特許 6294456 修飾されたドセタキセルリポソーム製剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6294456

(24)【登録日】2018年2月23日

(45)【発行日】2018年3月14日

(54)【発明の名称】修飾されたドセタキセルリポソーム製剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/337 20060101AFI20180305BHJP

   A61K 9/127 20060101ALI20180305BHJP

   A61K 47/24 20060101ALI20180305BHJP

   A61K 47/28 20060101ALI20180305BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20180305BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/337

   A61K9/127

   A61K47/24

   A61K47/28

   A61P35/00

【請求項の数】33

【全頁数】51

(21)【出願番号】特願2016-502155(P2016-502155)

(86)(22)【出願日】2014年3月13日

(65)【公表番号】特表2016-513655(P2016-513655A)

(43)【公表日】2016年5月16日

(86)【国際出願番号】US2014026483

(87)【国際公開番号】WO2014160392

(87)【国際公開日】20141002

【審査請求日】2015年10月21日

(31)【優先権主張番号】61/779,902

(32)【優先日】2013年3月13日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】595181003

【氏名又は名称】マリンクロッド エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】100107489

【弁理士】

【氏名又は名称】大塩 竹志

(72)【発明者】

【氏名】マッギー， ウィリアム

(72)【発明者】

【氏名】ブラックレッジ， ジェイムズ

(72)【発明者】

【氏名】グラパーハウス， マーガレット

【審査官】 今村 明子

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１１−５２３６４３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００６−５０８１２６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１２／１０１５８７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２０１１−５０９９４７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２０１２／０２３１０６６（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，１９９９年，Vol.289, No.2，p.1128-1133

【文献】 Journal of Controlled Release，１９９８年，Vol.53，p.275-279

【文献】 Nature Biotechnology，１９９９年 ８月，Vol.17，p.775-779

【文献】 Biochimica et Biophysica Acta，１９９９年，Vol.1420，p.153-167

【文献】 Journal of Controlled Release，２０１２年，Vol.160，p.117-134

【文献】 MEMBRANE，２０１３年 １月 １日，Vol.38, No.1，p.51-56

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ９／００− ９／７２

Ａ６１Ｋ ３１／００−３１／８０

Ａ６１Ｋ ３３／００−３３／４４

Ａ６１Ｋ ４７／００−４７／６９

Ａ６１Ｐ １／００−４３／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

リポソームタキサンを調製する方法であって、該方法は、
ａ）ホスファチジルコリン脂質およびステロールを含む脂質二重層を有する第一のリポソームを形成し、ここで、該脂質二重層は水溶液を含む内部区画を封入し；
ｂ）該第一のリポソームにタキサン、またはその薬学的に許容され得る塩を負荷して、負荷されたリポソームを形成し、ここで、該タキサンは２’−Ｏ−位でヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカノイル）基によってエステル化されたドセタキセルであり；次いで、
ｃ）該負荷されたリポソームおよびポリ（エチレングリコール）−リン脂質コンジュゲート（ＰＥＧ−脂質）を含む混合物を形成し、ここで、ホスファチジルコリン脂質およびステロールの合計と該ＰＥＧ−脂質との比が、約１０００：１（モル：モル）〜約２０：１（モル：モル）であり、該ＰＥＧ−脂質の該脂質二重層への挿入を可能とするために、約３０〜６０分間約５０℃〜約６０℃まで該混合物を加熱し；
それによりリポソームタキサンを形成することを含み、
ここで、該ステロールがコレステロールであり、該リポソームが、３５モル％〜５０モル％のコレステロールを含有し、
該ＰＥＧ−脂質の挿入の結果、該リポソーム中の全脂質の２モル％〜８モル％のＰＥＧ脂質をもたらされる、方法。

【請求項2】

前記リポソームタキサンが、０．１２〜０．２５の薬物対脂質比を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記リポソームタキサンが、０．１４〜０．１９の薬物対脂質比を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記コレステロールが、脂質の量に対して約３５重量％〜４５重量％の量で存在する、請求項１または２に記載の方法。

【請求項5】

前記コレステロールが、脂質の量に対して約４０重量％〜４５重量％の量で存在する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

リポソームタキサンを調製する方法であって、該方法は、
ａ）ホスファチジルコリン脂質およびコレステロールを含む脂質二重層を有する第一のリポソームを形成し、ここで、該脂質二重層は水溶液を含む内部区画を封入し；
ｂ）該第一のリポソームにタキサン、またはその薬学的に許容され得る塩を負荷して、負荷されたリポソームを形成し、ここで、該タキサンは２’−Ｏ−位でヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカノイル）基によってエステル化されたドセタキセルであり；次いで、
ｃ）該負荷されたリポソームおよびポリ（エチレングリコール）−リン脂質コンジュゲート（ＰＥＧ−脂質）を含む混合物を形成し、ここで、ホスファチジルコリン脂質およびコレステロールの合計と該ＰＥＧ−脂質との比が、約１０００：１（モル：モル）〜約２０：１（モル：モル）であり、該ＰＥＧ−脂質の該脂質二重層への挿入を可能とするために、約３０〜６０分間約５０℃〜約６０℃まで該混合物を加熱し；
それによりリポソームタキサンを形成することを含み、
前記第一のリポソームが、ＤＳＰＣ／ＤＳＰＥ／Ｃｈｏｌ、４５／１０／４５；ＤＯＰＣ／Ｃｈｏｌ、５５／４５；ＤＯＰＣ／Ｃｈｏｌ、６５／３５；ＨＳＰＣ／Ｃｈｏｌ、５５／４５；ＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ、５５／４５；ＤＭＰＣ／Ｃｈｏｌ、５５／４５；ＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ、６５／３５；ＤＰＰＣ／Ｃｈｏｌ、５５／４５；ＳＯＰＣ／Ｃｈｏｌ、５５／４５；ＰＯＰＣ／Ｃｈｏｌ、５５／４５；ＨＳＰＣ／Ｃｈｏｌ、６５／３５よりなる群から選択される脂質コレステロールの組合せから形成され；前記ＰＥＧ−脂質の挿入の結果、脂質、コレステロールおよびＰＥＧ−脂質の合わせた量に対して約１．９重量％〜約５．０重量％のＰＥＧ−脂質の量がもたらされる、方法。

【請求項7】

前記第一のリポソームが、ＳＯＰＣ／ＣｈｏｌおよびＰＯＰＣ／Ｃｈｏｌよりなる群から選択される脂質コレステロールの組合せから形成され、コレステロールは約４２〜４８モル％の量で存在し、前記ＰＥＧ−脂質の挿入の結果、脂質、コレステロールおよびＰＥＧ−脂質の合わせた量に対して約２重量％〜約６重量％のＰＥＧ−脂質の量がもたらされる、請求項１に記載の方法。

【請求項8】

リポソームタキサンを調製する方法であって、該方法は、
ａ）ホスファチジルコリン脂質およびコレステロールを含む脂質二重層を有する第一のリポソームを形成し、ここで、該脂質二重層は水溶液を含む内部区画を封入し；
ｂ）該第一のリポソームにタキサン、またはその薬学的に許容され得る塩を負荷して、負荷されたリポソームを形成し、ここで、該タキサンは２’−Ｏ−位でヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカノイル）基によってエステル化されたドセタキセルであり；次いで、
ｃ）該負荷されたリポソームおよびポリ（エチレングリコール）−リン脂質コンジュゲート（ＰＥＧ−脂質）を含む混合物を形成し、ここで、ホスファチジルコリン脂質およびコレステロールの合計と該ＰＥＧ−脂質との比が、約１０００：１（モル：モル）〜約２０：１（モル：モル）であり、該ＰＥＧ−脂質の該脂質二重層への挿入を可能とするために、約３０〜６０分間約５０℃〜約６０℃まで該混合物を加熱し；
それによりリポソームタキサンを形成することを含み、
前記第一のリポソームが、ＤＯＰＣ／Ｃｈｏｌ、ＨＳＰＣ／Ｃｈｏｌ、ＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ、およびＤＰＰＣ／Ｃｈｏｌよりなる群から選択される脂質コレステロールの組合せから形成され、コレステロールは約３５〜４８モル％の量で存在し、前記ＰＥＧ−脂質の挿入の結果、脂質、コレステロールおよびＰＥＧ−脂質の合わせた量に対して約２重量％〜約６重量％のＰＥＧ−脂質の量がもたらされる、方法。

【請求項9】

前記ヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカノイル）基が、５−（４−メチルピペラジン−１−イル）−ペンタノイル、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−ブタノイル、３−（４−メチルピペラジン−１−イル）−プロピオノイル、２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−エタノイル、５−モルホリノ−ペンタノイル、４−モルホリノ−ブタノイル、３−モルホリノ−プロピオノイル、２−モルホリノ−エタノイル、５−（ピペリジン−１−イル）ペンタノイル、４−（ピペリジン−１−イル）ブタノイル、３−（ピペリジン−１−イル）プロピオノイル、および２−（ピペリジン−１−イル）−エタノイルよりなる群から選択される、請求項１に記載の方法。

【請求項10】

前記ヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカノイル）基が４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−ブタノイルである、請求項１に記載の方法。

【請求項11】

前記ホスファチジルコリン脂質が、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、水素添加大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、およびそれらの混合物よりなる群から選択される、請求項１に記載の方法。

【請求項12】

前記脂質二重層がＤＳＰＣおよびコレステロールを含み、ＤＳＰＣ：コレステロール比が約５５：４５（モル：モル）である、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

前記第一のリポソームの前記内部区画が水性硫酸アンモニウムを含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項14】

前記第一のリポソームの負荷が、該第一のリポソームの前記内部区画における前記タキサンの蓄積を可能とするのに十分な条件下で、該第一のリポソームおよび該タキサンもしくはその薬学的に許容され得る塩を含む水溶液を形成することを含む、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

工程ｂ）が、約５０℃〜約７０℃の温度で行われる、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

工程ｂ）が、前記タキサンの重量に対する前記ホスファチジルコリンおよび前記ステロールの合わせた重量の比が約１：０．０１〜約１：１であるように行われる、請求項１４に記載の方法。

【請求項17】

前記タキサンの重量に対する前記ホスファチジルコリンおよび前記ステロールの合わせた重量の比が約１：０．２である、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記ＰＥＧ−脂質がジアシル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）］である、請求項１に記載の方法。

【請求項19】

前記ＰＥＧ−脂質が、ジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００）およびジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−５０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００）よりなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記ＰＥＧ−脂質に対する合わせたホスファチジルコリンおよびステロールの比が約３５：１（モル：モル）〜約２５：１（モル：モル）である、請求項１に記載の方法。

【請求項21】

前記ＰＥＧ−脂質に対する合わせたホスファチジルコリンおよびステロールの比が約３３：１（モル：モル）である、請求項１に記載の方法。

【請求項22】

前記ＰＥＧ−脂質に対する合わせたホスファチジルコリンおよびステロールの比が約２７：１（モル：モル）である、請求項１に記載の方法。

【請求項23】

工程ｃ）における前記混合物からのリポソームタキサンを、封入されていないタキサンおよび挿入されていないＰＥＧ−脂質を実質的に含まない水溶液に交換することをさらに含む、請求項１に記載の方法。

【請求項24】

前記リポソームタキサンを凍結乾燥することをさらに含む、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項25】

リポソームを含むがんの処置用の組成物であって、該リポソームが：
ｉ）ホスファチジルコリン脂質；
ｉｉ）ステロール；
ｉｉｉ）ＰＥＧ−脂質；および
ｉｖ）タキサンまたはその薬学的に許容され得る塩
を含み；
該タキサンが２’−Ｏ−位でヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカン酸）によってエステル化されたドセタキセルであって；
該ＰＥＧ−脂質が該リポソーム中の全脂質の２モル％〜８モル％を構成し、
ここで、該ステロールがコレステロールであり、該リポソームが、３５モル％〜５０モル％のコレステロールを含有し、
５℃で貯蔵した場合、該リポソームからのドセタキセルの放出が、該ＰＥＧ−脂質を有さないリポソームと比較して約１／２０に減少する、組成物。

【請求項26】

前記ヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカン酸）が、５−（４−メチルピペラジン−１−イル）−ペンタン酸、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−ブタン酸、３−（４−メチルピペラジン−１−イル）−プロピオン酸、２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−エタン酸、５−モルホリノ−ペンタン酸、４−モルホリノ−ブタン酸、３−モルホリノ−プロピオン酸、２−モルホリノ−エタン酸、５−（ピペリジン−１−イル）ペンタン酸、４−（ピペリジン−１−イル）ブタン酸、３−（ピペリジン−１−イル）プロピオン酸、および２−（ピペリジン−１−イル）エタン酸よりなる群から選択される、請求項２５に記載の組成物。

【請求項27】

前記ヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカン酸）が、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−ブタン酸である、請求項２６に記載の組成物。

【請求項28】

前記ホスファチジルコリン脂質が、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、水素添加大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、およびそれらの混合物よりなる群から選択され；前記ステロールがコレステロールである、請求項２５に記載の組成物。

【請求項29】

前記ＰＥＧ−脂質が、ジアシル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）］である、請求項２５に記載の組成物。

【請求項30】

前記ＰＥＧ−脂質が、ジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］およびジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−５０００］よりなる群から選択される、請求項２５に記載の組成物。

【請求項31】

リポソームを含むがんの処置用の組成物であって、該リポソームが：
ｉ）ホスファチジルコリン脂質；
ｉｉ）ステロール；
ｉｉｉ）ＰＥＧ−脂質；および
ｉｖ）タキサンまたはその薬学的に許容され得る塩
を含み；
該タキサンが２’−Ｏ−位でヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカン酸）によってエステル化されたドセタキセルであって；
該ＰＥＧ−脂質が該リポソーム中の全脂質の２モル％〜８モル％を構成し、
ここで、該ステロールがコレステロールであり、
前記リポソームが、約５０モル％〜約７０モル％の、ＤＰＰＣおよびＤＳＰＣよりなる群から選択されるホスファチジルコリン脂質、ならびに約３５モル％〜約４５モル％のコレステロールを含み、
５℃で貯蔵した場合、該リポソームからのドセタキセルの放出が、該ＰＥＧ−脂質を有さないリポソームと比較して約１／２０に減少する、組成物。

【請求項32】

前記リポソームが、約５３モル％のＤＳＰＣ、約４４モル％のコレステロール、および約３モル％のＰＥＧ−脂質を含み、前記ＰＥＧ−脂質がジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］である、請求項３１に記載の組成物。

【請求項33】

がんの処置を必要とする被験体において、がんを処置するための、請求項２５〜３２のいずれか１項に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年３月１３日に出願された米国仮特許出願第６１／７７９，９０２号の優先権の利益を主張し、当該出願の内容は、その全体が本明細書に参考として援用される。

【0002】

連邦政府による支援を受けた研究開発下でなされた発明に対する権利に関する陳述
適用されず

【0003】

「配列表」、表、またはコンパクトディスクで提出されたコンピュータプログラム一覧の添付書類に対する言及
適用されず

【背景技術】

【0004】

タキソテール（登録商標）（ドセタキセル）およびタキソール（登録商標）（パクリタキセル）は、市場において最も広く処方される抗がん薬物であって、高度に可変（ドセタキセル）で非線形（パクリタキセル）の薬物動態、製剤ビークルに関連する深刻な過敏反応（クレモフォールＥＬ、Ｔｗｅｅｎ８０）、および投与量制限的骨髄抑制および神経毒性を含めた、多数の薬理学的および毒物学的関心事に関連する。タキソテール（登録商標）の場合、薬物動態における大きな変動性は、毒性および有効性の顕著な変動性、ならびに非結合薬物への全身の曝露に相関する血液学的毒性を引き起こす。加えて、タキサンの治療活性は、腫瘍細胞の薬物曝露の持続時間と共に増加するので、市販のタキサン製剤の投与量制限的毒性は、それらの治療的潜在能力を実質的に制限する。がん細胞によるタンパク質トランスポーターポンプのアップレギュレーションなどの原因による薬物に対する耐性は、タキサンベースの療法をさらに複雑にしかねない。従って、減少した毒性および改良された有効性を持つタキサンベースの化学療法に対する要望が存在する。本発明は、この要望および他の要望に取り組むものである。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0005】

第一の態様において、本発明は、がんの処置用の組成物を提供する。該組成物は、ホスファチジルコリン脂質、ステロール、ポリ（エチレングリコール）−リン脂質コンジュゲート（ＰＥＧ−脂質）、およびタキサンまたはその薬学的に許容され得る塩を含有するリポソームを含む。タキサンは、２’−Ｏ−位でヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカン酸）によってエステル化されたドセタキセルであり、ＰＥＧ−脂質はリポソーム中の全脂質の２〜８モル％を構成する。

【0006】

第二の態様において、本発明は、リポソームタキサンを調製する方法を提供する。該方法は、ａ）ホスファチジルコリン脂質およびステロールを含む脂質二重層を有する第一のリポソームを形成し、ここで、該脂質二重層は、水溶液を含む内部区画を封入し；ｂ）該第一のリポソームに、タキサンまたはその薬学的に許容され得る塩を負荷して、負荷されたリポソームを形成し、ここで、該タキサンは２’−Ｏ−位でヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカン酸）によってエステル化されたドセタキセルであり；次いで、ｃ）ＰＥＧ−脂質の該脂質二重層への挿入を可能とするのに十分な条件下で、該負荷されたリポソームおよび該ＰＥＧ−脂質を含有する混合物を形成することを含む。

