特許 6355641 スプライソスタチン類似体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6355641

(24)【登録日】2018年6月22日

(45)【発行日】2018年7月11日

(54)【発明の名称】スプライソスタチン類似体

(51)【国際特許分類】

   C07D 309/14 20060101AFI20180702BHJP

   C07K 16/30 20060101ALI20180702BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20180702BHJP

   C07D 493/10 20060101ALI20180702BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20180702BHJP

   A61K 31/35 20060101ALI20180702BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20180702BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20180702BHJP

   A61K 31/351 20060101ALI20180702BHJP

   C07D 309/22 20060101ALI20180702BHJP

   A61K 31/453 20060101ALI20180702BHJP

   C07D 519/00 20060101ALI20180702BHJP

   A61K 31/397 20060101ALI20180702BHJP

   A61K 31/497 20060101ALI20180702BHJP

   A61K 31/501 20060101ALI20180702BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20180702BHJP

   A61K 47/50 20170101ALI20180702BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20180702BHJP

   A61K 47/30 20060101ALI20180702BHJP

   A61K 35/66 20150101ALI20180702BHJP

【ＦＩ】

   C07D309/14

   C07K16/30ZNA

   C12P21/08

   C07D493/10 CCSP

   A61P35/00

   A61K31/35

   A61K45/00

   A61P43/00 111

   A61P43/00 121

   A61K31/351

   C07D309/22

   A61K31/453

   C07D519/00 301

   A61K31/397

   A61K31/497

   A61K31/501

   A61K39/395 C

   A61K39/395 H

   A61K47/50

   A61K47/22

   A61K47/30

   A61K35/66

【請求項の数】42

【全頁数】347

(21)【出願番号】特願2015-540238(P2015-540238)

(86)(22)【出願日】2013年10月22日

(65)【公表番号】特表2015-535004(P2015-535004A)

(43)【公表日】2015年12月7日

(86)【国際出願番号】IB2013059553

(87)【国際公開番号】WO2014068443

(87)【国際公開日】20140508

【審査請求日】2016年9月28日

(31)【優先権主張番号】61/722,769

(32)【優先日】2012年11月5日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/723,645

(32)【優先日】2012年11月7日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/829,409

(32)【優先日】2013年5月31日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】593141953

【氏名又は名称】ファイザー・インク

(74)【代理人】

【識別番号】100133927

【弁理士】

【氏名又は名称】四本 能尚

(74)【代理人】

【識別番号】100137040

【弁理士】

【氏名又は名称】宮澤 純子

(74)【代理人】

【識別番号】100147186

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 眞紀

(74)【代理人】

【識別番号】100174447

【弁理士】

【氏名又は名称】龍田 美幸

(72)【発明者】

【氏名】ケネス ジョン ディリコ

(72)【発明者】

【氏名】アレサンドラ エス． ユースタキオ

(72)【発明者】

【氏名】マイケル エリック グリーン

(72)【発明者】

【氏名】ハイイン ヒー

(72)【発明者】

【氏名】ミン ヒー

(72)【発明者】

【氏名】フランク エリック コーン

(72)【発明者】

【氏名】クリストファー ジョン オドネル

(72)【発明者】

【氏名】スジエット パセンヴィーティル

(72)【発明者】

【氏名】アノウカ サヤニ ラトナヤキ

(72)【発明者】

【氏名】チャクラパニ スブラマニアム

(72)【発明者】

【氏名】ジェシ アレクサンダー テスキ

(72)【発明者】

【氏名】フイ ユ ヤング

【審査官】 杉江 渉

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００９−５０９９７７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１１／１３０５９８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１１／１３０６１３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 OSMAN S. et al，Evaluation of FR901464 analogues in vitro and in vivo，MedChemComm，２０１１年，vol.2, no.38，p.38-43

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ ２０１／００ − ５２１／００

Ａ６１Ｋ ３１／００ − ３１／８０

Ａ６１Ｋ ４７／００ − ４７／６９

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）の化合物

【化1】

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［式中、
破線は、任意選択の結合を表し、
各Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ^２は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
Ｒ^１は、−Ｒ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ^１３、−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５、−ＯＣＯＮ（Ｒ^１４）ＮＲ（Ｒ^１５）、＝Ｏ（酸素への二重結合）および−ＮＲ^１４Ｒ^１５からなる群から選択され、
Ｒ^２およびＲ^３は、水素およびＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^４およびＲ^５は、水素、−ＯＲ、−ＮＲ^１４Ｒ^１５およびオキソからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ならびにヒドロキシルおよびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_２〜５アルキリデンを形成し、
Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってオキソであり、または
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分は、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１〜６アルキルまたは−ＯＲであり、
Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−ＳＲおよび−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５から独立に選択され、
Ｒ^１３は、水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜８カルボシクリル、Ｃ_３〜８ヘテロシクリル、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_６〜１４アリール、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から選択され、Ｒ^１３は、−ＮＲＲまたは−ＳＯ_２ＮＲＲで置換されていてもよく、
各Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素、ヒドロキシル、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲＲ、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、
またはＲ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび（ｘｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒは、水素および−Ｃ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
各ｍは、独立に、０、１、２または３である］、
または薬学的に許容できるその塩。

【請求項2】

Ｒ^６およびＲ^７が、エポキシ環を形成し、またはＲ^９が、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｒ^１５、もしくは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５である、請求項１に記載の化合物または塩。

【請求項3】

Ｘ^１が、−Ｏ−であり、Ｘ^２が、−ＮＲ−であり、Ｒ^１が、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ^１３、−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５および−ＮＲ^１４Ｒ^１５からなる群から選択され、Ｒ^２が、Ｃ_１〜６アルキルであり、Ｒ^３が、Ｃ_１〜６アルキルであり、Ｒ^４が、水素または−ＯＲであり、Ｒ^５が、水素または−ＯＲであり、Ｒ^６およびＲ^７が、ヒドロキシル、およびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から各々独立に選択され、またはＲ^６およびＲ^７が、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分が、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、Ｒ^８が、水素または−ＯＲであり、Ｒ^９が、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｒ^１５、および−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５、から独立に選択され、Ｒ^１３が、水素、Ｃ_１〜６アルキルからなる群から選択され、またはＲ^１４およびＲ^１５のそれぞれが、水素、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、またはＲ^１４およびＲ^１５が、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環が、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８が、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび（ｘｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択される、請求項１に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項4】

Ｘ^２が、−ＮＨ−であり、Ｘ^１が、−Ｏ−であり、Ｒ^１が、−ＯＣＯＲ^１３、ＯＨまたは−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５であり、Ｒ^２が、メチルであり、Ｒ^３が、メチルであり、Ｒ^４が、−ＯＨであり、Ｒ^５が、水素であり、Ｒ^８が、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７が、一緒になってエポキシドを形成し、Ｒ^９が、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｒ^１５、または−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５であり、Ｒ^１３が、Ｃ_１〜６アルキルであり、Ｒ^１４およびＲ^１５が、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成する、請求項１に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項5】

【化2-1】

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【化2-2】

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【化2-3】

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【化2-4】

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【化2-5】

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【化2-6】

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【化2-7】

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【化2-8】

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【化2-9】

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【化2-10】

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【化2-11】

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からなる群から選択される請求項１に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。

【請求項6】

式ＩＩの化合物：
（Ｌ−Ｐ）
（ＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩
［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ^１−Ｌ^２−Ｌ^３であり、Ｌ^３は、Ｐに結合しており、
Ｐは、式（Ｉ）のラジカルであり、

【化3】

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式中、
破線は、任意選択の結合を表し、
各Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ^２は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ’は、ＣＲまたはＮであり、
各Ｘ’’は、Ｘ’’が、Ｌ^２またはさらなるＬ^３に結合している場合、ＣＨ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−もしくはＮ−であり、またはそうでなければ、Ｏ、Ｓ、ＣＲＲ、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲもしくはＮＲＲであり、
各Ｘ’’’は、Ｘ’’’が、Ｌ^２に結合している場合、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−もしくはＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−であり、またはそうでなければ、Ｒであり、
Ｙは、−Ｃ（Ｒ）_２−、−Ｏ−、−ＮＲ−または−Ｓ−であり、
Ｒ^１は、−Ｒ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ^１３、−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５、−ＯＣＯＮ（Ｒ^１４）ＮＲ（Ｒ^１５）、＝Ｏ（酸素への二重結合）および−ＮＲ^１４Ｒ^１５からなる群から選択され、
Ｒ^２およびＲ^３は、水素およびＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^４およびＲ^５は、水素、−ＯＲ、−ＮＲ^１４Ｒ^１５およびオキソからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ならびにヒドロキシルおよびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_２〜５アルキリデンを形成し、
Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってオキソであり、または
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分は、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１〜６アルキルまたは−ＯＲであり、
Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−であり、
Ｌ^１は、−ハロゲン、−ＮＲ_２、

【化4】

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から選択され、
Ｌ^２は、Ｌ^２Ａ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２ＣまたはＬ^２Ｃ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２Ａであり、
Ｌ^２Ａは、
−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＣ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−（ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル）_１〜４−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−および（−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−）_１〜２０から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ａは、存在せず、
Ｌ^２Ｂは、ＡＡ_０〜ａａから選択され、ＡＡは、天然または非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、但し、ＡＡ_０の場合、Ｌ^２Ｂは存在せず、
Ｌ^２Ｃは、

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および

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から選択され、またはＬ^２Ｃは、存在せず、
Ｌ^３は、−Ｃ_１〜６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８カルボシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−ＮＲ−、−ＮＲ−ＮＲ−および−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（２つのＲ基は接合して、４〜１０員環を形成してもよい）、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＳＯ_２−ＮＲ−、−ＳＯ_２−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−Ｃ（Ｏ）−、

【化5】

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の１つもしくは複数から選択され、またはＬ^３は、存在せず、
Ｒ^１３は、水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜８カルボシクリル、Ｃ_３〜８ヘテロシクリル、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_６〜１４アリール、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から選択され、Ｒ^１３は、−ＮＲＲまたは−ＳＯ_２ＮＲＲで置換されていてもよく、
各Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素、ヒドロキシル、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲＲ、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、
またはＲ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲ、および（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒは、水素および−Ｃ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
各ｍは、独立に、０、１、２または３である］。

【請求項7】

式ＩＩ’の化合物：
Ｌ−Ｐ’
（ＩＩ’）
または薬学的に許容できるその塩
［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ^１−Ｌ^２−Ｌ^３であり、Ｌ^３は、Ｐ’に結合しており、
Ｐ’は、式（Ｉ’）のラジカルであり、

【化6】

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式中、
破線は、任意選択の結合を表し、
各Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ^２は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ’は、ＣＲまたはＮであり、
各Ｘ’’は、Ｘ’’が、Ｌ^２またはさらなるＬ^３に結合している場合、ＣＨ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−もしくはＮ−であり、またはそうでなければ、Ｏ、Ｓ、ＣＲＲ、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲもしくはＮＲＲであり、
各Ｘ’’’は、Ｘ’’’が、Ｌ^２に結合している場合、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−もしくはＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−であり、またはそうでなければ、Ｒであり、
Ｙは、−Ｃ（Ｒ）_２−、−Ｏ−、−ＮＲ−または−Ｓ−であり、
Ｒ^１は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−、−ＯＲ’’、−ＯＣＯＲ^１３’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲＲ^１４’、−ＯＣＯＮ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）−、および−ＮＲ−からなる群から選択され、
Ｒ^２およびＲ^３は、水素およびＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^４およびＲ^５は、水素、−ＯＲ、−ＮＲ^１４Ｒ^１５およびオキソからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ならびにヒドロキシルおよびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_２〜５アルキリデンを形成し、
Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってオキソであり、または
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分は、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１〜６アルキルまたは−ＯＲであり、
Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−ＳＲおよび−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５、から独立に選択され、
Ｌ^１は、−ハロゲン、−ＮＲ_２、

【化7】

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から選択され、
Ｌ^２は、Ｌ^２Ａ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２ＣまたはＬ^２Ｃ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２Ａであり、
Ｌ^２Ａは、
−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＣ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−（ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル）_１〜４−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−および（−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−）_１〜２０から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ａは、存在せず、
Ｌ^２Ｂは、ＡＡ_０〜ａａから選択され、ＡＡは、天然または非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、但し、ＡＡ_０の場合、Ｌ^２Ｂは存在せず、
Ｌ^２Ｃは、

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および

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から選択され、またはＬ^２Ｃは、存在せず、
Ｌ^３は、−Ｃ_１〜６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８カルボシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−ＮＲ−、−ＮＲ−ＮＲ−および−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（２つのＲ基は接合して、４〜１０員環を形成してもよい）、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＳＯ_２−ＮＲ−、−ＳＯ_２−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−Ｃ（Ｏ）−、

【化8】

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の１つもしくは複数から選択され、またはＬ^３は、存在せず、
Ｒ^１３’は、結合、−Ｃ_１〜６アルキレン−、−Ｃ_３〜８カルボシクリル−、−Ｃ_３〜８ヘテロシクリル−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_６〜１４アリール−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_５〜１４ヘテロアリール−からなる群から選択され、
各Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素、ヒドロキシル、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲＲ、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、
またはＲ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒ^１４’は、結合、−ＮＲ−、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル−、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ−、および−Ｃ_１〜６アルキレン−からなる群から独立に選択され、
Ｒ^１４’は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−ＮＲＲまたは−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒは、水素および−Ｃ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
各Ｒ’は、−Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_８ヘテロアルキルおよびアリールから独立に選択され、
各Ｒ’’は、結合および−Ｃ_１〜６アルキレン−からなる群から独立に選択され、
各ｍは、独立に、０、１、２または３である］。

【請求項8】

Ｌ^１が、

【化9】

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であり、Ｌ^２Ａ、Ｌ^２Ｂ、Ｌ^２ＣおよびＬ^３が、全て存在しない、請求項６または７に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項9】

Ｒ^６が、−ＯＨであり、Ｒ^７が、ハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルである、請求項６または７に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項10】

Ｘ^２が、−ＮＨ−であり、Ｘ^１が、−Ｏ−であり、Ｒ^１が、−ＯＣＯＲ^１３、−ＯＨまたは−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５であり、Ｒ^２が、メチルであり、Ｒ^３が、メチルであり、Ｒ^４が、−ＯＨであり、Ｒ^５が、水素であり、Ｒ^８が、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７が、一緒になってエポキシドを形成し、Ｒ^１３が、Ｃ_１〜６アルキルであり、Ｒ^１４およびＲ^１５が、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、Ｌ^１が、

【化10】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｌ^２Ａ、Ｌ^２Ｂ、Ｌ^２ＣおよびＬ^３が、全て存在しない、請求項６に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項11】

Ｘ^２が、−ＮＨ−であり、Ｘ^１が、−Ｏ−であり、Ｒ^１が、−ＯＣＯＲ^１３、−ＯＨまたは−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５であり、Ｒ^２が、メチルであり、Ｒ^３が、メチルであり、Ｒ^４が、−ＯＨであり、Ｒ^５が、水素であり、Ｒ^８が、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７が、一緒になってエポキシドを形成し、Ｒ^１３が、Ｃ_１〜６アルキルであり、Ｒ^１４およびＲ^１５が、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、Ｌ^１が、ハロゲンであり、Ｌ^３が、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲであり、Ｌ^２Ａが、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−であり、Ｌ^２ＢおよびＬ^２Ｃが、存在しない、請求項６に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項12】

Ｒ１が、−ＯＣＯＲ^１３または−ＯＲであり、Ｒ^２が、メチルであり、Ｒ^３が、メチルであり、Ｒ^４が、−ＯＨであり、Ｒ^５が、水素であり、Ｒ^８が、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７が、エポキシドを形成し、Ｌ^３が、−ＮＲ−ＮＲ−（各Ｒが、水素もしくはメチルであり、または２つのＲ置換基が、一緒になって６員環を形成する）であり、Ｌ^１が、ハロゲン、−ＮＲ^２または

【化11】

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であり、Ｌ^２Ｃが、

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｌ^２Ｂが、−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−であり、Ｌ^２Ａが、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−である、請求項６に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項13】

Ｒ^１が、−ＯＣＯＲ^１３または−ＯＲであり、Ｒ^２が、メチルであり、Ｒ^３が、メチルであり、Ｒ^４が、−ＯＨであり、Ｒ^５が、水素であり、Ｒ^８が、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７が、エポキシドを形成し、Ｌ^３が、−ＮＲ−ＮＲ−（各Ｒが、水素もしくはメチルであり、または２つのＲ置換基が、一緒になって６員環を形成する）であり、Ｌ^１が、ハロゲン、−ＮＲ^２または

【化12】

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であり、Ｌ^２Ｃが、存在せず、Ｌ^２Ｂが、−Ａｌａ−Ｖａｌ−であり、Ｌ^２Ａが、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−または−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−である、請求項６に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項14】

Ｌ^１が、−ハロゲン、−ＮＲ_２、

【化13】

[この文献は図面を表示できません]

から選択される、請求項６または７に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項15】

Ｒ^１が、−ＯＣＯＲ^１３’であり、Ｒ^２が、メチルであり、Ｒ^３が、メチルであり、Ｒ^４が、−ＯＨであり、Ｒ^５が、水素であり、Ｒ^８が、水素であり、Ｒ^９が、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｒ^１５であり、Ｒ^１３’が、結合であり、Ｌ^３が、

【化14】

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であり、式中、ｍが、０であり、Ｘ’が、Ｎであり、Ｘ’’が、−Ｎ−であり、Ｘ’’’が、存在せず、Ｌ^１が、ハロゲンであり、Ｌ^２Ｃが、

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であり、Ｌ^２Ｂが、−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−であり、Ｌ^２Ａが、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−である、請求項７に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項16】

Ｘ^１が、−Ｏ−であり、Ｘ^２が、−ＮＲ−であり、Ｒ^１が、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ^１３、−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５および−ＮＲ^１４Ｒ^１５からなる群から選択され、Ｒ^２が、Ｃ_１〜６アルキルであり、Ｒ^３が、Ｃ_１〜６アルキルであり、Ｒ^４が、水素または−ＯＲであり、Ｒ^５が、水素または−ＯＲであり、Ｒ^６およびＲ^７が、ヒドロキシル、およびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から各々独立に選択され、またはＲ^６およびＲ^７が、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分が、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、Ｒ^８が、水素または−ＯＲであり、Ｒ^１３が、水素、Ｃ_１〜６アルキルからなる群から選択され、またはＲ^１４およびＲ^１５のそれぞれが、水素、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、またはＲ^１４およびＲ^１５が、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環が、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８が、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択される、請求項６
に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項17】

【化15-1】

[この文献は図面を表示できません]

【化15-2】

[この文献は図面を表示できません]

【化15-3】

[この文献は図面を表示できません]

【化15-4】

[この文献は図面を表示できません]

【化15-5】

[この文献は図面を表示できません]

【化15-6】

[この文献は図面を表示できません]

【化15-7】

[この文献は図面を表示できません]

【化15-8】

[この文献は図面を表示できません]

【化15-9】

[この文献は図面を表示できません]

【化15-10】

[この文献は図面を表示できません]

【化15-11】

[この文献は図面を表示できません]

【化15-12】

[この文献は図面を表示できません]

からなる群から選択される請求項６または７に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。

【請求項18】

式ＩＩＩの化合物：
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ）_ｂ
（ＩＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩
［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ^１−Ｌ^２−Ｌ^３であり、Ｌ^３は、Ｐに結合しており、
Ｐは、式（Ｉ）のラジカルであり、

【化16】

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式中、
破線は、任意選択の結合を表し、
ＡＢは、抗体であり、
各Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ^２は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ’は、ＣＲまたはＮであり、
各Ｘ’’は、Ｘ’’が、Ｌ^２またはさらなるＬ^３に結合している場合、ＣＨ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−もしくはＮ−であり、またはそうでなければ、Ｏ、Ｓ、ＣＲＲ、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲもしくはＮＲＲであり、
各Ｘ’’’は、Ｘ’’’が、Ｌ^２に結合している場合、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−もしくはＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−であり、またはそうでなければ、Ｒであり、
Ｙは、−Ｃ（Ｒ）_２−、−Ｏ−、−ＮＲ−または−Ｓ−であり、
Ｒ^１は、−Ｒ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ^１３、−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５、−ＯＣＯＮ（Ｒ^１４）ＮＲ（Ｒ^１５）、＝Ｏ（酸素への二重結合）および−ＮＲ^１４Ｒ^１５からなる群から選択され、
Ｒ^２およびＲ^３は、水素およびＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^４およびＲ^５は、水素、−ＯＲ、−ＮＲ^１４Ｒ^１５およびオキソからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ならびにヒドロキシルおよびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_２〜５アルキリデンを形成し、
Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってオキソであり、または
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分は、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１〜６アルキルまたは−ＯＲであり、
Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−であり、
Ｌ^１は、ＡＢへの結合、−ＮＲ−（ＡＢへの結合）および

【化17】

[この文献は図面を表示できません]

から選択され、
Ｌ^２は、Ｌ^２Ａ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２ＣまたはＬ^２Ｃ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２Ａであり、
Ｌ^２Ａは、
−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＣ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−（ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル）_１〜４−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−および（−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−）_１〜２０から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ａは、存在せず、
Ｌ^２Ｂは、ＡＡ_０〜ａａから選択され、ＡＡは、天然または非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、但し、ＡＡ_０の場合、Ｌ^２Ｂは存在せず、
Ｌ^２Ｃは、

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および

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から選択され、またはＬ^２Ｃは、存在せず、
Ｌ^３は、−Ｃ_１〜６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８カルボシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−ＮＲ−、−ＮＲ−ＮＲ−および−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（２つのＲ基は接合して、４〜１０員環を形成してもよい）、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＳＯ_２−ＮＲ−、−ＳＯ_２−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−Ｃ（Ｏ）−、

【化18】

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の１つもしくは複数から選択され、またはＬ^３は、存在せず、
Ｒ^１３は、水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜８カルボシクリル、Ｃ_３〜８ヘテロシクリル、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_６〜１４アリール、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から選択され、Ｒ^１３は、−ＮＲＲまたは−ＳＯ_２ＮＲＲで置換されていてもよく、
各Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素、ヒドロキシル、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲＲ、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、
またはＲ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲ、および（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒは、水素および−Ｃ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
ｂは、１〜２０であり、
各ｍは、独立に、０、１、２または３である］。

【請求項19】

式ＩＩＩ’の化合物：
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ’）_ｂ
（ＩＩＩ’）
または薬学的に許容できるその塩
［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ^１−Ｌ^２−Ｌ^３であり、Ｌ^３は、Ｐ’に結合しており、
Ｐ’は、式（Ｉ’）のラジカルであり、

【化19】

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式中、
破線は、任意選択の結合を表し、
ＡＢは、抗体であり、
各Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ^２は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ’は、ＣＲまたはＮであり、
各Ｘ’’は、Ｘ’’が、Ｌ^２またはさらなるＬ^３に結合している場合、ＣＨ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−もしくはＮ−であり、またはそうでなければ、Ｏ、Ｓ、ＣＲＲ、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲもしくはＮＲＲであり、
各Ｘ’’’は、Ｘ’’’が、Ｌ^２に結合している場合、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−もしくはＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−であり、またはそうでなければ、Ｒであり、
Ｙは、−Ｃ（Ｒ）_２−、−Ｏ−、−ＮＲ−または−Ｓ−であり、
Ｒ^１は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−、−ＯＲ’’、−ＯＣＯＲ^１３’、−ＯＣＯＮＲＲ^１４’、−ＯＣＯＮ（Ｒ^１４）Ｎ（Ｒ^１５）−、および−ＮＲ^１４−からなる群から選択され、
Ｒ^２およびＲ^３は、水素およびＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^４およびＲ^５は、水素、−ＯＲ、−ＮＲ^１４Ｒ^１５およびオキソからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ならびにヒドロキシルおよびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_２〜５アルキリデンを形成し、
Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってオキソであり、または
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分は、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１〜６アルキルまたは−ＯＲであり、
Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−ＳＲおよび−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５、から独立に選択され、
Ｌ^１は、ＡＢへの結合、−ＮＲ−（ＡＢへの結合）および

【化20】

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から選択され、
Ｌ^２は、Ｌ^２Ａ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２ＣまたはＬ^２Ｃ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２Ａであり、
Ｌ^２Ａは、
−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＣ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−（ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル）_１〜４−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−および（−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−）_１〜２０から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ａは、存在せず、
Ｌ^２Ｂは、ＡＡ_０〜ａａから選択され、ＡＡは、天然または非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、但し、ＡＡ_０の場合、Ｌ^２Ｂは存在せず、
Ｌ^２Ｃは、

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および

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から選択され、またはＬ^２Ｃは、存在せず、
Ｌ^３は、−Ｃ_１〜６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８カルボシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−ＮＲ−、−ＮＲ−ＮＲ−および−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（２つのＲ基は接合して、４〜１０員環を形成してもよい）、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＳＯ_２−ＮＲ−、−ＳＯ_２−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−Ｃ（Ｏ）−、

【化21】

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の１つもしくは複数から選択され、またはＬ^３は、存在せず、
Ｒ^１３’は、結合、−Ｃ_１〜６アルキレン−、−Ｃ_３〜８カルボシクリル−、−Ｃ_３〜８ヘテロシクリル−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_６〜１４アリール−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_５〜１４ヘテロアリール−からなる群から選択され、
各Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素、ヒドロキシル、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲＲ、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、
またはＲ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒ^１４’は、結合、−ＮＲ−、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル−、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ−、および−Ｃ_１〜６アルキレン−からなる群から独立に選択され、
Ｒ^１４’は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−ＮＲＲまたは−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒは、水素および−Ｃ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
各Ｒ’は、−Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_８ヘテロアルキルおよびアリールから独立に選択され、
各Ｒ’’は、結合および−Ｃ_１〜６アルキレン−からなる群から独立に選択され、
ｂは、１〜２０であり、
各ｍは、独立に、０、１、２または３である］。

【請求項20】

Ｘ^１が、−Ｏ−であり、Ｘ^２が、−ＮＲ−であり、Ｒ^１が、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ^１３、−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５および−ＮＲ^１４Ｒ^１５からなる群から選択され、Ｒ^２が、Ｃ_１〜６アルキルであり、Ｒ^３が、Ｃ_１〜６アルキルであり、Ｒ^４が、水素または−ＯＲであり、Ｒ^５が、水素または−ＯＲであり、Ｒ^６およびＲ^７が、ヒドロキシル、およびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から各々独立に選択され、またはＲ^６およびＲ^７が、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分が、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、Ｒ^８が、水素または−ＯＲであり、Ｒ^１３が、水素、Ｃ_１〜６アルキルからなる群から選択され、またはＲ^１４およびＲ^１５のそれぞれが、水素、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、またはＲ^１４およびＲ^１５が、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環が、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８が、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび（ｘｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択される、請求項１８に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項21】

Ｘ^２が、−ＮＨ−であり、Ｘ^１が、−Ｏ−であり、Ｒ^１が、−ＯＣＯＲ^１３、ＯＨまたは−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５であり、Ｒ^２が、メチルであり、Ｒ^３が、メチルであり、Ｒ^４が、−ＯＨであり、Ｒ^５が、水素であり、Ｒ^８が、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７が、一緒になってエポキシドを形成し、Ｒ^１３が、Ｃ_１〜６アルキルであり、Ｒ^１４およびＲ^１５が、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、Ｌ^１が、ＡＢへの結合および−ＮＲ−（ＡＢへの結合）から選択され、Ｌ^２Ａ、Ｌ^２Ｂ、Ｌ^２ＣおよびＬ^３が、全て存在しない、請求項１８に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項22】

Ｘ^２が、−ＮＨ−であり、Ｘ^１が、−Ｏ−であり、Ｒ^１が、−ＯＣＯＲ^１３、ＯＨまたは−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５であり、Ｒ^２が、メチルであり、Ｒ^３が、メチルであり、Ｒ^４が、−ＯＨであり、Ｒ^５が、水素であり、Ｒ^８が、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７が、一緒になってエポキシドを形成し、Ｒ^１３が、Ｃ_１〜６アルキルであり、Ｒ^１４およびＲ^１５が、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、Ｌ^１が、ＡＢへの結合および−ＮＲ−（ＡＢへの結合）から選択され、Ｌ^３が、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲであり、Ｒが、水素であり、アルキル基が、エチルであり、Ｌ^２Ａが、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−であり、Ｌ^２ＢおよびＬ^２Ｃが、存在しない、請求項１８に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項23】

Ｘ^２が、−ＮＨ−であり、Ｘ^１が、−Ｏ−であり、Ｒ^１が、−ＯＣＯＲ^１３であり、Ｒ^２が、メチルであり、Ｒ^３が、メチルであり、Ｒ^４が、−ＯＨであり、Ｒ^５が、水素であり、Ｒ^８が、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７が、一緒になってエポキシドを形成し、Ｒ^１３が、Ｃ_１〜６アルキルであり、Ｒ^１４およびＲ^１５が、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、Ｌ^１が、ＡＢへの結合および−ＮＲ−（ＡＢへの結合）から選択され、Ｌ^３が、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲであり、Ｒが、水素であり、アルキル基が、エチルであり、Ｌ^２Ａが、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−であり、Ｌ^２ＢおよびＬ^２Ｃが、存在しない、請求項１８に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項24】

Ｒ^１が、−ＯＣＯＲ^１３または−ＯＲであり、Ｒ^２が、メチルであり、Ｒ^３が、メチルであり、Ｒ^４が、−ＯＨであり、Ｒ^５が、水素であり、Ｒ^８が、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７が、エポキシドを形成し、Ｌ^３が、−ＮＲ−ＮＲ−（各Ｒが、水素もしくはメチルであり、または２つのＲ置換基が、一緒になって６員環を形成する）であり、Ｌ^１が、ＡＢへの結合から選択され、Ｌ^２Ｃが、

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｌ^２Ｂが、−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−であり、Ｌ^２Ａが、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−である、請求項１８に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項25】

Ｒ^１が、−ＯＣＯＲ^１３または−ＯＲであり、Ｒ^２が、メチルであり、Ｒ^３が、メチルであり、Ｒ^４が、−ＯＨであり、Ｒ^５が、水素であり、Ｒ^８が、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７が、エポキシドを形成し、Ｌ^３が、−ＮＲ−ＮＲ−（各Ｒが、水素もしくはメチルであり、または２つのＲ置換基が、一緒になって６員環を形成する）であり、Ｌ^１が、ＡＢへの結合および−ＮＲ−（ＡＢへの結合）から選択され、Ｌ^２Ｃが、

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｌ^２Ｂが、−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−であり、Ｌ^２Ａが、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−である、請求項１８に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項26】

Ｌ^２Ｃが、存在せず、Ｌ^２Ｂが、−Ａｌａ−Ｖａｌ−であり、Ｌ^２Ａが、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−である、請求項１８または１９に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項27】

Ｌ^１が、ＡＢへの結合、−ＮＲ−（ＡＢへの結合）および

【化22】

[この文献は図面を表示できません]

から選択される、請求項１８または１９に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項28】

前記抗体が、トラスツズマブおよびＫ３９２Ｃ＋Ｌ４４３Ｃトラスツズマブ変異体から選択される、請求項１８または１９に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項29】

前記抗体が、トランスグルタミナーゼの存在下でポリペプチド工学によって反応性が付与されたアシルドナーグルタミン含有タグまたは内因性グルタミンで操作されたＦｃ含有またはＦａｂ含有ポリペプチドを介して結合している、請求項１８または１９に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。

【請求項30】

【化23-1】

[この文献は図面を表示できません]

【化23-2】

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【化23-3】

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【化23-4】

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【化23-5】

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【化23-6】

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【化23-7】

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【化23-8】

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【化23-9】

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【化23-10】

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【化23-11】

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【化23-12】

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【化23-13】

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【化23-14】

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【化23-15】

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（式中、−Ｘまたは−Ｓ−Ｘは、抗体ＡＢを表す）
からなる群から選択される、請求項１８または１９に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。

【請求項31】

前記抗体ＡＢが、トラスツズマブ、トラスツズマブ変異体、オレゴボマブ、エドレコロマブ、セツキシマブ、ビトロネクチン受容体（α_ｖβ_３）に対するヒト化モノクローナル抗体、アレムツズマブ、非ホジキンリンパ腫の処置のためのヒト化抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体、１３１Ｉ Ｌｙｍ−１、非ホジキンリンパ腫の処置のためのマウス抗ＨＬＡ−Ｄｒ１０抗体、ホジキン病または非ホジキンリンパ腫の処置のためのヒト化抗ＣＤ２ｍＡｂ、ラベツズマブ、ベバシズマブ、イブリツモマブチウキセタン、オファツムマブ、パニツムマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、イピリムマブ、ゲムツズマブ、癌胎児性タンパク質受容体５Ｔ４に対するヒト化モノクローナル抗体、Ｍ１／７０（ＣＤ１１ｂ受容体に対する抗体）、および他の抗体から選択される、請求項１８から３０のいずれか一項に記載の化合物または塩。

【請求項32】

Ｐが、請求項１から６に記載の化合物のラジカルを表す、請求項６、７、１８および１９のいずれか一項に記載の化合物または塩。

【請求項33】

Ｌが、１つまたは複数の独立に選択されるアミノ酸ジラジカルを含む、請求項６、７、１８および１９のいずれか一項に記載の化合物または塩。

【請求項34】

Ｌが、バリン、シトルリン、フェニルアラニン、リシン、アラニンおよびグリシンからなる群から選択される１つまたは複数の独立に選択されるアミノ酸ジラジカルを含む、請求項６、７、１８および１９のいずれか一項に記載の化合物または塩。

【請求項35】

Ｌが、細胞内プロテアーゼによって、Ｐ、またはＰを含むラジカルから切断されることができる、請求項６、７、１８および１９のいずれか一項に記載の化合物または塩。

【請求項36】

ＡＢが、ＡＢのシステイン残基を介して硫黄または硫黄−硫黄結合を介してアミノ酸ジラジカルに付着している、請求項１８または１９に記載の化合物または塩。

【請求項37】

ＡＢが、リシン残基を介してアミノ酸ジラジカルに付着している、請求項１８または１９に記載の化合物または塩。

【請求項38】

ＡＢが、ＡＢのグルタミン残基を介してアミド結合を介してアミノ酸ジラジカルに付着している、請求項１８または１９に記載の化合物または塩。

【請求項39】

前記抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体または抗体フラグメントである、請求項１８から３０のいずれか一項に記載の化合物または塩。

【請求項40】

有効量の請求項１から３９のいずれか一項に記載の化合物もしくは塩、または薬学的に許容できる賦形剤、担体もしくは添加剤を含む医薬組成物。

【請求項41】

チューブリン形成阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、およびＤＮＡ結合剤からなる群から選択される治療有効量の化学療法剤をさらに含む、請求項４０に記載の医薬組成物。

【請求項42】

がんを処置するための、請求項４０に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、これらの全てが参照により本明細書にその全体が組み込まれている、２０１２年１１月５日に出願された米国特許仮出願第６１／７２２，７６９号、２０１２年１１月７日に出願された米国特許仮出願第６１／７２３，６４５号、および２０１３年５月３１日に出願された米国特許仮出願第６１／８２９，４０９号の利益を主張するものである。

【0002】

本発明は、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）におけるペイロードとして有用な新規な天然物に由来し、かつ／またはスプライソスタチンをベースとする化合物、およびＡＤＣに関連して有用なペイロード−リンカー化合物を対象とする。本発明はさらに、上記のペイロード、ペイロード−リンカーおよびＡＤＣを含む組成物、ならびにがんを含めた病的状態を処置するためのこれらのペイロード、ペイロード−リンカーおよびＡＤＣを使用する方法に関する。

【背景技術】

【0003】

直接またはリンカーを介した抗体への薬物のコンジュゲーションは、薬物のコンジュゲーションのための化学基の同一性および場所、薬物放出の機序、薬物放出を実現する構造的要素、ならびに放出された遊離薬物への構造修飾を含めた種々の要因を考慮することが関与する。さらに、抗体の内部移行の後に薬物が放出される場合、薬物放出の機序はコンジュゲートの細胞内輸送と調和しなくてはならない。

【0004】

いくつかの異なる薬物クラスが抗体を介した送達のために試みられてきたなかで、僅かに少数の薬物クラスが適切な毒性プロファイルを有しつつ抗体薬物コンジュゲートとして効果的であると証明されてきた。

【0005】

天然物であるＦＲ９０１４６３、ＦＲ９０１４６４、およびＦＲ９０１４６５は、ヒトがん細胞系に対する強力な阻害活性、およびいくつかの異種移植片腫瘍モデルにおける有効性を有すると報告された。（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ（１９９６）、４９（１２）、１２０４〜１２１１）。天然物であるＦＲ９０１４６４、およびスプライソスタチンＡと称されるそのメチルケタールは、必要不可欠な部分複合体であるＵ２ ｓｎＲＮＡの構成要素であるＳＦ３ｂとの相互作用によってスプライソゾームを阻害すると最近報告された。（Ｎａｔｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００７）、３（９）、５７６〜５８３；Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）（２０１０）、４６８（７３２４）、６６４〜６６８）。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明は、化合物およびこれらを含む医薬組成物、これらの調製、ならびに該化合物の、これらに限定されないが主として抗がん剤としての使用に関する。

【課題を解決するための手段】

【0007】

一態様によれば、本発明は、式（Ｉ）の化合物（複数可）、

【0008】

【化1】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
破線は、任意選択の結合を表し、
各Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ^２は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
Ｒ^１は、−Ｒ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ^１３、−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５、−ＯＣＯＮ（Ｒ^１４）ＮＲ（Ｒ^１５）、＝Ｏ（酸素への二重結合）および−ＮＲ^１４Ｒ^１５からなる群から選択され、
Ｒ^２およびＲ^３は、水素およびＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^４およびＲ^５は、水素、−ＯＲ、−ＮＲ^１４Ｒ^１５およびオキソからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ならびにヒドロキシルおよびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_２〜５アルキリデンを形成し、
Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってオキソであり、または
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分は、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１〜６アルキルまたは−ＯＲであり、
Ｒ^９は、水素、−Ｃ_１〜６アルキル、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−ＳＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＲ^１３および−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５から独立に選択され、
Ｒ^１３は、水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜８カルボシクリル、Ｃ_３〜８ヘテロシクリル、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_６〜１４アリール、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から選択され、Ｒ^１３は、−ＮＲＲまたは−ＳＯ_２ＮＲＲで置換されていてもよく、
各Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素、ヒドロキシル、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲＲ、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、
またはＲ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒは、水素および−Ｃ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
各ｍは、独立に、０、１、２または３である]、
または薬学的に許容できるその塩に関する。

【0009】

別の態様によれば、本発明は、式（ＩＩ）の化合物（複数可）、
Ｌ−Ｐ
（ＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩
[式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ^１−Ｌ^２−Ｌ^３であり、Ｌ^３は、Ｐに結合しており、
Ｐは、式（Ｉ）のラジカルであり、

【0010】

【化2】

[この文献は図面を表示できません]

式中、
破線は、任意選択の結合を表し、
各Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ^２は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ’は、ＣＲまたはＮであり、
各Ｘ’’は、Ｘ’’が、Ｌ^２またはさらなるＬ^３に結合している場合、ＣＨ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−もしくはＮ−であり、またはそうでなければ、Ｏ、Ｓ、ＣＲＲ、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲもしくはＮＲＲであり、
各Ｘ’’’は、Ｘ’’’が、Ｌ^２に結合している場合、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−もしくはＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−であり、またはそうでなければ、Ｒであり、
Ｙは、−Ｃ（Ｒ）_２−、−Ｏ−、−ＮＲ−または−Ｓ−であり、
Ｒ^１は、−Ｒ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ^１３、−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５、−ＯＣＯＮ（Ｒ^１４）ＮＲ（Ｒ^１５）、＝Ｏ（酸素への二重結合）および−ＮＲ^１４Ｒ^１５からなる群から選択され、
Ｒ^２およびＲ^３は、水素およびＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^４およびＲ^５は、水素、−ＯＲ、−ＮＲ^１４Ｒ^１５およびオキソからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ならびにヒドロキシルおよびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_２〜５アルキリデンを形成し、
Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってオキソであり、または
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分は、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１〜６アルキルまたは−ＯＲであり、
Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−または−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−であり、
Ｌ^１は、−ハロゲン、−ＮＲ_２、

【0011】

【化3】

[この文献は図面を表示できません]

から選択され、
Ｌ^２は、Ｌ^２Ａ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２ＣまたはＬ^２Ｃ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２Ａであり、
Ｌ^２Ａは、
−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＣ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−（ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル）_１〜４−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−および（−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−）_１〜２０から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ａは、存在せず、
Ｌ^２Ｂは、ＡＡ_０〜ａａから選択され、ＡＡは、天然または非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ^２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ｃは、存在せず、
Ｌ^３は、−Ｃ_１〜６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８カルボシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−ＮＲ−、−ＮＲ−ＮＲ−および−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（２つのＲ基は接合して、４〜１０員環を形成してもよい）、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＳＯ_２−ＮＲ−、−ＳＯ_２−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−Ｃ（Ｏ）−、

【0012】

【化4】

[この文献は図面を表示できません]

の１つもしくは複数から選択され、またはＬ^３は、存在せず、
Ｒ^１３は、水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜８カルボシクリル、Ｃ_３〜８ヘテロシクリル、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_６〜１４アリール、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から選択され、Ｒ^１３は、−ＮＲＲまたは−ＳＯ_２ＮＲＲで置換されていてもよく、
各Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素、ヒドロキシル、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲＲ、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、
またはＲ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲ、および（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒは、水素および−Ｃ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
各ｍは、独立に、０、１、２または３である]
に関する。

【0013】

別の態様によれば、本発明は、式（ＩＩ’）の化合物（複数可）、
Ｌ−Ｐ’
（ＩＩ’）
または薬学的に許容できるその塩
［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ^１−Ｌ^２−Ｌ^３であり、Ｌ^３は、Ｐ’に結合しており、
Ｐ’は、式（Ｉ’）のラジカルであり、

【0014】

【化5】

[この文献は図面を表示できません]

式中、
破線は、任意選択の結合を表し、
各Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ^２は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ’は、ＣＲまたはＮであり、
各Ｘ’’は、Ｘ’’が、Ｌ^２またはさらなるＬ^３に結合している場合、ＣＨ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−もしくはＮ−であり、またはそうでなければ、Ｏ、Ｓ、ＣＲＲ、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲもしくはＮＲＲであり、
各Ｘ’’’は、Ｘ’’’が、Ｌ^２に結合している場合、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−もしくはＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−であり、またはそうでなければ、Ｒであり、
Ｙは、−Ｃ（Ｒ）_２−、−Ｏ−、−ＮＲ−または−Ｓ−であり、
Ｒ^１は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−、−ＯＲ’’、−ＯＣＯＲ^１３’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲＲ^１４’、−ＯＣＯＮ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）−、および−ＮＲ−からなる群から選択され、
Ｒ^２およびＲ^３は、水素およびＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^４およびＲ^５は、水素、−ＯＲ、−ＮＲ^１４Ｒ^１５およびオキソからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ならびにヒドロキシルおよびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_２〜５アルキリデンを形成し、
Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってオキソであり、または
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分は、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１〜６アルキルまたは−ＯＲであり、
Ｒ^９は、水素、−Ｃ_１〜６アルキル、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−ＳＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｎ（Ｒ）ＣＯＲ^１３および−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ^１４（Ｒ）Ｒ^１５から独立に選択され、
Ｌ^１は、−ハロゲン、−ＮＲ_２、

【0015】

【化6】

[この文献は図面を表示できません]

から選択され、
Ｌ^２は、Ｌ^２Ａ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２ＣまたはＬ^２Ｃ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２Ａであり、
Ｌ^２Ａは、
−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＣ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−（ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル）_１〜４−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−および（−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−）_１〜２０から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ａは、存在せず、
Ｌ^２Ｂは、ＡＡ_０〜ａａから選択され、ＡＡは、天然または非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ^２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ｃは、存在せず、
Ｌ^３は、−Ｃ_１〜６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８カルボシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−ＮＲ−、−ＮＲ−ＮＲ−および−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（２つのＲ基は接合して、４〜１０員環を形成してもよい）、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＳＯ_２−ＮＲ−、−ＳＯ_２−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−Ｃ（Ｏ）−、

【0016】

【化7】

[この文献は図面を表示できません]

の１つもしくは複数から選択され、またはＬ^３は、存在せず、
Ｒ^１３’は、結合、−Ｃ_１〜６アルキレン−、−Ｃ_３〜８カルボシクリル−、−Ｃ_３〜８ヘテロシクリル−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_６〜１４アリール−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_５〜１４ヘテロアリール−からなる群から選択され、
各Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素、ヒドロキシル、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲＲ、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、
またはＲ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒ^１４’は、結合、−ＮＲ−、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル−、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ−、および−Ｃ_１〜６アルキレン−からなる群から独立に選択され、
Ｒ^１４’は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−ＮＲＲまたは−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒは、水素および−Ｃ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
各Ｒ’は、−Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_８ヘテロアルキルおよびアリールから独立に選択され、
各Ｒ’’は、結合および−Ｃ_１〜６アルキレン−からなる群から独立に選択され、
各ｍは、独立に、０、１、２または３である]
に関する。

【0017】

また別の態様によれば、本発明は、式（ＩＩＩ）の化合物（複数可）、
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ）_ｂ
（ＩＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩
［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ^１−Ｌ^２−Ｌ^３であり、Ｌ^３は、Ｐに結合しており、
Ｐは、式（Ｉ）のラジカルであり、

【0018】

【化8】

[この文献は図面を表示できません]

式中、
破線は、任意選択の結合を表し、
ＡＢは、抗体であり、
各Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ^２は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ’は、ＣＲまたはＮであり、
各Ｘ’’は、Ｘ’’が、Ｌ^２またはさらなるＬ^３に結合している場合、ＣＨ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−もしくはＮ−であり、またはそうでなければ、Ｏ、Ｓ、ＣＲＲ、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲもしくはＮＲＲであり、
各Ｘ’’’は、Ｘ’’’が、Ｌ^２に結合している場合、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−もしくはＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−であり、またはそうでなければ、Ｒであり、
Ｙは、−Ｃ（Ｒ）_２−、−Ｏ−、−ＮＲ−または−Ｓ−であり、
Ｒ^１は、−Ｒ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ^１３、−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５、−ＯＣＯＮ（Ｒ^１４）ＮＲ（Ｒ^１５）、＝Ｏ（酸素への二重結合）および−ＮＲ^１４Ｒ^１５からなる群から選択され、
Ｒ^２およびＲ^３は、水素およびＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^４およびＲ^５は、水素、−ＯＲ、−ＮＲ^１４Ｒ^１５およびオキソからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ならびにヒドロキシルおよびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_２〜５アルキリデンを形成し、
Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってオキソであり、または
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分は、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１〜６アルキルまたは−ＯＲであり、
Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−または−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−であり、
Ｌ^１は、ＡＢへの結合、−ＮＲ−（ＡＢへの結合）および

【0019】

【化9】

[この文献は図面を表示できません]

から選択され、
Ｌ^２は、Ｌ^２Ａ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２ＣまたはＬ^２Ｃ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２Ａであり、
Ｌ^２Ａは、
−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＣ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−（ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル）_１〜４−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−および（−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−）_１〜２０から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ａは、存在せず、
Ｌ^２Ｂは、ＡＡ_０〜ａａから選択され、ＡＡは、天然または非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ^２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ｃは、存在せず、
Ｌ^３は、−Ｃ_１〜６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８カルボシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−ＮＲ−、−ＮＲ−ＮＲ−および−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（２つのＲ基は接合して、４〜１０員環を形成してもよい）、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＳＯ_２−ＮＲ−、−ＳＯ_２−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−Ｃ（Ｏ）−、

【0020】

【化10】

[この文献は図面を表示できません]

の１つもしくは複数から選択され、またはＬ^３は、存在せず、
Ｒ^１３は、水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜８カルボシクリル、Ｃ_３〜８ヘテロシクリル、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_６〜１４アリール、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から選択され、Ｒ^１３は、−ＮＲＲまたは−ＳＯ_２ＮＲＲで置換されていてもよく、
各Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素、ヒドロキシル、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲＲ、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、
またはＲ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲ、および（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒは、水素および−Ｃ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
ｂは、１〜２０であり、
各ｍは、独立に、０、１、２または３である]
に関する。

【0021】

さらに別の態様によれば、本発明は、式（ＩＩＩ’）の化合物（複数可）、
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ’）_ｂ
（ＩＩＩ’）
または薬学的に許容できるその塩
[式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ^１−Ｌ^２−Ｌ^３であり、Ｌ^３は、Ｐ’に結合しており、
Ｐ’は、式（Ｉ’）のラジカルであり、

【0022】

【化11】

[この文献は図面を表示できません]

式中、
破線は、任意選択の結合を表し、
ＡＢは、抗体であり、
各Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ^２は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ’は、ＣＲまたはＮであり、
各Ｘ’’は、Ｘ’’が、Ｌ^２またはさらなるＬ^３に結合している場合、ＣＨ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−もしくはＮ−であり、またはそうでなければ、Ｏ、Ｓ、ＣＲＲ、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲもしくはＮＲＲであり、
各Ｘ’’’は、Ｘ’’’が、Ｌ^２に結合している場合、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−もしくはＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−であり、またはそうでなければ、Ｒであり、
Ｙは、−Ｃ（Ｒ）_２−、−Ｏ−、−ＮＲ−または−Ｓ−であり、
Ｒ^１は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−、−ＯＲ’’、−ＯＣＯＲ^１３’、−ＯＣＯＮＲＲ^１４’、−ＯＣＯＮ（Ｒ^１４）Ｎ（Ｒ^１５）−、および−ＮＲ^１４−からなる群から選択され、
Ｒ^２およびＲ^３は、水素およびＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^４およびＲ^５は、水素、−ＯＲ、−ＮＲ^１４Ｒ^１５およびオキソからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ならびにヒドロキシルおよびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_２〜５アルキリデンを形成し、
Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってオキソであり、または
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分は、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１〜６アルキルまたは−ＯＲであり、
Ｒ^９は、水素、−Ｃ_１〜６アルキル、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−ＳＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｎ（Ｒ）ＣＯＲ^１３および−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５から独立に選択され、
Ｌ^１は、ＡＢへの結合、−ＮＲ−（ＡＢへの結合）および

【0023】

【化12】

[この文献は図面を表示できません]

から選択され、
Ｌ^２は、Ｌ^２Ａ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２ＣまたはＬ^２Ｃ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２Ａであり、
Ｌ^２Ａは、
−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＣ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−（ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル）_１〜４−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−および（−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−）_１〜２０から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ａは、存在せず、
Ｌ^２Ｂは、ＡＡ_０〜ａａから選択され、ＡＡは、天然または非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ^２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ｃは、存在せず、
Ｌ^３は、−Ｃ_１〜６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８カルボシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−ＮＲ−、−ＮＲ−ＮＲ−および−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（２つのＲ基は接合して、４〜１０員環を形成してもよい）、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＳＯ_２−ＮＲ−、−ＳＯ_２−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−Ｃ（Ｏ）−、

【0024】

【化13】

[この文献は図面を表示できません]

の１つもしくは複数から選択され、またはＬ^３は、存在せず、
Ｒ^１３’は、結合、−Ｃ_１〜６アルキレン−、−Ｃ_３〜８カルボシクリル−、−Ｃ_３〜８ヘテロシクリル−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_６〜１４アリール−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_５〜１４ヘテロアリール−からなる群から選択され、
各Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素、ヒドロキシル、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲＲ、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、
またはＲ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒ^１４’は、結合、−ＮＲ−、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル−、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ−、および−Ｃ_１〜６アルキレン−からなる群から独立に選択され、
Ｒ^１４’は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−ＮＲＲまたは−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒは、水素および−Ｃ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
各Ｒ’は、−Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_８ヘテロアルキルおよびアリールから独立に選択され、
各Ｒ’’は、結合および−Ｃ_１〜６アルキレン−からなる群から独立に選択され、
ｂは、１〜２０であり、
各ｍは、独立に、０、１、２または３である]
に関する。

【0025】

別の態様において、本発明は、式ＩＩＩまたはＩＩＩ’の抗体薬物コンジュゲート化合物に関し、抗体ＡＢは、トラスツズマブ、トラスツズマブ変異体（例えば、本明細書において、または国際特許出願第ＰＣＴ／ＩＢ２０１２／０５６２３４号において開示されているトラスツズマブ変異体）、オレゴボマブ、エドレコロマブ、セツキシマブ、ビトロネクチン受容体（α_ｖβ_３）に対するヒト化モノクローナル抗体、アレムツズマブ、非ホジキンリンパ腫の処置のためのヒト化抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体、１３１Ｉ Ｌｙｍ−１、非ホジキンリンパ腫の処置のためのマウス抗ＨＬＡ−Ｄｒ１０抗体、ホジキン病または非ホジキンリンパ腫の処置のためのヒト化抗ＣＤ２２ｍＡｂ、ラベツズマブ、ベバシズマブ、イブリツモマブチウキセタン、オファツムマブ、パニツムマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、イピリムマブ、ゲムツズマブ、癌胎児性タンパク質受容体５Ｔ４に対するヒト化モノクローナル抗体、およびＭ１／７０（ＣＤ１１ｂ受容体に対する抗体）、ならびに他の抗体から選択される。

【0026】

トラスツズマブ（ＩＮＮ；商品名Ｈｅｒｃｌｏｎ、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）とは、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体を妨げるモノクローナル抗体を指す。

【0027】

別の態様において、本発明は、式ＩＩ、ＩＩ’、ＩＩＩまたはＩＩＩ’の化合物（複数可）に関し、Ｌは、１つまたは複数の独立に選択されるアミノ酸ジラジカル、好ましくはバリン、シトルリン、フェニルアラニン、リシン、アラニンおよびグリシンからなる群から選択される１つまたは複数の独立に選択されるアミノ酸ジラジカルを含む。

【0028】

別の態様によれば、本発明は、式ＩＩＩまたはＩＩＩ’の化合物（複数可）に関し、Ｌは、Ｐ、またはＰを含むラジカルから細胞内プロテアーゼによって切断されることができる。

【0029】

さらなる態様によると、本発明は、式ＩＩＩまたはＩＩＩ’の化合物（複数可）に関し、抗体は、硫黄もしくは硫黄−硫黄結合を介して抗体のシステイン残基、アミド結合を介して抗体のリシン残基、またはアミド結合を介してグルタミン残基によって、アミノ酸ジラジカルに付着している。好ましくは、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体または抗体フラグメントである。

【0030】

また別の態様によると、本発明は、有効量の化合物（複数可）または塩（複数可）、および薬学的に許容できる賦形剤、担体または添加剤を含む、式Ｉ、Ｉ’、ＩＩ、ＩＩ’、ＩＩＩもしくはＩＩＩ’の化合物（複数可）、および／またはその塩（複数可）の医薬組成物に関する。このような医薬組成物は、チューブリン形成阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、およびＤＮＡ結合剤からなる群から選択される治療有効量の化学療法剤をさらに含み得る。

【0031】

別の態様によれば、本発明は、腫瘍細胞またはがん細胞を死滅させるかまたはその増殖を阻害する方法であって、所定量の式Ｉ、Ｉ’、ＩＩ、ＩＩ’、ＩＩＩもしくはＩＩＩ’の化合物、および／またはその塩（複数可）で、患者における腫瘍細胞またはがん細胞を処置することを含み、前記量は、腫瘍細胞またはがん細胞を死滅させるかまたはその増殖を阻害するのに有効な量である、上記方法に関する。

【0032】

本発明の別の態様は、がんを処置するために有効量の上記の化合物のいずれかおよび／または上記の抗体薬物コンジュゲートのいずれかを使用する方法であって、それを必要としている患者に有効量の前記化合物および／またはコンジュゲートを投与することによってなされる、上記方法に関する。

【図面の簡単な説明】

【0033】

【図1】他のバークホルデリア属の種に対するＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１のほぼ完全な１６Ｓ ｒＲＮＡ配列によって決定した系統発生的関係の略図である。

【図2】スプライソスタチンについての生合成遺伝子クラスター、およびチトクロムＰ４５０ Ｆｒ９ＲおよびＦｅ（ＩＩ）／α−ケトグルタレート依存性ジオキシゲナーゼＦｒ９Ｐによって触媒されるヒドロキシル化ステップを抜粋した、提唱されている生合成経路である。

【図3】ＡＤＣ３、４および５についての異種移植片データを示すグラフである。

【図4】ＡＤＣ１４および１８についての異種移植片データを示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0034】

本発明は、細胞毒性スプライソスタチン類似体を含めた細胞毒性天然物、細胞毒性スプライソスタチン類似体を含めた前記細胞毒性天然物を含む抗体薬物コンジュゲート、ならびにがんおよび他の病的状態を処置するためにこれらを使用する方法を対象とする。本発明はまた、哺乳動物細胞または関連する病的状態の検出、診断、または処置のための、このような化合物および／またはコンジュゲートのインビトロ、インサイチュ、およびインビボでの使用方法に関する。

【0035】

定義および略語
特に断りのない限り、下記の用語および語句は、本明細書において使用する場合、下記の意味を有することが意図される。本明細書において商品名が使用されるとき、商品名は、文脈によって他の指示がない限り、生成物製剤、ジェネリック薬物、および商品名の製品の活性医薬成分（複数可）を含む。

【0036】

「抗体」（または「Ａｂ」もしくは「ＡＢ」）という用語は、本明細書では最も広範な意味で使用され、具体的には、所望の生物活性を示す、無傷のモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一特異性抗体、多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体フラグメントを包含する。無傷の抗体は、主に２つの領域：可変領域および定常領域を有する。可変領域は、標的抗原に結合し、標的抗原と相互作用する。可変領域は、特定の抗原上の特異的結合部位を認識し、これに結合する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。定常領域は、免疫系によって認識され、免疫系と相互作用し得る（例えば、Ｊａｎｅｗａｙら、２００１、Ｉｍｍｕｎｏ．Ｂｉｏｌｏｇｙ、第５版、Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい）。抗体は、任意のタイプまたはクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＡ）またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）のものでもよい。抗体は、任意の適切な種から得たものでもよい。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトまたはマウス起源である。抗体は、例えば、ヒト、ヒト化またはキメラでもよい。

【0037】

「特異的に結合する」および「特異的結合」という用語は、所定の抗原に抗体が結合することを指す。抗体は、典型的には、少なくとも約１×１０^７Ｍ^−１の親和性で所定の抗原に結合し、さらに、所定の抗原またはそれと密接に関連する抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）に結合する場合の親和性の少なくとも２倍大きな親和性で所定の抗原に結合する。

【0038】

「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書において使用する場合、実質的に均質な抗体の集団から得た抗体を指し、すなわち、この集団を含む個々の抗体は、少量で存在し得る考えられる天然の変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位に対するものである。「モノクローナル」という修飾語は、抗体の実質的に均質な集団から得たものとしての抗体の性質を示し、何らかの特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されない。

【0039】

「モノクローナル抗体」という用語は特に、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の種に由来するかまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一かまたは相同であり、一方で、鎖（複数可）の残部が、別の種に由来するかまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体、およびこのような抗体のフラグメントの対応する配列と同一かまたは相同である「キメラ」抗体であって、ただし所望の生物活性を示すものを含む。

【0040】

「無傷の抗体」は、抗体クラスごとに適宜、抗原結合性可変領域、ならびに軽鎖定常ドメイン（Ｃ_Ｌ）、ならびに重鎖定常ドメインＣ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、Ｃ_Ｈ３およびＣ_Ｈ４を含むものである。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。

【0041】

無傷の抗体は、抗体のＦｃ領域（例えば、天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に起因するこれらの生物活性を指す１つまたは複数の「エフェクター機能」を有し得る。抗体エフェクター機能の例は、補体依存性細胞毒性、抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）および抗体依存性細胞媒介食作用を含む。

【0042】

「抗体フラグメント」は、好ましくは、抗原結合性領域またはその可変領域を含む、無傷の抗体の部分を含む。抗体フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、およびＦｖフラグメント、二特異性抗体、三特異性抗体、四特異性抗体、線状抗体、単鎖抗体分子、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、抗体フラグメント（複数可）から形成される多特異性抗体フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生されるフラグメント（複数可）、または標的抗原（例えば、がん細胞抗原、ウイルス抗原または微生物抗原）に免疫特異的に結合する上記のいずれかのエピトープ結合フラグメントが含まれる。

【0043】

「可変」という用語は、抗体との関連で、配列において広範に異なる抗体の可変ドメインの特定の部分を指し、その特定の抗原についてのそれぞれの特定の抗体の結合および特異性において使用される。この可変性は、軽鎖および重鎖可変ドメインにおける「超可変領域」と称される３つのセグメントにおいて濃縮している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される。天然重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、３つの超可変領域によって接続した４つのＦＲを含む。

【0044】

「超可変領域」という用語は、本明細書において使用されるとき、抗原結合性に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は一般に、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」（例えば、軽鎖可変ドメインにおける残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメインにおける３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｌ３）；Ｋａｂａｔら（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１））からのアミノ酸残基、ならびに／または「超可変ループ」（例えば、軽鎖可変ドメインにおける残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）および９１〜９６（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメインにおける２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（１４２）および９６〜１０１（Ｈ３）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、１９８７、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７）からのこれらの残基を含む。ＦＲ残基は、本明細書において定義したような超可変領域残基以外のこれらの可変ドメイン残基である。

【0045】

「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶ_ＨおよびＶ_Ｌドメインを含み、これらのドメインは、一本鎖ポリペプチド中に存在する。典型的には、Ｆｖポリペプチドは、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これは、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能とする。ｓｃＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、第１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２６９〜３１５頁（１９９４）を参照されたい。

【0046】

「二特異性抗体」という用語は、２つの抗原結合性部位を有する小さな抗体フラグメントを指し、フラグメントは、同じポリペプチド鎖中の可変軽ドメイン（Ｖ_Ｌ）に接続した可変重ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む。短すぎて、同じ鎖上の２つのドメインの間の対合ができないリンカーを使用することによって、ドメインは別の鎖の相補的ドメインと対合させることを余儀なくされ、２つの抗原結合性部位を生じさせる。二特異性抗体は、例えば、ＥＰ０４０４０９７；ＷＯ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、１９９３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４〜６４４８により詳細に記載されている。

【0047】

非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含有するキメラ抗体である。大部分は、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域からの残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）、例えば、マウス、ラット、ウサギまたはヒトではない霊長類の超可変領域からの残基によって置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。場合によって、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基で置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体において見出されない残基を含み得る。これらの修飾を行って、抗体の能力をさらに改良する。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、超可変ループの全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。ヒト化抗体は場合によりまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域を含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら、１９８６、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２〜５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３〜３２９；およびＰｒｅｓｔａ、１９９２、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３〜５９６を参照されたい。

【0048】

本明細書において使用する場合、「単離された」とは、（ａ）自然源、例えば、植物もしくは動物の細胞、または細胞培養物、または（ｂ）合成有機化学反応混合物の他の構成要素から分離していることを意味する。本明細書において使用する場合、「精製された」とは、単離されたとき、単離物が、単離物の重量によって、少なくとも９５％、および別の態様において、少なくとも９８％の化合物（例えば、コンジュゲート）を含有することを意味する。

【0049】

「単離された」抗体は、その自然環境の構成要素から同定および分離および／または回収された抗体である。その自然環境の汚染要素は、抗体についての診断用または治療上の使用を妨げる材料であり、このような要素としては、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が挙げられる。好ましい実施形態において、抗体は、（１）ローリー法によって決定した場合、抗体が９５重量％超、最も好ましくは９９重量％超になるまで、（２）スピニングカップ配列決定装置を使用することによって、Ｎ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クマシーブルー、もしくは好ましくは銀染色を使用して、還元条件もしくは非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均質になるまで精製される。抗体の自然環境の少なくとも１つの構成要素が存在しなくなることから、単離された抗体には、組換え細胞内の元の位置に存在する抗体も含まれる。しかし、通常、単離された抗体は、少なくとも１つの精製ステップによって調製される。

【0050】

「アポトーシスを誘発する」抗体は、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞収縮、小胞体の拡張、細胞断片化、および／または膜小胞（アポトーシス小体と称される）の形成によって決定されるような、プログラム細胞死を誘発する抗体である。細胞は、腫瘍細胞、例えば、乳房、卵巣、胃、子宮内膜、唾液腺、肺、腎臓、結腸、甲状腺、膵臓または膀胱の細胞である。アポトーシスと関連する細胞事象を評価するために様々な方法が利用可能である。例えば、ホスファチジルセリン（ＰＳ）転座は、アネキシン結合によって測定することができ、ＤＮＡ断片化は、ＤＮＡラダリングによって評価することができ、ＤＮＡ断片化と共に核／クロマチン凝縮は、低二倍体細胞における増加によって評価することができる。

【0051】

「治療有効量」という用語は、哺乳動物において疾患または障害を処置するのに有効な薬物の量を指す。がんの場合、治療有効量の薬物は、がん細胞の数を低減させ、腫瘍サイズを低減させ、末梢器官へのがん細胞浸潤を阻害し（すなわち、ある程度遅延および好ましくは停止させ）、腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度遅延および好ましくは停止させ）、腫瘍増殖をある程度阻害し、かつ／またはがんと関連する症状の１つもしくは複数をある程度緩和し得る。薬物が存在するがん細胞の増殖を阻害し、かつ／または存在するがん細胞を死滅し得る程度まで、薬物は細胞増殖抑制性および／または細胞毒性であり得る。がん療法のために、有効性は、例えば、疾患の進行までの時間（ＴＴＰ）をアセスメントすることによって、および／または奏効率（ＲＲ）を決定することによって測定することができる。

【0052】

「実質的な量」という用語は、混合物または試料の集団の大部分、すなわち、５０％超を指す。

【0053】

「細胞内代謝物」という用語は、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）上の細胞内の代謝過程または反応によって生じる化合物を指す。代謝過程または反応は、酵素的プロセス、例えば、ＡＤＣのペプチドリンカーのタンパク質分解的切断であり得る。細胞内代謝物には、これらに限定されないが、細胞中への侵入、拡散、取込みまたは輸送の後に、細胞内切断を受けた抗体および遊離薬物が含まれる。

【0054】

「細胞内で切断された」および「細胞内切断」という用語は、ＡＤＣ上の細胞内の代謝過程または反応などを指し、これによって、共有結合的付着、例えば、薬物部分および抗体の間のリンカーが切断され、遊離薬物、または細胞内の抗体から解離したコンジュゲートの他の代謝物をもたらす。ＡＤＣの切断された部分は、このように細胞内代謝物である。

【0055】

「バイオアベイラビリティー」という用語は、患者に投与された所与の量の薬物の全身性アベイラビリティー（すなわち、血液／血漿レベル）を指す。バイオアベイラビリティーは、投与された剤形から全身循環に達する薬物の時間（速度）および総量（程度）の両方の測定値を示す定数項である。

【0056】

「細胞毒性活性」という用語は、ＡＤＣの細胞死滅性、細胞増殖抑制性もしくは抗増殖性の効果、または前記ＡＤＣの細胞内代謝物を指す。細胞毒性活性は、細胞の半分が残存する単位体積当たりの濃度（モルまたは質量）であるＩＣ_５０値として表される場合もある。

【0057】

「障害」は、薬物または抗体薬物コンジュゲートによる処置の利益を受けるあらゆる状態である。これには、哺乳動物を対象となる障害に罹患しやすくする病的状態を含めた慢性および急性の障害または疾患も含まれる。本明細書において処置される障害の非限定的な例としては、良性および悪性のがん；白血病およびリンパ性悪性腫瘍、ニューロン、グリア、アストロサイト、視床下部および他の腺、マクロファージ、上皮、間質および胞胚腔の障害；ならびに炎症性、血管形成および免疫の障害が挙げられる。

【0058】

「がん」および「がんの」という用語は、調節不能な細胞増殖によって典型的には特徴付けられる哺乳動物における生理学的状態または障害を指すか、またはそれらを表す用語である。「腫瘍」は、１つまたは複数のがん細胞を含む。

【0059】

「患者」の例には、これらに限定されないが、ヒト、ラット、マウス、モルモット、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、鳥および家禽が含まれる。例示的な実施形態において、患者は、ヒトである。

【0060】

「処置する」または「処置」という用語は、文脈によって他の指示がない限り、治療的処置、および再発を予防するための予防的措置を指し、その目的は、望ましくない生理学的変化または障害、例えば、がんの発生または拡散を阻害または遅延させる（和らげる）ことである。本発明の目的のために、有益または所望の臨床結果には、これらに限定されないが、検出可能または検出不可能のいずれにせよ、症状の軽減、疾患の程度の低減、疾患の安定化した（すなわち、悪化しない）状態、疾患の進行の遅れまたは遅延、病態の寛解または緩和、および軽快（部分的または全体的のいずれにせよ）が含まれる。「処置」はまた、処置を受けない場合の予想される生存と比較して延長された生存を意味する場合がある。処置を必要としているものは、状態または障害を既に有するもの、および状態または障害を有する傾向があるものを含む。

【0061】

がんとの関連において、「処置すること」という用語は、腫瘍細胞、がん細胞、または腫瘍の増殖を阻害すること、腫瘍細胞またはがん細胞の複製を阻害すること、全体的な腫瘍量を和らげること、またはがん細胞の数を減少させること、および疾患と関連する１つまたは複数の症状を寛解させることのいずれかまたは全てを含む。

【0062】

自己免疫疾患との関連において、「処置すること」という用語は、これらに限定されないが、自己免疫性抗体を産生する細胞を含めた自己免疫性の病態と関連する細胞の複製を阻害すること、自己免疫性抗体負荷を和らげること、および自己免疫疾患の１つまたは複数の症状を寛解させることのいずれかまたは全てを含む。

【0063】

感染症との関連において、「処置すること」という用語は、感染症をもたらす病原体の増殖、増殖作用または複製を阻害すること、および感染症の１つまたは複数の症状を寛解させることのいずれかまたは全てを含む。

【0064】

「添付文書」という用語は、このような治療生成物の使用に関する適応症（複数可）、用法、投与量、投与、禁忌および／または警告についての情報を含有する、治療製品の市販のパッケージにおいて通例含まれる指示を指すために使用される。

【0065】

本明細書において使用する場合、「細胞」、「細胞系」および「細胞培養物」という用語は互換的に使用され、このような名称は全て、子孫を含む。「形質転換体」および「形質転換細胞」という語は、移行の数にこだわらずに、初代対象細胞および培養物またはこれらに由来する子孫を含む。また意図的なまたは偶発性の変異によって、子孫全てがＤＮＡ量において必ずしも正確に同一であるとは限らないことも理解されよう。最初の形質転換細胞においてスクリーニングされたものと同じ機能または生物活性を有する変異体子孫が含まれる。異なる名称も意図されるが、そのような場合は文脈から明らかである。

【0066】

他の指示がない限り、「アルキル」という用語は、それ自体で、または別の用語の部分として、示した数の炭素原子を有する直鎖または分岐状の飽和炭化水素を指す（例えば、「Ｃ_１〜Ｃ_８」アルキルは、１〜８個の炭素原子を有するアルキル基を指す）。炭素原子の数が示されていないとき、アルキル基は、１〜８個の炭素原子、好ましくは、１〜６個の炭素原子を有する。代表的な直鎖Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルには、これらに限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチルおよびｎ−オクチルが含まれ、一方、分岐状Ｃ_１〜Ｃ_８アルキルには、これらに限定されないが、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、および−２−メチルブチルが含まれ、不飽和Ｃ_２〜Ｃ_８アルキルには、これらに限定されないが、ビニル、アリル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブチレニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニルおよび３−メチル−１−ブチニルが含まれる。

【0067】

他の指示がない限り、「アルキレン」は、それ自体で、または別の用語の部分として、述べた数の炭素原子、典型的には、１〜１８個の炭素原子の、親アルカンの同じまたは２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することに由来する２つの一価ラジカル中心を有する、飽和の分岐鎖または直鎖または環状の炭化水素ラジカルを指す。典型的なアルキレンラジカルには、これらに限定されないが、メチレン（−ＣＨ_２−）、１，２−エチレン（−ＣＨ_２ＣＨ_２−）、１，３−プロピレン（−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−）、１，４−ブチレン（−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−）などが含まれる。「Ｃ_１〜Ｃ_１０」直鎖アルキレンは、式−（ＣＨ_２）_１〜１０−の直鎖飽和炭化水素基である。Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキレンの例には、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オシチレン、ノニレンおよびデカレンが含まれる。本発明の特定の実施形態において、アルキレンは、１〜９個、１〜８個、１〜７個、および１〜６個の炭素を有する。

【0068】

他の指示がない限り、「ヘテロアルキル」という用語は、それ自体で、または別の用語と組み合わせて、特に明記しない限り、完全飽和であり、または１〜３度の不飽和を含有し、述べた数の炭素原子、ならびにＯ、Ｎ、Ｓｉ、Ｓおよび／またはＰからなる群から選択される１〜３個のヘテロ原子からなる、安定的な直鎖もしくは分岐鎖炭化水素、またはこれらの組合せを意味し、窒素および硫黄原子は、酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は、四級化されていてもよい。ヘテロ原子（複数可）であるＯ、ＮおよびＳは、ヘテロアルキル基の任意の内側の位置に配置されていてもよい。ヘテロ原子であるＳｉは、アルキル基が分子の残部に付着している位置を含めたヘテロアルキル基の任意の位置に配置されていてもよい。最大２個のヘテロ原子が連続していてもよい。

【0069】

「ハロ」または「ハロゲン」とは、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを指す。

【0070】

「ハロ（Ｃ_１〜６−アルキル）」とは、１〜３個または１〜２個のハロ基で置換されているＣ_１〜６−アルキル基を指し、Ｃ_１〜６−アルキルおよびハロは、本明細書に定義されている通りである。この用語は、例えば、ＣＦ_３を含む。

【0071】

「エポキシ」、または「エポキシ基」または「エポキシ残基」という用語は、下記のように単結合によって連結された炭素原子および酸素原子を含む３員環を指すことにおいて当業者には公知である。

【0072】

【化14】

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【0073】

したがって、「エポキシド」という用語は、本明細書の上記で定義するような少なくとも１つのエポキシ基を含む化合物を指す。

【0074】

他の指示がない限り、「ヘテロアルキレン」という用語は、それ自体で、または別の置換基の部分として、ヘテロアルキル（上記で考察するような）に由来する二価基を意味する。ヘテロアルキレン基について、ヘテロ原子はまた、鎖末端のいずれかまたは両方を占めることができる。

【0075】

他の指示がない限り、「アリール」は、それ自体で、または別の用語の部分として、親芳香族環系の単一の炭素原子からの１個の水素原子を除去して得られた、６〜２０個の炭素原子、好ましくは、６〜１４個の炭素原子の置換または非置換の一価芳香族炭化水素ラジカルを意味する。典型的なアリール基には、これらに限定されないが、ベンゼン、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニルなどに由来するラジカルが含まれる。置換芳香族基（例えば、アリール基）は、下記の基：Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）_２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）_２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、ハロゲン、−Ｎ_３、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）_２および−ＣＮの１つまたは複数、好ましくは１〜５つで置換することができる。各Ｒ’は、−Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_８ヘテロアルキルおよびアリール、好ましくは、非置換アリールから独立に選択される。いくつかの実施形態において、置換芳香族基は、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−ＮＨＣＯＮＨ_２、−Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ’および−ＳＲ’の１つまたは複数をさらに含むことができる。

【0076】

「ヘテロアリール」という用語は、本明細書において使用する場合、窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を有し、かつ少なくとも１個の炭素原子を含有する、５〜１４員、例えば、５〜６員の芳香族複素環を指す。ヘテロアリールは、単環式、二環式、または三環式環系であり得る。代表的なヘテロアリールは、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサジアゾリル、ピリジル、フリル、ベンゾフラニル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、キノリニル、ピロリル、インドリル、オキサゾリル、ベンゾオキサゾリル、イミダゾリル、ベンゾイミダゾリル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、ピリミジル、アゼピニル、オキセピニル、およびキノキサリニルである。ヘテロアリールは、置換されていてもよい。典型的な置換基には、これらに限定されないが、−Ｘ、−Ｒ、−Ｏ−、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｓ⁻、−ＮＲ_２、−ＮＲ_３、＝ＮＲ、−ＣＸ_３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ_２、＝Ｎ_２、−Ｎ_３、−ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_２、−ＳＯ_３⁻、−ＳＯ_３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）_２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＲ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）_２、−ＰＯ_３^２−、ＰＯ_３Ｈ_２、−ＡｓＯ_２Ｈ_２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、−ＣＯ_２Ｒ、−ＣＯ_２⁻、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ_２、−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ_２、Ｃ_１〜Ｃ_２０ヘテロアルキル、Ｃ_６〜Ｃ_２０アリール、Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリル、保護基またはプロドラッグ部分が含まれ、各Ｘは、独立に、ハロゲンである−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉであり、各Ｒは、独立に、−ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６アルキルである。

【0077】

「アリーレン」、「ヘテロアリーレン」という用語は、それぞれ、「アリール」および「ヘテロアリール」の二価のバージョン、ならびに「アリール」および「ヘテロアリール」を組み込む他の用語を指す。

【0078】

「ヒドロキシ」とは、基−ＯＨを指す。

【0079】

「置換アルキル」とは、１個または複数個の水素原子が置換基でそれぞれ独立に置き換えられているアルキルを意味する。典型的な置換基には、これらに限定されないが、−Ｘ、−Ｒ、−Ｏ−、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｓ⁻、−ＮＲ_２、−ＮＲ_３、＝ＮＲ、−ＣＸ_３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ_２、＝Ｎ_２、−Ｎ_３、−ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_２、−ＳＯ_３⁻、−ＳＯ_３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）_２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＲ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）_２、−ＰＯ_３^２−、ＰＯ_３Ｈ_２、−ＡｓＯ_２Ｈ_２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、−ＣＯ_２Ｒ、−ＣＯ_２⁻、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ_２、−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ_２、Ｃ_１〜Ｃ_２０ヘテロアルキル、Ｃ_６〜Ｃ_２０アリール、Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリル、保護基またはプロドラッグ部分が含まれ、各Ｘは、独立に、ハロゲンである−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉであり、各Ｒは、独立に、−ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６アルキルである。ハロゲンで置換されている置換アルキルは、本明細書においてハロアルキルと称されることがある。アリール、アルキレン、ヘテロアルキレン、および本明細書に記載のようなアルキルまたはアルキレン部分を含有する、もしくは含有しない他の基はまた、同様に置換し得る。

