特許 6353856 ２−（（４−アミノ−３−（３−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−Ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）−３−（２−トリフルオロ−メチル）ベンジル）キナゾリン−４（３Ｈ）−オン誘導体及びホスホイノシチド３−キナーゼ阻害剤としてのそれらの使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6353856

(24)【登録日】2018年6月15日

(45)【発行日】2018年7月4日

(54)【発明の名称】２−（（４−アミノ−３−（３−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−Ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）−３−（２−トリフルオロ−メチル）ベンジル）キナゾリン−４（３Ｈ）−オン誘導体及びホスホイノシチド３−キナーゼ阻害剤としてのそれらの使用

(51)【国際特許分類】

   C07D 487/04 20060101AFI20180625BHJP

   A61K 31/519 20060101ALI20180625BHJP

   A61K 31/573 20060101ALI20180625BHJP

   A61K 31/522 20060101ALI20180625BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20180625BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20180625BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20180625BHJP

   A61P 11/02 20060101ALI20180625BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20180625BHJP

   A61P 27/14 20060101ALI20180625BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20180625BHJP

   A61P 17/04 20060101ALI20180625BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20180625BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20180625BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20180625BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20180625BHJP

   A61P 1/18 20060101ALI20180625BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20180625BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20180625BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20180625BHJP

【ＦＩ】

   C07D487/04 143

   C07D487/04CSP

   A61K31/519

   A61K31/573

   A61K31/522

   A61K45/00

   A61P11/00

   A61P11/06

   A61P11/02

   A61P31/12

   A61P27/14

   A61P27/02

   A61P17/04

   A61P17/00

   A61P1/04

   A61P29/00 101

   A61P19/02

   A61P1/18

   A61P35/00

   A61P35/04

   A61P43/00 111

【請求項の数】13

【全頁数】62

(21)【出願番号】特願2015-562319(P2015-562319)

(86)(22)【出願日】2014年3月14日

(65)【公表番号】特表2016-510802(P2016-510802A)

(43)【公表日】2016年4月11日

(86)【国際出願番号】GB2014050770

(87)【国際公開番号】WO2014140597

(87)【国際公開日】20140918

【審査請求日】2017年1月23日

(31)【優先権主張番号】13275070.4

(32)【優先日】2013年3月15日

(33)【優先権主張国】EP

(31)【優先権主張番号】13193372.3

(32)【優先日】2013年11月18日

(33)【優先権主張国】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】511079148

【氏名又は名称】レスピバート・リミテツド

(74)【代理人】

【識別番号】110000741

【氏名又は名称】特許業務法人小田島特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ブロークス，ルデイ・ローラン・マリア

(72)【発明者】

【氏名】コプマン，アレツクス・ヘルマン

(72)【発明者】

【氏名】スミス，アラン・ジヨン

(72)【発明者】

【氏名】タデイ，デイビド・ミシエル・アドリアン

(72)【発明者】

【氏名】オニオンズ，スチユアート・トーマス

【審査官】 前田 憲彦

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１３−５０８３３４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１２／０５２７５３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２０１２−５２１９９４（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ ４８７／００

Ａ６１Ｋ ３１／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）

【化1】

の化合物、又はすべてのその立体異性体、互変異性体及び同位体的誘導体を含むその製薬学的に許容され得る塩。

【請求項2】

８．２、９．０、９．２、９．７、１２．２、１４．１、１４．３、１５．０、１６．４、１８．０、１８．５、１９．０、１９．６、２１．８、２２．３、２２．５、２４．３、２４．５、２４．８、２５．１及び２５．８（±０．２度、２−シータ値）から選ばれる、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２１個全部のピークを含有するＸＲＰＤパターンを有するその２型結晶多形の形態における、式（Ｉ）

の化合物。

【請求項3】

９．７、１２．２、１４．１及び１４．３（±０．２度、２−シータ値）から選ばれる１、２、３又は４個のピークを含有するＸＲＰＤパターンを有する、請求項２に従う式（Ｉ）の化合物。

【請求項4】

１種もしくはそれより多い製薬学的に許容され得る希釈剤又は担体と組み合わされた、請求項１〜３のいずれか１つに従う化合物を含んでなる製薬学的組成物。

【請求項5】

コルチコステロイド、ベータアゴニスト、キサンチン、ムスカリンアンタゴニスト及びｐ３８ ＭＡＰキナーゼ阻害剤から選ばれる第２の又はさらなる活性成分をさらに含んでなる請求項４に従う製薬学的組成物。

【請求項6】

（Ａ）請求項１〜３のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物；及び
（Ｂ）コルチコステロイド、ベータアゴニスト、キサンチン、ムスカリンアンタゴニスト、ホスホジエステラーゼ阻害剤及びｐ３８ ＭＡＰキナーゼ阻害剤から選ばれるさらなる活性成分
を含んでなり、ここで成分（Ａ）及び（Ｂ）のそれぞれは製薬学的に許容され得る希釈剤又は担体との混合された状態で調製され、ここで活性成分（Ａ）および（Ｂ）は共−調整されまたは共−投与され得る、製薬学的製品。

【請求項7】

請求項１〜３のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物を含んでなる、薬剤。

【請求項8】

コルチコステロイド、ベータアゴニスト、キサンチン、ムスカリンアンタゴニスト及びｐ３８ ＭＡＰキナーゼ阻害剤から選ばれる１種もしくはそれより多いさらなる活性成分との組み合わせでの使用のための、請求項１〜３のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物を含んでなる薬剤。

【請求項9】

ＣＯＰＤ（慢性気管支炎及び気腫を含む）、ぜんそく、小児ぜんそく、のう胞性線維症、サルコイドーシス、突発性肺線維症、アレルギー性鼻炎、鼻炎、副鼻腔炎及びウイルスにより引き起こされるそれらの１つの悪化、呼吸器ウイルス感染（その合併症を含む）、アレルギー性結膜炎、結膜炎、アレルギー性皮膚炎、接触性皮膚炎、乾癬、潰瘍性大腸炎、慢性関節リウマチ又は変形性関節症に続発性の炎症関節、慢性関節リウマチ、膵炎、悪液質、成長阻害ならびに非小細胞性肺ガン、乳ガン、胃ガン、結腸直腸ガン及び悪性黒色種を含む腫瘍の転移から選ばれる状態の処置又は予防における使用のための、請求項１〜３のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物、又は請求項４もしくは請求項５に従う製薬学的組成物、又は請求項６に従う製薬学的製品。

【請求項10】

ＣＯＰＤ（慢性気管支炎及び気腫を含む）、ぜんそく、小児ぜんそく、のう胞性線維症、サルコイドーシス、突発性肺線維症、アレルギー性鼻炎、鼻炎、副鼻腔炎及びウイルスにより引き起こされるそれらの１つの悪化、呼吸器ウイルス感染（その合併症を含む）、アレルギー性結膜炎、結膜炎、アレルギー性皮膚炎、接触性皮膚炎、乾癬、潰瘍性大腸炎、慢性関節リウマチ又は変形性関節症に続発性の炎症関節、慢性関節リウマチ、膵炎、悪液質、成長阻害ならびに非小細胞性肺ガン、乳ガン、胃ガン、結腸直腸ガン及び悪性黒色種を含む腫瘍の転移から選ばれる状態の処置又は予防用の薬剤の製造のための、請求項１〜３のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物、又は請求項４もしくは請求項５に従う製薬学的調剤、又は請求項６に従う製薬学的製品の使用。

【請求項11】

式（ＩＩ）：

【化2】

［式中、ＬＧ₁はハロを示す］
の中間体、又は式（ＩＩ）の化合物のフェノール性ヒドロキシルがｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエーテルとして保護されているその保護誘導体。

【請求項12】

式（ＩＩ）

【化3】

［式中、ＬＧ₁は脱離基を示す］
の化合物、又は式（ＩＩ）の化合物のフェノール性ヒドロキシルがｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエーテルとして保護されているその保護誘導体を、式（Ｉ）の化合物又はその保護誘導体を与えるのに適した条件下でフラグメント：

【化4】

と反応させ、必要なら保護化合物を脱保護して式（Ｉ）の化合物を与えることを含んでなる、請求項１〜３のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物の製造方法。

【請求項13】

式（Ｉａ）

【化5】

の化合物、又はすべてのその立体異性体、互変異性体及び同位体的誘導体を含む製薬学的に許容され得るその塩。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

発明の分野
本発明は、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３キナーゼ、ＰＩ３Ｋ）を阻害する化合物に関する。特に本開示はＰＩ３Ｋデルタサブタイプ及びさらにそのガンマサブタイプを阻害する化合物ならびに特にＣＯＰＤ及びぜんそくのような肺の炎症性疾患を含む炎症性疾患の処置における、薬剤組み合わせにおける使用を含む治療におけるそれらの使用に関する。本発明は該化合物の製造方法ならびにそれを含んでなる製薬学的組成物にも拡大される。

【背景技術】

【0002】

発明の背景
脂質キナーゼは、細胞移動及び接着を含む広範囲の生理学的プロセスの調節に含まれる種を生産するための脂質のリン酸化を触媒する。ＰＩ３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は膜結合タンパク質であり、自身が細胞膜と結合している脂質のリン酸化を触媒する酵素の種類に属する。ＰＩ３Ｋデルタイソ酵素（ＰＩ３Ｋδ）は、細胞シグナリングを媒介し、炎症、成長因子シグナリング、悪性転換及び免疫に関係があるとされてきた種々の３’−リン酸化ホスホイノシチドの生成を担うＩ型ＰＩ３Ｋキナーゼの４つのイソ型の１つである［非特許文献１による総説を参照されたい］。

【0003】

炎症の調節にＰＩ３Ｋが含まれることは、ＬＹ−２９４００２及びＷｏｒｔｍａｎｎｉｎのような全−活性（ｐａｎ−ａｃｔｉｖｅ）ＰＩ３Ｋ阻害剤を用いていくつかのモデルにおいて確証されている［非特許文献２］。下記のように、選択的なＰＩ３Ｋ阻害剤を用いて、あるいは特異的な酵素イソ型を欠くノックアウトマウスにおいて、最近の研究が行われた。これらの研究は、ＰＩ３Ｋ酵素により調節される経路の炎症における役割を示した。ＰＩ３Ｋδ選択的阻害剤ＩＣ−８７１１４は、気道過敏症、ＩｇＥ放出、炎症性サイトカイン発現、肺中への炎症性細胞蓄積ならびにオボアルブミン−感作、オボアルブミン−接種（ｏｖａｌｂｕｍｉｎ−ｃｈａｌｌｅｎｇｅｄ）マウスにおける血管透過性を阻害することが見出された［非特許文献３及び非特許文献４］。さらに、ＩＣ−８７１１４は、ＴＮＦαにより刺激されたマウスの肺における好中球蓄積及び好中球機能を低下させた［非特許文献５］。

【0004】

ＰＩ３Ｋδイソ型はインスリン及び他の成長因子により、ならびにＧ−タンパク質共役タンパク質シグナリング及び炎症性サイトカインにより活性化される。さらに、ノックアウトマウスを用いる研究は、ぜんそくの病因論においてＰＩ３Ｋガンマ（ＰＩ３Ｋγ）の活性化が重要であり得ることを明らかにした。例えばネズミマスト細胞反応は、機能性ＰＩ３Ｋγを必要とするオートクリンシグナルにより試験管内及び生体内で悪化する。ＰＩ３Ｋγを欠くマウスは、受身全身アナフィラキシーにより挑戦される場合、水腫を示さなかった［非特許文献６］。かくしてＰＩ３Ｋγは種々のＧ−タンパク質共役受容体（ＧＰＣＲｓ）を介して、特にマスト細胞機能を調節することにより、炎症シグナルを中継する。オボアルブミン感作及び挑戦マウスにおける好酸球蓄積も、野生型動物と比較してこれらのＰＩ３Ｋγ−欠失マウスにおいて阻害されると報告された［非特許文献７］。最後に、ＰＩ３Ｋγ阻害剤を用いる処置は、肺切片のＩＬ−１３−増強（ａｕｇｍｅｎｔｅｄ）気道収縮を弱めた［非特許文献８］。

【0005】

最近、ＰＩ３Ｋ二重δ／γ阻害剤ＴＧ１００−１１５は、ネズミモデルにおいてエアロゾル適用により投与されると肺好酸球増加症を阻害し、インターロイキン−１３レベル、ムチン蓄積及び気道過敏症を低下させることが報告された。同じ著者は、該化合物がＬＰＳ又はタバコ煙により引き出される肺好酸球増加症を阻害することができることも報告した［非特許文献９］。ＰＩ３Ｋδ及びγの他の小分子阻害剤は、ＰＩ３Ｋδ選択的阻害剤と比較して、それより優れたＬＰＳ誘導ＴＮＦα生産及びＴ細胞活性化の阻害を生ずることが報告された［非特許文献１０］。

【0006】

ＰＩ３Ｋδイソ型は酸化的ストレスによっても活性化されるので、それは高レベルの酸化的ストレスが関連するとされている疾患において治療的干渉のための標的としておそらく適切であり得る。ＰＩ３Ｋシグナル伝達経路の下流媒介物にはＡｋｔ（セリン／トレオニンタンパク質キナーゼ）及びラパマイシンの哺乳類標的、酵素ｍＴＯＲが含まれる。最近の研究は、Ａｋｔのリン酸化に導くＰＩ３Ｋδの活性化が、活性化されなければコルチコステロイド−感受性である細胞において、コルチコステロイド耐性の状態を誘導できることを示唆した［非特許文献１１］。これらの観察は、このシグナリングカスケードがＣＯＰＤに苦しむ患者ならびに喫煙し、それにより彼らの肺を高い酸化的ストレスに供しているぜんそく患者の肺において観察される炎症のコルチコステロイド−不感受性に責任のある１つの機構であり得るという仮定に導いた。事実、ＣＯＰＤ及びぜんそくの両方の処置において用いられる化合物であるテオフィリンは、ＰＩ３キナーゼδにより調節される経路との相互作用を含む機構を介して、ステロイド不感受性を逆転させることが示唆されている［非特許文献１１］。

【0007】

現在、ぜんそく及びＣＯＰＤの両方のための処置の大黒柱は、臨床的に適切であると判断されるコルチコステロイド、ムスカリンアンタゴニスト及びβ₂−アゴニストの組み合わせを用いる吸入療法である。ＣＯＰＤ及びぜんそくにおける満たされていない医学的要求に向き合う１つの方法は、単独療法として、あるいはこれらの３つの薬理学的種類からの１種もしくはそれより多い薬剤と組み合わされて用いられる時に有意な利益を与える可能性を有する新規な吸入薬剤を同定することである。従って、ぜんそく、ＣＯＰＤ及び他の炎症性疾患において強化された治療有効性を与える可能性を有するイソ型選択的ＰＩ３Ｋ阻害剤を同定し、且つ開発する必要が残っている。

【0008】

特許文献１は：本明細書で先行技術の化合物Ａと言及する６−（２−（（４−アミノ−３−（３−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）−３−（２−クロロベンジル）−４−オキソ−３，４−ジヒドロキナゾリン−５−イル）−Ｎ，Ｎ−ビス（２−メトキシエチル）ヘキシ−５−インアミドを開示している。

【0009】

特許文献２は、ある種の３−ベンジル−５−アルキニル−キナゾリン−４（３Ｈ）−オンを開示している。本明細書で開示される化合物の例は、本明細書で実施例５０と言及される２−（（４−アミノ−３−（３−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）−３−（２−フルオロベンジル）−５−（３−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）プロピ−１−イニル）キナゾリン−４（３Ｈ）−オンである。

【0010】

これらの先行技術のいずれも、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物の同じ有利な側面を有していない。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0011】

【特許文献1】国際公開第２０１２／０５２７５３号パンフレット

【特許文献2】国際公開第２０１１／０４８１１１号パンフレット

【非特許文献】

【0012】

【非特許文献1】Ｒａｍｅｈ，Ｌ．Ｅ．ａｎｄ Ｃａｎｔｌｅｙ，Ｌ．Ｃ．著，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９９年，２７４：８３４７−８３５０

【非特許文献2】Ｉｔｏ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．著，Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２００７年，３２１：１−８

【非特許文献3】Ｌｅｅ，Ｋ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．著，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００６年，１１８；４０３−４０９

【非特許文献4】Ｌｅｅ，Ｋ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．著，ＦＡＳＥＢ Ｊ．，２００６年，２０：４５５−６５

【非特許文献5】Ｓａｄｈｕ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．著，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２００３年，３０８：７６４−９

【非特許文献6】Ｗｙｍａｎｎ Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．著，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．，２００３年，３１：２７５−８０

【非特許文献7】Ｌｉｍ Ｄ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．著，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２００９年，２９６（２）：Ｌ２１０−Ｌ２１９

【非特許文献8】Ｊｉａｎｇ Ｈ．ｅｔ ａｌ．著，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２０１２，３４２（２）：３０５−１１

【非特許文献9】Ｄｏｕｋａｓ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．著，Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２００９年，３２８：７５８−７６５

【非特許文献10】Ｗｉｌｌｉａｍｓ Ｏ．ｅｔ ａｌ．著，Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．，２０１０，１７（２）：１２３−３４

【非特許文献11】Ｔｏ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．著，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．，２０１０，１８２：８９７−９０４

【発明の概要】

【0013】

発明の概略
本発明に従い、すべてのその立体異性体、互変異性体及び同位体的誘導体を含む式（Ｉ）：

【0014】

【化1】

【0015】

の化合物あるいは製薬学的に許容され得るその塩を提供する。

【0016】

本発明の別の側面において、固体結晶形態における式（Ｉ）の化合物を提供する。

【0017】

本発明のさらなる側面において、その２型結晶多形の形態（本明細書で「２型結晶多形」と言及されることがある）における式（Ｉ）の化合物を提供する。

【0018】

本発明のさらなる側面において、その３型結晶多形の形態（本明細書で「３型結晶多形」と言及されることがある）における式（Ｉ）の化合物を提供する。

【0019】

先行技術の化合物である化合物Ａ及び実施例５０の試験管内側面と本開示の化合物の側面の比較を本明細書下記に示す（実験部分における表５を参照されたい）。本発明の化合物は特に有力な二重ＰＩ３Ｋδ／γイソ型阻害剤であり、それは前に開示された化合物を超える明確且つ有利な治療的側面をそれに与える薬理学的特徴である。本発明のこの側面は、肺炎症における治療的有効性及び臨床的利益の予報者である動物モデルにおける式（Ｉ）の化合物の生体内側面から特に明らかである（実験部分における表８〜１２を参照されたい）。

【0020】

１つの態様において、本開示の化合物は、試験物質がマウス肺中への好中球のポリＩＣ誘導流入を阻害する能力を測定する生体内アッセイにおいて比較される時に、先行技術の化合物を超える向上した阻害活性を有する。示される向上は、当該技術分野において前に開示された既知の化合物を１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０倍（あるいはそれより多数倍）超え得る。

【0021】

生体内ポリＩＣアッセイにおける活性は、ぜんそく又はＣＯＰＤで苦しむ患者におけるウイルス−誘導悪化を阻害する本発明の化合物の能力の指標であると考えられる。ウイルス感染は、患者の肺における炎症を悪化させることにより、ならびにステロイド耐性表現型を形成することにより、疾患の悪化を引き起こすと考えられる。ポリＩＣは、ウイルスがプロ炎症性（ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）となる機構の１つを刺激する。

【0022】

その固有の物理的及び化学的安定性、溶解性の側面及び特にその独特の生物学的活性を含む本明細書に記載される化合物の薬剤−様性質は、該化合物を製薬学的薬剤として、及び特に炎症媒介疾患の処置のための製薬学的薬剤としての使用に適したものとしている。

