特許 6397939 アッセイ装置及び標的分析種の検出方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6397939

(24)【登録日】2018年9月7日

(45)【発行日】2018年9月26日

(54)【発明の名称】アッセイ装置及び標的分析種の検出方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/543 20060101AFI20180913BHJP

【ＦＩ】

   G01N33/543 531

   G01N33/543 521

【請求項の数】12

【全頁数】32

(21)【出願番号】特願2016-572287(P2016-572287)

(86)(22)【出願日】2015年6月8日

(65)【公表番号】特表2017-517739(P2017-517739A)

(43)【公表日】2017年6月29日

(86)【国際出願番号】US2015034624

(87)【国際公開番号】WO2015191419

(87)【国際公開日】20151217

【審査請求日】2017年1月23日

(31)【優先権主張番号】62/009,602

(32)【優先日】2014年6月9日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】505005049

【氏名又は名称】スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】100110803

【弁理士】

【氏名又は名称】赤澤 太朗

(74)【代理人】

【識別番号】100135909

【弁理士】

【氏名又は名称】野村 和歌子

(74)【代理人】

【識別番号】100133042

【弁理士】

【氏名又は名称】佃 誠玄

(74)【代理人】

【識別番号】100157185

【弁理士】

【氏名又は名称】吉野 亮平

(72)【発明者】

【氏名】ロスコー，スティーブン ビー．

(72)【発明者】

【氏名】カン，ミュンチャン

(72)【発明者】

【氏名】ブルティネル，エヴァン ディー．

(72)【発明者】

【氏名】ミラー，ジェシー ディー．

(72)【発明者】

【氏名】クライン，レニー ケイ．

(72)【発明者】

【氏名】ダイ，ミンファ

(72)【発明者】

【氏名】リウ，シ−チョウ

【審査官】 草川 貴史

(56)【参考文献】

【文献】 特表平０６−５０４１３０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１３−５３６４３１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００９−５１３９６７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１５−５０５６１５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２０１４／０２２７７９６（ＵＳ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｇ０１Ｎ ３３／４８−３３／９８

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

試料入口を備える受け部と、
前記受け部内に配設され、かつ第１の表面を有するプランジャと、
少なくとも１つの試薬と、
前記プランジャの前記第１の表面に装着された膜と、を備え、
前記膜は、
複数の親和性構成成分が配設された標的結合領域、
毛管力をもたらすウィック、及び
複数の捕捉化合物が固定された検出領域を有し、前記検出領域は前記標的結合領域と前記ウィックとの間に位置する、アッセイ装置。

【請求項2】

前記プランジャは、前記プランジャに力が加えられると、前記検出領域を、前記ウィックと流体連通している状態から切り離し、かつ前記検出領域を、前記少なくとも１つの試薬と流体連通している状態に置くよう構成される、請求項１に記載のアッセイ装置。

【請求項3】

前記少なくとも１つの試薬が前記受け部に配設される、請求項１又は２に記載のアッセイ装置。

【請求項4】

前記親和性構成成分のそれぞれが、抗体、リガンド、ペプチドアプタマー、ヌクレオチドアプタマー、又はこれらの組合せを含む結合部分を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のアッセイ装置。

【請求項5】

前記捕捉化合物が、アプタマー、ペプチド、抗体、リガンド、又はこれらの組合せを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載のアッセイ装置。

【請求項6】

前記プランジャが、前記プランジャが前記受け部内で回転されると、前記検出領域を、前記ウィックと流体連通している状態から切り離すよう構成される、請求項１〜５のいずれか一項に記載のアッセイ装置。

【請求項7】

前記プランジャが、前記第１の表面の反対側の第２の表面と、前記第１の表面及び前記第２の表面と連通している末端部と、を更に備え、前記膜が前記末端部及び前記第２の表面と接触している、請求項１〜６のいずれか一項に記載のアッセイ装置。

【請求項8】

前記プランジャがばねを備え、前記プランジャが押し下げられると、前記ばねが前記検出領域で前記膜に係合し、かつ前記ばねが伸長し、前記検出領域を、前記ウィックと流体連通している状態から切り離し、かつ前記検出領域を、前記少なくとも１つの試薬と流体連通している状態に置く、請求項１〜７のいずれか一項に記載のアッセイ装置。

【請求項9】

表面及び試料入口を有する受け部と、
毛管力をもたらすウィックを有し、前記受け部の前記表面に装着された膜と、
前記受け部に配設された少なくとも１つの試薬と、
前記受け部内に配設され、かつ表面を有するプランジャと、
複数の捕捉化合物が固定され、前記プランジャの前記表面に装着された前記検出領域と、を備え、前記検出領域が前記試料入口と前記ウィックとの間に位置する、アッセイ装置。

【請求項10】

前記検出領域が、前記プランジャに力が加えられると、前記膜と流体連通している状態から、前記試薬と流体連通している状態に移動される、請求項９に記載のアッセイ装置。

【請求項11】

標的分析種の検出方法であって、
（ａ）
表面及び試料入口を備える受け部と、
少なくとも１つの試薬と、
前記受け部内に配設され、かつ表面を有するプランジャと、
毛管力をもたらすウィックを有し、前記プランジャの前記表面か、前記受け部の前記表面か、又は両者に装着された膜と、
複数の捕捉化合物が固定された検出領域と、を備え、前記検出領域が、前記試料入口と前記ウィックとの間に位置する、アッセイ装置を提供することと、
（ｂ）標的分析種の含有が予想される試料を提供することと、
（ｃ）前記試料を、前記試料入口を通して前記膜に添加することと、
（ｄ）前記試料が前記検出領域に到達するまで前記膜に沿って前記試料を移動させることと、
（ｅ）前記標的分析種と前記捕捉化合物との反応によって前記標的分析種を固定することと、
（ｆ）前記固定した標的分析種を前記少なくとも１つの試薬と反応させ、検出可能なシグナルを発生させることと、
（ｇ）前記発生したシグナルを検出することと、を含む、方法。

【請求項12】

前記反応させることが、前記プランジャに力を加え、前記検出領域を、前記ウィックと流体連通している状態から切り離し、かつ前記検出領域を、前記少なくとも１つの試薬と流体連通している状態に置くことを更に含み、前記プランジャに力を加えることが、前記プランジャを回転させること、前記プランジャを押し下げること、又はこれらの組合せを含む、請求項１１に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

化学発光、蛍光、比色分析等を利用するものなどの、定量的試験結果を含む、アッセイ装置及び標的分析種の検出方法が提供される。

【背景技術】

【0002】

側方流動イムノアッセイは、食品及び医療診断業界、並びに迅速な連鎖球菌検査及び妊娠検査等の簡易な臨床現場即時検査において、広く使用されている。側方流動ストリップそのものは、通常、界面活性剤を染み込ませたニトロセルロース膜であり、この膜が装置の測定結果の変動の一因となる。現在のイムノアッセイ法は、典型的には非定量的であり、感度が不足している。

【0003】

したがって、定量的な結果を提供しながらも、迅速な試験結果を提供する、アッセイ装置が依然として求められている。

【発明の概要】

【0004】

アッセイ装置及び標的分析種の検出方法が提供される。第１の態様において、アッセイ装置が提供される。より詳細には、試料入口を含む受け部と、受け部内に配設され、かつ第１の表面を有するプランジャと、少なくとも１つの試薬と、プランジャの第１の表面に装着された膜と、毛管力をもたらすウィックと、検出領域と、を含むアッセイ装置が提供される。膜は、複数の親和性構成成分が配設された標的結合領域を含む。複数の捕捉化合物が、標的結合領域とウィックとの間に位置する検出領域に固定される。

【0005】

第２の態様において、他のアッセイ装置が提供される。このアッセイ装置は、表面及び試料入口を含む受け部と、受け部の表面に装着された膜と、受け部に配設された少なくとも１つの試薬と、受け部内に配設され、かつ表面を有するプランジャと、複数の捕捉化合物が固定された検出領域と、を含む。膜は、毛管力をもたらすウィックを有する。検出領域はプランジャの表面に装着され、かつ試料入口とウィックとの間に位置する。

【0006】

第３の態様において、標的分析種の検出方法が提供される。この方法は、（ａ）表面及び試料入口を含む受け部と、少なくとも１つの試薬と、受け部内に配設され、かつ表面を有するプランジャと、プランジャの表面、受け部の表面か又は両者に装着された膜と、複数の捕捉化合物が固定された検出領域と、を備える、アッセイ装置を提供することを含む。膜は毛管力をもたらすウィックを有し、かつ検出領域は試料入口とウィックとの間に位置する。この方法は、（ｂ）標的分析種の含有が予想される試料を提供することと、（ｃ）この試料を試料入口を通して膜に添加することと、（ｄ）試料が検出領域に到達するまで膜に沿って試料を移動させることと、（ｅ）標的分析種と捕捉化合物との反応によって標的分析種を固定することと、（ｆ）固定された標的分析種を少なくとも１つの試薬と反応させ、検出可能なシグナルを発生させることと、（ｇ）発生したシグナルを検出することと、を更に含む。

