特許 6294229 アミン陽イオン性脂質およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6294229

(24)【登録日】2018年2月23日

(45)【発行日】2018年3月14日

(54)【発明の名称】アミン陽イオン性脂質およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C07D 213/74 20060101AFI20180305BHJP

   C07D 239/42 20060101ALI20180305BHJP

   C07D 243/08 20060101ALI20180305BHJP

   C07D 295/03 20060101ALI20180305BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20180305BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20180305BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20180305BHJP

   A61K 9/127 20060101ALI20180305BHJP

   A61K 9/51 20060101ALI20180305BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20180305BHJP

   C12N 15/113 20100101ALI20180305BHJP

【ＦＩ】

   C07D213/74CSP

   C07D239/42 Z

   C07D243/08 502

   C07D295/03

   A61P35/00

   A61K31/713

   A61K47/22

   A61K9/127

   A61K9/51

   A61K9/107

   C12N15/00 GZNA

【請求項の数】31

【全頁数】93

(21)【出願番号】特願2014-537255(P2014-537255)

(86)(22)【出願日】2012年10月18日

(65)【公表番号】特表2015-501309(P2015-501309A)

(43)【公表日】2015年1月15日

(86)【国際出願番号】US2012060875

(87)【国際公開番号】WO2013059496

(87)【国際公開日】20130425

【審査請求日】2015年10月16日

(31)【優先権主張番号】61/548,598

(32)【優先日】2011年10月18日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】511072747

【氏名又は名称】ダイセルナ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＤＩＣＥＲＮＡ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100150142

【弁理士】

【氏名又は名称】相原 礼路

(72)【発明者】

【氏名】ブラウン， ボブ， デール

(72)【発明者】

【氏名】バス， スジット， クマー

(72)【発明者】

【氏名】シュワルツ， デービット

(72)【発明者】

【氏名】フレーザー， アリスター

【審査官】 安孫子 由美

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１０／０５４４０５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第９７／０００２４１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第９８／００５６７８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第９７／００３９３９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第０２／０１６５５２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１１／１４１７０５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１２／０００１０４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００７／１３００７３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００８／００４０５８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１１／０２２４６０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００６／１１８３２７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 米国特許第０３２８８７７４（ＵＳ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２０１０／００５５１６８（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００９／１２９３８５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１０／０３０７３０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１０／０３０７３９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 Meekel, Arthur A. P, et al.，Synthesis of pyridinium amphiphiles used for transfection and some characteristics of amphiphile/DNA complex formation，European Journal of Organic Chemistry，２０００年，(4)，665-673

【文献】 Hopkins, Timothy E.; Wagener, Kenneth B.，Amino Acid and Dipeptide Functionalized Polyolefins，Macromolecules，２００３年，36(7)，2206-2214

【文献】 Hopkins, Timothy E.; Wagener, Kenneth B.，ADMET Synthesis of Polyolefins Targeted for Biological Applications，Macromolecules，２００４年，37(4)，1180-1189

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ，Ａ６１Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ（ＳＴＮ）

ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下の式を有する化合物であって、

【化1】

式中、
各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｃ_{１１−２４}アルキル、Ｃ_{１１−２４}アルケニルまたはＣ_{１１−２４}アルキニルであり、
各ｎ１およびｎ２は、独立して、１から２の整数であり；および
Ｒ^５は、Ｈ、Ｃ_１−６アルキルおよびヘテロシクリルから成る群より選択される、
化合物。

【請求項2】

請求項１に記載の化合物であって、前記化合物は、下記L-5、L-6、L-24、L-28、L-29、L-45およびL-48からなる群より選択される、化合物。

【表1】

【請求項3】

請求項１に記載の化合物を含む製剤であって、
前記製剤は、カチオン性脂質、中性脂質、ステロール誘導体および二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）をさらに含む、製剤。

【請求項4】

請求項１に記載の化合物および薬学的に許容可能な賦形剤を含む、医薬組成物。

【請求項5】

非ヒト対象の疾患を治療する、または予防する方法であって、前記疾患を治療するのに十分な量で、請求項１に記載の化合物を前記対象に投与することを含み、
前記疾患は、肝細胞癌、肺癌、前立腺癌および神経芽細胞腫からなる群より選択される、前記方法。

【請求項6】

非ヒト対象または非ヒト対象由来の細胞における標的核酸の発現を変調する方法であって、前記対象または前記細胞の前記標的遺伝子の発現を低減させるのに十分な量で、請求項１に記載の化合物を前記対象または前記細胞に投与することを含み、
前記標的遺伝子は、随意に、ＡＢＬ１、ＡＲ、β−カテニン、ＢＣＬ１、ＢＣＬ２、ＢＣＬ６、ＣＢＦＡ２、ＣＢＬ、ＣＳＦ１Ｒ、ＥＲＢＡ１、ＥＲＢＡ２、ＥＲＢＢ１、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＴＳ１、ＥＴＳ２、ＥＴＶ６、ＦＧＲ、ＦＯＳ、ＦＹＮ、ＨＣＲ、ＨＲＡＳ、ＪＵＮ、ＫＲＡＳ、ＬＣＫ、ＬＹＮ、ＭＥＴ、ＭＤＭ２、ＭＬＬ１、ＭＬＬ２、ＭＬＬ３、ＭＹＢ、ＭＹＣ、ＭＹＣＬ１、ＭＹＣＮ、ＮＲＡＳ、ＰＩＭ１、ＰＭＬ、ＲＥＴ、ＳＲＣ、ＴＡＬ１、ＴＡＬ２、ＴＣＬ３、ＴＣＬ５、ＹＥＳ、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＭＡＤＨ４、ＭＣＣ、ＮＦ１、ＮＦ２、ＲＢ１、ＴＰ５３、ＷＴ１、ＡｐｏＢ１００、ＣＳＮ５、ＣＤＫ６、ＩＴＧＢ１、ＴＧＦβ１、サイクリンＤ１、ＰＬＫ１、およびＫＩＦ１−結合タンパク質から成る群より選択され、
前記標的遺伝子の発現は、前記対象において低減される、前記方法。

【請求項7】

非ヒト対象または非ヒト対象由来の細胞における標的核酸の発現を変調する方法であって、前記対象または前記細胞の前記標的遺伝子の発現を低減させるのに十分な量で、請求項１に記載の化合物を前記対象または前記細胞に投与することを含み、
前記標的遺伝子は、随意に、ＡＢＬ１、ＡＲ、β−カテニン、ＢＣＬ１、ＢＣＬ２、ＢＣＬ６、ＣＢＦＡ２、ＣＢＬ、ＣＳＦ１Ｒ、ＥＲＢＡ１、ＥＲＢＡ２、ＥＲＢＢ１、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＴＳ１、ＥＴＳ２、ＥＴＶ６、ＦＧＲ、ＦＯＳ、ＦＹＮ、ＨＣＲ、ＨＲＡＳ、ＪＵＮ、ＫＲＡＳ、ＬＣＫ、ＬＹＮ、ＭＥＴ、ＭＤＭ２、ＭＬＬ１、ＭＬＬ２、ＭＬＬ３、ＭＹＢ、ＭＹＣ、ＭＹＣＬ１、ＭＹＣＮ、ＮＲＡＳ、ＰＩＭ１、ＰＭＬ、ＲＥＴ、ＳＲＣ、ＴＡＬ１、ＴＡＬ２、ＴＣＬ３、ＴＣＬ５、ＹＥＳ、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＭＡＤＨ４、ＭＣＣ、ＮＦ１、ＮＦ２、ＲＢ１、ＴＰ５３、ＷＴ１、ＡｐｏＢ１００、ＣＳＮ５、ＣＤＫ６、ＩＴＧＢ１、ＴＧＦβ１、サイクリンＤ１、ＰＬＫ１、およびＫＩＦ１−結合タンパク質から成る群より選択され、
前記標的遺伝子の発現は、前記対象において低減される、前記方法。

【請求項8】

請求項１に記載の化合物であって、Ｒ^５はＣ_１−６アルキルである、化合物。

【請求項9】

下記式を有する、化合物。

【化2】

・・・L-6

【請求項10】

下記式を有する、化合物。

【化3】

・・・L-48

【請求項11】

請求項３に記載の製剤であって、
前記カチオン性脂質は、Ｎ，Ｎ−ジメチル−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）、１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−Ｏ−エチル−３−ホスホコリン（ＤＰｅＰＣ）、１，２−ジオレオイル−３−ジメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＤＡＰ）、および１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＴＡＰ）から成る群より選択され、
前記中性脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２−ジオレオイル−グリセロ−ｓｎ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、およびスフィンゴミエリン（ＳＭ）から成る群より選択される、製剤。

【請求項12】

請求項３に記載の製剤であって、前記カチオン性脂質は、ＤＯＤＭＡであり、前記中性脂質は、ＤＳＰＣである、製剤。

【請求項13】

請求項３に記載の製剤であって、前記製剤は、ＰＥＧ−脂質複合体をさらに含む、製剤。

【請求項14】

請求項１３に記載の製剤であって、
前記ＰＥＧ−脂質複合体は、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロｌ−３−（メトキシ−ポリエチレングリコール）（ＰＥＧ−ＤＭＧ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（カルボニル−メトキシ−ポリエチレングリコール）（ＰＥＧ−ＤＭＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（カルボニル−メトキシ−ポリエチレングリコール）（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（カルボニル−メトキシ−ポリエチレングリコール）（ＰＥＧ−ＤＰＰＥ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロｌ−３−（メトキシ−ポリエチレングリコール）（ＰＥＧ−ＤＰＧ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（カルボニル−メトキシ−ポリエチレングリコール）（ＰＥＧ−ＤＯＰＥ）、および１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロｌ−３−（メトキシ−ポリエチレングリコール）（ＰＥＧ−ＤＯＧ）から成る群より選択される、製剤。

【請求項15】

請求項１３に記載の製剤であって、前記ＰＥＧ−脂質複合体は、ＰＥＧ−ＤＭＰＥまたはＰＥＧ−ＤＳＰＥである、製剤。

【請求項16】

請求項３に記載の製剤であって、
前記ステロール誘導体は、コレステロール、コレスタノン、コレステノン、コプロスタノール、３β−［−（Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−コレステロール）、グアニジウム−トレン−コレステロール（ＢＧＴＣ）、（２Ｓ，３Ｓ）−２−（（（３Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１７Ｒ）−１０，１３−ジメチル−１７−（（Ｒ）−６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イルオキシ）カルボニルアミノ）エチル２，３，４，４−テトラヒドロキシルオキシ）カルボニルアミノ）エチル２，３，４，４−テトラヒドロキシ（ＤＰＣ−１）、（２Ｓ，３Ｓ）−（（３Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１７Ｒ）−１０，１３−ジメチル−１７−（（Ｒ）−６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル）２，３，４，４−テトラヒドロキシブタノエート（ＤＰＣ−２）、ビス（（３Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１７Ｒ）−１０，１３−ジメチル−１７−（（Ｒ）−６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３、１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル）２，３，４−トリヒドロキシペンタンジオエート（ＤＰＣ−３）、および６−（（（３Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１７Ｒ）−１０，１３−ジメチル−１７−（（Ｒ）−６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イルオキシ）オキシドホスホリルオキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロキシヘキサノエート（ＤＰＣ−４）から成る群より選択される、製剤。

【請求項17】

請求項３に記載の製剤であって、前記ステロール誘導体は、コレステロールである、製剤。

【請求項18】

請求項１３に記載の製剤であって、２０モル％から２５モル％の請求項１に記載の化合物、２０モル％から３０モル％のカチオン性脂質、２モル％から８モル％のＰＥＧ−脂質複合体、１０モル％から２０モル％の中性脂質および約２５モル％から３５モル％のステロール誘導体を含む、製剤。

【請求項19】

請求項１３に記載の製剤であって、２２モル％の請求項１に記載の化合物、２６モル％のカチオン性脂質、５モル％から９モル％のＰＥＧ−脂質複合体、１４モル％の中性脂質および２９モル％から３３モル％のステロール誘導体を含む、製剤。

【請求項20】

請求項３に記載の製剤であって、トランスフェクション脂質を含む脂質粒子をさらに含む、製剤。

【請求項21】

請求項１３に記載の製剤であって、前記ｄｓＲＮＡは、１０モル％から４０モル％の１つ以上のカチオン性脂質および０．５モル％から１０モル％の１つ以上のＰＥＧ−脂質を含む、製剤。

【請求項22】

請求項２０に記載の製剤であって、前記トランスフェクション脂質は、５モル％から２０モル％の中性脂質、０．５モル％から１０モル％のＰＥＧ−脂質複合体および２０モル％から４０モル％のステロール誘導体を含む、製剤。

【請求項23】

請求項３に記載の製剤であって、前記ｄｓＲＮＡは、１０から４０個のヌクレオチド、１６から３０個のヌクレオチド、１９から２９個のヌクレオチド、２５から３５個のヌクレオチドおよび８から５０個のヌクレオチドからなる群より選択される長さを有する、製剤。

【請求項24】

請求項３に記載の製剤であって、前記製剤は、前記製剤に存在する総脂質に対して、１：１０（重量／重量）から１：１００（重量／重量）比の前記ｄｓＲＮＡを含む、製剤。

【請求項25】

請求項３に記載の製剤であって、リポソーム、リポプレックスまたはミセルをさらに含む、製剤。

【請求項26】

請求項２５に記載の製剤であって、前記リポソームは、脂質ナノ粒子である、製剤。

【請求項27】

請求項１に記載の化合物を含む製剤であって、前記製剤は、カチオン性脂質、中性脂質、ステロール誘導体、ＰＥＧ−脂質複合体、１つ以上のＲＮＡ結合剤を含む脂質粒子、トランスフェクション脂質、ｄｓＲＮＡ、リポソーム、リポプレックスおよびミセルからなる群より選択される１つ以上の成分をさらに含む、製剤。

【請求項28】

請求項１に記載の化合物であって、各Ｒ^１およびＲ^２は、Ｃ_{１１−２４}アルケニルである、化合物。

【請求項29】

請求項２８に記載の化合物であって、Ｒ^５は、Ｃ_１−６アルキルである、化合物。

【請求項30】

請求項２９に記載の化合物であって、前記Ｃ_１−６アルキルは、メチルである、化合物。

【請求項31】

請求項１に記載の化合物であって、
各Ｒ^１およびＲ^２は、Ｃ_{１１−２４}アルケニルであり、
下記式

【化4】

は、下記H-6、H-5、H-28、H-31、H-32およびH-37からなる群より選択される、化合物。

【表2】

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本願は、その開示がその全体で参照することにより本明細書に組み込まれる、２０１１年１０月１８日に出願された米国仮出願第６１／５４８，５９８号の利益を主張する。

【0002】

本発明は、部分的に、アミン陽イオン性脂質化合物、ならびにその製剤、および細胞への核酸分子等の治療薬の送達におけるそれらの使用に関する。

【背景技術】

【0003】

核酸分子は、それらのサイズおよび親水性により、容易に細胞膜を横断することができない。したがって、送達が、核酸治療学、例えば、アンチセンスペイロードおよびＲＮＡｉ技術にとって、主要な課題であった。全身投与後にリボヌクレアーゼＨ活性またはＲＮＡｉ活性をトリガするために、核酸分子を含有する製剤は、（１）酵素的および非酵素的分解からペイロードを保護し、（２）製剤の適切な生体内分布を提供するだけでなく、（３）製剤の細胞取り込みまたは内部化を可能にし、（４）細胞の細胞質への核酸ペイロードの送達を促進しなければならない。上記の基準１および２に優れている多くの製剤は、基準３および４に欠けており、したがって、多くの核酸製剤は、優れた生体内分布を示すが、全身送達および局所送達の欠如により、標的遺伝子を分解することができない。

【0004】

したがって、ＲＮＡｉ剤等の治療薬の送達のために新しい化合物の必要性がある。具体的には、陽イオン性脂質の役割を果たすことが可能な化合物は、核酸ペイロードを細胞に送達するために、脂質粒子製剤で使用されてもよい。

【発明の概要】

【0005】

我々は、１つ以上の治療薬を送達するための、アミノアミンおよびアミノアミド陽イオン性脂質を含む、新規のアミン系脂質化合物、ならびにその製剤を開発した。具体的には、ポリアニオン系ペイロードまたはアンチセンスペイロード（例えば、核酸分子またはＲＮＡｉ剤）を細胞に送達し、標的遺伝子を抑制するために、本発明の化合物（例えば、式（Ｉ）またはＩＩ（ａ）−ＩＩ（ｋ）の化合物）を使用することができる。

【0006】

１つの態様では、本発明は、以下の式

【化1】

またはその薬学的に容認可能な塩を有する、化合物を特色とし、
各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルケニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルケニル、または随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキニルであり、Ｒ^１およびＲ^２は、＞ＣＨＮＲ^３Ｒ^４に隣接する炭素上のオキソと置換されず、
Ｒ^３は、Ｈまたは随意に置換されたＣ_１−６アルキルであり、
Ｒ^４は、−ＮＲ^４ａＲ^４ｂと置換される非置換Ｃ_１−６アルキル、−ＮＲ^４ａＲ^４ｂとさらに置換される置換Ｃ_１−６アルキル、または随意に置換されたＣ_３−７ヘテロシクリルであり、各Ｒ^４ａおよびＲ^４ｂは、独立して、Ｈ、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、または随意に置換されたＣ_１−６アルキルであり、またはＲ^４ａおよびＲ^４ｂは、随意に置換されたＣ_３−７ヘテロシクリルを形成するようにともに合体し、Ｒ^３およびＲ^４は、随意に置換されたＣ_３−７ヘテロシクリルを形成するようにともに合体することができ、
Ｒ^３およびＲ^４は、随意に置換されたイミダゾリル、または随意に置換されたベンズイミダゾリル、または随意に置換されたスクシンイミジルを形成するようにともに合体せず、１つ、および１つだけの１級アミンが、Ｒ^３またはＲ^４のいずれか一方の上に存在することができ、またはいかなる１級アミンも、Ｒ^３またはＲ^４のいずれか一方の上に存在せず、Ｒ^３もＲ^４も、随意に置換されたアミドではなく、
Ｒ^１またはＲ^２が、飽和Ｃ_１１アルキルまたは飽和Ｃ_１５アルキルであるとき、Ｒ^３は、Ｈではなく、Ｒ^１またはＲ^２が、飽和Ｃ_１６アルキルまたは飽和Ｃ_１７アルキルであるとき、Ｒ^１およびＲ^２は、ヒドロキシと置換されず、Ｒ^１またはＲ^２が、飽和Ｃ_１７アルキルであるとき、Ｒ^３またはＲ^４は、ヒドロキシと置換されず、Ｒ^１またはＲ^２が、飽和Ｃ_１８アルキルであるとき、Ｒ^４は、随意に置換されたイミダゾリルと置換されない。

【0007】

いくつかの実施形態では、Ｒ^３は、−ＮＲ^３ａＲ^３ｂと置換されたＣ_１−６アルキルであり、各Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは、独立して、Ｈまたは随意に置換されたＣ_１−６アルキルである。特定の実施形態では、各Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは、独立して、ＨまたはＣ_１−６アルキルである。

【0008】

いくつかの実施形態では、Ｒ^４は、−ＮＲ^４ａＲ^４ｂと置換される非置換Ｃ_１−６アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ^４は、置換Ｃ_１−６アルキル（例えば、置換Ｃ_１−３アルキル、置換Ｃ_１−２アルキル、置換Ｃ_１アルキル、置換Ｃ_２アルキル、または置換Ｃ_３アルキル）、または−ＮＲ^４ａＲ^４ｂとさらに置換される置換Ｃ_１−６アミノアルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^４は、オキソと置換されたＣ_１−６アルキルであり、−ＮＲ^４ａＲ^４ｂとさらに置換される。いくつかの実施形態では、Ｒ^４ａおよびＲ^４ｂは、随意に置換されたＣ_３−７ヘテロシクリル（例えば、随意に置換されたピロリジニル、随意に置換されたイミダゾリジニル、随意に置換されたピラゾリジニル、随意に置換されたピペリジニル、随意に置換されたピペラジニル、随意に置換されたアゼパニル、随意に置換されたピロリル、随意に置換されたイミダゾリル、または随意に置換されたピラゾリル）を形成するようにともに合体する。いくつかの実施形態では、各Ｒ^４ａおよびＲ^４ｂは、独立して、随意に置換されたＣ_１−６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^４は、随意に置換されたＣ_３−７ヘテロシクリルと置換される非置換Ｃ_１−６アルキルである（例えば、本明細書で説明されるいずれか）。いくつかの実施形態では、Ｒ^４は、（例えば、オキソを伴う）置換Ｃ_１−６アルキル、または随意に置換されたＣ_３−７ヘテロシクリル（例えば、随意に置換されたピロリジニル、随意に置換されたイミダゾリジニル、随意に置換されたピラゾリジニル、随意に置換されたピペリジニル、随意に置換されたピペラジニル、随意に置換されたアゼパニル、随意に置換されたピロリル、随意に置換されたイミダゾリル、随意に置換されたピラゾリル、随意に置換されたピリジニル、随意に置換されたピラジニル、随意に置換されたピリミジニル、または随意に置換されたピリダジニル）とさらに置換されるＣ_１−６アミノアルキルである。

【0009】

いくつかの実施形態では、Ｒ^３およびＲ^４は、随意に置換されたＣ_３−７ヘテロシクリル（例えば、随意に置換されたピロリジニル、随意に置換されたイミダゾリジニル、随意に置換されたピラゾリジニル、随意に置換されたピペリジニル、随意に置換されたピペラジニル、随意に置換されたアゼパニル、随意に置換されたピロリル、随意に置換されたイミダゾリル、随意に置換されたピラゾリル、随意に置換されたピリジニル、随意に置換されたピラジニル、随意に置換されたピリミジニル、または随意に置換されたピリダジニル）を形成するようにともに合体する。

【0010】

いくつかの実施形態では、本化合物は、以下の式

【化2】

またはその薬学的に容認可能な塩を有し、各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルケニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルケニル、または随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキニルであり、各ｎ１およびｎ２は、独立して、０から２の整数であり（例えば、ｎ１およびｎ２は、両方とも１であり、またはｎ１は、１であり、ｎ２は、２であり）、Ｒ^５は、Ｈ、随意に置換されたＣ_１−６アルキル、および随意に置換されたヘテロシクリル（例えば、非置換Ｃ_１−６アルキル、または随意に置換されたピロリル、随意に置換されたイミダゾリル、随意に置換されたピラゾリル、随意に置換されたピリジニル、随意に置換されたピラジニル、随意に置換されたピリミジニル、あるいは随意に置換されたピリダジニルと置換されたＣ_１−６アルキル）から成る群より選択される。いくつかの実施形態では、本化合物は、Ｌ−２、Ｌ−５、Ｌ−６、Ｌ−２２、Ｌ−２３、Ｌ−２４、Ｌ−２５、Ｌ−２６、Ｌ−２８、Ｌ−２９、Ｌ−４５、およびＬ−４８、またはその薬学的に容認可能な塩から成る群より選択される。

【0011】

いくつかの実施形態では、本化合物は、以下の式

【化3】

またはその薬学的に容認可能な塩を有し、各Ｒ^１およびＲ^２は、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルケニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルケニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキニルであり、各ｎ１およびｎ２は、独立して、０から２の整数であり（例えば、ｎ１およびｎ２は、両方とも１であり、またはｎ１は、１であり、ｎ２は、２であり）、Ｒ^５は、Ｈ、随意に置換されたＣ_１−６アルキル、および随意に置換されたヘテロシクリル（例えば、非置換Ｃ_１−６アルキル、または随意に置換されたピロリル、随意に置換されたイミダゾリル、随意に置換されたピラゾリル、随意に置換されたピリジニル、随意に置換されたピラジニル、随意に置換されたピリミジニル、または随意に置換されたピリダジニルと置換されたＣ_１−６アルキル）から成る群より選択される。いくつかの実施形態では、本化合物は、Ｌ−２７およびＬ−４７、またはその薬学的に容認可能な塩から成る群より選択される。

【0012】

本明細書で説明される任意の式（例えば、式（Ｉ）、（ＩＩａ）、および（ＩＩｂ））に対するいくつかの実施形態では、Ｒ^５は、ＮＲ^５ａＲ^５ｂと置換されたＣ_１−６アルキルであり、各Ｒ^５ａおよびＲ^５ｂは、独立して、Ｈ、随意に置換されたＣ_１−６アルキル（例えば、随意に置換されたＣ_１−６アルキル）であり、Ｒ^５ａおよびＲ^５ｂは、随意に置換されたＣ_３−７ヘテロシクリルを形成するようにともに合体することができる。いくつかの実施形態では、Ｒ^５は、随意に置換されたヘテロシクリル（例えば、随意に置換されたピロリジニル、随意に置換されたイミダゾリジニル、随意に置換されたピラゾリジニル、随意に置換されたピペリジニル、随意に置換されたピペラジニル、随意に置換されたアゼパニル、随意に置換されたピロリル、随意に置換されたイミダゾリル、随意に置換されたピラゾリル、随意に置換されたピリジニル、随意に置換されたピラジニル、随意に置換されたピリミジニル、または随意に置換されたピリダジニル）である。

【0013】

いくつかの実施形態では、本化合物は、以下の式

【化4】

またはその薬学的に容認可能な塩を有し、各Ｒ^１およびＲ^２は、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルケニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルケニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキニルであり、各ｎ１およびｎ２は、独立して、０から２の整数である（例えば、ｎ１およびｎ２は、両方とも１であり、またはｎ１は、１であり、ｎ２は、２である）。いくつかの実施形態では、本化合物は、Ｌ−４６またはその薬学的に容認可能な塩である。

【0014】

いくつかの実施形態では、本化合物は、以下の式

【化5】

またはその薬学的に容認可能な塩を有し、各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルケニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルケニル、または随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキニルであり、Ｒ^３は、Ｈまたは随意に置換されたＣ_１−６アルキルであり、Ｌ^１は、随意に置換されたＣ_１−６アルキレンであり、各Ｒ^５およびＲ^６は、独立して、Ｈまたは随意に置換されたＣ_１−６アルキルであり、またはＲ^５およびＲ^６は、随意に置換されたＣ_３−７ヘテロシクリルを形成するようにともに合体する。

【0015】

いくつかの実施形態では、本化合物は、以下の式

【化6】

またはその薬学的に容認可能な塩を有し、各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルケニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルケニル、または随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキニルであり、Ｒ^３は、Ｈまたは随意に置換されたＣ_１−６アルキルであり、Ｌ^１は、随意に置換されたＣ_１−６アルキレンであり、各Ｒ^５およびＲ^６は、独立して、Ｈまたは随意に置換されたＣ_１−６アルキルであり、またはＲ^５およびＲ^６は、随意に置換されたＣ_３−７ヘテロシクリルを形成するようにともに合体する。

【0016】

式（ＩＩｄ）または（ＩＩｅ）のいくつかの実施形態では、Ｒ^５およびＲ^６は、随意に置換されたピロリジニル、随意に置換されたイミダゾリジニル、随意に置換されたピラゾリジニル、随意に置換されたピペリジニル、随意に置換されたピペラジニル、または随意に置換されたアゼパニルを形成するように合体する。

【0017】

いくつかの実施形態では、本化合物は、Ｌ−１、Ｌ−３、Ｌ−４、Ｌ−７、Ｌ−９、Ｌ−１０、Ｌ−１１、Ｌ−１２、Ｌ−１５、Ｌ−１６、Ｌ−１７、Ｌ−１８、Ｌ−１９、Ｌ−３０、Ｌ−３１、Ｌ−３２、Ｌ−３３、Ｌ−３４、Ｌ−４２、Ｌ−４３、およびＬ−４９、または薬学的に容認可能な塩から成る群より選択される。

【0018】

いくつかの実施形態では、本化合物は、以下の式

【化7】

あるいはその薬学的に容認可能な塩を有し、各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルケニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルケニル、または随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキニルであり、Ｒ^３は、Ｈまたは随意に置換されたＣ_１−６アルキルであり、Ｌ^１は、随意に置換されたＣ_１−６アルキレンであり、各ｎ３およびｎ４は、独立して、０から２の整数であり、Ｒ^５は、Ｈまたは随意に置換されたＣ_１−６アルキルである。

【0019】

いくつかの実施形態では、本化合物は、Ｌ−１４、Ｌ−２１、およびＬ−３６、またはその薬学的に容認可能な塩から成る群より選択される。

【0020】

本明細書で説明される任意の式（例えば、式（ＩＩｄ）−（ＩＩｊ）、例えば、式（ＩＩｄ）−（ＩＩｇ））のいくつかの実施形態では、Ｒ^３は、−ＮＲ^３ａＲ^３ｂと置換されたＣ_１−６アルキルであり、各Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは、独立して、Ｈまたは随意に置換されたＣ_１−６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^３は、非置換Ｃ_１−６アルキルである。

【0021】

本明細書で説明される任意の式（例えば、式（ＩＩｄ）−（ＩＩｊ）、例えば、式（ＩＩｄ）−（ＩＩｇ））のいくつかの実施形態では、Ｌ^１は、メチル、エチル、プロピル、または−ＮＲ^ＬａＲ^Ｌｂと置換されたＣ_１−６アルキレンであり、各Ｒ^ＬａおよびＲ^Ｌｂは、独立して、Ｈまたは随意に置換されたＣ_１−６アルキルである。

【0022】

いくつかの実施形態では、本化合物は、以下の式

【化8】

またはその薬学的に容認可能な塩を有し、各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルケニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルケニル、または随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキニルであり、Ｒ^３は、Ｈまたは随意に置換されたＣ_１−６アルキルであり、Ｌ^１は、随意に置換されたＣ_１−６アルキレンであり、Ｒ^５は、Ｈまたは随意に置換されたＣ_１−６アルキルである。

【0023】

いくつかの実施形態では、Ｌ^１は、第４位においてイミダゾリル基に結合される。

【0024】

いくつかの実施形態では、本化合物は、Ｌ−８、Ｌ−１３、Ｌ−２０、Ｌ−３５、およびＬ−４４、またはその薬学的に容認可能な塩から成る群より選択される。

【0025】

いくつかの実施形態では、本化合物は、以下の式

【化9】

あるいはその薬学的に容認可能な塩を有し、各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルケニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルケニル、または随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキニルであり、Ｒ^３は、Ｈまたは随意に置換されたＣ_１−６アルキルであり、Ｌ^１は、随意に置換されたＣ_１−６アルキレンであり、各Ｒ^５およびＲ^６は、独立して、Ｈまたは随意に置換されたＣ_１−６アルキルである。

【0026】

いくつかの実施形態では、本化合物は、以下の式

【化10】

またはその薬学的に容認可能な塩を有し、各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルケニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルケニル、または随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキニルであり、Ｒ^３は、Ｈまたは随意に置換されたＣ_１−６アルキルであり、
各Ｒ^５およびＲ^６は、独立して、Ｈまたは随意に置換されたＣ_１−６アルキルである。

【0027】

本明細書で説明される任意の式（例えば、式（ＩＩｄ）−（ＩＩｋ）、例えば、式（ＩＩｉ）−（ＩＩｋ））のいくつかの実施形態では、各Ｒ^５およびＲ^６は、独立して、−ＮＲ^５ａＲ^５ｂと置換されたＣ_１−６アルキルであり、各Ｒ^５ａおよびＲ^５ｂは、独立して、Ｈまたは随意に置換されたＣ_１−６アルキルである。

