特許 6381544 免疫調節有効成分としての局所的使用のためのグルタミン酸誘導体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6381544

(24)【登録日】2018年8月10日

(45)【発行日】2018年8月29日

(54)【発明の名称】免疫調節有効成分としての局所的使用のためのグルタミン酸誘導体

(51)【国際特許分類】

   C07C 229/24 20060101AFI20180820BHJP

   A61K 31/223 20060101ALI20180820BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20180820BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20180820BHJP

   A61P 17/08 20060101ALI20180820BHJP

   C07C 227/30 20060101ALI20180820BHJP

   C07B 53/00 20060101ALI20180820BHJP

   C07B 61/00 20060101ALN20180820BHJP

【ＦＩ】

   C07C229/24CSP

   A61K31/223

   A61P17/00

   A61P17/06

   A61P17/08

   C07C227/30

   C07B53/00 C

   !C07B61/00 300

【請求項の数】4

【全頁数】21

(21)【出願番号】特願2015-548559(P2015-548559)

(86)(22)【出願日】2013年12月19日

(65)【公表番号】特表2016-508974(P2016-508974A)

(43)【公表日】2016年3月24日

(86)【国際出願番号】EP2013077320

(87)【国際公開番号】WO2014096155

(87)【国際公開日】20140626

【審査請求日】2016年12月8日

(31)【優先権主張番号】1262329

(32)【優先日】2012年12月19日

(33)【優先権主張国】FR

(73)【特許権者】

【識別番号】500166231

【氏名又は名称】ピエール、ファブレ、デルモ‐コスメティーク

【氏名又は名称原語表記】ＰＩＥＲＲＥ ＦＡＢＲＥ ＤＥＲＭＯ−ＣＯＳＭＥＴＩＱＵＥ

(74)【代理人】

【識別番号】100091487

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 行孝

(74)【代理人】

【識別番号】100117787

【弁理士】

【氏名又は名称】勝沼 宏仁

(74)【代理人】

【識別番号】100126099

【弁理士】

【氏名又は名称】反町 洋

(74)【代理人】

【識別番号】100176083

【弁理士】

【氏名又は名称】松山 祐子

(72)【発明者】

【氏名】ダニエル、レドゥル

(72)【発明者】

【氏名】シルビー、ドヌ−マリオン

(72)【発明者】

【氏名】ステファヌ、プワニー

(72)【発明者】

【氏名】マリー−フランソワーズ、アリー

【審査官】 原口 美和

(56)【参考文献】

【文献】 特開平０６−０４０８４４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特公昭５２−０３８０９２（ＪＰ，Ｂ１）

【文献】 英国特許出願公告第０１１２５８２０（ＧＢ，Ａ）

【文献】 Journal of Bioscience and Bioengineering，１９９９年，Vol. 87, No. 3，pp. 357-360

【文献】 SYNTHETIC COMMUNICATIONS，１９９９年 ３月 １日，Vol. 29, No. 5，pp. 843-854

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｃ ２２９／２４

Ａ６１Ｋ ３１／２２３

Ａ６１Ｐ １７／００

Ａ６１Ｐ １７／０６

Ａ６１Ｐ １７／０８

Ｃ０７Ｂ ５３／００

Ｃ０７Ｃ ２２７／３０

Ｃ０７Ｂ ６１／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

炎症性皮膚疾患の治療および／または予防用の局所的使用のための、
５−（３，７−ジメチルオクチル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（３，７−ジメチルオクチルオキシ）−５−オキソペンタン酸、
５−（ノナン−２−イル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（ノナン−２−イルオキシ）−５−オキソペンタン酸、
５−（ノナン−５−イル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（ノナン−５−イルオキシ）−５−オキソペンタン酸、
５−（２−ヘキシルデシル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（２−ヘキシルデシルオキシ）−５−オキソペンタン酸、および
５−（２−エチルヘキシル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（２−エチルヘキシルオキシ）−５−オキソペンタン酸
から選択される、Ｌ−グルタミン酸から誘導された化合物。

【請求項2】

炎症性皮膚疾患が、アトピー性皮膚炎、接触性湿疹、座瘡、脂漏性皮膚炎、酒さまたは乾癬からなる、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

炎症性皮膚疾患の治療および／または予防用の局所的使用のための、少なくとも１種類の薬学上または化粧上許容される賦形剤と組み合わせた、請求項１に定義されるＬ−グルタミン酸から誘導された化合物を有効成分として含んでなる、局所用組成物。

【請求項4】

α−（ｎ−ベンジル）−Ｌ−グルタメート−Ｎ−α−ベンジルカルボニル酸を、Ｒが３，７−ジメチルオクチル基、ノナン−２−イル基、ノナン−５−イル基、２−ヘキシルデシル基および２−エチルヘキシル基から選択される式Ｒ−ＯＨの対応するアルコールと反応させ、かつ、得られた生成物を触媒的水素化により脱保護する、Ｌ−グルタミン酸から誘導された化合物の製造方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明の分野は、新規なグルタミン酸誘導体および免疫調節有効成分としてのそれらの使用に関する。

【0002】

より詳しくは、本発明は、アトピー性皮膚炎、接触性湿疹、座瘡、脂漏性皮膚炎、酒さまたは乾癬などの炎症性皮膚疾患の治療および予防におけるそれらの局所的使用のための新規な着目される組成物に関する。

【背景技術】

【0003】

グルタミン酸のエステルに関してこれまでに記載されている適用は、とりわけ、毛細血管成長を促進することを意図した化粧用組成物を対象とする（ＥＰ０５７２１６７）。他の先願は、合成中間体としてのグルタミン酸の特定のエステルを記載している。

【0004】

アトピー性皮膚炎（ＡＤ）は、小児の２０％近くを侵し、先進国でその罹患率が急増している炎症性の慢性病態である。アトピー性皮膚炎は多因子性疾患であり、その表現型は、多様に組み合わせられ、患者において極めて多形的に発現される、遺伝的および免疫学的要因ならびにホルモン的および環境的要因の両者に支配される要因によって媒介される。現在、ＩｇＥ依存性アレルギーＡＤの形態が識別され、それは患者の約８０％を侵し、正常なＩｇＥ血清濃度が再び見られる少数派の患者に関係する非アレルギー形態である。さらに、疫学的研究は、ＡＤは小児では非アレルギー形態で始まり、その後、アレルギー型へと進展することを示唆していると思われる(Novak N et al., Dichotomic nature of atopic dermatitis reflected by combined analysis of monocyte immunophenotyping and single nucleotide polymorphisms of the interleukin-4/interleukin-13 receptor gene: the dichotomy of extrinsic and intrinsic atopic dermatitis, J Invest Dermatol. 2002 Oct;119(4):870-5, 2002; Allam JP et al., Recent highlights in the pathophysiology of atopic eczema, Int Arch Allergy Immunol. 2005 Feb;136(2):191-7)。