【0007】

このアッセイ装置及び方法を使用することにより、標的分析種の簡便、迅速で、定量的なアッセイが可能となる。

【図面の簡単な説明】

【0008】

【図1A】アッセイ装置の例示的部分断面概略図である。

【図1B】プランジャ押し下げ後の図１Ａのアッセイ装置の例示的部分断面概略図である。

【図2A】アッセイ装置の他の例示的部分断面概略図である。

【図2B】プランジャ回転後の図２Ａのアッセイ装置の例示的部分断面概略図である。

【図2C】プランジャ押し下げ後の図２Ｂのアッセイ装置の例示的部分断面概略図である。

【図3A】アッセイ装置の更なる例示的部分断面概略図である。

【図3B】プランジャ回転後の図３Ａのアッセイ装置の例示的部分断面概略図である。

【図3C】プランジャ押し下げ後の図３Ｂのアッセイ装置の例示的部分断面概略図である。

【図4A】アッセイ装置のまた更なる例示的部分断面概略図である。

【図4B】プランジャ回転後の図４Ａのアッセイ装置の例示的部分断面概略図である。

【図4C】プランジャ押し下げ後の図４Ｂのアッセイ装置の例示的部分断面概略図である。

【図5A】アッセイ装置の更に他の例示的部分断面概略図である。

【図5B】プランジャ押し下げ後の図５Ａのアッセイ装置の例示的部分断面概略図である。

【図6A】アッセイ装置の更に他の例示的部分断面概略図である。

【図6B】プランジャ押し下げ後の図６Ａのアッセイ装置の例示的部分断面概略図である。

【図7A】アッセイ装置のまた更なる例示的部分断面概略図である。

【図7B】最初のプランジャ押し下げ後の図７Ａのアッセイ装置の例示的部分断面概略図である。

【図7C】更なるプランジャ押し下げ後の図７Ｂのアッセイ装置の例示的部分断面概略図である。

【0009】

上記の図面は正確な縮尺で描画されていない場合もあるが、本開示の各種実施形態を明示している。一方、発明を実施するための形態に記載のとおり、他の実施形態もまた企図される。

【発明を実施するための形態】

【0010】

アッセイ装置及び標的分析種の検出方法が提供される。

【0011】

端点を用いたいかなる数値範囲の説明も、範囲の端点と、範囲内の全ての数値と、記載された範囲内の任意のより狭い範囲と、を含むことを意味する（例えば、１〜５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８、４、及び５を含む）。特に記載のない限り、本明細書及び実施形態で使用される量又は成分、特性の測定値等を表す全ての数値は、全ての場合において、用語「約」によって修飾されるものと理解することとする。したがって、逆の記載がない限り、前述の明細書及び添付の実施形態の列挙において明示される数値パラメータは、当業者によって本開示の内容を利用して取得が求められる所望の特性に応じ、変動する場合がある。少なくとも、特許請求された実施形態の範囲に対する均等論の適用を限定する試みとしてではなく、各数値パラメータは、少なくとも、報告された有効桁数に照らし、通常の四捨五入の手法を適用して解釈されるべきである。

【0012】

下記の用語定義集については、特許請求の範囲又は本明細書の他の箇所において異なる定義が規定されない限り、これらの定義が、本出願の全般に対して適用されるものとする。

【0013】

用語
「発明の詳細な説明」及び「特許請求の範囲」に渡って使用される特定の用語は、ほとんどは周知のものだが、若干の説明を必要とする場合もある。本願では下記のように使用されることを理解するものとする。

【0014】

用語「a」、「an」、及び「the」は「少なくとも１つ（at least one）」と互換的に使用され、記載されている構成要素の１つ又はそれ以上を意味する。

【0015】

用語「及び／又は（and/or）」はいずれか又は両者を意味する。例えば、「Ａ及び／又はＢ（A and/or B）」という表現は、Ａ、Ｂ、又はＡとＢの組合せを意味する。

【0016】

用語「抗体」は、標的分析種等の特定の抗原と反応する免疫グロブリン分子、及び更に、抗体断片（例えば、ＳｃＦｖ又はＦａｂ）を指す。

【0017】

用語「抗原」は、特定の免疫応答を誘導することができ、かつその応答の生成物と反応することができる任意の物質を指す。

【0018】

用語「アプタマー」は、特定の標的分析種の分子又は原子に結合する、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子又はタンパク質を指す。

【0019】

用語「リガンド」は、標的分析種の分子又は原子に結合し、その結果複合体を形成する、原子、分子、官能基、又はイオンを指す。

【0020】

用語「親和性構成成分」は、例えば、標的分析種に対する抗体、アプタマー、又はリガンドなどの、標的分析種に結合する物質を指す。親和性構成成分は、結合部分及び検出部分から構成される。結合部分は、抗体、ヌクレオチドアプタマー、ペプチドアプタマー、又はリガンドを含む。検出部分は、酵素、触媒、及び／又は光信号（例えば、比色分析シグナル、蛍光シグナル、又は発光シグナル）を提供する分子を含む。

【0021】

用語「捕捉化合物」は、例えば、標的分析種に対する抗体、アプタマー、又はリガンドなど、標的分析種に結合し、かつ標的分析種を定位置に結合するよう固定されている物質を指す。

【0022】

対象の分析種、例えば、細菌、タンパク質、及び他の原子又は分子は、本質的に化学発光性、蛍光性、有色性等でないことが多く、したがって、特定の検出を実施するためには、分析種の単離及び後続の反応による検出を可能とする、抗体、リガンド又はアプタマー等の親和性構成成分をアッセイ装置に取り込む必要がある。

【0023】

第１の態様において、
試料入口を含む受け部と、
受け部内に配設され、かつ第１の表面を有するプランジャと、
少なくとも１つの試薬と、
プランジャの第１の表面に装着された膜と、を備え、膜は、
複数の親和性構成成分が配設された標的結合領域、
毛管力をもたらすウィック、及び
複数の捕捉化合物が固定された検出領域を有し、検出領域は標的結合領域とウィックとの間に位置する、アッセイ装置が提供される。

【0024】

図１Ａを参照すると、例示的な実施形態において、アッセイ装置１００は、試料入口１４を有する受け部１２と、受け部１２内に配設され、かつ第１の表面１７を有するプランジャ１６と、少なくとも１つの試薬１８と、プランジャ１６の第１の表面１７に装着された膜２０と、を備え、膜は、複数の親和性構成成分２３が配設された標的結合領域２２と、毛管力をもたらすウィック２４と、複数の捕捉化合物２７が固定された検出領域２６と、を有する。検出領域２６は、標的結合領域２２とウィック２４との間に位置する。ある実施形態において、少なくとも１つの試薬１８が受け部１２に配設され、かつ受け部１２は、少なくとも１つの試薬１８をプランジャ１６から隔離するための障壁２８を更に備える。任意に、障壁は、金属ホイル又はポーチ、例えば、内部に少なくとも１つの試薬が配設されたポーチを備える。ある実施形態において、プランジャは、圧縮嵌め、接着剤、又は受け部壁の内部に形成された隆起部を使用して、受け部に固定される。

【0025】

図１Ｂを参照すると、プランジャ１６は、力Ｆがプランジャ１６にかけられると、検出領域２６を、ウィック２４と流体連通している状態から切り離し、かつ検出領域２６を、少なくとも１つの試薬１８と流体連通している状態に置くよう構成される。ある実施形態において、プランジャ１６は、障壁２８に穴を開けるよう構成された、尖端等の末端部３０を含む。プランジャの末端部の形状は、障壁の厚さ及び材料の種類に応じて異なるものとすることができる。図１Ｂに図示した実施形態において、障壁２８はホイルポーチであり、プランジャ１６の末端部３０は丸みを帯びている。

【0026】

第２の態様において、
表面及び試料入口を備える受け部と、
毛管力をもたらすウィックを有し、受け部の表面に装着された膜と、
受け部に配設された少なくとも１つの試薬と、
受け部内に配設され、かつ表面を有するプランジャと、
複数の捕捉化合物が固定され、プランジャの表面に装着された検出領域と、を備え、検出領域は試料入口とウィックとの間に位置する、アッセイ装置が提供される。

【0027】

図５Ａ及び５Ｂを参照すると、アッセイ装置５００が図示されている。アッセイ装置５００は、表面１０及び試料入口１４を有する受け部１２と、毛管力をもたらすウィック２４を有し、受け部１２の表面１０に装着された膜２０と、受け部１２に配設された少なくとも１つの試薬１８と、受け部１２内に配設され、かつ表面１７を有するプランジャ１６と、複数の捕捉化合物２７が固定され、プランジャ１６の表面１７に装着された検出領域２６と、を備え、検出領域２６は試料入口１４とウィック２４との間に位置する。力Ｆがプランジャ１６にかけられると、検出領域２６は、膜２０と流体連通している状態から、少なくとも１つの試薬１８と流体連通している状態に移動される。

【0028】

図１Ａ〜１Ｂ及び５Ａ〜５Ｂにそれぞれ図示したアッセイ装置１００及び５００の利点は、単一かつ単純な力Ｆ（すなわち、プランジャ１６の押し下げ）によって、検出領域２６を、膜２０と流体連通している状態から、少なくとも１つの試薬１８と流体連通している状態に移動させることができることである。更に、図５Ａ〜５Ｂのアッセイ装置５００において、少なくとも１つの試薬１８がウィック２４まで輸送される直接の通路がないため、少なくとも１つの試薬１８が過剰な親和性化合物と反応することによるバックグラウンドシグナルが回避される。