【0028】

いくつかの実施形態では、本化合物は、Ｌ−３７、Ｌ−３８、Ｌ−３９、Ｌ−４０、およびＬ−４１、またはその薬学的に容認可能な塩から成る群より選択される。

【0029】

本明細書で説明される任意の式（例えば、式（ＩＩｄ）−（ＩＩｋ））のいくつかの実施形態では、Ｌ^１は、随意に置換されたＣ_１−６アルキレンである。

【0030】

本明細書で説明される任意の式（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩａ）−（ＩＩｋ））のいくつかの実施形態では、Ｒ^３は、随意に置換されたＣ_１−６アルキルである。いくつかの実施形態では、各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、直線および分岐形態を含む、非置換Ｃ_{１１−２４}アルケニルまたは非置換Ｃ_{１１−２４}ヘテロアルケニルである（例えば、各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、１つ以上の二重結合を含有する、非置換Ｃ_{１１−２４}アルケニルまたは非置換Ｃ_{１１−２４}ヘテロアルケニルである）。いくつかの実施形態では、Ｒ^１またはＲ^２のうちの１つは、飽和Ｃ_{１１−２４}アルキルではない。いくつかの実施形態では、Ｒ^１およびＲ^２の両方は、飽和Ｃ_{１１−２４}アルキルではない。いくつかの実施形態では、各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、リノレニル（Ｃ１８：３）、リノレニルオキシ（Ｃ１８：３）、リノレノイル（Ｃ１８：３）、リノレイル（Ｃ１８：２）、リノレイルオキシ（Ｃ１８：２）、リノレオイル（Ｃ１８：２）、オレイル（Ｃ１８：１）、オレイルオキシ（１８：１）、オレイルオキシメチレン（１８：１）、オレオイル（Ｃ１８：１）、オレオイルメチレン（Ｃ１８：１）、ステアリル（Ｃ１８：０）、ステアリルオキシ（Ｃ１８：０）、ステアロイル（Ｃ１８：０）、パルミチル（Ｃ１６：０）、パルミチルオキシ（Ｃ１６：０）、パルミトイル（Ｃ１６：０）、パルミトイルメチレン（Ｃ１６：０）、ミリスチル（Ｃ１４：０）、ミリスチルオキシ（Ｃ１４：０）、ミリストイル（Ｃ１４：０）、ラウリル（Ｃ１２：０）、ラウリルオキシ（Ｃ１２：０）、およびラウロイル（Ｃ１２：０）から成る群より選択され、例えば、リノレイル（Ｃ１８：２）またはオレイル（Ｃ１８：１）である。いくつかの実施形態では、Ｒ^１およびＲ^２は、同一であるか、または異なる。

【0031】

本明細書で説明される任意の式（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩａ）−（ＩＩｋ））のいくつかの実施形態では、Ｒ^３およびＲ^４の両方ではないが、Ｒ^３またはＲ^４は、１級アミンと置換される。いくつかの実施形態では、Ｒ^３およびＲ^４の両方は、１級アミンと置換されない。

【0032】

本明細書で説明される任意の式（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩａ）−（ＩＩｋ））のいくつかの実施形態では、Ｒ^３およびＲ^４は、それらが付着しているＮとともに、表２および３からのＨ−１からＨ−５２のうちの１つの頭部基を含む。いくつかの実施形態では、各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、リノレニル（Ｃ１８：３）、リノレニルオキシ（Ｃ１８：３）、リノレノイル（Ｃ１８：３）、リノレイル（Ｃ１８：２）、リノレイルオキシ（Ｃ１８：２）、リノレオイル（Ｃ１８：２）、オレイル（Ｃ１８：１）、オレイルオキシ（１８：１）、オレイルオキシメチレン（１８：１）、オレオイル（Ｃ１８：１）、オレオイルメチレン（Ｃ１８：１）、ステアリル（Ｃ１８：０）、ステアリルオキシ（Ｃ１８：０）、ステアロイル（Ｃ１８：０）、パルミチル（Ｃ１６：０）、パルミチルオキシ（Ｃ１６：０）、パルミトイル（Ｃ１６：０）、パルミトイルメチレン（Ｃ１６：０）、ミリスチル（Ｃ１４：０）、ミリスチルオキシ（Ｃ１４：０）、ミリストイル（Ｃ１４：０）、ラウリル（Ｃ１２：０）、ラウリルオキシ（Ｃ１２：０）、およびラウロイル（Ｃ１２：０）から成る群より選択され、例えば、各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、リノレイル（Ｃ１８：２）またはオレイル（Ｃ１８：１）である。

【0033】

別の態様では、本発明の化合物は、Ｒ^１Ｒ^２−ＣＨ−Ａを含み、Ｒ^１およびＲ^２は、尾部基（例えば、本明細書、例えば、表４で説明されるいずれか）であり、Ａは、頭部基（例えば、本明細書、例えば、表２および３で説明されるいずれか）である。いくつかの実施形態では、頭部基は、Ｈ−１からＨ−５２のうちの１つ、例えば、Ｈ−２、Ｈ−５、Ｈ−６、Ｈ−１９、Ｈ−２６、またはＨ−４３、例えば、Ｈ−５またはＨ−４３）である。

【0034】

別の態様では、本発明の化合物は、表１で提供される任意の化合物、またはその薬学的に容認可能な塩である。

【0035】

１つの態様では、本発明は、本明細書で説明される任意の化合物（例えば、表１で提供される１つ以上の化合物）、またはその薬学的に容認可能な塩を含む、製剤を特色とする。

【0036】

いくつかの実施形態では、本製剤は、本化合物のうちの２つ以上、例えば、本化合物のうちの２つ、３つ、４つ、５つ、５つ、６つ、７つ以上を含む。

【0037】

いくつかの実施形態では、本製剤は、約１０％から約８０％の本化合物、例えば、約１０％から約１５％、約１０％から約２０％、約１０％から約２５％、約１０％から約３０％、約１０％から約３５％、約１５％から約２０％、約１５％から約２５％、約１５％から約３０％、約１５％から約３５％、約１５％から約４０％、約２０％から約２５％、約２０％から約３０％、約２０％から約３５％、約２０％から約４０％、約２５％から約３０％、約２５％から約３５％、約２５％から約４０％、約３０％から約３５％、約３０％から約４０％、または約３５％から約４０％の本発明の１つ以上の化合物を含む。

【0038】

いくつかの実施形態では、本製剤はさらに、陽イオン性脂質（例えば、ＤＯＤＭＡ、ＤＯＴＭＡ、ＤＰｅＰＣ、ＤＯＤＡＰ、またはＤＯＴＡＰと、中性脂質（例えば、ＤＳＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＯＰＥ、またはＳＭ）と、随意に、ステロール誘導体（例えば、コレステロール、コレスタノン、コレステノン、コプロスタノール、３β−［−（Ｎ−（Ｎ′，Ｎ′−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル）コレステロール（ＤＣ−コレステロール）、ビス−グアニジウム−トレン−コレステロール（ＢＧＴＣ）、（２Ｓ，３Ｓ）−２−（（（３Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１７Ｒ）−１０，１３−ジメチル１７−（（Ｒ）−６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イルオキシ）カルボニルアミノ）エチル２，３，４，４−テトラヒドロキシブタノエート（ＤＰＣ−１）、（２Ｓ，３Ｓ）−（（３Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１７Ｒ）−１０，１３−ジメチル−１７−（（Ｒ）−６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル）２，３，４，４−テトラヒドロキシブタノエート（ＤＰＣ−２）、ビス（（３Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１７Ｒ）−１０，１３−ジメチル１７−（（Ｒ）−６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル）２，３，４−トリヒドロキシペンタンジオエート（ＤＰＣ−３）、または６−（（（３Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１７Ｒ）−１０，１３−ジメチル１７−（（Ｒ）−６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イルオキシ）オキシドホスホリルオキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロキシヘキサノエート（ＤＰＣ−４）］とを含む。いくつかの実施形態では、本製剤はさらに、ＰＥＧ−脂質複合体（例えば、ＰＥＧ−ＤＭＧ、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ、ＰＥＧ−ＤＳＰＥ、ＰＥＧ−ＤＰＰＥ、ＰＥＧ−ＤＰＧ、ＰＥＧ−ＤＯＰＥ、およびＰＥＧ−ＤＯＧ）を含む。

【0039】

いくつかの実施形態では、本製剤は、約１０モル％から約４０モル％の本発明の１つ以上の化合物（例えば、本明細書、例えば、表１で説明される任意の化合物のうちの１つ以上）、約１０モル％から約４０モル％の１つ以上の陽イオン性脂質または本発明の１つ以上の化合物（例えば、本明細書、例えば、表１で説明される任意の化合物のうちの１つ以上）、約１モル％から約２０モル％の１つ以上のＰＥＧ−脂質複合体、約５モル％から約２０モル％の１つ以上の中性脂質、および約２０モル％から約４０モル％の１つ以上のステロール誘導体を含む。

【0040】

特定の実施形態では、本製剤は、約１０モル％から約８０モル％（例えば、約４８モル％等の約４０モル％から約５５モル％）の１つ以上の陽イオン性脂質（例えば、本発明の化合物および／または本明細書で説明されるような他の陽イオン性脂質）、約１モル％から約２０モル％の１つ以上のＰＥＧ−脂質複合体、約５モル％から約２０モル％の１つ以上の中性脂質、および約２０モル％から約４０モル％の１つ以上のステロール誘導体を含む。いくつかの実施形態では、本製剤は、約１０モル％から約３０モル％（例えば、約２２モル％）の本発明の１つ以上の化合物（例えば、Ｌ−６、Ｌ−３０、および／または本明細書で説明されるいずれか）、約１５モル％から約３５モル％（例えば、約２６モル％）の１つ以上の陽イオン性脂質（例えば、ＤＯＤＭＡまたは本明細書で説明されるいずれか）、約３モル％から約９モル％（例えば、約６モル％）の１つ以上のＰＥＧ−脂質複合体（例えば、ＰＥＧ−ＤＳＰＥ、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ、および／または本明細書で説明されるいずれか）、約１０モル％から約２０モル％（例えば、約１４モル％）の１つ以上の中性脂質（例えば、ＤＳＰＣまたは本明細書で説明されるいずれか）、および約２０モル％から約４０モル％（例えば、約３３モル％等の約２９モル％から約３３モル％）の１つ以上のステロール誘導体（例えば、コレステロール、その誘導体、または本明細書で説明されるいずれか）を含む。

【0041】

いくつかの実施形態では、本発明の１つ以上の化合物は、約１０モル％から約４０モル％、例えば、約１０モル％から約１５モル％、約１０モル％から約２０モル％、約１０モル％から約２５モル％、約１０モル％から約３０モル％、約１０モル％から約３５モル％、約１５モル％から約２０モル％、約１５モル％から約２５モル％、約１５モル％から約３０モル％、約１５モル％から約３５モル％、約１５モル％から約４０モル％、約２０モル％から約２５モル％、約２０モル％から約３０モル％、約２０モル％から約３５モル％、約２０モル％から約４０モル％、約２５モル％から約３０モル％、約２５モル％から約３５モル％、約２５モル％から約４０モル％、約３０モル％から約３５モル％、約３０モル％から約４０モル％、または約３５モル％から約４０モル％（例えば、約２１．０モル％、２１．２モル％、２１．４モル％、２１．６モル％、２１．８モル％、２２モル％、２５モル％、２６モル％、２６モル％、３０モル％、３５モル％、または４０モル％）の本発明の１つ以上の化合物の量で存在する。いくつかの実施形態では、本発明の１つ以上の化合物は、約１０モル％から約８０モル％、例えば、約１０モル％から約１５モル％、約１０モル％から約２０モル％、約１０モル％から約２５モル％、約１０モル％から約３０モル％、約１０モル％から約３５モル％、約１０モル％から約４０モル％、約１０モル％から約４５モル％、約１０モル％から約５０モル％、約１０モル％から約５５モル％、約１０モル％から約６０モル％、約１０モル％から約６５モル％、約１０モル％から約７０モル％、約１０モル％から約７５モル％、約１５モル％から約２０モル％、約１５モル％から約２５モル％、約１５モル％から約３０モル％、約１５モル％から約３５モル％、約１５モル％から約４０モル％、約１５モル％から約４５モル％、約１５モル％から約５０モル％、約１５モル％から約５５モル％、約１５モル％から約６０モル％、約１５モル％から約６５モル％、約１５モル％から約７０モル％、約１５モル％から約７５モル％、約１５モル％から約８０モル％、約２０モル％から約２５モル％、約２０モル％から約３０モル％、約２０モル％から約３５モル％、約２０モル％から約４０モル％、約２０モル％から約４５モル％、約２０モル％から約５０モル％、約２０モル％から約５５モル％、約２０モル％から約６０モル％、約２０モル％から約６５モル％、約２０モル％から約７０モル％、約２０モル％から約７５モル％、約２０モル％から約８０モル％、約２５モル％から約３０モル％、約２５モル％から約３５モル％、約２５モル％から約４０モル％、約２５モル％から約４５モル％、約２５モル％から約５０モル％、約２５モル％から約５５モル％、約２５モル％から約６０モル％、約２５モル％から約６５モル％、約２５モル％から約７０モル％、約２５モル％から約７５モル％、約２５モル％から約８０モル％、約３０モル％から約３５モル％、約３０モル％から約４０モル％、約３０モル％から約４５モル％、約３０モル％から約５０モル％、約３０モル％から約５５モル％、約３０モル％から約６０モル％、約３０モル％から約６５モル％、約３０モル％から約７０モル％、約３０モル％から約７５モル％、約３０モル％から約８０モル％、約３５モル％から約４０モル％、約３５モル％から約４５モル％、約３５モル％から約５０モル％、約３５モル％から約５５モル％、約３５モル％から約６０モル％、約３５モル％から約６５モル％、約３５モル％から約７０モル％、約３５モル％から約７５モル％、または約３５モル％から約８０モル％、約４０モル％から約４５モル％、約４０モル％から約５０モル％、約４０モル％から約５５モル％、約４０モル％から約６０モル％、約４０モル％から約６５モル％、約４０モル％から約７０モル％、約４０モル％から約７５モル％、約４０モル％から約８０モル％、約４５モル％から約５０モル％、約４５モル％から約５５モル％、約４５モル％から約６０モル％、約４５モル％から約６５モル％、約４５モル％から約７０モル％、約４５モル％から約７５モル％、または約４５モル％から約８０モル％、約５０モル％から約５５モル％、約５０モル％から約６０モル％、約５０モル％から約６５モル％、約５０モル％から約７０モル％、約５０モル％から約７５モル％、または約５０モル％から約８０モル％（例えば、約２１．０モル％、２１．２モル％、２１．４モル％、２１．６モル％、２１．８モル％、２２モル％、２５モル％、２６モル％、２６モル％、３０モル％、３５モル％、４０モル％、４５モル％、４８モル％、４９モル％、５０モル％、５５モル％、６０モル％、６５モル％、７０モル％、または７５モル％）の本発明の１つ以上の化合物の量で存在する。

【0042】

いくつかの実施形態では、１つ以上の陽イオン性脂質は、約１０モル％から約４０モル％、例えば、約１０モル％から約１５モル％、約１０モル％から約２０モル％、約１０モル％から約２５モル％、約１０モル％から約３０モル％、約１０モル％から約３５モル％、約１５モル％から約２０モル％、約１５モル％から約２５モル％、約１５モル％から約３０モル％、約１５モル％から約３５モル％、約１５モル％から約４０モル％、約２０モル％から約２５モル％、約２０モル％から約３０モル％、約２０モル％から約３５モル％、約２０モル％から約４０モル％、約２５モル％から約３０モル％、約２５モル％から約３５モル％、約２５モル％から約４０モル％、約３０モル％から約３５モル％、約３０モル％から約４０モル％、または約３５モル％から約４０モル％（例えば、約２５．１モル％、２５．２モル％、２５．３モル％、２５．４モル％、２５．５モル％、２５．６モル％、２５．７モル％、２５．８モル％、２５．９モル％、２６．０モル％、２６．２モル％、２６．４モル％、２６．６モル％、２６．８モル％、または２７モル％）の１つ以上の陽イオン性脂質（例えば、ＤＯＤＭＡまたは表１等の本明細書で説明されるいずれか）の量で存在する。

【0043】

いくつかの実施形態では、１つ以上のＰＥＧ−脂質複合体は、約１モル％から約２０モル％、例えば、約１モル％から約５モル％、約１モル％から約１０モル％、約１モル％から約１５モル％、約２モル％から約５モル％、約２モル％から約１０モル％、約２モル％から約１５モル％、約２モル％から約２０モル％、約５モル％から約１０モル％、約５モル％から約１５モル％、約５モル％から約２０モル％、約１０モル％から約１５モル％、約１０モル％から約２０モル％、約１５モル％から約２０モル％（例えば、約２．５モル％、２．６モル％、２．７モル％、２．８モル％、２．９モル％、３モル％、３．５モル％、４モル％、４．３モル％、４．５モル％、４．７モル％、５モル％、５．３モル％、５．５モル％、５．７モル％、６モル％、６．５モル％、６．７モル％、７モル％、７．５モル％、８モル％、８．５モル％、または９モル％）の１つ以上のＰＥＧ−脂質複合体（例えば、ＰＥＧ−ＤＳＰＥ、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ、および／または本明細書で説明されるいずれか）の量で存在する。

【0044】

いくつかの実施形態では、１つ以上の中性脂質は、約５モル％から約２０モル％、例えば、約５モル％から約１０モル％、約５モル％から約１５モル％、約５モル％から約２０モル％、約７モル％から約１０モル％、約７モル％から約１５モル％、約７モル％から約２０モル％、約１０モル％から約１５モル％、約１０モル％から約２０モル％、約１５モル％から約２０モル％（例えば、約１３．０モル％、１３．２モル％、１３．４モル％、１３．６モル％、１３．８モル％、１４モル％、１４．１モル％、１４．３モル％、１４．５モル％、１４．７モル％、または１４．９モル％）の１つ以上の中性脂質（例えば、ＤＳＰＣまたは本明細書で説明されるいずれか）の量で存在する。

【0045】

いくつかの実施形態では、１つ以上のステロール誘導体は、約２０モル％から約４０モル％、例えば、約２０モル％から約２５モル％、約２０モル％から約３０モル％、約２０モル％から約３５モル％、約２５モル％から約３０モル％、約２５モル％から約３５モル％、約２５モル％から約４０モル％、約３０モル％から約３５モル％、約３０モル％から約４０モル％、または約３５モル％から約４０モル％（例えば、約２８．４モル％、２８．６モル％、２８．８モル％、２９．０モル％、３０モル％、３１モル％、３２モル％、３３モル％、３３．２モル％、３３．４モル％、３３．６モル％、３３．８モル％、３４モル％、３４．４モル％、３４．７モル％、または３４．９モル％）の１つ以上のステロール誘導体（例えば、コレステロールまたは本明細書で説明されるいずれか）の量で存在する。

【0046】

いくつかの実施形態では、本製剤は、１つ以上のＲＮＡ結合剤と、１つ以上のトランスフェクション脂質とを含む、１つ以上の脂質粒子を含み、１つ以上のＲＮＡ結合剤は、約１０モル％から約４０モル％の１つ以上の陽イオン性脂質または本発明の１つ以上の化合物、および約０．５モル％から約１０モル％の１つ以上のＰＥＧ−脂質を含み、１つ以上のトランスフェクション脂質は、約１０モル％から約４０モル％の本発明の１つ以上の化合物、約５モル％から約２０モル％の１つ以上の中性脂質、約０．５モル％から約１０モル％の１つ以上のＰＥＧ−脂質複合体、および約２０モル％から約４０モル％の１つ以上のステロール誘導体を含む。付加的な製剤および割合は、本明細書で説明される通りである。

【0047】

いくつかの実施形態では、本製剤はさらに、ポリアニオン系ペイロードまたはアンチセンスペイロードを含む。いくつかの実施形態では、ポリアニオン系ペイロードは、ＲＮＡｉ剤（例えば、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｐｔｇｓＲＮＡ、またはＤｓｉＲＮＡ、例えば、ＤｓｉＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、１０から４０個のヌクレオチドの長さ、例えば、１０から１５個のヌクレオチド、１０から２０個のヌクレオチド、１０から２５個のヌクレオチド、１０から３０個のヌクレオチド、１０から３５個のヌクレオチド、１５から２０個のヌクレオチド、１５から２５個のヌクレオチド、１５から３０個のヌクレオチド、１５から３５個のヌクレオチド、１５から４０個のヌクレオチド、１６から２０個のヌクレオチド、１６から２５個のヌクレオチド、１６から３０個のヌクレオチド、１６から３５個のヌクレオチド、１６から４０個のヌクレオチド、２０から２５個のヌクレオチド、１８から２０個のヌクレオチド、１８から２５個のヌクレオチド、１８から３０個のヌクレオチド、１８から３５個のヌクレオチド、１８から４０個のヌクレオチド、１９から２０個のヌクレオチド、１９から２５個のヌクレオチド、１９から３０個のヌクレオチド、１９から３５個のヌクレオチド、１９から４０個のヌクレオチド、２０から３０個のヌクレオチド、２０から３５個のヌクレオチド、２０から４０個のヌクレオチド、２５から３０個のヌクレオチド、２５から３５個のヌクレオチド、２５から４０個のヌクレオチド、３０から３５個のヌクレオチド、３０から４０個のヌクレオチド、または３５から４０個のヌクレオチドの長さ、例えば、２５から３５個のヌクレオチドの長さ、例えば、１６から３０個のヌクレオチドの長さ、例えば、１９から２９個のヌクレオチドの長さを有する。いくつかの実施形態では、アンチセンスペイロードは、８から５０個のヌクレオチドの長さ（例えば、８から１０個のヌクレオチド、８から１５個のヌクレオチド、８から１５個のヌクレオチド、８から２０個のヌクレオチド、８から２５個のヌクレオチド、８から３０個のヌクレオチド、８から３５個のヌクレオチド、８から４０個のヌクレオチド、または８から４５個のヌクレオチドの長さ）例えば、１４から３５個のヌクレオチドの長さ（例えば、１４から１５個のヌクレオチド、１４から２０個のヌクレオチド、１４から２５個のヌクレオチド、または１４から３０個のヌクレオチドの長さ）、例えば、１７から２４個のヌクレオチド、例えば、１７から２０個のヌクレオチドの長さを有する。

【0048】

いくつかの実施形態では、本製剤は、製剤に存在する総脂質に対して、約１：１０（重量／重量）から約１：１００（重量／重量）比のポリアニオン系ペイロード、例えば、製剤に存在する総脂質に対して、約１：１０（重量／重量）から約１：１５（重量／重量）比、約１：１０（重量／重量）から約１：２０（重量／重量）比、約１：１０（重量／重量）から約１：４０（重量／重量）比、約１：１０（重量／重量）から約１：５０（重量／重量）比、約１：１０（重量／重量）から約１：６０（重量／重量）比、約１：１０（重量／重量）から約１：７０（重量／重量）比、約１：１０（重量／重量）から約１：８０（重量／重量）比、約１：１０（重量／重量）から約１：９０（重量／重量）比、約１：１０（重量／重量）から約１：９５（重量／重量）比、約１：２０（重量／重量）から約１：４０（重量／重量）比、約１：２０（重量／重量）から約１：５０（重量／重量）比、約１：２０（重量／重量）から約１：６０（重量／重量）比、約１：２０（重量／重量）から約１：７０（重量／重量）比、約１：２０（重量／重量）から約１：８０（重量／重量）比、約１：２０（重量／重量）から約１：９０（重量／重量）比、約１：２０（重量／重量）から約１：９５（重量／重量）比、約１：２０（重量／重量）から約１：１００（重量／重量）比、約１：４０（重量／重量）から約１：５０（重量／重量）比、約１：４０（重量／重量）から約１：６０（重量／重量）比、約１：４０（重量／重量）から約１：７０（重量／重量）比、約１：４０（重量／重量）から約１：８０（重量／重量）比、約１：４０（重量／重量）から約１：９０（重量／重量）比、約１：４０（重量／重量）から約１：９５（重量／重量）比、約１：４０（重量／重量）から約１：１００（重量／重量）比、約１：５０（重量／重量）から約１：６０（重量／重量）比、約１：５０（重量／重量）から約１：７０（重量／重量）比、約１：５０（重量／重量）から約１：８０（重量／重量）比、約１：５０（重量／重量）から約１：９０（重量／重量）比、約１：５０（重量／重量）から約１：９５（重量／重量）比、約１：５０（重量／重量）から約１：１００（重量／重量）比、約１：６０（重量／重量）から約１：７０（重量／重量）比、約１：６０（重量／重量）から約１：８０（重量／重量）比、約１：６０（重量／重量）から約１：９０（重量／重量）比、約１：６０（重量／重量）から約１：９５（ｗ／ｗ）（重量／重量）比、約１：６０（重量／重量）から約１：１００（重量／重量）比、約１：８０（重量／重量）から約１：９０（重量／重量）比、約１：８０（重量／重量）から約１：９５（重量／重量）比、または約１：８０（重量／重量）から約１：１００（重量／重量）比のポリアニオン系ペイロードを含む。

【0049】

いくつかの実施形態では、本製剤は、リポソーム（例えば、脂質ナノ粒子）、リポプレックス、またはミセルを含む。

【0050】

１つの態様では、本発明は、本明細書で説明されるいずれかの化合物（例えば、表１で提供される１つ以上の化合物）、またはその薬学的に容認可能な塩、あるいは本明細書で説明される製剤と、薬学的に容認可能な賦形剤とを含む、医薬組成物を特色とする。

【0051】

別の態様では、本発明は、対象の疾患を治療する、または予防的に治療する方法であって、疾患（例えば、肝臓癌（例えば、肝細胞癌、肝芽腫、胆管癌、脈管肉腫、または血管肉腫）、肺癌（例えば、小細胞肺癌、または非小細胞肺癌）、前立腺癌、または神経芽細胞腫）を治療するのに十分な量で、本明細書で説明される任意の化合物（例えば、表１で提供される１つ以上の化合物）、またはその薬学的に容認可能な塩、本明細書で説明される任意の製剤、あるいは本明細書で説明される任意の組成物を対象に投与することを含む、方法を特色とする。本発明はさらに、限定されないが、癌（例えば、肺、乳房、膵臓、結腸、肝細胞、腎臓、女性生殖管、前立腺、扁平上皮細胞、上皮内癌）、リンパ腫（例えば、組織球性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫）、ＭＥＮ２症候群、神経線維腫症（シュワン細胞新生物を含む）、骨髄異形成症候群、白血病、腫瘍血管新生、甲状腺、肝臓、骨、皮膚、脳、中枢神経系、膵臓、肺（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌）、乳房、結腸、膀胱、前立腺、消化管、子宮内膜、卵管、精巣、および卵巣の癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、前立腺腫瘍、肥満細胞腫瘍（イヌ肥満細胞腫瘍を含む）、急性骨髄線維症、白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、黒色腫、肥満細胞症、神経膠腫、膠芽細胞腫、星状細胞腫、神経芽細胞腫、肉腫（例えば、神経外胚葉起源の肉腫、または平滑筋肉腫）、他の組織への腫瘍の転移、および化学療法誘導性低酸素症を含む、腫瘍性疾患または関連合併症を治療する、または予防的に治療する方法を特色とする。

【0052】

別の態様では、本発明は、対象の標的核酸の発現を変調する方法であって、対象の標的遺伝子（例えば、本明細書で説明されるいずれか、例えば、ＡＢＬ１、ＡＲ、β−カテニン（ＣＴＮＮＢ１）、ＢＣＬ１、ＢＣＬ２、ＢＣＬ６、ＣＢＦＡ２、ＣＢＬ、ＣＳＦ１Ｒ、ＥＲＢＡ１、ＥＲＢＡ２、ＥＲＢＢ１、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＴＳ１、ＥＴＳ２、ＥＴＶ６、ＦＧＲ、ＦＯＳ、ＦＹＮ、ＨＣＲ、ＨＲＡＳ、ＪＵＮ、ＫＲＡＳ、ＬＣＫ、ＬＹＮ、ＭＥＴ、ＭＤＭ２、ＭＬＬ１、ＭＬＬ２、ＭＬＬ３、ＭＹＢ、ＭＹＣ、ＭＹＣＬ１、ＭＹＣＮ、ＮＲＡＳ、ＰＩＭ１、ＰＭＬ、ＲＥＴ、ＳＲＣ、ＴＡＬ１、ＴＡＬ２、ＴＣＬ３、ＴＣＬ５、ＹＥＳ、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＭＡＤＨ４、ＭＣＣ、ＮＦ１、ＮＦ２、ＲＢ１、ＴＰ５３、ＷＴ１、ＡｐｏＢ１００、ＣＳＮ５、ＣＤＫ６、ＩＴＧＢ１、ＴＧＦβ１、サイクリンＤ１、ヘプシジン、ＰＣＳＫ９、ＴＴＲ、ＰＬＫ１、およびＫＩＦ１−結合タンパク質から成る群より選択される１つ以上の標的遺伝子）の発現を低減させるのに十分な量で、本明細書で説明される任意の化合物（例えば、表１で提供される１つ以上の化合物）、またはその薬学的に容認可能な塩、本明細書で説明される任意の製剤、あるいは説明される任意の組成物を投与することを含む、方法を特色とする（例えば、本方法は、対象の標的遺伝子の発現を低減する方法を含む）。

【0053】

別の実施形態では、本発明は、１日に１回以上（例えば、１日に１、２、３、または４回）、週に１回以上（例えば、週に２、３、４、５、６、または７回）、または月に１回以上（例えば、月に２、３、４、５、６、７、または１０回）の対象への本発明のポリアニオン系ペイロードまたはアンチセンスペイロードの投与量の投与を特色とする。対象は、任意の用量用法で（例えば、１日に１回以上（例えば、１日に１、２、３、または４回）、週に１回以上（例えば、週に２、３、４、５、６、または７回）、または月に１回以上（例えば、月に２、３、４、５、６、７、または１０回））、約０．０００１から約１０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．０００１から約１ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１から約５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１から約１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１から約５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１から約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１から約１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１から約５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１から約１０ｍｇ／ｋｇ、約１から約５ｍｇ／ｋｇ、または約１から約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内のポリアニオン系ペイロードまたはアンチセンスペイロードの投与量を受容してもよい。

【0054】

いくつかの実施形態では、本発明は、例えば、１日に１回以上（例えば、１日に１、２、３、または４回）、週に１回以上（例えば、週に２、３、４、５、６、または７回）、または月に１回以上（例えば、月に２、３、４、５、６、７、または１０回）の対象への本発明の製剤の投与を特色とする。対象は、任意の用量用法で（例えば、１日に１回以上（例えば、１日に１、２、３、または４回）、週に１回以上（例えば、週に２、３、４、５、６、または７回）、または月に１回以上（例えば、月に２、３、４、５、６、７、または１０回））、約０．００１から約２００ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００１から約１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１から約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．００１から約２０ｍｇ／ｋｇ、約０．００１から約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．００１から約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１から約１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１から約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１から約２０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１から約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１から約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１から約２００ｍｇ／ｋｇ、約０．１から約１ｍｇ／ｋｇ、約０．１から約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１から約２０ｍｇ／ｋｇ、約０．１から約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１から約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．１から約２００ｍｇ／ｋｇ、約１から約１０ｍｇ／ｋｇ、約１から約２０ｍｇ／ｋｇ、約１から約５０ｍｇ／ｋｇ、約１から約１００ｍｇ／ｋｇ、約１から約２００ｍｇ／ｋｇ、約１０から約２０ｍｇ／ｋｇ、約１０から約５０ｍｇ／ｋｇ、約１０から約１００ｍｇ／ｋｇ、約１０から約２００ｍｇ／ｋｇ、約２０から約５０ｍｇ／ｋｇ、約２０から約１００ｍｇ／ｋｇ、または約２０から約２００ｍｇ／ｋｇの範囲内の製剤の投与量を受容してもよい。

【0055】

別の態様では、本発明は、ポリアニオン系ペイロードまたはアンチセンスペイロードを特定の種類の組織に送達する方法を特色とする。ペイロードが送達され得る特定の種類の組織の実施例は、肝臓、膵臓、肺、前立腺、腎臓、骨髄、脾臓、胸腺、リンパ節、脳、脊髄、心臓、骨格筋、皮膚、口腔粘膜、食道、胃、回腸、小腸、結腸、膀胱、子宮頸部、卵巣、精巣、乳腺、副腎、脂肪組織（白色および／または褐色）、血液（例えば、ヒト造血前駆細胞、ヒト造血幹細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＣＤ４＋細胞等の造血細胞）、リンパ球、および他の血液系統細胞を含むが、それらに限定されない。

【0056】

上記の態様のうちのいずれかでは、本発明の化合物は、２つの不飽和脂質尾部基を含む（例えば、各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルケニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキニル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルケニル、または随意に置換されたＣ_{１１−２４}ヘテロアルキニルである）。

【0057】

上記の態様のうちのいずれかでは、本発明の化合物は、脂質尾部基を含み、これらの基は、−ＣＨＲ^３Ｒ^４に隣接する酸素を含まない（例えば、各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキル、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルケニル、または随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキニルである）。