【0005】

免疫学的には、炎症性病変の発生は、環境中に存在する、タンパク質アレルゲン（アトピー性皮膚炎の場合）かまたは化学的アレルゲン（アレルギー性接触性湿疹）のいずれかのアレルゲンによる感作期の後に見られる。湿疹病変はアレルゲンに新たに曝された後に見られ、血液の炎症性細胞が皮膚に浸潤することによる。この期間に活性化されたＣＤ４^＋Ｔリンパ球サブ集団は、Ｔｈ２型（ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３）のサイトカインの産生に関して特定のプロファイルを有し、遅発反応のエフェクター細胞の動員に関与し、ＡＤを有する患者に見られる皮膚バリアの異常を特徴とするフィラグリンおよびセラミドの合成の減少を引き起こす(Cytokine modulation of atopic dermatitis filaggrin skin expression, Howell MD et al., J Allergy Clin Immunol. 2007 Jul;120(1):150-5), (Imokawa et al., Decreased level of ceramides in stratum corneum of atopic dermatitis: an etiologic factor in atopicdry skin, J Invest Dermatol. 1991 Apr;96(4):523-6 1991)。これに関して、皮膚バリアの変化は、アレルゲンの浸透および特定のＴリンパ球の活性化を促進する。さらに、これらのサイトカインは、抗原により活性化されたＢリンパ球に由来する形質細胞によるＩｇＥの合成を担う。よって、アレルギー性応答を持続するための悪循環が存在する。ＩｇＥが負荷された抗原を呈する細胞は、それらのリンパ球に対してはるかに多量のエピトープを有し、ＩｇＥ応答を促進する。

【0006】

ＩＬ−４の産生はＴＨ２分化を特徴付け、ＩｇＥ応答の生成に決定的な役割を果たす。

【0007】

さらに、ＴＨ１７リンパ球は炎症性サイトカインを産生し、ＡＤの病因に重要な役割を果たすことが示された。実際に、薬理臨床試験で、著者らは、ＡＤを有する患者の血液および皮膚のＴＨ１７リンパ球のパーセンテージの上昇と、この上昇がＡＤの重篤度と正の有意な相関があることを見出している(Koga C, Kabashima K, Kobayashi M, Tokura Y. Possible pathogenic role of TH17 cells for atopic dermatitis. J Investig Dermatol 2008; 128:2625-30)。最後に、慢性ＡＤ病変におけるＴＨ１応答の優勢性が挙げられる(von Bubnoff et al, Natural killer cells in atopic and autoimmune diseases of the skin, J Allergy Clin Immunol. 2010 Jan;125(1):60-8)。

【0008】

アトピー性皮膚炎の従来の治療は、特に、皮膚用コルチコイド、またはＴリンパ球免疫応答を抑制することができる分子としての免疫抑制剤を使用する。

【0009】

タクロリムスまたはピメクロリムスのような免疫抑制剤の臨床有効性が多くの研究により確立されている：
De Prost et al., double-blind randomized placebo-controlled trial of local cyclosporine in atopic dermatitis, Arch Dermatol. 1989 Apr;125(4):570;
Ho VC et al., Safety and efficacy of nonsteroid pimecrolimus cream 1% in the treatment of atopic dermatitis in infants, J Pediatr. 2003 Feb;142(2):155-62;
Reitamo et al., Topical noncorticosteroid immunomodulation in the treatment of atopic dermatitis, Am J Clin Dermatol. 2002;3(6):381-8. Review。

【0010】

しかしながら、皮膚用コルチコイドまたは免疫抑制剤は、特に小児にでは、望ましくない作用を伴わないわけではない。

【0011】

ＡＤは、数年間の反復発疹を特徴とする。ＡＤは、自然緩解を挟んだ突発により発症する。

【発明の概要】

【0012】

この疾患は長期間の治療を要する。従って、これらの炎症性皮膚疾患に対する治療法を明らかにする必要および強い要求がある。局所経路による免疫調節剤の使用は、アトピー性皮膚炎、ならびに乾癬または接触性湿疹などの他の皮膚疾患を治療するための治療蓄積の最近の部分である。

【0013】

本出願者は、炎症性皮膚疾患に対して鋭意研究を行い、特に驚くべきことに、一般式ＩのＬ−グルタミン酸誘導体が免疫応答の調節および炎症性応答の調節の両方の特性を有していることに気づいた。

【0014】

従って、本発明の範囲内で、局所適用向けに設計され、リンパ球およびケラチノサイト集団の活性化を調節することができる、Ｌ−グルタメートから誘導された分子（Ｌ−グルタミン酸の５位におけるモノエステル）の開発が企図された。

【0015】

本発明の意味において、「Ｌ−グルタミン酸誘導体」とは、皮膚の炎症性疾患の治療および／または予防向けの皮膚科学的な有効成分としての局所的使用のための、下記の一般式Ｉ：

【化1】

［式中、
Ｒは、
・直鎖または分岐型Ｃ_５−Ｃ_２５アルキル基、好ましくは、Ｃ_５−Ｃ_１４アルキル基、
・またはベンジルラジカル、
・またはフェネチルラジカル、
・イソプレニル、ゲラニル、ファルネシルおよびフィチルラジカルからなる群から選択されるラジカル
を表す］
を満たす化合物を意味する。

【0016】

本発明の特定の実施形態によれば、一般式Ｉの化合物は、ラジカルＲが直鎖または分岐型Ｃ_５−Ｃ_２５、および好ましくは、Ｃ_７−Ｃ_１４アルキル基を表すものである。

【0017】

「アルキルラジカル」とは、本発明の意味において、示された数の炭素原子を含んでなる飽和直鎖または分岐型脂肪族炭化水素鎖を意味する。

【0018】

「ベンジルラジカル」とは、本発明の意味において、−ＣＨ_２−Ｃ_６Ｈ_５を意味する。

【0019】

「フェネチルラジカル」とは、本発明の意味において、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｃ_６Ｈ_５を意味する。

【0020】

本発明の別の態様によれば、炎症性皮膚疾患の治療および／または予防向けの皮膚科学的な使用および組成物はまた、純粋なＬ鏡像異性体だけでなく、Ｄ型およびＬ型の２種の鏡像異性体のあらゆる混合物の形態の、しかしながら好ましくは、主要画分がＬ鏡像異性体である、グルタミン酸誘導体に関する。

【0021】

本発明による化合物は、リンパ球応答ＴＨ１、ＴＨ２およびＴＨ１７に対してグルタミン酸単独で得られるものよりも優れた免疫調節効率を有する（実施例３の化合物で得られたそれぞれ図１ａ、１ｂおよび１ｃ）。従って、これらの誘導体は、アトピー性皮膚炎、接触性湿疹、または乾癬などの炎症性皮膚疾患に罹患している患者において、免疫調節剤としての潜在的利益を有する。

