ、これまで眼内血管新生病の治療法として満足なものはなく、現行の治療は、克服すべき課題が多く残されているといえる。

【0004】

最近、癌抗原蛋白であるＷＴ１蛋白が癌組織血管にも発現しているという報告がなされた（非特許文献１）。

【0005】

これまで癌抗原ペプチドを癌ワクチンとして用いる例についての報告は多いが、癌抗原ペプチドをワクチンとして用いて血管新生病を治療および予防することについては報告がなかった。

【0006】

かかる状況下において、血管新生病の新たな根治療法の開発が望まれていた。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0007】

【非特許文献1】N. Wagner et al. Oncogene (2008) 27, 3662-3672

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

血管新生病の治療及び予防のための新たな製剤を提供することが本発明の課題であった。また、比較的低コストで、患者自身による自己投与可能な低侵襲製剤を提供することも本発明の課題であった。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本発明者らは、上記課題を解決せんと鋭意研究を重ね、癌抗原ペプチドをワクチンとして用いることにより血管新生病を治療または予防できることを見いだした。さらに本発明者らは、ＷＴ１ペプチドを全身投与することにより血管新生病を治療できることも見いだした。これらの知見に基づいて、本発明者らは本発明を完成させるに至った。

【0010】

すなわち本発明は、以下のものを提供する。
（１）癌抗原ペプチドを含む、血管新生病の治療及び予防のいずれか又は両方のための医薬組成物。
（２）癌抗原ペプチドにより誘導または活性化された抗原提示細胞またはキラーＴ細胞またはヘルパーＴ細胞を含む、血管新生病の治療及び予防のいずれか又は両方のための医薬組成物。
（３）癌抗原ペプチドがＷＴ１ペプチドまたは変異型ＷＴ１ペプチドである、（１）または（２）に記載の医薬組成物。
（４）ＷＴ１ペプチドまたは変異型ＷＴ１ペプチドがＨＬＡ分子との結合能を有するものである、（３）に記載の医薬組成物。
（５）ＷＴ１ペプチドまたは変異型ＷＴ１ペプチドがキラーＴ細胞またはヘルパーＴ細胞を活性化するものである、（３）または（４）に記載の医薬組成物。
（６）ＷＴ１ペプチドの長さが７〜３０アミノ酸である、（３）〜（５）のいずれかに記載の医薬組成物。
（７）ＷＴ１ペプチドが以下のアミノ酸配列：
（ａ）配列番号：１〜配列番号：３９で示されるいずれかのアミノ酸配列、または
（ｂ）上記（ａ）のアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸が置換、欠失または付加されているアミノ酸配列
を含むものである、（３）〜（６）のいずれかに記載の医薬組成物。
（８）ＷＴ１ペプチドが以下のアミノ酸配列：
（ａ）Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｌｅｕ （配列番号：１）、
（ｂ）Ｃｙｓ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｔｒｐ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｌｅｕ （配列番号：１９）
（ｃ）Ａｌａ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ （配列番号：２７）
（ｄ）Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｈｉｓ （配列番号：３２）、または
（ｅ）（ａ）〜（ｄ）のいずれかのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸が置換、欠失または付加されているアミノ酸配列
を含むものである、（３）〜（７）のいずれかに記載の医薬組成物。
（９）血管新生病が眼内血管新生病である、（１）〜（８）のいずれかに記載の医薬組成物。
（１０）眼内血管新生病が、滲出型加齢黄斑変性、近視性黄斑変性、網膜色素線条症、中心性漿液性脈絡網膜症、種々の網膜色素上皮症、脈絡膜萎縮症、コロイデレミア、脈絡膜骨腫、糖尿病網膜症、未熟児網膜症、血管新生緑内障および角膜血管新生からなる群より選択される疾患である、（９）に記載の医薬組成物。
（１１）皮内投与、経皮投与または経粘膜投与により投与される、（１）〜（１０）のいずれかに記載の医薬組成物。
（１２）血管新生病の治療および予防のいずれかまたは両方に用いられる医薬と併用される、（１）〜（１１）のいずれかに記載の医薬組成物。

【発明の効果】

【0011】

本発明によれば、癌抗原ペプチドを含む、血管新生病の治療及び予防のいずれか又は両方のための医薬組成物が提供される。さらに本発明によれば、癌抗原ペプチドにより誘導または活性化された抗原提示細胞またはキラーＴ細胞またはヘルパーＴ細胞を含む、血管新生病の治療及び予防のいずれか又は両方のための医薬組成物が提供される。本発明の医薬組成物は、局所投与のみならず皮内投与、皮下投与、経皮投与や経粘膜投与などの全身投与が可能であるため低侵襲性である。さらに本発明の医薬組成物は、患者自身による自己投与も可能である。また、本発明の医薬組成物の治療効果は高く、患者の治療満足度も高い。さらに、本発明の医薬組成物を用いて眼内血管新生病を治療または予防する場合には、対側眼の治療または予防についても効果が期待できる。