【0058】

上記の態様のうちのいずれかでは、本発明の化合物は、脂質尾部基を含み、これらの基は、１つ以上の生分解性基（例えば、１つ以上のエステル基）を含まない。

【0059】

上記の態様のうちのいずれかでは、本発明の化合物は、１１、１２、１３、１４、１５、１６、または１８個よりも多くの炭素を有する、２つの脂質尾部基を含む（例えば、各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、随意に置換されたＣ_{１７−２４}アルケニル、随意に置換されたＣ_{１５−２４}アルキニル、随意に置換されたＣ_{１５−２４}ヘテロアルケニル、または随意に置換されたＣ_{１５−２４}ヘテロアルキニルであり、各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、随意に置換されたＣ_{１６−２４}アルケニル、随意に置換されたＣ_{１６−２４}アルキニル、随意に置換されたＣ_{１６−２４}ヘテロアルケニル、または随意に置換されたＣ_{１６−２４}ヘテロアルキニルであり、各Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、随意に置換されたＣ_{１７−２４}アルケニル、随意に置換されたＣ_{１７−２４}アルキニル、随意に置換されたＣ_{１７−２４}ヘテロアルケニル、または随意に置換されたＣ_{１７−２４}ヘテロアルキニルであり、あるいはＲ^１およびＲ^２は、独立して、随意に置換されたＣ_{１８−２４}アルケニル、随意に置換されたＣ_{１８−２４}アルキニル、随意に置換されたＣ_{１８−２４}ヘテロアルケニル、または随意に置換されたＣ_{１８−２４}ヘテロアルキニルである）。

【0060】

上記の態様のうちのいずれかでは、本発明の化合物は、尿素基を含有しない（例えば、Ｒ^３もＲ^４も、随意に置換されたアミドではない）。いくつかの実施形態では、本化合物は、カルバミル基を含有しない。いくつかの実施形態では、化合物は、１つよりも多くの１級アミン基を含有しない（例えば、２つの１級アミン基を含有しない、またはＲ^１−Ｒ^６のうちの１つ以上、例えば、Ｒ^３またはＲ^４のいずれか一方に、いなかる１級アミン基も含有しない）。特定の実施形態では、本化合物は、１つだけの１級アミンを含むか、またはいかなる１級アミンも含まない（例えば、Ｒ^１−Ｒ^６のうちの１つ以上、例えば、Ｒ^３またはＲ^４のいずれか一方に、１つだけの１級アミンが存在するか、またはいかなる１級アミンも存在しない）。

【0061】

上記の態様のうちのいずれかでは、本発明の化合物は、ヒドロキシ基を含有しない（例えば、Ｒ^１もＲ^２も、１つ、２つ、または３つのヒドロキシ基と置換されない、あるいはＲ^３もＲ^４も、１つ、２つ、または３つのヒドロキシ基と置換されない）。いくつかの実施形態では、Ｒ^１またはＲ^２が飽和Ｃ_{１１−２４}アルキル基（例えば、飽和Ｃ_１５アルキル、飽和Ｃ_１６アルキル、飽和Ｃ_１７アルキル、または飽和Ｃ_１８アルキル）であるとき、Ｒ^１および／またはＲ^２は、１つ、２つ、または３つのヒドロキシ基と置換されない。いくつかの実施形態では、Ｒ^１またはＲ^２が飽和Ｃ_{１１−２４}アルキル基（例えば、飽和Ｃ_１５アルキル、飽和Ｃ_１６アルキル、飽和Ｃ_１７アルキル、または飽和Ｃ_１８アルキル）であるとき、Ｒ^３および／またはＲ^４は、１つ、２つ、または３つのヒドロキシ基と置換されない。

【0062】

上記の態様のうちのいずれかでは、本発明の化合物は、わずか２つのアミド基（例えば、化合物の頭部基にわずか２つまたは１つのアミド基）を含む。他の実施形態では、本化合物は、Ｒ^１−Ｒ^６のうちの１つ以上にゼロ、１つ、または２つのアミド基（例えば、Ｒ^３またはＲ^４にゼロ、１つ、または２つのアミド基）を含む。さらに別の実施形態では、本化合物は、１つ、および１つだけのアミド基を含むことができる（例えば、Ｒ^３またはＲ^４に１つ、および１つだけのアミド基を含むことができる）。さらなる実施形態では、本化合物は、１つ、および１つだけのアミド基を含むか、またはいかなるアミド基も含まない（例えば、Ｒ^３またはＲ^４に１つ、および１つだけのアミド基を含むか、またはいかなるアミド基も含まない）。

【0063】

上記の態様のうちのいずれかでは、本発明の化合物は、Ｎ−（４−Ｎ′，Ｎ′−ジメチルアミノ）ブタノール−（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−アミン、またはＮ−（３−Ｎ′，Ｎ′−ジメチルアミノ）プロパノール−（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−アミン、あるいはそれらの塩を除外する。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、Ｎ−メチル−Ｎ−（４−Ｎ′，Ｎ′−ジメチルアミノ）ブタノール−（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−アミン、またはＮ−メチル−Ｎ−（３−Ｎ′，Ｎ′−ジメチルアミノ）プロパノール−（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−アミン、あるいはそれらの塩を除外する。

【0064】

上記の態様のうちのいずれかでは、本発明の化合物は、Ｎ−（４−Ｎ′，Ｎ′−ジメチルアミノ）ブタノール−（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８−トリエン−１９−アミン、Ｎ−メチル−Ｎ−（４−Ｎ′，Ｎ′−ジメチルアミノ）ブタノール−（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８−トリエン−１９−アミン、Ｎ−（４−Ｎ′，Ｎ′−ジメチルアミノ）ブタノール−（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ，３４Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１，３４−ペンタエン−１９−アミン、Ｎ−メチル−Ｎ−（４−Ｎ′，Ｎ′−ジメチルアミノ）ブタノール−（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ，３４Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１，３４−ペンタエン−１９−アミン、Ｎ−（３−Ｎ′，Ｎ′−ジメチルアミノ）プロパノール−（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８−トリエン−１９−アミン、Ｎ−メチル−Ｎ−（３−Ｎ′，Ｎ′−ジメチルアミノ）プロパノール−（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８−トリエン−１９−アミン、Ｎ−（３−Ｎ′，Ｎ′−ジメチルアミノ）プロパノール−（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ，３４Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１，３４−ペンタエン−１９−アミン、Ｎ−メチル−Ｎ−（３−Ｎ′，Ｎ′−ジメチルアミノ）プロパノール−（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ，３４Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１，３４−ペンタエン−１９−アミン、またはそれらの塩を除外する。

【0065】

上記の態様のうちのいずれかでは、本発明の化合物は、ジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（３−（ジメチルアミノ）プロパノール）アミノ）ヘプタデカンジオエート、ジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノール）アミノ）ヘプタデカンジオエート、ジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（５−（ジメチルアミノ）ペンタノイル）アミノ）ヘプタデカンジオエート、またはそれらの塩を除外する。

【0066】

上記の態様のうちのいずれかでは、本発明の化合物は、６．２未満および６．５以上のｐＫａ値（例えば、４．０から５．２、４．０から５．６、または４．０から５．８等の４．０から６．２、あるいは６．５から８．５、例えば、６．５から７．０、６．５から７．５、または６．５から８．０のｐＫａ値）を有する。特定の実施形態では、ｐＫａ値は、約５．０から約６．０（例えば、５．０から５．５、５．０から５．６、５．０から５．７、５．０から５．８、５．０から５．９、５．０から６．０、５．２から５．５、５．２から５．６、５．２から５．７、５．２から５．８、５．２から５．９、５．２から６．０、５．４から５．５、５．４から５．６、５．４から５．７、５．４から５．８、５．４から５．９、５．４から６．０、５．６から５．７、５．６から５．８、５．６から５．９、または５．６から６．０）である。ｐＫａ値は、任意の有用な方法、例えば、２−（ｐ−トルイジン）−６−ナフタレンスルホン酸（ＴＮＳ）の蛍光を測定すること、ゼータ電位測定等によって判定することができる。特定の実施形態では、ｐＫａ値は、（例えば、ｐＫａが半最大蛍光強度でのｐＨとして定義される、原位置ＴＮＳ蛍光滴定によって測定されるような）荷電陽イオン性脂質の濃度および非荷電脂質の比である。

【0067】

定義
本明細書で使用されるように、「約」という用語は、記載された値の±１０％を意味する。

【0068】

「アルケニル」とは、特に指定がない限り、１つ以上の炭素炭素二重結合を含有する、２から２４個の炭素の一価直鎖基または分岐鎖基を意味する。アルケニル基は、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、オレイル、リノレイル、リノレニル、および同等物によって例示される。「Ｃ_ｘ−ｙアルケニル」という用語は、ｘからｙ個の炭素を有するアルケニル基を表す。ｘの例示的な値は、２、３、４、５、および１１であり、ｙについては、３、４、５、６、および２４であり、ｘからｙについては、２から１０、２から９、２から８、２から７、２から６、２から５、２から４、１０から２４、１１から２４、１２から２４、１４から２４、１６から２４、１８から２４、１０から２２、１１から２２、１２から２２、１４から２２、１６から２２、１８から２２、１０から２０、１１から２０、１２から２０、１４から２０、１６から２０、または１８から２０である。いくつかの実施形態では、アルケニルは、アルキル基について本明細書で定義されるように、１、２、３、または４個の置換基とさらに置換することができる。

【0069】

「アルキル」とは、特に指定がない限り、１から２４個の炭素原子の一価直鎖または分岐鎖飽和基を意味する。アルキル基は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、ラウリル、ミリスチル、パルミチル、ステアリル、および同等物によって例示され、（１）アルコキシ、（２）本明細書で定義されるようなアミノ、（３）Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩ等のハロ、（４）（ヘテロシクリル）オキシ、（５）ヘテロシクリル、（６）アルキル、（７）アルケニル、（９）アルキニル、（１０）シクロアルキル、（１１）ヒドロキシ、（１２）ニトロ、または（１３）オキソ（例えば、カルボキシアルデヒドまたはアシル）から成る群より独立して選択される、１つ、２つ、３つの置換基、または２つ以上の炭素のアルキル基の場合は４つの置換基と随意に置換されてもよい。いくつかの実施形態では、これらの基のそれぞれは、本明細書で説明されるようにさらに置換することができる。「Ｃ_ｘ−ｙアルキル」という用語は、ｘからｙ個の炭素を有するアルキル基を表す。ｘの例示的な値は、１、２、３、４、５、および１１であり、ｙについては、２、３、４、５、６、および２４であり、ｘからｙについては、１から１０、１から９、１から８、１から７、１から６、１から５、１から４、１０から２４、１１から２４、１２から２４、１４から２４、１６から２４、１８から２４、１０から２２、１１から２２、１２から２２、１４から２２、１６から２２、１８から２２、１０から２０、１１から２０、１２から２０、１４から２０、１６から２０、または１８から２０である。

【0070】

本明細書で使用されるような「アルキレン」という用語、および「アルキ−」という接頭語は、２つの水素原子の除去によって直鎖または分岐鎖炭化水素から導出される、多価（例えば、二価）炭化水素基を表す。アルキレン基は、メチレン、エチレン、イソプロピレン、および同等物によって例示される。「Ｃ_ｘ−ｙアルキレン」という用語は、ｘからｙ個の炭素を有するアルキレン基を表す。ｘの例示的な値は、１、２、３、４、および５であり、ｙの例示的な値は、２、３、４、５、および６である。いくつかの実施形態では、アルキレンは、アルキル基について本明細書で定義されるように、１、２、３、または４個の置換基とさらに置換することができる。

【0071】

「アルキニル」とは、特に指定がない限り、１つ以上の炭素炭素三重結合を含有する、２から２４個の炭素の一価直または分岐鎖基を意味する。アルキニル基は、エチニル、１−プロピニル、および同等物によって例示される。「Ｃ_ｘ−ｙアルキニル」という用語は、ｘからｙ個の炭素を有するアルキレン基を表す。ｘの例示的な値は、２、３、４、５、および１１であり、ｙについては、３、４、５、６、および２４であり、ｘからｙについては、２から１０、２から９、２から８、２から７、２から６、２から５、２から４、１０から２４、１１から２４、１２から２４、１４から２４、１６から２４、１８から２４、１０から２２、１１から２２、１２から２２、１４から２２、１６から２２、１８から２２、１０から２０、１１から２０、１２から２０、１４から２０、１６から２０、または１８から２０である。いくつかの実施形態では、アルキニルは、アルキル基について本明細書で定義されるように、１、２、３、または４個の置換基とさらに置換することができる。

【0072】

「アミド」とは、カルボニル基を通して親分子基に付着した、本明細書で定義されるようなアミン基を意味する。

【0073】

本明細書で使用されるような「アミノ」とは、−Ｎ（Ｒ^Ｎ１）_２を意味し、各Ｒ^Ｎ１は、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＮＯ_２、Ｎ（Ｒ^Ｎ２）_２、ＳＯ_２ＯＲ^Ｎ２、ＳＯ_２Ｒ^Ｎ２、ＳＯＲ^Ｎ２、Ｎ−保護基、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アリール、アルカリル、シクロアルキル、アルクシクロアルキル、ヘテロシクリル（例えば、ヘテロアリール）、アルクヘテロシクリル（例えば、アルクヘテロアリール）であり、または２つのＲ^Ｎ１は、ヘテロシクリルまたはＮ−保護基を形成するように合体し、各Ｒ^Ｎ２は、独立して、Ｈ、アルキル、またはアリールである。好ましい実施形態では、アミノは、−ＮＨ_２または−ＮＨＲ^Ｎ１であり、Ｒ^Ｎ１は、独立して、ＯＨ、ＮＯ_２、ＮＨ_２、ＮＲ^Ｎ２_２、ＳＯ_２ＯＲ^Ｎ２、ＳＯ_２Ｒ^Ｎ２、ＳＯＲ^Ｎ２、アルキル、またはアリールであり、各Ｒ^Ｎ２は、Ｈ、アルキル、またはアリールであり得る。「１級アミン」とは、構造−ＮＨ_２を有する基を意味する。

【0074】

本明細書で使用されるような「アミノアルキル」とは、本明細書で定義されるようなアミノ基によって置換された、本明細書で定義されるようなアルキル基を表す。アルキルおよびアミノはそれぞれ、それぞれの基について本明細書で説明されるように、１、２、３、または４個の置換基とさらに置換することができる。

【0075】

本明細書で使用されるように、「カルバミル」という用語は、構造−ＮＲ^Ｎ１Ｃ（＝Ｏ）ＯＲまたは−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ１）_２を有する、カルバミン酸塩基を指し、各Ｒ^Ｎ１の意味は、本明細書で提供される「アミノ」の定義で見出され、Ｒは、本明細書で定義されるように、アルキル、シクロアルキル、アルクシクロアルキル、アリール、アルカリル、ヘテロシクリル（例えば、ヘテロアリール）、またはアルクヘテロシクリル（例えば、アルクヘテロアリール）である。

【0076】

本明細書で使用されるような「カルボニル」という用語は、Ｃ＝Ｏとして表すこともできる、Ｃ（Ｏ）基を表す。

【0077】

「シクロアルキル」とは、一価で飽和または部分に不飽和の３から１０員単環式または多環式（例えば、二環式または三環式）炭化水素環系を意味する。実施例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロヘプチルを含む。

【0078】

本明細書で使用されるような「ハロ」という用語は、臭素、塩素、要素、またはフッ素から選択されるハロゲンを表す。

【0079】

「ヘテロアルケニル」とは、構成炭素原子のうちの１つ以上が、それぞれＯ、Ｎ、またはＳで置き換えられている、本明細書で定義されるようなアルケニル基を意味する。例示的なヘテロアルケニル基は、オキソ基と置換され、および／または酸素原子を通して親分子基に付着した、本明細書で定義されるようなアルケニル基を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロアルケニル基は、アルキル基について本明細書で説明されるように、１、２、３、または４個の置換基とさらに置換することができる。

【0080】

「ヘテロアルキル」とは、構成炭素原子のうちの１つ以上が、それぞれＯ、Ｎ、またはＳで置き換えられている、本明細書で定義されるようなアルキル基を意味する。例示的なヘテロアルキル基は、オキソ基と置換され、および／または酸素原子を通して親分子基に付着した、本明細書で定義されるようなアルキル基を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキル基は、アルキル基について本明細書で説明されるように、１、２、３、または４個の置換基とさらに置換することができる。

【0081】

本明細書で使用されるような「ヘテロアルキレン」という用語は、構成炭素原子のうちの１つまたは２つが、それぞれＯ、Ｎ、またはＳで置き換えられている、本明細書で定義されるようなアルキレン基を指す。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキレン基は、アルキレン基について本明細書で説明されるように、１、２、３、または４個の置換基とさらに置換することができる。「Ｃ_ｘ−ｙヘテロアルキレン」という用語は、ｘからｙ個の炭素を有するヘテロアルキレン基を表す。ｘの例示的な値は、１、２、３、４、５、および１１であり、ｙについては、２、３、４、５、６、および２４であり、ｘからｙについては、１から１０、１から９、１から８、１から７、１から６、１から５、１から４、１０から２４、１１から２４、１２から２４、１４から２４、１６から２４、１８から２４、１０から２２、１１から２２、１２から２２、１４から２２、１６から２２、１８から２２、１０から２０、１１から２０、１２から２０、１４から２０、１６から２０、または１８から２０である。

【0082】

「ヘテロアルキニル」とは、構成炭素原子のうちの１つ以上が、それぞれＯ、Ｎ、またはＳで置き換えられている、本明細書で定義されるようなアルキニル基を意味する。例示的なヘテロアルキニル基は、オキソ基と置換され、および／または酸素原子を通して親分子基に付着した、本明細書で定義されるようなアルキニル基を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキニル基は、アルキル基について本明細書で説明されるように、１、２、３、または４個の置換基とさらに置換することができる。

【0083】

本明細書で使用されるような「ヘテロアリール」という用語は、芳香族である、本明細書で定義されるようなヘテロシクリルの一部を表し、すなわち、それらは、単または多環式環系内に４ｎ＋２ｐｉ電子を含有する。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、ヘテロシクリル基について定義されるように、１、２、３、または４個の置換基と置換される。

【0084】

本明細書で使用されるような「ヘテロシクリル」という用語は、特に指定がない限り、窒素、酸素、および硫黄から成る群より独立して選択される、１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を含有する、３、４、５、６、７、または８員環を表す。ヘテロシクリルは、飽和または不飽和であり、０から３個の不飽和結合を含有し得る。例えば、５員環は、ゼロから２つの二重結合を有し、６および７員環は、ゼロから３つの二重結合を有する。あるヘテロシクリル基は、２から９個の炭素原子、例えば、３から７個の炭素原子を含む。他のそのような基は、最大で１２個の炭素原子を含み得る。「ヘテロシクリル」という用語はまた、１つ以上の炭素および／またはヘテロ原子が、単環式環、例えば、キヌクリジニル基の２つの非隣接要素を架橋する、架橋多環式構造を有する、複素環式化合物も表す。複素環基の実施例は、アジリジニル、アゼチジニル、ピロリニル、ピロリル、ピロリジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピペリジニル、アゼパニル、ピラジニル、ピペラジニル、ジアゼパニル、モルホリニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、および同等物を含む。

【0085】

本明細書で使用されるような「（ヘテロシクリル）オキシ」という用語は、酸素原子を通して親分子基に付着した、本明細書で定義されるようなヘテロシクリル基を表す。いくつかの実施形態では、ヘテロシクリル基は、本明細書で定義されるように、１、２、３、または４個の置換基と置換することができる。

【0086】

本明細書で使用されるような「（ヘテロシクリル）オイル」という用語は、カルボニル基を通して親分子基に付着した、本明細書で定義されるようなヘテロシクリル基を表す。いくつかの実施形態では、ヘテロシクリル基は、本明細書で定義されるように、１、２、３、または４個の置換基と置換することができる。

【0087】

本明細書で使用されるような「ヒドロキシ」という用語は、−ＯＨ基を表す。

【0088】

「リンカー」とは、１つ以上の原子を含有する、随意に置換された多価（例えば、二価）基を意味する。リンカーの実施例は、本明細書で説明されるような随意に置換されたアルキレンおよびヘテロアルキレン基を含む。

【0089】

本明細書で使用されるような「Ｎ−保護基」という用語は、合成手順中の望ましくない反応からアミノ基を保護することを目的としている基を表す。一般的に使用されているＮ−保護基は、参照することにより本明細書に組み込まれる、Ｇｒｅｅｎｅの“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，” ３^ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９９）で開示されている。Ｎ−保護基は、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、２−クロロアセチル、２−ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、ｏ−ニトロフェノキシアセチル、α−クロロブチリル、ベンゾイル、４−クロロベンゾイル、４−ブロモベンゾイル、４−ニトロベンゾイル、アラニン、ロイシン、フェニルアラニン等の保護または非保護Ｄ、Ｌ、またはＤ、Ｌ−アミノ酸等のキラル補助基、および同等物等のアシル、アリーロイル、またはカルバミル基と、ベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニル、および同等物等のスルホニル含有基と、ベンジルオキシカルボニル、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、２，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，４，５−トリメトキシベンジルオキシカルボニル、１−（ｐ−ビフェニルイル）−１−メチルエトキシカルボニル、α，α−ジメチル３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニル、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２，−トリクロロエトキシカルボニル、フェノキシカルボニル、４−ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル−９−メトキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、フェニルチオカルボニル、および同等物等のカルバミン酸塩形成基と、ベンジル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチル、および同等物等のアルカリル基と、トリメチルシリルおよび同等物等のシリル基とを含む。好ましいＮ−保護基は、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、アラニル、フェニルスルホニル、ベンジル、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、およびベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）である。

【0090】

本明細書で使用されるような「オキソ」という用語は、＝Ｏを表す。

【0091】

「尿素」という用語は、構造ＮＲ^Ｎ１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^Ｎ１を有する基を指し、各Ｒ^Ｎ１の意味は、本明細書で提供される「アミノ」の定義で見出される。

【0092】

作用物質の「十分な量」とは、臨床結果等の有益または望ましい結果を達成するのに十分な薬剤の量を意味し、そのようなものとして、十分な量は、それが適用される状況に依存する。例えば、標的遺伝子の発現レベルを低減させる製剤を投与する状況で、製剤の十分な量は、製剤の投与を伴わずに得られる応答と比較して、標的遺伝子の発現レベルの低減を達成するのに十分な量である。

【0093】

「陰イオン性脂質」とは、生理学的ｐＨで正味の負電荷を有する、任意の脂質分子を意味する。

【0094】

本明細書で使用されるように、「アンチセンス化合物」または「アンチセンスペイロード」という用語は、とりわけ、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＤＮＡ、ＤＮＡ様、ＲＮＡ、ＲＮＡ様）、またはアンチセンス配向オリゴヌクレオチド、アンチセンスＰＮＡ、リボザイム、および外部ガイド配列（例えば、Ｇｕｅｒｒｉｅｒ−Ｔａｋａｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：８４６８，１９９７で説明されているように、リボヌクレアーゼＰを採用する配列）を含む、ある二本鎖または自己交雑構築物を包含する。アンチセンス化合物は、種々の手段によって、それらの効果を示すことができる。１つのそのような手段は、真核生物におけるリボヌクレアーゼＨまたは原核生物におけるリボヌクレアーゼＰ等の内因性ヌクレアーゼのアンチセンス媒介指図である（Ｃｈｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１２６６：１８１６２，１９９１、Ｆｏｒｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９：７８３，１９９０）。

【0095】

「陽イオン性脂質」とは、生理学的ｐＨで正味の正電荷を有する、任意の脂質分子を意味する。例示的な陽イオン性脂質は、例えば、表１において、本明細書で説明されるいずれかを含む。

【0096】

「Ｄｉｃｅｒ−基質ＲＮＡ」または「ＤｓｉＲＮＡ」とは、遺伝子サイレンシングが可能である２５〜３５個（例えば、２７個等の２５〜２７個）のヌクレオチド二本鎖分子の類を意味する。他のＲＮＡｉ剤と比較して、そのさらに長い長さにより、ＤｓｉＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒの有望な基質である。

【0097】

「二本鎖分子」とは、ＲＮＡ干渉を通して遺伝子産物を抑制するために使用することができる、二本鎖ＲＮＡ：ＲＮＡまたはＲＮＡ：ＤＮＡ分子を意味する。

【0098】

「発現」とは、当技術分野で公知である方法による、遺伝子またはポリペプチドの検出を意味する。例えば、ＤＮＡ発現はしばしば、サザンブロット法またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって検出され、ＲＮＡ発現はしばしば、ノーザンブロット法、ＲＴ−ＰＣＲ、遺伝子アレイ技術、またはリボヌクレアーゼ保護アッセイによって検出される。タンパク質発現レベルを測定する方法は、概して、ウェスタンブロット法、免疫ブロット法、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、免疫沈降、免疫蛍光、表面プラズモン共鳴、化学発光、蛍光偏光、リン光、免疫組織化学分析、マトリクス支援レーザ脱離／イオン化飛行時間（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）質量分析法、マイクロサイトメトリ、顕微鏡法、蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）、およびフローサイトメトリ、ならびに限定されないが、酵素活性または他のタンパク質パートナーとの相互作用を含む、タンパク質の性質に基づくアッセイを含むが、それらに限定されない。

【0099】

「交雑させる」とは、種々の厳密性の条件下で、本明細書で定義されるように、十分に相補的なポリヌクレオチド、またはその複数分の間で二本鎖分子を形成するように対合することを意味する（例えば、Ｗａｈｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５２：３９９（１９８７）、Ｋｉｍｍｅｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５２：５０７（１９８７）を参照）。例えば、高い厳密性の塩濃度は、通常、約７５０ｍＭ ＮａＣｌおよび７５ｍＭクエン酸三ナトリウム未満、約５００ｍＭ ＮａＣｌおよび５０ｍＭクエン酸三ナトリウム未満、または約２５０ｍＭ ＮａＣｌおよび２５ｍＭクエン酸三ナトリウム未満となるであろう。有機溶媒、例えば、ホルムアミドがない場合に、低い厳密性の交雑を得ることができる一方で、少なくとも約３５％のホルムアミドまたは少なくとも約５０％のホルムアミドの存在下で、高い厳密性の交雑を得ることができる。高い厳密性の温度条件は、通常は、少なくとも約３０℃、少なくとも３７℃、または４２℃の温度を含むであろう。交雑時間、洗剤、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度、およびキャリアＤＮＡの包含または除外等の様々な付加的パラメータが、当業者に周知である。必要に応じて、これらの種々の条件を組み合わせることによって、種々のレベルの厳密性が達成される。一実施形態では、交雑は、７５０ｍＭ ＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸三ナトリウム、および１％ＳＤＳ中で３０℃において起こるであろう。代替実施形態では、交雑は、その後に洗浄が続く、１２〜１６時間にわたる交雑後に、ｐＨ６．４の４００ｍＭ ＮａＣｌ、４０ｍＭ ＰＩＰＥＳ、および１ｍＭ ＥＤＴＡ中で５０℃または７０℃において起こるであろう。付加的な好ましい交雑条件は、その後に０．３ｘＳＳＣ中で７０℃での洗浄が続く、１ｘＳＳＣ中で７０℃または１ｘＳＳＣ、５０％ホルムアミド中で５０℃における交雑、あるいはその後に１ｘＳＳＣ中で６７℃での洗浄が続く、４ｘＳＳＣ中で７０℃または４ｘＳＳＣ、５０％ホルムアミド中で５０℃における交雑を含む。これらの条件での有用な変形例が、当業者に容易に明白となるであろう。そのような１つの例示的な変形例は、生理学的細胞内条件を模倣するように設計されている条件下での交雑の評価を含み、陽イオンおよび陰イオンは、陽イオンについては１０：１６０：２：２６でのナトリウム：カリウム：カルシウム：マグネシウム、陰イオンについては３：１０：１００：２０：６５での塩化物：重炭酸塩：リン酸塩：硫酸塩：グルコン酸塩といった割合で類別される。

【0100】

「脂質ベクター」とは、リポソーム、リポプレックス、ミセル、脂質ナノ粒子、核系粒子、トランスフェクション脂質（複数可）と組み合わせられるＲＮＡ結合剤−ＲＮＡ凝集体を含む粒子、または本発明の１つ以上の化合物を含む小胞系粒子を意味する。

【0101】

「マイクロＲＮＡ」（ｍｉＲＮＡ）とは、ＲＮＡ干渉を通して遺伝子産物を抑制するために使用することができる、一本鎖ＲＮＡ分子を意味する。

【0102】

「変調する」とは、発現、レベル、または活性が、変調因子がない場合に観察されるよりも大きい、または小さいように、遺伝子の発現、またはＲＮＡ分子、あるいは１つ以上のタンパク質またはタンパク質サブユニットをコードする同等のＲＮＡ分子のレベル、あるいは１つ以上のタンパク質またはタンパク質サブユニットの活性が、上方調節または下方調節されることを意味する。例えば、変調するという用語は、阻害または遺伝子サイレンシングを含むことができ、遺伝子の発現のレベル、あるいはＲＮＡ分子またはその同等物のレベルは、対照と比較して、少なくとも１０％（例えば、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％）だけ低減させられる。

【0103】

「中性脂質」とは、生理学的ｐＨで非荷電または中性両性イオン形態のいずれかで存在する、任意の脂質分子を意味する。

【0104】

「ポリアニオン系ペイロード」とは、製剤に組み込まれ得る、複数の負に帯電した原子を含む化学部分を意味する。ポリアニオン系ペイロードの実施例は、核酸、ＲＮＡｉ剤、ｓｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＤｓｉＲＮＡ、およびアンチセンスペイロードを含む。

【0105】

「ＲＮＡ結合剤」とは、核酸、例えば、治療製剤の核酸ペイロードを結合または交雑することが可能な任意の作用物質または作用物質の組み合わせを意味する。ＲＮＡ結合剤は、本明細書で説明される任意の脂質（例えば、本明細書または表１で説明されるもの等の１つ以上の陽イオン性脂質、または１つ以上の陽イオン性脂質の組み合わせ、ならびに１つ以上の陽イオン性脂質および中性脂質またはＰＥＧ−脂質複合体等の他の脂質の組み合わせ）を含む。ＲＮＡ結合剤は、内部凝集体等の製剤内の任意の有用な構造を形成することができる。

【0106】

「ＲＮＡｉ剤」とは、標的核酸を交雑することによって遺伝子サイレンシング効果を示す、任意の作用物質または化合物を意味する。ＲＮＡｉ剤は、配列特異的ＲＮＡｉ（例えば、厳密な条件下で）、例えば、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉オリゴヌクレオチド、低分子干渉核酸、低分子干渉修飾オリゴヌクレオチド、化学修飾ｓｉＲＮＡ、転写後遺伝子サイレンシングＲＮＡ（ｐｔｇｓＲＮＡ）、およびＤｉｃｅｒ−基質ＲＮＡ（ＤｓｉＲＮＡ）を媒介することが可能である、任意の核酸分子を含む。

【0107】

「短ヘアピンＲＮＡ」または「ｈＲＮＡ」とは、急峻なヘアピンカーブを生じ、遺伝子サイレンシングが可能であるＲＮＡの配列を意味する。

【0108】

「センス領域」とは、別の核酸のアンチセンス領域への十分な相補性を有する、本発明の核酸のヌクレオチド配列を意味する。加えて、本発明の核酸のセンス領域は、標的遺伝子ヌクレオチド配列との相同性を有する、ヌクレオチド配列を含むことができる。「アンチセンス領域」とは、標的遺伝子ヌクレオチド配列への十分な相補性を有する、本発明の核酸のヌクレオチド配列を意味する。

【0109】

「サイレンシング」または「遺伝子サイレンシング」とは、遺伝子の発現、または１つ以上のタンパク質をコードするＲＮＡ分子のレベルが、対照条件下で（例えば、ＲＮＡｉ剤がない場合に、あるいはスクランブル配列を伴う、または不整合を伴うＲＮＡｉ分子等の不活性または減衰分子の存在下で）観察されるものを下回って、ＲＮＡｉ剤の存在下で低減されることを意味する。遺伝子サイレンシングは、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％（すなわち、完全阻害）だけ遺伝子産物発現を減少させ得る。

