特許 6392764 ピロロベンゾジアゼピン−抗体結合体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6392764

(24)【登録日】2018年8月31日

(45)【発行日】2018年9月19日

(54)【発明の名称】ピロロベンゾジアゼピン−抗体結合体

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20180910BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20180910BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20180910BHJP

   A61K 47/65 20170101ALI20180910BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20180910BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20180910BHJP

【ＦＩ】

   C07K16/28ZNA

   A61K39/395 L

   A61K39/395 N

   A61K45/00

   A61K47/65

   A61K47/68

   A61P35/00

【請求項の数】18

【全頁数】159

(21)【出願番号】特願2015-536165(P2015-536165)

(86)(22)【出願日】2013年10月11日

(65)【公表番号】特表2015-534579(P2015-534579A)

(43)【公表日】2015年12月3日

(86)【国際出願番号】EP2013071349

(87)【国際公開番号】WO2014057119

(87)【国際公開日】20140417

【審査請求日】2016年10月11日

(31)【優先権主張番号】61/712,924

(32)【優先日】2012年10月12日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/712,928

(32)【優先日】2012年10月12日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/798,106

(32)【優先日】2013年3月15日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/798,037

(32)【優先日】2013年3月15日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】61/798,072

(32)【優先日】2013年3月15日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】515100846

【氏名又は名称】エイディーシー・セラピューティクス・エス・アー

【氏名又は名称原語表記】ＡＤＣ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ ＳＡ

(73)【特許権者】

【識別番号】508098350

【氏名又は名称】メドイミューン・リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ

(74)【代理人】

【識別番号】110000523

【氏名又は名称】アクシス国際特許業務法人

(72)【発明者】

【氏名】パトリシウス・ヘンドリクス・コーネリス・ヴァン・バーケル

(72)【発明者】

【氏名】フィリップ・ウィルソン・ハワード

【審査官】 小林 薫

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１１／１３０６１６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１１／１３０６１３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１１／１３０５９８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１０／０４３８８０（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｋ １／００−１９／００

Ａ６１Ｋ ３１／００−３１／３２７

Ａ６１Ｋ ３９／００−３９／４４；４９／００−５１／１２

Ａ６１Ｐ １／００−４３／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

次式ＣｏｎｊＡ、ＣｏｎｊＢ、ＣｏｎｊＣ、ＣｏｎＪＤ又はＣｏｎｊＥの結合体：
ＣｏｎｊＡ

【化1】

；
ＣｏｎｊＢ

【化2】

；
ＣｏｎｊＣ：

【化3】

；
ＣｏｎｊＤ

【化4】

又はＣｏｎｊＥ：

【化5】

（式中、ＡｂはＣＤ２５に結合する抗体であり、該抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２及び配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインと、配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２及び配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインとを含み、抗体（Ａｂ）に対する薬剤（Ｄ）の薬剤負荷（ｐ）は１〜８である。）。

【請求項2】

前記抗体が配列番号１の配列を有するＶＨドメインを有する、請求項１に記載の結合体。

【請求項3】

前記抗体が配列番号２の配列を有するＶＬドメインを有する、請求項１又は２に記載の結合体。

【請求項4】

前記抗体がそのままの抗体である、請求項１〜３のいずれかに記載の結合体。

【請求項5】

前記抗体がヒト化、脱免疫化又は再表面化されている、請求項１〜４のいずれかに記載の結合体。

【請求項6】

前記抗体が完全ヒトモノクローナル抗体ＩｇＧ１である、請求項１〜３のいずれかに記載の結合体。

【請求項7】

ｐが１、２、３又は４である、請求項１〜６のいずれかに記載の結合体。

【請求項8】

治療に使用するための、請求項１〜７のいずれかに記載の結合体。

【請求項9】

被験体における増殖性疾患の治療に使用するための、請求項１〜７のいずれかに記載の結合体。

【請求項10】

前記疾患が癌である、請求項９に記載の結合体。

【請求項11】

請求項１に記載の式ＣｏｎｊＡ、ＣｏｎｊＢ、ＣｏｎｊＣ、ＣｏｎｊＤ又はＣｏｎｊＥの抗体−薬剤結合体化合物の混合物を含み、前記抗体−薬剤結合体化合物の混合物中における抗体当たりの平均薬剤負荷が２〜５である、抗体−薬剤結合体化合物の混合物。

【請求項12】

治療に使用するための、請求項１１に記載の抗体−薬剤結合体化合物の混合物。

【請求項13】

被験体における増殖性疾患の治療に使用するための、請求項１１に記載の抗体−薬剤結合体化合物の混合物。

【請求項14】

前記疾患が癌である、請求項１３に記載の抗体−薬剤結合体化合物の混合物。

【請求項15】

請求項１〜１０のいずれかに記載の結合体又は請求項１１〜１４のいずれかに記載の抗体−薬剤結合体化合物の混合物と、薬学的に許容される希釈剤、キャリア又は賦形剤とを含む医薬組成物。

【請求項16】

化学療法剤の治療有効量をさらに含む、請求項１５に記載の医薬組成物。

【請求項17】

請求項１〜１０のいずれかに記載の結合体又は請求項１１〜１４のいずれかに記載の抗体−薬剤結合体化合物の混合物の、被験体における増殖性疾患の治療に使用するための薬剤の製造における使用。

【請求項18】

請求項１５又は１６に記載の医薬組成物の、被験体における癌の治療に使用するための医薬品の製造における使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、抗体に対するリンカーの形態の、不安定Ｃ２又はＮ１０保護基を有するピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）に関する。

【背景技術】

【0002】

発明の背景
いくつかのピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）には、ＤＮＡの特定の配列を認識して結合する能力がある。好ましい配列はＰｕＧＰｕである。最初のＰＢＤ抗腫瘍抗生物質であるアントラマイシンは、１９６５年に発見された（Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，外，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７，５７９３−５７９５（１９６５）；Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，外，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７，５７９１−５７９３（１９６５））。それ以来、天然に存在する多数のＰＢＤが報告されており、１０を超える合成経路が様々なアナログに対して開発されている（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，外，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９４，４３３−４６５（１９９４）；Ａｎｔｏｎｏｗ，Ｄ．及びＴｈｕｒｓｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２０１１ １１１（４），２８１５−２８６４）。ファミリー化合物としては、アブベイマイシン（Ｈｏｃｈｌｏｗｓｋｉ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４０，１４５−１４８（１９８７））、キカマイシン（Ｋｏｎｉｓｈｉ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３７，２００−２０６（１９８４））、ＤＣ−８１（特開昭５８−１８０４８７号公報；Ｔｈｕｒｓｔｏｎ外，Ｃｈｅｍ．Ｂｒｉｔ．，２６，７６７−７７２（１９９０）；Ｂｏｓｅ外，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，４８，７５１−７５８（１９９２））、マゼトラマイシン（Ｋｕｍｉｎｏｔｏ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３３，６６５−６６７（１９８０））、ネオトラマイシンＡ及びＢ（Ｔａｋｅｕｃｈｉ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２９，９３−９６（１９７６））、ポロトラマイシン（Ｔｓｕｎａｋａｗａ，外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，１３６６−１３７３（１９８８））、プロトラカルシン（Ｓｈｉｍｉｚｕ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２９，２４９２−２５０３（１９８２）；Ｌａｎｇｌｅｙ及びＴｈｕｒｓｔｏｎ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５２，９１−９７（１９８７））、シバノミシン（ＤＣ−１０２）（Ｈａｒａ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，７０２−７０４（１９８８）；Ｉｔｏｈ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，１２８１−１２８４（１９８８））、シビロマイシン（Ｌｅｂｅｒ外，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１０，２９９２−２９９３（１９８８））及びトママイシン（Ａｒｉｍａ外，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２５，４３７−４４４（１９７２））が挙げられる。ＰＢＤは次の一般構造のものである：

【化1】

これらのものは、それらの芳香族Ａ環及びピロロＣ環の両方における置換基の数、種類及び位置、並びにＣ環の飽和度が相違する。Ｂ環中には、ＤＮＡのアルキル化を担当する求電子性中心であるＮ１０−Ｃ１１位にイミン（Ｎ＝Ｃ）、カルビノールアミン（ＮＨ−ＣＨ（ＯＨ））、又はカルビノールアミンメチルエーテル（ＮＨ−ＣＨ（ＯＭｅ））のいずれかが存在する。既知の天然物の全ては、キラルＣ１１ａ位に（Ｓ）−配置を有し、これはＣ環からＡ環の方に見て右回りのねじれを与える。これは、それらにＢ型ＤＮＡの副溝とのイソヘリシティーのために好適な三次元形状を与え、これにより結合部位にぴたりと嵌ることになる（Ｋｏｈｎ，Ｉｎ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ＩＩＩ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３−１１（１９７５）；Ｈｕｒｌｅｙ及びＮｅｅｄｈａｍ−ＶａｎＤｅｖａｎｔｅｒ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，１９，２３０−２３７（１９８６））。副溝に付加物を形成する能力は、それらがＤＮＡプロセシングを妨害すること、すなわちそれらを抗腫瘍剤として使用することを可能にする。

【0003】

特に有利なピロロベンゾジアゼピン化合物は、化合物１としてＧｒｅｇｓｏｎ外（Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９９９，７９７−７９８）及び化合物４ａとしてＧｒｅｇｓｏｎ外（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１，４４，１１６１−１１７４）に記載されている。ＳＧ２０００としても知られているこの化合物を以下に示す：

【化2】

【0004】

ＷＯ２００７／０８５９３０には、抗体などの細胞結合剤への結合のためのリンカー基を有する二量体ＰＢＤ化合物の調製が記載されている。リンカーは、二量体の単量体ＰＢＤ単位を結合させる架橋部分に存在する。

【0005】

本発明者は、ＷＯ２０１１／１３０６１３及びＷＯ２０１１／１３０６１６において、抗体などの細胞結合剤への結合のためのリンカー基を有する二量体ＰＢＤ化合物を記載した。これらの化合物におけるリンカーは、Ｃ２位置を介してＰＢＤコアに結合し、そして一般的にはリンカー基への酵素の作用によって切断される。 ＷＯ２０１１／１３０５９８では、これらの化合物におけるリンカーは、ＰＢＤコア上における利用可能なＮ１０位置の１つに結合され、そして一般的にはリンカー基への酵素の作用によって切断される。

【0006】

抗体−薬剤結合体
癌、免疫疾患及び血管新生障害を有する患者の標的治療のために抗体療法が確立されてきている（Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．（２００６）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６：３４３−３５７）。細胞毒性又は細胞増殖抑制剤、すなわち癌治療において腫瘍細胞を死滅させる又は阻害する薬剤の局所送達のための抗体−薬剤結合体（ＡＤＣ）、すなわち免疫結合体の使用は、腫瘍への薬剤成分の送達及び細胞内蓄積を標的とするのに対し、これらの非結合薬剤の全身投与は、正常細胞に許容できないレベル毒性をもたらす場合がある（Ｘｉｅ外（２００６）Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．６（３）：２８１−２９１；Ｋｏｖｔｕｎ外（２００６）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６（６）：３２１４−３１２１；Ｌａｗ外（２００６）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６（４）：２３２８−２３３７；Ｗｕ外（２００５）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３（９）：１１３７−１１４５；Ｌａｍｂｅｒｔ Ｊ．（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：５４３−５４９；Ｈａｍａｎｎ Ｐ．（２００５）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ １５（９）：１０８７−１１０３；Ｐａｙｎｅ，Ｇ．（２００３）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ３：２０７−２１２；Ｔｒａｉｌ外（２００３）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：３２８−３３７；Ｓｙｒｉｇｏｓ及びＥｐｅｎｅｔｏｓ（１９９９）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９：６０５−６１４）。

【0007】

それによって最小限の毒性で最大の効果が求められている。ＡＤＣを設計し、洗練するための努力は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の選択性並びに薬剤の作用機序、薬剤結合、薬物／抗体比（負荷）及び薬物放出特性に焦点が当てられてきた（Ｊｕｎｕｔｕｌａ外，２００８ｂ Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２６（８）：９２５−９３２；Ｄｏｒｎａｎ外（２００９）Ｂｌｏｏｄ １１４（１３）：２７２１−２７２９；米国特許第７５２１５４１号；米国特許第７７２３４８５号；ＷＯ２００９／０５２２４９；ＭｃＤｏｎａｇｈ（２００６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌ．１９（７）：２９９−３０７；Ｄｏｒｏｎｉｎａ外（２００６）Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１７：１１４−１２４；Ｅｒｉｃｋｓｏｎ外（２００６）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６（８）：１−８；Ｓａｎｄｅｒｓｏｎ外（２００５）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１１：８４３−８５２；Ｊｅｆｆｒｅｙ外（２００５）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４８：１３４４−１３５８；Ｈａｍｂｌｅｔｔ外（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：７０６３−７０７０）。薬剤部分は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合、プロテアソーム及び／又はトポイソメラーゼ阻害を含めた機構によってそれらの細胞毒性及び細胞増殖抑制効果を付与することができる。いくつかの細胞毒性薬剤は、大きな抗体又はタンパク質受容体リガンドに結合すると不活性又は低活性になる傾向がある。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

本発明者は、特定のＰＢＤ二量体抗体結合体を開発した。

【課題を解決するための手段】

【0009】

発明の開示
本発明の第１の態様は、式Ｌ−（Ｄ^L）_pの結合体を含み、ここで、Ｄ^Lは、次式Ｉ又はＩＩである：

【化3】

式中：
Ｌは以下に定義される抗体（Ａｂ）であり；
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在する場合には、Ｒ¹²は次のものよりなる群から選択され：
（ｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、Ｃ_1〜7アルキル、Ｃ_3〜7ヘテロシクリル及びビス−オキシ−Ｃ_1〜3アルキレンよりなる群から選択される１個以上の置換基で置換されていてよいＣ_5〜10アリール基；
（ｉｂ）Ｃ_1〜5飽和脂肪族アルキル基；
（ｉｃ）Ｃ_3〜6飽和シクロアルキル；
（ｉｄ）

【化4】

ここで、Ｒ²¹、Ｒ²²及びＲ²³のそれぞれは、独立して、Ｈ、Ｃ_1〜3飽和アルキル、Ｃ_2〜3アルケニル、Ｃ_2〜3アルキニル及びシクロプロピルから選択されここで、Ｒ¹²基中の炭素原子の合計数は５を超えない；
（ｉｅ）

【化5】

ここで、Ｒ^25a及びＲ^25bの一方はＨであり、他方はハロ、メチル、メトキシで置換されていてよいフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択され；及び
（ｉｆ）

【化6】

ここで、Ｒ²⁴は、Ｈ；Ｃ_1〜3飽和アルキル；Ｃ_2〜3アルケニル；Ｃ_2〜3アルキニル；シクロプロピル；ハロ、メチル、メトキシから選択される基で置換されていてよいフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択され；
Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在する場合には、
Ｒ¹²は

【化7】

であり、ここで、Ｒ^26a及びＲ^26bは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃ_1〜4飽和アルキル及びＣ_2〜3アルケニルから選択され、該アルキル及びアルケニル基は、Ｃ_1〜4アルキルアミド及びＣ_1〜4アルキルエステルから選択される基で置換されていてよく、又は、Ｒ^26a及びＲ^26bの一方がＨである場合には、他方は、ニトリル及びＣ_1〜4アルキルエステルから選択され；
Ｒ⁶及びＲ⁹は、独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ₂、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから選択され；
ここで、Ｒ及びＲ’は、独立して、置換されていてよいＣ_1〜12アルキル、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル及びＣ_5〜20アリール基から選択され；
Ｒ^7’は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ₂、ＮＨＲ、ＮＨＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ₃Ｓｎ及びハロから選択され；
Ｒ”は、鎖が１個以上のヘテロ原子、例えばＯ、Ｓ、ＮＲ^N2（ここでＲ^N2は、Ｈ又はＣ_1〜4アルキルである）及び／又は芳香環、例えばベンゼン又はピリジンによって中断されていてよいＣ_3〜12アルキレン基であり；
Ｙ及びＹ’は、Ｏ、Ｓ、又はＮＨから選択され；
Ｒ^6’、Ｒ^7’、Ｒ^9’は、それぞれＲ⁶、Ｒ⁷及びＲ⁹と同じ基から選択され；
［式Ｉ］
Ｒ^L1’は、抗体（Ａｂ）への結合のためのリンカーであり；
Ｒ^11aは、ＯＨ、ＯＲ^A（ここで、Ｒ^Aは、Ｃ_1〜4アルキルである。）及びＳＯ_zＭ（ここで、ｚは２又は３であり、Ｍは一価の薬学的に許容される陽イオンである。）から選択され；
Ｒ²⁰及びＲ²¹は、一緒になって、これらが結合している窒素原子と炭素原子の間に二重結合を形成し；
Ｒ²⁰はＨ及びＲ^Cから選択され、ここで、Ｒ^Cはキャッピング基であり；
Ｒ²¹はＯＨ、ＯＲ^A及びＳＯ_zＭから選択され；
Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在する場合には、Ｒ²は、次のものよりなる群から選択され：
（ｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、Ｃ_1〜7アルキル、Ｃ_3〜7ヘテロシクリル及びビス−オキシ−Ｃ_1〜3アルキレンよりなる群から選択される１個以上の置換基で置換されていてよいＣ_5〜10アリール基；
（ｉｂ）Ｃ_1〜5飽和脂肪族アルキル基；
（ｉｃ）Ｃ_3〜6飽和シクロアルキル；
（ｉｄ）

【化8】

ここで、Ｒ¹¹、Ｒ¹²及びＲ¹³のそれぞれは、独立して、Ｈ、Ｃ_1〜3飽和アルキル、Ｃ_2〜3アルケニル、Ｃ_2〜3アルキニル及びシクロプロピルから選択され、ここで、Ｒ²基中における炭素原子の総数は５を超えず；
（ｉｅ）

【化9】

ここで、Ｒ^15a及びＲ^15bの一方はＨであり、他方はハロ、メチル、メトキシから選ばれる基で置換されていてよいフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択され；及び
（ｉｆ）

【化10】

ここで、Ｒ¹⁴は、Ｈ；Ｃ_1〜3飽和アルキル；Ｃ_2〜3アルケニル；Ｃ_2〜3アルキニル；シクロプロピル；ハロ、メチル、メトキシから選択される基で置換されていてよいフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択され；
Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在する場合には、
Ｒ²は

【化11】

であり、ここで、Ｒ^16a及びＲ^16bは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃ_1〜4飽和アルキル、Ｃ_2〜3アルケニルから選択され、該アルキル基及びアルケニル基は、Ｃ_1〜4アルキルアミド及びＣ_1〜4アルキルエステルから選択される基で置換されていてよく、又は、Ｒ^16a及びＲ^16bの一方がＨである場合には、他方はニトリル及びＣ_1〜4アルキルエステルから選択され；
［式ＩＩ］
Ｒ²²は、次式ＩＩＩａ、次式ＩＩＩｂ又は次式ＩＩＩｃであり：
（ａ）

【化12】

ここで、ＡはＣ_5〜7アリール基であり、また
（ｉ）Ｑ¹は単結合であり、Ｑ²は単結合及び−Ｚ−（ＣＨ₂）_n−から選択され、ここで、Ｚは単結合、Ｏ、Ｓ及びＮＨから選択され、ｎは１〜３であり；又は
（ｉｉ）Ｑ¹は−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｑ²は単結合である；
（ｂ）

【化13】

ここで、
Ｒ^C1、Ｒ^C2及びＲ^C3は、独立して、Ｈ及び非置換Ｃ_1〜2アルキルから選択され；
（ｃ）

【化14】

Ｑ’はＯ−Ｒ^L2’、Ｓ−Ｒ^L2’及びＮＲ^N−Ｒ^L2’から選択され、及びＲ^NはＨ、メチル及びエチルから選択され
Ｘは次のものよりなる群から選択され：Ｏ−Ｒ^L2’、Ｓ−Ｒ^L2’、ＣＯ₂−Ｒ^L2’、ＣＯ−Ｒ^L2’、ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ^L2’、ＮＨＮＨ−Ｒ^L2’、ＣＯＮＨＮＨ−Ｒ^L2’、

【化15】

、

【化16】

ＮＲ^NＲ^L2’、ここで、Ｒ^NはＨ及びＣ_1〜4アルキルよりなる群から選択され；
Ｒ^L2’は抗体（Ａｂ）への結合のためのリンカーであり；
Ｒ¹⁰及びＲ¹¹は、一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子間に二重結合を形成し；又は
Ｒ¹⁰はＨであり、Ｒ¹¹はＯＨ、ＯＲ^A及びＳＯ_zＭから選択され；
Ｒ³⁰及びＲ³¹は、一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子の間に二重結合を形成し；
Ｒ³⁰はＨであり、Ｒ³¹はＯＨ、ＯＲ^A及びＳＯ_zＭから選択される。

【0010】

いくつかの実施形態では、結合体は次のものではない：
ＣｏｎｊＡ

【化17】

；
ＣｏｎｊＢ

【化18】

；
ＣｏｎｊＣ：

【化19】

；
ＣｏｎｊＤ

【化20】

又はＣｏｎｊＥ：

【化21】

。

【0011】

他の実施形態では、結合体は、式ＣｏｎｊＡ、ＣｏｎｊＢ、ＣｏｎｊＣ、ＣｏｎｊＤ及びＣｏｎｊＥの結合体から選択されることが好ましい場合がある。

【0012】

式Ｉにおける下付き文字ｐは１〜２０の整数である。したがって、結合体は、リンカー単位によって少なくとも一つの薬剤単位に共有結合された以下に定義される抗体（Ａｂ）を含む。以下でより詳細に説明するリガンド単位は、標的部分に特異的に結合する標的化剤である。したがって、本発明は、例えば、様々な癌及び自己免疫疾患の治療方法も提供する。薬剤負荷は、ｐ、すなわち抗体当たりの薬剤分子の数で表される。薬剤負荷は、抗体当たり１〜２０個の薬剤単位（ＤＬ）の範囲であることができる。組成物に関して、ｐは、該組成物中における結合体の平均薬剤負荷を表し、ｐは１〜２０を範囲とする。

【0013】

本発明の第２の態様は、本発明の第１の態様の結合体の製造方法であって、次式Ｉ^L又はＩＩ^Lの化合物：

【化22】

を以下で定義されるような抗体（Ａｂ）に結合させることを含み、式中：
Ｒ^L1は、抗体（Ａｂ）への結合に好適なリンカーであり；
Ｒ^22Lは、次の式ＩＩＩａ^L、式ＩＩＩｂ^L又は式ＩＩＩｃ^Lのものであり；
（ａ）

【化23】

；
（ｂ）

【化24】

（ｃ）

【化25】

ここで、Ｑ^LはＯ−Ｒ^L2、Ｓ−Ｒ^L2及びＮＲ^N−Ｒ^L2から選択され、Ｒ^NはＨ、メチル及びエチルから選択され
Ｘ^Lは、次のものよりなる群から選択され：Ｏ−Ｒ^L2、Ｓ−Ｒ^L2、ＣＯ₂−Ｒ^L2、ＣＯ−Ｒ^L2、Ｎ＝Ｃ＝Ｏ−Ｒ^L2、ＮＨＮＨ−Ｒ^L2、ＣＯＮＨＮＨ−Ｒ^L2、

【化26】

【化27】

ＮＲ^NＲ^L、ここで、Ｒ^NはＨ及びＣ_1〜4アルキルよりなる群から選択され；
Ｒ^L2は、抗体（Ａｂ）への結合に好適なリンカーであり；
残りの全て基は、第１の態様において定義したとおりである。

【0014】

したがって、第２の態様では、本発明は、次のＡ〜Ｅからそれぞれ選択される化合物を以下で定義される抗体に結合させることを含む、ＣｏｎｊＡ、ＣｏｎｊＢ、ＣｏｎｊＣ、ＣｏｎｊＤ及びＣｏｎｊＥよりなる群から選択される結合体を作製する方法を提供することが好ましい場合がある：
Ａ：

【化28】

Ｂ：

【化29】

Ｃ：

【化30】

Ｄ：

【化31】

及びＥ：

【化32】

【0015】

ＷＯ２０１１／１３０６１５には、化合物２６が開示されている：

【化33】

このものは、Ａの親化合物である。化合物Ａは、このＰＢＤを、細胞結合剤への結合のためのリンカーと共に含む。細胞結合剤は、多数のエチレングリコール部分を与えて結合体の合成に有用な溶解性を与える。

【0016】

ＷＯ２０１０／０４３３８０及びＷＯ２０１１／１３０６１３には、化合物３０が開示されている：

【化34】

【0017】

また、ＷＯ２０１１／１３０６１３には、化合物５１が開示されている：

【化35】

化合物Ｂは、ＰＢＤ部分間に（ＣＨ₂）₅鎖の代わりに（ＣＨ₂）₃鎖を有する点でのみ化合物３０とは相違し、これにより脱離したＰＢＤ二量体の親油性が減少する。結合基は、メタ位ではなくパラ位でＣ２−フェニル基に結合する。

【0018】

ＷＯ２０１１／１３０６１３には、化合物９３が開示されている：

【化36】

化合物Ｃは、２つの点でこれとは相違する。細胞結合剤は、結合体の合成に有用な溶解性を提供する増加した数のエチレングリコール部分を与え、フェニル置換基は、１個ではなく２個の酸素原子を与え、これは溶解性にも役立つ。 また、化合物Ｃ’の構造とは、このものが副溝により強く結合することを意味する場合もある。

【0019】

化合物Ａ、Ｂ及びＣは、それぞれのＣ環に２個のｓｐ²中心を有するところ、これは、それぞれのＣ環に１個のみのｓｐ²中心を有する化合物の場合よりも強くＤＮＡの副溝に結合するのを可能にすることができる。

【0020】

ＷＯ２０１１／１３０５９８には、化合物８０が開示されている：

【化37】

化合物Ｄは、細胞結合剤への結合のためのヨードアセトアミド基を有する点でこれとは異なる。この基には、細胞結合剤に結合したときのその安定性に関して化合物８０を超える利点を提供することができる（下記参照）。化合物８０中のマレイミド基は、レトロ−マイケル反応を受け、細胞結合剤から非結合状態になるため、アルブミン及びグルタチオンなどの生体分子を含む他のチオールによる捕捉に脆弱な場合がある。このような非結合が化合物Ａで生じることはない。また、ヨードアセトアミド基は、他の望ましくない副反応を回避することができる。

【0021】

化合物Ｅは、より小さく親油性の少ないＣ２置換基、例えば、４Ｆ−フェニル、プロピレンを有する点で、Ｃ２−３末端二重結合を有する薬剤リンカーを持つ以前に開示されたＰＢＤ二量体とは異なる。このように、化合物Ｂの結合体（下記参照）は、いったん合成されたら凝集する可能性は低い。このような結合体の凝集は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により測定できる。

【0022】

両方の化合物Ｄ及びＥは、それぞれのＣ環に２個のｓｐ²中心を有するが、これは、それぞれのＣ環に１個のみのｓｐ²中心を有する化合物の場合よりも強くＤＮＡの副溝に結合することを可能にすることができる。

【0023】

ＷＯ２０１０／０４３８８０、ＷＯ２０１１／１３０６１３、２０１１／１３０５９８及びＷＯ２０１１／１３０６１６に開示された薬剤リンカーを本発明で使用することができ、これらは引用により本明細書で援用する。ここに記載する薬剤リンカーは、これらの文献に記載されたとおりに合成できる。

【図面の簡単な説明】

【0024】

【図1】図１は、ＨｕＭａｘ−ＴＡＣ−Ａの試験管内での有効性を示す。

【図2】図２は、ＨｕＭａｘ−ＴＡＣ−Ａの試験管内での有効性を示す。

【図3A】図３Ａは、ＨＵＭＡＸ−ＴＡＣ−ＡＤＣ結合体に対する薬剤リンカーの選択を示す。

【図3B】図３Ｂは、ＨＵＭＡＸ−ＴＡＣ−ＡＤＣ結合体に対する薬剤リンカーの選択を示す。

【図3C】図３Ｃは、ＨＵＭＡＸ−ＴＡＣ−ＡＤＣ結合体に対する薬剤リンカーの選択を示す。

【図4】図４は、Ｋａｒｐａｓ２９９異種移植片モデルにおけるＨｕＭａｘ−ＴＡＣ−ＡＤＣに対する薬剤リンカー選択を示す。

【図5】図５は体重測定を示す。

【発明を実施するための形態】

【0025】

発明の詳細な説明
本発明は、被験体における好ましい部位にＰＢＤ化合物を与えるのに使用するために好適である。この結合体は、リンカーの任意の部宇分を保持していない活性なＰＢＤの化合物の放出を可能にする。ＰＢＤの化合物の反応性に影響を与える可能性がある断片は存在しない。したがってＣｏｎｊＡは、次の化合物ＲｅｌＡを放出するであろう：

【化38】

ＣｏｎｊＢは、次の化合物ＲｅｌＢを放出するであろう：

【化39】

ＣｏｎｊＣは、次の化合物ＲｅｌＣを放出するであろう：

【化40】

ＣｏｎｊＤは、次の化合物ＲｅｌＤを放出するであろう：

【化41】

そして、ＣｏｎｊＥは、次の化合物ＲｅｌＥを放出するであろう：

【化42】

【0026】

本発明においてＰＢＤ二量体と抗体との間にある特定の結合は、好ましくは細胞外で安定である。細胞への輸送又は送達前に、抗体−薬剤結合体（ＡＤＣ）は、好ましくは安定であり、かつ、そのままの状態を保持する、すなわち、抗体は、薬剤部分に結合されたままである。リンカーは、標的細胞の外部では安定であり、かつ、細胞内では有効な速度で切断され得る。効果的なリンカーは、（ｉ）抗体の特異的結合特性を維持し、（ｉｉ）結合体又は薬剤部分の細胞内送達を可能にし、（ｉｉｉ）安定でかつそのままの状態を保持し、すなわち、結合体がその標的部位に送達又は輸送されるまで切断されない状態を保持し、及び（ｉｖ）ＰＢＤ薬剤部分の細胞傷害性の殺細胞効果又は細胞増殖抑制効果を維持する。ＡＤＣの安定性は、質量分析、ＨＰＬＣ及び分離／分析技術ＬＣ／ＭＳなどの標準的な分析技術によって測定できる。

【0027】

式ＲｅｌＡ、ＲｅｌＢ、ＲｅｌＣ、ＲｅｌＤ又はＲｅｌＥの化合物の送達は、式ＣｏｎｊＡ、ＣｏｎｊＢ、ＣｏｎｊＣ、ＣｏｎｊＤ又はＣｏｎｊＥの結合体の所望の活性化部位で、結合基、特にバリン−アラニンジペプチド部分へのカテプシンなどの酵素の作用によって達成される。

【0028】

抗体
一態様では、抗体は、ＣＤ２５に結合する抗体であり、該抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２及び配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１に従う配列を有するＶＨドメインを含む。

【0029】

抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２及び配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインをさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２に従う配列を有するＶＬドメインをさらに含む。

【0030】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、このＶＨ及びＶＬドメインは、配列番号２と対になった配列番号１の配列を有する。

【0031】

ＶＨ及びＶＬドメインは、ＣＤ２５を結合する抗体抗原結合部位を形成するように対になることができる。

【0032】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインを含むそのままの抗体であり、このＶＨ及びＶＬドメインは、配列番号１及び配列番号２の配列を有する。

【0033】

いくつかの実施形態では、抗体は、完全ヒトモノクローナルＩｇＧ１、好ましくはＩｇＧ１，κ抗体である。

【0034】

いくつかの態様では、抗体は、ＷＯ２００４／０４５５１２（Ｇｅｎｍａｂ Ａ／Ｓ）に記載されたＡＢ１２抗体である。

【0035】

態様では、抗体は、以下で説明されるように変性（又はさらに変性）された、ここで説明する抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ここで開示される抗体のヒト化、脱免疫化又は再表面化変種である。

【0036】

用語
ここで、用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、かつ、所望の生物学的活性、例えばＣＤ２５結合能を示す限りにおいて、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二量体、多量体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、そのままの抗体及び抗体断片をカバーする（Ｍｉｌｌｅｒ外（２００３）Ｊｏｕｒ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １７０：４８５４−４８６１）。抗体は、マウス、ヒト、ヒト化、キメラ、又は他の種に由来することができる。抗体とは、特定の抗原を認識し、そしてそれに結合することのできる免疫系によって生成されるタンパク質のことである。（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．、Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．、Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．、Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第５版，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。標的抗原は、一般に、複数の抗体上のＣＤＲによって認識される多数の結合部位（エピトープとも呼ばれる）を有する。異なるエピトープに特異的に結合するそれぞれの抗体は異なる構造を有する。したがって、一つの抗原は、複数の対応する抗体を有することができる。抗体は、全長免疫グロブリン分子又は全長免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、標的の抗原又はその部分に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子を含み、このような標的としては、自己免疫疾患に関連する自己免疫抗体を産生する１種以上の癌細胞細胞が挙げられるが、これらに限定されない。免疫グロブリンは、免疫グロブリン分子の任意の型（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ及びＩｇＡ）、クラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）若しくはサブクラス、又はアロタイプ（例えば、ヒトＧ１ｍ１、Ｇ１ｍ２、Ｇ１ｍ３、非Ｇ１ｍ１［すなわちＧ１ｍ１以外の任意のアロタイプ］、Ｇ１ｍ１７、Ｇ２ｍ２３、Ｇ３ｍ２１、Ｇ３ｍ２８、Ｇ３ｍ１１、Ｇ３ｍ５、Ｇ３ｍ１３、Ｇ３ｍ１４、Ｇ３ｍ１０、Ｇ３ｍ１５、Ｇ３ｍ１６、Ｇ３ｍ６、Ｇ３ｍ２４、Ｇ３ｍ２６、Ｇ３ｍ２７、Ａ２ｍ１、Ａ２ｍ２、Ｋｍ１、Ｋｍ２及びＫｍ３）のものであることができる。免疫グロブリンは、ヒト、マウス、又はウサギ起源を含めて任意の種に由来できる。

【0037】

本明細書で使用するときに、「ＣＤ２５と結合する」は、抗体がウシ血清アルブミンなどの非特異的な相手よりも高い親和性でＣＤ２５と結合することを意味するために使用される（ＢＳＡ、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＣＡＡ７６８４７、バージョン番号ＣＡＡ７６８４７．１ＧＩ：３３３６８４２、記録更新日：２０１１年１月７日２時３０分ＰＭ）。いくつかの実施形態では、抗体は、生理的条件で測定されたときに、ＢＳＡに対する抗体の結合定数（Ｋ_a）よりも少なくとも２、３、４、５、１０、２０、５０、１００、２００、５００、１０００、２０００、５０００、１０⁴、１０⁵又は１０⁶倍高い会合定数でＣＤ２５と結合する。本発明の抗体は、高い親和性でＣＤ２５と結合することができる。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、約１０^-6Ｍ以下、例えば１×１０^-6、１０^-7、１０^-8、１０^-9、１０^-10、１０^-11、１０^-12、１０^-13又は１０^-14のＫＤでＣＤ２５と結合することができる。

【0038】

いくつかの実施形態では、ＣＤ２５ポリペプチドは、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿０００４０８、バージョン番号ＮＰ＿０００４０８．１ ＧＩ：４５５７６６７、記録更新日：２０１２年９月９日４時５９分ＰＭに相当する。一実施形態では、ＣＤ２５ポリペプチドをコードする核酸は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０００４１７、バージョン番号ＮＭ＿０００４１７．２ ＧＩ：２６９９７３８６０、記録更新日：２０１２年９月９日４時５９分ＰＭに相当する。

【0039】

「抗体断片」は、全長抗体の一部、一般にはその抗原結合領域又は可変領域を含む。 抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）₂及びｓｃＦｖ断片；二重特異性抗体；直鎖抗体；Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生される断片、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、ＣＤＲ（相補性決定領域）、及び癌細胞抗原、ウイルス抗原又は微生物抗原、単鎖抗体分子に免疫特異的に結合する上記のいずれかのエピトープ結合断片；及び抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられる。

【0040】

ここで使用するときに、用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体をいう、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る、自然に生じる場合がある突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、単一の抗原部位に対して向けられる非常に特異的なものである。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の抗体によって汚染されずに合成できるという点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られるときの抗体の特徴を示すが、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ外（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５で最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製でき、又は組換えＤＮＡ法（米国特許第４８１６５６７号を参照）によって作製できる。また、モノクローナル抗体は、例えばＣｌａｃｋｓｏｎ外（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８；Ｍａｒｋｓ外（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２２２：５８１−５９７に記載された技術を使用してファージ抗体ライブラリーから単離でき、又は完全ヒト免疫グロブリン系を運ぶトランスジェニックマウス（Ｌｏｎｂｅｒｇ（２００８）Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎｉｏｎ ２０（４）：４５０−４５９）から単離できる。

【0041】

ここで、モノクローナル抗体は特に、重鎖及び／又は軽鎖の一部が特定の種に由来する又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応配列と同一又は相同である一方で、鎖の残りが別の種に由来する又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応配列と同一又は相同である「キメラ」抗体、並びに所望の生物学的活性を示す限りにおいてこのような抗体の断片が挙げられる（米国特許第４８１６５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ外（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５）。キメラ抗体としては、非ヒト霊長類（例えば旧世界ザル又は類人猿）及びヒトの定常領域配列に由来する可変ドメイン抗原結合配列を含む「霊長類化」抗体が挙げられる。

【0042】

ここで、「そのままの抗体」とは、ＶＬ及びＶＨドメイン並びに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含むもののことである。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）又はそのアミノ酸配列変異体とすることができる。そのままの抗体は、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域又はアミノ酸配列変異体Ｆｃ領域）に起因する生物学的活性を指す１以上の「エフェクター機能」を有することができる。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞仲介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；Ｂ細胞受容体及びＢＣＲなどの細胞表面受容体の下方調節が挙げられる。

【0043】

そのままの抗体は、それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、異なる「クラス」に割り当てることができる。そのままの抗体の５種の主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭが存在し、これらのいくつかは、「サブクラス」（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ及びＩｇＡ２にさらに分類できる。異なる抗体のクラスに相当する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ及びμと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元立体配置はよく知られている。

【0044】

抗体の修飾
ここで開示される抗体を修飾して、例えば、これらをヒト被験体に対して免疫原性を少なくすることができる。これは、当業者によく知られた技術のいずれかを使用して達成できる。これらの技術のいくつかは、以下でより詳細に説明する。

【0045】

ヒト化
非ヒト抗体又は抗体フラグメントの生体内免疫原性を低減させるための技術としては、「ヒト化」と呼ばれるものが挙げられる。

【0046】

「ヒト化抗体」とは、可変領域の一部、好ましくはそのままのヒト可変ドメインよりも実質的に少ない部分が非ヒト種由来の対応配列によって置換され、しかも修飾された可変領域が別のタンパク質、好ましくはヒト抗体の定常領域の少なくとも別の部分に結合しているヒト抗体の修飾された可変領域の一部を少なくとも含むポリペプチドを意味する。表現「ヒト化抗体」には、１個以上の相補性決定領域（「ＣＤＲ」）アミノ酸残基及び／又は１個以上のフレームワーク領域（「ＦＷ」又は「ＦＲ」）アミノ酸残基がげっ歯類又は他の非ヒト抗体における類似部位由来のアミノ酸残基によって置換されたヒト抗体が含まれる。また、表現「ヒト化抗体」には、実質的にヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有するＦＲと、実質的に非ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有するＣＤＲとを含む免疫グロブリンアミノ酸配列変異体又はその断片も含まれる。

【0047】

非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ抗体である。あるいは、別の見方をすると、ヒト化抗体は、ヒト配列の代わりに非ヒト（例えばマウス）抗体から選択された配列も含むヒト抗体である。ヒト化抗体は、その結合及び／又は生物学的活性を有意に変化させない同一の又は異なる種からの保存的アミノ酸置換又は非天然残基を含むことができる。このような抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ抗体である。

【0048】

「ＣＤＲ移植」、「誘導選択」、「脱免疫化」、「表面再生」（「ベニアリング」としても知られている）、「複合抗体」、「ヒトストリング内容最適化」及びフレームワークシャッフリングを含めて、様々なヒト化技術が存在する。

【0049】

ＣＤＲグラフティング
この技術では、ヒト化抗体は、レシピエント抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特性を有するマウス、ラット、ラクダ、ウシ、ヤギ又はウサギなどの非ヒト種のＣＤＲ（ドナー抗体）からの残基によって置換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である（実際には、非ヒトＣＤＲは、ヒトフレームワーク上に「グラフト」される）。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基で置換されている（これは、例えば、特定のＦＲ残基が抗原結合に有意な効果を及ぼす場合に生じる可能性がある）。

【0050】

さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見出されない残基を含むことができる。これらの修飾は、抗体の特性をさらに洗練しかつ最大限にするために行われる。したがって、一般に、ヒト化抗体は、超可変ループの全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのそれに対応し、かつ、ＦＲ領域の全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のそれである、少なくとも１個、一態様では２個の可変ドメインの全てを含む。ヒト化抗体は、任意に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部又はヒト免疫グロブリンのそれを含むであろう。

【0051】

誘導選択
この方法は、特定のエピトープに特異的な所定の非ヒト抗体のＶ_H又はＶ_LドメインとヒトＶ_H又はＶ_Lライブラリーとを組み合わせることからなり、特異的ヒトＶドメインは、目的の抗原に対して選択される。その後、この選択されたヒトＶＨをＶＬライブラリーと組み合わせて、完全にヒトのＶＨｘＶＬの組み合わせを生成する。この方法は、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｎ．Ｙ．）１２，（１９９４）８９９−９０３に記載されている。

【0052】

複合抗体
この方法では、ヒト抗体のアミノ酸配列の２以上のセグメントを最終抗体分子内で組み合わせる。 これらは、複数のヒトＶＨ及びＶＬ配列セグメントを、最終複合抗体のＶ領域中におけるヒトＴ細胞エピトープを制限又は回避する組み合わせで組み合わせることによって構築される。必要な場合には、Ｔ細胞エピトープは、Ｔ細胞エピトープに貢献する又はこれをコードするＶ領域セグメントを、Ｔ細胞エピトープを回避する別のセグメントに置換することによって制限又は回避される。この方法は、ＵＳ２００８／０２０６２３９ Ａ１に記載されている。

【0053】

脱免疫化
この方法は、治療用抗体（又は他の分子）のＶ領域からヒト（又は他の第２種）Ｔ細胞エピトープを除去することを含む。 治療用抗体Ｖ領域配列は、例えば、ＭＨＣ結合モチーフのデータベースとの比較により、ＭＨＣクラスＩＩ−結合モチーフの存在について分析される（例えばｗｗｗ．ｗｅｈｉ．ｅｄｕ．ａｕでホストされる「モチーフ」データベース）。あるいは、ＭＨＣクラスＩＩ−結合モチーフは、Ａｌｔｕｖｉａ外（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４９ ２４４−２５０（１９９５））によって考案されたような 計算スレッド化手法を使用して同定できる；これらの方法では、Ｖ領域配列からの連続重複ペプチドを、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質への結合エネルギーについて試験する。このデータを、両親媒性、ロスバードモチーフ及びカテプシンＢの切断部位並びに他のプロセシング酵素などの正常に提示されるペプチドに関連する他の配列の特徴に関する情報と組み合わせることができる。

【0054】

潜在的な第２種（例えば、ヒト）のＴ細胞エピトープが同定されたら、これらを１以上のアミノ酸の変更によって除去する。修飾アミノ酸は、通常、Ｔ細胞エピトープ自体の内部にあるが、タンパク質の一次又は二次構造の点でエピトープに隣接していてもよい（すなわち、一次構造においては隣接していなくてもよい）。最も典型的には、変更は、置換によるものであるが、いくつかの状況では、アミノ酸の付加又は欠失がより適切であろう。

【0055】

全ての変更は、組換えＤＮＡ技術によって達成でき、その結果、最終分子は、部位特異的突然変異誘発などのよく確立された方法を使用して、組換え宿主からの発現により調製できる。しかし、タンパク質化学又は分子変更の任意の他の手段を使用することも可能である。

【0056】

再表面化
この方法は、次のことを含む：
（ａ）非ヒト抗体可変領域の三次元モデルを構築することによって非ヒト（例えば齧歯類）抗体（又はその断片）の可変領域の立体配座構造を決定すること；
（ｂ）重鎖及び軽鎖フレームワーク位置のセットを与えるように十分な数の非ヒト及びヒト抗体可変領域重鎖及び軽鎖のＸ線結晶構造からの相対アクセシビリティ分布を使用して配列アラインメントを生成し、その際、アラインメント位置は、該十分な数の非ヒト抗体重鎖及び軽鎖の９８％で同一である；
（ｃ）ヒト化される非ヒト抗体について、工程（ｂ）で生成されたフレームワーク位置のセットを使用して重鎖及び軽鎖表面露出アミノ酸残基のセットを定義する；
（ｄ）ヒト抗体アミノ酸配列から、工程（ｃ）で定義された表面露出アミノ酸残基のセットと最も同一性の高い重鎖及び軽鎖の表面露出アミノ酸残基のセットを同定し、ここで、このヒト抗体からの重鎖及び軽鎖は、対になる又は自然には対にならない；
（ｅ）ヒト化される非ヒト抗体のアミノ酸配列において、工程（ｃ）で定義された重鎖及び軽鎖表面露出アミノ酸残基のセットを工程（ｄ）で定義された重鎖及び軽鎖の表面露出アミノ酸残基のセットで置換すること；
（ｆ）工程（ｅ）で特定された置換により得られた非ヒト抗体の可変領域の三次元モデルを構築すること；
（ｇ）工程（ａ）及び（Ｆ）で構築された三次元モデルを比較することにより、ヒト化される非ヒト抗体の相補性決定領域の任意の残基の任意の原子の５Å内にある工程（ｃ）又は（ｄ）で同定されたセットから任意のアミノ酸残基を同定すること；及び
（ｈ）工程（ｇ）で同定された任意の残基をヒトから元の非ヒトアミノ酸残基に変更して、それによって表面露出アミノ酸残基の非ヒト抗体ヒト化セットを定義すること；
ただし工程（ａ）を最初に実施する必要はないが、工程（ｇ）の前に実施しなければならないことを条件とする。

【0057】

超ヒト化
この方法は、非ヒト配列と機能的ヒト生殖系列遺伝子レパートリーとを比較する。非ヒト配列と同一又は密接に関連する正準構造をコードするヒト遺伝子が選択される。ＣＤＲ内において最も高い相同性を有する選択されたヒトの遺伝子をＦＲドナーとして選択する。最後に、非ヒトＣＤＲはこれらのヒトＦＲにグラフトされる。この方法は、ＷＯ２００５／０７９４７９ Ａ２号に記載されている。

【0058】

ヒトストリングコンテント最適化
この方法は、非ヒト（例えばマウス）の配列とヒト生殖細胞系列遺伝子のレパートリーとを比較し、それらの差異を、潜在的ＭＨＣ／Ｔ細胞エピトープのレベルで配列を定量するヒトストリングコンテント（ＨＳＣ）として記録する。標的配列を、グローバルな同一性指標を使用するのではなく、そのＨＳＣを最大化することによってヒト化して複数の多様なヒト化変異体を生成する（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４４，（２００７）１９８６−１９９８に記載されている）。

【0059】

フレームワークシャフリング
非ヒト抗体のＣＤＲは、全ての既知の重鎖及び軽鎖ヒト生殖細胞系遺伝子フレームワークを包含するｃＤＮＡプールにインフレームで融合される。その後、ヒト化抗体は、例えばファージ表示抗体ライブラリーのパニングによって選択される。これは、この方法は、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６，４３−６０（２００５）に記載されている。

【0060】

定義
薬学的に許容できる陽イオン
薬学的に許容できる１価又は２価の陽イオンの例は、Ｂｅｒｇｅ外，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６，１−１９（１９７７）に記載されている。この文献を引用によりここに含める。

【0061】

薬学的に許容できる陽イオンは、無機又は有機であることができる。

【0062】

薬学的に許容できる１価の無機陽イオンの例としては、Ｎａ⁺及びＫ⁺などのアルカリ金属イオンが挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に許容できる２価の無機陽イオンの例としては、Ｃａ²⁺及びＭｇ²⁺などのアルカリ土類陽イオンが挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に許容できる有機陽イオンの例としては、アンモニウムイオン（すなわちＮＨ₄⁺）及び置換アンモニウムイオン（例えばＮＨ₃Ｒ⁺、ＮＨ₂Ｒ₂⁺、ＮＨＲ₃⁺、ＮＲ₄⁺）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの好適な置換アンモニウムイオンの例は、次のものから誘導されるものである：エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン及びトロメタミン、並びにリジン及びアルギニンなどのアミノ酸。一般的な第四級アンモニウムイオンの例はＮ（ＣＨ₃）₄⁺である。

【0063】

置換基
本明細書で使用するときに、「置換されていてよい」という語句は、非置換であってもよく又は置換されていてもよい親基に関連する。

【0064】

特に断らない限り、本発明で使用する「置換された」という用語は、１個以上の置換基を有する親基に関する。用語「置換基」は、ここでは従来の意味で使用され、共有結合している化学的部分又は適切な場合には、親基に融合された化学的部分を意味する。多種多様な置換基がよく知られており、様々な親基へのそれらの形成及び導入方法もよく知られている。

