特許 6387095 バソプレッシン−２受容体アゴニスト

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6387095

(24)【登録日】2018年8月17日

(45)【発行日】2018年9月5日

(54)【発明の名称】バソプレッシン−２受容体アゴニスト

(51)【国際特許分類】

   C07K 7/16 20060101AFI20180827BHJP

   A61K 38/11 20060101ALI20180827BHJP

   C07D 417/06 20060101ALI20180827BHJP

   A61P 13/02 20060101ALI20180827BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20180827BHJP

【ＦＩ】

   C07K7/16ZNA

   A61K38/11

   C07D417/06

   A61P13/02

   A61P43/00 111

【請求項の数】22

【全頁数】54

(21)【出願番号】特願2016-530091(P2016-530091)

(86)(22)【出願日】2014年7月25日

(65)【公表番号】特表2016-527255(P2016-527255A)

(43)【公表日】2016年9月8日

(86)【国際出願番号】US2014048317

(87)【国際公開番号】WO2015013690

(87)【国際公開日】20150129

【審査請求日】2017年7月18日

(31)【優先権主張番号】61/952,073

(32)【優先日】2014年3月12日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/859,024

(32)【優先日】2013年7月26日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】500297535

【氏名又は名称】フェリング ベスローテン フェンノートシャップ

(74)【代理人】

【識別番号】230104019

【弁護士】

【氏名又は名称】大野 聖二

(74)【代理人】

【識別番号】100119183

【弁理士】

【氏名又は名称】松任谷 優子

(74)【代理人】

【識別番号】100114465

【弁理士】

【氏名又は名称】北野 健

(74)【代理人】

【識別番号】100149076

【弁理士】

【氏名又は名称】梅田 慎介

(74)【代理人】

【識別番号】100173185

【弁理士】

【氏名又は名称】森田 裕

(74)【代理人】

【識別番号】100133042

【弁理士】

【氏名又は名称】佃 誠玄

(72)【発明者】

【氏名】ウィスニーウースキー，カジミエシュ

(72)【発明者】

【氏名】シュタインガート，クラウディオ

(72)【発明者】

【氏名】リヴィエール，ピエール

【審査官】 植原 克典

(56)【参考文献】

【文献】 特表平９−５０２４２３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表平８−５１１５５７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 J.Med.Chem.，１９８７年，vol.30，p.2245-2252

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｋ ７／１６

Ａ６１Ｋ ３８／１１

Ｃ０７Ｄ ４１７／０６

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式Ｉの化合物または医薬として許容されるその塩：

【化1】

式中、
Ｒ²は、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₄アルキル、ハロゲン、−ＯＨまたは−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₄アルキルであり、
Ｒ³は、Ｈまたは−ＣＨ₂−ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ⁵Ｒ⁶であり、
Ｒ⁴は、Ｈまたは−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ₂であり、
Ｒ⁵およびＲ⁶は、独立して、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₆アルキル、−ＣＨ₂−シクロプロピル、−シクロプロピルまたはアリールアルキルであり、ただし、Ｒ⁵およびＲ⁶が両方ともＨであることはなく、
ＸおよびＹは、独立して、−ＣＨ₂−または−Ｓ−であり、ただし、Ｘが−ＣＨ₂−である場合、Ｙは−ＣＨ₂−でなく、
Ｚは、−ＣＨＲ⁷−またはＳであり、Ｒ⁷は、ＨまたはＣ₁〜Ｃ₄アルキル、ハロゲン、−ＯＨもしくは−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₄アルキルであり、
Ｒ⁸は、Ｈまたは−ＣＨ₃であり、
Ａｒは、ヘテロアリールまたはフェニルであり、所望により、１つのＣ₁〜Ｃ₄アルキル、ハロゲン、−ＯＨまたは−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₄アルキルで置換されていてもよい。

【請求項2】

Ｒ⁵およびＲ⁶が、独立して、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₆アルキルまたはアリールアルキルである、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

ＸおよびＹの一方のみが−Ｓ−である、請求項１に記載の化合物。

【請求項4】

Ｘが−ＣＨ₂−である、請求項１に記載の化合物。

【請求項5】

ＸおよびＹが両方とも−Ｓ−である、請求項１に記載の化合物。

【請求項6】

Ａｒがチオフェンである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項7】

Ｒ⁸が−ＣＨ₃である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項8】

Ｒ³が−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ⁵Ｒ⁶である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項9】

Ｒ⁵がＨであり、Ｒ⁶がＣ₁〜Ｃ₄アルキルである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項10】

Ｒ⁵およびＲ⁶の両方が−ＣＨ₂ＣＨ₃である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項11】

Ｒ²がハロゲンである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項12】

Ｒ²が−Ｃｌである、請求項１１に記載の化合物。

【請求項13】

Ｒ²が−Ｆである、請求項１１に記載の化合物。

【請求項14】

下記化合物５、１０、１３、１４、２１、または３３である、請求項１に記載の化合物。

【化2】

【化3】

【化4】

【化5】

【化6】

【化7】

【請求項15】

下記化合物５である、請求項１に記載の化合物。

【化8】

【請求項16】

下記化合物１０である、請求項１に記載の化合物。

【化9】

【請求項17】

下記化合物１３である、請求項１に記載の化合物。

【化10】

【請求項18】

下記化合物１４である、請求項１に記載の化合物。

【化11】

【請求項19】

下記化合物２１である、請求項１に記載の化合物。

【化12】

【請求項20】

下記化合物３３である、請求項１に記載の化合物。

【化13】

【請求項21】

請求項１〜２０のいずれか一項に記載の化合物を含む、尿崩症、一次性夜尿症または夜間頻尿の治療に使用するための医薬組成物。

【請求項22】

請求項１〜２０のいずれか一項に記載の化合物の、尿崩症、一次性夜尿症または夜間頻尿の治療のための薬剤の製造における使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０１３年７月２６日に出願された米国仮特許出願第６１／８５９，０２４号および２０１４年３月１２日に出願された同第６１／９５２，０７３号の利益を主張し、これらはいずれも援用によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

本発明は、バソプレッシン−２（Ｖ₂）受容体に対してアゴニスト活性を有する新規な化合物、これらを含む医薬組成物、およびこれらの化合物の、疾患の治療のための薬剤の製造のための使用に関する。

