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特許6376707サーチュイン調節剤としての置換架橋尿素類似体
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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】6376707
(24)【登録日】2018年8月3日
(45)【発行日】2018年8月22日
(54)【発明の名称】サーチュイン調節剤としての置換架橋尿素類似体
(51)【国際特許分類】
C07D 471/18 20060101AFI20180813BHJP
A61K 31/4995 20060101ALI20180813BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20180813BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20180813BHJP
A61P 3/00 20060101ALI20180813BHJP
A61K 31/55 20060101ALI20180813BHJP
A61K 31/551 20060101ALI20180813BHJP
C07D 519/00 20060101ALI20180813BHJP
【ＦＩ】
C07D471/18CSP
A61K31/4995
A61P43/00 111
A61P3/10
A61P3/00
A61K31/55
A61K31/551
C07D519/00 301
【請求項の数】18
【全頁数】298
(21)【出願番号】特願2016-514017(P2016-514017)
(86)(22)【出願日】2014年5月13日
(65)【公表番号】特表2016-518448(P2016-518448A)
(43)【公表日】2016年6月23日
(86)【国際出願番号】US2014037767
(87)【国際公開番号】WO2014186313
(87)【国際公開日】20141120
【審査請求日】2017年5月15日
(31)【優先権主張番号】61/822,758
(32)【優先日】2013年5月13日
(33)【優先権主張国】US
(73)【特許権者】
【識別番号】591002957
【氏名又は名称】グラクソスミスクライン・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー
【氏名又は名称原語表記】ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ ＬＬＣ
(74)【代理人】
【識別番号】100091982
【弁理士】
【氏名又は名称】永井 浩之
(74)【代理人】
【識別番号】100091487
【弁理士】
【氏名又は名称】中村 行孝
(74)【代理人】
【識別番号】100082991
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 泰和
(74)【代理人】
【識別番号】100105153
【弁理士】
【氏名又は名称】朝倉 悟
(74)【代理人】
【識別番号】100117787
【弁理士】
【氏名又は名称】勝沼 宏仁
(74)【代理人】
【識別番号】100143971
【弁理士】
【氏名又は名称】藤井 宏行
(74)【代理人】
【識別番号】100188651
【弁理士】
【氏名又は名称】遠藤 広介
(72)【発明者】
【氏名】チャールズ、エイ．ブラム
(72)【発明者】
【氏名】クリストファー、オールマン
(72)【発明者】
【氏名】ブルース、ジー．シュチェパンキェビチ
(72)【発明者】
【氏名】リチャード、ダナ、コールドウェル
(72)【発明者】
【氏名】レベッカ、カソーボン
(72)【発明者】
【氏名】ブライアン、エイチ．ホワイト
(72)【発明者】
【氏名】ロバート、ビー．ペルニ
(72)【発明者】
【氏名】カールステン、コペッチ
(72)【発明者】
【氏名】ジェレミー、エス．ディッシュ
(72)【発明者】
【氏名】プイ、イー、ン
(72)【発明者】
【氏名】ライアン、マイケル、フォックス
【審査官】
前田 憲彦
(56)【参考文献】
【文献】
特表２０１３−５０９４４２（ＪＰ，Ａ）
【文献】
特表２０１２−５０７５５６（ＪＰ，Ａ）
【文献】
特表２０１０−５０２５８２（ＪＰ，Ａ）
【文献】
特表２００８−５２７００２（ＪＰ，Ａ）
【文献】
Current Topics in Medicinal Chemistry (Sharjah, United Arab Emirates),，２００８年，8(17)，p.1533-1544
(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）
Ｃ０７Ｄ ４７１／００
Ａ６１Ｋ ３１／００
Ｃ０７Ｄ ５１９／００
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）の化合物またはその塩：
ｍは、１または２であり；
ｎは、２または３であり；
ｐは、０〜４であり；
Ｒ１は、炭素環および複素環から選択され、ここで、前記炭素環および複素環は、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、フルオロ置換Ｃ１−Ｃ４アルキル、−Ｃ≡Ｎ、−Ｙ、−Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ、−Ｘ−Ｏ−Ｙ、−Ｘ−ＯＲ４、−Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ３Ｒ３、−Ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ−ＮＲ３Ｒ３、−Ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ、−Ｘ−ＮＲ３Ｒ３、＝Ｏ、−ＮＨ−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒ３、−（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル、−Ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ、フェニル、−Ｏ−フェニル、３〜６員飽和または不飽和複素環および−Ｏ−（５〜６員飽和複素環）から独立に選択される１以上の置換基で置換されていてもよく、ここで、Ｒ１の任意のフェニル、３〜６員飽和もしくは不飽和複素環または−Ｏ−５〜６員飽和複素環置換基は、ハロ、−ＯＲ４、−Ｘ−Ｏ−Ｙ、−ＣＦ３、−Ｙ、−Ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ−ＮＲ３Ｒ３、−Ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ−（５〜６員飽和複素環または炭素環）および−Ｘ−Ｃ（＝Ｎ）−ＮＲ３Ｒ３から選択される１以上の置換基で置換されていてもよく、かつ、置換可能な任意の窒素原子において、−Ｙ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ、−Ｙ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ−ＮＲ３Ｒ３、−Ｙ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ、−Ｙ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＲ４で置換されていてもよく；
Ｒ２は、炭素環および複素環から選択され、ここで、前記炭素環および複素環は、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、フルオロ置換Ｃ１−Ｃ４アルキル、−Ｃ≡Ｎ、−Ｙ、−Ｘ−ＯＲ４、−Ｘ−Ｏ−Ｙ、−ＳＯ２−Ｒ３、−Ｘ−ＮＲ３Ｒ３、−ＮＨ−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ３Ｒ３、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ、−ＳＯ２−ＮＲ３Ｒ３、３〜６員飽和炭素環または複素環およびフェニルから独立に選択される１以上の置換基で置換されていてもよく、ここで、Ｒ２の任意の３〜６員飽和複素環置換基は、任意の炭素原子において、ハロ、−ＣＦ３、−Ｙから選択される１以上の置換基で置換されていてもよく；
各Ｒ３は、水素、−Ｃ（＝Ｎ）−ＮＨ２、−Ｙから独立に選択され；
２つのＲ３は、それらが結合されている窒素または炭素原子と一緒に４〜８員飽和複素環を形成し；
各Ｒ４は、水素、Ｙから独立に選択され；
Ｒ５およびＲ６は、水素、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−５〜６員飽和または不飽和複素環または炭素環から独立に選択され、ここで、Ｒ５およびＲ６の一方だけがＯ−Ｃ（＝Ｏ）−５〜６員飽和または不飽和複素環または炭素環であり；あるいは
Ｒ５およびＲ６は、それらが結合されている炭素原子と一緒に＝Ｏを形成し；
Ｒ７およびＲ８は、水素、ハロ、−ＯＨ、−Ｏ−ＹおよびＹから独立に選択され；
Ｒ９は、水素、ハロ、−ＯＨ、−ＯＣＦ３、−Ｏ−Ｙ、Ｙから選択され；
各Ｘは、Ｃ０−Ｃ５直鎖または分岐アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；かつ、
各Ｙは、Ｃ１−Ｃ５直鎖または分岐アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；
ここで、任意のＹまたはＸは、−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４アルケン）、ハロ、−ＮＨ２の１以上で置換されていてもよい］。
【化1】
[この文献は図面を表示できません]
［式中、ｍは、１または２であり；
ｎは、２または３であり；
ｐは、０〜４であり；
Ｒ１は、炭素環および複素環から選択され、ここで、前記炭素環および複素環は、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、フルオロ置換Ｃ１−Ｃ４アルキル、−Ｃ≡Ｎ、−Ｙ、−Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ、−Ｘ−Ｏ−Ｙ、−Ｘ−ＯＲ４、−Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ３Ｒ３、−Ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ−ＮＲ３Ｒ３、−Ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ、−Ｘ−ＮＲ３Ｒ３、＝Ｏ、−ＮＨ−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒ３、−（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル、−Ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ、フェニル、−Ｏ−フェニル、３〜６員飽和または不飽和複素環および−Ｏ−（５〜６員飽和複素環）から独立に選択される１以上の置換基で置換されていてもよく、ここで、Ｒ１の任意のフェニル、３〜６員飽和もしくは不飽和複素環または−Ｏ−５〜６員飽和複素環置換基は、ハロ、−ＯＲ４、−Ｘ−Ｏ−Ｙ、−ＣＦ３、−Ｙ、−Ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ−ＮＲ３Ｒ３、−Ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ−（５〜６員飽和複素環または炭素環）および−Ｘ−Ｃ（＝Ｎ）−ＮＲ３Ｒ３から選択される１以上の置換基で置換されていてもよく、かつ、置換可能な任意の窒素原子において、−Ｙ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ、−Ｙ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ−ＮＲ３Ｒ３、−Ｙ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ、−Ｙ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＲ４で置換されていてもよく；
Ｒ２は、炭素環および複素環から選択され、ここで、前記炭素環および複素環は、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、フルオロ置換Ｃ１−Ｃ４アルキル、−Ｃ≡Ｎ、−Ｙ、−Ｘ−ＯＲ４、−Ｘ−Ｏ−Ｙ、−ＳＯ２−Ｒ３、−Ｘ−ＮＲ３Ｒ３、−ＮＨ−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ３Ｒ３、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ、−ＳＯ２−ＮＲ３Ｒ３、３〜６員飽和炭素環または複素環およびフェニルから独立に選択される１以上の置換基で置換されていてもよく、ここで、Ｒ２の任意の３〜６員飽和複素環置換基は、任意の炭素原子において、ハロ、−ＣＦ３、−Ｙから選択される１以上の置換基で置換されていてもよく；
各Ｒ３は、水素、−Ｃ（＝Ｎ）−ＮＨ２、−Ｙから独立に選択され；
２つのＲ３は、それらが結合されている窒素または炭素原子と一緒に４〜８員飽和複素環を形成し；
各Ｒ４は、水素、Ｙから独立に選択され；
Ｒ５およびＲ６は、水素、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−５〜６員飽和または不飽和複素環または炭素環から独立に選択され、ここで、Ｒ５およびＲ６の一方だけがＯ−Ｃ（＝Ｏ）−５〜６員飽和または不飽和複素環または炭素環であり；あるいは
Ｒ５およびＲ６は、それらが結合されている炭素原子と一緒に＝Ｏを形成し；
Ｒ７およびＲ８は、水素、ハロ、−ＯＨ、−Ｏ−ＹおよびＹから独立に選択され；
Ｒ９は、水素、ハロ、−ＯＨ、−ＯＣＦ３、−Ｏ−Ｙ、Ｙから選択され；
各Ｘは、Ｃ０−Ｃ５直鎖または分岐アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；かつ、
各Ｙは、Ｃ１−Ｃ５直鎖または分岐アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；
ここで、任意のＹまたはＸは、−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４アルケン）、ハロ、−ＮＨ２の１以上で置換されていてもよい］。
【請求項2】
化合物が構造式（ＩＩａ）で表される構造を有する、請求項１に記載の化合物または塩：
[この文献は図面を表示できません]
【請求項3】
化合物が構造式（ＩＩＩａ）で表される構造を有する、請求項１に記載の化合物または塩：
【化3】
[この文献は図面を表示できません]
【請求項4】
ｐが０である、請求項１に記載の化合物または塩。
【請求項5】
−（ＣＨ２）ｐ−Ｒ１が下記のいずれか１つから選択される、請求項１に記載の化合物または塩：
【化4】
[この文献は図面を表示できません]
【請求項6】
Ｒ１がフェニル、飽和または不飽和５〜６員複素環および縮合二環式８〜１１員飽和または不飽和炭素環または複素環から選択される、請求項１に記載の化合物または塩。
【請求項7】
Ｒ１が下記のいずれか１つから選択される、請求項１に記載の化合物または塩：
【化5】
[この文献は図面を表示できません]
【請求項8】
Ｒ２が５〜７員飽和炭素環または複素環、Ｎ結合複素環、および８〜１１員飽和または不飽和複素環から選択される、請求項１に記載の化合物または塩。
【請求項9】
Ｒ２が下記のいずれか１つから選択される、請求項８に記載の化合物または塩：
【化6】
[この文献は図面を表示できません]
【請求項10】
化合物が下記である、請求項１に記載の化合物または塩：
【化7】
[この文献は図面を表示できません]
【請求項11】
化合物が下記である、請求項１に記載の化合物または塩：
【化8】
[この文献は図面を表示できません]
【請求項12】
薬学的に許容可能な担体または希釈剤と請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物とを含んでなる、医薬組成物。
【請求項13】
付加的な活性薬剤をさらに含んでなる、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項14】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物が局所用担体を含有する局所用製剤に組み込まれるものである、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項15】
細胞におけるサーチュイン−１活性増強のための、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項16】
接触性皮膚炎（刺激物接触性皮膚炎およびアレルギー性接触性皮膚炎を含む）、アトピー性皮膚炎（アレルギー性湿疹としても知られる）、日光角化症、角化障害（湿疹を含む）、表皮水疱性疾患（天疱瘡を含む）、剥脱性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、紅斑（多形性紅斑および結節性紅斑を含む）、日光もしくは他の光源により引き起こされる損傷、円板状紅斑性狼瘡、皮膚筋炎、乾癬、皮膚癌または自然老化の作用の予防または治療のための、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項17】
アトピー性皮膚炎の予防または治療のための、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項18】
乾癬の予防または治療のための、請求項１２に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【0001】
背景サイレント情報レギュレーター(Silent Information Regulator)（ＳＩＲ）ファミリーの遺伝子は、始原細菌から真核生物までに及ぶ生物のゲノムに存在する保存性の高い遺伝子群である。コードされているＳＩＲタンパク質は、遺伝子サイレンシングの調節からＤＮＡ修復までの多様なプロセスに関与する。このファミリーの中で十分に特徴付けられている遺伝子はＳ．セレビシエ(S. cerevisiae)ＳＩＲ２であり、これは、酵母接合型、テロメア位置効果および細胞老化を特定する情報を含むサイレンシングＨＭ遺伝子座に関与する。酵母Ｓｉｒ２タンパク質は、ヒストン脱アセチル化酵素のファミリーに属す。ＳＩＲ遺伝子ファミリーのメンバーによりコードされているタンパク質は、２５０アミノ酸のコアドメインに高い配列保存を示す。ネズミチフス菌(Salmonella typhimurium)におけるＳｉｒ２ホモログであるＣｏｂＢは、ＮＡＤ（ニコチン酸アミドアデニンジヌクレオチド）依存性ＡＤＰリボシルトランスフェラーゼとして機能する。
【0002】
Ｓｉｒ２タンパク質は、共通基質としてＮＡＤを使用するクラスＩＩＩ脱アセチル化酵素である。多くが遺伝子サイレンシングに関与する他の脱アセチル化酵素とは違い、Ｓｉｒ２は、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）のようなクラスＩおよびＩＩヒストン脱アセチル化酵素阻害剤に不感受性である。
【0003】
Ｓｉｒ２によるアセチル−リシンの脱アセチル化は、ＮＡＤ加水分解と強く共役しており、ニコチンアミドと新規なアセチル−ＡＤＰリボース化合物を産生する。その機能にはＳｉｒ２のＮＡＤ依存性脱アセチル化酵素活性が不可欠であり、このことは酵母においてその生物学的役割を細胞代謝と結びつけ得る。哺乳動物のＳｉｒ２ホモログは、ＮＡＤ依存性ヒストン脱アセチル化酵素活性を有する。
【0004】
生化学的研究では、Ｓｉｒ２がヒストンＨ３およびＨ４のアミノ末端テールを容易に脱アセチル化して、２’／３’−Ｏ−アセチル−ＡＤＰ−リボース（ＯＡＡＤＰＲ）とニコチンアミドの形成をもたらし得ることが示されている。ＳＩＲ２の余分なコピーを有する系統は、ｒＤＮＡサイレンシングの増強と３０％長い寿命を示す。また、Ｃ．エレガンス（C. elegans）ＳＩＲ２ホモログであるｓｉｒ−２．１、およびキイロショウジョウバエ(D. melanogaster)ｄＳｉｒ２遺伝子の余分なコピーはこれらの生物において寿命を延長することも示されている。このことは、老化に関するＳＩＲ２依存性調節経路が進化の早期に発生し、よく保存されていることを意味する。今日、Ｓｉｒ２遺伝子は、生物の健康およびストレス耐性を増進して逆境に生き残る機会を高めるために進化してきたと考えられる。
【0005】
ヒトでは、Ｓｉｒ２の保存された触媒ドメインを共通に持つ数種のＳｉｒ２様遺伝子（ＳＩＲＴ１〜ＳＩＲＴ７）が存在する。ＳＩＲＴ１は、Ｓｉｒ２と最も高い程度の配列類似性を有する核タンパク質である。ＳＩＲＴ１は、腫瘍抑制因子ｐ５３、細胞シグナル伝達因子ＮＦ−κＢ、およびＦＯＸＯ転写因子を含む、脱アセチル化による複数の細胞標的を調節する。
【0006】
ＳＩＲＴ３は、原核生物および真核生物で保存されているＳＩＲＴ１のホモログである。ＳＩＲＴ３タンパク質は、Ｎ末端に位置するユニークなドメインによりミトコンドリアのクリスタに標的化される。ＳＩＲＴ３は、ＮＡＤ＋依存性タンパク質脱アセチル化酵素活性を有し、特に、代謝活性のある組織で遍在発現する。ミトコンドリアに移行すると、ＳＩＲＴ３は、ミトコンドリアマトリックスプロセシングペプチダーゼ（ＭＰＰ）により切断されて、より小さな活性型になると考えられている。
【0007】
７０年の間、カロリー制限は哺乳動物の健康を改善し、寿命を延長することが知られていた。酵母の寿命も、後生動物の寿命と同様に、低グルコースなどのカロリー制限を模した介入により延長される。ＳＩＲ２遺伝子を欠く酵母およびハエの両方は、カロリー制限しても長く生きないという発見は、ＳＩＲ２遺伝子が、制限されたカロリー食の有益な健康効果に介在するという証拠を提供する。さらに、酵母グルコース応答性ｃＡＭＰ（アデノシン３’，５’−一リン酸）依存性（ＰＫＡ）経路の活性を低下させる突然変異は、野生型細胞における寿命を延長するが変異型ｓｉｒ２株では延長せず、このことはＳＩＲ２がおそらくカロリー制限経路の重要な下流成分であることを示す。
【0008】
治療的可能性に加え、ＳＩＲＴ１活性および小分子サーチュイン調節剤による活性化の構造的および生物物理学的研究は、サーチュインの生物学的機能の理解、さらにサーチュイン活性化の作用機序の理解を進めるため、および新規なサーチュイン調節剤を同定するアッセイの開発を助けるために有用であろう。
【発明の概要】
【0009】
概要本明細書では、新規なサーチュイン調節化合物およびその使用方法が提供される。
【0010】
一面において、本発明は、以下に詳細に記載されるような構造式（Ｉ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）および（ＩＶ）のサーチュイン調節化合物を提供する。
【0011】
別の面では、本発明は、サーチュイン調節化合物、またはサーチュイン調節化合物を含んでなる組成物を使用するための方法を提供する。特定の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、例えば、細胞寿命の延長、ならびに、例えば、老化またはストレスに関連する疾患または障害、糖尿病、肥満、神経変性疾患、化学療法薬誘発性神経障害、虚血イベントに関連する神経障害、眼疾患および／または障害、心血管疾患、血液凝固障害、炎症、および／または潮紅などを含む多様な疾患および障害の治療および／または予防を含む、様々な治療適用に使用することができる。サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物はまた、ミトコンドリア活性の増強から利益を受けると思われる対象における疾患もしくは障害を治療するため、筋肉性能を向上させるため、筋肉のＡＴＰレベルを高めるため、または低酸素もしくは虚血に関連する筋肉組織損傷を治療もしくは予防するために使用してもよい。他の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、例えば、ストレスに対する細胞の感受性の増強、アポトーシスの増加、癌の治療、食欲の刺激、および／または体重増加の刺激などを含む、様々な治療適用のために使用してもよい。以下にさらに記載されるように、本方法は、それを必要とする対象に薬学上有効な量のサーチュイン調節化合物を投与することを含んでなる。
【0012】
特定の面では、サーチュイン調節化合物は、単独で投与してもよいし、または他のサーチュイン調節化合物もしくは他の治療薬を含む他の化合物と組み合わせて投与してもよい。
【図面の簡単な説明】
【0013】
【図3】図３は、（Ａ）全長ＳＩＲＴ１のＨＤＸ−ＭＳ、（Ｂ）ＳＩＲＴ１ｃｃ活性に対するＣＢＳの効果の酵素的特徴、（Ｃ）ミニｈＳＩＲＴ１（ΔＮ）とミニｈＳＩＲＴ１のＳＴＡＣ活性化のピボットプロット、（Ｄ）ミニｈＳＩＲＴ１（ΔＣＢＳ）とミニｈＳＩＲＴ１のＳＴＡＣ活性化のピボットプロット、および（Ｅ）ミニｈＳＩＲＴ１（Ｅ２３０Ｋ）とミニｈＳＩＲＴ１のＳＴＡＣ活性化のピボットプロットを示す。
【発明の具体的説明】
【0014】
１．定義本明細書で使用する場合、以下の語句は下記に示す意味を有するものとする。そうではないことが定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、当業者に一般に理解されているのと同じ意味を有する。
【0015】
用語「薬剤」は、本明細書では、化学化合物、化学化合物の混合物、生体高分子（例えば、核酸、抗体、タンパク質もしくはその一部、例えば、ペプチド）、または細菌、植物、真菌、もしくは動物（特に、哺乳動物）細胞もしくは組織などの生体材料から形成される抽出物を表して使用される。
【0016】
化合物に関して言う場合の用語「生物学的に利用可能な(bioavailable)」は技術分野で認識されており、投与された化合物の全部または一部が、それが投与される対象または患者に吸収されるか、組み込まれるか、またはそうでなければ生理学的に利用可能であることを可能とする化合物の形態を意味する。
【0017】
「サーチュインの生物学的に活性な部分」は、脱アセチル化能などの生物活性を有する（「触媒活性のある」）サーチュインタンパク質の部分を意味する。サーチュインの触媒活性部分は、サーチュインのコアドメインを含んでなり得る。例えば、ＮＡＤ＋結合ドメインと基質結合ドメインを包含する、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３６３７０のＳＩＲＴ１の触媒活性部分は、限定されるものではないが、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１２２３８のポリヌクレオチドによりコードされる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３６３７０のアミノ酸２４０〜６６４または２４０〜５０５を含み得る。従って、この領域は、コアドメインと呼ばれる場合がある。ＳＩＲＴ１の他の触媒活性部分もまたコアドメインと呼ばれることがあり、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１２２３８のヌクレオチド８３４〜１３９４によりコードされる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３６３７０の約アミノ酸２６１〜４４７；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１２２３８のヌクレオチド７７７〜１５３２によりコードされる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３６３７０の約アミノ酸２４２〜４９３；またはＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１２２３８のヌクレオチド８１３〜１５３８によりコードされる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３６３７０の約アミノ酸２５４〜４９５を含む。ＳＩＲＴ１の別の「生物学的に活性な」部分は、化合物結合部位に重要なコアドメインのＮ末端側のドメインを含んでなる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３６３７０のアミノ酸６２〜２９３または１８３〜２２５である。
【0018】
用語「伴侶動物」は、ネコおよびイヌを意味する。本明細書で使用する場合、用語「イヌ」は、カニス・ファミリアス(Canis familiaris)種の任意のメンバーを表し、それには多数の異なる品種が存在する。用語「ネコ」は、飼いネコおよびネコ科(Felidae)ネコ属(Felis)の他のメンバーを含むネコ動物を意味する。
【0019】
「糖尿病」は、高血糖またはケトアシドーシス、ならびに長期高血糖状態から生じる慢性遺伝的代謝異常または糖耐性における疾患を意味する。「糖尿病」は、疾患のＩ型およびＩＩ型（非インスリン依存性真性糖尿病またはＮＩＤＤＭ）の両形態を包含する。糖尿病のリスク因子としては以下の因子が含まれる：男性では４０インチもしくは女性では３５インチを超える胴囲、１３０／８５ｍｍＨｇ以上の血圧、１５０ｍｇ／ｄｌを超えるトリグリセリド、１００ｍｇ／ｄｌを超える空腹時血糖、または男性では４０ｍｇ／ｄｌもしくは女性では５０ｍｇ／ｄｌ未満の高密度リポタンパク質。
【0020】
用語「ＥＤ５０」は技術分野で認識されており、有効用量の尺度を意味する。特定の実施態様では、ＥＤ５０は、その最大応答または効果を５０％引き下げる薬物の用量、あるいは、被験者または摘出組織もしくは細胞などの調製物の５０％に所定の応答をもたらす用量を意味する。用語「ＬＤ５０」は、技術分野で認識されている致死用量の尺度である。特定の実施態様では、ＬＤ５０は、被験体の５０％が死に至る薬物の用量を意味する。用語「治療係数」は、ＬＤ５０／ＥＤ５０として定義される薬物の治療係数を意味する、技術分野で認識されている用語である。
【0021】
用語「高インスリン血症」は、ある個体における血中のインスリンレベルが正常より高い状態を意味する。
【0022】
用語「インスリン抵抗性」は、正常な量のインスリンが、インスリン抵抗性を有さない対象の生物学的応答に比べて正常以下の生物学的応答をもたらす状態を意味する。
【0023】
本明細書に述べるような「インスリン抵抗性障害」は、インスリン抵抗性により引き起こされる、または寄与される任意の疾患または病態を意味する。例としては、糖尿病、肥満、代謝症候群、インスリン抵抗性症候群、Ｘ症候群、インスリン抵抗性、高血圧、高血圧症、高血中コレステロール、異脂肪血症、高脂血症、アテローム性動脈硬化性疾患（脳卒中、冠動脈疾患または心筋梗塞を含む）、高血糖症、高インスリン血症および／または高プロインスリン血症、耐糖能異常、インスリン放出遅延、糖尿病性合併症（冠動脈性心疾患、狭心症、鬱血性心不全、脳卒中、認知症における認知機能、網膜症、末梢神経障害、腎症、糸球体腎炎、糸球体硬化症、ネフローゼ症候群、高血圧性腎硬化症、数種の癌（例えば、子宮内膜癌、乳癌、前立腺癌、および結腸癌）、妊娠合併症、女性の生殖に関する健康の不全(poor female reproductive health)（例えば、生理不順、不妊症、排卵不順、多嚢性卵巣症候群（ＰＣＯＳ））、脂肪異栄養症、コレステロール関連障害（例えば、胆石、胆嚢炎および胆石症）、痛風、閉塞性睡眠時無呼吸および呼吸器系障害、骨関節炎、ならびに骨欠損（例えば、特に、骨粗鬆症）が挙げられる。
【0024】
用語「家畜動物」は、例えば、ウシ類動物（ウシおよびウシ属(Bos)の他のメンバーを含む）、ブタ類動物（飼育ブタおよびイノシシ属(Sus)の他のメンバーを含む）、ヒツジ類動物（ヒツジおよびヒツジ属(Ovis)の他のメンバーを含む）、飼育ヤギおよびヤギ属(Capra)の他のメンバーなどの、食肉および様々な副産物のために飼養されるものを含む家畜化された四足動物、荷物運搬としての飼養などの特殊作業のために飼養される家畜化された四足動物、例えば、ウマ科(Equidae)ウマ属(Equus)の飼育ウマおよび他のメンバーを含むウマ類動物を意味する。
【0025】
用語「哺乳動物」は当技術分野で公知であり、例示的哺乳動物としては、ヒト、霊長類、家畜動物（ウシ、ブタなどを含む）、伴侶動物（例えば、イヌ、ネコなど）および齧歯類（例えば、マウスおよびラット）が挙げられる。
【0026】
「肥満」個体または肥満症に罹患している個体は一般に、少なくとも２５以上の体格指数（ＢＭＩ）を有する個体である。肥満はインスリン抵抗性に関連する場合も関連しない場合もある。
【0027】
用語「非経口投与」および「非経口投与される」とは、技術分野で認識されており、経腸投与および局所投与以外の、通常には注射による投与様式を意味し、限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、および胸骨内注射および注入が含まれる。
【0028】
「患者」、「対象」、「個体」または「宿主」は、ヒトまたは非ヒト動物のいずれかを意味する。
【0029】
用語「薬学的に許容可能な担体」は、技術分野で認識されており、任意の対象組成物またはその成分の運搬または輸送ににかかわる、薬学的に許容可能な材料、組成物またはビヒクル、例えば、液体または固体増量剤、希釈剤、賦形剤、溶媒または封入剤を意味する。各担体は、対象組成物およびその成分と適合し、かつ、患者に害がないという意味で「許容可能」でなければならない。薬学的に許容可能な担体として働き得る材料のいくつかの例としては、（１）ラクトース、グルコースおよびスクロースなどの糖類；（２）コーンスターチおよびジャガイモデンプンなどのデンプン類；（３）セルロース、およびその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよびセルロースアセテート；（４）粉末トラガカントガム；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）カカオ脂および坐剤ワックスなどの賦形剤；（９）落花生油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油および大豆油などの油類；（１０）プロピレングリコールなどのグリコール類；（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなどのポリオール類；（１２）オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル類；（１３）寒天；（１４）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；（１５）アルギン酸；（１６）発熱性物質除去水；（１７）等張性生理食塩水；（１８）リンゲル液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸緩衝溶液；および（２１）医薬製剤に使用される他の無毒な適合性物質が含まれる。
【0030】
用語「予防する」は、技術分野で認識されており、局部的再発（例えば、疼痛）などの病態、癌などの疾患、心不全などの複合症候群(syndrome complex)、または他の任意の医学的状態に関して使用する場合、当技術分野で十分に理解されており、組成物を受容していない対象に比べて、対象の医学的状態の症状の頻度を少なくするまたは発症を遅延させる組成物の投与を含む。よって、癌の予防には、例えば、統計学的および／または臨床的に有意な量まで、非処置対照集団に比べて予防的処置を受けた患者集団において検出可能な癌増殖の数を低減すること、および／または非処置対照集団に比べて処置集団において検出可能な癌増殖の出現を遅延させることが含まれる。感染の予防としては、例えば、非処置対照集団に比べて処置集団において感染の診断数を低減すること、および／または非処置対照集団に比べて処置集団において感染の症状の発症を遅延させることが含まれる。疼痛の予防には、例えば、非処置対照集団に比べて処置集団の対象が受ける疼痛感覚の大きさを軽減すること、あるいはまた、遅延させることが含まれる。
【0031】
用語「予防的処置」または「治療的処置」は技術分野で認識されており、宿主への薬物の投与を意味する。薬物が望ましくない病態（例えば、宿主動物の疾患または他の望ましくない状態）の臨床徴候の前に投与されれば、その処置は予防的であり、すなわち、望ましくない病態の発症からの宿主の保護であり、一方、望ましくない病態の徴候後に投与されれば、その処置は治療的である（すなわち、既存の望ましくない病態のまたはそれからの副作用を軽減、改善または維持することを意図される）。
【0032】
組成物に関して用語「発熱物質不含」は、組成物が投与された対象において、有害な作用（例えば、刺激作用、発熱、炎症、下痢、呼吸困難、内毒素ショックなど）をもたらすような量で発熱物質を含有しない組成物を意味する。例えば、この用語は、例えばリポ多糖類（ＬＰＳ）などの内毒素を含まないか、または実質的に含まない組成物を包含するものとする。
【0033】
細胞の「複製寿命」は、一個の「母細胞」により産生される娘細胞の数を意味する。他方、「生活加齢(chronological aging)」または「生活寿命(chronological lifespan)」は、非分裂細胞の集団が、栄養素が奪われた際に生残し続ける時間を意味する。「細胞の寿命を延長する」または「細胞の寿命を引き延ばす」とは、細胞または生物に適用される場合、一細胞により産生される娘細胞の数を増やすこと；細胞もしくは生物の、ストレスに対処し、例えば、ＤＮＡ、タンパク質に対する損傷に対抗する能力を高めること；および／または細胞もしくは生物の、例えば、ストレス（例えば、ヒートショック、浸透圧ストレス、高エネルギー放射線、化学的に誘導されるストレス、ＤＮＡ損傷、不適当な塩レベル、不適当な窒素レベル、または不適当な栄養素レベル）などの特定の条件下でより長期間生残する、および生きた状態で存在する能力を高めることを意味する。寿命は、本明細書に記載の方法を使用すると、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％または２０％〜７０％、３０％〜６０％、４０％〜６０％の間、またはそれを超える程度まで延長可能である。
【0034】
「サーチュイン調節化合物」は、サーチュインタンパク質のレベルを増すおよび／またはサーチュインタンパク質の少なくとも１つの活性を増強する化合物を意味する。例示的実施態様では、サーチュイン調節化合物は、サーチュインタンパク質の少なくとも１つの生物活性を少なくとも約１０％、２５％、５０％、７５％、１００％、またはそれを超える程度で増強し得る。サーチュインタンパク質の例示的生物活性としては、例えばヒストンおよびｐ５３の脱アセチル化；寿命の延長；ゲノム安定性の増強；サイレンシング転写；および母細胞と娘細胞の間の酸化タンパク質の分離の制御が含まれる。
【0035】
タンパク質は、例えばアセチル化ペプチド基質の脱アセチル化を含む。
【0036】
「サーチュインタンパク質」は、サーチュイン脱アセチル化酵素タンパク質ファミリーのメンバー、または好ましくは、酵母Ｓｉｒ２（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ５３６８５）、Ｃ．エレガンスＳｉｒ−２．１（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿５０１９１２）、およびヒトＳＩＲＴ１（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１２２３８およびＮＰ＿０３６３７０（またはＡＦ０８３１０６））およびＳＩＲＴ２（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１２２３７、ＮＭ＿０３０５９３、ＮＰ＿０３６３６９、ＮＰ＿０８５０９６、およびＡＦ０８３１０７）タンパク質を含むｓｉｒ２ファミリーを意味する。他のファミリーメンバーとしては、「ＨＳＴ遺伝子」（Ｓｉｒ２ホモログ(homologues of Sir two)）と呼ばれる４つのさらなる酵母Ｓｉｒ２様遺伝子ＨＳＴ１、ＨＳＴ２、ＨＳＴ３およびＨＳＴ４、ならびに５つの他のヒトホモログｈＳＩＲＴ３、ｈＳＩＲＴ４、ｈＳＩＲＴ５、ｈＳＩＲＴ６およびｈＳＩＲＴ７(Brachmann et al. (1995) Genes Dev. 9:2888 and Frye et al. (1999) BBRC 260:273)が含まれる。
【0037】
「ＳＩＲＴ１タンパク質」は、サーチュイン脱アセチル化酵素のｓｉｒ２ファミリーのメンバーを意味する。特定の実施態様では、ＳＩＲＴ１タンパク質は、酵母Ｓｉｒ２（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ５３６８５）、Ｃ．エレガンスＳｉｒ−２．１（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿５０１９１２）、ヒトＳＩＲＴ１（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１２２３８またはＮＰ＿０３６３７０（またはＡＦ０８３１０６））、マウスＳＩＲＴ１（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１９８１２またはＮＰ＿０６２７８６）、ならびにその等価物および断片を含む。別の実施態様では、ＳＩＲＴ１タンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３６３７０、ＮＰ＿５０１９１２、ＮＰ＿０８５０９６、ＮＰ＿０３６３６９、またはＰ５３６８５で示されるアミノ酸配列からなるか、またはから本質的になる配列を含んでなるポリペプチドを含む。ＳＩＲＴ１タンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３６３７０、ＮＰ＿５０１９１２、ＮＰ＿０８５０９６、ＮＰ＿０３６３６９、またはＰ５３６８５で示されるアミノ酸配列；１〜約２、３、５、７、１０、１５、２０、３０、５０、７５個またはそれを超える保存的アミノ酸置換を有する、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３６３７０、ＮＰ＿５０１９１２、ＮＰ＿０８５０９６、ＮＰ＿０３６３６９、またはＰ５３６８５で示されるアミノ酸配列；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３６３７０、ＮＰ＿５０１９１２、ＮＰ＿０８５０９６、ＮＰ＿０３６３６９、またはＰ５３６８５と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列の全部または一部を含んでなるポリペプチド、およびその機能的断片を含む。本発明のポリペプチドはまた、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３６３７０、ＮＰ＿５０１９１２、ＮＰ＿０８５０９６、ＮＰ＿０３６３６９、またはＰ５３６８５のホモログ（例えば、オーソログおよびパラログ）、変異体、または断片も含む。
【0038】
本明細書で使用する場合、「ＳＩＲＴ２タンパク質」、「ＳＩＲＴ３タンパク質」、「ＳＩＲＴ４タンパク質」、「ＳＩＲＴ５タンパク質」、「ＳＩＲＴ６タンパク質」、および「ＳＩＲＴ７タンパク質」は、ＳＩＲＴ１タンパク質、特に、およそ２７５アミノ酸の保存された触媒ドメインにおいて相同である、他の哺乳動物、例えば、ヒトのサーチュイン脱アセチル化酵素タンパク質を意味する。例えば、「ＳＩＲＴ３タンパク質」は、ＳＩＲＴ１タンパク質と相同なサーチュイン脱アセチル化酵素タンパク質ファミリーのメンバーを意味する。特定の実施態様では、ＳＩＲＴ３タンパク質は、ヒトＳＩＲＴ３（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＨ０１０４２、ＮＰ＿０３６３７１、またはＮＰ＿００１０１７５２４）およびマウスＳＩＲＴ３（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０７１８７８）タンパク質、ならびにその等価物および断片を含む。特定の実施態様では、ＳＩＲＴ４タンパク質は、ヒトＳＩＲＴ４（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１２２４０またはＮＰ＿０３６３７２）を含む。特定の実施態様では、ＳＩＲＴ５タンパク質は、ヒトＳＩＲＴ５（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１２２４１またはＮＰ＿０３６３７３）を含む。特定の実施態様では、ＳＩＲＴ６タンパク質は、ヒトＳＩＲＴ６（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１６５３９またはＮＰ＿０５７６２３）を含む。別の実施態様では、ＳＩＲＴ３タンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＨ０１０４２、ＮＰ＿０３６３７１、ＮＰ＿００１０１７５２４、またはＮＰ＿０７１８７８で示されるアミノ酸配列からなるか、またはから本質的になる配列を含んでなるポリペプチドを含む。ＳＩＲＴ３タンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＨ０１０４２、ＮＰ＿０３６３７１、ＮＰ＿００１０１７５２４、またはＮＰ＿０７１８７８で示されるアミノ酸配列；１〜約２、３、５、７、１０、１５、２０、３０、５０、７５個またはそれを超える保存的アミノ酸置換を有する、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＨ０１０４２、ＮＰ＿０３６３７１、ＮＰ＿００１０１７５２４、またはＮＰ＿０７１８７８で示されるアミノ酸配列；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＨ０１０４２、ＮＰ＿０３６３７１、ＮＰ＿００１０１７５２４、またはＮＰ＿０７１８７８と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列の全部または一部を含んでなるポリペプチド、ならびにその機能的断片を含む。本発明のポリペプチドはまた、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＨ０１０４２、ＮＰ＿０３６３７１、ＮＰ＿００１０１７５２４、またはＮＰ＿０７１８７８のホモログ（例えば、オーソログおよびパラログ）、変異体、または断片も含む。特定の実施態様では、ＳＩＲＴ３タンパク質は、ミトコンドリアマトリックスプロセシングペプチダーゼ（ＭＰＰ）および／またはミトコンドリア中間ペプチダーゼ（ＭＩＰ）での切断により産生されるＳＩＲＴ３タンパク質の断片を含む。
【0039】
用語「立体異性体」は、本明細書で使用する場合、技術分野で認識されており、同じ分子構成を有し、それらの原子団の三次元空間配置だけが異なる、２以上の異性体のいずれもを意味する。本明細書で化合物または化合物属を記載するために使用される場合、立体異性体は、化合物の任意の一部または化合物全体を含む。例えば、ジアステレオマーおよび鏡像異性体は立体異性体である。
【0040】
用語「全身投与」および「全身投与される」とは、技術分野で認識されており、対象組成物、治療薬または他の物質を経腸的または非経口的投与を意味する。
【0041】
用語「互変異性体」は、本明細書で使用する場合、技術分野で認識されており、ある構造が互変異性（特に酸素に結合している水素の位置に関して２以上の構成配置で存在し得る構造異性の形態を意味する）の結果として存在し得る、可能性のある選択的構造のいずれか１つを意味する。本明細書で化合物または化合物属を記載するために使用する場合、「互変異性体」は容易に相互変換し、平衡状態で存在するものとさらに理解される。例えば、ケトおよびエノール互変異性体は、任意の所与の条件または条件群に関する平衡位置によって決定される割合で存在する。【化1】
[この文献は図面を表示できません]
【0042】
用語「治療薬」は、技術分野で認識されており、対象において局所的または全身的に作用する任意の生物学的に、生理学的に、または薬理学的に活性な物質を意味する。この用語はまた、動物またはヒトにおける、疾患の診断、治癒、緩和、治療もしくは予防において、または望ましい心身の発達および／もしくは状態の増進において使用することを意図した任意の物質も意味する。
【0043】
用語「治療効果」は、技術分野で認識されており、動物、特に、哺乳動物、より詳しくは、ヒトにおいて、薬理学的に活性な物質によって引き起こされる有益な局所的または全身的効果を意味する。「治療上有効な量」という句は、任意の処置に適用可能な合理的利益／リスク比で何らかの望まれる局所的または全身的効果をもたらすような物質の量を意味する。このような物質の治療上有効な量は、治療される対象および病態、対象の体重および齢、病態の重篤度、投与様式などによって異なり、当業者により容易に決定され得る。例えば、本明細書に記載の特定の組成物は、処置に適用可能な合理的利益／リスク比で望まれる効果をもたらす十分な量で投与することができる。
【0044】
病態または疾患を「治療する」とは、病態または疾患の少なくとも１つの症状を治癒することならびに改善することを意味する。
【0045】
用語「視力障害」は、治療（例えば、手術）で部分的にしか逆転できない、または逆転できない場合が多い視力の減退を意味する。特に重篤な視力障害は、「失明」または「視力喪失」と呼ばれ、完全な視力喪失、矯正レンズでは改善できない２０／２００より悪い視力、または２０°直径（１０°半径）未満の視野を意味する。
【0046】
２．化合物一面において、本発明は、例えば、老化またはストレスに関連する疾患または障害、糖尿病、肥満、神経変性疾患、眼疾患および障害、心血管疾患、血液凝固障害、炎症、癌、および／または潮紅などを含む多様な疾患および障害を治療および／または予防するための新規な化合物を提供する。サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物などの対象化合物はまた、ミトコンドリア活性の増強から利益を受けると思われる対象における疾患もしくは障害を治療するため、筋肉性能を向上させるため、筋肉のＡＴＰレベルを高めるため、または低酸素もしくは虚血に関連する筋肉組織損傷を治療もしくは予防するために使用してもよい。本明細書に開示される化合物は、本明細書に開示される医薬組成物および／または１以上の方法において使用するために好適であり得る。
【0047】
特定の実施態様では、本発明の化合物は構造式（Ｉ）により表される。
【0048】
本発明は、構造式（Ｉ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、および（ＩＶ）の、またはそうでなければ上記で示される化合物のいずれかの医薬組成物を含む。構造式（Ｉ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、および（ＩＶ）の化合物の医薬組成物は、１種類以上の薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含んでなり得る。
【0049】
一実施態様では、本発明のサーチュイン調節化合物は構造式（Ｉ）：【化2】
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［式中、ｍは、１または２であり；
ｎは、２または３であり；
ｐは、０〜４であり；
Ｒ１は、炭素環および複素環から選択され、ここで、Ｒ１は、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、フルオロ置換Ｃ１−Ｃ４アルキル、−Ｃ≡Ｎ、−Ｙ、−Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ、−Ｘ−Ｏ−Ｙ、−Ｘ−ＯＲ４、−Ｘ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ３Ｒ３、−Ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ−ＮＲ３Ｒ３、−Ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ、−Ｘ−ＮＲ３Ｒ３、＝Ｏ、−ＮＨ−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒ３、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒ３、−Ｓ−Ｒ３、−（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル、−Ｃ（＝Ｎ）−ＮＲ３Ｒ３、−Ｃ（＝Ｎ）−ＮＨ−Ｘ−ＮＲ３Ｒ３、−Ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｘ、−ＮＨ−Ｘ、フェニル、−Ｏ−フェニル、３〜６員飽和または不飽和複素環および−Ｏ−（５〜６員飽和複素環）から独立に選択される１以上の置換基で置換されていてもよく、ここで、Ｒ１の任意のフェニル、３〜６員飽和もしくは不飽和複素環または−Ｏ−５〜６員飽和複素環置換基は、ハロ、−ＯＲ４、−Ｘ−Ｏ−Ｙ、−ＣＦ３、−Ｙ、−Ｘ−Ｒ３Ｒ３、−Ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ−ＮＲ３Ｒ３、−Ｘ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ−（５〜６員飽和複素環または炭素環）、−Ｘ−Ｃ（＝Ｎ）−ＮＲ３Ｒ３および−Ｓ−Ｙから選択される１以上の置換基で置換されていてもよく、かつ、置換可能な任意の窒素原子において、−Ｙ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＲ４、−Ｙ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ−ＮＲ３Ｒ３、−Ｙ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ、−Ｙ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＲ４、−Ｙ−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｙまたは−Ｃ（＝Ｏ）−３〜５員飽和炭素環で置換されていてもよく；
Ｒ２は、炭素環および複素環から選択され、ここで、Ｒ２は、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、フルオロ置換Ｃ１−Ｃ４アルキル、−Ｃ≡Ｎ、−Ｙ、−Ｘ−ＯＲ４、−Ｘ−Ｏ−Ｙ、−ＳＯ２−Ｒ３、−Ｘ-ＮＲ３Ｒ３、−ＮＨ−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ３Ｒ３、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ、−ＳＯ２−Ｒｙ、−ＳＯ２−ＮＨ−Ｒｙ、−ＳＯ２−ＮＲ３Ｒ３、３〜６員飽和炭素環または複素環およびフェニルから独立に選択される１以上の置換基で置換されていてもよく、ここで、Ｒ２の任意の３〜６員飽和複素環置換基は、任意の炭素原子において、ハロ、−ＣＦ３、−Ｙ、−Ｘ−Ｏ−Ｙ、−ＮＨ−Ｙおよび−Ｎ（Ｙ）２から選択される１以上の置換基で置換されていてもよく、かつ、任意の窒素原子において、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ、−Ｙおよび−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙから選択される１以上の置換基で置換されていてもよく、かつ、Ｒ２がＮ結合５〜７員飽和または不飽和複素環である場合、それは任意の窒素原子において、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ、−Ｙおよび−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙから選択される１以上の置換基でさらに置換され；
各Ｒ３は、水素、−Ｃ（＝Ｎ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ、−Ｙ、−Ｙ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ、−Ｙ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ、−Ｙ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＦ３、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ−３〜５員飽和複素環、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ−（３〜５員飽和複素環）、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＦ３、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＣＦ３、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｙ、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＯＨから独立に選択され；
２つのＲ３は、それらが結合されている窒素または炭素原子と一緒に、Ｎ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）２、およびＯから独立に選択される１個の付加的ヘテロ原子を含んでなってもよい４〜８員飽和複素環を形成し、ここで、２つのＲ３により形成される複素環は、任意の炭素原子において、ＯＨ、ハロ、Ｙ、ＮＨ２、ＮＨ−Ｙ、Ｎ（Ｙ）２、Ｏ−Ｙの１以上で置換されていてもよく、かつ、置換可能な任意の窒素原子において、Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ、ＹまたはＣ（＝Ｏ）−Ｙで置換されていてもよく；
各Ｒ４は、水素、Ｙ、−ＣＦ３、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ、−Ｙ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙまたは−Ｙ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙから独立に選択され；
Ｒ５およびＲ６は、水素、−ＯＨ、−ＯＣＦ３、−Ｏ−Ｙ、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｙ、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｙ）２、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−５〜６員飽和または不飽和複素環または炭素環(-O-C(=O)-5- to 6- membered saturated or unsaturated heterocycle or carbocycle)から独立に選択され、ここで、Ｒ５およびＲ６の一方だけがＯ−Ｃ（＝Ｏ）−５〜６員飽和または不飽和複素環または炭素環であり、かつ、Ｒ５またはＲ６がＯ−Ｃ（＝Ｏ）−５〜６員飽和または不飽和複素環または炭素環である場合、それはハロ、−ＯＨ、Ｙ、−Ｏ−Ｙ、−ＯＣＦ３または−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙでさらに置換され；あるいは
Ｒ５およびＲ６は、それらが結合されている炭素原子と一緒に、＝Ｏを形成し；
Ｒ７およびＲ８は、水素、ハロ、−ＯＨ、−Ｏ−ＹおよびＹから独立に選択され；
Ｒ９は、水素、ハロ、−ＯＨ、−ＯＣＦ３、−Ｏ−Ｙ、Ｙ、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ、−ＮＨ−Ｙおよび−Ｎ（Ｙ）２から選択され；
各Ｘは、Ｃ０−Ｃ５直鎖または分岐アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；かつ、
各Ｙは、Ｃ１−Ｃ５直鎖または分岐アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；
ここで、任意のＹまたはＸは、−ＯＨ、−Ｃ１−Ｃ４直鎖または分岐アルキル、−Ｃ１−Ｃ４アルケン、−Ｃ１−Ｃ４アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４アルケン）、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４アルキニル）、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ１−Ｃ４直鎖または分岐アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ１−Ｃ４アルケン、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ１−Ｃ４アルキニル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ１−Ｃ４直鎖または分岐アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ１−Ｃ４アルケン、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ１−Ｃ４アルキニル、ハロ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）２、−（Ｃ１−Ｃ３直鎖または分岐アルキル）−ＮＨ−（＝ＮＨ）−ＮＨ２、−ＮＨ（アルコキシ−置換Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−ＮＨ（ヒドロキシ−置換Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｎ（アルコキシ−置換Ｃ１−Ｃ４アルキル）（ヒドロキシ−置換Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｎ（ヒドロキシ−置換Ｃ１−Ｃ４アルキル）２または−Ｎ（アルコキシ−置換Ｃ１−Ｃ４アルキル）２の１以上で置換されていてもよい］
で表され、またはその塩である。
【0050】
特定の実施態様では、構造式（Ｉ）の化合物または塩は構造式（ＩＩａ）：【化3】
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で表される構造により特徴付けられる。
【0051】
特定の実施態様では、構造式（Ｉ）の化合物または塩は、構造式（ＩＩＩａ）：【化4】
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で表される構造により特徴付けられる。
【0052】
特定の実施態様では、構造式（Ｉ）の化合物または塩は、構造（ＩＩｂ）または（ＩＩＩｂ）：【化5】
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で表される構造により特徴付けられる。
【0053】
特定の実施態様では、構造式（Ｉ）の化合物または塩は、構造式（ＩＶ）：【化6】
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で表される構造により特徴付けられる。
【0054】
特定の実施態様では、構造式（Ｉ）の化合物または塩は、ｐ＝０を有する（すなわち、Ｃ（Ｏ）−ＮＨとＲ１の間にメチレンが無い）ことを特徴とする。
【0055】
特定の実施態様では、構造式（Ｉ）の化合物または塩は、ｐ＝１〜４を有する（すなわち、Ｃ（Ｏ）−ＮＨとＲ１の間に１〜４個のメチレンがある）ことを特徴とする。
【0056】
特定の実施態様では、構造式（Ｉ）の化合物または塩は、【化7】
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から選択される−（ＣＨ２）ｐ−Ｒ１基を有することを特徴とする。
【0057】
特定の実施態様では、構造式（Ｉ）の化合物または塩は、フェニル、飽和もしくは不飽和５〜６員複素環、または縮合二環式８〜１１員飽和もしくは不飽和炭素環もしくは複素環であるＲ１基を特徴とする。
【0058】
特定の実施態様では、構造式（Ｉ）の化合物または塩は、縮合二環式８〜１１員飽和または不飽和複素環であるＲ１を特徴とする。
【0059】
特定の実施態様では、構造式（Ｉ）の化合物または塩は、【化8】
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のいずれか１つから選択されるＲ１基を特徴とする。
【0060】
特定の実施態様では、構造式（Ｉ）の化合物または塩は、【化9】
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のいずれか１つから選択されるＲ１基を特徴とする。
【0061】
特定の実施態様では、構造式（Ｉ）の化合物または塩は、５〜７員飽和炭素環または複素環、Ｎ結合複素環、および８〜１１員飽和または不飽和複素環から選択されるＲ２基を特徴とする。
【0062】
特定の実施態様では、構造式（Ｉ）の化合物または塩は、Ｎ結合５〜７員飽和または不飽和複素環であるＲ２基を特徴とする。
【0063】
上記の特定の実施態様では、本化合物は、【化10】
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のいずれか１つから選択される。
【0064】
特定の実施態様では、構造式（Ｉ）の化合物または塩は、縮合二環式８〜１１員飽和または不飽和複素環であるＲ２基を特徴とする。
【0065】
上記の特定の実施態様では、本化合物は、【化11】
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のいずれか１つから選択される。
【0066】
特定の実施態様では、構造式（Ｉ）の化合物または塩は、【化12】
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のいずれか１つから選択されるＲ２基を特徴とする。
【0067】
特定の実施態様では、構造式（Ｉ）の化合物または塩は、【化13】
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のいずれか１つから選択されるＲ２基を特徴とする。
【0068】
特定の実施態様では、構造式（Ｉ）の化合物または塩は、【化14】
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のいずれか１つから選択される。
【0069】
特定の実施態様では、構造式（ＩＩａ）の化合物または塩は、【化15】
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のいずれか１つから選択される。
【0070】
特定の実施態様では、構造式（ＩＩＩａ）の化合物または塩は、【化16】
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のいずれか１つから選択される。
【0071】
特定の実施態様では、構造式（ＩＩｂ）の化合物または塩は、【化17】
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から選択される。
【0072】
特定の実施態様では、構造式（ＩＩＩｂ）の化合物または塩は、【化18】
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から選択される。
【0073】
特定の実施態様では、構造式（ＩＶ）の化合物または塩は、【化19】
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のいずれか１つから選択される。
【0074】
新規な本発明の化合物を含む本発明の化合物はまた、本明細書に記載の医薬組成物および方法において使用することもできる。
【0075】
前記実施態様のいずれにおいても、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ置換基は、例えば、１、２もしくは３個のメトキシ基、または１個のメトキシ基と１個のエトキシ基などの１以上のアルコキシ置換基を含み得る。例示的Ｃ１−Ｃ４アルコキシ置換基としては、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、およびｔｅｒｔ−ブトキシが挙げられる。
【0076】
前記実施態様のいずれにおいても、ヒドロキシ置換基は、２または３個のヒドロキシ基などの１以上のヒドロキシ置換基を含み得る。
【0077】
前記実施態様のいずれにおいても、「ハロ置換」基は、１個のハロ置換基からペルハロ置換までを含む。例示的ハロ置換Ｃ１−Ｃ４アルキルとしては、ＣＦＨ２、ＣＣｌＨ２、ＣＢｒＨ２、ＣＦ２Ｈ、ＣＣｌ２Ｈ、ＣＢｒ２Ｈ、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ＣＢｒ３、ＣＨ２ＣＨ２Ｆ、ＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ、ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ、ＣＨ２ＣＨＦ２、ＣＨＦＣＨ３、ＣＨＣｌＣＨ３、ＣＨＢｒＣＨ３、ＣＦ２ＣＨＦ２、ＣＦ２ＣＨＣｌ２、ＣＦ２ＣＨＢｒ２、ＣＨ（ＣＦ３）２、およびＣ（ＣＦ３）３が挙げられる。ペルハロ置換Ｃ１−Ｃ４アルキルとしては、例えば、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ＣＢｒ３、ＣＦ２ＣＦ３、ＣＣｌ２ＣＦ３およびＣＢｒ２ＣＦ３が挙げられる。
【0078】
前記実施態様のいずれにおいても、「炭素環」基は、単環式炭素環具体例および／または多環式炭素環具体例、例えば、縮合式、架橋式または二環式炭素環具体例を意味し得る。本発明の「炭素環」基は、さらに、芳香族炭素環具体例および／もしくは非芳香族炭素環具体例、または、多環式具体例の場合には、１以上の芳香環および／もしくは１以上の非芳香環の両方を有する炭素環も意味し得る。多環式炭素環具体例は、二環式環、縮合環または架橋式二環であり得る。限定されない例示的炭素環としては、フェニル、シクロヘキサン、シクロペンタン、またはシクロヘキセン、アマンタジン、シクロペンタン、シクロヘキサン、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、１，５−シクロオクタジエン、１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン、ビシクロ［４．２．０］オクト−３−エン、ナフタレン、アダマンタン、デカリン、ナフタレン、１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン、ノルボルナン、デカリン、スピロペンタン、メマンチン、ビペリデン、リマンタジン、カンファー、コレステロール、４−フェニルシクロヘキサノール(4-phenylcyclcohexanol)、ビシクロ［４．２．０］オクタン、メマンチンおよび４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−インデンおよびビシクロ［４．１．０］ヘプト−３−エンが挙げられる。
【0079】
前記実施態様のいずれにおいても、「複素環」基は、単環式複素環具体例および／または 多環式複素環式具体例、例えば、縮合式、架橋式または二環式複素環具体例を意味し得る。本発明の「複素環」基は、さらに、芳香族複素環具体例および／もしくは非芳香族複素環具体例、または多環式具体例の場合には、１以上の芳香環および／もしくは１以上の非芳香環の両方を有する複素環も意味し得る。多環式複素環具体例は、二環式環、縮合環または架橋式二環であり得る。限定されない例示的複素環としては、ピリジル、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリン、ピリミジン、ベンゾフラン、インドール、キノリン、ラクトン、ラクタム、ベンゾジアゼピン、インドール、キノリン、プリン、アデニン、グアニン、４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｄ］チアゾール、ヘキサミンおよびメテナミンが挙げられる。
【0080】
本発明の特定の化合物は、特定の幾何異性形または立体異性形で存在し得る。本発明は、本発明の範囲内に入るものとして、シス−およびトランス−異性体、（Ｒ）−および（Ｓ）−鏡像異性体、ジアステレオマー、（Ｄ）−異性体、（Ｌ）−異性体、それらのラセミ混合物、およびそれらの他の混合物を含む、このような総ての化合物を企図する。アルキル基などの置換基に付加的不斉炭素原子が存在してもよい。このような異性体ならびにそれらの混合物は総て本発明に含まれることが意図される。
【0081】
本明細書に記載の化合物およびそれらの塩はまた、対応する水和物（例えば、半水和物、一水和物、二水和物、三水和物、四水和物）または溶媒和物として存在することもできる。溶媒和物および水和物の調製に好適な溶媒は、当業者ならば一般に選択可能である。
【0082】
本化合物およびそれらの塩は、非晶質形態または結晶形態（共結晶および多形体を含む）で存在することができる。
【0083】
本発明のサーチュイン調節化合物は有利には、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性、特に、サーチュインタンパク質脱アセチル化酵素活性を調節する。
【0084】
上記の特性とは別にまたは加えて、本発明の特定のサーチュイン調節化合物は、サーチュインタンパク質（例えば、ＳＩＲＴ１および／またはＳＩＲＴ３タンパク質）の脱アセチル化活性の調節に有効な化合物濃度では下記の活性のうち１以上を実質的に持たない：ＰＩ３キナーゼの阻害、アルドレダクターゼの阻害、チロシンキナーゼの阻害、ＥＧＦＲチロシンキナーゼのトランス活性化、冠動脈拡張、または鎮痙活性。
【0085】
「アルキル」基または「アルカン」は、完全に飽和している直鎖または分岐非芳香族炭化水素である。一般に、直鎖または分岐アルキル基は、それ以外の定義がされない限り、１〜約２０個、好ましくは、１〜約１０個の炭素原子を有する。直鎖および分岐アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ペンチルおよびオクチルが挙げられる。Ｃ１−Ｃ４直鎖または分岐アルキル基はまた、「低級アルキル」基とも呼ばれる。
【0086】
用語「アルケニル」（「アルケン」）および「アルキニル」（「アルキン」）は、それぞれ少なくとも１つの二重結合または三重結合を含むこと以外は、長さおよび可能性のある置換が上記アルキル基に類似する不飽和脂肪族基を意味する。
【0087】
用語「芳香族炭素環」は、少なくとも１つの芳香環を含有する芳香族炭化水素環系を意味する。この環は他の芳香族炭素環または非芳香族炭素環と縮合またはそうでなければ結合していてもよい。芳香族炭素環基の例としては、炭素環式芳香族基、例えば、フェニル、ナフチル、およびアントラシルが挙げられる。
【0088】
「アザビシクロ」は、環骨格中に窒素原子を含む二環式分を意味する。このビシクルの２環は、２つの相互結合原子で縮合されているか（例えば、インドール）、原子の配列で縮合されているか（例えば、アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン）、または１つの原子で連結されている（例えば、スピロ環）。
【0089】