【0065】

置換基の例を以下で詳しく説明する。

【0066】

Ｃ_1〜12アルキル：本明細書で使用される用語「Ｃ_1〜12アルキル」とは、脂肪族又は脂環式であってよくかつ飽和又は不飽和であってもよい（例えば、部分的に不飽和、完全に不飽和）、１〜１２個の炭素原子を有する炭化水素化合物の炭素原子から水素原子を除去することにより得られる１価部分をいう。ここで使用するときに、用語「Ｃ_1〜4アルキル」とは、脂肪族又は芳香族であってよく、かつ、飽和又は不飽和（例えば部分不飽和、完全に不飽和）であってよい、１〜４個の炭素原子を有する炭化水素化合物の炭素原子から１個の水素原子を除去することによって得られる１価部分をいう。したがって、用語「アルキル」には、以下に説明するサブクラスのアルケニル、アルキニル、シクロアルキルなどが含まれる。

【0067】

飽和アルキル基の例としては、メチル（Ｃ₁）、エチル（Ｃ₂）、プロピル（Ｃ₃）、ブチル（Ｃ₄）、ペンチル（Ｃ₅）、ヘキシル（Ｃ₆）及びヘプチル（Ｃ₇）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0068】

飽和直鎖アルキル基の例としては、メチル（Ｃ₁）、エチル（Ｃ₂）、ｎ−プロピル（Ｃ₃）、ｎ−ブチル（Ｃ₄）、ｎ−ペンチル（アミル）（Ｃ₅）、ｎ型ヘキシル（Ｃ₆）及びｎ−ヘプチル（Ｃ₇）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0069】

飽和分岐アルキル基の例としては、イソプロピル（Ｃ₃）、イソブチル（Ｃ₄）、ｓ−ブチル（Ｃ₄）、ｔ−ブチル（Ｃ₄）、イソペンチル（Ｃ₅）、及びネオペンチル（Ｃ₅）が挙げられる。

【0070】

Ｃ_2〜12アルケニル：ここで使用するときに、用語「Ｃ_2〜12アルケニル」とは、１個以上の炭素−炭素二重結合を有するアルキル基をいう。

【0071】

不飽和アルケニル基の例としては、エチニル（ビニル、−ＣＨ＝ＣＨ₂）、１−プロペニル（−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₃）、２−プロペニル（アリル、−ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ₂）、イソプロペニル（１−メチルビニル、−Ｃ（ＣＨ₃）＝ＣＨ₂）、ブテニル（Ｃ₄）、ペンテニル（Ｃ₅）及びヘキセニル（Ｃ₆）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0072】

Ｃ_2〜12アルキニル：本明細書で使用する用語「Ｃ_2〜12アルキニル」は、１個以上の炭素−炭素三重結合を有するアルキル基を意味する。

【0073】

不飽和アルキニル基の例としては、エチニル（−Ｃ≡ＣＨ）及び２−プロピニル（プロパルギル、−ＣＨ₂−Ｃ≡ＣＨ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0074】

Ｃ_3〜12シクロアルキル：ここで使用するときに、用語「Ｃ_3〜12シクロアルキル」とは、シクリル基でもあるアルキル基をいう；すなわち、環状炭化水素（炭素環式）化合物の脂環式環原子から水素原子を除去することによって得られる１価の部分であって、該部分が３〜７個の環原子を含めて３〜７個の炭素原子を有するものである。

【0075】

シクロアルキル基の例としては、次のものから誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない：
飽和単環式炭化水素化合物：
シクロプロパン（Ｃ₃）、シクロブタン（Ｃ₄）、シクロペンタン（Ｃ₅）、シクロヘキサン（Ｃ₆）、シクロヘプタン（Ｃ₇）、メチルシクロプロパン（Ｃ₄）、ジメチルシクロプロパン（Ｃ₅）、メチルシクロブタン（Ｃ₅）、ジメチルシクロブタン（Ｃ₆）、メチルシクロペンタン（Ｃ₆）ジメチルシクロペンタン（Ｃ₇）、メチルシクロヘキサン（Ｃ₇）；不飽和単環式炭化水素化合物：
シクロプロペン（Ｃ₃）、シクロブテン（Ｃ₄）、シクロペンテン（Ｃ₅）、シクロヘキセン（Ｃ₆）、メチルシクロプロペン（Ｃ₄）、ジメチルシクロプロペン（Ｃ₅）、メチルシクロブテン（Ｃ₅）、ジメチルシクロブテン（Ｃ₆）、メチルシクロペンテン（Ｃ₆）、ジメチルシクロペンテン（Ｃ₇）及びメチルシクロヘキセン（Ｃ₇）；及び
飽和多環式炭化水素化合物：
ノルカラン（Ｃ₇）、ノルピナン（Ｃ₇）、ノルボルナン（Ｃ₇）。

【0076】

Ｃ_3〜20ヘテロシクリル：本明細書で使用するときに、用語「Ｃ_3〜20ヘテロシクリル」とは、複素環式化合物の環原子から水素原子を除去することにより得られる１価部分であって、その部分が３〜２０個の環原子を有し、そのうち１〜１０個が環ヘテロ原子であるものをいう。好ましくは、各環は３〜７個の環原子を有し、そのうちの１〜４個は環ヘテロ原子である。

【0077】

本明細書において、接頭辞（例えばＣ_3〜20、Ｃ_3〜7、Ｃ_5〜6など）は、炭素原子かヘテロ原子かどうかを問わず、環原子の数又は環原子の数の範囲を示す。例えば、本明細書で使用する用語「Ｃ_5〜6ヘテロシクリル」とは、５又は６個の環原子を有するヘテロシクリル基をいう。

【0078】

単環式ヘテロシクリル基の例としては、次のものから誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない：
Ｎ₁：アジリジン（Ｃ₃）、アゼチジン（Ｃ₄）、ピロリジン（テトラヒドロピロール）（Ｃ₅）、ピロリン（例えば、３−ピロリン、２，５−ジヒドロピロール）（Ｃ₅）、２Ｈ−ピロール又は３Ｈ−ピロール（イソピロール、イソアゾール）（Ｃ₅）、ピペリジン（Ｃ₆）、ジヒドロピリジン（Ｃ₆）、テトラヒドロピリジン（Ｃ₆）、アゼピン（Ｃ₇）；
Ｏ₁：オキシラン（Ｃ₃）、オキセタン（Ｃ₄）、オキソラン（テトラヒドロフラン）（Ｃ₅）、オキソール（ジヒドロフラン）（Ｃ₅）、オキサン（テトラヒドロピラン）（Ｃ₆）、ジヒドロピラン（Ｃ₆）、ピラン（Ｃ₆）、オキセピン（Ｃ₇）；
Ｓ₁：チイラン（Ｃ₃）、チエタン（Ｃ₄）、チオラン（テトラヒドロチオフェン）（Ｃ₅）、チアン（テトラヒドロチオピラン）（Ｃ₆）、チエパン（Ｃ₇）；
Ｏ₂：ジオキソラン（Ｃ₅）、ジオキサン（Ｃ₆）、及びジオキセパン（Ｃ₇）；
Ｏ₃：トリオキサン（Ｃ₆）；
Ｎ₂：イミダゾリジン（Ｃ₅）、ピラゾリジン（ジアゾリジン）（Ｃ₅）、イミダゾリン（Ｃ₅）、ピラゾリン（ジヒドロピラゾール）（Ｃ₅）、ピペラジン（Ｃ₆）；
Ｎ₁Ｏ₁：ヒドロオキサゾール（Ｃ₅）、ジヒドロオキサゾール（Ｃ₅）、テトラヒドロイソオキサゾール（Ｃ₅）、ジヒドロイソオキサゾール（Ｃ₅）、モルホリン（Ｃ₆）、テトラヒドロオキサジン（Ｃ₆）、ジヒドロオキサジン（Ｃ₆）、オキサジン（Ｃ₆）；
Ｎ₁Ｓ₁：チアゾリン（Ｃ₅）、チアゾリジン（Ｃ₅）、チオモルホリン（Ｃ₆）；
Ｎ₂Ｏ₁：オキサジアジン（Ｃ₆）；
Ｏ₁Ｓ₁：オキサチオール（Ｃ₅）及びオキサチアン（チオキサン）（Ｃ₆）；並びに
Ｎ₁Ｏ₁Ｓ₁：オキサチアジン（Ｃ₆）。

【0079】

置換単環式ヘテロシクリル基の例としては、環状の形態の糖類から誘導されるものが挙げられる。例えば、アラビノフラノース、リキソフラノース、リボフラノース及びキシロフラノースなどのフラノース（Ｃ₅）並びにアロピラノース、アルトロピラノース、グルコピラノース、マンノピラノース、ガラクトピラノース、イドピラノース、ガラクトピラノース及びタロピラノースなどのピラノース（Ｃ₆）。

【0080】

Ｃ_5〜20アリール：本明細書で使用するときに、用語「Ｃ_5〜20アリール」とは、芳香族化合物の芳香環原子から水素原子を除去することにより得られる１価部分であって、その部分が３〜２０個の環原子を有するものを意味する。ここで使用するときに、用語「Ｃ_5〜7アリール」とは、芳香族化合物の芳香環原子から水素原子を除去することによって得られる１価部分であって、該部分が５〜７個の環原子を有するものをいい、ここで使用するときに、用語「Ｃ_5〜10アリール」とは、芳香族化合物の芳香環原子から水素原子を除去することによって得られる１価部分であって、該部分が５〜１０個の環原子を有するものをいう。好ましくは、各環は５〜７個の環原子を有する。

【0081】

この文脈において、接頭辞（例えばＣ_3〜20、Ｃ_5〜7、Ｃ_5〜6、Ｃ_5〜10など）は、環原子（炭素原子であるかヘテロ原子であるかを問わない）の数又は環原子数の範囲を意味する。例えば、本明細書で使用する用語「Ｃ_5〜6アリール」とは、５又は６個の環原子を有するアリール基をいう。

【0082】

環原子は、「カルボアリール基」のように、全て炭素原子である。
カルボアリール基の例としては、ベンゼン（すなわちフェニル）（Ｃ₆）、ナフタレン（Ｃ₁₀）、アズレン（Ｃ₁₀）、アントラセン（Ｃ₁₄）、フェナントレン（Ｃ₁₄）、ナフタセン（Ｃ₁₈）及びピレン（Ｃ₁₆）から誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない。

【0083】

複数の縮合環であってそのうちの少なくとも一つが芳香環であるものを有するアリール基の例としては、次のものから誘導される基が挙げられるが、これらに限定されない：インダン（例：２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン）（Ｃ₉）、インデン（Ｃ₉）、イソインデン（Ｃ₉）、テトラリン（１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン（Ｃ₁₀）、アセナフテン（Ｃ₁₂）、フルオレン（Ｃ₁₃）、フェナレン（Ｃ₁₃）、アセフェナントレン（Ｃ₁₅）及びアセアントレン（Ｃ₁₆）。

【0084】

あるいは、環原子は、「ヘテロアリール基」のように、１個以上のヘテロ原子を含むことができる。単環式ヘテロアリール基の例としては、次のものから誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない：
Ｎ₁：ピロール（アゾール）（Ｃ₅）、ピリジン（アジン）（Ｃ₆）；
Ｏ₁：フラン（オキソール）（Ｃ₅）；
Ｓ₁：チオフェン（チオール）（Ｃ₅）；
Ｎ₁Ｏ₁：オキサゾール（Ｃ₅）、イソオキサゾール（Ｃ₅）、イソオキサジン（Ｃ₆）；
Ｎ₂Ｏ₁：オキサジアゾール（フラザン）（Ｃ₅）；
Ｎ₃Ｏ₁：オキサトリアゾール（Ｃ₅）；
Ｎ₁Ｓ₁：チアゾール（Ｃ₅）、イソチアゾール（Ｃ₅）；
Ｎ₂：イミダゾール（１，３−ジアゾール）（Ｃ₅）、ピラゾール（１，２−ジアゾール）（Ｃ₅）、ピリダジン（１，２−ジアジン）（Ｃ₆）、ピリミジン（１，３−ジアジン）（Ｃ₆）（例えば、シトシン、チミン、ウラシル）、ピラジン（１，４−ジアジン）（Ｃ₆）；
Ｎ₃：トリアゾール（Ｃ₅）、トリアジン（Ｃ₆）；及び
Ｎ₄：テトラゾール（Ｃ₅）。

【0085】

縮合環を含むヘテロアリールの例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：
次のものから誘導されるＣ₉（２個の縮合環を有する）：ベンゾフラン（Ｏ₁）、イソベンゾフラン（Ｏ₁）、インドール（Ｎ₁）、イソインドール（Ｎ₁）、インドリジン（Ｎ₁）、インドリン（Ｎ₁）、イソインドリン（Ｎ₁）、プリン（Ｎ₄）（例えば、アデニン、グアニン）ベンズイミダゾール（Ｎ₂）、インダゾール（Ｎ₂）、ベンゾオキサゾール（Ｎ₁Ｏ₁）、ベンズイソオキサゾール（Ｎ₁Ｏ₁）、ベンゾジオキソール（Ｏ₂）、ベンゾフラザン（Ｎ₂Ｏ₁）、ベンゾトリアゾール（Ｎ₃）、ベンゾチオフラン（Ｓ₁）、ベンゾチアゾール（Ｎ₁Ｓ₁）、ベンゾチアジアゾール（Ｎ₂Ｓ）；
次のものから誘導されるＣ₁₀（２個の縮合環を有する）：クロメン（Ｏ₁）、イソクロメン（Ｏ₁）、クロマン（Ｏ₁）、イソクロマン（Ｏ₁）、ベンゾジオキサン（Ｏ₂）、キノリン（Ｎ₁）、イソキノリン（Ｎ₁）、キノリジン（Ｎ₁）、ベンゾオキサジン（Ｎ₁Ｏ₁）、ベンゾジアジン（Ｎ₂）、ピリドピリジン（Ｎ₂）、キノキサリン（Ｎ₂）、キナゾリン（Ｎ₂）、シンノリン（Ｎ₂）、フタラジン（Ｎ₂）、ナフチリジン（Ｎ₂）、プテリジン（Ｎ₄）；
ベンゾジアゼピン（Ｎ₂）から誘導されるＣ₁₁（２個の縮合環を有する）；
カルバゾール（Ｎ₁）、ジベンゾフラン（Ｏ₁）、ジベンゾチオフェン（Ｓ₁）、カルボリン（Ｎ₂）、ペリミジン（Ｎ₂）、ピリドインドール（Ｎ₂）から誘導されるＣ₁₃（３個の縮合環を有する）；及び
次のものから誘導されるＣ₁₄（３個の縮合環を有する）：アクリジン（Ｎ₁）、キサンテン（Ｏ₁）、チオキサンテン（Ｓ₁）、オキサントレン（Ｏ₂）、フェノキサチイン（Ｏ₁Ｓ₁）、フェナジン（Ｎ₂）、フェノキサジン（Ｎ₁Ｏ₁）、フェノチアジン（Ｎ₁Ｓ₁）、チアントレン（Ｓ₂）、フェナントリジン（Ｎ₁）フェナントロリン（Ｎ₂）、フェナジン（Ｎ₂）。

【0086】

上記の基は、単独か別の置換基の一部かどうかを問わず、それら自体がそれら自体及び以下に示す追加の置換基から選択される１個以上の基で随意に置換されていてもよい。

【0087】

ハロ：−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ及び−Ｉ。

【0088】

ヒドロキシ：−ＯＨ。

【0089】

エーテル：−ＯＲ、ここで、Ｒは、エーテル置換基、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基（以下に述べるＣ_1〜7アルコキシ基ともいう）、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基（Ｃ_3〜20ヘテロシクリルオキシ基ともいう）又はＣ_5〜20アリール基（Ｃ_5〜20アリールオキシ基ともいう）であり、好ましくはＣ_1〜7アルキル基である。

【0090】

アルコキシ：−ＯＲ、ここで、Ｒは、アルキル基、例えばＣ_1〜7アルキル基である。Ｃ_1〜7アルコキシ基の例としては、−ＯＭｅ（メトキシ）、−ＯＥｔ（エトキシ）、−Ｏ（ｎＰｒ）（ｎ−プロポキシ）、−Ｏ（ｉＰｒ）（イソプロポキシ）、−Ｏ（ｎＢｕ）（ｎ−ブトキシ）、−Ｏ（ｓＢｕ）（ｓ−ブトキシ）、−Ｏ（ｉＢｕ）（イソブトキシ）及び−Ｏ（ｔＢｕ）（ｔ−ブトキシ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0091】

アセタール：−ＣＨ（ＯＲ¹）（ＯＲ²）、式中：Ｒ¹及びＲ²は、独立して、アセタール置換基は、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＣ_1〜7アルキル基であり、或いは、「環状」アセタール基の場合には、Ｒ¹及びＲ²は、それらが結合している２個の酸素原子及びそれらが結合している炭素原子と一緒になって、４〜８個の環原子を有する複素環を形成する。アセタール基の例としては、−ＣＨ（ＯＭｅ）₂、−ＣＨ（ＯＥｔ）₂及び−ＣＨ（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）が挙げられるがこれらに限定されない。

【0092】

ヘミアセタール：−ＣＨ（ＯＨ）（ＯＲ¹）、式中：Ｒ¹は、ヘミアセタールの置換基、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＣ_1〜7アルキル基である。ヘミアセタール基の例としては、−ＣＨ（ＯＨ）（ＯＭｅ）及び−ＣＨ（ＯＨ）（ＯＥｔ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0093】

ケタール：−ＣＲ（ＯＲ¹）（ＯＲ²）、ここで、Ｒ¹及びＲ²は、アセタールについて定義したとおりのものであり、Ｒは水素以外のケタールの置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＣ_1〜7アルキル基である。ケタールとしては次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＭｅ）₂、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＥｔ）₂、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）、−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＭｅ）₂、−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＥｔ）₂、及び−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）。

【0094】

ヘミケタール：−ＣＲ（ＯＨ）（ＯＲ¹）、ここで、Ｒ¹はヘミアセタールについて定義したとおりのものであり、Ｒは水素以外のヘミケタールの置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＣ_1〜7アルキル基である。ヘミアセタール基の例としては、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＨ）（ＯＭｅ）、−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＨ）（ＯＭｅ）、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＨ）（ＯＥｔ）、及び−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＨ）（ＯＥｔ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0095】

オキソ（ケト、−オン）：＝Ｏ。

【0096】

チオン（チオケトン）：＝Ｓ。

【0097】

イミノ（イミン）：＝ＮＲ、ここで、Ｒはイミノ置換基、例えば、水素、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基又はＣ_5〜20アリール基、好ましくは水素又はＣ_1〜7アルキル基である。エステル基の例としては、＝ＮＨ、＝ＮＭｅ、＝ＮＥｔ及び＝ＮＰｈが挙げられるが、これらに限定されない。

【0098】

ホルミル（カルボアルデヒド、カルボキシアルデヒド）：−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ。

【0099】

アシル（ケト）：−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、式中：Ｒは、アシルの置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基（Ｃ_1〜7アルキルアシル若しくはＣ_1〜7アルカノイルともいう）、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基（Ｃ_3〜20ヘテロシクリルともいう）又はＣ_5〜20アリール基（Ｃ_5〜20アリールアシルともいう）、好ましくは、Ｃ_1〜7アルキル基である。アシル基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ₃（アセチル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ₂ＣＨ₃（プロピオニル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ₃）₃（ｔ−ブチリル）及び−Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈ（ベンゾイル、フェノン）。

【0100】

カルボキシ（カルボン酸）：−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ。

【0101】

チオカルボキシ（チオカルボン酸）：−Ｃ（＝Ｓ）ＳＨ。

【0102】

チオロカルボキシ（チオロカルボン酸）：−Ｃ（＝Ｏ）ＳＨ。

【0103】

チオノカルボキシ（チオノカルボン酸）：−Ｃ（＝Ｓ）ＯＨ。

【0104】

イミド酸：−Ｃ（＝ＮＨ）ＯＨ。

【0105】

ヒドロキサム酸：−Ｃ（＝ＮＯＨ）ＯＨ。

【0106】

エステル（カルボキシレート、カルボン酸エステル、オキシカルボニル）：−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ、ここで、Ｒはエステルの置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＣ_1〜7アルキル基である。エステル基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ₃、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ₂ＣＨ₃、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ（ＣＨ₃）₃、及び−Ｃ（＝Ｏ）ＯＰｈ。

【0107】

アシルオキシ（逆エステル）：−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ、ここで、Ｒはアシルオキシの置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＣ_1〜7アルキル基である。アシルオキシ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ₃（アセトキシ）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ₃）₃、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｐｈ、及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ₂Ｐｈ。

【0108】

オキシカルボイルオキシ：−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ、ここで、Ｒはエステルの置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＣ_1〜7アルキル基である。エステル基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ₃、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ₂ＣＨ₃、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣ（ＣＨ₃）₃、及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＰｈ。

【0109】

アミノ：−ＮＲ¹Ｒ²、ここで、Ｒ¹及びＲ²は独立してアミノ置換基であり、例えば、水素、Ｃ_1〜7アルキル基（Ｃ_1〜7アルキルアミノ若しくはジ−Ｃ_1〜7アルキルアミノともいう）、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基、若しくはＣ_5〜20アリール基、好ましくはＨ若しくはＣ_1〜7アルキル基、又は、「環状」アミノ基の場合には、Ｒ¹とＲ²は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、４〜８個の環原子を有する複素環を形成する。アミノ基は、第一級（−ＮＨ₂）、第二級（−ＮＨＲ¹）又は第三級（−ＮＨＲ¹Ｒ²）であることができ、また、陽イオン形態では、第四級（−⁺ＮＲ¹Ｒ²Ｒ³）であることができる。アミノ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＮＨ₂、−ＮＨＣＨ₃、−ＮＨＣ（ＣＨ₃）₂、−Ｎ（ＣＨ₃）₂、−Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂、及び−ＮＨＰｈ。環状アミノ基の例としては、アジリジノ、アゼチジノ、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノ、モルホリノ、及びチオモルホリノが挙げられるが、これらに限定されない。

【0110】

アミド（カルバモイル、カルバミル、アミノカルボニル、カルボキシアミド）：−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ¹Ｒ²、ここで、Ｒ¹及びＲ²は、独立して、アミノ基について定義したアミノ置換基である。アミノ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ₂、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ₃、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ₃）₂、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ₂ＣＨ₃、及び−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂、並びにＲ¹及びＲ²が、それらが結合している窒素原子と一緒になって、例えば、ピペリジノカルボニル、モルホリノカルボニル、チオモルホリノカルボニル及びピペラジノカルボニルのような複素環構造を形成するアミド基。

【0111】

チオアミド（チオカルバミル）：−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ¹Ｒ²、ここで、Ｒ¹及びＲ²は、独立して、アミノ基について定義したアミノ置換基である。アミノ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ₂、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ₃、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（ＣＨ₃）₂、及び−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ₂ＣＨ₃。

【0112】

アシルアミド（アシルアミノ）：−ＮＲ¹Ｃ（＝Ｏ）Ｒ²、式中：Ｒ¹はアミドの置換基であり、例えば、水素、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基、又はＣ_5〜20アリール基、好ましくは水素又はＣ_1〜7アルキル基であり、Ｒ²は、アシルの置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基又はＣ_5〜20アリール基、好ましくは水素又はＣ_1〜7アルキル基である。アシルアミド基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ₃、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ₂ＣＨ₃、及び−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｐｈ。Ｒ¹及びＲ²は一緒になって、例えば、スクシンイミジル、マレイミジル、及びフタルイミジルのように環状構造を形成してもよい：

【化43】

【0113】

アミノカルボニル：−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ¹Ｒ²、ここで、Ｒ¹及びＲ²は、独立して、アミノ基について定義したアミノ置換基である。アミノカルボニルオキシ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ₂、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨＭｅ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＭｅ₂、及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＥｔ₂。

【0114】

ウレイド：−Ｎ（Ｒ¹）ＣＯＮＲ²Ｒ³、ここで、Ｒ²及びＲ³は、独立に、アミノ基について定義したとおりのアミノの置換基であり、Ｒ¹は、ウレイドの置換基であり、例えば、水素、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基、又はＣ_5〜20アリール基、好ましくは水素又はＣ_1〜7アルキル基である。ウレイド基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＮＨＣＯＮＨ₂、−ＮＨＣＯＮＨＭｅ、−ＮＨＣＯＮＨＥｔ、−ＮＨＣＯＮＭｅ₂、−ＮＨＣＯＮＥｔ₂、−ＮＭｅＣＯＮＨ₂、−ＮＭｅＣＯＮＨＭｅ、−ＮＭｅＣＯＮＨＥｔ、−ＮＭｅＣＯＮＭｅ₂、及び−ＮＭｅＣＯＮＥｔ₂。

【0115】

グアニジノ：−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ₂。

【0116】

テトラゾリル：４個の窒素原子及び１個の炭素原子を有する芳香族５員環：

【化44】

【0117】

イミノ：＝ＮＲ、ここで、Ｒは、イミノの置換基であり、例えば水素、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基、又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＨ又はＣ_1〜7アルキル基である。イミノ基の例としては、＝ＮＨ、＝ＮＭｅ及び＝ＮＥｔが挙げられるが、これらに限定されない。

【0118】

アミジン（アミジノ）：−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ₂、ここで、各Ｒはアミジンの置換基であり、例えば、水素、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基、又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＨ又はＣ_1〜7アルキル基である。アミジン基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ₂、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＭｅ₂、及び−Ｃ（＝ＮＭｅ）ＮＭｅ₂。

【0119】

ニトロ：−ＮＯ₂。

【0120】

ニトロソ：−ＮＯ。

【0121】

アジド：−Ｎ₃。

【0122】

シアノ（ニトリル、カルバニトリル）：−ＣＮ。

【0123】

イソシアノ：−ＮＣ。
シアナト：-ＯＣＮ。

【0124】

イソシアナト：−ＮＣＯ。

【0125】

チオシアノ（チオシアナト）：−ＳＣＮ。

【0126】

イソチオシアノ（イソチオシアナト）：−ＮＣＳ。

【0127】

スルフヒドリル（チオール、メルカプト）：−ＳＨ。

【0128】

チオエーテル（スルフィド）：−ＳＲ、ここで、Ｒはチオエーテルの置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基（Ｃ_1〜7アルキルチオ基ともいう）、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基、又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＣ_1〜7アルキル基である。Ｃ_1〜7アルキルチオ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＳＣＨ₃及び−ＳＣＨ₂ＣＨ₃。

【0129】

ジスルフィド：−ＳＳ−Ｒ、ここで、Ｒは、ジスルフィドの置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基、又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＣ_1〜7アルキル基（ここでは、Ｃ_1〜7アルキルジスルフィドともいう）である。Ｃ_1〜7アルキルジスルフィド基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＳＳＣＨ₃及び−ＳＳＣＨ₂ＣＨ₃。

【0130】

スルフィン（スルフィニル、スルホキシド）：−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、ここで、Ｒは、スルフィンの置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＣ_1〜7アルキル基である。スルフィン置換基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ₃及び−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ₂ＣＨ₃。

【0131】

スルホン（スルホニル）：−Ｓ（＝Ｏ）₂Ｒ、ここで、Ｒは、スルホンの置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基、又はＣ_5〜20アリール基、好ましくは、フッ素化又は過フッ素化Ｃ_1〜7アルキル基を含めてＣ_1〜7アルキル基である。スルホン基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｓ（＝Ｏ）₂ＣＨ₃（メタンスルホニル、メシル）、−Ｓ（＝Ｏ）₂ＣＦ₃（トリフリル）、−Ｓ（＝Ｏ）₂ＣＨ₂ＣＨ₃（エシル）、−Ｓ（＝Ｏ）₂Ｃ₄Ｆ₉（ノナフリル）、−Ｓ（＝Ｏ）₂ＣＨ₂ＣＦ₃（トレシル）、−Ｓ（＝Ｏ）₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ₂（タウリル）、−Ｓ（＝Ｏ）₂Ｐｈ（フェニルスルホニル、ベシル）、４−メチルフェニルスルホニル（トシル）、４−クロロフェニルスルホニル（クロシル）、４−ブロモフェニル（ブロシル）、４−ニトロフェニル（ノシル）、２−ナフタレン（ナプシル）及び５−ジメチルアミノナフタレン−１−イルスルホネート（ダンシル）。

【0132】

スルフィン酸（スルフィノ）：−Ｓ（＝Ｏ）ＯＨ、−ＳＯ₂Ｈ。

【0133】

スルホン酸（スルホ）：−Ｓ（＝Ｏ）₂ＯＨ、−ＳＯ₃Ｈ。

【0134】

スルフィネート（スルフィン酸エステル）：−Ｓ（＝Ｏ）ＯＲ；ここで、Ｒは、スルフィネートの置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＣ_1〜7アルキル基である。スルフィネート基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｓ（＝Ｏ）ＯＣＨ₃（メトキシスルフィニル；スルフィン酸メチル）及び−Ｓ（＝Ｏ）ＯＣＨ₂ＣＨ₃（エトキシスルフィニル、スルフィン酸エチル）。

【0135】

スルホネート（スルホン酸エステル）：−Ｓ（＝Ｏ）₂ＯＲ、ここで、Ｒは、スルホネート置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＣ_1〜7アルキル基である。スルホネート基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｓ（＝Ｏ）₂ＯＣＨ₃（メトキシスルホニル；スルホン酸メチル）及び−Ｓ（＝Ｏ）₂ＯＣＨ₂ＣＨ₃（エトキシスルホニル；スルホン酸エチル）。

【0136】

スルフィニルオキシ：−ＯＳ（＝Ｏ）Ｒ、ここで、Ｒは、スルフィニルオキシ置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＣ_1〜7アルキル基である。スルフィニル基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＳ（＝Ｏ）ＣＨ₃及び−ＯＳ（＝Ｏ）ＣＨ₂ＣＨ₃。

【0137】

スルホニルオキシ：−ＯＳ（＝Ｏ）₂Ｒ、ここで、Ｒは、スルホニルオキシの置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＣ_1〜7アルキル基である。スルホニルオキシ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＳ（＝Ｏ）₂ＣＨ₃（メシレート）及び−ＯＳ（＝Ｏ）₂ＣＨ₂ＣＨ₃（エシレート）。

【0138】

スルフェート：−ＯＳ（＝Ｏ）₂ＯＲ；ここで、Ｒは、スルフェートの置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である。スルフェート基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＳ（＝Ｏ）₂ＯＣＨ₃及び−ＳＯ（＝Ｏ）₂ＯＣＨ₂ＣＨ₃。

【0139】

スルファミル（スルファモイル；スルフィン酸アミド、スルフィンアミド）：−Ｓ（＝Ｏ）ＮＲ¹Ｒ²、ここで、Ｒ¹及びＲ²は、独立して、アミノ基について定義したアミノ置換基である。スルファミル基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ₂、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ₃）、−Ｓ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ₃）₂、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ₂ＣＨ₃）、−Ｓ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂、及び−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨＰｈ。

【0140】

スルホンアミド（スルフィナモイル；スルホン酸アミド；スルホンアミド）：−Ｓ（＝Ｏ）₂ＮＲ¹Ｒ²、ここで、Ｒ¹及びＲ²は、独立して、アミノ基について定義したアミノ置換基である。スルホンアミド基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｓ（＝Ｏ）₂ＮＨ₂、−Ｓ（＝Ｏ）₂ＮＨ（ＣＨ₃）、−Ｓ（＝Ｏ）₂Ｎ（ＣＨ₃）₂、−Ｓ（＝Ｏ）₂ＮＨ（ＣＨ₂ＣＨ₃）、−Ｓ（＝Ｏ）₂Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂、及び−Ｓ（＝Ｏ）₂ＮＨＰｈ。

【0141】

スルファミノ：−ＮＲ¹Ｓ（＝Ｏ）₂ＯＨ、ここで、Ｒ¹は、アミノ基について定義したとおりのアミノ置換基である。スルファミノ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＮＨＳ（＝Ｏ）₂ＯＨ及び−Ｎ（ＣＨ₃）Ｓ（＝Ｏ）₂ＯＨ。

【0142】

スルホンアミノ：−ＮＲ¹Ｓ（＝Ｏ）₂Ｒ、ここで、Ｒ¹は、アミノ基について定義したとおりのアミノ置換基であり、Ｒは、スルホンアミノ置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＣ_1〜7アルキル基である。スルホンアミノ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＮＨＳ（＝Ｏ）₂ＣＨ₃及び−Ｎ（ＣＨ₃）Ｓ（＝Ｏ）₂Ｃ₆Ｈ₅。

【0143】

スルフィンアミノ：−ＮＲ¹Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、ここで、Ｒ¹は、アミノ基について定義したとおりのアミノ置換基であり、Ｒはスルフィンアミノ置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＣ_1〜7アルキル基である。スルフィンアミノ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＮＨＳ（＝Ｏ）ＣＨ₃及び−Ｎ（ＣＨ₃）Ｓ（＝Ｏ）Ｃ₆Ｈ₅。

【0144】

ホスフィノ（ホスフィン）：−ＰＲ₂、ここで、Ｒは、ホスフィノ置換基であり、例えば、−Ｈ、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基、又はＣ_5〜20アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ_1〜7アルキル基又はＣ_5〜20アリール基である。ホスフィノ基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＰＨ₂、−Ｐ（ＣＨ₃）₂、−Ｐ（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂、−Ｐ（ｔ−Ｂｕ）₂、及び−Ｐ（Ｐｈ）₂。

【0145】

ホスホ：−Ｐ（＝Ｏ）₂。

【0146】

ホスフィニル（ホスフィンオキシド）：−Ｐ（＝Ｏ）Ｒ₂、ここで、Ｒはホスフィニル置換基であり、例えば、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基、又はＣ_5〜20アリール基、好ましくはＣ_1〜7アルキル基又はＣ_5〜20アリール基である。ホスフィニル基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｐ（＝Ｏ）（ＣＨ₃）₂、−Ｐ（＝Ｏ）（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂、−Ｐ（＝Ｏ）（ｔ−Ｂｕ）₂、及び−Ｐ（＝Ｏ）（Ｐｈ）₂。

【0147】

ホスホン酸（ホスホノ）：−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）₂。

【0148】

ホスホネート（ホスホノエステル）：−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）₂、ここで、Ｒは、ホスホネートの置換基であり、例えば、−Ｈ、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基、又はＣ_5〜20アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ_1〜7アルキル基又はＣ_5〜20アリール基である。ホスホネート基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＣＨ₃）₂、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＣＨ₂ＣＨ₃）₂、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）₂、及び−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＰｈ）₂。

【0149】

リン酸（ホスホノオキシ）：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）₂。

【0150】

ホスフェート（ホスホノオキシエステル）：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）₂、ここで、Ｒは、ホスフェートの置換基であり、例えば、−Ｈ、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基、又はＣ_5〜20アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ_1〜7アルキル基又はＣ_5〜20アリール基である。ホスフェート基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ₃）₂、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ₂ＣＨ₃）₂、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）₂、及び−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＰｈ）₂。

【0151】

亜リン酸：−ＯＰ（ＯＨ）₂。

【0152】

ホスファイト：−ＯＰ（ＯＲ）₂、ここで、Ｒはホスファイトの置換基であり、例えば、−Ｈ、Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基、又はＣ_5〜20アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ_1〜7アルキル基又はＣ_5〜20アリール基である。ホスファイト基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＰ（ＯＣＨ₃）₂、−ＯＰ（ＯＣＨ₂ＣＨ₃）₂、−ＯＰ（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）₂、及び−ＯＰ（ＯＰｈ）₂。

【0153】

ホスホラミダイト：−ＯＰ（ＯＲ¹）−ＮＲ²₂、ここで、Ｒ¹及びＲ²は、ホスホラミダイトの置換基であり、例えば、−Ｈ、（随意に置換された）Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基、又はＣ_5〜20アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ_1〜7アルキル基又はＣ_5〜20アリール基である。ホスホラミダイト基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＰ（ＯＣＨ₂ＣＨ₃）−Ｎ（ＣＨ₃）₂、−ＯＰ（ＯＣＨ₂ＣＨ₃）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）₂、及び−ＯＰ（ＯＣＨ₂ＣＨ₂ＣＮ）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）₂。

【0154】

ホスホラミデート：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ¹）−ＮＲ²₂、ここで、Ｒ¹及びＲ²は、ホスホラミデートの置換基であり、例えば、−Ｈ、（随意に置換された）Ｃ_1〜7アルキル基、Ｃ_3〜20ヘテロシクリル基、又はＣ_5〜20アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ_1〜7アルキル基又はＣ_5〜20アリール基である。ホスホラミデート基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ₂ＣＨ₃）−Ｎ（ＣＨ₃）₂、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ₂ＣＨ₃）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）₂、及び−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ₂ＣＨ₂ＣＮ）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）₂。

【0155】

アルキレン
Ｃ_3〜12アルキレン：ここで使用するときに、用語「Ｃ_3〜12アルキレン」とは、脂肪族又は脂環式であることができ、かつ、飽和、部分的に不飽和又は完全に不飽和であることができる３〜１２個の炭素原子を有する炭化水素化合物（特に断らない限り）の２個の水素原子（両方とも同じ炭素原子からのもの又は２個の異なる炭素原子のいずれかからのもの）を除去することにより得られる二座部分をいう。したがって、「アルキレン」という用語には、以下に説明するサブクラスのアルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレンなどが含まれる。

【0156】

直鎖飽和Ｃ_3〜12アルキレン基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−（ＣＨ₂）_n−（ここで、ｎは３〜１２の整数である）、例えば、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂−（プロピレン）、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂−（ブチレン）、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂−（ペンチレン）及び−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ−₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂−（ヘプチレン）。

【0157】

分岐飽和Ｃ_3〜12アルキレン基の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂−、−ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₂−、−ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂−、−ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂−、−ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₂−、−ＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₃）−、−ＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₃）ＣＨ₂−、及び−ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₃）ＣＨ₂−。

【0158】

直鎖部分不飽和Ｃ_3〜12アルキレン基（Ｃ_3〜12アルケニレン及びアルキニレン基）の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−、−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ₂−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−、及び−ＣＨ₂−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ₂−。

【0159】

分岐部分不飽和Ｃ_3〜12アルキレン基（Ｃ_3〜12アルケニレン及びアルキニレン基）の例としては、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：−Ｃ（ＣＨ₃）＝ＣＨ−、−Ｃ（ＣＨ₃）＝ＣＨ−ＣＨ₂−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ（ＣＨ₃）−及び−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ（ＣＨ₃）−。

【0160】

脂環式飽和Ｃ_3〜12アルキレン基（Ｃ_3〜12シクロアルキレン）の例としては、シクロペンチレン（例えば、１，３−シクロペンチレン）及びシクロヘキシレン（例えば１，４−シクロヘキシレン）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0161】

脂環式部分不飽和Ｃ_3〜12アルキレン基（Ｃ_3〜12シクロアルキレン）の例としては、シクロペンテニレン（例えば、４−シクロペンテン−１，３−イレン）、シクロヘキセニレン（例えば、２−シクロヘキセン−１，４−イレン；３−シクロヘキセン−１，２−イレン；２，５−シクロヘキサジエン−１，４−イレン）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0162】

カルバメート窒素保護基：用語「カルバメート窒素保護基」とは、イミン結合における窒素をマスクする部分をいい、これらは、当該分野において周知である。これらの基は、次の構造を有する：

【化45】

式中、Ｒ^’10は、上で定義したＲである。多数の好適な基が、グリーン，ＴＷ及びウッツ，ＧＭ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社，１９９９年の５０３〜５４９頁に記載されている。この文献を参照により本明細書に含める。

【0163】

ヘミアミナール窒素保護基：用語「ヘミアミナール窒素保護基」とは、以下の構造を有する基を意味する：

【化46】

式中：Ｒ^’10は、上で定義したＲである。アミド保護基として多数の好適な基がグリーン，Ｔ．Ｗ及びウッツ，Ｇ．Ｍ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社，１９９９年の６３３〜６４７頁に記載されている。この文献を参照により本明細書に含める。

【0164】

カルバメート窒素保護基及びヘミアミナール窒素保護基は、併せて「合成のための窒素保護基」と呼ばれる場合がある。

【0165】

結合体
本発明は、リンカー単位を介して抗体に結合されたPBD化合物を含む結合体を提供する。

【0166】

一実施形態では、結合体は、スペーサー結合基に結合された抗体を含み、該スペーサーはトリガーに結合し、該トリガーは自壊性リンカーに結合し、該自壊性リンカーはPBD化合物のN10位に結合している:

【化47】

ここで、Ａｂは上で定義された抗体であり、ＰＢＤは、ここで記載されるようなピロロベンゾジアゼピン化合物（Ｄ）である。この例示は、本発明の特定の実施形態ではＲ^L’、Ａ、Ｌ¹及びＬ²に相当する部分を示す。Ｒ^L’はＲ^L1’又はＲ^L2’のいずれかとすることができる。ＤはＤ^LでありＲ^L1’又はＲ^L2’が除去されている。

【0167】

本発明は、被験体における好ましい部位にＰＢＤ化合物を与える際に使用するのに好適である。好ましい実施形態では、結合体は、リンカーの任意の部分を保持しない活性ＰＢＤ化合物の放出を可能にする。ＰＢＤ化合物の反応性に影響を与える可能性のあるスタブは存在しない。

【0168】

リンカーは、共有結合を介してＰＢＤ薬剤部分Ｄに抗体を結合させる。リンカーは、二官能性又は多官能性部分であり、これを使用して、１個以上の薬物部分（Ｄ）と抗体単位（Ａｂ）とを結合させて抗体−薬剤結合体（ＡＤＣ）を形成させることができる。リンカー（Ｒ^L’）は、細胞の外側、すなわち細胞外に安定である場合があり、或いは酵素活性、加水分解又は他の代謝条件により切断可能である。抗体−薬剤結合体（ＡＤＣ）は、好都合には、薬剤部分及び抗体への結合のための反応性官能基を有するリンカーを使用して調製できる。システインチオール又はアミン、例えば抗体（Ａｂ）のリジンなどのＮ末端又はアミノ酸側鎖は、リンカー又はスペーサー試薬、ＰＢＤ薬剤部分（Ｄ）又は薬物−リンカー試薬（Ｄ^L、Ｄ−Ｒ^L）（ここで、Ｒ^LはＲ^L1又はＲ^L2であることができる。）の官能基との結合を形成することができる。

【0169】

好ましくは、ADCのリンカーは、ADC分子の凝集を防止し、かつ、ADCを水性媒体及び単量体状態に溶けやすい状態を保持する。

【0170】

ＡＤＣのリンカーは、好ましくは細胞外で安定である。細胞への輸送又は送達前に、抗体−薬剤結合体（ＡＤＣ）は、好ましくは安定であり、かつ、そのままの状態を保持する、すなわち、抗体は、薬剤部分に結合されたままである。リンカーは、標的細胞の外部では安定であり、かつ、細胞内では有効な速度で切断され得る。効果的なリンカーは、（ｉ）抗体の特異的結合特性を維持し、（ｉｉ）結合体又は薬剤部分の細胞内送達を可能にし、（ｉｉｉ）安定でかつそのままの状態を保持し、すなわち、結合体がその標的部位に送達又は輸送されるまで切断されない状態を保持し、及び（ｉｖ）ＰＢＤ薬剤部分の細胞傷害性の殺細胞効果又は細胞増殖抑制効果を維持する。ＡＤＣの安定性は、質量分析、ＨＰＬＣ及び分離／分析技術ＬＣ／ＭＳなどの標準的な分析技術によって測定できる。

【0171】

抗体と薬剤部分との共有結合は、リンカーが２個の反応性官能基、すなわち反応性の意味では二価を有することが必要である。ペプチド、核酸、薬剤、毒素、抗体、ハプテン及びレポーター基などの２以上の機能又は生物学的に活性な部分を結合させるのに有用な二価リンカー試薬が知られており、結合体を生じさせる方法が記載されている（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ；Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐ２３４−２４２）。

【0172】

別の実施形態では、リンカーは、凝集、溶解性又は反応性を調節する基で置換されていてよい。例えば、スルホネート置換基は、試薬の水溶性を増大させ、かつ、リンカー試薬と抗体又は薬剤部分とのカップリング反応を促進し、又はＡＤＣを調製するために使用される合成経路に応じて、Ａｂ−ＬとＤＬ若しくはＤＬ−ＬとＡｂとのカップリング反応を促進することができる。

【0173】

一実施形態では、Ｌ−ＲＬ’は次の基である：

【化48】

アスタリスクは、薬剤単位（Ｄ）への結合点を示し、Ａｂは抗体（Ｌ）であり、Ｌ¹はリンカーであり、Ａは、Ｌ¹を抗体に結合させる結合基であり、Ｌ²は、共有結合又はＯＣ（＝Ｏ）と共に自壊性リンカーを形成し、Ｌ¹又はＬ²は切断可能なリンカーである。

【0174】

Ｌ¹は、好ましくは切断可能なリンカーであり、切断のためのリンカー活性化の引き金と呼ぶことができる。

【0175】

Ｌ¹及びＬ²の性質は、存在する場合には、広く変化できる。これらの基は、それらの切断特性に基づいて選択され、これらの特性は、結合体が送達される部位の状況によって決定できる。酵素の作用によって切断されるリンカーが好ましいが、ｐＨの変化（例えば、酸又は塩基に不安定）、温度の変化又は照射（例えば、光不安定）によって切断可能なリンカーを使用してもよい。また、還元又は酸化条件下で切断可能なリンカーも本発明で使用することができる。

【0176】

Ｌ¹は、アミノ酸の連続配列を含むことができる。アミノ酸配列は、酵素的切断のための標的基質であることができ、それによってＮ１０位からＬ−Ｒ^L’を放出することを可能にする。

【0177】

一実施形態では、Ｌ¹は、酵素の作用により切断可能である。一実施形態では、酵素は、エステラーゼ又はペプチダーゼである。

【0178】

一実施形態では、Ｌ²が存在し、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−と一緒になって自壊性リンカーを形成する。一実施形態では、Ｌ²は酵素活性のための基質であり、これによりＮ１０位からＬ−Ｒ^L’を放出することを可能にする。

【0179】

一実施形態では、Ｌ¹が酵素の作用により切断可能であり、Ｌ²が存在する場合には、酵素がＬ¹とＬ²との間の結合を切断する。

【0180】

Ｌ¹及びＬ²は、存在する場合には、次のものから選択される結合によって結合できる：
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、及び
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ。

【0181】

Ｌ²に結合するＬ¹のアミノ基は、アミノ酸のＮ−末端であることができ、又は、アミノ酸側鎖、例えば、リジンアミノ酸側鎖のアミノ基から誘導できる。

【0182】

Ｌ²に結合するＬ¹のカルボキシル基は、アミノ酸のＣ末端であることができ、又は、例えば、アミノ酸側鎖、グルタミン酸アミノ酸側鎖のカルボキシル基から誘導できる。

【0183】

Ｌ²に結合するＬ¹のヒドロキシ基は、アミノ酸側鎖、例えば、セリンアミノ酸側鎖のヒドロキシル基から誘導できる。

【0184】

用語「アミノ酸側鎖」としては、次に見られる群が挙げられる：（ｉ）アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン及びバリンなどの天然アミノ酸；（ｉｉ）オルニチン及びシトルリンなどの微量アミノ酸；（ｉｉｉ）非天然アミノ酸、β−アミノ酸、合成アナログ及び天然アミノ酸の誘導体；並びに（ｉｖ）全ての鏡像異性体、ジアステレオマー、異性体的に濃縮された形態、同位体標識（例えば²Ｈ、³Ｈ、¹⁴Ｃ、¹⁵Ｎ）された形態、保護形態及びそれらのラセミ混合物。

【0185】

一実施形態では、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−及びＬ²は、一緒になって次の基を形成する：

【化49】

ここで、アスタリスクは、Ｎ１０位への結合点を示し、波線はリンカーＬ¹への結合点を示し、Ｙは−Ｎ（Ｈ）−、−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）−又は−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−であり、ｎは０〜３である。フェニレン環は、ここで記載される１、２又は３個の置換基で置換されていてよい。一実施形態では、フェニレン基は、ハロ、ＮＯ₂、Ｒ又はＯＲで置換されていてよい。

【0186】

一実施形態では、ＹはＮＨである。

【0187】

一実施形態では、ｎは０又は１であり、好ましくは、ｎは０である。

【0188】

ＹがＮＨであり、ｎが０である場合には、自壊性基をｐ−アミノベンジルカルボニルリンカー（ＰＡＢＣ）と呼ぶことができる。

【0189】

自壊性基は、リモート部位が活性化され、以下に示す線に沿って進む（ｎ＝０のため）ときに、保護基の放出を可能にする：

【化50】

ここで、Ｌ^*は、リンカーの残りの部分の活性化形態である。これらの基は、保護される化合物から活性化部位を分離するという利点を有する。上記のように、フェニレン基は置換されていてよい。

【0190】

ここで説明する一実施形態では、基Ｌ^*は、ジペプチド基を含むことができる、ここで説明するリンカーＬ¹である。

【0191】

別の実施形態では、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−及びＬ²は、一緒になって次のものから選択される基を形成する：

【化51】

ここで、アスタリスク、波線、Ｙ、及びｎは、上で定義したとおりのものである。各フェニレン環は、ここで記載した１個、２個又は３個の置換基で置換されていていよい。一実施形態では、Ｙ置換基を有するフェニレン環は、随意に置換されており、Ｙ置換基を有しないフェニレン環は置換されていない。一実施形態では、Ｙ置換基を有するフェニレン環は置換されておらず、Ｙ置換基を有しないフェニレン環は置換されていてよい。

【0192】

別の実施形態では、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−及びＬ²は、一緒になって次のものから選択される基を形成する：

