特許 6289375 抗ＩＬ−３６Ｒ抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6289375

(24)【登録日】2018年2月16日

(45)【発行日】2018年3月7日

(54)【発明の名称】抗ＩＬ−３６Ｒ抗体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/09 20060101AFI20180226BHJP

   C12N 15/02 20060101ALI20180226BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20180226BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20180226BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20180226BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20180226BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20180226BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20180226BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20180226BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20180226BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20180226BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20180226BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20180226BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20180226BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20180226BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20180226BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20180226BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20180226BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20180226BHJP

【ＦＩ】

   C12N15/00 A

   C12N15/00 CZNA

   C07K16/28

   C12P21/08

   C12N5/10

   C12N1/15

   C12N1/19

   C12N1/21

   A61P29/00

   A61P37/06

   A61P11/00

   A61P3/00

   A61P35/00

   A61P17/06

   A61P1/04

   A61P19/02

   A61P29/00 101

   A61P11/06

   A61K39/395 N

   G01N33/53 P

【請求項の数】28

【全頁数】96

(21)【出願番号】特願2014-542388(P2014-542388)

(86)(22)【出願日】2012年11月14日

(65)【公表番号】特表2015-500633(P2015-500633A)

(43)【公表日】2015年1月8日

(86)【国際出願番号】US2012064933

(87)【国際公開番号】WO2013074569

(87)【国際公開日】20130523

【審査請求日】2015年11月13日

(31)【優先権主張番号】61/560,554

(32)【優先日】2011年11月16日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/644,111

(32)【優先日】2012年5月8日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/713,713

(32)【優先日】2012年10月15日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】503385923

【氏名又は名称】ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング

(74)【代理人】

【識別番号】110001508

【氏名又は名称】特許業務法人 津国

(74)【代理人】

【識別番号】100078662

【弁理士】

【氏名又は名称】津国 肇

(74)【代理人】

【識別番号】100131808

【弁理士】

【氏名又は名称】柳橋 泰雄

(74)【代理人】

【識別番号】100116528

【弁理士】

【氏名又は名称】三宅 俊男

(74)【代理人】

【識別番号】100146031

【弁理士】

【氏名又は名称】柴田 明夫

(74)【代理人】

【識別番号】100122736

【弁理士】

【氏名又は名称】小國 泰弘

(74)【代理人】

【識別番号】100122747

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 洋子

(74)【代理人】

【識別番号】100132540

【弁理士】

【氏名又は名称】生川 芳徳

(74)【代理人】

【識別番号】100133651

【弁理士】

【氏名又は名称】森田 慶子

(72)【発明者】

【氏名】ブラウン，スー−エレン

(72)【発明者】

【氏名】カナダ，キース

(72)【発明者】

【氏名】クレウィッキ，ルカシュ

(72)【発明者】

【氏名】ハウエル，マイケル

(72)【発明者】

【氏名】メンネリッヒ，デトレフ

(72)【発明者】

【氏名】ウォスカ・ジュニア，ジョセフ・ロバート

【審査官】 鈴木 崇之

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００９−５０４１９１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１０／０２５３６９（ＷＯ，Ａ２）

【文献】 特表２０１０−５０２２２５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 J. Immunol.，２０１０年，Vol. 185, No. 7，pp. 4354-4362

【文献】 J. Biol. Chem.，２００４年，Vol. 279, No. 14，pp. 13677-13688

【文献】 東ソー研究・技術報告，２００８年，第５２巻，pp. 3-9

【文献】 Mol. Immunol.，２００８年，Vol. 46，pp. 135-144

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ１２Ｎ １５／００−１５／９０

Ｃ１２Ｐ ２１／０８

Ｃ１２Ｎ ５／００−５／２８

Ｃ０７Ｋ １６／２８

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメント。

【請求項2】

抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメント。

【請求項3】

抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメント。

【請求項4】

抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメント。

【請求項5】

配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体。

【請求項6】

配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体。

【請求項7】

配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体。

【請求項8】

請求項１〜７のいずれか１項記載の抗体又は抗原結合フラグメント、及び医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。

【請求項9】

医薬において使用するための、請求項１〜７のいずれか１項記載の抗体又は抗原結合フラグメント、又は請求項８記載の医薬組成物。

【請求項10】

医薬における使用が、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器系疾患、代謝異常、上皮媒介性の炎症性疾患、線維症、又は癌の処置方法における使用である、請求項９記載の抗体又は抗原結合フラグメント又は医薬組成物。

【請求項11】

医薬における使用が、乾癬、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、ＣＯＰＤ、慢性喘息、又は強直性脊椎炎の処置方法における使用である、請求項８又は９記載の抗体又は抗原結合フラグメント、又は医薬組成物。

【請求項12】

医薬における使用が、炎症性腸疾患の処置方法における使用である、請求項９〜１１のいずれか１項記載の抗体又は抗原結合フラグメント、又は医薬組成物。

【請求項13】

医薬における使用が、クローン病の処置方法における使用である、請求項９〜１２のいずれか１項記載の抗体又は抗原結合フラグメント、又は医薬組成物。

【請求項14】

医薬における使用が、潰瘍性大腸炎の処置方法における使用である、請求項９〜１２のいずれか１項記載の抗体又は抗原結合フラグメント、又は医薬組成物。

【請求項15】

医薬における使用が、掌蹠膿疱症の処置方法における使用である、請求項９〜１２のいずれか１項記載の抗体又は抗原結合フラグメント、又は医薬組成物。

【請求項16】

医薬における使用が、汎発性膿疱性乾癬の処置方法における使用である、請求項９〜１２のいずれか１項記載の抗体又は抗原結合フラグメント、又は医薬組成物。

【請求項17】

請求項１〜７のいずれか１項記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントをコードする配列を含む、単離ポリヌクレオチド。

【請求項18】

ＤＮＡ又はＲＮＡである、請求項１７記載の単離ポリヌクレオチド。

【請求項19】

配列番号１２５、１２６、１２７、１１８、８０、８７、８８、８９、２６、４４、５３、６２、７２、１０４の１つ以上により定義される配列をコードする、請求項１７又は１８記載の単離ポリヌクレオチド。

【請求項20】

請求項１７〜１９のいずれか１項記載のポリヌクレオチドを含むベクター。

【請求項21】

請求項１７〜１９のいずれか１項記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。

【請求項22】

請求項１７〜１９のいずれか１項記載のポリヌクレオチドを発現制御配列と機能的に関連して含むベクター。

【請求項23】

請求項１７又は１８記載のポリヌクレオチド、又は請求項２０記載のベクターを含む宿主細胞。

【請求項24】

請求項１〜７のいずれか１項記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントの製造方法。

【請求項25】

請求項１７〜１９のいずれか１項記載のポリヌクレオチド、又は請求項２０〜２２のいずれか１項記載のベクター、又は請求項２３記載の宿主細胞の使用を含む、組み換え体製造方法。

【請求項26】

工程（ａ）宿主細胞を、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントの発現を可能にする条件下で培養すること、及び（ｂ）抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントを回収すること、を含む、請求項２４又は２５記載の方法。

【請求項27】

請求項１〜７のいずれか１項記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントを含む、診断キット。

【請求項28】

炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器系疾患、代謝異常、上皮媒介性の炎症性疾患、線維症、癌、乾癬、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、ＣＯＰＤ、慢性喘息、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、掌蹠膿疱症又は汎発性膿疱性乾癬の診断のための、請求項２７記載の診断キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットでＥＦＳ−Ｗｅｂ経由で提出され、全体として引用により取り込まれる配列表を含む。２０１２年１１月１２日付けで作成された当該ＡＳＣＩＩの複写は、０９−０５８３ＷＯ．ｔｘｔと命名され、サイズ１４７，３９０バイトである。

【0002】

発明の技術分野
本発明は、一般的に、診断上及び治療上用いるための抗ＩＬ−３６Ｒ抗体に関する。抗体は、かかる化合物を含む医薬組成物及びキットにおいて用いることができる。抗体は、ヒトにおける種々の疾患又は異常（例えば、免疫疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、線維症、及び呼吸器系疾患）の処置方法において有用である。

【0003】

発明の背景
サイトカインのＩＬ−１ファミリーは、１１種の異なるリガンド、すなわち、ＩＬ−１α（ＩＬ−１Ｆ１とも呼ばれる）、ＩＬ−１β（ＩＬ−１Ｆ２）、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１Ｒａ又はＩＬ−１Ｆ３）、ＩＬ−１８（ＩＬ−１Ｆ４）、ＩＬ−１Ｆ５〜ＩＬ−１Ｆ１０、及びＩＬ−１Ｆ１１（又はＩＬ−３３）からなる。ＩＬ−１α及びＩＬ−１βは、タイプＩのＩＬ−１受容体（ＩＬ−１ＲＩ）への結合による炎症誘発性活性、及び共通の共受容体ＩＬ−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）の動員を誘導する一方、ＩＬ−１Ｒａは、ＩＬ−１ＲＩに結合するＩＬ−１の競合的阻害剤として作用し、故に抗炎症性活性を発揮することが知られている。多数の研究により、ＩＬ−１８はＩＦＮ−γのインデューサーである炎症性サイトカインであることが報告されている一方、ＩＬ−３３は、特に、Ｔｈ２応答の制御に関与する免疫調節性サイトカインとして記載された。ＩＬ−１Ｆ５、ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、及びＩＬ−１Ｆ９を含むＩＬ−１ファミリーの新規メンバーは、ＩＬ−１の相同体についてのＤＮＡデータベースでの検索により同定された。ヒト及びマウスにおいて、これらのサイトカインをコードする全遺伝子は、染色体２ｑの３００ｋｂ未満に位置し、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、及びＩＬ１ＲＮ遺伝子に隣接する。ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、及びＩＬ−１Ｆ９は、ＩＬ−１及びＩＬ−１Ｒａと２１％〜３７％アミノ酸配列相同性を有する一方、ＩＬ−１Ｆ５は、ＩＬ−１Ｒａとの５２％アミノ酸配列相同性を示し、これにより、ＩＬ−１Ｆ５が内在性受容体アンタゴニストとなり得ることが示唆される。

【0004】

ＩＬ−１Ｆ６、ＩＬ−１Ｆ８、及びＩＬ−１Ｆ９は、ＩＬ−１Ｒファミリーの受容体であるＩＬ−１Ｒｒｐ２に結合し、ＩＬ−１ＲＡｃＰを、ＩＬ−１により誘導されるものと同様の細胞内シグナルを刺激する共受容体として用いる一方、ＩＬ−１Ｆ５は、ＩＬ−１Ｒｒｐ２を過剰発現するＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞において、ＩＬ−１Ｆ９により誘導されるＮＦ−κＢ活性化を阻害することが示された。ＩＬ−１β同様、これら全てのＩＬ−１相同体は、リーダーペプチドを欠き、通常の分泌経路を介して放出されないが、ＩＬ−１Ｒｒｐ２アゴニストの放出は、ＩＬ−１β分泌を制御するものとは異なるメカニズムにより制御され得ることを示唆している。これらのサイトカインの特異的生物学的作用を認識し、それら全てが同一の受容体に結合することを認知するために、最近、ＩＬ−１相同体の命名法を修正することが提案されている。従って、ＩＬ−１Ｒｒｐ２は現在ＩＬ−３６Ｒと命名され、そのリガンドはＩＬ−３６α（ＩＬ−１Ｆ６）、ＩＬ−３６β（ＩＬ−１Ｆ８）、及びＩＬ−３６γ（ＩＬ−１Ｆ９）と命名される。加えて、受容体アンタゴニスト活性を発揮することが示されているＩＬ−１Ｆ５は、ＩＬ−３６Ｒａと再度命名された。

【0005】

ＩＬ−３６α、ＩＬ−３６β、及びＩＬ−３６γのメッセンジャーＲＮＡは、いくつかの組織、具体的には、病原体にさらされた、皮膚内の内上皮組織において高発現している。興味深いことに、ＩＬ−３６Ｒａ及びＩＬ−３６αの発現は、ＩＬ−１β／ＴＮＦ−αにより刺激されたヒトケラチノサイトにおいて有意にアップレギュレートされ、ＩＬ−３６Ｒａ及びＩＬ−３６γｍＲＮＡは、損傷性乾癬皮膚において高度に増大される。更に、ＩＬ−３６γタンパク質産生は、ＴＮＦ−α及びＩＦＮ−γ刺激後、ヒトケラチノサイトにおいて増強される。上昇したＩＬ−３６αのｍＲＮＡ及びタンパク質発現は慢性腎疾患においても報告された。

【0006】

ケラチノサイトにおいてＩＬ−３６αを過剰発現するトランスジェニックマウスは、乾癬と共通するいくつかの特徴を有する炎症性皮膚損傷を示す。この表現型は、トランスジェニックマウスがＩＬ−３６Ｒａ欠損マウスと交配されたとき、重度であり、これにより、インビボにおけるＩＬ−３６Ｒａの制御機能が支持される。マウスが１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール１３−アセタートで処置されるなら、ケラチノサイト特異的ＩＬ−３６αトランスジェニックにおける炎症性皮膚状態は、さらにヒト乾癬に類似する（組織学的、分子的、及び治療に対するその応答においてヒト疾患に似ている）。更に、免疫欠損マウスに移植されたヒト乾癬性損傷皮膚は、マウスが抗ＩＬ−３６Ｒ抗体で処置されたとき、正常化され、これにより、ＩＬ−３６軸がヒト乾癬皮膚における損傷表現型を維持するのに必要とされることが示される。まとめると、これらのデータは、ＩＬ−３６α、ＩＬ−３６β、及びＩＬ−３６γを含むＩＬ−３６Ｒリガンドが、インビボ及びインビトロにける炎症性作用を示し、ＩＬ−３６Ｒａが天然のアンタゴニストとして作用し、これによりＩＬ−１／ＩＬ−１Ｒａシステムを模倣することを示す。

【0007】

それ故、ＩＬ−３６Ｒリガンドが多数の疾患状態に関与する証拠が存在し、特に、炎症性疾患の処置において使用するための、この経路を標的にする新規治療剤が必要である。

【0008】

発明の概要
本発明は、生物学的治療、特に、ＩＬ−３６Ｒに結合する抗体を提供することにより、上記の必要に取り組む。１つの態様において、本発明の抗体は、ＩＬ３６リガンドにより仲介されるシグナル伝達（α、β、及び／又はγ）を阻害する。１つの態様において、本発明の抗体は、例えば、疾患（例えば、乾癬、炎症性腸疾患、強皮症、ＣＯＰＤ、及び慢性腎疾患）における上皮媒介性の炎症／線維症の処置に有用である。

【0009】

１つの態様において、本発明は、１個以上の以下の特性を有する抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供する。

【0010】

１つの態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、高い分子／細胞結合能を有する。１つの態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ヒトＩＬ−３６ＲにＫ_Ｄ＜０．１nMで結合する。更なる態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体、特にヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ヒトＩＬ−３６ＲにＫ_Ｄ＜５０pMで結合する。１つの態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ＩＬ−３６Ｒ発現細胞にＥＣ_９０＜５nMで結合する。

【0011】

別の態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、高い、細胞に基づく機能的阻害能を有する。１つの態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、全３種のＩＬ−３６Ｒアンタゴニストリガンド（α、β、γ）をＩＣ_９０≦５nMで疾患関連細胞株及び初代細胞において阻害する。

【0012】

１つの態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、上述の分子／細胞結合能及び細胞に基づく機能的阻害能を有する。

【0013】

更なる態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ヒトＩＬ−１Ｒ１又はＩＬ−３６Ｒ陰性細胞株に対して高い選択性（例えば、１０００倍より高い選択性）を有する。更なる態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ヒトＩＬ−１Ｒ１又はＩＬ−３６Ｒ陰性細胞株に結合しない。

【0014】

実施態様１において、本発明は、ヒトＩＬ−３６Ｒに０．１nM以下のＫ_Ｄで結合する、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。

【0015】

実施態様２において、本発明は、実施態様１に記載のＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメント（ここで、当該抗体又は抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体又はその抗原結合フラグメントである）を提供する。

【0016】

実施態様３において、本発明は、実施態様１又は２記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメント（ここで、当該抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントである）を提供する。

【0017】

実施態様４において、本発明は、ヒトＩＬ−３６Ｒに５０pM以下のＫ_Ｄで結合する、実施態様３記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。

【0018】

実施態様５において、本発明は、ヒトＩＬ−１Ｒ１に結合しない、実施態様１〜４のいずれか１つに記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。

【0019】

実施態様６において、本発明は、実施態様１記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３５、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、又は１４０のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む。

【0020】

実施態様７において、本発明は、実施態様６記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０２のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む。

【0021】

実施態様８において、本発明は、実施態様６記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０３のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む。

【0022】

実施態様９において、本発明は、実施態様６記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む。

【0023】

実施態様１０において、本発明は、実施態様６記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む。

【0024】

実施態様１１において、本発明は、実施態様６記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む。

【0025】

実施態様１２において、本発明は、実施態様６記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１４０のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２、１０８、１０９、１１０、又は１１１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む。

【0026】

実施態様１３において、本発明は、実施態様１記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、又は８３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、及び配列番号８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、又は９５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0027】

実施態様１４において、本発明は、実施態様１３記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、
配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域
を含む。

【0028】

実施態様１５において、本発明は、
配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域
を含む抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。

【0029】

実施態様１６において、本発明は、実施態様１記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、
配列番号２７のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０７のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２７のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；配列番号１０７のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６４のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２７のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号５４のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６３又は６４のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む。

【0030】

実施態様１７において、本発明は、実施態様１記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号８４、８５、又は８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９６、９７、９８、９９、１００、又は１０１のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0031】

実施態様１８において、本発明は、実施態様１７記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、
配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域
を含む。

【0032】

実施態様１９において、本発明は、実施態様１７記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、
配列番号８６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号８６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域
を含む。

【0033】

実施態様２０において、本発明は、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、ここで、抗体は、配列番号１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、又は１２１のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、又は１３３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0034】

実施態様２１において、本発明は、実施態様２０記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、ここで、抗体は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0035】

実施態様２２において、本発明は、実施態様２０記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、ここで、抗体は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0036】

実施態様２３において、本発明は、実施態様２０記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、ここで、抗体は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0037】

実施態様２４において、本発明は、実施態様２０記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、ここで、抗体は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0038】

実施態様２５において、本発明は、実施態様２０記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、ここで、抗体は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0039】

実施態様２６において、本発明は、実施態様２０記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、ここで、抗体は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0040】

実施態様２７において、本発明は、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、ここで、抗体は、配列番号１２２、１２３、又は１２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、又は１３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0041】

実施態様２８において、本発明は、実施態様２７記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、ここで、抗体は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0042】

実施態様２９において、本発明は、実施態様２７記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、ここで、抗体は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0043】

実施態様３０において、本発明は、２７記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供し、ここで、抗体は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0044】

実施態様３１において、本発明は、実施態様１記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０３のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む。

【0045】

実施態様３２において、本発明は、実施態様１記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ）配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号１０４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む。

【0046】

実施態様３３において、本発明は、実施態様１記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ）配列番号２７のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号１０７のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む。

【0047】

実施態様３４において、本発明は、実施態様１記載の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ）配列番号２７のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号１０７のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６４のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む。

【0048】

１つの実施態様において、実施態様１〜３４のいずれか１つに記載の抗体又はその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体である。１つの実施態様において、実施態様１〜３４のいずれか１つに記載の抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒト化抗体である。１つの実施態様において、実施態様１〜３４のいずれか１つに記載の抗体又はその抗原結合フラグメントは、モノクローナルヒト化抗体である。

【0049】

実施態様３５において、本発明は、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、
配列番号２１のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３０のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号３９のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号４８のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号５７のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号６７のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２２のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３１のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４０のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号４９のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号５８のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号６８のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２３のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３２のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４１のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号５０のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号５９のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号６９のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３３のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４２のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号５１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６０のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７０のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４３のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号５２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７１のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４４のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７２のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２７のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号５４のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２７のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４５のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号５４のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６４のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７３のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２８のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３７のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４６のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号５５のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６５のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７４のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２９のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ１）；配列番号３８のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ２）；配列番号４７のアミノ酸配列（Ｌ−ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号５６のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ１）；配列番号６６のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ２）；配列番号７５のアミノ酸配列（Ｈ−ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む。

【0050】

実施態様３６において、本発明は、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメントは、
配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域
を含む。

【0051】

更なる実施態様３７において、本発明は、上述の実施態様のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント、及び医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。

【0052】

更なる実施態様３８において、本発明は、医薬において使用するための、上述の実施態様のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント、又は医薬組成物を提供する。

【0053】

更なる実施態様３９において、本発明は、実施態様１〜３７のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント、又は医薬組成物（ここで、使用は、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器系疾患、代謝異常、上皮媒介性の炎症性疾患、線維症、又は癌の処置である）を提供する。

【0054】

更なる実施態様４０において、本発明は、実施態様１〜３７のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント、又は医薬組成物（ここで、使用は、乾癬、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、ＣＯＰＤ、慢性喘息、又は強直性脊椎炎の処置のためである）を提供する。