【図面の簡単な説明】

【0023】

図の簡単な記述

【図1a】マウス気道におけるポリ−Ｉ：Ｃ−誘導好中球蓄積への化合物（Ｉ）又は化合物Ａを用いる処置の効果を示す棒グラフである。

【図1b】マウス気道におけるポリ−Ｉ：Ｃ−誘導好中球蓄積への化合物（Ｉ）対化合物Ａの阻害力価の比較を示す。

【図2a】ネズミＢＡＬＦにおけるタバコ煙−誘導マクロファージ蓄積への化合物（Ｉ）又は化合物Ａを用いる処置の効果を示す棒グラフである。

【図2b】ネズミＢＡＬＦにおけるタバコ煙−誘導好中球蓄積への化合物（Ｉ）又は化合物Ａを用いる処置の効果を示す棒グラフである。

【図3】１型結晶多形の試料から取得したＸ−線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンである（実施例２を参照されたい）。

【図4】１型結晶多形の試料の熱−重量分析（ＴＧＡ）（上のプロット）及び示差走査熱量分析（ＤＳＣ）（下のプロット）を示す（実施例２を参照されたい）。

【図5】２型結晶多形の試料から取得したＸＲＰＤパターンである（実施例４を参照されたい）。

【図6】２型結晶多形の試料のＴＧＡ分析を示す（実施例４を参照されたい）。

【図7】２型結晶多形の試料のＤＳＣ分析を示す（実施例４を参照されたい）。

【図8】２型結晶多形の試料に関するＤＶＳ等温線プロットである（実施例４を参照されたい）。

【図9】２型結晶多形の試料に関する質量におけるＤＶＳ変化のプロットである（実施例４を参照されたい）。

【図10】２型結晶多形の試料についてのＤＶＳ分析の前（下のプロット）及び後（上のプロット）に得たＸＲＰＤパターンを示す（実施例４を参照されたい）。

【図11】保存前（下のプロット）ならびに２５℃／９６％ＲＨ（中間のプロット）及び４０℃／７５％ＲＨ（上のプロット）における１週間の保存の後に得た２型結晶多形の試料のＸＲＰＤパターンを示す（実施例４を参照されたい）。

【図12】３型結晶多形の試料から取得したＸＲＰＤパターンである（実施例８を参照されたい）。

【図13】３型結晶多形の試料のＴＧＡ（上のプロット）及びＤＳＣ（下のプロット）分析を示す（実施例８を参照されたい）。

【図14】３型結晶多形の試料についてのＧＶＳ分析である（実施例８を参照されたい）。

【図15】３型結晶多形の試料についてのＤＶＳ分析の前（下のプロット）及び後（上のプロット）に得たＸＲＰＤパターンを示す（実施例８を参照されたい）。

【図16】保存前（下のプロット）ならびに２５℃／９６％ＲＨ（中間のプロット）及び４０℃／７５％ＲＨ（上のプロット）における１週間の保存の後に得た３型結晶多形の試料のＸＲＰＤパターンを示す（実施例８を参照されたい）。

【図17】７型（最上のプロット）、６型、５型、４型、３型、２型及び１型（最下のプロット）の試料から取得したＸＲＰＤパターンの重ね図（ｏｖｅｒｌａｙ）を示す（実施例９〜１２を参照されたい）。

【0024】

発明の詳細な記述
本明細書で用いられる阻害剤という用語は、試験管内酵素アッセイにおいて標的タンパク質、例えばＰＩ３Ｋδ酵素の生物学的活性を減じる（例えば少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％もしくはそれより多く）か、あるいは除去する化合物を指すことが意図されている。

【0025】

本明細書で用いられるデルタ／ガンマ（δ／γ）阻害剤という用語は、化合物が必ずしも同じ程度までではないが、両酵素イソ型における阻害活性をいくらかの程度まで阻害する事実を指すことが意図されている。

【0026】

本開示の化合物は、細胞に基づくスクリーニング系において活性であり、それにより、それが細胞への透過のための適した性質を有し、且つ細胞内薬理学的効果を及ぼすことができることを示している（実験部分における表６及び表７を参照されたい）。

【0027】

本開示の化合物は、薬剤として治療的に適した且つ望ましい製薬学的性質、例えば妥当な化学的安定性及び光安定性を含む物理−化学的特徴、適した溶解性の側面ならびに有力な活性を有する。

【0028】

１つの態様において、本発明の化合物の製薬学的に許容され得る塩を提供する。

【0029】

１つの態様において、本発明の化合物の製薬学的に許容され得る酸付加塩を提供する。

【0030】

本明細書上記で言及した製薬学的に許容され得る酸付加塩は、式（Ｉ）の化合物が形成することができる治療的に活性な無毒性の酸付加塩を含むものとする。式（Ｉ）の化合物の遊離の塩基の形態をそのような適した酸の例で処理することにより、これらの製薬学的に許容され得る酸付加塩を簡単に得ることができる。適した酸の例には、例えば塩酸、臭化水素酸及び硫酸及びリン酸などのような無機酸；あるいは例えば酢酸、プロパン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、パラ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、パラ−アミノサリチル酸、パモ酸などのような有機酸が含まれる。適した酸のさらなる例はベンゼンスルホン酸である。

【0031】

式（Ｉ）の化合物の塩の例にはすべての製薬学的に許容され得る塩、例えば制限ではなく、ＨＣｌ及びＨＢｒ塩のような無機酸の酸付加塩ならびにメタンスルホン酸塩のような有機酸の付加塩が含まれる。さらなる例には硫酸塩及びリン酸塩が含まれる。

【0032】

別の態様において、式（Ｉ）の化合物を適した塩基と反応させることにより形成される本発明の化合物の製薬学的に許容され得る塩を提供する。適した塩基の例には、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム、Ｌ−アルギニン、コリン及びＬ−リシンが含まれる。

【0033】

１つの態様において、遊離の塩基としての２−（（４−アミノ−３−（３−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）−５−（３−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）プロピ−１−イン−１−イル）−３−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）キナゾリン−４（３Ｈ）−オンを提供する。

【0034】

本発明は、本明細書に開示される化合物の溶媒和物にも拡大される。溶媒和物の例には水和物が含まれる。

【0035】

本開示の化合物は、特定される原子が天然に存在するかもしくは天然に存在しない同位体であるものを含む。１つの態様において、同位体は安定な同位体である。かくして本開示の化合物は、例えば水素原子の代わりに１個もしくはそれより多いジューテリウム原子を含有するものなどを含む。

【0036】

本開示は、本明細書に定義される化合物のすべての多形形態（ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ｆｏｒｍｓ）にも拡大される。

【0037】

式（Ｉ）の化合物は、ＬＧ₁がハロ、特にブロモのような脱離基を示す式（ＩＩ）：

【0038】

【化2】

【0039】

の化合物又はその保護誘導体を式（ＩＩＩ）：

【0040】

【化3】

【0041】

の化合物と、適した触媒及び有機塩基の存在下に、且つ極性非プロトン性溶媒中で、不活性雰囲気下で反応させることを含んでなる方法により簡便に製造され得る。適した触媒には、ヨウ化銅の存在下におけるビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリドのようなパラジウム触媒が含まれる。この転換に適した極性非プロトン性溶媒はＤＭＦであり、適した不活性雰囲気は窒素である。

【0042】

式（ＩＩ）の化合物が保護誘導体である合成方法の場合、式（Ｉ）の化合物は当該技術分野において周知であり且つ実施されている適した脱保護段階により現れる。例えば式（Ｉ）の化合物中に存在するフェノールがシリル基、例えばｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基で保護されている場合、ＤＭＦのような極性非プロトン性溶媒の存在下でテトラブチルアンモニウムフルオリドのような試薬を用いる処理により脱保護段階を行うことができる。低い温度（ｒｅｄｕｃｅｄ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）で、例えば０℃において反応を行うことができる。

【0043】

式（ＩＩ）の化合物は、ＬＧ₁が式（ＩＩ）の化合物に関して上記で定義した脱離基であり、ＬＧ₂もハロ、例えばハロゲン原子及び適切には塩素のような脱離基である式（ＩＶ）：

【0044】

【化4】

【0045】

の化合物又はその保護誘導体を、式（Ｖ）：

【0046】

【化5】

【0047】

の化合物又はその保護誘導体と、塩基の存在下且つ極性非プロトン性溶媒中で反応させることにより製造され得る。

【0048】

この転換のために適した塩基には、炭酸カリウムが含まれ、適した極性非プロトン性溶媒はＤＭＦである。

【0049】

合成方法には、カップリング段階の間に式（ＶＩＩ）の化合物のフェノール性ヒドロキシルを保護するのが有利であるとみなされるものが含まれ、適した保護誘導体にはｔｅｒｔブチルジメチルシリルエーテル及びｔｅｒｔ−ブチルエーテルが含まれる。

【0050】

あるいはまた、ＬＧ₁が式（ＩＩ）の化合物に関して上記で定義した通りであり、ＬＧ₃がハロ、特にヨードのような脱離基を示す式（ＶＩ）：

【0051】

【化6】

【0052】

の化合物又はその保護誘導体を、式（ＶＩＩ）：

【0053】

【化7】

【0054】

の化合物又はその保護誘導体と、適した貴金属触媒、無機塩基及び極性プロトン性溶媒の存在下に、不活性雰囲気下で反応させ、適宜続いて脱保護をすることにより、式（ＩＩ）の化合物を製造することができる。

【0055】

適した触媒は、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）である。

【0056】

適した無機塩基は炭酸ナトリウムであり、適した極性プロトン性溶媒はエタノールである。

【0057】

高められた温度で、例えば８５℃で長時間、例えば３日間反応を行ってから室温に冷ますことができる。

【0058】

上記の反応順の１つ又はそれより多くの間に化学的に敏感な基を覆い隠し、１つ又はそれより多くのプロセスが有効であることを確実にするために、保護基は有利であり得る。かくして望ましいかもしくは必要なら、中間化合物を通常の保護基の使用により保護することができる。保護基及びそれらの除去のための手段は、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃにより出版されたＴｈｅｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓによる“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”；４^th Ｒｅｖ Ｅｄ．，２００６，ＩＳＢＮ−１０：０４７１６９７５４０に記載されている。

【0059】

新規な中間体は、本発明の側面として特許請求される。

【0060】

有利には、本発明の化合物（Ｉ）はアトロプ異性を示さない。

【0061】

本開示の実施例２に従って製造される化合物（Ｉ）は、１型結晶多形として製造される。１型結晶多形は、実質的に図３に示されるようなＸＲＰＤパターンにより特徴付けられる。

【0062】

１型結晶多形の試料の熱的挙動は複雑であることが見出された。実施例２で議論され且つ図４中に示されるＤＳＣ分析（下のプロット）において示される通り、１型結晶多形の試料は、加熱されると複数の事象を経て、結局は異なる結晶多形−本明細書で２型結晶多形と言及される−に転換した（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ）。

【0063】

２型結晶多形は無水であることが見出され、約１９０℃（ピーク極大）において分解を伴って融解した。１型結晶多形について行われたスラリ化実験は、ほとんどの溶媒の場合に２型結晶多形の生成を生じたが、ジクロロメタン中で１型結晶多形をスラリ化することにより、無水結晶多形−本明細書で３型結晶多形と言及される−が得られた。３型結晶多形は無水であることが見出され、約１８６℃（ピーク極大；実施例８を参照されたい）において分解を伴って融解した。ＴＨＦ、１，４−ジオキサン、１０％水／アセトニトリル又は１０％水／アセトンを用いる１型結晶多形又は非晶質形態における化合物（Ｉ）のスラリ化から、化合物（Ｉ）の複数の擬多形（４、５、６及び７擬多形）も得られた（実施例９〜１２を参照されたい）。

【0064】

化合物（Ｉ）の７種の多形及び擬多形形態の中で、２型及び３型結晶多形は最も有望な固体状態の性質を有し、２型結晶多形はより高い融点を有する故に最も好ましかった。

【0065】

種々の温度において種々の溶媒中で、２型及び３型結晶多形の５０／５０混合物を用い、競争的スラリ実験を行った（実施例１３を参照されたい）。すべての実験は２型結晶多形を与え、これが熱力学的により安定な形態であることを確証した。化合物の保存及び化合物を含有する製薬学的生成物の製造の間、あるいは製造後のそのような生成物の寿命の間、多形形態の相互−転換の危険を最小にするのが望ましいということから、２型結晶多形は化合物（Ｉ）の３型結晶多形及び他の多形形態を超える利点を有する。

【0066】

適切には、２型結晶多形は１−プロパノール中の溶液から化合物（Ｉ）を結晶化させることにより製造される。播種を用いて又は用いずに１−プロパノールを用いる代表的な方
法を、実施例３に記載する。

【0067】

メタノール、エタノール、２−プロパノール、１−プロパノール、アセトン、酢酸エチル、アセトニトリル、トルエン、酢酸イソプロピル、ＴＢＭＥ、２−ブタノン、ＤＭＳＯ、ジエチルエーテル、ＭＩＢＫ、ヘプタン、ニトロメタン、１０％水／エタノール、１０％水／アセトニトリル又は１０％水／２−プロパノール中で１型結晶多形をスラリ化することによって２型結晶多形を製造することもできる。

【0068】

あるいはまた、メタノール、エタノール、２−プロパノール、１−プロパノール、アセトン、酢酸エチル、アセトニトリル、トルエン、酢酸イソプロピル、ＴＢＭＥ、２−ブタノン、ＤＭＳＯ、ジエチルエーテル、ＭＩＢＫ、ニトロメタン、１０％水／エタノール又は１０％水／２−プロパノール中で非晶質形態における化合物（Ｉ）をスラリ化することにより、２型結晶多形を製造することができる。

【0069】

発明者等の実験は、ジクロロメタン中での非晶質形態における化合物（Ｉ）のスラリ化は３型結晶多形の生成に導くことを示した。従って、２型結晶多形の生成を意図する結晶化条件において、ジクロロメタンの使用は避けられねばならない。

【0070】

発明者等の実験は、ＴＨＦ中での非晶質形態における化合物（Ｉ）又は１型結晶多形のスラリ化は、４型擬多形の生成に導くことを示した。従って、２型結晶多形の生成を意図する結晶化条件において、ＴＨＦの使用は避けられねばならない。

【0071】

発明者等の実験は、１，４−ジオキサン中での非晶質形態における化合物（Ｉ）又は１型結晶多形のスラリ化は、５型擬多形の生成に導くことを示した。従って、２型結晶多形の生成を意図する結晶化条件において、１，４−ジオキサンの使用は避けられねばならない。

【0072】

発明者等の実験は、１０％水／アセトニトリル中での非晶質形態における化合物（Ｉ）のスラリ化は、６型擬多形の生成に導くことを示した。従って、非晶質形態における化合物（Ｉ）からの２型結晶多形の生成を意図する結晶化条件において、１０％水／アセトニトリルの使用は避けられねばならない。

【0073】

発明者等の実験は、１０％水／アセトン中での非晶質形態における化合物（Ｉ）のスラリ化は、７型擬多形の生成に導くことを示した。従って、非晶質形態における化合物（Ｉ）からの２型結晶多形の生成を意図する結晶化条件において、１０％水／アセトンの使用は避けられねばならない。

【0074】

２型結晶多形は、実質的に図５に示される通りのＸＲＰＤパターンにより特徴付けられる。このパターンは、位置８．２、９．０、９．２、９．７、１２．２、１４．１、１４．３、１５．０、１６．４、１８．０、１８．５、１９．０、１９．６、２１．８、２２．３、２２．５、２４．３、２４．５、２４．８、２５．１及び２５．８（±０．２度、２−シータ値）において主ピークを有する。これらの中の少なくとも３個（例えば３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２１個全部）が、得られるＸＲＰＤパターン中で観察可能であることが典型的である。９．７、１２．２、１４．１及び１４．３におけるピークは２型結晶多形に関して特に特徴的であり、従ってこれらのピークの中の少なくとも１個（例えば１、２、３もしくは４個全部）がＸＲＰＤパターン中で観察可能であるこが典型的である。

【0075】

３型結晶多形は、実質的に図１２に示される通りのＸＲＰＤパターンにより特徴付けられる。

【0076】

４型擬多形は、実質的に図１７に示される通りのＸＲＰＤパターンにより特徴付けられる。

【0077】

５型擬多形は、実質的に図１７に示される通りのＸＲＰＤパターンにより特徴付けられる。

【0078】

６型擬多形は、実質的に図１７に示される通りのＸＲＰＤパターンにより特徴付けられる。

【0079】

７型擬多形は、実質的に図１７に示される通りのＸＲＰＤパターンにより特徴付けられる。

【0080】

１つの側面において、化合物は、例えばＣＯＰＤ及び／又はぜんそくの処置において有用である。

【0081】

今日までに開発されたＰＩ３Ｋ化合物は、典型的には経口的投与用が意図されてきた。典型的には、この戦略は十分な作用の持続時間を達成するために化合物の薬物動態学的側面を最適化することを含む。この方法で、投薬の間の十分に高い薬剤濃度が確立され且つ保持され、継続的な臨床的利益を与える。この方法の避けられない且つしばしば望ましくない結果は、標的とされない体組織、特に肝臓及び消化管が薬理学的に活性な濃度の薬剤におそらく暴露されることである。

【0082】

代わりの戦略は、薬剤を炎症器官に直接投薬する処置管理を設計することである（例えば局所的治療）。この方法はすべての慢性炎症状態の処置のために適切というわけではないが、それは肺疾患（ぜんそく、ＣＯＰＤ、のう胞性線維症）、皮膚損傷（ｓｋｉｎ ｌｅｓｉｏｎｓ）（アトピー性皮膚炎及び乾癬）、鼻の疾患（アレルギー性鼻炎）、眼の疾患（アレルギー性結膜炎）及び胃腸障害（潰瘍性大腸炎）の処置において広く利用されてきた。

【0083】

局所的治療において、薬剤が持続した作用期間を有し、主に標的器官中に保持されてそれにより全身毒性の危険を最小にすることを保証することにより、所望の有効性を達成できることがある。あるいはまた、活性薬剤の「溜め（ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）」を形成し、それは次いで所望の効果を持続させるために利用可能である、適した調剤を用いることができる。第１の方法は、抗コリン薬チオトロピウムブロミド（ｔｉｏｔｒｏｐｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ）（Ｓｐｉｒｉｖａ ＨａｎｄｉＨａｌｅｒ（登録商標））の使用において例示され、それはＣＯＰＤのための処置として肺に局所的に投与される。この化合物はその標的受容体に関して例外的に高い親和性を有し、非常に遅いオフ速度（ｏｆｆ ｒａｔｅ）（解離速度）及び結果としての持続した作用期間を生ずる。

【0084】

本開示の１つの側面に従って、例えば肺に局所的に投与されるＰＩ３キナーゼ阻害剤としての式（Ｉ）の化合物又はそれを含有する製薬学的調剤の使用を提供する。

【0085】

かくして１つの態様において、本開示の化合物は、患者への治療的利益を最大にし、一方で望ましくない全身的影響に関する可能性を最小にするために、肺への局所的投与による使用用が意図されている。従って式（Ｉ）の化合物はそれが体循環系に達したら迅速に代謝されること及び代謝回転の生成物は親分子より活性が低いことが有利である。

【0086】

式（Ｉ）の化合物の初回通過代謝（ｆｉｒｓｔ ｐａｓｓ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ）の主な生成物であるらしいものは対応するアルコール、化合物（Ｉａ）であり、それはこの
化学型の構造に関する共通の特徴である代謝プロセスであるＯ−脱メチル化から生ずる。この代謝生成物であり得るものは、α及びβサブタイプの両方において、ＰＩ３Ｋ阻害剤として式（Ｉ）の化合物より有意に活性が低い（実験部分における表６を参照されたい）。