【化52】

ここで、アスタリスク、波線、Ｙ及びｎは上で定義したとおりであり、ＥはＯ、Ｓ又はＮＲであり、ＤはＮ、ＣＨ又はＣＲであり、ＦはＮ、ＣＨ又はＣＲである。

【0193】

一実施形態では、ＤはＮである。
一実施形態では、ＤはＣＨである。
一実施形態では、ＥはＯ又はＳである。
一実施形態では、ＦはＣＨである。

【0194】

好ましい実施形態では、リンカーは、カテプシン不安定リンカーである。

【0195】

一実施形態では、Ｌ¹は、ジペプチドを含む。ジペプチドは、−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯ−として表すことができ、ここで、−ＮＨ−及び−ＣＯ−は、それぞれアミノ酸基Ｘ₁及びＸ₂のＮ末端及びＣ末端を表す。ジペプチド中のアミノ酸は、天然アミノ酸及び非天然アミノ酸の任意の組合せとすることができる。いくつかの実施形態では、ジペプチドは、天然アミノ酸を含む。リンカーがカテプシン不安定リンカーである場合には、ジペプチドは、カテプシン仲介切断のための作用部位である。この場合、ジペプチドは、カテプシンのための認識部位である。

【0196】

さらに、カルボキシル又はアミノ側鎖官能基を有するアミノ酸基について、例えばそれぞれＧｌｕ及びＬｙｓについて、ＣＯ及びＮＨは、その側鎖官能基を表すことができる。

【0197】

一実施形態では、ジペプチド−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯ−中の基−Ｘ₁−Ｘ₂−は、次のものから選択される：
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ａｌａ−、
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、
−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−、
−Ｌｅｕ−Ｃｉｔ−、
−Ｉｌｅ−Ｃｉｔ−、
−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−、
−Ｔｒｐ−Ｃｉｔ−；
ここで、Ｃｉｔはシトルリンである。

【0198】

好ましくは、ジペプチド−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯ−中の基−Ｘ₁−Ｘ₂−は、次のものから選択される：
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ａｌａ−、
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−。

【0199】

最も好ましくは、ジペプチド−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯ−中における基−Ｘ₁−Ｘ₂−は、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−又は−Ｖａｌ−Ａｌａ−である。

【0200】

Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ外、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，１３，８５５−８６９（参照によりここに含める）により記載されたものを含めて、他のジペプチドの組み合わせを使用することができる。

【0201】

一実施形態では、適切な場合にはアミノ酸側鎖が誘導体化される。例えば、アミノ酸側鎖のアミノ基又はカルボキシ基が誘導体化できる。
一実施形態では、リジンなどの側鎖アミノ酸のアミノ基ＮＨ₂は、ＮＨＲ及びＮＲＲ’よりなる群から選択される誘導体化された形態である。
一実施形態では、アスパラギン酸などの側鎖アミノ酸のカルボキシ基ＣＯＯＨは、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＨＲ及びＣＯＮＲＲ’よりなる群から選択される誘導体化された形態である。

【0202】

一実施形態では、アミノ酸側鎖は、適宜化学的に保護される。この側鎖保護基は、Ｒ^Lに関連して以下で説明するような基であることができる。本発明者は、保護されたアミノ酸配列が酵素によって切断可能であることを証明した。例えば、Ｂｏｃで側鎖保護されたＬｙｓ残基を含むジペプチド配列がカテプシンにより切断可能であることが証明された。

【0203】

アミノ酸の側鎖のための保護基は、当技術分野で周知であり、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社のカタログに記載されている。追加の保護基戦略が、グリーン及びウッツのＯｒｇａｎｉｃ ＳｙｎｔｈｅｓｉｓにおけるＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐｓに記載されている。

【0204】

可能な側鎖保護基を、反応性側鎖官能基を有するアミノ酸について以下に示す：
Ａｒｇ：Ｚ、Ｍｔｒ、Ｔｏｓ；
Ａｓｎ：Ｔｒｔ、Ｘａｎ；
Ａｓｐ：Ｂｚｌ、ｔ−Ｂｕ；
Ｃｙｓ：Ａｃｍ、Ｂｚｌ、Ｂｚｌ−ＯＭｅ、Ｂｚｌ−Ｍｅ、Ｔｒｔ；
Ｇｌｕ：Ｂｚｌ、ｔ−Ｂｕ；
Ｇｌｎ：Ｔｒｔ、Ｘａｎ；
Ｈｉｓ：Ｂｏｃ、Ｄｎｐ、Ｔｏｓ、Ｔｒｔ；
Ｌｙｓ：Ｂｏｃ、Ｚ−Ｃｌ、Ｆｍｏｃ、Ｚ、Ａｌｌｏｃ；
Ｓｅｒ：Ｂｚｌ、ＴＢＤＭＳ、ＴＢＤＰＳ；
Ｔｈｒ：Ｂｚ；
Ｔｒｐ：Ｂｏｃ；
Ｔｙｒ：Ｂｚｌ、Ｚ、Ｚ−Ｂｒ。

【0205】

一実施形態では、側鎖保護は、存在する場合には、キャッピング基として又はその一部として与えられる基に対して直交的となるように選択される。このように、側鎖保護基の除去は、キャッピング基又はキャッピング基の一部である任意の保護基の官能基を除去しない。

【0206】

本発明の他の実施形態では、選択されたアミノ酸は、反応性側鎖官能基を有さないものである。例えば、アミノ酸は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ及びＶａｌから選択できる。一実施形態では、ジペプチドは、自壊性基と組み合わせて使用される。自壊性基は、−Ｘ₂−に結合できる。

【0207】

自壊性基が存在する場合には、−Ｘ₂−は自壊性基に直接結合している。好ましくは、基−Ｘ₂−ＣＯ−はＹに結合し、ここで、ＹはＮＨであり、それによって基−Ｘ₂−ＣＯ−ＮＨ−を形成する。

【0208】

ＮＨ−Ｘ₁−はＡに直接結合している。Ａは官能基ＣＯを含み、それにより−Ｘ₁−と共にアミド結合を形成することができる。

【0209】

一実施形態では、Ｌ¹及びＬ²は、−ＯＣ（＝Ｏ）−と共に、基ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＰＡＢＣ−を含む。ＰＡＢＣ基はＮ１０位に直接結合する。好ましくは、自壊基及びジペプチドは、一緒になって以下に示す基−ＮＨ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＣＯ−ＮＨ−ＰＡＢＣ−を形成する：

【化53】

ここで、アスタリスクはＮ１０位への結合点を示し、波線はリンカーＬ¹の残りの部分への結合点又はＡ¹への結合点を示す。好ましくは、波線はＡ¹への結合点を示す。Ｌｙｓアミノ酸の側鎖は、例えば、上記のようにＢｏｃ、Ｆｍｏｃ又はＡｌｌｏｃで保護できる。

【0210】

或いは、自壊性リンカー及びジペプチドは一緒になって以下に例示する基−ＮＨ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＣＯ−ＮＨ−ＰＡＢＣ−を形成する。

【化54】

ここで、アスタリスク及び波線は上で定義したとおりである。

【0211】

あるいは、自壊性リンカー及びジペプチドは、一緒になって、以下に示される基−ＮＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＣＯ−ＮＨ−ＰＡＢＣを形成する：

【化55】

ここで、アスタリスク及び波線は上で定義したとおりである。

【0212】

一実施形態では、Ａは共有結合である。したがって、Ｌ¹と抗体とは直接結合する。例えば、Ｌ¹が連続したアミノ酸配列を含む場合には、その配列のＮ末端は、抗体に直接結合できる。

【0213】

したがって、Ａが共有結合である場合には、抗体とＬ１との間の結合は、以下から選択できる：
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−Ｓ−、
−Ｓ−Ｓ−、
−ＣＨ₂Ｃ（＝Ｏ）−及び
＝Ｎ−ＮＨ−。

【0214】

抗体に結合するＬ¹のアミノ基は、アミノ酸のＮ末端であることができ、又はアミノ酸側鎖、例えばリジンアミノ酸側鎖のアミノ基から誘導できる。抗体に結合するＬ¹のカルボキシル基は、アミノ酸のＣ末端であることができ、又はアミノ酸側鎖、例えばグルタミン酸アミノ酸側鎖のカルボキシル基から誘導できる。抗体に結合するＬ¹のヒドロキシル基は、アミノ酸側鎖、例えばセリンアミノ酸側鎖のヒドロキシル基から誘導できる。抗体に結合するＬ¹のチオール基は、アミノ酸側鎖、例えばセリンアミノ酸側鎖のチオール基から誘導できる。

【0215】

また、Ｌ１のアミノ基、カルボキシル基、ヒドロキシル及びチオール基の関係で上記したコメントは、抗体にも当てはまる。

【0216】

一実施形態では、Ｌ²は、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）と共に次のものを表す：

【化56】

ここで、アスタリスクはＮ１０の位置への結合点を示し、波線はＬ¹への結合点を示し、ｎは０〜３であり、Ｙは共有結合又は官能基であり、Ｅは、例えば酵素作用又は光によって活性化可能な基であり、それによって自壊性単位を生成する。フェニレン環は、ここで記載されるような１個、２個又は３個の置換基でさらに置換されていてよい。一実施形態では、フェニレン基は、ハロ、ＮＯ₂、Ｒ又はＯＲで置換されていてよい。好ましくは、ｎは０又は１、最も好ましくは０である。

【0217】

Ｅは、この基が例えば光又は酵素作用による活性化に影響を受けやすいように選択される。Ｅは−ＮＯ₂又はグルクロン酸であることができる。前者はニトロレダクターゼの作用に影響を受けやすく、後者はβ−グルクロニダーゼの作用に影響を受けやすい場合がある。

【0218】

この実施形態では、自壊性リンカーは、Ｅが活性化され、以下に示す線に沿って進行するときに保護化合物の脱離を可能にする（ｎ＝０の場合）：

【化57】

ここで、アスタリスクは、Ｎ１０位への結合点を示す。Ｅ^*は、Ｅの活性化形態であり、Ｙは上記のとおりである。これらの基は、保護される化合物から活性化部位を分離するという利点を有する。上述のように、フェニレン基は、さらに置換されていてよい。

【0219】

基Ｙは、Ｌ¹への共有結合であることができる。
基Ｙは、次のものから選択される官能基であることができる：
−Ｃ（＝Ｏ）−、
−ＮＨ−、
−Ｏ−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣ（＝Ｏ）−及び
−Ｓ−。

【0220】

Ｌ¹がジペプチドである場合には、ＹはＮＨ又はＣ（＝Ｏ）であることが好ましく、これによりＬ¹とＹとの間にアミド結合を形成する。本実施形態では、ジペプチド配列は、酵素活性のための基質である必要はない。

【0221】

別の実施形態では、Ａはスペーサー基である。このようにしてＬ¹と抗体とが間接的に結合する。

【0222】

Ｌ¹とＡとは、次から選択される結合によって結合できる：
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−，
−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−及び
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ−。

【0223】

一実施形態では、基Ａは次のとおりである：

【化58】

ここで、アスタリスクはＬ¹への結合点を示し、波線は抗体への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0224】

一実施形態では、基Ａは次のとおりである：

【化59】

ここで、アスタリスクはＬ¹への結合点を示し、波線は抗体への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0225】

一実施形態では、基Ａは次のとおりである：

【化60】

ここで、アスタリスクはＬ¹への結合点を示し、波線は抗体への結合点を示し、ｎは０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。別の実施形態では、ｍは１０〜３０、好ましくは２０〜３０である。あるいは、ｍは０〜５０である。この実施形態では、ｍは好ましくは１０〜４０であり、ｎは１である。

【0226】

一実施形態では、基Ａは次のとおりである：

【化61】

ここで、アスタリスクはＬ¹への結合点を示し、波線は抗体への結合点を示し、ｎは０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。別の実施形態では、ｍは１０〜３０、好ましくは２０〜３０である。あるいは、ｍは０〜５０である。この実施形態では、ｍは好ましくは１０〜４０であり、ｎは１である。

【0227】

一実施形態では、抗体とＡとの結合は、抗体のチオール残基及びＡのマレイミド基を介する。

【0228】

一実施形態では、抗体とＡとの間の結合は、次のとおりである：

【化62】

ここで、アスタリスクは、Ａの残りの部分への結合点を示し、そして、波線はこの抗体の残りの部分への結合点を示す。この実施形態では、Ｓ原子は、典型的にはリガンド単位に由来する。

【0229】

上記各実施形態では、別の官能基を以下に示すマレイミド誘導基の代わりに使用できる：

【化63】

ここで、波線は、前述のように抗体への結合点を示し、そして、アスタリスクはＡ基の残りの部分への結合を示す。

【0230】

一実施形態では、マレイミド誘導基は、次の基で置換される：

【化64】

ここで、波線は抗体への結合点を示し、そしてアスタリスクはＡ基の残りの部分への結合を示す。

【0231】

一実施形態では、マレイミド誘導基は、任意に抗体と共に次のものから選択される基で置換される：
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−Ｓ−、
−Ｓ−Ｓ−、
−ＣＨ₂Ｃ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ₂−、
＝Ｎ−ＮＨ−及び
−ＮＨ−Ｎ＝。

【0232】

一実施形態では、マレイミド誘導基は、適宜抗体と共に、次のものから選択される基で置換される：

【化65】

ここで、波線は、抗体への結合点又はＡ基の残りの部分への結合のいずれかを示し、そして、アスタリスクは、抗体への結合点又はＡ基の残りの部分への結合の他方のものを示す。

【0233】

Ｌ¹を抗体に結合させるのに好適な他の基は、ＷＯ２００５／０８２０２３に記載されている。

【0234】

一実施形態では、結合基Ａが存在し、トリガーＬ¹が存在し、そして自壊性リンカーＬ²は存在しない。したがって、Ｌ¹と薬剤単位とは、結合により直接連結している。同様に、この実施形態では、Ｌ²は結合である。これは、Ｄ^Lが式ＩＩのものである場合には特に関連性のある場合がある。

【0235】

Ｌ¹及びＤは、以下から選択される結合によって結合できる：
−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ＜、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ＜及び
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ＜、
ここで、Ｎ＜又はＯ−はＤの一部である。

【0236】

一実施形態では、Ｌ¹とＤは、好ましくは以下から選択される結合によって結合する：
−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ＜及び
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−。

【0237】

一実施形態では、Ｌ¹はジペプチドを含み、このジペプチドの一方の末端がＤに結合する。上記のように、ジペプチド中のアミノ酸は、天然アミノ酸及び非天然アミノ酸の任意の組合せとすることができる。いくつかの実施形態では、ジペプチドは、天然アミノ酸を含む。リンカーがカテプシン不安定リンカーである場合には、ジペプチドは、カテプシン仲介切断のための作用部位である。この場合、ジペプチドは、カテプシンのための認識部位である。

【0238】

一実施形態では、ジペプチド−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯ−中の基−Ｘ₁−Ｘ₂−は、次のものから選択される：
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ａｌａ−、
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、
−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−、
−Ｌｅｕ−Ｃｉｔ−、
−Ｉｌｅ−Ｃｉｔ−、
−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−及び
−Ｔｒｐ−Ｃｉｔ−；
ここで、Ｃｉｔはシトルリンである。このようなジペプチドにおいて、−ＮＨ−はＸ₁のアミノ基であり、ＣＯはＸ₂のカルボニル基である。

【0239】

好ましくは、ジペプチド−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯ−中の基−Ｘ₁−Ｘ₂−は、次のものから選択される：
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ａｌａ−、
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−及び
−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−。

【0240】

最も好ましくは、ジペプチド−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯ−における基−Ｘ₁−Ｘ₂−は、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−又は−Ｖａｌ−Ａｌａ−である。

【0241】

関心のある他のジペプチドとしては、次のものが挙げられる：
−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−、
−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−及び
−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−。

【0242】

上記のものを含めて、他のジペプチドの組み合わせを使用することができる。

【0243】

一実施形態では、Ｌ¹−Ｄは次のとおりである：

【化66】

ここで、−ＮＨ−Ｘ₁−Ｘ₂−ＣＯはジペプチドであり、−Ｎ＜は薬剤単位の一部であり、アスタリスクは、薬剤単位の残部への結合点を示し、そして、波線は、Ｌ¹の残りの部分への結合点又はＡへの結合点を示す。好ましくは、波線はＡへの結合点を示す。

【0244】

一実施形態では、ジペプチドはバリン−アラニンであり、そしてＬ¹−Ｄは次のとおりである：

【化67】

ここで、アスタリスク、−Ｎ＜及び波線は上で定義したとおりである。

【0245】

一実施形態では、ジペプチドはフェニルアラニン−リジンであり、そしてＬ¹−Ｄは次のとおりである：

【化68】

ここで、アスタリスク、−Ｎ＜及び波線は上で定義したとおりである。

【0246】

一実施形態では、ジペプチドはバリン−シトルリンである。

【0247】

一実施形態では、基Ａ−Ｌ¹は以下のとおりである：

【化69】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0248】

一実施形態では、基Ａ−Ｌ¹は以下のとおりである：

【化70】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0249】

一実施形態では、基Ａ−Ｌ¹は以下のとおりである：

【化71】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0250】

一実施形態では、基Ａ−Ｌ¹は以下のとおりである：

【化72】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、そして、ｍは０〜１０、１〜７、好ましくは３〜７、最も好ましくは３又は７である。

【0251】

一実施形態では、基Ａ−Ｌ¹は以下のとおりである：

【化73】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0252】

一実施形態では、基Ａ−Ｌ¹は以下のとおりである：

【化74】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0253】

一実施形態では、基Ａ−Ｌ¹は以下のとおりである：

【化75】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0254】

一実施形態では、基Ａ−Ｌ¹は次のとおりである：

【化76】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0255】

一実施形態では、基Ａ−Ｌ¹は次のとおりである：

【化77】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、Ｓはリガンド単位の硫黄基であり、波線はリガンド単位の残りの部分への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0256】

一実施形態では、基Ａ−Ｌ¹は次のとおりである：

【化78】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、Ｓはリガンド単位の硫黄基であり、波線はリガンド単位の残部への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0257】

一実施形態では、基Ａ−Ｌ¹は次のとおりである：

【化79】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、Ｓはリガンド単位の硫黄基であり、波線はリガンド単位の残部への結合点を示し、ｎは０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0258】

一実施形態では、基Ａ−Ｌ¹は次のとおりである：

【化80】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜７、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0259】

一実施形態では、基Ａ¹−Ｌ¹は次のとおりである：

【化81】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線はリガンド単位の残部への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0260】

一実施形態では、基Ａ¹−Ｌ¹は次のとおりである：

【化82】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線はリガンド単位の残部への結合点を示し、そしてｎは０〜６である。一実施形態では、ｎは５である。

【0261】

一実施形態では、基Ａ−Ｌ¹は次のとおりである：

【化83】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線はリガンド単位の残部への結合点を示し、ｎは０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0262】

一実施形態では、基Ａ¹−Ｌ¹は次のとおりである：

【化84】

ここで、アスタリスクは、Ｌ²又はＤへの結合点を示し、波線はリガンド単位の残部への結合点を示し、ｎは０又は１であり、そしてｍは０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜８、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。

【0263】

基Ｒ^L’は、基Ｒ^Lから誘導できる。基Ｒ^Lは、Ｒ^Lの官能基への抗体の結合によって基Ｒ^L’に変換できる。他の工程は実施してＲ^LをＲ^L’に変換することができる。これらの工程は、存在する場合には保護基の除去又は適切な官能基の導入を含むことができる。

【0264】

Ｒ^L
リンカーは、１以上のアミノ酸単位を含むプロテアーゼ切断可能ペプチド部分を含むことができる。ペプチドリンカー試薬は、Ｔ−ＢＯＣ化学（Ｇｅｉｓｅｒ外「Ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８８，ｐｐ．１９９−２１８）及びＦｍｏｃ／ ＨＢＴＵ化学（Ｆｉｅｌｄｓ，Ｇ．及びＮｏｂｌｅ，Ｒ．（１９９０）「Ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ ９−ｆｌｕｏｒｏｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ」，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．３５：１６１−２１４）を含め、ペプチド化学の分野で知られている固相又は液相合成法（Ｅ．Ｓｃｈｒoｄｅｒ及びＫ． Ｌuｂｋｅ，Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，第１巻，ｐｐ７６−１３６（１９６５）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）によって、レイニンシンフォニーペプチド合成機（米国アリゾナ州ツーソンのプロテイン・テクノロジーズ社）又はモデル４３３（米国カリフォルニア州フォスターシティーのアプライド・バイオシステムズ社）などの自動合成機で調製できる。

【0265】

例示のアミノ酸リンカーとしては、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド又はペンタペプチドが挙げられる。例示のジペプチドとしては、バリン−シトルリン（ｖｃ又はｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｆ又はａｌａ−ｐｈｅ）が挙げられる。例示のトリペプチドとしては、グリシン−バリン−シトルリン（ｇｌｙ−ｖａｌ−ｃｉｔ）及びグリシン−グリシン−グリシン（ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ）が挙げられる。アミノ酸リンカー成分を含むアミノ酸残基としては、天然に存在するもの並びに微量アミノ酸及び非天然アミノ酸アナログ、例えばシトルリンなどが挙げられる。アミノ酸リンカー成分を、特定の酵素、例えば腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ及びＤ、又はプラスミンプロテアーゼによる酵素的切断の選択性について設計及び最適化することができる。

【0266】

アミノ酸側鎖としては、天然に存在するもの並びに微量アミノ酸及び非天然アミノ酸アナログ、例えばシトルリンが挙げられる。アミノ酸側鎖としては、水素、メチル、イソプロピル、イソブチル、ｓ−ブチル、ベンジル、ｐ−ヒドロキシベンジル、−ＣＨ₂ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ₃、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃、−ＣＨ₂ＣＯＮＨ₂、−ＣＨ₂ＣＯＯＨ、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＮＨ₂、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＯＨ、−（ＣＨ₂）₃ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ₂、−（ＣＨ₂）₃ＮＨ₂、−（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＯＣＨ₃、−（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ₂）₄ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ₂、−（ＣＨ₂）₄ＮＨ₂、−（ＣＨ₂）₄ＮＨＣＯＣＨ₃、−（ＣＨ₂）₄ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ₂）₃ＮＨＣＯＮＨ₂、−（ＣＨ₂）₄ＮＨＣＯＮＨ₂、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ₂ＮＨ₂、２−ピリジルメチル−、３−ピリジルメチル− 、４−ピリジルメチル、フェニル、シクロヘキシル並びに次の構造が挙げられる：

【化85】

【0267】

アミノ酸側鎖が水素（グリシン）以外のものを含む場合には、アミノ酸側鎖が結合している炭素原子はキラルである。アミノ酸側鎖が結合している各炭素原子は、独立して（Ｓ）又は（Ｒ）配置又はラセミ混合物の状態である。このように、薬剤−リンカー試薬は、鏡像異性的に純粋なラセミ体又はジアステレオマーであってもよい。

【0268】

例示的な実施形態では、アミノ酸側鎖は、天然及び非天然のアミノ酸、例えば、アラニン、２−アミノ−２−シクロヘキシル酢酸、２−アミノ−２−フェニル酢酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、ノルロイシン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、γ−アミノ酪酸、α，α−ジメチルγ−アミノ酪酸、β，β−ジメチルγ−アミノ酪酸、オルニチン及びシトルリン（Ｃｉｔ）から選択される。

【0269】

パラ−アミノベンジルカルバモイル（ＰＡＢ）自壊性スペーサーを有する、抗体への結合のための中間リンカー・ＰＢＤ薬剤部分を構築するのに有用な例示バリン−シトルリン（ｖａｌ−ｃｉｔ又はｖｃ）ジペプチドリンカー試薬は、次の構造を有する：

【化86】

ここで、ＱはＣ₁〜Ｃ₈アルキル、−Ｏ−（Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル）、−ハロゲン、−ＮＯ₂又は−ＣＮであり；ｍは０〜４の範囲の整数である。

【0270】

ｐ−アミノベンジル基を有する例示Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｍｔｒ）ジペプチドリンカー試薬は、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ外，（１９９７）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，３８：５２５７−６０に従って調製でき、かつ、次の構造を有する：

【化87】

ここで、Ｍｔｒはモノ−４−メトキシトリチルであり、ＱはＣ₁〜Ｃ₈アルキル、−Ｏ−（Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル）、−ハロゲン、−ＮＯ₂又は−ＣＮであり；ｍは０〜４の範囲の整数である。

【0271】

「自壊性リンカー」ＰＡＢ（パラ−アミノベンジル）は、抗体薬剤結合体において薬剤部分を抗体に結合させる（Ｃａｒｌ外（１９８１）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２４：４７９−４８０；Ｃｈａｋｒａｖａｒｔｙ外（１９８３）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２６：６３８−６４４；ＵＳ６２１４３４５；ＵＳ２００３０１３０１８９、ＵＳ２００３００９６７４３、ＵＳ６７５９５０９、ＵＳ２００４００５２７９３、ＵＳ６２１８５１９；ＵＳ６８３５８０７；ＵＳ６２６８４８８；ＵＳ２００４００１８１９４；ＷＯ９８／１３０５９；ＵＳ２００４００５２７９３；ＵＳ６６７７４３５；ＵＳ５６２１００２；ＵＳ２００４０１２１９４０；ＷＯ２００４／０３２８２８）。

【0272】

ＰＡＢ以外の自壊性スペーサーの他の例としては、（ｉ）ＰＡＢ基に電気的類似する芳香族化合物、例えば２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体（Ｈａｙ外（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２３７）、チアゾール（ＵＳ７３７５０７８）、複数の延長ＰＡＢ単位（ｄｅ Ｇｒｏｏｔ外（２００１）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６６：８８１５−８８３０）及びオルト又はパラ−アミノベンジルアセタール；及び（ｉｉ）同族体化スチリルＰＡＢアナログ（ＵＳ７２２３８３７）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0273】

アミド結合加水分解に基づく環化を受けるスペーサー、例えば、置換及び非置換の４−アミノ酪酸アミド（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ外（１９９５）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２：２２３）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］及びビシクロ［２．２．２］環系（Ｓｔｏｒｍ外（１９７２）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９４：５８１５）及び２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Ａｍｓｂｅｒｒｙ外（１９９０）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：５８６７）を使用することができる。また、グリシンで置換されているアミン含有薬剤の除去（Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙ外（１９８４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７：１４４７）も、ＡＤＣにおいて有用な自壊性スペーサーの例である。

【0274】

一実施形態では、バリン−シトルリンジペプチドＰＡＢアナログ試薬は、２，６−ジメチルフェニル基を有し、かつ、次の構造を有する：

【化88】

【0275】

本発明の抗体薬剤結合体に有用なリンカー試薬としては、限定されないが：ＢＭＰＥＯ、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホＧＭＢＳ、スルホＫＭＵＳ、スルホＭＢＳ、スルホＳＩＡＢ、スルホＳＭＣＣ及びスルホＳＭＰＢ、及びＳＶＳＢ（スクシンイミジル（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）、並びにビスマレイミド試薬：ＤＴＭＥ、ＢＭＢ、ＢＭＤＢ、ＢＭＨ、ＢＭＯＥ、１，８−ビスマレイミドジエチレングリコール（ＢＭ（ＰＥＯ）₂）、及び１，１１−ビスマレイミドトリエチレングリコール（ＢＭ（ＰＥＯ）₃）が挙げられ、これらは、米国イリノイ州ロックフォードのＰｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社及び他の試薬供給業者から市販されている。

【0276】

ビスマレイミド試薬は、逐次又は同時の態様で、抗体のシステイン残基の遊離チオール基をチオール含有薬剤部分、標識又はリンカー中間体に結合させる。抗体、ＰＢＤ薬物部分又はリンカー中間体のチオール基と反応性であるマレイミド以外の他の官能基としては、ヨードアセトアミド、ブロモアセトアミド、ビニルピリジン、ジスルフィド、ピリジルジスルフィド、イソシアネート及びイソチオシアネートが挙げられる。

【化89】

【0277】

リンカー試薬の他の実施形態は、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎは、スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ，Ｃａｒｌｓｓｏｎ外（１９７８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１７３：７２３−７３７）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えばジメチルアジピミデートＨＣｌ）、活性エステル（ジスクシンイミジルスベレート等）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビスアジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビスジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）エチレンジアミン）、ジイソシアネート（トルエン−２，６−ジイソシアネートなど）及びビス−活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）である。また、有用なリンカー試薬は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社（米国コロラド州ボルダー）などの他の市販の供給源により取得でき、又はＴｏｋｉ外（２００２）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６７：１８６６−１８７２；ＵＳ６２１４３４５；ＷＯ０２／０８８１７２；ＵＳ２００３１３０１８９；ＵＳ２００３０９６７４３；ＷＯ０３／０２６５７７；ＷＯ０３／０４３５８３；及びＷＯ０４／０３２８２８に記載された手順に従って合成できる。

【0278】

リンカーは、分岐多官能性リンカー部分により複数の薬剤部分を抗体に共有結合させるための樹状タイプのリンカーとすることができる（ＵＳ２００６／１１６４２２；ＵＳ２００５／２７１６１５；ｄｅ Ｇｒｏｏｔ外（２００３）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．４２：４４９０−４４９４；Ａｍｉｒ外（２００３）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．４２：４４９４−４４９９；Ｓｈａｍｉｓ外（２００４）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２６：１７２６−１７３１；Ｓｕｎ外（２００２）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ１２：２２１３−２２１５；Ｓｕｎ外（２００３）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１１：１７６１−１７６８；Ｋｉｎｇ外（２００２）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ４３：１９８７−１９９０）。樹状リンカーは、ＡＤＣの効力に関連する、薬剤対抗体のモル比、すなわち負荷を増大させることができる。したがって、抗体が１個のみの反応性システインチオール基を有する場合には、多数の薬物部分が樹状又は分岐リンカーを介して結合できる。

【0279】

樹状型リンカーの例示的な一実施形態は、次の構造を有する：

【化90】

ここで、アスタリスクはＰＢＤ部分のＮ１０位への結合点を示す。

【0280】

Ｒ^cキャッピング基
本発明の第１態様の結合体は、Ｎ１０位にキャッピング基Ｒ^Cを有することができる。化合物Ｅは、キャッピング基Ｒ^Cを有することができる。

【0281】

一実施形態では、結合体が二量体であり各単量体が式（Ａ）のものである場合には、単量体単位の１つにおける基Ｒ¹⁰は、キャッピング基Ｒ^C又は基Ｒ¹⁰がある。

【0282】

一実施形態では、結合体が二量体であり各単量体が式（Ａ）のものである場合には、単量体単位の１つにおける基Ｒ¹⁰はキャッピング基Ｒ^Cである。

【0283】

一実施形態では、化合物Ｅが二量体であり各単量体が式（Ｅ）のものである場合には、単量体単位の１つにおける基Ｒ^Lは、キャッピング基Ｒ^C又は抗体への結合のためのリンカーである。

【0284】

一実施形態では、化合物Ｅが二量体であり各単量体が式（Ｅ）のものである場合には、単量体単位の１つにおける基Ｒ^Lはキャッピング基Ｒ^Cである。

【0285】

基Ｒ^Cは、ＰＢＤ部分のＮ１０位から除去してＮ１０−Ｃ１１イミン結合、カルビノールアミン、置換カルビノールアミン、ＱＲ¹¹がＯＳＯ₃Ｍの場合には、亜硫酸水素塩付加物、チオカルビノールアミン、置換チオカルビノールアミン又は置換カルビノールアミンを残すことができる。

【0286】

一実施形態では、Ｒ^Cは、Ｎ１０−Ｃ１１イミン結合、カルビノールアミン、置換カルビノールアミン又はＱＲ¹¹がＯＳＯ₃Ｍの場合には、亜硫酸水素塩付加物を残すように除去可能な保護基であることができる。一実施形態では、Ｒ^CはＮ１０−Ｃ１１イミン結合を残して除去可能な保護基である。

【0287】

基Ｒ^Cは、Ｒ¹⁰基を除去して例えばＮ１０−Ｃ１１イミン結合、カルビノールアミンなどを生じさせるのに必要な条件と同一の条件下で除去可能であることが意図される。キャッピング基は、Ｎ１０位での目的の官能基のための保護基として作用する。キャッピング基は、抗体に対して反応性ではないことが意図される。例えば、Ｒ^CはＲ^Lと同一ではない。

【0288】

キャッピング基を有する化合物は、イミン単量体を有する二量体の合成における中間体として使用できる。あるいは、キャッピング基を有する化合物は、結合体として使用でき、その際、キャッピング基は、イミン、カルビノールアミン、置換カルビノールアミンなどを得るために、目標位置で除去される。したがって、この実施形態では、キャッピング基を、本発明者の先の出願ＷＯ００／１２５０７号で定義されるように、治療上除去可能な窒素保護基と呼ぶことができる。

【0289】

一実施形態では、基Ｒ^Cは、基Ｒ¹⁰のリンカーＲ^Lを切断する条件下で除去可能である。したがって、一実施形態では、キャッピング基は、酵素の作用により切断可能である。

【0290】

別の実施形態では、キャッピング基は、リンカーＲ^Lの抗体への結合前に除去可能である。この実施形態では、キャッピング基は、リンカーＲ^Lを切断しない条件下で除去可能である。

【0291】

化合物が抗体への結合を形成するための官能基Ｇ¹を含む場合には、キャッピング基は、Ｇ¹の付加又は脱マスキングの前に除去可能である。

【0292】

キャッピング基は、二量体中の単量体単位の一つのみが抗体に結合することを確保するように保護基戦略の一部として使用できる。

【0293】

キャッピング基は、Ｎ１０−Ｃ１１イミン結合のためのマスクとして使用できる。キャッピング基は、イミン官能性が化合物に必要とされるような時に除去できる。また、キャッピング基は、上記のように、カルビノールアミン、置換カルビノールアミン及び亜硫酸水素塩付加物のためのマスクでもある。

【0294】

Ｒ^Cは、本発明者の先の出願ＷＯ００／１２５０７号に記載されているようなＮ１０の保護基であることができる。一実施形態では、Ｒ^Cは、本発明者の先の出願ＷＯ００／１２５０７号で定義されるような治療上除去可能な窒素保護基である。

【0295】

一実施形態では、Ｒ^Cは、カルバメート保護基である。

【0296】

一実施形態では、カルバメート保護基は、Ａｌｌｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ｔｒｏｃ、Ｔｅｏｃ、Ｐｓｅｃ、Ｃｂｚ及びＰＮＺから選択される。任意に、カルバメート保護基は、さらにＭｏｃから選択される。

【0297】

一実施形態では、Ｒ^Cは、抗体への結合のための官能基を欠くリンカー基Ｒ^Lである。

【0298】

本願は、カルバメートであるＲ^C基に特に関係する。

【0299】

一実施形態では、Ｒ^Cは次の基である：

【化91】

ここで、アスタリスクはＮ１０位への結合点を示し、Ｇ²は末端基であり、Ｌ³は共有結合又は切断可能なリンカーＬ¹であり、Ｌ²は共有結合であり又はＯＣ（＝Ｏ）と共に自壊性リンカーを形成する。

【0300】

Ｌ³及びＬ²が両方とも共有結合である場合には、Ｇ²及びＯＣ（＝Ｏ）は、一緒になって上で定義したカルバメート保護基を形成する。

【0301】

Ｌ¹は、Ｒ¹⁰に関連して上で定義した通りである。Ｌ²は、Ｒ¹⁰に関連して上で定義した通りである。

【0302】

様々な末端基を、よく知られた保護基に基づくものを含めて以下に記載する。

【0303】

一実施形態では、Ｌ³は切断可能なリンカーＬ¹であり、Ｌ²は、ＯＣ（＝Ｏ）と共に自壊性リンカーを形成する。この実施形態では、Ｇ²は、ＡＣ（アセチル）若しくはＭｏｃ又は次のカルバメート保護基から選択される：Ａｌｌｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ｔｒｏｃ、Ｔｅｏｃ、Ｐｓｅｃ、Ｃｂｚ及びＰＮＺ。任意に、カルバメート保護基は、さらにＭｏｃから選択される。

【0304】

別の実施形態では、Ｇ²はアシル基−Ｃ（＝Ｏ）Ｇ³であり、ここで、Ｇ³は、アルキル（シクロアルキル、アルケニル及びアルキニルを含む）、ヘテロアルキル、ヘテロシクリル及びアリール（ヘテロアリール及びカルボアリールを含む）から選択される。これらの基は置換されていてもよい。アシル基は、適切な場合には、Ｌ³又はＬ²のアミノ基と共にアミド結合を形成することができる。アシル基は、適切な場合には、Ｌ³又はＬ²のヒドロキシ基と共にエステル結合を形成することができる。

【0305】

一実施形態では、Ｇ³はヘテロアルキルである。ヘテロアルキル基は、ポリエチレングリコールを含むことができる。ヘテロアルキル基は、アシル基に隣接するＯ又はＮなどのヘテロ原子を有することができ、それによって、適宜基Ｌ³又はＬ²中に存在するヘテロ原子を有するカルバメート又はカーボネート基を適宜形成することができる。

【0306】

一実施形態では、Ｇ³はＮＨ₂、ＮＨＲ及びＮＲＲ’から選択される。好ましくは、Ｇ₃はＮＲＲ’である。

【0307】

一実施形態では、Ｇ²は次の基である：

【化92】

ここで、アスタリスクはＬ³との結合点を示し、ｎは０〜６であり、Ｇ⁴はＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’、ＮＨ₂、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ₂及びハロから選択される。基ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂及びＮＨＲは保護されている。一実施形態では、ｎは１〜６であり、好ましくはｎは５である。一実施形態では、Ｇ⁴はＯＲ、ＳＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’及びＮＲＲ’である。一実施形態では、Ｇ⁴はＯＲ、ＳＲ及びＮＲＲ’である。好ましくは、Ｇ⁴はＯＲ及びＮＲＲ’から選択され、最も好ましくは、Ｇ⁴はＯＲである。最も好ましくは、Ｇ⁴はＯＭｅである。

【0308】

一実施形態では、基Ｇ²は次のものである：

【化93】

ここで、アスタリスクはＬ³への結合点を示し、ｎ及びＧ⁴は上で定義した通りである。

【0309】

一実施形態では、基Ｇ²は次のものである：

【化94】

ここで、アスタリスクはＬ³への結合点を示し、ｎは０又は１であり、ｍは０〜５０であり、Ｇ⁴は、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’、ＮＨ₂、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ₂、及びハロから選択される。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ｍは０〜１０、１〜２、好ましくは４〜８、最も好ましくは４又は８である。別の実施形態では、ｎは１であり、ｍは１０〜５０、好ましくは２０〜４０である。基ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂及びＮＨＲは保護されている。一実施形態では、Ｇ⁴はＯＲ、ＳＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’、及びＮＲＲ’である。一実施形態では、Ｇ⁴はＯＲ、ＳＲ、及びＮＲＲ’である。好ましくは、Ｇ⁴はＯＲ及びＮＲＲ’から選択される、最も好ましくは、Ｇ⁴はＯＲである。好ましくは、Ｇ⁴はＯＭｅである。

【0310】

一実施形態では、基Ｇ²は次のものである：

【化95】

ここで、アスタリスクはＬ³への結合点を示し、ｎ、ｍ及びＧ⁴は上で定義した通りである。

【0311】

一実施形態では、基Ｇ²は次のものである：

【化96】

ここで、ｎは１〜２０であり、ｍは０〜６であり、Ｇ⁴はＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’、ＮＨ₂、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ₂、及びハロから選択される。一実施形態では、ｎは１〜１０である。別の実施形態では、ｎは１０〜５０、好ましくは２０〜４０である。一実施形態では、ｎは１である。一実施形態では、ｍは１である。基ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂及びＮＨＲは保護されている。一実施形態では、Ｇ⁴はＯＲ、ＳＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’、及びＮＲＲ’である。一実施形態では、Ｇ⁴はＯＲ、ＳＲ、及びＮＲＲ’である。好ましくは、Ｇ⁴はＯＲ及びＮＲＲ’から選択され、最も好ましくはＧ⁴はＯＲである。好ましくは、Ｇ⁴はＯＭｅである。

【0312】

一実施形態では、基Ｇ²は次のものである：

【化97】

ここで、アスタリスクはＬ³への結合点を示し、ｎ、ｍ及びＧ⁴は上で定義した通りである。

【0313】

各実施の形態では、上記Ｇ⁴はＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂及びＮＨＲであることができる。これらの基は、好ましくは保護されている。一実施形態では、ＯＨは、Ｂｚｌ、ＴＢＤＭＳ又はＴＢＤＰＳで保護されている。一実施形態では、ＳＨは、Ａｃｍ、Ｂｚｌ、Ｂｚｌ−ＯＭｅ、Ｂｚｌ−Ｍｅ又はＴｒｔで保護されている。一実施形態では、ＮＨ₂又はＮＨＲは、Ｂｏｃ、Ｍｏｃ、Ｚ−Ｃｌ、Ｆｍｏｃ、Ｚ又はＡｌｌｏｃで保護されている。

【0314】

一実施形態では、基Ｇ²は、ジペプチドである基Ｌ³と共に存在する。

【0315】

キャッピング基は、抗体への結合のためのものではない。したがって、二量体中に存在する他の単量体は、リンカーを介した抗体への結合点として機能する。したがって、キャッピング基に存在する官能基は、抗体との反応に利用可能でないことが好ましい。このように、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂、ＣＯＯＨなどの反応性官能基は、好ましくは回避される。しかしながら、上記のように、このような官能基は、保護される場合にはキャッピング基に存在していてもよい。

【0316】

実施形態
本発明の実施形態は、ＣｏｎｊＡ（ここで抗体は上で定義した通りである）を含む。

【0317】

本発明の実施形態は、ＣｏｎｊＢ（ここで、抗体は上で定義した通りである）を含む。

【0318】

本発明の実施形態は、ＣｏｎｊＣ（ここで、抗体は上で定義した通りである）を含む。

【0319】

本発明の実施形態は、ＣｏｎｊＤ（ここで、抗体は上で定義した通りである）を含む。

【0320】

本発明の実施形態は、ＣｏｎｊＥ（ここで、抗体は上で定義した通りである）を含む。

【0321】

上述のように、本発明のいくつかの実施形態はＣｏｎｊＡ、ＣｏｎｊＢ、ＣｏｎｊＣ、ＣｏｎｊＤ及びＣｏｎｊＥを除外する。

【0322】

薬剤負荷
薬剤負荷は、抗体当たりＰＢＤ薬剤の数平均である。本発明の化合物がシステインに結合している場合には、薬剤負荷は、抗体当たり１〜８の薬剤（ＤＬ）の範囲であることができ、すなわち、この場合、１、２、３、４、５、６、７、及び８個の薬剤部分が抗体に共有結合している。結合体の組成物は、１〜８の薬剤の範囲と結合した抗体のコレクションを含む。本発明の化合物がリジンに結合している場合には、薬剤負荷は抗体当たり１〜８０薬剤（ＤＬ）の範囲であることができるが、４０、２０、１０又は８の上限がが好ましい場合がある。結合体の組成物は、１〜８０、１〜４０、１〜２０、１〜１０又は１〜８の範囲の薬剤と結合した抗体のコレクションを含む。

【0323】

結合反応によるＡＤＣの調製の際における抗体当たりの薬剤の平均数は、ＵＶ、逆相ＨＰＬＣ、ＨＩＣ、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、電気泳動などの従来の手段によって特徴付けることができる。また、ｐの観点でのＡＤＣの定量的分布も決定することができる。ＥＬＩＳＡにより、ＡＤＣの特定の調製物におけるｐの平均値を決定することができる（Ｈａｍｂｌｅｔｔ外（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：７０６３−７０７０；Ｓａｎｄｅｒｓｏｎ外（２００５）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１１：８４３−８５２）。ただし、ｐ（薬剤）値の分布は、抗体−抗原結合及びＥＬＩＳＡの検出限界によって識別可能ではない。また、抗体−薬剤結合体の検出のためのＥＬＩＳＡアッセイは、薬剤部分が重鎖や軽鎖断片などの抗体に結合する場所又は特定のアミノ酸残基を判定しない。いくつかの例では、ｐが他の薬剤負荷を有するＡＤＣからの所定値である場合に、均一なＡＤＣの分離、精製及び特性評価は、逆相ＨＰＬＣ又は電気泳動などの手段によって達成できる。また、このような技術は、他のタイプの結合体にも適用可能である。

【0324】

いくつかの抗体−薬剤結合体について、pは、抗体上の結合部位の数により制限されることがある。例えば、抗体は、1個のみ若しくは数個のシステインチオール基を有することができ、又は1個のみ若しくは数個の十分に反応性のチオール基を有することができ、これらを介してリンカーを結合させることができる。より高い薬剤負荷、例えばｐ>5は、所定の抗体−薬剤結合体の凝集、不溶性、毒性又は細胞透過性の損失を引き起こす可能性がある。

【0325】

典型的には、薬剤部分の理論最大値未満が結合反応中に抗体に結合する。抗体は、例えば、薬剤−リンカー中間体（Ｄ−Ｌ）又はリンカー試薬とは反応しない多くのリジン残基を含むことができる。最も反応性のあるリシン基のみがアミン反応性リンカー試薬と反応することができる。また、最も反応性のあるシステインチオール基のみがチオール反応性リンカー試薬と反応することができる。一般に、抗体は、たとえあったとしても、薬剤部分に結合することのできる多くの遊離及び反応性システインチオール基を含まない。化合物の抗体における大部分のシステインチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在し、かつ、部分的又は全体的な還元条件下でジチオスレイトール（ＤＴＴ）又はＴＣＥＰなどの還元剤で還元されなければならない。ＡＤＣの負荷（薬剤／抗体比）は、いくつかの異なる方法で制御することができ、これらの方法としては、（ｉ）抗体に対する薬剤−リンカー中間体（Ｄ−Ｌ）又はリンカー試薬のモル過剰を制限すること：（ｉｉ）結合反応の時間又は温度を制限すること、及び（ｉｉｉ）システインチオール修飾についての部分的又は制限還元条件が挙げられる。

【0326】

所定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド、すなわちシステイン架橋を有する。抗体は、ＤＴＴ（ジチオスレイトール）などの還元剤で処理することにより、リンカー試薬との結合について反応性となる場合がある。したがって、それぞれのシステイン架橋は、理論的には、２個の反応性のチオール求核基を形成することになる。追加の求核基を、アミンをチオールに転化させるリシンと２−イミノチオラン（トラウトの試薬）との反応により抗体に導入することができる。反応性のチオール基は、１、３、３、４個以上のシステイン残基を設計することにより抗体（又はその断片）に導入できる（例えば、１個以上の非天然システインアミノ酸残基を含む変異抗体を調製する）。ＵＳ７５２１５４１には、反応性システインアミノ酸の導入による設計抗体が教示されている。

【0327】

システインアミノ酸は、抗体中にありかつ鎖内又は分子間ジスルフィド結合を形成しない反応性部位で操作できる（Ｊｕｎｕｔｕｌａ外，２００８ｂ Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２６（８）：９２５−９３２；Ｄｏｒｎａｎ外（２００９）Ｂｌｏｏｄ １１４（１３）：２７２１−２７２９；ＵＳ７５２１５４１；ＵＳ７７２３４８５；ＷＯ２００９／０５２２４９）。操作されたシステインチオールは、マレイミドやα−ハロアミドなどのチオール反応性求電子基を有するリンカー試薬又は本発明の薬剤−リンカー試薬と反応してシステイン設計抗体及びＰＢＤ薬剤部分を有するＡＤＣを形成することができる。このように、薬剤部分の位置を設計し、制御し、そして知ることができる。薬剤負荷は制御できる。というのは、設計システインチオール基は、典型的には、チオール反応性リンカー試薬又は薬剤−リンカー試薬と高い収率で反応するからである。重鎖又は軽鎖上の単一部位での置換によりシステインアミノ酸を導入するようにＩｇＧ抗体を設計すると、対称の抗体上に２つの新たなシステインが得られる。２付近の薬剤負荷は、結合体製品ＡＤＣのほぼ均一性により達成できる。

【0328】

あるいは、部位特異的結合体は、Ａｘｕｐ外（（２０１２），Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ． １０９（４０）：１６１０１−１６１１６）によって記載されているように、それらの重鎖及び／又は軽鎖に非天然アミノ酸を含むように抗体を設計することによって達成できる。これらの非天然アミノ酸は、直交化学がリンカー試薬及び薬剤を結合させるように設計できるというさらなる利点を与える。

【0329】

抗体の複数の求核性又は求電子基が薬剤−リンカー中間体又はリンカー試薬、続いて薬剤部分試薬と反応する場合には、得られる生成物は、ＡＤＣ化合物と、抗体に結合した薬剤部分の分布、例えば１、２、３などとの混合物である。ポリマー逆相（ＰＬＲＰ）及び疎水性相互作用（ＨＩＣ）などの液体クロマトグラフィー法は、薬剤負荷値によって混合物中の化合物を分離することができる。単一の薬剤負荷値（Ｐ）を有するＡＤＣの調製物は単離できるが、これらの単一負荷値ＡＤＣは、依然として不均一な混合物であることができる。というのは、薬剤部分は、抗体上の異なる部位でリンカーを介して結合できるからである。

【0330】

したがって、本発明の抗体−薬剤結合体組成物は、抗体−薬剤結合体化合物の混合物を含み、その際、その抗体は１個以上のＰＢＤの薬剤部分を有し、しかもその薬剤部分は様々なアミノ酸残基で抗体に結合できる。

【0331】

一実施形態では、抗体当たりのピロロベンゾジアゼピン二量体基の平均数は、１〜２０の範囲にある。いくつかの実施形態では、この範囲は、１〜８、２〜８、２〜６、２〜４及び４〜８から選択される。

