特許 6334537 グルカゴン類似体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6334537

(24)【登録日】2018年5月11日

(45)【発行日】2018年5月30日

(54)【発明の名称】グルカゴン類似体

(51)【国際特許分類】

   C07K 14/00 20060101AFI20180521BHJP

   C12P 21/02 20060101ALI20180521BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20180521BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20180521BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20180521BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20180521BHJP

   A61P 9/12 20060101ALI20180521BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20180521BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20180521BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20180521BHJP

   A61K 31/64 20060101ALI20180521BHJP

   A61K 31/155 20060101ALI20180521BHJP

   A61K 31/455 20060101ALI20180521BHJP

   A61P 7/10 20060101ALI20180521BHJP

   C07K 14/605 20060101ALN20180521BHJP

   C12N 15/09 20060101ALN20180521BHJP

   C12N 1/15 20060101ALN20180521BHJP

   C12N 1/19 20060101ALN20180521BHJP

   C12N 1/21 20060101ALN20180521BHJP

   C12N 5/10 20060101ALN20180521BHJP

【ＦＩ】

   C07K14/00ZNA

   C12P21/02 C

   A61K38/16

   A61P3/04

   A61P3/06

   A61P3/10

   A61P9/12

   A61P9/10

   A61P9/10 101

   A61P9/00

   A61K45/00

   A61K31/64

   A61K31/155

   A61K31/455

   A61P7/10

   !C07K14/605

   !C12N15/00 A

   !C12N1/15

   !C12N1/19

   !C12N1/21

   !C12N5/10

【請求項の数】14

【全頁数】39

(21)【出願番号】特願2015-531601(P2015-531601)

(86)(22)【出願日】2013年9月17日

(65)【公表番号】特表2015-533803(P2015-533803A)

(43)【公表日】2015年11月26日

(86)【国際出願番号】EP2013069286

(87)【国際公開番号】WO2014041195

(87)【国際公開日】20140320

【審査請求日】2016年9月6日

(31)【優先権主張番号】12184744.6

(32)【優先日】2012年9月17日

(33)【優先権主張国】EP

(31)【優先権主張番号】61/701,952

(32)【優先日】2012年9月17日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/784,294

(32)【優先日】2013年3月14日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】502453045

【氏名又は名称】ジーランド ファーマ アクティーゼルスカブ

(73)【特許権者】

【識別番号】503385923

【氏名又は名称】ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100077517

【弁理士】

【氏名又は名称】石田 敬

(74)【代理人】

【識別番号】100087871

【弁理士】

【氏名又は名称】福本 積

(74)【代理人】

【識別番号】100087413

【弁理士】

【氏名又は名称】古賀 哲次

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100196977

【弁理士】

【氏名又は名称】上原 路子

(72)【発明者】

【氏名】ヤコブ リンド トルボルウ

(72)【発明者】

【氏名】ケルド フォスゲラウ

(72)【発明者】

【氏名】ピア ネーレゴルド

(72)【発明者】

【氏名】ラスムス ユスト

(72)【発明者】

【氏名】デイッテ リベル

(72)【発明者】

【氏名】ディーター ボルフガング ハンプレヒト

(72)【発明者】

【氏名】ロベルト アウグスティーン

(72)【発明者】

【氏名】レオ トーマス

(72)【発明者】

【氏名】ボルフガング リスト

【審査官】 高山 敏充

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１１／００６４９７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１０／０７０２５１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１１／０８８８３７（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｋ

Ｃ１２Ｎ １５／００−１５／９０

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＰｕｂＭｅｄ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式：
Ｒ¹−Ｘ−Ｒ²
［式中、
Ｒ¹は、Ｈ（水素）、Ｃ_1-4アルキル、アセチル、ホルミル、ベンゾイル、又はトリフルオロアセチルであり；
Ｒ²は、ＯＨ又はＮＨ₂であり；かつ、
Ｘは、配列：
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＬＲＡ
からなるペプチドである］を有する化合物；
又は、その医薬的に許容し得る塩又は溶媒和物。

【請求項2】

式：
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＬＲＡ−ＮＨ₂（化合物７）
を有する、請求項１に記載の化合物、
又は、その医薬的に許容し得る塩又は溶媒和物。

【請求項3】

請求項２に記載の化合物を担体との混合物中に含む、組成物。

【請求項4】

前記組成物が医薬組成物であり、前記担体が医薬的に許容し得る担体である、請求項３に記載の組成物。

【請求項5】

医学的治療法で使用される、請求項１又は２に記載の化合物。

【請求項6】

体重増加を防止するか又は体重減少を促進することが必要な個体において、体重増加を防止するか又は体重減少を促進するための医薬の製造における請求項１又は２に記載の化合物の使用。

【請求項7】

循環ＬＤＬレベルを低下させ、及び／又はＨＤＬ／ＬＤＬ比を上昇させることが必要な個体において、循環ＬＤＬレベルを低下させ、及び／又はＨＤＬ／ＬＤＬ比を上昇させるための医薬の製造における請求項１又は２に記載の化合物の使用。

【請求項8】

体重過多により引き起こされるか又はこれを特徴とする症状の治療のための医薬の製造における、請求項１又は２に記載の化合物の使用。

【請求項9】

肥満、病的肥満、手術前の病的肥満、肥満に関連する炎症、肥満に関連する胆嚢疾患、肥満誘発性睡眠時無呼吸、糖尿病、メタボリック症候群、高血圧、アテローム性脂質異常症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、冠動脈性心疾患、末梢動脈疾患、脳卒中又は微小血管疾患の予防又は治療のための医薬の製造における、請求項１又は２に記載の化合物の使用。

【請求項10】

前記医薬は、糖尿病、肥満、脂質異常症、又は高血圧症の治療のための薬剤との併用療法の一部として投与するためのものである、請求項６〜９のいずれか１項に記載の使用。

【請求項11】

糖尿病の治療のための前記薬剤が、ビグアニド（例えば、メトホルミン）、スルホニル尿素、メグリチニド又はグリニド（例えばナテグリニド）、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、グリタゾン、異なるＧＬＰ−１アゴニスト、インスリン又はインスリン類似体である、請求項１０に記載の使用。

【請求項12】

肥満の治療のための前記薬剤が、グルカゴン様ペプチド受容体１アゴニスト、ペプチドＹＹアゴニスト又はその類似体、カンナビノイド受容体１アンタゴニスト、リパーゼ阻害剤、メラノコルチン受容体４アゴニスト、又はメラニン凝集ホルモン受容体１アンタゴニストである、請求項１０に記載の使用。

【請求項13】

高血圧の治療のための前記薬剤が、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、利尿薬、ベータ遮断薬、又はカルシウムチャネル遮断薬である、請求項１０に記載の使用。

【請求項14】

脂質異常症の治療のための前記薬剤が、スタチン、フィブラート、ナイアシン、及び／又はコレステロール吸収阻害剤である、請求項１０に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、例えば肥満や体重過多、糖尿病、及び他の代謝障害における、グルカゴン類似体、及びその医学的使用に関する。

【背景技術】

【0002】

プレプログルカゴンは、１５８アミノ酸の前駆体ポリペプチドであり、これは、組織中で示差的に処理されて、グルカゴン（Ｇｌｕ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、及びオキシントモジュリン（ＯＸＭ）を含む、多くの構造が関連するプログルカゴン由来ペプチドを生成する。これらの分子は、グルコースホメオスタシス、インスリン分泌、胃内容排出、及び腸の成長、並びに食物摂取の調節を含む多種多様な生理的機能に関与している。

【0003】

グルカゴンは、プレプログルカゴンのアミノ酸５３〜８１に対応した２９アミノ酸ペプチドである。オキシントモジュリン（ＯＸＭ）は、オクタペプチドであるカルボキシ末端エクステンション（プレプログルカゴンのアミノ酸８２〜８９、「介在ペプチド１」又はＩＰ−１と呼ばれる）を有するグルカゴンの完全な２９アミノ酸配列を含む３７アミノ酸ペプチドである。ＧＬＰ−１の主要な生物活性のある断片は、プレプログルカゴンのアミノ酸９８〜１２７に対応する３０アミノ酸のＣ末端アミド化ペプチドとして産生される。

【0004】

グルカゴンは肝細胞上のグルカゴン受容体に結合して、グリコーゲンの形で貯蔵されたグルコースを、肝臓に糖新生により放出させることによって、血液中のグルコースのレベルを維持するのを助ける。これらの貯蔵が枯渇してくると、グルカゴンは肝臓を刺激して、糖新生によって追加のグルコースを合成させる。このグルコースは血流中に放出され、低血糖症の発症を予防する。

【0005】

ＧＬＰ−１は、グルコース刺激インスリン分泌を改善することにより、上昇した血中グルコースレベルを低下させ、主に食物摂取を減少させることを介して体重減少を促進する。

【0006】

ＯＸＭは、食物摂取に応答して及び食事のカロリー含量に比例して、血液中に放出される。ＯＸＭは、ヒトの食欲を抑制し、食物摂取を阻害することが示されている（Cohen et al, Journal of Endocrinology and Metabolism, 88, 4696-4701, 2003; 国際公開第２００３／０２２３０４号パンフレット）。オキシントモジュリンで処置されたラットは、対で給餌したラットより小さい体重増加を示すため、ＧＬＰ−１の食欲抑制効果と同様の食欲抑制効果に加えて、ＯＸＭは別の機序によっても体重に影響を与えるはずである（Bloom, Endocrinology 2004, 145, 2687）。肥満げっ歯動物をＯＸＭで処置することはまた、その耐糖能を改善（Parlevliet et al, Am J Physiol Endocrinol Metab, 294, E142-7, 2008）し、体重増加を抑制（国際公開第２００３／０２２３０４号パンフレット）する。

【0007】

ＯＸＭは、ＧＬＰ−１受容体よりもグルカゴン受容体に対して２倍高い効力でグルカゴン受容体とＧＬＰ−１受容体の両方を活性化するが、これらの各受容体上の本来のグルカゴン及びＧＬＰ−１より効力は小さい。ヒトグルカゴンはまた、両方の受容体を活性化することができるが、ＧＬＰ−１受容体よりグルカゴン受容体に対して強い優先性を示す。一方ＧＬＰ−１は、グルカゴン受容体を活性化することができない。オキシントモジュリンの作用機序は、充分には理解されていない。特に、ホルモンの肝臓外作用の一部が、ＧＬＰ−１やグルカゴン受容体によって、又は１つ又はそれ以上の未同定の受容体によって仲介されるかどうかは不明である。

【0008】

他のペプチドは、グルカゴン受容体とＧＬＰ−１受容体の両方に結合し活性化（Hjort et al, Journal of Biological Chemistry, 269, 30121-30124, 1994）し、体重増加を抑制し、食物摂取を低下させることが証明されている（例えば、国際公開第ＷＯ２００６／１３４３４０号、第２００７／１００５３５号、第２００８／１０１０１号、第２００８／１５２４０３号、第２００９／１５５２５７号、第２００９／１５５２５８号、第２０１０／０７０２５２号、第２０１０／０７０２５３号、第２０１０／０７０２５５号、第２０１０／０７０２５１号、第２０１１／００６４９７号、第２０１１／１６０６３０号、第２０１１／１６０６３３号パンフレットを参照）

【0009】

肥満は、種々の疾患、特に心血管障害（ＣＶＤ）、II型糖尿病、閉塞性睡眠時無呼吸、ある種の癌、及び骨関節炎に関連する、世界的に増大しつつある健康問題である。その結果、肥満は寿命を縮めることがわかっている。世界保健機構による２００５年の予測に従うと、全世界で４億人の成人（年齢＞１５才）が肥満であると分類されている。米国では、肥満は、喫煙後の防ぐことができた死の２番目に大きな原因であると考えられている。

【0010】

肥満の増加は、糖尿病の増加を招き、II型糖尿病の約９０％のヒトは肥満であると分類することができる。世界中には２億４６００万人の糖尿病患者がおり、２０２５年までに３億８０００万人が糖尿病になると推定されている。多くは、高／異常ＬＤＬとトリグリセリド及び低ＨＤＬを含む追加の心血管障害危険因子を有する。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0011】

