特許 6342285 粒子分析装置における異常判定方法、分析装置における精度管理方法、および粒子分析装置

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6342285

(24)【登録日】2018年5月25日

(45)【発行日】2018年6月13日

(54)【発明の名称】粒子分析装置における異常判定方法、分析装置における精度管理方法、および粒子分析装置

(51)【国際特許分類】

   G01N 21/64 20060101AFI20180604BHJP

   G01N 15/00 20060101ALI20180604BHJP

【ＦＩ】

   G01N21/64 F

   G01N15/00 C

【請求項の数】28

【全頁数】27

(21)【出願番号】特願2014-202184(P2014-202184)

(22)【出願日】2014年9月30日

(65)【公開番号】特開2016-70833(P2016-70833A)

(43)【公開日】2016年5月9日

【審査請求日】2017年3月28日

(73)【特許権者】

【識別番号】390014960

【氏名又は名称】シスメックス株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100111383

【弁理士】

【氏名又は名称】芝野 正雅

(72)【発明者】

【氏名】横山 光士

(72)【発明者】

【氏名】森▲崎▼ 博実

【審査官】 吉田 将志

(56)【参考文献】

【文献】 特開２００７−０４７１５４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１４−０３６６１８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０９−２７４０３５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００９−０５８２３３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１４−００１９４９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２０１３／０１３０２３６（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 米国特許出願公開第２０１２／０２９５３３９（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 米国特許出願公開第２００９／００２３１２９（ＵＳ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｇ０１Ｎ ２１／６２−７４

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

試料調製部および光学検出部を備える粒子分析装置における異常判定方法であって、
前記試料調製部によって、蛍光色素を含む試薬と、前記蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、前記蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子とを混合して混合物を調製し、
前記光学検出部によって、フローセルに前記混合物を流し、前記フローセルを流れる前記第１および第２コントロール粒子に光を照射して、前記第１コントロール粒子および前記第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、
前記第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、前記第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、
前記第１管理値と前記第２管理値とから算出される値または前記第１管理値と前記第２管理値の割合に基づき、少なくとも前記試料調製部における染色の異常を判定し、
前記第１コントロール粒子が細胞であり、
前記試薬が、前記第１コントロール粒子としての細胞の核を染色する核酸染色色素を含む、異常判定方法。

【請求項2】

試料調製部および光学検出部を備える粒子分析装置における異常判定方法であって、
前記試料調製部によって、蛍光色素を含む試薬と、前記蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子とを混合して混合物を調製し、
前記光学検出部によって、前記混合物をフローセルに流し、前記フローセルを流れる前記第１コントロール粒子に光を照射して、前記第１コントロール粒子からの蛍光を検出し、
前記光学検出部によって、蛍光を発する第２コントロール粒子を前記フローセルに流し、前記フローセルを流れる前記第２コントロール粒子に光を照射して、前記第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、
前記第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、前記第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、
前記第１管理値と前記第２管理値とから算出される値または前記第１管理値と前記第２管理値の割合に基づき、少なくとも前記試料調製部における染色の異常を判定し、
前記第１コントロール粒子が細胞であり、
前記試薬が、前記第１コントロール粒子としての細胞の核を染色する核酸染色色素を含む、異常判定方法。

【請求項3】

前記第２管理値に基づいて、前記光学検出部における異常を判定する、請求項１または２に記載の異常判定方法。

【請求項4】

前記第２管理値が異常である場合、および、前記第１管理値と前記第２管理値とから算出された値または割合が異常である場合、前記粒子分析装置による臨床検体の測定を禁止する、請求項１ないし３の何れか一項に記載の異常判定方法。

【請求項5】

少なくとも前記第１管理値と前記第２管理値とから算出された値または割合が異常である場合、試薬の交換を促すメッセージを前記粒子分析装置に出力させる、請求項４に記載の異常判定方法。

【請求項6】

少なくとも前記第２管理値に基づく異常判定結果と、前記第１管理値と前記第２管理値とから算出された値または割合に基づく異常判定結果とを一覧表形式で前記粒子分析装置に出力させる、請求項１ないし５の何れか一項に記載の異常判定方法。

【請求項7】

前記試料調製部は、蛍光色素を含む前記試薬に加えて、ＲＮＡを除去するＲＮＡ除去剤を用いて前記混合物を調製する、請求項１ないし６の何れか一項に記載の異常判定方法。

【請求項8】

試料調製部および光学検出部を備える粒子分析装置における異常判定方法であって、
前記試料調製部によって、蛍光色素を含む試薬と、前記蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、前記蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子とを混合して混合物を調製し、
前記光学検出部によって、フローセルに前記混合物を流し、前記フローセルを流れる前記第１および第２コントロール粒子に光を照射して、前記第１コントロール粒子および前記第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、
前記第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、前記第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、
前記第１管理値と前記第２管理値とに基づいて第３管理値を算出し、算出した前記第３管理値が基準範囲から外れるか否かにより、前記試料調製部における染色の異常を判定する、異常判定方法。

【請求項9】

試料調製部および光学検出部を備える粒子分析装置における異常判定方法であって、
前記試料調製部によって、蛍光色素を含む試薬と、前記蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子とを混合して混合物を調製し、
前記光学検出部によって、前記混合物をフローセルに流し、前記フローセルを流れる前記第１コントロール粒子に光を照射して、前記第１コントロール粒子からの蛍光を検出し、
前記光学検出部によって、蛍光を発する第２コントロール粒子を前記フローセルに流し、前記フローセルを流れる前記第２コントロール粒子に光を照射して、前記第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、
前記第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、前記第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、
前記第１管理値と前記第２管理値とに基づいて第３管理値を算出し、算出した前記第３管理値が基準範囲から外れるか否かにより、前記試料調製部における染色の異常を判定する、異常判定方法。

【請求項10】

前記第３管理値は、前記第１管理値を前記第２管理値で除した値である、請求項８または９に記載の異常判定方法。

【請求項11】

前記第１管理値および第２管理値を軸とする座標空間において、前記第１および第２コントロール粒子から取得した前記第１管理値および第２管理値に対応する座標が、正常範囲を示す領域内にない場合、少なくとも前記試料調製部における染色の異常を報知することをさらに含む、請求項１ないし１０の何れか一項に記載の異常判定方法。

【請求項12】

前記粒子分析装置は、検体に含まれる細胞のＤＮＡ量を解析する、請求項１ないし１１の何れか一項に記載の異常判定方法。

【請求項13】

前記粒子分析装置は、検体に含まれる細胞のＤＮＡ量を解析し、所定量以上のＤＮＡを含む細胞の比率を求める、請求項１ないし１２の何れか一項に記載の異常判定方法。

【請求項14】

前記第１管理値および前記第２管理値は、各粒子の蛍光信号の波形から求められる数値の代表値に基づく値である、請求項１ないし１３の何れか一項に記載の異常判定方法。

【請求項15】

蛍光染色した細胞の核から発せられる蛍光の信号波形に基づいて、細胞核に含まれるＤＮＡ量を解析する粒子分析装置における異常判定方法であって、
前記粒子分析装置によって、蛍光色素を含む試薬と、前記蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、前記蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子とを混合して混合物を調製し、
前記粒子分析装置によって、フローセルに前記混合物を流し、前記フローセルを流れる前記第１および第２コントロール粒子に光を照射して、前記第１コントロール粒子および前記第２コントロール粒子からの蛍光に基づく信号波形を取得し、
前記第１コントロール粒子の蛍光の信号波形の面積を第１蛍光面積として求め、
前記第２コントロール粒子の蛍光の信号波形の面積を第２蛍光面積として求め、
前記第１蛍光面積と、前記第２蛍光面積とに基づき、少なくとも前記粒子分析装置における染色の異常を判定し、
前記第１コントロール粒子が細胞であり、
前記試薬が、前記第１コントロール粒子としての細胞の核を染色する核酸染色色素を含む、異常判定方法。

【請求項16】

蛍光染色した細胞の核から発せられる蛍光の信号波形に基づいて、細胞核に含まれるＤＮＡ量を解析する粒子分析装置における異常判定方法であって、
前記粒子分析装置によって、蛍光色素を含む試薬と、前記蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、前記蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子とを混合して混合物を調製し、
前記粒子分析装置によって、フローセルに前記混合物を流し、前記フローセルを流れる前記第１および第２コントロール粒子に光を照射して、前記第１コントロール粒子および前記第２コントロール粒子からの蛍光に基づく信号波形を取得し、
前記第１コントロール粒子の蛍光の信号波形の面積を第１管理値として求め、
前記第２コントロール粒子の蛍光の信号波形の面積を第２管理値として求め、
前記第１管理値と前記第２管理値とに基づいて第３管理値を算出し、算出した前記第３管理値が基準範囲から外れるか否かにより、前記粒子分析装置における染色の異常を判定する、異常判定方法。

【請求項17】

前記第２コントロール粒子は蛍光ラテックス粒子を含む、請求項１ないし１６の何れか一項に記載の異常判定方法。

【請求項18】

蛍光色素を含む第１試薬とＲＮＡ除去剤を含む第２試薬とを用いて細胞を含む検体を処理し、処理された検体に含まれる細胞のＤＮＡ量に関する特徴パラメータに基づいて、所定量以上のＤＮＡを含む細胞の比率を求める分析装置における精度管理方法であって、
前記分析装置によって、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、前記蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子と、前記第１および第２試薬とを混合して混合物を調製し、
前記分析装置によって、フローセルに前記混合物を流し、前記フローセルを流れる前記第１および第２コントロール粒子に光を照射して、前記第１コントロール粒子および前記第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、
前記第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、前記第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、
前記第１管理値と前記第２管理値とから算出される値または前記第１管理値と前記第２管理値の割合に基づき、前記第１および第２試薬の少なくとも一方の交換を促すメッセージを出力し、
前記第１コントロール粒子が細胞であり、
前記試薬が、前記第１コントロール粒子としての細胞の核を染色する核酸染色色素を含む、精度管理方法。