【0055】

更なる実施態様４１において、本発明は、実施態様１〜３７のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント、又は医薬組成物（ここで、使用は、炎症性腸疾患の処置のためである）を提供する。

【0056】

なお更なる実施態様４２において、本発明は、実施態様４１に記載の抗体又は抗原結合フラグメント、又は医薬組成物（ここで、疾患はクローン病である）を提供する。

【0057】

別の実施態様４３において、本発明は、実施態様１〜３７のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント、又は医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、疾患の処置方法（ここで、疾患は、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器系疾患、代謝異常、上皮媒介性の炎症性疾患、線維症、及び癌から選択される）を提供する。

【0058】

別の実施態様４５において、本発明は、実施態様４３記載の方法を提供し、ここで、疾患は、乾癬、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、ＣＯＰＤ、慢性喘息、及び強直性脊椎炎から選択される。

【0059】

なお更なる実施態様４５において、本発明はクローン病の処置方法を提供する。

【0060】

本発明の更なる実施態様は、
− 本発明による抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントをコードする配列を含む単離ポリヌクレオチド、好ましくは、ＤＮＡ又はＲＮＡ配列；
− 配列番号１〜１４０の１つ以上により定義される配列をコードする、本発明による単離ポリヌクレオチド；
− 本発明によるポリヌクレオチドを含むベクター、好ましくは、発現ベクター、より好ましくは、本発明によるポリヌクレオチドを発現制御配列と機能的に関連して含むベクター；
− 本発明によるポリヌクレオチド、及び／又は本発明によるベクターを含む宿主細胞；
− 本発明による抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントの製造方法、好ましくは、本発明によるポリヌクレオチド、及び／又は本発明によるベクター、及び／又は本発明による宿主細胞の使用を含む組換え製造方法；
− かかる方法は、好ましくは、工程（ａ）宿主細胞を、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントの発現を可能にする条件下で培養し、（ｂ）抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントを回収する、を含み；
− 本発明による抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントを含む、診断キット又は診断方法、又はその使用；
− 炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器系疾患、代謝異常、上皮媒介性の炎症性疾患、線維症、癌、乾癬、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、ＣＯＰＤ、慢性喘息、強直性脊椎炎、又はクローン病の診断のための、本発明による診断キット又は診断方法
を含む。

【図面の簡単な説明】

【0061】

【図1】ＩＬ−３６アンタゴニストリガンド（ＩＬ−３６ＲＡ／ＩＬ１Ｆ５、ＩＬ−３８／ＩＬＦ１０）は、シグナル伝達カスケードを阻害する。

【図2】遺伝子チップ分析は、ＩＬ−３６Ｒリガンド（ＩＬ−３６ＲＡ、ＩＬ−３６α、及びＩＬ−３６γ）が、乾癬皮膚においてアップレギュレートされることを示す。

【図3】ヒト皮膚切片を用いた発現プロファイル。抗体３３Ｄ１０を用いた抗体滴定で包埋されたホルマリン固定パラフィン。

【図4】ヒト皮膚切片の表皮の厚さを評価するための方法。

【0062】

発明の説明
本発明は、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体に関する。１つの態様において、本発明の抗体は、例えば、ヒトにおいて、診断上及び治療上用いるためである。

【0063】

本発明は、ＩＬ−３６Ｒ、特にヒトＩＬ−３６Ｒに結合する抗体を提供する。本発明はまた、ＩＬ−３６Ｒを結合するヒト化抗体に関する。特定の実施態様において、これらのヒト化抗体の配列は、ある種のリードマウス抗体の配列に基づき同定された。

【0064】

この理論によって結び付けられることを望まなくても、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントはヒトＩＬ−３６Ｒに結合し、従ってＩＬ−３６アゴニストの結合を妨げ、そうすることでＩＬ−３６Ｒから炎症性メディエーターへのシグナル伝達カスケードを少なくとも部分的に阻害すると信じられている。これは図１により説明される。

【0065】

１つの態様において、本発明の抗体は、ヒトの疾患モデルにおいて用いるためのものである。ＩＬ−３６Ｒは、ＩＬ−１ＲＬ２及びＩＬ−１Ｒｒｐ２としても知られている。アゴニストＩＬ−３６リガンド（α、β、又はγ）は、ＩＬ−３６受容体を捉えて、ＩＬ−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）と共にヘテロダイマーを形成することにより、シグナル伝達カスケードを開始することが報告されている。ＩＬ−３６アンタゴニストリガンド（ＩＬ−３６ＲＡ／ＩＬ１Ｆ５、ＩＬ−３８／ＩＬＦ１０）は、シグナル伝達カスケードを阻害する（図１を参照）。

【0066】

１つの態様において、本発明は、以下の１つ以上の特性を有する抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供する。

【0067】

１つの態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、高い分子／細胞結合能を有する。１つの態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ヒトＩＬ−３６ＲにＫ_Ｄ＜０．１nMで結合する。更なる態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体、特にヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ヒトＩＬ−３６ＲにＫ_Ｄ＜５０pMで結合する。１つの態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ＩＬ−３６Ｒ発現細胞にＥＣ_９０＜５nMで結合する。

【0068】

別の態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、高い、細胞に基づく機能的阻害能を有する。１つの態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、疾患関連細胞株及び初代細胞において、全３種のＩＬ−３６Ｒアゴニストリガンド（α、β、γ）をＩＣ_９０≦５nMで阻害する。

【0069】

１つの態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、上で説明された分子／細胞結合能及び細胞に基づく機能的阻害能を有する。

【0070】

１つの態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化抗体である。１つの態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はモノクローナル抗体である。１つの態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は全長抗体である。１つの態様において、本発明の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体（例えば、全長ヒト化モノクローナル抗体）である。

【0071】

本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントは、特異的な「ＩＬ−３６Ｒ抗原エピトープ」又は「ＩＬ−３６Ｒエピトープ」を認識する。本明細書において用いられるこれらの用語は、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体と免疫活性のある分子（例えば、ペプチド）又は分子のフラグメントに言及する。

【0072】

エピトープは、最も通常には、タンパク質、短いオリゴペプチド、オリゴペプチド模倣物（すなわち、ＩＬ−３６Ｒ抗原の抗体結合特性を模倣する有機化合物）、又はその組み合わせである。抗体のペプチド又はポリペプチドエピトープの最小サイズは、約４〜５個のアミノ酸であると考えられる。ペプチド又はポリペプチドエピトープは、例えば少なくとも７個のアミノ酸、又は例えば少なくとも９個のアミノ酸、又は例えば約１５〜約２０個のアミノ酸を含有する。抗体は、３次元形態の抗原性ペプチド又はポリペプチドを認識することができるので、エピトープを含むアミノ酸は近接する必要はなく、ある種の場合、同一のペプチド鎖上でなくてもよい。エピトープは、当該技術分野において知られた種々の技術（例えば、Ｘ線結晶解析、水素／重水素交換質量分析（ＨＸＭＳ）、部位特異的変異誘発、アラニン系統的変異誘発、及びペプチドスクリーニング法）により決定され得る。

【0073】

抗体又は免疫グロブリンの一般的構造は、当業者に周知である。これらの分子は、典型的には約１５０，０００ダルトンのヘテロ４量体糖タンパク質であり、２個の同一の軽（Ｌ）鎖及び２個の同一の重（Ｈ）鎖からなり、典型的には全長抗体として言及される。各軽鎖は、１個のジスルフィド結合により重鎖に共有結合して、ヘテロダイマーを形成し、ヘテロ４量体分子は、ヘテロダイマーの２個の同一の重鎖間の共有ジスルフィド結合を介して形成される。軽鎖と重鎖は、１個のジスルフィド結合により互いに結合し、２個の重鎖間のジスルフィド結合数は、免疫グロブリンアイソタイプにより変動する。各重鎖及び軽鎖はまた、一定間隔の鎖間ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、アミノ末端に可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）、続いて３又は４個の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、Ｃ_Ｈ３、及びＣ_Ｈ４）、並びにＣ_Ｈ１とＣ_Ｈ２間のヒンジ領域を有する。各軽鎖は、２個のドメイン、アミノ末端に可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）及びカルボキシ末端の定常ドメイン（Ｃ_Ｌ）を有する。Ｖ_Ｌドメインは、Ｖ_Ｈドメインと非共有結合的に関連し、一方Ｃ_Ｌドメインは、通常ジスルフィド結合を介してＣ_Ｈ１ドメインに共有結合する。具体的なアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメイン間の境界を形成すると考えられている（Chothia et al., 1985, J. Mol. Biol. 186:651-663）。可変ドメインは、本明細書において可変領域としても言及される。

【0074】

可変ドメイン内のある種のドメインは、異なる抗体間で十分に異なる（すなわち、「高頻度可変性」である）。これらの高頻度可変性ドメインは、その特異的な抗原決定基について、各具体的な抗体の結合及び特異性に直接関与する残基を含有する。軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの両方における高頻度可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）又は高頻度可変性ループ（ＨＶＬ）として知られる３個のセグメントに集中する。ＣＤＲは、Kabat et al., 1991, In: Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5^th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.における配列比較により定義される。ＨＶＬ（本明細書においてＣＤＲとしても言及される）は、可変ドメインの３次元構造により構造的に定義される（Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917により記載される）。これら２つの方法は、ＣＤＲを若干異なって同定する。Ｋａｂａｔにより定義される通り、ＣＤＲ−Ｌ１は、軽鎖可変ドメイン中の約残基２４〜３４、ＣＤＲ−Ｌ２は約残基５０〜５６、ＣＤＲ−Ｌ３は約残基８９〜９７に位置し；ＣＤＲ−Ｈ１は、重鎖可変ドメイン中の約残基３１〜３５、ＣＤＲ−Ｈ２は約残基５０〜６５、ＣＤＲ−Ｈ３は約残基９５〜１０２に位置する。特定のＣＤＲを含む正確な残基数は、ＣＤＲの配列及びサイズに依存して変動する。当業者は、どの残基が抗体の可変領域アミノ酸配列に付与される具体的なＣＤＲを含むかを日常的に決定することができる。それ故、重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は、所定の抗体に特異的な固有性及び機能的特性を定義する。

【0075】

各重鎖及び軽鎖内の３個のＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）により分けられ、どちらかといえばほとんど変動しない配列を含有する。ＦＲ及びＣＤＲは、重鎖及び軽鎖可変ドメインのアミノ末端からカルボキシ末端に、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の順で配置される。主として、ＦＲのβ−シート構造は、各鎖内のＣＤＲを互いに、並びに他の鎖由来のＣＤＲに極めて接近させる。得られた配置は抗原結合部位に関与する（Kabat et al., 1991, NIH Publ. No. 91-3242, Vol. I, pages 647-669を参照）が、全てのＣＤＲ残基が必ずしも抗原結合に直接関与するわけではない。

【0076】

ＦＲ残基及びＩｇ定常ドメインは、直接ではないが、抗原結合に関与し、及び／又は抗体エフェクター機能を仲介する。いくつかのＦＲ残基は、少なくとも３種の方法（エピトープに直接非共有結合すること、１個以上のＣＤＲ残基と相互作用すること、及び重鎖と軽鎖間の境界を影響することによる）で、抗原結合に対して有意な作用を有すると考えられる。定常ドメインは、抗原結合に直接関与しないが、種々のＩｇエフェクター機能（例えば、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、及び抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）における抗体の関与）を仲介する。

【0077】

脊椎動物の免疫グロブリンの軽鎖は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、２種の明確に区別できる種類であるカッパ（κ）及びラムダ（λ）の１つに割り当てられる。比較により、哺乳動物免疫グロブリンの重鎖は、定常ドメインの配列により５つの主要な種類：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭの１つに割り当てられる。ＩｇＧ及びＩｇＡは更に、サブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ_２）に分けられる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。天然の免疫グロブリンクラスのサブユニット構造及び３次元配置は周知である。

【0078】

用語「抗体」、「抗ＩＬ−３６Ｒ抗体」、「ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体」、「ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒエピトープ抗体」、及び「変異体ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒエピトープ抗体」は、具体的にはモノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多特異的抗体（例えば、二重特異的抗体）、及び抗体フラグメント（例えば、可変ドメイン、及び所望の生物学的活性（例えば、ＩＬ−３６Ｒ結合）を発揮する抗体の他の部分）を包含する。用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）は、単一の抗原決定基である「エピトープ」に対して高度に特異的である抗体に言及する。それ故、修飾語「モノクローナル」は、同一のエピトープに対する抗体を示しており、任意の具体的な方法による抗体産生を必要とすると解されるべきではない。モノクローナル抗体は、当該技術分野で知られた任意の技術又は方法論（例えば、ハイブリードマ方法（Kohler et al., 1975, Nature 256:495）、又は当該技術分野で知られた組み換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）、又はClackson et al., 1991, Nature 352: 624-628、及びMarks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222: 581-597に記載される技術を用いたファージ抗体ライブラリーを用いて組換え的に産生されるモノクローナル抗体の単離方法を含む）により、作成され得ると解されるべきである。

【0079】

用語「モノマー」は、抗体の同種形態に言及する。例えば、全長抗体について、モノマーは、２個の同一の重鎖及び２個の同一の軽鎖を有するモノマー抗体を意味する。

【0080】

キメラ抗体は、１つの種（例えば、非ヒト哺乳類（例えば、マウス））由来の抗体の重鎖及び軽鎖可変領域、及び別の種（例えば、ヒト）抗体の重鎖及び軽鎖定常領域からなり、第１の種（例えば、マウス）由来の抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列を、第２の種（例えば、ヒト）由来の抗体の定常領域についてのＤＮＡ配列に結び付け、宿主を、キメラ抗体の産生を可能にする結合配列を含有する発現ベクターでトランスフォーメーションすることにより、得ることができる。或は、キメラ抗体はまた、（ここで、重鎖及び／又は軽鎖の１個以上の領域又はドメインが、別の免疫グロブリンクラス又はアイソタイプ、又はコンセンサス又は生殖細胞系列配列由来のモノクローナル抗体における対応する配列と同一、相同、又は変異体である。キメラ抗体は、その親抗体の所望の生物学的活性（例えば、同一のエピトープへの結合）を発揮する抗体のフラグメントを含むことができる（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；及びMorrison et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855を参照）。

【0081】

用語「抗体フラグメント」、「抗ＩＬ−３６Ｒ抗体フラグメント」、「抗ＩＬ−３６Ｒエピトープ抗体フラグメント」、「ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体フラグメント」、「ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒエピトープ抗体フラグメント」、「変異体ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒエピトープ抗体フラグメント」は、全長抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の部分（ここで、可変領域又は機能的能力は保持されている（例えば、特異的なＩＬ−３６Ｒエピトープ結合））に言及する。抗体フラグメントの例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びｓｃＦｖ−Ｆｃフラグメント、二重特異性抗体、直線抗体、１本鎖抗体、小型抗体（minibody）、抗体フラグメントから形成される二重特異性抗体、及び抗体フラグメントから形成される多特異的抗体を含むが、これらに限定されない。

【0082】

全長抗体は、酵素（例えば、パパイン又はペプシン）で処理して、有用な抗体フラグメントを生成することができる。パパイン切断を用いて、それぞれ単一の抗原結合部位、及び残りの「Ｆｃ」フラグメントを有する、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２個の同一の抗原結合抗体フラグメントを生成する。Ｆａｂフラグメントはまた、軽鎖の定常ドメイン、及び重鎖のＣ_Ｈ１ドメインを含有する。ペプシン処理は、２個の抗原結合部位を有し、なおも抗原を架橋結合できるＦ（ａｂ’）_２フラグメントを生じる。

【0083】

Ｆａｂ’フラグメントは、Ｆａｂフラグメントとは抗体ヒンジ領域由来の１個以上のシステインをＣ_Ｈ１ドメインのＣ末端に含む追加残基の存在により異なる。Ｆ（ａｂ’）_２抗体フラグメントは、ヒンジ領域においてシステイン残基により結合された１対のＦａｂ’フラグメントである。抗体フラグメントの他の化学的結合も知られている。

【0084】

「Ｆｖ」フラグメントは、１個の重鎖可変ドメインと１個の軽鎖可変ドメインの２量体からなる完全抗原認識部位及び抗原結合部位を、タイトな非共有結合性会合において含有する。この配置において、各可変ドメインの３個のＣＤＲは相互作用して、抗原結合部位をＶ_Ｈ−Ｖ_Ｌ２量体の表面上に明確にする。まとめると、６個のＣＤＲが抗原結合特異性を抗体に付与する。

【0085】

「１本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメイン（ここで、ドメインは、単一のポリペプチド鎖に存在する）の１本鎖Ｆｖ変異体である。１本鎖Ｆｖは、抗原を認識し、結合することができる。ｓｃＦｖポリペプチドは、場合により、ｓｃＦｖによる抗原結合のため、所望の３次元構造の形成を促進するために、Ｖ_ＨとＶ_Ｌドメインとの間に位置するポリペプチドリンカーを含有してもよい（例えば、Pluckthun, 1994, In The Pharmacology of monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315を参照）。

【0086】

「二重特異性抗体」は、２個の抗原結合部位を有する小さな抗体フラグメントに言及し、そのフラグメントは、同一のポリペプチド鎖において軽鎖可変ドメイン（Ｖ．ｓｕｂ．Ｌ）に結合された重鎖可変ドメイン（Ｖ．ｓｕｂ．Ｈ）を含む（Ｖ．ｓｕｂ．Ｈ−Ｖ．ｓｕｂ．Ｌ、又はＶ．ｓｕｂ．Ｌ−Ｖ．ｓｕｂ．Ｈ）。二重特異性抗体は、例えば、Holliger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448において十分に記載されている。

【0087】

他の認識される抗体フラグメントは、１対の抗原結合領域を形成するための１対のタンデムＦｄセグメント（Ｖ_Ｈ−Ｃ_Ｈ１−Ｖ_Ｈ−Ｃ_Ｈ１）を含むものを含む。これらの「直線抗体」は、例えば、Zapata et al. 1995, Protein Eng. 8(10):1057-1062に記載される二重特異性又は単一特性であり得る。

【0088】

「ヒト化抗体」又は「ヒト化抗体フラグメント」は、免疫グロブリンアミノ酸配列変異体、又はそのフラグメントを含むキメラ抗体の特定の種類であり、そしてそれは予め決められた抗原に結合可能であり、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有する１個以上のＦＲ、及び非ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有する１個以上のＣＤＲを含む。「移入」配列としてしばしば言及されるこの非ヒトアミノ酸配列は、典型的には、「移入」抗体ドメイン、具体的には可変ドメインから入手される。一般に、ヒト化抗体は、ヒト重鎖又は軽鎖可変ドメインのＦＲ間に挿入された、非ヒト抗体の少なくともＣＤＲ又はＨＶＬを含む。本発明は、ヒト生殖細胞系列配列重鎖及び軽鎖可変ドメインのＦＲ間に挿入されたマウスモノクローナル抗体又はヒト化ＣＤＲからもたらされるＣＤＲを含有する特異的なヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を記載する。ある種のマウスＦＲ残基は、ヒト化抗体の機能に重要であり得、それ故ある種のヒト生殖細胞系列配列重鎖及び軽鎖可変ドメインは、対応するマウス配列のものと同一であるように改変されると理解されるだろう。

【0089】

別の態様において、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、実質的に全てである少なくとも１個、典型的には２個の可変ドメインを含み（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂｃ、及びＦｖフラグメントにおいて含有される）、ここで、全て又は実質的に全てのＣＤＲは非ヒト免疫グロブリンのそれに対応し、特に本明細書において、全てのＣＤＲは、本明細書において以下で詳述されるマウス又はヒト化配列であり、全て又は実質的に全てのＦＲは、ヒト免疫グロブリンコンセンサス又は生殖細胞系列配列のものである。別の態様において、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はまた、少なくとも一部の免疫グロブリンＦｃ領域、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含有する。通常、抗体は、軽鎖、並びに少なくとも重鎖の可変ドメインの両方を含有する。抗体はまた、適切に、重鎖の１個以上のＣ_Ｈ１、ヒンジ、Ｃ_Ｈ２、Ｃ_Ｈ３、及び／又はＣ_Ｈ４領域も含有し得る。

【0090】

ヒト化抗ＩＬ−３６ｒ抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む任意のクラスの免疫グロブリン、及びＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ_２を含む任意のアイソタイプから選択することができる。例えば、定常ドメインは、定常ドメインを固定する補体であり得、ここで、ヒト化抗体は細胞毒性活性を発揮し、アイソタイプは典型的にはＩｇＧ_１であることが望まれる。かかる細胞毒性活性が望まれない場合、定常ドメインは別のアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ_２）のものであってもよい。代わりのヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、１個より多い免疫グロブリンクラス又はアイソタイプ由来の配列を含むことができ、所望のエフェクター機能を最適化するための、具体的な定常ドメインを選択することは当該技術分野において通常の技術である。特定の実施態様において、本発明は、ＩｇＧ_１抗体であり、より具体的にはエフェクター機能がノックアウトされているＩｇＧ１抗体である抗体を提供する。