【0007】

第三の態様において、本発明はがんを処置する方法を提供する。該方法は、本発明のリポソームタキサンを、投与を必要とする被験体に投与することを含む。
本発明は、例えば、以下の項目も提供される。
（項目１）
リポソームタキサンを調製する方法であって、
ａ）ホスファチジルコリン脂質およびステロールを含む脂質二重層を有する第一のリポソームを形成し、ここで、該脂質二重層は水溶液を含む内部区画を封入し；
ｂ）該第一のリポソームにタキサン、またはその薬学的に許容され得る塩を負荷して、負荷されたリポソームを形成し、ここで、該タキサンは２’−Ｏ−位でヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカノイル）基によってエステル化されたドセタキセルであり；次いで、
ｃ）ポリ（エチレングリコール）−リン脂質コンジュゲート（ＰＥＧ−脂質）の該脂質二重層への挿入を可能とするのに十分な条件下で、該負荷されたリポソームおよび該ＰＥＧ−脂質を含む混合物を形成し；
それによりリポソームタキサンを形成することを含む、方法。
（項目２）
前記リポソームタキサンが、０．１２〜０．２５の薬物対脂質比を有する、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記リポソームタキサンが、０．１４〜０．１９の薬物対脂質比を有する、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記リポソームタキサンに存在する前記ステロールがコレステロールであって、脂質の量に対して約３０重量％〜４５重量％の量で存在する、項目１または２に記載の方法。
（項目５）
前記リポソームタキサンに存在する前記ステロールがコレステロールであって、脂質の量に対して約４０重量％〜４５重量％の量で存在する、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目６）
前記第一のリポソームが、ＤＳＰＣ／ＤＳＰＥ／Ｃｈｏｌ、４５／１０／４５；ＤＯＰＣ／Ｃｈｏｌ、５５／４５；ＤＯＰＣ／Ｃｈｏｌ、６５／３５；ＨＳＰＣ／Ｃｈｏｌ、５５／４５；ＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ、５５／４５；ＤＭＰＣ／Ｃｈｏｌ、５５／４５；ＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ、６５／３５；ＤＰＰＣ／Ｃｈｏｌ、５５／４５；ＳＯＰＣ／Ｃｈｏｌ、５５／４５；ＰＯＰＣ／Ｃｈｏｌ、５５／４５；ＨＳＰＣ／Ｃｈｏｌ、６５／３５よりなる群から選択される脂質コレステロールの組合せから形成され；前記ＰＥＧ−脂質の挿入の結果、脂質、コレステロールおよびＰＥＧ−脂質の合わせた量に対して約１．９重量％〜約５．０重量％のＰＥＧ−脂質の量がもたらされる、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記第一のリポソームが、ＳＯＰＣ／ＣｈｏｌおよびＰＯＰＣ／Ｃｈｏｌよりなる群から選択される脂質コレステロールの組合せから形成され、コレステロールは約４２〜４８モル％の量で存在し、前記ＰＥＧ−脂質の挿入の結果、脂質、コレステロールおよびＰＥＧ−脂質の合わせた量に対して約１．９重量％〜約５．０重量％のＰＥＧ−脂質の量がもたらされる、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記第一のリポソームが、ＤＯＰＣ／Ｃｈｏｌ、ＨＳＰＣ／Ｃｈｏｌ、ＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ、およびＤＰＰＣ／Ｃｈｏｌよりなる群から選択される脂質コレステロールの組合せから形成され、コレステロールは約３０〜４８モル％の量で存在し、前記ＰＥＧ−脂質の挿入の結果、脂質、コレステロールおよびＰＥＧ−脂質の合わせた量に対して約１．９重量％〜約５．０重量％のＰＥＧ−脂質の量がもたらされる、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記ヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカノイル）基が、５−（４−メチルピペラジン−１−イル）−ペンタノイル、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−ブタノイル、３−（４−メチルピペラジン−１−イル）−プロピオノイル、２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−エタノイル、５−モルホリノ−ペンタノイル、４−モルホリノ−ブタノイル、３−モルホリノ−プロピオノイル、２−モルホリノ−エタノイル、５−（ピペリジン−１−イル）ペンタノイル、４−（ピペリジン−１−イル）ブタノイル、３−（ピペリジン−１−イル）プロピオノイル、および２−（ピペリジン−１−イル）−エタノイルよりなる群から選択される、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記ヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカノイル）基が４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−ブタノイルである、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記ホスファチジルコリン脂質が、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、水素添加大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、およびそれらの混合物よりなる群から選択され；前記ステロールがコレステロールである、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記脂質二重層がＤＳＰＣおよびコレステロールを含み、ＤＳＰＣ：コレステロール比が約５５：４５（モル：モル）である、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記脂質二重層がＤＳＰＣおよびコレステロールを含み、ＤＳＰＣ：コレステロール比が約７０：３０（モル：モル）である、項目１１に記載の方法。
（項目１４）
前記第一のリポソームの前記内部区画が水性硫酸アンモニウムを含む、項目１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５）
前記第一のリポソームの負荷が、該第一のリポソームの前記内部区画における前記タキサンの蓄積を可能とするのに十分な条件下で、該第一のリポソームおよび該タキサンもしくはその薬学的に許容され得る塩を含む水溶液を形成することを含む、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
工程ｂ）が、約５０℃〜約７０℃の温度で行われる、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
工程ｂ）が、前記タキサンの重量に対する前記ホスファチジルコリンおよび前記ステロールの合わせた重量の比が約１：０．０１〜約１：１であるように行われる、項目１５に記載の方法。
（項目１８）
前記タキサンの重量に対する前記ホスファチジルコリンおよび前記ステロールの合わせた重量の比が約１：０．２である、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記ＰＥＧ−脂質がジアシル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）］である、項目１に記載の方法。
（項目２０）
前記ＰＥＧ−脂質が、ジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００）およびジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−５０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００）よりなる群から選択される、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
工程ｃ）が、前記ＰＥＧ−脂質に対する合わせたホスファチジルコリンおよびステロールの比が約１０００：１（モル：モル）〜約２０：１（モル：モル）であるように行われる、項目１に記載の方法。
（項目２２）
前記ＰＥＧ−脂質に対する合わせたホスファチジルコリンおよびステロールの比が約３５：１（モル：モル）〜約２５：１（モル：モル）である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記ＰＥＧ−脂質に対する合わせたホスファチジルコリンおよびステロールの比が約３３：１（モル：モル）である、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
前記ＰＥＧ−脂質に対する合わせたホスファチジルコリンおよびステロールの比が約２７：１（モル：モル）である、項目２１に記載の方法。
（項目２５）
工程ｃ）が、約３５℃〜約７０℃の温度で行われる、項目１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
（項目２６）
工程ｃ）が、約５０℃〜約５５℃の温度で行われる、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
工程ｃ）における前記混合物からのリポソームタキサンを、封入されていないタキサンおよび挿入されていないＰＥＧ−脂質を実質的に含まない水溶液に交換することをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目２８）
前記リポソームタキサンを凍結乾燥することをさらに含む、項目１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２９）
項目１〜２８のいずれか１項に記載の方法に従って調製されたリポソームタキサン。
（項目３０）
がんを処置する方法であって、項目１〜２８のいずれか１項に記載の方法に従って調製されたリポソームタキサンを、それを必要とする被験体に投与することを含む方法。
（項目３１）
リポソームを含むがんの処置用の組成物であって、該リポソームが：
ｉ）ホスファチジルコリン脂質；
ｉｉ）ステロール；
ｉｉｉ）ＰＥＧ−脂質；および
ｉｖ）タキサンまたはその薬学的に許容され得る塩
を含み；
該タキサンが２’−Ｏ−位でヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカン酸）によってエステル化されたドセタキセルであって；
該ＰＥＧ−脂質が該リポソーム中の全脂質の２〜８モル％を構成する、組成物。
（項目３２）
前記ヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカン酸）が、５−（４−メチルピペラジン−１−イル）−ペンタン酸、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−ブタン酸、３−（４−メチルピペラジン−１−イル）−プロピオン酸、２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−エタン酸、５−モルホリノ−ペンタン酸、４−モルホリノ−ブタン酸、３−モルホリノ−プロピオン酸、２−モルホリノ−エタン酸、５−（ピペリジン−１−イル）ペンタン酸、４−（ピペリジン−１−イル）ブタン酸、３−（ピペリジン−１−イル）プロピオン酸、および２−（ピペリジン−１−イル）エタン酸よりなる群から選択される、項目３１に記載の組成物。
（項目３３）
前記ヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカン酸）が、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−ブタン酸である、項目３１に記載の組成物。
（項目３４）
前記ホスファチジルコリン脂質が、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、水素添加大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、およびそれらの混合物よりなる群から選択され；前記ステロールがコレステロールである、項目３１に記載の組成物。
（項目３５）
前記ＰＥＧ−脂質が、ジアシル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）］である、項目３１に記載の組成物。
（項目３６）
前記ＰＥＧ−脂質が、ジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］およびジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−５０００］よりなる群から選択される、項目３１に記載の組成物。
（項目３７）
前記リポソームが、約５０モル％〜約７０モル％の、ＤＰＰＣおよびＤＳＰＣよりなる群から選択されるホスファチジルコリン脂質、ならびに約２５モル％〜約４５モル％のコレステロールを含む、項目３１に記載の組成物。
（項目３８）
前記リポソームが、約５３モル％のＤＳＰＣ、約４４モル％のコレステロール、および約３モル％のＰＥＧ−脂質を含み、前記ＰＥＧ−脂質がジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］である、項目３７に記載の組成物。
（項目３９）
前記リポソームが、約６６モル％のＤＳＰＣ、約３０モル％のコレステロール、および約４モル％のＰＥＧ−脂質を含み、前記ＰＥＧ−脂質がジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］である、項目３７に記載の組成物。
（項目４０）
がんを処置する方法であって、項目３１〜３９のいずれか１項に従って調製されたリポソームタキサンを、それを必要とする被験体に投与することを含む方法。

【図面の簡単な説明】

【0008】

【図1】図１は、ＴＤ−１、ＴＤ−１リポソーム、およびＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの、ＰＣ３異種移植片を持つマウスへの投与後の、血漿からのＴＤ−１（Ａ）およびドセタキセル（Ｂ）のクリアランスを示す。

【0009】

【図2】図２は、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの、Ａ５４９異種移植片を持つマウスへの投与後の、血漿からのＴＤ−１のクリアランスを示す。データは、３匹のマウスの平均値±標準誤差として、または３匹未満のマウスの場合、平均値または単一の値として表される。

【0010】

【図3】図３は、ＴＤ−１、ＴＤ−１リポソームおよびＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの、ＰＣ３異種移植片を持つマウスへの投与後の、腫瘍におけるＴＤ−１（Ａ）およびドセタキセル（Ｂ）のレベルを示す。データは、３匹のマウスの平均値±標準誤差として表される。

【0011】

【図4】図４は、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームおよびドセタキセルの、Ａ５４９ヒトＮＳＣＬＣ異種移植片を持つマウスへの投与後の、腫瘍におけるＴＤ−１（Ａ）およびドセタキセル（Ｂ）のレベルを示す。データは、３匹のマウスの平均値±標準誤差として、または３匹未満のマウスであれば、平均値または単一の値として表される。

【0012】

【図5】図５は、４０ｍｇ／ｋｇ（Ａ）および１４４ｍｇ／ｋｇ（Ｂ）ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの、Ａ５４９ヒトＮＳＣＬＣ異種移植片を持つマウスへの投与後の、組織におけるＴＤ−１のレベルを示す。データは、３匹のマウスの平均値±標準誤差として、または３匹未満のマウスの場合、平均値または単一の値として表される。

【0013】

【図6】図６は、４０ｍｇ／ｋｇ（Ａ）および１４４ｍｇ／ｋｇ（Ｂ）ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの、Ａ５４９ヒトＮＳＣＬＣ異種移植片を持つマウスへの投与後の、組織におけるドセタキセルのレベルを示す。データは、３匹のマウスの平均値±標準誤差として、または３匹未満のマウスの場合、平均値または単一の値として表される。

【0014】

【図7】図７（Ａ）は、無胸腺ヌードマウスにおける、ヒトＡ２５３（頭頸部）腫瘍異種移植片に対するＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームおよびドセタキセルの抗腫瘍効果を示す。データは平均値±標準誤差として表される（ｎ＝５〜１０）。処置後３１日目に、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（９０ｍｇ／ｋｇ）処置マウスは、生理食塩水（対照）またはドセタキセル（３０ｍｇ／ｋｇ）処置マウスよりも有意に小さな腫瘍を有する。＊、ｐ＜０．０５、一元配置ＡＮＯＶＡ後のニューマン＝コイルス（Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ）事後検定。図７（Ｂ）は、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム、ドセタキセルまたは生理食塩水で処置したＡ２５３（頭頸部）異種移植片腫瘍を持つ無胸腺ヌードマウスのカプラン−マイヤー（Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ）生存プロットを示す。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（９０ｍｇ／ｋｇ）は、ドセタキセルおよび対照よりも有意に大きく生存を増加させた。＊、ｐ＜０．０５、マンテル−コックス（Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ）、ｌｏｇ−ランク検定。各群は、腫瘍を持つ１０匹の雌マウスで開始した。

【0015】

【図8】図８（Ａ）は、無胸腺ヌードマウスにおける、ヒトＡ５４９ＮＳＣＬＣ腫瘍異種移植片に対するＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームおよびドセタキセルの抗腫瘍効果を示す。データは、平均値±標準誤差として表される（ｎ＝５〜１０）。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（９０ｍｇ／ｋｇ）は、処置後７０日目に、対照またはドセタキセル（１０、２０、および３０ｍｇ／ｋｇ）と比較して、腫瘍成長を有意に阻害した。＊、ｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡ、続いての、Ｎｅｕｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ事後検定。図８（Ｂ）は、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム、ドセタキセルまたは生理食塩水で処置された、Ａ５４９ＮＳＣＬＣ異種移植片腫瘍を持つマウスのカプラン−マイヤー生存プロットを示す。各群は、腫瘍を持つ１０匹の雌マウスで開始した。

【0016】

【図9】図９（Ａ）は、ヌードマウスにおける、Ａ５４９ヒトＮＳＣＬＣ腫瘍異種移植片に対するＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームおよびドセタキセルの抗腫瘍効果を示す。被験物質は、０および２１日目に投与された。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（６０および９０ｍｇ／ｋｇ）およびドセタキセル（１８および２７ｍｇ／ｋｇ）の投与の結果、最初の処置から３７日後に、生理食塩水よりも有意に小さな腫瘍がもたらされた。＊、ｐ＜０．０５。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（６０および９０ｍｇ／ｋｇ）での処置の結果、処置から３７および５６日後に、比較的許容される投与量のドセタキセル（１８および２７ｍｇ／ｋｇ）よりも有意に小さな腫瘍がもたらされた。＃、ｐ＜０．０５。一元配置ＡＮＯＶＡ後のＮｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ事後検定。データは、５〜１０匹のマウスの平均値±標準誤差として表される。図９（Ｂ）は、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム、ドセタキセルまたは生理食塩水で処置された、Ａ５４９ＮＳＣＬＣ異種移植片腫瘍を持つ無胸腺ヌードマウスのカプラン−マイヤー生存プロットを示す。全ての投与量レベルのＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームおよびドセタキセルは、生理食塩水と比較して生存を有意に増加させた。ｐ＜０．０５、マンテル−コックス、ｌｏｇ−ランク検定。各群は、腫瘍を持つ１０匹の雌マウスで開始した。

【0017】

【図10】図１０（Ａ）は、無胸腺ヌードマウスにおける、ヒトＰＣ３（前立腺）腫瘍異種移植片に対するＴＤ−１リポソーム、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム、およびドセタキセルの抗腫瘍効果を示す。全ての処置群は、単回のＩＶ投与から３６日後に、生理食塩水よりも有意に小さな腫瘍を示した。１９ｍｇ／ｋｇのＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームでの処置は、ドセタキセル（９ｍｇ／ｋｇ）およびＴＤ−１リポソーム（３０ｍｇ／ｋｇ）の等毒性投与量よりも有意に小さな腫瘍を引き起こした。＊、ｐ＜０．０５。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（３８ｍｇ／ｋｇ）は、処置後７９日目に、比較的許容される投与量において、ドセタキセル（１８ｍｇ／ｋｇ）よりも小さな腫瘍を引き起こした。＃、ｐ＜０．０５。一元配置ＡＮＯＶＡ後のＮｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ事後検定。データは、３〜６匹のマウスの平均として表される。図１０（Ｂ）は、ＴＤ−１リポソーム、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム、ドセタキセルまたは生理食塩水で処置された、ヒトＰＣ３（前立腺）異種移植片腫瘍を持つ無胸腺ヌードマウスのカプラン−マイヤー生存プロットを示す。１８および２７ｍｇ／ｋｇのドセタキセル処置、および全ての処置投与量のＴＤ−１リポソームおよびＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームは、生理食塩水よりも有意に多く生存を増加させた。ｐ＜０．０５、マンテル−コックス、ｌｏｇ−ランク検定。各群は、腫瘍を持つ５〜６匹の雄マウスで開始した。

【0018】

【図11】図１１（Ａ）は、無胸腺ヌードマウスにおける、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５／ＰＴＫ７（ヒト乳房）腫瘍異種移植片に対するＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームおよびドセタキセルの抗腫瘍効果を示す。経時的なメジアン腫瘍体積（ｍｍ^３）は、被験物質の単回のＩＶ投与後に示される。データは、４〜８匹のマウスのメジアンとして表される。図１１（Ｂ）は、ドセタキセル、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム、または生理食塩水の単回の投与で処置された、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５／ＰＴＫ７（ヒト乳房）異種移植片腫瘍を持つ無胸腺ヌードマウスのパーセント生存を示すカプラン−マイヤー生存プロットを示す。各群は、腫瘍を持つ８匹の雌マウスで開始した。

