特許 6389009 ギンコライドＢと第Ｘａ因子阻害剤とを含有する薬物組成物及びその製造方法と用途

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6389009

(24)【登録日】2018年8月24日

(45)【発行日】2018年9月12日

(54)【発明の名称】ギンコライドＢと第Ｘａ因子阻害剤とを含有する薬物組成物及びその製造方法と用途

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/5377 20060101AFI20180903BHJP

   A61K 31/365 20060101ALI20180903BHJP

   A61K 31/437 20060101ALI20180903BHJP

   A61K 31/423 20060101ALI20180903BHJP

   A61K 31/4425 20060101ALI20180903BHJP

   A61P 7/02 20060101ALI20180903BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20180903BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/5377

   A61K31/365

   A61K31/437

   A61K31/423

   A61K31/4425

   A61P7/02

   A61P43/00 121

【請求項の数】8

【全頁数】45

(21)【出願番号】特願2017-542250(P2017-542250)

(86)(22)【出願日】2015年10月30日

(65)【公表番号】特表2017-537142(P2017-537142A)

(43)【公表日】2017年12月14日

(86)【国際出願番号】CN2015093305

(87)【国際公開番号】WO2016066128

(87)【国際公開日】20160506

【審査請求日】2017年5月1日

(31)【優先権主張番号】201410606703.9

(32)【優先日】2014年10月30日

(33)【優先権主張国】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】517155831

【氏名又は名称】チェンデュ バイユ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＣＨＥＮＧＤＵ ＢＡＩＹＵ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．，ＬＴＤ．

(74)【代理人】

【識別番号】100144048

【弁理士】

【氏名又は名称】坂本 智弘

(72)【発明者】

【氏名】スン，イー

【審査官】 今村 明子

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００２−５０４１１０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００４−５３４０８３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開昭６１−０３７７２６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 Journal of Thrombosis and Thrombolysis，２００７年 ８月，Vol.24, Issue1，p.43-51

【文献】 ニューフードインダストリー，１９９８年 ５月 １日，Vol.40,No.5，p.1-7

【文献】 医学のあゆみ，２０１２年 ７月１４日，Vol.242, No.2，p.194-198

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ９／００− ９／７２

Ａ６１Ｋ ３１／００−３１／８０

Ａ６１Ｋ ３３／００−３３／４４

Ａ６１Ｋ ４７／００−４７／６９

Ａ６１Ｐ １／００−４３／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ギンコライドＢと第Ｘａ因子阻害剤のキサバン系薬物とを含有し、
前記キサバン系薬物は、リバーロキサバン、アピキサバン、エドキサバン、ラザキサバン、又はオタミキサバンであり、
前記ギンコライドＢと前記キサバン系薬物との重量配合比は、
ギンコライドＢが１〜２０部であり；及び、
リバーロキサバンが５〜４０部であり；又は
アピキサバンが０．５〜２０部であり；又は
エドキサバンが８〜５０部であり；又は
ラザキサバンが１〜２０部であり；又は
オタミキサバンが１５〜１５０部であることを特徴とする抗血小板凝集のための薬物組成物。

【請求項2】

前記ギンコライドＢとリバーロキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、リバーロキサバンが１０〜２０部であり、
好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、リバーロキサバンが１５部である、
ことを特徴とする請求項１に記載の抗血小板凝集のための薬物組成物。

【請求項3】

前記ギンコライドＢとアピキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、アピキサバンが１〜１０部であり、
好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、アピキサバンが５部であり、
或いは、
前記ギンコライドＢとエドキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、エドキサバンが１０〜３０部であり、
好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、エドキサバンが１５部であり、
或いは、
前記ギンコライドＢとラザキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、ラザキサバンが５〜１５部であり、
好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、ラザキサバンが１０部であり、
或いは、
前記ギンコライドＢとオタミキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、オタミキサバンが３０〜１２５部であり、
好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが８〜１２部、オタミキサバンが５０〜９０部であり、
さらに好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、オタミキサバンが６０部である
ことを特徴とする請求項１に記載の抗血小板凝集のための薬物組成物。

【請求項4】

請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗血小板凝集のための薬物組成物の製造方法であって、
成分及び重量比に従って原料のギンコライドＢと第Ｘａ因子阻害剤のキサバン系薬物を秤量するステップＳ１と、
原料を混合した後、薬学的に許容できる賦形剤を添加して、薬学的に常用される薬物製剤を製造するステップＳ２とを含む薬物組成物の製造方法。

【請求項5】

請求項１〜３のいずれか１項に記載の薬物組成物の、抗血小板凝集剤の製造における使用。

【請求項6】

ギンコライドＢと第Ｘａ因子阻害剤のキサバン系薬物の、抗血小板凝集の併用薬の製造における使用であって、
前記キサバン系薬物は、リバーロキサバン、アピキサバン、エドキサバン、ラザキサバン、又はオタミキサバンであり、
前記ギンコライドＢと前記キサバン系薬物との重量配合比は、
ギンコライドＢが１〜２０部であり；及び、
リバーロキサバンが５〜４０部であり；又は
アピキサバンが０．５〜２０部であり；又は
エドキサバンが８〜５０部であり；又は
ラザキサバンが１〜２０部であり；又は
オタミキサバンが１５〜１５０部であることを特徴とする使用。

【請求項7】

前記ギンコライドＢとリバーロキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、リバーロキサバンが１０〜２０部であり、
好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、リバーロキサバンが１５部である
ことを特徴とする請求項６に記載の使用。

【請求項8】

前記ギンコライドＢとアピキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、アピキサバンが１〜１０部であり、
好ましくは、両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、アピキサバンが５部であり、
或いは、
前記ギンコライドＢとエドキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、エドキサバンが１０〜３０部であり、
好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、エドキサバンが１５部であり、
或いは、
前記ギンコライドＢとラザキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、ラザキサバンが５〜１５部であり、
好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、ラザキサバンが１０部であり、
或いは、
前記ギンコライドＢとオタミキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、オタミキサバンが３０〜１２５部であり、
好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが８〜１２部、オタミキサバンが５０〜９０部であり、
さらに好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、オタミキサバンが６０部である
ことを特徴とする請求項６に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ギンコライドＢと第Ｘａ因子阻害剤とを含有する薬物組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

近年、新規な抗凝固薬物である第Ｘａ因子阻害剤が世に出て、抗凝固療法の新たな方向を開拓した。第Ｘａ因子阻害剤は、抗凝固効果を増強するとともに、大出血の危険性を低減し、血液監視を必要とせず、長期にわたる治療に便利である。研究により、第Ｘａ因子がトロンビン形成への抑制及び血液凝固カスケードの活性化において重要な役割を担って、血液凝固カスケードの上流で血液凝固因子を抑制すると、より強力な抗凝固作用を及ぼすことが実証された。第Ｘａ因子は、血小板を活性化できないとともに、凝固カスケードに対するポジティブフィードバック作用もない。直接第Ｘａ因子阻害剤は、血栓に結合する因子を抑制できるだけでなく、プロトロンビンに結合する因子も抑制できる。

【0003】

リバーロキサバンは、最初に開発された第Ｘａ因子阻害剤として既に正式に市販されている。多くの臨床研究の結果、リバーロキサバンの静脈血栓塞栓症の予防及び治療などの分野での効果が現在の標準的な治療薬のエノキサパリンナトリウムよりも優れていることが示されている。臨床で、股関節や膝関節置換術後の患者における深部静脈血栓症（ＤＶＴ）及び肺塞栓（ＰＥ）の形成を予防するとともに、非弁膜症性心房細動患者における脳卒中及び非中枢神経系塞栓症を防止し、冠動脈症候群の再発リスクを低減する等に用いることもできる。しかし、リバーロキサバンの薬力学的性質のため、過量投与となると、出血性合併症を引き起こす可能性があり、また、亜集団の患者の一部には出血リスクが高く、リバーロキサバンの薬効を対処する特異的解毒剤がまだ存在していない。