【背景技術】

【0003】

バソプレッシン受容体には３つの既知のサブタイプＶ_1a、Ｖ_1bおよびＶ₂がある。Ｖ_1b受容体はＶ₃受容体ともいわれ、Ｖ_1a受容体はＶ₁受容体ともいわれる。各々のサブタイプは組織内で異なる発現のパターンを有しており、Ｖ₂は主として腎臓で見られ、内在性リガンドバソプレッシンの抗利尿活性を媒介する（Ｆａｖｏｒｙら、２００９）。Ｖ_1bは脳内に広く分布している（Ｈｅｒｎａｎｄｏら、２００１）。Ｖ_1aは平滑筋、肝臓、腎臓、血小板、脾臓および脳を含めて様々な組織で見られる（Ｚｉｎｇｇ、１９９６；Ｏｓｔｒｏｗｓｋｉら、１９９４）。

【0004】

Ｖ₂受容体のアゴニストは臨床的に有用である。デスモプレシンは、幾つかの地域で尿崩症、一次性夜尿症、夜間頻尿、ならびに血友病Ａおよびフォンビルブラント病を始めとする凝固異常の治療用に承認されているＶ₂受容体アゴニストである。デスモプレシンはＶ₂およびＶ_1b受容体の両方に結合し活性化するが、Ｖ_1aに対する活性はそれより弱い。

【0005】

デスモプレシンは、部分的に腎臓を介して分泌されることが示されており（例えば、Ｆｊｅｌｌｅｓｔａｄ−Ｐａｕｌｓｅｎら、１９９３）、デスモプレシンの半減期は腎臓機能障害の患者では増大する（Ｒｕｚｉｃｋａら、２００３；Ａｇｅｒｓｏｅら、２００４）。Ａｇｅｒｓｏｅらは、増大した半減期が、長期の抗利尿作用をもたらし、発作または昏睡のような有害事象を引き起こし得る血清ナトリウムレベルの低下、すなわち低ナトリウム血症のリスクを増大させる可能性を示唆している。彼らはさらに、「デスモプレシンは腎機能障害のある患者に対して安全で十分に容認されるようであるが、中程度または重篤な腎機能障害を有する患者を少しでもデスモプレシンで治療しようとするならば、有効な投与計画をたてるときに多大な注意を払うべきである」と述べている。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

したがって、Ｖ_1b受容体に対して低減した活性を有する追加のＶ₂受容体アゴニストに対するニーズがある。加えて、排泄のために大いに腎臓に依存することのないＶ₂受容体アゴニストも望ましい場合がある。

【課題を解決するための手段】

【0007】

１つの実施形態において、式Ｉの化合物または医薬として許容されるその塩が提供される。

【化1】

式中、Ｒ²は、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₄アルキル、ハロゲン、−ＯＨまたは−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₄アルキルであり、
Ｒ³は、Ｈまたは−ＣＨ₂−ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ⁵Ｒ⁶であり、
Ｒ⁴は、Ｈまたは−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ₂であり、
Ｒ⁵およびＲ⁶は、独立して、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₆アルキル、−ＣＨ₂−シクロプロピル、−シクロプロピルまたはアリールアルキルであり、ただし、Ｒ⁵およびＲ⁶が両方ともＨであることはなく、
ＸおよびＹは、独立して、−ＣＨ₂−または−Ｓ−であり、ただし、Ｘが−ＣＨ₂−である場合、Ｙは−ＣＨ₂−ではなく、
Ｚは、−ＣＨＲ⁷−またはＳであり、Ｒ⁷は、ＨまたはＣ₁〜Ｃ₄アルキル、ハロゲン、−ＯＨもしくは−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₄アルキルであり、
Ｒ⁸は、Ｈまたは−ＣＨ₃であり、
Ａｒは、ヘテロアリールまたはフェニルであり、所望により、１つのＣ₁〜Ｃ₄アルキル、ハロゲン、−ＯＨまたは−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₄アルキルで置換されていてもよい。

【0008】

幾つかの実施形態において、Ｒ⁵およびＲ⁶は、独立して、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₆アルキルまたはアリールアルキルである。

【0009】

幾つかの実施形態において、Ｒ⁵およびＲ⁶は、独立して、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₆アルキルまたはアリールアルキルである。

【0010】

幾つかの実施形態において、Ｒ⁵およびＲ⁶は両方ともＨであることはない。

【0011】

幾つかの実施形態において、ＸおよびＹの一方のみが−Ｓ−である。幾つかの実施形態において、Ｘは−ＣＨ₂−である。幾つかの実施形態において、ＸおよびＹは両方とも−Ｓ−である。

【0012】

幾つかの実施形態において、Ａｒはチオフェンである。

【0013】

幾つかの実施形態において、Ｒ⁸は−ＣＨ₃である。

【0014】

幾つかの実施形態において、Ｒ³は−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ⁵Ｒ⁶である。これらの実施形態の幾つかにおいて、Ｒ⁵はＨであり、Ｒ⁶はＣ₁〜Ｃ₄アルキルである。これらの実施形態の幾つかにおいて、Ｒ⁵およびＲ⁶の両方とも−ＣＨ₂ＣＨ₃である。

【0015】

幾つかの実施形態において、Ｒ²はハロゲンである。これらの実施形態の幾つかにおいて、Ｒ²は−Ｃｌである。これらの実施形態の幾つかにおいて、Ｒ²は−Ｆである。

【0016】

また、本発明により、１つの実施形態に従って、治療上有効な量の式Ｉの化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、尿崩症、一次性夜尿症および夜間頻尿の１つを治療する方法も提供される。本発明はまた、本明細書に記載の状態を治療する際における本明細書に記載の化合物の使用、および本明細書に記載の状態を治療するための薬剤の製造における本明細書に記載の化合物の使用も包含する。

【0017】

ある実施形態によれば、式Ｉの化合物は尿崩症、一次性夜尿症または夜間頻尿の治療のための薬剤に使用される。

【発明を実施するための形態】

【0018】

他に断らない限り、本明細書および特許請求の範囲を含めて本出願で使用する以下の用語は次に掲げる定義を有する。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形態の用語は、前後関係から明らかに他の意味が示されない限り、複数の対象を包含することに留意しなければならない。標準的化学用語の定義は、Ｃａｒｅｙ ａｎｄ Ｓｕｎｄｂｅｒｇ（２００７）Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５^th Ｅｄ．Ｖｏｌｓ．Ａ ａｎｄ Ｂ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを含めた参考資料に見ることができる。本発明の実施の際には、特に示さない限り、当業界の技能の範囲内で、合成有機化学、質量分析、分取用および分析用のクロマトグラフィー、タンパク質化学、生化学ならびに薬理学の慣用の方法を使用する。