【0019】

【図12】図１２（Ａ）は、無胸腺ヌードマウスにおける、ＨＴ１０８０／ＰＴＫ７ヒト線維肉腫腫瘍異種移植片に対するＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームおよびドセタキセルの抗腫瘍効果を示す。経時的な平均腫瘍体積（ｍｍ^３）は、ドセタキセル、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム、または生理食塩水の単回のＩＶ投与後に示される。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（３０、６０および９０ｍｇ／ｋｇ）での処置およびドセタキセル（２７ｍｇ／ｋｇ）処置は、処置後１４日目に、生理食塩水よりも有意に小さな腫瘍を引き起こした。＊、ｐ＜０．０５。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（６０および９０ｍｇ／ｋｇ）の投与の結果、処置後２１日目に、対応する等毒性投与量でドセタキセル（１８および２７ｍｇ／ｋｇ）よりも有意に小さな腫瘍がもたらされた。＊＊、ｐ＜０．０５。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（９０ｍｇ／ｋｇ）の投与の結果、処置後３０日目に、比較的許容される投与量でのドセタキセル（２７ｍｇ／ｋｇ）よりも有意に小さな腫瘍がもたらされた。＃、ｐ＜０．０５。一元配置ＡＮＯＶＡ後のＮｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ事後検定。データは、５〜１０匹のマウスの平均値±標準誤差として表される。図１２（Ｂ）は、ドセタキセル、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム、または生理食塩水で処置された、ＨＴ１０８０／ＰＴＫ７ヒト線維肉腫異種移植片腫瘍を持つ無胸腺ヌードマウスのカプラン−マイヤー生存プロットを示す。全ての投与量レベルのＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームは、生理食塩水よりも有意に大きく生存を増加させ、＊、ｐ＜０．０５、そして、９０ｍｇ／ｋｇのＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームは、ドセタキセル（全ての投与量レベル）よりも有意に大きく生存を増加させた。＃、ｐ＜０．０５、マンテル−コックス、ｌｏｇ−ランク検定。各群は、腫瘍を持つ１０匹の雌マウスで開始した。

【0020】

【図13】図１３（Ａ）は、無胸腺ヌードマウスにおける、Ａ４３１ヒト類表皮腫瘍異種移植片に対するＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームおよびドセタキセルの抗腫瘍効果を示す。経時的な平均腫瘍体積（ｍｍ^３）は、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム、ドセタキセルまたは生理食塩水の単回のＩＶ投与後に示される。全ての投与量レベルのＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームおよびドセタキセルは、処置後７日目に、生理食塩水よりも有意に小さな腫瘍を引き起こした。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（６０ｍ／ｋｇ）は、２０または３０ｍｇ／ｋｇのいずれかのドセタキセルでの処置よりも有意に小さな腫瘍を引き起こした。＊、ｐ＜０．０５。投与後１７日目に、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（６０および９０ｍｇ／ｋｇ）で処置した群は、ドセタキセル（２０ｍｇ／ｋｇ）よりも有意に小さな腫瘍を示した。＃、ｐ＜０．０５。一元配置ＡＮＯＶＡ後のＮｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ事後検定。データは、４〜８匹のマウスの平均値±標準誤差として表される。図１３（Ｂ）は、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム、ドセタキセル、または生理食塩水で処置された、Ａ４３１ヒト（類表皮）異種移植片腫瘍を持つ無胸腺ヌードマウスのパーセント生存を示すカプラン−マイヤー生存プロットを示す。全ての投与量レベルのＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームは、生理食塩水およびドセタキセル（２０および３０ｍｇ／ｋｇ）よりも有意に多く生存を増大させた。ｐ＜０．０５、マンテル−コックス、ｌｏｇ−ランク検定。各群は、腫瘍を持つ８匹の雌マウスで開始した。

【0021】

【図14A】図１４（Ａ）、１４（Ｂ）、および１４（Ｃ）は、特許請求される組成物および方法を開発するために評価された組成物の表を提供する。記載欄で提供される比率は、（本明細書に記載されるタキサンの負荷に先立って、かつＰＥＧ−脂質の添加に先立って）第一のリポソームを調製するための最初の比率である。ＰＣ（ホスファチジルコリン脂質）、Ｃｈｏｌ（コレステロール）およびＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００のパーセンテージを、最終の組成物の組み立て（ａｓｓｅｍｂｌｙ）に続いてモル％で提供する。

【図14B】図１４（Ａ）、１４（Ｂ）、および１４（Ｃ）は、特許請求される組成物および方法を開発するために評価された組成物の表を提供する。記載欄で提供される比率は、（本明細書に記載されるタキサンの負荷に先立って、かつＰＥＧ−脂質の添加に先立って）第一のリポソームを調製するための最初の比率である。ＰＣ（ホスファチジルコリン脂質）、Ｃｈｏｌ（コレステロール）およびＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００のパーセンテージを、最終の組成物の組み立て（ａｓｓｅｍｂｌｙ）に続いてモル％で提供する。

【図14C】図１４（Ａ）、１４（Ｂ）、および１４（Ｃ）は、特許請求される組成物および方法を開発するために評価された組成物の表を提供する。記載欄で提供される比率は、（本明細書に記載されるタキサンの負荷に先立って、かつＰＥＧ−脂質の添加に先立って）第一のリポソームを調製するための最初の比率である。ＰＣ（ホスファチジルコリン脂質）、Ｃｈｏｌ（コレステロール）およびＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００のパーセンテージを、最終の組成物の組み立て（ａｓｓｅｍｂｌｙ）に続いてモル％で提供する。

【発明を実施するための形態】

【0022】

Ｉ．概要
本発明は、新規なリポソームタキサン、ならびにタキサンのリポソーム中への封入、およびそれに続くポリ（エチレングリコール）官能化脂質のリポソーム中への組込みのための多工程のワンポット法を提供する。本明細書中に記載される方法によって調製されるリポソームタキサンは、貯蔵安定性、イン・ビボ循環時間、およびイン・ビボ有効性の増大を含めたいくつかの利点を示す。リポソームタキサンは、本明細書中において記載されるようにがんの処置に有用である。

【0023】

ＩＩ．定義
本明細書中で用いる場合、用語「リポソーム」は、脂質二重層によって包まれたあらゆる区画を含む。用語リポソームは、単一の脂質二重層よりなり、一般に約２０〜約４００ｎｍの範囲の直径を有する単層小胞を含む。リポソームは、一般に１〜１０μｍの範囲の直径を有する多層であってもよい。いくつかの実施態様において、リポソームは、多層小胞（ＭＬＶ；大きさが約１μｍ〜約１０μｍ）、大型単層小胞（ＬＵＶ；大きさが数百ナノメートル〜約１０μｍ）、および小型単層小胞（ＳＵＶ；大きさが約２０ｎｍ〜約２００ｎｍ）を含むことができる。

【0024】

本明細書中で用いる場合、用語「ホスファチジルコリン脂質」とは、コリン頭部基（すなわち、１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）を有するジアシルグリセリドリン脂質をいう。ホスファチジルコリン脂質中のアシル基は、一般に、６〜２４個の炭素原子を有する脂肪酸に由来する。ホスファチジルコリン脂質は、合成および天然由来の１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを含むことができる。

【0025】

本明細書中で用いる場合、用語「ステロール」とは、少なくとも１つのヒドロキシル基を含有するステロイドをいう。ステロイドは、縮合四環ゴナン環系の存在によって特徴付けられる。ステロールは、限定されるものではないが、コレステロール（すなわち、２，１５−ジメチル−１４−（１，５−ジメチルヘキシル）テトラシクロ［８．７．０．０^２，７．０^{１１，１５}］ヘプタコス−７−エン−５−オール；Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ登録番号５７−８８−５）を含む。

【0026】

本明細書中で用いる場合、用語「ＰＥＧ−脂質」とは、疎水性または両親媒性脂質部分に共有結合したポリ（エチレングリコール）ポリマーをいう。該脂質部分は、脂肪、ワックス、ステロイド、脂溶性ビタミン、モノグリセリド、ジグリセリド、リン脂質、およびスフィンゴ脂質を含むことができる。好ましいＰＥＧ−脂質は、ジアシル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）］およびＮ−アシル−スフィンゴシン−１−｛スクシニル［メトキシ（ポリエチレングリコール）］｝を含む。ＰＥＧ−脂質中のＰＥＧの分子量は、一般に、約５００〜約５０００ダルトン（Ｄａ：ｇ／モル）である。ＰＥＧ−脂質中のＰＥＧは線状または分岐状構造を有することができる。

【0027】

本明細書中で用いる場合、用語「タキサン」とは、もともとはイチイ（Ｔａｘｕｓ属）から単離された、これもタキサンと呼ばれる、ジテルペン天然産物と同様な構造的骨格を有する化合物をいう。タキサンは、一般に、縮合した６／８／６三環炭素骨格によって特徴付けられ、該グループは天然産物および合成誘導体を含む。タキサンの例としては、限定されるものではないが、パクリタキセル、ドセタキセル、およびカバジタキセルが挙げられる。本発明のある種のタキサンは、三環タキサンコアから延びる３−フェニルプロピオネート（ｐｈｅｎｙｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）側鎖の２’ヒドロキシル基においてエステル部分を含む。

【0028】

本明細書中で用いる場合、用語「ヘテロシクリル」とは、３〜１２個の環員およびＮ、ＯおよびＳの１〜４個のヘテロ原子を有する飽和または不飽和環系をいう。ヘテロ原子は、限定されるものではないが、−Ｓ（Ｏ）−および−Ｓ（Ｏ）_２−のように、酸化されていてもよい。ヘテロシクリル基は、３〜６、４〜６、５〜６、３〜８、４〜８、５〜８、６〜８、３〜９、３〜１０、３〜１１、または３〜１２個の環員のような、あらゆる数の環原子を含むことができる。１、２、３、または４、あるいは１〜２、１〜３、１〜４、２〜３、２〜４、または３〜４のようなあらゆる適切な数のヘテロ原子も、ヘテロシクリル基に含むことができる。ヘテロシクリルは、限定されるものではないが、４−メチルピペラジニル、モルホリノ、およびピペリジニルを含む。

【0029】

本明細書中で用いる場合、用語「アルカン酸」とは、２〜５個の炭素原子を含有するカルボン酸をいう。アルカン酸は、線状または分岐状であってよい。アルカン酸の例としては、限定されるものではないが、酢酸、プロピオン酸、およびブタン酸が挙げられる。

【0030】

本明細書中で用いる場合、用語「モルパーセント」および「モル％」とは、リポソームの所定の脂質成分のモル数を全ての脂質成分の合計モル数で割ったものをいう。明示的に述べない限り、リポソームの脂質成分についてモル％を計算する場合に、活性剤、希釈剤、または他の成分の量は含まれない。

【0031】

本明細書中で用いる場合、用語「負荷」とは、タキサンのリポソーム中への蓄積を行うことをいう。タキサンは、リポソームの水性内部に封入することができるか、あるいは脂質二重層に包埋することができる。リポソームは受動的に負荷することができ、ここで、該タキサンはリポソーム調製の間に用いられる溶液中に含まれる。別法として、リポソームは、リポソーム二重層を横切る化学勾配（例えば、ｐＨまたはイオン勾配）を確立し、水性外部からリポソーム内部へのタキサンの移動を引き起こすことによって遠隔的に負荷することができる。

【0032】

本明細書中で用いる場合、用語「挿入」とは、脂質成分のリポソーム二重層への包埋をいう。一般に、ＰＥＧ−脂質のような両親媒性脂質は、両親媒性脂質の疎水性部分と二重層の疎水性内部との間のファンデルワールス相互作用によって溶液から二重層へ移動する。

【0033】

本明細書中で用いる場合、用語「組成物」とは、特定量の特定成分を含む生成物、ならびに特定量の特定成分の組合せから直接的にまたは間接的に得られるあらゆる生成物をいう。本発明の医薬組成物は、一般に、本明細書中に記載されたリポソームタキサンおよび薬学的に許容され得る担体、希釈剤、または賦形剤を含有する。「薬学的に許容され得る」とは、担体、希釈剤、または賦形剤が製剤の他の成分と適合しなければならず、かつその受容者に対して有害であってはならないことを意味する。

【0034】

本明細書中で用いる場合、用語「がん」とは、ヒトのがんおよび癌、肉腫、腺癌、リンパ腫、白血病、および固形がんおよびリンパ性がんを含めた状態をいう。様々なタイプのがんの例としては、限定されるものではないが、肺がん（例えば、非小細胞肺がんまたはＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、前立腺がん、結腸直腸がん、肝臓がん（すなわち、肝癌）、腎臓がん（すなわち、腎臓細胞癌）、膀胱がん、乳がん、甲状腺がん、胸膜がん、膵臓がん、子宮がん、子宮頸がん、精巣がん、肛門がん、膵臓がん、胆管がん、胃腸カルチノイド腫瘍、食道がん、胆嚢がん、虫垂がん、小腸がん、胃（胃の）がん、中枢神経系のがん、皮膚がん、絨毛癌、頭頸部がん、血液がん、骨原性肉腫、線維肉腫、神経芽細胞腫、膠腫、メラノーマ、Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、小細胞リンパ腫、大細胞リンパ腫、単球性白血病、骨髄性白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、および多発性骨髄腫が挙げられる。

【0035】

本明細書中で用いる場合、用語「処置する」、「処置すること」および「処置」とは、症状の緩和；軽快；縮小、またはがんまたはがん症状を患者にとってより許容できるものとするようなあらゆる客観的または主観的パラメータを含めた、がんまたはがんの症状の処置または軽減における成功のあらゆる兆候をいう。症状の処置または軽減は、例えば、理学的検査または臨床検査の結果を含めた、あらゆる客観的または主観的パラメータに基づくことができる。

【0036】

本明細書中で用いる場合、用語「投与する」、「投与された」、または「投与すること」とは、本発明のリポソーム組成物を投与する方法をいう。本発明のリポソーム組成物は、非経口、静脈内、皮内、筋肉内、または腹腔内を含めた種々の方法で投与することができる。リポソーム組成物は、組成物または製剤の一部として投与することもできる。

【0037】

本明細書中で用いる場合、用語「被験体」とは、一生のいずれかの段階におけるいずれかの哺乳動物、特にヒトをいう。

【0038】

本明細書中で用いる場合、用語「約」は、特定の値を修飾するのに用いられる場合、その数値の前後の近い範囲を示す。「Ｘ」が値である場合、例えば、「約Ｘ」は、０．９Ｘ〜１．１Ｘの値、より好ましくは、０．９５Ｘ〜１．０５Ｘの値を示す。「約Ｘ」へのあらゆる言及は、少なくとも値Ｘ、０．９Ｘ、０．９１Ｘ、０．９２Ｘ、０．９３Ｘ、０．９４Ｘ、０．９５Ｘ、０．９６Ｘ、０．９７Ｘ、０．９８Ｘ、０．９９Ｘ、１．０１Ｘ、１．０２Ｘ、１．０３Ｘ、１．０４Ｘ、１．０５Ｘ、１．０６Ｘ、１．０７Ｘ、１．０８Ｘ、１．０９Ｘ、および１．１Ｘを具体的に示す。

【0039】

ＩＩＩ．本発明の実施態様
第一の態様において、本発明は、がんの処置用の組成物を提供する。該組成物は、ホスファチジルコリン脂質、ステロール、ＰＥＧ−脂質、およびタキサンまたはその薬学的に許容され得る塩を含有するリポソームを含む。タキサンは、ヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカン酸）でエステル化されており、ＰＥＧ−脂質はリポソーム中の全脂質の２〜８モル％を構成する。

【0040】

タキサン
いくつかの実施態様において、タキサンは式Ｉによる化合物、またはその薬学的に許容され得る塩である。

【化1】

【0041】

式Ｉの化合物では、Ｒ^１はフェニルおよびｔ−ブトキシから選択され；Ｒ^２はＨ、アセチルおよびメチルから選択され；Ｒ^３はＨ、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−ブタノイルおよびメチルから選択され；Ｒ^４はＨおよびヘテロシクリル−Ｃ_２−５アルカノイルから選択される。Ｒ^３およびＲ^４の少なくとも一方はＨ以外である。

【0042】

式Ｉの化合物は、乳がん、卵巣がん、および肺がんを含めた種々のがんの処置のための化学療法剤として有用である。式Ｉはパクリタキセル誘導体を含み、ここで、Ｒ^１はフェニルである。パクリタキセルそれ自体は、完全な化学合成ならびに１０−デアセチルバッカチンＩＩＩ（１０−ＤＡＢ；以下の式ＩＩ）を使用する半合成方法を含めた種々の方法によって得ることができる。１０−ＤＡＢはタイヘイヨウイチイおよびヨーロッパイチイ（各々、Ｔａｘｕｓ ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａおよびＴａｘｕｓ ｂａｃｃａｔａ）から単離することができ、パクリタキセル、および限定されるものではないが、ドセタキセル（すなわち、Ｒ^１＝ｔ−ブトキシ；Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４＝Ｈ）およびカバジタキセルの既知の方法による調製のための出発材料として用いることができる。半合成方法によるタキサン調製が、完全な合成によるタキサン調製に加えて、本発明での使用で考えられる。

【化2】

【0043】

上記のように、がん療法のための、パクリタキセルおよびドセタキセルを含めたタキサンの使用は、不十分な溶解性による低い生物学的利用性によって、ならびに高い毒性によって制限され得る。これらの欠点を矯正するために種々の戦略が使用されてきた。例えば、種々の極性の部分による、三環コアのＣ７およびＣ１０官能基における、またはＣ１３側鎖のＣ２’ヒドロキシル基におけるタキサン骨格の誘導体化を用いて、タキサンベースの薬物の生物学的利用性を改変することができる（例えば、米国特許第６，４８２，８５０号；米国特許第６，５４１，５０８号；米国特許第５，６０８，０８７号；および米国特許第５，８２４，７０１号参照）。

【0044】

タキサンのリポソームへの組込みは、生物学的利用性を改善し、タキサンの毒性を低下させることができる。本発明においては、弱塩基部分によるタキサン骨格の修飾は、修飾を行わなければ難水溶性であるタキサンのリポソームの水性内部への活発な負荷を促進することができる。一般に、弱塩基部分は、Ｎ−メチル−ピペラジノ基、モルホリノ基、ピペリジノ基、ビス−ピペリジノ基またはジメチルアミノ基などのイオン化可能なアミノ基を含むことができる。いくつかの実施態様において、弱塩基部分はＮ−メチル−ピペラジノ基である。