「ビシクル」または「二環式」は、２環の間で１、２または３個またはそれを超える原子が共有されている二環系を意味する。ビシクルには、２個の隣接する原子が２環のそれぞれに共有されている縮合ビシクル、例えば、デカリン、インドールが含まれる。ビシクルにはまた、２環が１個の原子を共有するスピロビシクル、例えば、スピロ［２．２］ペンタン、１−オキサ−６−アザスピロ［３．４］オクタンが含まれる。ビシクルにはさらに、２環の間で少なくとも３個の原子が共有される架橋式ビシクル、例えば、ノルボルナンが含まれる。
【0090】
「架橋式ビシクル」化合物は、その系の両環により少なくとも３個の原子が共有される二環式環系であり、すなわち、それらは、２個のブリッジヘッド原子を接続する１以上の原子の少なくとも１つの架橋を含む。架橋アザビシクロは、それらの環のうち少なくとも１つに窒素原子を含む架橋二環式分子を意味する。
【0091】
用語「Ｂｏｃ」は、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル基（一般的なアミン保護基）を意味する。
【0092】
用語「炭素環」、および「炭素環式」、本明細書で使用する場合、環の各原子が炭素である、飽和または不飽和環を意味する。用語炭素環は、芳香族炭素環と非芳香族炭素環の両方を含む。非芳香族炭素環は、総ての炭素原子が飽和しているシクロアルカン環と、少なくとも１つの二重結合を含むシクロアルケン環の両方を含む。「炭素環」は、５〜７員の単環式環および８〜１２員の二環式環を含む。二環式炭素環の各環は、非芳香環および芳香環から選択され得る。炭素環は、２環の間で１、２または３個またはそれを超える原子が共有される二環式分子を含む。用語「縮合炭素環」は、各環が他の環と２個の隣接する原子を共有する二環式炭素環を意味する。縮合炭素環の各環は、非芳香環および芳香環(fromnon-aromaticaromatic rings)から選択され得る。例示的実施態様では、芳香環、例えば、フェニルは、非芳香族または芳香環、例えば、シクロヘキサン、シクロペンタン、またはシクロヘキセンと縮合されてよい。非芳香族(non-aromtatic)と芳香族二環式環のいずれの組合せも、原子価が許す限り、炭素環式の定義に含まれる。例示的「炭素環」としては、シクロペンタン、シクロヘキサン、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、１，５−シクロオクタジエン、１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン、ビシクロ［４．２．０］オクト−３−エン、ナフタレンおよびアダマンタンが挙げられる。例示的縮合炭素環としては、デカリン、ナフタレン、１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン、ビシクロ［４．２．０］オクタン、４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−インデンおよびビシクロ［４．１．０］ヘプト−３−エンが挙げられる。「炭素環」は、水素原子担持能のあるいずれの１以上の位置で置換されてもよい。
【0093】
「シクロアルキル」基は、完全に飽和している（非芳香族）、環式炭化水素である。一般に、シクロアルキル基は、それ以外の定義がされない限り、３〜約１０個の炭素原子、より一般には３〜８個の炭素原子を有する。「シクロアルケニル」基は、１以上の二重結合を含有する環式炭化水素である。
【0094】
「ハロゲン」は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを表す。
【0095】
「ハロゲン置換」または「ハロ」置換は、１以上の水素のＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩでの置換を表す。
【0096】
用語「ヘテロアリール」または「芳香族複素環」は、その構造が少なくとも１個のヘテロ原子、好ましくは、１〜４個のヘテロ原子、より好ましくは、１または２個のヘテロ原子を含む置換または非置換芳香族一環構造、好ましくは、５〜７員環、より好ましくは、５〜６員環を含む。用語「ヘテロアリール」はまた、１環、またはそれらの管のうち少なくとも１つが例えば複素芳香族であり、他の環式環がシクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、芳香族炭素環、ヘテロアリール、および／もしくはヘテロシクリルであり得る２環を有する環系を含む。ヘテロアリール基としては、例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、およびピリミジンが挙げられる。
【0097】
用語「複素環」、および「複素環式」は、本明細書で使用する場合、例えば、Ｎ、Ｏ、ＢおよびＳ原子、好ましくは、Ｎ、Ｏ、またはＳから選択される１以上のヘテロ原子を含んでなる非芳香環または芳香環を意味する。用語「複素環」は、「芳香族複素環」と「非芳香族複素環」の両方を含む。複素環は、４〜７員の単環式および８〜１２員の二環式環を含む。複素環は、２環の間で１、２または３個またはそれを超える原子が共有される二環式分子を含む。二環式複素環の各環は、非芳香環および芳香環から選択され得る。用語「縮合複素環」は、それらの環のそれぞれが他の環と２個の隣接する原子を共有する二環式複素環を意味する。縮合複素環の各環は、非芳香環および芳香環から選択され得る。例示的実施態様では、芳香環、例えば、ピリジルは、非芳香族または芳香環、例えば、シクロヘキサン、シクロペンタン、ピロリジン、２，３−ジヒドロフランまたはシクロヘキセンと縮合されてよい。「複素環」基としては、例えば、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリン、ピリミジン、ベンゾフラン、インドール、キノリン、ラクトン、およびラクタムが挙げられる。例示的「縮合複素環」としては、ベンゾジアゼピン、インドール、キノリン、プリン、および４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｄ］チアゾールが挙げられる。「複素環」は、水素原子担持能のあるいずれの１以上の位置で置換されてもよい。
【0098】
「単環式環」としては、５〜７員芳香族炭素環またはヘテロアリール、３〜７員シクロアルキルまたはシクロアルケニル、および５〜７員非芳香族ヘテロシクリルが含まれる。例示的単環式基としては、置換または非置換複素環または炭素環、例えば、チアゾリル、オキサゾリル、オキサジニル、チアジニル、ジチアニル、ジオキサニル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、フラニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、ピラニル、テトラゾリル、ピラゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、イミダゾリル、ピリジニル、ピロリル、ジヒドロピロリル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリミジニル、モルホリニル、テトラヒドロチオフェニル、チオフェニル、シクロヘキシル、シクロペンチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロヘプタニル、アゼチジニル、オキセタニル、チイラニル、オキシラニル、アジリジニル、およびチオモルホリニルが挙げられる。
【0099】
本明細書で使用する場合、「置換」は、構造中の水素原子を水素以外の原子または分子に置き換えることを意味する。置換可能な原子、例えば、「置換可能な窒素」は、少なくとも１つの共鳴形態で水素原子を担持する原子である。水素原子は、ＣＨ３またはＯＨ基などの別の原子または基に関しても置換可能である。例えば、ピペリジン分子中の窒素は、その窒素が水素原子と結合していれば置換可能である。例えば、ピペリジンの窒素が水素以外の原子と結合していれば、その窒素は置換可能でない。水素原子をいずれの共鳴形態でも担持できない原子は置換可能でない。
【0100】
本発明により想定される置換基および変数の組合せは、安定な化合物の形成をもたらすもののみである。本明細書で使用する場合、用語「安定な」とは、製造を可能とするに十分な安定性を有し、かつ、本明細書に詳細に示される目的に有用である十分な期間、化合物の完全性を維持する化合物を意味する。
【0101】
本明細書に開示される化合物はまた、部分的および完全に重水素化された変種も含む。特定の実施態様では、重水素化変種は、動態研究のために使用可能である。当業者ならば、このような重水素原子が存在する部位を選択することができる。
【0102】
本発明にはまた、本明細書に記載の化合物の塩、特に、薬学的に許容可能な塩も含まれる。十分に酸性の官能基、十分に塩基性の官能基、または両官能基を有する本発明の化合物は、いくつかの無機塩基、ならびに無機酸および有機酸のいずれかと反応して塩を形成することができる。あるいは、第四級窒素を有するものなどの、本質的に荷電している化合物は、適当な対イオン（例えば、臭化物イオン、塩化物イオン、またはフッ化物イオンなどのハロゲン化物イオン、特に、臭化物イオン）とともに塩を形成することができる。
【0103】
酸付加塩を形成するために一般に使用される酸は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸などの無機酸、ならびにｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、ｐ−ブロモフェニル−スルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、酢酸などの有機酸である。このような塩の例としては、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオール酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４−二酸塩、ヘキシン−１，６−二酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、γ−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、マンデル酸塩などが挙げられる。
【0104】
塩基付加塩としては、水酸化、炭酸、重炭酸アンモニウムまたはアルカリ金属またはアルカリ土類金属などの、無機塩基に由来するものが含まれる。このような塩基は、本発明の塩を作製する上で有用であり、従って、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、炭酸カリウムなどを含む。
【0105】
別の実施態様によれば、本発明は、上記で定義された化合物を生産する方法を提供する。これらの化合物は、従来の技術を用いて合成され得る。有利には、これらの化合物は、好都合にも、容易に入手可能な出発材料から合成される。
【0106】
本明細書に記載の化合物の合成に有用な合成化学変換および方法は当技術分野で公知であり、例えば、R. Larock, Comprehensive Organic Transformations (1989); T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed. (1991); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis (1994); and L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis (1995)に記載されているものが含まれる。
【0107】
例示的実施態様では、治療化合物は、細胞の細胞質膜を通過するができる。例えば、化合物は、少なくとも約２０％、５０％、７５％、８０％、９０％または９５％の細胞透過性を持ち得る。
【0108】
本明細書に記載の化合物はまた、以下の特徴のうち１以上を持ち得る：本化合物は、細胞または対象にとって本質的に非毒性であり得る；本化合物は、２０００ａｍｕ以下、１０００ａｍｕ以下の有機分子または小分子であり得る；本化合物は、通常の大気条件下で、少なくとも約３０日、６０日、１２０日、６か月または１年の半減期を持ち得る；本化合物は、溶液中で、少なくとも約３０日、６０日、１２０日、６か月または１年の半減期を持ち得る；化合物は、溶液中でレスベラトロールよりも少なくとも約５０％、２倍、５倍、１０倍、３０倍、５０倍または１００倍の倍率の高い安定性であり得る；化合物は、ＤＮＡ修復因子Ｋｕ７０の脱アセチル化を促進し得る；化合物は、ＲｅｌＡ／ｐ６５の脱アセチル化を促進し得る；化合物は、全般的なターンオーバー速度を高め、ＴＮＦにより誘導されるアポトーシスに対する細胞の感受性を高め得る。
【0109】
特定の実施態様では、サーチュイン調節化合物は、サーチュインの脱アセチル化酵素活性を調節するのに有効な濃度（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ）では、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）クラスＩ、および／またはＨＤＡＣクラスＩＩの実質的阻害能を持たない。例えば、好ましい実施態様では、サーチュイン調節化合物はサーチュイン調節化合物であり、サーチュイン脱アセチル化酵素活性の活性化に関するＥＣ５０が、ＨＤＡＣ Ｉおよび／またはＨＤＡＣ ＩＩの阻害に関するＥＣ５０の多くとも５分の１(at least 5 fold less than the EC50)、いっそうより好ましくは多くとも１０分の１、１００分の１またはさらには１０００分の１となるように選択される。ＨＤＡＣ Ｉおよび／またはＨＤＡＣ ＩＩ活性をアッセイするための方法は当技術分野で周知であり、このようなアッセイを実施するためのキットは商業的に購入可能である。例えば、ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ，Ｉｎｃ．（マウンテンビュー、ＣＡ；world wide web at biovision.com）およびＴｈｏｍａｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（スウェズボロ、ＮＪ；world wide web at tomassci.com）参照。
【0110】
特定の実施態様では、サーチュイン調節化合物は、サーチュインホモログの実質的調節能を持たない。特定の実施態様では、ヒトサーチュインタンパク質の活性剤は、ヒトサーチュインの脱アセチル化酵素活性を活性化するのに有効な濃度（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ）では、下等真核生物、特に、酵母またはヒト病原体由来のサーチュインタンパク質の実質的活性化能を持ち得ない。例えば、サーチュイン調節化合物は、ＳＩＲＴ１および／またはＳＩＲＴ３などのヒトサーチュイン脱アセチル化酵素活性の活性化に関するＥＣ５０が、Ｓｉｒ２などの酵母（例えば、カンジダ、Ｓ．セレビシエなど）サーチュインの活性化に関するＥＣ５０の多くとも５分の１、いっそうより好ましくは多くとも１０分の１、１００分の１またはさらには１０００分の１となるように選択され得る。別の実施態様では、下等真核生物、特に、酵母またはヒト病原体由来のサーチュインタンパク質の阻害剤は、下等真核生物由来のサーチュインタンパク質の脱アセチル化酵素活性を阻害するのに有効な濃度（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ）では、ヒト由来のサーチュインタンパク質の実質的活性化能を持たない。例えば、サーチュイン阻害化合物は、ＳＩＲＴ１および／またはＳＩＲＴ３などのヒトサーチュイン脱アセチル化酵素活性の阻害に関するＩＣ５０が、Ｓｉｒ２などの酵母（例えば、カンジダ、Ｓ．セレビシエなど）サーチュインの阻害に関するＩＣ５０の多くても５分の１、いっそうより好ましくは多くても１０分の１、１００分の１またはさらには１０００分の１となるように選択され得る。
【0111】
特定の実施態様では、サーチュイン調節化合物は、１以上のサーチュインタンパク質ホモログ、例えば、ヒトＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２、ＳＩＲＴ３、ＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ６、またはＳＩＲＴ７の１以上の調節能を持ち得る。いくつかの実施態様では、サーチュイン調節化合物は、ＳＩＲＴ１タンパク質とＳＩＲＴ３タンパク質の両方の調節能を有する。
【0112】
他の実施態様では、ＳＩＲＴ１調節剤は、ヒトＳＩＲＴ１の脱アセチル化酵素活性の調節に有効な濃度（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ）では、他のサーチュインタンパク質ホモログ、例えば、ヒトＳＩＲＴ２、ＳＩＲＴ３、ＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ６、またはＳＩＲＴ７の１以上の実質的調節能を持たない。例えば、サーチュイン調節化合物は、ヒトＳＩＲＴ１脱アセチル化酵素活性の調節に関するＥＤ５０が、ヒトＳＩＲＴ２、ＳＩＲＴ３、ＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ６、またはＳＩＲＴ７の１以上の調節に関するＥＤ５０の多くとも５分の１、いっそうより好ましくは多くとも１０分の１、１００分の１またはさらには１０００分の１となるように選択され得る。いくつかの実施態様では、ＳＩＲＴ１調節剤は、ＳＩＲＴ３タンパク質の実質的調節能を持たない。
【0113】
他の実施態様では、ＳＩＲＴ３調節剤は、ヒトＳＩＲＴ３の脱アセチル化酵素活性の調節に有効な濃度（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ）では、他のサーチュインタンパク質ホモログ、例えば、ヒトＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２、ＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ６、またはＳＩＲＴ７の１以上の実質的調節能を持たない。例えば、サーチュイン調節化合物は、ヒトＳＩＲＴ３脱アセチル化酵素活性の調節に関するＥＤ５０が、ヒトＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２、ＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ６、またはＳＩＲＴ７の１以上の調節に関するＥＤ５０の多くとも５分の１、いっそうより好ましくは多くとも１０分の１、１００分の１またはさらには１０００分の１となるように選択され得る。いくつかの実施態様では、ＳＩＲＴ３調節剤は、ＳＩＲＴ１タンパク質の実質的調節能を持たない。
【0114】
特定の実施態様では、サーチュイン調節化合物は、サーチュインタンパク質に対して約１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、１０−１２Ｍまたはそれ未満の結合親和性を持ち得る。サーチュイン調節化合物は、その基質またはＮＡＤ＋（または他の補因子）に対するサーチュインタンパク質の見かけのＫｍを少なくとも約２、３、４、５、１０、２０、３０、５０または１００倍、低下させる（活性剤）または増大させる（阻害剤）。特定の実施態様では、Ｋｍ値は、本明細書に記載の質量分析アッセイを用いて決定される。好ましい活性化は、その基質または補因子に対するサーチュインのＫｍを、同等の濃度で、レスベラトロールにより引き起こされる程度よりも高い程度で低下させるか、またはその基質または補因子に対するサーチュインのＫｍを、より低い濃度で、レスベラトロールにより引き起こされる程度と同等に低下させる。サーチュイン調節化合物は、サーチュインタンパク質の最大反応速度を、少なくとも約２、３、４、５、１０、２０、３０、５０または１００倍増大させ得る。サーチュイン調節化合物は、ＳＩＲＴ１および／またはＳＩＲＴ３タンパク質の脱アセチル化酵素活性の調節に関するＥＤ５０が、約１ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約１μＭ未満、約１０μＭ未満、約１００μＭ未満、または約１〜１０ｎＭ、約１０〜１００ｎＭ、約０．１〜１μＭ、約１〜１０μＭまたは約１０〜１００μＭであり得る。サーチュイン調節化合物は、細胞アッセイまたは細胞に基づくアッセイにおいて測定した場合に、ＳＩＲＴ１および／またはＳＩＲＴ３タンパク質の脱アセチル化酵素活性を、少なくとも約５、１０、２０、３０、５０、または１００倍調節し得る。サーチュイン調節化合物は、同濃度のレスベラトロールに比べて、サーチュインタンパク質の脱アセチル化酵素活性の少なくとも約１０％、３０％、５０％、８０％、２倍、５倍、１０倍、５０倍または１００倍高い誘導をもたらし得る。サーチュイン調節化合物は、ＳＩＲＴ５の調節に関するＥＤ５０が、ＳＩＲＴ１および／またはＳＩＲＴ３の調節に関するそれよりも少なくとも約１０倍、２０倍、３０倍、５０倍大きいものであり得る。
【0115】
３．例示的使用特定の面では、本発明は、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を調節するための方法、ならびにその使用方法を提供する。
【0116】
特定の実施態様では、本発明は、サーチュイン調節化合物がサーチュインタンパク質を活性化する、例えば、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強する、サーチュイン調節化合物の使用方法を提供する。サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、例えば、細胞寿命の延長、ならびに例えば、老化またはストレスに関連する疾患または障害、糖尿病、肥満、神経変性疾患、心血管疾患、血液凝固障害、炎症、癌、および／または潮紅などを含む多様な疾患および障害の治療および／または予防を含む、様々な治療適用に有用であり得る。これらの方法は、それを必要とする対象に薬学的に有効な量のサーチュイン調節化合物、例えば、サーチュイン調節化合物を投与することを含んでなる。
【0117】
特定の理論に縛られることを望むものではないが、本発明の活性剤群は、サーチュインタンパク質内の同じ場所（例えば、活性部位または活性部位のＫｍまたは最大反応速度に影響を及ぼす部位）でサーチュインと相互作用し得ると考えられる。これは特定種のサーチュイン活性剤および阻害剤が実質的な構造類似性を持ち得るからであると考えられる。
【0118】
特定の実施態様では、本明細書に記載のサーチュイン調節化合物は、単独で摂取してもまたは他の化合物と組み合わせて摂取してもよい。特定の実施態様では、２種類以上のサーチュイン調節化合物の混合物を、それを必要とする面に投与し得る。別の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物を、以下の化合物：レスベラトロール、ブテイン、フィセチン、ピセアタンノール、またはケルセチンの１以上とともに投与し得る。例示的実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物を、ニコチン酸またはニコチンアミドリボシドと組み合わせて投与し得る。別の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を低下させるサーチュイン調節化合物を、以下の化合物：ニコチンアミド（ＮＡＭ）、スラミン；ＮＦ０２３（Ｇタンパク質アンタゴニスト）；ＮＦ２７９（プリン受容体アンタゴニスト）；トロロクス（６−ヒドロキシ−２，５，７，８，テトラメチルクロマン−２−カルボン酸）；（−）−エピガロカテキン（３，５，７，３’，４’、５’部位におけるヒドロキシ）；（−）−没食子酸エピガロカテキン（ヒドロキシ部位５，７，３’，４’，５’および３位の没食子酸エステル）；シアニジンクロリド（３，５，７，３’，４’−ペンタヒドロキシフラビリウムクロリド）；デルフィニジンクロリド（３，５，７，３’，４’，５’−ヘキサヒドロキシフラビリウムクロリド）；ミリセチン（カンナビスセチン；３，５，７，３’，４’，５’−ヘキサヒドロキシフラボン）；３，７，３’，４’，５’−ペンタヒドロキシフラボン；ゴシペチン（３，５，７，８，３’，４’−ヘキサヒドロキシフラボン）、サーチノール；およびスプリトマイシンの１以上とともに投与し得る。さらに別の実施態様では、１以上のサーチュイン調節化合物を、例えば、癌、糖尿病、神経変性疾患、心血管疾患、血液凝固、炎症、潮紅、肥満、老化、ストレスなどを含む様々な疾患の治療または予防のための１以上の治療薬とともに投与し得る。種々の実施態様では、サーチュイン調節化合物を含んでなる併用療法は、（１）１以上のサーチュイン調節化合物を１以上の治療薬（例えば、本明細書に記載の１以上の治療薬）と組み合わせて含んでなる医薬組成物；および（２）サーチュイン調節化合物と治療薬が同じ組成物中に処方されない（しかしながら、同じキットまたはパッケージ、例えば、ブリスターパックまたは他のマルチチャンバーパッケージ；使用者によって分離され得る連結し、個別に封止された容器（例えば、ホイルポーチ）；または１または複数の化合物と１または複数の他の治療薬が別の容器内にあるキット内に存在し得る）、１以上のサーチュイン調節化合物と１以上の治療薬との併用投与を意味し得る。個別の処方を用いる場合、サーチュイン調節化合物は、別の治療薬の投与と同時に、間欠的に、時間差で、その前に、その後に、またはそれらの組合せで投与することができる。
【0119】
特定の実施態様では、本明細書に記載の化合物を用いて疾患または障害を軽減、予防または治療するための方法はまた、ヒトＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２および／またはＳＩＲＴ３、またはそのホモログなどのサーチュインのタンパク質レベルを増大させることも含んでなり得る。タンパク質レベルの増大は、サーチュインをコードする１コピー以上の核酸を細胞に導入することによって達成することができる。例えば、サーチュインのレベルは、サーチュインをコードする核酸を哺乳動物細胞に導入することによって哺乳動物細胞において増大させることができ、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３６３７０で示されるアミノ酸配列をコードする核酸を導入することによってＳＩＲＴ１のレベルが増大され、および／またはＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＨ０１０４２で示されるアミノ酸配列をコードする核酸を導入することによりＳＩＲＴ３のレベルが増大される。
【0120】
サーチュインのタンパク質レベルを増大させるために細胞に導入される核酸は、サーチュイン、例えば、ＳＩＲＴ１および／またはＳＩＲＴ３タンパク質の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一のタンパク質をコードし得る。例えば、このタンパク質をコードする核酸は、ＳＩＲＴ１タンパク質（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１２２３８）および／またはＳＩＲＴ３（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＢＣ００１０４２）タンパク質をコードする核酸と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であり得る。この核酸はまた、好ましくは、ストリンジェントハイブリダイゼーション条件下で、野生型サーチュイン、例えば、ＳＩＲＴ１タンパク質および／またはＳＩＲＴ３タンパク質をコードする核酸とハイブリダイズする核酸であってもよい。ストリンジェントハイブリダイゼーション条件は、０．２×ＳＳＣ中、６５℃でのハイブリダイゼーションおよび洗浄を含み得る。野生型サーチュインタンパク質とは異なるタンパク質、例えば、野生型サーチュインの断片であるタンパク質をコードする核酸を用いる場合には、このタンパク質は好ましくは生物学的に活性であり、例えば、脱アセチル化能がある。サーチュインの生物学的に活性な部分を細胞で発現させることだけが必要である。例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３６３７０を有する野生型ＳＩＲＴ１とは異なるタンパク質は、好ましくは、そのコア構造を含む。コア構造は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１２２３８のヌクレオチド２３７〜９３２によりコードされる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３６３７０のアミノ酸６２〜２９３を意味する場合があり、これはＮＡＤ結合ドメインならびに基質結合ドメインを包含する。ＳＩＲＴ１のコアドメインはまた、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１２２３８のヌクレオチド８３４〜１３９４によりコードされる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３６３７０の約アミノ酸２６１〜４４７；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１２２３８のヌクレオチド７７７〜１５３２によりコードされる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３６３７０の約アミノ酸２４２〜４９３；またはＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１２２３８のヌクレオチド８１３〜１５３８によりコードされる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３６３７０の約アミノ酸２５４〜４９５を意味する場合もある。タンパク質が生物学的機能、例えば、脱アセチル化能を保持するかどうかは、当技術分野で公知の方法に従って決定することができる。
【0121】
特定の実施態様では、サーチュイン調節化合物を用いて疾患または障害を、軽減、予防または治療するための方法はまた、サーチュイン、例えば、ヒトＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２および／またはＳＩＲＴ３、またはそのホモログのタンパク質レベルを低下させることも含んでなる。サーチュインタンパク質レベルの低下は、当技術分野で公知の方法に従って達成することができる。例えば、サーチュインにターゲティングされるｓｉＲＮＡ、アンチセンス核酸、またはリボザイムを細胞で発現させることができる。ドミナントネガティブサーチュイン突然変異体、例えば、脱アセチル化能のない突然変異体も使用可能である。例えば、Luo et al. (2001) Cell 107:137に記載されているＳＩＲＴ１の突然変異体Ｈ３６３Ｙが使用可能である。あるいは、転写を阻害する薬剤が使用可能である。
【0122】
サーチュインタンパク質レベルを調節するための方法はまた、サーチュインをコードする遺伝子の転写を調節するための方法、対応するｍＲＮＡを安定化／脱安定化するための方法、および当技術分野で公知の他の方法も含み得る。
【0123】
老化／ストレス一面において、本発明は、細胞を、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強する本発明のサーチュイン調節化合物と接触させることにより、細胞の寿命を延長する、細胞の増殖能を拡張する、細胞の老化を緩慢にする、細胞の生残を促進する、細胞において細胞老化を遅延させる、カロリー制限の効果を模倣する、細胞のストレス耐性を高める、または細胞のアポトーシスを防ぐ方法を提供する。例示的実施態様では、これらの方法は、細胞をサーチュイン調節化合物と接触させることを含んでなる。
【0124】
本明細書に記載の方法は、細胞、特に、初代細胞（すなわち、生物、例えばヒトから得た細胞）が細胞培養において生きた状態で維持され得る時間を延長するために使用できる。胚性幹（ＥＳ）細胞および多能性細胞、ならびにそれらから分化した細胞も、細胞、またはその後代をより長い期間、培養維持するために、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を像去するサーチュイン調節化合物で処理することができる。このような細胞はまた、例えばｅｘ ｖｉｖｏで改質した後に対象に移植するために使用することができる。
【0125】
一面において、長期間保存することが意図される細胞を、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物で処理することができる。これらの細胞は懸濁液（例えば、血液細胞、血清、生物学的増殖培地など）または組織もしくは器官中にあってよい。例えば、輸血の目的で個体から採取した血液を、血液細胞を長期間保存するために、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物で処理してもよい。さらに、法医学目的で使用される血液もまた、 サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物を用いて保存してよい。寿命を延長するためまたはアポトーシスから保護するために処理可能な他の細胞としては、消費のための細胞、例えば、非ヒト哺乳動物由来細胞（例えば、食肉）または植物細胞（例えば、野菜）が含まれる。
【0126】
サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物はまた、哺乳動物、植物、昆虫または微生物の発達期および成長期の間に、例えば、発達期および／または成長期を変化させる、遅延させるもしくは加速させるために適用してもよい。
【0127】
別の面では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、例えば、充実組織移植、臓器移植、細胞懸濁液、幹細胞、骨髄細胞などを含む、移植または細胞療法に有用な細胞を処理するために使用してもよい。これらの細胞または組織は、自家移植片、同種移植片、同系移植片または異種移植片であり得る。これらの細胞または組織を、対象への投与／移植前に、投与／移植と同時に、および／または投与／移植後にサーチュイン調節化合物で処理してもよい。これらの細胞または組織は、それらの細胞をドナー個体から取り出す前に、これらの細胞または組織をドナー個体から取り出した後にｅｘ ｖｉｖｏで、またはレシピエントに移植した後に処理してもよい。例えば、ドナー個体もしくはレシピエント個体は、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物で全身処置してもよいし、またはサーチュイン調節化合物で局所処置した細胞／組織のサブセットを有してもよい。特定の実施態様では、これらの細胞または組織（またはドナー／レシピエント個体）はさらに、移植片の生残を延長するために有用な別の治療薬、例えば、免疫抑制剤、サイトカイン、血管新生因子などで処置してもよい。
【0128】
さらに他の実施態様では、細胞を、例えば、それらの寿命を延長するかまたはアポトーシスを防ぐために、ｖｉｖｏにおいてサーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物で処理してもよい。例えば、皮膚は、皮膚または上皮細胞をサーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物で処理することにより老化（例えば、しわの発生、弾性の低下など）から保護することができる。例示的実施態様では、皮膚を、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物を含んでなる医薬組成物または化粧用組成物と接触させる。本明細書に記載の方法に従って処置可能な例示的皮膚疾病または皮膚病態としては、炎症、日焼けによる損傷または自然老化に関連する、またはそれらにより引き起こされる障害または疾患が含まれる。例えば、組成物は、接触性皮膚炎（刺激物接触性皮膚炎およびアレルギー性接触性皮膚炎を含む）、アトピー性皮膚炎（アレルギー性湿疹としても知られる）、日光角化症、角化障害（湿疹を含む）、表皮水疱性疾患（天疱瘡を含む）、剥脱性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、紅斑（多形性紅斑および結節性紅斑を含む）、日光または他の光源により引き起こされる損傷、円板状紅斑性狼瘡、皮膚筋炎、乾癬、皮膚癌および自然老化の作用の予防または治療に有用性を見出す。別の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、創傷および／または火傷（例えば、１度、２度または３度火傷および／または熱火傷、化学火傷また電気火傷を含む）の治療に、治癒を促進するために使用することができる。これらの製剤(formulation)は、皮膚または粘膜組織へ局所投与してもよい。
【0129】
サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強する１種類以上のサーチュイン調節化合物を含んでなる局所用製剤はまた、予防用組成物、例えば、化学予防用組成物としても使用可能である。化学予防法において使用する場合、特定の個体において病態において視認病態の前に敏感皮膚が処置される。
【0130】
サーチュイン調節化合物は、対象に局所送達または全身送達することができる。特定の実施態様では、サーチュイン調節化合物は、注射、局所用製剤などにより対象の組織または器官に局所送達される。
【0131】
別の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、対象において細胞老化により誘発されたまたは増悪した疾患または病態を治療または予防するために；例えば老化の発現後に対象の老化の速度を低下させるための方法；対象の寿命を延長するための方法；寿命に関する疾患または病態を治療または予防するための方法；細胞の増殖能に関する疾患または病態を治療または予防するための方法；および細胞損傷または細胞死をもたらす疾患または病態を治療または予防するための方法に使用することができる。特定の実施態様では、本方法は、対象の寿命を短縮する疾患の発生率を低減することによって作用しない。特定の実施態様では、方法は、癌などの疾患により引き起こされる致死を低減することによって作用しない。
【0132】
さらに別の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、一般に、その細胞の寿命を延長するため、その細胞をストレスおよび／またはアポトーシスから保護するために、対象に投与することができる。対象を本明細書に記載の化合物で処置することは、対象をホルメシス、すなわち、生物に有益であってそれらの寿命を延長し得る軽いストレスに曝すことと類似していると考えられる。
【0133】
サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、老化および老化関連の結果または疾患、例えば、脳卒中、心疾患、心不全、関節炎、高血圧、およびアルツハイマー病を予防するために対象に投与することができる。処置可能な他の病態としては、眼障害、例えば、眼の老化に関する障害、例えば、白内障、緑内障、および黄斑変性が含まれる。サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物はまた、細胞死に関連する疾患、例えば、慢性疾患の処置に、細胞を細胞死から保護するために対象に投与することもできる。例示的疾患としては、神経系細胞死、ニューロン機能不全、または筋肉細胞死もしくは機能不全に関連するもの、例えば、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、および筋ジストロフィー；ＡＩＤＳ；劇症肝炎；脳の変性に関連する疾患、例えば、クロイツフェルト・ヤコブ病、色素性網膜炎および小脳変性症；脊髄形成異常、例えば、再生不良性貧血；虚血性疾患、例えば、心筋梗塞および脳卒中；肝疾患、例えば、アルコール性肝炎、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎；関節疾患、例えば、骨関節炎；アテローム性動脈硬化症；脱毛症；ＵＶ光による皮膚損傷；扁平苔癬；皮膚の萎縮；白内障；および移植片拒絶が含まれる。細胞死はまた、手術、薬物療法、化学暴露または放射線暴露によっても引き起こされることがある。
【0134】
サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物はまた、急性疾患、例えば、器官または組織の損傷に苦しむ対象、例えば、脳卒中もしくは心筋梗塞に苦しむ対象、または脊髄損傷に苦しむ対象に投与することもできる。サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物はまた、アルコール性肝臓を修復するためにも使用し得る。
【0135】
心血管疾患別の実施態様では、本発明は、必要とする対象にサーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物を投与することにより、心血管疾患を治療および／または予防するための方法を提供する。
【0136】
サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物を用いて治療または予防することできる心血管疾患としては、心筋症または心筋炎；例えば、特発性心筋症、代謝性心筋症、アルコール性心筋症、薬剤性心筋症、虚血性心筋症、および高血圧性心筋症が含まれる。また、本明細書に記載の化合物および方法を用いて治療可能または予防可能なものとしては、主要血管（大血管疾患）、例えば、大動脈、冠動脈、頸動脈、脳動脈、腎臓動脈、回腸動脈、大腿動脈、および膝窩動脈のアテローム性障害もある。治療または予防可能な他の血管疾患としては、血小板凝集、網膜細動脈、糸球体細動脈、神経脈管、心細動脈、ならびに眼、腎臓、心臓、および中枢神経系および末梢神経系に関連する毛細血管床に関連するものが含まれる。サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物はまた、個体の血漿中のＨＤＬレベルを増大させるために使用することができる。
【0137】
サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物で処置可能なさらに他の障害としては、再狭窄、例えば、冠動脈介入後の再狭窄、および異常なレベルの高密度および低密度コレステロールに関連する障害が含まれる。
【0138】
特定の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、別の心血管薬との併用療法の一部として投与することができる。特定の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、抗不整脈薬との併用療法の一部として投与することができる。別の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、別の心血管薬との併用療法の一部として投与することができる。
【0139】
細胞死／癌サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、放射線または毒素の暴露を最近受けた、または受けた可能性のある対象に投与することができる。特定の実施態様では、放射線または毒素の暴露は業務関連または医療行為の一部として受けたものであり、例えば、予防処置として投与される。別の実施態様では、この放射線または毒素暴露は、意図せずに受けたものである。このような場合、本化合物は好ましくは、アポトーシスおよび続いての急性放射線症候群の発生を阻害するために、暴露後できるだけ早く投与する。
【0140】
サーチュイン調節化合物はまた、癌を治療および／または予防するためにも使用することができる。特定の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、癌を治療および／または予防するために使用することができる。カロリー制限は、癌を含む加齢性障害の発生の低減に関連付けられている。従って、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性の増強は、例えば癌などの加齢性障害の発生を治療および／または予防するために有用であり得る。サーチュイン調節化合物を用いて治療可能な例示的癌は、脳および腎臓の癌；乳癌、前立腺癌、精巣癌、および卵巣癌を含むホルモン依存性癌；リンパ腫、および白血病がある。固形腫瘍に関連する癌では、調節化合物を腫瘍に直接投与してもよい。血液細胞の癌、例えば白血病は、血流中または骨髄中に調節化合物を投与することによって処置することができる。良性細胞増殖、例えば疣贅も処置可能である。処置可能な他の疾患としては、自己免疫疾患、例えば、全身性紅斑性狼瘡、硬皮症、および関節炎が含まれ、この場合には、自己免疫細胞が除去されるべきである。ウイルス感染，例えば、ヘルペス、ＨＩＶ、アデノウイルス、およびＨＴＬＶ−１関連の悪性および良性障害もまた、サーチュイン調節化合物の投与によって処置することができる。あるいは、細胞を対象から得、特定の望ましくない細胞、例えば癌細胞を除去するためにｅｘ ｖｉｖｏで処理し、同じまたは異なる対象に再び投与することもできる。
【0141】
化学療法薬を、抗癌活性を有するとして本明細書に記載された調節化合物、例えば、アポトーシスを誘発する化合物、寿命を引き下げる化合物、または細胞をストレス感受性とする化合物と併用投与してもよい。化学療法薬は、それ自体を、細胞死を誘導する、または寿命を引き下げる、またはストレス感受性を増強するとして本明細書に記載されたサーチュイン調節化合物と併用してもよいし、および／または他の化学療法薬と組み合わせて使用してもよい。従来の化学療法薬に加え、本明細書に記載のサーチュイン調節化合物はまた、望ましくない細胞増殖に寄与する細胞成分の発現を阻害するための、アンチセンスＲＮＡ、ＲＮＡｉまたは他のポリヌクレオチドと併用してもよい。
【0142】
サーチュイン調節化合物と従来の化学療法薬を含んでなる併用療法は、その組合せが、従来の化学療法薬がより低用量でより大きな効果を発揮することを可能とするので、当技術分野で公知の併用療法よりも有利であり得る。好ましい実施態様では、化学療法薬、または従来の化学療法薬の組合せの有効用量（ＥＤ５０）は、サーチュイン調節化合物と組み合わせて使用した場合、化学療法薬単独のＥＤ５０の多くても２分の１、いっそうより好ましくは５分の１、１０分の１またはさらには２５分の１となる。逆に、このような化学療法薬またはこのような化学療法薬の組合せの治療係数（ＴＩ）は、本明細書に記載のサーチュイン調節化合物と組み合わせて使用した場合、従来の化学療法薬レジメン単独のＴＩの少なくとも２倍、いっそうより好ましくは、５倍、１０倍またはさらには２５倍となり得る。
【0143】
ニューロン疾患／障害特定の面では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、神経変性疾患、および中枢神経系（ＣＮＳ）、脊髄または末梢神経系（ＰＮＳ）の外傷性もしくは機械的損傷に苦しむ患者を処置するために使用することができる。神経変性疾患は一般に、脳細胞の萎縮および／または死滅によるものであり得るヒト脳の質量および容積の減少を含み、健常者の老化に起因するものよりもはるかに顕著である。神経変性疾患は、長期間の正常な脳機能の後に、特定の脳領域の進行性の変性（例えば、神経細胞の機能不全および死滅）のために徐々に進行し得る。あるいは、神経変性疾患は、外傷または毒素に関連するものなど、急発生する場合がある。脳変性の実際の発症には、臨床発現までに長年かかることがある。神経変性疾患の例としては、限定されるものではないが、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ；ルー・ゲーリック病）、びまん性レビー小体病、有棘赤血球舞踏病、原発性側索硬化症、眼疾患（視神経炎）、化学療法誘発性神経障害（例えば、ビンクリスチン、パクリタキセル、ボルテゾミブ由来）、糖尿病誘発性神経障害およびフリードライヒ運動失調症が挙げられる。サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、これらの障害および以下に記載される他の障害を処置するために使用することができる。
【0144】
ＡＤは、記憶喪失、異常行動、人格変化、および思考力の低下をもたらすＣＮＳ障害である。これらの喪失は、特定の種類の脳細胞の死滅、ならびにそれらの間の接続およびそれらの補助ネットワーク（例えば、グリア細胞）の破断に関連する。最初期症状としては、近時記憶の喪失、誤った判断、および人格変化が含まれる。ＰＤは、制御されない身体の動き、筋強剛、振戦、およびジスキネジアをもたらし、ドーパミンを産生する脳の領域における脳細胞の死滅に関連するＣＮＳ障害である。ＡＬＳ（運動ニューロン疾患）は、脳と骨格筋を接続するＣＮＳ成分である運動ニューロンを攻撃するＣＮＳ障害である。
【0145】
ＨＤは、制御されない動き、知力の低下、および情緒障害を引き起こす神経変性疾患である。テイ−サックス疾患およびサンドホッフ疾患は、β−ヘキサミニダーゼの基質であるＧＭ２ガングリオシドおよび関連の糖脂質が神経系に蓄積し、急性神経変性を誘発する糖脂質蓄積疾患である。
【0146】
アポトーシスが免疫系におけるＡＩＤＳの病因に役割を果たすことは周知である。しかしながら、ＨＩＶ−１はまた神経疾患も誘発し、これは本発明のサーチュイン調節化合物で処置可能である。
【0147】
ニューロン欠損は、ヒトのクロイツフェルト・ヤコブ病、ウシのＢＳＥ（狂牛病）、ヒツジおよびヤギのスクレイピー病、ならびにネコの猫海綿状脳症（ＦＳＥ）などのプリオン疾患の顕著な特徴でもある。サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、これらのプリオン疾患(prior diseases)によるニューロン欠損を治療または予防するために有用であり得る。
【0148】
別の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、軸策変性症を含む任意の疾患または障害を治療または予防するために使用することができる。遠位端軸策変性症は、何らかの代謝性のまたは有毒な末梢神経系（ＰＮＳ）ニューロンの混乱から起こる一種の末梢神経障害である。それは代謝性のまたは有毒な混乱に対する最も一般的な神経の応答であり、従って、糖尿病などの代謝性疾患、腎不全、栄養不良などの欠乏症候群、およびアルコール依存症、または毒素もしくは薬物の作用により引き起こされ得る。遠位端軸策変性症を有する者は、通常、対称性手袋靴下型感覚−運動障害を呈する。罹患領域では深部腱反射および自律神経系（ＡＮＳ）機能も失われるかまたは低下する。
【0149】
糖尿病性神経障害は、真性糖尿病に関連する神経因性障害である。糖尿病性神経障害に関連し得る比較的一般的な病態としては、第３脳神経麻痺；単神経障害；多発性単神経炎；糖尿病性筋萎縮；有痛性多発神経障害；自律神経障害；および胸腹部神経障害が含まれる。
【0150】
末梢神経障害は、神経の疾患によりまたは全身性疾患の副作用から起こり得る、末梢神経系の神経損傷に対する医学用語である。末梢神経障害の主要な原因としては、発作、栄養欠乏、およびＨＩＶが含まれるが、糖尿病が最も可能性の高い原因である。
【0151】
例示的実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、多発性硬化症（ＭＳ）（再発性ＭＳおよび単発症候性ＭＳを含む）、および他の脱髄病態、例えば、慢性炎症性脱髄性多発神経障害（ＣＩＤＰ）、またはそれに関連する症状を治療または予防するために使用することができる。
【0152】
さらに別の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、疾患による外傷、傷害（手術的介入を含む）、または環境的外傷（例えば、神経毒、アルコール依存症など）を含む、神経に対する外傷を治療するために使用することができる。
【0153】
サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物はまた、種々のＰＮＳ障害の症状を予防、治療および緩和するために有用であり得る。用語「末梢神経障害」は、脳および脊髄の外側の神経、すなわち末梢神経が損傷を受けている広範囲の障害を包含する。末梢神経障害はまた末梢神経炎とも呼ばれ、または多くの神経が関与する場合には、多発神経障害または多発神経炎という用語が使用することができる。
【0154】
サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物で処置可能なＰＮＳ疾患としては、糖尿病、らい病、シャルコー・マリー・トゥース病、ギラン−バレー症候群および腕神経叢神経障害（頸部および第１胸椎神経根、神経幹、脊髄、および腕神経叢の末梢神経成分の疾患）が含まれる。
【0155】
別の実施態様では、サーチュイン調節化合物は、ポリグルタミン疾患を治療または予防するために使用することができる。例示的ポリグルタミン疾患としては、球脊髄性筋萎縮症（ケネディー病）、ハンチントン病（ＨＤ）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ハウリバー症候群）、脊髄小脳失調症１型、脊髄小脳失調症２型、脊髄小脳失調症３型（マシャド・ジョセフ病）、脊髄小脳失調症６型、脊髄小脳失調症７型、および脊髄小脳失調症１７型が含まれる。
【0156】
特定の実施態様では、本発明は、細胞への血流の低下に応答した損傷を予防するために中枢神経系細胞を処置するための方法を提供する。一般に、予防可能な損傷の重篤度は、大部分は、細胞への血流の低下の程度および低下の持続時間に依存する。特定の実施態様では、アポトーシスまたはネクローシス細胞死が予防することができる。なおさらなる実施態様では、虚血媒介損傷、例えば、細胞傷害性浮腫または中枢神経系組織無酸素血症が予防することができる。各実施態様では、中枢神経系細胞は、脊髄細胞または脳細胞であり得る。
【0157】
別の面は、中枢神経系虚血性病態を処置するためのサーチュイン調節化合物を対象に投与することを包含する。いくつかの中枢神経系虚血性病態が、本明細書に記載のサーチュイン調節化合物により治療することができる。特定の実施態様では、虚血性病態は、アポトーシスまたはネクローシス細胞死、細胞傷害性浮腫または中枢神経系組織無酸素症などの任意の種類の虚血性中枢神経系損傷をもたらす脳卒中である。脳卒中はいずれの脳領域にも影響を及ぼし得、または脳卒中の発生をもたらすことが一般に知られるいずれの病因論によっても起こり得る。この実施態様の１つの別法において、脳卒中は脳幹脳卒中である。この実施態様のもう１つの別法では、脳卒中は小脳脳卒中である。さらにもう１つの実施態様では、脳卒中は塞栓性脳卒中である。さらに別の別法では、脳卒中は出血性脳卒中であり得る。さらなる実施態様では、脳卒中は血栓性脳卒中である。
【0158】
さらに別の面では、サーチュイン調節化合物は、中枢神経系虚血性病態の後に、虚血コアの梗塞サイズを低減するために投与することができる。さらに、サーチュイン調節化合物はまた、中枢神経系虚血性病態後に虚血性ペナンブラ(ischemic penumbra)または移行帯(transitional zone)の大きさを低減するために有益に投与することができる。
【0159】
特定の実施態様では、併用薬物療法は、神経変性疾患またはこれら病態に関連する続発性病態の治療または予防のための薬物または化合物を含み得る。よって、併用薬物療法は、１種類以上のサーチュイン活性剤と１種類以上の抗神経変性薬剤を含み得る。
【0160】
血液凝固障害他の面では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、血液凝固障害（または止血障害）を治療または予防するために使用することができる。本明細書で互換的に使用されるように、用語「止血」、「血液凝固(blood coagulation)」、および「血液凝固(blood clotting)」は、血管収縮および凝固の生理学的特性を含む出血の制御を意味する。血液凝固は、傷害、炎症、疾患、先天性欠損、機能不全または他の障害後に、哺乳動物の循環の健全性の維持を助ける。さらに、血餅の形成は、傷害の場合に出血を制限（止血）するだけでなく、重要な動脈または静脈の閉塞によりアテローム性動脈硬化性疾患関連の重篤な臓器損傷および死をもたらす場合がある。従って、血栓症は、誤った時機および場所での血餅形成である。
【0161】
よって、本発明は、血液凝固障害、例えば、心筋梗塞、脳卒中、抹消動脈疾患による四肢喪失または肺塞栓を予防または治療するために血餅の形成を阻害することを目的とする抗凝固および抗血栓処置を提供する。
【0162】
本明細書互換的に使用されるように、「止血の変調」および「止血の調節」には、止血の誘導（例えば、刺激または増強）、ならびに止血阻害（例えば、低減または低下）が含まれる。
【0163】
一面において、本発明は、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物を投与することにより、対象において止血を低減または阻害するための方法を提供する。本明細書に開示される組成物および方法は、血栓性障害の治療または予防に有用である。本明細書で使用する場合、用語「血栓性障害」には、過剰なもしくは望ましくない凝固もしくは止血活性、または血液凝固亢進状態を特徴とする任意の障害または病態が含まれる。血栓性障害には、血小板粘着および血栓形成を含む疾患または障害が含まれ、血栓形成特性の増大、例えば、血栓の数の増大、若年の血栓症、家族性の血栓症傾向、および異常な部位での血栓症として発現し得る。
【0164】
別の実施態様では、併用薬物療法は、血液凝固障害またはこれらの病態に関連する続発性病態の治療または予防のための薬物または化合物を含み得る。よって、併用薬物療法は、１種類以上の、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物と１種類以上の抗凝固または抗血栓薬を含み得る。
【0165】
体重管理別の面では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、対象において体重増加または肥満を治療または予防するために使用することができる。例えば、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、例えば、遺伝性肥満、食事性肥満、ホルモン関連肥満、薬物の投与に関連する肥満を治療または予防するため、対象の体重を減らすため、または対象の体重増加を減らすもしくは防ぐために使用することができる。このような処置を必要とする対象は、肥満の対象、肥満となる可能性のある対象、過体重の対象、または過体重となる可能性のある対象であり得る。肥満または過体重となる可能性のある対象は、例えば、家族歴、遺伝学、食習慣、活動レベル、薬物摂取、またはそれらの様々な組合せに基づいて特定することができる。
【0166】
さらに他の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、対象において体重減少を促進することにより治療または予防可能な様々な他の疾患および病態に苦しむ対象に投与することができる。このような疾患には、例えば、高血圧、高血圧症、高血中コレステロール、異脂肪血症、２型糖尿病、インスリン抵抗性、グルコース不耐症、高インスリン血症、冠動脈性心疾患、狭心症、鬱血性心不全、脳卒中、胆石、胆嚢炎および胆石症、痛風、骨関節炎、閉塞性睡眠時無呼吸および呼吸器系障害、数種の癌（例えば、子宮内膜癌、乳癌、前立腺癌、および結腸癌）、妊娠合併症、女性の生殖に関する健康の不全(poor female reproductive health)（例えば、生理不順、不妊症、排卵不順）、膀胱調節障害（例えば、緊張性尿失禁）；尿酸腎結石症；精神障害（例えば、鬱病、摂食障害、身体醜形障害(distorted body image)、および低い自尊心）が含まれる。最後に、ＡＩＤＳ患者は、ＡＩＤＳに対する併用療法に応答して脂肪異栄養症またはインスリン抵抗性を発症することがある。
【0167】
別の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏに関わらず、脂肪生成または脂肪細胞分化を阻害するために使用することができる。このような方法は、肥満を治療または予防するために使用することができる。
【0168】
他の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、食欲を抑えかつ／または満腹感を高め、それにより、体重減少を引き起こす、または体重増加を回避するために使用することができる。このような処置を必要とする対象は、過体重、肥満の対象、または過体重もしくは肥満となる可能性のある対象であり得る。この方法は、毎日、または１日おきに、または１週間に１回、一用量を、例えば丸剤の形態で対象に投与することを含んでなり得る。この用量は、「食欲抑制用量」であり得る。
【0169】
例示的実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、体重増加または肥満を治療または予防するための併用療法として投与することができる。例えば、１種類以上の、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物が、１種類以上の抗肥満薬と組み合わせて投与することができる。
【0170】
別の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、薬剤性の体重増加を低減するために投与することができる。例えば、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、食欲を刺激し得る、または体重増加、特に、水分保持以外の要因による体重増加を招き得る薬物との併用療法として投与することができる。
【0171】
代謝障害／糖尿病別の面では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、インスリン抵抗性、前糖尿病状態、ＩＩ型糖尿病、および／またはその合併症などの代謝障害を治療または予防するために使用することができる。サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物の投与は、対象においてインスリン感受性を高め、かつ／またはインスリンレベルを低下させ得る。このような処置を必要とする対象は、インスリン抵抗性またはＩＩ型糖尿病の他の前症状を有する対象、ＩＩ型糖尿病を有する対象、またはこれらの病態のいずれかを発症する可能性のある対象であり得る。例えば、対象は、インスリン抵抗性を有し、例えば、高循環レベルのインスリンを有し、かつ／または高脂血症、脂肪生成不全(dyslipogenesis)、高コレステロール血症、耐糖能異常、高血糖値、Ｘ症候群のその他の症状、高血圧症、アテローム性動脈硬化症および脂肪異栄養症などの関連病態を有する対象であり得る。
【0172】
例示的実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、代謝障害を治療または予防するための併用療法として投与することができる。例えば、１種類以上の、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、１種類以上の抗糖尿病薬と組み合わせて投与することができる。
【0173】
炎症性疾患他の面では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、炎症に関連する疾患または障害を治療または予防するために使用することができる。サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、炎症誘発の開始前、誘発時、または誘発後に投与することができる。予防的に使用する場合、この化合物は好ましくは、何らかの炎症性応答または症状に先立って提供される。この化合物の投与により、炎症性応答または症状を予防または軽減することができる。
【0174】
別の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、喘息、気管支炎、肺線維症、アレルギー性鼻炎、酸素毒性、気腫、慢性気管支炎、急性呼吸窮迫症候群、および任意の慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を含む、アレルギーおよび呼吸器系病態を治療または予防するために使用することができる。本化合物は、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎を含む慢性肝炎感染を治療するために使用することができる。
【0175】
さらに、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、自己免疫疾患、および／または自己免疫疾患に関連する炎症、例えば、関節リウマチ、乾癬性関節炎、および強直性脊椎炎を含む関節炎、ならびに臓器組織自己免疫疾患（例えば、レイノー症候群）、潰瘍性大腸炎、クローン病、口腔粘膜炎、硬皮症、重症筋無力症、移植拒絶、内毒素ショック、敗血症、乾癬、湿疹、皮膚炎、多発性硬化症、自己免疫性甲状腺炎、ブドウ膜炎、全身性紅斑性狼瘡、アジソン病、自己免疫性多腺性疾患（自己免疫性多腺性症候群としても知られる）、およびグレーブス病を治療するために使用することができる。
【0176】
特定の実施態様では、１種類以上の、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、単独で摂取しても、または炎症の治療もしくは予防に有用である他の化合物と組み合わせて摂取してもよい。
【0177】
潮紅別の面では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、障害の症状である潮紅および／または顔面紅潮の発生または重篤度を低減するために用いることができる。例えば、本方法には、癌患者における潮紅および／または顔面紅潮の発生または重篤度を低減するための、単独または他の薬剤と組み合わせての、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物の使用が含まれる。他の面では、この方法は、閉経期および閉経後の女性における潮紅、および／または顔面紅潮の発生または重篤度を低減するための、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物の使用を提供する。
【0178】
別の面では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、別の薬物療法の副作用である潮紅および／または顔面紅潮、例えば、薬剤性潮紅の発生または重篤度を低減するための療法として使用することができる。特定の実施態様では、薬剤性潮紅を治療および／または予防するための方法は、それを必要とする患者に、少なくとも１種類の潮紅誘発化合物と少なくとも１種類の、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物を含んでなる製剤を投与することを含んでなる。他の実施態様では、薬剤性潮紅を処置するための方法は、潮紅を誘発する１種類以上の化合物と１種類以上のサーチュイン調節化合物を別々に投与することを含んでなり、例えば、ここで、サーチュイン調節化合物と潮紅誘発剤は同じ組成物に処方されていない。別々の製剤を用いる場合、サーチュイン調節化合物、（１）潮紅誘発剤の投与と同時に、（２）潮紅誘発剤と間欠的に、（３）潮紅誘発剤の投与との時間差で、（４）潮紅誘発剤の投与の前に、（５）潮紅誘発剤の投与の後に、および（６）これらの種々の組合せによって投与してよい。例としての潮紅誘発剤としては、例えば、ナイアシン、ラロキシフェン、抗鬱薬、抗精神病薬、化学療法薬、カルシウムチャネル遮断薬、および抗生物質が挙げられる。
【0179】
特定の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、血管拡張薬または抗高脂血症薬（コレステロール低下薬および脂肪作用薬を含む）の潮紅副作用を低減するために使用することができる。例示的実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、ナイアシンの投与に関連する潮紅を低減するために使用することができる。
【0180】
別の実施態様では、本発明は、潮紅副作用の低減を伴う、高脂血症を治療および／または予防するための方法を提供する。別の代表的実施態様では、この方法は、ラロキシフェンの潮紅副作用を低減するためのサーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物の使用を含む。別の代表的実施態様では、この方法は、抗鬱薬または抗精神病薬の潮紅副作用を低減するためのサーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物の使用を含む。例えば、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、セロトニン再取り込み阻害剤、または５ＨＴ２受容体アンタゴニストと併用する（個別にまたは一緒に投与する）ことができる。
【0181】
特定の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、潮紅を低減するためにセロトニン再取り込み阻害剤（ＳＲＩ）を用いた処置の一部として使用することができる。さらに別の代表的実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、シクロホスファミドおよびタモキシフェンなどの化学療法薬の潮紅副作用を低減するために使用することができる。
【0182】
別の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、アムロジピンなどのカルシウムチャネル遮断薬の潮紅副作用を低減するために使用することができる。
【0183】
別の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、抗生物質の潮紅副作用を低減するために使用することができる。例えば、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、レボフロキサシンと併用することができる。
【0184】
眼障害本発明の一面は、本明細書に開示される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、プロドラッグまたは代謝誘導体から選択される、治療用量のサーチュイン調節剤を患者に投与することにより、視力障害を阻止、低減、またはそうでなければ治療するための方法である。
【0185】
本発明の特定の面では、視力障害は、視神経または中枢神経系の損傷によって引き起こされる。特定の実施態様では、視神経損傷は、緑内障によって発生するものなどの高い眼圧によって引き起こされる。他の特定の実施態様では、視神経損傷は、神経の膨張によって引き起こされ、これは、視神経炎の場合などの感染症または免疫（例えば、自己免疫）反応に関連する場合が多い。
【0186】
本発明の特定の面では、視力障害は網膜損傷により引き起こされる。特定の実施態様では、網膜損傷は、眼への血流の妨害によって引き起こされる（例えば、動脈硬化症、血管炎）。特定の実施態様では、網膜損傷は、黄斑の障害によって引き起こされる（例えば、滲出性または非滲出性黄斑変性）。
【0187】
例示的網膜疾患としては、滲出性加齢性黄斑変性、非滲出性加齢性黄斑変性、電子人工網膜(Retinal Electronic Prosthesis)およびＲＰＥ移植による加齢性黄斑変性(RPE Transplantation Age Related Macular Degeneration)、急性多源性板状色素上皮症（Acute Multifocal Placoid Pigment Epitheliopathy）、急性網膜壊死、ベスト病、網膜動脈分枝閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、癌に付随するおよび関連する自己免疫網膜症、網膜中心動脈閉塞症、網膜中心静脈閉塞症、中心性漿液性網脈絡膜症、イールズ病、黄斑上膜、網膜格子状変性、細動脈瘤（Macroaneurysm）、糖尿病性黄斑浮腫、アーヴァイン‐ガス黄斑浮腫、黄斑円孔、網膜下新生血管膜（Subretinal Neovascular Membranes）、びまん性片側性亜急性視神経網膜炎（Diffuse Unilateral Subacute Neuroretinitis）、非偽水晶体嚢胞状黄斑浮腫（Nonpseudophakic Cystoid Macular Edema）、推定眼ヒストプラスマ症候群、滲出性網膜剥離、術後網膜剥離、増殖性網膜剥離、裂孔原性網膜剥離、牽引性網膜剥離、網膜色素変性症、ＣＭＶ網膜炎、網膜芽細胞腫、未熟児網膜症、散弾状網膜症、背景糖尿病性網膜症（Background Diabetic Retinopathy）、増殖性糖尿病性網膜症、異常ヘモグロビン症性網膜症（Hemoglobinopathies Retinopathy）、プルチェル網膜症、バルサルバ網膜症、若年性網膜分離症、老年性網膜分離症、テルソン症候群、および白点症候群が挙げられる。
【0188】
他の例示的疾患としては、眼の細菌感染症（例えば、結膜炎、角膜炎、結核、梅毒、淋病）、ウイルス感染症（例えば、眼の単純ヘルペスウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス網膜炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ））、ならびにＨＩＶまたはその他のＨＩＶ関連およびその他の免疫不全関連眼疾患に続発する進行性外側網膜壊死が挙げられる。さらに、眼疾患としては、真菌感染症（例えば、カンジダ脈絡膜炎、ヒストプラスマ症）、原虫感染症（例えば、トキソプラズマ症）、ならびに眼のトキソカラ症およびサルコイドーシスなどのその他の疾患が挙げられる。
【0189】
本発明の一面は、化学療法薬（例えば、神経毒性薬、またはステロイドなどの眼圧を上昇させる薬物）による治療中の対象における視力障害の阻止、低減、または治療するための、そのような処置を必要とする対象に本明細書に開示されるサーチュイン調節剤の治療用量を投与することによる方法である。
【0190】
本発明の別の面は、眼の手術、または脊髄手術などの腹臥位で実施されるその他の手術を含む手術を受けている対象における視力障害の阻止、低減、または治療するための、そのような処置を必要とする対象に本明細書に開示されるサーチュイン調節薬の治療用量を投与することによる方法である。眼の手術としては、白内障、虹彩切開術、および水晶体交換が含まれる。
【0191】
本発明の別の面は、白内障、ドライアイ、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、および網膜損傷などを含む加齢性眼疾患の阻止および予防的処置を含む処置であって、そのような処置を必要とする対象に本明細書に開示されるサーチュイン調節薬の治療用量を投与することによる処置である。
【0192】
本発明の別の面は、ストレス、化学的侵襲、または放射線によって引き起こされる眼の損傷の予防または治療であって、そのような処置を必要とする対象に本明細書に開示されるサーチュイン調節薬の治療用量を投与することによる予防または治療である。放射線または電磁気による眼への損傷としては、ＣＲＴ、または太陽光線もしくはＵＶへの曝露によって引き起こされるものを含み得る。
【0193】
特定の実施態様では、併用薬物療法は、眼障害もしくはこれらの病態に関連する続発性病態の治療または予防のための薬物または化合物を含み得る。従って、併用薬物療法は、１種類以上のサーチュイン活性剤と眼障害の治療のための１種類以上の治療薬を含み得る。
【0194】