【0332】

いくつかの実施形態では、抗体当たり１個の二量体ピロロベンゾジアゼピン基が存在する。

【0333】

他の形態の包含
特に断らない限り、上に含まれるのは、これらの置換基の周知のイオン、塩、溶媒和物及び保護された形態である。例えば、カルボン酸（−ＣＯＯＨ）への言及には、陰イオン性（カルボキシレート）型（−ＣＯＯ^-）、その塩又は溶媒和物のみならず、通常の保護された形態が含まれる。同様に、アミノ基に対する言及には、アミノ基のプロトン化形態（−Ｎ⁺ＨＲ¹Ｒ²）、塩又は溶媒和物、例えば、塩酸塩のみならず、アミノ基の通常の保護形態が含まれる。同様に、ヒドロキシル基に対する言及には、陰イオン形態（−Ｏ^-）、塩又は溶媒和物のみならず、従来の保護形態が含まれる。

【0334】

塩
活性化合物の対応する塩、例えば、薬学的に許容される塩を調製し、精製し及び／又は取り扱うことが便利又は望ましい場合がある。薬学的に許容される塩の例は、Ｂｅｒｇｅ外，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６，１−１９（１９７７）で議論されている。

【0335】

例えば、化合物が陰イオン性である又は陰イオン性であることができる官能基を有する場合（例えば、−ＣＯＯＨは、−ＣＯＯ^-であることができる）、好適な陽イオンで塩が形成され得る。好適な無機陽イオンの例としては、Ｎａ⁺及びＫ⁺などのアルカリ金属イオン、Ｃａ²⁺及びＭｇ²⁺などのアルカリ土類陽イオン、及びＡｌ⁺などの他の陽イオンが挙げられるが、これらに限定されない。好適な有機陽イオンの例としては、アンモニウムイオン（すなわちＮＨ₄⁺）及び置換アンモニウムイオン（例えばＮＨ₃Ｒ⁺、ＮＨ₂Ｒ₂⁺、ＮＨＲ₃⁺、ＮＲ₄⁺）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの好適な置換アンモニウムイオンの例は、次のものから誘導されるものである：エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン及びトロメタミン、並びにリジン及びアルギニンなどのアミノ酸。一般的な第四級アンモニウムイオンの例はＮ（ＣＨ₃）₄⁺である。

【0336】

化合物が陽イオン性である又は陽イオン性であることのできる官能基を有する場合（例えば−ＮＨ₂は−ＮＨ₃⁺であることができる）、好適な陰イオンで塩を形成させることができる。好適な無機陰イオンの例としては、以下の無機酸から誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない：塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、亜硝酸、リン酸、及び亜リン酸。

【0337】

好適な有機陰イオンの例としては、次の有機酸から誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない：２−アセトキシ安息香酸、酢酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、桂皮酸、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフタレンカルボン酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、粘液酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、フェニルスルホン酸、プロピオン酸、ピルビン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、酒石酸、トルエンスルホン酸、及び吉草酸。好適な高分子有機陰イオンの例としては、以下のポリマー酸から誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない：タンニン酸、カルボキシメチルセルロース。

【0338】

溶媒和物
活性化合物の対応する溶媒和物を調製、精製、及び／又は処理することが好都合又は望ましい場合がある。用語「溶媒和物」は、ここでは、溶質（例えば、活性化合物、活性化合物の塩）と溶媒との複合体をいうために従来の意味で使用される。溶媒が水である場合、溶媒和物は、簡便には水和物、例えば、一水和物、二水和物、三水和物などと呼ぶことができる。

【0339】

本発明は、溶媒が水又はアルコール（Ｒ^AＯＨ、ここでＲ^Aは、Ｃ_1〜4アルキルである）である場合に、以下に示されるＰＢＤ部分のイミン結合に溶媒が付加する化合物を含む。

【化98】

これらの形態は、ＰＢＤのカルビノールアミン及びカルビノールアミンエーテル形態と呼ぶことができる（上記Ｒ¹⁰に関連する節で説明したように）。これらの平衡のバランスは、化合物が見出される条件のみならず、その部分自体の性質にも依存する。

【0340】

これらの特定の化合物は、例えば凍結乾燥によって固体状態で単離できる。

【0341】

異性体
本発明の所定の化合物は、１種以上の特定の幾何、光学、エナンチオマー、ジアステレオマー、エピマー、アトロプ、立体異性、互変異性、立体配座又はアノマー形態で存在でき、これらのものとしては限定されないが、シス及びトランス型；Ｅ−及びＺ型；ｃ、ｔ及びｒ型；エンド及びエキソ型；Ｒ、Ｓ及びメソ型；Ｄ及びＬ型；ｄ及びｌ型；（＋）及び（−）型；ケト、エノール及びエノラート型；ｓｙｎ型及びアンチ型；向斜及び背斜型；α及びβ型；軸及び赤道型；舟、椅子、ねじれ、エンベロープ及びいす型；並びにこれらの組み合わせが挙げられ、以下、まとめて「異性体」（又は「異性体型」）と呼ぶ。

【0342】

用語「キラル」とは、鏡像相手の重ね合わせ不可能な特性を有する分子をいうのに対し、用語「アキラル」とは、それらの鏡像相手に重ね合わせることができる分子をいう。

【0343】

用語「立体異性体」とは、同一の化学構造を有するが、空間における原子又は基の配置に関して異なる化合物をいう。

【0344】

「ジアステレオマー」とは、２以上のキラル中心を有し、かつ、それらの分子が互いに鏡像でない立体異性体をいう。ジアステレオマーは、様々な物性、例えば、融点、沸点、スペクトル特性及び反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、電気泳動及びクロマトグラフィーなどの高分解能分析手順下で分離できる。

【0345】

「鏡像異性体」とは、互いに重ね合わせることができない鏡像である、化合物の２種の立体異性体をいう。

【0346】

ここで使用される立体化学の定義及び規則は、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ著，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ，ニューヨーク；並びにＥｌｉｅｌ，Ｅ．及びＷｉｌｅｎ，Ｓ．，「Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ社，ニューヨーク，１９９４に従う。本発明の化合物は、不斉中心又はキラル中心を含むことができるため、様々な立体異性体形で存在することができる。ジアステレオマー、エナンチオマー及びアトロプ異性体並びにラセミ混合物などのそれらの混合物を含めて（これらに限定されない）、本発明の化合物の全ての立体異性体は、本発明の一部をなす。多くの有機化合物は光学的に活性な形態で存在する、すなわち、これらは平面偏光の面を回転させる能力を有する。光学的に活性な化合物を記載する際に、接頭辞Ｄ及びＬ、又はＲ及びＳは、そのキラル中心周辺の分子の絶対配置を示すために使用される。接頭辞Ｄ及びＬ又は（＋）及び（−）は、化合物による平面偏光の回転の符号を示すため使用され、（−）又はｌ、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）又はｄの接頭辞の化合物は右旋性である。所与の化学構造について、これらの立体異性体は、これらが互いに鏡像であることを除き同一である。また、特定の立体異性体は、エナンチオマーと呼ばれることもあり、そのような異性体の混合物はエナンチオマー混合物と呼ばれる場合が多い。エナンチオマーの５０：５０混合物は、ラセミ混合物又はラセミ体と呼ばれ、これは、化学反応又はプロセスにおいて立体選択性又は立体特異性が存在しなかった場合に生じることがある。用語「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」とは、光学活性を欠く２つのエナンチオマー種の等モル混合物をいう。

【0347】

互変異性型について以下で説明される場合を除き、ここで使用するときに用語「異性体」から具体的に除外されるのは、構造異性体（すなわち、単に空間的な原子の位置ではなく原子間の結合が異なる異性体）であることに注意されたい。例えば、メトキシ基−ＯＣＨ₃に対する言及は、その構造異性体、ヒドロキシメチル基ＣＨ₂ＯＨに対する言及であると解釈すべきではない。同様に、オルト−クロロフェニルに対する言及は、その構造異性体であるメタ−クロロフェニルに対する言及であると解釈すべきではない。しかし、構造の種類に対する言及は、その種類内に入る構造的異性体を含むことができる（例えば、Ｃ_1〜7アルキルは、ｎ−プロピル及びイソプロピルを含み；ブチルは、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル及びｔ−ブチルを含み；メトキシフェニルは、オルト−、メタ−及びパラ−メトキシフェニルを含む）。

【0348】

上記の除外は、例えば、次の互変異性体対と同様に、互変異性形態、例えばケト、エノール及びエノラート型には関連しない：ケト／エノール（以下に示す）、イミン／エナミン、アミド／イミノアルコール、アミジン／アミジン、ニトロソ／オキシム、チオケトン／エンチオール、Ｎ−ニトロソ／ヒドロキシアゾ及びニトロ／アシ−ニトロ。

【化99】

【0349】

用語「互変異性体」又は「互変異性体」とは、低エネルギー障壁を介して相互に変換可能な様々なエネルギーの構造異性体をいう。例えば、プロトン互変異性体（プロトトロピック互変異性体としても知られている）は、ケト−エノール及びイミン−エナミン異性化などの、プロトンの移動による相互変換を含む。原子価互変異性体は、結合電子のうちのいくつかの再構成による相互変換を含む。

【0350】

用語「異性体」に具体的に含まれるのは、一つ以上の同位体置換を有する化合物であることに留意されたい。例えば、Ｈは¹Ｈ、²Ｈ（Ｄ）及び³Ｈ（Ｔ）を含めた任意の同位体形態であることができ；Ｃは¹²Ｃ、¹³Ｃ及び¹⁴Ｃを含めた任意の同位体形態であることができ；Ｏは¹⁶Ｏ及び¹⁸Ｏを含めた任意の同位体形態などであることができる。

【0351】

本発明の化合物に導入することができる同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素及び塩素の同位元素、例えば、²Ｈ（重水素、Ｄ）、³Ｈ（トリチウム）、¹¹Ｃ、¹³Ｃ、¹⁴Ｃ、¹⁵Ｎ、¹⁸Ｆ、³¹Ｐ、³²Ｐ、³⁵Ｓ、³⁶Ｃｌ及び¹²⁵Ｉが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の様々な同位体標識化合物、例えば³Ｈ、¹³Ｃ及び¹⁴Ｃなどの放射性同位体が導入される。このような同位体標識化合物は、薬剤又は基質組織分布アッセイを含めて、代謝研究、反応速度論研究、検出又は陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）や単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）などの画像化技術或いは又は患者の放射線治療に有用な場合がある。本発明の重水素標識又は置換治療化合物は、分布、代謝及び排出（ＡＤＭＥ）に関連するＤＭＰＫ（薬物代謝及び薬物動態）特性を向上させることができる。重水素などのより重い同位体での置換は、より大きな代謝安定性から生じる所定の治療上の利点、例えば生体内半減期の増大又は用量要件の低減を与える。¹⁸Ｆ標識化合物はＰＥＴ又はＳＰＥＣＴ研究に有用な場合がある。本発明の化合物及びプロドラッグの同位体標識化合物は、一般に、非同位体標識試薬の代わりに容易に入手可能な同位体標識試薬を使用することにより、以下で説明するスキーム又は実施例及び製造例に開示されている手順を実施することによって調製できる。さらに、より重い同位体、特に重水素（すなわち、²Ｈ又はＤ）による置換は、より大きな代謝安定性に起因する所定の治療上の利点、例えば、生体内半減期の延長又は必要用量の減少又は治療指数の改善を与えることができる。この文脈における重水素は置換基とみなされることが分かる。このようなより重い同位体、特に重水素の濃度は、同位体濃縮係数により定義できる。本発明の化合物では、特定の同位体として特に指定されていない任意の原子は、その原子の任意の安定同位体を表すことを意味する。

【0352】

特に明記しない限り、特定の化合物への言及には、そのラセミ体及び他の混合物を含めて（全体的又は部分的に）、そのようなすべての異性体が含まれる。このような異性体形態の調製（例えば不斉合成）及び分離（例えば分別結晶及びクロマトグラフィー手段）のための方法は、当技術分野で知られており、又はここで教示した方法若しくは既知の方法を既知の態様で適合させることによって容易に得られる。

【0353】

生物学的活性
試験管内細胞増殖アッセイ
一般に、抗体−薬剤結合体（ＡＤＣ）の細胞毒性又は細胞増殖抑制活性は、細胞培養培地中におけるＡＤＣの抗体に受容体タンパク質を有する哺乳動物細胞を曝露し；約６時間〜約５日にわたって細胞を培養し；細胞生存率を測定することによって測定される。細胞ベースの試験管内アッセイを使用して、本発明のＡＤＣの生存率（増殖）、細胞傷害性及びアポトーシス（カスパーゼ活性化）の誘導を測定する。

【0354】

抗体−薬剤結合体の試験管内での効能を、細胞増殖アッセイによって測定することができる。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイは、甲虫ルシフェラーゼの組換え体発現に基づく市販（米国ウィスコンシン州マディソンのプロメガ社Ｉ）の均一アッセイ法である（米国特許第５５８３０２４号；同５６７４７１３号及び同５７００６７０号）。この細胞増殖アッセイは、存在するＡＴＰの定量化、代謝的に活性な細胞の指標に基づいて培養中の生存細胞の数を決定する（Ｃｒｏｕｃｈ外（１９９３）Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈ． １６０：８１−８８；米国特許第６６０２６７７号）。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイは、自動ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）を施すことができる９６ウェルの形式で実施される（Ｃｒｅｅ外（１９９５）ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ ６：３９８−４０４）。均一アッセイ手順は、血清添加培地で培養した細胞に単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を直接添加することを含む。細胞洗浄、培地の除去及び複数回のピペッティング工程は必要ではない。このシステムは、試薬を添加し混合した後１０分以内に３８４ウェル形式で１５個程度の細胞／ウェルを検出する。細胞をＡＤＣで連続的に処理することができ、又は細胞を処理し、そしてＡＤＣから分離することができる。一般に、簡単にすなわち３時間処理された細胞は、連続的に処理された細胞と同じ効能を示した。

【0355】

均一「添加・混合・測定」形式は、細胞溶解及びＡＴＰの存在量に比例する発光シグナルの生成をもたらす。ＡＴＰの量は、培養中に存在する細胞の数に正比例する。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイは、ルシフェラーゼ反応によって生成される「成長型」発光シグナルを生成し、これは、使用する細胞の種類及び媒体によって一般により５時間を超える半減期を有する。生存細胞は、相対発光単位（ＲＬＵ）に反映される。基質である甲虫ルシフェリンは、光子のＡＴＰからＡＭＰへの付随的変換及び光子の生成で、組換えホタルルシフェラーゼによって酸化的に脱カルボキシル化される。

【0356】

また、抗体−薬剤結合体の試験管内での効能は、細胞傷害性アッセイでも測定できる。培養接着細胞を、ＰＢＳで洗浄し、トリプシンで分離させ、１０％ＦＣＳを含む完全培地で希釈し、遠心分離し、新たな培地に再懸濁、そして血球計数器で計数する。懸濁培養物を直接計数する。計数に好適な単分散細胞懸濁液は、細胞塊を破壊するように吸引を繰り返すことにより懸濁液の攪拌を要する場合がある。

【0357】

細胞懸濁液を所望の接種密度に希釈し、そして黒色の９６ウェルプレートに分配する（ウェル当たり１００μｌ）。接着細胞株のプレートを一晩インキュベートして接着させる。懸濁細胞培養物を接種の日に使用することができる。

【0358】

ＡＤＣ（２０μｇ／ｍｌ）のストック溶液（１ｍｌ）を、適切な細胞培養培地で作製する。ストックＡＤＣの連続１０倍希釈を、１５ｍｌ遠心管内で１００μｌ〜９００μＬの細胞培養培地を連続的に移すことによって作製する。

【0359】

各ＡＤＣ希釈液（１００μｌ）４つの反復ウェルを、予め細胞懸濁液（１００μｌ）が入れられた９６ウェル黒色プレートに分注し、２００μｌの最終容量にする。対照ウェルは、細胞培養培地（１００μｌ）を受け入れる。

【0360】

細胞株の世代時間が３０時間を超える場合には、ＡＤＣのインキュベーションは、５日間にわたるが、それ以外の場合は４日間のインキュベーションを行う。

【0361】

インキュベーション期間の終了時に、細胞生存率を、アラマーブルーアッセイを使用して評価する。アラマーブルー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）をプレート全体にわたってに分注し（ウェル当たり２０μｌ）、４時間インキュベートする。アラマーブルー蛍光を、励起５７０ｎｍ、発光５８５ｎｍでＶａｒｉｏｓｋａｎフラッシュプレートリーダーにより測定する。細胞生存率（％）を、対照ウェル中における平均蛍光と比較した、ＡＤＣ処理ウェル中における平均蛍光から算出する。

【0362】

使用
本発明の結合体は、標的位置にＰＢＤの化合物を与えるために使用される。

【0363】

標的位置は、好ましくは、増殖性の細胞集団である。抗体は、増殖細胞集団上に存在する抗原に対する抗体である。

【0364】

一実施形態では、抗原は、非増殖性細胞集団では存在しない、又は増殖細胞集団、例えば腫瘍細胞集団中に存在する抗原の量と比較して低いレベルで存在する。

【0365】

標的位置では、リンカーは、化合物ＲｅｌＡ、ＲｅｌＢ、ＲｅｌＣ、ＲｅｌＤ又はＲｅｌＥを脱離させるように切断できる。したがって、結合体を使用して、化合物のＲｅｌＡ、ＲｅｌＢ、ＲｅｌＣ、ＲｅｌＤ又はＲｅｌＥを標的位置に選択的に与えることができる。

【0366】

リンカーは、標的位置に存在する酵素によって切断できる。

【0367】

標的位置は、試験管内、生体内又は生体外であることができる。

【0368】

本発明の抗体−薬剤結合体（ＡＤＣ）の化合物は、抗癌活性に対して有用性を有するものを含む。特に、化合物は、ＰＢＤの薬剤部分、すなわち毒素に結合、すなわちリンカーによって共有結合した抗体を含む。薬剤が抗体に結合していない場合には、ＰＢＤ薬剤は、細胞毒性効果を有する。すなわち、ＰＢＤ薬剤部分の生物学的活性は、抗体への結合によって調節される。本発明の抗体−薬剤結合体（ＡＤＣ）は、腫瘍組織に細胞毒性剤の有効用量を選択的に送達し、それによって、より高い選択性、すなわちより低い有効用量が達成できる。

【0369】

したがって、一態様では、本発明は、治療に使用するためのここに記載される結合体化合物を提供する。

【0370】

さらなる態様では、増殖性疾患の治療に使用するためのここに記載した結合体化合物を提供する。本発明の第２の態様は、増殖性疾患を治療するための医薬の製造における結合体化合物の使用を提供する。

【0371】

当業者であれば、候補結合体が任意の特定の細胞型について増殖性状態を治療するかどうかを容易に決定することができる。例えば、特定の化合物により与えられる活性を評価するために簡便に使用することができるアッセイを、以下の実施例に記載する。

【0372】

用語「増殖性疾患」とは、試験管内であるか生体内であるかを問わず、腫瘍性成長又は過形成性成長といった、望ましくない過剰又は異常細胞の不必要な又は制御されない細胞増殖をいう。

【0373】

増殖性状態の例としては、限定されないが、良性、前悪性及び悪性の細胞増殖、例えば、新生物及び腫瘍（例えば、組織球、神経膠腫、星状細胞腫、骨腫）、癌（例えば、肺癌、小細胞、肺癌、消化器癌、大腸癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、肝臓癌、腎臓癌、膀胱癌、膵臓癌、脳癌、肉腫、骨肉腫、カポジ肉腫、黒色腫）、リンパ腫、白血病、乾癬、骨疾患、線維増殖性障害（例えば結合組織の）及びアテローム性動脈硬化症が挙げられるが、これらに限定されない。特に関心のある癌としては、白血病及び卵巣癌が挙げられるが、これらに限定されない。

【0374】

細胞の任意のタイプを処置することができ、例えば、肺、胃腸（例えば腸、結腸を含む）、乳房（乳腺）、卵巣、前立腺、肝臓（肝）、腎臓（腎）、膀胱、膵臓、脳、及び皮膚が挙げられるが、これらに限定されない。

【0375】

特に関心のある癌としては、乳癌、胃癌又は膀胱癌が挙げられるが、これらに限定されない。

【0376】

本発明の抗体−薬剤結合体（ＡＤＣ）を使用して、例えば腫瘍抗原の過剰発現によって特徴付けられる様々な疾患又は障害を治療することができると考えられる。代表的な状態又は過剰増殖性疾患としては、良性又は悪性腫瘍；白血病、血液悪性腫瘍及びリンパ性悪性腫瘍が挙げられる。その他のものとしては、神経細胞、グリア、星状細胞、視床下部、腺、マクロファージ、上皮、間質、胞胚腔、炎症、血管新生及び自己免疫疾患を含めて免疫学的なものが挙げられる。

【0377】

一般的に、治療される疾患又は障害は、癌などの過剰増殖性疾患である。ここで治療される癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病又はリンパ性悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。このような癌のより特定の例としては、扁平上皮細胞癌（例えば上皮扁平細胞癌）、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌及び肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸癌などの胃部癌又は胃癌、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌又は腎癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌並びに頭頸部癌が挙げられる。

【0378】

ADC化合物を治療に使用することができる自己免疫疾患としては、リウマチ性疾患（例えば、関節リウマチ、シェーグレン症候群、強皮症、SLE及びループス腎炎のような狼瘡、多発性筋炎/皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、抗リン脂質抗体症候群及び乾癬性関節炎など）、変形性関節症、自己免疫性胃腸及び肝臓障害（例えば、炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎及びクローン病）、自己免疫性胃炎及び悪性貧血、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎及びセリアック病など）、

【0379】

血液学的疾患（例えば、血小板減少性紫斑病、血栓性血小板減少性紫斑病、輸血後紫斑病及び自己免疫性溶血性貧血など）、アテローム性動脈硬化症、ブドウ膜炎、自己免疫性聴覚疾患（例えば、内耳疾患及び聴力低下など）、ベーチェット病、レイノー症候群、臓器移植及び自己免疫内分泌障害（例えば、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）などの糖尿病関連自己免疫疾患、アジソン病及び自己免疫性甲状腺疾患（例えばグレーブス病及び甲状腺炎）など）が挙げられる。より好ましいこのような疾患としては、例えば、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、ＡＮＣＡ関連血管炎、狼瘡、多発性硬化症、シェーグレン症候群、グレーブス病、ＩＤＤＭ、悪性貧血、甲状腺炎及び糸球体腎炎が挙げられる。

【0380】

治療方法
本発明の結合体は、治療方法に使用できる。また、提供されるのは、治療を必要とする被験体に、治療に有効な量の本発明の結合体化合物を投与することを含む治療方法である。「治療に有効な量」という用語とは、患者に対して利益を示すのに十分な量のことである。このような利益は少なくとも一つの症状の少なくとも改善であることができる。実際の投与量及び投与の割合と時間経過は、治療されるものの性質及び重症度に依存する。治療の処方、例えば、投与量の決定は、一般開業医及び他の医師の責任の範囲内である。

【0381】

本発明の化合物は、治療される状態に応じて同時に又は連続的に、単独で又は他の治療と組み合わせて投与できる。治療及び療法の例としては、化学療法（例えば化学療法剤などの薬物を含めた活性剤の投与）、手術及び放射線治療が挙げられるが、これらに限定されない。

【0382】

「化学療法剤」は、作用機構にかかわらず癌の治療に有用な化学化合物である。化学療法剤の部類としては、アルキル化剤、代謝拮抗剤、紡錘体毒植物アルカロイド、細胞毒性/抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、抗体、光増感剤及びキナーゼ阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。化学療法剤としては、「標的治療」及び従来の化学療法で使用される化合物が挙げられる。

【0383】

化学療法剤の例としては、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ Ｐｈａｒｍ．）、ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、サノフィ・アベンティス）、５−ＦＵ（フルオロウラシル、５−フルオロウラシル、ＣＡＳ番号５１−２１−８）、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）、リリー）、 ＰＤ−０３２５９０１（ＣＡＳ番号３９１２１０−１０−９、ファイザー）、シスプラチン（シスジアミン、ジクロロ白金（ＩＩ）、ＣＡＳ番号１５６６３−２７−１）、カルボプラチン（ＣＡＳ番号４１５７５−９４−４）、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、ブリストル・マイヤーズスクイブオンコロジー、米国ニュージャージー州プリンストン）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、ジェネンテック）、テモゾロミド（４−メチル−５−オキソ−２，３，４，６，８−ペンタアザビシクロ［４．３．０］ノナ−２，７，９−トリエン−９−カルボキサミド、ＣＡＳ番号８５６２２−９３−１、ＴＥＭＯＤＡＲ（登録商標）、ＴＥＭＯＤＡＬ（登録商標）、シェリング・プラウ）、タモキシフェン（（Ｚ）−２−［４−（１，２−ジフェニル−１−ブテニル）フェノキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン、ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）、ＩＳＴＵＢＡＬ（登録商標）、ＶＡＬＯＤＥＸ（登録商標 ）及びドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標））、Ａｋｔｉ−１／２、ＨＰＰＤ及びラパマイシンが挙げられる。

【0384】

化学療法剤のさらなる例としては、次のものが挙げられる：オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標）、サノフィ）、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍ．）、スーテント（ＳＵＮＩＴＩＮＩＢ（登録商標）、ＳＵ１１２４８、ファイザー）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）、ノバルティス）、メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、ノバルティス）、ＸＬ−５１８（ＭＥＫ阻害剤、エクセリクシス、ＷＯ２００７／０４４５１５）、ＡＲＲＹ−８８６（ＭＥＫ阻害剤、ＡＺＤ６２４４、アレイバイオファーマ、アストラゼネカ）、ＳＦ−１１２６（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｓｅｍａｆｏｒｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＥＺ−２３５（ＰＩ３Ｋ阻害剤、ノバルティス）、ＸＬ−１４７（ＰＩ３Ｋ阻害剤、エクセリクシス）、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４（ノバルティス）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）、アストラゼネカ）、ロイコボリン（フォリン酸）、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ社）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６、グラクソスミスクライン）、ロナファルニブ（ＳＡＲＡＳＡＲ（商標）、ＳＣＨ６６３３６、シェリング・プラウ）、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）、ＢＡＹ４３−９００６、バイエル研究所）、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）、アストラゼネカ）、イリノテカン（ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）、ＣＰＴ−１１、ファイザー）、チピファルニブ（ＺＡＲＮＥＳＴＲＡ（商標）、ジョンソン・エンド・ジョンソン）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）（クレモフォアを含まない）、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ、米国イリノイ州Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ）、バンデタニブ（ｒＩＮＮ、ＺＤ６４７４、ＺＡＣＴＩＭＡR、アストラゼネカ）、クロラムブシル、ＡＧ１４７８、ＡＧ１５７１（ＳＵ５２７１；Ｓｕｇｅｎ）、テムシロリムス（ＴＯＲＩＳＥＬ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）、パゾパニブ（グラクソスミスクライン）、カンフォスファミド（ＴＥＬＣＹＴＡ（登録商標）、Ｔｅｌｉｋ）、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）、ＮＥＯＳＡＲ（登録商標））；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンなどのスルホン酸アルキル；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ及びウレドーパなどのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド及びトリメチロメラミンを含むエチレンイミン及びメチルアメラミン；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログトポテカンを含む）;ブリオスタチン;カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログのＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチンなどのニトロソ尿素；エンジイン抗生物質などの抗生物質（例えばカリケアマイシン、カリケアマイシンｇａｍｍａ１Ｉ、カリケアマイシンｏｍｅｇａＩ１（Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．（１９９４）３３：１８３−１８６）；ダイネミシン、ダイネミシンＡ；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラマイシン；並びにネオカルチノスタチン発色団及び関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、ミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、ネモルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン類、ミコフェノール酸、ナガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキセート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの抗代謝産物；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキセートなどの葉酸アナログ；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリンアナログ；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジンアナログ；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎；フォリン酸などの葉酸補充液；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デホファミン；デメコルチン；ジアジクオン；エルホルニチン；エリプチニウムアセテート；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシン及びアンサマイトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモル；ニトラエリン；ペントスタチン； フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリニン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（米国オレゴン州ユージーンのＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ−２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン； ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；シスプラチン及びカルボプラチンなどの白金アナログ；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標）、ロシュ）。イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸及び誘導体。

【0385】

また、「化学療法剤」の定義に含まれるのは、次のものである：（ｉ）例えばタモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）；クエン酸タモキシフェン）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン及びＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）（トレミフィンシトレート）を含めて抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）などの腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害するように作用する抗ホルモン剤；（ｉｉ）例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）（酢酸メゲストロール）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）（エキセメスタン；ファイザー）、ホルメスタニー、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）（ボロゾール）、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）（レトロゾール；ノバルティス）及びＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）（アナストロゾール；アストラゼネカ）などの副腎でのエストロゲン産生を調節する、酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤；（ｉｉｉ）フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド及びゴセレリンなどの抗アンドロゲン；並びにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；（ｉｖ）ＭＥＫ阻害剤などのプロテインキナーゼ阻害剤（ＷＯ２００７／０４４５１５）；（ｖ）脂質キナーゼ阻害剤；（ｖｉ）アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えばオブリメルセン（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標）、ジェンタ社）などＰＫＣ−α、Ｒａｆ及びＨ−ＲＡＳ；（Ｖｉｉ）ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標））及びＨＥＲ２発現阻害剤などのリボザイム；（ｖｉｉｉ）遺伝子治療ワクチンなどのワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）及びＶＡＸＩＤ（登録商標）；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）などのトポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；（ｉｘ）ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社）などの抗血管新生剤；並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸及び誘導体。

【0386】

また、「化学療法剤」の定義に含まれるのは、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、ジェネンテック社）などの治療用抗体；セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）、Ｉｍｃｌｏｎｅ社）；パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）、アムジェン）、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、ジェネンテック／バイオジェン・アイデック）、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（登録商標）、ＧＳＫ）、ペルツズマブ（ＰＥＲＪＥＴＡＴＭ、ＯＭＮＩＴＡＲＧ（商標）、２Ｃ４、ジェネンテック社）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、ジェネンテック社）、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ、Ｃｏｒｉｘｉａ）並びに抗体薬剤結合体、ゲムツズマブオゾガマイシン（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標）、ワイス社）である。

【0387】

本発明の結合体と組み合わせた化学療法剤としての治療可能性を有するヒト化モノクローナル抗体としては、次のものが挙げられる：アレムツズマブ、アポリズマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、バピネオズマブ、ベバシズマブ、ビバツズマブメルタンシン、カンツズマブメルタンシン、セデリズマブ、セルトリズマブペゴル、シドフシツズマブ、シドツズマブ、ダクリズマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、フェルビズマブ、ホントリズマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、オゾガマイシンイノツズマブ、イピリムマブ、ラベツズマブ、リンツズマブ、マツズマブ、メポリズマブ、モタビズマブ、モトビズマブ、ナタリズマブ、ニモツズマブ、ノロビズマブ、ヌマビズマブ、オクレリズマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パスコリズマブ、ペシフシツズマブ、ペクツズマブ、ペルツズマブ、ペキセリズマブ、ラリビズマブ、ラニビズマブ、レスリビズマブ、レスリズマブ、レシビズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、シブロツズマブ、シプリズマブ、ソンツズマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、テフィバズマブ、トシリズマブ、トラリズマブ、トラスツズマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツクシツズマブ、ウマビズマブ、ウルトキサズマブ及びビシリズマブ。

【0388】

本発明に係る医薬組成物及び本発明に従って使用するための医薬組成物は、活性成分、すなわち結合体化合物に加えて、薬学的に許容される賦形剤、担体、緩衝剤、安定剤又は当業者に周知の他の材料を含むことができる。このような材料は、非毒性であるべきであり、活性成分の有効性を妨害してはならない。担体その他の材料の正確な性質は、経口又は注射、例えば、皮膚、皮下又は静脈内であることができる投与経路に依存する。

【0389】

経口投与用の医薬組成物は、錠剤、カプセル、粉末又は液体形態とすることができる。錠剤は、固体キャリア又はアジュバントを含むことができる。液体医薬組成物は、一般に、水、石油、動物油又は植物油、鉱油又は合成油などの液体キャリアを含む。生理食塩溶液、デキストロース又は他の糖類溶液又はエチレングリコール、プロピレングリコール若しくはポリエチレングリコールなどのグリコールを含むことができる。カプセルは、ゼラチンなどの固体キャリアを含むことができる。

【0390】

静脈内、皮膚若しくは皮下注射又は罹患部位での注射について、活性成分は、発熱物質を含まず、かつ、適切なｐＨ、等張性及び安定性を有する非経口的に許容できる水溶液の形態である。当業者は、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、乳酸リンゲル注射液などの等張性ビヒクル用いて適切な溶液をうまく調製することができる。必要に応じて、保存剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤及び／又は他の添加剤を含むことができる。

【0391】

処方物
結合体化合物を単独で使用（例えば、投与）することが可能であるが、組成物又は諸方物として与えることが好ましい場合が多い。

【0392】

一実施形態では、組成物は、ここで記載される結合体化合物と、薬学的に許容されるキャリア、希釈剤又は賦形剤とを含む医薬組成物（例えば、諸方物、製剤、薬剤）である。

【0393】

一実施形態では、組成物は、ここで説明する少なくとも1種の結合体化合物と、当業者に知られている1種以上の他の薬学的に許容される成分、例えば、限定されないが、薬学的に許容されるキャリア、希釈剤、賦形剤、アジュバント、充填剤、緩衝剤、防腐剤、抗酸化剤、潤滑剤、安定剤、可溶化剤、界面活性剤（例えば、湿潤剤）、マスキング剤、着色剤、香味剤及び甘味剤とを含む医薬組成物である。

【0394】

一実施形態では、組成物は、他の活性剤、例えば他の治療薬又は予防薬をさらに含む。

【0395】

好適なキャリア、希釈剤、賦形剤などは、標準的な薬学の教科書に見出すことができる。例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ、第２版（Ｍ．Ａｓｈ及びＩ．Ａｓｈ編），２００１（Ｓｙｎａｐｓｅ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｉｎｃ．米国ニューヨークＥｎｄｉｃｏｔｔ）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００；及びＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，第２版，１９９４参照。

【0396】

本発明の別の態様は、ここで定義される少なくとも１種の［¹¹Ｃ］放射性同位元素標識結合体又は結合体様化合物と、当業者に周知の１種以上の他の薬学的に許容される成分、例えば、キャリア、希釈剤、賦形剤などとを混合させることを含む医薬組成物の製造方法に関する。別個の単位として処方する場合（例えば、錠剤など）には、各単位は、活性化合物の所定量（投与量）を含む。

【0397】

ここで使用するときに、用語「薬学的に許容される」とは、音響医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応又は他の問題若しくは合併症なしに、当該被験者（例えば、ヒト）の組織との接触における使用に好適で、合理的な利益／リスク比に見合った化合物、成分、材料、組成物、剤形などをいう。それぞれのキャリア、希釈剤、賦形剤などは、処方物の他の成分と適合するという意味で「許容可能」でなければならない。

【0398】

処方物は、薬学の分野で周知の任意の方法によって調製できる。このような方法は、活性化合物と、１種以上の補助成分を構成するキャリアとを一緒にする工程を含む。一般に、処方物は、活性化合物とキャリア（例えば、液体キャリア、微粉固体キャリアなど）とを均一かつ密接に混合し、そして必要に応じて、その後、生成物を成形することによって調製される。

【0399】

製剤は、速又は遅放性；即時、遅延、時限又は持続放出性；又はそれらの組み合わせを与えるように調製できる。

【0400】

非経口投与（例えば、注射による）に好適な処方物としては、水性又は非水性の等張性で発熱物質を含まない滅菌液体（例えば、溶液、懸濁液）が挙げられ、そこに、活性成分が溶解、懸濁又はそうでなければ準備されている（例えば、リポソーム又は他の微粒子で）。このような液体は、抗酸化剤、緩衝剤、保存剤、安定剤、静菌剤、懸濁化剤、増粘剤及び処方物を目的のレシピエントの血液（又は他の関連する体液）と等張にする溶質などの薬学的に許容される他の成分をさらに含有することができる。賦形剤の例としては、例えば、水、アルコール、ポリオール、グリセロール、植物油などが挙げられる。このような処方物に使用するのに好適な等張性キャリアの例としては、塩化ナトリウム注射液、リンゲル液又は乳酸加リンゲル注射液が挙げられる。典型的には、液体中における活性成分の濃度は、約１ ｎｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、例えば約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１μｇ／ｍｌである。処方物は、単位用量又は複数用量の密封容器、例えばアンプル及びバイアルで提供でき、そして使用直前に無菌液体キャリア、例えば注射用の水の添加しか必要とされないフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存できる。即席注射溶液及び懸濁液は、滅菌粉末、顆粒及び錠剤から調製できる。

【0401】

用量
結合体化合物及び結合体化合物を含む組成物の適切な投与量は、患者によって変更できることが当業者であれば分かるであろう。最適投与量の決定は、一般に、任意のリスク又は有害な副作用に対して治療効果のレベルのバランスをとることを伴う。選択される用量レベルは、特定の化合物の活性、投与経路、投与時間、化合物の排泄速度、治療期間、併用される他の薬物、化合物及び／又は材料、状態の重症度、並びに患者の種類、性別、年齢、体重、状態、一般的健康状態及び病歴（これらに限定されない）を含め、様々な要因に依存するであろう。化合物の量及び投与経路は、最終的には医師、獣医師、又は臨床医の判断になるが、一般に、用量は、重大な有害又は有毒な副作用を引き起こすことなく所望の効果を実現する作用部位での局所濃度を達成するように選択される。

【0402】

投与は、治療の過程を通して連続的又は断続的に（例えば適切な間隔での分割用量で）単回投与で実施できる。投与の最も有効な手段及び用量を決定する方法は、当業者には周知であり、かつ、治療のために使用される処方物、治療の目的、治療される標的細胞及び治療される対象により変わってくる。単回又は複数回投与は、治療する医師、獣医師、又は臨床医によって選択される用量レベル及びパターンで実施できる。

【0403】

一般に、活性化合物の好適な用量は、１日当たり被験体の体重１キログラム当たり約約１００ｎｇ〜２５ｍｇ（より典型的には約１μｇ〜約１０ｍｇ）の範囲である。活性化合物が塩、エステル、アミド、プロドラッグ等である場合には、投与量は親化合物に基づいて計算されるため、使用される実際の重量は比例して増加する。

【0404】

一実施形態では、活性化合物は、以下の投与計画に従ってヒト患者に投与される：約１００ｍｇを１日３回。

【0405】

一実施形態では、活性化合物は、以下の投与計画に従ってヒト患者に投与される：約１５０ｍｇを１日２回。

【0406】

一実施形態では、活性化合物は、以下の投与計画に従ってヒト患者に投与される：約２００ｍｇを１日２回。

【0407】

しかし、一実施形態では、結合体化合物は、以下の投与計画に従ってヒト患者に投与される：約５０又は約７５ｍｇを１位日３又は４回。

【0408】

一実施形態では、結合体化合物は、以下の投与計画に従ってヒト患者に投与される：約１００又は約１２５ｍｇを１日２回。

【0409】

上記の投与量は、結合体（ＰＢＤ部分及び抗体へのリンカーを含む）又は与えられるＰＢＤ化合物の有効量、例えばリンカーの切断後に放出可能な化合物の量に適用できる。

【0410】

疾患の予防又は治療について、本発明のＡＤＣの適切な投薬量は、上で定義されるように、治療される疾患のタイプ、疾患の重症度及び経過、その分子が予防又は治療目的で投与されるかどうか、以前の治療、患者の病歴及び抗体に対する応答並びに主治医の裁量に依存する。この分子は、患者に一度に又は一連の治療にわたって好適に投与される。疾患のタイプ及び重症度に応じて、１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）の分子は、例えば、１回以上の別個の投与によるか連続注射によるかどうかを問わず、患者への投与のための最初の候補投与量である。

【0411】

典型的な一日用量は、上記の要因に応じて約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲の場合がある。患者に投与されるＡＤＣの例示的な用量は、患者の体重の約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲にある。数日間以上にわたる反復投与については、状態に応じて、疾患症状の所望の抑制が生じるまで治療を維持する。典型的な投薬計画は、約４ｍｇ／ｋｇの初期負荷投与量、その後ＡＤＣの毎週、２週間又は３週間の追加投与量を投与する過程を含む。他の投薬計画も有用な場合がある。この治療の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易に監視される。

【0412】

治療
症状を治療する文脈においてここで使用される用語「治療」とは、一般に、ヒト又は動物（例えば、獣医学用途における）かどうかを問わず、いくつかの所望の治療効果、例えば状態の進行の阻害が達成される治療及び治療をいい、かつ、進行速度の低下、進行速度の停止、症状の退縮、状態の寛解及び状態の治癒を含む。また、予防手段としての治療（すなわち、予防、防止）も含まれる。

【0413】

ここで使用するときに、用語「治療上有効な量」とは、所望の治療計画に従って投与された場合にいくつかの所望の治療効果を生じさせるのに有効で、合理的な利益／リスク比に見合う活性化合物の量又は活性化合物を含む材料、組成物若しくは投薬の量をいう。

【0414】

同様に、用語「予防上有効な量」とは、所望の治療計画に従って投与された場合にいくつかの所望の予防効果を生じさせるのに有効で、合理的な利益／リスク比に見合う活性化合物の量又は活性化合物を含む材料、組成物若しくは投薬の量をいう。

【0415】

薬剤結合体の調製
抗体薬剤結合体は、抗体の求核基と薬剤−リンカー試薬との反応を含め、当業者に知られている有機化学反応、条件及び試薬を使用していくつかの経路によって調製できる。この方法を使用して本発明の抗体−薬剤結合体を調製することができる。

【0416】

抗体上の求核基としては、側鎖チオール基、例えばシステインが挙げられるが、これらに限定されない。チオール基は求核性であり、本発明のもののように反応してリンカー部分上の求電子基と共有結合を形成することができる。所定の抗体は、還元性鎖間ジスルフィド、すなわちシステイン架橋を有する。抗体は、ＤＴＴ（クリーランド試薬、ジチオトレイトール）又はＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩；Ｇｅｔｚ外（１９９９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．第２７３巻：７３−８０；Ｓｏｌｔｅｃ Ｖｅｎｔｕｒｅｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）などの還元剤での処理によって、リンカー試薬との結合について反応になることができる。このようにして、それぞれのシステインジスルフィド架橋は、理論的には、２個の反応性チオール求核基を形成することになる。付加的な求核基を、アミンをチオールに転換させるリシンと２−イミノチオラン（トラウト試薬）との反応により抗体に導入することができる。

【0417】

被験体／患者
被験体／患者は、動物、哺乳動物、胎盤哺乳類、有袋類（例えば、カンガルー、ウォンバット）、単孔類（例えば、カモノハシカモノハシ）、げっ歯類（例えば、モルモット、ハムスター、ラット、マウス）、ネズミ科（例えば、マウス）、ウサギ目（例えば、ウサギ）、鳥類（例えば、鳥）、イヌ科（例えば、犬）、ネコ科（例えば、猫）、ウマ科（例えば、馬）、ブタ（例えば、豚）、ヒツジ（例えば、羊）、ウシ属（例えば、雌牛）、霊長類、サル（例えば、猿又は類人猿）、サル（例えば、マーモセット、ヒヒ）、類人猿（例えば、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル）又はヒトであることができる。

【0418】

また、被験体／患者は、その発達形態のうち任意のもの、例えば胎児であることができる。好ましい一実施形態では、被験体／患者はヒトである。

【0419】

追加の優先
次の優先は、上記本発明の全ての態様に適用される場合もあり又は単一の態様に関連する場合もある。これらの優先事項を任意の組み合わせで互いに組み合わせることができる。

【0420】

いくつかの実施形態では、Ｒ^6’、Ｒ^7’、Ｒ^9’及びＹ’は、好ましくは、それぞれＲ⁶、Ｒ⁷、Ｒ⁹及びＹと同一である。

【0421】

二量体結合
Ｙ及びＹ’は、好ましくはＯである。

【0422】

Ｒ”は好ましくは置換基を有しないＣ_3〜7アルキレン基である。より好ましくは、Ｒ”は、Ｃ₃、Ｃ₅、又はＣ₇アルキレンである。最も好ましくは、Ｒ”はＣ₃又はＣ₅アルキレンである。

【0423】

Ｒ⁶〜Ｒ⁹
Ｒ⁹は、好ましくはＨである。

【0424】

Ｒ⁶は、好ましくは、Ｈ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＮＨ₂、ニトロ及びハロから選択され、より好ましくは、Ｈ又はハロであり、最も好ましくはＨである。

【0425】

Ｒ⁷は、好ましくはＨ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ₂、ＮＨＲ、ＮＲＲ’及びハロから選択され、より好ましくは独立して、Ｈ、ＯＨ及びＯＲから選択され、ここで、Ｒは、好ましくは、置換されていてよいＣ_1〜7アルキル、Ｃ_3〜10ヘテロシクリル及びＣ_5〜10アリール基から選択される。Ｒは、より好ましくは、置換されていても置換されていなくてもよいＣ_1〜4アルキル基であることができる。関心のある置換基は、Ｃ_5〜6アリール基（例えばフェニル）である。７位での特に好ましい置換基はＯＭｅ及びＯＣＨ₂Ｐｈである。特に関心のある他の置換基は、ジメチルアミノ（すなわち、−ＮＭｅ₂）；−（ＯＣ₂Ｈ₄）_qＯＭｅ（ここで、ｑは０〜２である。）；モルホリノ、ピペリジニル及びＮ−メチル−ピペラジニルを含めた窒素含有Ｃ₆ヘテロシクリルである。

【0426】

これらの優先は、それぞれ、Ｒ^9’、Ｒ^6’及びＲ^7’に適用される。

【0427】

Ｒ¹²
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在する場合には、Ｒ¹²は次のものから選択される：
（ａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、Ｃ_1〜7アルキル、Ｃ_3〜7ヘテロシクリル及びビスオキシ−Ｃ_1〜3アルキレンよりなる群から選択される１個以上の置換基により置換されていてよいＣ_5〜10アリール基；
（ｂ）Ｃ_1〜5飽和脂肪族アルキル；
（ｃ）Ｃ_3〜6飽和シクロアルキル；
（ｄ）

【化100】

（ここで、Ｒ²¹、Ｒ²²及びＲ²³のそれぞれは、独立して、Ｈ、Ｃ_1〜3飽和アルキル、Ｃ_2〜3アルケニル、Ｃ_2〜3アルキニル及びシクロプロピルから選択され、ここで、Ｒ¹²基における炭素原子の総数は５以下である）；
（ｅ）

【化101】

（ここで、Ｒ^25a及びＲ^25bの一方はＨであり、他方はフェニル（該フェニルは、ハロ、メチル、メトキシで置換されていてよい）、ピリジル及びチオフェニルから選択される）；及び
（ｆ）

【化102】

（ここで、Ｒ²⁴は、Ｈ、Ｃ_1〜3飽和アルキル、Ｃ_2〜3アルケニル、Ｃ_2〜3アルキニル、シクロプロピル、フェニル（このフェニルは、ハロ、メチル、メトキシから選択される基により置換されていてよい）、ピリジル及びチオフェニルから選択される）。

【0428】

Ｒ¹²がＣ_5〜10のアリール基である場合には、このものはＣ_5〜7アリール基であることができる。Ｃ_5〜7アリール基は、フェニル基又はＣ_5〜7ヘテロアリール基、例えば、フラニル、チオフェニル及びピリジルであることができる。いくつかの実施形態では、Ｒ¹²は、好ましくはフェニルである。他の実施形態では、Ｒ¹²は、好ましくチオフェニル、例えば、チオフェン−２−イル及びチオフェン−３−イルである。

【0429】

Ｒ¹²がＣ_5〜10アリール基の場合には、このものは、Ｃ_8〜10アリール、例えば、キノリニル又はイソキノリニル基であることができる。キノリニル又はイソキノリニル基は、任意の利用可能な環位置を介してＰＢＤコアに結合できる。例えば、キノリニルは、キノリン−２−イル、キノリン−３−イル、キノリン−４−イル、キノリン−５−イル、キノリン−６−イル、キノリン−７−イル及びキノリン−８−イルであることができる。これらのうち、キノリン−３−イル及びキノリン−６−イルが好ましい場合がある。イソキノリニルは、イソキノリン−１−イル、イソキノリン−３−イル、イソキノリン−４−イル、イソキノリン−５−イル、イソキノリン−６−イル、イソキノリン−７−イル及びイソキノリン−８−イルであることができる。これらのなかでは、イソキノリン−３−イル及びイソキノリン−６−イルが好ましい場合がある。

【0430】

Ｒ¹²がＣ_5〜10のアリール基である場合には、このものは任意の数の置換基を有することができる。このものは、好ましくは１〜３個の置換基を保持し、１〜２個がより好ましく、単独で置換された基が最も好ましい。置換基は任意の位置であることができる。

【0431】

Ｒ¹²がＣ_5〜7アリール基である場合には、単一の置換基は、好ましくは、化合物の残部への結合に隣接していない環原子上にある、すなわち、このものは、好ましくは、化合物の残部への結合に対してβ又はγである。したがって、Ｃ_5〜7アリール基がフェニルの場合には、その置換基は、好ましくはメタ又はパラ位にあり、より好ましくはパラ位にある。