【0045】

タキサンは、誘導体の活性が遊離薬物の活性と実質的に同等であるように、意図された治療活性には必須でない領域において誘導体化することができる。例えば、いくつかの態様において、弱塩基誘導体は、バッカチン骨格の７−ＯＨ基において誘導体化されたタキサンドセタキセルを含む。いくつかの実施態様において、ドセタキセル活性に必須である２’−ＯＨ基において誘導体化されたドセタキセル誘導体が提供される。

【0046】

従って、本発明のいくつかの実施態様は、タキサンまたはその薬学的に許容され得る塩を含有するリポソームを提供し、ここで、該タキサンは２’−Ｏ−位でヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカン酸）によってエステル化されたドセタキセルである（すなわち、タキサンは、Ｒ^１がｔ−ブトキシであり；Ｒ^２がＨであり；Ｒ^３がＨであり；Ｒ^４がヘテロシクリル−Ｃ_２−５アルカノイルである式Ｉの化合物である）。いくつかの実施態様において、ヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカン酸）は、５−（４−メチルピペラジン−１−イル）−ペンタン酸、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−ブタン酸、３−（４−メチルピペラジン−１−イル）−プロピオン酸、２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−エタン酸、５−モルホリノ−ペンタン酸、４−モルホリノ−ブタン酸、３−モルホリノ−プロピオン酸、２−モルホリノ−エタン酸、５−（ピペリジン−１−イル）ペンタン酸、４−（ピペリジン−１−イル）ブタン酸、３−（ピペリジン−１−イル）プロピオン酸、および２−（ピペリジン−１−イル）エタン酸から選択される。いくつかの実施態様において、ヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカン酸）は４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−ブタン酸である。

【0047】

リポソーム
本発明のリポソームは、上記のようにカチオン性脂質、双性イオン性脂質、中性脂質、またはアニオン性脂質を含めたあらゆる適切な脂質も含有することができる。適切な脂質は、脂肪、ワックス、ステロイド、コレステロール、脂溶性ビタミン、モノグリセリド、ジグリセリド、リン脂質、スフィンゴ脂質、糖脂質、カチオン性またはアニオン性脂質、誘導体化脂質等を含むことができる。

【0048】

一般に、本発明のリポソームは、少なくとも１つのホスファチジルコリン脂質（ＰＣ）を含有する。適切なホスファチジルコリン脂質は、飽和ＰＣおよび不飽和ＰＣを含む。

【0049】

飽和ＰＣの例としては、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ジミリストイルホスファチジルコリン；ＤＭＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ジステアロイルホスファチジルコリン；ＤＳＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ジパルミトイルホスファチジルコリン；ＤＰＰＣ）、１−ミリストイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＭＰＰＣ）、１−パルミトイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＭＰＣ）、１−ミリストイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＭＳＰＣ）、１−パルミトイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＳＰＣ）、１−ステアロイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＳＰＰＣ）、および１−ステアロイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＳＭＰＣ）が挙げられる。

【0050】

不飽和ＰＣの例としては、限定されるものではないが、１，２−ジミリストレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジミリステライドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミテライドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジエライドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジペトロセレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン；ＰＯＰＣ）、１−パルミトイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１−ステアロイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＳＯＰＣ）、１−ステアロイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１−オレオイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＭＰＣ）、１−オレオイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＰＰＣ）、および１−オレオイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＳＰＣ）が挙げられる。

【0051】

卵ＰＣ、心臓抽出物、脳抽出物、肝臓抽出物、大豆ＰＣ、および水素添加大豆ＰＣ（ＨＳＰＣ）などの脂質抽出物も本発明で有用である。

【0052】

本明細書中で提供される組成物は、いくつかの実施態様において、実質的に（以下に記載される添加されたタキサンおよびＰＥＧ−脂質との）ＰＣ／コレステロール混合物からなる。いくつかの実施態様において、リポソーム組成物は、実質的にホスファチジルコリン脂質、またはホスファチジルコリン脂質とコレステロール、ＰＥＧ−脂質およびタキサンとの混合物からなる。なお他の実施態様において、リポソーム組成物は、実質的に、単一タイプのホスファチジルコリンとコレステロール、ＰＥＧ−脂質およびタキサンからなる。いくつかの実施態様において、単一タイプのホスファチジルコリン脂質が用いられる場合、それはＤＯＰＣ、ＤＳＰＣ、ＨＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＰＯＰＣおよびＳＯＰＣから選択される。

【0053】

いくつかの実施態様において、ホスファチジルコリン脂質は、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＨＳＰＣ、およびそれらの混合物よりなる群から選択される。いくつかの実施態様において、本発明の組成物は、５０〜６５モル％のホスファチジルコリン脂質もしくはホスファチジルコリン脂質の混合物、または４５〜７０モル％のホスファチジルコリン脂質もしくはホスファチジルコリン脂質の混合物を含有するリポソームを含む。リポソームは、例えば、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４または６５モル％のホスファチジルコリンを含有することができる。いくつかの実施態様において、リポソームは約５５モル％のホスファチジルコリンを含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは約５３モル％のホスファチジルコリンを含有する。

【0054】

低量、またはホスファチジルコリン脂質未満の量で一般に用いられる他の適切なリン脂質は、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）を含む。リン脂質の例としては、限定されるものではないが、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）、ジオレオイルホスファチジルセリン（ＤＯＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１６−Ｏ−モノメチルＰＥ、１６−Ｏ−ジメチルＰＥ、１８−１−トランスＰＥ、１−ステアロイル−２−オレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、ジエライドイルホスホエタノールアミン（トランスＤＯＰＥ）、およびカルジオリピンが挙げられる。

【0055】

いくつかの実施態様において、リン脂質は、さらなる誘導体化のための反応性官能基を含むことができる。そのような反応性脂質の例としては、限定されるものではないが、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＤＯＰＥ−ｍａｌ）およびジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−スクシニル（スクシニル−ＰＥ）が挙げられる。

【0056】

本発明のリポソームは、縮合四環ゴナン環系の存在によって特徴付けられるステロイドを含有することができる。ステロイドの例としては、限定されるものではないが、コール酸、プロゲステロン、コルチゾン、アルドステロン、テストステロン、デヒドロエピアンドロステロン、およびエストラジオールおよびコレステロールなどのステロールが挙げられる。合成ステロイドおよびその誘導体もまた本発明における使用で考えられる。

【0057】

一般に、リポソームは少なくとも１つのステロールを含有する。いくつかの実施態様において、ステロールはコレステロール（すなわち、２，１５−ジメチル−１４−（１，５−ジメチルヘキシル）テトラシクロ［８．７．０．０^２，７．０^{１１，１５}］ヘプタコス−７−エン−５−オール）である。いくつかの実施態様において、リポソームは約３０〜５０モル％のコレステロール、または約３０〜４５モル％のコレステロールを含有することができる。リポソームは、例えば、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、または４５モル％のコレステロールを含有することができる。いくつかの実施態様において、リポソームは３０〜４０モル％のコレステロールを含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは４０〜４５モル％のコレステロールを含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは４５モル％のコレステロールを含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは４４モル％のコレステロールを含有する。

【0058】

本発明のリポソームは、任意の適切なポリ（エチレングリコール）−脂質誘導体（ＰＥＧ−脂質）を含むことができる。いくつかの実施態様において、ＰＥＧ−脂質はジアシル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）］である。ＰＥＧ−脂質中のポリ（エチレングリコール）の分子量は、一般に、約５００Ｄａ〜約５０００Ｄａの範囲である。ポリ（エチレングリコール）は、例えば、７５０Ｄａ、１０００Ｄａ、２０００Ｄａ、または５０００Ｄａの分子量を有することができる。いくつかの実施態様において、ＰＥＧ−脂質は、ジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−２０００）およびジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−５０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−５０００）から選択される。いくつかの実施態様において、ＰＥＧ−脂質はＤＳＰＥ−ＰＥＧ−２０００である。

【0059】

一般に、本発明の組成物は、２〜８モル％のＰＥＧ−脂質を含有するリポソームを含む。リポソームは、例えば、２、３、４、５、６、７または８モル％のＰＥＧ−脂質を含有することができる。いくつかの実施態様において、リポソームは２〜６モル％のＰＥＧ−脂質を含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは３モル％のＰＥＧ−脂質を含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは３モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ−２０００を含有する。

【0060】

本発明のリポソームは、一般にホスファチジルコリン脂質の量よりも少ない量である、いくらかの量のカチオン性脂質を含むこともできる。カチオン性脂質は、生理学的条件下で、正電荷を持つ官能基を含有する。カチオン性脂質は、限定されるものではないが、Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、Ｎ−［１−（２，３−ジテトラデシルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、３β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）およびＮ，Ｎ−ジメチル−２，３−ジオレイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）を含む。

【0061】

本発明のいくつかの実施態様において、リポソームは、約５０モル％〜約７０モル％のＤＳＰＣおよび約２５モル％〜約４５モル％のコレステロールを含む。いくつかの実施態様において、リポソームは約５３モル％のＤＳＰＣ、約４４モル％のコレステロールおよび約３モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ−２０００を含む。いくつかの実施態様において、リポソームは、約６６モル％のＤＳＰＣ、約３０モル％のコレステロールおよび約４モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ−２０００を含む。

【0062】

診断剤
本発明のリポソームは、診断剤を含有してもよい。本発明で用いられる診断剤は、例えば、以下の文献中に提供される当該分野で既知のいかなる診断剤も含むことができる：Ａｒｍｓｔｒｏｎｇら、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｉｍａｇｉｎｇ、第５版、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２００４）；Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｖ．Ｐ．編、Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｉｍａｇｉｎｇ Ａｇｅｎｔｓ、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（１９９５）；Ｖａｌｌａｂｈａｊｏｓｕｌａ，Ｓ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｉｎｇ：Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ｆｏｒ ＰＥＴ ａｎｄ ＳＰＥＣＴ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（２００９）。診断剤は、限定されるものではないが、ガンマ線放射性、放射性、エコー源性、光学的、蛍光性、吸収性、磁性または断層撮影法シグナルを含む検出可能なシグナルを提供する、および／または増強する剤としての方法を含めた、種々の方法によって検出することができる。診断剤を撮像するための技術は、限定されるものではないが、単光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）、光学的撮像、陽電子放射型断層撮影法（ＰＥＴ）、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、ｘ線撮像、ガンマ線撮像等を含むことができる。診断剤は、例えば、リポソームに包埋する、または封入することを含めた、種々の方法で治療リポソームと会合させることができる。

【0063】

いくつかの実施態様において、診断剤は、種々の診断用撮像技術に用いられる金属イオンに結合するキレーターを含むことができる。典型的なキレーターは、限定されるものではないが、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、［４−（１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカ−１−イル）メチル］安息香酸（ＣＰＴＡ）、シクロヘキサンジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）四酢酸（ＥＧＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、クエン酸、ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、イミノジ酢酸（ＩＤＡ）、トリエチレンテトラアミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ（メチレンホスホン酸）（ＤＯＴＰ）、１，４，８，１１−テトラアザシクロドデカン−１，４，８，１１−四酢酸（ＴＥＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）、およびその誘導体を含む。

【0064】

放射性同位体も、本明細書中に記載された診断剤のいくつかに組み込むことができ、ガンマ線、陽電子、ベータおよびアルファ粒子およびＸ線を発する放射性核種を含むことができる。適切な放射性核種は、限定されるものではないが、^２２５Ａｃ、^７２Ａｓ、^２１１Ａｔ、^１１Ｂ、^１２８Ｂａ、^２１２Ｂｉ、^７５Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^１４Ｃ、^１０９Ｃｄ、^６２Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^１８Ｆ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^３Ｈ、^１２３Ｉ、^１２５Ｉ、^１３０Ｉ、^１３１Ｉ、^１１１Ｉｎ、^１７７Ｌｕ、^１３Ｎ、^１５Ｏ、^３２Ｐ、^３３Ｐ、^２１２Ｐｂ、^１０３Ｐｄ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^４７Ｓｃ、^１５３Ｓｍ、^８９Ｓｒ、^９９ｍＴｃ、^８８Ｙおよび^９０Ｙを含む。ある実施態様において、放射性剤は、^１１１Ｉｎ−ＤＴＰＡ、^９９ｍＴｃ（ＣＯ）_３−ＤＴＰＡ、^９９ｍＴｃ（ＣＯ）_３−ＥＮＰｙ２、^{６２／６４／６７}Ｃｕ−ＴＥＴＡ、^９９ｍＴｃ（ＣＯ）_３−ＩＤＡ、および^９９ｍＴｃ（ＣＯ）_３トリアミン（環状または線状）を含むことができる。他の実施態様においては、該剤は、ＤＯＴＡ、および^１１１Ｉｎ、^１７７Ｌｕ、^１５３Ｓｍ、^{８８／９０}Ｙ、^{６２／６４／６７}Ｃｕ、または^{６７／６８}Ｇａを伴うその種々の類似体を含むことができる。いくつかの実施態様において、リポソームは、以下の文献で提供されるようなＤＴＰＡ−脂質などの、キレートに付着した脂質の組込みによって放射性標識することができる：Ｐｈｉｌｌｉｐｓら、Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｄｉｓｃｉｐｌｉｎａｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｎａｎｏｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１（１）：６９−８３（２００８）；Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｖ．Ｐ．＆ Ｗｅｉｓｓｉｇ，Ｖ．編 Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ第２版：Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ（２００３）；Ｅｌｂａｙｏｕｍｉ，Ｔ．Ａ．＆ Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｖ．Ｐ．、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｍｏｌ．Ｉｍａｇｉｎｇ ３３：１１９６−１２０５（２００６）；Ｍｏｕｇｉｎ−Ｄｅｇｒａｅｆ，Ｍ．ら、Ｉｎｔ’ｌ Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ３４４：１１０−１１７（２００７）。

【0065】

他の実施態様において、診断剤は、蛍光剤、リン光剤、化学発光剤等などの光学剤を含むことができる。多数の剤（例えば、色素、プローブ、ラベル、またはインジケーター）が当該分野で既知であり、本発明で用いることができる。（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｔｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ−Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｂｅｓ ａｎｄ Ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、第１０版（２００５）参照）。蛍光剤は、種々の有機および／または無機小分子あるいは種々の蛍光タンパク質およびその誘導体を含むことができる。例えば、蛍光剤は、限定されるものではないが、シアニン、フタロシアニン、ポルフィリン、インドシアニン、ローダミン、フェノキサジン、フェニルキサンテン、フェノチアジン、フェノセレナジン、フルオレセイン、ベンゾポルフィリン、スクアライン、ジピロロピリミドン、テトラセン、キノリン、ピラジン、コリン、クロコニウム、アクリドン、フェナントリジン、ローダミン、アクリジン、アントラキノン、カルコゲノピリリウム類似体、クロリン、ナフタロシアニン、メチン色素、インドレニウム色素、アゾ化合物、アズレン、アザアズレン、トリフェニルメタン色素、インドール、ベンゾインドール、インドカルボシアニン、ベンゾインドカルボシアニン、および４，４−ジフルオロ−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセンの一般構造を有するＢＯＤＩＰＹ^ＴＭ誘導体、および／またはこれらのいずれかのコンジュゲートおよび／または誘導体を含むことができる。用いることができる他の剤は、限定されるものではないが、例えば、フルオレセイン、フルオレセイン−ポリアスパラギン酸コンジュゲート、フルオレセイン−ポリグルタミン酸コンジュゲート、フルオレセイン−ポリアルギニンコンジュゲート、インドシアニングリーン、インドシアニンドデカアスパラギン酸コンジュゲート、インドシアニン−ポリアスパラギン酸コンジュゲート、イソスルファンブルー、インドールジスルホネート、ベンゾインドールジスルホネート、ビス（エチルカルボキシメチル）インドシアニン、ビス（ペンチルカルボキシルメチル）インドシアニン、ポリヒドロキシインドールスルホネート、ポリヒドロキシベンゾインドールスルホネート、リジッドヘテロ原子インドールスルホネート、インドシアニンビスプロパン酸、インドシアニンビスヘキサン酸、３，６−ジシアノ−２，５−［（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（カルボキシメチル）アミノ］ピラジン、３，６−［（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−アザテジノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−モルホリノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−ピペラジノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−チオモルホリノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−チオモルホリノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸Ｓ−オキシド、２，５−ジシアノ−３，６−（Ｎ−チオモルホリノ）ピラジンＳ，Ｓ−ジオキシド、インドカルボシアニンテトラスルホネート、クロロインドカルボシアニン、および３，６−ジアミノピラジン−２，５−ジカルボン酸を含む。

【0066】

当業者であれば、用いる特定の光学剤は、励起に用いる波長、皮膚組織下の深さ、および当該分野で一般によく知られている他の因子によって決まり得ることを認識する。例えば、光学剤のための最適な吸収または励起極大は、使用される剤によって変動し得るが、一般には、本発明の光学剤は、電磁スペクトルの紫外（ＵＶ）、可視、または赤外（ＩＲ）領域の光を吸収し、またはそのような光によって励起される。例えば、近ＩＲを吸収し、かつそこにおいて発光する色素（約７００〜９００ｎｍ、例えば、インドシアニン）が好ましい。内視鏡方法を用いる局所的可視化のためには、可視領域において吸収する任意の色素が適切である。