第１の態様において本発明は、式：
Ｒ¹−Ｘ−Ｚ−Ｒ²
［式中、
Ｒ¹は、Ｈ、Ｃ_1-4アルキル、アセチル、ホルミル、ベンゾイル、又はトリフルオロアセチルであり；
Ｒ²は、ＯＨ又はＮＨ₂であり；
Ｘは、式：
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳ（配列番号１）、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ（配列番号２）、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＡＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳＡ（配列番号４）、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＨＤＦＶＥＷＬＥＳＡ（配列番号５）、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＲＹＬＤＳＫＡＡＥＤＦＶＥＷＬＬＲＡ（配列番号６）、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＥＤＦＶＥＷＬＬＲＡ（配列番号７）、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳ（配列番号８）、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＲ（配列番号９）、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＡＡＨＥＦＶＥＷＬＥＳＡ（配列番号１０）、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＲＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳ（配列番号１１）、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＲＹＬＤＳＫＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ（配列番号１２）、
Ｈ−Ａｉｂ−ＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳＫＡＡＥＥＦＩＥＷＬＥＳＡ（配列番号１７）、
ＨＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥＫＡＡＨＥＦＩＥＷＬＥＳＡ（配列番号１８）、
Ｈ−Ａｉｂ−ＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥＫＡＡＨＥＦＶＥＷＬＥＳＡ（配列番号１９）、
を有するペプチドであり；
Ｚは、存在しないか、又はＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｄｂｕ、Ｄｐｒ、及びＯｒｎからなる群から独立に選択される１〜２０アミノ酸単位の配列である］を有する化合物；
又は、その医薬的に許容し得る塩又は溶媒和物を提供する。

【0012】

第２の態様において本発明は、式：
Ｒ¹−Ｘ−ＯＨ
［式中、
Ｒ¹は、Ｈ、Ｃ_1-4アルキル、アセチル、ホルミル、ベンゾイル、又はトリフルオロアセチルであり；
Ｘは、配列番号３、１３、又は１４；
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＲＡ（配列番号３）、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ（配列番号１３）、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＲＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳＡ（配列番号１４）のペプチドである］の化合物、
又は、その医薬的に許容し得る塩又は溶媒和物を提供する。

【0013】

第３の態様において本発明は、式：
Ｒ¹−Ｘ−Ｚ−Ｒ²
［式中、
Ｒ¹は、Ｈ、Ｃ_1-4アルキル、アセチル、ホルミル、ベンゾイル、又はトリフルオロアセチルであり；
Ｒ²は、ＯＨ又はＮＨ₂であり；
Ｘは、配列番号１５；
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ（配列番号１５）、
又は、以下の位置の最大３つで配列番号１５とは異なり、従って、配列番号１５と異なる場合、
２位の残基は、Ｓｅｒ及びＤ−Ｓｅｒから選択され、
３位の残基は、Ｈｉｓ及びＨｓｅから選択され、
１２位の残基は、Ａｒｇであり、
１５位の残基は、Ｇｌｕであり、
１６位の残基は、Ｓｅｒであり、
１８位の残基は、Ａｒｇであり、
２０位の残基は、Ｈｉｓ及びＧｌｕから選択され、
２１位の残基は、Ｇｌｕであり、
２３位の残基は、Ｖａｌであり、
２８位の残基は、Ａｒｇ及びＧｌｕから選択され、
２９位の残基は、存在しない、
のペプチドであり；
Ｚは、存在しないか、又は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｄｂｕ、Ｄｐｒ、及びＯｒｎからなる群から独立に選択される１〜２０アミノ酸単位の配列である］を有する化合物；
又は、その医薬的に許容し得る塩又は溶媒和物を提供する。

【0014】

ある実施態様において、２０位の残基は可変ではなく、Ｈｉｓである。

【0015】

この化合物は、式：
Ｒ¹−Ｘ−Ｚ−Ｒ²
［式中、
Ｒ¹は、Ｈ、Ｃ_1-4アルキル、アセチル、ホルミル、ベンゾイル、又はトリフルオロアセチルであり；
Ｒ²は、ＯＨ又はＮＨ₂であり；
Ｘは、配列番号１５；
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ（配列番号１５）、
又は、以下の位置の１つ又は２つで配列番号１５とは異なり、従って、配列番号１５と異なる場合、
２１位の残基は、Ｇｌｕであり、
２３位の残基は、Ｖａｌである、ペプチドであり、
Ｚは、存在しないか、又は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｄｂｕ、Ｄｐｒ、及びＯｒｎからなる群から独立して選択される１〜２０アミノ酸単位の配列である］を有することができるか、
又は、その医薬的に許容し得る塩又は溶媒和物である。

【0016】

第４の態様において本発明は、式：
Ｒ¹−Ｘ−Ｚ−Ｒ²
［式中、
Ｒ¹は、Ｈ、Ｃ_1-4アルキル、アセチル、ホルミル、ベンゾイル、又はトリフルオロアセチルであり；
Ｒ²は、ＯＨ又はＮＨ₂であり；
Ｘは、配列番号１６；
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＥＤＦＶＥＷＬＥＳＡ（配列番号１６）、
又は、以下の位置の最大３つで配列番号１６とは異なり、従って、配列番号１６と異なる場合、
２位の残基は、Ｓｅｒ及びＤ−Ｓｅｒから選択され、
３位の残基は、Ｈｉｓ及びＨｓｅから選択され、
１２位の残基は、Ａｒｇであり、
１５位の残基は、Ｇｌｕであり、
１６位の残基は、Ｇｌｕであり、
１８位の残基は、Ａｒｇであり、
２０位の残基は、Ｈｉｓ及びＨｉｓから選択され、
２１位の残基は、Ｇｌｕであり、
２３位の残基は、Ｉｌｅであり、
２８位の残基は、Ａｒｇ及びＧｌｕから選択され、
２９位の残基は、存在しない、
のペプチドであり、
Ｚは、存在しないか、又は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｄｂｕ、Ｄｐｒ、及びＯｒｎからなる群から独立に選択される１〜２０アミノ酸単位の配列である］を有する化合物、
又は、その医薬的に許容し得る塩又は溶媒和物を提供する。

【0017】

この化合物は、式：
Ｒ¹−Ｘ−Ｚ−Ｒ²
［式中、
Ｒ¹は、Ｈ、Ｃ_1-4アルキル、アセチル、ホルミル、ベンゾイル、又はトリフルオロアセチルであり；
Ｒ²は、ＯＨ又はＮＨ₂であり；
Ｘは、配列番号１６；
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＥＤＦＶＥＷＬＥＳＡ（配列番号１６）、
又は、以下の位置の１つ又は２つで配列番号１６とは異なり、従って、配列番号１６と異なる場合、
２１位の残基は、Ｇｌｕであり、
２３位の残基は、Ｉｌｅである、ペプチドであり、
Ｚは、存在しないか、又は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｄｂｕ、Ｄｐｒ、及びＯｒｎからなる群から独立して選択される１〜２０アミノ酸単位の配列である］を有することができるか、
又は、その医薬的に許容し得る塩又は溶媒和物である。

【0018】

本発明の第３又は第４の態様の化合物は、配列：
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ（配列番号１５）、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＥＤＦＶＥＷＬＥＳＡ（配列番号１６）、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥＫＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ（配列番号２０）、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳＫＡＡＥＤＦＩＥＷＬＥＳＡ（配列番号２１）、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥＫＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ（配列番号２２）、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳＫＡＡＨＤＦＶＥＷＬＥＳＡ（配列番号２３）、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳＫＡＡＥＤＦＶＥＷＬＥＳＡ（配列番号２４）、又は
Ｈ−ＤＳｅｒ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ（配列番号２５）、
を有するペプチドＸを含むことができる。

【0019】

すべての態様において、本発明の化合物は、式：
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳ−ＯＨ、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ−ＯＨ、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＡＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＨＤＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＲＹＬＤＳＫＡＡＥＤＦＶＥＷＬＬＲＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＥＤＦＶＥＷＬＬＲＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳ−ＮＨ₂、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＲ−ＯＨ、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＡＡＨＥＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＲＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳ−ＯＨ、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＲＹＬＤＳＫＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＲＡ−ＯＨ、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ−ＯＨ、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＲＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳＡ−ＯＨ、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫＡＡＥＤＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−Ａｉｂ−ＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳＫＡＡＥＥＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＯＨ、
Ｈ−ＨＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥＫＡＡＨＥＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＯＨ、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥＫＡＡＨＥＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥＫＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳＫＡＡＥＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥＫＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳＫＡＡＨＤＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳＫＡＡＥＤＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−Ｈ−ＤＳｅｒ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、を有することができるか、
又は、その医薬的に許容し得る塩又は溶媒和物でもよい。

【0020】

疑問を避けるために、本発明の第３及び第４の態様の化合物において、可変性を可能にするために明確には記載されていない位置は、固定されていることが意図され、従ってこれらの位置において記載された残基のみを含むことが意図される。

【0021】

本発明のすべての態様において、ペプチドＸ又はＺ（存在する場合）中の１つ又はそれ以上のアミノ酸鎖は、親油性置換基に結合してもよい。

【0022】

好ましくは、ペプチドＸ中の１つ又はそれ以上のアミノ酸側鎖は、親油性置換基に結合している。

【0023】

親油性置換基は、式Ｚ¹［ここで、Ｚ¹は、Ｘ又はＺの関連する残基の側鎖に直接結合（共有結合）している親油性成分である］、又はＺ¹Ｚ²［ここで、Ｚ¹は親油性成分であり、Ｚ²はスペーサーであり、そしてＺ¹は、Ｚ²を介してＸ又はＺの残基の側鎖に結合している］を有することができる。

【0024】

追加的に又は代替的に、ペプチドＸ又はＺ（存在する場合）中の１つ又はそれ以上のアミノ酸側鎖は、ポリマー性置換基に結合している。

【0025】

ある実施態様において、ペプチドＸ又はＸ−Ｚは、１つのみの親油性置換基及び／又は１つのみのポリマー性置換基を運搬する。

【0026】

親油性置換基及びポリマー性置換基は、より詳細に後述される。

【0027】

親油性成分及び／又はポリマー性置換基は、任意の適切な残基の側鎖に結合することができる。リジン残基（例えば１２位（存在する場合）又は１７位のリジン残基）は特に安定である。

【0028】

ペプチドＸは、式：
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳ、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫ＊ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＥＳＡ、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＲＹＬＤＳＫ＊ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＬＲＡ、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＬＲＡ、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳ、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＲ、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫ＊ＡＡＨＥＦＶＥＷＬＥＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫ＊ＲＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳ、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＲＹＬＤＳＫ＊ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＲＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫ＊ＲＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫ＊ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＥＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳＫ＊ＡＡＥＥＦＩＥＷＬＥＳＡ、
ＨＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥＫ＊ＡＡＨＥＦＩＥＷＬＥＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥＫ＊ＡＡＨＥＦＶＥＷＬＥＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥＫ＊ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳＫ＊ＡＡＥＤＦＩＥＷＬＥＳＡ、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥＫ＊ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳＫ＊ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＥＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳＫ＊ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＥＳＡ、
Ｈ−ＤＳｅｒ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫ＊ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ、
（ここで、「＊」は、親油性又はポリマー性置換基、特に親油性置換基の位置を示す）を有することができる。

【0029】

本発明の化合物は、式：
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳ−ＯＨ、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ−ＯＨ、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫ＊ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＲＹＬＤＳＫ＊ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＬＲＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＬＲＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳ−ＮＨ₂、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＲ−ＯＨ、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫ＊ＡＡＨＥＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫ＊ＲＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳ−ＯＨ、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＲＹＬＤＳＫ＊ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＲＡ−ＯＨ、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ−ＯＨ、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫ＊ＲＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳＡ−ＯＨ、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫ＊ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＫ＊ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳＫ＊ＡＡＥＥＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＯＨ、
Ｈ−ＨＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥＫ＊ＡＡＨＥＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＯＨ、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥＫ＊ＡＡＨＥＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥＫ＊ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳＫ＊ＡＡＥＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥＫ＊ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳＫ＊ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳＫ＊ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
Ｈ−Ｈ−ＤＳｅｒ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫ＊ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂、
を有することができるか、
又は、その医薬的に許容し得る塩又は溶媒和物でもよい。