【請求項19】

蛍光色素を含む第１試薬とＲＮＡ除去剤を含む第２試薬とを用いて細胞を含む検体を処理し、処理された検体に含まれる細胞のＤＮＡ量に関する特徴パラメータに基づいて、所定量以上のＤＮＡを含む細胞の比率を求める分析装置における精度管理方法であって、
前記分析装置によって、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、前記蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子と、前記第１および第２試薬とを混合して混合物を調製し、
前記分析装置によって、フローセルに前記混合物を流し、前記フローセルを流れる前記第１および第２コントロール粒子に光を照射して、前記第１コントロール粒子および前記第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、
前記第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、前記第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、
前記第１管理値と前記第２管理値とに基づいて第３管理値を算出し、算出した前記第３管理値が基準範囲から外れるか否かにより、前記第１および第２試薬の少なくとも一方の交換を促すメッセージを出力する、精度管理方法。

【請求項20】

蛍光色素を含む第１試薬とＲＮＡ除去剤を含む第２試薬とを用いて細胞を含む検体を処理し、処理された検体に含まれる細胞のＤＮＡ量に関する特徴パラメータに基づいて、所定量以上のＤＮＡを含む細胞の比率を求める分析装置における精度管理方法であって、
前記分析装置によって、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、前記蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子と、前記第１および第２試薬とを混合して混合物を調製し、
前記分析装置によって、フローセルに前記混合物を流し、前記フローセルを流れる前記第１および第２コントロール粒子に光を照射して、前記第１コントロール粒子および前記第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、
前記第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、前記第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、
前記第１管理値と前記第２管理値とから算出された値が、基準範囲の下限閾値より小さい場合、前記第１試薬の交換を促すメッセージを出力し、
前記第１管理値と前記第２管理値とから算出された値が、基準範囲の上限閾値より大きい場合、前記第２試薬の交換を促すメッセージを出力する、精度管理方法。

【請求項21】

試料調製部および光学検出部を備える粒子分析装置における異常判定方法であって、
前記試料調製部によって、蛍光色素を含む試薬と、前記蛍光色素によって染色されるコントロール粒子と、蛍光ラテックス粒子とを混合して混合物を調製し、
前記光学検出部によって、フローセルに前記混合物を流し、前記フローセルを流れる前記コントロール粒子および前記蛍光ラテックス粒子に光を照射して、前記コントロール粒子および前記蛍光ラテックス粒子からの蛍光を検出し、
前記コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、前記蛍光ラテックス粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、
前記第１管理値と前記第２管理値とに基づいて第３管理値を算出し、算出した前記第３管理値が基準範囲から外れるか否かにより、前記試料調製部における染色の異常を判定する、異常判定方法。

【請求項22】

蛍光色素を含む試薬と試料とを混合する試料調製部と、
前記試料調製部によって調製された混合物をフローセルに流し、前記フローセルを流れる前記混合物に光を照射し、照射によって前記混合物から生じた光を検出する光学検出部と、
前記光学検出部によって検出された光の特徴を解析する解析部と、を備え、
前記解析部は、精度管理モードが設定されると、
前記試料調製部に、前記試薬と、前記蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、前記蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子とを混合して混合物を調製させ、
前記光学検出部に、前記混合物を前記フローセルに流させ、前記フローセルを流れる前記第１および第２コントロール粒子に光を照射して、前記第１コントロール粒子および前記第２コントロール粒子からの蛍光を検出させ、
前記第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、前記第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、
前記第１管理値と前記第２管理値とから算出される値または前記第１管理値と前記第２管理値の割合に基づき、少なくとも前記試料調製部における染色の異常を判定し、
前記第１コントロール粒子が細胞であり、
前記試薬が、前記第１コントロール粒子としての細胞の核を染色する核酸染色色素を含む、粒子分析装置。

【請求項23】

蛍光色素を含む試薬と試料とを混合する試料調製部と、
前記試料調製部によって調製された混合物をフローセルに流し、前記フローセルを流れる前記混合物に光を照射し、照射によって前記混合物から生じた光を検出する光学検出部と、
前記光学検出部によって検出された光の特徴を解析する解析部と、を備え、
前記解析部は、精度管理モードが設定されると、
前記試料調製部に、前記試薬と、前記蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、前記蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子とを混合して混合物を調製させ、
前記光学検出部に、前記混合物を前記フローセルに流させ、前記フローセルを流れる前記第１および第２コントロール粒子に光を照射して、前記第１コントロール粒子および前記第２コントロール粒子からの蛍光を検出させ、
前記第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、前記第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、
前記第１管理値と前記第２管理値とに基づいて第３管理値を算出し、算出した前記第３管理値が基準範囲から外れるか否かにより、前記試料調製部における染色の異常を判定する、粒子分析装置。

【請求項24】

試料調製部および光学検出部を備える粒子分析装置における異常判定方法であって、
前記試料調製部によって、蛍光色素を含む試薬と、前記蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、前記蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子とを混合して混合物を調製し、
前記光学検出部によって、フローセルに前記混合物を流し、前記フローセルを流れる前記第１および第２コントロール粒子に光を照射して、前記第１コントロール粒子および前記第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、
前記第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、前記第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、
前記第１管理値と前記第２管理値の割合に基づき、少なくとも前記試料調製部における染色の異常を判定する、異常判定方法。

【請求項25】

試料調製部および光学検出部を備える粒子分析装置における異常判定方法であって、
前記試料調製部によって、蛍光色素を含む試薬と、前記蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子とを混合して混合物を調製し、
前記光学検出部によって、前記混合物をフローセルに流し、前記フローセルを流れる前記第１コントロール粒子に光を照射して、前記第１コントロール粒子からの蛍光を検出し、
前記光学検出部によって、蛍光を発する第２コントロール粒子を前記フローセルに流し、前記フローセルを流れる前記第２コントロール粒子に光を照射して、前記第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、
前記第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、前記第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、
前記第１管理値と前記第２管理値の割合に基づき、少なくとも前記試料調製部における染色の異常を判定する、異常判定方法。

【請求項26】

蛍光染色した細胞の核から発せられる蛍光の信号波形に基づいて、細胞核に含まれるＤＮＡ量を解析する粒子分析装置における異常判定方法であって、
前記粒子分析装置によって、蛍光色素を含む試薬と、前記蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、前記蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子とを混合して混合物を調製し、
前記粒子分析装置によって、フローセルに前記混合物を流し、前記フローセルを流れる前記第１および第２コントロール粒子に光を照射して、前記第１コントロール粒子および前記第２コントロール粒子からの蛍光に基づく信号波形を取得し、
前記第１コントロール粒子の蛍光の信号波形の面積を第１管理値として求め、
前記第２コントロール粒子の蛍光の信号波形の面積を第２管理値として求め、
前記第１管理値と前記第２管理値の割合に基づき、少なくとも前記粒子分析装置における染色の異常を判定する、異常判定方法。

【請求項27】

蛍光色素を含む第１試薬とＲＮＡ除去剤を含む第２試薬とを用いて細胞を含む検体を処理し、処理された検体に含まれる細胞のＤＮＡ量に関する特徴パラメータに基づいて、所定量以上のＤＮＡを含む細胞の比率を求める分析装置における精度管理方法であって、
前記分析装置によって、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、前記蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子と、前記第１および第２試薬とを混合して混合物を調製し、
前記分析装置によって、フローセルに前記混合物を流し、前記フローセルを流れる前記第１および第２コントロール粒子に光を照射して、前記第１コントロール粒子および前記第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、
前記第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、前記第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、
前記第１管理値と前記第２管理値の割合に基づき、前記第１および第２試薬の少なくとも一方の交換を促すメッセージを出力する、精度管理方法。

【請求項28】

蛍光色素を含む試薬と試料とを混合する試料調製部と、
前記試料調製部によって調製された混合物をフローセルに流し、前記フローセルを流れる前記混合物に光を照射し、照射によって前記混合物から生じた光を検出する光学検出部と、
前記光学検出部によって検出された光の特徴を解析する解析部と、を備え、
前記解析部は、精度管理モードが設定されると、
前記試料調製部に、前記試薬と、前記蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、前記蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子とを混合して混合物を調製させ、
前記光学検出部に、前記混合物を前記フローセルに流させ、前記フローセルを流れる前記第１および第２コントロール粒子に光を照射して、前記第１コントロール粒子および前記第２コントロール粒子からの蛍光を検出させ、
前記第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、前記第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、
前記第１管理値と前記第２管理値の割合に基づき、少なくとも前記試料調製部における染色の異常を判定する、粒子分析装置。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、粒子分析装置における異常判定方法、分析装置における精度管理方法、および粒子分析装置に関する。

【背景技術】

【0002】

粒子から生じる蛍光を検出して粒子を分析する粒子分析装置がある。粒子分析装置は、粒子を含む検体に蛍光色素を混合して測定試料を調製し、調製した測定試料をフローセルに流す。粒子分析装置は、測定試料の流れに光を照射し、粒子から生じる蛍光を検出する。こうして検出された信号に基づいて、粒子が分類される。このような粒子分析装置では、正確な測定結果が得られるように、精度管理用標準物質を用いた精度管理が行われる。