【図面の簡単な説明】

【0012】

【図1】図１は、動物実験における観察、測定、検査項目等のまとめを示すスキームである。

【図2】図２は、ＷＴ１ペプチドワクチンの眼底血管新生抑制効果を示す典型フルオレセイン蛍光眼底像である。左の２つの写真はＰＢＳ皮内投与の結果であり（コントロール）、右の２つの写真はＷＴ１ペプチド（ＷＴ１_１２６：Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｌｅｕ （配列番号：１））を皮内投与した場合の結果である。

【図3】図３は、ＷＴ１ペプチド（ＷＴ１_１２６：Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｌｅｕ （配列番号：１））を１μｇ／ｂｏｄｙ、１０μｇ／ｂｏｄｙ、１００μｇ／ｂｏｄｙ皮内投与して、脈絡膜新生血管領域の変化を経時的に調べた結果を示すグラフである。

【図4】図４は、ＷＴ１ペプチド（ＷＴ１_３５：Ａｌａ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ （配列番号：２７））を１μｇ／ｂｏｄｙ、１０μｇ／ｂｏｄｙ、１００μｇ／ｂｏｄｙ皮内投与して、脈絡膜新生血管領域の変化を経時的に調べた結果を示すグラフである。

【図5】図５は、ＷＴ１ペプチド（ＷＴ１_２３５ｍ：Ｃｙｓ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｔｒｐ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｌｅｕ （配列番号：１９）およびＷＴ１_３３２：Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｈｉｓ （配列番号：３２））を２００μｇ／ｂｏｄｙ皮内投与して、脈絡膜新生血管領域の変化を経時的に調べた結果を示すグラフである。

【図6】図６は、ＷＴ１ペプチド（ＷＴ１_１２６、ＷＴ１_２３５ｍおよびＷＴ１_３３２）とアフリベルセプトを併用した場合の脈絡膜新生血管領域の変化を経時的に調べた結果を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0013】

本発明は、１つの態様において、癌抗原ペプチドを含む、血管新生病の治療及び予防のいずれか又は両方のための医薬組成物に関する。癌抗原ペプチドは癌抗原蛋白の一部分である。ＷＴ１をはじめとする様々な癌抗原蛋白が知られている。本発明の医薬組成物に使用する癌抗原ペプチドは１種類であってもよく、あるいは複数種類であってもよい。癌抗原ＷＴ１ペプチドが対象において血管新生病の治療効果を発揮するかどうかは、癌抗原ペプチドが対象のＨＬＡ型に対応するかどうかによる。現在、多くの癌抗原ペプチドに関して、どのＨＬＡ型に適合するのか知られているので、本発明に用いる癌抗原ペプチドを、対象のＨＬＡ型に応じて選択することができる。したがって、本発明の医薬組成物に複数種類の癌抗原ペプチドを使用して、幅広い対象に対応するようにしてもよい。血管新生病も様々なものが知られている。血管新生病の例としては、様々な癌、多発性骨髄腫、関節リウマチ、乾癬、滲出型加齢黄斑変性などの眼内血管新生病、アテローム硬化型プラーク、血管奇形、血管膠着、卵巣肥大症候群、多嚢胞卵巣、肉芽腫、血管腫、肥大性痕、ケロイド、強皮症、いぼなどが挙げられるが、これらに限らない。

【0014】

癌抗原ペプチドを対象に投与する、あるいは対象から得た血液などのサンプルに添加することにより、当該癌抗原ペプチドを提示する抗原提示細胞を得ることができる。癌抗原を提示する抗原提示細胞がリンパ球を刺激して、キラーＴ細胞やヘルパーＴ細胞が誘導または活性化される。癌抗原ペプチドの作用は、それにより誘導または活性化された抗原提示細胞またはキラーＴ細胞またはヘルパーＴ細胞によるものである。したがって、本発明は、もう１つの態様において、癌抗原ペプチドにより誘導または活性化された抗原提示細胞またはキラーＴ細胞またはヘルパーＴ細胞を含む、血管新生病の治療及び予防のいずれか又は両方のための医薬組成物に関する。上記医薬組成物に用いる抗原提示細胞またはキラーＴ細胞またはヘルパーＴ細胞は、いずれの癌抗原ペプチドを用いて誘導または活性化されたものであってもよく、例えばＷＴ１ペプチドを用いて誘導または活性化されたものであってもよい。