【0067】

いくつかの実施態様において、本発明のプロセスで使用される非イオン化放射線の波長の範囲は、約３５０ｎｍ〜約１２００ｎｍであり得る。１つの典型的な実施態様において、蛍光剤は、電磁スペクトルの可視部分の青色領域（約４３０ｎｍ〜約５００ｎｍ）において波長を有する光によって励起でき、かつ電磁スペクトルの可視部分の緑色領域（約５２０ｎｍ〜約５６５ｎｍ）における波長で発光する。例えば、フルオレセイン色素は、約４８８ｎｍの波長を持つ光で励起することができ、約５２０ｎｍの発光波長を有する。別の例として、３，６−ジアミノピラジン−２，５−ジカルボン酸は、約４７０ｎｍの波長を有する光で励起することができ、約５３２ｎｍの波長で蛍光を発する。別の実施態様において、光学剤の励起および発光波長は、電磁スペクトルの近−赤外領域に入ってもよい。例えば、インドシアニングリーンなどのインドシアニン色素は、約７８０ｎｍの波長を持つ光で励起することができ、約８３０ｎｍの発光波長を有する。

【0068】

なお他の実施態様において、診断剤は、限定されるものではないが、例えば、ヨウ素ベースのｘ線造影剤、超常磁性酸化鉄（ＳＰＩＯ）、ガドリニウムまたはマンガンの錯体等を含めた、当該分野で一般によく知られた磁気共鳴（ＭＲ）およびｘ線造影剤を含むことができる（例えば、Ａｒｍｓｔｒｏｎｇら、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｉｍａｇｉｎｇ、第５版、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２００４）参照）。いくつかの実施態様において、診断剤は、磁気共鳴（ＭＲ）撮像剤を含むことができる。典型的な磁気共鳴剤は、限定されるものではないが、常磁性剤、超常磁性剤等を含む。典型的な常磁性剤は、限定されるものではないが、ガドペンテト酸、ガドテル酸、ガドジアミド、ガドリニウム、ガドテリドール、マンガホジピール、ガドベルセタミド、クエン酸第二鉄アンモニウム、ガドベン酸、ガドブトロール、ガドキセト酸を含むことができる。超常磁性剤は、限定されるものではないが、超常磁性酸化鉄およびフェリステンを含むことができる。ある実施態様において、診断剤は、例えば、以下の文献に提供されるｘ線造影剤を含むことができる：Ｈ．Ｓ Ｔｈｏｍｓｅｎ、Ｒ．Ｎ．ＭｕｌｌｅｒおよびＲ．Ｆ．Ｍａｔｔｒｅｙ編、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｃｏｎｔｒａｓｔ Ｍｅｄｉａ（Ｂｅｒｌｉｎ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９９）；Ｐ．Ｄａｗｓｏｎ、Ｄ．ＣｏｓｇｒｏｖｅおよびＲ．Ｇｒａｉｎｇｅｒ編、Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｏｎｔｒａｓｔ Ｍｅｄｉａ（ＩＳＩＳ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｅｄｉａ １９９９）；Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｖ．Ｐ．、Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１：１８３−２１５（２０００）；Ｂｏｇｄａｎｏｖ，Ａ．Ａ．ら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．３７：２７９−２９３（１９９９）；Ｓａｃｈｓｅ，Ａら、Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ ３２（１）：４４−５０（１９９７）。ｘ線造影剤の例としては、限定されるものではないが、イオパミドール、イオメプロール、イオヘキソール、イオペントール、イオプロマイド、イオシミド、イオベルゾール、イオトロラン、イオタスル、イオジキサノール、イオデシモール、イオグルカミド、イオグルニド、イオグラミド、イオサルコール、イオキシラン、イオパミロン、メトリザマイド、イオビトリドールおよびイオシメノールが挙げられる。ある実施態様において、ｘ線造影剤は、イオパミドール、イオメプロール、イオプロマイド、イオヘキソール、イオペントール、イオベルゾール、イオビトリドール、イオジキサノール、イオトロランおよびイオシメノールを含むことができる。

【0069】

標的化剤
いくつかの場合において、標的部位におけるリポソームの蓄積は、がん組織などのある種の組織の増強された透過性および滞留特性によるものであり得る。そのような様式での蓄積は、しばしば、部分的にはリポソームの大きさのためもたらされ、特殊な標的化の機能性を必要としないことがある。他の場合には、本発明のリポソームは、標的化剤を含むこともできる。一般に、本発明の標的化剤は、器官、組織、細胞、細胞外マトリックス、または細胞内領域と関連する標的などの関心対象であるいかなる標的とも関連させることができる。ある実施態様において、標的は、がん性疾患などの特定の病状と関連させることができる。いくつかの実施態様において、標的化成分は、受容体などのただ１つの標的に対して特異的であり得る。適切な標的は、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ＲＮＡなどの核酸、またはその修飾された誘導体を含むことができる。適切な標的は、限定されるものではないが、細胞外タンパク質、受容体、細胞表面受容体、腫瘍マーカー、膜貫通タンパク質、酵素、または抗体などのタンパク質も含むことができる。適切な標的は、例えば、細胞の表面に存在し得る単糖、二糖、または多糖などの炭水化物を含むことができる。

【0070】

ある実施態様において、標的化剤は、標的リガンド（例えば、ＲＧＤ含有ペプチド）、標的リガンドの小分子ミミック（例えば、ペプチドミメティックリガンド）または特定の標的に対して特異的な抗体または抗体断片を含むことができる。いくつかの実施態様において、標的化剤は、葉酸誘導体、Ｂ−１２誘導体、インテグリンＲＧＤペプチド、ＮＧＲ誘導体、ソマトスタチン誘導体、またはソマトスタチン受容体に結合するペプチド、例えば、オクトレオチドおよびオクトレオテート等をさらに含むことができる。本発明の標的化剤はアプタマーを含むことができる。アプタマーは、関心対象である標的と会合し、またはそれに結合するように設計することができる。アプタマーは、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、および／またはペプチドよりなることができ、アプタマーのある種の態様は、当該分野でよく知られている（例えば、Ｋｌｕｓｓｍａｎ，Ｓ．編、Ｔｈｅ Ａｐｔａｍｅｒ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ（２００６）；Ｎｉｓｓｅｎｂａｕｍ，Ｅ．Ｔ．、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２６（８）：４４２−４４９（２００８）参照）。

【0071】

リポソームタキサンを調製する方法
第二の態様において、本発明は、リポソームタキサンを調製する方法を提供する。当業者に知られた多数の技術を用いて、リポソームを調製し、タキサンを負荷することができる。脂質小胞は、例えば、（適切な容器中で脂質と有機溶媒との混合物の蒸発によって調製された）乾燥した脂質フィルムを水または水性緩衝液で水和させることによって調製することができる。脂質フィルムの水和は、典型的には、多層小胞（ＭＬＶ）の懸濁液をもたらす。別法として、ＭＬＶは、Ｃ_１−４アルカノールなどの適切な溶媒中の脂質の溶液を水または水性緩衝液で希釈することによって形成することができる。単層小胞は、超音波処理、または規定された細孔径を持つ膜を通す押出しによってＭＬＶから形成することができる。タキサンの封入は、薬物を、ＭＬＶ形成中にフィルム水和または脂質希釈に用いる水溶液に含めることによって行うことができる。タキサンは、「遠隔負荷」技術を用いて、予め形成された小胞中に封入することもできる。遠隔負荷は、タキサンを外部溶液から小胞の内部へ駆動する、小胞膜のいずれかの側でのｐＨまたはイオン勾配の確立を含む。

【0072】

従って、本発明のいくつかの実施態様は、ａ）ホスファチジルコリン脂質およびステロールを含む脂質二重層を有する第一のリポソームを形成し、ここで、該脂質二重層は水溶液を含有する内部を封入し；ｂ）該第一のリポソームにタキサン、またはその薬学的に許容され得る塩を負荷して、負荷されたリポソームを形成し、ここで、該タキサンは２’−Ｏ−位でヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカノイル）基によってエステル化されたドセタキセルであり；ｃ）ＰＥＧ−脂質を該脂質二重層に組み込むことを含む、リポソームタキサンを調製する方法を提供する。

【0073】

本発明の方法で用いられるタキサンおよび脂質は、一般に、上記の通りである。しかしながら、リポソームタキサンへの経路は、部分的には、具体的なタキサンおよび脂質の同定、および用いられる量および組合せによって決まる。例えば、タキサンは、リポソーム調製の種々の段階において小胞中に封入することができる。いくつかの実施態様において、第一のリポソームは、脂質二重層がＤＳＰＣおよびコレステロールを含み、ＤＳＰＣ：コレステロール比が約５５：４５（モル：モル）であるように形成される。いくつかの実施態様において、第一のリポソームは、脂質二重層がＤＳＰＣおよびコレステロールを含み、ＤＳＰＣ：コレステロール比が約７０：３０（モル：モル）であるように形成される。いくつかの実施態様において、第一のリポソームの内部は水性硫酸アンモニウム緩衝液を含有する。第一のリポソームの負荷は、第一のリポソームの内部区画中へのタキサンの蓄積を可能とするのに十分な条件下で、第一のリポソームおよびタキサン、またはその薬学的に許容され得る塩を含有する水溶液を形成することを含むことができる。

【0074】

負荷条件は、一般に、外部水溶液中よりも、第一のリポソームの内部においてより高い硫酸アンモニウム濃度を含む。いくつかの実施態様において、負荷工程は、リポソーム中の脂質成分のうちの１つ以上のゲル−流体間相転移温度（Ｔ_ｍ）を超える温度で行われる。負荷は、例えば、約５０、約５５、約６０、約６５または約７０℃で行うことができる。いくつかの実施態様において、負荷工程は、約５０℃〜約７０℃の温度で行われる。負荷は、任意の適切な量のタキサンを用いて行うことができる。一般に、タキサンは、タキサンの重量に対するリポソーム中のホスファチジルコリンおよびステロールの合わせた重量の比が約１：０．０１〜約１：１であるような量で用いられる。タキサンの重量に対する合わせたホスファチジルコリン／ステロールの比は、例えば、約１：０．０１、約１：０．０５、約１：０．１０、約１：０．１５、約１：０．２０、約１：０．２５、約１：０．３０、約１：０．３５、約１：０．４０、約１：０．４５、約１：０．５０、約１：０．５５、約１：０．６０、約１：０．６５、約１：０．７０、約１：０．７５、約１：０．８０、約１：０．８５、約１：０．９０、約１：０．９５、または約１：１であり得る。いくつかの実施態様において、負荷工程は、タキサンの重量に対するホスファチジルコリンおよびステロールの合わせた重量の比が、約１：０．０１〜約１：１であるように行われる。ある実施態様において、タキサンの重量に対するホスファチジルコリンおよびステロールの合わせた重量の比は、約１：０．０５〜約１：０．５である。いくつかの実施態様において、タキサンの重量に対するホスファチジルコリンおよびステロールの合わせた重量の比は、約１：０．２である。負荷工程は、所望のレベルにおけるリポソーム内部へのタキサンの蓄積を可能とするのに十分ないかなる量の時間にわたって行うこともできる。

【0075】

ＰＥＧ−脂質は、リポソーム調製の種々の段階において脂質小胞に組み込むこともできる。例えば、ＰＥＧ−脂質を含有するＭＬＶは、タキサンの負荷に先立って調製することができる。別法として、ＰＥＧ−脂質は、小胞のタキサンの負荷の後に脂質二重層へ挿入することができる。ＰＥＧ−脂質は、ＳＵＶの押出しに先立ってＭＬＶに挿入することができるか、あるいはＰＥＧ−脂質は、予め形成されたＳＵＶに挿入することができる。

【0076】

従って、本発明のいくつかの実施形態は、リポソームタキサンを調製する方法を提供し、ここで、該方法は、ａ）ホスファチジルコリン脂質およびステロールを含む脂質二重層を有する第一のリポソームを形成し、ここで、該脂質二重層は水溶液を含む内部区画を封入し；ｂ）該第一のリポソームにタキサン、またはその薬学的に許容され得る塩を負荷して、負荷されたリポソームを形成し、ここで、該タキサンは、２’−Ｏ−位でヘテロシクリル−（Ｃ_２−５アルカノイル）基によってエステル化されたドセタキセルであり；ｃ）ポリ（エチレングリコール）−リン脂質コンジュゲート（ＰＥＧ−脂質）の該脂質二重層への挿入を可能とするのに十分な条件下で、該負荷されたリポソームおよび該ＰＥＧ−脂質を含有する混合物を形成することを含む。

【0077】

ある実施態様において、ＰＥＧ−脂質の挿入は、約３５〜７０℃の温度で行われる。負荷は、例えば、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、または約７０℃で行うことができる。いくつかの実施態様において、ＰＥＧ−脂質の挿入は、約５０℃〜約５５℃の温度で行われる。挿入は、任意の適切な量のＰＥＧ−脂質を用いて行うことができる。一般に、ＰＥＧ−脂質は、ＰＥＧ−脂質のモル数に対するホスファチジルコリンおよびステロールの合わせたモル数の比が約１０００：１〜約２０：１であるような量で用いられる。ＰＥＧ脂質に対する合わせたホスファチジルコリン／ステロールのモル比は、例えば、約１０００：１、約９５０：１、約９００：１、約８５０：１、約８００：１、約７５０：１、約７００：１、約６５０：１、約６００：１、約５５０：１、約５００：１、約４５０：１、約４００：１、約３５０：１、約３００：１、約２５０：１、約２００：１、約１５０：１、約１００：１、約５０：１、または約２０：１であり得る。いくつかの実施態様において、負荷工程は、ＰＥＧ−脂質に対する合わせたホスファチジルコリンおよびステロールの比が約１０００：１〜約２０：１（モル：モル）であるように行われる。いくつかの実施態様において、ＰＥＧ−脂質に対する合わせたホスファチジルコリンおよびステロールの比は、約１００：１〜約２０：１（モル：モル）である。いくつかの実施態様において、ＰＥＧ−脂質に対する合わせたホスファチジルコリンおよびステロールの比は、約３５：１（モル：モル）〜約２５：１（モル：モル）である。いくつかの実施態様において、ＰＥＧ−脂質に対する合わせたホスファチジルコリンおよびステロールの比は、約３３：１（モル）モルである。いくつかの実施態様において、ＰＥＧ−脂質に対する合わせたホスファチジルコリンおよびステロールの比は、約２７：１（モル：モル）である。

【0078】

当業者に知られた多数の追加の調製技術を本発明の方法に含めることができる。リポソームは、透析、サイズ排除クロマトグラフィー、透析濾過、および限外濾過を含めた技術によって種々の緩衝液に交換することができる。緩衝液の交換を用いて、封入されていないタキサンおよび他の不要な可溶性材料を組成物から除去することができる。水性緩衝液およびある種の有機溶媒は、凍結乾燥によってリポソームから除去することができる。いくつかの実施態様において、本発明の方法は、工程ｃ）における混合物からのリポソームタキサンを、封入されていないタキサンおよび挿入されていないＰＥＧ−脂質を実質的に含まない水溶液に交換することを含む。いくつかの実施態様において、該方法は、リポソームタキサンを凍結乾燥することを含む。

【0079】

がんを処置する方法
別の態様において、本発明は、がんを処置する方法を提供する。該方法は、上記のリポソームタキサンを含有する組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む。がんの処置のための治療的使用において、本発明のリポソーム組成物は、タキサンの初期投与量が１日当たり約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇの範囲であるように投与することができる。約０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１〜２００ｍｇ／ｋｇ、または約１〜１００ｍｇ／ｋｇ、または約１０〜５０ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ、または約５ｍｇ／ｋｇ、または約２．５ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇの日投与量を用いることができる。

【0080】

投与量は、患者の要求、処置されるがんのタイプおよび重症度、および使用されるリポソーム組成物によって変化し得る。例えば、投与量は、特定の患者において診断されたがんのタイプおよびステージを考慮して経験的に決定することができる。患者に投与される投与量は、経時的に患者における有益な治療的応答に影響を及ぼすのに十分なものとすべきである。投与量の大きさは、特定の患者における特定のリポソーム組成物の投与に伴うあらゆる有害な副作用の存在、性質、および程度によっても決定される。特定の状況のために適切な投与量の決定は、開業医の技量の範囲内のものである。一般に、処置は、リポソーム組成物の最適投与量未満であるより小さな投与量で開始される。その後、投与量を状況下での最適な効果に到達するまで、小さな増分ずつ増加させる。便宜上、毎日の投与量の合計は、所望であれば、該日の間に少量ずつに分割して投与してよい。

【0081】

本明細書に記載された方法は、特に、（血液学的悪性疾患とは反対に）器官および組織のがん、理想的には上皮がんである固形腫瘍がん（固形腫瘍）に適用される。固形腫瘍がんの例としては、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、食道がん、胃がん、頭頸部がん、肝細胞がん、肺がん、メラノーマ、神経内分泌がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がんおよび腎臓がんが挙げられる。実施態様の１つの群において、本発明の方法による処置に適した固形腫瘍がんは、ＣＲＣ、乳がんおよび前立腺がんから選択される。実施態様の別の群において、本発明の方法は、例えば、多発性骨髄腫、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病および慢性骨髄性白血病を含む血液学的悪性疾患の処置に適用される。