【0003】

特許文献１の手法では、第１蛍光色素で蛍光染色される第１標準粒子と、予め第２蛍光色素を含み、且つ、第１蛍光色素では実質的に染色されない第２標準粒子とを含む精度管理物質を用いて、粒子分析装置の異常個所が判定される。第２標準粒子の測定結果が基準範囲から外れると、蛍光検出器が異常と判定される。また、第２標準粒子の測定結果が基準範囲内にある場合に、第１標準粒子の測定結果が基準範囲から外れると、試料調製機構が異常と判定される。第１標準粒子の測定結果が基準範囲よりも小さく、第２標準粒子の測定結果が基準範囲よりも大きい場合、試料調製機構と蛍光検出器が異常と判定される。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】特開２００７−４７１５４号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

特許文献１の手法では、染色工程に異常がある場合とそうでない場合とを区別できない場合があった。本発明は、染色工程の異常判定を従来に比べてより確実に行うことに向けたものである。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明の第１の態様は、試料調製部および光学検出部を備える粒子分析装置における異常判定方法に関する。本態様に係る異常判定方法は、試料調製部によって、蛍光色素を含む試薬と、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子とを混合して混合物を調製し、光学検出部によって、フローセルに混合物を流し、フローセルを流れる第１および第２コントロール粒子に光を照射して、第１コントロール粒子および第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、第１管理値と第２管理値とから算出される値または第１管理値と第２管理値の割合に基づき、少なくとも試料調製部における染色の異常を判定する。また、第１コントロール粒子が細胞であり、試薬が、第１コントロール粒子としての細胞の核を染色する核酸染色色素を含む。
本発明の第２の態様は、試料調製部および光学検出部を備える粒子分析装置における異常判定方法に関する。本態様に係る異常判定方法は、試料調製部によって、蛍光色素を含む試薬と、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子とを混合して混合物を調製し、光学検出部によって、混合物をフローセルに流し、フローセルを流れる第１コントロール粒子に光を照射して、第１コントロール粒子からの蛍光を検出し、光学検出部によって、蛍光を発する第２コントロール粒子をフローセルに流し、フローセルを流れる第２コントロール粒子に光を照射して、第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、第１管理値と第２管理値とから算出される値または第１管理値と第２管理値の割合に基づき、少なくとも試料調製部における染色の異常を判定する。また、第１コントロール粒子が細胞であり、試薬が、第１コントロール粒子としての細胞の核を染色する核酸染色色素を含む。
本発明の第３の態様は、試料調製部および光学検出部を備える粒子分析装置における異常判定方法に関する。本態様に係る異常判定方法は、試料調製部によって、蛍光色素を含む試薬と、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子とを混合して混合物を調製し、光学検出部によって、フローセルに混合物を流し、フローセルを流れる第１および第２コントロール粒子に光を照射して、第１コントロール粒子および第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、第１管理値と第２管理値とに基づいて第３管理値を算出し、算出した第３管理値が基準範囲から外れるか否かにより、試料調製部における染色の異常を判定する。
本発明の第４の態様は、試料調製部および光学検出部を備える粒子分析装置における異常判定方法に関する。本態様に係る異常判定方法は、試料調製部によって、蛍光色素を含む試薬と、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子とを混合して混合物を調製し、光学検出部によって、混合物をフローセルに流し、フローセルを流れる第１コントロール粒子に光を照射して、第１コントロール粒子からの蛍光を検出し、光学検出部によって、蛍光を発する第２コントロール粒子をフローセルに流し、フローセルを流れる第２コントロール粒子に光を照射して、第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、第１管理値と第２管理値とに基づいて第３管理値を算出し、算出した第３管理値が基準範囲から外れるか否かにより、試料調製部における染色の異常を判定する。

【0007】

本発明の第５の態様は、蛍光染色した細胞の核から発せられる蛍光の信号波形に基づいて、細胞核に含まれるＤＮＡ量を解析する粒子分析装置における異常判定方法に関する。本態様に係る異常判定方法は、粒子分析装置によって、蛍光色素を含む試薬と、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子とを混合して混合物を調製し、粒子分析装置によって、フローセルに混合物を流し、フローセルを流れる第１および第２コントロール粒子に光を照射して、第１コントロール粒子および第２コントロール粒子からの蛍光に基づく信号波形を取得し、第１コントロール粒子の蛍光の信号波形の面積を第１蛍光面積として求め、第２コントロール粒子の蛍光の信号波形の面積を第２蛍光面積として求め、第１蛍光面積と、第２蛍光面積とに基づき、少なくとも粒子分析装置における染色の異常を判定する。また、第１コントロール粒子が細胞であり、試薬が、第１コントロール粒子としての細胞の核を染色する核酸染色色素を含む。
本発明の第６の態様は、蛍光染色した細胞の核から発せられる蛍光の信号波形に基づいて、細胞核に含まれるＤＮＡ量を解析する粒子分析装置における異常判定方法に関する。本態様に係る異常判定方法は、粒子分析装置によって、蛍光色素を含む試薬と、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子とを混合して混合物を調製し、粒子分析装置によって、フローセルに混合物を流し、フローセルを流れる第１および第２コントロール粒子に光を照射して、第１コントロール粒子および第２コントロール粒子からの蛍光に基づく信号波形を取得し、第１コントロール粒子の蛍光の信号波形の面積を第１管理値として求め、第２コントロール粒子の蛍光の信号波形の面積を第２管理値として求め、第１管理値と第２管理値とに基づいて第３管理値を算出し、算出した第３管理値が基準範囲から外れるか否かにより、粒子分析装置における染色の異常を判定する。

【0008】

本発明の第７の態様は、蛍光色素を含む第１試薬とＲＮＡ除去剤を含む第２試薬とを用いて細胞を含む検体を処理し、処理された検体に含まれる細胞のＤＮＡ量に関する特徴パラメータに基づいて、所定量以上のＤＮＡを含む細胞の比率を求める分析装置における精度管理方法に関する。本態様に係る精度管理方法は、分析装置によって、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子と、第１および第２試薬とを混合して混合物を調製し、分析装置によって、フローセルに混合物を流し、フローセルを流れる第１および第２コントロール粒子に光を照射して、第１コントロール粒子および第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、第１管理値と第２管理値とから算出される値または第１管理値と第２管理値の割合に基づき、第１および第２試薬の少なくとも一方の交換を促すメッセージを出力し、第１コントロール粒子が細胞であり、試薬が、第１コントロール粒子としての細胞の核を染色する核酸染色色素を含む。
本発明の第８の態様は、蛍光色素を含む第１試薬とＲＮＡ除去剤を含む第２試薬とを用いて細胞を含む検体を処理し、処理された検体に含まれる細胞のＤＮＡ量に関する特徴パラメータに基づいて、所定量以上のＤＮＡを含む細胞の比率を求める分析装置における精度管理方法に関する。本態様に係る精度管理方法は、分析装置によって、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子と、第１および第２試薬とを混合して混合物を調製し、分析装置によって、フローセルに混合物を流し、フローセルを流れる第１および第２コントロール粒子に光を照射して、第１コントロール粒子および第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、第１管理値と第２管理値とに基づいて第３管理値を算出し、算出した第３管理値が基準範囲から外れるか否かにより、第１および第２試薬の少なくとも一方の交換を促すメッセージを出力する。
本発明の第９の態様は、蛍光色素を含む第１試薬とＲＮＡ除去剤を含む第２試薬とを用いて細胞を含む検体を処理し、処理された検体に含まれる細胞のＤＮＡ量に関する特徴パラメータに基づいて、所定量以上のＤＮＡを含む細胞の比率を求める分析装置における精度管理方法に関する。本態様に係る精度管理方法は、分析装置によって、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子と、第１および第２試薬とを混合して混合物を調製し、分析装置によって、フローセルに混合物を流し、フローセルを流れる第１および第２コントロール粒子に光を照射して、第１コントロール粒子および第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、第１管理値と第２管理値とから算出された値が、基準範囲の下限閾値より小さい場合、第１試薬の交換を促すメッセージを出力し、第１管理値と第２管理値とから算出された値が、基準範囲の上限閾値より大きい場合、第２試薬の交換を促すメッセージを出力する。
本発明の第１０の態様は、試料調製部および光学検出部を備える粒子分析装置における異常判定方法に関する。本態様に係る異常判定方法は、試料調製部によって、蛍光色素を含む試薬と、蛍光色素によって染色されるコントロール粒子と、蛍光ラテックス粒子とを混合して混合物を調製し、光学検出部によって、フローセルに混合物を流し、フローセルを流れるコントロール粒子および蛍光ラテックス粒子に光を照射して、コントロール粒子および蛍光ラテックス粒子からの蛍光を検出し、コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、蛍光ラテックス粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、第１管理値と第２管理値とに基づいて第３管理値を算出し、算出した第３管理値が基準範囲から外れるか否かにより、試料調製部における染色の異常を判定する。