【0110】

「低分子阻害ＲＮＡ」、「低分子干渉ＲＮＡ」、または「ｓｉＲＮＡ」とは、遺伝子サイレンシングが可能である１０〜４０個（例えば、２１個等の１５〜２５個）のヌクレオチド二本鎖分子の類を意味する。最も顕著には、ｓｉＲＮＡは、典型的には、ｓｉＲＮＡが特定の遺伝子産物の産物に干渉する、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路に関与する。

【0111】

「実質的同一性」または「実質的に同一」とは、それぞれ、参照配列と同一のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列を有するか、または２つの配列が最適に整合させられたときに、参照配列内の対応する場所で同一である、それぞれ、特定割合のアミノ酸残基またはヌクレオチドを有する、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列を意味する。例えば、参照配列と「実質的に同一」であるアミノ酸配列は、参照アミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一性を有する。ポリペプチドについては、比較配列の長さは、概して、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の連続アミノ酸、より好ましくは、少なくとも２５、５０、７５、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、または３５０個の連続アミノ酸、最も好ましくは、全長アミノ酸配列となるであろう。核酸については、比較配列の長さは、概して、少なくとも５個の連続ヌクレオチド、好ましくは、少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個の連続ヌクレオチド、最も好ましくは、全長ヌクレオチド配列となるであろう。デフォルト設定で配列分析ソフトウェア（例えば、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ，１７１０ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｖｅｎｕｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ ５３７０５のＳｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ）を使用して、配列同一性が測定されてもよい。そのようなソフトウェアは、種々の置換、欠失、および他の修飾に相同性を割り当てることによって、類似配列を合致させてもよい。

【0112】

「十分に相補的」とは、標的核酸として正確な相補的ポリヌクレオチド配列を有するか、または２つの配列が最適に整合させられたときに標的核酸内の対応する場所で正確な相補体である特定割合のヌクレオチドを有する、ポリヌクレオチド配列を意味する。例えば、標的核酸配列に「実質的に相補的」であるポリヌクレオチド配列は、標的核酸配列と少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％相補性を有する。１０から４０個のヌクレオチドの長さを有するＲＮＡｉ剤については、十分に相補的な配列は、１、２、３、４、または５個の非相補的ヌクレオチドを有するものを含む。実際に、例えば、ＤｓｉＲＮＡ剤を含む、ある実施形態では、活性二本鎖ＲＮＡｉ剤が、標的核酸に十分に相補的であるガイド鎖のわずか１５から１９個連続ヌクレオチドを保有することができる一方で、（ある実施形態では、残りのガイド鎖が、標的にされる核酸（例えば、ｍＲＮＡ）と部分的または完全に相補的であり得るが）残りのガイド鎖が標的核酸との任意の程度の相補性を保有する必要はない。

【0113】

「標的核酸」とは、発現または活性が変調される、任意の核酸配列を意味する。標的核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡであり得る。ある実施形態では、標的核酸は、標的ｍＲＮＡである。

【0114】

「トランスフェクション脂質」とは、核酸、例えば、核酸ペイロードを送達することが可能な任意の脂質または脂質の組み合わせを意味する（随意に、核酸ペイロードは、ＲＮＡ結合剤、例えば、１つ以上の陽イオン性脂質と関連している）。トランスフェクション脂質は、本明細書で説明される任意の脂質（例えば、本明細書または表１で説明されるもの等の１つ以上の陽イオン性脂質、１つ以上の陽イオン性脂質の組み合わせ、ならびに１つ以上の陽イオン性脂質および中性脂質、陰イオン性脂質、ＰＥＧ−脂質複合体、またはステロール誘導体等の任意の他の脂質または作用物質の組み合わせ）を含む。トランスフェクション脂質またはそのようなトランスフェクション脂質を含む組み合わせは、外部凝集表面等の製剤内の任意の有用な構造を形成することができる。

【0115】

「医薬組成物」とは、薬学的に容認可能な賦形剤を用いて製剤化され、哺乳類の疾患の治療のための治療計画の一部として政府規制機関の承認によって製造または販売される、本明細書で説明される化合物を含有する組成物を意味する。医薬組成物は、例えば、単位投薬形態（例えば、錠剤、カプセル、カプレット、ジェルキャップ、またはシロップ）での経口投与のため、（例えば、クリーム、ゲル、ローション、または軟膏としての）局所投与のため、（例えば、粒子塞栓物質を含まない滅菌溶液として、および静脈内使用に好適な溶媒系で）静脈内投与のため、または本明細書で説明される任意の他の製剤で製剤化することができる。

【0116】

「薬学的に容認可能な賦形剤」とは、患者において非毒性かつ非炎症性であるという性質を有する、本明細書で説明される化合物以外の任意の成分（例えば、活性化合物を懸濁または溶解させることが可能な媒介物）を意味する。賦形剤は、例えば、付着防止剤、酸化防止剤、結合剤、被覆、圧縮酸、崩壊剤、染料（顔料）、軟化剤、乳化剤、充填剤（希釈剤）、膜形成剤または被覆、香味料、香料、流動促進剤（流動増進剤）、潤滑剤、防腐剤、印刷インク、吸着剤、懸濁または分散剤、甘味料、および水和水を含んでもよい。例示的な賦形剤は、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶性セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、アルファデンプン、プロピルパラベン、レチニルパルミテート、シェラック、二酸化ケイ素、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、蔗糖、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、およびキシリトールを含むが、それらに限定されない。

【0117】

「薬学的に容認可能な塩」とは、適切な医学的判断の範囲内で、必要以上の毒性、刺激、アレルギー反応、および同等物を伴わずに、ヒトおよび動物の組織と接触して使用するために好適であり、妥当な便益／リスク比に相応する、塩を意味する。薬学的に容認可能な塩は、当技術分野で周知である。例えば、薬学的に容認可能な塩は、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６（１）：１，１９７７、およびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ： Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ，Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００８で説明されている。塩は、遊離塩基を好適な有機酸と反応させることによって、本発明の化合物の最終単離および精製中に、または別個に、原位置で調製することができる。代表的な酸付加塩は、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、へプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩、および同等物を含む。代表的なアルカリまたはアルカリ性土類金属塩は、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、および同等物、ならびに限定されないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、および同等物を含む、非毒性アンモニウム、４級アンモニウム、およびアミン陽イオンを含む。

【0118】

「対象」とは、ヒトまたはヒト以外の動物（例えば、哺乳類）のいずれか一方を意味する。

【0119】

本明細書で使用され、また当技術分野で良く理解されるように、「治療」とは、臨床結果等の有益または所望の結果を得るためのアプローチである。有益または所望の結果は、検出可能または検出不可能かにかかわらず、１つ以上の兆候または症状の軽減または改善、疾患、障害、または症状の程度の減少、疾患、障害、または症状の状態の安定化（すなわち、悪化しない）、疾患、障害、または症状の蔓延の予防、疾患、障害、または症状の進行の遅延または減速、疾患、障害、または症状の改善または緩和、および（部分的または完全）寛解を含むことができるが、それらに限定されない。疾患、障害、または症状を「緩和すること」とは、治療がない場合の程度または時間経過と比較して、疾患、障害、または症状の程度および／または望ましくない臨床兆候が減少させられ、および／または進行の時間経過が減速または延長させられることを意味する。「癌を治療すること」、「癌を予防すること」、または「癌を阻害すること」とは、腫瘍のサイズまたは癌細胞の数の低減を引き起こすこと、腫瘍のサイズまたは癌細胞増殖の増加を減速または阻害すること、腫瘍または他の癌の消滅とその再発との間の無病生存期間を増加させること、腫瘍または他の癌の初期または後続の発生の可能性を防止または低減すること、あるいは腫瘍または他の癌と関連付けられる有害兆候を低減することを意味する。所望の実施形態では、治療を乗り切る腫瘍または癌細胞の割合は、任意の標準アッセイを使用して測定されるように、初期数の腫瘍または癌細胞より少なくとも２０、４０、６０、８０、または１００％低い。望ましくは、本発明の化合物の投与によって誘導される腫瘍または癌細胞の数の減少は、非腫瘍または非癌細胞の数の減少より少なくとも２、５、１０、２０、または５０倍大きい。望ましくは、本発明の方法は、標準方法を使用して判定されるように、腫瘍のサイズまたは癌細胞の数の２０、４０、６０、８０、または１００％の減少をもたらす。望ましくは、治療された対象の少なくとも２０、４０、６０、８０、９０、または９５％は、腫瘍または癌の全ての兆候が消滅する、完全寛解を有する。望ましくは、腫瘍または癌は、再発しないか、または５、１０、１５、あるいは２０年以上後に再発する。対象の疾患または症状（例えば、癌）を「予防的に治療すること」とは、病徴の出現前に、疾患または症状の発現（すなわち、発病）のリスクを低減させること、あるいは疾患または症状の重症度を低減させることを意味する。予防的治療は、疾患またはその症状の出現を完全に予防または低減してもよく、および／または疾患あるいは疾患に起因する悪影響に対する部分または完全治癒に関して治療的であり得る。予防的治療は、疾患にかかりやすくあり得るが、それがあるとまだ診断されていない個人において、疾患または症状が起こることを低減または予防すること（例えば、癌を予防すること）を含んでもよい。

【図面の簡単な説明】

【0120】

【図1】アミノアミド（「アミド」と標識される）およびアミノアミン（「アミン」と標識される）化合物の例示的実施形態を示す。これらの化合物について、Ｒ^１およびＲ^２は、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、またはヘテロアルキニル等の本明細書で説明される任意の尾部基であり得る。

【図2A】例示的な化合物Ｌ−１からＬ−１４を示す。

【図2B】同上。

【図3】３級アミンを有する、例示的な化合物Ｌ−１５からＬ−２１を示す。

【図4】化合物Ｌ−５、Ｌ−６、Ｌ−２２、およびＬ−２３を含む、Ｌ−２の例示的な類似体を示す。

【図5】化合物Ｌ−２４からＬ−２９を含む、Ｌ−６の例示的な類似体を示す。

【図6】化合物Ｌ−３０からＬ−３６を含む、Ｌ−９の例示的なアミド類似体を示す。

【図7】各Ｒ^１およびＲ^２が、独立して、随意に置換されたＣ_{１１−２４}アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、またはヘテロアルキニル等の本明細書で説明される任意の尾部基である、ピペラジニル基を有する化合物Ｌ−３７からＬ−４１を示す。

【図8】追加の例示的なアミノアミン陽イオン性脂質構造Ｌ−４２、Ｌ−４３、およびＬ−４４を示す。

【図9】本発明のさらに例示的な陽イオン性脂質構造Ｌ−６、Ｌ−４５、Ｌ−４６、およびＬ−４７を示す。

【図10】治療されていない対照と比較した、化合物Ｌ−１またはＬ−２を含有する脂質粒子の生体外分解を示すグラフである。

【図11】Ｌ−１、Ｌ−２、Ｌ−５、Ｌ−６、Ｌ−７、Ｌ−８、Ｌ−２２、またはＬ−３０を含む脂質粒子の単回用量、および５ｍｇ／ｋｇのＤｓｉＲＮＡを使用し、４８時間後に細胞収穫が続く、マウス肝臓内のＨＰＲＴ１ ｍＲＮＡの生体内分解を示すグラフである。

【図12】Ｌ−２、Ｌ−５、Ｌ−６、またはＬ−３０を含む脂質粒子の単回用量、および１ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇのいずれか一方のＤｓｉＲＮＡを使用し、４８時間後に細胞収穫が続く、マウス肝臓内のＨＰＲＴ１ ｍＲＮＡの生体内分解を示すグラフである。

【図13】Ｌ−６またはＬ−３０を用いて製剤化された脂質粒子の２用量、および５ｍｇ／ｋｇのＤｓｉＲＮＡを使用し、４８時間後に細胞収穫が続く、マウス肝臓および同所性Ｈｅｐ３Ｂ腫瘍内のＨＰＲＴ１ ｍＲＮＡの生体内分解を示すグラフである。

【図14】Ｌ−６またはＬ−３０を用いて製剤化された脂質粒子の２用量、および５ｍｇ／ｋｇのＤｓｉＲＮＡを使用し、４８時間後に細胞収穫が続く、マウス肝臓および同所性ＨｅｐＧ２腫瘍内のＨＰＲＴ１ ｍＲＮＡの生体内分解を示すグラフである。

【図15】生体内Ｈｅｐ３Ｂモデルにおける血清α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）レベルへの活性ＤｓｉＲＮＡを伴う脂質粒子製剤Ｌ−６およびＬ−３０（「Ｌ−６活性」および「Ｌ−３０活性」）の影響を示すグラフである。対照が、ＤｓｉＲＮＡを伴わない製剤（「Ｌ−６対照」および「Ｌ−３０対照」）および緩衝剤（「ＰＢＳ」）について提供される。

【図16】生体内Ｈｅｐ３Ｂモードにおける腫瘍重量への活性ＤｓｉＲＮＡを伴う脂質粒子製剤Ｌ−６およびＬ−３０（「Ｌ−６活性」および「Ｌ−３０活性」）への影響を示すグラフである。対照が、ＤｓｉＲＮＡを伴わない製剤（「Ｌ−６対照」および「Ｌ−３０対照」）および緩衝剤（「ＰＢＳ」）について提供される。

【図17】ジオレイル尾部基を有する、例示的な化合物Ｌ−４８およびＬ−４９を示す。

【図18】Ｌ−３０を含む脂質粒子の単回静脈注射用量、および１、３、または１０ｍｇ／ｋｇのいずれか一方のＤｓｉＲＮＡを使用し、４８時間後に細胞収穫が続く、マウス肝臓および同所性Ｈｅｐ３Ｂ腫瘍（０．５ｇ±０．１）内のＨＰＲＴ１ ｍＲＮＡの生体内分解を示すグラフである。Ｎ＝７／群の肝臓および腫瘍（ＳＥＭを伴う平均）。本明細書で説明されるようなＬ−３０［１］およびＬ−３０［２］といった、２つの製剤が検査された。

【図19】Ｌ−３０［１］製剤を伴う脂質粒子の単回用量およびＤｓｉＲＮＡを使用した、複数の同所性肝臓癌モデルにおけるＨＰＲＴ１ ｍＲＮＡの生体内分解を示すグラフである。Ｈｅｐ３ＢおよびＨｅｐＧ２モデルが、細胞懸濁液として移植され、ＨｕＨ１、ＨｕＨ７、およびＭＨＣＣ９７Ｈが、トロカール断片として移植された。Ｎ＝５〜７／群、５ｍｇ／ｋｇでの静脈注射、Ｑ２Ｄｘ１。全ての群での標的分解が、ＰＢＳに対して有意であった（ｐ＜０．０５）。

【図20】Ｌ−３０［１］製剤を伴う脂質粒子の単回用量および種々の独立ＤｓｉＲＮＡを使用した、同所性Ｈｅｐ３Ｂ ＨＣＣ腫瘍モデルにおける種々のｍＲＮＡの生体内分解を示すグラフである。Ｎ＝６〜７／群、５ｍｇ／ｋｇでの静脈注射、ＱＴＩＷｘ２であり、全ては１０ｍｇ／ｋｇでの経口投与、ＱＤｘ１４によってソラフェニブを与えられた。＊＊＝ｐ＜０．０１、＊＝ｐ＜０．０５。

【図21】７２時間後に細胞収穫が続く、Ｌ−３０の７つの異なる製剤（［Ａ］から［Ｇ］）に５ｍｇ／ｋｇのＤｓｉＲＮＡを含有する脂質粒子の単回用量を用いた、Ｈｅｐ３Ｂ ＨＣＣ腫瘍組織内のＨＰＲＴ１ ｍＲＮＡの生体内分解を示すグラフである。誤差を伴うバーの中の値は、平均＋ＳＥＭ（Ｎ＝７／群）を表す。

【図22】第５日目での細胞収穫が続く、第１日目および第３日目で２つの製剤Ｌ−６［２］およびＬ−３０［２］に１０ｍｇ／ｋｇのＤｓｉＲＮＡを含有する脂質粒子の用量を用いた、Ｈ１９７５ ＮＳＣＬＣ ＳＣ異種移植肺腫瘍組織内のＨＰＲＴ１ ｍＲＮＡの生体内分解を示すグラフである。誤差を伴うバーの中の値は、平均＋ＳＥＭ（Ｎ＝７／群）を表す。

【図23】第５日目での細胞収穫が続く、第１日目および第３日目で２つの製剤Ｌ−６［２］およびＬ−３０［２］に１０ｍｇ／ｋｇのＤｓｉＲＮＡを含有する脂質粒子の用量を用いた、２２Ｒｖ１前立腺癌ＳＣ異種移植片内のＨＰＲＴ１ ｍＲＮＡの生体内分解を示すグラフである。誤差を伴うバーの中の値は、平均＋ＳＥＭ（Ｎ＝７／群）を表す。

【図24】第５日目での細胞収穫が続く、第１日目および第３日目で３つの製剤Ｌ−６［１］、Ｌ−３０［Ａ］、およびＬ−３０［Ｅ］に１０ｍｇ／ｋｇのＤｓｉＲＮＡを含有する脂質粒子の用量を用いた、肝臓に移植された２２Ｒｖ１前立腺癌内のＨＰＲＴ１ ｍＲＮＡの生体内分解を示すグラフである。誤差を伴うバーの中の値は、平均＋ＳＥＭ（Ｎ＝７／群）を表す。

【発明を実施するための形態】

【0121】

我々は、脂質粒子に製剤化され得る、アミノアミンおよびアミノアミド陽イオン性脂質を開発した。本発明の製剤は、（例えば、対象において生体外または生体内で）細胞へのポリアニオン系ペイロード（例えば、核酸分子またはＲＮＡｉ剤）の送達のために使用されてもよい。ポリアニオン系ペイロードの送達は、細胞内で配列特異的遺伝子サイレンシングを達成してもよい。

【0122】

アミノアミンおよびアミノアミド脂質
本発明の化合物は、式（Ｉ）の任意の化合物を含む。特定の実施形態では、化合物は、表１から選択される。

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【表1-5】

【表1-6】

【0123】

（例えば、表１で提供されるような）本発明の化合物は、当技術分野で確立されたものに類似するプロセスによって、例えば、方式１〜４に示される反応シーケンスによって、調製されてもよい。これらの反応シーケンスによって産生される例示的な脂質、またはその修飾が、図１〜９および図１７で提供される。
方式１

【化11】

【0124】

式Ｃ１の２級アミンは、Ｒ^４が本明細書で説明される、１級アミンＢ１を用いて、本明細書で説明されるように、Ｒ^１およびＲ^２が脂質尾部基である、ケトンＡ１を処理することによって、還元的アミノ化条件下で調製されてもよい。還元的アミノ化のための条件は、適切な溶媒中でケトンＡ１および１級アミンＢ１をシアノ水素化ホウ素ナトリウムまたはトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム等の還元剤と組み合わせることを含む。特定の実施形態では、Ｃ１のアミノアミン脂質はさらに、窒素に隣接するＲ^３の中の炭素上にオキソ基を有する、対応するアミノアミド脂質を形成するように酸化させられる。他の実施形態では、Ｃ１のアミノアミン脂質はさらに、Ｒ^４の中の窒素において、または任意の炭素上で、アルキル化を受ける。この方式を使用して産生することができる例示的な化合物が、図１で提供される。
方式２

【化12】

【0125】

式Ｅ２の３級アミンは、Ｒ^３およびＲ^４が本明細書で説明される、２級アミンＤ２を用いて、本明細書で説明されるように、各Ｒ^１およびＲ^２が脂質尾部基である、ケトンＡ２を処理することによって、還元的アミノ化条件下で調製されてもよい。還元的アミノ化のための条件は、適切な溶媒中でケトンＡ２および２級アミンＤ２をシアノ水素化ホウ素ナトリウムまたはトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム等の還元剤と組み合わせることを含む。Ｄ２のいくつかの実施形態では、Ｒ^３およびＲ^４は、１つ以上のヘテロ原子を含有する複素環を形成するように接合し、結果として生じた３級アミンＥ２は、そのようなＲ^３およびＲ^４基を含む。特定の実施形態では、Ｅ２のアミノアミン脂質はさらに、窒素に隣接するＲ^３またはＲ^４の中の炭素上にオキソ基を有する、対応するアミノアミド脂質を形成するように酸化させられる。他の実施形態では、Ｅ２のアミノアミン脂質はさらに、Ｒ^３および／またはＲ^４の中の任意の炭素上でアルキル化を受ける。
方式３

【化13】

【0126】

式Ｆ３のアミンは、随意に、高い圧力下で、適切な溶媒中でケトンＡ３、アンモニア、二水素、および触媒を組み合わせることによって調製されてもよい。式Ｈ３のアミノアミド脂質は、ＬＧが離脱基であり、Ｒ^４が本明細書で説明される、適切な溶媒中でアミンＦ３を活性化カルボン酸Ｇ３と組み合わせることによって調製されてもよい。例示的なＬＧは、ハロ（例えば、塩化物、臭素、またはヨウ素）、トシラート、およびトリフラートを含む。Ｉ３のアミノアミン脂質は、アミドＨ３を還元剤（例えば、水素化アルミニウムリチウム、ボランテトラヒドロフラン、またはボラン硫化ジメチル）と組み合わせることによって調製されてもよい。特定の実施形態では、Ｈ３のアミノアミド脂質はさらに、Ｒ^４′の中の窒素において、または任意の炭素上でアルキル化を受ける。他の実施形態では、Ｉ３のアミノアミン脂質はさらに、Ｒ^４の中の窒素において、または任意の炭素上でアルキル化を受ける。
方式４

【化14】

【0127】

式Ｋ４のアミノアミド脂質は、ＬＧが離脱基であり、Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^４が本明細書で説明される、適切な溶媒中でケトンＡ４およびアミンＪ４を組み合わせることによって調製されてもよい。例示的なＬＧは、ハロ（例えば、塩化物、臭素、またはヨウ素）、トシラート、およびトリフラートを含む。Ｌ４のアミノアミン脂質は、アミドＫ４を還元剤（例えば、水素化アルミニウムリチウム、ボランテトラヒドロフラン、またはボラン硫化ジメチル）と組み合わせることによって調製されてもよい。他の実施形態では、Ｋ４のアミノアミド脂質はさらに、Ｒ^４′の中の窒素において、または任意の炭素上でアルキル化を受ける。他の実施形態では、Ｌ４のアミノアミン脂質はさらに、Ｒ^４の中の窒素において、または任意の炭素上でアルキル化を受ける。この方法によって産生される例示的な化合物が、図７で提供される。

【0128】

上記の方式のうちのいずれかでは、Ｒ^４は、本明細書で説明されるように、随意に置換されたヘテロシクリル、随意に置換された−Ｌ^１−ＮＲ^５Ｒ６^５、随意に置換された−Ｃ（Ｏ）−Ｌ^１−ＮＲ^５Ｒ^６、または随意に置換された−Ｌ^１−ヘテロシクリルであり得る。

【0129】

上記の方式のうちのいずれかでは、化合物はさらに、Ｎ上に随意に置換されたＣ_１−６アルキルを導入して（すなわち、Ｒ^３が随意に置換されたＣ_１−６アルキルである）３級アミンを形成するように、アルキル化することができる。３級アミンを有する例示的な化合物が、図３で提供される。

【0130】

例えば、図１〜９および図１７のように、本明細書で説明される脂質のうちのいずれかは、上記および実施例１〜５で提供される合成方式を適用することによって、必要であれば、当業者に公知である修飾を行うことによって産生することができる。

【0131】

脂質頭部基
本発明の化合物は、概して、脂質頭部基と、ヘッドピースと、１つ以上の脂質尾部基とを含む。ヘッドピース、例えば、＞ＣＨ−は、頭部基を尾部基（複数可）に接続する。特定の実施形態では、頭部基は、２つ以上の窒素原子を含む。例えば、表２または３において、本明細書で説明される頭部基のうちのいずれかは、１つ以上の置換基（例えば、アルキルについて本明細書で説明される１つ以上の置換基）と随意に置換されてもよい。

【0132】

アミン基を有する頭部基の非限定的なリストが、表２で提供される。本明細書で説明される頭部基のうちのいずれか、例えば、表２の中の頭部基Ｈ−１からＨ−３９は、本発明の化合物を形成するように、ヘッドピース＞ＣＨ−を介して、例えば、表４において、本明細書で説明される尾部基のうちのいずれかと組み合わせることができる。

【表2-1】

【表2-2】

【表2-3】

【0133】

アミド基を有する頭部基の非限定的なリストが、表３で提供される。本明細書で説明される頭部基のうちのいずれか、例えば、表３の中の頭部基Ｈ−４０からＨ−５２は、本発明の化合物を形成するように、ヘッドピース＞ＣＨ−を介して、例えば、表４において、本明細書で説明される尾部基のうちのいずれかと組み合わせることができる。

【表3】

【0134】

脂質尾部基
本明細書で説明されるように、本発明の化合物は、概して、１つ以上のヘテロ原子を随意に含むことができる、１つ以上の尾部基を含む。各化合物について、尾部基は、同一であり得るか、または異なり得る。例えば、表４において、本明細書で説明される尾部基のいずれかは、１つ以上の置換基（例えば、アルキルについて本明細書で説明される１つ以上の置換基）と随意に置換されてもよい。

【0135】

例示的な尾部基は、リノレニル（Ｃ１８：３）、リノレニルオキシ（Ｃ１８：３）、リノレノイル（Ｃ１８：３）、リノレイル（Ｃ１８：２）、リノレイルオキシ（Ｃ１８：２）、およびリノレオイル（Ｃ１８：２）等の、炭素または１つ以上のヘテロ原子（例えば、Ｏ）を有する飽和または不飽和基、ならびにメチレンによってヘッドピースに接続される、本明細書で説明される任意のヘテロ原子尾部基、例えば、リノレニルオキシメチレン（Ｃ１８：３）、リノレノイルメチレン（Ｃ１８：３）、およびリノレイルオキシメチレン（Ｃ１８：２）、またはリノレオイルメチレン（Ｃ１８：２）の群から選択される尾部基を含む。脂質尾部基の付加的な非限定的リストが、表４で提供される。

【表4-1】

【表4-2】

【0136】

製剤
本発明の化合物は、製剤を産生するように、１つ以上の脂質分子（例えば、陽イオン性、陰イオン性、または中性脂質）と組み合わせられてもよい。本製剤はまた、１つ以上の構成要素（例えば、ステロール誘導体、ＰＥＧ−脂質複合体、ポリアミド−脂質複合体、ガングリオシド、酸化防止剤、界面活性剤、両親媒性物質、または塩）および／または１つ以上のポリアニオン系ペイロード（例えば、１つ以上の核酸またはＲＮＡｉ剤）を含むこともできる。核酸ペイロードを組み込むように脂質を製剤化する方法は、例えば、参照することにより本明細書に組み込まれる、Ｊｕｄｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１９（３）：６６１，２００９、Ｎｏｂｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６４（４）：７４１，２００９、Ａｂｒａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１８（１）：１７１，２００９、Ｙａｇｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６９（１６）：６５３１，２００９、Ｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ １３３（２）：１３２，２００９、Ｍａｎｇａｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５５５：２９，２００９で説明されている。

【0137】

１つよりも多くの脂質分子を伴う製剤
本発明の製剤は、本明細書で説明されるように、ポリペプチド−脂質複合体、および脂質ベクターの形成または安定性に役立つ他の構成要素を含む、脂質分子の任意の有用な組み合わせ（例えば、本発明の化合物、陽イオン性脂質（１つ以上の陽イオン性脂質、例えば、本明細書で説明されるような本発明の１つ以上の陽イオン性脂質を随意に含む、および／または当技術分野で公知である１つ以上の陽イオン性脂質を随意に含む）、中性脂質、陰イオン性脂質、およびＰＥＧ−脂質複合体）を含んでもよい。当業者であれば、特定の作用物質のカプセル化、脂質製剤の安定性、大規模反応条件、または任意の他の関連因子に有利に働く組み合わせを最適化する方法が分かるであろう。本発明の製剤は、形成または安定性に役立つ他の構成要素を含んでもよい。

【0138】

製剤中の各構成要素の割合は、ＲＮＡｉ剤をカプセル化し、ＲＮＡｉ剤を細胞の中へ移入することが可能な脂質ベクターを産生するように平衡を保たせることができる。例示的な製剤は、約１０モル％から約４０モル％の本発明の１つ以上の化合物、約１０モル％から約４０モル％の１つ以上の陽イオン性脂質、約１モル％から約２０モル％の１つ以上のＰＥＧ−脂質複合体、約５モル％から約２０モル％の１つ以上の中性脂質、および約２０モル％から約４０モル％の１つ以上のステロール誘導体を含む。特定の実施形態では、本製剤は、約２０モル％から約２５モル％（例えば、約２１．０モル％、２１．２モル％、２１．４モル％、２１．６モル％、２１．８モル％、または２２モル％）の本発明の１つ以上の化合物、約２５モル％から約３０モル％（例えば、約２５．１モル％、２５．２モル％、２５．３モル％、２５．４モル％、２５．５モル％、２５．６モル％、２５．７モル％、２５．８モル％、２５．９モル％、２６．０モル％、２６．２モル％、２６．４モル％、２６．６モル％、２６．８モル％、または２７モル％）の１つ以上の陽イオン性脂質（例えば、ＤＯＤＭＡ）、約１０モル％から約１５モル％（例えば、約１３．０モル％、１３．２モル％、１３．４モル％、１３．６モル％、１３．８モル％、１４モル％、１４．１モル％、１４．３モル％、１４．５モル％、１４．７モル％、または１４．９モル％）の１つ以上の中性脂質（例えば、ＤＳＰＣ）、約２．５モル％から約１０モル％（例えば、約２．５モル％、２．６モル％、２．７モル％、２．８モル％、２．９モル％、３モル％、３．５モル％、４モル％、４．３モル％、４．５モル％、４．７モル％、５モル％、５．３モル％、５．５モル％、５．７モル％、６モル％、６．５モル％、６．７モル％、７モル％、７．５モル％、８モル％、８．５モル％、または９モル％）の１つ以上のＰＥＧ−脂質複合体（例えば、約２．８モル％、２．９モル％、３．０モル％、３．５モル％、３．７モル％、３．９モル％、４モル％、４．１モル％、４．３モル％、４．５モル％、４．７モル％、４．９モル％、５モル％、５．１モル％、５．３モル％、５．５モル％、５．７モル％、５．９モル％、６モル％、６．３モル％、６．５モル％、６．７モル％、または７モル％のＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥおよび／またはＰＥＧ２０００−ＤＭＰＥ、および／または３モル％、３．５モル％、３．７モル％、３．９モル％、４モル％、４．１モル％、４．３モル％、４．５モル％、４．７モル％、４．９モル％、５モル％、５．１モル％、５．３モル％、５．５モル％、５．７モル％、５．９モル％、６モル％、６．３モル％、６．５モル％、６．７モル％、または７モル％のＰＥＧ２０００−ＤＭＧ）、および約２５モル％から約３５モル％（例えば、約２８．４モル％、２８．６モル％、２８．８モル％、２９．０モル％、３０モル％、３１モル％、３２モル％、３３モル％、３３．２モル％、３３．４モル％、３３．６モル％、３３．８モル％、３４モル％、３４．４モル％、３４．７モル％、または３４．９モル％）のステロール誘導体（例えば、コレステロール）を含む。

【0139】

本製剤は、任意の有用な量の１つ以上の陽イオン性脂質を含むことができる。いくつかの実施形態では、本製剤中の陽イオン性脂質の含有量は、約１０モル％から約４０モル％（例えば、約１０モル％から１５モル％、約１５モル％から２０モル％、約２０モル％から２５モル％、約２５モル％から３０モル％、約３０モル％から３５モル％、および約３５モル％から４０モル％）である。特定の実施形態では、混合陽イオン性脂質（例えば、１０．８モル％のＬ−１および１０．８モル％のＬ−２）が使用される。