特定の実施態様では、サーチュイン調節剤は、眼圧を低下させるための療法と併用投与することができる。別の実施態様では、サーチュイン調節剤は、緑内障を治療および／または予防するための療法と併用投与することができる。さらに別の実施態様では、サーチュイン調節剤は、視神経炎を治療および／または予防するための療法と併用投与することができる。特定の実施態様では、サーチュイン調節剤は、ＣＭＶ網膜炎を治療および／または予防するための療法と併用投与することができる。別の実施態様では、サーチュイン調節剤は、多発性硬化症を治療および／または予防するための療法と併用投与することができる。
【0195】
ミトコンドリア関連疾患および障害特定の実施態様では、本発明は、ミトコンドリア活性の上昇から利益を受けると思われる疾患または障害を治療するための方法を提供する。この方法は、それを必要とする対象に、治療上有効な量のサーチュイン調節化合物を投与することを含む。ミトコンドリア活性の上昇とは、ミトコンドリアの総数（例えば、ミトコンドリア質量）を維持しつつミトコンドリア活性を上昇させること、ミトコンドリアの数を増加させることによってミトコンドリア活性を上昇させること（例えば、ミトコンドリア生合成を刺激することによる）、またはこれらの組合せを意味する。特定の実施態様では、ミトコンドリア活性の上昇から利益を受けると思われる疾患または障害としては、ミトコンドリア機能不全に関連する疾患または障害が含まれる。
【0196】
特定の実施態様では、ミトコンドリア活性の上昇から利益を受けると思われる疾患または障害を治療するための方法は、ミトコンドリア機能不全に罹患する対象を識別することを含んでなり得る。ミトコンドリア機能不全を診断するための方法には、分子遺伝学的、病理的、および／または生化学的分析を含み得る。ミトコンドリア機能不全に関連する疾患および障害としては、ミトコンドリア呼吸鎖活性の欠陥が哺乳動物におけるこのような疾患または障害の病態生理の発生に寄与している疾患および障害が含まれる。ミトコンドリア活性の上昇から利益を受けると思われる疾患または障害としては、一般に、例えば、遊離ラジカルが媒介する酸化的損傷が組織の変性をもたらす疾患、細胞が不適切なアポトーシスを受ける疾患、および細胞がアポトーシスを受けることができない疾患が挙げられる。
【0197】
特定の実施態様では、本発明は、ミトコンドリア活性の上昇から利益を受けると思われる疾患または障害を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、１種類異常のサーチュイン活性化化合物を、例えば、ミトコンドリア機能不全の治療に有用な薬剤、またはミトコンドリア機能不全が関与する疾患もしくは障害に付随する症状の低減に有用である薬剤など、別の治療薬と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。
【0198】
例示的実施態様では、治療上有効な量のサーチュイン調節化合物を対象に投与することによる、ミトコンドリア活性の上昇から利益を受けると思われる疾患または障害を治療するための方法を提供する。例示的疾患または障害としては、例えば、神経筋障害（例えば、フリードライヒ失調症、筋ジストロフィー、多発性硬化症など）、ニューロンの不安定性の障害（例えば、発作性障害、片頭痛など）、発育遅延、神経変性障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症など）、虚血、腎尿細管性アシドーシス、加齢性神経変性および認知機能低下、化学療法疲労（chemotherapy fatigue）、加齢性もしくは化学療法誘発性の閉経または月経周期もしくは排卵の不順、ミトコンドリア筋症、ミトコンドリア損傷（例えば、カルシウム蓄積、興奮毒性、一酸化窒素曝露、低酸素など）、およびミトコンドリア調節不全が含まれる。
【0199】
筋ジストロフィーとは、神経筋構造および機能の劣化が関与する疾患のファミリーを意味し、多くの場合、デュシェンヌ型筋ジストロフィーなどの骨格筋萎縮症および心筋機能不全をもたらす。特定の実施態様では、サーチュイン調節化合物は、筋ジストロフィー患者における筋肉機能の能力低下速度の低減、および筋肉機能の状態の改善のために使用することができる。
【0200】
特定の実施態様では、サーチュイン調節化合物は、ミトコンドリア筋症の治療に有用であり得る。ミトコンドリア筋症は、軽度の緩やかに進行する外眼筋の弱体化から重度の致死性である小児筋症および多系統脳筋症までに及ぶ。これらの間である程度の重なりを有するいくつかの症候群が定義されている。筋肉に影響する確立された症候群としては、進行性外眼筋麻痺症候群、カーンズ−セイヤー症候群（眼筋麻痺、色素性網膜症、心臓伝導障害、小脳失調、および感音難聴を含む）、ＭＥＬＡＳ症候群（ミトコンドリア脳筋症、乳酸アシドーシス、および脳卒中様症候群）、ＭＥＲＦＦ症候群（ミオクローヌス癲癇および赤色ぼろ線維）、肢帯筋分布弱体化(limb-girdle distribution weakness)、ならびに小児筋症（良性、または重度および致死性）が挙げられる。
【0201】
特定の実施形態では、サーチュイン調節化合物は、カルシウム蓄積、興奮毒性、一酸化窒素曝露、薬物誘発性毒性損傷、または低酸素による毒性損傷など、ミトコンドリアへの毒性損傷に罹患する患者を治療するために有用であり得る。
【0202】
特定の実施形態では、サーチュイン調節化合物は、ミトコンドリアの調節不全に関連する疾患または障害を治療するために有用であり得る。
【0203】
筋肉性能他の実施態様では、本発明は、治療上有効な量のサーチュイン調節化合物を投与することにより筋肉性能を向上させるための方法を提供する。例えば、サーチュイン調節化合物は、身体的耐久力（例えば、運動、肉体労働、スポーツ活動などの身体作業を遂行する能力）の改善、身体疲労の阻止もしくは遅延、血中酸素レベルの上昇、健康な個人のエネルギーの増大、作業を行う能力および耐久力の向上、筋肉疲労の低減、ストレスの低減、心機能および心血管機能の向上、性的能力の改善、筋肉ＡＴＰレベルの増大、および／または血中乳酸の減少のために有用であり得る。特定の実施態様では、この方法は、ミトコンドリア活性を増強する、ミトコンドリア生合成を増大させる、および／またはミトコンドリア質量を増大させる量のサーチュイン調節化合物を投与することを含む。
【0204】
スポーツ実行能とは、スポーツ活動に参加した場合の、運動選手の筋肉が性能を発揮する能力を意味する。スポーツ実行能、力、スピード、および耐久力の向上は、筋肉収縮力の増加、筋肉収縮の大きさの増加、刺激と収縮との間の筋肉反応時間の短縮によって測定される。運動選手とは、任意のレベルでスポーツに参加し、その実行能における力、スピード、および耐久力の向上を達成することを求める個人を意味し、例えば、ボディビルダー、自転車選手、長距離ランナー、短距離ランナーなどである。スポーツ実行能の向上は、筋肉疲労を克服する能力、より長時間活動を続ける能力、およびより効果的なトレーニングを行う能力によって表される。
【0205】
運動選手の筋肉性能に関しては、長時間にわたってより高いレベルの負荷での競技またはトレーニングを可能とする条件を作り出すことが望ましい。
【0206】
本発明の方法はまた、急性筋肉減少症、例えば、筋萎縮症および／もしくは熱傷に付随する悪液質、床上安静(bed rest)、四肢不動化(limb immobilization)、または胸部、腹腔、および／もしくは整形の大手術を含む病態に関連する筋肉の治療にも効果的であると企図される。
【0207】
特定の実施態様では、本発明は、サーチュイン調節剤を含んでなる新規な食事組成物、その作製のための方法、およびスポーツ実行能の改善のためにその組成物を使用する方法を提供する。従って、耐久力を必要とするスポーツおよび激しい筋肉活動を繰り返し必要とする労働を含む広義の運動に関与する人に対して、身体的耐久力を改善する、および／または身体疲労を阻止する作用を有する治療組成物、食品、および飲料が提供される。このような食事組成物は、電解質、カフェイン、ビタミン、炭水化物などをさらに含んでなってもよい。
【0208】
その他の使用サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、ウイルス感染症（例えば、インフルエンザ、ヘルペス、もしくはパピローマウイルスによる感染症）を治療もしくは予防するために、または抗真菌薬として用いることができる。特定の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、ウイルス性疾患の治療のための別の治療薬との併用薬物療法の一部として投与することができる。別の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、別の抗真菌薬との併用薬物療法の一部として投与することができる。
【0209】
本明細書に記載のように処置することができる対象としては、哺乳動物、例えば、ヒト、ヒツジ類、ウシ類、ウマ類、ブタ類、イヌ類、ネコ類、非ヒト霊長類、マウス、およびラットなどの真核生物が含まれる。処理可能な細胞としては、真核細胞、例えば上記の対象由来の細胞、または植物細胞、酵母細胞、および原核細胞、例えば、細菌細胞が含まれる。例えば、調節化合物を家畜動物に投与して、飼育条件により長く耐える能力を改善することができる。
【0210】
サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物はまた、植物の寿命、ストレス耐性、およびアポトーシス耐性を増大させるために使用することができる。特定の実施態様では、化合物は、例えば定期的に植物にまたは真菌に適用される。別の実施態様では、化合物を産生するように植物を遺伝的に改変する。別の実施態様では、植物および果実が、摘果および出荷の前に化合物で処理され、出荷過程での損傷に対する耐性が強化される。植物種子もまた、本明細書に記載の化合物と接触させることにより、例えばそれを保存することができる。
【0211】
他の実施態様では、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、酵母細胞の寿命を調節するために使用することができる。酵母細胞の寿命を延長することが望ましいと思われる状況としては、酵母が用いられるいずれのプロセスをも含まれ、例えば、ビール、ヨーグルト、およびパン製品、例えば食パンの製造である。寿命が延長された酵母を使用することにより、使用する酵母量の削減、またはより長期間にわたる酵母の活性化を得ることができる。遺伝子組換えによるタンパク質産生のために用いられる酵母またはその他の哺乳類細胞もまた、本明細書に記載するように処理することができる。
【0212】
サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物はまた、昆虫の寿命、ストレス耐性、およびアポトーシス耐性を増大させるために使用することもできる。この実施態様では、化合物は、益虫、例えば、ハチ、および植物の受粉に関与するその他の昆虫に適用される。特定の実施態様では、化合物は、ハチミツの製造に関与するハチに適用される。一般に、本明細書に記載の方法は、真核生物などの商業的に重要であり得るいずれの生物へも適用可能である。例えば、本化合物は魚類（水産養殖）および鳥類（例えば、ニワトリおよび家禽）に適用することができる。
【0213】
より高用量の、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物はまた、サイレンシングを受けた遺伝子の調節および発達過程でのアポトーシスの調節に干渉することによる殺虫剤として使用することもできる。この実施態様では、化合物は、この化合物が植物ではなく昆虫の幼生に対して生物学的に利用可能となるような当技術分野で公知の方法を用いて植物に適用することができる。
【0214】
少なくとも繁殖と長寿命との間のリンクを考慮すると、サーチュインタンパク質のレベルおよび／または活性を増強するサーチュイン調節化合物は、昆虫、動物、および微生物などの生物の繁殖に影響を与えるために適用することができる。
【0215】
４．アッセイ本明細書で企図されるさらに他の方法には、サーチュインを調節する化合物または薬剤を同定するためのスクリーニング方法が含まれる。薬剤は、アプタマーなどの核酸であってよい。アッセイは、細胞基づく形式または無細胞形式で実施してよい。例えば、アッセイは、サーチュインを調節することが知られている薬剤によってサーチュインを調節することができる条件下で、サーチュインを試験薬剤とともにインキュベートすること（または接触させること）、および試験薬剤の不在下に対しての試験薬剤の存在下におけるサーチュインの調節レベルをモニタリングまたは測定することを含んでなり得る。サーチュインの調節レベルは、基質を脱アセチル化するその能力を測定することによって決定することができる。例示的基質は、バイオモル（ＢＩＯＭＯＬ）（Ｐｌｙｍｏｕｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ、ＰＡ）から入手可能なアセチル化ペプチドである。好ましい基質としては、アセチル化Ｋ３８２を含んでなるものなどのｐ５３のペプチドが挙げられる。特に好ましい基質は、Ｆｌｕｏｒ ｄｅ Ｌｙｓ−ＳＩＲＴ１（バイオモル）、すなわち、アセチル化ペプチドＡｒｇ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓである。その他の基質は、ヒトヒストンＨ３およびＨ４由来のペプチド、またはアセチル化アミノ酸である。基質は、蛍光発性であってよい。サーチュインは、ＳＩＲＴ１、Ｓｉｒ２、ＳＩＲＴ３、またはその一部であってよい。例えば、組換え型ＳＩＲＴ１は、バイオモルから入手可能である。反応は約３０分間実施し、例えばニコチンアミドで停止させることができる。ＨＤＡＣ蛍光活性アッセイ／創薬キット（ＡＫ−５００、ＢＩＯＭＯＬ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いてアセチル化のレベルを決定することができる。同様のアッセイが、Bitterman et al. (2002) J. Biol. Chem. 277:45099に記載されている。アッセイにおけるサーチュインの調節レベルは、本明細書に記載の１種類以上の化合物の存在下（個別にまたは同時に）におけるサーチュインの調節レベルと比較してよく、これを、陽性対照または陰性対照として用いてよい。アッセイにおいて使用するためのサーチュインは、全長サーチュインタンパク質であってもその一部であってもよい。活性化化合物がＳＩＲＴ１のＮ末端と相互作用すると思われることが本明細書で示されたことから、アッセイにおいて使用するためのタンパク質としては、サーチュインのＮ末端部分、例えば、ＳＩＲＴ１のおよそアミノ酸１〜１７６または１〜２５５；Ｓｉｒ２のおよそアミノ酸１〜１７４、または１〜２５２が含まれる。
【0216】
特定の実施態様では、スクリーニングアッセイは、（ｉ）サーチュインと試験薬剤およびアセチル化基質とを、サーチュインが試験薬剤の不在下で基質を脱アセチル化するのに適切な条件下で接触させること；ならびに（ｉｉ）基質のアセチル化のレベルを決定することを含んでなり、ここで、試験薬剤の存在下での基質のアセチル化レベルが試験薬剤の不在下よりも低ければ、その試験薬剤はサーチュインによる脱アセチル化を刺激することを示し、一方、試験剤の存在下での基質のアセチル化レベルが試験薬剤の不在下よりも高ければ、その試験薬剤はサーチュインによる脱アセチル化を阻害することを示す。
【0217】
別の実施態様では、このスクリーニングアッセイは、サーチュインを介したＮＡＤ依存性脱アセチル化の２’／３’−Ｏ−アセチル−ＡＤＰ−リボース産物の形成を検出し得る。このＯ−アセチル−ＡＤＰ−リボース産物は、サーチュイン脱アセチル化反応の脱アセチル化ペプチド産物と等モル量で形成される。従って、このスクリーニングアッセイは、（ｉ）サーチュインと試験薬剤およびアセチル化基質とを、サーチュインが試験薬剤の不在下で基質を脱アセチル化するのに適切な条件下で接触させること；ならびに（ｉｉ）Ｏ−アセチル−ＡＤＰ−リボースの形成量を決定することを含んでなり、ここで、試験薬剤の存在下でのＯ−アセチル−ＡＤＰ−リボースの形成量が増加していれば、その試験薬剤はサーチュインによる脱アセチル化を刺激することを示し、一方、試験剤の存在下でのＯ−アセチル−ＡＤＰ−リボース形成が試験薬剤の不在下よりも減少していれば、その試験薬剤はサーチュインによる脱アセチル化を阻害することを示す。
【0218】
サーチュインを調節する、例えば、刺激する薬剤をｉｎ ｖｉｖｏにて同定するための方法は、（ｉ）細胞と試験薬剤、および細胞に進入する能力を有する基質とを、サーチュインが試験薬剤の不在下で基質を脱アセチル化するのに適切な条件下、クラスＩおよびクラスＩＩ ＨＤＡＣの阻害剤の存在下で接触させること；ならびに（ｉｉ）基質のアセチル化のレベルを決定することを含んでなり、ここで、試験薬剤の存在下での基質のアセチル化レベルが試験薬剤の不在下よりも低ければ、その試験剤はサーチュインによる脱アセチル化を刺激することを示し、一方、試験薬剤の存在下での基質のアセチル化レベルが試験薬剤の不在下よりも高ければ、その試験剤はサーチュインによる脱アセチル化を阻害することを示す。好ましい基質はアセチル化ペプチドであり、これはまた、さらに本明細書に記載するように、好ましくは蛍光性でもある。この方法はさらに、基質のアセチル化のレベルを決定するために細胞を溶解することも含んでなり得る。細胞に添加される基質の濃度は、約１μＭ〜約１０ｍＭ、好ましくは約１０μＭ〜１ｍＭ、いっそうより好ましくは約１００μＭ〜１ｍＭの範囲、例えば、約２００μＭであってよい。好ましい基質は、ε−アセチルリジン（Ｆｌｕｏｒ ｄｅ Ｌｙｓ、ＦｄＬ）またはＦｌｕｏｒ ｄｅ Ｌｙｓ−ＳＩＲＴ１などのアセチル化リジンである。クラスＩおよびクラスＩＩ ＨＤＡＣの好ましい阻害剤は、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）であり、これは、約０．０１〜１００μＭ、好ましくは約０．１〜１０μＭの範囲、例えば１μＭの濃度で用いてよい。試験化合物および基質と細胞とのインキュベーションは、約１０分〜５時間、好ましくは約１〜３時間行ってよい。ＴＳＡはすべてのクラスＩおよびクラスＩＩ ＨＤＡＣを阻害すること、ならびに例えばＦｌｕｏｒ ｄｅ Ｌｙｓなどの特定の基質はＳＩＲＴ２に対しては不十分な基質であり、ＳＩＲＴ３〜７に対してはさらに弱い基質であることから、このようなアッセイを用いてｉｎ ｖｉｖｏにてＳＩＲＴ１の調節剤を同定することができる。
【0219】
５．医薬組成物本明細書に記載の化合物は、１種類以上の生理学的または薬理学的に許容可能な担体または賦形剤を用いて、従来の方法で処方することができる。例えば、化合物ならびにそれらの薬理学的に許容可能な塩および溶媒和物は、例えば注射（例えば、ＳｕｂＱ、ＩＭ、ＩＰ）、吸入もしくは吹送（口もしくは鼻経由）、または経口、頬側、舌下、経皮、経鼻、非経口、もしくは直腸内投与による投与用として処方することができる。特定の実施態様では、化合物は、標的細胞の存在する部位、すなわち特定の組織、臓器、または体液（例えば、血液、脳脊髄液など）に、局所投与することができる。
【0220】
本化合物は、全身、および局所または局在投与を含む種々の投与様式用に処方することができる。技術および製剤は一般に、Remington's Pharmaceutical Sciences, Meade Publishing Co., Easton, PAに見出すことができる。非経口投与に関しては、筋肉内、静脈内、腹腔内、および皮下を含む注射が好ましい。注射の場合、本化合物は、溶液中、好ましくはハンクス液またはリンゲル液などの生理学的適合性のあるバッファー中に処方することができる。さらに、本化合物は、固体剤形に処方し、使用の直前に再溶解または懸濁させることもできる。凍結乾燥剤形も含まれる。
【0221】
経口投与の場合、医薬組成物は、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、またはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；増量剤（例えば、ラクトース、微結晶セルロース、またはリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、またはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはグリコール酸ナトリウムデンプン）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容可能な賦形剤を用いた従来の手段よって調製された、例えば、錠剤、ロゼンジ、またはカプセルの形態を採ってよい。錠剤は、当技術分野で周知の方法によってコーティングしてよい。経口投与のための液体製剤は、例えば、溶液、シロップ、もしくは懸濁液の形態を採ってよく、または使用前に水もしくは他の適切なビヒクルで構成する乾燥品として提供してもよい。このような液体製剤は、沈殿防止剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体、または硬化食用油脂）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアラビアガム）；非水性ビヒクル（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコール、または分留植物油）、および保存剤（例えば、メチルまたはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸）などの薬学的に許容可能な添加剤を用いる従来の手段によって調製してよい。この製剤はまた、必要に応じて、緩衝塩、香味剤、着色剤、および甘味剤を含有してもよい。経口投与用の製剤は、活性化合物の制御放出が得られるように適宜処方してもよい。
【0222】
吸入による投与の場合（例えば、経肺送達）、本化合物は、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、またはその他の適切なガスなどの適切な噴霧剤を使用して、加圧パックまたは噴霧器からエアゾールスプレー剤形の形態で好都合に送達することができる。加圧エアゾールの場合、用量単位は、計量された量を供給するバルブを設けることによって決定され得る。吸入器または吹送器に使用するための、例えばゼラチンなどのカプセルおよびカートリッジは、化合物とラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末基剤との粉末混合物を含むように処方し得る。
【0223】
本化合物は、例えばボーラス注射または連続注入などの注射による非経口投与用に処方してもよい。注射用製剤は、保存剤を添加して、例えばアンプルまたは多用量容器中の単位投与形として提供してよい。本組成物は、油性もしくは水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルションなどの形態を採ってもよく、懸濁剤、安定化剤、および／または分散剤などの処方剤(formulatory agent)を含有してよい。あるいは、有効成分は、例えば滅菌発熱性物質除去水などの適切な媒体で使用前に構成する粉末の形態であってもよい。
【0224】
本化合物はまた、例えばカカオバターまたは他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤を含有する坐剤または保留浣腸などの直腸用組成物として処方することもできる。
【0225】
既述の製剤に加えて、化合物はまた、デポー製剤として処方することもできる。このような長期間作用する製剤は、移植（例えば、皮下もしくは筋肉内）、または筋肉内注射によって投与してよい。従って、例えば、化合物は、適切なポリマー性もしくは疎水性物質とともに（例えば、許容される油中のエマルションとして）、もしくはイオン交換樹脂とともに、または、例えば難溶性塩などの難溶性誘導体として処方してよい。制御放出製剤にはパッチも含まれる。
【0226】
特定の実施態様では、本明細書に記載の化合物は、中枢神経系（ＣＮＳ）へ送達するために処方することができる(Begley, Pharmacology & Therapeutics 104: 29-45 (2004)に総説）。ＣＮＳへの薬物送達の従来の手法としては、神経外科的方法（例えば、脳内注射または脳室内注入）；ＢＢＢの内在性輸送経路の１つを利用する試みとしての薬剤の分子操作（例えば、それ自体はＢＢＢを通過する能力を持たない薬剤と組み合わせて、内皮細胞表面分子に対して親和性を有する輸送ペプチドを含んでなるキメラ融合タンパク質の作製）；薬剤の脂質溶解性を高めるように設計された薬理学的方法（例えば、水溶性薬剤の脂質またはコレステロール担体とのコンジュゲーション）：ならびに高浸透圧分断(hyperosmotic disruption)によるＢＢＢの完全性の一時的な分断（頚動脈へのマンニトール溶液の注入、またはアンジオテンシンペプチドなどの生物活性薬剤の使用によって得られる）が挙げられる。
【0227】
リポソームは、容易に注射可能であるさらなる薬物送達系である。従って、本発明の方法では、活性化合物はまた、リポソーム送達系の形態で投与することもできる。リポソームは当業者に周知である。リポソームは、コレステロール、ホスファチジルコリンのステアリルアミンなどの種々のリン脂質から形成することができる。本発明の方法に使用可能なリポソームは、限定されるものではないが、小単層小胞、大単層小胞、および多層小胞を含むすべての種類のリポソームを包含する。
【0228】
本明細書に記載の化合物の製剤、特に溶液を作製する別法は、シクロデキストリンの使用を介するものである。シクロデキストリンとは、α−、β−、またはγ−シクロデキストリンを意味する。シクロデキストリンは、引用することにより本明細書の一部とされるPitha et al.の米国特許第４，７２７，０６４号に詳細に記載されている。シクロデキストリンは、グルコースの環状オリゴマーであり；これらの化合物は、その分子がシクロデキストリン分子の脂溶性物質を求めるキャビティ(lipophile-seeking cavities)に嵌まり込むことができるいずれの薬物とも包接複合体を形成する。
【0229】
速やかに崩壊または溶解する剤形は、薬理活性薬剤の迅速な吸収、特に頬側および舌下吸収に有用である。急速融解剤形は、高齢患者および小児患者など、カプレットおよび錠剤などの通常の固体剤形の嚥下が困難である患者にとって有益である。さらに、急速融解剤形により例えば咀嚼剤形に付随する欠点が回避され、この場合、矯味剤の量および患者が活性薬剤の喉のザラザラ感(throat grittiness)を嫌がる程度を決定する上で、活性薬剤が患者の口内に残留する時間の長さが重要な役割を担う。
【0230】
医薬組成物（美容製剤を含む）は、本明細書に記載の１種類以上の化合物を約０．００００１から１００重量％、例えば、０．００１〜１０重量％または０．１重量％〜５重量％の量で含んでなり得る。他の実施態様では、医薬組成物は、（ｉ）０．０５〜１０００ｍｇの本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、（ｉｉ）０．１〜２グラムの１種類以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含んでなる。
【0231】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の化合物は、一般に局所薬物投与に適する局所用担体を含有し、当技術分野で公知のそのようないずれかの物質を含んでなる局所用製剤に組み込まれる。局所用担体は、例えば、軟膏、ローション、クリーム、マイクロエマルション、ゲル、オイル、または溶液などの所望の形態で組成物を提供するように選択することができ、天然または合成由来の物質からなってよい。選択された担体が、活性薬剤または局所用製剤の他の成分に悪影響を及ぼさないことが好ましい。本明細書における使用のために適切な局所用担体の例としては、水、アルコールおよび他の無毒性有機溶媒、グリセリン、鉱油、シリコーン、石油ゼリー、ラノリン、脂肪酸、植物油、パラベン、ならびにワックスなどが挙げられる。
【0232】
製剤は、無色、無臭の軟膏、ローション、クリーム、マイクロエマルション、およびゲルであってよい。
【0233】
本化合物は、軟膏に組み込んでよく、これは一般に、通常にはワセリンまたはその他の石油誘導体に基づく半固体製剤である。用いられる具体的な軟膏基剤は、当業者により理解されているように、最適な薬物送達をもたらし、好ましくは、例えば軟化などの他の所望の特徴も付与するものである。その他の担体またはビヒクルと同様に、軟膏基剤も不活性、安定、無刺激性、および無感作性であるべきである。
【0234】
本化合物は、ローションに組み込んでよく、これは一般に、摩擦なく皮膚表面に適用される製剤であり、通常は、活性薬剤を含む固体粒子が水もしくはアルコール基剤中に存在する液体または半液体製剤である。ローションは、通常、固体の懸濁液であり、水中油型の液体油性エマルションを含んでなってよい。
【0235】
本化合物は、クリームに組み込んでよく、これは一般に、水中油型または油中水型の、粘性液体または半固体エマルションである。クリーム基剤は、水洗可能なものであり、油相、乳化剤、および水相を含有する。油相は、一般に、ワセリン、およびセチルもしくはステアリルアルコールなどの脂肪アルコールからなり；水相は、必ずというわけではないが通常は、油相よりも体積が大きく、一般には湿潤剤を含有する。クリーム製剤中の乳化剤は、上記のRemington'sに説明されるように、一般に、非イオン性、アニオン性、カチオン性、または両性界面活性剤である。
【0236】
本化合物は、マイクロエマルションに組み込んでよく、これは一般に、界面活性剤分子の界面層によって安定化された、熱力学的に安定である、オイルと水などの２つの不混和性液体の透明な等方性分散液である(Encyclopedia of Pharmaceutical Technology (New York: Marcel Dekker, 1992), volume 9)。
【0237】
本化合物は、ゲル製剤に組み込んでよく、これは一般に、無機小粒子から形成される懸濁液（２相系）、または担体液体全体に実質的に均一に分布した大有機分子（単相ゲル）からなる半固体系である。ゲルは一般に水性単体液体を用いるが、アルコールおよびオイルも単体液体として使用することができる。
【0238】
その他の活性薬剤を製剤中に含んでもよく、例えば、その他の抗炎症薬、鎮痛薬、抗菌薬、抗真菌薬、抗生物質、ビタミン、抗酸化薬、および日焼け止め製剤でよく見られるサンブロック剤であり、限定されるものではないが、アントラニレート、ベンゾフェノン（特にベンゾフェノン−３）、カンファー誘導体、シンナメート（例えば、オクチルメトキシシンナメート）、ジベンゾイルメタン（例えば、ブチルメトキシジベンゾイルメタン）、ｐ−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）およびその誘導体、ならびにサリチレート（例えば、オクチルサリチレート）が含まれる。
【0239】
特定の局所製剤では、活性薬剤は、製剤のおよそ０．２５重量％〜７５重量％の範囲好ましくは製剤のおよそ０．２５重量％〜３０重量％の範囲、より好ましくは製剤のおよそ０．５重量％〜１５重量％の範囲、最も好ましくは製剤のおよそ１．０重量％〜１０重量％の範囲の量で存在する。
【0240】
眼の病態は、化合物の例えば全身、局所、眼内注射により、または化合物を放出する徐放性デバイスの挿入により治療または予防することができる。化合物は、薬学的に許容可能な眼用ビヒクルで送達してよく、それにより、この化合物と眼の表面との接触が、化合物を角膜、および例えば前房、後房、硝子体、眼房水、ガラス体液、角膜、虹彩／毛様体、水晶体、脈絡膜／網膜、および強膜などの眼の内部領域へ浸透させるのに十分な時間にわたって維持される。薬学的に許容可能な眼用ビヒクルは、例えば、軟膏、植物油、またはカプセル化剤であってよい。あるいは、本発明の化合物は、ガラス体液および眼房水へ直接注射してもよい。さらなる別法では、本化合物は、眼の治療のために、静脈内注入または注射によるなどの全身投与を行ってもよい。
【0241】
本明細書に記載の化合物は、無酸素環境下にて保存してよい。例えば、化合物は、Ｐｆｉｚｅｒ，ＩｎｃからのＣａｐｓｕｇｅｌなどの経口投与用気密カプセル内に調製することができる。
【0242】
例えばｅｘ ｖｉｖｏにて本明細書に記載の化合物で処理された細胞は、対象に移植片を投与する方法に従って投与することができ、これは、例えば、シクロスポリンＡなどの免疫抑制薬の投与を伴ってよい。医薬製剤の一般的な原理に関しては、読者には、Cell Therapy: Stem Cell Transplantation, Gene Therapy, and Cellular Immunotherapy, G. Morstyn & W. Sheridan eds, Cambridge University Press, 1996；およびHematopoietic Stem Cell Therapy, E. D. Ball, J. Lister & P. Law, Churchill Livingstone, 2000を参照されたい。
【0243】
化合物の毒性および治療効力は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順によって測定することができる。ＬＤ５０は、集団の５０％に対して致死的な用量である。ＥＤ５０は、集団の５０％に対して治療効果を有する用量である。毒性および治療効果の間の用量比（ＬＤ５０／ＥＤ５０）が治療指数である。大きな治療指数を示す化合物が好ましい。毒性副作用を示す化合物を用いてもよいが、非感染細胞への損傷の可能性を最小限に抑え、それにより副作用を低減するために、罹患組織の部位へそのような化合物を標的化する送達系を設計するよう注意を払わなければならない。
【0244】
細胞培養アッセイおよび動物実験から得られたデータを、ヒトに用いるための用量範囲の設定に使用することができる。そのような化合物の用量は、ほとんどまたはまったく毒性のないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内に入っていてよい。用量は、採用される剤形および使用される投与経路に応じてこの範囲内で異なり得る。いずれの化合物に対しても、治療上有効な用量は、最初は細胞培養アッセイから見積もることができる。細胞培養で決定されたＩＣ５０（すなわち、症状の最大の半分の抑制を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿中濃度範囲を達成する用量を、動物モデルで設定してよい。このような情報を用いて、ヒトに有用な用量をより正確に決定することができる。血漿中レベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定してよい。
【0245】
６．キット本明細書では、例えば、治療目的のキット、または細胞寿命の調節もしくはアポトーシスの調節のためのキットなどのキットも提供される。キットは、本明細書に記載の１種類以上の化合物を、例えば、予め計量された用量で含んでなり得る。キットは、場合により、細胞を化合物と接触させるためのデバイス、および使用説明書を含んでなり得る。デバイスとしては、シリンジ、ステント、および化合物を対象（例えば、対象の血管）へ導入するための、またはそれを対象の皮膚に適用するためのその他のデバイスが含まれる。
【0246】
さらに別の実施態様では、本発明は、本発明の化合物と別の治療薬（併用療法および併用組成物で用いたものと同じ）を、別個の剤形で、互いに連結した形で含んでなる物質の組成物を提供する。本明細書で用いる「互いに連結した形で」という用語は、個別の剤形が一緒に包装されているか、またはそうでなければ互いに結合されている（これにより、個別の剤形が、同一の療法の一部として販売および投与されることが意図されていることが容易に明らかである）ことを意味する。この化合物および他の薬剤は、ブリスターパックもしくはその他の多チャンバーパッケージに一緒に包装されているか、または使用者が分離することができる（例えば、２つの容器間の切り取り線で切り離すことにより）連結されていて別個に封止された容器（ホイルパウチなど）として包装されていることが好ましい。
【0247】
さらに別の実施態様では、本発明は、ａ）本発明の化合物；およびｂ）本明細書の他所に記載されるものなどの別の治療薬を、別個の容器に含んでなるキットを提供する。
【0248】
本方法の実施に際しては、特に断りのない限り、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡ、および免疫学の従来の技術が用いられ、これらは当業者の技量の範囲内である。このような技術は文献で詳細に説明がなされている。例えば、Molecular Cloning A Laboratory Manual, 第2版, Sambrook, Fritsch and Maniatis編 (Cold Spring Harbor Laboratory Press: 1989); DNA Cloning, Volumes I and II (D. N. Glover ed., 1985); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait ed., 1984); Mullis et al. 米国特許第号４，６８３，１９５号; Nucleic Acid Hybridization (B. D Hames & S. J. Higgins eds. 1984); Transcription And Translation (B. D. Hames & S. J. Higgins eds. 1984); Culture Of Animal Cells (R. I. Freshney, Alan R. Liss, Inc., 1987); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press, 1986); B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984); the treatise, Methods In Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.); Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells (J. H. Miller and M. P. Calos eds., 1987, Cold Spring Harbor Laboratory); Methods In Enzymology, Vols. 154 and 155 (Wu et al.編), Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Mayer and Walker, eds., Academic Press, London, 1987); Handbook Of Experimental Immunology, Volumes I-IV (D. M. Weir and C. C. Blackwell編, 1986); Manipulating the Mouse Embryo, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1986)参照。
【実施例】
【0249】
具体例以上に本発明を全般的に説明したが、本発明は以下の実施例を参照すればより容易に理解される。これらの実施例は、本発明の特定の面および実施態様を単に説明するために含めるものであり、本発明を何ら限定するものではない。
【0250】
実施例１．（４Ｓ）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５−（２Ｈ）−カルボキサミドの製造： 工程１． ２−（（６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）コハク酸（Ｓ）−ジメチルの合成：
【化20】
[この文献は図面を表示できません]
温度計、還流冷却器、および機械的撹拌機を備えた２Ｌフラスコに、（１００ｇ、０．５２ｍｏｌ）の２，６−ジクロロ−３−ニトロピリジン、（２０５ｇ、１．０４ｍｏｌ）の（Ｓ）−アスパラギン酸ジメチルエステル塩酸塩、（１７４ｇ、２．０７ｍｏｌ）のＮａＨＣＯ３および１Ｌのテトラヒドロフランを加えた。この反応物を４０℃で１６時間撹拌し、ＨＰＬＣにより２，６−ジクロロピリジンの消失に関してモニタリングした。反応が完了した後、個体を濾去し、酢酸エチル（３×３００ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液および洗液を濃縮乾固し、残渣を１Ｌの酢酸エチルに取った。この溶液を２００ｇの木炭とともに周囲温度で２時間撹拌し、木炭を濾去し、さらなる酢酸エチル（３×２００ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液および洗液を真空濃縮し、粗生成物２−（（６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）コハク酸（Ｓ）−ジメチル（１８０ｇ）を黄色油状物として得た。これをそれ以上精製せずに次の工程で使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１１Ｈ１２ＣｌＮ３Ｏ６の理論値：３１７．０；測定値：３１８．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【0251】
類似の方法を用い、（Ｒ）−アスパラギン酸ジメチルエステル塩酸塩で出発することにより、２−（（６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）コハク酸（Ｒ）−ジメチルを製造することができた。
【0252】
工程２． ２−（６−クロロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）酢酸（Ｓ）−メチルの合成：【化21】
[この文献は図面を表示できません]
温度計、還流冷却器、および機械的撹拌機を備えた５Ｌ三頚フラスコに、粗２−（（６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）コハク酸（Ｓ）−ジメチル（１８０ｇ、０．５２ｍｏｌ）、鉄粉（１４６ｇ、２．５９ｍｏｌ）、２Ｌの２−プロパノール、および７００ｍＬの水を装填した。この混合物を４０℃で撹拌し、酢酸（１５．５ｇ、０．２５９ｍｍｏｌ）を、内部温度を７０℃より低く保持するために十分な速度で加えた。この反応物を７０℃で３０分間撹拌したところ、ＨＰＬＣは反応が完了したことを示した。この混合物を４０℃に冷却した後、Ｎａ２ＣＯ３（１６５ｇ、１．５５ｍｏｌ）を加え、この混合物を１時間撹拌した。固体を濾去した後、それらの固体をテトラヒドロフラン（３×５００ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液および洗液を真空濃縮した後、残渣を１Ｌのエタノール中で１２時間撹拌した。固体を濾過し、冷エタノールで洗浄した。これを真空乾燥させ、２−（６−クロロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）酢酸（Ｓ）−メチル（９１ｇ、６８％）を灰白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１０Ｈ１０ＣｌＮ３Ｏ３の理論値：２５５．０；測定値：２５６．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【0253】
類似の手順を用い、２−（（６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）コハク酸（Ｒ）−ジメチルで出発することにより、２−（６−クロロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）酢酸（Ｒ）−メチルを製造することができた。
【0254】
工程３． （Ｓ）−２−（６−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）エタノールの合成：【化22】
[この文献は図面を表示できません]
機械的撹拌機、還流冷却器、および窒素流入口を備えた５Ｌ３頚フラスコに、ＬｉＡｌＨ４（６０ｇ、１．５８ｍｏｌ）を装填した。このフラスコを氷浴で冷却した後、５００ｍＬのテトラヒドロフランを加えた。この撹拌混合物を０℃に冷却し、内部温度を５℃より低く維持しながら、２Ｌのテトラヒドロフラン中、２−（６−クロロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）酢酸（Ｓ）−メチル（８１ｇ、０．３２ｍｏｌ）の溶液を加えた。添加が完了した後、この反応を１６時間還流下で加熱し、ＨＰＬＣにより生成物の出現に関してモニタリングした。エステルの還元は急速に起こったが、ラクタムの還元は、完全な還元にはより長時間を要した。この反応物を５℃に冷却した後、内部温度を１０℃より低く維持しながら６０ｍＬの水を加えた。添加が完了した後、この反応物を１５分間撹拌した。次に、内部温度を５℃より低く維持しながら６０ｍＬの１５％（ｗ／ｗ）ＮａＯＨ（水溶液）を加えた。添加が完了した後、この反応物を１５分間撹拌した。後処理を行うため、１８０ｍＬの水を加えた後、この混合物を周囲温度で１時間撹拌した。固体を濾過し、テトラヒドロフラン（３×１５０ｍＬ）で洗浄した。濾液および洗液を真空濃縮した後、固体残渣を真空乾燥させ、（Ｓ）−２−（６−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）エタノール（５５ｇ、８１％）を褐色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ９Ｈ１２ＣｌＮ３Ｏの理論値：２１３．１；測定値：２１４．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【0255】
類似の手順を用い、２−（６−クロロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）酢酸（Ｒ）−メチルで出発することにより、（Ｒ）−２−（６−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）エタノールを製造することができた。
【0256】
工程４． （４Ｓ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成：【化23】
[この文献は図面を表示できません]
５００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中、（Ｓ）−２−（６−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）エタノール（５０ｇ、０．２３４ｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（９５ｇ、０．９３６ｍｏｌ）を加えた。この混合物を均質となるまで周囲温度で撹拌した後、０℃に冷却した。次に、温度を０℃５(at 0°C 5)に維持しながらＰＯＣｌ３（５４ｇ、０．３５１ｍｏｌ）を滴下した。冷却を取り除き、この反応物を周囲温度で２時間撹拌し、ＨＰＬＣにより出発アルコールの消失に関してモニタリングした。反応が完了した後、２００ｍＬの１．２Ｍ ＮａＨＣＯ３（水溶液）を加えた。層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合わせたＣＨ２Ｃｌ２層を１Ｍ ＨＣｌ（水溶液）（４×３００ｍＬ）で抽出し、合わせたＨＣｌ層をＮａＨＣＯ３（飽和）でｐＨ＝８に調整した。得られた混合物をＣＨ２Ｃｌ２（４×３００ｍＬ）で抽出し、合わせたＣＨ２Ｃｌ２層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、５０ｇの木炭で処理した。この混合物を周囲温度で３時間撹拌し、木炭で濾過し、この木炭をさらに２００ｍＬのＣＨ２Ｃｌで洗浄した。合わせた濾液および洗浄溶液を濃縮乾固した。固体残渣を真空乾燥させ、（４Ｓ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（３０ｇ、６６％）を灰白色の結晶性固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ９Ｈ１０ＣｌＮ３の理論値：１９５．１；測定値：１９６．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【0257】
類似の手順を用い、（Ｒ）−２−（６−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）エタノールで出発することにより、（４Ｒ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンを製造することができた。
【0258】
工程５． （４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成：【化24】
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（４Ｓ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（１．８８ｇ、９．６ｍｍｏｌ）、（３−トリフルオロメチルフェニル）ボロン酸（２．４ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（０．２２８ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（０．９７２ｇ、２．０４ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（６．６ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）の混合物をジオキサン／Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ、ｖ／ｖ＝９：１）に溶かした。この反応混合物を一晩９０℃に加熱した。室温まで冷却した後、それをＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）で希釈し、水で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃで抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（ペンタン中０から１００％ＥｔＯＡｃへの勾配）により精製し、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンを淡黄色固体として得た（２．２６ｇ、７７％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１６Ｈ１４Ｆ３Ｎ３の理論値：３０５．１；測定値：３０６［Ｍ＋Ｈ］。
【0259】
Ｐｄ（ＯＡｃ）２を用いる類似のカップリング手順を用い、適当な３−置換フェニルボロン酸またはエステルを使用することにより、（４Ｓ）−７−（３−置換フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンを製造することができた。（４Ｒ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンで出発し、類似の鏡像異性体を製造することができた。
【0260】
工程６． （４Ｓ）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化25】
[この文献は図面を表示できません]
ＴＨＦ（４ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（０．１００ｇ、０．３２８ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（１６０μＬ、１．１５ｍｍｏｌ）の溶液に、トリホスゲン（０．０５０ｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）を加えた。３０分間室温で撹拌した後、２−ピリジルアミン（０．０９２ｇ、０．９８３ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を一晩６０℃に加熱し、反応混合物を濃縮し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）に取った。この溶液を水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（ペンタン中０から１００％ＥｔＯＡｃへの勾配）により精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（０．０８６ｇ、６２％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２２Ｈ１８Ｆ３Ｎ５Ｏの理論値：４２５．２；測定値：４２６．２［Ｍ＋Ｈ］。
【0261】
類似の手順を用い、２−ピリジルアミンを適当なアミン部分に置き換えることにより、様々な（４Ｓ）−７−（３−トリフルオロメチルフェニル(trifluoromethlyphenyl)）−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造することができた。
【0262】
類似の鏡像異性体が、（４Ｒ）−７−（３−トリフルオロメチルフェニル(trifluoromethlyphenyl)）−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドで出発することにより製造できる。同様に、（９Ｓ）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ−（アリール）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミドは、（９Ｓ）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシンおよび適当なアミン部分から、この一般手順により製造することができた。
【0263】
実施例２． （４Ｓ）−Ｎ−フェネチル−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化26】
[この文献は図面を表示できません]
０℃にて、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（０．１００ｇ、０．３２６ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（０．０７７５ｇ、０．９８０ｍｍｏｌ）およびクロロギ酸フェニル（０．０６１１７ｇ、０．３９２ｍｍｏｌ）を加えた。２時間後、この混合物を飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液で急冷し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×７５ｍＬ）で抽出し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ３で乾燥させ、濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボン酸（４Ｓ）−フェニル（０．１２０ｇ、収率８４％）を得た。
【0264】
ＭｅＣＮ（３ｍＬ）中、７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボン酸（４Ｓ）−フェニル、２−フェニルエタンアミン（０．０５７ｇ、０．４７０ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（０．０３５ｇ、０．２８２ｍｍｏｌ）を８０℃で一晩撹拌した。室温まで冷却した後、この混合物を濃縮し、残渣を、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（１０：１）で溶出するＰｒｅｐ−ＴＬＣにより精製し、（４Ｓ）−Ｎ−フェネチル−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（０．０２０ｇ、収率１８％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２５Ｈ２３Ｆ３Ｎ４Ｏの理論値：４５２．１８；測定値：４５３［Ｍ＋Ｈ］。
【0265】
実施例３． （４Ｓ）−Ｎ−（３−（３−アミノプロプ−１−イン−１−イル）−５−（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化27】
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ジオキサン中４ＮのＨＣｌ（１０ｍＬ）中、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（３−アミノプロプ−１−イン−１−イル）−５−（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（Ａ、０．０５０ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の懸濁液を室温で１６時間撹拌した。この混合物を減圧下で濃縮し、ＣＨ３ＣＮで摩砕した。残渣をＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏに溶かし、凍結乾燥させ、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（３−アミノプロプ−１−イン−１−イル）−５−（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（０．０３０ｇ、収率７０％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２９Ｈ２３Ｆ３Ｎ６Ｏ２の理論値：５４４．１８；測定値：５４５［Ｍ＋Ｈ］。
【0266】
実施例４． （４Ｓ）−Ｎ−メチル−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化28】
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（４Ｓ）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（０．２６７ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）をジメチルアセトアミドに溶かし、１当量のＮａＨ（０．０２５ｇ、油中６０％）を加えた。この溶液をＭｅＩ（３９μＬ）の添加前に５分間撹拌した。この混合物を室温で一晩撹拌した後、酢酸エチルで希釈し、ブライン（２回）、水（２回）、およびブラインで順次洗浄した。この溶液を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮し、シリカゲルカートリッジ（酢酸エチル：ペンタン溶出剤）にロードした。純粋な画分を濃縮し、純粋な（４Ｓ）−Ｎ−メチル−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２３Ｈ２０Ｆ３Ｎ５Ｏの理論値：４３９．１６；測定値：４４０．１［Ｍ＋Ｈ］。
【0267】
実施例５． （４Ｓ）−Ｎ−（３−フルオロピリジン−４−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化29】
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ＴＨＦ（１０ｍＬ）中、３−フルオロピリジン−４−アミン（１ｇ、８．９２ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．９５ｍＬ、１１．１６ｍｍｏｌ）の冷却溶液に、クロロギ酸フェニル（１．４６ｇ、９．３７ｍｍｏｌ）を滴下した。この反応物を室温で一晩撹拌した。ｐｒｅｐ−ＴＬＣにより精製し、（３−フルオロピリジン−４−イル）カルバミン酸フェニルを黄色固体として得た。
【0268】
３ｍＬのアセトニトリル中、フェニル（３−フルオロピリジン−４−イル）カルバメート（７２ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２４ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の混合物を６０℃で一晩撹拌した。この混合物をそのままｐｒｅｐ−ＴＬＣにロードし、溶出剤として酢酸エチル／石油エーテル＝１：３〜１：８を用いて精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（３−フルオロピリジン−４−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（１８ｍｇ、２５％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２２Ｈ１７Ｆ４Ｎ５Ｏの理論値：４４３．１；測定値：４４４．１［Ｍ＋Ｈ］。
【0269】
カルバミン酸フェニルを用いるこの一般的尿素形成手順を用い、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンを適当な（４Ｓ）−７−（アリール）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンに置き換えることにより、また、３−フルオロピリジン−４−アミンを適当なアミン部分に置き換えることにより、様々な（４Ｓ）−７−（アリール）−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造することができた。鏡像異性体シリーズは、（４Ｒ）−７−（アリール）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンで出発することにより製造することができた。
【0270】
実施例６． （４Ｓ）−７−（３−クロロフェニル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：工程１． （４Ｓ）−７−（３−クロロフェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成：
【化30】
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ジオキサン／Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ／１ｍＬ）に、（４Ｓ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（５００ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ）、（３−クロロフェニル）ボロン酸（８０７ｍｇ、５．１１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２１２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（２．０８ｇ、６．４ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を９０℃で一晩撹拌した。この混合物を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝１／４）により精製し、（４Ｓ）−７−（３−クロロフェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（５０６ｍｇ、８１％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ１４ＣｌＮ３の理論値：２７１．１、測定値：２７２．１［Ｍ＋Ｈ］。
【0271】
類似の手順を用い、適当なボロン酸またはエステルに使用することにより、（４Ｓ）−７−（３−フルオロフェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンまたは（４Ｓ）−７−（３−メトキシフェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンを製造することができた。鏡像異性体シリーズは、適当な（４Ｒ）−７−（３−置換フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンで出発することにより製造することができた。また、この方法により適当な出発クロリドを用いて、（９Ｓ）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン、（９Ｒ）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン、３−（（９Ｒ）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−２−イル）ベンゾニトリル、３−（（９Ｓ）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−２−イル）ベンゾニトリル、（９Ｓ）−２−（５−（メチルスルホニル）ピリジン−３−イル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン、（９Ｓ）−２−（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（（９Ｒ）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−２−イル）アニリン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（（９Ｓ）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−２−イル）アニリン、（９Ｓ）−２−（６−メチルピリジン−３−イル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン、（９Ｓ）−２−（ピリジン−３−イル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン、（９Ｓ）−２−（３−クロロフェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシンも製造された。
【0272】
工程２． （４Ｓ）−７−（３−クロロフェニル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化31】
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ＴＨＦ（５０ｍＬ）中、２−ピリジルアミン（５ｇ、５３．１０ｍｍｏｌ）およびピリジン（５．６５ｍＬ、６６．４１ｍｍｏｌ）の冷却溶液に、クロロギ酸フェニル（６．９９ｍＬ、５５．７９ｍｍｏｌ）を滴下した。この反応物を室温で一晩撹拌した。ブラインをゆっくり加え、この混合物を酢酸エチルで抽出した。層を分離し、有機層を飽和重炭酸ナトリウムおよびブラインで洗浄した。次に、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を石油エーテルで洗浄し、ピリジン−２−イルカルバミン酸フェニル（２．１ｇ、１８％）を得た。
【0273】
３ｍＬのアセトニトリル中、ピリジン−２−イルカルバミン酸フェニル（６６ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）、（４Ｓ）−７−（３−クロロフェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（４０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２３ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の混合物を６５℃で一晩撹拌した。反応の進行をＴＬＣおよびＬＣ−ＭＳによりモニタリングした。この混合物を、溶出剤として酢酸エチル／石油エーテル＝１：３〜１：８を用いるｐｒｅｐ−ＴＬＣにそのままロードし、（４Ｓ）−７−（３−クロロフェニル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（２８ｍｇ、４８％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２１Ｈ１８ＣｌＮ５Ｏの理論値：３９１．１；測定値：３９２．１［Ｍ＋Ｈ］。
【0274】
カルバミン酸フェニルを用いるこの一般的尿素形成手順を用い、（４Ｓ）−７−（３−クロロ、−フルオロまたは−メトキシフェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンと適当なアミン部分を使用することにより、様々な（４Ｓ）−７−（３−クロロ、−フルオロ、または−メトキシフェニル）−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造することができた。鏡像異性体シリーズは、適当な４Ｒ）−７−（３−置換フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンで出発することにより製造することができた。同様に、（９Ｓ）−２−（５−フルオロ−またはクロロピリジン−３−イル）−Ｎ−（アリール）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミドも、この尿素形成手順によって製造することができた；出発（９Ｓ）−２−（５−フルオロ−またはクロロピリジン−３−イル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシンの製造に関しては以下の実施例を参照。
【0275】
（４Ｓ）−７−（３−クロロフェニル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造するために用いたもの（上記の工程１および２）と類似の手順を用いて、市販のボロン酸エステルで出発し、以下の化合物を製造することができる。
【0276】
実施例７． （９Ｓ）−２−（５−クロロピリジン−３−イル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシンの製造：工程１． ２−（（６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）グルタル酸（Ｓ）−ジメチルの合成：
【化32】
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この部分は、以下のプロトコールを用いて製造した。４０．０ｇ（２０７ｍｍｏｌ）の２，６−ジクロロ−３−ニトロピリジン、８７．７ｇ（４１４ｍｍｏｌ）のＬ−グルタミン酸ジメチルエステル塩酸塩、および６９．６ｇ（８２９ｍｍｏｌ）のＮａＨＣＯ３の混合物に６００ｍＬのテトラヒドロフランを加えた。この混合物を、ＨＰＬＣにより２，６−ジクロロ−３−ニトロピリジンの消失に関してモニタリングしながら、４０℃で２４時間撹拌した。反応が完了した後、固体を濾去し、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液および洗液を真空濃縮した後、残渣を、１０／１（ｖ／ｖ）ヘキサン／酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、６０ｇ（８７％）の生成物を黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１２Ｈ１４ＣｌＮ３Ｏ６の理論値：３３１．０；測定値：３３２．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【0277】
工程２． ３−（６−クロロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）プロパン酸（Ｓ）−メチルの合成：【化33】
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この部分は、以下のプロトコールを用いて製造した。２０ｇ（６０．２ｍｍｏｌ）の２−（（６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）ペンタン二酸（Ｓ）−ジメチル、および１６．８ｇ（３０１ｍｍｏｌ）の鉄粉の混合物、３７５ｍＬの２−プロパノール、次いで、１２５ｍＬの水を加えた。この撹拌混合物に５．５ｇ（９０．３ｍｍｏｌ）の酢酸を加えた後、この反応物を１時間還流下で撹拌した。反応をＨＰＬＣにより出発材料の消失に関してモニタリングした。反応が完了した後、固体を濾去し、２−プロパノールで洗浄した（３×５０ｍＬ）。合わせた濾液および洗液を濃縮乾固した後、残渣を真空乾燥させ、１５ｇ（８１％）の生成物を暗黄色固体として得た。これをそれ以上精製せずに次の工程で使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１１Ｈ１２ＣｌＮ３Ｏ３の理論値：２６９．０；測定値：２７０．１。
【0278】
工程３． （Ｓ）−３−（６−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）プロパン−１−オールの合成：【化34】
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この部分は、以下のプロトコールを用いて製造した。２６０ｍＬのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中、１７．７８ｇ（１３３．３ｍｍｏｌ）のＡｌＣｌ３の溶液に、ＴＨＦ中、２００ｍＬの２Ｍ ＬｉＡｌＨ４をＮ２下、ガスの発生を制御する速度で滴下した。これにより、ＴＨＦ中、アラン（ＡｌＨ３）の溶液を得た。別のフラスコで、４６０ｍＬのＴＨＦ中、２６．０ｇ（９６．４ｍｍｏｌ）の３−（６−クロロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）プロパン酸（Ｓ）−メチルの溶液をＮ２下で製造した後、ドライアイス／アセトン浴で冷却した。これにアラン溶液を撹拌しながら２時間かけて滴下した。添加が完了した際に、冷却浴を取り除き、この反応物を周囲温度まで温めた。１．５時間後、ＬＣＭＳ分析は反応が完了したことを示した。次に、６５ｍＬの水中、１７．６ｇのＮａＯＨの溶液を、Ｈ２の発生を制御するようにゆっくり加えた。この懸濁液を１８時間撹拌した後、固体を濾去した。沈澱を酢酸エチルで洗浄した後、濾液および洗液を真空濃縮した。生成物を、ＣＨ２Ｃｌ２、次いで、ＣＨ２Ｃｌ２中０から１０％メタノールへの勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（３３０ｇプレパックカラム）により精製し、１５．２１ｇ（６９％）の黄色〜橙色固体を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１０Ｈ１４ＣｌＮ３Ｏの理論値：２２７．１；測定値：２２８．１。
【0279】
工程４． （５Ｒ，９Ｓ）−２−クロロ−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシンの合成：【化35】