【0022】

本発明の特定の実施形態では、一般式Ｉの誘導体の活性は、それらの鎖長に従って評価された。鎖長がＣ_５〜Ｃ_１４の間である化合物からの活性が最適である（図２ａおよび２ｂ）。本発明の別の実施形態によれば、短い分岐鎖の存在は、実施例３による化合物に比べて免疫調節活性を維持する可能性を与える（図２ｃ）。

【0023】

本発明の好ましい実施形態では、式Ｉの化合物は、新規化合物：
５（３，７−ジメチルオクチル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（３，７−ジメチルオクチルオキシ）−５−オキソ−ペンタン酸、
５（ノナン−２−イル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（ノナン−２−イルオキシ）−５−オキソペンタン酸、
５（ノナン−５−イル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（ノナン−５−イルオキシ）−５−オキソペンタン酸、
５（２−ヘキシルデシル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（２−ヘキシルデシルオキシ）−５−オキソペンタン酸、
５（２−エチルヘキシル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（２−エチルヘキシルオキシ）−５−オキソペンタン酸
である。

【0024】

さらに、本発明による式Ｉの化合物はまた、この場合にもグルタミン酸では見られない抗炎症活性を示す（実施例３の化合物に関しては図４）。これらの誘導体のこの付加的活性は、座瘡、酒さならびに脂漏性皮膚炎などの他の炎症性皮膚疾患に対するそれらの治療適用分野を広げる。

【0025】

従って、本発明による誘導体は、アトピー性皮膚炎、接触性湿疹、座瘡、脂漏性皮膚炎、酒さまたは乾癬などの炎症性皮膚疾患に罹患している患者において、抗炎症および免疫調節剤としての利益を有する。

【0026】

本発明の特定の実施形態によれば、一般式（Ｉ）の化合物は、下記化合物：
５−（ｎ−ペンチル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５−オキソ−５−（ペンチルオキシ）ペンタン酸、
５−（ｎ−ヘキシル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５−（ヘキシルオキシ）−５−オキソペンタン酸、
５−（ｎ−ノニル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５−（ノニルオキシ）−５−オキソペンタン酸、
５−（ｎ−ドデシル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５−（ドデシルオキシ）−５−オキソペンタン酸、
５−（ｎ−テトラデシル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５−オキソ−５（テトラデシル）ペンタン酸、
５−（ｎ−ヘキサデシル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５−（ヘキサデシルオキシ）−５−オキソペンタン酸、
５−（ｎ−オクタデシル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５−（オクタデシルオキシ）−５−オキソペンタン酸、
５−（３，７−ジメチルオクチル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（３，７−ジメチルオクチルオキシ）−５−オキソ−ペンタン酸、
５−（ノナン−２−イル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（ノナン−２−イルオキシ）−５−オキソペンタン酸、
５−（ノナン−５−イル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（ノナン−５−イルオキシ）−５−オキソペンタン酸、
５−（２−ヘキシルデシル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（２−ヘキシルデシルオキシ）−５−オキソペンタン酸、
５−（２−エチルヘキシル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（２−エチルヘキシルオキシ）−５−オキソペンタン酸
の一覧から選択され得る。

【0027】

本発明は、有効成分／免疫調節剤および／または抗炎症剤としての使用のための一般式（Ｉ）の化合物に関する。

【0028】

本発明はまた、炎症性皮膚疾患の治療および／または予防における一般式（Ｉ）の化合物を含んでなる皮膚科学的または化粧用組成物の局所的使用に関する。

【0029】

本発明のもう１つの特徴によれば、免疫調節活性は、組成物の総重量に対して０．０１重量％〜２０重量％、好ましくは０．１重量％〜１０重量％、より詳しくは１重量％〜５重量％の量で少なくとも１種類の式Ｉの化合物を含有する皮膚科学的または化粧用組成物として表れる。

【0030】

本発明による皮膚科学的または化粧用組成物は、１または数種の皮膚科学上または化粧上適合する通常の賦形剤をさらに含んでなる。

【0031】

皮膚科学上または化粧上適合する賦形剤は、ミルク、クリーム、バーム、オイル、ローション、ゲル、発泡ゲル、軟膏、スプレーなどとして局所適用向けの組成物を得るための、当業者に公知のものの中のいずれの賦形剤であってもよい。

【0032】

本発明はまた、Ｎ−α−ベンジルカルボニル−Ｌ−グルタミン酸α−ベンジルエステルを式Ｒ−ＯＨ（式中、Ｒは先に示した意味を有する）のアルコールと反応させ、得られた生成物を触媒的水素化により脱保護することを特徴とする、式Ｉの化合物の製造方法に関する。

【0033】

本発明は、その範囲を限定することなく本発明を説明する以下の結果を読めばより良く理解される。

【図面の簡単な説明】

【0034】

【図1】図１ａ、１ｂおよび１ｃ：ヒトリンパ球によるＩＬ−２（１ａ）、ＩＬ−４（１ｂ）およびＩＬ−１７（１ｃ）の分泌に対する、実施例３の化合物の免疫調節活性の実証。

【図2】図２ａ、２ｂおよび２ｃ：ヒトリンパ球によるＩＬ−２の分泌に対する、直鎖短鎖（２ａ）、直鎖長鎖（２ｂ）および分岐短鎖（２ｃ）を有するアルキル誘導体の免疫調節活性の実証。

【図3】Ｔｈ１、Ｔｈ２およびＴｈ１７型の免疫応答に関与するサイトカインの分泌に対する実施例１２の化合物の免疫調節活性の実証。

【図4】ヒトケラチノサイトによるＩＬ−８の産生に対する実施例３の化合物の抗炎症活性の実証。

【発明の具体的説明】

【0035】

Ａ／薬理学的評価：
Ａ．１−免疫調節活性の実証：それぞれリンパ球応答ＴＨ１、ＴＨ２およびＴＨ１７に関するＩＬ２、ＩＬ−４およびＩＬ−１７の分泌試験
本発明によるエステルの薬理学的活性は次のように実証した：
・血液単核ヒト細胞（末梢血単核細胞ＰＢＭＣ）を“Etablissement Francais du Sang” (EFS) Pyrenees Mediterraneeからのバフィーコートバッグから、フィコール勾配（リンパ球分離用媒体、密度１．０７７ｇ／ｍｌ）で単離し、この細胞集団から磁気免疫選択（ＣＤ４^＋Ｔ細胞単離キットＩＩ、Ｒｅｆ．１３０−０９１−１５５ Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）によりＣＤ４^＋リンパ球を精製した後、２４ウェルプレートの、少量の５％ＦＣＳ ＲＰＭＩ培養培地中に分注し、その後、それらを評価対象の有効成分とともに１時間プレインキュベートした後に３００ｎｇ／ｍｌのＳＥＢ（黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)腸毒素Ｂ）で２４時間刺激する。下記の方法に従って上清から採取したサンプルからリンパ球サイトカインの投与を行う：
・ＩＬ２（ＴＨ１）、ＩＬ４（ＴＨ２）は、フローサイトメトリーにてＣＢＡ（Ｒｅｆ．５５０７４９、ＢＥＣＴＯＮ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）により評価する、
・ＩＬ１７（ＴＨ１７）はＥＬＩＳＡ、ヒトＩＬ１７ Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ（Ｒｅｆ． Ｄ１７００、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）により評価する、
・ＩＬ２（ＴＨ１）もまた、ＥＬＩＳＡ、Ｄｕｏｓｅｔ ＩＬ２（Ｒｅｆ． ＤＹ２０２、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）により評価する。

