特許 6286031 化合物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6286031

(24)【登録日】2018年2月9日

(45)【発行日】2018年2月28日

(54)【発明の名称】化合物

(51)【国際特許分類】

   C07D 471/04 20060101AFI20180215BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20180215BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20180215BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20180215BHJP

   A61K 31/437 20060101ALI20180215BHJP

【ＦＩ】

   C07D471/04 103H

   C07D471/04CSP

   A61P35/00

   A61P15/00

   A61K45/00

   A61K31/437

【請求項の数】25

【全頁数】113

(21)【出願番号】特願2016-516235(P2016-516235)

(86)(22)【出願日】2014年5月27日

(65)【公表番号】特表2016-522835(P2016-522835A)

(43)【公表日】2016年8月4日

(86)【国際出願番号】GB2014051607

(87)【国際公開番号】WO2014191726

(87)【国際公開日】20141204

【審査請求日】2017年5月29日

(31)【優先権主張番号】61/827,951

(32)【優先日】2013年5月28日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/915,685

(32)【優先日】2013年12月13日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】300022641

【氏名又は名称】アストラゼネカ アクチボラグ

(74)【代理人】

【識別番号】100140109

【弁理士】

【氏名又は名称】小野 新次郎

(74)【代理人】

【識別番号】100075270

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 泰

(74)【代理人】

【識別番号】100101373

【弁理士】

【氏名又は名称】竹内 茂雄

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100122644

【弁理士】

【氏名又は名称】寺地 拓己

(72)【発明者】

【氏名】アクタル，ナディム

(72)【発明者】

【氏名】ブラッドベリー，ロバート・ヒュー

(72)【発明者】

【氏名】バター，デヴィッド

(72)【発明者】

【氏名】カーリー，ゴードン・スチュアート

(72)【発明者】

【氏名】デ サヴィ，クリストファー

(72)【発明者】

【氏名】ドナルド，クレイグ・サミュエル

(72)【発明者】

【氏名】ノーマン，リチャード・アルバート

(72)【発明者】

【氏名】オズボーン，マシュー

(72)【発明者】

【氏名】ラボー，アルフレッド・アーサー

(72)【発明者】

【氏名】レッドファーン，ヘザー・マリー

(72)【発明者】

【氏名】ウィリアムス，ヘレン・エリザベス

(72)【発明者】

【氏名】ヤヴァリ，ネダ

【審査官】 土橋 敬介

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１２−５２８１９２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００７−５１８８２２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００７−５００７０５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平１１−３４９５２７（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ

Ａ６１Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）

【化1】

［式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ＨまたはＦであり；
Ｒ^３は、Ｈまたはメチルであり；
ａ）Ｒ^４は、Ｈであり、Ｒ^５は、Ｆであるか；または
ｂ）Ｒ^４は、Ｆであり、Ｒ^５は、Ｈであるか
のいずれかである］
の化合物またはその医薬的に許容される塩。

【請求項2】

前記化合物が、式（ＩＡ）

【化2】

の化合物である、請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。

【請求項3】

Ｒ^３が水素である、請求項１または２に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。

【請求項4】

Ｒ^３がメチルである、請求項１または２に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。

【請求項5】

Ｒ^４が水素であり、Ｒ^５がフルオロである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。

【請求項6】

Ｒ^５が、水素であり、Ｒ^４が、フルオロである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。

【請求項7】

前記化合物が、
（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（３−フルオロ−４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；および
（Ｅ）−３−［４−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−ジュウテリオ−２−（２−フルオロ−２−メチル−プロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル］−３，５−ジフルオロ−フェニル］プロパ−２−エン酸
から選択される、請求項１に記載の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩。

【請求項8】

以下の化学構造：

【化3】

を有する、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸またはその医薬的に許容される塩である、請求項７に記載の化合物。

【請求項9】

（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸である、化合物。

【請求項10】

（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸のマレイン酸塩である、化合物。

【請求項11】

２θ＝８．４°および１０．９°において少なくとも２つの特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する結晶性形態であり、当該ピークは当該値の±０．２°（２θ）の範囲に観測されてもよい、化合物（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸。

【請求項12】

２θ＝８．４°、１０．９°、１８．３°、２４．０°および１４．０°において特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する結晶性形態であり、当該ピークは当該値の±０．２°（２θ）の範囲に観測されてもよい、化合物（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸。

【請求項13】

２θ＝８．４°、１０．９°、１８．３°、２４．０°、１４．０°、１９．０°、１４．４°、１３．０°、１５．３°および２０．６°において特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する結晶性形態であり、当該ピークは当該値の±０．２°（２θ）の範囲に観測されてもよい、化合物（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸。

【請求項14】

実質的に図２で示されるようなＸＲＰＤを有する結晶性形態の、化合物（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸。

【請求項15】

実質的に図８で示されるようなＸＲＰＤを有する結晶性形態の、化合物（１Ｒ，３Ｒ）−１−｛４−［（Ｅ）−２−カルボキシエテニル］−２，６−ジフルオロフェニル｝−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ベータ−カルボリン−２−イウムマレエート。

【請求項16】

医薬品として使用するための、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。

【請求項17】

ヒトなどの温血動物におけるがんの予防または処置に使用するための、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。

【請求項18】

（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸、またはその医薬的に許容される塩である、請求項１７に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。

【請求項19】

乳がんまたは婦人科系がんの処置で使用するための、請求項１７または１８に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。

【請求項20】

活性成分としての請求項１〜１５のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩と、少なくとも１つの医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーとを含む医薬組成物。

【請求項21】

少なくとも１つの医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーを伴って、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸、またはその医薬的に許容される塩を含み、組成物中の（Ｒ，Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−２−イウム−１−イル）フェニル）アクリレートの含有量が５％ｗ／ｗ未満である、請求項２０の医薬組成物。

【請求項22】

前記組成物が、抗酸化剤をさらに含み、金属−キレート剤をさらに含んでいてもよい、請求項２１に記載の医薬組成物。

【請求項23】

請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩と、別の抗腫瘍剤とを含む、がんの処置での使用に好適な組み合わせ。

【請求項24】

化合物が（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸、またはその医薬的に許容される塩である、請求項２３に記載の組み合わせ。

【請求項25】

追加の抗腫瘍剤がパルボシクリブである、請求項２３または２４に記載の組み合わせ。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、抗がん活性を有し、したがってヒトまたは動物の体の処置方法において有用な可能性がある、所定の新規のインドール誘導体またはそれらの医薬的に許容される塩に関する。また本発明は、前記インドール誘導体、それらを含有する医薬組成物を製造するための方法、およびがんの予防または処置における使用などの、治療方法におけるそれらの使用、例えばヒトなどの温血動物におけるがんの予防または処置に使用するための医薬品の製造におけるそれらの使用にも関する。

【0002】

本発明はまた、エストロゲン受容体の選択的な下方調節因子であるインドール誘導体にも関する。

【背景技術】

【0003】

エストロゲン受容体アルファ（ＥＲα、ＥＳＲ１、ＮＲ３Ａ）およびエストロゲン受容体ベータ（ＥＲβ、ＥＳＲ２、ＮＲ３ｂ）は、大きい核内受容体ファミリーの一員であるステロイドホルモン受容体である。ＥＲａは、全ての核内受容体と同様に構造化されると、６つの機能性ドメイン（Ａ〜Ｆと命名）で構成され（Dahlman-Wrightら、Pharmacol. Rev.、2006、58：773〜781）、それが特異的なリガンドである雌性ステロイドホルモン１７ｂエストラジオール（Ｅ２）と会合した後、その複合体は、エストロゲン受容体エレメント（ＥＲＥ）と命名されたゲノム配列に結合し、標的遺伝子の転写をモジュレートするための共調節因子と相互作用することから、ＥＲａはリガンド依存性転写因子として分類される。ＥＲα遺伝子は６ｑ２５．１に位置し、５９５ＡＡのタンパク質をコードしており、オルタナティブスプライシングおよび翻訳開始部位によって複数のアイソフォームが生産される可能性がある。この受容体は、ＤＮＡ結合ドメイン（ドメインＣ）およびリガンド結合ドメイン（ドメインＥ）に加えて、Ｎ末端（Ａ／Ｂ）ドメイン、ＣドメインとＥドメインとを連結するヒンジ（Ｄ）ドメイン、およびＣ末端伸長（Ｆドメイン）を含有する。ＥＲａおよびＥＲｂのＣおよびＥドメインは完全に保存されているが（それぞれ９６％および５５％のアミノ酸同一性）、Ａ／Ｂ、ＤおよびＦドメインの保存は非保存的である（３０％未満のアミノ酸同一性）。どちらの受容体も雌性生殖器官の調節および発達に関与し、加えて、中枢神経系、心臓血管系において、さらには骨代謝において役割を果たす。受容体がＥＲＥと直接結合するとき（直接の活性化または古典的経路）または間接的に結合するとき（間接的な活性化または非古典的経路）、ＥＲのゲノム作用は、細胞の細胞核で起こる。ＥＲは、リガンドの非存在下で、ヒートショックタンパク質のＨｓｐ９０およびＨｓｐ７０と会合し、会合したシャペロン機構が、リガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）を安定化させて、ＥＲがリガンドに接近できるようにする。リガンドが結合したＥＲは、ヒートショックタンパク質から解離して、二量体化、ＤＮＡ結合、共活性化因子または共抑制因子との相互作用、および標的遺伝子発現のモジュレーションをもたらす受容体におけるコンフォメーション変化を起こす。非古典的経路では、ＡＰ−１およびＳｐ−１が、遺伝子発現をモジュレートするために受容体の両方のアイソフォームによって使用される代替の調節ＤＮＡ配列である。この例において、ＥＲは、ＤＮＡと直接相互作用しないが、他のＤＮＡとの会合を介して、転写因子、例えばｃ−Ｊｕｎまたはｃ−Ｆｏｓと結合する（Kushnerら、Pure Applied Chemistry 2003、75：1757〜1769）。ＥＲが遺伝子転写に影響を与える正確なメカニズムは十分理解されていないが、ＤＮＡが結合した受容体によって動員される多数の核因子が介在すると考えられる。共調節因子の動員は、主として２つのタンパク質表面、ＡＦ２およびＡＦ１が介在し、これらはそれぞれＥドメインおよびＡ／Ｂドメインに位置する。ＡＦ１は、増殖因子によって調節され、その活性は細胞およびプロモーター環境に依存するが、それに対してＡＦ２は、全体的に活性に関してリガンド結合に依存する。これら２つのドメインは独立して作用する可能性があるが、最大のＥＲ転写活性は、これら２つのドメインを介した相乗的な相互作用を介して達成される（Tzukermanら、Mol. Endocrinology、1994、8：21〜30）。ＥＲは転写因子と考えられているが、これらはまた、Ｅ２投与後の組織における、ゲノム作用にとっては迅速すぎると考えられる時間スケールの急速なＥＲ作用で証明されるように、非ゲノム機構を介して作用する可能性もある。それでもなお、エストロゲンの急速な作用に関与する受容体が、同じ核のＥＲであるか、または別個のＧタンパク質共役ステロイド受容体であるかはわかっていないが（Warnerら、Steroids 2006 71:91〜95）、例えばＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路および内皮型一酸化窒素合成酵素およびＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路の活性化など、ますます多くのＥ２によって誘導された経路が同定されつつある。リガンド依存性の経路に加えて、ＥＲαは、増殖因子シグナル伝達、例えばインスリン様増殖因子１（ＩＧＦ−１）および上皮増殖因子（ＥＧＦ）を介したＭＡＰＫの刺激と関連するＡＦ−１を介したリガンドとは無関係の活性を有することが示された。ＡＦ−１の活性は、Ｓｅｒ１１８のリン酸化に依存しており、ＥＲと増殖因子シグナル伝達とのクロストークの例は、ＩＧＦ−１およびＥＧＦなどの増殖因子に応答したＭＡＰＫによるＳｅｒ１１８のリン酸化である（Katoら、Science、1995、270：1491〜1494）。

【0004】

多数の構造的に別個の化合物が、ＥＲに結合することが示されている。内因性リガンドＥ２などのいくつかの化合物は受容体アゴニストとして作用するが、対してそれ以外のものはＥ２結合を競合的に阻害し、受容体アンタゴニストとして作用する。これらの化合物は、それらの機能的な作用に応じて２つのクラスに分けることができる。タモキシフェンなどの選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）は、細胞およびプロモーターコンテクスト、加えて標的化されたＥＲアイソフォームに応じて、受容体アゴニストおよびアンタゴニストの両方として作用する能力を有する。例えばタモキシフェンは、乳房ではアンタゴニストとして作用するが、骨、心臓血管系および子宮では部分アゴニストとして作用する。全てのＳＥＲＭが、ＡＦ２アンタゴニストとして作用して、ＡＦ１を介してそれらの部分アゴニストの特徴を引き出すと考えられる。第二のグループは、例えばフルベストラントが挙げられるが、完全アンタゴニストとして分類され、化合物結合時のリガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）における独特なコンフォメーション変化を誘導し、それによりへリックス１２とＬＢＤの残部との相互作用を完全に阻止して、補因子の動員をブロックすることを介して、ＡＦ１およびＡＦ２ドメインの完全な阻害によってエストロゲン活性をブロックすることができる（Wakelingら、Cancer Res.、1991、51：3867〜3873；Pikeら、Structure、2001、9：145〜153）。

【0005】

ＥＲαの細胞内レベルは、Ｅ２の存在下で、ユビキチン／プロテオソーム（Ｕｂ／２６Ｓ）経路を介して下方調節される。リガンドが結合したＥＲαのポリユビキチニル化は、少なくとも３種の酵素によって触媒される。つまり、ユビキチン活性化酵素Ｅ１によって活性化されたユビキチンは、Ｅ２によりリシン残基と、Ｅ３ユビキチンリガーゼによるイソペプチド結合を介してコンジュゲートされ、次いでポリユビキチン化したＥＲαは、分解のためにプロテオソームに向けられる。ＥＲ依存性転写調節とプロテオソーム介在のＥＲ分解は連動しているにもかかわらず（Lonardら、Mol. Cell、2000 5：939〜948）、それ自身における転写はＥＲα分解に必要ではなく、核におけるプロテオソーム分解のためにＥＲαを標的化するには、転写開始複合体の組立てで十分である。このＥ２によって誘導された分解プロセスは、細胞の増殖、分化および代謝にとっての必要条件に応答して転写を急速に活性化するその能力に必要であると考えられる（Stenoienら、Mol. Cell Biol.、2001、21：4404〜4412）。またフルベストラントは、２６Ｓプロテオソーム経路を介してＥＲαの急速な下方調節も誘導できるアンタゴニストの部分集合である、選択的エストロゲン受容体下方調節因子（ＳＥＲＤ）としても分類される。対照的に、タモキシフェンなどのＳＥＲＭは、転写への作用がＳＥＲＤで見られる作用に類似しているが、ＥＲαレベルを増加させることができる。

【0006】

乳がんのおよそ７０％が、ＥＲおよび／またはプロゲステロン受容体を発現することから、これらの腫瘍細胞は成長に関してホルモン依存性であることが示唆される。卵巣および子宮内膜がんなどの他のがんも、成長に関してＥＲαシグナル伝達に依存すると考えられる。このような患者のための療法は、例えば、閉経前および閉経後両方の状況における初期および進行中のＥＲ陽性乳がんを処置するのに使用されるタモキシフェンのように、ＥＲに結合するリガンドに拮抗すること；例えば、タモキシフェンまたはアロマターゼ阻害剤を用いた療法を行ったにもかかわらず乳がんが進行した女性においてそれを処置するのに使用されるフルベストラントのように、ＥＲαに拮抗してそれを下方調節すること；または例えば、初期および進行中のＥＲ陽性乳がんを処置するのに使用されるアロマターゼ阻害剤のように、エストロゲン合成をブロックすることのいずれかによって、ＥＲシグナル伝達を阻害することができる。これらの療法は乳がんの処置に極めて良い効果を示したが、ＥＲを発現する腫瘍を有する患者の相当数が、既存のＥＲ療法に対してデノボ耐性を示すか、または時間が経つにつれてこれらの療法に耐性を発生させる。初発のタモキシフェン療法に対する耐性を説明するためのいくつかの別個のメカニズムが説明されており、このようなメカニズムは主として、タモキシフェン−ＥＲα複合体に結合する所定の補因子のより低い親和性をこれらの補因子の過剰発現により相殺すること、またはタモキシフェン−ＥＲα複合体と、通常はこの複合体に結合しない補因子との相互作用を容易にする第二の部位を形成することのいずれかによって、アンタゴニストとして作用するタモキシフェンをアゴニストに切り替えることを含む。それゆえに耐性は、タモキシフェン−ＥＲα活性を駆動させる特異的な補因子を発現する細胞が成長した結果として生じると推測できる。また、他の増殖因子シグナル伝達経路が、ＥＲ受容体または共活性化因子を直接活性化して、リガンドのシグナル伝達とは無関係に細胞増殖を駆動させる可能性もある。

【0007】

つい最近になって、ＥＳＲ１における突然変異が、１７〜２５％の様々な頻度で、転移性ＥＲ陽性患者由来の腫瘍サンプルおよび患者由来の異種移植片モデル（ＰＤＸ）において可能性のある耐性メカニズムであると同定された。これらの突然変異は、そこに限定されるわけではないがリガンド結合ドメインにおいて優勢であり、突然変異した機能性タンパク質をもたらす。アミノ酸変化の例としては、Ｓｅｒ４６３Ｐｒｏ、Ｖａｌ５４３Ｇｌｕ、Ｌｅｕ５３６Ａｒｇ、Ｔｙｒ５３７Ｓｅｒ、Ｔｙｒ５３７ＡｓｎおよびＡｓｐ５３８Ｇｌｙが挙げられ、アミノ酸５３７および５３８における変化が、現在説明されている変化の大部分を構成する。これまでに、これらの突然変異は、がんゲノムアトラス（the Cancer Genome Atlas）データベースで特徴付けられた原発性乳房サンプルからのゲノム中では検出されていない。３９０種のＥＲ発現陽性原発性乳がんサンプルのうち、ＥＳＲ１において一つの突然変異も検出されなかった（Cancer Genome Atlas Network、2012 Nature490：61〜70）。リガンド結合ドメインの突然変異は、アロマターゼ阻害剤による内分泌療法に対する耐性応答として発達したと考えられるが、これは、これらの突然変異受容体が、エストラジオールの非存在下で基底の転写活性を示すためである。アミノ酸５３７および５３８で突然変異したＥＲの結晶構造から、両方の突然変異体は、へリックス１２の位置をシフトさせることによってＥＲのアゴニストのコンフォメーションのほうを選び、それにより共活性化因子を動員して、アゴニストによって活性化された野生型ＥＲを模擬することが示された。公開されたデータから、タモキシフェンおよびフルベストラントなどの内分泌療法は、それでもなおＥＲ突然変異体に結合し、転写活性化をある程度阻害できること、さらにフルベストラントは、Ｔｒｙ５３７Ｓｅｒを分解させることができるが、完全に受容体を阻害するにはより多くの用量が必要になる場合があることが示された（Toyら、Nat. Genetics 2013、45：1439〜1445；Robinsonら、Nat. Genetics 2013、45：144601451；Li, S.ら、Cell Rep. 4、1116〜1130 （2013）。したがって、この段階ではＥＳＲ１突然変異が臨床転帰の変更と関連するかどうかは不明であるが、式（Ｉ）の所定の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が、突然変異ＥＲを下方調節し拮抗する可能性があるという説は蓋然性がある。

【0008】

どの耐性メカニズムまたはメカニズムの組み合わせが起こるかに関係なく、多くは、それでもなおＥＲ依存性活性に頼っており、それによるＳＥＲＤメカニズムを介した受容体の除去は、細胞からＥＲα受容体を除去する最良の方法を提供する。フルベストラントは、臨床用途に承認された現在のところ唯一のＳＥＲＤであるが、その機械論的な特性にもかかわらず、現状では一か月の用量が５００ｍｇと制限されており、そのためインビトロの乳房細胞株実験で見られる受容体の完全な下方調節と比較して患者サンプル中の受容体の転換が５０％未満しか生じないことから、この薬物の薬理学的特性はその効能を制限してきた（Wardellら、Biochem. Pharm.、2011、82：122〜130）。したがって、初期の転移性および獲得耐性の状況において利益の増大をもたらすのに必要な医薬特性およびＳＥＲＤメカニズムを有する、新しいＥＲを標的とする薬剤が求められている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0009】

【特許文献1】Dahlman-Wrightら、Pharmacol. Rev.、2006、58：773〜781

【特許文献2】Kushnerら、Pure Applied Chemistry 2003、75：1757〜1769

【特許文献3】Tzukermanら、Mol. Endocrinology、1994、8：21〜30

【特許文献4】Warnerら、Steroids 2006 71:91〜95

【特許文献5】Katoら、Science、1995、270：1491〜1494

【特許文献6】Wakelingら、Cancer Res.、1991、51：3867〜3873

【特許文献7】Pikeら、Structure、2001、9：145〜153

【特許文献8】Lonardら、Mol. Cell、2000 5：939〜948

【特許文献9】Stenoienら、Mol. Cell Biol.、2001、21：4404〜4412）

【特許文献10】Cancer Genome Atlas Network、2012 Nature490：61〜70

【特許文献11】Toyら、Nat. Genetics 2013、45：1439〜1445

【特許文献12】Robinsonら、Nat. Genetics 2013、45：144601451

【特許文献13】Li, S.ら、Cell Rep. 4、1116〜1130 （2013）

【特許文献14】Wardellら、Biochem. Pharm.、2011、82：122〜130

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0010】

本発明の化合物は、悪性疾患に起因する制御不能な細胞増殖の阻害において有用な、強力な抗腫瘍活性を所有することを見出した。本発明の化合物は、最低限ＳＥＲＤとして作用することにより抗腫瘍作用を提供する。

【課題を解決するための手段】

【0011】

本発明の一形態によれば、式（Ｉ）

【0012】

【化1】

【0013】

［式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ＨまたはＦであり；
Ｒ^３は、Ｈまたはメチルであり；
ａ）Ｒ^４は、Ｈであり、Ｒ^５は、Ｆであるか；または
ｂ）Ｒ^４は、Ｆであり、Ｒ^５は、Ｈであるか
のいずれかである］
の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

【0014】

本発明の別の形態において、上記で定義した通りの式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0015】

式（Ｉ）の化合物は、１、２または３つのキラル中心を有し、本発明は、純粋なキラル形態またはあらゆる比率のそれらの混合物を包含する。光学的に活性な形態の合成は、当業界において周知の有機化学の標準的な技術によって、例えば光学的に活性な出発原料からの合成またはラセミ体の分割によって実行されてもよい。同様に、上述の活性は、標準的な実験技術を使用して評価することができる。

【0016】

本明細書で説明される化合物の特定のエナンチオマーまたはジアステレオ異性体が、同じ化合物の他のエナンチオマーまたはジアステレオ異性体より活性な場合もある。

【0017】

本発明のさらなる形態によれば、≧９５、≧９８％または≧９９％のエナンチオマー過剰率（％ｅｅ）で存在する単一のエナンチオマーである、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。都合のよい形態としては、単一のエナンチオマーは、≧９９％のエナンチオマー過剰率（％ｅｅ）で存在する。

【0018】

本発明のさらなる形態によれば、医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、≧９５、≧９８％または≧９９％のエナンチオマー過剰率（％ｅｅ）で存在する単一のエナンチオマーである、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩を含む医薬組成物が提供される。都合のよい形態としては、単一のエナンチオマーは、≧９９％のエナンチオマー過剰率（％ｅｅ）で存在する。

【0019】

本発明のさらなる形態によれば、≧９５、≧９８％または≧９９％のジアステレオマー過剰率（％ｄｅ）で存在する単一のジアステレオ異性体である、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。都合のよい形態としては、単一のジアステレオ異性体は、≧９９％のジアステレオマー過剰率（％ｄｅ）で存在する。

【0020】

本発明のさらなる形態によれば、医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、≧９５、≧９８％または≧９９％のジアステレオマー過剰率（％ｄｅ）で存在する単一のジアステレオ異性体である、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩を含む医薬組成物が提供される。都合のよい形態としては、単一のジアステレオ異性体は、≧９９％のジアステレオマー過剰率（％ｄｅ）で存在する。

【0021】

１つの特定の形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＡ）：

【0022】

【化2】

【0023】

の化合物である。

【0024】

別の形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＢ）：

【0025】

【化3】

【0026】

の化合物である。

【0027】

本明細書において式（Ｉ）の化合物という場合、特に他の指定がない限り、式（ＩＡ）の化合物および／または（ＩＢ）も指すと理解されるものとする。

【0028】

例えば、実施例１の化合物、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸は、式（ＩＡ）の化合物の例である。

【0029】

【化4】

【0030】

その異性体である、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｓ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸は、式（ＩＢ）の化合物の例である。

【0031】

【化5】

【0032】

これらの２種の異性体は両方、式（Ｉ）の化合物の例である（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸の例である。

【0033】

【化6】

【0034】

いくつかの式（Ｉ）の化合物は、結晶質である可能性もあり、１種より多くの結晶性形態を有する可能性がある。本発明は、ＳＥＲＤ活性において有用な特性を有するあらゆる非晶質形態、またはそれらの混合物を包含することが理解されるものとし、後述する標準的な試験によってＳＥＲＤ活性に関する非晶質形態の効能を決定する方法は、当業界において周知である。

【0035】

一般的に、結晶質材料は、Ｘ線粉末回折（以降、ＸＲＰＤ）分析、示差走査熱量測定（以降、ＤＳＣ）、熱重量分析（以降、ＴＧＡ）、拡散反射率赤外フーリエ変換（ＤＲＩＦＴ）分光法、近赤外（ＮＩＲ）分光法、液相および／または固相核磁気共鳴分光法などの従来の技術を使用して分析できることが公知である。このような結晶質材料の含水量は、カール・フィッシャー分析によって決定することもできる。

【0036】

一例として、実施例７の化合物は結晶性を示し、１種の結晶性形態が同定されている。

【0037】

したがって、本発明のさらなる形態は、（Ｅ）−３−（４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸（実施例７）の形態Ａである。

【0038】

本発明のさらなる形態によれば、およその２シータ＝４．５°において少なくとも１つの特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、結晶性形態である実施例７の形態Ａが提供される。

【0039】

本発明のさらなる形態によれば、およその２シータ＝１０．８°において少なくとも１つの特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、結晶性形態である実施例７の形態Ａが提供される。

【0040】

本発明のさらなる形態によれば、およその２シータ＝４．５および１０．８°において少なくとも２つの特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、結晶性形態である実施例７の形態Ａが提供される。

【0041】

本発明のさらなる形態によれば、およその２シータ＝４．５、４．８、６．１、７．９、９．９、１０．８、１３．４、１４．０、１４．３および１８．５°で特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、結晶性形態である実施例７の形態Ａが提供される。

【0042】

本発明によれば、図１に示されたＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、結晶性形態である実施例７の形態Ａが提供される。

【0043】

本発明のさらなる形態によれば、およその２シータ＝４．５°のプラスまたはマイナス０．２°の２シータにおいて少なくとも１つの特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、結晶性形態である実施例７の形態Ａが提供される。

【0044】

本発明のさらなる形態によれば、およその２シータ＝１０．８°のプラスまたはマイナス０．２°の２シータにおいて少なくとも１つの特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、結晶性形態である実施例７の形態Ａが提供される。

【0045】

本発明のさらなる形態によれば、およその２シータ＝４．５および１０．８°のプラスまたはマイナス０．２°の２シータにおいて少なくとも２つの特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、結晶性形態である実施例７の形態Ａが提供される。

【0046】

本発明のさらなる形態によれば、およその２シータ＝４．５、４．８、６．１、７．９、９．９、１０．８、１３．４、１４．０、１４．３および１８．５°、のプラスまたはマイナス０．２°の２シータで特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、結晶性形態である実施例７の形態Ａが提供される。

【0047】

さらに実施例１は、結晶性も示す。

【0048】

本発明によれば、およその２シータ＝８．４°において少なくとも１つの特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸の結晶性形態である形態Ｂが提供される。

【0049】

本発明によれば、およその２シータ＝１０．９°において少なくとも１つの特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸の結晶性形態である形態Ｂが提供される。

【0050】

本発明によれば、およその２シータ＝８．４°および１０．９°において少なくとも２つの特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸の結晶性形態である形態Ｂが提供される。

【0051】

本発明によれば、およその２シータ＝８．４、１０．９、１８．３、２４．０および１４．０°において特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸の結晶性形態である形態Ｂが提供される。

【0052】

本発明によれば、およその２シータ＝８．４、１０．９、１８．３、２４．０、１４．０、１９．０、１４．４、１３．０、１５．３、２０．６°において特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸の結晶性形態である形態Ｂが提供される。

【0053】

本発明によれば、図２に示されたＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸の結晶性形態である形態Ｂが提供される。

【0054】

本発明によれば、２シータ＝８．４°のプラスまたはマイナス０．２°の２シータにおいて少なくとも１つの特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸の結晶性形態である形態Ｂが提供される。

【0055】

本発明によれば、２シータ＝１０．９°のプラスまたはマイナス０．２°の２シータにおいて少なくとも１つの特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸の結晶性形態である形態Ｂが提供される。

【0056】

本発明によれば、２シータ＝８．４°および１０．９°において少なくとも２つの特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸の結晶性形態である形態Ｂが提供され、ここで前記値は、プラスまたはマイナス０．２°の２シータであってもよい。

【0057】

本発明によれば、およその２シータ＝８．４、１０．９、１８．３、２４．０および１４．０°において特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸の結晶性形態である形態Ｂが提供され、ここで前記値は、プラスまたはマイナス０．２°の２シータであってもよい。

【0058】

本発明によれば、２シータ＝８．４、１０．９、１８．３、２４．０、１４．０、１９．０、１４．４、１３．０、１５．３、２０．６°において特定のピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸の結晶性形態である形態Ｂが提供され、ここで前記値は、プラスまたはマイナス０．２°の２シータであってもよい。

【図面の簡単な説明】

【0059】

【図1】図１は、実施例７の形態ＡのＸ線粉末回折パターンを示す。

【図2】図２は、実施例１の形態ＢのＸ線粉末回折パターンを示す。

【図3】図３は、実施例１の形態ＢのＤＳＣサーモグラムを示す。

【図4】図４は、実施例１の形態ＡのＸ線粉末回折パターンを示す。

【図5】図５は、実施例１の形態ＡのＴＧＡサーモグラムを示す。

【図6】図６は、実施例１の形態ＣのＸ線粉末回折パターンを示す。

【図7】図７は、実施例１の形態ＣのＴＧＡサーモグラムを示す。

【図8】図８は、実施例１１のＸ線粉末回折パターンを示す。

【図9】図９は、実施例１１のＤＳＣトレースを示す。

【図10】図１０は、実施例１およびＡＺＤ２０１４を用いたＭＣＦ−７異種移植片研究の結果を示す。

【図11】図１１は、実施例１を用いたＨＣＣ１４２８長期エストロゲン枯渇（ＬＴＥＤ）異種移植片の効能研究の結果を示す。

【図12】図１２は、実施例１を用いたＨＣＣ１４２８長期エストロゲン枯渇（ＬＴＥＤ）異種移植片の効能研究の結果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0060】

本発明が実施例１の形態Ｂの結晶性形態に関すると述べられる場合、結晶性の程度は、都合のよい形態としては約６０％より高く、より都合のよい形態としては約８０％より高く、好ましくは約９０％より高く、より好ましくは約９５％より高い。最も好ましくは、結晶性の程度は、約９８％より高い。

【0061】

さらに、本発明が実施例１の形態Ｂの結晶性形態に関すると述べられる場合、好ましくは、その材料は、他の結晶性形態または非晶質の材料を実質的に含まない。「実質的に含まない」は、本発明者らによれば、単一の多形が、都合のよい形態としては約６０％より多い、より都合のよい形態としては約８０％より多い、好ましくは約９０％より多い、より好ましくは約９５％より多い、最も好ましくは約９８％より多いことを意味する。

【0062】

Ｘ線粉末回折パターンの２シータ値は、装置ごとに、またはサンプルごとにわずかに異なっている可能性があるため、引用された値は絶対的と解釈されないことが理解されるものとする。

【0063】

測定条件（例えば使用される器具または装置）に応じて、１つまたはそれより多くの測定誤差を有するＸ線粉末回折パターンが得られる可能性があることが知られている。特定には、Ｘ線粉末回折パターンの強度は、測定条件に応じて変動する可能性があることが一般的に公知である。それゆえに、上述した本発明の結晶性形態は、特に他の指定がない限り、関連する図に示されるＸ線粉末回折パターンに同一なＸ線粉末回折パターンを示す結晶に限定されず、これらの図に示されるものと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを示すあらゆる結晶が、本発明の範囲内に含まれることが理解されるものとする。Ｘ線粉末回折分野の当業者は、Ｘ線粉末回折パターンの実質的な同一性を判断することができる。

【0064】

またＸ線粉末回折分野の当業者は、ピークの相対強度は、例えば、サンプルの分析に影響を与える可能性がある３０マイクロメートルを超えるサイズの粒子や不統一なアスペクト比によって影響される可能性があることも認識していると予想される。また当業者は、反射の位置は、回折計においてサンプルが設置される正確な高さおよび回折計のゼロ較正によって影響される可能性があることも認識していると予想される。サンプル表面の平面性も小さい作用を有する可能性がある。したがって提示される回折パターンデータは、絶対値として解釈されないものとする（Jenkins, RおよびSnyder, R.L. 「Introduction to X-Ray Powder Diffractometry」、John Wiley & Sons 1996；Bunn, C.W.（1948）、Chemical Crystallography、Clarendon Press、ロンドン；Klug, H.P.およびAlexander, L.E.（1974）、X-Ray Diffraction Proceduresを参照）。

【0065】

一般的に、Ｘ線粉末回折データにおける回折角度の測定誤差は、およそプラスまたはマイナス０．２°の２シータであり、このような測定誤差の程度が、Ｘ線粉末回折データを検討する際に考慮に入れられると予想される。さらに、強度は、実験条件およびサンプル調製（好ましい方向）に応じて変動する可能性があることが理解されるものとする。

【0066】

本発明の特定の化合物は各実施例であり、それぞれは、本発明のさらなる独立した形態を提供する。本発明のさらなる特定の化合物は、実施例の医薬的に許容される各塩（複数可）であり、それぞれは、本発明のさらなる独立した形態を提供する。

【0067】

本発明のさらなる形態によれば、本明細書で開示されたような実施例のいずれかに従って入手可能な式（Ｉ）の化合物が提供される。

【0068】

さらなる特徴は、本明細書で定義されたあらゆる範囲であるが、ただし実施例１、２、３などの具体的な実施例は個々に特許請求されない。

【0069】

当業者であれば、所定の式（Ｉ）の化合物は非対称に置換された炭素原子を含有することから、光学的に活性ラセミ体で存在し単離される場合があることを理解すると予想される。いくつかの式（Ｉ）の化合物は、多形を示す可能性がある。本発明は、ＳＥＲＤとして有用な特性を有する、あらゆるラセミの、光学的に活性な、多形性もしくは立体異性の形態、またはそれらの混合物を包含すると理解されるものとし、光学的に活性な形態を調製する方法（例えば、再結晶技術によるラセミ体の分割、光学的に活性な出発原料からの合成、キラル合成、酵素による分割、生体内変換、またはキラル固定相を使用したクロマトグラフィーによる分離によって）、および後述する標準的な試験によってＳＥＲＤとしての効能を決定する方法は、当業界において周知である。

【0070】

上記で定義された所定の式（Ｉ）の化合物は、互変異性の現象を示す可能性があると理解されるものとする。本発明は、その定義に、このような互変異性の、ＳＥＲＤ活性を有するあらゆる形態、またはそれらの混合物を包含し、式の描画に利用された、または実施例で命名されたいずれか１種の互変異性の形態のみに限定されないと理解されるものとする。一般的に、このような互変異性のいずれかの形態のうちの１つが、以下に記載の実施例において命名されるか、または以下に記載のあらゆる関連する式の描画において示されるに過ぎない。

【0071】

本発明は、本発明の化合物に存在する原子の全ての同位体を包含することが意図される。同位体は、同じ原子番号を有するが質量数が異なる原子を包含すると理解されるものとする。例えば、水素の同位体としては、トリチウムおよび重水素が挙げられる。炭素の同位体としては、^１３Ｃおよび^１４Ｃが挙げられる。実施例１の重水素化されたバージョンは、実施例１０に記載される。