【0432】

Ｒ¹²がＣ_8〜10アリール基、例えばキノリニル又はイソキノリニルである場合には、このものは、キノリン又はイソキノリン環の任意の位置に任意の数の置換基を保持できる。いくつかの実施形態では、このものは、１個、２個又は３個の置換基を保持し、これらのものは、近位及び遠位の環又は両方（１個以上の置換基の場合）にあることができる。

【0433】

Ｒ¹²がＣ_5〜10アリール基である場合のＲ¹²置換基
Ｒ¹²がＣ_5〜10アリール基であるときのＲ¹²の置換基がハロである場合には、これは好ましくはＦ又はＣｌであり、より好ましくはＦである。

【0434】

Ｒ¹²がＣ_5〜10のアリール基であるＲ¹²上の置換基がエーテルである場合には、このものは、いくつかの実施形態では、アルコキシ基、例えば、Ｃ_1〜7アルコキシ基（例えばメトキシ、エトキシ）であることができ、又はいくつかの実施形態では、Ｃ_5〜7アリールオキシ基（例えばフェノキシ、ピリジルオキシ、フラニルオキシ）であることができる。アルコキシ基は、例えばアミノ基（例えばジメチルアミノ）によってそれ自体さらに置換されていてもよい。

【0435】

Ｒ¹²がＣ_5〜10アリール基である場合のＲ¹²上の置換基がＣ_1〜7アルキルである場合には、このものは、好ましくはＣ_1〜4アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル）であることができる。

【0436】

Ｒ¹²がＣ_5〜10アリール基であるＲ¹²上の置換基がＣ_3〜7ヘテロシクリルである場合には、このものは、いくつかの実施形態ではＣ₆窒素含有ヘテロシクリル基、例えば、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペリジニル、ピペラジニルであることができる。これらの基は、窒素原子を介して、ＰＢＤ部分の残部に結合できる。これらの基は、例えばＣ_1〜4アルキル基によってさらに置換されていてもよい。Ｃ₆窒素含有ヘテロシクリル基がピペラジニルである場合には、該さらなる置換基は、第２の窒素環原子上にあることができる。

【0437】

Ｒ¹²がＣ_5〜10アリール基である場合のＲ¹²上の置換基がビスオキシＣ_1〜3アルキレンである場合には、このものは、好ましく、ビスオキシメチレン又はビスオキシエチレンである。

【0438】

Ｒ¹²がＣ_5〜10アリール基であるＲ¹²上の置換基がエステルである場合には、このものは、好ましくはメチルエステル又はエチルエステルである。

【0439】

Ｒ¹²がＣ_5〜10アリール基であるときの特に好ましい置換基としては、メトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビスオキシメチレン、メチルピペラジニル、モルホリノ及びメチルチオフェニルが挙げられる。Ｒ¹²についての特に好ましい別の置換基はジメチルアミノプロピル及びカルボキシである。

【0440】

Ｒ¹²がＣ_5〜10アリール基であるときの特に好ましい置換Ｒ¹²基としては、４−メトキシフェニル、３−メトキシフェニル、４−エトキシフェニル、３−エトキシフェニル、４−フルオロフェニル、４−クロロフェニル、３，４−ビスオキシメチレンフェニル、４−メチルチオフェニル、４−シアノフェニル、４−フェノキシフェニル、キノリン−３−イル及びキノリン−６−イル、イソキノリン−３−イル及びイソキノリン−６−イル、２−チエニル、２−フラニル、メトキシナフチル及びナフチルが挙げられるが、これらに限定されない。別の可能な置換基Ｒ¹²は、４−ニトロフェニルである。特に興味深いＲ¹²基は、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル及び３，４−ビスオキシメチレンフェニルが挙げられる。

【0441】

Ｒ¹²がＣ_1〜5飽和脂肪族アルキルである場合には、このものは、メチル、エチル、プロピル、ブチル又はペンチルであることができる。いくつかの実施形態では、このものは、メチル、エチル又はプロピル（ｎ−ペンチル又はイソプロピル）であることができる。これらの実施形態のいくつかでは、このものはメチルであることができる。他の実施形態では、このものは、直鎖状又は分岐状であることができるブチル又はペンチルであることができる。

【0442】

Ｒ¹²がＣ_3〜6飽和シクロアルキルである場合には、これは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル又はシクロヘキシルであることができる。いくつかの実施形態では、これはシクロプロピルであることができる。

【0443】

Ｒ¹²が

【化103】

の場合には、Ｒ²¹、Ｒ²²及びＲ²³のそれぞれは、独立して、Ｈ、Ｃ_1〜3飽和アルキル、Ｃ_2〜3アルケニル、Ｃ_2〜3アルキニル及びシクロプロピルから選択され、ここで、Ｒ¹²基中における炭素原子の総数は５以下である。いくつかの実施形態では、Ｒ¹²基中の炭素原子の総数は４以下又３以下である。

【0444】

いくつかの実施形態では、Ｒ²¹、Ｒ²²及びＲ²³の一つはＨであり、他の２つの基は、Ｈ、Ｃ_1〜3飽和アルキル、Ｃ_2〜3アルケニル、Ｃ_2〜3アルキニル及びシクロプロピルから選択される。

【0445】

他の実施形態では、Ｒ²¹、Ｒ²²及びＲ²³の二つはＨであり、他の基はＨ、Ｃ_1〜3飽和アルキル、Ｃ_2〜3アルケニル、Ｃ_2〜3アルキニル及びシクロプロピルから選択される。

【0446】

いくつかの実施形態では、Ｈではない基は、メチル及びエチルから選択される。これらの実施形態のいくつかでは、Ｈではない基はメチルである。

【0447】

いくつかの実施形態では、Ｒ²¹はＨである。

【0448】

いくつかの実施形態では、Ｒ²²はＨである。

【0449】

いくつかの実施形態では、Ｒ²³はＨである。

【0450】

いくつかの実施形態では、Ｒ²¹及びＲ²²はＨである。

【0451】

いくつかの実施形態では、Ｒ²¹及びＲ²³はＨである。

【0452】

いくつかの実施形態では、Ｒ²²及びＲ²³はＨである。

【0453】

特に関心のあるＲ¹²基は次のものである：

【化104】

【0454】

Ｒ¹²が

【化105】

の場合には、Ｒ^25a及びＲ^25bの一方はＨであり、他方は、ハロ、メチル、メトキシから選択される基により置換されていてよいフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｈでない基は、置換されていてよいフェニルである。任意のフェニル置換基がハロである場合には、これは好ましくはフルオロである。ある種の実施形態では、フェニル基は非置換である。

【0455】

Ｒ¹²が

【化106】

の場合には、Ｒ²⁴は、Ｈ；Ｃ_1〜3飽和アルキル；Ｃ_2〜3アルケニル；Ｃ_2〜3アルキニル；シクロプロピル；ハロ、メチル、メトキシから選択される基で置換されていてよいフェニル；ピリジル及びチオフェニルから選択される。任意のフェニル置換基がハロである場合には、これは好ましくはフルオロである。ある種の実施形態では、フェニル基は、非置換である。
いくつかの実施形態では、Ｒ²⁴はＨ、メチル、エチル、エテニル及びエチニルから選択される。これらの実施形態のいくつかでは、Ｒ²⁴はＨ及びメチルから選択される。

【0456】

Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在する場合には、Ｒ¹²は

【化107】

であり、ここで、Ｒ^26a及びＲ^26bは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃ_1〜4飽和アルキル及びＣ_2〜3アルケニルから選択され、該アルキル及びアルケニル基は、Ｃ_1〜4アルキルアミド及びＣ_1〜4アルキルエステルから選択される基で置換されていてよく、又は、Ｒ^26a及びＲ^26bの一方がＨである場合には、他方は、ニトリル及びＣ_1〜4アルキルエステルから選択され；他のものはニトリル及びＣ_1〜4アルキルエステルから選択される。

【0457】

いくつかの実施形態では、Ｒ^26a及びＲ^26bは両方ともＨであることが好ましい。

【0458】

他の実施形態では、Ｒ^26a及びＲ^26bは両方ともメチルであることが好ましい。

【0459】

さらなる実施形態では、Ｒ^26a及びＲ^26bの一方はＨであり、他方はＣ_1〜4飽和アルキル、Ｃ_2〜3アルケニルから選択されることが好ましく、該アルキル及びアルケニル基は置換されていてよい。これらのさらなる実施形態では、Ｈでない基は、メチル及びエチルから選択されることがさらに好ましい場合がある。

【0460】

Ｒ²
いくつかの実施形態では、Ｒ²²は、式ＩＩａのものである。

【0461】

このものが式ＩＩａであるときのＲ²²におけるＡは、フェニル基又はＣ_5〜7ヘテロアリール基、例えばフラニル、チオフェニル及びピリジルとすることができる。いくつかの実施形態では、Ａは好ましくはフェニルである。

【0462】

Ｑ²−Ｘは、Ｃ_5〜7アリール基の利用可能な環原子のいずれか上にあることができるが、好ましくは化合物の残部への結合に隣接しない環原子上にあることができる、すなわち、好ましくは化合物の残部への結合に対してβ又はγである。したがって、Ｃ_5〜7アリール基（Ａ）がフェニルである場合には、置換基（Ｑ²−Ｘ）は、メタ位又はパラ位にあることが好ましく、より好ましくはパラ位にある。

【0463】

いくつかの実施形態では、Ｑ¹は単結合である。これらの実施形態では、Ｑ²は単結合及び−Ｚ−（ＣＨ₂）_n−から選択され、ここで、Ｚは単結合、Ｏ、Ｓ及びＮＨから選択され、ｎは１〜３である。これらの実施形態のいくつかでは、Ｑ²は単結合である。他の実施形態では、Ｑ²は−Ｚ−（ＣＨ₂）_n−である。これらの実施形態では、ＺはＯ又はＳであることができ、ｎは１であることができ、又はｎは２であることができる。これらの実施形態の他のものでは、Ｚは単結合であることができ、ｎは１であることができる。

【0464】

他の実施形態において、Ｑ¹は−ＣＨ＝ＣＨ−である。

【0465】

他の実施形態では、Ｒ²²は式ＩＩｂのものである。これらの実施形態では、Ｒ^C1、Ｒ^C2及びＲ^C3は、独立してＨ及び非置換Ｃ_1〜2アルキルから選択される。いくつかの好ましい実施形態では、Ｒ^C1、Ｒ^C2及びＲ^C3は全てＨである。他の実施形態では、Ｒ^C1、Ｒ^C2及びＲ^C3は全てメチルである。特定の実施形態では、Ｒ^C1、Ｒ^C2及びＲ^C3は、独立してＨ及びメチルから選択される。

【0466】

Ｘは、次のものよりなる群から選択される基である：
Ｏ−Ｒ^L2’、Ｓ−Ｒ^L2’、ＣＯ₂−Ｒ^L2’、ＣＯ−Ｒ^L2’、ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ^L2’、ＮＨＮＨ−Ｒ^L2’、ＣＯＮＨＮＨ−Ｒ^L2’、

【化108】

【化109】

ＮＲ^NＲ^L2’、
ここで、Ｒ^Nは、Ｈ及びＣ_1〜4アルキルよりなる群から選択される。Ｘは、好ましくはＯＨ、ＳＨ、ＣＯ₂Ｈ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ又はＮＨＲＮであることができ、より好ましくはＯ−Ｒ^L2’、Ｓ−Ｒ^L2’、ＣＯ₂−Ｒ^L2’、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ^L2’又はＮＨ−Ｒ^L2’であることができる。特に好ましい基としては、Ｏ−Ｒ^L2’、Ｓ−Ｒ^L2’及びＮＨ−Ｒ^L2’が挙げられ、ＮＨ−Ｒ^L2’が最も好ましい基である。

【0467】

いくつかの実施形態では、Ｒ²²は式ＩＩｃのものである。これらの実施形態では、ＱはＮＲ^N−Ｒ^L2’であることが好ましい。他の実施形態では、ＱはＯ−Ｒ^L2’である。さらなる実施形態では、ＱはＳ−Ｒ^L2’である。Ｒ^Nは、好ましくはＨ及びメチルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ^NはＨである。他の実施形態では、Ｒ^Nはメチルである。

【0468】

いくつかの実施形態では、Ｒ²²は−Ａ−ＣＨ₂−Ｘ及び−Ａ−Ｘとすることができる。これらの実施形態では、ＸはＯ−Ｒ^L2’、Ｓ−Ｒ^L2’、ＣＯ₂−Ｒ^L2’、ＣＯ−Ｒ^L2’及びＮＨ−Ｒ^L2’であることができる。特に好ましい実施形態では、ＸがＮＨ−Ｒ^L2’とすることができる。

【0469】

Ｒ¹⁰、Ｒ¹¹
いくつかの実施形態では、Ｒ¹⁰及びＲ¹¹は、一緒になって、それらが結合している窒素と炭素原子と間に二重結合を形成する。

【0470】

いくつかの実施形態では、Ｒ¹¹はＯＨである。

【0471】

いくつかの実施形態では、Ｒ¹¹はＯＭｅである。

【0472】

いくつかの実施形態では、Ｒ¹¹はＳＯ_zＭであり、ここで、ｚは２又は３であり、Ｍは一価の薬学的に許容される陽イオンである。

【0473】

Ｒ^11a
いくつかの実施形態では、Ｒ^11aはＯＨである。

【0474】

いくつかの実施形態では、Ｒ^11aはＯＭｅである。

【0475】

いくつかの実施形態では、Ｒ^11aはＳＯ_zＭであり、ここで、ｚは２又は３であり、Ｍは一価の薬学的に許容される陽イオンである。

【0476】

Ｒ²⁰、Ｒ²¹
いくつかの実施形態では、Ｒ²⁰及びＲ²¹は、一緒になって、それらが結合している窒素と炭素原子と間に二重結合を形成する。

【0477】

いくつかの実施形態では、Ｒ²⁰はＨである。

【0478】

いくつかの実施形態では、Ｒ²⁰はＲ^Cである。

【0479】

いくつかの実施形態では、Ｒ²¹はＯＨである。

【0480】

いくつかの実施形態では、Ｒ²¹はＯＭｅである。

【0481】

いくつかの実施形態では、Ｒ²¹はＳＯ_zＭであり、ここで、ｚは２又は３であり、Ｍは一価の薬学的に許容される陽イオンである。

【0482】

Ｒ³⁰、Ｒ³¹
いくつかの実施形態では、Ｒ³⁰及びＲ³¹は、一緒になって、それらが結合している窒素と炭素原子と間に二重結合を形成する。

【0483】

いくつかの実施形態では、Ｒ³¹はＯＨである。

【0484】

いくつかの実施形態では、Ｒ³¹はＯＭｅである。

【0485】

いくつかの実施形態では、Ｒ³¹はＳＯ_zＭであり、ここで、ｚは２又は３であり、Ｍは一価の薬学的に許容される陽イオンである。

【0486】

Ｍ及びｚ
Ｍは、一価の薬学的に許容できる陽イオンであり、好ましくはＮａ⁺であることが好ましい。

【0487】

ｚは、好ましくは３である。

【0488】

本発明の第１の態様の好ましい結合体は、式ＩａのＤ^Lを有することができる：

【化110】

ここで、Ｒ^L1’、Ｒ²⁰及びＲ²¹は上で定義した通りであり；
ｎは１又は３であり；
Ｒ^1aはメチル又はフェニルであり；
Ｒ^12aは次のものから選択される：
（ａ）

【化111】

及び
（ｂ）

【化112】

（ｃ）

【化113】

（ｄ）

【化114】

（ｅ）

【化115】

（ｆ）

【化116】

（ｇ）

【化117】

及び
（ｈ）

【化118】

。

【0489】

本発明の第１の態様の好ましい結合体は、次式ＩｂのＤ^Lを有することができる：

【化119】

ここで、Ｒ^L1’、Ｒ²⁰及びＲ²¹は上で定義した通りであり；
ｎは１又は３であり；
Ｒ^1aはメチル又はフェニルであり

【0490】

本発明の第１の態様の好ましい結合体は、次式ＩｃのＤ^Lを有することができる：

【化120】

ここで、Ｒ^L2’、Ｒ¹⁰、Ｒ¹¹、Ｒ³⁰及びＲ³¹は、上で定義した通りであり、
ｎは１又は３であり、
Ｒ^12aは次のものから選択される：
（ａ）

【化121】

及び
（ｂ）

【化122】

（ｃ）

【化123】

（ｄ）

【化124】

（ｅ）

【化125】

（ｆ）

【化126】

（ｇ）

【化127】

及び
（ｈ）

【化128】

アミノ基は、フェニル基のメタ位又はパラ位のいずれかにある。

【0491】

本発明の第１の態様の好ましい結合体は、次式ＩｄのＤ^Lを有することができる：

【化129】

ここで、Ｒ^L2’、Ｒ¹⁰、Ｒ¹¹、Ｒ³⁰及びＲ³¹は、上で定義した通りであり；
ｎは１又は３であり；
Ｒ^1aはメチル又はフェニルであり；
Ｒ^12aは次のものから選択される：
（ａ）

【化130】

及び
（ｂ）

【化131】

（ｃ）

【化132】

（ｄ）

【化133】

（ｅ）

【化134】

（ｆ）

【化135】

（ｇ）

【化136】

及び
（ｈ）

【化137】

。

【0492】

本発明の第１の態様の好ましい結合体は、次式ＩｅのＤＬを有することができる：

【化138】

ここで、Ｒ^L2’、Ｒ¹⁰、Ｒ¹¹、Ｒ³⁰及びＲ³¹は、上で定義した通りであり；
ｎは１又は３であり；
Ｒ^1aはメチル又はフェニルであり；
Ｒ^12aは次のものから選択される：
（ａ）

【化139】

及び
（ｂ）

【化140】

（ｃ）

【化141】

（ｄ）

【化142】

（ｅ）

【化143】

（ｆ）

【化144】

（ｇ）

【化145】

及び
（ｈ）

【化146】

。

【実施例】

【0493】

実施例
一般的な実験方法
旋光度は、ＡＤＰ２２０旋光計（ベーリング・スタンリー社）で測定し、濃度（ｃ）はｇ／１００ｍＬで与える。融点はデジタル融点装置（Ｅｌｅｃｔｒｏｔｈｅｒｍａｌ）を用いて測定した。ＩＲスペクトルは、パーキン−エルマー・スペクトラム１００ＦＴ ＩＲ分光計で記録した。¹Ｈ及び¹³Ｃ ＮＭＲスペクトルは、ブルカーアバンスＮＭＲ分光計をそれぞれ４００及び１００ＭＨｚで用いて３００Ｋで得た。化学シフトをＴＭＳ（δ＝０．０ｐｐｍ）に対して報告し、そしてシグナルを、ｓ（一重項）、ｄ（二重項）、ｔ（三重項）、ｄｔ（二重三重項）、ｄｄ（二重項の二重項）、ｄｄｄ（二重項の二重二重項）又はｍ（多重項）として示し、カップリング定数をヘルツ（Ｈｚ）で与える。質量分析（ＭＳ）データは、Ｗａｔｅｒｓ２９９６ＰＤＡを有するＷａｔｅｒｓ２６９５ＨＰＬＣに連結されたＷａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱ装置を用いて収集した。使用したＷａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱパラメーターは、毛細管（ｋＶ）、３．３８；コーン（Ｖ）、３５；エクストラクター（Ｖ）、３．０；源温度（℃）、１００；脱溶媒和温度（℃）、２００；コーン流量（Ｌ／ｈ）、５０；脱溶媒和流量（Ｌ／ｈ）、２５０であった。高分解能質量分析（ＨＲＭＳ）データを、器具にサンプルを導入するために金属被覆されたホウケイ酸ガラスのチップを用いてＷａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＱＴＯＦグローバルによりポジティブＷモードで記録した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）をシリカゲルアルミニウムプレート（メルク６０、Ｆ₂₅₄）上で実施し、そしてフラッシュクロマトグラフィーは、シリカゲル（メルク６０、２３０〜４００メッシュＡＳＴＭ）を用いた。ＨＯＢｔ（ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ社）及び固体担持試薬（アルゴノート社）を除き、他の全ての化学物質及び溶媒は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入し、さらに精製することなく供給されたまま使用した。無水溶媒を、適切な乾燥剤の存在下に乾燥窒素雰囲気下で蒸留することによって調製し、４Åモレキュラーシーブ又はナトリウムワイヤを通して保存した。石油エーテルとは、４０〜６０℃で沸騰する留分をいう。

【0494】

一般的なＬＣ／ＭＳ条件：
方法１（特に示さない限りにおいて使用されるデフォルト方法）
ＨＰＬＣ（ウォーターズ・アライアンス２６９５）を、水（Ａ）（ギ酸０．１％）及びアセトニトリル（Ｂ）（ギ酸０．１％）の移動相を用いて行った。勾配：１．０分にわたり初期組成５％Ｂを保持し、続いて３分かけて５％Ｂから９５％Ｂに増加させる。この組成を９５％Ｂで０．１分間保持し、次いで０．０３分で５％Ｂに戻し、そしてそこで０．８７分間保持した。総勾配実行時間は５分に等しい。

【0495】

方法２
ＨＰＬＣ（ウォーターズ・アライアンス２６９５）を、水（Ａ）（ギ酸０．１％）及びアセトニトリル（Ｂ）（ギ酸０．１％）の移動相を用いて行った。勾配：初期組成５％Ｂを１．０分にわたって保持し、次いで２．５分かけて５％Ｂから９５％Ｂまで増加させる。組成を９５％Ｂで０．５分間保持し、次いで０．１分で５％Ｂに戻し、そこで０．９分間保持した。総勾配実行時間は５分に等しい。

【0496】

両方の方法について
流速は３．０ｍＬ／分であり、４００μＬを、質量分析計に入るゼロのデッドボリュームのティーピースを介して分割した。波長検出範囲：２２０〜４００ｎｍ。機能種別：ダイオードアレイ（５３５スキャン）。カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）オニキスモノリシックＣ１８５０×４．６０ｍｍ。

【0497】

逆相フラッシュ精製条件は次のとおりであった：フラッシュ精製システム（バリアン９７１−ＦＰ）を、水（Ａ）及びアセトニトリル（Ｂ）の移動相を使用して実行した。勾配：初期組成５％Ｂを２０Ｃ．Ｖ．（カラム体積）にわたって保持し、続いて６０Ｃ．Ｖ．以内に５％Ｂから７０％Ｂに増加させる。この組成を１５Ｃ．Ｖ．にわたって９５％Ｂで保持し、その後５ Ｃ．Ｖ．で５％Ｂに戻し、そして１０Ｃ．Ｖ．にわたって５％Ｂで保持した。総勾配実行時間は１２０Ｃ．Ｖ．に等しい。流速６．０ｍｌ／分。波長検出範囲：２５４ ｎｍ。カラム：アジレントＡＸ１３７２−１ ＳＦ１０−５．５ｇＣ８。

【0498】

分取ＨＰＬＣ：逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）を、次の寸法のＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸ５μＣ−１８カラムで実施した：分析について１５０×４．６ｍｍ及び分取作業について１５０ｘ２１．２０ｍｍ。全てのＵＰＬＣ実験を勾配条件で実施した。使用した溶離液は、溶媒Ａ（０．１％ギ酸を含むＨ₂Ｏ）及び溶媒Ｂ（０．１％ギ酸を含むＣＨ₃ＣＮ）であった。使用した流量は、分析については１．０ｍｍ／分、分取ＨＰＬＣについては２０．０ｍｌ／分であった。検出は２５４及び２８０ ｎｍであった。

【0499】

中間体１２の合成

【化147】

【0500】

（ａ）１’，３’−ビス［２−メトキシ−４−（メトキシカルボニル）フェノキシ］プロパン（３）
ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（７１．３ｍＬ、７３．２ｇ、３６２ミリモル）を、窒素雰囲気下において０〜５℃（氷／アセトン）で、バニリン酸メチル２（６０．０ｇ、３２９ミリモル）及びＰｈ３Ｐ（１２９．４ｇ、４９４ミリモル）の無水ＴＨＦ（８００ｍＬ）へのオーバーヘッド攪拌溶液に６０分間かけて滴下して添加した。この反応混合物をさらに１時間にわたって０〜５℃で撹拌し、その時間の後、１，３−プロパンジオール（１１．４ｍＬ、１２．０ｇ、１５８ミリモル）のＴＨＦ溶液（１２ｍＬ）を２０分間かけて滴下添加した。この反応混合物を室温にまで加温し、そして５日間撹拌した。得られた白色沈殿物３を真空濾過により収集し、ＴＨＦで洗浄し、そして一定重量まで真空デシケーター中で乾燥させた。収量＝５４．７ｇ（１，３−プロパンジオールに基づいて８４％）。ＬＣ／ＭＳによる十分な純度（３．２０分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）４２７（［Ｍ＋Ｎａ］^+.，１０）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．６４（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１．８，８．３Ｈｚ），７．５４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１．８Ｈｚ），６．９３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），４．３０（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ），３．９０（ｓ，６Ｈ），３．８９（ｓ，６Ｈ），２．４０（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）。

【0501】

（ｂ）１’，３’−ビス［２−メトキシ−４−（メトキシカルボニル）−５−ニトロフェノキシ］プロパン（４）
固体のＣｕ（ＮＯ₃）₂・３Ｈ₂Ｏ（８１．５ｇ、３３７．５ミリモル）を、ビス−エステル３（５４．７ｇ、１３５ミリモル）の無水酢酸（６５０ｍＬ）へのオーバーヘッド攪拌スラリーに０〜５℃でゆっくりと添加した（氷／アセトン）。この反応混合物を０〜５℃で１時間撹拌し、次いで室温にまで加温した。この混合物の増粘を伴う軽度の発熱（約４０〜５０℃）及びＮＯ₂の放出がこの段階で観察された。追加の無水酢酸（３００ｍＬ）を加え、そして反応混合物を室温で１６時間撹拌した。この反応混合物を氷（〜１．５Ｌ）上に注ぎ、撹拌し、そして室温に戻した。得られた黄色沈殿物を真空濾過により回収し、デシケーター内で乾燥させて黄色固体として所望のビス−ニトロ化合物４を得た。収量＝６６．７ｇ（１００％）。ＬＣ／ＭＳによる十分な純度（３．２５ ｍｉｎ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）５１７（［Ｍ＋Ｎａ］^+.，４０）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．４９（ｓ，２Ｈ），７．０６（ｓ，２Ｈ），４．３２（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．９５（ｓ，６Ｈ），３．９０（ｓ，６Ｈ），２．４５−２．４０（ｍ，２Ｈ）。

【0502】

（ｃ）１’，３’−ビス（４−カルボキシ−２−メトキシ−５−ニトロフェノキシ）プロパン（５）
メチルエステル４（６６．７ｇ、１３５ミリモル）のＴＨＦ（７００ｍＬ）へのスラリーを、１ＮのＮａＯＨ（７００ｍＬ）で処理し、そしてこの反応混合物を室温で激しく撹拌した。４日間攪拌した後、スラリーは暗色溶液になり、この溶液に減圧下で回転蒸発を施してＴＨＦを除去した。得られた水性残渣を濃ＨＣｌでｐＨ１に酸性化し、無色の沈殿物５を回収し、そして真空オーブン（５０℃）内で完全に乾燥させた。収率＝５４．５ｇ（８７％）。ＬＣ／ＭＳによる十分な純度（２．６５ ｍｉｎ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）４８９（［Ｍ＋Ｎａ］^+.，３０））；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ７．６２（ｓ，２Ｈ），７．３０（ｓ，２Ｈ），４．２９（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．８５（ｓ，６Ｈ），２．３０−２．２６（ｍ，２Ｈ）。

【0503】

（ｄ）１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［（５−メトキシ−２−ニトロ−１，４−フェニレン）カルボニル］］ビス［（２Ｓ，４Ｒ）−メチル−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボキシレート］（６）
塩化オキサリル（２４．５ｍＬ、３５．６ｇ、２８１ミリモル）を、ニトロ安息香酸５（４３ｇ、９２．３ミリモル）及びＤＭＦ（６ｍＬ）の無水ＤＣＭ（６００ｍＬ）への攪拌懸濁液に添加した。初期の泡立ち後に、反応懸濁液は溶液になり、そしてこの混合物を室温で１６時間撹拌した。酸塩化物への転化を、反応混合物のサンプルをＭｅＯＨで処理することによって確認し、そして得られたビス−メチルエステルをＬＣ／ＭＳで観察した。溶媒の大部分を減圧下で蒸発させて除去した；得られた濃縮溶液を最小量の乾燥ＤＣＭに再溶解させ、そしてジエチルエーテルで粉砕した。得られた黄色沈殿物を濾過により回収し、冷ジエチルエーテルで洗浄し、４０℃の真空オーブン内で１時間乾燥させた。固体酸塩化物を（２Ｓ，４Ｒ）−メチル−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボキシレート塩酸塩（３８．１ｇ、２１０ミリモル）及びＴＥＡ（６４．５ｍＬ、ｇ、４６３ミリモル）のＤＣＭ（４００ｍＬ）への撹拌懸濁液に−４０℃（ドライアイス／ＣＨ₃ＣＮ）で２５分間かけて少しずつ加えた。ＬＣ／ＭＳ（２．４７分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）７２１（［Ｍ＋Ｈ］⁺，１００）によって判断されたときに直ちに反応を終了させた。この混合物をＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、そして１ＮのＨＣｌ（３００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ₃（３００ｍＬ）、食塩水（４００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、そして溶媒を減圧下で蒸発させて、橙色固体として純粋な生成物６を得た（６６．７ｇ、１００％）。［α］²²_D＝−４６．１°（ｃ＝０．４７，ＣＨＣｌ₃）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）（回転異性体）δ７．６３（ｓ，２Ｈ），６．８２（ｓ，２Ｈ），４．７９−４．７２（ｍ，２Ｈ），４．４９−４．２８（ｍ，６Ｈ），３．９６（ｓ，６Ｈ），３．７９（ｓ，６Ｈ），３．４６−３．３８（ｍ，２Ｈ），３．０２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ），２．４８−２．３０（ｍ，４Ｈ），２．２９−２．０４（ｍ，４Ｈ）；¹³Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）（回転異性体）δ１７２．４，１６６．７，１５４．６，１４８．４，１３７．２，１２７．０，１０９．７，１０８．２，６９．７，６５．１，５７．４，５７．０，５６．７，５２．４，３７．８，２９．０；ＩＲ（ＡＴＲ，ＣＨＣｌ₃）３４１０（ｂｒ），３０１０，２９５３，１７４１，１６２２，１５７７，１５１９，１４５５，１４２９，１３３４，１２７４，１２１１，１１７７，１０７２，１０５０，１００８，８７１ｃｍ^-1；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ（相対強度）７２１（［Ｍ＋Ｈ］^+.，４７），３８８（８０）；ＨＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺。理論Ｃ₃₁Ｈ₃₆Ｎ₄Ｏ₁₆ｍ／ｚ７２１．２１９９，ｆｏｕｎｄ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ７２１．２２２７。

【0504】

（ｅ）１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス（１１ａＳ，２Ｒ）−２−（ヒドロキシ）−７−メトキシ−１，２，３，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］（７）
方法Ａ：ニトロ−エステル６（４４ｇ、６１．１ミリモル）のメタノール（２．８Ｌ）溶液を、５Ｌの３ツ口丸底フラスコ中における新たに購入したラネー（登録商標）ニッケル（〜５０％のＨ₂Ｏへのスラリーの〜５０ｇ）及び突沸防止顆粒に添加した。この混合物を還流で加熱し、次いでヒドラジン水和物（２１．６ｍＬ、２２．２ｇ、６９３ミリモル）のＭｅＯＨ（２００ｍＬ）溶液で滴下処理し、その時点で激しい泡立ちが観察された。添加を完了したときに（〜４５分）、追加のラネー（登録商標）ニッケルを、発泡が停止し、そして反応混合物の最初の黄色が放出されるまで注意深く添加した。この混合物をさらに５分間加熱還流し、その時点で、ＴＬＣ（９０：１０ｖ／ｖのＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ）及びＬＣ／ＭＳ（２．１２分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）５９７（［Ｍ＋Ｈ］⁺，１００））によって反応が完了したとみなした。反応混合物を、セライトを含有する焼結漏斗を通して真空吸引により直ちに熱濾過した。濾液を真空中での蒸発により体積減少させ、その時点で、無色の沈殿物が形成され、これを濾過により回収し、真空デシケーター内で乾燥させたて7を得た（31ｇ、85％）。［α］²⁷_D＝＋４０４°（ｃ＝０．１０，ＤＭＦ）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ１０．２（ｓ，２Ｈ，ＮＨ），７．２６（ｓ，２Ｈ），６．７３（ｓ，２Ｈ），５．１１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝３．９８Ｈｚ，ＯＨ），４．３２−４．２７（ｍ，２Ｈ），４．１９−４．０７（ｍ，６Ｈ），３．７８（ｓ，６Ｈ），３．６２（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１２．１，３．６０Ｈｚ），３．４３（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１２．０，４．７２Ｈｚ），２．６７−２．５７（ｍ，２Ｈ），２．２６（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．９０Ｈｚ），１．９９−１．８９（ｍ，２Ｈ）；¹³Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ１６９．１，１６４．０，１４９．９，１４４．５，１２９．８，１１７．１，１１１．３，１０４．５，５４．８，５４．４，５３．１，３３．５，２７．５；ＩＲ（ＡＴＲ，ニート）３４３８，１６８０，１６５４，１６１０，１６０５，１５１６，１４９０，１４３４，１３７９，１２６３，１２３４，１２１６，１１７７，１１５６，１１１５，１０８９，１０３８，１０１８，９５２，８７０ｃｍ^-1；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ（相対強度）６１９（［Ｍ＋Ｎａ］^+.，１０），５９７（［Ｍ＋Ｈ］^+.，５２），４４５（１２），３２６（１１）；ＨＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺。理論Ｃ₂₉Ｈ₃₂Ｎ₄Ｏ₁₀ｍ／ｚ５９７．２１９１，ｆｏｕｎｄ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ５９７．２２０５。

【0505】

方法Ｂ：１０％Ｐｄ／Ｃ（７．５ｇ、１０％ｗ／ｗ）のＤＭＦ（４０ｍＬ）への懸濁液を、ニトロ−エステル６（７５ｇ、１０４ミリモル）のＤＭＦ（３６０ｍＬ）溶液に添加した。この懸濁液を８時間にわたってＰａｒｒ水素化装置で水素化した。水素の取り込みが停止した後に、反応の進行をＬＣ／ＭＳで監視した。固体Ｐｄ／Ｃを濾過により除去し、そしてろ液を４０℃で真空下（１０ｍｂａｒ未満）で回転蒸発により濃縮して、微量のＤＭＦ及び残留炭を含む暗色のオイルを得た。残留物を水浴（ロータリーエバポレーター浴）上において４０℃でエタノール（５００ｍＬ）中において温浸し、そして得られた懸濁液を、セライトを通して濾過し、エタノール（５００ｍＬ）で洗浄して透明なろ液を得た。この溶液にヒドラジン水和物（１０ｍＬ、３２１ミリモル）を加え、そして反応混合物を加熱還流した。２０分後に白色沈殿物の形成が観察され、そして還流をさらに３０分間継続した。この混合物を室温にまで冷却し、そして沈殿物を濾過により回収し、ジエチルエーテルで洗浄し（２：１沈殿物の容量）、そして真空デシケーター中で乾燥させて７を得た（５０ｇ、８１％）。方法Ｂの分析データ：方法Ａについて得られたものと同一（旋光度、¹Ｈ ＮＭＲ、ＬＣ／ＭＳ及びＴＬＣ）。

【0506】

（ｆ）１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス（１１ａＳ，２Ｒ）−２−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−７−メトキシ−１，２，３，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］（８）
ＴＢＳＣｌ（２７．６ｇ、１８２．９ミリモル）及びイミダゾール（２９．９ｇ、４３８．８ミリモル）を０℃（氷／アセトン）でテトララクタム７（２１．８ｇ、３６．６ミリモル）の無水ＤＭＦ（４００ ｍＬ）への濁った溶液に添加した。この混合物を３時間にわたって窒素雰囲気下で撹拌させ、その後、ＬＣ／ＭＳ（３．９０分（ＥＳ＋）ｍ ／ ｚ（相対強度）８２５（［Ｍ＋Ｈ］⁺，１００）によって判断されるように、反応が完了したとみなした。この反応混合物を氷（〜１．７５Ｌ）に注ぎ、そして攪拌しながら室温まで加温した。得られた白色沈殿物を真空濾過により集め、Ｈ₂Ｏ、ジエチルエーテルで洗浄し、そして真空デシケーター中で乾燥させて純粋な８を得た（３０．１ｇ、９９％）。［α］²³_D＝＋２３４°（ｃ＝０．４１，ＣＨＣｌ₃）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ８．６５（ｓ，２Ｈ，ＮＨ），７．４４（ｓ，２Ｈ），６．５４（ｓ，２Ｈ），４．５０（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．３８Ｈｚ），４．２１−４．１０（ｍ，６Ｈ），３．８７（ｓ，６Ｈ），３．７３−３．６３（ｍ，４Ｈ），２．８５−２．７９（ｍ，２Ｈ），２．３６−２．２９（ｍ，２Ｈ），２．０７−１．９９（ｍ，２Ｈ），０．８６（ｓ，１８Ｈ），０．０８（ｓ，１２Ｈ）；¹³Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ１７０．４，１６５．７，１５１．４，１４６．６，１２９．７，１１８．９，１１２．８，１０５．３，６９．２，６５．４，５６．３，５５．７，５４．２，３５．２，２８．７，２５．７，１８．０，−４．８２及び−４．８６；ＩＲ（ＡＴＲ，ＣＨＣｌ₃）３２３５，２９５５，２９２６，２８５５，１６９８，１６９５，１６０３，１５１８，１４９１，１４４６，１３８０，１３５６，１２５１，１２２０，１１２０，１０９９，１０３３ｃｍ^-1；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ（相対強度）８２５（［Ｍ＋Ｈ］^+.，６２），７２１（１４），４４０（３８）；ＨＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺。理論Ｃ₄₁Ｈ₆₀Ｎ₄Ｏ₁₀Ｓｉ₂ｍ／ｚ８２５．３９２１，ｆｏｕｎｄ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ８２５．３９４８。

【0507】

（ｇ）１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス（１１ａＳ，２Ｒ）−２−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−７−メトキシ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１，２，３，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］（９）
ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中１．６ Ｍ溶液の６８．３ｍＬ、１０９ミリモル）の溶液を、−３０℃（ドライアイス／エチレングリコール）でテトララクタム８（３０．０８ｇ、３６．４ミリモル）の無水ＴＨＦ（６００ｍＬ）攪拌懸濁液に窒素雰囲気下で滴下した。反応混合物をこの温度で１時間撹拌し（ここでは赤みを帯びたオレンジ色）、その時点で、ＳＥＭＣｌ（１９．３ｍＬ、１８．２ｇ、１０９ミリモル）の無水ＴＨＦ（１２０ｍＬ）溶液を滴下添加した。この反応混合物を室温までゆっくりと温め、そして窒素雰囲気下で１６時間撹拌した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）及びＬＣ／ＭＳ（４．７７分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１０８５（［Ｍ＋Ｈ］＋，１００）によって判断されたときに反応が完了したとみなした。ＴＨＦを真空中で蒸発させて除去し、そして得られた残渣をＥｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）に溶解し、Ｈ₂Ｏ（２５０ｍＬ）、食塩水（２５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、そして真空中で蒸発させて、オイルとしての粗Ｎ１０−ＳＥＭ保護テトララクタム９を得た（最大３９．５ｇ、１００％）。この生成物を精製せずに次の工程でそのまま使用した。［α］²³_D＝＋１６３°（ｃ＝０．４１，ＣＨＣｌ₃）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．３３（ｓ，２Ｈ），７．２２（ｓ，２Ｈ），５．４７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．９８Ｈｚ），４．６８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．９９Ｈｚ），４．５７（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．７７Ｈｚ），４．２９−４．１９（ｍ，６Ｈ），３．８９（ｓ，６Ｈ），３．７９−３．５１（ｍ，８Ｈ），２．８７−２．８１（ｍ，２Ｈ），２．４１（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．８１Ｈｚ），２．０３−１．９０（ｍ，２Ｈ），１．０２−０．８１（ｍ，２２Ｈ），０．０９（ｓ，１２Ｈ），０．０１（ｓ，１８Ｈ）；¹³Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ１７０．０，１６５．７，１５１．２，１４７．５，１３３．８，１２１．８，１１１．６，１０６．９，７８．１，６９．６，６７．１，６５．５，５６．６，５６．３，５３．７，３５．６，３０．０，２５．８，１８．４，１８．１，−１．２４，−４．７３；ＩＲ（ＡＴＲ，ＣＨＣｌ₃）２９５１，１６８５，１６４０，１６０６，１５１７，１４６２，１４３３，１３６０，１２４７，１１２７，１０６５ ｃｍ^-1；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ（相対強度）１１１３（［Ｍ＋Ｎａ］^+.，４８），１０８５（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００），１００９（５），８１３（６）；ＨＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺。理論Ｃ₅₃Ｈ₈₈Ｎ₄Ｏ₁₂Ｓｉ₄ｍ／ｚ１０８５．５５４８，ｆｏｕｎｄ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ１０８５．５５４２。

【0508】

（ｈ）１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス（１１ａＳ，２Ｒ）−２−ヒドロキシ−７−メトキシ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１，２，３，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］（１０）
ＴＢＡＦの溶液（１．０ＭのＴＨＦ溶液の１５０ｍＬ、１５０ミリモル）を、粗ビス−シリルエーテル９［８４．０ｇ（最大５６．８ｇ）、５２．４ミリモル］のＴＨＦ（８００ｍＬ）撹拌溶液に室温で添加した。１時間撹拌した後、ＴＬＣ（９５：５ｖ／ｖのＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ）による反応混合物の分析から、反応の完了が明らかになった。ＴＨＦを減圧下における室温での蒸発により除去し、得られた残渣をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）に溶解し、ＮＨ₄Ｃｌ（３００ｍＬ）で洗浄した。一緒にした有機層をブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、そして減圧下で蒸発させて粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（勾配溶出：１００％ＣＨＣｌ₃〜９６：４（ｖ ／ｖ）のＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ）による精製で、白色泡状物として純粋なテトララクタム１０を得た（３６．０ｇ、７９％）。ＬＣ／ＭＳ３．３３分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）８７９（［Ｍ＋Ｎａ］^+.，１００），８５７（［Ｍ＋Ｈ］^+.，４０）；［α］²³_D＝＋２０２°（ｃ＝０．３４，ＣＨＣｌ₃）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．２８（ｓ，２Ｈ），７．２０（ｓ，２Ｈ），５．４４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），４．７２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），４．６１−４．５８（ｍ，２Ｈ），４．２５（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝５．８３Ｈｚ），４．２０−４．１６（ｍ，２Ｈ），３．９１−３．８５（ｍ，８Ｈ），３．７７−３．５４（ｍ，６Ｈ），３．０１（ｂｒ ｓ，２Ｈ，ＯＨ），２．９６−２．９０（ｍ，２Ｈ），２．３８（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．７７Ｈｚ），２．１１−２．０５（ｍ，２Ｈ），１．００−０．９１（ｍ，４Ｈ），０．００（ｓ，１８Ｈ）；¹³Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ１６９．５，１６５．９，１５１．３，１４７．４，１３３．７，１２１．５，１１１．６，１０６．９，７９．４，６９．３，６７．２，６５．２，５６．５，５６．２，５４．１，３５．２，２９．１，１８．４，−１．２３；ＩＲ（ＡＴＲ，ＣＨＣｌ₃）２９５６，１６８４，１６２５，１６０４，１５１８，１４６４，１４３４，１３６１，１２３８，１０５８，１０２１ ｃｍ^-1；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ（相対強度）８８５（［Ｍ＋２９］^+.，７０），８５７（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００），７１１（８），４４８（１７）；ＨＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺。理論Ｃ₄₁Ｈ₆₀Ｎ₄Ｏ₁₂Ｓｉ₂ｍ／ｚ８５７．３８１９，ｆｏｕｎｄ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ８５７．３８２６。

【0509】

（ｉ）１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス（１１ａＳ）−７−メトキシ−２−オキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１，２，３，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］（１１）
ジオール１０（２５．６ｇ、３０ミリモル、１当量）、ＮａＯＡｃ（６．９ｇ、８４ミリモル、２．８当量）及びＴＥＭＰＯ（１８８ｍｇ、１．２ミリモル、０．０４当量）をアルゴン下でＤＣＭ（３２６ｍＬ）に溶解させた。これを−８℃（内部温度）に冷却し、ＴＣＣＡ（９．７ｇ、４２ミリモル、１．４当量）を１５分かけて少しずつ加えた。３０分後に、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）及びＬＣ／ＭＳ［３．６０分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）８５４．２１（［Ｍ＋Ｈ］＋，４０），（ＥＳ−）ｍ／ｚ（相対強度）８８７．０７（［Ｍ−Ｈ＋Ｃｌ］−，１０）］により、反応が完了したことが示された。冷ＤＣＭ（２００ｍＬ）を加え、そしてこの混合物をセライトのパッドを通して濾過してから、飽和炭酸水素ナトリウム／チオ硫酸ナトリウム溶液で洗浄した（１：１ｖ／ｖ、２００ｍＬ×２）。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を減圧下で除去して黄色／オレンジ色のスポンジを得た（２５．４ｇ、９９％）。ＬＣ／ＭＳ［３．６０分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）８５４．２１（［Ｍ＋Ｈ］^+.，４０）；［α］²⁰_D＝＋２９１°（ｃ＝０．２６，ＣＨＣｌ₃）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．３２（ｓ，２Ｈ），７．２５（ｓ，２Ｈ），５．５０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ），４．７５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ），４．６０（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．８５，３．０７Ｈｚ），４．３１−４．１８（ｍ，６Ｈ），３．８９−３．８４（ｍ，８Ｈ），３．７８−３．６２（ｍ，４Ｈ），３．５５（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１９．２，２．８５Ｈｚ），２．７６（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１９．２，９．９０Ｈｚ），２．４２（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．７７Ｈｚ），０．９８−０．９１（ｍ，４Ｈ），０．００（ｓ，１８Ｈ）；¹³Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ２０６．８，１６８．８，１６５．９，１５１．８，１４８．０，１３３．９，１２０．９，１１１．６，１０７．２，７８．２，６７．３，６５．６，５６．３，５４．９，５２．４，３７．４，２９．０，１８．４，−１．２４；ＩＲ（ＡＴＲ，ＣＨＣｌ₃）２９５７，１７６３，１６８５，１６４４，１６０６，１５１６，１４５７，１４３４，１３６０，１２４７，１２０９，１０９８，１０６６，１０２３ ｃｍ^-1；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ（相対強度）８８１（［Ｍ＋２９］^+.，３８），８５３（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００），７０７（８），５４２（１２）；ＨＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺。理論Ｃ₄₁Ｈ₅₆Ｎ₄Ｏ₁₂Ｓｉ₂ｍ／ｚ８５３．３５０６，ｆｏｕｎｄ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ８５３．３５０２。

【0510】

（ｊ）１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス（１１ａＳ）−７−メトキシ−２−［［（トリフルオロメチル）スルホニル］オキシ］−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］（１２）
無水２，６−ルチジン（５．１５ｍＬ、４．７４ｇ、４４．２ミリモル）を、窒素雰囲気下において−４５℃（ドライアイス／アセトニトリル）でビス−ケトン１１（６．０８ｇ、７．１ミリモル）の乾燥ＤＣＭ（１８０ｍＬ）への激しく撹拌した溶液に一度に注入した。新たに開かれたアンプルから採取された無水トリフルオロメタンスルホン酸無水物（７．２ｍＬ、１２．０８ｇ、４２．８ミリモル）を急速に滴下注入すると共に、−４０℃以下の温度を維持した。反応混合物を１時間にわたり−４５℃で撹拌し、その時点で、ＴＬＣ（５０／５０（ｖ／ｖ）のｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）により、出発物質の完全な消費が明らかになった。冷反応混合物を直ちにＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、そして激しく振盪しながら、水（１×１００ｍＬ）、５％クエン酸溶液（１×２００ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（２００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ₄）。溶媒を減圧下で濾過し蒸発させて粗生成物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製（勾配溶離：９０：１０（ｖ／ｖ）のｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ〜７０：３０ｖ／ｖのｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）して黄色の泡状物としてビス−エノールトリフレート１２を得た（５．５ｇ、７０％）。ＬＣ／ＭＳ４．３２分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１１３９（［Ｍ＋Ｎａ］^+.，２０）；［α］²⁴_D＝＋２７１°（ｃ＝０．１８，ＣＨＣｌ₃）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．３３（ｓ，２Ｈ），７．２６（ｓ，２Ｈ），７．１４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝１．９７Ｈｚ），５．５１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ），４．７６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ），４．６２（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１１．０，３．６９Ｈｚ），４．３２−４．２３（ｍ，４Ｈ），３．９４−３．９０（ｍ，８Ｈ），３．８１−３．６４（ｍ，４Ｈ），３．１６（ｄｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１６．３，１１．０，２．３６Ｈｚ），２．４３（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．８５Ｈｚ），１．２３−０．９２（ｍ，４Ｈ），０．０２（ｓ，１８Ｈ）；¹³Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ１６７．１，１６２．７，１５１．９，１４８．０，１３８．４，１３３．６，１２０．２，１１８．８，１１１．９，１０７．４，７８．６，６７．５，６５．６，５６．７，５６．３，３０．８，２９．０，１８．４，−１．２５；ＩＲ（ＡＴＲ，ＣＨＣｌ₃）２９５８，１６９０，１６４６，１６０５，１５１７，１４５６，１４２８，１３６０，１３２７，１２０７，１１３６，１０９６，１０６０，１０２２，９３８，９１３ｃｍ^-1；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ（相対強度）１１４４（［Ｍ＋２８］^+.，１００），１１１７（［Ｍ＋Ｈ］^+.，４８），１０４１（４０），５７８（８）；ＨＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］⁺。理論Ｃ₄₃Ｈ₅₄Ｎ₄Ｏ₁₆Ｓｉ₂Ｓ₂Ｆ₆ｍ／ｚ１１１７．２４９１，ｆｏｕｎｄ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ１１１７．２４６５。