【0140】

いくつかの実施形態では、本製剤は、１つ以上のＲＮＡ結合剤および１つ以上のトランスフェクション脂質を有する、脂質粒子を含み、１つ以上のＲＮＡ結合剤は、約１０モル％から約４０モル％の１つ以上の陽イオン性脂質（例えば、ＤＯＤＭＡ）、および約０．５モル％から約１０モル％の１つ以上のＰＥＧ−脂質複合体（例えば、ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ等のＰＥＧ−ＤＳＰＥおよび／またはＰＥＧ２０００−ＤＭＰＥ等のＰＥＧ−ＤＭＰＥ）を含み、１つ以上のトランスフェクション脂質は、約１０モル％から約４０モル％の本発明の１つ以上の化合物（例えば、Ｌ−６、−３０、または表１の中のいずれか）、約５モル％から約２０モル％の１つ以上の中性脂質（例えば、ＤＳＰＣ）、約０．５モル％から約１０モル％の１つ以上のＰＥＧ−脂質複合体（例えば、ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ等のＰＥＧ−ＤＳＰＥ、および／またはＰＥＧ−ＤＭＰＥ、例えば、ＰＥＧ２０００−ＤＭＰＥ）、および約２０モル％から約４０モル％の１つ以上のステロール誘導体（例えば、コレステロール）を含む。

【0141】

脂質粒子のＲＮＡ結合剤（複数可）は、任意の有用な脂質および複合体の組み合わせを含むことができる。特定の実施形態では、陽イオン性脂質（例えば、ＤＯＤＭＡ）の含有量は、約１０モル％から約４０モル％（例えば、約２０モル％から４０モル％、２０モル％から３５モル％、２０モル％から３０モル％、１５モル％から４０モル％、１５モル％から３５モル％、１５モル％から２５モル％、または１５モル％から２０モル％）である。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ−脂質複合体（例えば、ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ等のＰＥＧ−ＤＳＰＥおよび／またはＰＥＧ２０００−ＤＭＰＥ等のＰＥＧ−ＤＭＰＥ）は、約０．５モル％から約１０モル％（例えば、約０．５モル％から１モル％、０．５モル％から５モル％、０．５モル％から１０モル％、１モル％から５モル％、または１モル％から１０モル％）である。

【0142】

脂質粒子のトランスフェクション脂質（複数可）は、任意の有用な脂質および複合体の組み合わせを含むことができる。特定の実施形態では、本発明の１つ以上の化合物（例えば、Ｌ−６、−３０、または表１の中のいずれか）の含有量は、約１０モル％から約４０モル％（例えば、約１０モル％から２０モル％、１０モル％から３０モル％、１０モル％から３５モル％、１５モル％から２０モル％、１５モル％から２５モル％、１５モル％から３０モル％、１５モル％から３５モル％、１５モル％から４０モル％、２０モル％から２５モル％、２０モル％から３０モル％、２０モル％から３５モル％、２０モル％から４０モル％、２５モル％から３０モル％、２５モル％から３５モル％、または２５モル％から４０モル％）である。いくつかの実施形態では、１つ以上の中性脂質（例えば、ＤＳＰＣ）の含有量は、約５モル％から約２０モル％（例えば、約５モル％から１０モル％、５モル％から１５モル％、７モル％から１０モル％、７モル％から１５モル％、７モル％から２０モル％、１０モル％から１５モル％、または１０モル％から２０モル％）である。いくつかの実施形態では、１つ以上のＰＥＧ−脂質複合体（例えば、ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ等のＰＥＧ−ＤＳＰＥおよび／またはＰＥＧ２０００−ＤＭＰＥ等のＰＥＧ−ＤＭＰＥ）の含有量は、約０．５モル％から約１０モル％（例えば、約０．５モル％から１モル％、０．５モル％から５モル％、０．５モル％から１０モル％、１モル％から５モル％、または１モル％から１０モル％）である。いくつかの実施形態では、１つ以上のステロール誘導体（例えば、コレステロール）の含有量は、約２０モル％から約４０モル％（例えば、約２０モル％から２５モル％、２０モル％から３０モル％、２０モル％から３５モル％、２０モル％から４０モル％、２５モル％から３０モル％、２５モル％から３５モル％、または２５モル％から４０モル％）である。

【0143】

他の実施形態では、本発明の化合物は、ＲＮＡ結合剤（複数可）の製剤で使用される（例えば、約２５．９モル％のＬ−６、Ｌ−３０、Ｌ−４８、またはＬ−４９）。特定の実施形態では、ＲＮＡ結合剤（複数可）の製剤で使用される本発明の化合物は、トランスフェクション脂質（複数可）の製剤で使用される本発明の化合物とは異なる（例えば、ＲＮＡ結合剤としての２５．９モル％Ｌ−４８、およびトランスフェクション脂質としての２１．６モル％Ｌ−３０）。本製剤のいくつかの実施形態では、１つ以上のＲＮＡ結合剤は、内部凝集体を形成し、１つ以上のトランスフェクション脂質は、外部凝集表面を形成する。特定の実施形態では、外部凝集表面は、膜、脂質二重層、および／または多重膜層ではない。

【0144】

本製剤はまた、任意の有用な量の１つ以上のＰＥＧ−脂質複合体を含むこともできる。いくつかの実施形態では、本製剤中のＰＥＧ−脂質複合体の含有量は、約１モル％から約２０モル％（例えば、約１モル％から約２モル％、約２モル％から約４モル％、約２モル％から約７モル％、約４モル％から約８モル％、約８モル％から約１２モル％、約１２モル％から約１６モル％、または約１６モル％から約２０モル％）である。他の実施形態では、ＰＥＧ−脂質複合体の含有量は、約７モル％、６モル％、３．０モル％、または２．５モル％である。また、ＰＥＧ−脂質含有量は、ＤＳＰＣまたはコレステロールのいずれか一方、あるいは両方の含有量の適切な調整によって、約１モル％から約２０モル％まで変化させられてもよい。ＰＥＧ−脂質は、Ｃ１４：０（表４のような、例えば、ＰＥＧ−ＤＳＰＥまたはＰＥＧ−ＤＭＰＥ等）、Ｃ１６（ＰＥＧ−ＤＰＰＥ、ＰＥＧ−ＤＰＧ等）、Ｃ１８：０（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ、ＰＥＧ−ＤＳＧ等）、またはＣ１８：１（ＰＥＧ−ＤＯＰＥ、ＰＥＧ−ＤＯＧ等）を使用することによって、変化させられてもよい。さらに、異なる分子量のＰＥＧ部分を使用することができる（ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ３４００、ＰＥＧ５０００等）。特定の実施形態では、混合ＰＥＧ−複合体が、本明細書で説明されるように使用される。特定の実施形態では、ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥが使用される。特定の実施形態では、ＰＥＧ２０００−ＤＭＰＥが使用される。

【0145】

ＲＮＡｉ剤を伴う製剤
本発明の製剤は、本明細書で説明される方法のうちのいずれかによって、ＲＮＡｉ剤とともにアミノアミン陽イオン性脂質および／またはアミノアミド脂質を用いて製剤化されてもよい。例えば、参照することにより本明細書に組み込まれる、Ｊｕｄｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１９（３）：６６１，２００９、Ｎｏｂｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６４（４）：７４１，２００９、Ａｂｒａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１８（１）：１７１，２００９、Ｙａｇｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６９（１６）：６５３１，２００９、Ｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ １３３（２）：１３２，２００９、Ｍａｎｇａｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５５５：２９，２００９を参照されたい。

【0146】

本製剤は、任意の有用な比で、ＲＮＡｉ剤と、脂質分子および／または１つ以上の構成要素とを含むことができる。例示的な比は、ＲＮＡｉ剤：総脂質比の約１：１０から約１：１００（重量／重量）（例えば、約１：１０から約１：５０、例えば、約１：２０）の（重量／重量）比を含み、総脂質比は、１つ以上の脂質分子（例えば、陽イオン性、陰イオン性、または中性脂質）および１つ以上の構成要素（例えば、ステロール誘導体、ＰＥＧ−脂質複合体、ポリアミド−脂質複合体、ガングリオシド、酸化防止剤、界面活性剤、両親媒性物質、または塩）の組み合わせの重量である。

【0147】

本製剤は、本明細書で説明される任意のＲＮＡｉ剤の約１ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇに及ぶ用量で、ＲＮＡｉ剤を含むことができる。例示的な用量は、製剤中に１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇのＲＮＡｉ剤を含む。

【0148】

製剤を調製する方法
本発明の製剤は、任意の有用なプロセスで調製することができる。１つの例示的な手順では、製剤の構成要素（例えば、１つ以上のＲＮＡ結合剤、トランスフェクション脂質、または本明細書で説明される任意の脂質）が、溶媒（例えば、水性溶媒、非水性溶媒、またはそれらの溶媒混合物）中で溶解させられる。結果として生じた脂質懸濁液は、随意に、濾過し、混合（例えば、バッチ混合、インライン混合、および／またはボルテックス）し、（例えば、窒素またはアルゴン気流を使用して）蒸発させ、（例えば、水性溶媒、非水性溶媒、またはそれらの溶媒混合物中で）再懸濁させ、凍結融解し、押し出し、および／または超音波分解することができる。さらに、脂質懸濁液は、随意に、最終懸濁液を産生するように、任意の所望の構成要素（例えば、１つ以上のＲＮＡｉ剤、ＲＮＡ結合剤、トランスフェクション脂質、および／または本明細書で説明される任意の脂質）を添加することによって処理することができる。１つ以上の所望の構成要素は、懸濁液と同一または異なる溶媒中で提供することができる。例えば、脂質懸濁液は、第１の溶媒または溶媒系（例えば、水、水−ＨＣｌ、水−エタノール、緩衝剤（例えば、５ｍＭ、１０ｍＭ、５０ｍＭ、７５ｍＭ、１００ｍＭ、または１５０ｍＭ等のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ハンク平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）、アール平衡塩溶液（ＥＢＳＳ）、炭酸塩、乳酸塩、アスコルビン酸塩、およびクエン酸塩）等の１つ以上の水性または非水性溶媒（複数可）、生理学的浸透圧溶液（２９０ｍＯｓｍ／ｋｇ、例えば、０．９％生理食塩水、５％デキストロース、および１０％蔗糖）、生理食塩水、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、グリセロール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、クロロホルム、ジクロロメタン、ヘキサン、シクロヘキサン、アセトン、エーテル、ジエチルエーテル、ジオキサン、イソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、またはそれらの組み合わせ）の中で提供することができ、ＲＮＡｉ剤は、第２の溶媒または溶媒系、例えば、水、水−ＨＣｌ、水−エタノール、緩衝剤（例えば、５ｍＭ、１０ｍＭ、５０ｍＭ、７５ｍＭ、１００ｍＭ、または１５０ｍＭ等のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ハンク平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）、アール平衡塩溶液（ＥＢＳＳ）、炭酸塩、乳酸塩、アスコルビン酸塩、およびクエン酸塩）等の１つ以上の水性または非水性溶媒（複数可）、生理学的浸透圧溶液（２９０ｍＯｓｍ／ｋｇ、例えば、０．９％生理食塩水、５％デキストロース、および１０％蔗糖）、生理食塩水、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、グリセロール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、クロロホルム、ジクロロメタン、ヘキサン、シクロヘキサン、アセトン、エーテル、ジエチルエーテル、ジオキサン、イソプロピルエーテル、テトラヒドロフランまたはそれらの組み合わせの中で提供することができる。水性溶媒および／または緩衝剤の例示的な濃度は、約４％から約８％エタノール（例えば、約４％から５％、５％から６％、６％から７％、または７％から８％）、約１０ｍＭから約１００ｍＭクエン酸塩（例えば、約１０ｍＭから３０ｍＭ、３０ｍＭから５０ｍＭ、５０ｍＭから７０ｍＭ、７０ｍＭから９０ｍＭ、または９０ｍＭから１００ｍＭ）を含む。溶媒または溶媒系のうちのいずれかは、酸化防止剤、塩（例えば、塩化ナトリウム）、クエン酸、アスコルビン酸、グリシン、システイン、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、マンニトール、乳糖、トレハロース、マルトース、グリセロール、および／またはグルコース等の１つ以上の安定剤を含むことができる。さらなる実施例では、１つ以上のＲＮＡ結合剤が、第１の溶媒または溶媒系を使用して脂質懸濁液に導入され、次いで、第２の溶媒または溶媒系の中の１つ以上のトランスフェクション脂質の添加が続き、第１および第２の溶媒または溶媒系は、同一であるか、または異なる（例えば、第１の溶媒または溶媒系は、本明細書で説明されるいずれかであり、第２の溶媒または溶媒系は、本明細書で説明されるいずれかである）。特定の実施形態では、第２の溶媒または溶媒系は、生理食塩水、緩衝剤（例えば、クエン酸塩またはＰＢＳ）、水、およびエタノールから成る群より選択される、１つ以上の水性または非水性溶媒を含む。最終懸濁液は、随意に、（例えば、超遠心分離機によって）分離し、混合（例えば、バッチ混合、インライン混合、および／またはボルテックス）し、再懸濁させ、（例えば、１つ以上の溶媒または緩衝系を用いて）調整し、超音波分解し、凍結融解し、押し出し、および／または精製することができる。

【0149】

陽イオン性脂質
１つ以上の陽イオン性脂質を本製剤に含むことができる。本発明の化合物に加えて、他の陽イオン性脂質は、参照することにより本明細書に組み込まれる、Ｌｏｖｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ，１０７（５）：１８６４−１８６９（２０１０）で説明されるように、Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチル塩化アンモニウム（ＤＯＤＡＣ）、１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）、Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム（ＤＤＡＢ）、１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（キラル形態Ｒ−ＤＯＴＡＰおよびＳ−ＤＯＴＡＰを含むＤＯＴＡＰ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ−２−（スペルミンカルボキシアミド）エチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム（ＤＯＳＰＡ）、ジオクタデシルアミドグリシルカルボキシスペルミン（ＤＯＧＳ）、１，２−ジオレオイル−３−ジメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＤＡＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル（２，３−ジオレイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）、Ｎ−（１，２−ジミリスチルオキシプロプ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルＮ−ヒドロキシエチルアンモニウム（ＤＭＲＩＥ）、１，２−ジリノレイルオキシ−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、１，２−ジリノレニルオキシ−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）、１，２−ジリノレオイル−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＡＰ）、１−リノレオイル−２−リノレイルオキシ−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−２−ＤＭＡＰ）、１，２−ジリノレイルカルバモイルオキシ−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−Ｃ−ＤＡＰ）、１，２−ジリノレイルチオ−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−Ｓ−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−Ｏ−エチル−３−ホスホコリン（ＤＰｅＰＣ）、塩化ジステアリルジメチルアンモニウム（ＤＳＤＭＡ）、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（例えば、１２：０ＥＰＣ、またはその塩化物）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（例えば、１６：０ＥＰＣ、またはその塩化物）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（例えば、１８：０ＥＰＣ、またはその塩化物）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（例えば、１８：１ＥＰＣ、またはその塩化物）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミドスペルミン（ＤＰＰＥＳ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミドＬ−リシン（ＤＰＰＥＬ）、１−［２−ジオレオイルオキシ］エチル］−２−オレイル−３−（２−ヒドロキシエチル）塩化イミダゾリニウム（ＤＯＴＩＭ）、（１−メチル−４−（シス−９−ジオレイル）メチル−ピリジニウム−塩化物））（ＳＡＩＮＴ）、およびＣ１２〜２００を含むが、それらに限定されない。

【0150】

陽イオン性脂質は、異なるキラル形態のもの（例えば、本明細書で説明される任意の陽イオン性脂質のＲまたはＳ型）、または任意の塩形態（例えば、本明細書で説明される陽イオン性脂質の塩化物、臭化物、トリフルオロ酢酸塩、またはメタンスルホン酸塩）を含む。

【0151】

加えて、陽イオン性脂質のいくつかの市販調製品が、本製剤に含まれてもよい。そのような市販調製品は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．からのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）（ＤＯＳＰＡおよびＤＯＰＥの組み合わせ）およびＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）（ＤＯＴＭＡおよびＤＯＰＥの組み合わせ）、ならびにＰｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．からのＴｒａｎｓｆｅｃｔａｍ（登録商標）（ＤＯＧＳを含む組成物）およびＴｒａｎｓｆａｓｔ（商標）を含むが、それらに限定されない。

【0152】

陰イオン性脂質
１つ以上の陰イオン性脂質を本製剤に含むことができる。そのような陰イオン性脂質は、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、カルジオリピン（ＣＬ）、ジアシルホスファチジルセリン（ＰＳ）、ジアシルホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、Ｎ−アシルホスファチジルエタノールアミン（ＮＡＰＥ）、Ｎ−スクシニルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−グルタリルホスファチジルエタノールアミン、リシルホスファチジルグリセロール、およびパルミトイルオレオイルホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）、ならびに異なるキラル形態（例えば、ＲまたはＳ形態）、塩形態（例えば、塩化物、臭化物、トリフルオロ酢酸塩、またはメタンスルホン酸塩）、およびそれらの混合物を含むが、それらに限定されない。

【0153】

中性脂質
１つ以上の中性脂質を本製剤に含むことができる。そのような中性脂質は、セラミド、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（キラル形態Ｒ−ＤＳＰＣおよびＳ−ＤＳＰＣを含むＤＳＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジオレオイル−グリセロ−ｓｎ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジエライドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＥＰＥ）、１−ステアロイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、ならびに異なるキラル形態（例えば、ＲまたはＳ形態）、塩形態（例えば、塩化物、臭化物、トリフルオロ酢酸塩、またはメタンスルホン酸塩）、およびそれらの混合物を含むが、それらに限定されない。他のジアシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンおよびジアシル−グリセロ−ｓｎ−３−ホスホエタノールアミン脂質もまた、本発明の脂質粒子で使用されてもよい。

【0154】

いくつかの実施形態では、本製剤に存在する中性脂質構成要素は、１つ以上のリン脂質を含む。さらなる実施形態では、中性脂質構成要素は、１つ以上のリン脂質およびコレステロールの混合物を含む。いくつかの実施形態では、本製剤で使用するための中性脂肪の選択は、薬物動態および／または薬力学的性質、例えば、脂質粒径および血流中の安定性の考慮によって誘導される。

【0155】

ステロール誘導体
１つ以上のステロール誘導体を本製剤に含むことができる。理論によって限定されることを所望するわけではないが、製剤を安定させ、および／またはトランスフェクションを増加させるために、ステロール誘導体を使用することができる。例示的なステロール誘導体は、コレステロール、コレスタノールの誘導体（例えば、コレスタノン、コレステノン、またはコプロスタノール）、３β−［−（Ｎ−（Ｎ′，Ｎ′−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル）コレステロール（ＤＣ−コレステロール、例えば、その塩酸塩）、ビス−グアニジウム−トレン−コレステロール（ＢＧＴＣ）、（２Ｓ，３Ｓ）−２−（（（３Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１７Ｒ）−１０，１３−ジメチル１７−（（Ｒ）−６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イルオキシ）カルボニルアミノ）エチル２，３，４，４−テトラヒドロキシブタノエート（ＤＰＣ−１）、（２Ｓ，３Ｓ）−（（３Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１７Ｒ）−１０，１３−ジメチル１７−（（Ｒ）−６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル）２，３，４，４−テトラヒドロキシブタノエート（ＤＰＣ−２）、ビス（（３Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１７Ｒ）−１０，１３−ジメチル１７−（（Ｒ）−６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル）２，３，４−トリヒドロキシペンタンジオエート（ＤＰＣ−３）、および６−（（（３Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１７Ｒ）−１０，１３−ジメチル１７−（（Ｒ）−６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イルオキシ）オキシドホスホリルオキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロキシヘキサノエート（ＤＰＣ−４）を含む。

【0156】

ＰＥＧ−脂質複合体
１つ以上のＰＥＧ−脂質複合体を本製剤に含むことができる。理論によって限定されることを所望するわけではないが、ＰＥＧ−脂質複合体は、脂質ベクターの凝集を低減させることができる。ＰＥＧ−脂質複合体は、参照することにより本明細書に組み込まれる、米国特許第５，８８５，６１３号および米国特許公開第２００３／００７７８２９号で説明されている。

【0157】

本製剤に含まれ得るＰＥＧ−脂質複合体は、１，２−ジリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（カルボニル−メトキシ−ポリエチレングリコール）（ＰＥＧ−ＤＭＰＥ）（例えば、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホタノールアミン−Ｎ−（カルボニル−メトキシ−ポリエチレングリコール−２０００）（ＰＥＧ−２０００−ＤＭＰＥ））、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（カルボニル−メトキシ−ポリエチレングリコール）（ＰＥＧ−ＤＰＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（カルボニル−メトキシ−ポリエチレングリコール）（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（カルボニル−メトキシ−ポリエチレングリコール）（ＰＥＧ−ＤＯＰＥ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール−３−（メトキシ−ポリエチレングリコール）（ＰＥＧ−ＤＭＧ）（例えば、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール−３−（メトキシ−ポリエチレングリコール）（ＰＥＧ−２０００−ＤＭＧ））、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロール−３−（メトキシ−ポリエチレングリコール）（ＰＥＧ−ＤＰＧ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロール−３−（メトキシ−ポリエチレングリコール）（ＰＥＧ−ＤＳＧ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロール−３−（メトキシ−ポリエチレングリコール）（ＰＥＧ−ＤＯＧ）、３−Ｎ−［（ω−メトキシポリ（エチレングリコール）２０００）カルバモイル］−１，２−ジミリスチルオキシ−プロピルアミン（ＰＥＧ−Ｃ−ＤＭＡ）、Ｒ−３−［（ω−メトキシポリ（エチレングリコール）２０００）カルバモイル］］−１，２−ジミリスチルオキシルプロピル−３−アミン（ＰＥＧ−２０００−Ｃ−ＤＯＭＧ）、およびＰＥＧ−セラミド複合体（例えば、参照することにより本明細書に組み込まれる米国特許第５，８２０，８７３号で説明されている、ＰＥＧ−ＣｅｒＣ１４またはＰＥＧ−ＣｅｒＣ２０）を含むが、それらに限定されない。付加的なＰＥＧ−脂質複合体は、ホスファチジルエタノールアミンまたはセラミド等の本明細書で説明される任意の脂質に複合したＰＥＧ（参照することにより本明細書に組み込まれる米国特許第５，８２０，８７３号、第５，５３４，４９９号、および第５，８８５，６１３号を参照）、および本明細書で説明される任意のＰＥＧ−脂質複合体の塩形態（例えば、ナトリウム、アンモニウム、またはトリメチルアンモニウム塩）を含む。

【0158】

ＰＥＧ−脂質複合体は、本明細書で説明される任意の脂質分子と、または異なる分子量（例えば、３００から５，０００ダルトン）のＰＥＧ分子との置換等の１つ以上の種々の修飾を含むことができる。例示的な置換は、ＰＥＧ−脂質複合体（例えば、ｍＰＥＧ２０００−ＤＭＧ）を形成するように、ポリエチレングリコール部分（例えば、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ３４００、ＰＥＧ５０００等）と組み合わせた、Ｃ１４：０（表４のような）、Ｃ１６（ＰＥＧ−ＤＰＰＥ、ＰＥＧ−ＤＰＧ等）、Ｃ１８：０（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ、ＰＥＧ−ＤＳＧ等）、またはＣ１８：１（ＰＥＧ−ＤＯＰＥ、ＰＥＧ−ＤＯＧ等）のうちの１つ以上の使用を含む。種々の分子量を伴うＰＥＧ部分の実施例は、ＰＥＧ３５０、ＰＥＧ５５０、ＰＥＧ７５０、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ３０００、ＰＥＧ３４００、ＰＥＧ４０００、およびＰＥＧ５０００を含む。

【0159】

他の構成要素
本製剤は、脂質ベクターを安定させ、脂質ベクターの凝集を低減させ、および／または治療薬（例えば、ＲＮＡｉ剤）を送達することに役立つように、任意の他の構成要素を含むことができる。例示的な構成要素は、参照することにより本明細書に組み込まれる、米国特許第６，３２０，０１７号および第６，５８６，５５９号で説明されるもの等のω−アミノ（オリゴエチレングリコール）アルカン酸モノマーに基づくポリアミド−脂質複合体（ＡＴＴＡ−脂質）、ガングリオシド（例えば、アシアロガングリオシドＧＭ１またはＧＭ２、ジシアロガングリオシドＧＤ１ａ、ＧＤ１ａ−ＮＡｃＧａｌ、ＧＤ１−ｂ、ＧＤ２、またはＧＤ３、グロボシド、モノシアロガングリオシドＧＭ１、ＧＭ２、またはＧＭ３、テトラシアロガングリオシドＧＱ１ｂ、およびトリシアロガングリオシドＧＴ１ａまたはＧＴ１ｂ）、酸化防止剤（例えば、α−トコフェロールまたはβ−ヒドロキシトルイジン）、１つ以上の界面活性剤（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ（登録商標）、Ｓｐａｎ（登録商標）、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ（登録商標）、Ｔｙｌｏｘａｐｏｌ（登録商標）、Ｅｍｕｌｐｈｏｒ（登録商標）、またはＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）（例えば、ポリエチレングリコールの脂肪酸エステルとともにグリセロール−ポリエチレングリコールリシノール酸塩の主要構成要素を有するＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ）等の、モノパルミチン酸ソルビタンまたはモノパルミチン酸ソルビタン、油性蔗糖エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンステロールエーテル、ポリオキシエチレン−ポリプロポキシアルキルエーテル、ブロック重合体およびセチルエーテル、ならびにポリオキシエチレンヒマシ油または水素化ヒマシ油誘導体、およびポリグリセリン脂肪酸エステル）、１つ以上の両親媒性物質（例えば、大豆油、ベニバナ油、オリーブ油、ゴマ油、ルリヂサ油、ヒマシ油、および綿実油等の植物油、鉱油、および魚油、そのような供給源からの水素化および／または分画トリグリセリド、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ油、例えば、Ｍｉｇｌｙｏｌ（登録商標））、国際公開第９２／０５５７１号で開示されている定義された非極性脂質等の種々の合成または半合成モノ、ジ、またはトリグリセリド、ならびにアセチル化モノグリセリド、またはミリスチン酸イソプロピル、オレイン酸エチル等の脂肪酸のアルキルエーテル（ＥＰ ０ ３５３ ２６７参照）、あるいはオレイルアルコール、セチルアルコール等の脂肪酸アルコール）、および本明細書で説明される任意の塩等の１つ以上の塩を含む。典型的には、凝集を低減させるように選択される脂質構成要素の濃度は、約１モル％から１５モル％である。

【0160】

脂質ベクター
本発明の製剤は、本発明の１つ以上の化合物（例えば、式（Ｉ）の化合物または表１から選択される化合物）と、治療薬（例えば、ＲＮＡｉ剤）を輸送することが可能な任意の脂質系組成物とを含むことができる。例示的な脂質系組成物は、１つ以上の脂質分子（例えば、本発明の化合物、陽イオン性脂質、陰イオン性脂質、または中性脂質）および／または１つ以上の構成要素（例えば、ステロール誘導体および／またはＰＥＧ−脂質複合体）を含む。

【0161】

脂質ベクターは、脂質ベクター（例えば、リポソーム、リポプレックス、およびミセル）を形成することが可能な任意の生体適合性脂質または脂質の組み合わせを使用して、形成することができる。脂質ベクターの中への治療薬のカプセル化は、損傷または分解から薬剤を保護するか、または細胞の中へのその進入を促進することができる。脂質ベクターは、電荷相互作用（例えば、陽イオン性脂質ベクターおよび陰イオン性細胞膜）の結果として、細胞膜と相互作用して融合し、したがって、細胞質の中へ薬剤を放出する。リポソームは、本発明の化合物、脂質分子、および／または構成要素のうちの１つ以上を含む、二層小胞である。脂質ナノ粒子は、サイズが約１ｎｍから約１，０００ｎｍに及ぶリポソームである。リポプレックスは、全体的な正電荷をリポソームに付与するように陽イオン性脂質分子ともに形成されたリポソームである。ミセルは、脂質分子の単層を伴う小胞である。

【0162】

リポソーム
ある実施形態では、脂質ベクターは、リポソームである。典型的には、使用される脂質は、二重層を形成することが可能であり、陽イオン性である。好適な脂質分子の類は、リン脂質（例えば、ホスホチジルコリン）、脂肪酸、糖脂質、セラミド、グリセリド、およびコレステロール、またはそれらの任意の組み合わせを含む。代替として、または加えて、脂質ベクターは、中性脂質（例えば、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ））を含むことができる。脂質ベクターを形成することができる他の脂質が、当技術分野で公知であり、本明細書で説明される。

【0163】

本明細書で使用されるように、疎水性頭部および親水性尾部を伴う分子である、「脂質分子」とは、本発明の化合物、または本明細書で説明される任意の陽イオン性、中性、または陰イオン性脂質を含む、リポソームを形成することが可能であり得る。脂質分子は、随意に、親水性ポリマー基を含むように修飾することができる。そのような脂質分子の実施例は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ）、例えば、そのアンモニウム塩）、および１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［カルボキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥカルボキシ）を含む。

【0164】

脂質分子の実施例は、カルジオリピン（ＣＬ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、およびホスファチジルセリン（ＰＳ）等の天然脂質、レシチン等の脂質混合物、スフィンゴシン、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、スルファチド、ガングリオシド、およびフィトスフィンゴシン等のスフィンゴ脂質、１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ジオレオイル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＤＡＰ）、ジメチルジオクタデシル臭化アンモニウム（ＤＤＡＢ）、３−β−［Ｎ−（Ｎ′，Ｎ′−ジメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、Ｎ−［１−（２，３，−ジテトラデシルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルＮ−ヒドロキシエチル臭化アンモニウム（ＤＭＲＩＥ）、Ｎ−［１−（２，３，−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチル臭化アンモニウム（ＤＯＲＩＥ）、および１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）等の陽イオン性脂質、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、および１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロール−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）等のホスファチジルコリン、１，２−ジブチリル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、および１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（グルタリル）等のホスホエタノールアミン、リン酸ジセチル（ＤＣＰ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−リン酸塩、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−リン酸塩、および１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−リン酸塩等のホスファチジン酸、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１′−ｒａｃ−グリセロール）、および１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１′−ｒａｃ−グリセロール）等のホスファチジルグリセロール、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン、および１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン等のホスファチジルセリン、１′，３′−ビス［１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ］−ｓｎ−グリセロール等のカルジオリピン、ならびに１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−７５０］、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−５０００］、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］、および１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［カルボキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］等のＰＥＧ−脂質複合体を含む。

【0165】

本発明の化合物は、市販の脂質組成物を含む、任意の有用な脂質組成物と組み合わせることができる。そのような組成物の実施例は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．からのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）（ＤＯＳＰＡおよびＤＯＰＥの組み合わせ）およびＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）（ＤＯＴＭＡおよびＤＯＰＥの組み合わせ）、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．からのＴｒａｎｓｆｅｃｔａｍ（登録商標）（ＤＯＧＳを含む組成物）およびＴｒａｎｓｆａｓｔ（商標）、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．からのＮｅｕｒｏＰＯＲＴＥＲ（商標）およびＥｓｃｏｒｔ（商標）、ＲｏｃｈｅからのＦｕＧＥＮＥ（登録商標）６、ならびにＳｔｒａｔｅｇｅｎｅからのＬｉｐｏＴＡＸ（登録商標）を含む。公知の脂質組成物は、Ｂｏａｄｏ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２４：１７７２−１７８７（２００７）で説明されているようなＴｒｏｊａｎ Ｈｏｒｓｅ Ｌｉｐｓｏｍｅ技術を含む。

【0166】

リポソームはまた、リポソームの形成または安定性に役立つ他の構成要素を含むこともできる。構成要素の実施例は、コレステロール、酸化防止剤（例えば、α−トコフェロールまたはβ−ヒドロキシトルイジン）、界面活性剤、および塩を含む。

【0167】

リポソームは、本発明の１つ以上の化合物、およびリポソームの形成または安定性に役立つ他の脂質構成要素を含む、脂質分子を含む任意の有用な組み合わせであり得る。当業者であれば、特定の作用物質のカプセル化、リポソームの安定性、大規模反応条件、または任意の他の関連因子に有利に働く組み合わせを最適化する方法が分かるであろう。例示的な組み合わせは、Ｂｏａｄｏ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２４：１７７２−１７８７（２００７）で説明されている。