【0072】

式（Ｉ）の化合物の好適な医薬的に許容される塩は、例えば、アルカリもしくはアルカリ土類金属の塩、例えばナトリウム、カルシウムもしくはマグネシウムの塩、またはアンモニウム塩、またはメチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ピペリジン、モルホリンもしくはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミンなどの有機塩基との塩である。式（Ｉ）の化合物のさらなる好適な医薬的に許容される塩は、他の金属塩、例えばカリウム、亜鉛、または他のこのような当業界公知の金属カチオンの塩であってもよい。本発明の一形態において、式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容される塩は、金属カチオンとの塩、アンモニウム塩または有機塩基との塩である。

【0073】

式（Ｉ）の化合物のさらなる好適な医薬的に許容される塩は、例えば、式（Ｉ）の化合物の投与後にヒトまたは動物の体内で形成された塩である。

【0074】

また式（Ｉ）の化合物の好適な医薬的に許容される塩は、例えば、式（Ｉ）の化合物の酸付加塩、例えば塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸またはトリフルオロ酢酸などの強い無機酸または有機酸との酸付加塩であってもよい。また式（Ｉ）の化合物の他の可能性のある好適な医薬的に許容される塩は、実施例１に関して後述する通りであってもよい。本発明の別の形態において、式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容される塩は、酸付加塩である。

【0075】

式（Ｉ）の化合物の塩の形成を検証する実験では、実施例１（（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸）が結晶質の塩を形成する可能性が試験された。以下の酸および塩基：酢酸、アジピン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、ケイ皮酸、クエン酸、Ｄ，Ｌ−乳酸、エタンジスルホン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、塩酸、Ｌ−酒石酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、メタンスルホン酸、ナパジシル酸（napadisylic acid）、リン酸、サッカリン、コハク酸、硫酸、トルエンスルホン酸、酢酸カルシウム、ジエチルアミン、エタノールアミン、エチレンジアミン、ヒドロキシエチルピロリジン、酢酸マグネシウム、メグルミン、ピペラジン、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、ｔ−ブチルアミン、トリエタノールアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）およびＮ，Ｎ−ジエチルエタノールアミンが試された。

【0076】

上記の酸および塩基のなかでも、採用される実験条件で、分離可能な固体の塩が必ずしも得られるとは限らず、または結晶性形態で得られるとは限らない。実施例１の好ましい塩としては、結晶性形態で単離され得る塩が挙げられ、例えば、ベンゼンスルホン酸の塩（ベシル酸塩）、コハク酸の塩（コハク酸塩）およびマレイン酸の塩（マレイン酸塩）である。

【0077】

一形態において、実施例１の好適な塩としては、ベシル酸塩、コハク酸塩およびマレイン酸塩を挙げることができる。別の形態において、実施例１の好適な塩は、実施例１１に記載のマレイン酸塩であり得る。

【0078】

さらに、式（Ｉ）の化合物の好適な医薬的に許容される共結晶も本発明の形態を形成することが理解されるものとする。誤解を避けるために、共結晶（co-crystalまたはcocrystal）という用語は、ホストのＡＰＩ（医薬品有効成分）の分子または分子（複数）と、ゲスト（またはコフォーマー（co-former））の分子または分子（複数）とが存在する多成分系を指す。共結晶において、ＡＰＩ分子とゲスト（またはコフォーマー）分子はどちらも、それら単独の純粋な形態では室温において固体として存在する（共結晶を溶媒和物または水和物とを区別するため）。塩は、ＡＰＩ分子とゲスト分子間で有意または完全なプロトン変換が生じているため、この特定の定義からは除外される。共結晶において、ＡＰＩおよびコフォーマー分子は、水素結合および場合によっては他の共有結合以外の相互作用によって相互作用する。医薬的に許容されるコフォーマーとしては、中性分子、例えばニコチンアミド、レソルシノールおよびキシレノール、加えてイオン化可能な分子、例えばシュウ酸、３，５−ジヒドロキシ安息香酸およびイソキノリンが挙げられる（プロトン変換の程度が、塩が形成されるのか、または共結晶が形成されるのかを決定する）。共結晶はそれ自身、水和物などの溶媒和物を形成する可能性があることに留意されたい。

【0079】

さらに、式（Ｉ）の化合物の好適な医薬的に許容される溶媒和物もまた、本発明の形態を形成することが理解されるものとする。好適な医薬的に許容される溶媒和物は、例えば、半水和物、一水和物、二水和物もしくは三水和物などの水和物、またはそれに代わるものである。

【0080】

さらに、式（Ｉ）の化合物の好適な医薬的に許容されるプロドラッグも、本発明の形態を形成することが理解されるものとする。したがって、本発明の化合物は、プロドラッグの形態で投与されてもよく、ここでプロドラッグとは、ヒトまたは動物の体内で分解して本発明の化合物を放出する化合物である。プロドラッグは、本発明の化合物の物理的特性および／または薬物動態学的特性を変更するために使用される場合がある。本発明の化合物が、特性を改変する基を結合させることができる好適な基または置換基を含有する場合に、プロドラッグを形成することができる。プロドラッグの例としては、式（Ｉ）の化合物中のカルボキシ基に形成され得るインビボで切断可能なエステル誘導体が挙げられる。

【0081】

したがって、本発明は、有機合成により入手可能な場合の、およびそれらのプロドラッグの切断によりヒトまたは動物の体内で利用可能な場合の、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物を包含する。したがって、本発明は、有機合成手段によって生産される式（Ｉ）の化合物を包含し、さらに、ヒトまたは動物の体内で前駆化合物の代謝により生産されるような化合物も包含し、すなわち式（Ｉ）の化合物は、合成的に生産された化合物または代謝的に生産された化合物であってもよい。

【0082】

式（Ｉ）の化合物の好適な医薬的に許容されるプロドラッグは、望ましくない薬理活性がなく、さらに不都合な毒性もなく、ヒトまたは動物の体への投与に好適であるという理にかなった医学的判断に基づくものである。

【0083】

プロドラッグの様々な形態は、例えば以下の文書で説明されている。
ａ）Methods in Enzymology、42巻, 309-396頁、K. Widderら編（Academic Press、1985）；
ｂ）Design of Pro-drugs、H. Bundgaard編（Elsevier、1985）；
ｃ）A Textbook of Drug Design and Development、Krogsgaard-LarsenおよびH. Bundgaard編、第5章、「Design and Application of Pro-drugs」、H. Bundgaard著、113〜191頁（1991）；
d）H. Bundgaard、Advanced Drug Delivery Reviews、8、1〜38（1992）；
e）H. Bundgaardら、Journal of Pharmaceutical Sciences、77、285（1988）；
f）N. Kakeyaら、Chem. Pharm. Bull.、32、692（1984）；
g）T. HiguchiおよびV. Stella、「Pro-Drugs as Novel Delivery Systems」、A.C.S. Symposium Series、14巻；および
h）E. Roche（編集者）、「Bioreversible Carriers in Drug Design」、Pergamon Press、1987。

【0084】

カルボキシ基を有する式Ｉの化合物の好適な医薬的に許容されるプロドラッグは、例えば、それらのインビボで切断可能なエステルである。カルボキシ基を含有する式Ｉの化合物のインビボで切断可能なエステルは、例えば、ヒトまたは動物の体内で切断されて親の酸を生じる医薬的に許容されるエステルである。カルボキシの場合の好適な医薬的に許容されるエステルとしては、（１〜６Ｃ）アルキルエステル、例えばメチル、エチルおよびｔｅｒｔ−ブチル、（１〜６Ｃ）アルコキシメチルエステル、例えばメトキシメチルエステル、（１〜６Ｃ）アルカノイルオキシメチルエステル、例えばピバロイルオキシメチルエステル、３−フタリジルエステル、（３〜８Ｃ）シクロアルキルカルボニルオキシ−（１〜６Ｃ）アルキルエステル、例えばシクロペンチルカルボニルオキシメチルおよび１−シクロヘキシルカルボニルオキシエチルエステル、２−オキソ−１，３−ジオキソレニルメチルエステル、例えば５−メチル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イルメチルエステルおよび（１〜６Ｃ）アルコキシカルボニルオキシ−（１〜６Ｃ）アルキルエステル、例えばメトキシカルボニルオキシメチルおよび１−メトキシカルボニルオキシエチルエステルが挙げられる。

【0085】

カルボキシ基を有する式Ｉの化合物の好適な医薬的に許容されるプロドラッグは、例えばインビボで切断可能なアミド、例えばＮ−Ｃ_１〜６アルキルおよびＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ_１〜６アルキル）アミド、例えばＮ−メチル、Ｎ−エチル、Ｎ−プロピル、Ｎ，Ｎ−ジメチル、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルまたはＮ，Ｎ−ジエチルアミドである。

【0086】

式（Ｉ）の化合物のインビボでの作用は、式（Ｉ）の化合物の投与後にヒトまたは動物の体内で形成される１種またはそれより多くの代謝産物によって部分的に発揮される可能性がある。上述したように、式（Ｉ）の化合物のインビボでの作用もまた、前駆化合物（プロドラッグ）の代謝により発揮される可能性がある。

【0087】

以下に示すように、インビトロのヒト系から、実施例１の２種の異性体の活性代謝産物が同定され（ここで上記異性体は、^＊で印を付けられた炭素に存在する両方の立体配置の結果として、ジアステレオマーである）、両方の異性体の合成は、本明細書では実施例１４ＡおよびＢに提示される。

【0088】

【化7】

【0089】

加えて、以下の化合物が、マウスなどの一部の種においては活性代謝産物であると考えられる。

【0090】

【化8】

【0091】

このような活性代謝産物は、本発明のさらなる独立した形態を形成する。

【0092】

誤解を避けるために、本明細書において、基が「上記で定義された（hereinbefore defined）」または「上記で定義された（defined hereinbefore）」で修飾される場合、前記基は、最初に出現した最も広義の定義、加えてその基に関する特定の定義のそれぞれおよび全部を包含すると理解されるものとする。

【0093】

本発明の特定の新規の化合物としては、例えば、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が挙げられ、ここで、特に他の指定がない限り、Ｒ^１およびＲ^２のそれぞれは、上記または下記の記述で定義された意味のいずれかを有する：
一形態において、Ｒ^１は、水素である。別の形態において、Ｒ^１は、フルオロである。

【0094】

一形態においてＲ^２は、水素である。別の形態においてＲ^２は、フルオロである。

【0095】

一形態において、Ｒ^１およびＲ^２の両方は、水素である。別の形態において、Ｒ^１およびＲ^２の両方は、フルオロである。別の形態において、Ｒ^１は、水素であり、Ｒ^２は、フルオロである。

【0096】

一形態において、Ｒ^３は、水素である。別の形態において、Ｒ^３は、メチルである。

【0097】

一形態において、Ｒ^４は、水素であり、Ｒ^５は、フルオロである。別の形態において、Ｒ^５は、水素であり、Ｒ^４は、フルオロである。

【0098】

本発明の特定の化合物は、例えば、以下に記載される実施例中で開示される式（Ｉ）の化合物である。

【0099】

例えば、本発明の特定の化合物は、以下のいずれか１種から選択される式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩である：
（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（３−フルオロ−４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸。

【0100】

本発明のさらなる特定の化合物は、以下のいずれか１種から選択される式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩である：
（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４（１Ｒ）−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４（１Ｒ）−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（４（１Ｒ）−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（４（１Ｒ）−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；
（Ｅ）−３−（３−フルオロ−４（１Ｒ）−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸；および
（Ｅ）−３−［４−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−ジュウテリオ−２−（２−フルオロ−２−メチル−プロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル］−３，５−ジフルオロ−フェニル］プロパ−２−エン酸。

【0101】

本発明の特定の医薬的に許容される塩は、（１Ｒ，３Ｒ）−１−｛４−［（Ｅ）−２−カルボキシエテニル］−２，６−ジフルオロフェニル｝−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ベータ−カルボリン−２−イウムマレエートである。

【0102】

本発明の別の形態は、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩を調製するための方法を提供する。好適な方法は、以下の代表的なプロセスの改変型によって例示され、ここで、特に他の指定がない限り、Ｒ^１〜Ｒ^５は、上記で定義された意味のいずれかを有する。必要な出発原料は、有機化学の標準的手法により得てもよい。このような出発原料の調製は、以下の代表的なプロセスの改変型と共に、添付の実施例の範囲内で説明される。その代わりに、必要な出発原料は、有機化学者の通常の技術の範囲内である例示された手法と類似した手法によって入手可能である。

【0103】

式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）のエステル誘導体の加水分解によって都合よく作製され、ここでＲ^６は、（１〜６Ｃ）アルキル、例えばメチルである。加水分解は、都合のよい形態としては、塩基の存在下で、例えば好適な溶媒中の水酸化ナトリウム（例えばＴＨＦおよびＭｅＯＨ水溶液（または別の類似のアルコール）、または例えばイソプロパノール水溶液などのアルコール水溶液）を使用して、および好適な温度、都合のよい形態としては室温で実行される。

【0104】

【化9】

【0105】

式（ＩＩ）の化合物は、例えば：
ａ）ピクテ−スペングラー反応に好適な当業界において公知の条件下での（例えば、酸（例えば酢酸）の存在下、および好適な溶媒（例えばトルエン）中、および好適な温度（例えば８０℃））での、式（ＩＩＩ）の化合物と式（ＩＶ）の化合物との反応によって；または

【0106】

【化10】

【0107】

ｂ）塩基（例えばアミン塩基、例えばＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン）および好適な極性溶媒（例えばジオキサン）の存在下、好適な温度（例えば室温から９０℃）での、式（Ｖ）の化合物と式（ＶＩ）の化合物（式中、ＬＧは、当業界において公知の脱離基、例えばハロゲン化物またはトリフルオロメタンスルホネート（トリフレート）、都合のよい形態としてはトリフレートである）との反応によって作製してもよい。

【0108】

【化11】

【0109】

式（ＩＩＩ）の化合物は、上記の式（Ｖ）および（ＶＩ）の化合物の反応に関して説明されたような条件下での、式（ＶＩＩ）の化合物と式（ＶＩ）の化合物との反応によって調製され得る。

【0110】

【化12】

【0111】

式（ＩＶ）の化合物は、Ｈｅｃｋ反応に関する当業界において公知の条件下での；すなわち、好適な溶媒（例えばＤＭＡ）中、好適な温度（例えば８０℃）での、アリールホスフィン（例えばトリ−ｏ−トリルホスフィン）、パラジウム触媒（例えば酢酸パラジウム（ＩＩ）および塩基（例えばトリエチルアミン）の存在下での、式（ＶＩＩＩ）の化合物とアクリル酸アルキルエステル（例えばＲ^６がメチルであるアクリル酸メチル）との反応によって調製され得る。

【0112】

【化13】

【0113】

式（Ｖ）の化合物は、上記の式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）の化合物の反応に関して説明された条件に類似した条件を使用した、式（ＶＩＩ）の化合物と式（ＩＶ）の化合物との反応によって調製され得る。

【0114】

ＬＧがトリフレートである式（ＶＩ）の化合物は、以下のスキーム１および２で示すようにして調製され得る。ＬＧがトリフレート以外である式（ＶＩ）の他の化合物は、当業界において公知の類似の方法で調製され得る。

【0115】

【化14】

【0116】

工程１：フッ素化剤、例えばＮ，Ｎ−ジエチル−１，１，２，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−１−アミン／ＤＣＭ／ＲＴ、次いで還元剤、例えば水素化アルミニウムリチウム／ＴＨＦ／ＲＴ
工程２：トリフルオロメタンスルホン酸無水物／塩基、例えば２，６−ルチジン／ＤＣＭ／０℃

【0117】

【化15】

【0118】

工程１：還元剤、例えば水素化アルミニウムリチウム／エーテル／０℃
工程２：トリフルオロメタンスルホン酸無水物／塩基、例えば２，６−ルチジン／ＤＣＭ／−１０℃
式（Ｉ）の化合物は、キラルである。当業者には、望ましい異性体を得るために立体選択的反応を使用できることが理解されると予想される。その代わりに、立体化学は、好適な手段によって、例えば、本明細書では実施例４で例示したように（および例えばJ. Org. Chem. 2009、74、2771〜2779で説明されているように）、保護されたアミン基での中間体の酸性化を介したシスからトランス異性体へのエピマー化によって調整することができる。

【0119】

本発明のさらなる形態において、都合のよい形態としては塩基の存在下で式（ＩＩ）の化合物を加水分解することを含む、式（Ｉ）の化合物を作製するための方法が提供される。

【0120】

上述した方法の改変型における方法の工程の他の順列も可能であることが理解されると予想される。

【0121】

本明細書において上述した方法のいずれかにより得られたあらゆる式（Ｉ）の化合物は、必要に応じて別の式（Ｉ）の化合物に変換できることが理解されると予想される。

【0122】

式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容される塩が必要とされる場合、塩は、例えば前記化合物と好適な塩基との反応により得てもよい。

【0123】

式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容されるプロドラッグが必要とされる場合、プロドラッグは、従来の手法を使用して得てもよい。例えば、式（Ｉ）の化合物のインビボで切断可能なエステルは、例えば、カルボキシ基を含有する式（Ｉ）の化合物と医薬的に許容されるアルコールとの反応により得てもよい。プロドラッグに関するさらなる情報は、上記で示した通りである。

【0124】

また、上述した反応のうちいくつかにおいて、化合物中のいずれかの感受性基を保護することが必要であるかまたは望ましい場合があることが理解されるものと予想される。保護が必要であるかまたは望ましい例、および好適な保護方法は、当業者公知である。従来の保護基は、標準的な技法に従って使用することができる（説明については、T.W. Green、Protective Groups in Organic Synthesis、John Wiley and Sons、1991を参照）。したがって、反応物がアミノ、カルボキシまたはヒドロキシなどの基を包含する場合、本明細書で述べられた反応のうちいくつかにおいてその基を保護することが望ましい場合がある。

【0125】

アミノまたはアルキルアミノ基に関して好適な保護基は、例えば、アシル基、例えばアセチルなどのアルカノイル基、アルコキシカルボニル基、例えばメトキシカルボニル、エトキシカルボニルもしくはｔ−ブトキシカルボニル基、アリールメトキシカルボニル基、例えばベンジルオキシカルボニル、またはアロイル基、例えばベンゾイルである。上記の保護基のための脱保護条件は、必然的に、保護基の選択に応じて様々である。したがって、例えば、アルカノイルもしくはアルコキシカルボニル基またはアロイル基などのアシル基は、例えば、アルカリ金属水酸化物、例えば水酸化リチウムまたは水酸化ナトリウムなどの好適な塩基での加水分解によって除去することができる。その代わりに、ｔ−ブトキシカルボニル基などのアシル基は、例えば、塩化水素酸、硫酸もしくはリン酸またはトリフルオロ酢酸のような好適な酸での処置によって除去することもでき、ベンジルオキシカルボニル基などのアリールメトキシカルボニル基は、例えば、炭素担持パラジウムなどの触媒上での水素添加によって、またはルイス酸、例えばホウ酸トリス（トリフルオロ酢酸塩）での処置によって除去することもできる。一級アミノ基に好適な代替の保護基は、例えばフタロイル基であり、これは、アルキルアミン、例えばジメチルアミノプロピルアミン、またはヒドラジンでの処置によって除去することもできる。

【0126】

ヒドロキシ基にとっての好適な保護基は、例えば、アシル基、例えばアセチルなどのアルカノイル基、アロイル基、例えばベンゾイル、またはアリールメチル基、例えばベンジルである。上記の保護基のための脱保護条件は、必然的に、保護基の選択に応じて様々であると予想される。したがって、例えば、アルカノイルまたはアロイル基などのアシル基は、例えば、アルカリ金属水酸化物、例えば水酸化リチウムまたは水酸化ナトリウムなどの好適な塩基での加水分解によって除去することもできる。その代わりに、ベンジル基などのアリールメチル基は、例えば、炭素担持パラジウムなどの触媒上での水素添加によって除去することもできる。

【0127】

カルボキシ基にとっての好適な保護基は、例えば、エステルを形成する基、例えばメチルまたはエチル基であり、これは、例えば、水酸化ナトリウムなどの塩基での加水分解によって除去することもでき、または例えばｔ−ブチル基であり、これは、例えば、酸、例えばトリフルオロ酢酸などの有機酸での処置によって除去することもでき、または例えばベンジル基であり、これは、例えば、炭素担持パラジウムなどの触媒上での水素添加によって除去することもできる。

【0128】

保護基は、化学技術において周知の従来技術を使用して、合成中のあらゆる都合のよい段階で除去することができる。

【0129】

本明細書で定義された所定の中間体（例えば、式ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩおよびＶＩＩＩの化合物、特に式ＩＩ、ＩＩＩおよび／またはＶの化合物）は新規であり、これらは、本発明のさらなる特徴として提供される。

【0130】

生物学的アッセイ
以下のアッセイを使用して、本発明の化合物の作用を測定した。

【0131】

ＥＲα結合アッセイ
ランザスクリーン（LanthaScreen（商標））時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）検出のエンドポイントを使用した競合アッセイで、単離されたエストロゲン受容体アルファリガンド結合ドメイン（ＥＲアルファ−ＬＢＤ（ＧＳＴ））に結合する化合物の能力を評価した。ランザスクリーンＴＲ−ＦＲＥＴのエンドポイントに関して、好適なフルオロフォア（フルオルモンＥＳ２（Fluormone ES2）、製品コードＰ２６４５）および組換えヒトエストロゲン受容体アルファリガンド結合ドメイン（製品コードＰＶ４５４３）をインビトロジェン（Invitrogen）から購入し、化合物の結合を測定するのに使用した。アッセイの原理は、ＥＲアルファ−ＬＢＤ（ＧＳＴ）を蛍光リガンドに添加すると、受容体／フルオロフォア複合体が形成されることである。テルビウム標識抗ＧＳＴ抗体（製品コードＰＶ３５５１）は、そのＧＳＴタグに結合することにより受容体を間接的に標識するために使用され、競合結合は、蛍光リガンドを置き換えて、その結果としてＴｂ−抗ＧＳＴ抗体とトレーサーとの間のＴＲ−ＦＲＥＴシグナルの損失を引き起こす試験化合物の能力によって検出される。アッセイは以下のようにして行われ、ここで全ての試薬の添加は、ベックマン・コールター（Beckman Coulter）のＢｉｏＲＡＰＴＲ ＦＲＤマイクロフルイディックワークステーションを使用して実行された。

【0132】

１．黒色の低容量の３８４ウェルアッセイプレートに、１２０ｎｌの試験化合物を音響的に分配する。

【0133】

２．ＥＳ２スクリーニング緩衝液中の１×ＥＲアルファ−ＬＢＤ／Ｔｂ−抗ＧＳＴ Ａｂを調製し、２０分間インキュベートする。

【0134】

３．使用前に、ＥＲアルファ−ＬＢＤ／Ｔｂ−抗ＧＳＴ Ａｂ溶液に１×フルオロフォアを添加する。

【0135】

４．アッセイプレートの各ウェルに、１２μｌの１×ＡＲ−ＬＢＤ／Ｔｂ−抗ＧＳＴ Ａｂ／フルオロフォア試薬を分配する。

【0136】

５．アッセイプレートを覆って試薬を光と蒸発から保護し、室温で１時間インキュベートする。

【0137】

６．ＢＭＧ ＰｈｅｒａＳＴＡＲを使用して、３３７ｎｍで励起し、４９０ｎｍおよび５２０ｎｍで各ウェルの蛍光放出シグナルを測定する。

【0138】

ラボサイト（Labcyte）のエコー５５０（Echo 550）を使用して、連続希釈した化合物を含有する化合物源マイクロプレート（４ウェルに、それぞれ１０ｍＭ、０．１ｍＭ、１μＭおよび１０ｎＭの最終的な化合物が含有される）から、化合物をアッセイマイクロプレートに直接投入する。エコー５５０は、ＤＭＳＯ化合物溶液の直接的なマイクロプレートからマイクロプレートへの移動を実行するための音響技術を使用する液体取扱装置であり、このシステムは、異なる源のプレートウェルからの複数の低ｎＬ体積の化合物を移動させ、アッセイ中に望ましい化合物の連続希釈物を得て、次いでこれを、希釈範囲全体にわたりＤＭＳＯ濃度を正規化するために充填し戻すようにプログラム化することができる。合計で１２０ｎＬの化合物とＤＭＳＯとを各ウェルに添加し、それぞれ１００、２９．１７、１０．４２、２．０８３、１、０．２９２、０．１０４、０．０２０８３、０．０１、０．００２９１７、０．００１０４２、０．０００１μＭの最終的な化合物濃度範囲にわたり１２ポイントの濃度応答様式で化合物を試験した。各化合物を用いて得られたＴＲ−ＦＲＥＴ用量反応データを好適なソフトウェアパッケージ（例えばオリジン（Origin）またはジーンデータ（Genedata））にエクスポートし、カーブフィッティング分析を行った。競合的ＥＲアルファ結合をＩＣ_５０値として表した。これは、ＥＲアルファ−ＬＢＤに結合するトレーサー化合物の５０％低減を達成するのに必要な化合物濃度を計算することによって決定された。

【0139】

ＭＣＦ−７ＥＲの下方調節アッセイ
ＭＣＦ−７ヒト腺管癌乳房細胞株を使用した細胞ベースの免疫蛍光アッセイで、エストロゲン受容体（ＥＲ）の数を下方調節する化合物の能力を評価した。２ｍＭのＬ−グルタミンを含有するアッセイ培地（フェノールレッド非含有ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（シグマ（Sigma）Ｄ５９２１）中のクライオバイアル（およそ５×１０^６個の細胞）からＭＣＦ−７細胞を直接再生し、５％（ｖ／ｖ）チャコール／デキストラン処理したウシ胎児血清細胞を、滅菌した１８Ｇ×幅１．５インチ（１．２×４０ｍｍ）ゲージのニードルを使用して一回注入し、コールターカウンター（ベックマン（Beckman））を使用して細胞密度を測定した。細胞を、細胞３．７５×１０^４個／ｍｌの密度にアッセイ培地でさらに希釈し、４０μｌ／ウェルを、サーモ・サイエンティフィック（Thermo Scientific）のマトリックス・ウェルメイト（Matrix WellMate）またはサーモマルチドロップ（Thermo Multidrop）を使用して、底が透明な黒色の組織培養処理済み３８４ウェルプレート（コースター（Costar）、番号３７１２）に添加した。細胞を植え付けた後、３７℃、５％ＣＯ_２（リコニック（Liconic）回転式インキュベーター）で、プレートを一晩インキュベートした。自動化ワークセル（統合型のエコー２ワークセル）の一部であるラボサイト（LabCyte）のエコー（Echo（登録商標））モデル５５５化合物リフォーマッター（compound reformatter）を使用して試験データを作成した。試験化合物の１０ｍＭの化合物ストック溶液を使用して、３８４ウェルの化合物投入プレート（ラボサイトＰ−０５５２５−ＣＶ１）を作製した。それぞれの１０ｍＭの化合物ストック溶液４０μｌを第一の四分円のウェルに分配し、次いで、ハイドラＩＩ（Hydra II）（MATRIX UK）液体操作ユニットを使用してＤＭＳＯでの１：１００の段階的な連続希釈を行い、４０μｌの希釈化合物をそれぞれ四分円のウェル２（０．１ｍＭ）、３（１μＭ）および４（０．０１μＭ）に入れた。源プレート上のＰ列中のウェルに４０μｌのＤＭＳＯを添加することにより、用量範囲全体のＤＭＳＯでの正規化が可能になる。対照ウェルに入れるために、化合物源プレート上の、Ｏ１列に４０μｌのＤＭＳＯを添加し、Ｏ３列にＤＭＳＯ中の１００μＭファスロデックス（Faslodex（登録商標））４０μｌを添加した。エコーは、音響技術を使用して、アッセイプレートに対してＤＭＳＯ化合物溶液の直接的なマイクロプレートからマイクロプレートへの移動を実行する。このシステムは、マイクロプレート間で２．５ｎＬもの少ない体積を複数の増分で移動させ、その際にアッセイプレート中で化合物の連続希釈物を作製し、次いでこれを、希釈範囲全体でＤＭＳＯ濃度を正規化するために充填し戻すようにプログラム化することができる。上記の通りに調製された化合物源プレートを含むセルプレート上に化合物を分配し、統合型エコー２ワークセルを使用して、３倍希釈物と１つの最終的な１０倍希釈物とを含む１２ポイントの重複する３μＭから３ｐＭの用量範囲を作製した。そこで、最大シグナルの対照ウェルにはＤＭＳＯを入れて０．３％の最終濃度を得て、最小シグナルの対照ウェルにはファスロデックス（登録商標）を入れて、１００ｎＭの最終濃度を得た。プレートを３７℃、５％ＣＯ_２で１８〜２２時間さらにインキュベートし、次いで２０μｌの１１．１％（ｖ／ｖ）ホルムアルデヒド溶液（リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中）の添加によって固定し、３．７％（ｖ／ｖ）の最終的なホルムアルデヒド濃度を得た。細胞を室温で２０分間固定し、その後、バイオテック（BioTek）プレートウォッシャーを使用して、２５０μｌのＰＢＳ／プロクリン（殺生保存剤を含むＰＢＳ）で２回洗浄し、次いで全てのウェルに４０μｌのＰＢＳ／プロクリンを添加し、プレートを４℃で保存した。統合型のエコー２ワークセルで上述した固定方法を実行した。自動化オートイライザ（AutoElisa）ワークセルを使用して免疫染色を行った。全てのウェルからＰＢＳ／プロクリンを吸い出し、０．５％トゥイーン（Tween（商標））２０（ｖ／ｖ）を含有する４０μｌのＰＢＳを用いて、細胞を室温で１時間透過化した。２５０μｌのプロクリン（殺生保存剤を含むＰＢＳＴ）を含むＰＢＳ／０．０５％（ｖ／ｖ）トゥイーン２０中でプレートを３回洗浄し、次いで、２０μｌの、ＰＢＳ／トゥイーン（商標）／３％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン中のＥＲα（ＳＰ１）ウサギモノクローナル抗体（サーモフィッシャー（Thermofisher））１：１０００を添加した。プレートを４℃で一晩インキュベートし（リコニック回転式インキュベーター）、次いで、２５０μｌの、プロクリン（ＰＢＳＴ）を含むＰＢＳ／０．０５％（ｖ／ｖ）トゥイーン（商標）２０中で３回洗浄した。次いで、ＰＢＳ／トゥイーン（商標）／３％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン中の１：５０００でヘキストを含む、２０μｌ／ウェルのヤギ抗ウサギＩｇＧアレクサフルオロ（AlexaFluor）５９４またはヤギ抗ウサギアレクサフルオロ４８８抗体（モレキュラープローブス（Molecular Probes））と共にプレートを室温で１時間インキュベートした。次いでプレートを、プロクリン（殺生保存剤を含むＰＢＳＴ）を含む２５０μｌのＰＢＳ／０．０５％（ｖ／ｖ）トゥイーン（商標）２０中で３回洗浄した。各ウェルに２０μｌのＰＢＳを添加し、プレートを黒色のプレートシールで覆い、読取り前に４℃で保存した。各ウェルのＥＲα受容体レベルを測定するために、５９４ｎｍ（２４時間のタイムポイント）または４８８ｎｍ（５時間のタイムポイント）の蛍光を読み取るセロミクス（Cellomics）のアレイスキャンを使用して、プレートを読み取った。平均合計強度を細胞数に正規化し、細胞１つ当たりの合計強度を得た。好適なソフトウェアパッケージ（例えばオリジン）にデータをエクスポートし、カーブフィッティング分析を行った。ＥＲα受容体の下方調節をＩＣ_５０値として表し、これは、平均の最大合計強度シグナルの５０％低減を達成するのに必要な化合物濃度の計算によって決定された。

【0140】

式（Ｉ）の化合物の薬理学的特性は予想した通りに構造変化に応じて変化するが、一般的に、式（Ｉ）の化合物は、上記の試験の１つまたはそれより多くにおいて以下の濃度または用量で活性有することを実証することができる。

【0141】

各実施例につき以下のデータを作成した（以下のデータは、単一の実験または複数の反復実験の平均の結果であり得る）：

【0142】

【表1】

【0143】

単一の薬剤としての実施例１をｍＴＯＲ阻害剤と組み合わせて用いたＭＣＦ−７インビボ異種移植片研究
免疫不全（ＳＣＩＤ）マウス後脇腹に０．５ｍｇ／２１日のエストロゲンペレット（イノベーティブ・リサーチ（Innovative Research）、米国）を外科的に埋め込んだ次の日に、各マウスの皮下に、ＭＣＦ７細胞（５×１０^６個の細胞を１００μｌのＲＰＭＩ細胞培地に懸濁した）を埋め込んだ。腫瘍を週２回測定し、腫瘍体積の変化および成長阻害を、両側に副尺が付いたノギスでの測定（長さ×幅）によって決定し、ここで長さを腫瘍全体で最長の直径とし、幅をそれに対応する垂線とした。腫瘍体積を、式（長さ×幅）×√（長さ×幅）×π／６）を使用して計算した。

【0144】

細胞埋め込みの１３日間後に腫瘍を測定して、マウスを試験グループに無作為化に分けた。次の日に（すなわち細胞埋め込みの１４日後）、化合物での処置を始めた。

【0145】

異なるマウスグループにｍＴＯＲ阻害剤であるＡＺＤ２０１４を、１日１回１５ｍｇ／ｋｇで毎日、０．１ｍｌ／１０ｇの体積で経口（ｐ．ｏ．）投与した。実施例１を、１日１回５ｍｇ／ｋｇとして０．１ｍｌ／１０ｇで経口投与した。１つの動物グループにビヒクルをｐ．ｏ．投与して、対照として利用した。対照グループの活性物質については、マウス９匹／グループを使用した。

【0146】

図１０に、この研究から得られたデータを示す。

【0147】

式（Ｉ）の化合物とＰＩ３Ｋα／δ阻害剤との組み合わせの作用は、上記のｍＴＯＲ阻害剤との組み合わせに類似した方式で研究することができる。

【0148】

ＨＣＣ１４２８長期エストロゲン枯渇（ＨＣＣ１４２８ＬＴＥＤ）異種移植片の効能研究
好適な細胞培養期間の後、ＨＣＣ１４２８ＬＴＥＤ細胞（１×１０^６）を、卵巣摘出術を受けた雌免疫不全ＮＳＧマウス（ジャクソン研究所（Jackson Labs）、米国）後脇腹の皮下に埋め込んだ。腫瘍を週２回測定して、腫瘍体積の変化および成長阻害を、両側に副尺が付いたノギスでの測定（長さ×幅）によって決定し、ここで長さを腫瘍全体で最長の直径とし、幅をそれに対応する垂線とした。腫瘍体積を、式（長さ×幅）×√（長さ×幅）×（π／６）を使用して計算した。細胞埋め込みの後に、平均サイズが１５０ｍｍ^３に達するまで腫瘍を週１回測定し、それに達した時点で、各グループが１０匹のマウスを含有する無作為化した試験グループにマウスを配した。その日の後に（この研究の６２日目に）化合物での処置を始め、腫瘍を週１回測定し続けた。実施例１を、１日１回２５ｍｇ／ｋｇで毎日、０．１ｍｌ／１０ｇの体積で経口（ｐ．ｏ．）投与した。別の動物グループにビヒクルをｐ．ｏ．投与しては、対照として作用した。

【0149】

投与の２８日後、対照処置した腫瘍は、平均して２２０ｍｍ^３に成長したが（相乗平均値を使用）、実施例１で処置したマウスからの腫瘍のサイズは４６ｍｍ^３に減少し、これは腫瘍増殖の１２１％の阻害を表す（対応のないｔ検定により、Ｐ＜０．００１）。