【0029】

下記の開示は、上述の第１の態様及び第２の態様に関する。

【0030】

本明細書に開示のアッセイ装置で使用される親和性構成成分は、対象の標的分析種に結合し、かつ検出反応に関与可能なものである限り、特に限定されない。親和性構成成分は、結合部分と検出部分との任意の組合せを含む。上述のとおり、結合部分は、抗体、ヌクレオチドアプタマー、ペプチドアプタマー、又はリガンドを含み、かつ検出部分は、酵素、触媒、及び／又は光信号（例えば、比色分析シグナル、蛍光シグナル、又は発光シグナル）を提供する分子を含む。親和性構成成分の検出部分として好適なもののうちいくつかとしては、例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、及びアルカリホスファターゼが挙げられるが、これらに限定されない。親和性構成成分と同様に、捕捉化合物も、検出領域の定位置に固定されたまま留まり、かつ対象の標的分析種に結合する限り、限定されない。捕捉化合物は、典型的に、アプタマー、ペプチド、抗体、リガンド、又はこれらの組合せを含む。

【0031】

検出可能なシグナル（例えば、化学発光又は蛍光反応からの光、比色分析からの吸光度等）を発生させるため、任意の捕捉された分析種及びそれらが結合した親和性構成成分を、少なくとも１つの試薬と反応させる。多くの実施形態において、少なくとも１つの試薬は過酸化水素及び／又はルシフェリンを含む。好ましくは、少なくとも１つの試薬は、水溶液を含む。過酸化水素が関与する化学発光反応にはルミノールが使用されることが多いため、本開示のある態様において、障壁はポーチを備え、かつポーチはルミノールを含有する。１つの好適なポーチは、２つのプラスチックリングを有するカップ構造を備え、ホイルの層が各リングに取り付けられ、かつ各リングを覆い、取り囲まれたカップを形成する。ポーチは、捕捉された標的分析種の添加前にルミノール及び過酸化水素が反応するのを防止するが、一旦ポーチに穴が開けられると、ルミノールは過酸化水素に接触できるようになる。ある実施形態において、親和性構成成分は、アプタマーに結合された酵素又は抗体に結合された酵素を含む。当業者であれば、対象の標的分析種に対し特定のアプタマー及び抗体を特定することができる。一般的な酵素としては、例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ及びルシフェラーゼが挙げられる。アプタマー又は抗体に結合されたセイヨウワサビペルオキシダーゼ酵素を含む態様では、例えば、ルミノール及び過酸化水素と反応するセイヨウワサビペルオキシダーゼが結合した量をもとに、標的分析種の定量的測定が行われる。受け部において膜を使用する利点は、毛管作用によって溶液中の触媒を少なくとも１つの試薬からウィックの方向に連続的に移動させることで、余剰の反応触媒（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ）を除去することにより、バックグラウンドシグナルを最小化することである。

【0032】

膜は、流動アッセイにおいて典型的に利用される１つ以上の材料を任意に備え、材料は、例えば、流体制御フィルム、毛管により流体を誘導する装置（例えば、流体制御フィルムの積層体）、ニトロセルロース、又はナイロン、ポリスルフォン、ポリエーテルスルフォン、若しくはフッ化ポリビニリデン（ＰＶＤＦ）製の膜等の他の不織膜であるが、これらに限定されるものではない。例えば、好適なニトロセルロース膜及びＰＶＤＦ膜は当業者には既知であり、Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）等の供給業者から市販されている。膜の検出領域は、試料溶液中の標的分析種と捕捉化合物との間の接触を最大化するための曲がりくねった流路を有する、不織膜又は類似の材料を任意に含む。

【0033】

流体制御フィルムは、少なくとも１つのマイクロ構造を有する支持表面を含むシートを備え、この表面内部にある１つ以上のチャネルにより、流体の制御又は方向性のある流れが可能となり、促進され、又は容易になる。好適な流体制御フィルムは、米国特許第５，５１４，１２０号、同第５，７２８，４４６号、同第６，０８０，２４３号、及び同第６，２９０，６８５号に記載されている。流体制御フィルムは、典型的には繊維のかたまりというよりはシート又はフィルムの形態である。流体制御フィルムのチャネルは、繊維から形成される、ウェブ、発泡体、又はトウによって通常もたらされるものより、効果的な流体流を提供する。繊維に形成されるチャネルの壁は、比較的不規則な起伏及び複雑な表面を呈し、チャネルを通過する流体の流れを妨げる。これに対し、かかるチャネルは所定のパターンから正確に再現され、主表面に沿って延在する、一連の個々の開口毛管チャネルを形成する。シート、フィルム、又は管に再現されたこれらのマイクロチャネルは、好ましくは、実質的に各チャネルの長さに沿って、更に好ましくは、チャネル間で均一かつ規則的である。流体は、典型的に、流体制御フィルム中の約２．５インチ（６．３５ｃｍ）の距離を約１５秒以内で吸い上げられる。流体制御フィルムを利用する利点としては、不織膜と比較して流路がより均一であり、したがって、より再現性の高い結果が得られることが挙げられる。

【0034】

流体制御フィルムは、キャスティング、又はエンボス加工に好適な任意の熱可塑性材料、例えば、ポリオレフィン、ポリエステル、ポリアミド、ポリ（塩化ビニル）、ポリエーテルエステル、ポリイミド、ポリエステルアミド、ポリアクリレート、ポリビニルアセテート、ポリビニルアセテートの加水分解誘導体等、又はこれらの組合せから形成することができる。ポリオレフィンが通常用いられ、特にポリエチレン又はポリプロピレン、これらのブレンド及び／又はコポリマーが配合され、プロピレン及び／又はエチレンのコポリマーは、少ない割合でビニルアセテート、又はメチルアクリレート及びブチルアクリレート等のアクリレート等の他のモノマーを共に配合される。ポリオレフィンは優れた物理的特性を呈し、加工が容易で、典型的には、類似の特徴を有する他の熱可塑性材料よりも安価である。ポリオレフィンは、キャスティング又はエンボスロールの表面を容易に再現する。これらは丈夫で耐久性があり、かつ形状を良く保持するため、キャスティング加工又はエンボス加工後のかかるフィルムの取扱いが容易となる。親水性ポリウレタンもまた、有利な物理的特性と、固有の高い表面エネルギーとを有する。あるいは、流体制御フィルムを、ポリウレタン、アクリレート、エポキシ及びシリコーン等の熱硬化性材料（硬化性樹脂材料）からキャスティングすることができ、熱又はＵＶ若しくは電子ビーム照射、又は湿気への曝露によって硬化させることができる。これらの材料は、表面エネルギー調整剤（界面活性剤及び親水性ポリマー等）、可塑剤、抗酸化剤、顔料、離型剤、帯電防止剤等を含む、各種の添加物を含有する。好適な流体制御フィルムを、また、感圧性接着材料を使用して製造することもできる。いくつかの場合において、チャネルは無機材料（例えば、ガラス、セラミックス、又は金属）を使用して形成され得る。好ましくは、流体制御フィルムは、液体に曝露されると、幾何学及び表面特性を実質的に保持する。

【0035】

多くの実施形態において、アッセイ装置のプランジャは、第１の表面の反対側の第２の表面と、第１の表面及び第２の表面と連通している末端部と、を更に備え、膜は末端部及び第２の表面と接触している。例えば、図１Ａは、プランジャ１６の第１の表面１７の反対側のプランジャ１６の第２の表面２９と、第１の表面１７及び第２の表面２９と連通している末端部３０と、を図示し、膜２０は末端部３０及び第２の表面２９と接触している。図１Ａに示した実施形態において、膜２０はプランジャ１６を囲むＵ字形状を備える。Ｖ字形状、角張ったＵ字形状等の膜の他の形状もまた、企図される。膜の検出領域は、プランジャの末端部に位置することが多い。図１Ａ、２Ａ、３Ａ、５Ａ、及び６Ａのそれぞれを参照すると、プランジャ１６の末端部３０に検出領域２６を有することにより、検出領域を、少なくとも１つの試薬の比較的近くに置く。ある態様において、受け部１２は、試験管又は試験管に類似の形状を備える。アッセイ装置を３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ ＮＧ照度計（３Ｍ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）より入手可能）等の測定器に設置する際は、プランジャ１６の末端部３０は、照度計の検出領域近くに置かれることになる。

【0036】

ある実施形態において、アッセイ装置は、上記の障壁に穴を開けるのを支援するための構成要素（図示せず）、例えば、公開されている国際特許出願ＷＯ９７／２３５９６に記載のシャトル、を更に含む。この構成要素は、尖端部、末端部上の少なくとも１つの突出部、及び構成要素の表面の少なくとも１つの開口部の、１つ以上を含む。典型的には、かかる構成要素は、プランジャの末端部が丸みを帯びているか、若しくは角張っている場合、又は検出領域がプランジャの末端部に位置している場合に、有利に使用され得る。かかる構成要素を有するアッセイ装置の例示的な構成は、プランジャの底部と、試薬溶液上部の障壁との間に配設された構成要素を含む。この構成要素は、障壁を破断するため独立して移動可能なものであってもよく、又はプランジャが操作されたとき、プランジャが障壁に到達する前に構成要素が障壁に穴を開けるように、プランジャに装着されていてもよい。ある実施形態において、構成要素は、構成要素が障壁を破断し試薬溶液と接触した際に反応混合物に添加されるべき固体試薬で被覆されているか、又はこの固体試薬を含有する。