【0019】

「アルキル」はＣ_1-12の直鎖または分岐鎖アルキルである。分岐アルキルにはｉｓｏ−、ｓｅｃ−およびｔｅｒｔ−立体配置が含まれる。

【0020】

「アリール」は、所望によりＣ₁〜Ｃ₄アルキル、ハロゲン、−ＯＨまたは−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₄アルキルで置換されていてもよい、５〜１２個の炭素原子の単環式または二環式の芳香族炭素環式系である。代表的な単環式および二環式芳香族炭素環式系には、所望により置換されていてもよいフェニルおよび所望により置換されていてもよいナフチルがある。

【0021】

「アリールアルキル」は、置換基としてアリールまたはヘテロアリール基を有するアルキル基である。

【0022】

「ヘテロアリール」は、所望によりＣ₁〜Ｃ₄アルキル、ハロゲン、−ＯＨまたは−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₄アルキルで置換されていてもよい、芳香族複素環式５または６員環系である。５員のヘテロ芳香族環系は５個の環原子を有する単環式芳香族環系であり、ここで１、２、３または４個の環原子は独立してＮ、ＯおよびＳから選択される。代表的な５員のヘテロ芳香族環系には、所望により置換されていてもよい、イミダゾリル、チアゾリル、チエニル、フリル、ピラゾリル、およびトリアゾリルがある。６員のヘテロ芳香族環系は６個の環原子を有する単環式芳香族環系であり、ここで１、２、３または４個の環原子は独立してＮ、ＯおよびＳから選択される。代表的な６員のヘテロ芳香族環系には、所望により置換されていてもよい、ピリジル、ピリミジルおよびピラジニルがある。

【0023】

本発明の１つの実施形態は本発明の化合物を含む医薬組成物を提供する。第１の実施形態において、医薬組成物はさらに、１つまたは複数の医薬として許容される賦形剤またはビヒクル、ならびに所望により他の治療および／または予防成分を含む。かかる賦形剤は当業者に公知である。本発明の化合物には、限定されることはないが、遊離塩基のような塩基性の化合物が含まれる。医薬として許容される賦形剤および塩の徹底した考察は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）から利用可能である。

【0024】

医薬として許容される塩の例としては、酸付加塩、例えば、塩化水素酸のようなハロゲン化水素酸、ならびに硫酸、リン酸および硝酸のような鉱酸、ならびにギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、エンボン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、ハロベンゼンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トルエンスルホン酸およびナフタレンスルホン酸のような、脂肪族、脂環式、芳香族または複素環式スルホン酸またはカルボン酸との反応によって形成される塩がある（例えば、Ｂｅｒｇｅら，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１ １９，１９７７およびＷｅｒｍｕｔｈ，Ｃ．Ｇ． ａｎｄ Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ，ｅｄｓ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ．Ｚｕｒｉｃｈ：Ｖｅｒｌａｇ Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，２００２参照）。

【0025】

意図された投与モードに応じて、医薬組成物は、例えば、錠剤、坐剤、丸剤、カプセル剤、散剤、液剤、懸濁剤、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤などのような固体、半固体または液体の剤形の形態、好ましくは正確な薬用量の単回投与に適した単位投与形態であり得る。組成物は有効な量の選択された薬剤を医薬として許容される担体と組み合わせて含み、さらに他の医薬品、アジュバント、希釈剤、緩衝剤等を含んでいてもよい。

【0026】

本発明は、異性体、異性体のラセミもしくは非ラセミ混合物または医薬として許容されるその塩もしくは溶媒和物を含む本発明の化合物を、１つまたは複数の医薬として許容される担体ならびに所望により他の治療および／または予防成分と共に含む医薬組成物を包含する。

【0027】

固体の組成物で、慣用の非毒性固体担体としては、例えば、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、ショ糖、炭酸マグネシウムなどがある。

【0028】

経口投与の場合、組成物は一般に、錠剤、カプセル剤、ソフトゲルカプセル剤、非水性溶液剤、懸濁剤またはシロップ剤の形態をとる。錠剤およびカプセル剤が好ましい経口投与形態である。幾つかの実施形態において、錠剤はウエハー、例えば速融解性ウエハーである。幾つかの実施形態において、ウエハーは舌下投与経路により投与される。経口用の錠剤およびカプセルは一般にラクトースおよびコーンスターチのようなよく使われる担体を１つまたは複数含む。ステアリン酸マグネシウムのような滑剤も通例添加される。液体懸濁剤を使用する場合、活性薬剤を乳化剤および懸濁剤と組み合わせてもよい。所望であれば、香料、着色剤および／または甘味料も添加してよい。本発明の経口製剤に配合されるその他の任意成分には、限定されることはないが、保存剤、懸濁剤、増粘剤などがある。

【0029】

治療のための薬用量は、併用療法の成分の吸収、分配、代謝および排泄の速度ならびに当業者に公知の他の要因に依存する。薬用量の値はまた軽減するべき症状の重篤度と共に変化する。さらに、任意の個々の対象に対して、具体的な投薬計画および投与計画は、個々人の必要性および治療薬の投与を管理または監督する人の専門的判断に従って経時的に調節することができると理解されたい。幾つかの実施形態において、静脈内投与用量はおよそ１００ｎｇである。幾つかの実施形態において、経口投与用量は１μｇ〜１ｍｇである。幾つかの実施形態において、経鼻投与用量は３ｍｇ〜６ｍｇである。

【0030】

使用する略語は次の通り。

【数1】

【0031】

他に特に規定がなければ、Ｌ−アミノ酸を使用したが、慣用アミノ酸の術語を使用する。２０種の慣用アミノ酸以外のアミノ酸の例には次のものがある。

【数2】

【0032】

化合物
本発明の化合物は、式Ｉの構造および医薬として許容されるその塩を有する。

【化2】

式中、
Ｒ²は、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₄アルキル、ハロゲン、−ＯＨまたは−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₄アルキルであり、
Ｒ³は、Ｈまたは−ＣＨ₂−ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ⁵Ｒ⁶であり、
Ｒ⁴は、Ｈまたは−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ₂であり、
Ｒ⁵およびＲ⁶は、独立して、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₆アルキル、−ＣＨ₂−シクロプロピル、−シクロプロピルまたはアリールアルキルであり、ただし、Ｒ⁵およびＲ⁶が両方ともＨであることはなく、
ＸおよびＹは、独立して、−ＣＨ₂−またはＳであり、ただし、Ｘが−ＣＨ₂−である場合、Ｙは−ＣＨ₂−ではなく、
Ｚは、−ＣＨＲ⁷−またはＳであり、Ｒ⁷は、ＨまたはＣ₁〜Ｃ₄アルキル、ハロゲン、−ＯＨもしくは−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₄アルキルであり、
Ｒ⁸は、Ｈまたは−ＣＨ₃であり、
Ａｒは、ヘテロアリールまたはフェニルであり、所望により、１つのＣ₁〜Ｃ₄アルキル、ハロゲン、−ＯＨまたは−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₄アルキルで置換されていてもよい。