【0511】

例１

【化148】

【0512】

（ａ）（Ｓ）−８−（３−（（（Ｓ）−２−（４−アミノフェニル）−７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イルトリフルオロメタンスルホネート（１３）
Ｐｄ（ＰＰｈ₃）４（１１６．９ｍｇ、０．１０１ミリモル）を、ビス−エノールトリフレート１２（５．６５ｇ、５．０６ミリモル）と、４−アミノフェニル酸ピナコールエステル（１ｇ、４．５６ミリモル）と、Ｎａ₂ＣＯ₃（２．４６ｇ、２３．２ミリモル）と、ＭｅＯＨ（３７ｍＬ）と、トルエン（７４ｍＬ）と、水（３７ｍＬ）との攪拌混合物に添加した。この反応混合物を２４時間にわたって窒素雰囲気下に３０℃で撹拌し、その後に、全てのボロン酸エステルが消費された。次いで、この反応混合物を蒸発乾固させてから、残渣をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）に溶解させ、そしてＨ₂Ｏ（２×１００ｍＬ）、塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、そして減圧下で蒸発させて粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィーによる精製（勾配溶出：６０：４０（ｖ／ｖ）のヘキサン／ＥｔＯＡｃ〜８０：２０（ｖ／ｖ）のヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で、黄色がかった泡状物として生成物１３を得た（２．４ｇ、４５％）。ＬＣ／ＭＳ４．０２分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１０６０．２１（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００）；¹Ｈ−ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ₃，４００ ＭＨｚ）δ７．４０（ｓ，１Ｈ），７．３３（ｓ，１Ｈ），７．２７（ｂｓ，３Ｈ），７．２４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．１５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），６．６６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），５．５２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），４．７７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），４．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），４．６２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．７，１１．０Ｈｚ），４．５８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．４，１０．６Ｈｚ），４．２９（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），４．００−３．８５（ｍ，８Ｈ），３．８０−３．６０（ｍ，４Ｈ），３．１６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４，１１．０，１６．３Ｈｚ），３．１１（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２，１０．５，１６．１Ｈｚ），２．４３（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ），１．１−０．９（ｍ，４Ｈ），０．２（ｓ，１８Ｈ）。¹³Ｃ−ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ₃，１００ＭＨｚ）δ１６９．８，１６８．３，１６４．０，１６２．７，１５３．３，１５２．６，１４９．２８，１４９．０，１４７．６，１３９．６，１３４．８，１３４．５，１２７．９，１２７．５，１２５．１，１２３．２１，１２１．５，１２０．５，１２０．１，１１６．４，１１３．２，１０８．７，７９．８，７９．６，６８．７，６８．５，６７．０，６６．８，５８．８，５８．０，５７．６，３２．８，３２．０，３０．３，１９．７，０．２５。

【0513】

（ｂ）（Ｓ）−２−（４−アミノフェニル）−８−（３−（（（Ｓ）−２−シクロプロピル−７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５，１１（１０Ｈ，１１ａＨ）ジオン（１４）
トリフェニルアルシン（０．２４ｇ、０．８ミリモル）、酸化銀（Ｉ）（１．０２ｇ、４．４ミリモル）、シクロプロピルボロン酸（０．４７ｇ、５．５ミリモル）及び出発物質１３（１．１５ｇ、１．１ミリモル）をアルゴン雰囲気下でジオキサン（３０ｍＬ）に溶解した。リン酸三カリウム（２．８ｇ、１３．２ミリモル）を、乳棒及び乳鉢ですり潰し、そしてすぐに反応混合物に添加した。反応混合物を排出し、アルゴンで３回フラッシュし、７１℃に加熱した。パラジウム（ＩＩ）ビス（塩化ベンゾニトリル）（８４ｍｇ、０．２２ミリモル）を添加し、そして反応容器を３回排気し、アルゴンでフラッシュした。１０分後、少量のサンプルを、ＴＬＣ（８０：２０ｖ／ｖ酢酸エチル／ヘキサン）及びＬＣ／ＭＳによる分析のために採取した。３０分後、反応が完了し（ＬＣ／ＭＳ分析から、出発物質の完全な消費が示された）、そしてこの反応物をセライトを通して濾過し、そしてフィルターパッドを酢酸エチル（４００ｍＬ）で洗浄した。濾液を水（２×２００ｍＬ）及びブライン（２×２００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を真空中で除去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（３０：７０ｖ／ｖのヘキサン／酢酸エチル）により精製することで、オレンジ色／黄色の固体として生成物１４を得た（０．６６ｇ、６３％）。方法１、ＬＣ／ＭＳ（３．８５分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）９５２．１７（［Ｍ＋Ｈ］＋，１００）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．３６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．３０（ｓ，１Ｈ），７．２５−７．１９（ｍ，４Ｈ），６．６８（ｓ，１Ｈ），６．６２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），５．４９（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．６，１０．０Ｈｚ），４．７３（ａｐｐ． ｔ，２Ｈ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ），４．５４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．２，１０．４Ｈｚ），４．４０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．２，１０．４Ｈｚ），４．２９−４．２３（ｍ，４Ｈ），３．９１−３．８５（ｍ，７Ｈ），３．８０−３．７１（ｍ，２Ｈ），３．７０−３．６１（ｍ，２Ｈ），３．３８−３．３２（ｍ，１Ｈ），３．１２−３．０１（ｍ，１Ｈ），２．５０−２．６９（ｍ，１Ｈ），２．４０（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），１．５０−１．４３（ｍ，１Ｈ），０．９９−０．７１（ｍ，６Ｈ），０．５４−０．５９（ｍ，２Ｈ），０．００（ｓ，１８Ｈ）ｐｐｍ。

【0514】

（ｃ）（Ｓ）−２−（４−アミノフェニル）−８−（３−（（（Ｓ）−２−シクロプロピル−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（１５）
ＳＥＭジラクタム１４（０．６６ｇ、０．６９ミリモル）をＴＨＦ（２３ ｍＬ）に溶解し、そしてアルゴン雰囲気下で−７８℃に冷却した。Ｓｕｐｅｒ−Ｈｙｄｒｉｄｅ（登録商標）溶液（１．７ｍＬ、ＴＨＦ中１Ｍ）を５分かけて滴下すると共に、温度を監視した。２０分後、少量のサンプルを採取し、そしてＬＣ／ＭＳ分析のために水で洗浄した。水（５０ｍＬ）を加え、そして冷浴を除去した。有機層を抽出し、そしてブライン（６０ｍＬ）で洗浄した。一緒にした水層をＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ（９０／１０ｖ／ｖ）（２×５０ｍＬ）で洗浄した。一緒にした有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を真空中で除去した。粗生成物をＭｅＯＨ（４８ｍＬ）、塩化メチレン（１８ｍＬ）及び水（６ｍＬ）に溶解させ、そして十分なシリカゲルを添加して濃厚な懸濁液を得た。５日間撹拌した後、懸濁液を、焼結漏斗を通して濾過し、生成物が溶出しなくなるまでＣＨ₂Ｃｌ₂／メタノール（９：１）（〜２００ｍＬ）で洗浄した。有機層をブライン（２×７０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を真空中で除去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１００％のＣＨＣｌ₃から９６／４（ｖ／ｖ）のＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ）により精製して、黄色の固体として生成物１５を得た（３０２ｍｇ、６６％）。方法１、ＬＣ／ＭＳ（２．４２分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）６６０．７４（［Ｍ＋ Ｈ］＋，３０）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．８６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），７．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），７．５８−７．４４（ｍ，３Ｈ），７．３４−７．２０（ｍ，３Ｈ），６．８８−６．６６（ｍ，４Ｈ），４．３５−４．１５（ｍ，６Ｈ），３．９５−３．７５（ｍ，７Ｈ），３．３９−３．２２（ｍ，１Ｈ），３．１４−３．０４（ｍ，１Ｈ），２．９３−２．８５（ｍ，１Ｈ），２．４６−２．３６（ｍ，２Ｈ），１．４９−１．４１（ｍ，１Ｈ），０．８０−０．７２（ｍ，２Ｈ），０．５８−０．５１（ａｐｐ．ｓ，２Ｈ）ｐｐｍ。

【0515】

（ｄ）アリル（（２Ｓ）−１−（（（２Ｓ）−１−（（４−（８−（３−（（２−シクロプロピル−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（１６）
アルゴンを充填した脱気丸底フラスコ中において、ＨＯ−Ａｌａ−Ｖａｌ−ａｌｌｏｃ（１４９．６ｍｇ、０．５４９ミリモル）及びＥＥＤＱ（１３５．８ｍｇ、０．５４９ミリモル）を、乾燥ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ（５ｍＬ）の９：１混合物に溶解させた。フラスコをアルミ箔で包み、そして反応混合物を室温で１時間撹拌してから、出発材料１５（３０２ｍｇ、０．４５７ミリモル）を添加した。この反応混合物を室温でさらに４０時間攪拌してから、揮発性物質を減圧下で回転蒸発により除去した（反応をＬＣ／ＭＳ、ＲＴ出発物質２．３２分（ＥＳ＋６６０．２９（［Ｍ＋ Ｈ］＋，１００）で追跡した）。この粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより直接精製（１００％のＣＨＣｌ₃〜９０／１０ｖ／ｖのＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ）して純粋な生成物（１６）を４２％収率（１７４ｍｇ）で得た。方法２、ＬＣ／ＭＳ（２．７０分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）９１４．７３（［Ｍ＋Ｈ］＋，６０），６６０．４３（６０），１８４．３１（１００））。

【0516】

（ｅ）（２Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（２Ｓ）−１−（（４−（８−（３−（（２−シクロプロピル−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）−３−メチルブタンアミド（１７）
出発物質１６（１７０ｍｇ、０．１８５ミリモル）を、アルゴンを充填した丸底フラスコ中の乾燥塩化メチレン（５ｍＬ）に溶解させてから、ピロリジン（４１μＬ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加した。フラスコをアルゴンで三回パージ／再充填してから、Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄（１４ｍｇ、０．０８４ミリモル）を添加し、そしてフラッシュ操作を繰り返した。１時間後、出発物質の完全な消費が観察され（反応をＬＣ／ＭＳで追跡した）、そしてＥｔ₂Ｏ（５０ｍＬ）を反応混合物に添加し、これを全ての生成物が溶液から崩れるまで攪拌した。この固体を、焼結漏斗を通して濾過し、Ｅｔ₂Ｏ（２×２５ｍＬ）で２回洗浄した。収集フラスコを交換し、そして単離した固体をＣＨＣｌ₃中に溶解させた（１００ｍＬ又は全ての生成物が焼結漏斗を通過するまで）。続いて、揮発性物質を減圧下での回転蒸発により除去して粗生成物１７を得、このものを次の工程で直接使用した（１６８ｍｇ）。ＬＣ／ＭＳ方法２（２．７０分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）８３０．２７（［Ｍ＋Ｈ］＋，５０），６６０．１３（８０），１７１．１５（１００））。

【0517】

（ｆ） Ｎ−（（Ｒ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｓ）−８−（３−（（（Ｓ）−２−シクロプロピル−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−１−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコサン−２７−アミド（１８）
出発物質１７（１５４ｍｇ、０．１８５ミリモル）及びＥＤＣＩ・ＨＣｌ（１１０ｍｇ、０．１８５ミリモル）を、パージされかつアルゴンが充填された丸底フラスコ中の乾燥塩化メチレン（５ｍＬ）中に溶解させた。この混合物を室温で１時間にわたって攪拌してから、ＰＥＧ８マレイミド（３５．６ｍｇ、０．１８５ミリモル）を添加し、そしてその反応混合物をさらに１６時間撹拌した（又は反応が完了するまで、ＬＣ／ＭＳによって監視した）。反応溶液を、塩化メチレン（５０ｍＬ）で希釈し、そして有機物をＨ₂Ｏ（５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄してから、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を減圧下での回転蒸発により除去して粗生成物を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１００％のＣＨＣｌ₃〜８５／１５ｖ／ｖのＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ）での精製により、所望の生成物を得た（１３５ｍｇ）が、未反応ＰＥＧ８マレイミドの微量残留量が認められた（ＬＣ／ＭＳ、２．２１分、方法２により）。自動化逆相シリカゲルクロマトグラフィー（Ｈ₂Ｏ／ＣＨ₃ＣＮ）（条件については一般的な情報を参照）は、不純物を正常に除去し、純粋な最終生成物を得た（出発物質３７ｍｇ、３３％から純粋な生成物１８、１１０ｍｇ）。全体の収率＝１７％。方法２、ＬＣ／ＭＳ（２．５８分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１４０４．０３（［Ｍ＋Ｈ］＋，２０），７０２．６３（１００））。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．９１（ｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５４−７．５０（ｍ，２Ｈ），７．４５（ｓ，１Ｈ），７．３９−７．３１（ｍ，２Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，２Ｈ），６．７６（ｓ，１Ｈ），６．７２−６．６８（ｍ，２Ｈ），４．７４−４．６２（ｍ，１Ｈ），４．４５−４．１７（ｍ，７Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．６７−３．５８（ｍ，３４Ｈ），３．５４（ｍ，２Ｈ），３．４２（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．１６−３．０７（ｍ，１Ｈ），２．９２（ｄｄ，Ｊ＝１６．１，４．１Ｈｚ，１Ｈ），２．６２−２．４９（ｍ，４Ｈ），２．４８−２．３９（ｍ，２Ｈ），２．３７−２．２５（ｍ，１Ｈ），１．９２（ｓ，１Ｈ），１．５２−１．４４（ｍ，３Ｈ），１．１０−０．９３（ｍ，６Ｈ），０．７９（ｄｄ，Ｊ＝９．２，５．３Ｈｚ，２Ｈ），０．５７（ｄｄ，Ｊ＝９．２，５．３Ｈｚ，２Ｈ），ＮＨが観察されなかった。

【0518】

例２

【化149】

【0519】

（ａ）（Ｒ）−２−（（Ｒ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパン酸（２０ｂ）
ＨＯ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｈ ２０ａ（３５０ｍｇ、１．８６ミリモル）及びＮａ₂ＣＯ３（４９３ｍｇ、４．６５ミリモル）を蒸留Ｈ₂Ｏ（１５ｍＬ）に溶解させ、そして混合物を０℃に冷却してから、ジオキサン（１５ｍＬ）を添加した（アミノ酸塩の部分的な沈殿が生じた）。Ｆｍｏｃ−Ｃｌ（５０４ｍｇ、１．９５ミリモル）のジオキサン（１５ｍＬ）溶液を１０分間かけて激しく撹拌しながら滴下添加した。得られた混合物を０℃で２時間攪拌してから、氷浴を除去し、そして撹拌を１６時間維持した。溶媒を減圧下での回転蒸発により除去し、そして残渣を水（１５０ｍＬ）に溶解させた。ｐＨを１ＮのＨＣｌで９から２に調整し、その後水層をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。一緒にして有機物をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、そして揮発性物質を減圧下での回転蒸発により除去して純粋なＨＯ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｆｍｏｃ ２０ｂを得た（７４６ｍｇ、収率９７％）。ＬＣ／ＭＳ２．８５分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）４１０．６０；¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．７９（ｄ，Ｊ＝７．７７Ｈｚ，２Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝７．７７Ｈｚ，２Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），６．３０（ｂｓ，１Ｈ），５．３０（ｂｓ，１Ｈ），４．７１−７．５６（ｍ，１Ｈ），４．５４−４．３６（ｍ，２Ｈ），４．０８−３．９１（ｍ，１Ｈ），２．２１−２．０７（ｍ，１Ｈ），１．５０（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），１．０６−０．９０（ｍ，６Ｈ）。

【0520】

（ｂ）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−３−メチル−１−オキソ−１−（（（Ｓ）−１−オキソ−１−（（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）アミノ）プロパン−２−イル）アミノ）ブタン−２−イル）カルバメート（２０）
４−アミノフェニルボロン酸ピナコールエステル（１４６．９ｍｇ、０．６７ミリモル）を、アルゴンでフラッシュしたフラスコ中において予めで室温で３０分間撹拌したＨＯ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｆｍｏｃ ２０ｂ（３３０ｍｇ、０．８ミリモル）、ＤＣＣ（１６６ｍｇ、０．８ミリモル）及びＤＭＡＰ（５ｍｇ、触媒）の乾燥ＤＣＭ（８ｍＬ）溶液に添加した。次いで、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応をＬＣＭＳ及びＴＬＣで追跡した。反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、そして有機層をＨ₂Ｏ及びブラインで洗浄してから、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして溶媒を減圧下での回転蒸発により除去した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーカラムに乾式充填し（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、６：４）、そして純粋な生成物２０を白色固体として８８％収率（３６０ｍｇ）で単離した。

【0521】

（ｃ）８−（３−（（２−（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）フェニル）−７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イルトリフルオロメタンスルホネート（２１）
ビス−トリフレート１２（２．０３ｇ、１．８１ミリモル）、ボロン酸ピナコールエステル（１ｇ、１．６３ミリモル）及びＮａ₂ＣＯ₃（８８１ｍｇ、８．３１ミリモル）をトルエン／メタノール／Ｈ₂Ｏの２：１：１（４０ｍＬ）混合物に溶解させた。反応フラスコをパージし、アルゴンを３回充填してから、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（４１ｍｇ、０．０３５ミリモル）を添加し、そしてこの反応混合物を一晩３０℃に加熱した。溶媒を減圧下で除去し、そして残留物をＨ₂Ｏ（１００ｍＬ）に溶解させ、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。一緒にした有機物をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして揮発性物質を減圧下での回転蒸発により除去した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーカラム（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、８：２〜２５：７５）で精製して純粋な２１を３３％収率（８８５ｍｇ）で得た。ＬＣ／ＭＳ３．８５分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１４５２．９０；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．７８−７．１６（ｍ，１７Ｈ），７．１３（ｓ，１Ｈ），６．５１−６．２４（ｍ，１Ｈ），５．５１（ｄｄ，Ｊ＝１０．０，５．１Ｈｚ，２Ｈ），５．３６−５．１１（ｍ，１Ｈ），４．７４（ｄｄ，Ｊ＝１０．１，４．４Ｈｚ，２Ｈ），４．７０−４．５３（ｍ，２Ｈ），４．４７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２７（ｍ，４Ｈ），４．２０−４．１４（ｍ，１Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．７７（ｄｄｄ，Ｊ＝１６．７，９．０，６．４Ｈｚ，３Ｈ），３．７１−３．６１（ｍ，２Ｈ），３．２４−２．９１（ｍ，３Ｈ），２．５５−２．３３（ｍ，２Ｈ），２．２２−２．０７（ｍ，１Ｈ），１．５２−１．３７（ｍ，３Ｈ），１．０４−０．８６（ｍ，１０Ｈ），０．００（ｓ，１８Ｈ）。

【0522】

（ｄ）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（２Ｓ）−１−（（（２Ｓ）−１−（（４−（８−（３−（（２−シクロプロピル−７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（２２）
トリフェニルアルシン（４２ｍｇ、０．１３７ミリモル）を、乾燥ジオキサン（１０ｍＬ）中ＰＢＤ−トリフレート２１（２５０ｍｇ、０．１７２ミリモル）、シクロプロピルボロン酸（７３．９ｍｇ、０．８６ミリモル）、酸化銀（１５９ｍｇ、０．６８８ミリモル）及びリン酸三カリウムの混合物（４３８ｍｇの、２．０６ミリモル）にアルゴン雰囲気下で添加した。反応をアルゴンで３回フラッシュし、そして塩化ビス（ベンゾニトリル）パラジウム（ＩＩ）（１３．２ｍｇ、０．０３４ミリモル）を添加した。反応をアルゴンで３回以上フラッシュしてから、７５℃に温め、そして１０分間攪拌した。反応混合物をセライトのパッドを通して濾過し、その後、これを酢酸エチルですすいだ。溶媒を減圧下での回転蒸発により除去した。得られた残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにかけた（シリカゲル；１％メタノール／クロロホルム）。純粋な画分を集め、一緒にし、そして過剰な溶出液を減圧下での回転蒸発により除去して所望の生成物２２を得た（１３２ｍｇ、収率５０％）。ＬＣ／ＭＳ３．８３分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１３４５．９１^;1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．８８−７．１４（ｍ，１７Ｈ），６．６９（ｓ，１Ｈ），６．４５−６．２５（ｍ，１Ｈ），５．５７−５．４１（ｍ，２Ｈ），５．３４−５．１４（ｍ，１Ｈ），４．７８−４．６７（ｍ，２Ｈ），４．６２−４．５５（ｍ，１Ｈ），４．５０−４．４５（ｍ，２Ｈ），４．５１−４．４４（ｍ，１Ｈ），４．３１−４．２１（ｍ，４Ｈ），４．１６（ｍ，１Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．８２−３．７１（ｍ，２Ｈ），３．６６（ｍ，３Ｈ），３．４０−３．２８（ｍ，１Ｈ），３．０７（ｍ，１Ｈ），２．７０−２．５７（ｍ，１Ｈ），２．４７−２．３６（ｍ，２Ｈ），２．１５（ｍ，１Ｈ），１．５１−１．４０（ｍ，３Ｈ），１．０３−０．８７（ｍ，１１Ｈ），０．７７−０．７１（ｍ，２Ｈ），０．６０−０．５４（ｍ，２Ｈ），０．００（ｔ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１８Ｈ）。

【0523】

（ｅ）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（２Ｓ）−１−（（（２Ｓ）−１−（（４−（８−（３−（（２−シクロプロピル−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（２３）
Ｓｕｐｅｒ−Ｈｙｄｒｉｄｅ（登録商標）の溶液（０．５ｍＬ、ＴＨＦ中１Ｍ）を、アルゴン雰囲気下において−７８℃でＳＥＭジラクタム２２（２６５ｍｇ、０．１９ミリモル）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に滴下して添加した。この添加を、反応混合物の内部温度を一定に維持するために、５分間かけて完了させた。２０分後、アリコートをＬＣ／ＭＳ分析のために水でクエンチし、その分析から、反応が完了したことが明らかになった。水（２０ｍＬ）を反応混合物に添加し、冷浴を除去した。有機層をＥｔＯＡｃで抽出し（３×３０ｍＬ）、一緒にした有機物をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして溶媒を減圧下での回転蒸発により除去した。粗生成物をＭｅＯＨ（１２ｍＬ）、塩化メチレン（６ｍＬ）、水（２ｍＬ）及び十分なシリカゲルに溶解し、濃厚撹拌懸濁液を形成させた。５日後、懸濁液を焼結漏斗を通して濾過し、そして生成物の溶出が完了するまで塩化メチレン／メタノール（９：１）（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層をブライン（２×７０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして溶媒を減圧下での回転蒸発により除去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１００％のＣＨＣｌ₃〜９６％のＣＨＣｌ₃／４％のＭｅＯＨ）により精製して、黄色の固体として生成物２３を得た（１６２ｍｇ、７８％）。ＬＣ／ＭＳ３．０２分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１０５２．３７。

【0524】

（ｆ）（２Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（２Ｓ）−１−（（４−（８−（３−（（２−シクロプロピル−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）−３−メチルブタンアミド（１７）
過剰のピペリジン（０．２ｍＬ、２ミリモル）をＳＥＭジラクタム２３（７６ｍｇ、０．０７３ミリモル）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に加えた。この混合物を室温で２０分間攪拌し、その時点で、反応が完了した（ＬＣ／ＭＳによって監視）。この反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（７５ｍＬ）で希釈し、そして有機相をピペリジンが完全に除去されるまでＨ₂Ｏ（３×７５ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして過剰の溶媒を減圧下での回転蒸発により除去して粗生成物１７を得、これを次の工程でそのまま使用した。ＬＣ／ＭＳ２．３２分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）８３０．００。

【0525】

（ｇ）Ｎ−（（２Ｓ）−１−（（（２Ｓ）−１−（（４−（８−（３−（（２−シクロプロピル−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−１−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコサン−２７−アミド（１８）
ＥＤＣＩ塩酸塩（１４ｍｇ、０．０７３２ミリモル）をアルゴン雰囲気下でマレイミドＰＥＧ８酸（４３．４ｍｇ、０．０７３２ミリモル）の乾燥ＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍＬ）への懸濁液を添加した。この混合物を室温で１時間攪拌してからＰＢＤ１７（６０．７ｍｇ、０．０７３２ミリモル）を加えた。反応が完了するまで（通常は５時間）攪拌を維持した。反応物をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、そして有機相をＨ₂Ｏ及びブラインで洗浄してから、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして過剰の溶媒を減圧下での回転蒸発により除去した。生成物を、注意深くシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し（１００％のＣＨＣｌ₃から出発して９：１のＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨまで緩やかな溶出）、その後逆相クロマトグラフィーによって生成して、未反応のマレイミドＰＥＧ８酸を除去した。生成物１８を１７．６％（２１．８ｍｇ）で単離した。ＬＣ／ＭＳ２．５７分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１４０５．３０；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．９１（ｔ，Ｊ＝３．５ Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝４．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝８．７ Ｈｚ，１Ｈ），７．５４−７．５０（ｍ，２Ｈ），７．４５（ｓ，１Ｈ），７．３９−７．３１（ｍ，２Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝１０．５ Ｈｚ，２Ｈ），６．７６（ｓ，１Ｈ），６．７２−６．６８（ｍ，２Ｈ），４．７４−４．６２（ｍ，１Ｈ），４．４５−４．１７（ｍ，７Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．６７−３．５８（ｍ，３４Ｈ），３．５４（ｍ，２Ｈ），３．４２（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，５．２ Ｈｚ，２Ｈ），３．１６−３．０７（ｍ，１Ｈ），２．９２（ｄｄ，Ｊ＝１６．１，４．１ Ｈｚ，１Ｈ），２．６２−２．４９（ｍ，４Ｈ），２．４８−２．３９（ｍ，２Ｈ），２．３７−２．２５（ｍ，１Ｈ），１．９２（ｓ，１Ｈ），１．５２−１．４４（ｍ，３Ｈ），１．１０−０．９３（ｍ，６Ｈ），０．７９（ｄｄ，Ｊ＝９．２，５．３ Ｈｚ，２Ｈ），０．５７（ｄｄ，Ｊ＝９．２，５．３ Ｈｚ，２Ｈ）、ＮＨは観察されなかった。

【0526】

例３

【化150】

【0527】

（ａ）（Ｓ）−７−メトキシ−８−（３−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−２−イルトリフルオロメタンスルホネート（２４）
Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄（２０．６ｍｇ、０．０１８ミリモル）を、ビスエノールトリフレート１２（５００ｍｇ、０．４４ミリモル）、Ｎ−メチルピペラジンボロン酸エステル（１００ｍｇ、０．４ミリモル）、Ｎａ₂ＣＯ₃（２１８ｍｇ、２．０５ミリモル）、ＭｅＯＨ（２．５ｍＬ）、トルエン（５ｍＬ）及び水（２．５ｍＬ）の撹拌混合物に添加した。この反応混合物を２４時間にわたって窒素雰囲気下に３０℃で撹拌し、その時間後、全てのボロン酸エステルが消費された。次いで、反応混合物を蒸発乾固させてから、残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解させ、そしてＨ₂Ｏ（２×５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、ろ過し、そして減圧下で蒸発させて粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（勾配溶出：８０：２０（ｖ／ｖ）のヘキサン／ ＥｔＯＡｃ〜６０：４０（ｖ／ｖ）のヘキサン／ ＥｔＯＡｃ）で精製して、黄色がかった泡状物として生成物２４を得た（１２２．６ｍｇ、２５％）。ＬＣ／ＭＳ３．１５分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１１４４（［Ｍ＋Ｈ］⁺、２０％）。

【0528】

（ｂ）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｓ）−７−メトキシ−８−（３−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（２５）
ＰＢＤ−トリフレート２４（３５９ｍｇ、０．３１４ミリモル）、ボロン酸ピナコールエステル２０（２５０ｍｇ、０．４０８ミリモル）及びトリエチルアミン（０．３５ｍＬ、２．５１ミリモル）をトルエン／メタノール／Ｈ₂Ｏ、２：１：１（３ｍＬ）の混合物に溶解した。マイクロ波容器を３回パージし、アルゴンを充填してから、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２１．７ｍｇ、０．０１８ミリモル）を添加し、そして反応混合物を８０℃で１０分間マイクロ波内に置いた。次に、ＣＨ₂Ｃｌ₂（１００ｍＬ）を加え、そして有機層を水（２×５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄してから、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、揮発性物質を減圧下での回転蒸発により除去した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーカラムにより精製（ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ、１００％〜９：１）して、純粋な２５を得た（２００ｍｇ、４３％の収率）。ＬＣ／ＭＳ３．２７分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１４７８（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００％）。

【0529】

（ｃ）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｓ）−７−メトキシ−８−（３−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（２６）
Ｓｕｐｅｒ−Ｈｙｄｒｉｄｅ（登録商標）（０．３４ｍＬ、ＴＨＦ中１Ｍ）を、アルゴン雰囲気下において−７８℃でＳＥＭジラクタム２５（２００ｍｇ、０．１３５ミリモル）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に滴下して添加した。この反応混合物の内部温度を一定に維持するために添加を５分間かけて完了させた。２０分後、アリコートをＬＣ／ＭＳ分析のために水でクエンチし、この分析からこの反応が完了したことが明らかになった。水（２０ｍＬ）を反応混合物に添加し、冷浴を除去した。有機層をＥｔＯＡｃ（３×３０ｍＬ）で抽出し、一緒にした有機物をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして溶媒を減圧下での回転蒸発により除去した。粗生成物をＭｅＯＨ（６ｍＬ）、ＣＨ₂Ｃｌ₂（３ｍＬ）、水（１ｍＬ）及び十分なシリカゲルに溶解させて濃厚な撹拌懸濁液を形成さでる。５日後、この懸濁液を、焼結漏斗を通して濾過し、生成物の溶出が完了するまでＣＨ₂Ｃｌ₂／メタノール（９：１）（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をブライン（２×５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして溶媒を減圧下での回転蒸発により除去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１００％のＣＨＣｌ₃〜９６％のＣＨＣｌ₃／４％のＭｅＯＨ）により精製して、黄色の固体として生成物２６を得た（１００ｍｇ、６３％）。ＬＣ／ＭＳ２．６７分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１１８６（［Ｍ＋Ｈ］^+.，５％）。

【0530】

（ｄ）（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｒ）−７−メトキシ−８−（３−（（（Ｒ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）−３−メチルブタンアミド（２７）
過剰のピペリジン（０．１ｍＬ、１ミリモル）をＰＢＤ２６（３６．４ｍｇ、０．０３ミリモル）のＤＭＦ（０．９ｍＬ）溶液に加えた。この混合物を室温で２０分間攪拌し、その時点で反応が完了した（ＬＣ／ＭＳによって監視）。この反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ）で希釈し、ピペリジンが完全に除去されるまで有機相をＨ₂Ｏで洗浄した（３×５０ｍＬ）。有機相をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして過剰の溶媒を減圧下での回転蒸発により除去して粗生成物２７を得、これを次の工程でそのまま使用した。ＬＣ／ＭＳ２．２０分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）９６４（［Ｍ＋Ｈ］^+.，５％）。

【0531】

（ｅ）６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｓ）−７−メトキシ−８−（３−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）ヘキサンアミド（２８）
ＥＤＣＩ塩酸塩（４．７ｍｇ、０．０３ミリモル）をアルゴン雰囲気下で６−マレイミドヘキサン酸（６．５ｍｇ、０．０３ミリモル）の乾燥ＣＨ₂Ｃｌ₂（３ｍＬ）への懸濁液に添加した。この混合物を室温で１時間攪拌してから、ＰＢＤ２７（３４ｍｇ、粗製）を加えた。反応が完了するまで（６時間）攪拌を維持した。反応物をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、そして有機相をＨ₂Ｏ及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして過剰の溶媒を減圧下での回転蒸発により除去した。生成物を、注意深くシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し（１００％のＣＨＣｌ₃から出発して９：１のＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨまでの緩やかな溶出）、その後逆相クロマトグラフィーで生成して、未反応のマレイミドＰＥＧ８酸を除去した。生成物２８を、２工程にわたって４１％で単離した（１４．６ｍｇ）。ＬＣ／ＭＳ２．４０分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１１５７（［Ｍ＋Ｈ］^+.，５％）。

【0532】

例４−化合物２５の別の合成

【化151】

【0533】

ＰＢＤ−トリフレート２１（４６９ｍｇ、０．３２３ミリモル）、ボロン酸ピナコールエステル（１４６．５ｍｇ、０．４８４ミリモル）及びＮａ₂ＣＯ₃（１５７ｍｇ、１．４８ミリモル）をトルエン／メタノール／Ｈ₂Ｏの２：１：１（１０ｍＬ）混合物に溶解した。反応フラスコをアルゴンで３回パージしてから、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（７．４１ｍｇ、０．００６４ミリモル）を添加し、そしてこの反応混合物を一晩３０℃に加熱した。溶媒を減圧下で除去し、残留物をＨ₂Ｏ（５０ｍＬ）に溶解させ、そしてＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。一緒にした有機物をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして揮発性物質を減圧下での回転蒸発により除去した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して（ＣＨＣｌ₃の１００％〜ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨの９５％：５％）、純粋な２５を３３％の収率（８８５ｍｇ）で得た。ＬＣ／ＭＳ３．２７分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１４７８（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００％）。

【0534】

例５

【化152】

【0535】

（ａ）（Ｓ）−２−（４−アミノフェニル）−８−（３−（（（Ｓ）−２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５，１１（１０Ｈ，１１ａＨ）ジオン（２９）
３，４−（メチレンジオキシ）フェニルボロン酸（３５６ｍｇ、２．１ミリモル、１．３当量）、ＴＥＡ（１．８ｍＬ、１２．９ミリモル、８当量）及びトリフレート／アニリン１３（１．７５ｇ、１．７ミリモル、１当量）をＡｒ雰囲気下でエタノール（７ｍＬ）、トルエン（１３ｍＬ）及び水（２ｍＬ）の混合物に溶解させた。この反応混合物を排出し、アルゴンで３回フラッシュしてから、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１１４ｍｇ、０．１ミリモル、０．０６当量）を添加した。フラスコを再度排気し、そしてＡｒで３回フラッシュし、３０秒予備攪拌時間しながら８分間にわたって８０℃でマイクロ波加熱した。ＴＬＣ（８０：２０ｖ／ｖの酢酸エチル／ヘキサン）による分析から、出発物質の完全な消費が示された。反応混合物をジクロロメタン（５０ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして溶媒を真空中で除去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（６０：４０〜２０：８０（ｖ／ｖ）のヘキサン／酢酸エチル）により精製して、黄色固体として生成物２９を得た（１．２１ｇ、７１％）。ＬＣ／ＭＳ（３．９２分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１０３２．４４（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００）。

【0536】

（ｂ）（Ｓ）−２−（４−アミノフェニル）−８−（３−（（（Ｓ）−２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（３０）
ＳＥＭジラクタム２９（０．２５ｇ、０．２４ミリモル、１当量）をＴＨＦ（８ｍＬ）に溶解し、アルゴン雰囲気下で７８℃に冷却した。温度を監視しながら、Ｓｕｐｅｒ−Ｈｙｄｒｉｄｅ（登録商標）（０．６ｍＬ、ＴＨＦ中１Ｍ、２．５当量）を５分間かけて滴下して加えた。２０分後、少量のサンプルを採取し、そしてＬＣＭＳ分析の準備をした。水（５０ｍＬ）を添加し、冷浴を除去し、そして溶液を酢酸エチル（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を抽出し、そしてブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして溶媒を真空中で除去した。粗生成物をＥｔＯＨ（１５ｍＬ）、ＣＨ₂Ｃｌ₂（７．５ｍＬ）及び水（２．５ｍＬ）に溶解し、そして濃厚な懸濁液になるまで十分なシリカゲルを添加した。５日間攪拌した後、これを焼結漏斗を通して濾過し、生成物が溶出しなくなるまでＣＨ₂Ｃｌ₂／メタノール（９：１）（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をブライン（２×５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして溶媒を真空中で除去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１％〜４％ＭｅＯＨ勾配と共にＣＨＣｌ₃）によって精製して、黄色固体として生成物３０を得た（９４ｍｇ、５３％）。ＬＣ／ＭＳ（２．５３分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）７３９．６４（［Ｍ］^+.，７０）。

【0537】

(ｃ）アリル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｓ）−８−（３−（（（Ｓ）−２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（３１）
Ａｒ雰囲気下で、Ａｌａｎｉｎｅ−Ｖａｌｉｎｅ−Ａｌｌｏｃ（１８０ｍｇ、０．６６ミリモル、１．２当量）を無水ＣＨ₂Ｃｌ₂（２１ｍＬ）及びメタノール（１ｍＬ）中においてＥＥＤＱ（１６３ｍｇ、０．６６ミリモル、１．２当量）と共に１時間撹拌した。ＰＢＤ３０（４０７ｍｇ、０．５５ミリモル、１当量）を無水ＣＨ₂Ｃｌ₂（２１ｍＬ）及びメタノール（１ｍＬ）に溶解し、そして反応物に添加した。室温で５日日撹拌した後に、ＬＣ／ＭＳは大部分の生成物の形成を示した。溶媒を減圧下で除去してからカラムクロマトグラフィーで精製（１％〜６％ＭｅＯＨ勾配でのＣＨ₂Ｃｌ₂）して、黄色の固体として生成物３１を得た（１８４ｍｇ、３４％）。ＬＣ／ＭＳ（２．９５分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）９９４．９５（［Ｍ＋Ｈ］^+.，６０）。

【0538】

（ｄ）（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｓ）−８−（３−（（（Ｓ）−２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）−３−メチルブタンアミド（３２）
イミン３１（１００ｍｇ、０．１ミリモル、１当量）をＡｒ雰囲気下で無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）（溶解を助けるために一滴のメタノールを用いる）に溶解させた。ピロリジン（３０μＬ、０．１５ミリモル、１．５当量）を滴下して添加してから、フラスコを排気し、そしてアルゴンで３回フラッシュした。Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄（７ｍｇ、６μｍｏｌ、０．０６当量）を添加し、フラスコを排気し、そしてアルゴンで３回フラッシュした。１時間後のＬＣ／ＭＳ分析から、生成物の形成及び出発物質の完全な消失が示された。Ｅｔ₂Ｏ（６０ｍＬ）を反応混合物に添加し、そして全ての生成物が溶液から崩れるまでこれを攪拌した。沈殿物を焼結漏斗を通して濾過し、Ｅｔ₂Ｏ（２×２０ｍＬ）で２回洗浄した。収集フラスコを交換し、単離した固体を溶解させ、そしてＣＨＣｌ₃（１００ｍＬ）で焼結体を介して洗浄した。溶媒を減圧下で除去して黄色の固体として粗生成物３２を得、これを次の工程で直接使用した。ＬＣ／ＭＳ（１．１４分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）９１０．４０（［Ｍ＋Ｈ］^+.，６７）。

【0539】

（ｅ）Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｓ）−８−（３−（（（Ｓ）−２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−１−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコサン−２７−アミド（３３）
イミン３２（９２ｍｇ、０．１ミリモル、１．１当量）を、溶解を助けるための一滴の無水ＭｅＯＨと共にＣＨＣｌ₃（６ｍＬ）に溶解させた。マレイミドＰＥＧ８酸（５３ｍｇ、０．０９ミリモル、１当量）を添加し、その後ＥＥＤＱ（３３ｍｇ、０．１４ミリモル、１．５当量）を添加した。これを、ＬＣ／ＭＳ分析により大部分の生成物の形成が示されるまで４日間にわたりアルゴン下において室温で激しく攪拌した。溶媒を真空中で除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１％〜１０％のＭｅＯＨ勾配を用いたＣＨＣｌ₃）により部分的に生成して３３を得た（８１ｍｇ）。この物質を分取ＨＰＬＣによってさらに精製して、黄色の固体として３３を得た（２６．３ｍｇ、１８％）。急速ギ酸実施：ＬＣ／ＭＳ（１．３９分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１４８５．００（［Ｍ＋Ｈ］＋．，６４）。

【0540】

例６

【化153】

【0541】

（ａ）９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｓ）−８−（３−（（（Ｓ）−２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（３４）
トリフレート２１（０．５ｇ、０．３５ミリモル、１当量）、３，４−（メチレンジオキシ）フェニルボロン酸（７５ｍｇ、０．４５ミリモル、１．３当量）及びＮａ₂ＣＯ₃（０．１７ｇ、１．６ミリモル、４．５当量）をアルゴン雰囲気下でトルエン（１１ｍＬ）、ＥｔＯＨ（５．５ｍＬ）及び水（５．５ｍＬ）に溶解させた。フラスコを排気し、そしてアルゴンで３回フラッシュした。Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄（２４ｍｇ、０．０２ミリモル、０．０６当量）を添加し、再びフラスコを排気し、アルゴンで３回フラッシュした。これを３０℃に加熱し、一晩撹拌し続けた。ＬＣ／ＭＳによる分析から、出発物質の完全な消失が示された。溶媒を真空中で除去し、残留物を水（６０ｍＬ）に溶解させてから酢酸エチル（６０ｍＬ×３）で洗浄した。一緒にした有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして溶媒を真空下で除去した。カラムクロマトグラフィー（５０：５０〜２５：７５（ｖ／ｖ）のヘキサン／酢酸エチル）により精製して、黄色の固体として生成物３４を得た（３１０ｍｇ、６４％）。ＬＣ／ＭＳ（１．４４分（ＥＳ^-）ｍ／ｚ（相対強度）１４２３．３５（［Ｍ−Ｈ］^-，７９）。

【0542】

（ｂ）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｓ）−８−（３−（（（Ｓ）−２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（３５）
ＳＥＭジラクタム３４（０．３１ｇ、０．２２ミリモル、１当量）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解し、そしてアルゴン雰囲気下で７８℃に冷却した。Ｓｕｐｅｒ−Ｈｙｄｒｉｄｅ（登録商標）（０．５ｍＬ、ＴＨＦ中１Ｍ、２．５当量）を、温度を監視しつつ５分間かけてを滴下添加した。３０分後、少量のサンプルを採取し、ＬＣ／ＭＳ分析のための準備をした。水（５０ｍＬ）を添加し、冷浴を除去し、そして溶液を酢酸エチル（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を抽出し、そしてブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして溶媒を真空下で除去した。粗生成物をＥｔＯＨ（１３．２ｍＬ）、ＣＨ₂Ｃｌ₂（６．６ｍＬ）及び水（２．２ ｍＬ）に溶解させ、濃厚な懸濁液になるまで十分なシリカゲルを添加した。５日間攪拌した後、これを焼結漏斗を通して濾過し、生成物が溶出しなくなるまでＣＨ₂Ｃｌ₂／メタノール（９：１）（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をブライン（２×５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして溶媒を真空下で除去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１％〜４％ＭｅＯＨ勾配を用いたＣＨＣｌ₃）により精製して、黄色の固体として純粋な生成物３５を得た（１８５ｍｇ、７５％）。ＬＣ／ＭＳ（１．７０分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１１３２．８５（［Ｍ＋Ｈ］^+.，６０）。

【0543】

（ｃ）（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｓ）−８−（３−（（（Ｓ）−２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）−３−メチルブタンアミド（３２）
イミン３５（８２ｍｇ、０．０７ミリモル、１当量）（１ｍＬ）をＤＭＦに溶解させてから、ピペリジン（０．２ｍＬ、２ミリモル、過剰）をゆっくりと添加した。この溶液をＬＣ／ＭＳ分析により出発物質の完全な消費が示されるまで室温で２０分間攪拌した。反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ×４）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして溶媒を真空下で除去した。生成物３３を次の工程でさらに精製することなく使用した。ＬＣ／ＭＳ（１．１５分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）９１０．６０（［Ｍ＋Ｈ］^+.，５８）。

【0544】

例７
（ｉ）（Ｓ）−（２−アミノ−５−メトキシ−４−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）フェニル）（２−（（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メタノン（４９）

【化154】

【0545】

（ａ）５−メトキシ−２−ニトロ−４−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）ベンズアルデヒド（４２）
ニートのトリイソプロピルシリルクロリド（５６．４ｍＬ、２６２ミリモル）イミダゾール（４８．７ｇ、７１５．２３ミリモル）と４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンズアルデヒド４１（４７ｇ、２３８ミリモル）との混合物（一緒に粉砕）に添加した。この混合物を、フェノール及びイミダゾールが融解し、溶液になるまで加熱した（１００℃）。この反応混合物を１５分間撹拌した後、冷却させ、それによってフラスコの底部に固形物が形成することが観察された（塩化イミダゾール）。反応混合物を５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで希釈し、シリカゲル上に直接ロードし、そしてパッドを５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出し、その後１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出した（低過剰のため、非常にわずかの未反応ＴＩＰＳＣｌが生成物中に見出された）。所望の生成物をヘキサン中５％酢酸エチルで溶出した。過剰な溶離液を減圧下での回転蒸発により除去し、その後高真空下で乾燥させて結晶性感光性固体を得た（７４．４ｇ、８８％）。ＬＣ／ＭＳ（４．２２分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）３５３．８８（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００））による十分な純度；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ１０．４３（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｓ，１Ｈ），７．４０（ｓ，１Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ），１．３５−１．２４（ｍ，３Ｈ），１．１０（ｍ，１８Ｈ）。

【0546】

（ｂ）５−メトキシ−２−ニトロ−４−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）安息香酸（４３）
亜塩素酸ナトリウム（４７．３ｇ、５２３ミリモル、８０％工業等級）及びリン酸二水素ナトリウム一塩基（３５．２ｇ、２９３ミリモル）（ＮａＨ₂ＰＯ₄）の水溶液（８００ｍＬ）を、室温で化合物２（７４ｇ、２０９ミリモル）のテトラヒドロフラン（５００ｍＬ）溶液に添加した。過酸化水素（６０％ｗ／ｗ、１４０ｍＬ、２．９３モル）を激しく撹拌した二相混合物に直ちに添加した。反応混合物はガス（酸素）発生し、出発物質が溶解し、反応混合物の温度が４５℃に上昇した。３０分後、ＬＣ／ＭＳから、反応が完了したことが明らかになった。反応混合物を氷浴で冷却し、塩酸（１Ｍ）を添加してｐＨを３に低下させた（この工程は、多くの場合不必要であることが分かった。というのは、反応終了時のｐＨは既に酸性だからである；抽出前のｐＨを確認することが必要である）。次いで、反応混合物を酢酸エチル（１Ｌ）及びブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、有機相を抽出し、そして硫酸マグネシウムで乾燥させた。有機相を濾過し、過剰の溶媒を減圧下での回転蒸発により除去して生成物４３を黄色の固体として定量的収率で得た。ＬＣ／ＭＳ（３．９３分（ＥＳ−）ｍ／ｚ（相対強度）３６７．７４（［Ｍ−Ｈ］^-.，１００））；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．３６（ｓ，１Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），１．３４−１．２２（ｍ，３Ｈ），１．１０（ｍ，１８Ｈ）。

【0547】

（ｃ）（（２Ｓ，４Ｒ）−２−（（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−ヒドロキシピロリジン−１−イル）（５−メトキシ−２−ニトロ−４−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）フェニル）メタノン（４５）
ＤＣＣ（２９．２ｇ、１４１ミリモル、１．２当量）を０℃で酸３（４３．５ｇ、１１７．８ミリモル、１当量）及びヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（１９．８ｇ、１２９．６ミリモル、１．１当量）のジクロロメタン溶液（２００ｍＬ）に添加した。冷浴を除去し、そして反応を室温で３０分間進行させ、その時点で、（２Ｓ，４Ｒ）−２−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−４−ヒドロキシピロリジン４４（３０ｇ、１２９．６ミリモル、１．１当量）及びトリエチルアミン（２４．６６ｍＬ、１７６ミリモル、１．５当量）のジクロロメタン溶液（１００ｍＬ）をアルゴン下において−１０℃で迅速に添加した（大規模では、添加時間は、反応混合物をさらに冷却することによって短縮できる）。この反応混合物を１時間４０分間にわたって室温で撹拌し、そしてＬＣ／ＭＳ及びＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）により監視した。固形物をセライトで濾過により除去し、そして有機相をｐＨが４又は５と測定されるまで冷水性０．１Ｍ ＨＣｌで洗浄した。次いで、有機相を水で洗浄し、その後飽和重炭酸ナトリウム水溶液及びブラインで洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、そして過剰の溶媒を減圧下での回転蒸発により除去した。残留物にフラッシュカラムクロマトグラフィーを施した（シリカゲル；勾配４０／６０酢酸エチル／ヘキサン〜８０／２０酢酸エチル／ヘキサン）。過剰の溶媒を減圧下での回転蒸発により除去して、純粋な生成物４５を得た（純粋な生成物６６％の４５．５ｇ、及びわずかに不純な生成物の１７ｇ、合計９０％）。ＬＣ／ＭＳ４．４３分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）５８２．９２（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．６６（ｓ，１Ｈ），６．７４（ｓ，１Ｈ），４．５４（ｓ，１Ｈ），４．４０（ｓ，１Ｈ），４．１３（ｓ，１Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．７７（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），３．３６（ｄｄ，Ｊ＝１１．３，４．５ Ｈｚ，１Ｈ），３．１４−３．０２（ｍ，１Ｈ），２．３８−２．２８（ｍ，１Ｈ），２．１０（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．３，８．４，２．２ Ｈｚ，１Ｈ），１．３６−１．１９（ｍ，３Ｈ），１．１５−１．０５（ｍ，１８Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．１７−０．０５（ｍ，６Ｈ），（回転異性体の存在）。