【0009】

本発明の第１１の態様は、蛍光色素を含む試薬と試料とを混合する試料調製部と、試料調製部によって調製された混合物をフローセルに流し、フローセルを流れる混合物に光を照射し、照射によって混合物から生じた光を検出する光学検出部と、光学検出部によって検出された光の特徴を解析する解析部と、を備える。解析部は、精度管理モードが設定されると、試料調製部に、試薬と、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子とを混合して混合物を調製させ、光学検出部に、混合物をフローセルに流させ、フローセルを流れる第１および第２コントロール粒子に光を照射して、第１コントロール粒子および第２コントロール粒子からの蛍光を検出させ、第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、第１管理値と第２管理値とから算出される値または第１管理値と第２管理値の割合に基づき、少なくとも試料調製部における染色の異常を判定する。第１コントロール粒子が細胞であり、試薬が、第１コントロール粒子としての細胞の核を染色する核酸染色色素を含む。
本発明の第１２の態様は、蛍光色素を含む試薬と試料とを混合する試料調製部と、試料調製部によって調製された混合物をフローセルに流し、フローセルを流れる混合物に光を照射し、照射によって混合物から生じた光を検出する光学検出部と、光学検出部によって検出された光の特徴を解析する解析部と、を備える。解析部は、精度管理モードが設定されると、試料調製部に、試薬と、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子とを混合して混合物を調製させ、光学検出部に、混合物をフローセルに流させ、フローセルを流れる第１および第２コントロール粒子に光を照射して、第１コントロール粒子および第２コントロール粒子からの蛍光を検出させ、第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、第１管理値と第２管理値とに基づいて第３管理値を算出し、算出した第３管理値が基準範囲から外れるか否かにより、試料調製部における染色の異常を判定する。

【0010】

本発明の第１３の態様は、試料調製部および光学検出部を備える粒子分析装置における異常判定方法に関する。本態様に係る異常判定方法は、記試料調製部によって、蛍光色素を含む試薬と、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子とを混合して混合物を調製し、光学検出部によって、フローセルに混合物を流し、フローセルを流れる第１および第２コントロール粒子に光を照射して、第１コントロール粒子および第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、第１管理値と第２管理値の割合に基づき、少なくとも試料調製部における染色の異常を判定する。
本発明の第１４の態様は、試料調製部および光学検出部を備える粒子分析装置における異常判定方法に関する。本態様に係る異常判定方法は、試料調製部によって、蛍光色素を含む試薬と、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子とを混合して混合物を調製し、光学検出部によって、混合物をフローセルに流し、フローセルを流れる第１コントロール粒子に光を照射して、第１コントロール粒子からの蛍光を検出し、光学検出部によって、蛍光を発する第２コントロール粒子をフローセルに流し、フローセルを流れる第２コントロール粒子に光を照射して、第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、第１管理値と第２管理値の割合に基づき、少なくとも試料調製部における染色の異常を判定する。
本発明の第１５の態様は、蛍光染色した細胞の核から発せられる蛍光の信号波形に基づいて、細胞核に含まれるＤＮＡ量を解析する粒子分析装置における異常判定方法に関する。本態様に係る異常判定方法は、粒子分析装置によって、蛍光色素を含む試薬と、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子とを混合して混合物を調製し、粒子分析装置によって、フローセルに混合物を流し、フローセルを流れる第１および第２コントロール粒子に光を照射して、第１コントロール粒子および第２コントロール粒子からの蛍光に基づく信号波形を取得し、第１コントロール粒子の蛍光の信号波形の面積を第１管理値として求め、第２コントロール粒子の蛍光の信号波形の面積を第２管理値として求め、第１管理値と第２管理値の割合に基づき、少なくとも粒子分析装置における染色の異常を判定する。
本発明の第１６の態様は、蛍光色素を含む第１試薬とＲＮＡ除去剤を含む第２試薬とを用いて細胞を含む検体を処理し、処理された検体に含まれる細胞のＤＮＡ量に関する特徴パラメータに基づいて、所定量以上のＤＮＡを含む細胞の比率を求める分析装置における精度管理方法に関する。本態様に係る精度管理方法は、分析装置によって、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子と、第１および第２試薬とを混合して混合物を調製し、分析装置によって、フローセルに混合物を流し、フローセルを流れる第１および第２コントロール粒子に光を照射して、第１コントロール粒子および第２コントロール粒子からの蛍光を検出し、第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、第１管理値と第２管理値の割合に基づき、第１および第２試薬の少なくとも一方の交換を促すメッセージを出力する。
本発明の第１７の態様は、蛍光色素を含む試薬と試料とを混合する試料調製部と、試料調製部によって調製された混合物をフローセルに流し、フローセルを流れる混合物に光を照射し、照射によって混合物から生じた光を検出する光学検出部と、光学検出部によって検出された光の特徴を解析する解析部と、を備える。解析部は、精度管理モードが設定されると、試料調製部に、試薬と、蛍光色素によって染色される第１コントロール粒子と、蛍光色素によって染色されず、且つ蛍光を発する第２コントロール粒子とを混合して混合物を調製させ、光学検出部に、混合物をフローセルに流させ、フローセルを流れる第１および第２コントロール粒子に光を照射して、第１コントロール粒子および第２コントロール粒子からの蛍光を検出させ、第１コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第１管理値と、第２コントロール粒子から発せられた蛍光の検出結果を示す第２管理値を取得し、第１管理値と第２管理値の割合に基づき、少なくとも試料調製部における染色の異常を判定する。

【発明の効果】

【0011】

本発明のいくつかの態様によれば、従来に比べて、染色工程の異常判定をより確実に行うことが可能となる。本発明の１つの態様によれば、細胞核に含まれるＤＮＡ量を解析する粒子分析装置に適した染色工程の異常判定を行うことが可能となる。

【0012】

本発明の効果ないし意義は、以下に示す実施形態の説明により更に明らかとなろう。ただし、以下に示す実施形態は、あくまでも、本発明を実施化する際の一つの例示であって、本発明は、以下の実施形態により何ら制限されるものではない。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】実施形態１に係る粒子分析装置の構成を示すブロック図である。

【図2】図２（ａ）は、実施形態１に係る光学検出部の構成を示す模式図であり、図２（ｂ）〜（ｄ）は、実施形態１に係る特徴パラメータを示す模式図である。

【図3】実施形態１に係る通常モードにおいて粒子分析装置が行う処理を示すフローチャートである。

【図4】実施形態１に係る精度管理モードにおいて粒子分析装置が行う処理を示すフローチャートである。

【図5】図５（ａ）は、実施形態１に係る各粒子から生じた蛍光信号の波形の面積に関するヒストグラムを示す模式図であり、図５（ｂ）は、実施形態１に係る第１測定値と第２測定値を示す図である。

【図6】実施形態１に係る精度管理モードにおいて粒子分析装置が行う処理を示すフローチャートの変更例である。

【図7】図７（ａ）、（ｂ）は、実施形態１に係る検出異常判定および染色異常判定を示すフローチャートであり、図７（ｃ）は、実施形態１に係る判定に用いる下限閾値および上限閾値を示す図である。

【図8】図８（ａ）は、実施形態１に係る染色異常判定を示すフローチャートの変更例であり、図８（ｂ）は、変更例に係る染色異常の判定で用いる正常範囲を示す図である。

【図9】図９（ａ）〜（ｃ）は、実施形態１に係る出力部に表示する画面を示す図である。

【図10】図１０（ａ）は、実施形態１に係る出力部に表示する画面を示す図であり、図１０（ｂ）は、実施形態１に係る出力部に表示する画面の変更例を示す図である。

【図11】図１１（ａ）は、実施形態２に係る染色異常判定を示すフローチャートであり、図１１（ｂ）、（ｃ）は、実施形態２に係る出力部に表示する画面を示す図である。

【図12】図１２（ａ）〜（ｃ）は、実施形態１に係る実験において、それぞれ、条件１〜３の場合に取得した第１測定値、第２測定値、第１管理値、第２管理値および第３管理値、ならびに、判定結果を示す図であり、図１２（ｄ）は、実施形態１に係る実験において、判定に用いた下限閾値と上限閾値を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0014】

以下に示す実施形態１、２は、子宮頸部の細胞を分析対象とし、細胞の癌化に関する情報を取得する装置に本発明を適用したものである。分析対象は、口腔細胞、膀胱、咽頭などの上皮細胞や、臓器の上皮細胞であっても良い。

【0015】

＜実施形態１＞
図１に示すように、粒子分析装置１０は、移送部２０と、前処理部３０と、試料調製部４０と、光学検出部５０と、解析部６０と、出力部７０と、入力部８０と、を備える。粒子分析装置１０は、動作モードとして、通常モードと精度管理モードを備えている。粒子分析装置１０は、通常モードにおいて、検体１１の分析を行う。検体１１は、臨床検体であり、被検者の子宮頸部から採取され、子宮頸部の上皮細胞を含んでいる。粒子分析装置１０は、精度管理モードにおいて、第１コントロール粒子１２ａと第２コントロール粒子１２ｂを用いて精度管理を行う。

【0016】

まず、動作モードが通常モードである場合について説明する。検体１１は、アルコールを主成分とする保存液に細胞を懸濁した液体であり、検体容器に収容されている。アルコールは好ましくはメタノールである。移送部２０は、検体１１を吸引して図示しないキュベットに分注し、キュベットを移送する。前処理部３０は、キュベットに分注された検体１１に含まれる凝集した細胞を超音波分散する。さらに、前処理部３０は、検体１１に含まれる細胞を懸濁している保存液を希釈液に置換し、検体１１から夾雑物を取り除いて、検体１１を濃縮する。

【0017】

試料調製部４０は、前処理部３０による処理が終わった検体１１と、試薬４１、４２とを混合して、混合物を調製する。試薬４１は、蛍光色素を含む。試薬４１に含まれる蛍光色素は、核酸染色色素である。試薬４１により検体１１に含まれる細胞の核酸が染色される。

