特許 6289619 ピリジン誘導体の新規な結晶多形体およびその製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6289619

(24)【登録日】2018年2月16日

(45)【発行日】2018年3月7日

(54)【発明の名称】ピリジン誘導体の新規な結晶多形体およびその製造方法

(51)【国際特許分類】

   C07D 401/04 20060101AFI20180226BHJP

   A61K 31/4439 20060101ALI20180226BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20180226BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20180226BHJP

   A61P 9/12 20060101ALI20180226BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20180226BHJP

   A61P 19/06 20060101ALI20180226BHJP

【ＦＩ】

   C07D401/04CSP

   A61K31/4439

   A61P3/10

   A61P9/10 101

   A61P9/12

   A61P13/12

   A61P19/06

【請求項の数】19

【全頁数】20

(21)【出願番号】特願2016-519263(P2016-519263)

(86)(22)【出願日】2015年5月12日

(86)【国際出願番号】JP2015063632

(87)【国際公開番号】WO2015174411

(87)【国際公開日】20151119

【審査請求日】2016年10月5日

(31)【優先権主張番号】特願2014-99678(P2014-99678)

(32)【優先日】2014年5月13日

(33)【優先権主張国】JP

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】503369495

【氏名又は名称】帝人ファーマ株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100150810

【弁理士】

【氏名又は名称】武居 良太郎

(74)【代理人】

【識別番号】100134784

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 和美

(72)【発明者】

【氏名】宮本 英俊

(72)【発明者】

【氏名】野里 久江

(72)【発明者】

【氏名】丸山 明伸

【審査官】 三上 晶子

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１１−５１６４６８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１１−０２０９５０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１２／０２６５６５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１１／００７８９５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１０／０９８４２８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００７／１４８７８７（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ

Ａ６１Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角２θ＝１３．４°、１５．２°、２０．０°、２０．８°、２４．０°、２６．６°、３０．１°、３０．７°、３１．３°、および３３．０°に特徴的なピークを有する、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の結晶（Ａ晶）。

【請求項2】

粉末Ｘ線回折スペクトルが、以下の図１に示すパターンを有する、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の結晶（Ａ晶）。
〔図１〕

【請求項3】

固体ＮＭＲスペクトル（^１３Ｃ）において、化学シフト１２５．８ｐｐｍ、１３４．８ｐｐｍ、１３６．７ｐｐｍ、および１５０．１ｐｐｍに特徴的なピークを有する、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の結晶（Ａ晶）。

【請求項4】

固体ＮＭＲスペクトル（^１３Ｃ）が、以下の図３に示すパターンを有する、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の結晶（Ａ晶）。
〔図２〕

【請求項5】

赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ法）において、波数１３１３ｃｍ^−１、１３２４ｃｍ^−１、および１３９１ｃｍ^−１に特徴的な吸収ピークを有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の結晶（Ａ晶）。

【請求項6】

粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角２θ＝１０．８°、１２．０°、１３．８°、１６．０°、１９．３°、２１．０°、２２．４°、２３．７°、２６．６°、および
３１．２°に特徴的なピークを有する、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の結晶（Ｂ晶）。

【請求項7】

粉末Ｘ線回折スペクトルが、以下の図２に示すパターンを有する、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の結晶（Ｂ晶）。
〔図３〕

【請求項8】

固体ＮＭＲスペクトル（^１３Ｃ）において、化学シフト１６．４ｐｐｍ（ダブルピーク）、１２０．５ｐｐｍ、および１３５．６ｐｐｍに特徴的なピークを有する、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の結晶（Ｂ晶）。

【請求項9】

固体ＮＭＲスペクトル（^１３Ｃ）が、以下の図４に示すパターンを有する、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の結晶（Ｂ晶）。
〔図４〕

【請求項10】

赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ法）において、波数１３２９ｃｍ^−１、１３８２ｃｍ^−１、および１４０１ｃｍ^−１に特徴的な吸収ピークを有する、請求項６〜９のいずれか１項に記載の２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の結晶（Ｂ晶）。

【請求項11】

２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸のアルキルエステルを溶媒に懸濁し、塩基の水溶液を添加して加水分解する工程；および
反応物を中和する工程；
を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の結晶（Ａ晶）の製造方法。

【請求項12】

中和物を冷却しながら撹拌する工程をさらに含む、請求項１１に記載の結晶の製造方法。

【請求項13】

溶媒が、メタノール、エタノール、２−プロパノール、１−ブタノールおよびテトラヒドロフランより選択される単一の有機溶媒、もしくはこれら有機溶媒と水との混合溶媒、または、メタノール、エタノール、２−プロパノールおよび１−ブタノールより選択される２種以上の混合有機溶媒、もしくはこれらの混合有機溶媒と水との混合溶媒である、請求項１１または１２に記載の結晶の製造方法。

【請求項14】

溶媒が、メタノール、エタノール、２−プロパノールおよび１−ブタノールより選択される単一の有機溶媒、またはこれらの単一有機溶媒と水との混合溶媒である、請求項１３に記載の結晶の製造方法。