【0080】

他の指示がない限り、「アラルキル」は、それ自体で、または別の用語の部分として、上記に定義されているようなアリール基で置換されている、上記に定義されているようなアルキル基を意味する。

【0081】

他の指示がない限り、「Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリル」は、それ自体で、または別の用語の部分として、３〜８個の炭素原子（また環員と称される）、およびＮ、Ｏ、ＰまたはＳから独立に選択される１〜４個のヘテロ原子環員を有し、かつ親環系の環原子からの１個の水素原子を除去して得られた、一価または二価の置換または非置換の芳香族または非芳香族の単環式または二環式環系を指す。同様に、他の指示がない限り、「Ｃ_３〜Ｃ_１０ヘテロシクリル」は、それ自体で、または別の用語の部分として、３〜１０個の炭素原子（また環員と称される）、およびＮ、Ｏ、ＰまたはＳから独立に選択される１〜４個のヘテロ原子環員を有し、かつ親環系の環原子からの１個の水素原子を除去して得られた、一価または二価の置換または非置換の芳香族または非芳香族の単環式または二環式環系を指す。ヘテロシクリルにおける１個または複数個のＮ、ＣまたはＳ原子は、酸化させることができる。ヘテロ原子を含む環は、芳香族または非芳香族でもよい。「ヘテロシクリル」という用語が、特定の数の炭素に関係なく用いられるとき、１０個超の炭素を有するヘテロシクリル基、例えば、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個または２０個の炭素を有する環または環系はまた、Ｃ_３〜Ｃ_１０ヘテロシクリルと共に可能であり、包含される。同様に、「ヘテロシクリル」という用語が、特定の数の炭素に関係なく用いられるとき、３個未満の炭素を有するヘテロシクリル基、例えば、１個または２個を有する環は、可能であり、包含される。「ヘテロシクロアルキル」という用語は、非芳香族ヘテロシクリル環または環系を指し、全ての炭素原子は飽和している（すなわち、水素または下記のような別の置換基に結合しており、二重結合または三重結合が存在しない）。特定の実施形態において、ヘテロシクロアルキル基は典型的には、３〜５員および１〜２個のヘテロ原子を有する。特定の実施形態において、ヘテロシクロアルキルは、エポキシでもよい。

【0082】

特に断りのない限り、ヘテロシクリルは、任意のヘテロ原子または炭素原子においてそのペンダント基に付着しており、これによって安定的が構造をもたらされる。Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリルの代表例には、これらに限定されないが、テトラヒドロフラニル、オキセタニル、ピラニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、インドリル、ベンゾピラゾリル、ピロリル、チオフェニル（チオペン）、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリルおよびテトラゾリルが含まれる。Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリル、またはＣ_３〜Ｃ_１０ヘテロシクリルは、これらに限定されないが、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_８ヘテロアルキル、−ＯＲ’、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）_２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、ハロゲン、−Ｎ_３、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）_２および−ＣＮを含めた７つまでの基で置換することができ、各Ｒ’は、−Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_８ヘテロアルキルおよびアリールから独立に選択される。いくつかの実施形態において、置換ヘテロシクリルはまた、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−ＮＨＣＯＮＨ_２、−Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ’および−ＳＲ’の１つまたは複数を含むことができる。

【0083】

他の指示がない限り、「ヘテロアラルキル」は、それ自体で、または別の用語の部分として、上記に定義されているような芳香族ヘテロシクリル基で置換されている上記に定義されているようなアルキル基を意味する。

【0084】

他の指示がない限り、「Ｃ_３〜Ｃ_８カルボシクリル」は、それ自体で、または別の用語の部分として、親環系の環原子からの１個の水素原子または２個の水素原子を除去して得られた、３員、４員、５員、６員、７員または８員の一価または二価の置換または非置換の飽和または不飽和の非芳香族単環式または二環式の炭素環式環である。同様に、他の指示がない限り、「Ｃ_３〜Ｃ_１０カルボシクリル」は、それ自体で、または別の用語の部分として、親環系の環原子からの１個の水素原子を除去して得られた、３員、４員、５員、６員、７員、８員、９員または１０員の一価または二価の置換または非置換の飽和または不飽和の非芳香族単環式または二環式の炭素環式環である。代表的なＣ_３〜Ｃ_８カルボシクリルには、これらに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンタジエニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、１，３−シクロヘキサジエニル、１，４−シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、１，３−シクロヘプタジエニル、１，３，５−シクロヘプタトリエニル、シクロオクチル、シクロオクタジエニル、ビシクロ（１１１）ペンタン、およびビシクロ（２２２）オクタンが含まれる。Ｃ_３〜Ｃ_８カルボシクリル基、またはＣ_３〜Ｃ_１０カルボシクリル基は、非置換であるか、またはこれらに限定されないが、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_８ヘテロアルキル、−ＯＲ’、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）_２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ’、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ_３、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）_２および−ＣＮを含めた７つまでの基で置換されていてもよく、各Ｒ’は、−Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_８ヘテロアルキルおよびアリールから独立に選択される。「カルボシクリル」という用語が、炭素の特定の数に関係なく用いられるとき、１０個超の炭素を有するカルボシクリル基、例えば、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個または２０個の炭素を有する環系は、Ｃ_３〜Ｃ_１０カルボシクリルと共にまた可能であり、包含される。「シクロアルキル」という用語は、カルボシクリル環または環系を指し、全ての炭素原子は、飽和している（すなわち、水素または下記のような別の置換基に結合しており、二重結合または三重結合が存在しない）。

【0085】

「キラル」という用語は、鏡像パートナーの重ねることが出来ない特性を有する分子を指し、一方、「アキラル」という用語は、これらの鏡像パートナー上に重ねることが出来る分子を指す。

【0086】

「立体異性体」という用語は、同一の化学構造を有するが、空間中の原子または基の配置に関して異なる化合物を指す。

【0087】

「ジアステレオマー」とは、２つ以上のキラル中心を有し、その分子が互いの鏡像でない立体異性体を指す。ジアステレオマーは、異なる物理的特性、例えば、融点、沸点、分光特性、および反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、高分解能分析手順、例えば、電気泳動およびクロマトグラフィーで分離が可能である。

【0088】

本明細書において使用される立体化学の定義および規則は、一般にＳ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ編、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）；およびＥｌｉｅｌおよびＷｉｌｅｎ、Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９４）に従う。多くの有機化合物は光学活性な形態で存在し、すなわち、これらは平面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性な化合物を記載することにおいて、接頭辞ＤおよびＬ、またはＲおよびＳを使用して、そのキラル中心（複数可）の周りの分子の絶対配置を表す。接頭辞ｄおよびｌまたは（＋）および（−）を用いて、化合物による平面偏光の回転のサインを示し、（−）またはｌは、化合物は左旋性であることを意味する。（＋）またはｄという接頭辞を伴う化合物は、右旋性である。所与の化学構造について、これらの立体異性体は、これらが互いの鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体はまた、エナンチオマーと称してもよく、このような異性体の混合物は、エナンチオマー混合物と称されることが多い。エナンチオマーの５０：５０混合物はラセミ混合物またはラセミ化合物と称され、これは化学反応またはプロセスにおいて立体選択または立体特異性がない場合に起こり得る。「ラセミ混合物」および「ラセミ化合物」という用語は、光学活性を欠いている２つのエナンチオマー種の等モル混合物を指す。

【0089】

アミノ酸「誘導体」は、親アミノ酸の共有結合的付着による、例えば、アルキル化、グリコシル化、アセチル化、リン酸化などによる置換または修飾を有するアミノ酸を含む。「誘導体」の定義内にさらに含まれるものは、例えば、置換された連結、および当技術分野において公知の他の修飾を有するアミノ酸の１種または複数種の類似体である。

【0090】

「天然アミノ酸」とは、文脈によって他の指示がない限り、アルギニン、グルタミン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、リシン、グリシン、アラニン、ヒスチジン、セリン、プロリン、グルタミン酸、アスパラギン酸、トレオニン、システイン、メチオニン、ロイシン、アスパラギン、イソロイシン、およびバリンを指す。

【0091】

「薬学的に許容できる塩」という語句は、本明細書において使用する場合、化合物の薬学的に許容できる有機または無機塩を指す。化合物は典型的には、少なくとも１個のアミノ基を含有し、したがってこのアミノ基と酸付加塩を形成することができる。例示的な塩には、これらに限定されないが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、およびパモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエート））が含まれる。薬学的に許容できる塩は、別の分子、例えば、酢酸イオン、コハク酸イオンまたは他の対イオンを含むことが関与し得る。対イオンは、親化合物上の電荷を安定化させる任意の有機または無機部分であり得る。さらに、薬学的に許容できる塩は、その構造中に複数個の電荷を帯びた原子を有し得る。複数の電荷を帯びた原子が薬学的に許容できる塩の部分である例は、複数の対イオンを有することができる。したがって、薬学的に許容できる塩は、１個もしくは複数個の電荷を帯びた原子および／または１つもしくは複数の対イオンを有することができる。

【0092】

「添加量」または「薬物添加量」または「ペイロード添加量」という用語は、ＡＤＣ分子中の抗体毎の平均ペイロード数を表するか、またはそのような数を指す（「ペイロード」（複数可）は、本明細書において「薬物」（複数可）と互換的に使用される）。薬物添加量は、抗体１つ当たり薬物１〜２０の範囲であり得る。これは、ＤＡＲ、または薬物対抗体比と称されることがある。本明細書に記載されているＡＤＣの組成物は典型的には、１〜２０、および特定の実施形態において、１〜８、２〜８、２〜６、２〜５および２〜４のＤＡＲを有する。典型的なＤＡＲ値は、２、４、６および８である。抗体１つ当たりの平均薬物数、またはＤＡＲ値は、通常の手段、例えば、ＵＶ／可視分光法、質量分析法、ＥＬＩＳＡアッセイ、およびＨＰＬＣによって特性決定し得る。定量的ＤＡＲ値をまた決定し得る。場合によって、特定のＤＡＲ値を有する均質なＡＤＣの分離、精製、および特性決定は、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動などの手段によって達成し得る。ＤＡＲは、抗体上の付着部位の数によって制限し得る。例えば、付着がシステインチオールである場合、抗体は、１つのみもしくはいくつかのシステインチオール基を有してもよく、またはそれを通してリンカー単位が付着し得る、１つのみもしくはいくつかの十分に反応性のチオール基を有してもよい。いくつかの実施形態において、システインチオールは、鎖間のジスルフィド結合を形成するシステイン残基のチオール基である。いくつかの実施形態において、システインチオールは、鎖間のジスルフィド結合を形成しないシステイン残基のチオール基である。典型的には、理論的最大未満の薬物部分が、コンジュゲーション反応の間に、抗体にコンジュゲートする。抗体は、例えば、リンカーまたはリンカー中間体と反応しない多くのリシン残基を含有し得る。最も反応性のリシン基のみが、反応性リンカー試薬と反応し得る。

【0093】

一般に、抗体は、リンカーを介して薬物に連結する可能性がある遊離および反応性のシステインチオール基を多く含有することはなく、含有したとしてもわずかである。抗体における大部分のシステインチオール残基はジスルフィド架橋として存在し、還元剤、例えば、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）で還元しなくてはならない。抗体は、変性条件に供されて、反応性求核基、例えば、リシンまたはシステインを曝露し得る。ＡＤＣの添加量（薬物／抗体比）は、（ｉ）抗体に対して過剰なモル濃度の薬物−リンカーを制限すること、（ｉｉ）コンジュゲーションの反応時間または温度を制限すること、および（ｉｉｉ）システインチオール修飾のための部分的または制限的な還元的条件を含めて、いくつかの異なる様式で制御し得る。１つより多くの求核基が薬物−リンカーと反応する場合、このように得られた産物は、抗体毎の１つまたは複数の薬物部分の分布を伴うＡＤＣの混合物である。抗体毎の薬物の平均数は、例えば、抗体に対して特異的な、および薬物に対して特異的な、二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって混合物から計算し得る。個々のＡＤＣは、質量分析法によって混合物において同定し得、ＨＰＬＣ、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって分離し得る。

【0094】

下記は、本出願において他に定義または記載し得ない略語および定義の一覧である。ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシドを指す）、ＨＲＭＳ（高分解能質量分析法を指す）、ＤＡＤ（ダイオードアレイ検出を指す）、ＴＦＡ（２，２，２−トリフルオロ酢酸またはトリフルオロ酢酸を指す）、ＴＦＦ（接線流濾過を指す）、ＥｔＯＨ（エタノールを指す）、ＭＷ（分子量を指す）、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィーを指す）、分取ＨＰＬＣ（分取高速液体クロマトグラフィーを指す）、ｅｔｃ．（その他を指す）、トリチル（１，１’，１’’−エタン−１，１，１−トリイルトリベンゼンを指す）、ＴＨＦ（テトラヒドロフランを指す）、ＮＨＳ（１−ヒドロキシ−２，５−ピロリジンジオンを指す）、Ｃｂｚ（カルボキシベンジルを指す）、ｅｑ．（当量を指す）、ｎ−ＢｕＬｉ（ｎ−ブチルリチウムを指す）、ＯＡｃ（アセテートを指す）、ＭｅＯＨ（メタノールを指す）、ｉ−Ｐｒ（イソプロピルまたはプロパン−２−イルを指す）、ＮＭＭ（４−メチルモルホリンを指す）、および「−」（表において、この時点でデータが利用可能でないことを指す）。

【0095】

本明細書において使用する場合、「Ｈ／Ｃ」とは、そのシステイン残基の１つを介して（リンカーまたは本発明の化合物に）結合している、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体を妨げるモノクローナル抗体であるトラスツズマブ（商品名ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））を指す。

【0096】

本明細書において使用する場合、「Ｈ／Ｋ」とは、そのリシン残基の１つを介して（リンカーまたは本発明の化合物に）結合している、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体を妨げるモノクローナル抗体であるトラスツズマブを指す。

【0097】

本出願を通して使用するように、アミノ酸残基のナンバリング（例えば、１１４位におけるアラニン）は、Ｋａｂａｔ法のＥＵインデックスに基づく。

【0098】

本明細書において使用する場合、「Ｈ／ＴＧ１−（Ｑ）」とは、抗体中に包埋されているトランスグルタミナーゼペプチド（ＴＧ１）基質タグ中にあるその天然または操作されたグルタミン残基の１つを介して（リンカーまたは本発明の化合物に）結合している、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体を妨げるモノクローナル抗体である操作されたトラスツズマブを指す。

【0099】

本明細書において使用する場合、「Ｈ−Ａ１１４Ｃ／Ｃ１１４」とは、重鎖の１１４位におけるアラニンと置換されたその操作されたシステインの１つを介して（リンカーまたは本発明の化合物に）結合している、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体を妨げるモノクローナル抗体である操作されたトラスツズマブを指す。

【0100】

本明細書において使用する場合、「Ｈ−Ｋ３９２Ｃ＋Ｌ４４３Ｃ／Ｃ３９２＋Ｃ４４３」とは、重鎖の３９２位におけるリシンおよび重鎖の４４３位におけるロイシンと置換されたその操作されたシステイン残基の１つまたは両方を介して（リンカーまたは本発明の化合物に）結合している、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体を妨げるモノクローナル抗体である操作されたトラスツズマブを指す。

【0101】

本明細書において使用する場合、「Ｈ−Ｅ３８８Ｃ＋Ｎ４２１Ｃ／Ｃ３８８＋Ｃ４２１」とは、重鎖の３８８位におけるグルタミン酸および４２１位におけるアスパラギンと置換されたその操作されたシステイン残基の１つまたは両方を介して（リンカーまたは本発明の化合物に）結合している、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体を妨げるモノクローナル抗体である操作されたトラスツズマブを指す。

【0102】

本明細書において使用する場合、「Ｈ−Ｑ３４７Ｃ＋Ｋ３９２Ｃ／Ｃ３４７＋Ｃ３９２」とは、重鎖の３４７位におけるグルタミンおよび３９２位におけるリシンと置換されたその操作されたシステイン残基の１つまたは両方を介して（リンカーまたは本発明の化合物に）結合している、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体を妨げるモノクローナル抗体である操作されたトラスツズマブを指す。

【0103】

本明細書において使用する場合、「Ｈ−Ｌ４４３Ｃ＋ｋＫ１８３Ｃ／Ｃ４４３＋ｋＣ１８３」とは、重鎖における４４３位におけるロイシンおよび軽（カッパ）鎖の１８３位におけるリシンと置換されたその操作されたシステインの１つまたは両方を介して（リンカーまたは本発明の化合物に）結合している、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体を妨げるモノクローナル抗体である操作されたトラスツズマブを指す。

【0104】

本明細書において使用する場合、「Ｈ−Ｑ３４７Ｃ＋Ｌ４４３Ｃ／Ｃ３４７＋Ｃ４４３」とは、重鎖の３４７位におけるグルタミンおよび４４３位におけるロイシンと置換されたその操作されたシステインの１つまたは両方を介して（リンカーまたは本発明の化合物に）結合している、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体を妨げるモノクローナル抗体である操作されたトラスツズマブを指す。

【0105】

本明細書において使用する場合、「Ｈ−ｋＫ１８３Ｃ／ｋＣ１８３」とは、軽（カッパ）鎖の１８３位におけるリシンにおいて置換されたその操作されたシステインを介して（リンカーまたは本発明の化合物に）結合している、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体を妨げるモノクローナル抗体である操作されたトラスツズマブを指す。

【0106】

本明細書において使用する場合、「Ｈ−Ｎ４２１Ｃ／Ｃ４２１」とは、重鎖の４２１位におけるアスパラギンにおいて置換されたその操作されたシステインを介して（リンカーまたは本発明の化合物に）結合している、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体を妨げるモノクローナル抗体である操作されたトラスツズマブを指す。

【0107】

一般に、本明細書において使用する場合、「Ｈ−（ＡＡ１）＃＃＃（ＡＡ２）／（ＡＡ２）＃＃＃」（（ＡＡ１）および（ＡＡ２）は、第１および第２のアミノ酸である）とは、重鎖の＃＃＃位における（ＡＡ１）において置換されたその操作された（ＡＡ２）を介して本発明の化合物に結合している、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体を妨げるモノクローナル抗体である操作されたトラスツズマブを指し、＃＃＃は、関連性のあるアミノ酸（複数可）の位置を表す。「ｋ」または「カッパ」に言及する同様の表示法は、軽鎖上の置換を示す。

【0108】

同様に、本明細書において使用する場合、「Ｈ−（ＡＡ１）＃＃＃（ＡＡ２）＋（ＡＡ３）＃＃＃＃（ＡＡ４）／（ＡＡ２）＃＃＃＋（ＡＡ４）＃＃＃＃」（（ＡＡ１）、（ＡＡ２）、（ＡＡ３）および（ＡＡ４）は、第１、第２、第３および第４のアミノ酸である）とは、重鎖の＃＃＃位（＃＃＃は、関連性のあるアミノ酸（複数可）の位置を表す）において（ＡＡ１）において置換されたその操作された（ＡＡ２）を介して本発明の化合物に結合しており、かつまた重鎖の＃＃＃＃位（＃＃＃＃は、関連性のあるアミノ酸（複数可）の位置を表す）において（ＡＡ３）において置換されたその操作された（ＡＡ４）を介して本発明の化合物に結合している、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体を妨げるモノクローナル抗体である操作されたトラスツズマブを指す。「ｋ」または「カッパ」に言及する同様の表示法は、軽鎖上の置換を示す。

【0109】

本明細書において使用する場合、「−ＰＡＢＣ−」または「ＰＡＢＣ」とは、構造：

【0110】

【化15】

[この文献は図面を表示できません]

を指す。

【0111】

本明細書において使用する場合、「−ＰＡＢＡ−」または「ＰＡＢＡ」とは、構造：

【0112】

【化16】

[この文献は図面を表示できません]

を指す。

【0113】

化合物およびその抗体薬物コンジュゲート
一態様によれば、本発明は、式（Ｉ）の化合物（複数可）、

【0114】

【化17】

[この文献は図面を表示できません]

[式中、
破線は、任意選択の結合を表し、
各Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ^２は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
Ｒ^１は、−Ｒ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ^１３、−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５、−ＯＣＯＮ（Ｒ^１４）ＮＲ（Ｒ^１５）、＝Ｏ（酸素への二重結合）および−ＮＲ^１４Ｒ^１５からなる群から選択され、
Ｒ^２およびＲ^３は、水素およびＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^４およびＲ^５は、水素、−ＯＲ、−ＮＲ^１４Ｒ^１５およびオキソからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ならびにヒドロキシルおよびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_２〜５アルキリデンを形成し、
Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってオキソであり、または
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分は、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１〜６アルキルまたは−ＯＲであり、
Ｒ^９は、水素、−Ｃ_１〜６アルキル、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−ＳＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｎ（Ｒ）ＣＯＲ^１３および−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５から独立に選択され、
Ｒ^１３は、水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜８カルボシクリル、Ｃ_３〜８ヘテロシクリル、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_６〜１４アリール、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から選択され、Ｒ^１３は、−ＮＲＲまたは−ＳＯ_２ＮＲＲで置換されていてもよく、
各Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素、ヒドロキシル、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲＲ、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、
またはＲ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒは、水素および−Ｃ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
各ｍは、独立に、０、１、２または３である]、
または薬学的に許容できるその塩に関する。

【0115】

別の態様によれば、本発明は、式（ＩＩ）の化合物（複数可）、
Ｌ−Ｐ
（ＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩
[式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ^１−Ｌ^２−Ｌ^３であり、Ｌ^３は、Ｐに結合しており、
Ｐは、式（Ｉ）のラジカルであり、

【0116】

【化18】

[この文献は図面を表示できません]

式中、
破線は、任意選択の結合を表し、
各Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ^２は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ’は、ＣＲまたはＮであり、
各Ｘ’’は、Ｘ’’が、Ｌ^２またはさらなるＬ^３に結合している場合、ＣＨ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−もしくはＮ−であり、またはそうでなければ、Ｏ、Ｓ、ＣＲＲ、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲもしくはＮＲＲであり、
各Ｘ’’’は、Ｘ’’’が、Ｌ^２に結合している場合、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−もしくはＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−であり、またはそうでなければ、Ｒであり、
Ｙは、−Ｃ（Ｒ）_２−、−Ｏ−、−ＮＲ−または−Ｓ−であり、
Ｒ^１は、−Ｒ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ^１３、−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５、−ＯＣＯＮ（Ｒ^１４）ＮＲ（Ｒ^１５）、＝Ｏ（酸素への二重結合）および−ＮＲ^１４Ｒ^１５からなる群から選択され、
Ｒ^２およびＲ^３は、水素およびＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^４およびＲ^５は、水素、−ＯＲ、−ＮＲ^１４Ｒ^１５およびオキソからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ならびにヒドロキシルおよびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_２〜５アルキリデンを形成し、
Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってオキソであり、または
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分は、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１〜６アルキルまたは−ＯＲであり、
Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−または−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−であり、
Ｌ^１は、−ハロゲン、−ＮＲ_２、

【0117】

【化19】

[この文献は図面を表示できません]

から選択され、
Ｌ^２は、Ｌ^２Ａ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２ＣまたはＬ^２Ｃ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２Ａであり、
Ｌ^２Ａは、
−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＣ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−（ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル）_１〜４−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−および（−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−）_１〜２０から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ａは、存在せず、
Ｌ^２Ｂは、ＡＡ_０〜ａａから選択され、ＡＡは、天然または非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ^２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ｃは、存在せず、
Ｌ^３は、−Ｃ_１〜６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８カルボシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−ＮＲ−、−ＮＲ−ＮＲ−および−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（２つのＲ基は接合して、４〜１０員環を形成してもよい）、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＳＯ_２−ＮＲ−、−ＳＯ_２−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−Ｃ（Ｏ）−、

【0118】

【化20】

[この文献は図面を表示できません]

の１つもしくは複数から選択され、またはＬ^３は、存在せず、
Ｒ^１３は、水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜８カルボシクリル、Ｃ_３〜８ヘテロシクリル、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_６〜１４アリール、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から選択され、Ｒ^１３は、−ＮＲＲまたは−ＳＯ_２ＮＲＲで置換されていてもよく、
各Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素、ヒドロキシル、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲＲ、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、
またはＲ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲ、および（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒは、水素および−Ｃ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
各ｍは、独立に、０、１、２または３である]
に関する。

【0119】

別の態様によれば、本発明は、式（ＩＩ’）の化合物（複数可）、
Ｌ−Ｐ’
（ＩＩ’）
または薬学的に許容できるその塩
[式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ^１−Ｌ^２−Ｌ^３であり、Ｌ^３は、Ｐ’に結合しており、
Ｐ’は、式（Ｉ’）のラジカルであり、

【0120】

【化21】

[この文献は図面を表示できません]

式中、
破線は、任意選択の結合を表し、
各Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ^２は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ’は、ＣＲまたはＮであり、
各Ｘ’’は、Ｘ’’が、Ｌ^２またはさらなるＬ^３に結合している場合、ＣＨ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−もしくはＮ−であり、またはそうでなければ、Ｏ、Ｓ、ＣＲＲ、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲもしくはＮＲＲであり、
各Ｘ’’’は、Ｘ’’’が、Ｌ^２に結合している場合、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−もしくはＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−であり、またはそうでなければ、Ｒであり、
Ｙは、−Ｃ（Ｒ）_２−、−Ｏ−、−ＮＲ−または−Ｓ−であり、
Ｒ^１は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−、−ＯＲ’’、−ＯＣＯＲ^１３’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲＲ^１４’、−ＯＣＯＮ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）−、および−ＮＲ−からなる群から選択され、
Ｒ^２およびＲ^３は、水素およびＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^４およびＲ^５は、水素、−ＯＲ、−ＮＲ^１４Ｒ^１５およびオキソからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ならびにヒドロキシルおよびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_２〜５アルキリデンを形成し、
Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってオキソであり、または
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分は、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１〜６アルキルまたは−ＯＲであり、
Ｒ^９は、水素、−Ｃ_１〜６アルキル、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−ＳＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｎ（Ｒ）ＣＯＲ^１３および−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５から独立に選択され、
Ｌ^１は、−ハロゲン、−ＮＲ_２、

【0121】

【化22】

[この文献は図面を表示できません]

から選択され、
Ｌ^２は、Ｌ^２Ａ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２ＣまたはＬ^２Ｃ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２Ａであり、
Ｌ^２Ａは、
−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＣ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−（ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル）_１〜４−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−および（−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−）_１〜２０から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ａは、存在せず、
Ｌ^２Ｂは、ＡＡ_０〜ａａから選択され、ＡＡは、天然または非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ^２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ｃは、存在せず、
Ｌ^３は、−Ｃ_１〜６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８カルボシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−ＮＲ−、−ＮＲ−ＮＲ−および−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（２つのＲ基は接合して、４〜１０員環を形成してもよい）、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＳＯ_２−ＮＲ−、−ＳＯ_２−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−Ｃ（Ｏ）−、

【0122】

【化23】

[この文献は図面を表示できません]

の１つもしくは複数から選択され、またはＬ^３は、存在せず、
Ｒ^１３’は、結合、−Ｃ_１〜６アルキレン−、−Ｃ_３〜８カルボシクリル−、−Ｃ_３〜８ヘテロシクリル−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_６〜１４アリール−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_５〜１４ヘテロアリール−からなる群から選択され、
各Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素、ヒドロキシル、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲＲ、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、
またはＲ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒ^１４’は、結合、−ＮＲ−、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル−、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ−、および−Ｃ_１〜６アルキレン−からなる群から独立に選択され、
Ｒ^１４’は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−ＮＲＲまたは−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒは、水素および−Ｃ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
各Ｒ’は、−Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_８ヘテロアルキルおよびアリールから独立に選択され、
各Ｒ’’は、結合および−Ｃ_１〜６アルキレン−からなる群から独立に選択され、
各ｍは、独立に、０、１、２または３である]
に関する。

【0123】

また別の態様によれば、本発明は、式（ＩＩＩ）の化合物(複数可)、
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ）_ｂ
（ＩＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩
[式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ^１−Ｌ^２−Ｌ^３であり、Ｌ^３は、Ｐに結合しており、
Ｐは、式（Ｉ）のラジカルであり、

【0124】

【化24】

[この文献は図面を表示できません]

式中、
破線は、任意選択の結合を表し、
ＡＢは、抗体であり、
各Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ^２は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ’は、ＣＲまたはＮであり、
各Ｘ’’は、Ｘ’’が、Ｌ^２またはさらなるＬ^３に結合している場合、ＣＨ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−もしくはＮ−であり、またはそうでなければ、Ｏ、Ｓ、ＣＲＲ、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲもしくはＮＲＲであり、
各Ｘ’’’は、Ｘ’’’が、Ｌ^２に結合している場合、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−もしくはＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−であり、またはそうでなければ、Ｒであり、
Ｙは、−Ｃ（Ｒ）_２−、−Ｏ−、−ＮＲ−または−Ｓ−であり、
Ｒ^１は、−Ｒ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ^１３、−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５、−ＯＣＯＮ（Ｒ^１４）ＮＲ（Ｒ^１５）、＝Ｏ（酸素への二重結合）および−ＮＲ^１４Ｒ^１５からなる群から選択され、
Ｒ^２およびＲ^３は、水素およびＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^４およびＲ^５は、水素、−ＯＲ、−ＮＲ^１４Ｒ^１５およびオキソからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ならびにヒドロキシルおよびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_２〜５アルキリデンを形成し、
Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってオキソであり、または
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分は、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１〜６アルキルまたは−ＯＲであり、
Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−または−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−であり、
Ｌ^１は、ＡＢへの結合、−ＮＲ−（ＡＢへの結合）および

【0125】

【化25】

[この文献は図面を表示できません]

から選択され、
Ｌ^２は、Ｌ^２Ａ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２ＣまたはＬ^２Ｃ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２Ａであり、
Ｌ^２Ａは、
−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＣ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−（ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル）_１〜４−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−および（−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−）_１〜２０から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ａは、存在せず、
Ｌ^２Ｂは、ＡＡ_０〜ａａから選択され、ＡＡは、天然または非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ^２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ｃは、存在せず、
Ｌ^３は、−Ｃ_１〜６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８カルボシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−ＮＲ−、−ＮＲ−ＮＲ−および−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（２つのＲ基は接合して、４〜１０員環を形成してもよい）、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＳＯ_２−ＮＲ−、−ＳＯ_２−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−Ｃ（Ｏ）−、

【0126】

【化26】

[この文献は図面を表示できません]

の１つもしくは複数から選択され、またはＬ^３は、存在せず、
Ｒ^１３は、水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜８カルボシクリル、Ｃ_３〜８ヘテロシクリル、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_６〜１４アリール、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から選択され、Ｒ^１３は、−ＮＲＲまたは−ＳＯ_２ＮＲＲで置換されていてもよく、
各Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素、ヒドロキシル、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲＲ、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、
またはＲ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲ、および（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒは、水素および−Ｃ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
ｂは、１〜２０であり、
各ｍは、独立に、０、１、２または３である]
に関する。

【0127】

さらに別の態様によれば、本発明は、式（ＩＩＩ’）の化合物(複数可)、
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ’）_ｂ
（ＩＩＩ’）
または薬学的に許容できるその塩
[式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ^１−Ｌ^２−Ｌ^３であり、Ｌ^３は、Ｐ’に結合しており、
Ｐ’は、式（Ｉ’）のラジカルであり、

【0128】

【化27】

[この文献は図面を表示できません]

式中、
破線は、任意選択の結合を表し、
ＡＢは、抗体であり、
各Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ^２は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ’は、ＣＲまたはＮであり、
各Ｘ’’は、Ｘ’’が、Ｌ^２またはさらなるＬ^３に結合している場合、ＣＨ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−もしくはＮ−であり、またはそうでなければ、Ｏ、Ｓ、ＣＲＲ、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲもしくはＮＲＲであり、
各Ｘ’’’は、Ｘ’’’が、Ｌ^２に結合している場合、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−もしくはＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−であり、またはそうでなければ、Ｒであり、
Ｙは、−Ｃ（Ｒ）_２−、−Ｏ−、−ＮＲ−または−Ｓ−であり、
Ｒ^１は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−、−ＯＲ’’、−ＯＣＯＲ^１３’、−ＯＣＯＮＲＲ^１４’、−ＯＣＯＮ（Ｒ^１４）Ｎ（Ｒ^１５）−、および−ＮＲ^１４−からなる群から選択され、
Ｒ^２およびＲ^３は、水素およびＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^４およびＲ^５は、水素、−ＯＲ、−ＮＲ^１４Ｒ^１５およびオキソからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ならびにヒドロキシルおよびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_２〜５アルキリデンを形成し、
Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってオキソであり、または
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分は、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１〜６アルキルまたは−ＯＲであり、
Ｒ^９は、水素、−Ｃ_１〜６アルキル、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−ＳＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｎ（Ｒ）ＣＯＲ^１３および−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５から独立に選択され、
Ｌ^１は、ＡＢへの結合、−ＮＲ−（ＡＢへの結合）および

【0129】

【化28】

[この文献は図面を表示できません]

から選択され、
Ｌ^２は、Ｌ^２Ａ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２ＣまたはＬ^２Ｃ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２Ａであり、
Ｌ^２Ａは、
−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＣ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−（ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル）_１〜４−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−および（−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−）_１〜２０から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ａは、存在せず、
Ｌ^２Ｂは、ＡＡ_０〜ａａから選択され、ＡＡは、天然または非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ^２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ｃは、存在せず、
Ｌ^３は、−Ｃ_１〜６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８カルボシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−ＮＲ−、−ＮＲ−ＮＲ−および−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（２つのＲ基は接合して、４〜１０員環を形成してもよい）、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＳＯ_２−ＮＲ−、−ＳＯ_２−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−Ｃ（Ｏ）−、

【0130】

【化29】

[この文献は図面を表示できません]

の１つもしくは複数から選択され、またはＬ^３は、存在せず、
Ｒ^１３’は、結合、−Ｃ_１〜６アルキレン−、−Ｃ_３〜８カルボシクリル−、−Ｃ_３〜８ヘテロシクリル−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_６〜１４アリール−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_５〜１４ヘテロアリール−からなる群から選択され、
各Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素、ヒドロキシル、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲＲ、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、
またはＲ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒ^１４’は、結合、−ＮＲ−、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル−、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ−、および−Ｃ_１〜６アルキレン−からなる群から独立に選択され、
Ｒ^１４’は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−ＮＲＲまたは−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒは、水素および−Ｃ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
各Ｒ’は、−Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_８ヘテロアルキルおよびアリールから独立に選択され、
各Ｒ’’は、結合および−Ｃ_１〜６アルキレン−からなる群から独立に選択され、
ｂは、１〜２０であり、
各ｍは、独立に、０、１、２または３である]
に関する。

【0131】

上記で記載した二価の可変部分は、分子内の複数の配向でのこのようなラジカルの位置付けを適宜表すように意図されていることに留意すべきである。したがって、例えば、単一の例のみを引用すれば、Ｌ^１およびＬ^３の間のＬ^２部分「−ＰＡＢＣ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−」は、Ｌ^１−ＰＡＢＣ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−Ｌ^３またはＬ^１−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−Ｌ^３として位置付けすることができる。同様に、Ｌ２は、本明細書において、Ｌ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ｃを含むと定義され、その構築体は、複数の配向で同様に位置付けし得る。

【0132】

このように、特定の実施形態において、構成要素の下記の配列を有する式ＩＩＩまたはＩＩＩ’のＡＤＣを提供する。
ＡＢ−Ｌ^１−Ｌ^２−Ｌ^３−Ｐ、
ＡＢ−Ｌ^１−Ｌ^２−Ｌ^３−Ｐ’、
ＡＢ−Ｌ^１−Ｌ^２Ａ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２Ｃ−Ｌ^３−Ｐ、または
ＡＢ−Ｌ^１−Ｌ^２Ｃ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２Ａ−Ｌ^３−Ｐ。

【0133】

状況によって、本明細書に記載されている特定の化学基および部分が好ましい。このように、本明細書において記載および特許請求する様々なペイロード、リンカー−ペイロードおよびＡＤＣに関するものを含めて本発明の特定の実施形態において、下記の１つまたは複数（または全て、またはどれもあてはまらない）を適用し得る。

【0134】

本発明の特定の実施形態において、Ｘ^１は好ましくは、−Ｏ−である。

【0135】

本発明の特定の実施形態において、Ｘ^２は好ましくは、−ＮＲ−である。

【0136】

本発明の特定の実施形態において、Ｒ^１は好ましくは、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ^１３、−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５および−ＮＲ^１４Ｒ^１５からなる群から選択される。

【0137】

本発明の特定の実施形態において、Ｒ^２は好ましくは、Ｃ_１〜６アルキルであり、より好ましくは、メチルである。

【0138】

本発明の特定の実施形態において、Ｒ^３は好ましくは、Ｃ_１〜６アルキルであり、より好ましくは、メチルである。

【0139】

本発明の特定の実施形態において、Ｒ^４は好ましくは、水素または−ＯＲである。

【0140】

本発明の特定の実施形態において、Ｒ^５は好ましくは、水素または−ＯＲである。

【0141】

本発明の特定の実施形態において、Ｒ^６およびＲ^７は、ヒドロキシル、およびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から各々独立に選択され、またはＲ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分は、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいことが好ましい。

【0142】

本発明の特定の実施形態において、Ｒ^８は好ましくは、水素または−ＯＲである。

【0143】

本発明の特定の実施形態において、Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ^１４Ｒ^１５および−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｎ（Ｒ）ＣＯＲ^１３から独立に選択される。

【0144】

本発明の特定の実施形態において、Ｒ^１３は好ましくは、水素、Ｃ_１〜６アルキルからなる群から選択される。

【0145】

本発明の特定の実施形態において、各Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、またはＲ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択されることが好ましい。

【0146】

本発明の特定の実施形態において、ｍが０であることが好ましい。本発明の特定の実施形態において、ｍが１であることが好ましい。本発明の特定の実施形態において、ｍが２であることが好ましい。本発明の特定の実施形態において、ｍが３であることが好ましい。

【0147】

本発明の特定の実施形態において、Ｘ^２は、−ＮＨ−であり、Ｘ^１は、−Ｏ−であり、Ｒ^１は、−ＯＣＯＲ^１３、ＯＨまたは−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５であり、Ｒ^２は、メチルであり、Ｒ^３は、メチルであり、Ｒ^４は、−ＯＨであり、Ｒ^５は、水素であり、Ｒ^８は、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってエポキシドを形成し、Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ^１３は、Ｃ_１〜６アルキル（より好ましくは、メチル）であり、Ｒ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｌ^１は、

【0148】

【化30】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｌ^２Ａ、Ｌ^２Ｂ、Ｌ^２ＣおよびＬ^３は、全て存在しないことが好ましい。代わりに、Ｒ^６は、−ＯＨであり、Ｒ^７は、ハロゲン（塩素がより好ましい）から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルである。

【0149】

本発明の特定の実施形態において、Ｘ^２は、−ＮＨ−であり、Ｘ^１は、−Ｏ−であり、Ｒ^１は、−ＯＣＯＲ^１３、ＯＨまたは−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５であり、Ｒ^２は、メチルであり、Ｒ^３は、メチルであり、Ｒ^４は、−ＯＨであり、Ｒ^５は、水素であり、Ｒ^８は、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってエポキシドを形成し、Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ^１３は、Ｃ_１〜６アルキル（より好ましくは、メチル）であり、Ｒ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、Ｌ^１は、ハロゲンであり、Ｌ^３は、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲであり、Ｒはより好ましくは、水素であり、アルキル基はより好ましくは、エチルであり、Ｌ^２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−であり、Ｌ^２ＢおよびＬ^２Ｃは、存在しないことが好ましい。

【0150】

本発明の特定の実施形態において、Ｘ^２は、−ＮＨ−であり、Ｘ^１は、−Ｏ−であり、Ｒ^１は、−ＯＣＯＲ^１３であり、Ｒ１３はより好ましくは、水素であり、Ｒ^２は、メチルであり、Ｒ^３は、メチルであり、Ｒ^４は、−ＯＨであり、Ｒ^５は、水素であり、Ｒ^８は、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってエポキシドを形成し、Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ^１３は、Ｃ_１〜６アルキル（より好ましくは、メチル）であり、Ｒ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、Ｌ^１は、ハロゲンであり、Ｌ^３は、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲであり、Ｒはより好ましくは、水素であり、アルキル基はより好ましくは、エチルであり、Ｌ^２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−であり、Ｌ^２ＢおよびＬ^２Ｃは、存在しないことが好ましい。

【0151】

本発明の特定の実施形態において、Ｒ１は、−ＯＣＯＲ^１３または−ＯＲであり、Ｒはより好ましくは、水素であり、Ｒ^２は、メチルであり、Ｒ^３は、メチルであり、Ｒ^４は、−ＯＨであり、Ｒ^５は、水素であり、Ｒ^８は、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７は、エポキシドを形成し、Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｌ^３は、−ＮＲ−ＮＲ−（各Ｒはより好ましくは、水素もしくはメチルであり、または２つのＲ置換基は一緒になって、６員環を形成する）であり、Ｌ^１は、ハロゲン、−ＮＲ^２または

【0152】

【化31】

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であり、Ｌ^２Ｃは、ＰＡＢＣであり、Ｌ^２Ｂは、−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−であり、Ｌ^２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−であることが好ましい。

【0153】

本発明の特定の実施形態において、Ｒ１は、−ＯＣＯＲ^１３または−ＯＲであり、Ｒはより好ましくは、水素であり、Ｒ^２は、メチルであり、Ｒ^３は、メチルであり、Ｒ^４は、−ＯＨであり、Ｒ^５は、水素であり、Ｒ^８は、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７は、エポキシドを形成し、Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｌ^３は、−ＮＲ−ＮＲ−（各Ｒはより好ましくは、水素もしくはメチルであり、または２つのＲ置換基は一緒になって、６員環を形成する）であり、Ｌ^１は、ハロゲン、−ＮＲ^２または

【0154】

【化32】

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であり、Ｌ^２Ｃは、存在せず、Ｌ^２Ｂは、−Ａｌａ−Ｖａｌ−であり、Ｌ^２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−または−Ｃ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−であることが好ましい。

【0155】

本発明の特定の実施形態において、Ｌ^１は、−ハロゲン、−ＮＲ_２、

【0156】

【化33】

[この文献は図面を表示できません]

から選択されることが好ましい。

【0157】

本発明の特定の実施形態において、Ｒ^１は、−ＯＣＯＲ^１３’であり、Ｒ^２は、メチルであり、Ｒ^３は、メチルであり、Ｒ^４は、−ＯＨであり、Ｒ^５は、水素であり、Ｒ^８は、水素であり、Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｒ^１５であり、Ｒ^１４およびＲ^１５はより好ましくは、水素であり、Ｒ^１３’は、結合であり、Ｌ^３は、

【0158】

【化34】

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であり、ｍは、０であり、Ｘ’は、Ｎであり、Ｘ’’は、−Ｎ−であり、Ｘ’’’は、存在せず、Ｌ^１は、ハロゲンであり、Ｌ^２Ｃは、ＰＡＢＣであり、Ｌ^２Ｂは、−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−であり、Ｌ^２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−であることが好ましい。

【0159】

本発明の特定の実施形態において、Ｘ^２は、−ＮＨ−であり、Ｘ^１は、−Ｏ−であり、Ｒ^１は、−ＯＣＯＲ^１３、ＯＨまたは−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５であり、Ｒ^２は、メチルであり、Ｒ^３は、メチルであり、Ｒ^４は、−ＯＨであり、Ｒ^５は、水素であり、Ｒ^８は、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってエポキシドを形成し、Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ^１３は、Ｃ_１〜６アルキル（より好ましくは、メチル）であり、Ｒ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｌ^１は、ＡＢへの結合、−ＮＲ−（ＡＢへの結合）および

【0160】

【化35】

[この文献は図面を表示できません]

から選択され、Ｌ^２Ａ、Ｌ^２Ｂ、Ｌ^２ＣおよびＬ^３は、全て存在しないことが好ましい。代わりに、Ｒ^６は、−ＯＨであり、Ｒ^７は、ハロゲン（塩素がより好ましい）から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルである。

【0161】

本発明の特定の実施形態において、Ｘ^２は、−ＮＨ−であり、Ｘ^１は、−Ｏ−であり、Ｒ^１は、−ＯＣＯＲ^１３、ＯＨまたは−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５であり、Ｒ^２は、メチルであり、Ｒ^３は、メチルであり、Ｒ^４は、−ＯＨであり、Ｒ^５は、水素であり、Ｒ^８は、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってエポキシドを形成し、Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ^１３は、Ｃ_１〜６アルキル（より好ましくは、メチル）であり、Ｒ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、Ｌ^１は、ＡＢへの結合、−ＮＲ−（ＡＢへの結合）および

【0162】

【化36】

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から選択され、Ｌ^３は、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲであり、Ｒはより好ましくは、水素であり、アルキル基はより好ましくは、エチルであり、Ｌ^２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−であり、Ｌ^２ＢおよびＬ^２Ｃは、存在しないことが好ましい。

【0163】

本発明の特定の実施形態において、Ｘ^２は、−ＮＨ−であり、Ｘ^１は、−Ｏ−であり、Ｒ^１は、−ＯＣＯＲ^１３であり、Ｒ１３はより好ましくは、水素であり、Ｒ^２は、メチルであり、Ｒ^３は、メチルであり、Ｒ^４は、−ＯＨであり、Ｒ^５は、水素であり、Ｒ^８は、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってエポキシドを形成し、Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ^１３は、Ｃ_１〜６アルキル（より好ましくは、メチル）であり、Ｒ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、Ｌ^１は、ＡＢへの結合、−ＮＲ−（ＡＢへの結合）および

【0164】

【化37】

[この文献は図面を表示できません]

から選択され、Ｌ^３は、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲであり、Ｒはより好ましくは、水素であり、アルキル基はより好ましくは、エチルであり、Ｌ^２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−であり、Ｌ^２ＢおよびＬ^２Ｃは、存在しないことが好ましい。

【0165】

本発明の特定の実施形態において、Ｒ１は、−ＯＣＯＲ^１３または−ＯＲであり、Ｒはより好ましくは、水素であり、Ｒ^２は、メチルであり、Ｒ^３は、メチルであり、Ｒ^４は、−ＯＨであり、Ｒ^５は、水素であり、Ｒ^８は、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７は、エポキシドを形成し、Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｌ^３は、−ＮＲ−ＮＲ−（各Ｒはより好ましくは、水素もしくはメチルであり、または２つのＲ置換基は一緒になって、６員環を形成する）であり、Ｌ^１は、ＡＢへの結合、−ＮＲ−（ＡＢへの結合）および

【0166】

【化38】

[この文献は図面を表示できません]

から選択され、Ｌ^２Ｃは、ＰＡＢＣであり、Ｌ^２Ｂは、−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−であり、Ｌ^２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−であることが好ましい。

【0167】

本発明の特定の実施形態において、Ｒ１は、−ＯＣＯＲ^１３または−ＯＲであり、Ｒはより好ましくは、水素であり、Ｒ^２は、メチルであり、Ｒ^３は、メチルであり、Ｒ^４は、−ＯＨであり、Ｒ^５は、水素であり、Ｒ^８は、水素であり、Ｒ^６およびＲ^７は、エポキシドを形成し、Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｌ^３は、−ＮＲ−ＮＲ−（各Ｒはより好ましくは、水素もしくはメチルであり、または２つのＲ置換基は一緒になって、６員環を形成する）であり、Ｌ^１は、ＡＢへの結合、−ＮＲ−（ＡＢへの結合）および

【0168】

【化39】

[この文献は図面を表示できません]

から選択され、Ｌ^２Ｃは、存在せず、Ｌ^２Ｂは、−Ａｌａ−Ｖａｌ−であり、Ｌ^２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−_Ｃ１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−であることが好ましい。

【0169】

本発明の特定の実施形態において、Ｌ^１は、ＡＢへの結合、−ＮＲ−（ＡＢへの結合）および

【0170】

【化40】

[この文献は図面を表示できません]

から選択されることが好ましい。

【0171】

本発明の特定の実施形態において、抗体は、トラスツズマブ、（Ｃ３９２＋Ｌ４４３）トラスツズマブ変異体、および（Ｃ３９２＋Ｃ４４３）トラスツズマブ変異体から選択されることが好ましい。

【0172】

本発明の特定の実施形態において、抗体が、トランスグルタミナーゼの存在下でポリペプチド工学（例えば、ポリペプチドにおけるアミノ酸の欠失、挿入、置換、変異、または任意のこれらの組合せによる）によって反応性（すなわち、アミンおよびトランスグルタミナーゼの存在下でアシルドナーとして共有結合を形成する能力）が付与されたアシルドナーグルタミン含有タグ（例えば、Ｇｌｎ含有ペプチドタグもしくはＱ−タグ）または内因性グルタミンで操作されたＦｃ含有またはＦａｂ含有ポリペプチドを介して結合していることが好ましい。

【0173】

特定の実施形態において、本発明は、上記の抗体薬物コンジュゲートおよびそれに伴う定義のいずれかに関し、ここで抗体薬物コンジュゲートは、２、３、４、５、６、７、８、９または１０の本発明の化合物を含む。

【0174】

特定の実施形態において、本発明は、上記の抗体薬物コンジュゲートおよびそれに伴う定義のいずれかに関し、ここで抗体薬物コンジュゲートは、３または４の本発明の化合物を含む。

【0175】

本発明の典型的にはカルボキシルおよび／またはアミノ含有化合物は、カルボキシル非含有化合物とは異なる独特の利点を担持する。このような利点の１つは、改善された水溶解度にある。別の利点は、水中、ならびに体液、例えば、血清、血液、脳脊髄液中、ならびに薬物製剤中での改善された化学的安定性である。また別の利点は、これらと適当なアニオン、例えば、塩化物イオン、酢酸イオン、および他の対イオンとを対合させることによって、カルボキシレート化合物の塩の形態を容易に調製する能力である。さらに、本発明のカルボキシレート化合物を、容易に使用して、がん細胞系およびがんに対して強力および改善された細胞毒性を有するアミドおよびエステル誘導体を調製することができる。カルボン酸基は、アミン、アルコールおよび他の基を担持する適切に修飾されたリンカー分子と反応して、ペイロード−リンカーを得ることができるため、カルボキシレート含有化合物はさらに、抗体に連結するこれらの能力において利点を有する。カルボン酸化合物はまた直接官能化して、活性化したカルボン酸誘導体を得ることができ、これはそれに続いて、さらなるリンカーを付加することなく抗体にコンジュゲートすることができる。例えば、本発明のカルボン酸含有化合物を、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドと反応させて、活性化したカルボキシル−ＮＨＳエステルを得てもよい。次いで、カルボキシル−ＮＨＳエステルおよびその結果作製されるペイロード−リンカーは、抗体と反応して、抗体薬物コンジュゲートを産生することができる。

【0176】

抗体単位（ＡｂまたはＡＢ）
上で述べたように、「抗体」（または「Ａｂ」もしくは「ＡＢ」）という用語は、本明細書において最も広い意味で使用され、具体的には、無傷のモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一特異性抗体、多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および所望の生物活性を示す抗体フラグメントを包含する。さらに、本明細書に記載されている本発明の特定の態様は、抗体薬物コンジュゲートを指す一方で、コンジュゲートの抗体部分は、所与の標的細胞集団と関連する受容体、抗原または他の受容性部分と特異的に結合または反応的に会合もしくは複合体化するものと置き換え得ることがさらに想定される。例えば、抗体を含有する代わりに、本発明のコンジュゲートは、治療的にまたはその他の点で生物学的に修飾されることを求められる細胞集団の受容体、抗原または他の受容性部分に結合、複合体化、または反応するターゲティング分子を含有することができる。このような分子の例は、より小さな分子量のタンパク質、ポリペプチドまたはペプチド、レクチン、糖タンパク質、非ペプチド、ビタミン、栄養素輸送分子（これらに限定されないが、トランスフェリンなど）、または任意の他の細胞結合分子もしくは物質を含む。特定の態様において、抗体または他のこのようなターゲティング分子は、それと共に抗体または他のターゲティング分子が相互作用する特定の標的細胞集団に対して薬物を送達するように作用する。

【0177】

別の態様において、本発明は、式ＩＩＩまたはＩＩＩ’の抗体薬物コンジュゲート化合物に関し、抗体ＡＢは、トラスツズマブ、トラスツズマブ変異体（例えば、本明細書または国際特許出願第ＰＣＴ／ＩＢ２０１２／０５６２３４号において開示されているトラスツズマブ変異体）、オレゴボマブ、エドレコロマブ、セツキシマブ、ビトロネクチン受容体（α_ｖβ_３）に対するヒト化モノクローナル抗体、アレムツズマブ、非ホジキンリンパ腫の処置のためのヒト化抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体を含めた抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体、１３１Ｉ Ｌｙｍ−１、非ホジキンリンパ腫の処置のためのマウス抗ＨＬＡ−Ｄｒ１０抗体を含めた抗ＨＬＡ−Ｄｒ１０抗体、抗ｃｄ３３抗体、ホジキン病または非ホジキンリンパ腫の処置のためのヒト化抗ＣＤ２２ｍＡｂを含めた抗ｃｄ２２抗体、ラベツズマブ、ベバシズマブ、イブリツモマブチウキセタン、オファツムマブ、パニツムマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、イピリムマブ、およびゲムツズマブから選択される。

【0178】

抗体単位上に存在し得るヘテロ原子は、硫黄（一実施形態において、抗体のスルフヒドリル基から）、酸素（一実施形態において、抗体のカルボニル、カルボキシルまたはヒドロキシル基から）、および窒素（一実施形態において、抗体の第一級または第二級アミノ基から）を含む。これらのヘテロ原子は、抗体の天然状態における抗体、例えば、天然の抗体上に存在することができ、または化学修飾によって抗体中に導入することができる。

【0179】

一実施形態において、抗体単位はスルフヒドリル基を有し、抗体単位はスルフヒドリル基の硫黄原子を介して結合する。

【0180】

別の実施形態において、抗体は、活性化したエステル（このようなエステルには、これらに限定されないが、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、ペンタフルオロフェニル、およびｐ−ニトロフェニルエステルが含まれる）と反応することができるリシン残基を有し、このように、抗体単位の窒素原子、およびカルボニルからなるアミド結合を形成する。

【0181】

さらに別の態様において、抗体単位は、化学修飾されて１つまたは複数のスルフヒドリル基を導入することができる１つまたは複数のリシン残基を有する。リシンを修飾するために使用することができる試薬には、これらに限定されないが、Ｎ−スクシンイミジルＳ−アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）および２−イミノチオラン塩酸塩（トラウト試薬）が含まれる。

【0182】

別の実施形態において、抗体単位は、化学修飾されて１つまたは複数のスルフヒドリル基を有することができる１つまたは複数の炭水化物基を有することができる。

【0183】

さらに別の実施形態において、抗体単位は、酸化されてアルデヒド基を提供することができる１つまたは複数の炭水化物基を有することができる（例えば、Ｌａｇｕｚｚａら、１９８９、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３２（３）：５４８〜５５を参照されたい）。対応するアルデヒドは、反応部位、例えば、ヒドラジンおよびヒドロキシルアミンと結合を形成することができる。薬物の付着または会合のためのタンパク質の修飾のための他のプロトコルは、Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（２００２）（参照により本明細書中に組み込まれている）に記載されている。

【0184】

コンジュゲートが、抗体の代わりに非免疫反応性タンパク質、ポリペプチド、またはペプチド単位を含むとき、有用な非免疫反応性タンパク質、ポリペプチド、またはペプチド単位には、これらに限定されないが、トランスフェリン、上皮増殖因子（「ＥＧＦ」）、ボンベシン、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、血小板由来増殖因子、ＩＬ−２、ＩＬ−６、トランスフォーミング増殖因子（「ＴＯＰ」）、例えば、ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−β、ワクチニア増殖因子（「ＶＧＦ」）、インスリンおよびインスリン様増殖因子ＩおよびＩＩ、ソマトスタチン、レクチンならびに低密度リポタンパク質からのアポタンパク質が含まれる。

【0185】

有用なポリクローナル抗体は、免疫化された動物の血清に由来する抗体分子の不均質な集団である。有用なモノクローナル抗体は、特定の抗原決定基（例えば、がん細胞抗原、ウイルス抗原、微生物抗原、タンパク質、ペプチド、炭水化物、化学物質、核酸、またはそのフラグメント）に対する抗体の均質な集団である。対象の抗原に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、当技術分野において公知の任意の技術を使用することによって調製することができ、培養物中の連続細胞系による抗体分子の産生を実現する。

【0186】

有用なモノクローナル抗体には、これらに限定されないが、ヒトモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、抗体フラグメント、またはキメラモノクローナル抗体が含まれる。ヒトモノクローナル抗体は、多数の当技術分野で公知の技術のいずれかによって作製し得る（例えば、Ｔｅｎｇら、１９８３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８０：７３０８〜７３１２；Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７２〜７９；およびＯｌｓｓｏｎら、１９８２、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：３〜１６）。

【0187】

抗体はまた、二重特異性抗体でもよい。二重特異性抗体を作製する方法は当技術分野において公知であり、下で考察する。

【0188】

抗体は、標的細胞（例えば、がん細胞抗原、ウイルス抗原、もしくは微生物抗原）に免疫特異的に結合する抗体、または腫瘍細胞もしくはマトリックスに結合する他の抗体の機能的活性フラグメント、誘導体もしくは類似体でもよい。これに関しては、「機能的活性」とは、フラグメント、誘導体または類似体が、このフラグメント、誘導体または類似体が由来する抗体が認識したものと同じ抗原を認識する抗抗イディオタイプ抗体を誘発することができることを意味する。具体的には、例示的な実施形態において、免疫グロブリン分子のイディオタイプの抗原性は、抗原を特異的に認識するＣＤＲ配列に対してＣ末端にあるフレームワークおよびＣＤＲ配列の欠失によって増強することができる。どのＣＤＲ配列が抗原に結合するかを決定するために、ＣＤＲ配列を含有する合成ペプチドは、当技術分野において公知の任意の結合アッセイ方法（例えば、ＢＩＡコアアッセイ）によって、抗原による結合アッセイにおいて使用することができる（ＣＤＲ配列の場所については、例えば、Ｋａｂａｔら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．；Ｋａｂａｔ Ｅら、１９８０、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １２５（３）：９６１〜９６９を参照されたい）。

【0189】

他の有用な抗体には、これらに限定されないが、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆｖｓ、単鎖抗体、二特異性抗体、三特異性抗体、四特異性抗体、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＦＶ、または抗体と同じ特異性を有する任意の他の分子などの抗体のフラグメントが含まれる。

【0190】

さらに、組換え抗体、例えば、標準的な組換えＤＮＡ技術を使用して作製することができる、ヒトおよび非ヒト部分の両方を含む、キメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、有用な抗体である。キメラ抗体は、異なる部分が、異なる動物種に由来する分子、例えば、マウスモノクローナルに由来する可変領域、およびヒト免疫グロブリン定常領域を有するものである。（例えば、全内容が参照により本明細書中に組み込まれている、米国特許第４，８１６，５６７号；および米国特許第４，８１６，３９７号を参照されたい）。ヒト化抗体は、非ヒト種からの１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク領域を有する、非ヒト種からの抗体分子である。（例えば、参照により本明細書中にその全体が組み込まれている米国特許第５，５８５，０８９号を参照されたい）。このようなキメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、当技術分野で公知の組換えＤＮＡ技術によって、例えば、それらの各々が参照により本明細書中にその全体が組み込まれている、国際公開第ＷＯ８７／０２６７１号；欧州特許第０１８４１８７号；欧州特許出願公開第０１７１４９６号；欧州特許出願公開第０１７３４９４号；国際公開第ＷＯ８６／０１５３３号；米国特許第４，８１６，５６７号；欧州特許出願公開第０１２０２３号；Ｂｅｒｔｅｒら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１〜１０４３；Ｌｉｕら、１９８７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：３４３９〜３４４３；Ｌｉｕら、１９８７、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１〜３５２６；Ｓｕｎら、１９８７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：２１４〜２１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら、１９８７、Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．４７：９９９〜１００５；Ｗｏｏｄら、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４４６〜４４９；およびＳｈａｗら、１９８８、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８０：１５５３〜１５５９；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、１９８５、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２〜１２０７；Ｏｉら、１９８６、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４；米国特許第５，２２５，５３９号；Ｊｏｎｅｓら、１９８６、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５５２〜５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４；およびＢｅｉｄｌｅｒら、１９８８、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３〜４０６０に記載されている方法を使用して産生することができる。

【0191】

完全ヒト抗体が特に望ましく、内因性免疫グロブリン重鎖および軽鎖遺伝子を発現することができないが、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを使用して産生することができる。トランスジェニックマウスを、通常の様式で、選択された抗原、例えば、本発明のポリペプチドの全部または一部で免疫化する。抗原に対するモノクローナル抗体は、通常のハイブリドーマ技術を使用して得ることができる。トランスジェニックマウスが持つヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞分化の間に再配置され、それに続いてクラススイッチおよび体細胞変異を受ける。このように、このような技術を使用して、治療的に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体を産生することが可能である。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概要について、ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、１９９５、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５〜９３を参照されたい。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのこの技術、ならびにこのような抗体を産生するためのプロトコルの詳細な考察について、例えば、これらの各々が参照により本明細書中にその全体が組み込まれている、米国特許第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６６１，０１６号；同第５，５４５，８０６号を参照されたい。他のヒト抗体は、例えば、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（現在は、Ａｍｇｅｎ、Ｆｒｅｅｍｏｎｔ、Ｃａｌｉｆ．）およびＭｅｄａｒｅｘ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）から商業的に得ることができる。

【0192】

選択されたエピトープを認識する完全ヒト抗体は、「誘導選択」と称される技術を使用して生じさせることができる。このアプローチにおいて、選択された非ヒトモノクローナル抗体、例えば、マウス抗体を使用して、同じエピトープを認識する完全ヒト抗体の選択を誘導する。（例えば、Ｊｅｓｐｅｒｓら、１９９４、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１２：８９９〜９０３を参照されたい）。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリーを含めた当技術分野で公知の様々な技術を使用して産生することができる（例えば、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、１９９１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１；Ｍａｒｋｓら、１９９１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１；ＱｕａｎおよびＣａｒｔｅｒ、２００２、Ｔｈｅ ｒｉｓｅ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎ Ａｎｔｉ−ＩｇＥ ａｎｄ Ａｌｌｅｒｇｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅ、ＪａｒｄｉｅｕおよびＦｉｃｋ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、第２０章、４２７〜４６９頁を参照されたい）。

【0193】

他の実施形態において、抗体は、抗体の融合タンパク質、またはその機能的活性フラグメントであり、例えば、抗体は、抗体からではない別のタンパク質（またはタンパク質のその一部、好ましくは少なくとも１０、２０もしくは５０のアミノ酸部分）のアミノ酸配列のＮ末端またはＣ末端において共有結合（例えば、ペプチド結合）を介して融合している。好ましくは、抗体またはそのフラグメントは、定常ドメインのＮ末端における他のタンパク質に共有結合で連結している。

【0194】

すなわち、抗体は、このような共有結合的付着によって、抗体がその抗原結合性免疫特異性を保持することが可能となる限り、任意のタイプの分子の共有結合的付着によって修飾されている類似体および誘導体を含む。これらに限定されないが、例えば、抗体の誘導体および類似体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解的切断、細胞抗体単位または他のタンパク質への連結などによってさらに修飾されたものを含む。多数の化学修飾のいずれかを、これらに限定されないが、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンなどの存在下での代謝合成を含めた公知の技術によって行うことができる。さらに、類似体または誘導体は、１種または複数種の非天然のアミノ酸を含有することができる。

【0195】

抗体は、Ｆｃ受容体と相互作用する、アミノ酸残基における修飾（例えば、置換、欠失または付加）を有することができる。特に、抗体は、抗ＦｃドメインおよびＦｃＲｎ受容体の間の相互作用において関与していると同定されるアミノ酸残基における修飾を有することができる（例えば、参照により本明細書中にその全体が組み込まれている国際公開第ＷＯ９７／３４６３１号を参照されたい）。

【0196】

がん細胞抗原に対して免疫特異的な抗体は、商業的に得ることができ、または当業者には公知の任意の方法、例えば、化学合成もしくは組換え発現技術によって産生することができる。がん細胞抗原に対して免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋデータベースもしくは同様のデータベース、文献から、または通例のクローニングおよび配列決定によって得ることができる。

【0197】

特定の実施形態において、がんの処置のために公知の抗体を使用することができる。がん細胞抗原に対して免疫特異的な抗体は、商業的に得ることができ、または当業者に公知の任意の方法、例えば、組換え発現技術によって産生することができる。がん細胞抗原に対して免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋデータベースもしくは同様のデータベース、文献から、または通例のクローニングおよび配列決定によって得ることができる。がんの処置のために利用可能な抗体の例には、これらに限定されないが、卵巣がんの処置のためのマウス抗体であるＯＶＡＲＥＸ；結腸直腸がんの処置のためのマウスＩｇＧ_２ａ抗体であるＰＡＮＯＲＥＸ（Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ、ＮＣ）；上皮増殖因子陽性がん、例えば、頭頸部がんの処置のための抗ＥＧＦＲ ＩｇＧキメラ抗体であるセツキシマブＥＲＢＩＴＵＸ（Ｉｍｃｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．、ＮＹ）；肉腫の処置のためのヒト化抗体であるＶｉｔａｘｉｎ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、Ｉｎｃ．、ＭＤ）；慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）の処置のためのヒト化ＩｇＧ_１抗体であるＣＡＭＰＡＴＨ Ｉ／Ｈ（Ｌｅｕｋｏｓｉｔｅ、ＭＡ）；非ホジキンリンパ腫の処置のためのヒト化抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体であるＳＭＡＲＴ ＩＤ１０（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．、ＣＡ）；非ホジキンリンパ腫の処置のための放射性標識したマウス抗ＨＬＡ−Ｄｒ１０抗体であるＯＮＣＯＬＹＭ（Ｔｅｃｈｎｉｃｌｏｎｅ，Ｉｎｃ．、ＣＡ）；ホジキン病または非ホジキンリンパ腫の処置のためのヒト化抗ＣＤ２ｍＡｂであるＡＬＬＯＭＵＮＥ（ＢｉｏＴｒａｎｓｐｌａｎｔ、ＣＡ）；ならびに結腸直腸がんの処置のためのヒト化抗ＣＥＡ抗体であるＣＥＡＣＩＤＥ（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ、ＮＪ）が含まれる。

【0198】

がん診断および治療のための有効な細胞標的を発見する試みにおいて、研究者は、１種または複数種の正常な非がん細胞（複数可）上と比較して、１種または複数種の特定のタイプ（複数可）のがん細胞の表面上に特異的に発現している膜貫通ポリペプチドまたはその他の点で腫瘍に関連するポリペプチドを同定することを探究してきた。しばしば、このような腫瘍に関連するポリペプチドは、非がん細胞の表面上と比較して、がん細胞の表面上により豊富に発現している。このような腫瘍に関連する細胞表面抗原ポリペプチドの同定は、抗体をベースとする治療によって破壊するために、がん細胞を特異的に標的とする能力を生じさせてきた。

【0199】

リンカー単位（Ｌ）
リンカー（本明細書において「［リンカー］」と称されることがある）は、薬物および抗体を連結して、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を形成するために使用することができる二官能性化合物である。このようなコンジュゲートは、例えば、腫瘍に関連する抗原に対するイムノコンジュゲートの形成において有用である。このようなコンジュゲートは、腫瘍細胞への細胞毒性薬の選択的送達を可能とする。

【0200】

ＡＤＣにおいて、リンカーは、ペイロードを抗体に付着させる役割を果たす。

【0201】

一態様において、第２の反応部位、例えば、抗体単位（例えば、抗体）上に存在する求核基と反応性である求電子基を有する、リンカー単位の第２のセクションが導入される。抗体上の有用な求核基には、これらに限定されないが、スルフヒドリル、ヒドロキシルおよびアミノ基が含まれる。抗体の求核基のヘテロ原子は、リンカー単位上の求電子基と反応性であり、リンカー単位への共有結合を形成する。有用な求電子基には、これらに限定されないが、マレイミドおよびハロアセトアミド基が含まれる。求電子基は、抗体付着のための好都合な部位を提供する。

【0202】

別の実施形態において、リンカー単位は、抗体上に存在する求電子基と反応性である求核基を有する反応部位を有する。抗体上の有用な求電子基には、これらに限定されないが、アルデヒドおよびケトンカルボニル基が含まれる。リンカー単位の求核基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応して、抗体への共有結合を形成することができる。リンカー単位上の有用な求核基には、これらに限定されないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジドが含まれる。抗体上の求電子基は、リンカー単位への付着のための好都合な部位を提供する。

【0203】

アミノ官能基はまた、カルボン酸、または化合物の活性化したエステルと反応して、アミド連結を形成することができるため、リンカー単位のための有用な反応部位である。典型的には、本発明のペプチドをベースとする化合物は、２つ以上のアミノ酸および／またはペプチドフラグメントの間のペプチド結合を形成させることによって調製することができる。このようなペプチド結合は、例えば、ペプチド化学の分野において周知である液相合成法（例えば、ＳｃｈｒｏｄｅｒおよびＬｕｂｋｅ、「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、第１巻、７６〜１３６頁、１９６５、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）によって調製することができる。

【0204】

本発明の文脈において、これらに限定されないが、特に、リンカー構成要素、例えば、Ｌ^１、Ｌ^２（Ｌ^２Ａ、Ｌ^２ＢおよびＬ^２Ｃを含めた）、ならびにＬ^３において、「〜の１つまたは複数から選択」または「〜の１つまたは複数」という言い回しは、同一でも異なってもよい複数の構成要素が逐次的に配列されるか、または配列し得ることを示す。このように、例えば、Ｌ^３は、−Ｃ_１〜６アルキル−、−ＮＲ−もしくは他の個々に一覧表示された構成要素であり得るが、−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲ−、または２つ以上の一覧表示された構成要素の任意の他の組合せであってもよい。

【0205】

化合物およびその抗体薬物コンジュゲートの合成
本発明の化合物およびコンジュゲートは、例示において下記で概要を述べる合成手順を使用して作製することができる。下でより詳細に記載するように、本発明の化合物およびコンジュゲートは、化合物に結合するための反応部位を有するリンカー単位のセクションを使用して調製することができる。一態様において、例えば抗体単位（例えば抗体）上に存在する求核基と反応性を有する求電子基などの第２の反応部位を有するリンカー単位の第２のセクションが導入される。抗体上の有用な求核基には、これらに限定されないが、スルフヒドリル、ヒドロキシルおよびアミノ基が含まれる。抗体の求核基のヘテロ原子は、リンカー単位上の求電子基と反応性であり、リンカー単位への共有結合を形成する。有用な求電子基には、これらに限定されないが、マレイミドおよびハロアセトアミド基が含まれる。求電子基は、抗体付着のための好都合な部位を提供する。

【0206】

別の実施形態において、リンカー単位は、抗体上に存在する求電子基と反応性である求核基を有する反応部位を有する。抗体上の有用な求電子基には、これらに限定されないが、アルデヒドおよびケトンカルボニル基が含まれる。リンカー単位の求核基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応して、抗体への共有結合を形成することができる。リンカー単位上の有用な求核基には、これらに限定されないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジドが含まれる。抗体上の求電子基は、リンカー単位への付着のための好都合な部位を提供する。

【0207】

アミノ官能基はまた、カルボン酸、または化合物の活性化したエステルと反応して、アミド連結を形成することができるため、リンカー単位のための有用な反応部位である。典型的には、本発明のペプチドをベースとする化合物は、２つ以上のアミノ酸および／またはペプチドフラグメントの間のペプチド結合を形成させることによって調製することができる。このようなペプチド結合は、例えば、ペプチド化学の分野において周知である液相合成法（例えば、ＳｃｈｒｏｄｅｒおよびＬｕｂｋｅ、「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、第１巻、７６〜１３６頁、１９６５、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）によって調製することができる。

【0208】

下でより詳細に記載するように、コンジュゲートは、本発明の化合物への結合のための反応部位を有するリンカーのセクションを使用し、抗体に対する反応部位を有するリンカー単位の別のセクションを導入して調製することができる。一態様において、リンカー単位は、抗体単位、例えば、抗体上に存在する求核基と反応性である求電子基を有する反応部位を有する。求電子基は、抗体付着のための好都合な部位を提供する。抗体上の有用な求核基には、これらに限定されないが、スルフヒドリル、ヒドロキシルおよびアミノ基が含まれる。抗体の求核基のヘテロ原子は、リンカー単位上の求電子基と反応性であり、リンカー単位への共有結合を形成する。有用な求電子基には、これらに限定されないが、マレイミドおよびハロアセトアミド基が含まれる。

【0209】

別の実施形態において、リンカー単位は、抗体単位上に存在する求電子基と反応性である求核基を有する反応部位を有する。抗体上の求電子基は、リンカー単位への付着のための好都合な部位を提供する。抗体上の有用な求電子基には、これらに限定されないが、アルデヒドおよびケトンカルボニル基が含まれる。リンカー単位の求核基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応して、抗体への共有結合を形成することができる。リンカー単位上の有用な求核基には、これらに限定されないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジドが含まれる。

【0210】

トランスグルタミナーゼとのコンジュゲーション
特定の実施形態において、本発明の化合物は、トランスグルタミナーゼの存在下でポリペプチド工学（例えば、ポリペプチドにおけるアミノ酸の欠失、挿入、置換、変異、または任意のこれらの組合せによる）によって反応性（すなわち、アミンおよびトランスグルタミナーゼの存在下でアシルドナーとして共有結合を形成する能力）が付与されたアシルドナーグルタミン含有タグ（例えば、Ｇｌｎ含有ペプチドタグもしくはＱ−タグ）または内因性グルタミンで操作されたＦｃ含有またはＦａｂ含有ポリペプチドに共有結合で架橋し得るが、ただし、本発明の化合物は、アミンドナー剤（例えば、反応性アミンを含み、または反応性アミンに付着している低分子）を含み、それによって、操作されたＦｃ含有ポリペプチドコンジュゲートの安定的および均質な集団を形成し、アミンドナー剤は、アシルドナーグルタミン含有タグまたは曝露された／利用可能な／反応性の内因性グルタミンを介してＦｃ含有またはＦａｂ含有ポリペプチドに部位特異的にコンジュゲートしている。例えば、本発明の化合物は、その全内容が参照により本明細書中に組み込まれている国際特許出願第ＰＣＴ／ＩＢ２０１１／０５４８９９号において記載されているようにコンジュゲートし得る。特定の実施形態において、トランスグルタミナーゼの存在下でポリペプチド工学によって反応性が付与されたアシルドナーグルタミン含有タグまたは内因性グルタミンで操作されたＦｃ含有またはＦａｂ含有ポリペプチドへの本発明の化合物のコンジュゲーションを促進するために、Ｚは、ＮＨ_２である。

【0211】

ヒト軽鎖カッパドメイン定常領域へのコンジュゲーション
特定の実施形態において、本発明の化合物は、ヒト軽鎖カッパドメイン定常領域（ＣＬκ）のＫ^１８８の側鎖に共有結合で付着し得る（Ｋａｂａｔによる完全軽鎖ナンバリング）。例えば、本発明の化合物は、その全内容が参照により本明細書中に組み込まれている米国特許出願第１３／１８０，２０４号に記載されているようにコンジュゲートし得る。特定の実施形態において、Ｋ１８８ＣＬκへのコンジュゲーションを促進するために、Ｚは、

【0212】

【化41】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^７は、出現する毎に、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、Ｂｒ、ＮＯ_２、ＣＮおよびＣＦ_３からなる群から独立に選択され、ｈは、１、２、３、４または５である。

【0213】

特定の実施形態において、本発明は、抗体（またはその抗原結合部分）に共有結合でコンジュゲートしている本発明の化合物を含む組成物を提供し、組成物中の本発明の化合物の少なくとも約５０％、または少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％は、Ｋ^１８８ＣＬκにおいて抗体またはその抗原結合部分にコンジュゲートしている。

【0214】

特定の実施形態において、本発明の化合物は、触媒抗体、例えば、アルドラーゼ抗体の結合部位、またはその抗原結合部分にコンジュゲートし得る。アルドラーゼ抗体は、（例えば、コンジュゲーションによる）干渉がないとき、脂肪族ケトンドナーとアルデヒドアクセプターとのアルドール付加反応を触媒する結合部位の一部を含有する。米国特許出願公開第ＵＳ２００６／２０５６７０号の内容、特に、リンカーについて記載している７８〜１１８頁、ならびに抗体、有用なフラグメント、そのバリアントおよび改変物、ｈ３８Ｃ２、結合部位および相補性決定領域（ＣＤＲ）、および関連する抗体技術について記載しているパラグラフ［０１５３］〜［０２３３］は、参照により本明細書中に組み込まれる。「結合部位」という用語は、抗原結合に関与するＣＤＲおよび隣接するフレームワーク残基を含む。

【0215】

組成物および投与方法
他の実施形態において、本発明の別の態様は、有効量の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲート、ならびに薬学的に許容できる担体またはビヒクルを含む医薬組成物に関する。特定の実施形態において、組成物は、動物またはヒトへの投与に適している。

【0216】

本医薬組成物は、組成物が患者に投与されることが可能となる任意の形態でもよい。例えば、組成物は、固体または液体の形態でもよい。典型的な投与経路には、これらに限定されないが、非経口、目および腫瘍内が含まれる。非経口投与は、皮下注射、静脈内、筋内または胸骨内の注射または注入技術を含む。一態様において、組成物は、非経口的に投与される。特定の実施形態において、組成物は、静脈内に投与される。

【0217】

医薬組成物は、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートが患者への組成物の投与によって生物が利用可能となることが可能となるように製剤することができる。組成物は、１つまたは複数の投与量単位の形態を取ることができ、例えば、錠剤は、単一の投与量単位でよく、液体形態の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートの容器は、複数の投与量単位を保持することができる。