【0548】

（ｄ）（Ｓ）−５−（（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−１−（５−メトキシ−２−ニトロ−４−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）ベンゾイル）ピロリジン−３−オン（４６）
ＴＣＣＡ（８．８２ｇ、４０ミリモル、０．７当量）を０℃で４５（３１．７ｇ、５４ミリモル、１当量）及びＴＥＭＰＯ（０．８５ｇ、５．４ミリモル、０．１当量）の乾燥ジクロロメタン攪拌溶液（２５０ｍＬ）に添加した。この反応混合物を激しく２０分間撹拌し、その時点で、ＴＬＣ（５０／５０酢酸エチル／ヘキサン）は出発物質の完全な消費を示した。反応混合物をセライトを通して濾過し、ろ液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）、チオ硫酸ナトリウム（３００ｍＬ中９ｇ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、そして硫酸マグネシウム上で乾燥させた。減圧下での回転蒸発により生成物４６を定量的収率で得た。ＬＣ／ＭＳ４．５２分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）５８１．０８（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．７８−７．６０（ｍ，１Ｈ），６．８５−６．６２（ｍ，１Ｈ），４．９４（ｄｄ，Ｊ＝３０．８，７．８ Ｈｚ，１Ｈ），４．５０−４．１６（ｍ，１Ｈ），３．９９−３．８２（ｍ，３Ｈ），３．８０−３．３４（ｍ，３Ｈ），２．９２−２．１７（ｍ，２Ｈ），１．４０−１．１８（ｍ，３Ｈ），１．１１（ｔ，Ｊ＝６．２ Ｈｚ，１８Ｈ），０．９７−０．７５（ｍ，９Ｈ），０．１５−０．０６（ｍ，６Ｈ），（回転異性体の存在）。

【0549】

（ｅ）（Ｓ）−５−（（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−１−（５−メトキシ−２−ニトロ−４−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）ベンゾイル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−３−イルトリフルオロメタンスルホネート（４７）
トリフルオロメタンスルホン酸無水物（２７．７ｍＬ、４６．４ｇ、１６５ミリモル、３当量）を、２，６−ルチジン（２５．６ｍＬ、２３．５ｇ、２２０ミリモル、４当量、ふるい上で乾燥）の存在下において−５０℃（アセトン／ドライアイス浴）で、ケトン４６（３１．９ｇ、５５ミリモル、１当量）の乾燥ジクロロメタン（９００ｍＬ）への激しく撹拌した懸濁液に注入した（温度を制御）。この反応混合物を１．５時間撹拌し、そのときに、ミニワークアップ（水／ジクロロメタン）後のＬＣ／ＭＳから、反応が完了したことが明らかになった。水をまだ冷たい反応混合物に加え、そして有機層を分離し、飽和重炭酸ナトリウム、ブライン及び硫酸マグネシウムで洗浄した。有機相をろ過し、そして過剰の溶媒を減圧下での回転蒸発により除去した。残留物をカラムフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル；１０／９０（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサン）に付した後、過剰の溶離液を除去して、生成物４７を得た（３７．６ｇ、９６％）。ＬＣ／ＭＳ、方法２、 ４．３２分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）７１２．８９（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．７１（ｓ，１Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），６．０５（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．７８（ｄｄ，Ｊ＝９．８，５．５ Ｈｚ，１Ｈ），４．１５−３．７５（ｍ，５Ｈ），３．１７（ｄｄｄ，Ｊ＝１６．２，１０．４，２．３ Ｈｚ，１Ｈ），２．９９（ｄｄｄ，Ｊ＝１６．３，４．０，１．６ Ｈｚ，１Ｈ），１．４５−１．１９（ｍ，３Ｈ），１．１５−１．０８（ｍ，１８Ｈ），１．０５（ｓ，６Ｈ），０．９５−０．８７（ｍ，９Ｈ），０．１５−０．０８（ｍ，６Ｈ）。

【0550】

（ｆ）（Ｓ）−（２−（（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）（５−メトキシ−２−ニトロ−４−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）フェニル）メタノン（４８）
トリフェニルアルシン（１．７１ｇ、５．６０ミリモル、０．４当量）を、アルゴン雰囲気下で、トリフレート４７（１０．００ｇ、１４ミリモル、１当量）、メチルボロン酸（２．９４ｇ、４９．１ミリモル、３．５当量）、酸化銀（１３ｇ、５６ミリモル、４当量）及びリン酸カリウム三塩基（１７．８ｇ、８４ミリモル、６当量）の乾燥ジオキサン（８０ｍＬ）中の混合物に添加した。反応物をアルゴンで３回フラッシュした後、ビス（ベンゾニトリル）パラジウム（ＩＩ）クロリド（５４０ｍｇ、１．４０ミリモル、０．１当量）を加えた。反応物をアルゴンで３回フラッシュしてから、１１０℃に瞬時に加温した（ｄｒｙｓｙｎ加熱ブロックを、フラスコの追加前に１１０℃に予め加温しておいた）。１０分後、反応物を室温にまで冷却し、セライトパッドを通して濾過した。溶媒を減圧下での回転蒸発により除去した。得られた残留物をカラムフラッシュクロマトグラフィーに付した（シリカゲル；１０％酢酸エチル／ヘキサン）。純粋な画分を集めて一緒にし、そして過剰な溶出液を減圧下での回転蒸発により除去して、生成物４８を得た（４．５ｇ、５５％）。ＬＣ／ＭＳ，４．２７分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）５７９．１８（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．７０（ｓ，１Ｈ），６．７７（ｓ，１Ｈ），５．５１（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．７７−４．５９（ｍ，１Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），２．９２−２．６５（ｍ，１Ｈ），２．５５（ｄ，Ｊ＝１４．８ Ｈｚ，１Ｈ），１．６２（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，３Ｈ），１．４０−１．１８（ｍ，３Ｈ），１．１１（ｓ，９Ｈ），１．１０（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），０．１１（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，６Ｈ）。

【0551】

（ｇ）（Ｓ）−（２−アミノ−５−メトキシ−４−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）フェニル）（２−（（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メタノン（４９）
亜鉛粉末（２８ｇ、４３０ミリモル、３７当量）を、約１５℃で、化合物４８（６．７ｇ、１１．５８ミリモル）のエタノール中５％ギ酸ｖ／ｖ溶液（７０ｍＬ）に添加した。生じた発熱を氷浴を用いて制御して３０℃未満の反応混合物の温度を維持した。３０分後、反応混合物をセライトのパッドを通して濾過した。ろ液を酢酸エチルで希釈し、そして有機相を水、飽和重炭酸ナトリウム水溶液及びブラインで洗浄した。有機相を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、そして過剰の溶媒を減圧下での回転蒸発により除去した。得られた残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにかけた（シリカゲル；ヘキサン中１０％酢酸エチル）。純粋な画分を集めて一緒にし、そして過剰の溶媒を減圧下での回転蒸発により除去して、生成物４９を得た（５．１ｇ、８０％）。ＬＣ／ＭＳ，４．２３分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）５５０．２１（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．２８（ｓ，１Ｈ），６．６７（ｓ，１Ｈ），６．１９（ｓ，１Ｈ），４．６４−４．５３（ｍ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ），４．１７（ｓ，１Ｈ），３．８７（ｓ，１Ｈ），３．７７−３．６９（ｍ，１Ｈ），３．６６（ｓ，３Ｈ），２．７１−２．６０（ｍ，１Ｈ），２．５３−２．４３（ｍ，１Ｈ），２．０４−１．９７（ｍ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ），１．６２（ｓ，３Ｈ），１．２６−１．１３（ｍ，３Ｈ），１．０８−０．９９（ｍ，１８Ｈ），０．８２（ｓ，９Ｈ），０．０３−−０．０３（ｍ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，６Ｈ）。

【0552】

（ｉｉ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−アリル１１−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−８−（（５−ヨードペンチル）オキシ）−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート

【化155】

【0553】

（ａ）（Ｓ）−アリル（２−（２−（（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボニル）−４−メトキシ−５−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）フェニル）カルバメート（５０）
アリルクロロホルメート（０．３０ｍＬ、３．００ミリモル、１．１当量）を、−７８℃（アセトン／ドライアイス浴）で、乾燥ピリジン（０．４８ｍＬ、６．００ミリモル、２．２当量）の存在下でのアミン４９（１．５ｇ、２．７３ミリモル）の乾燥ジクロロメタン溶液（２０ｍＬ）に添加した。３０分後、浴を取り除き、反応混合物を室温にまで加温した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、飽和水性硫酸銅を添加した。次いで、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及びブラインで順次洗浄した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、そして過剰の溶媒を減圧下での回転蒸発によって除去して、生成物５０を得、これを次の反応に直接使用した。ＬＣ／ＭＳ，４．４５分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）６３２．９１（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００）。

【0554】

（ｂ）（Ｓ）−アリル（２−（２−（ヒドロキシメチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボニル）−４−メトキシ−５−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）フェニル）カルバメート（５１）
粗生成物５０を、酢酸／メタノール／テトラヒドロフラン／水の７：１：１：２混合物（２８：４：４：４：８ｍＬ）に溶解し、そして室温で撹拌した。３時間後、出発物質の完全な消失をＬＣ／ＭＳで観察した。この反応混合物を酢酸エチルで希釈し、そして水（２×５００ｍＬ）、飽和水性重炭酸ナトリウム（２００ｍＬ）及びブラインで順次洗浄した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、そして過剰の酢酸エチルを減圧下での回転蒸発により除去した。得られた残留物にフラッシュカラムクロマトグラフィーを行った（シリカゲル、ヘキサン中２５％酢酸エチル）。純粋な画分を集めて一緒にし、そして過剰な溶離液を減圧下での回転蒸発により除去して、所望の生成物５１を得た（１ｇ、７１％）。ＬＣ／ＭＳ，３．７０分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）５１９．１３（［Ｍ＋Ｈ］^+.，９５）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ８．３４（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｓ，１Ｈ），６．７８（ｓ，１Ｈ），６．１５（ｓ，１Ｈ），５．９５（ｄｄｔ，Ｊ＝１７．２，１０．５，５．７Ｈｚ，１Ｈ），５．３３（ｄｑ，Ｊ＝１７．２，１．５Ｈｚ，１Ｈ），５．２３（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．４，２．６，１．３Ｈｚ，１Ｈ），４．７３（ｔｔ，Ｊ＝７．８，４．８Ｈｚ，１Ｈ），４．６３（ｄｔ，Ｊ＝５．７，１．４Ｈｚ，２Ｈ），４．５４（ｓ，１Ｈ），３．８９−３．７０（ｍ，５Ｈ），２．８７（ｄｄ，Ｊ＝１６．５，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），２．１９（ｄｄ，Ｊ＝１６．８，４．６Ｈｚ，１Ｈ），１．７０（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，３Ｈ），１．３８−１．２３（ｍ，３Ｈ），１．１２（ｓ，１０Ｈ），１．１０（ｓ，８Ｈ）。

【0555】

（ｃ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−アリル１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−８−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（５２）
ジメチルスルホキシド（０．３５ｍＬ、４．８３ミリモル、２．５当量）をアルゴン雰囲気下において−７８℃（ドライアイス／アセトン浴）で塩化オキサリル（０．２ｍＬ、２．３２ミリモル、１．２当量）の乾燥ジクロロメタン溶液（１０ｍＬ）に滴下添加した。１０分後、５１（１ｇ、１．９３ミリモル）の乾燥ジクロロメタン溶液（８ｍＬ）をなお−７８℃の温度でゆっくりと添加した。１５分後、トリエチルアミン（１．３５ｍＬ、４Åモレキュラーシーブ上で乾燥、９．６５ミリモル、５当量）を滴下添加し、そしてドライアイス／アセトン浴を除去した。反応混合物を室温に到達させ、そして冷塩酸（０．１Ｍ）、飽和重炭酸ナトリウム水溶液及びブラインで抽出した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、そして過剰なジクロロメタンを減圧下での回転蒸発により除去して、生成物５２を得た（６５８ｍｇ、６６％）。ＬＣ／ＭＳ，３．５２分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）５１７．１４（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．２０（ｓ，１Ｈ），６．７５−６．６３（ｍ，Ｊ＝８．８，４．０Ｈｚ，２Ｈ），５．８９−５．６４（ｍ，Ｊ＝９．６，４．１Ｈｚ，２Ｈ），５．２３−５．０３（ｍ，２Ｈ），４．６８−４．３８（ｍ，２Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．８３−３．７７（ｍ，１Ｈ），３．４０（ｓ，１Ｈ），３．０５−２．８３（ｍ，１Ｈ），２．５９（ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ，１Ｈ），１．７８（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，３Ｈ），１．３３−１．１６（ｍ，３Ｈ），１．０９（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，９Ｈ），１．０７（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，９Ｈ）。

【0556】

（ｄ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−アリル１１−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−８−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（５３）
ｔ−ブチルジメチルシリルトリフレート（０．７０ｍＬ、３．００ミリモル、３当量）を、アルゴン下０℃で、化合物５２（５２０ｍｇ、１．００ミリモル）及び２，６−ルチジン（０．４６ｍＬ、４．００ミリモル、４当量）の乾燥ジクロロメタン溶液（４０ｍＬ）に添加した。１０分後、冷浴を除去し、そして反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及びブラインで抽出した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、そして過剰分を減圧下での回転蒸発により除去した。得られた残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにかけた（シリカゲル；勾配、ヘキサン中１０％酢酸エチル〜ヘキサン中２０％酢酸エチル）。純粋な画分を集めて一緒にし、そして過剰な溶離液を減圧下での回転蒸発により除去して、生成物５３を得た（５４０ｍｇ、８５％）。ＬＣ／ＭＳ，４．４２分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）６５３．１４（［Ｍ＋Ｎａ］^+.，１００）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．２０（ｓ，１Ｈ），６．７１−６．６４（ｍ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），５．８３（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），５．８０−５．６８（ｍ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），５．１４−５．０６（ｍ，２Ｈ），４．５８（ｄｄ，Ｊ＝１３．２，５．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３６（ｄｄ，Ｊ＝１３．３，５．５Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．７１（ｔｄ，Ｊ＝１０．１，３．８Ｈｚ，１Ｈ），２．９１（ｄｄ，Ｊ＝１６．９，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），２．３６（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ），１．７５（ｓ，３Ｈ），１．３１−１．１６（ｍ，３Ｈ），１．１２−１．０１（ｍ，Ｊ＝７．４，２．１Ｈｚ，１８Ｈ），０．８９−０．８１（ｍ，９Ｈ），０．２５（ｓ，３Ｈ），０．１９（ｓ，３Ｈ）。

【0557】

（ｅ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−アリル１１−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−８−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（５４）
酢酸リチウム（８７ｍｇ、０．８５ミリモル）を化合物５３（５４０ｍｇ、０．８５ミリモル）の湿潤ジメチルホルムアミド（６ｍＬ、５０：１ＤＭＦ／水）溶液に添加した。４時間後、反応が完了し、そして反応混合物を酢酸エチル（２５ｍＬ）で希釈し、クエン酸水溶液（ｐＨ〜３）、水及びブラインで洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、そして過剰な酢酸エチルを減圧下での回転蒸発により除去した。得られた残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにかけた（シリカゲル；勾配、ヘキサン中２５％〜７５％の酢酸エチル）。純粋な画分を集めて一緒にし、そして過剰な溶離液を減圧下での回転蒸発により除去して生成物５４を得た（４００ｍｇ、定量的）。ＬＣ／ＭＳ，（３．３３分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）４７５．２６（［Ｍ＋Ｈ］⁺，１００）。

【0558】

（ｆ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−アリル１１−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−８−（（５−ヨードペンチル）オキシ）−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（５５）
ジヨードペンタン（０．６３ｍＬ、４．２１ミリモル、５当量）及び炭酸カリウム（１１６ｍｇ、０．８４ミリモル、１当量）をフェノール５４（４００ｍｇ、０．８４ミリモル）のアセトン（４ｍＬ、モレキュラーシーブ上で乾燥）溶液に添加した。次いで、この反応混合物を６０℃に加温し、そして６時間攪拌した。アセトンを減圧下での回転蒸発により除去した。得られた残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにかけた（シリカゲル；５０／５０ｖ／ｖのヘキサン／酢酸エチル）。純粋な画分を集めて一緒にし、そして過剰な溶離液を除去して５５を９０％の収率で得た。ＬＣ／ＭＳ，３．９０分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）６７０．９１（［Ｍ］⁺，１００）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．２３（ｓ，１Ｈ），６．６９（ｓ，１Ｈ），６．６０（ｓ，１Ｈ），５．８７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．８３−５．６８（ｍ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），５．１５−５．０１（ｍ，２Ｈ），４．６７−４．５８（ｍ，１Ｈ），４．４５−４．３５（ｍ，１Ｈ），４．０４−３．９３（ｍ，２Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），３．７３（ｔｄ，Ｊ＝１０．０，３．８Ｈｚ，１Ｈ），３．２５−３．１４（ｍ，Ｊ＝８．５，７．０Ｈｚ，２Ｈ），２．９２（ｄｄ，Ｊ＝１６．８，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），２．３８（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ），１．９５−１．８１（ｍ，４Ｈ），１．７７（ｓ，３Ｈ），１．６４−１．４９（ｍ，２Ｈ），０．８８（ｓ，９Ｈ），０．２５（ｓ，３Ｈ），０．２３（ｓ，３Ｈ）。

【0559】

（ｉｉｉ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−４−（２−（１−（（１−（アリルオキシ）−４−メチル−１，２−ジオキソペンタン−３−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ヒドラジニル）ベンジル１１−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−８−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（７０）

【化156】

【0560】

（ａ）アリル３−（２−（２−（４−（（（（２−（（Ｓ）−２−（（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボニル）−４−メトキシ−５−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）フェニル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）ヒドラジニル）プロパンアミド）−４−メチル−２−オキソペンタノエート（５６）
トリエチルアミン（２．２３ｍＬ、１８．０４ミリモル、２．２当量）を、５℃（氷浴）で、アミン４９（４ｇ、８．２０ミリモル）及びトリホスゲン（７７８ｍｇ、２．９５ミリモル、０．３６当量）の乾燥テトラヒドロフラン攪拌溶液（４０ｍＬ）に加えた。イソシアネート反応の進行を、この反応混合物からアリコートを取り出し、メタノールでクエンチし、そしてＬＣ／ＭＳ分析を行うことによって定期的に監視した。イソシアネート形成が完了したら、ａｌｌｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢＯＨ（４．１２ｇ、１２．３０ミリモル、１．５当量）及びトリエチルアミン（１．５２ｍＬ、１２．３０ミリモル、１．５当量）の乾燥テトラヒドロフラン溶液（４０ｍＬ）を、新たに調製されたイソシアネートに注入により迅速に添加した。反応混合物を４時間にわたって４０℃で撹拌した。過剰の溶媒を減圧下での回転蒸発により除去した。得られた残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにかけた（シリカゲル；勾配、ジクロロメタン中１％メタノール〜５％メタノール）。（ＥｔＯＡｃ及びヘキサンを使用した別のクロマトグラフィー条件も成功した）。純粋な画分を集めて合わせ、そして過剰な溶離液を減圧下での回転蒸発により除去して生成物５６を得た（３．９ｇ、５０％）。ＬＣ／ＭＳ，４．２３分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）９５２．３６（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００）；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ８．６２（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．４６（ｓ，１Ｈ），７．７７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），６．７６（ｓ，１Ｈ），６．５７（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．１７（ｓ，１Ｈ），６．０３−５．８３（ｍ，１Ｈ），５．２６（ｄｄ，Ｊ＝３３．８，１３．５Ｈｚ，３Ｈ），５．１０（ｓ，２Ｈ），４．７０−４．６０（ｍ，２Ｈ），４．５８（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１．３Ｈｚ，２Ｈ），４．０６−３．９９（ｍ，１Ｈ），３．９２（ｓ，１Ｈ），３．８２−３．７１（ｍ，１Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），２．７９−２．６４（ｍ，１Ｈ），２．５４（ｄ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，１Ｈ），２．１６（ｄｑ，Ｊ＝１３．５，６．７Ｈｚ，１Ｈ），１．６７（ｓ，３Ｈ），１．４６（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），１．３５−１．２４（ｍ，３Ｈ），１．１２（ｓ，９Ｈ），１．１０（ｓ，９Ｈ），０．９７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．９４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．８７（ｓ，９Ｈ），０．０７−０．０２（ｍ，６Ｈ）。

【0561】

（ｂ）アリル３−（２−（２−（４−（（（（２−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボニル）−４−メトキシ−５−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）フェニル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）ヒドラジニル）プロパンアミド）−４−メチル−２−オキソペンタノエート（５７）
ＴＢＳエーテル５６（１．３２ｇ、１．３８ミリモル）を、酢酸／メタノール／テトラヒドロフラン／水の７：１：１：２の混合物（１４：２：２：４ｍＬ）に溶解させ、そして室温で撹拌した。３時間後、もはや出発物質はＬＣ／ＭＳでは観察されなかった。反応混合物を酢酸エチル（２５ｍＬ）で希釈し、そして水、飽和重炭酸ナトリウム水溶液及びブラインで順次洗浄した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、そして過剰な酢酸エチルを減圧下での回転蒸発により除去した。得られた残留物にフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタン中２％メタノール）を行った。純粋な画分を集めて合わせ、過剰な溶離液を減圧下での回転蒸発により除去して所望の生成物５７を得た（９２０ｍｇ、８０％）。ＬＣ／ＭＳ，３．６０分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）８３８．１８（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ８．５５（ｓ，１Ｈ），８．３５（ｓ，１Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．７７（ｓ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．１３（ｓ，１Ｈ），５．９７−５．８２（ｍ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），５．４１−５．１５（ｍ，３Ｈ），５．１０（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，２Ｈ），４．７６−４．４２（ｍ，５Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｓ，５Ｈ），２．８４（ｄｄ，Ｊ＝１６．７，１０．４Ｈｚ，１Ｈ），２．２６−２．０８（ｍ，２Ｈ），１．６８（ｓ，３Ｈ），１．４４（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），１．３０（ｄｔ，Ｊ＝１４．７，７．４Ｈｚ，３Ｈ），１．１２（ｓ，９Ｈ），１．１０（ｓ，９Ｈ），０．９６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．９３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。

【0562】

（ｃ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−４−（２−（１−（（１−（アリルオキシ）−４−メチル−１，２−ジオキソペンタン−３−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ヒドラジニル）ベンジル１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−８−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（５８）
ジメチルスルホキシド（０．２ｍＬ、２．７５ミリモル、２．５当量）を、アルゴンの雰囲気下において−７８℃（ドライアイス／アセトン浴）で、塩化オキサリル（０．１１ｍＬ、１．３２ミリモル、１．２当量）の乾燥ジクロロメタン溶液（７ｍＬ）に滴下して加えた。１０分後、５７（９２０ｍｇ、１．１０ミリモル）の乾燥ジクロロメタン（５ｍＬ）溶液を依然として−７８℃の温度でゆっくりと添加した。１５分後、トリエチルアミン（０．７７ｍＬ、４Åモレキュラーシーブ上で乾燥、５．５０ミリモル、５当量）を滴下添加し、そしてドライアイス／アセトン浴を除去した。反応混合物を室温に到達させ、そして冷塩酸（０．１Ｍ）、飽和重炭酸ナトリウム水溶液及びブラインで抽出した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、過剰量のジクロロメタンを減圧下での回転蒸発により除去した。得られた残留物をカラムフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル；勾配ジクロロメタン中２％メタノール〜５％メタノール）にかけた。純粋な画分を回収して一緒にし、そして減圧下での回転蒸発によって過剰な溶離液の除去して、生成物５８を得た（５５０ｍｇ、６０％）。ＬＣ／ＭＳ，３．４３分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）８３６．０１（［Ｍ］^+.，１００）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ８．３９（ｓ，１Ｈ），７．５２−７．４０（ｍ，２Ｈ），７．２１−７．０８（ｍ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，２Ｈ），６．６７（ｓ，１Ｈ），６．６０−６．４７（ｍ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），５．９７−５．８３（ｍ，１Ｈ），５．７９−５．６６（ｍ，１Ｈ），５．３８−４．９０（ｍ，６Ｈ），４．６８−４．５２（ｍ，Ｊ＝１８．４，５．５Ｈｚ，４Ｈ），４．０４−３．９４（ｍ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），３．８７−３．７６（ｍ，５Ｈ），３．００−２．８８（ｍ，１Ｈ），２．６６−２．４９（ｍ，２Ｈ），２．２１−２．０８（ｍ，２Ｈ），１．７６（ｓ，３Ｈ），１．４５（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），１．０９−０．９８（ｍ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１８Ｈ），０．９６（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．９３（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）。

【0563】

（ｄ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−４−（２−（１−（（１−（アリルオキシ）−４−メチル−１，２−ジオキソペンタン−３−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ヒドラジニル）ベンジル１１−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−８−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（５９）
ｔ−ブチルジメチルシリルトリフレート（０．３８ｍＬ、１．６２ミリモル、３当量）を、アルゴン下０℃で、化合物５８（４５０ｍｇ、０．５４ ｍｍｏｌ）及び２，６−ルチジン（０．２５ｍＬ、２．１６ミリモル、４当量）の乾燥ジクロロメタン溶液（５ｍＬ）に添加した。１０分後、冷浴を除去し、そして反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及びブラインで抽出した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、そして過剰の溶媒を減圧下での回転蒸発により除去した。得られた三流物をカラムフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル；５０／５０ｖ／ｖのヘキサン／酢酸エチル）にかけた。純粋な画分を回収して一緒にし、そして過剰な溶出液を減圧下での回転蒸発により除去して生成物５９を得た（３３４ｍｇ、６５％）。ＬＣ／ＭＳ，４．１８分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）９５０．５０（［Ｍ］^+.，１００）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ８．５３（ｓ，１Ｈ），８．０２（ｓ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．２１（ｓ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），６．７２−６．６１（ｍ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），６．１６（ｓ，１Ｈ），５．９７−５．７９（ｍ，Ｊ＝２４．４，７．５Ｈｚ，２Ｈ），５．４１−５．０８（ｍ，５Ｈ），４．８６（ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ），４．６９−４．６０（ｍ，１Ｈ），４．５７（ｓ，１Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．７４（ｔｄ，Ｊ＝９．６，３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．４３−２．０９（ｍ，Ｊ＝３４．８，１９．４，１１．７Ｈｚ，３Ｈ），１．７６（ｓ，３Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），１．３０−１．２１（ｍ，３Ｈ），０．９７（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．９２（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，３Ｈ），０．８４（ｓ，９Ｈ），０．２３（ｓ，３Ｈ），０．１２（ｓ，３Ｈ）。

【0564】

（ｅ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−４−（２−（１−（（１−（アリルオキシ）−４−メチル−１，２−ジオキソペンタン−３−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ヒドラジニル）ベンジル１１−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−８−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（６０）
酢酸リチウム（５０ｍｇ、０．４９ミリモル）を化合物５９（４７０ｍｇ、０．４９ミリモル）の湿潤ジメチルホルムアミド（４ｍＬ、５０：１ＤＭＦ／水）溶液に添加した。４時間後、反応が完了し、反応混合物を酢酸エチルで希釈し、そしてクエン酸（ｐＨ〜３）、水及びブラインで洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、そして過剰な酢酸エチルを減圧下での回転蒸発により除去した。得られた残留物をカラムフラッシュクロマトグラフィーに付した（シリカゲル；勾配５０／５０〜２５／７５（ｖ／ｖ）のヘキサン／酢酸エチル）。純粋な画分を回収して一緒にし、そして過剰な溶出液を減圧下での回転蒸発により除去して生成物６０を得た（４００ｍｇ、定量的）。ＬＣ／ＭＳ，３．３２分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）７９４．１８（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ８．５３（ｓ，１Ｈ），８．０２（ｓ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．２１（ｓ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），６．７２−６．６１（ｍ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），６．１６（ｓ，１Ｈ），５．９７−５．７９（ｍ，Ｊ＝２４．４，７．５Ｈｚ，２Ｈ），５．４１−５．０８（ｍ，５Ｈ），４．８６（ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ），４．６９−４．６０（ｍ，１Ｈ），４．５７（ｓ，１Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．７４（ｔｄ，Ｊ＝９．６，３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．４３−２．０９（ｍ，Ｊ＝３４．８，１９．４，１１．７Ｈｚ，３Ｈ），１．７６（ｓ，３Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），１．３０−１．２１（ｍ，３Ｈ），０．９７（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．９２（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，３Ｈ），０．８４（ｓ，９Ｈ），０．２３（ｓ，３Ｈ），０．１２（ｓ，３Ｈ）。

【0565】

（ｉｖ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−４−（（２Ｓ，５Ｓ）−３７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５−イソプロピル−２−メチル−４，７，３５−トリオキソ−１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１−オクタオキサ−３，６，３４−トリアザヘプタトリアコンタンアミド）ベンジル１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（６４）

【化157】

【0566】

（ａ）（１１Ｓ）−アリル８−（（５−（（（１１Ｓ）−１０−（（（４−（２−（１−（（１−（アリルオキシ）−４−メチル−１，２−ジオキソペンタン−３−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ヒドラジニル）ベンジル）オキシ）カルボニル）−１１−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−１１−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（６１）
炭酸カリウム（７０ｍｇ、０．５０４ミリモル、１当量）を５５（３７０ｍｇ、０．５５２ミリモル、１．２当量）及びフェノール６０（４００ｍｇ、０．５０４ミリモル）の乾燥アセトン（２５ｍＬ）溶液に添加した。反応物を７０℃で８時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳにより、全ての出発物質が消費されなかったことが示されたため、反応物を室温で一晩撹拌し、そして翌日にさらに２時間攪拌した。アセトンを減圧下での回転蒸発により除去した。得られた残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにかけた（シリカゲル；ヘキサン中８０％酢酸エチル〜１００％酢酸エチル）。純粋な画分を集めて合わせ、そして過剰な溶離液を減圧下での回転蒸発により除去して生成物６１を得た（３８５ｍｇ、５７％）。ＬＣ／ＭＳ，４．０７分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１３３６．５５（［Ｍ＋Ｈ］^+.，５０）。

【0567】

（ｂ）（１１Ｓ）−アリル８−（（５−（（（１１Ｓ）−１０−（（（４−（２−（１−（（１−（アリルオキシ）−４−メチル−１，２−ジオキソペンタン−３−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ヒドラジニル）ベンジル）オキシ）カルボニル）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（６２）
フッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（１Ｍ、０．３４ｍＬ、０．３４ミリモル、２当量）を６１（２３０ｍｇ、０．１７２ミリモル）の乾燥テトラヒドロフラン（３ｍＬ）溶液に添加した。出発材料は１０分後には完全に消費された。反応混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、そして水及びブラインで順次洗浄した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、そして過剰な酢酸エチルを減圧下での回転蒸発により除去した。得られた残留物６２を次の反応のための粗混合物として使用した。ＬＣ／ＭＳ，２．８７分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１１０８．１１（［Ｍ＋Ｈ］^+.，１００）。

【0568】

（ｃ）（１１Ｓ）−４−（２−（１−（（１−アミノ−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ヒドラジニル）ベンジル１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（６３）
テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１２ｍｇ、０．０１ミリモル、０．０６当量）を粗生成物６２（０．１７２ミリモル）及びピロリジン（３６μＬ、０．４３ミリモル、２．５当量）の乾燥ジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液に添加した。反応混合物を２０分間撹拌し、ジクロロメタンで希釈し、そして飽和塩化アンモニウム水溶液及びブラインで順次洗浄した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、そして過剰なジクロロメタンを減圧下での回転蒸発により除去した。得られた残留物６３を次の反応のための粗混合物として使用した。ＬＣ／ＭＳ，２．３８分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）９２２．１６（［Ｍ＋Ｈ］^{+ .}，４０）。

【0569】

（ｄ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−４−（（２Ｓ，５Ｓ）−３７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５−イソプロピル−２−メチル−４，７，３５−トリオキソ−１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１−オクタオキサ−３，６，３４−トリアザヘプタトリアコンタンアミド）ベンジル１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（６４）
１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ、３３ｍｇ、０．１７２ミリモル）を粗生成６３（０．１７２ミリモル）及びＭａｌ−（ＰＥＧ）８酸（１００ｍｇ、０．１７２ミリモル）の乾燥ジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液に添加した。反応物を２時間撹拌し、出発物質の存在はもはやＬＣ／ＭＳでは観察されなかった。反応物をジクロロメタンで希釈し、水及びブラインで順次洗浄した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、そして過剰なジクロロメタンを減圧下での回転蒸発により除去した。得られた残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにかけた（シリカゲル；１００％クロロホルム〜クロロホルム中１０％メタノール）。純粋な画分を回収して一緒にし、そして過剰な溶出液を減圧下での回転蒸発により除去して、６４（Ｅ）を得た（６０ｍｇ、３工程で２５％）。

【0570】

例８

【化158】

化合物６５は、ＷＯ２０１１／１３０５９８の化合物７９である。

【0571】

（１１Ｓ）−４−（１−ヨード２０−イソプロピル−２３−メチル−２，１８，２１−トリオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３，１９，２２−トリアザテトラコサンアミド）ベンジル１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（３−（（７−メトキシ−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペンー１−イル）−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペンー１−イル）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（６６）
Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ、４．７１μＬ、０．０３０４ミリモル）をアミン６５（０．０２７６ミリモル）及びヨード−（ＰＥＧ）４−酸（１３．１ｍｇ、０．０３０４ミリモル）の乾燥ジクロロメタン（０．８ｍＬ）溶液に添加した。反応物を３時間撹拌し、そして出発物質の存在はもはやＬＣ／ＭＳでは観察されなかった。反応混合物を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）プレート上に直接ロードし、そして分取ＴＬＣ（クロロホルム中１０％メタノール）によって精製した。純粋なバンドをＴＬＣプレートから掻き取り、クロロホルム中１０％メタノールに溶解させ、ろ過し、そして過剰の溶離液を減圧下での回転蒸発によって除去して６６（Ｄ）を得た（２０．９ｍｇ、５６％）。ＬＣ／ＭＳ、方法２、３．０８分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ（相対強度）１３６１．１６（［Ｍ＋Ｈ］⁺，１００）。

【0572】

例９のための一般的な実験法
ＬＣＭＳデータを、エレクトロスプレーイオン化と共にＡｇｉｌｅｎｔ６１１０四重極ＭＳを備えたＡｇｉｌｅｎｔ１２００シリーズＬＣ／ＭＳを用いて得た。移動相Ａ−水中０．１％酢酸。移動相Ｂ−アセトニトリル中０．１％。１．００ｍＬ／分の流量。勾配を３分かけて５％Ｂから９５％Ｂに上昇させ、１分間にわたって９５％Ｂで保持し、次いで６秒間で５％Ｂまで落とす。総実行時間は５分である。カラム：フェノメネックスジェミニ−ＮＸ３μｍＣ１８、３０×２．００ｍｍ。クロマトグラムは２５４ｎｍでのＵＶ検出に基づく。質量スペクトルを、ＭＳをポジティブモードで用いて達成した。プロトンＮＭＲ化学シフト値を、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶ４００を用いて４００ＭＨｚでデルタスケールで測定した。以下の略語を用いた：ｓは一重項、ｄは二重項、ｔは三重項、ｑは四重項、ｍは多重項；ｂｒはブロードである。カップリング定数はＨｚで報告する。特に明記しない限り、（フラッシュ法による）カラムクロマトグラフィーは、Ｍｅｒｃｋ Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌシリカ（Ａｒｔ．９３８５）で行った。質量分析（ＭＳ）データは、Ｗａｔｅｒｓ２７９５ ＨＰＬＣ分離モジュールに連結されたＷａｔｅｒｓマイクロマスＬＣＴ機器を用いて収集した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）をシリカゲルアルミニウムプレート（メルク６０、Ｆ₂₅₄）で行った。他の全ての化学物質及び溶媒は、シグマ・オルドリッチ社又はフィッシャーサイエンティフィック社から購入し、さらに精製することなく供給されたまま使用した。

【0573】

旋光度は、ＡＤＰ２２０旋光計（スタンリー・ベーリング社）で測定し、濃度（ｃ）はｇ／１００ｍＬで与える。融点はデジタル融点装置（電熱）を用いて測定した。ＩＲスペクトルは、パーキン−エルマー・スペクトラム１００ＦＴ ＩＲ分光計で記録した。¹Ｈ及び¹³Ｃ ＮＭＲスペクトルは、ブルカーアバンスＮＭＲ分光計をそれぞれ４００及び１００ＭＨｚで用いて３００Ｋで得た。化学シフトをＴＭＳ（δ＝０．０ｐｐｍ）に対して報告し、そしてシグナルを、ｓ（一重項）、ｄ（二重項）、ｔ（三重項）、ｄｔ（二重三重項）、ｄｄ（二重項の二重項）、ｄｄｄ（二重項の二重二重項）又はｍ（多重項）として示し、カップリング定数をヘルツ（Ｈｚ）で与える。質量分析（ＭＳ）データは、Ｗａｔｅｒｓ２９９６ ＰＤＡを有するＷａｔｅｒｓ２６９５ ＨＰＬＣに連結されたＷａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱ装置を用いて収集した。使用したＷａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱパラメーターは、毛細管（ｋＶ）、３．３８；コーン（Ｖ）、３５；エクストラクター（Ｖ）、３．０；源温度（℃）、１００；脱溶媒和温度（℃）、２００；コーン流量（Ｌ／ｈ）、５０；脱溶媒和流量（Ｌ／ｈ）、２５０であった。高分解能質量分析（ＨＲＭＳ）データを、器具にサンプルを導入するために金属被覆されたホウケイ酸ガラスのチップを用いてＷａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＱＴＯＦグローバルによりポジティブＷモードで記録した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）をシリカゲルアルミニウムプレート（メルク６０、Ｆ₂₅₄）上で実施し、そしてフラッシュクロマトグラフィーは、シリカゲル（メルク６０、２３０〜４００メッシュＡＳＴＭ）を用いた。ＨＯＢｔ（ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ社）及び固体担持試薬（アルゴノート社）を除き、他の全ての化学物質及び溶媒は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入し、さらに精製することなく供給されたまま使用した。無水溶媒を、適切な乾燥剤の存在下に乾燥窒素雰囲気下で蒸留することによって調製し、４Åモレキュラーシーブ又はナトリウムワイヤを通して保存した。石油エーテルとは、４０〜６０℃で沸騰する留分をいう。

【0574】

一般的なＬＣ／ＭＳ条件：ＨＰＬＣ（ウォーターズ・アライアンス２６９５）を、水（Ａ）（ギ酸０．１％）及びアセトニトリル（Ｂ）（ギ酸０．１％）の移動相を用いて行った。勾配：１．０分にわたり初期組成５％、続いて３分以内に５％Ｂから９５％Ｂ。この組成を９５％Ｂで０．５分間保持し、次いで０．３分で５％Ｂに戻した。総勾配実行時間は５分に相当する。流速は３．０ｍＬ／分であり、４００μＬを、質量分析計に入るゼロのデッドボリュームのティーピースを介して分割した。波長検出範囲：２２０〜４００ｎｍ。機能種別：ダイオードアレイ（５３５スキャン）。カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）オニキスモノリシックＣ１８５０×４．６０ｍｍ。

【0575】

例９
（ｉ）重要な中間体
（ａ）

【化159】

【0576】

（ａ−ｉ）（Ｓ）−２−（アリルオキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタン酸（Ｉ２）
アリルクロロホルメート（３６．２ｍＬ、３４０．５９ミリモル、１．２当量）をＬ−バリン（Ｉ１）（３３．２５ｇ、２８３．８２ミリモル、１．０当量）及び炭酸カリウム（５９．２７ｇ、４２５．７４ミリモル、１．５当量）の撹拌水（６５０ｍＬ）及びＴＨＦ（６５０ｍＬ）溶液に滴下添加した。次いで、反応混合物を１８時間室温で攪拌し、その後溶媒を減圧下で濃縮し、そして残った溶液をジエチルエーテル（３×１００ｍＬ）で抽出した。水性部分を濃塩酸でｐＨ２に酸性化し、そしてＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出した。一緒にした有機物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して、生成物を無色の油状物として得た（５７．１ｇ、収率１００％と仮定される）。ＬＣ／ＭＳ（１．９６６分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：２０２．１ ［Ｍ＋Ｈ］⁺． ¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ１２．５７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），５．９６−５．８６（ｍ，１Ｈ），５．３０（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．２，３．４，１．７Ｈｚ），５．１８（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．４，２．９，１．６Ｈｚ），４．４８（ｄｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．３，１．５Ｈｚ），３．８５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６，６．０Ｈｚ），２．０３（ｏｃｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），０．８９（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），０．８７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ）。

【0577】

（ａ−ｉｉ）（Ｓ）−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル２−（アリルオキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタノエート（Ｉ３）
保護酸Ｉ２（６０．６ｇ、３０１．１６ミリモル、１．０当量）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（３４．６６ｇ、３０１．１６ミリモル、１．０当量）の乾燥ＴＨＦ（８００ｍＬ）撹拌溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（６２．１４ｇ、３０１．１６ミリモル、１当量）を添加した。反応物を室温で１８時間撹拌し、次いでこの反応混合物を濾過し、そして固体をＴＨＦで洗浄し、合わせた濾液を減圧下で濃縮した。残留物をＤＣＭに再溶解させ、そして０℃で３０分間放置した。この懸濁液を濾過し、冷ＤＣＭで洗浄した。ろ液を減圧下で濃縮して、生成物を粘性の無色のオイルとして得（８４．７ｇ、１００％の収率と推定）、これをさらに精製することなく次の工程で使用した。ＬＣ／ＭＳ（２．１９４分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：３２１．０［Ｍ＋Ｎａ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ８．０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），５．９７−５．８７（ｍ，１Ｈ），５．３０（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．２，３．０，１．７Ｈｚ），５．１９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．４，２．７，１．４Ｈｚ），４．５２（ｄｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．３，１．４Ｈｚ），４．３２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３，６．６Ｈｚ），２．８１（ｍ，４Ｈ），２．１８（ｏｃｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），１．００（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）。

【0578】

（ａ−ｉｉｉ）（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（アリルオキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパン酸（Ｉ４）
スクシンイミドエステルＩ３（１２．９９ｇ、４３．５５ミリモル、１．０当量）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液を、Ｌ−アラニン（４．０７ｇ、４５．７３ミリモル、１．０５当量）及びＮａＨＣＯ₃（４．０２ｇ、４７．９０ミリモル、１．１当量）のＴＨＦ（１００ｍＬ）及びＨ₂Ｏ（１００ｍＬ）溶液に添加した。この混合物を７２時間室温で撹拌し、そのときにＴＨＦを減圧下で除去した。ｐＨをクエン酸で３〜４に調整して白色のガムを沈殿させた。酢酸エチル（６×１５０ｍＬ）で抽出した後に、合わせた有機物をＨ₂Ｏ（２００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。ジエチルエーテルで粉砕して、生成物を白色粉末として得、これを濾過により回収し、そしてジエチルエーテルで洗浄した（５．７８ｇ、４９％）。ＬＣ／ＭＳ（１．９２５分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：２７３．１［Ｍ＋Ｈ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ１２．４７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．１７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．１６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），５．９５−５．８５（ｍ，１Ｈ），５．２９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．２，１．７Ｈｚ），５．１７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．４，１．５Ｈｚ），４．４６（ｍ，２Ｈ），４．１８（ｑｕｉｎ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），３．８７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．０，７．１Ｈｚ），１．９５（ｏｃｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．２６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），０．８８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．８３（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）。

【0579】

（ａ−ｉｖ）アリル（Ｓ）−１−（（Ｓ）−１−（４−（ヒドロキシメチル）フェニルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イルカルバメート（Ｉ５）
ＥＥＤＱ（５．５１ｇ、２２．２９ミリモル、１．０５当量）を、ｐ−アミノベンジルアルコール（２．７４ｇ、２２．２９ミリモル、１．０５当量）及び酸Ｉ４（５．７８ｇ、２１．２３ミリモル、１当量）の乾燥ＴＨＦ（１００ ｍＬ）溶液に添加し、そして７２時間室温で撹拌した。次いで、この反応混合物を減圧下で濃縮し、得られた茶色の固体をジエチルエーテルで粉砕し、そしてろ過し、その後過剰のジエチルエーテルで洗浄して、生成物をオフホワイトの固体として得た（７．１ｇ、８８％）。ＬＣ／ＭＳ（１．９８０分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：３７８．０［Ｍ＋Ｈ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ９．８９（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．１３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），７．５２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．２６（ｍ，１Ｈ），７．２３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），５．９１（ｍ，１Ｈ），５．３０（ｍ，１Ｈ），５．１７（ｍ，１Ｈ），４．４６（ｍ，２Ｈ），５．０９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），４．４８（ｍ，２Ｈ），４．４２（ｍ，３Ｈ），３．８９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６，６．８Ｈｚ），１．９７（ｍ，１Ｈ），１．３０（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），０．８８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．８３（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）。

【0580】

（ｂ）

【化160】

【0581】

１−ヨード−２−オキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザー１８−オクタデカン酸（Ｉ７）
ヨード酢酸無水物（０．２５０ｇ、０．７０６ミリモル、１．１当量）の乾燥ＤＣＭ（１ｍＬ）溶液をＤＣＭ（１ｍＬ）中アミノ−ＰＥＧ（４）− 酸Ｉ６（０．１７０ｇ、０．６４２ミリモル、１．０当量）に添加した。この混合物を室温で一晩暗所で撹拌した。この反応混合物を０．１ＭのＨＣｌ、水で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム中３％ＭｅＯＨ及び０．１％ギ酸〜クロロホルム中１０％ＭｅＯＨ及び０．１％ギ酸）により精製して、生成物をオレンジ色の油状物として得た（０．１１８ｇ、４２％）。ＬＣ／ＭＳ（１．６２３分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：４３３．９８［Ｍ＋Ｈ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ８．０６９（ｓ，１Ｈ），７．２２（ｂｒ ｓ，１Ｈ），３．７９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ），３．７４（ｓ，２Ｈ），３．７２−３．５８（ｍ，１４Ｈ），３．５０−３．４６（ｍ，２Ｈ），２．６２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ）。

【0582】

（ｉｉ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−アリル１１−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−８−（３−ヨードプロポキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（７４）

【化161】

【0583】

（ａ）（Ｓ）−５−（（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）−１−（５−メトキシ−２−ニトロ−４−（トリイソプロピルシリルオキシ）ベンゾイル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−３−イルトリフルオロメタンスルホネート（４７）
トリフルオロメタンスルホン酸無水物（２８．４ｇ、１００．０ミリモル、３．０当量）を、−５０℃で、ケトン４６（１９．５ｇ、３０．０ミリモル、１．０当量）の２，６−ルチジン（１４．４ｇ、１３０．０ミリモル、４．０当量）を含むＤＣＭ（５５０ ｍＬ）の激しく撹拌した溶液に、２５分かけて滴下添加した。この反応混合物を１．５時間撹拌し、そのときにＬＣ／ＭＳが反応の完了を示した。有機相を水（１００ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（１５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で順次洗浄し、そして有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、９０／１０（ｖ／ｖ）のｎ−ヘキサン／酢酸エチル）で精製して、生成物を淡黄色油状物として得た（１９．５ｇ、８２％）。ＬＣ／ＭＳ（４．３９１分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：７１３．２５［Ｍ＋Ｈ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．６８（ｓ，１Ｈ），６．７２（ｓ，１Ｈ），６．０２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１．９Ｈｚ），４．７５（ｍ，１Ｈ），４．０５（ｍ，２Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．１５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．２，１０．３，２．３Ｈｚ），２．９６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．２，４．０，１．６Ｈｚ），１．２８−１．２１（ｍ，３Ｈ），１．０７（ｄ，１８Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），０．８８（ｓ，９Ｈ），０．０９（ｓ，３Ｈ），０．０８（ｓ，３Ｈ）。

【0584】

（ｂ）（Ｓ，Ｅ）−（２−（（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）−４−（１−プロペニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）（５−メトキシ−２−ニトロ−４−（トリイソプロピルシリルオキシ）フェニル）メタノン（６７）
テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．４１ｇ、０．３５ミリモル、０．０３当量）を、窒素雰囲気下で、乾燥ジオキサン（６０ｍＬ）中におけるトリフレート４７（８．４ｇ、１１．８ミリモル、１．０当量）、Ｅ−１−プロペン−１−イルボロン酸（１．４２グラム、１６．５ミリモル、１．４当量）及びリン酸カリウム（５．０ｇ、２３．６ミリモル、２．０当量）の混合物に添加した。この混合物を１２０分間にわたって２５℃で攪拌し、そのときにＬＣ／ＭＳが反応の完了を示した。酢酸エチル（１２０ｍＬ）及び水（１２０ｍＬ）を添加し、有機相を除去し、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、９５／５（ｖ／ｖ）のｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ〜９０／１０（ｖ／ｖ）のｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）により精製して、生成物を黄色泡状物として得た（４．９６ｇ、７０％）。ＬＣ／ＭＳ（４．４７７分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：６０５．０［Ｍ＋Ｈ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．６７（ｓ，１Ｈ），６．７４（ｓ，１Ｈ），５．９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），５．６７（ｓ，１Ｈ），４．６５（ｍ，１Ｈ），４．０４（ｍ，２Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），２．８５（ｍ，１Ｈ），２．７１（ｍ，１Ｈ），１．７２（ｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８，１．０Ｈｚ），１．３０−１．２２（ｍ，３Ｈ），１．０７（ｄ，１８Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），０．８７（ｓ，９Ｈ），０．０８（ｓ，３Ｈ），０．０７（ｓ，３Ｈ）。