【0004】

アピキサバンは、選択的に活性化する経口第Ｘａ因子阻害剤として、ラザキサバンの変異体であり、ファイザー社とブリストル・マイヤーズスクイブにより共同開発され、米国及び欧州連合で市販されており、血栓を予防することができ、股部又は膝部の置換術を受けた患者における血栓予防に用いられる。しかし、臨床試験研究により、急性冠症候群が発生した患者では、抗血小板治療にアピキサバンを併用すれば、用量依存的な出血イベントの増加及び虚血イベントの減少という傾向を引き起こす可能性がある、と研究者が発見した。アピキサバンの安全性及び有効性が基礎的な抗血小板治療に依存する可能性がある。

【0005】

エドキサバンは、日本の第一三共株式会社が創製した低分子の経口抗凝固剤であり、血液凝固第Ｘ因子（ＦＸａ）の阻害剤である。主に膝関節全置換術（ＴＫＡ）、股関節全置換術（ＴＨＡ）、股関節骨折手術（ＨＦＳ）を受けた患者に併発した静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）に用いられる。血液凝固過程において、活性化された血液凝固第Ｘ因子（ＦＸａ）がプロトロンビン（ＦＩＩ）を活性化してトロンビン（ＦＩＩａ）を生成し、フィブリン形成を促進することで、血栓を形成するので、ＦＸａは、新世代抗凝固薬物を開発するための主な標的となっている。エドキサバンは、選択的、可逆的かつ直接的にＦＸａを抑制することにより血栓形成を抑制する経口抗凝固薬物であり、そのＦＸａに対する選択性がＦＩＩａより１０４倍も高い。日本国内外の臨床試験により、本製品は下肢整形外科手術を受けた患者に併発するＶＴＥを効果的に抑制でき、安全で信頼できることが実証された。しかし、該薬剤は費用が高いという制約があり、大部分の患者にとって治療の障害となる可能性がある。

【0006】

ラザキサバンは、相対分子量が５２８であり、経口有効なペプチド類似体として、第Ｘａ因子と高い親和性を持ち、ある第ＩＩ相臨床研究は、それが整形外科手術後の静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）の予防に有効なことを示した。このランダム化された二重盲検試験には６５６例の膝関節全置換術患者があり、有効な４３８例の患者において、ラザキバンとＶＴＥ発生率とは明らかな用量反応関係がある。ラザキバン２５ｍｇ群のＶＴＥ発生率がエノキサパリン群よりも有意に低く、大出血発生率がエノキサパリン群に近似していると注意すべきである。しかしながら、ラザキサバン５０〜１００ｍｇ群において大出血の確率はエノキサパリン群より高い。

【0007】

オタミキサバンは、高い選択性を持ちかつ可逆的な注射用トロンビン第Ｘａ因子阻害剤であり、用量依存的な方式により血栓形成を抑制し、効果の発見及び消失が迅速で、薬物動態が線形モデルに従い、腎臓から排除されにくい。以前の研究から、活性化第Ｘ因子阻害剤でＡＣＳを治療すると、血栓を形成するリスクがあることがわかったので、ＰＣＩ術においてこれらの抗凝固薬物及び他の併用する抗血栓因子の投与量を調整すべきであるが、中等用量のオタミキサバンを用いる場合は、これらの要因を心配する必要がないかと思われる。また、オタミキサバンの効果の発見及び消失が迅速で、静脈内に投与され、抗凝固反応が予測可能である（監視を必要としない）などの優勢を考慮すると、オタミキサバンは、急診からインターベンション治療までの間でＮＳＴＥ−ＡＣＳ患者への単一の抗凝固薬物となり、かつ大きな優勢を持っている可能性がある。オタミキサバンの腎臓から排泄される薬量が２５％未満であるので、腎機能障害患者に用いる場合に投与量を調整する必要がないと述べた報告がある。オタミキサバンは、虚血性イベントの発生リスクを低減できいとともに出血のリスクを増大させる可能性があり、早期でＰＣＩ術を施行したＮＳＴＥ−ＡＣＳ患者へのオタミキサバンの利用に反対する報道もある。

【0008】

したがって、治療效果を保証することを前提として、如何にキサバン系薬物の大量使用を減少させて副作用を低減しコストを削減するかは、早急に解決すべきである。

【発明の開示】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

本発明は、従来の第Ｘａ因子阻害剤における高い出血リスクとその他の欠点を克服し、より多くの選択肢を患者に与えるために、新規な薬物組成物を開発することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0010】

本発明は、ギンコライドＢと第Ｘａ因子阻害剤とを含有する薬物組成物を提供する。

【0011】

前記第Ｘａ因子阻害剤は、キサバン系薬物である。

【0012】

前記キサバン系薬物は、リバーロキサバン、アピキサバン、エドキサバン、ラザキサバン及び／又はオタミキサバンである。

【0013】

前記リバーロキサバンの構造式は、下記のとおりである。

【化1】

【0014】

前記アピキサバンの構造式は、下記のとおりである。

【化2】

【0015】

前記エドキサバンの構造式は、下記のとおりである。

【化3】

【0016】

前記ラザキサバンの構造式は、下記のとおりである。

【化4】

【0017】

前記オタミキサバンの構造式は、下記のとおりである。

【化5】

【0018】

前記ギンコライドＢとリバーロキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが１〜２０部、リバーロキサバンが５〜４０部である。

【0019】

好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、リバーロキサバンが１０〜２０部である。

【0020】

さらに好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、リバーロキサバンが１５部である。

【0021】

或いは、
前記ギンコライドＢとアピキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが１〜２０部、アピキサバンが０．５〜２０部である。

【0022】

好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、アピキサバンが１〜１０部である。

【0023】

さらに好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、アピキサバン５部である。

【0024】

或いは、
前記ギンコライドＢとエドキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが１〜２０部、エドキサバンが８〜５０部である。

【0025】

好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、エドキサバンが１０〜３０部である。

【0026】

さらに好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、エドキサバンが１５部である。

【0027】

或いは、
前記ギンコライドＢとラザキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが１〜２０部、ラザキサバンが１〜２０部である。

【0028】

好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、ラザキサバンが５〜１５部である。

【0029】

さらに好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、ラザキサバンが１０部である。

【0030】

或いは、
前記ギンコライドＢとオタミキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが１〜２０部、オタミキサバンが１５〜１５０部である。

【0031】

好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、オタミキサバンが３０〜１２５部である。さらに好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが８〜１２部、オタミキサバンが５０〜９０部である。

【0032】

なおさらに好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、オタミキサバンが６０部である。

【0033】

本発明は、さらに、
成分及び重量比に従って原料のギンコライドＢとキサバン系薬物を秤量するステップＳ１と、
原料を混合した後、薬学的に許容できる賦形剤を添加して、薬学的に常用される薬物製剤を製造するステップＳ２とを含む前記薬物組成物の製造方法を提供する。

【0034】

前記薬学的に許容できる賦形剤は、デンプン、アルファー化デンプン、乳糖、白糖、タルク、デキストリン、シクロデキストリン、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルデンプンナトリウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロスポビドン、グルコース、メグルミン、ステアリン酸マグネシウム、デキストラン、グリセリン、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、繊維植物油、安息香酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、塩酸、クエン酸、クエン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、ゼラチン、レシチン、ビタミンＣのうちの１種又は複数を含む。

【0035】

前記薬物製剤は、錠剤、カプセル剤、軟カプセル剤、内服液、顆粒剤、丸剤、滴丸剤、散剤、シロップ剤、丹剤、注射剤、坐剤、貼付剤、滴剤、スプレー剤、クリーム剤、懸濁剤、チンキ剤、乳剤、注射用液剤、注射用粉剤、標的製剤、徐放性製剤、放出制御製剤を含む。

【0036】

本発明は、さらに、ギンコライドＢと第Ｘａ因子阻害剤との併用薬の、抗血小板凝集剤の製造における用途を提供する。

【0037】

前記第Ｘａ因子阻害剤は、キサバン系薬物である。

【0038】

前記キサバン系薬物は、リバーロキサバン、アピキサバン、エドキサバン、ラザキサバン及び／又はオタミキサバンである。

【0039】

前記ギンコライドＢとリバーロキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが１〜２０部、リバーロキサバンが５〜４０部である。

【0040】

好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、リバーロキサバンが１０〜２０部である。

【0041】

さらに好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、リバーロキサバンが１５部である。

【0042】

或いは、
前記ギンコライドＢとアピキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが１〜２０部、アピキサバンが０．５〜２０部である。