【0033】

【表1】

【0034】

化合物１〜４１の構造（配列番号１〜４１）を以下に示す。

【化3】

【0035】

【表2】

【0036】

【表3】

【0037】

【表4】

【実施例】

【0038】

一般合成
アミノ酸誘導体は民間提供会社（Ａａｐｐｔｅｃ、ＥＭＤ ＭｉｌｌｉｐｏｒｅおよびＰｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）から購入した。樹脂は民間供給業者（ＰＣＡＳ ＢｉｏＭａｔｒｉｘ Ｉｎｃ．およびＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から購入した。追加の試薬、化学品および溶媒は全てＳｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈおよびＶＷＲから購入した。

【0039】

本明細書に記載されている化合物は、固相ペプチド化学の標準的方法によって、Ｆｍｏｃ法を利用して合成した。ペプチドは、手動で、Ｔｒｉｂｕｔｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｔｕｃｓｏｎ，Ａｒｉｚｏｎａ）を用いて自動的に、または手動および自動合成の組合せによって組み立てた。

【0040】

分取用ＨＰＬＣは、Ｗａｔｅｒｓ Ｐｒｅｐ ＬＣ ＳｙｓｔｅｍでＰｒｅｐＰａｃｋカートリッジＤｅｌｔａ−Ｐａｃｋ Ｃ１８、３００Å、１５μｍ、４７×３００ｍｍを用いて１００ｍＬ／ｍｉｎの流量で、および／またはＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８カラム、１００Å、５μｍ、３０×１００ｍｍで４０ｍＬ／ｍｉｎの流量で行った。分析用逆相ＨＰＬＣは、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２００ｒｒ Ｓｅｒｉｅｓ液体クロマトグラフでＡｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ Ｃ１８カラム、１．８μｍ、４．６×１１０ｍｍを用いて１．５ｍＬ／ｍｉｎの流量で行った。最終化合物の分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２００ Ｓｅｒｉｅｓクロマトグラフで逆相ＨＰＬＣによりＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ １１０Å Ｃ１８カラム、３μｍ、２×１５０ｍｍで０．３ｍＬ／ｍｉｎの流量で行った。質量スペクトルは、ＭＡＴ Ｆｉｎｎｉｎｇａｎ ＬＣＱエレクトロスプレー質量分析計で記録した。他に断らない限り、全ての反応は室温で行った。以下の標準的参考文献は、全般的実験セットアップ、ならびに必要とされる出発材料および試薬の入手可能性に関するさらなる指針を提供する：Ｋａｔｅｓ，Ｓ．Ａ．，Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ，Ｆ．，Ｅｄｓ．，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｂａｓｅｌ，２０００；Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１；Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｊ．Ｍ．，Ｙｏｕｎｇ，Ｊ．Ｄ．，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９８４；Ｂｉｓｅｌｌｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９８，２７３，２２４９８−２２５０５；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９６３，８５，２１４９−２１５４；およびＣｈａｎｇ ａｎｄ Ｗｈｉｔｅ Ｐ．Ｄ．，‘Ｆｍｏｃ Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ’，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，２０００。

【0041】

以下の保護基を利用して所与のアミノ酸側鎖官能基を保護した：Ａｒｇに対してＰｂｆ（２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル）；Ｔｙｒに対してｔＢｕ（ｔ−ブチル）；Ｃｙｓ、ＧｌｎおよびＡｓｎに対してＴｒｔ（トリチル）。

【0042】

Ｆｍｏｃで保護されたアミノ酸のＴｒｉｂｕｔｅ合成機でのカップリングはＤＭＦ中のＨＢＴＵ／ＮＭＭにより仲介したが、システイン誘導体はＤＭＦ中のＤＩＣ／ＨＯＢｔでカップリングさせた。合成中、５倍過剰の活性化されたＦｍｏｃ保護アミノ酸による３０〜６０分の単一のサイクルを使用した。Ｆｍｏｃ保護基の除去はＵＶでモニターした。ＤＭＦ中２０％ピペリジンによるペプチド樹脂の複数の（必要に応じて１０回まで）２分洗浄を行った。

【0043】

ＤＭＦ中のＤＩＣ／ＨＯＢｔで仲介されるカップリングを全てのアミノ酸に手動モードで使用した。合成中３倍過剰の活性化されたＦｍｏｃ保護アミノ酸による少なくとも２時間の単一サイクルを使用した。カップリングの完結はニンヒドリン（Ｋａｉｓｅｒ）試験で評価した。Ｆｍｏｃ保護基の除去はＤＭＦ中の２０％ピペリジンを用いたペプチド樹脂の単一の３０分洗浄で達成した。

【0044】

ペプチド合成の完了時、ペプチド樹脂をＤＣＭで洗浄し、真空中で乾燥した。樹脂を９６：２：２（ｖ／ｖ／ｖ）のＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ／ＴＩＳで２ｈ処理して側鎖保護基を除去し、同時に樹脂からペプチドを開裂させた。ペプチドをろ過し、ジエチルエーテルで沈殿させ、デカントした。ジスルフィド架橋を有するペプチドを得るには、沈殿を純なＴＦＡに溶解させ、続いて溶液を水中１０％アセトニトリルに注ぎ入れた。場合によっては追加の量のアセトニトリルを加えて基質を可溶化した。線状ペプチドを０．１ＭのＩ₂／ＭｅＯＨで酸化した。黄色の色が消えずに残るようになるまで酸化剤溶液を滴下して加えた。過剰のヨウ素を固体アスコルビン酸で還元した。次に濃アンモニアでｐＨを約４に調節した。得られた溶液を直接ＨＰＬＣ ｐｒｅｐカラムに載せ、成分Ｂ（下記表参照）の勾配で溶出した。

【0045】

アミド結合の形成によりペプチドを環化させるには、粗製線状ペプチドをＤＭＦに溶解させ、ＤＭＦ中のＨＢＴＵの溶液も調製した。ペプチド溶液と活性化剤溶液を、ＤＩＰＥＡを含有するある容積の激しく撹拌されているＤＭＦに交互に加えた。純なＤＩＰＥＡの添加によりｐＨを９〜１０に維持した。反応をＨＰＬＣでモニターしたところ、通例活性化剤およびペプチド溶液の最後の部分を加えた後は基質ピークが検出されなかった。反応混合物を０．１％ＡｃＯＨで希釈し、得られた溶液を直接ＨＰＬＣ ｐｒｅｐカラムに載せ、成分Ｂの勾配で溶出した。