【0087】

【化8】

【0088】

かくして１つの側面において、そのすべての立体異性体、互変異性体及び同位体的誘導体を含む式（Ｉａ）の化合物又は製薬学的に許容され得るその塩を提供する。

【0089】

本開示の１つの側面において、本発明の化合物は局所的送達、例えば特にＣＯＰＤの処置のための肺への局所的送達に特に適している。

【0090】

かくして１つの側面において、吸入による、すなわち肺への局所的投与によるＣＯＰＤ及び／又はぜんそく、特にＣＯＰＤ又は重症のぜんそくの処置のための本発明の化合物の使用を提供する。有利には、肺への投与は、患者にとって副作用を最小にしながら実現されるべき化合物の有益な効果を可能にする。

【0091】

１つの態様において、化合物はコルチコステロイドを用いる処置に患者を感作するのに適している。

【0092】

さらに本発明は、場合により１種もしくはそれより多い製薬学的に許容され得る希釈剤又は担体と組み合わせて本開示に従う化合物を含んでなる製薬学的組成物を提供する。

【0093】

希釈剤及び担体には、非経口的、経口的、局所的、粘膜的及び直腸的投与に適したものが含まれ得、投与の経路に依存して異なり得る。

【0094】

１つの態様において、例えば特に液体溶液又は懸濁液の形態における非経口的、皮下、筋肉内、静脈内、関節内又は関節周囲投与のための；特に錠剤又はカプセルの形態における経口的投与のための；特に粉末、鼻滴又はエアロゾルの形態における局所的、例えば肺もしくは鼻内投与ならびに経皮的投与のための；例えば頬、舌下又は膣粘膜への粘膜的投与のためならびに例えば座薬の形態における直腸的投与のための組成物を調製することができる。別の態様において、液体溶液（ｌｉｑｕｉｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）又は懸濁液の形態における経口的投与のため；液体溶液、液体懸濁物（ｌｉｑｕｉｄ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ）、溶液又は懸濁物を含んでなる鼻滴あるいは加圧もしくは非−加圧エアロゾルの形態における局所的投与のための組成物を調製することができる。

【0095】

組成物は単位投薬量形態物において簡便に投与され得、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ．，（１９８５）に記載されている通りに、製薬技術分野において周知の方法のいずれかにより調製され得る。多単位投与形態物（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｕｎｉｔ ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍ）においても組成物を簡便に投与することができる。

【0096】

非経口的投与のための調剤は、賦形剤として無菌の水又は食塩水、アルキレングリコール、例えばプロピレングリコール、ポリアルキレングリコール、例えばポリエチレングリコール、植物起源の油、水素化ナフタレンなどを含有することができる。

【0097】

経鼻投与のための調剤は固体であることができ、賦形剤、例えばラクトース又はデキストランを含有することができるか、あるいは鼻滴又は計量スプレーの形態における使用のために水性もしくは油性溶液であることができる。経鼻投与のための調剤は水性懸濁液の形態にあることもできる。口腔投与のために、典型的な賦形剤には糖類、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、アルファデンプンなどが含まれる。

【0098】

経口的投与に適した組成物は、１種もしくはそれより多い生理学的に適合性の担体及び／又は賦形剤を含むことができ、固体又は液体形態にあることができる。結合剤、例えばシロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント又はポリビニルピロリドン；充填剤、例えばラクトース、スクロース、コーンスターチ、リン酸カルシウム、ソリビトール又はグリシン；滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール又はシリカ；ならびに界面活性剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムを用いて錠剤及びカプセルを調製することができる。液体組成物は懸濁化剤、例えばソルビトールシロップ、メチルセルロース、糖シロップ、ゼラチン、カルボキシメチル−セルロース又は食用脂肪；乳化剤、例えばレシチン又はアラビアゴム；植物油、例えばアーモンド油、ココナツ油、タラの肝油又はピーナツ油；防腐剤、例えばブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）及びブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）のような通常の添加剤を含有することができる。液体組成物を例えばゼラチン中にカプセル封入して、単位投薬量形態物を与えることができる。

【0099】

固体の経口的投薬形態物には錠剤、ツーピースハードシェルカプセル（ｔｗｏ−ｐｉｅｃｅ ｈａｒｄ ｓｈｅｌｌ ｃａｐｓｕｌｅｓ）及び軟質弾性ゼラチン（ＳＥＧ）カプセルが含まれる。そのようなツーピース硬質シェルカプセルを、例えばゼラチン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）から作ることができる。

【0100】

ドライシェル調剤（ｄｒｙ ｓｈｅｌｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）は、典型的には約４０％〜６０％濃度のゼラチン、約２０％〜３０％濃度の可塑剤（例えばグリセリン、ソルビトール又はプロピレングリコール）及び約３０％〜４０％濃度の水を含む。防腐剤、染料、不透明剤及び風味剤のような他の材料も存在することができる。液体充填材料は、溶解された、可溶化された又は分散された（蜜蝋、水素化ひまし油又はポリエチレングリコール４０００のような懸濁化剤を用いて）固体薬剤あるいはビヒクルもしくはビヒクルの組み合わせ、例えば鉱油、植物油、トリグリセリド、グリコール、ポリオール及び界面活性剤中の液体薬剤を含む。

【0101】

適切には、式（Ｉ）の化合物を局所的に肺に投与する。従って、１つの態様において、場合により１種もしくはそれより多い局所的に許容され得る希釈剤又は担体と組み合わせて本開示の化合物を含んでなる製薬学的組成物を提供する。

【0102】

エアロゾル調剤の使用により肺への局所的投与を達成することができる。エアロゾル調剤は、典型的には適したエアロゾルプロペラント、例えばクロロフルオロカーボン（ＣＦ
Ｃ）又はヒドロフルオロカーボン（ＨＦＣ）中に懸濁又は溶解された活性成分を含む。適したＣＦＣプロペラントにはトリクロロモノフルオロメタン（プロペラント１１）、ジクロロテトラフルオロメタン（プロペラント１１４）及びジクロロジフルオロメタン（プロペラント１２）が含まれる。適したＨＦＣプロペラントにはテトラフルオロエタン（ＨＦＣ−１３４ａ）及びヘプタフルオロプロパン（ＨＦＣ−２２７）が含まれる。プロペラントは、典型的には４０重量％〜９９．５重量％、例えば４０重量％〜９０重量％の合計吸入組成物を含む。調剤は、補助−溶媒（例えばエタノール）及び界面活性剤（例えばレシチン、ソルビタントリオレートなど）を含む賦形剤を含むことができる。他の可能な賦形剤にはポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、グリセリンなどが含まれる。エアロゾル調剤はキャニスター中に包装され、計量バルブ（例えばＢｅｓｐａｋ，Ｖａｌｏｉｓ又は３Ｍにより、あるいはまたＡｐｔａｒ、Ｃｏｓｔｅｒ又はＶａｒｉにより供給されるような）を用いて適した投薬量が送達される。

【0103】

水溶液又は懸濁液のような非−加圧調剤の使用により肺への局所的投与を達成することもできる。これらをネブライザー、例えば手で持つことができ携帯用であることができるかあるいは家庭もしくは病院使用用（すなわち非携帯用）であることができるものを用いて投与することができる。調剤は水、緩衝剤、張度調整剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤及び補助溶媒のような賦形剤を含むことができる。懸濁液（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｌｉｑｕｉｄ）及びエアロゾル調剤（加圧されていても加圧されていなくても）は、典型的には例えば０．５〜１０μｍ、例えば約１〜５μｍのＤ₅₀を有する微粉砕された形態で本発明の化合物を含有するであろう。Ｄ₁₀、Ｄ₅₀及びＤ₉₀値を用いて粒度分布を示すことができる。粒度分布のＤ₅₀メジアン値は、分布を半分で分けるミクロンにおける粒度として定義される。レーザー回折から誘導される測定は体積分布としてより正確に記述され、結局この方法を用いて得られるＤ₅₀値はＤｖ₅₀（体積分布に関するメジアン）としてより意味深長に言及される。本明細書で用いられる場合、Ｄｖ値はレーザー回折を用いて測定される粒度分布を指す。類似して、レーザー回折の関係で用いられるＤ₁₀及びＤ₉₀値はＤｖ₁₀及びＤｖ₉₀値を意味すると理解され、それぞれ分布の１０％がＤ₁₀値より低い値にあり、分布の９０％がＤ₉₀値より低い値にある粒度を指す。

【0104】

乾燥−粉末調剤の使用により肺への局所的投与を達成することもできる。乾燥粉末調剤は、典型的には１〜１０μｍの質量平均直径（ＭＭＡＤ）又は０．５〜１０μｍ、例えば約１〜５μｍのＤ₅₀を有する微粉砕された形態で本開示の化合物を含有するであろう。超微粉砕法（ｍｉｃｒｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ）又は類似のサイズリダクションプロセス（ｓｉｚｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ）により、微粉砕された形態（ｆｉｎｅｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｆｏｒｍ）における本発明の化合物の粉末を調製することができる。Ｈｏｓｏｋａｗａ Ａｌｐｉｎｅにより製造されるもののようなジェットミルを用いて、超微粉砕を行うことができる。得られる粒度分布を、レーザー回折（例えばＭａｌｖｅｒｎ Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ ２０００Ｓ測定器を用いる）を用いて測定することができる。調剤は、典型的には通常比較的大きい粒度、例えば５０μｍかもしくはそれより大きい、例えば１００μｍかもしくはそれより大きい質量平均直径（ＭＭＡＤ）又は４０〜１５０μｍのＤ₅₀の局所的に許容され得る希釈剤、例えばラクトース、グルコース又はマンニトール（好ましくはラクトース）を含有するであろう。本明細書で用いられる場合、「ラクトース」という用語は、α−ラクトース一水和物、β−ラクトース一水和物、無水α−ラクトース、無水β−ラクトース及び非晶質ラクトースを含むラクトース−含有成分を指す。超微粉砕、篩別、磨砕、圧縮、凝集又は噴霧乾燥により、ラクトース成分を加工することができる。種々の形態におけるラクトースの商業的に入手可能な形態、例えばＬａｃｔｏｈａｌｅ（登録商標）（吸入等級ラクトース；ＤＦＥ Ｐｈａｒｍａ）、ＩｎｈａＬａｃ（登録商標）７０（乾燥粉末吸入器用の篩別ラクトース；Ｍｅｇｇｌｅ）、Ｐｈａｒｍａｔｏｓｅ（登録商標）（ＤＦＥ Ｐｈａｒｍａ）及びＲｅｓｐｉｔｏｓｅ（登録商標）（篩別吸入等級ラクトース；ＤＦＥ Ｐｈａｒｍａ）製品も包含さ
れる。１つの態様において、ラクトース成分はα−ラクトース一水和物、無水α−ラクトース及び非晶質ラクトースより成る群から選ばれる。好ましくは、ラクトースはα−ラクトース一水和物である。

【0105】

乾燥粉末調剤は、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸カルシウム又はステアリン酸マグネシウムのような他の賦形剤を含有することもできる。

【0106】

乾燥粉末調剤は、典型的には乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）装置を用いて送達される。乾燥粉末送達系の例にはＳＰＩＮＨＡＬＥＲ（登録商標）、ＤＩＳＫＨＡＬＥＲ（登録商標）、ＴＵＲＢＯＨＡＬＥＲ（登録商標）、ＤＩＳＫＵＳ（登録商標）、ＳＫＹＥＨＡＬＥＲ（登録商標）、ＡＣＣＵＨＡＬＥＲ（登録商標）及びＣＬＩＣＫＨＡＬＥＲ（登録商標）が含まれる。乾燥粉末送達系のさらなる例にはＥＣＬＩＰＳＥ、ＮＥＸＴ、ＲＯＴＡＨＡＬＥＲ、ＨＡＮＤＩＨＡＬＥＲ、ＡＥＲＯＬＩＳＥＲ、ＣＹＣＬＯＨＡＬＥＲ、ＢＲＥＥＺＨＡＬＥＲ／ＮＥＯＨＡＬＥＲ、ＭＯＮＯＤＯＳＥ、ＦＬＯＷＣＡＰＳ、ＴＷＩＮＣＡＰＳ、Ｘ−ＣＡＰＳ、ＴＵＲＢＯＳＰＩＮ、ＥＬＰＥＮＨＡＬＥＲ、ＭＩＡＴＨＡＬＥＲ、ＴＷＩＳＴＨＡＬＥＲ、ＮＯＶＯＬＩＺＥＲ、ＰＲＥＳＳＡＩＲ、ＥＬＬＩＰＴＡ、ＯＲＩＥＬ乾燥粉末吸入器、ＭＩＣＲＯＤＯＳＥ、ＰＵＬＶＩＮＡＬ、ＥＡＳＹＨＡＬＥＲ、ＵＬＴＲＡＨＡＬＥＲ、ＴＡＩＦＵＮ、ＰＵＬＭＯＪＥＴ、ＯＭＮＩＨＡＬＥＲ、ＧＹＲＯＨＡＬＥＲ、ＴＡＰＥＲ、ＣＯＮＩＸ、ＸＣＥＬＯＶＡＩＲ及びＰＲＯＨＡＬＥＲが含まれる。

【0107】

１つの態様において、本発明の化合物を、例えばＤＩＳＫＵＳのような装置中に充填された適した等級のラクトースを含んでなる超微粉砕された乾燥粉末調剤として提供する。適切には、そのような装置は多回投与装置（ｍｕｌｔｉｄｏｓｅ ｄｅｖｉｃｅ）であり、例えばＤＩＳＫＵＳのような多−単位投与装置における使用用のブリスター中に充填する。

【0108】

１つの態様において、本発明の化合物を、ＤＩＳＫＵＳのような多−投薬量装置において用いるためのブリスター中に充填された、適した等級のラクトース及びステアリン酸マグネシウムを含んでなる超微粉砕された乾燥粉末調剤として提供する。適切には、そのような装置は多回投与装置である。

【0109】

別の態様において、本発明の化合物を、例えばＡＥＲＯＬＩＺＥＲのような単投薬量装置における使用のための硬質シェルカプセル中に充填された、適した等級のラクトースを含んでなる超微粉砕された乾燥粉末調剤として提供する。

【0110】

別の態様において、本発明の化合物を、ＡＥＲＯＬＩＺＥＲのような単投薬量装置における使用のための硬質シェルカプセル中に充填された、適した等級のラクトース及びステアリン酸マグネシウムを含んでなる超微粉砕された乾燥粉末調剤として提供する。

【0111】

乾燥粉末吸入器における使用に適した代表的な化合物（Ｉ）の組成物を、実施例１５中に挙げる。

【0112】

本開示に従う化合物は、治療的活性を有することが意図されている。さらなる側面において、本発明は、薬剤としての使用のための本開示の化合物を提供する。

【0113】

本開示に従う化合物は、ＣＯＰＤ（慢性気管支炎及び気腫を含む）、ぜんそく、小児ぜんそく、のう胞性線維症、サルコイドーシス、突発性肺線維症、アレルギー性鼻炎、鼻炎、副鼻腔炎及びウイルスにより引き起こされるそれらの１つの悪化、呼吸器ウイルス感染を含む呼吸器障害、特にぜんそく、慢性気管支炎及びＣＯＰＤの処置においても有用であ
り得る。

【0114】

呼吸器ウイルスにはインフルエンザ、呼吸器発疹ウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス、ＳＡＲＳコロナウイルス及びアデノウイルスが含まれる。呼吸器ウイルスのさらなる例はライノウイルスである。

【0115】

以前に患者の状態がコルチコステロイドに無反応性になってしまった場合、本開示の化合物は、それを用いる処置に患者の状態を再−感作することもできる。

【0116】

本発明の１つの態様において、単独療法としての使用に適した投薬量に等しい投薬量の本発明の化合物が用いられるが、コルチコステロイドと組み合わされて投与される。

【0117】

１つの態様において、以前に患者がコルチコステロイドに無反応性になってしまった場合、単独の薬剤としては治療的量以下であろう投薬量の式（Ｉ）の化合物が、コルチコステロイドと組み合わされて用いられ、それにより後者への患者の反応性を復活させる。

【0118】

１つの態様において、以前に患者がコルチコステロイドに無反応性になってしまった場合、式（Ｉ）の化合物の不在下で投与されると治療的量以下であろう投薬量のコルチコステロイドと組み合わされてある量の式（Ｉ）の化合物が用いられ、それによりコルチコステロイドへの患者の反応性を復活させる。

【0119】

さらに、本開示の化合物は抗−ウイルス活性を示すことができ、例えばぜんそく及び／又はＣＯＰＤのような炎症状態のウイルス性の悪化の処置において有用であることが証明され得る。

【0120】

本開示の化合物は、インフルエンザウイルス、ライノウイルス及び／又は呼吸器発疹ウイルスと関連する疾患又は疾患の合併症の予防、処置又は改善においても有用であり得る。

【0121】

１つの態様において、ウイルス感染又はウイルス感染により引き起こされる炎症性合併症の処置又は予防における使用のための式（Ｉ）の化合物を提供する。

【0122】

本開示に従う式（Ｉ）の化合物は、アレルギー性結膜炎、結膜炎、アレルギー性皮膚炎、接触性皮膚炎、乾癬、潰瘍性大腸炎、慢性関節リウマチ又は変形性関節症に続発性の炎症関節を含む局所的（ｔｏｐｉｃａｌ）又は局所的（ｌｏｃａｌ）治療により処置され得るある種の状態の処置において有用であることも予測される。

【0123】

１つの態様において、式（Ｉ）の化合物は、適した経路により投与される時、Ｃ型肝炎及び／又はＨＩＶの処置において有用であると考えられる。投与の適した経路には経口的投与、静脈内注射又は輸液が含まれ得る。

【0124】

１つの態様において、Ｃ型肝炎の処置のための式（Ｉ）の化合物は、肝臓への血液プレエントリー（ｂｌｏｏｄ ｐｒｅ−ｅｎｔｒｙ）に送達される。

【0125】

本開示の化合物は、慢性関節リウマチ、膵炎、悪液質、成長阻害ならびに非小細胞性肺ガン、乳ガン、胃ガン、結腸直腸ガン及び悪性黒色種を含む腫瘍の転移を含むある種の他の状態の処置において有用であることも予測される。