【0082】

該組成物は、本発明の方法において単独で、あるいは他の治療剤と組み合わせて投与してよい。追加の剤は、限定されるものではないが、アバスチン、ドキソルビシン、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、または他のタキサンを含めた抗がん剤または細胞毒性剤であり得る。追加の抗がん剤は、限定されるものではないが、２０−エピ−１，２５ ジヒドロキシビタミンＤ３，４−イポメアノール、５−エチニルウラシル、９−ジヒドロタキソール、アビラテロン、アシビシン、アクラルビシン、塩酸アコダゾール、アクロニン、アシルフルベン、アデシペノール、アドゼレシン、アルデスロイキン、全−ｔｋアンタゴニスト、アルトレタミン、アンバムスチン、アンボマイシン、酢酸アメタントロン、アミドックス、アミホスチン、アミノグルテチミド、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラフォリド、血管新生阻害剤、アンタゴニストＤ、アンタゴニストＧ、アンタレリクス、アントラマイシン、抗背側化形態形成タンパク質−１（ａｎｔｉ−ｄｏｒｓａｌｉｚｉｎｇ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ−１）、抗エストロゲン、抗ネオプラストン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、グリシン酸アフィジコリン、アポトーシス遺伝子調節剤、アポトーシス制御因子、アプリン酸、ＡＲＡ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ、アルギニンデアミナーゼ、アスパラギナーゼ、アスペルリン、アスラクリン、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナスタチン１、アキシナスタチン２、アキシナスタチン３、アザシチジン、アザセトロン、アザトキシン、アザチロシン、アゼテパ、アゾトマイシン、バッカチンＩＩＩ誘導体、バラノール、バチマスタット、ベンゾクロリン、ベンゾデパ、ベンゾイルスタウロスポリン、ベータラクタム誘導体、ベータ−アレチン、ベタクラマイシンＢ、ベツリン酸、ＢＦＧＦ阻害剤、ビカルタミド、ビサントレン、塩酸ビサントレン、ビスアジリジニルスペルミン、ビスナフィド、ジメシル酸ビスナフィド、ビストラテンＡ、ビゼレシン、ブレオマイシン、硫酸ブレオマイシン、ＢＲＣ／ＡＢＬアンタゴニスト、ブレフレート、ブレキナールナトリウム、ブロピリミン、ブドチタン、ブスルファン、ブチオニンスルホキシミン、カクチノマイシン、カルシポトリオール、カルホスチンＣ、カルステロン、カンプトテシン誘導体、カナリポックスＩＬ−２、カペシタビン、カラセミド、カルベチマー、カルボプラチン、カルボキサミド−アミノ−トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、カレストＭ３、カルムスチン、カム７００、軟骨由来阻害剤、塩酸カルビシン、カルゼレシン、カゼインキナーゼ阻害剤、カスタノスペルミン、セクロピンＢ、セデフィンゴール、セトロレリクス、クロラムブシル、クロリン、クロロキノキサリンスルホンアミド、シカプロスト、シロレマイシン、シスプラチン、シス−ポルフィリン、クラドリビン、クロミフェン類似体、クロトリマゾール、コリスマイシンＡ、コリスマイシンＢ、コンブレタスタチンＡ４、コンブレタスタチン類似体、コナゲニン、クランベスシジン８１６、クリスナトール、メシル酸クリスナトール、クリプトフィシン８、クリプトフィシンＡ誘導体、クラシンＡ、シクロペンタントラキノン（ｃｙｃｌｏｐｅｎｔａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ）、シクロホスファミド、シクロプロタム、シペマイシン、シタラビン、シタラビンオクホスファート、細胞溶解因子、サイトスタチン、ダカルバジン、ダクリキシマブ、ダクチノマイシン、塩酸ダウノルビシン、デシタビン、デヒドロジデムニンＢ、デスロレリン、デキシホスファミド、デキソルマプラチン、デクスラゾキサン、デクスベラパミル、デザグアニン、メシル酸デザグアニン、ジアジコン、ジデムニンＢ、ジドックス、ジエチルノルスペルミン、ジヒドロ−５−アザシチジン、ジオキサマイシン、ジフェニルスピロムスチン、ドセタキセル、ドコサノール、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、塩酸ドキソルビシン、ドロロキシフェン、クエン酸ドロロキシフェン、プロピオン酸ドロモスタノロン、ドロナビノール、デュアゾマイシン(ｄｕａｚｏｍｙｃｉｎ)、デュオカルマイシンＳＡ、エブセレン、エコムスチン、エダトレキセート、エデルホシン、エドレコロマブ、エフロミチン、塩酸エフロミチン、エレメン、エルサミトルシン、エミテフール、エンロプラチン、エンプロマート、エピプロピジン、エピルビシン、塩酸エピルビシン、エプリステリド、エルブロゾール、赤血球遺伝子療法ベクター系、塩酸エソルビシン、エストラムスチン、エストラムスチン類似体、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エストロゲンアゴニスト、エストロゲンアンタゴニスト、エタニダゾール、エトポシド、リン酸エトポシド、エトプリン、エキセメスタン、ファドロゾール、塩酸ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチム、フィナステリド、フラボピリドール、フレゼラスチン、フロクスウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）、フルアステロン、フルダラビン、リン酸フルダラビン、塩酸フルオロダウノルニシン（ｆｌｕｏｒｏｄａｕｎｏｒｕｎｉｃｉｎ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、フルオロウラシル、フルオロシタビン、ホルフェニメクス、フォルメスタン、フォスキドン、フォストリエシン、フォストリエシンナトリウム、フォテムスチン、ガドリニウムテキサフィリン、硝酸ガリウム、ガロシタビン、ガニレリクス、ゼラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン、塩酸ゲムシタビン、グルタチオン阻害剤、ヘプスルファム、ヘレグリン、ヘキサメチレンビスアセタミド、ヒドロキシ尿素、ヒペリシン、イバンドロン酸、イダルビシン、塩酸イダルビシン、イドキシフェン、イドラマントン、イホスファミド、イルモホシン、イロマスタット、イミダゾアクリドン、イミキモド、免疫刺激ペプチド、インスリン様成長因子−１受容体阻害剤、インターフェロンアゴニスト、インターフェロンアルファ−２Ａ、インターフェロンアルファ−２Ｂ、インターフェロンアルファ−Ｎ１、インターフェロンアルファ−Ｎ３、インターフェロンベータ−ＩＡ、インターフェロンガンマ−ＩＢ、インターフェロン、インターロイキン、イオベングアン、ヨードドキソルビシン、イプロプラチン、イリノテカン、塩酸イリノテカン、イロプラクト、イルソグラジン、イソベンガゾール、イソホモハリコンドリンＢ、イタセトロン、ジャスプラキノリド、カハラリドＦ、ラメラリン−Ｎトリアセテート、ランレオチド、酢酸ランレオチド、レイナマイシン、レノグラスチム、硫酸レンチナン、レプトルスタチン、レトロゾール、白血病阻害因子、白血球アルファインターフェロン、酢酸ロイプロリド、ロイプロリド／エストロゲン／プロゲステロン、ロイプロレリン、レバミゾール、リアロゾール、塩酸リアロゾール、線状ポリアミン類似体、親油性二糖ペプチド、親油性白金化合物、リソクリナミド７（ｌｉｓｓｏｃｌｉｎａｍｉｄｅ ７）、ロバプラチン、ロムブリシン、ロメトレキソール、ロメトレキソールナトリウム、ロムスチン、ロニダミン、ロソキサントロン、塩酸ロソキサントロン、ロバスタチン、ロキソリビン、ルルトテカン、ルテチウムテキサフィリン、リソフィリン、溶解性ペプチド、メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）、マンノスタチンＡ、マリマスタット、マソプロコール、マスピン、マトリリシン阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）、塩酸メクロレタミン、酢酸メゲストロール、酢酸メレンゲストロール、メルファラン、メノガリル、メルバロン、メルカプトプリン、メテレリン、メチオニナーゼ、メトトレキセート、メトトレキセートナトリウム、メトクロプラミド、メトプリン、メツレデパ、微細藻類プロテインキナーゼＣ阻害剤、ＭＩＦ阻害剤、ミフェプリストン、ミルテホシン、ミリモスチム、ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ、ミチンドミド、ミトカルシン（ｍｉｔｏｃａｒｃｉｎ）、ミトクロミン（ｍｉｔｏｃｒｏｍｉｎ）、ミトギリン（ｍｉｔｏｇｉｌｌｉｎ）、マイトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）、ミトラクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）、ミトマルシン（ｍｉｔｏｍａｌｃｉｎ）、マイトマイシン、マイトマイシン類似体、ミトナフィド、ミトスペル（ｍｉｔｏｓｐｅｒ）、ミトタン、マイトトキシン線維芽細胞成長因子−サポリン、ミトキサントロン、塩酸ミトキサントロン、モファロテン、モルグラモスチム、モノクローナル抗体、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン、モノホスホリル脂質ａ／ミオバクテリア細胞壁ＳＫ、モピダモール、多剤耐性遺伝子阻害剤、多発性腫瘍サプレッサー１ベースの療法、マスタード抗がん剤、ミカペルオキシドＢ、マイコバクテリア細胞壁抽出物、ミコフェノール酸、ミリアポロン、ｎ−アセチルジナリン、ナファレリン、ナグレスチップ（ｎａｇｒｅｓｔｉｐ）、ナロキソン／ペンタゾシン、ナパビン、ナフテルピン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネモルビシン、ネリドロン酸、中性エンドペプチダーゼ、ニルタミド、ニサマイシン、一酸化窒素調節剤、ニトロキシド抗酸化剤、ニトルリン、ノコダゾール、ノガラマイシン、ｎ−置換ベンズアミド、０６−ベンジルグアニン、オクトレオチド、オキセノン、オリゴヌクレオチド、オナプリストン、オンダンセトロン、オラシン、経口サイトカインインデューサ、オルマプラチン、オサテロン、オキサリプラチン、オキサウノマイシン、オキシスラン、パクリタキセル、パクリタキセル類似体、パクリタキセル誘導体、パラウアミン、パルミトイルリゾキシン、パミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン、パゼリプチン、ペグアスパルガーゼ（ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ）、ペルデシン、ペリオマイシン、ペンタムスチン、ペントサンポリ硫酸ナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール、硫酸ペプロマイシン、ペルフルブロン、ペルフォスファミド、ペリリルアルコール、フェナジノマイシン、酢酸フェニル、ホスファターゼ阻害剤、ピシバニール、塩酸ピロカルピン、ピポブロマン、ピポスルファン、ピラルビシン、ピリトレキシム、塩酸ピロキサントロン、プラセチンＡ、プラセチンＢ、プラスミノーゲンアクチベータ阻害剤、白金錯体、白金化合物、白金−トリアミン錯体、プリカマイシン、プロメスタン、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プレドニムスチン、塩酸プロカルバジン、プロピルビス−アクリドン、プロスタグランジンＪ２、前立腺癌抗アンドロゲン、プロテアソーム阻害剤、タンパク質Ａベースの免疫調節剤、プロテインキナーゼＣ阻害剤、プロテインチロシンホスファターゼ阻害剤、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、ピューロマイシン、塩酸ピューロマイシン、プルプリン、ピラゾフリン、ピラゾロアクリジン、ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート、ＲＡＦアンタゴニスト、ラルチトレキセド、ラモセトロン、ＲＡＳファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ＲＡＳ阻害剤、ＲＡＳ−ＧＡＰ阻害剤、脱メチル化レテリプチン、レニウムＲＥ１８６エチドロネート、リゾキシン、リボプリン、リボザイム、ＲＩＩレチナミド、ＲＮＡｉ、ログレチミド、ロヒツキン、ロムルチド、ロキニメクス（ｒｏｑｕｉｎｉｍｅｘ）、ルビギノンＢ１、ルボキシル、サフィンゴール、塩酸サフィンゴール、サイントピン、サルクヌ（ｓａｒｃｎｕ）、サルコフィトールＡ、サルグラモスチム、ＳＤＩ １ミメティックス、セムスチン、老化由来阻害剤１、センスオリゴヌクレオチド、シグナル伝達阻害剤、シグナル伝達調節剤、シムトラゼン、一本鎖抗原結合タンパク質、シゾフラン、ソブゾキサン、ボロカプテートナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｂｏｒｏｃａｐｔａｔｅ）、フェニル酢酸ナトリウム、ソルベロール、ソマトメジン結合タンパク質、ソネルミン、スパルホサートナトリウム、スパルホス酸、スパルソマイシン、スピカマイシンＤ、塩酸スピロゲルマニウム、スピロムスチン、スピロプラチン、スプレノペンチン、スポンギスタチン１、スクアラミン、幹細胞阻害剤、幹細胞分裂阻害剤、スチピアミド、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、
ストロメリシン阻害剤、スルフィノシン、スロフェヌル（ｓｕｌｏｆｅｎｕｒ）、超活性血管作用性腸ペプチドアンタゴニスト、スラジスタ、スラミン、スワインソニン、合成グリコサミノグリカン、タリソマイシン、タリムスチン、タモキシフェンメチオダイド、タウロムスチン、タザロテン、テコガランナトリウム、テガフール、テルラピリリウム、テロメラーゼ阻害剤、塩酸テロキサントロン、テモポルフィン、テモゾロミド、テニポシド、テロキシロン、テストラクトン、テトラクロロデカオキシド、テトラゾミン、サリブラスチン、サリドマイド、チアミプリン、チオコラリン、チオグアニン、チオテパ、トロンボポエチン、トロンボポエチンミメティック、チマルファシン、チモポエチン受容体アゴニスト、チモトリナン、甲状腺刺激ホルモン、チアゾフリン、スズエチルエチオプルプリン、チラパザミン、二塩化チタノセン、塩酸トポテカン、トプセンチン、トレミフェン、クエン酸トレミフェン、全能性幹細胞因子、翻訳阻害剤、酢酸トレストロン、トレチノイン、トリアセチルウリジン、トリシリビン、リン酸トリシリビン、トリメトトレキセート、グルクロン酸トリメトトレキセート、トリプトレリン、トロピセトロン、塩酸ツブロゾール、ツロステリド、チロシンキナーゼ阻害剤、チルフォスチン、ＵＢＣ阻害剤、ウベニメクス、ウラシルマスタード、ウレデパ、尿生殖洞由来成長阻害因子、ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト、バプレオチド、バリオリンＢ、ベラレソール、ベラミン、ベルジン、ベルテポルフィン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、ビンデシン、硫酸ビンデシン、硫酸ビネピジン、硫酸ビングリシネート、硫酸ビンロイロシン、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン、硫酸ビンロシジン、ビンキサルチン、硫酸ビンゾリジン、ビタキシン、ボロゾール、ザノテロン、ゼニプラチン、ジラスコルブ、ジノスタチン、ジノスタチンスチマラマー、または塩酸ゾルビシンを含むことができる。

【実施例】

【0083】

ＩＶ．実施例
実施例１ リポソームタキサンの調製
緩衝液および試薬の調製
３００ｍＭスクロース透析溶液の調製。１０２．６９ｇのスクロースを秤量し、１Ｌメスフラスコに加えた。該フラスコにＤＩ水を４分の３充填し、固体が溶解するまで振盪することによって混合した。ＤＩ水を室温で加えて、スクロースを所望の濃度とし、蓋をしたフラスコを繰り返し倒立させることによって混合した。溶液を真空によって０．２μｍの４７ｍｍナイロン膜を通して濾過し、２〜５℃で貯蔵した。

【0084】

３５０ｍＭ硫酸アンモニウム緩衝溶液の調製。２３．１３ｇの硫酸アンモニウムを秤量し、クラスＡの５００ｍＬメスフラスコに加えた。該フラスコにＤＩ水を４分の３充填し、固体が溶解するまで振盪することによって混合した。ＤＩ水を室温で加えて、硫酸アンモニウムを所望の濃度とし、蓋をしたフラスコを繰り返し倒立させることによって混合した。溶液を、真空によって０．２μｍの４７ｍｍナイロン膜を通して濾過し、２〜５℃で貯蔵した。

【0085】

３５０ｍＭ硫酸アンモニウム／１００ｍＭスクロース緩衝溶液の調製。３４．２４ｇのスクロースおよび４６．２４ｇの硫酸アンモニウムを秤量し、１ＬのクラスＡメスフラスコに加えた。該フラスコにＤＩ水を４分の３充填し、固体が溶解するまで振盪することによって混合した。ＤＩ水を室温で加えて、該溶液を所望の濃度とし、蓋をしたフラスコを繰り返し倒立させることによって混合した。溶液を、真空によって０．２μｍの４７ｍｍナイロン膜を通して濾過し、２〜５℃で貯蔵した。

【0086】

脂質溶媒和。ＤＳＰＣ（１．７８５ｇ）およびコレステロール（０．７１５ｇ）を清浄なガラス秤量漏斗中で秤量した。該材料を清浄な１Ｌ丸底フラスコに充填した。１５ｍＬのエタノールを、室温で、クラスＡメスピペットを用いて加えた。丸底フラスコを、６０℃でロータリーエバポレーター水浴に連結した。全ての材料が完全に溶解するまで（約３０分）、該フラスコを真空無しで該浴中で１５０ＲＰＭおよび６０℃で回転させた。脂質溶液を溶媒和後に６０℃の温度に維持した。８５ｍＬの硫酸アンモニウム／スクロースをクラスＡメスシリンダー中で測定し、パラフィルムで被覆し、水浴を用いて６０℃まで加熱した。

【0087】

リポソームの調製
１Ｌ丸底フラスコをロータリーエバポレーターから取り出した。加熱された８５ｍＬの硫酸アンモニウム／スクロースを、激しく渦を巻いている状態で、フラスコに排出した。混合物を、ロータリーエバポレーター浴上のフラスコ中で、６０℃で３０分間回転させた。次いで、フラスコを取り出し、直ちに押出しを開始した。

【0088】

押出し。４つのガラス血清瓶およびストッパーを、エタノールで３回すすぎ、ＵＨＰ窒素で乾燥することによって準備した。試料添加まで該瓶に蓋をした。１００ｍＬの押出機を１つのドレインディスクとともに組み立て、２つの０．２μｍのヌクレオポア膜を押出機の濾過ベースに加えた。７０℃に加熱したＤＩ水１００ｍＬの通過を完了することによって、押出機を浄化した。リポソーム溶液を、１Ｌフラスコから、７０℃まで加熱した押出機に排出した。リポソームを押し出し、２５０ｍＬのガラスビーカー中まで通過させた。該２００ｎｍ膜を２枚の１００ｎｍ膜で置き換え、系を清浄な２５０ｍＬのビーカーに一回パージした。押出しは、清浄なビーカーを用いて１０回繰り返した。最終のリポソーム試料を清浄化した血清瓶に回収し、蓋をし、密閉し、室温まで冷却した。リポソームを２〜５℃で貯蔵した。