【0018】

核酸染色色素は、核酸に結合することで蛍光を発する蛍光色素であればよい。核酸蛍光色素として、たとえば、プロピジウムアイオダイド、エチジウムブロマイド、エチジウム−アクリジンヘテロダイマー、エチジウムジアジド、エチジウムホモダイマー−１、エチジウムホモダイマー−２、エチジウムモノアジド、トリメチレンビス［［３‐［［４‐［［（３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム）‐２‐イル］メチレン］‐１，４‐ジヒドロキノリン］‐１‐イル］プロピル］ジメチルアミニウム］・テトラヨージド、４‐［（３‐メチルベンゾチアゾール‐２（３Ｈ）‐イリデン）メチル］‐１‐［３‐（トリメチルアミニオ）プロピル］キノリニウム・ジヨージド、Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'‐テトラメチル‐Ｎ，Ｎ'‐ビス［３‐［４‐［３‐［（３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム）‐２‐イル］‐２‐プロペニリデン］‐１，４‐ジヒドロキノリン‐１‐イル］プロピル］‐１，３‐プロパンジアミニウム・テトラヨージド、又は２‐［３‐［［１‐［３‐（トリメチルアミニオ）プロピル］‐１，４‐ジヒドロキノリン］‐４‐イリデン］‐１‐プロペニル］‐３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム・ジヨージドなどが挙げられる。

【0019】

試薬４２は、検体１１に含まれるＲＮＡを除去するためのＲＮＡ除去剤を含む。検体１１は、その細胞中にＲＮＡを含むことがある。試薬４１は核酸染色色素であるため、検体１１に含まれるＲＮＡを染色することがある。ＲＮＡが染色されると、検出されるべきＤＮＡ由来の蛍光にＲＮＡ由来の蛍光が加わり、バックグラウンドが上がるため、好ましくない。このようなＲＮＡは、試薬４２により分解される。

【0020】

光学検出部５０は、フローサイトメータを備える。光学検出部５０は、試料調製部４０で調製された混合物をフローセル５０ａに流し、フローセル５０ａを流れる混合物に光を照射し、混合物から発せられる光を検出する。

【0021】

図２（ａ）に示すように、光学検出部５０は、フローセル５０ａと、光源５１と、集光レンズ群５２と、集光レンズ５３と、光検出器５４と、集光レンズ５５と、光検出器５６と、信号処理回路５７と、を備える。

【0022】

光源５１は、レーザ光を出射する。集光レンズ群５２は、複数のレンズからなり、レーザ光を、フローセル５０ａを流れる混合物に集光する。これにより、混合物中の粒子から、前方散乱光と蛍光が生じる。前方散乱光は、粒子の大きさを反映し、蛍光は、粒子の染色度合いを反映する。

【0023】

集光レンズ５３は、前方散乱光を集光する。光検出器５４は、前方散乱光を受光する。光検出器５４は、フォトダイオードであり、受光した前方散乱光に応じた電気信号、すなわち前方散乱光信号を出力する。集光レンズ５５は、蛍光を集光する。光検出器５６は、蛍光を受光する。光検出器５６は、フォトマルチプライヤであり、受光した蛍光に応じた電気信号、すなわち蛍光信号を出力する。

【0024】

信号処理回路５７は、光検出器５４、５６から出力された各信号に対して所定の信号処理を施すことにより、それぞれ、前方散乱光信号と蛍光信号とに対応する波形を取得する。信号処理回路５７は、取得した波形から、ピーク値、幅、面積等の複数の特徴パラメータを算出する。ピーク値は、図２（ｂ）に示すように、波形の最大値である。幅は、図２（ｃ）に示すように、所定の閾値よりも大きい波形部分の幅である。面積は、図２（ｄ）に示すように、所定の閾値と波形とが交わる点から下に伸ばした線分と、波形とに囲まれる部分の面積である。信号処理回路５７は、粒子ごとの各光の特徴パラメータを、解析部６０に出力する。

【0025】

図１に戻り、解析部６０は、点線で示すように、移送部２０と、前処理部３０と、試料調製部４０と、光学検出部５０を制御する。解析部６０は、信号処理回路５７から出力された粒子ごとの各光の特徴パラメータを記憶部６０ａに記憶する。解析部６０は、粒子ごとの各光の特徴パラメータに基づいて各光の特徴を解析し、解析結果を取得する。解析結果は、癌化に関する情報等を含む。解析部６０は、解析結果を出力部７０に表示する。解析部６０は、入力部８０を介してオペレータからの指示を受け付ける。出力部７０は、ディスプレイであり、入力部８０は、マウスやキーボードである。

【0026】

次に、動作モードが精度管理モードである場合について説明する。第１コントロール粒子１２ａは、試薬４１の蛍光色素によって染色される粒子である。第２コントロール粒子１２ｂは、試薬４１の蛍光色素によって実質的に染色されず、且つ、予め蛍光色素を含むことにより蛍光を発する粒子である。

【0027】

第１コントロール粒子１２ａは、細胞、ポリアクリルアミド粒子、親水性ビニルポリマー粒子、ラテックス粒子、およびシリカ粒子からなる群から選択される。第１コントロール粒子１２ａは、好ましくは細胞である。

【0028】

第２コントロール粒子１２ｂは、蛍光ラテックス粒子である。第２コントロール粒子１２ｂは、第１コントロール粒子１２ａよりも強い蛍光を発する。より詳細には、第２コントロール粒子１２ｂは、試薬４１、４２を用いて適切な条件下で染色された第１コントロール粒子１２ａより強い蛍光を発する。このため、それぞれの蛍光強度の差によって、第１コントロール粒子１２ａと第２コントロール粒子１２ｂとを区別することが可能である。

【0029】

第１コントロール粒子１２ａと第２コントロール粒子１２ｂは、容器に収容されている。移送部２０は、第１コントロール粒子１２ａと第２コントロール粒子１２ｂを吸引して図示しないキュベットに分注し、キュベットを移送する。前処理部３０は、精度管理モードでは用いられない。試料調製部４０は、第１コントロール粒子１２ａと、第２コントロール粒子１２ｂと、試薬４１、４２とを混合して、混合物を調製する。これにより、第１コントロール粒子１２ａは、試薬４１によって染色される。

【0030】

第１コントロール粒子１２ａは試料中にＲＮＡを含んでいる。これはＲＮＡ除去剤を含む試薬４２が正しく作用しているか否かを判定するためである。

【0031】

光学検出部５０は、通常モードと同様にして、試料調製部４０で調製された混合物をフローセル５０ａに流し、フローセル５０ａを流れる第１コントロール粒子１２ａおよび第２コントロール粒子１２ｂに光を照射し、第１コントロール粒子１２ａおよび第２コントロール粒子１２ｂから発せられる光を検出する。光学検出部５０の信号処理回路５７は、粒子ごとの各光の特徴パラメータを、解析部６０に出力する。解析部６０は、信号処理回路５７から出力された粒子ごとの各光の特徴パラメータを記憶部６０ａに記憶する。

【0032】

解析部６０は、粒子ごとの各光の特徴パラメータに基づいて、第１管理値と、第２管理値と、第３管理値を取得する。第１管理値と第２管理値は、それぞれ、第１コントロール粒子１２ａと第２コントロール粒子１２ｂから発せられた蛍光の検出結果を示す。第３管理値は、第１管理値と第２管理値とから算出される値である。解析部６０は、第２管理値に基づいて、検出異常、すなわち、光学検出部５０における異常を判定する。解析部６０は、第３管理値に基づいて、染色異常、すなわち、試料調製部４０における染色の異常を判定する。解析部６０は、検出異常と染色異常がある場合、出力部７０を介してそれぞれ検出異常と染色異常を報知するための出力を行う。検出異常と染色異常の判定については、追ってフローチャートを参照して説明する。

【0033】

次に、通常モードにおいて粒子分析装置１０が行う処理について、図３に示すフローチャートを参照して説明する。

【0034】

図３に示すように、粒子分析装置１０が起動すると、ステップＳ１０１において、解析部６０は、オペレータにより入力部８０を介して動作モードが通常モードに設定されたかを判定する。解析部６０は、ステップＳ１０１でＹＥＳと判定すると、ステップＳ１０２において、上述したように、前処理部３０に検体１１の前処理をさせる。ステップＳ１０３において、解析部６０は、試料調製部４０に、試薬４１、４２と、前処理部３０による処理が終わった検体１１とを混合して混合物を調製させる。ステップＳ１０４において、解析部６０は、光学検出部５０に、混合物をフローセル５０ａに流させ、フローセル５０ａを流れる混合物に光を照射して、照射によって混合物から生じた光を検出させる。解析部６０は、混合物に含まれる細胞から生じた各光の特徴パラメータを、記憶部６０ａに記憶する。

【0035】

ステップＳ１０５において、解析部６０は、記憶部６０ａに記憶した粒子ごとの各光の特徴パラメータに基づいて、混合物に含まれる全ての細胞のうち、Ｎ／Ｃ比が所定の範囲内である細胞を抽出する。解析部６０は、「蛍光信号の波形の幅／前方散乱光信号の波形の幅」を算出することにより、Ｎ／Ｃ比を取得する。

