特許 6402016 神経機能改善剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6402016

(24)【登録日】2018年9月14日

(45)【発行日】2018年10月10日

(54)【発明の名称】神経機能改善剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/74 20150101AFI20181001BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20181001BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20181001BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20181001BHJP

   A23L 33/00 20160101ALN20181001BHJP

【ＦＩ】

   A61K35/74 A

   A61P25/00

   A61P29/00

   A61P43/00 105

   !A23L33/00

【請求項の数】4

【全頁数】14

(21)【出願番号】特願2014-250271(P2014-250271)

(22)【出願日】2014年12月10日

(65)【公開番号】特開2016-108303(P2016-108303A)

(43)【公開日】2016年6月20日

【審査請求日】2017年7月19日

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用 （１）日本病態生理学会雑誌 第２３巻２号 第５６頁，発行日 平成２６年７月３１日 （２）第２４回日本病態生理学会大会，開催日 平成２６年８月１０日

(73)【特許権者】

【識別番号】304019399

【氏名又は名称】国立大学法人岐阜大学

(73)【特許権者】

【識別番号】391015351

【氏名又は名称】ビオフェルミン製薬株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100077012

【弁理士】

【氏名又は名称】岩谷 龍

(72)【発明者】

【氏名】椎名 貴彦

(72)【発明者】

【氏名】志水 泰武

(72)【発明者】

【氏名】嶋川 真木

(72)【発明者】

【氏名】大野 裕史

【審査官】 渡部 正博

(56)【参考文献】

【文献】 特開２０１２−１２６７００（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００８／１２０７１３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２０１３−５２８０５３（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３５／００−３５／７６８

Ａ６１Ｐ １／００−４３／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

乳酸菌を含有する腸管の神経機能改善剤であって、該神経機能改善が、炎症状態の神経の変化の予防又は抑制であり、該炎症状態の神経の変化の予防又は抑制が、(i) 一酸化窒素作動性神経の減弱の予防又は抑制、及び／又は(ii)タキキニン及びアセチルコリン作動性神経を除く平滑筋収縮作用を有する神経の出現の予防又は抑制であることを特徴とする、剤。

【請求項2】

乳酸菌が、ストレプトコッカス（Streptococcus）属に属する請求項１に記載の剤。

【請求項3】

乳酸菌が、ストレプトコッカス・フェーカリス（Streptococcus faecalis）に属する請求項１又は２に記載の剤。

【請求項4】

乳酸菌が、ストレプトコッカス・フェーカリス １２９ ＢＩＯ ３Ｂ（Streptococcus faecalis 129 BIO 3B）を含む請求項１〜３のいずれかに記載の剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、神経機能改善剤に関する。

【背景技術】

【0002】

一酸化窒素（ＮＯ）は、平滑筋細胞内の溶解性グアニル酸シクラーゼと結合してｃＧＭＰの生成をもたらす。ｃＧＭＰはＧキナーゼを活性化し、機能タンパクをリン酸化する。Ｇキナーゼによるリン酸化は、Ｃａの筋小胞体への取り込み、細胞外への排出等による平滑筋弛緩をもたらす。また、タキキニンは平滑筋収縮を引き起こすポリペプチド群の総称である。さらに、副交感神経末端から放出されたアセチルコリンは、ムスカリン受容体に結合して平滑筋を収縮させることが知られている。

【0003】

例えば、炎症の際に生じる内在神経系（ＮＯ作動性神経、アセチルコリン作動性神経、タキキニン作動性神経その他の内在神経）の変化（異常化）のみならずその変化を予防又は抑制するための有効成分については不明な点が多かった。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

本発明は、新規な神経機能改善剤を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0005】

本発明者らは、上記課題を解決するために検討した結果、乳酸菌が上記内在神経系の変化を予防又は抑制することを見出し、さらに検討を重ねて、種々の新知見を得て、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は以下の発明に関する。
〔１〕乳酸菌を含有する神経機能改善剤。
〔２〕乳酸菌が、ストレプトコッカス（Streptococcus）属に属する前記〔１〕に記載の剤。
〔３〕乳酸菌が、ストレプトコッカス・フェーカリス（Streptococcus faecalis）に属する前記〔１〕又は〔２〕に記載の剤。
〔４〕乳酸菌が、ストレプトコッカス・フェーカリス １２９ ＢＩＯ ３Ｂ（Streptococcus faecalis 129 BIO 3B）を含む前記〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の剤。
〔５〕神経機能改善が、炎症状態の神経の変化の予防又は抑制である前記〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載の剤。
〔６〕炎症状態の神経の変化が、一酸化窒素作動性神経の減弱並びにタキキニン及びアセチルコリン作動性神経を除く平滑筋収縮作用を有する神経の出現である前記〔５〕に記載の剤。