【0030】

ある実施態様において、Ｘは、式：
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳ、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＥＳＡ、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＲＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＬＲＡ、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＬＲＡ、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳ、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＲ、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＥＦＶＥＷＬＥＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＲＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳ、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＲＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＲＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＲＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＥＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＥＦＩＥＷＬＥＳＡ、
ＨＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＥＦＩＥＷＬＥＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＥＦＶＥＷＬＥＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥＫ−（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＤＦＩＥＷＬＥＳＡ、
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＥＳＡ、
Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＥＳＡ、
Ｈ−ＤＳｅｒ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ、を有する。

【0031】

本発明化合物は、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳ−ＯＨ（化合物１）、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ−ＯＨ（化合物２）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳＡ−ＮＨ₂（化合物４）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物５）、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＲＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＬＲＡ−ＮＨ₂（化合物６）、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＬＲＡ−ＮＨ₂（化合物７）、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳ−ＮＨ₂（化合物８）、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＲ−ＯＨ（化合物９）、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＥＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物１０）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＲＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳ−ＯＨ（化合物１１）、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＲＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ−ＮＨ₂（化合物１２）、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＲＡ−ＯＨ（化合物３）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ−ＯＨ（化合物１３）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＲＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳＡ−ＯＨ（化合物１４）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物１５）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物１６）、
Ｈ−Ａｉｂ−ＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＥＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＯＨ（化合物１７）、
Ｈ−ＨＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＥＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＯＨ（化合物１８）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＥＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物１９）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物２０）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物２１）、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物２２）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物２３）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物２４）、
Ｈ−Ｈ−ＤＳｅｒ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物２５）、
又は、その医薬的に許容し得る塩又は溶媒和物でもよい。

【0032】

天然に存在するアミノ酸のみからなるペプチド配列Ｘ又はＸ−Ｚについて、本発明は、本明細書に記載のようなペプチドＸ又はＸ−Ｚをコードする核酸（ＤＮＡ又はＲＮＡでもよい）をさらに提供する。また、そのような核酸を含む発現ベクター、及びそのような核酸又は発現ベクターを含有する宿主細胞も提供される。宿主細胞は典型的には、コードされるペプチドＸ又はＸ−Ｚを発現し、任意に分泌することができる。

【0033】

本発明の化合物は、グルカゴン類似体ペプチドである。本明細書においてグルカゴン類似体ペプチドへの参照は、本発明の化合物又は本明細書が必要とするようなペプチドＸ又はＸ−Ｚへの参照であると理解されるべきである。本発明の化合物への参照は、特に別の指定がなければ、又は文脈から除外されることがなければ、任意の本発明の化合物の医薬的に許容し得る塩（例えば、酢酸塩又は塩化物塩）又は溶媒和物を含むものと理解すべきである。

【0034】

本発明は、本明細書で定義される本発明の化合物（既に記載されたその医薬的に許容し得る塩又は溶媒和物を含む）、ペプチドＸ又はＸ−Ｚをコードする核酸、このような核酸を含む発現ベクター、又はこのような核酸もしくは発現ベクターを含有する宿主細胞を、担体との混合物中に含む、組成物を提供する。好適な実施態様において、本組成物は医薬組成物であり、担体は医薬的に許容し得る担体である。グルカゴン類似体ペプチドは、グルカゴン類似体の医薬的に許容し得る塩の形態でもよい。

【0035】

本明細書に記載の化合物は、特に、体重増加を防止するか又は体重減少を促進することに利用を見いだす。「防止する」とは、治療が無い場合と比較して抑制又は低下させることを意味し、必ずしも体重増加の完全な停止を意味するものではない。本ペプチドは、食物摂取の低下及び／又はエネルギー消費の上昇を引き起こすことができ、体重への作用が観察される。体重への作用とは独立して、本発明の化合物は、グルコース調節及び／又は循環コレステロールレベルへの有効な作用を有し、循環ＬＤＬレベルを低下させ、ＨＤＬ／ＬＤＬ比を上昇させることができる。すなわち本発明の化合物は、体重過多により引き起こされるか又はこれを特徴とする任意の症状の直接的又は間接的治療法、例えば、肥満、病的肥満、肥満に関連する炎症、肥満に関連する胆嚢疾患、肥満誘発性睡眠時無呼吸の治療及び／又は予防に使用することができる。これらはまた、不充分なグルコース調節又は脂質異常症（例えば、ＬＤＬレベルの上昇又はＨＤＬ／ＬＤＬ比の低下）、糖尿病（特に２型糖尿病）、メタボリック症候群、高血圧、アテローム性脂質異常症、アテローム性動脈硬化症、冠動脈性心疾患、末梢動脈疾患、脳卒中又は微小血管疾患により引き起こされるか又はこれを特徴とする症状の予防に使用することができる。これらの症状においてこれらの作用は、体重へのこれらの作用の結果としてであるか、又はそれとは独立したものでもよい。

【0036】

本発明はまた、医学的治療方法、特に上記のような症状の治療方法で使用するための本発明の化合物を提供する。

【0037】

本発明はまた、上記のような症状の治療のための医薬の調製における本発明の化合物の使用を提供する。

【0038】

本発明の化合物は、糖尿病、肥満、脂質異常症、又は高血圧症の治療のための薬剤との併用療法の一部として投与することができる。

【0039】

このような場合には、これらの２つの活性物質は、同じ医薬製剤の一部として、又は別個の製剤として、一緒に又は別々に投与することができる。

【0040】

従って本発明の化合物は、ビグアニド（例えばメトホルミン）、スルホニル尿素、メグリチニド又はグリニド（例えばナテグリニド）、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、グリタゾン、インスリン又はインスリン類似体を含むがこれらに限定されない抗糖尿病薬と組み合わせて使用することができる。インスリン類似体の例としては、Lantus（登録商標）、Novorapid（登録商標）、Humalog（登録商標）、Novomix（登録商標）、Actraphane HM（登録商標）、Levemir（登録商標）、及びApidra（登録商標）を含むがこれらに限定されるものではない。

【0041】

本化合物はさらに、グルカゴン様ペプチド受容体１アゴニスト、ペプチドＹＹもしくはその類似体、カンナビノイド受容体１アンタゴニスト、リパーゼ阻害剤、メラノコルチン受容体４アゴニスト、又はメラニン濃縮ホルモン受容体１アンタゴニストを含むがこれらに限定されない抗肥満薬と組み合わせて使用することができる。

【0042】

本化合物はさらに、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、利尿薬、ベータ遮断薬、又はカルシウムチャネル遮断薬を含むがこれらに限定されない抗高血圧薬と組み合わせて使用することができる。

【0043】

本化合物は、スタチン、フィブラート、ナイアシン、又はコレステロール吸収阻害剤を含むがこれらに限定されない抗脂質異常症薬と組み合わせて使用することができる。

【0044】

すなわち本発明はさらに、本発明の化合物と、例えば上記した抗糖尿病薬、抗肥満薬、抗高血圧薬、又は抗脂質異常症薬とを含む組成物又は治療用キットを提供する。また、医学的治療方法における使用のための、特に上記した症状の治療のためのかかる組成物又は治療用キットも提供される。

【0045】

本発明の化合物は、合成化学によって製造することができる。従って本発明は、本発明の化合物の合成方法を提供する。

【0046】

既に説明したように、本発明は、ペプチド配列Ｘ又はＸ−Ｚをコードする核酸、並びに前述核酸配列を含む発現ベクター（任意に、配列に作動可能に連結されて、その発現を指令する）、及び前記核酸又は発現ベクターを含有する宿主細胞に及ぶ。好ましくは、前記宿主細胞は、本発明の化合物を発現し、任意に分泌することができる。

【0047】

本発明は、本発明の化合物の製造方法であって、ペプチド配列Ｘ又はＸ−Ｚを発現するのに適した条件下で宿主細胞を培養し、こうして製造された化合物を精製することを含む方法を提供する。これは、ペプチドが、天然に存在するアミノ酸のみを含有する場合に、特に有用である。

【0048】

本発明の化合物が、１つ又はそれ以上の天然に存在しないアミノ酸を含有する場合、この方法は、配列Ｘ又はＸ−Ｚとは１つ又はそれ以上異なるペプチド配列を発現させ、こうして製造された化合物を任意に精製し、１つ又はそれ以上のアミノ酸を追加するか又は修飾して、本発明の化合物又はアミノ酸配列Ｘ又はＸ−Ｚを含む化合物を製造することを含むことができる。

【0049】

本発明の化合物を生成するためにいかなる方法が使用されても、これは、本明細書のb別の場所で定義されるように、特に１つ又はそれ以上の親油性及び／又はポリマー成分を導入するために、配列Ｘ又はＸ−Ｚを修飾する１つ又はそれ以上の更なる工程を含むことができる。

【0050】

本発明はさらに、医学的治療方法において使用するための、本発明の核酸、本発明の発現ベクター、又は本発明の化合物を発現し任意に分泌することができる宿主細胞を提供する。前記核酸、発現ベクター、及び宿主細胞は、本発明の化合物自体で治療することができる本明細書に記載の障害のいずれかの治療に使用することができることは、理解されるであろう。従って、本発明の化合物を含む治療用組成物、本発明の化合物の投与、又はこれらの任意の治療的使用への言及は、特に別の指定がなければ、本発明の核酸、発現ベクター、又は宿主細胞の同等の使用を包含すると解釈されるべきである。

【発明を実施するための形態】

【0051】

本明細書を通して、天然に存在するアミノ酸のための従来の１文字コードと３文字コードが使用されており、他のアミノ酸、例えばＡｉｂ（α−アミノイソ酪酸）、Ｈｓｅ（ホモセリン）、Ｏｒｎ（オルニチン）、ＤＢＵ（２，４−ジアミノ酪酸）、Ｄｐｒ（２，３−ジアミノプロパン酸）については、一般に認められた３文字コードが使用されている。

【0052】

グルカゴンは、プレプログルカゴンのアミノ酸５３〜８１に対応する配列を有する２９アミノ酸ペプチドであり、配列Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ（配列番号２６）を有する。オキシントモジュリン（ＯＸＭ）は、オクタペプチドのカルボキシ末端エクステンション（プレプログルカゴンのアミノ酸８２〜８９であり、配列Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｉｌｅ−Ａｌａ（配列番号２７）を有し、「介在ペプチド１」又はＩＰ−１と呼ばれる）を有するグルカゴンの完全な２９アミノ酸配列を含む３７アミノ酸ペプチドである；すなわちヒトオキシントモジュリンの全配列は、Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｉｌｅ−Ａｌａ）（配列番号２８）である。ＧＬＰ−１の主要な生物活性断片は、プレプログルカゴンのアミノ酸９８〜１２７に対応する３０アミノ酸のＣ末端アミド化ペプチドとして産生される。

【0053】

すなわち用語「天然のグルカゴン」は、配列Ｈ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−ＯＨ（配列番号２６）を有する天然のヒトグルカゴンを指す。

【0054】

本発明の化合物の配列Ｘ内のアミノ酸は、通常のＮ末端からＣ末端方向へ１〜２９へ連続して番号を付けることができると考えられる。従ってＸ内の「位置」への言及は、天然のヒトグルカゴンや他の分子内の位置への言及のように理解すべきである。

【0055】

本発明の化合物は、例えば、グルカゴン類似体ペプチドのコンフォメーション及び／又は２次構造を安定化させるために、及び／又は、国際公開第９９／４６２８３号パンフレットに記載されているように、酵素的加水分解に対してグルカゴン類似体ペプチドをより耐性にするために、１〜２０アミノ酸のＣ末端ペプチド配列Ｚを含んでよい。