【0036】

次に、解析部６０は、ステップＳ１０６、Ｓ１０７において、以下に示すように、検体１１に含まれる細胞のＤＮＡ量に基づく解析を行う。ステップＳ１０６において、解析部６０は、ステップＳ１０５で抽出した細胞のＤＮＡ量に関するヒストグラムを作成する。具体的には、解析部６０は、蛍光信号の波形の面積と細胞数を２軸とするヒストグラムを作成する。蛍光信号の波形の面積（以下、蛍光面積という）は、細胞のＤＮＡ量に相当する。ステップＳ１０７において、解析部６０は、検体１１に含まれる細胞の蛍光面積を解析し、所定量以上のＤＮＡを含む細胞の比率（以下、対象細胞比率という）を取得する。具体的には、解析部６０は、ステップＳ１０６で作成したヒストグラムに基づいて、「所定の閾値以上の蛍光面積を有する細胞数／所定の閾値未満の蛍光面積を有する細胞数」を演算することにより、対象細胞比率を取得する。

【0037】

なお、ここでは、説明の便宜上、ステップＳ１０６においてヒストグラムを作成して対象細胞比率を取得したが、ヒストグラムは、必ずしも実際に作成する必要はない。すなわち、対象細胞比率は、ステップＳ１０５で抽出した細胞に基づいて、データ処理により取得しても良い。同様に、図４のステップＳ２０４においても、第１測定値と第２測定値は、ヒストグラムを作成せずに、データ処理により取得しても良い。

【0038】

ステップＳ１０８において、解析部６０は、ステップＳ１０７で取得した対象細胞比率に基づいて、再検要否を判定する。解析部６０は、対象細胞比率が所定値以上であれば再検が必要であると判定し、所定値未満であれば再検が不要であると判定する。ステップＳ１０９において、解析部６０は、対象細胞比率と、再検要否の判定結果とを、解析結果として出力部７０に表示する。

【0039】

ＤＮＡ量に基づく解析を行う粒子分析装置１０においては、試薬４１による核酸の染色と、試薬４２によるバックグラウンドの低下がＤＮＡ量に関するヒストグラムの形状に直接的に影響を及ぼす。試薬４１と試薬４２は保管条件や使用条件により劣化する可能性がある。試薬４１が劣化すると核酸が十分に染色されず、ヒストグラムの分布が低値側にシフトすることがある。試薬４２が劣化すると、ＲＮＡの除去が不十分になり、蛍光のバックグラウンドが上がり、ヒストグラムの分布が高値側にシフトすることがある。いずれの場合も、正確なＤＮＡ量の解析に好ましくない影響をもたらしうる。

【0040】

したがって、試薬４１、４２の品質管理は重要であり、さらに、精度管理モードにおいて試料調製部４０における染色の異常を判定することは重要である。

【0041】

次に、精度管理モードにおいて粒子分析装置１０が行う処理について、図４に示すフローチャートを参照して説明する。

【0042】

図４に示すように、粒子分析装置１０が起動すると、ステップＳ２０１において、解析部６０は、オペレータにより入力部８０を介して動作モードが精度管理モードに設定されたかを判定する。解析部６０は、ステップＳ２０１でＹＥＳと判定すると、ステップＳ２０２において、試料調製部４０に、試薬４１、４２と、第１コントロール粒子１２ａと、第２コントロール粒子１２ｂとを混合して混合物を調製させる。ステップＳ２０３において、解析部６０は、光学検出部５０に、混合物をフローセル５０ａに流させ、フローセル５０ａを流れる第１コントロール粒子１２ａと第２コントロール粒子１２ｂに光を照射して、第１コントロール粒子１２ａと第２コントロール粒子１２ｂからの蛍光を検出させる。解析部６０は、第１コントロール粒子１２ａから生じる各光の特徴パラメータと、第２コントロール粒子１２ｂから生じる各光の特徴パラメータを、記憶部６０ａに記憶する。

【0043】

ステップＳ２０４において、解析部６０は、第１測定値と第２測定値を取得する。具体的には、解析部６０は、まず、記憶部６０ａに記憶した粒子のデータを、蛍光強度の差に基づいて、第１コントロール粒子１２ａと第２コントロール粒子１２ｂの何れかに分類する。上述したように、第２コントロール粒子１２ｂは、第１コントロール粒子１２ａよりも強い蛍光を発する。したがって、蛍光強度の差に基づいて、第１コントロール粒子１２ａと第２コントロール粒子１２ｂの分類が可能となる。

【0044】

続いて、解析部６０は、第１コントロール粒子１２ａと第２コントロール粒子１２ｂについて、それぞれ、図５（ａ）に示すように、各粒子から生じた蛍光面積に関するヒストグラムを作成する。解析部６０は、図５（ａ）に示すようなヒストグラムにおいて、代表値を取得する。代表値は、最頻値、すなわち、蛍光面積に関するヒストグラムにおいて最も度数の高い蛍光面積である。代表値は、平均値や中央値であっても良い。解析部６０は、第１コントロール粒子１２ａのヒストグラムに基づいて取得した代表値を第１測定値とし、第２コントロール粒子１２ｂのヒストグラムに基づいて取得した代表値を第２測定値とする。

【0045】

ステップＳ２０５において、解析部６０は、予め決められた測定回数に基づいて、精度管理の測定が終了したかを判定する。予め決められた測定回数をｎ回とすると、解析部６０は、ステップＳ２０２〜Ｓ２０４の処理をｎ回繰り返し行う。ｎ回目の第１測定値をＶ１ｎ、ｎ回目の第２測定値をＶ２ｎとすると、解析部６０は、図５（ｂ）に示すように、１回目〜ｎ回目の測定において、それぞれ第１測定値と第２測定を取得する。ｎは、たとえば１や２に設定される。

【0046】

なお、上記手順では、試薬４１、４２と、第１コントロール粒子１２ａと、第２コントロール粒子１２ｂとを混合して混合物を調製したが、これに代えて、第１コントロール粒子１２ａの混合物と第２コントロール粒子１２ｂの混合物を、別々に調製しても良い。この場合、ステップＳ２０２〜Ｓ２０５の処理は、図６に示すように、ステップＳ２２１〜Ｓ２２８となる。

【0047】

図６に示すように、ステップＳ２２１において、解析部６０は、試料調製部４０に、試薬４１、４２と、第１コントロール粒子１２ａとを混合して混合物を調製させる。ステップＳ２２２において、解析部６０は、光学検出部５０に、混合物をフローセル５０ａに流させ、フローセル５０ａを流れる第１コントロール粒子１２ａに光を照射して、第１コントロール粒子１２ａからの蛍光を検出させる。ステップＳ２２３において、解析部６０は、上記ステップＳ２０４と同様にして、第１測定値を取得する。解析部６０は、ステップＳ２２４の判定に従って、予め決められた回数だけＳ２２１〜Ｓ２２３の処理を繰り返し、予め決められた回数だけ第１測定値を取得する。

【0048】

続いて、解析部６０は、ステップＳ２２１〜Ｓ２２４と同様、ステップＳ２２５〜Ｓ２２８において、予め決められた回数だけ第２測定値を取得する。図６のステップＳ２２１〜Ｓ２２８によっても、図４のステップＳ２０２〜Ｓ２０５と同様、図５（ｂ）に示すように第１測定値と第２測定値が取得される。

【0049】

図４に戻り、ステップＳ２０６において、解析部６０は、第１管理値と、第２管理値と、第３管理値を取得する。第１管理値は、ステップＳ２０４で取得した第１測定値の平均であり、以下の式（１１）により取得される。第２管理値は、ステップＳ２０４で取得した第２測定値の平均であり、以下の式（１２）により取得される。第３管理値は、第１管理値と第２管理値とから算出される値であり、好ましくは第１管理値と第２管理値の比の値である。第３管理値は、以下の式（１３）により取得される。

【0050】

第１管理値 ＝ （Ｖ１１＋Ｖ１２＋…＋Ｖ１ｎ）／ｎ … （１１）
第２管理値 ＝ （Ｖ２１＋Ｖ２２＋…＋Ｖ２ｎ）／ｎ … （１２）
第３管理値 ＝ 第１管理値／第２管理値 … （１３）

【0051】

第２管理値は、試薬４１によって実質的に染色されず、予め蛍光色素を含む第２コントロール粒子１２ｂから生じた蛍光に基づいて取得された値であるため、光学検出部５０の状態を反映する。これに対して、第１管理値は、光学検出部５０の状態に加えて、染色工程の状態（試薬劣化など）をも反映する値である。第１管理値は、光学検出部５０の状態を表す第２管理値と、染色工程の状態を表す値との積と考えることができる。したがって、第１管理値を第２管理値で除した第３管理値は、染色工程の状態を反映する。

【0052】

なお、第３管理値は、第１管理値／第２管理値を２乗した値であっても良く、第１管理値／第２管理値に対して定数を加算、減算、乗算または除算した値であっても良く、第２管理値／第１管理値であっても良く、第１管理値／第２管理値に対して対数をとった値であっても良い。第３管理値は、第１管理値と第２管理値を用いることなく、（Ｖ１１＋Ｖ１２＋…＋Ｖ１ｎ）／（Ｖ２１＋Ｖ２２＋…＋Ｖ２ｎ）により取得しても良い。

【0053】

ステップＳ２０７において、解析部６０は、第２管理値と第３管理値に基づいて、図７（ａ）、（ｂ）に示す異常判定の処理を並行して行う。

【0054】

図７（ａ）に示すように、ステップＳ４０１において、解析部６０は、第２管理値が基準範囲内であるかを判定する。図７（ｃ）に示すように、第２管理値の基準範囲は、下限閾値Ｓｈ２１と上限閾値Ｓｈ２２によって規定されている。下限閾値Ｓｈ２１と上限閾値Ｓｈ２２は、記憶部６０ａに記憶されている。解析部６０は、ステップＳ４０１でＹＥＳと判定すると、ステップＳ４０２において検出異常なしと判定し、ステップＳ４０１でＮＯと判定すると、ステップＳ４０３において検出異常ありと判定する。