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１２ｇ（５２．７ｍｍｏｌ）の（Ｓ）−３−（６−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）プロパン−１−オールに１６０ｍＬの４８％（ｗ／ｗ）ＨＢｒ（水溶液）を加えた後、この反応物を９０℃で１８時間撹拌した。反応をＨＰＬＣにより出発アルコールの消失に関してモニタリングした。反応が完了した後、それを周囲温度まで冷却し、その後、１．２ＭのＮａＨＣＯ３（水溶液）をｐＨ＝８まで加えた。この混合物を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した後、有機相をブライン（１×１００ｍＬ）で逆抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固した。残渣を、２／１（ｖ／ｖ）ヘキサン／酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、６．０ｇ（５５％）の生成物を淡黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１０Ｈ１２ＣｌＮ３の理論値：２０９．１；測定値：２１０．１。
【0280】
工程５． ２−クロロ−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボン酸（９Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルの合成：【化36】
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５ｍＬ ＴＨＦ中、（９Ｓ）−２−クロロ−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン（１．３ｇ、６．１９ｍｍｏｌ、注：５Ｒ立体化学を意味する）、Ｂｏｃ２Ｏ（２．０２ｇ、９．２８ｍｍｏｌ、１．５当量）およびＤＭＡＰ（１．５１ｇ、１２．３８ｍｍｏｌ、２．０当量）を６０℃で２時間撹拌した。反応の進行をＴＬＳおよびＬＣ／ＭＳによりモニタリングした。水（３０ｍＬ）を加え、この混合物をＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出した。有機層を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、２−クロロ−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボン酸（９Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルを白色固体として得た（１．３ｇ、９２％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ２０ＣｌＮ３Ｏ２の理論値：３０９．１。
【0281】
工程６． ２−（５−クロロピリジン−３−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボン酸（９Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルの合成：【化37】
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ジオキサン／水（１０ｍＬ／１ｍＬ）の脱気混合物に、２−クロロ−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボン酸（９Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（６５０ｍｇ、２．０９６ｍｍｏｌ）、（５−クロロピリジン−３−イル）ボロン酸（６５８ｍｇ、４．１９ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１７１ｍｇ、０．２０９ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（２．０４ｇ、６．２９ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を１１０℃で１２時間撹拌した後、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝３／１）により精製し、２−（５−クロロピリジン−３−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボン酸（９Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（６００ｍｇ、６３％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２０Ｈ２３ＣｌＮ４Ｏ２の理論値：３８６．２。
【0282】
２−（５−フルオロピリジン−３−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボン酸（９Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルは、（５−フルオロピリジン−３−イル）ボロン酸で出発し、同じ方法により製造された。
【0283】
工程７． （９Ｓ）−２−（５−クロロピリジン−３−イル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシンの合成：【化38】
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この部分は、以下のプロトコールを用いて製造した。２−（５−クロロピリジン−３−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボン酸（９Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（６００ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）をＨＣｌ／ＭｅＯＨ（１Ｍ、２０ｍＬ）に溶かし、この反応物を室温で１．５時間撹拌した後、真空濃縮した。水（２０ｍＬ）およびＫ２ＣＯ３（３ｇ）を加え、この混合物を室温で２時間撹拌した後、ＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出し、（９Ｓ）−２−（５−クロロピリジン−３−イル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン（４５０ｍｇ、定量的）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ１５ＣｌＮ４の理論値：２８６．１。
【0284】
（９Ｓ）−２−（５−フルオロピリジン−３−イル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシンも同じ方法により製造された。
【0285】
これらの部分を用い、前記実施例に記載されている一般的尿素カップリング手順により尿素化合物を製造した。
【0286】
実施例８． （９Ｓ）−２−（５−メチルピリジン−３−イル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシンの製造：【化39】
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この部分は、以下のプロトコールを用いて製造した。脱気した１，４−ジオキサン／Ｈ２Ｏ（２０ｍｌ、ｖ／ｖ＝１０／１）に（９Ｓ）−２−クロロ−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン（６００ｍｇ、２．８７ｍｍｏｌ）、５−メチルピリジン−３−イルボロン酸（１．１８ｇ、３．０当量）、ＰＣｙ３（６４４ｍｇ、０．８当量）およびＰｄ２（ｄｂａ）３（３３０ｍｇ、０．２当量）を加えた。この混合物を密閉試験管中で１１０℃に加熱した。１１０℃で１２時間撹拌した後、この黒色懸濁液を室温まで冷却し、減圧下で濃縮した。この濃縮物をＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）に懸濁させ、水（４×８０ｍｌ）、ブライン（８０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。この濃縮物をカラム（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０／１）により精製し、生成物を淡褐色固体（７５６ｍｇ、９９％）として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１６Ｈ１８Ｎ４の理論値：２６６．１；測定値：２６７．２［Ｍ＋Ｈ］。
【0287】
また、これらの条件を用い、適当なボロン酸で出発することにより、（９Ｓ）−２−（４−メチルピリジン−３−イル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシンおよび４−（３−（（９Ｓ）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−２−イル）フェニル）モルホリンも製造した。
【0288】
得られた部分を用い、上記の一般的尿素カップリング手順により尿素化合物を製造した。
【0289】
実施例９．（９Ｓ）−Ｎ−（ピリダジン−３−イル）−２−（ピリジン−３−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化40】
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この部分は、カルバミン酸フェニルの代わりにカルバミン酸ｐ−クロロフェニルを用い、４Ｓ）−７−（３−クロロフェニル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドに関して記載されたものと類似のカルバメートプロトコールによって製造した。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２０Ｈ１９Ｎ７Ｏの理論値：３７３．２；測定値：３７４．３［Ｍ＋Ｈ］。
【0290】
実施例１０． （４Ｓ）−７−（３−クロロフェニル）−Ｎ−（６−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）ピラジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化41】
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３ｍＬのＴＨＦ中、６−（（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メトキシ）ピラジン−２−アミン（８３ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）およびピリジン（２９ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）の混合物に、トリホスゲン（４３ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を加えた。上記の混合物を６０℃で２時間撹拌した。次に、この反応混合物に（４Ｓ）−７−（３−クロロフェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（５０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で一晩撹拌した。粗生成物をｐｒｅｐ−ＴＬＣにより精製し、尿素中間体を黄色固体として得た。ＴＨＦ（３ｍＬ）中、この材料の溶液に、濃ＨＣｌを加え、この反応物を室温で１５分間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３を加えてｐＨを７〜８に調整した。この反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、有機層をブラインで洗浄した。ｐｒｅｐ−ＴＬＣにより精製し、（４Ｓ）−７−（３−クロロフェニル）−Ｎ−（６−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）ピラジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（８．９ｍｇ、４０％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２３Ｈ２３ＣｌＮ６Ｏ４の理論値：４８２．２；測定値：４８３．１［Ｍ＋Ｈ］。
【0291】
トリホスゲンを用いるこの一般的尿素形成手順を用い、（４Ｓ）−７−（３−フルオロフェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンおよび適当なアミン部分も使用することにより、様々な（４Ｓ）−７−（３−クロロまたは−フルオロフェニル）−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造することができた。
【0292】
実施例１１． （９Ｓ）−２−（３−シアノフェニル）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化42】
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室温で、ＴＨＦ（１２ｍＬ）中、３−（（９Ｓ）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−２−イル）ベンゾニトリル（５０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）およびトリホスゲン（２７ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＩＰＥＡ（９７μＬ、０．５４ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を６０℃で３０分間加熱した。３−アミノピリジン（１０２ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）を加え、この反応混合物を３２時間還流下で加熱した。室温まで冷却した後にＣＨ３ＯＨを加えた。この混合物を濃縮し、ｐｒｅｐ ＨＰＬＣにより精製した。このＴＦＡ塩をＣＨ３ＣＮに懸濁させ、１Ｎ ＨＣｌを加え、この混合物を凍結乾燥させ、（９Ｓ）−２−（３−シアノフェニル）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミド（４８ｍｇ、６１％）を塩酸塩として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２３Ｈ２０Ｎ６Ｏの理論値：３９６．２；測定値：３９７．１［Ｍ＋Ｈ］。
【0293】
実施例１２． （９Ｓ）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−２−（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化43】
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ＤＭＦ（３ｍＬ）中、ピリジン−２−イルカルバミン酸４−クロロフェニル（３２５ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）、（９Ｓ）−２−（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン（７０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１６０ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）の混合物を密閉試験管中、１００℃で２４時間加熱した。この混合物を室温まで冷却した後、ＥｔＯＡｃ／Ｈ２Ｏ（６０ｍＬ／３０ｍＬ）の間で分液した。有機層を分離し、Ｈ２Ｏ、ブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。粗生成物をｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ／ＣＨ３ＯＨ、１２０：４０：２で溶出）により精製し、（９Ｓ）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−２−（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミドを黄褐色固体として得た（８０ｍｇ、８３％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２２Ｈ１９Ｆ３Ｎ６Ｏの理論値：４４０．２；測定値：４４１．２［Ｍ＋Ｈ］。
【0294】
実施例１３． （４Ｓ）−Ｎ−（２−メチル−２Ｈ−インダゾール−５−イル）−７−（２−メチルピリジン−４−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：工程１． （４Ｓ）−７−（２−メチルピリジン−４−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成：
【化44】
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脱気したジオキサン／Ｈ２Ｏ（１４ｍＬ、ｖ／ｖ＝１０／１）中、（４Ｓ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］−ジアゼピン（５００ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ）の溶液に、２−メチルピリジン−４−ボロン酸（１．０４８ｇ、７．６５ｍｍｏｌ）、ＰＣｙ３（２８６ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４・３Ｈ２Ｏ（１．６９８ｇ、６．３７５ｍｍｏｌ）およびＰｄ２（ｄｂａ）３（２３４ｍｇ、０．２５５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を１１０℃で一晩撹拌した。この混合物を室温まで冷却した後、濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃと水（各５０ｍＬ）で分液した。有機層を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮乾固した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＴＨＦ＝３／２）により精製し、（４Ｓ）−７−（２−メチルピリジン−４−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（４１８ｍｇ、８２％）を淡黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ１６Ｎ４の理論値：２５２．１；測定値：２５３．２［Ｍ＋Ｈ］。
【0295】
以下の中間体は、適当なボロン酸および２−クロロピリジンを置き換え、上記プロトコールを用いて製造した。２−（（９Ｓ）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−２−イル）ベンゾニトリル、５−（（９Ｓ）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−２−イル）ニコチノニトリル
【0296】
工程２． （４Ｓ）−Ｎ−（２−メチル−２Ｈ−インダゾール−５−イル）−７−（２−メチルピリジン−４−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化45】
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ＣＨ２Ｃｌ２（１８ｍＬ）中、クロロギ酸フェニル（０．２ｍＬ、１．６ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．１６ｍＬ、１．９５ｍｍｏｌ）の溶液に、２−メチル−２Ｈ−インダゾール−５−アミン（１８０ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で３０分間撹拌した後、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１０ｍＬ）で急冷した。水相をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮乾固した。残渣をヘキサン（５ｍＬ×３）で洗浄し、（２−メチル−２Ｈ−インダゾール−５−イル）カルバミン酸フェニル（３０４ｍｇ、９３％）を得た。
【0297】
ＴＨＦ（３ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−（２−メチルピリジン−４−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（９０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）、（２−メチル−２Ｈ−インダゾール−５−イル）カルバミン酸フェニル（２８５ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１３０ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）の混合物を密閉試験管中、８０℃で加熱した。８０℃で３６時間加熱した後、この混合物を室温まで冷却し、濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）に懸濁させ、濾過した。濾液を水（２０ｍＬ×３）、次いで、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。この濃縮物をｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝２３／１／滴）により精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（２−メチル−２Ｈ−インダゾール−５−イル）−７−（２−メチルピリジン−４−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（６０ｍｇ、４０％）を褐色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２４Ｈ２３Ｎ７Ｏの理論値：４２５．２；測定値：４２６．３［Ｍ＋Ｈ］。
【0298】
カルバミン酸フェニルを用いるこの一般的尿素形成手順を用い、適当なアミン部分を使用することにより、様々な（４Ｓ）−Ｎ−（アリール）−７−（２−メチルピリジン−４−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造することができた。
【0299】
実施例１４： （４Ｓ）−Ｎ−（２，６−ジエチルフェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化46】
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窒素雰囲気下、乾燥ＴＨＦ（３ｍＬ）中、２，６−ジエチルアニリン（３９．１ｍｇ、０．２６２ｍｍｏｌ、２．０当量）およびピリジン（０．５ｍｌ、過剰量）の混合物に、トリホスゲン（５４．４ｍｇ、０．１８３ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を６０℃で２時間撹拌し、この反応混合物に（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（４０ｍｇ、０．１３１ｍｍｏｌ、１．０当量）を加え、さらに１８時間撹拌した。この反応混合物に飽和重炭酸ナトリウム溶液（５ｍｌ）およびジクロロメタン（１０ｍｌ）を加え、有機層を水（１０ｍＬ）およびブラインで順次洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空濃縮した。粗生成物を、溶出剤としてＣＨ２Ｃｌ２中１５：１酢酸エチルを用い、ｐｒｅｐ−ＴＬＣにより精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（２，６−ジエチルフェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを白色固体として得た（５．１ｍｇ、収率８％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２７Ｈ２７Ｆ３Ｎ４Ｏの理論値：４８０．２１；測定値：４８１ ［Ｍ＋Ｈ］。
【0300】
トリホスゲンを用いるこの一般的尿素形成手順を用い、２，６−ジエチルアニリンを適当なアミン部分に置き換えることにより、様々な（４Ｓ）−７−（３−トリフルオロメチルフェニル(trifluoromethlyphenyl)）−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造することができた。
【0301】
実施例１５． （４Ｓ）−７−（２−メチルピリジン−４−イル）−Ｎ−（ピラジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：工程１． （４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（ピラジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：
【化47】
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ＤＭＦ（８ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（４００ｍｇ、２．０４ｍｍｏｌ）、ピラジン−２−イルカルバミン酸フェニル（１．３２ｇ、６．１３ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２４９ｍｇ、２．０４ｍｍｏｌ）の混合物を、密閉フラスコ内で８２℃に加熱した。２２時間加熱した後、この混合物を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈した。この混合物を水（８ｍＬ×９）、次いで、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ＝５０／１）により精製し、（４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（ピラジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（６００ｍｇ、９３％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１４Ｈ１３ＣｌＮ６Ｏの理論値：３１６．１。
【0302】
この一般的手順を用い、ピラジン−２−イルカルバミン酸フェニルを適当なカルバメート部分に置き換えることにより、様々な（４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造することができた。
【0303】
工程２． （４Ｓ）−７−（２−メチルピリジン−４−イル）−Ｎ−（ピラジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化48】
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窒素雰囲気下、トルエン／ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ（１．９ｍＬ、ｖ／ｖ／ｖ＝１０／６／３）中、（４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（ピラジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（４０ｍｇ、０．１２６ｍｍｏｌ）、２−メチルピリジン−４−ボロン酸（４４ｍｇ）、およびＮａＨＣＯ３（３２ｍｇ）の混合物に、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（９ｍｇ）を加えた。この反応混合物を６時間還流下で加熱した。さらなる２−メチルピリジン−４−ボロン酸（４４ｍｇ）、ＮａＨＣＯ３（３２ｍｇ）、およびＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（８ｍｇ）を追加し、この混合物を脱気した。還流下で一晩撹拌した後、この反応混合物を室温まで冷却し、濃縮した。この濃縮物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）および水（５ｍＬ）に懸濁させた。この水性懸濁液をＥｔＯＡｃ（８ｍＬ）で抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ相をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。ｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ＝５０／１）により精製し、（４Ｓ）−７−（２−メチルピリジン−４−イル）−Ｎ−（ピラジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（１８ｍｇ、３８％）を灰白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２０Ｈ１９Ｎ７Ｏの理論値：３７３．２；測定値：３７４．３［Ｍ＋Ｈ］。
【0304】
ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２を用いるこの一般的手順を用い、適当な（４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドおよび適当なボロン酸またはエステルを使用することにより、様々な（４Ｓ）−７−（２−メチルピリジン−４−イル）−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドおよび（４Ｓ）−７−（６−メチルピリジン−３−イル）−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造することができた。
【0305】
実施例１６． （４Ｓ）−７−（３−（（Ｒ）−３−フルオロピロリジン−１−イル）フェニル）−Ｎ−（ピラジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化49】
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ジオキサン／Ｈ２Ｏ（１．５ｍＬ、ｖ／ｖ＝９／１）中、（４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（ピラジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（４０ｍｇ、０．１２６ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−３−フルオロ−１−（３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）ピロリジン（７４ｍｇ、０．２５２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（２ｍｇ、０．０１２６ｍｍｏｌ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（１２ｍｇ、０．０２５２ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（８２ｍｇ、０．２５２ｍｍｏｌ）の混合物を、密閉フラスコ内で１１０℃に加熱した。一晩加熱した後、この混合物を冷却し、濾過して不溶性材料を除した。濾液をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（５ｍＬ×２）で洗浄し、ブライン（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。ｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ＝３／１）により精製し、（４Ｓ）−７−（３−（（Ｒ）−３−フルオロピロリジン−１−イル）フェニル）−Ｎ−（ピラジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（１８ｍｇ、３２％）を淡黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２４Ｈ２４ＦＮ７Ｏの理論値：４４５．２；測定値：４４６．３［Ｍ＋Ｈ］。
【0306】
Ｐｄ（ＯＡｃ）２を用いるこの一般的手順を用い、適当な（４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドおよび適当なボロン酸またはエステルを使用することにより、様々な（４Ｓ）−７−（３−および２−置換フェニル）−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドおよび（４Ｓ）−７−（２−（トリフルオロメチル）ピリジン−４−イル）−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造することができた。
【0307】
実施例１７． （４Ｓ）−７−（３−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ）フェニル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：工程１． （４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：
【化50】
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ＤＭＦ（６ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（３００ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）、ピリジン−２−イルカルバミン酸フェニル（９８６ｍｇ、４．５９ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１８８ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）の混合物を脱気し、密閉フラスコ内で８０℃に加熱した。８０℃で一晩撹拌した後、この反応混合物を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ／Ｈ２Ｏ（１５０ｍＬ／５０ｍＬ）で分液した。有機相を水（２０ｍＬ×６）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次に、この濃縮物をカラム（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ＝１／１）により精製し、（４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（４０９ｍｇ、８４％）を灰白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ１４ＣｌＮ５Ｏの理論値：３１５．１；測定値：３１６．１［Ｍ＋Ｈ］。
【0308】
工程２． （４Ｓ）−７−（３−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド：【化51】
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ジオキサン／Ｈ２Ｏ（３ｍＬ、ｖ／ｖ＝９／１）中、（４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（８０ｍｇ、０．２８４ｍｍｏｌ）、（３−ヒドロキシフェニル）ボロン酸（７８ｍｇ、０．５６８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（６ｍｇ、０．０３８４ｍｍｏｌ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（２７ｍｇ、０．０５６８ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（１８５ｍｇ、０．５６８ｍｍｏｌ）の混合物を脱気し、密閉試験管中、１１０℃で一晩加熱した後、室温まで冷却し、減圧下で濃縮した。この濃縮物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に懸濁させ、水（５ｍＬ×２）、ブライン（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をカラム（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ＝１／１）により精製し、（４Ｓ）−７−（３−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（６５ｍｇ、６１％）を灰白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２１Ｈ１９Ｎ５Ｏ２の理論値：３７３．２；測定値：３７４．２［Ｍ＋Ｈ］。
【0309】
工程３． （４Ｓ）−７−（３−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ）フェニル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化52】
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ＤＭＦ（３ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−（３−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（９０ｍｇ、０．２４１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＨ（２４ｍｇ、０．６０３ｍｍｏｌ）を加えた。室温で３０分間撹拌した後、（Ｓ）−４−（クロロメチル）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン（２１７ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を密閉フラスコ内で３２時間８５℃に加熱した。この混合物を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、水およびブラインで洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。この濃縮物をＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）に溶かし、ジオキサン中ＨＣｌ溶液（６ｍＬ）を加えた。次に、このようにして得られた混合物を室温で４時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、濃縮し、飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）に懸濁させた。この混合物をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ×３）で抽出し、合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。ｐｒｅｐ−ＴＬＣにより精製し、（４Ｓ）−７−（３−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ）フェニル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（２４ｍｇ、３３％）を灰白色粉末として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２４Ｈ２５Ｎ５Ｏ４の理論値：４４７．２；測定値：４４８．３［Ｍ＋Ｈ］。
【0310】
この一般的手順を用い、適当な（４Ｓ）−７−（３−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを使用することにより、様々な（４Ｓ）−７−（３−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ）フェニル）−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造することができた。
【0311】
実施例１８． （４Ｓ）−７−（１−プロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：工程１． （４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（ピラジル−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：
【化53】
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（４Ｓ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（９９９ｍｇ、３．２６ｍｍｏｌ、１．０当量）を、塩化メチレン（３０ｍＬ）中でＤＩＥＡ（１．７ｍＬ、９．７８ｍｍｏｌ、３．０当量）と合わせ(as combined with)、氷浴上で０℃に冷却した。次に、この撹拌溶液にトリホスゲン（４８２ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ、０．５当量）を数回に分けて少量ずつ加えた。氷浴を取り除き、反応物を室温まで温めた。次に、この反応物を一晩撹拌した。その後、ピリジン−３−アミン（８００ｍｇ、３．６０ｍｍｏｌ、１．１当量）を数分かけて少量ずつゆっくり加えた。次に、この混合物を室温で２時間撹拌した。その後、この混合物を水（１００ｍＬ）で処理し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈した。相を分離し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣を、１５〜１００％（ＥｔＯＡｃ／ペンタン）の勾配を用いるカラムクロマトグラフィーにより精製し、（４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（ピラジル−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（７６１ｍｇ、収率４７％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ１４ＣｌＮ５Ｏの理論値３１５．１；測定値：３１５．７［Ｍ＋Ｈ］。
【0312】
工程２． （４Ｓ）−７−（１−プロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド：【化54】
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標題化合物は、以下のプロトコールを用いて製造した：ジオキサン／Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（ピラジル−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（１００ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、１．０当量）、１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−ボロン酸（１５１ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ、２．０当量）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２６．７ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ、０．２当量）およびＣｓ２ＣＯ３（２０８ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ、２．０当量）の混合物を１００℃で６時間撹拌した。水を加え、この混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、ｐｒｅ−ＴＬＣより精製し、（４Ｓ）−７−（１−プロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（３７．１ｍｇ、収率３０％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２１Ｈ２３Ｎ７Ｏの理論値３８９．２；測定値：３９０．３［Ｍ＋Ｈ］。
【0313】
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２を用いるこの一般的手順を用い、２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−ボロン酸を適当なボロン酸またはエステル部分に置き換えることにより、様々な（４Ｓ）−７−（ピリジン−３−イル）−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造することができた。
【0314】
実施例１９： （４Ｓ）−７−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソｌ−５−イル）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造(Preperation)：工程１． ３−（ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピリド［１，２−ａ］［１，３，５］トリアジン−２，４（３Ｈ）−ジオンの合成：
【化55】
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標題化合物を以下のプロトコールを用いて製造した：１０．０ｇのピコリン酸（８１．２ｍｍｏｌ、１当量）を２５０ｍＬのトルエンに懸濁させた。２０．０ｍＬのジフェニル ホスホリルアジド（９２．６ｍｍｏｌ、１．１４当量）を加えた。１３．４ｍＬのトリエチルアミン（９５．８ｍｍｏｌ、１．１８当量）を滴下した。この反応混合物を室温で３０分間、次いで、８０℃で２時間撹拌した。この反応混合物を室温まで冷却した。固体を濾過し、酢酸エチルおよびペンタンで洗浄した。固体を高真空下で乾燥させた。６．４６ｇ（収率６６％）の褐色固体が得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ１４ＣｌＮ５Ｏの理論値： ２４０．０６；測定値：２４１．３１［Ｍ＋Ｈ］。
【0315】
この一般的手順を用い、６員芳香環上の２位に窒素ヘテロ原子を有する適当なヘテロアリールカルボン酸に置き換えることにより、３−（ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピリド［１，２−ａ］［１，３，５］トリアジン−２，４（３Ｈ）−ジオンおよび３−（ピラジン−２−イル）−２Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］［１，３，５］トリアジン−２，４（３Ｈ）−ジオンを製造することができた。
【0316】
工程２． （４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化56】
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標題化合物を以下のプロトコールを用いて製造した：（４Ｓ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（２．０ｇ、１０．２ｍｍｏｌ、１．０当量）を２−メチル−テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）に溶かし、室温にてＮａＨ（１．７ｇ、３０．６ｍｍｏｌ、３．０当量）で処理した。次に、得られた混合物を室温で３０分間撹拌した。その後、３−（ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピリド［１，２−ａ］［１，３，５］トリアジン−２，４（３Ｈ）−ジオン（２．４ｇ、１０．２ｍｍｏｌ、１．０当量）を加えた後、反応物に還流冷却器を取り付け、一晩８０℃に加熱した。次に、この反応物を室温まで冷却し、氷浴上に置き、ＮａＨＣＯ３（６５ｍＬ）をゆっくり添加して急冷した。次に、粗反応物をＥｔＯＡｃ（各７５ｍＬ）で３回抽出し、有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。反応物を１０−１００％ＥｔＯＡｃ／ペンタンの勾配を用いるカラムクロマトグラフィーにより精製し、（４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（２．５ｇ、７８％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ１４ＣｌＮ５Ｏの理論値：３１５．０９；測定値：３１６．１０［Ｍ＋Ｈ］。
【0317】
工程３． （４Ｓ）−７−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成： 【化57】
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（４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（７９ｍｇ、０．２５０ｍｍｏｌ、１．０当量）をＰｄ２（ｄｂａ）３（２．３ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ、０．０２当量）、Ｋ３ＰＯ４（８０ｍｇ、０．３８０ｍｍｏｌ、２当量）、Ｓ−Ｐｈｏｓ（４．８ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、０．０５当量）と合わせ、このフラスコをＮ２でパージし、密閉した。次に、Ｎ−ブタノール（１ｍＬ）をシリンジで加え、この反応物を３時間１００℃に加熱した。その後、この反応物を室温まで冷却し、濾過した後、そのまま５−９５％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）の勾配を用いる逆相クロマトグラフィーにより精製し、（４Ｓ）−７−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソｌ−５−イル）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（１１ｍｇ、１０％）を得た。Ｃ１５Ｈ１４ＣｌＮ５Ｏ：４３７．１３；測定値：４３８．１７［Ｍ＋Ｈ］。
【0318】
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２を用いこの一般的手順を用い、２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−ボロン酸を適当なボロン酸またはエステル部分に置き換えることにより、様々な（４Ｓ）−７−（ピリジン−２−イル）−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドおよび（４Ｓ）−Ｎ−（ピラジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造することができた。
【0319】
実施例２０． （４Ｓ）−Ｎ−（５−フルオロピリジン−２−イル）−７−（２−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリジン−４−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造： 工程１． （４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（５−フルオロピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：
【化58】
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ＤＭＦ（７ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（２８０ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）、（５−フルオロピリジン−２−イル）カルバミン酸４−クロロフェニル（１．１４ｇ、４．２９ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１７４ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）の混合物を密閉フラスコ内で８０℃に加熱した。８０℃で一晩撹拌した後、この反応混合物を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈した。有機相を水（５０ｍＬ×１、１０ｍＬ×６）、次いで、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。次に、この濃縮物をカラム（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ＝１／１）により精製し、（４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（５−フルオロピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（３６０ｍｇ、７５％）を灰白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ１３ＣｌＦＮ５Ｏの理論値：３３３．１。
【0320】
工程２． （４Ｓ）−Ｎ−（５−フルオロピリジン−２−イル）−７−（２−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリジン−４−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化59】
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脱気したジオキサン／Ｈ２Ｏ（２ｍＬ、ｖ／ｖ＝９／１）中、（４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（５−フルオロピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（５０ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）、４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−２−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリジン（１０２ｍｇ、０．２９８ｍｍｏｌ）、ＰＣｙ３（８ｍｇ、０．０２９８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１４ｍｇ、０．０１４９ｍｍｏｌ）、およびＫ３ＰＯ４・３Ｈ２Ｏ（７９ｍｇ、０．３７３ｍｍｏｌ）の混合物を密閉フラスコ内で１２０℃に加熱した。一晩撹拌した後、この混合物を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）で希釈した。この希釈溶液をＨ２Ｏ（２０ｍＬ×１、１０ｍＬ×５）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。ｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝３／１／２滴）により精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（５−フルオロピリジン−２−イル）−７−（２−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリジン−４−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（５４ｍｇ、７１％）を灰白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２５Ｈ２３Ｆ４Ｎ７Ｏの理論値：５１３．２；測定値：５１４．３［Ｍ＋Ｈ］。
【0321】
Ｐｄ２（ｄｂａ）３を用いるこの一般的手順を用い、適当な（４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドおよび適当なボロン酸またはエステルを使用することにより、様々な（４Ｓ）−７−（２−（３−置換−ピロリジン−１−イル）ピリジン−４−イル）−Ｎ−（アリール）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造することができた。
【0322】
実施例２１． （４Ｓ）−７−（３−クロロフェニル）−９−メトキシ−Ｎ−（ピラジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：工程１． ２，６−ジクロロ−４−メトキシピリジンの合成：
【化60】
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ＭｅＯＨ中、２，４，６−トリクロロピリジン（３０ｇ、１６５ｍｍｏｌ）の溶液に、ナトリウムメトキシド（１０．７ｇ、１９７ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。この混合物を一晩撹拌し、３００ｍｌの水で急冷した。この懸濁液を濾過し、水および石油エーテルで洗浄し、２，６−ジクロロ−４−メトキシピリジンを白色固体として得た（１８．０ｇ、収率６１％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ６Ｈ５Ｃｌ２ＮＯの理論値：１７６．９７。
【0323】
工程２． ２，６−ジクロロ−４−メトキシ−３−ニトロピリジンの合成：【化61】
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硫酸（１１０ｍＬ）中、２，６−ジクロロ−４−メトキシピリジン（１８．１ｇ、１０２ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で硝酸（１５．６ｍＬ）を滴下した後、この混合物を２時間１００℃に加熱した。この反応混合物を氷水に注ぎ、この懸濁液を濾過し、水で洗浄し、２，６−ジクロロ−４−メトキシ−３−ニトロピリジンを白色固体として得た（１９．９ｇ、収率８８％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ６Ｈ４Ｃｌ２Ｎ２Ｏ３の理論値：２２１．９６。
【0324】
工程３． ２−（（６−クロロ−４−メトキシ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）コハク酸（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルの合成：【化62】
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ＤＭＦ（１５０ｍＬ）中、２，６−ジクロロ−４−メトキシ−３−ニトロピリジン（１４．５ｇ、６５ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−１，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１，４−ジオキソブタン−２−アミニウムクロリド（２２ｇ、７８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（３２．３ｍＬ）を加え、この混合物を３時間８０℃に加熱した。ＤＭＦを真空下で除去し、残渣を酢酸エチルに溶かし、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、フラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル中１０％酢酸エチル）により精製し、２−（（６−クロロ−４−メトキシ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）コハク酸（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルを黄色油状物として得た（４．８ｇ、収率１６％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１８Ｈ２６ＣｌＮ３Ｏ７の理論値：４３１．１５。
【0325】
工程４． ２−（６−クロロ−８−メトキシ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）酢酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルの合成：【化63】
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ＡｃＯＨ（６０ｍｌ）中、２−（（６−クロロ−４−メトキシ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）コハク酸（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４．７ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）の混合物に、鉄粉（６．１０７ｇ、１０９ｍｍｏｌ）を加え、この反応混合物を１００℃で２時間撹拌した。この反応物を１Ｎ ＮａＯＨで急冷し、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、フラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル中４０％酢酸エチル）により精製し、２−（６−クロロ−８−メトキシ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）酢酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルを 黄色油状物として得た（１．８７ｇ、収率５２％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１４Ｈ１８ＣｌＮ３Ｏ４の理論値：３２７．１０。
【0326】
工程５． （Ｓ）−２−（６−クロロ−８−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）エタノールの合成：【化64】
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ＴＨＦ（２０ｍＬ）中、２−（６−クロロ−８−メトキシ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）酢酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１．７ｇ、５．２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＢＨ３−Ｍｅ２Ｓ（５．２ｍＬ、Ｍｅ２Ｓ中１０Ｍ、５２ｍＬ）を加えた後、この反応混合物を５０℃で一晩加熱した。室温まで冷却したところで、この反応物を、水を滴下して急冷し、その後、１Ｎ ＨＣｌ水溶液（１０ｍＬ）を加え、この混合物を５０℃で２時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３を加え、この混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、濃縮して油状物とした。この油状物をＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）中ＴＦＡ（１５ｍＬ）で２時間処理し、ＤＣＭおよびＴＦＡを真空下で除去した。残渣をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）に溶かし、Ｃｓ２ＣＯ３（２ｇ）を加えた。この混合物を１時間撹拌し、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（３０：１ ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）により精製し、（Ｓ）−２−（６−クロロ−８−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）エタノールを黄色油状物として得た（９９７ｍｇ、収率７９％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１０Ｈ１４ＣｌＮ３Ｏ２の理論値：２４３．０８。
【0327】
工程６． （４Ｓ）−７−クロロ−９−メトキシ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成：【化65】
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ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中、ＰＰｈ３（１．００３ｇ、３．８３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＤＱ（８６９ｍｇ、３．８３ｍｍｏｌ）を加えた後、（Ｓ）−２−（６−クロロ−８−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）エタノール（６２０ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を３０分間撹拌し、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル中３３から１００％酢酸エチルへ）により精製し、（４Ｓ）−７−クロロ−９−メトキシ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンを黄色固体として得た（４１３ｍｇ、収率７２％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１０Ｈ１２ＣｌＮ３Ｏの理論値：２２５．０７。
【0328】
工程７． （４Ｓ）−７−（３−クロロフェニル）−９−メトキシ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成：【化66】
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１０：１ジオキサン／水（６ｍＬ）溶液中、（４Ｓ）−７−クロロ−９−メトキシ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（２２６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、（３−クロロフェニル）ボロン酸（１８７ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（６５４ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２．ＤＣＭ（４０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）の混合物をマイクロ波加熱した（１３０℃×１時間）。この反応混合物を濃縮乾固し、ＣＨ２Ｃｌ２に懸濁させ、飽和ＮａＨＣＯ３、水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。この反応混合物をまず、シリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０から１０％ＭｅＯＨへの勾配）により精製し、次に、Ｐｒｅｐ ＨＰＬＣにより精製した。この反応を同じスケールで２回繰り返し、合わせたＨＰＬＣ画分を凍結乾燥させ、（４Ｓ）−９−メトキシ−７−（３−クロロフェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（１９９ｍｇ、３収率３％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１６Ｈ１６ＣｌＮ３Ｏの理論値：３０１．１０；測定値：３０２［Ｍ＋Ｈ］。
【0329】
この一般的手順を用い、（３−クロロフェニル）ボロン酸を（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ボロン酸に置き換えることにより、（４Ｓ）−９−メトキシ−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンを製造することができた。
【0330】
工程８． （４Ｓ）−７−（３−クロロフェニル）−９−メトキシ−Ｎ−（ピラジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化67】
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ＴＨＦ（１０ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−（３−クロロフェニル）−９−メトキシ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（６０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の溶液に、鉱油中６０％ＮａＨ懸濁液（２４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を１時間加熱還流し、３−（ピラジン−２−イル）−２Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］［１，３，５］トリアジン−２，４（３Ｈ）−ジオン（７３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を加え、この混合物をさらに２時間還流下で加熱した。この反応混合物を室温まで冷却し、濃縮乾固し、飽和ＮａＨＣＯ３で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（３回）。有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮し、ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥させ、（４Ｓ）−７−（３−クロロフェニル）−９−メトキシ−Ｎ−（ピラジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（５４ｍｇ、収率６４％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２１Ｈ１９ＣｌＮ６Ｏ２の理論値：４２２．１３；測定値：４２３［Ｍ＋Ｈ］。
【0331】
実施例２２． （４Ｓ）−９−メトキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造： 【化68】
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１５ｍｌのアセトニトリル中、ピリジン−２−イルカルバミン酸フェニル（１９１．６ｍｇ、０．８９９５ｍｍｏｌ）、（４Ｓ）−９−メトキシ−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（１５０ｍｇ、０．４４７７ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（６５．５５ｍｇ、０．５３７３ｍｍｏｌ）の混合物を６０℃で一晩撹拌した。この混合物をそのままｐｒｅｐ−ＴＬＣにロードし、精製し（溶出剤として酢酸エチルを使用）、（４Ｓ）−９−メトキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを白色固体として得た（１５０ｍｇ、収率：７４％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２３Ｈ２０Ｆ３Ｎ５Ｏ２の理論値：４５５．２；測定値：４５６［Ｍ＋Ｈ］。
【0332】
この一般的手順を用い、ピリジン−２−イルカルバミン酸フェニルを適当なカルバミン酸部分に置き換えることにより、（４Ｓ）−９−メトキシ−Ｎ−（アリール）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造することができた。
【0333】
実施例２３． （４Ｓ）−９−ヒドロキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化69】
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窒素雰囲気下、０℃で、３ｍｌの乾燥ＣＨ２Ｃｌ２中、（４Ｓ）−９−メトキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（５０ｍｇ、０．１０９８ｍｍｏｌ）の混合物に、ＢＢｒ３（０．５ｍＬ、０．５４９４ｍｍｏｌ）を滴下した。次に、この反応混合物を５０℃で一晩撹拌した。この反応混合物に重炭酸ナトリウム溶液（５ｍＬ）およびジクロロメタン（１０ｍＬ）を加え、有機層を水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空濃縮した。粗生成物を、溶出剤として（ＣＨ２Ｃｌ２中１：２０ ＭｅＯＨ）を用いるｐｒｅｐ−ＴＬＣにより精製し、（４Ｓ）−９−ヒドロキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを白色固体として得た（１８ｍｇ、収率３５％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２２Ｈ１８Ｆ３Ｎ５Ｏ２の理論値：４４１．１；測定値：４４２［Ｍ＋Ｈ］。
【0334】
この一般的手順を用い、（４Ｓ）−９−メトキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを適当な（４Ｓ）−９−メトキシ−Ｎ−（アリール）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドに置き換えることにより、（（４Ｓ）−９−ヒドロキシ−Ｎ−（アリール）−７−（３（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造することができた。
【0335】
実施例２４． （４Ｓ）−Ｎ−（４−（（３−（３−メチル−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）プロパンアミド）メチル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化70】