【0046】

緩衝剤系Ｔを用いて各々の粗製ペプチドを精製した。逆相分析用ＨＰＬＣにより決定される純度が９３％を超える画分をプールし、再度カラムに載せ、緩衝剤Ｔで溶出してトリフルオロ酢酸塩を用意した。場合によっては緩衝剤系Ｃによる追加の精製を実施した。酢酸塩を得るために緩衝剤ＴまたはＣによる試行の画分を再度カラムに載せ、カラムを５容積の０．１Ｍ酢酸アンモニウムで洗浄した。最終生成物を緩衝剤Ａで溶出した。画分をプールし、凍結乾燥した。

【0047】

【表5】

【0048】

調製された化合物は通例少なくとも約９５％純粋品であることが判明した。

【0049】

実施例１−配列番号：２１
７．８ｇ（６．９ｍｍｏｌ）のＨ−Ｐｒｏ−２−クロロトリチルＡＭ樹脂（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号８５６０５７、０．８８ｍｍｏｌ／ｇ）から出発して１−７断片を手動で組み立てた。ＤＭＦ中でＤＩＣ／ＨＯＢｔで仲介されるカップリングを使用した。合成中３倍過剰の活性化されたＦｍｏｃ保護アミノ酸を用いる少なくとも２時間の単一サイクルを使用した。カップリングの完結はニンヒドリン試験で評価した。Ｆｍｏｃ保護基の除去はＤＭＦ中２０％ピペリジンによるペプチド樹脂の単一の３０ｍｉｎの洗浄で達成された。次のアミノ酸誘導体を使用して、樹脂に結合したペプチドの残基１〜７を組み立てた：Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（（ＣＨ₂）₃Ｃ（Ｏ）ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｉ−ＯＨおよびＢｏｃ−Ｃｐａ−ＯＨ。１−７ペプチド断片を組み立てた後、樹脂をＤＣＭで十分に洗浄し、ＤＣＭ／ＨＦＩＰの７：３（ｖ／ｖ）混合物で処理した（２×１ｈ、各３０ｍＬ）。その後溶媒を蒸発させ、残渣をエチルエーテルで沈殿させ、ろ過し、真空中で乾燥した。５．７９ｇ（４．６３ｍｍｏｌ、６７％）の粗製の保護された線状ペプチドを得た。（この生成物の残りは本明細書に記載されている他の化合物の合成に使用した。）

【0050】

Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−ＮＥｔ₂×２ＴＦＡ。
２．８１ｇ（５．４ｍｍｏｌ）のＢｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（Ｃｈｅｍ Ｉｍｐｅｘ、カタログ＃０５２８２）、１．９５ｍＬ（１１．２ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡおよび２．１３ｇ（５．６ｍｍｏｌ）のＨＢＴＵを１０ｍＬのＤＭＦに溶解した。その後０．６２ｍＬ（６ｍｍｏｌ）のジエチルアミンを溶液に加えた。５ｍｉｎ後基質は分析用ＨＰＬＣで検出されなかった。反応混合物を５００ｍＬの水に注ぎ入れ、沈殿を遠心分離によって分離し、真空中で乾燥した。残渣を２０ｍＬのＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ₂Ｏ（９６／２／２、ｖ／ｖ／ｖ）で１ｈ処理し、溶媒を蒸発させた。残渣をエチルエーテルで処理し、デカントした。１．６５ｇ（３．６ｍｍｏｌ、６７％）の半固体誘導体を得、これを精製することなく次のステップで使用した。

【0051】

Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−ＮＥｔ₂とのカップリング。
２．３ｇ（約１．８６ｍｍｏｌ）の線状の保護されたペプチドおよび０．７６ｇ（２ｍｍｏｌ）のＨＢＴＵを、０．７３ｍＬ（４．２ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡを含有する１０ｍＬのＤＭＦに溶解させた。その後１ｍＬのＤＭＦ中の０．９３ｇ（２．０５ｍｍｏｌ）のＨ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ×２ＴＦＡを反応混合物に加えた。５ｍｉｎ後基質はＨＰＬＣで検出されなかった。生成物を１Ｌの水で沈殿させ、ろ過して除き、真空中で乾燥した。２．６ｇ（１．７８ｍｍｏｌ、９６％）の粗製の保護された線状ペプチドを得た。完全に保護されたペプチドを２０ｍＬのＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ₂Ｏ（９６／２／２、ｖ／ｖ／ｖ）で１ｈ処理し、溶媒を蒸発させた。保護されてない線状ペプチドをエチルエーテルで沈殿させ、凍結乾燥した。収量１．８２ｇ（１．５５ｍｍｏｌ、８３％）。

【0052】

線状ペプチドの全量を５０ｍＬのＤＭＦに溶解させた。１０ｍＬのＤＭＦ中の０．５９ｇ（約１．５５ｍｍｏｌ）のＨＢＴＵの溶液も調製した。ペプチド溶液および活性化剤溶液を、それぞれ５ｍＬおよび１ｍＬずつの１０の部分に分けて、２００μＬのＤＩＰＥＡを含有する５０ｍＬの激しく撹拌されているＤＭＦに交互に加えた。純なＤＩＰＥＡの添加によりｐＨを９〜１０に維持した。活性化剤およびペプチド溶液の最後の部分を加えた後ＨＰＬＣで基質ピークは検出されなかった。反応混合物を０．１％ＡｃＯＨで１Ｌに希釈した。得られた溶液を直接ＨＰＬＣ ｐｒｅｐカラムに載せ、成分Ｂ（上記表参照）の勾配で溶出させた緩衝剤系Ｔで精製した。逆相分析用ＨＰＬＣで決定される純度が９３％を超える画分をプールし、カラムに再度載せた。カラムを５容積の０．１ＭＡｃＯＮＨ₄で洗浄し、その後化合物を緩衝剤Ｃで溶出して酢酸塩を用意した。画分をプールし、凍結乾燥した。７０３．１ｍｇ（０．６０ｍｍｏｌ、８９．６％ペプチド含量に基づいて全体で２２％）の白色のペプチド粉末を得た。生成物の純度は分析用ＨＰＬＣで９９．７％と決定され、観測されたＭ＋Ｈは１０４５．６であった（計算Ｍ＋Ｈ＝１０４５．５）。