【0055】

図７（ｂ）に示すように、ステップＳ４１１において、解析部６０は、第３管理値が基準範囲内であるかを判定する。図７（ｃ）に示すように、第３管理値の基準範囲は、下限閾値Ｓｈ３１と上限閾値Ｓｈ３２によって規定されている。下限閾値Ｓｈ３１と上限閾値Ｓｈ３２は、記憶部６０ａに記憶されている。解析部６０は、ステップＳ４１１でＹＥＳと判定すると、ステップＳ４１２において染色異常なしと判定し、ステップＳ４１１でＮＯと判定すると、ステップＳ４１３において染色異常ありと判定する。

【0056】

染色異常判定は、図７（ｂ）に示す処理に代えて、図８（ａ）に示す処理であっても良い。この場合、以下に示すように、第１管理値と第２管理値の割合に基づいて、染色異常の判定が行われるため、図４のステップＳ２０６で、第３管理値を取得する必要がない。図８（ａ）に示す処理では、図７（ｂ）と比較して、ステップＳ４１１の前にステップＳ４２１が追加され、ステップＳ４１１がステップＳ４２２に変更されている。

【0057】

図８（ａ）に示すように、ステップＳ４２１において、解析部６０は、取得した第１管理値と第２管理値とに基づく点を、図８（ｂ）に示すように、第１管理値および第２管理値を軸とする座標空間にプロットする。座標空間には、図８（ｂ）において斜線で示すように、正常範囲が設定されている。解析部６０は、正常範囲を予め記憶部６０ａに記憶している。ステップＳ４２２において、解析部６０は、プロットした点が正常範囲内に属するかを判定する。解析部６０は、ステップＳ４２２でＹＥＳと判定すると、ステップＳ４１２において染色異常なしと判定し、ステップＳ４２２でＮＯと判定すると、ステップＳ４１３において染色異常ありと判定する。

【0058】

なお、ここでは、説明の便宜上、ステップＳ４２１において、第１管理値と第２管理値に基づく点を空間座標にプロットしたが、空間座標の作成および点のプロットは、必ずしも実際に行う必要はない。すなわち、空間座標の作成および点のプロット、ならびに、プロットした点が正常範囲内にあるか否かの判定に代えて、第１管理値と第２管理値に基づく点が正常範囲内に属するか否かの判定を、データ処理により行っても良い。

【0059】

異常判定の処理は、図７（ａ）、（ｂ）に示すように別々のフローチャートに従って行われた。しかしながら、図７（ａ）、（ｂ）に示すフローチャートが、１つのフローチャートにまとめられ、１つのフローチャートに従って、システム異常を判定する処理と、検出異常を判定する処理と、染色異常を判定する処理が行われても良い。

【0060】

図４に戻り、図７（ａ）、（ｂ）に示す異常判定の処理が全て終了すると、解析部６０は、ステップＳ２０８において、図７（ａ）に示す処理の結果に基づいて検出異常の有無を判定し、ステップＳ２０９、Ｓ２１０において、図７（ｂ）に示す処理の結果に基づいて染色異常の有無を判定する。

【0061】

解析部６０は、ステップＳ２０８でＮＯと判定し、ステップＳ２０９でＮＯと判定すると、ステップＳ２１１において、図９（ａ）に示すような画面７１を出力部７０に表示する。画面７１は、精度管理結果を示すリスト７１ａ、７１ｂを含む。リスト７１ａは、第１〜第３管理値を一覧表形式で表示する。リスト７１ｂは、精度管理異常判定結果として、検出異常の有無と染色異常の有無を一覧表形式で表示する。

【0062】

解析部６０は、ステップＳ２０８でＮＯと判定し、ステップＳ２０９でＹＥＳと判定すると、ステップＳ２１２において、図９（ｂ）に示すような画面７２を出力部７０に表示する。画面７２は、図９（ａ）に示すリスト７１ａ、７１ｂと同様のリスト７２ａ、７２ｂを含む。さらに、画面７２は、「試料調製部における染色に異常があります」とのメッセージと、領域７２ｃとを含む。領域７２ｃには、試薬４１、４２の交換を促すメッセージとして、「試薬を交換して下さい」が表示される。領域７２ｃに表示されるメッセージは、「試薬の状態を確認して下さい」や「サービスマンに連絡して下さい」でも良い。オペレータは、画面７２を参照することにより、試料調製部４０における染色に異常があることを知ることができ、領域７２ｃを参照することにより、染色異常の解消に向けて円滑かつ迅速に対処できるため、円滑かつ迅速に染色異常を解消できる。

【0063】

ステップＳ２１３において、解析部６０は、通常モードにおける検体１１の測定を禁止する。これにより、図３のステップＳ１０２以降の処理が開始されなくなるため、通常モードにおいて誤って検体１１の測定が行われ、精度の低い解析結果が得られてしまうことを防止できる。ステップＳ２１２において検体１１の測定が禁止された場合、オペレータやサービスマンにより対処がなされた後、図４に示す精度管理モードの処理が再度行われる。このとき、解析部６０は、ステップＳ２０８でＮＯと判定し、ステップＳ２０９においてＮＯと判定すると、検体１１の測定の禁止を解除する。

【0064】

解析部６０は、ステップＳ２０８でＹＥＳと判定し、ステップＳ２１０でＮＯと判定すると、ステップＳ２１４において、図９（ｃ）に示すような画面７３を出力部７０に表示し、ステップＳ２１３において、通常モードにおける検体１１の測定を禁止する。画面７３は、図９（ａ）に示すリスト７１ａ、７１ｂと同様のリスト７３ａ、７３ｂを含む。さらに、画面７３は、「光学検出部に異常があります」とのメッセージと、領域７３ｃとを含む。領域７３ｃには、対処を促すためのメッセージとして、「感度調整を実行して下さい」が表示される。領域７３ｃに表示されるメッセージは、「サービスマンに連絡して下さい」でも良い。オペレータは、画面７３を参照することにより、光学検出部５０に異常があることを知ることができ、領域７３ｃを参照することにより、検出異常の解消に向けて円滑かつ迅速に対処できるため、円滑かつ迅速に検出異常を解消できる。

【0065】

解析部６０は、ステップＳ２０８でＹＥＳと判定し、ステップＳ２１０でＹＥＳと判定すると、ステップＳ２１５において、図１０（ａ）に示すような画面７４を出力部７０に表示し、ステップＳ２１３において、通常モードにおける検体１１の測定を禁止する。画面７４は、図９（ａ）に示すリスト７１ａ、７１ｂと同様のリスト７４ａ、７４ｂを含む。さらに、画面７４は、図９（ｂ）の画面７２と同様、メッセージと領域７４ｃを含み、図９（ｃ）の画面７３と同様、メッセージと領域７４ｄを含む。

【0066】

ステップＳ２１５によれば、光学検出部５０と試料調製部４０の両方に異常があるような場合でも、検出異常と試薬異常が個別にかつ確実に報知される。よって、オペレータは、異常解消に向けて円滑かつ迅速に対処できるため、円滑かつ迅速に検出異常と試薬異常を解消できる。

【0067】

図１０（ｂ）は、精度管理結果を示す画面７１の他の例を示す。図１０（ｂ）の画面７１では、リスト７１ｂにシステム異常の有無が表示される。システム異常とは、検出異常の判定と染色異常の判定を総合した結果である。したがって、いずれかが異常と判定されれば、リスト７１ｂに「システム異常：あり」と表示される。いずれにも異常がなければ、リスト７１ｂに「システム異常：なし」と表示される。なお、第１管理値が基準範囲内であるか否かによって、システム異常を判定してもよい。

【0068】

解析部６０は、精度管理モードにおいて第３管理値を取得する度に、取得した第３管理値を記憶部６０ａに記憶しても良い。こうすると、第３管理値の経過を経時的に観察することで、試薬４１、４２の劣化を予知でき、試薬４１、４２の交換時期を予測できる。

【0069】

＜実施形態２＞
実施形態２では、粒子分析装置１０の構成は、実施形態１と同様であり、染色異常判定の処理のみが、以下に示すように実施形態１と異なっている。

【0070】

図１１（ａ）に示すように、ステップＳ４４１において、解析部６０は、第３管理値が閾値Ｓｈ３２より大きいか否かを判定する。解析部６０は、ステップＳ４４１でＮＯと判定すると、ステップＳ４４２において、第３管理値が閾値Ｓｈ３１より小さいか否かを判定する。

【0071】

解析部６０は、ステップＳ４４１でＮＯと判定し、ステップＳ４４２でＮＯと判定すると、ステップＳ４４３において染色異常なしと判定する。解析部６０は、ステップＳ４４１でＮＯと判定し、ステップＳ４４２でＹＥＳと判定すると、ステップＳ４４４において試薬４１に異常ありと判定する。解析部６０は、ステップＳ４４１でＹＥＳと判定すると、ステップＳ４４５において試薬４２に異常ありと判定する。解析部６０は、図８（ｂ）に示す座標空間を用いて、ステップＳ４４１、Ｓ４４２の判定を行っても良い。

【0072】

ステップＳ４４４、Ｓ４４５で試薬に異常ありと判定されると、図４のステップＳ２１２、Ｓ２１５の後段において、試薬の交換を促すメッセージが表示される。具体的には、解析部６０は、ステップＳ４４４において試薬４１に異常ありと判定した場合、図１１（ｂ）に示す画面７５を出力部７０に表示する。解析部６０は、ステップＳ４４５において試薬４２に異常ありと判定した場合、図１１（ｃ）に示す画面７６を出力部７０に表示する。