【請求項15】

溶媒が、エタノールである、請求項１４に記載の結晶の製造方法。

【請求項16】

溶媒が、テトラヒドロフランとエタノールの混合溶媒である、請求項１１または１２に記載の結晶の製造方法。

【請求項17】

請求項１〜１０のいずれか１項に記載の結晶、および製薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。

【請求項18】

請求項１〜１０のいずれか１項に記載の結晶を有効成分として含有する、ＵＲＡＴ１阻害薬。

【請求項19】

請求項１〜１０のいずれか１項に記載の結晶を有効成分として含有する、痛風、高尿酸血症、高血圧症、腎疾患、糖尿病、動脈硬化症、およびレッシュ・ナイハン症候群からなる群より選ばれる一つ以上の疾患の治療薬または予防薬。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、痛風、高尿酸血症等の治療薬または予防薬として有用な、新規ピリジン誘導体の結晶およびその製造方法に関する。

【背景技術】

【0002】

尿酸はプリン体が肝臓で分解されて生じる最終生成物である。生体内の尿酸の主な排泄経路は腎臓であり、約２／３が尿中に排泄され、残りは糞便より排泄される。健常人の血中尿酸値は維持されているが、尿酸産生が過剰になるか、または尿酸排泄が低下することにより高尿酸血症が起こる。

【0003】

血中尿酸値が高い状態となる高尿酸血症は、痛風や尿路結石を引き起こす要因であり、さらに腎障害や、動脈硬化への一因ともいわれている。また近年、血中尿酸値が高いほどメタボリックシンドローム、高血圧等の生活習慣病や、慢性腎臓病などの発症率が高いという研究報告も増えており、これらの疾患の危機因子と認識されつつある。それゆえ、高尿酸血症の改善は、様々な疾患の改善につながることが期待される（非特許文献１）。

【0004】

近年、ヒト腎臓尿酸トランスポーターをコードする遺伝子（ＳＬＣ２２Ａ１２）が同定された。本遺伝子よりコードされるトランスポーター（ｕｒａｔｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ １、ＵＲＡＴ１）はＯＡＴファミリーに属する１２回膜貫通型の分子であり、腎臓特異的にｍＲＮＡが発現し、更にヒト腎臓組織切片での近位尿細管管腔側における局在が認められた。アフリカツメガエル卵母細胞発現系を用いた実験より、ＵＲＡＴ１を介する尿酸取り込みが示された。更に、ＵＲＡＴ１を阻害するプロベネシド（ｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄ）又はベンズブロマロン（ｂｅｎｚｂｒｏｍａｒｏｎｅ）が、高尿酸血症や、痛風等の治療剤又は予防剤として有用であることが報告されている（非特許文献２）。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0005】

【非特許文献1】日本痛風・核酸代謝学会ガイドライン改訂委員会編集 高尿酸血症・痛風の治療ガイドライン 第２版、メディカルレビュー社（２０１０）

【非特許文献2】Ｅｎｏｍｏｔｏ Ａ．ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ４１７， ４４７−４５２ （２００２）

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明の目的は、痛風、高尿酸血症等の治療薬または予防薬として有用な、新規化合物の結晶を提供することである。また、化学的に安定で、かつ医薬原薬として適した結晶を再現性良く製造できる方法を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明者らは上記目的で鋭意研究した結果、下記式（Ｉ）：

【化1】

で表される化合物は結晶化が可能であること、および少なくとも２種類の結晶多形体が存在することを見出した。またそれらの結晶多形体は、結晶化方法によりつくり分けることが可能であることを見出した。