【0091】

ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のＦＲ、及びＣＤＲ、又はＨＶＬは、親配列に正確に対応する必要はない。例えば、移入ＣＤＲ、又はＨＶＬ、又はコンセンサス又は生殖細胞系列ＦＲ配列における１個以上の残基は、得られたアミノ酸残基がいずれかの親配列における対応する部分の元の残基ともはや同一ではないが、それにも関わらず抗体がＩＬ−３６Ｒに対する結合能を保持するように、置換、挿入、又は欠損により変更されてもよい（例えば、変異誘発されてもよい）。かかる変更は、典型的には大規模ではなく、保存的変更である。通常、少なくとも７５％のヒト化抗体残基は、親のコンセンサス又は生殖細胞系列ＦＲ及び移入ＣＤＲ配列に対応し、より頻繁には少なくとも９０％、最も頻繁には９５％より多く、又は９８％より多く、又は９９％より多くが対応するだろう。

【0092】

重鎖可変領域と軽鎖可変領域間の境界（「Ｖ_Ｌ−Ｖ_Ｈ境界」）に影響する免疫グロブリン残基は、互いに関連する２つの鎖の近接性又は配向性に影響するものである。鎖間の相互作用に関与し得るある種の残基は、Ｖ_Ｌ残基３４、３６、３８、４４、４６、８７、８９、９１、９６、及び９８、及びＶ_Ｈ残基３５、３７、３９、４５、４７、９１、９３、９５、１００、及び１０３を含む（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987)において説明される番号方式を用いている）。米国特許第６，４０７，２１３号はまた、残基（例えば、Ｖ_Ｌ残基４３及び８５、及びＶ_Ｈ残基４３及び６０）もこの相互作用に関与し得ることを考察している。これらの残基がヒトＩｇＧのみについて示されているとき、それらは種に渡り適用可能である。鎖間の相互作用に関与すると合理的に予測される重要な抗体残基がコンセンサス配列への置換のため選択される。

【0093】

用語「コンセンサス配列」及び「コンセンサス抗体」は、任意の具体的なクラス、アイソタイプ、又はサブユニット構造（例えば、ヒト免疫グロブリン可変ドメイン）の全ての免疫グロブリンにおいてそれぞれの位置で最も頻繁に生じるアミノ酸残基を含むアミノ酸配列に言及する。コンセンサス配列は、特定の種又は多くの種の免疫グロブリンに基づき得る。「コンセンサス」配列、構造、又は抗体は、ある種の実施態様において記載されるコンセンサスヒト配列を包含すると解され、任意の具体的なクラス、アイソタイプ、又はサブユニット構造の全ヒト免疫グロブリンにおいてそれぞれの位置で最も頻繁に生じるアミノ酸残基を含むアミノ酸配列に言及する。従って、コンセンサス配列は、それぞれの位置で、１個以上の既知の免疫グロブリンにおいて存在するアミノ酸を有するアミノ酸配列を含有するが、それは任意の単一の免疫グロブリンのアミノ酸配列全体を正確には複製し得ない。可変領域コンセンサス配列は、任意の天然に産生される抗体又は免疫グロブリン（Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.,）、及びその変異体から得られない。

【0094】

ヒト生殖細胞系列配列は、ヒト集団において天然に見出される。これらの生殖細胞系列遺伝子の組み合わせは抗体の多様性を生じる。抗体の軽鎖の生殖細胞系列抗体配列は、保存されたヒト生殖細胞系列カッパ、又はラムダｖ−遺伝子及びｊ−遺伝子からもたらされる。同様に、重鎖配列は、生殖細胞系列ｖ−遺伝子、ｄ−遺伝子、及びｊ−遺伝子からもたらされる（LeFranc, M-P, and LeFranc, G, "The Immunoglobulin Facts Book" Academic Press, 2001）。

【0095】

本明細書において用いられる「変異体」、「抗ＩＬ−３６Ｒ変異体」、「ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ変異体」、又は「変異体ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ」のそれぞれは、少なくとも軽鎖可変マウスＣＤＲを有するヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体に言及する。変異体は、軽鎖又は重鎖可変ドメインの１つ又は両方において１個以上のアミノ酸変更を有するものを含む（但し、アミノ酸変更は、抗体のＩＬ−３６Ｒへの結合を実質的に損なわない）。

【0096】

「単離」抗体は、その天然環境の構成成分から同定され、分離され、及び／又は回収されるたものである。抗体の天然環境の混入成分は、抗体の診断上又は治療上の使用と干渉し得る物質であり、酵素、ホルモン、又は他のタンパク質又は非タンパク質性溶質であり得る。１つの態様において、抗体は、抗体重量の少なくとも９５％より高い単離物に精製されるだろう。

【0097】

抗体の天然環境の構成成分の少なくとも１つは存在しないので、単離抗体には、抗体が産生される組み換え細胞内のインサイツの抗体も含まれる。しかしながら、通常、単離抗体は、少なくとも１つの精製工程（ここで、組み換え細胞材料が取り除かれる）により調製される。

【0098】

用語「抗体パフォーマンス」は、抗原の抗体認識、又はインビボでの抗体の有効性に関与する要因に言及する。抗体のアミノ酸配列中の変更は、抗体特性（例えば、フォールディング）に影響することができ、物理的要因（例えば、抗体の抗原への結合の開始速度（ｋａ）、抗体の抗原からの解離定数（ｋｄ）、抗体の抗原についての親和性定数（Ｋｄ）、抗体の構造、タンパク質安定性、及び抗体の半減期）に影響し得る。

【0099】

本明細書において用いられる用語「タグを付けられたエピトープ」は、「エピトープタグ」に融合した抗ＩＬ−３６Ｒ抗体に言及する。「エピトープタグ」は、抗体産生のためエピトープを提供するのに十分な数のアミノ酸を有するポリペプチドであり、それが、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の所望の活性を阻害しないように設計される。エピトープタグは、通常、エピトープタグに対して生じた抗体が、他のエピトープと実質的にクロス反応しないように十分に固有なものである。適当なタグポリペプチドは、一般に、少なくとも６個のアミノ酸残基を含有し、通常、約８〜５０個のアミノ酸残基、又は約９〜３０個の残基を含有する。エピトープタグ及びエピトープを結合する抗体の例は、ｆｌｕ ＨＡタグポリペプチド及びその抗体１２ＣＡ５を含む（Field et al., 1988 Mol. Cell. Biol. 8: 2159-2165；ｃ−ｍｙｃタグ、及び８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、Ｂ７、及びそれに対する９Ｅ１０抗体（Evan et al., 1985, Mol. Cell. Biol. 5(12):3610-3616）；及び単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タグ、及びその抗体（Paborsky et al. 1990, Protein Engineering 3(6): 547-553）を含む。ある種の実施態様において、エピトープタグは「エピトープを結合するサルベージ受容体」である。本明細書において用いられる用語「エピトープを結合するサルベージ受容体」は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期の増大に関与するＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、又はＩｇＧ_４）のＦｃ領域のエピトープに言及する。

【0100】

いくつかの実施態様において、本発明の抗体は細胞毒性剤に結合され得る。これは、細胞の機能を阻害するか又は妨げる、及び／又は細胞の破壊を引き起こす任意の物質である。用語は、放射性アイソトープ（例えば、Ｉ^１３１、Ｉ^１２５、Ｙ^９０、及びＲｅ^１８６）、化学療法剤、及び毒物（例えば、細菌、真菌、植物、又は動物起源の酵素的に活性な毒物、及びそのフラグメント）を含むことが意図されている。かかる細胞毒性剤は、標準的な方法を用いて本発明のヒト化抗体に結合することができ、例えば、抗体での治療に望ましい患者を処置するために用いられる。

【0101】

「化学療法剤」は、癌の処置において有用な化学的化合物である。本発明の治療抗体と結合することができる化学療法剤の多数の例が存在する。かかる化学療法剤の例は、アルキル化剤（例えば、チオテパ及びシクロスホスファミド；スルホン酸アルキル（例えば、ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファン）；アジリジン（例えば、ベンゾドーパ（benzodopa）、カルボコン、メツレドーパ（meturedopa）、及びウレドーパ（uredopa）;アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、及びトリメチローロメラミンを含むエチレンイミン及びメチルアメラミン；アセトゲニン（特に、ブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼルシン、及びビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（cryptophycine）（具体的には、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン、オーリスタチン（類似体モノメチル−オーリスタチンＥ及びモノメチル−オーリスタチンＦを含む）；ズオカルマイシン（合成類似体であるＫＷ−２１８９及びＣＢＩ−ＴＭＩを含む）；エリュテロビン；パンクラティスタチン（pancratistatin）；サルコジクチン（sarcodictyin）; スポンジスタチン；ナイトロジェンマスタード（例えば、クロラムブチル、クロマファジン、クロロホスファミド（cholophosphamide）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン（novembichin）、フェネステリン（phenesterine）、プレドニマスチン；トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロスレアス（nitrosureas）（例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン；抗生物質（例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリチアマイシン、特にカリケアマイシンガンマ１Ｉ及びカリチアマイシンファイＩ１（例えば、Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33:183-186を参照）；ディネマイシンＡを含むディネマイシン；ビスホスホネート（例えば、クロドロネート）；エスペラマイシン；並びにネオカルジノスタチンクロモフォア及び放出された色素タンパク質であるエンジイン抗生物質クロモモホル（chromomophore））、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（authramycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（carabicin）、カミノマイシン（caminomycin）、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトロビシン（detorubicin）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（Adriamycin（登録商標））(モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、及びデオキシドキソルビシンを含む)、エピルブシン（epirubucin）、エソルビシン（esorubicin）、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン（例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（potfiromycin）、ピュロマイシン（puromycine）、クェラマイシン（quelamycin）、ロドルビシン（rodorubicin）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸類似体（例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート）；プリン類似体（例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン（thiamiprine）、チオグアニン；ピリミジン類似体（例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン（例えば、カルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗アドレナル（例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補液（例えば、フロリン酸）；アセグラトン；アイドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル（bestrabucil）；ビスアントレン；エダトラキセート；デホファミン（defofamine）；デモコルシン（democolcine）；ジアジクオン；エルホミチン（elfomithine）；エリプチニウムアセテート；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；メイタンシノイド（例えば、メイタンシン及びアンサマイトシン）；ミトグアゾン、ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット（phenamet）；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（商標）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン（sizofuran）；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２''−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ−２毒、ベラクリン（verracurin）Ａ、ロリジンＡ、及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミタブロニトール（mitabronitol）；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（gacytosine）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド（例えば、パクリタキセル(ＴＡＸＯＬ（商標）、Bristol−Myers Squibb Oncology、Princeton、N.J.)）及びドキセタキセル（doxetaxel）（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（商標）、Rhone-Poulenc Rorer、Antony、France）；クロラムブチル；ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ（登録商標））；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；プラチナ類似体（例えば、シスプラチン及びカルボプラチン）；ビンブラスチン；プラチナ；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビンＮａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド（例えば、レチノイン酸）；カペシタビン；及び上述のいずれかの医薬的に許容される塩、酸、又は誘導体を含む。この定義に、腫瘍上でのホルモン作用を制御するか又は阻害するために作用する抗ホルモン剤（例えば、抗エストロゲン及び選択性エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、例えば、タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標）を含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン（trioxifene）、ケオキシフェン（keoxifene）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン（onapristone）、及びトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）））；副腎でのエストロゲン産生を制御する、酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤（例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、メゲストロールアセテート（Ｍｅｇａｃｅ（登録商標））、エキセメスタン、ホルメスタン、ファドロゾール、ボロゾール（Ｒｉｖｉｓｏｒ（登録商標））、レトロゾール（Ｆｅｍａｒａ（登録商標））、及びアナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））；及び抗アンドロゲン（例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリード、及びゴセレリン；及び上述のいずれかの医薬的に許容される塩、酸、又は誘導体も含まれる。これらの剤の任意の１個以上を本発明のヒト化抗体と結合して、種々の異常の処置に有用な治療剤がもたらされ得る。

【0102】

抗体はまたプロドラッグに結合してもよい。「プロドラッグ」は、親薬物と比較して、腫瘍細胞に対してより少ない細胞毒性であり、酵素的に活性化されることができるか、又はより活性な形態に変換される、医薬的に有効な物質の前駆体又は誘導体形態である。例えば、Wilman, 1986, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy", In Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast and Stella et al., 1985, "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery, In: "Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp. 247-267, Humana Pressを参照。有用なプロドラッグは、プロドラッグを含有するリン酸塩、プロドラッグを含有するチオリン酸塩、プロドラッグを含有する硫酸塩、プロドラッグを含有するペプチド、Ｄ−アミノ酸−修飾プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、プロドラッグを含有するβ−ラクタム、場合により置換されている、プロドラッグを含有するフェノキシアセトアミド、及び場合により置換されている、プロドラッグを含有するフェニルアセトアミド、５−フルオロシトシン、及びより活性な細胞毒性のない薬物に変換され得る他の５−フルオロウリジンプロドラッグを含むが、これらに限定されない。プロドラッグ形態に誘導体化され得る細胞毒性薬物の例は、上述の化学療法剤を含むが、これらに限定されない。

【0103】

診断上並びに治療上のモニタリング目的のため、本発明の抗体はまた、標識、標識単独、又は標識と更に第２の剤（プロドラッグ、化学療法剤等）に結合してもよい。他の第２の剤から区別される標識は、検出可能な化合物又は組成物である剤に言及し、そしてこれは、本発明のヒト化抗体に直接的又は間接的に結合されてもよい。標識は、それ自体検出可能（例えば、ラジオアイソトープ標識、又は蛍光標識）であってもよいか、又は酵素標識の場合、検出可能な基質化合物又は組成物の化学的変化を触媒してよもよい。標識ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、調製され、インビトロ及びインビボ診断を含む種々の適用に用いることができる。

【0104】

本発明の抗体は、インビボにおけるデリバリーに影響するように、リポソーム調製物の一部として考案されてもよい。「リポソーム」は、様々な種類の脂質、リン脂質、及び／又は界面活性剤からなる小型の小胞である。リポソームは、場合により１個以上の医薬的に有効な剤及び／又は標識に結合されるか、又はそれと組み合わされた、化合物又は製剤（例えば、本明細書で開示されるヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体）の哺乳類へのデリバリーに有用である。リポソームの成分は、通常、生物学的メンブレンの脂質配置と同様に、２層構成で配置される。

【0105】

本発明のある種の態様は、本発明のヒト化抗体の１個以上のドメインをコードする単離核酸に関する。「単離」核酸分子は、抗体核酸の天然供給源において通常関連する少なくとも１個の混入核酸分子から同定され、分離された核酸分子である。単離核酸分子は、それが天然の細胞中に存在する核酸分子と区別される。

【0106】

本発明の種々の態様において、ヒト化抗体の１個以上のドメインは、組み換え的に発現される。かかる組み換え発現は、１個以上の制御配列、すなわち、特定の宿主生物において作動可能に結合したコード配列の発現に必要なポリヌクレオチド配列を利用してもよい。原核細胞における使用に適した制御配列は、例えば、プロモーター、オペレーター、及びリボソーム結合部位配列を含む。真核生物の制御配列は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを含むが、これらに限定されない。これらの制御配列は、原核生物及び真核生物の宿主細胞におけるヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の発現及び産生のために利用することができる。

【0107】

核酸配列は、それが、別の核酸配列と機能的に関連して置かれるとき、「作動可能に結合」される。例えば、核酸プレ配列又は分泌リーダーは、ポリペプチドの分泌に関与する前タンパク質として発現されるなら、ポリペプチドをコードする核酸に作動可能に結合し、プロモーター又はエンハンサーは、配列の転写に影響するなら、コード配列に作動可能に結合するか、又はリボソーム結合部位は、翻訳を促進するよう位置するなら、コード配列に作動可能に結合する。一般的に、「作動可能に結合した」は、結合されたＤＮＡ配列が隣接し、分泌リーダーの場合、リーディングフレームで隣接することを意味する。しかしながら、エンハンサーが場合により隣接する。結合は、通常の制限酵素部位でのライゲーションにより成され得る。かかる部位が存在しないなら、合成オリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーが用いられ得る。

【0108】

本明細書において用いられる、表現「細胞」、「細胞株」、及び「細胞培養」は同じ意味で用いられ、かかる指定の全てがその子孫を含む。従って、「形質転換体」及び「トランスフォーメーションされた細胞」は、初代対象細胞、及びトランスファーの数を問わずそこからもたらされる培養物を含む。

【0109】

処置目的のため、用語「哺乳類」は、ヒト、家畜、及び動物園、スポーツ、又はペットの動物（例えば、イヌ、ウマ、ネコ、ウシなど）を含む哺乳類として分類される任意の動物に言及する。好ましくは、哺乳類はヒトである。

【0110】

本明細書で用いられる「異常」は、本明細書に記載されるヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体での処置から利益を受ける任意の状態である。これは、哺乳類を対象の異常に罹患しやすくする病的状態を含む慢性及び急性異常又は疾患を含む。本明細書において処置されるべき非限定的な例又は異常は、炎症性、血管形成、自己免疫、及び免疫異常、呼吸障害、癌、血液系腫瘍、良性及び悪性腫瘍、白血病、及びリンパ系腫瘍を含む。

【0111】

用語「癌」及び「癌性」は、無制御の細胞増殖により典型的に特徴付けられる哺乳類における生理的状態に言及するか、又は記載する。癌の例は、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病を含むが、これらに限定されない。

【0112】

ＩＬ−３６Ｒ関連異常は、免疫系の疾患及び異常（例えば、自己免疫疾患及び炎症性疾患）を含む。かかる状態は、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、強皮症、シェーグレン症候群、多発性硬化症、乾癬、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎及びクローン病）、肺の炎症、喘息、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、上皮炎症性疾患、線維症、及び強直性脊椎炎を含むが、これらに限定されない。

【0113】

用語「静脈内注入」は、約１５分より長い時間、一般的には約３０〜９０分間、動物又はヒト患者の静脈への剤の導入に言及する。

【0114】

用語「静脈内ボーラス」又は「静脈内プッシュ」は、身体が約１５分未満、一般的には５分未満で薬物を受けるような、動物又はヒトの静脈への薬物投与に言及する。

【0115】

用語「皮下投与」は、動物又はヒト患者の皮下、好ましくは皮膚と下部組織の間のポケット内での、比較的ゆっくりとした、薬物容器からの持続性デリバリーによる、剤の導入に言及する。皮膚をつまむか、又は皮膚を持ち上げて下部組織から離すことにより、ポケットが生まれる。

【0116】

用語「皮下注入」は、３０分以下、又は９０分以下を含むがこれらに限定されない時間、比較的ゆっくりとした、薬物容器からの持続性デリバリーにより、動物又はヒト患者の皮下、好ましくは皮膚と下部組織の間のポケット内への薬物の導入に言及する。場合により、注入は、動物又はヒト患者の皮下に移植された薬物デリバリーポンプの皮下移植により成され、ここで、ポンプは、予め決められた量の薬物を予め決められた期間（例えば、３０分、９０分）又は処置計画期間にまたがる時間デリバーする。

【0117】

用語「皮下ボーラス」は、動物又はヒト患者の皮膚の真下での薬物投与に言及し、ボーラス薬物デリバリーは、約１５分未満であり、別の態様において５分未満、なお別の態様において６０秒未満である。なお別の態様において、投与は、皮膚と下部組織との間のポケット内であり、ここで、ポケットは、皮膚をつまむか、又は皮膚を持ち上げて下部組織から離すことにより作られ得る。

【0118】

用語「治療上有効量」を用いて、処置される異常の症状の１つ以上を軽減するか、又は回復させる有効な剤の量に言及する。別の態様において、治療上有効量は、例えば、疾患の進行を遅延させる際に有効であることが示された標的血清濃度に言及する。有効性は、通常の方法で、処置されるべき状態に依存して測定され得る。

【0119】

本明細書で用いられる用語「処置」及び「治療」などは、１つ以上の症状の軽減又は除去、疾患又は異常の進行の退行、遅延又は停止を含むがこれらに限定されない、任意の臨床上所望又は有益な効果を導く疾患又は異常のための治療、並びに、予防、又は抑制手段を含むことを意味する。従って、例えば、用語処置は、疾患又は異常の症状の始まる前、又はその後の剤の投与を含み、これにより、疾患又は異常の１つ以上の兆候が予防されるか、又は取り除かれる。別の例として、その用語は、疾患の症状と闘うための、疾患の臨床的徴候後の剤の投与を含む。更に、発症後、及び臨床的症状が改善し、投与が臨床的パラメーター（例えば、組織損傷の程度、転移の量又は範囲）に影響を与えた後の剤の投与は、処置が疾患の改善を導くかどうかに関わらず、本明細書で用いられる「処置」又は「治療」に含まれる。更に、単独又は別の治療剤と組み合わせた本発明の組成物が、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体組成物の使用なしの症状と比較して、処置される異常の少なくとも１つの症状を軽減するか、または改善する限り、結果は、疾患の全症状が軽減されるかどうかに関わらず、内在する異常の効果的な処置と考えられるべきである。

【0120】

用語「添付文書」を用いて、治療産物の使用に関する効能、用法、投与、禁忌及び／又は注意についての情報を含む、治療産物の市販のパッケージに習慣的に含まれる指示に言及する。