【発明の効果】

【0006】

本発明は、新規な神経機能改善剤を提供することができる。また、本発明の神経機能改善剤は、炎症状態の神経の変化の予防又は抑制することができる点において、特に顕著な効果を有する。

【図面の簡単な説明】

【0007】

【図1】図１は、噴霧乾燥装置の概略を示す図である。

【図2】図２は、実施例のプロトコルを示す。

【図3】図３は、実施例で用いたマグヌス槽の構造を示す模式図である。

【図4】図４は、正常大腸標本の機械的反応を示す図である。

【図5】図５は、炎症後の大腸標本の機械的反応を示す図である。

【図6】図６は、正常大腸標本の機械的反応を示す図である。

【図7】図７は、炎症後の大腸標本の機械的反応を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0008】

本発明は、乳酸菌を含有する神経機能改善剤（以下、本発明の剤という）を提供する。本発明の剤は、乳酸菌を含有していればよく、さらに他の成分を含有していてもよい。乳酸菌は、１種単独で使用してもよく、２種以上を混合して用いてもよい。

【0009】

本発明における乳酸菌は特に限定されず、例えば、ビフィズス菌、乳酸桿菌、乳酸球菌等の乳酸菌が挙げられる。

【0010】

本発明においては使用される乳酸菌は、例えば、Bifidobacterium bifidum、B. longum、 B. breve、B. adolescentis、B. infantis、B.pseudolongum、B.thermophilum等のビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属のビフィズス菌；例えば、Lactobacillus acidophilus、L. casei、L. gasseri、L. plantarum、L. delbrueckii subsp bulgaricus、L. delbrueckii subsp lactis、L. fermentum、L. helveticus、L. johnsonii、L. paracasei subsp. paracasei、L. reuteri、L. rhamnosus、L. salivarius、L. brevis等のラクトバシラス（Lactobacillus）属の乳酸桿菌；例えば、Leuconostoc mesenteroides等のリューコノストック属、Streptococcus(Enterococcus) faecalis、Streptococcus(Enterococcus) faecium、 Streptococcus(Enterococcus) hirae、Streptococcus thermophilus等のストレプトコッカス（Streptococcus）属（現在の分類学上、エンテロコッカス (Enterococcus)属に分類される）、Lactococcus lactis、L. cremoris等のラクトコッカス（Lactococcus）属、Tetragenococcus halophilus等のテトラジェノコッカス（Tetragenococcus）属、Pediococcus acidilactici、P. pentosaceus等のペディオコッカス（Pediococcus）属、Oenococcus oeni等のオエノコッカス（Oenococcus）属等の乳酸球菌等が挙げられる。
これらの菌体は、例えばＡＴＣＣ又はＩＦＯ等の機関や財団法人 日本ビフィズス菌センターなどから容易に入手することができる。また、市販されているものを適宜使用することもできる。

【0011】

本明細書中においては、ストレプトコッカス（Streptococcus）属とは、ストレプトコッカス（Streptococcus）属及びエンテロコッカス(Enterococcus)属を包含する。

【0012】

乳酸菌の分類体系は１９８０年頃までは細胞形態、細胞配列、乳酸発酵形式、糖の資化性、ＤＮＡ−ＤＮＡ相同性などによって分類されていたが、現在では化学分類学的性質や１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列を用いた遺伝学的手法により、新規属の提案や既知属の再分類が活発に行われるようになったため、現在の分類学ではストレプトコッカス・フェーカリス １２９ ＢＩＯ ３Ｂはエンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)に属している。

【0013】

本発明において、乳酸菌は、ストレプトコッカス（Streptococcus）属に属する菌を含むことが好ましい。ストレプトコッカス（Streptococcus）属に属する乳酸菌は、好ましくは、現在乳酸菌の分類に使用されている１９８４年以降の分類学上、エンテロコッカス (Enterococcus)属に分類される乳酸菌である。ストレプトコッカス（Streptococcus）属の乳酸菌として、ストレプトコッカス・フェーカリス（Streptococcus faecalis）が好ましく、さらに、ストレプトコッカス・フェーカリス １２９ ＢＩＯ ３Ｂ（Streptococcus faecalis 129 BIO 3B）を必須として用いるのが最も好ましい。