【0056】

存在する場合、Ｚは、１〜２０アミノ酸残基のペプチド配列を示し、例えば１〜１５の範囲、より好ましくは１〜１０の範囲、特に１〜７アミノ酸残基の範囲、例えば１、２、３、４、５、６、又は７アミノ酸残基、例えば６アミノ酸残基の範囲である。ペプチド配列Ｚ中のアミノ酸残基の各々は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｄｂｕ（２，４−ジアミノ酪酸）、Ｄｐｒ（２，３−ジアミノプロパン酸）、及びＯｒｎ（オルニチン）から独立して選択することができる。好ましくはアミノ酸残基は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｄｂｕ、Ｄｐｒ 及びＯｒｎから選択され、より好ましくはＧｌｕ、Ｌｙｓ、及びＣｙｓからのみ選択される。上記アミノ酸は、Ｄ−又はＬ−配向を有することができ、これは、ある実施態様において、Ｌ−配行を有する。特に好適な配列Ｚは、４、５、６、又は７個の連続リジン残基の配列（すなわち、Ｌｙｓ₃、Ｌｙｓ₄、Ｌｙｓ₅、Ｌｙｓ₆、又はＬｙｓ₇）であり、特に５又は６個の連続リジン残基の配列である。Ｚの他の典型的な配列は、国際公開第０１／０４１５６号パンフレットに記載されている。代替的に、配列ＺのＣ末端残基は、Ｃｙｓ残基でもよい。これは、化合物の修飾（例えば、ＰＥＧ化、又はアルブミンへの結合）を補助することができる。かかる実施態様において、配列Ｚは、例えば１アミノ酸のみの長さ（すなわちＺ＝Ｃｙｓ）であるか、又は２、３、４、５、６、又はさらに多くのアミノ酸の長さでもよい。従って他のアミノ酸は、ペプチドＸと末端Ｃｙｓ残基との間のスペーサーとして機能する。

【0057】

ペプチド配列Ｚは、ヒトＯＸＭのＩＰ−１部分の対応する配列（これは、配列Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｉｌｅ−Ａｌａを有する）と２５％以下の配列同一性を有する。

【0058】

あるペプチド又はポリペプチド配列の、別のポリペプチド配列（例えばＩＰ−１）に対する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、これらの２つを互いに整列させ、必要であれば最適な整列のためにギャップを導入した時、別のポリペプチドの対応する配列中の、対応して位置するアミノ酸残基と同一であるそのポリペプチド配列中のアミノ酸残基のパーセントとして計算される。％同一性値は、ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２（Altschulら、Methods in Enzymology, 266:460-480 (1996)）を用いて測定することができる。ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２はいくつかの検索パラメータを使用し、その大部分はデフォルト値に設定されている。調整可能なパラメータは、以下の値が設定されている：オーバーラップスパン＝１、オーバーラップフラクション＝０．１２５、ワード閾値（Ｔ）＝１１。％アミノ酸配列同一性値は、ＷＵ−ＢＬＡＳＴによって決定される一致する同一残基の数を、基準配列の残基の総数（整列スコアを最大にするために、ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２によって基準配列に導入されたギャップは無視される）で割って、１００を掛けることにより決定される。

【0059】

すなわち、ＺがＩＰ−１の８アミノ酸と最適に整列された時、これが有するＩＰ−１の対応するアミノ酸と同一であるアミノ酸は、２個以下である。

【0060】

ある実施態様において、Ｚは存在しない。

【0061】

本発明の化合物中の１つ又はそれ以上のアミノ酸側鎖は、親油性置換基に結合させることができる。親油性置換基は、アミノ酸側鎖中の原子に共有結合するか、又は代替的に、スペーサーによってアミノ酸側鎖に結合させることができる。親油性置換基は、ペプチドＸの一部であるアミノ酸の側鎖へ、及び／又はペプチドＺの一部であるアミノ酸の側鎖に結合させることができる。

【0062】

特定の理論に拘束されるものではないが、親油性置換基は血流中のアルブミンに結合し、こうして本発明の化合物を酵素分解から遮断し、従って化合物の半減期を上昇させる。これはまた、例えばグルカゴン受容体及び／又はＧＬＰ−１受容体について、化合物の効力を調節することもできる。

【0063】

ある実施態様において、１つのアミノ酸側鎖のみが親油性置換基に結合される。他の実施態様において、２つのアミノ酸側鎖がそれぞれ親油性置換基に結合される。さらに別の実施態様において、３つ又はそれ以上のアミノ酸側鎖がそれぞれ親油性置換基に結合される。化合物が２つ又はそれ以上の親油性置換基を含有する時、これらは同じか又は異なってもよい。

【0064】

親油性置換基は、親油性成分Ｚ¹を含むか又はこれからなり、これは、アミノ酸側鎖中の原子に直接共有結合してもよいか、又は代替的に、スペーサーＺ²によりアミノ酸側鎖に結合することができる。

【0065】

ここで用語「結合した」は、１つの同定可能な化学成分の他の化学成分への物理的結合、及びかかる成分間の構造的関係を説明するために使用される。これは、特定の合成法を包含するものと考えてはならない。

【0066】

親油性成分は、エステル、スルホニルエステル、チオエステル、アミド、カルバメート、尿素、又はスルホンアミドを介して、アミノ酸側鎖又はスペーサーに結合することができる。従って、好ましくは親油性置換基は、アシル基、スルホニル基、Ｎ原子、Ｏ原子、もしくはＳ原子（これは、エステル、スルホニルエステル、チオエステル、アミド、又はスルホンアミドの一部を形成する）を含むことが理解されるであろう。好ましくは、親油性置換基中のアシル基は、アミノ酸側鎖又はスペーサーと、アミド又はエステルの一部を形成する。

【0067】

親油性成分は、４〜３０個のＣ原子を有する炭化水素鎖を含むことができる。好ましくは、これは少なくとも８個又は１２個のＣ原子を有し、好ましくは２４個以下の炭素原子、又は２０個以下の炭素原子を有する。炭化水素鎖は直鎖状でも分岐状でもよく、飽和でも不飽和でもよい。炭化水素鎖は、好ましくはアミノ酸側鎖又はスペーサーへの結合の一部を形成する成分、例えば、アシル基、スルホニル基、Ｎ原子、Ｏ原子又はＳ原子で置換されることが理解されるであろう。最も好ましくは、炭化水素鎖はアシル基で置換され、従って炭化水素鎖は、例えばパルミトイル、カプロイル、ラウロイル、ミリストイル、又はステアロイルなどのアルカノイル基の一部であってもよい。

【0068】

従って親油性成分は、以下に示される式を有することができる：

【0069】

【化1】

【0070】

Ａは、例えばアシル基、スルホニル基、ＮＨ、Ｎ−アルキル、Ｏ原子、又はＳ原子でもよく、好ましくはアシルである。ｎは３〜２９の整数、好ましくは７〜２５、より好ましくは１１〜２１、さらにより好ましくは１５〜１９の整数である。

【0071】

炭化水素鎖は、さらに置換することができる。例えばこれは、特に、スペーサー又はペプチドから遠い分子の遊離末端で、ＮＨ₂、ＯＨ、及びＣＯＯＨから選択される最大３つの置換基で置換することができる。例えばこれは、遊離カルボン酸基を含むことができる。

【0072】

炭化水素鎖がさらに置換される場合、好ましくはこれは、１つのみの置換基でさらに置換される。代替的に又は追加的に、炭化水素鎖は、例えば以下に示されるシクロアルカン又はヘテロシクロアルカンを含むことができる：

【0073】

【化2】

【0074】

好ましくは、シクロアルカン又はヘテロシクロアルカンは６員環である。最も好ましくは、これはピペリジンである。

【0075】

代替的に、親油性成分は、シクロペンタノフェナトレン骨格に基づくことができ、これは、部分的に又は完全に不飽和又は飽和されていてもよい。骨格中の炭素原子はそれぞれ、Ｍｅ又はＯＨで置換することができる。例えば親油性置換基は、コリル、デオキシコリル、又はリトコリルでもよい。

【0076】

上記したように親油性成分は、スペーサーによりアミノ酸側鎖に結合してもよい。存在する場合は、スペーサーは親油性成分及びアミノ酸側鎖に結合される。スペーサーは、エステル、スルホニルエステル、チオエステル、アミド、カルバメート、尿素、又はスルホンアミドにより、親油性成分及びアミノ酸側鎖に独立して結合することができる。従って、これは、アシル、スルホニル、Ｎ原子、Ｏ原子、又はＳ原子から独立して選択される２つの成分を含むことができる。スペーサーは、式：

【0077】

【化3】

【0078】

［式中、ＢとＤは各々、アシル、スルホニル、ＮＨ、Ｎ−アルキル、Ｏ原子、及びＳ原子から独立して選択され、好ましくはアシル及びＮＨから選択される。好ましくは、ｎは１〜１０の整数、好ましくは１〜５の整数である。スペーサはさらに、Ｃ_0-6アルキル、Ｃ_0-6アルキルアミン、Ｃ_0-6アルキルヒドロキシ、及びＣ_0-6アルキルカルボキシから選択される１つ又はそれ以上の置換基で置換されていてもよい］を有することができる。

【0079】

あるいは、スペーサーは、上記式の２つ又はそれ以上の繰り返し単位を有していてもよい。Ｂ、Ｄ及びｎは各々、繰り返し単位毎に独立して選択される。隣接する繰り返し単位は、共有結合で、それぞれＢ成分及びＤ成分を介して互いに結合することができる。例えば、隣接する繰り返し単位のＢ成分及びＤ成分は、一緒にエステル、スルホニルエステル、チオエステル、アミド、又はスルホンアミドを形成することができる。上記したように、スペーサの各末端の遊離Ｂ単位及びＤ単位は、アミノ酸側鎖及び親油性成分に結合している。

【0080】

好ましくは、スペーサーは、５個以下、４個以下又は３個以下の繰り返し単位を有する。最も好ましくは、スペーサーは、２つの繰り返し単位を有するか、又は単一の単位である。

【0081】

スペーサー（又は、これが繰り返し単位を有している場合、スペーサの繰り返し単位の一つ以上）は、例えば天然の又は非天然のアミノ酸であってもよい。また、官能化側鎖を有するアミノ酸について、Ｂ及び／又はＤはアミノ酸の側鎖内の成分であってもよいことが理解されるであろう。スペーサーは、任意の天然の又は非天然のアミノ酸であってもよい。例えば、スペーサー（又は、これが繰り返し単位を有している場合、スペーサの繰り返し単位の一つ以上）は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、α−Ｇｌｕ，β−Ｇｌｕ、γ−ＧＬｕ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇａｂａ、Ａｉｂ、β−Ａｌａ、５−アミノペンタノイル、６−アミノヘキサノイル、７−アミノヘプタノイル、８−アミノオクタノイル、９−アミンノナノイル、又は１０−アミノデカノイルでもよい。

【0082】

例えば、スペーサーは、γ−Ｇｌｕ、Ｇａｂａ、β−Ａｌａ、及びα−Ｇｌｕから選択される単一のアミノ酸でもよい。

【0083】

親油性置換基は、本発明の化合物中の任意のアミノ酸側鎖に結合することができる。好ましくはアミノ酸側鎖は、スペーサー又は親油性置換基とともに、エステル、スルホニルエステル、チオエステル、アミド、又はスルホンアミドを形成するために、カルボキシル、ヒドロキシル、チオール、アミド、又はアミン基を含む。例えば親油性置換基は、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｄｂｕ、Ｄｐｒ、又はＯｒｎに結合することができる。好ましくは、親油性置換基はＬｙｓに結合される。本明細書の式中のＬｙｓとして示されるアミノ酸は、例えば、親油性置換基が添加されているＤｂｕ、Ｄｐｒ、又はＯｒｎにより置換することができる。

【0084】

親油性成分を含む親油性置換基の例は、以下の式に示される：

【0085】

【化4】

【0086】

ここで、本発明の化合物中のＬｙｓ残基は、アミド成分を介してγ−Ｇｌｕ（スペーサー）に共有結合される。パルミトイル（すなわち、ヘキサデカノイル）は、アミド成分を介してγ−Ｇｌｕスペーサーに共有結合され、こうしてヘキサデカノイル−イソＧＬｕ基を生成する。

【0087】

代替的に又は追加的に、本発明の化合物中の１つ又はそれ以上のアミノ酸側鎖は、例えば、溶解度及び／又はインビボ半減期（例えば血漿中）及び／又は生物学的利用能を上昇させるために、ポリマー成分に結合することができる。かかる修飾はまた、治療用タンパク質及びペプチドのクリアランス（例えば、腎クリアランス）を低下させることが知られている。