【0015】

血管新生病のなかでも典型的なものとして眼内血管新生病が挙げられる。また、癌抗原ペプチドのなかでも広く用いられているものとしてＷＴ１ペプチドが挙げられる。したがって、本発明は、さらなる態様において、ＷＴ１ペプチドまたは変異型ＷＴ１ペプチドを含む、眼内血管新生病の治療のための医薬組成物に関するものである。

【0016】

本明細書において、ＷＴ１ペプチドは、ＷＴ１遺伝子（Wilms' tumor gene 1）によりコードされている癌抗原蛋白ＷＴ１の部分ペプチドをいう。癌抗原蛋白ＷＴ１のアミノ酸配列を配列番号：４０に示す。したがって、ＷＴ１ペプチドは、癌抗原蛋白ＷＴ１に含まれる連続したアミノ酸配列からなるペプチドである。ＷＴ１ペプチドは当業者によく知られており、特に癌の免疫療法に関する報告が多数ある。ＷＴ１ペプチドは、公知の方法、例えば遺伝子工学的方法や化学合成法によって製造することができる。なお、特に断らない限り、本明細書においてＷＴ１ペプチドという場合は、ヒトの癌抗原蛋白ＷＴ１に由来するペプチドをいうものとする。

【0017】

本発明に用いるＷＴ１ペプチドは、ＷＴ１ペプチドのアミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸が置換、欠失または付加されているアミノ酸配列からなる、変異型ＷＴ１ペプチドであってもよい。変異型ＷＴ１ペプチドは、人工的にアミノ酸配列を変更したＷＴ１ペプチド（改変型ＷＴ１ペプチドともいう）であってもよく、自然変異によって得られるＷＴ１ペプチドであってもよく、あるいは由来する動物種によるアミノ酸配列の相違を含むＷＴ１ペプチドであってもよい。本発明において、変異型ＷＴ１ペプチドは、天然型のＷＴ１ペプチドと同様の眼内血管新生病の治療効果を有するものである。アミノ酸配列の置換、欠失または付加方法としては遺伝子工学的方法や化学的方法が当業者に公知であり、当業者は所望のアミノ酸配列を容易に得ることができる。ここで、１個ないし数個とは、例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個であり、好ましくは１個、２個、３個、４個または５個であり、より好ましくは１個、２個または３個である。さらに好ましくは１個または２個である。

【0018】

また、ＷＴ１ペプチド中のアミノ酸残基が修飾されたペプチドも変異型ＷＴ１ペプチドに含まれる。ペプチド中のアミノ酸残基の修飾の種類および修飾方法は当業者に公知である。修飾の具体例として、ＷＴ１ペプチドのＮ末端および／またはＣ末端にアミノ酸、ペプチド、またはそれらのアナログ等の種々の物質を結合させてもよい。上記の種々の物質は、本発明のＷＴ１ペプチドの溶解性を調節するもの、耐プロテアーゼ作用等その安定性を向上させるもの、所定の組織・器官に特異的に本発明のＷＴ１ペプチドをデリバリーするもの、抗原提示細胞の取り込み効率を増強させるものであってもよい。あるいは上記の種々の物質が生体内で除去されてＷＴ１ペプチドを生じるようにしてもよい。

【0019】

本明細書において、特に断らないかぎり、ＷＴ１ペプチドという場合には、変異型ＷＴ１ペプチドを包含するものとする。

【0020】

本発明に用いられるＷＴ１ペプチドの長さは特に限定されないが、約７個〜約３０個のアミノ酸からなるものが好ましい。好ましいＷＴ１ペプチドは、ＨＬＡ分子に結合して提示される抗原ペプチドの配列の規則性（モチーフ）を有し、ＨＬＡ分子との結合能を有するものである。ＨＬＡ分子との結合能は、当該技術分野において既知の方法により調べることができる。かかる方法として、例えば、Ｒａｎｋｐｅｐ、ＢＩＭＡＳ、ＳＹＦＰＥＩＴＨＩなどのコンピューターベースの方法、ＨＬＡ分子に対する結合能を有する既知のＷＴ１ペプチドとの競合的結合試験などがある。また、好ましいＷＴ１ペプチドは、キラーＴ細胞またはヘルパーＴ細胞を活性化するものである。