【0036】

見られた免疫応答の調節を添付の図面により示す：
図１：ヒトリンパ球によるＩＬ−２（１ａ）、ＩＬ−４（１ｂ）およびＩＬ−１７（１ｃ）の産生に対する実施例３の化合物とグルタミン酸の免疫調節活性の実証；この活性は用量依存的であり、３００μＭの濃度でそれぞれＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−１７の産生の６３％、７０％および５４％阻害が得られる。

【0037】

図２：ヒトリンパ球によるＩＬ−２の分泌に対する、直鎖短鎖（２ａ）、直鎖長鎖（２ｂ）および分岐短鎖（２ｃ）を有するアルキル誘導体の免疫調節活性の実証；鎖長がＣ_５〜Ｃ_１４の間である化合物の活性が最適であり、短い分岐鎖の存在は、実施例３の化合物に比べてこの活性を維持する可能性を与える。

【0038】

図３：ヒトリンパ球によるサイトカインＴｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ１７の産生に対する、実施例１２の化合物の免疫調節活性の実証；この活性は用量依存的であり、３００μＭの濃度で、ＩＬ２、ＩＬ６、ＩＦＮγ、ＩＬ１β、ＴＮＦαの産生の４３％、４４％、７７％、８０％、１８％阻害、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ１０、ＩＬ１３の産生の６９％、７７％、８７％、８４％阻害、およびＩＬ１７の産生の８６％阻害が得られる。

【0039】

グルタメート単位に親油性が存在すると、黄色ブドウ球菌のスーパー抗原（ＳＥＢ）Ｂ腸毒素により誘導されるＴＨ２、ＴＨ１７およびＴＨ１のリンパ球活性化の調節が可能となる。

【0040】

Ａ．２−抗炎症活性の実証：ケラチノサイト応答に関するＩＬ８分泌の検討
２４ウェルプレートに分注したＨａＣａＴケラチノサイトを評価対象の有効成分とともに２時間プレインキュベートした後、１０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦαで２４時間刺激する。下記の方法に従い、上清から採取したサンプルからインターロイキン８の投与を行う：
・ＩＬ８は、ＥＬＩＳＡ、Ｄｕｏｓｅｔ ＩＬ８（Ｒｅｆ． ＤＹ２０８Ｅ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）により評価する。

【0041】

見られた炎症性応答の調節を添付の図面により示す：
図４：ＩＬ−８の産生に対する実施例３とグルタミン酸の抗炎症活性の実証。

【実施例】

【0042】

本発明による化合物の合成例
手順１
この手順は、仏国特許第１４２７９９６号、ＭＥＲＣＫ＆ＣＯ、１９６５に記載されているものから適合させたものである。

【0043】

実施例１
５−（ｎ−ペンチル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５−オキソ−５−（ペンチルオキシ）ペンタン酸
Ｌ−グルタミン酸（３ｇ、１当量）を、ｔｅｒｔ−ブタノール（１０．５当量）とペンタノール（９９％、４当量）の混合物に懸濁させる。この反応媒体を４０℃に加熱した後、９５％Ｈ_２ＳＯ_４（１．５当量）を滴下する。次に、加熱温度を明澄な溶液が得られるまで６５℃に高める。最後に、温度を６５℃で２０時間維持する。加熱を止めた後、この反応混合物にトリエチルアミン（０．５７当量）をできるだけ迅速に滴下する。次に、５ｍｌの水および６６ｍｌのエタノールを加える。最後に、室温で、２．１当量のトリエチルアミンを加えると沈殿が始まる。次に、この反応媒体を撹拌しながら３０分間放置する。その後、沈殿を濾過し、次いで、５０℃で１時間、真空乾燥させ、１３ｍｌのエタノール、その後、１３ｍｌのジエチルエーテルで洗浄する。得られた生成物を３０℃で一晩、真空乾燥させた後、４０ｍｌのイソプロパノール：水（１：１）溶液を加え、完全に溶解するまで８３℃に加熱することによって再結晶化させる。次に、この混合物を室温に戻し、生成物を結晶化させる。その後、沈殿を４ｍｌのイソプロパノール：水（１：１）混合物、次いで、１３ｍｌのエタノール、最後に１３ｍｌのジエチルエーテルで洗浄する。得られた生成物を白色結晶の形態で単離する。
収率:１０％

【0044】

【化2】

【0045】

NMR (¹H, D₂O): δ (ppm): 0.9 (t, 3H, CH_3(j)); 1.3 (m, 4H, CH_2(i−h)); 1.7 (quint, 2H, CH_2(g)); 2.1 (m, 2H, CH_2(c)); 2.6 (m, 2H, CH_2(d)); 3.7 (t, 1H, CH_(b)); 4.1 (t, 2H, CH_2(f)).
NMR (¹³C, D₂O): δ (ppm):16.1 (CH_3(j)); 24.5 (CH_2(i)); 28.4 (CH_2(c)); 30.2 (CH_2(h)); 30.3 (CH_2(g)); 32.9 (CH_2(d)); 56.9 (CH_(b)); 68.9 (CH_2(f)); 174.5 (C_(e)); 177.9 (C_(a)).
MS: ESI+: [M+H]⁺:218.2 (100%)

【0046】

実施例２
５（−ｎ−ヘキシル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５−（ヘキシルオキシ）−５−オキソペンタン酸
Ｌ−グルタミン酸（３ｇ、１当量）をｔｅｒｔ−ブタノール（１０．５当量）とヘキサノール（９９％、４当量）の混合物に懸濁させる。反応媒体を４０℃に加熱した後、９５％Ｈ_２ＳＯ_４（１．５当量）を滴下する。次に、加熱温度を明澄な溶液が得られるまで６５℃に高める。最後に、温度を６５℃で１時間維持する。加熱を止めた後、この反応混合物にトリエチルアミン（０．５７当量）をできるだけ迅速に滴下する。次に、５ｍｌの水および６６ｍｌのエタノールを加える。最後に、室温で、２．１当量のトリエチルアミンを加えると沈殿が始まる。次に、この反応媒体を撹拌しながら３０分間放置する。その後、沈殿を濾過し、次いで、５０℃で１時間、真空乾燥させ、１３ｍｌのエタノール、その後、１３ｍｌのジエチルエーテルで洗浄する。得られた生成物を３０℃で一晩、真空乾燥させた後、４０ｍｌのイソプロパノール：水（１：１）溶液を加え、完全に溶解するまで８３℃に加熱することによって再結晶化させる。次に、この混合物を室温に戻し、生成物を結晶化させる。その後、沈殿を４ｍｌのイソプロパノール：水（１：１）混合物、次いで、１３ｍｌのエタノール、最後に１３ｍｌのジエチルエーテルで洗浄する。得られた生成物を白色結晶の形態で単離する。
収率：１７％