【0053】

実施例２−配列番号：１０
２．３２ｇ（約１．８ｍｍｏｌ）の、配列番号：２１の合成で調製した保護された線状ペプチドを７ｍＬのＤＭＦに溶解させ、０．６３ｍＬ（３．６ｍｍｏｌ、２当量）のＮＭＭを、次いで０．７６ｇ（２ｍｍｏｌ、１．１当量）のＨＢＴＵを加えた。別のバイアルで、０．６４ｇ（２．８ｍｍｏｌ、１．５当量）の硫酸アグマチンを、０．４９ｍＬ（２．８ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡを含有する７ｍＬのＤＭＦに懸濁させた。Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（ＢＴＡ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ＃１２８９１０）を、時々ボルテックス／超音波処理される懸濁液に加えた。懸濁液に４当量のＢＴＡを加えた後透明な溶液が得られた。２つの溶液を合わせたところ、５ｍｉｎ後ＨＰＬＣにより基質ペプチドは検出されなかった。生成物を１Ｌの水で沈殿させ、ろ過して除き、真空中で乾燥した。得られた粉末を５０ｍＬのＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ₂Ｏの９６／２／２（ｖ／ｖ／ｖ）混合物で１．５時間処理した。溶媒を蒸発させ、線状ペプチドをエチルエーテルで沈殿させ、水／アセトニトリルで再構成し、凍結乾燥した。

【0054】

前のステップで得られたペプチドの全量（２．１３ｇ、約２ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのＤＭＦに溶解させた。１０ｍＬのＤＭＦ中の０．７６ｇ（２ｍｍｏｌ）のＨＢＴＵの溶液も調製した。ペプチド溶液および活性化剤溶液をそれぞれ２．５ｍＬおよび０．５ｍＬずつの１０の部分に分けて、４００μＬのＤＩＰＥＡを含有する５０ｍＬの激しく撹拌されているＤＭＦに交互に加えた。純なＤＩＰＥＡの添加によりｐＨを９〜１０に維持した。活性化剤およびペプチド溶液の最後の部分を加えた後基質ピークは検出されなかった。反応混合物を０．１％ＡｃＯＨで１Ｌに希釈し、得られた溶液を直接ＨＰＬＣ ｐｒｅｐカラムに載せ、成分Ｂ（上記表参照）の勾配で溶出される緩衝剤系Ｔで精製した。逆相分析用ＨＰＬＣで決定される純度が９３％を超える画分をプールし、カラムに再度載せた。カラムを５容積の０．１ＭのＡｃＯＮＨ₄で洗浄し、その後化合物を緩衝剤Ｃで溶出して酢酸塩を用意した。画分をプールし、凍結乾燥した。６５６．７ｍｇ（０．６２ｍｍｏｌ、８９．５％のペプチド含量に基づいて２３％の全収率）の白色のペプチド粉末を得た。生成物の純度は分析用ＨＰＬＣにより１００．０％と決定され、観測されたＭ＋Ｈは９４６．６であった（計算Ｍ＋Ｈは９４６．４であった）。

【0055】

実施例３−配列番号：５
１ｇ（約１ｍｍｏｌ）のＦＭＰＢ ＡＭ樹脂（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ＃８５５０２８）を１５ｍｌのＤＣＥ／ＴＭＯＦの１：１混合物に膨潤させた。この樹脂懸濁液に、イソブチルアミン（１．５ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）を、続いて３．２ｇの固体トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムを加えた。懸濁液を一晩振盪した。樹脂をＭｅＯＨ、ＤＭＦおよびＤＣＭで洗浄し、その後ＤＣＭ中でＦｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ／ＤＩＣ（４当量）によりアシル化した。樹脂をＤＭＦで洗浄し、クロラニル試験でアシル化の完結を試験した（陰性）。樹脂を３つの等しい部分に分割し、合成を０．３３ｍｍｏｌスケールでＴｒｉｂｕｔｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒにより続けた。５倍過剰のＦｍｏｃで保護されたアミノ酸を用い、ＤＭＦ中でＨＢＴＵ／ＮＭＭにより、または（Ｃｙｓの場合）ＤＩＣ／ＨＯＢｔにより仲介される単一のカップリングを使用した。Ｆｍｏｃ保護基は、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンによる幾つかの連続した２ｍｉｎの洗浄で除去した。次のアミノ酸誘導体を自動合成に使用した：Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（（ＣＨ₂）₃Ｃ（Ｏ）ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｉ−ＯＨおよびＢｏｃ−Ｃｐａ−ＯＨ。全ペプチド配列を組み立てた後ペプチドを２０ｍＬの９６：２：２（ｖ／ｖ／ｖ）のＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ／ＴＩＳで２ｈかけて樹脂から開裂した。線状ペプチドを、２００μＬのＤＩＰＥＡを含有する４０ｍＬのＤＭＦに溶解させた。５ｍＬのＤＭＦ中の１５２ｍｇ（約０．４ｍｍｏｌ）のＨＢＴＵの溶液も調製した。ペプチド溶液および活性化剤溶液をそれぞれ４ｍＬおよび０．５ｍＬずつ１０の部分に分けて４０ｍＬの激しく撹拌されているＤＭＦに交互に加えた。純なＤＩＰＥＡの添加によりｐＨを９〜１０に維持した。活性化剤溶液の最後の部分を加えた後基質ピークはＨＰＬＣで検出されなかった。反応混合物を０．１％ＡｃＯＨで１Ｌに希釈した。得られた溶液を直接ＨＰＬＣ ｐｒｅｐカラムに載せた。緩衝剤Ｔによる３つの連続した試行で化合物を精製した。

【0056】

９７％の純度を超える画分をプールし、凍結乾燥した。４９．０ｍｇ（０．０４２ｍｍｏｌ、９０％ペプチド含量を仮定して全体で１２％）の白色のペプチド粉末を得た。この生成物の純度は分析用ＨＰＬＣで９９．５％と決定され、観測されたＭ＋Ｈは１０４５．６であった（計算Ｍ＋Ｈ＝１０４５．５）。