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ＤＭＦ（２ｍＬ）中、（４Ｓ）−Ｎ−（４−（アミノメチル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド塩酸塩（４９ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、３−（３−メチル−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）プロパン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（２３ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（７０μＬ、０．５ｍｍｏｌ）の溶液を室温で１時間撹拌した。水（１０ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）を加え、この反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し（３回）、濃縮乾固した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０から１０％ＭｅＯＨへの勾配）で精製し、濃縮し、ジエチルエーテルおよびペンタンでチェースし、真空下で乾燥させ、（４Ｓ）−Ｎ−（４−（（３−（３−メチル−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）プロパンアミド）メチル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを白色泡沫として得た（３９ｍｇ、収率６８％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２９Ｈ２８Ｆ３Ｎ７Ｏ２の理論値：５６３．２３；測定値：５６４［Ｍ＋Ｈ］。
【0336】
実施例２５： （４Ｓ）−Ｎ−（３−（３−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化71】
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ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（４６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）およびトリホスゲン（３６ｍｇ、１２０ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（５６μＬ、０．４５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を４０℃で２．５時間撹拌し、ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）に溶かした３−（３−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）アニリン（４０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で２時間撹拌した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（まず、ペンタン中、０から１００％ＣＨ２Ｃｌ２へ、次に、ＣＨ２Ｃｌ２中０から１０％ＭｅＯＨへの勾配で溶出）により精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（３−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを得た（４０ｍｇ、収率５０％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２５Ｈ１８Ｆ６Ｎ６Ｏの理論値：５３２．１４；測定値：５３３［Ｍ＋Ｈ］。
【0337】
上記の３−（３−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）アニリンは、Biasotti B. et. al., Bioorganic and Medicinal Chemistry, 2003, 11, 2247-2254に従って製造した。
【0338】
この一般的手順を用い、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンを適当なアミンに置き換えることにより、様々な（３−（３−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）フェニル）尿素を製造した。
【0339】
実施例２６． （３Ｒ，４Ｒ）−７−クロロ−３−（（トリメチルシリル）オキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの製造：工程１． ２−ベンズアミドコハク酸（Ｓ）−ジメチルの合成
【化72】
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温度計、冷却器、および機械的撹拌機を備えた５Ｌ３頚フラスコに、１６１ｇ（１．００ｍｏｌ）のＬ−アスパラギン酸ジメチルエステル、２５００ｍＬのジクロロメタン、および１９８ｇ（１．９６ｍｏｌ）のトリエチルアミンを加えた。この溶液を−５℃に冷却した後、内部温度を−５℃に維持しながら、１５６ｇ（１．１１ｍｏｌ）の塩化ベンゾイルを滴下した。この混合物を−５℃で１時間撹拌した後、それを濾過した。沈澱をさらなるジクロロメタンで３回洗浄した後、合わせた濾液および洗液を飽和Ｋ２ＣＯ３水溶液で抽出した。ジクロロメタン層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させた後、真空濃縮し、２００ｇ（７５％）の生成物を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ１５ＮＯ５の理論値：２６５．１。
【0340】
工程２． ２−フェニル−４，５−ジヒドロオキサゾール−４，５−ジカルボン酸（４Ｓ，５Ｓ）−ジメチルの合成．【化73】
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温度計、機械的撹拌機、およびＮ２流入口を備えた１０Ｌ４頚フラスコに、１００ｇ（０．３７７ｍｏｌ）の２−ベンズアミドコハク酸（Ｓ）−ジメチル、次いで、４Ｌの乾燥テトラヒドロフランを加えた。この混合物を撹拌し、０℃に冷却した。この溶液に、テトラヒドロフラン中、リチウムビス（トリメチルシリル）アミドの１．０Ｍ溶液７７０ｍＬ（０．７７ｍｏｌ）を、添加時に内部温度を０℃に維持しながら加えた。この反応物を０℃で３０分間撹拌した後、それを−７８℃まで冷却した。これに−７８℃で、２Ｌのテトラヒドロフラン中、１９５ｇ（０．７７ｍｏｌ）のヨウ素の溶液を滴下した。この反応物を−７８℃で１時間撹拌した後、それを２Ｌの飽和ＮＨ４Ｃｌ（水溶液）および４００ｇ（２．５３ｍｏｌ）のＮａ２Ｓ２Ｏ３の添加により急冷した。この混合物を周囲温度で３０分間撹拌した後、２Ｌの酢酸エチルを加え、層を分離した。水相をさらなる酢酸エチル（３×２Ｌ）で抽出した。合わせた酢酸エチル層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させた後、真空濃縮した。残渣を、２０：１（ｖ／ｖ）ヘプタン：酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、３０ｇ（３０％）の生成物を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ１３ＮＯ５の理論値：２６３．１。
【0341】
工程３． （２Ｓ，３Ｓ）−２−アミノ−３−ヒドロキシコハク酸の合成【化74】
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還流冷却器を備えた５００ｍＬフラスコに、１３ｇ（５０ｍｍｏｌ）の２−フェニル−４，５−ジヒドロオキサゾール−４，５−ジカルボン酸（４Ｓ，５Ｓ）−ジメチルおよび２００ｍＬ（２．４ｍｏｌ）の１２Ｍ ＨＣｌ（水溶液）を加えた。この反応物を５０℃で１６時間撹拌した後、溶媒を真空下除去した。残渣を１０００ｍＬの水に取り、ＨＰＬＣにより安息香酸が水層に存在しなくなるまで、酢酸エチルで抽出した。有機層を廃棄し、水層を真空濃縮し、８．６ｇ（９４％）の（２Ｓ，３Ｓ）−２−アミノ−３−ヒドロキシコハク酸塩酸塩を白色結晶性固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ４Ｈ７ＮＯ５の理論値：１４９．０。
【0342】
工程４． ２−アミノ−３−ヒドロキシコハク酸（２Ｓ，３Ｓ）−ジメチルの合成【化75】
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還流冷却器を備えた５００ｍＬ３頚フラスコに、１７０ｍＬのメタノールを加えた。このメタノールを−５℃に冷却した後、２３．６ｇ（１９８ｍｍｏｌ）のＳＯＣｌ２を滴下した。添加が完了した後、８．６ｇ（４６ｍｍｏｌ）の（２Ｓ，３Ｓ）−２−アミノ−３−ヒドロキシコハク酸ＨＣｌ塩を加え、この溶液を周囲温度で１６時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、粗２−アミノ−３−ヒドロキシコハク酸（２Ｓ，３Ｓ）−ジメチルＨＣｌ塩を黄色油状物として得、これをそれ以上精製せずに次の工程で使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ６Ｈ１１ＮＯ５の理論値：１７７．１。
【0343】
工程５． ２−（（６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）−３−ヒドロキシコハク酸（２Ｓ，３Ｓ）−ジメチルの合成【化76】
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還流冷却器を備えた５００ｍＬ丸底フラスコに、１８ｇ（８４．３ｍｍｏｌ）の２−アミノ−３−ヒドロキシコハク酸（２Ｓ，３Ｓ）−ジメチルＨＣｌ、２９ｇ（１５０ｍｍｏｌ）の２，６−ジクロロ−３−ニトロピリジン、４２．５ｇのＮａＨＣＯ３（５０６ｍｍｏｌ）、および３５０ｍＬのＴＨＦを加えた。この反応物を４０℃で３６時間撹拌した。固体を濾去し、さらなるＴＨＦ（３０ｍＬ×３）で洗浄した。濾液および洗液を合わせ、真空濃縮した。残渣を、５：１（ｖ／ｖ）から１：１（ｖ／ｖ）ヘプタン：酢酸エチルへの勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、２２ｇ（６３％）の２−（（６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）−３−ヒドロキシコハク酸（２Ｓ，３Ｓ）−ジメチルを黄色結晶性固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１１Ｈ１２ＣｌＮ３Ｏ７の理論値：３３３．０。
【0344】
この手順を用い、２−アミノ−３−ヒドロキシコハク酸（２Ｓ，３Ｓ）−ジメチル塩酸塩を２−アミノ−３−ヒドロキシコハク酸ジメチル塩酸塩に置き換えることにより、２−（（６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）−３−ヒドロキシコハク酸ジメチルを製造することができた。
【0345】
工程６． ２−（（Ｓ）−６−クロロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）−２−ヒドロキシ酢酸（Ｓ）−メチルの合成【化77】
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Ｈ２Ｏ中、１０ｇのラネーＮｉのスラリーを、デカントして水を除去し、２−プロパノールで希釈し、再びデカントし、１０ｇの重量の湿潤混合物を得た。５００ｍＬフラスコに１０ｇ（３０ｍｍｏｌ）の２−（（６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）−３−ヒドロキシコハク酸（２Ｓ，３Ｓ）−ジメチル、２００ｍＬの２−プロパノール、次いで、１０ｇのラネーＮｉを加えた。この反応を真空下に置き、水素を３回再充填した後、それを１気圧のＨ２下で３時間、またはＨＰＬＣにより出発ニトロ化合物の残留が無くなるまで撹拌した。ラネーＮｉを濾去した後、濾液を５００ｍＬ丸底フラスコに入れ、５ｍＬ（８７ｍｍｏｌ）の氷酢酸を加えた。このフラスコに還流冷却器を取り付けた後、この反応物を８０℃で１６時間、ＨＰＬＣにより中間体ジアミノピリジンが存在しなくなるまで撹拌した。溶媒を真空下で除去した。残渣を、５／１（ｖ／ｖ）ヘプタン／酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、６ｇ（７２％）の生成物を淡黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１０Ｈ１０ＣｌＮ３Ｏ４の理論値：２７１．０。
【0346】
この手順を用い、２−（（６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）−３−ヒドロキシコハク酸（２Ｓ，３Ｓ）−ジメチルを２−（（６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）−３−ヒドロキシコハク酸ジメチルに置き換えることにより、２−（６−クロロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）−２−ヒドロキシ酢酸メチルを製造することができた。
【0347】
工程７． （Ｓ）−１−（（Ｒ）−６−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）エタン−１，２−ジオールの合成【化78】
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還流冷却器および温度計を備えた１００ｍＬ３頚丸底フラスコに、２０ｍＬのテトラヒドロフラン、次いで、１．１９ｇ（３０ｍｍｏｌ）のＬｉＡｌＨ４を加えた。この撹拌混合物を−５℃に冷却した後、２０ｍＬのテトラヒドロフラン中、０．５ｇ（２ｍｍｏｌ）の２−（（Ｓ）−６−クロロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）−２−ヒドロキシ酢酸（Ｓ）−メチルの溶液を滴下した。この反応物を７０℃で１６時間、またはＨＰＬＣにより反応が完了するまで撹拌した。（ラクタムの還元はエステルの還元よりも遅かった。）この反応物を−１０℃に冷却した後、１．２ｍＬの水を滴下し、この反応物を１０分間撹拌した。次に、１．２ｍＬの１５％（ｗ／ｖ）ＮａＯＨ（水溶液）を滴下し、この反応物を２０分間撹拌した。過剰量のＬｉＡｌＨ４の急冷を行うために、さらに３．６ｍＬの水を滴下し、その後、この反応物を２０分間撹拌した。この反応物を濾過し、沈澱をテトラヒドロフラン（３×２０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液および洗液を真空濃縮し、約１．５ｇの固体を得た。これを１６ｍＬの酢酸エチルで希釈し、濾過した。濾液を真空濃縮し、３１０ｍｇ（８０％）の生成物を褐色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ９Ｈ１２ＣｌＮ３Ｏ２の理論値：２２９．１。
【0348】
この手順を用い、２−（６−クロロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）−２−ヒドロキシ酢酸（Ｓ）−メチルを２−（（Ｓ）−６−クロロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）−２−ヒドロキシ酢酸メチルに置き換えることにより、１−（６−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）エタン−１，２−ジオールを製造することができた。
【0349】
工程８． （１Ｓ，４Ｒ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−３−オールの合成【化79】
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還流冷却器を備えた１０ｍＬ丸底フラスコに、２５０ｍｇ（１．１ｍｍｏｌ）の（Ｓ）−１−（（Ｒ）−６−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）エタン−１，２−ジオール、次いで、５ｍＬの４８％ＨＢｒ（水溶液）を加えた。この反応物を１０５℃で１６時間、またはＨＰＬＣが総ての出発材料が消費されたことを示すまで加熱した。この反応物を冷却した後、Ｋ２ＣＯ３（Ｓ）をｐＨ＝８までゆっくり加えた。溶媒を真空下で除去した後、残渣を、２０／１（ｖ／ｖ）ジクロロメタン／メタノールで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、１１０ｍｇ（４７％）の生成物を白色結晶性固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ９Ｈ１０ＣｌＮ３Ｏの理論値：２１１．１。
【0350】
この手順を用い、（Ｓ）−１−（（Ｒ）−１−（６−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）エタン−１，２−ジオールを６−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）エタン−１，２−ジオールに置き換えることにより、７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−３−オールを製造することができた。
【0351】
工程９． （１Ｓ，４Ｒ）−７−クロロ−３−（（トリメチルシリル）オキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成【化80】
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１０ｍＬ丸底フラスコに、１．６８ｇ（７．９ｍｍｏｌ）の（１Ｓ，４Ｒ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−３−オール、５ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、および２．８ｍＬ（２４ｍｍｏｌ）の２，６−ジメチルピリジンを加えた。この混合物をそれが均質となるまで撹拌した後、周囲温度で１．５ｍＬ（１２ｍｍｏｌ）のクロロトリメチルシランを滴下した。この反応物を周囲温度で３時間撹拌した後、それを１００ｍＬのジクロロメタンで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）（１×５０ｍＬ）、次いで、ブライン（３×５０ｍＬ）で抽出し、真空濃縮し、２．０４ｇ（９１％）の生成物を白色結晶性固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１２Ｈ１８ＣｌＮ３ＯＳｉの理論値：２８３．１。
【0352】
この手順を用い、（１Ｓ，４Ｒ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−３−オールを７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−３−オールに置き換えることにより、７−クロロ−３−（（トリメチルシリル）オキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンを製造することができた。
【0353】
実施例２７． （３Ｒ，４Ｒ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（（トリメチルシリル）オキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの製造：【化81】
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１０：１ジオキサン：水（８．８ｍＬ）中、（３Ｒ，４Ｒ）−７−クロロ−３−（（トリメチルシリル）オキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（２８３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ボロン酸（２８５ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、ＸＰｈｏｓ（２４ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（５．６ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（９７７ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）の混合物を脱気し、１００℃で２５分間マイクロ波加熱した。ジオキサン層を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０から７％ＭｅＯＨへの勾配）により精製し、（３Ｒ，４Ｒ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（（トリメチルシリル）オキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンを得た。これらの画分を濃縮し、ＥｔＯＡｃに溶かし、飽和ＮａＨＣＯ３、水、ブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮し、（３Ｒ，４Ｒ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（（トリメチルシリル）オキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（３３８ｍｇ、収率８５％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１９Ｈ２２Ｆ３Ｎ３ＯＳｉの理論値：３９３．１５；測定値：３９４［Ｍ＋Ｈ］。
【0354】
水素化ナトリウムを用いるこの一般的カップリング手順を用い、３−（ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピリド［１，２−ａ］［１，３，５］トリアジン−２，４（３Ｈ）−ジオンを適当なイソシアン酸アリールまたはイソシアン酸アリール二量体(aryl isocyante dimer)に置き換えることにより、（３Ｒ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−Ｎ−アリール−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造することができた。非立体特異的シリーズは、７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（（トリメチルシリル）オキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンで出発して製造することができた。
【0355】
実施例２８． （３Ｒ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化82】
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ＴＨＦ（３０ｍＬ）中、（３Ｒ，４Ｒ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（（トリメチルシリル）オキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（２１５ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）および鉱油中６０％ＮａＨ（６６ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）の溶液を２０分間加熱還流した。３−（ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピリド［１，２−ａ］［１，３，５］トリアジン−２，４（３Ｈ）−ジオン（１９７ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を加え、この反応混合物を還流下で２時間加熱した。この反応混合物を冷却し、濃縮乾固し、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３、水、ブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮乾固した。残渣をＰｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製し、これらの画分を濃縮乾固し、ジエチルエーテルとペンタンの混合物で摩砕し、２，２，２−トリフルオロ酢酸（３Ｒ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを白色固体として得た（１３２ｍｇ、収率４４％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２２Ｈ１８Ｆ３Ｎ５Ｏ２の理論値：４４１．１４；測定値：４４２［Ｍ＋Ｈ］。
【0356】
実施例２９． （４Ｒ）−３−オキソ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化83】
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ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中、２，２，２−トリフルオロ酢酸（３Ｒ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（９２ｍｇ、０．１６６ｍｍｏｌ）の溶液に、デス・マーチン・ペリオダン(Dess-Martin Periodane)（１０５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。第２分量のデス・マーチン・ペリオダン(Dess-Martin Periodane)（１０５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を装填し、この反応混合物を室温で０．５時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）を加え、この反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮して白色泡沫を得た。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ペナーテ(Penate)中０から１００％酢酸エチルへ）により精製した後、Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥させ、２，２，２−トリフルオロ酢酸（４Ｒ）−３−オキソ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（６２ｍｇ、収率６７％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２２Ｈ１６Ｆ３Ｎ５Ｏ２の理論値：４３９．１３；測定値：４４０［Ｍ＋Ｈ］。
【0357】
この一般的手順を用い、（３Ｒ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを（３Ｒ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドで置き換えることにより、（４Ｒ）−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）−３−オキソ−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造した。
【0358】
実施例３０． （３Ｓ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化84】
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窒素雰囲気下、−７８℃にて、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中、２，２，２−トリフルオロ酢酸（４Ｒ）−３−オキソ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（５０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ中１Ｍのスーパーヒドリドの溶液（０．４５ｍＬ、０．４５ｍｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物を−７８℃で３０分間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）の添加で急冷し、室温まで温め、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０から１０％ＭｅＯＨへの勾配）により精製し、（３Ｓ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（２２ｍｇ、収率５５％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２２Ｈ１８Ｆ３Ｎ５Ｏ２の理論値：４４１．１４；測定値：４４２［Ｍ＋Ｈ］。
【0359】
実施例３１． 酢酸（３Ｓ，４Ｒ）−５−（ピリジン−２−イルカルバモイル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−３−イルの製造：【化85】
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ＣＨ２Ｃｌ２中、（３Ｓ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（１５ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（１０μＬ、０．０７ｍｍｏｌ）、次いで、ＤＭＡＰ（１ｍｇ）および無水酢酸（１０μＬ、０．０１１ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で２時間撹拌し、濃縮乾固し、Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製した。これらの画分を凍結乾燥させ、酢酸（３Ｓ，４Ｒ）−５−（ピリジン−２−イルカルバモイル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−３−イル２，２，２−トリフルオロアセテート（５．９ｍｇ、収率２９％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２４Ｈ２０Ｆ３Ｎ５Ｏ３の理論値：４８３．１５；測定値：４８４［Ｍ＋Ｈ］。
【0360】
この一般的手順を用い、（３Ｓ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを（３Ｒ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドで置き換えることにより、酢酸（３Ｒ，４Ｒ）−５−（ピリジン−２−イルカルバモイル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−３−イルを製造した。
【0361】
この一般的手順を用い、（３Ｓ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを（３Ｒ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドで置き換え、かつ、無水酢酸および無水安息香酸を置き換えることにより、安息香酸（３Ｒ，４Ｒ）−５−（ピリジン−２−イルカルバモイル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−３−イルを製造した。
【0362】
実施例３２． （３Ｒ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化86】
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ＣＨ３ＣＮ（２０ｍＬ）中、（３Ｒ，４Ｒ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（（トリメチルシリル）オキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（２８４ｍｇ、０．７２２ｍｍｏｌ）、（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）カルバミン酸フェニル（４０４ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（４４ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）の溶液を６０℃で（一晩）、次いで、８０℃で（２時間）加熱した。次に、この反応混合物に追加量の（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）カルバミン酸フェニル（２０２ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（８８ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を８０℃で一晩加熱し、濃縮乾固した。この反応混合物をまず、カラムクロマトグラフィー（ペンタン中０から１００％酢酸エチルへの勾配）により精製し、次いで、ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥させ、（３Ｒ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドをトリフルオロ酢酸塩として得た（１６１ｍｇ、３６％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２６Ｈ２０Ｆ３Ｎ５Ｏ３の理論値：５０７．１５；測定値：５０８［Ｍ＋Ｈ］。
【0363】
実施例３３． （３Ｒ，４Ｒ）−７−（３−クロロフェニル）−３−ヒドロキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：工程１． （３Ｒ，４Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成：
【化87】
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Ｎ２下、−２０℃で、２ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中、（３Ｒ，４Ｒ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−３−オール（９０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＢＳＯＴｆ（１１１ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。この混合物を１時間撹拌した後、１Ｎ ＨＣｌおよび水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固した。残渣をＰｒｅｐ．ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＥＡ＝２０：１）により精製し、（３Ｒ，４Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンを黄色固体として得た（９０ｍｇ、収率７３％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ２４ＣｌＮ３ＯＳｉの理論値：３２５．１４。
【0364】
工程２． （３Ｒ，４Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（３−クロロフェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成【化88】
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ジオキサン／Ｈ２Ｏ（１１ｍＬ、１０：１）中、（３Ｒ，４Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（１．０８ｇ、３．３２ｍｍｏｌ）、（３−クロロフェニル）ボロン酸（５７０ｍｇ、３．６５ｍｍｏｌ）、ＣＳ２ＣＯ３（２．４８ｇ、７．６３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）の混合物をマイクロ波反応器にて１３０℃で２．５時間加熱した。この混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を水およびブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固した。残渣をｐｒｅｐ．ＨＰＬＣにより精製し、（３Ｒ，４Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（３−クロロフェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンを淡黄色固体として得た（８５０ｍｇ、収率６３％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２１Ｈ２８ＣｌＮ３ＯＳｉの理論値：４０１．１７。
【0365】
この一般的手順を用い、（３Ｒ，４Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンを製造した。
【0366】
工程３． （３Ｒ，４Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（３−クロロフェニル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化89】
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５ｍｌのＭｅＣＮ中、ピリジン−２−イルカルバミン酸フェニル（８６ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、（３Ｒ，４Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（３−クロロフェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（８０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２４ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の混合物を６５℃で一晩撹拌した。粗反応混合物を、ＤＣＭ：ＥＡ＝２０：１で溶出するｐｒｅｐ．ＴＬＣにより精製し、（３Ｒ，４Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（３−クロロフェニル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（１１０ｍｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２７Ｈ３２ＣｌＮ３Ｏ２Ｓｉの理論値：５２１．２。
【0367】
工程４． （３Ｒ，４Ｒ）−７−（３−クロロフェニル）−３−ヒドロキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化90】
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１０ｍＬのＴＨＦおよび濃ＨＣｌ（１ｍＬ）中、（３Ｒ，４Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（３−クロロフェニル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（１１０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）の溶液を室温で４８時間撹拌した。この混合物を減圧下で濃縮した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を用いてｐＨを８に調整した。この混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、ブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）。濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ中で摩砕し、（３Ｒ，４Ｒ）−７−（３−クロロフェニル）−３−ヒドロキシ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（３４ｍｇ、収率３９％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２１Ｈ１８ＣｌＮ５Ｏ２の理論値：４０７．１；測定値：４０８［Ｍ＋Ｈ］。
【0368】
実施例３４． （３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−３−ヒドロキシ−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：工程１． （３Ｒ，４Ｒ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−３−オールの合成：
【化91】
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ジオキサン／Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ、１０：１）中、（３Ｒ，４Ｒ）−７−クロロ−３−（（トリメチルシリル）オキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（１ｇ、３．５３ｍｍｏｌ）、（（３−トリフルオロメチル）フェニル）ボロン酸（１．３４ｇ、７．０６ｍｍｏｌ）、ＣＳ２ＣＯ３（３．４４ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３００ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）の混合物を、マイクロ波下、１３０℃で２．５時間反応させた。次に、この反応混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出し、水、次いで、ブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝４：１）により精製し、（３Ｒ，４Ｒ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−３−オール（６００ｍｇ、３９％収率）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１６Ｈ１４Ｆ３Ｎ３Ｏの理論値：３２１．１。
【0369】
工程２． （３Ｒ，４Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成：【化92】
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ＴＢＳＣｌ（３３８ｍｇ、２．２４ｍｍｏｌ）、（３Ｒ，４Ｒ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−３−オール（６００ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（４１５ｍｇ、４．１１ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２２ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の混合物を４８時間撹拌した。出発材料を消費するためにはさらなるＴＢＳＣｌおよびＴＥＡが必要であった。粗残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製し、（３Ｒ，４Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（９０ｍｇ、収率７３％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２２Ｈ２８Ｆ３Ｎ３ＯＳｉの理論値：４３５．２０。
【0370】
工程３． （３Ｒ，４Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−Ｎ−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化93】
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５ｍｌのＭｅＣＮ中、（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）カルバミン酸フェニル（２５ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、（３Ｒ，４Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（３−クロロフェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（３０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）の混合物を６５℃で一晩撹拌した。粗反応混合物をｐｒｅｐ．ＴＬＣにより精製し、（３Ｒ，４Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−Ｎ−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（３０ｍｇ、定量的）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２８Ｈ３４Ｆ３Ｎ５Ｏ２ＳＳｉの理論値：５８９．２２。
【0371】
工程４． （３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−３−ヒドロキシ−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化94】
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ＴＨＦ（２ｍＬ）中、（３Ｒ，４Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−Ｎ−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（３０ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＢＡＦ／ＴＨＦ（０．１ｍＬ、０．１ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で一晩(overninght)撹拌し、水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水、次いで、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。残渣をｐｒｅｐ．ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）により精製し、（３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−３−ヒドロキシ−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを白色固体として得た（１２ｍｇ、収率５０％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２２Ｈ２０Ｆ３Ｎ５Ｏ２Ｓの理論値：４７５．１３；測定値：４７６［Ｍ＋Ｈ］。
【0372】
実施例３５： （４Ｓ）−Ｎ−（４−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化95】
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０℃に冷却した、ピリジン（７８０μＬ、９．６５ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（１０ｍＬ）中、４−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−アミン（５００ｍｇ、３．１０ｍｍｏｌ）の溶液に、クロロギ酸フェニル（４６６μＬ、３．７２ｍｍｏｌ）を１．５時間かけて加えた。この反応物を０℃で２時間撹拌した。水（１５ｍＬ）をゆっくり加え、さらなるジクロロメタンを加えた。有機層を分離し、飽和炭酸ナトリウム（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、総ての溶媒を真空下で除去した。残渣を５：１石油エーテル：酢酸エチルに３０分間懸濁させた後、この懸濁液を濾過し、（４−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−イル）カルバミン酸フェニル（５４７ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ、収率６３％）を得た。
【0373】
アセトニトリル（５ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（１１０ｍｇ、０．３６１ｍｍｏｌ）、（４−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−イル）カルバミン酸フェニル（２０３ｍｇ、０．７２２ｍｍｏｌ）および４−（ジメチルアミノ）ピリジン（５３．０ｍｇ、０．４３４ｍｍｏｌ）の溶液を６０℃で一晩撹拌した。この混合物を分取ＨＰＬＣにより精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（４−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（２４．３ｍｇ、０．０４９３ｍｍｏｌ、収率１４％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２５Ｈ１９Ｆ３Ｎ６Ｏ２の理論値：４９２．２；測定値：４９３．２［Ｍ＋Ｈ］。
【0374】
実施例３６： （４Ｓ）−Ｎ−（３，５−ビス（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：工程１． （３，５−ビス（オキサゾール−５−イル）フェニル）カルバミン酸フェニルの合成：
【化96】
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ジクロロメタン（１５ｍＬ）中、３，５−ビス（オキサゾール−５−イル）アニリン（１００ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）、クロロギ酸フェニル（７６ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．２０ｍＬ）の混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、残った材料を分取ＴＬＣ（１：１石油エーテル：酢酸エチル）により精製し、（３，５−ビス（オキサゾール−５−イル）フェニル）カルバミン酸フェニル（１４０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ、収率９２％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１９Ｈ１３Ｎ３Ｏ４の理論値：３４７．１。
【0375】
工程２． （４Ｓ）−Ｎ−（３，５−ビス（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化97】
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アセトニトリル（２ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（７０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）、（３，５−ビス（オキサゾール−５−イル）フェニル）カルバミン酸フェニル（１４０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（５６ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）の混合物を一晩還流させた。溶媒を真空下で除去し、残った残渣を分取ＴＬＣ（１０：１ジクロロメタン：メタノール）により精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（３，５−ビス（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（１３．７ｍｇ、０．０２４５ｍｍｏｌ、収率１１％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２９Ｈ２１Ｆ３Ｎ６Ｏ３の理論値：５５８．２；測定値：５５９．０。
【0376】
実施例３７． （（１−（３−（（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５−カルボキサミド）フェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの製造：【化98】
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アセトニトリル（５ｍＬ）中、トリホスゲン（２１４ｍｇ、０．７２１ｍｍｏｌ）の溶液に、アセトニトリル（５ｍＬ）およびトリエチルアミン（２ｍＬ）中、（（１−（３−アミノフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（４１７ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。得られた懸濁液を室温で１０分間撹拌した後、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（化合物＃；３０２ｍｇ、０．９８９ｍｍｏｌ）および４−（ジメチルアミノ）ピリジン（１２２ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）を固体として加えた。この反応物を８０℃で１５分間撹拌した。この反応物を室温まで冷却し、メタノール（２ｍＬ）を加え、この反応物を飽和重炭酸ナトリウム（５０ｍＬ）に注ぎ、ジクロロメタン（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を真空下で除去し、残った材料をフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０％から８％メタノールへ）により精製し、（（１−（３−（（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５−カルボキサミド）フェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５７９ｍｇ、０．９３３ｍｍｏｌ、収率９４％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ３１Ｈ３１Ｆ３Ｎ８Ｏ３の理論値：６２０．３；測定値：６２１．０［Ｍ＋Ｈ］。
【0377】
実施例３８． （４Ｓ）−Ｎ−（３−（４−（アミノメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化99】
[この文献は図面を表示できません]
（（１−（３−（（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５−カルボキサミド）フェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１６０ｍｇ、０．２５８ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（１．６ｍＬ）に溶かした。この反応物を５０℃で１０分間撹拌した後、総ての溶媒を真空下で除去し、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（４−（アミノメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドトリフルオロ酢酸塩（１６４ｍｇ、０．２５８ｍｍｏｌ、収率１００％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２６Ｈ２３Ｆ３Ｎ８Ｏの理論値：５２０．２；測定値：５２１．０［Ｍ＋Ｈ］。
【0378】
実施例３９： （４Ｓ）−Ｎ−（６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：工程１： （４Ｓ）−Ｎ−（６−ブロモピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：
【化100】
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アセトニトリル（２５ｍＬ）中、トリホスゲン（１．８１ｇ、６．１０ｍｍｏｌ）の溶液に、アセトニトリル（２５ｍＬ）中、６−ブロモピリジン−２−アミン（２．２６ｇ、１３．１ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。トリエチルアミン（８．００ｍＬ、５７．４ｍｍｏｌ）を加え、この反応物を８０℃で３０分間撹拌し、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（１．０４ｇ、３．４１ｍｍｏｌ）および４−（ジメチルアミノ）ピリジン（４１０ｍｇ、３．３６ｍｍｏｌ）を固体として加え、この反応物を８０℃で１時間撹拌した。この反応物を室温まで冷却し、水（３０ｍＬ）に注ぎ、ジクロロメタン（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、総ての溶媒を真空下で除去した。残った残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ペンタン中３０％から１００％酢酸エチルへ）により精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（６−ブロモピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（１．１２ｇ、２．２２ｍｍｏｌ、収率６５％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２２Ｈ１７ＢｒＦ３Ｎ５Ｏの理論値：５０３．１；測定値：５０３．８［Ｍ＋Ｈ］。
【0379】
工程２： （４Ｓ）−Ｎ−（６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化101】
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マイクロ波バイアルに（４Ｓ）−Ｎ−（６−ブロモピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（４６．０ｍｇ、０．０９１２ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（４．８ｍｇ、０．００４２ｍｍｏｌ）、フッ化セシウム（１８０ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）、１−メチル−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール（６０．０ｍｇ、０．２８８ｍｍｏｌ）、ＤＭＥ（１．５ｍＬ）、および水（１５０μＬ）を装填した。このマイクロ波バイアルを密閉し、マイクロ波中、１００℃で３時間加熱した。有機層を分離し、水層を１０：１酢酸エチル：メタノール（２×２ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を真空下で除去し、残った残渣をＤＭＳＯ（４ｍＬ）に溶かし、濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣにより精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドトリフルオロ酢酸塩（２８．４ｍｇ、０．０４６０ｍｍｏｌ、収率５０％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２６Ｈ２２Ｆ３Ｎ７Ｏの理論値：５０５．２；測定値：５０６．０［Ｍ＋Ｈ］。
【0380】
実施例４０： （４Ｓ）−Ｎ−（３−（ピペラジン−１−イルメチル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化102】
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バイアルにトリホスゲン（７５．０ｍｇ、０．２５３ｍｍｏｌ）を装填し、これをアセトニトリル（２．５ｍＬ）に溶かした。アセトニトリル（２．５ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（１５０ｍｇ、０．４９１ｍｍｏｌ）の溶液、次いで、トリエチルアミン（０．５０ｍＬ、３．５９ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で４時間撹拌し、４−（３−アミノベンジル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（４８０ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）を固体として加え、次いで、ＤＭＡＰ（３６０ｍｇ、２．９５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を８０℃で１６時間撹拌し、総ての溶媒を真空下で除去した。残った材料をトリフルオロ酢酸（５．０ｍＬ）に溶かし、この溶液を５０℃で２０分間撹拌した。余分な量のトリフルオロ酢酸を真空下で除去し、残った材料をＤＭＳＯに溶かし、得られた溶液を分取ＨＰＬＣにより精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（ピペラジン−１−イルメチル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドトリフルオロ酢酸塩（８９．１ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ、収率２９％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２８Ｈ２９Ｆ３Ｎ６Ｏの理論値：５２２．２。
【0381】
実施例４１： （４Ｓ）−Ｎ−（４−（ピペラジン−１−イル）ピリミジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：工程１． ４−（２−（（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５−カルボキサミド）ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成：
【化103】
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０℃で、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中、４−（２−アミノピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２００ｍｇ、０．７１６ｍｍｏｌ）の溶液に、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド溶液（ＴＨＦ中１．０Ｍ、１．５０ｍＬ、１．５０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温まで温め、３０分間撹拌し、ＴＨＦ（５ｍＬ）中、７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボン酸（４Ｓ）−フェニル（３２７ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。この反応物を室温で１．５時間撹拌した後、溶媒を真空下で除去し、残った残渣をｐｒｅｐ ＴＬＣ（３：１石油エーテル：酢酸エチル）により精製し、４−（２−（（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５−カルボキサミド）ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１６０ｍｇ、０．２６２ｍｍｏｌ、収率３７％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ３０Ｈ３３Ｆ３Ｎ８Ｏ３の理論値：６１０．３。
【0382】
工程２． （４Ｓ）−Ｎ−（４−（ピペラジン−１−イル）ピリミジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化104】
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４−（２−（（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５−カルボキサミド）ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１６０ｍｇ、０．２６２ｍｍｏｌ）を酢酸エチル中の塩酸（２Ｍ、１０ｍＬ）に溶かし、３０分間撹拌した。総ての溶媒を真空下で除去し、（４Ｓ）−Ｎ−（４−（ピペラジン−１−イル）ピリミジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（４７ｍｇ、０．０９２ｍｍｏｌ、収率３５％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２５Ｈ２５Ｆ３Ｎ８Ｏの理論値：５１０．２；測定値：５１１．０［Ｍ＋Ｈ］。
【0383】
実施例４２： ２−（４−（３−（（９Ｓ）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０−カルボキサミド）フェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成：【化105】
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バイアルにトリホスゲン（１８０ｍｇ、０．６０７ｍｍｏｌ）を装填し、これをジクロロメタン（３ｍＬ）に溶かした。（９Ｓ）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン（３２０ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）の溶液を加え、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．００ｍＬ、５．７４ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で２５分間撹拌した後、ジクロロメタン（５ｍＬ）中、（２−（４−（３−アミノフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（４１５ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。この反応物を４０℃で１６時間撹拌した後、マイクロ波中１２０℃で１時間加熱した。冷却後、溶媒を真空下で除去し、残った残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０％から８％メタノールへ）により精製し、（２−（４−（３−（（９Ｓ）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０−カルボキサミド）フェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（９９．０ｍｇ、０．１５３ｍｍｏｌ、収率１５％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ３３Ｈ３５Ｆ３Ｎ８Ｏ３の理論値：６４８．３。
【0384】
実施例４３： （４Ｓ）−Ｎ−（３−（２−（グアニジノメチル）オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化106】
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ＤＭＦ（１ｍＬ）中、１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキシイミドアミド塩酸塩（１５ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１７μＬ、０．１０ｍｍｏｌ）の溶液を室温で１０分間撹拌し、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（２−（アミノメチル）オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（５２ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で一晩撹拌した後、ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥させ、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（２−（グアニジノメチル）オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドトリフルオロ酢酸塩（２５．５ｍｇ、収率３８％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２８Ｈ２５Ｆ３Ｎ８Ｏ２の理論値：５６２．２１；測定値：５６３［Ｍ＋Ｈ］。
【0385】
この一般的手順を用い、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（２−（アミノメチル）オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを適当なアミンで置き換えることにより、他のグアニジンを製造した。
【0386】
実施例４４： （４Ｓ）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）ピペリジン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：工程１． （９Ｓ）−２−（３−（トリフルオロメチル）ピペリジン−１−イル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシンの合成：
【化107】
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２０ｍＬマイクロ波バイアルに磁気撹拌子、（９Ｓ）−２−クロロ−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン（６２９ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）、［１，３−ビス（２，６−ジ−イソプロピルフェニル）−４，５−ジヒドロイミダゾール−２−イリデン］クロロ］アリルパラジウム（ＩＩ）（６２．１ｍｇ、０．１２０ｍｍｏｌ）、３−トリフルオロメチルピペリジン（９１９ｍｇ、６．００ｍｍｏｌ）およびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（６７３ｍｇ、６．００ｍｍｏｌ）を装填した。ＤＭＥ（７．０ｍＬ）を加え、このマイクロ波バイアルに蓋をし、２時間９０℃に加熱した。室温まで冷却した後、メタノール（５ｍＬ）およびシリカゲル（５ｇ）を加え、総ての溶媒を真空下で除去した。残ったシリカゲルスラリーを４０ｇシリカゲルカラムの上にロードし、フラッシュクロマトグラフィー（ペンタン中５０％から１００％酢酸エチルへ）により、（９Ｓ）−２−（３−（トリフルオロメチル）ピペリジン−１−イル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン２をジアステレオマーの１：１混合物で得た（７１３ｍｇ、２．１８ｍｍｏｌ、収率７３％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１６Ｈ２１Ｆ３Ｎ４の理論値：３２６．２。
【0387】
【化108】
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工程２． （４Ｓ）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）ピペリジン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化109】
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アセトニトリル（２ｍＬ）およびピリジン（１ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）ピペリジン−１−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（４０．０ｍｇ、０．１２８ｍｍｏｌ）の溶液に、トリホスゲン（２６．０ｍｇ、０．０８７６ｍｍｏｌ）を固体として加えた。得られた赤色溶液を５０℃で１時間撹拌した後、４−アミノピリミジン（９５．０ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）を固体として加え、この反応を７０℃で６時間撹拌した。６時間後、窒素流下で大部分のアセトニトリルを除去し、この反応物にメタノール（１ｍＬ）およびＤＭＳＯ（２ｍＬ）を加えた。得られた溶液をｐｒｅｐ ＨＰＬＣにより精製し、単離された材料をアセトニトリル／１Ｎ ＨＣｌ水溶液から凍結乾燥させ、（４Ｓ）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）ピペリジン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド塩酸塩（３４．９ｍｇ、０．０７４３ｍｍｏｌ、収率５８％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２０Ｈ２２Ｆ３Ｎ７Ｏの理論値：４３３．２。
【0388】
実施例４５： （４Ｓ）−７−（（Ｓ）−３−（ジメチルアミノ）ピロリジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：工程１． （３Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−（（４Ｓ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−７−イル）ピロリジン−３−アミンの合成：