【0047】

【化3】

【0048】

NMR (¹H, D₂O): δ (ppm): 0.88 (t, 3H, CH_3(k)); 1.3 (m, 6H, CH_2(j−h)); 1.7 (quint, 2H, CH_2(g)); 2.1 (m, 2H, CH_2(c)); 2.6 (m, 2H, CH_2(d)); 3.7 (t, 1H, CH_(b)); 4.1 (t, 2H, CH_2(f)).
NMR (¹³C, D₂O):δ (ppm):16.2 (CH_3(k)); 24.8 (CH_2(j)); 27.7 (CH_2(c)); 28.4 (CH_2(h)); 30.6 (CH_2(g)); 32.9 (CH_2(d)); 33.6 (CH_2(i)); 56.9 (CH_(b)); 68.9 (CH_2(f)); 174.5 (C_(e)); 177.9 (C_(a)).
MS: ESI+:[M+H]⁺:232.1 (100%)

【0049】

実施例３
５−（ｎ−ノニル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５−（ノニルオキシ）−５−オキソペンタン酸
Ｌ−グルタミン酸（３ｇ、１当量）をｔｅｒｔ−ブタノール（１０．５当量）とノナノール（９９％、４当量）の混合物に懸濁させる。反応媒体を４０℃に加熱した後、９５％Ｈ_２ＳＯ_４（１．５当量）を滴下する。次に、加熱温度を明澄な溶液が得られるまで６５℃に高める。最後に、温度を６５℃で４時間維持する。加熱を止めた後、この反応混合物にトリエチルアミン（０．５７当量）をできるだけ迅速に滴下する。次に、５ｍｌの水および６６ｍｌのメタノールを加える。最後に、室温で、２．１当量のトリエチルアミンを加えると沈殿が始まる。次に、この反応媒体を撹拌しながら３０分間放置する。その後、沈殿を濾過し、約５０ｍｌの蒸留水に再懸濁させる。この混合物を撹拌し、２０分間６５℃に加熱する。沈殿を再び濾過し、１３ｍｌのメタノール、その後、１３ｍｌのジエチルエーテルで洗浄する。得られた生成物を２５℃で一晩、真空乾燥させた後、５０ｍｌのイソプロパノール：水（１：１）溶液を加え、完全に溶解するまで加熱しながらイソプロパノールを還流させることによって再結晶化させる。次に、この混合物を室温に戻し、生成物を結晶化させる。その後、沈殿を５ｍｌのイソプロパノール：水（１：１）混合物、次いで、１５ｍｌのメタノール、最後に１５ｍｌのジエチルエーテルで洗浄する。生成物を白色結晶として単離し、２０℃で一晩、真空乾燥させる。
収率：４０％

【0050】

【化4】

【0051】

NMR (¹H, MeOD): δ (ppm): 0.9 (t, 3H, CH_3(n)); 1.3 (m, 12H, CH_2(m−h)); 1.7 (quint, 2H, CH_2(g)); 2.1 (m, 2H, CH_2(c)); 2.5 (t, 2H, CH_2(d)); 3.6 (t, 1H, CH_(b)); 4.1 (t, 2H, CH_2(f)).
NMR (¹³C, MeOD): δ (ppm): 14.5 (CH_3(n)); 23.7 (CH_2(m)); 27.1 (CH_2(c)); 27.5 (CH_2(h)); 29.8 (CH_2(g)); 30.4 (CH_2(k)); 30.5 (CH_2(i)); 30.7 (CH_2(j)); 31.1(CH_2(d)); 33.1 (CH_2(l)); 55.5 (CH_(b)); 66.0 (CH_2(f)); 174.5 (C_(e)); 177.9 (C_(a)).
C₁₄H₂₇N₂O₄の分析理論値(273.37):理論値: C 61.51; H 9.96; N 5.12; 実測値: C 61.80; H 9.96; N 4.72
MS: ESI+: [M+H]⁺: 274.2 (100%)

【0052】

実施例４
５−（ｎ−ドデシル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５−（ドデシルオキシ）−５−オキソペンタン酸
Ｌ−グルタミン酸（５ｇ、１当量）をｔｅｒｔ−ブタノール（３４ｍｌ、１０．５当量）と１−ドデカノール（２２．９ｇ、３．６当量）の混合物に懸濁させる。この反応媒体を４０℃に加熱する。９５％Ｈ_２ＳＯ_４（２．９ｍｌ）を滴下する。この懸濁液を６５℃に加熱する。１時間半の後、均質な溶液が得られる。この混合物をさらに１時間６５℃で撹拌し、加熱を切る。室温に戻した後、トリエチルアミン（２．７ｍｌ）を１分以内に滴下する。次に、水（８ｍｌ）およびエタノール（１１９ｍｌ）、次いで、トリエチルアミン（１０．２ｍｌ）を加える。３０分の撹拌の後、白色沈殿を濾過し、乾燥させる。これにより得られたペースト状の白色固体を６５℃の湯（９１ｍｌ）の中で摩砕する。固体を濾過し、メタノール（２３ｍｌ）、次いで、ジエチルエーテル（２３ｍｌ）で洗浄し、真空乾燥させる。その後、得られた白色粉末（５．７２ｇ）を８５℃にてイソプロパノール：水（２：１）（１６０ｍｌ）混合物中で摩砕する。この混合物を室温まで冷却し、予想された生成物をフリットで濾過し、イソプロパノール：水（２：１）（５０ｍｌ）混合物、次いで、メタノール（５０ｍｌ）、およびジエチルエーテル（５０ｍｌ）ですすぐ。生成物を一晩、真空乾燥させた後、水（１００ｍｌ）中で摩砕し、最後に、イソプロパノール：水（２：１）（１５０ｍｌ）混合物中で２回目の結晶化を行う。