【0150】

異種移植片腫瘍中のエストロゲン受容体タンパク質のレベルを測定するために、ビヒクルまたは実施例１での処置の最終投与から２４時間後に腫瘍サンプルを回収し、液体窒素中で急速冷凍した。タンパク質抽出のために、氷水上の２ｍｌサンプルチューブ中で、シグマ（Sigma）のホスファターゼ阻害剤（１対１００に希釈した番号２（Ｐ５７２６）および番号３（Ｐ００４４））およびロシュ（Roche）のコンプリート（１１８３６１４５００１）プロテアーゼ阻害剤（錠剤１個／５０ｍｌ）、１ｍＭジチオスレイトール（ＤＴＴ）を添加した７００μｌのインビトロジェンの細胞抽出緩衝液（ＦＮＮ００１１）に、腫瘍フラグメントを添加した。ミキサーミル（Mixermill）（レベル２７／秒）３×２分の均質化サイクルを使用してサンプルの均質化を行った。サンプルを短時間で回転させて、完全な腫瘍の均質化を確認した。ホモジネートを１０秒超音波破砕し、次いで最高速度（１３０００ｒｐｍ）の遠心分離機で１５分間遠沈した。上澄み中のタンパク質レベルを測定し、標準的な方法を使用しておよそ４５μｇのタンパク質を１５ウェルのビストリスゲル（４〜１２％ゲル）に泳動させた。タンパク質分離およびニトロセルロースフィルターへの移行後、エストロゲン受容体６８ｋＤａ：サーモフィッシャーＳＰ１番号９１０１Ｓ抗体を添加し、乳汁／ＰＢＳ／Ｔで１：４００に希釈し、４℃で一晩インキュベートした。約２０ｍｌのＴＢＳ／Ｔ０．０５％中でフィルターを３×５分洗浄し、二次抗ウサギ検出抗体をＴＢＳ／Ｔ中の５％マーベル（Marvel）で１：２０００に希釈し、室温で１時間インキュベートした。化学発光性のスーパーシグナル・ウェスト・デュラ（SuperSignal West Dura）長期持続基質を使用してシグナルを検出し、シンジーン（Syngene）ソフトウェアを使用して定量した。ローディング対照として、ビンキュリンタンパク質レベルを、マーベルで１：１０，０００に希釈したＶ９３１シグマおよび抗マウス検出抗体を使用して測定した。図１１および１２に記載の結果は、実施例１での処置により、ビヒクル対照に対して、ＥＲレベルの６０％減少が観察されたことを示す。

【0151】

本発明のさらなる形態によれば、医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩を含む医薬組成物が提供される。

【0152】

錠剤の調合に好適な医薬的に許容される賦形剤としては、例えば、不活性希釈剤、造粒剤および崩壊剤、結合剤、潤滑剤、保存剤ならびに抗酸化剤が挙げられる。さらなる好適な医薬的に許容される賦形剤は、キレート化剤であり得る。錠剤の調合物は、コーティングされていなくてもよいし、または消化管内でのそれらの崩壊とそれに続く活性成分の吸収を改変するため、もしくはそれらの安定性および／もしくは外観を改善するためにコーティングされていてもよく、いずれのケースにおいても、従来のコーティング剤と当業界において周知の手法が使用される。

【0153】

経口で使用するための組成物は、その代わりに、活性成分が不活性な固形希釈剤と混合されているハードゼラチンカプセルの形態であってもよいし、または活性成分が水または油と混合されているソフトゼラチンカプセルの形態であってもよい。

【0154】

水性懸濁液は、一般的に、１種またはそれより多くの懸濁化剤、分散剤または湿潤剤と共に、活性成分を微粉末化した形態で含有する。水性懸濁液はまた、１種またはそれより多くの保存剤、抗酸化剤、着色剤、矯味矯臭剤、および／または甘味剤を含有していてもよい。

【0155】

油性懸濁液は、植物油中に、または鉱油中に活性成分を懸濁することによって製剤化されてもよい。油性懸濁液はまた、増粘剤を含有していてもよい。口当たりのよい経口製剤を提供するために、上記されたものなどの甘味剤、および矯味矯臭剤が添加されてもよい。これらの組成物を、抗酸化剤の添加により保存してもよい。

【0156】

水の添加による水性懸濁液の調製に好適な分散性の粉末および顆粒は、一般的に、分散剤または湿潤剤、懸濁化剤および１種またはそれより多くの保存剤と共に活性成分を含有する。また甘味剤、香料および着色剤などの追加の賦形剤が存在していてもよい。

【0157】

本発明の医薬組成物はまた、水中油型エマルジョンの形態であってもよい。油相は、植物油もしくは鉱油、またはこれらいずれかの混合物であってもよい。エマルジョンはまた、甘味剤、香料および保存剤を含有していてもよい。

【0158】

シロップおよびエリキシルは、甘味剤を用いて製剤化されてもよいし、粘滑剤、保存剤、香料および／または着色剤を含有していてもよい。

【0159】

医薬組成物はまた、滅菌された注射可能な水性または油性懸濁液の形態であってもよく、これは、公知の手法に従って、上述された１種またはそれより多くの適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して製剤化されてもよい。また滅菌注射製剤は、非毒性の非経口的に許容できる希釈剤または溶媒系中の滅菌注射用溶液または懸濁液であってもよい。

【0160】

吸入による投与のための組成物は、微粉化した固体を含有するエアロゾルまたは液滴のいずれかとして活性成分を分配するように準備された、従来の加圧されたエアロゾルの形態であってもよい。揮発性フッ素化炭化水素または炭化水素などの従来のエアロゾル噴射剤を使用することができ、エアロゾルデバイスは、計量された量の活性成分が分配されるようにうまく準備される。また乾燥粉末吸入器も好適であり得る。

【0161】

調合物に関するさらなる情報について、読者は、Comprehensive Medicinal Chemistry（Corwin Hansch；編集長）、Pergamon Press 1990の5巻の25.2章を参照されたい。

【0162】

本発明の一形態において、上述した医薬組成物は、実施例１の化合物［（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸］またはそれらの医薬的に許容される塩を含む。都合のよい形態としては、実施例１の化合物は、本明細書では結晶性形態Ｂと記載されるその多形で存在する。

【0163】

実施例１に記載されたような（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸の合成プロセスによれば、分解産物の形成を回避するために、光の非存在下で、窒素雰囲気下でプロセスを実行することを推奨している。

【0164】

分解産物は、（Ｒ，Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−２−イウム−１−イル）フェニル）アクリレートと称され、以下の構造：

【0165】

【化16】

【0166】

を有し、実施例１の［（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸］から遊離基の連鎖メカニズムを介した空気中での自動酸化により形成される可能性があると考えられる。誤解を避けるために、この分解産物は、有意なＳＥＲＤ活性を有するとは考えられない。

【0167】

この化合物はまた、（Ｅ）−３−［３，５−ジフルオロ−４−［（３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチル−プロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−２−イウム−１−イル］フェニル］プロパ−２−エノエートと称されることもあり、それを作製するための合成方法は、実施例１３に示される。

【0168】

当業者であれば、医薬品の安全な生産および貯蔵にとって、分解産物形成の制御は必須であることを理解しているものと予想される。また当業者であれば、所定の化合物は、医薬組成物に調合した後でさえも、貯蔵時に分解する可能性があること、さらに、このような分解は、いくつかの場合において、医薬組成物中に適切な賦形剤を使用することによって、および／または最終産物を適切に包装することによって制御される可能性があることも理解しているものと予想される。当業者であればさらに、商業的使用のために開発される最終的な調合物は、化学的安定性などに加えて、例えば物理的安定性および溶解特徴などの多数の特徴にとって最適化されている必要があることを理解しているものと予想される。それゆえにこのような調合物は、多数の異なる要素の釣り合いがとれるように開発されると予想される。

【0169】

好適には、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸またはそれらの医薬的に許容される塩の組成物は、抗酸化剤として作用する化合物を包含する。

【0170】

医薬組成物での使用に好適な抗酸化化合物は、当業界において公知であり、そのようなものとしては、例えば、アセトン重亜硫酸ナトリウム；アルファリポ酸；アルファトコフェロール；アスコルビン酸；アスコルビン酸パルミテート；ブチルヒドロキシアニソール；ブチルヒドロキシトルエン；カロテン；クエン酸一水和物；没食子酸ドデシル；エリソルビン酸；フマル酸；グルタチオン；ヒスチジン；次亜リン酸；ラクトビオン酸；リポ酸；リンゴ酸；メラトニン；メチオニン；ｄ−マンノース；モノチオグリセロール；没食子酸オクチル；メタ重亜硫酸カリウム；プロピオン酸；没食子酸プロピル；アスコルビン酸ナトリウム；重亜硫酸ナトリウム；ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム；メタ重亜硫酸ナトリウム；亜硫酸ナトリウム；チオ硫酸ナトリウム；塩化第一スズ；二酸化硫黄；チモール；トコフェロール；トコトリエノール；ユビキノール；尿酸；ビタミンＥ；およびコハク酸ビタミンＥポリエチレングリコールが挙げられる。このような化合物は、様々なメカニズムによってそれらの抗酸化作用を発揮する可能性があり、これらのメカニズムの１つまたはそれより多くは、いずれかの特定の化合物にとって、他のものよりも有効である可能性がある。いくつかの抗酸化化合物、例えばＢＨＡは、遊離基スカベンジャーとして作用する。他の抗酸化剤、例えばメタ重亜硫酸ナトリウムおよびアスコルビン酸は、容易に酸化されるため、活性成分よりも優先的に酸化される可能性がある。

【0171】

例えば、金属によって誘導された過酸化物の形成が酸化メカニズムに関与する場合、あらゆる金属汚染物質を除去することによって間接的に安定化作用を達成するために、例えばＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）などのキレート剤の使用が有用な場合がある。他の金属−キレート剤は、当業界において公知であり、そのようなものとしては、例えば、ベータデクススルホブチルエーテルナトリウム；酢酸カルシウム；クエン酸一水和物；シクロデキストリン；エデト酸二ナトリウム；エデト酸；フマル酸；ガラクトース；グルタミン酸；ヒスチジン；ヒドロキシプロピルベータデクス；リンゴ酸；ペンテト酸；フィトケラチン；ポリ（メチルビニルエーテル／無水マレイン酸）；クエン酸カリウム；クエン酸ナトリウム二水和物；二塩基性リン酸ナトリウム；一塩基性リン酸ナトリウム；酒石酸；およびトレハロースが挙げられる。

【0172】

例えば、実施例１の例示的な調合物に、没食子酸プロピル、メタ重亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸およびブチルヒドロキシアニソールが包含された。さらにＥＤＴＡも包含された。このような調合物の例は、実施例１２として示されている。これらのなかでも、多数の異なる熱および湿度条件下で４週間貯蔵した後、メタ重亜硫酸ナトリウムを含有する組成物の安定性が、抗酸化剤非含有のものよりも低いようであった。多数の異なる熱および湿度条件下で４週間貯蔵した後、アスコルビン酸を含有する組成物が最も安定が高いようであった（液体クロマトグラフィー分析、例えばＵＨＰＬＣによって決定した場合）。

【0173】

実施例１の化合物を含む調合物にとってさらなる好適な添加剤は、低い金属含量の賦形剤、低い過酸化物含量の賦形剤、遊離基スカベンジャーと同時に充填剤でもあるマンニトールなどの賦形剤の使用を包含する。このような調合物の生産プロセスも、安定性に影響する可能性がある。例えば、いくつかの活性成分の場合、最大の安定化を確実にするためには、活性成分と安定性を誘導する賦形剤との確実な均質混合が重要となる可能性がある。均質混合は、例えば、混合速度、粒度および湿式または乾式混合／顆粒化プロセスの影響を受ける可能性がある。活性成分は、抗酸化剤と共に顆粒化して、他の賦形剤と混合してもよい。また医薬組成物の外側にあるあらゆるコーティングに抗酸化剤を添加してもよい。

【0174】

本発明の一形態において、少なくとも１種の医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸またはそれらの医薬的に許容される塩を含む医薬組成物が提供される。

【0175】

本発明の一形態において、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸またはそれらの医薬的に許容される塩を含み、さらに抗酸化剤も含む医薬組成物が提供される。抗酸化剤として、好適にはアスコルビン酸が使用される可能性がある。

【0176】

本発明の一形態において、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸またはそれらの医薬的に許容される塩を含み、さらに金属キレート剤も含む医薬組成物が提供される。金属キレート剤として、好適にはＥＤＴＡが使用される可能性がある。

【0177】

本発明の別の形態において、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸またはそれらの医薬的に許容される塩、抗酸化剤を含み、場合により金属キレート剤をさらに含んでいてもよい、医薬組成物が提供される。

【0178】

本発明の別の形態において、少なくとも１種の医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸またはそれらの医薬的に許容される塩を含む医薬組成物であって、ここで該組成物は、５％ｗ／ｗ未満の（Ｒ，Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−２−イウム−１−イル）フェニル）アクリレートを含有する、上記組成物が提供される。

【0179】

本発明の別の形態において、少なくとも１種の医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸またはそれらの医薬的に許容される塩を含む医薬組成物であって、ここで該組成物は、２％ｗ／ｗ未満の（Ｒ，Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−２−イウム−１−イル）フェニル）アクリレートを含有する、上記組成物が提供される。

【0180】

本発明の別の形態において、少なくとも１種の医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸またはそれらの医薬的に許容される塩を含む医薬組成物であって、ここで該組成物は、１％ｗ／ｗ未満の（Ｒ，Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−２−イウム−１−イル）フェニル）アクリレートを含有する、上記組成物が提供される。

【0181】

本発明の別の形態において、少なくとも１種の医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸またはそれらの医薬的に許容される塩を含む医薬組成物であって、ここで該組成物は、０．５％ｗ／ｗ未満の（Ｒ，Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−２−イウム−１−イル）フェニル）アクリレートを含有する、上記組成物が提供される。

【0182】

本発明の別の形態において、少なくとも１種の医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸またはそれらの医薬的に許容される塩を含む医薬組成物であって、ここで該組成物は、０．１％ｗ／ｗ未満の（Ｒ，Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−２−イウム−１−イル）フェニル）アクリレートを含有する、上記組成物が提供される。

【0183】

本発明の別の形態において、少なくとも１種の医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸またはそれらの医薬的に許容される塩を含む医薬組成物であって、ここで該組成物は、０．０５％ｗ／ｗ未満の（Ｒ，Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−２−イウム−１−イル）フェニル）アクリレートを含有する、上記組成物が提供される。

【0184】

上記の形態において、組成物が、５％ｗ／ｗ、２％ｗ／ｗ、１％ｗ／ｗ、０．５％ｗ／ｗ、０．１％ｗ／ｗまたは０．０５％ｗ／ｗ未満の（Ｒ，Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−２−イウム−１−イル）フェニル）アクリレートを含有すると説明される場合、当業者であれば理解していると予想されるが、これは、組成物中に存在する（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸の重量と比較した、重量に基づく重量パーセンテージを意味すると意図される。

【0185】

それゆえに、分解産物である（Ｒ，Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−２−イウム−１−イル）フェニル）アクリレートは、実施例１の化合物またはそれを含有する医薬組成物の安定性モニターするために、ＨＰＬＣなどの分析技術において、参照マーカーまたは参照標準として使用することができる。

【0186】

単一の剤形を生産するために１種またはそれより多くの賦形剤と組み合わされる活性成分の量は、必然的に、処置される宿主および具体的な投与経路に応じて様々であると予想される。例えば、ヒトへの経口投与は、一般的に、例えば、１ｍｇ〜２ｇの活性物質（より好適には１００ｍｇ〜２ｇ、例えば２５０ｍｇ〜１．８ｇ、例えば５００ｍｇ〜１．８ｇ、特に５００ｍｇ〜１．５ｇ、都合のよい形態としては５００ｍｇ〜１ｇ）を、適切で便利な量の賦形剤と共に配合して投与することを要すると予想され、ここで賦形剤の上記適切で便利な量は、総組成物の約３〜約９８重量パーセントの範囲で様々であり得る。多くの投薬量が必要な場合、複数の剤形を要する場合があることが理解されるものとし、例えば、２つまたはそれより多くの錠剤またはカプセルに、都合よく分割した活性成分の用量をそれぞれに含めることが挙げられる。典型的には、単位剤形は、約１０ｍｇ〜０．５ｇの本発明の化合物を含有すると予想されるが、単位剤形は最大１ｇを含有していてもよい。都合のよい形態としては、単一の固体剤形は、１から３００ｍｇの間の活性成分を含有していてもよい。

【0187】

本発明の化合物の処置または予防目的のための用量の規模は、当然ながら、周知の医療の原則に従って、病状の性質および重症度、動物または患者の年齢および性別ならびに投与経路に従って様々であると予想される。

【0188】

処置または予防目的で本発明の化合物を使用する際、本発明の化合物は、一般的に、例えば１ｍｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の１日用量が取り込まれるように投与されると予想され、必要があれば数回に分けた用量で供与してもよい。一般的に、非経口経路が採用される場合、より低い用量が投与されると予想される。したがって、例えば、静脈内投与の場合、例えば１ｍｇ／ｋｇ体重〜２５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の用量が、一般的に、使用されると予想される。同様に、吸入による投与の場合、例えば１ｍｇ／ｋｇ体重〜２５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の用量が使用されると予想される。しかしながら、特に錠剤形態での経口投与が好ましい。

【0189】

本発明の一形態において、本発明の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩は、１０ｍｇ〜１００ｍｇの式（Ｉ）の化合物（またはそれらの医薬的に許容される塩）を含む錠剤として投与され、ここで１つまたはそれより多くの錠剤は、望ましい用量を達成するのに必要なように投与される。

【0190】

上述したように、ＥＲαを介したシグナル伝達は、がんおよび他の細胞増殖を媒介する、血管新生事象を媒介する、ならびにがん細胞の運動、移動および浸潤を媒介する作用の１つまたはそれより多くにより腫瘍形成を引き起こすことが知られている。本発明の化合物は、腫瘍細胞の増殖および生存ならびに転移性腫瘍細胞の浸潤および移動能をもたらすシグナル伝達工程に関連するＥＲαの拮抗作用および下方調節により得られると考えられる強力な抗腫瘍活性を有することを、本発明者らが発見した。

【0191】

したがって、本発明の化合物は、抗腫瘍剤として、特定には、腫瘍の増殖および生存の阻害ならびに転移性腫瘍増殖の阻害をもたらす、哺乳動物のがん細胞の増殖、生存、運動性、内転移および浸潤の選択的阻害剤として有用である可能性がある。特に、本発明の化合物は、固形腫瘍疾患の封じ込めおよび／または処置における増殖抑制剤および抗浸潤剤として有用である可能性がある。特に、本発明の化合物は、ＥＲαの阻害に対して感受性である腫瘍、さらに、腫瘍細胞の増殖および生存ならびに転移性腫瘍細胞の移動能力および浸潤をもたらすシグナル伝達工程に関連する腫瘍の予防または処置において有用な可能性がある。さらに、本発明の化合物は、ＥＲαの拮抗作用および下方調節が単独または部分的に介在する腫瘍の予防または処置において有用な可能性があり、すなわち本化合物は、処置が必要な温血動物においてＥＲα阻害作用を生じさせるのに使用することができる。

【0192】

本発明のさらなる形態によれば、ヒトなどの温血動物における医薬品として使用するための、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

【0193】

本発明のさらなる形態によれば、ヒトなどの温血動物において増殖抑制作用を生じさせるのに使用するための、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

【0194】

本発明のさらなる形態によれば、固形腫瘍疾患の封じ込めおよび／または処置における抗浸潤剤としてヒトなどの温血動物で使用するための、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

【0195】

本発明のさらなる形態によれば、ヒトなどの温血動物において増殖抑制作用を生じさせるための、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

【0196】

本発明のさらなる形態によれば、ヒトなどの温血動物において増殖抑制作用を生じさせるのに使用するための医薬品の製造における、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

【0197】

本発明のさらなる形態によれば、固形腫瘍疾患の封じ込めおよび／または処置における抗浸潤剤としてヒトなどの温血動物に使用するための医薬品の製造における、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

【0198】

本発明のさらなる形態によれば、処置が必要なヒトなどの温血動物において増殖抑制作用を生じさせるための方法であって、前記動物に、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、上記方法が提供される。

【0199】

本発明のさらなる形態によれば、処置が必要なヒトなどの温血動物において固形腫瘍疾患の封じ込めおよび／または処置により浸潤抑制作用を生じさせるための方法であって、前記動物に、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、上記方法が提供される。

【0200】

本発明のさらなる形態によれば、ヒトなどの温血動物におけるがんの予防または処置に使用するための、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

【0201】

本発明のさらなる形態によれば、ヒトなどの温血動物におけるがんの予防または処置に使用するための医薬品の製造における、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

【0202】

本発明のさらなる形態によれば、処置が必要なヒトなどの温血動物におけるがんを予防または処置するための方法であって、前記動物に、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、上記方法が提供される。

【0203】

本発明のさらなる形態によれば、ヒトなどの温血動物における固形腫瘍疾患の予防または処置に使用するための、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

【0204】

本発明のさらなる形態によれば、ヒトなどの温血動物における固形腫瘍疾患の予防または処置に使用するための医薬品の製造における、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

【0205】

本発明のさらなる形態によれば、処置が必要なヒトなどの温血動物において固形腫瘍疾患を予防または処置するための方法であって、前記動物に、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、上記方法が提供される。

【0206】

本発明のさらなる形態によれば、腫瘍細胞の増殖、生存、浸潤および移動能力をもたらすシグナル伝達工程に関連するＥＲαの阻害に対して感受性である腫瘍の予防または処置に使用するための、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

【0207】

本発明のさらなる形態によれば、腫瘍細胞の増殖、生存、浸潤および移動能力をもたらすシグナル伝達工程に関連するＥＲαの阻害に対して感受性である腫瘍の予防または処置に使用するための医薬品の製造における、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

【0208】

本発明のさらなる形態によれば、腫瘍細胞の増殖、生存、浸潤および移動能力をもたらすシグナル伝達工程に関連するＥＲαの阻害に対して感受性である腫瘍を予防または処置するための方法であって、前記動物に、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、上記方法が提供される。

【0209】

本発明のさらなる形態によれば、ＥＲαに阻害作用を提供することに使用するための、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

【0210】

本発明のさらなる形態によれば、ＥＲαに阻害作用を提供することに使用するための医薬品の製造における、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

【0211】

本発明のさらなる形態によれば、ＥＲαに阻害作用を提供するための方法であって、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、上記方法も提供される。

【0212】

本発明のさらなる形態によれば、ＥＲαに選択的な阻害作用を提供することに使用するための、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

【0213】

本発明のさらなる形態によれば、ＥＲαに選択的な阻害作用を提供することに使用するための医薬品の製造における、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

【0214】

本発明のさらなる形態によれば、ＥＲαに選択的な阻害作用を提供するための方法であって、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、上記方法も提供される。

【0215】

本明細書では、ＥＲαリガンド結合ドメインに結合することができ、選択的エストロゲン受容体分解剤である化合物が説明される。生化学および細胞ベースのアッセイにおいて、本発明の化合物は、強力なエストロゲン受容体結合剤であり、ＥＲαの細胞レベルを低下させることが示され、それゆえに、エストロゲン感受性の疾患または状態（例えば内分泌療法への耐性が発生している疾患など）の処置において、すなわち、乳がんおよび婦人科系がん（例えば子宮内膜がん、卵巣がんおよび子宮頸がんなど）、ならびにデノボ突然変異であり得る、またはアロマターゼ阻害剤などの先行の内分泌療法での処置の結果として生じたＥＲα成熟タンパク質を発現するがんの処置において使用するのに有用な可能性がある。

【0216】

本発明のさらなる形態によれば、乳がんまたは婦人科系がんの処置で使用するための、本明細書の上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

【0217】

本発明のさらなる形態によれば、乳がん、子宮内膜がん、卵巣がんまたは子宮頸がんの処置で使用するための、本明細書の上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

【0218】

本発明のさらなる形態によれば、乳がんの処置で使用するための、本明細書の上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

【0219】

本発明のさらなる形態によれば、乳がんの処置で使用するための、本明細書の上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩であって、該がんが、１種またはそれより多くの他の内分泌療法への耐性を発生させている、上記化合物が提供される。

【0220】

本発明のさらなる形態によれば、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、乳がんまたは婦人科系がんを処置するための方法が提供される。

【0221】

本発明のさらなる形態によれば、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、乳がん、子宮内膜がん、卵巣がんまたは子宮頸がんを処置するための方法が提供される。

【0222】

本発明のさらなる形態によれば、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、乳がんを処置するための方法が提供される。

【0223】

本発明のさらなる形態によれば、乳がんを処置するための方法であって、該がんが、１種またはそれより多くの他の内分泌療法への耐性を発生させており、該方法が、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、上記方法が提供される。

【0224】

本発明のさらなる形態によれば、乳がんまたは婦人科系がんの処置に使用するための医薬品の製造における、本明細書の上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

【0225】

本発明のさらなる形態によれば、乳がん、子宮内膜がん、卵巣がんまたは子宮頸がんの処置に使用するための医薬品の製造における、本明細書の上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

【0226】

本発明のさらなる形態によれば、乳がんの処置に使用するための医薬品の製造における、本明細書の上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

【0227】

本発明のさらなる形態によれば、乳がんの処置に使用するための医薬品の製造における、本明細書の上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の使用であって、該がんが、１種またはそれより多くの他の内分泌療法への耐性を発生させている、上記使用が提供される。

【0228】

本発明の１つの特徴において、処置しようとするがんは、乳がんである。この特徴のさらなる形態において、乳がんは、エストロゲン受容体＋ｖｅ（ＥＲ＋ｖｅ）である。この形態の一実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、別の抗がん剤、例えば本明細書で定義されるような抗ホルモン剤と組み合わせて投与される。

【0229】

本発明のさらなる形態によれば、ＥＲ＋ｖｅ乳がんの処置で使用するための、本明細書の上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

【0230】

本発明のさらなる形態によれば、上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、ＥＲ＋ｖｅ乳がんを処置するための方法が提供される。

【0231】

本発明のさらなる形態によれば、ＥＲ＋ｖｅ乳がんの処置に使用するための医薬品の製造における、本明細書の上記で定義したような式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

【0232】

上述したように、式（Ｉ）の化合物のインビボでの作用は、式（Ｉ）の化合物の投与後にヒトまたは動物の体内で形成された１種またはそれより多くの代謝産物によって部分的に発揮される可能性がある。

【0233】

それゆえに本発明はまた、患者においてＥＲ−αを阻害するための方法であって、患者においてＥＲ−αを阻害するのに有効な量の式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩を患者に投与することを含む、上記方法も考慮する。

【0234】

それゆえに本発明はまた、患者においてＥＲ−αを阻害するための方法であって、患者においてＥＲ−αを阻害するのに有効な量の式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩を患者に投与することを含む、上記方法も考慮する。

【0235】

上記の使用および方法全てにおいて、好適な式（Ｉ）の化合物は、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩である。一形態において、実施例１は、本明細書で説明されているような結晶性形態Ｂである。

【0236】

本明細書で定義された抗癌処置は、単独療法として適用されてもよいし、または本発明の化合物に加えて、従来の外科手術または放射線治療または化学療法を含んでいてもよい。このような化学療法としては、以下の抗腫瘍剤カテゴリーの１種またはそれより多くを挙げることができる：
（ｉ）内科的腫瘍学において使用されるような、他の抗増殖／抗新生物剤およびそれらの組み合わせ、例えば、アルキル化剤（例えばシスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、テモゾロミド（temozolamide）およびニトロソウレア）；代謝拮抗物質（例えばゲムシタビンおよび抗葉酸剤、例えばフルオロピリミジン、例えば５−フルオロウラシルおよびテガフール、ラルチトレキセド、メトトレキセート、シトシンアラビノシド、ならびにヒドロキシ尿素）；抗腫瘍抗生物質（例えばアントラサイクリン、例えばアドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン−Ｃ、ダクチノマイシンおよびミトラマイシン）；細胞分裂抑制薬（例えばビンカアルカロイド、例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびビノレルビン、ならびにタキソイド、例えばタキソールおよびタキソテール、ならびにポロキナーゼ阻害剤）；ならびにトポイソメラーゼ阻害剤（例えばエピポドフィロトキシン、例えばエトポシドおよびテニポシド、アムサクリン、トポテカンならびにカンプトテシン）；
（ｉｉ）抗ホルモン剤、例えば抗エストロゲン剤（例えばタモキシフェン、フルベストラント、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェンおよびヨードキシフェン）、プロゲストゲン（例えば酢酸メゲストロール）、アロマターゼ阻害剤（例えばアナストロゾール、レトロゾール、ボロゾール（vorazole）およびエキセメスタン）；
（ｉｉｉ）増殖因子の機能およびそれらの下流シグナル伝達経路の阻害剤：例えばあらゆる増殖因子または増殖因子受容体の標的のＡｂモジュレーターなど（Sternら、Critical Reviews in Oncology/Haematology、2005、54、11〜29頁で総論されている）；さら例えばこのような標的の小分子阻害剤など、例えばキナーゼ阻害剤、例として、抗ｅｒｂＢ２抗体であるトラスツズマブ［ハーセプチン（Herceptin（商標））］、抗ＥＧＦＲ抗体であるパニツムマブ、抗ＥＧＦＲ抗体であるセツキシマブ［セツキシマブ、Ｃ２２５］およびチロシンキナーゼ阻害剤、例えばｅｒｂＢ受容体ファミリーの阻害剤、例えば上皮増殖因子ファミリー受容体（ＥＧＦＲ／ｅｒｂＢ１）チロシンキナーゼ阻害剤、例えばゲフィチニブまたはエルロチニブ、ｅｒｂＢ２チロシンキナーゼ阻害剤、例えばラパチニブ、ならびに混合されたｅｒｂ１／２阻害剤、例えばアファチニブ（afatanib）など；類似の方策、例えば増殖因子およびそれらの受容体の他のクラス、例えば、ｃ−ｍｅｔおよびｒｏｎなどの肝細胞増殖因子ファミリーまたはそれらの受容体の阻害剤なども利用可能；インスリンおよびインスリン増殖因子ファミリーまたはそれらの受容体（ＩＧＦＲ、ＩＲ）の阻害剤、血小板由来増殖因子ファミリーまたはそれらの受容体（ＰＤＧＦＲ）の阻害剤、ならびにｃ−キット、ＡｎＬＫ、およびＣＳＦ−１Ｒなどの他の受容体チロシンキナーゼが介在するシグナル伝達の阻害剤；
また、ＰＩ３−キナーゼシグナル伝達経路におけるシグナル伝達タンパク質を標的とするモジュレーター、例えば、ＰＩ３Ｋ−α／β／γなどのＰＩ３−キナーゼアイソフォーム、およびＡＫＴ、ｍＴＯＲ（例えばＡＺＤ２０１４）、ＰＤＫ、ＳＧＫ、ＰＩ４ＫまたはＰＩＰ５Ｋなどのｓｅｒ／ｔｈｒキナーゼの阻害剤など；また、上記で列挙されていないセリン／スレオニンキナーゼの阻害剤、例えばｒａｆ阻害剤、例えばベムラフェニブ、ＭＥＫ阻害剤、例えばセルメチニブ（ＡＺＤ６２４４）、Ａｂｌ阻害剤、例えばイマチニブまたはニロチニブ、Ｂｔｋ阻害剤、例えばイブルチニブ、Ｓｙｋ阻害剤、例えばフォスタマチニブ（fostamatinib）、オーロラキナーゼ阻害剤（例えばＡＺＤ１１５２）、ＪＡＫ、ＳＴＡＴおよびＩＲＡＫ４などの他のｓｅｒ／ｔｈｒキナーゼの阻害剤、およびサイクリン依存性キナーゼ阻害剤、例えばパルボシクリブ（palbociclib）など；
（ｉｖ）ＤＮＡ損傷シグナル伝達経路のモジュレーター、例えばＰＡＲＰ阻害剤（例えばオラパリブ（Olaparib））、ＡＴＲ阻害剤またはＡＴＭ阻害剤；
（ｖ）アポトーシスおよび細胞死経路のモジュレーター、例えばＢｃｌファミリーモジュレーター（例えばＡＢＴ−２６３／ナビトクラックス（Navitoclax）、ＡＢＴ−１９９）；
（ｖｉ）抗血管新生剤、例えば血管内皮増殖因子の作用を阻害するもの［例えば抗血管内皮細胞増殖因子抗体であるベバシズマブ（アバスチン（Avastin（商標）））および例えば、ＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤、例えばソラフェニブ、アキシチニブ、パゾパニブ、スニチニブおよびバンデタニブ（および他のメカニズムによって作用する化合物（例えばリノマイド（linomide）、インテグリンαｖβ３の機能およびアンギオスタチンの阻害剤）］；
（ｖｉｉ）血管障害剤、例えばコンブレタスタチンＡ４；
（ｖｉｉｉ）抗浸潤剤、例えばｃ−Ｓｒｃキナーゼファミリー阻害剤、例えばダサチニブ（J. Med. Chem.、2004、47、6658〜6661）およびボスチニブ（ＳＫＩ−６０６）、ならびにメタロプロテイナーゼ阻害剤、例えばマリマスタット、ウロキナーゼ型プラスミノゲン活性化因子受容体機能の阻害剤またはヘパラナーゼに対する抗体］；
（ｉｘ）免疫療法アプローチ、例えば患者の腫瘍細胞の免疫原性を高めるエクスビボおよびインビボのアプローチ、例えばインターロイキン２、インターロイキン４または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子などのサイトカインでのトランスフェクション、Ｔ細胞のアネルギーを減少させるアプローチ、サイトカインでトランスフェクトされた樹状細胞などのトランスフェクトされた免疫細胞を使用するアプローチ、サイトカインでトランスフェクトされた腫瘍細胞株を使用するアプローチ、および抗イディオタイプ抗体を使用するアプローチなど、具体的な例としては、ＰＤ−１（例えばＢＭＳ−９３６５５８）またはＣＴＬＡ４（例えばイピリムマブおよびトレメリムマブ）を標的とするモノクローナル抗体など；
（ｘ）アンチセンスまたはＲＮＡｉベースの療法、例えば、列挙した標的を対象とする療法；
（ｘｉ）遺伝子治療アプローチ、例えば、異常なｐ５３または異常なＢＲＣＡ１もしくはＢＲＣＡ２などの異常な遺伝子を置き換えるアプローチ、ＧＤＥＰＴ（遺伝子指向性酵素プロドラッグ療法）アプローチ、例えばシトシンデアミナーゼ、チミジンキナーゼまたは細菌のニトロレダクターゼ酵素を使用するアプローチ、ならびに化学療法または放射線治療、例えば多剤耐性遺伝子治療に対する患者の耐性を高めるアプローチなど。

【0237】

本発明のこの形態によれば、本明細書で定義されるような本発明の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩と、別の抗腫瘍剤、特定には上記の（ｉ）〜（ｘｉ）に列挙した抗腫瘍剤のいずれか１種とを含む、がんの処置で使用するのに好適な組み合わせが提供される。特定には、上記の（ｉ）〜（ｘｉ）に列挙した抗腫瘍剤は、処置しようとする具体的ながんにとって標準的治療であり、当業者であれば「標準的治療」の意味を理解しているものと予想される。一形態において、本発明の化合物は、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩である。

【0238】

それゆえに本発明のさらなる形態において、別の抗腫瘍剤、特定には本明細書で上記された（ｉ）〜（ｘｉ）に列挙されたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた、本発明の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

【0239】

本発明のさらなる形態において、別の抗腫瘍剤、特定には本明細書で上記された（ｉ）〜（ｘｉ）に列挙されたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた、実施例１［（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸］またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

【0240】

本発明のさらなる形態において、別の抗腫瘍剤、特定には上記の（ｉ）で列挙したものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた、本発明の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

【0241】

本発明のさらなる形態において、本明細書の上記で定義したような本発明の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩と、上記の（ｉ）で列挙した抗腫瘍剤のいずれか１種とが提供される。

【0242】

本発明のさらなる形態において、上記の（ｉ）で列挙した抗腫瘍剤のいずれか１種と組み合わせた、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

【0243】

本発明のさらなる形態において、上記で定義したような本発明の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩と、タキソイド、例えばタキソールまたはタキソテールなど、都合のよい形態としてはタキソテールとを含む、がんの処置で使用するのに好適な組み合わせが提供される。例えば、タキソイド、例えばタキソールまたはタキソテールなど、都合のよい形態としてはタキソテールと組み合わせた本発明の好適な化合物は、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩である。

【0244】

本発明のさらなる形態において、別の抗腫瘍剤、特定には本明細書で上記された（ｉｉ）で列挙したものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた、本発明の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。