【0218】

医薬組成物の調製において使用される材料は、使用される量で無毒性のものであってもよい。医薬組成物中の活性成分（複数可）の最適な投与量は、種々の要因によって決まることは当業者には明らかである。関連要因には、これらに限定されないが、動物のタイプ（例えば、ヒト）、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートの特定の形態、投与の様式、ならびに用いる組成物が含まれる。

【0219】

組成物が、例えば、錠剤または散剤形態であるように、薬学的に許容できる担体またはビヒクルは、固体または微粒子でもよい。担体（複数可）は、液体でもよい。さらに、担体（複数可）は、微粒子でもよい。

【0220】

組成物は、液体の形態、例えば、溶液剤、乳剤または懸濁剤でもよい。注射による投与のための組成物において、界面活性剤、保存剤、湿潤剤、分散化剤、懸濁化剤、緩衝液、安定剤および等張剤の１つまたは複数をまた含むことができる。

【0221】

液体組成物はまた、これらが溶液剤、懸濁剤かまたは他の同様の形態かに関わらず、下記の１つまたは複数を含むことができる。無菌賦形剤、例えば、注射用水、食塩水、好ましくは生理食塩水、リンゲル液、等張塩化ナトリウム、不揮発性油、例えば、溶媒または懸濁媒としての役割を果たすことができる合成モノまたはジグリセリド、ポリエチレングリコール、グリセリン、シクロデキストリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；緩衝液、例えば、酢酸、クエン酸、リン酸またはアミノ酸、および浸透圧の調節のための薬剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース。非経口組成物は、ガラス、プラスチックまたは他の材料でできた、アンプル、使い捨て注射器または複数回用量バイアル中に封入することができる。生理食塩水は、例示的なアジュバントである。注射可能な組成物は好ましくは、無菌である。

【0222】

特定の障害または状態の処置において有効である本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートの量は、障害または状態の性質によって決まり、標準的な臨床技術によって決定することができる。さらに、インビトロまたはインビボでのアッセイを場合によって用い、最適な投与量範囲の同定を助けることができる。組成物中に用いられる正確な用量はまた、投与経路、および疾患または障害の重症度によって決まり、医師の判断および各患者の状況によって決定すべきである。

【0223】

組成物は、適切な投与量が得られるように、有効量の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートを含む。典型的には、この量は、組成物の重量によって少なくとも約０．０１％の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートである。例示的な実施形態において、非経口投与量単位が、約０．０１％〜約２重量％の量の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートを含有するように、医薬組成物を調製する。

【0224】

静脈内投与のために、組成物は、患者の体重１ｋｇ当たり約０．０１〜約１００ｍｇの本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートを含むことができる。一態様において、組成物は、患者の体重１ｋｇ当たり約１〜約１００ｍｇの本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートを含むことができる。別の態様において、投与される量は、約０．１〜約２５ｍｇ／ｋｇ体重の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートの範囲である。

【0225】

一般に、患者に投与される本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートの投与量は典型的には、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ患者の体重である。一態様において、患者に投与される投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ患者の体重である。別の態様において、患者に投与される投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ患者の体重である。さらに別の態様において、患者に投与される投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ患者の体重である。また別の態様において、投与される投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ患者の体重である。さらに別の態様において、投与される投与量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ患者の体重である。

【0226】

本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートは、任意の好都合な経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって投与することができる。投与は、全身性または局所でもよい。様々な送達系、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、カプセルなどにおけるカプセル化は公知であり、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートを投与するために使用することができる。特定の実施形態において、複数種の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートを、患者に投与する。

【0227】

特定の実施形態において、１種または複数種の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートを、処置を必要とする領域において局所的に投与することが望ましくてもよい。限定としてではなく、例えば、手術の間の局所注入；例えば、手術後の創傷被覆材と併せた局所適用；注射による；カテーテルを用いた；またはインプラントを用いた（インプラントは、膜、例えば、シラスティック膜、もしくは繊維を含めた多孔性、非多孔性、もしくはゼラチン質材料のものである）によって、これは達成することができる。一実施形態において、投与は、がん、腫瘍または新生物または前新生物組織の部位（または以前の部位）における直接の注射によってなされてもよい。別の実施形態において、投与は、自己免疫疾患の徴候の部位（または以前の部位）における直接の注射によってなされてもよい。

【0228】

さらに別の実施形態において、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートは、これらに限定されないがポンプなどの制御放出系で送達することができ、または様々なポリマー材料を使用することができる。さらに別の実施形態において、制御放出系は、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートの標的、例えば、肝臓の近くに配置することができ、それによって、全身性用量の１画分のみを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、前掲、第２巻、１１５〜１３８頁（１９８４）を参照されたい）。Ｌａｎｇｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７〜１５３３（１９９０））による概説において考察されている他の制御放出系を、使用することができる。

【0229】

「担体」という用語は、賦形剤、アジュバントまたは添加剤を指し、これと共に化合物またはその抗体薬物コンジュゲートが投与される。このような医薬担体は、液体、例えば、水、および石油、動物、野菜または合成起源のものを含めた油でもよい。担体は、食塩水などでもよい。さらに、助剤、安定化剤および他の薬剤を使用することができる。一実施形態において、患者に投与するとき、化合物またはコンジュゲートおよび薬学的に許容できる担体は、無菌である。化合物またはコンジュゲートが静脈内に投与されるとき、水は例示的な担体である。食塩溶液および水性デキストロースおよびグリセロール溶液はまた、特に、注射可能な溶液のための液体担体として用いることができる。本組成物はまた、必要に応じて、少量の湿潤剤または乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含有することができる。

【0230】

本組成物は、溶液剤、ペレット、散剤、持続放出製剤の形態、または使用に適した任意の他の形態を取ることができる。適切な医薬担体の他の例は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎに記載されている。

【0231】

一実施形態において、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートは、動物、特に、人間への静脈内投与のために適合された医薬組成物としての通例の手順によって製剤される。典型的には、静脈内投与のための担体またはビヒクルは、無菌の等張緩衝水溶液である。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤を含むことができる。静脈内投与のための組成物は、局所麻酔剤、例えば、注射の部位における疼痛を緩和するリグノカインを場合により含むことができる。一般に、成分は、別々に、または単位剤形、例えば、密封された容器、例えば、活性剤の量を示すアンプルもしくはサッシェ中の、凍結乾燥した粉末もしくは水を含有しない濃縮物として、一緒に混合して供給される。本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートが注入によって投与される場合、例えば、無菌の医薬品グレードの水または食塩水を含有する注入ボトルで分注することができる。本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートが注射によって投与される場合、投与の前に成分を混合することができるように、注射用滅菌水、または食塩水のアンプルを提供することができる。

【0232】

組成物は、固体または液体の投与量単位の物理的形態を変更する様々な材料を含むことができる。例えば、組成物は、活性成分の周りのコーティングシェルを形成する材料を含むことができる。コーティングシェルを形成する材料は典型的には不活性であり、例えば、糖、セラック、および他の腸溶性コーティング剤から選択することができる。代わりに、活性成分をゼラチンカプセル中に入れてもよい。

【0233】

固体または液体形態であろうと、本組成物は、がんの処置において使用される薬理学的薬剤を含むことができる。

【0234】

化合物およびその抗体薬物コンジュゲートの治療上の使用
本発明の別の態様は、がんを処置するための、本発明の化合物およびその抗体薬物コンジュゲートを使用する方法に関する。

【0235】

本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートは、腫瘍細胞もしくはがん細胞の増殖を阻害し、腫瘍もしくはがん細胞においてアポトーシスをもたらし、または患者におけるがんを処置するために有用である。本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートは、したがって、動物のがんの処置のための種々の状況において使用することができる。前記コンジュゲートを使用して、腫瘍細胞またはがん細胞へ本発明の化合物を送達することができる。理論に束縛されるものではないが、一実施形態において、コンジュゲートの抗体は、がん細胞または腫瘍細胞と関連する抗原に結合し、または会合し、コンジュゲートは、受容体仲介エンドサイトーシスまたは他の内部移行機序によって、腫瘍細胞またはがん細胞内に取り込まれる（内部移行する）ことができる。抗原は腫瘍細胞もしくはがん細胞に付着することができ、または腫瘍細胞もしくはがん細胞と関連する細胞外マトリックスタンパク質でもよい。特定の実施形態において、いったん細胞内にあれば、１つまたは複数の特異的ペプチド配列は、１つまたは複数の腫瘍細胞またはがん細胞に関連するプロテアーゼによって酵素的にまたは加水分解的に切断され、コンジュゲートからの本発明の化合物の放出がもたらされる。次いで、放出された本発明の化合物は、細胞内で自由に移動し、細胞毒性または細胞増殖抑制活性を誘発する。コンジュゲートはまた細胞内プロテアーゼによって切断され、本発明の化合物を放出することができる。代わりの実施形態において、本発明の化合物は、腫瘍細胞またはがん細胞の外側のコンジュゲートから切断され、本発明の化合物はそれに続いて細胞に侵入する。

【0236】

特定の実施形態において、コンジュゲートは、コンジュゲーション特異的な腫瘍またはがん薬物ターゲティングを提供し、このように、本発明の化合物の一般毒性を低減させる。

【0237】

別の実施形態において、抗体単位は、腫瘍細胞またはがん細胞に結合する。

【0238】

別の実施形態において、抗体単位は、腫瘍細胞またはがん細胞の表面上にある腫瘍細胞またはがん細胞抗原に結合する。

【0239】

別の実施形態において、抗体単位は、腫瘍細胞またはがん細胞と関連する細胞外マトリックスタンパク質である、腫瘍細胞またはがん細胞抗原に結合する。

【0240】

特定の腫瘍細胞またはがん細胞についての抗体単位の特異性は、最も効果的に処置される腫瘍またはがんを決定するために重要であり得る。

【0241】

本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートで処置することができる特定のタイプのがんには、これらに限定されないが、膀胱、乳房、子宮頸部、結腸、子宮内膜、腎臓、肺、食道、卵巣、前立腺、膵臓、皮膚、胃、および精巣の癌腫；ならびにこれらに限定されないが、白血病およびリンパ腫を含めた血液由来のがんが含まれる。

【0242】

がんのための多様式治療。これらに限定されないが、腫瘍、転移、または制御されない細胞増殖によって特徴付けられる他の疾患もしくは障害を含めたがんは、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートの投与によって処置または阻害することができる。

【0243】

他の実施形態において、それを必要としている患者に、有効量の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲート、ならびに化学療法剤を投与することを含む、がんを処置する方法を提供する。一実施形態において、化学療法剤は、それによってがんの処置が不応性であると見出されてこなかったものである。別の実施形態において、化学療法剤は、それによってがんの処置が不応性であると見出されてきたものである。本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートは、がんのための処置として手術をまた受けた患者に投与することができる。

【0244】

いくつかの実施形態において、患者はまた、さらなる処置、例えば、放射線療法を受ける。特定の実施形態において、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートは、化学療法剤または放射線療法と同時に投与される。別の特定の実施形態において、化学療法剤または放射線療法は、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートの投与の前に、または投与に続けて投与する。

【0245】

化学療法剤は、一連のセッションに亘り投与することができる。化学療法剤のいずれかの１つまたは組合せ、このような標準的な化学療法剤（複数可）を投与することができる。

【0246】

さらに、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートによるがんの処置の方法は、化学療法または放射線療法に代わるものとして提供されるが、化学療法または放射線療法は、毒性がありすぎると証明されてきており、または証明することができ、例えば、処置される対象にとって許容されないまたは耐えられない副作用をもたらす。処置される患者は、場合によって、どのような処置が許容されまたは耐えられると見出されるかによって、別のがん処置、例えば、手術、放射線療法または化学療法で処置することができる。

【0247】

本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートはまた、インビトロまたはエキソビボの様式で、例えば、これらに限定されないが、白血病およびリンパ腫を含めた特定のがんの処置のために使用することができ、このような処置は、自己幹細胞移植が関与する。これは、動物の自己造血幹細胞を収集し、ここから全てのがん細胞を一掃し、次いで、動物の残存する骨髄細胞集団を、付随的な高線量の放射線療法を伴いもしくは伴わずに、高用量の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートの投与によって根絶し、幹細胞移植片を動物中に再注入する複数ステップのプロセスを含み得る。次いで、骨髄機能が元に戻る間に支持療法を提供し、患者を回復させる。

【0248】

本発明を下記の実施例においてさらに記載するが、これは本発明の範囲を制限することを意図するものではない。

【0249】

放出された種
本発明のさらなる実施形態は、１種または複数種のがん細胞または腫瘍細胞が関連するプロテアーゼによる酵素的切断および／または加水切断であると考えられるものによる、がん細胞もしくは腫瘍細胞内またはこれらの近くに放出された化学種を含む。このような化合物は、本明細書に記載されている種を含み、また化合物、例えば、構造において記載されるものを含む。

【0250】

式（ＩＩ）の化合物（複数可）：
Ｌ−Ｐ
（ＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩：
［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ^１−Ｌ^２−Ｌ^３であり、Ｌ^３は、Ｐに結合しており、
Ｐは、式（Ｉ）のラジカルであり、

【0251】

【化42】

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式中、
破線は、任意選択の結合を表し、
各Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ^２は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ’は、ＣＲまたはＮであり、
各Ｘ’’は、Ｘ’’が、Ｌ^２またはさらなるＬ^３に結合している場合、ＣＨ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−もしくはＮ−であり、またはそうでなければ、Ｏ、Ｓ、ＣＲＲ、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲもしくはＮＲＲであり、
各Ｘ’’’は、Ｘ’’’が、Ｌ^２に結合している場合、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−もしくはＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−であり、またはそうでなければ、Ｒであり、
Ｙは、−Ｃ（Ｒ）_２−、−Ｏ−、−ＮＲ−または−Ｓ−であり、
Ｒ^１は、−Ｒ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ^１３、−ＯＣＯＮＲ^１４Ｒ^１５、−ＯＣＯＮ（Ｒ^１４）ＮＲ（Ｒ^１５）、＝Ｏ（酸素への二重結合）および−ＮＲ^１４Ｒ^１５からなる群から選択され、
Ｒ^２およびＲ^３は、水素およびＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^４およびＲ^５は、水素、−ＯＲ、−ＮＲ^１４Ｒ^１５およびオキソからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ならびにヒドロキシルおよびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_２〜５アルキリデンを形成し、
Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってオキソであり、または
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分は、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１〜６アルキルまたは−ＯＲであり、
Ｒ^９は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−または−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−であり、
Ｌ^１は、−酸、−ＮＲ−酸および

【0252】

【化43】

[この文献は図面を表示できません]

から選択され、
Ｌ^２は、Ｌ^２Ａ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２ＣまたはＬ^２Ｃ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２Ａであり、
Ｌ^２Ａは、
−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＣ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−（ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル）_１〜４−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−および（−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−）_１〜２０から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ａは、存在せず、
Ｌ^２Ｂは、ＡＡ_０〜ａａから選択され、ＡＡは、天然または非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ^２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ｃは、存在せず、
Ｌ^３は、−Ｃ_１〜６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８カルボシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−ＮＲ−、−ＮＲ−ＮＲ−および−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（２つのＲ基は接合して、４〜１０員環を形成してもよい）、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＳＯ_２−ＮＲ−、−ＳＯ_２−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−Ｃ（Ｏ）−、

【0253】

【化44】

[この文献は図面を表示できません]

の１つもしくは複数から選択され、またはＬ^３は、存在せず、
Ｒ^１３は、水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜８カルボシクリル、Ｃ_３〜８ヘテロシクリル、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_６〜１４アリール、Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から選択され、Ｒ^１３は、−ＮＲＲまたは−ＳＯ_２ＮＲＲで置換されていてもよく、
各Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素、ヒドロキシル、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲＲ、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、
またはＲ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲ、および（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
酸は、−ＳＣＨ_２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ_２）、−ＮＨ（ＣＨ_２）_４ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ_２）および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ_２）から選択されるアミノ酸残基であり、
各Ｒは、水素および−Ｃ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
各ｍは、独立に、０、１、２または３である］。

【0254】

さらに、式（ＩＩ’）の化合物（複数可）：
Ｌ−Ｐ’
（ＩＩ’）
または薬学的に許容できるその塩：
［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ^１−Ｌ^２−Ｌ^３であり、Ｌ^３は、Ｐ’に結合しており、
Ｐ’は、式（Ｉ’）のラジカルであり、

【0255】

【化45】

[この文献は図面を表示できません]

式中、
破線は、任意選択の結合を表し、
各Ｘ^１は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ^２は、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−からなる群から独立に選択され、
各Ｘ’は、ＣＲまたはＮであり、
各Ｘ’’は、Ｘ’’が、Ｌ^２またはさらなるＬ^３に結合している場合、ＣＨ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−ＮＲ−、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−もしくはＮ−であり、またはそうでなければ、Ｏ、Ｓ、ＣＲＲ、ＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲもしくはＮＲＲであり、
各Ｘ’’’は、Ｘ’’’が、Ｌ^２に結合している場合、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−もしくはＣＲ−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−であり、またはそうでなければ、Ｒであり、
Ｙは、−Ｃ（Ｒ）_２−、−Ｏ−、−ＮＲ−または−Ｓ−であり、
Ｒ^１は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−、−ＯＲ’’、−ＯＣＯＲ^１３’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲＲ^１４’、−ＯＣＯＮ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）−、および−ＮＲ−からなる群から選択され、
Ｒ^２およびＲ^３は、水素およびＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^４およびＲ^５は、水素、−ＯＲ、−ＮＲ^１４Ｒ^１５およびオキソからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ならびにヒドロキシルおよびハロゲンから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいＣ_２〜５アルキリデンを形成し、
Ｒ^６およびＲ^７は、一緒になってオキソであり、または
Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素および硫黄からなる群から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む３〜５員のヘテロシクロアルキル部分を形成し、前記ヘテロシクロアルキル部分は、Ｒから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１〜６アルキルまたは−ＯＲであり、
Ｒ^９は、水素、−Ｃ_１〜６アルキル、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）−ＳＲ、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ^１４Ｒ^１５、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｎ（Ｒ）ＣＯＲ^１３および−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲ^１４Ｎ（Ｒ）Ｒ^１５から独立に選択され、
Ｌ^１は、−酸、−ＮＲ−酸および

【0256】

【化46】

[この文献は図面を表示できません]

から選択され、
Ｌ^２は、Ｌ^２Ａ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２ＣまたはＬ^２Ｃ−Ｌ^２Ｂ−Ｌ^２Ａであり、
Ｌ^２Ａは、
−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＣ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−、−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−（ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル）_１〜４−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｓ−および（−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−）_１〜２０から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ａは、存在せず、
Ｌ^２Ｂは、ＡＡ_０〜ａａから選択され、ＡＡは、天然または非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ^２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含み、またはＬ^２Ｃは、存在せず、
Ｌ^３は、−Ｃ_１〜６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８ヘテロシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_３〜Ｃ_８カルボシクリル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−、−Ｓ−、−ＮＲ−、−ＮＲ−ＮＲ−および−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（２つのＲ基は接合して、４〜１０員環を形成してもよい）、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＮＲ−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−ＳＯ_２−ＮＲ−、−ＳＯ_２−、−ＮＲ−Ｃ_１〜６アルキル−フェニル−Ｃ（Ｏ）−、

【0257】

【化47】

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の１つもしくは複数から選択され、またはＬ^３は、存在せず、
Ｒ^１３’は、結合、−Ｃ_１〜６アルキレン−、−Ｃ_３〜８カルボシクリル−、−Ｃ_３〜８ヘテロシクリル−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_６〜１４アリール−、−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ_５〜１４ヘテロアリール−からなる群から選択され、
各Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素、ヒドロキシル、−ＮＲＲ、−ＮＲＮＲ_２、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０カルボシクリル、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲＲ、−Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_６〜１４アリール、−Ｃ_１〜６アルキレン−Ｃ_６〜１４アリールおよび−Ｃ_５〜１４ヘテロアリールからなる群から独立に選択され、
またはＲ^１４およびＲ^１５は、これらが接合している原子（複数可）と一緒になって、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１４、Ｒ^１５、もしくは両方、またはＲ^１４およびＲ^１５と共に形成される環は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＮＲＲまたは−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
各Ｒ^１４’は、結合、−ＮＲ−、−Ｃ_３〜１０カルボシクリル−、−Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_１〜６ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＲ−、および−Ｃ_１〜６アルキレン−からなる群から独立に選択され、
Ｒ^１４’は、−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｒ^１８で置換されていてもよく、各Ｒ^１８は、（ｉ）−ＮＲＲ、（ｉｉ）−Ｃ（ＮＲＲ）（Ｃ（Ｏ）ＯＲ）、（ｉｉｉ）−Ｓ−Ｒ、（ｉｖ）ハロゲン、−ＣＦ_３、−ＮＲＲまたは−ＳＯ_２ＮＲＲの１つまたは複数で置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、（ｖ）−ＳＯ_２Ｒ、（ｖｉ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｖｉｉ）−ＳＯ_２ＮＲＲ、（ｖｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、（ｉｘ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（ｘ）−ＮＲＲ、−ＳＯ_２ＮＲＲまたは−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０〜６ＮＲＲで置換されていてもよい−Ｃ_４〜６シクロアルキル、（ｘｉ）−Ｒ、（ｘｉｉ）−ＯＲ、（ｘｉｉｉ）−Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｉｖ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＮＲＲ、（ｘｖ）−（Ｃ（Ｒ）_２）_ｍ−Ｏ−ＮＲＲおよび（ｘｉｖ）−Ｓ−Ｓ−Ｃ_１〜６アルキル−ＮＲＲから独立に選択され、
酸は、−ＳＣＨ_２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ_２）、−ＮＨ（ＣＨ_２）_４ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ_２）および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ_２）から選択されるアミノ酸残基であり、
各Ｒは、水素および−Ｃ_１〜６アルキルからなる群から独立に選択され、
各Ｒ’は、−Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_８ヘテロアルキルおよびアリールから独立に選択され、
各Ｒ’’は、結合および−Ｃ_１〜６アルキレン−からなる群から独立に選択され、
各ｍは、独立に、０、１、２または３である］。

【実施例】

【0258】

天然物の産生
下記の手順は、本発明においてペイロードとして有用な「天然物」の産生についての概要を述べる。「天然物」という用語は、産物が発酵工程によって産生されることを表すが、これらの産物が公知であり、または天然に見出すことができることを示唆しない。天然物は、接頭辞「ＮＰ」と共に下記で記述する。

【0259】

（実施例１）
［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃ＮＰ１）；［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃ＮＰ２）；［（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−５−ヒドロキシ−４−メチリデンテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］酢酸（＃ＮＰ３）；［（２Ｓ，６Ｓ）−６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−４−メチリデンテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］酢酸（＃ＮＰ４）の発酵、抽出および単離

【0260】

【化48】

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ステップ１：シュードモナス属種の番号２６６３（菌株ＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１）を使用した発酵：
シュードモナス属種の番号２６６３（菌株ＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１）は、産業技術総合研究所（日本、〒３０５−８５６６、茨城県つくば市東１−１−１、つくば中央第６、ＡＩＳＴ）における産業技術総合研究所特許生物寄託センター（ＩＰＯＤ）から得た。生化学的（ＢＢＬ Ｃｒｙｓｔａｌ Ｋｉｔ）および１６Ｓ ｒＲＮＡ配列分析によって行われたそれに続く分類学的研究によって、ＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１がバークホルデリア属の種であったことが明らかになった。

【0261】

栄養寒天プレート上にＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１野生型の冷凍培養物を希釈平板培養することによって単一のコロニー単離物を培養した。５０ｍｌの種培地（１％ポリペプトン、０．５％酵母抽出物、０．５％ＮａＣｌ）を含有するいくつかの２５０ｍｌのエルレンマイヤーフラスコに、寒天増殖培養物を接種し、振盪しながら３０℃にて２２０ｒｐｍで１８〜２０時間インキュベートした。種培養を、２．５％（ｖ／ｖ）でバッフルを有さない２．８Ｌのフェルンバッハフラスコ当たり５００ｍｌの産生培地（１％可溶性デンプン、１％グリセリン、０．５％グルコース、１％ＨｙＳｏｙダイズペプトン、０．５％コーンスティープリカー、０．２％硫酸アンモニウム、０．００６％硫酸マグネシウム、６Ｈ_２Ｏ、０．２％ＣａＣＯ_３、ｐＨ７．０）中に接種した。発酵物を２５℃にて振盪しながら２００ｒｐｍで７２時間インキュベートした。

【0262】

ステップ２。発酵ブロスの抽出：実施例１のステップ１からの発酵の終わりに、５０ｇ／Ｌの湿ったＤＩＡＩＯＮ ＨＰ−２０樹脂を生成物発酵の上清に加え、混合物を１００ｒｐｍで３０分間振盪した。ＨＰ−２０を遠心分離によって集め、次いで、周囲温度にて酢酸エチルで抽出した。より詳細には、実施例１のステップ１によって、１３ＬのＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１の発酵を、２５℃にて７２時間行った。全ブロスを、３８００ｒｐｍで３０分間遠心した。細胞を廃棄し、上清を事前洗浄した湿ったＨＰ２０樹脂（２６０ｇの乾重量）と混合した。このように得られた懸濁液を、振盪機上で周囲温度にて１時間振盪した。化合物が結合したＨＰ２０樹脂を酢酸エチル（毎回１Ｌ）で２回抽出し、酢酸エチル溶液をセライト上で濾過し、それに続いて減圧下での蒸発を行い、明るい色の粗抽出液（２．４ｇ）を得た。

【0263】

ステップ３：［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃ＮＰ１）；［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃ＮＰ２）の単離および特性決定：実施例１のステップ２からの粗抽出液を、１：１のアセトニトリル／ジメチルスルホキシドの混合物（全体で１４ｍＬ）に溶解した。粘稠溶液を濾過し、次いで、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｃ１８ＤＥＬＴＡ ＰＡＫ（ＷＡＴ０１１８０１）、３００×５０ｍｍ、１５μｍ、１００Ａ；移動相Ａ：１：１のアセトニトリル／Ｈ_２Ｏ中の０．０２％酢酸（ｖｖ）；移動相Ｂ：３：１のアセトニトリル／Ｈ_２Ｏ中の０．０２％酢酸（ｖ／ｖ）、および移動相Ｃ：アセトニトリル中の０．０２％酢酸（ｖ／ｖ）、勾配：５分間１００％Ａ、１８分に亘り０％Ａから１００％Ｂ、および２分に亘り１００％Ｂから１００％Ｃ、および２分間１００％Ｃ、流量：５０ｍＬ／分）によって精製した。１３．５分および１８．０分の保持時間を伴う画分を集め、フリーズドライし、＃ＮＰ１（１７２．５ｍｇ）および＃ＮＰ２（２２７．２ｍｇ）をそれぞれ白色の粉末として得た。１４．８分および２０．５分の保持時間を伴う画分をまた集め、フリーズドライし、２つの半精製した灰色がかった粉末ＩおよびＩＩを得た。
＃ＮＰ１；ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝９．３６分（純度９２．５％）；HRESIMS
(プロトコルO) m/z 536.2837 [M+H]⁺; ¹H
NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 12.20 (br s,
D₂O交換可能), 7.80 (d, J = 7.9, 1H, D₂O交換可能), 6.35 (dq, J = 6.0, 6.0, 1H), 6.32 (br d, J = 15.6, 1H),
6.10 (d, J = 11.2, 1H), 5.85 (dd, J = 11.8, 7.4, 1H), 5.58 (dd, J = 15.5, 5.8,
1H), 5.49 (br dd, J = 7.0, 7.0, 1H), 4.24 (m, 2H), 3.63 (m, 2H), 3.49 (ddd, J =
5.5, 5.5, 2.5, 1H), 3.24 (d, J = 6.0, 1H), 2.74 (d, J = 3.5, 1H), 2.57 (d, J =
3.5, 1H), 2.55 (dd, J = 16.4, 8.5, 1H), 2.46 (m, 1H), 2.28 (m, 1H), 2.18 (m, 1H),
1.97(s, 3H), 1.82 (m, 1H), 1.79 (m, 2H), 1.68 (s, 3H), 1.65 (m, 1H), 1.56 (m),
1.23 (d, J = 6.4, 3H), 1.06 (d, J = 6.5, 3H), 0.93 (d, J = 7.0, 3H).¹³C
NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ172.15, 169.66,
164.55, 142.76, 136.22, 133.88, 128.84, 123.73, 122.83, 79.90, 76.93, 74.88,
70.35, 68.10, 67.93, 57.36, 49.63, 46.39, 39.09, 35.21, 33.91, 31.71, 28.67,
21.02, 19.96, 17.79, 14.22, 12.41.
＃ＮＰ２、ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１０．９３分（純度９０．４％）；HRESIMS
(プロトコルO) m/z 520.2895 [M+H]⁺; ¹H
NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ12.13
(br s, 1H, D₂O交換可能), 7.80 (d, J = 7.9, 1H, D₂O交換可能), 6.35 (dq, J = 6.0, 6.0, 1H), 6.27 (br d, J = 15.8, 1H), 6.10 (d,
J = 11.2, 1H), 5.85 (dd, J = 11.8, 7.3, 1H), 5.57 (dd, J = 15.6, 5.8, 1H), 5.50
(br dd, J = 7.0, 7.0, 1H), 4.50 (ddd, J = 5.5, 5.5, 5.5, 1H), 4.29 (m, 1H),
3.63 (m, 2H), 3.48 (m, 1H), 2.61 (s, 2H), 2.58 (dd, J = 16.0, 8.5, 1H), 2.49
(m, 1H), 2.28 (m, 1H), 2.18 (m, 1H), 1.96 (s, 3H), 1.79 (m, 2H), 1.76 (m, 1H),
1.68 (s, 3H), 1.65 (m, 1H), 1.63 (m, 1H), 1.40 (dd, J = 11.5, 7.2, 1H), 1.24
(d, J = 6.4, 3H), 1.06 (d, J = 6.4, 3H), 0.94 (d, J = 7.0, 3H). ¹³C
NMR (100 MHz, DMSO-d₆) 172.88, 169.64, 164.56, 142.75, 135.37,
133.74, 128.99, 126.57, 122.84, 79.97, 74.90, 70.36, 68.16, 68.11, 54.71,
52.25, 46.40, 39.08, 37.22, 36.46, 35.23, 31.72, 28.71, 21.01, 19.95, 17.78,
14.23, 12.40.

【0264】

ステップ４：［（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−５−ヒドロキシ−４−メチリデンテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］酢酸（＃ＮＰ３）の単離。
実施例１のステップ２において単離した半精製した粉末Ｉを、逆相ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ−ＯＤＳ−Ａ、２５０×３０ｍｍ、Ｓ−１０μｍ、１２ｎｍ：移動相Ａ：水中の０．０２％酢酸；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％酢酸：勾配系：２３分に亘り３０％〜１００％Ｂ、および１分間１００％Ｂで保持、流量：２０ｍＬ／分）によってさらに精製し、＃ＮＰ３（７．６ｍｇ）を白色の粉末として得た。
＃ＮＰ３：ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１０．９分（純度９４．２％）；HRESIMS
(プロトコルO) m/z 520.2910 [M+H]⁺; ¹H
NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ7.76
(d, J = 7.9, 1H, D₂O交換可能), 6.35 (dq, J =
6.4, 6.4, 1H), 6.22 (br d, J = 15.8, 1H), 6.10 (d, J = 11.0, 1H), 5.85 (dd, J =
11.8, 7.4, 1H), 5.57 (dd, J = 15.5, 5.8, 1H), 5.48 (br dd, J = 7.0, 7.0, 1H),
5.04 (br s, 1H), 4.80 (br s, 1H), 4.18 (m, 1H), 3.88 (dd, J = 5.8, 5.8, 1H),
3.63 (m, 2H), 3.49 (ddd, J = 6.0, 6.0, 2.5, 1H), 2.37 (m, 2H), 2.33 (m, 1H),
2.27 (m, 1H), 2.23 (m, 1H), 2.17 (m, 1H), 1.97 (s, 3H), 1.79 (m, 2H), 1.68 (s,
3H), 1.65 (m, 1H), 1.24 (d, J = 6.4, 3H), 1.06 (d, J = 6.5, 3H), 0.94 (d, J =
7.0, 3H). ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ172.35, 169.57, 164.50, 144.64, 142.64, 136.08, 133.77, 128.74,
125.24, 122.81, 108.88, 79.95, 76.97, 74.84, 72.37, 69.47, 68.02, 46.34, 38.09,
36.97, 35.17, 31.67, 28.70, 20.95, 19.91, 17.72, 14.20, 12.34.

【0265】

ステップ５：［（２Ｓ，６Ｓ）−６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−４−メチリデンテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］酢酸（＃ＮＰ４）の単離。
実施例１のステップ２において単離した半精製した粉末ＩＩを、逆相ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ−ＯＤＳ−Ａ、２５０×３０ｍｍ、Ｓ−１０μｍ、１２ｎｍ：移動相Ａ：水中の０．０２％酢酸；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％酢酸：勾配系：２３分に亘り３０％〜１００％Ｂ、および１００％Ｂを１分間保持、流量：２０ｍＬ／分）によってさらに精製し、＃ＮＰ４（１２．２ｍｇ）を白色の粉末として得た。
＃ＮＰ４：ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１２．７分（純度９６．５％）；HRESIMS
(プロトコルO) m/z 504.2959 [M+H]⁺. ¹H
NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ7.75 (d, J =
7.9, 1H, D₂O交換可能), 6.37 (dq, J = 7.5, 6.4,
1H), 6.23 (br d, J = 16.0, 1H), 6.10 (d, J = 11.8, 1H), 5.85 (dd, J = 11.8,
7.5, 1H), 5.53 (dd, J = 16.0, 5.6, 1H), 5.51 (dd, J = 6.5, 6.5, 1H), 4.80 (br
s, 1H), 4.76 (br s, 1H), 4.32 (ddd, J = 5.6, 5.5, 5.5, 1H), 4.13 (m, 1H), 3.63
(m, 2H), 3.49 (ddd, J = 6.0, 6.0, 2.5, 1H), 2.38 (m, 2H), 2.36 (dd, J = 11.5,
5.0, 1H), 2.32 (m, 1H), 2.29 (m, 1H), 2.18 (br dd, J = 11.9, 6.5, 1H), 2.13
(dd, J = 11.5, 5.9, 1H), 2.00 (dd, J = 10.5, 7.0, 1H), 1.97 (s, 3H), 1.79 (m,
2H), 1.67 (s, 3H), 1.65 (m, 1H), 1.24 (d, J = 6.4, 3H), 1.05 (d, J = 6.3, 3H),
0.94 (d, J = 7.0, 3H). ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ172.11, 169.61, 164.54, 142.69, 141.40, 135.72, 133.71, 129.01,
126.48, 122.83, 110.53, 79.94, 74.86, 71.99, 68.76, 68.06, 46.37, 38.97, 38.92,
38.70, 35.19, 31.70, 28.71, 20.97, 19.92, 17.74, 14.21, 12.36.

【0266】

（実施例２）
天然物類似体：（５Ｒ）−５−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，５−アンヒドロ−１−（カルボキシメチル）−３−Ｃ−（クロロメチル）−２−デオキシペンチトール（＃ＮＰ５）；（６Ｒ）−６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１−デオキシ−４−Ｃ−（ヒドロキシメチル）ヘキサ−２−ウロピラノース（＃ＮＰ６）；（４−［（アセチルオキシ）メチル］−６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−４−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）酢酸（＃ＮＰ７）；［６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−４−（クロロメチル）−４−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］酢酸（＃ＮＰ８）；４−Ｃ−［（アセチルオキシ）メチル］−６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１−デオキシヘキサ−２−ウロピラノース（＃ＮＰ９）；６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−４−Ｃ−［（｛［６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−４−（クロロメチル）−４−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］アセチル｝オキシ）メチル］−１−デオキシヘキサ−２−ウロピラノース（＃ＮＰ１０）；（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−２，５−ジメチル−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−［（２Ｓ）−４−メチル−６−オキソ−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］ペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃ＮＰ１１）の発酵、抽出および単離。

【0267】

【化49】

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ステップ１：実施例１、ステップ２におけるように調製した粗固体抽出物（３．７ｇ）を、メタノールに溶解し、メタノールを使用してＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ２０カラム上で分画し、１５．０時間の期間自動化画分コレクターを使用して溶離液を１５分間隔で集めた（全部で６５画分を集めた）。これからの画分−１９を、逆相ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ−ＯＤＳ−Ａ、２５０×３０ｍｍ、Ｓ−１０ｕｍ、１２ｎｍ；移動相Ａ：０．２％酢酸アンモニウム（Ｗ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％酢酸；勾配：２０分に亘り３０％Ｂ〜６０％Ｂ、５分に亘り１００％Ｂへ、および４分間１００％Ｂで保持、および２分に亘り１００％Ｂ〜３０％Ｂ；流量：２０ｍＬ／分）によってさらに精製し、１３の画分を得た。画分Ａ（４．３〜６．４分）、Ｂ（１０．８〜１１．９分）、Ｃ（１２．５〜１３．５分）、Ｄ（１３．５〜１４．６分）、Ｅ（１５．０〜１６．１分）、Ｆ（１６．５〜１７．８分）、Ｇ（１９．０〜１９．８分）、Ｈ（１９．８〜２１．０分）、Ｉ（２１．８〜２３．０分）、Ｊ（２３．３〜２５．４分）、Ｊ１（２５．４〜２６．２分）、Ｋ（２７．９〜２８．５分）、Ｌ（２８．７〜２９．５分）

【0268】

ステップ２：（５Ｒ）−５−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，５−アンヒドロ−１−（カルボキシメチル）−３−Ｃ−（クロロメチル）−２−デオキシペンチトール（＃ＮＰ５）：（６Ｒ）−６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１−デオキシ−４−Ｃ−（ヒドロキシメチル）ヘキサ−２−ウロピラノース（＃ＮＰ６）；（４−［（アセチルオキシ）メチル］−６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−４−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）酢酸（＃ＮＰ７）の単離
実施例２のステップ１からの画分Ｄを、逆相ＨＰＬＣ（カラム、カラム：Ｃ１８−Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ；Ｌｕｎａ、１０μＭ；２５０×１０ｍｍ；移動相Ａ：水中の０．２％酢酸アンモニウム（Ｗ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％酢酸；勾配：５分に亘り２５％Ｂ〜３５％Ｂ、１７分に亘り４５％Ｂに、２分に亘り７０％Ｂに：流量：２．５ｍＬ／分）によってさらに精製し、１３分、１４分および１５分で溶出した画分を集め、フリーズドライした。
１３分で溶出した画分は、＃ＮＰ５を生じさせた。収量：１．０ｍｇ：HRESIMS (プロトコルO) m/z 572.2614 (M+H)⁺, m/z 594.2438 (M+Na)⁺; ¹H
NMR (500 MHz, DMSO-d_6, 多重線, JはHz単位) δ7.80 (d, J =
8.0, 1H), 6.36 (m, 1H), 6.23 (d, J = 15.8, 1H), 6.11 (dd, J = 1.3, 11.7, 1H),
5.86 (dd, J = 7.5, 11.6, 1H), 5.63 (dd, J = 5.6, 15.8, 4H), 5.47 (m, 1H), 4.21
(m, 1H), 4.10 (dd, J = 5.6, 8.3, 1H), 3.64 (m, 2H), 3.62 (d, J = 10.6, 1H),
3.49 (m, 1H), 3.42 (d, J = 10.6, 1H), 3.16 (d, J = 8.3, 1H), 2.68 (m, 1H), 2.57
(m, 1H), 2.30 (m, 1H), 2.19 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.83 (m, 2H), 1.80 (m, 2H),
1.69 (s, 3H), 1.65 (m, 1H), 1.24 (d, J = 6.5, 3H), 1.06 (d, J = 6.3, 3H), 0.95
(d, J = 7.3, 2H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-d₆) δ173.3, 170,1, 165,0, 143.1, 135.6, 134.4, 128.5, 126.8, 123.2, 80.2,
75.1, 71.7, 71.3, 70.0, 68.6, 68.2, 50.4, 46.6, 39.9, 35.2, 35.0, 31.9, 29.0,
21.0, 20.1, 17.9, 14.4, 12.5.

【0269】

ステップ３：６Ｒ）−６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１−デオキシ−４−Ｃ−（ヒドロキシメチル）ヘキサ−２−ウロピラノース（＃ＮＰ６）の単離：上記の実施例２のステップ２からの保持時間１４．０分において集めた画分を、逆相ＨＰＬＣ（カラム：Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ：ＲＰ１８ｅ、１００−１０ｍｍ：移動相Ａ：水中の０．２％酢酸アンモニウム（Ｗ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％酢酸；勾配：２０分に亘り２５％Ｂ〜３３％Ｂ；流量：２．５ｍＬ／分）を使用してさらに精製し、＃ＮＰ６を得た。収量４．０ｍｇ、HRESIMS (プロトコルO) m/z 542.2948 (M+H)⁺;
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d_6, 多重線, JはHz単位) δ7.77 (d, J =
8.0, 1H), 6.32 (m, 1H), 6.17 (d, J = 15.8, 1H), 6.05 (dd, J = 1.3, 11.6, 1H),
5.82 (dd, J = 7.5, 11.6, 1H), 5.57 (dd, J = 5.9, 15.8, 1H), 5.42 (m, 1H), 4.09
(m, 1H), 3.60 (m, 2H), 3.46 (m, 1H), 3.38 (d, J = 10.1, 1H), 3.28 (d, J = 10.1,
1H), 3.21 (br s, 1H), 3.17 (br s, 1H), 2.25 (m, 1H), 2.16 (m, 1H), 1.94 (s,
1H), 1.76 (m, 2H), 1.66 (s, 3H), 1.62 (m, 1H), 1.21 (d, J = 6.3, 3H), 1.17 (d,
J = 8.5, 3H), 1.02 (d, J = 6.3, 3H), 0.91 (d, J = 7.3, 3H). ¹³C NMR
(126 MHz, DMSO-d₆) δ 174.1, 165.2, 143.5,
135.9, 134.6, 128.9, 127.4, 123.6, 98.8, 80.0, 77.3, 75.5, 69.7, 69.4, 69.2,
68.8, 59.6, 47.0, 35.8, 32.6, 29.5, 26.5, 21.7, 20.7, 18.5, 14.9, 13.1.

【0270】

ステップ４：（４−［（アセチルオキシ）メチル］−６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−４−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）酢酸（＃ＮＰ７）の単離：上記の実施例２のステップ２からの保持時間１５．０分において集めた画分を、逆相ＨＰＬＣ（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ−ＯＤＳ−Ａ；２５０×１０ｍｍ、Ｓ−５ｕｍ、１２ｎｍ、移動相Ａ：水中の０．２％酢酸アンモニウム（Ｗ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％酢酸；勾配：２０分に亘り３０％Ｂ〜５０％Ｂ、５分に亘り９５％Ｂに：流量：２．５ｍＬ／分）を使用してさらに精製し、＃ＮＰ７を得た。HRESIMS (プロトコルO) m/z 580.3112 (M+H)⁺,
m/z 602.2928 (M+Na)⁺; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d_6, 多重線, JはHz単位) δ 7.80 (d, J = 8.0, 1H), 6.36 (m, 1H), 6.19 (d, J = 15.8, 1H), 6.11
(d, J = 11.6, 1H), 5.87 (dd, J = 7.5, 11.6, 1H), 5.49 (m, 1H), 5.48 (m, 1H),
4.41 (dd, J = 7.2, 12.8, 1H), 4.28 (d, J = 5.8, 1H), 3.79 (m, 2H), 3.65 (m,
1H), 3.64 (m, 1H), 3.49 (m, 1H), 2.60 (m, 1H), 2.56 (m, 1H), 2.29 (m, 1H), 2.19
(m, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.80 (m, 2H), 1.67 (br s, 3H), 1.68-1.65
(br m, 2H), 1.51 (m, 1H), 1.45 (m, 1H), 1.40 (m, 1H), 1.24 (d, J = 6.5, 3H),
1.06 (d, J = 6.3, 3H), 0.94 (d, J = 7.3, 3H). ¹³C NMR (126 MHz,
DMSO-d₆) δ 173.4, 170.8, 170.1, 165.0,
143.2, 134,4, 134.2, 129.0, 128.9, 123.3, 80.3, 75.1, 68.3, 68.2, 68.0, 66.3,
71.1, 46.5, 39.4, 38.6, 35.4, 35.3, 31.8, 28.9, 21.1, 20.8, 20.0, 17.9, 14.4,
12.5.

【0271】

ステップ５：［６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−４−（クロロメチル）−４−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］酢酸（＃ＮＰ８）、４−Ｃ−［（アセチルオキシ）メチル］−６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１−デオキシヘキサ−２−ウロピラノース（＃ＮＰ９）、および６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−４−Ｃ−［（｛［６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−４−（クロロメチル）−４−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］アセチル｝オキシ）メチル］−１−デオキシヘキサ−２−ウロピラノース（＃ＮＰ１０）の単離：
実施例２のステップ１からの画分Ｆを、逆相ＨＰＬＣ（Ｃ１８−Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ；Ｌｕｎａ２５０×１０ｍｍ、１０ｕＭ；移動相Ａ：水中の０．２％酢酸アンモニウム（Ｗ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％酢酸；勾配：２０分に亘り４０％Ｂ〜４５％Ｂ、５分に亘り９５％Ｂに；流量：２．５ｍＬ／分）によってさらに精製した。８分、１３分および２８分で溶出した画分を集め、フリーズドライし、
＃ＮＰ８（８．０分で溶出した画分）：収量：１．０ｍｇ；HRESIMS (プロトコルO) m/z 556.2671 (M+H)⁺, m/z 578.2489 (M+Na)⁺; ¹H
NMR (500 MHz, DMSO-d_6, 多重線, JはHz単位) δ 7.80 (d, J =
8.0, 1H), 6.37 (m, 1H), 6.21 (d, J = 15.9, 1H), 6.11 (dd, J = 1.3, 11.6, 1H),
5.87 (dd, J = 7.5, 11.6, 1H), 5.50 (m, 1H), 5.48 (m, 1H), 4.39 (m, 1H), 4.30
(m, 1H), 3.65 (m, 2H), 3.50 (m, 1H), 3.48 (br s, 2H), 2.91 (dd, J = 8.9, 15.0,
1H), 2.60 (dd, J = 6.0, 15.0, 1H), 2.30 (m, 1H), 2.19 (m, 1H), 1.98 (s, 3H),
180 (m, 2H), 1.73 (m, 1H), 1.69 (br s, 3H), 1.65 (m, 1H), 1.58 (m, 1H), 1.55
(m, 1H), 1.43 (br dd, J = 13.1, 10.4, 1H), 1.25 (d, J = 6.5, 3H), 1.07 (d, J =
6.3, 3H), 0.95 (d, J = 7.3, 3H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-d₆)
δ 173.4, 170.1, 165.0, 143.2, 134.5, 134.2, 128.9 (x2),
123.2, 80.2, 75.2, 68.7, 68.5, 68.2, 66.5, 54.6, 46.5, 39.9, 38.7, 35.6, 35.4,
31.9, 28.9, 21.1, 20.1, 17.9, 14.4, 12.5.
＃ＮＰ９（１３分で溶出した画分）：収量：１．０ｍｇ：HRESIMS (プロトコルO) m/z 584.3066 (M+H)⁺, m/z 606.2887 (M+Na)⁺; ¹H
NMR (500 MHz, DMSO-d_6, 多重線, JはHz単位) δ 7.80 (d, J =
7.9, 1H), 6.36 (m, 1H), 6.25 (d, J = 15.7, 1H), 6.11 (dd, J = 1.0, 11.6, 1H),
5.87 (dd, J = 7.5, 11.6, 1H), 5.63 (dd, J = 6.1, 15.8, 1H), 5.48 (m, 1H), 4.19
(dd, J = 6.1, 9.6, 1H), 3.97 (d, J = 10.0, 1H), 3.88 (d, J = 10.0, 1H), 3.65
(m, 2H), 3.50 (m, 1H), 3.17 (br s, 1H), 3.15 (br s, 1H), 2.30 (m, 1H), 2.19 (m,
1H), 2.00 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.80 (m, 2H), 1.70 (s, 3H), 1.65 (m, 1H), 1.26
(br d, J = 1.6, 3H), 1.24 (br s, 3H), 1.06 (d, J = 6.2, 3H), 0.96 (d, J = 7.3,
3H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-d₆) δ
170.4, 170.1, 165.0, 143.1, 136.1, 134.4, 128.9, 126.4, 123.2, 98.5, 80.4,
75.4, 75.2, 69.2 (x2), 69.0, 68.2, 60.7, 46.5, 35.4, 31.9, 28.9, 25.9, 21.1
(x2), 20.0, 17.9, 14.4, 12.6.
＃ＮＰ１０（２３分で溶出した画分）：収量：１．０ｍｇ、HRESIMS (プロトコルO) m/z 562.2582 (M+2Na)²⁺, m/z 1101.5263 (M+Na)⁺;
¹H NMR (500 MHz, DMSO-d_6, 多重線, JはHz単位) δ 7.79 (d, J =
7.9, 2H), 6.37 (m, 2H), 6.27 (d, J = 16.2, 1H), 6.21 (d, J = 15.6, 1H), 6.12
(d, J = 11.6, 1H), 6.11 (d, J = 15.3, 1H), 5.88 (dd, J = 7.5, 11.6, 2H), 5.64
(dd, J = 6.2, 15.8, 1H), 5.54-5.48 (m, 3H), 4.40-4.31 (m, 2H), 4.20 (dd, J =
6.2, 9.4, 1H), 4.04 (m, 1H), 3.90 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 3.69-3.62 (m, 4H),
3.54-3.47 (m, 4H), 3.21 - 3.13 (m, 2H), 3.06 (dd, J = 8.7, 15.6, 1H), 2.73 (dd,
J = 5.3, 15.7, 1H), 2.31 (m, 2H), 2.20 (m, 2H), 1.99 (s, 6H), 1.84-1.79 (m,
5H), 1.72 (s, 3H), 1.69 (s, 3H), 1.68-1.64 (m, 2H), 1.62 (m, 1H), 1.55
(d, J = 13.8 Hz, 1H), 1.44 (m, 1H), 1.27 (brs, 3H), 1.26 (brs, 6H), 1.08 (m,
6H), 0.96 (m, 6H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-d₆) δ 171.3, 170.0 (x2), 165.0 (x2), 143.2 (x2), 136.5, 134.6, 134.7,
134.4, 128.9 (x3), 126.6, 123.3 (x2), 98.4, 80.5 (x2), 75.4, 75.5 (x2), 69.5
(x2), 69.2, 68.6, 68.5 (x3), 66.5, 60.7, 54.8, 46.9 (x2), 40.0, 38.5, 35.9,
35.7 (x2), 32.3 (x2), 29.3, 29.2, 26.2, 21.5 (x2), 20.4 (x2), 18.2 (x2), 14.7
(x2), 12.9 (x2).
を得た。

【0272】

ステップ６：（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−２，５−ジメチル−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−［（２Ｓ）−４−メチル−６−オキソ−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］ペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃ＮＰ１１）の単離。
実施例２のステップ１からの画分Ｋを、逆相ＨＰＬＣ（Ｃ１８−Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ；Ｌｕｎａ２５０×１０ｍｍ、１０ｕＭ；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ；Ｌｕｎａ２５０×１０ｍｍ、１０ｕＭ；；移動相Ａ：水中の０．２％酢酸アンモニウム（Ｗ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％酢酸；勾配：１５分に亘り４０〜９５％Ｂ、流量：２．５ｍｌ／分）によってさらに精製し、＃ＮＰ１１を得た。収量：２．０ｍｇ。HRESIMS (プロトコルO) m/z 460.2694 (M+H)⁺,
m/z 482.2514 (M+Na)⁺; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆)
δ ppm ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.82 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 6.37 (m, 1H), 6.38 (m, 1H), 6.13 (dd, J =
1.2, 11.6, 1H), 5.88 (dd, J = 7.5, 11.6, 1H), 5.78 (s, 1H), 5.68 (dd, J = 6.7,
15.8, 1H), 5.62 (t, J = 7.0, 1H), 4.97 (m, 1H), 3.67 (m, 1H), 3.66 (m, 1H),
3.52 (m, 1H), 2.47 (m, 1H), 2.44 (m, 1H), 2.33 (m, 1H), 2.23 (m, 1H), 2.00 (s,
3H), 1.97 (s, 3H), 1.82 (m, 2H), 1.74 (s, 3H), 1.67 (m, 1H), 1.26 (d, J = 6.5,
3H),1.08 (d, J = 6.3, 3H), 0.97 (d, J = 7.1, 3H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-d₆)
δ 170.1, 165.0, 164.4, 159.0, 143.1, 137.6, 133.9,
131.2, 124.4, 123.2, 115.6, 80.2, 75.2, 77.2, 68.0, 46.5, 35.3, 34.5, 32.1,
28.9, 22.3, 21.0, 20.1, 17.9, 14.3, 12.4.

【0273】

（実施例３）
ＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１の分子の系統発生的特性決定
ステップ１：ゲノムＤＮＡを、ＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１の純粋な培養物から単離し、ほぼ完全な１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子を、プライマー８ＦＰＬ（５’ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ３’）（配列番号１）および１４９２ＲＰＬ（５’ＧＧＴＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴ３’）（配列番号２）を使用してＰＣＲ増幅した。ＰＣＲ産物を、ＤＮＡ Ｃｌｅａｎ ａｎｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ（商標）−２５キット（Ｚｙｍｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）で精製し、直接配列決定し、下記の１６Ｓ ｒＲＮＡプライマー：８ＦＰＬ、ｐＣ ＦＷＤ（５’ＣＴＡＣＧＧＧＡＧＧＣＡＧＣＡＧＴＧＧＧ３’）（配列番号３）、ｐＣ ＲＥＶ（５’ＣＣＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＧＴＡＧ３’）（配列番号４）、ｐＤ ＦＷＤ（５’ＣＡＧＣＡＧＣＣＧＣＧＧＴＡＡＴＡＣ３’）（配列番号５）、ｐＤ ＲＥＶ（５’ＧＴＡＴＴＡＣＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＧ３’）（配列番号６）、ｐＦ ＦＷＤ（５’ＣＡＴＧＧＣＴＧＴＣＧＴＣＡＧＣＴＣＧＴ３’）（配列番号７）、ｐＦ ＲＥＶ（５’ＡＣＧＡＧＣＴＧＡＣＧＡＣＡＧＣＣＡＴＧ３’）（配列番号８）および１４９２ＲＰＬを伴う二本鎖のカバー度を実現した。完全二本鎖１６Ｓ ｒＲＮＡ配列（配列番号１）を、公共データベース（国立バイオテクノロジー情報センター）においてサーチし、バークホルデリア属の種としてのＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１の分類学的系列を決定した。最も密接に関連するバークホルデリア属の種タイプ菌株の１６Ｓ ｒＲＮＡ配列、およびＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１と１００％同一性を共有するバークホルデリア属の種ＮＲＲＬ Ｂ５０３１９（菌株Ａ３９６）の配列（ＵＳ２０１１０２０７６０４Ａ１、Ａｓｏｌｋａｒら、２０１１）は、ＧｅｎＢａｎｋから抽出した。ＣｌｕｓｔａｌＸ（バージョン１．８１）を使用して複数の配列アラインメントを行い、標準的な樹状方法、例えば、ＴＲＥＥＣＯＮ（バージョン１．３ｂ）によって、他のバークホルデリア属の種に対するＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１の系統発生的位置を決定した。
ＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１（配列番号９）
ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧＡＴＴＧＡＡＣＧＣＴＧＧＣＧＧＣＡＴＧＣＣＴＴＡＣＡＣＡＴＧＣＡＡＧＴＣＧＡＡＣＧＧＣＡＧＣＡＣＧＧＧＴＧＣＴＴＧＣＡＣＣＴＧＧＴＧＧＣＧＡＧＴＧＧＣＧＡＡＣＧＧＧＴＧＡＧＴＡＡＴＡＣＡＴＣＧＧＡＡＣＡＴＧＴＣＣＴＧＴＡＧＴＧＧＧＧＧＡＴＡＧＣＣＣＧＧＣＧＡＡＡＧＣＣＧＧＡＴＴＡＡＴＡＣＣＧＣＡＴＡＣＧＡＴＣＴＡＣＧＧＡＴＧＡＡＡＧＣＧＧＧＧＧＡＴＣＴＴＣＧＧＡＣＣＴＣＧＣＧＣＴＡＴＡＧＧＧＴＴＧＧＣＣＧＡＴＧＧＣＴＧＡＴＴＡＧＣＴＡＧＴＴＧＧＴＧＧＧＧＴＡＡＡＧＧＣＣＴＡＣＣＡＡＧＧＣＧＡＣＧＡＴＣＡＧＴＡＧＣＴＧＧＴＣＴＧＡＧＡＧＧＡＣＧＡＴＣＡＧＣＣＡＣＡＣＴＧＧＧＡＣＴＧＡＧＡＣＡＣＧＧＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＴＡＣＧＧＧＡＧＧＣＡＧＣＡＧＴＧＧＧＧＡＡＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＴＧＧＧＧＧＡＡＡＣＣＣＴＧＡＴＣＣＡＧＣＡＡＴＧＣＣＧＣＧＴＧＴＧＴＧＡＡＧＡＡＧＧＣＣＴＴＣＧＧＧＴＴＧＴＡＡＡＧＣＡＣＴＴＴＴＧＴＣＣＧＧＡＡＡＧＡＡＡＴＣＣＴＴＴＧＧＧＣＴＡＡＴＡＣＣＣＣＧＧＧＧＧＧＡＴＧＡＣＧＧＴＡＣＣＧＧＡＡＧＡＡＴＡＡＧＣＡＣＣＧＧＣＴＡＡＣＴＡＣＧＴＧＣＣＡＧＣＡＧＣＣＧＣＧＧＴＡＡＴＡＣＧＴＡＧＧＧＴＧＣＧＡＧＣＧＴＴＡＡＴＣＧＧＡＡＴＴＡＣＴＧＧＧＣＧＴＡＡＡＧＣＧＴＧＣＧＣＡＧＧＣＧＧＴＴＴＧＴＴＡＡＧＡＣＡＧＡＴＧＴＧＡＡＡＴＣＣＣＣＧＧＧＣＴＴＡＡＣＣＴＧＧＧＡＡＣＴＧＣＡＴＴＴＧＴＧＡＣＴＧＧＣＡＡＧＣＴＡＧＡＧＴＡＴＧＧＣＡＧＡＧＧＧＧＧＧＴＡＧＡＡＴＴＣＣＡＣＧＴＧＴＡＧＣＡＧＴＧＡＡＡＴＧＣＧＴＡＧＡＧＡＴＧＴＧＧＡＧＧＡＡＴＡＣＣＧＡＴＧＧＣＧＡＡＧＧＣＡＧＣＣＣＣＣＴＧＧＧＣＣＡＡＴＡＣＴＧＡＣＧＣＴＣＡＴＧＣＡＣＧＡＡＡＧＣＧＴＧＧＧＧＡＧＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＴＡＧＡＴＡＣＣＣＴＧＧＴＡＧＴＣＣＡＣＧＣＣＣＴＡＡＡＣＧＡＴＧＴＣＡＡＣＴＡＧＴＴＧＴＴＧＧＧＧＡＴＴＣＡＴＴＴＣＣＴＴＡＧＴＡＡＣＧＴＡＧＣＴＡＡＣＧＣＧＴＧＡＡＧＴＴＧＡＣＣＧＣＣＴＧＧＧＧＡＧＴＡＣＧＧＴＣＧＣＡＡＧＡＴＴＡＡＡＡＣＴＣＡＡＡＧＧＡＡＴＴＧＡＣＧＧＧＧＡＣＣＣＧＣＡＣＡＡＧＣＧＧＴＧＧＡＴＧＡＴＧＴＧＧＡＴＴＡＡＴＴＣＧＡＴＧＣＡＡＣＧＣＧＡＡＡＡＡＣＣＴＴＡＣＣＴＡＣＣＣＴＴＧＡＣＡＴＧＧＴＣＧＧＡＡＴＣＣＴＧＡＡＧＡＧＡＴＴＣＧＧＧＡＧＴＧＣＴＣＧＡＡＡＧＡＧＡＡＣＣＧＡＴＡＣＡＣＡＧＧＴＧＣＴＧＣＡＴＧＧＣＴＧＴＣＧＴＣＡＧＣＴＣＧＴＧＴＣＧＴＧＡＧＡＴＧＴＴＧＧＧＴＴＡＡＧＴＣＣＣＧＣＡＡＣＧＡＧＣＧＣＡＡＣＣＣＴＴＧＴＣＣＴＴＡＧＴＴＧＣＴＡＣＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＴＣＴＡＡＧＧＡＧＡＣＴＧＣＣＧＧＴＧＡＣＡＡＡＣＣＧＧＡＧＧＡＡＧＧＴＧＧＧＧＡＴＧＡＣＧＴＣＡＡＧＴＣＣＴＣＡＴＧＧＣＣＣＴＴＡＴＧＧＧＴＡＧＧＧＣＴＴＣＡＣＡＣＧＴＣＡＴＡＣＡＡＴＧＧＴＣＧＧＡＡＣＡＧＡＧＧＧＴＴＧＣＣＡＡＣＣＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＡＧＣＴＡＡＴＣＣＣＡＧＡＡＡＡＣＣＧＡＴＣＧＴＡＧＴＣＣＧＧＡＴＴＧＣＡＣＴＣＴＧＣＡＡＣＴＣＧＡＧＴＧＣＡＴＧＡＡＧＣＴＧＧＡＡＴＣＧＣＴＡＧＴＡＡＴＣＧＣＧＧＡＴＣＡＧＣＡＴＧＣＣＧＣＧＧＴＧＡＡＴＡＣＧＴＴＣＣＣＧＧＧＴＣＴＴＧＴＡＣＡＣＡＣＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＴＴＡＣＣＡＧＡＡＧＴＧＧＣＴＡＧＴＣＴＡＡＣＣＧＣＡＡＧＧＡＧＧＡＣＧＧＴＣＡＣＣＡＣＧＧＴＡＧＧＡＴＴＣＡＴＧＡＣＴＧＧＧＧＴＧＡＡＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＧＧＴＡＡＣＣ

【0274】

図１は、他のバークホルデリア属の種に対するＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１のほぼ完全な１６Ｓ ｒＲＮＡ配列によって決定した系統発生的関係を例示する。近隣結合系統樹は、バークホルデリア・ピケッティ（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｉｃｋｅｔｔｉｉ）を起源にもったが、これらのそれぞれのノードにおいてブートストラップ値（１００の複製および５０％超に基づいた）を示す。スケールバーは、ヌクレオチド毎の０．０２の置換を表す。

【0275】

（実施例４）
ＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１の操作された菌株＃１による、［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃ＮＰ１）；および［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃ＮＰ２）の発酵、抽出および単離
ステップ１：スプライソスタチン生合成遺伝子クラスターのためのゲノムマイニング：
ＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１のゲノムを、次世代技術を使用して配列決定した（４５４およびＩｌｌｕｍｉｎａ）。スプライソスタチンについての生合成遺伝子クラスター（図２）を、ゲノムマイニングによってＤＮＡ配列から推測した（概説については、Ｃｈａｌｌｉｓ ＧＬ、２００８、Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ、５１： ２６１８〜２６２８を参照されたい）が、これによって本発明者らはｔｒａｎｓ−アシルトランスフェラーゼ（ＡＴ）ポリケチドシンターゼ（ＰＫＳ）／非リボソームペプチドシンテターゼ（ＮＲＰＳ）ハイブリッド経路を同定した（概説については、Ｊ Ｐｉｅｌ、２０１０、Ｎａｔ Ｐｒｏｄ Ｒｅｐ、２７：９９６〜１０４７およびその中の参照文献を参照されたい）。ＰＫＳおよびＮＲＰＳ遺伝子ノックアウト変異体は、検出可能なスプライソスタチンの産生を示さなかったが、これはスプライソスタチン生合成におけるこれらの遺伝子の関与を確認する。本発明者らの知見は、Ｚｈａｎｇ Ｆら（２０１１、Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ、１３３： ２４５２〜６２）によって報告されたものと一致しており、このＪＡＣＳ論文において紹介された遺伝子用語法をこの後で使用する。

【0276】

図２は、スプライソスタチンについての生合成遺伝子クラスター、およびチトクロムＰ４５０Ｆｒ９ＲおよびＦｅ（ＩＩ）／α−ケトグルタレート依存性ジオキシゲナーゼＦｒ９Ｐによって触媒されるヒドロキシル化ステップを抜粋した、提唱されている生合成経路である。上部における矢印は、ＰＫＳ−ＮＲＰＳ遺伝子のコードＤＮＡ配列を表す。補助的遺伝子は示さない。

【0277】

ステップ２：ＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１のジオキシゲナーゼ（ｆｒ９Ｐ）ノックアウト変異菌株（菌株＃１）の生成
遺伝子置換えのポイントの上流および下流の２つの約７００ｂｐ長のＤＮＡフラグメントを、ＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１ゲノムＤＮＡを、鋳型ならびにプライマー対Ｐ１＿ｄｉｏｘ（ＴＧＧ ＣＧＡ ＡＣＡ ＧＡＴ ＣＧＡ ＧＴＴ ＴＧ）（配列番号１０）およびＰ２＿ｄｉｏｘ（ＣＴＴ ＧＣＧ ＧＡＧ ＡＡＣ ＴＧＴ ＧＡＡ ＴＧＣ ＧＣＡ ＡＴＡ ＧＡＡ ＧＣＧ ＣＴＧ ＴＣＡ ＴＧＧ ＡＡＴ Ｇ）（配列番号１１）、およびＰ３＿ｄｉｏｘ（ＣＣＧ ＡＡＡ ＡＧＴ ＧＣＣ ＡＣＣ ＴＧＡ ＣＧＴ ＣＴＡ ＡＧＡ ＴＡＡ ＣＴＣ ＧＴＧ ＧＡＴ ＡＴＴ ＣＧＧ ＣＡＡ Ｇ）（配列番号１２）およびＰ４＿ｄｉｏｘ（ＡＧＡ ＡＴＣ ＣＣＧ ＣＧＡ ＴＣＣ ＣＡＡ Ｃ）（配列番号１３）として使用して、ＰＣＲ（Ｐｆｕ Ｕｌｔｒａ（商標）ポリメラーゼ、Ｐｒｏｍｅｇａ）によって増幅した。下線を引いた塩基は、テトラサイクリン抵抗性（ｔｅｔ）マーカーへの相同領域を表す。ｔｅｔマーカーを、ｐＥＸ１８Ｔｃ（Ｓｃｈｗｅｉｚｅｒ ＨＰ、１９９８、Ｇｅｎｅ、２１２：７７〜８６）を鋳型ならびにプライマー対Ｐｔｅｔ＿ｆ（ＴＴＧ ＣＧＣ ＡＴＴ ＣＡＣ ＡＧＴ ＴＣＴ Ｃ）（配列番号１４）およびＰｔｅｔ＿ｒ（ＴＣＴ ＴＡＧ ＡＣＧ ＴＣＡ ＧＧＴ ＧＧＣ ＡＣ）（配列番号１５）として使用して、ＰＣＲによって増幅した。３つのフラグメントを、ＳＯＥ−ＰＣＲ（Ｐｆｕ Ｕｌｔｒａ（商標）ポリメラーゼ、Ｐｒｏｍｅｇａを使用して）によって構築し、ｐＥＸ１００ＴのＳｍａＩ部位（Ｓｃｈｗｅｉｚｅｒ ＨＰ＆Ｈｏａｎｇ ＴＴ、１９９５、Ｇｅｎｅ、１５８：１５〜２２）中に連結し、プラスミドｐＡＥ−ＰＦ１２を生じさせた。ｐＡＥ−ＰＦ１２を、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｓ１７．１からのコンジュゲーションによってＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１中に移行させた。テトラサイクリン（２５μｇ／ｍｌ）を、変異体の選択のために使用し、スクロース５％を、ベクター骨格の対抗選択のために使用し、ゲンタマイシン（１０μｇ／ｍｌ）を、コンジュゲーション後の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の除去のために使用した。変異体を、プライマー対Ｐ１＿ｄｉｏｘ／Ｐ４＿ｄｉｏｘ、Ｐ１＿ｄｉｏｘ／Ｐｔｅｔ＿ｒ、およびＴＰ１＿ｐＥＸ１００Ｔ（ＧＧＡ ＣＧＡ ＡＴＣ ＧＡＡ ＣＴＣ ＡＧＧ ＡＡＣ ＴＴＧ）（配列番号１６）／ＴＰ２＿ｐＥＸ１００Ｔ（ＣＧＡ ＡＧＡ ＧＣＧ ＡＴＴ ＧＡＧ ＧＡＡ ＡＡＧ Ｇ）（配列番号１７）を使用して、３つの別々の反応においてコロニーＰＣＲ（ＲＥＤ Ｔａｑ（登録商標）、Ｓｉｇｍａ）によって確認し、菌株＃１を得た。

【0278】

ステップ３：操作された菌株＃１を使用した発酵：操作された菌株＃１を、テトラサイクリン（２５ｍｇ／Ｌ）を含有する種培地（１％ポリペプトン、０．５％酵母抽出物、０．５％ＮａＣｌ）中で３０℃および２２０ｒｐｍにて約２４時間培養した。テトラサイクリン（２５ｍｇ／Ｌ）を含有する新鮮な種培地に第１の種培養を１０％（ｖ／ｖ）で接種することによって第２の種培養を生じさせ、３０℃にて振盪しながら２２０ｒｐｍで約２４時間インキュベートした。８５０ｍｌの種培養を使用して、３０Ｌのバイオリアクター（ＢＩＯＳＴＡＴ（登録商標）Ｃ ｐｌｕｓ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＢＢＩ Ｓｙｓｔｅｍｓ）中に含有される２９Ｌの産生培地（４％グリセリン、２％ＨｙＳｏｙダイズペプトン、０．２％硫酸アンモニウム、０．０１％硫酸マグネシウム、６Ｈ_２Ｏ、０．２％ＣａＣＯ_３）を接種した。発酵を２５℃にて５日間行った。最初の撹拌を３４４ｒｐｍに、最初の空気流を１．３ｓｌｐｍに設定し、ＤＯは、増加する撹拌を伴って３％で制御した。

【0279】

ステップ４。発酵ブロスの抽出：実施例４のステップ３からの発酵の終わりに、１．５ｋｇの湿ったＤＩＡＩＯＮ ＨＰ−２０樹脂を全ブロスに加え、混合物を一晩振盪した。ＨＰ−２０を、５０μｍ〜１５０μｍのステンレス鋼ウェッジワイヤーメッシュを通す濾過によって集めた。化合物が結合したＨＰ−２０樹脂を酢酸エチルで４回抽出した（毎回３Ｌ、振盪しながら４５分間）。次いで、樹脂を洗浄し（２Ｌのメタノールで１回、および大量の脱イオン水で３回）、上記と同じ手順に従って、水性濾液中にまだ残存する化合物の再捕捉のために再使用した。合わせた酢酸エチル抽出物からの溶媒を、減圧下での蒸発によって除去し、淡黄色の粉末（１３７ｇ）を得た。

【0280】

ステップ５：［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃ＮＰ１）；および［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃ＮＰ２）の単離：実施例４のステップ４からの１．７ｇの抽出物を２：１のＤＭＦ／ＡＣＮの混合溶媒（全体で２２ｍｌ）に溶解し、濾過し、次いで、逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ ＯＤＳ−Ａ、５０×３００ｍｍ、１５ｕｍ、１２０Ａ、移動相Ａ：水中の０．０２％ＡｃＯＨ、移動相Ｂ：アセトニトリル溶媒系中の０．０２％ＡｃＯＨ、勾配：２分間５０％Ｂ、１８分に亘り７５％Ｂに；２分間１００％Ｂ、流量：５０ｍＬ／分；５回の反復注射）によって精製した。１３．５分および１８．０分の保持時間を伴う画分を集め、フリーズドライし、それぞれ、＃ＮＰ１（１９１ｍｇ）および＃ＮＰ２（４６６ｍｇ）を白色の粉末として得た。
＃ＮＰ１．；ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝９．３８分（純度９８．５％）
＃ＮＰ２．；ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１０．９７分（純度９６．５％）

【0281】

（実施例５）
Ｆｅｒｍ ＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１の操作された菌株＃２による、［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃ＮＰ１）の発酵、抽出および単離
ステップ１：操作された菌株＃２の生成：第一に、ベクターｍｉｎｉ−ＣＴＸ１中のｔｅｔマーカー（Ｈｏａｎｇ ＴＴら、２０００、Ｐｌａｓｍｉｄ、４３：５９〜７２）を、λ−Ｒｅｄが媒介する組換えによってｐＣＲ２．１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からのｎｅｏ（カナマイシンおよびネオマイシン抵抗性）によって再配置した（Ｄａｔｓｅｎｋｏ ＫＡ＆Ｗａｎｎｅｒ ＢＬ．、２０００、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ、９７：６６４０〜５）。使用したプライマーは、Ｐ１＿ｎｅｏ＿ｐＣＲ２．１（ＧＴＴ ＧＧＴ ＴＴＧ ＣＧＣ ＡＴＴ ＣＡＣ ＡＧＴ ＴＣＴ ＣＣＧ ＣＡＡ ＧＡＡ ＴＴＧ ＡＴＴ ＧＣＡ ＡＧＧ ＧＣＴ ＧＣＴ ＡＡＡ ＧＧＡ ＡＧ）（配列番号１８）およびＰ２＿ｎｅｏ＿ｔｅｔ＿ＣＴＸ１＿ｐＣＲ２．１（ＴＣＴ ＴＣＣ ＧＣＴ ＴＣＣ ＴＣＧ ＣＴＣ ＡＣＴ ＧＡＣ ＴＣＧ ＣＴＧ ＣＧＣ ＴＣＧ ＧＴＣ ＡＣＧ ＧＡＡ ＡＴＧ ＴＴＧ ＡＡＴ ＡＣＴ ＣＡＴ ＡＣＴ Ｃ）（配列番号１９）であった。下線を引いた配列は、λ−Ｒｅｄが媒介する組換えについての相同領域を表す。得られたベクターは、ｐＡＥ−ＰＦ２４と命名した。

【0282】

Ｐ_ＢＡＤ／ａｒａＣアラビノース誘発系は、ｐＫＤ４６を鋳型ならびにプライマー対Ｐ１＿ＢＡＤｐ＿ｆ（ＧＣＴ ＣＴＡ ＧＡＣ ＡＴＣ ＧＡＴ ＴＴＡ ＴＴＡ ＴＧＡ ＣＡＡ ＣＴＴ ＧＡＣ、ＸｂａＩ部位は下線部分）（配列番号２０）およびＰ２＿ＢＡＤｐ＿ｒ（ＣＣＣ ＡＡＡ ＡＡＡ ＡＣＧ ＧＧＴ ＡＴＧ Ｇ）（配列番号２１）として使用して、ＰＣＲ（Ｐｈｕｓｉｏｎ（登録商標）Ｈｏｔ Ｓｔａｒｔポリメラーゼ、Ｆｉｎｎｚｙｍｅｓ）によって増幅した。スプライソスタチン生合成遺伝子クラスター中に含有されるチトクロムＰ４５０遺伝子（ｆｒ９Ｒ）をコードする遺伝子（推定上のＲＢＳを含むが、プロモーターを含まない）を、ＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１からのゲノムＤＮＡ、ならびにプライマー対Ｐ３＿Ｐ４５０＿ＢＡＤ＿ｆ（ＣＴＡ ＣＴＧ ＴＴＴ ＣＴＣ ＣＡＴ ＡＣＣ ＣＧＴ ＴＴＴ ＴＴＴ ＧＧＧ ＧＧＧ ＴＴＧ ＴＴＧ ＧＴＴ ＴＴＴ ＧＡＡ ＡＴＴ ＧＣ、ＳＯＥ−ＰＣＲについての伸張部分は下線部分）（配列番号２２）およびＰ４＿Ｐ４５０＿ｒ（ＡＴＧ ＧＴＧ ＡＡＧ ＣＴＴ ＡＡＧ ＴＣＧ ＡＣＡ ＡＣＣ ＧＧＣ ＡＴＴ ＣＣ、ＨｉｎｄＩＩＩ部位は下線部分）（配列番号２３）を使用して、ＰＣＲ（Ｐｈｕｓｉｏｎ（登録商標）Ｈｏｔ Ｓｔａｒｔポリメラーゼ、Ｆｉｎｎｚｙｍｅｓ）によって増幅した。このように得られた２つのフラグメントを、ＳＯＥ−ＰＣＲ（Ｐｈｕｓｉｏｎ（登録商標）Ｈｏｔ Ｓｔａｒｔポリメラーゼ、Ｆｉｎｎｚｙｍｅｓ）によって構築し、それに続きｐＡＥ−ＰＦ２４のＳｐｅＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ部位中に連結し、ｐＡＥ−ＰＦ２９を生じさせた。ｐＡＥ−ＰＦ２９を、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｓ１７．１からのコンジュゲーションで操作された菌株＃１中に移行させた。カナマイシン（５００μｇ／ｍｌ）を、変異体の選択のために使用し、ゲンタマイシン（１０ｕｇ／ｍｌ）をコンジュゲーション後に大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を除去するために使用した。変異体を、プライマーセットＴＰ１＿ＣＴＸ１＿マーカー（ＧＣＡ ＴＴＣ ＡＣＡ ＧＴＴ ＣＴＣ ＣＧＣ ＡＡＧ）（配列番号２４）およびＴＰ２＿ＣＴＸ１＿マーカー（ＣＴＣ ＧＣＴ ＣＡＣ ＴＧＡ ＣＴＣ ＧＣＴ Ｇ）（配列番号２５）、およびＴ３＿ｍｉｎｉ−ＣＴＸ１＿ｆ（ＧＣＡ ＡＴＴ ＡＡＣ ＣＣＴ ＣＡＣ ＴＡＡ ＡＧＧ）（配列番号２６）およびＭＣＳ＿ｍｉｎｉ−ＣＴＸ１＿ｒ（ＣＴＡ ＴＡＧ ＧＧＣ ＧＡＡ ＴＴＧ ＧＧＴ ＡＣ）（配列番号２７）を使用して、２つのコロニーＰＣＲ反応（ＲＥＤ Ｔａｑ（登録商標）、Ｓｉｇｍａ）によって確認し、操作された菌株＃２を得た。