【0121】

抗体
１つの態様において、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体、特にヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体、及び１個以上の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体、特に１個以上の本発明のヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を含む組成物及び製造物品が、本明細書において記載及び開示される。抗ＩＬ−３６抗体、特にヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の抗原結合フラグメントを含む結合剤もまた、記載される。

【0122】

本発明の代表的抗体の可変領域及びＣＤＲが以下に開示される：

【0123】

抗ＩＬ−３６Ｒマウス抗体配列
本発明の代表的マウスリード抗体（マウスリード）の可変領域及びＣＤＲが以下に示される：

【0124】

【表1】

【0125】

抗ＩＬ−３６ＲマウスＣＤＲ配列
リードマウス抗体のＣＤＲ配列の概要が以下に示される：

【表2】

【0126】

抗ＩＬ−３６Ｒヒト化抗体配列
ヒトフレームワーク配列が、フレームワーク相同性、ＣＤＲ構造、保存カノニカル残基、保存インターフェースパッキング残基、及びヒト化可変領域を得るための他のパラメーターに基づきマウスリードのため選択された（実施例５を参照）。

【0127】

抗体８１Ｂ４及び７３Ｃ５に由来する代表的ヒト化可変領域が以下に示される。

【0128】

軽鎖可変領域（ＶＫ）アミノ酸配列

【表3】

【0129】

重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列

【表4】

【0130】

上で示された抗体８１Ｂ４及び７３Ｃ５に由来するヒト化可変領域由来のＣＤＲ配列が以下に表される。

【0131】

【表5】

【0132】

１つの態様において、本発明の可変領域は定常領域に結合する。例えば、本発明の可変領域は、以下に示される定常領域に結合して、抗体の重鎖又は軽鎖を形成する。

【0133】

【表6】

【0134】

本発明の代表的軽鎖及び重鎖配列が以下に示される（定常領域に結合した抗体８１Ｂ４及び７３Ｃ５に由来するヒト化可変領域）。

【0135】

軽鎖アミノ酸配列

【表7】

【0136】

重鎖アミノ酸配列

【表8】

【0137】

上で挙げられたＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ番号方式（Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273, 927-948）を用いて定義される。

【0138】

１つの態様において、本発明の抗体は、例えば、上で説明された３個の軽鎖ＣＤＲ及び３個の重鎖ＣＤＲを含む。

【0139】

１つの態様において、本発明の抗体は、上で説明された軽鎖及び重鎖可変領域を含む。１つの態様において、本発明の軽鎖可変領域は、軽鎖定常領域（例えば、κ又はλ定常領域）に融合される。１つの態様において、本発明の重鎖可変領域は、重鎖定常領域（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、又はＩｇＭ、特にＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、又はＩｇＧ_４）に融合される。

【0140】

本発明は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体（抗体Ｂ１）を提供する。

【0141】

本発明は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体（抗体Ｂ２）を提供する。

【0142】

本発明は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体（抗体Ｂ３）を提供する。

【0143】

本発明は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体（抗体Ｂ４）を提供する。

【0144】

本発明は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体（抗体Ｂ５）を提供する。

【0145】

本発明は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体（抗体Ｂ６）を提供する。

【0146】

本発明は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体（抗体Ｃ３）を提供する。

【0147】

本発明は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体（抗体Ｃ２）を提供する。

【0148】

本発明は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１３８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体（抗体Ｃ１）を提供する。

【0149】

本発明の代表的な抗体が以下に示される。

【0150】

【表9】

【0151】

【表10】

【0152】

本発明の抗体は、ヒトにおける種々の疾患又は異常（例えば、免疫疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、及び呼吸器系疾患）の処置方法において有用である。例えば、本発明の抗体は、乾癬、関節リウマチ、炎症性腸疾患、又は乾癬性関節炎の処置方法において有用である。例えば、本発明の抗体は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）又は喘息の処置方法において有用である。例えば、本発明の抗体は、強皮症、掌蹠膿疱症、汎発性膿疱性乾癬、糖尿病性腎症、ループス腎炎、強皮症、強直性脊椎炎、ＩＬ−３６受容体アンタゴニスト欠損性自己免疫疾患（ＤＩＴＲＡ）、ＩＬ−１受容体アンタゴニストの欠損性自己免疫疾患（ＤＩＲＡ）、又はクリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）の処置方法において有用である。

【0153】

いくつかの態様において、ヒト化抗体は阻害活性を示し、これにより、ＩＬ−３６リガンドのＩＬ−３６受容体への結合を、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％低減する。ＩＬ−３６リガンドのＩＬ−３６受容体への結合を阻害する抗体の能力は、当該技術分野において知られた競合結合アッセイを用いて測定することができる。或は、抗体の阻害活性は、ＩＬ−３６の生物学的作用（例えば、ＩＬ−８、ＩＬ−６、及びＧＭ−ＣＳＦの産生）を評価して、ＩＬ−３６受容体により仲介されるシグナル伝達が阻害されるかどうかを決定することにより、測定することができる。

【0154】

更なる態様において、本発明は、好ましい生物物理学的特性を有するヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を提供する。１つの態様において、本発明のヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、バッファー中に少なくとも９０％のモノマー形態、又は少なくとも９２％のモノマー形態、又は少なくとも９５％のモノマー形態で存在する。更なる態様において、本発明のヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、バッファー中に少なくとも９０％のモノマー形態、又は少なくとも９２％のモノマー形態、又は少なくとも９５％のモノマー形態で１ヶ月間又は４ヶ月間残存する。

【0155】

１つの態様において、本発明のヒト化抗体は、抗体Ｂ１、抗体Ｂ２、抗体Ｂ３、抗体Ｂ４、抗体Ｂ５、抗体Ｂ６、抗体Ｃ１、抗体Ｃ２、又は抗体Ｃ３である。従って、１つの実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１５の軽鎖配列、及び配列番号１２５の重鎖配列を含む（抗体Ｂ１）。別の実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１５の軽鎖配列、及び配列番号１２６の重鎖配列を含む（抗体Ｂ２）。別の実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１５の軽鎖配列、及び配列番号１２７の重鎖配列を含む（抗体Ｂ３）。別の実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１８の軽鎖配列、及び配列番号１２５の重鎖配列を含む（抗体Ｂ４）。別の実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１８の軽鎖配列、及び配列番号１２６の重鎖配列を含む（抗体Ｂ５）。別の実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１８の軽鎖配列、及び配列番号１２７の重鎖配列を含む（抗体Ｂ６）。別の実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１２４の軽鎖配列、及び配列番号１３８の重鎖配列を含む（抗体Ｃ１）。別の実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１２３の軽鎖配列、及び配列番号１３９の重鎖配列を含む（抗体Ｃ２）。別の実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１２３の軽鎖配列、及び配列番号１３８の重鎖配列を含む（抗体Ｃ３）。

【0156】

更なる実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１５の軽鎖配列、及び配列番号１２５の重鎖配列からなる（抗体Ｂ１）。別の実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１５の軽鎖配列、及び配列番号１２６の重鎖配列からなる（抗体Ｂ２）。別の実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１５の軽鎖配列、及び配列番号１２７の重鎖配列からなる（抗体Ｂ３）。別の実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１８の軽鎖配列、及び配列番号１２５の重鎖配列からなる（抗体Ｂ４）。別の実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１８の軽鎖配列、及び配列番号１２６の重鎖配列からなる（抗体Ｂ５）。別の実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１１８の軽鎖配列、及び配列番号１２７の重鎖配列からなる（抗体Ｂ６）。別の実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１２４の軽鎖配列、及び配列番号１３８の重鎖配列からなる（抗体Ｃ１）。別の実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１２３の軽鎖配列、及び配列番号１３９の重鎖配列からなる（抗体Ｃ２）。別の実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１２３の軽鎖配列、及び配列番号１３８の重鎖配列からなる（抗体Ｃ３）。

【0157】

いくつかの実施態様において、抗原結合フラグメント（例えば、重鎖及び軽鎖可変領域）を含むヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、抗体Ｂ１、抗体Ｂ２、抗体Ｂ３、抗体Ｂ４、抗体Ｂ５、抗体Ｂ６、抗体Ｃ１、抗体Ｃ２、又は抗体Ｃ３に由来する残基のアミノ酸配列を含む。

【0158】

更なる実施態様において、本発明は、ヒトＩＬ−３６Ｒに本発明の抗体（例えば、本明細書に記載の抗体Ｂ１、抗体Ｂ２、抗体Ｂ３、抗体Ｂ４、抗体Ｂ５、抗体Ｂ６、抗体Ｃ１、抗体Ｃ２、又は抗体Ｃ３）と競合的に結合する、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。抗体又は抗原結合フラグメントのＩＬ−３６Ｒに競合的に結合する能力は、当該技術分野において知られた競合的結合アッセイを用いて、測定することができる。

【0159】

ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、場合により、コンセンサス又は生殖細胞系列フレームワーク領域に特異的なアミノ酸置換を含む。これらのフレームワーク位置でのアミノ酸残基の特異的置換は、ＣＤＲ又はＨＶＬのヒト生殖細胞系列フレームワーク領域への「直接交換」により形成されるヒト化抗体で証明されたものにおいて、結合親和性及び／又は安定性を含む抗体パフォーマンスの種々の態様を改良することができる。

【0160】

いくつかの実施態様において、本発明は、配列番号１〜１０のいずれか１つにおいて説明されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する他のモノクローナル抗体を記載する。いくつかの実施態様において、本発明は、配列番号１１〜２０のいずれか１つにおいて説明されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有する他のモノクローナル抗体を記載する。かかるＣＤＲをヒトコンセンサス重鎖及び軽鎖可変ドメインのＦＲに置くことにより、有用な本発明のヒト化抗体を得る。

【0161】

特に、本発明は、配列番号１／１１、２／１２、３／１３、４／１４、５／１５、６／１６、７／１７、８／１８、９／１９、１０／２０の軽鎖可変領域と重鎖可変領域の組み合わせを有するモノクローナル抗体を提供する。かかる可変領域は、ヒト定常領域と組み合わせることができる。

【0162】

いくつかの実施態様において、本発明は、配列番号７６〜８６のいずれか１つにおいて説明されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を有する他のヒト化抗体を記載する。いくつかの実施態様において、本発明は、配列番号８７〜１０１のいずれか１つにおいて説明されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列を有する他のヒト化抗体を記載する。特に、本発明は、配列番号７７／８９、８０／８８、８０／８９、７７／８７、７７／８８、８０／８７、８６／１００、８５／１０１、８５／１００の軽鎖可変領域と重鎖可変領域の組み合わせを有するモノクローナル抗体を提供する。かかる可変領域は、ヒト定常領域と組み合わせることができる。

【0163】

更なる実施態様において、本発明は、配列番号７７のＣＤＲ、及び配列番号７７の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含むヒト化軽鎖可変ドメイン、及び配列番号８９のＣＤＲ、及び配列番号８９の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含むヒト化重鎖可変ドメインを含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。１つの実施態様において、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。

【0164】

更なる実施態様において、本発明は、配列番号８０のＣＤＲ、及び配列番号８０の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含むヒト化軽鎖可変ドメイン、及び配列番号８８のＣＤＲ、及び配列番号８８の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含むヒト化重鎖可変ドメインを含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。１つの実施態様において、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。

【0165】

更なる実施態様において、本発明は、配列番号８０のＣＤＲ、及び配列番号８０の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含むヒト化軽鎖可変ドメイン、及び配列番号８９のＣＤＲ、及び配列番号８９の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含むヒト化重鎖可変ドメインを含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。１つの実施態様において、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。

【0166】

更なる実施態様において、本発明は、配列番号７７のＣＤＲ、及び配列番号７７の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含むヒト化軽鎖可変ドメイン、及び配列番号８７のＣＤＲ、及び配列番号８７の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含むヒト化重鎖可変ドメインを含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。１つの実施態様において、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。

【0167】

更なる実施態様において、本発明は、配列番号７７のＣＤＲ、及び配列番号７７の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含むヒト化軽鎖可変ドメイン、及び配列番号８８のＣＤＲ、及び配列番号８８の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含むヒト化重鎖可変ドメインを含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。１つの実施態様において、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。

【0168】

更なる実施態様において、本発明は、配列番号８０のＣＤＲ、及び配列番号８０の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワークを含むヒト化軽鎖可変ドメイン、及び配列番号８７のＣＤＲ、及び配列番号８７の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含むヒト化重鎖可変ドメインを含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。１つの実施態様において、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。

【0169】

更なる実施態様において、本発明は、配列番号８６ＣＤＲ、及び配列番号８６の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含むヒト化重鎖可変ドメイン、及び配列番号１００のＣＤＲ、及び配列番号１００の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含むヒト化重鎖可変ドメインを含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。１つの実施態様において、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。

【0170】

更なる実施態様において、本発明は、配列番号８５のＣＤＲ、及び配列番号８５の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含むヒト化軽鎖可変ドメイン、及び配列番号１０１のＣＤＲ、及び配列番号１０１の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含むヒト化重鎖可変ドメインを含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。１つの実施態様において、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。

【0171】

更なる実施態様において、本発明は、配列番号８５のＣＤＲ、及び配列番号８５の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含むヒト化軽鎖可変ドメイン、及び配列番号１００のＣＤＲ、及び配列番号１００の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含むヒト化重鎖可変ドメインを含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。１つの実施態様において、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。

【0172】

いくつかの特定の実施態様において、本明細書に開示されるヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、少なくとも、本明細書に開示されるマウスモノクローナル抗体又はヒト化抗体のＣＤＲ又はＨＶＬ、及びヒト生殖細胞系重鎖及び軽鎖可変ドメインのＦＲを含む重鎖又は軽鎖可変ドメインを含む。

【0173】

１つの更なる態様において、本発明は、配列番号２１〜２９のいずれか１つの軽鎖ＣＤＲ１（Ｌ−ＣＤＲ１）配列；配列番号３０〜３８のいずれか１つの軽鎖ＣＤＲ２（Ｌ−ＣＤＲ２）配列；配列番号３９〜４７のいずれか１つの軽鎖ＣＤＲ３（Ｌ−ＣＤＲ３）配列；配列番号４８〜５６のいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１（Ｈ−ＣＤＲ１）配列；配列番号５７〜６６のいずれか１つの重鎖ＣＤＲ２（Ｈ−ＣＤＲ２）配列；及び配列番号６７〜７５のいずれか１つの重鎖ＣＤＲ３（Ｈ−ＣＤＲ３）配列を含む、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。１つの態様において、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントは、上で挙げられたＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、及びＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、及び上で挙げられたＨ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む。

【0174】

更なる態様において、本発明は、
ａ）それぞれ、配列番号２１、３０、３９、４８、５７、及び６７のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｂ）それぞれ、配列番号２２、３１、４０、４９、５８、及び６８のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｃ）それぞれ、配列番号２３、３２、４１、５０、５９、及び６９のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｄ）それぞれ、配列番号２４、３３、４２、５１、６０、及び７０のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｅ）それぞれ、配列番号２５、３４、４３、５２、６１、及び７１のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｆ）それぞれ、配列番号２６、３５、４４、５３、６２、及び７２のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｇ）それぞれ、配列番号２７、３６、４５、５４、６３、及び７３のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｈ）それぞれ、配列番号２７、３６、４５、５４、６４、及び７４のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｉ）それぞれ、配列番号２７、３６、４５、５４、６４、及び７３のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｊ）それぞれ、配列番号２８、３７、４６、５５、６５、及び７４のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｋ）それぞれ、配列番号２９、３８、４７、５６、６６、及び７５のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列
を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。

【0175】

更なる態様において、本発明は、
ａ）それぞれ、配列番号２６、１０３、４４、５３、６２、及び７２のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｂ）それぞれ、配列番号２６、１０４、４４、５３、６２、及び７２のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｃ）それぞれ、配列番号２７、３６、４５、１０７、６３、及び７３のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列；又は
ｄ）それぞれ、配列番号２７、３６、４５、１０７、６４、又は７３のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３配列
を含む抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。

【0176】

１つの態様において、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントは、上で挙げられたＬ−ＣＤＲ１とＬ−ＣＤＲ２とＬ−ＣＤＲ３の組み合わせを含む軽鎖可変領域、及び上で挙げられたＨ−ＣＤＲ１とＨ−ＣＤＲ２とＨ−ＣＤＲ３の組み合わせを含む重鎖可変領域を含む。

【0177】

具体的な実施態様において、これらの例示的免疫グロブリン間で交換されたＣＤＲ領域（すなわち、例えば、マウス抗体又はこれに由来するヒト化抗体の１つの１又は２個のＣＤＲを、別のマウス抗体又はこれに由来するヒト化抗体由来の類似ＣＤＲで交換すること）を有するキメラ抗体は有用な抗体となると考えられる。

【0178】

ある種の実施態様において、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は抗体フラグメントである。種々の抗体フラグメントが上で一般的に考察されており、抗体フラグメントの産生のために開発された技術が存在する。フラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質消化を解してもたらされ得る（例えば、Morimoto et al., 1992, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117；及びBrennan et al., 1985, Science 229:81を参照）。或は、フラグメントは、組み換え宿主細胞において直接産生され得る。例えば、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントは、大腸菌（E. coli）から直接回収され、化学的に結合させて、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントを形成することができる（例えば、Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167を参照）。別のアプローチにより、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントは、組み換え宿主細胞培地から直接単離することができる。抗体フラグメントの産生の他の技術は、当業者に明らかである。従って、１つの態様において、本発明は、本明細書に記載されるＣＤＲ、特に本明細書に記載のＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、及びＨ−ＣＤＲ３の組み合わせの１つを含む抗体フラグメントを提供する。更なる態様において、本発明は、本明細書に記載の可変領域（例えば、本明細書に記載の軽鎖可変領域と重鎖可変領域の組み合わせの１つ）を含む抗体フラグメントを提供する。

【0179】

ある種の実施態様は、配列番号１１５又は１１８のいずれかの軽鎖配列を配列番号１２５、１２６、又は１２７の重鎖配列と組み合わせて含むヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のＦ（ａｂ’）_２フラグメントを含む。かかる実施態様は、例えばＦ（ａｂ’）_２を含むインタクトな抗体を含み得る。

【0180】

ある種の実施態様は、配列番号１２３又は１２４のいずれかの軽鎖配列を配列番号１３８又は１３９の重鎖配列と組み合わせて含むヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のＦ（ａｂ’）_２フラグメントを含む。かかる実施態様は、例えばＦ（ａｂ’）_２を含むインタクトな抗体を含み得る。

【0181】

いくつかの実施態様において、抗体又は抗体フラグメントは、エフェクター機能を仲介する定常領域を含む。定常領域は、ＩＬ−３６Ｒ発現標的細胞に対する抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、及び／又は補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）応答をもたらし得る。エフェクタードメインは、例えば、Ｉｇ分子のＦｃ領域であり得る。

【0182】

抗体のエフェクタードメインは、任意の適当な脊椎動物種及びアイソタイプ由来であることができる。異なる動物種由来のアイソタイプは、エフェクター機能を仲介する能力の点で異なる。例えば、ＣＤＣ及びＡＤＣＣ／ＡＤＣＰを仲介するヒト免疫グロブリンの能力は、一般に、それぞれ、ＩｇＭ≒ＩｇＧ_１≒ＩｇＧ_３＞ＩｇＧ_２＞ＩｇＧ_４、及びＩｇＧ_１≒ＩｇＧ_３＞ＩｇＧ_２／ＩｇＭ／ＩｇＧ_４の順である。マウス免疫グロブリンは、ＣＤＣ及びＡＤＣＣ／ＡＤＣＰを、一般にそれぞれマウスＩｇＭ≒ＩｇＧ_３＞＞ＩｇＧ_２ｂ＞ＩｇＧ_２ａ＞＞ＩｇＧ_１、及びＩｇＧ_２ｂ＞ＩｇＧ_２ａ＞ＩｇＧ_１＞＞ＩｇＧ_３の順で仲介する。別の例において、マウスＩｇＧ_２ａは、ＡＤＣＣを仲介し、一方マウスＩｇＧ_２ａ及びＩｇＭの両方がＣＤＣを仲介する。

【0183】

抗体の改変
ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体及び剤は、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントの改変を含み得る。例えば、癌の処置における抗体の有効性を増強すために、抗体をエフェクター機能に関して修飾することが所望され得る。かかる改変の１つは、システイン残基（複数を含む）のＦｃ領域への導入であり、これにより、この領域での鎖間のジスルフィド結合形成が可能になる。このように生成されたホモ２量体抗体は、改良された内部移行能及び／又は増大した補体介在性細胞殺傷、及び／又は抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）を有することができる。例えば、Caron et al., 1992, J. Exp Med. 176:1191-1195；及びShopes, 1992, J. Immunol. 148:2918-2922を参照。増大した抗腫瘍活性を有するホモ２量体抗体は、Wolff et al., 1993, Cancer Research 53: 2560-2565に記載されるヘテロ２官能性架橋剤を用いて調製され得る。或は、抗体は、２個のＦｃ領域を含有するよう操作されて、抗体の補体溶解能及びＡＤＣＣ能を増強し得る。Stevenson et al., 1989, 抗Cancer Drug Design 3: 219-230を参照。