【0014】

本発明の効果を奏する限り、上記乳酸菌以外に、糖化菌、酪酸菌等の有用菌を含んでもよい。例えば、Bacillus subtilis、Bacillus mesentericus、Bacillus polyformenticus等の糖化菌；例えば、Bacillus coagulans等の有胞子性乳酸菌； Bacillus toyoi、B．licheniformis、Clostridium butyricum等の酪酸菌；その他の有用菌が挙げられる。
これらの菌体は、例えばＡＴＣＣ又はＩＦＯなどの機関や財団法人 日本ビフィズス菌センターなどから容易に入手することができる。また、市販されているものを適宜使用することもできる。

【0015】

上記菌体は、公知の条件又はそれに準じる条件で培養することにより得ることができる。例えば、乳酸菌の場合は、通常、グルコ−ス、酵母エキス、ペプトン等を含む液体培地で上記乳酸菌の１種又は２種以上を通常約２５〜４５℃程度で約４〜７２時間程度、好気又は嫌気培養し、培養液から菌体を集菌し、洗浄し、湿菌体を得る。また、糖化菌の場合は、通常、肉エキス、カゼイン製ペプトン、塩化ナトリウム等を含む寒天培地で１種又は２種以上を通常約２５〜４５℃程度で約４〜７２時間程度、好気培養し、培地から菌体を集菌し、洗浄し、湿菌体を得る。

【0016】

本発明において用いる乳酸菌は、生菌が好ましいが、菌の処理物を用いてもよい。菌の処理物とは、乳酸菌に何らかの処理を加えたものをいい、その処理は特に限定されない。該処理物として具体的には、該菌体の超音波などによる破砕液、該菌体の培養液又は培養上清、それらを濾過又は遠心分離など固液分離手段によって分離した固体残渣などが挙げられる。また、細胞壁を酵素又は機械的手段により除去した処理液、トリクロロ酢酸処理又は塩析処理などして得られるタンパク質複合体（タンパク質、リポタンパク質、糖タンパク質など）又はペプチド複合体（ペプチド、糖ペプチド等）なども該処理物として挙げられる。さらに、これらの濃縮物、これらの希釈物又はこれらの乾燥物なども該処理物に含まれる。また、該菌体の超音波などによる破砕液、該細胞の培養液又は培養上清などに対し、例えば各種クロマトグラフィーによる分離などの処理をさらに加えたものも本発明における該処理物に含まれる。乳酸菌の死菌体も本発明における該処理物に含まれる。上記死菌体は、例えば、酵素処理、約１００℃程度の熱をかける加熱処理、抗生物質などの薬物による処理、ホルマリンなどの化学物質による処理、γ線などの放射線による処理などにより得ることができる。これらの技術は従来充分に確立されていて、本発明において、そのような技術に従ってよい。

【0017】

本発明において使用される乳酸菌は、乾燥物（菌体乾燥物）であってもよく、菌体乾燥物としては、シングルミクロンの菌体乾燥物が好ましい。菌体乾燥物とは、通常は乾燥された個々の菌体又は乾燥された菌体の集合物をいう。また、シングルミクロンとは、小数第１位を四捨五入して１〜１０μｍをいう。本発明に使用される乳酸菌として、シングルミクロンの菌体乾燥物を使用すると、製剤中の生菌率が上がり、その結果、神経機能の亢進作用が高くなる。シングルミクロンの乳酸菌の製造方法も従来公知であり、本発明の実施においても、公知の方法に従ってよい。

【0018】

菌体乾燥物の好ましい製造方法について説明する。上記菌体を溶媒に分散して菌体液とする。溶媒は、当業界で用いられる公知の溶媒を用いてよいが、水が好ましい。また、所望によりエタノールを加えてよい。エタノールを加えることによって、最初にエタノールが気化し、ついで水が気化するから、段階的な乾燥が可能となる。さらに、菌体液は、懸濁液であってもよい。溶媒は上記で示したものと同じでよい。また、懸濁させる際、懸濁剤、例えばアルギン酸ナトリウム等を使用してもよい。
また、上記菌体液には、公知技術に従ってさらに賦形剤、結合剤、崩壊剤、静電気防止剤など当業界で一般に用いられている添加剤を通常の配合割合で添加してもよい。
賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、Ｄ−マンニトール、トウモロコシデンプン、粉末セルロース、リン酸水素カルシウム、炭酸カルシウム等が挙げられる。結合剤としては、例えばヒドロキシプロピルセルロース、ポビドン（ポリビニルピロリドン）、キサンタンガム等が挙げられる。崩壊剤としては、例えば、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースカルシウム、部分アルファー化デンプン、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、カルボキシメチルスターチ等が挙げられる。静電気防止剤としては、例えば微粉または非微粉タルク、コロイド状シリカ、加工シリカ、沈降シリカ等が挙げられる。