【0008】

すなわち、本発明は、
［１］下記式（Ｉ）：

【化2】

で表される２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の結晶；
［２］結晶がＡ晶である、［１］に記載の結晶；
［３］粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角２θ＝１３．４°、１５．２°、２０．０°、２０．８°、２４．０°、２６．６°、３０．１°、３０．７°、３１．３°、および３３．０°に特徴的なピークを有する、［２］に記載の結晶；
［４］粉末Ｘ線回折スペクトルが、図１に示すパターンを有する、［２］に記載の結晶；
［５］固体ＮＭＲスペクトル（^１３Ｃ）において、化学シフト１２５．８ｐｐｍ、１３４．８ｐｐｍ、１３６．７ｐｐｍ及び１５０．１ｐｐｍに特徴的なピークを有する、［２］に記載の結晶；
［６］固体ＮＭＲスペクトル（^１３Ｃ）が、図３に示すパターンを有する、［２］に記載の結晶；
［７］赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ法）において、波数１３１３ｃｍ^−１、１３２４ｃｍ^−１及び１３９１ｃｍ^−１に特徴的な吸収ピークを有する、［２］に記載の結晶；
［８］赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ法）が、図５に示すパターンを有する、［２］に記載の結晶；
［９］熱重量測定・示差熱分析における吸熱ピークが、２３４℃である、［２］〜［８］のいずれかに記載の結晶；
［１０］結晶がＢ晶である、［１］に記載の結晶；
［１１］粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角２θ＝１０．８°、１２．０°、１３．８°、１６．０°、１９．３°、２１．０°、２２．４°、２３．７°、２６．６°、および３１．２°に特徴的なピークを有する、［１０］に記載の結晶；
［１２］粉末Ｘ線回折スペクトルが、図２に示すパターンを有する、［１０］に記載の結晶；
［１３］固体ＮＭＲスペクトル（^１３Ｃ）において、化学シフト１６．４ｐｐｍ（ダブルピーク）、１２０．５ｐｐｍ及び１３５．６ｐｐｍに特徴的なピークを有する、［１０］に記載の結晶；
［１４］固体ＮＭＲスペクトル（^１３Ｃ）が、図４に示すパターンを有する、［１０］に記載の結晶；
［１５］赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ法）において、波数１３２９ｃｍ^−１、１３８２ｃｍ^−１及び１４０１ｃｍ^−１に特徴的な吸収ピークを有する、［１０］に記載の結晶；
［１６］赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ法）が、図６に示すパターンを有する、［１０］に記載の結晶；
［１７］熱重量測定・示差熱分析における吸熱ピークが、２３６℃である、［１０］〜［１６］のいずれか１項に記載の結晶；
［１８］２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸のアルキルエステルを溶媒に懸濁し、塩基の水溶液を添加して加水分解する工程；および
反応物を中和する工程；
を含む、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の結晶の製造方法；
［１９］中和物を冷却しながら撹拌する工程をさらに含む、［１８］に記載の結晶の製造方法；
［２０］溶媒が、メタノール、エタノール、２−プロパノール、１−ブタノールおよびテトラヒドロフランより選択される単一の有機溶媒、もしくはこれら有機溶媒と水との混合溶媒、または、メタノール、エタノール、２−プロパノールおよび１−ブタノールより選択される２種以上の混合有機溶媒、もしくはこれらの混合有機溶媒と水との混合溶媒である、［１８］または［１９］に記載の結晶の製造方法；
［２１］溶媒が、メタノール、エタノール、２−プロパノールおよび１−ブタノールより選択される単一の有機溶媒、またはこれらの単一有機溶媒と水との混合溶媒である、［２０］に記載の結晶の製造方法；
［２２］溶媒が、エタノールである、［２１］に記載の結晶の製造方法；
［２３］溶媒が、テトラヒドロフランとエタノールの混合溶媒である、［１８］または［１９］に記載の結晶の製造方法；
［２４］［１］〜［１７］のいずれかに記載の結晶、および製薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物；
［２５］［１］〜［１７］のいずれかに記載の結晶を有効成分として含有する、ＵＲＡＴ１阻害薬；ならびに
［２６］［１］〜［１７］のいずれかに記載の結晶を有効成分として含有する、痛風、高尿酸血症、高血圧症、腎疾患、糖尿病、動脈硬化症、およびレッシュ・ナイハン症候群からなる群より選ばれる一つ以上の疾患の治療薬または予防薬；
である。

【発明の効果】

【0009】

本発明により、痛風、高尿酸血症等の治療薬または予防薬として有用なピリジン誘導体の結晶、およびその製造方法が提供される。当該結晶は、医薬品製造用原体として用いることができる。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1】図１は、Ａ晶の粉末Ｘ線回折スペクトルである。

【図2】図２は、Ｂ晶の粉末Ｘ線回折スペクトルである。

【図3】図３は、Ａ晶の固体ＮＭＲスペクトルである。

【図4】図４は、Ｂ晶の固体ＮＭＲスペクトルである。

【図5】図５は、Ａ晶の赤外吸収スペクトルである。

【図6】図６は、Ｂ晶の赤外吸収スペクトルである。

【発明を実施するための形態】

【0011】

本発明の結晶は、粉末Ｘ線回折スペクトル、固体ＮＭＲスペクトル、赤外吸収スペクトル及び／又は熱重量測定・示差熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）等によって特徴付けられる。これらの結晶の粉末Ｘ線回折（ＸＲＤ）スペクトル、固体ＮＭＲスペクトル、赤外吸収スペクトルは特徴的なパターンを示し、それぞれの結晶は特異的な回折角２θの値を有する。また、これらの結晶は、熱重量測定・示差熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）においても、それぞれに特徴的な熱挙動を示す。

【0012】

本発明のＡ晶は、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角２θ＝１３．４°、１５．２°、２０．０°、２０．８°、２４．０°、２６．６°、３０．１°、３０．７°、３１．３°、および３３．０°に特徴的なピークを有する。また、本発明のＡ晶は、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、図１に示すパターンを有する。
本発明のＡ晶は、^１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおいて、化学シフト１２５．８ｐｐｍ、１３４．８ｐｐｍ、１３６．７ｐｐｍ及び１５０．１ｐｐｍにピークを有する。また、本発明のＡ晶は、^１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおいて、図３に示すパターンを有する。
本発明のＡ晶は、赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ法）において、波数１３１３ｃｍ^−１、１３２４ｃｍ^−１及び１３９１ｃｍ^−１に吸収ピークを有する。また、本発明のＡ晶は、赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ法）において、図５に示すパターンを有する。
本発明のＡ晶は、熱重量測定・示差熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）において、２３４℃に吸熱ピークを有する。Ａ晶は無水物晶である。