【0126】

１つの態様において、現在開示されている化合物及びそれを含んでなる製薬学的調剤は、ガン、特に肺ガンの処置又は予防において、特に肺への局所的投与により有用である。

【0127】

かくしてさらなる側面において、本発明は上記の状態の１つもしくはそれより多くの処置における使用のための本明細書に記載される化合物を提供する。

【0128】

さらなる側面において、本発明は上記の状態の１つもしくはそれより多くの処置用の薬剤の製造のための本明細書に記載される化合物の使用を提供する。

【0129】

さらなる側面において、本発明は本開示の化合物又はその製薬学的組成物の有効量を患者に投与することを含む、上記の状態の処置方法を提供する。

【0130】

本明細書に記載される化合物を、上記で同定した疾患の１つもしくはそれより多くの処置のための薬剤の製造において用いることもできる。

【0131】

「処置」という用語は、予防ならびに治療的処置を包含することが意図されている。

【0132】

本開示の化合物を１種もしくはそれより多い他の活性成分、例えば上記の状態の処置に適した活性成分と組み合わせて投与することもできる。例えば呼吸器障害の処置のための可能な組み合わせには、コルチコステロイド（例えばブデソニド（ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ）、ベクロメタゾンジプロピオネート（ｂｅｃｌｏｍｅｔｈａｓｏｎｅ ｄｉｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、フルチカゾンプロピオネート（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、モメタゾンフロエート（ｍｏｍｅｔａｓｏｎｅ ｆｕｒｏａｔｅ）、フルチカゾンフロエート）、ベータアゴニスト（例えばテルブタリン（ｔｅｒｂｕｔａｌｉｎｅ）、サルブタモル（ｓａｌｂｕｔａｍｏｌ）、サルメテロル（ｓａｌｍｅｔｅｒｏｌ）、フォルモテロル（ｆｏｒｍｏｔｅｒｏｌ）、インダカテロル（ｉｎｄａｃａｔｅｒｏｌ））、キサンチン（例えばテオフィリン（ｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅ））、ムスカリンアンタゴニスト（ｍｕｓｃａｒｉｎｉｃ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）（例えばイプラトロピウム（ｉｐｒａｔｒｏｐｉｕｍ））及び／又はｐ３８ ＭＡＰキナーゼ阻害剤との組み合わせが含まれる。適したコルチコステロイドのさらなる例は、シクレソニド（ｃｉｃｌｅｓｏｎｉｄｅ）又はフルニソリド（ｆｌｕｎｉｓｏｌｉｄｅ）である。適切には、ベータアゴニストはベータ２アゴニストである。ベータ２アゴニストのさらなる例はレプロテロル（ｒｅｐｒｏｔｅｒｏｌ）、ビランテロル（ｖｉｌａｎｔｅｒｏｌ）、オロダテロル（ｏｌｏｄａｔｅｒｏｌ）、レプロテロル（ｒｅｐｒｏｔｅｒｏｌ）及びフェノテロル（ｆｅｎｏｔｅｒｏｌ）である。ムスカリンアンタゴニストのさらなる例にはチオトロピウム（ｔｉｏｔｒｏｐｉｕｍ）、ウメクリジニウム（ｕｍｅｃｌｉｄｉｎｉｕｍ）、グリコピロニウム（ｇｌｙｃｏｐｙｒｒｏｎｉｕｍ）、アクリジニウム（ａｃｌｉｄｉｎｉｕｍ）及びダラトロピウム（ｄａｒａｔｒｏｐｉｕｍ）、例えばブロミド塩としてのこれらのいずれかが含まれる。呼吸器障害の処置のためのさらなる可能な組み合わせは、本開示の化合物とホスホジエステラーゼ阻害剤である。

【0133】

１つの態様において、本開示の化合物を抗ウイルス剤、例えばアシクロビル（ａｃｙｃｌｏｖｉｒ）、オセルタミビル（ｏｓｅｌｔａｍｉｖｉｒ）、ザナマビル（ｚａｎａｍａｖｉｒ）（Ｒｅｌｅｎｚａ（登録商標））又はインターフェロンと組み合わせて投与する。

【0134】

１つの態様において、活性成分の組み合わせを共−調製する（ｃｏ−ｆｏｒｍｕｌａｔｅｄ）。

【0135】

１つの態様において、本開示の化合物を吸入用の調剤として、例えばＣＯＰＤ又は肺ガンの予防を含む肺ガンの維持療法における使用のために、コルチコステロイドと共−調製する。

【0136】

１つの態様において、活性成分の組み合わせを単純に共−投与する（ｃｏ−ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ）。

【0137】

１つの態様において：
（Ａ）本開示の化合物；ならびに
（Ｂ）例えばコルチコステロイド、ベータアゴニスト、キサンチン、ムスカリンアンタゴニスト、ホスホジエステラーゼ阻害剤及びｐ３８ ＭＡＰキナーゼ阻害剤から選ばれる（例えばコルチコステロイド、ベータアゴニスト、キサンチン、ムスカリンアンタゴニスト及びｐ３８ ＭＡＰキナーゼ阻害剤から選ばれる）さらなる活性成分
を含んでなり、ここで成分（Ａ）及び（Ｂ）のそれぞれは製薬学的に許容され得る希釈剤又は担体との混合物において調製される組み合わせ生成物を提供する。組み合わせは、場合により追加の関連する賦形剤を含むことができる。適切には、ベータアゴニストはベータ２アゴニストである。

【0138】

１つの態様において、例えばコルチコステロイド、ベータアゴニスト、キサンチン、ムスカリンアンタゴニスト及びｐ３８ ＭＡＰキナーゼ阻害剤から選ばれる１種もしくはそれより多いさらなる活性成分と組み合わされて投与されるべき薬剤としての使用するための請求項１に従う式（Ｉ）の化合物を提供する。適切には、ベータアゴニストはベータ２アゴニストである。

【0139】

１つの態様において、本開示の化合物を吸入により投与し、コルチコステロイドを経口的にあるいは組み合わせて又は個別に吸入により投与する。

【0140】

１つの態様において、本開示の化合物を吸入により投与し、ベータ２アゴニストを経口的にあるいは組み合わせて又は個別に吸入により投与する。

【発明を実施するための形態】

【0141】

実験部分
本明細書で用いられる略語を下記に定義する（表１）。定義されない略語は、それらの一般的に受け入れられている意味を表わすことが意図されている。

【0142】

表１：略語
Ａｑ 水性
Ａｃ アセチル
ＡＣＤ 酸性クエン酸ブドウ糖（ａｃｉｄ ｃｉｔｒａｔｅ ｄｅｘ
ｔｒｏｓｅ）
ＡＴＰ アデノシン−５’−三リン酸
ＢＡＬＦ 気管支肺胞洗浄液
ｂｒ ブロード
ＢＳＡ ウシ血清アルブミン
ＣＯＰＤ 慢性閉塞性肺疾患
ＣＸＣＬ１ ＣＸＣモチーフケモカインリガンド１
ＣＸＣＬ８ ＣＸＣモチーフケモカインリガンド８
ｄ 二重項
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＭＡ ジメチルアセトアミド
ＤＭＡＰ ４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ．ＨＣｌ １−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジ
イミド塩酸塩
ＥＬＩＺＡ 酵素結合イムノソルベントアッセイ
（ＥＳ⁺） エレクトロスプレーイオン化、正モード
Ｅｔ エチル
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＥｔＯＨ エタノール
ＦＡＣＳ 蛍光−活性化細胞選別（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ−ａｃｔ
ｉｖａｔｄ ｃｅｌｌ ｓｏｒｔｉｎｇ）
ＦＣＳ 胎児ウシ血清
ＦＩＴＣ フルオレセインイソチオシアナート
ＦＰ フルチカゾンプロピオネート
ＨＰＬＣ−ＭＳ 高性能液体クロマトグラフィー質量分析
ｈｒ 時間
ＨＲＰ ホースラディッシュペルオキシダーゼ
ＩＦＮγ インターフェロンガンマ
ｉ−ｎ 鼻内
ｉ−ｔ 気管内
ＩＬ−４ インターロイキン４
ＩＬ−５ インターロイキン５
ＩＬ−１３ インターロイキン１３
ＩＬ−１７ インターロイキン１７
ＬＰＳ リポ多糖
ＩＰＡ イソプロパノール（プロパン−２−オール）
Ｍ モル
（Ｍ＋Ｈ）⁺ プロトン化分子イオン
ＭＣＰ−１ 単球化学誘引性タンパク質
ＭＤＡ マロンジアルデヒド
Ｍｅ メチル
ＭｅＯＨ メタノール
ＭＨｚ メガヘルツ
ｍｉｎ 分
ＭＩＢＫ メチルイソブチルケトン
ＭＯＭＡ−２ 抗−単球及びマクロファージ抗体
ＭＴＴ ３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−
ジフェニルテトラゾリウムブロミド
ｍ／ｚ 質量対電荷比
ＮＨ₄ＯＡｃ 酢酸アンモニウム
ｎｍ ナノメーター
ＮＭＰ Ｎ−メチルピロリドン
ＮＭＲ 核磁気共鳴（分光分析）
ＯＶＡ オボアルブミン
ＰＢＭＣ 末梢血単核細胞
ＰＢＳ リン酸塩緩衝食塩水
Ｐｄ₂（ｄｂａ）₃ トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）
ＰｄＣｌ₂（ＰＰｈ₃）₂ ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロ
リド
Ｐｈ フェニル
ＰＩＰ２ ホスファチジルイノシトール４，５−ビホスフェート
ＰＩＰ３ ホスファチジルイノシトール３，４，５−トリホスフェートＰＭＡ ホルボールミリステートアセテート
ｐｏ 経口的投与による
ＰＰｈ₃ トリフェニルホスフィン
ｑ 四重項
ｑｕｉｎ 五重項
Ｒ^t 保持時間
ＲＨ 相対湿度
ＲＴ 室温
ＲＰ ＨＰＬＣ 逆相高性能液体クロマトグラフィー
ｓ 一重項
ＳＤＳ ドデシル硫酸ナトリウム
ＳＥＭ 平均の標準誤差
ｔ 三重項
ＴＢＭＥ メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＭＢ ３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン
ＴＮＦα 腫瘍壊死因子アルファ
ＴＲ−ＦＲＥＴ 時間分解蛍光共鳴エネルギー移動

【0143】

一般的な方法
すべての出発材料及び溶媒は、商業的供給源から得たか、あるいは文献引用に従って製造された。他にことわらなければ、すべての反応は撹拌された。有機溶液は慣例的に無水硫酸マグネシウム上で乾燥された。

【0144】

カラムクロマトグラフィーは、予備−充填シリカ（２３０〜４００メッシュ，４０〜６３μｍ）カートリッジ上で、示される量を用いて行われた。

【0145】

分析法
分析的ＬＣＭＳ
Ｗａｔｅｒｓ Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｃ₁₈ ３．５μｍカラム（４．６ｘ５０ｍｍ）を用いて、２．５〜４．５ｍＬ分^-1の流量を用い、０．１％ｖ／ｖのギ酸を含有するＨ₂Ｏ−ＭｅＣＮ勾配を用いて４分かけて溶離させ、分析的ＬＣＭＳを行った。勾配の情報：０−３．００分，９５％Ｈ₂Ｏ−５％ＭｅＣＮから５％Ｈ₂Ｏ−９５％ＭｅＣＮに勾配；３．００−３．０１分，５％Ｈ₂Ｏ−９５％ＭｅＣＮにおいて保持，流量を４．５ｍＬ分^-1に上昇させた；３．０１−３．５０分，５％Ｈ₂Ｏ−９５％ＭｅＣＮにおいて保持；３．５０−３．６０分，９５％Ｈ₂Ｏ−５％ＭｅＣＮに戻した，流量を３．５０ｍＬ分^-1に低下させた；３．６０−３．９０分，９５％Ｈ₂Ｏ−５％ＭｅＣＮにおいて保持；３．９０−４．００分，９５％Ｈ₂Ｏ−５％ＭｅＣＮにおいて保持，流量を２．５ｍＬ分^-1に低下させた。試料含有画分を、２５４ｎｍにおけるそれらのＵＶ吸光度により検出した。溶離ピークの質量スペクトルを、正及び負の混合イオンエレクトスプレーモードで運転されるＡｇｉｌｅｎｔ ６１２０四重極型質量分析計を用いて測定した。

【0146】

¹Ｈ ＮＭＲ分光分析
Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＩＩＩ分光計上で４００ＭＨｚにおいて、参照標準として残留非ジューテリウム化溶媒を用いて¹Ｈ ＮＭＲスペクトルを取得し、他に特定しなければＤＭＳＯ−ｄ₆中で実験に供した（ｒｕｎ）。

【0147】

Ｘ−線粉末回折−方法１（Ｂｒｕｃｋｅｒ ＡＸＳ Ｃ２ ＧＡＤＤＳ回折計を用いる）
Ｃｕ Ｋα線（４０ｋＶ，４０ｍＡ）、自動化ＸＹＺステージ、自動−試料配置のためのレーザービデオ顕微鏡及びＨｉＳｔａｒ ２−次元面積検出器を用いて、回折パターンを集めた。Ｘ−線オプチックスは、０．３ｍｍのピンホールコリメーターと連結された１
つのＧｏｅｂｅｌ多層鏡から成った。ビーム発散、すなわち試料上のＸ−線ビームの有効寸法は約４ｍｍであった。２０ｃｍの試料−検出器距離と共にθ−θ連続走査モードを用い、それは３．２^o−２９．７^oの有効２θ範囲を与えた。典型的には、試料をＸ−線ビームに１２０秒間暴露した。データ収集のために用いられるソフトウェアはＸＰ／２００４
４．１．４３用のＧＡＤＤＳであり、Ｄｉｆｆｒａｃ Ｐｌｕｓ ＥＶＡ ｖ１３．０．０．２又はｖ１５．０．０．０を用いてデータを分析し、提示した。周囲条件下で実験に供される試料を、受け取ったまま磨砕なしで粉末として用い、平板試験片として調製した。約１〜２ｍｇの試料をガラススライド上に軽く圧して平らな表面を得た。非−周囲条件下で実験に供される試料を、熱−伝導性化合物と一緒にシリコンウェハー上に載せた。次いで試料を２０℃／分において適した温度まで加熱し、続いて１分間等温で保持してから、データ収集を開始した。

【0148】

Ｘ−線粉末回折−方法２（Ｂｒｕｃｋｅｒ ＡＸＳ Ｄ８アドバンス回折計を用いる）
Ｃｕ Ｋα線（４０ｋＶ，４０ｍＡ）、θ−２θゴニオメーターならびにＶ４の発散及び受光スリット、ＧｅモノクロメーターならびにＬｙｎｘｅｙｅ検出器を用いて、回折パターンを集めた。データ収集のために用いるソフトウェアはＤｉｆｆｒａｃ Ｐｌｕｓ ＸＲＤ Ｃｏｍｍａｎｄｅｒ ｖ２．６．１であり、Ｄｉｆｆｒａｃ Ｐｌｕｓ ＥＶＡ
ｖ１３．０．０．２又はｖ１５．０．０．０を用いてデータを分析し、提示した。受取ったままの粉末を用い、平板試験片として周囲条件下で試料を実験に供した。研磨されたゼロ−バックグラウンド（５１０）シリコンウェハー中へのキャビティーカット中に、試料を穏やかに充填した。分析の間、試料をそれ自身の平面において回転させた。データ収集の詳細は：角度範囲：２−４２^o２θ；ステップサイズ：０．０５^o２θ；収集時間：０．５秒／ステップである。

【0149】

Ｘ−線粉末回折−方法３（ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ （Ｐｈｉｌｉｐｓ） Ｘ’ＰｅｒｔＰＲＯ ＭＰＤ回折計を用いる）
測定器にはＣｕ ＬＦＦ Ｘ−線管が備えられた。化合物をゼロバックグラウンド試料ホルダー上に広げた。用いられる測定器パラメーターは以下の通りである：発生器（ｇｅｎｅｒａｔｏｒ）ボルト数：４５ｋＶ；発生器アンペア数：４０ｍＡ；形状（ｇｅｏｍｅｔｒｙ）：Ｂｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏ；ステージ：スピナーステージ。測定条件は以下の通りであった：走査モード：連続；走査範囲：３−５０^o２θ；ステップサイズ：０．０２^o／ステップ；カウンティング時間：３０秒／ステップ；スピナー回転時間：１秒；放射線の型：ＣｕＫα。入射ビーム路パラメーターは以下の通りであった：プログラム．発散スリット：１５ｍｍ；ソーラースリット：０．０４ｒａｄ；ビームマスク：１５ｍｍ；散乱防止スリット（ａｎｔｉ ｓｃａｔｔｅｒ ｓｌｉｔ）：１^o；ビームナイフ：＋。回折ビーム路パラメーターは以下の通りであった：長い散乱防止シールド（ｌｏｎｇ
ａｎｔｉ ｓｃａｔｔｅｒ ｓｈｉｅｌｄ）：＋；ソーラースリット：０．０４ｒａｄ；Ｎｉフィルター：＋；検出器：Ｘ’Ｃｅｌｅｒａｔｏｒ。

【0150】

示差走査熱量測定−方法１（Ｍｅｔｔｌｅｒ ＤＳＣ ８２３ｅ測定器を用いる）
Ｍｅｔｔｌｅｒ ＤＳＣ ８２３Ｅには３４位置オートサンプラーが備えられている。保証された（ｃｅｒｔｉｆｉｅｄ）インジウムを用い、測定器をエネルギー及び温度に関してキャリブレーションした。典型的には、ピンホールがあけられた（ｐｉｎ−ｈｏｌｅｄ）アルミニウムの皿中の０．５〜３ｍｇの各試料を１０℃／分で２５℃から３００℃まで加熱した。試料上に５０ｍｌ／分における窒素パージを保持した。測定器制御及びデータ分析ソフトウェアはＳＴＡＲｅ ｖ９．２０であった。

【0151】

示差走査熱量測定−方法２（ＲＣＳ冷却装置が備えられたＴＡ−Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ
Ｑ１０００ ＭＴＤＳＣを用いる）
ＴＡ−Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ試料皿を適したカバーで閉じ、ＲＣＳ冷却装置が備えら
れたＴＡ−Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｑ１０００ ＭＴＤＳＣ上でＤＳＣ曲線を記録した。以下のパラメーターを用いた：初期温度：２５℃；加熱速度：１０℃／分；最終温度：２５０℃。

【0152】

熱−重量分析−方法１（Ｍｅｔｔｌｅｒ ＴＧＡ／ＳＤＴＡ ８５１ｅ測定器を用いる）
３４位置オートサンプラーが備えられたＭｅｔｔｌｅｒ ＴＧＡ／ＳＤＴＡ ８５１ｅ上でＴＧＡデータを集めた。保証されたインジウムを用いて測定器を温度キャリブレーションした。典型的には、あらかじめ秤量されたアルミニウムるつぼ上に５〜３０ｍｇの各試料を装入し、それを１０℃／分で周囲温度から３５０℃まで加熱した。試料上に５０ｍｌ／分の窒素パージを保持した。測定器制御及びデータ分析ソフトウェアはＳＴＡＲｅ ｖ９．２０であった。

【0153】

熱−重量分析（ＴＧＡ）−方法２（ＴＡ−Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｑ５００ ＴＧＡ熱重量分析計を用いる）
ＴＡ−Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｑ５００ ＴＧＡ熱重量分析計上でＴＧＡデータを集めた。化合物をアルミニウム試料皿中に移してから、以下のパラメーターを用いて分析した：初期温度：室温；加熱速度：２０℃／分；分解能係数：４；最終的な状態：３５０℃又は＜８０［（ｗ／ｗ）％］。

【0154】

重量的蒸気収着（ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ ｖａｐｏｒ ｓｏｒｐｔｉｏｎ）（ＧＶＳ）
ＤＶＳ Ｉｎｔｒｉｃｓｉｃ Ｃｏｎｔｒｏｌソフトウェア ｖ１．０．１．２（又はｖ１．０．１．３）により制御されるＳＭＳ ＤＶＳ Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ水分収着分析計を用い、収着等温線を得た。測定器制御により試料温度を２５℃に保持した。２００ｍｌ／分の合計流量を用いて乾燥及び湿潤窒素の流れを混合することにより、湿度を制御した。試料の近くに置かれるキャリブレーションされたＲｏｔｒｏｎｉｃプローブ（１．０−１００％ＲＨの動的範囲（ｄｙｎａｍｉｃ ｒａｎｇｅ））により、相対湿度を測定した。％ＲＨの関数としての試料の重量変化（質量緩和（ｍａｓｓ ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ））を微量天秤（精度±０．００５ｍｇ）により常に監視した。典型的には、５〜２０ｍｇの試料を、周囲条件下で風袋が測定されたメッシュステンレススチールバスケット中に入れた。４０％ＲＨ及び２５℃（典型的な室内条件）において試料を装入し、取り出した。下記に概述する通りに、水分収着等温線を行った（２回の完全なサイクルを与える４回の走査）。２５℃において１０％ＲＨ間隔で０−９０％ＲＨ範囲に及んで標準等温線を行った。Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ ＥｘｃｅｌにおいてＤＶＳ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｕｉｔｅ
ｖ６．２（又は６．１もしくは６．０）を用い、データ分析を行った。