【0021】

キラーＴ細胞を活性化するＷＴ１ペプチド（本明細書においてキラーＷＴ１ペプチドと称する）は、多くのものが公知である。一般に、好ましいキラーＷＴ１ペプチドは７〜１２個のアミノ酸からなるアミノ酸配列を有する。より好ましいキラーＷＴ１ペプチドは９個のアミノ酸からなるアミノ酸配列を有する。本発明に使用可能なキラーＷＴ１ペプチドの例としては、下記アミノ酸配列：Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｌｅｕ （配列番号：１）、Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｐｈｅ （配列番号：２）、Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｌｅｕ （配列番号：３）、Ａｌａ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｅｕ （配列番号：４）、Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｌｅｕ （配列番号：５）、Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ａｒｇ （配列番号：６）、Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｔｙｒ （配列番号：７）、Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｔｙｒ （配列番号：８）、Ｃｙｓ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｔｒｐ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｌｅｕ （配列番号：９）、Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｒｇ （配列番号：１０）、Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｒｇ （配列番号：１１）、Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｇｌｎ Ａｒｇ （配列番号：１２）、Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ａｒｇ （配列番号：１３）、Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ａｒｇ （配列番号：１４）、Ｓｅｒ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ａｒｇ （配列番号：１５）、Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ （配列番号：１６）、Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ｃｙｓ Ｌｙｓ （配列番号：１７）、Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｖａｌ （配列番号：１８）、Ｃｙｓ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｔｒｐ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｌｅｕ （配列番号：１９）、Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｖａｌ （配列番号：２０）、Ｓｅｒ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｖａｌ （配列番号：２１）、Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｖａｌ （配列番号：２２）、Ｐｈｅ Ｍｅｔ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｌｅｕ （配列番号：２３）、Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｌｅｕ （配列番号：２４）、Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｌｅｕ （配列番号：２５）、またはＡｒｇ Ｍｅｔ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｖａｌ （配列番号：２６）を含む、あるいはからなるペプチド、およびこれらの変異型ＷＴ１ペプチドなどが挙げられるが、これらに限定されない。その他のキラーＷＴ１ペプチドの例としては、国際出願公開公報ＷＯ２０００／０１８７９５（出典明示によりその全内容を本明細書に取り入れる）に記載されたものが挙げられるが、これらに限定されない。

【0022】

ヘルパーＴ細胞を活性化するＷＴ１ペプチド（本発明においてヘルパーＷＴ１ペプチドと称する）は、多くのものが公知である。一般に、好ましいヘルパーＷＴ１ペプチドは１０〜２５個のアミノ酸からなるアミノ酸配列を有する。より好ましいヘルパーＷＴ１ペプチドは１３〜２０個のアミノ酸からなるアミノ酸配列を有する。本発明に使用可能なヘルパーＷＴ１ペプチドの例としては、下記アミノ酸配列：Ａｌａ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ （配列番号：２７）、Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｇｌｙ （配列番号：２８）、Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｇｌｙ （配列番号：２９）、Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｃｙｓ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｔｒｐ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｌｅｕ （配列番号：３０）、Ｐｈｅ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｖａｌ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｒｇ （配列番号：３１）、またはＬｙｓ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｈｉｓ （配列番号：３２）を含む、あるいはからなるペプチド、およびこれらの変異型ＷＴ１ペプチドが例示されるが、これらに限定されない。

【0023】

本発明の医薬組成物に使用するＷＴ１ペプチドは１種類であってもよく、複数種類であってもよい。また、本発明の医薬組成物に使用するＷＴ１ペプチドはキラーＷＴ１ペプチドであってもよく、あるいはヘルパーＷＴ１ペプチドであってもよく、これらを混合して用いてもよい。

【0024】

本発明においてＷＴ１ペプチドの二量体を用いてもよい。ＷＴ１ペプチドの二量体は、システイン残基を有する２つのＷＴ１ペプチド間にジスルフィド結合を形成させることによって得てもよい。

【0025】

本発明の医薬組成物に使用するＷＴ１ペプチドは１種類であってもよく、あるいは複数種類であってもよい。ＷＴ１ペプチドが対象において眼内血管新生病の治療効果を発揮するかどうかは、ＷＴ１ペプチドが対象のＨＬＡ型に対応するかどうかによる。現在、多くのＷＴ１ペプチドに関して、どのＨＬＡ型に適合するのか知られているので、本発明に用いるＷＴ１ペプチドを、対象のＨＬＡ型に応じて選択することができる。また、本発明の医薬組成物に複数種類のＷＴ１ペプチドを使用して、幅広い対象に対応するようにしてもよい。