【0013】

本発明のＢ晶は、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角２θ＝１０．８°、１２．０°、１３．８°、１６．０°、１９．３°、２１．０°、２２．４°、２３．７°、２６．６°、および３１．２°に特徴的なピークを有する。また、本発明のＢ晶は、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、図２に示すパターンを有する。
本発明のＢ晶は、^１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおいて、化学シフト１６．４ｐｐｍ（ダブルピーク）、１２０．５ｐｐｍ及び１３５．６ｐｐｍに特徴的なピークを有する。また、本発明のＢ晶は、^１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおいて、図４に示すパターンを有する。
本発明のＢ晶は、赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ法）において、波数１３２９ｃｍ^−１、１３８２ｃｍ^−１及び１４０１ｃｍ^−１に特徴的な吸収ピークを有する。また、本発明のＢ晶は、赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ法）において、図６に示すパターンを有する。
本発明のＢ晶は、熱重量測定・示差熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）において、２３６℃に吸熱ピークを有する。Ｂ晶は無水物晶である。

【0014】

ここで「特徴的なピーク」とは各々の結晶多形の粉末Ｘ線回折スペクトル、^１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトル、および赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ法）において主に認められるピーク及び固有のピークを意味する。これらのスペクトルのピークにより特定される本発明の結晶には、上記の特徴的なピーク以外のピークを認めるものも含まれる。

【0015】

粉末Ｘ線回折スペクトルにおける回折角２θの位置および相対強度は測定条件によって多少変動しうるものであるため、２θがわずかに異なる場合であっても、適宜スペクトル全体のパターンを参照して結晶形の同一性は認定されるべきであり、かかる誤差の範囲の結晶も本発明に含まれる。２θの誤差としては、例えば、±０．５°の範囲であり、典型的には±０．２°の範囲である。すなわち、上記回折角で特定される結晶には、±０．５°ないし±０．２°の範囲で一致するものも含まれる。
一般に、^１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおける化学シフトも、誤差が生じ得るものである。かかる誤差としては、例えば、±０．５ｐｐｍ、典型的には、±０．２５ｐｐｍの範囲である。すなわち、上記化学シフトで特定される結晶には、±０．２５ｐｐｍないし±０．５ｐｐｍの範囲で一致するものも含まれる。
一般に、赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ法）の吸収ピークも、誤差が生じ得るものである。かかる誤差としては、例えば、±５ｃｍ^−１、典型的には、±２ｃｍ^−１の範囲である。すなわち、上記波数で特定される結晶には、±２ｃｍ^−１ないし±５ｃｍ^−１の範囲で一致するものも含まれる。

【0016】

熱重量測定・示差熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）における吸熱ピークの誤差としては、例えば、±５℃の範囲であり、典型的には±２℃の範囲である。すなわち、上記吸熱ピークで特定される結晶には、±５℃ないし±２℃の範囲で一致するものも含まれる。

【0017】

２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の結晶は、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸のアルキルエステルを溶媒に懸濁し、塩基の水溶液を添加して加水分解する工程；および
反応物を中和する工程；
を含む方法により製造することができる。
また、本発明の結晶の製造方法は、さらに、中和物を冷却しながら撹拌する工程を含むことができる。

【0018】

本発明の結晶は、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸のアルキルエステルをメタノール、エタノール、２−プロパノール、１−ブタノールおよびテトラヒドロフランより選択される１種以上の有機溶媒、またはこれらの有機溶媒と水との混合溶媒をはじめとする反応に不活性な溶媒に懸濁させ、そこに塩基の水溶液を添加することで得られる。Ａ晶の製造に用いられる溶媒としては、メタノール、エタノール、２−プロパノール、１−ブタノール、およびテトラヒドロフランより選択される単一の有機溶媒、もしくはこれら有機溶媒と水との混合溶媒、または、メタノール、エタノール、２−プロパノール、および１−ブタノールより選択される２種以上の混合有機溶媒、もしくはこれらの混合有機溶媒と水との混合溶媒が挙げられる。好ましくはメタノール、エタノール、２−プロパノール、および１−ブタノールより選択される単一の有機溶媒、またはこれらの単一有機溶媒と水との混合溶媒であり、より好ましくはエタノールである。２種以上の溶媒が混合される場合、混合比率は当業者が適宜調整をすることができる。

【0019】

Ｂ晶の製造に用いられる溶媒としては、テトラヒドロフランとエタノールの混合溶媒が挙げられる。テトラヒドロフランとエタノールの混合比率は当業者が適宜調整をすることができるが、１：１が好ましい。

【0020】

２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸のアルキルエステルとしては、Ｃ１〜Ｃ６アルキルエステルが好ましく、エチルエステルがより好ましい。ここで、アルキルエステルとは、直鎖または分岐鎖の脂肪族飽和炭化水素エステルをいう。Ｃ１〜Ｃ６のアルキルエステルとしては、メチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、イソプロピルエステル、ブチルエステル、イソブチルエステル、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、ペンチルエステル、イソペンチルエステル、ヘキシルエステル等を具体例として挙げることができる。

【0021】

２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸のアルキルエステルから２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸への加水分解反応は、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸のアルキルエステルを上記溶媒に懸濁させた後、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸のアルキルエステルに等量、あるいは小過剰の塩基を反応させることで進行する。好ましい塩基としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムを挙げることができる。本反応は０℃から１００℃で進行するが、好ましくは室温から６０℃である。