【0585】

（ｃ）（Ｓ，Ｅ）−（２−アミノ−５−メトキシ−４−（トリイソプロピルシリルオキシ）フェニル）（２−（（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）−４−（１−プロペニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メタノン（６８）
亜鉛粉末（２２．０ｇ、０．３３モル、３７当量）を、氷浴を使用して温度を２５〜３０℃に維持して、プロペニル中間体６７（５．５ｇ、９．１ミリモル、１．０当量）の５％ｖ／ｖギ酸／エタノール溶液（５５ｍＬ）に２０分かけて少しずつ添加した。３０分後、反応混合物をセライト（登録商標）の短い床を通して濾過した。セライト（登録商標）を酢酸エチル（６５ｍＬ）で洗浄し、一緒にした有機層を水（３５ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（３５ｍＬ）及びブライン（１０ｍＬ）で連続的に洗浄した。有機相をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、９０／１０（ｖ／ｖ）のｎ−ヘキサン／酢酸エチル）で精製して、生成物を淡黄色のオイルとして得た（３．６ｇ、６９．０％）。ＬＣ／ＭＳ（４．４３９分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：５７５．２［Ｍ＋Ｈ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ６．７５（ｍ，１Ｈ），６．４０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），６．２８（ｍ，１Ｈ），６．１１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），５．５３（ｍ，１Ｈ），４．６７（ｍ，１Ｈ），４．３６（ｍ，２Ｈ），３．９３（ｂｒ ｓ，１Ｈ），３．８４（ｂｒ ｓ，１Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），２．８６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．７，１０．４Ｈｚ），２．７３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．９，４．５Ｈｚ），１．８０（ｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８，１．３Ｈｚ），１．３５−１．２３（ｍ，３Ｈ），１．１２（ｄ，１８Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），０．８９（ｓ，９Ｈ），０．０８（ｓ，３Ｈ），０．０７（ｓ，３Ｈ）。

【0586】

（ｄ）（Ｓ，Ｅ）−アリル２−（２−（（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）−４−（１−プロペニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボニル）−４−メトキシ−５−（トリイソプロピルシリルオキシ）フェニルカルバメート（６９）
クロロギ酸アリル（０．８３ｇ、６．８８ミリモル、１．１当量）を、−７８℃で、アミン６８（３．６ｇ、６．２６ミリモル、１．０当量）の、乾燥ピリジン（１．０９ｇ、１３．７７ミリモル、２．２当量）を含む乾燥ＤＣＭ（８０ｍＬ）の溶液に添加した。ドライアイスを除去し、反応混合物を室温にまで加温した。さらに１５分間撹拌した後、ＬＣ／ＭＳは反応の完了を示した。有機相を０．０１ＮのＨＣｌ（５０ｍＬ）、飽和重炭酸ナトリウム（５０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で連続的に洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして減圧下で濃縮して、淡黄色の油を残し、これをさらに精製することなく次の工程で使用した（４．１２ｇ、１００％の収率と推定）。ＬＣ／ＭＳ（４．８６２分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：６５９．２［Ｍ＋Ｈ］⁺。

【0587】

（ｅ）（Ｓ，Ｅ）−アリル２−（２−（ヒドロキシメチル）−４−（１−プロペニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボニル）−４−メトキシ−５−（トリイソプロピルシリルオキシ）フェニルカルバメート（７０）
粗中間体６９（１００％収率と推定、４．１２ｇ、６．２５ミリモル、１．０当量）を、酢酸（７０ｍＬ）と、メタノール（１０ｍＬ）と、ＴＨＦ（１０ｍＬ）と、水（２０ｍＬ）との混合物に溶解させ、そして室温で撹拌した。６時間後、反応混合物を酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し、そして水（２×５００ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（３００ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で連続的に洗浄した。有機相をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１／９９ｖ／ｖのメタノール／ＤＣＭ〜５／９５ｖ／ｖのメタノール／ＤＣＭ）で精製して、生成物を黄色の油状物として得、そしてさらに未反応の出発材料１ｇを回収した。この物質を上と同じ反応条件に供したが、ただし１６時間撹拌した。ワークアップ及び精製の後、追加の生成物を単離した（２．７ｇ、７９％、２段階）。ＬＣ／ＭＳ（３．７４２分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：５４５．２［Ｍ＋Ｈ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ８．３８（ｍ，１Ｈ），７．７２（ｍ，１Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），６．３７（ｍ，１Ｈ），６．１０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ），５．９７（ｍ，１Ｈ），５．５３（ｍ，１Ｈ），５．３６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．２，３．１，１．５Ｈｚ），５．２５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．４，２．５，１．３Ｈｚ），４．７８（ｍ，１Ｈ），４．６５（ｄｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．７，１．３Ｈｚ），３．８４（ｍ，３Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），３．０４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．７，１０．５Ｈｚ），２．４０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．０，４．５Ｈｚ），１．８２（ｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８，１．０Ｈｚ），１．３６−１．２６（ｍ，３Ｈ），１．１４（ｄ，１８Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）。

【0588】

（ｆ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−アリル１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−８−（トリイソプロピルシリルオキシ）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（７１）
乾燥ジメチルスルホキシド（１．１６ｇ、１４．８７ミリモル、３．０当量）を、窒素雰囲気下−７８℃で塩化オキサリル（０．９４ｇ、７．４３ミリモル、１．５当量）のＤＣＭ（２５ｍＬ）溶液に滴下添加した。−７８℃の温度を維持し、１０分後に、第一級アルコール７０（２．７ｇ、４．９６ミリモル、１．０当量）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液を滴下添加した。さらに１５分後、乾燥トリエチルアミン（２．５ｇ、２４．７８ミリモル、５．０当量）を添加し、そして反応混合物を室温に加温した。反応混合物を０．１Ｎの冷ＨＣｌ（５０ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（５０ｍＬ）及びブライン（１０ｍＬ）で連続的に洗浄し、そして有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して生成物を黄色の油状物として得、これをさらに精製することなく次の工程で使用した（２．６８ｇは、１００％の収率と推定）。ＬＣ／ＭＳ（３．５４８分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：５４３．２［Ｍ＋Ｈ］⁺。

【0589】

（ｇ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−アリル１１−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−８−（トリイソプロピルシリルオキシ）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（７２）
ｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（３．９３ｇ、１４．８７ミリモル、３．０当量）を、窒素雰囲気下０℃で、カルビノールアミン７１（収率１００％と推定、２．６８ｇ、４．９６ミリモル、１．０当量）、２，６−ルチジン（２．１２ｇ、１９．８３ミリモル、４．０当量）の乾燥ＤＣＭ（４０ｍＬ）溶液に添加した。１０分後、反応混合物を室温に温め、さらに６０分間撹拌した。有機相を水（１０ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（１０ｍＬ）及びブライン（５ｍＬ）で順次洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム〜２／９８（ｖ／ｖ）のメタノール／クロロホルム）により精製して、生成物を黄色の油状物として得た（２．０ｇ、６３％、２工程）。ＬＣ／ＭＳ（４．７４８分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：６５７．２［Ｍ＋Ｈ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．１９（ｓ，１Ｈ），６．８６（ｍ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），６．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），５．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），５．７８（ｍ，１Ｈ），５．４８（ｍ，１Ｈ），５．１１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），５．０８（ｍ，１Ｈ），４．５８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．４，５．４Ｈｚ），４．３５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．２，５．７Ｈｚ），３．８３（ｓ，３Ｈ），３．７６（ｓ，１Ｈ），３．００（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．６，１１．０Ｈｚ），２．５３（ｍ，１Ｈ），１．８１（ｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８，０．９Ｈｚ），１．３０−１．１８（ｍ，３Ｈ），１．０８（ｄ，９Ｈ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），１．０６（ｄ，９Ｈ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），０．８６（ｓ，９Ｈ），０．２５（ｓ，３Ｈ），０．１８（ｓ，３Ｈ）。

【0590】

（ｈ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−アリル１１−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−８−ヒドロキシ−７−メトキシ−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（７３）
酢酸リチウム二水和物（０．３１ｇ、３．０４ミリモル、１．０当量）を２５℃でジアゼピン７２（２．０ｇ、３．０４ミリモル、１．０当量）の湿潤ＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液に加え、そして４時間攪拌した。反応混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、そして０．１Ｍクエン酸（５０ｍＬ、ｐＨ３）、水（５０ｍＬ）及びブライン（１０ｍＬ）で連続的に洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、５０／５０（ｖ／ｖ）のｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ〜２５／７５（ｖ／ｖ）のｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）により精製して生成物を淡黄色の固体として得た（０．６８ｇ、４５％）。ＬＣ／ＭＳ（３．３５２分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：５０１．１［Ｍ＋Ｈ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．０２（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｍ，１Ｈ），６．５３（ｓ，１Ｈ），６．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ），５．８０（ｓ，１Ｈ），５．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），５．５５（ｍ，１Ｈ），５．２９（ｍ，１Ｈ），４．８７（ｍ，２Ｈ），４．３９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．５，４．２Ｈｚ），４．２０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．２，５．７Ｈｚ），３．７３（ｓ，３Ｈ），３．５９（ｍ，１Ｈ），２．８１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．１，１０．５Ｈｚ），２．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ），１．６１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），０．６７（ｓ，９Ｈ），０．０５（ｓ，３Ｈ），０．００（ｓ，３Ｈ）。

【0591】

（ｉ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−アリル１１−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−８−（３−ヨードプロポキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（７４）
ジヨードプロパン（０．２９５ｇ、１．００ミリモル、５．０当量）及び炭酸カリウム（０．０２８ｇ、０．２０ミリモル、１．０当量）を、フェノール３３（０．１００ｇ、０．０２０ミリモル、１．０当量）の乾燥アセトン（５ｍＬ）溶液に添加した。反応混合物を６時間にわたり６０℃で加熱し、そのときにＬＣ／ＭＳは反応の完了を示した。反応混合物を減圧下で濃縮乾固し残、留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、７５／２５（ｖ／ｖ）のｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ〜５０／５０（ｖ／ｖ）のｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）により精製して、生成物を無色の油状物として得た（０．０７４ｇ、５６％）。ＬＣ／ＭＳ（３．８５３分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：６６９．０［Ｍ＋Ｈ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ７．２６（ｓ，１Ｈ），６．９０（ｓ，１Ｈ），６．６８（ｓ，１Ｈ），６．２４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ），５．８７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），５．７８（ｍ，１Ｈ），５．５３（ｍ，１Ｈ），５．１２（ｍ，２Ｈ），４．６５（ｍ，２Ｈ），４．４１（ｍ，１Ｈ），４．１１（ｍ，１Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｍ，１Ｈ），３．４０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），３．０５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．３，１０．１Ｈｚ），２．５７（ｍ，１Ｈ），２．３４（ｍ，２Ｈ），１．８４（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），０．９２（ｓ，９Ｈ），０．２８（ｓ，３Ｈ），０．２６（ｓ，３Ｈ）。

【0592】

（ｉｉｉ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（アリルオキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ｂｅｎｚｙｌ １１−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−８−ヒドロキシ−７−メトキシ−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（７９）

【化162】

【0593】

（ａ）アリル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（２−（（Ｓ）−２−（（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−（（Ｅ）−１−プロペン−１−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボニル）−４−メトキシ−５−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）フェニル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（７５）
トリエチルアミン（０．２５６ｍＬ、１．８４ミリモル、２．２当量）を、５℃（氷浴）で、アミン６８（０．４８０ｇ、０．８３５ミリモル、１．０当量）及びトリホスゲン（０．０８９ｇ、０．３０１ミリモル、０．３６当量）の乾燥ＴＨＦ（１５ｍＬ）撹拌溶液に添加した。イソシアネート反応の進行を、この反応混合物からアリコートを取り出し、メタノールでクエンチし、そしてＬＣＭＳ分析を行うことによって定期的に監視した。イソシアネート反応が完了した後に、Ａｌｌｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢＯＨ Ｉ５（０．４７３ｇ、１．２５ミリモル、１．５当量）及びトリエチルアミン（０．１７４ｍＬ、１．２５ミリモル、１．５当量）の乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液を新たに調製されたイソシアネートに注入によって迅速に添加した。反応物を４時間にわたって４０℃で撹拌し、その後室温で一晩撹拌した。この混合物を減圧下で濃縮し、そしてフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２０／８０（ｖ／ｖ）のｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ〜５０／５０（ｖ／ｖ）のｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、その後１／９９（ｖ／ｖ）のＤＣＭ／ＭｅＯＨ〜５／９５（ｖ／ｖ）のＤＣＭ／ＭｅＯＨ）によって精製して、生成物を黄色の固体として得た（０．５７９ｇ、７１％）。ＬＣ／ＭＳ（４．４６８分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：９７８．５５［Ｍ＋Ｈ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ８．６３（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．４２（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．５３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．３１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），６．７６（ｓ，１Ｈ），６．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），６．３６（ｂｒ ｓ，１Ｈ），６．０４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ），５．９０（ｍ，１Ｈ），５．５５（ｍ，１Ｈ），５．３３−５．２１（ｍ，３Ｈ），５．１０（ｓ，２Ｈ），４．６６（ｍ，２Ｈ），４．５７（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．６，１．０Ｈｚ），３．９８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３，６．８Ｈｚ），３．９０（ｍ，１Ｈ），３．８１（ｍ，１Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），２．８２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．４，９．６Ｈｚ），２．７２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．９，３．５Ｈｚ），２．１７（ｍ，１Ｈ），１．７８（ｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．５，０．８Ｈｚ），１．４６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．２９（ｍ，３Ｈ），１．１１（ｄ，１８Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），０．９７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．９２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．８３（ｓ，９Ｈ），０．０４（ｓ，３Ｈ），０．０１（ｓ，３Ｈ）。

【0594】

（ｂ）アリル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（２−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−（（Ｅ）−１−プロペン−１−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボニル）−４−メトキシ−５−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）フェニル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（７６）
シリルエーテル７５（１．４９ｇ、１．５２ミリモル、１．０当量）を酢酸／メタノール／テトラヒドロフラン／水の７：１：１：２混合物（１４：２：２：４ｍＬ）に溶解し、そして室温で撹拌した。２時間後、反応物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、水、重炭酸ナトリウム水溶液、次いでブラインで順次洗浄した。次いで、有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１００／０、その後９９／１〜９２／８ｖ／ｖのＤＣＭ／ＭｅＯＨ）により精製して、生成物をオレンジ色の固体として得た（１．２ｇ、９２％）。ＬＣ／ＭＳ（３．６４９分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：８６５．４４［Ｍ＋Ｈ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ８．４４（ｓ，１Ｈ），８．３５（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．５３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．３２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），６．７８（ｓ，１Ｈ），６．５６（ｍ，２Ｈ），６．３２（ｂｒ ｓ，１Ｈ），６．０５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．９Ｈｚ），５．９０（ｍ，１Ｈ），５．５６（ｍ，１Ｈ），５．３０（ｍ，２Ｈ），５．２２（ｍ，１Ｈ），５．１０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝３．１Ｈｚ），４．７３（ｍ，１Ｈ），４．６４（ｍ，１Ｈ），４．５７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ），４．０１（ｍ，１Ｈ），３．７９（ｍ，２Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），２．９８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．３，１０．２Ｈｚ），２．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．６，４．１Ｈｚ），２．１６（ｍ，１Ｈ），１．７８（ｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８，０．９Ｈｚ），１．４６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．２９（ｍ，３Ｈ），１．１１（ｄ，１８Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），０．９７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．９２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）。

【0595】

（ｃ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（アリルオキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−８−（トリイソプロピルシリルオキシ）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（７７）
乾燥ジメチルスルホキシド（０．１８０ｇ、２．３ミリモル、３．０当量）を窒素雰囲気下−７８℃で塩化オキサリル（０．１４７ｇ、１．１ミリモル、１．５当量）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に滴下添加した。−７８℃の温度を維持し、２０分後に、第一級アルコール７６（０．６６６ｇ、０．７７ミリモル、１．０当量）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液を滴下添加した。さらに１５分後、乾燥トリエチルアミン（０．３９０ｇ、３．８５ミリモル、５．０当量）を添加し、そして反応混合物を室温まで温めた。反応混合物を０．１Ｎの冷ＨＣｌ（１０ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（１０ｍＬ）及びブライン（５ｍＬ）で順次洗浄した。次いで、有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。次いで残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、５０／５０（ｖ／ｖ）のｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ〜２５／７５（ｖ／ｖ）のｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）により精製して、生成物を白色の固体として得た（０．３５６ｇ、５４％）。ＬＣ／ＭＳ（３．４８７分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：８６２．２［Ｍ＋Ｈ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ８．３４（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．４７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．１７（ｓ，１Ｈ），７．１４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），６．８６（ｂｒ ｓ，１Ｈ），６．６５（ｂｒ ｓ，１Ｈ），６．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），６．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ），５．８０（ｍ，１Ｈ），５．４０（ｍ，１Ｈ），５．５３（ｍ，１Ｈ），５．３２（ｍ，１Ｈ），５．２１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），５．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ），４．９０（ｍ，１Ｈ），４．５８（ｍ，３Ｈ），３．９８（ｍ，１Ｈ），３．８４（ｍ，１Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．５０（ｍ，１Ｈ），３．０５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．０，１０．３Ｈｚ），２．７６（ｍ，１Ｈ），２．１５（ｍ，１Ｈ），１．８０（ｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．７，０．８Ｈｚ），１．４４（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．１６（ｍ，３Ｈ），１．０１（ｄ，１８Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），０．９６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．９２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）。

【0596】

（ｄ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（アリルオキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル１１−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−８−（トリイソプロピルシリルオキシ）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（７８）
ｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（０．４６ｇ、１．７４ｍｍｏｌ、３．０当量）を、窒素雰囲気下０℃で、第二級アルコール７７（０．５ｇ、０．５８ミリモル、１．０当量）及び２，６−ルチジン（０．２５ｇ、２．３２ミリモル、４．０当量）の乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に添加した。１０分後、反応混合物を室温まで温め、さらに１２０分間撹拌した。次いで、有機相を水（１０ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（１０ｍＬ）及びブライン（５ｍＬ）で順次洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、５０／５０（ｖ／ｖ）のｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）により精製して、生成物を白色固体として得た（０．３２０ｇ、５７％）。ＬＣ／ＭＳ（４．４１５分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：９７６．５２［Ｍ＋Ｈ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ８．３１（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．４８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．２１（ｓ，１Ｈ），７．１４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），６．８９（ｓ，１Ｈ），６．６５（ｓ，１Ｈ），６．３８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），６．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ），５．９３（ｍ，１Ｈ），５．８５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），５．５０（ｍ，１Ｈ），５．３４（ｍ，１Ｈ），５．２４（ｍ，２Ｈ），５．１５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ），４．８６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ），４．６２（ｍ，３Ｈ），４．０１（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．７８（ｍ，１Ｈ），３．０４（ｍ，１Ｈ），２．５６（ｍ，１Ｈ），２．２０（ｍ，１Ｈ），１．８４（ｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６，０．７Ｈｚ），１．４８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．２０（ｍ，３Ｈ），１．０５（ｄ，９Ｈ，Ｊ＝２．９Ｈｚ），１．０３（ｄ，９Ｈ，Ｊ＝２．９Ｈｚ），０．９９（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．９５（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．８８（ｓ，９Ｈ），０．２７（ｓ，３Ｈ），０．１４（ｓ，３Ｈ）。

【0597】

（ｅ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（アリルオキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル１１−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−８−ヒドロキシ−７−メトキシ−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（７９）
酢酸リチウム二水和物（０．０１０ｇ、０．１０ミリモル、１．０当量）を、３時間にわたり２５℃でシリルエーテル７８（０．１００ｇ、０．１０ミリモル、１．０当量）の湿潤ＤＭＦ（２ｍＬ）溶液に添加した。次いで、反応混合物を酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈し、そして０．１Ｍクエン酸（２０ｍＬ、ｐＨ３）、水（２０ｍＬ）及びブライン（５ｍＬ）で連続的に洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、５／９５（ｖ／ｖ）のメタノール／ＤＣＭ）により精製して、生成物を淡黄色油状物として得た（０．０７０ｇ、８３％）。ＬＣ／ＭＳ（３．３６２分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：８２０．２［Ｍ＋Ｈ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ８．３９（ｓ，１Ｈ），７．４８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．２５（ｓ，１Ｈ），７．１２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６．８８（ｓ，１Ｈ），６．６８（ｓ，１Ｈ），６．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），６．２４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ），６．０３（ｓ，１Ｈ），５．９２（ｍ，１Ｈ），５．８４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），５．５０（ｍ，１Ｈ），５．３４（ｍ，１Ｈ），５．２６（ｍ，２Ｈ），５．１８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ），４．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ），４．６６−４．６０（ｍ，３Ｈ），４．０２（ｍ，１Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｍ，１Ｈ），３．０３（ｍ，１Ｈ），２．５７（ｍ，１Ｈ），２．１９（ｍ，１Ｈ），１．８４（ｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８，０．８Ｈｚ），１．４８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．００（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．９５（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．８７（ｓ，９Ｈ），０．２６（ｓ，３Ｈ），０．１２（ｓ，３Ｈ）。

【0598】

（ｉｖ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−４−（（２０Ｓ，２３Ｓ）−１−ヨード２０−イソプロピル−２３−メチル−２，１８，２１−トリオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３，１９，２２−トリアザテトラコサンアミド）ベンジル１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート （６６，Ｄ）

【化163】

【0599】

（ａ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−アリル８−（３−（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１０−（（４−（（Ｒ）−２−（（Ｒ）−２−（アリルオキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）−１１−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−１１−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（８０）
炭酸カリウム（０．０３０ｇ、０．２１ミリモル、１．０当量）をフェノール７９（０．１７５ｇ、０．２１ミリモル、１．０当量）及びヨードリンカー７４（０．２１４ｇ、０．３２ミリモル、１．５当量）のアセトン（１０ｍＬ）溶液に添加した。反応混合物を１７時間にわたり密閉フラスコ中において７５℃で窒素雰囲気下に加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮乾固し、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２／９８ｖ／ｖのメタノール／ＤＣＭ〜５／９５ｖ／ｖのメタノール／ＤＣＭ）により精製して、生成物を淡黄色の固体として得た（０．１００ｇ、３５％）。ＬＣ／ＭＳ（４．２９３分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：１３５９．１３［Ｍ］⁺。

【0600】

（ｂ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−アリル８−（３−（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１０−（（４−（（Ｒ）−２−（（Ｒ）−２−（アリルオキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（８１）
フッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（１Ｍ、０．２２ｍＬ、０．２２ミリモル、２．０当量）をシリルエーテル８０（０．１５０ｇ、０．１１ミリモル、１．０当量）の乾燥ＴＨＦ（２ｍＬ）溶液に添加した。反応混合物を室温で２０分間攪拌し、その後ＬＣ／ＭＳは反応の完了を示した。反応混合物を酢酸エチル（１０ｍＬ）で希釈し、水（５ｍＬ）及びブライン（５ｍＬ）で順次洗浄した。有機相をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして減圧下で濃縮して黄色の固体が残った。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、６／９４ｖ／ｖのメタノール／ ＤＣＭ〜１０／９０ｖ／ｖのメタノール／ＤＣＭ）によって精製して、生成物を淡黄色の固体として得た（０．０９０ｇ、７３％）。ＬＣ／ＭＳ（２．９４７分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：１１５４．０ ［Ｍ＋Ｎａ］⁺。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ８．３９（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．３９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．１８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ），７．１０（ｍ，３Ｈ），６．８６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），６．７４（ｓ，１Ｈ），６．５５（ｓ，１Ｈ），６．２２（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１５．３，６．６Ｈｚ），５．８５（ｍ，２Ｈ），５．７４（ｍ，３Ｈ），５．５２（ｍ，２Ｈ），５．２２（ｍ，１Ｈ），５．００（ｍ，２Ｈ），４．５７（ｍ，６Ｈ），４．４１（ｍ，２Ｈ），４．０９（ｍ，４Ｈ），３．８５（ｍ，１１Ｈ），３．０６（ｍ，２Ｈ），２．７６（ｍ，２Ｈ），２．２０（ｍ，２Ｈ），２．０８（ｍ，１Ｈ），１．７９（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．４０（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ），０．９０（ｍ，６Ｈ）。

【0601】

（ｃ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−４−（（Ｒ）−２−（（Ｒ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（６５）
テトラキス（トリフェニルホスフェン）パラジウム（０）（０．００５ｇ、０．００５ミリモル、０．０６当量）を、ビス−カルビノールアミン８１（０．０９０ｇ、０．０８ミリモル、１．０当量）及びピロリジン（１６μＬ、０．２０ミリモル、２．５当量）の乾燥ＤＣＭ（５ｍＬ）溶液に添加した。２０分後、反応混合物をＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈し、そして飽和塩化アンモニウム（５ｍＬ）及びブライン（５ｍＬ）で順次洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、そして溶媒を減圧下で除去して淡黄色の固体として粗生成物が残り、これをさらに精製することなく次の工程で使用した（０．０７５ｇ、１００％の収率と推定）。ＬＣ／ＭＳ（２．０６０分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：９４７．２［Ｍ＋Ｈ］⁺。

【0602】

（ｄ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−４−（（２０Ｓ，２３Ｓ）−１−ヨード２０−イソプロピル−２３−メチル−２，１８，２１−トリオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３，１９，２２−トリアザテトラコサンアミド）ベンジル１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−５−オキソ−２−（（Ｅ）−１−プロペニル）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（６６，Ｄ）
ＥＤＣＩ（０．０１５ｇ、０．０８ミリモル、１．０当量）を、アミン６５（収率１００％と推定、０．０７５ｇ、０．０８ミリモル、１．０当量）及びヨードアセトアミド−ＰＥＧ４−酸Ｉ７（０．０３４ｇ、０．０８ミリモル、１．０当量）の乾燥ジクロロメタン（５ｍＬ）溶液に添加し、そしてこの反応物を暗所で攪拌した。５０分後、追加量のヨードアセトアミド−ＰＥＧ４−酸Ｉ７（０．００７ｇ、０．０１６ミリモル、０．２当量）を追加量のＥＤＣＩ（０．００３ｇ、０．０１６ミリモル、０．２当量）と共に添加した。合計２．５時間後に、この反応混合物をジクロロメタン（１５ｍＬ）で希釈し、水（１０ｍＬ）及びブライン（１０ｍＬ）で順次洗浄した。有機相をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。得られた残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム１００％〜９０：１０ｖ／ｖのクロロホルム：メタノール）により精製した。純粋な画分を併せて生成物を得た（０．０２５４ｇ、２３％、２工程）。これらの粗画分を集め、そして分取ＴＬＣによって精製（シリカゲル、９０：１０ｖ／ｖのクロロホルム：メタノール）して、生成物の第２バッチを得た（０．００３６ｇ、３％、２工程）。ＬＣ／ＭＳ（２．６８９分（ＥＳ＋）），ｍ／ｚ：６８１．０ １／２［Ｍ＋２Ｈ］⁺。

【0603】

例１０：放出された化合物の活性
Ｋ５６２アッセイ
Ｋ５６２ヒト慢性骨髄性白血病細胞を、５％ＣＯ₂を含む加湿雰囲気中において３７℃で、１０％ウシ胎児血清及び２ｍＭグルタミンを補充したＲＰＭ１１６４０培地中で維持し、そして暗所において３７℃で１時間又は９６時間にわたり特定の用量の薬剤と共にインキュベートした。このインキュベーションを遠心分離（５分、３００ｇ）で停止させ、そして細胞を、薬剤を含まない培地で１回洗浄した。適切な薬剤処理の後に、細胞を９６ウェルマイクロタイタープレートに移した（ウェル当たり１０⁴個の細胞、サンプル当たり８ウェル）。次いで、プレートを、５％のＣＯ₂を含む加湿雰囲気中において３７℃で暗所において保持した。このアッセイは、生細胞が黄色の可溶性テトラゾリウム塩の３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ、シグマアルドリッチ）を不溶性の紫色ホルマザン沈殿物に還元する能力に基づくものである。４日間にわたるプレートのインキュベーション後（対照細胞の数を約１０倍増加させるため）、２０μＬのＭＴＴ溶液（リン酸緩衝生理食塩水中５ｍｇ／ｍＬ）を各ウェルに加え、そしてプレートをさらに５時間インキュベートした。次いで、プレートを３００ｇで５分間遠心分離し、そして培地の大部分をウェル当たり１０〜２０μＬを残して細胞ペレットからピペットで移した。ＤＭＳＯ（２００μＬ）を各ウェルに添加し、そしてサンプルを、完全な混合を確実にするように撹拌した。その後、光学密度をタイターテックマルチスキャンＥＬＩＳＡプレートリーダーにより５５０ｎｍの波長で読み取り、そして用量応答曲線を作成した。それぞれの曲線について、ＩＣ₅₀値を、最終光学密度を対照値の５０％に減少させるのに必要な用量として読み取った。

【0604】

化合物ＲｅｌＣは、このアッセイでは０．１ｐＭ未満のＩＣ₅₀を有する。

【0605】

化合物ＲｅｌＥは、このアッセイでは０．４２５ｎＭのＩＣ₅₀を有する。

【0606】

例１１：結合体の形成
一般的な抗体結合手順
抗体を、還元緩衝液（例：リン酸緩衝生理食塩水ＰＢＳ、ヒスチジン緩衝液、ホウ酸ナトリウム緩衝液、ＴＲＩＳ緩衝液）で１〜５ｍｇ／ｍＬに希釈する。ＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩）の新たに調製された溶液を添加してシステインジスルフィド架橋を選択的に減少させる。ＴＣＥＰの量は、抗体当たり１〜４モル当量以内で還元目標レベルに比例し、２〜８個の反応性チオールを生成する。３７℃で数時間還元した後、この混合物を室温まで冷却し、そして過剰の薬剤−リンカー（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ）を希釈ＤＭＳＯ溶液として添加した（反応混合物の１０％容量／容量までの最終ＤＭＳＯ含有量）。混合物を穏やかに、適切な時間、一般に１〜３時間にわたって４℃又は室温で振盪した。過剰の反応性チオールは、結合の終了時にＮ−エチルマレイミド（ＮＥＭ）のような「チオールキャッピング剤」と反応できる。抗体−薬剤結合体を、１０ｋＤａ以上の分子量カットオフを有する遠心スピンフィルターを用いて濃縮し、次いで接線流濾過（ｔＦＦ）又は高速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）によって精製する。対応する抗体−薬剤結合体を、逆相クロマトグラフィー（ＲＰ）又は疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）をＵＶ−可視、蛍光又は質量分析計検出と共に使用して薬剤当たりの抗体比（ＤＡＲ）を評価するために高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）又は超高性能液体クロマトグラフィー（ＵＨＰＬＣ）によって分析することによって決定できる；凝集体レベル及び単量体純度は、サイズ排除クロマトグラフィーをＵＶ可視、蛍光又は質量分析計検出とと共に使用するＨＰＬＣ又はＵＨＰＬＣによって分析できる。最終結合体濃度を、分光（２８０、２１４及び３３０ｎｍでの吸光度）及び生化学的アッセイ（ビシンコニン酸アッセイＢＣＡ；Ｓｍｉｔｈ，Ｐ．Ｋ．，外（１９８５）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５０ （１）：７６−８５；基準として既知濃度のＩｇＧ抗体を使用）の組み合わせにより決定する。抗体−薬剤結合体を、一般に無菌条件下で０．２μｍフィルターを使用して濾過滅菌し、そして＋４℃、−２０℃又は−８０℃で保存する。

【0607】

ＤＡＲの決定
抗体又はＡＤＣ（３５μＬ中約３５μｇ）を１０μＬのホウ酸緩衝液（１００ｍＭ、ｐＨ８．４）及び５μＬのＤＴＴ（水中０．５Ｍ）に添加することによって還元させ、そして１５分間にわたり３７℃で加熱した。サンプルを１容量のアセトニトリル：水：ギ酸（４９％：４９％：２％ｖ／ｖ）で希釈し、そして８０℃でＷｉｄｅｐｏｒｅ ３．６μＸＢ−Ｃ１８ １５０×２．１ｍｍ（Ｐ／Ｎ ００Ｆ−４４８２−ＡＮ）カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社Ａｅｒｉｓ）に、ＵＰＬＣシステム（島津製作所Ｎｅｘｅｒａ）で、７５％緩衝液Ａ（水、トリフルオロ酢酸（０．１％ｖ／ｖ）（ｔＦＡ））、２５％緩衝液Ｂ（アセトニトリル：水：ＴＦＡ９０％：１０％：０．１％ｖ／ｖ）で平衡化された１ｍｌ／分の流量で注入した。結合した物質を１０分で２５％から５５％までの緩衝液Ｂの勾配を使用して溶離させた。２１４ｎｍでのＵＶ吸収のピークを積分した。次のピークを、各ＡＤＣ又は抗体に対して同定した：天然の抗体の軽鎖（Ｌ０）、天然の抗体の重鎖（Ｈ０）及び薬剤−リンカーが付加されたこれらの鎖のそれぞれ（１の薬剤を有する軽鎖についてはＬ１及び１、２又は３の結合薬剤−リンカーを有する重鎖についてはＨ１、Ｈ２、Ｈ３と標識）。３３０ ｎｍでのＵＶクロマトグラムを、薬剤−リンカーを含有する断片の同定のために使用した（すなわち、Ｌ１、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）。

【0608】

ＰＢＤ／タンパク質のモル比を軽鎖及び重鎖の両方について算出した：

【数1】

【0609】

最終ＤＡＲは次のように算出される：

【数2】

【0610】

ＤＡＲ測定を、薬剤−リンカーの吸光度からの干渉を最小限に抑えるために２１４ｎｍで実施する。

【0611】

ＡＤＣの生成
抗体ＡＢ１２（それぞれＶＨ及びＶＬ配列の配列番号１及び配列番号２を有する完全ヒトモノクローナルＩｇＧ１、Ｋ抗体）を薬剤リンカーＡに結合させてＣｏｎｊＡＢ１２−Ａを得、そしてＤＡＲは、２．１４であると測定された。

【0612】

抗体ＡＢ１２（それぞれＶＨ及びＶＬ配列の配列番号１及び配列番号２を有する完全ヒトモノクローナルＩｇＧ１、Ｋ抗体）を薬剤リンカーＤに結合させてＣｏｎｊＡＢ１２−Ｄを得、そしてＤＡＲは、１．２５であると測定された（下の表を参照）。

【0613】

抗体ＡＢ１２（それぞれＶＨ及びＶＬ配列の配列番号１及び配列番号２を有する完全ヒトモノクローナルＩｇＧ１、Ｋ抗体）を薬剤リンカーＥに結合させてＣｏｎｊＡＢ１２−Ｅを得、そしてＤＡＲは、２．３であると測定された（下の表を参照）。

【0614】

以下の表に示すように、他のＡＤＣも調製した。

【0615】

ＨＵＭＡＸ−ＴＡＣは、配列番号１に従う配列を有するＶＨドメイン及び配列番号２に従う配列を有するＶＬドメインを含む抗ＣＤ２５抗体である。

【0616】

上述のように、ＣＤ２５に対する標的のＡＤＣを、ＨｕＭａｘ−ＴＡＣ抗体を３種の異なるリンカーに結合させることによって生成させた。得られたＡＤＣを、測定されたＤＡＲと共に以下の表にまとめる。Ｂ１２抗ＨＩＶｇｐ１２０抗体を使用して対照の非ＣＤ２５標的ＡＤＣを生成した。

【0617】

【表1】

【0618】

例１２：ＡＤＣの試験管内細胞毒性
細胞培養
ＳＵ−ＤＨＬ−１及びＫａｒｐａｓ２９９細胞は、微生物細胞培養のライプニッツ研究所ＤＳＭＺ−ドイツコレクションから入手した。Ｄａｕｄｉ細胞は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションから入手した。細胞培養培地は、Ｌ−グルタミン及び１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ１６４０であった。細胞を加湿インキュベーター中において３７℃、５％ＣＯ₂で増殖させた。

【0619】

細胞毒性アッセイ
懸濁細胞の培養液（１×１０⁶／ｍｌまでで）の濃度及び生存率を、トリパンブルーで１：１混合し、そして透明（生）／青（死）細胞を血球計数器で計数することによって決定した。細胞懸濁液を、必要な播種密度（一般に１０⁵／ｍｌ）にまで希釈し、そして９６ウェル平底プレートに分注した。アラマーブルーアッセイについては、１００μｌ／ウェルをブラックウェルプレートに分注した。ＭＴＳアッセイについては、５０μＬ／ウェルを透明なウェルプレートに分注した。ＡＤＣ（２０μｇ／ｍｌ）のストック溶液（１ｍｌ）を、フィルター滅菌ＡＤＣを細胞培養培地に希釈することによって作製した。ストックＡＤＣの８×１０倍希釈のセットを、細胞培養培地９００μｌに１００μｌをシリアル転送することにより２４ウェルプレートで作製した。それぞれのＡＤＣ希釈（アラマーブルーについては１００μｌ／ウェル、ＭＴＳについては５０μＬ／ウェル）を、細胞懸濁液を含む９６ウェルプレートの４つの複製ウェルに分注した。対照ウェルには、同じ量の培地のみを与えた。４日間のインキュベーション後、細胞生存率をアラマーブルー又はＭＴＳアッセイのいずれかにより測定しました。

【0620】

ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（登録商標）（インビトロジェン社、カタログ番号ＤＡＬ１０２５）を、各ウェルに分注し（ウェルあたり２０μｌ）、そしてＣＯ₂ガス供給インキュベーター内において３７℃で４時間インキュベートした。ウェルの蛍光を、励起５７０ｎｍ、発光５８５ｎｍで測定した。細胞生存率（％）を、４つの対照ウェル（１００％）における平均蛍光と比較した、４つのＡＤＣ処理ウェルにおける平均蛍光の比率から算出した。

【0621】

ＭＴＳ（プロメガ社、カタログ番号Ｇ５４２１）を各ウェルに分注し（ウェルあたり２０μｌ）、そしてＣＯ₂ガス供給インキュベーター内において３７℃で４時間インキュベートした。吸光度を４９０ｎｍで測定した。細胞生存率（％）を、４つの対照ウェル（１００％）における平均吸光度と比較した、４つのＡＤＣ処理ウェルにおける平均吸光度から算出した。用量応答曲線を、３回の反復実験の平均値データから作成し、そしてＥＣ₅₀を、プリズムを使用して可変勾配を有するシグモイド用量応答曲線にデータを当てはめることにより決定した（米国カリフォルニア州サンディエゴのグラフパッド社）。

【0622】

ＨＵＭＡＸ−ＴＡＣのＣＤ２５＋ｖｅ細胞株への結合
Ｋａｒｐａｓ２９９及びＳＵ−ＤＨＬ−１の未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）由来細胞株は、ＣＤ２５を発現することが以前に報告されている。それらの発現プロファイルを確認するために、ＣＤ２５の表面発現をフローサイトメトリーによって分析した。ＨＵＭＡＸ−ＴＡＣをＣＤ２５特異的抗体として使用した。Ｂ１２を陰性対照抗体として使用した。

【0623】

図１は、Ｋａｒｐａｓ２９９及びＳＵ−ＤＨＬ−１細胞株上でのＣＤ２５の発現を示す。カーパス及びＳＵ−ＤＨＬ−１上の表面ＣＤ２５発現をフローサイトメトリーによって決定した。グラフは、３回（Ｋａｒｐａｓ２９９）又は４回の独立した実験（ＳＵ−ＤＨＬ−１）の平均を表す。ＥＣ５０値をｎｇ／ｍｌで報告する。

【0624】

両方の細胞株は、ＨＵＭＡＸ−ＴＡＣに特異的に結合したが、ネガティブコントロール抗体は結合せず、これは、細胞表面ＣＤ２５の発現を確認するものである。

【0625】

【表2】

【0626】

試験管内細胞毒性
ＨｕＭａｘ−ＴＡＣ−Ａの有効性をＳＵ−ＤＨＬ−１細胞に対して試験した。ＣＤ２５のネガティブコントロールとして、Ｄａｕｄｉ Ｂ細胞を使用した。

【0627】

図２は、ＨｕＭａｘ−ＴＡＣ−Ａの試験管内での有効性を示す。ＨｕＭａｘ−ＴＡＣ−Ａの連続１０倍希釈液（μｇ／ｍＬ）をＳＵ−ＤＨＬ−１細胞又はＤａｕｄｉ細胞と共にインキュベートした。アラマーブルーアッセイをインキュベーション期間の終了時に実施し、そして細胞生存を算出した。グラフは３回の反復実験の平均を表す。

【0628】

ＨｕＭａｘ−ＴＡＣ−Ａは、ＳＵ−ＤＨＬ−１細胞に対して有意な細胞毒性を示した（図２）。

【0629】

図３Ａ、Ｂ、Ｃ（及び表３Ａ、３Ｂ及び３Ｃ）は、ＨＵＭＡＸ−ＴＡＣ−ＡＤＣ結合体に対する薬剤リンカーの選択を示す。３種の異なる弾頭リンカー（Ａ、Ｅ、Ｄ）に結合したＨｕＭａｘ−ＴＡＣの連続１０倍希釈液（μｇ／ｍＬ）をＳＵ−ＤＨＬ−１、Ｋａｒｐａｓ２９９又はＤａｕｄｉ細胞と共にインキュベートした。ＭＴＳアッセイをインキュベーション期間の終了時に行い、パーセント細胞死を測定した。グラフは３回の反復実験の平均を表す。 ＥＣ₅₀値を、μｇ／ｍ．ＨＴ＝ＨＵＭＡＸ−ＴＡＣで報告する。

【0630】

表３Ａ

【表3A】

表３Ｂ

【表3B】

表３Ｃ

【表3C】

【0631】

例１３：ＡＤＣの生体内抗腫瘍活性
ＣＤ２５＋（ｖｅ）ヒト未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）由来細胞株Ｋａｒｐａｓ２９９を使用して、生体内でＨｕＭａｘ−ＴＡＣのために最も可能性の高いＰＢＤ弾頭を決定した。抗体を、上記Ａ及びＥ薬剤リンカーに結合させ、そしてＫａｒｐａｓ２９９異種移植片モデルで試験した。非ＣＤ２５結合コントロールとして、同じ弾頭に結合された抗ＨＩＶｇｐ１２０抗体、Ｂ１２を使用した。同時に、非ＣＤ２５結合ＡＤＣコントロールで観察される任意の潜在的な抗腫瘍活性を調査するために、ＨＵＭＡＸ−ＴＡＣ−Ｅ及びＢ１２−Ｅ（いずれも上述した）を、ヒトＩｇＧの３０倍過剰量と組み合わせて生体内で試験した。

【0632】

研究設計
薬剤及び処置：

【表4】

【0633】

手順：
・脇腹において０％マトリゲル皮下でＩｘＫＡＲＰＡＳ−２９９−ＳＰＮ腫瘍細胞を有するＣＲ雌ＮＣｒ ｎｕ／ｎｕマウスをセットアップする。
・細胞注入量は０．１ｍＬ／マウスである。
・開始日における年齢：８〜１２週間。
・腫瘍が１００〜１５０ｍｍ³の平均サイズに達したときにペアマッチを実行し、そして治療を開始する。
・体重：１日４回×５、その後終了まで二週間。
・キャリパー測定：終了まで二週間。
・任意の副作用又は死亡を直ちに報告する。
・＞３０％の体重減少が１回観察された又は＞２５％の体重減少が３回連続して測定された任意の個々の動物を安楽死させる。
・＞２０％の平均体重減少又は＞１０％の死亡率の２つの測定値を有する任意の群は、投与を中止する。この群は安楽死されず、回復が可能となる。＞２０％の重量減少を有する群内では、個々の体重減少の終点に当たる個体を安楽死させる。群の治療に関連する体重減少が元の体重の１０％以内に回復した場合には、投与をより低い用量又はより少ない頻度の投薬スケジュールで再開することができる。非処置体重回復（％）の例外を、ケースバイケースで許可することができる。
・終点ＴＧＤ。動物を個別に監視すべきである。実験の終点は、２０００ｍｍ³の腫瘍体積又は６０日であり、最初に来たいずれかである。レスポンダーをさらに長く追跡することができる。終点に達したときには、動物を安楽死させなければならない。

【0634】

一般的な方法論的アプローチ
群平均腫瘍容積の算出については、次の規則を適用した：動物が腫瘍のサイズのため調査を終了したときに、この動物について記録された最終的な腫瘍体積を、その後の時点での平均体積を算出するために使用されたデータと共に含めた。エラーバーは、平均標準誤差（ＳＥＭ）を示す。腫瘍体積値は、群中に５０％未満の動物しかその研究では残ならかった場合には群平均腫瘍体積を算出するためには使用しなかった。プリズム（カリフォルニア州サンディエゴのグラフパッド社）を図形表現及び統計分析のために使用した。

【0635】

結果
図４は、Ｋａｒｐａｓ２９９異種移植片モデルにおけるＨｕＭａｘ−ＴＡＣ−ＡＤＣに対する薬剤リンカー選択を示す。実験群当たりの平均腫瘍体積が０．１ｃｍ³に達したときにマウスに投与し、そしてマウスを、尾静脈にＩＶを介して０．３及び１ｍｇ／ｋｇ（結合ＡＤＣについて）並びに１ｍｇ／ｋｇ（非結合ＡＤＣについて）でのＡＤＣの単回投与で処置した。ＩＶＩＧの実験について、マウスを、尾静脈内にＩＶを介してＩｇＧの１ｍｇ／ｋｇ±３０ｍｇ／ｋｇでＨＵＭＡＸ−ＴＡＣ−Ｅ又はＢ１２−Ｅのいずれかの単回投与で処置した。データは、各群における１０匹のマウスからの平均腫瘍体積（±ＳＥＭ）を表す。

【0636】

ＨｕＭａｘ−ＴＡＣ−Ｅは、両方の濃度でＨｕＭａｘ−ＴＡＣ−Ａと比較して最も強力な抗腫瘍活性を示した（図４）。非結合ＡＤＣコントロール（Ｂ１２−Ａ及びＢ１２−Ｅ）のいずれも有意な抗腫瘍活性を示さなかった。

【0637】

ＨＵＭＡＸ−ＴＡＣ−Ｅ及びＢ１２−Ｅの両方をＫａｒｐａｓ２９９異種移植モデルにおいて３０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧと組み合わせて試験したところ、それらの相対活性は、この試験の全期間にわたり影響を受けなかった（図４）が、これは、生体内での抗ＣＤ２５ ＰＢＤ ＡＤＣの評価に好適な異種移植モデルとしてのＫａｒｐａｓ２９９細胞株を検証するものである。

【0638】

図５は、体重測定を示す。体重を各処置群について毎週監視した。実験群間で体重の有意な変化は検出されなかった。データは、各群における８匹のマウスからの平均体重（±ＳＥＭ）を表す。

【0639】

ＣＤ２５標的及び非ＣＤ２５標的ＡＤＣの両方によるマウスの処置は、体重の有意な変化とは関連していなかったが、これは重大な毒性作用がないことを示す（図５）。

【0640】

略語
Ａｃ アセチル
Ａｃｍ アセトアミドメチル
Ａｌｌｏｃ アリルオキシカルボニル
Ｂｏｃ ジ−ｔ−ブチルジカーボネート
ｔ−Ｂｕ ｔ−ブチル
Ｂｚｌ ベンジル、この場合、Ｂｚｌ−ＯＭｅはメトキシベンジルであり、Ｂｚｌ−Ｍｅはメチルベンゼンである
Ｃｂｚ又は Ｚベンジルオキシカルボニル、この場合、Ｚ−Ｃｌ及びＺ−Ｂｒは、それぞれクロロベンジルオキシカルボニル及びブロモベンジルオキシカルボニルである
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
Ｄｎｐ ジニトロフェニル
ＤＴＴ ジチオトレイトール
Ｆｍｏｃ ９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニル
Ｉｍｐ Ｎ−１０イミン保護基：３−（２−メトキシエトキシ）プロパノエートヴァル−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ
ＭＣ−ＯＳｕ マレイミドカプロイル−Ｏ−Ｎ−スクシンイミド
Ｍｏｃ メトキシカルボニル
ＭＰ マレイミドプロパンアミド
Ｍｔｒ ４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル
ＰＡＢ ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル
ＰＥＧ エチレンオキシ
ＰＮＺ ｐ−ニトロベンジルカルバメート
Ｐｓｅｃ ２−（フェニルスルホニル）エトキシカルボニル
ＴＢＤＭＳ ｔ−ブチルジメチルシリル
ＴＢＤＰＳ ｔ−ブチルジフェニルシリル
Ｔｅｏｃ ２−（トリメチルシリル）エトキシカルボニル
Ｔｏｓ トシル
Ｔｒｏｃ 塩化２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル
Ｔｒｔ トリチル
Ｘａｎ キサンチル

【0641】

配列

配列番号1 (AB12 VH):
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSRYIINWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGVENYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARKDWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLA

配列番号2 (AB12 VL):
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFP

配列番号3 (VH CDR1):
RYIIN

配列番号4 (VH CDR2):
RIIPILGVENYAQKFQG

配列番号5 (VH CDR3):
KDWFDY

配列番号6 (VL CDR1):
RASQSVSSYLA

配列番号7 (VL CDR2):
GASSRAT

配列番号8 (VL CDR3):
QQYGSSPLT

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4】

【図5】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]