【0037】

任意に、膜は、ウィックと検出領域との間に配設された制御ラインを更に備え、制御ラインは一般的な捕捉化合物を含む。図３Ａを参照すると、アッセイ装置３００は、膜２０上の、ウィック２４と検出領域２６との間に制御ライン３２を含むものとして図示されている。一般的な捕捉化合物は、過剰の親和性構成成分が一般的な捕捉化合物と反応する際に変色をもたらす。制御ラインは窓３４を通して容易に見ることができ、試料が検出領域を通過したか、及び任意の捕捉された標的分析種が検出可能な状態となっているかを、使用者が視覚的に判定できるようにする。あるいは、ウィック２４（全体又は一部）は、わずかに緩衝化したｐＨ指示薬によって処理されてもよい。例えば、ブロモフェノールブルーは、ｐＨが３から５に増加するにつれ、黄色から青色へと変化する。一旦緩衝化されるとｐＨが５以上になる任意の試料に関しては、この青色の出現は、かかる試料の状態が、捕捉された何らかの標的分析種を検出可能なものとなったことの指標として機能する。

【0038】

図３Ａ〜３Ｃ及び２Ａ〜２Ｃはそれぞれ、ねじ山が設けられた下方部３６を含むプランジャ１６を収容するアッセイ装置３００及びアッセイ装置２００を更に図示する。ねじ山が設けられた下方部３６は、受け部１２の壁１３に接続されたアライナ３８にマウントされ、プランジャ１６がその垂直軸まわりに回転された際、膜２０の下方部４０は回転せず、かつ発生した引き離し力が、下方部４０を膜２０の残りの部分から引き離す。アライナ３８は、例えば、壁のスロット内に突出部を入れて（図示せず）垂直方向に移動できるように壁１３に接続され、プランジャ１６のねじ山が設けられた下方部３６の回転と共に下方部４０が下方に移動できるようにし、膜２０に物理的な間隙を生じさせる。プランジャ１６が続いて押し下げられると、下方部４０は障壁２８を破断することが可能となり、少なくとも１つの試薬１８と相互作用するが、膜２０の破断が、任意の過剰の親和性構成成分２３が保持されているウィック２４までの反応液の移行を防止する。

【0039】

図４Ａ〜４Ｂを参照すると、アッセイ装置４００が図示されている。この態様において、アッセイ装置４００は、プランジャ１６と、受け部１２内に配設されたプランジャスリーブ１９とを収容する受け部１２を含む。この装置は、プランジャスリーブ１９の外面１５に装着された膜２０を備える。プランジャスリーブ１９は、プランジャスリーブ１９の、膜２０の検出領域２６に隣接する部分に開口部を画定するよう構成される。プランジャスリーブ１９は、受け部１２の壁１３に接続されたアライナ３８にマウントされることによって本態様の受け部１２に固定される。アライナ３８は、垂直に移動できるよう、壁の垂直スロット（図示せず）と連通する等して、壁１３に接続される。検出領域２６はプランジャ１６の表面に装着される。複数の捕捉化合物２７が検出領域２６上に固定される。図４Ｂに示したとおり、プランジャ１６が回転されると、膜２０の検出領域２６のみが回転し、その結果発生した引き離し力が、検出領域２６を膜２０の残りの部分から引き離し、検出領域２６をプランジャスリーブ１９の内部へと移動させる。図４Ｃに示したとおり、プランジャ１６が引き続き押し下げられると、プランジャの末端部３０が障壁２８に穴を開け、かつ検出領域２６は破断された障壁２８を通過して移動し、受け部１２内に含有された少なくとも１つの試薬１８と流体連通する。

【0040】

追加的に、プランジャ１６はまた、ポーチを備える障壁に穴を開けるために使用されてもよく、ひいては、過剰の構成成分を、少なくとも１つの試薬１８に同時に添加することが可能となる。膜２０は、ウィック２４が膜２０の底部にあり、かつ試料入口（図示せず）が頂部にある状態で示されている。この状態において、試料流体は下向きに流れる。この態様の変化形において、アッセイ装置４００は単純に改変することができ、試料入口が図４Ａ〜４Ｂで示したウィック２４の位置に置かれ、ウィック２４は検出領域２６の上方の位置に再配置される。かかる装置は、膜の下方末端が試験溶液に浸される慣用法である、ディップスティック膜として機能する。添加された任意の過剰試料は試料入口から逆流するため、潜在的な試料の過剰充填は防止される。

【0041】

図２Ｂ、３Ｂ、及び４Ｂのそれぞれを参照すると、アッセイ装置のある種の実施形態において、プランジャ１６が受け部１２内で回転されるとき、プランジャ１６は、検出領域２６を、ウィック２４と流体連通している状態から切り離すように構成される。

【0042】

図６Ａ及び６Ｂを参照すると、アッセイ装置６００が示されている。プランジャ１６はばね４４を備え、プランジャ１６が押し下げられると、ばね４４は検出領域２６で膜２０に係合し、かつばね４４は伸長し、検出領域２６（この上に複数の捕捉化合物２７が固定されている）を、ウィック２４と流体連通している状態から切り離し、かつ検出領域２６を、少なくとも１つの試薬１８と流体連通している状態に置く。

【0043】

図７Ａ及び７Ｂを参照すると、アッセイ装置７００が示されている。プランジャ１６はばね４４を備え、プランジャ１６が押し下げられると、ばね４４は膜２０に係合し、かつばね４４は伸長し、部分２１において膜２０に破断を生じ、検出領域２６が引き続きウィック２４と流体連通している状態を防止する。図７Ｃを参照すると、プランジャ１６が更に押し下げられると、検出領域２６（この上に複数の捕捉化合物２７が固定されている）は、少なくとも１つの試薬１８と流体連通している状態に置かれる。部分２１における膜２０の破断は、少なくとも１つの試薬のウィック２４方向への流体流を最小化し、それによって検出中のバックグラウンドシグナルを最小化する。

【0044】

アッセイ装置の他の一実施形態（図示せず）において、少なくとも１つの試薬はプランジャ内に配設され、かつプランジャは、少なくとも１つの試薬の一部を放出し、少なくとも１つの試薬の一部を、検出領域と流体連通している状態に置くよう構成される。かかる構成により、少なくとも１つの試薬を膜から隔離するための隔離障壁の使用を回避する。

【0045】

アッセイ装置の更なる実施形態（図示せず）において、受け部の一部は不透明であり、かつ受け部の一部は光に対して透明である。受け部の一部を不透明とすると、受け部の光に対して透明な部分を透過するバックグラウンドシグナルの検出が最小限に抑えられることが利点である。

【0046】

第３の態様において、標的分析種の検出方法が提供され、この方法は、
（ａ）
表面及び試料入口を備える受け部と、
少なくとも１つの試薬と、
受け部内に配設され、かつ表面を有するプランジャと、
毛管力をもたらすウィックを有し、プランジャの表面か、受け部の表面か、又は両者に装着された膜と、
複数の捕捉化合物が固定された検出領域と、を備え、検出領域が、試料入口とウィックとの間に位置する、アッセイ装置を提供することと、
（ｂ）標的分析種の含有が予想される試料を提供することと、
（ｃ）この試料を、試料入口を通して膜に添加することと、
（ｄ）試料が検出領域に到達するまで膜に沿って試料を移動させることと、
（ｅ）標的分析種と捕捉化合物との反応によって標的分析種を固定することと、
（ｆ）固定された標的分析種を少なくとも１つの試薬と反応させ、検出可能なシグナルを発生させることと、
（ｇ）発生したシグナルを検出することと、を含む。

【0047】

第１及び第２の態様に関して詳細に上述したアッセイ装置のいずれも、第３の態様の方法における使用に好適である。

【0048】

ある実施形態において、試料を提供することは、複数の親和性構成成分を試料に添加し、任意の標的分析種を結合させることを更に含む。一方、他の実施形態において、膜は、複数の親和性構成成分が配設された標的結合領域を更に備え、標的結合領域は、試料入口と検出領域との間に位置する。

【0049】

ほとんどの実施形態において、検出領域はプランジャの表面に装着され、かつ／又は受け部の表面に装着される。固定された標的分析種を少なくとも１つの試薬と反応させ、検出可能なシグナルを発生させるため、反応させることは、プランジャに力を加え、検出領域を、ウィックと流体連通している状態から切り離し、かつ検出領域を、少なくとも１つの試薬と流体連通している状態に置くことを更に含む。例えば、プランジャに力を加えることは、典型的に、プランジャを回転させること、プランジャを押し下げること、又はプランジャを回転させてからプランジャを押し下げることを含む。

【0050】

本方法の利点の１つは、本方法が、各種の定量的検出方法と適合性があることである。例えば、ある一実施形態において、発生されたシグナルは発光を含み、かつ検出することは、照度計を使用して発光を計測することを含む。他の一実施形態において、発生されたシグナルは蛍光を含み、かつ検出することは蛍光光度計を使用することを含み、並びに更なる実施形態では、発生されたシグナルは変色を含み、かつ検出することは比色計を使用することを含む。好ましくは、検出することは、発光、蛍光、又は変色を定量化することを更に含む。

【0051】

アッセイ装置又はアッセイ装置を使用して標的分析種を検出する方法について、各種の項目を説明する。

【0052】

実施形態１は、アッセイ装置であり、試料入口を有する受け部と、受け部内に配設され、かつ第１の表面を有するプランジャと、少なくとも１つの試薬と、プランジャの第１の表面に装着された膜と、を備え、膜は、複数の親和性構成成分が配設された標的結合領域、毛管力をもたらすウィック、及び複数の捕捉化合物が固定された検出領域を有する。検出領域は、標的結合領域とウィックとの間に位置する。

