特許 6368614 ホモシステイン濃度抑制剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6368614

(24)【登録日】2018年7月13日

(45)【発行日】2018年8月1日

(54)【発明の名称】ホモシステイン濃度抑制剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 36/05 20060101AFI20180723BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20180723BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20180723BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20180723BHJP

【ＦＩ】

   A61K36/05

   A61P43/00 111

   A61P9/00

   A61P25/28

【請求項の数】6

【全頁数】9

(21)【出願番号】特願2014-210207(P2014-210207)

(22)【出願日】2014年10月14日

(65)【公開番号】特開2016-79116(P2016-79116A)

(43)【公開日】2016年5月16日

【審査請求日】2017年4月28日

(73)【特許権者】

【識別番号】596120326

【氏名又は名称】株式会社サン・クロレラ

(74)【代理人】

【識別番号】100095522

【弁理士】

【氏名又は名称】高良 尚志

(72)【発明者】

【氏名】藤島 雅基

(72)【発明者】

【氏名】竹腰 英夫

【審査官】 鳥居 福代

(56)【参考文献】

【文献】 特開２００９−１７３６４０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０５−０６８５３６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０９−０１０６２２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開昭６１−２０２６８５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１３／１０５６１７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 日本老年医学会雑誌，２０１２年，Vol.49, 臨時増刊号，p.98 [O-169]

【文献】 別冊・医学のあゆみ 高脂血症と動脈硬化，２００２年，pp.122-126

【文献】 ビタミン，２０１３年，Vol.87, No.1，pp.25-32

【文献】 日本栄養・食糧学会大会講演要旨集，２０１２年，Vol.66th，p.199 [3I-02p]

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３６／００−３６／９０６８

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である場合の血漿総ホモシステイン濃度を低下させ又は上昇を防ぐための、クロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物からなるホモシステイン濃度抑制剤。

【請求項2】

経口投与剤である請求項１記載のホモシステイン濃度抑制剤。

【請求項3】

MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である場合に推奨される葉酸服用量の４２重量％の葉酸を含有する量の経口投与により血漿総ホモシステイン濃度を低下させ又は上昇を防ぎ得る請求項２記載のホモシステイン濃度抑制剤。

【請求項4】

上記クロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物が、クロレラ・ピレノイドサの細胞壁が９５％以上破砕されたものである請求項１乃至３の何れか１項に記載のホモシステイン濃度抑制剤。

【請求項5】

上記クロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物が、細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサの乾燥粉末である請求項１乃至４の何れか１項に記載のホモシステイン濃度抑制剤。

【請求項6】

上記クロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物を、容量の８０乃至８５％の多数の直径０．５乃至１．５mmのグラスビーズが封入された密閉シリンダー内で、そのグラスビーズをクロレラ・ピレノイドサ濃度１０乃至２５重量％のクロレラ・ピレノイドサ粉体・水懸濁液と混和・回転することにより、その懸濁液中のクロレラ・ピレノイドサを摩砕することによって得るものである請求項１乃至５の何れか１項に記載のホモシステイン濃度抑制剤を製造する方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である場合の血漿総ホモシステイン濃度を低下させ又は上昇を防ぐためのホモシステイン濃度抑制剤に関する。

【背景技術】

【0002】

血漿総ホモシステイン濃度が高いと、心血管疾患やアルツハイマー病等の発病リクスが高まる。特に、MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である場合、血漿総ホモシステイン濃度が高値となり易いため、心血管疾患やアルツハイマー病等の発病率が高い。

【0003】

この点において、MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である場合に血漿総ホモシステイン濃度を低下させ又は上昇を防ぐ手段に対する要望は強い。

【0004】

特開２００９−１７３６４０号公報には、ビタミンＢ６、Ｂ１２、葉酸からなるビタミン群のうちの１種又は２種以上の成分と、セサミン類とを含有し、ビタミンＢ群の総重量が、セサミン類の総重量を１００として、１〜５００（重量比）である、血中ホモシステイン濃度を低下させ、あるいは上昇を抑制しうる組成物が開示されている。

【0005】

この組成物は、高ホモシステイン血症及びそれに関連する疾患の予防、改善及び治療に有効であるとされている。

【0006】

しかしながら、特開２００９−１７３６４０号公報には、MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である場合の血漿総ホモシステイン濃度の低下について記述は見当たらない。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0007】

【特許文献1】特開２００９−１７３６４０号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

本発明は、上記のような点に鑑み行われたものであって、その目的とするところは、長期に亙って安全且つ簡便に投与し得る、MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である場合の血漿総ホモシステイン濃度を低下させ又は上昇を防ぐためのホモシステイン濃度抑制剤を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本発明のホモシステイン濃度抑制剤は、次のように表すことができる。