【0184】

ＡＤＣＣを指示する改良された能力を有する抗体は、Ｆｃ領域のグリコシル化パターンを改変することにより生成される。これは、Ｃ_Ｈ２ドメインにおけるアスパラギン残基Ｎ２９７での抗体グリコシル化が、ＡＤＣＣに必須のＩｇＧ受容体とＦｃγ受容体との間の相互作用に関与するので、可能である。宿主細胞株は、改変されたグリコシル化（例えば、増大した二分化Ｎ−アセチルグルコサミン又は低減したフコース）を有する抗体を発現するよう操作されている。フコースの低減は、二分化Ｎ−アセチルグルコサミンの存在を増大するより、ＡＤＣＣ活性をより増強する。更に、低フコース抗体によるＡＤＣＣの増強は、ＦｃγＲＩＩＩａＶ／Ｆ多型の非依存性である。

【0185】

抗体のＦｃ領域のアミノ酸配列を改変することは、ＡＤＣＣを増強するためのグリコシル化操作に代わるものである。Ｆｃγ受容体に対するヒトＩｇＧ_１上の結合部位は、広範な変異解析により決定される。これにより、インビトロでＦｃγＲＩＩＩａに対する結合親和性を増大し、ＡＤＣＣを増強するＦｃ変異を有するヒト化ＩｇＧ_１抗体が生成される。加えて、Ｆｃ変異体は、結合特性の多数の異なる並べ替え（例えば、他のＦｃγＲ受容体に変わらず又は減少して結合する特異的ＦｃγＲ受容体への改良された結合）で得られる。

【0186】

別の態様は、細胞毒性剤（例えば、化学療法剤、毒物（例えば、細菌、真菌、植物、又は動物起源の酵素活性毒物、又はそのフラグメント）、又は放射性アイソトープ（すなわち、放射性複合体）に結合したヒト化抗体又はそのフラグメントを含む免疫複合体を含む。

【0187】

かかる免疫複合体の生成に有用な化学療法剤は上述されている。有用な免疫複合体を形成するために用いられ得る酵素活性毒物及びそのフラグメントは、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（シュードモナス・エルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、αサルシン、アロイリテス・ホルジイ（Aleurites fordii）タンパク質、ジアンチンタンパク質、フィトラカ・アメリカナ（Phytolaca Americana）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、モモルディカ・カラナティア（Momordica charantia）阻害剤、クルシン、クロチン、サポナリア・オフィシナリス（Sapaonaria officinalis）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、トリコテシンなどを含む。様々な放射性核種は、放射性複合体化ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の産生に利用可能である。例として、^２１２Ｂｉ、^１３１Ｉ、^１３１Ｉｎ、^９０Ｙ、及び^１８６Ｒｅを含む。

【0188】

ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の細胞毒性剤又は化学療法剤との複合体は、既知の方法により、多数の二機能性タンパク質カップリング剤（例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二機能性誘導体（例えば、ジメチルアジプイミデートＨＣＬ）、活性エステル（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン２，６−ジイソシアネート）、及びビス−活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン））を用いて作成され得る。例えば、リシン免疫毒は、Vitetta et al., 1987, Science 238:1098に記載の通り調製され得る。炭素−１４−標識１−イソチオシアネートベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体との複合体化のための典型的なキレート剤である。複合体はまた切断可能なリンカーで形成され得る。

【0189】

本明細書に開示されるヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はまた、免疫リポソームとしても処方され得る。抗体を含有するリポソームは、当該技術分野で知られた方法（例えば、Epstein et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688;Hwang et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030；及び米国特許第４，４８５，０４５号及び第４，５４４，５４５号に記載）により調製される。増強された循環時間を有するリポソームが、例えば、米国特許第５，０１３，５５６号において開示される。

【0190】

具体的には、有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、及びＰＥＧ−誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発法により生成され得る。規定の孔サイズのフィルターを通して、所望の直径を有するリポソームを得る。本明細書で開示される抗体のＦａｂ’フラグメントは、Martin et al., 1982, J. Biol. Chem. 257:286-288に記載のリポソームに、ジスルフィド相互変換反応を介して結合され得る。化学療法剤（例えば、ドキソルビシン）が、場合によりリポソーム内に含有される。例えば、Gabizon et al., 1989, J. National Cancer Inst. 81(19):1484を参照。

【0191】

本明細書において記載され、開示される抗体はまた、ＡＤＥＰＴ（抗体指示酵素プロドラッグ療法）法において、抗体を、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤）を活性な抗癌薬物に変換するプロドラッグ活性化酵素に複合体化させることにより、用いられ得る。例えば、国際公開公報第８１／０１１４５号、国際公開公報第８８／０７３７８号、及び米国特許第４，９７５，２７８号を参照。ＡＤＥＰＴに有用な免疫複合体の酵素成分は、プロドラッグをそのより活性な細胞毒性形態に変換する方法で、プロドラッグ上で作用することができる酵素である。ＡＤＥＰＴにおいて有用である特定の酵素は、プロドラッグ含有リン酸塩を遊離薬物に変換するためのアルカリホスファターゼ；プロドラッグ含有硫酸塩を遊離薬物に変換するためのアリールスルファターゼ；非毒性５−フルオロシトシンを抗癌薬物である５−フルオロウラシルに変換するためのシトシンデアミナーゼ；プロドラッグ含有ペプチドを遊離薬物に変換するためのプロテアーゼ（例えば、セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼ、及びカテプシン（例えば、カテプシンＢ及びＬ））；Ｄ−アミノ酸置換基含有プロドラッグを変換するためのＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に変換するための炭水化物分解酵素（例えば、β−ガラクトシダーゼ及びノイラミニダーゼ）；β−ラクタムで誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するためのβ−ラクタム；及びアミン窒素にてそれぞれフェノキシアセチル又はフェニルアセチル基で誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するためのペニシリンＶアミダーゼ又はペニシリンＧアミダーゼの様なペニシリンアミダーゼを含むが、これらに限定されない。或は、酵素活性を有する抗体（「アブザイム（abzymes）」）を用いて、プロドラッグを遊離活性薬物に変換することができる（例えば、Massey, 1987, Nature 328: 457-458を参照）。抗体とアブザイムの複合体は、既知の、アブザイムの腫瘍細胞集団へのデリバリー方法（例えば、酵素を上で考察されたヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体／ヘテロ２官能性架橋結合試薬に共有結合させることによる）により調製され得る。或は、上述の酵素の少なくとも機能的に活性な部分に結合した本明細書において開示される抗体の少なくとも抗原結合領域を含む融合タンパク質は、組み換えＤＮＡ技術（例えば、Neuberger et al., 1984, Nature 312:604-608を参照）を用いて構築され得る。

【0192】

ある種の実施態様において、組織浸潤を増大するためにインタクトな抗体よりむしろヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体フラグメントを用いることが所望され得る（例えば、血清半減期を増大するために抗体フラグメントを改変することが所望され得る）。これは、例えば、サルベージ受容体結合エピトープの抗体フラグメントへの取り込みにより達成され得る。１つの方法において、抗体フラグメントの適当な領域は変えられ得る（例えば、変異誘発される）か、又はエピトープは、例えば、ＤＮＡ又はペプチド合成により末端部又は中間部で抗体フラグメントに融合しているペプチドタグに取り込まれ得る。例えば、国際公開公報第９６／３２４７８号を参照。

【0193】

他の実施態様において、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の共有結合修飾も含まれる。共有結合修飾は、システイニル残基、ヒスチジル残基、リシニル及びアミノ末端残基、アルギニル残基、チロシル残基、カルボキシル側鎖（アスパルチル又はグルタミル）、グルタミニル及びアスパラギニル残基、又はセリル、又はスレオニル残基の修飾を含む。別の種類の共有結合修飾は、グリコシドを抗体に化学的又は酵素的に結合することを含む。かかる修飾は、適用可能であれば、抗体の化学合成又は酵素的又は化学的切断により作成され得る。抗体の他の種類の共有結合修飾は、抗体の標的アミノ酸残基を、選択された側鎖又はアミノ又はカルボキシ末端残基と反応することができる有機誘導体化剤と反応させることにより、分子に導入され得る。

【0194】

抗体上に存在する任意の炭水化物部分の除去は、化学的又は酵素的に成され得る。化学的脱グリコシル化は、Hakimuddin et al., 1987, Arch. Biochem. Biophys. 259:52、及びEdge et al., 1981, Anal. Biochem., 118:131により記載されている。抗体上の炭水化物部分の酵素的切断は、Thotakura et al., 1987, Meth. Enzymol 138:350により記載される、様々なエンド−及びエキソ−グリコシダーゼを用いることにより成され得る。

【0195】

別の種類の有用な共有結合修飾は、１個以上の米国特許第４，６４０，８３５号、米国特許第４，４９６，６８９号、米国特許第４，３０１，１４４号、米国特許第４，６７０，４１７号、米国特許第４，７９１，１９２号、及び米国特許第４，１７９，３３７号に説明される方法で、抗体を様々な非タンパク質性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレン）の１個に結合することを含む。

【0196】

ヒト化及びアミノ酸配列変異体
抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のアミノ酸配列変異体は、適当なヌクレオチド変更を抗ＩＬ−３６Ｒ抗体ＤＮＡに導入することにより又はペプチド合成により調製することができる。かかる変異体は、例えば、本明細書の実施例の抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のアミノ酸配列内の残基の欠損、及び／又は挿入、及び／又は置換を含む。欠損、挿入、及び置換は、最終構造物が所望の特徴を有する条件で、最終構造物に至るよう任意に組み合わされる。アミノ酸変更はまた、ヒト化又は変異体抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の翻訳後プロセスを変更し得る（例えば、グリコシル化部位の数又は位置を変更する）。

【0197】

変異誘発の好ましい位置である抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のある種の残基又は領域の有用な同定方法は、Cunningham and Wells (Science, 244:1081-1085 (1989))により記載される通り、「アラニン系統的変異導入法」と呼ばれる。ここで、標的残基の残基又は基（例えば、荷電残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕ））が同定され、アミノ酸のＩＬ−３６Ｒ抗原との相互作用に影響するように、中性又は負に荷電したアミノ酸（典型的には、アラニン）により置き換えられる。次に、置換に対して機能的な感受性を示すこれらのアミノ酸位置は、更に、又は他の変異体を置換部位で又は置換部位に対して導入することにより改良される。従って、アミノ酸配列バリエーションを導入するための部位が予め決定され、一方変異自体の性質が予め決定されることを必要としない。例えば、所定の位置での変異の効力を分析するために、アラニン系統的又は無作為変異誘発が標的コドン又は領域で行われ、発現された抗ＩＬ−３６Ｒ抗体変異体が所望の活性についてスクリーニングされる。

【0198】

アミノ酸配列挿入物は、長さが１個の残基から１００個以上の残基を含有するポリペプチドの範囲にある、アミノ及び／又はカルボキシル末端融合物、並びに単一以上のアミノ酸残基の配列間挿入物を含む。末端の挿入物の例としては、エピトープタグに融合した抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を含む。抗ＩＬ−３６Ｒ抗体分子の他の挿入性変異体は、抗体の血清半減期を増大する酵素又はポリペプチドの抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のＮ末端又はＣ末端への融合物を含む。

【0199】

別の種類の変異体はアミノ酸置変異体である。これらの変異体は、取り除かれた抗ＩＬ−３６Ｒ抗体分子において少なくとも１個のアミノ酸残基、及びその場所に挿入された異なる残基を有する。置換性変異誘発についての非常に興味深い位置は超可変領域を含むが、ＦＲの変更も考慮される。保存的置換は、表５において表題「好ましい置換」の下に示される。かかる置換が生物学的活性の変化を生じるなら、「典型的な置換」と命名されるか又はアミノ酸種類に関連して更に後述される、より実質的な変更が導入され、生成物がスクリーニングされ得る。

【0200】

【表11】

【0201】

タンパク質化学において、一般に、抗体の生物学的特性は、（ａ）置換範囲内のポリペプチド骨格の構造（例えば、シート又はらせん形構造）、（ｂ）標的部位での分子の荷電又は疎水性、又は（ｃ）側鎖の容積の維持に対する作用の点で有意に異なる置換を選択することにより行われ得ることが、受容される。天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づきグループ分けされる：
（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；
（２）中性親水性：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；
（３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ；
（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｉｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；
（５）鎖配向性に影響する残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；及び
（６）芳香族性：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。

【0202】

非保存的置換は、これらの種類の１個のメンバーを別の種類に変えることを必要とする。

【0203】

ヒト化又は変異体抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の適切な構造の維持に関与しない任意のシステイン残基はまた、一般にセリンで置換されて、分子の酸化安定性を改善するか、異常な架橋を防ぐか、又は細胞毒性又は細胞分裂阻害化合物への結合の確立されたポイントを提供し得る。逆に、システイン結合が抗体に追加されて、その安定性を改善し得る（特に、抗体が抗体フラグメント（例えば、Ｆｖフラグメント）である場合）。

【0204】

一種の置換性変異体は、親抗体（例えば、ヒト化又はヒト抗体）の１個以上の超可変領域残基の置換に関与する。一般的には、更なる開発のために選択された生じた変異体（複数を含む）は、親抗体（これから生成される）と比較して改良された生物学的特性を有するだろう。かかる置換性変異体を生成する通常の方法は、ファージディスプレーを用いた親和性成熟である。簡単に言うと、いくつかの超可変領域部位（例えば、６〜７個の部位）が、各部位で全ての可能性のあるアミノ置換を生成するよう変異される。従って、生成された抗体変異体は、各粒子内にパッケージングされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物への融合物として糸状ファージ粒子から１価形式で提示される。次に、ファージにより提示された変異体は、その生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。改変の候補超可変領域部位を同定するために、アラニン系統的変異導入法が、抗原結合に有意に寄与する超可変領域残基を同定するために行われ得る。或は、又は加えて、抗体とヒトＩＬ−３６Ｒ間の接触点を同定するために、抗原と抗体複合体の結晶構造を解析することが有益であり得る。かかる接触残基及び近接の残基は、本明細書に詳述される技術による置換の候補である。一度かかる変異体が生成されると、変異体の一団が本明細書に記載されるスクリーニングの対象とされ、１個以上の関連アッセイにおいて優れた特性を有する抗体が、更なる開発のため選択され得る。

【0205】

別の一種の抗体のアミノ酸変異体は、抗体の元のグリコシル化パターンを変える。「変えること」は、抗体中に見出される１個以上の炭水化物部分を欠損すること、及び／又は抗体に存在しない１個以上のグリコシル化部位を加えることを意味する。

【0206】

いくつかの実施態様において、本発明の抗体をグリコシル化部位に加えて改変することが所望され得る。抗体のグリコシル化は、典型的にはＮ−結合又はＯ−結合のいずれかである。Ｎ−結合は、炭水化物部分のアスパラギン残基の側鎖への結合に言及する。トリペプチド配列であるアスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−スレオニン（ここで、Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸である）は、炭水化物部分のアスパラギン側鎖への酵素結合の認識配列である。従って、ポリペプチド中のこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在が、可能性のあるグリコシル化部位を生じる。Ｏ−結合グリコシル化は、糖であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、又はキシロースの１つの、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はスレオニンへの結合に言及するが、５−ヒドロキシプロリン又は５−ヒドロキシリジンも用いられ得る。従って、所定のタンパク質（例えば、抗体）をグリコシル化するために、タンパク質のアミノ酸配列は、１個以上の上述のトリペプチド配列を含有するよう操作される（Ｎ−結合グリコシル化部位について）。変化はまた、元の抗体の配列の１個以上のセリン又はスレオニン残基への付加、又は置換により作成され得る（Ｏ−結合グリコシル化部位について）。

【0207】

抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のアミノ酸配列変異体をコードする核酸分子は、当該技術分野で知られている様々な方法により調製される。これらの方法は、天然の供給源からの単離（天然に存在するアミノ酸配列変異体の場合）、又は抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の既に調製された変異体又は非変異体バージョンのオリゴヌクレオチドにより仲介される（又は部位指定）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発、及びカセット変異誘発による調製を含むが、これらに限定されない。

【0208】

ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、及び組み換え方法
他の実施態様は、ヒト化抗体の産生のため、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体をコードする配列を含む単離ポリヌクレオチド、ベクター、及びポリヌクレオチドを含む宿主細胞、及び組み換え技術を包含する。単離ポリヌクレオチドは、例えば、全長モノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、及びＦｖフラグメント、二重特異性抗体、直鎖抗体、１本鎖抗体分子、及び抗体フラグメントから形成される多特異的抗体を含む、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の任意の所望の形態をコードすることができる。

【0209】

いくつかの実施態様は、配列番号１〜１０のいずれかのアミノ酸配列を有する抗体又は抗体フラグメントの軽鎖可変領域をコードする配列を含む単離ポリヌクレオチドを含む。ある種の実施態様は、配列番号１１〜２０のアミノ酸配列を有する抗体又は抗体フラグメントの重鎖可変領域をコードする配列を含む単離ポリヌクレオチドを含む。

【0210】

いくつかの実施態様は、配列番号７６〜８６のいずれかのアミノ酸配列を有する抗体又は抗体フラグメントの軽鎖可変領域をコードする配列を含む単離ポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施態様は、配列番号８７〜１０１のアミノ酸配列を有する抗体又は抗体フラグメントの重鎖可変領域をコードする配列を含む単離ポリヌクレオチドを含む。

【0211】

いくつかの実施態様は、配列番号１１４〜１２４のいずれかのアミノ酸配列を有する抗体の軽鎖をコードする配列を含む単離ポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施態様は、配列番号１２５〜１３９のアミノ酸配列を有する抗体の重鎖をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。

【0212】

１つの態様において、単離ポリヌクレオチド配列（複数を含む）は、それぞれ配列番号１１５及び配列番号１２７；それぞれ配列番号１１８及び配列番号１２６；それぞれ配列番号１１８及び配列番号１２７；それぞれ配列番号１１５及び配列番号１２５；それぞれ配列番号１１５及び配列番号１２６；それぞれ配列番号１１８及び配列番号１２５；それぞれ配列番号１２４及び配列番号１３８；それぞれ配列番号１２３及び配列番号１３９；それぞれ配列番号１２３及び配列番号１３８のアミノ酸配列を含む軽鎖及び重鎖可変領域を有する抗体又は抗体フラグメントをコードする。

【0213】

ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はそのフラグメント又は鎖をコードする配列を含むポリヌクレオチドは、当該技術分野で知られた１個以上の調節又は制御配列に融合されることができ、当該技術分野で知られた適当な発現ベクター又は宿主細胞に含有され得る。重鎖又は軽鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチド分子のそれぞれは、独立して、定常ドメイン（例えば、ヒト定常ドメイン）をコードするポリヌクレオチド配列に融合されることができ、これによりインタクトな抗体の産生が可能になる。或は、ポリヌクレオチド又はその部分が一緒に融合されて、１本鎖抗体の産生のための鋳型が提供され得る。

【0214】

組み換え体産生のため、抗体をコードするポリヌクレオチドは、クローニング（ＤＮＡの増幅）又は発現のための複製可能なベクターに挿入される。組み換え抗体を発現するのに適した多くのベクターが利用可能である。ベクター成分は、一般に、以下：シグナル配列、複製起源、１個以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列の１個以上を含むが、これらに限定されない。

【0215】

ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体はまた、融合ポリペプチドとしても産生されることができ、ここで、抗体は異種性ポリペプチド（例えば、成熟タンパク質又はポリペプチドのアミノ末端に特異的な切断部位を有するシグナル配列又は他のポリペプチド）で融合される。選択された異種性シグナル配列は、典型的には、宿主細胞により認識され、プロセシングされる（すなわち、シグナルペプチダーゼにより切断される）ものである。ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体シグナル配列を認識せず、プロセシングしない原核生物宿主細胞のため、シグナル配列は、原核生物のシグナル配列により置換され得る。シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、リポタンパク質、熱安定性エンテロトキシンＩＩリーダーなどであり得る。酵母分泌のため、天然のシグナル配列が、例えば、酵母インベルターゼα因子により得られるリーダー配列（サッカロミセス（Saccharomyces）及びクリベロマイセス（Kluyveromyces）α−因子リーダーを含む）、酸性ホスファターゼ、カンジタ・アルビカンス（C. albicans）グルコアミラーゼ、又は国際公開公報第９０／１３６４６号に記載のシグナルで置換され得る。哺乳類細胞において、哺乳類シグナル配列、並びにウイルス分泌リーダー（例えば、単純ヘルペスｇＤシグナル）が用いられ得る。かかるプレカーサー領域のＤＮＡが、リーディングフレームでヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体をコードするＤＮＡにライゲーションされる。