【0283】

ステップ２：操作された菌株＃２を使用した発酵：操作された菌株＃２を、テトラサイクリン（２５ｍｇ／Ｌ）を含有する種培地（１％ポリペプトン、０．５％酵母抽出物、０．５％ＮａＣｌ）中で３０℃および２２０ｒｐｍにて約２４時間培養した。テトラサイクリン（２５ｍｇ／Ｌ）を含有する新鮮な種培地に第１の種培養を１０％（ｖ／ｖ）で接種することによって第２の種培養を生じさせ、３０℃にて振盪しながら２２０ｒｐｍで約２４時間インキュベートした。種培養を使用して、２．５％（ｖ／ｖ）でバッフルを有さない２．８Ｌのフェルンバッハフラスコ毎に５５０ｍｌの産生培地（４％グリセリン、２％ＨｙＳｏｙダイズペプトン、１．５％Ｌ−アラビノース、０．２％硫酸アンモニウム、０．０１％硫酸マグネシウム、６Ｈ_２Ｏ、０．２％ＣａＣＯ_３）を接種した。発酵物を２５℃にて振盪しながら２００ｒｐｍで４日間インキュベートした。

【0284】

ステップ３。発酵ブロスの抽出：実施例５のステップ２からの発酵の終わりに、１００ｇ／Ｌの湿ったＤＩＡＩＯＮ ＨＰ−２０樹脂を約６Ｌの生成物発酵に加え、混合物を３時間振盪した。ＨＰ−２０を、５０μｍ〜１５０μｍのステンレス鋼ウェッジワイヤーメッシュを通す濾過によって集めた。化合物が結合したＨＰ−２０樹脂を、酢酸エチル（毎回２Ｌ）で３回抽出した。より詳細には、樹脂をカルボイに移行し、２Ｌの酢酸エチルを加え、１時間振盪し、５０μｍ〜１５０μｍのステンレス鋼ウェッジワイヤーメッシュを通して濾過することによって、それぞれの抽出を行った。合わせた酢酸エチル抽出物からの溶媒を減圧下での蒸発によって除去し、淡黄色の粗抽出液（１７．２５ｇ）を得た。

【0285】

ステップ４：［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃ＮＰ１）の単離。実施例５のステップ３からの０．１２ｇの抽出物を２：１のＤＭＦ／ＡＣＮの混合溶媒（全部で２２ｍｌ）に溶解し、濾過し、次いで、逆相ＨＰＬＣ（ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ、３０×２５０ｍｍ、１０ｕｍ、１２０Ａ、移動相Ａ：水中の０．０２％ＡｃＯＨ、移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％ＡｃＯＨ、勾配：２分間３０％Ｂ、１８分に亘り１００％Ｂに；２分間１００％Ｂ、流量：２０ｍＬ／分）によって精製した。１５．０分の保持時間を伴う画分を集め、フリーズドライし、＃ＮＰ１（７３．６ｍｇ）を白色の粉末として得た。
＃ＮＰ１；ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝９．３６分（純度９２．５％）

【0286】

（実施例６）
ＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１の操作された菌株＃３による、（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ）−７−ヒドロキシ−７−メチル−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃ＮＰ１２）；および［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃ＮＰ２）の発酵、抽出および単離

【0287】

【化50】

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ステップ１：操作された菌株＃３の生成：遺伝子置換えのポイントの上流および下流の２つの約７００ｂｐ長のＤＮＡフラグメントを、ＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１ゲノムＤＮＡを鋳型ならびにプライマー対Ｐ１＿Ｐ４５０（ＧＣＡ ＴＣＣ ＡＡＴ ＣＡＣ ＴＴＧ ＡＡＣ ＡＧＧ）（配列番号２８）およびＰ２＿Ｐ４５０（ＣＴＴ ＧＣＧ ＧＡＧ ＡＡＣ ＴＧＴ ＧＡＡ ＴＧＣ ＧＣＡ ＡＧＣ ＣＡＴ ＣＡＴ ＴＣＴ ＣＧＡ ＣＡＴ ＴＴＣ Ｃ）（配列番号２９）、およびＰ３＿Ｐ４５０（ＣＣＧ ＡＡＡ ＡＧＴ ＧＣＣ ＡＣＣ ＴＧＡ ＣＧＴ ＣＴＡ ＡＧＡ ＡＧＡ ＴＴＧ ＴＧＡ ＣＧＧ ＴＡＣ ＴＧＡ ＡＧＣ）（配列番号３０）およびＰ４＿Ｐ４５０（ＡＧＡ ＧＡＡ ＣＧＡ ＴＣＧ ＣＴＣ ＣＡＣ ＡＧ）（配列番号３１）として使用して、ＰＣＲ（Ｐｆｕ Ｕｌｔｒａ（商標）ポリメラーゼ、Ｐｒｏｍｅｇａ）によって増幅した。下線を引いた塩基は、テトラサイクリン抵抗性（ｔｅｔ）マーカーへの相同領域を表す。ｔｅｔマーカーを、ｐＥＸ１８Ｔｃ（Ｓｃｈｗｅｉｚｅｒ ＨＰ、１９９８、Ｇｅｎｅ、２１２：７７〜８６）を鋳型ならびにプライマー対Ｐｔｅｔ＿ｆ（ＴＴＧ ＣＧＣ ＡＴＴ ＣＡＣ ＡＧＴ ＴＣＴ Ｃ）（配列番号３２）およびＰｔｅｔ＿ｒ（ＴＣＴ ＴＡＧ ＡＣＧ ＴＣＡ ＧＧＴ ＧＧＣ ＡＣ）（配列番号３３）として使用して、ＰＣＲによって増幅した。３つのフラグメントを、ＳＯＥ−ＰＣＲ（Ｐｆｕ Ｕｌｔｒａ（商標）ポリメラーゼ、Ｐｒｏｍｅｇａを使用して）によって構築し、ｐＥＸ１００ＴのＳｍａＩ部位中に連結し（Ｓｃｈｗｅｉｚｅｒ ＨＰ＆Ｈｏａｎｇ ＴＴ、１９９５、Ｇｅｎｅ、１５８：１５〜２２）、プラスミドｐＡＥ−ＰＦ１１を生じさせた。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｓ１７．１からのコンジュゲーションによって、ｐＡＥ−ＰＦ１１を、ＦＥＲＭ ＢＰ−３４２１中に移行させた。テトラサイクリン（２５μｇ／ｍｌ）を、変異体の選択のために使用し、スクロース５％を、ベクター骨格の対抗選択のために使用し、ゲンタマイシン（１０μｇ／ｍｌ）を、コンジュゲーション後の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を除去するために使用した。変異体を、プライマー対Ｐ１＿Ｐ４５０／Ｐｔｅｔ＿ｒおよびＴＰ１＿ｐＥＸ１００Ｔ（ＧＧＡ ＣＧＡ ＡＴＣ ＧＡＡ ＣＴＣ ＡＧＧ ＡＡＣ ＴＴＧ）（配列番号３４）／ＴＰ２＿ｐＥＸ１００Ｔ（ＣＧＡ ＡＧＡ ＧＣＧ ＡＴＴ ＧＡＧ ＧＡＡ ＡＡＧ Ｇ）（配列番号３５）を使用して、２つのコロニーＰＣＲ（ＲＥＤ Ｔａｑ（登録商標）、Ｓｉｇｍａ）反応において確認し、菌株＃３を得た。

【0288】

ステップ２：操作された菌株＃３を使用した発酵：操作された菌株＃３を、テトラサイクリン（２５ｍｇ／Ｌ）を含有する種培地（１％ポリペプトン、０．５％酵母抽出物、０．５％ＮａＣｌ）中で３０℃および２２０ｒｐｍにて約２４時間培養した。テトラサイクリン（２５ｍｇ／Ｌ）を含有する新鮮な種培地に第１の種培養を１０％（ｖ／ｖ）で接種することによって第２の種培養を生じさせ、３０℃にて振盪しながら２２０ｒｐｍで約２４時間インキュベートした。種培養を使用して、２．５％（ｖ／ｖ）でバッフルを有さない２．８Ｌのフェルンバッハフラスコ中に含有される４００ｍｌの産生培地（４％グリセリン、２％ＨｙＳｏｙダイズペプトン、０．２％硫酸アンモニウム、０．０１％硫酸マグネシウム、６Ｈ_２Ｏ、０．２％ＣａＣＯ_３）を接種した。発酵物を２５℃にて振盪しながら２００ｒｐｍで５日間インキュベートした。

【0289】

ステップ３。発酵ブロスの抽出：実施例６のステップ２からの産生培養物を、４，２００ｒｐｍで３０分間遠心し、細胞を除去した。５０ｇの湿ったＤＩＡＩＯＮ ＨＰ−２０樹脂を上清（１２．５％ｗ／ｖ）に加え、混合物を２００ｒｐｍで１時間振盪した。化合物が結合したＨＰ−２０を遠心分離によって集め、次いで、酢酸エチル（各抽出について２５０ｍｌ）で２回抽出した。合わせた抽出物をＭｇＳＯ_４（これは次いで、ワットマン紙による濾過によって除去した）で乾燥した後、溶媒を減圧下での蒸発によって除去し、明るい色の粗抽出液を得た。

【0290】

ステップ４：［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃ＮＰ２）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ）−７−ヒドロキシ−７−メチル−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃ＮＰ１２）の単離：実施例６のステップ３からの粗抽出液の半分を、分取順相ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ ＳＦＣ２−エチルピリジン、２５０×２１．２ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：ヘプタン；移動相Ｂ：エタノール（変性）。勾配：１．５分間５％Ｂ、８．５分に亘り１００％Ｂに、２分間１００％Ｂ、０．５分に亘り５％Ｂに、および２．５分間５％Ｂ、流量：２７ｍＬ／分）によって精製した。６．５８分および８．１８分の保持時間を伴う画分を集め、フリーズドライし、それぞれ、＃ＮＰ１２（１６３ｍｇ、８９％純粋、非常に明るい黄色がかった粉末として）、および＃ＮＰ２（２０５ｍｇ、ＵＶによって８９％純粋）を得た。
＃ＮＰ１２：ＨＰＬＣ（プロトコルＰ）：保持時間＝１２．６５分（純度８９％）；ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ、４７４．２［Ｍ＋Ｈ^＋−Ｈ_２Ｏ］^＋および５１４．２［Ｍ＋Ｎａ^＋］^＋
＃ＮＰ２：ＨＰＬＣ（プロトコルＰ）：保持時間＝１２．４６分（純度８９％）；ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ、５２０．２［Ｍ＋Ｈ^＋］^＋

【0291】

ステップ５：（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ）−７−ヒドロキシ−７−メチル−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃ＮＰ１２）の単離：実施例６のステップ４からの６．５８分の画分の２分の１を、逆相ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８、１５０×２１．２ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水；移動相Ｂ：アセトニトリル、勾配：１．５分間２０％Ｂ、８．５分に亘り７０％Ｂに、２分に亘り１００％Ｂに、０．５分に亘り２０％Ｂに、流量：２７ｍＬ／分）によって精製した。保持時間８．２５分を伴う画分を集め、フリーズドライし、＃ＮＰ１２（２８ｍｇ）を白色の粉末として得た。＃ＮＰ１２；ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１２．６分（純度９８．５％）；HRESIMS (プロトコルO) m/z 492.296 [M+H]⁺;
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.78 (d, J =
8.0 Hz, 1H), 6.35 (m, 1H), 6.21 (d, J = 15.8, 1H), 6.11 (dd, J = 0.9, 11.7,
1H), 5.85 (dd, J = 11.6, 7.5 Hz, 1H), 5.53 (m, 1H), 5.49 (m, 1H), 5.41 (d, J =
1.6 Hz, OH), 4.64 (m, 1H), 3.65 (m, 1H), 3.64 (m, 1H), 3.49 (m, 1H), 2.45 (m,
2H), 2.30 (m, 1H), 2.20 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.96 (m, 1H), 1.81 (m, 3H), 1.69
(s, 3H), 1.65 (m, 1H), 1.31 (s, 3H), 1.25 (m, 1H), 1.25 (d, J = 6.3 Hz,
3H), 1.14 (m, 1H), 1.07 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.95 (d, J = 7.3 Hz, 3H). ¹³C
NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 169.6, 164.6,
142.1, 134.1, 133.7, 128.2, 127.1, 122.6, 95.3, 79.5, 74.3, 67.6, 66.7, 54.5,
48.4, 46.1, 41.4, 37.5, 35.0, 31.1, 29.6, 28.5, 20.8, 19.5, 17.8, 13.9, 12.2.

【0292】

（実施例７）
バークホルデリア属の種ＭＳＭＢ４３を使用した、［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃ＮＰ１）；［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃ＮＰ２）の発酵、抽出および産生の確立
ステップ１：バークホルデリア属の種ＭＳＭＢ４３を使用した発酵：バークホルデリア属の種（提唱されている名称「バークホルデリア・ハンプティドオエンシス（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｈｕｍｐｔｙｄｏｏｅｎｓｉｓ）」）であるＭＳＭＢ４３は、疾病予防管理センター（ＣＤＣ）およびＭｅｎｚｉｅｓ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ Ｒｅｓｅａｒｃｈから取得した。ＭＳＭＢ４３を、凍結保存からの栄養寒天プレート上で培養し、３０℃にて４８時間インキュベートした。寒天増殖培養物を、１０ｍｌの種培地（１％ポリペプトン、０．５％酵母抽出物、０．５％ＮａＣｌ）を含有する２５×１５０ｍｍの培養チューブ中に接種した。種培養を３０℃にて振盪しながら２２０ｒｐｍで１８〜２０時間インキュベートした。種培養を、２５０ｍｌのエルレンマイヤーフラスコ当たり５０ｍｌの産生培地（１％可溶性デンプン、１％グリセリン、０．５％グルコース、１％ＨｙＳｏｙダイズペプトン、０．５％コーンスティープリカー、０．２％硫酸アンモニウム、０．００６％硫酸マグネシウム、６Ｈ_２Ｏ、０．２％ＣａＣＯ_３、ｐＨ７．０）中に２．５％（容量／容量）で接種した。発酵物を２５℃にて振盪しながら２００ｒｐｍで７２時間インキュベートした。

【0293】

ステップ２：発酵物のＬＣ−ＭＳ分析。
発酵物を遠心して、細胞をペレット化し、上清を０．２２μｍのポリフッ化ビニリデン膜を通して濾過した。各上清の一部をジメチルスルホキシド（１０：１）と混合し、Ａｃｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ）機器：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、３．５ｕＭ移動相Ａ：水中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；勾配、１２．０分に亘り５％〜１００％Ｂ；３．０分間１００％Ｂ（注入容量：５．０ｕＬ）を使用してＬＣ−ＭＳによって分析した。発酵の５日目に、ＭＳＭＢ４３は、保持時間および質量スペクトルデータによって明らかなように、それぞれ、１５０ｍｇ／Ｌおよび５０ｍｇ／Ｌの力価でＮＰ１およびＮＰ２を産生した。
ＮＰ１：：ｍ／ｚ：５３５．９（Ｍ＋Ｈ）^＋、保持時間：１３．３１分
ＮＰ２：ｍ／ｚ：５１９．９（Ｍ＋Ｈ）^＋、保持時間：１４．５８分

【0294】

合成の実験手順
実験を一般に、酸素感受性もしくは水分感受性試薬または中間体を用いた場合は特に、不活性雰囲気（窒素またはアルゴン）下で行った。適切な場合、無水溶媒を含めて市販の溶媒および試薬は一般に、それ以上精製することなく使用した（一般に、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷｉｓｃｏｎｓｉｎからのＳｕｒｅ−Ｓｅａｌ（商標）製品）。質量分析法データは、液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣＭＳ）または大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）から報告する。核磁気共鳴（ＮＭＲ）データについての化学シフトは、用いた重水素化溶媒からの残留ピークを参照した百万分率（ｐｐｍ、δ）で表す。

【0295】

他の実施例または方法における手順を参照する合成について、反応プロトコル（反応の長さおよび温度）は変化し得る。一般に、反応に続いて、薄層クロマトグラフィー、ＬＣＭＳまたはＨＰＬＣを行い、適当な場合、後処理に供した。精製は、実験毎に変化し得る。一般に、溶離液／勾配のために使用する溶媒および溶媒比は、適当な保持時間を実現するために選択した。他に特定しない限り、逆相ＨＰＬＣ画分を凍結乾燥／フリーズドライによって濃縮した。中間体および最終化合物は、（０℃）または室温にて密封したバイアルまたはフラスコ中で窒素下にて貯蔵した。

【0296】

化合物名は、ＡＣＤ Ｌａｂｓソフトウェアで作成した。

【0297】

分析のために使用するＨＰＬＣ条件
プロトコルＡ^ＡおよびＡ^Ｂ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、１５０×３．０ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０２％トリフルオロ酢酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％トリフルオロ酢酸（ｖ／ｖ）；勾配：５％〜１００％Ｂ（１０分に亘り）^Ａまたは（２０分に亘り）^Ｂ；流量：０．７５ｍＬ／分、温度：制御せず；検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ、２５４ｎｍ；注入量、１０μＬ；機器：ＨＰ１１００。

【0298】

プロトコルＢ：カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８、５０×４．６ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０５％ギ酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０５％ギ酸（ｖ／ｖ）；勾配：４分に亘り５％〜９５％Ｂ、１分間９５％Ｂで保持、流量：２．０ｍＬ／分、温度：室温；検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ；注入量、４μＬ；機器：Ｗａｔｅｒｓ ＬＣおよびＺＱ質量分析計。

【0299】

プロトコルＣ：カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３、Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ；移動相Ａ：水中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；勾配：０．１分に亘り５％Ｂ、２．５分に亘り５％〜９５％Ｂ、０．３５分に亘り９５％Ｂ；流量：１．２５ｍＬ／分、温度：６０℃；検出：２００〜４５０ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲１００〜２０００ダルトン；注入量：５μＬ；機器：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ。

【0300】

プロトコルＤ：カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３、Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ；移動相Ａ：水中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；勾配：０．１分に亘り５％Ｂ、１．５分に亘り５％〜９５％Ｂ、０．３５分に亘り９５％Ｂ；流量：１．２５ｍＬ／分、温度：６０℃；検出：２００〜４５０ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲１００〜２０００ダルトン；注入量：５μＬ；機器：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ。

【0301】

プロトコルＥ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、１５０×３．０ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０２％トリフルオロ酢酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％トリフルオロ酢酸（ｖ／ｖ）；勾配：２３．５分に亘り０％〜１００％Ｂ；流量：１．５ｍＬ／分、温度：制御せず；検出：ＤＡＤ、２１０ｎｍ；注入量：１０μＬ；機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＨＰＬＣ

【0302】

プロトコルＦ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、１５０×３．０ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；勾配：１．５分に亘り５％Ｂ、８．５分に亘り５％〜１００％Ｂ、次いで、１分間１００％Ｂ；流量：０．７５ｍＬ／分、温度：４５℃；検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ、２５４ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲１５０〜２０００ダルトン；注入量：１０μＬ；機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１２００ＬＣＭＳ。

【0303】

プロトコルＧ：カラム：Ａｔｌａｎｔｉｓ ｄＣ１８、５０×４．６ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０５％トリフルオロ酢酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０５％トリフルオロ酢酸（ｖ／ｖ）；勾配：４．０分に亘り５％〜９５％Ｂ、直線的；次いで、１分に亘り９５％Ｂで保持、流量：２ｍＬ／分、温度：室温；検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲１６０〜１０００ダルトン；注入量、４ｕＬ；機器：Ｗａｔｅｒｓ９９６ＰＤＡ。

【0304】

プロトコルＨ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、１５０×３．０ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：１．５分に亘り５％Ｂ、８．５分に亘り５％〜１００％Ｂ、次いで、１分間１００％Ｂ；流量：０．７５ｍＬ／分、温度：２５℃；検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ、２５４ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲１５０〜２０００ダルトン；注入量：１０μＬ；機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１２００ＬＣＭＳ。

【0305】

プロトコルＩ：カラム：Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８、２．１×３０ｍｍ、３ｍ；移動相Ａ：水中の０．１％トリフルオロ酢酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％トリフルオロ酢酸（ｖ／ｖ）；勾配、０．９分に亘り０％〜６０％Ｂ、０．６分に亘り６０％Ｂ；０．５分間１００％Ｂ；流量：１．２ｍＬ／分、検出：ＤＡＤ、２２０ｎＭ；温度：２５℃；注入量：１μＬ；機器：Ａｇｉｌｅｎｔ

【0306】

プロトコルＪ：カラム：Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８、２．１×３０ｍｍ、３μｍ；移動相Ａ：水中の０．１％トリフルオロ酢酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％トリフルオロ酢酸（ｖ／ｖ）；勾配：０．９分に亘り１０％〜８０％Ｂ、０．６分に亘り８０％Ｂ；０．５分間１００％Ｂ；流量：１．２ｍＬ／分、検出：ＤＡＤ、２２０ｎＭ；温度：２５℃；注入量：１μＬ；機器：Ａｇｉｌｅｎｔ。

【0307】

プロトコルＫ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ＰＦＰ、１００×３ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０５％ギ酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０５％ギ酸（ｖ／ｖ）；勾配：９分に亘り５％〜９５％Ｂ、１分間９５％Ｂで保持、流量：１．０ｍＬ／分、温度：室温；検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ；注入量：４μＬ；機器：Ｗａｔｅｒｓ ＬＣおよびＺＱ質量分析計。

【0308】

プロトコルＬ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ−ＮＸ、Ｃ１８、４．６ｍｍ×５０ｍｍ、１１０Ａ、３μｍ、移動相Ａ：水中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；勾配５％；０．０〜４．１０分に亘り１００％Ｂに；４．１０〜４．５０分は１００％Ｂで保持；流量：１．２５ｍＬ／分、温度：６０℃；検出：２００〜４５０ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲１００〜２０００ダルトン；注入量：５μＬ；機器：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ。

【0309】

プロトコルＭ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ−ＮＸ、４．６ｍｍ×５０ｍｍ、Ｃ１８、３μｍ、１１０Ａ；移動相Ａ：水中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；勾配：４．１０分に亘り５％〜１００％Ｂ、０．４分間１００％Ｂで保持、次いで、０．５分に亘り１００％〜５％Ｂ；流量：１．５ｍＬ／分、温度：６０℃；検出：ＨＰ１１００ＤＡＤ（１３１５Ａ）、２００〜４５０ｎｍのスキャン；１ｎｍ間隔；ＭＳ ＥＳＩ（＋／−）、１００〜１２００ｍ／ｚ、スキャン、０．５秒のスキャン時間、セントロイド；注入量：５μＬ；機器：ＨＰＬＣポンプ、ＤＡＤ検出器、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＤＥからのカラムオーブン；Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡからのオートサンプラーおよびＭＳ検出器；Ｖａｒｉａｎ ｍｅｄｉｃａｌ ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡからのＥＬＳ検出器。

【0310】

プロトコルＮ：カラム：ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ、４．６×１５０ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０１％トリフルオロ酢酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０１％トリフルオロ酢酸（ｖ／ｖ）；勾配：１５分に亘り１０％〜１００％Ｂ；流量：１．０ｍＬ／分、温度：制御せず；検出：ＤＡＤ、２３０ｎｍ；注入量：５μＬ；機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＨＰＬＣ。

【0311】

プロトコルＯ：能動遮蔽型９．４Ｔｅｓｌａ超電導磁石（Ｍａｇｎｅｘ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｌｔｄ．、ＵＫ）、外部Ｂｒｕｋｅｒ ＡＰＯＬＬＯ ＥＳＩ源、およびＳｙｎｒａｄ５０Ｗ ＣＯ_２ＣＷレーザーを備えたＢｒｕｋｅｒ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）ＡＰＥＸＩＩ ＦＴＩＣＲ質量分析計を使用して、高分解能エレクトロスプレーイオン化質量スペクトル（ＨＲＥＳＩＭＳ）を得た。試料を、質量分析計中に１：１（ｖ：ｖ）の水：アセトニトリル（０．２５％ギ酸）からなる担体溶媒と共に５０μＬ／分の流量でフロー注入した。Ｂｒｕｋｅｒ Ｘｍａｓｓソフトウェアを、データ収集および分析のために使用した。ＨＰチューニングミックスを使用して、質量スペクトルを外部較正した。

【0312】

プロトコルＰ：カラム：ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ、４．６×１５０ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０１％トリフルオロ酢酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０１％トリフルオロ酢酸（ｖ／ｖ）；勾配：１９分に亘り１０％〜１００％Ｂ；流量：１．０ｍＬ／分、温度：制御せず；検出：ＤＡＤ、２３０ｎｍ；注入量：５μＬ；機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＨＰＬＣ。

【0313】

プロトコルＱ：カラム：カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ３００ＳＢ−Ｃ８、７５×２．１ｍｍ、２．６μｍ；移動相Ａ：水中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；勾配：４分に亘り２０％Ｂ〜４５％Ｂ；流量：１．０ｍＬ／分、温度：６０℃；検出：２２０ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲４００〜２０００Ｄａ；注入量：１０μＬ；機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＬＣ、Ｗａｔｅｒｓ ＭｉｃｒｏｍａｓｓＺＱ ＭＳ。ＭａｘＥｎｔ１を使用して、デコンボリューションを行った。

【0314】

精製のために使用するＨＰＬＣ条件
方法Ａ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ、Ｃ１８、３０×１００ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０２％酢酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％酢酸（ｖ／ｖ）；勾配：可変、１５〜２０分に亘りＡ中のＢの増加する勾配；流量：２０ｍＬ／分、温度：制御せず；検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ、２５４ｎｍ；注入量：可変；機器：Ｇｉｌｓｏｎ。

【0315】

方法Ｂ^＊：カラム：ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ、３０×２５０ｍｍ、１０μｍ；移動相Ａ：水中の０．０２％酢酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％酢酸（ｖ／ｖ）；勾配：可変、１５〜２０分に亘りＡ中のＢの増加する勾配；流量：２０ｍＬ／分、温度：制御せず；検出：ＤＡＤ、２３０ｎｍ；注入量：可変、０．５〜２ｍＬ；機器：Ｖａｒｉａｎ ＰｒｏＳｔａｒモデル３３０分取ＨＰＬＣ。

【0316】

方法Ｃ^＊：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、１５０×２１．２ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：可変、１０分に亘りＡ中のＢの増加する勾配；流量：２７ｍＬ／分、温度：室温；検出：ＤＡＤ、２１０〜３６０ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲１５０〜２０００ダルトン；機器：Ｗａｔｅｒｓ Ｆｒａｃｔｉｏｎ Ｌｙｎｘ ＬＣＭＳ。

【0317】

方法Ｄ^＊：カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ、Ｃ１８、１９×１００ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０５％ギ酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０５％ギ酸（ｖ／ｖ）；勾配：可変、１０〜２０分に亘りＡ中のＢの増加する勾配；流量：２５ｍＬ／分、検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ、ＭＳ（＋）範囲１６０〜１０００ダルトン；機器：Ｗａｔｅｒｓ ＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘ。

【0318】

方法Ｅ：カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ、Ｃ１８、１９×１００ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０５％トリフルオロ酢酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０５％トリフルオロ酢酸（ｖ／ｖ）；勾配：８．５分に亘り１０〜５０％Ｂ、０．５分に亘り５０〜１００％Ｂ、１００％Ｂで１分間保持、流量：２５ｍＬ／分、検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ、ＭＳ（＋）範囲１６０〜１０００ダルトン；機器：Ｗａｔｅｒｓ ＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘ。

【0319】

方法Ｆ^＊：カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｃ１８ＤＥＬＴＡ ＰＡＫ（ＷＡＴ０１１８０１）、３００×５０ｍｍ、１５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０２％酢酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％酢酸（ｖ／ｖ）；勾配：可変、１５〜２０分に亘りＡ中のＢの増加する勾配；流量：５０ｍＬ／分、温度：制御せず；検出：ＤＡＤ、２３０ｎｍ；注入量：可変、０．５〜５ｍＬ；機器：Ｖａｒｉａｎ ＰｒｏＳｔａｒモデル３３０分取ＨＰＬＣ。

【0320】

方法Ｇ^＊：カラム：ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ、５０×３００ｍｍ、１２μｍ、１２０Ａ、移動相Ａ：水中の０．０２％酢酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％酢酸（ｖ／ｖ）；勾配：３分間４０％Ｂ、２０分に亘り４０〜１００％Ｂ、および３分間１００％Ｂ、流量；２０ｍＬ／分、温度：制御せず；検出：ＤＡＤ、２３０ｎｍ；注入量：可変、０．５〜５ｍＬ；機器：Ｖａｒｉａｎ ＰｒｏＳｔａｒモデル３３０分取ＨＰＬＣ。

【0321】

方法Ｈ：カラム：Ｃｒｏｍｏｌｉｔｈ ＲＰ−１８ｅ１００−１０ｍｍ、移動相Ａ：水中の０．０２％酢酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％酢酸（ｖ／ｖ）；勾配：３０分に亘り２０〜５５％Ｂ、４分に亘り５５〜１００％Ｂ、２分に亘り１００〜２０％Ｂ、および２分間２０％Ｂ、流量；２．５ｍＬ／分、温度：制御せず；検出：ＤＡＤ、２３０ｎｍ；注入量：可変、０．０２５〜０．１ｍＬ；機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００分析用ＨＰＬＣ。

【0322】

方法Ｉ：カラム：Ｃ１８セミ分取ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−Ａ、２５０×１０ｍｍ（Ｓ−５μｍ、１２ｎｍ）、移動相Ａ：水中の０．０２％酢酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％酢酸（ｖ／ｖ）；勾配：２２分に亘り１８〜２５％Ｂ、１分に亘り２５〜９５％Ｂ、４分間９５％Ｂ、１分に亘り９５〜１８％Ｂ、および６分間１８％Ｂ、流量：２．５ｍＬ／分、温度：制御せず、検出：ＤＡＤ、２３０ｎｍ、注入量：可変、０．０２５〜０．１ｍＬ、機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１２００分析用ＨＰＬＣ。

【0323】

方法Ｊ：カラム：Ｃ１８セミ分取ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−Ａ、２５０×１０ｍｍ（Ｓ−５μｍ、１２ｎｍ）、移動相Ａ：水中の０．０２％酢酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％酢酸（ｖ／ｖ）；勾配：３０分に亘り２０〜３０％Ｂ、１分に亘り３０〜９５％Ｂ、４分間９５％Ｂ、２分に亘り９５〜２０％Ｂ、および６分間２０％Ｂ、流量：２．５ｍＬ／分、温度：制御せず、検出：ＤＡＤ、２３０ｎｍ、注入量：可変、０．０２５〜０．１ｍＬ、機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１２００分析用ＨＰＬＣ。

【0324】

方法Ｋ：カラム：Ｃｒｏｍｏｌｉｔｈ ＲＰ−１８ｅ、１００−１０ｍｍ、移動相Ａ：水（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル（ｖ／ｖ）；勾配：２０分に亘り３０〜６５％Ｂ、１分に亘り６５〜９５％Ｂ、２分に亘り９５〜３０％Ｂ、流量；２．５ｍＬ／分、温度：制御せず；検出：ＤＡＤ、２３０ｎｍ；注入量：可変、０．０２５〜０．１ｍＬ；機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１２００分析用ＨＰＬＣ。

【0325】

場合によって、これらに限定されないが、勾配、勾配長さおよび流量の変化などの、精製ＨＰＬＣ条件へのいくつかの軽微な変更を行った。これは、記号^＊によって示す。

【0326】

一般手順
一般手順Ａ：活性化Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルの調製。

【0327】

【化51】

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酸のテトラヒドロフラン中０．１Ｍ溶液に、０℃でＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（２．２当量）を、続いてＮ−ヒドロキシスクシンイミド（２．２当量）を加え、反応物を室温に加温し、撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（またはＨＰＬＣもしくはＴＬＣ）によりモニターした；反応は通常１〜７２時間内に完結した。溶媒を減圧下で除去し、残留物を逆相クロマトグラフィーにより精製して、所望のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを得た。

【0328】

一般手順Ｂ：ＮＨＳエステルからのアミドの調製。

【0329】

【化52】

[この文献は図面を表示できません]

テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドの何れか中のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（１当量）（０．１Ｍ）に、０℃でアミン（１から１０当量）を加えた。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（またはＨＰＬＣもしくはＴＬＣ）によりモニターした；反応は通常１〜７２時間内に完結した。反応混合物を真空で濃縮し、残留物を逆相クロマトグラフィーにより精製して、所望のアミド生成物を得た。

【0330】

一般手順Ｃ：ペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステルの調製

【0331】

【化53】

[この文献は図面を表示できません]

酸のテトラヒドロフラン中０．００５Ｍ溶液に、０℃でＤＣＣ（１当量）を、続いてテトラヒドロフラン（０．３Ｍ）に溶解したペンタフルロフェノール（２から４当量）の溶液を加えた。反応物を室温に加温し、撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（またはＨＰＬＣもしくはＴＬＣ）によりモニターした；反応は通常１〜４８時間内に完結した。反応物を減圧下で濃縮し、残留物を逆相クロマトグラフィーにより精製して、所望のペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステルを得た。

【0332】

一般手順Ｄ：ＮＨＳエステルからのアミドの調製におけるライブラリプロトコル。アミン（１当量）をテトラヒドロフラン（１ｍＬ、０．０４Ｍ）中に溶解し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５当量）を、続いてメタノール（０．２ｍＬ）を加えた。次いで溶液全体を、テトラヒドロフラン（１ｍＬ、０．０４Ｍ）中に溶解したＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（１当量）の冷却溶液（０℃）に滴下添加した。反応物を（０℃）で３０分間撹拌し、次いで室温に加温し、７２時間まで撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（またはＨＰＬＣもしくはＴＬＣ）によりモニターした；反応は通常１〜７２時間内に完結した。溶媒を真空で除去し、残留物を逆相クロマトグラフィーにより精製し、所望の生成物に関する画分を合わせ、凍結乾燥して、標的のアミドを得た。

【0333】

一般手順Ｅ：ＮＨＳエステルのインサイチュ生成によるアミドの調製。

【0334】

【化54】

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酸（１当量）（０℃または室温）のテトラヒドロフランまたはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドもしくはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド中溶液（０．０８Ｍ）に、ＤＣＣ（２．２当量）を、続いてＮ−ヒドロキシスクシンイミド（２．２当量）を加え、反応物を０℃で撹拌するか室温に加温し、出発物の酸のほとんどが消費されたことをＬＣ／ＭＳによる分析が示すまで撹拌した。反応混合物を０℃に再度冷却し、アミン（１から２０当量）を加え、室温に加温し、撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳ（またはＨＰＬＣもしくはＴＬＣ）によりモニターした；反応は通常１〜７２時間内に完結した。反応混合物を真空で濃縮し、残留物を逆相クロマトグラフィーにより精製して、所望のアミドを得た。

【0335】

一般手順Ｆ：ＮＨＳエステルからのアミドの調製。アミン（またはアミン−酸塩）（１．０当量）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（５当量）のメタノール（０．２ｍＬ）中混合物を、１５分間撹拌し、得られた溶液をＮＨＳエステル（１．０当量）のテトラヒドロフラン（１．０ｍＬ）中溶液に移した。ＮＨＳ−エステル出発物のほとんどが消費されたことをＬＣ／ＭＳによる分析が示すまで、反応物を室温で更にアミン（１〜３当量）を加えて撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、残留物を逆相クロマトグラフィーにより精製して、所望のアミド生成物を得た。

【0336】

（実施例Ａ１）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート＃Ｂ１の調製。

【0337】

【化55】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート＃Ｂ１の合成。＃ＮＰ１（１０３ｍｇ、０．１９２ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（２ｍＬ、０．０９６Ｍ）中冷却（０℃）溶液に、ＤＣＣ（８７．１ｍｇ、０．４２２ｍｍｏｌ、２．２当量）を加え、反応物を１５分間撹拌した。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（４８．６ｍｇ、０．４２２ｍｍｏｌ、２．２当量）を加え、反応物を（０℃）で１５分間撹拌し、室温に加温し、７２時間撹拌した。反応物を真空で濃縮し、残留物を中圧逆相Ｃ１８クロマトグラフィー（濃度勾配：各相中に０．０２％酢酸を含むアセトニトリル中５％から９０％水）により精製した。所望の生成物に関する画分を凍結乾燥して、＃Ｂ１を固体として得た。収量：６６．６ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ、５４％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）保持時間＝８．１７０分（純度９１％）。LCMS (プロトコルD): m/z 633.3 [M+H]⁺,
保持時間= 0.81分. ¹H
NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 7.78 (d, J=8.02
Hz, 1 H) 6.37 - 6.30 (m, 2 H) 6.09 (m, 1 H) 5.85 (dd, J=11.54, 7.43 Hz, 1 H)
5.59 (dd, J=16.04, 5.28 Hz, 1 H) 5.50 (t, J=7.04 Hz, 1 H) 5.07 (d, J=6.06 Hz, 1
H, D₂O交換可能) 4.34 - 4.25 (m, 2 H) 3.63 (d,
J=5.48 Hz, 2 H) 3.48 (td, J=7.09, 2.64 Hz, 1 H) 3.27 (d, J=5.28 Hz, 1 H) 2.97
(d, J=6.85 Hz, 2 H) 2.82 - 2.77 (m, 4 H) 2.59 (d, J=5.09 Hz, 1 H) 2.33 - 2.11
(m, 2 H) 1.96 (s, 3 H) 1.92 (d, J=8.22 Hz, 1 H) 1.82 - 1.77 (m, 2 H) 1.68 (s, 3
H) 1.66-1.6 (br. s., 1 H) 1.59 - 1.55 (m, 1 H) 1.23 (d, J=6.46 Hz, 3 H) 1.05
(d, J=6.26 Hz, 3 H) 0.93 (d, J=7.24 Hz, 3 H)

【0338】

（実施例Ａ２）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２）の調製。

【0339】

【化56】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２）の合成。＃ＮＰ２（４３０ｍｇ、０．８２８ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（６ｍＬ、０．１３Ｍ）中冷却（０℃）溶液に、ＤＣＣ（３７６ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ、２．２当量）を、続いてＮ−ヒドロキシスクシンイミド（２１０ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ、２．２当量）を加えた。反応物を室温に加温した。１８時間後、灰白色固体を濾過し、濾液を濃縮して、黄色残留物を得た。残留物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２を白色固体として得た。収量：２０４ｍｇ、０．３３１ｍｍｏｌ、４０％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）：保持時間＝９．４６３分（純度７７％）。LCMS (プロトコルD): m/z 617.3 [M+H]⁺
保持時間= 0.91分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 7.72 (d, J=7.81 Hz,
1 H) 6.32 - 6.21 (m, 2 H) 6.04 (m, 1 H) 5.85 (dd, J=11.48, 7.21 Hz, 1 H) 5.57
(dd, J=15.80, 4.90 Hz, 1 H) 5.47 (t, J=7.04 Hz, 1 H) 4.53 - 4.47 (m, 1 H) 4.32
- 4.25 (m, 1 H) 3.62-3.55 (m, 2 H) 3.45 - 3.41 (m, 1 H) 2.95 (d, J=6.60 Hz, 2
H) 2.74 (s, 3 H) 2.59 (dd, J= 16.00, 4.68 Hz, 2 H) 2.30 - 2.07 (m, 2 H) 1.91
(s, 3 H) 1.77 -1.65 (m, 4 H) 1.63 (br s, 4 H) 1.61- 1.57 (m, 1 H) 1.48 (dd, J=
13.27, 7.02 Hz, 1 H) 1.19 (d, J=6.24 Hz, 3 H) 1.050 (d, J=6.24 Hz, 3 H) 0.89
(d, J=7.41 Hz, 3 H)

【0340】

（実施例Ａ３）
ペンタフルオロフェニル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ３）の合成

【0341】

【化57】

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ステップ１。ペンタフルオロフェニル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ３）の合成。＃ＮＰ１（２５ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（０．７ｍＬ、０．０６Ｍ）中溶液に、ＤＣＣ（９．７ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ、１当量）を、続いてペンタフルオロフェノール（１７．３ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ、２当量）のテトラヒドロフラン（０．３ｍＬ、０．３Ｍ）中溶液を加えた。反応物を室温で１８時間撹拌し、濾過し、濾過ケーキをアセトニトリルで濯いだ。合わせた濾液を真空で濃縮し、粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ３を白色固体として得た。収量：２１．６ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ、６５％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ｂ）：保持時間＝１５．６１７分（純度８７％）。LCMS (プロトコルD): m/z 702.2 [M+H]⁺
保持時間= 1.0分. ¹H NMR
((400 MHz, DMSO-d₆) δ: 7.79 (d, J=7.8 Hz,
1H), 6.38 (t, J=6.2 Hz, 1H), 6.32 (d, J=16.4 Hz, 1H), 6.12 (dd, J=11.7, 1.2 Hz,
1H), 5.88 (dd, J=11.5, 7.6 Hz, 1H), 5.64 (dd, J=16.0, 5.1 Hz, 1H), 5.45 (t,
J=7.0 Hz, 1H), 5.10 (d, J=6.2 Hz, 1H), 4.43 (dd, J=7.0, 3.9 Hz, 1H), 4.32 (t,
J=4.7 Hz, 1H), 3.70-3.60 (m, 1H), 3.51-3.43 (m, 1H), 3.12 (d, J=6.6 Hz, 1H),
2.82 (d, J=5.1 Hz, 1H), 2.65 (d, J=5.1 Hz, 1H), 2.36-2.15 (m, 2 H), 2.02-1.91
(m, 3 H), 1.81 (br. s., 1H), 1.71 (s, 3 H), 1.68-1.59 (m, 4 H), 1.27 (d, J=6.2
Hz, 3 H), 1.06 (d, J=6.2 Hz, 3 H), 0.95 (d, J=7.4 Hz, 3 H)

【0342】

（実施例Ａ４）
（２Ｚ，４Ｓ）−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−４−ヒドロキシペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ５）の調製。

【0343】

【化58】

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ステップ１。［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−ヒドロキシ−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃Ｂ４）の合成。テトラヒドロフラン／水の１：１混合物（１．５ｍＬ、０．０１２Ｍ）に溶解した＃ＮＰ１（１０．２ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、水酸化リチウム（６ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ、１３当量）を加えた。反応物を室温で１．５時間撹拌し、溶媒を真空で除去した。粗製の残留物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ４を固体として得た。収量：２ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ、２０％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ）：保持時間＝７．８５０分（純度９３％）。LCMS (プロトコルD); m/z 494.1[M+H]⁺ 保持時間= 0.68分. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃)
δ 6.46 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 6.28 (d, J = 16 Hz, 1 H),
6.09 (dd, J = 11.9および5.3 Hz, 1 H), 5.73, (dd, J = 12.1および1.6 Hz, 1 H), 5.57 (dd, J = 15.6および5.9 Hz, 1
H), 5.39-5.32 (m, 1 H), 4.75-4.66 (m, 1 H), 4.50-4.41 (m, 1 H), 4.19-4.13 (m,
1H), 3.89-3.82 (m, 1 H), 3.68-3.59 (m, 1 H), 3.52-3.43 (m, 2 H), 2.99 (dd, J =
15.2および9.4 Hz, 1 H), 2.94 (d, J = 4.3 Hz, 1 H),
2.59-2.49 (m, 2 H), 2.36-2.25 (m, 1 H), 2.20-2.09 (m, 2 H), 1.94-1.79 (m, 2 H),
1.76-1.68 (m, 1 H), 1.66 (s, 3 H), 1.63 (d, J = 3.9 Hz, 1 H), 1.27 (d, J = 6.6
Hz, 3 H), 1.08 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.93 (d, J = 7.4 Hz, 3 H).

【0344】

ステップ２。（２Ｚ，４Ｓ）−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−４−ヒドロキシペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ５）の合成。＃ＮＰ１の代わりに＃Ｂ４を用いた以外は、実施例Ａ１における＃Ｂ１の合成のための一般手順に従って調製した。粗製の反応物を真空で濃縮し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ５を固体として得た。収量：１６．２ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ、６４％。LCMS (プロトコルD): m/z 591.3[M+H]⁺ 保持時間= 0.71分. ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆,
多重線, JはHz単位) δ 7.78 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 6.35
(d, J = 15.6 Hz, 1 H), 5.97 (dd, J = 11.9および1.2 Hz, 1
H), 5.87 (dd, J = 11.7および7.1 Hz, 1 H), 5.61 (dd, J =
15.6および5.1 Hz, 1 H), 5.55-5.49 (m, 1 H), 5.22-5.14 (m,
1 H), 5.11 (d, J = 4.7 Hz, 1 H), 5.08 (d, J = 6.0 Hz, 1 H), 4.36-4.25 (m, 2 H),
3.69-3.60 (m, 2 H), 3.53-3.45 (m, 1 H), 3.31-3.27 (m, 1 H), 2.99 (d, J = 6.7
Hz, 2 H), 2.84-2.76 (m, 4 H), 2.61 (d, J = 5.0 Hz, 1 H), 2.34-2.26 (m, 1 H),
2.24-2.15 (m, 1 H), 1.95 (dd, J = 13.0および8.2 Hz, 1 H),
1.87-1.73 (m, 2 H), 1.72-1.62 (m, 4 H), 1.59 (dd, J = 13.0および3.6 Hz, 1 H), 1.11 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 1.06 (d, J = 6.4 Hz, 3 H),
0.95 (d, J = 7.3 Hz, 3 H).

【0345】

（実施例Ａ５）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−ヒドラジニル−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ６）の調製。

【0346】

【化59】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−ヒドラジニル−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ６）の合成。ヒドラジン（テトラヒドロフラン中１Ｍ溶液０．６１５ｍＬ、０．６１５ｍｍｏｌ、５当量）を、ジクロロメタン（３ｍＬ、０．０４Ｍ）に溶解した＃Ｂ１（７８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に加え、室温で１時間撹拌し、次いで更にヒドラジン（テトラヒドロフラン中１Ｍ溶液０．６１５ｍＬ、０．６１５ｍｍｏｌ、５当量）を加えた。１時間後、反応物を水で希釈し、ジクロロメタン（３×）で抽出し、有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残留物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ６を固体として得た。収量：４３ｍｇ、５８％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ）保持時間＝６．８７０分（純度＝７２％）。LCMS (プロトコルC): m/z 550.4 [M+H]⁺,
保持時間= 1.15分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.99 (s, 1 H), 7.78 (d,
J = 8.2 Hz, 1 H), 6.42-6.25 (m, 2 H), 6.11 (dd, J = 11.5および1.4 Hz, 1 H), 5.86 (dd, J = 11.7および7.4 Hz, 1
H), 5.60 (dd, J = 16および5.9 Hz, 1 H), 5.55-5.49 (m , 1
H), 5.02 (d, J = 5.5 Hz, 1 H), 4.32-4.07 (m, 4 H), 3.70-3.60 (m, 2 H),
3.54-3.45 (m, 1 H), 3.22 (見かけt, J = 4.9 Hz, 1 H), 2.74
(d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.58 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.44 (dd, J = 14.2および8.4 Hz, 1 H), 2.35-2.25 (m, 1 H), 2.24-2.14 (m, 2 H), 1.97 (s, 3 H),
1.91-1.77 (m, 3 H), 1.70-1.60 (m, 4 H), 1.46 (dd, J = 12.9および3.5 Hz, 1 H), 1.25 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.6 Hz, 3 H),
0.95 (d, J = 7.4 Hz, 3 H).

【0347】

（実施例Ａ６）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−ヒドラジニル−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ７）の調製。

【0348】

【化60】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−ヒドラジニル−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ７）の合成。＃ＮＰ２（１４０ｍｇ、０．２６９ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（４ｍＬ、０．０７Ｍ）中溶液に、ＤＣＣ（１２２ｍｇ、０．５９２ｍｍｏｌ、２．２当量）を、続いてＮ−ヒドロキシスクシンイミド（６８．１ｍｇ、０．５９２ｍｍｏｌ、２．２当量）を加えた。１８時間後、ヒドラジン（テトラヒドロフラン中１Ｍ溶液０．５７６ｍＬ、０．５７６ｍｍｏｌ、２．１当量）を加えた。３０分後、更にヒドラジン（テトラヒドロフラン中１Ｍ溶液１ｍＬ、１ｍｍｏｌ、３．７当量）を加えた。１０分後、反応物を真空で濃縮し、所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｃ^＊）により精製して、＃Ｂ７を固体として得た。収量：７８ｍｇ、０．１４５ｍｍｏｌ、５４％。ＨＰＬＣ（プロトコルＦ）：ｍ／ｚ５３４．４［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝８．１４３分（純度１００％）。

【0349】

（実施例Ａ７）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−｛２−［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ８）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ９）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−｛２−オキソ−２−［（４−スルファモイルベンジル）アミノ］エチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１０）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（４−アミノベンジル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１１）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（ピペラジン−１−イル）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート、酢酸塩（＃Ｂ１２）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート、酢酸塩（＃Ｂ１３）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−（ヒドロキシアミノ）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１４）の調製。

【0350】

【化61】

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ステップ１ａ。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−｛２−［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ８）の合成。一般手順Ｄに従って、２−アミノエタノール（２．０ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ、１．０３当量）、テトラヒドロフラン（１ｍＬ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０２８ｍＬ、０．１６０ｍｍｏｌ、５当量）、メタノール（０．２ｍＬ）および＃Ｂ１（２０ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ、１当量）から所望の粗製物を合成し、これを逆相クロマトグラフィー（方法Ｄ^＊）により精製して、＃Ｂ８を固体として得た。収量：１７．６ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ、９７％。ＨＰＬＣ（プロトコルＢ）：ｍ／ｚ５７９．６［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝２．００分（純度１００％）。

【0351】

ステップ１ｂ。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ９）の合成。テトラヒドロフラン（１ｍＬ、０．０２４Ｍ）に溶解した＃Ｂ１（１５ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、アンモニア（メタノール中７Ｍ溶液０．０６９ｍＬ、０．４８０ｍｍｏｌ、２０当量）を加えた。３．５時間撹拌した後、溶媒を真空で除去し、所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｃ^＊）により精製して、＃Ｂ９を固体として得た。収量：６ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、５０％。ＨＰＬＣ（プロトコルＦ）ｍ／ｚ５３５．３［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝７．７９６分（純度１００％）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.78 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.30 (s, 1 H), 6.77 (s, 1 H), 6.40-6.28
(m, 2 H), 6.10 (d, J = 11.7 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.5および7.6 Hz, 1 H), 5.61 (dd, J = 15.8および5.7 Hz, 1
H), 5.54-5.47 (m, 1 H), 4.99 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 4.29-4.20 (m, 2 H),
3.69-3.61 (m, 2 H), 3.53-3.46 (m, 1 H), 3.23 (見かけt, J =
5.1 Hz, 1 H), 2.74 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.57 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.48-2.44
(m, 1 H), 2.36-2.25 (m, 1 H), 2.25-2.16 (m, 2 H), 1.97 (s, 3 H), 1.87-1.77 (m,
2 H), 1.69 (s, 3 H), 1.68-1.60 (m, 2 H), 1.49 (dd, J = 13.1および3.7 Hz, 1 H), 1.25 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H),
0.95 (d, J = 7.4 Hz, 3 H).

【0352】

ステップ１ｃ。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−｛２−オキソ−２−［（４−スルファモイルベンジル）アミノ］エチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１０）の合成。一般手順Ｄに従って、４−（アミノメチル）ベンゼンスルホンアミド、塩酸塩（９．２ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ、１当量）、テトラヒドロフラン（１ｍＬ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０３５ｍＬ、０．２００ｍｍｏｌ、５当量）、メタノール（０．２ｍＬ）および＃Ｂ１（２５ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ、１当量）から所望の粗製物を合成し、これを逆相クロマトグラフィー（方法Ｄ^＊）により精製して、＃Ｂ１０を固体として得た。収量：１５．５ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、５５％。ＨＰＬＣ（プロトコルＢ）：ｍ／ｚ７０４．４［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝２．３６分（純度１００％）。¹H NMR (400 MHz, メタノール-d₄) δ: 8.58 (br. s., 1H), 7.80
(d, J=8.2 Hz, 1H), 7.63 (d, J=8.6 Hz, 2 H), 7.45 (d, J=8.2 Hz, 2H), 6.42-6.32
(m, 2 H), 6.02-5.90 (m, 2 H), 5.67 (dd, J=15.8, 6.0 Hz, 1H), 5.53 (t, J=7.0 Hz,
1H), 4.62-4.54 (m, 1H), 4.46 (d, J=4.3 Hz, 1H), 4.42-4.32 (m, 2 H), 3.78-3.65
(m, 2 H), 3.58 (t, J=5.8 Hz, 1H), 3.43 (d, J=5.8 Hz, 1H), 2.92-2.81 (m, 2 H),
2.66 (d, J=5.1 Hz, 1H), 2.40 (m, 2 H), 2.24 (m, 1H), 2.02-2.02 (m, 3 H), 1.98
(s, 1H), 1.98-1.67 (m, 2 H), 1.90-1.85 (m, 1 H), 1.83-1.80 (m, 1 H), 1.77 (s, 2
H), 1.41-1.32 (m, 4 H), 1.13-0.98 (m, 3 H).

【0353】

ステップ１ｄ。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（４−アミノベンジル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１１）の合成。一般手順Ｄに従って、４−（アミノメチル）アニリン（３．９ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ、１当量）、テトラヒドロフラン（１ｍＬ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０１１ｍＬ、０．０６４ｍｍｏｌ、２当量）、メタノール（０．２ｍＬ）および＃Ｂ１（２０ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ、１当量）から所望の粗製物を合成し、これを逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１１を固体として得た。収量：１７．６ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ、８６％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）：保持時間＝６．７４８分（純度９１％）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 8.14 (t, J=5.77 Hz, 1 H) 7.78 (d, J=8.02 Hz, 1 H) 6.90 - 6.84
(m, 2 H) 6.48 - 6.43 (m, 2 H) 6.39 - 6.30 (m, 1 H) 6.27 (s, 1 H) 6.09 (m,1 H)
5.88 - 5.80 (m, 1 H) 5.59 (dd, J=15.85, 5.48 Hz, 1 H) 5.51 (t, J=6.94 Hz, 1 H)
5.01 (d, J=5.28 Hz, 1 H) 4.89 (s, 2 H) 4.30 - 4.22 (m, 1 H) 4.12 - 3.99 (m, 1
H) 3.63 (d, J=5.87 Hz, 2 H) 3.49 (td, J=7.04, 2.54 Hz, 1 H) 3.22 (t, J=4.40 Hz,
1 H) 2.73 (d, J=5.09 Hz, 1 H) 2.59 - 2.50 (m, 2 H) 2.35 - 2.13 (m, 3 H) 1.96
(s, 3 H) 1.88 - 1.75 (m, 3 H) 1.69 (s, 3 H) 1.64 (td, J=4.89, 2.54 Hz, 1 H)
1.44 (dd, J=12.81, 3.62 Hz, 1 H) 1.23 (d, J=6.46 Hz, 3 H) 1.04 (d, J=6.46 Hz, 3
H) 0.93 (d, J=7.43 Hz, 3 H)

【0354】

ステップ１ｅ。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（ピペラジン−１−イル）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート、酢酸塩（＃Ｂ１２）。テトラヒドロフラン（０．２４ｍＬ、０．０４８Ｍ）に溶解した＃Ｂ１（１５．５ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ピペラジン（２．５ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。３０分間撹拌した後、反応物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出し、合わせた有機物を硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、溶媒を真空で除去した。所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１２を白色固体として得た。収量：８．２ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、５２％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）保持時間＝６．７９５分（純度８０％）。LCMS (プロトコルC): m/z 604.3 [M+H]⁺,
保持時間= 1.01分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.79 (d, J = 8.2 Hz, 1
H), 6.41-6.28 (m, 2 H), 6.11 (d, J = 10.5 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.5および7.6 Hz, 1 H), 5.60 (dd, J = 16および5.1 Hz, 1
H), 5.55-5.48 (m, 1 H), 4.97 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 4.31-4.20 (m, 2 H), 3.70-3.60
(m, 2 H), 3.55-3.35 (m, 6 H), 3.27-3.22 (m, 1 H), 2.75 (d, J = 5.1 Hz, 1 H),
2.69-2.54 (m, 5 H), 2.36-2.13 (m, 4 H), 1.98 (s, 3 H), 1.88-1.76 (m, 3 H),
1.72-1.61 (m, 4 H), 1.58-1.51 (m, 1 H), 1.25 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 1.07 (d, J =
6.2 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.4 Hz, 3 H).

【0355】

ステップ１ｆ。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート、酢酸塩（＃Ｂ１３）。テトラヒドロフラン（０．５００ｍＬ、０．０６Ｍ）に溶解した＃Ｂ１（１８．８ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、１−メチルピペラジン（３．６ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。３０分間撹拌した後、反応物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出し、合わせた有機物を硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、溶媒を真空で除去した。所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１３を白色固体として得た。収量：１１．６ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ、５７％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）保持時間＝６．４２２分（純度９４％）。LCMS (プロトコルC): m/z 618.4 [M+H]⁺,
保持時間= 0.97分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.79 (d, J = 7.8 Hz, 1
H), 6.42-6.27 (m, 2 H), 6.11 (d, J = 10.5 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.3および7.4 Hz, 1 H), 5.60 (dd, J = 15.8および5.3 Hz, 1
H), 5.55-5.48 (m, 1 H), 4.97 (d, J = 6.2 Hz, 1 H), 4.30-4.21 (m, 2 H),
3.70-3.61 (m, 2 H), 3.56-3.33 (m, 5 H), 3.25 (見かけt, J =
5.5 Hz, 1 H), 2.79-2.65 (m, 2 H), 2.60-2.53 (m, 2 H), 2.35-2.12 (m, 9 H), 1.98
(s, 3 H), 1.88-1.78 (m, 3 H), 1.72-1.61 (m, 4 H), 1.56 (dd, J = 12.9および3.5 Hz, 1 H), 1.25 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H),
0.95 (d, J = 7.4 Hz, 3 H).

【0356】

ステップ１ｇ。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−（ヒドロキシアミノ）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１４）。テトラヒドロフラン（０．４５０ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．１７５ｍＬ）に溶解した＃Ｂ１（３０．７ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３２ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ、５当量）およびヒドロキシルアミン塩酸塩（１０．６ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。３０分間撹拌した後、反応物を水で希釈し、酢酸エチル（３×）で抽出し、合わせた有機物を水で再度洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、真空で濃縮した。所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１４を白色固体として得た。収量：１１．８ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ、４３％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）保持時間＝７．１８９分（純度９６％）。LCMS (プロトコルC): m/z 551.2 [M+H]⁺,
保持時間= 1.18分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.42 (s, 1 H), 8.74
(s, 1 H) 7.80 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 6.43-6.29 (m, 2 H), 6.16-6.10 (m, 1 H),
5.88 (dd, J = 11.7および7.4 Hz, 1 H), 5.61 (dd, J = 16および5.5 Hz, 1 H), 5.57-5.51 (m, 1 H), 5.04 (d, J = 5.5 Hz, 1 H),
4.32-4.23 (m, 2 H), 3.72-3.62 (m, 2 H), 3.57-3.48 (m, 1 H), 3.27-3.21 (m, 1 H),
2.76 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.60 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.44-2.27 (m, 2 H),
2.26-2.11 (m, 2 H), 2.00 (s, 3 H), 1.92-1.80 (m, 3 H), 1.74-1.63 (m, 4 H), 1.49
(dd, J = 12.7および3.3 Hz, 1 H), 1.27 (d, J = 6.6 Hz, 3
H), 1.09 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.97 (d, J = 7.4 Hz, 3 H).

【0357】

（実施例Ａ８）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１５）の調製。

【0358】

【化62】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１５）の合成。テトラヒドロフラン（３ｍＬ、０．０６Ｍ）に溶解した＃Ｂ２（１０８ｍｇ、０．１７５ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、アンモニア（メタノール中７Ｍ溶液０．５００ｍＬ、３．５ｍｍｏｌ、２０当量）を加えた。１時間撹拌した後、溶媒を真空で除去し、所望の粗製物を中圧逆相Ｃ１８クロマトグラフィー（濃度勾配：各相中０．０２％酢酸を含むアセトニトリル中０％から９０％水）により精製して、＃Ｂ１５を固体として得た。収量：２３．９ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ、２６％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）保持時間＝８．２３１分（純度８９％）。LCMS (プロトコルC): m/z 519.3 [M+H]⁺,
保持時間= 1.41分. ¹H
NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.80 (d, J = 7.8
Hz, 1 H), 7.33 (s, 1 H), 6.78 (s, 1 H), 6.42-6.33 (m, 1 H), 6.28 (d, J = 16 Hz,
1 H), 6.16-6.10 (m, 1 H), 5.88 (dd, J = 11.7および7.4 Hz,
1 H), 5.61 (dd, J = 15.8および5.7 Hz, 1 H), 5.56-5.50 (m,
1 H), 4.60-4.51 (m, 1 H), 4.38-4.27 (m, 1 H), 3.72-3.62 (m, 2 H), 3.56-3.48 (m,
1 H), 2.71-2.54 (m, 4 H), 2.38-2.27 (m, 1 H), 2.26-2.16 (m, 2 H), 2.00 (s, 3
H), 1.89-1.74 (m, 3 H), 1.71 (s, 3 H), 1.69-1.61 (m, 2 H), 1.39 (dd, J = 13.5および6.4 Hz, 1 H), 1.27 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 1.09 (d, J = 6.6 Hz, 3 H),
0.97 (d, J = 7.4 Hz, 3 H).

【0359】

（実施例Ａ９）
［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃Ｂ１６）および（２Ｚ，４Ｓ）−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−４−ヒドロキシペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ１７）の調製。

【0360】

【化63】

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ステップ１。［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃Ｂ１６）の合成。テトラヒドロフラン／水の１：１混合物（３ｍＬ、０．０１６Ｍ）に溶解した＃ＮＰ２（２５ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、水酸化リチウム（１５ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ、１３当量）を加えた。反応物を室温で１時間撹拌し、溶媒を真空で除去した。粗製の残留物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１６を固体として得た。収量：１７ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ、７４％。LCMS (プロトコルD); m/z 478.1 [M+H]⁺,
保持時間= 0.75分. ¹H NMR
(400 MHz, CDCl3-d) δ6.27 (d, J=8.98 Hz, 1 H) 6.09 (d,
J=15.61 Hz, 1 H) 6.00 (dd, J=12.10, 5.46 Hz, 1 H) 5.62 (dd, J=12.10, 1.17 Hz, 1
H) 5.40 (dd, J=15.61, 5.85 Hz, 2H) 5.25 (t, J=6.63 Hz, 1 H) 4.61 (t, J=6.63 Hz,
1 H) 4.48 - 4.32 (m, 2 H) 3.79- 3.73 (m, 1 H) 3.57 - 3.48 (m, 2 H) 3.42 - 3.33
(m, 2 H) 2.85 (dd, J=15.22, 8.98 Hz, 2 H) 2.52 - 2.44 (m, 2 H) 2.42 (d, J=5.07
Hz, 1 H) 2.25 - 2.00 (m, 1 H) 1.94 - 1.87 (m, 2 H) 1.80 - 1.74 (m, 2 H) 1.68 -
1.59 (m, 2 H) 1.55 (s, 3 H) 1.46 (dd, J=13.46, 3.71 Hz, 1 H) 1.27 (dd, J=13.66,
4.29 Hz, 1 H) 1.17 (d, J=6.63 Hz, 3 H) 0.98 (d, J=6.24 Hz, 3H) 0.83 (d, J=7.02
Hz, 3 H).

【0361】

ステップ２。（２Ｚ，４Ｓ）−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−４−ヒドロキシペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ１７）の合成。＃ＮＰ１の代わりに＃Ｂ１６を用いた以外は、実施例Ａ１における＃Ｂ１の合成のための一般手順に従って調製した。粗製の反応物を真空で濃縮し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１７を固体として得た。収量：２８ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ、43% LCMS (プロトコルD); m/z 575.1
[M+H]⁺, 保持時間= 0.82分.
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.76 (d, J
= 7.8 Hz, 1 H), 6.30 (d, J = 16 Hz, 1 H), 5.97 (d, J = 12.1 Hz, 1 H), 5.86 (dd,
J = 11.7および7.0 Hz, 1 H), 5.63 (dd, J = 16および5.1 Hz, 1 H), 5.56-5.48 (m, 1H), 5.22-5.06 (m, 2 H), 4.60-4.53 (m, 1
H), 4.39-4.30 (m, 1 H), 3.70-3.60 (m, 2H), 3.54-3.45 (m, 1 H), 3.03-2.98 (m, 2
H), 2.80 (s, 4 H), 2.70-2.60 (m, 2 H), 2.59 (s, 1 H), 2.37-2.13 (m, 3 H),
1.87-1.60 (m, 7 H), 1.54 (dd, J = 13.3および7 Hz, 1 H),
1.11 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 1.06 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.4 Hz, 3
H).

【0362】

（実施例Ａ１０）
４−｛４−［（１Ｅ）−１−（２−｛［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニリデン）エチル］フェノキシ｝ブタン酸（＃Ｂ１８）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−｛（２Ｅ）−２−［１−（４−｛４−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−４−オキソブトキシ｝フェニル）エチリデン］ヒドラジニル｝−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１９）の調製。

【0363】

【化64】

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ステップ１。４−｛４−［（１Ｅ）−１−（２−｛［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニリデン）エチル］フェノキシ｝ブタン酸（＃Ｂ１８）の合成。＃Ｂ７（３５ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ、１当量）のエタノール（１ｍＬ、０．０６Ｍ）中溶液に、４−（４−アセチルフェノキシ）ブタン酸（７３．３ｍｇ、０．３３０ｍｍｏｌ、５当量）を、続いて氷酢酸（０．２５０ｍＬ）を加え、反応物を３７℃に加熱した。３．５時間後、反応物を濾過し、逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１８を白色固体として得た。収量：２５．５ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ、５２％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）；ｍ／ｚ７３７．３８［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．８８分。

【0364】

ステップ２。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−｛（２Ｅ）−２−［１−（４−｛４−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−４−オキソブトキシ｝フェニル）エチリデン］ヒドラジニル｝−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１９）の合成。テトラヒドロフラン（０．７ｍＬ、０．０４９Ｍ）に溶解した＃Ｂ１８（２５ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＤＣＣ（１５．５ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ、２．２当量）を、続いてＮ−ヒドロキシスクシンイミド（８．６０ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ、２．２当量）を加えた。反応物を４時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、残留物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１９を白色固体として得た。収量：１３ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、４６％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）；ｍ／ｚ８３５．８［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９２分。

【0365】

（実施例Ａ１１）
４−｛４−［（１Ｅ）−１−（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニリデン）エチル］フェノキシ｝ブタン酸（＃Ｂ２０）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−｛（２Ｅ）−２−［１−（４−｛４−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−４−オキソブトキシ｝フェニル）エチリデン］ヒドラジニル｝−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２１）の調製。

【0366】

【化65】

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ステップ１。４−｛４−［（１Ｅ）−１−（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニリデン）エチル］フェノキシ｝ブタン酸（＃Ｂ２０）の合成。＃Ｂ６（１８．１ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ、１当量）のエタノール（０．５００ｍＬ、０．０６Ｍ）中溶液に、４−（４−アセチルフェノキシ）ブタン酸（３６．７ｍｇ、０．１６５ｍｍｏｌ、５当量）を、続いて氷酢酸（０．１２５ｍＬ）を加え、反応物を３７℃に加熱した。１時間後、反応物を濾過し、逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２０を白色固体として得た。収量：２４．９ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ、８５％。ＬＣＭＳ（プロトコルＣ）；ｍ／ｚ７５４．５［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝１．４７分。

【0367】

ステップ２。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−｛（２Ｅ）−２−［１−（４−｛４−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−４−オキソブトキシ｝フェニル）エチリデン］ヒドラジニル｝−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２１）の合成。テトラヒドロフラン（０．５５０ｍＬ、０．０５Ｍ）に溶解した＃Ｂ２０（２１．３ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＤＣＣ（１３．５ｍｇ、０．０６２ｍｍｏｌ、２．２当量）を、続いてＮ−ヒドロキシスクシンイミド（７．３ｍｇ、０．０６２ｍｍｏｌ、２．２当量）を加えた。反応物を５時間撹拌し、更にＤＣＣ（５ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、０．８当量）を、続いてＮ−ヒドロキシスクシンイミド（５ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ、１．５当量）を加えた。１８時間後、溶媒を真空で除去し、残留物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２１を白色固体として得た。収量：１１ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ、４７％。ＨＰＬＣ（プロトコルＨ）：ｍ／ｚ８５１．３［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝９．０７４分（純度８８％）。LCMS (プロトコルC); m/z 851.5 [M+H]⁺,
保持時間= 1.58分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 10.42-10.25
(m, 1 H), 7.83-7.66 (m, 3 H), 7.02-6.92 (m, 2 H), 6.43-6.22 (m, 2 H), 6.1-6.05
(m, 1 H), 5.93-5.81 (m, 1 H), 5.68-5.37 (m, 2 H), 5.08-4.90 (m, 1 H), 4.52-4.25
(m, 3 H), 4.13-4.04 (m, 2 H), 3.71-3.55 (m, 2 H), 3.52-3.40 (m, 1 H), 2.94-2.55
(m, 9 H), 2.35-2.03 (m, 7 H), 1.98 (s, 3 H), 1.95-1.85 (m, 1 H), 1.84-1.73 (m,
2 H), 1.72-1.54 (m, 5 H), 1.30-1.20 (m, 3 H), 1.12-1.00 (m, 3 H), 0.98-0.87 (m,
3 H).

【0368】

（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−［２−（ヒドロキシアミノ）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２２）の調製。

【0369】

【化66】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−［２−（ヒドロキシアミノ）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２２）の合成。テトラヒドロフラン（１．８ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．６００ｍＬ）に溶解した＃Ｂ２（１００．８ｍｇ、０．１７５ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１１４ｍｇ、０．８７５ｍｍｏｌ、５当量）およびヒドロキシルアミン塩酸塩（１０．６ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。１時間撹拌した後、反応物を水で希釈し、酢酸エチル（３×）で抽出し、合わせた有機物を水で再度洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、真空で濃縮した。所望の粗製物を中圧逆相Ｃ１８クロマトグラフィー（濃度勾配：各相中０．０２％酢酸を含むアセトニトリル中１０％から１００％水）により精製して、＃Ｂ２２を白色固体として得た。収量：６８ｍｇ、０．１２７ｍｍｏｌ、７３％。LCMS (プロトコルC): m/z 535.4 [M+H]⁺,
保持時間= 1.36分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.40 (s, 1H), 8.73 (d,
J = 2 Hz, 1 H), 7.79 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 6.41-6.32 (m, 1 H), 6.26 (d, J
= 15.6 Hz, 1 H), 6.12 (d, J = 11.3 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.5および7.6 Hz, 1 H), 5.59 (dd, J = 16および5.5 Hz, 1
H), 5.55-5.49 (m, 1 H), 4.56-4.49 (m, 1 H), 4.36-4.27 (m, 1 H), 3.70-3.61 (m, 2
H), 3.54-3.47 (m, 1 H), 2.65-2.60 (m, 2 H), 2.48-2.41 (m, 1 H), 2.36-2.17 (m, 2
H), 2.16-2.09 (m, 1 H), 1.98 (s, 3 H), 1.85-1.72 (m, 3 H), 1.72-1.61 (m, 6 H),
1.43-1.35 (m, 1 H), 1.25 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.95
(d, J = 7.4 Hz, 3 H).

【0370】

（実施例Ａ１２）
Ｎ−［３−（２−｛２−［（ブロモアセチル）アミノ］エトキシ｝エトキシ）プロパノイル］−Ｄ−バリル−Ｎ−（４−｛［（｛４−［（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）メチル］フェニル｝カルバモイル）オキシ］メチル｝フェニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｄ−オルニチンアミド（＃Ｂ２７）の調製。

【0371】

【化67】

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ステップ１。Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（４−｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］メチル｝フェニル）カルバモイル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２３）の合成。ｔｅｒｔ−ブチル（４−アミノベンジル）カルバメート（７５．４ｍｇ、０．３３９ｍｍｏｌ、１．３当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ、０．１６Ｍ）中溶液に、２，６−ジメチルピリジン（１４０ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ、５当量）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１６９ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ、５当量）および３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−オール（ＨＯＡｔ、７１．１ｍｇ、０．５２２ｍｍｏｌ、２当量）を加え、５分間撹拌した。全反応混合物をＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（｛［（４−ニトロフェノキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（２００ｍｇ、０．２６１ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ、０．１３Ｍ）中溶液に加え、反応物を５０℃に５時間加熱し、真空で濃縮した。所望の粗製物を中圧逆相Ｃ１８クロマトグラフィー（濃度勾配：各相中０．０２％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル中１０％から１００％水）により精製して、＃Ｂ２３を固体として得た。収量：４０ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ、１８％。

【0372】

ステップ２。Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［４−（アミノメチル）フェニル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド、ジトリフルオロ酢酸塩（＃Ｂ２４）の合成。＃Ｂ２３（４０ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（２ｍＬ、０．０２３Ｍ）中懸濁液に、ジクロロメタン／トリフルオロ酢酸の１：１溶液（２ｍＬ）を加えた。４５分後、反応物を真空で濃縮してオレンジ色ゴム状物の＃Ｂ２４にし、これを更には精製せずに使用した。収量：４６ｍｇ（定量的収率と仮定）。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ７５０．４［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．７３分。

【0373】

ステップ３。Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｄ−バリル−Ｎ−（４−｛［（｛４−［（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）メチル］フェニル｝カルバモイル）オキシ］メチル｝フェニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｄ−オルニチンアミド（＃Ｂ２５）の合成。＃Ｂ２４（４６ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ、０．０４７Ｍ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２．８ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ、２．１当量）を加えた。次いで全混合物を＃Ｂ１（２９．７ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）中溶液に滴下添加した。１８時間後、メタノール（０．４ｍＬ）を加えた。４８時間後、反応物を真空で濃縮し、粗生成物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２５を白色固体として得た。収量：１２．２ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ、２０％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）：保持時間＝９．１４０（純度＝８９％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１２６８．７［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９２分。

【0374】

ステップ４。Ｄ−バリル−Ｎ−（４−｛［（｛４−［（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）メチル］フェニル｝カルバモイル）オキシ］メチル｝フェニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｄ−オルニチンアミド（＃Ｂ２６）の合成。＃Ｂ２５（１２ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．３ｍＬ、０．３Ｍ）中溶液に、ピペリジン（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１ｍＬ中原液０．０５０ｍＬを０．２ｍＬ）を加えた。３０分後、反応物を真空で濃縮し、逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製し、所望の生成物に関する画分を凍結乾燥して、＃Ｂ２６を固体として得た。収量：６．６ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ、７０％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）：保持時間＝６．９５７（純度＝８９％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１０４５．８［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．６９分。

【0375】

ステップ５。Ｎ−［３−（２−｛２−［（ブロモアセチル）アミノ］エトキシ｝エトキシ）プロパノイル］−Ｄ−バリル−Ｎ−（４−｛［（｛４−［（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）メチル］フェニル｝カルバモイル）オキシ］メチル｝フェニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｄ−オルニチンアミド（＃Ｂ２７）の合成。＃Ｂ２６（６ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（０．６ｍＬ、０．０１Ｍ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（原液［Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０．０１ｍＬをテトラヒドロフラン１ｍＬに溶解することにより調製した］０．２５ｍＬ、０．０１２ｍｍｏｌ、２当量）を加え、室温で５分間撹拌した。全混合物を、２−ブロモ−Ｎ−［２−（２−｛３−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−３−オキソプロポキシ｝エトキシ）エチル］アセトアミド（２．４ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ、１当量）の冷却（０℃）溶液に滴下添加した。反応物を（０℃）で５分間撹拌し、次いで室温に加温した。１６時間後、反応物を真空で濃縮し、逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２７を白色固体として得た。収量：１．４ｍｇ、０．００１ｍｍｏｌ、２０％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１３４８．７［Ｍ＋Ｎａ］^＋、保持時間＝０．７７分。

【0376】

（実施例Ａ１３）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−［２−（｛４−［（３−｛２−［（Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝グリシル）アミノ］フェニル｝プロパノイル）スルファモイル］ベンジル｝アミノ）−２−オキソエチル］−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ３７）の調製

【0377】

【化68】

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ステップ１。メチル（２Ｅ）−３−（２−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）グリシル］アミノ｝フェニル）プロパ−２−エノエート（＃Ｂ２８）の合成。Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）グリシン（１３．４ｇ、７７．１ｍｍｏｌ、１当量）、１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（２２．１ｇ、１１５．７ｍｍｏｌ、１．５当量）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１１．４ｇ、８４．８ｍｍｏｌ、１．１当量）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（０．９ｇ、７．４ｍｍｏｌ、０．１０当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３５０ｍＬ）中溶液に、室温でメチル（２Ｅ）−３−（２−アミノフェニル）プロパ−２−エノエート（１５ｇ、８４．７ｍｍｏｌ、１．１当量）を加えた。反応物を５０℃に加温し、１８時間撹拌した。反応物を水（４００ｍＬ）で希釈し、クエン酸（２００ｍＬ）で洗浄し、酢酸エチル（３００ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濾液を真空で濃縮した。粗生成物を石油エーテル：酢酸エチル８：１から１：１で溶出したシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、化合物＃Ｂ２８（２０ｇ、７１％）を固体として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 8.29 (br, 1H), 7.84 (d, 2H), 7.55(t, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.22 (t,
1H), 6.41(d, 2H), 5.37 (br, 1H), 4.00 (d, 2H), 3.79 (s, 3H), 1.46 (s, 9H).

【0378】

ステップ２。メチル３−（２−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）グリシル］アミノ｝フェニル）プロパノエート（＃Ｂ２９）の合成。化合物＃Ｂ２８（２０ｇ、５９．８ｍｍｏｌ、１当量）およびＰｄ／Ｃ（２．０ｇ）の酢酸エチル（３５０ｍＬ）およびメタノール（３００ｍＬ）中懸濁液を、数回真空で脱気しＨ_２でパージした。反応混合物をＨ_２（３０Ｐｓｉ）下室温で９時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾過ケーキを酢酸エチル（１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を蒸発乾固して化合物＃Ｂ２９を油状物として得、これを更には精製せずに次のステップに使用した：収量（２０．７５ｇ、定量的と仮定）。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 9.13 (br, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.22(d, 1H), 7.17 (m, 2H), 5.34 (br,
1H), 4.04 (d, 2H), 3.64 (s, 3H), 2.95 (t, 2H), 2.72(t, 2H),1.46 (s, 9H).