【0022】

加水分解反応後、使用した塩基と等量、あるいは小過剰の酸を反応させることで中和する。好ましい酸としては、塩酸を挙げることができる。中和反応は０℃から１００℃で進行するが好ましくは０℃から６０℃である。

【0023】

次いで、中和させた反応物を冷却しながら撹拌した後、析出物を濾取、乾燥して結晶を得る。撹拌条件、濾別までの時間は特に限定されないが、それらの条件が結晶の収率、化学純度、粒子径、粒度分布などに影響することがあるので、目的に応じて組み合わせて設定することが好ましい。濾取は通常の方法、例えば自然濾過、加圧濾過、減圧濾過、または遠心分離を用いることができる。乾燥は通常の方法、例えば自然乾燥、減圧乾燥、加熱乾燥、減圧加熱乾燥を用いることができる。

【0024】

２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸のアルキルエステルの合成はいかなる方法で行ってもよいが、下記スキームＡで示したように合成することができる。すなわち、イミダゾール誘導体（Ｖ）をブロモ化して化合物（ＩＶ）を得た後に、塩基およびハライド化合物を用いた反応、もしくはアルコールを用いた光延反応でＮ−アルキル化を行い、化合物（ＩＩＩ）を得る。化合物（ＩＩＩ）とボロン酸誘導体との鈴木カップリング反応により、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸のアルキルエステル（ＩＩ）を得る。かかる化合物（ＩＩ）のエステル基を加水分解することで、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸（Ｉ）を得ることができる。

【0025】

【化3】

【0026】

（スキーム中、Ｒはアルキル基である）。スキームＡにおける化合物（Ｖ）から（ＩＶ）への臭素化の好ましい試薬としては、臭素、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）等を挙げることができる。また本反応における溶媒は特に限定されないが、例えばテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、１，２−ジエトキシエタン等のエーテル類、ジクロロメタン、四塩化炭素等のハロゲン溶媒、アセトニトリル、またはこれらの混合溶媒等が挙げられる。本反応は０℃から１００℃で反応するが、室温から５０℃で行うのが好ましい。

【0027】

化合物（ＩＶ）から化合物（ＩＩＩ）へのＮ−アルキル化は、塩基およびハライド化合物を用いた反応、またはアルコールを用いた光延反応により進行する。塩基およびハライド化合物を用いた場合の塩基としては、炭酸カリウム、炭酸セシウム、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、水素化ナトリウム等を挙げることができるが、このうち好ましい塩基としては炭酸カリウム、炭酸セシウム、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンである。また、ハライド化合物としては、塩化物、臭化物、ヨウ化物が挙げられるが、好ましいハライド化合物としては塩化物、臭化物である。塩基およびハライド化合物存在下での反応温度は、室温から１５０℃が好ましく、より好ましくは５０℃から１２０℃である。また本反応における溶媒は特に限定されないが、例えばテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、１，２−ジエトキシエタン等のエーテル類、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン等のアミド類、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、トルエン、キシレン、またはこれらの混合溶媒等が挙げられる。また化合物（ＩＶ）から化合物（ＩＩＩ）へのＮ−アルキル化は、アルコールとの光延反応でも進行する。光延反応の条件としては、不活性な溶媒中、ホスフィン化合物、縮合剤、アルコール、化合物（ＩＶ）を反応させることで、化合物（ＩＩＩ）が得られる。ホスフィンとしては、トリブチルホスフィン、トリフェニルホスフィン、トリシクロヘキシルホスフィン等が挙げられるが、好ましくはトリフェニルホスフィンである。また好ましい縮合剤としては、アゾジカルボン酸ジエチル（ＤＥＡＤ）またはアゾジカルボン酸ジイソプロピル（ＤＩＡＤ）である。本光延反応の反応温度は、０℃から１００℃のいずれでもよいが、好ましい反応温度としては、室温から８０℃である。また光延反応の溶媒は特に限定されないが、例えばテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、１，２−ジエトキシエタン等のエーテル類、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン等のアミド類、ジクロロメタン等のハロゲン溶媒、トルエン、キシレン、またはこれらの混合溶媒等が挙げられる。

【0028】

化合物（ＩＩＩ）から化合物（ＩＩ）への鈴木カップリング反応は、化合物（ＩＩＩ）とボロン酸誘導体、パラジウム触媒、塩基を、反応に不活性な溶媒中で加熱することで進行する。本反応は、不活性ガス雰囲気下で行うのが好ましい。ボロン酸誘導体としては、ボロン酸、ボロン酸ピナコールエステルを好ましい例として挙げることができる。またパラジウム触媒としては、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（ＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ））、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４）等を用いることが好ましい。また塩基としては、炭酸カリウム、炭酸セシウム、リン酸カリウムを好ましい塩基として挙げることができる。また本反応における溶媒は特に限定しないが、例えばテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、１，２−ジエトキシエタン等のエーテル類、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン等のアミド類、エタノール、２−プロパノール、ブタノール等のアルコール類、トルエン、キシレン、水、またはこれらの混合溶媒を用いるのが良い。本反応は５０℃から１５０℃で進行するが、好ましくは８０℃から１２０℃である。