【0088】

熟練した読者は、例えば、“Comprehensive Organic Transformations, A Guide to Functional Group Preparations”, 2nd edition, Larock, R. C.; Wiley-VCH: New York, 1999に記載された一般的合成法を使用して、スペーサーと親油性成分との結合反応を行うために使用することができる適切な技術は、周知しているであろう。かかる変換は、合成プロセスの任意の適切な段階で起きることができる。

【0089】

ポリマー成分は、好ましくは水溶性（両親媒性又は親水性）、非毒性、及び薬理学的に不活性である。適切なポリマー成分は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＰＥＧのホモポリマー−又はコポリマー、ＰＥＧのモノメチル置換ポリマー（ｍＰＥＧ）、及びポリオキシエチレングリセロール（ＰＯＧ）を含む。例えば、Int. J. Hematology 68:1 (1998); Bioconjugate Chem. 6:150 (1995)；及びCrit. Rev. Therap. Drug Carrier Sys. 9:249 (1992)を参照。

【0090】

他の適切なポリマー成分は、ポリリジン、ポリアスパラギン酸、及びポリグルタミン酸などのポリアミノ酸を含む（例えば、Gombotz, et al. (1995) , Bioconjugate Chem. , vol. 6 : 332-351; Hudecz, et al. (1992) , Bioconjugate Chem. , vol. 3, 49-57; Tsukada, et al. (1984) , J. Natl. Cancer Inst. , vol 73, : 721-729; and Pratesi, et al. (1985), Br. J. Cancer, vol. 52: 841-848を参照）。

【0091】

ポリマー成分は、直鎖又は分岐鎖でもよい。これは、５００〜４０，０００Ｄａ、例えば５００〜１０，０００Ｄａ、１０００〜５０００Ｄａ、１０，０００〜２０，０００Ｄａ、２０，０００〜４０，０００Ｄａの分子量を有することができる。

【0092】

本発明の化合物は、２つ又はそれ以上のかかる成分を含むことができ、この場合、すべてのかかる成分の総分子量は、一般的に上記した範囲内に入るであろう。

【0093】

ポリマー成分は、アミノ酸側鎖のアミノ基、カルボキシル基、又はチオール基に（共有結合により）結合することができる。好適な例は、Ｃｙｓ残基のチオール基、及びＬｙｓ残基のイプシロンアミノ基である。Ａｓｐ及びＧｌｕ残基のカルボキシル基も使用することができる。

【0094】

熟練した読者は、結合反応を実施するのに使用することができる適切な技術を周知しているであろう。例えば、メトキシ基を有するＰＥＧ成分は、Nektar Therapeuticsから市販されている試薬を使用して、マレイミド結合によりＣｙｓチオール基に結合することができる。適切な化学の詳細については、国際公開第２００８／１０１０１７号パンフレット、及び上記引用文献を参照されたい。

【0095】

ペプチド合成
本発明の化合物は、標準的合成法、組換え発現系、又は任意の他の最新技術により製造することができる。すなわち、グルカゴン類似体は、例えば、
（ａ）固相法又は液相法を使用して、段階的に又は断片組み立てによりペプチドを合成し、最終的ペプチド生成物を単離し精製すること、又は
（ｂ）宿主細胞中でペプチドをコードする核酸構築体を発現させ、宿主細胞又は培養培地から発現生成物を回収すること、又は
（ｃ）ペプチドをコードする核酸構築体の無細胞インビトロ発現を行い、発現生成物を回収すること、
又は、（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）の方法の任意の組合せにより、ペプチドの断片を得て、次に、前記断片を連結させてペプチド得て、そして前記ペプチドを回収すること、
を含む方法を含む多くの方法で合成することができる。

【0096】

本発明の類似体は、固相又は液相ペプチド合成により合成することが好ましい。この点で、国際公開第９８／１１１２５号パンフレット、及び、Synthetic Peptides（第２版）中のFields, GB et al., 2002, "Principles and practice of solid-phase peptide synthesis"、及びその中の例を参照されたい。

【0097】

組換え発現のために、本発明の核酸断片は、通常、適切なベクター中に挿入されて、本発明の核酸断片を担持するクローニングベクター又は発現ベクターが形成される；かかる新規ベクターもまた、本発明の一部である。ベクターは、目的及び適用のタイプに依存して、プラスミド、ファージ、コスミド、ミニ染色体、又はウイルスの形態でもよく、ある細胞中で一過性にのみ発現されるネーキッドＤＮＡも重要なベクターである。本発明の好適なクローニングベクター及び発現ベクター（プラスミドベクター）は、自律複製が可能であり、従って、高レベル発現又は以後のクローニングのための高レベル複製の目的のための、高コピー数を可能にする。

【0098】

一般的に、発現ベクターは、５’→３’方向に機能できる形で結合した以下の特徴を有する：本発明の核酸断片の発現を駆動するためのプロモーター、任意に、分泌（細胞外相、又は該当する場合は周辺質へ）を可能にするリーダーペプチドをコードする核酸配列、本発明のペプチドをコードする核酸断片、及び任意に、ターミネーターをコードする核酸配列。これらは、選択マーカー及び複製開始点などの追加の特徴を含んでよい。産生株又は細胞株中で発現ベクターを操作する場合、ベクターは宿主細胞ゲノム内に組み込むことができることが好ましい。当業者は、適切なベクターを周知しており、その特定の要件に従ってこれを設計することができる。

【0099】

本発明のベクターは、宿主細胞を形質転換して本発明の化合物を産生するために使用される。かかる形質転換細胞（これも本発明の一部である）は、本発明の核酸断片及びベクターの増殖のために使用されるか、又は本発明のペプチドの組換え産生のために使用される、培養細胞又は細胞株でもよい。

【0100】

本発明の好適な形質転換細胞は、細菌［例えば、エシェリヒア種（例えば、大腸菌（E. coli）、バシラス種（例えば、枯草菌（Bacillus subtilis））、サルモネラ種］、又はマイコバクテリウム（Mycobacterium）種（好ましくは、非病原性、例えばエム・ボビスＢＳＧ）、酵母（例えば、サッカロミセス・セレビッシェ（Saccharomyces cerevisiae）、及びピキア・パストリス（Pichia pastoris））、及び原生動物などの微生物である。あるいは、形質転換細胞は多細胞生物から得ることができ、すなわち、これは、真菌細胞、昆虫細胞、藻類細胞、植物細胞、又は動物細胞（例えば、哺乳動物細胞）でもよい。クローニング及び／又は最適化発現の目的のために、形質転換細胞は本発明の核酸断片を複製することができることが好ましい。核酸断片を発現する細胞は、本発明の有用な実施態様である；これらは、本発明のペプチドの小規模又は大規模調製のために使用することができる。

【0101】

形質転換細胞を用いて本発明のペプチドを産生させる時、決して必須ではないが、発現生成物が培養培地中に分泌されることが便利である。

【0102】

効力
ＧＬＰ−１又はグルカゴン（Ｇｌｕ）受容体への関連化合物の結合は、アゴニスト活性の指標として使用することができるが、一般的には、前記化合物の関連受容体への結合により引き起こされる細胞内シグナル伝達を測定する生物学的アッセイを使用することが好ましい。例えば、グルカゴンアゴニストによるグルカゴン受容体の活性化は、細胞性サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）生成を刺激するであろう。同様に、ＧＬＰ−１アゴニストによるＧＬＰ−１受容体の活性化は、細胞性ｃＡＭＰ生成を刺激するであろう。すなわち、これらの２つの受容体の１つを発現する適切な細胞中のｃＡＭＰの産生は、関連する受容体活性を追跡するために使用することができる。従って、それぞれが１つの受容体を発現し他の受容体は発現しない細胞タイプの適切な対の使用は、両方のタイプの受容体に対するアゴニスト活性を測定するために使用することができる。

【0103】

熟練者は適切なアッセイフォーマットを周知しているであろうが、例が以下に示される。ＧＬＰ−１受容体及び／又はグルカゴン受容体は、実施例に記載されたような受容体の配列を有することができる。例えば、アッセイは、一次受け入れ番号ＧＩ：４５０３９４７を有するヒトグルカゴン受容体（Ｇｌｕｃａｇｏｎ−Ｒ）、及び／又は一次受け入れ番号ＧＩ：１６６７９５２８３を有するヒトグルカゴン様ペプチド１受容体（ＧＬＰ−１Ｒ）を使用することができる（前駆体タンパク質の配列が言及される時、もちろん、アッセイが、シグナル配列の欠如した成熟タンパク質を使用してもよいことを理解すべきであるという点で）。

【0104】

ＥＣ₅₀は、ある受容体におけるアゴニスト効力の数値的尺度として使用することができる。ＥＣ₅₀値は、ある具体的なアッセイにおいて、その化合物の最大活性の半分を達成するために必要な化合物の濃度の尺度である。すなわち、例えばある具体的なアッセイにおいて、グルカゴンのＥＣ₅₀［ＧＬＰ−１］より低いＥＣ₅₀［ＧＬＰ−１］を有する化合物は、グルカゴンより高いＧＬＰ−１受容体アゴニスト効力を有すると考えることができる。

【0105】

本明細書に記載の化合物は、グルカゴン受容体とＧＬＰ−１受容体の両方でｃＡＭＰ生成を刺激することができるという観察により確定されるように、典型的にはＧｌｕＧＬＰ−１二重アゴニストである。各受容体の刺激は、独立したアッセイで測定することができ、後に互いに比較される。

【0106】

ＧＬＰ−１受容体についてのＥＣ₅₀値（ＥＣ₅₀［ＧＬＰ−１−Ｒ］）をグルカゴン受容体についてのＥＣ₅₀値（ＥＣ₅₀［ＧｌｕｃａｇｏｎＲ］）と比較することにより、ある化合物について、相対的ＧＬＰ−１Ｒ選択性は以下のように計算することができる：

【0107】

相対的ＧＬＰ−１Ｒ選択性［化合物］＝（ＥＣ₅₀［ＧＬＰ−１−Ｒ］）／（ＥＣ₅₀［Ｇｌｕｃａｇｏｎ−Ｒ］）

【0108】

用語「ＥＣ₅₀」は、典型的にはある具体的な受容体での、又は受容体機能についてのある具体的なマーカーのレベルで、半最大有効濃度を意味し、特定の生化学的状況に依存して、阻害又はアンタゴニスト活性を指すことができる。

【0109】

特定の理論に拘束されるものではないが、ある化合物の相対的選択性は、ＧＬＰ−１受容体又はグルカゴン受容体に対するその作用を、他の受容体に対するその作用と直接比較することを可能にすることができる。例えば、ある化合物の相対的ＧＬＰ−１選択性が高いほど、その化合物は、グルカゴン受容体と比較して、ＧＬＰ−１受容体に対してより有効となり得る。典型的には、この結果は、同じ種からのグルカゴン受容体及びＧＬＰ−１受容体（例えば、ヒトグルカゴン受容体及びＧＬＰ−１受容体、又はマウスグルカゴン受容体及びＧＬＰ−１受容体）について比較される。

【0110】

特定レベルのグルカゴン−Ｒアゴニスト活性について、本化合物は、グルカゴンより高レベルのＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性（すなわち、ＧＬＰ−１受容体でのより大きな効力）を示すことができるという点で、本発明の化合物は、ヒトグルカゴンより高い相対的ＧＬＰ−１Ｒ選択性を有することができる。グルカゴン受容体及びＧＬＰ−１受容体での特定の化合物の絶対効力は、適切な相対的ＧＬＰ−１Ｒ選択性が達成される限り、天然のヒトグルカゴンの効力より高いか、低いか、又はほぼ等しくてもよいことは、理解されるであろう。

【0111】

しかし本発明の化合物は、ヒトグルカゴンより低いＥＣ₅₀［ＧＬＰ−１Ｒ］を有してもよい。本化合物は、ヒトグルカゴンのＥＣ₅₀［グルカゴン−Ｒ］より１０倍未満高い、ヒトグルカゴンのＥＣ₅₀［グルカゴン−Ｒ］より５倍未満高い、又はヒトグルカゴンのＥＣ₅₀［グルカゴン−Ｒ］より２倍未満高い、ＥＣ₅₀［グルカゴン−Ｒ］を維持しながら、グルカゴンより低いＥＣ₅₀［ＧＬＰ−１−Ｒ］を有してもよい。