【0053】

実施形態２は、実施形態１に記載のアッセイ装置であり、プランジャは、プランジャに力が加えられると、検出領域を、ウィックと流体連通している状態から切り離し、かつ検出領域を、少なくとも１つの試薬と流体連通している状態に置くよう構成される。

【0054】

実施形態３は、実施形態１又は２に記載のアッセイ装置であり、少なくとも１つの試薬が受け部に配設される。

【0055】

実施形態４は、実施形態１〜３のいずれかに記載のアッセイ装置であり、受け部は、少なくとも１つの試薬をプランジャから隔離するための障壁を更に備える。

【0056】

実施形態５は、実施形態４に記載のアッセイ装置であり、障壁は金属ホイル又はポーチを備える。

【0057】

実施形態６は、実施形態４に記載のアッセイ装置であり、プランジャは、障壁に穴を開けるように構成された末端部を更に備える。

【0058】

実施形態７は、実施形態４又は５に記載のアッセイ装置であり、プランジャは尖端を備える。

【0059】

実施形態８は、実施形態１に記載のアッセイ装置であり、少なくとも１つの試薬が受け部内に配設される。

【0060】

実施形態９は、実施形態８に記載のアッセイ装置であり、プランジャは、少なくとも１つの試薬の一部を放出し、少なくとも１つの試薬の一部を検出領域と流体連通している状態に置くよう構成される。

【0061】

実施形態１０は、実施形態１〜９のいずれかに記載のアッセイ装置であり、受け部の一部は不透明であり、かつ受け部の一部は光に対して透明である。

【0062】

実施形態１１は、実施形態１〜１０のいずれかに記載のアッセイ装置であり、親和性構成成分のそれぞれは、抗体、リガンド、ペプチドアプタマー、ヌクレオチドアプタマー、又はこれらの組合せを含む結合部分を含む。

【0063】

実施形態１２は、実施形態１〜１１のいずれかに記載のアッセイ装置であり、親和性構成成分のそれぞれは、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、又はこれらの組合せを含む検出部分を含む。

【0064】

実施形態１３は、実施形態１〜１２のいずれかに記載のアッセイ装置であり、捕捉化合物は、アプタマー、ペプチド、抗体、リガンド、又はこれらの組合せを含む。

【0065】

実施形態１４は、実施形態１〜１３のいずれかに記載のアッセイ装置であり、少なくとも１つの試薬は過酸化水素を含む。

【0066】

実施形態１５は、実施形態１〜１４のいずれかに記載のアッセイ装置であり、少なくとも１つの試薬はルシフェリンを含む。

【0067】

実施形態１６は、実施形態１５に記載のアッセイ装置であり、障壁はポーチを備え、かつポーチはルミノールを含有する。

【0068】

実施形態１７は、実施形態１〜１６のいずれかに記載のアッセイ装置であり、親和性構成成分は、ペプチドアプタマー又はヌクレオチドアプタマーに結合された酵素を含む。

【0069】

実施形態１８は、実施形態１〜１６のいずれかに記載のアッセイ装置であり、親和性構成成分は、抗体に結合された酵素を含む。

【0070】

実施形態１９は、実施形態１〜１８のいずれかに記載のアッセイ装置であり、少なくとも１つの試薬は水溶液を含む。

【0071】

実施形態２０は、実施形態１〜１９のいずれかに記載のアッセイ装置であり、膜は流体制御フィルムである。

【0072】

実施形態２１は、実施形態１〜２０のいずれかに記載のアッセイ装置であり、膜はニトロセルロースを含む。

【0073】

実施形態２２は、実施形態１〜２１のいずれかに記載のアッセイ装置であり、検出領域は不織膜を備える。

【0074】

実施形態２３は、実施形態１〜７又は１０〜２２のいずれかに記載のアッセイ装置であり、プランジャは、プランジャが受け部内で回転されると、検出領域を、ウィックと流体連通している状態から切り離すよう構成される。

【0075】

実施形態２４は、実施形態１〜１８のいずれかに記載のアッセイ装置であり、プランジャは、第１の表面の反対側の第２の表面と、第１の表面及び第２の表面と連通している末端部と、を更に備え、膜は末端部及び第２の表面と接触している。

【0076】

実施形態２５は、実施形態２４に記載のアッセイ装置であり、検出領域はプランジャの末端部に位置する。

【0077】

実施形態２６は、実施形態１〜２５のいずれかに記載のアッセイ装置であり、膜は、ウィックと検出領域との間に配設された制御ラインを更に備え、制御ラインは一般的な捕捉化合物を含む。

【0078】

実施形態２７は、実施形態１〜２６のいずれかに記載のアッセイ装置であり、受け部は試験管を備える。

【0079】

実施形態２８は、実施形態１〜２７のいずれかに記載のアッセイ装置であり、プランジャはばねを備え、プランジャが押し下げられるとばねは検出領域で膜に係合し、かつばねは伸長し、検出領域を、ウィックと流体連通している状態から切り離し、かつ検出領域を、少なくとも１つの試薬と流体連通している状態に置く。

【0080】

実施形態２９は、実施形態１〜２７のいずれかに記載のアッセイ装置であり、膜は毛管による流体誘導体を備える。

【0081】

実施形態３０は、実施形態２９に記載のアッセイ装置であり、毛管による流体誘導体は積層された流体輸送フィルムを含む。

【0082】

実施形態３１は、アッセイ装置であり、表面及び試料入口を有する受け部と、毛管力をもたらすウィックを有し、受け部の表面に装着された膜と、受け部に配設された少なくとも１つの試薬と、受け部内に配設され、かつ表面を有するプランジャと、複数の捕捉化合物が固定され、プランジャの表面に装着された検出領域と、を備え、検出領域は試料入口とウィックとの間に位置する。

【0083】

実施形態３２は、実施形態３１に記載のアッセイ装置であり、検出領域は、プランジャに力が加えられると、膜と流体連通している状態から、試薬と流体連通している状態に移動される。

【0084】

実施形態３３は、実施形態３１又は３２に記載のアッセイ装置であり、受け部の一部は不透明であり、かつ受け部の一部は光に対して透明である。

【0085】

実施形態３４は、実施形態３１〜３３のいずれかに記載のアッセイ装置であり、親和性構成成分のそれぞれは、抗体、リガンド、ペプチドアプタマー、ヌクレオチドアプタマー、又はこれらの組合せを含む結合部分を含む。

【0086】

実施形態３５は、実施形態３１〜３４のいずれかに記載のアッセイ装置であり、親和性構成成分のそれぞれは、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、又はこれらの組合せを含む検出部分を含む。

【0087】

実施形態３６は、実施形態３１〜３５のいずれかに記載のアッセイ装置であり、捕捉化合物は、アプタマー、ペプチド、抗体、リガンド、又はこれらの組合せを含む。

【0088】

実施形態３７は、実施形態３１〜３６のいずれかに記載のアッセイ装置であり、少なくとも１つの試薬は過酸化水素を含む。

【0089】

実施形態３８は、実施形態３１〜３７のいずれかに記載のアッセイ装置であり、少なくとも１つの試薬はルシフェリンを含む。

【0090】

実施形態３９は、実施形態３１〜３８のいずれかに記載のアッセイ装置であり、親和性構成成分は、ペプチドアプタマー又はヌクレオチドアプタマーに結合された酵素を含む。

【0091】

実施形態４０は、実施形態３１〜３８のいずれかに記載のアッセイ装置であり、親和性構成成分は、抗体に結合された酵素を含む。

【0092】

実施形態４１は、実施形態３１〜４０のいずれかに記載のアッセイ装置であり、少なくとも１つの試薬は水溶液を含む。

【0093】

実施形態４２は、実施形態３１〜４１のいずれかに記載のアッセイ装置であり、膜は流体制御フィルムである。

【0094】

実施形態４３は、実施形態３１〜４２のいずれかに記載のアッセイ装置であり、膜はニトロセルロースを含む。

【0095】

実施形態４４は、実施形態３１〜４３のいずれかに記載のアッセイ装置であり、検出領域は不織膜を備える。

【0096】

実施形態４５は、実施形態３１〜４４のいずれかに記載のアッセイ装置であり、プランジャは、プランジャが受け部内で回転されると、検出領域を、ウィックと流体連通している状態から切り離し、かつ検出領域を、少なくとも１つの試薬と流体連通している状態に置くよう構成される。

【0097】

実施形態４６は、実施形態３１〜４５のいずれかに記載のアッセイ装置であり、受け部は、少なくとも１つの試薬をプランジャから隔離するための障壁を更に備える。

【0098】

実施形態４７は、実施形態４６に記載のアッセイ装置であり、障壁は金属ホイル又はポーチを備える。

【0099】

実施形態４８は、実施形態４７に記載のアッセイ装置であり、プランジャは、障壁に穴を開けるように構成された末端部を更に備える。

【0100】

実施形態４９は、実施形態４７又は４８に記載のアッセイ装置であり、プランジャは尖端を備える。

【0101】

実施形態５０は、実施形態３８に記載のアッセイ装置であり、障壁はポーチを備え、かつポーチはルミノールを含有する。

【0102】

実施形態５１は、実施形態３１〜５０のいずれかに記載のアッセイ装置であり、膜は、ウィックと検出領域との間に配設された制御ラインを更に備え、制御ラインは一般的な捕捉化合物を含む。