【0029】

本発明の結晶は、上記反応より得られた２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸を、適当な溶媒に懸濁させて撹拌することによっても得ることができる。かかる溶媒としては、メタノール、エタノール、２−プロパノール、１−ブタノール、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、酢酸、ｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、トルエン、アニソール、および水が挙げられる。本発明のそれぞれの結晶は、特徴的な粉末Ｘ線回折スペクトルや熱重量測定・示差熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）によって他の結晶形と区別できるが、他の結晶形の混入率という点について言及するものではない。特定の結晶を単独で得る場合、少なくとも、これらの測定方法によって検出できない程度の混入であれば許容される。また、医薬としてそれぞれ特定の結晶を原体として使用する場合、他結晶の含有を許容しない趣旨でもない。

【0030】

本発明のそれぞれの結晶は、いずれも医薬の有効成分として用いることができる。また、単独の結晶のみならず、２種以上の混合物で用いることができる。
本発明において、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の結晶を得ることにより、結晶でないものに比べ、製造時の取り扱いや再現性、安定性、また、保存安定性などが有利となる。
本発明の結晶と、医薬上許容される担体を用いて医薬組成物とすることができる。

【0031】

本発明の結晶を含有する製剤は、通常製剤化に用いられる添加剤を用いて調製される。それら添加剤としては、固形製剤の場合、乳糖、白糖、ブドウ糖、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、結晶セルロース、軽質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、及びリン酸水素カルシウム等の賦形剤；結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及びポリビニルピロリドン等の結合剤；デンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、及びカルボキシメチルスターチナトリム等の崩壊剤；タルク、及びステアリン酸類等の滑沢剤；ヒドロキシメチルプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、及びエチルセルロース等のコーティング剤；着色剤；半固形製剤の場合、白色ワセリン等の基剤、液状製剤の場合、エタノール等の溶剤、エタノール等の溶解補助剤、パラオキシ安息香酸エステル類等の保存剤、ブドウ糖等の等張化剤、クエン酸類等の緩衝剤、Ｌ−アスコルビン酸等の抗酸化剤、ＥＤＴＡ等のキレート剤、及びポリソルベート８０等の懸濁化剤・乳化剤、等を挙げることができる。

【0032】

本発明の結晶は、固形製剤、半固形製剤、及び液状製剤等のいずれの剤形、経口剤及び非経口剤（注射剤、経皮剤、点眼剤、坐剤、経鼻剤、および吸入剤等）のいずれの適用製剤であっても使用することができる。

【0033】

本発明の結晶を有効成分として含有する医薬組成物は、ＵＲＡＴ１阻害薬、もしくは痛風、高尿酸血症、高血圧症、間質性腎炎等の腎疾患、糖尿病、動脈硬化症、またはレッシュ・ナイハン症候群等、ＵＲＡＴ１の関与する疾患の治療薬または予防薬として用いることができる。ここで、「予防」とは、未だ罹患または発症をしていない個体において、罹患または発症を未然に防ぐことであり、「治療」とは既に罹患または発症した個体において、疾患や症状を治癒、抑制または改善させることをいう。

【実施例】

【0034】

［測定方法］
本発明の結晶の粉末Ｘ線回折は、以下の条件で測定した。
装置：ブルカー・エイエックスエス製Ｄ８ ＤＩＳＣＯＶＥＲ Ｗｉｔｈ ＧＡＤＤＳ ＣＳ線源：Ｃｕ・Ｋα，波長：１．５４１８３８（１０^−１０ｍ）、４０ｋｖ−４０ｍＡ、入射側平板グラファイトモノクロメータ、コリメータφ３００μｍ、２次元ＰＳＰＣ検出器、スキャン３〜４０°
［測定方法］
本発明の結晶の固体ＮＭＲスペクトルは、以下の条件で測定した。
装置： ブルカー製 ＤＳＸ３００ＷＢ
測定温度： 室温
測定核： １３Ｃ
パルス繰り返し時間： ５秒
パルスモード： ＣＰ／ＭＡＳ測定
［測定方法］
本発明の結晶の赤外吸収スペクトルは、日本薬局方の一般試験法に記載された赤外スペクトル測定法の臭化カリウム錠剤法に従い、以下の条件で測定した。
装置：サーモフィッシャーサイエンティフィック製 ＡＶＡＴＡＲ３２０
測定範囲：４０００〜４００ｃｍ^−１
分解能：４ｃｍ^−１
積算回数：６４

【0035】

本発明の結晶の熱重量測定・示差熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）は、以下の条件で測定した。
装置：リガク製ＴＧ８１２０
昇温速度：毎分１０℃、雰囲気：窒素、サンプルパン：アルミニウム、リファレンス：アルミナ、サンプリング：１．０秒、測定温度範囲：２０〜３００℃