【化110】
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２０ｍＬマイクロ波バイアルに磁気撹拌子、（４Ｓ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（９７８ｍｇ、５．００ｍｍｏｌ）、［１，３−ビス（２，６−ジ−イソプロピルフェニル）−４，５−ジヒドロイミダゾール−２−イリデン］クロロ］アリルパラジウム（ＩＩ）（５１．７ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルピロリジン−３−アミン（１．１４ｇ、１０．００ｍｍｏｌ）およびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１．１２ｍｇ、１０．００ｍｍｏｌ）を装填した。ＤＭＥ（１０．０ｍＬ）を加え、このマイクロ波バイアルに蓋をし、４時間１００℃に加熱した。室温まで冷却した後、メタノール（２０ｍＬ）およびシリカゲル（５ｇ）を加え、総ての溶媒を真空下で除去した。残ったシリカゲルスラリーを４０ｇシリカゲルカラムの上にロードし、フラッシュクロマトグラフィー（ペンタン中０％から１０％メタノールへ）により、（３Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−（（４Ｓ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−７−イル）ピロリジン−３−アミン（５２４ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ、収率３８％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ２３Ｎ５の理論値：２７３．２。
【0389】
工程２． （４Ｓ）−７−（（Ｓ）−３−（ジメチルアミノ）ピロリジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化111】
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アセトニトリル（５４０μＬ）およびピリジン（１５０μＬ）中、（３Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−（（４Ｓ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−７−イル）ピロリジン−３−アミン（４０．０ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）の溶液に、アセトニトリル（３１０μＬ）中、トリホスゲン（２８．９ｍｇ、０．０９７５ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。この反応を５０℃で３０分間撹拌した後、トリエチルアミン（４０μＬ）を加えた。３−アミノピリジン（９４ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）を固体として加え、この反応物を６０℃で１６時間撹拌した。１６時間後、この反応物を室温まで冷却し、メタノール（１ｍＬ）を加え、得られた溶液を分取ＨＰＬＣにより精製した。単離された材料をアセトニトリル／１Ｎ ＨＣｌ水溶液から凍結乾燥させ、（４Ｓ）−７−（（Ｓ）−３−（ジメチルアミノ）ピロリジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド塩酸塩（３０．６ｍｇ、０．０７１２ｍｍｏｌ、収率４９％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２１Ｈ２７Ｎ７Ｏの理論値：３９３．２。
【0390】
実施例４６： ４−（（９Ｓ）−１０−（ピリミジン−４−イルカルバモイル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−２−イル）−１，４−ジアゼパン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成：工程１． ４−（（９Ｓ）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−２−イル）−１，４−ジアゼパン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成：
【化112】
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２０ｍＬマイクロ波バイアルに磁気撹拌子、（９Ｓ）−２−クロロ−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン（５００ｍｇ、２．３８ｍｍｏｌ）、［１，３−ビス（２，６−ジ−イソプロピルフェニル）−４，５−ジヒドロイミダゾール−２−イリデン］クロロ］アリルパラジウム（ＩＩ）（１２．４ｍｇ、０．０２４０ｍｍｏｌ）、ホモピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（９５３ｍｇ、４．７６ｍｍｏｌ）およびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（５３４ｍｇ、４．７６ｍｍｏｌ）を装填した。ＤＭＥ（５．０ｍＬ）を加え、このバイアルに蓋をし、マイクロ波中、８５℃で４時間加熱した。室温まで冷却した後、メタノール（２０ｍＬ）およびシリカゲル（５ｇ）を加え、総ての溶媒を真空下で除去し、残ったシリカゲルスラリーを４０ｇシリカゲルカラム上にロードした。フラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０％から８％メタノールへ）により、４−（（９Ｓ）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−２−イル）−１，４−ジアゼパン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５５０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ、収率６２％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２０Ｈ３１Ｎ５Ｏ２の理論値：３７３．２；測定値：３７４．２［Ｍ＋Ｈ］。
【0391】
工程２． ４−（（９Ｓ）−１０−（ピリミジン−４−イルカルバモイル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−２−イル）−１，４−ジアゼパン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成：【化113】
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アセトニトリル（３０ｍＬ）中、４−（（９Ｓ）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−２−イル）−１，４−ジアゼパン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５００ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）、ピリミジン−４−イル−カルバミン酸フェニルエステル（５７０ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１９０ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）の混合物を６０℃で３．５時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をジクロロメタンに溶かし、水、ブラインで洗浄し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。総ての溶媒を真空下で除去し、残った残渣を、ジクロロメタン：酢酸エチル（２：１）を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した後、ジクロロメタン中３％メタノールを用いる分取薄層クロマトグラフィーにより精製し、４−（（９Ｓ）−１０−（ピリミジン−４−イルカルバモイル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−２−イル）−１，４−ジアゼパン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３６３ｍｇ、０．７３４ｍｍｏｌ、収率５５％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２５Ｈ３４Ｎ８Ｏ３の理論値：４９４．３；測定値：４９５．４［Ｍ＋Ｈ］。
【0392】
実施例４７： （９Ｓ）−２−（１，４−ジアゼパン−１−イル）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化114】
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４−（（９Ｓ）−１０−（ピリミジン−４−イルカルバモイル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−２−イル）−１，４−ジアゼパン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（４００ｍｇ、０．８０８ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ中１ＭのＨＣｌ（２０ｍＬ）に溶かし、この反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。総ての溶媒を真空下で除去した。水（２０ｍＬ）および炭酸カリウム（３４４ｍｇ、２．４２ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を室温で１時間撹拌した。ジクロロメタン（３×５ｍＬ）で抽出し、溶媒を真空下で乾燥させ、（９Ｓ）−２−（１，４−ジアゼパン−１−イル）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミド（３００ｍｇ、０．７６１ｍｍｏｌ、収９４％率）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２０Ｈ２６Ｎ８Ｏの理論値：３９４．２。
【0393】
実施例４８： （９Ｓ）−２−（４−（メチルスルホニル）−１，４−ジアゼパン−１−イル）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化115】
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ジクロロメタン（３ｍＬ）中、（９Ｓ）−２−（１，４−ジアゼパン−１−イル）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミド（６０．０ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（４６．１ｍｇ、０．４５７ｍｍｏｌ）および塩化メタンスルホニル（１８．１ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を０℃で１時間撹拌した。この溶液を水、ブラインで洗浄し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。残った溶液を、ジクロロメタン中３％メタノールを用いる分取クロマトグラフィーにより精製し、（９Ｓ）−２−（４−（メチルスルホニル）−１，４−ジアゼパン−１−イル）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミド（３０．０ｍｇ、０．０６３５ｍｍｏｌ、収率４２％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２１Ｈ２８Ｎ８Ｏ３Ｓの理論値：４７２．２。
【0394】
実施例４９： （９Ｓ）−２−（４−メチル−１，４−ジアゼパン−１−イル）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化116】
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メタノール（３ｍＬ）中、（９Ｓ）−２−（１，４−ジアゼパン−１−イル）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミド（１００ｍｇ、０．２５４ｍｍｏｌ）の溶液に、ホルムアルデヒド（水中３７％、２０μＬ）および１０％パラジウム炭素（１０ｍｇ）を加えた。この反応物を水素雰囲気下で１時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、残った残渣を、ジクロロメタン中３％メタノールを用いる分取薄層クロマトグラフィーにより精製し、（９Ｓ）−２−（４−メチル−１，４−ジアゼパン−１−イル）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミド（２２．２ｍｇ、０．０５４３ｍｍｏｌ、収率２１％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２１Ｈ２８Ｎ８Ｏの理論値：４０８．２。
【0395】
実施例５０： （９Ｓ）−２−（４−イソプロピル−１，４−ジアゼパン−１−イル）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化117】
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ジクロロメタン（３ｍＬ）中、（９Ｓ）−２−（１，４−ジアゼパン−１−イル）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミド（５０．０ｍｇ、０．１２７ｍｍｏｌ）の溶液に、アセトン（１２．９ｍｇ、０．２５４ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を３０分間撹拌し、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（２０．１ｍｇ、０．０７５９ｍｍｏｌ）を固体として加え、この反応物を室温で一晩撹拌した。総ての溶媒を真空下で除去し、残った残渣を分取薄層クロマトグラフィー（１００％酢酸エチル）により精製し、（９Ｓ）−２−（４−イソプロピル−１，４−ジアゼパン−１−イル）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミド（１６．８ｍｇ、０．０３８５ｍｍｏｌ、収率３０％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２３Ｈ３２Ｎ８Ｏの理論値：４３６．３。
【0396】
実施例５１： （９Ｓ）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−２−（４−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１，４−ジアゼパン−１−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化118】
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ＤＭＦ（３ｍＬ）中、（９Ｓ）−２−（１，４−ジアゼパン−１−イル）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミド（１００ｍｇ、０．２５４ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸ナトリウム（８０．７ｍｇ、０．７６１ｍｍｏｌ）およびトリフルオロメタンスルホン酸２，２，２−トリフルオロエチル（１６３ｍｇ、０．５０８ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で一晩撹拌した後、ジクロロメタン（１０ｍＬ）で希釈し、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。総ての溶媒を真空下で除去し、残った残渣を、ジクロロメタン中３％メタノールを用いる分取薄層クロマトグラフィーにより精製し、（９Ｓ）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−２−（４−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１，４−ジアゼパン−１−イル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミド（１９．５ｍｇ、０．０４０９ｍｍｏｌ、収率１６％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２２Ｈ２７Ｆ３Ｎ８Ｏの理論値：４７６．２。
【0397】
実施例５２： （４Ｓ）−７−（４−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１，４−ジアゼパン−１−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成：工程１． ４−（（４Ｓ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−７−イル）−１，４−ジアゼパン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成：
【化119】
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ＤＭＥ（５ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（５００ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ）、Ｎ−Ｂｏｃホモピペラジン（９５３ｍｇ、４．７６ｍｍｏｌ）、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（５３４ｍｇ、４．７６ｍｍｏｌ）の溶液に、［１，３−ビス（２，６−ジ−イソプロピルフェニル）−４，５−ジヒドロイミダゾール−２−イリデン］クロロ］アリルパラジウム（ＩＩ）（１２．４ｍｇ、０．０２４０ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を９０℃で３時間加熱した。冷却後、水を加え、この混合物を酢酸エチル（３×１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残った残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（５：１ペンタン：酢酸エチル）により精製し、 ４−（（４Ｓ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−７−イル）−１，４−ジアゼパン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（６１０ｍｇ、１．７０ｍｍｏｌ、収率６６％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１９Ｈ２９Ｎ５Ｏ２の理論値：３５９．２。
【0398】
工程２． （４Ｓ）−７−（１，４−ジアゼパン−１−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成：【化120】
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ＥｔＯＡｃ（５Ｍ、１０ｍＬ）中、４−（（４Ｓ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−７−イル）−１，４−ジアゼパン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（６１０ｍｇ、１．７０ｍｍｏｌ）およびＨＣｌの混合物を室温で３０分間撹拌した。溶媒を除去し、（４Ｓ）−７−（１，４−ジアゼパン−１−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（４１８ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ、収率９５％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１４Ｈ２１Ｎ５の理論値：２５９．２。
【0399】
工程３． （４Ｓ）−７−（４−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１，４−ジアゼパン−１−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成：【化121】
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ＤＭＦ（５ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−（１，４−ジアゼパン−１−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（４１８ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロメタンスルホン酸２，２，２−トリフルオロエチル（７４８ｍｇ、３．２３ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（６６６ｍｇ、４．８３ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で一晩撹拌した。この反応物を水で希釈し、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残った残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（６：１ペンタン：酢酸エチル）により精製し、（４Ｓ）−７−（４−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１，４−ジアゼパン−１−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（３２０ｍｇ、０．９３７ｍｍｏｌ、収率５８％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１６Ｈ２２Ｆ３Ｎ５の理論値：３４１．２。
【0400】
実施例５３： （４Ｓ）−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（（Ｒ）−３−（トリフルオロメチル）ピペリジン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドおよび（４Ｓ）−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（（Ｓ）−３−（トリフルオロメチル）ピペリジン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化122】
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（４Ｓ）−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）ピペリジン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（１２０ｍｇ、０．２４１ｍｍｏｌ）を３０×２５０ｍｍ ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ−Ｈカラムにロードした。２０：８０エタノール：ヘプタンで溶出すると、最初に（４Ｓ）−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（（Ｒ）−３−（トリフルオロメチル）ピペリジン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（４１．３ｍｇ、０．０８２８ｍｍｏｌ、収率３４％）、［α］Ｄ２５＝＋３２（ｃ、０．０９、ＭｅＯＨ）が、次に、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（（Ｓ）−３−（トリフルオロメチル）ピペリジン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（４４．８ｍｇ、０．０８９９ｍｍｏｌ、収率３７％）［α］Ｄ２５＝＋１８．５（ｃ、０．１１、ＭｅＯＨ）が溶出した。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２５Ｈ２５Ｆ３Ｎ６Ｏ２の理論値：４９８．２；測定値：４９９．３［Ｍ＋Ｈ］。
【0401】
実施例５４． （５Ｓ）−Ｎ−（５−フルオロピリジン−３−イル）−８−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−４，５−ジヒドロ−２，５−メタノピリド［２，３−ｇ］［１，２，６］チアジアゾシン−６（３Ｈ）−カルボキサミド１，１−ジオキシドの製造：工程１． （１−（（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）スルホニル）ピロリジン−３−イル）カルバミン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルの合成：
【化123】
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ジクロロメタン（１０ｍＬ）中、２，６−ジクロロピリジン−３−スルホニルクロリド(Org. Process Res. Dev. 2009, 13, 875-879)（３．４０ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ピロリジン−３−イルカルバミン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（２．８２ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）、次いで、トリエチルアミン（３．００ｍＬ、２１．５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で３０分間撹拌した後、飽和重炭酸ナトリウムに注ぎ、ジクロロメタンで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を真空下で除去し、（１−（（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）スルホニル）ピロリジン−３−イル）カルバミン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（５．４７ｇ、１３．８ｍｍｏｌ、収率１００％）を得た。
【0402】
工程２． （５Ｓ）−８−クロロ−３，４，５，６−テトラヒドロ−２，５−メタノピリド［２，３−ｇ］［１，２，６］チアジアゾシン１，１−ジオキシドの合成：【化124】
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ジクロロメタン（３０ｍＬ）中、（１−（（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）スルホニル）ピロリジン−３−イル）カルバミン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（５．４７ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を加えた。この反応物を室温で一晩撹拌し、総ての溶媒を真空下で除去した。残った残渣をＤＭＦ（３０ｍＬ）に溶かし、炭酸ナトリウム（１０．０ｇ、９４．３ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を９０℃で２時間撹拌した。この反応物を室温まで冷却し、氷水に注ぎ、得られた溶液を濾過し、固体を水で洗浄した。集めた固体を乾燥させ、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、（５Ｓ）−８−クロロ−３，４，５，６−テトラヒドロ−２，５−メタノピリド［２，３−ｇ］［１，２，６］チアジアゾシン１，１−ジオキシド（１．８０ｇ、６．９３ｍｍｏｌ、収率５０％）を得た。
【0403】
工程３． （５Ｓ）−８−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−２，５−メタノピリド［２，３−ｇ］［１，２，６］チアジアゾシン１，１−ジオキシドの合成：【化125】
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１０：１ジオキサン：水（４５ｍＬ）中、（５Ｓ）−８−クロロ−３，４，５，６−テトラヒドロ−２，５−メタノピリド［２，３−ｇ］［１，２，６］チアジアゾシン１，１−ジオキシド（８００ｍｇ、３．０８ｍｍｏｌ）、３−トリフルオロメチルベンゼンボロン酸（１．１７ｇ、６．１６ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（３．００ｇ、９．２１ｍｍｏｌ）および［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（３７０ｍｇ、０．４５３ｍｍｏｌ）の混合物を１１０℃で一晩撹拌した。冷却後、溶媒を真空下で除去し、残渣をジクロロメタンと水で分液した。有機層を分離し、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を真空下で除去した。残った残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、（５Ｓ）−８−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−２，５−メタノピリド［２，３−ｇ］［１，２，６］チアジアゾシン１，１−ジオキシド（１．００ｇ、２．７１ｍｍｏｌ、収率８８％）を得た。
【0404】
工程４． （５Ｓ）−８−（（Ｓ）−３−フルオロピロリジン−１−イル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−２，５−メタノピリド［２，３−ｇ］［１，２，６］チアジアゾシン１，１−ジオキシドの合成：【化126】
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ＤＭＦ（１０ｍＬ）中、（５Ｓ）−８−クロロ−３，４，５，６−テトラヒドロ−２，５−メタノピリド［２，３−ｇ］［１，２，６］チアジアゾシン１，１−ジオキシド（８００ｍｇ、３．０８ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（１．６０ｇ、１５．１ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−３−フルオロピロリジン塩酸塩（１．１０ｇ、８．７６ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を９０℃で６時間撹拌した後、砕いた氷に注ぎ、撹拌し、濾過した。集めた固体を水で洗浄し、乾燥させ、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、（５Ｓ）−８−（（Ｓ）−３−フルオロピロリジン−１−イル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−２，５−メタノピリド［２，３−ｇ］［１，２，６］チアジアゾシン１，１−ジオキシド（６８０ｍｇ、２．１８ｍｍｏｌ、収率７１％）を得た。
【0405】
工程５． （５Ｓ）−Ｎ−（５−フルオロピリジン−３−イル）−８−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−４，５−ジヒドロ−２，５−メタノピリド［２，３−ｇ］［１，２，６］チアジアゾシン−６（３Ｈ）−カルボキサミド１，１−ジオキシドの合成：【化127】
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（５Ｓ）−８−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−２，５−メタノピリド［２，３−ｇ］［１，２，６］チアジアゾシン１，１−ジオキシド（７０．０ｍｇ、０．１９０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）に溶かし、水素化ナトリウム（５４ｍｇ、油中６０％、１．３５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で２時間撹拌し、（５−フルオロピリジン−３−イル）カルバミン酸フェニル（１７６ｍｇ、０．７６８ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で１時間撹拌し、水に注ぎ、ジクロロメタンで抽出した。有機層を真空濃縮し、残った残渣を分取薄層クロマトグラフィーにより精製し、（５Ｓ）−Ｎ−（５−フルオロピリジン−３−イル）−８−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−４，５−ジヒドロ−２，５−メタノピリド［２，３−ｇ］［１，２，６］チアジアゾシン−６（３Ｈ）−カルボキサミド１，１−ジオキシド（２４．０ｍｇ、０．０４７３ｍｍｏｌ、収率２５％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２２Ｈ１７Ｆ４Ｎ５Ｏ３Ｓの理論値：５０７．１；測定値：５０８．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【0406】
以下の化合物を類似の方法で製造した：（５Ｓ）−Ｎ−（５−フルオロピリジン−３−イル）−８−（（Ｓ）−３−フルオロピロリジン−１−イル）−４，５−ジヒドロ−２，５−メタノピリド［２，３−ｇ］［１，２，６］チアジアゾシン−６（３Ｈ）−カルボキサミド１，１−ジオキシド。
【0407】
実施例５５． （４Ｓ）−Ｎ−（３−（４−（（６−アミノヘキサンアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化128】
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トリフルオロ酢酸（３．０ｍＬ）中、（（１−（３−（（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５−カルボキサミド）フェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１９０ｍｇ、０．３０６ｍｍｏｌ）の溶液を室温で１時間撹拌した後、余分なトリフルオロ酢酸を真空で除去した。残った残渣をＤＭＦ（５．０ｍＬ）およびトリエチルアミン（１．０ｍＬ）に溶かし、２， ６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸５−ジオキソピロリジン−１−イル（２５０ｍｇ、０．７６１ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を８０℃で３０分間撹拌した後、６５℃に冷却し、４Ｎ ＨＣｌ（４ｍＬ）を加えた。この反応物を６５℃で２時間撹拌した後、濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣにより精製した。単離された材料をアセトニトリル／１Ｎ ＨＣｌから凍結乾燥させ、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（４−（（６−アミノヘキサンアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド塩酸塩（２０８ｍｇ、０．３１０ｍｍｏｌ、収率１００％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ３２Ｈ３４Ｆ３Ｎ９Ｏ２の理論値：６３３．３；測定値：６３４．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【0408】
実施例５６． （４Ｓ）−Ｎ−（３−（４−（（６−（５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド）ヘキサンアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化129】
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アセトニトリル（１．３ｍＬ）およびトリエチルアミン（０．１３ｍＬ、０．９３３ｍｍｏｌ）中、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（４−（アミノメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（４４．２ｍｇ、０．０８５０ｍｍｏｌ）の溶液に、ビオチンアミドヘキサン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（４０．９ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を６５℃で２時間撹拌した後、ＤＭＦ（１ｍＬ）を加え、得られた反応混合物を濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣにより精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（４−（（６−（５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド）ヘキサンアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（４３．６ｍｇ、０．０４４８ｍｍｏｌ、収率５３％）を得た。
【0409】
実施例５７． （４Ｓ）−Ｎ−（３−（４−（（３−（３’，６’−ジヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−スピロ［イソベンゾフラン−１，９’−キサンテン］−５−イル）チオウレイド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化130】
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アセトニトリル（１．３ｍＬ）およびトリエチルアミン（０．１３ｍＬ、０．９３３ｍｍｏｌ）中、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（４−（アミノメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（４４．２ｍｇ、０．０８５０ｍｍｏｌ）の溶液に、フルオレセインイソチオシアネート異性体Ｉ（３５．０ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を６５℃で２時間撹拌した後、ＤＭＦ（１ｍＬ）を加え、得られた反応混合物を濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣにより精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（４−（（３−（３’，６’−ジヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−スピロ［イソベンゾフラン−１，９’−キサンテン］−５−イル）チオウレイド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（５１．０ｍｇ、０．０４９８ｍｍｏｌ、収率５８％）を得た。
【0410】
実施例５８． （４Ｓ）−Ｎ−（３−（４−（（３−（（Ｚ）−２−（（１−（ジフルオロボリル）−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチレン）−２Ｈ−ピロール−５−イル）プロパンアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化131】
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アセトニトリル（０．３５ｍＬ）およびトリエチルアミン（０．０３５ｍＬ、０．２５１ｍｍｏｌ）中、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（４−（アミノメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（１２．２ｍｇ、０．０２３４ｍｍｏｌ）の溶液に、４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオン酸、スクシンイミジルエステル（１０ｍｇ、０．０２５７ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を６０℃で３０分間撹拌した後、この反応混合物を分取ＨＰＬＣにより精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（４−（（３−（（Ｚ）−２−（（１−（ジフルオロボリル）−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチレン）−２Ｈ−ピロール−５−イル）プロパンアミド）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（５．８ｍｇ、０．００６４ｍｍｏｌ、収率２７％）を得た。
【0411】
実施例５９． （９Ｓ）−Ｎ−（４−（アセトアミドメチル）フェニル）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化132】
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ピリジン（３．０ｍＬ）中、（９Ｓ）−Ｎ−（４−（アミノメチル）フェニル）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミド塩酸塩（１０８ｍｇ、０．２１４ｍｍｏｌ）の溶液に、無水酢酸（２８．０μＬ、０．３００ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で４時間撹拌し、この反応混合物を分取ＨＰＬＣにより精製し、（９Ｓ）−Ｎ−（４−（アセトアミドメチル）フェニル）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミドトリフルオロアセテート（１１１ｍｇ、０．１７８ｍｍｏｌ、収率８３％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２７Ｈ２６Ｆ３Ｎ５Ｏ２の理論値：５０９．２；測定値：５１０．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【0412】
実施例６０． （４Ｓ）−Ｎ−（３−（ピロリジン−３−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：工程１： ３−（３−（（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５−カルボキサミド）フェニル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成：
【化133】
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（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（Ａ７、０．１５０ｇ、０．４９０ｍｍｏｌ）を５ｍｌの塩化メチレンに溶かし、ＤＩＥＡ（１９３μｌ、１．０８ｍｍｏｌ）で処理した。この混合物を室温で３０分間撹拌した。次に、３−（３−アミノフェニル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．１４１ｇ、０．５３９ｍｍｏｌ）を加え、この溶液を室温で一晩撹拌した。この反応物を５ｍｌの塩化メチレンで希釈し、１０ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄した。有機層を集め、濃縮乾固した。ペンタン中５−１００％酢酸エチルを用いるシリカカラムクロマトグラフィーにより精製し、３−（３−（（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５−カルボキサミド）フェニル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．０７７ｇ、２６％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ３２Ｈ３４Ｆ３Ｎ５Ｏ３の理論値：５９３．３、測定値：５９４［Ｍ＋Ｈ］。
【0413】
工程２： （４Ｓ）−Ｎ−（３−（ピロリジン−３−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化134】
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３−（３−（（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５−カルボキサミド）フェニル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｓ）ｔｅｒｔ−ブチル：（０．０７７ｇ、０．１３０ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン中４ＮのＨＣｌ ５ｍＬに溶かし、窒素下、室温で３時間撹拌した。次に、総ての溶媒を減圧下で除去し、得られた固体を真空下で一晩乾燥させ、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（ピロリジン−３−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（０．０７８ｇ、１００％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２７Ｈ２６Ｆ３Ｎ５Ｏの理論値：４９３．２１；測定値：４９４［Ｍ＋Ｈ］。
【0414】
実施例６１． （４Ｓ）−Ｎ−（３−（１−（２−アミノ−２−オキソエチル）ピロリジン−３−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化135】
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（４Ｓ）−Ｎ−（３−（ピロリジン−３−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（Ｂ５７９、０．０２９ｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）を２ｍｌの塩化メチレンに溶かした後、ＤＩＥＡ（３１μｌ、０．１７４ｍｍｏｌ）で処理した。クロロアセトアミド（０．００６ｇ、０．０６４ｍｍｏｌ）を加え、この反応物を一晩６０℃に加熱した。次に、この反応物を室温まで冷却し、５ｍｌの塩化メチレンで希釈し、１０ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄した。有機層を濃縮乾固し、０．１％トリフルオロ酢酸(trifluroracetic acid)を含有する水中５−９５％アセトニトリル(acetonitrle)の勾配を用いるＣ１８での逆相クロマトグラフィーにより精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（１−（２−アミノ−２−オキソエチル）ピロリジン−３−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（０．００８ｇ、２３％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２９Ｈ２９Ｆ３Ｎ６Ｏ２の理論値：５５０．２；測定値：５５１［Ｍ＋Ｈ］。
【0415】
実施例６２： （４Ｓ）−Ｎ−（３−（１−（２−アミノ−２−オキソエチル）ピロリジン−３−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化136】
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（４Ｓ）−Ｎ−（３−（ピロリジン−３−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（Ｂ５７９、０．０２０ｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）を１．５ｍｌの塩化メチレンに溶かした後、ＤＩＥＡ（１３μｌ、０．０７６ｍｍｏｌ）で処理した。次に、塩化アセチル（０．００５ｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）を加え、この反応物を室温で一晩撹拌した。その後、この反応物を５ｍｌの塩化メチレンで希釈し、１０ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄した。有機層を濃縮乾固し、Ｃ１８での逆相クロマトグラフィーにより精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（１−（２−アミノ−２−オキソエチル）ピロリジン−３−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（０．０２３ｇ、８８％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２９Ｈ２８Ｆ３Ｎ５Ｏ２の理論値：５３５．２；測定値：５３６［Ｍ＋Ｈ］。
【0416】
この一般的アシル化手順を用い、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（１−プロピオニルピロリジン−３−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドおよび（４Ｓ）−Ｎ−（３−（１−（シクロプロパンカルボニル）ピロリジン−３−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造した。
【0417】
実施例６３． （（５−（３−（（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５−カルボキサミド）フェニル）オキサゾール−２−イル）メチル）カルバミン酸ベンジルの製造：【化137】
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４ｍＬの塩化メチレン中、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（０．２７６ｇ、０．９０２ｍｍｏｌ）を、ＤＩＥＡ（４００μＬ、２．２６１ｍｍｏｌ）およびトリホスゲン（０．２００ｇ、０．６７６ｍｍｏｌ）と合わせた。次に、この混合物を６５℃に加熱し、この時点で、４ｍＬの塩化メチレン中、（（５−（３−アミノフェニル）オキサゾール−２−イル）メチル）カルバミン酸ベンジル（０．３２１ｇ、０．９９２ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した。次に、この混合物を６５℃で５時間加熱した。その後、この反応物を室温まで冷却した後、１０ｍＬの塩化メチレンを加え、次いで、５０ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム(sodium hydrogen carnonate)溶液で洗浄した。有機層を集め、減圧下で濃縮乾固した。次に、残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、（（５−（３−（（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５−カルボキサミド）フェニル）オキサゾール−２−イル）メチル）カルバミン酸ベンジル（０．０８２ｇ、１４％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ３５Ｈ２９Ｆ３Ｎ６Ｏ４の理論値：６５４．２２；測定値：６５５［Ｍ＋Ｈ］。
【0418】
実施例６４． （４Ｓ）−Ｎ−（３−（２−（アミノメチル）オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造(prepration)：【化138】
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（（５−（３−（（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５−カルボキサミド）フェニル）オキサゾール−２−イル）メチル）カルバミン酸ベンジル（０．０４０ｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの酢酸エチルに溶かし、真空下で３回脱気した。次に、およそ(approximately)５ｍｇのパラジウム（炭素上１０％、脱気タイプ）を加え、反応容器を窒素でパージした後、水素バルーンを取り付けた。その後、撹拌を開始し、この混合物を水素下で２時間撹拌した。次に、この反応容器を排気し、窒素でパージした。固体を取り出し、溶媒を減圧下で除去し、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（２−（アミノメチル）オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（０．０３２ｇ、１００％）を得、これを精製せずに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２７Ｈ２３Ｆ３Ｎ６Ｏ２の理論値：５２０．５１；測定値：５２１［Ｍ＋Ｈ］。
【0419】
実施例６５． （４Ｓ）−Ｎ−（５−フェニル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造工程１． ７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボン酸（４Ｓ）−フェニルの合成：
【化139】
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ＤＣＭ（１５ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（１．５ｇ、４．９２ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．７４ｍＬ、９．８４ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で、クロロギ酸フェニル（１．１ｍＬ、８．８５ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた混合物をこの温度で２時間撹拌した後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して粗カルバミン酸フェニル（１．８ｇ）を褐色油状物として得、これをそれ以上精製せずに次の工程で使用した。
【0420】
【化140】
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工程２． （４Ｓ）−Ｎ−（５−フェニル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）中、アミン５−フェニル−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン（３０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＨ（１８ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を０℃で少量ずつ加え、この反応混合物を室温で３０分間撹拌した後、７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボン酸（４Ｓ）−フェニル（１５７ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を一晩撹拌した。得られた混合物をＭｅＯＨ（２ｍＬ）で急冷し、エバポレーターにより真空濃縮した。残渣をｐｒｅｐ−ＴＬＣにより精製し、２−（３−（（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチル）フェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（５０ｍｇ、収率５４．９％）を白色固体として得た。
【0421】
７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボン酸（４Ｓ）−フェニルを用いるこの一般的手順を用い、５−フェニル−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミンの代わりに適当なアリール−アミンを使用することにより、様々なカルボキサミドを製造することができた。
【0422】
実施例６６． （４Ｓ）−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボチオアミドの製造工程１． ５−（３−イソチオシアナトフェニル）オキサゾールの合成：
【化141】
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乾燥ＴＨＦ（６ｍＬ）中、３−（オキサゾール−５−イル）アニリン（１６０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（０．４ｍＬ、３．０ ｍｍｏｌ）の溶液に、乾燥ＴＨＦ（１．５ｍＬ）中、チオホスゲン（０．１５２ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン雰囲気下、０℃で、１０分かけて滴下した。この反応混合物を周囲温度で３０分間撹拌したところ、ＴＬＣは３−（オキサゾール−５−イル）アニリンが完全に消費されたことを示した。溶媒を減圧下でエバポレーターにより除去し、残渣を水（１０ｍＬ）および酢酸エチル（２５ｍＬ）で希釈し、有機層を分離した。水相を酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次いで、水およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して５−（３−イソチオシアナトフェニル）オキサゾールを得、これを、それ以上精製を行わずに次の反応に使用した。
【0423】
工程２． （４Ｓ）−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボチオアミドの合成：【化142】
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（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（２４４ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（５ｍＬ）に溶かし、ＮａＨ（１２８ｍｇ、６０％、３．２ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下、０℃で少量ずつ加えた。この混合物を室温まで温め、１時間撹拌した。ＤＭＦ（３ｍＬ）中、上記で作製５−（３−イソチオシアナトフェニル）オキサゾールの溶液を滴下し、この反応混合物を周囲温度で一晩撹拌した。次に、得られた混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で急冷し、酢酸エチル（３×１５ｍＬ）で抽出し、水およびブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗物質を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、標題化合物（４Ｓ）−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボチオアミド（１８６．１ｍｇ、収率４６％）を得た。
【0424】
実施例６７． （４Ｓ）−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノベンゾ［ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：工程１． ２−（（５−ブロモ−２−ニトロフェニル）アミノ）コハク酸（Ｓ）−ジメチルの合成：
【化143】
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ＤＭＳＯ（１２７ｍＬ）中、４−ブロモ−２−フルオロ−１−ニトロベンゼン（１５．０ｇ、６８ｍｍｏｌ）、２−アミノコハク酸（Ｓ）−ジメチル塩酸塩（１５ｇ、７５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３６ｍＬ）の混合物を１００℃で２時間撹拌した。冷却した後、水（２００ｍＬ）を加え、この混合物を酢酸エチル（３×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝４／１）により精製し、２−（（５−ブロモ−２−ニトロフェニル）アミノ）コハク酸（Ｓ）−ジメチル（１２．４ｇ、収率５１％）を得た。
【0425】
工程２． ２−（７−ブロモ−３−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノキサリン−２−イル）酢酸（Ｓ）−メチル（Ｓｕｎｄｉａ Ｅ６５５−５２３−２３）の合成：【化144】
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ｉ−ＰｒＯＨ（２５０ｍＬ）および水（５０ｍＬ）中、２−（（５−ブロモ−２−ニトロフェニル）アミノ）コハク酸（Ｓ）−ジメチル（１２．４ｇ、３４．４ｍｍｏｌ）、Ｆｅ（２２ｇ、３９２ｍｍｏｌ）およびＡｃＯＨ（１．２ｍＬ）の混合物を還流下で２時間撹拌した。冷却後、固体を濾過し、濾液を濃縮した。残渣をＤＣＭ（３００ｍＬ）および水（３００ｍＬ）で希釈し、有機層を分離し、水相をＤＣＭ（３×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝４／１）により精製し、２−（７−ブロモ−３−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノキサリン−２−イル）酢酸（Ｓ）−メチル（８．８ｇ、収率８６％）を得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 10.43 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 6.75-6.73 (m, 1H), 6.66-6.63 (m, 1H), 6.32 (s, 1H), 4.19-4.16 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 2.78-2.72 (m, 1H), 2.68-2.61 (m, 1H)。
【0426】
工程３． （Ｓ）−２−（７−ブロモ−１，２，３，４−テトラヒドロキノキサリン−２−イル）エタノールの合成：【化145】
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ＴＨＦ（３０ｍＬ）中、２−（７−ブロモ−３−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノキサリン−２−イル）酢酸（Ｓ）−メチル（４．４ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で、１５分かけて、ＢＨ３Ｍｅ２Ｓ（１０Ｍ、１０ｍＬ）を滴下した。この反応物を一晩加熱還流した。冷却した後、この混合物を６Ｎ ＨＣｌ（１０ｍＬ）で急冷し、得られた混合物を５０℃で２時間撹拌した。次に、この混合物を、２Ｎ ＮａＯＨを用いて塩基性化してｐＨ約８とした。この混合物をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を水およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により精製し、（Ｓ）−２−（７−ブロモ−１，２，３，４−テトラヒドロキノキサリン−２−イル）エタノール（２．４ｇ、収率６３％）を得た。
【0427】
工程４． （４Ｓ）−７−ブロモ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノベンゾ［ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成：【化146】
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室温にて、ＤＣＭ（１００ｍＬ）中、ＰＰｈ３（３．０ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＤＱ（２．７ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）を加えた。（Ｓ）−２−（７−ブロモ−１，２，３，４−テトラヒドロキノキサリン−２−イル）エタノール（２．０ｇ、７．８ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝４０／１）により精製し、（４Ｓ）−７−ブロモ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノベンゾ［ｂ］［１，４］ジアゼピン（１．５ｇ、収率８１％）を得た。
【0428】
工程５． （４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノベンゾ［ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成：【化147】
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ジオキサン（６０ｍＬ）および水（６ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−ブロモ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノベンゾ［ｂ］［１，４］ジアゼピン（６００ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）、（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ボロン酸（９５０ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（２．４ｇ、７．５ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ２雰囲気下、室温でＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２０４ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を１１０℃で一晩撹拌した。冷却した後、固体を濾過し、濾液を濃縮した。残渣をＤＣＭ（３０ｍＬ）および水（３０ｍＬ）で希釈し、有機層を分離し、水相をＤＣＭ（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により精製し、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノベンゾ［ｂ］［１，４］ジアゼピン（７００ｍｇ、収率９５％）を得た。
【0429】
工程６． （４Ｓ）−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノベンゾ［ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化148】
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ＴＨＦ（５ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノベンゾ［ｂ］［１，４］ジアゼピン（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．１ｍＬ）およびトリホスゲン（４０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の混合物を６０℃で２時間撹拌した。３−（オキサゾール−５−イル）アニリン（３８ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を６０℃で一晩撹拌した。冷却した後、得られた混合物を濃縮し、残渣をｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノベンゾ［ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（２６．１ｍｇ、収率３３％）を得た。
【0430】
実施例６８． （４Ｓ）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノベンゾ［ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化149】
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ＣＨ３ＣＮ（２．５ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノベンゾ［ｂ］［１，４］ジアゼピン（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（５２ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）およびピリジン−２−イルカルバミン酸フェニル（８９ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）の混合物を一晩還流そた。冷却した後、溶媒を除去した。残渣をｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノベンゾ［ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（２４．４ｍｇ、収率３５％）を得た。
【0431】
実施例６９． （４Ｓ）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）シクロヘキシル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：工程１． （４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）シクロヘキシル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成：
【化150】
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この部分は、上記の一般的な根岸カップリング手順を用いて製造し、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）シクロヘキシル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンをジアステレオマーの１１：１混合物として得た（４８２ｍｇ、３６％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１６Ｈ２０Ｆ３Ｎ３の理論値：３１１．１６；測定値：３１２［Ｍ＋Ｈ］。
【0432】
工程２． （４Ｓ）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）シクロヘキシル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化151】
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これらの化合物は、上記のトリホスゲン尿素カップリング手順を用いて製造し、（４Ｓ）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）シクロヘキシル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドをジアステレオマーの９：１混合物として得た（３８ｍｇ、６２％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２２Ｈ２４Ｆ３Ｎ５Ｏの理論値：４３１．１９；測定値：４３２［Ｍ＋Ｈ］。
【0433】
実施例７０． （４Ｓ）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）シクロヘキシル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化152】
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このジアステレオマー混合物は、以下のプロトコールを用いて製造した。カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ、２１ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１．５ｍＬ）中でスラリーとした後、４−アミノピリミジン（１３ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を加えた。総てを溶液とするために、ジオキサンを加えた（０．５ｍＬ）。この混合物を窒素雰囲気下、室温で１時間撹拌した。ＤＣＭ（１ｍＬ）中、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）シクロヘキシル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（４１ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を加え、この反応物を一晩撹拌した後、さらなるＣＤＩを加え（２１ｍｇ）、この反応物を４時間加熱還流した。この反応物をＬＣＭＳによりモニタリングしたところ、中間体（４−アミノピリミジンの付加前）が主要反応成分であった。この反応物をを室温まで冷却し、濃縮した後、さらなる４−アミノピリミジン（２５ｍｇ）を１ｍＬのＤＭＳＯ（より良い溶解度のため）中で加えた。この反応物を一晩６０℃に温めた後、次の晩は１００℃の密閉試験管中で温めた。さらなる４−アミノピリミジン（２５ｍｇ）を加え、この反応物を密閉し、マイクロ波中で１時間１２０℃に加熱した。ＤＣＭ（１０ｍＬ）、次いで、１Ｎ ＨＣｌ（３ｍＬ）を加えた。これをＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０−１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製した後、再びｐｒｅｐ ＨＰＬＣにより精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（ピリミジン−４−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）シクロヘキシル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（４ｍｇ、７％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２１Ｈ２３Ｆ３Ｎ６Ｏの理論値：４３２．１９；測定値：４３３［Ｍ＋Ｈ］。