【0216】

発現及びクローニングベクターは、ベクターを１個以上の選択された宿主細胞において複製することを可能にする核酸配列を含有する。一般に、クローニングベクターにおいて、これらの配列は、ベクターを、宿主染色体ＤＮＡと関係なく複製することを可能にするものであり、複製開始点又は自己複製配列を含む。様々な細菌、酵母、及びウイルスについてのかかる配列が周知である。プラスミドｐＢＲ３２２由来の複製開始点は、大抵のグラム陰性細菌に適しており、２−υプラスミド開始点は酵母に適しており、種々のウイルス開始点（ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ、及びＢＰＶ）は、哺乳類細胞におけるクローニングベクターに適している。一般に、複製成分の開始点は、哺乳類発現ベクターに必要とされない（ＳＶ４０開始点は、初期プロモーターを含有するので、典型的に用いられ得る）。

【0217】

発現及びクローニングベクターは、発現の同定を促進するための選択可能なマーカーをコードする遺伝子を含有し得る。典型的な選択可能なマーカー遺伝子は、抗生物質又は他の毒物（例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート、又はテトラサイクリン）に対する耐性を付与するタンパク質をコードするか、或は補体栄養要求性欠損であるか、又は他の代替において複合培地中に存在しない特定の栄養素を供給する（例えば、バチルス（Bacilli）に対するＤ−アラニンラセマーゼをコードする遺伝子）。

【0218】

選択スキームの１つの例は、薬物を利用して、宿主細胞の成長を停止させる。異種性遺伝子で十分にトランスフォーメーションされるこれらの細胞は、薬物耐性を付与するタンパク質を生じ、これにより選択計画を生き残る。かかる優性選択の例は、薬物であるネオマイシン、ミコフェノール酸、及びハイグロマイシンを使用する。哺乳類細胞について共通する選択可能なマーカーは、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体をコードする核酸を取り上げるのに適した細胞の同定を可能にするものである（例えば、ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸還元酵素）、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン−Ｉ及び−ＩＩ（例えば、霊長類メタロチオネイン遺伝子）、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼなど）。ＤＨＦＲ選択遺伝子でトランスフォーメーションされた細胞は、まず、形質転換体の全てを、メトトレキサート（Ｍｔｘ）、ＤＨＦＲの競合的アンタゴニストを含有する培養培地において培養することにより、同定される。野生型ＤＨＦＲが用いられるときの適当な宿主細胞は、ＤＨＦＲ活性（例えば、ＤＧ４４）における欠損であるチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株である。

【0219】

或は、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体、野生型ＤＨＦＲタンパク質、及び別の選択可能なマーカー（例えば、アミノグリコシド３’−ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ））をコードするＤＮＡ配列でトランスフォーメーション又はコトランスフォーメーションされた宿主細胞（具体的には、内在性ＤＨＦＲを含有する野生型宿主）は、選択可能なマーカーに対する選択剤（例えば、アミノグリコシド系抗生物質（例えば、カナマイシン、ネオマイシン、又はＧ４１８））を含有する培地における細胞成長により選択され得る。例えば、米国特許第４，９６５，１９９号を参照。

【0220】

組み換え産生が、宿主細胞としての酵母細胞において行われる場合、酵母プラスミドＹＲｐ７に存在するＴＲＰ１遺伝子（Stinchcomb et al., 1979, Nature 282: 39）が選択可能なマーカーとして用いられ得る。ＴＲＰ１遺伝子は、トリプトファン中で成長する能力を欠く酵母の変異株に対する選択マーカーをもたらす（例えば、ＡＴＣＣ番号４４０７６又はＰＥＰ４−１（Jones, 1977, Genetics 85:12））。次に、酵母宿主細胞ゲノムにおけるｔｒｐ１損傷の存在は、トリプトファンの不存下での成長によるトランスフォーメーションの検出に有効な環境をもたらす。同様に、Ｌｅｕ２ｐ−欠損酵母株（例えば、ＡＴＣＣ２０，６２２及び３８，６２６）は、ＬＥＵ２遺伝子を生じる既知のプラスミドにより補完される。

【0221】

加えて、１．６μｍの環状プラスミドｐＫＤ１からもたらされるベクターが、クリベロマイセス酵母のトランスフォーメーションのため用いられ得る。或は、組み換え仔ウシキモシンの巨大スケール産生ための発現系は、クルイベロミセス・ラクチス（K. lactis）において報告されている（Van den Berg, 1990, Bio/Technology 8:135）。クリベロマイセスの工業用株による成熟組み換えヒト血清アルブミンの分泌のための安定な多複製発現ベクターも開示されている（Fleer et al., 1991, Bio/Technology 9:968-975）。

【0222】

発現及びクローニングベクターは、通常、宿主生物により認識され、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はそのポリペプチド鎖をコードする核酸分子に作動可能に結合しているプロモーターを含有する。原核生物宿主での使用に適したプロモーターは、ｐｈｏＡプロモーター、β−ラクタム、及びラクトースプロモーター系、アルカリホスファターゼ、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、及びハイブリッドプロモーター（例えば、ｔａｃプロモーター）を含む。他の既知の細菌プロモーターも適している。細菌系において使用するためのプロモーターはまた、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体をコードするＤＮＡに作動可能に結合したシャイン・ダルガーノ（Ｓ．Ｄ．）配列も含有する。

【0223】

多数の真核生物のプロモーター配列が知られいてる。実質的に、全ての真核生物遺伝子は、転写が開始される場所から約２５〜３０塩基上流に位置するＡＴリッチな領域を有する。多くの遺伝子の転写の開始から７０〜８０塩基上流で見出される別の配列は、ＣＮＣＡＡＴ領域（Ｎは任意のヌクレオチドであり得る）である。大抵の真核生物遺伝子の３’末端は、コード配列の３’末端へのポリＡテールの付加のためのシグナルであり得るＡＡＴＡＡＡ配列である。これらの配列の全てが真核生物発現ベクターに適当に挿入される。

【0224】

酵母宿主と一緒の使用に適した促進配列の例は、３−ホスホグリセリン酸キナーゼ又は他の解糖酵素（例えば、エノラーゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸脱炭酸酵素、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース−６−リン酸イソメラーゼ、３−ホスホグリセリン酸ムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、及びグルコキナーゼ）用プロモーターを含む。

【0225】

誘導可能なプロモーターは、増殖条件により制御される転写の更なる利点を有する。これらは、アルコール脱水素酵素２、イソチトクロムＣ、酸性ホスファターゼ、窒素代謝と関連する誘導体酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド−３−リン酸塩脱水素酵素、及びマルトース及びガラクトース利用に責任を負う酵素についての酵母プロモーター領域を含む。酵母発現での使用に適したベクター及びプロモーターは更に、欧州特許第７３，６５７号に記載されている。酵母エンハンサーはまた、有利には酵母プロモーターと共に用いられる。

【0226】

哺乳類宿主細胞においてベクターからのヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体転写は、例えば、ウイルス（例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス２）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、及びシミアンウイルス４０（ＳＶ４０））のゲノム、異種哺乳類プロモーター（例えば、アクチンプロモーター又は免疫グロブリンプロモーター）、又はヒートショックプロモーターから得られるプロモーターにより制御される（但し、かかるプロモーターは宿主細胞系と適合可能である）。

【0227】

ＳＶ４０ウイルスの初期及び後期プロモーターは、好都合には、複製のＳＶ４０ウイルス開始点も含有するＳＶ４０制限フラグメントとして得られる。ヒトサイトメガロウイルスの前初期プロモーターは、好都合には、ＨｉｎｄＩＩＩ Ｅ制限フラグメントとして得られる。ウシパピローマウイルスをベクターとして用いた哺乳類宿主におけるＤＮＡ発現系は、米国特許第４，４１９，４４６号に開示されている。この系の修飾は、米国特許第４，６０１，９７８号に記載されている。単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼプロモーターの制御下でのマウス細胞でのヒトｐ−インターフェロンｃＤＮＡの発現を開示している、Reyes et al., 1982, Nature 297:598-601も参照。或は、ラウス肉腫ウイルス末端反復配列がプロモーターとして用いられ得る。

【0228】

組み換え発現ベクターにおいて用いられ得る別の有用なエレメントは、エンハンサー配列であり、そしてこれを用いて、高等真核生物によるヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体をコードするＤＮＡの転写が増大される。哺乳類遺伝子（例えば、グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテイン、及びインスリン）由来の多数のエンハンサー配列が現在知られている。しかしながら、典型的には、真核生物細胞ウイルス由来のエンハンサーが用いられる。例として、複製開始点の後ろ側（ｂｐ１００〜２７０）のＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製開始点の後ろ側のポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーを含む。真核生物のプロモーターの活性化のためのエレメントの増強について記載している、Yaniv, 1982, Nature 297:17-18も参照。エンハンサーは、ベクターにヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体コード配列にたいして５’又は３’位置でスプライシングされ得るが、好ましくは、プロモーターから５’部位に位置する。

【0229】

真核生物宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト又は他の多細胞生物由来の有核細胞）において用いられる発現ベクターはまた、転写の終結に必要な配列、及びｍＲＮＡの安定化に必要な配列も含有し得る。かかる配列は、真核生物又はウイルスのＤＮＡ又はｃＤＮＡの５’、及び場合により３’の非翻訳領域から一般に入手可能である。これらの領域は、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分において、ポリアデニル化フラグメントとして転写されるヌクレオチドセグメントを含有する。１個の有用な転写終結要素は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。国際公開公報第９４／１１０２６号、及びそこに開示される発現ベクターを参照。いくつかの実施態様において、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ＣＨＥＦ系を用いて発現することができる（例えば、米国特許第５，８８８，８０９号（開示は、引用により本明細書に取り込まれる）を参照）。

【0230】

本明細書において、ベクター中のＤＮＡのクローニング又は発現に適当な宿主細胞は、上述の原核生物、酵母、又は高等真核生物の細胞である。この目的に適した原核生物は、真正細菌（例えば、グラム陰性又はグラム陽性生物（例えば、腸内細菌科（例えば、エシェリキア（Escherichia）（例えば、エシェリキア・コリ）、エンテロバクター（Enterobacter）、エルウィニア（Erwinia）、クレブシエラ（Klebsiella）、プロテウス（Proteus）、サルモネラ（Salmonella）（例えば、サルモネラ・チフィムリウム（Salmonella typhimurium））、セラチア（Serratia）（例えば、セラチア・マルセスカンス（Serratia marcescans））、及びシゲラ（Shigella）、並びにバチルス（Bacilli）（例えば、バチルス・サブチリシン（B. subtilis）及びバチルス・リケニホルミス（B. licheniformis）（例えば、１９８９年４月１２日付けで公開された旧東ドイツ公開公報第２６６，７１０号において開示されているバチルス・リケニホルミス４１Ｐ））、シュードモナス（Pseudomonas）（例えば、シュードモナス・エルギノーサ（P. aeruginosa））、及びストレプトマイセス（Streptomyces）））を含む。１個の好ましいエシェリキア・コリクローニング宿主は、エシェリキア・コリ２９４（ＡＴＣＣ３１，４４６）であるが、他の株（例えば、エシェリキア・コリＢ、エシェリキア・コリＸ１７７６（ＡＴＣＣ３１，５３７）、及びエシェリキア・コリＷ３１１０（ＡＴＣＣ２７，３２５））も適している。これらの例は制限よりむしろ説明である。

【0231】

原核生物に加え、真核生物微生物（例えば、糸状菌又は酵母）が、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体コードベクターの適当なクローニング宿主又は発現宿主である。サッカロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）、又は一般的なパン酵母が、下等真核生物の宿主微生物において最も一般的に用いられる。しかしながら、多数の他の属、種、及び系統が、一般に利用可能であり、本明細書において有用である（例えば、シゾサッカロミセス・ポンベ（Schizosaccharomyces pombe）；クリベロマイセス（Kluyveromyces）宿主（例えば、クリベロマイセス・ラクティス（K. lactis）、クリベロマイセス・フラギリス（K. fragilis）（ＡＴＣＣ１２，４２４）、クリベロマイセス・ブルガリクス（K. bulgaricus）（ＡＴＣＣ１６，０４５）、クリベロマイセス・ウィッケラミイ（K. wickeramii）（ＡＴＣＣ２４，１７８）、クリベロマイセス・ワルティイ（K. waltii）（ＡＴＣＣ５６，５００）、クリベロマイセス・ドロソフィラルム（K. drosophilarum）（ＡＴＣＣ３６，９０６）、クリベロマイセス・サーモトレランス（K. thermotolerans）、及びクリベロマイセス・マルキシアヌス（K. marxianus）；ヤロウイア（欧州特許第４０２，２２６号）；ピキア・パストリス（Pichia pastors）（欧州特許第ＥＰ１８３，０７０号）；カンジタ（Candida）；トリコデルマ・レエシア（Trichoderma reesia）（欧州特許第２４４，２３４号）；ニューロスポラ・クラッサ（Neurospora crassa）；スクワンニオマイセス（Schwanniomyces）（例えば、スクワンニオマイセス・オッシデンタリス（Schwanniomyces occidentalis））；及び糸状菌（例えば、ニューロスポラ（Neurospora）、ペニシリウム（Penicillium）、トリポクラディウム（Tolypocladium）、及びアスペルギルス（Aspergillus）宿主（例えば、アスペルギルス・ニデュランス（A. nidulans）及びアスペルギルス・ニガー（A. niger））。

【0232】

グリコシル化ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物からもたらされる。無脊椎動物細胞の例は、例えば、多数のバキュロウイルス株及び変異体、及び宿主（例えば、スポドプテラ・フルギペルダ（Spodoptera frugiperda）（イモムシ）、アエデス・アエジプティ（Aedes aegypti）（蚊）、アエデス・アルボピクタス（Aedes albopictus）（蚊）、ドロソフィア・メラノガステル（Drosophila melanogaster）（ショウジョウバエ）、及びボンビックス・モリ（Bombyx mori）（カイコ））由来の対応する許容状態の昆虫宿主細胞を含む植物及び昆虫細胞を含む。様々なトランスフェクション用ウイルス株が公的に入手可能である（例えば、オートグラファ・カリフォルニア（Autographa californica）ＮＰＶのＬ−１変異体、及びボンビックス・モリ（Bombyx mori）ＮＰＶのＢｍ−５株、及びかかるウイルスが、特にスポドプテラ・フルギペルダ（Spodoptera frugiperda）細胞のトランスフェクションのために用いられ得る）。

【0233】

綿、トウモロコシ、ポテト、大豆、ペチュニア、トマト、及びタバコの植物細胞培養物は、宿主としても利用され得る。

【0234】

別の態様において、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒの発現は脊椎動物細胞において行われる。培養（組織培養）での脊椎動物細胞の増殖は日常的な方法となり、技術が広範に利用可能である。有用な哺乳類宿主細胞株の例は、ＳＶ４０によりトランスフォーメーションされたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）、ヒト胚性腎臓株（懸濁培養中での増殖のためサブクローニングされた２９３又は２９３細胞（Graham et al., 1977, J. Gen Virol. 36: 59））、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞細胞／−ＤＨＦＲ１（ＣＨＯ、Urlaub et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216；例えば、ＤＧ４４）、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Mather, 1980, Biol. Reprod. 23:243-251）、サル腎細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１５８７）、ヒト頸部癌腫細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）、ＴＲ１細胞（Mather et al., 1982, Annals N.Y. Acad. Sci. 383: 44-68）、ＭＲＣ５細胞、ＦＳ４細胞、及びヒトへパトーマ細胞株（Ｈｅｐ Ｇ２）である。

【0235】

宿主細胞は、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体産生のため上述の発現又はクローニングベクターでトランスフォーメーションされ、プロモーターを誘導するか、形質転換体を選択するか、又は所望の配列をコードする遺伝子を増殖するのに適当であるよう改変された通常の栄養培地にて培養される。

【0236】

本明細書に記載されるヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を産生するために用いられる宿主細胞は、様々な培地で培養され得る。市販の培地（例えば、ハムＦ１０（Sigma-Aldrich Co., St. Louis, Mo.）、基礎培地（ＭＥＭ）（Sigma-Aldrich Co.）、ＲＰＭＩ−１６４０（Sigma-Aldrich Co.）、及びダルベッコ変法イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Sigma-Aldrich Co.）は、宿主細胞の培養に適している。加えて、Ham et al., 1979, Meth. Enz. 58: 44, Barnes et al., 1980, Anal. Biochem. 102: 255、米国特許第４，７６７，７０４号、米国特許第４，６５７，８６６号、米国特許第４，９２７，７６２号、米国特許第４，５６０，６５５号、米国特許第５，１２２，４６９号、国際公開公報第９０／１０３４３０号、及び国際公開公報第８７／００１９５号の１つ以上に記載される培地のいずれかが、宿主細胞用培養培地として用いられ得る。これらの培地のいずれかは、必要に応じて、ホルモン及び／又は他の成長因子（例えば、インスリン、トランスフェリン、又は上皮成長因子）、塩（例えば、塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、及びリン酸塩）、バッファー（例えば、ＨＥＰＥＳ）、ヌクレオチド（例えば、アデノシン及びチミジン）、抗生物質（例えば、ゲンタマイシン）、トレースエレメント（マイクロモル範囲の最終濃度で通常存在する無機化合物として定義される）、及びグルコース又は等価のエネルギー供給源で補われる。他の補助剤はまた、当業者に知られた適当な濃度で含まれ得る。培養条件（例えば、温度、ｐＨなど）は、発現のため選択された宿主細胞で従前に用いられたものであり、当業者にあきらかである。

【0237】

組み換え技術を用いたとき、抗体は、細胞膜周辺腔において細胞内で産生され得るか、又は培地中に直接分泌され得る。第１工程として、抗体が細胞内で産生され、細胞を破壊して、タンパク質が放出され得る。粒子状壊死組織片である宿主細胞又は溶解フラグメントのいずれかは、例えば、遠心分離又は限外濾過により取り除かれ得る。Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167は、エシェリキア・コリの細胞膜周辺腔に分泌される抗体を単離する方法を記載する。簡単に言うと、細胞ペーストは、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、及びフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）の存在下で約３０分かけて分解される。細胞片は遠心分離により取り除かれ得る。抗体が培地中に分泌される場合、かかる発現系由来の培養上清は、一般に、市販のタンパク質濃縮フィルター（例えば、Ａｍｉｃｏｎ又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｕｎｉｔ）を用いてまず濃縮される。プロテアーゼ阻害剤（例えば、ＰＭＳＦ）は、前述の工程のいずれかで、タンパク質分解を阻害するために含まれ、抗生物質は、付随的混入物の成長を妨げるために含まれ得る。様々な方法を用いて、抗体を宿主細胞から単離することができる。

【0238】

細胞から調製される抗体組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、及びアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製され得る（但し、アフィニティークロマトグラフィーが典型的な精製技術である）。親和性リガンドとしてのタンパク質Ａの適合性は、種、及び抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインのアイソタイプに依存する。タンパク質Ａを用いて、ヒトガンマ１、ガンマ２、又はガンマ４重鎖に基づく抗体が精製され得る（例えば、Lindmark et al., 1983 J. Immunol. Meth. 62:1-13を参照）。タンパク質Ｇが、全てのマウスアイソタイプ、及びヒトガンマ３について推薦される（例えば、Guss et al., 1986 EMBO J. 5:1567-1575を参照）。親和性リガンドが結合するマトリックスは、最も頻繁にはアガロースであるが、他のマトリックスも利用可能である。機械的に安定なマトリックス（例えば、調節された孔ガラス又はポリ（スチレンジビニル）ベンゼン）は、アガロースで達成され得るより速い流速及び短い処理時間を可能にする。抗体がＣ_Ｈ３ドメインを含む場合、Bakerbond ABX(登録商標)樹脂(J. T. Baker, Phillipsburg, N.J.）は、精製に有用である。タンパク質精製のための他の技術（例えば、イオン交換カラム上での分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上のクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）上でのクロマトグラフィー、アニオン又はカチオン交換樹脂（例えば、ポリアスパラギン酸カラム）上でのクロマトグラフィー、等電点電気泳動、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、及び硫酸アンモニウム沈殿）も、回収されるべき抗体に依存して利用可能である。

【0239】

任意の予備精製工程（複数を含む）に従い、対象の抗体及び混入物を含む混合物が、ｐＨ約２．５〜４．５で溶出バッファーを用いた低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーの対象にされ得る（典型的には、低塩濃度（例えば、約０〜０．２５Ｍ塩）で行われる）。

【0240】

本明細書で定義される低度、中程度、高度にストリンジェンシーな条件下で、本発明の抗体又は抗体フラグメントをコードする単離ポリヌクレオチド配列（複数を含む）により表されるヌクレオチド配列の全体又は部分（例えば、可変領域をコードする部分）にハイブリダイゼーションする核酸も含まれる。核酸をハイブリダイゼーションするハイブリダイゼーション部分は、典型的には少なくとも１５（例えば、２０、２５、３０、又は５０）ヌクレオチド長である。核酸をハイブリダイゼーションするハイブリダイゼーション部分は、抗ＩＬ−３６Ｒポリペプチド（例えば、重鎖又は軽鎖可変領域）をコードする核酸の一部又は全部の配列、又はその相補鎖と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％）同一である。本明細書に記載される種類の核酸のハイブリダイゼーションは、例えば、クローニングプローブ、プライマー（例えば、ＰＣＲプライマー）、又は診断プローブとして用いられ得る。