【0036】

［実施例１］
２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸のＡ晶の製造
エチル ２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボキシレート（５．０ｇ，１１．７ｍｍｏｌ）をエタノール（３２．５ｍＬ）に懸濁し、そこに２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１１．７ｍＬ，２３．５ｍｍｏｌ）を加えて６０℃で１時間撹拌し溶解を確認した。反応後、フィルターを通し、水（５．０ｍＬ）で洗浄後、２Ｍ塩酸（１１．７ｍＬ，４．４ｍｍｏｌ）を６０℃で１時間以上かけて添加し中和した。結晶の析出後、６０℃で３０分、室温で３０分、０℃で３０分撹拌後、結晶をろ取した。得られた結晶を水（９０ｍＬ）とエタノール（１０ｍＬ）の混合溶媒で洗浄し、５０℃で終夜減圧乾燥をし、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の結晶を得た。得られた結晶のＸＲＤを図１に示す。回折角２θ＝１３．４°、１５．２°、２０．０°、２０．８°、２４．０°、２６．６°、３０．１°、３０．７°、３１．３°、および３３．０°にピークが観測された。得られた結晶の固体ＮＭＲスペクトルを図３に、赤外吸収スペクトルを図５に示す。また、熱重量測定・示差熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）における吸熱ピークは、２３４℃であった。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１３．１３（１Ｈ，ｓ），８．７０（１Ｈ，ｂｒｓ），８．５５（１Ｈ，ｂｒｓ），８．０２（１Ｈ，ｂｒｓ），７．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．４Ｈｚ），６．６０（１Ｈ，ｂｒｓ），５．６０（２Ｈ，ｓ），２．４９（３Ｈ，ｓ）．

【0037】

［実施例２］
２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸のＢ晶の製造
エチル ２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボキシレート（１．０ｇ，２．３５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（６．５ｍＬ）とエタノール（６．５ｍＬ）の混合溶媒に懸濁し、そこに２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（２．３５ｍＬ，４．７ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で１時間撹拌し溶解を確認した。反応後、フィルターを通し、水（１０ｍＬ）で洗浄後、室温まで冷却し２Ｍ塩酸（２．３５ｍＬ，４．７ｍｍｏｌ）を加えて中和した。結晶の析出後、０℃まで冷却し、３０分撹拌後、結晶をろ取した。得られた結晶を水（４．５ｍＬ）とエタノール（０．５ｍＬ）の混合溶媒で洗浄し、４５℃で終夜減圧乾燥をし、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の結晶（９１７ｍｇ）を得た。得られた結晶のＸＲＤを図２に示す。回折角２θ＝１０．８°、１２．０°、１３．８°、１６．０°、１９．３°、２１．０°、２２．４°、２３．７°、２６．６°、および３１．２°にピークが観測された。得られた結晶の固体ＮＭＲスペクトルを図４に、赤外吸収スペクトルを図６に示す。また、熱重量測定・示差熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）における吸熱ピークは２３６℃であった。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１３．１３（１Ｈ，ｓ），８．７０（１Ｈ，ｂｒｓ），８．５５（１Ｈ，ｂｒｓ），８．０２（１Ｈ，ｂｒｓ），７．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．４Ｈｚ），６．６０（１Ｈ，ｂｒｓ），５．６１（２Ｈ，ｓ），２．４９（３Ｈ，ｓ）．

【0038】

［参考例１］
エチル ２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボキシレートの製造
実施例１、２で使用したエチル ２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボキシレートは下記の方法に従って製造した。

【0039】

【化4】

【0040】

（１）エチル ４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボキシレート（７．５ｇ，４８．７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１２０ｍＬ）に溶解し、そこにＮ−ブロモスクシンイミド（１０．４ｇ，５８．４ｍｍｏｌ）を加えて室温下３時間撹拌した。反応後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで２度抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濃縮後、カラムクロマトグラフィーで精製し、エチル ２−ブロモ−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボキシレート（３．６ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：４．３５（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），２．５１（３Ｈ，ｓ），１．３７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）．

【0041】

（２）（１）に記載のエチル ２−ブロモ−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボキシレート（２．７５ｇ，１１．８１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（３．２６ｇ，２３．６２ｍｍｏｌ）と２，５−ジクロロベンジルブロミド（３．４ｇ，１４．１７ｍｍｏｌ）を加えて９０℃で３時間撹拌した。反応後、水を加え、酢酸エチルで２度抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。濃縮後、カラムクロマトグラフィーで精製し、エチル ２−ブロモ−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボキシレート（１．７２ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：７．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．２０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．４Ｈｚ），６．４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），５．６０（２Ｈ，ｓ），４．２５（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．５６（３Ｈ，ｓ），１．２７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）．

【0042】

（３）エチル ２−ブロモ−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボキシレート（１００ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ）、５−クロロピリジン−３−イルボロン酸（３０ｍｇ，０．５１ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）（２８ｍｇ，０．０３８ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１６６ｍｇ，０．５１ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（０．７１ｍＬ）と水（０．１４ｍＬ）との混合溶媒に溶解し、その溶液を窒素雰囲気下、９５℃で終夜撹拌した。反応後、水を加え、酢酸エチルで２度抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。濃縮後、カラムクロマトグラフィーで精製し、エチル ２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボキシレート（３５ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：８．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），８．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０），７．８９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），７．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．２５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．２，２．６Ｈｚ），６．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０），５．５５（２Ｈ，ｓ），４．２７（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．６４（３Ｈ，ｓ），１．２８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）．