【0379】

ステップ３。３−（２−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）グリシル］アミノ｝−フェニル）プロパン酸（＃Ｂ３０）の合成。＃Ｂ２９（２０．７５ｇ、５９．８ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）中溶液に、水酸化ナトリウム（１２．２４ｇ、０．３０６ｍｍｏｌ）の水（１５５ｍＬ）中溶液を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物のｐＨをクエン酸によりｐＨ５〜６に調節し、酢酸エチル（４００ｍＬ×２）で抽出した。有機層をブライン（１５０ｍＬ×２）で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮乾固して＃Ｂ３０を固体として得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。収量：２１．５ｇ（定量的と仮定）。¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ7.29 (m, 1H), 7.23 (m, 3H), 3.90 (s, 2H), 2.91 (m, 2H), 2.66 (m,
2H), 1.49 (m, 9H). LCMS (プロトコルI): m/z 345
[M+Na]⁺, 保持時間= 1.034分.

【0380】

ステップ４。３−［２−（グリシルアミノ）フェニル］プロパン酸（＃Ｂ３１）の合成。＃Ｂ３０（１０ｇ、３１．１ｍｍｏｌ、１当量）の酢酸エチル（１００ｍＬ）中溶液に、ＨＣｌ／ジオキサン（７０ｍＬ）を加えた。反応物を室温で３時間撹拌し、次いで濃縮乾固した。残留物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（５０ｍＬ）から再結晶して、＃Ｂ３１を固体として得た（５．９ｇ、２６．５ｍｍｏｌ、３ステップで８５．５％）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.06 (br, 1H), 8.31 (br, 3H), 7.41(d, 1H), 7.28 (m, 3H), 3.84 (s,
2H), 2.88(m, 2H), 2.52 (m, 2H).

【0381】

ステップ５。３−（２−｛［Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）グリシル］アミノ｝フェニル）プロパン酸（＃Ｂ３２）の合成。＃Ｂ３１（１．１１ｇ、４．９８ｍｍｏｌ、１当量）および重炭酸ナトリウム（５２８ｍｇ、７．４７ｍｍｏｌ、１．５当量）のテトラヒドロフラン（２５ｍＬ）および水（１０ｍＬ）中溶液に、９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝カルバメート（２．７ｇ、５．９８ｍｍｏｌ、１．２当量）のテトラヒドロフラン（４５ｍＬ）および１，２−ジメトキシエタン（１０ｍＬ）中溶液を滴下添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物のｐＨをクエン酸によりｐＨ５〜６に調節し、ジクロロメタン（１００ｍＬ×２）で抽出した。有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮乾固した。粗生成物をジクロロメタン：メタノール１００：１から１０：１で溶出したシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ３２（１．１ｇ、１．９７ｍｍｏｌ、３９．７％）を固体として得た。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆), δ9.31(s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.89 (d, 2H), 7.70 (d, 2H), 7.40 (m, 6H),
7.13 (m, 5H), 4.30 (m, 2H), 4.21 (m, 1H), 3.90 (m, 2H), 2.98 (m, 2H), 2.80 (m,
2H), 2.77 (m, 1H), 2.48 (m, 1H), 2.20 (m, 2H), 1.54(m, 2H), 1.42 (m, 2H), 1.25
(m, 2H). LCMS (プロトコルI): m/z 580.1 [M+Na]⁺,
保持時間= 1.315分.

【0382】

ステップ６。９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル｛６−［（２−｛［２−（３−｛［（４−｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］メチル｝フェニル）スルホニル］アミノ｝−３−オキソプロピル）フェニル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−６−オキソヘキシル｝カルバメート（＃Ｂ３３）の合成。＃Ｂ３２（９００ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ、１当量）およびｔｅｒｔ−ブチル（４−スルファモイルベンジル）カルバメート（７８７ｍｇ、２．５９ｍｍｏｌ、１．６当量）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（１９８ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ、１当量）、１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（３６９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、０．７当量）のジクロロメタン（３０ｍＬ）中混合物を、室温で３．５時間撹拌した。反応混合物のｐＨをクエン酸によりｐＨ５〜６に調節し、ジクロロメタン（３０ｍＬ×２）で抽出した。有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮乾固した。粗生成物をジクロロメタン：メタノール１００：１から２０：１で溶出したシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ３３を固体として得た（８００ｍｇ、０．９７２ｍｍｏｌ、６０．０％）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆), δ12.09 (br, 1H), 9.30 (s, 1H), 8.19 (m, 1H), 7.89 (m, 4H), 7.70 (m,
2H), 7.46 (m, 1H), 7.44 (m, 4H), 7.42 (m, 3H), 7.35 (m, 1H), 7.16 (m, 1H), 7.08
(m, 2H), 4.23 (m, 2H), 3.88 (m, 3H), 3.87 (m, 2H), 2.70 (m, 2H), 2.68 (m, 2H),
2.50 (m 2H), 2.17 (m, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.51 (s, 9H), 1.25 (m, 4H). LCMS (プロトコルJ): m/z 726.1 [M-Boc]⁺, 保持時間= 1.211分.

【0383】

ステップ７。９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル（６−｛［２−（｛２−［３−（｛［４−（アミノメチル）フェニル］スルホニル｝アミノ）−３−オキソプロピル］フェニル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−６−オキソヘキシル）カルバメート（＃Ｂ３４）の合成。（＃Ｂ３３）（５２．６ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（３ｍＬ、０．０２Ｍ）中懸濁液にトリフルオロ酢酸（０．６ｍＬ）を加え、２時間撹拌し、次いで真空で濃縮した。残留物をアセトニトリル（３×）と共沸して、＃Ｂ３４（４５．７ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ、定量的と仮定）を得、これを更には精製せずに次のステップにそのまま使用した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ７２６．３［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．７３分。

【0384】

ステップ８。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（４−｛［３−（２−｛［Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）グリシル］アミノ｝フェニル）プロパノイル］スルファモイル｝ベンジル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ３５）の合成。＃Ｂ３４（４５．７ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（０．５ｍＬ、０．１２Ｍ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２４．４ｍｇ、０．１８９ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。全反応混合物を＃Ｂ１（４０ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に加え、反応物を室温に加温した。１時間後、反応物を真空で濃縮して＃Ｂ３５（５５ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ、７０％）を得、これを更には精製せずに次のステップにそのまま使用した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１２４３．６［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９５分。

【0385】

ステップ９。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（４−｛［３−（２−｛［Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）グリシル］アミノ｝フェニル）プロパノイル］スルファモイル｝ベンジル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート、ギ酸塩（＃Ｂ３６）の合成。＃Ｂ３５（５５ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中溶液に、ピペリジン（原液［Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１ｍＬに０．０５ｍＬを溶解することにより調製した］０．２ｍＬ、０．１０６ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。３０分後、反応物を真空で濃縮し、逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ３６を白色固体として得た。収量：３０ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ、５２％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）：保持時間＝７．１４３分（純度＝９２％）。LCMS (プロトコルD): m/z 1021.4 [M+H]⁺
保持時間= 0.67分. ¹H NMR
(DMSO-d₆) δ: 10.23-10.21 (b.s., 1 H D₂O交換可能) 8.36-8.31 (m, 1H), 8.25-8.20 (m, 1H), 7.76-7.68 (m, 1H), 7.53-7.42
(m, 3H), 7.14-7.02 (m, 3H), 6.99-6.93 (m, 1H), 6.35-6.21 (m, 2H), 6.08-6.01 (m,
1H), 5.82-5.76 (m, 1H), 5.61-5.52 (m, 1H), 5.50-5.42 (m, 1H), 4.28-4.16 (m,
4H), 3.82 (d, J=5.9 Hz, 2H), 3.57 (d, J=6.2 Hz, 2H), 3.49-3.42 (m, 1H),
3.21-3.18 (m, 1H), 2.74-2.66 (m, 3H), 2.62-2.49 (m, 3H), 2.31-2.11 (m, 6H),
1.91 (s, 3H), 1.84-1.69 (m, 3H), 1.64 (s, 3H), 1.60-1.41 (m, 6H), 1.32-1.22
(m., 2H), 1.18 (d, J=6.6 Hz, 3H), 0.99 (d, J=6.21 Hz, 3H) -0.88 (d, J=6.21 Hz,
3H)

【0386】

ステップ１０。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−［２−（｛４−［（３−｛２−［（Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝グリシル）アミノ］フェニル｝プロパノイル）スルファモイル］ベンジル｝アミノ）−２−オキソエチル］−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ３７）の合成。＃Ｂ３６（２０ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（９．８ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ、４．２当量）およびメタノール（０．１ｍＬ）を加えた。全混合物を１−［（ブロモアセチル）オキシ］ピロリジン−２，５−ジオン（４．２ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、１当量）の冷却（０℃）溶液に加え、０℃で５分間撹拌し、次いで室温に加温した。１８時間後、反応物を真空で濃縮し、逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ３７を白色固体として得た。収量：３．８ｍｇ、０．００３ｍｍｏｌ、１８％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）：保持時間＝７．５５４および７．７７分（純度９１％）。LCMS (プロトコルD): m/z 1141.4 [M+H]⁺
保持時間= 0.8分. ¹H NMR
(400 MHz, メタノール-d₄) δ: 7.66 (d, J=8.2 Hz, 2H), 7.56-7.49 (m, 1H), 7.33-7.26 (m, 2 H),
7.03 (m , 3 H), 6.32-6.23 (m, 1H), 5.94-5.81 (m, 2H), 5.58 (dd, J=16.0, 8.0 Hz,
1 H), 5.47-5.39 (m, 1H), 4.46 (s, 2H), 4.43-4.34 (m, 1H), 4.3 (m, 2 H), 3.88
(s, 2 H), 3.68 (s, 2H), 3.67-3.62 (m, 2 H), 3.61-3.55 (m, 1H), 3.52-3.44 (m,
1H), 3.36-3.32 (m, 1 H), 3.11 (t, J=16 Hz, 1 H), 2.8 (d, J=8.0, 1H), 2.78-2.72
(m, 2H), 2.68 (t, J=8.0, 2 H), 2.57 (d, J=4.0 Hz, 1 H), 2.45-2.39 (m, 2 H),
2.36 (dd, J=16.0, 8.0 Hz, 1 H), 2.30 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 2.25 (t, J=8.0 Hz, 2
H), 2.20-2.09 (m, 1 H), 1.9 (s, 1H), 1.85-1.78 (m, 2 H), 1.75-1.71, (m, 1H), 1.68
(s, 3 H ), 1.64-1.54 (m, 3 H), 1.50-1.43 (m, 2 H), 1.27-1.35 (m, 2 H), 1.25 (d,
J=8.0 Hz, 3 H), 1.00 (d, J=8.0 Hz, 3 H), 1.05-0.87 (d, J=8.0 Hz, 3 H).

【0387】

（実施例Ａ１４）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルピペリジン−１−カルボキシレート（＃Ｂ４０）の調製。

【0388】

【化69】

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ステップ１。（２Ｚ，４Ｓ）−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−４−ヒドロキシペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ３９）の合成。＃Ｂ１５（３８ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ、１当量）の４：１テトラヒドロフラン：水（２．２ｍＬ）中溶液に、水酸化リチウム（１５．６ｍｇ、０．６５２ｍｍｏｌ、８．７当量）を加え、混合物を室温で１２時間撹拌した。反応物を酢酸エチルで希釈し、水で洗浄した。水層を酢酸エチル（３×）で抽出し、合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空で濃縮した。逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ３９を固体として得た。収量：１６．７ｍｇ、０．０３５ｍｏｌ、４７％。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.76 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.31 (s, 1 H), 6.77 (s, 1 H), 6.27 (d, J
= 16.0 Hz, 1 H), 5.97 (d, J = 11 Hz, 1 H), 5.86 (dd, J = 11.7および7.0 Hz, 1 H), 5.59 (dd, J = 16.0および5.5 Hz, 1
H), 5.54-5.47 (m, 1 H), 5.22-5.12 (m, 1 H), 5.10 (d, J = 4.7 Hz, 1 H),
4.58-4.48 (m, 1 H), 4.35-4.25 (m, 1 H), 3.69-3.59 (m, 2 H), 3.54-3.46 (m, 1 H),
2.64-2.52 (m, 3 H), 2.37-2.14 (m, 3 H), 1.87-1.73 (m, 3 H), 1.72-1.60 (m, 6 H),
1.37 (dd, J = 13.3および6.2 Hz, 1 H), 1.11 (d, J = 6.2 Hz,
3 H), 1.06 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.4 Hz, 3 H). HPLC (プロトコルA^A) 保持時間= 7.15分 (純度 =100%). LCMS (プロトコルC): m/z 499.3 [M+Na]⁺, 保持時間=
1.18分.

【0389】

ステップ２。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルピペリジン−１−カルボキシレート＃Ｂ４０の合成：＃Ｂ３９（１０６ｍｇ、０．２２２ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（３ｍＬ）中溶液に、トリエチルアミン（７９ｍｇ、０．７７７ｍｍｏｌ、３．５当量）、４−Ｎ，Ｎ’−ジメチルアミノピリジン（１８．９ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ、０．７当量）およびビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（２０７ｍｇ、０．６６６ｍｍｏｌ、３当量）を加え、反応物を室温で２時間撹拌した。この混合物の５分の１にピペリジン（１８．９ｍｇ、０．２２２ｍｍｏｌ、１当量）を加え、混合物を室温で３．５時間撹拌し、真空で濃縮し、残留物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｄ^＊）により精製して、＃Ｂ４０を得た。収量２．７ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ、９．５％。ＨＰＬＣ（プロトコルＢ）ｍ／ｚ５８８．４［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝２．８２分（純度＝１００％）。

【0390】

（実施例Ａ１５）
Ｎ−［３−（２−｛２−［（ブロモアセチル）アミノ］エトキシ｝エトキシ）プロパノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ４３）の調製。

【0391】

【化70】

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ステップ１。Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ４１）の合成。＃Ｂ７（５６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．６ｍＬ）中溶液に、Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（｛［（４−ニトロフェノキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（ＦＭｏｃＶａｌＣｉｔＰＡＢＣ−ＰＮＰ、ＷＯ０４０１０９５７、１２１ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、１．５当量）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（５６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ、４．０当量）、２，６−ジメチルピリジン（４５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ、４．０当量）および３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−オール（１４．３ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ、１．０５当量）を加えた。５０℃で１．５時間撹拌した後、反応混合物を真空で濃縮し、粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ４１を固体として得た。収量：７２ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ、５９％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１１８３．５［Ｍ＋Ｎａ］^＋、保持時間＝０．９５分。

【0392】

ステップ２。Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ４２）の合成。＃Ｂ４１（５０ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．７ｍＬ）中溶液に、ピペリジン（６６ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ、２０当量）を加え、混合物を２０分間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ４２を得た。収量：３１ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ、７６％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ９３９．３［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．６６分。

【0393】

ステップ３。Ｎ−［３−（２−｛２−［（ブロモアセチル）アミノ］エトキシ｝エトキシ）プロパノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ４３）の合成。＃Ｂ４２（１０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）中溶液に、２−ブロモ−Ｎ−［２−（２−｛３−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−３−オキソプロポキシ｝エトキシ）エチル］アセトアミド（４．３ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、１当量）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。反応物をジメチルスルホキシド（０．２ｍＬ）で希釈し、逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ４３を固体として得た。収量：８．８ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ、６６％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）保持時間＝７．６９分（純度＝７１％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＡ）：ｍ／ｚ１２２０．４［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．７７分。

【0394】

（実施例Ａ１６）
Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ４７）の調製。

【0395】

【化71】

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ステップ１。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ４４）の合成。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３．８ｍＬ、２２．１２ｍｍｏｌ、１．９当量）を、室温で６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸（４．２ｇ、１１．８０ｍｍｏｌ、１当量）およびＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、５．６ｇ、１４．７５ｍｍｏｌ、１．２５当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ、０．２４Ｍ）中溶液に加え、１０分間撹拌した。次いでＬ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（ＷＯ０４０１０９５７より、５．６ｇ、１４．７５ｍｍｏｌ、１．２５当量）を混合物に加えた。１５時間後、ジクロロメタンを加えることにより反応混合物は沈殿し、濾過して、＃Ｂ４４を灰白色固体として得た。収量：６．９ｇ、９．６ｍｍｏｌ、８２％。ＬＣＭＳ７１５．６（Ｍ＋Ｈ）^＋

【0396】

ステップ２。４−［（Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ^２−｛（３Ｓ）−３−［（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）アミノ］−４−メチルペンタ−１−エン−２−イル｝−Ｌ−オルニチル）アミノ］ベンジル４−ニトロフェニルカルボネート（＃Ｂ４５）の合成。＃Ｂ４４（５００ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ、１当量）および４−ニトロフェニルカルボネート（６３８ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ、３当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ、０．２Ｍ）中溶液を、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３６５μＬ、２．１ｍｍｏｌ、３当量）で処理した。反応物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、ＳｉＯ_２上に吸着させ、シリカゲルクロマトグラフィー（濃度勾配：ジクロロメタン中０から２５％メタノール）により精製して、＃Ｂ４５を固体として得た。収量：４０２ｍｇ、０．４７６ｍｍｏｌ、６８％。ＬＣＭＳ（プロトコルＬ）：ｍ／ｚ８８０．７［Ｍ＋Ｈ］^＋保持時間３．３９。

【0397】

ステップ３。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ４６）の合成。化合物＃Ｂ４１の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ６（７１ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）および＃Ｂ４５（１７１ｍｇ、０．１９４ｍｍｏｌ）から、標題化合物を収率１０％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１２９０．５［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９１分。

【0398】

ステップ４。Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ４７）の合成。＃Ｂ４６（１９ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．３５ｍＬ）中溶液に、ピペリジン（２５ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ、２０当量）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。反応物をジメチルスルホキシド（０．７ｍＬ）で希釈し、逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ４７を固体として得た。収量：３ｍｇ、０．００２８ｍｍｏｌ、１８％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）保持時間＝６．６５、６．６９分（純度＝９１％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１０６９．９［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．６１分。

【0399】

（実施例Ａ１７）
Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ４８）の調製。

【0400】

【化72】

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ステップ１。一般手順Ｅにおいてと同様に、化合物＃Ｂ９（１１３ｍｇ、０．２１７ｍｍｏｌ）を粗製の＃Ｂ７に変換した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ５３４．１［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．７７分。粗製物を更には精製せずに次のステップに使用した。

【0401】

ステップ２。Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ４８）の合成。粗製の＃Ｂ７（６０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．８ｍＬ）中溶液に、２，６−ジメチルピリジン（４８ｍｇ、０．４４８ｍｍｏｌ、４当量）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（５７．９ｍｇ、０．４４８ｍｍｏｌ、４当量）およびＨＯＡｔ（１５．２ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ、１当量）を加えた。反応物を５０℃に加温し、１．５時間撹拌した。反応物を室温に冷却し、ピペリジン（１９１ｍｇ、２．２４ｍｍｏｌ、２０当量）をゆっくり加え、２．０時間撹拌した。反応物を真空で濃縮し、逆相クロマトグラフィー（方法Ｃ^＊）により精製して、＃Ｂ４８を固体として得た。収量６．４ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ、５．２％。ＨＰＬＣ（プロトコルＦ）：ｍ／ｚ１０５２．６［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝７．１１４分（純度１００％）。

【0402】

（実施例Ａ１８）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イルオキシ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ４９）の調製。

【0403】

【化73】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イルオキシ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ４９）の合成。＃ＮＰ１（１．５ｇ、純度約５０％、２．８ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、１．０７ｇ、４．５ｍｍｏｌ、１．６当量）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（ヒューニッヒ塩基、１．０ｍＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（７．０ｍＬ）中混合物を、周囲温度で４０分間撹拌した。反応混合物を濾過し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ｆ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ４９を白色粉体として得た。収量：７３０．７ｍｇ、収率８０％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１１．１５分（純度９２％）。HRESIMS (プロトコルO) m/z 654.313 [M+H]⁺.
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 8.84
(dd, J = 4.4, 1.2, 1H), 8.74 (dd, J = 8.3, 1.2, 1H), 7.77 (d, J = 8.2, 1H, D₂O交換可能), 7.66 (dd, J = 8.3, 4.4, 1H), 6.45 (br d, J = 15.8, 1H), 6.36
(ddq, J = 1.5, 6.5, 6.5, 1H), 6.09 (dd, J = 1.3, 11.7, 1H), 5.86 (dd, J = 11.7,
7.4, 1H), 5.62 (dd, J = 16.0, 5.0, 1H), 5.38 (br dd, J = 7.4, 7.4, 1H), 5.18
(d, J = 6.0, D₂O交換可能), 4.48 (m, 1H), 4.37
(dd, J = 4.0, 4.0, 1H), 3.61 (m, 1H), 3.54 (dq, 2.1, 6.5, 1H), 3.37 (ddd, J =
6.9, 6.9, 3.1, 1H), 3.34 (m, 2H), 3.26 (dd, J = 16.0, 9.7, 1H), 2.21 (m, 1H),
2.14 (m, 1H), 2.10 (dd, J = 12.7, 8.9, 1H), 1.99 (s, 3H), 1.74 (m, 2H), 1.68
(s, 3H), 1.59 (dd, J = 13.0, 3.3, 1H), 1.50 (m, 1H), 1.25 (d, J = 6.4, 3H),
0.95 (d, J = 6.5, 3H), 0.86 (d, J = 7.0, 3H).

【0404】

（実施例Ａ１９）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−２，５−ジメチル−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−｛（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−［２−オキソ−２−（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イルオキシ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝ペンタ−２，４−ジエン−１−イル］テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ５０）の調製。

【0405】

【化74】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−２，５−ジメチル−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−｛（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−［２−オキソ−２−（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イルオキシ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝ペンタ−２，４−ジエン−１−イル］テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ５０）の合成。＃ＮＰ２（２８４ｍｇ、純度９２％、０．４７ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、２２０ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ、１．２当量）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（ヒューニッヒ塩基、０．１ｍＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中混合物を、周囲温度で６０分間撹拌した。反応混合物を濾過し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ｆ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ５０を白色粉体として得た。収量：３０７．０ｍｇ、収率８８％、ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１３．１２分（純度９４％）。HRESIMS (プロトコルO) m/z 638.320 [M+H]⁺.
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 8.83 (dd, J
= 4.4, 1.2, 1H), 8.73 (dd, J = 8.5, 1.2, 1H), 7.76 (d, J = 8.1, 1H, D₂O交換可能), 7.66 (dd, J = 8.5, 4.4, 1H), 6.39 (br d, J = 15.8, 1H), 6.36
(ddq, J = 1.5, 6.5, 6.5, 1H), 6.09 (dd, J = 1.5, 11.7, 1H), 5.87 (dd, J = 11.7,
7.5, 1H), 5.66 (dd, J = 16.1, 4.9, 1H), 5.44 (br dd, J = 7.1, 7.1, 1H), 4.71
(ddd, J = 4.4, 4.4, 4.4, 1H), 4.51 (m, 1H), 3.63 (m, 1H), 3.57 (dq, J = 2.3,
6.6, 1H), 3.41 (ddd, J = 6.9, 6.9, 3.1, 1H), 3.36 (dd, J = 16.0, 4.1, 1H), 3.33
(dd, J = 16.1, 10.0, 1H), 2.74 (d, J = 4.8, 1H), 2.70 (d, J = 4.8, 1H), 2.24
(m, 1H), 2.15 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.85 (m, 1H), 1.83 (m, 1H), 1.70 (dd, J =
13.0, 7.5, 1H), 1.66 (dd, J = 13.5, 7.9, 1H), 1.52 (m, 1H), 1.25 (d, J =
6.8, 3H), 1.00 (d, J = 6.5, 3H), 0.89 (d, J = 7.5, 3H).

【0406】

（実施例Ａ２０）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−（｛２−［（ヨードアセチル）アミノ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ５２）の調製。

【0407】

【化75】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（２−アミノエチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ５１）の合成。＃Ｂ４９（５０．５ｍｇ、純度９２％、０．０８ｍｍｏｌ、１．０当量）および９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル（２−アミノエチル）カルバメート（３２．１ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、１．４当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）中溶液に、撹拌しながらＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（ヒューニッヒ塩基、２０μＬ）を加えた。次いで得られた混合物を室温で１０分間撹拌した。反応溶液にピペリジン（３０μＬ、０．３５ｍｍｏｌ、４．４当量）をゆっくり加え、溶液を周囲温度で１時間撹拌した。次いで反応混合物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ５１を白色粉体として得た。収量：３８．８ｍｇ、収率８６％、ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝６．６１分（純度９７％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ５７８．８［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0408】

ステップ２。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−（｛２−［（ヨードアセチル）アミノ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ５２）の合成。ヨード酢酸（４０．３ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、７．３当量）およびＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、６１．６ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ、１０．０当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．５ｍＬ）中溶液を、室温で１０分間撹拌し、薄黄色溶液をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）中の＃Ｂ５１（２１．１ｍｇ、純度８５．０％、０．０３１ｍｍｏｌ、１．０当量）に加えた。得られた溶液を室温で２０分間撹拌した。次いで反応混合物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ５２を白色粉体として得た。収量：１０．３ｍｇ、収率３７％、ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝８．９６分（純度３７％）。LCMS (プロトコルM): m/z 746.3 [M+H]⁺.
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 8.22 (m, 1H
, D₂O交換可能), 7.91 (m, 1H , D₂O交換可能), 7.80 (d, J = 7.8, 1H, D₂O交換可能),
6.36 (dq, J = 6.0, 6.0, 1H), 6.29 (br d, J = 16.0, 1H), 6.11 (d, J = 11.7, 1H),
5.86 (dd, J = 11.7, 7.8, 1H), 5.60 (dd, J = 16.0, 5.5, 1H), 5.51 (br dd, J =
6.6, 6.6, 1H), 5.02 (d, J = 5.0, D₂O交換可能,
1H), 4.26 (m, 2H), 3.65 (m, 2H), 3.60 (s, 2H), 3.51 (br dd, J = 6.2, 6.2, 1H),
3.24 (m, 1H), 3.08 (br s, 4H), 2.76 (d, J = 5.1, 1H), 2.60 (d, J = 5.1, 1H),
2.51 (m, 1H), 2.47 (m, 1H), 2.28 (m, 1H), 2.18 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.86 (m,
1H), 1.80 (m, 2H), 1.70 (s, 3H), 1.65 (m, 1H), 1.49 (dd, J = 12.5, 2.7, 1H),
1.25 (d, J = 6.6, 3H), 1.07 (d, J = 6.5, 3H), 0.95 (d, J = 7.0, 3H).

【0409】

（実施例Ａ２１）
（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシ−Ｎ−｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−（｛２−［（ヨードアセチル）アミノ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝ペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ５４）の調製。

【0410】

【化76】

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ステップ１。［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−ヒドロキシ−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃Ｂ４）の合成。＃ＮＰ１（１９２ｍｇ、純度約５０％、０．１８ｍｍｏｌ、１．０当量）、炭酸カリウム（３００ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ、１３．５当量）およびメタノール（５ｍＬ）の混合物を、室温で２時間撹拌した。反応混合物を酢酸で中和し、濾過し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ｇ）を用いて精製して、＃Ｂ４を白色粉体として得た。収量：５０．２ｍｇ、ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝７．３９分（純度９６％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ４９４．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0411】

ステップ２。（２Ｚ，４Ｓ）−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（２−アミノエチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−４−ヒドロキシペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ５３）の合成。＃Ｂ４（２３．４ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、３４．０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、２．０当量）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（２０．０μＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）中溶液を、室温で３０分間撹拌した。この溶液にエタン−１，２−ジアミン（８０μｌ、１．３ｍｍｏｌ、約３０当量）を加え、得られた溶液を１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ５３を白色粉体として得た。収量：３１ｍｇ。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝５．５８分（純度５０％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ５３６．４［Ｍ＋Ｈ］^＋

【0412】

ステップ３。（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシ−Ｎ−｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−（｛２−［（ヨードアセチル）アミノ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝ペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ５４）の合成。ヨード酢酸（３５ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、６当量）およびＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、４９．８ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、８当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）中溶液を、室温で１０分間撹拌し、次いでＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）中の＃Ｂ５３（３１．０ｍｇ、純度約５０％、約０．０３ｍｍｏｌ、１．０当量）に加えた。得られた溶液を室温で０．５時間撹拌した。反応混合物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、粗製の＃Ｂ５４を白色粉体として得た（２３．０ｍｇ）。この物質を異なる濃度勾配系で再度精製して、＃Ｂ５４を白色粉体として得た。収量：１５．９ｍｇ、収率２７％、３ステップで。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝７．１０分（純度９２％）。LCMS (プロトコルM) m/z 704.2 [M+H]⁺. ¹H
NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 8.22 (m, 1H
, D₂O交換可能), 7.91 (m, 1H , D₂O交換可能), 7.77 (d, J = 7.8, 1H, D₂O交換可能),
6.28 (br d, J = 16.0, 1H), 5.98 (d, J = 11.7, 1H), 5.86 (dd, J = 11.7, 7.0,
1H), 5.60 (dd, J = 16.0, 5.5, 1H), 5.51 (br dd, J = 6.6, 6.6, 1H), 5.16 (dq, J
= 6.2, 6.2, 1H), 5.11 (d, J = 3.9, 1H, D₂O交換可能), 5.03 (d, J = 4.5, D₂O交換可能,
1H), 4.26 (m, 2H), 3.65 (m, 2H), 3.60 (s, 2H), 3.51 (br dd, J = 6.5, 6.5, 1H),
3.25 (m, 1H), 3.08 (br s, 4H), 2.75 (d, J = 4.7, 1H), 2.60 (d, J = 4.7, 1H),
2.51 (m, 1H), 2.47 (m, 1H), 2.27 (m, 1H), 2.22 (m, 1H), 1.86 (m, 1H), 1.80 (m,
2H), 1.70 (s, 3H), 1.65 (m, 1H), 1.49 (dd, J = 12.5, 2.3, 1H), 1.11 (d, J =
6.6, 3H), 1.07 (d, J = 6.0, 3H), 0.95 (d, J = 7.4, 3H).

【0413】

（実施例Ａ２２）
メチル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ５５）の調製。

【0414】

【化77】

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ステップ１。メチル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ５５）の合成。＃ＮＰ１（９．９ｍｇ、純度９２％、０．０１８ｍｍｏｌ、１．０当量）、炭酸カリウム（４０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ、１８当量）およびヨードメタン（３０μＬ、０．３１ｍｍｏｌ、１７当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５００μＬ）中混合物を、室温で２時間撹拌した。反応混合物を酢酸で中和し、濾過し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ５５を白色粉体として得た。収量：７．８ｍｇ、収率７７％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１０．７分（純度９４％）。LCMS (プロトコルM) m/z 550.5 [M+H]⁺. ¹H
NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.80
(d, J = 8.1, 1H, D₂O交換可能), 6.36 (ddq, J =
1.2, 6.8, 6.8, 1H), 6.28 (br d, J = 15.9, 1H), 6.11 (dd, J = 1.2, 11.7, 1H),
5.87 (dd, J = 11.7, 7.7, 1H), 5.58 (dd, J = 16.1, 5.0, 1H), 5.52 (br dd, J =
7.4, 7.4, 1H), 5.02 (d, J = 5.8, D₂O交換可能),
4.29 (m, 1H), 4.27 (dd, J = 5.3, 5.3, 1H), 3.65 (m, 2H), 3.60 (s, 3H), 3.51 (ddd,
J = 7.0, 7.0, 2.5, 1H), 3.25 (dd, J = 5.8, 5.3, 1H), 2.76 (d, J = 5.0, 1H),
2.65 (dd, 15.4, 8.7, 1H), 2.58 (d, J = 5.0, 1H), 2.57 (dd, J = 15.4, 5.0), 2.30
(m, 1H), 2.21 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.86 (dd, J = 13.2, 7.6, 1H), 1.69 (s,
3H), 1.66 (m, 1H), 1.53 (dd, 13.2, 3.9, 1H), 1.25 (d, J = 6.1, 3H), 1.07 (d, J
= 6.4, 3H), 0.95 (d, J = 7.4, 3H).

【0415】

（実施例Ａ２３）
［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，６−ジメチル−５−（｛（２Ｚ，４Ｓ）−４−［（ピペリジン−１−イルカルボニル）オキシ］ペンタ−２−エノイル｝アミノ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃Ｂ６０）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−（｛２−［（ヨードアセチル）アミノ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルピペリジン−１−カルボキシレート（＃Ｂ６２）の調製。

【0416】

【化78】

[この文献は図面を表示できません]

ステップ１。メチル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−（１−エトキシエトキシ）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ５６）の合成。＃ＮＰ１（１９５ｍｇ、純度約５０％、０．１８ｍｍｏｌ、１．０当量）および炭酸カリウム（２００ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ、９当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４．０ｍＬ）中混合物に、ヨードメタン（５００μＬ、１８当量）を加えた。得られた溶液を１２０分間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を水と酢酸エチル（各相１０ｍＬ）との間で分配した。有機層を無水硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下で蒸発させて、＃Ｂ５５をフィルムとして得た（１９１．２ｍｇ、純度約５０％）。次に、粗製の＃Ｂ５５（１９１．０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、１．０当量）をピリジニウムｐ−トルエンスルホネート（ＰＰＴＳ、５６．１ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、１．２当量）と混合し、無水ジクロロメタン（２．０ｍｌ）中のエチルビニルエーテル（２．５ｍｌ、４３ｍｍｏｌ）を室温で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下で一部蒸発させ、次いで酢酸エチル（１０ｍＬ）／重炭酸ナトリウム水溶液（飽和、１０ｍＬ）の間で分配した。有機層を無水硫酸マグネシウムで脱水し、次いで減圧下で蒸発させて、＃Ｂ５６（１８７．１ｍｇ）を得た。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１３．２分（純度５０％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ５４９．５［Ｍ＋Ｈ−ＣＨＣＨ_３ＯＣＨ_２ＣＨ_３］^＋。これを次の反応にそのまま使用した。

【0417】

ステップ２。メチル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−（１−エトキシエトキシ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ５７）の合成。＃Ｂ５６（１８７．１ｍｇ、純度約５０％、０．１５ｍｍｏｌ、１．０当量）、炭酸カリウム（１２０ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ、６．５当量）のメタノール（４ｍｌ）中懸濁液を、室温で１時間撹拌した。次いで反応混合物を濾過し、減圧下で蒸発乾固して＃Ｂ５７（１７１．５ｍｇ）を得、これを次の反応にそのまま使用した。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝９．９分（純度５０％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ５０７．５［Ｍ＋Ｈ−ＣＨＣＨ_３ＯＣＨ_２ＣＨ_３］^＋。

【0418】

ステップ３。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−（１−エトキシエトキシ）−７−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルピペリジン−１−カルボキシレート（＃Ｂ５８）の合成。＃Ｂ５７（１７１ｍｇ、純度５０％、０．１５ｍｍｏｌ、１．０当量）、ビス（ｐ−ニトロフェニル）カルボネート（３２０．１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、７当量）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（９．８ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ、０．５当量）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（ヒューニッヒ塩基、１５０μＬ）のジクロロメタン（４．０ｍＬ）中溶液を、室温で６時間撹拌した。反応溶液にピペリジン（５００μＬ、５．８ｍｍｏｌ、３８当量）をゆっくり加え、得られた黄色溶液を室温で１５分間撹拌した。氷冷水（２０ｍＬ）を加え、有機溶媒を減圧下で蒸発除去した。このように生成した沈殿物を濾取し、次いで真空乾固して＃Ｂ５８（３４７．０ｍｇ）を得、これを次の反応にそのまま使用した。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１３．２０分（純度２５％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ６９１．７［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0419】

ステップ４。［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，６−ジメチル−５−（｛（２Ｚ，４Ｓ）−４−［（ピペリジン−１−イルカルボニル）オキシ］ペンタ−２−エノイル｝アミノ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−（１−エトキシエトキシ）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃Ｂ５９）の合成。＃Ｂ５８（３４７ｍｇ、純度約２５％、０．１３ｍｍｏｌ、１．０当量）のアセトニトリル（１０ｍｌ）中溶液に、１Ｍ水酸化リチウム（１ｍＬ）および水（１ｍＬ）を加えた。得られた濁った溶液を室温で１時間撹拌し、これは徐々に透明になった。更に１Ｍ水酸化リチウム（１．０ｍＬ）を加え、溶液を更に２時間撹拌した。反応混合物をｎ−ブタノール（３０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配した。最上層をＨ_２Ｏ（２０ｍＬ）で洗浄し、次いで減圧下で蒸発乾固して＃Ｂ５９（２８０．２ｍｇ）を得、これを次の反応にそのまま使用した。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝７．４３分（純度３０％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ６７７．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0420】

ステップ５。［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，６−ジメチル−５−（｛（２Ｚ，４Ｓ）−４−［（ピペリジン−１−イルカルボニル）オキシ］ペンタ−２−エノイル｝アミノ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃Ｂ６０）の合成。＃Ｂ５９（２８０．２ｍｇ、純度約３０％、０．１２ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピリジニウムｐ−トルエンスルホネート（ＰＰＴＳ、２５０．４ｍｇ、１ｍｍｏｌ、８．０当量）のメタノール（５ｍＬ）中溶液を、室温で４時間撹拌し、次いで４℃で１８時間放置した。次いで反応混合物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ６０を白色粉体として得た。収量：７８．４ｍｇ、（収率４０％、ステップ１〜５で）ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１０．８４分（純度９６．７％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ６０５．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0421】

ステップ６。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（２−アミノエチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルピペリジン−１−カルボキシレート（＃Ｂ６１）の合成。＃Ｂ６０（３８．２ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、４０．１ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ、１．７当量）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（ヒューニッヒ塩基、２０．０μＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）中溶液を、室温で２０分間撹拌した。この溶液に１，２−エチレンジアミン（１２０μＬ、２ｍｍｏｌ、３３当量）を加え、得られた溶液を２０分間撹拌した。反応混合物を濾過し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ６１を白色粉体として得た。収量：１４．２ｍｇ、ｘｘ％）ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝７．８６分（純度７０％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ６４７．８［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0422】

ステップ７。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−（｛２−［（ヨードアセチル）アミノ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルピペリジン−１−カルボキシレート（＃Ｂ６２）の合成。ヨード酢酸（２０．３ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ、７当量）およびＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、３１．６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、１０当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中溶液を、室温で１０分間撹拌し、次いでＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２ｍｌ）中の＃Ｂ６１（１４．０ｍｇ、純度約７０％、０．０１５ｍｍｏｌ、１．０当量）を含むバイアルに加えた。得られた溶液を室温で３０分間撹拌した。反応混合物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ６２を白色粉体として得た。収量：３．７ｍｇ、（１１％、ステップ６〜７で）ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１０．４８分（純度９４％）。LCMS (プロトコルM): m/z 815.4 [M+H]⁺,
837.4 [M+Na]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 8.22 (m, 1H , D₂O交換可能), 7.91 (m,
1H , D₂O交換可能), 7.78 (d, J = 7.8, 1H, D₂O交換可能), 6.29 (br d, J = 16.1, 1H), 6.22 (dq, J = 7.0, 7.0, 1H), 6.09 (d,
J = 11.7, 1H), 5.89 (dd, J = 11.3, 7.4, 1H), 5.61 (dd, J = 16.0, 5.1, 1H), 5.51
(br dd, J = 6.2, 6.2, 1H), 5.03 (d, J = 5.5, D₂O交換可能), 4.26 (m, 2H), 3.65 (m, 2H), 3.60 (s, 2H), 3.51 (br dd, J = 6.2,
6.2, 1H), 3.30 (m, 4H), 3.24 (dd, J = 5.0, 5.0, 1H), 3.12-3.08 (m, 4H), 3.00
(d, 1H), 2.80 (s, 4H), 2.75 (d, J = 5.1, 1H), 2.60 (d, J = 5.1, 1H), 2.49 (m, 2H),
2.28 (m, 1H), 2.21 (m, 1H), 1.89 (dd, J = 13.2, 8.6, 1H), 1.80 (m, 2H), 1.70
(s, 3H), 1.64 (m, 1H), 1.50 (dq, J = 13.2, 3.1, 1H), 1.52 (m, 2H), 1.42 (m,
4H), 1.25 (d, J = 6.2, 3H), 1.07 (d, J = 6.0, 3H), 0.95 (d, J = 7.4, 3H).

【0423】

（実施例Ａ２４）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ６３）の調製。

【0424】

【化79】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ６３）の合成。＃Ｂ４９（４３．２ｍｇ、純度９２．１％、０．０６５ｍｍｏｌ、１．０当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）中溶液に、無溶媒でプロピルアミン（３０μＬ、０．５ｍｍｏｌ、７．０当量）を加えた。得られた溶液を１０分間撹拌した。反応混合物をＨ_２Ｏと酢酸エチル（各１０ｍｌ）との間で分配した。有機層を無水硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下で蒸発させて、＃Ｂ６３を得た。収量：４０．４ｍｇ、１００％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝９．７３分（純度８９％）。HRESIMS (プロトコルO) m/z 577.3478 [M+H]⁺.
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.83 (t, J =
6.0, 1H, D₂O交換可能), 7.81 (d, J = 8.1, 1H, D₂O交換可能), 6.36 (ddq, J = 1.4, 6.5, 6.5, 1H), 6.28 (br d, J = 15.9, 1H),
6.11 (dd, J = 1.4, 11.7, 1H), 5.87 (dd, J = 11.7, 7.5, 1H), 5.59 (dd, J = 15.9,
5.4, 1H), 5.51 (br dd, J = 7.1, 7.1, 1H), 5.02 (d, J = 5.4, D₂O交換可能), 4.26 (dd, J = 5.0, 5.0, 1H), 4.24 (m, 1H), 3.65 (m, 1H), 3.64 (m,
1H), 3.49 (ddd, J = 7.0, 7.0, 2.6, 1H), 3.24 (dd, J = 5.0, 5.0, 1H), 3.01 (m,
1H), 2.96 (m, 1H), 2.75 (d, J = 5.2, 1H), 2.58 (d, J = 5.2, 1H), 2.52 (m, 1H),
2.29 (ddd, J = 15.5, 7.1, 7.1, 1H), 2.21 (m, 1H), 2.20 (dd, J = 14.0, 4.8, 1H),
1.98 (s, 3H), 1.83 (dd, J = 13.4, 5.0, 1H), 1.80 (m, 2H), 1.69 (s, 3H), 1.65
(m, 1H), 1.48 (dd, 12.7, 3.9, 1H), 1.38 (dq, J = 7.5, 7.5, 2H), 1.25 (d, J =
6.6, 3H), 1.07 (d, J = 6.8, 3H), 0.95 (d, J = 7.5, 3H), 0.82 (t, J = 7.5, 3H).

【0425】

（実施例Ａ２５）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−２，５−ジメチル−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−｛（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝ペンタ−２，４−ジエン−１−イル］テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ６４）の調製。

【0426】

【化80】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−２，５−ジメチル−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−３−メチル−５−｛（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝ペンタ−２，４−ジエン−１−イル］テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ６４）の合成。＃ＮＰ２（２８．７ｍｇ、純度９１％、０．０５５ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、２４．８ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ、１．２当量）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（ヒューニッヒ塩基、３０μＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液を、室温で３０分間撹拌した。この溶液に無溶媒でプロピルアミン（３０μＬ、０．５ｍｍｏｌ、７．０当量）を加え、得られた反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ６４を白色粉体として得た。収量：３４．１ｍｇ、８６％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１３．１１分（純度１００％）。LCMS (プロトコルM): m/z 561.6 [M+H]⁺. ¹H
NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.83
(t, J = 6.0, 1H, D₂O交換可能), 7.81 (d, J = 8.0,
1H, D₂O交換可能), 6.36 (ddq, J = 1.6, 7.4, 6.6,
1H), 6.24 (br d, J = 16.0, 1H), 6.10 (dd, J = 1.6, 12.0, 1H), 5.87 (dd, J =
11.8, 7.6, 1H), 5.58 (dd, J = 15.9, 5.4, 1H), 5.50 (br dd, J = 7.3, 7.3, 1H),
4.55 (ddd, J = 5.3, 5.3, 5.3, 1H), 4.29 (dddd, J = 9.5, 5.3, 5.3, 5.3, 1H),
3.65 (m, 1H), 3.64 (m, 1H), 3.48 (ddd, J = 7.1, 7.1, 2.6, 1H), 3.01 (m, 1H),
2.96 (m, 1H), 2.63 (d, J = 5.0, 1H), 2.61 (d, J = 5.0, 1H), 2.59 (dd, J = 14.2,
8.8, 1H), 2.31 (ddd, J = 16.1, 7.5, 7.0, 1H), 2.21 (dd, J = 14.1, 5.0, 1H),
2.19 (m, 1H), 1.96 (s, 3H), 1.81 (m, 1H), 1.79 (m, 1H), 1.77 (dd, J = 13.0,
4.0, 1H), 1.69 (s, 3H), 1.66 (m, 2H), 1.37 (dq, J = 7.5, 7.5, 2H), 1.36 (m,
1H), 1.25 (d, J = 6.6, 3H), 1.07 (d, J = 6.8, 3H), 0.95 (d, J = 7.5, 3H), 0.82
(t, J = 7.5, 3H).

【0427】

（実施例Ａ２６）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルピペリジン−１−カルボキシレート（＃Ｂ６６）の調製。

【0428】

【化81】

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ステップ１。（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−５−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−７−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−４−イルアセテート（＃Ｂ６４ａ）の合成。＃Ｂ６３（４４．０ｍｇ、純度約９０％、０．０７６ｍｍｏｌ、１．０当量）のピリジン（０．５ｍＬ）中溶液に、無水酢酸（１５０μＬ、１．６ｍｍｏｌ、２１．０当量））を加えた。次いで得られた混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を氷冷水（１０ｍＬ）に移し、２０分間撹拌し、次いで酢酸エチル（３０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配した。有機層を水（３×２０ｍＬ）で洗浄し、蒸発乾固した。残留物をジメチルスルホキシド（１５０μＬ）に溶解し、バチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂｕｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｒｐｈｉｌｌｕｓ）（Ｓｉｇｍａ６９５０９、０．５ｍｇ／ｍＬ、合計１５ｍＬ）により生産されるエステラーゼを含む１Ｍトリス緩衝溶液（ｐＨ７．０）に溶液をゆっくり加えた。反応物を１時間撹拌し、次いで酢酸エチル（２×２０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）との間で分配した。合わせた有機層を水（２×２０ｍＬ）で洗浄し、次いで減圧下で蒸発させて、＃Ｂ６４ａを灰白色粉体として得た。収量：４４．９ｍｇ、（定量的と仮定）ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝９．５１分（純度８８％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ５７７．６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0429】

ステップ２。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−（アセチルオキシ）−７−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルピペリジン−１−カルボキシレート（＃Ｂ６５）の合成。＃Ｂ６４ａ（１４．７ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ、１．０当量）、ビス（ｐ−ニトロフェニル）カルボネート（３８．４ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ、５当量）、ｐ−ジメチルアミノピリジン（１．６ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ、０．５当量）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（ヒューニッヒ塩基、３０μＬ）のジクロロメタン（１ｍＬ）中溶液を、室温で１６時間撹拌した。この反応溶液にピペリジン（６０μＬ、０．７ｍｍｏｌ、２８当量）をゆっくり加え、溶液を室温で１５分間撹拌した。氷冷水（１０ｍＬ）を加え、有機溶媒を減圧下で蒸発除去した。沈殿物を濾取し、水で洗浄し、次いで減圧下で蒸発させて、＃Ｂ６５を得た。収量２６．２ｍｇ、（定量的と仮定）ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１３．１分（純度４５％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ６８８．５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0430】

ステップ３。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルピペリジン−１−カルボキシレート（＃Ｂ６６）の合成。＃Ｂ６５（２６．１ｍｇ、純度約４５％、０．０１７ｍｍｏｌ、１．０当量）、炭酸カリウム（５１ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ、２４当量）のメタノール（１．５ｍＬ）中溶液を、室温で１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を酢酸エチルと水（各相１０ｍＬ）との間で分配した。有機層を無水硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下で蒸発乾固し、次いでこれを逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ６６を白色粉体として得た。収量：７．３ｍｇ、（ステップ１〜３で４４％）。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１１．４４分（純度９６．７％）。LCMS (プロトコルM): m/z 646.4 [M+H]⁺. ¹H
NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.83 (t, J =
5.6, 1H, D₂O交換可能), 7.79 (d, J = 8.0, 1H, D₂O交換可能), 6.28 (br d, J = 16.1, 1H), 6.22 (ddq, J = 1.4, 6.8, 6.8, 1H),
6.08 (dd, J = 1.4, 11.8, 1H), 5.88 (dd, J = 11.7, 7.4, 1H), 5.59 (dd, J = 15.7,
5.3, 1H), 5.51 (br dd, J = 7.0, 7.0, 1H), 5.02 (d, J = 5.3, D₂O交換可能), 4.27 (dd, J = 5.0, 5.0, 1H), 4.23 (m, 1H), 3.65 (m, 1H), 3.64 (m,
1H), 3.49 (ddd, J = 7.0, 7.0, 2.6, 1H), 3.30 (m, 4H), 3.24 (dd, J = 5.0, 5.0,
1H), 3.01 (m, 1H), 2.96 (m, 1H), 2.75 (d, J = 5.2, 1H), 2.58 (d, J = 5.2, 1H),
2.51 (m, 1H), 2.29 (m, 1H), 2.22 (m, 1H), 2.20 (dd, J = 14.0, 4.8, 1H), 1.82
(dd, J = 13.3, 8.2, 1H), 1.79 (m, 2H), 1.69 (s, 3H), 1.65 (m, 1H), 1.51 (m,
2H), 1.49 (dd, 13.3, 5.0, 1H), 1.42 (m, 4H), 1.38 (dq, J = 7.5, 7.5, 2H), 1.25
(d, J = 6.5, 3H), 1.07 (d, J = 6.4, 3H), 0.95 (d, J = 7.4, 3H), 0.82 (t, J =
7.5, 3H).

【0431】

（実施例Ａ２７）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルピペリジン−１−カルボキシレート（＃Ｂ６７）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルピペリジン−１−カルボキシレート（＃Ｂ６７）の調製。

【0432】

【化82】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルピペリジン−１−カルボキシレート（＃Ｂ６７）の合成。＃Ｂ６０（実施例Ａ２３、２３．０ｍｇ、純度９６．７％、０．０３８ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１３．１ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ、１．７当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．８ｍＬ）中混合物を、室温で２０分間撹拌した。この溶液にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２ｍｌ）中のＮ−ヒドロキシルスクシンイミド（３４．５ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ、７．７当量）を加えた。得られた溶液を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を濾過し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ６７を白色粉体として得た。収量：９．４ｍｇ、３９％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１１．０４分（純度１００％）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.78 (d, J = 8.0, 1H, D₂O交換可能),
6.35 (br d, J = 16.1, 1H), 6.22 (dq, J = 7.0, 7.0, 1H), 6.08 (d, J = 11.7, 1H),
5.89 (dd, J = 11.7, 7.4, 1H), 5.60 (dd, J = 16.0, 5.1, 1H), 5.52 (br dd, J =
7.0, 7.0, 1H), 5.08 (d, J = 6.2, D₂O交換可能),
4.29 (m, 2H), 3.65 (m, 2H), 3.49 (br dd, J = 7.0, 7.0, 1H), 3.29 (m, 5H), 3.00
(d, J = 6.6, 2H), 2.80 (s, 4H), 2.79 (d, J = 5.2, 1H), 2.60 (d, J = 5.2, 1H),
2.28 (m, 1H), 2.21 (m, 1H), 1.95 (dd, J = 13.2, 8.6, 1H), 1.81 (m, 2H), 1.69
(s, 3H), 1.64 (m, 1H), 1.58 (dq, J = 13.2, 3.1, 1H), 1.52 (m, 2H), 1.43 (m,
4H), 1.25 (d, J = 6.2, 3H), 1.07 (d, J = 6.2, 3H), 0.95 (d, J = 7.0, 3H).

【0433】

（実施例Ａ２８）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イル２−メチルプロパノエート（＃Ｂ７１）の調製。

【0434】

【化83】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−（１−エトキシエトキシ）−７−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ６８）の合成。＃Ｂ６３（実施例Ａ２４、３５．０ｍｇ、純度９２％、０．０６ｍｍｏｌ、１．０当量）、ピリジニウムｐ−トルエンスルホネート（ＰＰＴＳ、７．１ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ、０．４当量）およびエチルビニルエーテル（０．５ｍＬ、８．６ｍｍｏｌ、大過剰量）の無水ジクロロメタン（１．０ｍＬ）中溶液を、室温で２時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタン（１０ｍＬ）／水（１０ｍＬ）の間で分配した。有機層を無水硫酸マグネシウムで脱水し、次いで減圧下で蒸発させて、＃Ｂ６８を得た。収量：３６．１ｍｇ、ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１２．３３分（純度９０％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ５７７．６［Ｍ＋Ｈ−ＣＨＣＨ_３ＯＣＨ_２ＣＨ_３］^＋。

【0435】

ステップ２。（２Ｚ，４Ｓ）−Ｎ−｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−（１−エトキシエトキシ）−７−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝−４−ヒドロキシペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ６９）の合成。＃Ｂ６８（３６．１ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、１．０当量）および炭酸カリウム（５０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ、８当量）のメタノール（１．０ｍＬ）中懸濁液を、室温で１時間撹拌した。次いで反応混合物を濾過し、減圧下で蒸発乾固して、＃Ｂ６９を得た。収量：３３．４ｍｇ。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１０．４５８および１０．４５９分（純度８７．６％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ５３５．５［Ｍ＋Ｈ−ＣＨＣＨ_３ＯＣＨ_２ＣＨ_３］^＋。

【0436】

ステップ３。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−（１−エトキシエトキシ）−７−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イル２−メチルプロパノエート（＃Ｂ７０）の合成。＃Ｂ６９（３３．０ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ、１．０当量）およびイソ酪酸無水物（１００μＬ、０．７５ｍｍｏｌ、１５当量）のピリジン（５００μＬ）中溶液を、３５℃で２４時間撹拌した。次いで反応混合物を減圧下で蒸発させて、＃Ｂ７０を得た。収量：３７．３ｍｇ、ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１４．０６（純度８８．３％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ６０５．６［Ｍ＋Ｈ−ＣＨＣＨ_３ＯＣＨ_２ＣＨ_３］^＋、

【0437】

ステップ４。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イル２−メチルプロパノエート（＃Ｂ７１）の合成。＃Ｂ７０（１７．８ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ、１．０当量）、ピリジニウムｐ−トルエンスルホネート（６０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、１０当量）の無水メタノール（２．０ｍｌ）中溶液を、室温で６０分間撹拌した。次いで反応混合物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ７１を白色粉体として得た。収量：８ｍｇ、（ステップ１〜４で５０％）。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１１．５０分（純度１００％）。HRESIMS (プロトコルO) m/z 605.3798 (M+H)⁺.
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.83 (t, J =
6.0, 1H, D₂O交換可能), 7.81 (d, J = 8.1, 1H, D₂O交換可能), 6.35 (ddq, J = 1.3, 6.5, 6.5, 1H), 6.28 (br d, J = 15.9, 1H),
6.12 (dd, J = 1.3, 11.7, 1H), 5.86 (dd, J = 11.7, 7.5, 1H), 5.59 (dd, J = 15.9,
5.4, 1H), 5.51 (br dd, J = 7.1, 7.1, 1H), 5.02 (d, J = 5.4, D₂O交換可能), 4.26 (dd, J = 5.0, 5.0, 1H), 4.24 (m, 1H), 3.65 (m, 1H), 3.64 (m,
1H), 3.49 (ddd, J = 7.0, 7.0, 2.6, 1H), 3.24 (dd, J = 5.0, 5.0, 1H), 3.01 (m,
1H), 2.96 (m, 1H), 2.75 (d, J = 5.2, 1H), 2.58 (d, J = 5.2, 1H), 2.52 (m, 1H),
2.48 (七重線, J = 6.5, 1H), 2.29 (ddd, J = 15.5, 7.1, 7.1,
1H), 2.21 (m, 1H), 2.20 (dd, J = 14.0, 4.8, 1H), 1.83 (dd, J = 13.4, 5.0, 1H),
1.80 (m, 2H), 1.69 (s, 3H), 1.65 (m, 1H), 1.48 (dd, 12.7, 3.9, 1H), 1.38 (dq, J
= 7.5, 7.5, 2H), 1.25 (d, J = 6.6, 3H), 1.07 (d, J = 6.8, 9H), 0.95 (d, J =
7.5, 3H), 0.82 (t, J = 7.5, 3H).

【0438】

（実施例Ａ２９）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（ピペリジン−１−イル）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ７２）の調製。

【0439】

【化84】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（ピペリジン−１−イル）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ７２）の合成。＃ＮＰ１（１６３．０ｍｇ、純度９２％、０．２７ｍｍｏｌ、１．０当量）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢＴ、１６０．０ｍｇ、１ｍｍｏｌ、４当量）および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド−ＨＣｌ（ＥＤＣ、１９５．０ｍｇ、１ｍｏｌ、４当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４．０ｍＬ）中混合物を、０℃で３０分間撹拌した。その後、この溶液に０℃でトリエチルアミン（５０μＬ）およびピペリジン（１８０μＬ、２．１ｍｍｏｌ、７．５当量）を加えた。得られた反応混合物を室温で３時間および０℃で１６時間撹拌した。次いで反応混合物を酢酸エチル（２×２０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）との間で分配した。合わせた有機層を水（２×１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水し、次いで減圧下で蒸発させて、粗製の＃Ｂ７２を灰白色ガラス状物として得た（２２３．５ｍｇ、純度７９．５％）。この物質の一部（３３．１ｍｇ）を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ７２を白色粉体として得た。収量：２７．４ｍｇ、１００％、ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１０．５８分（純度９８％）。LCMS (プロトコルM): m/z 603.7 [M+H]⁺. ¹H
NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.80 (d, J =
7.8, 1H, D₂O交換可能), 6.36 (dq, J = 6.0,
6.0, 1H), 6.31 (br d, J = 16.0, 1H), 6.11 (d, J = 11.7, 1H), 5.87 (dd, J =
11.7, 7.8, 1H), 5.60 (dd, J = 16.0, 5.5, 1H), 5.52 (br dd, J = 7.0, 7.0, 1H),
4.98 (d, J = 5.8, 1H, D₂O交換可能), 4.25 (m,
2H), 3.65 (m, 2H), 3.49 (br dd, J = 6.2, 6.2, 1H), 3.40 (m, 4H), 3.25 (dd, 5.8,
5.1, 1H), 3.08 (br s, 4H), 2.76 (d, J = 5.1, 1H), 2.68 (dd, J = 15.2, 7.0, 1H),
2.58 (d, J = 5.1, 1H), 2.50 (m, 1H), 2.29 (m, 1H), 2.20 (m, 1H), 1.98 (s, 3H),
1.86 (m, 1H), 1.80 (m, 2H), 1.70 (s, 3H), 1.65 (m, 1H), 1.56 (m, 3H), 1.48 (m,
2H), 1.40 (m, 2H), 1.25 (d, J = 6.2, 3H), 1.07 (d, J = 6.2, 3H), 0.95 (d, J =
7.0, 3H).

【0440】

（実施例Ａ３０）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（ｔｒａｎｓ−３−アミノシクロブチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ７３）の調製。

【0441】

【化85】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（ｔｒａｎｓ−３−アミノシクロブチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ７３）の合成。＃ＮＰ１（５０．２ｍｇ、純度９４％、０．０９ｍｍｏｌ、１．０当量）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢＴ、６５．５ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ、４．７当量）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド−ＨＣｌ（ＥＤＣ、７０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ、４当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３．０ｍＬ）中混合物を、０℃で３０分間撹拌した。その後、この溶液にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）中のｔｒａｎｓ−１，３−ジアミノシクロブタン（１１２ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ、１４当量）およびトリエチルアミン（２００μＬ）を０℃で加えた。得られた反応混合物を室温で１５分間撹拌した。反応混合物を酢酸で中和し、濾過し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ７３を無色ガラス状物として得た。収量：６４．３ｍｇ、１００％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝６．６６分（純度８５．２％）。LCMS (プロトコルM): m/z 604.6 [M+H]⁺. ¹H
NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 8.26 (d, J =
7.0, 1H, D₂O交換可能), 7.80 (d, J = 7.9, 1H, D₂O交換可能), 6.36 (dq, J = 6.0, 6.0, 1H), 6.28 (br d, J = 16.0, 1H),
6.11 (d, J = 11.3, 1H), 5.88 (dd, J = 11.7, 7.8, 1H), 5.60 (dd, J = 16.0, 5.8,
1H), 5.49 (br dd, J = 6.6, 6.6, 1H), 5.04 (m, 1H, D₂O交換可能), 4.37 (m, 1H), 4.27-4.21 (m, 2H), 3.65 (m, 3H), 3.50 (br dd, J =
5.5, 5.5, 1H), 3.26 (d, J = 4.3, 1H), 2.76 (d, J = 4.7, 1H), 2.58 (d, J = 4.7,
1H), 2.48 (m, 1H), 2.29 (m, 1H), 2.22-2.11 (m, 6H), 1.98(s, 3H), 1.82 (m, 1H),
1.80 (m, 2H), 1.70 (s, 3H), 1.65 (m, 1H), 1.49 (dd, J = 12.5, 2.7, 1H), 1.25
(d, J = 6.2, 3H), 1.07 (d, J = 6.0, 3H), 0.95 (d, J = 7.4, 3H).

【0442】

（実施例Ａ３１）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−（｛ｔｒａｎｓ−３−［（ヨードアセチル）アミノ］シクロブチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ７４）の調製。

【0443】

【化86】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−（｛ｔｒａｎｓ−３−［（ヨードアセチル）アミノ］シクロブチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ７４）の合成。ヨード酢酸（３８．６ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ、５．９当量）およびＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、６４．２ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ、９当量）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．０ｍＬ）中溶液を、室温で１０分間撹拌した。得られた薄黄色溶液をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中の＃Ｂ７３（実施例Ａ３０、２７．１ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ、１．０当量）にゆっくり加え、次いで室温で１５分間撹拌した。生成物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ７４を白色粉体として得た。収量：１４．２ｍｇ、４１％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝９．６１分（純度１００％）。LCMS (プロトコルM); m/z 772.4 [M+H]⁺.
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 8.60 (d, J =
7.0, D₂O交換可能), 8.28 (d, J = 7.0, 1H, D₂O交換可能), 7.80 (d, J = 7.9, 1H, D₂O交換可能),
6.36 (dq, J = 6.0, 6.0, 1H), 6.29 (br d, J = 16.0, 1H), 6.11 (d, J = 11.7, 1H),
5.87 (dd, J = 11.7, 7.8, 1H), 5.60 (dd, J = 16.0, 5.8, 1H), 5.49 (br dd, J =
7.0, 7.0, 1H), 5.01 (d, J = 5.4, 1H, D₂O交換可能),
4.27-4.23 (m, 3H), 4.19 (m, 1H), 3.65 (m, 2H), 3.59 (s, 2H), 3.49 (br dd, J =
6.0, 6.0, 1H), 3.26 (dd, J = 5.1, 5.1, 1H), 2.76 (d, J = 5.1, 1H), 2.58 (d, J =
5.1, 1H), 2.53 (m, 1H), 2.32 (m, 1H), 2.22-2.11 (m, 6H), 1.98(s, 3H), 1.82 (m,
1H), 1.80 (m, 2H), 1.69 (s, 3H), 1.65 (m, 1H), 1.52 (dd, J = 14.8, 2.7, 1H),
1.25 (d, J = 6.2, 3H), 1.07 (d, J = 6.0, 3H), 0.95 (d, J = 7.0, 3H).

【0444】

（実施例Ａ３２）
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［ｔｒａｎｓ−３−（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）シクロブチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ７５）の調製。

【0445】

【化87】

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ステップ１。Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［ｔｒａｎｓ−３−（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）シクロブチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ７５）の合成。Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−｛４−［（｛［（４−ニトロベンジル）オキシ］カルボニル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−オルニチンアミド（ＭａｌＣＶａｌＣｉｔＰＡＢＡ−ＰＮＰ、欧州出願特許（１９９４）、ＥＰ６２４３７７、２３．１ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ、１．３当量）および＃Ｂ７３（１５．５ｍｇ、純度８５％、０．０２２ｍｍｏｌ、１．０当量）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．６ｍｌ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ヒューニッヒ塩基、３０μＬ）を加えた。得られた混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ７５を白色粉体として得た。収量：１２．６ｍｇ、２８％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝９．３分（純度９１％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ１２０２．５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0446】

（実施例Ａ３３）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ７６）の調製。

【0447】

【化88】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ７６）の合成。＃ＮＰ１（４０．２ｍｇ、純度９２％、０．０７ｍｍｏｌ、１．０当量）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢＴ、６２．５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ、５．８当量）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド−ＨＣｌ（ＥＤＣ、７２．２ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ、５当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３．０ｍＬ）中溶液を０℃で３０分間撹拌した。その後、この溶液にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）中のｔｒａｎｓ−１，４−ジアミノシクロヘキサン（２９０．０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ、３０当量）およびトリエチルアミン（５０μＬ）を０℃で加えた。次いで得られた混合物を室温で０．５時間および０℃で１６時間撹拌した。反応混合物を酢酸で中和し、濾過し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ７６を白色粉体として得た。収量：４８．２ｍｇ、１００％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝７．１６分（純度８７．５％）。LCMS (プロトコルM): m/z 632.2 [M+H]⁺.
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.81 (d, J =
7.8, 1H, D₂O交換可能), 7.72 (d, J = 7.8, 1H, D₂O交換可能), 6.36 (dq, J = 6.0, 6.0, 1H), 6.28 (br d, J = 15.6, 1H), 6.11 (d,
J = 11.7, 1H), 5.87 (dd, J = 11.7, 7.8, 1H), 5.59 (dd, J = 16.0, 5.5, 1H), 5.49
(br dd, J = 6.6, 6.6, 1H), 5.02 (m, 1H, D₂O交換可能), 4.26 (m, 1H), 4.22 (m, H), 3.65 (m, 2H), 3.49 (br dd, J = 6.2,
6.2, 1H), 3.45-3.32 (m, 2H), 3.26 (d, J = 3.9, 1H), 2.75 (d, J = 5.1, 1H), 2.58
(d, J = 5.1, 1H), 2.46 (m, 1H), 2.29 (m, 1H), 2.22 (m, 1H), 2.16 (dd, J = 14.0,
4.7, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.83 (m, 1H), 1.81 (m, 2H), 1.79-1.72 (m, 4H), 1.70 (s,
3H), 1.65 (m, 1H), 1.46 (dd, J = 12.5, 3.0, 1H), 1.25 (d, J = 6.2, 3H),
1.16-1.10 (m, 4H), 1.07 (d, J = 6.0, 3H), 0.95 (d, J = 7.0, 3H).

【0448】

（実施例Ａ３４）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（５−アミノペンチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ７７）の調製。

【0449】

【化89】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（５−アミノペンチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ７７）の合成。＃ＮＰ１（３０．５ｍｇ、純度９２％、０．０５６ｍｍｏｌ、１．０当量）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢＴ、３８．０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、４．４当量）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド−ＨＣｌ（ＥＤＣ、５４．０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ、５当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３．０ｍＬ）中溶液を、０℃で３０分間撹拌した。その後、この溶液にトリエチルアミン（５０μＬ）および１，５−ペンタンジアミン（５０μＬ、０．５ｍｍｏｌ、９当量）を０℃で加えた。得られた混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を酢酸で中和し、濾過し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製した。保持時間２２．０分のピークを集め、ＮＨ_４ＯＨで中和し、凍結乾燥して、＃Ｂ７７を白色粉体として得た。収量２３．１ｍｇ、収率６８％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝７．６７分（純度９１％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ６２０．６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0450】

（実施例Ａ３５）
Ｎ−｛［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝−２−メチルアラニン（＃Ｂ７９）の調製。

【0451】

【化90】

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ステップ１。Ｎ−｛［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝−２−メチルアラニン（＃Ｂ７８）の合成。＃ＮＰ２（１１８．３ｍｇ、純度９４．０％、０．２ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、３１．７ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ、０．４当量）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ヒューニッヒ塩基、１０μＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．０ｍＬ）中混合物を、周囲温度で３０分間撹拌した。その後、この溶液に１：１ピリジン／ジメチルスルホキシド（１．０ｍＬ）中のトリエチルアミン（１００μＬ）および２−メチルアラニン（３２．５ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ、１．３当量）を加えた。得られた懸濁液を周囲温度で２．０時間撹拌した。反応混合物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ７８を白色粉体として得た。収量：５４．３ｍｇ、収率４５％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１１．２９分（純度９４．１％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）；ｍ／ｚ６０５．６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0452】

ステップ２。Ｎ−｛［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝−２−メチルアラニン（＃Ｂ７９）の合成。＃Ｂ７８（６．６ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、６．０ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ、１．５当量）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ヒューニッヒ塩基、３．０μＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２００μＬ）中溶液を、周囲温度で３０分間撹拌した。この溶液にプロピルアミン（３．６μＬ、０．０６ｍｍｏｌ、５当量）を加え、得られた溶液を１時間撹拌した。反応混合物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ７９を白色粉体として得た。収量：４．９ｍｇ、収率７０％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１２．３１分（純度１００％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ６４６．７［Ｍ＋Ｈ］^＋；６６８．７［Ｍ＋Ｎａ］^＋。

【0453】

（実施例Ａ３６）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−（２−｛［２−メチル−１−オキソ−１−（プロピルアミノ）プロパン−２−イル］アミノ｝−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ８１）の調製。

【0454】

【化91】

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ステップ１。Ｎ−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝−２−メチルアラニン（＃Ｂ８０）の合成。＃ＮＰ１（１２２．４ｍｇ、純度９２．０％、０．２２ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、３３．２ｍｇ、０．０８７ｍｍｏｌ、０．４当量）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ヒューニッヒ塩基、１０μＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．０ｍＬ）中混合物を、周囲温度で３０分間撹拌した。その後、この溶液に１：１ピリジン／ジメチルスルホキシド（１．０ｍＬ）中のトリエチルアミン（１００μＬ）および２−メチルアラニン（３６．４ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。得られた懸濁液を周囲温度で２．０時間撹拌した。反応混合物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ８０を白色粉体として得た。収量：５２．７ｍｇ、収率４２％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝９．２８分（純度９０％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ６２１．６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0455】

ステップ２。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−（２−｛［２−メチル−１−オキソ−１−（プロピルアミノ）プロパン−２−イル］アミノ｝−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ８１）の調製。＃Ｂ８０（６．０ｍｇ、純度９０％、０．０１ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、５．１ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ、１．３当量）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ヒューニッヒ塩基、３．０μＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２００μＬ）中溶液を、周囲温度で３０分間撹拌した。この溶液にプロピルアミン（３．６μＬ、０．０６ｍｍｏｌ、６当量）を加え、得られた溶液を１時間撹拌した。反応混合物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ８１を白色粉体として得た。収量：４．７ｍｇ、収率８７％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１０．９５分（純度９９％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ６６２．７［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0456】

（実施例Ａ３７）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（４−｛［（｛４−［（Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝グリシル）アミノ］ベンジル｝オキシ）カルボニル］アミノ｝ベンジル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１２３）の調製

【0457】

【化92】

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ステップ１：９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル｛２−［（４−｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］メチル｝フェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝カルバメート（＃Ｂ１１８）の合成：Ｆｍｏｃ−グリシン（１６ｇ、５４ｍｍｏｌ、１．０当量）の乾燥ＤＭＦ（１６０ｍＬ）中溶液に、０℃でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１４ｇ、１０８ｍｍｏｌ、２．０当量）およびＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムテトラフルオロボレート（１６ｇ、５４ｍｍｏｌ、１．０当量）を加えた。混合物を０℃で３０分間撹拌し、ｔｅｒｔ−ブチル［４−（グリシルアミノ）ベンジル］カルバメート（１２ｇ、５４ｍｍｏｌ、１．０当量）の乾燥ＤＭＦ（５０ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で終夜撹拌し、氷水（４００ｍＬ）中に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ×２）で抽出した。有機層をブライン（２００ｍＬ×２）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、真空で濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）および石油エーテル（４００ｍＬ）から再結晶して、＃Ｂ１１８（１８ｇ、６６．６％）を白色固体として得た。1H NMR (400Hz, DMSO-d₆): δ 9.93
(s, 1H), 7.91 (d, 2H), 7.75 (d, 2H), 7.61 (m, 1 H), 7.52 (d, 2H), 7.43 (m, 2H),
7.36 (m, 3H), 7.18 (d, 3 H), 4.32 (d, 2H), 4.26 (m, 1 H), 4.07 (d, 2H), 3.80
(d, 2H), 1.39 (s, 9H)

【0458】

ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル［４−（グリシルアミノ）ベンジル］カルバメート（＃Ｂ１１９）の合成：＃Ｂ１１８（７．０ｇ、１４．０ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（７０ｍＬ）中溶液に、室温でピペリジン（４．７ｍＬ、４７．５ｍｍｏｌ、３．４当量）を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、真空で蒸発させた。残留物を石油エーテル（１００ｍＬ×２）で洗浄し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）および石油エーテル（２００ｍＬ）から再結晶して、＃Ｂ１１９（３．３ｇ、８４．６％）を白色固体として得た¹H NMR (400Hz, CDCl₃): δ 9.37 (s, 1H), 7.57 (d, 2H), 7.25 (d, 2H), 4.80 (br, 1H), 4.27 (d,
2H), 3.47 (s, 2H), 1.45 (s, 9H)

【0459】

ステップ３：９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル［６−（｛２−［（４−｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］メチル｝フェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝アミノ）−６−オキソヘキシル］カルバメート（＃Ｂ１２０）の合成：６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸（２．６６ｇ、７．５３ｍｍｏｌ、１．０当量）の乾燥ＤＣＭ（５０ｍＬ）中溶液に、０℃でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．９３ｇ、１５．１ｍｍｏｌ、２．０当量）およびＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、２．８６ｇ、７．５３ｍｍｏｌ、１．０当量）を加えた。混合物を０℃で３０分間撹拌し、＃Ｂ１１９（２．１ｇ、７．５３ｍｍｏｌ、１．０当量）を一度に加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を濾過し、固体をＤＣＭで洗浄し、真空乾固して、＃Ｂ１２０（４ｇ、８６．４％）を白色固体として得た。1H NMR (400Hz, DMSO-d₆): δ 9.91
(s, 1H), 8.11 (br, 1H), 7.90 (d, 2H), 7.69 (d, 2H), 7.51 (d, 2H), 7.41 (m, 2H),
7.33 (m, 3H), 7.17 (d, 2H), 4.28 (m, 3H), 4.06 (d, 2H), 3.86 (br, 2H), 2.97 (m,
2H), 2.15 (m, 2H), 1.51 (m, 2H), 1.38 (m, 12H); LCMS (プロトコルI): m/z 637.1 (M+Na]⁺, 保持時間=
1.18分.

【0460】

ステップ４：９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル｛６−［（２−｛［４−（アミノメチル）フェニル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］−６−オキソヘキシル｝カルバメートトリフルオロ酢酸塩（＃Ｂ１２１）の合成：＃Ｂ１２０（１ｇ、１．６３ｍｍｏｌ、１．０当量）の乾燥ＤＣＭ（２０ｍＬ）中懸濁液に、０℃でトリフルオロ酢酸（６ｍＬ、大過剰）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌し、真空で濃縮した。残留物を水（３０ｍＬ）に懸濁し、凍結乾燥して、＃Ｂ１２１（１．２ｇ、１００％）を淡黄色固体として得た。1H NMR (400Hz, DMSO-d₆): δ10.08
(s, 1H), 8.15 (br, 4H), 7.90 (d, 2H), 7.69 (d, 2H), 7.63 (d, 2H), 7.41 (m, 8H),
4.30 (m, 3H), 3.98 (m, 3H), 3.87 (d, 2H), 2.97 (m, 2H), 2.17 (m, 2H), 1.51 (m,
2H), 1.40 (m, 2H), 1.26 (m, 2H): LCMS (プロトコルI):
m/z 537.1 (M+Na]⁺, 保持時間= 1.10分.