【0245】

本発明のさらなる形態において、本明細書の上記で定義したような本発明の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩と、上記の（ｉｉ）で列挙した抗ホルモン剤のいずれか１種、例えば上記の（ｉｉ）で列挙した抗エストロゲンのいずれか１種、または例えば上記の（ｉｉ）で列挙したアロマターゼ阻害剤とを含む、がんの処置で使用するのに好適な組み合わせが提供される。

【0246】

本発明のさらなる形態において、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩と、上記の（ｉｉ）で列挙した抗ホルモン剤のいずれか１種、例えば上記の（ｉｉ）で列挙した抗エストロゲンのいずれか１種、または例えば上記の（ｉｉ）で列挙したアロマターゼ阻害剤とを含む、がんの処置で使用するのに好適な組み合わせが提供される。

【0247】

本発明のさらなる形態において、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩と、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばＡＺＤ２０１４（例えばＷＯ２００８／０２３１６１を参照）とを含む、がんの処置で使用するのに好適な組み合わせが提供される。

【0248】

【化17】

【0249】

本発明のさらなる形態において、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩と、ＰＩ３Ｋα−阻害剤、例えば本発明者らの同時係属中のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＧＢ２０１４／０５０１６３に記載のＰＩ３Ｋα／δ阻害剤とを含む、がんの処置で使用するのに好適な組み合わせが提供される。好適なＰＩ３Ｋα／δ阻害剤の一例は、ＰＣＴ／ＧＢ２０１４／０５０１６３に記載の実施例３であり、これは、化合物１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンまたはそれらの医薬的に許容される塩である。ＰＣＴ／ＧＢ２０１４／０５０１６３に記載の実施例３の製造法は、本明細書において参考例１に記載される。

【0250】

本発明のさらなる形態において、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩と、パルボシクリブとを含む、がんの処置で使用するのに好適な組み合わせが提供される。

【0251】

一形態において、上記の、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩、特に実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩と、上記の（ｉｉ）で列挙した抗腫瘍剤、またはｍＴＯＲ阻害剤（例えばＡＺＤ２０１４）、またはＰＩ３Ｋ−α阻害剤（例えば、本発明者らの同時係属中のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＧＢ２０１４／０５０１６３に記載のＰＩ３Ｋα／δ阻害剤、特にそこに記載された実施例３）またはパルボシクリブとの組み合わせは、乳がんまたは婦人科系がん、例えば乳がん、子宮内膜がん、卵巣がんまたは子宮頸がん、特に乳がん、例えばＥＲ＋ｖｅ乳がんの処置で使用するのに好適である。

【0252】

本明細書において、用語「組み合わせ」が使用される場合、これは、同時の、別々の、または逐次的な投与を指すことが理解されるものとする。本発明の一形態において「組み合わせ」は、同時投与を指す。本発明の別の形態において「組み合わせ」は、別々の投与を指す。本発明のさらなる形態において「組み合わせ」は、逐次投与を指す。投与が逐次的または別々である場合、第二の成分投与の遅延は、例えば組み合わせの有益な作用を失わせるようなものではないと予想される。２種またはそれより多くの成分の組み合わせが別々または逐次的に投与される場合、各成分ごとの投薬計画は、他の成分と異なっていてもよいし、それらから独立していてもよいことが理解されるものとする。都合のよい形態としては、本発明の化合物は、１日１回投与される。

【0253】

本発明のさらなる形態によれば、医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、本明細書で上記された（ｉ）〜（ｘｉ）に列挙されたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせて、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩を含む医薬組成物が提供される。

【0254】

本発明のさらなる形態によれば、医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、本明細書で上記された（ｉ）〜（ｘｉ）に列挙されたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせて、実施例１［（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸］またはそれらの医薬的に許容される塩を含む医薬組成物が提供される。

【0255】

本発明のさらなる形態によれば、医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、上記の（ｉｉ）で列挙した抗ホルモン剤のいずれか１種、例えば上記の（ｉｉ）で列挙した抗エストロゲンのいずれか１種、または例えば上記の（ｉｉ）で列挙したアロマターゼ阻害剤と組み合わせて、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩を含む医薬組成物が提供される。

【0256】

本発明のさらなる形態において、医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩と、上記の（ｉｉ）で列挙した抗ホルモン剤のいずれか１種、例えば上記の（ｉｉ）で列挙した抗エストロゲンのいずれか１種、または例えば上記の（ｉｉ）で列挙したアロマターゼ阻害剤とを含む医薬組成物が提供される。

【0257】

本発明のさらなる形態において、医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩と、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばＡＺＤ２０１４（例えばＷＯ２００８／０２３１６１を参照）とを含む医薬組成物が提供される。

【0258】

本発明のさらなる形態において、医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩と、ＰＩ３Ｋα−阻害剤、例えば本発明者らの同時係属中のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＧＢ２０１４／０５０１６３に記載のＰＩ３Ｋα／δ阻害剤とを含む医薬組成物が提供される。好適なＰＩ３Ｋα／δ阻害剤の一例は、上述したようなＰＣＴ／ＧＢ２０１４／０５０１６３に記載の実施例３である。

【0259】

本発明のさらなる形態において、医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩と、パルボシクリブとを含む医薬組成物が提供される。

【0260】

一形態において、上記された式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩、特に実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩と、上記の（ｉｉ）で列挙した抗腫瘍剤、またはｍＴＯＲ阻害剤（例えばＡＺＤ２０１４）、またはＰＩ３Ｋ−α阻害剤（例えば、本発明者らの同時係属中のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＧＢ２０１４／０５０１６３に記載のＰＩ３Ｋα／δ阻害剤、特にそこに記載された実施例３）もしくはパルボシクリブとの医薬組成物は、乳がんまたは婦人科系がん、例えば乳がん、子宮内膜がん、卵巣がんまたは子宮頸がん、特に乳がん、例えばＥＲ＋ｖｅ乳がんの処置で使用するのに好適である。

【0261】

本発明のさらなる形態によれば、がんの処置において使用するための医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、本明細書で上記された（ｉ）〜（ｘｉ）に列挙されたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせて、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩を含む医薬組成物が提供される。

【0262】

本発明のさらなる形態によれば、がんの処置において使用するための医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、上記の（ｉｉ）で列挙した抗ホルモン剤のいずれか１種、例えば上記の（ｉｉ）で列挙した抗エストロゲンのいずれか１種、または例えば上記の（ｉｉ）で列挙したアロマターゼ阻害剤と組み合わせた、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩を含む医薬組成物が提供される。

【0263】

本発明のさらなる形態によれば、がんの処置において使用するための医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、本明細書で上記された（ｉ）〜（ｘｉ）に列挙されたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩を含む医薬組成物が提供される。

【0264】

本発明のさらなる形態において、がんの処置において使用するための医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩と、上記の（ｉｉ）で列挙した抗ホルモン剤のいずれか１種、例えば上記の（ｉｉ）で列挙した抗エストロゲンのいずれか１種、または例えば上記の（ｉｉ）で列挙したアロマターゼ阻害剤とを含む医薬組成物が提供される。

【0265】

本発明のさらなる形態において、がんの処置において使用するための医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩と、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばＡＺＤ２０１４（例えばＷＯ２００８／０２３１６１を参照）とを含む医薬組成物が提供される。

【0266】

本発明のさらなる形態において、がんの処置において使用するための医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩と、ＰＩ３Ｋα−阻害剤、例えば本発明者らの同時係属中のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＧＢ２０１４／０５０１６３に記載のＰＩ３Ｋα／δ阻害剤とを含む医薬組成物が提供される。好適なＰＩ３Ｋα／δ阻害剤の一例は、上述したようなＰＣＴ／ＧＢ２０１４／０５０１６３に記載の実施例３である。

【0267】

本発明のさらなる形態において、がんの処置において使用するための医薬的に許容される希釈剤またはキャリアーと共に、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩と、パルボシクリブとを含む医薬組成物が提供される。

【0268】

一形態において、上記された式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩、特に実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩と、上記の（ｉｉ）で列挙した抗腫瘍剤、またはｍＴＯＲ阻害剤（例えばＡＺＤ２０１４）、またはＰＩ３Ｋ−α阻害剤（例えば、本発明者らの同時係属中のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＧＢ２０１４／０５０１６３に記載のＰＩ３Ｋα／δ阻害剤、特にそこに記載された実施例３）もしくはパルボシクリブとの医薬組成物は、乳がんまたは婦人科系がん、例えば乳がん、子宮内膜がん、卵巣がんまたは子宮頸がん、特に乳がん、例えばＥＲ＋ｖｅ乳がんの処置で使用するのに好適である。

【0269】

本発明の別の特徴によれば、ヒトなどの温血動物におけるがんの処置に使用するための医薬品の製造における、本明細書で上記された（ｉ）〜（ｘｉ）に列挙されたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

【0270】

本発明の別の特徴によれば、ヒトなどの温血動物におけるがんに使用するための医薬品の製造における、本明細書で上記された（ｉ）〜（ｘｉ）に列挙されたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

【0271】

本発明のさらなる形態によれば、ヒトなどの温血動物におけるがんの処置に使用するための医薬品の製造における、上記の（ｉｉ）で列挙した抗ホルモン剤のいずれか１種、例えば上記の（ｉｉ）で列挙した抗エストロゲンのいずれか１種、または例えば上記の（ｉｉ）で列挙したアロマターゼ阻害剤と組み合わせた、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

【0272】

本発明のさらなる形態において、ヒトなどの温血動物におけるがんの処置に使用するための医薬品の製造における、上記の（ｉｉ）で列挙した抗ホルモン剤のいずれか１種、例えば上記の（ｉｉ）で列挙した抗エストロゲンのいずれか１種、または例えば上記の（ｉｉ）で列挙したアロマターゼ阻害剤と組み合わせた、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

【0273】

本発明のさらなる形態において、ヒトなどの温血動物におけるがんの処置に使用するための医薬品の製造における、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばＡＺＤ２０１４（例えばＷＯ２００８／０２３１６１を参照）と組み合わせた、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

【0274】

本発明のさらなる形態において、ヒトなどの温血動物におけるがんの処置に使用するための医薬品の製造における、ＰＩ３Ｋα−阻害剤、例えば本発明者らの同時係属中のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＧＢ２０１４／０５０１６３に記載のＰＩ３Ｋα／δ阻害剤と組み合わせた、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。好適なＰＩ３Ｋα／δ阻害剤の一例は、上述したようなＰＣＴ／ＧＢ２０１４／０５０１６３に記載の実施例３である。

【0275】

本発明のさらなる形態において、ヒトなどの温血動物におけるがんの処置に使用するための医薬品の製造における、パルボシクリブと組み合わせた、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。

【0276】

一形態において、上記の（ｉｉ）で列挙した抗腫瘍剤、またはｍＴＯＲ阻害剤（例えばＡＺＤ２０１４）、またはＰＩ３Ｋ−α阻害剤（例えば、本発明者らの同時係属中のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＧＢ２０１４／０５０１６３に記載のＰＩ３Ｋα／δ阻害剤、特にそこに記載された実施例３）もしくはパルボシクリブと組み合わせた、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩、特に実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩の上記使用は、乳がんまたは婦人科系がん、例えば乳がん、子宮内膜がん、卵巣がんまたは子宮頸がん、特に乳がん、例えばＥＲ＋ｖｅ乳がんを処置するための医薬品の製造における使用に好適である。

【0277】

それゆえに、本発明のさらなる特徴において、処置が必要なヒトなどの温血動物におけるがんの処置方法であって、前記動物に、本明細書で上記された（ｉ）〜（ｘｉ）に列挙されたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせて、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、上記処置方法が提供される。

【0278】

本発明のさらなる形態によれば、処置が必要なヒトなどの温血動物におけるがんの処置方法であって、前記動物に、本明細書で上記された（ｉ）〜（ｘｉ）に列挙されたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせて、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、上記処置方法が提供される。

【0279】

本発明のさらなる形態によれば、処置が必要なヒトなどの温血動物におけるがんの処置方法であって、前記動物に、上記の（ii）で列挙した抗ホルモン剤のいずれか１種、例えば上記の（ii）で列挙した抗エストロゲンのいずれか１種、または例えば上記の（ii）で列挙したアロマターゼ阻害剤と組み合わせて、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、上記処置方法が提供される。

【0280】

本発明のさらなる形態において、処置が必要なヒトなどの温血動物におけるがんの処置方法であって、前記動物に、上記の（ｉｉ）で列挙した抗ホルモン剤のいずれか１種、例えば上記の（ｉｉ）で列挙した抗エストロゲンのいずれか１種、または例えば上記の（ｉｉ）で列挙したアロマターゼ阻害剤と組み合わせて、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、上記処置方法が提供される。

【0281】

本発明のさらなる形態において、処置が必要なヒトなどの温血動物におけるがんの処置方法であって、前記動物に、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばＡＺＤ２０１４（例えばＷＯ２００８／０２３１６１を参照）と組み合わせて、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、上記処置方法が提供される。

【0282】

本発明のさらなる形態において、処置が必要なヒトなどの温血動物におけるがんの処置方法であって、前記動物に、ＰＩ３Ｋα−阻害剤、例えば本発明者らの同時係属中のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＧＢ２０１４／０５０１６３に記載のＰＩ３Ｋα／δ阻害剤と組み合わせて、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、上記処置方法が提供される。好適なＰＩ３Ｋα／δ阻害剤の一例は、上述したようなＰＣＴ／ＧＢ２０１４／０５０１６３に記載の実施例３である。

【0283】

本発明のさらなる形態において、処置が必要なヒトなどの温血動物におけるがんの処置方法であって、前記動物に、パルボシクリブと組み合わせて、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、上記処置方法が提供される。

【0284】

一形態において、上記されたがんの処置方法は、乳がんまたは婦人科系がん、例えば乳がん、子宮内膜がん、卵巣がんまたは子宮頸がん、特に乳がん、例えばＥＲ＋ｖｅ乳がんを処置するための方法である。

【0285】

本発明のさらなる形態によれば、本明細書で上記された（ｉ）〜（ｘｉ）に列挙されたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせて、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩を含むキットが提供される。

【0286】

本発明のさらなる形態によれば、本明細書で上記された（ｉ）または（ｉｉ）に列挙したものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせて、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩を含むキットが提供される。

【0287】

本発明のさらなる形態によれば、
ａ）第一の単位剤形の、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩；
ｂ）第二の単位剤形の、本明細書で上記された（ｉ）〜（ｘｉ）に列挙されたものから選択される抗腫瘍剤；および
ｃ）前記第一および第二の剤形を収容するための容器手段
を含むキットが提供される。

【0288】

本発明のさらなる形態によれば、
ａ）第一の単位剤形の、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩；
ｂ）第二の単位剤形の、本明細書で上記された（ｉ）〜（ｉｉ）に列挙したものから選択される抗腫瘍剤；および
ｃ）前記第一および第二の剤形を収容するための容器手段
を含むキットが提供される。

【0289】

本発明のさらなる形態によれば、本明細書で上記された（ｉ）〜（ｘｉ）に列挙されたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせて、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩を含むキットが提供される。

【0290】

本発明のさらなる形態によれば、本明細書で上記された（ｉ）または（ｉｉ）に列挙したものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせて、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩を含むキットが提供される。

【0291】

本発明のさらなる形態によれば、
ａ）第一の単位剤形の、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩；
ｂ）第二の単位剤形の、本明細書で上記された（ｉ）〜（ｘｉ）に列挙されたものから選択される抗腫瘍剤；および
ｃ）前記第一および第二の剤形を収容するための容器手段
を含むキットが提供される。

【0292】

本発明のさらなる形態によれば、
ａ）第一の単位剤形の、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩；
ｂ）第二の単位剤形の、本明細書で上記された（ｉ）〜（ｉｉ）に列挙したものから選択される抗腫瘍剤；および
ｃ）前記第一および第二の剤形を収容するための容器手段
を含むキットが提供される。

【0293】

本発明のさらなる形態によれば、
ａ）第一の単位剤形の、実施例１またはそれらの医薬的に許容される塩；
ｂ）第二の単位剤形の、ＡＺＤ２０１４、ＰＩ３Ｋα−阻害剤（例えば、本発明者らの同時係属中のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＧＢ２０１４／０５０１６３に記載のＰＩ３Ｋα／δ阻害剤）およびパルボシクリブから選択される抗腫瘍剤；および
ｃ）前記第一および第二の剤形を収容するための容器手段
を含むキットが提供される。

【0294】

実施例１の化合物が使用される上記の方法、使用および他の形態の全てにおいて、好適には、該化合物は結晶性形態Ｂとして使用される。

【0295】

上述したような併用療法は、その通常の処方スケジュールに従って典型的に実行される標準的治療の前に追加されてもよい。

【0296】

式（Ｉ）の化合物は、主として温血動物（ヒトなど）で使用するための治療剤として有用であるが、該化合物は、ＥＲ−αの阻害が必要とされるならばどのような場合でも有用である。したがって、該化合物は、新しい生物学的試験の開発および新しい薬理作用のある物質の探索における薬理学的な標準的用途において有用である。

【0297】

個別化医療
本発明の別の形態は、ＥＲαをコードする遺伝子の状態と、式（Ｉ）の化合物での処置に対する潜在的な感受性との関連を同定することに基づく。詳細に言えば、いくつかのＥＲα突然変異は、現行の処置に対する耐性メカニズムとして発生すると考えられていることに少なくとも一部起因して、ＥＲα遺伝子の状態は、患者が、現行のホルモン療法（例えばアロマターゼ阻害剤）に応答する可能性が低いことの指標となる可能性がある。次いで、ＳＥＲＤ、特に、過剰な不利益なくより多くの用量で経口投与することができるＳＥＲＤは、他の療法に対して耐性である可能性があるＥＲα突然変異を有する患者を処置するのに有利に使用することができる。したがってそれにより、式（Ｉ）の化合物で処置するための患者、特にがん患者を選択するための、機会、方法およびツールがもたらされる。本発明は、患者選択ツールおよび方法（個別化医薬など）に関する。選択は、処置しようとする腫瘍細胞が、野生型または突然変異ＥＲα遺伝子を有するかどうかに基づく。それゆえにＥＲα遺伝子の状態は、ＳＥＲＤでの処置を選択することが有利であり得ることを示すバイオマーカーとして使用することができる。誤解を避けるために、本明細書で説明されるような式（Ｉ）の化合物は、野生型および突然変異ＥＲα遺伝子に対して同様に活性であると考えられ、ここで少なくともこれらの突然変異は、本出願の出願日の時点で確認されたＥＲα遺伝子である。

【0298】

ＳＥＲＤ、例えば式（Ｉ）の化合物での処置に対して腫瘍が応答すると予想される患者の割合を高めたり、またはそのような患者を選択したりすると予想されるバイオマーカーが必要なことは明らかである。他者と比べて１種の薬剤に応答する可能性が最も高い患者を同定する患者選択バイオマーカーは、このような薬剤の潜在的な副作用に対して非応答性の腫瘍を有する患者にとって不必要な処置を減らせるために、がんの処置において理想的である。

【0299】

バイオマーカーは、「治療的介入に対する正常な生物学的プロセス、病原性プロセス、または薬理学的応答のインジケーターとして客観的に測定され評価される特徴」と説明することができる。バイオマーカーは、特定の状態または疾患に関連するあらゆる同定可能および測定可能なインジケーターであり、この場合、バイオマーカーの存在またはレベルと、状態または疾患のいくつかの形態（例えば、状態または疾患に対する感受性、もしくは状態または疾患を処置するために使用された薬物に対する反応性の存在、そのレベルまたはレベルの変化、そのタイプ、その段階など）との間に、相関がある。この相関は、定性的、定量的、または定性的および定量的の両方であり得る。典型的には、バイオマーカーは、化合物、化合物フラグメントまたは化合物群である。このような化合物は、有機体中に見出される、または有機体によって生産されるあらゆる化合物であってもよく、例えば、タンパク質（およびペプチド）、核酸および他の化合物などである。

【0300】

バイオマーカーは、予測力を有するものであってもよく、そのようなものとして、特定の状態または疾患の存在、レベル、タイプまたは段階（例えば、特定の微生物または毒素の存在またはレベルなど）、特定の状態または疾患に対する感受性（例えば、遺伝学的感受性など）、または特定の処置（例えば、薬物処置など）に対する応答を予測または検出するのに使用することができる。バイオマーカーは、調査および開発プログラムの効率を改善することにより創薬と開発の将来においてますます重要な役割を果たすと考えられる。バイオマーカーは、診断薬、疾患進行のモニター、処置のモニター、および臨床転帰の予測変数として使用することができる。例えば、特定のがんのマーカー、ならびに特定の心臓血管および免疫疾患のマーカーを同定するために、様々なバイオマーカー調査プロジェクトが試みられている。新しい有効なバイオマーカーが開発されれば、医療および医薬開発コストにおける有意な低減と、多種多様の疾患および状態の処置における有意な改善の両方がもたらされると考えられる。

【0301】

臨床試験を最適に設計し、これらの試行から最大の情報を獲得するために、バイオマーカーが必要な場合がある。マーカーは、代用および腫瘍組織において測定可能なものであってもよい。これらのマーカーも、理想的には効能と相関すると予想され、したがって究極的には患者選択に使用することができる。

【0302】

したがって、本発明のこの形態の根底にある技術的な問題は、式（Ｉ）の化合物での処置のために患者を層別化するための手段の同定である。技術的な問題は、特許請求の範囲および／または本明細書に記載の説明で特徴付けられた実施態様の提供によって解決される。

【0303】

野生型ＥＲαを含有する腫瘍は、例えば第一選択の処置として式（Ｉ）の化合物での処置の影響を受けやすいと考えられる。腫瘍はまた、第二選択、第三選択またはそれに続く療法として式（Ｉ）の化合物での処置に応答する可能性があり、これは、特定には、腫瘍が突然変異ＥＲαを含有し、したがってＡＩなどの現行の療法に対して耐性である可能性がある場合に有用な可能性がある。耐性の状況では、野生型腫瘍の場合より多くの投薬量の式（Ｉ）の化合物が必要な場合もある。

【0304】

本発明は、式（Ｉ）の化合物に対する細胞の感受性を決定する方法を提供する。本方法は、前記細胞におけるＥＲα遺伝子の状態を決定することを含む。細胞成長アッセイにおいて、式（Ｉ）の化合物が（細胞増殖の阻害および／または細胞死の増加のいずれかにより）細胞数の増加を阻害する場合、細胞は、式（Ｉ）の化合物に対して感受性であると定義される。本発明の方法は、成長阻害により、細胞が式（Ｉ）の化合物に応答する可能性がより高いことを予測するのに有用である。

【0305】

「腫瘍を示す」サンプルは、単離された実際の腫瘍サンプルであってもよいし、またはさらに加工されたサンプル、例えば腫瘍サンプルからＰＣＲで増幅した核酸のサンプルであってもよい。

【0306】

定義：
この個別化医療の章において：
「対立遺伝子」は、その特定のヌクレオチドまたはアミノ酸配列によって他の形態とは区別される遺伝子座の特定の形態を指す。

【0307】

「増幅反応」は、非標的核酸に対して標的核酸の特異的増幅が起こる核酸反応である。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）は、周知の増幅反応である。

【0308】

「がん」は、本明細書において、新生物形成性の表現型への細胞形質転換によって発生する新生物成長を指すものとして使用される。このような細胞形質転換は、遺伝学的な突然変異を含むことが多い。

【0309】

「遺伝子」は、発現を制御する５’または３’フランキング領域内に（遺伝子の転写された部分内ではなく）位置する可能性がある、プロモーター、エクソン、イントロン、および他の配列エレメントなどのＲＮＡ産物の生合成調節に関する全ての情報を含有するＤＮＡのセグメントである。

【0310】

「遺伝子の状態」は、遺伝子が野生型であるかまたはそうでないか（すなわち突然変異体であるか）を指す。

【0311】

「標識」は、アッセイサンプルにおける標的ポリヌクレオチドの存在の指標である検出可能なシグナルを生産することができる組成物を指す。好適な標識としては、放射性同位体、ヌクレオチド発色団、酵素、基質、蛍光分子、化学発光部分、磁気粒子、生物発光部分、および同種のものが挙げられる。そのようなものとして、標識は、分光、光化学、生化学、免疫化学、電気的、光学または化学的な手段によって検出可能なあらゆる組成物である。

【0312】

「非同義のバリエーション」は、別個の（変更された）ポリペプチド配列の生産を引き起こす、遺伝子のコード配列中の、またはそのような配列と一部重複するバリエーション（変化）を指す。これらのバリエーションは、タンパク質の機能に影響を与える場合もあるし、または与えない場合もあり、例えば、ミスセンス変異体（結果としてあるアミノ酸の別のアミノ酸への置換が生じる）、ナンセンス変異体（結果として未成熟終止コドンが生成されるためにトランケートされたポリペプチドが生じる）、および挿入／欠失変異体などが挙げられる。

【0313】

「同義のバリエーション」は、コードされたポリペプチドの配列に影響を与えない遺伝子のコード配列におけるバリエーション（変化）を指す。これらのバリエーションは、タンパク質の機能に間接的に影響を与える可能性があるが（例えば遺伝子の発現を変更することにより）、一般的には、反対の証拠がない限り無害と考えられる。

【0314】

「核酸」は、当業界において公知のように、天然に見出される天然核酸および／または改変された骨格もしくは塩基を有する改変された人工核酸などの、一本鎖または二本鎖ＤＮＡおよびＲＮＡ分子を指す。

【0315】

「プライマー」は、コピーしようとうする核酸鎖に相補的なプライマー伸長産物合成のための開始点としての役割を果たすことができる、一本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチド配列を指す。プライマーの長さおよび配列は、伸長産物の合成を開始させることができるようなものでなければならない。典型的なプライマーは、標的配列に実質的に相補的な配列の少なくとも約７ヌクレオチドの長さを含有するが、それよりやや長いプライマーが好ましい。通常、プライマーは、約１５〜２６ヌクレオチドを含有するが、それより長いまたはそれより短いプライマーが採用される場合もある。

【0316】

「多形部位」は、集団中で少なくとも２つの代替配列が見出される遺伝子座内の位置である。

【0317】

「多形」は、個体で観察された多形部位における配列のバリエーションを指す。多形は、ヌクレオチド置換、挿入、欠失およびマイクロサテライトを包含し、遺伝子発現またはタンパク質の機能において検出可能な差を引き起こす可能性があるが、必ずではない。発現またはタンパク質の機能への作用に関する証拠がない限り、非同義変異などの一般的な多形は通常、野生型遺伝子配列の定義に包含されるとみなされる。検証、観察された頻度、および疾患との関連を包含するヒト多形のカタログおよび関連する注釈は、ＮＣＢＩによって維持されている（ｄｂＳＮＰ：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/）。ここで用語「多形」は、遺伝子配列の文脈で使用される場合は、化合物の固体状の形態、すなわち化合物の結晶質または非晶質の性質の文脈で使用される場合の用語「多形」と混同されないように留意されたい。当業者であれば、その文脈に応じて意図された意味を理解するものと予想される。

【0318】

「プローブ」は、検出しようとする対立遺伝子の標的配列に正確に相補的な配列を有する、一本鎖配列に特異的なオリゴヌクレオチドを指す。

【0319】

「応答」は、２つの主要なグループ、すなわち部分寛解または病勢安定を示すグループおよび進行性の疾患の徴候を示すグループに患者を分類することを含む、固形腫瘍における治療効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）に従ってなされた測定によって定義される。

【0320】

「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」は、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（７５０ｍＭのＮａＣｌ、７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト溶液、１０％硫酸デキストラン、および２０ｐｇ／ｍｌの変性断片化サケ精子ＤＮＡを含む溶液中で４２℃で一晩インキュベートし、続いて０．１×ＳＳＣ中、約６５℃でフィルターを洗浄することを指す。

【0321】

「生存」は、患者の全生存および無増悪生存を包含する。

【0322】

「全生存」（ＯＳ）は、薬物投与開始から、何らかの原因による死亡までの時間と定義される。「無増悪生存」（ＰＦＳ）は、薬物投与開始から、進行性疾患の最初の出現またはあらゆる原因による死亡までの時間と定義される。

【0323】

本発明の一形態によれば、式（Ｉ）の化合物での処置に関して患者を選択するための方法であって、該方法は、患者からの腫瘍細胞を含有するサンプルを用意すること；患者の腫瘍細胞を含有するサンプルにおけるＥＲα遺伝子が野生型または突然変異体であるかどうかを決定すること；およびそれに基づき式（Ｉ）の化合物での処置に関して患者を選択することを含む、上記方法が提供される。

【0324】

本方法は、実際の患者のサンプルを単離する工程を包含していてもよいし、またはそれを除いてもよい。したがって、本発明の一形態によれば、式（Ｉ）の化合物での処置に関して患者を選択するための方法であって、該方法は、前もって患者から単離した腫瘍細胞を含有するサンプル中のＥＲα遺伝子が野生型または突然変異体であるかどうかを決定すること；およびそれに基づき式（Ｉ）の化合物での処置に関して患者を選択することを含む、上記方法が提供される。

【0325】

一実施態様において、腫瘍細胞のＤＮＡが突然変異ＥＲα遺伝子を有する場合、患者は、式（Ｉ）の化合物での処置に関して選択される。他の実施態様において、腫瘍細胞のＤＮＡが野生型ＥＲα遺伝子を有する患者が、式（Ｉ）の化合物での処置に関して選択される。

【0326】

本発明の目的に関して、遺伝子の野生型の状態は、遺伝子の正常または適切な発現およびコードされたタンパク質の正常な機能を示すことを意味する。対照的に、突然変異状態は、がんにおける突然変異ＥＲα遺伝子の公知の役割（本明細書で説明されるような）と一致する、機能が変更されたタンパク質の発現を示すことを意味する。突然変異状態では、これらに限定されないが、突然変異、増幅、欠失、ゲノム再構成、またはメチル化プロファイルの変化などの様々な遺伝学的または後成的な変更が起こる可能性がある。しかしながら、このような変更にもかかわらず正常なタンパク質、または機能的に同等な変異体の適切な発現が起こる場合、遺伝子状態は、野生型とみなされる。典型的には機能的な突然変異遺伝子状態をもたらさないと予想される変異体の例としては、同義のコード変異体および一般的な多形（同義または非同義）が挙げられる。以下で論じられるように、遺伝子状態は、機能アッセイによって評価することができ、または検出された参照配列からの偏差の性質から推論される場合もある。

【0327】

所定の実施態様において、ＥＲα遺伝子の野生型または突然変異状態は、遺伝子中の非同義の核酸バリエーションの存在または非存在によって決定される。機能的な作用について注釈がない公知の一般的な多形に対応する観察された非同義のバリエーションは、突然変異体の遺伝子状態に寄与しない。

【0328】

突然変異状態を示すＥＲα遺伝子における他のバリエーションとしては、プレｍＲＮＡからｍＲＮＡへのプロセシング中にイントロン／エクソンジャンクションの認識を減少させるスプライス部位のバリエーションが挙げられる。これは、エクソンのスキッピング、またはプライシングされたｍＲＮＡにおける通常はイントロンの配列の包含（イントロンの保持または潜在的なスプライスジャンクションの利用）をもたらす可能性がある。これは順に、正常なタンパク質と比べて挿入および／または欠失を有する異常なタンパク質の生産をもたらす可能性がある。したがって、他の実施態様において、イントロン／エクソンジャンクションにおけるスプライス部位認識配列を変更する変異体がある場合、遺伝子は、突然変異状態を有する。

【0329】

ＥＳＲ１の場合、参照配列は、遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＧ＿００８４９３）、ｍＲＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＭ＿０００１２５）、およびタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＰ＿０００１１６またはスイスプロット（Swiss-Prot）受託番号：Ｐ０３３７２）について入手可能である。当業者であれば、ＥＳＲ１遺伝子の状態、すなわち、ＤＮＡまたはタンパク質配列を野生型と比較することに基づき、特定のＥＳＲ１遺伝子が野生型または突然変異体であるかどうかを決定することができると予想される。

【0330】

ＥＲα遺伝子に関して開示された遺伝子およびｍＲＮＡ配列は代表的な配列であることは明らかであると予想される。正常な個体では、各遺伝子には２つのコピー、すなわち母系のコピーと親系のコピーがあり、これらはいくつかの配列差を有する可能性があるが、さらに集団内で、遺伝子配列の多数の対立遺伝子変異体が存在すると予想される。野生型とみなされる他の配列としては、核酸配列に１つまたはそれより多くの同義の変化（この変化は、コードされたタンパク質配列を変更しない）、タンパク質配列を変更するがタンパク質の機能に影響を与えない非同義の一般的な多形（例えば生殖系の多形）、およびイントロンの非スプライス部位配列の変化を有する配列が挙げられる。

【0331】

ＥＲαの遺伝子状態を決定するための当業者に利用可能な多数の技術がある。遺伝子状態は、核酸配列決定によって決定することができる。これは、全長遺伝子の直接的な配列決定、または遺伝子、例えば一般的に突然変異した部位内の特異的部位の分析によって行うことができる。

【0332】

サンプル
遺伝子状態に関して試験しようとする患者のサンプルは、個体から得られた、または個体から得ることができる、あらゆる腫瘍組織または腫瘍細胞を含有するサンプルであり得る。試験サンプルは、都合のよい形態としては、個体から得られた、血液、口腔スワブ、生検、または他の体液もしくは組織のサンプルである。特定の例としては、血漿または血清中の循環腫瘍細胞、循環ＤＮＡ、卵巣がん患者の腹水から単離した細胞、肺に腫瘍を有する患者の場合は肺の痰、乳がん患者からの穿刺吸引物、尿、末梢血液、細胞の掻き取り検体（cell scraping）、毛包、皮膚パンチまたは頬側サンプルが挙げられる。

【0333】

試験サンプルは、同様に、試験サンプル中の配列に対応する核酸配列であってもよく、すなわち分析の前に、サンプル核酸中の領域の前部または一部が、あらゆる便利な技術、例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して最初に増幅されることが理解されるものとする。核酸は、ゲノムＤＮＡであってもよいし、または分画されたＲＮＡもしくは全細胞ＲＮＡであってもよい。特定の実施態様において、ＲＮＡは全細胞ＲＮＡであり、ランダムプライマーまたはポリＡプライマーを使用して第一の鎖のｃＤＮＡを標識するためのテンプレートとして直接使用される。試験サンプル中の核酸またはタンパク質は、標準的な方法論に従ってサンプルから抽出してもよい（GreenおよびSambrook編、Molecular Cloning：A Laboratory Manual（2012、第4版、1〜3巻、ISBN9781936113422）、Cold Spring Harbor Laboratory Press、ニューヨーク州コールドスプリングハーバーを参照）。

【0334】

本発明の診断方法は、個体または患者から前もって採取されたサンプルを使用して行うことができる。このようなサンプルは、凍結により保存してもよいし、またはホルマリン−パラフィンもしくは他の媒体に固定して埋め込んでもよい。その代わりに、新鮮な腫瘍細胞を含有するサンプルを得て使用してもよい。

【0335】

本発明の方法は、あらゆる腫瘍からの細胞を使用して適用することができる。式（Ｉ）の化合物での処置に好適な腫瘍は、本明細書において上述されている。

【0336】

核酸の検出方法
突然変異ＥＲα核酸の検出は、本発明の内容において、薬物処置を選択するために採用することができる。これらの遺伝子における突然変異はＤＮＡレベルで起こるため、本発明の方法は、ゲノムＤＮＡ、同様に転写物およびタンパク質それ自身における突然変異または変化の検出に基づくものであってもよい。検出された突然変異が実際に対象で発現されることを確認するために、転写物および／またはポリペプチドの分析によりゲノムＤＮＡにおける突然変異を確認することが望ましい可能性がある。

【0337】

当業者には、遺伝子中の１つまたはそれより多くの位置における変異ヌクレオチドの存在または非存在を検出するのに使用することができる多数の分析手法があることは明らかであると予想される。一般的に、対立遺伝子変異の検出は、突然変異識別技術、場合により増幅反応（例えばポリメラーゼ連鎖反応に基づくもの）、および場合によりシグナル生成システムを必要とする。当業界において利用可能な多数の突然変異検出技術があり、これらは、当業界において多数の利用可能なものがあるシグナル生成システムと組み合わせて使用することができる。対立遺伝子変異を検出するための多くの方法が、Nollauら、Clin. Chem.、1997、43、1114〜1120；Anderson SM. Expert Rev Mol Diagn.、2011、11、635〜642；Meyerson M.ら、Nat Rev Genet.、2010、11、685〜696；および標準的な教本の、例えば「Laboratory Protocols for Mutation Detection」、U． Landegren編、Oxford University Press、1996および「PCR」、第2版、NewtonおよびGraham、BIOS Scientific Publishers Limited、1997で総論されている。