【0155】

【表1】

【0156】

等温線の完了後、試料を回収し、ＸＲＰＤにより再−分析した。

【0157】

動的蒸気収着（ＤＶＳ）
約２０ｍｇの化合物をＳＭＳ動的蒸気収着中に移し、２５℃において以下のパラメーターを用いて大気湿度に関して重量変化を記録した：乾燥：乾燥窒素下で６０分間；平衡：６０分間；ＲＨ（％）測定点：サイクル１：５，１０，２０，３０，４０，５０，６０，７０，８０，９０，９５，９０，８０，７０，６０，５０，４０，３０，２０，１０，５；サイクル２：１０，２０，３０，４０，５０，６０，７０，８０，９０，９５，９０，８０，７０，６０，５０，４０，３０，２０，１０，５，０。

【実施例1】

【0158】

化合物（Ｉ）及び化合物（Ｉａ）の製造
中間体Ａ：２−（（４−アミノ−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）−５−ブロモ−３−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）キナゾリン−４（３Ｈ）−オン

【0159】

【化9】

【0160】

−１℃においてトルエン（１．２Ｌ）中の２−ブロモ−６−（２−クロロアセトアミド）安息香酸［Ｋｉｎｇ−Ｕｎｄｅｒｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，国際公開第２０１１／０４８１１１号パンフレット］（５０．０ｇ，１７１ミリモル）、（２−（トリフルオロメチ
ル）フェニル）メタナミン（２９．４ｍＬ，２０５ミリモル）及びトリエチルアミン（３４ｍＬ，４３０ミリモル）の撹拌混合物に、トルエン（１００ｍＬ）中の三塩化リンの溶液（３７ｍＬ，４３０ミリモル）を１時間かけて滴下し、その時間の間、内部温度を５℃より低く保持した。反応混合物を２．５時間加熱還流し、得られる懸濁液を次いでまだ熱い間に濾過した。濾液を保留し、集めた固体を新しいトルエン（１００ｍＬ）中に懸濁させ、激しく撹拌しながら９０℃に加熱した。濾過により固体を取り出し、粗生成物を含有する有機抽出物を合わせた。

【0161】

同じ規模で同一の条件下で反応を繰り返すことにより、この材料の第２のバッチを製造した。両反応からの合わされた濾液を真空中で蒸発させ、ＩＰＡを用いて残留物を磨砕した（２ｘ４００ｍＬ）。そのようにして得られる粗材料を真空中で乾燥し、５−ブロモ−２−（クロロメチル）−３−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）キナゾリン−４（３Ｈ）−オンをオフ−ホワイト色の固体として与えた（１００ｇ，ＨＰＬＣにより純度９０％，６１％）；Ｒ^t ２．７０分；ｍ／ｚ ４３１／４３３（Ｍ＋Ｈ）⁺（ＥＳ⁺）。

【0162】

ＤＭＦ（６００ｍＬ）中の上記の通りに得られるキナゾリノン（１００ｇ，純度９０％，２１０ミリモル）及び３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン（５０．４ｇ，１９３ミリモル）の溶液に、室温において炭酸カリウム（８０．０ｇ，５８０ミリモル）を加え、１８時間後、反応混合物を水（１．２Ｌ）中に注いだ。得られる沈殿を濾過により集め、水（５００ｍＬ）、ＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）及び最後にＥｔ₂Ｏ（４００ｍＬ）で連続的に洗浄した。得られるケークを真空中で乾燥し、表題化合物、中間体Ａをオフホワイト色の固体として与えた（１１５ｇ，８９％）；Ｒ^t ２．２８分；ｍ／ｚ ６５６／６５８（Ｍ＋Ｈ）⁺（ＥＳ⁺）。

【0163】

中間体Ｂ：２−（（４−アミノ−３−（３−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）−５−ブロモ−３−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）キナゾリン−４（３Ｈ）−オン

【0164】

【化10】

【0165】

１−ブタノール（９００ｍＬ）中の中間体Ａ（５４．４ｇ，８３．０ミリモル）、（３−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）ボロン酸（１５．５ｇ，９９．０ミリモル）及びＫ₃ＰＯ₄（１９．１ｇ，８３．０ミリモル）の溶液に、室温において２０分間、窒素を散布した。混合物をＰＰｈ₃（３．２６ｇ，１２．４ミリモル）で、及びＰｄ₂（ｄｂａ）₃（１．９０ｇ，２．０７ミリモル）で処理し、さらに１０分間窒素を散布し、次いで窒素流下で９０℃に加熱した。４０時間後、混合物を７０℃に冷まし、水（２５０ｍＬ）を滴下した。混合物を５０℃に３時間冷まし、次いで室温に３日間冷まし、その時間の間にベージュ色の沈殿が生成した。固体を濾過により集め、１−ブタノール（２ｘ１００ｍＬ）及び水（２ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、次いで真空中で４０℃において乾燥し、表題化合物、中間体Ｂをオフホワイト色の固体として与えた（３５．２ｇ，６５％）；Ｒ^t ２．２
５分；ｍ／ｚ ６４０／６４２（Ｍ＋Ｈ）⁺（ＥＳ⁺）。

【0166】

化合物（Ｉ）：２−（（４−アミノ−３−（３−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）−５−（３−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）プロピ−１−イン−１−イル）−３−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）キナゾリン−４（３Ｈ）−オン

【0167】

【化11】

【0168】

Ｅｔ₂ＮＨ及びＤＭＦの混合物（４：１ ｖ／ｖ，８２０ｍＬ）中の中間体Ｂ（３５．２ｇ，５５．０ミリモル）、３−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）プロピ−１−イン［Ｋｉｎｇ−Ｕｎｄｅｒｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，国際公開第２０１１／０４８１１１号パンフレット］（１７．４ｇ，１１０ミリモル）、ＰｄＣｌ₂（ＰＰｈ₃）₂（３．８６ｇ，５．５０ミリモル）及びヨウ化銅（Ｉ）（１．０５ｇ，５．５０ミリモル）の懸濁液に室温において１０分間、窒素を散布した。混合物を６５℃に１．５時間加熱し、次いで室温に冷ました。揮発性物質を真空中で蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）と飽和ＮＨ₄ＯＡｃ水溶液（６５０ｍＬ）に分配した。水層を分離し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を真空中で蒸発させ、暗褐色の粘性の油を与えた。メタノール（２００ｍＬ）を加え、混合物を室温で１６時間撹拌した。黄色の沈殿が生成し、それを濾過により集め、ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で洗浄した。得られる固体を２つの別のバッチにおいてフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した（ＳｉＯ₂，３３０ｇ，ＤＣＭ中のＭｅＯＨ，０−６％，勾配溶離）。精製された材料をＤＣＭ／ＭｅＯＨの混合物（１０：１ ｖ／ｖ）中に一緒に取り上げ、均一な溶液を与え、それを次いで蒸発させ、真空中で乾燥し、表題化合物、化合物（Ｉ）をオフホワイト色の固体として与えた（２０．１ｇ，５１％）；Ｒｔ ２．１５分，ｍ／ｚ ７１８（Ｍ＋Ｈ）⁺（ＥＳ⁺）；¹Ｈ ＮＭＲ δ：３．１９（３Ｈ，ｓ），３．３５−３．３８（２Ｈ，重なり ｍ），３．４４−３．４９（４Ｈ，重なりｍ），３．６０−３．６３（２Ｈ，重なりｍ），４．３７（２Ｈ，ｓ），５．４９（２Ｈ，ｓ），５．７６（２Ｈ，ｓ），６．４２（１Ｈ，ｄ），６．６５（１Ｈ，ｍ），６．７３（１Ｈ，ｍ），６．７９（１Ｈ，ｍ），７．１５（１Ｈ，ｔ），７．２８（１Ｈ，ｔ），７．５２（１Ｈ，ｄ），７．６５−７．６９（２Ｈ，重なりｍ），７．８２（１Ｈ，ｍ），８．１２（１Ｈ，ｓ），１０．１５（１Ｈ，ｓ）

【0169】

化合物（Ｉａ）：２−（（４−アミノ−３−（３−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）−５−（３−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）プロピ−１−イン−１−イル）−３−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）キナゾリン−４（３Ｈ）−オン

【0170】

【化12】

【0171】

Ｅｔ₂ＮＨ及びＤＭＦの混合物（４：１ ｖ／ｖ，７．５ｍＬ）中の中間体Ｂ（１９０ｍｇ，０．２９７ミリモル）、２−（２−（プロピ−２−イン−１−イルオキシ）エトキシ）エタノール［Ｋｉｎｇ−Ｕｎｄｅｒｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，国際公開第２０１１／０４８１１１号パンフレット］（２５７ｍｇ，０．８９０ミリモル）、ＰｄＣｌ₂（ＰＰｈ₃）₂（２０８ｍｇ，０．２９７ミリモル）及びヨウ化銅（Ｉ）（５７ｍｇ，０．３０ミリモル）の懸濁液を、Ｎ₂を用いて脱ガスし、次いで６０℃に１６時間加熱した。反応混合物を室温に冷まし、真空中でシリカゲル上に蒸発させ、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し（ＳｉＯ₂，１２ｇ，ＤＣＭ中のＭｅＯＨ，０−５％，勾配溶離）、表題化合物、化合物（Ｉａ）を淡褐色の固体として与えた（３０ｍｇ，１４％）；Ｒｔ １．８８分，ｍ／ｚ ７０４（Ｍ＋Ｈ）⁺（ＥＳ⁺）；¹Ｈ ＮＭＲ δ：３．３６−３．５０（６Ｈ，重なり ｍ），３．６１−３．６３（２Ｈ，重なり ｍ），４．３７（２Ｈ，ｓ），４．５８（１Ｈ，ｍ），５．４８（２Ｈ，ｓ），５．７６（２Ｈ，ｓ），６．４１（１Ｈ，ｄ），６．６４（１Ｈ，ｍ），６．７２（１Ｈ，ｄ），６．７８（１Ｈ，ｓ），７．１４（１Ｈ，ｔ），７．２７（１Ｈ，ｔ），７．５２（１Ｈ，ｄ），７．６５−７．７１（２Ｈ，重なり ｍ），７．８２（１Ｈ，ｔ），８．１３（１Ｈ，ｓ），１０．１９（１Ｈ，ｂｒ ｓ）。

【0172】

構造的に類似の化合物の分析に基づき（国際公開第２０１１／０４８１１１号パンフレットを参照されたい）、化合物（Ｉ）がアトロプ異性を示すことは、非常にありそうもないと考えられる。アトロプ異性から生ずる薬剤開発に関する追加の複雑性及び結果は、ステレオジェン中心の存在のような分子異性の他の源から生ずるものと類似である。この性質はそのような分子をキラル及び分割されなければラセミ混合物の両方とし；それらの成分は異なる薬理学的及び毒物学的側面を有し得る。この特徴はそのような分子に関する下流の開発コストを有意に増加させそうであり、従って化合物（Ｉ）にアトロプ異性がないことは、非常に望ましく且つ有利な性質である。

【実施例2】

【0173】

１型結晶多形としての化合物（Ｉ）の製造
１型結晶多形としての化合物（Ｉ）を、以下のスキームにまとめる通りに製造され得る中間体Ｂから出発して製造した：

【0174】

【化13】

【0175】

中間体の製造を下記に示す。
１−ブロモ−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−フルオロベンゼン

【0176】

【化14】

【0177】

氷冷されたＤＭＡ（２．０Ｌ）に、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（２８４ｇ，３．８９モル）を分けて加え、続いて１−ブロモ−３，５−ジフルオロベンゼン（２９８ｍＬ，２．５９モル）を滴下した。滴下が完了したら、混合物を室温に温め、７２時間撹拌した。水（２００ｍＬ）を加え、得られるゴム状沈殿を濾過した。上澄み液を真空中で濃縮し、残留物を真空蒸留により精製した。得られる油をジエチルエーテル（１．０Ｌ）中に溶解し、水で洗浄し（６ｘ２５０ｍＬ）、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、真空中で濃縮して表題化合物を無色の油として与えた（２２０ｇ，８８１ミリモル，３４．０％）：沸点８４〜８６℃（８ミリバール）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃） δ：１．３５（９Ｈ，ｓ），６．６４（１Ｈ，ｄｔ），６．９２−６．９６（２Ｈ，重なりｍ）．

【0178】

（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−フルオロフェニル）ボロン酸；２

【0179】

【化15】

【0180】

ＴＨＦ（１．０Ｌ）中の１−ブロモ−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−フルオロベンゼン（７５．０ｇ，３０４ミリモル）の溶液に、ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中の２．５Ｍ，１５０ｍＬ，３３７ミリモル）を−７８℃で滴下した。得られる混合物をこの温度で４５分間撹拌し、次いでホウ酸トリイソプロピル（１０５ｍＬ，４５５ミリモル）を滴下した。混合物をその温度で１．５時間撹拌し、次いで１．５時間かけて−５℃に温めた。混合物をジエチルエーテル（１．０Ｌ）及び１Ｍ ＨＣｌ水溶液（４５０ｍＬ）で希釈し、層を分離した。水層をさらなるジエチルエーテル（２ｘ２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、次いで真空中で蒸発させて淡黄色の油を与えた。油をイソ−ヘキサン（３００ｍＬ）中に再溶解し、再び濃縮して、オフホワイト色の粘着性の固体を与えた。イソ−ヘキサン（１５０ｍＬ）を用いて固体を磨砕し、濾過し、白色の粉末を与えた。材料を２Ｍ ＮａＯＨ（６００ｍＬ）とジエチルエーテル（６００ｍＬ）に分配した。有意な量の材料が不溶性であり、これを濾過し、ジエチルエーテルを用いて洗浄した（ＬＣＭＳにより、清浄な生成物と確証した）。塩基性の水層を氷浴中で冷却し、濃ＨＣｌ（〜１３０ｍＬ）を用いてｐＨ１に酸性化した。水層をＤＣＭ（３ｘ３００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機物を乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濾過し、真空中で濃縮して、ベージュ色の粉末を与えた。イソ−ヘキサン（１００ｍＬ）を用いてこれを磨砕し、さらなる清浄な生成物を与えた。２つのバッチを合わせ、表題化合物２をオフホワイト色の粉末として与えた（１７．２ｇ，７３．０ミリモル，２４．１％）；Ｒ_t：１．８７分。

【0181】

２−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−フルオロフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン；３

【0182】

【化16】

【0183】

パラジウム（ＩＩ）ジクロリド−１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（６．８１ｇ，９．３１ミリモル）、酢酸カリウム（５４．８ｇ，５５８ミリモル）及び４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）（５２．０ｇ，２０５ミリモル）の混合物を窒素でフラッシングし、これにＤＭＳＯ（５２８ｍＬ）中の１−ブロモ−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−フルオロベンゼン（４６．０ｇ，１８６ミリモル）の溶液を加えた。得られる混合物を３分間音波処理し、５分間脱ガスし、８０℃で２３時間加熱した。反応混合物をジエチルエーテル（５００ｍＬ）と水（５００ｍＬ）に分配した。水層をさらなるジエチルエーテルで抽出した（３ｘ４００ｍＬ）。合わせた有機抽出物をブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で濃縮して暗褐色の残留物を与えた。この残留物を
イソ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃの混合物中に溶解し、シリカの短プラグを介して濾過し、真空中で蒸発させ、明褐色の固体を与えた。固体残留物をシリカ上に予備−吸着させ、それをカラムクロマトグラフィーにより精製し（ＳｉＯ₂，イソ−ヘキサン中の０−４％ＥｔＯＡｃを用いて溶離，勾配溶離）、表題化合物３を白色の固体として与えた（２７．０ｇ，８７．０ミリモル，４６．８％）：¹Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃） δ：１．３１（１２Ｈ，ｓ），１．３４（９Ｈ，ｓ），６．７８（１Ｈ，ｍ），７．１７−７．２０（２Ｈ，重なりｍ）．

【0184】

２−（（４−アミノ−３−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）−５−ブロモ−３−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）キナゾリン−４（３Ｈ）−オン；１（ボロン酸，３から）

【0185】

【化17】

【0186】

ＥｔＯＡｃ／水の混合物（９：１，２ｘ５００ｍＬ）中の中間体Ａ（２ｘ１０．０ｇ，１４．９ミリモル）、（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−フルオフェニル）ボロン酸３（２ｘ３．１７ｇ，１４．９ミリモル）、炭酸ナトリウムデカハイドレート（２ｘ６．７５ｇ，２３．６ミリモル）及びパラジウムテトラキストリフェニルホスフィン（２ｘ０．５２ｇ，０．４５ミリモル）の混合物を、窒素を用いて脱ガスし、１０分間音波処理し、次いで６５℃において窒素下で１８時間撹拌した。反応混合物を合わせ、溶媒を真空中で除去し、残留物をＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ溶液（５００ｍＬ）中に溶解し、飽和酢酸アンモニウム溶液（４００ｍＬ）で洗浄した。水層をさらなるＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ溶液で抽出した（２ｘ４００ｍＬ）。合わせた有機抽出物を真空中で蒸発させ、残留物をシリカゲル上に予備−吸着させ、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し（ＤＣＭ中の０−４０％ＥｔＯＡｃを用いて溶離，勾配溶離）、表題化合物１を淡黄色の固体として与えた（８．４ｇ，９．８９ミリモル，３２．４％）：Ｒ_t ２．７０分，¹Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆） δ：１．３７（９Ｈ，ｓ），５．５０（２Ｈ，ｓ），５．７８（２Ｈ，ｓ），６．４９（１Ｈ，ｄ），６．９１（１Ｈ，ｔ），６．９５（１Ｈ，ｄｔ），７．０４（１Ｈ，ｍ），７．１５（１Ｈ，ｔ），７．２８（１Ｈ，ｔ），７．５４（１Ｈ，ｄ），７．６８−７．７２（２Ｈ，重なりｍ），７．８３（１Ｈ，ｄｄ），８．１５（１Ｈ，ｓ）。材料は、純度が約８０％であった。

【0187】

２−（（４−アミノ−３−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）−５−ブロモ−３−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）キナゾリン−４（３Ｈ）−オン；１（ボロン酸エステル，２から）

【0188】

【化18】

【0189】

ＥｔＯＡｃ／水の混合物（９：１，５００ｍＬ）中の中間体Ａ（１０．０ｇ，１４．９ミリモル；実施例１に記載した通りに製造される）、２−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−フルオフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン２（６．５９ｇ，２２．４０ミリモル）（３．１７ｇ，１４．９ミリモル）、炭酸ナトリウムデカハイドレート（２６．７５ｇ，２３．６ミリモル）及びパラジウムテトラキストリフェニルホスフィン（０．５２ｇ，０．４５ミリモル）の混合物を、窒素を用いて脱ガスし、１０分間音波処理し、次いで６５℃において窒素下で４０時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物をＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ溶液（２５０ｍＬ）中に溶解し、飽和酢酸アンモニウム溶液（２００ｍＬ）で洗浄した。水層をさらなるＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ溶液で抽出した（２ｘ２００ｍＬ）。合わせた有機抽出物を真空中で蒸発させ、残留物をシリカゲル上に予備−吸着させ、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し（ＤＣＭ中の０−４０％ＥｔＯＡｃを用いて溶離，勾配溶離）、表題化合物を淡黄色の固体として与えた（４．５ｇ，６．１４ミリモル，４１．１％）：Ｒ_t ２．７０分，

【0190】

２−（（４−アミノ−３−（３−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）−５−ブロモ−３−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）キナゾリン−４（３Ｈ）−オン