【0461】

ステップ５：（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（４−｛［Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）グリシル］アミノ｝ベンジル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１２２）の合成：＃Ｂ１２１（３２．７ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（１．０ｍＬ）およびメタノール（０．１ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２６．０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ、４．５当量）を加えた。全反応混合物を＃Ｂ１（２８ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（１．０ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に加え、反応物を室温に加温した。１時間後、反応物を真空で濃縮し、残留物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１２２（１２．４ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、２７％）を得た：ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１０３２．６［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９２分。

【0462】

ステップ６：（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（４−｛［（｛４−［（Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝グリシル）アミノ］ベンジル｝オキシ）カルボニル］アミノ｝ベンジル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１２３）の合成。＃Ｂ１２２（１２．４ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、１当量）のジメチルホルムアミド（０．７ｍＬ、０．０１Ｍ）中溶液に、ピペリジン（原液［ピペリジン１００ｕＬをＤＭＦ（１ｍｌ）に溶解することにより調製した］１１ｕＬ、０．０１３ｍｍｏｌ、１．１当量）を加えた。反応物を１６時間撹拌し、次いでブロモ酢酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（２．８ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）中溶液を滴下添加した。反応物を１６時間撹拌し、真空で濃縮し、残留物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１２３を固体として得た。収量：２．５ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ、２２％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ９３２．２［Ｍ＋Ｈ］^＋保持時間＝０．７６分。

【0463】

（実施例Ａ３８）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−カルバムイミドアミド−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１２４）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−［２−（Ｎ’−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝カルバムイミドアミド）−２−オキソエチル］−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１２５）の調製

【0464】

【化93】

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ステップ１：（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−カルバムイミドアミド−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１２４）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−［２−（Ｎ’−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝カルバムイミドアミド）−２−オキソエチル］−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１２５）の合成：＃ＮＰ１（１３５ｍｇ、純度約６０％、約０．１５ｍｍｏｌ）およびＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、７２ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ、１．２当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１．０ｍＬ）中混合物に、０℃でＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（３０ｕＬ、＃当量）を加えた。周囲温度で１０分間撹拌した後、混合物をグアニジン塩酸塩（４００ｍｇ、４．１ｍｍｏｌ、２８当量）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（１００ｕＬ）の１：１メチルスルホキシド／水（３．０ｍＬ）中溶液に移した。得られた溶液を２０分間撹拌し、逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、（＃Ｂ１２４）および（＃Ｂ１２５）を白色粉体として得た。
＃Ｂ１２４：収量：５５．６ｍｇ、収率３８％、ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝８．０１分（純度８７％）。LCMS (プロトコルM): m/z 577.44 [M+H]⁺.
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.80 (d, J =
7.9, 1H, D₂O交換可能), 6.36 (dq, J = 6.0,
6.0, 1H), 6.27 (br d, J = 16.0, 1H), 6.11 (d, J = 11.3, 1H), 5.87 (dd, J =
11.3, 7.4, 1H), 5.60 (dd, J = 15.6, 5.5, 1H), 5.51 (br dd, J = 7.4, 7.4, 1H), 4.93
(d, J = 5.8, 1H, D₂O交換可能), 4.29 (m, 1H),
4.22 (m, 1H), 3.65 (m, 2H), 3.50 (br dd, J = 6.0, 6.0, 1H), 3.22 (dd, J = 4.7,
4.7, 1H), 2.73 (d, J = 5.1, 1H), 2.56 (d, J = 5.1, 1H), 2.46 (m, 1H), 2.32 (m,
2H), 2.20 (m, 1H), 1.98(s, 3H), 1.82 (m, 1H), 1.80 (m, 2H), 1.69 (s, 3H), 1.65
(m, 1H), 1.52 (dd, J = 13.2, 3.5, 1H), 1.25 (d, J = 6.2, 3H), 1.07 (d, J = 6.0,
3H), 0.95 (d, J = 7.4, 3H).
＃Ｂ１２５：収量：４９．０ｍｇ、収率３６％、ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１０．１４分（純度９０％）。LCMS (プロトコルM): m/z 1094.76 [M+H]⁺.
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.78 (d, J =
7.9, 2H, D₂O交換可能), 6.36 (dq, J = 6.0,
6.0, 2H), 6.27 (br d, J = 16.0, 2H), 6.11 (d, J = 11.7, 2H), 5.87 (dd, J =
11.7, 7.8, 2H), 5.60 (dd, J = 16.0, 5.0, 2H), 5.49 (br dd, J = 6.7, 6.7, 2H),
5.01 (br s, 2H, D₂O交換可能), 4.32 (m, 2H), 4.25
(m, 2H), 3.65 (m, 4H), 3.49 (br dd, J = 6.6, 6.6, 2H), 3.28 (d, J = 4.3, 2H),
2.76 (d, J = 4.7, 2H), 2.59 (d, J = 4.7, 2H), 2.54 (m, 2H), 2.30 (m, 2H), 2.28
(m, 2H), 2.21 (m, 2H), 1.98(s, 6H), 1.83 (m, 2H), 1.80 (m, 4H), 1.69 (s, 6H),
1.65 (m, 2H), 1.52 (br d, J = 12.8, 2H), 1.25 (d, J = 6.2, 6H), 1.06 (d, J =
6.2, 6H), 0.94 (d, J = 7.0, 6H).

【0465】

例えば本願を通して記載している置換基を有する二量体化合物など、本明細書に開示した二量体化合物と同様の二量体化合物も本発明の範囲に含まれる。

【0466】

（実施例Ａ３９）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［Ｎ’−（ブロモアセチル）カルバムイミドアミド］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１２６）の調製

【0467】

【化94】

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ステップ１：（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［Ｎ’−（ブロモアセチル）カルバムイミドアミド］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１２６）の合成。＃Ｂ１２４（２４．０ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ、１．０当量）およびブロモ酢酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（２４．１ｍｇ、０．０９２ｍｍｏｌ、２．０当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍｌ）中溶液に、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（１０ｕＬ）を加えた。得られた溶液を周囲温度で３０分間撹拌し、逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ１２６を白色粉体として得た。収量：５．７ｍｇ、２０％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１０．０１分（純度９９％）。LCMS (プロトコルM): m/z 697.35, 699.35 (1:1)
[M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 9.57(br s, 1H, D₂O交換可能), 9.41(br
s, 1H, D₂O交換可能), 9.24(br s, 1H, D₂O交換可能), 9.08 (br s, 1H, D₂O交換可能 ),
7.79 (d, J = 7.5, 1H, D₂O交換可能), 6.36
(dq, J = 6.0, 6.0, 1H), 6.26 (br d, J = 16.0, 1H), 6.11 (d, J = 11.7, 1H), 5.87
(dd, J = 11.3, 7.4, 1H), 5.60 (m, 1H), 5.49 (m, 1H), 4.35-4.28 (m, 2H), 3.65
(m, 2H), 3.50 (br dd, J = 6.0, 6.0, 1H), 3.41 (s, 2H), 3.26 (d, J = 4.7, 1H),
2.78 (d, J = 4.3, 1H), 2.61 (d, J = 4.3, 1H), 2.55 (m, 1H), 2.32 (m, 2H), 2.20
(m, 1H), 1.98(s, 3H), 1.85 (m, 1H), 1.80 (m, 2H), 1.69 (s, 3H), 1.65 (m, 1H),
1.53 (dd, J = 13.2, 3.5, 1H), 1.25 (d, J = 6.2, 3H), 1.07 (d, J = 6.2, 3H),
0.95 (d, J = 6.6, 3H).

【0468】

（実施例Ａ４０）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−｛２−［｛２−［（ヨードアセチル）（メチル）アミノ］エチル｝（メチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１２８）の調製

【0469】

【化95】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（メチル（２−（メチルアミノ）エチル）アミノ）］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１２７）の合成：＃Ｂ４９（５４．５ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ、１．０当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．０ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ’−ジメチル−１，２−エチレンジアミン（１２０ｕＬ、１．１ｍｍｏｌ、１２当量）を加えた。反応混合物を周囲温度で５分間撹拌し、生成物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、（＃Ｂ１２７）を得た。収量：２９．１ｍｇ、５７％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝６．９２分（純度７６％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ６０６．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0470】

ステップ２。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−｛２−［｛２−［（ヨードアセチル）（メチル）アミノ］エチル｝（メチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１２８）の合成。ヨード酢酸（４３．１ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ、４．８当量）およびＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、６４．１０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ、６．３当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．０ｍＬ）中溶液を、周囲温度で１０分間撹拌し、次いで（＃Ｂ１２７）（２９．１ｍｇ、純度７６．０％、０．０４８ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２ｍｌ）中溶液に移した。反応混合物を２０分間撹拌し、逆相クロマトグラフィーにより精製して、（＃Ｂ１２８）を白色粉体として得た。収量：１２．２ｍｇ、５４％。ＨＰＬＣ分析（プロトコルＮ）：保持時間＝９．５７分（純度９５．２％）。LCMS (プロトコルM): m/z 774.2 [M+H]⁺. ¹H
NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.80 (d, J =
7.4, 1H, D₂O交換可能), 6.36 (dq, J = 6.2,
6.2, 1H), 6.33 (br d, J = 15.5, 1H), 6.11 (d, J = 11.3, 1H), 5.86 (dd, J =
11.7, 7.8, 1H), 5.60 (dd, J = 16.0, 4.7, 1H), 5.52 (br dd, J = 6.6, 6.6, 1H),
4.98 (m, 1H, D₂O交換可能), 4.26 (m, 2H), 3.65
(m, 2H), 3.51 (br dd, J = 6.2, 6.2, 1H), 3.46-3.35 (m, 6H), 3.24 (m, 1H), 3.02
(s, 1.5H), 2.97 (s, 1.5H), 2.95 (s, 1.5H), 2.82 (s, 1.5H), 2.76 (m, 1H), 2.65
(m, 1H), 2.59 (m, 1H), 2.55 (m, 1H), 2.30 (m, 1H), 2.22 (m, 1H), 1.98 (s, 3H),
1.86 (m, 1H), 1.80 (m, 2H), 1.70 (s, 3H), 1.65 (m, 1H), 1.49 (dd, J = 12.5,
2.7, 1H), 1.25 (d, J = 6.2, 3H), 1.07 (d, J = 6.2, 3H), 0.95 (d, J = 7.0, 3H).

【0471】

（実施例Ａ４１）
（２Ｚ）−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−４−オキソペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ１２９）の調製。

【0472】

【化96】

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ステップ１。（２Ｚ）−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−４−オキソペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ１２９）の合成：＃Ｂ３９（６０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（２ｍＬ）中溶液に、０℃でデス−マーチンペルヨージナン（１１９ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ、２当量）を加え、氷浴を除去した。３５分後、飽和重炭酸ナトリウムおよびジクロロメタンを加え、水層をジクロロメタンで抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、溶媒を真空で除去した。粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１２９を白色固体として得た。収量：１９．０４ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ、３２％。LCMS (プロトコルD): m/z 475.3 [M+H]⁺, 保持時間= 0.70分. ¹H NMR (400 MHz,
DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ d, J = 8.0 Hz, 1 H), 7.32 (s, 1 H), 6.77
(s, 1 H), 6.32 (s, 2 H), 6.27 (d, J = 16.0 Hz, 1 H), 5.60 (dd, J = 16.0および5.5 Hz, 1 H), 5.55-5.47 (m, 1 H), 4.58-4.50 (m, 1 H), 4.35-4.26 (m,
1 H), 3.69-3.59 (m, 2 H), 3.54-3.48 (m, 1 H), 2.65-2.51 (m, 3 H), 2.36-2.15 (m,
6 H), 1.88-1.73 (m, 3 H), 1.72-1.60 (m, 6 H), 1.37 (dd, J = 13.3および6.2 Hz, 1 H), 1.08 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 0.96 (d, J = 7.4 Hz, 3 H).

【0473】

（実施例Ａ４２）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルメチル［２−（メチルスルファニル）エチル］カルバメート（＃Ｂ１３０）の調製。

【0474】

【化97】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−４−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１３１）の合成：＃Ｂ９（１１９ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（３ｍＬ）中溶液に、０℃で２，６−ルチジン（１０４μＬ、０．８９ｍｍｏｌ、４当量）を、続いてｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリル−トリフルオロメタンスルホネート（１６０μＬ、０６７ｍｍｏｌ、３当量）を滴下添加した。７０分後、反応物を飽和重炭酸ナトリウムおよびジクロロメタンで希釈し、抽出し、溶媒分離管上で濾過し、溶媒を真空で除去した。所望の粗製物を水中０．０２％酢酸（容量／容量）およびアセトニトリル中０．０２％酢酸（容量／容量）（５％から１００％）で溶出した逆相中圧液体クロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ１３１を白色固体として得た。収量：３４ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、２３％。ＬＣＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ６７１．３［Ｍ＋Ｎａ］^＋、保持時間＝２．０８分。

【0475】

ステップ２。（２Ｚ，４Ｓ）−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−４−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−４−ヒドロキシペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ１３２）の合成。＃Ｂ１３１（３２ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ、１当量）の４：１テトラヒドロフラン：水（１ｍＬ）中溶液に、水酸化リチウム（１１．７ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ、１０当量）を加え、混合物を室温で２１時間撹拌した。反応物を真空で濃縮し、残留物を酢酸エチルおよび水に溶解した。水層を酢酸エチル（３×）で抽出し、合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空で濃縮した。水中０．０２％酢酸（容量／容量）およびアセトニトリル中０．０２％酢酸（容量／容量）（１０％から１００％）で溶出した逆相中圧液体クロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ１３２を白色固体として得た。収量：１１．３ｍｇ、０．０１９ｍｏｌ、３８％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ６２９．３［Ｍ＋Ｎａ］^＋、保持時間＝０．９８分。

【0476】

ステップ３。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−４−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルメチル［２−（メチルスルファニル）エチル］カルバメート（＃Ｂ１３３）の合成：＃Ｂ１３２（６３．２ｍｇ、０．１０４ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（１．８ｍＬ）中溶液に、トリエチルアミン（７３μＬ、０．５２０ｍｍｏｌ、５当量）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（８．９ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ、０．７当量）およびビス−（４−ニトロフェニル）−カルボネート（１０６ｍｇ、０．３４３ｍｍｏｌ、３．３当量）を加え、反応物を室温で２．５時間撹拌した。この混合物の３分の１に、Ｎ−メチル−２−（メチルスルファニル）エタンアミン塩酸塩（２４．６ｍｇ、０．１７４ｍｍｏｌ、１．６７当量）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出し、溶媒分離管上で濾過し、ジメチルスルホキシド（１ｍＬ）で希釈し、真空で濃縮した。残留物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１３３を得た。収量：１５．２ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ、２０％。ＬＣＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ７６０．７６［Ｍ＋Ｎａ］^＋、保持時間＝２．１９分。

【0477】

ステップ４。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルメチル［２−（メチルスルファニル）エチル］カルバメート（＃Ｂ１３０）の合成：０℃に冷却した＃Ｂ１３３（１５．２ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（０．４ｍＬ）中溶液に、テトラブチルアンモニウムフルオリド（テトラヒドロフラン中１Ｍ、５３μＬ、０．０５３ｍｍｏｌ、２．５当量）を加え、１０分後反応物を室温に加温した。１．５時間後、反応物を真空で濃縮し、残留物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１３０を得た。収量：８．５ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ、６５％。LCMS (プロトコルD): m/z 646.3 [M+Na]⁺,
保持時間= 0.79分. ¹H
NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.77 (d, J =
8.2 Hz, 1 H), 7.31 (s, 1 H), 6.77 (s, 1 H), 6.32 (d, J = 16.0 Hz, 1 H),
6.26-6.18 (m, 1 H), 6.09 (d, J = 11.5 Hz, 1 H), 5.89 (dd, J = 11.5および7.0 Hz, 1 H), 5.60 (dd, J = 16.0および5.5 Hz, 1
H), 5.54-5.47 (m, 1 H), 5.00 (d, J = 5.5 Hz, 1 H), 4.29-4.21 (m, 2 H),
3.69-3.61 (m, 2 H), 3.54-3.47 (m, 1 H), 3.42-3.33 (m, 2 H), 3.26-3.21 (m, 1 H),
2.89-2.78 (m, 3 H), 2.74 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.64-2.56 (m, 3 H), 2.36-2.17
(m, 4 H), 2.07 (s, 3 H), 1.90-1.78 (m, 3 H), 1.72-1.61 (m, 4 H), 1.54-1.46 (m,
1 H), 1.26 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.96 (d, J = 7.0
Hz, 3 H).

【0478】

（実施例Ａ４３）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルピペリジン−１−カルボキシレート（＃Ｂ１３４）の調製。

【0479】

【化98】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−４−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルピペリジン−１−カルボキシレート（＃Ｂ１３５）の合成：実施例Ａ４２のステップ３に記載した手順を用い、化合物＃Ｂ１３３の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１３２（６３．２ｍｇ、０．１０４ｍｍｏｌ、１．０当量）、トリエチルアミン（７３μＬ、０．５２０ｍｍｏｌ、５当量）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（８．９ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ、０．７当量）およびビス−（４−ニトロフェニル）−カルボネート（１０６ｍｇ、０．３４３ｍｍｏｌ、３．３当量）ならびにピペリジン（１４．８ｍｇ、０．１７４ｍｍｏｌ、１．７当量）から、標題化合物を収率１８％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ７４０．５［Ｍ＋Ｎａ］^＋、保持時間＝１．１３分。

【0480】

ステップ２。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルピペリジン−１−カルボキシレート（＃Ｂ１３４）の合成：化合物＃Ｂ１３０にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１３５（１３．５ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）およびテトラブチルアンモニウムフルオリド１２．８ｍｇ（テトラヒドロフラン中１Ｍ、５３μＬ、０．０５３ｍｍｏｌ、２．５当量）から、標題化合物を収率７６％で調製した。LCMS (プロトコルD): m/z 626.60 [M+Na]⁺,
保持時間= 0.81分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.77 (d, J =
7.80 Hz, 1 H), 7.31 (s, 1 H), 6.77 (s, 1 H), 6.32 (d, J = 15.6 Hz, 1 H),
6.26-6.17 (m, 1 H), 6.09 (d, J = 11.7 Hz, 1 H), 5.89 (dd, J = 11.7および7.4 Hz, 1 H), 5.60 (dd, J = 16.0および5.5 Hz, 1
H), 5.54-5.47 (m, 1 H), 5.00 (d, J = 5.5 Hz, 1 H), 4.29-4.20 (m, 2 H),
3.69-3.61 (m, 2 H), 3.54-3.47 (m, 1 H), 3.27-3.21 (m, 1 H), 2.75 (d, J = 5.1
Hz, 1 H), 2.58 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.36-2.16 (m, 4 H), 1.88-1.78 (m, 3 H),
1.73-1.61 (m, 4 H), 1.57-1.38 (m, 7 H), 1.25 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 1.07 (d, J =
6.2 Hz, 3 H), 0.96 (d, J = 7.4 Hz, 3 H).

【0481】

（実施例Ａ４４）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルピペラジン−１−カルボキシレート、酢酸塩（＃Ｂ１３６）の調製

【0482】

【化99】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルピペラジン−１−カルボキシレート、酢酸塩（＃Ｂ１３６）の合成：化合物＃Ｂ１３３の調製にて記載した手順を用いて、３７ｍｇ（０．０７８ｍｍｏｌ）トリエチルアミン（３９．７ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ、５当量）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（６．７ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ、０．７当量）、ビス−（４−ニトロフェニル）−カルボネート（８４．７ｍｇ、０．２７３ｍｍｏｌ、３．５当量）およびピペラジン（１６．８ｍｇ、０．１９５ｍｍｏｌ、２．５当量）から、標題化合物を収率２７％で調製した。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）：保持時間＝６．３１８分（純度９５％）。LCMS (プロトコルC): m/z 589.4 [M+H]⁺
保持時間= 0.97分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ7.77 (d, J = 8.20 Hz, 1
H), 7.31 (s, 1 H), 6.77 (s, 1 H), 6.31-6.17 (m, 2 H), 6.09 (d, J = 11.7 Hz, 1
H), 5.89 (dd, J = 11.7および7.4 Hz, 1 H), 5.60 (dd, J =
15.6および5.5 Hz, 1 H), 5.55-5.45 (m, 1 H), 4.57-4.50 (m,
1 H), 4.35-4.25 (m, 1 H), 3.69-3.60 (m, 2 H), 3.54-3.46 (m, 2 H), 2.65-2.53 (m,
4 H) 2.36-2.14 (m, 4 H), 1.88 (s, 3 H), 1.85-1.73 (m, 3 H), 1.72-1.61 (m, 5 H),
1.41-1.33 (m, 1 H), 1.25 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.95
(d, J = 7.0 Hz, 3 H).

【0483】

（実施例Ａ４５）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イル−４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（＃Ｂ１３７）の調製。

【0484】

【化100】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イル−４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート、酢酸塩（＃Ｂ１３７）の合成：化合物＃Ｂ１３３の調製にて記載した手順を用いて、３７ｍｇ（０．０７８ｍｍｏｌ）トリエチルアミン（３９．７ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ、５当量）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（６．７ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ、０．７当量）、ビス−（４−ニトロフェニル）−カルボネート（８４．７ｍｇ、０．２７３ｍｍｏｌ、３．５当量）および１−Ｍｅ−ピペラジン（１９．５ｍｇ、０．１９５ｍｍｏｌ、２．５当量）から、標題化合物を収率２７％で調製した。LCMS (プロトコルC): m/z 603.4 [M+H]⁺
保持時間= 1.29分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.77 (d, J = 7.8 Hz, 1 H),
7.32 (s, 1 H), 6.77 (s, 1 H), 6.32-6.19 (m, 2 H), 6.10 (d, J = 11.7 Hz, 1 H),
5.89 (dd, J = 11.7および7.4 Hz, 1 H), 5.60 (dd, J = 16.0および5.9 Hz, 1 H), 5.55-5.47 (m, 1 H), 4.58-4.50 (m, 1 H), 4.35-4.26 (m,
1 H), 3.71-3.61 (m, 2 H), 3.55-3.47 (m, 2 H), 2.65-2.53 (m, 3 H), 2.36-2.14 (m,
8 H), 1.89 (s, 3 H), 1.85-1.74 (m, 3 H), 1.72-1.61 (m, 5 H), 1.42-1.33 (m, 1
H), 1.26 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.96 (d, J = 7.4 Hz,
3 H).

【0485】

（実施例Ａ４６）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛［（１Ｈ−イミダゾール−１−イルカルボニル）アミノ］メチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１３８）および（２Ｚ，４Ｓ）−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（アミノメチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−４−ヒドロキシペンタ−２−エンアミド、酢酸塩（＃Ｂ１３９）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（アミノメチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート、酢酸塩（＃Ｂ１４０）の調製。

【0486】

【化101】

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ステップ１ａ。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛［（１Ｈ−イミダゾール−１−イルカルボニル）アミノ］メチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１３８）の合成：＃Ｂ２２（１５．９ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ、１当量）のアセトニトリル（０．６ｍＬ）中溶液に、室温でカルボニルジイミダゾール（７．４ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ、１．５当量）を加え、反応物を１０分間撹拌した。次いで反応物を６０℃に５．５時間加熱し、室温に冷却した。水およびジクロロメタンを加え、水層を抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、溶媒を真空で除去した。所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１３８を白色固体として得た。収量：３．４ｍｇ、０．００５９ｍｍｏｌ、２０％。ＬＣＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ５８５．４［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝１．４０分。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）保持時間＝７．４２６分（純度８３％）。

【0487】

ステップ１ｂ。（２Ｚ，４Ｓ）−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（アミノメチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−４−ヒドロキシペンタ−２−エンアミド、酢酸塩（＃Ｂ１３９）の合成：＃Ｂ２２（３５．２ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ、１当量）のアセトニトリル（２．２ｍＬ）中溶液に、室温でカルボニルジイミダゾール（１６．２ｍｇ、０．０９９ｍｍｏｌ、１．５当量）を加え、反応物を３０分間撹拌した。次いで反応物を６０℃に５時間加熱した。反応物を室温に冷却し、アセトニトリル（３３ｍＬ）、水（１７ｍＬ）および１Ｎ ＮａＯＨ（１７ｍＬ）の溶液に加え、室温で１５分間撹拌した。反応物を水で希釈し、アセトニトリルを真空で除去した。水溶液をジクロロメタンで抽出し、酢酸（０．５ｍＬ）で中和し、真空で濃縮した。残留物をアセトニトリルに溶解し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、真空で濃縮した。所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１３９を白色固体として得た。収量：７．７ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、２３％。LCMS (プロトコルC): m/z 449.3 [M+H]⁺, 保持時間= 0.93分. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆,
多重線, JはHz単位) δ7.76 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 6.26 (d, J =
15.6 Hz, 1 H), 5.97 (d, J = 11.7 Hz, 1 H), 5.86 (dd, J = 11.7および7.0 Hz, 1 H), 5.67 (dd, J = 15.6および5.8 Hz, 1
H), 5.56-5.49 (m, 1 H), 5.21-5.13 (m, 1 H), 4.54-4.46 (m, 1 H), 3.79-3.71 (m, 1
H), 3.70-3.60 (m, 2 H), 3.54-3.46 (m, 1 H), 2.80 (dd, J = 12.9および7.4 Hz, 1 H), 2.62 (s, 2 H), 2.58-2.53 (m, 1 H), 2.37-2.14 (m, 2 H),
1.89-1.56 (m, 11 H), 1.44 (dd, J = 13.3および7.4 Hz, 1 H),
1.11 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.96 (d, J = 7.4 Hz, 3
H).

【0488】

ステップ１ｃ。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（アミノメチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート、酢酸塩（＃Ｂ１４０）の合成：＃Ｂ２２（５０．８ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ、１当量）のアセトニトリル（３．１ｍＬ）中溶液に、室温でカルボニルジイミダゾール（２３．４ｍｇ、０．１４３ｍｍｏｌ、１．５当量）を加え、反応物を３０分間撹拌した。次いで反応物を６５℃に４時間加熱した。反応物を室温に冷却し、アセトニトリル（８３ｍＬ）、水（６ｍＬ）および１Ｎ ＮａＯＨ（６ｍＬ）の溶液に加え、室温で３５分間撹拌した。反応物を酢酸（０．３５ｍＬ）で中和し、真空で濃縮した。残留物をアセトニトリルに溶解し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、真空で濃縮した。所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１４０を得た。収量：１５ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ、３２％。LCMS (プロトコルC): m/z 491.3 [M+H]⁺, 保持時間= 1.13分. HPLC (プロトコルA^A) 保持時間= 6.969分 (純度 87%). ¹H NMR (400 MHz,
DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.78 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 6.42-6.30 (m,
1 H), 6.26 (d, J = 16.0 Hz, 1 H), 6.11 (d, J = 11.5 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J =
11.5および7.4 Hz, 1 H), 5.67 (dd, J = 16.0および5.8 Hz, 1 H), 5.56-5.49 (m, 1 H), 4.54-4.46 (m, 1 H), 3.81-3.73 (m,
1 H), 3.69-3.61 (m, 2 H), 3.54-3.46 (m, 1 H), 2.80 (dd, J = 12.9および7.4 Hz, 1 H), 2.63 (s, 2 H), 2.58-2.53 (m, 1 H), 2.37-2.14 (m, 2 H),
1.98 (s, 3 H), 1.84-1.56 (m, 8 H), 1.44 (dd, J = 13.3および7.4 Hz, 1 H), 1.25 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.6 Hz, 3 H),
0.96 (d, J = 7.0 Hz, 3 H).

【0489】

（実施例Ａ４７）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−｛２−［（ｔｒａｎｓ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１４１）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−｛２−［（ｃｉｓ−３−ヒドロキシシクロブチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１４２）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−（２−メチルヒドラジニル）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１４３）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−（１−メチルヒドラジニル）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１４４）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−［２−（１，２−ジメチルヒドラジニル）−２−オキソエチル］−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１４５）の調製。

【0490】

【化102】

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ステップ１ａ。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−｛２−［（ｔｒａｎｓ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１４１）の合成：テトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）に溶解した＃Ｂ１（１９．７ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキサノール（５．７ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ、１．６当量）を加えた。１．５時間撹拌した後、反応物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出し、合わせた有機物を硫酸ナトリウムで脱水し、濾過した。溶媒を真空で除去した。所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１４１を白色固体として得た。収量：１１．８ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ、６０％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）保持時間＝７．４０８分（純度９４％）。LCMS (プロトコルD): m/z 633.3 [M+H]⁺, 保持時間= 0.73分. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆)
δ 7.79 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.68 (d, J = 7.8 Hz, 1 H),
6.42-6.32 (m, 1 H), 6.28 (d, J = 16.0 Hz, 1 H), 6.11 (d, J = 11.5 Hz, 1 H),
5.87 (dd, J = 11.5および7.4 Hz, 1 H), 5.59 (dd, J = 16.0および5.5 Hz, 1 H), 5.54-5.45 (m, 1 H), 5.00 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 4.49
(d, J = 4.3 Hz, 1 H), 4.30-4.15 (m, 2 H), 3.70-3.60 (m, 2 H), 3.54-3.39 (m, 2
H), 3.26-3.20 (m, 1 H), 2.74 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.58 (d, J = 5.1 Hz, 1 H),
2.37-2.10 (m, 3 H), 1.98 (s, 3 H), 1.89-1.59 (m, 10 H), 1.51-1.41 (m, 1 H),
1.25 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 1.20-1.10 (m, 4 H), 1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.95
(d, J = 7.4 Hz, 3 H).

【0491】

ステップ１ｂ。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−｛２−［（ｃｉｓ−３−ヒドロキシシクロブチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１４２）の合成。＃Ｂ１（１６．２ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５：１、０．６ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１３．７μＬ、０．０７８ｍｍｏｌ、３当量）およびｔｒａｎｓ−３−アミノシクロブタノール塩酸塩（４．８ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ、１．５当量）（１２：４８ｐｍ）を加え、反応物を２時間撹拌した。更にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｕＬ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１３ｕＬ、０．０７８ｍｍｏｌ、３当量）およびｔｒａｎｓ−３−アミノシクロブタノール塩酸塩（３ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、０．９当量）を加え、反応物を更に３０分間撹拌した。反応物をジメチルスルホキシドで希釈し、真空で濃縮して、テトラヒドロフランを除去した。所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１４２を白色固体として得た。収量：９．５ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ、６１％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）保持時間＝７．０５７分（純度９１％）。LCMS (プロトコルD): m/z 627.1 [M+Na]⁺,
保持時間= 0.72分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.03 (d, J = 7.8
Hz, 1 H), 7.79 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 6.42-6.32 (m, 1 H), 6.28 (d, J = 16.0 Hz,
1 H), 6.11 (d, J = 11.7 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.7および7.4
Hz, 1 H), 5.59 (dd, J = 16.0および5.5 Hz, 1 H), 5.55-5.48
(m, 1 H), 5.07-4.97 (m, 2 H), 4.30-4.17 (m, 2 H), 3.81-3.71 (m, 1 H), 3.70-3.59
(m, 3 H), 3.54-3.46 (m, 1 H), 3.27-3.20 (m, 1 H), 2.75 (d, J = 4.9 Hz, 1 H),
2.58 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 2.48-2.39 (m, 2 H), 2.36-2.13 (m, 3 H), 1.98 (s, 3
H), 1.89-1.61 (m, 9 H), 1.49-1.41 (m, 1 H), 1.25 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 1.07 (d,
J = 6.2 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.4 Hz, 3 H).

【0492】

ステップ１ｃ。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−（２−メチルヒドラジニル）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１４３）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−（１−メチルヒドラジニル）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１４４）の合成：＃Ｂ１（３２．４ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２：１、０．７５ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（７１．８μＬ、０．４０８ｍｍｏｌ、８当量）およびＮ−メチルヒドラジンスルフェート（２２．１ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、３当量）を加え、反応物を２０分間撹拌した。更にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２５０ｕＬ）を加えた。更に３０分後、更にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３５ｕＬ、０．２０ｍｍｏｌ、４当量）およびＮ−メチルヒドラジンスルフェート（１５ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、２当量）を加え、反応物を４５分間撹拌した。反応物を水および酢酸エチルで希釈し、水層を抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、真空で濃縮した。所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１４３および＃Ｂ１４４を白色固体として得た。
＃Ｂ１４３収量：１．９ｍｇ、０．００３４ｍｍｏｌ、７％。LCMS (プロトコルD): m/z 564.2 [M+H]⁺, 保持時間= 0.73分. ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 9.31 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 7.81 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 6.41-6.32 (m,
1 H), 6.29 (d, J = 16.0 Hz, 1 H), 6.11 (d, J = 11.6 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J =
11.6および7.6 Hz, 1 H), 5.59 (dd, J = 16.0および5.6 Hz, 1 H), 5.54-5.48 (m, 1 H), 5.04 (d, J = 5.4 Hz, 1 H),
4.80-4.72 (m, 1 H), 4.29-4.20 (m, 2 H), 3.69-3.61 (m, 2 H), 3.53-3.46 (m, 1 H),
3.27-3.21 (m, 1 H), 2.75 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.58 (d, J = 5.1 Hz, 1 H),
2.45-2.13 (m, 7 H), 1.98 (s, 3 H), 1.89-1.74 (m, 3 H), 1.72-1.58 (m, 4 H),
1.53-1.45 (m, 1 H), 1.25 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 0.95
(d, J = 7.3 Hz, 3 H).
＃Ｂ１４４収量：２．３ｍｇ、０．００４０ｍｍｏｌ、８％。LCMS (プロトコルD): m/z 564.2 [M+H]⁺, 保持時間= 0.76分. ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 7.81 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 6.41-6.27 (m, 2 H), 6.11 (d, J = 11.5
Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.5および7.3 Hz, 1 H), 5.60 (dd,
J = 16.1および5.9 Hz, 1 H), 5.56-5.48 (m, 1 H), 4.94 (d, J
= 6.4 Hz, 1 H), 4.67 (s, 1 H), 4.32-4.20 (m, 2 H), 3.69-3.62 (m, 2 H),
3.53-3.47 (m, 1 H), 3.26-3.21 (m, 1 H), 3.06 (dd, J = 154および7.3 Hz, 1 H), 2.98 (s, 2 H), 2.75 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 2.62-2.53
(m, 2 H), 2.35-2.13 (m, 3 H), 1.98 (s, 3 H), 1.89-1.74 (m, 3 H), 1.72-1.58 (m,
5 H), 1.25 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.3
Hz, 3 H).

【0493】

ステップ１ｄ。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−［２−（１，２−ジメチルヒドラジニル）−２−オキソエチル］−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１４５）の合成：＃Ｂ１（２９．７ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１：１、１ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１１６μＬ、０．６５８ｍｍｏｌ、１４当量）を、続いてＮ，Ｎ’−ジメチルヒドラジン二塩酸塩（３１．３ｍｇ、０．２３５ｍｍｏｌ、５当量）を加え、反応物を３０分間撹拌した。反応物を水および酢酸エチルで希釈し、水層を抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、真空で濃縮した。所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１４５を白色固体として得た。収量：２．２ｍｇ、０．００３８ｍｍｏｌ、８％。LCMS (プロトコルD): m/z 578.2 [M+H]⁺, 保持時間= 0.82分. ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆)
δ 7.81 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 6.41-6.27 (m, 2 H), 6.11
(d, J = 11.7 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.7および7.6 Hz, 1
H), 5.60 (dd, J = 15.9および5.4 Hz, 1 H), 5.56-5.48 (m, 1
H), 4.94 (d, J = 6.6 Hz, 1 H), 4.79 (q, J = 5.7 Hz, 1 H), 4.32-4.19 (m, 2 H),
3.68-3.61 (m, 2 H), 3.53-3.47 (m, 1 H), 3.26-3.21 (m, 1 H), 3.01 (d, J = 15.2および7.3 Hz, 1 H), 2.93 (s, 3 H), 2.76-2.73 (m, 1 H), 2.60-2.53 (m, 2 H),
2.44 (d, J = 5.7 Hz, 3 H), 2.35-2.15 (m, 3 H), 1.98 (s, 3 H), 1.87-1.75 (m, 3
H), 1.72-1.56 (m, 5 H), 1.25 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.4 Hz, 3 H),
0.95 (d, J = 7.3 Hz, 3 H).

【0494】

（実施例Ａ４８）
Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｄ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１４６）の調製。

【0495】

【化103】

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ステップ１。Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｄ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１４６）の合成。＃Ｂ４７（１０．４ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．３ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６．３μＬ、０．０３６ｍｍｏｌ、４当量）を、続いて１−［（ブロモアセチル）オキシ］ピロリジン−２，５−ジオン（４．２ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ、１．９当量）を加え、１５分間撹拌し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１４６を白色固体として得た。収量：４．６ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ、４３％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）：保持時間＝７．５９７分（純度８７％）。LCMS (プロトコルC): m/z 1188.6 [M+H]⁺
保持時間= 1.37分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.99 (s, 1 H), 9.68 (s,
1 H), 9.12 (s, 1 H), 8.26-8.18 (m, 1 H), 8.11-8.04 (m, 1 H), 7.84-7.74 (m, 2
H), 7.64-7.54 (m, 2 H), 7.34-7.21 (m, 2 H), 6.41-6.27 (m, 2 H), 6.11 (d, J = 11.7
Hz, 1 H), 6.00-5.93 (m, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.7および7.4
Hz, 1 H), 5.65-5.47 (m, 2 H), 5.40 (s, 2 H), 5.04 (d, J = 5.5 Hz, 1 H),
5.02-4.96 (m, 2 H), 4.43-4.34 (m, 1 H), 4.30-4.16 (m, 3 H), 3.81 (s, 2 H),
3.69-3.60 (m, 2 H), 3.54-3.45 (m, 1 H), 3.26-3.20 (m, 1 H), 3.09-2.88 (m, 4 H),
2.77-2.73 (m, 1 H), 2.62-2.55 (m, 1 H), 2.36-2.07 (m, 5 H), 1.98 (s, 3 H),
1.84-1.76 (m, 1 H), 1.73-1.61 (m, 5 H), 1.54-1.33 (m, 5 H), 1.29-1.21 (m, 5 H),
1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.4 Hz, 3 H), 0.84 (dd, J = 11.3および6.6 Hz, 6 H).

【0496】

（実施例Ａ４９）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（アミノメチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート、酢酸塩（＃Ｂ１４７）の調製。

【0497】

【化104】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（アミノメチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１４７）の合成：＃Ｂ１４（４０ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ、１当量）のアセトニトリル（２．３ｍＬ）中溶液に、室温でＣＤＩ（２９．８ｍｇ、０．１８２ｍｍｏｌ、２．５当量）を加え、反応物を４０分間撹拌した。次いで反応物を６５℃に４時間加熱した。室温に冷却した後、反応混合物をアセトニトリル（６３ｍＬ）、水（４．５ｍＬ）および１Ｎ ＮａＯＨ（４．５ｍＬ）の溶液に加え、３０分間撹拌した。酢酸（２７０ｕＬ）を加え、混合物を真空で濃縮した。得られた残留物をアセトニトリルに溶解し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、真空で濃縮した。所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１４７を白色固体として得た。収量：５．１ｍｇ、０．００８８ｍｍｏｌ、１２％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）保持時間＝６．７７８分（純度８９％）。LCMS (プロトコルC): m/z 507.2 [M+H]⁺, 保持時間= 0.98分. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆)
δ 7.77 (d, J = 7.4 Hz, 1 H), 6.41-6.24 (m, 2 H), 6.11
(d, J = 11.7 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.7および7.4 Hz, 1
H), 5.65 (dd, J = 16.0および6.2 Hz, 1 H), 5.56-5.48 (m, 1
H), 5.00-4.91 (m, 1 H), 4.27-4.20 (m, 1 H), 3.78-3.60 (m, 3 H), 3.55-3.46 (m, 1
H), 3.22-3.18 (m, 1 H), 2.80-2.71 (m, 2 H), 2.62-2.53 (m, 2 H), 2.33-2.15 (m, 3
H), 1.98 (s, 3 H), 1.89-1.77 (m, 5 H), 1.73-1.61 (m, 4 H), 1.48-1.41 (m, 1 H),
1.25 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.0 Hz, 3
H).

【0498】

（実施例Ａ５０）
メチル［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ１４８）の調製。

【0499】

【化105】

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ステップ１。メチル［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ１４８）の合成：＃ＮＰ２（２０４ｍｇ、０．３９３ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４．５ｍＬ）中溶液に、室温で炭酸カリウム（２７２ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ、５当量）およびヨードメタン（７４０μＬ、１１．８ｍｍｏｌ、３０当量）を加え、反応物を１．５時間撹拌した。反応物を濾過し、水（３×）で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、真空で濃縮した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ５３４．４２［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．８９分。粗製物を更には精製せずに次のステップに使用した。

【0500】

ステップ２。メチル［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ１４８）の合成。実施例Ａ＃５０のステップ１からの粗製物のメタノール（３．５ｍＬ）中溶液に、室温で炭酸カリウム（１３６ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ、２．５当量）を加え、反応物を２時間撹拌した。反応物をメタノールを用いて濾過し、ジメチルスルホキシド（２ｍＬ）で希釈し、真空で濃縮した。水中０．０２％酢酸（容量／容量）およびアセトニトリル中０．０２％酢酸（容量／容量）（１０％から９０％）で溶出した逆相中圧液体クロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ１４８を白色固体として得た。収量：９１．６ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、４８％。LCMS (プロトコルD): m/z 492.47 [M+H]⁺,
保持時間= 0.80分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.76 (d, J = 7.8 Hz, 1
H), 6.25 (d, J = 16.0 Hz, 1 H), 5.97 (d, J = 11.9 Hz, 1 H), 5.87 (d, J = 11.9および7.0 Hz, 1 H), 5.65-5.48 (m, 2 H), 5.22-5.13 (m, 1 H), 5.10 (d, J =
4.7 Hz, 1 H), 4.56-4.48 (m, 1 H), 4.36-4.25 (m, 1 H), 3.69-3.61 (m, 2 H), 3.60
(s, 3 H), 3.55-3.46 (m, 1 H), 2.74-2.56 (m, 4 H), 2.38-2.13 (m, 2 H), 1.90-1.60
(m, 9 H), 1.44 (dd, J = 13.2および7.0 Hz, 1 H), 1.11 (d, J
= 6.2 Hz, 3 H), 1.06 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.96 (d, J = 7.0 Hz, 3H).

【0501】

（実施例Ａ５１）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イル４−（メチルスルファニル）ブタノエート（＃Ｂ１４９）の調製。

【0502】

【化106】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イル４−（メチルスルファニル）ブタノエート（＃Ｂ１４９）の合成。＃Ｂ１４８（１２ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（０．５ｍＬ）中溶液に、４−（メチルチオ）ブタン酸（３２．２ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、１０当量）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２．９ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ、１当量）およびＤＩＣ（４１．３μＬ、０．２６４ｍｍｏｌ、１１当量）を加え、反応物を１時間撹拌した。反応物をジメチルスルホキシド（０．８ｍＬ）で希釈し、真空で濃縮した。所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１４９をゴム状物として得た。収量：９．７ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ、６６％。LCMS (プロトコルD): m/z 608.2 [M+H]⁺, 保持時間= 1.05分. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆)
δ 7.79 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 6.44-6.32 (m, 1 H),
6.25 (d, J = 16.0 Hz, 1 H), 6.12 (d, J = 11.7 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.7および7.4 Hz, 1 H), 5.62-5.50 (m, 2 H), 4.57-4.48 (m, 1 H), 4.36-4.25 (m,
1 H), 3.70-3.62 (m, 2 H), 3.60 (s, 3 H), 3.55-3.47 (m, 1 H), 2.74-2.56 (m, 4
H), 2.48-2.43 (m, 2 H), 2.41-2.15 (m, 4 H), 2.02 (s, 3 H), 1.88-1.60 (m, 11 H),
1.44 (dd, J = 12.9および6.6 Hz, 1 H), 1.26 (d, J = 6.6 Hz,
3 H), 1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.96 (d, J = 7.4 Hz, 3H).

【0503】

（実施例Ａ５２）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛［（ブロモアセチル）アミノ］メチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１５０）の調製。

【0504】

【化107】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛［（ブロモアセチル）アミノ］メチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１５０）の合成：＃Ｂ１４７（７ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８．５μＬ、０．０４８ｍｍｏｌ、４当量）および１−［（ブロモアセチル）オキシ］ピロリジン−２，５−ジオン（４．２ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、１．５当量）を加え、反応物を１０分間撹拌した。所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１５０を白色固体として得た。収量：２．９ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ、４０％。LCMS (プロトコルD): m/z 649.2 [M+Na]⁺,
保持時間= 0.81分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.42-8.32 (m, 1 H), δ 7.79 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 6.44-6.32 (m, 1 H), 6.28 (d, J = 16.0
Hz, 1 H), 6.11 (d, J = 11.3 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.3および7.4 Hz, 1 H), 5.61 (dd, J = 16.0および5.5 Hz, 1
H), 5.56-5.49 (m, 1 H), 5.02 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 4.33-4.26 (m, 1 H),
3.95-3.83 (m, 3 H), 3.72-3.59 (m, 2 H), 3.55-3.45 (m, 1 H), 3.40-3.32 (m, 1 H),
3.28-3.14 (m, 2 H), 2.77 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.61 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.31-2.12
(m, 2 H), 1.98 (s, 3 H), 1.88-1.75 (m, 3 H), 1.73-1.61 (m, 4 H), 1.51-1.41 (m,
1 H), 1.25 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.0
Hz, 3 H).

【0505】

（実施例Ａ５３）
Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−（４−｛［（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］メチル｝カルバモイル）オキシ］メチル｝フェニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１５１）の調製。

【0506】

【化108】

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ステップ１。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−（４−｛［（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］メチル｝カルバモイル）オキシ］メチル｝フェニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１５２）の合成。＃Ｂ１４０（１０．７ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中溶液に、室温で２，６−ルチジン（１０．２μＬ、０．０８８ｍｍｏｌ、４当量）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１５．５μＬ、０．０８８ｍｍｏｌ、４当量）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２．７ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、１当量）および＃Ｂ４５（２２．９ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、反応物を４０分間撹拌した。所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１５２を白色固体として得た。収量：１４．９ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、５５％。ＬＣＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ１２３１．６［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝１．９７分。

【0507】

ステップ２。Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−（４−｛［（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］メチル｝カルバモイル）オキシ］メチル｝フェニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド、酢酸塩（＃Ｂ１５３）の合成：化合物＃Ｂ４７の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１５２（１４．９ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピペリジン２０．４ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ、２０．０当量）から、標題化合物を収率８６％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ１００９．８３［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝１．３５分。

【0508】

ステップ３。Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−（４−｛［（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］メチル｝カルバモイル）オキシ］メチル｝フェニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１５１）の合成。化合物＃Ｂ１５０の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１５３（１１ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、１．０当量）および１−［（ブロモアセチル）オキシ］ピロリジン−２，５−ジオン３．５ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ、１．５当量）ならびにＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５．２ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ、４．０当量）から、標題化合物を収率７０％で調製した。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）保持時間＝８．４１３分（純度８７％）。LCMS (プロトコルC): m/z 1151.5 [M+Na]⁺,
保持時間= 1.61分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.96 (s, 1 H),
8.25-8.18 (m 1 H), 8.06 (d, J = 7.4 Hz, 1 H), 7.83-7.74 (m, 2 H), 7.62-7.54 (m,
2 H), 7.31-7.20 (m, 3 H), 6.41-6.31 (m, 1 H), 6.25 (d, J = 15.8 Hz, 1 H), 6.11
(d, J = 11.7 Hz, 1 H), 6.00-5.92 (m, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.7および7.4 Hz, 1 H), 5.61 (dd, J = 15.8および5.9 Hz, 1
H), 5.55-5.47 (m, 1 H), 5.39 (s, 2 H), 5.00-4.88 (m, 2 H), 4.59-4.49 (m, 1 H),
4.43-4.34 (m, 1 H), 4.24-4.15 (m, 2 H), 3.99-3.88 (m, 1 H), 3.81 (s, 2 H),
3.69-3.58 (m, 2 H), 3.53-3.36 (m, 2 H), 3.10-2.88 (m, 5 H), 2.63 (s, 2 H),
2.31-2.08 (m, 4 H), 2.02-1.92 (m, 4 H), 1.83-1.56 (m, 10 H), 1.55-1.29 (m, 7
H), 1.28-1.20 (m, 5 H), 1.05 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 0.94 (d, J = 7.4 Hz, 3 H),
0.85 (dd, J = 11.3および6.6 Hz, 6 H).

【0509】

（実施例Ａ５４）
Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−（４−｛［（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］メチル｝カルバモイル）オキシ］メチル｝フェニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１５４）の調製。

【0510】

【化109】

[この文献は図面を表示できません]

ステップ１。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−（４−｛［（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］メチル｝カルバモイル）オキシ］メチル｝フェニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１５５）の合成。＃Ｂ１５２の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１４７（１３ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）、２，６−ルチジン９．９ｍｇ（０．０９２ｍｍｏｌ、４当量）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１２．０ｍｇ（０．０９２ｍｍｏｌ、４当量）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン２．８ｍｇ（０．０２３ｍｍｏｌ、１当量）および＃Ｂ４５（２２．９ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ、１．２当量）２４．６ｍｇ（０．０２８ｍｍｏｌ、４当量）から、標題化合物を収率４１％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１２４７．９３［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９１分。

【0511】

ステップ２。Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−（４−｛［（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］メチル｝カルバモイル）オキシ］メチル｝フェニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド、酢酸塩（＃Ｂ１５６）の合成。＃Ｂ１５３の調製にて記載した手順を用いて、＃＃Ｂ１５５（１１．９ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピペリジン１７．０ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ、２０．０当量）から、標題化合物を収率６６％で調製した。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）保持時間＝７．００１分（純度８２％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１０２５．４［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．６９分。

【0512】

ステップ３。Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−（４−｛［（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］メチル｝カルバモイル）オキシ］メチル｝フェニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１５４）の合成。化合物＃Ｂ１５０の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１５６（６．１ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５．０ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ、７．０当量）および１−［（ブロモアセチル）オキシ］ピロリジン−２，５−ジオン（３．５ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、１．５当量）から、標題化合物を収率４６％で調製した。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）保持時間＝７．６６９分（純度８４％）。LCMS (プロトコルD): m/z 1151.5 [M+Na]⁺,
保持時間= 0.79分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.99 (s, 1 H),
8.27-8.19 (m 1 H), 8.16-8.06 (m, 1 H), 7.89-7.73 (m, 2 H), 7.62-7.54 (m, 2 H),
7.31-7.20 (m, 3 H), 6.41-6.31 (m, 1 H), 6.27 (d, J = 16.4 Hz, 1 H), 6.11 (d, J
= 10.9 Hz, 1 H), 6.05-5.94 (m, 1 H), 5.86 (dd, J = 10.9および7.0 Hz, 1 H), 5.67-5.56 (m, 1 H), 5.55-5.47 (m, 1 H), 5.40 (s, 2 H),
5.02-4.88 (m, 3 H), 4.44-4.33 (m, 2 H), 4.30-4.23 (m, 1 H), 4.22-4.15 (m, 2 H),
3.96-3.84 (m, 1 H), 3.81 (s, 2 H), 3.69-3.58 (m, 2 H), 3.53-3.43 (m, 2 H),
3.10-2.89 (m, 5 H), 2.79-2.71 (m, 1 H), 2.61-2.56 (m, 1 H), 2.31-2.10 (m, 4 H),
2.04-1.91 (m, 4 H), 1.84-1.32 (m, 15 H), 1.30-1.18 (m, 4 H), 1.06 (d, J = 6.2
Hz, 3 H), 0.94 (d, J = 7.4 Hz, 3 H), 0.84 (dd, J = 10.9および6.6 Hz, 6 H).

【0513】

（実施例Ａ５５）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（２Ｅ）−２−｛１−［４−（｛５−［（ブロモアセチル）アミノ］ペンチル｝オキシ）フェニル］エチリデン｝ヒドラジニル］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１５７）の調製。

【0514】

【化110】

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ステップ１。９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル［５−（４−アセチルフェノキシ）ペンチル］カルバメート（＃Ｂ１５８）の合成：（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル５−ヒドロキシペンチルカルバメート（５ｇ、１５．４ｍｍｏｌ、１当量）、１−（４−ヒドロキシフェニル）エタノン（２．１ｇ、１５．４ｍｍｏｌ、１当量）およびトリフェニルホスフィン（４．５３ｇ、１６．９ｍｍｏｌ、１．１当量）のトルエン（５０ｍＬ）中溶液に、ＤＩＡＤ（３．４３ｇ、１６．９ｍｍｏｌ、１．１当量）を０〜１０℃で滴下添加した。溶液を室温で１時間撹拌し、酢酸エチルで希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液およびブラインで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、真空で濃縮した。残留物を石油エーテル：酢酸エチル１０：１から７：１で溶出したシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、逆相クロマトグラフィーにより更に精製して、＃Ｂ１５８（３．６ｇ、５３％）を白色固体として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 7.93 (d, 2 H), 7.76 (d, 2 H), 7.59 (d, 2 H), 7.42 (m, 2 H), 7.33
(m, 2 H), 6.92 (d, 2 H), 4.79 (m, 1 H), 4.43 (m, 2 H), 4.23 (m, 1 H), 4.04 (m,
2 H), 3.25 (m, 2 H), 2.55 (s, 3 H), 1.84 (m, 2 H), 1.58-1.52 (m, 4 H).

【0515】

ステップ２。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（２Ｅ）−２−（１−｛４−［（５−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ペンチル）オキシ］フェニル｝エチリデン）ヒドラジニル］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１５９）の合成。化合物＃Ｂ２０の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ６（３０．８ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ、１．０当量）および＃Ｂ１５８（１２４．０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ、５．０当量）から、標題化合物を収率３３％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ９７５．４［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝１．０５分。

【0516】

ステップ３。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（２Ｅ）−２−（１−｛４−［（５−アミノペンチル）オキシ］フェニル｝エチリデン）ヒドラジニル］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート、酢酸塩（＃Ｂ１６０）の合成。＃Ｂ４７の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１５９（１７．８ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピペリジン３０．７ｍｇ（０．３６ｍｍｏｌ、２０．０当量）から、標題化合物を収率６４％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ７５３．６２［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．６６分。

【0517】

ステップ４。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（２Ｅ）−２−｛１−［４−（｛５−［（ブロモアセチル）アミノ］ペンチル｝オキシ）フェニル］エチリデン｝ヒドラジニル］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１５７）の合成：化合物＃Ｂ１５０の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１６０（６．２ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ、１．０当量）および１−［（ブロモアセチル）オキシ］ピロリジン−２，５−ジオン２．８ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ、１．５当量）ならびにＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４．２ｍｇ（０．０３２ｍｍｏｌ、４．０当量）から、標題化合物を収率４６％で調製した。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）保持時間＝８．６６８分（純度５３％）。LCMS (プロトコルD): m/z 873.3 [M+H]⁺, 保持時間= 0.88分. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆,
多重線, JはHz単位) δ 10.39-10.25 (m, 1 H), 8.30-8.20 (m, 1
H), 7.82-7.66 (m, 3 H), 6.99-6.90 (m, 2 H), 6.42-6.22 (m, 2 H), 6.16-6.06 (m, 1
H), 5.92-5.81 (m, 1 H), 5.68-5.34 (m, 3 H), 5.09-4.92 (m, 1 H), 4.51-4.25 (m, 3
H), 4.03-3.94 (m, 2 H), 3.82 (s, 2 H), 3.70-3.55 (m, 2 H), 3.50-3.40 (m, 1 H),
3.15-3.05 (m, 2 H), 2.90-2.71 (m, 2 H), 2.64-2.56 (m, 2 H), 2.30-2.10 (m, 5 H),
1.98 (s, 3 H), 1.94-1.84 (m, 1 H), 1.83-1.55 (m, 8 H), 1.53-1.33 (m, 4 H),
1.29-1.20 (m, 3 H), 1.12-1.00 (m, 3 H), 0.98-0.88 (m, 3 H).

【0518】

（実施例Ａ５６）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（｛［Ｎ−（ブロモアセチル）−β−アラニル］アミノ｝メチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１６１）の調製

【0519】

【化111】

[この文献は図面を表示できません]

ステップ１。２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−β−アラニネート（＃Ｂ１６２）の合成。Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−β−アラニン（２９７ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（３．５ｍＬ）中溶液に、室温でＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１１２ｍｇ、０．９５４ｍｍｏｌ、１当量）およびＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（２２８ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ、１．１当量）を加え、反応物を４時間撹拌した。反応物を濾過し、酢酸エチルで洗浄し、真空で濃縮した。所望の粗製物を水中０．０２％酢酸（容量／容量）およびアセトニトリル中０．０２％酢酸（容量／容量）（１０％から９５％）で溶出した逆相中圧液体クロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ１６２を白色固体として得た。収量：３２０ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ、８２％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ４３１．０［Ｍ＋Ｎａ］^＋、保持時間＝０．９１分。

【0520】

ステップ２。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−［（｛Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−β−アラニル｝アミノ）メチル］−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１６３）の合成。＃Ｂ１４７（１５．１ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１４．３μＬ、０．０８１ｍｍｏｌ、３当量）および＃Ｂ１６２（２２．１ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ、２当量）を加え、反応物を３０分間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、所望の＃Ｂ１６３と未反応の＃Ｂ１６２の混合物を得た。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ８００．４［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９７分。この物質を更には精製せずに次のステップに使用した。

【0521】

ステップ３。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−［（β−アラニルアミノ）メチル］−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート、酢酸塩（＃Ｂ１６４）の合成。化合物＃Ｂ４７の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１６３（１５．７ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピペリジン３４．１ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ、２０．０当量）から、標題化合物を収率６３％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ５７８．４１［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．６２分。

【0522】

ステップ４。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（｛［Ｎ−（ブロモアセチル）−β−アラニル］アミノ｝メチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１６１）の合成。化合物＃Ｂ１５０の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１６４（７．３ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ、１．０当量）および１−［（ブロモアセチル）オキシ］ピロリジン−２，５−ジオン４．５ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ、１．５当量）ならびにＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６．８ｍｇ（０．０５２ｍｍｏｌ、４．０当量）から、標題化合物を収率４３％で調製した。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）保持時間＝６．５６４分（純度７２％）。LCMS (プロトコルD): m/z 698.1 [M+H]⁺, 保持時間= 0.79分. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆)
δ 8.31-8.23 (m, 1 H), 8.02-7.93 (m, 1 H), δ 7.78 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 6.41-6.32 (m, 1 H), 6.28 (d, J = 15.8 Hz,
1 H), 6.11 (d, J = 11.7 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.7および7.4
Hz, 1 H), 5.61 (dd, J = 15.8および5.5 Hz, 1 H), 5.56-5.45
(m, 1 H), 5.00 (d, J = 6.2 Hz, 1 H), 4.31-4.24 (m, 1 H), 3.93-3.79 (m, 3 H),
3.72-3.59 (m, 2 H), 3.55-3.45 (m, 1 H), 3.27-3.08 (m, 3 H), 3.28-3.14 (m, 2 H),
2.77 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.61 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.36-2.14 (m, 4 H), 1.98
(s, 3 H), 1.88-1.75 (m, 3 H), 1.73-1.61 (m, 4 H), 1.51-1.41 (m, 1 H), 1.25 (d,
J = 6.6 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.0 Hz, 3 H).

【0523】

（実施例Ａ５７）
Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［４−（｛［（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イル］オキシ｝カルボニル）ピペラジン−１−イル］カルボニル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１６５）の調製。

【0524】

【化112】

[この文献は図面を表示できません]

ステップ１。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル］カルボニル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１６６）の合成。ｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシレート（３２ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．９ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（９０．８μＬ、０．５２ｍｍｏｌ、３当量）および４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（４．２ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ、０．２当量）を、続いて＃Ｂ４５（１５１ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、１当量）を加え、反応物を３０分間撹拌した。反応物をＤＭＳＯ（２．５ｍＬ）で希釈し、水中０．０２％酢酸（容量／容量）およびアセトニトリル中０．０２％酢酸（容量／容量）（１０％から９５％）で溶出した逆相中圧液体クロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ１６６を白色固体として得た。収量：１１４ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、７１％。ＬＣＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ９２７．５［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝１．８９分。

【0525】

ステップ２。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−（４−｛［（ピペラジン−１−イルカルボニル）オキシ］メチル｝フェニル）−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１６７）の合成。２つの分離容器中、＃Ｂ１６６（合計１０６ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、１当量）のアセトニトリル（６ｍＬ）中懸濁液に、室温でＴＦＡ（８００μＬ）を加え、反応物を１．５〜２時間撹拌した。反応物を真空で濃縮し、アセトニトリルで再度希釈し、真空で濃縮した（３×）。所望の粗製物を水中０．０２％酢酸（容量／容量）およびアセトニトリル中０．０２％酢酸（容量／容量）（１０％から１００％）で溶出した逆相中圧液体クロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ１６７を白色固体として得た。収量：６２ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ、５７％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ８２７．４［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．７２分。

【0526】

ステップ３。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［４−（｛［（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イル］オキシ｝カルボニル）ピペラジン−１−イル］カルボニル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１６８）の合成。＃Ｂ３９（１３．５ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（０．４ｍＬ）中溶液に、室温で４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（３．４ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ、１当量）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２４．７μＬ、０．１４ｍｍｏｌ、５当量）およびビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（１０．６ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、反応物を６時間撹拌した。＃Ｂ１６７（３４．５ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ、１．３当量）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２ｕＬ、０．０７ｍｍｏｌ、２．５当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５００ｕＬ）中溶液を加え、反応物を１時間撹拌した。反応物をＤＭＳＯ（５００ｕｌ）で希釈し、ジクロロメタンを真空で除去した。所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１６８を白色固体として得た。収量：１３ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、３５％。ＬＣＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ１３２９．６［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝１．８１分。

【0527】

ステップ４。Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［４−（｛［（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イル］オキシ｝カルボニル）ピペラジン−１−イル］カルボニル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド、酢酸塩（＃Ｂ１６９）の合成。化合物＃Ｂ４７の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１６８（１３ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピペリジン１７．０ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ、２０．０当量）から、標題化合物を収率８０％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１１０７．５［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．６９分。

【0528】

ステップ５。Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［４−（｛［（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イル］オキシ｝カルボニル）ピペラジン−１−イル］カルボニル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１６５）の合成。化合物＃Ｂ１５０の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１６９（９．４ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ、１．０当量）および１−［（ブロモアセチル）オキシ］ピロリジン−２，５−ジオン２．８ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ、１．５当量）ならびにＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４．２ｍｇ（０．０３２ｍｍｏｌ、４．０当量）から、標題化合物を収率６９％で調製した。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）保持時間＝７．７４１分（純度９１％）。LCMS (プロトコルC): m/z 1229.4 [M+H]⁺,
保持時間= 1.48分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.99 (s, 1 H),
8.27-8.19 (m 1 H), 8.13-8.04 (m, 1 H), 7.85-7.73 (m, 2 H), 7.64-7.55 (m, 2 H),
7.35-7.26 (m, 3 H), 6.77 (s, 1 H), 6.32-6.21 (m, 2 H), 6.10 (d, J = 12.1 Hz, 1
H), 6.01-5.85 (m, 2 H), 5.59 (dd, J = 16.0および5.5 Hz, 1
H), 5.55-5.47 (m, 1 H), 5.40 (s, 2 H), 5.02 (s, 2 H), 4.58-4.49 (m, 1 H),
4.45-4.25 (m, 2 H), 4.24-4.14 (m, 2 H), 3.81 (s, 2 H), 3.69-3.60 (m, 2 H),
3.53-3.45 (m, 2 H), 3.43-3.33 (m, 6 H), 3.10-2.89 (m, 4 H), 2.64-2.53 (m, 2 H),
2.38-2.09 (m, 5 H), 2.03-1.92 (m, 1 H), 1.87-1.56 (m, 11 H), 1.55-1.31 (m, 7
H), 1.30-1.19 (m, 5 H), 1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.0 Hz, 3 H),
0.84 (dd, J = 10.9および6.6 Hz, 6 H).

【0529】

（実施例Ａ５８）
Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（４−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１７０）の調製。

【0530】

【化113】

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ステップ１。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（４−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１７１）の合成：＃Ｂ１（１５ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．１ｍＬ）中溶液に、室温で＃Ｂ１６７（２８．２ｍｇ、０．０３ｍｏｌ、１．２５当量）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１６．８μＬ、０．０９６ｍｍｏｌ、４当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．６ｍＬ）中溶液を加え、反応物を１．５時間撹拌した。反応物をジメチルスルホキシドで希釈し、逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１７１を白色固体として得た。収量：１７．８ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ、５５％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１３４５．８［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９２分。

【0531】

ステップ２。Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（４−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１７２）の合成：化合物＃Ｂ４７の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１７１（１７．８ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）およびピペリジン２２．１ｍｇ（０．２６ｍｍｏｌ、２０．０当量）から、標題化合物を収率７９％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ１１２２．６［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝１．２３分。

【0532】

ステップ３。Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（４−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１７０）の合成。化合物＃Ｂ１５０の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１７２（１２．１ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）および１−［（ブロモアセチル）オキシ］ピロリジン−２，５−ジオン３．５ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ、１．５当量）ならびにＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５．２ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ、４．０当量）から、標題化合物を収率５７％で調製した。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）保持時間＝７．９２５分（純度８１％）。LCMS (プロトコルC): m/z 1244.4 [M+H]⁺,
保持時間= 1.45分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.99 (s, 1 H),
8.27-8.19 (m 1 H), 8.13-8.04 (m, 1 H), 7.85-7.73 (m, 2 H), 7.64-7.55 (m, 2 H),
7.35-7.26 (m, 2 H), 6.44-6.24 (m, 2 H), 6.10 (d, J = 11.7 Hz, 1 H), 6.03-5.93
(m, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.7および7.4 Hz, 1 H), 5.61 (dd,
J = 15.6および5.5 Hz, 1 H), 5.55-5.47 (m, 1 H), 5.40 (s, 2
H), 5.02 (s, 2 H), 4.98 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 4.43-4.33 (m, 2 H), 4.30-4.16 (m,
3 H), 3.81 (s, 2 H), 3.69-3.60 (m, 2 H), 3.55-3.34 (m, 6 H), 3.26-3.22 (m, 1
H), 3.09-2.89 (m, 4 H), 2.75 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.63-2.55 (m, 2 H),
2.31-2.09 (m, 4 H), 1.98 (s, 3 H), 1.92-1.78 (m, 3 H), 1.73-1.31 (m, 12 H),
1.30-1.19 (m, 5 H), 1.07 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.4 Hz, 3 H), 0.84
(dd, J = 10.9および6.6 Hz, 6 H).

【0533】

（実施例Ａ５９）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ）−７−［（ブタノイルアミノ）メチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１７３）の調製。

【0534】

【化114】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ）−７−［（ブタノイルアミノ）メチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１７３）の合成。＃Ｂ１４０（６．７ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（０．４ｍＬ）中溶液に、０℃で４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（０．４ｍｇ、０．００３ｍｍｏｌ、０．２当量）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２．３μＬ、０．０７ｍｍｏｌ、５当量）および酪酸（６．８μＬ、０．０７４ｍｍｏｌ、５．３当量）を加え、反応物を室温で２時間撹拌した。反応物にＤＣＣ（８ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ、３当量）を加え、反応物を４５分間撹拌した。反応物を酢酸エチルおよび飽和重炭酸ナトリウムで希釈し、抽出し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、真空で濃縮した。所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１７３を白色固体として得た。収量：３．４ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ、４３％。ＨＰＬＣ（プロトコルＡ^Ａ）：保持時間＝８．９２７分（純度８７％）。LCMS (プロトコルD): m/z 583.2 [M+Na]⁺,
保持時間= 0.88分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.84-7.75 (m, 2 H),
6.42-6.32 (m, 1 H), 6.23 (d, J = 16.0 Hz, 1 H), 6.11 (d, J = 11.5 Hz, 1 H),
5.87 (dd, J = 11.5および7.4 Hz, 1 H), 5.65-5.45 (m, 3 H),
4.60-4.51 (m, 1 H), 3.96-3.85 (m, 1 H), 3.70-3.60 (m, 2 H), 3.54-3.46 (m, 1 H),
3.12-3.01 (m, 1 H), 2.63 (s, 2 H), 2.32-2.12 (m, 2 H), 2.09-2.01 (m, 2 H), 1.98
(s, 3 H), 1.75-1.56 (m, 7 H), 1.55-1.45 (m, 2 H), 1.41-1.33 (m, 1 H), 1.25 (d, J
= 6.6 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.4 Hz, 3 H), 0.88-0.80
(m, 3 H).

【0535】

（実施例Ａ６０）
組換え型Ｆｒ９Ｐを有する生体触媒による［（３Ｒ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−５−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃Ｂ１７４）の調製

【0536】

【化115】

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ステップ１。組換え型Ｆｒ９Ｐ酵素の大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）中での生産および大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）からの精製。コドン最適化Ｆｒ９Ｐ遺伝子（実施例４のステップ１にて記載した通り）を合成し、ｐＧＳ−２１ａ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）のＮｃｏＩ−ＨｉｎｄＩＩＩ部位中に連結させてｐＡＥ−ＰＦ１６を生成した。組換え型、Ｈｉｓ_６−ＧＳＴ標識Ｆｒ９Ｐタンパク質を、プラスミドｐＡＥ−ＰＦ１６を用いる形質転換後、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）中で生産し、ここから精製した。培養液（アンピシリン（ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ）１００ｍｇ／Ｌを含むＴＢ培地（Ｔｅｒｒｉｆｉｃ ｂｒｏｔｈ））０．５Ｌを含む２つの２．８−Ｌフェルンバッハフラスコを、ＬＢ培養液２０ｍｌで終夜それぞれ播種し、２００ｒｐｍ、２５℃でインキュベートした。ＯＤ_６００が約０．９に達した際、細胞を０．２ｍＭのＩＰＴＧで誘発し、２５℃および２００ｒｐｍで再度インキュベートした。１８〜２０時間後、細胞を遠心分離により収集し、−８０℃で凍結した。細胞ペレットを氷冷した溶解用緩衝液［１０ｍＭリン酸塩緩衝液ｐＨ７．４；５００ｍＭ ＮａＣｌ；２０ｍＭイミダゾール；１０％グリセロール；リゾチーム１ｍｇ／ｍｌ；０．５％（容量／容量）トゥイーン２０；２０ｍＭβ−メルカプトエタノール］約５０ｍｌに再度懸濁し、氷上で３０分間インキュベートした。氷上で超音波処理した後、細胞溶解物を１４，０００ｒｐｍおよび４℃で４５分間遠心分離した。上澄み液を新しいチューブに移し、１４，０００ｒｐｍおよび４℃で３０分間再度遠心分離した。Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂スラリー液（Ｑｉａｇｅｎ）５ｍｌを、氷上にて小ビーカーに含まれる上澄み画分（透明溶解物）に加え、１時間穏やかに撹拌した。懸濁液をファルコンチューブに移し、３，０００ｒｐｍおよび４℃で１０分間遠心分離した。上澄み液を廃棄し、樹脂を氷冷した洗浄緩衝液［１０ｍＭリン酸塩緩衝液ｐＨ７．４；５００ｍＭ ＮａＣｌ；４０ｍＭイミダゾール；１０％グリセロール；２０ｍＭ β−ＭＥ］３０ｍｌでそれぞれ３回洗浄し、続いて３，０００ｒｐｍおよび４℃で１０分間遠心分離した。樹脂を使い捨てカラムに移し、洗浄緩衝液２．５ｍｌでそれぞれ更に３回洗浄した。酵素を溶出緩衝液［１０ｍＭリン酸塩緩衝液ｐＨ７．４；５００ｍＭ ＮａＣｌ；２５０ｍＭイミダゾール；１０％グリセロール；２０ｍＭ β−ＭＥ］３×２．５ｍｌで溶出した。緩衝液をＰＤ−１０カラムを用いて５０ｍＭ ＭＯＰＳｐＨ７．５に変換し、溶液をＶｉｖａｓｐｉｎカラムを用い３０ｋＤａの分子量をカットオフして濃縮した。貯蔵緩衝液は５０ｍＭ ＭＯＰＳｐＨ７．５、２ｍＭＤＴＴおよび１０％グリセロール（−８０℃での貯蔵用）または５０％グリセロール（−２０℃での貯蔵用）を含んでいた。精製した酵素の収量は約２５ｍｇ／Ｌ培養液であった。

【0537】

ステップ２。組換え型Ｆｒ９Ｐを用いる［（３Ｒ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−５−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃Ｂ１７４）の合成。＃ＮＰ２（１ｍｇ、０．４ｍＭ、１当量）の５０ｍＭ ＭＯＰＳ緩衝液ｐＨ７．５中水溶液に、α−ケトグルタレート（最終濃度０．８ｍＭ、２当量）、アスコルビン酸ナトリウム（０．０８ｍＭ、０．２当量）、ＮＨ_４Ｆｅ（ＩＩ）ＳＯ_４（０．０４ｍＭ、０．１当量）および実施例＃Ａ６０のステップ１からの組換え型Ｆｒ９Ｐ（１．２μＭ、０．００３当量）を加えた。室温で２時間インキュベーションした後、反応物を酢酸でｐＨを約４〜５に酸性化し、等容量の酢酸エチルで３回抽出した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残留物をアセトニトリル０．２５ｍｌに再度懸濁し、濾過し、逆相クロマトグラフィー（方法Ｈ）により精製した。保持時間１８．５分の画分を集め、水酸化アンモニウムで中和した後、これを減圧下で濃縮した。水性濃縮物を酢酸でｐＨを約４に酸性化し、等容量の酢酸エチルで２回抽出した。溶媒を減圧下で除去して、＃Ｂ１７４を白色固体として得た。収量：０．２ｍｇ。ＨＰＬＣ（プロトコルＰ）：保持時間＝１０．３９分。HRESIMS m/z 536.286 [M+H]⁺; ¹H NMR (400 MHz,
DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 12.24 (brs, OH), 8.00 (d, J = 8.0 Hz,
1H), 6.37 (m, 1H), 6.23 (d, J = 15.9, 1H), 6.12 (dd, J = 0.7, 11.5, 1H), 5.88
(dd, J = 11.6, 7.5 Hz, 1H), 5.54 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.67 (m, 1H), 3.66 (m,
2H), 3.51 (m, 1H), 2.60 (m, 1H), 2.53 (m, 1H), 2.33 (m, 1H), 2.31 (m, 1H), 2.20
(m, 1H), 2.00 (s, 3H), 1.84 (m, 1H), 1.81 (m, 2H), 1.70 (s, 3H), 1.67 (m, 1H),
1.39 (m, 1H), 1.26 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.16 (m, 1H), 1.08 (d, J = 6.4
Hz, 3H), 0.96 (d, J = 7.2 Hz, 3H). ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆)
δ 171.7, 170.5, 165.0, 142.7, 134.4, 133.3, 128.5,
127.3, 122.6, 95.3, 79.9, 74.8, 67.9, 67.2, 46.7, 46.1, 38.9, 37.7, 35.0, 31.5,
28.7, 20.8, 19.7, 17.6, 14.2, 12.2.

【0538】

（実施例Ａ６１）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルメチル［２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エチル］カルバメート（＃Ｂ１７５）の調製。

【0539】

【化116】

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ステップ１。Ｎ−メチル−２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エタンアミン、トリフルオロ酢酸塩（＃Ｂ１７６）の合成。ｔｅｒｔ−ブチルメチル［２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エチル］カルバメート（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００７、４６、６４６９）（９０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（１ｍＬ）中溶液に、室温でＴＦＡ（１ｍＬ）を加え、反応物を１時間撹拌した。反応物を真空で濃縮し、アセトニトリル（３×）と共沸して、＃Ｂ１７６を油状物として得た。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ２０１．１［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．４３分。粗製物を更には精製せずに次のステップに使用した。

【0540】

ステップ２。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルメチル［２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エチル］カルバメート（＃Ｂ１７５）の合成：＃Ｂ３９（１９．５ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（０．５ｍＬ）中溶液に、室温で４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（５ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ、１当量）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２１．７μＬ、０．１２３ｍｍｏｌ、３当量）およびビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（１８．９ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ、１．５当量）を加え、反応物を２．５時間撹拌した。更にビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（３．１ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ、０．２当量）を加え、反応物を更に１．５時間撹拌した。＃Ｂ１７６（４４．１ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ、２．５当量）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５４μＬ、０．３１ｍｍｏｌ、７．５当量）のジクロロメタン（０．４ｍＬ）中溶液を加え、反応物を１時間撹拌した。更に＃Ｂ１７６（１７ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ、１当量）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４４μＬ、０．２５ｍｍｏｌ、６当量）のジクロロメタン（０．２ｍＬ）中溶液を加え、反応物を更に１５分間撹拌した。反応混合物をＤＭＳＯ（１ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタンを真空で除去した。所望の粗製物を水中０．０２％酢酸（容量／容量）およびアセトニトリル中０．０２％酢酸（容量／容量）（１０％から１００％）で溶出した逆相中圧液体クロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ１７５を白色固体として得た。収量：７．６ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、２６％。LCMS (プロトコルD): m/z 703.6 [M+H]⁺, 保持時間= 0.91分. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆,
多重線, JはHz単位) δ 8.49-8.43 (m, 1 H), 7.87-7373 (m, 2 H),
7.32 (s, 1 H), 7.28-7.21 (m, 1 H), 6.78 (s, 1 H), 6.32 (d, J = 16.0 Hz, 1 H),
6.26 (d, J = 16.4 Hz, 1 H), 6.23-6.13 (m, 1 H), 6.11-5.98 (m, 1 H), 5.93-5.84
(m, 1 H), 5.76-5.67 (m, 1 H), 5.59 (dd, J = 15.9および5.6
Hz, 1 H)

【0541】

（実施例Ａ＃６２）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−［２−（２，２−ジメチルヒドラジニル）−２−オキソエチル］−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１７７）の調製。

【0542】

【化117】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−［２−（２，２−ジメチルヒドラジニル）−２−オキソエチル］−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１７７）の合成。テトラヒドロフラン（１ｍＬ）に溶解した＃Ｂ１（２６．８ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジメチルヒドラジン（１６μＬ、０．２１ｍｍｏｌ、５当量）を加えた。４０分間撹拌した後、更にＮ，Ｎ−ジメチルヒドラジン（６．４μＬ、０．０８４ｍｍｏｌ、２当量）を加え、反応物を５分間撹拌した。反応物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、合わせた有機物を硫酸ナトリウムで脱水し、濾過した。溶媒を真空で除去した。所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１７７を白色固体として得た。収量：１４．５ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ、６０％。LCMS (プロトコルD): m/z 578.5 [M+H]⁺, 保持時間= 0.72分. ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆)
δ 8.85 (s, 0.6 H), 8.33 (s, 0.4 H), 7.93-7.84 (m, 1 H),
6.40-6.27 (m, 2 H), 6.10 (d, J = 11.6 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.6および7.6 Hz, 1 H), 5.63-5.54 (m, 1 H), 5.53-5.46 (m, 1 H), 5.09 (d, J =
5.1 Hz, 0.6 H), 5.01 (d, J = 6.6 Hz, 0.4 H), 4.35-4.16 (m, 2 H), 3.68-3.60 (m,
2 H), 3.53-3.46 (m, 1 H), 3.27-3.21 (m, 1 H), 2.99-2.90 (m, 0.6 H), 2.76 (d, J
= 5.4 Hz, 1 H), 2.60-2.53 (m, 1 H), 2.47-2.38 (m, 6.4 H), 2.34-2.26 (m, 1 H),
2.25-2.15 (m, 1 H), 2.06 (dd, J = 14.2および4.9 Hz, 1 H),
1.98 (s, 3 H), 1.87-1.72 (m, 3 H), 1.71-1.58 (m, 4 H), 1.51-1.43 (m, 1 H), 1.24
(d, J = 6.4 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 0.94 (d, J = 7.3 Hz, 3 H).