【0338】

上述したように、がんを有する患者のＥＲα遺伝子における特定の変化または複数の変化の存在または非存在を決定することは、様々な方法で行うことができる。このような試験は、一般的に、生体サンプル、例えば、組織生検、尿、便、痰、血液、細胞、組織の掻き取り検体、乳房吸引物（breast aspirate）または他の細胞性材料から収集されたＤＮＡまたはＲＮＡを使用して行われ、これらに限定されないが、ＰＣＲ、対立遺伝子特異的なプローブを用いたハイブリダイゼーション、酵素による突然変異検出、ミスマッチの化学的切断、マススペクトロメトリーまたはミニシーケンスなどのＤＮＡ配列決定などの様々な方法によって行うことができる。

【0339】

好適な突然変異検出技術としては、増幅抵抗変異システム（ＡＲＭＳ（商標））、増幅抵抗変異システム線状伸長（ＡＬＥＸ（商標））、競合オリゴヌクレオチドプライミングシステム（ＣＯＰＳ）、Ｔａｑｍａｎ、分子ビーコン、制限酵素断片長多型（ＲＦＬＰ）、および制限部位ベースのＰＣＲおよび蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）技術が挙げられる。

【0340】

特定の実施態様において、バイオマーカー遺伝子内のヌクレオチドを決定するために採用される方法は、対立遺伝子特異的増幅（対立遺伝子特異的ＰＣＲ）、例えば増幅抵抗変異システム（ＡＲＭＳ）、配列決定すること、対立遺伝子識別アッセイ、ハイブリダイゼーション、制限酵素断片長多型（ＲＦＬＰ）またはオリゴヌクレオチドライゲーションアッセイ（ＯＬＡ）から選択される。

【0341】

特定の実施態様において、対立遺伝子特異的なプローブを用いたハイブリダイゼーションは、（１）例えば多数のＤＮＡチップアプリケーション中のような溶液中の標識されたサンプルを用いて固相（例えばガラス、シリコン、ナイロンメンブレン）に結合した対立遺伝子特異的なオリゴヌクレオチド；または、（２）溶液中の結合したサンプル（クローニングしたＤＮＡまたはＰＣＲ増幅したＤＮＡであることが多い）および標識されたオリゴヌクレオチド（ハイブリダイゼーションにより配列決定できるように対立遺伝子特異的であるかまたは短いかのいずれか）によって行うことができる。診断試験は、しばしば固体支持体上の分散のパネルを含んでいてもよく、これは、１つより多くの分散の同時決定を可能にする。このようなハイブリダイゼーションプローブは当業界において周知であり（例えば、GreenおよびSambrook編、Molecular Cloning：A Laboratory Manual（2012年、第4版、1〜3巻、ISBN 9781936113422）、Cold Spring Harbor Laboratory Press、ニューヨーク州コールドスプリングハーバーを参照）、２つまたはそれより多くの分散部位に及んでいてもよい。

【0342】

したがって、一実施態様において、少なくとも１つの突然変異の存在または非存在の検出は、推定上の突然変異部位を含有するＥＲα核酸を、少なくとも１つの核酸プローブと接触させることを提供する。プローブは、選択的なハイブリダイゼーション条件下で、分散部位を包含し、その分散部位に相補的ヌクレオチド塩基を含有する核酸配列と優先的にハイブリダイズする。ハイブリダイゼーションは、当業者公知の標識を使用した検出可能な標識を用いて検出することができる。このような標識としては、これらに限定されないが、放射性標識、蛍光標識、色素標識、および酵素標識が挙げられる。

【0343】

別の実施態様において、少なくとも１つの突然変異の存在または非存在の検出は、推定上の突然変異部位を含有するＥＲα核酸を、少なくとも１つの核酸プライマーと接触させることを提供する。プライマーは、選択的なハイブリダイゼーション条件下で、分散部位を包含し、その分散部位に相補的ヌクレオチド塩基を含有する核酸配列と優先的にハイブリダイズする。

【0344】

特異的な増幅のためのプライマーとして使用されるオリゴヌクレオチドは、分子の中心に目標とする突然変異に対する相補的ヌクレオチド塩基を有していてもよく（増幅がディファレンシャルハイブリダイゼーションに依存するように；例えば、Gibbsら、1989、Nucl. Acids Res.、17、2437〜248を参照）、または１つのプライマーの最も端の３’末端に目標とする突然変異に対する相補的ヌクレオチド塩基を有していてもよく、このような場合、適切な条件下でミスマッチがポリメラーゼ伸長を予防または低減することができる（例えば、Prossner、1993、Tibtech、11 238を参照）。

【0345】

さらに別の実施態様において、少なくとも１つの突然変異の存在または非存在の検出は、少なくとも１つの核酸配列を配列決定すること、および得られた配列を公知の野生型核酸配列と比較することを含む。

【0346】

その代わりに、少なくとも１つの突然変異の存在または非存在の決定は、少なくとも１つの核酸配列のマススペクトロメトリーによる決定を含む。

【0347】

一実施態様において、少なくとも１つの核酸の分散の存在または非存在の検出は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行うことを含む。仮定の分散を含有する標的核酸配列を増幅し、増幅された核酸のヌクレオチド配列を決定する。増幅された核酸のヌクレオチド配列を決定することは、少なくとも１つの核酸セグメント配列決定することを含む。その代わりに、増幅産物は、自動化および手動のゲル電気泳動、および同種のものなどの、それらのサイズに従って増幅産物を分離することができるあらゆる方法を使用して分析することができる。

【0348】

ゲノムの核酸中の突然変異は、増幅された核酸フラグメントにおける移動度シフトに基づく技術によって検出することが有利である。例えば、Chenら、Anal Biochem 1996、239、61〜9は、競合的移動度シフトアッセイによる一塩基の突然変異の検出を説明している。さらに、Marcelinoら、BioTechniques 1999、26、1134〜1148の技術に基づくアッセイは市販されている。

【0349】

特定の例では、キャピラリーヘテロ二重鎖分析を使用して、キャピラリーシステムで二重鎖核酸の移動度シフトに基づき突然変異の存在をミスマッチの存在の結果として検出することができる。

【0350】

サンプルからの分析のための核酸の生成は、一般的に、核酸増幅を必要とする。多くの増幅方法は、酵素による連鎖反応（例えばポリメラーゼ連鎖反応、リガーゼ連鎖反応、または自家持続配列複製法）、または核酸がクローニングされたベクターの全部または一部の複製に頼っている。好ましくは、本発明に係る増幅は、例えばポリメラーゼ連鎖反応によって示されるような指数関数的増幅である。

【0351】

多くの標的およびシグナルの増幅方法は文献で説明されており、例えば、これらの方法の一般的な総論は、Landegren, U．ら、Science、1988 242、229〜237およびLewis, R.、Genetic Engineering News 1990、10、54〜55で説明されている。これらの増幅方法は、本発明者らの発明の方法で使用でき、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ＰＣＲインサイチュ、リガーゼ増幅反応（ＬＡＲ）、リガーゼハイブリダイゼーション、Ｑβバクテリオファージレプリカーゼ、転写ベースの増幅システム（ＴＡＳ）、転写配列決定を用いたゲノム増幅（ＧＡＷＴＳ）、核酸配列ベースの増幅（ＮＡＳＢＡ）およびインサイチュハイブリダイゼーションが挙げられる。様々な増幅技術での使用に好適なプライマーは、当業界において公知の方法に従って調製することができる。

【0352】

ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）ＰＣＲは、とりわけ米国特許第４，６８３，１９５号および４，６８３，２０２号で説明されている核酸増幅方法である。ＰＣＲは、ＤＮＡポリメラーゼにより生じるプライマー伸長反応の繰り返しサイクルからなる。標的ＤＮＡを熱変性させて、増幅しようとするＤＮＡの逆の鎖で標的配列を挟む２つのオリゴヌクレオチドをハイブリダイズさせる。これらのオリゴヌクレオチドは、ＤＮＡポリメラーゼと共に使用するためのプライマーになる。プライマー伸長によりＤＮＡがコピーされて、両方の鎖の第二のコピーが作られる。熱変性、プライマーハイブリダイゼーションおよび伸長のサイクルを繰り返すことによって、標的ＤＮＡを、約２〜４時間で百万倍またはそれより多く増幅することができる。ＰＣＲは、分子生物学的なツールであり、増幅の結果を確認するための検出技術と共に使用する必要がある。ＰＣＲの利点は、標的ＤＮＡの量をおよそ４時間で１００万から１０億倍に増幅することにより感受性を高めることにある。ＰＣＲは、診断に関する状況においてあらゆる公知の核酸を増幅するのに使用できる（Mokら、Gynaecologic Oncology、1994、52：247〜252）。

【0353】

増幅抵抗変異システム（ＡＲＭＳ（商標））（Newtonら、Nucleic Acids Res.、1989、17、2503〜2516）などの対立遺伝子特異的な増幅技術も、一塩基の突然変異を検出するのに使用することができる。適切なＰＣＲ増幅条件下において、プライマーの３’末端に一塩基のミスマッチが存在していれば、完全にマッチする対立遺伝子を優先的に増幅するのに十分であり（Newtonら、1989、上記）、密接に関連した種の識別を可能にする。上述したプライマーを使用する増幅システムの原理は、ミスマッチした３’残基を有するオリゴヌクレオチドは、適切な条件下でのＰＣＲにおいてプライマーとして機能しないと予想されることである。この増幅システムは、アガロースゲル電気泳動後に反応混合物を単に精査するだけで遺伝子型解析を可能にする。

【0354】

増幅産物の分析は、自動化および手動のゲル電気泳動、マススペクトロメトリー、および同種のものなどの、それらのサイズに従って増幅産物を分離することができるあらゆる方法を使用して行うことができる。

【0355】

核酸の単離、増幅および分析方法は当業者にとって慣例的なものであり、プロトコールの例は、例えば、GreenおよびSambrook編、Molecular Cloning：A Laboratory Manual（2012年、第4版、1〜3巻、ISBN 9781936113422）、Cold Spring Harbor Laboratory Press、ニューヨーク州コールドスプリングハーバー）で見出すことができる。ＰＣＲ増幅で使用される方法に関する特に有用なプロトコールの情報源は、M. J. McPherson、S. G. Mailer、R. Beynon、C. Howe、Springer VerlagによるPCR (Basics: From Background to Bench)；第1版（2000年10月15日）、ISBN：0387916008である。

【0356】

また本発明は、ＥＲα遺伝子中の標的核酸を増幅するためのディジェネレートプライマーおよび増幅プロトコールおよび結果の分析を含む説明書を含む、予測および診断キットも提供する。本キットは、その代わりに、緩衝液、酵素、および増幅と増幅産物の分析を行うための容器も含んでいてもよい。また本キットは、ＤＮＡマイクロアレイまたは他の支持体などの他のツールを含むスクリーニングもしくは診断キットの構成要素であってもよい。好ましくは、本キットはまた、１つまたはそれより多くの対照テンプレート、例えば、正常組織サンプル、および／または参照遺伝子において異なる分散を提示する一連のサンプルから単離された核酸も提供する。

【0357】

一実施態様において、本キットは、２種またはそれより多くのプライマー対を提供し、各対は、参照（ＥＲα）遺伝子の異なる領域（各領域は、潜在的な分散の部位である）を増幅することができ、それによって１回の反応または数々の平行する反応で生体サンプルにおける数々の遺伝子分散の発現を分析するためのキットが提供される。

【0358】

本キット中のプライマーは、増幅産物の検出および核酸の分散の結果分析を容易にするために、標識、例えば蛍光標識されていてもよい。また本キットは、１回の分析で１つより多くの分散を検出することも可能にする。それゆえに、組み合わせキットは、参照遺伝子の異なるセグメントを増幅することができるプライマーで構成されると予想される。プライマーは、例えばそれぞれの分散が区別できるように異なる蛍光標識を使用して、示差的に標識されていてもよい。

【0359】

別の形態において、本発明は、がんに罹った患者の処置方法であって、患者の腫瘍細胞におけるＥＲα遺伝子の突然変異状態または野生型の状態を決定すること、およびＥＲα遺伝子が突然変異している場合、式（Ｉ）の化合物の有効量を患者に投与することを含む、上記処置方法を提供する。

【0360】

用語「有効な」および「有効性」は、本明細書で使用される場合、薬理学的な有効性と生理学的な安全性の両方を包含する。薬理学的な有効性は、患者において望ましい生物学的作用をもたらす処置の能力を指す。生理学的な安全性は、処置を施した結果生じる細胞、臓器および／または生物レベルでの毒性または他の不利な生理学的効果のレベルを指す（しばしば副作用と称される）。「有効がより低い」は、処置によって、治療的に有意により低いレベルの薬理学的な有効性および／または治療的により高いレベルの不利な生理学的効果がもたらされることを意味する。

【0361】

本発明の別の形態によれば、腫瘍細胞が突然変異ＥＲα遺伝子を所有すると同定されたがん患者を処置するための、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の使用が提供される。一実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、実施例１である。

【0362】

本発明の別の形態によれば、突然変異ＥＲα遺伝子を有すると同定された腫瘍細胞を有するがんを処置するための、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。一実施態様において式（Ｉ）の化合物は、実施例１である。

【0363】

本発明の別の形態によれば、式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、突然変異ＥＲα遺伝子を有すると同定された腫瘍細胞を用いたがんの処置方法が提供される。一実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、実施例１である。

【0364】

さらなる実施態様において、本発明は、突然変異ＥＲα遺伝子を有すると同定された腫瘍細胞を用いたがんの予防および処置で使用するための、式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物に関する。一実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、実施例１である。

【0365】

上記の全ての形態に関して、決定／同定されたＥＲαの突然変異型は、遺伝子全体にわたりあらゆる位置に存在する。

【0366】

上記の全ての形態に関して、一例として乳がんなどの腫瘍を使用した場合、決定／同定されたＥＲαの特定の突然変異型は、Ｓｅｒ４６３Ｐｒｏ、Ｖａｌ５４３Ｇｌｕ、Ｌｅｕ５３６Ａｒｇ、Ｔｙｒ５３７Ｓｅｒ、Ｔｙｒ５３７ＡｓｎおよびＡｓｐ５３８Ｇｌｙの位置にあるものである。

【0367】

図面の簡単な説明
図１は、実施例７の形態ＡのＸ線粉末回折パターンを示す。
図２は、実施例１の形態ＢのＸ線粉末回折パターンを示す。
図３は、実施例１の形態ＢのＤＳＣサーモグラムを示す。
図４は、実施例１の形態ＡのＸ線粉末回折パターンを示す。
図５は、実施例１の形態ＡのＴＧＡサーモグラムを示す。
図６は、実施例１の形態ＣのＸ線粉末回折パターンを示す。
図７は、実施例１の形態ＣのＴＧＡサーモグラムを示す。
図８は、実施例１１のＸ線粉末回折パターンを示す。
図９は、実施例１１のＤＳＣトレースを示す。
図１０は、実施例１およびＡＺＤ２０１４を用いたＭＣＦ−７異種移植片研究の結果を示す。
図１１は、実施例１を用いたＨＣＣ１４２８長期エストロゲン枯渇（ＬＴＥＤ）異種移植片の効能研究の結果を示す。
図１２は、実施例１を用いたＨＣＣ１４２８長期エストロゲン枯渇（ＬＴＥＤ）異種移植片の効能研究の結果を示す。

【実施例】

【0368】

以下の実施例にて本発明を例示するが、全般的には以下の通りである：
（ｉ）操作は、特に他の指定がない限り、周囲温度、すなわち１７〜２５℃の範囲で、窒素などの不活性ガスの雰囲気下で実行された。

【0369】

（ｉｉ）蒸発は、ロータリーエバポレーション、または真空中でジェネバック（Genevac）の器具もしくはバイオタージｖ１０（Biotage v10）エバポレーターを利用することによって実行され、ろ過により残留した固体を除去した後、ワークアップ手法を実行された。

【0370】

（ｉｉｉ）フラッシュクロマトグラフィー精製は、プレパックされたレディセップＲｆゴールド（RediSep Rf Gold（商標））シリカカラム（２０〜４０μｍ、球状の粒子）、グレースリゾルブ（GraceResolv（商標））カートリッジ（ダビシル（Davisil（登録商標））シリカ）またはシリサイクル（Silicycle）カートリッジ（４０〜６３μｍ）を使用した、自動化されたテレダイン（Teledyne）のイスコ・コンビフラッシュ（Teledyne Isco CombiFlash（登録商標））Ｒｆまたはテレダインのイスコ・コンビフラッシュ（登録商標）コンパニオン（Companion（登録商標））で行われた。

【0371】

（ｉｖ）分取用クロマトグラフィーは、ギルソン（Gilson）のＵＶコレクションを備えたプレップＨＰＬＣ機器で行われた。

【0372】

（ｖ）キラル分取用クロマトグラフィーは、ＵＶコレクションを備えたギルソンの機器（２３３インジェクター／画分コレクター、３３３および３３４ポンプ、１５５ＵＶ検出器）またはバリアン（Varian）のプレップスター（Prep Star）機器（２×ＳＤ１ポンプ、３２５ＵＶ検出器、７０１画分コレクター）で、ポンプをギルソンの３０５インジェクションを用いて稼働させて行われた；
（ｖｉ）収量が示される場合、それは必ずしも最大の到達可能な収量ではない。

【0373】

（ｖｉｉ）一般的に、式Ｉの最終産物の構造は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法によって確認された。ＮＭＲ化学シフト値は、デルタスケールで測定された［プロトン磁気共鳴スペクトルは、ブルカー（Bruker）のアバンス５００（Avance 500）（５００ＭＨｚ）またはブルカーのアバンス４００（４００ＭＨｚ）機器を使用して決定された］。測定値は、特に他の規定がない限り周囲温度で取られた。以下の略語を使用した：ｓ、一重項；ｄ、二重項；ｔ、三重項；ｑ、四重項；ｍ、多重項；ｄｄ、二重の二重項；ｄｄｄ、二重の二重の二重項；ｄｔ、三重の二重項；ｂｓ、幅広なシグナル。

【0374】

（ｖｉｉｉ）一般的に、式Ｉの最終産物はまた、液体クロマトグラフィー（ＬＣＭＳまたはＵＰＬＣ）後のマススペクトロスコピーによっても特徴付けられた。ＵＰＬＣは、１ｍｌ／分の流速で、１．５０分にわたり９７％Ａ＋３％Ｂから３％Ａから９７％Ｂの溶媒系を使用した（開始条件などに戻す平衡化にかかる総稼働時間は、１．７０分である）、ウォーターズ（Waters）のＳＱマススペクトロメーターを備えたウォーターズのＵＰＬＣ（カラム温度４０、ＵＶ＝２２０〜３００ｎｍ、マススペクトロメトリー＝ポジティブ／ネガティブの切り換えを備えたＥＳＩ）を、使用して実行され、ここでＡ＝０．１％ギ酸水溶液（酸研究用）または０．１％アンモニア水溶液（塩基研究用）であり、Ｂ＝アセトニトリルであった。酸分析の場合、使用したカラムは、ウォーターズのアクイティーＨＳＳ Ｔ３（Acquity HSS T3）、１．８μｍ、２．１×５０ｍｍであり、塩基分析の場合、使用したカラムは、ウォーターズのアクイティーＢＥＨ、１．７μｍ、２．１×５０ｍｍであった。ＬＣＭＳは、ウォーターズのＺＱ ＥＳＣｉマススペクトロメーターおよびフェノメネックス（Phenomenex）のジェミニ−ＮＸ（Gemini-NX）（５０×２．１ｍｍ、５μｍ）カラムを備えたウォーターズのアライアンスＨＴ（Alliance HT）（２７９５）を、１．１ｍｌ／分の流速、０．５分の保持を含め４分にわたり９５％Ａから９５％Ｂで使用して実行された。変更因子は、酸性または塩基性の方法かどうかに応じて、一定の５％Ｃ（５０：５０のアセトニトリル：０．１％ギ酸水溶液）またはＤ（５０：５０アセトニトリル：０．１％水酸化アンモニウム水溶液（０．８８ＳＧ）で維持される。

【0375】

（ｉｘ）イオン交換精製は、一般的に、ＳＣＸ−２（バイオタージのプロピルスルホン酸を官能化したシリカ。三官能価を有するシランを使用して製造された。末端のキャッピングなし）カートリッジを使用して行われた。

【0376】

（ｘ）中間体の純度は、薄層クロマトグラフ、マススペクトル、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）および／またはＮＭＲ分析により評価した。

【0377】

（ｘｉ）実施例７のＸＲＰＤ分析の場合、サンプルをバックグラウンドがゼロのシリコンウェーハにマウントし、ＰＡＮアナリティカルＣｕｂｉＸプロ（PANalytical CubiX Pro）回折計（ｌ＝１．５４１８Å）を使用して分析した。サンプルを回転させて、計数統計を改善した。データは、シータ−２シータの立体配置の反射配置で、２°から４０°の２シータのスキャン範囲にわたり０．０２５０６７°の増分ごとに２５秒の曝露で収集した。Ｘ線は、４５ｋＶおよび４０ｍＡで操作された銅製の長い微小焦点管によって生成した。Ｘ線粉末回折分野の当業者は、ピークの相対強度は、例えば、サンプルの分析に影響を与える可能性がある３０マイクロメートルを超えるサイズの粒子や不統一なアスペクト比によって影響される可能性があることも認識していると予想される。また当業者は、反射の位置は、回折計においてサンプルが設置される正確な高さおよび回折計のゼロ較正によって影響される可能性があることも認識していると予想される。サンプル表面の平面性も小さい作用を有する可能性がある。したがって提示される回折パターンデータは、絶対値として解釈されないものとする。

【0378】

（ｘｉｉ）実施例１のＸＲＰＤ分析の場合、Ｘ線粉末回折データは、ＰＡＮアナリティカルの単結晶シリコン（ＳＳＣ）ウェーハマウントに結晶質材料のサンプルをマウントして、顕微鏡スライドの助けによってサンプルを薄層に塗り広げることによって決定された。サンプルを３０毎分回転数で回転させ（計数統計を改善するため）、１．５４１８オングストロームの波長を用いて４５ｋＶおよび４０ｍＡで操作された銅製の長い微小焦点管によって生成されたＸ線を照射した。Ｘ線ビームを０．０４ラドのソーラスリットに通過させ、次いで自動可変発散スリットを、２０ｍｍ、最終的に２０ｍｍのビームマスクにセットした。反射した放射線を、２０ｍｍの散乱防止スリットと０．０４ラドのソーラスリットを通るように方向付けた。シータ−シータモードで２度から４０度の２シータの範囲にわたり、０．００２５０６７°の２シータ増分ごとに１．９０５秒、サンプルを晒した（連続スキャンモード）。稼働時間は３分および３６秒であった。機器には、Ｘ−セレレーター（X-Celerator）検出器が備えられていた。制御とデータ捕捉は、Ｘ’パート・インダストリー（X’Pert Industry）ソフトウェアで作動するデル（Dell）のペンティアム４ＨＴ（Pentium 4HT）ワークステーションによって行った。

【0379】

（ｘｉｉｉ）示差走査熱量測定：分析機器：ＴＡインスツルメント（TA Instruments）のＱ１０００ＤＳＣ。典型的には、標準的な蓋を備えたアルミニウム製平鍋中に入れた５ｍｇ未満の材料を、１０℃／分の一定の加熱速度で２５℃から３００℃の温度範囲にわたり加熱した。窒素を使用したパージガスを流速５０ｍｌ／分で使用した。

【0380】

（ｘｉｖ）熱重量分析分析機器：ＴＡインスツルメントのＱ５０００ＴＧＡ。典型的には、１０ｍｇ未満の材料を１００μｌの白金製平鍋に入れて、１０℃／分の一定の加熱速度で３０℃から１５０℃の温度範囲にわたり加熱される。

【0381】

（ｘｖ）以下の略語を使用した。
ａｑ． 水溶液
ＣＤＣｌ_３ 重水素化クロロホルム
Ｃｏｎｃ． 濃
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＭＡ Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＤＳＣ 示差走査熱量測定，
ＥｔＯＨ エタノール
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＩＰＡ／ｉＰｒＯＨ イソプロピルアルコール
ＭｅＣＮ アセトニトリル
ＭＴＢＥ メチルｔｅｒｔブチルエーテル
ｒｔ／ＲＴ 室温
ｓａｔ． 飽和
ｓｏｌ． 溶液
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＧＡ 熱重量分析。

【0382】

実施例１：（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸

【0383】

【化18】

【0384】

以下のプロセスは、［（Ｒ，Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−２−イウム−１−イル）フェニル）アクリレート］が形成される可能性があるために、窒素雰囲気下、光の非存在下で実行されると予想される。

【0385】

（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（３５０ｇ、７６６．６９ｍｍｏｌ）を、５Ｌの固定容器に入れた。その容器にイソプロピルアルコール（２．８０Ｌ）を添加した。水酸化ナトリウム（５Ｍ、４６０ｍｌ、２．３０ｍｏｌ）を一部ずつ添加し、混合物を２１℃で１６時間攪拌した。暗い色の溶液をフィルターで選別して微粒子を除去した。ろ液を反応装置の容器に戻した。フィルターとろ液収集容器をイソプロパノール（７００ｍｌ）で洗浄し、洗浄液を反応装置の容器に添加した。反応混合物をかき混ぜ、水（１．７５Ｌ）を添加した。その容器に濃塩酸（３７％ｗ／ｗ、１６５ｍｌ、１．９２ｍｏｌ）を入れた。その容器にさらなる塩酸（２１．５ｍｌ）を添加して、ｐＨを４．０から４．５の間に調整した。溶液を５０℃に加熱した。その容器に、内部温度を５０〜５３℃に維持しながら１時間かけて水（１．９２Ｌ）を添加した。ジャケット温度を７０℃に高めて、添加中の反応装置の温度をこの範囲に維持した。水の添加完了から１０分以内に、混合物そのものを種として結晶化を開始させた。混合物を５０〜５２℃で１．５時間保持した（ジャケットの設定温度は５８℃）。結果得られた黄色の懸濁液を、６時間かけて５℃（ジャケット温度）に冷却した。スラリーを５℃（ジャケット温度）で１１時間保持した。得られた黄色の固体をろ過により単離した。ケークをへらで練り、ケークのひび割れを予防した。容器を水（１．０５Ｌ）で洗浄した。洗浄液を使用して、ケークを洗浄した。ケークを空気中で吸引乾燥し、次いで一定重量になるまで４日にわたり真空中で乾燥させた（オーブン温度＝３０℃）。このようにして（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸を、黄色の結晶質固体である「形態Ｂ」として単離した（３１９．４５ｇ、９４％）。¹H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) 1.05 (3H, d), 1.08 - 1.28 (6H, m), 2.35 (1H, dd), 2.58 (1H, dd), 2.8 - 2.97 (2H, m), 3.47 - 3.57 (1H, m), 5.22 (1H, s), 6.67 (1H, d), 6.91 - 7.06 (2H, m), 7.19 (1H, d), 7.41 (1H, d), 7.46 (2H, d), 7.54 (1H, d), 10.58 (1H, s), 12.62 (1H, s)。

【0386】

形態Ｂの結晶質材料の形成が起こる実施例１を合成するための代替方法は、以下の通りである。

【0387】

以下のプロセスは、光分解産物（上述した通り）が形成される可能性があるために、窒素雰囲気下、光の非存在下で実行されると予想される。（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（５０．０ｇ；１０９．５３ｍｍｏｌ）を、イソプロピルアルコール（４５０ｍｌ）中で攪拌した。水酸化ナトリウム（６８．３４ｇ、６５．７２ｍｌ、３２８．５８ｍｍｏｌ）を一部ずつ添加し、混合物を２０℃で１６時間攪拌した。反応混合物を水（２５０ｍｌ）で希釈し、ｐＨを濃塩酸（２７．２８ｍｌ、３１７．６３ｍｍｏｌ）でｐＨ４に調整し、混合物を５０℃に加熱した。温度を４５℃より高く維持しながら３０分かけてさらなる水（２２５ｍｌ）を添加した。添加中、材料が結晶化し始めた。混合物を５時間かけて５０℃から５℃に冷却し、次いで懸濁液をさらに１１時間０℃で保持した。黄色の固体をろ過により単離した。ろ過ケークを水（１００ｍｌ）で洗浄し、フィルター上でさらに２０分乾燥させ、次いで真空オーブン中で一定重量になるまで１６時間乾燥させ（３０℃、脱気）、表題の化合物（４６．５２ｇ）を結晶質固体（形態Ｂ）として得た。
¹H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) 1.02 - 1.09 (3H, m), 1.17 (6H, dd), 2.37 (1H, dd), 2.59 (1H, dd), 2.8 - 2.98 (2H, m), 3.47 - 3.58 (1H, m), 5.24 (1H, s), 6.68 (1H, d), 6.9 - 7.06 (2H, m), 7.20 (1H, d), 7.38 - 7.51 (3H, m), 7.55 (1H, d), 10.59 (1H, s), 12.60 (1H, br)。また結晶性形態Ｂは、エタノール／水の混合物およびエタノール／ＭＴＢＥの混合物からも単離することができる。

【0388】

本発明のさらなる形態において、イソプロパノール／水の混合物から単離された実施例１の結晶性形態Ｂが提供される。

【0389】

本発明のさらなる形態において、実施例１の結晶性形態Ｂを単離するための方法であって、イソプロピルアルコールおよび塩基中での（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレートの加水分解、それに続く水性イソプロパノールからの結晶質生成物の酸性化および単離を含む、上記方法が提供される。

【0390】

実施例１の形態Ｂは、ＣｕＫα放射線を使用して測定された以下の２θ値：８．４および１０．９の少なくとも一方を示すことを特徴とする。実施例１の形態Ｂは、実質的に図２で示されるようなＸ線粉末回折パターンを示すことを特徴とする。表Ａに、１０のＸ線粉末回折ピークを示す。

【0391】

【表2】

【0392】

実施例１の形態ＢのＤＳＣ分析から、それが１８８．６℃で融解の開始を示す吸熱を用いた高融点固体であることが示される（図３）。実施例１は、融解による分解を示すが、融解の開始においてばらつきが生じる可能性があるため、１８８．６℃の値は絶対値として解釈されないものとする。

【0393】

実施例１の２種の溶媒和型も観察した。

【0394】

形態Ａは、メチル第三ブチルエーテル一溶媒和物である。図４に、Ｘ線粉末回折パターンを示す。ＴＧＡは、５５〜１５０℃において１４．７％ｗ／ｗの関連する重量減少を示す（図５）。メチル第三ブチルエーテル一溶媒和物に関する理論上の損失は、１６．６％と計算される。

【0395】

形態Ｃは、アセトン一溶媒和物であり、Ｘ線粉末回折パターンは図６に示される。ＴＧＡは、５０〜１５０℃％において１０．０％ｗ／ｗの関連する重量減少を示す（図７）。アセトン一溶媒和物に関する理論上の損失は、１１．０％と計算される。

【0396】

出発原料として使用された（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレートを以下のようにして調製した。

【0397】

２−フルオロ−２−メチルプロピルトリフルオロメタンスルホネートの調製

【0398】

【化19】

【0399】

窒素雰囲気下で、２−フルオロ−２−メチル−プロパン−１−オール（１０００ｇ、１０．８６モル）を２０Ｌの容器に入れた。その容器にＤＣＭ（８．５Ｌ）を添加した。混合物をかき混ぜ、１℃に冷却した。混合物に、２，６−ルチジン（１３９５ｇ、１３．０２モル）を添加した。ＤＣＭ（１Ｌ）中のトリフルオロメタンスルホン酸無水物（３２２０ｇ；１１．４１モル）の溶液を、反応混合物の温度を５℃未満に維持しながら（添加中、ジャケットの設定温度を−２０℃に下げた）１時間かけて添加した。追加の容器とラインをＤＣＭ（０．５Ｌ）で洗浄し、その容器に洗浄液を一部ずつ添加した。混合物を０℃で１時間かき混ぜ、赤色の溶液を得た。

【0400】

濃塩酸の溶液（１．２３Ｌ、３７％ｗ／ｗ、１６．３モル）を水（７Ｌ）に添加した。希塩酸溶液を赤色の溶液に添加し、攪拌した混合物を２５℃に温めた。層を分離させて上部の水層を捨てた。有機層を水（２×５Ｌ）で洗浄した。有機溶液を減圧下で濃縮し、赤色の油状物を得た。ワイプトフィルムエバポレーター（wiped film evaporator）（４．５ｍｂａｒ、ジャケット温度５０℃、コンデンサー温度４℃）を使用した蒸留によって赤色の油状物を精製して、２−フルオロ−２−メチルプロピルトリフルオロメタンスルホネート（１．６９Ｋｇ、６９％）を薄い赤色の油状物として得た。¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 27℃) δ 1.40 (6H, d), 4.79 (2H, d)。

【0401】

（Ｒ）−Ｎ−（１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−イル）−２−フルオロ−２−メチルプロパン−１−アミンの調製

【0402】

【化20】

【0403】

（２Ｒ）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−アミン（３．８１ｋｇ、２１．２１モル）を、窒素雰囲気下で１００Ｌのガラスが内張りされたジャケット付き容器に添加した。１，４−ジオキサン（２３Ｌ）を添加し、かき混ぜ機のスイッチを入れた。攪拌した懸濁液にジイソプロピルエチルアミン（５．５５Ｌ；３１．８２モル）、続いて（２−フルオロ−２−メチル−プロピル）トリフルオロメタンスルホネート（５．５５ｋｇ、２３．７７モル）を添加した。その容器に１，４−ジオキサン（４Ｌ）を添加し、混合物を７５℃に加熱した。加熱を２４時間続け、その後、混合物を２５℃に冷却した。その容器に水（３０．５Ｌ）、続いてトルエン（３０．５Ｌ）を添加した。４０分後、かき混ぜ機のスイッチを切って、層を分離させた。水層を除去し、有機溶液に水（３０．５Ｌ）を添加した。混合物を１５分かき混ぜ、その後、層を分離させた。容器から水層を除去した。およそ２７Ｌの蒸留物が除去されるまで、有機溶液を減圧蒸留によって濃縮した（ジャケット温度６５℃、１１０ｍｂａｒの圧力）。容器中に残存した溶液を冷却して、（Ｒ）−Ｎ−（１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−イル）−２−フルオロ−２−メチルプロパン−１−アミン（１５．４ｋｇ、９７％）を、トルエン中の溶液（３３％ｗ／ｗ）として得た。¹H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) 0.98 (3H, d), 1.26 (3H, d), 1.30 (3H, d), 2.57 - 2.75 (3H, m), 2.81 (1H, dd), 2.84 - 2.92 (1H, m), 6.97 (1H, t), 7.06 (1H, t), 7.11 - 7.22 (1H, トルエンシグナルにより不明瞭になった多重項), 7.34 (1H, d), 7.52 (1H, d), 10.80 (1H, s)。