【0019】

上記菌体液を、菌体乾燥物を製造するために噴霧乾燥装置による乾燥操作に付する。噴霧乾燥装置は、シングルミクロンの噴霧液滴を形成できる微粒化装置を備えた噴霧乾燥装置が好ましい。非常に粒径の小さな噴霧液滴にすると、噴霧液滴の単位質量あたりの表面積が大きくなり、乾燥温風との接触が効率よく行われるため、生産性が向上する。
ここでシングルミクロンの液滴とは、好ましくは噴霧液滴の粒径が小数第１位を四捨五入して１〜１０μｍであるものをいう。

【0020】

噴霧乾燥装置には、微粒化装置が、例えばロータリーアトマイザー（回転円盤）、加圧ノズル、又は圧縮気体の力を利用した２流体ノズルや４流体ノズルである噴霧乾燥装置が挙げられる。
噴霧乾燥装置は、シングルミクロンの噴霧液滴を形成できるものであれば、上記形式のいずれの噴霧乾燥装置であってもよいが、４流体ノズルを有する噴霧乾燥装置を使用するのが好ましい。

【0021】

４流体ノズルを有する噴霧乾燥装置では、例えば４流体ノズルの構造としては、好ましくは気体流路と液体流路とを１系統として、これを２系統ノズルエッジにおいて対称に設けたもので、ノズルエッジに流体流動面となる斜面を構成している。
また、ノズルエッジの先端の衝突焦点に向かって、両サイドから圧縮気体と液体を一点に集合させる外部混合方式の装置がよい。この方式であれば、ノズル詰まりがなく長時間噴霧することが可能となる。

【0022】

４流路ノズルを有する噴霧乾燥装置について図１を用いてさらに詳しく説明する。４流路ノズルのノズルエッジにおいて、液体流路３又は４から湧き出るように出た菌体液が、気体流路１又は２から出た高速気体流により流体流動面５で薄く引き伸ばされ、引き伸ばされた液体はノズルエッジ先端の衝突焦点６で発生する衝撃波で微粒化させることにより、シングルミクロンの噴霧液滴７を形成する。

【0023】

圧縮気体としては、例えば、空気、炭酸ガス、窒素ガス又はアルゴンガス等の不活性ガス等を用いることができる。とくに、酸化されやすいもの等を噴霧乾燥させる場合は、炭酸ガス、窒素ガス又はアルゴンガス等の不活性ガスを用いるのが好ましい。
圧縮気体の圧力としては、通常約１〜１５ｋｇ重／ｃｍ２、好ましくは約３〜８ｋｇ重／ｃｍ２である。
ノズルにおける気体量は、ノズルエッジ１ｍｍあたり、通常約１〜１００Ｌ／分、好ましくは約１０〜２０Ｌ／分である。

【0024】

通常、その後、乾燥室において、その噴霧液滴に乾燥温風を接触させることで水分を蒸発させ菌体乾燥物を得る。
乾燥室の入り口温度は、通常約２〜４００℃、好ましくは約５〜２５０℃、より好ましくは約５〜１５０℃である。入り口温度が約２００〜４００℃の高温であっても、水分の蒸発による気化熱により乾燥室内の温度はそれほど高くならず、また、乾燥室内の滞留時間を短くすることにより、生菌の死滅や損傷をある程度抑えることができる。
出口温度は、通常約０〜１２０℃、好ましくは約５〜９０℃、より好ましくは約５〜７０℃である。

【0025】

上記のように菌体乾燥物の粒径を小さくすることにより、生菌率が上がり、生菌率の多い製剤を提供できるという利点がある。
すなわち、シングルミクロンの菌体乾燥物を得るためにはシングルミクロンの噴霧液滴を噴霧するのが好ましい。噴霧液滴の粒径を小さくすると、噴霧液滴の単位質量あたりの表面積が大きくなるので、乾燥温風との接触が効率よく行われ、乾燥温風の熱による菌体の死滅又は損傷を極力抑えることができる。その結果として、生菌率が上がり生菌数の多い菌体乾燥物が得られる。