【0543】

（実施例Ａ＃６３）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−（｛ｔｒａｎｓ−３−［（１Ｈ−イミダゾール−１−イルカルボニル）アミノ］シクロブチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１７８）の調製。

【0544】

【化118】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−（｛ｔｒａｎｓ−３−［（１Ｈ−イミダゾール−１−イルカルボニル）アミノ］シクロブチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１７８）の合成。＃Ｂ７３（１５．３ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（０．５ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８．８μＬ、０．０５ｍｍｏｌ、２当量）およびカルボニルジイミダゾール（４．９ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、反応物を２５分間撹拌した。反応物をジクロロメタンで希釈し、水で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、ＤＭＳＯ（０．８ｍＬ）で希釈し、濃縮して、ジクロロメタンを除去した。所望の粗製物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１７８を白色固体として得た。収量：３．２ｍｇ、０．００４５ｍｍｏｌ、１８％。LCMS (プロトコルD): m/z 698.6 [M+H]⁺, 保持時間= 0.68分. ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆)
δ 8.67 (d, J = 6.9 Hz, 1 H), 8.37 (d, J = 7.1 Hz, 1 H),
8.24 (s, 1 H), 7.78 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 7.70-7.67 (m, 1 H), 7.02 (s, 1 H),
6.40-6.27 (m, 2 H), 6.10 (dd, 11.6および1.5 Hz, 1 H), 5.87
(dd, J = 11.6および7.3 Hz, 1 H), 5.60 (dd, J = 15.7および5.6 Hz, 1 H), 5.52-5.45 (m, 1 H), 5.01 (d, J = 5.4 Hz, 1 H),
4.43-4.34 (m, 1 H), 4.33-4.21 (m, 2 H), 3.67-3.54 (m, 2 H), 3.48-3.43 (m, 1 H),
3.30-3.26 (m, 1 H), 2.78 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.60-2.54 (m, 2 H), 2.39-2.13
(m, 7 H), 1.98 (s, 3 H), 1.83-1.74 (m, 3 H), 1.69 (s, 3 H), 1.65-1.53 (m, 3 H),
1.25 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 1.04 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 0.93 (d, J = 7.3 Hz, 3
H).

【0545】

（実施例Ａ＃６４）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（テトラヒドロピリダジン−１（２Ｈ）−イル）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１７９）の調製。

【0546】

【化119】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（テトラヒドロピリダジン−１（２Ｈ）−イル）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ１７９）の合成。＃Ｂ１（１８．１ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．６ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５１．１μＬ、０．２９ｍｍｏｌ、１０当量）およびヘキサヒドロピリダジン二塩酸塩（１８．５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、４当量）を加え、反応物を３０分間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１７９を白色固体として得た。収量：１０．７ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、６１％。LCMS (プロトコルD): m/z 604.6 [M+H]⁺, 保持時間= 0.80分. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆)
δ 7.79 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 6.42-6.27 (m, 2 H), 6.11
(d, J = 11.7 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.7および7.4 Hz, 1
H), 5.61 (dd, J = 16.0および5.9 Hz, 1 H), 5.55-5.47 (m, 1
H), 4.92 (d, J = 6.2 Hz, 1 H), 4.76 (見かけt, J = 7.0 Hz,
1 H), 4.34-4.18 (m, 2 H), 3.70-3.60 (m, 2 H), 3.54-3.40 (m, 3 H), 3.27-3.21 (m,
1 H), 3.03 (dd, J = 15.2および7.4 Hz, 1 H), 2.81-2.70 (m,
3 H), 2.55 (d, J = 5.5 Hz, 1 H), 2.33-2.15 (m, 2 H), 1.98 (s, 3 H), 1.85-1.74
(m, 3 H), 1.71-1.56 (m, 5 H), 1.55-1.48 (m, 4 H), 1.25 (d, J = 6.2 Hz, 3 H),
1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.4 Hz, 3 H).

【0547】

（実施例Ａ＃６５）
Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［（｛［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）メチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ−５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１８０）の調製。

【0548】

【化120】

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ステップ１。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（９，９−ジメチル−３，７−ジオキソ−２，８−ジオキサ−４，６−ジアザデカ−１−イル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１８１）の合成。ｔｅｒｔ−ブチルアミノメチルカルバメート塩酸塩（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９８０、４５、１７０３、３２．９ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、１当量）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４７μＬ、０．２７ｍｍｏｌ、３当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中溶液を、０℃で＃Ｂ４５（１６１．５ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中溶液に滴下添加した。４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ、０．１当量）を加え、得られた溶液を室温で１時間撹拌した。反応混合物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルで希釈し、濾過した。濾過ケーキを分取−ＨＰＬＣにより精製して、＃Ｂ１８１を白色固体として得た。収量：２０ｍｇ、０．０００２３ｍｍｏｌ、１３％。¹H NMR (400 MHz, MeOD-d₄) δ 7.82 (d, 2 H), 7.67 (d, 2H), 7.58 (d, 2 H), 7.42 (m, 6 H), 5.04
(br, 3 H), 4.63 (s, 4 H), 4.52 (m, 5 H), 4.36 (m, 2 H), 3.20 (m, 4 H), 2.32 (m,
2 H), 2.10 (m, 1H), 1.90 (m, 1 H), 1.77 (m, 1 H), 1.65 (m, 4 H), 1.44 (m, 7 H),
1.35 (m, 3 H), 0.98 (m, 6 H).

【0549】

ステップ２。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（アミノメチル）カルバモイル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミドトリフルオロ酢酸塩（＃Ｂ１８２）の合成。＃Ｂ１８１（２０ｍｇ、０．０００２３ｍｍｏｌ）に、予め冷却したトリフルオロ酢酸（１．３ｍＬ）を０℃で加え、反応物を１０分間撹拌した。反応物を濃縮し、アセトニトリルに溶解し、再度３回濃縮して＃Ｂ１８２をゴム状物として得、これを更には精製せずに次のステップに使用した：収量：２５ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ、１００％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ７８７．６［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．７５分。

【0550】

ステップ３。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［（｛［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）メチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１８３）の合成。＃ＮＰ２（１４．５ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１９．７μＬ、０．１１ｍｍｏｌ、４当量）およびＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（１２ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ、１．１当量）を加えた。ＤＭＦ（０．６ｍＬ）中の＃Ｂ１８２（２５．２ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ、１当量）を加え、反応物を４５分間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１８３を白色固体として得た。収量：９．８ｍｇ、０．００７６ｍｍｏｌ、２７％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１２８８．９４［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９４分。

【0551】

ステップ４。Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［（｛［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）メチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド酢酸塩（＃Ｂ１８４）の合成。化合物＃Ｂ４７の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１８３（１１．９ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピペリジン１５．３ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ、２０．０当量）から、標題化合物を収率７５％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１０６６．８［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．７３分。

【0552】

ステップ５。Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［（｛［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）メチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ−５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１８０）の合成。化合物＃Ｂ１５０の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１８４（７．６ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）および１−［（ブロモアセチル）オキシ］ピロリジン−２，５−ジオン２．６ｍｇ（０．０１１ｍｍｏｌ、１．５当量）ならびにＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３．７ｍｇ（０．０２８ｍｍｏｌ、４．０当量）から、標題化合物を収率６１％で調製した。LCMS (プロトコルD): m/z 1188.8 [M+H]⁺,
保持時間= 0.81分. ¹H NMR
(500 MHz, DMSO-d₆) δ 9.98 (s, 1 H),
8.45-8.37 (m, 1 H), 8.27-8.20 (m, 1 H), 8.14-8.05 (m, 1 H), 7.85-7.73 (m, 2 H),
7.61-7.55 (m, 2 H), 7.30-7.24 (m, 2 H), 6.40-6.32 (m, 1 H), 6.25 (d, J = 16.1
Hz, 1 H), 6.10 (dd, J = 11.5および1.2 Hz, 1 H), 6.01-5.93
(m, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.7および7.6 Hz, 1 H), 5.60 (dd,
J = 15.6および5.4 Hz, 1 H), 5.56-5.49 (m, 1 H), 5.41 (s, 2
H), 5.02 (s, 2 H), 4.56-4.50 (m, 1 H), 4.42-4.23 (m, 3 H), 4.22-4.16 (m, 1 H),
3.81 (s, 2 H), 3.69-3.60 (m, 3 H), 3.52-3.45 (m, 2 H), 3.09-2.89 (m, 5 H),
2.66-2.53 (m, 3 H), 2.34-2.09 (m, 6 H), 2.01-1.92 (m, 4 H), 1.85-1.55 (m, 10
H), 1.54-1.31 (m, 7 H), 1.27-1.20 (m, 4 H), 1.06 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 0.94 (d,
J = 7.3 Hz, 3 H), 0.86 (d, J = 6.9 Hz, 3 H), 0.83 (d, J = 6.9 Hz, 3 H).

【0553】

（実施例Ａ＃６６）
Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝−２−メチルヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１８５）の調製。

【0554】

【化121】

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ステップ１。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−メチルヒドラジニル］カルボニル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１８６）の合成。ｔｅｒｔ−ブチル１−メチルヒドラジンカルボキシレート（３４．８ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、１．３当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６４．４μＬ、０．３７ｍｍｏｌ、２当量）および４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（１１．１ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ、０．５当量）を、続いて＃Ｂ４５（１６１ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、１当量）を加え、反応物を撹拌した。４時間後、更にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル１−メチルヒドラジンカルボキシレート（１４ｍｇ、０．０９６ｍｍｏｌ、０．５当量）を加え、反応物を１．５時間撹拌した。反応物をＤＭＳＯ（１ｍＬ）で希釈し、水中０．０２％酢酸（容量／容量）およびアセトニトリル中０．０２％酢酸（容量／容量）（１０％から１００％）で溶出した逆相中圧液体クロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ１８６を白色固体として得た。収量：２６．１ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ、１６％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ８８７．６［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９２分。

【0555】

ステップ２。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（｛［（２−メチルヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミドトリフルオロ酢酸塩（＃Ｂ１８７）の合成。＃Ｂ１８６（１６．５ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ、１当量）に室温でトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、反応物を２０分間撹拌した。反応物を濃縮し、アセトニトリルに溶解し、再度３回濃縮して＃Ｂ１８７をゴム状物として得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ８０９．６［Ｍ＋Ｎａ］^＋、保持時間＝０．８０分。

【0556】

ステップ３。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝−２−メチルヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１８８）の合成。＃ＮＰ１（８．７ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１１．３μＬ、０．０６４ｍｍｏｌ、４当量）およびＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（７．４ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ、１．２当量）を、続いて＃Ｂ１８７（１７．１ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ、１．２当量）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５．７μＬ、０．０３２ｍｍｏｌ、２当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４ｍＬ）中溶液を加え、反応物を３０分間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１８８を白色固体として得た。収量：８．３ｍｇ、０．００６４ｍｍｏｌ、４０％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１３０４．９［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９３分。

【0557】

ステップ４。Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝−２−メチルヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド酢酸塩（＃Ｂ１８９）の合成。化合物＃Ｂ４７の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１８８（８．３ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピペリジン１０．２ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ、２０．０当量）から、標題化合物を収率８０％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１０８２．８１［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．６６分。

【0558】

ステップ５。Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝−２−メチルヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１８５）の合成。化合物＃Ｂ１５０の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１８９（５．５ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ、１当量）、１−［（ブロモアセチル）オキシ］ピロリジン−２，５−ジオン１．７ｍｇ（０．０１１ｍｍｏｌ、１．５当量）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２．６ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ、４．０当量）から、標題化合物を収率６３％で調製した。LCMS (プロトコルD): m/z 1204.86 [M+H]⁺,
保持時間= 0.77分. ¹H NMR
(500 MHz, DMSO-d₆) δ 10.01 (s, 1 H),
9.94-9.81 (m, 1 H), 8.28-8.20 (m, 1 H), 8.13-8.05 (m, 1 H), 7.86-7.76 (m, 2 H),
7.66-7.55 (m, 2 H), 7.37-7.25 (m, 2 H), 6.59-6.46 (m, 1 H), 6.40-6.29 (m, 2 H),
6.10 (dd, J = 11.6および1.5 Hz, 1 H), 6.01-5.95 (m, 1 H),
5.87 (dd, J = 11.6および7.6 Hz, 1 H), 5.65-5.57 (m, 1 H),
5.56-5.50 (m, 1 H), 5.41 (m, 2 H), 5.12-4.96 (m, 4 H), 4.42-4.33 (m, 1 H),
4.32-4.24 (m, 1 H), 4.23-4.16 (m, 2 H), 3.81 (s, 2 H), 3.69-3.60 (m, 2 H),
3.52-3.47 (m, 1 H), 3.07-2.89 (m, 5 H), 2.77-2.73 (m, 1 H), 2.60-2.54 (m, 1 H),
2.34-2.08 (m, 4 H), 2.01-1.92 (m, 4 H), 1.86-1.31 (m, 14 H), 1.27-1.20 (m, 4
H), 1.06 (d, J = 6.1 Hz, 3 H), 0.94 (d, J = 7.3 Hz, 3 H), 0.86 (d, J = 6.9 Hz,
3 H), 0.83 (d, J = 6.6 Hz, 3 H).

【0559】

（実施例Ａ＃６７）
Ｎ−｛７−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−７−オキソヘプタノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１９０）の調製。

【0560】

【化122】

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ステップ１。Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１９１）の合成。＃Ｂ６（１９．４ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２４．７μＬ、０．１４ｍｍｏｌ、４当量）、２，６−ルチジン（１６．３μＬ、０．１４ｍｍｏｌ、４当量）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（４．３ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ、１当量）およびＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（｛［（４−ニトロフェノキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（４０．６ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ、１．５当量）を加え、反応物を２．５時間撹拌した。更にＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（｛［（４−ニトロフェノキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（１３．５ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、０．５当量）を加え、反応物を更に１時間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１９１を白色固体として得た。収量：９．４ｍｇ、０．００８１ｍｍｏｌ、２３％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１１７７．８［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９０分。

【0561】

ステップ２。Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド酢酸塩（＃Ｂ１９２）の合成。化合物＃Ｂ４７の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ１９１（９．４ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピペリジン１３．６ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ、２０．０当量）から、標題化合物を収率５６％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ９５５．８［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．６５分。

【0562】

ステップ３。Ｎ−｛７−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−７−オキソヘプタノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ１９０）の合成。＃Ｂ１９２（４．５ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．３ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３．５μＬ、０．０２ｍｍｏｌ、５当量）を、続いて１，１’−［（１，７−ジオキソヘプタン−１，７−ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン−２，５−ジオン（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００６、１２８、２８０２においてと同様に調製した、８．９ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ、６．２当量）を加え、反応物を３５分間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１９０を白色固体として得た。収量：１．６５ｍｇ、０．００１４ｍｍｏｌ、３４％。LCMS (プロトコルD): m/z 1194.80 [M+H]⁺,
保持時間= 0.75分. ¹H NMR
(500 MHz, CD₃CN) δ 9.06 (s, 1 H), 8.17 (s, 1
H), 7.71-7.63 (m, 2 H), 7.35-7.25 (m, 2 H), 7.19 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.73 (d,
J = 6.6 Hz, 1 H), 6.47 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 6.41-6.30 (m, 2 H), 5.96-5.85 (m,
2 H), 5.67-5.50 (m, 2 H), 5.33-5.24 (m, 1 H), 5.08-4.99 (m, 2 H), 4.74 (s, 1
H), 4.57-4.48 (m, 1 H), 4.39-4.25 (m, 2 H), 4.15-4.08 (m, 1 H), 3.82-3.75 (m, 1
H), 3.67-3.59 (m, 1 H), 3.55-3.47 (m, 1 H), 3.35-3.20 (m, 2 H), 3.12-2.99 (m, 2
H), 2.82-2.73 (m, 5 H), 2.66-2.52 (m, 6 H), 2.46-2.38 (m, 2 H), 2.36-2.20 (m, 4
H), 1.98 (s, 3 H), 1.77-1.57 (m, 11 H), 1.53-1.36 (m, 6 H), 1.30 (d, J = 6.6
Hz, 3 H), 1.06 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 1.00-0.91 (m, 9 H).

【0563】

（実施例Ａ＃６８）
Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−［２−（３−｛［（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イル］オキシ｝−３−オキソプロピル）フェニル］−Ｌ−アラニンアミド（＃Ｂ１９３）の調製。

【0564】

【化123】

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ステップ１。６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサン酸（＃Ｂ１９４）の合成。６−アミノヘキサン酸（１４．２ｇ、０．１１ｍｏｌ、１当量））を、０℃で水（３０ｍＬ）中のＫＯＨ（６．２ｇ、０．１１ｍｏｌ、１当量）に加えた。ブロモアセチルブロミド（２６．１ｇ、０．１３ｍｏｌ、１．２当量）を滴下添加し、その間炭酸カリウム溶液（２．８Ｎ）を滴下添加してｐＨ＞７．８に調節した。添加後、溶液を０℃で１時間撹拌した。反応混合物を０．５Ｍ ＨＣｌにより酸性化してｐＨを１に調節し、酢酸エチルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、真空で濃縮した。残留物をジクロロメタン：メタノール５０：１で溶出したシリカカラムクロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ１９４（１０．２ｇ、３８％）を白色固体として得た。

【0565】

ステップ２。ペンタフルオロフェニル６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノエート（＃Ｂ１９５）の合成。＃Ｂ１９４（８ｇ、３１．７ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（４００ｍＬ）中溶液に、０℃でペンタフルオロフェニルトリフルオロアセテート（１３．３ｇ、４５．７ｍｍｏｌ、１．４５当量）およびピリジン（１０ｇ、１２７ｍｍｏｌ、４当量）を加えた。反応混合物を０℃で１０分間撹拌した。反応混合物を０．５Ｍ ＨＣｌで洗浄し、真空で濃縮した。残留物を酢酸エチル（ＰＥ中４９．２％）で溶出したフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ１９５（９．５ｇ、７１．７％）を白色固体として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.53 (br, 1 H), 3.89 (s, 2 H), 3.35 (m, 2 H), 2.70 (m, 2 H), 1.83
(m, 2 H), 1.64 (m, 2 H), 1.48 (m, 2 H).

【0566】

ステップ３。メチル（２Ｅ）−３−（２−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニル］アミノ｝フェニル）プロパ−２−エノエート（＃Ｂ１９６）の合成。メチル（２Ｅ）−３−（２−アミノフェニル）プロパ−２−エノエート（１４ｇ、７９．１ｍｍｏｌ、１当量）、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニン（２２．４ｇ、１１９ｍｍｏｌ、１．５当量）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１６．１ｇ、１１９ｍｍｏｌ、１．５当量）、１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（２２．８ｇ、１１９ｍｍｏｌ、１．５当量）および４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（１．９３ｇ、１５．８ｍｍｏｌ、０．２当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６００ｍＬ）中混合物を、５０℃で３日間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（１５００ｍＬ）および水（５００ｍＬ）で希釈した。有機層を分離し、水（３００ｍＬ×２）で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮乾固した。残留物を石油エーテル：酢酸エチル２０：１から５：１で溶出したシリカカラムクロマトグラフィーにより精製して、粗製の＃Ｂ１９６（２１ｇ、７６．４％）を黄色油状物として得、これを更には精製せずに使用した。

【0567】

ステップ４。メチル３−（２−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニル］アミノ｝フェニル）プロパノエート（＃Ｂ１９７）の合成。粗製の＃Ｂ１９６（２１ｇ、６０．３ｍｍｏｌ、１当量）のメタノール（１Ｌ）中溶液に、Ｐｄ／Ｃ（４ｇ）を２０℃で加え、反応混合物を水素（３５ｐｓｉ）下室温で１２時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濃縮乾固して、粗製の＃Ｂ１９７（１９ｇ、９０．５％）を黄色油状物として得、これを更には精製せずに使用した。

【0568】

ステップ５。３−（２−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニル］アミノ｝フェニル）プロパン酸（＃Ｂ１９８）の合成。粗製の＃Ｂ１９７（１９ｇ、５４．２ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（１５０ｍＬ）中溶液に、０℃で水酸化ナトリウム（１１０ｍＬ、２Ｍ）を加え、反応物を５０℃で３時間撹拌した。テトラヒドロフランを真空で除去し、得られた溶液を１Ｍ ＨＣｌによりｐＨ＝３〜４に調節し、酢酸エチル（１００ｍＬ×３）で抽出した。抽出物をブライン（２０ｍＬ×１）で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮乾固して、粗製の＃Ｂ１９８（１６ｇ、８８．９％）を茶褐色油状物として得た。

【0569】

ステップ３。３−［２−（Ｌ−アラニルアミノ）フェニル］プロパン酸トリフルオロ酢酸塩（＃Ｂ１９９）の合成。＃Ｂ１９８（１６ｇ、４７．５ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（１５０ｍＬ）中溶液に、０℃でＴＦＡ（１００ｍＬ）を加え、反応物を２５℃で１２時間撹拌した。反応混合物を濃縮乾固し、残留物を更には精製せずに次のステップに直接使用した。

【0570】

ステップ４。３−［２−（｛Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル｝アミノ）フェニル］プロパン酸（＃Ｂ２００）の合成。＃Ｂ１９９（５ｇ、２１．１ｍｍｏｌ、１当量）のアセトン（５０ｍＬ）および水（１００ｍＬ）中溶液に、０℃で重炭酸ナトリウム（５．３０ｇ、６３．４ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。次いでアセトン（５０ｍＬ）中の９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルカルボノクロリデート（４．９４ｇ、１９．１ｍｍｏｌ、０．９当量）を０℃で滴下添加した。反応物を１Ｍ ＨＣｌでｐＨ＝３〜４に調節し、水相を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、真空で濃縮し、残留物をメタノール：ジクロロメタン（１．５％〜２％）で溶出したシリカカラムクロマトグラフィーにより精製して粗生成物を得、これを分取−ＨＰＬＣにより更に精製して白色固体を得、これをＳＦＣ−分離により更に精製して、＃Ｂ２００（５６０ｍｇ、５．８％）を白色固体として得た。¹H NMR (400Hz, DMSO-_d6): δ 9.65 (s, 1H), 7.92 (d, 2H), 7.76 (m, 3H), 7.43-7.14 (m, 8H), 4.32
(m, 4H), 2.80 (m, 2H), 2.50 (m, 2H), 1.37 (m, 3H).

【0571】

ステップ５。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イル３−［２−（｛Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル｝アミノ）フェニル］プロパノエート（＃Ｂ２０１）の合成。＃Ｂ１４８（２１．２ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（０．５ｍＬ）中溶液に、室温で４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（３．５ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ、０．６７当量）、＃Ｂ２００（３９．４ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ、２当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．３ｍＬ）中溶液およびＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（２３．２ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ、２．５当量）を加え、反応物を２．５時間撹拌した。更にＤＣＣ（２３ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ、２．５当量）を加え、反応物を更に２時間撹拌した。反応物をＤＭＳＯ（０．７ｍＬ）で希釈し、逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２０１を白色固体として得た。収量：８．６ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ、２１％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ９５４．５７［Ｍ＋Ｎａ］^＋、保持時間＝１．１０分。

【0572】

ステップ６。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イル３−［２−（Ｌ−アラニルアミノ）フェニル］プロパノエート酢酸塩（＃Ｂ２０２）の合成。化合物＃Ｂ４７の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ２０１（１５．１ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピペリジン２７．２ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ、２０．０当量）から、標題化合物を収率７０％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ９５５．８［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．６５分。

【0573】

ステップ７。Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［２−（３−｛［（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イル］オキシ｝−３−オキソプロピル）フェニル］−Ｌ−アラニンアミド（＃Ｂ２０３）の合成。＃Ｂ２０２（９ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８．５μＬ、０．０４８ｍｍｏｌ、４当量）を、続いて２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリネート（１０．５ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、２当量）を加え、反応物を２０分間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２０３を白色固体として得た。収量：７．４ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ、６０％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１０３１．９［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝１．１１分。

【0574】

ステップ８。Ｌ−バリル−Ｎ−［２−（３−｛［（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イル］オキシ｝−３−オキソプロピル）フェニル］−Ｌ−アラニンアミド酢酸塩（＃Ｂ２０４）の合成。化合物＃Ｂ４７の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ２０３（７．４ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピペリジン１１．９ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ、２０．０当量）から、標題化合物を収率８７％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ８０９．９［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．８１分。

【0575】

ステップ９。Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−［２−（３−｛［（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イル］オキシ｝−３−オキソプロピル）フェニル］−Ｌ−アラニンアミド（＃Ｂ１９３）の合成。＃Ｂ２０４（５．３ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６．３μＬ、０．０３６ｍｍｏｌ、６当量）を、続いて＃Ｂ１９５（２．９ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、反応物を１０分間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ１９３を白色固体として得た。収量：４．１ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ、６５％。LCMS (プロトコルD): m/z 1044.9 [M+H]⁺,
保持時間= 0.95分. ¹H NMR
(500 MHz, DMSO-d₆) δ 9.42 (s, 1 H),
8.26-8.19 (m, 1 H), 8.14 (d, J = 6.9 Hz, 1 H), 7.85-7.77 (m, 2 H), 7.30-7.10
(m, 4 H), 6.42-6.33 (m, 1 H), 6.25 (d, J = 15.9 Hz, 1 H), 6.10 (dd, J = 11.7および1.2 Hz, 1 H), 5.83 (dd, J = 11.5および7.3 Hz, 1
H), 5.58 (dd, J = 15.9および5.1 Hz, 1 H), 5.56-5.50 (m, 1
H), 4.55-4.42 (m, 2 H), 4.34-4.26 (m, 1 H), 4.20 (dd, J = 8.8および6.9 Hz, 1 H), 3.81 (s, 2 H), 3.68-3.62 (m, 2 H), 3.60 (s, 3 H),
3.54-3.46 (m, 1 H), 3.07-2.99 (m, 2 H), 2.87-2.56 (m, 7 H), 2.35-2.08 (m, 5 H),
2.02-1.92 (m, 2 H), 1.88-1.61 (m, 8 H), 1.53-1.35 (m, 5 H), 1.33 (d, J = 7.1
Hz, 3 H), 1.28-1.19 (m, 4 H), 1.06 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.3 Hz, 3
H), 0.85 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 0.82 (d, J = 6.6 Hz, 3 H).

【0576】

（実施例Ａ＃６９）
Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝テトラヒドロピリダジン−１（２Ｈ）−イル］カルボニル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２０５）の調製。

【0577】

【化124】

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ステップ１。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−（４−｛［（テトラヒドロピリダジン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）オキシ］メチル｝フェニル）−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２０６）の合成。ヘキサヒドロピリダジン二塩酸塩（１１．１ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４９．３μＬ、０．２８ｍｍｏｌ、４当量）および４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（４．３ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ、０．５当量）を、続いて＃Ｂ４５（６１．６ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ、１当量）を加え、反応物を３０分間撹拌した。反応物を水中０．０２％酢酸（容量／容量）およびアセトニトリル中０．０２％酢酸（容量／容量）（５％から９５％）で溶出した逆相中圧液体クロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ２０６を白色固体として得た。収量：１９．８ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、３４％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ８２７．６３［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．８４分。

【0578】

ステップ２。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝テトラヒドロピリダジン−１（２Ｈ）−イル］カルボニル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２０７）の合成。＃ＮＰ１（１５．５ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ、２当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．１５ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１９．７μＬ、０．１１ｍｍｏｌ、８当量）およびＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（１１．３ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ、２．１当量）を、続いて＃Ｂ２０６（１１．４ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．６ｍＬ）中溶液を加え、反応物を２２時間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２０７を白色固体として得た。収量：４．２ｍｇ、０．００３ｍｍｏｌ、２２％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１３４５．２［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９７分。

【0579】

ステップ３。Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝テトラヒドロピリダジン−１（２Ｈ）−イル］カルボニル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド酢酸塩（＃Ｂ２０８）の合成。化合物＃Ｂ４７の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ２０７（９．８ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピペリジン１１．９ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ、２０．０当量）から、標題化合物を収率６７％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１１２２．９５［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．７４分。

【0580】

ステップ４。Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝テトラヒドロピリダジン−１（２Ｈ）−イル］カルボニル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２０５）の合成。化合物＃Ｂ１５０の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ２０８（５．６ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ、１当量）、１−［（ブロモアセチル）オキシ］ピロリジン−２，５−ジオン１．７ｍｇ（０．００７ｍｍｏｌ、１．５当量）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２．６ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ、４．０当量）から、標題化合物を収率５２％で調製した。LCMS (プロトコルD): m/z 1244.9 [M+H]⁺,
保持時間= 0.83分. ¹H NMR
(500 MHz, DMSO-d₆) δ 10.04 (br s, 1 H), 8.24
(br s, 1 H), 8.13 (br s, 1 H), 7.87-7.77 (m, 2 H), 7.65-7.55 (m, 2 H),
7.36-7.24 (m, 2 H), 6.88-6.77 (m, 1 H), 6.41-6.26 (m, 2 H), 6.10 (d, J = 11.5
Hz, 1 H), 6.04-5.95 (m, 1 H), 5.86 (dd, J = 11.5および7.3
Hz, 1 H), 5.66-5.48 (m, 2 H), 5.42 (br s, 1 H), 5.18-5.06 (m, 1 H), 5.05-4.94
(m, 1 H), 4.39-4.15 (m, 5 H), 4.11-3.98 (m, 1 H), 3.81 (s, 2 H), 3.68-3.60 (m,
2 H), 3.53-3.45 (m, 1 H), 3.28-3.20 (m, 2 H), 3.08-2.89 (m, 4 H), 2.85-2.72 (m,
2 H), 2.34-2.08 (m, 5 H), 2.02-1.92 (m, 4 H), 1.86-1.31 (m, 18 H), 1.28-1.20
(m, 4 H), 1.09-1.03 (m, 3 H), 0.94 (d, J = 7.3 Hz, 3 H), 0.85 (d, J = 6.6 Hz, 3
H), 0.82 (d, J = 6.6 Hz, 3 H).

【0581】

（実施例Ａ＃７０）
（２Ｚ，４Ｓ）−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−ヒドラジニル−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−４−ヒドロキシペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ２０９）の調製。

【0582】

【化125】

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ステップ１。（２Ｚ，４Ｓ）−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−ヒドラジニル−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−４−ヒドロキシペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ２０９）の合成。＃Ｂ４（１３．１ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（０．４ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＣＣ（１１．７ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ、２当量）を加え、反応物を１０分間撹拌した。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（６．３ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ、２当量）を加え、反応物を室温で５時間撹拌した。反応物をアセトニトリルで希釈し、濾過し、濃縮した。残留物をジクロロメタン（０．５ｍＬ）に溶解し、ヒドラジンの溶液（ＴＨＦ中１Ｍ、２７０μＬ、０．２７ｍｍｏｌ、１０当量）を加えた。反応物を１０分間撹拌し、ジメチルスルホキシドで希釈し、濃縮してジクロロメタンを除去し、濾過した。粗製の残留物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２０９を固体として得た。収量：８．１ｍｇ、５９％。LCMS (プロトコルD): m/z 508.6 [M+H]⁺, 保持時間= 0.59分. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆)
δ 9.00 (s, 1 H), 7.76 (d, J = 7.4 Hz, 1 H), 6.29 (d, J
= 15.8 Hz, 1 H) 5.98 (d, J = 11.3 Hz, 1 H), 5.86 (dd, J = 11.3および7.4 Hz, 1 H), 5.60 (dd, J = 15.8および5.5 Hz, 1
H), 5.56-5.48 (m, 1 H), 5.23-5.07 (m, 2 H), 5.06-4.98 (m, 1 H), 4.32-4.09 (m, 3
H), 3.70-3.59 (m, 2 H), 3.55-3.45 (m, 1 H), 3.25-3.19 (m, 1 H), 2.74 (d, J =
5.1 Hz, 1 H), 2.58 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.44 (dd, J = 14.4および8.6 Hz, 1 H), 2.36-2.14 (m, 3 H), 1.93-1.58 (m, 8 H), 1.50-1.42 (m,
1 H), 1.11 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.96 (d, J = 7.0
Hz, 3 H).

【0583】

（実施例Ａ＃７１）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−［（６Ｓ，９Ｓ）−１９−ブロモ−６−メチル−２，５，８，１１，１８−ペンタオキソ−９−（プロパン−２−イル）−３，４，７，１０，１７−ペンタアザノナデカ−１−イル］−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２１０）の調製。

【0584】

【化126】

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ステップ１。９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝カルバメート（＃Ｂ２１１）の合成。６−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）ヘキサン酸（６ｇ、１６．９ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（２５０ｍＬ）中溶液に、０℃でＮ−ヒドロキシスクシンイミド（２．１３ｇ、１８．５ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＤＣＣ（３．５ｇ、１８．５９ｍｍｏｌ、１．１当量）を加え、反応物を２０℃で終夜撹拌した。反応混合物を−２０℃に冷却し、濾過し、濃縮乾固した。残留物をＭＴＢＥ（３００ｍＬ）中で２０分間撹拌し、再度濾過した。濾過ケーキを真空乾固して、＃Ｂ２１１（５．６ｇ、７３％）を白色固体として得た。

【0585】

ステップ２。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリン（＃Ｂ２１２）の合成。Ｌ−バリン（１．５ｇ、１２．８ｍｍｏｌ、１当量）の水（６０ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中溶液に、０℃でＮａＨＣＯ_３（１．３７ｇ、１６．３ｍｍｏｌ、１．３当量）を加えた。次いで＃Ｂ２１１（５．６７ｇ、１２．６ｍｍｏｌ、０．９８当量）のジメトキシエタン（８０ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（８０ｍＬ）中溶液を０〜１０℃で滴下添加し、反応物を２０℃で１８時間撹拌した。反応混合物のｐＨをクエン酸の添加により４に調節し、反応混合物を濃縮した。酢酸エチル（４５０ｍＬ）およびメタノール（５０ｍＬ）を加え、混合物を１０分間撹拌した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮乾固した。残留物をジクロロメタン：メタノール１００：１から８：１で溶出したフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ２１２（２．６ｇ、４５％）を白色固体として得た。

【0586】

ステップ３。２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリネート（＃Ｂ２１３）の合成。＃Ｂ２１２（２ｇ、４．４２ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（６０ｍＬ）中溶液に、０℃でＮ−ヒドロキシスクシンイミド（０．５３ｇ、４．６５ｍｍｏｌ、１．０５当量）およびＤＣＣ（０．８８ｇ、４．６５ｍｍｏｌ、１．０５当量）を加え、反応物を２０℃で終夜撹拌した。反応混合物を−２０℃に冷却し、濾過し、濃縮乾固した。残留物をＭＴＢＥ（３００ｍＬ）中で２０分間撹拌し、濾過した。濾過ケーキを真空乾固して、＃Ｂ２１３（１．９ｇ、７９％）を白色固体として得た。

【0587】

ステップ４。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン（＃Ｂ２１４）の合成。Ｌ−アラニン（０．３２ｇ、３．６ｍｍｏｌ、１．０４当量）の水（１５ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中溶液に、０℃でＮａＨＣＯ_３（０．４４ｇ、５．１９ｍｍｏｌ、１．５当量）を加えた。次いで＃Ｂ２１３（１．９ｇ、３．４６ｍｍｏｌ、１当量）のジメトキシエタン（３０ｍＬ）中溶液を０〜１０℃で滴下添加し、反応物を２０℃で１８時間撹拌した。反応混合物のｐＨをクエン酸の添加により４に調節し、反応混合物を濃縮した。ジクロロメタン（４００ｍＬ）およびメタノール（５０ｍＬ）を加え、混合物を１０分間撹拌した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮乾固した。残留物をジクロロメタン：メタノール１００：１から８：１で溶出したフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して残留物を得、これをメタノール／テトラヒドロフラン（３：１）で３回再結晶して、＃Ｂ２１４（４９０ｍｇ、２７％）を白色固体として得た。¹H NMR (400 MHz, DMSO): 12.48 (b, 1
H), 8.21 (b, 1 H), 7.91 (d, 2 H), 7.77 (d, 1 H), 7.68 (m, 2 H), 7.41 (m, 2 H),
7.33 (m, 2 H), 7.31 (m, 1 H), 4.29 (m, 2 H), 4.18 (m, 3 H), 2.94 (m, 2 H), 2.16
(m, 2 H), 1.93 (m, 1 H), 1.47 (m, 2 H), 1.37 (m, 2 H), 1.25 (m, 3 H), 1.21 (m,
2 H), 0.86 (m, 6 H).

【0588】

ステップ５。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−［（１２Ｓ，１５Ｓ）−１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−１５−メチル−３，１０，１３，１６，１９−ペンタオキソ−１２−（プロパン−２−イル）−２−オキサ−４，１１，１４，１７，１８−ペンタアザイコサン−２０−イル］−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２１５）の合成。＃Ｂ２１４（１１．５ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、１．２当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２．７μＬ、０．０７２ｍｍｏｌ、４当量）およびＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（８．５ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、１．２当量）を、続いて＃Ｂ６（１０ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液を加え、反応物を３５分間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２１５を白色固体として得た。収量：１４．６ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ、７７％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１０５６．０［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９４分。

【0589】

ステップ６。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−｛２−［（２Ｓ）−２−（｛（２Ｓ）−２−［（６−アミノヘキサノイル）アミノ］−３−メチルブタノイル｝アミノ）プロパノイル］ヒドラジニル｝−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート、酢酸塩（＃Ｂ２１６）の合成。化合物＃Ｂ４７の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ２１５（２０．８ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピペリジン３４．１ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ、２０．０当量）から、標題化合物を収率８５％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ８３３．９［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．６５分。

【0590】

ステップ７。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−［（６Ｓ，９Ｓ）−１９−ブロモ−６−メチル−２，５，８，１１，１８−ペンタオキソ−９−（プロパン−２−イル）−３，４，７，１０，１７−ペンタアザノナデカ−１−イル］−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２１０）の合成。化合物＃Ｂ１５０の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ２１６（１５．２ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ、１当量）、１−［（ブロモアセチル）オキシ］ピロリジン−２，５−ジオン６．１ｍｇ（０．０２６ｍｍｏｌ、１．５当量）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン８．９ｍｇ（０．０６８ｍｍｏｌ、４．０当量）から、標題化合物を収率５７％で調製した。LCMS (プロトコルD): m/z 975.68 [M+Na]⁺,
保持時間= 0.76分. ¹H NMR
(500 MHz, DMSO-d₆) δ 9.93-9.80 (m, 2 H),
8.26-8.19 (m, 1 H), 8.14 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.98 (d, J = 7.6 Hz, 1 H),
7.85-7.73 (m, 2 H), 6.56 (br s, 1 H), 6.41-6.26 (m, 2 H), 6.11 (d, J = 11.5 Hz,
1 H), 5.86 (dd, J = 11.7および7.6 Hz, 1 H), 5.61 (dd, J =
15.9および5.6 Hz, 1 H), 5.56-5.48 (m, 1 H), 5.10-5.03 (m,
1 H), 4.39-4.13 (m, 4 H), 3.81 (s, 2 H), 3.69-3.60 (m, 2 H), 3.54-3.45 (m, 1
H), 3.25-3.19 (m, 1 H), 3.09-3.00 (m, 2 H), 2.74 (d, J = 5.0 Hz, 1 H), 2.58 (d,
J = 5.0, 1 H), 2.35-2.25 (m, 2 H), 2.24-2.05 (m, 3 H), 1.98 (s, 3 H), 1.96-1.75
(m, 4 H), 1.73-1.60 (m, 4 H), 1.55-1.33 (m, 5 H), 1.29-1.18 (m, 7 H), 1.07 (d,
J = 6.4 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.3 Hz, 3 H), 0.87-0.77 (m, 6 H).

【0591】

（実施例Ａ＃７２）
（２Ｒ）−２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロピル−２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジンカルボキシレート（＃Ｂ２１７）の調製。

【0592】

【化127】

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ステップ１。メチル（２Ｒ）−２−（アセチルスルファニル）プロパノエート（＃Ｂ２１８）の合成。チオ酢酸カリウム（３．９ｇ、３４．４ｍｍｏｌ、１．２当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６０ｍＬ）中溶液に、室温でＳ−メチル−２−クロロプロパノエート（３．５ｇ、２８．７ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中溶液を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を水（１５０ｍＬ）中に注ぎ入れ、石油エーテル（１００ｍＬ）で３回抽出した。抽出物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、真空で濃縮して、＃Ｂ２１８（４．４ｇ、９４．８％）を淡黄色油状物として得た。

【0593】

ステップ２。（２Ｒ）−２−スルファニルプロパン−１−オール（＃Ｂ２１９）の合成。ＬＡＨ（３．４ｇ、８９．５ｍｍｏｌ、５当量）のテトラヒドロフラン（１１６ｍＬ）中懸濁液に、０℃で＃Ｂ２１８（２．９ｇ、１７．９ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（２９ｍＬ）中溶液を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応物を２Ｎ ＨＣｌ（５０ｍＬ）で注意深くクエンチした。混合物をジクロロメタン（１００ｍＬ）で５回抽出し、抽出物を硫酸ナトリウムで脱水した。溶液を真空で濃縮して約１５０ｍＬにし、溶液を更には精製せずに次のステップに直接使用した。

【0594】

ステップ３。（２Ｒ）−２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロパン−１−オール（＃Ｂ２２０）の合成。アルドリチオール−２（５．９ｇ、２６．８ｍｍｏｌ、１．５当量）および酢酸（１．０７ｇ、１７．９ｍｍｏｌ、１当量）のエタノール（１２０ｍＬ）中溶液に、０℃で＃Ｂ２１９のＴＨＦ中溶液（１５０ｍＬ、約１７．９ｍｍｏｌ、１当量）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を真空で濃縮し、残留物を石油エーテル：酢酸エチル（１０：１から４：１）で溶出したシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して黄色油状物を得、これをＳＦＣにより再度精製して、＃Ｂ２２０（８６０ｍｇ、２４％）を淡黄色油状物として得た。¹H NMR (400Hz, CDCl₃): δ 8.50 (m, 1 H), 7.59 (m, 1 H), 7.40 (d, 1 H), 7.16 (m, 1 H), 5.98
(m, 1 H), 3.70 (m, 1 H), 3.41 (m, 1 H), 3.12 (m, 1 H), 1.31 (d, 3 H).

【0595】

ステップ４。４−ニトロフェニル−（２Ｒ）−２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロピルカルボネート（＃Ｂ２２１）の合成。＃Ｂ２２０（１１１ｍｇ、０．５５４ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（０．９ｍＬ）中溶液に、室温でピリジン（９９．４μＬ、１．２２ｍｍｏｌ、２．２当量）を加え、続いて４−ニトロフェニルクロロホルメート（１４０ｍｇ、０．６６５ｍｍｏｌ、１．２当量）のジクロロメタン（０．９ｍＬ）中溶液を滴下添加し、反応物を終夜撹拌した。反応物をジクロロメタンおよび水で希釈し、２回抽出し、ブラインで洗浄し、合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をジクロロメタンで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ２２１をゴム状物として得た。収量：４５ｍｇ、０．１２３ｍｍｏｌ、２２％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ３６７．２［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９９分。

【0596】

ステップ５。（２Ｒ）−２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロピル−２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジンカルボキシレート（＃Ｂ２１７）の合成。＃Ｂ６（９．８ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．１ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２．７μＬ、０．０７２ｍｍｏｌ、４当量）、２，６−ルチジン（８．４μＬ、０．０７２ｍｍｏｌ、４当量）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２．２ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、１当量）を加え、＃Ｂ２２１（１０ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ、１．５当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．３ｍＬ）中溶液を加え、反応物を５．５時間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２１７を白色固体として得た。収量：５．９ｍｇ、０．００７６ｍｍｏｌ、４２％。LCMS (プロトコルD): m/z 777.51 [M+H]⁺,
保持時間= 0.84分. ¹H NMR
(500 MHz, CD₃CN) δ 8.45-8.38 (m, 1 H), 8.15
(br s, 1 H), 7.84-7.73 (m, 2 H), 7.35 (br s, 1 H), 7.16 (ddd, J = 7.3, 4.9,および1.2 Hz, 1 H), 6.48-6.28 (m, 3 H), 5.97-5.84 (m, 2 H), 5.63 (dd, J =
15.7および5.9 Hz, 1 H), 5.59-5.52 (m, 1 H), 4.40-4.26 (m,
2 H), 4.20-4.04 (m, 2 H), 3.83-3.75 (m, 1 H), 3.69-3.61 (m, 1 H), 3.56-3.49 (m,
1 H), 3.32 (d, J = 4.7 Hz, 1 H), 3.24 (br s, 1 H), 2.79 (d, J = 4.9 Hz, 1 H),
2.65-2.53 (m, 2 H), 2.47-2.38 (m, 1 H), 2.36-2.19 (m, 4 H), 1.97 (s, 3 H),
1.77-1.67 (m, 4 H), 1.66-1.58 (m, 1 H), 1.35-1.26 (m, 6 H), 1.07 (d, J = 6.4
Hz, 3 H), 0.98 (d, J = 7.3 Hz, 3 H).

【0597】

（実施例Ａ＃７３）
Ｎ^２−アセチル−Ｌ−リシル−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−ヒドロキシ−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド、酢酸塩（＃Ｂ２２２）の調製。

【0598】

【化128】

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ステップ１。Ｎ^２−アセチル−Ｎ^６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシン（＃Ｂ２２３）の合成。Ｎ^６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシン（２２．５ｇ、９１．５ｍｍｏｌ、１当量）およびＫ_２ＣＯ_３（６３．１ｇ、０．４５７ｍｏｌ、５当量）のテトラヒドロフラン／水（２００ｍＬ／２００ｍＬ）中混合物に、０℃で塩化アセチル（８．６２ｇ、０．１０９ｍｏｌ、１．２当量）を加え、混合物を室温で４時間撹拌した。混合物を真空で濃縮して、テトラヒドロフランを除去し、水層を２Ｍ ＨＣｌでｐＨ＝１に調節し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で３回抽出した。抽出物をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、真空で濃縮して、＃Ｂ２２３（２３．１ｇ、８７．７％）を黄色油状物として得た。

【0599】

ステップ２。Ｎ^２−アセチル−Ｌ−リシン塩酸塩（＃Ｂ２２４）の合成。＃Ｂ２２３（２３．１ｇ、０．０８０ｍｍｏｌ、１当量）の酢酸エチル（４００ｍＬ）中溶液に、窒素下０℃で酢酸エチル（２５０ｍＬ）中のＨＣｌ（気体）を加えた。混合物を室温で４時間撹拌し、濾過した。固体を酢酸エチルで洗浄し、真空乾固して、＃Ｂ２２４（１８．５ｇ、＞１００％）を白色固体として得、これを更には精製せずに使用した。

【0600】

ステップ３。Ｎ^２−アセチル−Ｎ^６−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−リシン（＃Ｂ２２５）の合成。＃Ｂ２２４（８ｇ、３５．６ｍｍｏｌ、１当量）およびＮａＨＣＯ_３（５．９９ｇ、７１．３ｍｍｏｌ、２当量）のアセトン／水（８０ｍＬ／８０ｍＬ）中混合物に、０℃でＦｍｏｃ−Ｃｌ（９．４１ｇ、３６．３ｍｍｏｌ、１．０２当量）のアセトン（８０ｍＬ）中溶液を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を２Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝３〜４に調節し、酢酸エチル（１００ｍＬ）で３回抽出した。抽出物をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、真空で濃縮して、粗生成物（７ｇ）を黄色油状物として得た。粗生成物にジクロロメタンおよびｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（１００ｍＬ）を加え、懸濁液を３０分間撹拌し、次いで濾過した。濾過ケーキを真空乾固して、＃Ｂ２２５（３．２５ｇ、２２．２％）を白色固体として得た。

【0601】

ステップ４。Ｎ^２−アセチル−Ｎ^６−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−リシル−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２２６）の合成。＃Ｂ２２５（１．０４ｇ、２．５４ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中混合物に、窒素下０℃でＮ−メチルモルホリン（７６９ｍｇ、７．６１ｍｍｏｌ、３当量）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド−ＨＣｌ（６３２ｍｇ、３．３０ｍｍｏｌ、１．３当量）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（４４５ｍｇ、３．３０ｍｍｏｌ、１．３当量）およびＬ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（ＷＯ０４０１０９５７から、１．０１ｇ、２．６６ｍｍｏｌ、１．０５当量）を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。混合物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（３００ｍＬ）中に注ぎ入れ、濾過した。固体をジクロロメタン（５０ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で洗浄し、真空乾固して、＃Ｂ２２６（１．８７ｇ、９５．６％）を白色固体として得た。

【0602】

ステップ５。Ｎ^２−アセチル−Ｎ^６−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−リシル−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（｛［（４−ニトロフェノキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２２７）の合成。＃Ｂ２２６（１．８７ｇ、２．４３ｍｍｏｌ、１当量）およびビス−（４−ニトロフェニル）カルボネート（２．２１ｇ、７．２８ｍｍｏｌ、３当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）中混合物に、窒素下０℃でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３１３ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ、１当量）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。混合物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（５０ｍＬ）中に注ぎ入れ、濾過した。固体（１．９５ｇ）を分取ＨＰＬＣにより精製して、＃Ｂ２２７（５８０ｍｇ、２５．７％）を白色固体として得た。¹H NMR (400Hz, DMSO-d₆): δ 10.1 (s, 1 H), 8.29 (d, 2 H), 8.00 (d, 1 H), 7.86 (d, 1 H), 7.65
(d, 2 H), 7.64 (d, 1 H), 7.61 (m, 4 H), 7.40 (m, 2 H), 7.38 (m, 4 H), 7.30 (m,
3 H), 6.01 (br, 1 H), 5.21 (s, 2 H), 4.35 (br, 1 H), 4.27-4.15 (m, 5 H), 2.96
(m, 4 H), 1.98 (m, 1 H), 1.82 (s, 3 H), 1.65 (br, 3 H), 1.43-1.24 (m, 7 H),
0.83 (m, 6 H).

【0603】

ステップ６。Ｎ^２−アセチル−Ｎ^６−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−リシル−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−ヒドロキシ−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２２８）の合成。＃Ｂ２０９（８．１ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４ｍＬ）中溶液に、室温で２，６−ルチジン（７．５μＬ、０．０６４ｍｍｏｌ、４当量）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１１．３μＬ、０．０６４ｍｍｏｌ、４当量）および４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ、１当量）を、続いて＃Ｂ２２７（１７．８ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、反応物を５時間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２２８を白色固体として得た。収量：５．５ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ、２６％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１３０６．１［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．８１分。

【0604】

ステップ７。Ｎ^２−アセチル−Ｌ−リシル−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−ヒドロキシ−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド、酢酸塩（＃Ｂ２２２）の合成。化合物＃Ｂ４７の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ２２８（９．５ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピペリジン１１．９ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ、２０．０当量）から、標題化合物を収率７９％で調製した。LCMS (プロトコルD): m/z 1084.1 [M+H]⁺,
保持時間= 0.58分. ¹H NMR
(500 MHz, DMSO-d₆) δ 10.10 (s, 1 H),
8.22-8.12 (m, 1 H), 8.03 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.87-7.74 (m, 2 H), 7.64-7.53
(m, 2 H), 7.34-7.18 (m, 2 H), 6.31 (d, J = 15.9 Hz, 1 H), 6.09-6.01 (m, 1 H),
5.98 (d, J = 11.8 Hz, 1 H), 5.86 (dd, J = 11.8および7.1
Hz, 1 H), 5.66-5.56 (m, 1 H), 5.55-5.49 (m, 1 H), 5.44 (br s, 1 H), 5.23-4.91
(m, 3 H), 4.43-4.33 (m, 1 H), 4.30-4.21 (m, 2 H), 4.20-4.12 (m, 1 H), 3.69-3.59
(m, 1 H), 3.53-3.45 (m, 1 H), 3.07-2.88 (m, 2 H), 2.76-2.71 (m, 1 H), 2.61-2.56
(m, 1 H), 2.35-2.14 (m, 4 H), 2.04-1.53 (m, 18 H), 1.52-1.18 (m, 10 H), 1.11
(d, J = 6.4 Hz, 3 H), 1.06 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.3 Hz, 3 H),
0.85 (d, J = 6.9 Hz, 3 H), 0.82 (d, J = 6.9 Hz, 3 H).

【0605】

（実施例Ａ＃７４）
メチル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−ヒドロキシ−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−メトキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ２２９）の調製。

【0606】

【化129】

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ステップ１。メチル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ２３０）の合成。＃Ｂ５５（６６．８ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン中溶液に、０℃で２，６−ルチジン（７１．１μＬ、０．６１ｍｍｏｌ、５当量）を、続いてｔｅｒｔ−ブチル（クロロ）ジメチルシラン（８６．３μＬ、０．３６６ｍｍｏｌ、３当量）を加え、反応物を室温に加温した。１時間後、反応物を０℃に冷却し、ＮａＨＣＯ_３水溶液でクエンチし、ジクロロメタンで３回抽出し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を水中０．０２％酢酸（容量／容量）およびアセトニトリル中０．０２％酢酸（容量／容量）（１０％から１００％）で溶出した逆相中圧液体クロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ２３０をゴム状物として得た。収量：６８ｍｇ、０．００１ｍｍｏｌ、８４％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ６８６．５８［Ｍ＋Ｎａ］^＋、保持時間＝１．１６分。

【0607】

ステップ２。メチル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ２３１）の合成。＃Ｂ２３０（６８ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ、１当量）のメタノール（１ｍＬ）中溶液に、室温でＫ_２ＣＯ_３（３５．２ｍｇ、０．２５５ｍｍｏｌ、２．５当量）を加え、反応物を１時間撹拌した。反応物を濾過し、酢酸エチルで洗浄した。有機層を水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を水中０．０２％酢酸（容量／容量）およびアセトニトリル中０．０２％酢酸（容量／容量）（１０％から１００％）で溶出した逆相中圧液体クロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ２３１を白色固体として得た。収量：３３．２ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ、５２％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ６２２．５５［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝１．０９分。

【0608】

ステップ３。メチル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−メトキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ２３２）の合成。＃Ｂ２３１（２４．７ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、室温でＭｅＩ（３７．５μＬ、０．６ｍｍｏｌ、１５当量）およびＡｇ_２Ｏ（５５．６ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、６当量）を加え、反応物を暗所中２３時間撹拌した。更にＭｅＩ（３８μＬ、０．６ｍｍｏｌ、１５当量）およびＡｇ_２Ｏ（５５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、６当量）を加え、反応物を更に２５時間撹拌した。反応物をセライト上で濾過し、逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２３２を白色固体として得た。収量：９．４ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、３７％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ６３６．７［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝１．１９分。

【0609】

ステップ４。メチル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−ヒドロキシ−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−メトキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ２２９）の合成。＃Ｂ２３２（１２．６ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（０．４ｍＬ）中溶液に、０℃でテトラブチルアンモニウムフルオリド（テトラヒドロフラン中１Ｍ、２０．７μＬ、０．０２ｍｍｏｌ、１当量）を加え、反応物を室温に加温し、１時間撹拌した。更にテトラブチルアンモニウムフルオリド（テトラヒドロフラン中１Ｍ、１０．３ｕＬ、０．０１ｍｍｏｌ、０．５当量）を加え、反応物を４５分間撹拌した。反応物を濃縮し、ＤＭＳＯに溶解し、逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２２９を白色固体として得た。収量：４．９ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、４７％。LCMS (プロトコルD): m/z 522.50 [M+H]⁺,
保持時間= 0.79分. ¹H NMR
(500 MHz, DMSO-d₆) δ 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 1
H), 6.28 (d, J = 15.8 Hz, 1 H), 6.16 (d, J = 11.7 Hz, 1 H), 5.75 (dd, J = 11.7および8.1 Hz, 1 H), 5.58 (dd, J = 15.8および5.1 Hz, 1
H), 5.55-5.47 (m, 1 H), 5.10-4.99 (m, 2 H), 4.31-4.21 (m, 2 H), 3.69-3.62 (m, 2
H), 3.60 (s, 3 H), 3.54-3.47 (m, 1 H), 3.28-3.22 (m, 1 H), 3.14 (s, 3 H), 2.76
(d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.69-2.55 (m, 3 H), 2.35-2.14 (m, 2 H), 1.90-1.75 (m, 3
H), 1.73-1.60 (m, 4 H), 1.57-1.48 (m, 1 H), 1.12 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 1.07 (d,
J = 6.4 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.3 Hz, 3 H).

【0610】

（実施例Ａ＃７５）
Ｎ^２−アセチル−Ｌ−リシル−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド、酢酸塩（＃Ｂ２３３）の調製。

【0611】

【化130】

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ステップ１。Ｎ^２−アセチル−Ｎ^６−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−リシル−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２３４）の合成。＃Ｂ６（２０．５ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．８ｍＬ）中溶液に、室温で２，６−ルチジン（１７．３μＬ、０．１４８ｍｍｏｌ、４当量）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２６μＬ、０．１４８ｍｍｏｌ、４当量）および４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（４．５ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ、１当量）を、続いて＃Ｂ２２７（４５ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ、１．３当量）を加え、反応物を４時間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２３４を白色固体として得た。収量：１８．５ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ、３７％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１３４８．１［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．８８分。

【0612】

ステップ２。Ｎ^２−アセチル−Ｌ−リシル−Ｌ−バリル−Ｎ−［４−（｛［（２−｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝ヒドラジニル）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド、酢酸塩（＃Ｂ２３３）の合成。＃Ｂ２３４（１８．５ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．７ｍＬ）中溶液に、室温でピペリジン（２７．６μＬ、０．２８ｍｍｏｌ、２０当量）を加え、反応物を２０分間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して白色固体を得、これを逆相クロマトグラフィー（方法Ｃ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ＰＦＰ（２）カラム）により更に精製して、＃Ｂ２３３を白色固体として得た。収量：８ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ、５０％。LCMS (プロトコルD): m/z 1125.91 [M+H]⁺,
保持時間= 0.63分. ¹H NMR
(500 MHz, DMSO-d₆) δ 10.11 (s, 1 H), 8.43
(s, 1 H), 8.19-8.11 (m, 1 H), 8.05 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 7.86-7.76 (m, 2 H),
7.64-7.53 (m, 2 H), 7.34-7.18 (m, 2 H), 6.42-6.27 (m, 2 H), 6.16-6.04 (m, 2 H),
5.86 (dd, J = 11.5および7.3 Hz, 1 H), 5.66-5.38 (m, 3 H),
5.12-4.89 (m, 3 H), 4.43-4.33 (m, 1 H), 4.32-4.22 (m, 2 H), 4.20-4.14 (m, 1 H),
3.68-3.59 (m, 1 H), 3.54-3.45 (m, 1 H), 3.07-2.86 (m, 2 H), 2.79-2.72 (m, 1 H),
2.71-2.65 (m, 1 H), 2.61-2.55 (m, 1 H), 2.34-2.14 (m, 4 H), 2.04-1.94 (m, 4 H),
1.92-1.75 (m, 7 H), 1.74-1.54 (m, 8 H), 1.53-1.19 (m, 12 H), 1.06 (d, J = 6.4
Hz, 3 H), 0.94 (d, J = 7.1 Hz, 3 H), 0.86 (d, J = 6.8 Hz, 3 H), 0.82 (d, J =
6.8 Hz, 3 H).

【0613】

（実施例Ａ＃７６）
メチル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−ヒドロキシ−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ２３５）の調製。

【0614】

【化131】

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ステップ１。メチル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−ヒドロキシ−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ２３５）の合成。＃Ｂ５５（６０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、１当量）のメタノール（１ｍＬ）中溶液に、室温でＫ_２ＣＯ_３（３７．７ｍｇ、０．２７３ｍｍｏｌ、２．５当量）を加え、反応物を１時間撹拌した。反応物を濾過し、酢酸エチルで洗浄した。有機層を水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２３５を白色固体として得た。収量：３１．２ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ、５６％。LCMS (プロトコルD): m/z 530.43 [M+Na]⁺,
保持時間= 0.72分. ¹H NMR
(500 MHz, DMSO-d₆) δ 7.78 (d, J = 7.6 Hz, 1
H), 6.28 (d, J = 16.0 Hz, 1 H), 5.98 (d, J = 11.8 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.8および7.6 Hz, 1 H), 5.58 (dd, J = 16.0および5.2 Hz, 1
H), 5.55-5.49 (m, 1 H), 5.23-5.14 (m, 1 H), 5.10 (d, J = 4.7 Hz, 1 H), 5.02 (d,
J = 6.1 Hz, 1 H), 4.31-4.22 (m, 2 H), 3.69-3.62 (m, 2 H), 3.60 (s, 3 H),
3.54-3.47 (m, 1 H), 3.28-3.22 (m, 1 H), 2.76 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.69-2.55
(m, 3 H), 2.35-2.15 (m, 2 H), 1.90-1.73 (m, 3 H), 1.73-1.61 (m, 4 H), 1.57-1.49
(m, 1 H), 1.11 (d, J = 6.5 Hz, 3 H), 1.06 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.96 (d, J =
7.5 Hz, 3 H).

【0615】

（実施例Ａ＃７７）
（２Ｒ）−２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロピル−［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ２３６）の調製。

【0616】

【化132】

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ステップ１。（２Ｒ）−２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロピル−［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ２３６）の合成。＃ＮＰ１（１０．４ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ、１当量）および＃Ｂ２２０（１１．５ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ、３当量）のジクロロメタン（０．３ｍＬ）中溶液に、室温で４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２．３ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ、１当量）およびＮ，Ｎ’−ジ−イソ−プロピルカルボジイミド（８．９μＬ、０．０５７ｍｍｏｌ、３当量）を加え、反応物を７５分間撹拌した。反応物を濃縮し、ＤＭＳＯに溶解し、逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２３６を白色固体として得た。収量：７．６ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、５５％。LCMS (プロトコルD): m/z 719.58 [M+H]⁺,
保持時間= 0.94分. ¹H NMR
(500 MHz, DMSO-d₆) δ 8.46-8.40 (m, 1 H),
7.86-7.74 (m, 3 H), 7.27-7.20 (m, 1 H), 6.41-6.32 (m, 1 H), 6.27 (d, J = 16.1
Hz, 1 H), 6.10 (dd, J = 11.7および1.5 Hz, 1 H), 5.87 (dd,
J = 11.7および7.6 Hz, 1 H), 5.61 (dd, J = 16.1および5.9 Hz, 1 H), 5.52-5.45 (m, 1 H), 5.02 (d, J = 6.1 Hz, 1 H),
4.31-4.20 (m, 2 H), 4.18-4.06 (m, 2 H), 3.68-3.58 (m, 2 H), 3.52-3.44 (m, 1 H),
3.28-3.23 (m, 1 H), 2.76 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 2.70 (dd, J = 15.2および9.3 Hz, 1 H), 2.62-2.53 (m, 2 H), 2.34-2.14 (m, 2 H), 1.98 (s, 3 H),
1.86-1.72 (m, 4 H), 1.70-1.59 (m, 4 H), 1.29-1.21 (m, 6 H), 1.06 (d, J = 6.4
Hz, 3 H), 0.94 (d, J = 7.3 Hz, 3 H).

【0617】

（実施例Ａ＃７８）
Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）メチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２３７）の調製。

【0618】

【化133】

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ステップ１。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）メチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２３８）の合成。＃ＮＰ１（２０．４ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４０．２μＬ、０．２２８ｍｍｏｌ、６当量）およびＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（１９ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ、１．３当量）を、続いて＃Ｂ１８２（３４．２ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．７ｍＬ）中溶液を加え、反応物を４５分間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２３８を白色固体として得た。収量：１６．１ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、３３％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１３０５．３［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９２分。

【0619】

ステップ２。Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）メチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２３９）の合成。化合物＃Ｂ４７の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ２３８（１６．１ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピペリジン２０．４ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ、２０．０当量）から、標題化合物を収率８８％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１０８３．１［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．６７分。

【0620】

ステップ３。Ｎ−｛６−［（ブロモアセチル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）メチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２３７）の合成。化合物＃Ｂ１５０の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ２３９（１１．５ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）、１−［（ブロモアセチル）オキシ］ピロリジン−２，５−ジオン４ｍｇ（０．０１７ｍｍｏｌ、１．５当量）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５．７ｍｇ（０．０４４ｍｍｏｌ、４．０当量）から、標題化合物を収率６２％で調製した。LCMS (プロトコルD): m/z 1203.2 [M+H]⁺,
保持時間= 0.77分. ¹H NMR
(500 MHz, DMSO-d₆) δ 9.99 (s, 1 H),
8.45-8.37 (m, 1 H), 8.28-8.20 (m, 1 H), 8.15-8.05 (m, 1 H), 7.86-7.73 (m, 2 H),
7.62-7.54 (m, 2 H), 7.31-7.22 (m, 2 H), 6.41-6.33 (m, 1 H), 6.30 (d, J = 15.9
Hz, 1 H), 6.11 (dd, J = 11.6および1.5 Hz, 1 H), 6.02-5.94
(m, 1 H), 5.86 (dd, J = 11.6および7.6 Hz, 1 H), 5.60 (dd,
J = 15.9および5.6 Hz, 1 H), 5.56-5.48 (m, 1 H), 5.41 (s, 2
H), 5.04 (d, J = 5.4 Hz, 1 H), 4.95 (s, 2 H), 4.43-4.15 (m, 5 H), 3.81 (s, 2
H), 3.69-3.60 (m, 2 H), 3.53-3.45 (m, 1 H), 3.25-3.18 (m, 1 H), 3.09-2.88 (m, 4
H), 2.73 (d, J = 5.0 Hz, 1 H), 2.57 (d, J = 5.0 Hz, 1 H), 2.34-2.08 (m, 5 H),
2.03-1.91 (m, 4 H), 1.91-1.74 (m, 4 H), 1.73-1.30 (m, 12 H), 1.29-1.18 (m, 4
H), 1.06 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 0.94 (d, J = 7.3 Hz, 3 H), 0.86 (d, J = 6.6 Hz,
3 H), 0.83 (d, J = 6.9 Hz, 3 H).

【0621】

（実施例Ａ＃７９）
メチル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−メトキシ−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−メトキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ２４０）の調製。

【0622】

【化134】

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ステップ１。メチル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−メトキシ−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−メトキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ２４０）の合成。＃Ｂ２３５（２４．２ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、室温でＭｅＩ（４５μＬ、０．７ｍｍｏｌ、１５当量）およびＡｇ_２Ｏ（６６．７ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ、６当量）を加え、反応物を暗所中２３時間撹拌した。更にＭｅＩ（４５μＬ、０．７ｍｍｏｌ、１５当量）およびＡｇ_２Ｏ（６７ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ、６当量）を加え、反応物を更に２４時間撹拌した。反応物をセライト上で濾過し、逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２４０を白色固体として得た。収量：１２．２ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ、４８％。LCMS (プロトコルD): m/z 536.7 [M+H]⁺, 保持時間= 0.90分. ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆)
δ 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 6.36 (d, J = 15.8 Hz, 1
H), 6.16 (d, J = 11.7 Hz, 1 H), 5.75 (dd, J = 11.7および8.1
Hz, 1 H), 5.62-5.50 (m, 2 H), 5.10-4.99 (m, 1 H), 4.58-4.51 (m, 1 H), 4.28-4.18
(m, 1 H), 3.70-3.62 (m, 2 H), 3.60 (s, 3 H), 3.55-3.47 (m, 1 H), 3.32 (s, 3 H),
3.14 (s, 3 H), 2.96-2.91 (m, 1 H), 2.70-2.63 (m, 2 H), 2.58-2.52 (m, 1 H),
2.35-2.16 (m, 2 H), 2.06-1.97 (m, 1 H), 1.88-1.75 (m, 2 H), 1.73-1.60 (m, 4 H),
1.18-1.09 (m, 4 H), 1.07 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 0.96 (d, J = 7.3 Hz, 3 H).

【0623】

（実施例Ａ＃８０）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−［（カルバモイルアミノ）メチル］−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２４１）および（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−｛［（プロピルカルバモイル）アミノ］メチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２４２）の調製。

【0624】

【化135】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−（イソシアナトメチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２４３）の合成。＃ＮＰ１（２５．６ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（１ｍＬ）中溶液に、室温でトリエチルアミン（７．３ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ、１．５当量）を、続いてジフェニルホスホリルアジド（１１．７μＬ、０．０５３ｍｍｏｌ、１．１当量）を加え、反応物を２０時間撹拌した。反応物をジクロロメタンで希釈し、５％ＮａＨＣＯ_３（水溶液）で３回洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、真空で濃縮して、黄色油状物を得た。油状物をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶解し、５０℃に１時間加熱した。反応物を冷却して、＃Ｂ２４３をアセトニトリル中溶液として得、これを更には精製せずに使用した。完全転化と仮定した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ５３３．６［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．８８分。

【0625】

ステップ２。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−［（カルバモイルアミノ）メチル］−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２４１）の合成。＃Ｂ２４３（１２．８ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、１当量）のアセトニトリル（０．５ｍＬ）中溶液に、室温でＮＨ_３（メタノール中７Ｍ、３４．３μＬ、０．２４ｍｍｏｌ、１０当量）を加え、反応物を３０分間撹拌した。反応物を濃縮し、ＤＭＳＯで希釈し、逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２４１を白色固体として得た。収量：６．７ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、５１％。LCMS (プロトコルD): m/z 550.6 [M+H]⁺, 保持時間= 0.72分. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆)
δ 7.79 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 6.41-6.25 (m, 2 H), 6.11
(d, J = 11.7 Hz, 1 H), 6.02-5.94 (m, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.7および7.4 Hz, 1 H), 5.64 (dd, J = 16.0および5.9 Hz, 1
H), 5.57-5.50 (m, 1 H), 5.46 (br s, 1 H), 5.01 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 4.32-4.23
(m, 1 H), 3.88-3.77 (m, 1 H), 3.70-3.60 (m, 2 H), 3.55-3.46 (m, 1 H), 3.25-3.04
(m, 3 H), 2.75 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.60 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.35-2.13 (m, 2
H), 1.98 (s, 3 H), 1.88-1.59 (m, 8 H), 1.46-1.37 (m, 1 H), 1.25 (d, J = 6.2 Hz,
3 H), 1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.0 Hz, 3 H).

【0626】

ステップ３。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−｛［（プロピルカルバモイル）アミノ］メチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２４２）の合成。＃Ｂ２４３（９ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ、１当量）のアセトニトリル（０．４ｍＬ）中溶液に、室温でｎ−プロピルアミン（７μＬ、０．０８５ｍｍｏｌ、５当量）を加え、反応物を１０分間撹拌した。反応物をＤＭＳＯ（０．７ｍｌ）で希釈し、真空で濃縮し、逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２４２を白色固体として得た。収量：８ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ、８０％。LCMS (プロトコルD): m/z 592.7 [M+H]⁺, 保持時間= 0.80分. ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆)
δ 7.80^〜 (d, J = 8.1
Hz, 1 H), 6.41-6.32 (m, 1 H), 6.28 (d, J = 16.0 Hz, 1 H), 6.11 (d, J = 11.7 Hz,
1 H), 6.00-5.93 (m, 1 H), 5.91-5.81 (m, 2 H), 5.62 (dd, J = 16.0および5.6 Hz, 1 H), 5.54-5.46 (m, 1 H), 5.02 (d, J = 5.6 Hz, 1 H),
4.31-4.25 (m, 1 H), 3.86-3.77 (m, 1 H), 3.69-3.59 (m, 2 H), 3.53-3.45 (m, 1 H),
3.26-3.08 (m, 3 H), 2.97-2.88 (m, 2 H), 2.75 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.60 (d, J =
5.1 Hz, 1 H), 2.35-2.15 (m, 2 H), 1.98 (s, 3 H), 1.88-1.75 (m, 3 H), 1.73-1.60
(m, 4 H), 1.44-1.30 (m, 3 H), 1.25 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.4 Hz, 3
H), 0.95 (d, J = 7.3 Hz, 3 H), 0.82 (見かけt, J = 7.3 Hz,
3 H).

【0627】

（実施例Ａ＃８１）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−｛［（｛［（２Ｒ）−２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］メチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２４４）の調製。

【0628】

【化136】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４−ヒドロキシ−７−｛［（｛［（２Ｒ）−２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］メチル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２４４）の合成。＃Ｂ１４７（８．２ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（０．４ｍＬ）中溶液に、室温でトリエチルアミン（１２．３μＬ、０．０８８ｍｍｏｌ、６．３当量）を、続いてジクロロメタン（０．３ｍＬ）中の＃Ｂ２２１（９．４ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ、１．９当量）を加え、反応物を３０分間撹拌した。４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（１ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ、０．６当量）を加え、反応物を２時間撹拌した。反応物を濃縮し、ＤＭＳＯ（８００ｕＬ）に溶解し、逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２４４を白色固体として得た。収量：４ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ、４０％。LCMS (プロトコルD): m/z 734.33 [M+H]⁺,
保持時間= 0.91分. ¹H NMR
(500 MHz, DMSO-d₆) δ 8.46-8.40 (m, 1 H),
7.85-7.76 (m, 2 H), 7.36-7.29 (m, 1 H), 7.26-7.20 (m, 1 H), 6.41-6.32 (m, 1 H),
6.25 (d, J = 15.8 Hz, 1 H), 6.11 (d, J = 11.6 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.6および7.6 Hz, 1 H), 5.61 (dd, J = 15.8および6.0 Hz, 1
H), 5.50-5.43 (m, 1 H), 4.98 (d, J = 6.2 Hz, 1 H), 4.29-4.22 (m, 1 H),
4.10-4.03 (m, 1 H), 4.01-3.85 (m, 2 H), 3.67-3.57 (m, 2 H), 3.52-3.44 (m, 1 H),
3.28-3.21 (m, 1 H), 3.02-2.93 (m, 1 H), 2.76 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 2.57 (d, J =
5.1 Hz, 1 H), 2.34-2.13 (m, 2 H), 1.98 (s, 3 H), 1.85-1.53 (m, 9 H), 1.28-1.20
(m, 6 H), 1.05 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.93 (d, J = 7.3 Hz, 3 H).

【0629】

（実施例Ａ＃８２）
Ｎ−（２４−ブロモ−２３−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキサ−２２−アザテトラコサン−１−オイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２４５）の調製。

【0630】

【化137】

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ステップ１。ｔｅｒｔ−ブチル１−ヒドロキシ−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘンイコサン−２１−オエート（＃Ｂ２４６）の合成。３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン−１，１７−ジオール（２５ｇ、８８．７ｍｍｏｌ、１当量）、ｔｅｒｔ−ブチルプロパ−２−エノエート（１１．３ｇ、８８．７ｍｍｏｌ、１当量）およびベンジルトリメチルアンモニウムヒドロキシド（２．５ｍＬ）の混合物を、５０℃で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチル：ジクロロメタン（４％〜１０％）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ２４６（９．６３ｇ、２５．７％）を黄色油状物として得た。

【0631】

ステップ２。ｔｅｒｔ−ブチル１−｛［（４−メチルフェニル）スルホニル］オキシ｝−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘンイコサン−２１−オエート（＃Ｂ２４７）の合成。＃Ｂ２４６（９．６３ｇ、２３．５ｍｍｏｌ、１当量）およびトリエチルアミン（３．５６ｇ、３５．２ｍｍｏｌ、１．５当量）のジクロロメタン（１５０ｍＬ）中溶液に、０℃で４−メチルベンゼンスルホニルクロリド（６．６９ｇ、３５．２ｍｍｏｌ、１．５当量）を加え、溶液を室温で終夜撹拌した。反応混合物をＮａＨＣＯ_３水溶液（１５０ｍＬ）で洗浄し、水相を酢酸エチル（２００ｍＬ×３）で再度抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、真空で濃縮し、残留物をメタノール：ジクロロメタン（０．５％〜０．８％）で溶出するシリカカラムクロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ２４７（９．２１ｇ、６９．７％）を黄色油状物として得た。

【0632】

ステップ３。ｔｅｒｔ−ブチル１−アジド−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘンイコサン−２１−オエート（＃Ｂ２４８）の合成。＃Ｂ２４７（１３．０ｇ、２３．０ｍｍｏｌ、１当量）のアセトン／水（１５０ｍＬ／１５０ｍＬ）中溶液に、アジ化ナトリウム（３．２０ｇ、４９．２ｍｍｏｌ、２．１当量）およびヨウ化ナトリウム（６２１ｍｇ、３．４５ｍｍｏｌ、０．１５当量）を加え、反応物を還流状態で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（１５０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を真空で濃縮した。残留物を酢酸エチル：石油エーテル（１２〜３５％）で溶出するシリカカラムクロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ２４８（８．３０ｇ、８３．１％）を黄色油状物として得た。

【0633】

ステップ４。ｔｅｒｔ−ブチル１−アミノ−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘンイコサン−２１−オエート（＃Ｂ２４９）の合成。＃Ｂ２４８（８．３０ｇ、１９．１ｍｍｏｌ、１当量）およびＰｄ／Ｃ（１．０ｇ）のメタノール中懸濁液を、水素風船下室温で終夜撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を真空で濃縮して、＃Ｂ２４９（７．８０ｇ、１００％）を黄色油状物として得、これを次のステップに直接使用した。

【0634】

ステップ５。ｔｅｒｔ−ブチル１−ブロモ−２−オキソ−６，９，１２，１５，１８，２１−ヘキサオキサ−３−アザテトラコサン−２４−オエート（＃Ｂ２５０）の合成。＃Ｂ２４９（５．８０ｇ、１４．１ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（３００ｍＬ）中溶液に、０℃でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５．５０ｇ、４２．６ｍｍｏｌ、３当量）およびブロモアセチルブロミド（４．２４ｇ、２１．３ｍｍｏｌ、１．５当量）を加え、反応物を０℃で１５分間撹拌した。反応混合物を濃縮乾固し、残留物をメタノール：ジクロロメタン（０．５〜０．８％）で溶出するシリカカラムクロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ２５０（５．２０ｇ、６９．３％）を黄色固体として得た。

【0635】

ステップ６。１−ブロモ−２−オキソ−６，９，１２，１５，１８，２１−ヘキサオキサ−３−アザテトラコサン−２４−酸（＃Ｂ２５１）の合成。＃Ｂ２５０（５．２０ｇ、９．８０ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（１００ｍＬ）中溶液に、０℃でトリフルオロ酢酸（１００ｍＬ）を加え、溶液を室温で３時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮して、＃Ｂ２５１（６．００ｇ、１００％）を黄色油状物として得た。

【0636】

ステップ７。ペンタフルオロフェニル１−ブロモ−２−オキソ−６，９，１２，１５，１８，２１−ヘキサオキサ−３−アザテトラコサン−２４−オエート（＃Ｂ２５２）の合成。＃Ｂ２５１（４．６５ｇ、９．８０ｍｍｏｌ、１当量）およびペンタフルオロフェニルトリフルオロアセテート（４．１２ｇ、１４．７ｍｍｏｌ、１．５当量）のジクロロメタン（１５０ｍＬ）中溶液に、０℃でピリジン（４．６５ｇ、９．８０ｍｍｏｌ、１．５当量）を滴下添加し、溶液を３０分間撹拌した。反応混合物を２Ｍ ＨＣｌ（１５０ｍＬ×２）で洗浄し、水相をジクロロメタン（１５０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、真空で濃縮し、残留物をメタノール：ジクロロメタン（１．５〜２％）で溶出するシリカカラムクロマトグラフィーにより精製して黄色油状物を得、これを分取−ＨＰＬＣにより更に精製して、＃Ｂ２５２（１．２０ｇ、１９．１％）を黄色油状物として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.06 (br, 1 H), 3.89 (m, 4 H), 3.69-3.59 (m, 22 H), 3.58 (m, 2 H),
2.96 (m, 2 H).