【0043】

好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、アピキサバンが１〜１０部である。

【0044】

さらに好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、アピキサバン５部である。

【0045】

或いは、
前記ギンコライドＢとエドキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが１〜２０部、エドキサバンが８〜５０部である。

【0046】

好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、エドキサバンが１０〜３０部である。

【0047】

さらに好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、エドキサバンが１５部である。

【0048】

或いは、
前記ギンコライドＢとラザキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが１〜２０部、ラザキサバンが１〜２０部である。

【0049】

好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、ラザキサバンが５〜１５部である。

【0050】

さらに好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、ラザキサバンが１０部である。

【0051】

或いは、
前記ギンコライドＢとオタミキサバンとの重量配合比は、ギンコライドＢが１〜２０部、オタミキサバンが１５〜１５０部である。

【0052】

好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが５〜１５部、オタミキサバンが３０〜１２５部である。

【0053】

さらに好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが８〜１２部、オタミキサバンが５０〜９０部である。

【0054】

なおさらに好ましくは、この両者の重量配合比は、ギンコライドＢが１０部、オタミキサバンが６０部である。

【発明の効果】

【0055】

本発明に係る薬物組成物は、ギンコライドＢとキサバン系活性成分を含有するので、様々な作用メカニズムにより血小板凝集を抑制することができ、リバーロキサバン、アピキサバン、エドキサバン、ラザキサバン、オタミキサバンなどのキサバン系薬物の抗血小板凝集機能とギンコライドＢの抗血小板凝集機能を増強することができ、この両者は相乗効果を有し、臨床で使用すると、キサバン系薬物の薬量を減少させ、薬効を増強し、コストを低減し、副作用を減少させることができ、より好ましい選択肢を臨床研究用に提供する。本発明に係る薬物組成物は、配合方法が新規で、成分が簡単で、作用メカニズムが明確で、治療効果が顕著であり、工業的大量生産を実現することができる。

【0056】

本発明は、ギンコライドＢとキサバン系薬物を併用し、この両者は、相乗効果と血小板凝集抑制の優れた效果を奏する。

【0057】

本発明は、ギンコライドＢとキサバン系薬物を併用し、この両者は、相乗効果と血小板凝集抑制の優れた效果を奏し、臨床で応用するときに、キサバン系薬物の投与量を低減して、その大量の使用による副作用を減少させるだけでなく、コストを低減することができ、臨床応用の見通しに優れている。

【0058】

以下、実施例のような具体的な実施形態により、本発明の上記内容をさらに詳細に説明する。しかし、本発明の上記主旨の範囲が以下の実施例のみに限定されるものではない。本発明の上記内容に基づいて実現される全ての技術は、本発明の範囲に属する。

【発明を実施するための最良の形態】

【0059】

本発明に記載のギンコライドＢモノマー化合物は、市販製品を購買して入手し、或いは、従来の方法でギンコライドを分離精製して製造することができる。リバーロキサバン、アピキサバン、エドキサバン、ラザキサバン、オタミキサバンなども、市販製品を購買して入手し、或いは、従来の方法で合成することができる。検査によると、全てのモノマー化合物は、相応の対照物と構造が一致し、また、ＨＰＬＣ検出によりその純度がいずれも９５％以上である。

【0060】

実施例１
ギンコライドＢ １０部
リバーロキサバン １５部
薬学的に受容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に許容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って錠剤を製造する。

【0061】

実施例２
ギンコライドＢ ５部
リバーロキサバン ２０部
薬学的に受容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に許容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従ってカプセル剤又は軟カプセル剤を製造する。

【0062】

実施例３
ギンコライドＢ １５部
リバーロキサバン １０部
薬学的に受容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に受容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って丸剤を製造する。

【0063】

実施例４
ギンコライドＢ １部
リバーロキサバン ５部
薬学的に受容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に許容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って内服液を製造する。

【0064】

実施例５
ギンコライドＢ ２０部
リバーロキサバン４０部
薬学的に受容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に許容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って滴丸剤を製造する。

【0065】

実施例６
ギンコライドＢ １０部
アピキサバン ５部
薬学的に受容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に受容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従ってスプレー剤を製造する。

【0066】

実施例７
ギンコライドＢ ５部
アピキサバン １部
薬学的に受容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に許容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って注射用液剤又は注射用粉剤を製造する。

【0067】

実施例８
ギンコライドＢ １５部
アピキサバン １０部
薬学的に受容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に受容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って徐放性製剤又は放出制御製剤を製造する。

【0068】

実施例９
ギンコライドＢ ２０部
アピキサバン ２０部
薬学的に許容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に許容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って標的薬剤を製造する。

【0069】

実施例１０
ギンコライドＢ １０部
エドキサバン １５部
薬学的に許容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に許容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って顆粒剤又は懸濁剤を製造する。

【0070】

実施例１１
ギンコライドＢ ５部
エドキサバン ３０部
薬学的に許容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に許容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って錠剤を製造する。

【0071】

実施例１２
ギンコライドＢ １５部
エドキサバン １０部
薬学的に許容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に許容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従ってカプセル剤又は軟カプセル剤を製造する。

【0072】

実施例１３
ギンコライドＢ １部
エドキサバン ８部
薬学的に許容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に許容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って丸剤を製造する。

【0073】

実施例１４
ギンコライドＢ ２０部
エドキサバン ５０部
薬学的に許容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に許容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って内服液を製造する。

【0074】

実施例１５
ギンコライドＢ １０部
ラザキサバン １０部
薬学的に許容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に許容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って滴丸剤を製造する。

【0075】

実施例１６
ギンコライドＢ ５部
ラザキサバン１５部
薬学的に許容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に受容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従ってスプレー剤を製造する。

【0076】

実施例１７
ギンコライドＢ １５部
ラザキサバン ５部
薬学的に許容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に許容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って注射用液剤又は注射用粉剤を製造する。

【0077】

実施例１８
ギンコライドＢ １部
ラザキサバン ２０部
薬学的に許容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に受容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って徐放性製剤又は放出制御製剤を製造する。

【0078】

実施例１９
ギンコライドＢ ２０部
ラザキサバン １部
薬学的に許容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に許容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って標的薬剤を製造する。

【0079】

実施例２０
ギンコライドＢ １０部
オタミキサバン ６０部
薬学的に許容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に許容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って顆粒剤又は懸濁剤を製造する。

【0080】

実施例２１
ギンコライドＢ ８部
オタミキサバン ５０部
薬学的に許容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に許容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って内服液を製造する。

【0081】

実施例２２
ギンコライドＢ １２部
オタミキサバン ９０部
薬学的に許容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に許容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って滴丸剤を製造する。

【0082】

実施例２３
ギンコライドＢ １５部
オタミキサバン １２５部
薬学的に許容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に受容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従ってスプレー剤を製造する。

【0083】

実施例２４
ギンコライドＢ １部
オタミキサバン １５部
薬学的に許容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に許容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って注射用液剤又は注射用粉剤を製造する。

【0084】

実施例２５
ギンコライドＢ ２０部
オタミキサバン １２５部
薬学的に許容できる通常の賦形剤
上記原料を混合した後、薬学的に受容できる通常の賦形剤を添加して、通常の方法に従って徐放性製剤又は放出制御製剤を製造する。

【0085】

以下、試験例で本発明の有益な効果を説明する。

【0086】

試験例１ ギンコライドＢとキサバン系との組合せの、体外における抗ＰＡＦ誘発血小板凝集作用及びＸａ活性に対する影響
一、実験の目的：
マイクロプレートリーダーによる比濁法を用いて、成都百裕科技製薬有限公司製のギンコライドＢとキサバン系との組合せの、体外における抗ＰＡＦ誘発血小板凝集作用及びＸａ活性に対する影響を評価する。