【0168】

リポソームを産生することは、典型的には、一般的な２ステッププロセスを通して起こる。第１のステップでは、脂質および脂質構成要素が、脂質の均質な混合物を確保するように、揮発性有機溶媒または溶媒の混合物中で混合させられる。溶媒の実施例は、クロロホルム、メタノール、シクロヘキサン、およびｔ−ブタノールを含む。次いで、溶媒は、膜、粉末、またはペレットで乾燥脂質混合物を形成するように除去される。溶媒はまた、窒素、回転蒸発、噴霧乾燥、凍結乾燥、および真空乾燥を使用することによって等、任意の公知の分析技法を使用することによって除去することもできる。

【0169】

第２のステップでは、乾燥脂質混合物は、リポソームを形成するように水溶液で水和される。作用物質を水溶液に添加することができ、カプセル化作用物質を用いたリポソームの形成をもたらす。代替として、最初に、リポソームを第１の水溶液を用いて形成し、次いで、作用物質を含有する別の水溶液に暴露させる。作用物質のカプセル化は、反復凍結融解、超音波処理、または混合によって等、任意の公知の技法によって推進することができる。このアプローチのさらなる実施例は、Ｂｏａｄｏ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２４：１７７２−１７８７（２００７）で説明されている。代替として、作用物質は、脂溶性誘導体を産生するように疎水性部分（例えば、コレステロール）に結合され、脂溶性誘導体は、リポソームを形成するために他の脂質分子とともに使用される。

【0170】

第２のステップ中に、乾燥脂質混合物は、ポリペプチド−脂質複合体を含有する場合もあり、含有しない場合もある。本プロセスは、随意に、特定の温度の範囲が約４０℃から約７０℃を含む、乾燥脂質混合物に添加する前に、脂質分子の相転移温度を超えて水溶液を過熱することと、特定の時間範囲が約３０分から約２時間を含む、乾燥脂質混合物および水溶液の組み合わせをインキュベートすることと、ボルテックス混合、震盪、かき混ぜ、または撹拌等による、インキュベーション中の乾燥脂質混合物および水溶液の混合と、０．９％生理食塩水、５％デキストロース、および１０％蔗糖の溶液等の生理学的浸透圧を確保するための水溶液への非電解質の添加と、押出または超音波処理等による、大型多重膜小胞の崩壊と、乾燥脂質混合物が脂質分子を含有しなかった、ポリペプチド−脂質複合体を伴う事前形成されたリポソームの付加的なインキュベーションとを含む、種々の付加的なステップを含むことができる。当業者であれば、リポソームへの誘導体化脂質分子の組み込みを確保するように、または安定したリポソームを得るように、この水和ステップ中の特定の温度およびインキュベーション時間を識別することができるであろう。

【0171】

本発明の化合物（複数可）は、リポソームを形成するプロセスの任意の点で添加することができる。一実施例では、本化合物は、乾燥脂質混合物の形成中に脂質および脂質構成要素に添加される。別の実施例では、本化合物は、脂質および脂質構成要素を含有する乾燥脂質混合物で事前形成されるリポソームに追加される。さらに別の実施例では、ミセルが、化合物と形成され、リポソームが、脂質および脂質構成要素を含有する乾燥脂質混合物で形成され、次いで、ミセルおよびリポソームが、ともにインキュベートされる。水溶液は、緩衝剤、塩、キレート剤、生理食塩水、デキストロース、蔗糖等の作用物質またはリポソームを安定させる付加的な構成要素を含むことができる。

【0172】

この手技の一実施例では、脂質混合物から成る乾燥膜が、作用物質を含有する水溶液で水和される。この混合物は、最初に、５０℃で３０分間加熱され、次いで、室温まで冷却される。次に、混合物は、ポリペプチド−脂質複合体を含有する乾燥膜上に移される。次いで、混合物は、作用物質を含有するリポソームにポリペプチド−脂質複合体を組み込むように、３７℃で２時間インキュベートされる。例えば、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ １１２：２２９−２３９（２００６）を参照されたい。

【0173】

小胞構造を有する脂質粒子
ある実施形態では、脂質粒子は、陽イオン性脂質（例えば、ＤＯＤＭＡ、ＤＯＴＭＡ、および／またはアミノアミン脂質、アミノアミド脂質、または本発明の他の脂質）およびＲＮＡｉ剤、ならびに中性または両イオン性脂質、ＰＥＧ−脂質複合体、および随意にコレステロールを含む。

【0174】

１つ以上のＲＮＡ結合剤および１つ以上のトランスフェクション脂質を有する脂質粒子
脂質粒子はまた、１つ以上のＲＮＡ結合剤および１つ以上のトランスフェクション脂質を有するものも含む。一実施形態では、１つ以上のＲＮＡ結合剤は、内部凝集体を形成し、１つ以上のトランスフェクション脂質は、外部凝集表面を形成する。特定の実施形態では、外部凝集表面は、膜、脂質二重層、および／または多重膜層ではない。ある実施形態では、１つ以上のＲＮＡ結合剤（例えば、脂質）は、総脂質の約１０〜９０％を表す。他の実施形態では、１つ以上のＲＮＡ結合剤（例えば、脂質）は、総脂質の約５０％を表す。他の実施形態では、１つ以上のＲＮＡ結合剤（例えば、脂質）は、総脂質の約３０％を表す。ある実施形態では、脂質粒子の１つ以上のＲＮＡ結合剤を伴う核酸ペイロードの錯体／凝集体は、陽イオン性脂質（例えば、ＤＯＤＭＡ、ＤＯＴＭＡ、および／または本発明のアミノアミン脂質あるいはアミノアミド）と、ＲＮＡｉ剤とを含み、脂質粒子の１つ以上のトランスフェクション脂質は、中性または両イオン性脂質と、ＰＥＧ−脂質複合体と、随意にコレステロールとを含む。他の実施形態では、粒子の１つ以上のトランスフェクション脂質は、陽イオン性脂質（例えば、ＤＯＤＭＡ、ＤＯＴＭＡ、アミノアミン脂質、および／またはアミノアミド脂質）と、中性脂質と、ＰＥＧ−脂質複合体と、随意にコレステロールとを含む。

【0175】

ＲＮＡｉ剤
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、特定のＲＮＡ分子の分解を引き起こすこと、または特定の遺伝子の転写を妨害することによって、遺伝子発現を阻害する機構である。本質的に、ＲＮＡｉ標的はしばしば、ウイルスおよびトランスポゾン（先天性免疫応答の形態）からのＲＮＡ分子であるが、発達およびゲノム維持を調節することにおける役割も果たす。ＲＮＡｉの機構の手掛かりは、標的メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子にとって十分に相補的なヌクレオチド配列を有する、低分子干渉ＲＮＡ鎖（ｓｉＲＮＡ）である。ｓｉＲＮＡは、標的ｍＲＮＡへのＲＮＡｉ経路内でタンパク質を方向付け、それらを分解して、もはやタンパク質に変換することができない、より小さい部分に分解する。

【0176】

ＲＮＡｉ経路は、長い二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子を、典型的には、長さが約２１から約２３個のヌクレオチドであり、約１９塩基対二本鎖を含有する、ｓｉＲＮＡ分子に切断する、酵素Ｄｉｃｅｒによって開始される。次いで、誘導鎖として知られている、各断片の２本の鎖のうちの１本が、ＲＮＡ誘導サイレンシング錯体（ＲＩＳＣ）に組み込まれ、相補的配列と対合する。ＲＩＳＣは、ｓｉＲＮＡ二本鎖のアンチセンス鎖に相補的である配列を有する、一本鎖ＲＮＡの切断に介在する。標的ＲＮＡの切断は、ｓｉＲＮＡ二本鎖のアンチセンス鎖に相補的である領域の中央で起こる。この認識事象の成果は、転写後遺伝子サイレンシングである。これは、誘導鎖がｍＲＮＡ分子と特異的に対合し、ＲＩＳＣ錯体の触媒構成要素であるＡｒｇｏｎａｕｔｅによる分解を引き起こすときに起こる。

【0177】

本発明の化合物は、生体外で、または生体内で（例えば、対象の中で）１つ以上のＲＮＡｉ剤を細胞に送達するために使用することができる。ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡ：ＲＮＡまたはＲＮＡ：ＤＮＡ鎖のいずれか一方を含む、異なる種類の二本鎖分子を含むことができる。これらの作用物質は、単独で、または別のポリヌクレオチドと組み合わせて二本鎖ポリヌクレオチドを形成することが可能な１つ以上のポリヌクレオチドを発現する、二本鎖（３′−末端上に突出を伴う、または伴わない）、ヘアピンループ、または発現ベクターを含む、種々の構造で細胞に導入することができる。例示的なＲＮＡｉ剤は、本明細書で説明される、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＤｓｉＲＮＡ、およびｍｉＲＮＡ剤を含む。概して、これらの作用物質は、長さが約１０から約４０個のヌクレオチドであり、好ましい長さが、特定のＲＮＡｉ剤について以下で説明される。

【0178】

ＲＮＡｉ剤による機能的遺伝子サイレンシングは、標的遺伝子産物の完全阻害を必ずしも含むわけではない。場合によっては、ＲＮＡｉ剤によって引き起こされる遺伝子産物発現の限界減少が、宿主細胞、組織、臓器、または動物における有意な機能または表現型変化に変換し得る。したがって、遺伝子サイレンシングは、機能的同等物であると理解され、サイレンシングを達成する遺伝子産物分解の程度は、遺伝子標的または宿主細胞型の間で異なり得る。

【0179】

ｓｉＲＮＡ
低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、概して、３′−末端上に１つまたは２つのヌクレオチド突出を伴う、またはいかなる突出も伴わない、長さが１６から３０個のヌクレオチド（例えば、１８から２５個のヌクレオチド、例えば、２１個のヌクレオチド）の二本鎖ＲＮＡ分子である。熟練の施術者であれば、（例えば、遺伝子サイレンシングの全体的レベルを増加または減少させるように）この配列長を変化させてもよい。ある実施形態では、突出は、３′−末端におけるＵＵまたはｄＴｄＴである。概して、単一塩基対の不一致でさえサイレンシングを低減させることが示されているため、ｓｉＲＮＡ分子は、標的ＤＮＡ分子の１本の鎖に完全に相補的である。他の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、例えば、２′−デオキシ−または２′−Ｏ−メチル修飾、あるいは本明細書で説明される任意の修飾等の修飾骨格組成物を有してもよい。

【0180】

ｓｉＲＮＡとは、配列特異的に遺伝子発現を阻害または下方調節することが可能な核酸分子を指す。例えば、Ｚａｍｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １０１：２５ ３３（２０００）、Ｂａｓｓ，Ｎａｔｕｒｅ ４１１：４２８−４２９（２００１）、Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４１１：４９４−４９８（２００１）、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ ００／４４８９５号、第ＷＯ ０１／３６６４６号、第ＷＯ ９９／３２６１９号、第ＷＯ ００／０１８４６号、第ＷＯ ０１／２９０５８号、第ＷＯ ９９／０７４０９号、および第ＷＯ ００／４４９１４号を参照されたい。遺伝子サイレンシングで使用するためのｓｉＲＮＡ分子を調製する方法は、参照することにより本明細書に組み込まれる、米国特許第７，０７８，１９６号で説明されている。

【0181】

ｓｈＲＮＡ
短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）は、ヘアピンループ構造が存在し、同一鎖内の相補的ヌクレオチドが分子間結合を形成することを可能にする、一本鎖ＲＮＡ分子である。ｓｈＲＮＡは、ｓｉＲＮＡと比較してヌクレアーゼ分解に対する低減した感受性を示すことができる。ある実施形態では、ｓｈＲＮＡは、長さが１９から２９個のヌクレオチド（例えば、１９から２１個のヌクレオチドまたは２５から２９個のヌクレオチド）の茎長を有する。いくつかの実施形態では、ループサイズは、長さが４から２３個のヌクレオチドである。ｓｈＲＮＡは、概して、有効性を減少させることなく、１つ以上の不一致、例えば、ｓｈＲＮＡ茎の２本の鎖の間のＧ−Ｕ不一致を含有することができる。

【0182】

ＤｓｉＲＮＡ
Ｄｉｃｅｒ−基質ＲＮＡ（ＤｓｉＲＮＡ）は、２５から３５個のヌクレオチドの二本鎖ＲＮＡ剤である。そのような長さの作用物質が、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路のＤｉｃｅｒ酵素によって処理されると考えられる一方で、２５個のヌクレオチドよりも短い作用物質は、概して、Ｄｉｃｅｒ生成物を模倣し、Ｄｉｃｅｒ処理を免れる。いくつかの実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、１から４個のヌクレオチド（例えば、１から２個のヌクレオチド）のアンチセンスまたはセンス鎖の３′−末端において一本鎖ヌクレオチドを有する。

【0183】

ＤｓｉＲＮＡ剤のある修飾構造が、参照することにより本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２００７／０２６５２２０号等で以前に説明された。本発明の製剤で使用するために好適である付加的なＤｓｉＲＮＡ構造および特定の組成物は、参照することにより本明細書に組み込まれる、米国特許出願第１２／５８６，２８３号、米国特許公開第２００５／０２４４８５８号、第２００５／０２７７６１０号、第２００７／０２６５２２０号、第２０１１／００２１６０４号、第２０１０／０１７３９７４号、第２０１０／０１８４８４１号、第２０１０／０２４９２１４号、第２０１０／０３３１３８９号、第２０１１／０００３８８１号、第２０１１／００５９１８７号、第２０１１／０１１１０５６号、ならびに第ＰＣＴ公開第ＷＯ ２０１０／０８０１２９号、第ＷＯ ２０１０／０９３７８８号、第ＷＯ ２０１０／１１５２０２号、第ＷＯ ２０１０／１１５２０６号、第ＷＯ ２０１０／１４１７１８号、第ＷＯ ２０１０／１４１７２４号、第ＷＯ ２０１０／１４１９３３号、第ＷＯ ２０１１／０７２２９２号、第ＷＯ ２０１１／０７５１８８号で説明されている。概して、ＤｓｉＲＮＡ構築物は、１９−２３ｍｅｒ ｓｉＲＮＡについて説明されるような固相オリゴヌクレオチド合成方法を使用して合成される（例えば、米国特許第５，８０４，６８３号、第５，８３１，０７１号、第５，９９８，２０３号、第６，１１７，６５７号、第６，３５３，０９８号、第６，３６２，３２３号、第６，４３７，１１７号、第６，４６９，１５８号、第６，１１１，０８６号、第６，００８，４００号、および第６，１１１，０８６号を参照）。

【0184】

ｍｉＲＮＡ
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、長さが１７から２５個のヌクレオチド（例えば、２１から２３個のヌクレオチド）の一本鎖ＲＮＡ分子である。熟練の施術者であれば、遺伝子サイレンシングの全体的レベルを増加または減少させるように、この配列長を変化させてもよい。これらの作用物質は、標的メッセンジャーＲＮＡ上の相補的配列を結合することによって標的遺伝子を抑制する。本明細書で使用されるように、「ｍｉＲＮＡ前駆物質」という用語は、限定ではないが、一次ＲＮＡ転写産物である、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡおよびｐｒｅ−ｍｉＲＮＡを包含するために使用される。本発明の「ｍｉＲＮＡペイロード」は、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ、ｐｒｅ−ｍｉＲＮＡ、および／またはｍｉＲＮＡ（あるいは天然ｍｉＲＮＡ）を含むことができる。ある実施形態では、本発明のｓｉＲＮＡ（例えば、ＤｓｉＲＮＡ）は、ｍｉＲＮＡ配列を組み込むか、または該ｍｉＲＮＡとして機能するようにｍｉＲＮＡ配列に十分類似している（そのようなｓｉＲＮＡを「ｍｉＲＮＡ模倣」にする）、誘導鎖を提示してもよい。

【0185】

アンチセンス化合物
例示的なアンチセンス化合物は、連続ヌクレオシド長範囲を含み、範囲の上限は、５０個のヌクレオシドであり、範囲の下限は、８個のヌクレオシドである。ある実施形態では、範囲の上限は、３５個のヌクレオシドであり、範囲の下限は、１４個のヌクレオシドである。さらなる実施形態では、範囲の上限は、２４個のヌクレオシドであり、範囲の下限は、１７個のヌクレオシドである。なおもさらなる実施形態では、アンチセンス化合物は、２０個の連続ヌクレオシドである。当業者であれば、本明細書で開示されるように、範囲の上限が、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０個の連続ヌクレオシドを含み、範囲の下限が、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の連続ヌクレオシドを含むことを容易に認識するであろう。

【0186】

例示的なアンチセンス化合物は、標的配列の転写、変換に干渉し、分解（随意に、ヌクレアーゼ媒介分解）を推進し、および／または別様に機能を妨害する（例えば、別様に機能的な標的配列の機能に干渉する、例えば、アンチセンス化合物媒介機構を介したプロモータ、エンハンサ、または他の機能的核酸標的配列の妨害）ように、標的配列に十分に相補的である、一続きの少なくとも８個、随意に少なくとも１２個、随意に少なくとも１５個の連続ヌクレオシドを含む。

【0187】

修飾は、アンチセンス化合物に行うことができ、末端、選択された核酸塩基位置、糖位置のうちの１つに、またはヌクレオシド間結合のうちの１つに付着した複合体群を含んでもよい。可能な修飾は、２′−フルオロ（２′−Ｆ）、２′−Ｏメチル（２′−ＯＭｅ）、２′−Ｏ−（２−メトキシエチル）（２′−ＭＯＥ）高親和性糖修飾、逆脱塩基キャップ、デオキシ核酸塩基、ならびにロックド核酸（ＬＮＡ）およびエチレン架橋核酸（ＥＮＡ）等の二環式核酸塩基類似体を含むが、それらに限定されない。

【0188】

ＲＮＡｉ剤を作製する方法
ＲＮＡｉ剤は、標的核酸（例えば、標的遺伝子）に方向付けられる少なくとも１つのアンチセンスヌクレオチド配列を含む。アンチセンスヌクレオチドは、選択された標的配列に相補的であるＤＮＡまたはＲＮＡの一本鎖である。アンチセンスＲＮＡの場合、それに結合することによって、相補的ＲＮＡ鎖の変換を妨げる。アンチセンスＤＮＡは、特定の相補的（コード化または非コード化）ＲＮＡを標的にするために使用することができる。特定の実施形態では、アンチセンスヌクレオチドは、約１０から約４０個のヌクレオチド、より好ましくは約１５から約３０個のヌクレオチドを含有する。アンチセンスヌクレオチドは、所望の標的遺伝子に対する最大で８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、またはさらに１００％の相補性を有することができる。

【0189】

アンチセンスおよびセンスヌクレオチド、ならびに対応する二本鎖またはヘアピンループを産生する方法が、当技術分野で公知であり、任意の標的核酸配列を標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドを産生するように容易に適合することができる。アンチセンスヌクレオチド配列は、標的配列を分析して、二次構造、Ｔｍ、結合エネルギー、および相対的安定性を判定すること等によって、標的特異性を最適化するように、および／または、宿主細胞内の標的ｍＲＮＡへの特異的結合を低減または禁止するであろう、二量体、ヘアピン、または他の二次構造等の二次構造の形成を低減させるように、選択することができる。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡの極めて好ましい標的領域は、ＡＵＧ変換開始コドンにおける、またはその付近の領域、およびｍＲＮＡの５′ 領域に実質的に相補的である配列を含む。これらの二次構造分析および標的部位選択の考慮は、例えば、ＯＬＩＧＯプライマー分析ソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｉｎｓｉｇｈｔｓ）のバージョン４、および／またはＢＬＡＳＴＮ ２．０．５アルゴリズムソフトウェア（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９−３４０２，１９９７）を使用して行うことができる。ＲＮＡｉ剤を調製するための非限定的な方法が、参照することにより本明細書に組み込まれる、米国特許第５，８０４，６８３号、第５，８３１，０７１号、第５，９９８，２０３号、第６，１１７，６５７号、第６，３５３，０９８号、第６，３６２，３２３号、第６，４３７，１１７号、第６，４６９，１５８号、第６，１１１，０８６号、第６，００８，４００号、および第６，１１１，０８６号で説明されている。

【0190】

ＲＮＡｉ剤は、一本鎖、二本鎖、線形、円形（例えば、プラスミド）、刻み目が付いた円形、コイル状、スーパーコイル状、鎖状、または帯電等の任意の有用な形態を有することができる。加えて、ヌクレオチドは、５′ および３′ センスおよびアンチセンス鎖末端修飾を含有してもよく、鈍的または突出末端ヌクレオチド（例えば、３′−末端におけるＵＵまたはＴＴ）、あるいはそれらの組み合わせを有することができる。

【0191】

修飾ＤＮＡまたはＲＮＡ分子を含む修飾核酸が、本明細書で説明されるポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉ剤）内の自然発生核酸の代わりに使用されてもよい。修飾核酸は、本明細書で説明されるポリヌクレオチドの半減期、安定性、特異性、送達、可溶性、およびヌクレアーゼ耐性を向上させることができる。例えば、ｓｉＲＮＡ剤は、上記で説明される有益な質を与えるヌクレオチド類似体から部分的または完全に成ることができる。Ｅｌｍｅｎ ｅｔ ａｌ．（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３３：４３９−４４７（２００５））で説明されるように、合成ＲＮＡ様ヌクレオチド類似体（例えば、ロックド核酸（ＬＮＡ））は、標的遺伝子産物に対するサイレンシング活性を示す、ｓｉＲＮＡ分子を構築するために使用することができる。

【0192】

ホスホジエステル結合の中の非架橋酵素が硫黄で置き換えられる、ホスホロチオエート（ＰＳ）骨格修飾は、ヌクレアーゼ分解に対して核酸を安定させるように展開される、最も初期かつ最も一般的な手段のうちの１つである。一般に、ＰＳ修飾は、活性に大きく影響を及ぼすことなく、両方のｓｉＲＮＡ鎖に広く行うことができると考えられる（Ｋｕｒｒｅｃｋ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７０：１６２８−４４（２００３））。特定の実施形態では、ＰＳ修飾は、通常、３′ および５′ 末端における１つまたは２つの塩基に制限される。低い毒性を有しながらｓｉＲＮＡ活性を増進させるために、ボラノリン酸リンカーを使用することができる（Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３２：５９９１−６０００（２００４））。オリゴヌクレオチド骨格への他の例示的な修飾は、メチルホスホン酸塩、ジチオリン酸塩、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、アルキルホスホン酸塩（例えば、３′−アルキレンホスホン酸塩）、キラルホスホン酸塩、ホスフィン酸塩、アミド亜リン酸塩（例えば、３′−アミノアミド亜リン酸塩塩）、アミノアルキルアミド亜リン酸、チオノアミド亜リン酸塩、チオノアルキルホスホン酸塩、チオノアルキルホスホトリエステル、およびペプチド結合によって結合された反復Ｎ−（２−アミノエチル）−グリシン単位を有するタンパク質ヌクレオチド（ＰＮＡ）骨格を含み、代表的なＰＮＡ化合物は、米国特許第５，５３９，０８２号、第５，７１４，３３１号、および第５，７１９，２６２号、ならびにＮｉｅｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１４９７−１５００（１９９１）で開示されているものを含むが、それらに限定されない。

【0193】

骨格への他の修飾は、短鎖アルキルまたはシクロアルキルヌクレオシド間結合、混合ヘテロ原子およびアルキルまたはシクロアルキルヌクレオシド間結合、あるいは１つ以上の短鎖ヘテロ原子または複素環式ヌクレオシド間結合とリン原子を代替するものを含む（例えば、モルホリノ結合、シロキサン骨格、スリフィド、スルホキシド、およびスルホン骨格、ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格、メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格、アルケン含有骨格、スルファミン酸塩骨格、メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格、スルホン酸塩およびスルホンアミド骨格、アミド骨格、ならびに混合Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ_２構成要素部分を有するその他）を含む。

【0194】

ある修飾核酸塩基が、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、ならびにＮ−２、Ｎ−６、およびＯ−６置換プリン（例えば、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン、および５−メチルシトシン）等の本発明のオリゴマー化合物の結合親和性を増加させるために特に有用である。例示的な修飾核酸塩基は、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃまたはｍ５ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、およびヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチル、ならびにアデニンおよびグアニンの他のアルキル誘導体、２−プロピルならびにアデニンおよびグアニンの他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン、２−チオシトシン、５−ハロウラシルおよびシトシン、５−プロピニルウラシルおよびシトシン、６−アゾウラシル、シトシン、およびチミン、５−ウラシル（擬似ウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシ、ならびに他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ、具体的には、５−ブロモ、５−トリフルオロメチル、ならびに他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニン、７−メチルアデニン、８−アザグアニン、８−アザアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、３−デアザグアニン、および３−デアザアデニンを含む。これらの修飾核酸塩基は、特定の実施形態では、本明細書で説明される任意の糖修飾等の他の修飾と組み合わせられてもよい。

【0195】

修飾オリゴヌクレオチドはまた、１つ以上の置換糖部分を含有してもよく、修飾は、リボース環の任意の反応部位（例えば、リボース環の２′−ＯＨ）、または１つ以上の普遍的塩基で行うことができる。例示的な修飾は、Ｆ、Ｂｒ、またはＣｌ等の２′−ハロ、２′−ＯＭｅ等の２′−Ｏ−アルキル、２′−Ｓ−アルキル、または２′−Ｎ−アルキル、ｎおよびｍが１から約１０である、２′−Ｏ−メトキシエチル（２′−Ｏ−ＭＯＥ）、２′−Ｏ［（ＣＨ_２）_ｎＯ］_ｍＣＨ_３、２′−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＣＨ_３、２′−Ｏ（ＣＨ_２）_２ＯＮ（ＣＨ_３）_２Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、２′−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＨ_２、および２′−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＮ［（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３］］_２等の２′−Ｏ−（アルキル−Ｏ）_ｎ−アルキル、２′−Ｏ−アルケニル、２′−Ｓ−アルケニル、またはアルキル、アルケニル、およびアルキニルが置換または非置換Ｃ_１−１０アルキルまたはＣ_２−１０アルケニルおよびアルキニルであり得る、２′−Ｎ−アルケニル、２′−Ｏ−アルキニル、２′−Ｓ−アルキニル、または２′−Ｎ−アルキニル、ならびにロックド核酸（ＬＮＡ）を形成するリボースの第２′位と第４′位の間の架橋修飾を含む。例示的な普遍的塩基は、修飾ヌクレオチドの中のヌクレオチド糖部分の第１′位、または１−β−Ｄ−リボフラノシル−５−ニトロインドールおよび１−β−Ｄ−リボフラノシル−３−ニトロピロール等のヌクレオチド糖部分の中の同等位置に位置する、複素環式部分を含む。

【0196】

ある実施形態では、説明された形態の修復および／または修飾のパターンを保有する核酸を採用することができる。核酸の例示的な修飾および修飾パターンに関する付加的な詳細は、例えば、少なくとも米国公開第２０１０／０２４０７３４号、国際公開第２０１０／０８０１２９号、国際公開第２０１０／０３３２２５号、米国公開第２０１１／００２１６０４号、国際公開第２０１１／０７５１８８号、国際公開第２０１１／０７２２９２号、国際公開第２０１０／１４１７２４号、国際公開第２０１０／１４１７２６号、国際公開第２０１０／１４１９３３号、国際公開第２０１０／１１５２０２号、国際公開第２００８／１３６９０２号、国際公開第２０１１／１０９２９４号、国際公開第２０１１／０７５１８８号、ＰＣＴ／米国公開第１１／４２８１０号、ＰＣＴ／米国公開第１１／４２８２０号、米国公開第６１／４３５，３０４号、米国公開第６１／４７８，０９３号、米国公開第６１／４９７，３８７号、米国公開第６１／５２９，４２２号、米国特許第７，８９３，２４５号、国際公開第２００７／０５１３０３号、および米国公開第２０１０／０１８４２０９号といった参考文献で見出すことができる。先述の文書のそれぞれは、その全体で参照することにより本明細書に組み込まれる。

【0197】

ＲＮＡｉ遺伝子標的
本発明は、ＲＮＡｉ剤と組み合わせた、化合物または製剤を用いた治療による罹患組織または臓器内の標的遺伝子のサイレンシングを特色とする。本発明の治療可能性は、病状（例えば、癌）の確立または維持に関与することが知られている、または考えられる、特定の標的遺伝子のｍＲＮＡ分子が、ＲＮＡｉ剤によって分解されるときに実現される。

【0198】

本発明とともに使用するためのＲＮＡｉ標的の実施例は、接着分子、サイクリンキナーゼ阻害剤、Ｗｎｔ族構成要素、Ｐａｘ族構成要素、Ｗｉｎｇｅｄらせん族構成要素、Ｈｏｘ族構成要素、サイトカイン／リンフォカインおよびそれらの受容体、成長／分化因子およびそれらの受容体、神経伝達物質およびそれらの受容体等の発達タンパク質、癌遺伝子コード化タンパク質（例えば、ＡＢＬ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ００５１９、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２５）、ＡＲ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ１０２７５、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３６４７）、β−カテニン（ＣＴＮＮＢ１、ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ３５２２２、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１４９９）、ＢＣＬ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ２４３８５、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：５９５）、ＢＣＬ２（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ１０４１５、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：５９６）、ＢＣＬ６（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ４１１８２）、ＣＢＦＡ２（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｑ０１１９６、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：８６１）、ＣＢＬ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ２２６８１、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：６８７）、ＣＳＦ１Ｒ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０７３３３、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１４３６）、ＥＲＢＡ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ１０８２７、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：７０６７）、ＥＲＢＡ２（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ１０８２８、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：７０６８）、ＥＲＢＢ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ００５３３、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１９５６）、ＥＲＢＢ２（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０４６２６、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２０６４）、ＥＲＢＢ３（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ２１８６０、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１９０１５１）、ＥＲＢＢ４（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｑ１５３０３、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：６００５４３）、ＥＴＳ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ１４９２１、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２１１３）、ＥＴＳ２（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ１５０３６、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２１１４）、ＥＴＶ６（ＵｎｉＰｒｏｔ番号４１２１２、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２１２０）、ＦＧＲ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０９７６９、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２２６８）、ＦＯＳ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０１１０、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２３５３）、ＦＹＮ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０６２４１、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２５３４）、ＨＣＲ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｑ８ＴＤ３１、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：５４５３５）、ＨＲＡＳ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０１１１２、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３２６５）、ＪＵＮ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０５４１２、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３７２５）、ＫＲＡＳ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０１１１６、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３８４５）、ＬＣＫ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０６２３９、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３９３２）、ＬＹＮ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０７９４８、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４０６７）、ＭＤＭ２（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｑ００９８７、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４１９３）、ＭＬＬ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｑ０３１６４、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４２９７）、ＭＬＬ２（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｏ１４６８６、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：８０８５）、ＭＬＬ３（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｑ８ＮＥＺ４、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：５８５０８）、ＭＹＢ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ１０２４２、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４６０２）、ＭＹＣ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０１１０６、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４６０９）、ＭＹＣＬ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ１２５２４、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４６１０）、ＭＹＣＮ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０４１９８、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４６１３）、ＮＲＡＳ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０１１１１、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４８９３）、ＰＩＭ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ１１３０９、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：５２９２）、ＰＭＬ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ２９８９０、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：５３７１）、ＲＥＴ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０７９４９、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：５９７９）、ＳＲＣ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ１２９３１、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：６７１４）、ＴＡＬ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ１７５４２、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：６８８６）、ＴＡＬ２（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｑ１６５５９、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：６８８７）、ＴＣＬ３（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ３１３１４、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３１９５）、ＴＣＬ５（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ１７５４２、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：６８８６）、およびＹＥＳ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０７９４７、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：７５２５））、腫瘍抑制タンパク質（例えば、ＢＲＣＡ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ３８３９８、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：６７２）、ＢＲＣＡ２（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ５１５８７、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：６７５）、ＭＡＤＨ４（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｑ１３４８５、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４０８９）、ＭＣＣ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ２３５０８、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４１６３）、ＮＦ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ２１３５９、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４７６３）、ＮＦ２（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ３５２４０、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４７７１）、ＲＢ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０６４００、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：５９２５）、ＴＰ５３（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０４６３７、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：７１５７）、ＰＬＫ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ５３３５０、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：９６０６）、ＫＩＦ１結合タンパク質（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｑ９６ＥＫ５、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：９６０６）、およびＷＴ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ１９５４４、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４７９０））、リポタンパク質（例えば、アポリポタンパク質Ｂ（ＡｐｏＢ１００、ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０４１１４、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３３８））、酵素（例えば、ＡＣＣシンターゼおよびオキシダーゼ、ＡＣＰデサチュラーゼおよびヒドロキシラーゼ、ＡＤＰグルコースピロホリラーゼ、ＡＴＰアーゼ、アルコール脱水素酵素、アミラーゼ、アミログルコシダーゼ、カタラーゼ、セルラーゼ、カルコン合成酵素、キチナーゼ、シクロオキシゲナーゼ、デカルボキシラーゼ、デキストリナーゼ、ＤＮＡおよびＲＮＡポリメラーゼ、ガラクトシダーゼ、グルカナーゼ、グルコースオキシダーゼ、顆粒結合性デンプン合成酵素、ＧＴＰアーゼ、ヘリカーゼ、ヘミセルラーゼ、インテグラーゼ、イヌリラーゼ、インベルターゼ、イソメラーゼ、キナーゼ（例えば、ＰＬＫ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ５３３５０、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：９６０６））、ラクターゼ、リガーゼ（例えば、ＣＯＰ１としても知られている、ＲｉｎｇフィンガーおよびＷＤ反復含有タンパク質２（ＲＦＷＤ２））、リパーゼ、リポキシゲナーゼ、リゾチーム、ノパリン合成酵素、オクトピン合成酵素、ペクチンエステラーゼ、ペルオキシダーゼ、ホスファターゼ、ホスホリパーゼ、ホスホリラーゼ、フィターゼ、植物成長調節合成酵素、ポリガラクツロナーゼ、プロテイナーゼおよびペプチダーゼ、プラナーゼ、リコンビナーゼ、逆転写酵素、リブロース−１，５−ビスリン酸カルボキシラーゼオキシゲナーゼ（ＲｕＢｉｓＣｏｓ）、トポイソメラーゼ、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ１（ＨＰＲＴ１）等の転写酵素、およびキシラナーゼ）を含む。