【0073】

ここで、図７（ｃ）に示す実施形態１の染色異常判定の処理において、染色異常ありと判定される場合には、蛍光色素を含む試薬４１が劣化している場合と、ＲＮＡ除去剤を含む試薬４２が劣化している場合とが含まれる。試薬４１が劣化している場合、第１コントロール粒子１２ａの染まりが不十分になり、第１コントロール粒子１２ａから生じる蛍光が弱くなり、第３管理値が下がる。試薬４２が劣化している場合、遊離したＲＮＡの除去が不十分になり、蛍光のバックグラウンドが上がり、第３管理値が上がる。したがって、第３管理値を下限閾値Ｓｈ３１と比較することで、試薬４１に異常があることを判定でき、第３管理値を上限閾値Ｓｈ３２と比較することで、試薬４２に異常があることを判定できる。

【0074】

よって、実施形態２によれば、実施形態１と同様に染色異常があることを判定でき、さらに、試薬４１、４２のどちらを交換すれば良いかを知ることができる。

【0075】

＜異常判定に関する実験＞
次に、異常判定に関して実際に行った実験について説明する。

【0076】

１．材料
実験において使用した第１コントロール粒子１２ａと、第２コントロール粒子１２ｂと、試薬４１と、試薬４２とは、以下に示すとおりである。

【0077】

第１コントロール粒子１２ａとして、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション社より入手したＣ３３Ａ細胞（ＨＴＢ−３１）を、Ｈｏｌｏｇｉｃ社のＰｒｅｓｅｒｖＣｙｔ（登録商標）に懸濁して２４時間静置した後に、遠心分離して上清を除去し、これにｐＨ７．５、１０ｍＭであるＴｒｉｓ塩酸水溶液に懸濁したものを用いた。第２コントロール粒子１２ｂとして、ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社のＡｌｉｇｎＦｌｏｗ Ｐｌｕｓ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｂｅａｄｓ（Ａ−７３０３）を、ｐＨ７．５、１０ｍＭであるＴｒｉｓ塩酸水溶液で希釈したものを用いた。

【0078】

試薬４１として、シグマ社のＰＩ、すなわちヨウ化プロピジウムを、エチレングリコールで希釈したものを用いた。試薬４１については、試薬４１の調製後に、遮光した状態で保存したものと、露光した状態で保存したものを使用した。すなわち、試薬４１については、遮光保存をしたものと、露光劣化させた試薬４１それぞれを使用した。試薬４２として、シグマ社のＲＮａｓｅＡ（Ｃａｔ. Ｒ４６４２）を、ｐＨ７．５、１０ｍＭであるＴｒｉｓ塩酸水溶液で希釈したものを用いた。

【0079】

２．条件
実験では、染色液である試薬４１の異常と、光学検出部５０の感度の異常とを再現する目的で、試薬４１と、蛍光を検出する光検出器５６に印加する電圧とを、以下の３条件に示すように変化させた。

【0080】

条件１：試薬４１を露光保存したものとし、光検出器５６に印加する電圧を適正な２５１Ｖとした。
条件２：試薬４１を露光保存したものとし、光検出器５６に印加する電圧を２５５Ｖとした。
条件３：試薬４１を遮光保存したものとし、光検出器５６に印加する電圧を２５３Ｖとした。

【0081】

３．実験手順
実験では、第１コントロール粒子１２ａに関する測定と、第２コントロール粒子１２ｂに関する測定とを、別々に行った。すなわち、図４に示すフローチャートにおいて、ステップＳ２０２〜Ｓ２０５が、図６のステップＳ２２１〜Ｓ２２８に置き換えられた。以下、適宜、図４と図６のフローチャートを参照して説明する。

【0082】

図６のステップＳ２２１において、第１コントロール粒子１２ａに、試薬４２と希釈液を加え、３７℃にて１０分間静置した後、試薬４１を加え、３７℃にて２分間静置することで、第１コントロール粒子１２ａの混合物を調製した。図６のステップＳ２２２において、図１に図示した粒子分析装置１０を用いて、混合物からの蛍光信号を取得した。ステップＳ２２１〜Ｓ２２３を２回繰り返すことにより、１回目の第１測定値と２回目の第１測定値を取得した。

【0083】

続いて、図６のステップＳ２２５において、第２コントロール粒子１２ｂに希釈液を加えることで、第２コントロール粒子１２ｂを調製した。図６のステップＳ２２６において、ステップＳ２２２と同様の粒子分析装置１０を用いて、第２コントロール粒子１２ｂの蛍光信号を取得した。ステップＳ２２５〜Ｓ２２７を２回繰り返すことにより、１回目の第２測定値と２回目の第２測定値を取得した。

【0084】

条件１〜３の場合の第１測定値と第２測定値は、図１２（ａ）〜（ｃ）の上側の表に示す結果となった。なお、図１２（ａ）〜（ｃ）には、参考として、第１測定値と第２測定値との比の値が示されている。

【0085】

次に、図４のステップＳ２０６において、上述のとおり、第１〜第３管理値を取得した。すなわち、上記式（１１）〜（１３）において、ｎを２として第１〜第３管理値を取得した。条件１〜３の場合の第１〜第３管理値は、図１２（ａ）〜（ｃ）の下側の表に示す結果となった。

【0086】

第１〜第３管理値の判定に用いる上限閾値と下限閾値は、図１２（ｄ）に示すように設定した。下限閾値は、ターゲット値に許容幅を減じたものとし、上限閾値は、ターゲット値に許容幅を加えたものをとした。

【0087】

次に、システム異常判定と、検出異常判定と、染色異常判定を行った。検出異常判定と染色異常判定は、それぞれ、図７（ａ）、（ｂ）に示す処理に従って行った。特許文献１の手法と比較するために、特許文献１の手法と同様の手法によりシステム異常を判定した。すなわち、第１管理値が、下限閾値以上、且つ、上限閾値以下である場合、システム異常なしと判定し、第１管理値が、下限閾値より小さく、または、上限閾値より大きい場合、システム異常ありと判定した。条件１〜３の場合の第１〜第３管理値の判定結果は、図１２（ａ）〜（ｃ）の下側の表に示す結果となった。図１２（ａ）〜（ｃ）の下側の表において、管理値が、下限閾値以上、且つ、上限閾値以下である場合、判定は“Ｇ”となり、管理値が、下限閾値より小さく、または、上限閾値より大きい場合、判定は“ＮＧ”となる。

【0088】

４．実験結果
図１２（ａ）〜（ｃ）の下側の表に示すように、露光保存することにより意図的に劣化させた試薬４１を用いた場合、すなわち、条件１、２の場合は、第３管理値が下限閾値を下回り、第３管理値の判定は“ＮＧ”となった。光検出器５６の感度を意図的に上げた場合、すなわち、条件２、３の場合は、第２管理値が上限閾値を上回り、第２管理値の判定は“ＮＧ”となった。

【0089】

以上の実験により、露光保存した試薬４１を用いた条件１では、第１管理値と第２管理値の判定が“Ｇ”、すなわちシステムと検出に異常がないことが示されても、第３管理値の判定が“ＮＧ”、すなわち、染色に異常があることが示された。これは第１コントロール粒子１２ａの蛍光量（第１管理値）および第２コントロール粒子１２ｂの蛍光量（第２管理値）のみに着目する特許文献１の手法では発見できなった異常である。

【0090】

この点、実施形態１および２の手法によれば、染色の状態を表す第３管理値を、第１管理値とは別に求めることで、従来は把握できなかった染色工程の異常を発見できる。オペレータは、第３管理値を基準範囲内に戻すべく試薬交換を行うことで、適切なＤＮＡ量の解析が可能となるようにメンテナンスできる。

【0091】

また、条件２、３において、第１管理値の判定は互いに同じであり、第２管理値の判定は互いに同じである。しかしながら、露光保存した試薬４１を用いた条件２では、第３管理値の判定が“ＮＧ”、すなわち、染色に異常があることが示された。遮光保存した試薬４１を用いた条件３では、第３管理値の判定が“Ｇ”、すなわち、染色に異常がないことが示された。条件２と条件３の違いも、第１コントロール粒子１２ａの蛍光量（第１管理値）および第２コントロール粒子１２ｂの蛍光量（第２管理値）のみに着目する特許文献１の手法では発見できなった異常である。

【0092】

特許文献１の手法では、第２管理値が異常である場合、すなわち光学検出部に異常がある場合、さらに染色工程にも異常があるかどうかを判定する指標は提供されていなかった。光学検出部と染色工程の両方に異常がある場合、オペレータは光学検出部の感度調整に加えて試薬交換を行うが、従来の手法では、試薬交換を伴う異常か否かがわからなかった。

【0093】

この点、実施形態１および２の手法によれば、第１管理値と第２管理値との比の値である第３管理値に基づき、検出異常と染色異常を別々に判定できるため、第１管理値と第２管理値からでは判定できない染色異常を、第３管理値を用いて判定できることが分かる。したがって、本発明によれば、光学検出部５０と試料調製部４０の両方に異常があるような場合でも、検出異常と試薬異常が個別にかつ確実に報知できることが分かる。

【符号の説明】

【0094】

１０ … 粒子分析装置
１２ａ … 第１コントロール粒子
１２ｂ … 第２コントロール粒子
４０ … 試料調製部
４１ … 試薬
４２ … 試薬
５０ … 光学検出部
５０ａ … フローセル
６０ … 解析部

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】