【0103】

実施形態５２は、実施形態３１〜５１のいずれかに記載のアッセイ装置であり、受け部は試験管を備える。

【0104】

実施形態５３は、標的分析種の検出方法であり、この方法は、（ａ）表面及び試料入口を有する受け部と、少なくとも１つの試薬と、受け部内に配設され、かつ表面を有するプランジャと、毛管力をもたらすウィックを有し、プランジャの表面か、受け部の表面か、又は両者に装着された膜と、複数の捕捉化合物が固定された検出領域と、を備え、検出領域は試料入口とウィックとの間に位置する、アッセイ装置を提供することと、（ｂ）標的分析種の含有が予想される試料を提供することと、（ｃ）この試料を、試料入口を通してこの膜に添加することと、（ｄ）試料が検出領域に到達するまで膜に沿って試料を移動させることと、（ｅ）標的分析種と捕捉化合物との反応によって標的分析種を固定することと、（ｆ）固定された標的分析種を少なくとも１つの試薬と反応させ、検出可能なシグナルを発生させることと、（ｇ）発生したシグナルを検出することと、を含む。

【0105】

実施形態５４は、実施形態５３に記載の方法であり、試料を提供することは、複数の親和性構成成分を試料に添加し、任意の標的分析種を結合させることを更に含む。

【0106】

実施形態５５は、実施形態５３に記載の方法であり、膜は、複数の親和性構成成分が配設された標的結合領域を更に備え、標的結合領域は、試料入口と検出領域との間に位置する。

【0107】

実施形態５６は、実施形態５３〜５５のいずれかに記載の方法であり、反応させることは、プランジャに力を加え、検出領域を、ウィックと流体連通している状態から切り離し、かつ検出領域を、少なくとも１つの試薬と流体連通している状態に置くことを更に含む。

【0108】

実施形態５７は、実施形態５６に記載の方法であり、プランジャに力を加えることは、プランジャを回転させることを含む。

【0109】

実施形態５８は、実施形態５６に記載の方法であり、プランジャに力を加えることは、プランジャを押し下げることを含む。

【0110】

実施形態５９は、実施形態５３〜５８のいずれかに記載の方法であり、検出領域はプランジャの表面に装着される。

【0111】

実施形態６０は、実施形態５３〜５８のいずれかに記載の方法であり、検出領域は受け部の表面に装着される。

【0112】

実施形態６１は、実施形態５３〜６０のいずれかに記載の方法であり、発生されたシグナルは発光を含み、かつ検出することは、照度計を使用して発光を計測することを含む。

【0113】

実施形態６２は、実施形態６１に記載の方法であり、検出することは、発光を定量化することを更に含む。

【0114】

実施形態６３は、実施形態５３〜６０のいずれかに記載の方法であり、発生されたシグナルは蛍光を含む。

【0115】

実施形態６４は、実施形態６３に記載の方法であり、検出することは、蛍光を定量化することを更に含む。

【0116】

実施形態６５は、実施形態５３〜６０のいずれかに記載の方法であり、発生されたシグナルは変色を含む。

【0117】

実施形態６６は、実施形態６５に記載の方法であり、検出することは、変色を定量化することを更に含む。

【0118】

実施形態６７は、実施形態５３〜６６のいずれかに記載の方法であり、受け部の一部は不透明であり、かつ受け部の一部は光に対して透明である。

【0119】

実施形態６８は、実施形態５３〜６７のいずれかに記載の方法であり、親和性構成成分のそれぞれは、抗体、リガンド、ペプチドアプタマー、ヌクレオチドアプタマー、又はこれらの組合せを含む結合部分を含む。

【0120】

実施形態６９は、実施形態５３〜６８のいずれかに記載の方法であり、親和性構成成分のそれぞれは、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、又はこれらの組合せを含む検出部分を含む。

【0121】

実施形態７０は、実施形態５３〜６９のいずれかに記載の方法であり、捕捉化合物は、アプタマー、ペプチド、抗体、リガンド、又はこれらの組合せを含む。

【0122】

実施形態７１は、実施形態５３〜７０のいずれかに記載の方法であり、少なくとも１つの試薬は過酸化水素を含む。

【0123】

実施形態７２は、実施形態５３〜７１のいずれかに記載の方法であり、少なくとも１つの試薬はルシフェリンを含む。

【0124】

実施形態７３は、実施形態５３〜７１のいずれかに記載の方法であり、親和性構成成分は、ペプチドアプタマー又はヌクレオチドアプタマーに結合された酵素を含む。

【0125】

実施形態７４は、実施形態５３〜７１のいずれかに記載の方法であり、親和性構成成分は、抗体に結合された酵素を含む。

【0126】

実施形態７５は、実施形態５３〜７４のいずれかに記載の方法であり、少なくとも１つの試薬は水溶液を含む。

【0127】

実施形態７６は、実施形態５３〜７５のいずれかに記載の方法であり、膜は流体制御フィルムである。

【0128】

実施形態７７は、実施形態５３〜７６のいずれかに記載の方法であり、膜はニトロセルロースを含む。

【0129】

実施形態７８は、実施形態５３〜７７のいずれかに記載の方法であり、検出領域は不織膜を備える。

【0130】

実施形態７９は、実施形態５３〜７８のいずれかに記載の方法であり、プランジャは、プランジャが受け部内で回転されると、検出領域を、ウィックと流体連通している状態から切り離し、かつ検出領域を、少なくとも１つの試薬と流体連通している状態に置くよう構成される。

【0131】

実施形態８０は、実施形態５３に記載の方法であり、少なくとも１つの試薬が受け部に配設される。

【0132】

実施形態８１は、実施形態５３〜８０のいずれかに記載の方法であり、受け部は、少なくとも１つの試薬をプランジャから隔離するための障壁を更に備える。

【0133】

実施形態８２は、実施形態８１に記載の方法であり、障壁は金属ホイル又はポーチを備える。

【0134】

実施形態８３は、実施形態８２に記載の方法であり、障壁はポーチを備え、かつポーチはルミノールを含有する。

【0135】

実施形態８４は、実施形態８２に記載の方法であり、プランジャは、障壁に穴を開けるように構成された末端部を更に備える。

【0136】

実施形態８５は、実施形態８２又は実施形態８３に記載の方法であり、プランジャは尖端を備える。

【0137】

実施形態８６は、実施形態５３に記載の方法であり、少なくとも１つの試薬がプランジャ内に配設される。

【0138】

実施形態８７は、実施形態８６に記載の方法であり、プランジャは、少なくとも１つの試薬の一部を放出し、少なくとも１つの試薬の一部を検出領域と流体連通している状態に置くよう構成される。

【0139】

実施形態８８は、実施形態５３〜８７のいずれかに記載の方法であり、プランジャは、第１の表面の反対側の第２の表面と、第１の表面及び第２の表面と連通している末端部と、を更に備え、膜は末端部及び第２の表面と接触している。

【0140】

実施形態８９は、実施形態８８に記載の方法であり、検出領域はプランジャの末端部に位置する。

【0141】

実施形態９０は、実施形態５３〜８９のいずれかに記載の方法であり、膜は、ウィックと検出領域との間に配設された制御ラインを更に備え、制御ラインは一般的な捕捉化合物を含む。

【0142】

実施形態９１は、実施形態５３〜９０のいずれかに記載の方法であり、受け部は試験管を備える。

【0143】

実施形態９２は、実施形態５３〜９１のいずれかに記載の方法であり、プランジャはばねを備え、プランジャが押し下げられるとばねは検出領域で膜に係合し、かつばねは伸長し、検出領域を、ウィックと流体連通している状態から切り離し、かつ検出領域を、少なくとも１つの試薬と流体連通している状態に置く。

【0144】

実施形態９３は、実施形態５３〜９２のいずれかに記載の方法であり、膜は毛管による流体誘導体を備える。

【0145】

実施形態９４は、実施形態９３に記載の方法であり、毛管による流体誘導体は積層された流体輸送フィルムを備える。

【0146】

（実施例）
本発明の目的及び利点は、以下の実施例により更に例示されるが、これらの実施例に列挙したその特定の材料及び量、並びに他の条件及び詳細は、本発明を過度に限定すると解釈されるべきではない。これらの実施例は説明目的のためのものにすぎず、添付の「特許請求の範囲」の範囲を限定することを意図するものではない。

【0147】

材料
特に断りのない限り、本明細書の実施例及びその他の部分における全ての部、百分率、比等は、重量基準である。特に断りのない限り、全ての化学物質は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）より入手可能である。

【0148】

実施例１−１：
ペニシリンＧに特に結合するアプタマーを、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられた流体輸送フィルム上に担持させる。ペニシリンＧに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。試料溶液のアリコート１００μＬを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで、典型的には５分間、流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるペニシリンＧも、ＨＲＰ結合アプタマーと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。５分後、プランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、３−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ照度計（３Ｍ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）等の携帯式照度計によって測定する。

【0149】

実施例１−２：
ペニシリンＧに特に結合するアプタマーを、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられた流体輸送フィルム上に担持させる。ペニシリンＧに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ＡＢＴＳ（２，２’−アジノビス［３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸］−二アンモニウム塩）を含有させる。試料溶液のアリコート２００μＬを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで、典型的には５分間、流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるペニシリンＧも、ＨＲＰ結合アプタマーと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。５分後、プランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたＡＢＴＳを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、無色のＡＢＴＳを、青色のラジカルカチオンへと酸化する。青色の強度は、カラーチャートとの比較によって視覚的に、又は３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ比色計（３Ｍ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）等の比色計によって、評価できる。