【0010】

(1) MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である場合の血漿総ホモシステイン濃度を低下させ又は上昇を防ぐための、クロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物からなるホモシステイン濃度抑制剤。

【0011】

(2) 経口投与剤である上記(1)記載のホモシステイン濃度抑制剤。

【0012】

(3) MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である場合に推奨される葉酸服用量の４２重量％の葉酸を含有する量の経口投与により血漿総ホモシステイン濃度を低下させ又は上昇を防ぎ得る上記(2)記載のホモシステイン濃度抑制剤。

【0013】

(4) 上記クロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物が、容量の８０乃至８５％の多数の直径０．５乃至１．５mmのグラスビーズが封入された密閉シリンダー内で、そのグラスビーズをクロレラ・ピレノイドサ濃度１０乃至２５重量％のクロレラ・ピレノイドサ粉体・水懸濁液と混和・回転することにより、その懸濁液中のクロレラ・ピレノイドサを摩砕することによって得られたものである上記(1)乃至(3)の何れか１項に記載のホモシステイン濃度抑制剤。

【0014】

(5) 上記クロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物が、クロレラ・ピレノイドサの細胞壁が９５％以上破砕されたものである上記(1)乃至(4)の何れか１項に記載のホモシステイン濃度抑制剤。

【0015】

(6) 上記クロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物が、細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサの乾燥粉末である上記(1)乃至(5)の何れか１項に記載のホモシステイン濃度抑制剤。

【発明の効果】

【0016】

本発明のホモシステイン濃度抑制剤は、長期に亙って安全且つ簡便に投与し得、MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である場合の血漿総ホモシステイン濃度を効果的に低下させ又は上昇を効果的に防ぎ得る。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】血漿総ホモシステイン濃度の測定結果である。

【図2】血清葉酸濃度の測定結果である。

【図3】血清ビタミンＢ１２濃度の測定結果である。

【図4】血清ビタミンＤ濃度の測定結果である。

【発明を実施するための形態】

【0018】

本発明におけるクロレラ・ピレノイドサとは、クロレラ属（Chlorella) に属する単細胞緑藻類のうちのChlorella pyrenoidosa種を言う。

【0019】

本発明のホモシステイン濃度抑制剤におけるクロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物は、例えば、容量の８０乃至８５％の多数の直径０．５乃至１．５mmのグラスビーズが封入された密閉シリンダー内で、そのグラスビーズをクロレラ・ピレノイドサ濃度１０乃至２５重量％のクロレラ・ピレノイドサ粉体・水懸濁液と混和・回転することにより、その懸濁液中のクロレラ・ピレノイドサを摩砕することによって得ることができる。

【0020】

より具体的には、例えば、先ずクロレラ・ピレノイドサ濃度１０乃至２５重量％のクロレラ・ピレノイドサ粉体・水懸濁液を１０℃以下に調整する。次にこの懸濁液を、下記のような湿式微粉砕機に送入し、破砕直後のスラリーが４０℃以下になるよう微粉砕する。次いで、このようにして得られたクロレラ・ピレノイドサのスラリーを、直ちに１０℃以下に冷却することにより、細胞壁が破砕されたクロレラ・ピレノイドサを、品質劣化を生じさせることなく得ることができる。

【0021】

上記湿式微粉砕機は、冷却外套を持つ密閉シリンダー中に多数の直径０．５乃至１．５mmのグラスビーズが封入されたものである。そのグラスビーズ容量は密閉シリンダー容量の８０乃至８５％であり、グラスビーズを懸濁液と混和・回転することにより、懸濁液中の物質を摩砕するものである。この湿式微粉砕機は、流入する懸濁液を連続的に処理する連続湿式微粉砕機であることが好ましい。

【0022】

このような破砕方法により、クロレラ・ピレノイドサの細胞壁が９５％以上破砕されたクロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物を得ることも可能である。クロレラ・ピレノイドサの細胞壁が９５％以上破砕されていること、すなわち細胞壁が破砕されているクロレラ・ピレノイドサ細胞の比率が９５％以上であることは、例えば、血球計算盤を用いて確認することができる。本発明において用いるクロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物は、クロレラ・ピレノイドサの細胞壁が９５％以上破砕されたものであることが望ましい。

【0023】

このようにして細胞壁が破砕されたクロレラ・ピレノイドサは、真空乾燥後粉砕を行う等の適宜の処理を施した後に使用することが好ましい。

【0024】

本発明のホモシステイン濃度抑制剤は、MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である場合の血漿総ホモシステイン濃度を低下させ又は上昇を防ぐためのものであって、クロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物からなる。