【0199】

肝臓は、代謝（例えば、種々の高コレステロール血症におけるリポタンパク質代謝）および循環タンパク質（例えば、血友病における凝固因子）の分泌におけるその中心的役割を与えられた、核酸治療のための最も重要な標的組織のうちの１つである。加えて、慢性肝炎および肝硬変等の後天的障害は、一般的であり、また、ポリヌクレオチド系肝臓治療によって潜在的に治療される。肝臓に影響を及ぼすか、または肝臓による影響を受ける、いくつかの疾患または症状は、肝臓における遺伝子発現のノックダウン（阻害）を通して潜在的に治療される。例示的な肝臓疾患および障害は、肝臓癌（肝細胞癌、ＨＣＣを含む）、ウイルス感染（肝炎を含む）、代謝性障害（脂質異常症および糖尿病を含む）、線維症、および急性肝臓損傷を含む、リストから選択され得る。肝臓治療薬（例えば、特にＨＣＣに標的化された治療薬を含む）のため、随意に、他の癌を含む、他の標的、疾患、および／または障害に対処する治療薬のための例示的な分子標的は、とりわけ、ＣＳＮ５（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｑ９２９０５、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ１０９８７）、ＣＤＫ６（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｑ００５３４、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１０２１）、ＩＴＧＢ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０５５５６、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３６８８）、ＭＹＣ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０１１０６、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４６０９）、ＴＧＦβ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０１１３７、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：７０４０）、サイクリンＤ１（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｑ９Ｈ０１４、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：５９５）、ヘプシジン（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ８１１７２、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：５７８１７）、ＰＣＳＫ９（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｑ８ＮＢＰ７、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２５５７３８）、およびトランスサイレチン（ＴＴＲ、ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０２７６６、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：７２７６）を含む。

【0200】

本発明の製剤は、随意に、正常な組織（例えば、正常な肝臓組織）に、ならびに種々のモデル（例えば、同所性肝臓モデル、皮下肝臓モデル等）に標的化することができる。

【0201】

本発明の製剤のための１つの例示的な標的は、カイロミクロン、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、中間密度リポタンパク質（ＩＤＬ）、および低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）といった、種々の類のリポタンパク質で見出される、アポリポタンパク質Ｂ（ＡｐｏＢ）である。ＡｐｏＢは、ＡｐｏＢ／Ｅ受容体によるＬＤＬ粒子の細胞結合および内部化のための認識信号として機能する。アポリポタンパク質Ｂ含有リポタンパク質の蓄積または過多は、アテローム性動脈硬化等の脂質関連障害につながり得る。ＡｐｏＢを低減させる処方治療は、脂質関連障害を治療するために有用であり得る。アンチセンス治療の形態の１つの核酸系治療は、生体内でマウスにおけるＡｐｏＢレベルを低減させることが示されており、後に、治療は、血清コレステロールおよびトリグリセリドレベルを低減させた（米国公開第２００３／０２１５９４３号）。これらの結果は、ＡｐｏＢの適度な下方調節、および脂質関連障害を治療する際の標的としてのその使用を実証した。

【0202】

本発明の製剤のための別の例示的な標的は、例えば、血友病の治療のために標的化され得る、タンパク質Ｃである。

【0203】

治療薬の送達
本発明の製剤は、治療薬（例えば、ポリアニオン系薬剤、核酸、またはＲＮＡｉ剤）を細胞に送達するために使用されてもよい。本製剤によって送達される薬剤は、（例えば、生体外で、または対象において生体内で）遺伝子サイレンシングのために、あるいは対象の疾患（例えば、癌）を治療するか、または予防的に治療するために使用することができる。

【0204】

治療薬の送達は、任意の有用な方法を使用することによって評価されてもよい。例えば、本発明の化合物を含有する製剤を用いた送達は、同等用量での対照と比較して、１）標的遺伝子のノックダウン、または２）毒性あるいは耐容性によって評価されてもよい。これらの評価は、本発明の化合物（例えば、式（Ｉ）または表１の任意の化合物）と組み合わせて、本明細書で説明される任意の陽イオン性脂質（例えば、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＤＭＡ、ＤＬｉｎＤＭＡ、および／またはＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）等の本製剤中の脂質の任意の有用な組み合わせを用いて判定することができる。特定の実施形態では、本発明の化合物を使用するときに、治療薬の送達の向上が観察され、向上は、対照と比較して２５％以上（例えば、送達の２倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍以上の向上）である。

【0205】

ＲＮＡｉ剤の送達
ＲＮＡｉサイレンシングは、多種多様の細胞で使用することができ、ＨｅＬａ Ｓ３、ＣＯＳ７、２９３、ＮＩＨ／３Ｔ３、Ａ５４９、ＨＴ−２９、ＣＨＯ−ＫＩ、およびＭＣＦ−７細胞株は、いくらかのレベルのｓｉＲＮＡサイレンシングの影響を受けやすい。さらに、哺乳類細胞の抑制は、標的遺伝子に対する特異性を伴うＲＮＡレベルで起こることができ、ＲＮＡとタンパク質抑制との間の強い相関が観察されている。加えて、本発明の化合物およびその製剤は、（例えば、生体外で、または生体内で）ＲＮＡｉ剤を１つ以上の細胞に送達するために使用されてもよい。例示的なＲＮＡｉ剤は、本明細書で説明されるように、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、およびＤｓｉＲＮＡ剤を含む。

【0206】

生体外標的ノックダウン
ＲＮＡｉ剤の送達は、任意の有用な方法によって評価することができる。例えば、治療薬を含む製剤を、細胞培養モデル（例えば、ＨｅＬａ細胞）に生体外で移入することができ、終点測定は、（ｉ）ｑＰＣＲを使用したｍＲＮＡ定量、（ｉｉ）ウェスタンブロットを使用したタンパク質定量、（ｉｉｉ）本薬剤および／または本発明のアミノアミンまたはアミノアミド陽イオン性脂質の標識細胞内部化の１つ以上を含むが、それらに限定されない。取り込みまたは送達が、上記の終点の範囲および持続時間の両方にわたって評価されてもよい。送達前に、本製剤は、細胞培地中で室温にて約３０分間希釈されてもよく、最終濃度は、用量反応実験において、０から５０ｎＭの治療薬あるいはアミノアミンまたはアミノアミド陽イオン性脂質に変化させることができる。経時変化実験では、用量実験からの最適濃度が、種々のインキュベーション時間、例えば、３０分から７日にわたって研究されてもよい。

【0207】

ポリアニオン系ペイロードおよび脂質製剤の機能性もまた、蛍光タグで脂質化合物および治療薬を特異的に標識し、蛍光共局在化研究を行うことによって検査されてもよい。ポリアニオン系ペイロードおよび／または付着した蛍光標識を送達する本発明の化合物の能力は、細胞の内側の全蛍光を測定することによって、およびエンドソームまたはリソソーム区画と安定して関連付けられていない蛍光を測定することによっての両方で評価されてもよい（機能するために、ＲＮＡｉをトリガする治療薬は、細胞の内側に到達するだけでなく、細胞の細胞質に到達する必要もある）。蛍光共局在化および細胞輸送研究の実施が、当技術分野で説明されている（Ｌｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍ．６（３）：７６３，２００９、ＭｃＮａｕｇｈｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０６（１５）：６１１１，２００９）。

【0208】

特定の標的細胞型および標的組織への送達
本発明の化合物は、治療薬を種々の臓器および組織に送達して種々の疾患を治療するために使用することができる。例示的な標的組織または臓器は、肝臓、膵臓、肺、前立腺、腎臓、骨髄、脾臓、胸腺、リンパ節、脳、脊髄、心臓、骨格筋、皮膚、口腔粘膜、食道、胃、回腸、小腸、結腸、膀胱、子宮頸部、卵巣、精巣、乳腺、副腎、脂肪組織（白色および／または褐色）、血液（例えば、ヒト造血前駆細胞、ヒト造血幹細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＣＤ４＋細胞等の造血細胞）、リンパ球、および他の血液系統細胞を含むが、それらに限定されない。

【0209】

癌治療
本発明の化合物は、癌を有する、または癌を発現するリスク（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％の増加リスク）がある対象に１つ以上の治療薬（例えば、ＲＮＡｉ剤）を送達するために使用することができる。例示的な癌は、肝臓癌（例えば、肝細胞癌、肝芽腫、胆管癌、脈管肉腫、または血管肉腫）、または神経芽細胞腫を含む。例示的な腫瘍性疾患および関連合併症は、癌（例えば、肺、乳房、膵臓、結腸、肝細胞、腎臓、女性生殖管、扁平上皮細胞、上皮内癌）、リンパ腫（例えば、組織球性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫）、ＭＥＮ２症候群、神経線維腫症（シュワン細胞新生物を含む）、骨髄異形成症候群、白血病、腫瘍血管新生、甲状腺、肝臓、骨、皮膚、脳、中枢神経系、膵臓、肺（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、乳房、結腸、膀胱、前立腺、消化管、子宮内膜、卵管、精巣、および卵巣の癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、前立腺腫瘍、肥満細胞腫瘍（イヌ肥満細胞腫瘍を含む）、急性骨髄線維症、白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、黒色腫、肥満細胞症、神経膠腫、膠芽細胞腫、星状細胞腫、神経芽細胞腫、肉腫（例えば、神経外胚葉起源の肉腫、または平滑筋肉腫）、他の組織への腫瘍の転移、および化学療法誘導性低酸素症を含むが、それらに限定されない。

【0210】

投与および投与量
本発明はまた、治療薬（例えば、ＲＮＡｉ剤）を含む製剤等の、化合物を含有する医薬組成物または組成物の治療的有効量にも関する。本組成物は、種々の薬剤送達システムで使用するために製剤化することができる。１つ以上の生理学的に容認可能な賦形剤または担体も、適正な製剤のために本組成物に含むことができる。本発明で使用するための好適な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，１７ｔｈ ｅｄ．，１９８５で見出される。薬剤送達のための方法の簡潔な論評については、例えば、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３，１９９０を参照されたい。

【0211】

本医薬組成物は、予防的および治療的処置のために、経皮手段によって等、非経口、鼻腔内、局部、経口、または局所投与に意図されている。本医薬組成物は、非経口で（例えば、血管内、筋肉内、または皮下注射）、または経口摂取によって、または血管あるいは癌症状による影響を受ける領域での局所適用あるいは関節内注射によって、投与することができる。付加的な投与経路は、血管内、動脈内、腫瘍内、腹腔内、心室内、硬膜外、ならびに鼻腔内、眼内、強膜内、眼窩内、直腸、局所、またはエアロゾル吸入投与を含む。持続放出投与もまた、蓄積注射または浸食性インプラントあるいは構成要素等の手段によって、本発明に特異的に含まれる。したがって、本発明は、容認可能な担体、好ましくは、水性担体、例えば、水、緩衝用水、生理食塩水、ＰＢＳ、および同等物中に溶解または懸濁させられた上記の作用物質を含む、非経口投与のための組成物を提供する。本組成物は、生理学的条件に接近させるように必要に応じて、ｐＨ調整および緩衝剤、毒性調整剤、湿潤剤、洗剤、および同等物等の薬学的に容認可能な補助物質を含有してもよい。本発明はまた、錠剤、カプセル、および同等物の製剤用の結合剤または充填剤等の不活性成分を含有し得る、経口送達のための組成物を提供する。さらに、本発明は、クリーム、軟膏、および同等物の製剤用の溶媒または乳化剤等の不活性成分を含有し得る、局所投与のための組成物を提供する。

【0212】

これらの組成物は、従来の滅菌技法によって滅菌されてもよく、または滅菌濾過されてもよい。結果として生じる水溶液は、そのままで使用するために包装され、または凍結乾燥させられてもよく、凍結乾燥調製品は、投与の前に滅菌水性担体と組み合わせられる。調製品のｐＨは、典型的には、３から１１、より好ましくは、５から９または６から８、最も好ましくは７から７．５等の７から８であろう。固体形態での結果として生じる組成物は、錠剤またはカプセルの密閉包装等の中等に固定量の１つまたは複数の上記の作用物質をそれぞれ含有する、複数の単回用量単位で包装されてもよい。固体形態での本組成物はまた、局所的に適用可能なクリームまたは軟膏のために設計された圧搾可能なチューブの中等で、融通が利く分量のためのコンテナで包装することもできる。

【0213】

有効量を含有する本組成物は、予防的または治療的処置のために投与することができる。予防的用途では、腫瘍または癌の発現に対する臨床的に判定された傾向または増加した感受性がある患者に組成物を投与することができる。本発明の組成物は、臨床疾患の発病または腫瘍発生を遅延させ、低減させ、または好ましくは予防するのに十分な量で、患者（例えば、ヒト）に投与することができる。治療的用途では、組成物は、症状およびその合併症の兆候を治癒するか、または少なくとも部分的に止めるのに十分な量で、すでに癌に罹患している患者（例えば、ヒト）に投与される。この目的を達成するために十分な量は、「治療的有効用量」として定義され、疾患または病状と関連付けられる何らかの兆候を実質的に改善するのに十分な化合物の量である。例えば、癌の治療では、疾患または症状の任意の兆候を減少させ、予防し、遅延させ、抑制し、または止める作用物質または化合物が、治療的に有効であろう。作用物質または化合物の治療的有効量は、疾患または症状を治癒する必要はないが、個人において、疾患または症状の発病が遅延させられ、妨害され、または予防され、あるいは疾患または症状の兆候が改善され、あるいは疾患または症状の期間が変化させられる、または例えば、あまり重度ではない、あるいは回復が加速させられるように、疾患または症状に対する治療を提供するであろう。

【0214】

この用途に効果的な量は、疾患または症状の重症度、ならびに患者の体重および前進状態に依存し得るが、概して、患者あたりの用量につき約０．５ｍｇから約３０００ｍｇの１つまたは複数の作用物質に及び得る。初期投与および追加投与のための好適な計画は、後続の投与による１つ以上の毎時間、毎日、毎週、または毎月の間隔での反復投与が続く、初期投与によって類型化される。本発明の組成物中に存在する作用物質の全有効量は、ボーラスとして、または比較的短い期間にわたる注入によってのいずれかで、単回用量として哺乳類に投与することができ、あるいは複数の用量がより長期間にわたって投与される（例えば、４〜６、８〜１２、１４〜１６、または１８〜２４時間ごと、または２〜４日、１〜２週間ごと、月に１回の用量）分画治療プロトコルを使用して投与することができる。代替として、血液中の治療的に有効な濃度を維持するのに十分な連続静脈内注入が考慮される。

【0215】

本発明の組成物内に存在し、哺乳類（例えば、ヒト）に適用される本発明の方法で使用される、１つ以上の作用物質の治療的有効量は、哺乳類の年齢、体重、および状態の個体差を考慮して、当業者によって判定することができる。本発明の作用物質は、治療された対象で望ましい結果（例えば、癌または神経変性障害の減速または寛解）を生じる量である、有効量で対象（例えば、ヒト等の哺乳類）に投与される。そのような治療的有効量は、当業者によって実験的に判定することができる。

【0216】

患者はまた、１週間に１回以上（例えば、１週間に２、３、４、５、６、７回以上）１用量につき約０．１〜３，０００ｍｇ、１週間に０．１〜２，５００（例えば、２，０００、１，５００、１，０００、５００、１００、１０、１、０．５、または０．１）ｍｇの範囲内の作用物質を受容してもよい。患者はまた、２または３週間に１回、１用量につき０．１〜３，０００ｍｇの範囲内の本組成物の作用物質を受容してもよい。

【0217】

投与される製剤およびペイロード（例えば、ＤｓｉＲＮＡ）の量（用量）は、実験的に判定することができる。ある実施形態では、遺伝子発現の効果的なノックダウンは、０．０００１〜１０ｍｇ／ｋｇ動物重量の核酸ペイロードおよび０．００１〜２００ｍｇ／ｋｇ動物重量の送達製剤を使用して観察される。マウスにおける例示的な量は、０．１〜５ｍｇ／ｋｇの核酸ペイロードおよび０．７〜１００ｍｇ／ｋｇの送達製剤である。随意に、約１〜５０ｍｇ／ｋｇの送達製剤が投与される。ペイロード（例えば、ＤｓｉＲＮＡ）の量は、典型的には、より大きい用量で毒性ではないため、容易に増加される。

【0218】

ある実施形態では、用量は、例えば、急性対慢性適応症等に応じて、数日、数週間、またはそれ以上の期間（例えば、１日から２８日以上）にわたって毎日、１回だけ、または他の間隔で投与することができる。

【0219】

有効量を含む、本発明の組成物の単回または複数回投与は、治療医によって選択されている用量レベルおよびパターンで実行することができる。用量および投与スケジュールは、臨床医によって一般的に実践されている方法、または本明細書で説明される方法に従って、治療の経過の全体を通して監視され得る、患者の疾患または症状の重症度に基づいて判定および調整することができる。

【0220】

本発明の化合物および製剤は、処置または治療の従来の方法と組み合わせて使用されてもよいか、あるいは処置または治療の従来の方法とは別個に使用されてもよいかのいずれかである。本発明の化合物および製剤は、他の作用物質とともに併用療法で投与されるとき、個人に連続的または同時に投与されてもよい。代替として、本発明による医薬組成物は、本明細書で説明されるような薬学的に容認可能な賦形剤と関連する本発明の化合物または製剤、および当業者に公知である別の治療または予防薬の組み合わせを含む。

【0221】

製剤化された作用物質は、キットとしてともに包装することができる。非限定的実施例は、例えば、２つの丸薬、丸薬および粉末、坐薬およびバイアル中の液体、２つの局所クリーム等を含有する、キットを含む。キットは、粉末形態を再構成するためのバイアル、注射用の注射器、カスタマイズされた静脈内送達システム、吸入器等の、患者への単位用量の投与に役立つ随意的な構成要素を含むことができる。加えて、単位用量キットは、組成物の調製または投与のための説明書を含有することができる。キットは、特定の患者用の１人の患者の複数回使用のための単回使用単位用量として製造されてもよく（一定用量で、または治療が進行するにつれて個々の化合物の有効性が変化し得る）、またはキットは、複数の患者への投与のために好適な複数の用量を含有してもよい（「バルク包装」）。キット構成要素は、カートン、ブリスターパック、ボトル、チューブ、および同等物の中で組み立てられてもよい。

【0222】

組立ナノ粒子中の脂質のｐＫａ値の測定
脂質の異なる生理化学的性質が、異なる環境に存在するときの脂質の挙動を大いに決定する。１つのそのような重要な性質は、脂質のイオン化定数（Ｋａ）である。脂質の固有ｐＫａは、組立ナノ粒子中に存在するときのそれらの挙動の正しい表現ではない場合がある。水性環境中に存在するとき、脂質が、高い誘電率を伴う環境を被る一方で、組立ナノ粒子／小胞中で、それは、低い誘電率を提供する脂質によって包囲される。加えて、周辺脂質、コレステロール、およびＰＥＧ化脂質は全て、本製剤の見掛けのｐＫａに影響を及ぼす。陽イオン性脂質と核酸との間の相互作用の性質が静電気であるため、本製剤の見掛けのｐＫａが、ナノ粒子の核酸のカプセル化、また、後続の細胞内放出も決定する。

【0223】

ＴＮＳ蛍光方法が、本製剤中の脂質の見掛けのｐＫａを判定するために使用されてもよい。ＴＮＳ（２−（ｐ−トルイジノ）−６−ナフタレンスルホン酸）は、蛍光が水の存在下で急冷させられる、負に帯電した蛍光染料である。ＴＮＳは、正に帯電した膜に分かれ、これは、水の除去による蛍光の増加をもたらす。したがって、蛍光の増加は、異なるｐＨ環境に存在するときの陽イオン性脂質のイオン化を推定するために使用することができる。ＴＮＳを使用してｐＫａを判定する方法が、例えば、実施例で説明されるように、当技術分野で公知である。

【実施例】

【0224】

実施例１：ケトンおよび１級アミンからのアミノアミン脂質Ｌ−１の合成

【化15】

ケトンａ（１当量）およびアミンｂ（１．１当量）を、全てＮ_２雰囲気下で乾燥フラスコの中のジクロロエタンに溶解させ、室温（ＲＴ）で３０分間撹拌した。トリアセトキシボロヒドリド（１．５当量）を添加し、混合物を室温で一晩撹拌した。反応物を１Ｎ ＮａＯＨで急冷させた。急冷反応物をＤＣＭで希釈し、水で１回、食塩水で１回抽出し、有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させた。乾燥溶液をロトエバポレータ上で濾過および濃縮した。化合物Ｌ−１を産生するように、残留物をシリカカラム（１％ＭｅＯＨ／ＤＣＭから５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで始まる段階的勾配、収率は６０％から９０％まで変化した）によって精製した。Ｈ^１ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ５．４１−５．３０（ｍ，８Ｈ），３．１２（ｔ，２Ｈ），２．９１（ｍ，１Ｈ），２．７７（ｔ，６Ｈ），２．４８（ｂｓ，６Ｈ），２．２０（ｍ，２Ｈ），２．０５（ｑ，８Ｈ），１．８０−１．６９（ｍ，４Ｈ），１．３８−１．２５（ｍ，４０Ｈ），０．８９（ｔ，３Ｈ）；質量分析：エレクトロスプレー：［Ｍ＋１］理論値：６１３、実測値：６１３。

【0225】

この実施例の合成ステップを修正することによって、図２Ａ、２Ｂ、および３で提供されるもの等の付加的なアミノアミン脂質を調製した。

【0226】

実施例２：ケトンおよび２級アミンからのアミノアミン脂質Ｌ−２の合成

【化16】

ケトンａ（１当量）を全てＮ_２雰囲気下で乾燥フラスコの中の乾燥ＭｅＯＨに溶解させた。アミンｂ（１．１当量）を添加し、続いてトリアセトキシボロヒドリド（１．５当量）およびＡｃＯＨ（１当量）を添加し、反応物を室温で一晩撹拌した。反応物をＤＣＭで希釈し、水で１回、食塩水で１回抽出し、有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させた。乾燥溶液をロトエバポレータ上で濾過および濃縮した。化合物Ｌ−２を産生するように、残留物をシリカカラム（１％ＭｅＯＨ／ＤＣＭから５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで始まる段階的勾配、収率は６０％から９０％まで変化した）によって精製した。Ｈ^１ ＮＭＲ：（ＣＤ_３ＯＤ）δ５．３９−５．３０（ｍ，８Ｈ），２．７８（ｔ，４Ｈ），２．５９−２．５２（ｍ，１０Ｈ），２．３３（ｂｓ，８Ｈ），２．０７（ｑ，８Ｈ），１．２５（ｍ，２Ｈ），１．４０−１．２６（ｍ，４０Ｈ），０．９１４（ｔ，６Ｈ）；質量分析：エレクトロスプレーポジティブモード［Ｍ＋１］理論値：６６８，実測値：６６８。

【0227】

この実施例の合成ステップを修正することによって、図４および５で提供されるＬ−２およびＬ−６類似体等の付加的なアミノアミン脂質を調製した。

【0228】

実施例３：ケトンおよびモルホリンからの脂質Ｌ−４６の合成

【化17】

ＤＣＥ（１２ｍｌ）中のケトンａ（２．６６ｇ、５．０５ｍｍｏｌ）、モルホリンｂ（１．３４ｍｌ、１５ｍｍｏｌ）、およびＡｃＯＨ（１．７７ｍｌ、３０ｍｍｏｌ）の混合物に、ＮａＢＨ（ＡｃＯ）_３（１．６ｇ、７．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で７２時間撹拌した。ＴＬＣ検査（シリカゲル、ヘキサン：ＥｔＡｃ−Ｅｔ_３Ｎ ９５：５を用いた溶出）は、約４５％変換を示した。反応混合物を５％水性Ｋ_２ＣＯ_３で希釈し、ＤＣＭで抽出した。溶媒をＫ_２ＣＯ_３上で乾燥させ、ロトエバポレータ上で蒸発させた。残留物をシリカゲル上でＬＣによって分離した（ヘキサン：ＥｔＡｃ ９０：１０を用いた溶出）。所望の生成物Ｌ−４６は、３９％収率（１．１８ｇ）で得られ、ＮＭＲによって純粋であった。

【0229】

実施例４：ケトンおよびピペリジンからの脂質Ｌ−４７の合成

【化18】

ＤＣＥ（２４ｍｌ）中のジリノレイルケトンａ（３．９９ｇ、７．５８ｍｍｏｌ）、ピペリジンｂ（２．２５ｍｌ、２２ｍｍｏｌ）、およびＡｃＯＨ（１．３３ｍｌ、２３ｍｍｏｌ）の混合物に、ＮａＢＨ（ＡｃＯ）_３（２．４ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で９６時間撹拌した。ＴＬＣ検査（シリカゲル、ヘキサン：ＥｔＡｃ−Ｅｔ_３Ｎ ９５：５を用いた溶出）は、約３５％変換を示した。反応混合物を５％水性Ｋ_２ＣＯ_３で希釈し、ＤＣＭで抽出した。溶媒をＫ_２ＣＯ_３上で乾燥させ、ロトエバポレータ上で蒸発させた。残留物をシリカゲル上でＬＣによって分離した（ヘキサン：ＥｔＡｃ ９０：１０を用いた溶出）。所望の生成物Ｌ−４７は、２９％収率（１．３０ｇ）で得られ、ＮＭＲによって純粋であった。

【0230】

この実施例ならびに実施例３で提供される方法を使用することによって、図９で提供されるもの等の種々の頭部基を有する陽イオン性脂質を調製することができる。

【0231】

実施例５：１級アミンおよびカルボン酸からのアミド陽イオン性脂質の合成
以下の一般手順を使用して、以下のジリノレイルアミド誘導体を調製した。ＤＣＭ（１５ｇ／ｍＬ）中のジリノレイルアミン（３３８ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（６５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、アミノ酸（１ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（１当量）の溶液に、ＥＤＣ（１．２ｍｍｏｌ）の添加を組み合わせた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。ＴＬＣは、反応が完了したことを示した。反応混合物を水中の０．５％Ｋ_２ＣＯ_３で希釈し、ＤＣＭで抽出した。ロトエバポレータ上の濃縮後に、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィによって精製した（ヘキサン：Ｅｔ_３Ｎ ９５：５からヘキサン：ＣＨＣｌ_３：Ｅｔ_３Ｎ ４６：４４：５までの勾配）。得られた収率は８０〜８５％であった。

【0232】

ジオレイル誘導体も、以下で提供される方式に基づいて調製された。
１級アミンおよびカルボン酸からの脂質Ｌ−３０の合成

【化19】

１級アミンおよびカルボン酸からの脂質Ｌ−３１の合成

【化20】

１級アミンおよびカルボン酸からの脂質Ｌ−３２の合成

【化21】

１級アミンおよびカルボン酸からの脂質Ｌ−４２の合成

【化22】

【0233】

この実施例の合成ステップを修正することによって、図６〜８で提供されるもの等の付加的なアミドアミン脂質を調製した。

【0234】

実施例６：アミン脂質製剤の調製
脂質Ｌ−１およびＬ−２の有効性を検査するために、以下の構造を有するＲＮＡｉ剤（ＨＰＲＴ１用に対するＤｓｉＲＮＡ）とともに、陽イオン性脂質（ＤＯＤＭＡ）、中性脂質（ＤＳＰＣ）、ＰＥＧ−脂質複合体（ＰＥＧ−ＤＭＰＥおよびＰＥＧ−ＤＭＧ）、およびコレステロールを用いて製剤を調製した。

【化23】

大文字は、ＲＮＡヌクレオチドを示し、下線を引いた大文字は、２′−Ｏ−メチル−ＲＮＡヌクレオチドを示し、小文字は、ＤＮＡヌクレオチドを示す。

【0235】

ＤｓｉＲＮＡ鎖の調製：オリゴヌクレオチド合成および精製
標準方法（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ，Ｉｏｗａ）に従って、個々のＲＮＡ鎖を合成してＨＰＬＣ精製した。例えば、固相ホスホラミダイト化学反応を使用してＲＮＡオリゴヌクレオチドを合成し、脱保護し、標準技法（Ｄａｍｈａ ａｎｄ Ｏｌｇｉｖｉｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０：８１，１９９３、Ｗｉｎｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３： ２６７７，１９９５）を使用してＮＡＰ−５カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）上で脱塩した。１５分間の段階的線形勾配を使用したＡｍｅｒｓｈａｍ Ｓｏｕｒｃｅ １５Ｑカラム（１．０ｃｍ×２５ｃｍ、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）上でイオン交換高速液体クロマトグラフィ（ＩＥ−ＨＰＬＣ）を使用して、オリゴマーを精製した。勾配は、９０：１０緩衝剤Ａ：Ｂから５２：４８緩衝剤Ａ：Ｂであって、緩衝剤Ａは、ｐＨ８．５の１００ｍＭ Ｔｒｉｓであり、緩衝剤Ｂは、ｐＨ８．５の１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、１Ｍ ＮａＣｌである。サンプルを２６０ｎｍで監視し、全長オリゴヌクレオチド種に対応するピークを収集し、プールし、ＮＡＰ−５カラム上で脱塩し、凍結乾燥させた。

【0236】

Ｂｅｃｋｍａｎ ＰＡＣＥ ５０００（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，Ｃａｌｉｆ．）上のキャピラリ電気泳動（ＣＥ）によって、各オリゴマーの純度を判定した。ＣＥキャピラリは、１００μｍ内径を有し、ｓｓＤＮＡ １００Ｒ Ｇｅｌ（Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒ）を含有した。典型的には、約０．６ｎｍｏｌｅのオリゴヌクレオチドが、キャピラリに注入され、４４４Ｖ／ｃｍの電場で流され、２６０ｎｍにおけるＵＶ吸光度によって検出された。変性Ｔｒｉｓ−ホウ酸塩−７Ｍ−尿素流動緩衝剤をＢｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒから購入した。以下で説明される実験で使用するためにＣＥによって評価されるように、少なくとも９０％純粋であるオリゴリボヌクレオチドが得られた。製造業者の推奨プロトコルに従って、Ｖｏｙａｇｅｒ ＤＥＴＭ Ｂｉｏｓｐｅｃｔｏｍｅｔｒｙ Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆ．）上でのマトリクス支援レーザ脱離／イオン化飛行時間（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）質量分析法によって、化合物の同一性が検証された。しばしば期待分子量の０．２％以内で、全てのオリゴマーの相対分子量が得られた。