【0112】

本発明の化合物は、ヒトグルカゴンのＥＣ₅₀［グルカゴン−Ｒ］より２倍未満であるＥＣ₅₀［グルカゴン−Ｒ］を有してもよい。本化合物は、ヒトグルカゴンのＥＣ₅₀［グルカゴン−Ｒ］の２倍未満のＥＣ₅₀［グルカゴン−Ｒ］、ヒトグルカゴンのＥＣ₅₀［グルカゴン−Ｒ］の半分未満のＥＣ₅₀［グルカゴン−Ｒ］、ヒトグルカゴンのＥＣ₅₀［グルカゴン−Ｒ］の５分の１倍未満のＥＣ₅₀［グルカゴン−Ｒ］、又はヒトグルカゴンのＥＣ₅₀［グルカゴン−Ｒ］の１０分の１倍未満のＥＣ₅₀［グルカゴン−Ｒ］を有してもよい。

【0113】

本化合物の相対的ＧＬＰ−１Ｒ選択性は、０．０５〜２０でもよい。例えば本化合物は、０．０５〜０．２０、０．１〜０．３０、０．２〜０．５、０．３〜０．７、又は０．５〜１．０；１．０〜２．０、１．５〜３．０、２．０〜４．０、又は２．５〜５．０；又は、０．０５〜２０、０．０７５〜１５、０．１〜１０、０．１５〜５、０．７５〜２．５、又は０．９〜１．１の相対的選択性を有してもよい。

【0114】

ある実施態様において、グルカゴン−Ｒ及びＧＬＰ−１Ｒの両方、例えばヒトグルカゴン受容体及びＧＬＰ−１受容体についての、ある特定の化合物のＥＣ₅₀は、１ｎＭ未満であることが望ましいことがある。

【0115】

治療用途
本発明の化合物は、後述されるように、特に肥満及び糖尿病を含む代謝疾患に対する魅力的な治療及び／又は予防選択肢を提供することができる。

【0116】

糖尿病は、インスリン分泌、インスリン作用、又はその両方の欠陥に起因する高血糖により特徴付けられる代謝疾患の群を含む。糖尿病の急性兆候は、過度の尿産生、結果として起きる代償渇きと水分摂取の増加、視力障害、原因不明の体重減少、倦怠感、エネルギー代謝の変化を含む。糖尿病の慢性高血糖は、種々の器官、特に眼、腎臓、神経、心臓及び血管の長期損傷、機能障害、及び機能不全に関連している。糖尿病は、病因的特徴に基づいて、１型糖尿病、２型糖尿病、及び妊娠糖尿病に分類される。

【0117】

１型糖尿病は、すべての糖尿病症例の５〜１０％を占め、インスリン分泌膵臓β細胞の自己免疫破壊によって引き起こされる。

【0118】

２型糖尿病は、糖尿病症例の９０％〜９５％を占め、代謝障害の複雑な集合の結果である。２型糖尿病は、内因性インスリン産生が、血漿グルコースレベルを診断閾値以下に維持するには不十分となった結果である。

【0119】

妊娠糖尿病は、妊娠中に特定される任意の程度の耐糖能異常を意味指す。

【0120】

糖尿病前症は、空腹時血糖障害及び耐糖能障害を含み、血糖レベルが上昇しているが、糖尿病の臨床診断を確立するレベルより低い時に発生する状態を指す。

【0121】

２型糖尿病及び糖尿病前症を持つ人の大部分は、腹部肥満（腹部内臓の周りの過剰な脂肪組織）、アテローム性脂質異常症（動脈壁におけるプラーク蓄積を促進する、高トリグリセリド、低ＨＤＬコレステロール、及び／又は高ＬＤＬコレステロールを含む血中脂肪障害）、血圧上昇（高血圧）、前血栓状態（例えば、血中の高フィブリノーゲン又はプラスミノーゲン活性化因子阻害剤１）、及び前炎症性状態（例えば、血中のＣ反応性蛋白の上昇）を含む、追加の代謝危険因子が高頻度に存在するために、罹患率と死亡率のリスクが高くなっている。

【0122】

逆に肥満は、糖尿病前症、２型糖尿病、並びにある種の癌、閉塞性睡眠時無呼吸、及び胆嚢ブレイダー病を発症するリスクを増加させる。

【0123】

脂質異常症は、心血管疾患のリスク上昇と関連している。血漿高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）濃度とアテローム性動脈硬化症のリスクとの間には逆相関が存在するため、ＨＤＬは臨床的に重要である。アテローム性動脈硬化プラークに貯蔵されているコレステロールの大部分は低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）に由来するため、高濃度のＬＤＬは、アテローム性動脈硬化症と密接に関連している。ＨＤＬ／ＬＤＬ比は、アテローム性動脈硬化症、特に冠動脈アテローム性動脈硬化症のための臨床的リスクの指標である。

【0124】

メタボリック症候群は、一人のヒトにおける一群の代謝危険因子によって特徴付けられる。これらは、腹部肥満（腹部内臓の周りの過剰な脂肪組織）、アテローム性脂質異常症（動脈壁内のプラーク蓄積を促進する、高トリグリセリド、低ＨＤＬコレステロール、及び／又は高ＬＤＬコレステロールを含む血中脂肪障害）、血圧上昇（高血圧）、インスリン抵抗性と耐糖能異常、前血栓状態（例えば、血中の高フィブリノーゲン又はプラスミノーゲン活性化因子阻害剤１）、及び前炎症性状態（例えば、血中のＣ反応性蛋白の上昇）を含む。

【0125】

メタボリック症候群を有する個人は、冠動脈性心疾患や動脈硬化症の他の症状（例えば、脳卒中及び末梢血管疾患）に関連する他の疾患のリスクが高い。この症候群の主要なリスク要因は、腹部肥満であるように思われる。

【0126】

特定の理論に拘束されるものではないが、本発明の化合物は、ヒトグルカゴン受容体及びヒトＧＬＰ１受容体の両方に対する２重アゴニストとして作用すると考えられる（ここで、２重ＧｌｕＧＬＰ−１アゴニストと略記される）。２重アゴニストは、例えば脂肪代謝に対するグルカゴンの作用を、例えば血中グルコースレベルと食物摂取に対するＧＬＰ−１の作用とを組合せることができる。従ってこれらは、過剰な脂肪組織の除去を加速し、持続性の体重減少を誘発し、血糖コントロールを改善するように作用することができる。２重ＧｌｕＧＬＰ−１アゴニストはまた、高コレステロール、高ＬＤＬコレステロール、低ＨＤＬ／ＬＤＬコレステロール比などの心血管危険因子を減少させるように作用することができる。

【0127】

従って本発明の化合物は、必要な被験体において、体重増加を防止し、体重減少を促進し、過剰な体重を減少させるか、又は肥満（病的肥満を含む）並びに関連する疾患及び健康状態（限定されるものではないが、炎症、肥満関連胆嚢疾患、及び肥満誘発性睡眠時無呼吸を含む）を治療（例えば、食欲、摂食、食物摂取、カロリー摂取、及び／又はエネルギー消費の制御による）するための薬剤として使用することができる。本発明の化合物はまた、治療の必要な被験体において、メタボリック症候群、インスリン抵抗性、耐糖能異常、糖尿病前症、空腹時グルコースの増加、２型糖尿病、高血圧、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、冠動脈性心疾患、末梢動脈疾患、及び脳卒中を含む、グルコース調節障害により引き起こされるか又はこれに関連する症状の治療に使用することもできる。これらの条件のいくつかは、肥満に関連していることがある。しかし、これらの症状に対する本発明の化合物の効果は、体重に対する効果を介して、全体的に又は部分的に媒介され得るか、又はそれらに独立していてもよい。

【0128】

２重ＧｌｕＧＬＰ−１アゴニストの相乗効果は、高コレステロール及びＬＤＬなどの心血管危険因子の減少をもたらすことができ、これは、体重に対するそれらの作用からは完全に独立していてもよい。

【0129】

従って上記したように、本発明は、それを必要とする個体において、上記した症状の治療における本発明の化合物の使用を提供する。

【0130】

本発明はまた、医学的治療法、特に上記した症状の治療法で使用するための本発明の化合物を提供する。

【0131】

好適な態様において、記載した化合物は、糖尿病、特に２型糖尿病を治療するのに使用することができる。

【0132】

具体的な実施態様において本発明は、それを必要とする個体において、糖尿病、特に２型糖尿病を治療するための化合物の使用を含む。

【0133】

あまり好適な態様において、記載した化合物は、体重増加を防止するか、又は体重減少を促進するのに使用することができる。

【0134】

具体的な実施態様において本発明は、それを必要とする個体において、体重増加を防止するか、又は体重減少を促進するための化合物の使用を含む。

【0135】

具体的な実施態様において本発明は、それを必要とする個体において、体重過多により引き起こされるか又はこれを特徴とする症状の治療法、例えば、肥満、病的肥満、手術前の病的肥満、肥満に関連する炎症、肥満に関連する胆嚢疾患、肥満誘発性睡眠時無呼吸、糖尿病前症、糖尿病、特に２型糖尿病、高血圧、アテローム性脂質異常症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、冠動脈性心疾患、末梢動脈疾患、脳卒中又は微小血管疾患の治療及び／又は予防法における、化合物の使用を含む。

【0136】

別の態様において、記載した化合物は、循環ＬＤＬレベルを低下させるか、及び／又はＨＤＬ／ＬＤＬ比を上昇させる方法で使用することができる。

【0137】

具体的な実施態様において本発明は、それを必要とする個体において、循環ＬＤＬレベルを低下させるか、及び／又はＨＤＬ／ＬＤＬ比を上昇させる方法における、化合物の使用を含む。

【0138】

別の態様において、記載した化合物は、循環トリグリセリドレベルを低下させる方法で使用することができる。

【0139】

医薬組成物
本発明の化合物は、保存又は投与用に調製される医薬組成物として製剤化することができる。このような組成物は、典型的には、本発明の化合物の治療有効量を、適切な形態で、医薬的に許容し得る担体中に含む。

【0140】

本発明の化合物の治療有効量は、投与経路、治療される哺乳動物の種類、及び検討中の特定の哺乳類の身体的特徴に依存するであろう。これらの因子と、この量を決定するための関係を、医学分野の当業者は周知している。この量及び投与方法は、最適の効力を達成するために調整することができ、体重、食事、併用薬剤、及び他の因子（医学分野の当業者は周知している）に依存することがある。ヒトへの使用のために最も適切な投与サイズ及び投与計画は、本発明によって得られた結果から導かれてもよく、適切に計画された臨床試験で確認してもよい。本発明の化合物は、ヒトの治療のために特に有用であり得る。

【0141】

効果的な投与量及び治療プロトコルは、実験動物において低用量から開始し、効果を追跡しながら投与量を増加させ、そして、同様に組織的に投与計画を変化させる従来法によって決定することができる。ある被験体について最適な用量を決定する時、臨床医は多くの要因を考慮することができる。このような考慮事項は、当業者には公知である。

【0142】

用語「医薬的に許容し得る担体」は、任意の標準的医薬担体を含む。治療用途の医薬的に許容し得る担体は医薬分野で公知であり、例えばRemington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit. 1985)に記載されている。例えば、酸性ｐＨ又は生理学的ｐＨの無菌食塩水及びリン酸緩衝化食塩水を使用することができる。ｐＨ緩衝剤は、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、重炭酸アンモニウム、ジエタノールアミン、ヒスチジン（これは好適な緩衝剤である）、アルギニン、リジン、もしくは酢酸塩、又はそれらの混合物でもよい。この用語はさらに、ヒトを含む動物での使用のための、米国薬局方に記載されている任意の薬剤を包含する。