【0025】

MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である場合、血漿総ホモシステイン濃度が高値となり易いため、心血管疾患やアルツハイマー病等の発病率が高いが、クロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物からなる本発明のホモシステイン濃度抑制剤を投与することにより、血漿総ホモシステイン濃度を低下させ又は上昇を防いで、MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である場合の前記発病率を効果的に低下させることができる。

【0026】

クロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物からなる本発明のホモシステイン濃度抑制剤は、経口投与に適し、MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である成人に対する投与量は、例えば、クロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物の乾燥重量において１日当り６乃至２０ｇ程度（葉酸含有量が１６８乃至４２０μgである量）が適当であり、例えば８乃至１２ｇであるが、これらに限定されるものではない。クロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物は人体に対する毒性を有しない。

【0027】

本発明のホモシステイン濃度抑制剤は、MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である場合に推奨される葉酸服用量の４２重量％の葉酸を含有する量の経口投与により血漿総ホモシステイン濃度を効果的に低下させ又は上昇を効果的に防ぐことができる。MTHFR遺伝子型が変異ホモ型の場合、血漿総ホモシステイン濃度が高く、葉酸の吸収効率が低いため、成人で１日当り４００μgの葉酸の摂取が推奨されている。ところが、本発明のホモシステイン濃度抑制剤の場合、クロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物の乾燥重量において１日当り８ｇ（葉酸含有量が１６８μgである量）のホモシステイン濃度抑制剤を例えば３ヶ月程度の相当期間にわたり経口投与することにより、MTHFR遺伝子型が変異ホモ型の場合の血漿総ホモシステイン濃度を効果的に低下させ又は上昇を効果的に防ぐことができ、更なる期間にわたる経口投与によってその効果が持続する。

【0028】

なお、本発明のホモシステイン濃度抑制剤は、MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である場合に推奨される葉酸服用量の４２重量％を超える葉酸を含有する量の経口投与によっても血漿総ホモシステイン濃度を低下させ又は上昇を防ぐことができる。また、MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である場合に推奨される葉酸服用量の４２重量％未満の葉酸を含有する量の本発明のホモシステイン濃度抑制剤の経口投与によっても血漿総ホモシステイン濃度が低下し又は上昇が防がれることは可能である。

【0029】

本発明のホモシステイン濃度抑制剤における経口投与の形態に特に限定はないが、例えば、粉末、錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤とすることができる。

【0030】

また種々の形態を形成する上で、各種賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、可塑剤等を適宜用いることができる。

【0031】

賦形剤の例としては、糖類（乳糖，白糖，ブドウ糖，マンニトール），デンプン（バレイショ，コムギ，トウモロコシ），無機物（炭酸カルシウム，硫酸カルシウム，炭酸水素ナトリウム，塩化ナトリウム），結晶セルロース，植物末（カンゾウ末，ゲンチアナ末）、レシチン等を挙げることができる。

【0032】

結合剤の例としては、デンプンのり液，アラビアゴム，ゼラチン，アルギン酸ナトリウム，メチルセルロース（ＭＣ），エチルセルロース（ＥＣ），ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ），ポリビニルアルコール（ＰＶＡ），ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ），カルポキシメチルセルロース（ＣＭＣ）等を挙げることができる。

【0033】

崩壊剤の例としては、デンプン，寒天，ゼラチン末，結晶セルロース，ＣＭＣ・Ｎａ，ＣＭＣ・Ｃａ，炭酸カルシウム，炭酸水素ナトリウム，アルギン酸ナトリウム等を挙げることができる。

【0034】

滑沢剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム，タルク，水素添加植物油，マクロゴール，シリコーン油等を挙げることができる。

【0035】

コーティング剤の例としては、糖衣（白糖，ＨＰＣ，セラック），膠衣（ゼラチン，グリセリン，ソルビトール），フイルムコーティング〔ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ），ＥＣ，ＨＰＣ，ＰＶＰ〕，腸溶性コーティング〔ヒドロキシプロビルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ），セルロースアセテートフタレート（ＣＡＰ）〕等を挙げることができる。

【0036】

着色剤の例としては、水溶性食用色素，レーキ色素）等を挙げることができる。矯味剤の例としては、乳糖，白糖，ブドウ糖，マンニトール）等を挙げることができる。矯臭剤の例としては、芳香性精油類），光線遮断剤（酸化チタン）等を挙げることができる。可塑剤の例としては、フタル酸エステル類，植物油，ポリエチレングリコール）等を挙げることができる。

【実施例】

【0037】

クロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物の経口投与が血漿総ホモシステイン濃度に与える効果についての試験を行った。

【0038】

１．被験物質の製造

【0039】

被験物質である細胞壁を破砕したクロレラ・ピレノイドサ（Chlorella pyrenoidosa）の乾燥粉末（以下、単に「クロレラ」とも言う。）を、次のように製造した。