【0637】

ステップ８。Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２５３）の合成。＃Ｂ５１（１８．５ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．８ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２２．５μＬ、０．１２８ｍｍｏｌ、４当量）を、続いてＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（｛［（４−ニトロフェノキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（２９．１ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、反応物を７０分間撹拌した。更にＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−［４−（｛［（４−ニトロフェノキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）フェニル］−Ｌ−オルニチンアミド（４．９ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ、０．２当量）を加え、反応物を更に３０分間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２５３を白色固体として得た。収量：１３．１ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、３４％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１２０６．２［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９１分。

【0638】

ステップ９。Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２５４）の合成。化合物＃Ｂ４７の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ２５３（１３．１ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピペリジン１８．７ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ、２０．０当量）から、標題化合物を収率７６％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ９８４．０［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．６７分。

【0639】

ステップ１０。Ｎ−（２４−ブロモ−２３−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキサ−２２−アザテトラコサン−１−オイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２４５）の合成。＃Ｂ２５４（８．２ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．１５ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５．７μＬ、０．０３２ｍｍｏｌ、４当量）を、続いてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．３ｍＬ）中の＃Ｂ２５２（７．５ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、１．５当量）を加え、反応物を室温で３０分間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２４５を白色固体として得た。収量：５．４ｍｇ、０．００３８ｍｍｏｌ、４７％。LCMS (プロトコルD): m/z 1440.72 [M+H]⁺,
保持時間= 0.75分. ¹H NMR
(500 MHz, DMSO-d₆) δ 9.98 (s, 1 H),
8.38-8.28 (m, 1 H), 8.17-8.07 (m, 1 H), 7.96-7.90 (m, 1 H), 7.90-7.84 (m, 1 H),
7.83-7.76 (m, 1 H), 7.64-7.54 (m, 2 H), 7.32-7.23 (m, 2 H), 7.21-7.12 (m, 1 H),
6.41-6.32 (m, 1 H), 6.28 (d, J = 15.8 Hz, 1 H), 6.11 (dd, J = 11.7および1.2 Hz, 1 H), 6.02-5.94 (m, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.7および7.6 Hz, 1 H), 5.60 (dd, J = 15.8および5.6 Hz, 1
H), 5.56-5.46 (m, 1 H), 5.41 (s, 2 H), 5.03 (d, J = 5.6 Hz, 1 H), 4.93 (s, 2
H), 4.41-4.34 (m, 1 H), 4.29-4.18 (m, 2 H), 3.85 (s, 2 H), 3.69-3.55 (m, 4 H),
3.54-3.45 (m, 22 H), 3.43-3.39 (m, 2 H), 3.27-3.19 (m, 2 H), 3.16-2.89 (m, 6
H), 2.74 (d, J = 5.2 Hz, 1 H), 2.58 (d, J = 5.2 Hz, 1 H), 2.42-2.14 (m, 5 H),
2.01-1.91 (m, 4 H), 1.88-1.75 (m, 3 H), 1.73-1.53 (m, 6 H), 1.52-1.30 (m, 4 H),
1.25 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 1.06 (d, J = 6.1 Hz, 3 H), 0.94 (d, J = 7.3 Hz, 3
H), 0.86 (d, J = 6.9 Hz, 3 H), 0.83 (d, J = 6.9 Hz, 3 H).

【0640】

（実施例Ａ＃８３）
Ｎ−（２４−ブロモ−２３−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキサ−２２−アザテトラコサン−１−オイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−［２−（３−｛［ｔｒａｎｓ−４−（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−ヒドロキシ−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）シクロヘキシル］オキシ｝−３−オキソプロピル）フェニル］−Ｌ−アラニンアミド（＃Ｂ２５５）の調製。

【0641】

【化138】

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ステップ１。ｔｒａｎｓ−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロヘキシル（２Ｅ）−３−（２−ニトロフェニル）プロパ−２−エノエート（＃Ｂ２５７）の合成。（２Ｅ）−３−（２−ニトロフェニル）プロパ−２−エン酸（８．２６ｇ、５５．８ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（１００ｍＬ）中溶液に、＃Ｂ２５６（１２ｇ、５５．８ｍｍｏｌ、１当量）を、続いて１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド−ＨＣｌ（１０．９ｇ、５５．８ｍｍｏｌ、１当量）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（６８０ｍｇ、５．５８ｍｍｏｌ、０．１当量）およびトリエチルアミン（２３ｍＬ、１６７．７ｍｍｏｌ、３当量）を加え、反応物を室温で１７時間撹拌した。反応物を濃縮し、石油エーテル／酢酸エチル（４：１）で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ２５７（８．８ｇ、４０％）を白色固体として得た。

【0642】

ステップ２。ｔｒａｎｓ−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロヘキシル（２Ｅ）−３−（２−アミノフェニル）プロパ−２−エノエート（＃Ｂ２５８）の合成。＃Ｂ２５７（７．８ｇ、２０ｍｍｏｌ、１当量）の酢酸エチル（１５０ｍＬ）中溶液に、ＳｎＣｌ_２二水和物（２５ｇ、０．１１ｍｏｌ、５．５当量）を加え、反応物を１６時間撹拌した。溶液のｐＨをＮａＨＣＯ_３水溶液でｐＨ＝８〜９に調節し、濾過した。濾過ケーキを酢酸エチル／メタノールで３回洗浄し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、真空で濃縮した。残留物を石油エーテル／酢酸エチル（４：１）および酢酸エチル／メタノール（２０：１）で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ２５８（８５０ｍｇ、１２％）を黄色固体として得た。

【0643】

ステップ３。ｔｒａｎｓ−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロヘキシル３−（２−アミノフェニル）プロパノエート（＃Ｂ２５９）の合成。＃Ｂ２５８（８００ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ、１当量）の酢酸エチル（１０ｍＬ）中溶液に、室温でＰｄ／Ｃ（１ｇ）を加え、混合物を水素（３５ｐｓｉ）下３０分間撹拌した。反応物を濾過し、真空で濃縮して、粗製の＃Ｂ２５９（５００ｍｇ、６３％）を白色固体として得、これを更には精製せずに使用した。

【0644】

ステップ４。Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛２−［３−（｛ｔｒａｎｓ−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロヘキシル｝オキシ）−３−オキソプロピル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド（＃Ｂ２６０）の合成。＃Ｂ２５９（４００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中溶液に、室温でＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニン（４５３ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ、１当量）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（１２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ、０．１当量）およびＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（４６０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、１．１当量）を加え、反応物を３日間撹拌した。反応混合物を水中に注ぎ入れ、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物をジクロロメタン／メタノール（２０：１から１０：１）で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、＃Ｂ２６０（１１０ｍｇ、１３％）を白色固体として得た。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 9.18 (s, 1 H), 7.77 (m, 3 H), 7.61 (d, 2 H), 7.40 (m, 4 H), 7.15
(m, 3 H), 6.77 (m, 1 H), 5.47 (d, 1 H), 4.73 (m, 2 H), 4.45 (m, 4 H), 4.24 (m,
1 H), 3.11 (q, 1 H), 2.85 (m, 2 H), 2.69 (m, 2 H), 2.17 (m, 2 H), 1.97 (m, 4
H), 1.65 (m, 1 H), 1.56 (m, 3 H), 1.43 (m, 11 H), 1.25 (m, 4 H), 0.98 (m, 6 H).

【0645】

ステップ５。Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−（２−｛３−［（ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシル）オキシ］−３−オキソプロピル｝フェニル）−Ｌ−アラニンアミドトリフルオロ酢酸塩（＃Ｂ２６１）の合成。＃Ｂ２６０（３４．８ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ、１．０当量）に、予め冷却したトリフルオロ酢酸（０．８ｍＬ）を０℃で加え、反応物を１０分間撹拌し、そのまま室温に加温した。反応物を濃縮し、アセトニトリルに溶解し、再度３回濃縮して、＃Ｂ２６１をゴム状物として得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。完全に転化したと仮定。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ６５５．８［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．８１分。

【0646】

ステップ６。Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｎ−［２−（３−｛［ｔｒａｎｓ−４−（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−ヒドロキシ−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）シクロヘキシル］オキシ｝−３−オキソプロピル）フェニル］−Ｌ−アラニンアミド（＃Ｂ２６２）の合成。＃Ｂ４（１４．１ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３０．６μＬ、０．１７ｍｍｏｌ、６当量）およびＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（１３．６ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、反応物を５分間撹拌した。＃Ｂ２６１（３５．４ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ、１．６当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．６ｍＬ）中溶液を加え、反応物を３０分間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２６２を白色固体として得た。収量：２２．８ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ、７０％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１１３１．２［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９６分。

【0647】

ステップ７。Ｌ−バリル−Ｎ−［２−（３−｛［ｔｒａｎｓ−４−（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−ヒドロキシ−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）シクロヘキシル］オキシ｝−３−オキソプロピル）フェニル］−Ｌ−アラニンアミド（＃Ｂ２６３）の合成。化合物＃Ｂ４７の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ２６２（２２．８ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピペリジン３４．１ｍｇ（０．４０ｍｍｏｌ、２０．０当量）から、標題化合物を収率８８％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ９０８．５４［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．６４分。

【0648】

ステップ８。Ｎ−（２４−ブロモ−２３−オキソ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキサ−２２−アザテトラコサン−１−オイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−［２−（３−｛［ｔｒａｎｓ−４−（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−８−ヒドロキシ−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）シクロヘキシル］オキシ｝−３−オキソプロピル）フェニル］−Ｌ−アラニンアミド（＃Ｂ２５５）の合成。＃Ｂ２６３（１６．１ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２．７μＬ、０．０７２ｍｍｏｌ、４当量）を、続いてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中の＃Ｂ２５２（９．４ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ、１．９当量）を加え、反応物を室温で１５分間撹拌した。更にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．３ｍＬ）中の＃Ｂ２５２（８．８ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ、０．７５当量）を加え、反応物を更に１５分間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２５５を白色固体として得た。収量：１４．４ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、５９％。LCMS (プロトコルD): m/z 1365.75 [M+H]⁺,
保持時間= 0.78分. ¹H NMR
(500 MHz, DMSO-d₆) δ 9.40 (s, 1 H),
8.37-8.29 (m, 1 H), 8.15 (d, J = 7.1 Hz, 1 H), 7.87 (d, J = 8.8 Hz, 1 H),
7.82-7.74 (m, 2 H), 7.29-7.09 (m, 4 H), 6.28 (d, J = 15.9 Hz, 1 H), 5.98 (d, J
= 10.5 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.7および7.1 Hz, 1 H),
5.60 (dd, J = 15.9および5.6 Hz, 1 H), 5.54-5.46 (m, 1 H),
5.22-5.13 (m, 1 H), 5.11 (d, J = 4.7 Hz, 1 H), 5.02 (d, J = 5.1 Hz, 1 H),
4.61-4.52 (m, 1 H), 4.51-4.42 (m, 1 H), 4.30-4.17 (m, 3 H), 3.85 (s, 2 H),
3.69-3.37 (m, 25 H), 3.27-3.19 (m, 3 H), 2.88-2.72 (m, 3 H), 2.57 (d, J = 5.1
Hz, 1 H), 2.42-2.13 (m, 5 H), 2.01-1.91 (m, 2 H), 1.88-1.59 (m, 10 H),
1.53-1.43 (m, 1 H), 1.40-1.16 (m, 7 H), 1.11 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 1.06 (d, J =
6.4 Hz, 3 H), 0.96 (d, J = 7.3 Hz, 3 H), 0.86 (d, J = 6.9 Hz, 3 H), 0.83 (d, J
= 6.9 Hz, 3 H).

【0649】

（実施例Ａ＃８４）
メチル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−メトキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ２６５）およびメチル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−メトキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ２６４）の調製。

【0650】

【化139】

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ステップ１。メチル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−メトキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ２６５）の合成。＃ＮＰ１（３２．９ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．７ｍＬ）中溶液に、室温でＭｅＩ（１１４μＬ、１．８３ｍｍｏｌ、３０当量）およびＡｇ_２Ｏ（１７０ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ、１２当量）を加え、反応物を暗所中７２時間撹拌した。反応物をセライト上で濾過し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．８ｍＬ）で洗浄し、２部分に分けた。１部分をステップ２に使用し、一方他は逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２６５を白色固体として得た。収量：４．６６ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ、１４％。LCMS (プロトコルD): m/z 564.39 [M+H]⁺,
保持時間= 0.90分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.79 (d, J = 7.8 Hz, 1
H), 6.41-6.31 (m, 2 H), 6.11 (dd, J = 11.7および1.2 Hz, 1
H), 5.87 (dd, J = 11.7および7.8 Hz, 1 H), 5.63-5.51 (m, 2
H), 4.58-4.51 (m, 1 H), 4.28-4.18 (m, 1 H), 3.70-3.57 (m, 5 H), 3.55-3.47 (m, 1
H), 3.33 (s, 3 H), 2.96-2.91 (m, 1 H), 2.71-2.63 (m, 2 H), 2.37-2.15 (m, 2 H),
2.07-1.94 (m, 4 H), 1.88-1.75 (m, 2 H), 1.73-1.60 (m, 4 H), 1.25 (d, J = 6.2
Hz, 3 H), 1.19-1.11 (m, 1 H), 1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.96 (d, J = 7.0 Hz, 3
H).

【0651】

ステップ２。メチル［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−ヒドロキシペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−メトキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセテート（＃Ｂ２６４）の合成。＃Ｂ２６５（２０ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ、１当量）のメタノール（０．６ｍＬ）中溶液に、室温でＫ_２ＣＯ_３（１２．２ｍｇ、０．０８８ｍｍｏｌ、２．５当量）を加え、反応物を４５分間撹拌した。反応物を濾過し、酢酸エチルで洗浄した。有機層を水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２６４を白色固体として得た。収量：４．２ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ、２３％。LCMS (プロトコルD): m/z 522.40 [M+Na]⁺,
保持時間= 0.81分. ¹H NMR
(400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.76 (d, J = 7.8 Hz, 1
H), 6.36 (d, J = 14.4 Hz, 1 H), 5.98 (d, J = 11.7 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.7および7.0 Hz, 1 H), 5.63-5.50 (m, 2 H), 5.22-5.08 (m, 2 H), 4.58-4.52 (m,
1 H), 4.28-4.18 (m, 1 H), 3.70-3.57 (m, 5 H), 3.55-3.47 (m, 1 H), 3.32 (s, 3
H), 2.96-2.91 (m, 1 H), 2.71-2.63 (m, 2 H), 2.37-2.16 (m, 2 H), 2.06-1.96 (m, 1
H), 1.89-1.59 (m, 6 H), 1.20-1.02 (m, 7 H), 0.96 (d, J = 7.4 Hz, 3 H).

【0652】

（実施例Ａ＃８５）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（４−カルバモイルベンジル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２６６）の調製。

【0653】

【化140】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（４−カルバモイルベンジル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２６６）の合成。＃Ｂ１（１８．７ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２１．２μＬ、０．１２ｍｍｏｌ、２当量）および４−（アミノメチル）ベンズアミド塩酸塩（１１．２ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ、２当量）を加え、反応物を１時間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２６６を白色固体として得た。収量：１５．４ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ、７７％。LCMS (プロトコルD): m/z 668.37 [M+Na]⁺,
保持時間= 0.71分. ¹H NMR
(500 MHz, DMSO-d₆) δ 8.50-8.43 (m, 1 H),
7.88 (s, 1 H), 7.82-7.74 (m, 3 H), 7.33-7.25 (m, 3 H), 6.41-6.27 (m, 2 H), 6.10
(d, J = 11.6 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.6および7.5 Hz, 1
H), 5.62 (dd, J = 15.8および5.5 Hz, 1 H), 5.50-5.43 (m, 1
H), 5.04 (d, J = 5.4 Hz, 1 H), 4.43-4.20 (m, 3 H), 3.68-3.59 (m, 2 H),
3.53-3.45 (m, 1 H), 3.29-3.23 (m, 1 H), 2.78 (d, J = 5.3 Hz, 1 H), 2.68-2.56
(m, 2 H), 2.35-2.13 (m, 3 H), 1.98 (s, 3 H), 1.90-1.72 (m, 4 H), 1.70 (s, 3 H),
1.66-1.58 (m, 1 H), 1.57-1.49 (m, 1 H), 1.25 (d, J = 6.5 Hz, 3 H), 1.04 (d, J =
6.2 Hz, 3 H) , 0.93 (d, J = 7.3 Hz, 3 H).

【0654】

（実施例Ａ＃８６）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（４−カルバモイルフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２６７）の調製。

【0655】

【化141】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（４−カルバモイルフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２６７）の合成。＃ＮＰ１（１２．４ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ、１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２０．２μＬ、０．１２ｍｍｏｌ、５当量）およびＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（１０．９ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、反応物を５分間撹拌した。４−アミノベンズアミド（６．３ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ、２当量）を加え、反応物を１時間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２６７を白色固体として得た。収量：４．５ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ、３０％。LCMS (プロトコルD): m/z 654.37 [M+H]⁺,
保持時間= 0.73分. ¹H NMR
(500 MHz, DMSO-d₆) δ 10.21 (s, 1 H),
7.88-7.75 (m, 3 H), 7.70-7.62 (m, 2 H), 7.23 (s, 1 H), 6.41-6.32 (m, 1 H), 6.26
(d, J = 16.1 Hz, 1 H), 6.10 (d, J = 11.6 Hz, 1 H), 5.87 (dd, J = 11.6および7.6 Hz, 1 H), 5.58 (dd, J = 16.1および5.3 Hz, 1
H), 5.43-5.34 (m, 1 H), 5.08 (d, J = 5.4 Hz, 1 H), 4.42-4.29 (m, 2 H),
3.70-3.59 (m, 2 H), 3.48-3.40 (m, 1 H), 3.30-3.26 (m, 1 H), 2.81-2.73 (m, 2 H),
2.62 (d, J = 5 Hz, 1 H), 2.31-2.12 (m, 2 H), 1.98 (s, 3 H), 1.96-1.88 (m, 1 H),
1.87-1.74 (m, 2 H), 1.68 (s, 3 H), 1.63-1.50 (m, 2 H), 1.25 (d, J = 6.5 Hz, 3
H), 1.06 (d, J = 6.2 Hz, 3 H) , 0.93 (d, J = 7.5 Hz, 3 H).

【0656】

（実施例Ａ＃８７）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−［（６Ｓ，９Ｓ）−１９−ブロモ−６−メチル−２，５，８，１１，１８−ペンタオキソ−９−（プロパン−２−イル）−３，４，７，１０，１７−ペンタアザノナデカ−１−イル］−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２６８）の調製。

【0657】

【化142】

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ステップ１。Ｎ−（６−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−（４−｛９−［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３，７−ジオキソ−２−オキサ−４，６，８−トリアザノナ−１−イル｝フェニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２６９）の合成。＃Ｂ２４３（１９．７ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ、１当量）のアセトニトリル（１ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）を加え、アセトニトリルを真空で除去した。この溶液にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３２．６μＬ、０．１９ｍｍｏｌ、５当量）を、続いて＃Ｂ１８２（４０．５ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ、１．２２当量）の溶液を加え、反応物を３０分間撹拌した。更にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３２．６μＬ、０．１９ｍｍｏｌ、５当量）を加え、反応物を更に７０分間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ａ）により精製して、＃Ｂ２６９を白色固体として得た。収量：１２ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ、２５％。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１３２０．４［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．９１分。

【0658】

ステップ２。Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）−Ｌ−バリル−Ｎ−（４−｛９−［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３，７−ジオキソ−２−オキサ−４，６，８−トリアザノナ−１−イル｝フェニル）−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド酢酸塩（＃Ｂ２７０）の合成。化合物＃Ｂ４７の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ２６９（１９．８ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピペリジン２５．５ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ、２０．０当量）から、標題化合物を収率６９％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１０９７．７８［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．６４分。

【0659】

（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−［（６Ｓ，９Ｓ）−１９−ブロモ−６−メチル−２，５，８，１１，１８−ペンタオキソ−９−（プロパン−２−イル）−３，４，７，１０，１７−ペンタアザノナデカ−１−イル］−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２６８）の合成。化合物＃Ｂ１５０の調製にて記載した手順を用いて、＃Ｂ２７０（１２ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、１当量）、１−［（ブロモアセチル）オキシ］ピロリジン−２，５−ジオン３．５ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ、１．５当量）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン５．２ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ、４．０当量）から、標題化合物を収率６４％で調製した。ＬＣＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１２１７．４３［Ｍ＋Ｈ］^＋、保持時間＝０．７５分。¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 9.98 (s, 1 H), 8.27-8.20 (m, 1 H), 8.08 (d, J = 7.3 Hz, 1 H),
7.84-7.73 (m, 2 H), 7.62-7.54 (m, 2 H), 7.30-7.23 (m, 2 H), 6.65-6.57 (m, 1 H),
6.41-6.32 (m, 1 H), 6.29 (d, J = 15.9 Hz, 1 H), 6.16-6.07 (m, 2 H), 6.01-5.93
(m, 1 H), 5.86 (dd, J = 11.5および7.6 Hz, 1 H), 5.63 (dd,
J = 15.9および5.6 Hz, 1 H), 5.55-5.47 (m, 1 H), 5.41 (s, 2
H), 5.01 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 4.94 (s, 1 H), 4.43-4.16 (m, 4 H), 3.81 (s, 2
H), 3.69-3.59 (m, 2 H), 3.54-3.45 (m, 1 H), 3.26-3.10 (m, 3 H), 3.08-2.88 (m, 4
H), 2.74 (d, J = 5.0 Hz, 1 H), 2.60 (d, J = 5.0 Hz, 1 H), 2.35-2.09 (m, 6 H),
2.01-1.92 (m, 4 H), 1.87-1.75 (m, 4 H), 1.74-1.30 (m, 14 H), 1.29-1.19 (m, 4
H), 1.06 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 0.95 (d, J = 7.3 Hz, 3 H), 0.86 (d, J = 6.6 Hz,
3 H), 0.83 (d, J = 6.9 Hz, 3 H).

【0660】

（実施例＃Ａ８８）
（２Ｅ）−４−アミノ−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］ペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ２７１）および（２Ｚ）−４−アミノ−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］ペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ２７２）の調製

【0661】

【化143】

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ステップ１。（２Ｅ）−４−アミノ−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］ペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ２７１）および（２Ｚ）−４−アミノ−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］ペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ２７２）の合成：１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ７．４（３．５７ｍｌ）に、＃Ｂ１２９（７ｍｇ、ＤＭＳＯ（０．２３ｍｌ）中、１当量）、イソプロピルアミン（リン酸塩緩衝液ｐＨ３中で調製した１Ｍ溶液１．４７５ｍｌ、ｐＨ約７の溶液を得た、１００当量）、ピリドキサールホスフェート（リン酸塩緩衝液ｐＨ７．４中５０ｍＭ溶液０．２９５ｍｌ、１当量）およびＡＴＡ−Ｐ２−Ｂ０１酵素調製物（３３ｍｇ、リン酸塩緩衝液ｐＨ７．４（０．３３ｍｌ）中、Ｃｏｄｅｘｉｓ、ロット＃Ｄ１１１３４、アセトフェノンとしてＲ−選択）を加えた。３０℃、２００ｒｐｍで１９時間インキュベーションした後、ｐＨを水酸化ナトリウムで約１２に調節し、反応物を等容量の酢酸エチルで７回抽出した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残留物をアセトニトリル／水１：１（０．２５ｍｌ）に再度懸濁し、濾過し、逆相クロマトグラフィーにより合計１０回（方法Ｉ）精製した。保持時間１０および１３分の画分を集め、水酸化アンモニウムで中和した後、凍結乾燥して、＃Ｂ２７１および＃Ｂ２７２をそれぞれ白色固体として得た。
＃Ｂ２７１；（収量１．６ｍｇ）。ＨＰＬＣ（プロトコルＰ）：保持時間＝６．５分；HRESIMS
m/z 実測値 476.3124 [M+H]⁺ (C₂₆H₄₂N₃O₅の予想値はm/z 476.3124); ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.55 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.32 (br s, 1 H), 6.77 (br s, 1 H), 6.54
(dd, J = 15.6および6.2 Hz, 1 H), 6.27 (d, J = 16.0 Hz, 1
H), 6.21 (dd, J = 15.4および1.2 Hz, 1 H), 5.59 (dd, J =
16.0および5.5 Hz, 1 H), 5.51 (br t, J = 7.0 Hz,1 H), 4.54
(br q, J = 5.5 Hz, 1 H), 4.30 (m, 1 H), 3.69 (m, 1H), 3.64 (m, 1 H), 3.50 (m, 1
H), 3.42 (m, 1 H), 2.62 (m, 2 H), 2.58-2.52 (m, 1H), 2.34-2.27 (m, 2 H),
2.24-2.17 (m, 2 H), 1.85-1.73 (m, 4 H), 1.70 (s, 3 H), 1.64 (m, 2 H), 1.37 (dd,
J = 13.1および6.2 Hz, 1 H), 1.07 (d, J = 6.6 Hz, 3 H),
1.05 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 0.96 (d, J = 7.4 Hz, 3 H).
＃Ｂ２７２（収量１．１ｍｇ）。ＨＰＬＣ（プロトコルＰ）：保持時間＝６．８５分；HRESIMS
m/z 476.3131 [M+H]⁺ (C₂₆H₄₂N₃O₅の予想値はm/z 476.3124); ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.76 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.32 (br s, 1 H), 6.77 (br s, 1 H), 6.27
(d, J = 15.6 Hz, 1 H), 5.88 (br d, J = 11.7, 1 H), 5.73 (dd, J = 11.5および8.4 Hz, 1 H), 5.59 (dd, J = 16.0および5.5 Hz, 1
H), 5.51 (br t, J = 6.6 Hz,1 H), 4.54 (br q, J = 5.5 Hz, 1 H), 4.47 (m, J = 7.0
Hz, 1 H), 4.30 (m, 1 H), 3.65 (m, 2 H), 3.50 (m, 1 H), 2.62 (m, 2 H), 2.55 (m,
1H), 2.34-2.27 (m, 2 H), 2.24-2.18 (m, 2 H), 1.83-1.75 (m, 2 H), 1.70 (s, 3 H),
1.65 (m, 3 H), 1.38 (dd, J = 13.3および6.2 Hz, 1 H), 1.24
(br s, 1 H), 1.07 (d, J = 6.2 Hz, 3 H), 1.02 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 0.95 (d, J =
7.4 Hz, 3 H).

【0662】

（実施例＃Ａ８９）
（２Ｅ）−４−アミノ−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］ペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ２７３）の調製

【0663】

【化144】

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ステップ１。（２Ｅ）−４−アミノ−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｓ，５Ｓ，７Ｓ）−７−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］ペンタ−２−エンアミド（＃Ｂ２７３）の合成。＃Ｂ１２９（２．９ｍｇ、ＤＭＳＯ（０．１ｍｌ）中、１当量）に、ピリドキサールホスフェート（リン酸塩緩衝液ｐＨ７．４中５０ｍＭ溶液０．１２５ｍｌ、１当量）ならびに４５℃、２００ｒｐｍで１時間予めインキュベートしたイソプロピルアミン（リン酸塩緩衝液ｐＨ３中で調製した１Ｍ溶液０．６２５ｍｌ、ｐＨ約７の溶液を得た、１００当量）、ＡＴＡ−２５１酵素調製物（１５ｍｇ、０．１５ｍｌリン酸塩緩衝液ｐＨ７．４中、Ｃｏｄｅｘｉｓ、ロット＃Ｄ１１１４０、アセトフェノンとしてS−選択）および１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ７．４（１．６ｍｌ）の混合物を加えた。３７℃、２００ｒｐｍで２２時間インキュベーションした後、ｐＨを水酸化ナトリウムで約１２に調節し、反応物を等容量の酢酸エチルで７回抽出した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残留物をアセトニトリル／水１：１（０．２５ｍｌ）に再度懸濁し、濾過し、逆相クロマトグラフィーにより合計４回（方法Ｊ）精製した。保持時間９分の画分を集め、水酸化アンモニウムで中和した後、凍結乾燥して、＃Ｂ２７３を白色固体として得た。収量：０．７ｍｇ。ＨＰＬＣ（プロトコルＰ）：保持時間＝６．６分；HRESIMS m/z 476.3126 [M+H]⁺ (C₂₆H₄₂N₃O₅の予想値はm/z 476.3124); ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.57 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.33 (br s, 1 H), 6.78 (br s, 1 H), 6.54
(dd, J = 15.4および6.1 Hz, 1 H), 6.27 (d, J = 15.9 Hz, 1
H), 6.22 (br d, J = 15.4 Hz, 1 H), 5.59 (dd, J = 15.9および5.4 Hz, 1 H), 5.51 (br t, J = 7.1 Hz,1 H), 4.54 (q, J = 5.3 Hz, 1
H), , 4.30 (m, 1 H), 3.69 (m, 1H), 3.64 (dq, J = 6.8および2.2
Hz, 1 H), 3.49 (dt, J = 7および2.2 Hz, 1 H), 3.42 (m, 1
H), 2.62 (m, 2 H), 2.58-2.53 (m, 1H), 2.33-2.28 (m, 1 H), 2.23-2.18 (m, 2 H),
1.85-1.74 (m, 4 H), 1.70 (s, 3 H), 1.64 (m, 2 H), 1.37 (dd, J = 13.3および6.2 Hz, 1 H), 1.07 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 1.05 (d, J = 6.3 Hz, 3 H),
0.96 (d, J = 7.3 Hz, 3 H).

【0664】

（実施例＃Ａ９０）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，５Ｓ）−７−ヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２７４）の調製

【0665】

【化145】

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ステップ１。［（３Ｒ，７Ｓ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−５−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃Ｂ１７４）の合成。＃ＮＰ２（４ｍｇ、０．４ｍＭ、１当量）の５０ｍＭ ＭＯＰＳ緩衝液ｐＨ７．５中水溶液に、α−ケトグルタレート（最終濃度０．８ｍＭ、２当量）、アスコルビン酸ナトリウム（０．０８ｍＭ、０．２当量）、ＮＨ_４Ｆｅ（ＩＩ）ＳＯ_４（０．０４ｍＭ、０．１当量）および実施例＃Ａ６０のステップ１からの組換え型Ｆｒ９Ｐ（１．６μＭ、０．００４当量）を加えた。室温で２時間インキュベーションした後、反応物を酢酸でｐＨを約４〜５に酸性化し、等容量の酢酸エチルで３回抽出した。溶媒を減圧下で蒸発させて＃Ｂ１７４を得、これを更には精製せずに使用した。ＬＣＭＳｍ／ｚ５３６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0666】

ステップ２。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ）−７−ヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２７４）の合成
ＤＭＦ（０．０５Ｍ）中の＃Ｂ１７４（４．０ｍｇ；０．００７５ｍｍｏｌ）に０℃で。これにＨＡＴＵ（１．４当量）を加え、混合物を５分間撹拌した。ＤＩＰＥＡ（１当量）を、続いてＤＭＦ中のプロピルアミン（１．５当量）を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。反応物をアセトニトリルで希釈し、逆相ＨＰＬＣ（プロトコルＫ）により精製した：保持時間＝１０．８分。；生成物を含む画分を直ちに凍結し、凍結乾燥して、＃Ｂ２７４を白色固体として得た（２．４ｍｇ；収率６０％）。LCMS m/z 577 [M+H]+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.99 (dd, J = 5.5, 5.5 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.36 (m,
1H), 6.21 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 6.11 (dd, J = 11.7, 0.9 Hz, 1H), 5.86 (dd, J =
11.6, 7.6 Hz, 1H), 5.53 (dd, 15.7, 6.0 Hz, 1H), 5.47 (m, 1H), 4.65 (m, 1H),
3.65 (m, 1H), 3.64 (m, 1H), 3.48 (m, 1H), 3.05 (m, 1H), 3.01 (m, 1H), 2.47 (m,
2H), 2.40 (m, 2H), 2.29 (m, 1H), 2.19 (m, 1H), 2.11 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.80
(m, 3H), 1.68 (s, 3H), 1.64 (m, 1H), 1.41 (m, 2H), 1.29 (m, 1H), 1.25 (d, J =
6.4 Hz, 3H), 1.17 (m, 1H), 1.07 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.94 (d, J = 7.2 Hz, 3H),
0.84 (dd, J = 7.6, 7.6 Hz, 3H). ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆)
δ 170.0, 169.7, 164.4, 142.6, 133.9, 133.6, 128.4,
127.3, 122.6, 95.9, 79.7, 74.7, 66.8, 67.7, 54.2, 49.2, 46.0, 45.5, 39.8, 39.7,
37.8, 35.0, 31.4, 28.5, 22.0, 19.5, 17.4, 13.9, 12.6, 12.0, 10.9.

【0667】

（実施例＃Ａ９１）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４，７−ジヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２７５）の調製

【0668】

【化146】

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ステップ１。［（３Ｒ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−５，８−ジヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］酢酸（＃Ｂ２７６）の合成：＃ＮＰ１（４ｍｇ、０．４ｍＭ、１当量）の５０ｍＭ ＭＯＰＳ緩衝液ｐＨ７．５中水溶液に、α−ケトグルタレート（最終濃度０．８ｍＭ、２当量）、アスコルビン酸ナトリウム（０．０８ｍＭ、０．２当量）、ＮＨ_４Ｆｅ（ＩＩ）ＳＯ_４（０．０４ｍＭ、０．１当量）および実施例＃Ａ６０のステップ１からの組換え型Ｆｒ９Ｐ（１．２μＭ、０．００３当量）を加えた。室温で１時間３０分インキュベーションした後、反応物を酢酸でｐＨを約４〜５に酸性化し、等容量の酢酸エチルで３回抽出した。溶媒を減圧下で蒸発させ、得られた粗製の＃Ｂ２７６を更には精製せずに使用した。ＬＣＭＳｍ／ｚ５５２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0669】

ステップ２。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−４，７−ジヒドロキシ−７−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２７５）の合成
ＤＭＦ（０．０５Ｍ）中の＃Ｂ２７６（４．３ｍｇ；０．００８０ｍｍｏｌ）に、０℃でＨＡＴＵ（１．４当量）を加え、５分間撹拌した。ＤＩＰＥＡ（１当量）を、続いてＤＭＦ中のプロピルアミン（１．５当量）を加え、反応物を室温で１時間撹拌した。更にＨＡＴＵ（０．７当量）、ＤＩＰＥＡ（１当量）およびプロピルアミン（１当量）を加え、混合物を更に３０分間撹拌した。粗生成物をアセトニトリルで希釈し、逆相ＨＰＬＣ（プロトコルＫ）により精製した：保持時間＝８．６０分。生成物を含む画分を直ちに凍結し、凍結乾燥して、＃Ｂ２７５を白色固体として得た（２．３ｍｇ；収率４９％）。LCMS m/z 593 [M+H]+ ; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆,
多重線, JはHz単位) δ 8.01 (dd, J = 5.6, 5.6 Hz, 1H), 7.81 (d,
J = 8.0 Hz, 1H), 6.36 (m, 1H), 6.24 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 6.11 (dd, J = 12.1
Hz, 1H), 5.88 (dd, J = 11.7, 7.7 Hz, 1H), 5.67 (dd, 16.1, 4.4 Hz, 1H), 5.44 (m,
1H), 4.55 (d, 8.7 Hz, 1H), 4.33 (m, 1H), 3.65 (m, 1H), 3.64 (m, 1H), 3.48 (m,
1H), 3.33 (m, 1H), 3.07 (m, 1H), 3.00 (m, 1H), 2.73 (m, 1H), 2.39 (m, 2H), 2.31
(m, 1H), 2.29 (m, 1H), 2.27 (m, 1H), 2.19 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.80 (m, 2H),
1.69 (s, 3H), 1.64 (m, 1H), 1.49 (m, 1H), 1.41 (m, 2H), 1.25 (d, J = 6.3 Hz,
3H), 1.07 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.95 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.84 (m, 3H). ¹³C
NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 170.4, 169.6,
164.7, 143.4, 135.5, 134.0, 128.9, 126.3, 123.4, 95.7, 80.6, 75.4, 71.4, 68.4
(x2), 56.7, 46.7, 46.2, 45.9, 41.3, 40.6, 35.6, 32.1, 29.1, 22.8, 21.4, 20.2,
18.1, 14.6, 12.8, 11.8.

【0670】

（実施例＃Ａ９２）
Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［ｔｒａｎｓ−４−（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）シクロヘキシル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２７７）の調製

【0671】

【化147】

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ステップ１。Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［ｔｒａｎｓ−４−（｛［（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ）−７−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−８−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］アセチル｝アミノ）シクロヘキシル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ^５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（＃Ｂ２７７）の合成。Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ^５−カルバモイル−Ｎ−｛４−［（｛［（４−ニトロベンジル）オキシ］カルボニル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−オルニチンアミド（ＭａｌＣＶａｌＣｉｔＰＡＢＣ−ＰＮＰ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２００２、１３、８５５〜８６９においてと同様に調製した、１６．５ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＢ７６（１１．９ｍｇ、純度８３％、０．０１９ｍｍｏｌ、１．０当量）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍｌ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３０μＬ）を加えた。得られた混合物を周囲温度で０．５時間撹拌した。反応混合物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ２７７を白色粉体として得た。収量：９．３ｍｇ、４０％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝９．５分（純度９４％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ１２２９．５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0672】

（実施例＃Ａ９３）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（ｔｒａｎｓ−４−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝シクロヘキシル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２７８）の調製

【0673】

【化148】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（ｔｒａｎｓ−４−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝シクロヘキシル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２７８）の合成。６−マレイミドヘキサン酸（２４．２ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、５当量）およびジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、４９．５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、１１当量）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）中溶液を周囲温度で３０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍｌ）中の＃Ｂ７６（１３．０ｍｇ、純度８３％、０．０２１ｍｍｏｌ、１．０当量）を加え、得られた混合物を２時間撹拌した。反応混合物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ２７８を白色粉体として得た。収量：８．６ｍｇ、４９％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝９．６分（純度９６％）。ＬＣＭＳ（プロトコルＭ）：ｍ／ｚ８２４．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0674】

（実施例＃Ａ９４）
（１Ｓ，５Ｒ）−５−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，５−アンヒドロ−１−（カルボキシメチル）−３−Ｃ−（クロロメチル）−２−デオキシ−Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ−ペンチトール（＃ＮＰ５）［ＰＦ−０６７３９２３９］の調製

【0675】

【化149】

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ステップ１。（１Ｓ，５Ｒ）−５−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，５−アンヒドロ−１−（カルボキシメチル）−３−Ｃ−（クロロメチル）−２−デオキシ−Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ−ペンチトール（＃ＮＰ５）の合成。＃ＮＰ１（１０１ｍｇ、純度約７０％、約０．１９ｍｍｏｌ、１当量）の無水テトラヒドロフラン（１．０ｍＬ）中溶液を、塩化リチウム（６１ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ、７当量）の無水酢酸（１．０ｍＬ）中溶液と０℃で混合した。得られた溶液を周囲温度で１．５時間撹拌した。反応混合物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃ＮＰ５を白色粉体として得た。収量：５４．６ｍｇ、約７６％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１０．５分（純度９６％）。LCMS (プロトコルM): m/z 572.5 [M+H]⁺. ¹H
NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 12.00 (br s,
D₂O交換可能), 7.80 (d, J = 8.2, 1H, D₂O交換可能), 6.36 (dq, J = 6.0, 6.0, 1H), 6.22 (br d, J = 15.6, 1H),
6.11 (d, J = 11.7, 1H), 5.87 (dd, J = 11.7, 7.4, 1H), 5.62 (dd, J = 15.6, 5.4,
1H), 5.47 (br dd, J = 7.0, 7.0, 1H), 5.02 (d, J = 7.0, 1H, D₂O交換可能), 4.78 (br s, 1H, D₂O交換可能),
4.27 (m, 1H), 4.09 (dd, 8.1, 6.3, 1H), 3.65 (m, 2H), 3.63 (d, J = 10.9, 1H),
3.50 (m, 1H), 3.46 (d, J = 10.9, 1H), 3.22 (dd, J = 8.6, 7.4, 1H), 2.97 (dd, J
= 15.6, 9.0, 1H), 2.60 (dd, J = 15.6, 5.5, 1H), 2.28 (m, 1H), 2.21 (m, 1H),
1.98 (s, 3H), 1.92 (dd, J = 14.7, 6.6, 1H), 1.80 (m, 3H), 1.70 (s, 3H), 1.65
(m, 2H), 1.25 (d, J = 6.6, 3H), 1.07 (d, J = 6.5, 3H), 0.95 (d, J = 7.0, 3H).

【0676】

（実施例＃Ａ９５）
（１Ｓ，５Ｒ）−５−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，５−アンヒドロ−３−Ｃ−（クロロメチル）−２−デオキシ−１−［２−オキソ−２−（ペンタフルオロフェノキシ）エチル］−Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ−ペンチトール（＃Ｂ２７９）の調製

【0677】

【化150】

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ステップ１。（１Ｓ，５Ｒ）−５−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，５−アンヒドロ−３−Ｃ−（クロロメチル）−２−デオキシ−１−［２−オキソ−２−（ペンタフルオロフェノキシ）エチル］−Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ−ペンチトール（＃Ｂ２７９）の合成。＃ＮＰ５（１８．２ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ、１当量）およびＨＡＴＵ（１６．８ｍｇ）の乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２００ｕＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２０ｕＬ）を加え、溶液を周囲温度で５分間撹拌し、次いでＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５０ｕｌ）中のペンタフルオロフェノール（２５ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ、４当量）と混合した。反応混合物を２０分間撹拌し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ２７９を白色粉体として得た。収量：１５．１ｍｇ、７４％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１４．８分（純度９４％）。LCMS (プロトコルM): m/z 738.3 [M+H]⁺. ¹H
NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 多重線, JはHz単位) δ 7.80 (d, J =
7.8, 1H, D₂O交換可能), 6.36 (dq, J = 6.0,
6.0, 1H), 6.24 (br d, J = 15.6, 1H), 6.11 (d, J = 11.3, 1H), 5.87 (dd, J = 11.3,
7.4, 1H), 5.66 (dd, J = 15.9, 5.5, 1H), 5.44 (br dd, J = 6.6, 6.6, 1H), 5.16
(d, J = 7.0, 1H, D₂O交換可能), 4.97 (br s,
1H, D₂O交換可能), 4.46 (m, 1H), 4.16 (dd,
9.0, 5.8, 1H), 3.70-3.63 (m, 3H), 3.68 (d, J = 10.6, 1H), 3.51 (d, J = 10.9,
1H), 3.49 (m, 1H), 3.27 (dd, J = 9.0, 7.0, 1H), 3.10 (dd, J = 15.6, 4.3, 1H),
2.30 (m, 1H), 2.19 (m, 1H), 2.01 (dd, J = 15.1, 7.0, 1H), 1.97(s, 3H), 1.81 (m,
2H), 1.77 (d, J = 14.8, 1H), 1.70 (s, 3H), 1.64 (m, 1H), 1.25 (d, J = 6.4, 3H),
1.07 (d, J = 6.5, 3H), 0.95 (d, J = 7.0, 3H).

【0678】

（実施例＃Ａ９６）
（１Ｓ，５Ｒ）−５−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，５−アンヒドロ−１−［２−（｛２−［（ブロモアセチル）アミノ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−３−Ｃ−（クロロメチル）−２−デオキシ−Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ−ペンチトール（＃Ｂ２８０）の調製

【0679】

【化151】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−｛２−［（２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝エチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２８１）の合成。＃ＮＰ１（１２２．１ｍｇ、純度約６７％、０．２２ｍｍｏｌ、１．２当量）およびＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、１５１ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ、１．７当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ヒューニッヒ塩基、６０ｕＬ）を加え、得られた溶液を周囲温度で１０分間撹拌した。次いでＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中のＮ−フルオレニルメチルオキシカルボニル−１，２−ジアミノエタン臭化水素酸塩（７３ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ、１当量）を加え、得られた溶液を１０分間撹拌した。反応混合物を濾過し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ｆ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ２８１を白色粉体として得た。収量：１１４．５ｍｇ、収率６４％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１２．７分（純度９９％）。ＥＳＩＭＳ（正）ｍ／ｚ８００．７［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0680】

ステップ２。（１Ｓ，５Ｒ）−５−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，５−アンヒドロ−３−Ｃ−（クロロメチル）−２−デオキシ−１−｛２−［（２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝エチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ−ペンチトール（＃Ｂ２８２）の合成。＃Ｂ２８１（４４．５ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（０．４ｍＬ）中溶液を、塩化リチウム（３０．０ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）の乾燥酢酸（０．２ｍＬ）中溶液と混合した。反応物を周囲温度で１．５時間撹拌し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ｆ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ２８２を白色粉体として得た。収量：４８．０ｍｇ、収率１００％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１６．０分（純度９６％）。ＥＳＩＭＳ（正）ｍ／ｚ８３６．７［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0681】

ステップ３。（１Ｓ，５Ｒ）−５−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１−｛２−［（２−アミノエチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１，５−アンヒドロ−３−Ｃ−（クロロメチル）−２−デオキシ−Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ−ペンチトール（＃Ｂ２８３）の合成。＃Ｂ２８２（４８ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液に、ピペリジン（２０ｕＬ）を加えた。溶液を周囲温度で１時間撹拌し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ｆ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ２８３を白色粉体として得た。収量：２６．４ｍｇ、収率９２％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝６．８分（純度９１％）。ＥＳＩＭＳ（正）ｍ／ｚ６１４．６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0682】

ステップ４。（１Ｓ，５Ｒ）−５−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，５−アンヒドロ−１−［２−（｛２−［（ブロモアセチル）アミノ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−３−Ｃ−（クロロメチル）−２−デオキシ−Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ−ペンチトール（＃Ｂ２８０）の合成。＃Ｂ２８３（９．１ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）および１−［（ブロモアセチル）オキシ］ピロリジン−２，５−ジオン（６．２ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍｌ）中溶液に、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（ヒューニッヒ塩基、５．０ｕＬ）を加えた。得られた溶液を周囲温度で３０分間撹拌し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ｆ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ２８０を白色粉体として得た。収量：５．８ｍｇ、収率５３％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１０．０分（純度９９％）。ＥＳＩＭＳ（正）ｍ／ｚ７３６．６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0683】

（実施例＃Ａ９７）
（１Ｓ，５Ｒ）−５−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，５−アンヒドロ−３−Ｃ−（クロロメチル）−２−デオキシ−１−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ−ペンチトール（＃Ｂ２８４）の調製

【0684】

【化152】

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ステップ１。（１Ｓ，５Ｒ）−５−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，５−アンヒドロ−３−Ｃ−（クロロメチル）−２−デオキシ−１−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ−ペンチトール（＃Ｂ２８４）の合成。＃ＮＰ５（６．２ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、１当量）および炭酸カリウム（２０．０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ、１２当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中懸濁液に、ヨウ化メチル（２０ｕＬ、０．３２ｍｍｏｌ、２９当量）を加えた。得られた混合物を０℃で３０分間撹拌した。固体を濾過により除去し、濾液を逆相クロマトグラフィー（方法Ｆ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ２８４を白色粉体として得た。収量：５．６ｍｇ、収率９０％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１２．７分（純度９７％）。ＥＳＩＭＳ（正）ｍ／ｚ５８６．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0685】

（実施例＃Ａ９８）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（２Ｓ，４Ｓ，６Ｓ）−４−（クロロメチル）−４−ヒドロキシ−６−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２８５）の調製

【0686】

【化153】

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ステップ１。［（２Ｓ，４Ｓ，６Ｓ）−６−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−４−（クロロメチル）−４−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］酢酸（＃ＮＰ８）の合成。＃ＮＰ２（７０．４ｍｇ、純度９０％、０．１９ｍｍｏｌ、１当量）の無水テトラヒドロフラン（１．０ｍＬ）中溶液を、塩化リチウム（５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、６当量）の乾燥酢酸（１．０ｍＬ）中溶液と０℃で混合した。溶液を周囲温度で１．５時間次いで４０℃で２時間撹拌した。反応物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｆ^＊）を用いて精製して、＃ＮＰ８を白色粉体として得た。収量：５２．０ｍｇ、収率７２％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１１．４分（純度９８％）。ＥＳＩＭＳ（正）ｍ／ｚ５５６．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0687】

ステップ２。（２Ｓ，３Ｚ）−５−（｛（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−｛（２Ｓ，４Ｓ，６Ｓ）−４−（クロロメチル）−４−ヒドロキシ−６−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル｝−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル］−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル｝アミノ）−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２８５）の合成。＃ＮＰ８（５．０ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ、１当量）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、５．２ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ、１．５当量）およびジイソプロピルエチルアミン（ヒューニッヒ塩基、５．０ｕＬ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍｌ）中溶液を、周囲温度で１０分間撹拌した。次いで無溶媒でプロピルアミン（５．０ｕＬ、０．０８、９当量）を加え、溶液を１時間撹拌し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ｆ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ２８５を白色粉体として得た。収量：４．２ｍｇ、収率９０％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１１．８分（純度９５％）。ＥＳＩＭＳ（正）ｍ／ｚ５９７．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0688】

（実施例＃Ａ９９）
（１Ｓ，５Ｒ）−５−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，５−アンヒドロ−３−Ｃ−（クロロメチル）−２−デオキシ−１−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ−ペンチトール（＃Ｂ２８６）の調製

【0689】

【化154】

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ステップ１。（１Ｓ，５Ｒ）−５−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，５−アンヒドロ−３−Ｃ−（クロロメチル）−２−デオキシ−１−［２−オキソ−２−（プロピルアミノ）エチル］−Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ−ペンチトール（＃Ｂ２８６）の合成。＃Ｂ６３（１８．４ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ、１当量）の無水テトラヒドロフラン（１．０ｍｌ）中溶液を、塩化ナトリウム（５０．０ｍｇ）の乾燥酢酸（０．５ｍＬ）中懸濁液と混合した。次いで溶液を５０℃で５時間撹拌し、逆相クロマトグラフィー（方法Ｆ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ２８６を白色粉体として得た。収量：１７．５ｍｇ、収率９４％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１０．９分（純度９７％）。ＥＳＩＭＳ（正）ｍ／ｚ６１３．６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0690】

（実施例＃Ａ１００）
（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−｛［ｔｒａｎｓ−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）シクロブチル］アミノ｝−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２８７）および（１Ｓ，５Ｒ）−５−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，５−アンヒドロ−３−Ｃ−（クロロメチル）−２−デオキシ−１−（２−｛［ｔｒａｎｓ−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）シクロブチル］アミノ｝−２−オキソエチル）−Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ−ペンチトール（＃Ｂ２８８）の調製

【0691】

【化155】

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ステップ１。（２Ｓ，３Ｚ）−５−｛［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−｛（２Ｅ，４Ｅ）−５−［（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−７−（２−｛［ｔｒａｎｓ−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）シクロブチル］アミノ｝−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシ−１，６−ジオキサスピロ［２．５］オクタ−５−イル］−３−メチルペンタ−２，４−ジエン−１−イル｝−２，５−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］アミノ｝−５−オキソペンタ−３−エン−２−イルアセテート（＃Ｂ２８７）の合成。＃Ｂ７３（３２．５ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、１当量）の１：２：３ジメチルスルホキシド／飽和重炭酸ナトリウム／水（合計６ｍＬ）中溶液に、Ｎ−メトキシカルボニルマレイミド（４５ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ、６当量）を加えた。次いで懸濁液を℃で１時間撹拌した。生成物を酢酸エチル（１０ｍＬ）で抽出した。有機層を無水塩化マグネシウムで脱水し、次いで減圧下で蒸発乾固した。残留物をジクロロメタン（２ｍＬ）に再度溶解し、トリエチルアミン（９０ｕＬ）を加え、次いで４０℃で２時間撹拌した。反応混合物を酢酸で中和し、逆相クロマトグラフィー（方法Ｆ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ２８７を白色粉体として得た。収量：４．３ｍｇ、収率１１％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１０．１分（純度９７％）。ＥＳＩＭＳ（正）ｍ／ｚ６８４．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0692】

ステップ２。（１Ｓ，５Ｒ）−５−｛（１Ｅ，３Ｅ）−５−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−｛［（２Ｚ，４Ｓ）−４−（アセチルオキシ）ペンタ−２−エノイル］アミノ｝−３，６−ジメチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］−３−メチルペンタ−１，３−ジエン−１−イル｝−１，５−アンヒドロ−３−Ｃ−（クロロメチル）−２−デオキシ−１−（２−｛［ｔｒａｎｓ−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）シクロブチル］アミノ｝−２−オキソエチル）−Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ−ペンチトール（＃Ｂ２８８）の合成。＃Ｂ２８７（２．７ｍｇ）の無水テトラヒドロフラン（２００ｕＬ）中溶液を、塩化リチウム（１３ｍｇ）の乾燥酢酸（２００ｕＬ）中溶液と０℃で混合した。溶液を周囲温度で０．５時間撹拌し、次いで逆相クロマトグラフィー（方法Ｆ^＊）を用いて精製して、＃Ｂ２８８を白色粉体として得た。収量：０．８ｍｇ、収率２６％。ＨＰＬＣ（プロトコルＮ）：保持時間＝１０．６分（純度９２％）。ＥＳＩＭＳ（正）ｍ／ｚ７２０．７［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0693】

コンジュゲーション手順
一般コンジュゲーション手順Ａ：市販のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｉｎｃ）を、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ、Ｌｏｎｚａ）中に透析する。次いで、透析された抗体（５〜１０ｍｇ／ｍＬ）を、反応性Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを含有するＰＬ（３〜１２）当量のリンカー−ペイロード（ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中１０ｍＭ）と室温にて２時間５０ｍＭのホウ酸緩衝液、ｐＨ８．７中で反応させる。場合によって、５０ｍＭのホウ酸緩衝液、ｐＨ８．７を、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ、Ｌｏｎｚａ）と置換する。場合によって、リンカー−ペイロードの溶解性／反応性を改善するために、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）またはＤＭＳＯを加えて、最終反応混合物中の１０〜１５％（ｖ／ｖ）の総有機溶媒構成要素を達成する。次いで、反応混合物を、メーカーの指示に従ってＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ緩衝液交換カラムを使用して、ＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）中に緩衝液交換する。ＧＥ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラムおよびＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）溶離液を伴うＧＥ ＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒシステムを使用して、粗材料をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって精製する。次いで、ＡＫＴＡからのプールしたモノマー画分を濃縮し、メーカーの指示に従ってＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ緩衝液交換カラムを使用して、１０ｍＭのコハク酸ナトリウム緩衝液、５．４％トレハロースｐＨ５．１中に緩衝液交換する。純度のためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、および薬物−抗体比（添加量）を計算する液体クロマトグラフィーエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析法（ＬＣ−ＥＳＩ ＭＳ）によって、ＡＤＣをさらに特性決定する。タンパク質濃度を、ＵＶ分光光度計によって決定する。

【0694】

一般コンジュゲーション手順Ｂ：市販のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｉｎｃ）または治療用抗体を、５０ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ６．８中に透析する。透析された抗体（５〜１０ｍｇ／ｍＬ）を、反応性ペンタフルオロフェニルエステルを含有するＰＬ（４〜１２）当量のリンカー−ペイロード（ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中５〜３０ｍＭ）と室温にて２〜２０時間５０ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ６．８中で反応させる。場合によって、リンカー−ペイロードの溶解性／反応性を改善するために、ＤＭＡまたはＤＭＳＯを加えて、最終反応混合物中の１０〜１５％（ｖ／ｖ）の総有機溶媒構成要素を達成する。次いで、反応混合物を、メーカーの指示に従ってＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ緩衝液交換カラムを使用して、ＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）中に緩衝液交換する。ＧＥ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラムおよびＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）溶離液を伴うＧＥ ＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒシステムを使用して、粗材料をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって精製する。次いで、ＡＫＴＡからのプールしたモノマー画分を濃縮し、メーカーの指示に従ってＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ緩衝液交換カラムを使用して、１０ｍＭのコハク酸ナトリウム緩衝液、５．４％トレハロースｐＨ５．１中に緩衝液交換する。純度のためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、および薬物−抗体比（添加量）を計算する液体クロマトグラフィーエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析法（ＬＣ−ＥＳＩ ＭＳ）によって、ＡＤＣをさらに特性決定する。タンパク質濃度を、ＵＶ分光光度計によって決定する。

【0695】

一般コンジュゲーション手順Ｃ：市販のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｉｎｃ）または治療用抗体を、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ、Ｌｏｎｚａ）中に透析する。透析された抗体を、ｙ（１〜７）当量のトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ、蒸留水中５ｍＭ）を加えることによって還元し、ＤＰＢＳ、５ｍＭの２，２’，２’’，２’’’−（エタン−１，２−ジイルジニトリロ）四酢酸（ＥＤＴＡ）、ｐＨ７．０（緩衝液Ａ）を使用して、１５ｍｇ／ｍＬの最終抗体濃度に希釈する。反応物を３７℃にて２時間インキュベートし、次いで、室温に冷却する。ＰＬ（２〜１５）当量のリンカー−ペイロード（ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中５〜１０ｍＭ）を加えることによって、コンジュゲーションを行った。場合によって、リンカー−ペイロードの溶解性／反応性を改善するために、ＤＭＡまたはＤＭＳＯを加えて、最終反応混合物中の１０〜１５％（ｖ／ｖ）の総有機溶媒を達成し、緩衝液Ａを加えて、１０ｍｇ／ｍＬの最終抗体濃度を達成する。次いで、反応物を室温にて２時間インキュベートする。それに続いて、反応混合物を、メーカーの指示に従ってＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ緩衝液交換カラムを使用して、ＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）中に緩衝液交換する。ＧＥ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラムおよびＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）溶離液を伴うＧＥ ＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒシステムを使用して、粗材料をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって精製する。次いで、必要に応じて、ＡＫＴＡからのプールしたモノマー画分を濃縮する。純度のためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、および薬物−抗体比（添加量）を計算する液体クロマトグラフィーエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析法（ＬＣ−ＥＳＩ ＭＳ）によって、ＡＤＣをさらに特性決定する。タンパク質濃度を、ＵＶ分光光度計によって決定する。

【0696】

一般コンジュゲーション手順Ｄ：治療用抗体を、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ、Ｌｏｎｚａ）中に透析する。透析された抗体を、ｙ（１〜７）当量のトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ、蒸留水中５ｍＭ）を加えることによって還元し、ＤＰＢＳ、５ｍＭの２，２’，２’’，２’’’−（エタン−１，２−ジイルジニトリロ）四酢酸（ＥＤＴＡ）、ｐＨ７．０（緩衝液Ａ）を使用して、１５ｍｇ／ｍＬの最終抗体濃度に希釈する。反応物を３７℃にて２時間インキュベートし、次いで、室温に冷却する。ＰＬ（２〜１５）当量のリンカー−ペイロード（ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）中５〜１０ｍＭ）を加えることによって、コンジュゲーションを行った。場合によって、リンカー−ペイロードの溶解性／反応性を改善するために、ＤＭＡまたはＤＭＳＯを加えて、最終反応混合物中の１０〜１５％（ｖ／ｖ）の総有機溶媒を達成し、２０×ホウ酸緩衝液およびＤＰＢＳを加えて、５０ｍＭのホウ酸緩衝液、ｐＨ８．７中の１０ｍｇ／ｍＬの最終抗体濃度を達成する。反応物を３７℃にて３時間または室温にて１６時間インキュベートする。それに続いて、反応混合物を、メーカーの指示に従ってＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ緩衝液交換カラムを使用して、ＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）中に緩衝液交換する。ＧＥ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラムおよびＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）溶離液を伴うＧＥ ＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒシステムを使用して、粗材料をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって精製する。次いで、必要に応じて、ＡＫＴＡからのプールしたモノマー画分を濃縮する。純度のためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、および薬物−抗体比（添加量）を計算する液体クロマトグラフィーエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析法（ＬＣ−ＥＳＩ ＭＳ）によって、ＡＤＣをさらに特性決定する。タンパク質濃度を、ＵＶ分光光度計によって決定する。

【0697】

一般コンジュゲーション手順Ｅ：天然抗体に対して余分なシステイン残基を担持する治療用抗体を、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ、Ｌｏｎｚａ）中に透析する。透析された抗体を、１００当量のトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ、蒸留水中５ｍＭ）を加えることによって還元し、ＤＰＢＳ、５ｍＭの２，２’，２’’，２’’’−（エタン−１，２−ジイルジニトリロ）四酢酸（ＥＤＴＡ）、ｐＨ７．０（緩衝液Ａ）を使用して、１５ｍｇ／ｍＬの最終抗体濃度に希釈する。次いで、反応物を室温にて２時間インキュベートし、次いで、室温に冷却する。還元の後、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ、４ｍＬ、５０ＫＤ、ＭＷＣＯ限外濾過装置を使用して、ＴＣＥＰを反応混合物から除去する。反応混合物を最初の容量の１０分の１に４回濃縮し、毎回緩衝液Ａを使用して最初の容量に再希釈する。場合によって、それに続いて、反応混合物を、メーカーの指示に従ってＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ緩衝液交換カラムを使用して、緩衝液Ａ中に緩衝液交換する。代替法、例えば、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）または透析はまた、特定の状況において有用である。還元に続いて、抗体の還元されたヒンジ／内部ジスルフィドを、緩衝液Ａ中の１〜１．５ｍＭのデヒドロアスコルベート（ＤＨＡ）を室温にて一晩使用して再酸化させる。酸化の後、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ、４ｍＬ、５０ＫＤ、ＭＷＣＯ限外濾過装置を使用して、ＤＨＡを反応混合物から除去する。反応混合物を最初の容量の１０分の１に４回濃縮し、毎回５０ｍＭのホウ酸緩衝液、ｐＨ８．７を使用して最初の容量に再希釈する。場合によって、それに続いて、反応混合物を、メーカーの指示に従ってＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ緩衝液交換カラムを使用して、５０ｍＭのホウ酸緩衝液、ｐＨ８．７中に緩衝液交換する。代替法、例えば、ＴＦＦまたは透析はまた、特定の状況において有用である。コンジュゲーションを、ＰＬ（３〜１２）当量のリンカー−ペイロード（ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）中１０ｍＭ）を加えることによって行う。場合によって、リンカー−ペイロードの溶解性／反応性を改善するために、ＤＭＡまたはＤＭＳＯを加えて、最終反応混合物中の１０〜１５％（ｖ／ｖ）の総有機溶媒を達成し、２０×ホウ酸緩衝液およびＤＰＢＳを加えて、５０ｍＭのホウ酸緩衝液、ｐＨ８．７中で５〜１０ｍｇ／ｍＬの最終抗体濃度を達成する。反応物を３７℃にて３時間または室温にて１６時間インキュベートする。それに続いて、反応混合物を、メーカーの指示に従ってＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ緩衝液交換カラムを使用して、ＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）中に緩衝液交換する。ＧＥ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラムおよびＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）溶離液を伴うＧＥ ＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒシステムを使用して、粗材料をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって精製する。次いで、必要に応じて、ＡＫＴＡからのプールしたモノマー画分を濃縮する。純度のためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、および薬物−抗体比（添加量）を計算する液体クロマトグラフィーエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析法（ＬＣ−ＥＳＩ ＭＳ）によって、ＡＤＣをさらに特性決定する。タンパク質濃度を、ＵＶ分光光度計によって決定する。

【0698】

一般コンジュゲーション手順Ｆ：天然抗体に対して余分なシステイン残基を担持する治療用抗体を、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ、Ｌｏｎｚａ）中に透析する。透析された抗体を、１００当量のトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ、蒸留水中５ｍＭ）を加えることによって還元し、ＤＰＢＳ、５ｍＭの２，２’，２’’，２’’’−（エタン−１，２−ジイルジニトリロ）四酢酸（ＥＤＴＡ）、ｐＨ７．０（緩衝液Ａ）を使用して、１５ｍｇ／ｍＬの最終抗体濃度に希釈する。次いで、反応物を室温にて２時間インキュベートし、次いで、室温に冷却する。還元の後、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ、４ｍＬ、５０ＫＤ、ＭＷＣＯ限外濾過装置を使用して、ＴＣＥＰを反応混合物から除去する。反応混合物を最初の容量の１０分の１に４回濃縮し、毎回緩衝液Ａを使用して最初の容量に再希釈する。場合によって、それに続いて、反応混合物を、メーカーの指示に従ってＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ緩衝液交換カラムを使用して、緩衝液Ａ中に緩衝液交換する。代替法、例えば、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）または透析はまた、特定の状況において有用である。還元に続いて、抗体の還元されたヒンジ／内部ジスルフィドを、緩衝液Ａ中で１〜１．５ｍＭのデヒドロアスコルベート（ＤＨＡ）を室温にて一晩使用して再酸化させる。酸化の後、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ、４ｍＬ、５０ＫＤ、ＭＷＣＯ限外濾過装置を使用して、ＤＨＡを反応混合物から除去する。反応混合物を最初の容量の１０分の１に４回濃縮し、毎回緩衝液Ａを使用して最初の容量に再希釈する。場合によって、それに続いて、反応混合物を、メーカーの指示に従ってＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ緩衝液交換カラムを使用して、緩衝液Ａ中に緩衝液交換する。代替法、例えば、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）または透析はまた、特定の状況において有用である。コンジュゲーションを、ＰＬ（２〜１５）当量のリンカー−ペイロード（ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中５〜１０ｍＭ）を加えることによって行う。場合によって、リンカー−ペイロードの溶解性／反応性を改善するために、ＤＭＡまたはＤＭＳＯを加えて、最終反応混合物中の１０〜１５％（ｖ／ｖ）の総有機溶媒を達成し、緩衝液Ａを加えて、５〜１０ｍｇ／ｍＬの最終抗体濃度を達成する。反応物を室温にて１〜２時間インキュベートする。それに続いて、反応混合物を、メーカーの指示に従ってＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ緩衝液交換カラムを使用して、ＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）中に緩衝液交換する。ＧＥ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラムおよびＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）溶離液を伴うＧＥ ＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒシステムを使用して、粗材料をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって精製する。次いで、必要に応じて、ＡＫＴＡからのプールしたモノマー画分を濃縮する。純度のためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、および薬物−抗体比（添加量）を計算する液体クロマトグラフィーエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析法（ＬＣ−ＥＳＩ ＭＳ）によって、ＡＤＣをさらに特性決定する。タンパク質濃度を、ＵＶ分光光度計によって決定する。

【0699】

一般コンジュゲーション手順Ｇ：遠心限外濾過装置、例えば、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ５０ｋ Ｕｌｔｒａｃｅｌフィルター（パート＃ＵＦＣ８０５０９６、ＧＥ）の上の部分において、コンジュゲーション反応を行う。Ｌ−システインの１３２ｍＭのストック溶液を、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ、Ｌｏｎｚａ）、５ｍＭの２，２’，２’’，２’’’−（エタン−１，２−ジイルジニトリロ）四酢酸（ＥＤＴＡ）、ｐＨ７．０（緩衝液Ａ）中で調製する。この溶液（５０ｕＬ）を、９５０ｕＬの緩衝液Ａ中の余分なシステイン残基（５ｍｇ）を担持するそれぞれの変異抗体の混合物に加える。反応混合物中の最終システイン濃度は、６．６ｍＭである。反応物を室温にて１．５時間静置させた後、反応チューブを遠心して、材料を概ね１００ｕＬに濃縮する。混合物を緩衝液Ａで１ｍＬに希釈する。全てのシステイン還元体を除去するために、このプロセスを４回繰り返す。このように得られた材料を緩衝液Ａで１ｍＬに希釈し、１６ｕＬの５ｍＭのマレイミドリンカー−ペイロードの溶液（ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）（概ね５当量）中）で処置する。室温にて１．５時間静置した後、反応チューブを遠心して、材料を概ね１００μＬに濃縮する。混合物をＤＰＢＳで１ｍＬに希釈する。それに続いて、反応混合物を、メーカーの指示に従ってＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ緩衝液交換カラムを使用して、ＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）中に緩衝液交換する。ＧＥ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラムおよびＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）溶離液を伴うＧＥ ＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒシステムを使用して、粗材料をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって精製する。次いで、必要に応じて、ＡＫＴＡからのプールしたモノマー画分を濃縮する。純度のためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、および薬物−抗体比（添加量）を計算する液体クロマトグラフィーエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析法（ＬＣ−ＥＳＩ ＭＳ）によって、ＡＤＣをさらに特性決定する。タンパク質濃度を、ＵＶ分光光度計によって決定する。

【0700】

一般コンジュゲーション手順Ｈ：トランスグルタミン酵素反応性グルタミン残基を担持する治療用抗体を、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ、Ｌｏｎｚａ）中に透析する。トランスグルタミナーゼが媒介するコンジュゲーションは、２５ｍＭのトリス緩衝液、ｐＨ８．０中に抗体を含有する０．５〜５．０ｍｇ／ｍＬのトランスグルタミナーゼ反応性グルタミン、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．３１ｍＭの還元型グルタチオンと、ペイロード（ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中５〜１０ｍＭ）を担持する５．０〜２０．０倍過剰なモル濃度のアミノアルキルリンカーおよび２％ｗ／ｖのトランスグルタミナーゼ（Ａｊｉｎｏｍｏｔ Ａｃｔｉｖａ ＴＩ）とを混合することによって行う。次いで、反応物を室温にて４〜１６時間インキュベートする。それに続いて、反応混合物を、メーカーの指示に従ってＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ緩衝液交換カラムを使用して、ＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）中に緩衝液交換する。ＧＥ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラムおよびＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）溶離液を伴うＧＥ ＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒシステムを使用して、粗材料をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって精製する。次いで、必要に応じて、ＡＫＴＡからのプールしたモノマー画分を濃縮する。純度のためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、および薬物−抗体比（添加量）を計算する液体クロマトグラフィーエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析法（ＬＣ−ＥＳＩ ＭＳ）によって、ＡＤＣをさらに特性決定する。タンパク質濃度を、ＵＶ分光光度計によって決定する。

【0701】

一般コンジュゲーション手順Ｉ：天然抗体に対して余分なシステイン残基を担持する治療用抗体変異体を、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ、Ｌｏｎｚａ）中に透析する。透析された抗体を、ｘ（２５〜１００）当量のトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ、蒸留水中５ｍＭ）を加えることによって還元し、ＤＰＢＳ、５ｍＭの２，２’，２’’，２’’’−（エタン−１，２−ジイルジニトリロ）四酢酸（ＥＤＴＡ）、ｐＨ６．５〜７．４（緩衝液Ａ）を使用して、１５ｍｇ／ｍＬの最終抗体濃度に希釈する。次いで、反応物を室温にて１〜２時間インキュベートし、次いで、室温に冷却する。還元の後、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ、４ｍＬ、５０ＫＤ、ＭＷＣＯ限外濾過装置を使用して、ＴＣＥＰを反応混合物から除去する。反応混合物を最初の容量の１０分の１に４回濃縮し、毎回緩衝液Ａを使用して最初の容量に再希釈する。場合によって、それに続いて、反応混合物を、メーカーの指示に従ってＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ緩衝液交換カラムを使用して、緩衝液Ａ中に緩衝液交換する。還元に続いて、抗体の還元されたヒンジ／内部ジスルフィドを、緩衝液Ａ中で１ｍＭのデヒドロアスコルベート（ＤＨＡ）を使用して室温にて一晩再酸化させる。酸化の後、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ、４ｍＬ、５０ＫＤ、ＭＷＣＯ限外濾過装置を使用して、ＤＨＡを反応混合物から除去する。反応混合物を最初の容量の１０分の１に４回濃縮し、毎回緩衝液Ａを使用して最初の容量に再希釈する。コンジュゲーションを、ＰＬ（２〜１０）当量のリンカー−ペイロード（ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中５〜１０ｍＭ）を加えることによって行う。場合によって、リンカー−ペイロードの溶解性／反応性を改善するために、ＤＭＡまたはＤＭＳＯを加えて、最終反応混合物中の１０〜１５％（ｖ／ｖ）の総有機溶媒を達成し、緩衝液Ａを加えて、５〜１０ｍｇ／ｍＬの最終抗体濃度を達成する。反応物を室温にて１〜４時間インキュベートする。それに続いて、反応混合物を、メーカーの指示に従ってＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ緩衝液交換カラムを使用して、ＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）中に緩衝液交換する。ＧＥ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラムおよびＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）溶離液を伴うＧＥ ＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒシステムを使用して、粗材料をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって精製する。次いで、必要に応じて、ＡＫＴＡからのプールしたモノマー画分を濃縮する。純度のためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、および薬物−抗体比（添加量）を計算する液体クロマトグラフィーエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析法（ＬＣ−ＥＳＩ ＭＳ）によって、ＡＤＣをさらに特性決定する。タンパク質濃度を、ＵＶ分光光度計によって決定する。

【0702】

コンジュゲートの分析のために使用されるＳＥＣおよびＨＰＬＣ−ＥＳＩ ＭＳ条件：
プロトコル１：
プロトコル１（ＳＥＣ）：カラム：カラム：ＴＳＫ−ゲルＧ３０００ＳＷｘｌ、３００×７．８ｍｍ、１０μｍ；移動相：リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、１×）、２％アセトニトリルによってｐＨ７．４；定組成；流量：１ｍＬ／分、温度：室温；注入量：５μＬ；機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＨＰＬＣ。

【0703】

プロトコル１ｂ：カラム：Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ ５／１５０ＧＬ、５×１５０ｍｍ、１３μｍ；移動相：リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、１×）、２％アセトニトリルによってｐＨ７．４；定組成；流量：１ｍＬ／分、温度：室温；注入量：５μＬ；機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＨＰＬＣ。

【0704】

プロトコル２：プロトコル２（ＨＰＬＣ）：カラム：カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ３００ＳＢ−Ｃ８、７５×２．１ｍｍ、２．６μｍ；移動相Ａ：水中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；勾配：４分に亘り２０％Ｂ〜４５％Ｂ；流量：１．０ｍＬ／分、温度：６０℃；検出：２２０ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲４００〜２０００Ｄａ；注入量：１０μＬ；機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＬＣ、Ｗａｔｅｒｓ ＭｉｃｒｏｍａｓｓＺＱ ＭＳ。ＭａｘＥｎｔ１を使用してデコンボリューションを行った。試料を１００倍過剰なトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）またはジチオスレイトール（ＤＴＴ）で処置し、注射の前に室温にて１５分間インキュベートした。

【0705】

プロトコル３：カラム：Ａｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ２００ＳＥＣ、１．７ｕｍ；移動相：４５０ｍＭのＮａＣｌ；流量：０．５ｍＬ／分、温度：３５Ｃ；注入量：１０μＬ。

【0706】

トラスツズマブのインビトロおよびインビボでの研究
下記の研究について、トラスツズマブは、コンジュゲートした細胞毒性剤の非存在下で、同等の抗体濃度で、有意なインビトロでの効力またはインビボでの有効性を示さないことが留意される。

【0707】

インビトロの細胞アッセイ手順
標的を発現している（ＢＴ４７４（乳がん）、Ｎ８７（胃がん）、ＨＣＣ１９５４（乳がん）、ＭＤＡ−ＭＢ−３６１−ＤＹＴ２（乳がん））または発現していない（ＭＤＡ−ＭＢ−４６８）細胞を、９６ウェル細胞培養プレートに処置の前に２４時間添加した。細胞を、３倍段階希釈した抗体薬物コンジュゲートまたは遊離化合物（すなわち、抗体は、薬物にコンジュゲートしていない）によって１０の濃度にて２連で処置した。細胞生存率を、処置の９６時間後にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）ＡＱ_{ｕｅｏｕｓ} Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ細胞増殖ＭＴＳアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ）によって決定した。相対的細胞生存率を、未処置対照の百分率として決定した。ＩＣ_５０値を、４パラメーターロジスティックモデル＃２０３を使用してＸＬｆｉｔ ｖ４．２（ＩＤＢＳ、Ｇｕｉｌｄｆｏｒｄ、Ｓｕｒｒｙ、ＵＫ）で計算した。結果を表４および９に示す。効力は、０．０００２ｎｍより上の範囲であった。他の細胞系における試験を、表９Ａにおいて報告する。同様の手順および技術を用いた。

【0708】

インビボでのＮ８７腫瘍異種移植片モデル（図３および４）
抗体薬物コンジュゲートのインビボでの有効性研究を、Ｎ８７細胞系を使用して標的を発現している異種移植片モデルで行った。有効性研究のために、５０％ｍａｔｒｉｇｅｌ中の７５０万個の腫瘍細胞を、腫瘍サイズが２５０〜３５０ｍｍ^３に達するまで６〜８週齢のヌードマウスに皮下インプラントする。投与をボーラスの尾静脈注射によって行う。処置に対する腫瘍反応によって、動物に、４日毎に４回処置する１〜１０ｍｇ／ｋｇの抗体薬物コンジュゲートを注射する。全ての実験動物を、体重の変化について毎週モニターする。腫瘍容積を、カリパス装置によって最初の５０日間は週２回、その後は週１回測定し、下記の式で計算する。腫瘍容積＝（長さ×幅^２）／２。これらの腫瘍容積が２５００ｍｍ^３に達する前に、苦痛を与えないように動物を屠殺する。腫瘍サイズは、処置の第１週後に減少することが観察される。処置が中止した後、腫瘍の再増殖について動物を連続的にモニターし得る。

【0709】

Ｎ８７マウス異種移植片インビボスクリーニングモデルにおけるＡＤＣの３、４および５ならびにＡＤＣの１４および１５の試験の結果を、図３および４において示す。

【0710】

表１は、実施例＃Ｂ８２〜＃Ｂ１０８についての調製の詳細を提供する。

【0711】

表２は、実施例＃Ｂ８２〜＃Ｂ１０８についての特性決定データを提供する。

【0712】

表３は、ペイロード−リンカー＃Ｂ１０９〜＃Ｂ１１７の調製を提供する。

【0713】

表４は、天然物および合成類似体についてのインビトロでの細胞毒性データを示す。

【0714】

表５は、ペイロード−リンカー＃Ｂ１０９〜＃Ｂ１１７についての特性決定データを提供する。

【0715】

表６は、ＡＤＣの構造、およびこれらを調製するために使用されるペイロードリンカーを提供する。

【0716】

表７は、例示したＡＤＣの調製の一般方法を提供する。

【0717】

表８は、例示したＡＤＣについての分析データを提供する。

【0718】

表９は、表９：ＡＤＣについてのインビトロでの細胞毒性データを示す。

【0719】

表

【0720】

【表1-1】

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【表1-2】

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【表1-3】

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【表1-4】

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【表2-1】

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【表2-5】

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【表3】

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【表4-1】

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【表5-1】

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【表7-3】

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【表8-1】

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【表9-1】

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【表9-3】

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【表11-1】

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【0760】

【表11-2】

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【図1】

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【図2】

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【図3】

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【図4】

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【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]