【0026】

例えば、対象がＨＬＡ−Ａ^＊０２０１陽性である場合は、本発明の医薬組成物に用いられる好ましいＷＴ１ペプチドとしては、下記アミノ酸配列：Ａｓｐ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｖａｌ （配列番号：３３）、Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｌｅｕ （配列番号：１）、またはＳｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｖａｌ （配列番号：１８）を含む、あるいはからなるペプチド、および上記アミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸が置換、欠失または付加されているアミノ酸配列を含む、あるいはからなるペプチドなどが例示されるが、これらに限定されない。

【0027】

例えば、対象がＨＬＡ−Ａ^＊２６０１陽性である場合には、下記アミノ酸配列：Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｔｙｒ （配列番号：７）、Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｔｙｒ （配列番号：８）、またはＡｓｐ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ａｒｇ （配列番号：３４）を含む、あるいはからなるペプチド、および上記アミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸が置換、欠失または付加されているアミノ酸配列を含む、あるいはからなるペプチドなどが例示されるが、これらに限定されない。

【0028】

例えば、対象がＨＬＡ−Ａ^＊３３０３陽性である場合には、下記アミノ酸配列：Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｒｇ （配列番号：１０）、Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｒｇ （配列番号：１１）、Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｇｌｎ Ａｒｇ （配列番号：１２）、またはＴｈｒ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ａｒｇ （配列番号：１３）を含む、あるいはからなるペプチド、および上記アミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸が置換、欠失または付加されているアミノ酸配列を含む、あるいはからなるペプチドなどが例示されるが、これらに限定されない。

【0029】

例えば、対象がＨＬＡ−Ａ^＊１１０１陽性である場合には、下記アミノ酸配列：Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ （配列番号：３５）、Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ａｒｇ （配列番号：１４）、Ａｒｇ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｌｙｓ （配列番号：３６）、Ｓｅｒ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ａｒｇ （配列番号：１５）、Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ （配列番号：１６）、Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ｃｙｓ Ｌｙｓ （配列番号：１７）、Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ａｒｇ （配列番号：３７）、Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ａｒｇ Ｔｒｐ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｇｌｎ Ｌｙｓ （配列番号：３８）、またはＡｓｎ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｌｙｓ （配列番号：３９）を含む、あるいはからなるペプチド、および上記アミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸が置換、欠失または付加されているアミノ酸配列を含む、あるいはからなるペプチドなどが例示されるが、これらに限定されない。

【0030】

例えば、対象がＨＬＡ−Ａ^＊２４０２陽性である場合には、下記アミノ酸配列：Ｃｙｓ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｔｒｐ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｌｅｕ （配列番号：９）、またはＣｙｓ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｔｒｐ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｌｅｕ （配列番号：１９）を含む、あるいはからなるペプチド、配列番号：９のアミノ酸配列を含む、あるいはからなるペプチドの二量体、配列番号：９のアミノ酸配列を含む、あるいはからなるペプチドのシスチン体、および上記アミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸が置換、欠失または付加されているアミノ酸配列を含む、あるいはからなるペプチドなどが例示されるが、これらに限定されない。

【0031】

例えば、対象がＨＬＡ−ＤＲＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、またはＨＬＡ−ＤＱＢ１陽性である場合には、下記アミノ酸配列：Ａｌａ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ （配列番号：２７）、Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｇｌｙ （配列番号：２８）、Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｇｌｙ （配列番号：２９）、Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｃｙｓ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｔｒｐ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｌｅｕ （配列番号：３０）、Ｐｈｅ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｖａｌ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｒｇ （配列番号：３１）、またはＬｙｓ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｈｉｓ （配列番号：３２）を含む、あるいはからなるペプチド、および上記アミノ酸配列において１個ないし数個のアミノ酸が置換、欠失または付加されているアミノ酸配列を含む、あるいはからなるペプチドなどが例示されるが、これらに限定されない。

【0032】

本発明の医薬組成物中の有効成分として、ＷＴ１ペプチドをコードするポリヌクレオチドを用いてもよい。ポリヌクレオチドの塩基配列は、ＷＴ１ペプチドのアミノ酸配列に基づき決定できる。ポリヌクレオチドは、例えば、化学合成法などの公知のＤＮＡまたはＲＮＡ合成方法、ＰＣＲ法などにより製造することができる。

【0033】

本発明の医薬組成物を、血管新生病の治療および予防のいずれかまたは両方に用いられる医薬と併用してもよい。血管新生病の治療および予防のいずれかまたは両方に用いられる医薬としては、ベバシズマブ、セツキシマブ、パニツムマブなどが挙げられるが、これらに限定されない。眼内血管新生病の治療および予防のいずれかまたは両方に用いられる医薬としては、アフリベルセプト、ペガプタニブナトリウム、ラニビズマブなどの血管内皮細胞増殖因子阻害剤などが挙げられるが、これらに限定されない。