【0087】

二、材料と方法
２．１ 実験用動物
日本白色家兎、ＳＰＦグレード、雄と雌がそれぞれ半数で、体重が２．２〜２．５ｋｇである。

【0088】

２．２ 実験薬物
ギンコライドＢ（成都百裕科技製薬有限公司）、リバーロキサバン（成都百裕科技製薬有限公司）、アピキサバン（成都百裕科技製薬有限公司）、エドキサバン（成都百裕科技製薬有限公司）、ラザキサバン（成都百裕科技製薬有限公司）、オタミキサバン（成都百裕科技製薬有限公司）、組成物１（ギンコライドＢ：リバーロキサバン＝１０：１５）、組成物２（ギンコライドＢ：リバーロキサバン＝１：５）、組成物３（ギンコライドＢ：リバーロキサバン＝１：４０）、組成物４（ギンコライドＢ：リバーロキサバン＝２０：５）、組成物５（ギンコライドＢ：リバーロキサバン＝２０：４０）、組成物６（ギンコライドＢ：リバーロキサバン＝５：２０）、組成物７（ギンコライドＢ：リバーロキサバン＝１５：１０）、組成物８（ギンコライドＢ：リバーロキサバン＝１５：２０）、組成物９（ギンコライドＢ：アピキサバン＝１０：５）、組成物１０（ギンコライドＢ：アピキサバン＝１：２０）、組成物１１（ギンコライドＢ：アピキサバン＝２０：０．５）、組成物１２（ギンコライドＢ：アピキサバン＝２０：２０）、組成物１３（ギンコライドＢ：アピキサバン＝５：１）、組成物１４（ギンコライドＢ：アピキサバン＝５：１０）、組成物１５（ギンコライドＢ：アピキサバン＝１５：１）、組成物１６（ギンコライドＢ：アピキサバン＝１５：１０）、組成物１７（ギンコライドＢ：エドキサバン＝１０：１５）、組成物１８（ギンコライドＢ：エドキサバン＝１：８）、組成物１９（ギンコライドＢ：エドキサバン＝１：５０）、組成物２０（ギンコライドＢ：エドキサバン＝２０：８）、組成物２１（ギンコライドＢ：エドキサバン＝２０：５０）、組成物２２（ギンコライドＢ：エドキサバン＝５：１０）、組成物２３（ギンコライドＢ：エドキサバン＝１５：１０）、組成物２４（ギンコライドＢ：エドキサバン＝５：３０）、組成物２５（ギンコライドＢ：ラザキサバン＝１０：１０）、組成物２６（ギンコライドＢ：ラザキサバン＝１：２０）、組成物２７（ギンコライドＢ：ラザキサバン＝２０：１）、組成物２８（ギンコライドＢ：ラザキサバン＝５：１５）、組成物２９（ギンコライドＢ：ラザキサバン＝１５：５）、組成物３０（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝１０：６０）、組成物３１（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝１：１５）、組成物３２（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝１：１５０）、組成物３３（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝２０：１５）、組成物３４（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝２０：１５０）、組成物３５（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝１５：３０）、組成物３６（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝５：１２５）、組成物３７（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝１５：１２５）、組成物３８（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝８：５０）、組成物３９（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝８：９０）、組成物４０（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝１２：５０）、組成物４１（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝１２：９０）。

【0089】

２．３ 試薬と機器
機器：
ドイツＳａｒｔｏｒｉｕｓ社、ＢＳ１２４Ｓ型電子天秤（最小表示：０．０００１ｇ）、機器番号：ＢＫＹ−ＹＢ−００１、
ＡＣＳ−１５ＬＥＤ電子台秤、上海鷹牌衡器有限公司、機器番号ＢＫＹ−ＹＢ−００２、
長沙湘智ＤＬ−５Ｍ小型立式低速大容量冷凍遠心機、機器番号：ＢＫＹ−ＺＸ−０４０、長沙湘智遠心機器有限公司、
海爾ハイアールＤＷ−４０Ｌ１８８低温貯蔵庫、機器番号：ＢＫＹ−ＺＸ−０１２、血漿などの貯蔵、
ＬＳＣ−３１６Ｃ型星星縦型ショーケース、機器番号：ＢＫＹ−ＺＸ−０４１、試薬の貯蔵、
Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ ＭＫ３型マイクロプレートリーダー、機器番号：ＢＫＹ−ＺＸ−０１４、
Ｗｅｌｌｗａｓｈ ４ＭＫ２型プレートウォッシャー、機器番号：ＢＫＹ−ＺＸ−０２２、
ドイツＢｒａｎｄ Ｔｒａｎｓｆｅｒｐｅｔｔｅ（登録商標）Ｓ，Ｄ−１０００マイクロピペット、機器番号：ＢＫＹ−ＺＸ−０３６、
ドイツＢｒａｎｄ Ｔｒａｎｓｆｅｒｐｅｔｔｅ（登録商標）Ｓ，Ｄ−１００マイクロピペット、機器番号：ＢＫＹ−ＺＸ−０３８、
ＭＢ−１８３０型全自動血液アナライザー、四川美生科技有限公司、機器番号：ＢＫＹ−ＺＸ−０２３。

【0090】

試薬：
３．８％のクエン酸ナトリウム（５００ｇ／本、成都市科龍化工試薬廠、ロット番号：２０１３０６０１）、
血小板活性化因子（ＰＡＦ）（１ｍｇ／本、Ｓｉｇｍａ、ロット番号：Ｐ７５６８）、
抗血液凝固因子（Ｘａ）測定試薬（発色基質法）（１０×７１ｎｋａｔ、イタリアｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ社、ロット番号：Ｎ１２４３５５５）、
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）６０００（５０ｇ、北京百霊威科技有限公司、ロット番号：ＬＢ５０Ｐ７６）、
ヘパリンナトリウム（１ｇ／本、Ｂｏｍｅｉ、ロット番号：９０４１−０８−１）。

【0091】

２．４ 投与量設計と薬物調製方法
（１）各群は、生体内試験における推薦投与濃度に基づいて、薬物の割合に従って、血小板凝集試験を行い、具体的には表１を参照する。

【表1】

【表2】

【0092】

２．５ 血小板凝集率の測定
動物の心臓を穿刺して採血し、クエン酸ナトリウム（３．８％）１：９で抗凝固し、４℃×１０００ｒ／ｍｉｎで１０ｍｉｎ遠心して、多血小板血漿（ＰＲＰ）を収集し、残りの部分を３０００ｒ／ｍｉｎで１５ｍｉｎ遠心して、乏血小板血漿（ＰＰＰ）を収集し、ＰＰＰを用いてＰＲＰを２００±５０×１０^９／Ｌに調整する。
マイクロプレートの穴に２５０μｌのＰＲＰを添加し、それぞれ対応する濃度の薬剤を１０μｌ添加し、各濃度を２穴に並行的に添加し、最後にＰＡＦ凝集剤（濃度が０．３８μｇ／ｍｌ）を１０μｌ添加し、ブランク対照穴に２５０μｌのＰＰＰと１０μｌの生理食塩水を添加してゼロ点調整し、溶媒対照穴に２５０μｌのＰＰＰと１０μｌのジメチルスルホキシドを添加してゼロ点調整する。吸光度が低下しなくなるまで、異なる時間での吸光度を記録する。これまでの時間は血小板の最大凝集に必要な時間であり、次に、下記式で血小板の抑制率を算出する。
凝集抑制率＝（投与群の最大凝集に必要な時間−ブランク対照群の最大凝集に必要な時間）／ブランク対照群の最大凝集に必要な時間×１００％

【0093】

２．６ 抗凝固因子Ｘａの活性の測定
発色基質法で、キット説明書と参考文献に従ってマイクロプレートリーダーで血漿の抗第Ｘａ因子活性を測定する。

【0094】

２．７ 統計学的処理
試験データは計量資料であり、対応する計算式に基づいて凝集抑制率と抗第Ｘａ因子活性を算出し、Ｅｘｃｅｌソフトウェアで平均値を算出する。

【0095】

三、実験結果
３．１ 血小板凝集試験の結果

【表3】

【表4】

【0096】

表２から分かるように、ＰＡＦの誘導下で、各組成物群の血小板凝集率を生理食塩水群に比較すると、いずれも有意な差が認められ（ｐ＜０．０１、ｐ＜０．０５）、本発明の各薬物組成物がいずれも血小板凝集を効果的に抑制できることを示し、ギンコライドＢとキサバン系薬物の単独使用と比較すると、本発明ではギンコライドＢとキサバン系薬物を併用すると、抗血小板凝集機能が著しく向上し、ギンコライドＢとキサバン系薬物との併用が相乗効果を有することを示す。