【0026】

本発明の剤は、乳酸菌を単独で使用または他の成分を混合することにより容易に製造され得る。他の成分は、本発明の効果を奏する限り特に限定されない。本発明の剤は、医薬品、医薬部外品、飲食品、飼料等の形態として用いることができる。このような、本発明の剤を含む医薬品も、本発明の好ましい実施態様の１つである。

【0027】

本発明の剤の剤形は、それぞれの成分の物理化学的性質、生物学的性質等を考慮して投与に好適な剤形とすればよい。医薬品の場合には、経口投与に適しており、内服剤とすることが好ましい。内服剤の剤型としては、例えば、錠剤、ペレット、細粒剤、散剤、顆粒剤、丸剤、チュアブル剤、トローチ剤、液剤、懸濁剤等が挙げられる。中でも、錠剤又は散剤が好ましい。さらに、本発明の剤は、乳酸菌の他に、賦形剤（例えば、乳糖、デンプン、結晶セルロース又はリン酸ナトリウム等）、結合剤（例えば、デンプン、ゼラチン、カルメロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン等）、崩壊剤（例えばデンプン、カルメロースナトリウム等）、滑沢剤（例えばタルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、マクロゴール、ショ糖脂肪酸エステル等）、安定剤（亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエン等）、着色剤、賦香剤、光沢剤等、当業界で使用される公知の添加剤等を適宜含有していてもよい。製剤中に含まれる乳酸菌の合計量は、通常、最終製剤中に約０．０００００１〜９９質量％の範囲から適宜選択して決定することができる。

【0028】

なお、乳酸菌は、一般に嫌気性で乾燥状態では空気又は酸素に対して弱く、また、高温と湿気に弱いため、組成物の製剤化に際してはできるだけ、不活性ガスの存在下又は真空、低温下で、処理することが好ましい。

【0029】

乳酸菌を含有する組成物を固形製剤にする場合、乾燥法によって、単に粉末同士を混合してもよいし、またその粉末を圧縮して顆粒にしたり、錠剤にしたりしてもよい。湿式法により顆粒、錠剤を製造する場合は、結合剤の水溶液を用いて練合、乾燥し、目的の固形剤とすることができる。さらに、この様にして得られた粉末又は顆粒をカプセルに充填して、カプセル剤とすることもできる。

【0030】

例えば、錠剤を製造する場合は、公知の打錠機を用いるとよい。該打錠機としては、例えば単発式打錠機又はロータリー型打錠機等が挙げられる。また、丸剤、チュアブル剤又はトローチ剤の製造方法は、公知の方法に従って行われてよく、例えば錠剤を製造するのと同じ手段で作ることができる。

【0031】

微量の有効成分（乳酸菌）を大量の他の粉末と混合し均一な混合物を得るためには、いわゆる段階的混合法を採るのがよい。例えば、有効成分をその１００〜２００容量倍の粉末と混合して均一な粉末を得、これを残りの粉末と混合すると均一な粉末を得ることができる。
含水物からの乾燥には、Ｌ−乾燥、凍結乾燥、噴霧乾燥などの手段をとることができる。乳酸菌の乾燥菌体を得るには、適当な安定剤、例えばグルタミン酸モノナトリウム塩、アドニトールなどを加えた中性の緩衝液に菌を懸濁させておき、自体公知の方法で乾燥することもできる。

【0032】

本発明において、乳酸菌の投与量は、生菌を用いる場合には、生菌の菌数にして通常約１０^３〜１０^１２個／大人／回、好ましくは１０^５〜１０^１０個／大人／回、より好ましくは１０^６〜１０^１０個／大人／回である。ここで、製剤中の生菌数の測定は菌体によって異なるが、例えば日本薬局方外医薬品規格に記載されたそれぞれの菌体の定量方法により容易に測定できる。

【0033】

本発明の剤は、中でも、炎症状態の神経の変化の予防又は抑制のために好適に用いられる。炎症状態の神経の変化とは、例えば、一酸化窒素作動性神経の減弱、タキキニン及びアセチルコリン作動性神経を除く平滑筋収縮作用を有する神経の出現等のことである。「平滑筋」は、特に限定されるものではないが、例えば、血管平滑筋、気管支平滑筋、消化器平滑筋（例えば、食道、胃、空腸、回腸、大腸等の平滑筋等）、尿路平滑筋（例えば、尿管、膀胱、尿道等の平滑筋等）、胆管、膵管等に代表される各種分泌管の平滑筋等が挙げられる。