【0053】

生成物は最終的に白色結晶の形態で単離し、２０℃で一晩、真空乾燥させる。
収率４３％

【0054】

【化5】

【0055】

MP: 189.9℃
NMR (¹H, CF₃COOD, 300 MHz): δ (ppm): 0.9 (t, 3H, CH_3(q)); 1.3 (m, 18H, CH_2(p−h)); 1.8 (m, 2H, CH_2(g)); 2.5 (m, 2H, CH_2(c)); 2.95 (t, 2H, CH_2(d)); 4.3 (t, 2H, CH_2(f)); 4.58 (m, 1H, CH_(b)).
NMR (¹³C, CF₃COOD, 75 MHz): δ (ppm): 12.3 (CH_3(q)); 21.9 (CH_2(p)); 24.2 (CH_2(c)); 25.01 (CH_2(h)); 27.5 (CH_2(g)); 28.5-29.01 (CH_2(i−n)); 30.01 (CH_2(d)); 31.3 (CH_2(O)); 53.4 (CH_(b)); 67.6 (CH_2(f)); 172.5 (C_(e)); 176.6 (C_(a)).
C₁₇H₃₃NO₄の分析理論値(315.24):理論値: C 64.73; H 10.54; N 4.44; 実測値: C 64.57; H 10.69; N 4.10
MS: ESI+: [M+H]⁺: 316.2; ESI-: [M-H]⁻: 314.2

【0056】

実施例５
５−（ｎ−テトラデシル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５−オキソ−５（テトラデシル）ペンタン酸
白色固体として単離されたこの化合物は、４ｇのグルタミン酸および２３．３ｇのテトラデカノールを用い、Ｌ−グルタミン酸５ドデシルエステルを製造するために用いた手順に従って５１％の収率で得られた。

【0057】

【化6】

【0058】

MP: 184.8℃
NMR (¹H, CF₃COOD, 300 MHz): δ (ppm): 0.9 (t, 3H, CH_3(s)); 1.3−1.4 (m, 22H, CH_2(r−h)); 1.8 (m, 2H, CH_2(g)); 2.5 (m, 2H, CH_2(c)); 2.95 (t, 2H, CH_2(d));4.3 (t, 2H, CH_2(f)); 4.58 (m, 1H, CH_(b)).
NMR (¹³C, CF₃COOD, 75 MHz): δ (ppm): 12.2 (CH_3(s)); 21.9 (CH_2(r)); 24.2 (CH_2(c)); 25.01 (CH_2(h)); 27.5 (CH_2(g)); 28.5−29.07 (CH_2(i−p)); 30.00 (CH_2(d)); 31.4 (CH_2(q)); 53.4 (CH_(b)); 67.6 (CH_2(f)); 172.5 (C_(e)); 176.6 (C_(a)).
C₁₉H₃₇NO₄の分析理論値(343.27): 理論値: C 66.43; H 10.86; N 4.08; 実測値: C 65.66; H 10.58; N 3.94
MS: ESI+: [M+H]⁺: 344.2; ESI-: [M-H]⁻: 342.2

【0059】

実施例６
５−（ｎ−ヘキサデシル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５−（ヘキサデシルオキシ）−５−オキソペンタン酸
白色固体として単離されたこの化合物は、５ｇのグルタミン酸および３３ｇのヘキサデカノールを用い、５−（ｎ−ドデシル）−Ｌ−グルタメートを製造するために用いた手順に従って６９％の収率で得られた。

【0060】

【化7】

【0061】

MP: 179.3℃
NMR (¹H, CF₃COOD, 300 MHz): δ (ppm): 0.8 (t, 3H, CH_3(u)); 1.23 (m, 26H, CH_2(t−h)); 1.65 (m, 2H, CH_2(g)); 2.4 (m, 2H, CH_2(c)); 2.8 (t, 2H, CH_2(d)); 4.16 (t, 2H, CH_2(f)); 4.43 (m, 1H, CH_(b)).
NMR (¹³C, CF₃COOD, 75 MHz): δ (ppm): 12.2 (CH_3(u)); 21.9 (CH_2(t)); 24.1 (CH_2(c)); 24.9 (CH_2(h)); 27.4 (CH_2(g)); 28.4-28.9 (CH_2(i−r)); 29.8 (CH_2(d)); 31.3 (CH_2(s)); 53.2 (CH_(b)); 67.4 (CH_2(f)); 172.3 (C_(e)); 176.5 (C_(a)).
C₂₁H₄₁NO₄の分析値(371.55): 理論値: C 67.88; H 11.12; N 3.77; 実測値: C 67.60; H 10.93; N 3.77
MS: ESI+: [M+H]⁺: 372.3; ESI-: [M-H]⁻: 370.2

【0062】

実施例７
５−（ｎ−オクタデシル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５−（オクタデシルオキシ）−５−オキソペンタン酸
この化合物は、２．５ｇのグルタミン酸および１８．１ｇのオクタデカノールを用い、５−（ｎ−ドデシル）−Ｌ−グルタミン酸エステルを製造する用いた手順に従い、白色固体として４５％の収率で単離される。

【0063】

【化8】

【0064】

MP: 180.5℃
NMR (¹H, CF₃COOD, 300 MHz): δ (ppm): 0.8 (t, 3H, CH_3(w)); 1.3 (m, 30H, CH_2(v−h)); 1.7 (m, 2H, CH_2(g)); 2.5 (m, 2H, CH_2(c)); 2.9 (t, 2H, CH_2(d)); 4.2 (t, 2H, CH_2(f)); 4.5 (m, 1H, CH_(b)).
NMR (¹³C, CF₃COOD, 75 MHz): δ (ppm): 12.2 (CH_3(w)); 21.9 (CH_2(v)); 24.1 (CH_2(c)); 24.9 (CH_2(h)); 27.5 (CH_2(g)); 28.5−29.01 (CH_2(i−t)); 29.9 (CH_2(d)); 31.3 (CH_2(u)); 53.3 (CH_(b)); 67.5 (CH_2(f)); 172.4 (C_(e)); 176.6 (C_(a)).
C₂₃H₄₅NO₄の分析理論値(399.61): 理論値: C 69.13; H 11.35; N 3.51; 実測値: C 68.69; H 11.36; N 3.38
MS: ESI+: [M+H]⁺: 400.3; ESI-: [M-H]⁻: 398.3

【0065】

実施例８
５−（３，７−ジメチルオクチル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（３，７−ジメチルオクチルオキシ）−５−オキソ−ペンタン酸
この化合物は、３ｇのグルタミン酸および１５．６ｍｌの３，７−ジメチル−１−オクタノールを用い、５−（ｎ−ドデシル）−Ｌ−グルタミン酸エステルを製造するために用いた手順に従い、白色固体として５１％の収率で単離される。

【0066】

【化9】

【0067】

MP: 150.8℃
NMR (¹H, CF₃COOD, 300 MHz): δ (ppm): 0.95 (m, 6H, CH_3(m+o)); 0.98 (m, 3H, CH_3(n)); 1.3−1.4 (m, 6H, CH_2(i−k)); 1.7 (m, 3H, CH_2(g)+ CH_(l)); 1.9 (m, 1H, CH_(h)); 2.5 (m, 2H, CH_2(c)); 2.9 (m, 2H, CH_2(d)); 4.4 (t, 2H, CH_2(f)); 4.6 (m, 1H, CH_(b)).
NMR (¹³C, CF₃COOD, 75 MHz): δ (ppm): 17.3 (CH_3(n)); 20.5 (CH_3(m)+ CH_3(o)); 23.7 (CH_2(c)+ CH_2(j)); 27.06 (CH_(l)); 29.07 (CH_(h)); 29.7 (CH_2(d)); 34.15 (CH_2(g)); 36.16 (CH_2(i)); 38.3 (CH_2(k)); 53.05 CH_(b)); 65.8 (CH_2(f)); 172.2 (C_(e)); 176.3 (C_(a)).
C₁₅H₂₉NO₄の分析理論値(287.4): 理論値: C 62.69; H 10.17; N 4.87; 実測値: C 62.42; H 10.26; N 4.64
MS: ESI+: [M+H]⁺: 288.3; ESI-: [M-H]⁻: 286.3