【0404】

ナトリウム｛２，６−ジフルオロ−４−［（１Ｅ）−３−メトキシ−３−オキソプロパ−１−エン−１−イル］フェニル｝（ヒドロキシ）メタンスルホネートの調製

【0405】

【化21】

【0406】

２，６−ジフルオロ−４−ブロモベンズアルデヒド（１０００ｇ、４．３９ｍｏｌ）および１，１−ビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）フェロセンパラジウムジクロリド（５７．２ｇ；８７．７６ｍｍｏｌ）を２０Ｌの容器に入れた。テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムクロリド（１２２ｇ、４３８．９７ｍｍｏｌ）、続いてジメチルアセトアミド（５Ｌ）を添加した。容器を窒素ガス流でパージした。その容器にジイソプロピルエチルアミン（１．５Ｌ、８．７８ｍｏｌ）、続いてアクリル酸メチル（０．４３５Ｌ、４．８２ｍｏｌ）を添加した。混合物をかき混ぜ、６０℃に加熱した。混合物をこの温度で２０時間保持した。混合物に、酢酸エチル（１０Ｌ）を添加し、加熱を止めた。その容器に水（５Ｌ）を添加した。攪拌した混合物を２５℃に冷却し、攪拌を１０分続けた。かき混ぜを止め、層を分離させた。水層を除去し、捨てた。有機層を塩酸（２．２Ｍ、６Ｌ）および水（５Ｌ）で逐次的に洗浄した。その容器にホスホニクスＳＰＭ３２（Phosphonics SPM32）スカベンジャー（１０５０ｇ、１０５０ｍｏｌ）を添加し、混合物を２５℃で３日間攪拌した。固体材料をろ過により除去した。ケークを、エタノール（５Ｌ）で洗浄し、合わせたろ液を減圧下で濃縮し、固体を得た。２０Ｌの容器中で、固体をエタノール（９Ｌ）中に溶解させ、溶液をかき混ぜた。溶液を５０℃に加熱した。水（２．５Ｌ）中の重亜硫酸ナトリウム（４６０ｇ、４．４２ｍｏｌ）の溶液を３０分かけて添加した。それにより得られた粘性のスラリーを５０℃で４時間攪拌した。スラリーを２時間かけて２０℃に冷却した。固体をろ過により単離し、容器およびろ過ケークを、ＭＴＢＥ（２×３Ｌ）で洗浄した。結果得られた固体を真空中で乾燥させ、ナトリウム｛２，６−ジフルオロ−４−［（１Ｅ）−３−メトキシ−３−オキソプロパ−１−エン−１−イル］フェニル｝（ヒドロキシ）メタンスルホネート（１０３５ｇ、７１％）を淡褐色の固体として得た。¹H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) δ 3.73 (3H, s), 5.32 (1H, d), 5.94 (1H, d), 6.76 (1H, d), 7.40 (2H, d), 7.60 (1H, d)。

【0407】

（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−ホルミルフェニル）アクリレートの調製

【0408】

【化22】

【0409】

窒素雰囲気下で、ナトリウム｛２，６−ジフルオロ−４−［（１Ｅ）−３−メトキシ−３−オキソプロパ−１−エン−１−イル］フェニル｝（ヒドロキシ）メタンスルホネート（１．２１１ｋｇ、３．５２ｍｏｌ）、続いて炭酸カリウム（０．９７４ｋｇ、７．０５ｍｏｌ）を、１００Ｌの容器に入れた。水（９．１Ｌ）を添加し、かき混ぜ機を始動させた。酢酸エチル（９．１Ｌ）を添加した。混合物を２５℃で５時間かき混ぜた。かき混ぜ機を止め、混合物をそのまま２５℃で１４時間放置した。下部の水相を除去し、捨てた。上部の有機相を減圧下で濃縮し、薄茶色の固体を得た。固体を真空中で乾燥させ、（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−ホルミルフェニル）アクリレートを茶色の固体として得た（６０８ｇ、７６％）。¹H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) δ 3.77 (3H, s), 6.94 (1H, d), 7.66 (1H, d), 7.71 (2H, d), 10.20 (1H, s)。

【0410】

（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレートの調製

【0411】

【化23】

【0412】

窒素雰囲気下で、（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−ホルミルフェニル）アクリレート（０．６０６ｋｇ、２．６５ｍｏｌ）および（Ｒ）−Ｎ−（１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−イル）−２−フルオロ−２−メチルプロパン−１−アミン（トルエン中の３３％ｗ／ｗ溶液、２．０ｋｇ、２．６５ｍｏｌ）、続いてトルエン（４．２２Ｌ）を、２０Ｌの容器に入れた。その容器に酢酸（３０４ｍｌ、５．３１ｍｏｌ）を添加した。混合物をかき混ぜ、８０℃に加熱した。混合物を８０℃で一晩かき混ぜ、その後２０℃に冷却したである。水（３．３Ｌ）中の炭酸カリウム（０．９１６ｋｇ、６．６３ｍｏｌ）の溶液を混合物に添加した。混合物を１０分攪拌し、その後かき混ぜ機のスイッチを切って、層を分離させた。水層を除去し、捨てた。反応装置に水（３．３Ｌ）を入れた。混合物を１０分かき混ぜ、次いでそのまま１０分放置した。下部の水相を除去し、有機層をそのまま室温で一晩放置した。バッチを８０℃に加熱した。この熱い溶液にヘプタン（４．６１Ｌ）を３５分かけて添加した。攪拌した混合物をおよそ８０℃で１時間で保持した。混合物を２時間かけて３０℃に冷却し、その時間中に生成物が結晶化した。スラリーを３０℃で２．５時間攪拌した。固体をろ過により単離した。反応装置容器の壁をヘプタンで洗浄し、洗浄液をろ過ケークを洗浄するのに使用した。固体を真空中で乾燥させ、（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレートをピンク色の固体として得た（０．７６３ｋｇ、６１％）。¹H NMR (400 MHz, DMSO, 27℃) δ 1.06 (3H, d), 1.13 (3H, d), 1.21 (3H, d), 2.35 (1H, dd), 2.58 (1H, dd), 2.8 - 2.98 (2H, m), 3.44 - 3.61 (1H, m), 3.74 (3H, s), 5.24 (1H, s), 6.80 (1H, d), 6.9 - 7.05 (2H, m), 7.19 (1H, d), 7.41 (1H, d), 7.50 (2H, d), 7.63 (1H, d), 10.58 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 457。

【0413】

実施例１：（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸の代替の調製

【0414】

【化24】

【0415】

ＴＨＦ（１４３ｍｌ）およびメタノール（７１．４ｍｌ）中の（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（１１．２８ｇ、２４．７１ｍｍｏｌ）の溶液に、７．５Ｍ水酸化ナトリウム（３２．９ｍｌ、２４７．１０ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で４時間攪拌した。水溶液のｐＨを、２ＮのＨＣｌ溶液の添加によって約６．５に調整し、次いでこの溶液をジエチルエーテル（３×１５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機物をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濃縮した。未精製の生成物をフラッシュシリカクロマトグラフィーで、ＤＣＭ中０から２０％のメタノールの溶出勾配により精製し、黄色の固体を得た。アセトン／ヘプタンでの粉砕を試みたが、予想以上の溶解性のためにうまくいかなかった。溶媒を除去して、黄色の固体を得て、これを数滴のジエチルエーテルを含むイソヘキサン（５０ｍｌ）で粉砕し、結果得られた固体をろ過して除き、乾燥させ、未精製の生成物（１１．１４ｇ）を黄色の粉末として得た。固体を、窒素下および暗所でエタノール（１００ｍｌ）中に溶解させた。次いでこの溶液を、６２℃、暗所で、真空ポンプを使用して５ｍＢａｒで蒸発させた。この手法を２回繰り返し、結果得られた黄色のガラス状物質をへらでかき取って微粉末にし、真空ポンプを使用して、６２℃で６０分、５ｍＢａｒに晒し、黄色の粉末を得た。次いでこの粉末を真空オーブン中で、Ｐ_２Ｏ_５上、６２℃、３００ｍＢａｒで一晩放置し、表題の生成物（９．７７ｇ、８９％）を薄黄色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, DMSO, 27℃) δ 1.07 - 1.16 (3H, m), 1.18 - 1.29 (6H, m), 2.39 (1H, dd), 2.62 (1H, dd), 2.92 (2H, dd), 3.56 (1H, d), 5.26 (1H, s), 6.70 (1H, d), 7.02 (2H, dd), 7.22 (1H, d), 7.47 (3H, dd), 7.58 (1H, d), 10.60 (1H, s), 12.60 (1H, s). m/z: ES+ (エレクトロスプレー+) [M+H]+ 443。

【0416】

出発原料として使用された（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレートを以下のように調製した。

【0417】

２−フルオロ−２−メチルプロパン−１−オールの調製

【0418】

【化25】

【0419】

水素化アルミニウムリチウム（３．３７ｇ、８８．５６ｍｍｏｌ）を、ジエチルエーテル（１８４ｍｌ）中のエチル２−フルオロ−２−メチルプロパノエート（９．９ｇ、７３．８０ｍｍｏｌ）の冷却溶液に、０℃で、１５分かけて一部ずつ添加した。反応物を１時間攪拌し、次いで水（３．３ｍｌ）、続いて１５％ＮａＯＨ溶液（３．３ｍｌ）および水（６．７ｍｌ）を逐次的に添加した。この懸濁液を１５分攪拌し、次いろ過し、固体をジエチルエーテルで洗浄した。ろ液を蒸発させ、２−フルオロ−２−メチルプロパン−１−オール（５．９０ｇ、８７％）を無色の油状物として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 27℃) δ 1.37 (6H, d), 3.56 (2H, d), OHは観察されなかった。

【0420】

２-フルオロ-２-メチルプロピルトリフルオロメタンスルホネートの代替の調製

【0421】

【化26】

【0422】

トリフルオロメタンスルホン酸無水物（１２．０６ｍｌ、７１．２４ｍｍｏｌ）、続いて２，６−ルチジン（１１．４２ｍｌ、８１．４２ｍｍｏｌ）を、−１０℃で、ＤＣＭ（１４６ｍｌ）中の２−フルオロ−２−メチルプロパン−１−オール（６．２５ｇ、６７．８５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応物を１時間攪拌し、次いで２ＮのＨＣｌ（２×１００ｍｌ）および飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（２×１００ｍｌ）で洗浄した。次いで有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濃縮し、２−フルオロ−２−メチルプロピルトリフルオロメタンスルホネート（１２．８９ｇ、８５％）を赤色の油状物として得た。
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 27℃) δ 1.46 (6H, d), 4.41 (2H, d)。

【0423】

この中間体は、減圧蒸留により精製することもできる。ＤＳＣによる分析から、この材料は自己発熱する可能性を有することが示された。プロセスの安全性の理由から、ワイプトフィルムエバポレーターまたはその類似物が、バッチ蒸留より好ましい可能性がある。

【0424】

（Ｒ）−Ｎ−（１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−イル）−２−フルオロ−２−メチルプロパン−１−アミンの代替の調製

【0425】

【化27】

【0426】

２−フルオロ−２−メチルプロピルトリフルオロメタンスルホネート（８．０４ｇ、３５．８７ｍｍｏｌ）を、ジオキサン（５０ｍｌ）中の（Ｒ）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−アミン（５．００ｇ、２８．７０ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（７．４４ｍｌ、４３．０４ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応物を９０℃で３時間加熱した。室温に冷却した後、反応物をＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（２×１００ｍｌ）で洗浄した。水相をＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）で抽出し、次いで合わせた有機物をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、濃縮した。未精製の生成物をフラッシュシリカクロマトグラフィーで、１００％ＥｔＯＡｃの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｒ）−Ｎ−（１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−イル）−２−フルオロ−２−メチルプロパン−１−アミン（６．４９ｇ、９１％）を茶色の油状物として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 27℃) δ 1.14 (3H, d), 1.31 (3H, d), 1.37 (3H, d), 1.94 (1H, s), 2.63 - 2.87 (3H, m), 2.92 (1H, dd), 3.07 (1H, h), 7.07 (1H, d), 7.08 - 7.15 (1H, m), 7.16 - 7.24 (1H, m), 7.37 (1H, d), 7.62 (1H, d), 8.04 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 249。

【0427】

（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−ホルミルフェニル）アクリレートの代替の調製

【0428】

【化28】

【0429】

４−ブロモ−２，６−ジフルオロベンズアルデヒド（９．９９ｇ、４５．２０ｍｍｏｌ）およびアクリル酸メチル（６．１４ｍｌ、６７．８１ｍｍｏｌ）を完全に脱気したＤＭＡ（１００ｍｌ）に溶解させ、トリ−ｏ−トリルホスフィン（１．３７６ｇ、４．５２ｍｍｏｌ）、パラジウム（ＩＩ）アセテート（０．５０７ｇ、２．２６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１２．６０ｍｌ、９０．４１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を攪拌し、８０℃に６時間加熱した。反応混合物を冷却し、セライトの層を通過させてろ過し、メタノール（５０ｍｌ）で洗浄した。未精製の生成物をシリカに予め吸収させ、吸引クロマトグラフィーで、０〜１０％のジエチルエーテル／ジクロロメタンで溶出させることによって精製した。望ましい生成物を含有する画分を蒸発させ、ジエチルエーテル（５０ｍｌ）で粉砕し、黄色の固体を得て、これを水（５０ｍｌ）で粉砕し、高真空下、５０℃で乾燥させ、（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−ホルミルフェニル）アクリレート（８．８５ｇ、８７％）を黄色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, DMSO, 27℃) δ 3.75 (3H, s), 6.93 (1H, d), 7.52 - 7.81 (3H, m), 10.18 (1H, s)。ＬＣＭＳにおいて質量イオンは観察されなかった。

【0430】

（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレートの代替の調製

【0431】

【化29】

【0432】

（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−ホルミルフェニル）アクリレート（６．５８ｇ、２９．０９ｍｍｏｌ）を、トルエン（５１．１ｍｌ）および酢酸（２．７８ｍｌ、４８．４８ｍｍｏｌ）中の（Ｒ）−Ｎ−（１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−イル）−２−フルオロ−２−メチルプロパン−１−アミン（６．０２ｇ、２４．２４ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。反応物を８０℃で５時間加熱した。反応混合物を、ＳＣＸ−２カラムを使用したイオン交換クロマトグラフィーによって精製した。７ＭのＮＨ_３／メタノールを使用して、カラムから望ましい生成物を溶出させ、純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、茶色の固体を得た。未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ヘプタン中０から３０％のＥｔＯＡｃの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、表題の生成物（７．５２ｇ、６８．０％）を黄色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, DMSO, 100℃) δ 1.10 (3H, d), 1.12 - 1.31 (6H, m), 2.28 - 2.72 (2H, m), 2.84 - 3.09 (2H, m), 3.52 - 3.69 (1H, m), 3.76 (3H, s), 5.30 (1H, s), 6.64 (1H, d), 6.9 - 7.11 (2H, m), 7.21 (1H, d), 7.32 (2H, d), 7.42 (1H, d), 7.58 (1H, d), 10.14 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 457。

【0433】

実施例２：（Ｅ）−３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸

【0434】

【化30】

【0435】

７．５Ｍ水酸化ナトリウム溶液（０．９８３ｍｌ、７．３７ｍｍｏｌ）を、メタノール（５ｍｌ）中の（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（３１０ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を２０℃で２時間攪拌した。反応混合物を、ＳＣＸ−２カラムを使用したイオン交換クロマトグラフィーによって精製した。７ＭのＮＨ_３／メタノールを使用して、カラムから望ましい生成物を含有する画分を溶出させ、純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、黄色の固体を得た。未精製の生成物を、分取用ＨＰＬＣ（ウォーターズのサンファイン（SunFire）カラム、５μのシリカ、５０ｍｍの直径、１００ｍｍの長さ）で、溶出液として水（０．１％ギ酸含有）およびＭｅＣＮの極性が徐々に減少する混合物を使用して精製した。望ましい化合物を含有する画分を乾燥するまで蒸発させ、次いでＳＣＸ−２カラムにローディングし、メタノール中の７Ｎアンモニアで溶出させ、表題の生成物（６３．０ｍｇ、２１．０２％）を黄色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, DMSO, 30℃) δ 1.06 (3H, d), 1.30 (3H, d), 1.47 (3H, d), 2.53 - 2.64 (2H, m), 2.79 (2H, s), 3.10 (1H, d), 5.08 (1H, s), 6.47 (1H, d), 6.98 (1H, t), 7.06 (1H, t), 7.19 - 7.37 (3H, m), 7.44 (1H, d), 7.56 (1H, d), 7.63 (2H, d), 10.81 (1H, s), 12.30 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 407。

【0436】

出発原料として使用された（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレートを以下のように調製した。

【0437】

（Ｅ）−メチル３−（４−ホルミルフェニル）アクリレートの調製

【0438】

【化31】

【0439】

４−ブロモベンズアルデヒド（３０ｇ、１６２．１５ｍｍｏｌ）およびアクリル酸メチル（２０．９４ｇ、２４３．２２ｍｍｏｌ）を完全に脱気したＤＭＡ（３００ｍｌ）に溶解させ、トリ−ｏ−トリルホスフィン（４．９４ｇ、１６．２１ｍｍｏｌ）、パラジウム（ＩＩ）アセテート（１．８２０ｇ、８．１１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４５．２ｍｌ、３２４．２９ｍｍｏｌ）で処理し、１１０℃に１６時間加熱した。この時間の後に反応が完了したようにみえた。反応混合物を水（４Ｌ）に注入し、結果得られた沈殿をろ過し、乾燥させた。固体をシリカでのクロマトグラフィーにかけ、１００％のヘプタンからヘプタン中３０％のＥｔＯＡｃで溶出させた。関連する画分を合わせ、乾燥するまで蒸発させ、黄色の固体産物を得て、これをヘプタンで粉砕し、ろ過し、冷たいヘプタンで洗浄した。固体を乾燥させ、（Ｅ）−メチル３−（４−ホルミルフェニル）アクリレート（２５．６ｇ、８３％）を黄色の結晶質産物として得た。¹H NMR (400 MHz, DMSO, 30℃) δ 3.75 (3H, s), 6.79 (1H, d), 7.72 (1H, d), 7.93 (4H, s), 10.03 (1H, s)。ＬＣＭＳにおいて質量イオンは観察されなかった。

【0440】

（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレートの調製

【0441】

【化32】

【0442】

（Ｒ）−Ｎ−（１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−イル）−２−フルオロ−２−メチルプロパン−１−アミン（実施例１の出発原料の調製で説明したようにして得た）（４５０ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）および（Ｅ）−メチル３−（４−ホルミルフェニル）アクリレート（３４５ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）をトルエン（１５ｍｌ）中に溶解させた、酢酸（５ｍｌ）および分子篩を添加した。反応物を窒素下で１１０℃で１６時間攪拌し、次いで室温に冷却した。未精製の生成物を、ＳＣＸ−２カラムを使用したイオン交換クロマトグラフィーによって精製した。７ＭのＮＨ_３／メタノールを使用して、カラムから望ましい生成物を溶出させ、純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、粗生成物を得た。未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ヘプタン中０から３０％のＥｔＯＡｃの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（３１７ｍｇ、４１．６％）を黄色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 30℃) δ 1.09 (3H, d), 1.30 (3H, d), 1.47 (3H, d), 2.48 - 2.78 (4H, m), 3.30 (1H, m), 3.79 (3H, s), 5.09 (1H, s), 6.40 (1H, d), 7.12 (1H, td), 7.17 (1H, td), 7.29 (1H, d), 7.34 (2H, d), 7.43 (2H, d), 7.54 (1H, d), 7.66 (2H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 421。

【0443】

実施例３：（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸

【0444】

【化33】

【0445】

２Ｍ水酸化ナトリウム（３．０ｍｌ、６．００ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１．５ｍｌ）／メタノール（１．５ｍｌ）中の（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（２７５ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応物を室温で３時間攪拌した。ＥｔＯＡｃ（１５ｍｌ）および水（１５ｍｌ）を添加し、次いで水溶液のｐＨを、２ＮのＨＣｌの添加によって約７に調整した。層を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（１５ｍｌ）で抽出した。合わせた有機物をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濃縮した。未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ＤＣＭ中０から１０％のメタノールの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、表題の生成物（２５０ｍｇ、９４％）を薄黄色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, DMSO, 30℃) δ 0.77 (3H, d), 1.06 (3H, d), 1.93 (1H, m), 2.18 (1H, dd), 2.58 (1H, dd), 2.65 (1H, dd), 2.84 (1H, dd), 3.35 (1H, dd), 4.32 (1H, d), 4.44 (1H, d), 5.16 (1H, s), 6.67 (1H, d), 6.93 - 7.04 (2H, m), 7.21 (1H, d), 7.42 (1H, d), 7.46 (2H, m), 7.54 (1H, d), 10.57 (1H, s), 12.51 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 443。

【0446】

出発原料として使用された（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレートを以下のように調製した。

【0447】

（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロパン−１−オールの調製

【0448】

【化34】

【0449】

Ｎ，Ｎ−ジエチル−１，１，２，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−１−アミン（１８．２５ｍｌ、１００．５７ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（７７ｍｌ）中の（Ｒ）−メチル３−ヒドロキシ−２−メチルプロパノエート（９．２５ｍｌ、８３．８１ｍｍｏｌ）の溶液に一滴ずつ添加した（反応液は約４０℃に上昇）。反応物を周囲温度で１時間攪拌し、次いで還流しながら４時間温め、その後一晩かけて室温に冷却した。反応混合物を氷上に注ぎ、層を分離させた。水相をＤＣＭ（２×１５０ｍｌ）で抽出し、次いで合わせた有機物を乾燥させ、慎重に濃縮した。残留物をＴＨＦ（２００ｍｌ）中に溶解させ、氷槽中で冷却した。水素化アルミニウムリチウム（６．４５ｇ、１６７．６１ｍｍｏｌ）を１５分かけて一部ずつ添加した。反応物を０℃で１時間攪拌し、さらに１時間、室温に温めた。氷槽中で冷却した後、反応物を、水（７ｍｌ）、続いて１５％ＮａＯＨ（７ｍｌ）、最終的に水（２１ｍｌ）の添加によってクエンチした。顆粒状の固体が形成されるまで、ＭｇＳＯ_４を添加した。固体をセライトを通過させてろ過し、固体をジエチルエーテル（５０ｍｌ）で洗浄した。ろ液を、２ＮのＨＣｌ（２×１００ｍｌ）で洗浄し、次いで有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濃縮した。未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ＤＣＭ中０から１０％のＥｔＯＡｃの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロパン−１−オール（６．４２ｇ、８３％）を淡黄色の油状物として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 30℃) δ 0.97 (3H, dd), 1.96 - 2.14 (1H, m), 3.64 (2H, d), 4.3 - 4.42 (1H, m), 4.42 - 4.54 (1H, m), OHは観察されなかった。

【0450】

（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピルトリフルオロメタンスルホネートの調製

【0451】

【化35】

【0452】

ＤＣＭ（１４０ｍｌ）中の（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロパン−１−オール（７．９ｇ、８５．７７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、０℃で、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（１７．３１ｍｌ、１０２．９２ｍｍｏｌ）を一滴ずつ添加し、続いて２，６−ジメチルピリジン（１１．９５ｍｌ、１０２．９２ｍｍｏｌ）を一滴ずつ添加した。反応混合物を０℃で４５分および室温で３０分攪拌した。反応混合物をＤＣＭ（６０ｍｌ）で希釈し、１ＭのＨＣｌ（３×１００ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム溶液（１００ｍｌ）および飽和ブライン（５０ｍｌ）で逐次的に洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、ろ過し、ほぼ乾燥するまで蒸発させた。溶液をシリカのプラグに通過させてろ過し、ＤＣＭ（５０ｍｌ）で洗浄し、蒸発させ、（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピルトリフルオロメタンスルホネート（１４．３８ｇ、７４．８％）を茶色の油状物として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 27℃) δ 1.09 (3H, dd), 2.24 - 2.44 (1H, m), 4.30 (0.5H, dd), 4.37 - 4.46 (1H, m), 4.52 (2.5H, tt)。

【0453】

（Ｓ）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−イル）−３−フルオロ−２−メチルプロパン−１−アミンの調製

【0454】

【化36】

【0455】

（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピルトリフルオロメタンスルホネート（６６６ｍｇ、２．９７ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン（６．０５ｍｌ）中の（Ｒ）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−アミン（４７０ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（０．７００ｍｌ、４．０５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応物を室温で１時間攪拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ）で希釈し、水（２０ｍｌ）で洗浄した。水相をＥｔＯＡｃ（２×２０ｍｌ）で抽出し、次いで合わせた有機物を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濃縮した。未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ＤＣＭ中０から１０％のメタノールの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｓ）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−イル）−３−フルオロ−２−メチルプロパン−１−アミン（５９０ｍｇ、８８％）を茶色の油状物として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 30℃) δ 0.86 (3H, dd), 1.20 (3H, d), 1.94 - 2.11 (1H, m), 2.64~2.74 (2H, m), 2.85 - 2.98 (2H, m), 3.05 - 3.15 (1H, m), 4.13 - 4.39 (2H, m), 7.09 (1H, d), 7.12 (2H, ddd), 7.20 (1H, ddd), 7.33 - 7.41 (1H, m), 7.56 - 7.65 (1H, m), 8.10 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 249。

【0456】

（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレートの調製

【0457】

【化37】

【0458】

酢酸（２．０ｍｌ）を、トルエン（８．０ｍｌ）中の（Ｓ）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−イル）−３−フルオロ−２−メチルプロパン−１−アミン（２７３ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）および（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−ホルミルフェニル）アクリレート（実施例１の出発原料の調製で説明したようにして得た）（２２６ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応物を９５℃に２．５時間温めた。揮発物質を真空中で除去し、次いで残留物をＳＣＸ−２カラムに通過させた。次いでカラムを、７ＭのＮＨ_３／メタノールで溶出させて、生成物を遊離させた。ろ液を濃縮し、未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ＤＣＭ中０から１０％のメタノールの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（２８２ｍｇ、６１．８％）を薄黄色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 30℃)・δ 0.82 (3H, d), 1.12 (3H, d), 1.81 - 1.99 (1H, m), 2.24 (1H, ddd), 2.64 (1H, ddd), 2.71 (1H, dd), 2.93 - 3.01 (1H, ddd), 3.42 (1H, dq), 3.81 (3H, s), 4.25 - 4.39 (1H, m), 4.38 - 4.53 (1H, m), 5.20 (1H, s), 6.39 (1H, d), 6.99 (2H, m), 7.06 - 7.16 (2H, m), 7.21 - 7.25 (1H, m), 7.52 (3H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 457。

【0459】

実施例４：（Ｅ）−３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸

【0460】

【化38】

【0461】

７．５Ｍ水酸化ナトリウム溶液（０．９０４ｍｌ、６．７８ｍｍｏｌ）を、メタノール（３ｍｌ）中の（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（２８５ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を２０℃で２時間攪拌した。反応混合物を、ＳＣＸ−２カラムを使用したイオン交換クロマトグラフィーによって精製した。７ＭのＮＨ_３／メタノールを使用して、カラムから望ましい生成物を含有する画分を溶出させ、純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、黄色の固体を得た。未精製の生成物を、分取用ＬＣＭＳ（フェノメネックスのジェミニ−ＮＸアクシア・プレップＣ１８ ＯＢＤ（axia Prep C18 OBD）カラム、５μのシリカ、５０ｍｍの直径、１００ｍｍの長さ）で、溶出液として水（１％ＮＨ_３含有）およびＭｅＣＮの極性が徐々に減少する混合物を使用して精製した。望ましい化合物を含有する画分を乾燥するまで蒸発させ、表題の生成物（８０ｍｇ、２９．０％）を黄色の固体として得た。¹H NMR (500 MHz, DMSO, 33℃) δ 0.87 (3H, d), 1.04 (3H, d), 1.91 - 2.27 (2H, m), 2.50 (1H, p), 2.57 - 2.75 (2H, m), 3.13 (1H, s), 4.51 (2H, dd), 4.86 (1H, s), 6.47 (1H, d), 6.92 - 6.99 (1H, m), 7 - 7.09 (1H, m), 7.15 - 7.35 (3H, m), 7.35 - 7.5 (2H, m), 7.57 (2H, d), 10.64 (1H, d), CO₂Hは観察されなかった。m/z: ES+ [M+H]+ 407。

【0462】

出発原料として使用された（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレートを以下のように調製した。

【0463】

（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｓ，３Ｒ）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレートの調製

【0464】

【化39】

【0465】

（Ｅ）−メチル３−（４−ホルミルフェニル）アクリレート（実施例２の出発原料の調製で説明したようにして得た）（１８．５６ｇ、９７．５７ｍｍｏｌ）を、２３℃、窒素下で、酢酸（２５０ｍｌ）中の（Ｒ）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−アミン（１７ｇ、９７．５７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。結果得られた溶液を８０℃で２時間攪拌した。反応混合物を乾燥するまで蒸発させ、ＤＣＭ（５００ｍｌ）中で再溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ_３（３００ｍｌ×２）、２ＭのＮａＯＨ（ａｑ）（３００ｍｌ）、水（３００ｍｌ）、および飽和ブライン（３００ｍｌ）で逐次的に洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させ、粗生成物を得た。未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ＤＣＭ中１から７％のメタノールの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｓ，３Ｒ）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（２５．１ｇ、７４．３％）をベージュ色の発泡体として得た。生成物の大部分がシス異性体であり、分離不可能なトランス異性体を約１２％含有していた。¹H NMR (400 MHz, DMSO, 30℃) δ 1.25 (3H, d), 2.37 - 2.48 (1H, m), 2.74 (1H, d), 3.12 (1H, s), 3.73 (3H, s), 5.18 (1H, s), 6.64 (1H, d), 6.97 (2H, dd), 7.19 (1H, d), 7.36 - 7.46 (3H, m), 7.64 - 7.75 (3H, m), 10.19 (1H, s), NHは観察されなかった。m/z: ES+ [M+H]+ 347。

【0466】

（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｓ，３Ｒ）−２−アリル−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレートの調製

【0467】

【化40】

【0468】

（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｓ，３Ｒ）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（３５ｇ、１０１．０３ｍｍｏｌ）、３−ブロモプロパ−１−エン（９．６２ｍｌ、１１１．１４ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（１９．３６ｍｌ、１１１．１４ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（１６０ｍｌ）に懸濁し、窒素を５分間通してバブリングし、次いで混合物をマイクロ波管に密封した。反応物をマイクロ波反応器中で１４０℃に３．５時間加熱し、室温に冷却した。

【0469】

反応混合物を乾燥するまで蒸発させ、ＤＣＭ（１００ｍｌ）中に再溶解させ、１Ｍクエン酸（１００ｍｌ）、水（１００ｍｌ）、および飽和ブライン（１００ｍｌ）で逐次的に洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させ、粗生成物を得た。未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ヘプタン中０から２０％のＥｔＯＡｃの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−アリル−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート：（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｓ，３Ｒ）−２−アリル−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（１０．００ｇ、２５．６％）の５０：５０の混合物を薄黄色の固体として得た。 m/z:ES+ [M+H]+ 387。

【0470】

（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−アリル−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレートの調製

【0471】

【化41】

【0472】

トリフルオロ酢酸（５．５９ｍｌ、７５．２９ｍｍｏｌ）を、２０℃、窒素下で、ＤＣＭ（１００ｍｌ）中の（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｓ，３Ｒ）−２−アリル−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（９．７ｇ、２５．１０ｍｍｏｌ）に添加した。結果得られた溶液を２０℃で３日間攪拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（２５０ｍｌ）で慎重に希釈し、ＤＣＭ層を水（２５０ｍｌ）および飽和ブライン（２５０ｍｌ）で逐次的に洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させ、粗生成物を得た。未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ヘプタン中１０から２０％のＥｔＯＡｃの溶出勾配により精製した。画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−アリル−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート：（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｓ，３Ｒ）−２−アリル−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（７．９９ｇ、８２％）の６５：３５の混合物を薄黄色の固体として得た。m/z:ES+ [M+H]+ 387。

【0473】

（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレートの調製

【0474】

【化42】

【0475】

６５：３５の（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−アリル−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート：（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｓ，３Ｒ）−２−アリル−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（２．００ｇ、５．１７ｍｍｏｌ）の７つの別個のバッチを以下のように反応させた。

【0476】

（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−アリル−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（２．００ｇ、５．１７ｍｍｏｌ）およびクロロトリス（トリフェニルホスフィン）ロジウム（Ｉ）（ウィルキンソン触媒）（２．３４６ｇ、２．５４ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（１２ｍｌ）および水（２．４ｍｌ）に懸濁し、窒素を５分間通してバブリングし、その後マイクロ波管に密封した。反応物をマイクロ波反応器中で１００℃に６０分間加熱し、室温に冷却した。反応混合物を合わせ、乾燥するまで蒸発させ、ＤＣＭ（２００ｍｌ）中に再溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（２００ｍｌ）を添加した。有機層を、水（２００ｍｌ）および飽和ブライン（２００ｍｌ）で逐次的に洗浄し、その後ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させ、粗生成物を得た。未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ＤＣＭ中０から５％のメタノールの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（７．０２ｇ、５５．９％）を薄黄色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, DMSO, 30℃) δ 1.14 (3H, d), 2.27 - 2.4 (1H, m), 2.81 (1H, dd), 2.94 - 3.05 (1H, m), 3.72 (3H, s), 5.19 (1H, s), 6.60 (1H, d), 6.94 - 7 (1H, m), 7.01 - 7.09 (1H, m), 7.26 (3H, d), 7.43 (1H, d), 7.59 - 7.68 (3H, m), 10.70 (1H, s), NHは観察されなかった。m/z: ES+ [M+H]+ 347。

【0477】

（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレートの調製

【0478】

【化43】

【0479】

（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピルトリフルオロメタンスルホネート（実施例３の出発原料の調製で説明したようにして得た）（２９１ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン（５ｍｌ）中の（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（３００ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２２６ｍｌ、１．３０ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を９０℃で１時間攪拌し、次いで混合物を乾燥するまで蒸発させ、残留物をＤＣＭ（３０ｍｌ）と水（３０ｍｌ）との間で分配した。水層をＤＣＭ（３０ｍｌ）で抽出し、抽出物を有機層と合わせた。合わせた抽出物を相分離用のペーパーに通過させてろ過し、蒸発させた。残留物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、溶出溶媒としてヘプタン中の１５％のＥｔＯＡｃを用いて精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（３１４ｍｇ、８６％）をオフホワイト色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, DMSO, 30℃) δ 0.87 (3H, d), 1.06 (3H, d), 1.9 - 2.28 (2H, m), 2.55 - 2.8 (3H, m), 2.97 - 3.21 (1H, m), 3.72 (3H, s), 4.31 - 4.69 (2H, m), 4.88 (1H, s), 6.60 (1H, dd), 6.98 (1H, t), 7.04 (1H, t), 7.17 - 7.35 (3H, m), 7.44 (1H, d), 7.55 - 7.76 (3H, m), 10.65 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 421。

【0480】

実施例５：（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸（異性体１）^＊

【0481】

【化44】

【0482】

水酸化ナトリウム（１８４ｍｇ、４．６１ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１ｍｌ）／メタノール（１ｍｌ）中の（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１）（２１７ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）に添加した。結果得られた溶液を２０℃で１６時間攪拌した。反応物を水（１０ｍｌ）で希釈し、２ＮのＨＣｌの添加によってｐＨを７に調整した。この溶液をＥｔＯＡｃ（２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機物をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濃縮した。未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ヘプタン中０から５０％のＥｔＯＡｃの溶出勾配により精製した。純粋な画分を蒸発させ、粗生成物を得た。ジエチルエーテル／イソヘキサン混合物を使用して未精製の生成物を粉砕し、表題の生成物（５３．０ｍｇ、２５．２％）を黄色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, DMSO, 27℃) δ 0.54 (3H, d), 1.06 (3H, s), 1.34 (3H, s), 2.14 (1H, dd), 2.66 (1H, d), 2.83 (1H, d), 3.03 (1H, dd), 4.21 (1H, t), 4.33 (1H, t), 5.12 (1H, s), 6.73 (1H, d), 7.01 (2H, dtd), 7.14 - 7.28 (1H, m), 7.43 (1H, d), 7.54 (2H, s), 7.59 (1H, d), 10.50 (1H, s), 12.61 (1H, s), CO2Hは観察されなかった。m/z: ES+ [M+H]+ 457。

【0483】

^＊立体化学は、他の実施例から類推して、不明確な中心において（Ｒ）であると推察され、すなわち化合物は、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（１Ｒ）〜（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸であると推察された。

【0484】

出発原料として使用された３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１）を以下のように調製した。

【0485】

（Ｅ）−メチル３−（４−（３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）−３，５−ジフルオロフェニル）アクリレートの調製

【0486】

【化45】

【0487】

１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２−メチルプロパン−２−アミン（８０７ｍｇ、４．２９ｍｍｏｌ）および（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−ホルミルフェニル）アクリレート（実施例１の出発原料の調製で説明したようにして得た）（９７０ｍｇ、４．２９ｍｍｏｌ）を酢酸（１５ｍｌ）中で合わせ、この混合物を８０℃に２時間加熱した。反応混合物を、ＳＣＸ−２カラムを使用したイオン交換クロマトグラフィーによって精製した。メタノール中の２ＭのＮＨ_３を使用して、カラムから望ましい生成物を溶出させ、生成物を含有する画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（４−（３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）−３，５−ジフルオロフェニル）アクリレート（１６１０ｍｇ、９５％）を黄色の発泡体として得た。¹H NMR (500 MHz, DMSO, 20℃) δ 1.15 (3H, s), 1.27 (3H, s), 2.23 (1H, s), 2.61 (2H, s), 3.75 (3H, s), 5.46 (1H, s), 6.84 (1H, d), 6.97 (2H, dtd), 7.18 (1H, d), 7.39 (1H, d), 7.58 (2H, s), 7.67 (1H, d), 10.60 (1H, s). m/z: ES- [M-H]- 395。