【0191】

【化19】

【0192】

ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中の２−（（４−アミノ−３−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）−５−ブロモ−３−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）キナゾリン−４（３Ｈ）
−オン１（１３．０ｇ，１８．６ミリモル）の溶液に、トリフルオロ酢酸（２１．６ｍＬ，２８０ミリモル）を加え、得られる溶液を２時間撹拌した。真空中で溶媒を除去した。残留物をＤＣＭ（２００ｍＬ）及びＮａＨＣＯ₃の飽和溶液（２００ｍＬ）中に取り上げた。水層をさらにＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨで抽出し（２ｘ１００ｍＬ）、合わせた有機抽出物を真空中で蒸発させた。残留物をシリカゲル上に予備−吸着させ、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＤＣＭ中の０−３％ＭｅＯＨを用いて溶離させ、表題化合物１ｂを白色の固体として与えた（７．６０ｇ，１１．８ミリモル，６３．０％）：ｍ／ｚ ６４０（Ｍ＋Ｈ）⁺（ＥＳ⁺）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆） δ：５．４７（２Ｈ，ｓ），５．７８（２Ｈ，ｓ），６．４３（１Ｈ，ｄ），６．６５（１Ｈ，ｄｔ），６．７５（１Ｈ，ｍ），６．７９（１Ｈ，ｔ），７．１４（１Ｈ，ｔ），７．２８（１Ｈ，ｔ），７．５３（１Ｈ，ｄ），７．６９−７．７３（２Ｈ，重なりｍ），７．８５（１Ｈ，ｍ），８．１３（１Ｈ，ｓ），１０．１８（１Ｈ，ｄ）．

【0193】

１型結晶多形としての化合物（Ｉ）：２−（（４−アミノ−３−（３−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）−５−（３−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）プロピ−１−イン−１−イル）−３−（２−（トリフルオロメチル）ベンジル）キナゾリン−４（３Ｈ）−オン

【0194】

【化20】

【0195】

ジエチルアミン（３３０ｍＬ）中の３−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）プロピ−１−イン（４．６９ｇ，２９．７ミリモル）、ヨウ化銅（Ｉ）（２２６ｍｇ，１．１９ミリモル）、中間体Ｂ（７．６ｇ，１１．９ミリモル）及びビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（８３３ｍｇ，１．１９ミリモル）の混合物を、窒素を用いて十分に脱ガスし、６０℃で３時間撹拌した。追加の３−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）プロピ−１−イン（４００ｍｇ）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（１６７ｍｇ，０．２４ミリモル）及びヨウ化銅（Ｉ）（０．４５ｇ，０．２４ミリモル）をジエチルアミン（３０．０ｍＬ）中で加え、６０℃で３時間撹拌した。３−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）プロピ−１−イン７（４００ｍｇ）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（１６７ｍｇ，０．２４ミリモル）及びヨウ化銅（Ｉ）（０．４５ｇ，０．２４ミリモル）のさらなるアリコートを加え、反応混合物を６０℃でさらに７時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物をＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ溶液（２００ｍＬ）中に溶解し、酢酸アンモニウム水溶液（１０重量％，３００ｍＬ）で洗浄した。水層をさらにＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ溶液で抽出した（２ｘ２００ｍＬ）。合わせた有機層を真空中で蒸発させた。残留物をＭｅＯＨ（３０．０ｍＬ）中で終夜スラリ化し、濾過した。固体残留物をシリカ上
に予備吸着させ、カラムクロマトグラフィーにより精製し（ＳｉＯ₂，ＤＣＭ中の０−５％ＭｅＯＨを用いて溶離，勾配溶離）、化合物（Ｉ）を淡褐色の固体として１型結晶多形の形態で与えた（４．７３ｇ，６．５２ミリモル，５５．０％）：ｍ／ｚ ７１８（Ｍ＋Ｈ）⁺（ＥＳ⁺）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆） δ：３．２０（３Ｈ，ｓ），３．３５−３．３９（２Ｈ，重なり ｍ），３．４３−３．５０（４Ｈ，重なり
ｍ），３．６０−３．６４（２Ｈ，重なりｍ），４．３８（２Ｈ，ｓ），５．４９（２Ｈ，ｓ），５．７７（２Ｈ，ｓ），６．４２（１Ｈ，ｄ），６．６５（１Ｈ，ｄｔ），６．７４（１Ｈ，ｄｑ），６．７９（１Ｈ，ｔ），７．１５（１Ｈ，ｔ），７．２８（１Ｈ，ｔ），７．５２（１Ｈ，ｄ），７．６５−７．７２（２Ｈ，重なりｍ），７．８３（１Ｈ，ｍ），８．１３（１Ｈ，ｓ），１０．１９（１Ｈ，ｓ）。

【0196】

一般的な方法中のＸＲＰＤ方法２を用い、この材料の試料のＸＲＰＤ分析を行った。材料は、得られるＸＲＰＤパターン（図３）におい示される通り結晶性であったが、いくらかの非晶質材料を含有した。

【0197】

１型結晶多形の試料についてのＤＳＣ分析（一派的な方法中のＤＳＣ方法１を用いる）を図４に示しており（下のプロット）、そこで試料は加熱されると複数の事象を経ることがわかる。１０２℃のピーク極大を有する幅広の吸熱に１４１℃のピーク極大を有する発熱が続き、それに１７４℃のピーク極大を有するより鋭い吸熱が続く。加熱の間に新しい結晶多形が生成するのが観察された−後に２型結晶多形であることが見出された。１型結晶多形の試料についてのＴＧＡ分析（一般的な方法のＴＧＡ方法１を用いる）（図４；上のプロット）は、周囲温度から７５℃までに、おそらく遊離の溶媒及び／又は吸湿水の蒸発の故に、０．３４％の重量損失を示した。

【実施例3】

【0198】

２型結晶多形としての化合物（Ｉ）の製造
方法１
以下の通りに、１−プロパノール中の溶液から結晶化させることにより２型結晶多形を製造することができる。１００ｍｌの反応器に１．９８ｇの化合物（Ｉ）及び４９．５ｍｌの１−プロパノール（２５Ｌ／ｋｇ）を装入した。混合物を撹拌し、９５℃に温めた（溶液は９２℃において観察された）。溶液を９５℃で３０分間保持してから、１０時間かけて２３℃に冷まし、７２℃において自然の結晶化が起こった。不均一な混合物を４時間撹拌し、次いで沈殿を濾過し、１−プロパノール（２ｍＬ）で洗浄した。生成物を真空中で４５℃において１８時間乾燥し、１．７１ｇの２型結晶多形を８６．４％の収率で与えた。

【0199】

方法２
以下の通りに、１個又は複数個の２型結晶多形の結晶を播種することにより、１−プロパノール中の溶液からの２型結晶多形の結晶化を助長することもできる。１−プロパノール（２５．００Ｌ／ｋｇ，２７５．０ｍＬ）を化合物（Ｉ）（１１．００ｇ）に加えた。混合物を２５℃において３５０ｒｐｍで撹拌した。不均一な混合物を次いで９７℃に４０分間かけて温め（還流温度）、９７℃に５分間保ち、次いで５分かけて９６℃に冷まし、次いで９６℃に１時間保った。均一なわずかにオレンジ色の溶液を１５分間かけて８５℃に冷ました。次いで撹拌速度を２５０ｒｐｍに減じ、溶液に２型結晶多形を播種した（化合物（Ｉ）出発材料のｋｇ当たり０．０１ｋｇの種結晶，０．１１ｇ）。混合物を８５℃で１０分間撹拌し、次いで２．３の非線形係数を有するキュービッククーリング（ｃｕｂｉｃ ｃｏｏｌｉｎｇ）を用い、８時間かけて２２℃に冷ました。不均一な混合物を２２℃で１０時間撹拌してから沈殿を濾過した。生成物を１−プロパノール（１．００Ｌ／ｋｇ，８．８４ｇ，１１．００ｍＬ）で洗浄し、次いで４５℃において乾燥し（週末；７２時間）、２型結晶多形を与えた（９．５ｇ，８６．４％）。

【0200】

方法３
メタノール、エタノール、２−プロパノール、１−プロパノール、アセトン、酢酸エチル、アセトニトリル、トルエン、酢酸イソプロピル、ＴＢＭＥ、２−ブタノン、ＤＭＳＯ、ジエチルエーテル、ＭＩＢＫ、ヘプタン、ニトロメタン、１０％水／エタノール、１０％水／アセトニトリル又は１０％水／２−プロパノール中で１型結晶多形をスラリ化することによって２型結晶多形を製造することができる。

【0201】

方法４
メタノール、エタノール、２−プロパノール、１−プロパノール、アセトン、酢酸エチル、アセトニトリル、トルエン、酢酸イソプロピル、ＴＢＭＥ、２−ブタノン、ＤＭＳＯ、ジエチルエーテル、ＭＩＢＫ、ニトロメタン、１０％水／エタノール又は１０％水／２−プロパノール中で非晶質形態における化合物（Ｉ）をスラリ化することにより、２型結晶多形を製造することができる。

【0202】

方法５
２型結晶多形の大規模化製造は以下の通りである：２００ｍｇの１型結晶多形を２０ｍｌのシンチレーションバイアル中に量り込んだ。５０体積のメタノールを加え、５００ｒｐｍで一定に撹拌しながら２０℃〜５０℃で２４時間試料をスラリ化した（各温度において４時間）。得られる材料を真空下で濾過し、真空炉中で４０℃において終夜乾燥した。

【実施例4】

【0203】

２型結晶多形としての化合物（Ｉ）の特性化
２型結晶多形の試料のＸＲＰＤ分析を、一般的な方法中のＸＲＰＤ方法３を用いて行った。得られるＸＲＰＤパターンを図５に示す。

【0204】

２型結晶多形の試料のＴＧＡ分析を、一般的な方法中のＴＧＡ方法２を用いて行った。得られるデータを図６に示しており、それから２型結晶多形が１５５℃から２００℃までで±０．５％の重量損失を示したことが明らかである。

【0205】

２型結晶多形の試料についてのＤＳＣ分析を、一般的な方法中のＤＳＣ方法２を用いて行った。得られるデータを図７に示しており、それから、２型結晶多形が１９０．１℃（ピーク極大）において分解を伴う融解を示したことが明らかである。

【0206】

２型結晶多形の試料のＤＶＳ等温線プロットを図８に示し、質量におけるＤＶＳ変化のプロットを図９に示す。２型結晶多形は、０％ＲＨから９５％ＲＨまでで徐々に±０．４％水を吸収し、水の吸収は可逆的であることが観察され、２型が吸湿性でないことを示している。

【0207】

ＤＶＳ分析の後（図１０を参照されたい）のＸＲＰＤ（一般的な方法中のＸＲＰＤ方法３を用いる）ならびに２５℃／９６％ＲＨ及び４０℃／７５％ＲＨにおける１週間の保存の後のＸＲＰＤ（図１１を参照されたい，一般的な方法中のＸＲＰＳ方法１を用いる）により変化が気付かれなかったので、２型結晶多形の試料の静的安定性研究は、試料が固体形態に関して水分に安定であることを示した。

【実施例5】

【0208】

２型結晶多形としての超微粉砕された化合物（Ｉ）の安定性
５ｃｍのＪｅｔｍｉｌｌ超微粉砕装置を用いて超微粉砕された２型結晶多形を製造し、以下の粒度分布を生じた：Ｄ₁₀＝１．１４μｍ；Ｄ₅₀＝１．９４μｍ及びＤ₉₀＝３．３９μｍ（粒度分布はレーザー回折（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ測定器）を用
いて決定された）。

【0209】

超微粉砕された材料を、ゼロ時において、ならびに種々の条件の保存の後にＴＧＡ、ＸＲＰＤ及びＤＳＣにより分析した。試料を以下の条件下で保存した：（ｉ）室温／＜５％ＲＨにおいて７週間；（ｉｉ）室温／５６％ＲＨにおいて７週間；（ｉｉｉ）室温／７５％ＲＨにおいて７週間；（ｉｖ）５０℃において７週間；及び（ｖ）４０℃／７５％ＲＨにおいて７週間。

【0210】

表３に示されるデータは、種々の条件下で有意な変化が観察されなかったので、試料が結晶学的に及び熱力学的に安定であったことを示す。

【0211】

【表2】

【実施例6】

【0212】

非晶質形態における化合物（Ｉ）の製造
１型結晶多形（実施例２の方法を用いて得られる）を１２０℃に加熱することにより、非晶質形態における化合物（Ｉ）を製造した。

【実施例7】

【0213】

３型結晶多形としての化合物（Ｉ）の製造
方法１
非晶質形態における化合物（Ｉ）をジクロロメタン中でスラリ化することにより、３型結晶多形を製造することができる。

【0214】

方法２
３型結晶多形の大規模化製造は、以下の通りである：２００ｍｇの１型結晶多形を、５体積のジクロロメタンを含有する４ｍｌのバイアルに加えた。試料を３０秒間渦動させた。次いでさらに５体積のＤＣＭを加え、試料をさらに３０秒間渦動させた。試料を真空下で濾過し、真空炉中で２５℃において週末の経過に及んで乾燥した。

【実施例8】

【0215】

３型結晶多形としての化合物（Ｉ）の特性化
３型結晶多形の試料のＸＲＰＤ分析を、一般的な方法中のＸＲＰＤ方法２を用いて行っ
た。ＸＲＰＤパターンを図１２に示す。

【0216】

３型結晶多形の試料について得られたＴＧＡ及びＤＳＣデータ（一般的な方法のＴＧＡ方法１及びＤＳＣ方法１を用いる）を図１３に示す。３型結晶多形は約１８６℃（ピーク極大；ＤＳＣ−下のプロット）において分解を伴って融解する。

【0217】

３型結晶多形の試料について得られたＧＶＳ等温線を図１４に示しており、そこで０−９０％ＲＨにおいて０．９９％の質量変化が観察された。

【0218】

ＧＶＳ分析の後（図１５を参照されたい）のＸＲＰＤ（一般的な方法中のＸＲＰＤ方法２を用いる）ならびに２５℃／９６％ＲＨ及び４０℃／７５％ＲＨにおける１週間の保存の後のＸＲＰＤ（図１６を参照されたい，一般的な方法中のＸＲＰＳ方法１を用いる）により変化が気付かれなかったので、３型結晶多形の試料の静的安定性研究は、試料が固体形態に関して水分に安定であることを示した。

【実施例9】

【0219】

４型擬多形としての化合物（Ｉ）の製造
１型結晶多形の形態における化合物（Ｉ）（２０ｍｇ）又は非晶質形態における化合物（Ｉ）（２０ｍｇ）をＨＰＬＣバイアル中に量り込んだ。次いで室温において１分間振盪させながらＴＨＦを徐々に加えた。次いで試料を５０℃において１５分間振盪させ（５００ｒｐｍ）てから、ＴＨＦの次の添加を行った。８０体積のＴＨＦを加えて溶液を得るまで、このプロセスを続けた。溶液を０．１℃／分において５０℃から５℃まで冷却し、５℃において終夜保持した。次いで固体を得るために溶液を放置して蒸発させた。固体を真空下で濾過し、２時間空気乾燥（真空下）してから一般的な方法中のＸＲＰＤ方法１を用いるＸＲＰＤにより分析した。出発材料として非晶質形態における化合物（Ｉ）を用いて得られる固体の試料のＸＲＰＤパターンを図１７に示しており、それは４型擬多形に相当する。出発材料として１型結晶多形を用いて得られる固体の試料を真空炉中で２５℃において＞４８時間乾燥してから、再度ＸＲＰＤにより分析した。この長い乾燥期間の後、４型結晶多形は非晶質における化合物（Ｉ）に転換したことが観察された。従って、４型擬多形は準安定な溶媒和物である。

【実施例10】

【0220】

５型擬多形としての化合物（Ｉ）の製造
１型結晶多形の形態における化合物（Ｉ）（２０ｍｇ）又は非晶質形態における化合物（Ｉ）（２０ｍｇ）をＨＰＬＣバイアル中に量り込んだ。次いで室温において１分間振盪させながら１，４−ジオキサンを徐々に加えた。次いで試料を５０℃において１５分間振盪させ（５００ｒｐｍ）てから、１，４−ジオキサンの次の添加を行った。８０体積の１，４−ジオキサンを加えて溶液を得るまで、このプロセスを続けた。溶液を０．１℃／分において５０℃から５℃まで冷却し、５℃において終夜保持した。次いで固体を得るために溶液を放置して蒸発させた。固体を真空下で濾過し、２時間空気乾燥（真空下）してから一般的な方法中のＸＲＰＤ方法１を用いるＸＲＰＤにより分析した。出発材料として非晶質形態における化合物（Ｉ）を用いて得られる固体の試料のＸＲＰＤパターンを図１７に示しており、それは５型擬多形に相当する。出発材料として１型結晶多形を用いて得られる固体の試料を真空炉中で２５℃において＞４８時間乾燥してから、再度ＸＲＰＤにより分析した。この長い乾燥期間の後、５型擬多形は形態が変わらなかった。さらなる特性化を行って、¹Ｈ ＮＭＲ、ＴＧＡ及びＤＳＣデータ（示されていない）を形成し、それは５型擬多形が溶媒損失の後に非晶質における化合物（Ｉ）に逆戻りしたことを示した。従って、４型擬多形は準安定な溶媒和物である。

【実施例11】

【0221】

６型擬多形としての化合物（Ｉ）の製造
非晶質形態における化合物（Ｉ）（２０ｍｇ）をＨＰＬＣバイアル中に量り込んだ。次いで室温において１分間振盪させながら１０％水／アセトニトリルを徐々に加えた。次いで試料を５０℃において１５分間振盪させ（５００ｒｐｍ）てから、１０％水／アセトニトリルの次の添加を行った。８０体積の１０％水／アセトニトリルを加えてしまうまで、このプロセスを続けた。得られるスラリを５００ｒｐｍで振盪させながら２日間、２５℃〜５０℃（各温度において４時間）において放置して熟成させた。次いで固体を真空下で濾過し、２時間空気乾燥し、一般的な方法中のＸＲＰＤ方法１を用いるＸＲＰＤにより分析した。この材料の試料のＸＲＰＤパターンを図１７に示し、それは６型擬多形に相当する。ＸＲＰＤ分析に続き、材料を真空炉中で４０℃において終夜乾燥した。この長い乾燥期間の後、６型擬多形は溶媒を失い、２型結晶多形に転換したことが観察された。従って、６型擬多形は準安定な溶媒和物である。

【実施例12】

【0222】

７型擬多形としての化合物（Ｉ）の製造
非晶質形態における化合物（Ｉ）（２０ｍｇ）をＨＰＬＣバイアル中に量り込んだ。次いで室温において１分間振盪させながら１０％水／アセトンを徐々に加えた。次いで試料を５０℃において１５分間振盪させ（５００ｒｐｍ）てから、１０％水／アセトンの次の添加を行った。８０体積の１０％水／アセトンを加えてしまうまで、このプロセスを続けた。得られるスラリを５００ｒｐｍで振盪させながら２日間、２５℃〜５０℃（各温度において４時間）において放置して熟成させた。次いで固体を真空下で濾過し、２時間空気乾燥し、一般的な方法中のＸＲＰＤ方法１を用いるＸＲＰＤにより分析した。この材料の試料のＸＲＰＤパターンを図１７に示し、それは７型擬多形に相当する。ＸＲＰＤ分析に続き、材料を真空炉中で４０℃において終夜乾燥した。この長い乾燥期間の後、７型擬多形は溶媒を失い、２型結晶多形に転換したことが観察された。従って、７型擬多形は準安定な溶媒和物である。

【実施例13】

【0223】

２型及び３型結晶多形の熱力学的安定性及びそれらの相互転換
２型及び３型結晶多形の５０：５０混合物につき、競争的スラリ実験を行った。５０体積の溶媒を加え、試料を設定温度において３日間撹拌した（３００ｒｐｍ）。次いですべての試料を真空下で濾過し、３０分間空気乾燥してから、ＸＲＰＤ分析を行った。