【0097】

３．２ 抗血液凝固第Ｘａ因子活性試験の結果

【表5】

備考：抗凝固有効とは、血漿の抗第Ｘａ因子活性≧０．５ＩＵ／ＭＬと定義される（《心血管疾患者への低分子ヘパリン使用は正規化が必要》という報道によると、ＬＭＷＨの体内における薬物動態学的特徴により決定した）。

【0098】

表３から分かるように、各組成物群の抗血液凝固第Ｘａ因子活性は、生理食塩水群と比較すると、いずれも有意な差があり、本発明の各薬物組成物がいずれも第Ｘａ因子活性を効果的に抑制し抗血液凝固できることを示し、ギンコライドＢとキサバン系薬物の単独使用と比較すると、本発明ではギンコライドＢとキサバン系薬物を併用すると、体外における抗血液凝固第Ｘａ因子活性が著しく向上し、ギンコライドＢとキサバン系薬物との併用が相乗効果を有することを示す。

【0099】

表２及び表３から分かるように、ギンコライドＢ＋リバーロキサバンの組成物群（組成物１〜８）において、組成物１、５〜８群の血小板凝集抑制率と抗第Ｘａ因子活性が比較的に高く、組成物１群の血小板凝集抑制率と抗第Ｘａ因子活性が最も高いため、ギンコライドＢ＋リバーロキサバンの組成物において、ギンコライドＢとリバーロキサバンとの配合比率は、好ましくは、ギンコライドＢが５〜１５部、リバーロキサバンが１０〜２０部であり、最も好ましくは、ギンコライドＢが１０部、リバーロキサバンが１５部である。

【0100】

ギンコライドＢ＋アピキサバンの組成物群（組成物９〜１６）において、組成物９、１３〜１６群の血小板凝集抑制率と抗第Ｘａ因子活性が比較的に高く、組成物９群の血小板凝集抑制率と抗第Ｘａ因子活性が最も高いため、ギンコライドＢ＋リバーロキサバンの組成物において、ギンコライドＢとアピキサバンとの配合比率は、好ましくは、ギンコライドＢが５〜１５部、アピキサバンが１〜１０部であり、最も好ましくは、ギンコライドＢが１０部、アピキサバンが５部である。

【0101】

ギンコライドＢ＋エドキサバンの組成物群（組成物１７〜２４）において、組成物１７、２２〜２４群の血小板凝集抑制率と抗第Ｘａ因子活性が比較的に高く、組成物１７群の血小板凝集抑制率と抗第Ｘａ因子活性が最も高いため、ギンコライドＢ＋エドキサバンの組成物において、ギンコライドＢとエドキサバンとの配合比率は、好ましくは、ギンコライドＢが５〜１５部、エドキサバンが１０〜３０部であり、最も好ましくは、ギンコライドＢが１０部、エドキサバン１５部である。

【0102】

ギンコライドＢ＋ラザキサバンの組成物群（組成物２５〜２９）において、組成物２５、２８〜２９群の血小板凝集抑制率と抗第Ｘａ因子活性が比較的に高く、組成物２５群の血小板凝集抑制率と抗第Ｘａ因子活性が最も高いため、ギンコライドＢ＋ラザキサバンの組成物において、ギンコライドＢとラザキサバンとの配合比率は、好ましくは、ギンコライドＢが５〜１５部、ラザキサバンが５〜１５部であり、最も好ましくは、ギンコライドＢが１０部、ラザキサバン１０部である。

【0103】

ギンコライドＢ＋オタミキサバンの組成物群（組成物３０〜４１）において、組成物３０、３８〜４１群の血小板凝集抑制率と抗第Ｘａ因子活性が比較的に高く、組成物３０群の血小板凝集抑制率と抗第Ｘａ因子活性が最も高いため、ギンコライドＢ＋オタミキサバンの組成物において、ギンコライドＢとオタミキサバンとの配合比率は、好ましくは、ギンコライドＢが８〜１２部、オタミキサバンが５０〜９０部であり、最も好ましくは、ギンコライドＢが１０部、オタミキサバンが１０部である。

【0104】

試験結果から分かるように、本発明では、ギンコライドＢと、キサバン系活性成分、例えばリバーロキサバン、アピキサバン、エドキサバン、ラザキサバン、オタミキサバンなどのキサバン系薬物とを併用し、抗血小板凝集機能を明らかに増強し、抗第Ｘａ因子活性が明らかに増加し、かつこの両者の単独使用の場合より優れ、この両者の併用が相乗効果を発揮し、ギンコライドＢとキサバン系活性成分で構成された組成物は、抗血小板凝集機能が高く、抗第Ｘａ因子活性が高く、様々な作用メカニズムにより血小板凝集を抑制することができる。

【0105】

試験例２ ギンコライドＢとキサバン系の、兎外傷性肢体深部静脈血栓症形成モデルにおける抗凝固作用と抗血液凝固因子活性作用の比較研究

【0106】

一、実験の目的：
ギンコライドＢとキサバン系との組合せの、兎外傷性肢体深部静脈血栓症形成モデルにおける抗凝固作用と抗血液凝固因子活性作用の差異を比較する。

【0107】

二、材料と方法
２．１ 実験用動物
３８４羽のＩグレードの日本白色家兎を用い、１群あたり８羽あり、試験時の体重が２．０〜３．０ｋｇであり、全部は雄である。

【0108】

２．２ 実験薬物
ギンコライドＢ（成都百裕科技製薬有限公司）、リバーロキサバン（成都百裕科技製薬有限公司）、アピキサバン（成都百裕科技製薬有限公司）、エドキサバン（成都百裕科技製薬有限公司）、ラザキサバン（成都百裕科技製薬有限公司）、オタミキサバン（成都百裕科技製薬有限公司）、組成物１（ギンコライドＢ：リバーロキサバン＝１０：１５）、組成物２（ギンコライドＢ：リバーロキサバン＝１：５）、組成物３（ギンコライドＢ：リバーロキサバン＝１：４０）、組成物４（ギンコライドＢ：リバーロキサバン＝２０：５）、組成物５（ギンコライドＢ：リバーロキサバン＝２０：４０）、組成物６（ギンコライドＢ：リバーロキサバン＝５：２０）、組成物７（ギンコライドＢ：リバーロキサバン＝１５：１０）、組成物８（ギンコライドＢ：リバーロキサバン＝１５：２０）、組成物９（ギンコライドＢ：アピキサバン＝１０：５）、組成物１０（ギンコライドＢ：アピキサバン＝１：２０）、組成物１１（ギンコライドＢ：アピキサバン＝２０：０．５）、組成物１２（ギンコライドＢ：アピキサバン＝２０：２０）、組成物１３（ギンコライドＢ：アピキサバン＝５：１）、組成物１４（ギンコライドＢ：アピキサバン＝５：１０）、組成物１５（ギンコライドＢ：アピキサバン＝１５：１）、組成物１６（ギンコライドＢ：アピキサバン＝１５：１０）、組成物１７（ギンコライドＢ：エドキサバン＝１０：１５）、組成物１８（ギンコライドＢ：エドキサバン＝１：８）、組成物１９（ギンコライドＢ：エドキサバン＝１：５０）、組成物２０（ギンコライドＢ：エドキサバン＝２０：８）、組成物２１（ギンコライドＢ：エドキサバン＝２０：５０）、組成物２２（ギンコライドＢ：エドキサバン＝５：１０）、組成物２３（ギンコライドＢ：エドキサバン＝１５：１０）、組成物２４（ギンコライドＢ：エドキサバン＝５：３０）、組成物２５（ギンコライドＢ：ラザキサバン＝１０：１０）、組成物２６（ギンコライドＢ：ラザキサバン＝１：２０）、組成物２７（ギンコライドＢ：ラザキサバン＝２０：１）、組成物２８（ギンコライドＢ：ラザキサバン＝５：１５）、組成物２９（ギンコライドＢ：ラザキサバン＝１５：５）、組成物３０（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝１０：６０）、組成物３１（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝１：１５）、組成物３２（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝１：１５０）、組成物３３（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝２０：１５）、組成物３４（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝２０：１５０）、組成物３５（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝１５：３０）、組成物３６（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝５：１２５）、組成物３７（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝１５：１２５）、組成物３８（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝８：５０）、組成物３９（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝８：９０）、組成物４０（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝１２：５０）、組成物４１（ギンコライドＢ：オタミキサバン＝１２：９０）。