【0068】

手順２
出発生成物として（Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−４−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−５−オキソペンタン酸を用いる合成。次に、ベンジルにより保護された官能基を触媒的水素化により脱保護する。

【0069】

ＩＬ２に対する免疫調節活性の実証
先に記載した試験は、実施例８のこの化合物がＩＬ２の分泌に対して３００μＭで２９％の有意な活性を備えていることを示す。

【0070】

実施例９
５−（ｎ−ノナン−２−イル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（ノナン−２−イルオキシ）−５−オキソペンタン酸

【化10】

【0071】

器具：磁気撹拌を備え、窒素掃引下に置いた２５０ｍｌの一口フラスコ

【0072】

α−（ｎ−ベンジル）−Ｌ−グルタメート−Ｎ−α−ベンジルカルボニル酸（５ｇ、１当量）、２−ノナノール（２．９２ｇ、１．５当量）、ＥＤＣＩ（２．５８ｇ、１当量）、ＨＯＢＴ（１．８２ｇ、１当量）およびＤＭＡＰ（１．６５ｇ、１当量）をジクロロメタン（１００ｍｌ）に懸濁させる。反応媒体を室温で一晩撹拌する。この媒体を０．１Ｎ塩酸溶液、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、次いで、飽和塩化ナトリウム溶液で順次洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して淡黄色油状物を得、次にこれをシリカゲルでのクロマトグラフィー（ヘプタン：酢酸エチル勾配（１００：０から５０：５０へ）により精製して黄色油状物を得（２．６５ｇ、収率４０％）、これを再度、段階２下に置く。

【0073】

このアセンブリを不活性雰囲気下（窒素）で固化させる。この黄色油状物をメタノール（１３２ｍｌ）中の溶液とし、パラジウム／炭素（１０％、５６６ｍｇ）を加える。この媒体を室温で一晩水素化した後、セライトで濾過する。濾液を乾燥濃縮して白色固体を得、これをメタノール（１０ｍｌ）中、０℃で１時間摩砕する。次に、この固体をフリットで濾過し、氷冷メタノールですすぎ、乾燥させて白色固体を得る（１ｇ、収率６９％）。

【0074】

【化11】

【0075】

NMR (¹H, CF₃COOD, 300 MHz): δ (ppm): 0.9 (t, 3H, CH_3(m)); 1.3 (m, 13H, CH_3(n) + CH_2(h−l)); 1.7 (m, 2H, CH_2(g)); 2.5 (m, 2H, CH_2(c)); 2.9 (t, 2H, CH_2(d)); 4.5 (m, 1H, CH _(f)); 5.1 (m, 1H, CH_(b)).
NMR (¹³C, CF₃COOD, 75 MHz): δ (ppm): 12.3 (CH_3(m)); 17.6 (CH_2(n)); 21.7 (CH_2(l)); 24.2 (CH_2(c)); 24.6 (CH_2(h)); 28.4−28.5 (CH_2(i−j)); 30.2 (CH_2(d)); 30.3 (CH_2(k)); 34.9 (CH_2(g)); 53.3 (CH_(b)); 75.8 (CH_2(f)); 172.5 (C_(e)); 176.1 (C_(a)).
C₁₄H₂₇NO₄の分析理論値(273.37): 理論値: C 61.51; H 9.96; N 5.12; 実測値: C 61.63; H 9.67; N 5.07
MS: ESI+: [M+H]⁺: 274.3; ESI-: [M-H]⁻: 272.2

【0076】

実施例１０
５−（ｎ−ノナン−５−イル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（ノナン−５−イルオキシ）−５−オキソペンタン酸
この化合物は、化合物５−（ｎ−ノナン−２−イル）−Ｌ−グルタメートを単離するために用いたものと同じ操作条件下で得られる。最後の段階のメタノール中での摩砕だけは、この溶媒中でのこの生成物の溶解度が部分的であるために適用しなかった。

【0077】

段階１：経時的に結晶化する１．９８ｇの黄色油状物、収率６０％。
段階２：３００ｍｇ、収率６８％

【0078】

【化12】

【0079】

NMR (¹H, CF₃COOD, 300 MHz): δ (ppm): 0.9 (m, 6H, CH_3(n) + CH_3(j)); 1.3 (m, 8H, CH_2(m+l+h+i)); 1.4 (m, 4H, CH_2(k+g)); 2.1 (m, 2H, CH_2(c)); 2.5 (m, 2H, CH_2(d)); 3.5 (m, 1H, CH_(f)); 4.8 (m, 1H, CH_(b)).
NMR (¹³C, CF₃COOD, 75 MHz): δ (ppm): 17.5 (CH_3(j)+ CH_3(n)); 24.04 (CH_2(l+m+h+i)); 28.8 (CH_2(c)); 31.5 (CH_2(d)); 35.3 (CH_2(g+k)); 55.7 (CH_(b)); 76.4 (CH_2(f)); 173.4 (C_(e)); 174.6 (C_(a)).
C₁₄H₂₇NO₄の分析理論値(273.37): 理論値: C 61.51; H 9.96; N 5.12; 実測値: C 61.17; H 9.91; N 5.03
MS: ESI+: [M+H]⁺: 274.3; ESI- [M−H]⁻: 272.2

【0080】

実施例１１
５−（２−ヘキシルデシル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（２−ヘキシルデシルオキシ）−５−オキソペンタン酸
この化合物は、化合物５−（ノナン−２−イル）−Ｌ−グルタメートを単離するために用いたものと同じ操作条件下で得られる。最後の段階の低収率は、メタノール中でのこの生成物の溶解度が部分的であることで説明される。