【0224】

スラリ実験の結果を下記の表４にまとめる：

【0225】

【表3】

【0226】

すべての競争的スラリ実験は２型を生じ、これがより安定な熱力学的形態であることを示している。

【実施例14】

【0227】

試験管内及び生体内スクリーニング法及び結果
試験管内スクリーニング
生物学的試験：実験法
酵素阻害アッセイ
ＰＩ３Ｋ酵素は、ＡＴＰ及びＭｇ²⁺イオンの存在下でホスファチジルイノシトール４，５−二リン酸（ＰＩＰ２）のホスファチジルイノシトール３，４，５−三リン酸（ＰＩＰ３）へのリン酸化を触媒する。時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）（ＨＴＲＦ（登録商標）ＰＩ３Ｋ酵素アッセイ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）により、ユーロピウム標識抗−ＧＳＴモノクローナル抗体、ＧＳＴ−タグ付き（ＧＳＴ−ｔａｇｇｅｄ）プレクストリン相同（ＰＨ）ドメイン、ビオチニル化ＰＩＰ３及びストレプタビジン−アロフィ
コシアニン（ＡＰＣ）から成るエネルギー移動複合体からのビオチン−ＰＩＰ３の排除（ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ）によりＰＩＰ３生成物を検出することができる。複合体中のユーロピウムの３３０ｎｍにおける励起は、ＡＰＣへのエネルギー移動及び６６５ｎｍにおける蛍光発光を生じるが、ユーロピウム自身は６２０ｎｍにおけるその特徴的波長で発光する。ＰＩ３Ｋ活性により生成するＰＩＰ３生成物はビオチン−ＰＩＰ３を複合体から排除し、エネルギー移動の損失（ｌｏｓｓ）を生ずる（シグナルの低下）。

【0228】

試験されるべき化合物を、ＰＩＰ２基質及び組換えＰＩ３Ｋ酵素（α、β又はδイソ型，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから、あるいはγイソ型［ｐ１１０γ＋ｐ１０１構築物］，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｓｗａｍｐｓｃｏｔｔ，ＭＡからのいずれか）の混合物に所望の最終的な濃度で加え、混合物を室温で２時間インキュベーションした。このインキュベーション期間に続き、酵素／化合物／ＰＩＰ２基質混合物にＡＴＰ（１０μＭ）を加え、得られる混合物を室温でさらに３０分間インキュベーションした。次いでビオチニル化ＰＩＰ３を含有する停止溶液ならびにＧＳＴタグ付きＧＲＰ１プレクストリン相同（ＰＨ）ドメイン及びフルオロフォアを含有する検出混合物を加え、混合物を室温で１５〜１８時間インキュベーションしてから、蛍光マイクロプレートリーダー（Ｓｙｎｅｒｇｙ ４，Ｂｉｏ Ｔｅｋ ＵＫ，Ｂｅｄｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ）において検出した。

【0229】

式：ＡＰＣシグナル（６６５ｎｍにおける発光）／ユーロピウムシグナル（６２０ｎｍにおける発光）ｘ１０⁴に従って結果を計算した。各反応のパーセンテージ阻害を、ＤＭＳＯ処理された対照に対して計算し、次いで濃度−反応曲線から５０％阻害濃度（ＩＣ₅₀値）を計算した。

【0230】

ＰＩ３Ｋδ 細胞に基づくアッセイ
刺激に反応してのＰＩ３Ｋδ活性化を評価する手段として、ＰＩ３Ｋδシグナリングの下流生成物であるタンパク質Ａｋｔのリン酸化状態を決定した。

【0231】

ヒト白血病性単球リンパ腫細胞系から得たＵ９３７細胞を、ＰＭＡ（１００ｎｇ／ｍＬ）と一緒に４８〜７２時間インキュベーションすることにより、マクロファージ型細胞に分化させた。次いで細胞を試験化合物又はビヒクルと一緒に２時間予備−インキュベーションし、次いでＨ₂Ｏ₂（１０ｍＭ，５〜７分）への暴露により短時間刺激し、培地を４％ホルムアルデヒド溶液で置き換えることにより反応を停止させた。クエンチング緩衝液（０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含むＰＢＳ中の０．１％アジ化ナトリウム，１％Ｈ₂Ｏ₂）と一緒に２０分間インキュベーションすることにより、内在性ペルオキシド活性及びホルムアルデヒドを不活性化した。細胞を緩衝液（０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含有するＰＢＳ）で洗浄し、遮断溶液（ＰＢＳ中の１％ＢＳＡ）と一緒に１時間インキュベーションし、次いで緩衝液で再−洗浄し、抗−ｐＡｋｔ抗体又は抗−ｐａｎ−Ａｋｔ抗体（両方ともＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから）と一緒に終夜インキュベーションした。緩衝液（０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含有するＰＢＳ）を用いる洗浄の後、細胞をＨＲＰ−共役二次抗体（Ｄａｋｏ）と一緒にインキュベーションし、得られるシグナルを、ＴＭＢ基質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．により供給される基質試薬パック）を用いて比色定量法により（ＯＤ：６５５ｎｍを参照波長とする４５０ｎｍ）決定した。

【0232】

Ｈ₂ＳＯ₄溶液（１００μＬ）の添加によりこの反応を停止させた。次いで細胞を緩衝液（０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含有するＰＢＳ）で洗浄し、５％クリスタルバイオレット溶液（１００μＬ）を３０分間適用した。緩衝液（０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含有するＰＢＳ）を用いる洗浄の後、各ウェルに１％ＳＤＳ（１００μＬ）を加え、プレートを１時間軽く振盪させてから、５９５ｎｍにおける吸光度を測定した（
Ｖａｒｉｏｓｋａｎ（登録商標） Ｆｌａｓｈ，Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。ＯＤ_450-655読み取り値をＯＤ₅₉₅読み取り値で割ることにより、測定されたＯＤ_450-655読み取り値を細胞数に関して修正した。ｐＡｋｔシグナル対全Ａｋｔシグナルの比を用い、ＰＩ３Ｋδ活性化の程度を定量した。０％阻害としてのＨ₂Ｏ₂のみの対照に対して１００％阻害と設定される１０μｇ／ｍＬの標準対照（ＬＹ２９４００２）に対して、各ウェルに関するパーセント阻害を計算した。試験化合物の連続希釈により作成される濃度−反応曲線から、ＩＣ₅₀値を計算した。

【0233】

ＰＩ３Ｋγ 細胞に基づくアッセイ
刺激に反応してのＰＩ３Ｋγの活性化を評価する手段として、ＭＣＰ−１を用いる刺激に続き、ＰＩ３Ｋγシグナリングの下流生成物であるタンパク質Ａｋｔのリン酸化状態を決定した。

【0234】

Ｕ９３７細胞を、ＰＭＡ（１００ｎｇ／ｍＬ）と一緒に４８〜７２時間インキュベーションすることにより、マクロファージ型細胞に分化させた。次いで細胞を試験化合物又はビヒクルと一緒に２時間予備−インキュベーションし、次いでＭＣＰ−１（１０ｎＭ，１分）を用いて短時間刺激し、培地を４％ホルムアルデヒド溶液で置き換えることにより反応を停止させた。クエンチング緩衝液（０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含むＰＢＳ中の０．１％アジ化ナトリウム，１％Ｈ₂Ｏ₂）と一緒に２０分間インキュベーションすることにより、内在性ペルオキシド活性及びホルムアルデヒドを不活性化した。細胞を緩衝液（０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含有するＰＢＳ）で洗浄し、遮断溶液（ＰＢＳ中の１％ＢＳＡ）と一緒に１時間インキュベーションし、次いで緩衝液で再−洗浄し、抗−ｐＡｋｔ抗体又は抗−ｐａｎ−Ａｋｔ抗体（両方ともＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから）と一緒に終夜インキュベーションした。緩衝液（０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含有するＰＢＳ）を用いる洗浄の後、細胞をＨＲＰ−共役二次抗体（Ｄａｋｏ）と一緒にインキュベーションし、得られるシグナルを、ＴＭＢ基質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．により供給される基質試薬パック）を用いて比色定量法により（ＯＤ：６５５ｎｍを参照波長とする４５０ｎｍ）決定した。

【0235】

１Ｎ Ｈ₂ＳＯ₄溶液（１００μＬ）の添加によりこの反応を停止させた。次いで細胞を緩衝液（０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含有するＰＢＳ）で洗浄し、５％クリスタルバイオレット溶液（１００μＬ）を３０分間適用した。緩衝液（０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含有するＰＢＳ）を用いる洗浄の後、各ウェルに１％ＳＤＳ（１００μＬ）を加え、プレートを１時間軽く振盪させてから、５９５ｎｍにおける吸光度を測定した（Ｖａｒｉｏｓｋａｎ（登録商標） Ｆｌａｓｈ，Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。ＯＤ_450-655読み取り値をＯＤ₅₉₅読み取り値で割ることにより、測定されたＯＤ_450-655読み取り値を細胞数に関して修正した。ｐＡｋｔシグナル対全Ａｋｔシグナルの比を用い、ＰＩ３Ｋγ活性化の程度を定量した。０％阻害としてのＭＣＰ−１のみの対照に対して１００％阻害と設定される１０μｇ／ｍＬの標準対照（ＬＹ２９４００２）に対して、各ウェルに関するパーセント阻害を計算した。試験化合物の連続希釈により作成される濃度−反応曲線から、ＸＬ−Ｆｉｔ（ｉｄｂｓ，Ｇｕｉｌｄｆｏｒｄ，ＵＫ）を用いてＩＣ₅₀値を計算した。

【0236】

スーパーオキシドアニオン生産アッセイ
ＰＩ３Ｋδ依存性細胞機能を評価する手段として、ＩＦＮγ−感作Ｕ９３７細胞におけるスーパーオキシドアニオン生産を化学発光アッセイにより評価した。Ｕ９３７細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡから購入した）を、３７℃において１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ １６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｌｔｄ．，Ｐａｉｓｌｅｙ，ＵＫ）中に保持した。細胞を４０ｍＬの１０％ＦＣＳ ＲＰＭＩ １６４０中にｍＬ当たり１０⁷個の細胞の密度で懸濁させ、１００μｇ／ｍＬのＩＦＮγ溶液の２０μＬ（最終的な濃度：５
０ｎｇ／ｍＬ）で処理し、３７℃，５％ＣＯ₂において４日間インキュベーションした。

【0237】

ＩＦＮγ−感作Ｕ９３７細胞を９６−ウェルプレート中にウェル当たり０．２ｘ１０⁶個の細胞において播種し、飢餓培地（ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａ）（０．５％ＦＣＳ ＲＰＭＩ１６４０−フェノールレッドなし）中で試験化合物と一緒に２時間予備−インキュベーションした。サッカロミセス・セレビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｓｅｓ
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから）からのザイモサン Ａ（１０ｍｇ）を１ｍＬの１５０ｍＭ ＮａＣｌ中に再懸濁させ、１００℃で１５分間煮沸した。煮沸の後、ザイモサン粒子を１ｍＬのＰＢＳで２回洗浄し、０．５ｍＬのＢｉｏＰａｒｔｉｃｌｅｓ^TM オプソニン化試薬（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と一緒に３７℃において６０分間インキュベーションした。すべて（ザイモサンは別として）Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ Ａｎｉｏｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（＃ ＣＳ１０００，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｌｔｄ，Ｐｏｏｌｅ，ＵＫ）中で提供されるザイモサン粒子溶液（１０μＬ）、アッセイ緩衝液（８５μＬ）、ルミノール（２．５μＬ）及びエンハンサー溶液（２．５μＬ）の混合物で細胞を処理した。放出されるスーパーオキシドアニオンを示す化学発光を、発光測定（ｌｕｍｉｎｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ）（Ｖａｒｉｏｓｋａｎ（登録商標） Ｆｌａｓｈ，Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）により１５分毎に６０分まで測定した。

【0238】

インキュベーションから６０分後におけるデータを分析に用いた。各ウェルに関するパーセンテージ阻害を、０％阻害としての対照に対して１００％阻害と設定される標準ＰＩ３Ｋδ阻害剤である１０μｇ／ｍＬのＩＣ８７１１４に対して計算した。試験化合物の連続希釈により作成される濃度−反応曲線から、ＸＬ−Ｆｉｔ（ｉｄｂｓ，Ｇｕｉｌｄｆｏｒｄ，ＵＫ）を用いて相対的なＥＣ₅₀値を計算した。

【0239】

ＰＢＭＣｓにおけるｃｙｔｏｓｔｉｍ−誘導サイトカイン生産
ＰＩ３Ｋδ−依存性細胞機能を評価する手段として、ＰＢＭＣｓにおけるｃｙｔｏｓｔｉｍ−誘導ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３及びＩＦＮγ生産をＬｕｍｉｎｅｘ複合アッセイ（ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ａｓｓａｙ）により評価した。すべての健康なボランティアをＱｕｉｎｔｉｌｉｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ（Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）が募集し、血液試料をＲｅｓｐｉｖｅｒｔ Ｌｔｄに送達した。この研究は地方倫理委員会により承認され、すべての被験者は書面のインフォームドコンセントを与えた。

【0240】

ＰＢＭＣ懸濁液（２００μＬ；ｍＬ当たり２ｘ１０⁶個の細胞）を９６−ウェルプレートに加えた。細胞を純ＤＭＳＯ中の試験化合物又はビヒクルとしてのＤＭＳＯ（２μＬ）で処理し、室温で１時間インキュベーションした。Ｃｙｔｏｓｔｉｍ（Ｍｉｌｔｅｎｔｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｓｕｒｒｅｙ，ＵＫ）を１：５０の比率において導入し、細胞を２０時間インキュベーションした（３７℃；５％ＣＯ₂）。プレートを５００ｘｇにおいて５分間回転させ、上澄み液を集めた。高感度サイトカイン磁気ビーズキット（＃ＨＳＣＹＴＭＡＧ−６０ＳＫ，Ｍｉｌｌｌｉｐｏｒｅ，Ｗａｔｆｏｒｄ，ＵＫ）を用い、４つの被検体（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３及びＩＦＮγ）をＬｕｍｉｎｅｘにより以下の通りに分析した：磁気抗体ビーズは多重化され（ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄ）、９６−ウェルプレート中で標準、培地のみ又は試料（５０μＬ）と一緒に、４℃において振盪させながら終夜インキュベーションした。磁気プレート洗浄機を用い、キット中で与えられるＭｉｌｌｉｐｏｒｅ洗浄緩衝液で２回洗浄した後、ビーズを検出抗体（５０μＬ）と一緒に室温で振盪させながら１時間インキュベーションした。キット中で与えられるストレプタビジン−フィコエリスリン溶液を、室温で振盪させながら３０分間加えた。洗浄の後、ビーズをシース液（ｓｈｅａｔｈ ｆｌｕｉｄ）（１５０μＬ）中に再−懸濁させ、直後に分析した。Ｌｕｍｉｎｅｘ系を５０個のビーズをカウントするように設定し、上澄み液中の各被検体の量を標準曲線に対して計算した。濃度−阻害曲線から、ＸＬ−Ｆｉｔ（ＩＤＢＳ
，Ｇｕｉｌｄｆｏｒｄ，ＵＫ）を用いてＩＣ₅₀値を決定した。

【0241】

ＭＣＰ１への走化性
ＰＩ３Ｋγ依存性細胞機能の評価の手段として、４８ウェル−走化性チャンバー（ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ ｃｈａｍｂｅｒ）を用い、ＭＣＰ−１へのＴＨＰ１細胞走化性を評価した。ヒト白血病性単球リンパ腫細胞系からのＴＨＰ１細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡから購入した）を、１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ １６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｌｔｄ．，Ｐａｉｓｌｅｙ，ＵＫ）中に３７℃において保持した。細胞を０．５％ＢＳＡ／ＲＰＭＩ１６４０中に再−懸濁させ（ｍＬ当たり２ｘ１０⁶個の細胞）、３７℃，５％ＣＯ₂において１０分間インキュベーションした。次いで細胞懸濁液のアリコート（５００μＬ）を純ＤＭＳＯ中の化合物又はビヒクルとしてのＤＭＳＯ（２．５μＬ）で１時間処理した（３７℃，５％ＣＯ₂）。

【0242】

ＭＣＰ１（５０ｎＭ）を０．５％ＢＳＡ／ＲＰＭＩ１６４０中で調製した。ＭＣＰ１溶液（５０μＬ）を４８−ウェル走化性チャンバー（ＡＰ４８，ＮｅｕｒｏＰｒｏｂｅ Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）の下部プレート中の各ウェルに加えた。ポリカーボネート膜（８μｍ）を下部チャンバー上に載せ、次いで上部プレートを下部チャンバー及びフィルター膜の上に載せた。細胞懸濁液のアリコート（５０μＬ）を化合物又はビヒクルで処理してから、上部チャンバー中に注意深く加え、０．５％ＢＳＡ ＲＰＭＩ１６４０（５０μＬ）を上部に適用した。次いでチャンバーを２時間放置した（３７℃，５％ＣＯ₂）。次いで膜を注意深く除去し、下部チャンバーからの試料（２５μＬ）を新しい９６ウェルプレートに移した。

【0243】

１０％ＦＣＳフェノールレッド−非含有ＲＰＭＩ１６４０中のＭＴＴの溶液（５０μＬ）を各ウェルに加え、プレートを２時間インキュベーションした（３７℃，５％ＣＯ₂）。純ＤＭＳＯ（１００μＬ）を各ウェルに加えてＭＴＴから生成するホルマザンを抽出し、プレートを１時間軽く振盪させてから５９５ｎｍにおける吸光度を測定した（Ｖａｒｉｏｓｋａｎ（登録商標） Ｆｌａｓｈ，Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。値を選択的なＰＩ３Ｋγ阻害剤であるＡＳ６０４８５０（１０μｇ／ｍＬ）による阻害と比較し、相対的なパーセント阻害を計算した。ＸＬ−Ｆｉｔ（ｉｄｂｓ，Ｇｕｉｌｄｆｏｒｄ，ＵＫ）を用い、濃度−阻害曲線から相対的なＥＣ₅₀値を計算した。

【0244】

ＣＯＰＤ患者から得た好中球からのＣＸＣＬ８放出
ＣＯＰＤ患者から得た好中球からのＣＸＣＬ８放出への処理の効果をＥＬＩＳＡアッセイにより評価した。すべての患者をＱｕｉｎｔｉｌｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ（Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）が募集し、血液試料をＲｅｓｐｉｖｅｒｔ Ｌｔｄに送達した。この研究は地方倫理委員会により承認され、すべての被験者は書面のインフォームドコンセントを与えた。全血（３０ｍＬ）をＡＣＤ（５ｍＬ；２５０ｍｌの無菌の再蒸留水中に７．３６ｇのクエン酸、１４．７１ｇのクエン酸ナトリウム、９．９１ｇのデキストロースを含んでなる）及び６％のデキトスラン（１５ｍＬ；０．９％ＮａＣｌ中で希釈）と穏やかに混合し、赤血球を除去した。管を室温で４５分間インキュベーションし、次いで上澄み液（白血球が豊富な画分）を集め、赤血球を残した。

【0245】

この画分を、低い制動を用いて（ｗｉｔｈ ｌｏｗ ｂｒａｋｉｎｇ）遠心した（１２００ｒｐｍにおいて１０分間，４℃）。上澄み液を吸引し、ペレットを氷−冷された無菌の再蒸留Ｈ₂Ｏ（１０ｍＬ）中に再−懸濁させ、３０秒後に０．６Ｍ ＫＣｌ（４ｍＬ）を加えた。細胞懸濁液を無菌のＰＢＳで希釈し（５０ｍＬの最終的な体積まで）、次いで１５００ｒｐｍで５分間遠心した。上澄み液を吸引し、ペレットをＰＢＳ（２．５ｍＬ）中に再−懸濁させ、同じドナーからの２つの管を１つにプールした。