【0150】

実施例１−３：
ペニシリンＧに特に結合するアプタマーを、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられた流体輸送フィルム上に担持させる。ペニシリンＧに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ＡＤＨＰ（１０−アセチル−３，７−ジヒドロキシフェノキサジン）を含有させる。試料溶液のアリコート２５０μＬを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで、典型的には５分間、流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるペニシリンＧも、ＨＲＰ結合アプタマーと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。５分後、プランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたＡＤＨＰを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、非蛍光性のＡＤＨＰを、高蛍光性のレゾルフィンへと酸化する。蛍光の強度は、標準ＵＶランプ照射によって視覚的に、又は好適には、蛍光光度計によって励起波長〜５７０ｎｍ及び蛍光波長〜５８５ｎｍを用い、評価できる。

【0151】

実施例１−４：
ペニシリンＧに特に結合するアプタマーを、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられた流体輸送フィルム上に担持させる。ペニシリンＧに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。試料溶液のアリコート１００μＬを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで、典型的には５分間、流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるペニシリンＧも、ＨＲＰ結合アプタマーと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。続いて、ｐＨ７の緩衝液のアリコート１ｍＬを、試料入口を通して添加し、流体輸送フィルム及び検出領域の過剰のＨＲＰ結合抗体を洗い落とす。５分後、プランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、３−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ照度計（３Ｍ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）等の携帯式照度計によって測定する。

【0152】

実施例１−５：
ペニシリンＧに特に結合するアプタマーを、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられた流体輸送フィルム上に担持させる。ペニシリンＧに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ＡＢＴＳ（２，２’−アジノビス［３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸］−二アンモニウム塩）を含有させる。試料溶液のアリコート２００μＬを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで、典型的には５分間、流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるペニシリンＧも、ＨＲＰ結合アプタマーと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。続いて、ｐＨ７の緩衝液のアリコート１ｍＬを、試料入口を通して添加し、流体輸送フィルム及び検出領域の過剰のＨＲＰ結合抗体を洗い落とす。５分後、プランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたＡＢＴＳを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、無色のＡＢＴＳを、青色のラジカルカチオンへと酸化する。青色の強度は、カラーチャートとの比較によって視覚的に、又は３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ比色計（３Ｍ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）等の比色計によって、評価できる。

【0153】

実施例１−６：
ペニシリンＧに特に結合するアプタマーを、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられた流体輸送フィルム上に担持させる。ペニシリンＧに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ＡＤＨＰ（１０−アセチル−３，７−ジヒドロキシフェノキサジン）を含有させる。試料溶液のアリコート２５０μＬを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで、典型的には５分間、流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるペニシリンＧも、ＨＲＰ結合アプタマーと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。続いて、ｐＨ７の緩衝液のアリコート１ｍＬを、試料入口を通して添加し、流体輸送フィルム及び検出領域の過剰のＨＲＰ結合抗体を洗い落とす。５分後、プランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたＡＤＨＰを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、非蛍光性のＡＤＨＰを、高蛍光性のレゾルフィンへと酸化する。蛍光の強度は、標準ＵＶランプ照射によって視覚的に、又は好適には、蛍光光度計によって励起波長〜５７０ｎｍ及び蛍光波長〜５８５ｎｍを用い、評価できる。

【0154】

実施例２−１
クロストリジウム・ディフィシルに対する抗体を、米国特許第８，６９７，３７４号に記載のとおり、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。クロストリジウム・ディフィシルに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。試料溶液のアリコート１００μＬを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるクロストリジウム・ディフィシルも、ＨＲＰ結合抗体と反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。５分後、プランジャを１回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、３−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ照度計等の携帯式照度計によって測定する。

【0155】

実施例２−２：
クロストリジウム・ディフィシルに対する抗体を、米国特許第８，６９７，３７４号に記載のとおり、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。クロストリジウム・ディフィシルに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。試料溶液のアリコート１００μＬを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるクロストリジウム・ディフィシルも、ＨＲＰ結合抗体と反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。続いて、ｐＨ７の緩衝液のアリコート１ｍＬを、試料入口を通して添加し、流体輸送フィルム及び検出領域の過剰のＨＲＰ結合抗体を洗い落とす。５分後、プランジャを１回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、３−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ照度計等の携帯式照度計によって測定する。

【0156】

実施例２−３：
クロストリジウム・ディフィシルに対する抗体を、米国特許第８，６９７，３７４号に記載のとおり、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。クロストリジウム・ディフィシルに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。試料溶液のアリコート１００μＬを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるクロストリジウム・ディフィシルも、ＨＲＰ結合抗体と反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。続いて、ｐＨ５の緩衝液のアリコート１ｍＬを、試料入口を通して添加し、流体輸送フィルム及び検出領域の過剰のＨＲＰ結合抗体を洗い落とす。５分後、プランジャを１回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、３−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ照度計等の携帯式照度計によって測定する。

【0157】

実施例２−４：
クロストリジウム・ディフィシルに対する抗体を、米国特許第８，６９７，３７４号に記載のとおり、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。クロストリジウム・ディフィシルに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。試料溶液のアリコート１００μＬを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるクロストリジウム・ディフィシルも、ＨＲＰ結合抗体と反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。続いて、ｐＨ９の緩衝液のアリコート１ｍＬを、試料入口を通して添加し、流体輸送フィルム及び検出領域の過剰のＨＲＰ結合抗体を洗い落とす。５分後、プランジャを１回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、３−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ照度計等の携帯式照度計によって測定する。

【0158】

実施例２−５
クロストリジウム・ディフィシルに対する抗体を、米国特許第８，６９７，３７４号に記載のとおり、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。クロストリジウム・ディフィシルに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ＡＢＴＳ（２，２’−アジノビス［３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸］−二アンモニウム塩）を含有させる。試料溶液のアリコート４００μＬを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるクロストリジウム・ディフィシルも、ＨＲＰ結合抗体と反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。５分後、プランジャを１回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたＡＢＴＳを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、無色のＡＢＴＳを、青色のラジカルカチオンへと酸化する。青色の強度は、カラーチャートとの比較によって視覚的に、又は３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ比色計等の比色計によって、評価できる。

【0159】

実施例２−６：
クロストリジウム・ディフィシルに対する抗体を、米国特許第８，６９７，３７４号に記載のとおり、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。クロストリジウム・ディフィシルに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ＡＤＨＰ（１０−アセチル−３，７−ジヒドロキシフェノキサジン）を含有させる。試料溶液のアリコート８００μＬを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるクロストリジウム・ディフィシルも、ＨＲＰ結合抗体と反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。５分後、プランジャを１回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたＡＤＨＰを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、非蛍光性のＡＤＨＰを、高蛍光性のレゾルフィンへと酸化する。蛍光の強度は、標準ＵＶランプ照射によって視覚的に、又は好適には、蛍光光度計によって励起波長〜５７０ｎｍ及び蛍光波長〜５８５ｎｍを用い、評価できる。

【0160】

実施例３−１：
クロストリジウム・ディフィシルに対する抗体を、米国特許第８，６９７，３７４号に記載のとおり、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。クロストリジウム・ディフィシルに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。ウィックは、少量のブロモフェノールブルーを、黄色の酸性型で含有する。試料溶液のアリコート２５０μＬをｐＨ７の緩衝液１ｍＬと混合し、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この移動はウィック上の青色の出現（ブロモフェノールブルーに起因する）によって表示され、窓を通して可視化することができる。この間、試料中に存在する如何なるクロストリジウム・ディフィシルも、ＨＲＰ結合抗体と反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。５分後、プランジャを１回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、３−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ照度計等の携帯式照度計によって測定する。

【0161】

実施例３−２：
クロストリジウム・ディフィシルに対する抗体を、米国特許第８，６９７，３７４号に記載のとおり、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。クロストリジウム・ディフィシルに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ＡＢＴＳ（２，２’−アジノビス［３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸］−二アンモニウム塩）を含有させる。ウィックは、少量のブロモフェノールブルーを、黄色の酸性型で含有する。試料溶液のアリコート１００μＬをｐＨ７の緩衝液１ｍＬと混合し、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この移動はウィック上の青色の出現（ブロモフェノールブルーに起因する）によって表示され、窓を通して可視化することができる。この間、試料中に存在する如何なるクロストリジウム・ディフィシルも、ＨＲＰ結合抗体と反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。５分後、プランジャを１回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたＡＢＴＳを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、無色のＡＢＴＳを、青色のラジカルカチオンへと酸化する。青色の強度は、カラーチャートとの比較によって視覚的に、又は３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ比色計等の比色計によって、評価できる。

【0162】

実施例３−３：
クロストリジウム・ディフィシルに対する抗体を、米国特許第８，６９７，３７４号に記載のとおり、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。クロストリジウム・ディフィシルに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ＡＤＨＰ（１０−アセチル−３，７−ジヒドロキシフェノキサジン）を含有させる。ウィックは、少量のブロモフェノールブルーを、黄色の酸性型で含有する。試料溶液のアリコート２５０μＬをｐＨ７の緩衝液１ｍＬと混合し、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この移動はウィック上の青色の出現（ブロモフェノールブルーに起因する）によって表示され、窓を通して可視化することができる。この間、試料中に存在する如何なるクロストリジウム・ディフィシルも、ＨＲＰ結合抗体と反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。５分後、プランジャを１回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたＡＤＨＰを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、非蛍光性のＡＤＨＰを、高蛍光性のレゾルフィンへと酸化する。蛍光の強度は、標準ＵＶランプ照射によって視覚的に、又は好適には、蛍光光度計によって励起波長〜５７０ｎｍ及び蛍光波長〜５８５ｎｍを用い、評価できる。