【0081】

段階１：３．９３ｇの白色固体、収率５７％
段階２：４４０ｍｇの白色固体、収率１８％

【0082】

【化13】

【0083】

NMR (¹H, CF₃COOD, 300 MHz): δ (ppm): 0.9 (m, 6H, CH_3(o) + CH_3(u)); 1.3 (m, 24H, CH_{2(h+i+j+k+l+m+n+p+q+r+s+t)}); 1.7 (m, 1H, CH_g); 2.5 (m, 2H, CH_2(c)); 2.9 (m, 2H, CH_2(d)); 4.2 (m, 2H, CH_2(f)); 4.5 (m, 1H, CH_(b)).
NMR (¹³C, CF₃COOD, 75 MHz): δ (ppm): 12.1 (CH_3(O)+ CH_3(u)); 21.7 (CH_2(n+t)); 24.1 (CH_2(c)); 25.8 (CH_2(i+q)); 28.6−31.2 (CH_{2(d+j+k+r+h+p+m+l+s)}); 36.7 (CH_g); 53.3 (CH_(b)); 70.3 (CH_2(f)); 172.4 (C_(e)); 176.6 (C_(a)).
の分析理論値 C₂₁H₄₁NO₄ (371.3): 理論値: C 67.88; H 11.12; N 3.77; 実測値: C 67.78; H 11.08; N 3.76
MS: ESI+: [M+H]⁺: 372.3; ESI−: [M−H]⁻: 370.3

【0084】

実施例１２
５−（２−エチルヘキシル）−Ｌ−グルタメートまたは２−アミノ−５（２−エチルヘキシルオキシ）−５−オキソペンタン酸
この化合物は、化合物５−（ノナン−２−イル）−Ｌ−グルタメートを単離するために用いたものと同じ操作条件下で得られる。別法が段階２の処理において存在する。実際に、セライトで濾過した後、濾液を濃縮して約５０ｍｌとする。ジイソプロピルエーテル（２００ｍｌ）を加え、生じた混合物を−１８℃で一晩置く。これによって得られた懸濁液を濾過し、白色固体を真空乾燥させる。

【0085】

段階１：４．２２ｇの無色の油状物、収率６５％
段階２：１．５ｇの白色固体、収率７０％

【0086】

【化14】

【0087】

MP: 157.9℃
NMR (¹H, CF₃COOD, 300 MHz): δ (ppm): 0.9 (m, 6H, CH_3(k) + CH_3(m)); 1.4 (m, 8H, CH_2(h+i+j+l)); 1.7 (m, 1H, CH_g); 2.6 (m, 2H, CH_2(c)); 2.9 (m, 2H, CH_2(d)); 4.2 (m, 2H, CH_2(f)); 4.5 (m, 1H, CH_(b)).
NMR (¹³C, CF₃COOD, 75 MHz): δ (ppm): 8.9 (CH_3(m)); 11.9 (CH_3(k)); 22.0 (CH_2(j)); 22.8 (CH_2(l)); 24.2 (CH_2(c)); 28.2 (CH_2(i)); 29.5 (CH_2(h)); 29.9 (CH_2(d)); 38.3 (CH_g); 53.3 (CH_(b)); 69.9 (CH_2(f)); 172.5 (C_(e)); 176.6 (C_(a)).
C₁₃H₂₅NO₄の分析理論値(259.2): 理論値: C 60.21; H 9.72; N 5.40; 実測値: C 60.08; H 9.59; N 5.45
MS: ESI+: [M+H]⁺: 260.2; ESI-: [M-H]⁻: 258.1

【0088】

実施例１２の化合物のケラチノサイトモデルでの評価：
アトピー性皮膚炎（ＡＤ）の表現型を発現するケラチノサイトに対する抗炎症活性の実証：アトピー性皮膚炎の病態における過剰発現サイトカインおよびケモカインの研究
２４ウェルプレートに分注した初代ケラチノサイト（ＮＨＥＫ、正常ヒト表皮ケラチノサイト）を有効成分とともに１時間プレインキュベートした後、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてアトピー性皮膚炎の生理病理学的環境を作り出す可能性を与える４つのアゴニストのカクテル：１００ｎｇ／ｍｌ ＩＬ４＋１００ｎｇ／ｍｌ ＩＬ１３＋１μｇ／ｍｌポリＩ：Ｃ＋５μｇ／ｍｌ Ｐａｍ３ＣＳＫ４で２４時間刺激し、このモデルは、ＤＡにおける過剰発現Ｔｈ２サイトカイン（ＩＬ４、ＩＬ１３）により、ならびに、ＤＡの細菌成分（ＴＬＲ−２リガンドであるＰａｍ３ＣＳＫ４により模倣）およびウイルス成分（ＴＬＲ−３リガンドであるポリＩ：Ｃにより模倣）により、媒介される炎症誘導の可能性を与える。ＤＡマーカーの遺伝子発現の分析は、４８遺伝子を有するＰＣＲアレイで行い、３名の異なるＮＨＥＫドナーで繰り返す。

【0089】

見られる炎症性応答の調節を添付の表により示す：
ここで、全マーカーに関して、５時間または２４時間時点の０．５未満のＲＱ（相対量）は有意な阻害を示す：
→リンパ球Ｔｈ２分極に関与し、ＡＤに特異的なＴＳＬＰマーカーの阻害；
→炎症性サイトカインＩＬ１Ａ、ＩＬ８、ＣＳＦ２、ＩＦＮＢ１、ＶＥＧＦの阻害；
→動員、皮膚浸潤、および炎症性細胞（白血球、リンパ球、Ｔｈ１およびＴｈ２リンパ球、単球）の活性化に関与するケモカインＣＣＬ、ＣＸＣＬの阻害。

【0090】

ＤＡの炎症性マーカーであるサイトカインおよびケモカインの遺伝子発現に対する実施例１２の抗炎症活性の実証に関して得られた結果を下表に示す。

【0091】

【表1】

【0092】

本発明による有効成分の処方物の実施例
この種の式Ｉの化合物に関して具体的に処方物を開発し、詳細には、ラジカルＲが５〜２５個の炭素原子を有する直鎖または分岐型アルキルであり、一般に極めて低い水溶解度を有する処方物を開発した。

【0093】

下記の処方物は、実施例１２の化合物に相当するが、Ｃ_５−Ｃ_２５アルキル置換を有する式Ｉの他の化合物に対しても完全に一般化することができる。

【0094】

実施例１２の化合物 １．０
シクロメチコン ３．５
ＭＹＲＩＴＯＬ３１８皮膚軟化剤 ３．５
ＣＥＴＩＯＬ ＨＥ皮膚軟化剤 ３．５
ＳＥＰＩＰＬＵＳ４００ゲル化剤 ３．０
プロピレングリコール ９．０
フェノキシエタノール ０．２
精製水 ｑｓｐ １００ｍｌ

【0095】

上記処方物は、下記のように調製した。
相Ａ： 水およびフェノキシエタノール混合物を７５℃に加熱する。加熱を維持し、強く撹拌しながらゲル化剤を加える。
相Ｂ： 皮膚軟化剤とシリコーンを混合し、この混合物を７５℃に加熱する。
相Ｃ： プロピレングリコールと実施例１２の化合物を混合し、この混合物を３０分間８０℃に加熱する。
ＡにＢを乳化させた後、相Ｃを加える。

【図1a】

【図1b】

【図1c】

【図2a】

【図2b】

【図2c】

【図3】

【図4】