【0434】
実施例７１． （４Ｓ）−Ｎ−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）シクロヘキシル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：【化153】
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このジアステレオマー混合物は、以下のプロトコールを用いて製造した。
【0435】
カルバメート形成の一般的手順：ＤＣＭ（１６ｍＬ）中、４，５−ジメチルチアゾール−２−アミン（１．６３ｇ、１２．７ｍｍｏｌ、１．０当量）およびピリジン（３．０１ｇ、３８．２ｍｍｏｌ、３．０当量）の冷却溶液に、１．５時間かけてクロロギ酸フェニル（２．０９ｇ、１３．３ｍｍｏｌ、１．０５当量）を滴下した。この反応物を、冷却を続けながら、２時間撹拌した。水（１５ｍＬ）を３０分かけてゆっくり加えた後、この混合物をＤＣＭで希釈した。層を分離し、有機層を飽和炭酸ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）、次いで、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。次に、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させた後、減圧下で濃縮した。残渣をＥＡ／ＰＥ（１：５）に３０分間懸濁させた後、濾過し、（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）カルバミン酸フェニル（１．７ｇ、５４％）を得た。
【0436】
カルバメートを介した尿素カップリングの一般的手順：アセトニトリル（４ｍＬ）中、（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）カルバミン酸フェニル（８０ｍｇ、０．３２２ｍｍｏｌ、２．０当量）、（４Ｓ）−７−（３−（トリフルオロメチル）シクロヘキシル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（７５ｍｇ、０．１６１ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＤＭＡＰ（２４ｍｇ、０．１９３ｍｍｏｌ、１．２当量）の混合物を６０℃で一晩撹拌した。ＴＬＣおよびＬＣ／ＭＳを用いて反応の進行をモニタリングした。この混合物をｐｒｅｐ ＨＰＬＣにより精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）シクロヘキシル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（１４．５ｍｇ、１２％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２２Ｈ２６Ｆ３Ｎ５ＯＳの理論値：４６５．１８；測定値：４６６［Ｍ＋Ｈ］。
【0437】
実施例７２． Ｎ−（ピリダジン−３−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（化合物ｘｘ）の製造：工程１： ３−アミノペント−２−エン二酸ジエチル
【化154】
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２５０ｍＬ３頚フラスコに６．００ｇ（２９．７ｍｍｏｌ）の１，３−アセトンジカルボン酸ジエチルエステル、４．７０ｇ（５９．４ｍｍｏｌ）の重炭酸アンモニウム、および８０ｍＬのエタノールを装填した。この反応物を周囲温度で２４時間撹拌した後、それを真空濃縮した。残渣を１００ｍＬの水に取り、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１×２００ｍＬ）で逆抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、５ｇ（８７％）の生成物を無色の油状物として得た。これをそれ以上精製せずに次の反応で使用した。
【0438】
工程２： ３−アミノペンタン二酸ジエチル【化155】
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２５０ｍＬ３頚フラスコに５．００ｇ（２４．８ｍｍｏｌ）の３−アミノペント−２−エン二酸ジエチル、４０ｍＬのエタノール、１０ｍＬの氷酢酸、および３．１ｇ（４９．６ｍｍｏｌ）のＮａＢＨ３ＣＮを装填した。この反応物を周囲温度で２時間撹拌した後、溶媒を真空で除去した。残渣を水に取り、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた酢酸エチル層をブライン（１×２００ｍＬ）で逆抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、４ｇ（８０％）の生成物を無色の油状物として得た。これをそれ以上精製せずに次の反応で使用した。
【0439】
工程３： ３−（（６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）ペンタン二酸ジエチル【化156】
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２５０ｍＬ３頚フラスコに１．８ｇ（９．８ｍｍｏｌ）の２，６−ジクロロ−３−ニトロピリジン、４．０ｇ（１９．７ｍｍｏｌ）の粗３−アミノペンタン二酸ジエチル、３．２ｇ（３９．０ｍｍｏｌ）のＮａＨＣＯ３、および６０ｍＬのテトラヒドロフランを装填した。この反応物を４０℃で２４時間撹拌した後、溶媒を真空下で除去した。残渣を１００ｍＬの水に溶かした後、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（１×２００ｍＬ）で逆抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣を、２０／１（ｖ／ｖ）ヘキサン／酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、２．７ｇ（８０％）の生成物を淡黄色固体として得た。
【0440】
工程４： ３−（（３−アミノ−６−クロロピリジン−２−イル）アミノ）ペンタン二酸ジエチル【化157】
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温度計および磁気撹拌子を備えた２５０ｍＬ３頚フラスコに、２．７ｇ（７．５ｍｍｏｌ）の３−（（６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）ペンタン二酸ジエチル、２．１ｇ（３７．５ｍｍｏｌ）の鉄粉、６０ｍＬの２−プロパノール、２０ｍＬの水、および６７５ｍｇ（１１．０ｍｍｏｌ）の酢酸を装填した。この混合物を、ＨＰＬＣにより出発ニトロ化合物の消失に関してモニタリングしながら、１００℃で１時間撹拌した。反応が完了した後、固体を濾過し、２−プロパノール（３×５０ｍＬ）で洗浄した後、合わせた濾液および洗液を真空濃縮した。残渣を１００ｍＬの水に溶かし、ジクロロメタン（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１×５０ｍＬ）で逆抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固した。粗生成物を、４／１（ｖ／ｖ）ヘキサン／酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、１．８ｇ（７５％）の生成物を灰色固体として得た。
【0441】
工程５： ２−（７−クロロ−２−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−４−イル）酢酸エチル【化158】
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温度計および還流冷却器を備えた１００ｍＬ３頚フラスコを１．８ｇ（５．４ｍｍｏｌ）の３−（（３−アミノ−６−クロロピリジン−２−イル）アミノ）ペンタン二酸ジエチル、２０ｍＬのトルエン、および１．０ｍＬ（１３．４ｍｍｏｌ）のトリフルオロ酢酸を装填した。この混合物を還流下で５時間撹拌し、反応をＨＰＬＣにより出発材料の消失に関してモニタリングした。反応が完了した後、溶媒を真空下で除去し、その後、残渣を、３／１（ｖ／ｖ）ヘキサン／酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、１．１ｇ（７０％）の生成物を灰白色固体として得た。
【0442】
工程６： ２−（７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−４−イル）エタノール【化159】
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窒素流入口、還流冷却器、および温度計を備えた５０ｍＬ３頚フラスコに、１．０ｇ（３．５ｍｍｏｌ）の２−（７−クロロ−２−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−４−イル）酢酸エチル、５３０ｍｇ（１４．０ｍｍｏｌ）のＬｉＡｌＨ４、および１０ｍＬのテトラヒドロフランを装填した。この反応物をＮ２下、６０℃で、ＨＰＬＣにより生成物の出現に関してモニタリングしながら６時間撹拌した。エステルは急速に還元されたが、ラクタムは完全な還元により長時間を要した。反応が完了したところで、この混合物を氷浴で冷却し、内部温度を５℃より低く維持しながら、５３０μＬの水を加え、この混合物を１５分間撹拌した。次に、５３０μＬの１５％（ｗ／ｗ）ＮａＯＨ（水溶液）を、内部温度を５℃より低く維持しながら加え、その後、この混合物を１５分間撹拌した。後処理を行うため、１５９０μＬの水を加え、その後、この混合物を周囲温度で３０分間撹拌した。固体を濾過した後、沈澱をテトラヒドロフラン（３×５０ｍＬ）で洗浄した。濾液を真空濃縮した後、残渣を、２／１ヘキサン／酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、５２０ｍｇ（６５％）の生成物を淡黄色固体として得た。
【0443】
工程７： ７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン【化160】
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５０ｍＬ３頚フラスコに、５００ｍｇ（２．２ｍｍｏｌ）の２−（７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−４−イル）エタノール、および１０ｍＬの４０％（ｗ／ｗ）ＨＢｒ（水溶液）を装填した。この混合物を還流下で１８時間撹拌した後、それを周囲温度まで冷却し、飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）で中和した。この水性混合物を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した後、合わせた有機層をブライン（１×５０ｍＬ）で逆抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、空濃縮した。残渣を、３／１ヘキサン／酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、３２０ｍｇ（７０％）の生成物を灰白色固体として得た。
【0444】
工程８．７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成：【化161】
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ジオキサン／水混合物（１０ｍＬ／１ｍＬ）を脱気し、７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（２５０ｍｇ、１．１９６ｍｍｏｌ）、次いで、３−（トリフルオロメチル）フェニルボロン酸（４５４ｍｇ、２．３９２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（９７ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（１．１６ｇ、３．５８８ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を１１０℃で１２時間撹拌した後、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝４／１）により精製し、７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（２００ｍｇ、４８％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１７Ｈ１６Ｆ３Ｎ３の理論値：３１９．１３。
【0445】
工程９． Ｎ−（ピリダジン−３−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化162】
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以下の一般的尿素カップリング手順を用いた：アセトニトリル（５ｍＬ）中、ピリダジン−３−アミンのカルバミン酸塩（５３．９ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ、２．０当量）、７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（４０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、１．０当量）、およびＤＭＡＰ（１８．４ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、１．２当量）を６０℃で一晩撹拌した。反応の進行をＴＬＣおよびＬＣ／ＭＳによりモニタリングした。この反応混合物をそのまま、溶出剤として１００％ＥｔＯＡｃを用いるｐｒｅｐ．ＴＬＣ上にロードし、Ｎ−（ピリダジン−３−イル）−７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを白色固体として得た（１６．９ｍｇ、３０．６％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２２Ｈ１９Ｆ３Ｎ６Ｏの理論値：４４０．１６；測定値：４４０．９［Ｍ＋Ｈ］。
【0446】
この一般的尿素カップリング手順を用い、ピリダジン−３−アミンを適当なアミン部分に置き換えることにより、様々な７−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−、７−（３−クロロフェニル）−、７−（５−クロロピリジン−３−イル）−、および７−（５−フルオロピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドを製造することができた。
【0447】
実施例７３． ７−（３−クロロフェニル）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：工程１． ｔｅｒｔ−ブチル ７−クロロ−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキシレートの合成：
【化163】
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この部分は以下のプロトコールを用いて製造した。ＴＨＦ（５ｍＬ）中、７−クロロ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（３．０ｇ、１４．３１ｍｍｏｌ）、（Ｂｏｃ）２Ｏ（４．６ｇ、２１．０５ｍｍｏｌ、１．５当量）、およびＤＭＡＰ（３．４９ｇ、２８．６２ｍｍｏｌ、２．０当量）の混合物を６０℃で２時間撹拌した。ＴＬＣおよびＬＣ／ＭＳを用いて反応の進行をモニタリングした。水（３０ｍＬ）を加え、この混合物をＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出した。有機層を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製し、７−クロロ−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル白色固体として得た（４．５ｇ、９２％）。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ２０ＣｌＮ３Ｏ２の理論値：３０９．１２。
【0448】
工程２． ｔｅｒｔ−ブチル ７−（３−クロロフェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキシレートの合成：(Sundia Prop. 455)【化164】
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この部分は以下のプロトコールを用いて製造した。ジオキサン／水（２０ｍＬ／１ｍＬ）の脱気混合物に、７−クロロ−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．５ｇ、４．８５ｍｍｏｌ）、（３−クロロフェニル）ボロン酸（１．５１ｇ、９．７０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．３９６ｇ、０．４８５ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（４．７４ｇ、１４．５６ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を１１０℃で１２時間撹拌した後、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝２／１）により精製し、７−（３−クロロフェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．２ｇ、８９％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２１Ｈ２４ＣｌＮ３Ｏ２の理論値：３８５．１６。
【0449】
この一般的カップリング手順を用い、（３−クロロフェニル）ボロン酸を適当なボロン酸またはボロン酸エステル部分に置き換えることにより、様々な７−（３−置換(substituted)フェニルまたはピリジル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンを製造することができた。
【0450】
工程３． ７−（３−クロロフェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成：(Sundia Prop. 455)【化165】
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この部分を以下のプロトコールを用いて製造した。７−（３−クロロフェニル）−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．２ｇ、３．１ｍｍｏｌ）をＨＣｌ／ＭｅＯＨ（１Ｍ、２０ｍＬ）に溶かし、この反応混合物を室温で１．５時間撹拌した後、真空濃縮した。水（２０ｍＬ）およびＫ２ＣＯ３（３ｇ）を加えた。この混合物を室温で２時間撹拌した後、ＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出した。有機層を濃縮し、７−（３−クロロフェニル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（８００ｍｇ、９０％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１６Ｈ１６ＣｌＮ３の理論値：２８５．１０。
【0451】
工程４． ７−（３−クロロフェニル）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化166】
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この化合物は一般的尿素カップリング手順を用いて製造し、７−（３−クロロフェニル）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（２０．４ｍｇ、２４％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２２Ｈ２０ＣｌＮ５Ｏの理論値：４０５．１４；測定値：４０６［Ｍ＋Ｈ］。
【0452】
実施例７４． ７−（５−フルオロピリジン−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの製造：工程１． ７−（５−フルオロピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成：
【化167】
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この部分は以下のプロトコールを用いて製造した。ジオキサン／水（３０ｍＬ／３ｍＬ）の脱気混合物に、７−クロロ−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．３９ｇ、４．５ｍｍｏｌ）、（５−フルオロピリジン−３−イル）ボロン酸（１．２７ｇ、９．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．３７ｇ、０．４５ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（４．４０ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を１１０℃で１２時間撹拌した後、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝２／１）により精製し、７−（５−フルオロピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．５ｇ、８９％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２０Ｈ２３ＦＮ４Ｏ２の理論値：３７０．１８。
【0453】
工程２． ７−（５−フルオロピリジン−３−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピンの合成：【化168】
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この部分は以下のプロトコールを用いて製造した。ＤＣＭ（２０ｍＬ）中、７−（５−フルオロピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．５０ｇ）の溶液に、ＴＦＡ（２０ｍＬ）を加え、この反応混合物を室温で３時間撹拌した後、真空濃縮した。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で塩基性化し、ＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出した。有機層を濃縮し、７−（５−フルオロピリジン−３−イル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン（１．２ｇ、１００％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ１５ＦＮ４の理論値：２７０．１３。
【0454】
工程３． ７−（５−フルオロピリジン−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミドの合成：【化169】
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この化合物は一般的尿素カップリング手順を用いて製造し、７−（５−フルオロピリジン−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−エタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（１２．８ｍｇ、１５％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２１Ｈ１９ＦＮ６Ｏの理論値：３９０．１６；測定値：３９１［Ｍ＋Ｈ］。
【0455】
実施例７５． ３−ブロモ−５−（オキサゾール−５−イル）アニリンの製造：工程１． ５−（３−ブロモ−５−ニトロフェニル）オキサゾールの合成：
【化170】
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ＤＭＥ（１０ｍＬ）中、３−ブロモ−５−ニトロベンズアルデヒド（１ｇ、４．３４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１．２ｇ、８．６８ｍｍｏｌ）、次いで、１−（（イソシアノメチル）スルホニル）−４−メチルベンゼン（８９１ｍｇ、４．５６ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を還流下で一晩撹拌した。室温まで冷却した後、ＥｔＯＡｃを加え、この混合物をＨ２Ｏで２回、次いで、ブラインで洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（ペンタン中０％から１００％ＥｔＯＡｃへの勾配）のより精製し、５−（３−ブロモ−５−ニトロフェニル）オキサゾール（７６２ｍｇ、６５％）を橙色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ９Ｈ５ＢｒＮ２Ｏ３の理論値：２６８．０、２７０．０。
【0456】
工程２． ３−ブロモ−５−（オキサゾール−５−イル）アニリンの合成：【化171】
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ＴＨＦ（１４ｍＬ）中、５−（３−ブロモ−５−ニトロフェニル）オキサゾール（７６２ｍｇ、２．８３ｍｍｏｌ）の溶液に、酢酸（１３．６ｍＬ）、次いで、鉄粉（４７４ｍｇ、８．４９ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を６０℃で一晩撹拌した。室温まで冷却した後、この混合物を飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液（１７５ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、３−ブロモ−５−（オキサゾール−５−イル）アニリン（６９７ｍｇ）を褐色油状物として得た。この材料をそれ以上精製せずに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ９Ｈ７ＢｒＮ２Ｏの理論値：２３８．０、２４０．０。
【0457】
このオキサゾール形成とその後のニトロ還元の一般的二段階手順を用い、４−ブロモ−５−ニトロベンズアルデヒドを使用することにより、４−ブロモ−５−（オキサゾール−５−イル）アニリンを製造することができた。
【0458】
実施例７６． ６−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−アミンの製造：工程１． ６−アミノ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルピコリンアミドの合成：
【化172】
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アセトニトリル（１５０ｍＬ）中、６−アミノピコリン酸（１０．０ｇ、７２．５ｍｍｏｌ）のスラリーに、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（８．５２ｇ、８７．０ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１１．８ｇ、８７．０ｍｍｏｌ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノ）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（１６．７ｇ、８７．０ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３７．７ｍＬ、２１７ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で一晩撹拌し、溶媒を真空で除去した。残渣を１Ｎ ＮａＯＨと酢酸エチルで分液し、水層を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を真空下で除去した。残った残渣をフラッシュクロマトグラフィー（０．１％トリエチルアミンを含有する酢酸エチル）により精製し、６−アミノ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルピコリンアミド（４．３０ｇ、２３．７ｍｍｏｌ、収率３３％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ８Ｈ１１Ｎ３Ｏ２の理論値：１８１．１。
【0459】
工程２． ６−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−アミンの合成：【化173】
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ＴＨＦ（３０ｍＬ）中、６−アミノ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルピコリンアミド（４．３０ｇ、２３．７ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化リチウムアルミニウム（１．０８ｇ、２８．５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で９０分間撹拌した。酢酸エチル（３０ｍＬ）をゆっくり加え、この反応物を濾過し、濾液を取り、総ての溶媒を真空下で除去して６−アミノピコリンアルデヒドを得、これをそのまま次の工程のために取得した。
【0460】
メタノール（２０ｍＬ）中、上記アルデヒドの溶液に、イソシアン化物ｐ−トルエンスルホニルメチル（１３．９ｇ、７１．２ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１９．４ｇ、１４０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を還流下で２時間撹拌し、総ての溶媒を真空下で除去した。残渣を酢酸エチル（１５０ｍＬ）と水（７０ｍＬ）とで分液した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を真空下で除去した。残った残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン中１０％メタノール）により精製し、６−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−アミン（２．００ｇ、１２．４ｍｍｏｌ、二段階で収率５２％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ８Ｈ７Ｎ３Ｏの理論値：１６１．１。
【0461】
以下の化合物を類似の方法で製造した：４−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−アミン；５−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−３−アミン。
【0462】
実施例７７： ３，５−ビス（オキサゾール−５−イル）アニリンの合成：工程１． Ｎ１，Ｎ３−ジメトキシ−Ｎ１，Ｎ３−ジメチル−５−ニトロイソフタルアミドの合成：
【化174】
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ジクロロメタン（１００ｍＬ）中、５−ニトロイソフタル酸（５．００ｇ、２３．７ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化オキサリル（５．００ｍＬ、５９．１ｍｍｏｌ）を加え、この溶液を０℃に冷却した。ＤＭＦ（１．０ｍＬ）を３０分かけて滴下した。この混合物を室温まで温め、４時間撹拌した。総ての溶媒を真空下で除去した。
【0463】
ジクロロメタン（８０ｍＬ）中、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（４．６ｇ、４７．１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（６．６０ｍＬ、４７．４ｍｍｏｌ）の混合物に、０℃で、ジクロロメタン（２０ｍＬ）中、上記酸塩化物の溶液を加えた。反応が完了したところで、この反応混合物を真空濃縮した。残渣を１Ｎ水酸化ナトリウムと酢酸エチルとで分液し、有機層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を真空下で除去し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（１：１石油エーテル：酢酸エチル）により精製し、Ｎ１，Ｎ３−ジメトキシ−Ｎ１，Ｎ３−ジメチル−５−ニトロイソフタルアミド（４．００ｇ、１３．５ｍｍｏｌ、収率５７％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１２Ｈ１５Ｎ３Ｏ６の理論値：２９７．１。
【0464】
工程２． ５−ニトロイソフタルアルデヒドの合成：【化175】
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−４０℃で、（１５ＴＨＦ０ｍＬ）中、Ｎ１，Ｎ３−ジメトキシ−Ｎ１，Ｎ３−ジメチル−５−ニトロイソフタルアミド（５．００ｇ、１６．９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、水素化リチウムアルミニウム（２．７０ｇ、７１．１ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を−４０℃で４時間撹拌した。１０％水酸化ナトリウム溶液（２．７ｍＬ）をゆっくり加えた後、水（２．７ｍＬ）を加えた。生じた固体を濾過し、濾液を真空濃縮し、５−ニトロイソフタルアルデヒド（１．３７ｇ、７．６５ｍｍｏｌ、収率４５％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ８Ｈ５ＮＯ４の理論値：１７９．０。
【0465】
工程３． ５，５’−（５−ニトロ−１，３−フェニレン）ビス（オキサゾール）の合成：【化176】
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メタノール（１００ｍＬ）中、５−ニトロイソフタルアルデヒド（１．３７ｇ、７．６５ｍｍｏｌ）の溶液に、１−イソシアノメタンスルホニル−４−メチル−ベンゼン（７．４０ｇ、３７．８ｍｍｏｌ）および無水炭酸カリウム（５．２０ｇ、３７．８ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を窒素下で２時間還流させた。冷却後、溶媒を真空下で除去した。残渣を酢酸エチル（１５０ｍＬ）と水（７０ｍＬ）とで分液した。有機層を除去し、水層を酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、粗５，５’−（５−ニトロ−１，３−フェニレン）ビス（オキサゾール）（１．７０ｇ、６．６１ｍｍｏｌ、収率８６％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１２Ｈ７Ｎ３Ｏ４の理論値：２５７．０。
【0466】
工程４． ３，５−ビス（オキサゾール−５−イル）アニリンの合成：【化177】
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酢酸エチル（５０ｍＬ）中、５，５’−（５−ニトロ−１，３−フェニレン）ビス（オキサゾール）（１．７０ｇ、６．６１ｍｍｏｌ）およびパラジウム炭素（２００ｍｇ）の混合物を水素下で４時間撹拌した。固体を濾過し、濾液を真空濃縮した。残った残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（４：１石油エーテル：酢酸エチル）により精製し、３，５−ビス（オキサゾール−５−イル）アニリン（１．３０ｇ、５．７２ｍｍｏｌ、収率８７％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１２Ｈ９Ｎ３Ｏ２の理論値：２２７．１。
【0467】
実施例７８． （２−（４−（３−アミノフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの製造：【化178】
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２０ｍＬマイクロ波バイアルに、（２−ブロモエチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５５１ｍｇ、２．５０ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（４６０ｍｇ、７．０５ｍｍｏｌ）、およびＤＭＦ（５ｍＬ）を装填した。このバイアルを密閉し、マイクロ波中、１１０℃で１２時間加熱した。この反応混合物を水（８ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（２×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、総ての溶媒を真空下で除去し、粗（２−アジドエチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た。
【0468】
粗（２−アジドエチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルをＴＨＦ（５ｍＬ）およびトリエチルアミン（１ｍＬ）に溶かした。３−エチニルアニリン（３５０ｍｇ、２．９９ｍｍｏｌ）、次いで、ヨウ化銅（Ｉ）（１５．０ｍｇ、０．０７８８ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を６０℃で２時間撹拌した後、総ての溶媒を真空下で除去し、残った残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ペンタン中５０％から１００％酢酸エチルへ）により精製し、（２−（４−（３−アミノフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（４１５ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ、二段階の収率５５％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ２１Ｎ５Ｏ２の理論値：３０３．２。
【0469】
実施例７９． （（１−（３−アミノフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの製造：【化179】
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ＴＨＦ（９．０ｍＬ）およびトリエチルアミン（１．０ｍＬ）中、３−アジドアニリン(Chem. Commun. 2004; 888)（１．３４ｇ、９．９９ｍｍｏｌ）の溶液に、プロプ−２−イン−１−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．５５ｇ、９．９９ｍｍｏｌ）およびヨウ化銅（Ｉ）（４０ｍｇ、０．２１０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を６０℃で１時間撹拌した後、総ての溶媒を真空下で除去した。残った残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ペンタン中０％から８０％酢酸エチルへ）により精製し、（（１−（３−アミノフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（化合物＃；１．７１ｇ、５．９１ｍｍｏｌ、収率５９％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１４Ｈ１９Ｎ５Ｏ２の理論値：２８９．１；測定値：２９０．１［Ｍ＋Ｈ］。
【0470】
実施例８０： （（１−（３−アミノフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−５−イル）メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの製造：【化180】
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３−アジドアニリン（１．３３ｇ、９．９２ｍｍｏｌ）、プロプ−２−イン−１−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．５５ｇ、９．９９ｍｍｏｌ）、およびペンタメチルシクロペンタジエニルビス（トリフェニルホスフィン）ルテニウム（ＩＩ）クロリド（１５．９ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）を含むバイアルに、トルエン（１０ｍＬ）を加えた。この反応物を１００℃で７２時間撹拌した後、反応物を室温まで冷却した。ジクロロメタン（５ｍＬ）を加えて固体を溶かし、残った溶液をシリカゲルクロマトグラフィー（ペンタン中５０％から８０％酢酸エチルへ）により精製し、（（１−（３−アミノフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−５−イル）メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（９７０ｍｇ、３．３５ｍｍｏｌ、収率３４％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１４Ｈ１９Ｎ５Ｏ２の理論値：２８９．２。
【0471】
実施例８１： Ｎ４，Ｎ４−ジメチルピリミジン−２，４−ジアミンの製造：【化181】
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４−クロロ−２−アミノピリミジン（４９５ｍｇ、３．８２ｍｍｏｌ）を密閉試験管中、ジメチルアミン水溶液（３３％）に溶かし、この反応物を１００℃で一晩撹拌した。冷却後、この反応物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を真空下で除去し。Ｎ４，Ｎ４−ジメチルピリミジン−２，４−ジアミン（４００ｍｇ、２．８９ｍｍｏｌ、収率７６％）を得た。 ＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ６Ｈ１０Ｎ４の理論値：１３８．１。
【0472】
実施例８２： ４−（２−アミノピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの製造：【化182】
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４−クロロ−２−アミノピリミジン（５００ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ）とＮ−Ｂｏｃピペラジン（７．２１ｇ、３８．７ｍｍｏｌ）の混合物に、ＴＨＦ（２０ｍＬ）を加えた。この反応物を７０℃で一晩撹拌した。冷却後、溶媒を真空下で除去し、残った残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（１：１石油エーテル：酢酸エチル）により精製し、４−（２−アミノピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（６５０ｍｇ、２．３３ｍｍｏｌ、収率６０％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ２１Ｎ５Ｏ２の理論値：２７９．２。
【0473】
以下の化合物を類似の方法で製造した：４−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリミジン−２−アミン。
【0474】
実施例８３． （３−（４−アミノ−２−（オキサゾール−５−イル）フェニル）プロプ−２−イン−１−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの製造：工程１． ２−ブロモ−５−ニトロベンズアルデヒドの合成：
【化183】
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Ｈ２ＳＯ４（１００ｍＬ）中、２−ブロモベンズアルデヒド（１０．０ｇ、５３．７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＫＮＯ３（５．４３ｇ、５３．７ｍｍｏｌ）を０℃で、１時間かけて少量ずつ加えた。この混合物を４０分間撹拌し、さらなるＫＮＯ３（０．７２ｇ）を加えた。この反応混合物を０℃で３時間撹拌した後、氷水に注いだ。生じた沈澱を濾取し、水ですすぎ、ＥｔＯＡｃ／ペンタンから再結晶化させ、２−ブロモ−５−ニトロベンズアルデヒド（１１．７ｇ、収率９４％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ７Ｈ４ＢｒＮＯ３の理論値：２２８．９。
【0475】
工程２． ５−（２−ブロモ−５−ニトロフェニル）オキサゾールの合成：【化184】
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ＭｅＯＨ中、２−ブロモ−５−ニトロベンズアルデヒド（１．０ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（１．７９ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）およびＴｏｓＭＩＣ（２．１２ｇ、１０．８ｍｍｍｏｌ）の混合物を６０℃で１．５時間加熱した。この混合物を濃縮した。水を加え、固体を濾取し、水、ＭｅＯＨ、次いで、石油エーテルですすぎ、５−（２−ブロモ−５−ニトロフェニル）オキサゾール（７５０ｍｇ、収率６５％）を灰色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ９Ｈ５ＢｒＮ２Ｏ３の理論値：２２８．９。
【0476】
工程３． （３−（４−ニトロ−２−（オキサゾール−５−イル）フェニル）プロプ−２−イン−１−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成：【化185】
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ＤＭＥ（２０ｍＬ）中、５−（２−ブロモ−５−ニトロフェニル）オキサゾール（３００ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ２下で、プロプ−２−イン−１−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（４３１ｍｇ、２．７７ｍｍｏｌ）を加えた。ＣｕＩ（２１ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（７８ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、次いで、ＴＥＡ（０．５ｍＬ）を加えた。この反応混合物を８０℃で４時間加熱し、室温まで冷却し、水に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ペンタン＝１：５）により精製し、（３−（４−ニトロ−２−（オキサゾール−５−イル）フェニル）プロプ−２−イン−１−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３５０ｍｇ、収率９２％）を黄色油状物として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１７Ｈ１７Ｎ３Ｏ５の理論値：３４３．１。
【0477】
工程４． （３−（４−アミノ−２−（オキサゾール−５−イル）フェニル）プロプ−２−イン−１−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成：【化186】
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飽和ＮＨ４Ｃｌ／ＭｅＯＨ水溶液（Ｖ／Ｖ＝１：３）中、（３−（４−ニトロ−２−（オキサゾール−５−イル）フェニル）プロプ−２−イン−１−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．８ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）およびＦｅ（４．９６ｇ、８．８６ｍｍｏｌ）の懸濁液を６０℃で４．５時間加熱した。この混合物を室温まで冷却し、セライトパッドに通し、濾液を濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃに溶かし、水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。粗残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（３−（４−アミノ−２−（オキサゾール−５−イル）フェニル）プロプ−２−イン−１−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．５１ｇ、収率４４％）を黄色油状物として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１７Ｈ１９Ｎ３Ｏ３の理論値：２２８．９。
【0478】
（３−（３−アミノ−５−（オキサゾール−５−イル）フェニル）プロプ−２−イン−１−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルは、３−ブロモ−５−ニトロベンズアルデヒドから、（３−（４−アミノ−２−（オキサゾール−５−イル）フェニル）プロプ−２−イン−１−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルに関して記載したものと類似の方法で製造した。
【0479】
実施例８４． （３−（４−アミノ−２−（オキサゾール−５−イル）フェニル）プロピル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの製造：【化187】
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ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中、（３−（４−ニトロ−２−（オキサゾール−５−イル）フェニル）プロプ−２−イン−１−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．０ｇ、８．７５ｍｍｏｌ）および１０ｗｔ％Ｐｄ／Ｃ（１．０ｇ）の混合物を、Ｈ２雰囲気下（５０ｐｓｉ）で１６時間撹拌した。この混合触媒を濾去し、濾液を濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（３−（４−アミノ−２−（オキサゾール−５−イル）フェニル）プロピル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（９４０ｍｇ、収率３５％）を黄色油状物として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１７Ｈ２３Ｎ３Ｏ３の理論値：２２８．９。
【0480】
（３−（３−アミノ−５−（オキサゾール−５−イル）フェニル）プロピル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルは、（３−（３−ニトロ−５−（オキサゾール−５−イル）フェニル）プロプ−２−イン−１−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルから、（３−（４−アミノ−２−（オキサゾール−５−イル）フェニル）プロピル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルに関して記載したものと類似の方法で製造した。
【0481】
実施例８５． ２−（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジンの製造：【化188】
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ＮＭＰ（１３ｍＬ）中、２−フルオロ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン（１ｇ、４．４８ｍｍｏｌ）、３，３−ジフルオロピロリジン塩酸塩（１．９ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）、およびＫ２ＣＯ３（３ｇ、２２．４ｍｍｏｌ）の混合物を１１０℃で一晩撹拌した。第２分量の３，３−ジフルオロピロリジン塩酸塩（０．５ｇ）を加え、一晩撹拌した。この混合物を濾過し、Ｈ２Ｏで洗浄し、２Ｎ ＨＣｌを加えてｐＨを１に調整した。この混合物をＥｔＯＡｃで洗浄して残留する２−フルオロ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジンを除去した。水層をＫ２ＣＯ３溶液でｐＨ１３に調整した後、ＥｔＯＡｃで抽出し、２−（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン（２２０ｍｇ、１７％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ２１ＢＦ２Ｎ２Ｏ２の理論値：３１０．２。
【0482】
この一般的手順を用い、３−（トリフルオロメチル）ピロリジン塩酸塩を使用することにより、４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−２−（３−（トリフルオロメチル）ピロリジン−１−イル）ピリジンを製造することができた。
【0483】
実施例８６． （Ｓ）−２−（３−フルオロピロリジン−１−イル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジンの製造：【化189】
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ＩＰＡ（３．５ｍＬ）中、２−フルオロ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン（２００ｍｇ）、（Ｓ）−３−フルオロピロリジン塩酸塩（３５０ｍｇ）、およびＮａ２ＣＯ３（４８０）の混合物を、９１℃で１７時間撹拌した。この混合物を濾過し、濃縮した。２Ｎ ＨＣｌを加えてｐＨを１に調整し、ＥｔＯＡｃで抽出した。水層をＮａ２ＣＯ３溶液でｐＨ７に調整し、トルエンを用いて水を除去した。残渣をＥｔＯＡｃに取り、濾過し、濃縮し、（Ｓ）−２−（３−フルオロピロリジン−１−イル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン（９５ｍｇ、３６％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ２２ＢＦＮ２Ｏ２の理論値：２９２．２。
【0484】
この一般的手順を用い、（Ｒ）−３−フルオロピロリジン塩酸塩を使用するにより、（Ｒ）−２−（３−フルオロピロリジン−１−イル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジンを製造することができた。
【0485】
実施例８７． ３，３−ジフルオロ−１−（３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）ピロリジンの製造：工程１． １−（３−ブロモフェニル）−３，３−ジフルオロピロリジンの合成：
【化190】
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トルエン（２０ｍＬ）中、１，３−ジブロモベンゼン(dibromobenzne)（１ｇ、４．２４ｍｍｏｌ）、３，３−ジフルオロピロリジン塩酸塩（６６９ｍｇ、４．６６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１３４ｍｇ、０．２３３ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（３．３２ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）、およびＢＩＮＡＰ（２６４ｍｇ、０．４２４ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２雰囲気下で加熱還流した。一晩撹拌した後、この混合物を室温まで冷却し、濃縮した。この濃縮物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に懸濁させ、水（２０ｍＬ×３）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ３で乾燥させ、濃縮した。カラムクロマトグラフィー(chromaotography)（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝１００／１）により精製し、１−（３−ブロモフェニル）−３，３−ジフルオロピロリジン（６４５ｍｇ、＞１００％）を無色の油状物として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１０Ｈ１０ＢｒＦ２Ｎの理論値：２６１．０。
【0486】
工程２． ３，３−ジフルオロ−１−（３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）ピロリジンの合成：【化191】
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ジオキサン（１８ｍＬ）中、１−（３−ブロモフェニル）−３，３−ジフルオロピロリジン（８９９ｍｇ、３．４３ｍｍｏｌ）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）（９５７ｍｇ、３．７７ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（７５ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）、ＫＯＡｃ（１ｇ、１０．２９ｍｍｏｌ）の懸濁液を、Ｎ２雰囲気下、８５℃で加熱した。一晩撹拌した後、この懸濁液を室温まで冷却し、濾過した。濾液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン、次いで、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝１００／１）により精製し、３，３−ジフルオロ−１−（３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）ピロリジン（化合物Ａ＃；８７３ｍｇ、８２％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１６Ｈ２２ＢＦ２ＮＯ２の理論値：３０９．２。
【0487】
この一般的二段階手順を用い、３−（トリフルオロメチル）ピロリジン塩酸塩を使用することにより、１−（３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）ピロリジンを製造することができた。
【0488】
実施例８８． ２−（３−（（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチル）フェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロランの製造：工程１． １−アリル−３−ブロモベンゼンの合成：
【化192】
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３頚フラスコ中、金属Ｍｇ（１．７８ｇ、７３．７６ｍｍｏｌ）をＮ２雰囲気下で、乾燥エーテル（２０ｍＬ）に浸漬した。この混合物に、乾燥エーテル（２０ｍＬ）中、１，３−ジブロモベンゼンの３分の１容量（１５ｇ、６３．５８ｍｍｏｌ）を加えた。１，２−ジブロモエタン（０．１ｍＬ）を加えて反応を開始させた。還流が安定した後、残りの量の１，３−ジブロモベンゼン溶液を、還流を維持する様な速度で滴下した。添加が完了したところで、この混合物を還流下で１時間撹拌した。次に、乾燥エーテル（２０ｍＬ）中、臭化アリル（７．８７ｇ、６５．１２ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。添加が完了したところで、この懸濁液を還流下で１時間撹拌した。この反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ（１００ｍＬ）で急冷し、この混合物を分離させた。水相をエーテル（２０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機相をｓ水（７０ｍＬ×２）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、１−アリル−３−ブロモベンゼン（１４６ｇ）を無色の油状物として得た。この材料をそれ以上精製せずに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ９Ｈ９Ｂｒの理論値：１９６．０。
【0489】
工程２． ３−（３−ブロモフェニル）プロパン−１，２−ジオールの合成：【化193】
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ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ、ｖ／ｖ＝４／１）中、１−アリル−３−ブロモベンゼン（Ａ＃；１ｇ、５．０８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＭＯ（１．３ｇ、１１．１６ｍｍｏｌ）およびＫ２ＯｓＯ４・２Ｈ２Ｏ（１８７ｍｇ、０．５０８ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で２日間撹拌した。ＣＨ３ＣＮを減圧下で除去し、この濃縮物をＥｔＯＡｃで希釈した。この混合物をセライトで濾過し、濾液を濃縮し、３−（３−ブロモフェニル）プロパン−１，２−ジオール（化合物Ａ＃）を得た。この材料をそれ以上精製せずに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ９Ｈ１１ＢｒＯ２の理論値：２３０．０。
【0490】
工程３． ４−（３−ブロモベンジル）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソランの合成：【化194】
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アセトン（２５ｍＬ）中、３−（３−ブロモフェニル）プロパン−１，２−ジオール（Ａ＃； １．１７ｇ、５．０６ｍｍｏｌ）の溶液に、２，２−ジメトキシプロパン（１．８ｍＬ、１５．１８ｍｍｏｌ）およびＰＴＳＡ（９６ｍｇ、０．５０６ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で一晩撹拌した。この反応混合物を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝２０／１）により精製し、４−（３−ブロモベンジル）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン（化合物Ａ＃；２００ｍｇ、１５％）を淡黄色油状物として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１２Ｈ１５ＢｒＯ２の理論値：２７０．０。
【0491】
工程４． ２−（３−（（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチル）フェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロランの合成：【化195】
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ジオキサン（１５ｍＬ）中、４−（３−ブロモ−ベンジル）−２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン（Ａ＃；８００ｍｇ、２．９５ｍｍｏｌ）およびビス（ピナコラト）二ホウ素（８２２ｍｇ、１．１当量）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２１６ｍｇ、０．１当量）およびＫＯＡｃ（８６８ｍｇ、３．０当量）の混合物を脱気し、Ｎ２下で８５℃に加熱した。８５℃で一晩撹拌した後、この黒色懸濁液を室温まで冷却し、セライトで濾過した。濾液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝４０／１）により精製し、２−（３−（（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチル）フェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（化合物Ａ＃； ８００ｍｇ、８５％）を無色の油状物として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１８Ｈ２７ＢＯ４の理論値：３１８．２。
【0492】
実施例８９． （９Ｓ）−Ｎ−（４−（アミノメチル）フェニル）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メト−アノピリド(meth-anopyrido)［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミド塩酸塩および２−（６−ヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）−５−（（６−オキソ−６−（（４−（（９Ｓ）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０−カルボキサミド）ベンジル）アミノ）ヘキシル）カルバモイル）安息香酸の製造：【化196】
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試薬および条件：ａ）ＮａＨＣＯ３、ＴＨＦ、４０℃；ｂ）Ｆｅ、ＡｃＯＨ、ＩＰＡ／水、還流；ｃ）ＡｌＨ３、ＴＨＦ、−７８℃〜室温；ｄ）４８％ＨＢｒ；ｅ）３−トリフルオロフェニルボロン酸、Ｐｄ（ＯＡｃ）２、Ｘ−Ｐｈｏｓ、Ｃｓ２ＣＯ３、ジオキサン／水；ｆ）トリホスゲン、ＤＩＥＡ、ＣＨ２Ｃｌ２；ｇ）４Ｎ ＨＣｌ、ジオキサン；ｈ）ＤＩＥＡ、６［フルオレセイン−５（６）−カルボキサミド］ヘキサン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ＣＨ３ＣＮ。
【0493】
工程１． ２−（（６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）グルタル酸（Ｓ）−ジメチルの合成２，６−ジクロロ−３−ニトロピリジン（４０．０ｇ、２０７ｍｍｏｌ）、Ｌ−グルタミン酸ジメチルエステル塩酸塩（８７．７ｇ、４１４ｍｍｏｌ）およびＮａＨＣＯ３（６９．６ｇ、８２９ｍｍｏｌ）の混合物にテトラヒドロフラン（６００ｍＬ）を加えた。この混合物を、ＨＰＬＣにより２，６−ジクロロ−３−ニトロピリジンの消失をモニタリングしながら、４０℃で２４時間撹拌した。反応が完了した後、固体を濾過し、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液および洗液を真空濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（１０：１（ｖ／ｖ）ヘキサン／酢酸エチルで溶出する）により精製し、２−（（６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）グルタル酸（Ｓ）−ジメチルを黄色固体として得た（６０ｇ、８７％）。ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）３３２．１［Ｍ＋Ｈ］＋； ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ１２Ｈ１５Ｎ３Ｏ６Ｃｌの理論値３３２．０６４９；測定値３３２．０６５１。
【0494】
工程２． ３−（６−クロロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）プロパン酸（Ｓ）−メチルの合成２−（（６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−イル）アミノ）ペンタン二酸（Ｓ）−ジメチル（２０ｇ、６０．２ｍｍｏｌ）、および鉄粉（１６．８ｇ、３０１ｍｍｏｌ）の混合物に、２−プロパノール（３７５ｍＬ）および水（１２５ｍＬ）を加えた。この撹拌混合物に酢酸（５．５ｇ、９０．３ｍｍｏｌ）を加え、この反応物を、ＨＰＬＣにより出発材料の消失をモニタリングしながら、還流下で１時間撹拌した。反応が完了した後、固体を濾過し、２−プロパノール（３×５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液および洗液を濃縮乾固した後、残渣を真空濃縮し、３−（６−クロロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）プロパン酸（Ｓ）−メチルを暗黄色固体として得、これをそれ以上精製せずに次の工程で使用した（１５ｇ、８１％）。ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）２７０．１［Ｍ＋Ｈ］＋；ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ１１Ｈ１３Ｎ３Ｏ３Ｃｌの理論値２７０．０６４５；測定値２７０．０６４５。
【0495】
工程３． （Ｓ）−３−（６−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）プロパン−１−オールの合成Ｎ２下、テトラヒドロフラン（２６０ｍＬ）中、ＡｌＣｌ３（１７．７８ｇ、１３３．３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ（２００ｍＬ、４００ｍｍｏｌ）中、２ＭのＬｉＡｌＨ４を、ガスの発生を制御する速度で滴下した。これによりＴＨＦ中、アラン（ＡｌＨ３）の溶液が得られた。別のフラスコで、ＴＨＦ（４６０ｍＬ）中、３−（６−クロロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）プロパン酸（Ｓ）−メチル（２６．０ｇ、９６．４ｍｍｏｌ）の溶液をＮ２下で作製した後、ドライアイス／アセトン浴で冷却した。これにアラン溶液を、撹拌しながら２時間かけて滴下した。添加が完了した際に、冷却浴を取り除き、反応物を周囲温度まで温めた。ＬＣＭＳ分析は反応が完了したことを示し、水（６５ｍＬ）中、ＮａＯＨ（１７．６ｇ）の溶液を、Ｈ２の発生を制御するようにゆっくり加えた。この懸濁液を１８時間撹拌し、その後、固体を濾去した。沈澱を酢酸エチルで洗浄した後、濾液および洗液を真空濃縮した。この生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中ＭｅＯＨの０から１０％への勾配）により精製し、（Ｓ）−３−（６−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）プロパン−１−オールを黄色−橙色固体として得た（１５．２１ｇ、６９％）。ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）２２８．１［Ｍ＋Ｈ］＋；ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ１０Ｈ１５Ｎ３ＯＣｌの理論値２２８．０９０４；測定値２２８．０９０３。
【0496】
工程４． （５Ｒ，９Ｓ）−２−クロロ−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシンの合成（Ｓ）−３−（６−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）プロパン−１−オール（１２ｇ、５２．７ｍｍｏｌ）に４８％（ｗ／ｗ）ＨＢｒ（水溶液）（１６０ｍＬ）を加え、この反応物を、ＨＰＬＣにより出発アルコールの消失をモニタリングしながら、９０℃で１８時間撹拌した。反応が完了した後、それを周囲温度まで冷却し、次いで、１．２Ｍ ＮａＨＣＯ３水溶液をｐＨ８となるまで加えた。この混合物を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した後、有機相をブライン（１×１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮乾固した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（２：１（ｖ／ｖ）ヘキサン／酢酸エチルで溶出する）により精製し、（５Ｒ，９Ｓ）−２−クロロ−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシンを淡黄色固体として得た（６．０ｇ、５５％）。ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）２１０．１［Ｍ＋Ｈ］＋；ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ１０Ｈ１３Ｎ３Ｃｌの理論値２１０．０７９８；測定値２１０．０８００。
【0497】