【0109】

２．３ 試薬と機器
機器：
（１）兎体重計量検査機器
ＡＣＳ−１５ＬＥＤ電子台秤、最小表示１ｇ、最大称量６ｋｇ、機器番号ＢＫＹ−ＹＢ−００２、上海鷹牌衡器有限公司製、家兔体重秤量用。
（２）血液凝固機能及び血液凝固因子活性測定機器
日本シスメックスＣＡ−６６０型全自動血液凝固分析装置、機器番号；ＢＫＹ−ＺＸ−０４４、希森美康生物科技（无錫）有限公司。
ＤＬ−５Ｍ低速冷凍遠心機、機器番号：ＢＫＹ−ＺＸ−０４０、長沙湘智遠心機機器有限公司製。
ＢＣ−１１７Ｆ型冷蔵庫、機器番号：ＢＫＹ−ＺＸ−０１５、青島海爾股分有限公司製。
（３）ＰＡＦ含有量測定機器
Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ ＭＫ３型マイクロプレートリーダー、機器番号：ＢＫＹ−ＺＸ−０１４，米国Ｔｈｅｒｍｏ ｅｌｅｃｔｒｏｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ。
（４）病理学的検査機器
ドイツＳａｒｔｏｒｉｕｓ社、ＢＳ１２４Ｓ型電子天秤（最小表示：０．０００１ｇ）、機器番号：ＢＫＹ−ＴＪ−００２、ドイツＳａｒｔｏｒｉｕｓ社製。
ＺＴ−１４Ｖ２生物組織自動脱水装置、機器番号：ＢＫＹ−ＢＬ−０１６、孝感市亜光医用電子技術有限公司製。
常州中威ＢＭＪ−III型包埋装置、機器番号：ＢＫＹ−ＢＬ−００２、江蘇省常州市中威電子機器廠製。
常州中威ＰＨＹ−III組織病理学湯煎器、機器番号：ＢＫＹ−ＢＬ−００３、江蘇省常州市中威電子機器廠製。
Ｌｅｉｃａ ＲＭ２１２６回転式ミクロトーム、機器番号：ＢＫＹ−ＢＬ−００４、上海ライ・カー機器有限公司製。
日本オリンパスＢＸ４１−３２Ｐ０１顕微鏡、機器番号：ＢＫＹ−ＢＬ−０１３、日本オリンパス株式会社製。
ＹＲ−２１生物組織自動染色装置、機器番号：ＢＫＹ−ＢＬ−０１５、孝感市亜光医用電子技術有限公司製。
北京永光明２０２−０型スタンド式乾燥機、機器番号：ＢＫＹ−ＢＬ−００５、北京市永光明医療機器廠製。

【0110】

試薬：
（１）供試品の液体調製に必要な試薬
ヒドロキシプロピルメチルセルロース（クライアントから提供される）。
ラクトース、仕様：１００ｇ／本、ロット番号２０１５０４１７０１、有効期限：２０１８．０６、成都市科龍化工試薬廠。
マンニトール、仕様：５００ｇ／本、ロット番号：２０１４０２２０１、有効期限：２０１７．０６、成都市科龍化工試薬廠。
（２）血液凝固機能及び血液凝固因子活性の測定試薬
血液凝固品質管理試料、仕様：１ｍｌ×１０本／箱、ロット番号：５２８１６７Ｂ、有効期限：２０１７．４．２７、ＳＩＥＭＥＮＳ。
ＰＴ試薬、仕様：２ｍｌ×１０本／箱、ロット番号：Ｒ５００３、Ｒ５００５、有効期限：２０１７．１．１、２０１７．３．１、希森美康生物技術有限公司製。
ａＰＴＴ試薬、仕様：２ｍｌ×１０本／箱、ロット番号：Ｒ５００１、Ｒ５００６、有効期限：２０１６．９．１，２０１６．１２．１、希森美康生物技術有限公司製。
抗血液凝固因子（Ｘａ）測定キット（発色基質法）、仕様：１０×７１ｎｋａｔ、ロット番号：Ｎ１２４３５５５、メーカー：イタリアＣｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ社。
発色基質Ｓ、仕様：２５ｍｇ、ロット番号：Ｎ１１４３４５４、メーカー：イタリアＣｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ社。
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）６０００、仕様：５０ｇ、ロット番号：ＬＢ５０Ｐ７６、メーカー：北京百霊威科技有限公司。
ヘパリンナトリウム、仕様：１ｇ／本、ロット番号：９０４１−０８−１、メーカー：Ｂｏｍｅｉ。

【0111】

（３）ＰＡＦ含有量の測定試薬
科学研究用兎の血小板活性化因子（ＰＡＦ）キット、仕様：９６Ｔ／箱×５箱、４８Ｔ／箱×１箱、ロット番号：２０１５０９、２０１５０８、有効期限：２０１６．０２、上海バイ聯生物科技有限公司製。

【0112】

（４）麻酔薬
ペントバルビタールナトリウム、家兎麻酔用。使用時に精製水でペントバルビタールナトリウムを３％の濃度に調製する。３％のペントバルビタールナトリウム溶液（ｇ／ｖ）を調製する。モデル作製における家兎麻酔に用いられる。

【0113】

（５）病理学的検査剤
組織標本固定液（ＦＡＡ液）：９５％のエタノール（ＡＲグレード）、ロット番号：２０１５０５２３０１、有効期限：２０２０．４、仕様：２０ｋｇ／バケツ、成都市科龍化工試薬廠製、
氷酢酸（ＡＲグレード）、ロット番号：２０１５０４０２０１、有効期限：２０２０．０３、仕様：５００ｍｌ／本、成都市科龍化工試薬廠製、
ホルムアルデヒド（ＡＲグレード）、ロット番号：２０１４１２０８０１、有効期限：２０１６．１１、仕様：５００ｍｌ／本、成都市科龍化工試薬廠製。
調製方法：４２００ｍｌの９５％のエタノール、５００ｍｌのホルムアルデヒド、３００ｍｌの氷酢酸及び９００ｍｌの精製水をそれぞれ称量して、プラスチックのバケツに注入して、十分かつ均一に混合すればよい。
脱水試薬：無水エタノール（ＡＲグレード）、ロット番号：２０１５０５２５０１、有効期限：２０２０．０４、仕様：２０ｋｇ／バケツ、成都市科龍化工試薬廠製。
調製方法：精製水で無水エタノールを希釈して７０％、８０％及び９０％のエタノール溶液に調製する。
透明化試薬：キシレン（ＡＲグレード）、ロット番号：２０１４０７１００１、有効期限：２０１９．０６、仕様：５００ｍｌ／本、成都市科龍化工試薬廠製。
ヘマトキシリン染色液：ヘマトキシリン（ＡＲグレード）、ロット番号：２０１４０１０７０１、有効期限：２０１７．０４、仕様：５ｇ／本、成都市科龍化工試薬廠製、
硫酸カリウムアルミニウム（ＡＲグレード）、ロット番号：２０１４０９１６０１、有効期限：２０１７．１、仕様：５００ｇ／本、成都市科龍化工試薬廠製、
ヨウ素酸ナトリウム（ＡＲグレード）、ロット番号：２０１４０７１１、有効期限：２０１７．１、仕様：１００ｇ／本、成都市科龍化工試薬廠製、
グリセリン（グリセロール、ＡＲグレード）、ロット番号：２０１４１２２４０１、有効期限：２０１７．１２、成都市科龍化工試薬廠製、
氷酢酸（ＡＲグレード）、ロット番号：２０１５０４０２０１、有効期限：２０２０．３、仕様：５００ｍｌ／本、成都市科龍化工試薬廠製。
調製方法：１．５００２ｇのヘマトキシリンを秤量して、２５０ｍｌの精製水を添加し、完全に溶解するまで撹拌し、さらに３１２．５ｍｌの精製水を添加し、０．３００３ｇのヨウ素酸ナトリウムを秤量してビーカーに添加し、５分間撹拌し、次に３７．５００４ｇの硫酸カリウムアルミニウムを添加し、完全に溶解すると１８７．５ｍｌのグリセリンを添加し、均一に混合し、最後に７．５ｍｌの氷酢酸を添加し、十分に撹拌して均一に混合すれば得られる。
エオシン染色液：エオシン（水溶液）、ロット番号：２０１３１１０５０１、有効期限：２０１６．０５、仕様：２５ｇ／本、成都市科龍化工試薬廠製、
無水エタノール（ＡＲグレード）、ロット番号：２０１５０５２５０１、有効期限：２０２０．４、仕様：２０ｋｇ／バケツ、成都市科龍化工試薬廠製。
調製方法：６００ｍｌの無水エタノールと１５０ｍｌの精製水をビーカーに入れて、均一に混合し、３．７５０５ｇのエオシンを添加し、均一に撹拌して溶解すれば得られる。
塩酸−エタノール分別液：塩酸（ＡＲグレード）、ロット番号：２０１４０７２３０１、有効期限：２０１９．７．２２、仕様：５００ｍｌ／本、成都市科龍化工試薬廠製、
無水エタノール（ＡＲグレード）、ロット番号：２０１５０５２５０１、有効期限：２０２０．４、仕様：２０ｋｇ／バケツ、成都市科龍化工試薬廠製。
調製方法：５２０ｍｌの無水エタノールと２２２．５ｍｌの精製水をビーカーに入れて、均一に混合し、次に７．５ｍｌの濃塩酸を徐々に添加し、撹拌して均一に混合すれば得られる。
封入試薬：中性バルサム、仕様：１００ｇ／本、ロット番号：２０１４０１０６、有効期限：２０１８．１２、中国上海懿洋機器有限公司製。
カバーグラス洗浄液：二クロム酸カリウム：（ＡＲグレード）、ロット番号：２０１２０８２２、有効期限：２０１６．０７、仕様：５００ｇ／本、成都市科龍化工試薬廠製、
濃硫酸：（ＡＲグレード）、ロット番号：２０１４０７２３０１、２０１３０６０７、有効期限：２０１９．７．２２、２０１８．０６．０６、仕様：５００ｍｌ／本、成都市科龍化工試薬廠製。
調製方法：５００ｍｌの精製水に５０．０００３ｇの二クロム酸カリウムを添加して、撹拌し、溶解し、均一に混合し、次に５０ｍｌの濃硫酸をその中に徐々に添加して、撹拌して均一に混合すればよい。