【0488】

（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１）の調製

【0489】

【化46】

【0490】

（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピルトリフルオロメタンスルホネート（実施例３の出発原料の調製で説明したようにして得た）（０．３３９ｇ、１．５１ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン（２ｍｌ）中の（Ｅ）−メチル３−（４−（３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）−３，５−ジフルオロフェニル）アクリレート（０．３ｇ、０．７６ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（０．４５８ｍｌ、２．６５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。攪拌を２４時間続け、次いで揮発物質を真空中で除去し、未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ヘプタン中０から２５％のＥｔＯＡｃの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（０．２０２ｇ、３６％）を白色の固体として得た。この材料を別のバッチ（０．３６ｇ）と合わせ、分取用ＨＰＬＣ（キラルパックＩＡ（Chiralpak IA）カラム、２０μｍのシリカ、２０ｍｍの直径、２５０ｍｍの長さ）で、７０：３０のヘプタン：ＩＰＡを８０ｍｌ／分（４回の注入）で精製した。望ましい化合物を含有する画分を蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１、１番目に溶出、２１７ｍｇ）および（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体２、２番目に溶出、１６５ｍｇ）を得た。キラルパックＩＡカラム（５μｍのシリカ、４．６ｍｍの直径、５０ｍｍの長さ）で、７０：３０のヘプタン：ＩＰＡを２ｍｌ／分で用いて分析を行った。
¹H NMR (400 MHz, DMSO, 30℃) δ 0.50 (3H, d), 1.02 (3H, s), 1.30 (3H, s), 2.11 (1H, dd), 2.62 (2H, d), 2.80 (1H, d), 2.99 (1H, dd), 3.74 (3H, s), 4.09 - 4.23 (1H, m), 4.29 (1H, d), 5.09 (1H, s), 6.81 (1H, d), 6.97 (2H, dt), 7.16 (1H, d), 7.39 (1H, d), 7.53 (2H, d), 7.64 (1H, d), 10.44 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 471。

【0491】

実施例６：（Ｅ）３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸（異性体１）^＊

【0492】

【化47】

【0493】

２Ｍ水酸化ナトリウム（１．６ｍｌ、３．２０ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（０．８ｍｌ）／メタノール（０．８ｍｌ）中の（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１）（１４８ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応物を室温で３時間攪拌した。ＥｔＯＡｃ（１５ｍｌ）および水（１５ｍｌ）を添加し、水溶液のｐＨを、２ＮのＨＣｌの添加によって約７に調整した。層を分離し、水溶液をＥｔＯＡｃ（１５ｍｌ）で抽出した。合わせた有機物をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濃縮した。未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ヘプタン中２５から１００％のＥｔＯＡｃの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、表題の生成物（異性体１）（１２４ｍｇ、８６％）を薄黄色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 30℃) δ 1.03 (3H, d), 1.08 (3H, s), 1.16 (3H, d), 1.35 (3H, s), 2.56 (1H, dd), 2.66 (1H, d), 3.02 (1H, d), 3.17 (1H, dd), 5.24 (1H, s), 6.39 (1H, d), 7.00 (2H, d), 7.05 - 7.16 (2H, m), 7.20 (1H, dd), 7.28 (1H, s), 7.49 (1H, dd), 7.61 (1H, d), CO₂Hは観察されなかった。m/z: ES+ [M+H]+ 457。

【0494】

^＊立体化学は、他の実施例から類推して、不明確な中心において（Ｒ）であると推察された。

【0495】

出発原料として使用された（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１）を以下のように調製した。

【0496】

（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１）の調製

【0497】

【化48】

【0498】

２−フルオロ−２−メチルプロピルトリフルオロメタンスルホネート（実施例１の出発原料の調製で説明したようにして得た）（６７９ｍｇ、３．０３ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン（２．５ｍｌ）中の（Ｅ）−メチル３−（４−（３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）−３，５−ジフルオロフェニル）アクリレート（実施例５の出発原料の調製で説明したようにして得た）（６００ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（０．９１５ｍｌ、５．３０ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応物を室温で１時間攪拌した。次いでこの反応物を１０５℃に８８時間加熱した。揮発物質を真空中で除去し、未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ヘプタン中０から５０％のＥｔＯＡｃの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（４３０ｍｇ、６０．４％）を白色の固体として得た。ラセミ体生成物を、分取用ＨＰＬＣ（キラルパックＡＤカラム、２０μｍのシリカ、５０ｍｍの直径、２５０ｍｍの長さ）で、９０：１０のヘプタン：エタノールを９０ｍｌ／分で精製した。望ましい化合物を含有する画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１、１番目に溶出、１４９ｍｇ、３４．６％）および（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体２、２番目に溶出、１４３ｍｇ、３３．３％）をクリーム状の有色固体として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 30℃) δ 1.01 (3H, d), 1.08 (3H, s), 1.15 (3H, d), 1.34 (3H, s), 2.55 (1H, dd), 2.66 (1H, d), 2.98 - 3.06 (1H, m), 3.17 (1H, dd), 3.80 (3H, s), 5.23 (1H, s), 6.38 (1H, d), 6.97 (2H, d), 7.07 - 7.12 (2H, m), 7.17 - 7.22 (1H, m), 7.32 (1H, s), 7.46 - 7.5 (1H, m), 7.52 (1H, d). m/z ES- [M-H]- 469。

【0499】

実施例７：（Ｅ）−３−（４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸（異性体１）^＊

【0500】

【化49】

【0501】

２Ｍ水酸化ナトリウム溶液（２０．４２ｍｌ、４０．８５ｍｍｏｌ）を、メタノール（１００ｍｌ）、ＴＨＦ（１００ｍｌ）および水（７５ｍｌ）中の（Ｅ）−メチル３−（４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１）（３．５５ｇ、８．１７ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。この混合物を４０℃で１６時間加熱した。この混合物を水（１００ｍｌ）で希釈し、有機溶媒が除去されるような体積になるまで濃縮した。結果得られた水溶液を２ＭのＨＣｌでｐＨ６に酸性化した。結果得られた水性懸濁液をＤＣＭ（５００ｍｌ）で抽出し（ブラインを添加して、形成されたエマルジョンの分離を促進した）、相分離用のペーパーに通過させてろ過し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いでセライトを通過させてろ過し、蒸発させ、約３．５ｇの薄黄色の固体を得た。未精製の生成物をジエチルエーテル／ＤＣＭ（１：１、１５０ｍｌ）で処理し、超音波破砕した。形成された微細な懸濁液をシリカのパッド（約１００ｇ）に通過させ、シリカをジエチルエーテル（約２Ｌ）で溶出した。生成物を含有する画分を合わせ、蒸発させ、５０℃、真空中で乾燥させ、表題の生成物（２．３０５ｇ、６４．５％）をベージュ色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, DMSO, 30℃) δ 0.52 (3H, d), 1.03 (3H, s), 1.05 - 1.16 (1H, m), 1.23 (3H, s), 2.21 (1H, dd), 2.65 (1H, d), 2.84 (1H, d), 2.89 (1H, dd), 4.19 (1H, ddd), 4.31 (1H, ddd), 4.66 (1H, s), 6.50 (1H, d), 6.93 (1H, ddd), 6.98 (1H, ddd), 7.18 (1H, d), 7.38 (2H, d), 7.40 (1H, d), 7.58 (1H, d), 7.63 (2H, d), 10.18 (1H, s), 12.30 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 421。

【0502】

^＊立体化学は、他の実施例から類推して、不明確な中心において（Ｒ）であると推察された。

【0503】

栓付きの２５０ｍｌ丸底フラスコ中で、生成物（９．０ｇ、２１．４０ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（１５０ｍｌ）中、窒素下、暗所で１時間スラリー化した。この混合物を週末にわたり室温で攪拌し、次いでろ過し、冷たいアセトニトリル（６０ｍｌ）で洗浄し、白色の固体を得て、これを高真空下で４０℃で５時間乾燥させて、表題の生成物の結晶性形態Ａ（７．８１ｇ、８７％）を得た。

【0504】

結晶性形態ＡのＸＲＰＤトレースは以下のピークを包含し、図１に示される。

【0505】

【表3】

【0506】

出発原料として使用された（Ｅ）−メチル３−（４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１）を以下のように調製した。

【0507】

（Ｅ）−メチル３−（４−（３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（ラセミ化合物）の調製

【0508】

【化50】

【0509】

（Ｅ）−メチル３−（４−ホルミルフェニル）アクリレート（４１．８ｇ、２１９．６２ｍｍｏｌ）（実施例２の出発原料の調製で説明したようにして得た）を、窒素下で、酢酸（３１４ｍｌ）中の１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２−メチルプロパン−２−アミン（４３．８ｇ、２１９．６２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に一部ずつ添加した。結果得られた溶液を８０℃で５時間攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮した。トルエン（２００ｍｌ）を添加し、残留物を乾燥するまで蒸発させた。

【0510】

共沸処理を２回より多く繰り返して、茶色の固体を得た。これを、１：１のＥｔＯＡｃ／ヘプタン（５００ｍｌ）中で３０分攪拌し、その後、ろ過して、１：１のＥｔＯＡｃ／ヘプタンで洗浄した。この化合物を空気乾燥して、白色の固体を得た。粗生成物を、２−メチルテトラヒドロフラン（７５０ｍｌ）に懸濁し、飽和重炭酸ナトリウム溶液を攪拌した混合物（泡立ち）に１０分かけて添加し、この混合物を材料が溶解するまで攪拌したところ、水相は塩基性のままであった。相分離し、有機相をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、ろ過し、真空中で濃縮し、薄黄色の発泡体（約７８ｇ）を得た。この材料をジエチルエーテル（２００ｍｌ）中に溶解させ、乾燥するまで濃縮した（２回繰り返した）。第二の添加時に、適切な固体を得た。これを、ジエチルエーテル中で攪拌し、乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（４−（３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（ラセミ化合物）を得た（７３．６ｇ、８９％）。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 30℃) δ 1.26 (3H, s), 1.35 (3H, s), 1.42 (1H, br s), 2.69 - 2.82 (2H, m), 3.80 (3H, s), 5.12 (1H, s), 6.41 (1H, d), 7.06 - 7.16 (2H, m), 7.21 (1H, dd), 7.37 (2H, d), 7.46 - 7.54 (4H, m), 7.67 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 361。

【0511】

（Ｅ）−メチル３−（４−（３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１）の調製

【0512】

【化51】

【0513】

（Ｅ）−メチル３−（４−（３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（ラセミ化合物）（６５ｇ）を７回の注入で以下のように精製した。

【0514】

ラセミ体材料を、分取用ＨＰＬＣ（キラルパックＯＤカラム、２０μｍのシリカ、１００ｍｍの直径、２５０ｍｍの長さ）で、５０：５０のヘプタン：ＩＰＡにより精製した。望ましい化合物を含有する画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（４−（３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１、１番目に溶出、３０．３ｇ、９３％）および（Ｅ）−メチル３−（４−（３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体２、２番目に溶出、２８．２ｇ、８６％）を得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 30℃) δ 1.27 (3H, s), 1.36 (3H, s), 2.69 - 2.82 (2H, m), 3.80 (3H, s), 5.14 (1H, s), 6.43 (1H, d), 7.12 (2H, pd), 7.2 - 7.24 (1H, m), 7.39 (3H, d), 7.51 (3H, d), 7.68 (1H, d), NHは観察されなかった。m/z: ES+ [M+H]+ 361。

【0515】

（Ｅ）−メチル３−（４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１）の調製

【0516】

【化52】

【0517】

（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピルトリフルオロメタンスルホネート（実施例３の出発原料の調製で説明したようにして得た）（５．３２ｇ、２１．３６ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン（１７．５ｍｌ）中の（Ｅ）−メチル３−（４−（３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１）（３．５ｇ、９．７１ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（６．３４ｍｌ、３６．４１ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。この混合物を２２℃で３日間攪拌した。この混合物を蒸発させ、残留物をＤＣＭ（１５０ｍｌ）と水（１５０ｍｌ）との間で分配した。水層をＤＣＭ（５０ｍｌ）で抽出し、抽出物を有機層と合わせた。合わせた抽出物を相分離用のペーパーに通過させてろ過し、蒸発させた。残留物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、溶出溶媒としてヘプタン中の１５％のＥｔＯＡｃを用いて精製した。有意な量の生成物を含有する画分が、結晶を形成し始めた。チューブをかき混ぜて、さらなる結晶化を促進した。結晶をろ過によって収集し、少量のヘプタン中１５％のＥｔＯＡｃで洗浄して、（Ｅ）−メチル３−（４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１）（２．９１ｇ、６９．０％）を白色の結晶質固体として得た。結晶化からの溶液および他の生成物を含有する画分を合わせて、蒸発させた。残留物をＥｔＯＡｃ／ヘプタンから再結晶化して、より多くの３−（４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１）を白色の結晶質固体として得た（６３５ｍｇ、１５．１％）。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 30℃) δ 0.53 (3H, d), 0.95 - 1.07 (1H, m), 1.09 (3H, s), 1.32 (3H, s), 2.16 (1H, dd), 2.66 (1H, d), 2.94 (1H, d), 2.97 (1H, d), 3.80 (3H, s), 4.14 (1H, ddd), 4.31 (1H, ddd), 4.59 (1H, s), 6.42 (1H, d), 7.05 - 7.11 (2H, m), 7.13 (1H, s), 7.17 (1H, dd), 7.35 (2H, d), 7.45 (2H, d), 7.50 (1H, dd), 7.67 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 435。

【0518】

実施例８：（Ｅ）−３−（４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸（異性体１）^＊

【0519】

【化53】

【0520】

２Ｍ水酸化ナトリウム溶液（０．７８２ｍｌ、１．５６ｍｍｏｌ）を、メタノール（５ｍｌ）、ＴＨＦ（５．００ｍｌ）および水（５．００ｍｌ）中の（Ｅ）−メチル３−（４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１）（６８ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を２２℃で４０時間攪拌した。この混合物を、全ての有機溶媒が除去されるような体積になるまで濃縮し、２ＭのＨＣｌでｐＨ６に酸性化した。濃アンモニア水溶液（２滴）、続いてメタノール（約２ｍｌ）を添加し、薄黄色の溶液を得た。未精製の生成物を、分取用ＨＰＬＣ（ウォーターズのＸブリッジ・プレップ（XBridge Prep）Ｃ１８ ＯＢＤカラム、５μのシリカ、５０ｍｍの直径、１００ｍｍの長さ）で、溶出液として水（１％ＮＨ_３含有）およびＭｅＣＮの極性が徐々に減少する混合物を使用して精製した。望ましい化合物を含有する画分を乾燥するまで蒸発させ、表題の生成物（異性体１）（５０．０ｍｇ、７６％）を黄色の固体として得た。¹H NMR (500 MHz, DMSO, 30℃) δ 0.93 (3H, s), 1.19 (3H, d), 1.23 (3H, s), 1.51 (3H, d), 2.56 - 2.64 (2H, m), 2.75 (1H, d), 3.04 (1H, dd), 5.06 (1H, s), 6.40 (1H, d), 7.03 (1H, ddd), 7.09 - 7.15 (2H, m), 7.35 (1H, dd), 7.44 - 7.51 (5H, m), 10.87 (1H, s), CO₂Hは観察されなかった。m/z: ES+ [M+H]+ 421。

【0521】

^＊立体化学は、他の実施例から類推して、不明確な中心において（Ｒ）であると推察された。

【0522】

出発原料として使用された（Ｅ）−メチル３−（４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１）を以下のように調製した。

【0523】

（Ｅ）−メチル３−（４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１）の調製

【0524】

【化54】

【0525】

２−フルオロ−２−メチルプロピルトリフルオロメタンスルホネート（実施例１の出発原料の調製で説明したようにして得た）（３８９ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン（１．２５ｍｌ）中の（Ｅ）−メチル３−（４−（３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（ラセミ化合物）（実施例７の出発原料の調製で説明したようにして得た）（２５０ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．４５３ｍｌ、２．６０ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。この混合物を９５℃で６４時間攪拌し、次いでＤＣＭ（３０ｍｌ）と水（３０ｍｌ）との間で分配した。水層をＤＣＭ（２０ｍｌ）で抽出し、抽出物を有機層と合わせた。合わせた抽出物を相分離用のペーパーに通過させてろ過し、蒸発させた。残留物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、溶出溶媒としてヘプタン中の１５％のＥｔＯＡｃを用いて精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（ラセミ化合物）（１７８ｍｇ、５９．１％）をベージュ色の固体として得た。ラセミ体生成物を分取用ＨＰＬＣ（キラルパックＡＤカラム、２０μｍのシリカ、５０ｍｍの直径、２５０ｍｍの長さ）で、８０：２０のヘプタン：エタノールにより精製した。望ましい化合物を含有する画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１、１番目に溶出、７０ｍｇ）および（Ｅ）−メチル３−（４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体２、２番目に溶出、６６ｍｇ）を得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 30℃) δ 1.00 (3H, s), 1.13 (3H, d), 1.20 (3H, s), 1.44 (3H, d), 2.57 - 2.78 (3H, m), 2.93 (1H, dd), 3.80 (3H, s), 5.05 (1H, s), 6.41 (1H, d), 7.13 (1H, ddd), 7.18 (1H, ddd), 7.32 (1H, d), 7.43 (2H, d), 7.51 (2H, d), 7.54 (1H, d), 7.64 (1H, s), 7.67 (1H, d).m/z: ES+ [M+H]+ 435。

【0526】

実施例９：（Ｅ）−３−（３−フルオロ−４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸（異性体１）^＊

【0527】

【化55】

【0528】

２Ｍ水酸化ナトリウム（３．３１ｍｌ、６．６３ｍｍｏｌ）を、メタノール（５ｍｌ）、およびＴＨＦ（２０ｍｌ）中の（Ｅ）−メチル３−（３−フルオロ−４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（６００ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）（ジアステレオ異性体の混合物）の溶液に添加し、この混合物を周囲温度で４時間攪拌した。この混合物を、全ての有機溶媒が除去されるような体積になるまで濃縮し、水（５０ｍｌ）で希釈し、希塩酸でｐＨ６に酸性化し、酢酸エチル（２×５０ｍｌ）で抽出した。抽出物を合わせ、減圧下で蒸発させた。残留物を分取用ＨＰＬＣ（キラルパックＩＡカラム、２０μｍのシリカ、２０ｍｍの直径、２５０ｍｍの長さ）で、８０ｍｌ／分の９０：１０のヘプタン：ＩＰＡ、０．２％酢酸により精製した。望ましい化合物を含有する画分を合わせ、分析したところ、（Ｅ）−３−（３−フルオロ−４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸（異性体１、１番目に溶出、１３０ｍｇ、２２．３６％）および（Ｅ）−３−（３−フルオロ−４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸（異性体２、２番目に溶出、３０．０ｍｇ、５．１６％）を得た。¹H NMR (500 MHz, DMSO, 30℃) δ 0.49 (3H, d), 1.03 (3H, s), 1.14 - 1.21 (1H, m), 1.28 (3H, s), 2.17 (1H, dd), 2.59 - 2.71 (1H, m), 2.8 - 2.99 (2H, m), 4.09 - 4.34 (2H, m), 4.99 (1H, s), 6.59 (1H, d), 6.86 - 7.07 (2H, m), 7.1 - 7.19 (1H, m), 7.18 - 7.29 (1H, m), 7.36 - 7.49 (2H, m), 7.49 - 7.66 (2H, m), 10.31 (1H, s), CO₂Hは観察されなかった。m/z: ES+ [M+H]+ 439。

【0529】

^＊立体化学は、他の実施例から類推して、不明確な中心において（Ｒ）であると推察された。

【0530】

出発原料として使用された（Ｅ）−メチル３−（３−フルオロ−４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（ジアステレオ異性体の混合物）を以下のように調製した。

【0531】

（Ｅ）−メチル３−（３−フルオロ−４−ホルミルフェニル）アクリレートの調製

【0532】

【化56】

【0533】

４−ブロモ−２−フルオロベンズアルデヒド（２０．８８ｇ、１０２．８７ｍｍｏｌ）およびアクリル酸メチル（１３．９８ｍｌ、１５４．３０ｍｍｏｌ）を完全に脱気したＤＭＡ（１５０ｍｌ）に溶解させ、トリ−ｏ−トリルホスフィン（３．１３ｇ、１０．２９ｍｍｏｌ）、パラジウム（ＩＩ）アセテート（１．１５５ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２８．７ｍｌ、２０５．７４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を攪拌し、１００℃に１６時間加熱した。さらなるトリ−ｏ−トリルホスフィン（３．１３ｇ、１０．２９ｍｍｏｌ）およびパラジウム（ＩＩ）アセテート（１．１５５ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１１０℃にさらに２時間加熱した。水（１Ｌ）を添加し、反応混合物をＤＣＭ（２×５００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機物を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、ろ過し、蒸発させ、茶色の固体を得た。未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ヘプタン中０から２５％のＥｔＯＡｃの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（３−フルオロ−４−ホルミルフェニル）アクリレート（１５．２０ｇ、７１．０％）を黄色の固体として得た。
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 30℃) δ 3.83 (3H, s), 6.53 (1H, d), 7.31 (1H, dd), 7.41 (1H, d), 7.65 (1H, d), 7.79 - 8 (1H, m), 10.25 - 10.41 (1H, m)。ＬＣＭＳにおいて質量イオンは観察されなかった。

【0534】

（Ｅ）−メチル３−（４−（３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）−３−フルオロフェニル）アクリレート（ラセミ化合物）の調製

【0535】

【化57】

【0536】

酢酸（１５ｍｌ）中の１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２−メチルプロパン−２−アミン（１ｇ、５．３１ｍｍｏｌ）および（Ｅ）−メチル３−（３−フルオロ−４−ホルミルフェニル）アクリレート（１．１０６ｇ、５．３１ｍｍｏｌ）を窒素下で８０℃で２時間攪拌した。未精製の生成物を、ＳＣＸ−２カラムを使用したイオン交換クロマトグラフィーによって精製した。７ＭのＮＨ_３／メタノールを使用して、カラムから望ましい生成物を溶出させ、純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（４−（３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）−３−フルオロフェニル）アクリレート（ラセミ化合物）（２．０００ｇ、９９％）を得た。¹H NMR (400 MHz, DMSO, 30℃) δ 1.14 (3H, s), 1.27 (3H, s), 2.52 - 2.74 (2H, m), 3.74 (3H, s), 5.12 (1H, s), 6.69 (1H, d), 6.86 - 7.05 (2H, m), 7.20 (1H, d), 7.25 - 7.33 (2H, m), 7.39 (1H, d), 7.73 (1H, d), 7.85 (1H, t), 10.29 (1H, s), NHは観察されなかった。m/z: ES+ [M+H]+ 379。

【0537】

（Ｅ）−メチル３−（３−フルオロ−４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（ジアステレオ異性体の混合物）の調製

【0538】

【化58】

【0539】

（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピルトリフルオロメタンスルホネート（実施例３の出発原料の調製で説明したようにして得た）（１．２５９ｇ、５．６２ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン（５ｍｌ）中の（Ｅ）−メチル３−（４−（３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）−３−フルオロフェニル）アクリレート（ラセミ化合物）（８５０ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（１．４６７ｍｌ、８．４２ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を６０℃で４時間加熱し、次いで周囲温度で１２時間攪拌した。この混合物を酢酸エチル（２５ｍｌ）と水（２５ｍｌ）との間で分配した。水層を酢酸エチル（２×２５ｍｌ）で抽出し、抽出物を有機層と合わせた。合わせた抽出物を真空中で蒸発させた。残留物を、フラッシュシリカクロマトグラフィー、溶出溶媒としてのヘプタン中の１０％のＥｔＯＡｃで精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（３−フルオロ−４−（２−（（Ｓ）−３−フルオロ−２−メチルプロピル）−３，３−ジメチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（ジアステレオ異性体の混合物）（６００ｍｇ、５９．０％）を得た。m/z:ES+ [M+H]+ 453。

【0540】

実施例１０：（Ｅ）−３−［４−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−ジュウテリオ−２−（２−フルオロ−２−メチル−プロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル］−３，５−ジフルオロ−フェニル］プロパ−２−エン酸

【0541】

【化59】

【0542】

メチル（Ｅ）−３−［４−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−ジュウテリオ−２−（２−フルオロ−２−メチル−プロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル］−３，５−ジフルオロ−フェニル］プロパ−２−エノエート（４．７０ｇ、１０．２７ｍｍｏｌ）をｉＰｒＯＨ（４２．８ｍｌ）中に溶解させ、５Ｍ水酸化ナトリウム溶液（６．１６ｍｌ、３０．８２ｍｍｏｌ）を一部ずつ添加し、次いでこの反応物を室温で４時間攪拌した。水（１００ｍｌ）を添加し、ｐＨを、２ＮのＨＣｌの添加によって約５にした。この溶液をＥｔＯＡｃ（ｘ２）で抽出し、合わせた有機物を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、真空中で濃縮した。残留物をシリカのプラグに通過させ、まずＤＣＭで、次いでＤＣＭ中最大５％のＭｅＯＨで溶出させた。生成物を含有する画分を蒸発させて、黄色の固体（約４．２ｇ）を得た。残留物（４．２ｇ）をＥｔＯＨ（２０ｍｌ）中に溶解させ、３５℃に温めた。水（３０ｍｌ）を約４０分かけてゆっくり添加した。次いでこの混合物をさらに３０分攪拌し、次いでゆっくり室温に冷却した。追加の水（３０ｍｌ）を添加し、次いでこの反応物を０℃に冷却した。この混合物をろ過し、固体を水で洗浄し、その後、真空中で３５℃で一晩乾燥させ、（Ｅ）−３−［４−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−ジュウテリオ−２−（２−フルオロ−２−メチル−プロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル］−３，５−ジフルオロ−フェニル］プロパ−２−エン酸（３．３４ｇ、７３．３％）を薄黄色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 30℃) 1.12 (3H, d), 1.19 (3H, d), 1.26 (3H, d), 2.43 (1H, dd), 2.63 (1H, dd), 2.87 (1H, dd), 3.07 (1H, dd), 3.65 (1H, q), 6.41 (1H, d), 7.02 (2H, d), 7.06 - 7.16 (2H, m), 7.19 - 7.25 (1H, m), 7.41 (1H, s), 7.48 - 7.57 (1H, m), 7.63 (1H, d), CO₂Hは観察されなかった。m/z: ES+ [M+H]+ 444。

【0543】

その代わりにこの化合物は、（Ｅ）−３−［４−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−ジュウテリオ−２−（２−フルオロ−２−メチル−プロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル］−３，５−ジフルオロ−フェニル］アクリル酸と名付けることもできる。

【0544】

（４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−フェニル）−ジジュウテリオ−メタノールの調製

【0545】

【化60】

【0546】

重水素化ホウ素リチウム（lithium borodeuteride）（０．４９７ｇ、１７．２５ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（４６．０ｍｌ）中のメチル４−ブロモ−２，６−ジフルオロベンゾエート（２．８９ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）の溶液に一部ずつ添加した。反応物を５０℃に２時間加熱した。冷却後、２ＮのＨＣｌ（３０ｍｌ）を慎重に添加した。層を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機物を、ブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濃縮し、（４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−フェニル）−ジジュウテリオ−メタノール（２．２５０ｇ、８７％）を白色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 30℃) 1.96 (1H, s), 7.07 - 7.13 (2H, m)。

【0547】

４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−１−重水素ベンズアルデヒド（deuterobenzaldehyde）の調製

【0548】

【化61】

【0549】

デス−マーチン試薬（４．９８ｇ、１１．７３ｍｍｏｌ）を、室温で、ＤＣＭ（３９．１ｍｌ）中の（４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−フェニル）−ジジュウテリオ−メタノール（２．２０ｇ、９．７８ｍｍｏｌ）に添加した。反応物を１時間攪拌し、次いで１０％チオ硫酸ナトリウムを含有する飽和ＮａＨＣＯ_３（５０ｍｌ）の添加によってクエンチした。層を分離し、水相をＤＣＭ（２×５０ｍｌ）で抽出した。有機物を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濃縮し、次いで未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ヘプタン中０から２５％のＥｔＯＡｃの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−１−重水素ベンズアルデヒド（２．０４０ｇ、９４％）を白色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 30℃) 7.18 - 7.25 (2H, m)。質量イオンは観察されなかった。

【0550】

メチル（Ｅ）−３−（４−ジュウテリオカルボニル−３，５−ジフルオロ−フェニル）プロパ−２−エノエートの調製

【0551】

【化62】

【0552】

４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−１−重水素ベンズアルデヒド（３．３３ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（４．１８ｍｌ、３０．００ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．１６８ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）、およびトリトリルホスフィン（０．４５７ｇ、１．５０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３６．６ｍｌ）中に溶解させ、これを脱気した。次いでアクリル酸メチル（２．０２６ｍｌ、２２．５０ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を８０℃に４時間加熱した。冷却後、混合物を水（１５０ｍｌ）に添加し、ＥｔＯＡｃ（２×１５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機物を、２ＮのＨＣｌ（１００ｍｌ）、次いでブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、次いで乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濃縮した。未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ヘプタン中０から４０％のＥｔＯＡｃの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、メチル（Ｅ）−３−（４−ジュウテリオカルボニル−３，５−ジフルオロ−フェニル）プロパ−２−エノエート（２．９３ｇ、８６％）を黄色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl3, 30℃) 3.83 (3H, d), 6.51 (1H, d), 7.12 (2H, m), 7.57 (1H, d). m/z (ES+), [M+H]+ = 228。

【0553】

（Ｒ）−Ｎ−（１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−イル）−２−フルオロ−２−メチルプロパン−１−アミン

【0554】

【化63】

【0555】

（２Ｒ）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−アミン（３．８１ｋｇ、２１．２１モル）を、窒素雰囲気下で１００Ｌのガラスが内張りされたジャケット付き容器に添加した。１，４−ジオキサン（２３Ｌ）を添加し、かき混ぜ機のスイッチを入れた。攪拌した懸濁液にジイソプロピルエチルアミン（５．５５Ｌ；３１．８２モル）、続いて（２−フルオロ−２−メチル−プロピル）トリフルオロメタンスルホネート（５．５５ｋｇ、２３．７７モル）を添加した。その容器に１，４−ジオキサン（４Ｌ）を添加し、混合物を７５℃に加熱した。加熱を２４時間続け、その後、混合物を２５℃に冷却した。その容器に水（３０．５Ｌ）、続いてトルエン（３０．５Ｌ）を添加した。４０分後、かき混ぜ機のスイッチを切って、層を分離させた。水層を除去し、有機溶液に水（３０．５Ｌ）を添加した。混合物を１５分かき混ぜ、その後、層を分離させた。容器から水層を除去した。およそ２７Ｌの蒸留物が除去されるまで、有機溶液を減圧蒸留によって濃縮した（ジャケット温度６５℃、１１０ｍｂａｒの圧力）。容器中に残存した溶液を冷却して、（Ｒ）−Ｎ−（１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−イル）−２−フルオロ−２−メチルプロパン−１−アミン（１５．４ｋｇ、９７％）を、トルエン中の溶液（３３％ｗ／ｗ）として得た。¹H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) 0.98 (3H, d), 1.26 (3H, d), 1.30 (3H, d), 2.57 - 2.75 (3H, m), 2.81 (1H, dd), 2.84 - 2.92 (1H, m), 6.97 (1H, t), 7.06 (1H, t), 7.11 - 7.22 (1H, トルエンシグナルにより不明瞭になった多重項), 7.34 (1H, d), 7.52 (1H, d), 10.80 (1H, s)。

【0556】

メチル（Ｅ）−３−［４−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−ジュウテリオ−２−（２−フルオロ−２−メチル−プロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル］−３，５−ジフルオロ−フェニル］プロパ−２−エノエートの調製

【0557】

【化64】

【0558】

（Ｒ）−Ｎ−（１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−イル）−２−フルオロ−２−メチルプロパン−１−アミン［トルエン中、３３％ｗ／ｗ］（１１．２６ｇ、１４．９７ｍｍｏｌ）および（Ｅ）−３−（４−ジュウテリオカルボニル−３，５−ジフルオロ−フェニル）プロパ−２−エノエート（３．４０ｇ、１４．９７ｍｍｏｌ）を、トルエン（５５．６ｍｌ）／酢酸（４．２８ｍｌ、７４．８３ｍｍｏｌ）中、８０℃で５時間加熱した。冷却後、揮発物質を真空中で除去した。残留物をＤＣＭ（２００ｍｌ）に溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（２００ｍｌ）で洗浄した。水相をＤＣＭ（１００ｍｌ）で抽出し、次いで合わせた有機物をブラインで洗浄し、乾燥させ、真空中で濃縮した。粗生成物をＳＣＸ−２カラムにローディングし、メタノールで溶出させ、未反応のアルデヒドを除去した。次いでカラムを７ＭのＮＨ_３−ＭｅＯＨで溶出させて、生成物を遊離させた。塩基性のろ液を蒸発させ、未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ヘプタン中０から４０％のＥｔＯＡｃの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、メチル（Ｅ）−３−［４−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−ジュウテリオ−２−（２−フルオロ−２−メチル−プロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル］−３，５−ジフルオロ−フェニル］プロパ−２−エノエート（４．７０ｇ、６８．６％）を薄黄色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, 30℃) 1.11 (3H, d), 1.19 (3H, d), 1.25 (3H, d), 2.42 (1H, dd), 2.62 (1H, dd), 2.87 (1H, dd), 3.07 (1H, dd), 3.65 (1H, q), 3.81 (3H, s), 6.39 (1H, d), 6.99 (2H, d), 7.06 - 7.17 (2H, m), 7.23 (1H, dd), 7.45 (1H, s), 7.49 - 7.6 (2H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 458。

【0559】

実施例１１：（１Ｒ，３Ｒ）−１−｛４−［（Ｅ）−２−カルボキシエテニル］−２，６−ジフルオロフェニル｝−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ベータ−カルボリン−２−イウムマレエートの調製

【0560】

【化65】

【0561】

アセトン（１５ｍｌ）中のマレイン酸（１．３１ｇ、１１．２９ｍｍｏｌ）溶液を窒素下で攪拌した。このマレイン酸溶液に、アセトン（２５ｍｌ）中の（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸（実施例１）（５．００ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）の溶液を添加して、黄色の溶液を得た。反応容器ホイルを覆って遮光し、溶媒が蒸発するまで一晩窒素ガス流でパージした。固体を得て、これを真空中で２時間乾燥させ、表題の化合物をクリーム色の固体として得た（６．２３ｇ、９８％）。¹H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) 0.95 - 1.34 (9H, m), 2.24 - 2.45 (1H, m), 2.54 - 2.66 (1H, m), 2.8 - 2.99 (2H, m), 3.52 (1H, s), 5.22 (1H, s), 6.26 (2H, s), 6.67 (1H, d), 6.89 - 7.07 (2H, m), 7.19 (1H, d), 7.39 - 7.51 (3H, m), 7.55 (1H, d), 10.59 (1H, s)。

【0562】

このマレエートのＸＲＰＤトレースは図８に示され、ＤＳＣトレースは図９に示される。

【0563】

実施例１２
実施例１の例示的な組成物を、７５ｇスケールで、湿式造粒法を使用して製造した。活性成分、マンニトール、微結晶性セルロースおよびデンプングリコール酸ナトリウムを以下に要約した量に量りとり、ディオズナ（Diosna）Ｐ１−６ミキサー−グラニュレーターに移し、６００ｒｐｍで６分間（細断しながら）混合した。組成物Ａの場合、およそ１ｍＬ／秒の速度で２つのアリコートに３０ｍＬの水を添加しながら混合を続け、アリコートとアリコートとの合間では混合を中断し、一方で組成物Ｂの場合、必要な量のＥＤＴＡおよびアスコルビン酸を２０ｍＬの水と共に５０℃で２０分（遮光）攪拌することによって調製された溶液が、類似のプロセスを使用して添加され、このケースにおける第二のアリコートはおよそ１０ｍＬの濯ぎ用溶液を含む。湿式混合を合計１．５分続けた。湿った顆粒を１．５ｍｍの篩に通過させ、次いで５０〜６０℃で２％ｗ／ｗ未満の含水量になるまで真空中で乾燥させた。結果得られた顆粒を１ｍｍの篩を使用して磨砕し、次いでターブラーブレンダーを使用して潤滑剤と共に３２ｒｐｍで５分間混合した。６ｍｍの一般的な凹面加工用具を備えたリバ（Riva）のミニプレスを使用して、名目上１００ｍｇの圧縮重量に顆粒を圧縮することによって、活性成分１０ｍｇを含有する錠剤を形成した。