【0034】

本発明の医薬組成物により治療されうる眼内血管新生病としては、眼内血管新生病が、滲出型加齢黄斑変性、近視性黄斑変性、網膜色素線条症、中心性漿液性脈絡網膜症、種々の網膜色素上皮症、脈絡膜萎縮症、コロイデレミア、脈絡膜骨腫、糖尿病網膜症、未熟児網膜症、血管新生緑内障および角膜血管新生などが挙げられるがこれらに限定されない。

【0035】

本発明の医薬組成物の投与経路は特に限定されないが、好ましい投与経路の例として皮内投与、皮下投与、経皮投与、点眼、点鼻、舌下などの経粘膜投与が挙げられる。

【0036】

本発明の医薬組成物の剤形は特に限定されず、例えば注射用液剤、点眼用液剤、点鼻用液剤、ローション剤、クリーム剤、パッチ剤、舌下錠、トローチなどの剤形であってもよい。これらの剤形は当業者によく知られた方法により製造することができ、投与することができる。

【0037】

本発明の医薬組成物を用いる場合のＷＴ１ペプチドの投与量は、ＷＴ１ペプチドの種類、投与経路、剤形、疾患の種類、疾患の程度、対象の健康状態などを考慮して、適宜変更することができる。一般的には、ＷＴ１ペプチドの投与量は成人１日当たり０．１μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇである。ＷＴ１ペプチドの種類、投与経路、剤形についても同様に適宜変更することができる。本発明の医薬組成物は、医薬上許容される担体や賦形剤のほかに、例えば水酸化アルミニウムのごとき適当なアジュバントを含んでいてもよい。あるいは本発明の医薬組成物は、リポソーム中に封入されたＷＴ１ペプチドを含むものであってもよい。

【0038】

もう１つの態様において、本発明は、眼内血管新生病の治療及び予防のいずれか又は両方のためのＷＴ１ペプチドの使用に関する。さらなる態様において、本発明は、眼内血管新生病の治療及び予防のいずれか又は両方のための医薬の製造のためのＷＴ１ペプチドの使用に関する。さらにもう１つの態様において、本発明は、眼内血管新生病の治療及び予防のいずれか又は両方を必要とする対象にＷＴ１ペプチドを投与することを特徴とする、眼内血管新生病の治療及び予防のいずれか又は両方のための方法も関する。これらの態様においても、上記の説明があてはまる。

【0039】

さらなる態様において、本発明は、眼内血管新生病の治療及び予防のいずれか又は両方のためのＷＴ１ペプチドによって誘導または活性化された抗原提示細胞またはキラーＴ細胞またはヘルパーＴ細胞を含む医薬組成物に関する。さらに本発明は、眼内血管新生病の治療及び予防のいずれか又は両方のためのＷＴ１ペプチドによって誘導または活性化された抗原提示細胞またはキラーＴ細胞またはヘルパーＴ細胞の使用に関する。また本発明は、眼内血管新生病の治療及び予防のいずれか又は両方のための医薬の製造のためのＷＴ１ペプチドによって誘導または活性化された抗原提示細胞またはキラーＴ細胞またはヘルパーＴ細胞の使用に関する。さらにもう１つの態様において、本発明は、眼内血管新生病の治療及び予防のいずれか又は両方を必要とする対象にＷＴ１ペプチドによって誘導または活性化された抗原提示細胞またはキラーＴ細胞またはヘルパーＴ細胞を投与することを特徴とする、眼内血管新生病の治療及び予防のいずれか又は両方のための方法にも関する。これらの態様においても、上記の説明があてはまる。

【0040】

抗原提示細胞またはキラーＴ細胞またはヘルパーＴ細胞の誘導または活性化方法は当業者に公知である。インビボでは、ＷＴ１ペプチドを対象に投与することにより、これらの細胞を誘導または活性化することができる。インビトロにおいては、例えば、対象由来のリンパ球を含む試料と、ＷＴ１ペプチドとＨＬＡ分子との複合体とを反応させることにより、キラーＴ細胞を得てもよい。また例えば、対象由来の末梢血単核球をＷＴ１ペプチドの存在下で培養し、該末梢血単核球からＷＴ１特異的ＣＴＬを誘導してもよい。また例えば、対象由来の未熟抗原提示細胞をＷＴ１ペプチドの存在下で培養することにより、ＨＬＡ分子を介してＷＴ１ペプチドを提示する抗原提示細胞を誘導してもよい。未熟抗原提示細胞は、成熟して抗原提示細胞となり得る細胞をいい、未熟樹状細胞などが例示される。また例えば、ＷＴ１ペプチドを抗原提示細胞に添加して、ヘルパーＴ細胞を活性化してもよい。本発明の医薬組成物に使用する抗原提示細胞またはキラーＴ細胞またはヘルパーＴ細胞は、いずれのＷＴ１ペプチドを用いて誘導または活性化されたものであってもよい。このようにして誘導または活性化された抗原提示細胞またはキラーＴ細胞またはヘルパーＴ細胞を対象に、好ましくはこれらの細胞を得た対象に投与して、眼内血管新生病の治療及び予防を行うことができる。