【0241】

非治療上の使用
本明細書に記載される抗体は、親和性精製剤として有用である。このプロセスにおいて、抗体は、当該技術分野で周知の方法を用いて固相（例えば、タンパク質Ａ樹脂）上に固定される。固定された抗体は、精製されるべきＩＬ−３６Ｒタンパク質（又はそのフラグメント）を含有する試料と接触させ、その後、支持体は、固定された抗体に結合したＩＬ−３６Ｒタンパク質以外の試料中の全材料を実質的に取り除く適当な溶媒で洗浄される。最終的に、支持体は、ＩＬ−３６Ｒタンパク質を抗体から放出する別の溶媒で洗浄される。

【0242】

抗ＩＬ−３６Ｒ抗体（例えば、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体）はまた、ＩＬ−３６Ｒタンパク質を検出し、及び／又は定量化するための診断アッセイ（例えば、特定の細胞、組織、又は血清におけるＩＬ−３６Ｒ発現を検出すること）においても有用である。抗ＩＬ−３６Ｒ抗体もまた診断上用いて、例えば、臨床試験法の一部として疾患の発症又は進行がモニターされ得る（例えば、所定の処置及び／又は予防計画の有効性が決定され得る）。検出は、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を結合させることにより促進され得る。検出可能な物質の例は、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、生物発光物質、放射性物質、種々のポジトロン放出断層撮影を用いたポジトロン放出金属、及び非放射性常磁性金属イオンを含む。本発明による診断として用いるため、抗体に結合され得る金属イオンについて、例えば、米国特許第４，７４１，９００号を参照。

【0243】

抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、ＩＬ−３６Ｒ関連異常（例えば、ＩＬ−３６Ｒの異常発現により特徴付けられる異常）の診断方法において、又は対象がＩＬ−３６Ｒ関連異常を発症する増大したリスクを有するかを決定するために用いられ得る。かかる方法は、対象由来の生物学的試料をＩＬ−３６Ｒ抗体と接触させ、抗体のＩＬ−３６Ｒへの結合を検出する、を含む。「生物学的試料」により、個々の細胞株、組織培養物、又はＩＬ−３６Ｒを潜在的に発現する細胞の他の供給源から得られる任意の生物学的試料が意図される。組織生検及び体液を哺乳類から得る方法は、当該技術分野において周知である。

【0244】

いくつかの実施態様において、方法は更に、患者試料におけるＩＬ−３６Ｒのレベルを対照試料（例えば、ＩＬ−３６Ｒ関連異常を有しない対象）と比較して、患者が、ＩＬ−３６Ｒ関連異常を有するか、又はＩＬ−３６Ｒ関連異常を発症するリスクがあるかを決定することを含み得る。

【0245】

いくつかの実施態様において、例えば診断目的のため、検出可能な部分で抗体を標識することが有利であろう。ラジオアイソトープ、蛍光標識、酵素基質標識などを含む多数の検出可能な標識が利用可能である。標識は、種々の既知の技術を用いて抗体と間接的に結合され得る。例えば、抗体はビオチンと結合されることができ、上述の３種の広範なカテゴリーの標識のいずれかがアビジンと結合され得る（又は逆も真なり）。ビオチンはアビジンに選択的に結合し、これにより、標識は、この間接的な方法で抗体と結合され得る。或は、標識の抗体との間接的結合を達成するために、抗体は小ハプテン（例えば、ジゴキシン）と結合されることができ、上述の標識の異なる種類の１つは抗ハプテン抗体（例えば、抗ジゴキシン抗体）と結合される。これにより、標識の抗体との間接的結合が達成され得る。

【0246】

典型的なラジオアイソトープ標識は、^３５Ｓ、^１４Ｃ、^１２５Ｉ、^３Ｈ、及び^１３１Ｉを含む。抗体は、例えば、Current Protocol in Immunology, Volumes 1 and 2, 1991, Coligen et al., Ed. Wiley-Interscience, New York, N.Y., Pubsに記載される技術を用いて、ラジオアイソトープで標識され得る。放射性活性は、例えばシンチレーション測定により測定され得る。

【0247】

典型的な蛍光標識は、レアアースキレート剤（ユーロピウムキレート剤）からもたらされる標識を含むか、又はフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、リサミン、フィコエリトリン、及びＴｅｘａｓ Ｒｅｄが利用可能である。蛍光標識は、既知の技術（例えば、Current Protocol in Immunologyに開示されるもの）を介して抗体に結合され得る。蛍光は蛍光発光を用いて定量化され得る。

【0248】

当該技術分野で知られた、種々の十分に特徴付けられた酵素基質標識が存在する（例えば、説明については米国特許第４，２７５，１４９号を参照）。酵素は、一般に、種々の技術を用いて測定され得る発色基質の化学的変化を触媒する。例えば、変化は、分光光度法で測定され得る基質の色の変化であり得る。或は、酵素は、基質の蛍光又は化学発光を変化させ得る。蛍光の変化を定量する技術は上述されている。蛍光発光基質は、化学反応により電気的に励起され、次に、ケミルミノメーターを用いて測定され得る、例えば、又は蛍光受容部にエネルギーを供与する光を放出し得る。

【0249】

酵素標識の例としては、ルシフェラーゼ（例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号））、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、リンゴ酸脱水素酵素、ウレアーゼ、ペルオキシダーゼ（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ））、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖類酸化酵素（例えば、グルコース酸化酵素、ガラクトース酸化酵素、及びグルコース−６−リン酸塩脱水素酵素）、複素環酸化酵素（例えば、ウリカーゼ及びキサンチン酸化酵素）、ラクトペルオキシダーゼ、ミクロペルオキシダーゼなどを含む。酵素を抗体に結合する技術は、例えば、O'Sullivan et al., 1981, Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, in Methods in Enzym. (J. Langone & H. Van Vunakis, eds.), Academic press, N.Y., 73: 147-166に記載される。

【0250】

酵素と基質の組み合わせの例は、例えば、基質としての水素ペルオキシダーゼとの西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）（ここで、水素ペルオキシダーゼは、色素前駆体（例えば、オルトフェニレンジアミン（ＯＰＤ）又は３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンヒドロクロライド（ＴＭＢ）を酸化する）；発色基質としてのパラ−ニトロフェニルホスフェートとのアルカリホスファターゼ（ＡＰ）；及び発色基質（例えば、ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトシダーゼ又は蛍光発生基質４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトシダーゼ）とのβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ（β−Ｄ−Ｇａｌ）を含む。

【0251】

多数の他の酵素と基質の組み合わせが当業者に利用可能である。これらの一般的なレビューについては、米国特許第４，２７５，１４９号及び米国特許第４，３１８，９８０号を参照。

【0252】

別の実施態様において、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体が無標識で用いられ、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を結合する標識抗体を用いて検出される。

【0253】

本明細書に記載される抗体は、任意の既知のアッセイ方法（例えば、競合的結合アッセイ、直接及び間接サンドイッチアッセイ、及び免疫沈降アッセイ）において用いられ得る。例えば、Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc. 1987）を参照。

【0254】

抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを用いて、リガンドのＩＬ−３６受容体への結合を阻害することができる。かかる方法は、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを細胞（例えば、哺乳類細胞）又は細胞環境に投与することを含み、これにより、ＩＬ−３６受容体により仲介されるシグナル伝達が阻害される。これらの方法は、インビトロ又はインビボで行われ得る。「細胞環境」により、組織、培地、又は細胞を囲む細胞外基質が意図される。抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体又はフラグメントが、ＩＬ−３６Ｒ分子に、細胞の外側及び細胞の周りで結合し、故にＩＬ−３６リガンドのその受容体への結合を妨げる能力があるような方法で、細胞環境に投与される、

【0255】

診断キット
抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、診断キット（すなわち、予め決められた量の試薬の診断アッセイを行うための指示書と一緒にパッケージングされた組み合わせ）において用いられ得る。抗体が酵素で標識される場合、キットは、酵素により必要とされる基質及び補助因子（例えば、検出可能な発色団又はフルオロフォアをもたらす基質前駆体）を含み得る。加えて、他の添加剤（例えば、安定剤、バッファー（例えば、ブロックバッファー又は溶解バッファー）など）が含まれ得る。相対量の種々の試薬は広範囲で変動して、アッセイの感受性を実質的に最適化する試薬溶液濃度をもたらし得る。試薬は、溶解に際して、適当な濃度を有する試薬溶液をもたらす、賦形剤を含む通常凍結乾燥された乾燥粉末として提供され得る。

【0256】

治療上の使用
別の実施態様において、本明細書において開示されるヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、本明細書に記載されるＩＬ−３６Ｒの発現と関連する様々な異常の処置において有用である。ＩＬ−３６Ｒ関連異常の処置方法は、治療上有効量のヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む。

【0257】

ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は剤は、非経腸、皮下、腹腔内、肺内、及び鼻腔内、さらには所望なら、局所免疫抑制処置、病巣内投与（灌流、又はそうでなければ移植前に移植片を抗体と接触させることを含む）を含む任意の適当な方法により投与される。ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は剤は、例えば注射又はボーラスとして投与され得る。非経腸注射は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与を含む。加えて、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体は、適当には、パルス注射、具体的には、減少した用量の抗体で投与される。１つの態様において、投薬は、部分的に投与が短期又は慢性であるかどうかに依存して、注射により、最も好ましくは静脈内又は皮下注射により行われる。

【0258】

疾患の予防又は処置のため、抗体の適当な投薬量は、様々な要因（例えば、上で定義される処置されるべき疾患の種類、疾患の重篤度及び経過、抗体が予防又は治療目的のため投与されるかどうか、薬歴、患者の既往歴及び抗体に対する応答、及び主治医の裁量）に依存する。抗体は、適当には、処置時又は一連の処置に渡り患者に投与される。

【0259】

疾患の種類及び重篤度に依存して、約１μg/kg〜２０mg/kg（例えば、０．１〜１５mg/kg）の抗体は、例えば、１種以上の別々の投与により又は持続点滴により、患者に投与するための初期候補投薬である。典型的な１日投薬量は、上述の要因に依存して、約１μg/kg〜１００mg/kg又はそれ以上の範囲にあり得る。数日又はそれ以上に渡る反復投与のため、状態に依存して、疾患の症状の所望の抑制が生じるまで処置が持続される。しかしながら、他の投薬計画が有用であり得る。この療法の進歩は、通常の技術及びアッセイにより容易にモニターされる。典型的な投薬計画は、国際公開公報第９４／０４１８８号に開示されるものである。

【0260】

用語「抑制」は、疾患の１個以上の特徴の低下を指すために、「回復」及び「軽減」と同じ文脈で本明細書で用いられる。

【0261】

抗体組成物は、良好な医療上の実施と一致した方法で処方され、投薬され、投与される。この文脈で考慮する要因は、処置される具体的な異常、処置される具体的な哺乳動物、個々の患者の臨床状態、異常の原因、剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療従事者に知られた他の要因を含む。投与されるべき抗体の「治療上有効量」は、かかる考慮結果により影響され、ＩＬ−３６Ｒ発現と関連する異常を予防するか、改善するか、又は処置するのに必要な最小量である。

【0262】

抗体は、問題の異常を予防するか又は処置するために現在用いられる１個以上の剤と共に処方される必要はないが、場合により処方される。かかる他の剤の有効量は、製剤中に存在するヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ２３ｐ１９抗体の量、疾患又は治療の種類、及び上で考察された他の要因に依存する。これらは、一般に、本明細書において上で用いられたのと同一の投薬量及び投与経路で、又は用いられる投薬量の約１〜９９％で用いられる。

【0263】

医薬組成物及びその投与
ＩＬ−３６Ｒ結合剤（例えば、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体）を含む組成物は、免疫異常、呼吸障害、又は癌を有するか、又はリスクのある対象に投与され得る。本発明は更に、癌、呼吸障害、又は免疫異常の予防又は処置用医薬の製造における、ＩＬ−３６Ｒ結合剤（例えば、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体）の使用を提供する。本明細書で用いられる用語「対象」は、ＩＬ−３６Ｒ結合剤が投与され得る任意の哺乳類患者を意味し、例えば、ヒト及び非ヒト哺乳類（例えば、霊長類、げっ歯類、及びイヌ）を含む。本明細書に記載される方法を用いた処置に具体的に意図される対象は、ヒトを含む。抗体又は剤は、免疫異常、呼吸障害若しくは癌の予防又は処置において、単独で又は他の組成物と組み合わせて投与され得る。抗体又は剤と組み合わせて投与され得るかかる組成物は、メトトレキサート（ＭＴＸ）及び免疫調節物質（例えば、抗体又は低分子）を含む。

【0264】

かかる医薬組成物において使用するための抗体の例は、配列番号１〜１０のいずれかの軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する抗体又は抗体フラグメントを含むものである。かかる医薬組成物において使用するための抗体の例はまた、配列番号１１〜２０のいずれかの重鎖可変領域アミノ酸配列を有するヒト化抗体又は抗体フラグメントを含むものである。

【0265】

かかる医薬組成物において使用するための抗体の更なる例はまた、配列番号７６〜８６のいずれかの軽鎖可変領域アミノ酸配列を有するヒト化抗体又は抗体フラグメントを含むものである。かかる医薬組成物において使用するための好ましい抗体はまた、配列番号８７〜１０１のいずれかの重鎖可変領域アミノ酸配列を有するヒト化抗体又は抗体フラグメントを含むものである。

【0266】

かかる医薬組成物において使用するための抗体の更なる例はまた、配列番号７７及び８９、配列番号８０及び８８、配列番号８０及び８９、配列番号７７及び８７、配列番号７７及び８８、配列番号８０及び８７、配列番号８６及び１００、配列番号８５及び１０１、又は配列番号８５及び１０のいずれかの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を有するヒト化抗体又は抗体フラグメントを含むものである。

【0267】

かかる医薬組成物において使用するための抗体の更なる例はまた、配列番号１１５、１１８、１２３、又は１２４のいずれかの軽鎖領域アミノ酸配列を有するヒト化抗体を含むものである。かかる医薬組成物において使用するための好ましい抗体はまた、配列番号１２５、１２６、１２７、１３８、又は１３９のいずれかの重鎖可変領域アミノ酸配列を有するヒト化抗体を含むものである。

【0268】

かかる医薬組成物において使用するための抗体の更なる例はまた、抗体Ｂ１、抗体Ｂ２、抗体Ｂ３、抗体Ｂ４、抗体Ｂ５、抗体Ｂ６、抗体Ｃ１、抗体Ｃ２、又は抗体Ｃ３を含むものである。

【0269】

種々のデリバリーシステムが知られており、これを用いてＩＬ−３６Ｒ結合剤を投与することができる。導入方法は、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口経路を含むが、これらに限定されない。ＩＬ−３６Ｒ結合剤は、例えば、注入（ボーラス又は注射）により投与されることができ、他の生物学的に活性な剤（例えば、化学療法剤）と一緒に投与され得る。投与は全身又は局所であり得る。好ましい実施態様において、投与は皮下注射による。かかる注射用製剤は、例えば、毎週１回投与され得る予め充填されたシリンジに調製され得る。

【0270】

特定の実施態様において、ＩＬ−３６Ｒ結合剤組成物は、注射、カテーテル、座剤、又は移植により投与され、移植片は、メンブレン（例えば、サイラスティックメンブレン）又はファイバーを含む浸透性、非浸透性、又はゲル状の材料である。典型的には、組成物を投与するとき、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は剤が吸着しない材料が用いられる。

【0271】

他の実施態様において、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は剤は、制御された放出システムで送達される。１つの実施態様において、ポンプが用いられ得る（例えば、Langer, 1990, Science 249:1527-1533; Sefton, 1989, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574を参照）。別の実施態様において、ポリマー材料が用いられ得る（例えば、Medical Applications of Controlled Release (Langer and Wise eds., CRC Press, Boca Raton, Fla., 1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance (Smolen and Ball eds., Wiley, New York, 1984); Ranger and Peppas, 1983, Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61を参照）。Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105も参照。他の制御された放出システムが、例えば上記Ｌａｎｇｅｒにおいて考察されている。

【0272】

ＩＬ−３６Ｒ結合剤（例えば、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体）は、治療上有効量の結合剤及び１種以上の医薬的に適合可能な成分を含む医薬組成物として投与され得る。

【0273】

典型的な実施態様において、医薬組成物は、ヒトへの静脈内又は皮下投与に適合した医薬組成物として日常的な方法に従い処方される。典型的には、注射による投与用組成物は、無菌の等張水性バッファー中の溶液である。必要な場合、医薬はまた、注射部位での痛みを和らげるために可溶化剤及び局所麻酔薬（例えば、リグノカイン）を含み得る。一般的には、成分は、別々、又は例えば、有効な剤の量を示す密封された容器（例えば、アンプル剤又はサシェット）中の凍結乾燥粉末又は水を含まない濃縮物として単位投薬形態で一緒に混合される。医薬が注入により投与されるべき場合、それは、無菌の医薬グレードの水又は食塩水を含有する注入ボトルを用いて調剤され得る。医薬が注射により投与される場合、無菌の注射用水又は食塩水のアンプル剤は、成分が投与前に混合され得るように、提供され得る。

【0274】

更に、医薬組成物は、（ａ）ＩＬ−３６Ｒ結合剤（例えば、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体）を凍結乾燥形態で含有する容器、及び（ｂ）注射用の医薬的に許容される希釈剤（例えば、滅菌水）を含有する第２の容器を含む医薬キットとして提供され得る。医薬的に許容される希釈剤は、凍結乾燥抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又は剤の再構成又は希釈のために用いられ得る。場合により、かかる容器（複数を含む）との関係性は、医薬又は生物学的製品の製造、使用、又は販売を規制する政府機関により規定される形で公示され得る。

【0275】

免疫異常又は癌の処置又は予防において有効であるＩＬ−３６Ｒ結合剤（例えば、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体）の量は、標準的な臨床技術により投与され得る。加えて、場合によりインビトロアッセイを用いて、最適な投薬範囲を同定し得る。処方に利用されるべき正確な用量はまた、投与経路、免疫異常又は癌のステージに依存し、医師の判断及びそれぞれの患者の環境により決定されるべきである。有効な用量は、インビトロ又は動物モデル試験系からもたらされる用量応答曲線から推定され得る。

【0276】

一般的に、免疫異常又はＩＬ−３６Ｒ発現癌を有する患者に投与される抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はＩＬ−３６Ｒ結合剤の投薬量は、典型的には、対象の体重の約０．１mg/kg〜約１００mg/kgである。対象に投与される投薬量は、対象の体重の約０．１mg/kg〜約５０mg/kg、約１mg/kg〜約３０mg/kg、約１mg/kg〜約２０mg/kg、約１mg/kg〜約１５mg/kg、又は約１mg/kg〜約１０mg/kgである。

【0277】

典型的な用量は、１ng/kg〜１００mg/kgを含むが、これらに限定されない。いくつかの実施態様において、用量は、約０．５mg/kg、約１mg/kg、約２mg/kg、約３mg/kg、約４mg/kg、約５mg/kg、約６mg/kg、約７mg/kg、約８mg/kg、約９mg/kg、約１０mg/kg、約１１mg/kg、約１２mg/kg、約１３mg/kg、約１４mg/kg、約１５mg/kg、又は約１６mg/kgである。用量は、例えば、毎日、１週間に１回（毎週）、１週間に２回、１週間に３回、１週間に４回、１週間に５回、１週間に６回、隔週又は毎月、２ヶ月毎、又は３ヶ月毎に投与され得る。特定の実施態様において、用量は、約０．５mg/kg/週、約１mg/kg/週、約２mg/kg/週、約３mg/kg/週、約４mg/kg/週、約５mg/kg/週、約６mg/kg/週、約７mg/kg/週、約８mg/kg/週、約９mg/kg/週、約１０mg/kg/週、約１１mg/kg/週、約１２mg/kg/週、約１３mg/kg/週、約１４mg/kg/週、約１５mg/kg/週、又は約１６mg/kg/週である。いくつかの実施態様において、用量は、約１mg/kg/週から約１５mg/kg/週までの範囲である。

【0278】

いくつかの実施態様において、ＩＬ−３６Ｒ結合剤を含む医薬組成物は更に、結合剤に結合した又は結合していない治療剤を含み得る。抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はＩＬ−３６Ｒ結合剤は、免疫異常又は癌の処置又は予防用の１種以上の治療剤と組み合わせて同時投与され得る。

【0279】

かかる併用療法投与は、疾患パラメーター（例えば、症状の重篤度、症状の数、又は再発の頻度）に対する相加効果又は相乗効果を有し得る。

【0280】

併用投与についての治療計画に関して、特定の実施態様において、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はＩＬ−３６Ｒ結合剤は治療剤と同時に投与される。別の特定の実施態様において、治療剤は、抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はＩＬ−３６Ｒ結合剤の投与の少なくとも１時間から最大数ヶ月（例えば、少なくとも１時間、５時間、１２時間、１日、１週間、１ヶ月、又は３ヶ月）前又は後に、又は抗ＩＬ−３６Ｒ抗体又はＩＬ−３６Ｒ結合剤の投与前又は後に投与される。