【0057】

実施例４−配列番号：９
０．３７ｇ（約０．３ｍｍｏｌ）の１，４−ジアミノブタン−２−クロロトリチル樹脂（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ＃８５６０８５）を１０ｍＬのＤＭＦに膨潤させ、樹脂を自動合成反応容器に入れた。ペプチドの組み立てはＴｒｉｂｕｔｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒで行った。５倍過剰のＦｍｏｃで保護されたアミノ酸を用い、ＤＭＦ中でＨＢＴＵ／ＮＭＭにより、または（Ｃｙｓの場合）ＤＩＣ／ＨＯＢｔにより仲介される単一のカップリングを使用した。Ｆｍｏｃ保護基はＤＭＦ中の２０％ピペリジンによる幾つかの連続した２ｍｉｎの洗浄で除去した。次のアミノ酸誘導体を自動合成に用いた：Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（（ＣＨ₂）₃Ｃ（Ｏ）ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｉ−ＯＨおよびＢｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。全ペプチド配列を組み立てた後、３０ｍＬの３：７（ｖ／ｖ）のＨＦＩＰ／ＤＣＭで２ｈかけてペプチドを樹脂から開裂させた。樹脂をろ過し、溶媒を蒸発させた。線状の保護されたペプチドは無水のエチルエーテルで沈殿させた。沈殿をデカントし、２０ｍＬのアセトニトリルに懸濁させた。その後、１１１ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ）のＺ（２−Ｃｌ）−ＯＳｕおよび０．１３６ｍＬ（０．８ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡを懸濁液に加えた。基質を溶解させた後、溶媒を蒸発させ、残渣を２０ｍＬのＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ₂Ｏの９５／２．５／２．５混合物で１．５ｈ処理した。次いで、ＴＦＡを蒸発させ、残渣をジエチルエーテルで沈殿させた。粗製の線状ペプチドを、２００μＬのＤＩＰＥＡを含有する１００ｍＬのＤＭＦに溶解させた。その後、５ｍＬのＤＭＦ中の１２０ｍｇ（０．３１ｍｍｏｌ）のＨＢＴＵの溶液を激しく撹拌されている反応混合物に加えた。３０ｍｉｎ後、反応混合物を１Ｌの０．１％ＡｃＯＨで希釈し、得られた溶液をｐｒｅｐ ＨＰＬＣカラムに載せた。環状ペプチドは速く（約３％ＭｅＣＮ／ｍｉｎ）緩衝剤系Ｔ中に溶出させた。分析用ＨＰＬＣで９７％の純度を超える画分をプールし、凍結乾燥した。凍結乾燥物を５ｍＬのＴＭＳＢｒ／チオアニソール／ＴＦＡ混合物（１／１／６、ｖ／ｖ／ｖ）で１ｈ０℃において処理した。ＴＦＡを蒸発させ、ペプチドをエチルエーテルで沈殿させた。最終の生成物は緩衝剤Ｔによる単一の試行により精製した。

【0058】

９７％の純度を超える画分をプールし、凍結乾燥した。７７．５ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ、９０％のペプチド含量を仮定して全体で２６％）の白色のペプチド粉末を得た。生成物の純度は分析用ＨＰＬＣで９９．６％と決定され、観測されたＭ＋Ｈは８８６．４であった（計算Ｍ＋Ｈ＝８８６．４）。

【0059】

実施例５−配列番号：１７
０．４３ｇ（約０．３ｍｍｏｌ）のＨ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｏ−２−クロロトリチル樹脂（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ＃８５６０６７）を１０ｍＬのＤＭＦに膨潤させ、樹脂を自動合成反応容器に入れた。ペプチドの組み立てはＴｒｉｂｕｔｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒで行った。５倍過剰のＦｍｏｃで保護されたアミノ酸を用い、ＤＭＦ中でＨＢＴＵ／ＮＭＭにより、またはＤＩＣ／ＨＯＢｔにより（Ｃｙｓの場合）仲介される単一のカップリングを使用した。Ｆｍｏｃ保護基はＤＭＦ中の２０％ピペリジンによる幾つかの連続した２ｍｉｎの洗浄で除去した。次のアミノ酸誘導体を自動合成に使用した：Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（（ＣＨ₂）₃Ｃ（Ｏ）ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｔｈｉ−ＯＨ。３−８のペプチド配列が組み立てられた後、２倍過剰の試薬と共にＤＩＣ／ＨＯＢｔ方法を用いてＦｍｏｃ−Ｐｈｅ（４−Ｅｔ）−ＯＨを手動でカップリングさせた。次に、樹脂を２０％ＰＩＰ／ＤＭＦで３０ｍｉｎ処理し、Ｎ−末端アミノ官能基をＤＭＦ中のＢｏｃ₂Ｏでアシル化することにより、Ｆｍｏｃ基をＢｏｃ基で置換した。３０ｍＬの３：７（ｖ／ｖ）のＨＦＩＰ／ＤＣＭを２ｈ用いて線状ペプチドを樹脂から開裂した。樹脂をろ過し、溶媒を蒸発させた。線状の保護されたペプチドを無水のエチルエーテルで沈殿させた。沈殿をデカントし、真空中で乾燥した。４５０ｍｇの粗製の保護されたペプチドが得られた。ペプチドの全量（約０．３ｍｍｏｌ）を、０．５ｍＬのＤＭＦと６１μＬ（０．４５ｍｍｏｌ）のＮＭＭを含有する１０ｍＬの１，２−ジクロロエタンに溶解させた。溶液を氷浴上で０℃に冷却し、６１μＬ（０．４５ｍｍｏｌ）のクロロギ酸イソブチルを加えた。反応混合物を０℃で１０ｍｉｎ磁気により撹拌した。５ｍＬの水中の１６０ｍｇ（４．５ｍｍｏｌ）の水素化ホウ素ナトリウムの溶液を一度に加えた。反応を２００ｍＬの水で希釈し、生成物を遠心分離により分離し、真空中で乾燥した。その後生成物を２０ｍＬのＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ₂Ｏの９５／２．５／２．５混合物で１．５ｈ処理した。次いでＴＦＡを蒸発させ、残渣をジエチルエーテルで沈殿させた。粗製の線状ペプチドを、２００μＬのＤＩＰＥＡを含有する８０ｍＬのＤＭＦに溶解させた。続いて、５ｍＬのＤＭＦ中の６１ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）のＨＢＴＵの溶液を激しく撹拌されている反応混合物に加えた。３０ｍｉｎ後反応混合物を１Ｌの０．１％ＡｃＯＨで希釈し、得られた溶液をｐｒｅｐ ＨＰＬＣカラム上に載せた。環状ペプチドを緩衝剤Ｔによる２つの連続した試行によって精製した。

【0060】

９７％の純度を超える画分をプールし、凍結乾燥した。４１．７ｍｇ（０．０３９ｍｍｏｌ、９０％のペプチド含量を仮定して全体で１３％）の白色のペプチド粉末を得た。生成物の純度は分析用ＨＰＬＣで９５．１％と決定され、観測されたＭ＋Ｈは９７０．６であった（計算Ｍ＋Ｈ＝９７０．５）。