【0163】

実施例４−１：
アフラトシキン結合ペプチドをセイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。アフラトシキンに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。検出領域は、流体輸送を阻害しないが物理的なストレスを受けると破断する２つの弱化された領域（例えば、穿孔）によって、いずれの側にも結合される。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。ウィックは、少量のブロモフェノールブルーを、黄色の酸性型で含有する。試料溶液のアリコート５０μＬをｐＨ７の緩衝液０．５ｍＬと混合し、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が下方のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って下方に毛管移動させる。この移動はウィック上の青色の出現（ブロモフェノールブルーに起因する）によって表示され、窓を通して可視化することができる。この間、試料中に存在する如何なるアフラトシキンも、ＨＲＰ結合ペプチドと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。５分後、プランジャを４分の１回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを試薬溶液と接触させ、かつ膜の検出領域を試薬溶液中へと下方に移動させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、３−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ照度計等の携帯式照度計によって測定する。

【0164】

実施例４−２：
アフラトシキン結合ペプチドをセイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。アフラトシキンに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。検出領域は、流体輸送を阻害しないが物理的なストレスを受けると破断する２つの弱化された領域（例えば、穿孔）によって、いずれの側にも結合される。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。ウィックは、少量のブロモフェノールブルーを、黄色の酸性型で含有する。試料溶液のアリコート５０μＬをｐＨ８の緩衝液０．５ｍＬと混合し、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が下方のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って下方に毛管移動させる。この移動はウィック上の青色の出現（ブロモフェノールブルーに起因する）によって表示され、窓を通して可視化することができる。この間、試料中に存在する如何なるアフラトシキンも、ＨＲＰ結合ペプチドと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。５分後、プランジャを４分の１回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを試薬溶液と接触させ、かつ膜の検出領域を試薬溶液中へと下方に移動させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、３−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ照度計等の携帯式照度計によって測定する。

【0165】

実施例４−３：
アフラトシキン結合ペプチドをセイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。アフラトシキンに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。検出領域は、流体輸送を阻害しないが物理的なストレスを受けると破断する２つの弱化された領域（例えば、穿孔）によって、いずれの側にも結合される。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。ウィックは、少量のブロモフェノールブルーを、黄色の酸性型で含有する。試料溶液のアリコート５０μＬをｐＨ９の緩衝液０．５ｍＬと混合し、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が下方のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って下方に毛管移動させる。この移動はウィック上の青色の出現（ブロモフェノールブルーに起因する）によって表示され、窓を通して可視化することができる。この間、試料中に存在する如何なるアフラトシキンも、ＨＲＰ結合ペプチドと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。５分後、プランジャを４分の１回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを試薬溶液と接触させ、かつ膜の検出領域を試薬溶液中へと下方に移動させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、３−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ照度計等の携帯式照度計によって測定する。

【0166】

実施例５−１：
トロポミオシン結合ペプチドをアルカリホスファターゼ（ＡＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。トロポミオシンに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。ＣＤＰ Ｓｔａｒ（ＡＢＩ，Ｔｈｅｒｍｏ）等の化学発光ＡＰ基質を、界面活性剤及び／又はＳａｐｐｈｉｒｅ ＩＩ又はＥｍｅｒａｌｄ ＩＩ等の化学発光増強剤を任意に含有する試薬溶液中に含有させる。ウィックは、少量のブロモフェノールブルーを、黄色の酸性型で含有する。試料溶液のアリコート５００μＬをｐＨ７の緩衝液０．５ｍＬと混合し、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が頂部のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って上方に移動させる。この移動はウィック上の青色の出現（ブロモフェノールブルーに起因する）によって表示され、窓を通して可視化することができる。この間、試料中に存在する如何なるトロポミオシンも、ＡＰ結合ペプチドと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。５分後、プランジャを４分の１回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、かつ膜の検出領域を試薬溶液中へと下方に移動させる。検出領域に保持されたＡＰがＣＤＰ−Ｓｔａｒ基質を加水分解し、発光する。光は、３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ照度計等の携帯式照度計によって測定する。

【0167】

実施例５−２：
トロポミオシン結合ペプチドをアルカリホスファターゼ（ＡＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。トロポミオシンに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。ＣＤＰ Ｓｔａｒ（ＡＢＩ，Ｔｈｅｒｍｏ）等の化学発光ＡＰ基質を、界面活性剤及び／又はＳａｐｐｈｉｒｅ ＩＩ又はＥｍｅｒａｌｄ ＩＩ等の化学発光増強剤を任意に含有する試薬溶液中に含有させる。ウィックは、少量のブロモフェノールブルーを、黄色の酸性型で含有する。試料溶液のアリコート５００μＬをｐＨ７の緩衝液０．５ｍＬと混合し、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が頂部のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って上方に移動させる。この移動はウィック上の青色の出現（ブロモフェノールブルーに起因する）によって表示され、窓を通して可視化することができる。この間、試料中に存在する如何なるトロポミオシンも、ＡＰ結合ペプチドと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。１分後、プランジャを４分の１回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、かつ膜の検出領域を試薬溶液中へと下方に移動させる。検出領域に保持されたＡＰがＣＤＰ−Ｓｔａｒ基質を加水分解し、発光する。光は、３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ照度計等の携帯式照度計によって測定する。

【0168】

実施例５−３：
トロポミオシン結合ペプチドをアルカリホスファターゼ（ＡＰ）と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。トロポミオシンに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。ＣＤＰ Ｓｔａｒ（ＡＢＩ，Ｔｈｅｒｍｏ）等の化学発光ＡＰ基質を、界面活性剤及び／又はＳａｐｐｈｉｒｅ ＩＩ又はＥｍｅｒａｌｄ ＩＩ等の化学発光増強剤を任意に含有する試薬溶液中に含有させる。ウィックは、少量のブロモフェノールブルーを、黄色の酸性型で含有する。試料溶液のアリコート５００μＬをｐＨ７の緩衝液０．５ｍＬと混合し、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が頂部のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って上方に移動させる。この移動はウィック上の青色の出現（ブロモフェノールブルーに起因する）によって表示され、窓を通して可視化することができる。この間、試料中に存在する如何なるトロポミオシンも、ＡＰ結合ペプチドと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。１０分後、プランジャを４分の１回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、かつ膜の検出領域を試薬溶液中へと下方に移動させる。検出領域に保持されたＡＰがＣＤＰ−Ｓｔａｒ基質を加水分解し、発光する。光は、３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ照度計等の携帯式照度計によって測定する。

【0169】

実施例６−１：
ペニシリンＧに特に結合するアプタマーをセイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、受け部の表面に取り付けられた流体輸送フィルム上に担持させる。ペニシリンＧに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。試料溶液のアリコート１００μＬを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで、典型的には５分間、流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるペニシリンＧも、ＨＲＰ結合アプタマーと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。５分後、プランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、３−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ照度計等の携帯式照度計によって測定する。

【0170】

実施例６−２：
ペニシリンＧに特に結合するアプタマーをセイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、受け部の表面に取り付けられた流体輸送フィルム上に担持させる。ペニシリンＧに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ＡＢＴＳ（２，２’−アジノビス［３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸］−二アンモニウム塩）を含有させる。試料溶液のアリコート１００μＬを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで、典型的には５分間、流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるペニシリンＧも、ＨＲＰ結合アプタマーと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。５分後、プランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたＡＢＴＳを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、無色のＡＢＴＳを、青色のラジカルカチオンへと酸化する。青色の強度は、カラーチャートとの比較によって視覚的に、又は３Ｍ ＣＬＥＡＮ−ＴＲＡＣＥ比色計等の比色計によって、評価できる。

【0171】

実施例６−３：
ペニシリンＧに特に結合するアプタマーをセイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させ、受け部の表面に取り付けられた流体輸送フィルム上に担持させる。ペニシリンＧに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ＡＤＨＰ（１０−アセチル−３，７−ジヒドロキシフェノキサジン）を含有させる。試料溶液のアリコート１００μＬを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで、典型的には５分間、流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるペニシリンＧも、ＨＲＰ結合アプタマーと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。５分後、プランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたＡＤＨＰを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたＨＲＰは、非蛍光性のＡＤＨＰを、高蛍光性のレゾルフィンへと酸化する。蛍光の強度は、標準ＵＶランプ照射によって視覚的に、又は好適には、蛍光光度計によって励起波長〜５７０ｎｍ及び蛍光波長〜５８５ｎｍを用い、評価できる。

【0172】

本明細書においてある程度の例示的な実施形態について詳細に記載したが、当業者であれば、前述の説明を理解することにより、これらの実施形態の改変、変化形、及び同等物を容易に考え出し得ることが理解されよう。更に、本明細書で参照した全ての刊行物及び特許は、それぞれの個々の刊行物又は特許が具体的かつ個々に参照により組み込まれることが示されたのと同じ程度で、そのまま参照により組み込まれるものとする。各種の例示的な実施形態について記載した。これら及び他の実施形態は、以下、特許請求の範囲の範囲内にある。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図7C】