【0143】

用語「医薬的に許容し得る塩」は、本発明の化合物の任意の１つを指す。塩は、酸付加塩及び塩基性塩のような医薬的に許容し得る塩を含む。酸付加塩の例としては、塩酸塩、クエン酸塩、及び酢酸塩が挙げられる。塩基性塩の例としては、陽イオンが、ナトリウム、カリウム、カルシウムなどのアルカリ金属、カルシウム及びアンモニウムイオン⁺Ｎ（Ｒ³）₃（Ｒ⁴）（ここで、Ｒ³及びＲ⁴は、任意に置換されたＣ_1-6アルキル、任意に置換されたＣ_2-6アルケニル、任意に置換されたアリール、任意に置換されたヘテロアリールを独立して示す）などのアルカリ土類金属から選択される塩が挙げられる。医薬的に許容し得る塩の他の例は、“Remington’s Pharmaceutical Sciences” ,17th edition. Ed. Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, U.S.A., 1985、及びより最近の版、及びthe Encyclopaedia of Pharmaceutical Technologyに記載されている。

【0144】

「治療」は、有益な又は所望の臨床結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のために、有益な又は所望の臨床結果としては、限定されるものではないが、症状の緩和、疾患の程度の低減、疾患状態の安定化（すなわち、悪化しない）状態、疾患進行の遅延又は減速、疾患状態の改善又は緩和、及び検出可能又は検出不可能な寛解（部分的又は全身性）を含む。「治療」はまた、治療を受けない場合に予想される生存期間と比較して生存期間を延長することを意味することができる。「治療」は、障害の発症を予防するか、又は障害の病状を変化させる意図で行われる介入である。したがって、「治療」は、ある実施態様において、治療的処置及び予後的又は予防的手段の両方を指す。治療を必要とする者は、すでに障害を有する者、並びに障害が予防されるべき者を含む。治療は、治療が存在しない時と比較して、病状又は症状の拡大（例えば、体重増加、高血糖）を阻害又は低減することを意味し、必ずしも関連する症状の完全な停止を意味するものではない。

【0145】

医薬組成物は、単位剤型であってもよい。かかる剤型において組成物は、適切量の活性成分を含む単位用量に分割される。単位剤型は、個別量の調製物を含むパッケージ化された調製物、例えば、パケット化錠剤、カプセル剤、及びバイアル又はアンプル中の粉末でもよい。単位剤型はまた、それ自体カプセル剤、カシェ剤、又は錠剤でもよく、又は適切な数のこれらのパッケージ形態のいずれかでもよい。これは、単回投与用の注射形態で、例えばペンの形態で提供してもよい。ある実施態様において、パッケージ形態は、使用説明を有するラベル又は挿入物でもよい。組成物は、任意の適切な投与経路及び投与手段用に製剤化することができる。医薬的に許容し得る担体又は希釈剤は、経口、直腸、経鼻、局所的（口腔及び舌下を含む）、経膣、又は非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、及び経皮を含む）投与に適した調製物で使用されるものを含む。この調製物は、単位剤型で提示されることが便利であり、薬剤学の分野で公知の任意の方法により調製することができる。

【0146】

本明細書に記載の化合物について、皮下又は経皮的投与が特に適しているであろう。

【0147】

本発明の組成物はさらに、化合物の安定性を増強するために、生物学的利用能を上昇させるために、溶解度を上昇させるために、有害作用を低下させるために、当業者に公知の時間療法を達成するために、及び患者コンプライアンスを上昇させるために、又はこれらの任意の組合せのために、共有、疎水性、及び静電的相互作用を介して、薬剤担体、薬剤送達システム、及び進化型薬剤送達システムに調合するか、又はこれに結合させることができる。担体、薬剤送達システム、及び進化型薬剤送達システムの例は、限定されるものではないが、ポリマー、例えばセルロース及び誘導体、多糖、例えばデキストラン及び誘導体、デンプン及び誘導体、ポリ（ビニルアルコール）、アクリレート及びメタクリレートポリマー、ポリ乳酸とポリグリコール酸、及びこれらのブロックコポリマー、ポリエチレングリコール、担体タンパク質、例えばアルブミン、ゲル、例え、熱ゲル化システム、例えば当業者に公知のブロックコポリマー系、ミセル、リポソーム、微小球、ナノ粒子、液晶及びこれらの分散物、液体−水系の相挙動の分野の当業者に公知のＬ２相及びその分散物、ポリマーミセル、多相エマルション、自己乳化性、自己ミクロ乳化性、シクロデキストリン及びその誘導体、及びデンドリマーを含む。

【0148】

併用療法
本発明の化合物又は組成物は、肥満、高血圧、脂質異常症、又は糖尿病の治療のための薬剤との併用療法の一部として投与してもよい。

【0149】

このような場合、活性物質は、一緒に又は別々に、及び同じ医薬製剤として又は別の製剤として投与してもよい。

【0150】

すなわち本発明の化合物又は組成物はさらに、限定されるものではないが、グルカゴン様ペプチド受容体１アゴニスト、ペプチドＹＹ又はその類似体、カンナビノイド受容体１アンタゴニスト、リパーゼ阻害剤、メラノコルチン受容体４アゴニスト、又はメラニン凝集ホルモン受容体１アンタゴニストを含む抗肥満薬と組み合わせて使用することができる。

【0151】

本発明の化合物又は組成物は、限定されるものではないが、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、利尿薬、ベータ遮断薬、又はカルシウムチャネル遮断薬を含む抗高血圧薬と組み合わせて使用することができる。

【0152】

本発明の化合物又は組成物は、限定されるものではないが、スタチン、フィブラート、ナイアシン、及び／又はコレステロール吸収阻害剤を含む脂質異常症薬と組み合わせて使用することができる。

【0153】

さらに、本発明の化合物又は組成物は、限定されるものではないが、ビグアニド（例えば、メトホルミン）、スルホニル尿素、メグリチニド又はグリニド（例えばナテグリニド）、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、グリタゾン、異なるＧＬＰ−１アゴニスト、インスリン又はインスリン類似体を含む抗糖尿病薬と組み合わせて使用することができる。好適な実施態様において、化合物又はその塩は、適切な血糖コントロールを達成するために、インスリン又はインスリン類似体、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、スルホニル尿素又はメトホルミン、特にスルホニル尿素又はメトホルミンと組み合わせて使用される。インスリン類似体の例は、限定されるものではないが、ランタス、ノボラピッド、ヒューマログ、ノボミックス、及びアクトラファンＨＭ、レベミル、及びアピドラを含む。

【実施例】

【0154】

実施例１
グルカゴン類似体の一般的合成
ポリスチレン樹脂（TentaGel S Ram）上でＮＭＰ中の標準的Ｆｍｏｃ法を使用してマイクロ波支援合成機で、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）を行った。塩基としてのＤＩＰＥＡとともに、ＨＡＴＵを結合試薬として使用した。脱保護用に、ピペリジン（ＮＭＰ中２０％）を使用した。シュードプロリン：Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（psiMe, Mepro）−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ（psiMe, Mepro）−ＯＨ（NovaBiochemから購入）を適宜使用した。

【0155】

使用した略語は以下の通りである：
Ｂｏｃ： ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
ｉｖＤｄｅ： １−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）３−メチル−ブチル
Ｄｄｅ： １−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−エチル
ＤＣＭ： ジクロロメタン
ＤＭＦ： Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＩＰＥＡ： ジイソプロピルエチルアミン
ＥＤＴ： １，２−エタンジチオール
ＥｔＯＨ： エタノール
Ｅｔ₂Ｏ： ジエチルエーテル
ＨＡＴＵ： Ｎ−［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール［４，５−ｂ］ピリジン−１−イルメチレン］−Ｎ−メチルメタナミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキシド
ＭｅＣＮ： アセトニトリル
ＮＭＰ： Ｎ−メチルピロリドン
ＴＦＡ： トリフルオロ酢酸
ＴＩＳ： トリイソプロピルシラン

【0156】

切断：
９５／２．５／２．５％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ／ＴＩＳ／水を用いて室温（ｒ．ｔ．）で２時間処理することにより、粗ペプチドを樹脂から切断した。配列中にメチオニンを有するペプチドについては、９５／５（ｖ／ｖ）ＴＦＡ／ＥＤＴの混合物を使用した。ＴＦＡの大部分を減圧下で除去し、粗ペプチドを沈殿させ、ジエチルエーテルで洗浄し、周囲温度で一定重量になるまで乾燥させた。

【0157】

以下の化合物が合成された：
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳ−ＯＨ（化合物１）、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ−ＯＨ（化合物２）、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＲＡ−ＯＨ（化合物３）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳＡ−ＮＨ₂（化合物４）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物５）、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＲＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＬＲＡ−ＮＨ₂（化合物６）、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＬＲＡ−ＮＨ₂（化合物７）、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳ−ＮＨ₂（化合物８）、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＲ−ＯＨ（化合物９）、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＥＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物１０）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＲＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳ−ＯＨ（化合物１１）、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＲＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ−ＮＨ₂（化合物１２）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＬＳＡ−ＯＨ（化合物１３）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＲＡＫＤＦＩＥＷＬＬＳＡ−ＯＨ（化合物１４）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物１５）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物１６）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＥＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＯＨ（化合物１７）、
Ｈ−ＨＳＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＥＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＯＨ（化合物１８）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＨＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＥＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物１９）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物２０）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物２１）、
Ｈ−ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物２２）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＨＤＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物２３）、
Ｈ−Ｈ−Ａｉｂ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＥＳ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＥＤＦＶＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物２４）、
Ｈ−Ｈ−ＤＳｅｒ−ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＡＡＫＤＦＩＥＷＬＥＳＡ−ＮＨ₂（化合物２５）。

【0158】

実施例２
アシル化グルカゴン類似体の一般的合成
グルカゴン類似体の一般的合成のために上記のようにペプチド骨格を合成したが、これは、ペプチドが樹脂にまだ結合したままリジン残基の側鎖上でアシル化して、アシル化すべきリジンリジン上のイプシロンアミン以外を、側鎖基上で完全に保護した。アシル化すべきリジンをＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−ＯＨ又はＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）−ＯＨを用いて取り込んだ。ペプチドのＮ末端を、ＮＭＰ中のＢｏｃ₂Ｏを用いてＢｏｃ基で保護した。ペプチドが未だ樹脂に結合したまま、ＮＭＰ中５％ヒドラジン水和物を使用して、ｉｖＤｄｅ保護基を選択的に切断した。次に、保護していないリジン側鎖をＦｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕのようなスペーサーアミノ酸に結合させ、次にこれをピペリジンで脱保護し、上記した標準的ペプチド結合法を使用して、脂肪酸でアシル化した。代替的に、Ｎ末端のヒスチジンを、最初からＢｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨとして取り込んでもよい。樹脂からの切断と精製は、上記したように行った。

【0159】

実施例３
グルカゴン受容体とＧＬＰ−１受容体の効力アッセイ
ヒトグルカゴン受容体（グルカゴン−Ｒ）（一次受け入れ番号Ｐ４７８７１）又はヒトグルカゴン様ペプチド−１受容体（ＧＬＰ−１Ｒ）（一次受け入れ番号Ｐ４３２２０）をコードするｃＤＮＡを合成し、Zeocin耐性マーカーを含有する哺乳動物発現ベクター中にクローン化した。

【0160】

グルカゴン−Ｒ又はＧＬＰ−１−Ｒをコードする哺乳動物発現ベクターを、Altracten法によりチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞中にトランスフェクトさせた。選択圧力に耐性の細胞の限界希釈によるZeocin選択（２５０μｇ／ｍｌ）により、安定に発現しているクローンを得た。発現しているグルカゴン−Ｒ及びＧＬＰ−１−Ｒ細胞クローンを取り上げ、増殖させ、後述のグルカゴン−Ｒ及びＧＬＰ−１−Ｒ効力アッセイで試験した。１つのグルカゴン−Ｒ発現クローンと１つのＧＬＰ−１−Ｒ発現クローンを、化合物プロファイリングのために選択した。