【0089】

透析濾過。Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ＫｒｏｓｓＦｌｏ Ｕｎｉｔ透析濾過装置を、１００ｍｌ／分の流量および３Ｐｓｉの膜貫通圧力で、９５℃まで加熱した１Ｌの０．１Ｎ ＮａＯＨで清浄化した。５００ｍＬを溶出させた後に流れを逆とし、流れをさらに５００ｍＬにわたって継続した。試料リザーバを充填し、少なくとも３回置き換え、すすぐ前に系をパージして乾燥させた。埃および屑をイソプロパノールワイプで配管外部から清浄化した。滅菌した０．１μｍの２５ｍｍＰＶＤＦシリンジフィルターを、空気取入口濾過のためにＧＬ４５媒体瓶蓋に挿入した。系を、１００ｍＬ／分および３Ｐｓｉの膜貫通圧力で、室温で１ＬのＤＩ水ですすいだ。試料リザーバを充填し、ＤＩ水で少なくとも３回置き換えた。室温で３００ｍＭスクロースで系をパージする前に、系をパージして乾燥させた。試料リザーバを空にし、エタノールで３回、およびＤＩ水で３回すすいだ（１回のすすぎ当たり約１０ｍＬ）。押し出されたリポソーム試料を室温で試料リザーバに加えた。

【0090】

５００ｋＤａカットオフのｍＰＥＳ中空繊維モジュール、１００．０±１．０ｍＬ／分のポンプ速度、３．０±１．０ＰｓｉのＴＭＰ、−０．３≦０．０ＰｓｉのＰｐ、および５．０±１．０ＰｓｉのＰｆを用いて、透析濾過を開始した。透析濾過は、濾液の体積が残余分の体積のほぼ３０倍に到達するまで継続した。試料をリザーバから取り出し、清浄な血清瓶中に排出した。試料を０．２μｍの２５ｍｍシリンジフィルターを通して清浄な血清瓶中に濾過した。次いで、最初の３つの溶出させた液滴を処分しながら、試料を０．１μｍの２５ｍｍ滅菌無機シリンジフィルターを通して清浄な血清瓶中に濾過した。試料に蓋をし、密閉し、２〜５℃で貯蔵した。押出しに続いて、試料を、粒径、ｐＨ、脂質濃度、およびアンモニウム濃度の点において特性評価した。

【0091】

２’Ｏ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−ブタノイル−ドセタキセル（ＴＤ−１）の遠隔負荷およびＤＳＰＥ−ＰＥＧ−２０００の挿入
遠隔負荷手法。ドセタキセル誘導体ＴＤ−１（３８６ｍｇ、ＷＯ ２００９／１４１７３８ Ａ２に記載されたように調製）を、２つのゴムストッパー、温度制御熱電対用のアダプター、および撹拌棒を嵌合させた５００ｍＬの３ツ口丸底フラスコ中に秤量した。ＴＤ−１を１９０ｍＬの１０ｍＭ酢酸緩衝化スクロース溶液（ｐＨ５．５）に溶解させ、溶液のｐＨを、水酸化ナトリウム水溶液を用いて５．５〜５．６に調整した。適度に撹拌しつつ、加熱マントルを用いて、溶液を６５℃まで加熱した。

【0092】

第二の５００ｍＬの丸底フラスコに、リポソーム硫酸アンモニウム試料（１．９３２ｇの合計脂質）を加えた。リポソームを酢酸塩緩衝化スクロースで１９６ｍＬの最終体積まで希釈し、ｐＨを５．５に調整した。熱電対制御加熱マントルを用いて、混合物を６５℃まで加熱し、ＴＤ−１の溶液中に注いだ。加熱を１５分間継続し、次いで、温度を５５℃まで低下させた。リポソームの試料を大きさおよびｐＨ分析のために回収した。

【0093】

ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−２０００の挿入。ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−２０００（２９０ｍｇ）を８ｍＬの酢酸塩緩衝化スクロースに溶解させ、加熱されたリポソーム溶液に加えた。混合物を５５℃に３０分間維持した。加熱マントルを取り除き、混合物を周囲温度まで放冷した。リポソームの試料を大きさおよびｐＨ分析のために回収した。

【0094】

透析濾過。透析濾過装置は、上記の２０ｍＭ酢酸塩／３００ｍＭスクロース緩衝液で平衡化させた。２５０ｍＬのリポソーム混合物をリザーバに加え、限外濾過によって約５０ｍＬの合計体積まで濃縮した。残存するリポソーム混合物を加え、５０ｍＬまで濃縮した。限外濾液を、少なくとも１５体積の２０ｍＭ酢酸塩／３００ｍＭのスクロース、ｐＨ５．５０に対して透析濾過した。リポソームを６０ｍＬまで濃縮し、大きさおよびｐＨ分析のためにサンプリングした。試料を、ＴＤ−１、ドセタキセル、ＤＳＰＣ、コレステロール、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−２０００およびｌｙｓｏ−ＤＳＰＣの定量のために分析した。最終リポソーム調製物を、ブチルゴムストッパーおよび圧着シールを備えた透明な血清バイアル中で５℃で貯蔵した。

【0095】

上記の方法に従って調製したリポソーム調製物を、様々な条件下で貯蔵し、表１にまとめたように粒径および薬物放出の点において分析した。リポソームを非ＰＥＧ化試料と比較した。リポソームのＰＥＧ化は、貯蔵時にリポソームから漏出することが観察された薬物のレベルによって評価したところ、リポソーム完全性における予期せぬ利得をもたらした。凍結時のＰＥＧ化リポソームからのＴＤ−１の漏出は、非ＰＥＧ化リポソームに関して、ほぼ大きさの順に低減した。驚くべきことには、５℃における貯蔵時のＰＥＧ化リポソームからのＴＤ−１の漏出は、２２倍を超えて低減した。

【表1】

【0096】

実施例２ リポソームタキサン組成物へのＰＥＧ−脂質挿入の制御
熱挿入工程としてのＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）の組込みは、薬物負荷後に最もよく確立されることが判明した。ＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）の挿入のための温度および時間の注意深い制御は、適切なＰＥＧ化を提供することが判明し、種々のロットからの詳細を表３に記載する。全ての場合において、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの最終滅菌は、全ての入ってくる原料を注意深く制御して、０．２ミクロンフィルターを通す濾過によって行った。

【0097】

空のリポソームを、ＴＤ−１での負荷およびＰＥＧの挿入のために上記のように調製して、最終のＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームを形成した。以下の表は、生じた材料のロットおよび用いたＰＥＧ挿入条件についての種々のパラメータを比較する。

【表2】

【表3】

【表4】

【0098】

上記の７ロットについてのプロセスパラメータにおける主要な有意な変動が、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）の薬物負荷リポソームへの組込みの間に起こった。表３および表４に示されるように、ＰＥＧ化は、挿入に用いられた温度および時間によって決まった。より低い温度（例えば、５０℃）またはより短い時間（例えば、３０分の保持時間）は、薬物生成物におけるより低いＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）をもたらし（例えば、ロット２では２８．２％のＰＥＧ組込みおよびロット３では４５．３％のＰＥＧ組込み）、他方、高温（例えば、６２℃）は、薬物物質の封入（４５．８％）を犠牲にしてより高いＰＥＧ組込み（８０．５％）を提供し、これにより薬物生成物におけるより低い薬物対脂質比がもたらされる。６０分間での５５℃までの加熱は、薬物負荷およびＰＥＧ組込み（各々、表に記載された最終の４バッチについて６５〜８７％および６８〜９０％）の両方の良好な収率を提供することが示された。

【0099】

実施例３ リポソームタキサン誘導体の生体内分布、比較の結果
２つの薬物動態および組織分布の研究を、腫瘍を持つマウスにおいて完了し、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームをドセタキセルと比較する。

【0100】

ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの静脈内投与の結果、遊離薬物として注射された同等の量のドセタキセルよりも１０倍大きなドセタキセルへの全身曝露がもたらされた。ＴＤ−１およびドセタキセルの両方が、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの静脈内注射後にＰＣ３およびＡ５４９腫瘍の両方に蓄積した。ＴＤ−１およびドセタキセルの濃度は、投与後７２時間までゆっくりと増加し、観察期間（２１日まで）全体を通じて腫瘍中に留まった。対照的に、ドセタキセルの静脈内注射の結果、最初は腫瘍における高い濃度がもたらされたが、これは７日間の期間にわたって減少し、次いで、検出レベル未満に降下した。

【0101】

腫瘍組織中への蓄積へ加えて、ＴＤ−１およびドセタキセルは、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの投与後に肝臓、脾臓および腎臓にも蓄積した。これらの組織は、遅い組込みおよび安定な持続する滞留時間を伴う腫瘍と同様な生体内分布パターンを示した。対照的に、遊離ドセタキセルは、これらの組織に集まらず、注射から２４時間以内に検出レベル未満まで降下した。ドセタキセルの濃度は２４時間を通じて肺組織において検出可能であったが、分析測定は、骨格筋組織におけるドセタキセルの存在を検出しなかった。

【0102】

高投与量のＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（１４４ｍｇ／ｋｇ）における腫瘍中のＴＤ−１およびドセタキセル濃度の遅れた増加は、より低い投与量において、または他の組織において見出された挙動と合致せず、大きさが顕著に収縮した腫瘍における長い薬物曝露に起因する計算上の誤った結果であり得る。

【0103】

非ＰＥＧ化およびＰＥＧ化リポソームの両方におけるＴＤ−１の封入は、より低いピーク血漿中濃度（Ｃ_ｍａｘ）を生じさせる一方で、非封入ＴＤ−１およびドセタキセルの両方と比較して、ドセタキセルへの全身曝露（ＡＵＣ）を増加させた。

【0104】

マウスにおける薬物動態調査は、より低いピーク血中レベルで、腫瘍内での活性な薬物ドセタキセルへのより大きくかつより持続した曝露の点で利点を実証する。これは、増大した毒性なしに、ヒト患者における増強された抗腫瘍活性の可能性を示唆する。

【0105】

方法
設計 血漿中薬物動態および分布を、各々、ＰＣ３細胞（ヒト前立腺がん）を皮下移植した雄無胸腺ヌードマウスで研究した。一旦腫瘍が１００〜３００ｍｍ^３の体積に到達したところで、動物を５つの群に無作為に分けた。各動物には、表５に示されるように、単一の静脈内投与量のドセタキセル、封入されていないＴＤ−１、非ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム、またはＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームが与えられた。

【表5】

【0106】

３匹の動物を注射後５分、および１、４、２４、４８、７２、１２０および１６８時間で殺した。血液試料を、各時点において薬物動態分析のために採取した。ＴＤ−１およびドセタキセルの薬物動態パラメータを、非区画分析モデリングによって、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎＬｉｎソフトウエアを用いて計算した。

【0107】

結果
ＴＤ−１の血漿中濃度は、図１Ａに示されるように、経時的に減少した。どの形態の封入薬物と比較しても、封入されていないＴＤ−１は、低い全身曝露（ＡＵＣ）、迅速なクリアランスおよび大体積の分布を示した（表６）。

【表6】

【0108】

ＴＤ−１の投与量は、リポソーム製剤（ＴＤ−１リポソームおよびＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム）についてより高かったが、１１から３０ｍｇ／ｋｇへの投与量の増加の結果、封入ＴＤ−１についての全身曝露の３６００〜４９００倍の増加がもたらされた。加えて、ＴＤ−１の封入はクリアランスを示し、非封入製剤と比較して分布の体積を制限した。これらのデータは、ＴＤ−１のリポソーム形態が長時間にわたって血漿中に残ることを示す。３０から６０ｍｇ／ｋｇへのＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム投与量の増加は、Ｃ_ｍａｘおよびＴＤ−１に対する全身曝露を増加させたが、クリアランス、最終の半減期または分布の体積を改変しなかった。

【0109】

ドセタキセルの血漿中濃度は、経時的に減少した（図１Ｂ）。酸性または保護された条件（封入）下では安定であるが、ＴＤ−１は、中性のｐＨおよび非保護条件下では容易に加水分解して、ドセタキセルを形成する。非封入ＴＤ−１およびドセタキセルは、同様なドセタキセル濃度−時間曲線を呈し、濃度は４８時間後に検出レベル未満まで降下した。封入ＴＤ−１の投与後に、ドセタキセル濃度もまた降下したが、減少の速度は遊離薬物と比較して遅くなった。ドセタキセルの定量可能な濃度は、各々、３０および６０ｍｇ／ｋｇの後に、１２０および１６８時間にわたって生じた。

【0110】

遊離薬物として、ドセタキセルおよびＴＤ−１は、ＴＤ−１リポソームおよびＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームと比較して、比較的小さな全身曝露、迅速なクリアランス、および大体積の分布の薬物動態パラメータを有する血漿中ドセタキセル濃度を生じた（表７）。

【表7】

【0111】

ドセタキセルおよび非封入ＴＤ−１の両方は、同様な血漿中ドセタキセル濃度を呈し、これは、ＴＤ−１のドセタキセルへの変換に合致する。より遅いクリアランスは半減期を増加させ、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームによって提供されたドセタキセルの増大した全身曝露は、封入ＴＤ−１が、リポソームからの継続的放出およびドセタキセルへの変換のためのリザーバとして働くことを示す。

【0112】

Ａ５４９異種移植片を持つマウスにおける薬物動態
血漿薬物動態および分布を、各々、Ａ５４９細胞（ヒト非小細胞肺がん）を皮下移植した雌無胸腺ヌードマウスにおいて研究した。一旦腫瘍が１００〜３００ｍｍ^３の体積に到達したところで、動物を４つの群に無作為に分けた。各動物には、表８に示されるように、単一の静脈内投与量のドセタキセルまたはＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームを与えた。

【表8】

【0113】

３匹の動物を、注射後１、４、２４、７２（３日）、１６８（７日）、２１６（９日）、３３６（１４日）、４３２（１８日）および５０４時間（２１日）で殺した。血液試料を、各時点において薬物動態分析のために採取した。ＴＤ−１およびドセタキセルの薬物動態パラメータを、非区画分析モデリングによって、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎＬｉｎソフトウエアを用いて計算した。

【0114】

ＴＤ−１の血漿中濃度は、図２に示されるように、経時的に減少した。４０ｍｇ／ｋｇの投与量においては、ＴＤ−１の濃度は、リポソーム投与後１６８時間にわたって定量の限界（０．０２５μｇ／ｍＬ）を超えたままであった；他方、１４４ｍｇ／ｋｇの投薬の後に、ＴＤ−１は、リポソーム投与後の全３週間の観察期間にわたって検出された。Ｃ_ｍａｘおよびＴＤ−１への全身曝露（血漿中ＡＵＣ）は、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの投与量の増加に伴って増加した（表９）。

【表9】

【0115】

ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの静脈内注射後に、ドセタキセルの血漿中濃度は経時的にゆっくりと減少し、各々、４０および１４４ｍｇ／ｋｇの投薬後３および７日にわたって検出の限界を超えたままであった。対照的に、遊離薬物として投与されたドセタキセルは、４時間にわたってのみ検出可能であった。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（４０ｍｇ／ｋｇ）は、ドセタキセル（５０ｍｇ／ｋｇ）それ自体の投与からの濃度と同様なＣ_ｍａｘドセタキセル濃度を呈したが、曝露はＡＵＣの点において、ほぼ１０倍大きかった（表１０）。

【表10】

【0116】

ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームに由来するドセタキセルは、遊離薬物として投与されたドセタキセルと比較して、より小体積の分布に制限されているようであった。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームから生じたドセタキセルの血漿中濃度は、投与後３日間にわたって、血液中で測定されたＴＤ−１の濃度のほぼ１％であった。

【0117】

ＰＣ３異種移植片を持つマウスにおける組織分布
上記の血漿中レベルおよび薬物動態計算に加えて、組織分布も評価した。表５に記載された各動物から採取され、かつ分析前に凍結された組織は：腫瘍、肝臓、脾臓、および腎臓を含むものであった。ドセタキセルで処置されたマウスからの組織を、ドセタキセルレベルについて分析した。ＴＤ−１、ＴＤ−１リポソームおよびＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームで処置されたマウスからの組織を、ドセタキセルおよびＴＤ−１レベルの両方について分析した。

【0118】

リポソーム製剤では、ＴＤ−１の濃度は、最初は、ＰＣ３腫瘍組織において増加し、その後、該濃度は１６８時間の観察期間にわたってかなり一定に留まった（図３Ａ）。対照的に、非封入ＴＤ−１の投与後におけるＴＤ−１の腫瘍濃度は、ほぼ２４時間にわたって濃度が降下し、観察期間の残りにわたって非常に低い濃度に留まった。

【0119】

腫瘍中のドセタキセルの濃度は、ＴＤ−１リポソームおよびＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの投与後４８〜７２時間にわたってゆっくりと増加し、次いで、観察期間の残りにわたって比較的安定なままであった（図３Ｂ）。非封入ＴＤ−１の投与後、ドセタキセルの腫瘍濃度は迅速に増加し、観察期間にわたって上昇したままであった。遊離薬物としてのドセタキセルの投与の結果、腫瘍中のドセタキセルの高い濃度の迅速な開始がもたらされた。封入投与量のほぼ２／３で投与したが、遊離ドセタキセルの投与の結果、封入製剤よりもより高くより早い濃度、および注射後１２０および１６８時間における同様な濃度がもたらされた。

【0120】

ドセタキセル、非封入ＴＤ−１、非ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームおよびＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの投与の後、肝臓、脾臓および腎臓は、ドセタキセルおよびＴＤ−１の両方を含有した（表１１）。脾臓は、全ての試験した製剤について、肝臓および腎臓よりもドセタキセルに対するより大きな曝露（ＡＵＣ）を有する傾向があった。肝臓、脾臓、および腎臓は、非ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームと比較して、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの投与後に、ドセタキセルに対するより少ない曝露を有した。データは、クリアランスの器官によるＰＥＧ化リポソームのより少ない取込みと合致する。