【0237】

ＤｓｉＲＮＡ二本鎖の調製
例えば、１００ｍＭ酢酸カリウム、３０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５から成る二重緩衝剤中で１００μＭ濃度において、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）オリゴマーを再懸濁させた。例えば、５０μＭ二本鎖の最終溶液をもたらすように、相補的センスおよびアンチセンス鎖を等モル量で混合した。サンプルをＲＮＡ緩衝剤（ＩＤＴ）中で１００℃にて５分間加熱し、使用前に室温まで冷却させた。二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）オリゴマーを−２０℃で貯蔵した。一本鎖ＲＮＡオリゴマーを凍結乾燥状態で、または−８０℃でヌクレアーゼを含まない水の中で貯蔵した。

【0238】

小胞系脂質製剤の調製
表５で提供されるモル％で脂質粒子を調製した。総脂質対ＤｓｉＲＮＡの比は、約１：７であった。

【表5】

【0239】

ＲＮＡ−結合剤およびトランスフェクション脂質製剤の調製
表６で提供されるモル％で脂質粒子を調製した。総脂質対ＤｓｉＲＮＡの比は、約１：２０であった。

【表6】

【0240】

表５および６では、ＰＥＧ−ＤＭＰＥは、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］であり、ＰＥＧ−ＤＭＧは、（Ｒ）−３−［（ω−メトキシ−ＰＥＧ２０００−カルバモイル）］−１，２−ジ−Ｏ−テトラデシル−ｓｎ−グリセリドである。

【0241】

実施例７：アミン脂質製剤の生体外性能
種々の脂質製剤の有効性を評価するために、ＨＰＲＴ１を標的にするＤｓｉＲＮＡ分子を用いて生体外アッセイを行った。脂質製剤は、実施例６において上記で説明されるように、ＨＰＲＴ１に対するＤｓｉＲＮＡを用いて調製された。

【0242】

細胞培養およびＲＮＡトランスフェクション
ＨｅＬａ細胞をＡＴＣＣから得て、５％ＣＯ_２下で３７℃にて１０％ウシ胎仔血清（ＨｙＣｌｏｎｅ）が補充されたダルベッコ修飾イーグル培地（ＨｙＣｌｏｎｅ）中で維持した。１ｎＭ、５ｎＭ、または２５ｎＭの最終濃度で本発明の製剤を用いたインキュベーションを介して、本発明のｄｓＲＮＡ−陽イオン性脂質製剤をＨｅＬａ細胞に移入した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ｄｓＲＮＡを、０．１ｎＭまたは１ｎＭで陽性対照として使用した。概略すると、各ｄｓＲＮＡの２．５μＬの０．２μＭまたは０．０２μＭ原液を４７．５μＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ Ｉ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と混合した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）対照については、各ｄｓＲＮＡの２．５μＬの０．２μＭまたは０．０２μＭ原液を、４６．５μＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ Ｉ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）および１μＬのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＲＮＡｉＭＡＸと混合した。ｄｓＲＮＡ：Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＲＮＡｉＭＡＸ錯体が形成することを可能にするように、結果として生じた５０μＬ混合を１２ウェルプレートの個々のウェルの中へ添加し、室温で２０分間インキュベートした。

【0243】

その間に、ＨｅＬａ細胞をトリプシン処理し、約３６７細胞／μＬの最終濃度で培地に再懸濁させた。最終的に、４５０μＬの細胞懸濁液を各ウェルに添加し（最終体積５００μＬ）、プレートをインキュベータの中へ２４時間配置した。用量反応研究については、ｄｓＲＮＡの濃度を最初に１０ｐＭから１００ｎＭまで変化させた。経時変化研究については、約４時間から約７２時間のインキュベーション時間を研究した。

【0244】

阻害の評価
標的遺伝子ニックダウン度が、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＲＮＡｉＭＡＸ単独（媒介物対照）または未処置を含む、ＨＰＲＴ発現対照治療に正規化された値を用いて、ｑＲＴ−ＰＣＲによって判定された。

【0245】

ＲＮＡ単離および分析
細胞を２ｍＬのＰＢＳで１回洗浄し、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（商標）（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して総ＲＮＡを抽出し、３０μＬの最終体積で溶出した。製造業者の指示に従ってＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｒ １^ｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡＫｉｔ（商標）（Ｒｏｃｈｅ）およびランダム六量体を使用して、１μｇの総ＲＮＡを逆転写した。３．３３μＬのＨ_２Ｏおよびヒト遺伝子ＨＰＲＴ−１（受託番号ＮＭ＿０００１９４）標的配列に特異的なプライマーおよびプローブを含有する１μＬの３μＭ混合とともに、結果として生じたｃＤＮＡの３０分の１（０．６６μＬ）を、５μＬのＩＱ Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ Ｐｏｗｅｒｍｉｘ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）と混合した。

【0246】

定量的ＲＴ−ＰＣＲ
Ｃ１０００ Ｔｈｅｒｍａｌ ｃｙｃｌｅｒ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を伴うＣＦＸ９６ Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ Ｓｙｓｔｅｍを増幅反応に使用した。ＰＣＲ条件は、３分間で９５℃、次いで、循環は、９５℃、１０秒間、および４０サイクルに５５℃、１分間であった。各サンプルを３通りに検査した。相対的ＨＰＲＴ ｍＲＮＡレベルを標的ｍＲＮＡレベルに正規化し、トランスフェクション試薬単独で処置された、または未処置の対照サンプルで得られたｍＲＮＡレベルと比較した。Ｂｉｏ−Ｒａｄ ＣＦＸ Ｍａｎａｇｅｒバージョン１．０ソフトウェアを使用して、データを分析した。アミノアミン陽イオン性脂質を伴わないｄｓＲＮＡ製剤と対比したｄｓＲＮＡのアミノアミン陽イオン性脂質製剤の処置下での発現の比較として、発現データを提示した。

【0247】

結果
図１０は、アミノアミン脂質Ｌ−１またはＬ−２を含有する脂質粒子を使用した、生体外ノックダウンの結果を提供する。全体的に、Ｌ−１およびＬ−２の両方が、ＨｅＬａ細胞に投与されたときに標的ｍＲＮＡレベルを効果的に阻害した。具体的には、Ｌ−１は、１ｎＭの最低濃度で約７０％の残りのｍＲＮＡレベルを提供した。したがって、アミノアミン脂質は、トランスフェクションを介してＨｅＬａ細胞に投与されたときにＲＮＡｉ剤の効果的な送達を提供した。したがって、本発明の化合物のそれぞれ、例えば、任意の脂質またはその製剤が、ポリアニオン系ペイロード、例えば、ＲＮＡｉ剤またはアンチセンスペイロードの送達に有用となるであろう。

【0248】

実施例８：アミン脂質製剤の生体内性質
脂質の性能をさらに評価するために、ＨＰＲＴ１に対するＤｓｉＲＮＡを有する製剤を用いて、生体内実験を行った。

【0249】

２０モル％のＬ−１、Ｌ−２、Ｌ−５、Ｌ−６、Ｌ−７、Ｌ−８、Ｌ−２２、またはＬ−３０のうちの１つ、２６モル％のＤＯＤＭＡ、３モル％のＰＥＧ２０００−ＤＭＰＥ、３モル％のＰＥＧ２０００−ＤＭＧ、１３モル％のＤＳＰＣ、および３３モル％のコレステロールといった近似割合で、製剤を調製した。本製剤はさらに、約１：２０（重量／重量）のＤｓｉＲＮＡ：総脂質比を含んだ。

【0250】

約４週齢のＣＤ１雌マウスに、尾静脈を介した静脈内投与によって、１０μＬ／１ｇの体重の投与量で脂質粒子製剤の単回用量（１ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇのいずれか一方）を投与した。４８時間後（投与後）に、組織をＲＮＡＬａｔｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ）に収集した。終点分析において、総ＲＮＡをＲＴ−ｑＰＣＲのためにマウス肝臓から単離した。ＲＮＡサンプルを、室温の前にオリゴ（ｄＴ）プライマーとともに７０℃で５分間加熱した。ＰＣＲ反応において、ｍＨＰＲＴ発現をＲＰＬ２３（本明細書では対照として使用されたハウスキーピング遺伝子）で正規化した。図１１および１２は、ｎ＝５動物／群に対して平均±ＳＤを伴う誤差バーとともにデータを示す。

【0251】

第１組の実験では、脂質製剤の投与量は、単回用量で５ｍｇ／ｋｇであった（図１１）。この投与量で、化合物Ｌ−１およびＬ−７は、約８０％から約９０％の残りのｍＲＮＡレベルを提供した。Ｌ−３０の中等の頭部基の中のオキソ基の添加が、約１５％の残りのｍＲＮＡレベルによって証明されるように、遺伝子サイレンシングの劇的な増加を提供した。加えて、頭部基の中にヘテロシクリルを有する化合物（例えば、Ｌ−２、Ｌ−５、Ｌ−６、Ｌ−８、およびＬ−２２）は、約１５％から約４５％の残りのｍＲＮＡレベルを有する化合物を提供した。種々の製剤に対するｍＲＮＡノックダウン率が、表７に示されている。表７は、加えて、ＴＮＳ蛍光方法によって測定されるように、脂質のそれぞれに対するｐＫａ値を示す。

【0252】

本発明の陽イオン性脂質のｐＫａ値を判定するために、製剤（１ｍＭの濃度）を異なるｐＨ値におけるリン酸緩衝剤中でインキュベートし、それにＤＭＳＯに溶解させられたＴＮＳを添加した（６μＭ ＴＮＳの結果として生じた濃度）。結果として生じた溶液の蛍光は、３２５ｎｍの励起波長および４３５ｎｍの発光波長を伴うＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）Ｍ３蛍光プレートリーダ上で測定された。ＴＮＳの測定された蛍光は、方程式１に示される３パラメータシグモイド関数で適合された。

【数1】

【0253】

最大蛍光の半分に達したｐＨが、本製剤の見掛けのｐＫａとして報告され、ａおよびｂは、それぞれ、最大観察蛍光およびシグモイド関数の傾斜を反映する無次元パラメータである。

【表7】

【0254】

第２組の実験では、化合物Ｌ−２、Ｌ−５、Ｌ−６、およびＬ−３０が、単回用量において１ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇの投与量で評価された（図１２）。具体的には、Ｌ−５、Ｌ−６、およびＬ−３０は、１ｍｇ／ｋｇのより低い用量で効果的な遺伝子サイレンシングを提供した。全体的に、これらのデータは、生体内モデルにおける標的ＲＮＡレベルの効果的な阻害剤である、種々の脂質化合物および投与量を提供する。

【0255】

本発明のアミノアミンまたはアミノアミド陽イオン性脂質およびｄｓＲＮＡを含有する、脂質製剤の耐容性を評価するために、雌ＣＤ−１マウスにＬ−６およびＬ−３０製剤を注射し［それぞれ、１０ｍｇ／ｋｇのＤｓｉＲＮＡ用量、約２００ｍｇ／ｋｇの総脂質用量において２用量（ｑｏｄ）で投与し］、第２の用量の４８時間後に血清サンプルを収集した。アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）といった酵素の測定を介した肝機能検査（ＬＦＴ）を含む、臨床化学評価の一団について、血清サンプルを検査した。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を媒介物対照群として使用した。ＡＬＴおよびＡＳＴ評価は、製剤Ｌ−６およびＬ−３０についてＰＢＳ群の＜３倍であった。また、Ｌ−６およびＬ−３０製剤について観察された体重および肝臓の変化はなかった。したがって、Ｌ−６およびＬ−３０製剤は、耐容性良好であった。したがって、本明細書で説明される脂質のうちのいずれか、およびその製剤は、１つ以上の作用物質、例えば、ポリアニオン系またはアンチセンスペイロードの送達に有用であろう。

【0256】

実施例９：皮下動物腫瘍モデルにおいて標的遺伝子の発現を低減させるためのｄｓＲＮＡを伴う脂質製剤の使用
アミノアミンまたはアミノアミド陽イオン性脂質およびｄｓＲＮＡを含有する脂質製剤の送達の効率および後続の機能性を評価するために、皮下（ｓ．ｃ．）モデル（Ｊｕｄｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１９：６６１，２００９）が、ある修飾とともに使用される。Ｈｅｐ３Ｂ腫瘍が、左後脇腹への５０μＬ ＰＢＳ中の３×１０^６個の細胞の皮下注射によって雄ｎｕ／ｎｕマウスで確立される。マウスは、腫瘍が触診可能になるにつれて、播種の１０〜１７日後に治療群に無作為化される。ｄｓＲＮＡまたは媒介物対照の脂質製剤が、個々の動物の体重に従って１ｋｇの体重あたりのｄｓＲＮＡのｍｇに基づいて計算される、外側尾静脈を介した標準静脈内（ｉ．ｖ．）注射によって投与される。腫瘍は、デジタルキャリパを使用して腫瘍成長を評価するように、２次元（幅×長さ）で測定される。腫瘍体積は、ｘ＝最大直径、ｙ＝最小直径である、方程式ｘ＊ｙ＊ｙ／２を使用して計算され、群平均±ＳＤとして表される。腫瘍組織はまた、異なる治療群の動物から除去され、遺伝子ノックダウンが確認される。腫瘍体積、生存、およびＲＮＡ発現データは、アミノアミンまたはアミノアミド陽イオン性脂質を伴わないｄｓＲＮＡ製剤と対比して、ｄｓＲＮＡの脂質製剤の治療間の比較として提示される。

【0257】

実施例１０：Ｈｅｐ３Ｂ同所性肝臓腫瘍モデルにおいて標的遺伝子の発現を低減させるためのｄｓＲＮＡを伴う脂質製剤の使用
アミノアミンまたはアミノアミド陽イオン性脂質およびｄｓＲＮＡを含有する脂質製剤の標的化の効率および後続の機能性を評価するために、肝内腫瘍モデル（Ｊｕｄｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１９：６６１，２００９）が、ある修飾とともに利用された。Ｈｅｐ３Ｂ腫瘍細胞の直接肝内注射によって、肝臓腫瘍がマウスで確立された。雄ｎｕ／ｎｕマウスが、Ｈｅｐ３Ｂ腫瘍に対する宿主として使用された。２，２，２−トリブロモエタノール（Ｓｉｇｍａ）を使用して麻酔下でマウスを維持し、正中線を横断する単一の１ｃｍ切開を胸骨より下側に加え、左外側肝葉を露出させた。ハミルトンシリンジおよび３０ゲージ針を使用して、４０μＬの５０％ＰＢＳ／５０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）（ＢＤ）に懸濁させられた約２×１０^６個のＨｅｐ３Ｂ細胞を浅い角度で肝葉にゆっくりと注射した。次いで、縫合前に任意の出血を停止させるように、綿棒を刺創に適用した。マウスは、滅菌ケージの中で麻酔から回復させられ、従来の住居に戻される前に２〜４時間厳重に監視された。腫瘍移植の約３週間後に、マウスを治療群に無作為化した。マウス（ｎ＝７／群）は、外側尾静脈を介した標準静脈内（ｉ．ｖ．）注射によって投与されるような、（１）ｄｓＲＮＡのアミノアミンまたはアミノアミド脂質製剤、（２）アミノアミンまたはアミノアミド陽イオン性脂質を伴わないｄｓＲＮＡ製剤、あるいは（３）媒介物対照を受容した。用量は、個々の動物の体重に従って１ｋｇの体重あたりのｄｓＲＮＡのｍｇに基づいて計算された。

【0258】

図１３に示される結果を生成した実験について、動物は、Ｌ−６またはＬ−３０製剤化脂質粒子を伴う５ｍｇ／ｋｇのＤｓｉＲＮＡを投与された。表８は、本研究で使用されたＬ−６およびＬ−３０脂質を含む脂質製剤の特定の組成物を提示する。

【表8】

【0259】

全身腫瘍組織量および治療耐容性を発現する指標として、体重が研究の持続時間の全体を通して監視された。有効性研究について、定義された人道的終点が生存の代理として判定された。全身腫瘍組織量による安楽死の日を定義するように、臨床的兆候、体重減少、および腹部膨満の組み合わせに基づいて評価が行われた。腫瘍組織が異なる治療群の動物から除去され、遺伝子ノックダウンが確認された。

【0260】

図１３に示されるように、検査されたＬ−６およびＬ−３０製剤の両方が、肝臓および同所性Ｈｅｐ３Ｂ腫瘍組織の両方への製剤化された抗ＨＰＲＴ１ ＤｓｉＲＮＡペイロードの送達に著しく効果的であった。具体的には、ＨＰＲＴ１標的ｍＲＮＡの５０％以上のノックダウン（ある場合においては、６０〜８０％ノックダウン）が、ＰＢＳ対照と比較して肝臓および同所性Ｈｅｐ３Ｂ腫瘍組織の両方で観察された。したがって、脂質のうちのいずれか、またはその製剤が、標的遺伝子（例えば、癌と関連付けられる標的遺伝子）の発現を低減させることにおいて有用であろう。

【0261】

実施例１１：ＨｅｐＧ２同所性肝臓腫瘍モデルにおいて標的遺伝子の発現を低減させるためのｄｓＲＮＡを伴う脂質製剤の使用
ｄｓＲＮＡのアミノアミンまたはアミノアミド陽イオン性脂質製剤の標的化の効率および後続の機能性を評価するために、第２の肝内腫瘍モデルが利用された。ＨｅｐＧ２腫瘍細胞の直接肝内注射によって、肝臓腫瘍がマウスで確立された。雌ｎｕ／ｎｕマウスが、ＨｅｐＧ２腫瘍に対する宿主として使用された。Ａｖｅｒｔｉｎ（Ｓｉｇｍａ）を使用して麻酔下でマウスを維持し、正中線を横断する単一の１ｃｍ切開を胸骨より下側に加え、左外側肝葉を露出させた。ハミルトンシリンジおよび３０ゲージ針を使用して、６０μＬの５０％ＰＢＳ／５０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）（ＢＤ）に懸濁させられた約３×１０^６個のＨｅｐＧ２細胞を浅い角度で肝葉にゆっくりと注射した。次いで、縫合前に任意の出血を停止させるように、綿棒を刺創に適用した。マウスは、滅菌ケージの中で麻酔から回復させられ、従来の住居に戻される前に２〜４時間厳重に監視された。腫瘍移植の約３週間後に、マウスを治療群に無作為化した。マウス（ｎ＝６〜７／群）は、外側尾静脈を介した標準静脈内（ｉ．ｖ．）注射によって投与されるような、（１）ｄｓＲＮＡのアミノアミンまたはアミノアミド脂質製剤、（２）アミノアミンまたはアミノアミド陽イオン性脂質を伴わないｄｓＲＮＡ製剤、あるいは（３）媒介物対照を受容した。用量は、個々の動物の体重に従って１ｋｇの体重あたりのｄｓＲＮＡのｍｇに基づいて計算された。図１４に示される結果を生成した実験は、Ｌ−６またはＬ−３０製剤化脂質粒子を伴う５ｍｇ／ｋｇのＤｓｉＲＮＡで投与された。表８は、本研究で採用されたＬ−６およびＬ−３０脂質を含む脂質製剤の特定の組成物を提示する。全身腫瘍組織量および治療耐容性を発現する指標として、体重が研究の持続時間の全体を通して監視された。有効性研究について、定義された人道的終点が生存の代理として判定された。全身腫瘍組織量による安楽死の日を定義するように、臨床的兆候、体重減少、および腹部膨満の組み合わせに基づいて評価が行われた。腫瘍組織が異なる治療群の動物から除去され、遺伝子ノックダウンが確認された。

【0262】

図１４に示されるように、検査されたＬ−６およびＬ−３０製剤の両方が、肝臓組織への製剤化された抗ＨＰＲＴ１ ＤｓｉＲＮＡペイロードの送達に著しく効果的であった。その一方で、２０〜５０％レベルのＨＰＲＴ１標的ｍＲＮＡノックダウンが、同所性ＨｅｐＧ２腫瘍組織において両方の製剤について観察された。上記の結果は、正常な肝臓および少なくともある腫瘍組織（例えば、同所性Ｈｅｐ３Ｂ腫瘍、およびより少ない程度に同所性ＨｅｐＧ２腫瘍）への送達のために効果的なｄｓＲＮＡ送達媒介物として本明細書で調査されたＬ−６およびＬ−３０製剤を識別した。したがって、脂質のうちのいずれか、またはその製剤が、標的遺伝子（例えば、癌と関連付けられる標的遺伝子）の発現を低減させることにおいて有用であろう。

【0263】

腫瘍細胞取り込みのためのｄｓＲＮＡの脂質製剤の機能性はまた、蛍光タグで脂質および／またはｄｓＲＮＡを標識し、生体動物撮像システム（ＸｅｎｏｇｅｎまたはＢｉｏＲａｄ）を使用して蛍光生体内分布研究を行うことによって、検査することもできる（Ｅｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２７：５６７，２００９）。この方法論を使用し、ｄｓＲＮＡ製剤単独と比較することによって、ｄｓＲＮＡに対する腫瘍細胞内部化を促進するアミノアミンまたはアミノアミド陽イオン性脂質の能力が確認される。対照的に、この研究で対照として使用されるｄｓＲＮＡ製剤単独は、同程度に取り込まれ、腫瘍表面に送達されることができない。有効性終点、ＲＮＡ発現、および生体内分布データが、アミノアミンまたはアミノアミド陽イオン性脂質を伴わないｄｓＲＮＡ製剤と対比したｄｓＲＮＡの脂質製剤の処置間の比較として提示される。

【0264】

実施例１２：脂質製剤を用いた肝細胞癌の抗腫瘍効率
実施例１０で説明されるように、Ｈｅｐ３Ｂ腫瘍細胞の直接肝内注射によって、肝臓腫瘍がマウスで確立された。腫瘍移植の約２週間後に、マウスを治療群に無作為化した。マウス（ｎ＝６／群）は、外側尾静脈を介した標準静脈内（ｉ．ｖ．）注射によって投与されるような、（１）対照ｄｓＲＮＡのアミノアミンまたはアミノアミド脂質製剤、（２）活性ｄｓＲＮＡのアミノアミンまたはアミノアミド脂質製剤、あるいは（３）媒介物対照を受容した。用量は、個々の動物の体重に従って１ｋｇの体重あたりのｄｓＲＮＡのｍｇに基づいて計算された。図１５および１６に示される結果を生成した実験では、動物は、Ｌ−６またはＬ−３０製剤化脂質粒子を伴う５ｍｇ／ｋｇのＤｓｉＲＮＡを投与された。表８は、本研究で使用されたＬ−６およびＬ−３０脂質を含む脂質製剤の特定の組成物を提示する。

【0265】

全身腫瘍組織量および治療耐容性を発現する指標として、体重が研究の持続時間の全体を通して監視された。有効性研究について、定義された人道的終点が生存の代理として判定された。全身腫瘍組織量による安楽死の日を定義するように、臨床的兆候、体重減少、および腹部膨満の組み合わせに基づいて評価が行われた。腫瘍組織が異なる治療群の動物から除去され、異なる治療群の有効性を判定するように腫瘍重量が測定された。血清α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）レベルも、全身腫瘍組織量のバイオマーカーとして測定された。

【0266】

活性ペイロードを伴うＬ−６およびＬ−３０製剤の両方が、対照ペイロードを伴うＬ−６およびＬ−３０製剤ならびにＰＢＳ対照と比較して、血清ＡＦＰ（図１５）および腫瘍重量（図１６）を低減させることにおいて著しく効果的であった。

【0267】

実施例１３：複数の同所性肝臓癌モデルにおいて種々の標的遺伝子の発現を低減させるためのｄｓＲＮＡを伴う異なるＬ−３０脂質製剤の使用
肝臓に対する腫瘍におけるＨＰＲＴ１のノックダウンをＬ−３０の異なる製剤で調節することができるかどうかを評価するために、ＰＥＧ−脂質含有量を調整した。表９は、本研究で使用されたＬ−３０脂質を含む脂質製剤の特定の組成物を提供する。図１８に示される結果を生成した実験は、Ｌ−３０［１］製剤化脂質粒子の中の１、３、および１０ｍｇ／ｋｇのＤｓｉＲＮＡ、ならびにＬ−３０［２］製剤化脂質粒子の中の１０ｍｇ／ｋｇのＤｓｉＲＮＡで投与された。ＲＮＡ結合剤およびＤｓｉＲＮＡを製剤に導入するために、トランスフェクション脂質に対するものと同一であるか、または異なる溶媒および溶媒系（例えば、水性および／または非水性溶媒（複数可））を含む、任意の有用な溶媒および溶媒系を使用することができる。

【0268】

図１８に示されるように、Ｌ−３０［１］およびＬ−３０［２］製剤の両方が、肝臓組織および同所性Ｈｅｐ３Ｂ腫瘍組織への製剤化された抗ＨＰＲＴ１ ＤｓｉＲＮＡペイロードの送達に著しく効果的であった。その一方で、肝臓ノックダウンが、１０ｍｇ／ｋｇのＤｓｉＲＮＡを伴うＬ−３０［１］製剤と比較して、Ｌ−３０［２］における腫瘍ノックダウンに悪影響を及ぼすことなく、有意に低減させられる。これらの結果は、脂質製剤中のＰＥＧ−脂質含有量を増加させることにより、脂質粒子の送達、後に、ある組織への標的遺伝子のノックダウンに影響を及ぼし得ることを示す。

【0269】

ｄｓＲＮＡ送達媒介物としてのＬ−３０［１］製剤の有効性が、種々の同所性肝臓癌モデルにおいて異なるｄｓＲＮＡを用いて検査された。図１９は、Ｌ−３０［１］が、対照と比較して、全ての検査された癌モデルへの製剤化された抗ＨＰＲＴ１ ＤｓｉＲＮＡペイロードの送達に効果的であったことを示す、異なる肝臓癌モデルを使用した実験から生成された結果を示す。図２０は、複数の独立ＤｓｉＲＮＡを含有するＬ−３０［１］製剤を使用した実験から生成された結果、および同所性Ｈｅｐ３Ｂ ＨＣＣ腫瘍モデルにおける対応する遺伝子のノックダウンを示す。したがって、表９の中の脂質製剤の特定の組成物においてＬ−３０を置き換えるために、本明細書で説明される脂質のうちのいずれかを使用することができ、標的遺伝子（例えば、癌または本明細書で説明される疾患と関連付けられる標的遺伝子）の発現を低減させるために、任意のｄｓＲＮＡを使用することができる。

【表9】

【0270】

実施例１４：Ｈｅｐ３Ｂ ＨＣＣ腫瘍組織において標的遺伝子の発現を低減させるためのｄｓＲＮＡを伴う異なるＬ−３０脂質製剤の使用
ｄｓＲＮＡのＬ−３０製剤の標的化の効率および後続の機能性を評価するために、脂質モル百分率が変化するＬ−３０製剤を検査した。表１０は、トランスフェクション脂質としてＬ−３０を含む脂質製剤の特定の組成物を提供する。具体的には、Ｌ−３０［Ｅ］およびＬ−３０［Ｇ］製剤は、ＤＯＤＭＡの代わりにＲＮＡ結合剤としてＬ−４８を含有する。Ｌ−４８は、Ｈ−５頭部基およびジオレイル尾部基（図１７）を含む。ＲＮＡ結合剤およびＤｓｉＲＮＡを製剤に導入するために、トランスフェクション脂質に対するものと同一であるか、または異なる溶媒および溶媒系（例えば、水性および／または非水性溶媒（複数可））を含む、任意の有用な溶媒および溶媒系を使用することができる。

【0271】

Ｈｅｐ３Ｂ ＨＣＣ腫瘍組織におけるｈＨＰＲＴ１ノックダウンの結果が、図２１に示されている。全てのＬ−３０製剤（すなわち、［Ａ］から［Ｇ］）が、ＰＢＳ対照と比較して腫瘍組織のｈＨＰＲＴ１発現の減少をもたらした。具体的には、Ｌ−３０［Ａ］がｈＨＰＲＴ１発現の最大の減少を提供し、その後にＬ−３０［Ｄ］、Ｌ−３０［Ｇ］、およびＬ−３０［Ｅ］が続いた。

【表10】

【0272】

実施例１５：肺および前立腺腫瘍組織において標的遺伝子の発現を低減させるためのｄｓＲＮＡを伴う異なるＬ−６およびＬ−３０脂質製剤の使用
異なるＬ−６およびＬ−３０製剤の標的化の効率および後続の機能性を評価するために、ＨＰＲＴ１ ｍＲＮＡノックダウンを種々の腫瘍組織において検査した。表９、１０、および１１は、本研究で使用されたＬ−６およびＬ−３０脂質を含む脂質製剤の特定の組成物を提供する。ＲＮＡ結合剤および核酸ペイロード（例えば、ＤｓｉＲＮＡ）を製剤に導入するために、トランスフェクション脂質に対するものと同一であるか、または異なる溶媒および溶媒系（例えば、水性および／または非水性溶媒（複数可））を含む、任意の有用な溶媒および溶媒系を使用することができる。

【0273】

図２２を生成した実験は、Ｌ−６［２］およびＬ−３０［２］製剤化脂質粒子の中の１０ｍｇ／ｋｇのＤｓｉＲＮＡで投与され、かつ実験の第１日目および第３日目に投与された。腫瘍は、第５日目に採取された。ｈＨＰＲＴ１ ｍＲＮＡのノックダウンが、Ｈ１９７５ＮＳＣＬＣ肺腫瘍組織において測定された。より大きいレベルのＨＰＲＴ１標的ｍＲＮＡノックダウンが、Ｌ−６［２］製剤と比較してＬ−３０［２］製剤について観察された。

【0274】

図２３を生成した実験は、Ｌ−６［２］およびＬ−３０［３］製剤化脂質粒子の中の１０ｍｇ／ｋｇのＤｓｉＲＮＡで投与され、かつ実験の第１日目および第３日目に投与された。腫瘍は、第５日目に採取された。ｈＨＰＲＴ１ ｍＲＮＡのノックダウンが、２２Ｒｖ１前立腺癌ＳＣ異種移植腫瘍組織において測定された。より大きいレベルのＨＰＲＴ１標的ｍＲＮＡノックダウンが、Ｌ−６［２］製剤と比較してＬ−３０［３］製剤について観察された。肝臓に埋め込まれた２２Ｒｖ１前立腺癌におけるｈＨＰＲＴ１ノックダウンの結果が、図２４に示されている。実験が、図２３で行われた実験と同様に設定された。図２４の特定の実験では、より大きいレベルのＨＰＲＴ１標的ｍＲＮＡノックダウンが、Ｌ−３０［Ａ］およびＬ−３０［Ｅ］製剤の両方と比較してＬ−６［１］製剤について観察された。したがって、表９の中の脂質製剤の特定の組成物においてＬ−６またはＬ−３０を代替するために、本明細書で説明される脂質のうちのいずれかを使用することができ、癌（例えば、本明細書で説明される任意の癌）と関連付けられる標的遺伝子の発現を低減させるために、任意のｄｓＲＮＡを使用することができる。

【表11】

【0275】

実施例１６：ｄｓＲＮＡを伴うＬ−３０を含有する脂質製剤
表１２は、トランスフェクション脂質としてＬ−３０を含む脂質製剤の特定の構成要素を提供する。ＲＮＡ結合剤およびＤｓｉＲＮＡを製剤に導入するために、トランスフェクション脂質に対するものと同一であるか、または異なる溶媒および溶媒系（例えば、水性および／または非水性溶媒（複数可））を含む、任意の有用な溶媒および溶媒系を使用することができる。さらに、表１２の中のトランスフェクション脂質（例えば、表１中等において本明細書で説明されるいずれか）としてＬ−３０を置き換えるために、本明細書で説明される脂質のうちのいずれかを使用することができ、標的遺伝子（例えば、癌または本明細書で説明される疾患と関連付けられる標的遺伝子）の発現を低減させるために、任意のｄｓＲＮＡを使用することができる。

【表12】

【0276】

他の実施形態
本発明は、その具体的実施形態と関連して説明されているが、さらなる修正が可能であり、本願は、一般に本発明の原理に従う、本発明の任意の変形例、用途、または適合を対象とすることを目的としており、本開示からのそのような逸脱を含むことは、本発明が関連する既知または慣例的実践の範囲内であり、以上で記載される不可欠な特徴に適用され得ることを理解されるであろう。

【0277】

全ての出版物、特許、および特許出願は、各個別出版物、特許、または特許出願が、その全体で参照することにより組み込まれるように特異的かつ個別に示された場合と同一の程度に、それらの全体で参照することにより本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]