【0061】

実験（生物試験）
インビトロ受容体アッセイ
Ｖ₂受容体活性
ヒトＶ₂受容体（ｈＶ₂Ｒ）に対する化合物のアゴニスト活性を、ホタルルシフェラーゼの発現を調節する細胞内カルシウム応答性プロモーターエレメントを含有するレポーターＤＮＡと共にｈＶ₂受容体発現ＤＮＡをＨＥＫ−２９３（ヒト胚性腎臓２９３セルライン）細胞内に一過性にトランスフェクトすることにより、転写レポーター遺伝子アッセイで決定した。このアッセイに関するさらなる指針については、Ｂｏｓｓ、Ｖ．、Ｔａｌｐａｄｅ、Ｄ．Ｊ．、Ｍｕｒｐｈｙ、Ｔ．Ｊ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９６、Ｍａｙ ３；２７１（１８）、１０４２９−１０４３２参照。細胞を用量毎に１０倍に希釈した連続希釈の化合物に５ｈ曝した後、細胞を溶解させ、ルシフェラーゼ活性を測定し、非線形回帰によって化合物の効能およびＥＣ₅₀値を決定した。デスモプレシン（ｄＤＡＶＰ）を各実験の内部標準として使用した。試験した化合物に対する結果を表３に示す。

【0062】

Ｖ_1b受容体活性
選択性を決定するために、ヒトＶ_1b受容体（ｈＶ_1bＲ）を発現するルシフェラーゼに基づく転写レポーター遺伝子アッセイで化合物を試験した。ｈＶ_1bＲに対する化合物のアゴニスト活性を、ｈＶ_1bＲを発現するように安定してトランスフェクトされたＦｌｐ−Ｉｎ（商標）２９３セルライン（ＨＥＫ−ｆｌｐｉｎ）において転写レポーター遺伝子アッセイで決定した。これらの細胞はＮＦＡＴ応答性エレメント−ルシフェラーゼ（ＮＦＡＴ−Ｌｕｃ）レポーターで一過性にトランスフェクトされる。細胞を用量毎に１０倍に希釈された連続希釈の化合物に５時間曝した後、細胞を溶解させ、ルシフェラーゼ活性を測定し、化合物の効能およびＥＣ₅₀値を非線形回帰により決定した。ＡＶＰを各実験で内部標準として使用した。試験した化合物に対する結果を表３に示す。

【0063】

腎クリアランス
デスモプレシンは主として腎臓により身体から排泄される（「腎クリアランス」）。本発明の化合物は非腎性メカニズムを介するより高い程度のクリアランスを有する。薬物動態実験を腎摘出され偽手術されたラットで行った。非腎性クリアランス（ＣＬｎｒ）は腎摘出されたラットで決定し、総クリアランスは偽手術されたラット（ＣＬｓｈａｍ）で決定した。非腎性クリアランス％は（ＣＬｎｒ／ＣＬｓｈａｍ）×１００で計算した。

【0064】

薬物動態研究のために、成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを、頸静脈（化合物投与用）と頸動脈（採血用）を介してカテーテル処置した。複数の化合物を含有する溶液（カセット投与）を頸静脈カテーテルに注入した（各化合物１ｍｌ当たり０．１ｍｇＦＢ、０．３ｍｌ／動物；名目用量０．１ｍｇＦＢ／ｋｇ／化合物）。投与後２、６、１０、１５、２０、３０、４５、６０、９０および１２０分で自動化血液サンプル採取系、Ｉｎｓｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｂｌｏｏｄ Ｓａｍｐｌｉｎｇ Ｕｎｉｔ第二世代（ＡＢＳ２）を用いて血液サンプルを採取した。血液凝固防止剤としてＫ２ＥＤＴＡを用いて全血から血漿を調製した。サンプルのその後の生物分析は、化合物抽出および標準のＬＣ／ＭＳ法を用いる血漿濃度測定を含んでいた。ピーク面積と検定曲線からアナライト濃度を計算した。ＷＩＮＮＯＮＬＩＮ（商標）ｖ６．３ソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いた非コンパートメント解析法によって各動物について化合物濃度−時間図の最良適合によりＰＫパラメーターを得た。

【0065】

抗利尿作用
化合物の抗利尿活性をラットモデルで試験した。簡単にいうと、カテーテル処置した正常血液量のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを代謝ケージに入れた。各代謝ケージを、尿採集バイアルの上に配置した力変換器による自然尿量の連続測定用にセットし、ＮＯＴＯＣＯＲＤ（商標）ソフトウェアを用いて尿量の時間経過をモニターし記録した。ラットに、シリンジポンプとスイベル／テザー法を用いて試験化合物またはビヒクルを３時間静脈内注入した。尿量のデータを化合物の投与中（０〜３時間）採取し、投与後５時間にわたって採取した。場合によっては、尿オスモル濃度も決定した。本発明の化合物は抗利尿活性を示した。

【0066】

医薬組成物
また、本明細書に定義されている式（Ｉ）の化合物の医薬としての使用も提供される。さらに、医薬として許容されるアジュバント、希釈剤または担体と共に、活性成分として本明細書に定義されている式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物が提供される。

【0067】

医薬組成物は、例えば経口および経鼻を始めとする様々な投与モードに適合させることができる。したがって、組成物は、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、微小粒子剤、顆粒剤、シロップ剤、懸濁剤および溶液剤の形態であり得る。

【0068】

医薬組成物は所望により、例えば、崩壊剤、結合剤、滑剤、香料、保存剤、着色料およびこれらの任意の混合物から選択される少なくとも１種のさらなる添加剤を含んでいてもよい。かかる添加剤およびその他の添加剤の例は、‘Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ’；Ｅｄ．Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ、３^rd Ｅｄ．、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、ＵＳＡ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ ＵＫ、２０００に見られる。

【0069】

治療の方法
さらなる態様において、本発明は、上に概説した化合物の、尿崩症、一次性夜尿症および夜間頻尿の治療用の薬剤の製造のための使用を提供する。さらに、尿崩症、一次性夜尿症および夜間頻尿を治療する方法が提供される。本明細書で使用する「治療」とは、本発明の化合物が化合物が適切な用量で投与されるときの症状の軽減、疾患の発症の延期および／または疾患の治癒を意味する。

【0070】

本発明による化合物の典型的な投与量は広い範囲内で変化し、各患者の個人的ニーズおよび投与経路のような様々な要因に依存する。投与量は一日一回または一日一回より頻繁に、例えば断続的に投与することができる。当業界で通常の知識を有する医師は手元の状況に対して投与量を最適化することができる。

【0071】

本明細書で引用した全ての刊行物および特許出願は、各々の個々の刊行物または特許出願が参照によって本明細書に援用するために明確にかつ個々に示されているかのように、援用により本明細書に組み込まれている。

【0072】

以上、理解を容易にする目的で、例示および実例によって本発明を幾らか詳細に説明して来たが、本発明の教示に照らして当業者には直ぐに明らかなように、添付の特許請求の範囲の思想または範囲から逸脱することなく一定の変更および修正をなすことができる。