【0564】

【表4】

【0565】

分解生成物の形成に関する組成物ＡおよびＢの安定性（ここで「分解生成物」は、（Ｒ，Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−２−イウム−１−イル）フェニル）アクリレートを意味する）を、誘導封止した７５ｃｃのＨＤＰＥボトル中にパックした錠剤、または暗所で、以下で要約したように制御された温度および湿度下で保存されたペトリ皿中で雰囲気に露出させた錠剤に関して評価した。キレート剤と抗酸化剤の両方を含有する組成物Ｂが、標準的な錠剤の調合物である組成物Ａより、化学分解に対して安定であることは明白である。

【0566】

【表5】

【0567】

実施例１３：（Ｅ）−３−［３，５−ジフルオロ−４−［（３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチル−プロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−２−イウム−１−イル］フェニル］プロパ−２−エノエート

【0568】

【化66】

【0569】

（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸（２００ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を、室温で、アセトニトリル（６ｍｌ）／水（１．５００ｍｌ）中の硝酸アンモニウムセリウム（２４８ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応物を２時間攪拌し、さらに硝酸アンモニウムセリウム（２４８ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を２５℃でさらに１５分攪拌した。反応混合物を２ＭのＨＣｌ（３ｍｌ）で酸性化し、ＤＣＭ（２×１０ｍｌ）で抽出した。次いで有機物を真空中で濃縮し、未精製の生成物を、分取用ＨＰＬＣ（ウォーターズのサンファインカラム、５μのシリカ、５０ｍｍの直径、１００ｍｍの長さ）で、溶出液として水（０．１％ギ酸含有）およびＭｅＣＮの極性が徐々に減少する混合物を使用して精製した。望ましい化合物を含有する画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｒ，Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−４，９−ジヒドロ−３Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−２−イウム−１−イル）フェニル）アクリレート（３５．０ｍｇ、１７．５８％）をオレンジ色のガラス状物質として得た。¹H NMR (500 MHz, DMSO, 30℃) 1.27 (3H, d), 1.43 - 1.55 (6H, m), 3.51 (1H, d), 3.72 (1H, dd), 3.96 (1H, dd), 4.18 - 4.32 (1H, m), 4.67 (1H, s), 6.59 (1H, s), 7.09 - 7.3 (2H, m), 7.42 (1H, t), 7.52 - 7.73 (3H, m), 7.78 (1H, d), NHは観察されなかった。HRMS (ESI)：[M+H]⁺、実測値441.17831、C₂₃H₂₄F₂N₂O₂の要求値441.17844。

【0570】

（Ｅ）−３−［３，５−ジフルオロ−４−［２−（２−フルオロ−２−メチル−プロピル）−３−メチル−９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−２−イウム−１−イル］フェニル］プロパ−２−エノエートの調製

【0571】

【化67】

【0572】

（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸（０．５００ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１０ｍＬ）中に溶解させ、空気および光の存在下で１２０℃に１６時間加熱した。次いでこの反応物を１８０℃に２．５時間加熱した。反応混合物を冷却し、分取用ＨＰＬＣ（ウォーターズのＸブリッジ・プレップＣ１８ＯＢＤカラム、５μのシリカ、５０ｍｍの直径、１００ｍｍの長さ）で、溶出液として水（１％ＮＨ_３含有）およびＭｅＣＮの極性が徐々に減少する混合物を使用して精製した。望ましい化合物を含有する画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−３−［３，５−ジフルオロ−４−［２−（２−フルオロ−２−メチル−プロピル）−３−メチル−９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−２−イウム−１−イル］フェニル］プロパ−２−エノエート（０．０４７ｇ、９．４０％）をオレンジ色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, DMSO, 27℃) 1.27 (3H, s), 1.33 (3H, d), 3.09 (3H, s), 4.59 - 4.8 (1H, m), 5.14 - 5.37 (1H, m), 6.54 (1H, d), 7.19 (1H, d), 7.39 (1H, t), 7.63 (2H, d), 7.74 (1H, t), 7.91 (1H, d), 8.45 (1H, d), 8.88 (1H, s), 10.79 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 439。

【0573】

実施例１４Ａ：（Ｅ）−３−［３，５−ジフルオロ−４−［（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−３−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−３−メチル−１，３，４，９−テトラヒドロピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル］フェニル］プロパ−２−エン酸（異性体１）の調製

【0574】

【化68】

【0575】

２Ｍ水酸化ナトリウム（１．２７ｍＬ、２．５４ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（０．６３５ｍＬ）／メタノール（０．６３５ｍＬ）中の（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート−異性体１（１２０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応物を室温で１時間攪拌し、次いでＥｔＯＡｃおよび水で希釈した。水溶液を、２ＭのＨＣｌの添加によってｐＨ６に調整し、層を分離した。水層をＥｔＯＡｃで抽出し、次いで合わせた有機物を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、真空中で濃縮した。未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸−異性体１（８５ｍｇ、７２．９％）をベージュ色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, DMSO, 27℃) 0.97 (3H, d), 1.05 (3H, d), 2.32 - 2.4 (1H, m), 2.44 - 2.54 (1H, m), 2.73 - 2.93 (3H, m), 3 - 3.14 (2H, m), 3.32 - 3.49 (2H, m), 4.73 (1H, s), 5.14 (1H, s), 6.58 (1H, d), 6.82 - 6.96 (2H, m), 7.10 (1H, d), 7.33 (1H, d), 7.36 (1H, d), 7.45 (1H, d), 10.49 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 459。

【0576】

実施例１４Ｂ：（Ｅ）−３−［３，５−ジフルオロ−４−［（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−３−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−３−メチル−１，３，４，９−テトラヒドロピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル］フェニル］プロパ−２−エン酸（異性体２）の調製

【0577】

【化69】

【0578】

２Ｍ水酸化ナトリウム（１．２７ｍＬ、２．５４ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（０．５２９ｍＬ）／メタノール（０．５２９ｍＬ）中の（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート−異性体２（１１０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応物を室温で１時間攪拌し、次いでＥｔＯＡｃおよび水で希釈した。水溶液を、２ＭのＨＣｌの添加によってｐＨ６に調整し、層を分離した。水層をＥｔＯＡｃで抽出し、次いで合わせた有機物を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、真空中で濃縮した。未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリル酸−異性体２（８１ｍｇ、７６％）をベージュ色の固体として得た。¹H NMR (400 MHz, DMSO, 27℃) 1.02 (2H, s), 1.05 (3H, d), 1.23 (1H, s), 1.90 (3H, s), 2.28 - 2.46 (1H, m), 2.53 - 2.7 (1H, m), 2.86 - 3.03 (2H, m), 3.56 (1H, d), 4.83 (1H, s), 5.17 (1H, s), 6.66 (1H, d), 6.86 - 7.08 (2H, m), 7.17 (1H, d), 7.40 (1H, d), 7.44 (2H, d), 7.53 (1H, d), 10.54 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 459。

【0579】

出発原料として使用された（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１および２）を以下のように調製した。

【0580】

２−フルオロ−２−メチルプロパン−１，３−ジオール

【0581】

【化70】

【0582】

ＬｉＡｌＨ_４（０．７４１ｇ、１９．２５ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（３５．０ｍｌ）中のジエチル２−フルオロ−２−メチルマロネート（１．３４５ｇ、７．００ｍｍｏｌ）の冷却溶液に一部ずつ添加した。反応物をそのまま１時間かけて室温に温めた。０℃に冷却した後、反応物を、水（０．７５ｍＬ）、１５％ＮａＯＨ（０．７５ｍＬ）、次いで水（１．５ｍＬ）の添加によってクエンチした。懸濁液を３０分攪拌し、次いでろ過し、固体をＴＨＦで洗浄した。ろ液を蒸発させ、２−フルオロ−２−メチルプロパン−１，３−ジオール（０．７４５ｇ、９８％）を無色の油状物として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl3, 27℃) 1.34 (3H, d), 2.12 - 2.27 (2H, m), 3.75 (4H, d)。

【0583】

３−（（（Ｒ）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−イル）アミノ）−２−フルオロ−２−メチルプロパン−１−オール

【0584】

【化71】

【0585】

トリフルオロメタンスルホン酸無水物（１．１５１ｍｌ、６．８０ｍｍｏｌ）を、０℃で、ＤＣＭ（１７．８５ｍｌ）中の２−フルオロ−２−メチルプロパン−１，３−ジオール（０．７０ｇ、６．４７ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、続いて２，６−ルチジン（０．９０８ｍｌ、７．７７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物をそのまま３０分かけて室温に温め、次いで２ＭのＨＣｌで洗浄した。有機相を相分離カートリッジに通過させ、真空中で濃縮した。残留物をジオキサン（１２ｍＬ）中に溶解させ、次いで（Ｒ）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−アミン（１．１２８ｇ、６．４７ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１．６７８ｍｌ、９．７１ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を９０℃に２時間加熱した。冷却後、反応物をＤＣＭで希釈し、水で洗浄した。水相をＤＣＭで抽出し、次いで有機相を真空中で濃縮した。未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、３−（（（Ｒ）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−イル）アミノ）−２−フルオロ−２−メチルプロパン−１−オール（０．８１５ｇ、４７．６％）を茶色のゴム状物質として得た。m/z (ES+), [M+H]+ = 265。

【0586】

（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１および２）

【0587】

【化72】

【0588】

（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−ホルミルフェニル）アクリレート（５６５ｍｇ、２．５０ｍｍｏｌ）を、３−（（（Ｒ）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン−２−イル）アミノ）−２−フルオトルエン（１１．３ｍｌ）／酢酸（１．２５ｍｌ）中のロ−２−メチルプロパン−１−オール（６６１ｍｇ、２．５０ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。反応物を９０℃に５時間加熱した。冷却後、揮発物質を真空中で除去し、次いで残留物をＳＣＸ−２カラムに通過させ、メタノールで溶出させ、未反応のアルデヒドを除去した。次いでカラムをＮＨ_３／ＭｅＯＨで溶出させて、生成物を遊離させた。塩基性のろ液を蒸発させ、次いで未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ヘプタン中０から５０％のＥｔＯＡｃの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体１−１２２ｍｇ、１０．３％）黄色の固体としておよび（Ｅ）−メチル３−（３，５−ジフルオロ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−２−（２−フルオロ−３−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−イル）フェニル）アクリレート（異性体２−１２９ｍｇ、１１％を黄色／オレンジ色の固体として得た。異性体1 - ¹H NMR (400 MHz, CDCl3, 27℃) 1.10 (3H, d), 1.14 (3H, d), 2.54 (1H, dd), 2.62 - 2.73 (1H, m), 3.06 - 3.3 (2H, m), 3.40 (1H, dd), 3.56 (1H, t), 3.80 (3H, s), 3.87 - 4.08 (1H, m), 4.27 (1H, s), 5.16 (1H, s), 6.37 (1H, d), 7.01 (2H, d), 7.07 - 7.15 (2H, m), 7.14 - 7.24 (1H, m), 7.42 - 7.56 (2H, m), 7.71 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 473。異性体2 - ¹H NMR (400 MHz, CDCl3, 27℃) 1.15 (3H, d), 1.20 (3H, d), 2.65 (1H, dd), 2.79 (1H, t), 2.93 - 3.09 (2H, m), 3.57 (1H, dt), 3.70 (1H, dd), 3.78 (3H, s), 4.2 - 4.67 (1H, m), 5.42 (1H, s), 6.32 (1H, d), 6.94 (2H, d), 7.06 - 7.15 (2H, m), 7.19 - 7.27 (2H, m), 7.42 (1H, s), 7.51 (1H, dd), 8.02 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 473。

【0589】

参考例１：１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オン

【0590】

【化73】

【0591】

ピリジン４−メチルベンゼンスルホネート（１１．６２ｇ、４６．２４ｍｍｏｌ）を、窒素下で、メタノール（１Ｌ）中の１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン−１−オン（１２８ｇ、２３１．１９ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。混合物を６０℃で１．５時間攪拌した。５分後に混合物を可溶化した。混合物を５０℃で一晩保持し、その間の時間に沈殿が形成された。固体材料をろ過により単離し、水およびアセトニトリルで洗浄した。この材料はそれでもなお以前の段階からのわずかな不純物を含有していたため、さらなる精製が必要であった。材料をジクロロメタン中に溶解させ、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０％のメタノール／ＤＣＭから１０％のメタノール／ＤＣＭ）によって精製した。このようにして望ましい生成物、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オン（参考例１）（９２ｇ、８５％）をクリーム状の固体として単離した（形態Ａ）：¹H NMRスペクトル：(DMSO-d₆) 1.4 - 1.51 (12H, m), 1.51 - 1.78 (2H, m), 1.89 - 2.05 (2H, m), 2.72 - 2.86 (1H, m), 2.91 - 3.05 (1H, m), 3.12 - 3.24 (1H, m), 3.64 (2H, q), 3.83 - 4.01 (1H, m), 4.29 - 4.41 (1H, m), 4.47 (1H, t), 4.58 (2H, q), 8.26 (2H, s), 8.85 (1H, s)；マススペクトル[M+H]⁺= 470。

【0592】

１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン−１−オンを以下のように調製した。

【0593】

１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（７６ｍＬ、５１１．１４ｍｍｏｌ）を、２−メチルＴＨＦ（１．２Ｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（１５０ｇ、３１９．４６ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。ヨードエタン（４６ｍＬ、５７５．０３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を３５℃で１６時間攪拌した。さらなるヨードエタン（４６ｍＬ、５７５．０３ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（７６ｍＬ、５１１．１４ｍｍｏｌ）を添加し、攪拌を３５℃で２４時間続けた。混合物を水に注入し、不溶性材料をろ過により単離し、水およびＭＴＢＥで洗浄し、真空中で乾燥させ、ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（１１６ｇ、７３．０％）を黄色の固体として得た。ろ液をＤＣＭで抽出し、有機溶液を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残留物を、勾配溶出（３０％ＭＴＢＥ／ヘプタンから１００％ＭＴＢＥ）を使用したシリカでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。このようにして望ましい生成物の第二の生産物（１２ｇ、２４．１２ｍｍｏｌ、７．５５％）を黄色の固体として単離し、これを後で第一の生産物と合わせた：¹H NMRスペクトル: (DMSO-d₆) 1.41 (9H, s), 1.44 (9H, s), 1.48 (3H, t), 1.52 - 1.69 (2H, m), 1.87 - 2.04 (2H, m), 2.79 - 3.03 (3H, m), 3.86 - 4.03 (2H, m), 4.59 (2H, q), 7.89 (2H, s), 8.85 (1H, s);マススペクトル[M+H]⁺ = 498。

【0594】

ＤＣＭ（９Ｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（３００９．５ｇ、６．０５ｍｏｌ）の懸濁液を、Ｎ_２下で５〜１０℃に冷却した_。３０℃未満の温度を維持しながらこの懸濁液にＴＦＡ（９Ｌ）を一部ずつ添加した。反応混合物を室温で１時間攪拌した。混合物を濃縮し、結果得られた残留物を水（３０Ｌ）中に溶解させ、０〜５℃で３５％アンモニア水溶液（１２Ｌ）にゆっくり添加した。懸濁液を３０分攪拌し、次いで生成物をろ過して除き、水（２×６Ｌ）で洗浄した。生成物を５０℃、真空中で２日間乾燥させ、３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（１−エチル−３−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）ピラジン−２−アミン（（２４９６ｇ）を得た：¹H NMRスペクトル：(DMSO-d₆) 1.4 - 1.52 (12H, m), 1.57 - 1.73 (2H, m), 1.83 - 1.93 (2H, m), 2.57 - 2.7 (2H, m), 2.71 - 2.84 (1H, m), 2.96 - 3.09 (2H, m), 4.58 (2H, q), 8.06 (2H, s), 8.84 (1H, s)；マススペクトル[M+H]⁺= 398。

【0595】

ＴＨＦ（５５２ｍＬ）中の３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン酸（ＨＡＴＵ、４８．８０ｇ、０．２７７４ｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（８６．９６ｍＬ、０．４９９３ｍｏｌ）の溶液に、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（１１５．７３ｇ、０．３０５１ｍｏｌ）を、室温、窒素下で一部ずつ添加した。結果得られた混合物を２０分攪拌し、次いで３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（１−エチル−３−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）ピラジン−２−アミン（１２２．５ｇ（１１０．２５ｇの活性物質）、０．２７７４ｍｏｌ）を１時間かけて一部ずつ添加した。３．５時間後、混合物を濃縮し、残留物を、ＭｅＣＮ（２７５ｍＬ）中、室温で１５分間スラリー化した。生成物をろ過して除き、ＭｅＣＮ（３×１１０ｍＬ）で洗浄し、５０℃、真空中で一晩乾燥させた。それにより、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン−１−オン（１３１．９ｇ、９６％）を得た。¹H NMRスペクトル：(DMSO-d₆) 1.29 - 1.48 (16H, m), 1.48 - 1.75 (4H, m), 1.83 - 1.99 (2H, m), 2.48 - 2.68 (2H, m), 2.68 - 2.79 (1H, m), 2.87 - 2.99 (1H, m), 3.07 - 3.19 (1H, m), 3.32 - 3.42 (1H, m), 3.47 - 3.6 (1H, m), 3.64 - 3.75 (1H, m), 3.75 - 3.84 (1H, m), 3.84 - 3.95 (1H, m), 4.24 - 4.39 (1H, m), 4.47 - 4.6 (3H, m), 7.84 (2H, s), 8.79 (1H, s)：マススペクトル[M+Na]⁺= 577。

【0596】

参考例１の代替の調製
メタノール（１０４５ｍＬ）中の１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン−１−オン（１３１．９ｇ、０．２３８２ｍｏｌ）の懸濁液に、Ｎ２下で、ピリジニウムｐ−トルエンスルホネート（１１．９７ｇ、４７．７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、６０℃で５．５時間、次いで５０℃で一晩攪拌した。反応混合物を０℃に冷却し、固体をろ過して除いた。生成物を、水（２５０ｍＬ）中、室温で２０分環スラリー化し、ろ過して除き、水（３×４０ｍＬ）で洗浄し、真空中、５０℃で乾燥させた。それにより、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オン（２１．４ｇ）を形態Ａとして得た（以下参照）。

【0597】

メタノール溶液を濃縮し、結果得られた固体を、水（０．６Ｌ）中で室温で２０分スラリー化した。固体をろ過により単離し、水（３×１００ｍＬ）で洗浄した。二度目のろ過ケークのスラリー化を、水（０．５Ｌ）中でさらに２０分行った。生成物をろ過により単離し、水（１００ｍＬ）で洗浄し、真空中、５０℃で乾燥させた。それにより、８１．９ｇの１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オン（８１．９ｇ）を形態Ａとして得た。

【0598】

両方の生産物を合わせ（１０３．３ｇ）、形態Ｂ（１６．６８ｇ）と共に植え付け、室温で一晩、ＭｅＣＮ（８２６ｍＬ）中でスラリー化した。それにより、１１７．４ｇの１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンを薄黄色の固体、形態Ｂとして得た（１１７．４ｇ）（以下参照）。この材料を、ヘプタン（７．５の相対量）中で１時間スラリー化することによってさらに精製した。混合物をろ過し、フィルターで吸引乾燥し、真空オーブン中、５０℃で一晩乾燥させ、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オン（１０２．５ｇ）を形態Ｂとして得た。

【0599】

また形態Ｂは、種結晶を用いずにＭｅＣＮ中で形態Ａをスラリー化することによって作製してもよい。

【0600】

また形態ＡまたはＢは、以下のように形態Ｃに変換してもよい：
ＩＰＡ（１２ｖｏｌ）中の１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オン（例えば上記で概説した方法によって作製された形態Ｂ）の懸濁液を、固体が溶解するまで加熱還流した。この溶液を加熱ろ過し、次いで室温に冷却した。それにより、形態Ｃとして、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンを薄黄色の固体として得た（９９．３ｇ、９７％）。

【0601】

また形態Ｃは、以下のように形態Ｂに変換してもよい：
１０Ｌのフランジ付きフラスコ中に、ＭＩＢＫ（７９００ｍＬ）中の形態Ｃ（３７７．８ｇ、１部）を１１０〜１１５℃に加熱して、溶液を得た。この溶液ををそのまま９７〜１０３℃に冷却させ、即座にアセトニトリル（８２２０ｍＬ）中の形態Ｂの種（０．８ｇ）を含有する５０Ｌの容器にポリッシュろ過し、−１５℃で攪拌した。添加中、５０Ｌの容器中の温度をジャケット冷却手段によって−１５から２５℃の間に維持した。ＭＩＢＫに溶解させた追加の３部の化合物を、類似の方法で添加した。結果得られたスラリーに、形態Ｂの種（０．８ｇ）を添加し、次いで混合物を１０〜２０℃で一晩攪拌した。工程内分析により、目に見える形態Ｃまたは非晶質がない望ましい形態（形態Ｂ）であることを確認した。混合物をろ過し、アセトニトリル（３３４０ｍＬ）で洗浄した。固体を、一定重量が得られるまでオーブンで２日間乾燥させた（固体は、乾燥中に、粉末と約１ｍｍから約３〜４ｍｍのサイズの小さい塊の混合物に崩壊した）。収量＝１５３２．８ｇ（９３．５％）。

【0602】

３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン酸を以下のように調製した：
メタノール（２．４Ｌ）および濃硫酸（４４．４ｍＬ、８３２．６１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、０℃、窒素下で、ベータ−プロピオラクトン（１７５ｍＬ、２．７８ｍｏｌ）を一滴ずつ添加した。この溶液をそのまま室温で２日攪拌した。反応混合物を１０℃に冷却し、その後、重炭酸ナトリウム（１４５ｇ、１．７２ｍｏｌ）を一部ずつ添加し、結果得られた懸濁液をそのまま室温で７５分攪拌させておいた。この溶液をろ過し、ろ過ケークをメタノール（８００ｍＬ）で洗浄した。ろ液を蒸発させて油状物を得て、これをジクロロメタン（１．２Ｌ）中に再溶解させ、６０分間攪拌し、その後再度ろ過した。この溶液をろ過し、その後蒸発させて、メチル３−ヒドロキシプロパノエート（２１９ｇ、７６％）を油状物として得た。¹H NMRスペクトル：(CDCl₃) 2.50 (2H, t), 3.63 (3H, s), 3.78 (2H, t)。

【0603】

ピリジニウムｐ−トルエンスルホネート（７．６５ｇ、３０．４５ｍｍｏｌ）を、室温、窒素下で、ジクロロメタン（６５０ｍＬ）中のメチル３−ヒドロキシプロパノエート（６３．４ｇ、６０９．００ｍｍｏｌ）および３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン（７８ｍＬ、８５２．６０ｍｍｏｌ）の透明な溶液に添加し、曇った溶液を得た。これをそのまま室温で一晩攪拌した。反応混合物を水（２５０ｍＬ）およびブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、その後、乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、蒸発させて、油状物を得た。この未精製の生成物を、フラッシュシリカクロマトグラフィーで、ヘプタン中１５から３０％のＥｔＯＡｃの溶出勾配により精製した。純粋な画分を乾燥するまで蒸発させ、メチル３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパノエート（６７．７ｇ、５９．０％）を無色の油状物として得た：¹H NMRスペクトル：(CDCl₃) 1.47 (4H, dddd), 1.55 - 1.84 (2H, m), 2.55 (2H, t), 3.33 - 3.53 (1H, m), 3.53 - 3.7 (4H, m), 3.78 (1H, ddd), 3.93 (1H, dt), 4.42 - 4.72 (1H, m)；マススペクトル[MH]⁺ = 189。

【0604】

水酸化ナトリウム（２Ｍ、３４９ｍＬ、６９７．５８ｍｍｏｌ）を、室温で、ＴＨＦ（６８０ｍＬ）中のメチル３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパノエート（６７．６８ｇ、３５９．５８ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応混合物を室温で３時間攪拌した。ＴＨＦを真空中で除去し、次いで水層を酢酸エチル（２６０ｍＬ）で洗浄し、その後０℃に冷却し、慎重に塩酸（２Ｍ）を添加することによってｐＨ５に酸性化した。生成物を酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出し、その後、乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、蒸発させて、３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン酸（５７．０ｇ、９１％）を透明な油状物として得た。この材料を酢酸エチル（７５０ｍＬ）中に溶解させ、次いで水（３×２５０ｍＬ）およびブライン（２５０ｍＬ）で洗浄して、残存した酢酸を除去した。有機溶液を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、蒸発させ、３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン酸（４５．６７ｇ、７２．９％）を無色の油状物として得た：¹H NMRスペクトル：¹H NMR (CDCl₃) 1.43 - 1.67 (4H, m), 1.65 - 1.95 (2H, m), 2.68 (2H, t), 3.48 - 3.58 (1H, m), 3.73 (1H, dt), 3.88 (1H, ddd), 4.02 (1H, dt), 4.59 - 4.7 (1H, m)；マススペクトル[M-H]^- = 173。

【0605】

ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレートを以下のように調製した。

【0606】

ヒドラジン水和物（２３．５９ｍＬ、４８０．７５ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ（２Ｌ）中のメチル３−アミノ−６−ブロモピラジン−２−カルボキシレート（１００ｇ、４１８．０４ｍｍｏｌ）の攪拌した混合物に一滴ずつ添加した。混合物を５０℃、窒素下で加熱した。結果得られた粘性の懸濁液を５０℃で１６時間攪拌した。さらなるヒドラジン（２．５ｍＬ）を一部ずつ添加し、懸濁液を５０℃でさらに２４時間攪拌した。粘性の反応混合物にエタノール（５００ｍＬ）を入れ、混合物をそのまま室温に冷却させた。結果得られた懸濁液をろ過し、固体をエタノール（１Ｌ）で洗浄し、真空中で乾燥させ、３−アミノ−６−ブロモピラジン−２−カルボヒドラジド（９８ｇ、定量的）をクリーム状の固体として得た： ¹H NMRスペクトル；(DMSO-d₆) 4.52 (2H, s), 7.59 (2H, s), 8.30 (1H, s), 9.74 (1H, s)；マススペクトル[M+H]⁺ = 232。

【0607】

ピバル酸無水物（１６５ｍＬ、８１５．３８ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（１．８Ｌ）中の３−アミノ−６−ブロモピラジン−２−カルボヒドラジド（１７２ｇ、７４１．２６ｍｍｏｌ）の攪拌混合物に添加し、混合物を８０℃で１時間加熱した。反応物をそのまま１６時間攪拌させておいた。必要な黄色の固体材料をろ過により単離した。ろ液をＥｔＯＡｃ（２Ｌ）と重炭酸ナトリウム水溶液（２Ｌ）との間で分配した。有機層を飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させた。この溶液をろ過し、濃縮し、オレンジ色の粘性固体を得て、これをＭＴＢＥ（２５０ｍＬ）で粉砕した。不溶性の黄色固体をろ過により単離したところ、この材料は、第一の固体と同一であることが示された。合わせた固体を、真空オーブン中、５０℃で３日間乾燥させて、３−アミノ−６−ブロモ−Ｎ’−ピバロイルピラジン−２−カルボヒドラジド（２２４ｇ、９６％）を黄色の固体として得た：¹H NMRスペクトル：(DMSO-d₆) 1.17 (9H, s), 7.62 (2H, s), 8.37 (1H, s), 9.42 - 9.56 (1H, m), 10.09 - 10.23 (1H, m)；マススペクトル[M+H]⁺= 318。

【0608】

ＭｅＣＮ（１０．８Ｌ）中の３−アミノ−６−ブロモ−Ｎ’−ピバロイルピラジン−２−カルボヒドラジド（２３０１ｇ、７．２８ｍｏｌ）に、ＤＩＰＥＡ（３．０４４Ｌ、１７．４８ｍｏｌ）およびｐ−トルエン塩化スルホニル（１６６５ｇ、８．７３ｍｏｌ）を、５０℃で３０分間にわたり一部ずつ（約２８０ｇ×６）添加した。添加速度を制御することによって反応温度を６５〜７０℃に維持した。添加が完了した後、反応混合物を７０℃で１時間攪拌した。混合物を室温に冷却し、５％ＮａＨＣＯ_３（水溶液、２４．２Ｌ）でクエンチした。結果得られた懸濁液を３０分攪拌し、次いでろ過した。生成物を水（１４．８Ｌ）で洗浄し、吸引乾燥し、５０℃で１６時間乾燥させた。生成物をＤＣＭ（１２Ｌ）中に溶解させ、相分離した。有機相をシリカパッド（６ｋｇ）にローディングし、生成物を２０％のＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ（８×１０Ｌ）で溶出させた。生成物を含有する画分を濃縮して、１９８７ｇ（９２％収量）のＨＰＬＣにり純度９９．８％の５−ブロモ−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−アミンを得た（３６ｇ、１７％）：¹H NMRスペクトル：(DMSO-d₆) 1.43 (9H, s), 7.70 (2H, s), 8.39 (1H, s)；マススペクトル[M+H]⁺ = 298。

【0609】

窒素ガス流を、ＤＭＡ（１．２Ｌ）中の５−ブロモ−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−アミン（８９．３５ｇ、２３９．７５ｍｍｏｌ）の溶液に２０分通過させた。攪拌した混合物に、ジシクロヘキシル（２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル−２−イル）ホスフィン（１１．４３ｇ、２３．９８ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（５．４９ｇ、５．９９ｍｍｏｌ）、亜鉛（１．５６８ｇ、２３．９８ｍｍｏｌ）およびジシアノ亜鉛（１６．８９ｇ、１４３．８５ｍｍｏｌ）を逐次的に添加した。混合物を１００℃に加熱し、１時間攪拌した。混合物を冷却し、ＤＣＭ（３Ｌ）と水（１Ｌ）との間で分配した。黒色の混合物をセライトを通過させてろ過し、有機層を分離した。この溶液を水、次いでブラインで洗浄した。この溶液を硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物をＭＴＢＥで粉砕し、ろ過により単離して、ＭＴＢＥで洗浄した。ろ過ケークを真空中で乾燥させ、５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−カルボニトリル（５５．７ｇ、９５％）を薄いオレンジ色の固体として得た：¹H NMRスペクトル：(DMSO-d₆) 1.46 (9H, s), 6.02 (1H, s), 8.38 (2H, s)；マススペクトル[M-H]^- = 242。

【0610】

ヒドラジン水和物（８２ｍＬ、１．６９ｍｏｌ）を、ＩＰＡ（２００ｍＬ）中の５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−カルボニトリル（５５ｇ、２２５．１８ｍｍｏｌ）に添加し、混合物を５０℃、窒素下で１６時間加熱した。氷槽中で混合物を冷却した。結果得られた沈殿をろ過によって収集し、ＩＰＡおよびジエチルエーテルで洗浄し、一定の重量になるまで乾燥させ、（Ｚ）−５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−カルボヒドラゾンアミド（４９．２ｇ、７９％）を黄色の固体として得た：¹H NMRスペクトル：(DMSO-d₆) 1.45 (9H, s), 5.26 (2H, s), 5.58 (2H, s), 7.56 (2H, s), 8.75 (1H, s)；マススペクトル[M+H]⁺ = 277。

【0611】

Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（７４．３ｇ、１９５．４４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＡ（８００ｍｌ）中のＮ−Ｂｏｃ−イソニペコチン酸（４１．１ｇ、１７９．１５ｍｍｏｌ）および４−メチルモルホリン（３５．９ｍＬ、３２５．７４ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を１０分攪拌し、次いでこの溶液に、（Ｚ）−５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−カルボヒドラゾンアミド（４５ｇ、１６２．８７ｍｍｏｌ）を一部ずつ添加した（２２℃から２７℃の発熱が観察された）。２〜３分後、反応混合物から生成物が結晶化した。容器から反応混合物を取り出し、シンターを通過させてろ過した。容器側壁からの洗浄生成物（１５０ｍＬ）に追加のＤＭＡを添加し、これをろ過ケーク上に注いだ。その容器にイソプロパノール（６００ｍＬ）を添加し、容器中の生成物の残りを、力強くかき混ぜることによってこの溶媒に懸濁した。吸引によりＤＭＡが除去されたら、イソプロパノール懸濁液を使用してろ過ケークを洗浄した。ろ過ケークを吸引しつくし、次いでＭＴＢＥで洗浄し、再度吸引しつくした。ろ過ケークを真空中で乾燥させ、（Ｚ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（アミノ（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）メチレン）ヒドラジンカルボニル）ピペリジン−１−カルボキシレート（７６ｇ、９５％）を黄色の固体として得た：¹H NMRスペクトル：(DMSO-d₆) 1.40 (9H, s), 1.46 (9H, s), 1.63 - 1.9 (2H, m), 2.33 - 2.6 (2H, m, DMSOシグナルのために不明瞭), 2.63 - 3.03 (2H, m), 3.18 - 3.48 (4H, m, 水のシグナルのために不明瞭), 3.88 - 4.11 (2H, m), 6.43 (2H, s), 7.76 (2H, br), 8.84 (0.5H, s), 8.87 (0.5H, s), 9.85 (1H, s)；マススペクトル[M+H]⁺ = 488。

【0612】

代替の調製において、Ｎ−Ｂｏｃ−イソニペコチン酸は、以下のようにその場で形成されてもよい：
イソニペコチン酸（８５８ｇ、３．７４ｍｏｌ）をＤＭＡ（２５．３Ｌ）中に溶解させ、４−メチルモルホリン（３９３ｍＬ、３．７４ｍｏｌ）を添加した。５分間攪拌し、クロロギ酸イソブチル（４８９ｍＬ、３．７４ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２５℃で２時間攪拌し、１５℃に冷却し、その後（Ｚ）−５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−カルボヒドラゾンアミド（９４０ｇ、３．４ｍｏｌ）を１０分かけて一部ずつ添加した。反応混合物を１５℃で１〜２時間攪拌した。水（２０．５Ｌ）を１時間かけて一部ずつ添加し、さらに１時間攪拌し、その後ろ過した。次いでろ過ケークを水（４×４Ｌ）で洗浄し、フィルター上で吸引乾燥し、その後、乾燥するまで真空オーブン中５０℃で乾燥させ、望ましい生成物を得た。

【0613】

酢酸（２００ｍＬ）を、３Ｌの固定された二重のジャケットを有する容器中のジオキサン（５００ｍＬ）に添加し、この溶液を窒素下で７０℃に加熱した。この温かい混合物に、（Ｚ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（アミノ（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）メチレン）ヒドラジンカルボニル）−ピペリジン−１−カルボキシレート（７４．５ｇ、１５２．８０ｍｍｏｌ）を一部ずつ添加した。１０分後、温度を１００℃に高めた（わずかに還流しながら）。反応混合物を１００℃で１．５時間攪拌し（懸濁）、次いで８０℃で一晩保持した（一晩保持した後、溶液が形成された）。結果得られた溶液を減圧下で濃縮し、次いでトルエンで希釈し、乾燥するまで蒸発させ、トルエンに溶解させ、再度濃縮した。残った油を少々の酢酸エチルと混合し、乾燥するまで濃縮した。固体が溶液から結晶化し、これをＭＴＢＥ（２００ｍＬ）で粉砕し、ろ過により単離した。ろ過ケークを水およびＭＴＢＥで洗浄し、ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（５０ｇ、７０％）を灰色の固体として得た。

【0614】

ろ液を減圧下で濃縮し、黄色の固体を得た。この材料をＭＴＢＥで粉砕し、ろ過した。ろ過ケークを、酢酸エチル、次いでＭＴＢＥで洗浄し、第二の生産物を薄黄色の固体として得た（４．９３ｇ、７％）。この材料は第一の生産物と同一であった：¹H NMRスペクトル：(DMSO-d₆) 1.17 (9H, s), 1.22 (9H, s), 1.29 - 1.47 (2H, m), 1.67 - 1.78 (2H, m), 2.57 - 2.87 (3H, m), 3.57 - 3.92 (2H, m), 7.56 (2H, br), 8.56 (1H, s), 13.47 (2H, br s)；マススペクトル[M+H]+ = 470。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】