【表11】

【0121】

Ａ５４９異種移植片を持つマウスにおける組織分布
血漿中レベルおよび薬物動態計算に加えて、組織分布の評価を、（表８におけるように）ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの投与後に、Ａ５４９ヒトＮＳＣＬＣ腫瘍を持つマウスで行った。ＴＤ−１は、長期間にわたって、Ａ５４９腫瘍に蓄積した（図４Ａ）。ＴＤ−１の濃度は、注射後の最初の２４時間にわたってゆっくりと増加した。２４時間後に、ＴＤ−１の濃度は、低投与量では経時的に下方に移行する傾向があった。高い投与量では、濃度は、投与後ほぼ１４日にわたって幾分安定なままであり、次いで、増加する傾向があったが、変動も増加した。ＴＤ−１の濃度は、２１日の観測期間にわたって、定量の下限（２．０μｇ／ｇ）を超えたままであった。

【0122】

封入されていないＴＤ−１の投与と同様に、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの投与の結果、低投与量（４０ｍｇ／ｋｇ）について最初の７日間にわたって、および高投与量（１４４ｍｇ／ｋｇ）について９日間にわたって、Ａ５４９腫瘍におけるドセタキセルの濃度の増加がもたらされた。最初のピーク後に、ドセタキセル濃度はわずかに減少し、次いで、低投与量の後の２１日間の観察期間の残りにわたって安定なままであった（図４Ｂ）。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの高用量の後、ドセタキセルの濃度は、わずかに減少し、投与から１８および２１日後に再度増加した。対照的に、ドセタキセルの静脈内注射は、注射直後にピークとなり、次いで、経時的に減少し、９日後、定量レベル（１．０μｇ／ｇ）未満に降下した。

【0123】

同等の投与量において、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（４０ｍｇ／ｋｇ）は、ドセタキセル（５０ｍｇ／ｋｇ）それ自体の投与よりも３．９倍大きなドセタキセルの腫瘍曝露（ＡＵＣ）を呈した（表１２）。

【表12】

【0124】

腫瘍において、（封入されていないＴＤ−１の投与後のドセタキセルのレベルのパーセントとして表した）ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの投与後のドセタキセルレベルは、特に、より低い投与量において３〜７日後に増加し、レベルは２１日後に５５％に到達した。比率は、他の組織において概ね安定であり、肝臓および脾臓における１〜２％程度から腎臓における３〜５％までの範囲であった。

【0125】

肝臓、脾臓、腎臓、肺および骨格筋組織におけるＴＤ−１のレベルは、２つのカテゴリーに該当するようであったた（図５）。肝臓、脾臓および腎臓は、腫瘍と同様のパターンを示し、最初の７２時間にわたって取込みは遅く、濃度は３週間の期間の残りにわたってゆっくりと減少した。肺および骨格筋組織は、注射直後に最高の濃度を含有し、これは、各々、ほぼ７２および２４時間後に検出レベルに近い濃度まで減少した。

【0126】

ほぼ９日後に、骨格筋組織におけるＴＤ−１濃度は、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの４０ｍｇ／ｋｇ投与量についての定量レベル未満まで降下した。ＴＤ−１についての取込みおよび分布の同様なパターンが、１４４ｍｇ／ｋｇの投与量でのＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの投与後に起こった。高投与量のＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの後に、肺および骨格筋組織は、観察期間を通じて測定可能な濃度のＴＤ−１を保持したが、濃度は、特に、１６８〜５０４時間のプラトー期間にわたって、腫瘍、肝臓、脾臓および腎臓で見出された濃度よりも低い傾向があった。ＴＤ−１の定量の限界は、肝臓、腎臓、脾臓および肺については０．５μｇ／ｇであり、骨格筋については２．０μｇ／ｇであった。

【0127】

ＴＤ−１に関しては、取込みおよび排除パターンは、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームに由来するドセタキセルについての２つのカテゴリーに該当した（図６）。４０または１４４ｍｇ／ｋｇの投与量でのＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームは、骨格筋組織において定量可能な量のドセタキセルを生じなかった。ドセタキセルについての定量の限界は、肝臓、腎臓、脾臓および肺については０．５μｇ／ｇであり、骨格筋については１．０μｇ／ｇであった。ドセタキセル（５０ｍｇ／ｋｇ）の投与は、短い期間の間だけ組織に分布した。ドセタキセルの濃度は、２１６時間（９日）にわたって測定可能なレベルのドセタキセルを保持した腫瘍を除いて、組織のほとんどについて２４時間後に定量の限界未満まで降下した。

【0128】

実施例４ イン・ビボ腫瘍モデル、比較の結果
一連の研究を完了し、免疫不全マウスに移植された種々の腫瘍細胞系に対する活性を調べ、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの活性をドセタキセルと比較した。研究は大まかには同様の設計のものであった。腫瘍細胞系をヌード（免疫不全）マウスの脇腹に皮下移植し、一定の大きさまで成長させた。腫瘍が成長しなかったマウスは除いた。マウスを、生理食塩水（対照、全ての研究で含めた）またはドセタキセルまたはＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームのいずれかを受けるように割り当て、ゆっくりとしたボーラス静脈内注射によって設計された処置を投与した。それぞれの場合において、可能な場合、投与量は、同等のレベルの毒性／耐性を提供するものとして選択した。ＴＤ−１の最高投与量は、通常、投与できる体積によって制限された。腫瘍の体積を分析して、腫瘍の成長の遅延（ＴＧＤ）および部分的退行を決定した。マウスが最初の体重から２０％減少するか、または瀕死の状態になった場合、あるいはマウスの腫瘍体積が２５００ｍｍ^３を超え、または腫瘍が潰瘍となった場合、マウスを研究から取り除いた。マウスの最初のコーホートの半分未満が残っていれば、その群は、グラフ化せず、あるいはさらなる腫瘍の分析に含めなかった。しかしながら、全ての残存する動物を、生存中観察期間の完了まで追跡し、生存分析に含めた。これらの研究の様々な特徴を表１３にまとめる。

【表13】

【0129】

全ての研究は、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームが、これらの異種移植片モデルにおいて活性な抗腫瘍剤として作用し、比較的許容される投与量のドセタキセルと比較して、有意により大きな抗腫瘍活性を保有することを示す。

【0130】

Ａ２５３頭頸部癌モデルでの研究からのデータは、生理食塩水対照またはドセタキセルと比較して、９０ｍｇ／ｋｇのＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの投与の結果、腫瘍体積の有意な（ｐ＜０．０５）減少がもたらされ、腫瘍の成長が８１％だけ阻害され、腫瘍の成長の遅延が１７日だけ増加したことを示す（表１４）。対照またはドセタキセルと比較して、生存の有意な（ｐ＜０．０５）増加があった。ドセタキセルは、Ａ２５３腫瘍体積を有意に減少させることや、マウスにおける生存を延長することはなかった。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの抗腫瘍応答は、毒性が観察されることなく起こった。全ての動物は、明らかな毒性（体重減少）なしに８０日の投与後観察期間に耐え、実験の間に観察された決定的に処置に関連した死亡はなかった。腫瘍の成長および生存に対する効果を図７に示す。

【表14】

【0131】

Ａ５４９非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）モデルでの研究からのデータは、生理食塩水対照またはドセタキセルと比較して、９０ｍｇ／ｋｇのＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの投与の結果、腫瘍体積の有意な減少がもたらされ（ｐ＜０．０５）、腫瘍成長が８９％だけ阻害され（腫瘍成長阻害、ＴＧＩ、％）、動物の４０％において部分的な腫瘍退行が引き起こされた（表１５）。対照的に、ドセタキセルの投与は、Ａ５４９腫瘍体積を有意に減少させることや、マウスにおける生存を延長することはなかった。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの抗腫瘍応答は、毒性が観察されることなく起こった。全ての動物は、明らかな毒性（体重減少）なしに８０日の投与後観察期間に耐え、実験の間に観察された決定的に処置に関連した死亡はなかった。腫瘍成長および生存に対する効果を図８に示す。

【表15】

【0132】

同様の結果が、２１日おいて与えた２回の投与量の後で同じＮＳＣＬＣモデルで得られた。６０または９０ｍｇ／ｋｇのＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの投与の結果、１８または２７ｍｇ／ｋｇのドセタキセル、または生理食塩水で処置したマウスと比較して、有意に小さな腫瘍体積がもたらされた。１８および２７ｍｇ／ｋｇのドセタキセルもまた腫瘍成長を阻害したが、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームは、ＴＧＤ（腫瘍成長遅延）および部分的な腫瘍退行パラメータによって決定したところ、より大きな抗腫瘍効果を呈した（表１６）。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームは、生理食塩水と比較して、評価した各投与量において生存を増加させ、６０および９０ｍｇ／ｋｇ投与量レベルの両方が、全ての投与量のドセタキセルと比較して、メジアン生存を増加させた。腫瘍成長に対する効果を図９に示す。

【表16】

【0133】

ＰＣ３前立腺腫瘍モデルでの研究からのデータは、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームが、等毒性投与量で与えられた場合に、ドセタキセルよりも大きな抗腫瘍活性を保有することを示す。単回投与量のＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（１９、３８、または５７ｍｇ／ｋｇ）は、生理食塩水で処置したマウスと比較して、腫瘍体積の有意な（ｐ＜０．０５）減少を引き起こした。１８および２７ｍｇ／ｋｇのドセタキセルもまた腫瘍成長を阻害したが、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームは、ＴＧＤおよび部分的腫瘍退行によって決定したところ、より大きな抗腫瘍効果を呈した（表１７）。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームは、評価した各投与量において有意に（ｐ＜０．０５）生存を増加させ、５７ｍｇ／ｋｇのＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームは、全ての投与量のドセタキセルよりも有意に（ｐ＜０．０５）大きく生存を増加させた。注目すべきことには、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームは、非ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームよりも大きな腫瘍体積阻害を示した。１９ｍｇ／ｋｇのＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームでの処置は、等毒性投与量のドセタキセル（９ｍｇ／ｋｇ）およびＴＤ−１リポソーム（３０ｍｇ／ｋｇ）よりも有意に小さな腫瘍を引き起こした。＊、ｐ＜０．０５。腫瘍成長および生存に対する効果を図１０に示す。

【表17】

【0134】

ＭＤＡ−ＭＢ−４３５／ＰＴＫ７ヒト乳房異種移植片での研究からのデータは、単回投与量のＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（３０、６０、または９０ｍｇ／ｋｇ）の投与の結果、生理食塩水と比較して、より小さなメジアン腫瘍体積がもたらされたことを示す。１８および２７ｍｇ／ｋｇのドセタキセルもまた腫瘍成長を阻害したが、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームは、ＴＧＤ、％ＴＧＩ、および部分的腫瘍退行パラメータによって決定したところ、より大きな抗腫瘍効果を呈した（表１８）。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームは、評価した各投与量において生存を増加させ、６０および９０ｍｇ／ｋｇのＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームの両方が、全ての投与量のドセタキセルと比較して生存を増加させた。腫瘍成長および生存に対する効果を図１１に示す。

【表18】

【0135】

ＨＴ１０８０／ＰＴＫ７ヒト線維肉腫腫瘍に対して試験した場合、単回投与量のＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（３０、６０、または９０ｍｇ／ｋｇ）の投与の結果、生理食塩水で処置したマウスと比較して、腫瘍体積の有意な（ｐ＜０．０５）減少がもたらされた。ドセタキセル（２７ｍｇ／ｋｇ）もまた腫瘍成長を阻害したが、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームは、ＴＧＩ、ＴＧＤおよび部分的腫瘍退行パラメータによって決定したところ、より大きな抗腫瘍効果を呈した（表１９）。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームは、評価した各投与量において有意に（ｐ＜０．０５）生存を増加させ、生理食塩水の２〜３倍、メジアン生存を増加させた。対照的に、ドセタキセルは生存を有意に増加させなかった。腫瘍成長および生存に対する効果を図１２に示す。

【表19】

【0136】

Ａ４３１ヒト類表皮腫瘍異種移植片での研究からのデータは、単回投与量のＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（６０または９０ｍｇ／ｋｇ）の投与の結果、生理食塩水で処置した動物と比較して、腫瘍体積の有意な（ｐ＜０．０５）減少がもたらされたことを示す。２０および３０ｍｇ／ｋｇのドセタキセルもまた腫瘍成長を阻害したが、ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソームは、ＴＧＤおよび部分的腫瘍退行によって決定したところ、より大きな抗腫瘍効果を呈した（表２０）。ＰＥＧ化ＴＤ−１リポソーム（３０、６０、または９０ｍｇ／ｋｇ）の各処置は、生理食塩水および全ての投与量レベルのドセタキセルよりも有意に（ｐ＜０．０５）大きく生存を増加させた。腫瘍成長および生存に対する効果を図１３に示す。

【表20】

【0137】

脂質組成物分析の結果：
記載された遠隔負荷技術によるリポソームＴＤ−１（ＭＰ−３５２８）の調製を、一連の脂質組成物について評価してきた。これらの組成物は、ＴＤ−１の有意な喪失または加水分解なしにＤＳＰＥ−ＰＥＧの挿入を可能としつつ、封入ＴＤ−１を供給する広範囲な製剤を評価するために選択された。これらの製剤の調製のための方法論は以下のようにまとめることができる：
１）封入された硫酸アンモニウムを含有する小胞の調製
ａ．脂質をアルコール（ＥｔＯＨに溶解させ、これを、次いで、硫酸アンモニウムの水溶液に加えた。
ｂ．得られた小胞を押し出して、よく規定された粒径を得た。
ｃ．透析濾過を行って、封入されていない硫酸アンモニウムを除去した。
２）ＭＰ−３５２８の硫酸アンモニウム小胞への遠隔負荷
３）遠隔負荷されたＭＰ−３５２８を含有する小胞へのＤＳＰＥ−ＰＥＧの挿入
４）ヒスチジン／食塩水緩衝液に対する透析濾過

【0138】

この研究のために選択した脂質は：ジ−アルキル−グリセロ−ホスファチジルコリンの鎖長の差（Ｃ１４−Ｃ１８）、ジ−アルキル−グリセロ−ホスファチジルコリンの脂肪酸における不飽和、混合物中のモル％コレステロールについての変動、およびＤＳＰＥ−ＰＥＧにおけるＰＥＧの鎖長を含めた、種々の特徴を含むものであった。

【0139】

ＴＤ−１（ＭＰ−３５２８）のリポソーム製剤の調製の成功は、以下によって判定した：
１）薬物対全脂質比よって測定されたＭＰ−３５２８の封入。より高い値は、小胞への遠隔負荷のより高いレベルを示す（０．１未満の値は、最適未満の遠隔負荷、またはＤＳＰＥ−ＰＥＧ挿入工程の間における薬物の喪失のいずれかを示す）。
２）製剤から放出されたＭＰ−３５２８の％（％遊離）。％遊離のより高い値は、薬物の滞留が乏しいことを示唆する（＞２５％）。
３）ドセタキセルの％。低い値は、プロドラッグの有意な加水分解（＞５％）なしに調製が成功したことを示す。
４）加工の間における小胞完全性の示度としての小胞の粒径（１２０ｎｍよりも大きな粒径は、加工の間における許容できない変化を示唆する）
５）ＤＳＰＥ−ＰＥＧの、ＭＰ−３５２８の遠隔負荷後における小胞への組込み（低値＜１モル％は乏しい組込みを示す）

【0140】

図１４は、評価された組成物の表を提供する。

【0141】

結果：
約４５％（モル）以上のコレステロールを含有する調製された全ての製剤は、結果として、上記基準を満足する組成物をもたらした（実施例１、２、５、６、７、８、１０）。混合された不飽和、飽和ＰＣ（ＳＯＰＣおよびＰＯＰＣ）は、％遊離薬物に関して許容され得る結果（実施例１１〜１３）を与え、負電荷を持つＤＳＰＧを含有するもの（実施例１６）も同様であった。

【0142】

２５％（モル）のコレステロールレベルで調べた全ての製剤は、上記基準の少なくとも１つを満たさない組成物を与えた（実施例３、１８および２１）。一般に、これらの製剤は、不十分な薬物組込み（実施例１８および２１）または「遊離」であった薬物の％（実施例３）によって影響され、いくつかの場合においては、ＤＳＰＥ−ＰＥＧの組込みがほとんど〜全く無かった（実施例１８および２１）。

【0143】

中間的なコレステロールレベル（３５％モル）は、＞Ｃ１６の鎖長を含有するＰＣで許容され得る組成物を与え、ここで、両方の鎖は飽和または不飽和のいずれかであった（実施例４、９、１４）。いくつかの実施例において、ＰＯＰＣ、ＳＯＰＣ、ＤＰＰＣおよびＤＭＰＣは許容され得る組成物を生じなかった（実施例１５、１７、１９および２０）。ＰＯＰＣおよびＳＯＰＣの実施例（１５および１７）は、許容され得ないレベルの「遊離」薬物を有し、他方、ＤＰＰＣおよびＤＭＰＣの実施例（１９および２０）は、適切な量の薬物を含有しなかった。

【0144】

ＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）またはＤＳＰＥ−ＰＥＧ（５０００）のいずれかの使用は、許容され得ることが示された（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ（５０００）については、実施例８）。

【0145】

ここまで、明瞭性および理解の目的で、説明および例によって幾分詳細に記載してきたが、当業者であれば、ある種の変形および変更を添付の特許請求の範囲内で実施することができることを十分に理解するはずである。加えて、本明細書中で提供された各文献は、あたかも各文献が引用により個々に組み込まれるのと同等な程度に、引用によりその全体が組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14A】

【図14B】

【図14C】