【0114】

２．４ モデル作製
検疫及び適応性観察に合格した３９２羽の日本白色家兎を選択し、体重が２．０７０〜２．５６０ｋｇで、全部が雄であり、まず８羽を正常群として取り、その他は、打撃装置を用いて、１．５ｃｍの打撃接触円面の直径で打撃し、創傷エネルギをＥｐ＝ｍｇｈで算出すれば、鉄棒による打撃毎のエネルギーが７．５Ｊである。具体的な方法として、兎耳の縁部で３％のペントバルビタールナトリウムを１ｍｌ／ｋｇ静脈注射して麻酔し、右側臥位で、左大腿の付け根を打撃台に載せて、兔の左大腿骨大転子に触って判明し、打撃ヘッドの平面を大腿骨大転子からその以下１．５ｃｍまでの範囲内に付け、自製の打撃装置を用いて、兔大腿部の近位部の外側を打撃し、石膏で左下肢を屈膝屈股姿勢で固定し、ギプス包帯を装着する時に右股関節が自由に動けると検査した後、腹臥位でギプスの定形を待ち、モデルを作製した後、動物に自由に水を飲ませて、顆粒状飼料を給餌し、抗凝固剤や抗生物質を用いない。

【0115】

２．５ 群分けと投与方式
２．５．１ 薬物調製方法
薬物（ｍｇ）：ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ｍｇ）：ラクトース（ｍｇ）：マンニトール（ｍｇ）＝１：２：１０：２０であり、均一に研磨した後、１ｍｌの精製水を添加し、均一に撹拌すれば得られる。例えば、５０ｍｇの薬物＋１００ｍｇのヒドロキシプロピルメチルセルロース＋５００ｍｇのラクトース＋１０００ｍｇのマンニトールを、均一に研磨し、５０ｍｌの水を添加して、均一に撹拌すれば１ｍｇ／ｍｌの薬液が得られる。

【0116】

２．５．２ 投与方式
各群の動物をモデルに作製した後で群に分けて、下記表４の投与方式で胃内投与し、７日間と連続的に１日あたり１回投与する。

【表6】

【表7】

【0117】

２．６ 指標検出
２．６．１ 血液凝固機能及び血液凝固因子活性の測定
初回投与後０．５、１．０、２．０、３．０、及び４．０ｈで、耳の中心動脈から血液を採取し、血漿を分離し、全自動血液凝固測定装置でＰＰＴ、ＰＴ及びＸａ活性を測定する。

【0118】

２．６．２ ＰＡＦ含有量の変化
初回投与後０．５、１．０、２．０、３．０、及び４．０ｈで、耳の中心動脈から血液を採取し、血清を分離し、ＥＬＩＳＡ法でＰＡＦ含有量の変化を測定する。

【0119】

２．６．３ 深部静脈血栓症形成の測定
最終投与後３０ｍｉｎで放血して動物を死に処分し、大腿動脈、静脈を摘出し、ＨＥ染色し、光学顕微鏡検査で血管内皮損傷、血栓形成及び血管破裂などの状況を検査し、以上の病変程度に対して分類スコアを行い、具体的なスコア標準は表５を参照する。

【表8】

【0120】

２．７ 統計学的処理
血液凝固機能と血液凝固因子とＰＡＦ含有量のデータを測定データとして、Ｅｘｃｅｌソフトウェアを用いて平均値、標準偏差を算出し、データが正規分布であるかを判断し、正規分布であれば、ＥｘｃｅｌにおけるＦ検定を用いて等分散性検定を行い、次にｔ検定を選択して統計し、非正規分布であれば、ノンパラメトリック検定を行う。
病理学的検出データをカテゴリカルデータとし、ソフトウェアＳＰＳＳ１３．０による「ノンパラメトリック検定」の「複数の独立したサンプル」を用いて統計分析を行う。

【0121】

三、実験結果
３．１ 血液凝固機能及び抗血液凝固因子活性の測定

【表9】

【表10】

【表11】

【表12】

【0122】

表６で示すように、１．投与後０．５ｈ〜４ｈで、モデル群を正常対照群と比較すると、ａＰＴＴ（活性化部分トロンボプラスチン時間）はいずれも明らかな延長が見られなかった（ｐ＞０．０５）。成功裏にモデルを作製したことを示す。２．モデル群と比較すると、各投与群は、投与後０．５ｈ〜４ｈで大部分のａＰＴＴの明らかな延長が見られなかった（ｐ＞０．０５）。ギンコライドＢ、キサバン系及び各組成物群に出血有害反応がないことを示す。３．投与後１ｈでモデル群と比較すると、ギンコライドＢ及びリバーロキサバン群のａＰＴＴは、明らかな延長が発生し（ｐ＜０．０５）、アピキサバン群、エドキサバン群、ラザキサバン群、オタミキサバン群のａＰＰＴは、いずれも明らかな延長が見られず（Ｐ＞０．０５）、ギンコライドＢ＋キサバン系群のａＰＰＴは、有意な延長（ｐ＜０．０１）と明らかな延長（ｐ＜０．０５）が発生し、本発明の薬物組成物がａＰＰＴを効果的に延長するとともに、該比率におけるギンコライドＢ及びキサバンがａＰＰＴの延長に対して相乗効果を有することを示す。

【0123】

【表13】

【表14】

【表15】

【表16】

【0124】

表７で示すように、１．投与後０．５ｈ〜４ｈで、モデル群を正常対照群と比較すると、ＰＴ（トロンボプラスチン時間）はいずれも明らかな延長が見られなかった（ｐ＞０．０５）。成功裏にモデルを作製したことを示す。２．モデル群と比較すると、各投与群は、投与後０．５ｈ〜４ｈでＰＴの明らかな延長が見られなかった（ｐ＞０．０５）。ギンコライドＢ、キサバン系群及び各組成物群に出血有害反応がないことを示す。３．投与後０．５ｈでモデル群と比較すると、各組成物群のＰＴ（プロトロンビン時間）の明らかな延長（ｐ＜０．０５）と有意な延長（ｐ＜０．０１）が発生し、本発明の薬物組成物がＰＴを効果的に延長するとともに、ギンコライドＢ及びキサバン系がＰＴの延長に対して相乗効果を有することを示す。