【0041】

以上の説明において、主に眼内血管新生病の治療および／または予防に関するものであるが、以上の説明は、他の血管新生病についても当てはまる。

【0042】

以下に実施例を示して本発明をより詳細かつ具体的に説明するが、実施例は本発明を限定するものと解してはならない。

【実施例1】

【0043】

実施例１：マウスレーザー惹起脈絡膜血管新生モデルを用いたＷＴ１ペプチドワクチンの治療効果の実証
１．実験方法
１−１．被験物質
被験物質として２種のＷＴ１ペプチド：ＷＴ１_１２６（Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｌｅｕ （配列番号：１））およびＷＴ１_３５（Ａｌａ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ （配列番号：２７））を用いた。

【0044】

１−２．使用動物
雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（日本クレアから供給）を用いた。試験開始時においてマウスは８週齢（体重約２０〜２５ｇ）であった。飼育飼料（オリエンタル酵母社製）および水道水をマウスに自由摂取させた。各投与群につき６匹のマウスを用いた。

【0045】

１−３．投与量および投与方法
ＷＴ１ペプチドとし、ＷＴ１_１２６あるいはＷＴ１_３５を２２．７ ｍｇ／ｍＬとなるよう滅菌済みＰＢＳに溶解した。これを滅菌済みＰＢＳにて０．２２７および２．２７ ｍｇ／ｍＬに希釈した。これらＷＴ１溶液とＭｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ５１ ＶＧを体積比１：１．２７となるよう混合し、０．１μｌ／μＬ、１μｌ／μＬ、１０μｌ／μＬのエマルションを調製した。それぞれ１０μＬ／ｂｏｄｙとして皮内投与した。投与用量は１μｇ／ｂｏｄｙ、１０μｇ／ｂｏｄｙ、１００μｇ／ｂｏｄｙであった。投与時期は、光凝固から１５、２２、２９および３６日後とした。

【0046】

具体的には、被験物質（ＷＴ１ペプチド）投与群（１〜４群）のマウスには、以下の手順により投与を行った。
（１）１４日後の蛍光漏出面積から群分けを行った。
（２）光凝固１５、２２、２９、３６日後に、体重測定および一般症状観察を行った。
（３）バリカンにて腹部の毛刈りを行い、３０Ｇ針を用いて皮内投与した。

【0047】

試験群（各６匹）の構成を表１にまとめた。

【表1】

【0048】

１−４．光凝固および眼底撮影
以下の手順にて行った。
（１）体重測定および一般症状観察を行った。
（２）ミドリンＰ（参天製薬社製）により散瞳させたのち、ケタラール注射液およびセラクタール注射液の混合液（７：１）を１ｍＬ／ｋｇ筋肉内投与することにより全身麻酔を行った。
（３）光凝固は、マルチカラーレーザー光凝固装置（赤色）（ＮＩＤＥＫ社製）を使用し、スポットサイズ５０μｍ、出力６０ｍＷ、凝固時間０．１秒の凝固条件で行った。
（４）組織観察用カバーグラスをコンタクトレンズとして、眼底後極部に散在性に太い網膜血管を避けて、４個の光凝固を行った。
（５）光凝固後速やかに、Micron III（Phenix Research社製）にて眼底撮影を行った。
（６）ヒアレイン点眼液を両眼に点眼した。

【0049】

１−５．蛍光眼底造影
以下の手順にて行った。
（１）光凝固後１４、２１、２８、３５、４２日後に、体重測定および一般症状観察を行った。
（２）ミドリンＰにより散瞳させたのち、ケタラール注射液（第一三共社製）およびセラクタール注射液（バイエル社製）の混合液（７：１）を１ｍＬ／ｋｇ筋肉内投与することにより全身麻酔を行った。
（３）フルオレサイト０．１ｍＬ／ｋｇ（Alcon社製）を尾静脈から注入して、
Micron IIIにて蛍光眼底造影を行った。
（４）画像解析ソフトを用いて、蛍光漏出面積を求めた。