工程５． （９Ｓ）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシンの合成１，４−ジオキサンと水の１０〜１（ｖ／ｖ）混合物（６０ｍＬ）中、（９Ｓ）−２−クロロ−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン（３．０ｇ、１５．４ｍｍｏｌ）、（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ボロン酸（４．４ｇ、２３．１ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（３４４ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（Ｘ−Ｐｈｏｓ、４７６ｍｇ、３．０８ｍｍｏｌ）、および炭酸セシウム（１５ｇ、４６．２ｍｍｏｌ）の溶液を９０℃で２４時間加熱した。次に、この反応物を周囲温度まで冷却し、酢酸エチル（１５０ｍＬ）で希釈した。この混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２００ｍＬ×３）で洗浄した後、有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮乾固した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ペンタン中１０−１００％酢酸エチルの勾配）により精製し、（９Ｓ）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシンを淡黄色固体として得た（３．７ｇ、７５％）。ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）３２０．２［Ｍ＋Ｈ］＋；ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ１７Ｈ１７Ｎ３Ｆ３の理論値３２０．１３７５；測定値３２０．１３７５。
【0498】
工程６． ４−（（９Ｓ）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノ−ピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０−カルボキサミド）ベンジルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中、（９Ｓ）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン（９９９ｍｇ、３．２３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．７ｍＬ、９．７８ｍｍｏｌ）を加え、この反応混合物を、氷浴を用いて０℃で冷却した。次に、トリホスゲン（４８２ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）を４回に分けて少量ずつ加えた。氷浴を取り除き、この混合物を室温まで温めた。反応の進行を、５００μＬアリコートを取り出し、メタノールと合わせ、中間体クロロホルメートの形成をしてカルバミン酸メチルへの変化をアッセイすることによりモニタリングした。出発材料が残っていれば、追加分量のトリホスゲン（２００ｍｇ）を加え、反応混合物を室温で５時間撹拌した。次に、４−アミノベンジルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（８００ｍｇ、３．６０ｍｍｏｌ）を二等分して（各４００ｍｇ）上記混合物に加え、得られた混合物を室温で２時間撹拌した。飽和水溶液ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ）を加えた後、有機相を分離し、減圧下で濃縮乾固した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ペンタン中１５−１００％酢酸エチルの勾配）により精製し、４−（（９Ｓ）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０−カルボキサミド）ベンジル−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを白色固体として得た（７６１ｍｇ、４２％）。ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）５６８．２［Ｍ＋Ｈ］＋；ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ３０Ｈ３３Ｎ５Ｏ３Ｆ３の理論値５６８．２５３６；測定値５６８．２５３８。
【0499】
工程７． （９Ｓ）−Ｎ−（４−（アミノメチル）フェニル）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メト−アノピリド(meth-anopyrido)［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミド塩酸塩の合成４−（（９Ｓ）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０−カルボキサミド）ベンジルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（７５９ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）を４Ｎ ＨＣｌ（１０ｍＬ）および１，４−ジオキサンに溶かし、窒素下、周囲温度で１時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、得られた固体を一晩真空下で乾燥させ、（９Ｓ）−Ｎ−（４−（アミノメチル）フェニル）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミド塩酸塩を淡黄褐色固体として得た（７６３ｍｇ、１００％）。ＲＭＳ（ｍ／ｚ）４６８．１［Ｍ＋Ｈ］＋；ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ２５Ｈ２５Ｎ５ＯＦ３の理論値４６８．２０１１；測定値４６８．２０１０。
【0500】
工程８． ２−（６−ヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）−５−（（６−オキソ−６−（（４−（（９Ｓ）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０−カルボキサミド）ベンジル）アミノ）ヘキシル）カルバモイル）安息香酸の合成（９Ｓ）−Ｎ−（４−（アミノメチル）フェニル）−２−（３−（トリフルオロ−メチル）フェニル）−８，９−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０（７Ｈ）−カルボキサミド塩酸塩（３９ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２ｍＬ）およびメタノール（０．２ｍＬ）に溶かした。次に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３２μＬ、０．２０ｍｍｏｌ）、次いで、６−［フルオレセイン−５（６）−カルボキサミド］ヘキサン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（５０ｍｇ、０．０８５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で一晩撹拌した後、生成物を逆相ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡで改質した水中５−９５％アセトニトリルの勾配）により単離し、２−（６−ヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）−５−（（６−オキソ−６−（（４−（（９Ｓ）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−７，８，９，１０−テトラ−ヒドロ−６Ｈ−５，９−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゾシン−１０−カルボキサミド）ベンジル）アミノ）ヘキシル）カルブ−アモイル）安息香酸を褐色固体として得た（２６ｍｇ、３５％）。ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）９３９．２［Ｍ＋Ｈ］＋；ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ５２Ｈ４６Ｎ６Ｏ８Ｆ３の理論値９３９．３３２９；測定値９３９．３３２８。
【0501】
実施例９０．ミニｈＳＩＲＴ１の設計および同定全長ｈＳＩＲＴ１タンパク質に対して陽子−重陽子交換質量分析（ＨＤＸ−ＭＳ）を行い、ｈＳＩＲＴ１の重要な機能的領域を識別および同定した。Ｈ−Ｄ交換速度はタンパク質の動的特性に極めて依存的であり、溶媒に曝されている領域および／またはフレキシブルな領域ではより速い交換が起こり、およびより埋没している領域および／または構造的にリジッドな領域ではより遅い交換が起こる(Hamuro, Y. et al. (2003) J biomol Techniques: JBT 14, 171)。ｈＳＩＲＴ１（１９−７４７）に対する従前の研究(Hubbard, B. P. et al. (2013) Science 339, 1216)と一致して、全長ｈＳＩＲＴ１は、３つの主要な構造領域：触媒コア領域、残基２２９〜５１６（以下、ｈＳＩＲＴ１ｃｃと称する）(Jin, L. et al. (2009) J Biol Chem 284, 24394 and Frye, R. A. (2000) Biochem Biophys Res Commun 273, 793)、触媒コアの直前の１９０〜２３０のＮ末端領域、および触媒コアの後のＣ末端の６４０〜６７０前後の遠位領域を含む。
【0502】
ｈＳＩＲＴ１上のＳＴＡＣ結合部位を探索するために、ＳＴＡＣ １の不在下または存在下でＨＤＸ−ＭＳを行った。１の添加は、ｈＳＩＲＴ１のＮ末端ドメインにおける残基１９０〜２３０前後でのＨ−Ｄ交換速度を低下させ、このことは、この領域がＳＴＡＣ結合に関与することを示唆する。さらに、１５Ｎ標識ｈＳＩＲＴ１（１８０−２３０）の１Ｈ、１５Ｎ ＨＳＱＣスペクトルは十分分散しており、このことは、それが自律的に折り畳まれるドメインを形成することを示唆する。１５Ｎ標識ｈＳＩＲＴ１（１８０−２３０）への１の添加は有意な化学シフト摂動をもたらし、１とこの領域(以下、ＳＴＡＣ結合ドメイン（ＳＢＤ）と呼称）の直接的相互作用裏付ける。ｐ５３由来ペプチド基質（Ａｃ−ｐ５３（Ｗ５））(Dai, H. et al. (2010) J Biol Chem 285, 32695)の存在下でのｈＳＩＲＴ１への１の添加は、触媒コアにおいてＳＢＤの前後と推定基質結合部位（残基４１７〜４２４）の両方でＨ−Ｄ交換速度の摂動をもたらし、このことは、Ｎ末端ドメイン内のＳＴＡＣ結合とｈＳＩＲＴ１の触媒コア内の基質結合が共役していることを示す。このことは、ＳＴＡＣがｈＳＩＲＴ１の基質への結合を促進し、それにより、ｈＳＩＲＴ１の触媒効率を高めるという従来の所見(Milne, J. C. et al. (2007) Nature 450, 712)と一致している。
【0503】
ＳＢＤとは対照的に、ＨＤＸ−ＭＳにより同定されたＣ末端構造要素（６４１〜６６５）は、触媒コアから約１５０残基離れており、従前に報告されているマウスEssential for SIRT1 Activity（ＥＳＡ）ペプチド（１９）と類似の、Ｃ末端β鎖／シート（ＣＢＳ）と呼ばれるいくつかのβ鎖を含むと推定される。ｈＳＩＲＴ１ｃは、従前に報告されている(Dai, H. et al. (2010) J Biol Chem 285, 32695)脱アセチル化アッセイ条件を用いると、全長酵素の活性の約８分の１しか示さない。ＣＢＳペプチドは、ｈＳＩＲＴ１ｃｃの触媒活性をトランスで、全長ｈＳＩＲＴ１の活性の８０％にまで回復させ、ＥＣ５０＝５９ｎＭであり、従前の所見(Kang, H. et al. (2011) Mol Cell 44, 203 and Marmorstein, R. et al. (2012) J Biol Chem 287, 2468)と一致している。本発明者らはまた、β鎖領域（６４２〜６５８）のみにわたる最小ＣＢＳ断片を設計し、これは親ＣＢＳペプチドと同様の挙動を示した。動態特性から、ＣＢＳペプチドがペプチド基質とｈＳＩＲＴ１ｃｃのＮＡＤ＋の両方でＫＭ値を４分の１〜５分の１低下させることにより活性を回復させることが明らかである（表１）。
【0504】
【表1】
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【0505】
考え合わせると、上記のデータは、１）基本的触媒機構を構成する中心コア、２）ＳＴＡＣの結合および活性化を媒介するＮ末端ＳＢＤ、および３）より効率的な脱アセチル化酵素活性をもたらす触媒コアを安定化させるＣ末端ＣＢＳペプチドを含む、最小機能性ｈＳＩＲＴ１の三成分構造を示唆する。これに基づいて、本発明者らは、共有結合された３つの構造要素の総てを包含するｈＳＩＲＴ１構築物を設計し、本発明者らはこれをミニｈＳＩＲＴ１と呼ぶ。これらの構築物は１８３〜５０５または１８３〜５１６にわたり、フレキシブルなポリ−グリシン／セリンリンカー（ＧＳ、（ＧＧＧＳ）２、または（ＧＧＧＳ）３）(Sauer, R. T. and Robinson, C. R. (1998) Proceedings of Nat Academy of Sciences of USA 95, 5929)を介してＣＢＳペプチドに接続されている。競合的ｈＳＩＲＴ１阻害剤ＥＸ−５２７またはニコチンアミド（ＮＡＭ）に関するＩＣ５０値と同様に、ＫＭおよびｋｃａｔ値は、ミニｈＳＩＲＴ１構築物および全長酵素の間で比較することができ、ミニｈＳＩＲＴ１の機能的忠実度が確認される（表２参照）。加えて、ミニｈＳＩＲＴ１と全長酵素の間には、広範な化学型のセットにわたってＳＴＡＣを介する活性化に関する優れた相関が存在する。ＳＢＤを除去すると、ＳＴＡＣを介するミニｈＳＩＲＴ１の活性化が完全に無効となり、活性化に対するこのドメインの決定的な重要性が確認される。これに対して、ＣＢＳを欠くミニｈＳＩＲＴ１は有意なレベルのＳＴＡＣ活性化を保持し、ＣＢＳはＳＴＡＣを介する活性化を促進するものの、それに必要とされるわけではないことが示される。 最後に、Ｅ２３０Ｋ突然変異もまた、全長酵素の場合と同様に(Hubbard, B. P. et al. (2013) Science 339, 1216)、ミニｈＳＩＲＴ１におけるＳＴＡＣを介する活性化を弱める。まとめると、これらの所見は、ミニｈＳＩＲＴ１は、その分子サイズの半分で、完全な機能があり、全長ｈＳＩＲＴ１の、活性化可能な代用物であることを示す。
【0506】
【表2】
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【0507】
実施例９１．ミニｈＳＩＲＴ１／ＳＴＡＣ複合体の構造ｈＳＩＲＴ１触媒コアのＸ線結晶学的構造が報告されているが(Zhao, X. et al. (2013) J Med Chem 56, 963)、全長酵素の構造は、本発明者らの知る限りでは、存在しない。全長ｈＳＩＲＴ１の構造は、１つには、延長されたＮ末端およびＣ末端ドメイン立体構造的フレキシビリティーのために、難しいことであった。ミニｈＳＩＲＴ１構築物は、本発明者らに、全長酵素の等機能的代用物を結晶化する機会を与えた。本発明者らは、ＨＤＸ−ＭＳ試験で使用されるＳＴＡＣ １とともにミニｈＳＩＲＴ１（１８３−５０５−（ＧＧＧＳ）２−ＣＢＳ）の結晶化に成功し、ＳＩＲＴ３のホモログモデル(Jin, L. et al. (2009) J Biol chem 284, 24394)に基づく検索モデルを用いた分子置換により、複合体（ミニｈＳＩＲＴ１／１）の構造を３．１Åで決定した。ミニｈＳＩＲＴ１は、総てのサーチュインに共通なロスマンフォールド・ラージローブ(Rossmann-fold large lobe)および亜鉛結合スモールローブ(zinc-binding small lobe)を仮定する触媒コア、Ｎ末端３ヘリックスバンドルＳＢＤおよびＣ末端β−ヘアピンＣＢＳから構成される。興味深いことに、結晶格子中には、結晶学的対称性が関連する、ＳＴＡＣを介するミニｈＳＩＲＴ１の二量体が見られる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により、ＳＴＡＣ １の存在下の溶液中でミニｈＳＩＲＴ１は二量体を形成することが確認される。しかしながら、同じ化学型の類似のＳＴＡＣ ７では、ミニｈＳＩＲＴ１二量体の形成は見られない。この所見と、結晶化に使用されるＳＴＡＣ濃度は活性化を測定する生化学アッセイにおいて使用されるものよりもはるかに高いという事実を考えれば、結晶構造中に見られる二量体化は、ＳＴＡＣによるｈＳＩＲＴ１活性化の必要条件ではないと思われる。
【0508】
ＣＢＳは、ＣＢＳ結合時のｈＳＩＲＴ１ｃｃ摂動のＨＤＸ−ＭＳ結果と一致して、触媒ドメインのロスマンフォールドローブの６鎖β−シートによるβ−増幅(β-augmentation)を媒介する。ＣＢＳにより媒介れるβ−増幅は、アセチル化ペプチドとＮＡＤ＋基質の両方に見られるＫＭ値を回復させるｈＳＩＲＴ１触媒コアの活性部位を安定化させると思われる。Ｎ末端ＳＢＤは、ＨＤＸ−ＭＳ結果、ＮＭＲ結果および酵素動態結果と一致して、ＳＢＤ内のヘリックス−ターン−ヘリックス（Ｈ２−Ｔ−Ｈ３）モチーフと結合する１とともに、独立に折り畳まれる３ヘリックスバンドルを形成する。主要なミニｈＳＩＲＴ１／１結合部位は、１のＣＦ３基が占有する、中心を外れた、より深い疎水性ポケットを有する、比較的浅い疎水性表面である。これは複数のＳＴＡＣ化学型において構築された構造活性関係(structure activity relationship)（ＳＡＲ）の所見と一致し、分子内水素結合により維持されるコアスキャフォールドが全体的に平坦であるという要件を示す(Vu, et al. (2009) J Med Chem, 52, 1275)。ミニｈＳＩＲＴ１の構造と酵母Ｓｉｒ２の構造の間にはドメイン構成に関する著しい類似性が見られ、両方とも、Ｎ末端ヘリカルバンドルと、典型的なロスマンフォールド・ラージローブを超えるβ−ヘアピンによるＣ末端β−増幅を有する(Hsu, H. C. et al. (2013) Genes & Dev 27, 64)。しかしながら、酵母Ｓｉｒ２は、ｈＳＩＲＴ１に見られる１５０のアミノ酸挿入を含まず、酵母における天然の「ミニＳＩＲＴ１」と見られる。Ｓｉｒ２のＮ末端ドメインは、酵母タンパク質Ｓｉｒ４によるアロステリック活性化に重要であると思われる(Hsu, H. C. et al. (2013) Genes & Dev 27, 64)。Ｓｉｒ２Ｎ末端ドメインの構造はｈＳＩＲＴ１ ＳＢＤとは異なるものの、この２つは触媒コアのアロステリック活性化において機能的に保存された役割を有すると思われる。
【0509】
実施例９２．ＳＴＡＣ結合ポケットの部位特異的突然変異誘発本発明者らは、全長ｈＳＩＲＴ１の部位特異的突然変異誘発を用いて、ミニｈＳＩＲＴ１構造により同定されたＳＢＤの重要な残基を確認した。３種類の残基、すなわち、ａ）活性剤と直接相互作用すると思われる残基（Ｔ２１９Ａ、Ｉ２２３Ａ、Ｎ２２６Ａ、およびＩ２２７Ａ）、ｂ）カップリング調節剤Ｇｌｕ２３０ (Hubbard, B. P. et al. (2013) Science 339, 1216)（Ｅ２３０Ｋ、Ｅ２３０Ａ、およびＥ２３０Ｑ）、およびｃ）活性剤結合において明らかな役割を持たないＳＢＤ残基（Ｑ２２２ＡおよびＶ２２４Ａ）をプロービングする、全長ｈＳＩＲＴ１の以下の点突然変異を作製した。Ａｃ−ｐ５３（Ｗ５）基質を用いる基本触媒活性を有意に障害した、またはＥＸ−５２７、ＴＦＡ−ｐ５３ペプチド（Ａｃ−ＲＨＫ−ＫＴＦＡ−Ｌ−Ｎｌｅ−Ｆ−ＮＨ２）、またはニコチンアミド（ＮＡＭ）による阻害に影響を及ぼした突然変異体は無かった（表４および５参照）。
【0510】
活性化に及ぼす突然変異の全般的影響は、２５μＭの固定濃度で試験した２４６ ＳＴＡＣの構造的に多様なセットを用い、野生型と変異型の全長ＳＩＲＴ１の活性化倍率を比較することにより評価した。加えて、本発明者らは、５種類の化合物のパネルを用い、それらのＥＣ５０値および最大活性化値それぞれのシフトをモニタリングすることにより、ＳＴＡＣ結合と活性化に及ぼす突然変異の影響を検討した（ＳＴＡＣ１、６〜９）。Ｔ２１９Ａ、Ｉ２２３Ａ、およびＩ２２７Ａは総て、活性化の広範な障害を示し、野生型ｈＳＩＲＴ１に比べてＥＣ５０が増大し、これは構造と一致する活性剤結合の障害を意味する（表６参照）。興味深いことに、Ｉ２２３Ａは、最も化合物依存性の高い突然変異体であり、ＳＴＡＣにより媒介される活性化は弱から強の範囲に及ぶ。活性化の増強を示すＳＴＡＣは、オルトＣＦ３置換フェニル環を含む構造に富んでいる。結晶構造では、Ｉｌｅ２２３は活性剤の直下にあり、１のメタＣＦ３を挿入するポケットを裏打ちしている。Ｉｌｅ２２３からＡｌａへの突然変異により作り出されたキャビティは、オルト置換基とメタ置換をより良く適応させると思われる。この所見はさらにＳＴＡＣ結合を支配する重要な分子相互作用をバリデートし、ＳＴＡＣのＳＢＤとの相互作用を変更するための戦略を指し示す。
【0511】
【表3】
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【0512】
【表4】
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【0513】
【表5】
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【0514】
Ａｓｎ２２６は、タンパク質の表面で、そのカルボキサミド窒素と１のカルボニル酸素の間で水素結合を形成すると思われる。しかしながら、Ｎ２２６Ａの活性化は、野生型に比べて最小の障害でしかない。この水素結合からの小さな寄与は、その高い溶媒暴露性によるものであると思われる。
【0515】
Ｇｌｕ２３０のＬｙｓまたはＡｌａのいずれかへの突然変異は、ＳＴＡＣによる活性化を広範囲に障害すると最近報告されたが、これが起こる機構は明らかでない(Hubbard, B. P. et al. (2013) Science 339, 1216)。本発明者らは、Ｅ２３０Ｋ、Ｅ２３０Ａ、およびＥ２３０Ｑ全長ｈＳＩＲＴ１タンパク質の活性化を試験した。３種類のＧｌｕ２３０突然変異異体の総てで、最大活性化はＥＣ５０をシフさせることなく障害を受け（表７および８参照）、このことは、活性化されたｈＳＩＲＴ１の立体構造の形成または安定化におけるＧｌｕ２３０の役割を示唆している。Ｅ２３０Ｑの活性化もまた広範囲に障害を受け、Ｇｌｕ２３０の負電荷がｈＳＩＲＴ１の活性化された立体構造を安定化させるために重要であること、およびＧｌｕ２３０は活性化された立体構造中の正電荷残基と相互作用する可能性があることを示す。
【0516】
【表6】
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【0517】
【表7】
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【0518】
上記の突然変異体とは対照的に、Ｑ２２２ＡおよびＶ２２４Ａは、それらの位置がミニｈＳＩＲＴ１／１構造中のＳＴＡＣから離れていることと一致して、通常の活性化を示した。重要なことに、全長ｈＳＩＲＴ１で得られたこれらのデータは総て、ミニＳＩＲＴ１結晶構造が推定するものと一致し、これらの構造の生化学的重要性がさらに確認される。
【0519】
上記の突然変異の広範囲の影響にもかかわらず、それらの中に、ＳＢＤの除去で見られたような、ｈＳＩＲＴ１の活性化を完全に無効化したものは無かった。Ｉｌｅ２２３は結合したＳＴＡＣの直下にあり、Ｉ２２３Ａの活性化は化合物依存性が高いことから、本発明者らは、Ｉ２２３Ｒ ｈＳＩＲＴ１が、これまでで最も著しく活性化が障害された全長酵素を構成するのではないかという仮説を立てた。ＩｌｅからＡｒｇへの置換は、疎水性のＳＴＡＣ結合部位に嵩と電荷を与え、これが構造に基づく化合物結合を乱すと思われる。Ｉ２２３Ｒは、Ａｃ−ｐ５３（Ｗ５）またはＦＯＸＯ−３ａ基質ペプチドとの基本触媒活性またはＥＸ−５２７、ＴＦＡ−ｐ５３ペプチド、またはＮＡＭによる阻害を変化させない（表４、５および９参照）。しかしながら、活性化は、総ての２４６活性剤の場合には両基質で完全に失われる。
【0520】
【表8】
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【0521】
実施例９３．ＳＴＡＣと基質結合の間のアロステリック結合本発明者らは、ＳＴＡＣによるｈＳＩＲＴ１の活性化の機構を検討した。この目的のため、本発明者らは、ミニｈＳＩＲＴ１、１、ｐ５３に由来する７アミノ酸ペプチド基質（Ａｃ−ｐ５３）、および非加水分解性ＮＡＤ＋類似体ｃａｒｂａＮＡＤの四元複合体の２．７３Å構造、ならびにペプチドおよびＮＡＤ＋結合部位を占有する新規な活性部位指向阻害剤２との複合体としてのミニｈＳＩＲＴ１／１の２．７４Å構造を決定した。四元複合体構造では、Ａｃ−ｐ５３ペプチドおよびｃａｒｂａＮＡＤは、ラージローブとスモールローブの間の活性部位溝に結合する。Ａｃ−ｐ５３は、スモールローブ由来の残基Ｇｌｙ４１５およびＧｌｕ４１６ならびにラージローブ由来の残基Ｌｙｓ４４４およびＡｒｇ４４６と水素結合を形成する主鎖のアミド基で、拡張された立体構造に適合する。ペプチド＋１位のアミドとＡｒｇ４４６のアミドの間の水素結合は、疎水性＋１残基に対して側鎖間に潜在的相互作用を与え、これはＳＴＡＣにより媒介されるｈＳＩＲＴ１の活性化に重要であり得る(Dai, H. et al. (2010) J Biol Chem 285, 32695)。アセチルリジン側鎖は、Ｐｈｅ４１４、Ｌｅｕ４１８およびＶａｌ４４５によって裏打ちされた疎水性キャビティに入り込む。アセチル基は、Ｈｉｓ３６３とＰｈｅ２９７の間に挟まれ、アセチルリジンのε−ＮはＶａｌ４１２のカルボニル酸素と水素結合を形成し、これがアセチル−リジン側鎖の配向および拡張された立体構造を維持する。ＣａｒｂａＮＡＤもまたｈＳＩＲＴ１と複数の点で接触し、そのほとんどは、ｈＳＩＲＴ１触媒コア／ＮＡＤ／ＥＸ−５２７類似体の三元複合体で見られるものと同様である(Zhao, X. et al. (2013) J Med Chem 56, 963)。ニコチンアミド環のアミド基がＣ−ポケット内のＩｌｅ３４７およびＡｓｐ３４８と水素結合を形成するなど、いくつかの違いが指摘されている。加えて、ニコチンアミド側のリボフラノースの２’および３’ヒドロキシル基もアセチル−リジンのカルボニル酸素原子と水素結合を形成し、続いて起こるペプチドＮ−ε−アセチル基による求核作用のためにＮＡＤのＣ−１’原子を配向する補助をしている。阻害剤２は、最近報告されたＳＩＲＴ３／２複合体の構造と同様に、ミニｈＳＩＲＴ１のアセチル−リジン結合部位とニコチンアミド結合Ｃ−ポケットの両方を占有する。ＳＩＲＴ３と同様に、基質または活性部位阻害剤の結合は、ドメインの閉鎖をもたらし、スモールローブとラージローブを一緒にする(Szczepankiewicz, B. G. et al. (2012) J Org chem 77, 7319 and Jin, L. et al. J Biol Chem (2009) 284, 24394)。活性部位占有時のより顕著な立体構造変化は、Ｎ末端ドメインの上へ向かう動きであり、これはＡｒｇ２３４を中心にヒンジを形成すると思われ、ＳＢＤを活性部位に近接させ、協調した動きを介したＳＴＡＣ結合と基質結合部位のアロステリック結合の、可能性のある機構を提供する。このヒンジ残基Ａｒｇ２３４は多塩基リンカー（残基２３３〜２３８）内に位置し、そのグアニジニウム基とＡｓｐ４７５のカルボン酸基の間に形成される塩橋およびＨｉｓ４７３とＶａｌ４５９のカルボニル基に対する水素結合によってＮ末端ＳＢＤを触媒コアに係留している。これらの３つの構造におけるＳＢＤの比較は、そのドメインが比較的リジッドであることを示し、重ね合わせ可能なＳＴＡＣ−結合ヘリックス−ターン−ヘリックス（Ｈ２−Ｔ−Ｈ３）モチーフを有し、ミニｈＳＩＲＴ１／１／２複合体構造では、最初のヘリックスだけが若干外へ傾斜している。本発明者らは、Ｐｒｏ２３１およびＰｒｏ２３２をＧｌｙに変異させることによってリンカーのリジッド性を変調することにより、ＳＢＤと係留Ａｒｇ２３４の間の短いリンカー（２３０〜２３３）がアロステリック結合に重要であり得るかどうかを評価した。実際に、Ｐ２３１Ｇ／Ｐ２３２Ｇは、ミニｈＳＩＲＴ１のＳＴＡＣ活性化の著しい弱化を示し、このことは、この短いリンカーの、ＳＢＤの動きの媒介および結果としてのＳＴＡＣ結合と基質結合の共役に対する重要性を裏付ける。
【0522】
ＨＤＸ−ＭＳデータにより、野生型ｈＳＩＲＴ１とは対照的に、Ｅ２３０Ｋ突然変異体に対するＳＴＡＣの結合は、Ｅ２３０Ｋ／１／Ａｃ−ｐ５３（Ｗ５）複合体内のペプチド結合部位の周辺にもはや保護を与えないことが明らかである。これは、Ｅ２３０Ｋ突然変異がＳＴＡＣ結合部位と基質結合部位の間の共役を損なう可能性があることを示す。このことをさらに調べるために、ｈＳＩＲＴ１に対するＳＴＡＣの結合を測定し、基質の存在下で共役効果を検討するために、蛍光偏光（ＦＰ）アッセイを開発した。全長ｈＳＩＲＴ１とＫｄ ０．３μＭで結合するフルオレセイン結合ＳＴＡＣ（３）をＦＰプローブとして用い、それはその親化合物４によって効果的に競合排除された。３の結合はＩ２２３Ｒ ｈＳＩＲＴ１に関して重大な障害を受け、全長酵素においてＳＴＡＣの結合に直接関与するような、ミニｈＳＩＲＴ１／１構造において示されるこの残基の役割が確認される。ＳＴＡＣは、活性化に関するＫＭ低下機構と一致して、Ａｃ−ｐ５３（Ｗ５）の存在下で結合親和性（Ｋｉ）の増強を示した５により例示されるＡｃ−ｐ５３（Ｗ５）基質の不在下または存在下で、ＦＰアッセイで試験した。Ｅ２３０Ｋ突然変異体は野生型に比べてほとんどのＳＴＡＣに対して著しく同様の結合親和性を示すが、Ａｃ−ｐ５３（Ｗ５）によるこの結合の増強は存在しないか、または著しく弱められている。ＨＤＸ−ＭＳおよび活性化データはともに、Ｇｌｕ２３０はＳＴＡＣ結合に直接関与しないが、その代わりに、ＳＴＡＣと基質結合の共役を媒介して活性化を促進する重要な残基である。このことは、化合物１および２とともにＥ２３０ＫミニｈＳＩＲＴ１タンパク質の構造を決定することによってさらに確認した。全体的な構造は野生型ミニｈＳＩＲＴ１／１／２三元複合体の構造に類似しており、Ｇｌｕ２３０はＳＴＡＣ結合に直接関与しないが、その代わりに、アロステリック結合の際に動的役割を果たす可能性があることが確認された。さらに、Ｅ２３０ＫミニｈＳＩＲＴ１／ＳＴＡＣ構造では、野生型タンパク質構造に関して見られたものと同様の結晶学的二量体が見られたが、このことは、二量体化はＳＴＡＣによるｈＳＩＲＴ１の生化学的活性化に必要であるとは思えないことを示す。
【0523】
ＳＴＡＣにより媒介されるＳＩＲＴ１の活性化のための、アセチル基質上の疎水性部分の一般的必要性を評価するために(Dai, H. et al. (2010) J Biol Chem 285, 32695)、本発明者らは、Ａｒｇ４４６の＋１位への近接に基づき、潜在的＋１ Ｔｒｐ相互作用残基Ａｒｇ４４６からＡｌａへ変異させた。Ｒ４４６Ａ ｈＳＩＲＴ１は、予想されたように、Ａｃ−ｐ５３（Ｗ５）に関して、ＫＭ値の増大を示す（表２参照）。しかしながら、それはまた、Ｅ２３０Ｋ／Ａ突然変異体に関して見られたものと同様の活性化の弱化も示す。この所見、Ａｒｇ４４６の陽イオン的性質および活性部位とＳＴＡＣ結合部位の間の共役を考慮して、本発明者らは、対照としてＥ２３０ＫおよびＲ４４６ＥミニｈＳＩＲＴ１を用い、Ａｒｇ４４６がＥ２３０の、可能性のある静電気的パートナーであるかどうかを調べるために、ミニｈＳＩＲＴ１ Ｒ４４６Ｅ／Ｅ２３０Ｋ二重突然変異体を作製した。Ｅ２３０ＫまたはＲ４４６ＥはいずれもミニｈＳＩＲＴ１のＳＴＡＣ活性化の有意な弱化をもたらすが、Ｒ４４６Ｅ／Ｅ２３０Ｋ二重突然変異体は、Ｅ２３０ＫまたはＲ４４６Ｅに比べて、ＳＴＡＣにより媒介されるミニｈＳＩＲＴ１の活性化を部分的に回復させる。これらのデータは、活性化された立体構造におけるＧｌｕ２３０とＡｒｇ４４６の間の塩橋の存在を裏付け、活性化状態で触媒コアと相互作用するためのＳＢＤの提案される動きと一致している。
【0524】
本発明者らが本明細書で述べた総てのミニｈＳＩＲＴ１構築物は、全長ｈＳＩＲＴ１の３つの重要な特徴、すなわち、１）定常状態での酵素動態および阻害、２）複数の化学型にわたるＳＴＡＣ活性化プロファイル、３）およびＥ２３０ＫによるＳＴＡＣ活性化の障害を再現する。本発明者らは次に、ミニｈＳＩＲＴ１構築物を用いて、結合したＳＴＡＣとともに、完全機能型のｈＳＩＲＴ１の、初めて報告される構造を得る。生化学的特性決定および構造特性決定により、ＣＢＳと触媒コアの間のｈＳＩＲＴ１分子内相互作用が明らかとなり、これはｈＳＩＲＴ１の基本的脱アセチル化活性に不可欠である。より重要なことに、ミニｈＳＩＲＴ１／ＳＴＡＣ複合体の構造により、ＳＴＡＣ結合部位の詳細な構造が明らかとなり、将来の構造に基づく創薬のために重要な情報が得られる。ｈＳＩＲＴ１構造と、結合した種々のリガンドとの比較は、ＳＢＤの正確な場所は結晶充填によって影響を受ける可能性があるが、Ｎ末端ＳＢＤは立体構造反応座標に沿って上方移動を受けることを示唆する。従って、ＳＴＡＣ活性化の、可能性のある機構は、すなわち、ＳＢＤの上方移動と、ＳＴＡＣ結合と基質結合を共役させるための触媒コアのドメイン閉鎖との協調した動きと推論することができる。ＦＰを用いる生物物理学的特性決定および全長ｈＳＩＲＴ１を用いる部位特異的突然変異誘発は、ＳＴＡＣの結合および活性化のこのモデルを支持して、ミニｈＳＩＲＴ１／ＳＴＡＣ複合体の構造的所見と完全に一致する。本発明者らの知る限り、本明細書に報告されるミニｈＳＩＲＴ１／ＳＴＡＣ複合体の構造は、グルコキナーゼを除く酵素と結合した合成アロステリック活性剤の第２の実施例のみを表す(Grimsby, J. et al. (2005) Science 301, 370)。要約すると、本明細書に示される結果は、ペプチド基質を伴う小分子によるｈＳＩＲＴ１の直接的アロステリック活性化の明白な視覚的および機能的証明を提供し、ＳＴＡＣによる、およびおそらくはまたｈＳＩＲＴ１の内因性レギュレーターによるｈＳＩＲＴ１活性化の機構のさらなる解明の基礎を提供する。
【0525】
実施例９４．タンパク質のクローニング、発現、および精製ミニｈＳＩＲＴ１構築物を改変ｐＥＴ２１ｂベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ）にクローニングした。タンパク質は、大腸菌(E. coli)ＢＬ２１−Ｇｏｌｄ（ＤＥ３）細胞（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）で、ＴＥＶプロテアーゼ部位を組み込んだヘキサヒスチジンアフィニティータグとのＮ末端融合物として発現させた。単一のコロニーを１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含有するＬＢ培地で、３７℃、２５０ｒｐｍにて、Ａ６００が０．３となるまで培養した。次に、この培養物を１６℃、２５０ｒｐｍに、Ａ６００が０．６となるまで移行した。イソプロピル１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を終濃度が０．２ｍＭとなるように加え、１６℃、２５０ｒｐｍで一晩、発現を続けた。細胞を遠心分離により回収し、ペレットを溶解バッファー（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、２００ｍＭ ＮａＣｌ、５％グリセロール、および５ｍＭ ２−メルカプトエタノール）に再懸濁させ、音波処理を施して細胞を破壊した。４℃、１０，０００ｘｇで４０分の遠心分離により上清を細胞残渣から分離し、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、２００ｍＭ ＮａＣｌ、５％グリセロール、５ｍＭ ２−メルカプトエタノール、および２０ｍＭイミダゾールを含有するバッファーで平衡化したＮｉ−ＮＴＡカラム（Ｑｉａｇｅｎ）にロードした。このカラムを、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、２００ｍＭ ＮａＣｌ、５％グリセロール、５ｍＭ ２−メルカプトエタノール、および５０ｍＭイミダゾールを含有する、５カラム容量のバッファーで洗浄し、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、２００ｍＭ ＮａＣｌ、５％グリセロール、５ｍＭ ２−メルカプトエタノール、および２５０ｍＭイミダゾールを含有するバッファーで溶出させた。溶出したタンパク質を溶解中で透析し、ＴＥＶプロテアーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で消化して、４℃で一晩、Ｎ末端Ｈｉｓタグを除去した。タンパク質を、溶解バッファーで平衡化した第２のＮｉ−ＮＴＡカラムにロードした。タグのないタンパク質を、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、２００ｍＭ ＮａＣｌ、５％グリセロール、５ｍＭ ２−メルカプトエタノール、および５ｍＭイミダゾールを含有するバッファーにより溶出した。精製したタンパク質を２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、２５０ｍＭ ＮａＣｌ、５％グリセロール、および１０ｍＭ ＤＴＴを含有する透析バッファーに対して透析し、濃縮した。タンパク質をさらにＳ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により、クーマシーブリリアントブルーＲ−２５０により染色したＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析により評価した場合に、９５％純度まで精製し、透析バッファー中、１０〜１５ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。
【0526】
ヒトｈｓｉｒｔ１ １８０−２３０を、改変ｐＥＴ２１ｂベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ）のＢａｍＨＩとＸｈｏＩの間にクローニングし、これは発現をＴ７−ｌａｃＯプロモーターの制御下に置く。タンパク質を、ＴＥＶプロテアーゼ部位を組み込んだヘキサヒスチジンアフィニティータグとのＮ末端融合物として発現させた。単一コロニーを、１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含有する１００ｍｌ ＬＢ培地中、３７℃、２５０ｒｐｍで一晩培養した。次に、２０ｍｌのＬＢ培地を、１５ＮＨ４Ｃｌｗｐ含有する１ＬのＭ９培地に播種し、それらをオービタルシェーカー（２００ｒｐｍ）上、３７℃で、ＯＤ６００が約０．８となるまでインキュベートした。次に、この培養物を１６℃、２５０ｒｐｍに、Ａ６００が１．０となるまで移行した。イソプロピル１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシドを終濃度が０．３ｍＭとなるように加え、１６℃、２００ｒｐｍで一晩、発現を続けた。細胞を遠心分離により回収し、ペレットを溶解バッファー（５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、２００ｍＭ ＮａＣｌ、５％グリセロール、５ｍＭ β−ＭＥ、ｐＨ７．５）に再懸濁させ、音波処理を施して細胞を開放した。４℃、１０，０００ｘｇで４０分の遠心分離により上清を細胞残渣から分離し、５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、２００ｍＭ ＮａＣｌ、５％グリセロール、５ｍＭ β−ＭＥ、ｐＨ７．５を含有するバッファーで平衡化したＮｉ−ＮＴＡカラム（Ｑｉａｇｅｎ）にロードした。このカラムを、５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、２００ｍＭ ＮａＣｌ、５％グリセロール、５ｍ ＭＢ−ＭＥおよび２０ｍＭイミダゾール、ｐＨ７．５を含有する、２０カラム容量のバッファーで洗浄した後、５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、２００ｍＭ ＮａＣｌ、５％ グリセロール、５ｍＭ β−ＭＥおよび２５０ｍＭイミダゾール、ｐＨ７．５を含有するバッファーで溶出させた。溶出したタンパク質を溶解バッファー中で透析し、ＴＥＶプロテアーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で消化して、４℃で一晩、Ｎ末端Ｈｉｓタグを除去した。タンパク質を、溶解バッファーで平衡化した第２のＮｉ−ＮＴＡカラムにロードした。タグのないタンパク質を、５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、２００ｍＭ ＮａＣｌ、５％グリセロール、５ｍＭ β−ＭＥおよび１０ｍＭイミダゾール、ｐＨ７．５を含有するバッファーにより溶出した。精製したタンパク質を濃縮し、Ｓ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により、クーマシーブリリアントブルーＲ−２５０により染色したＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析により評価した場合に、９５％純度までさらに精製し、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．５ｍＭ ＴＣＥＰ、ｐＨ６．５中、１０ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。
【0527】
実施例９５．全長ＳＩＲＴ１製造全長ヒトＳＩＲＴ１（ｈＳＩＲＴ１）タンパク質をＣ末端Ｈｉｓ６タグとともに発現させ、ＡＫＴＡｘｐｒｅｓｓ（商標）（ＧＥ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて精製したＱ２２２Ａ、およびＩ２２３Ｒ ＳＩＲＴ１以外は、Hubbard. et al. (2013) Science 339, 1216に記載のとおりに精製した。各細胞ペーストを、氷上で、ｃＯｍｐｌｅｔｅ、ＥＤＴＡ不含プロテアーゼ阻害剤カクテル錠剤（Ｒｏｃｈｅ）を添加した１，０００Ｕベンゾナーゼヌクレアーゼ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）とともにバッファーＡ（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．５、２５０ｍＭ ＮａＣｌ、２５ｍＭイミダゾール、および０．１ｍＭ ＴＣＥＰ）に再懸濁させた。４０Ｗで合計１２分間、５０％オンおよび５０％オフのパルス音波処理により細胞を破砕した。不溶性残渣を遠心分離により除去した。明澄な上清をそのまま、１ｍＬ ＨｉｓＴｒａｐ ＦＦ Ｃｒｕｄｅカラム（ＧＥ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ）にロードした。バッファーＡで洗浄した後、ＳＩＲＴ１をバッファーＢ（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．５、２５０ｍＭ ＮａＣｌ、５００ｍＭイミダゾールおよび０．１ｍＭ ＴＣＥＰ）で溶出させた。タンパク質をさらに、Ｈｉ−ｌｏａｄ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ １６／６０ カラム（ＧＥ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用い、バッファーＣ（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．５、３００ｍＭ ＮａＣｌ、０．１ｍＭ ＴＣＥＰ）中、サイズ排除クロマトグラフィーにより精製した。酵素濃度は、ＢＳＡを標品として用い、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイにより測定した。最終的なタンパク質純度はゲル濃度計により評価した。タンパク質をＬＣ／ＭＳにより確認した。Ｖ２２４ＡおよびＴ２１９Ａ（８０％）およびＥ２３０Ａ（８５％）を除く総てのタンパク質が９０％純度より高かった。
【0528】
実施例９６．ＳＩＲＴ１脱アセチル化反応ＳＩＲＴ１脱アセチル化反応は、反応バッファー（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ、ｐＨ ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＤＴＴ、および１％ＤＭＳＯ）中２５℃で、継続的ＰＮＣ１／ＧＤＨ結合アッセイ(continuous PNC1/GDH coupled assay) (Smith, B. C. et al. (2009) Anal Biochem 394, 101)を用いるニコチンアミド産生または質量分析によるＯ−アセチルＡＤＰリボース（ＯＡｃＡＤＰｒ）産生(Hubbard. et al. (2013) Science 339, 1216)のいずれかをモニタリングしながら行った。使用したＰＮＣ１／ＧＤＨカップリング系成分の終濃度は、２０単位／ｍＬウシＧＤＨ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、１μＭ酵母ＰＮＣ１、３．４ｍＭ α−ケトグルタレート、および２２０μＭ ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨであった。吸光係数６．２２ｍＭ−１ｃｍ−１および光路長０．８１ｃｍを用い、３４０ｎｍでの吸光度を、用いた１５０μＬ反応に対する生成物濃度に変換した。ＯＡｃＡＤＰｒ産生をモニタリングするアッセイは、０．０５％ＢＳＡを含む反応バッファー中で行い、１％ギ酸および５ｍＭニコチンアミドの終濃度を与えた停止溶液で脱アセチル化反応を急冷することにより、各時点をとった。急冷した反応物を１：１アセトニトリル：メタノールで５倍希釈し、５，０００ｘｇで１０分間回転させてタンパク質を沈降させた後、エレクトロスプレーイオン化源を取り付けたＡＢＳｃｉｅｘ ＡＰＩ ４０００質量分析計に連結したＡｇｉｌｅｎｔ ＲａｐｉｄＦｉｒｅ ２００ Ｈｉｇｈ−Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ質量分析システム（Ａｇｉｌｅｎｔ、ウェイクフィールド、ＭＡ）で分析した。ｐ５３系Ａｃ−ｐ５３（Ｗ５）（Ａｃ−ＲＨＫＫＡｃＷ−ＮＨ２）ペプチドおよびＦＯＸＯ−３ａ ２１マー（Ａｃ−ＳＡＤＤＳＰＳＱＬＳＫＡｃＷＰＧＳＰＴＳＲＳＳ−ＮＨ２）ペプチドはＢｉｏｐｅｐｔｉｄｅ，Ｉｎｃから入手した。脱アセチル化アッセイでは、特に断りのない限り、Ａｃ−ｐ５３（Ｗ５）基質を使用した。
【0529】
基質のＫＭ決定は、固定された第２基質の飽和濃度で、１つの基質濃度を変えることによって行った。ＳＩＲＴ１活性化および阻害アッセイは、０．０５％ＢＳＡを含む反応バッファー中、２５℃で行い、ＯＡｃＡＤＰｒアッセイを用いて分析した。酵素および化合物を２０分間プレインキュベートした後に基質を添加した。全長ｈＳＩＲＴ１の活性化スクリーンについては、構造的に多様な２４６化合物のセットを各終濃度２５μＭで２回試験した。ＫＭ調節活性剤に対して感受性とするために、それらのＫＭ値のおよそ１０分の１の基質濃度を用いた（表５参照）。５つの化合物の用量依存性を調べ、活性化倍率データを数式１で表した。【数1】
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式中、ｖｘ／ｖ０は、活性剤（Ｘ）の存在下での反応速度（ｖｘ）と不在下での反応速度（ｖ０）の比であり、ＲＶｍａｘは、無限大活性剤濃度での相対速度であり、ＥＣ５０は、２分の１のＲＶｍａｘを生じるために必要な活性剤の濃度であり、ｂは、ｖｘ／ｖ０の最小値である。
【0530】
【表9】
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【0531】
実施例９７．タンパク質の結晶化、データ収集および構造決定ミニｈＳＩＲＴ１／１二元複合体の結晶は、ハンギングドロップ蒸気拡散法により１８℃で得た。ドロップは、１μｌのタンパク質／化合物混合物および０．２Ｍ塩化マグネシウム、０．１Ｍ Ｔｒｉｓ ｐＨ８．５、および１６％ ｗ／ｖのＰＥＧ ４０００の、１μｌの結晶化バッファーから構成された。ミニｈＳＩＲＴ１／１／２の結晶は、ハンギングドロップ蒸気拡散法により１８℃で得た。ドロップは、１μｌのタンパク質／化合物混合物、および０．５５Ｍ塩化ナトリウム、０．１Ｍ ＭＥＳ ｐＨ６．５、および２０％ ｗ／ｖのＰＥＧ ４０００１μｌの結晶化バッファーから構成された。ミニｈＳＩＲＴ１／１／ｐ５３−７マー／ｃａｒｂａＮＡＤ複合体の結晶は、ハンギングドロップ蒸気拡散法により１８℃で得た。ドロップは、１μｌのタンパク質／基質混合物、および５％ ｖ／ｖ Ｔａｃｓｉｍａｔｅ、ｐＨ．００．１ Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ ７．０および１０％ ｗ／ｖ ＰＥＧ ５０００ ＭＭＥの１μｌの結晶化バッファーから構成された。ミニｈＳＩＲＴ１（Ｅ２３０Ｋ）／１／２の結晶は、ハンギングドロップ蒸気拡散法により１８℃で得た。ドロップは、１μｌのタンパク質／化合物混合物、および０．２Ｍ硫酸リチウム、０．１Ｍのビス−Ｔｒｉｓ ｐＨ６．５、２９％ ｗ／ｖ ＰＥＧ ３３５０の１μｌの結晶化バッファーから構成された。
【0532】
これらの結晶を、２０％グリセロールを含有する母液中で凍結保護した後、液体窒素中で急速凍結を行った。ＳＳＲＦ ＢＬ１７Ｕ１、ＡＰＳ ２１−ＩＤ−ＤまたはＡＰＳ ２１−ＩＤ−Ｇビームラインで回折データを収集し、Ｘｉａ２プログラム(Winter, G. (2010) J Appl Crystallogr 43, 186)を用いて処理した。分子置換ソフトウエアＰｈａｓｅｒ(McCoy, A. J. et al. (2007) J Appl Crystallogr 40, 658)を用い、ＳＩＲＴ３のホモログモデル（ＰＤＢコード：３ＧＬＵ）に基づく残基２４２〜４９４を含有する検索モデルで構造を解明した。ＣＣＰ４パッケージ((1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50, 760)のＲｅｆｍａｃ５(Murshudov, A. A. et al. (1997) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 53, 240)とCoot et al. (2004) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 60, 2126の間で反復構造精密化およびモデル構築を行った。回折データ、精密化、および構造統計値に関する詳細なデータを表３に示す。
【0533】
【表10】
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【0534】
実施例９８．核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法１Ｈ、１５Ｎ ＨＳＱＣ ＮＭＲ試験は、４００μＭの１の存在下または不在下で、およそ２００μＭの１５Ｎ標識ＳＩＲＴ１（１８０−２３０）を含有するサンプルを用い、凍結探針を備えたＢｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ ＩＩＩ ６００ＭＨｚ ＮＭＲ分光計にて２５℃で行った。ＮＭＲデータは総てＮＭＲＰｉｐｅ(Delaglio, F. et al. (1995) J Biomol NMR 6, 277)で処理し、ＮＭＲＶｉｅｗ(Johnson, et al. (1994) J Biomol NMR 4, 603)で分析した。
【0535】
実施例９９．サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）アッセイこれらのアッセイは、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ、ｐＨ ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、および０．５ｍＭ ＴＣＥＰに溶かした１００μＭ ＳＴＡＣの不在下または存在下で、１０μＭミニｈＳＩＲＴ１を含有する１００μＬのサンプルを注入するＳｕｐｅｒｄｅｘ ７５ １０／３００ ＧＬカラム（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて行った。結合反応物は室温で１時間インキュベートした後に、カラムに注入した。
【0536】
実施例１００．蛍光偏光（ＦＰ）アッセイＦＰ試験は、２０μＬのアッセイバッファー（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、および１ｍＭ ＤＴＴ）中、２５℃で行った。３８４ウェルプレートをＰＨＥＲＡｓｔａｒ ＦＳにて、励起波長および発光波長それぞれ５０２ｎｍおよび５３３ｎｍで読み取った。プローブ結合に関しては、漸増濃度のＳＩＲＴ１を１０ｎＭのプローブ３に加えた。結合等温線は数式２により表された。競合結合様式に関しては、１５μＭのＡｃ−ｐ５３（Ｗ５）の不在下または存在下(in the absence or presence or 15μM Ac-p53(W5))で、１０ｎＭの３および０．３μＭのＳＩＲＴ１野生型またはＥ２３０Ｋ変異型の混合物に漸増濃度の競合因子を加えた。競合データは数式３で表された。ＩＣ５０からＫｉへの変換は数式４で表され、ここで、ＫｄはＳＩＲＴ１に対する３の結合親和性であり、Ｆ０はプローブ結合Ｂ／（Ｂ＋Ｆ）の分数であり、Ｌ０はプローブ３の濃度である。
【数2】
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【0537】
実施例１０１．水素−重水素交換質量分析（ＨＤＸ−ＭＳ）ＳＩＲＴ１の交換時(on-exchange)試験
Ｈ／Ｄ交換反応の後に、他所に詳細に記載されている完全自動システム(Hamuro, Y. et al. (2003) J Biomol Techniques: JBT 14, 171)を用い、ペプシン消化、脱塩、ＨＰＬＣ分離、およびＭＳ分析を行った。この試験セットに特有なものとして、交換時反応は、Ｄ２Ｏ中で２０μＬのＳＩＲＴ１保存溶液（１．９％ＤＭＳＯ中、０．７７ｍｇ／ｍＬ ＳＩＲＴ１、±３．８８ｍＭ Ａｃ−ｐ５３（Ｗ５）、±１９２μＭリガンド）と２０μＬの１００ｍＭリン酸塩、ｐＨ読み取り７．０を混合することにより開始した。５０％Ｄ２Ｏ混合物を０℃で１５、５０、１５０、５００、１，５００、または５，０００秒間インキュベートした。ＳＩＲＴ１（２２９−５１６）では、交換時反応は、Ｄ２Ｏ中で、４μＬのＳＩＲＴ１保存溶液（１．３６ｍｇ／ｍＬ ＳＩＲＴ１（２２９−５１６）、±１．６７ｍＭ Ｔｒｐ−２５マー）と３６μＬの２００ｍＭリン酸塩、ｐＨ読み取り７．０を混合することにより開始した。９０％Ｄ２Ｏ混合物を０℃で１５、５０、１５０、５００、１，５００、または５，０００秒間インキュベートした。分析直前に、２０μＬの１．６Ｍ塩酸グアニジン（ＧｕＨＣｌ）、０．８％ギ酸、ｐＨ２．３を添加して交換時反応を急冷した。
【0538】
実施例１０２．標準的ＨＤＸサンプルに関する一般的タンパク質処理急冷した溶液を、製造者の指示に従い、Ｐｏｒｏｓ ２０ ＡＬ媒体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カールズバッド、ＣＡ）に固定化したブタペプシン（Ｓｉｇｍａ、セントルイス、ＭＯ）を充填したペプシンカラム（ベッド容積１０４μＬ）に、０．０５％ＴＦＡ水溶液（２００μＬ／分）を用いて２分間通した。消化された断片を逆相トラップカラム（ベッド容積４μＬ）に一時的に回収し、脱塩した。このトラップカラムからペプチド断片を溶出させ、Ｃ１８カラム（ＢｉｏＢａｃｉｓ−１８； Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、サンノゼ、ＣＡ）により、２３分で１３％溶媒Ｂから４０％溶媒Ｂの直線勾配（溶媒Ａ、水中０．０５％ＴＦＡ；溶媒Ｂ、９５％アセトニトリル、５％バッファーＡ；流速１０μＬ／分）を用いて分離した。質量分析は、ＬＴＱ ＯｒｂｉＴｒａｐ ＸＬ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、サンノゼ、ＣＡ）を用い、キャピラリー温度２００℃で行った。
【0539】
実施例１０３．ＳＩＲＴ１の消化／分離の最適化および非重水素化試験非重水素化条件下、高解像度で、ペプチド断片によるＳＩＲＴ１の高い配列包括度を得るために、Ｈ／Ｄ−交換試験の前に、消化および分離条件を最適化した。この工程では、２０μＬの０．７７ｍｇ／ｍＬ（９．２μＭ）ＳＩＲＴ１と２０μＬのＨ２Ｏの混合物を、２０μＬの種々の酸性バッファーを添加することにより急冷した。ＳＩＲＴ１（２２９−５１６）の場合、４μＬのＳＩＲＴ１保存溶液（１．３６ｍｇ／ｍＬ ＳＩＲＴ１（２２９−５１６）、±１．６７ｍＭ Ｔｒｐ−２５マー）と３６μＬのＨ２Ｏの混合物を、２０μＬの種々の酸性バッファーを添加することにより急冷した。急冷した混合物に対し、上記の一般的タンパク質処理を行った。非重水素化ペプチド断片はSequest in Proteome Discoverer 1.1 (Thermo Fisher Scientific, San Jose, CA)によって同定した。
【0540】
実施例１０４．ＳＩＲＴ１の完全重水素化試験完全重水素化サンプルは、Ｄ２Ｏ、ｐＨ２．５中、４５μＬの０．７７ｍｇ／ｍＬ（９．２μＭ）ＳＩＲＴ１と４５μＬの１００ｍＭ ＴＣＥＰの混合物を６０℃で３時間インキュベートすることにより調製した。ＳＩＲＴ１（２２９−５１６）の場合、完全重水素化サンプルは、Ｄ２Ｏ、ｐＨ２．５中、９μＬの１．３６ｍｇ／ｍＬ（４１．７μＭ）ＳＩＲＴ１（２２９−５１６）と８１μＬの１００ｍＭ ＴＣＥＰの混合物を６０℃で３時間インキュベートすることにより調製した。インキュベーション後、サンプルを０℃で維持した後、交換時溶液と同様に急冷し、一般的タンパク質処理を行った。
【0541】
実施例１０５．交換時反応後の各ペプチドの重水素化レベルの測定ペプチドアイソトープエンベロープの重心は、Ｓｉｅｒｒａ Ａｎａｌｙｔｉｃｓ（モデスト、ＣＡ）と共同開発したインハウスプログラムを用いて測定した。タンパク質処理工程中の逆交換(back-exchange)の補正は、以下の標準数式５を用いて行った(Zhang, Z. et al. (1993) Protein Science 2, 522)。
【数3】
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式中、ｍ（Ｐ）、ｍ（Ｎ）、およびｍ（Ｆ）は、それぞれ部分的重水素化（交換時）ペプチド、非重水素化ペプチド、および完全重水素化ペプチドの重心値である。
【0542】
実施例１０６．生物活性質量分析に基づくアッセイを用いてＳＩＲＴ１活性の調節剤を同定した。ＴＡＭＲＡに基づくアッセイでは、以下のような２０アミノ酸残基を有するペプチドを用いた：Ａｃ−ＥＥ−Ｋ（ビオチン）−ＧＱＳＴＳＳＨＳＫ（Ａｃ）ＮｌｅＳＴＥＧ−Ｋ（５ＴＭＲ）−ＥＥ−ＮＨ２（配列番号１）（ここで、Ｋ（Ａｃ）は、アセチル化リジン残基であり、Ｎｌｅは、ノルロイシンである）。このペプチドをＣ末端において蛍光団５ＴＭＲ（励起５４０ｎｍ／発光５８０ｎｍ）で標識した。このペプチド基質の配列は、いくつかの改変を伴うｐ５３に基づくものであった。加えて、この配列中に本来存在するメチオニン残基は、メチオニンが合成および精製中の酸化に感受性があり得るために、ロイシンで置換した。Ｔｒｐに基づくアッセイでは、以下のようなアミノ酸残基を有するペプチドを用いた：Ａｃ−Ｒ−Ｈ−Ｋ−Ｋ（Ａｃ）−Ｗ−ＮＨ２（配列番号２）。
【0543】
ＴＡＭＲＡに基づく質量分析アッセイを次のように行った：０．５μＭのペプチド基質および１２０μＭのβＮＡＤ＋を１０ｎＭのＳＩＲＴ１とともに、反応バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−酢酸ｐＨ８、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌ、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、５ｍＭ ＤＴＴ、０．０５％ＢＳＡ）中、２５℃で２５分間インキュベートした。ＳＩＲＴ１タンパク質は、Ｔ７プロモーターを含有するベクターにＳｉｒＴ１遺伝子をクローニングし、次にこれをＢＬ２１（ＤＥ３）細菌細胞に形質転換し、発現させることによって得た。この反応混合物に試験化合物を種々の濃度で加え、生じた反応物をモニタリングした。ＳＩＲＴ１とともに２５分間インキュベートした後、１０μＬの１０％ギ酸を加えて反応を停止させた。得られた反応物を密閉し、その後の質量分析のために冷凍した。サーチュインにより媒介されるＮＡＤ依存性脱アセチル化反応により生じた脱アセチル化基質ペプチドの量（あるいはまた、生じたＯ−アセチル−ＡＤＰ−リボース（ＯＡＡＤＰＲ）の量）の決定は、試験化合物を含まない対照反応に対する、種々の濃度の試験化合物の存在下での相対的ＳＩＲＴ１活性の正確な測定を可能とした。
【0544】
Ｔｒｐ質量分析アッセイは、次のように行った。０．５μＭのペプチド基質および１２０μＭのβＮＡＤ＋を１０ｎＭのＳＩＲＴ１とともに、反応バッファー（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５、１５００ｍＭ ＮａＣｌ，１ｍＭ ＤＴＴ、０．０５％ＢＳＡ）中、２５℃で２５分間インキュベートした。ＳＩＲＴ１タンパク質は、Ｔ７プロモーターを含有するベクターにＳｉｒＴ１遺伝子をクローニングし、次にこれをＢＬ２１（ＤＥ３）細菌細胞で発現させ、以下にさらに詳細に記載するように精製することによって得た。この反応混合物に試験化合物を種々の濃度で加え、生じた反応物をモニタリングした。ＳＩＲＴ１とともに２５分間インキュベートした後、１０μＬの１０％ギ酸を加えて反応を停止させた。得られた反応物を密閉し、その後の質量分析のために冷凍した。次に、相対的ＳＩＲＴ１活性を、試験化合物を含まない対照反応に対する、種々の濃度の試験化合物の存在下でのＮＡＤ依存性サーチュイン脱アセチル化反応により生じたＯ−アセチル−ＡＤＰ−リボース（ＯＡＡＤＰＲ）量（あるいはまた、生じた脱アセチル化Ｔｒｐペプチドの量）を測定することにより決定した。試験薬剤がＳＩＲＴ１による脱アセチル化を活性化合物した程度は、ＥＣ１．５（すなわち、試験化合物を含まない対照の５０％だけＳＩＲＴ１活性を高めるために必要とされる化合物の濃度）、および最大活性化パーセント（すなわち、試験化合物に関して得られた、対照（１００％）に対する最大活性）として表した。
【0545】
サーチュイン活性の阻害に対する対照実験は、反応の開始時に陰性対照として１μＬの５００ｍＭニコチンアミドを加えることによって行った（例えば、最大サーチュイン阻害の決定を可能とする）。サーチュイン活性の活性化の対照実験は、アッセイの直線範囲内の所与の時点での基質の脱アセチル化量を決定するために、１０ｎＭのサーチュインタンパク質を、化合物の代わりに１μＬのＤＭＳＯとともに用いて行った。この時点は、直線範囲内で試験化合物に関して用いたものと同じであり、終点は速度変化を表す。
【0546】
上記のアッセイのために、ＳＩＲＴ１タンパク質を次のように発現させ、精製した。ＳｉｒＴ１遺伝子を、Ｔ７プロモーターを含有するベクターにクローニングし、ＢＬ２１（ＤＥ３）に形質転換した。タンパク質は、１８℃で一晩、１ｍＭ ＩＰＴＧを用いた誘導により、Ｎ末端Ｈｉｓタグ融合タンパク質として発現させ、３０，０００ｘｇで採取した。細胞を溶解バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、２ｍＭ Ｔｒｉｓ［２−カルボキシエチル］ホスフィン（ＴＣＥＰ）、１０μＭ ＺｎＣｌ２、２００ｍＭ ＮａＣｌ）中、リゾチームを用いて溶解させ、さらに完全に溶解させるために１０分間の音波処理を施した。タンパク質はＮｉ−ＮＴＡカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）で精製し、純粋なタンパク質を含有する画分をプールし、濃縮し、サイズ分画カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｓ２００ ２６／６０ ｇｌｏｂａｌ）に流した。可溶性タンパク質を含有するピークを回収し、イオン交換カラム（ＭｏｎｏＱ）に流した。勾配溶出（２００ｍＭ−５００ｍＭ ＮａＣｌ）により純粋なタンパク質を得た。このタンパク質を濃縮し、透析バッファー（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、２ｍＭ ＴＣＥＰ）に対して一晩透析した。このタンパク質をアリコートに分け、さらなる使用まで−８０℃で冷凍した。
【0547】
ＳＩＲＴ１を活性化した式（Ｉ）のサーチュイン調節化合物を上記のアッセイを用いて同定し、以下の表１に示す。ＥＣ１．５値は、ＳＩＲＴ１の１５０％の活性化をもたらす試験化合物の濃度に相当する。式（Ｉ）の活性化化合物のＥＣ１．５値は、Ａ（ＥＣ１．５＜１μＭ）、Ｂ（ＥＣ１．５ １〜２５μＭ）、Ｃ（ＥＣ１．５＞２５μＭ）で表される。最大活性化倍率％は、Ａ（活性化倍率≧１５０％）またはＢ（活性化倍率＜１５０％）で表される。「ＮＴ」は、試験せずを意味し；「ＮＤ」は、測定不可を意味する。表の化合物番号は化合物番号１０で始まり、括弧内の数字（＃）は、図４および実施例９０〜１０６のＳＴＡＣナンバリングシステムに相当する（すなわち、化合物番号６８はＳＴＡＣ １でもあり、従って、それは６８（１）として示される、さらなるＳＴＡＣ：５４６（３）、４４４（４）、３１４（５）、８１６（７）、７６（８）、および８１（９））。
【0548】
【表11】
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【0549】
特定の実施態様では、化合物は、化合物番号１、３、４、５、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２３、２５、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３６、３８、３９、４０、４１、４２、４５、４６、４７、４８、４９、５３、５４、５６、５７、５９、６１、６３、６６、６８、７５、７６、８０、８１、８３、８６、８７、９０、９３、９５、９９、１０１、１０２、１０７、１１０、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２８、１２９、１３０、１３３、１３５、１３６、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４５、１５０、１５１、１５３、１５６、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６８、１７０、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８４、１８９、１９１、１９４、１９７、２０７、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２３、２３０、２３３、２３５、２３９、２５０、２５４、２６０、２６１、２６４、２６８、２７１、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８５、２８６、２８８、２８９、２９０、２９２、２９３、２９５、２９９、３１４、３１６、３２２、３２４、３２５、３２９、３３０、３３２、３３３、３３５、３４１、３４４、３４７、３４８、３５０、３５１、３５２、３５３、３５４、３５６、３５９、３６０、３６１、３６５、３６６、３６７、３６９、３７３、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８３、３８５、３８７、３８８、３８９、３９１、３９２、３９３、３９４、３９６、４０１、４０２、４０３、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、４０９、４１０、４１１、４１２、４１５、４１７、４１９、４２１、４２２、４２３、４２５、４２７、４２８、４３０、４３１、４３５、４５２、４５９、４６１、４６３、４７０、４７２、４７３、４７４、４７５、４８０、４８１、４８３、４８５、４９１、４９２、４９６、４９７、４９８、４９９、５００、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０９、５１５、５１７、５１９、５２３、５２６、５２７、５３０、５３８、５４０、５４１、５４２、５５６、５５７、５５９、５６２、５６３、５７４、５７５、５８０、５８１、５８３、５８８、５８９、５９０、５９１、５９２、５９３、５９４、５９５、５９６、６０１、６０４、６０５、６０６、６０７、６１１、６１７、６２３、６２５、６２６、６２９、６３０、６３５、６３６、６３７、６３８、６３９、６４０、６４２、６４３、６４５、６４６、６４７、６４８、６５１、６５２、６５３、６５４、６５５、６５６、６５７、６５８、６５９、６６０、６６３、６６５、６６６、６６７、６６８、６７０、６７１、６７２、６７６、６８３、６９２、６９３、６９４、６９８、７０３、７０６、７０８、７０９、７１０、７１４、７１７、７１８、７１９、７２０、７２１、７２２、７２３、７２４、７２５、７２７、７３０、７３１、７３３、７３６、７３７、７３９、７４０、７４１、７４２、７４３、７４６、７４７、７４８、７４９、７５０、７５１、７５２、７５３、７５４、７５６、７５７、７５８、７６０、７６３、７６５、７６６、７６７、７７０、７７６、７７７、７８０、７８８、７９０、７９２、７９７、７９８、７９９、８０１、８０３、８０４、８０６および８０８のうちのいずれか１つである。
【0550】
実施例１０７（４Ｓ）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−７−（４−（トリフルオロメチル）ピペリジン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド
【化197】
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１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）中、（（４Ｓ）−７−クロロ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（７００ｍｇ、２．２１７ｍｍｏｌ）、４−（トリフルオロメチル）ピペリジン（６７９ｍｇ、４．４３ｍｍｏｌ）の脱気溶液に、２０℃で、ジシクロヘキシル（２’，４’，６’−トリイソプロピル−［１，１’−ビフェニル］−２−イル）ホスフィン（４２３ｍｇ、０．８８７ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（９１９ｍｇ、６．６５ｍｍｏｌ）および酢酸パラジウム（ＩＩ）（１００ｍｇ、０．４４３ｍｍｏｌ）を順次加え、この反応混合物を密閉試験管中、９０℃で１６時間撹拌した。この反応混合物を冷水（７０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し(seperated)、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して粗生成物を得た。この粗生成物をシリカゲルカラムに添加し、ジクロロメタン中１％から２％メタノールで溶出させた。画分を集めたところ５００ｍｇとなった。これを再びＧＲＡＣＥ逆相ＨＰＬＣにより精製し、（４Ｓ）−Ｎ−（ピリジン−３−イル）−７−（４−（トリフルオロメチル）ピペリジン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−１，４−メタノピリド［２，３−ｂ］［１，４］ジアゼピン−５（２Ｈ）−カルボキサミド（３２０ｍｇ、０．７１０ｍｍｏｌ、３２％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２１Ｈ２３Ｆ３Ｎ６Ｏの理論値：４３３．２。
【0551】
均等物本発明は、とりわけ、サーチュイン調節化合物およびその使用方法を提供する。本発明の具体例を述べてきたが、上記の明細書は例示であって限定するものではない。本明細書を見直すと、当業者には本発明の多くの変形が明らかとなるであろう。本発明の全範囲は、特許請求の範囲をその均等物の全範囲と併せて、また、明細書をこのような変形と併せて参照することにより決定されるべきである。
【0552】
引用による組み入れ本明細書で言及する総ての刊行物および特許は、以下に列挙するものを含め、個々の刊行物または特許がそれぞれ具体的かつ個別に引用することにより組み入れられることが示されている場合と同様に、その全内容が引用することにより本明細書に組み入れられる。相違がある場合、本明細書におけるいずれの定義も含めて本出願が優先する。
【0553】
さらに、ゲノム研究所（The Institute for Genomic Research）（ＴＩＧＲ）（www.tigr.org）、および／または米国バイオテクノロジー情報センター（National Center for Biotechnology Information）（ＮＣＢＩ）（www.ncbi.nlm.nih.gov）によって管理されるものなどの公共のデータベースへの登録に対応する受託番号を引用するいずれのポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列も、その全内容が引用することにより本明細書に組み入れられる。
【図1】
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【図2】
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【図3-1】
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【図3-2】
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【図3-3】
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【図4】
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【図5】
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【図6-1】
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【図6-2】
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【図7】
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【図8-1】
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【図8-2】
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【図9-1】
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【図9-2】
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【図10】
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【図11】
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【図12】
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