【0161】

ヒトグルカゴン−Ｒ又はヒトＧＬＰ−１−Ｒを発現するＣＨＯ細胞を接種した２４時間後、１００μＬの増殖培地中で９６ウェルマイクロタイタープレート中のウェル当たり３０，０００細胞の培養でアッセイした。分析の日に、増殖培地を除去し、細胞を２００μＬのアッセイ緩衝液（クレブス−リンゲル−緩衝液−ＫＲＢＨ）で１回洗浄した。緩衝液を除去し、増加する濃度の試験ペプチドを含有する脱イオン水中の０．１ｍＭ ＩＢＭＸを有する１０μＬのＫＲＢＨ（ＫＲＢＨ＋１０ｍＭヘペス、５ｍＭ ＮａＨＣＯ３、０．１％（ｖ／ｖ）ＢＳＡ）中で室温で１５分インキュベートした。溶解バッファー（０．１％ｗ／ｖ ＢＳＡ、５ｍＭヘペス、０．３％ｖ／ｖツイーン２０）の添加により、反応を停止させた。室温で１０分間、細胞を溶解後、溶解物を３８４ウェルプレートに移し、AlphaScreen（登録商標）cAMP Functional Assay Kitに含まれるような１０μＬのアクセプター／ドナービーズ混合物を加えた。暗所で室温で１時間インキュベーション後、ｃＡＭＰ内容物を、Perkin-ElmerのAlphaScreen（登録商標）cAMP Functional Assay Kitを適用して、製造業者の説明書に従って測定した。コンピューター支援曲線フィッティングを適用して、基準化合物（グルカゴンとＧＬＰ−１）と比較したＥＣ₅₀と相対的効力を計算した。すでに定義したように、ＧＬＰ−１／グルカゴン比を計算した。表１Ａと１Ｂとを参照されたい。

【0162】

【表1A】

【表1B】

【0163】

異なる実験室で同じプロトコールを使用して行われた実験で、２セットの化合物を試験した。

【0164】

実施例４
内因性ＧＬＰ−１受容体上のアゴニスト活性
内因性ＧＬＰ−１受容体上の試験化合物のアゴニスト活性を、マウスインスリノーマ細胞株を使用して測定した。受容体活性化の指標として、細胞内ｃＡＭＰを使用した。

【0165】

細胞を３６４ウェルプレート中で１０，０００細胞／ウェルの密度で２４時間培養した。培地を除去し、試験化合物又はＧＬＰ−１（０．１ｐＭ〜１００ｎＭへ上昇する濃度で）を含有する１０μＬのＫＲＢＨ緩衝液（ＮａＣｌ １３０ｍＭ、ＫＣｌ ３．６ｍＭ、ＮａＨ₂ＰＯ₄ ０．５ｍＭ、ＭｇＳＯ₄ ０．５ｍＭ、ＣａＣｌ₂ １．５ｍＭ）、又は溶媒対照（０．１％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯ）を、２６℃の温度で１５分間ウェルに加えた。

【0166】

細胞性ｃＡＭＰ内容物を、AlphaScreen（登録商標）cAMP Functional Assay Kit（Perkin Elmer）を使用して測定した。測定は、Envision（Perkin Elmer）を使用して製造業者の推奨に従って行った。

【0167】

すべての測定は、４重測定で行った。

【0168】

結果は、０．１％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯを含有するＫＲＢＨ緩衝液中で調製したｃＡＭＰ標準曲線を使用して、ｃＡＭＰ濃度に変換した。得られたｃＡＭＰ曲線を、ｌｏｇ（試験化合物濃度）に対する絶対ｃＡＭＰ濃度（ｎＭ）としてプロットし、曲線フィッティングプログラムＸＬｆｉｔを使用して解析した。

【0169】

内因性ＧＬＰ−１受容体上の各試験化合物の効力並びにアゴニスト活性を説明するために計算されたパラメータは：
ｐＥＣ５０（ＥＣ５０の負のｌｏｇ値、ｃＡＭＰレベルの半最大上昇を与える濃度、試験化合物の効力を反映する）；
パーセント対照（％ＣＴＬ）（ＧＬＰ−１誘導性の最大ｃＡＭＰ応答（１００％ＣＴＬ）に基づいて標準化された各試験化合物濃度についての％ｃＡＭＰ上昇）。表２を参照。

【0170】

【表2】

【0171】

実施例５
内因性グルカゴン受容体上のアゴニスト活性
内因性グルカゴン受容体上の試験化合物のアゴニスト活性を、初代培養肝細胞中のグリコーゲン合成速度に対するこれらの作用を測定することにより決定した。グリコーゲン受容体の活性化について、グリコーゲン合成の阻害が予測される。一定時間で細胞性グリコーゲン貯蔵中へ取り込まれる放射能標識グルコースの量を計測することにより、グリコーゲン合成速度を測定した。

【0172】

初代培養ラット肝細胞を、２４ウェルプレート中で４０，０００細胞／ウェルの密度で、３７℃で５％ＣＯ₂で２４時間培養した。

【0173】

培地を廃棄し、細胞をＰＢＳで洗浄した。次に、０．１％ＢＳＡと２２．５ｍＭ濃度のグルコースを含有する１８０μＬのＫＲＢＨ系の緩衝液をウェルに加え、次に試験化合物と４０μＣｉ／ｍｌのＤ−［Ｕ１４Ｃ］グルコース（各２０μＬ）を加えた。インキュベーションを３時間続けた。

【0174】

インキュベーション時間の最後に、インキュベーション緩衝液を吸引し、細胞を氷冷ＰＢＳで１回洗浄した後、１００μＬの１ｍｏｌ／ｌ ＮａＯＨで室温で３０分間インキュベートして、溶解させた。

【0175】

細胞溶解物を９６ウェルのフィルタープレートに移し、フィルタープレを４℃で１２０分間インキュベートすることによりグリコーゲンを沈殿させ、次にフィルタープレートを氷冷エタノール（７０％）で４回洗浄した。生じた沈殿物をろ過して乾燥させ、取り込まれた¹⁴Ｃ−グルコースの量を、Topcountシンチレーションカウンターを使用して製造業者の推奨に従って測定した。

【0176】

ビヒクル対照（ＫＲＢＨ緩衝液中０．１％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯ）を、非阻害グリコーゲン合成のための基準物質として含めた。Ｄ−［Ｕ¹⁴Ｃ］グルコースを添加していないウェルを、非特異的バックグランドシグナルの対照（すべての値から引かれる）として含めた。内因性グルカゴンペプチドを陽性対照として使用した。

【0177】

すべての処理は、少なくとも三重測定で行った。

【0178】

内因性グルカゴン受容体上の各試験化合物の効力並びにアゴニスト活性を記載するために計算されるパラメータは、ｐＥＣ５０と％ＣＴＬである。

【0179】

試験化合物の存在下のＣＰＭ／ウェルのパーセントを、バックグランドＣＰＭ／ウェルを引いた後のビヒクル対照のＣＰＭ／ウェルと比較して計算することにより、％ＣＴＬが決定される：
［ＣＰＭ／ウェル（基礎）−ＣＰＭ／ウェル（試料）］^*１００／［ＣＰＭ／ウェル（基礎）−ＣＰＭ／ウェル（対照）］

【0180】

グルカゴン受容体のアクチベーターは、グリコーゲン合成速度の阻害を与え、０％ ＣＴＬ（完全な阻害）と１００％ ＣＴＬ（阻害は観察されない）の間の％ＣＴＬ値を与えるであろう。

【0181】

生じた活性曲線を、ｌｏｇ（試験化合物濃度）に対する絶対カウント（単位：ｃｐｍ／試料）としてプロットし、曲線フィッティングプログラムＸＬｆｉｔを使用して解析した。

【0182】

ｐＥＣ５０（ＥＣ５０の負の対数値）は、試験化合物の効力を反映する。

【0183】

【表3】

【0184】

ＧＬＰ−１Ｒ活性化に関して引用される用語ＥＣ₅₀とｐＥＣ₅₀は、グリコーゲン合成に関して、同様にＩＣ５０とｐＩＣ５０と見なすことができるであろう。

【0185】

実施例６
薬物動態パラメータの推定
試験化合物の薬物動態パラメータを、Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊマウスへの皮下及び静脈内投与後に測定した。

【0186】

試験施設への到着時の体重が約２０〜２５ｇの８週齢のオスのＣ５７Ｂｌ／６Ｊマウスを、Taconic（Denmark）から得た。マウスを、１２時間の暗期サイクルと１２時間の明期サイクル（６：００に点灯）を有するヨーロッパ標準ケージＩＩＩ型中で飼った。全実験期間中、餌、Altromin 1324（Altromin, Germany）、及び水は自由に与えた。適切な順化を確実にするために、８〜１１週齢の動物を、実験操作の開始の少なくとも７日前には実験室に輸入した。サンプリング後、マウスを頸椎脱臼により安楽死させた。

【0187】

化合物をまず０．０９６％のアンモニウム水に溶解して公称濃度２ｍｇ／ｍｌとし、次に２５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を含有する無菌ＰＢＳで所望の活性成分含量（４μＭ）に希釈した。２０ｎｍｏｌ／ｋｇに相当する皮下及び静脈内注射を行った。ＧＬＰ−１−グルカゴン２重アゴニストを、皮下投与用に頸部領域に投与し、静脈内投与用に側尾静脈を介して投与した。

【0188】

血液試料（２５０μｌ）を眼窩周囲神経叢から、皮下投与については０．５、２、４、６、１２、１６、２０、２４時間の時点で、静脈内投与については１０、３０分、３、、６、１２、１８、２４時間の時点で、氷冷したＫ₃ＥＤＴＡ試験管中に採取し、サンプリング後２０分以内に４℃で５分遠心分離した。血漿（＞１００μｌ）を氷冷したMicronic試験管に分離し、直ちに凍結し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを使用して各ＧＬＰ−１−グルカゴン化合物について血漿濃度について分析するまで−７０℃に維持した。WinNonLin v6.3（Pharsight, Mountain View, Calif., USA）で非コンパートメントアプローチにより個々の血漿濃度プロフィールを解析し、生じる薬物動態パラメータを測定した。表４を参照されたい。

【0189】

【表4】

【0190】

実施例７
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける経口耐糖能試験（ＯＧＴＴ）
オスのＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを１０時間絶食させた後、２ｇ／ｋｇ体重の経口グルコースボラスを投与した。２５ｍＭリン酸塩で緩衝化させた食塩水にペプチドを溶解させ、１０ｎｍｏｌ／ｋｇ体重の用量で皮下注射により投与した４時間後、グルコースボラスを投与した。対照動物には、ビヒクル注射のみを行った。群の大きさは１群７匹であった。尾の出血により、投与前血液試料とグルコース投与前血液試料（０分）を得て、血中グルコースをグルコメーターで測定した。血中グルコースを測定するための追加の尾の血液試料を、グルコース負荷の１５分、３０分、６０分、９０分、及び１２０分後に得た。０〜１２０分の間の血中グルコース−時間曲線（ＡＵＣ）下の全面積を計算することにより、グルコース偏位（excursion９を定量した。データは、平均±ＳＥＭとして提示される。一元配置分散分析の後にテューキーのポストテスト（Tukey's post test）により、統計的比較を行った。

【0191】

【表5】

【0192】

実施例８
食餌誘導性肥満Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける脂肪症に対するグルカゴン−ＧＬＰ−１受容体２重作用性アゴニストの亜慢性作用
５週齢のオスのＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（Taconic A/S, Denmark）を、１２：１２時間の明−暗周期で高脂肪食（脂肪から総エネルギーの６０％、D12492, Research Diet Inc.）で２０週間維持した。次に、すべてのマウス（１ケージにつき２匹収容）を、１週間モック処理して、取り扱いと注射に対してマウスを慣れさせた。次に、マウスを体脂肪量（磁気共鳴法により測定）と体重に従って、９群（ｎ＝９〜１２）に層別した。次に動物を、ビヒクル（２５ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７．４）又は試験物質（１回投与当たり５ｎｍｏｌ／ｋｇ、ビヒクルと等しい量で）の皮下注射（５ｍｌ／ｋｇ）で１日に２回、全部で３１日間処理した。毎日の注射は、明期の開始時と終了時に行った。試験中毎日、体重、食物摂取、及び水分摂取を測定した。データは表６に平均体重変化±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として示される。Ｓ．Ｅ．Ｍ．は平均の標準誤差であり、式：Ｓ．Ｅ．Ｍ．＝ＳＤ／平方根（ｎ）を使用して計算され、ここで、ＳＤは標準偏差であり、ｎは観察の数（この場合、１群当たりの動物数）である。

【0193】

統計解析は、Graph Pad Prism バージョン５使用して行った。測定したパラメータを、一元配置分散分析と、次にダネット（Dunnett）の多重比較検定により比較した。差は、ｐ＜０．０５で統計的に有意であると見なされた。

【0194】

【表6】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]