【0246】

この細胞懸濁液を、Ｐａｓｔｅｕｒピペットを用いて５ｍＬのＦｉｃｏｌｌ−ｐａｑｕｅ^TM ｐｒｅｍｉｕｍ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）の上に注意深く層にして重ね（ｌａｙｅｒｅｄ）、次いで遠心した（低い制動を用いて１５００ｒｐｍにおいて３０分間）。管の底における単離された好中球を、５％ＦＣＳを含有するＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ，Ｐａｉｓｌｅｙ，ＵＫ）中に再−懸濁させ、９６ウェルプレートにおいてウェル当たり４ｘ１０⁵個の細胞の密度で播種した。細胞を３０分間インキュベーションしてから（３７℃，５％ＣＯ₂）、処理を開始した。

【0247】

好中球を試験化合物又はＤＭＳＯビヒクルと一緒に１時間予備−インキュベーションし、次いでＴＮＦα（１０ｍｇ／ｍＬ）を用いて刺激した。細胞非含有上澄み液をＴＮＦα刺激から３時間後に集め、ＤｕｏＳｅｔ ＥＬＩＳＡ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ，Ａｂｉｎｇｄｏｎ，ＵＫ）を用いるＥＬＩＳＡによりＣＸＣＬ８を測定した。報告されるＩＣ₅₀値は、ＸＬ−Ｆｉｔ（ＩＤＢＳ，Ｇｕｉｌｄｆｏｒｄ，ＵＫ）を用いて濃度−阻害曲線から決定された。

【0248】

ＭＴＴアッセイ
ＰＭＡ−分化Ｕ９３７細胞を、５％ＦＣＳ中で４時間又は１０％ＦＣＳ中で２４時間、試験化合物（１０μｇ／ｍＬ）又はビヒクルと一緒に予備−インキュベーションした。上澄み液を新しい培地（２００μＬ）で置き換え、ＭＴＴ倍液（１０μＬ，５ｍｇ／ｍＬ）を各ウェルに加えた。１時間のインキュベーションの後、培地を除去し、２００μＬのＤＭＳＯを各ウェルに加え、プレートを１時間軽く振盪させてから、５５０ｎｍにおける吸光度を読み取った。各ウェルに関し、細胞生存率へのパーセント損失をビヒクル（０．５％ ＤＭＳＯ）−処理に対して計算した。

【0249】

生体内スクリーニング：薬物動態学及び抗−炎症活性
マウスにおけるＬＰＳ−誘導気道好中球蓄積
非−絶食ＢＡＬＢ／ｃマウス（６〜８週令）にビヒクル又は試験化合物を、ＬＰＳ処置の開始に関してＴ＝−２時間、−８時間又は−１２時間の時点に、気管−内投与（投薬量体積２０μＬ）により投薬した。０．５ｍｇ／ｍＬの溶液においてＬＰＳを調製し、Ｄｅ
Ｖｉｂｌｉｓｓ超音波ネブライザー ２０００を用いてエアロゾル化した（３０分間の暴露の間に７ｍＬ）。ＬＰＳ挑戦から８時間後に、気管にカニューレ挿入し、気管カテーテルを介してＰＢＳ（１ｍＬ）を肺中に注入し、次いで引き出す（ｗｉｔｈｄｒａｗｉｎｇ）ことにより、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を抽出した。この方法を繰り返し、約２ｍＬの洗浄液の収量を与えた。血球計数板を用い、ＢＡＬＦ試料中の合計細胞数を測定した。１２００ｒｐｍにおいて室温で２分間遠心することにより、ＢＡＬＦ試料のサイトスピンスメア（ｃｙｔｏｓｐｉｎ ｓｍｅａｒｓ）を調製し、ＤｉｆｆＱｕｉｋ染色系（Ｄａｄｅ Ｂｅｈｒｉｎｇ）を用いて分別細胞カウント（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔ）に関して染色した。油浸顕鏡（ｏｉｌ ｉｍｍｅｒｓｉｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）を用いて細胞をカウントした。データをＢＡＬＦのｍＬ当たりの細胞の好中球数として表わす（平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ）。

【0250】

ラットにおけるＬＰＳ−誘導気道好中球蓄積
非−絶食ラットにビヒクル又は試験化合物を、ＬＰＳ処置の開始に関してＴ＝−２時間、−８時間又は−１２時間の時点に、気管−内投与（投薬量体積２０μＬ）により投薬した。ＬＰＳ溶液（０．３ｍｇ／ｍＬ）を、Ｄｅ Ｖｉｂｌｉｓｓ超音波ネブライザー ２０００を用いてエアロゾル化した（３０分間の間に７ｍＬ）。ＬＰＳ挑戦から８時間後に、気管にカニューレ挿入し、気管カテーテルを介してＰＢＳ（１ｍＬ）を肺中に注入し、次いで引き出すことにより、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を抽出した。この方法を繰り返し、約２ｍＬの洗浄液を与えた。

【0251】

Ｃｏｕｎｔｅｓｓ自動細胞カウンター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてＢＡＬＦ試料中の合計細胞数を測定した。１２００ｒｐｍにおいて室温で２分間遠心することにより、ＢＡＬＦ試料のサイトスピンスメアを調製し、ＤｉｆｆＱｕｉｋ染色系（Ｄａｄｅ Ｂｅｈｒｉｎｇ）を用いて分別細胞カウントに関して染色した。油浸顕鏡を用いて細胞をカウントした。データをＢＡＬＦのｍＬ当たりの細胞の好中球数として表わす（平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ）。

【0252】

マウスにおけるオボアルブミン−誘導気道好酸球及び好中球蓄積
０日及び７日に、ＯＶＡ（１０μｇ／マウス 腹腔内）を用いてＢＡＬＢ／ｃマウス（６〜８週令）を免疫化した。肺において局所的炎症反応を引き出すために、１３日から１５日の間、オボアルブミンの噴霧溶液（１０ｍｇ／ｍＬ，３０分の暴露，Ｄｅ Ｖｉｌｉｂｉｓｓ Ｕｌｔｒａｎｅｂ ２０００）を用いてマウスに繰り返し挑戦した。１７日に、各動物は最後のＯＶＡ挑戦の２時間前に、気管−内を介してビヒクル又は試験化合物のいずれかの投与を受けた。８時間後に動物を麻酔してから、気管切開を受けさせた。肺中にＰＢＳ（１ｍＬ）を注入し、それを次いで吸引することにより、ＢＡＬを得た。この方法を繰り返し、約２ｍＬの洗浄液を与えた。血球計数板を用い、ＢＡＬＦ試料中の合計細胞数を測定した。２００ｒｐｍにおいて室温で５分間遠心することにより、ＢＡＬＦ試料のサイトスピンスメアを調製し、ＤｉｆｆＱｕｉｋ染色系（Ｄａｄｅ Ｂｅｈｒｉｎｇ）を用いて分別細胞カウントに関して染色した。油浸顕鏡を用いて細胞をカウントした。データを鼻洗浄液のｍＬ当たりの細胞の分別数（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｎｕｍｂｅｒ）として表わす（平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ）。

【0253】

マウスにおけるポリ−Ｉ：Ｃ−誘導細胞蓄積
特定の病原体を含まないＡ／Ｊマウス（雄，５週令）に、３日間麻酔下で（３％ イソフルラン）毎日２回、ポリ（Ｉ：Ｃ）−ＬＭＷ（１ｍｇ／ｍＬ，４０μＬ）（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を鼻内に投薬した。各ポリ−Ｉ：Ｃ処置から２時間前に、試験物質を鼻内に投薬した（１０％ＤＭＳＯ／等張食塩水ビヒクル中の５０μＬ）。最後のポリ−Ｉ：Ｃ挑戦から２４時間後、動物を麻酔し、気管にカニューレ挿入し、肺中に等張食塩水（１００ｍＬ／ｋｇ）を注入し、次いでそこから吸引することにより、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）を得た。位相差顕微鏡下で血球計数板を用い、ＢＡＬＦ試料中の合計細胞数を測定した。

【0254】

抗−マウスＭＯＭＡ２−ＦＩＴＣ（マクロファージ）又は抗−マウス７／４−ＦＩＴＣ（好中球）を用い、ＦＡＣＳ分析により肺胞マクロファージ及び好中球の割合を決定した。細胞をＰＢＳ中に懸濁させ、抗−ＭＯＭＡ２−ＦＩＴＣ（２μｇ／ｍＬ，カタログ番号ＳＭ０６５Ｆ，Ａｃｒｉｓ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ＧｍｂＨ，Ｈｅｒｆｏｒｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）又は抗−７／４−ＦＩＴＣ（２μｇ／ｍＬ，カタログ番号ＣＬ０５０Ｆ，Ａｃｒｉｓ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ＧｍｂＨ，Ｈｅｒｆｏｒｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）と一緒に３０℃で３０分間インキュベーションし、次いでヨウ化プロピジウム（２μｇ／ｍＬ）を用いて対比染色し、壊死細胞の排除を可能にした。細胞をＰＢＳで洗浄し、ＦＡＣＳ管に移した。試料をフローサイトメーター（ＡＬＴＲＡ ＩＩ；Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｊａｐａｎ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）中に置き、ｌｏｇ ｘ−軸を有する単一−パラメーターＦＬ２［ＰＭＴ２］（ＦＩＴＣ）ヒストグラムをプロットし、ＦＩＴＣの相対的な強度を示した。各細胞型の割合を計算するためのＫａｌｕｚａ分析ソフトウェア（ｖｅｒ １．２）を用いる続く分析のために、データファイルを保存した。

【0255】

タバコ煙モデル
小動物のためのタバコ煙吸入実験系（Ｔｏｂａｃｃｏ Ｓｍｏｋｅ Ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ Ｓｙｓｔｅｍ）（Ｍｏｄｅｌ ＳＩＳ−ＣＳ；Ｓｉｂａｔ
ａ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を用い、３０分間／日において１１日間、Ａ／Ｊマウス（雄，５週令）をタバコ煙に暴露した（４％タバコ煙，圧縮空気で希釈）。最後のタバコ煙暴露の後、１日１回３日間、試験物質を投与した（５０％ＤＭＳＯ／等張食塩水中の溶液の３５μＬを含んでなる鼻−内投薬）。

【0256】

最後の投薬量の投与から１２時間後、動物を麻酔し、気管にカニューレ挿入し、ＰＢＳ（１００ｍＬ／ｋｇ）を肺中に注入し、次いでそこから吸引することにより、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を行った。位相差顕微鏡下で血球計数板を用い、ＢＡＬＦ試料中の合計細胞数を測定した。抗−マウスＭＯＭＡ２−ＦＩＴＣ（マクロファージ）又は抗−マウス７／４（好中球）を用い、ＦＡＣＳ分析により洗浄液マクロファージ及び好中球の割合を決定した。

【0257】

細胞をＰＢＳ中に懸濁させ、抗−ＭＯＭＡ２−ＦＩＴＣ（２μｇ／ｍＬ，カタログ番号ＳＭ０６５Ｆ，Ａｃｒｉｓ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ＧｍｂＨ，Ｈｅｒｆｏｒｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）又は抗−７／４−ＦＩＴＣ（２μｇ／ｍＬ，カタログ番号ＣＬ０５０Ｆ，Ａｃｒｉｓ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ＧｍｂＨ，Ｈｅｒｆｏｒｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）と一緒に３０℃で３０分間インキュベーションし、ヨウ化プロピジウム（２μｇ／ｍＬ）を用いて対比染色もし、壊死細胞の排除を可能にした。細胞をＰＢＳで洗浄し、ＦＡＣＳ管に移した。試料をフローサイトメーター（ＡＬＴＲＡ ＩＩ；Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ
Ｊａｐａｎ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）中に置き、ｌｏｇ ｘ−軸を有する単一−パラメーターＦＬ２［ＰＭＴ２］（ＦＩＴＣ）ヒストグラムをプロットし、ＦＩＴＣの相対的な強度を示した。

【0258】

各細胞型の割合を計算するためのＫａｌｕｚａ分析ソフトウェア（ｖｅｒ １．２）を用いる続く分析のために、データファイルを保存した。Ｑｕｅｎｔｉｋｉｎｅ（登録商標）マウスＫＣ、ＭＣＰ１、ＴＮＦα、ＩＬ−１７又はオステオポンチンＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）を用い、ＢＡＬＦ中のＣＸＣＬ１（ＫＣ）、ＭＣＰ１、ＴＮＦα、ＩＬ−１７又はオステオポンチンのレベルを決定した。ＯｘｉＳｅｌｅｃｔ（登録商標） ＴＢＡＲＳ Ａｓｓａｙキット（ＭＤＡ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｉｎｃ，Ｓａｎ
Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いてマロンジアルデヒドの存在を測定した。

【0259】

試験管内及び生体内スクリーニングの結果のまとめ
上記の方法を用いて決定される式（Ｉ）の化合物の試験管内の側面を下記に示す（表５、６及び７）。本発明の化合物は、酵素アッセイにおいてＰＩ３Ｋδ及びγイソ型の両方の有力な阻害を示し、ＰＩ３Ｋαに対して阻害活性を示さず、ＰＩ３Ｋβに対して低い阻害活性しか示さない（表５）。

【0260】

これらの効果は、過酸化水素又はＭＣＰ−１を用いる細胞の刺激により誘導されるＡｋｔリン酸化の有力な阻害に言い直される。式（Ｉ）の化合物と一緒のインキュベーションから生ずる細胞生存率への効果は検出されなかった（表６）。さらに、本明細書に開示される式（Ｉ）の化合物を用いる細胞の処理は、Ｕ９３７細胞からのＲＯＳならびにｃｙｔｏｓｔｉｍ−挑戦ＰＢＭＣｓからのサイトカインの生産を阻害することが見出された（表７）。

【0261】

式（Ｉ）の化合物の代謝生成物の可能性のあるもの、すなわち対応するアルコール、化合物（Ｉａ）は、式（Ｉ）の化合物より有意に低い活性のＰＩ３Ｋδ及びγイソ型の両方の阻害剤であることは注目に値する（表６）。結局、式（Ｉａ）の化合物は式（Ｉ）の化合物より有意に低い活性のＵ９３７細胞からのＲＯＳ生産及びｃｙｔｏｓｔｉｍ−挑戦ＰＢＭＣｓからのサイトカイン生産の阻害剤である（表７）。

【0262】

【表4】

【0263】

【表5】

【0264】

【表6】

【0265】

マウス及びラットにおけるＬＰＳ−誘導気道好中球増加症への化合物（Ｉ）を用いる処置の効果を、それぞれ表８及び９に報告する。処置は両方の種においてＬＰＳ−誘導好中球増加症の用量−依存性阻害を生ずることが見出された。さらに、細胞蓄積への処置の阻害効果は、長い作用の持続時間を示すことが見出された。

【0266】

【表7】

【0267】

【表8】

【0268】

マウスにおけるアレルゲン挑戦−誘導気道好酸球増加症及び好中球増加症への化合物（Ｉ）を用いる処置の効果を表１０に報告する。本明細書に開示される化合物を用いるマウスの処置は、アレルゲン挑戦に続く気管支肺胞洗浄液中の好酸球及び好中球の両方の蓄積の用量−依存性阻害を生ずることが見出された。

【0269】

【表9】

【0270】

ポリ−Ｉ：Ｃへのマウスの暴露に続くＢＡＬＦ中におけるマクロファージ及び好中球蓄積への化合物（Ｉ）又は化合物Ａを用いる処置の効果も研究した。この直接の比較において、化合物（Ｉ）又は化合物Ａのいずれかを用いる処置は、ＢＡＬＦ中へのポリ−Ｉ：Ｃ−誘導マクロファージ及び好中球蓄積の用量−依存性阻害を生ずることが見出された（表１１）。化合物（Ｉ）が化合物Ａより有意により大きい効力を示すことは注目に値し、このデータを好中球に関してグラフで示す（図１）。

【0271】

【表10】

【0272】

【表11】

【0273】

タバコ煙への暴露の後のＢＡＬＦ中におけるマクロファージ及び好中球蓄積への化合物（Ｉ）を用いる処置の効果を決定した（表１２）。この研究のために用いられるタバコ煙モデルはコルチコステロイド無反応性系であると報告され［Ｔｏ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．著，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．，２０１０，１８２：８９７−９０４；Ｍｅｄｉｃｈｅｒｌａ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．著，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２００８，３２４：９２１−９］、データは、デキサメタゾン（０．３−１０ｍｇ／ｋｇ，経口的投与による）が不活性であったことを明らかにしている。ＢＡＬＦ好中球への、及び活性化肺胞マクロファージ数への化合物（Ｉ）を用いる処置の効果は、単独療法として投与される時にそれが抗−炎症活性を有することを示している。さらに、単独療法として有意な効果がない投薬量において化合物（Ｉ）をフルチカゾンプロピオネートと共−投与すると、抗−炎症活性の顕著な強化が検出された。同時の研究において、タバコ煙に暴露されたマウスの化合物Ａを用いる処置の効果を評価した。これらのデータと化合物（Ｉ）に関して上記で示したデータとの比較は、化合物（Ｉ）が、化合物Ａが有力であるよりもっと有力なネズミＢＡＬＦ中におけるタバコ煙誘導細胞蓄積の阻害剤であることを示している（図２）。

【0274】

タバコ煙暴露は、気管支肺胞洗浄液中の炎症マーカーＣＸＣＬ１、ＭＣＰ１、ＴＮＦα、ＩＬ１７、オステオポンチン及びマロンジアルデヒドの濃度も上昇させる。化合物（Ｉ）を用いる処置は、用量−依存的なやり方でバイオマーカーのそれぞれの濃度を低下させる。さらに、組み合わせにおいて化合物（Ｉ）及びフルチカゾンプロピオネートの両方を用いる処置は、化合物（Ｉ）のみを用いる処置で達成されるより大きいバイオマーカー濃度における低下を示した（表１３）。

【0275】

【表12】

【0276】

要するに、本発明の化合物はＰＩ３Ｋδ及びγイソ型の両方の有力な阻害剤である。試験管内の側面は、生体内における広い抗−炎症性表現型に言い換えられる。この設定において、気道におけるポリＩ：Ｃ−誘導細胞蓄積に対する本明細書に開示される化合物の阻害効果は顕著である。ＰＩ３Ｋδの選択的な阻害剤と異なり、本明細書に開示される化合物（Ｉ）を単独で用いる処置がタバコ煙誘導気道炎症の顕著な阻害を生ずること、ならびにコルチコステロイドのみを用いる処置が効果なしの条件下で、それがコルチコステロイド、フルチカゾンプロピオネートと共−投与されると、これらの効果がより低い投薬量で起こることも、特に衝撃的である。

【実施例15】

【0277】

化合物（Ｉ）を含んでなる製薬学的調剤
化合物（Ｉ）の組成物を以下の通りに乾燥粉末吸入器用に調製することができる：
化合物（Ｉ）をエアジェットミルのような適した方法により超微粉砕して、約２μｍのＤ５０値を与え、次いでステアリン酸マグネシウムを用いて、又は用いずにブレンドにおいて調製する。ブレンドを、乾燥粉末吸入器を介する吸入用の単位投薬量容器（例えばカプセル、ブリスター）中に充填する。例としての投薬量当たり２５ｍｇの充填重量を有し、投薬量当たり１〜１０００マイクログラム（ｍｃｇ）の範囲の投薬量濃度を有する、０〜１％のステアリン酸マグネシウムを含有する調剤の例を示す。投薬量当たり種々の濃度、ステアリン酸マグネシウムの種々の量及び種々の充填重量を用いることもできる。

【0278】

【表13】

【0279】

【表14】

【0280】

【表15】

【0281】

明細書及び続く特許請求の範囲を通じて、文脈がそうでないことを要求しなければ、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語ならびに変形、例えば「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含んでなる」は、述べられる整数、段階、整数の群又は段階の群の包含（ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ）を意味し、他の整数、段階、整数の群又は段階の群の排除を意味しないことが理解されるであろう。

【0282】

本明細書で引用されるすべての特許及び特許出願は、引用することによりそれらの記載事項全体が本明細書の内容となる。

【図1a】

【図1b】

【図2a】

【図2b】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】