【0043】

［参考例２］
２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の製造
エチル ２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボキシレート（３５ｍｇ，０．０８２４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１ｍＬ）とメタノール（０．５ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、そこに２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（０．２ｍＬ，０．４ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で３時間撹拌した。反応後、２Ｍ塩酸（０．２ｍＬ，０．４ｍｍｏｌ）を加えて中和し、濃縮した。残査を常法により精製し、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸（２２ｍｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），８．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），８．０２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），７．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．３８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．４Ｈｚ），６．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），５．６１（２Ｈ，ｓ），２．５０（３Ｈ，ｓ）．

【0044】

［参考例３］
ヒトＵＲＡＴ１発現細胞を用いた尿酸輸送阻害試験
２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸をＤＭＳＯ（シグマ社製）に２０ｍＭの濃度になるように溶解した後、使用時の目的の濃度に調製して用いた。ヒトＵＲＡＴ１（ｈＵＲＡＴ１）完全長ｃＤＮＡ（Ｏｒｉｇｅｎｅ社製、ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＮＭ＿１４４５８５）を発現ベクターｐＣＭＶ６−Ｋａｎ／Ｎｅｏ（Ｏｒｉｇｅｎｅ社製）にサブクローニングし、リポフェクタミン２０００（インビトロジェン社製）を用いたリポソーム法により、ヒトＵＲＡＴ１遺伝子をヒト胎児腎由来細胞（ＨＥＫ２９３細胞）に導入し、Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ耐性によりヒトＵＲＡＴ１遺伝子を発現したＨＥＫ２９３細胞を選別した。下記方法と同様の方法で、^１４Ｃで標識された尿酸が細胞内に輸送されることを指標に、ヒトＵＲＡＴ１遺伝子が機能を発現していることを確認した。
ヒトＵＲＡＴ１発現ＨＥＫ２９３細胞を、２４穴細胞培養ディッシュに３×１０^５個／ｍＬ／ウェルになるように播種し、１０％ウシ胎児血清を含むダルベッコ改変イーグル培地（Ｄ−ＭＥＭ培地）で３７℃、２日間培養した後、以下の尿酸輸送阻害試験を行った。

【0045】

各ウェルから培地を吸引除去した後、細胞をＨａｎｋｓ’Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＨＢＳＳ）中のＮａＣｌをＮａ−ｇｌｕｃｏｎａｔｅで置換した溶液（以下、ＨＢＳＳ／Ｎａ−ｇｌｕｃｏｎａｔｅ）と置き換え、３７℃で約１０分間プレインキュベーションした。ＨＢＳＳ／Ｎａ−ｇｌｕｃｏｎａｔｅを吸引除去した後、予め３７℃に加温した種々の濃度の化合物と放射性リガンド（^１４Ｃで標識された尿酸；最終濃度２５μＭ）を含む^１４Ｃ−尿酸溶液を添加し、３７℃で５分間インキュベーションし取り込み反応を行った。反応後、^１４Ｃ−尿酸溶液を吸引除去し、氷冷したＨＢＳＳで３回洗浄した。ヒトＵＲＡＴ１発現ＨＥＫ２９３細胞を０．２ｍｏｌ／ＬのＮａＯＨ水溶液で溶解（以下、細胞サンプル）してウェルから採取し、細胞サンプルと液体シンチレーションカクテルＵＬＴＩＭＡ ＧＯＬＤ（パーキンエルマー社製）を混和し、液体シンチレーションカウンター（ベックマン・コールター社製）で放射活性を測定した。
ＵＲＡＴ１特異的な尿酸輸送を示す放射活性（化合物無添加（ＤＭＳＯ添加）でのヒトＵＲＡＴ１発現細胞ＨＥＫ２９３細胞における放射活性）を１００％として、化合物各濃度における尿酸輸送率（％ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ ｕｐｔａｋｅ）を算出し、尿酸輸送率が５０％に阻害される化合物濃度（ＩＣ_５０）を求めた。ＩＣ_５０は０．２μＭ以下であった。

【0046】

［参考例４］
フサオマキザル薬効評価試験
フサオマキザルに０．５％メチルセルロース液に懸濁した２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸（３ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ）をディスポーザブルカテーテル及び注射筒を用いて鼻腔から胃内に投与した。投与前、投与後３０分、１時間、２時間、４時間、８時間、１２時間及び２４時間に血液を、投与直後から４時間、投与後４時間から８時間、投与後８時間から１６時間、投与後１６時間から２４時間の間の尿サンプルを採取した。採取した血液と尿サンプル中の尿酸及びクレアチニンの濃度を自動分析装置（日本電子株式会社）により測定した。尿酸はＬタイプワコーＵＡ・Ｆ（和光純薬工業）、クレアチニンはＬタイプワコークレアチニン・Ｆ（和光純薬工業）を用いて測定した。血中及び尿中の尿酸濃度から尿酸クリアランスを、同様にクレアチニン濃度からクレアチニンクリアランスを算出し、尿酸排泄率を下式により求めた。
尿酸排泄率（％）＝（尿酸クリアランス／クレアチニンクリアランス）×１００
本試験において、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の優れた尿酸排泄促進作用が確認された。

【産業上の利用可能性】

【0047】

本発明の２−（５−クロロピリジン−３−イル）−１−（２，５−ジクロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸の結晶は、医薬品として用いられる。さらに、当該結晶は、医薬品製造用原体として用いることができる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】