【0050】

１−６．観察、測定、検査項目等のまとめ
これらを図１にまとめた。

【0051】

１−７．データ解析
データ解析には、Microsoft EXCELを用いた結果を平均値±標準偏差で表した。統計解析には、EXSUS version 8.0.0（SAS ver.9.3 株式会社ＣＡＣエクシケア）を用い、多群比較（１群 ｖｓ ２、３、４群）はDunnett typeを選択し多重比較検定を行った。有意水準はいずれも５％未満とした。

【0052】

２．実験結果
光凝固から２週間後および６週間後に蛍光眼底造影を行って血管新生を調べた結果を図２に示す。光凝固から６週間後のＷＴ１ペプチド（ＷＴ１_１２６）を投与したマウスの眼底の血管新生は、ＰＢＳ投与群のマウスを投与したマウスと比較して、著しく抑制されていた。

【0053】

光凝固から２、３、４および６週間後に蛍光眼底造影を行って、脈絡膜新生血管領域の経時変化を調べた。ＷＴ１_１２６を投与したマウスのデータを図３に、ＷＴ１_３５を投与したマウスのデータを図４に示す。いずれのＷＴ１ペプチドを用いたマウスにおいても、ＷＴ１ペプチド投与による脈絡膜新生血管領域の減少が見られた。
ＷＴ１_１２６投与群では、１μｇ／ｂｏｄｙ、１０μｇ／ｂｏｄｙ、１００μｇ／ｂｏｄｙのいずれの投与量であってもＰＢＳ投与群と比較して脈絡膜新生血管領域が減少した。特に、ＷＴ１_１２６を１００μｇ／ｂｏｄｙ投与した群では有意な減少効果が見られ、光凝固から６週間後において脈絡膜新生血管領域は、光凝固から２週間後の約５０％にまで減少した。一方、ＰＢＳ投与群では、光凝固から６週間後において脈絡膜新生血管領域は、光凝固から２週間後の約２３０％に増加した。
ＷＴ１_３５投与群においても、１μｇ／ｂｏｄｙ、１０μｇ／ｂｏｄｙ、１００μｇ／ｂｏｄｙのいずれの投与量であっても脈絡膜新生血管領域の減少傾向が見られた。光凝固から６週間後において脈絡膜新生血管領域は、光凝固から２週間後の約５０％にまで減少した。

【実施例2】

【0054】

被験物質として２種のＷＴ１ペプチド：ＷＴ１_２３５ｍ（Ｃｙｓ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｔｒｐ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｌｅｕ （配列番号：１９））およびＷＴ１_３３２（Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｈｉｓ （配列番号：３２））を用い、以下のように投与群を設定して、実施例１と同様の方法・手順にて実験を行った。なお、ＷＴ１_２３５ｍは、ＷＴ１_２３５（配列番号：９）の２位のメチオニンをチロシンに置換したペプチドである。

【表2】

【0055】

光凝固から２、３、４、５および６週間後に蛍光眼底造影を行って、脈絡膜新生血管領域の経時変化を調べた。結果を図５に示す。ＷＴ１_２３５ｍ、ＷＴ１_３３２いずれのＷＴ１ペプチドを投与したマウスにおいても、ＰＢＳ投与群と比較して、ＷＴ１ペプチド投与による脈絡膜新生血管領域の減少が見られた。ＷＴ１_３３２投与群においては、光凝固から６週間後において脈絡膜新生血管領域は、光凝固から２週間後の約７０％にまで減少した。ＷＴ１_２３５ｍ投与群においては、光凝固から６週間後において脈絡膜新生血管領域は、光凝固から２週間後と変わらず、増加が抑制されていた。

【実施例3】

【0056】

ＷＴ１ペプチド（ＷＴ１_１２６、ＷＴ１_２３５ｍおよびＷＴ１_３３２）とアフリベルセプトを併用した場合の脈絡膜新生血管領域の変化を経時的に調べた。投与群を以下のように設定した（併用群は３、４および５）。アフリベルセプトの投与は、レーザー投与日にマウスの右目に硝子体内投与した。

【表3】

【0057】

結果を図６に示す。ＷＴ１ペプチドをアフリベルセプトと併用した場合にも、脈絡膜新生血管領域の減少または増加抑制が確認され、併用効果が確認された。

【0058】

以上の実験結果から、癌抗原ペプチドであるＷＴ１ペプチドが血管新生病の治療に有効であることが確認された。

【産業上の利用可能性】

【0059】

本発明は、癌抗原ペプチドを含む血管新生病の治療及び予防のいずれか又は両方のための医薬組成物を提供するものであるから、特に医薬品の分野において利用可能である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【配列表】

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