【0125】

【表17】

【表18】

【表19】

【表20】

【表21】

【0126】

表８で示すように、１．投与後０．５ｈ〜４ｈで、モデル群と正常対照群を比較すると、抗血液凝固第Ｘａ因子活性はいずれも異常が見られなかった（ｐ＞０．０５）。成功裏にモデルを作製したことを示す。２．モデル群と比較すると、投与後０．５ｈ〜４ｈで、ギンコライドＢ群の抗血液凝固第Ｘａ因子活性は、時間経過につれて向上し（Ｐ＜０．００１）、リバーロキサバンとアピキサバン群はいずれも非常に有意な差があり（ｐ＜０．００１）、キサバン系薬物の抗血液凝固第Ｘａ因子活性がギンコライドＢより高いことを示す。３．投与後２ｈでモデル群と比較すると、各単一薬剤の群の抗第Ｘａ因子活性が明らかに高まり（ｐ＜０．０５）、各組成物群の抗第Ｘａ因子活性が非常に明らかに高まり（ｐ＜０．００１）、本発明の薬物組成物が抗第Ｘａ因子活性を向上させるとともに、ギンコライドＢ及びキサバンが抗第Ｘａ因子活性に対して相乗効果を有することを示す。

【0127】

３．２ ＰＡＦ含有量の変化

【表22】

【表23】

【表24】

【表25】

【表26】

【0128】

表９で示すように、１．投与後０．５ｈ〜４ｈで、モデル群と正常対照群を比較すると、ＰＡＦ（血小板活性化因子）含有量はいずれも有意な差が見られなかった（ｐ＞０．０５）。成功裏にモデルを作製したことを示す。２．モデル群と比較すると、投与後２ｈで、ギンコライドＢ群のＰＡＦ含有量が有意に低下し（Ｐ＜０．０１）、投与後４ｈで、リバーロキサバンとアピキサバン群のＰＡＦ含有量が非常に有意に低下し（Ｐ＜０．００１）、ラザキサバンとオタミキサバン群のＰＡＦ含有量が有意に低下（Ｐ＜０．０１）する。３．モデル群と比較すると、投与後０．５ｈで、各組成物群のＰＡＦ含有量が有意に低下し（Ｐ＜０．０１）、本発明の薬物組成物がＰＡＦ含有量を効果的に低下させるとともに、ギンコライドＢと組キサバン系のＰＡＦ拮抗受容体が相乗効果を有することを示し、投与後１ｈで、各組成物群のＰＡＦ含有量が非常に有意に低下するか（Ｐ＜０．００１）有意に低下し（Ｐ＜０．０１）、ギンコライドＢとアピキサバンのＰＡＦ拮抗受容体が相乗効果を有することを示し、投与後２ｈで、各組成物群のＰＡＦ含有量が非常に有意に低下するか（Ｐ＜０．００１）有意に低下し（Ｐ＜０．０１）、ギンコライドＢとアピキサバンのＰＡＦ拮抗受容体が相乗効果を有することを示す。

【0129】

表６〜表９から分かるように、
ギンコライドＢ＋リバーロキサバンの組成物群（組成物１〜８）において、組成物１、５〜８群のａＰＰＴが長く、ＰＴがより長く、抗第Ｘａ因子活性がより高く、ＰＡＦ含有量がより低く、組成物１群のａＰＰＴが最も長く、ＰＴが最も長く、抗第Ｘａ因子活性が最も高く、ＰＡＦ含有量が最も低いため、ギンコライドＢ＋リバーロキサバンの組成物において、ギンコライドＢとリバーロキサバンとの配合比率は、好ましくは、ギンコライドＢが５〜１５部、リバーロキサバンが１０〜２０部であり、最も好ましくは、ギンコライドＢが１０部、リバーロキサバンが１５部である。

【0130】

ギンコライドＢ＋アピキサバンの組成物群（組成物９〜１６）において、組成物９、１３〜１６群の血小板ａＰＰＴが長く、ＰＴがより長く、抗第Ｘａ因子活性がより高く、ＰＡＦ含有量がより低く、組成物９群のａＰＰＴが最も長く、ＰＴが最も長く、抗第Ｘａ因子活性が最も高く、ＰＡＦ含有量が最も低いため、ギンコライドＢ＋アピキサバンの組成物において、ギンコライドＢとアピキサバンとの配合比率は、好ましくは、ギンコライドＢが５〜１５部、アピキサバンが１〜１０部であり、最も好ましくは、ギンコライドＢが１０部、アピキサバンが５部である。

【0131】

ギンコライドＢ＋エドキサバンの組成物群（組成物１７〜２４）において、組成物１７、２２〜２４群のａＰＰＴが長く、ＰＴがより長く、抗第Ｘａ因子活性がより高く、ＰＡＦ含有量がより低く、組成物１７群のａＰＰＴが最も長く、ＰＴが最も長く、抗第Ｘａ因子活性が最も高く、ＰＡＦ含有量が最も低いため、ギンコライドＢ＋エドキサバンの組成物において、ギンコライドＢとエドキサバンとの配合比率は、好ましくは、ギンコライドＢが５〜１５部、エドキサバンが１０〜３０部であり、最も好ましくは、ギンコライドＢが１０部、エドキサバンが１５部である。

【0132】

ギンコライドＢ＋ラザキサバンの組成物群（組成物２５〜２９）において、組成物２５、２８〜２９群のａＰＰＴが長く、ＰＴがより長く、抗第Ｘａ因子活性がより高く、ＰＡＦ含有量がより低く、組成物２５群のａＰＰＴが最も長く、ＰＴが最も長く、抗第Ｘａ因子活性が最も高く、ＰＡＦ含有量が最も低いため、ギンコライドＢ＋ラザキサバンの組成物において、ギンコライドＢとラザキサバンとの配合比率は、好ましくは、ギンコライドＢが５〜１５部、ラザキサバンが５〜１５部であり、最も好ましくは、ギンコライドＢが１０部、ラザキサバンが１０部である。

【0133】

ギンコライドＢ＋オタミキサバンの組成物群（組成物３０〜４１）において、組成物３０、３８〜４１群のａＰＰＴが長く、ＰＴがより長く、抗第Ｘａ因子活性がより高く、ＰＡＦ含有量がより低く、組成物３０群のａＰＰＴが最も長く、ＰＴが最も長く、抗第Ｘａ因子活性が最も高く、ＰＡＦ含有量が最も低いため、ギンコライドＢ＋オタミキサバンの組成物において、ギンコライドＢとオタミキサバンとの配合比率は、好ましくは、ギンコライドＢが８〜１２部、オタミキサバンが５０〜９０部であり、最も好ましくは、ギンコライドＢが１０部、オタミキサバンが１０部である。

【0134】

試験結果から分かるように、本発明では、ギンコライドＢと、キサバン系活性成分、例えばリバーロキサバン、アピキサバン、エドキサバン、ラザキサバン、オタミキサバンなどのキサバン系薬物とを併用し、ａＰＰＴが明らかに延長し、ＰＴが明らかに延長し、抗第Ｘａ因子活性を明らかに増強し、ＰＡＦ含有量が明らかに低下し、かつこの両者の単独使用の場合より優れ、この両者の併用が相乗効果を発揮し、ギンコライドＢとキサバン系活性成分で構成された組成物は、ａＰＰＴが長く、ＰＴが長く、抗第Ｘａ因子活性が高く、ＰＡＦ含有量が低く、様々な作用メカニズムにより血小板凝集を抑制することができる。

【0135】

以上から、本発明では、ギンコライドＢとキサバン系薬物を併用し、この両者が相乗効果を奏し、本発明のギンコライドＢとキサバン系薬物で構成された薬物組成物は、血小板凝集を効果的に抑制でき、效果が高く、臨床応用の見通しに優れている。