【0040】

冷却外套を持つ密閉シリンダー中にその密閉シリンダー容量の８０乃至８５％の容量の多数の直径０．５乃至１．５mmのグラスビーズが封入されており、そのグラスビーズを流入液体と混和・回転することにより流入液体中の物質を摩砕する連続湿式微粉砕機（商品名：ダイノーミル［KD型］ WAB, Inc.製）に、１０℃以下に調整されたクロレラ・ピレノイドサ濃度１０乃至２５重量％のクロレラ・ピレノイドサ粉体・水懸濁液を送入して、破砕直後のスラリーが４０℃以下になるよう微粉砕し、次いで、このようにして得られたクロレラ・ピレノイドサスラリーを、直ちに１０℃以下に冷却し、真空乾燥後、粉砕することにより、被験物質である細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサの乾燥粉末が得られた。この細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサは、クロレラ・ピレノイドサの細胞壁が９５％以上破砕されたものである。

【0041】

２．被験者

【0042】

疾病の治療中ではない３０歳以上５５歳以下の成人男性であって、MTHFR遺伝子型が、野生型である者、変異ヘテロ型である者、及び、変異ホモ型である者を被験者とした。

【0043】

但し、下記何れかに該当するものは除外した。
1) 臨床評価に影響を与える薬物治療（漢方や民間療法を含む）をしている者（肥満症などの治療）
2) 肝、腎、心、肺、消化器、血液、内分泌系及び代謝系等に重篤な疾患・既往歴のある者
3) 生活習慣および食習慣が極度に乱れている者、あるいは不定期に激しい運動をしている者
4) アルコール多飲者
5) 食物及び薬物等にアレルギーのある者
6) 肥満を伴わない糖尿病、高血圧症、脂質異常症などで、遺伝要因等の他の影響が大きく関与していると考えられる者
7) ワーファリンを服用している者
8) 他の試験に参加している者

【0044】

３．試験方法

【0045】

１２ヶ月間にわたり、被験物質である細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサの乾燥粉末を１日当たり８ｇ経口投与し５回の採血検査を行う試験をオープン試験で行った。なお、試験開始前４週間は被験物質の投与は行わなかった。

【0046】

採血は、ベースライン、並びに、試験開始から３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、及び１２ヶ月後に、それぞれ行い、生化学検査を行うと共に、マイクロアレイで遺伝子の発現変動を解析した。

【0047】

４．結果

【0048】

採血検査に基づく血漿総ホモシステイン濃度、血清葉酸濃度、血清ビタミンＢ１２濃度、及び血清ビタミンＤ濃度の測定結果を、表１乃至４、及び、図１乃至４に示す。

【0049】

【表1】

【0050】

【表2】

【0051】

【表3】

【0052】

【表4】

【0053】

試験開始前の被験者の葉酸、ビタミンＢ１２、及びビタミンＤの摂取量は食事摂取基準を上回っていた。

【0054】

しかしながら、ベースラインにおいて、MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である者の血漿総ホモシステイン濃度は、MTHFR遺伝子型が野生型である者及び変異ヘテロ型である者の血漿総ホモシステイン濃度よりもかなり高く、基準上限値を大幅に上回っていた。また、ベースラインにおいて、MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である者の血清葉酸濃度、血清ビタミンＢ１２濃度、及び血清ビタミンＤ濃度は、MTHFR遺伝子型が野生型である者及び変異ヘテロ型である者のそれらよりも低かった。

【0055】

試験開始より３ヶ月後以降は、MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である者のみ、血漿総ホモシステイン濃度がベースラインよりも大きく低下した値となった。

【0056】

また、MTHFR遺伝子型が何れであるかにかかわらず、試験開始より３ヶ月後には血清葉酸濃度、血清ビタミンＢ１２濃度、及び血清ビタミンＤ濃度が上昇した。

【0057】

また、試験開始時と試験終了時で発現変動量に有意差を示すビタミン代謝関連の20遺伝子(p <= .05)が抽出でき、中でも葉酸輸送を担うSLC46A1遺伝子の発現亢進(p = .02, 1.4倍)が確認された。

【0058】

更に、試験の開始から終了にわたり、MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である者でMTHFR遺伝子発現が緩やかに上昇した。

【0059】

以上のように、被験物質の３ヶ月以上の経口投与により、MTHFR遺伝子型が変異ホモ型である場合のみ、血漿総ホモシステイン濃度が大きく低下し、また、MTHFR遺伝子型が野生型であるか、変異ヘテロ型であるか、変異ホモ型であるかにかかわらず、血清葉酸濃度、血清ビタミンＢ１２濃度、及び血清ビタミンＤ濃度が上昇した。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】