【0281】

製造物品
別の態様において、上述の異常の処置に有用な材料を含有する製造物品が含まれる。製造物品は容器及び標識を含む。適当な容器は、例えば、瓶、バイアル、シリンジ、及び試験管を含む。容器は、様々な材料（例えば、ガラス又はプラスチック）から形成され得る。容器は、状態を処置するのに有効な組成物を有しており、無菌的にアクセス可能な入り口を有し得る。例えば、容器は、皮下注射針により突き刺すことができるストッパーを有した静脈内溶液バッグ又はバイアルであり得る。組成物中の有効な剤はヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体である。容器上のラベル又は容器と関連するラベルは、組成物が最適な状態を処置するために用いられることを示す。製造物品は、更に、医薬的に許容されるバッファー（例えば、リン酸緩衝食塩水、リンゲル溶液、及びデキストロース溶液）を含む第２の容器を含み得る。それは更に、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、及び使用のための指示を伴った添付文書を含む、市販及び使用者の観点から所望される他の材料を含み得る。

【0282】

本発明は、本発明の範囲を制限することを意図していない、以下の実施例において更に記載される。

【0283】

本発明の抗体は、以下の実施例において更に記載される。

【0284】

実施例
実施例１：抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体の同定
複数のマウス系統を、組み換え体で産生したヒトＩＬ−３６Ｒ（ＥＣＤ−細胞外ドメイン： Ｇｅｎｂａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＰ＿００３８４５のアミノ酸２０〜３３２）タンパク質、及び従来のハイブリードマ産生を考慮して強力な力価応答を生じるもので免疫した。ヒトＩＬ−３６Ｒ（ＥＣＤ）への強力な結合を誘発するが、ヒトＩＬ−１Ｒ１（最も関連するＩＬ−１Ｒファミリーのメンバー）に結合しない融合産物をサブクローニングし、再度スクリーニングした。複数のハイブリードマを同定し、結合し、ＩＬ−３６Ｒからのシグナル伝達を中和するモノクローナル抗体を得た（実施例２、３、及び４を参照）。可変ドメインを、標準的ＰＣＲプライマーセットを用いてハイブリードマからクローニングした。代表的モノクローナル抗体の可変ドメイン及び特異的ＣＤＲは上述されている。全てのマウス抗体を、ヒト定常ドメイン上のマウス可変ドメインからなるキメラ抗体（ｈｕ ＩｇＧ１ＫＯ／ｋａｐｐａ）に変換した。ｈｕ ＩｇＧ１ＫＯ（ノックアウト）は、エフェクター機能（例えば、ＦｃγＲと補体の結合）を低減することによりＡＤＣＣとＣＤＣ活性を排除する、２つの置換性変異（Ｌｅｕ２３４Ａｌａ及びＬｅｕ２３５Ａｌａ）を有する。マウス及びキメラ抗体の可変ドメインは、同一である。キメラ抗体を作成して、抗体の機能を確認し、正確な可変ドメイン配列が得られたことを確実にした。

【0285】

実施例２：同定したマウス抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体の分子結合親和性
Ａ）組み換えヒトＩＬ−３６Ｒへの抗ＩＬ−３６Ｒ抗体結合の動態学及び結合親和性を、Ｐｒｏｔｅｏｎ（Bio-Rad, Hercules, CA）、単一カラム精製によりハイブリードマから精製した物質を用いて、測定した。単一ＩＬ−３６Ｒ表面コート濃度で実施したヒトＩＬ−３６Ｒへの全マウスリードの結合親和性は、＜１００pMであると推定した。７種の異なる表面密度（全体適合）でのマウス抗体のヒトＩＬ−３６Ｒへの結合親和性実施を表１に示す。キメラ抗ＩＬ３６ＲＩｇＧの結合は、各マウスリードに相当する。

【0286】

【表12】

【0287】

Ｂ）マウスＩＬ−３６ＲとヒトＩＬ−１Ｒ１についての分子選択性
マウス及びキメラ抗ＩＬ−３６Ｒ抗体を、濃度１００nMでマウスＩＬ−３６Ｒ又はヒトＩＬ−１Ｒ１表面のいずれかに注入した。Ｆｏｒｔｅｂｉｏ Ｏｃｔｅｔ（Fortebio, Menlo Park, CA）を用いて測定したこれらの抗体についてのマウスＩＬ−３６Ｒ及びヒトＩＬ−１Ｒ１への結合シグナルはゼロであり、このことは、これらの抗体がヒトＩＬ−３６Ｒに選択的に結合することを示す。抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のヒトＩＬ−３６Ｒへの結合も５０％ヒト血清の存在下で分析し、結合ｏｎ−ｒａｔｅに対する血清の有意な作用を観察しなかった。これは、高い特異性を示している。

【0288】

実施例３：機能的ヒト及びカニクイザルアッセイにおけるマウス及びキメラ抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体の効力
プロトコール：ヒトＮＣＩ／ＡＤＲ−ＲＥＳ細胞ｐＮＦκＢ／サイトカイン放出アッセイ
試薬：
Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ：切断型ｒｈ ＩＬ３６β
Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ：切断型ｒｈ ＩＬ３６γ
Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ：切断型ｒｈ ＩＬ３６α：
ＭＡ６０００ Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＮＦκＢ（Ｓｅｒ５３６）Ｗｈｏｌｅ Ｃｅｌｌ Ｌｙｓａｔｅ Ｋｉｔ
Meso Scale Diagnostics, LLC
ＭＳＤ ＥＬＩＳＡカスタムヒト９６ウェル４−スポットアッセイ
Meso Scale Diagnostics, LLC

【0289】

ＮＣＩ／ＡＤＲ−ＲＥＳ細胞を、４５０００細胞/ウェルで、０．２５％血清を含むＲＰＭＩ培地中、９６ウェルプレートに播種した。１枚のプレートをｐＮＦκＢの分析について用い、別のプレートをサイトカイン放出について用いた。次に、プレートを一晩、３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベーションした。リガンド（ＩＬ３６α、β、又はγ）と抗体を、血清不足（ＳＳ）培地中の４×所望濃度で希釈した。アンタゴニスト（抗体）をリガンドに先立ち細胞に加えた。ｐＮＦκＢについて：ＮＣＩ細胞＋／−リガンドとアンタゴニストを１時間、３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベーションした。次に、培地を吸引し、細胞を１００μｌ／ウェル完全溶解バッファー中、氷上、３０分間で溶解した。次に、溶解物を２５００RPMで、２０分間、４℃で遠心分離し、ＭＳＤ ＥＬＩＳＡプレートに移し、ｐＮＦκＢについて製造元のプロトコール通りアッセイした。サイトカイン放出について：刺激の１８〜２４時間後、上清をＭＳＤ ＥＬＩＳＡプレートに移し、サイトカインについて製造元のプロトコールとおりアッセイした。

【0290】

プロトコール：ＢａＦ／３カニクイザルＩＬ−３６Ｒ細胞についてのｐＮＦκＢ（Ｓ５３６）ＭＳＤ ＥＬＩＳＡ
ＢａＦ／３カニクイザルＩＬ−３６Ｒ細胞を、９０，０００細胞/ウェルで、ＳＳ培地中、９６ウェルプレートに播種した。培地１００μlを対照ウェルに加えた。アンタゴニスト（抗体）を、４×所望濃度で希釈し、５０μlを各ウェルに加えた。リガンド（ＩＬ３６α、β、又はγ）を、ＳＳ培地中の４×所望濃度で希釈し、５０μlを各ウェルに加えた（最終容量２００μl）。プレートを１５分間、３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベーションした。プレートを短時間遠心し、培地を吸引し、細胞を１００μl/ウェル完全溶解バッファー（ＭＳＤ ｐＮＦκＢプロトコールを参照）中で溶解し、氷上で３０分間インキュベーションした。次に、溶解物を２５００RPM、２０分間、４℃で遠心分離し、ＭＳＤ ＥＬＩＳＡプレートに移した。次に、溶解物をｐＮＦκＢ活性について上述のＭＳＤキットを用いて評価した。

【0291】

結果：ヒトＩＬ−３６リガンドを用いたヒト機能アッセイ（ｐＮＦκＢ及びサイトカイン放出）及びカニクイザル機能アッセイ（ｐＮＦｋＢ）におけるマウス抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体についてのＩＣ_９０の結果を表２に示す。ヒトＩＬ−３６リガンドを用いたヒト機能アッセイ（ｐＮＦκＢ及びサイトカイン放出）及びカニクイザル機能アッセイ（ｐＮＦκＢ）におけるキメラ抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体についてのＩＣ_９０の結果を表３に示す。

【0292】

【表13】

【0293】

【表14】

【0294】

実施例４：マウス抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体のヒトＩＬ−３６Ｒ発現細胞への結合
フローサイトメトリーによる抗体の結合についてのプロトコール
全長ヒトＩＬ−３６ＲでトランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞又はＮＣＩ／ＡＤＲ−ＲＥＳ細胞を、染色の２４時間前に継代した。細胞をフラスコからＰＢＳ中の５mM ＥＤＴＡ１０mlで洗浄することによりはがし、次に、３７℃、１０分間、更に５mM ＥＤＴＡ１０ml及びＡｃｃｕｍａｘ２．５mlとインキュベーションして、細胞を脱凝集／脱分散させた。次に、抗体をＰＢＳ＋２％ＢＳＡ中の特定の濃度に希釈し、細胞を２０分間、室温でインキュベーションした。次に、過剰抗体をＰＢＳ２００μlを加えることにより洗浄し、遠心分離した。次に、第２の試薬を１ウェル当たり５０μlで加え、１５分間、室温でインキュベーションし、上述の通り洗浄した。細胞をＰＢＳ２００μl中に再懸濁し、フローサイトメトリーにより分析した。ヒトＩＬ−３６Ｒ ＨＥＫ形質移入体へのマウス抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体結合についての結合ＥＣ_５０を、表４に示す。

【0295】

【表15】

【0296】

実施例５：ヒト化ＩＬ−３６Ｒ抗体の産生
ヒトにおいて投与後の可能性のある免疫原性を低減するために、マウス抗ヒトＩＬ−３６Ｒモノクローナル抗体８１Ｂ４及び７３Ｃ５を、設計及びスクリーニングプロセスにより「ヒト化」した。ヒトフレームワーク配列を、フレームワーク相同性、ＣＤＲ構造、保存基準残基、保存インターフェースパッキング残基、及び他のパラメーターに基づき、マウスリードについて選択した。これらのフレームワーク位置でのアミノ酸残基の特異的置換は、ヒト生殖細胞系列フレームワーク領域におけるＣＤＲ又はＨＶＬの「直接交換」により形成されるヒト化抗体において示されるものについて、結合親和性及び／又は安定性を含む種々の態様の抗体効力を改善することができる。キメラ親Ｆａｂと比較して良好又は同等の結合、及び改良した発現を示したＦａｂを、更なる特徴付けのために選択した。抗体８１Ｂ４及び７３Ｃ５について代表的なヒト化可変領域を記載部分に示す。この方法において、抗体Ｂ１から抗体Ｂ６は、マウス抗体８１Ｂ４から誘導されたヒト化抗体であった（ヒトＩｇＧ１ＫＯ（ＫＯ＝ノックアウト）／カッパ骨格にクローン化）。抗体Ｂ１からＢ６を表Ａに示す。抗体Ｃ１から抗体Ｃ３は、マウス抗体７３Ｃ５から誘導されたヒト化抗体であった（ヒトＩｇＧ１−ＫＯ（ＫＯ＝ノックアウト）／カッパ骨格にクローン化）。抗体Ｃ１からＣ３を表Ｃに示す。

【0297】

実施例６：ヒト化ＩＬ−３６Ｒ抗体の結合
組み換えヒトＩＬ−３６Ｒへのヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体結合の動態学及び結合親和性を、Ｐｒｏｔｅｏｎ（Bio-Rad, Hercules, CA）を用いて測定した。ヒトＩＬ−３６Ｒを５種の異なる表面密度で固定し、結果を全体適合を用いて解析した（３つの実験の結果を示す表５を参照）。フローサイトメトリーを介したヒト化抗体のＮＣＩ／ＡＤＲ−ＲＥＳ細胞への結合を、実施例４に記載のプロトコールを用いて測定した（ＥＣ_９０値について表５を参照）。

【0298】

【表16】

【0299】

実施例７：機能的ヒトアッセイにおけるヒト化抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体の効力
ヒト化ＩＬ−３６Ｒ変異体でのヒトＮＣＩ／ＡＤＲ−ＲＥＳ細胞からのシグナル伝達の機能的遮断を、実施例３に記載の通り試験した。ヒトＩＬ−３６リガンドを用いたヒト機能アッセイ（ｐＮＦκＢ及びサイトカイン放出）におけるヒト化抗ヒトＩＬ−３６Ｒ抗体についてのＩＣ_９０結果を、表６に示す。

【0300】

【表17】

【0301】

実施例８：機能的ヒト初代ケラチノサイトアッセイにおける抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の効力
プロトコール：ヒト初代上皮ケラチノサイトｐＮＦｋＢ／サイトカイン放出アッセイ
細胞を、３０，０００細胞／ウェルで、培養培地中、９６ウェルプレートに播種し、一晩、３７℃で、５％ＣＯ_２でインキュベーションした。次に、アッセイを実施例３に記載の通り行った。結果：ヒトＩＬ−３６リガンドで刺激したヒト初代ケラチノサイトアッセイ（ｐＮＦｋＢ及びＩＬ−８放出）におけるマウス、キメラ、及びヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のＩＣ_９０結果を、それぞれ表７、表８、及び表９に示す。

【0302】

【表18】

【0303】

【表19】

【0304】

【表20】

【0305】

実施例９：機能的ヒト初代腸上皮細胞アッセイにおける抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の効力
プロトコール：ヒト初代腸上皮細胞ｐＮＦｋＢ／サイトカイン放出アッセイ
細胞を、３０，０００細胞/ウェルで、培養培地中、９６ウェルプレート中に播種し、一晩、３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベーションした。次に、アッセイを実施例３に記載の通り行った。
結果：ヒトＩＬ−３６リガンドで刺激したヒト初代腸上皮細胞アッセイ（ｐＮＦｋＢ及びＩＬ−８放出）におけるマウス抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のＩＣ_９０結果を、表１０に示す。

【0306】

【表21】

【0307】

実施例１０：機能的ヒト初代腸筋線維芽細胞アッセイにおける抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の効力
プロトコール：ヒト初代腸筋線維芽細胞ｐＮＦκＢ／サイトカイン放出アッセイ
細胞を、３０，０００細胞/ウェルで、培養培地中、９６ウェルプレート中に播種し、３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベーションした。次に、アッセイを実施例３に記載の通り行った。
結果：ヒトＩＬ−３６リガンドで刺激したヒト初代腸筋線維芽細胞アッセイ（ｐＮＦｋＢ及びＩＬ−８放出）における抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のＩＣ_９０結果を、表１１及び表１２に示す。

【0308】

【表22】

【0309】

【表23】

【0310】

実施例１１：機能的ヒト初代真皮線維芽細胞アッセイにおける抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の効力
プロトコール：ヒト初代真皮線維芽細胞ｐＮＦκＢ／サイトカイン放出アッセイ
細胞を、３０，０００細胞/ウェルで、培養培地中、９６ウェルプレート中に播種し、一晩、３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベーションした。次に、アッセイを実施例３に記載の通り行った。
結果：ヒトＩＬ−３６リガンドで刺激したヒト初代真皮線維芽細胞アッセイ（ｐＮＦｋＢ及びＩＬ−８放出）における抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のＩＣ_９０結果を、表１３及び表１４に示す。

【0311】

【表24】

【0312】

【表25】

【0313】

実施例１２：機能的ヒト初代近位尿細管細胞アッセイにおけるマウス抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の効力
プロトコール：ヒト初代近位尿細管細胞ｐＮＦｋＢ／サイトカイン放出アッセイ
細胞を、５，０００細胞/ウェルで、培養培地中、９６ウェルプレート中に播種し、一晩、３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベーションした。アッセイを実施例３に記載の通り行った。
結果：ヒトＩＬ−３６リガンドで刺激したヒト初代近位尿細管細胞アッセイ（ＩＬ−８放出）におけるマウス、キメラ、ヒト化抗ＩＬ−３６Ｒ抗体のＩＣ_９０結果を、表１５に示す。

【0314】

【表26】

【0315】

実施例１３：ＩＬ−３６γ刺激再構築ヒト表皮からのＩＬ−８産生の阻害
プロトコール：再構築表皮
抗ＩＬ−３６Ｒ抗体（１．５μg/ml）を、再構築ヒト表皮と予めインキュベーションし、ヒト組換えＩＬ−３６γ（２０ng/ml）で刺激した。組み換えヒトＩＬ−１β（２０ng/ml；R & D Systems）を、ポジティブコントロールとして用いた。２４時間培養後、細胞上清を回収し、ＩＬ−８についてアッセイした（ＩＬ−８についてのアッセイを実施例３に記載）。試料をトリプリケートで試験し、平均pg/ml±標準誤差を以下の表（表１６）に示す。

【0316】

【表27】

【0317】

実施例１４：再構築ヒト表皮におけるＩＬ−３６リガンドにより誘導されるＳ１００Ａ７及びＳ１００Ａ１２遺伝子発現の阻害
アゴニストであるＩＬ−３６リガンドを用いた再構築ヒト表皮における刺激は、Ｓ１００Ａ７及びＳ１００Ａ１２遺伝子発現を誘導する。Ｓ１００Ａ７及びＳ１００Ａ１２は、表皮分化複合体内に位置する遺伝子である。
プロトコール：再構築比と表皮を抗ＩＬ−３６Ｒ抗体（１．５μg/ml）とインキュベーションし、ヒト組み換えＩＬ−３６γ（２０ng/ml）で刺激した。組み換えヒトＩＬ−１β（２０ng/mL；R & D Systems）をポジティブコントロールとして用いた。５％ＣＯ_２及び３７℃で２４時間培養後、ＲＮＡを、再構築ヒト表皮から単離し、リアルタイム逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応により遺伝子発現についてアッセイした。相対的発現を２^{−ΔΔＣｔ}法を用いて計算した。試料をトリプリケートで試験し、平均発現±標準誤差を以下の表（表１７）に示す。

【0318】

【表28】

【0319】

実施例１５：乾癬の異種移植モデルにおける抗ＩＬ−３６Ｒ抗体の有効性
プロトコール：血液及び非損傷性皮膚生検を、皮膚科医により臨床的に診断した２４人の乾癬患者から得た。皮膚生検を免疫欠損ＮＩＨ−ＩＩＩマウスに移植し、４〜５週間移植を可能にした。

【0320】

抹消血単核球（ＰＢＭＣ）を、移植片皮膚への皮膚注射のための生検時に各ドナーから採取した血液から単離した。注射前に、ＰＢＭＣを、１μg/mlブドウ球菌エンテロトキシンＢ（Toxin Technologies, Florida, USA）及び８０U/mlヒト組み換えＩＬ−２（Peprotech Inc., Oosterhout, The Netherlands）で刺激した。自己ＰＢＭＣを、皮膚炎症及び乾癬表現型の導入を同調させるためにＰＢＳ中の７．５×１０^５細胞と皮内注射した。細胞注射の３週間後、生検をマウスから回収し、組織学により分析した。

【0321】

組織学染色を、全グループの凍結保存皮膚組織において行った。全皮膚相を覆う対角線切片（８μm）を、図４に記載の通り調製した。表皮の厚さを評価するため、２つの非連続切片を、生検の中心からランダムに選択し、ヘマトキシリン・エオシン染色で染色した。続いて、切片を１００倍の拡大率で評価した。生検の全長に渡り、隆線長をＯｌｙｍｐｕｓ ＤＰ７１カメラ及びＣｅｌｌ＾Ｄ画像ソフト（V2.7, Munster, Germany）を用いて両切片において測定した。隆線長は、顆粒層の上端から隆線の下部の距離として定義される。生検を無作為かつ盲検方法でスコア化した。

【0322】

各処置群についての平均表皮厚及び最大表皮厚の結果を表１８に示す。表皮厚の正味変化の結果を表１９に示す。

【0323】

【表29】

【0324】

【表30】

【0325】

実施例１６：野生型及びインターロイキン−１受容体様２ホモ接合ノックアウトマウスにおけるタバコの煙への暴露の３週間後の亜慢性的肺炎症
プロトコール：野生型又はインターロイキン−１受容体様２マウスを、３週間タバコの煙に暴露し、肺窮迫を誘導した。週１及び２は５日間連続暴し、マウスを３週間４日連続暴露した。タバコへの暴露（１６分）と新鮮な空気（８分）の２４分間隔で、それぞれの日で５本のタバコにマウスを暴露した。最終暴露の１８時間後、マウスをハンクス塩溶液（０．６mM ＥＤＴＡ）２×０．８mlで洗浄した。上清及び細胞ペレットを、気管支肺胞洗浄液、続いて１０分間の遠心分離により回収した。各暴露群についての気管支肺胞洗浄液中のマクロファージ及び好中球の総カウントを表２０に示す。

【0326】

【表31】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]