【0034】

神経機能の変化により生じる症状としては特に限定されず、平滑筋運動の異常、炎症（炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、皮膚炎、逆流性食道炎、気管支炎、喀痰、鼻炎、リューマチ関節炎、変形性関節炎、結膜炎、眼炎、膀胱炎、大腸炎等）、疼痛、偏頭痛、神経痛、掻痒、気管支拡張症、咳、便秘、排尿障害、尿失禁、尿閉、頻尿、過活動膀胱、切迫早産、循環障害、高血圧症等が挙げられる。中でも、大腸炎、便秘に好適に適用される。炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、大腸炎、便秘以外の公知の平滑筋運動異常による疾病（例えば、巨大結腸症等）にも好適に使用される。個体としてはヒト、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル等の哺乳類が好ましく、特にヒトが好ましい。

【0035】

本発明の剤は、例えば、神経機能の変化により生じる症状のある個体（動物）に好適に適用することができる。また、本発明の剤は、副作用がなく安全であることから、予防目的で長期間投与することもできる。このため、上記神経機能の変化により生じる症状を発症した個体だけでなく、健常な個体、該症状を発症するおそれのある個体（動物）等にも好適に適用することができる。中でも、上記神経機能の変化により生じる症状を発症した個体に特に好適に適用される。

【0036】

本発明の剤は、投与の方法も簡単で、しかも副作用がほとんどないものである。

【0037】

本発明の剤は、炎症状態の神経の変化の予防又は抑制する剤、炎症による一酸化窒素作動性神経の減弱を予防又は抑制する剤、炎症によるタキキニン及びアセチルコリン作動性神経を除く平滑筋収縮作用を有する神経の発現を予防又は抑制する剤として好適に使用することができるものである。

【0038】

本発明の剤は、上述した医薬品として用いることができるほか、機能性食品、特定保健用食品、食品添加物、ドリンク剤などの飲食品として用いることができるものである。本発明の剤を含む神経機能改善用飲食品組成物、炎症状態の神経の変化の予防又は抑制するための飲食品組成物も、本発明の１つである。本発明に係る飲食品組成物を、神経機能の変化若しくは炎症を発症した、又はそのおそれのあるヒトを含む哺乳動物に摂取させることにより、神経機能を改善することができる。飲食品組成物中に含まれる乳酸菌の合計量は、通常、最終組成物中に約０．０００００１〜９９質量％の範囲から適宜選択して決定することができる。乳酸菌と併用される医薬成分としては、例えば、Bacillus subtilis、Bacillus mesentericus、Bacillus polyformenticus等の糖化菌；例えば、Bacillus coagulans等の有胞子性乳酸菌； Bacillus toyoi、B．licheniformis、Clostridium butyricum等の酪酸菌；その他の有用菌、副交感神経刺激薬、平滑筋収縮剤、クロルゾキサゾン、塩酸パパべリン、イソサミジン等の平滑筋弛緩剤、血管弛緩剤、血管拡張剤、血流増加剤、血流改善剤、前立腺平滑筋弛緩剤、膀胱平滑筋弛緩剤、フラボキサート等の平滑筋直接作用薬等が挙げられる。

【0039】

本発明の剤を飲食品組成物として用いる場合、その形態は特に限定されない。また、飲食品組成物は、自然流動食、半消化態栄養食若しくは成分栄養食、又はドリンク剤等の加工形態とすることもできる。さらに、本発明にかかる飲食品組成物は、アルコール飲料又はミネラルウォーターに用時添加する易溶性製剤としてもよい。より具体的には、本発明に係る飲食品組成物は、例えばビスケット、クッキー、ケーキ、キャンディー、チョコレート、チューインガム、和菓子などの菓子類；パン、麺類、米飯又はその加工品；清酒、薬用酒などの発酵食品；ヨーグルト、ハム、ベーコン、ソーセージ、マヨネーズなどの畜農食品；果汁飲料、清涼飲料、スポーツ飲料、アルコール飲料、茶などの飲料等の形態とすることができる。

【0040】

また、本発明に係る飲食品組成物は、例えば、医師の食事箋に基づく栄養士の管理の下に、病院給食の調理の際に任意の食品に本発明の飲食品組成物を加え、その場で調製した食品の形態で患者に与えることもできる。本発明の飲食品組成物は、液状であっても、粉末や顆粒などの固形状であってもよい。

【0041】

本発明に係る飲食品組成物は、食品分野で慣用の補助成分を含んでいてもよい。上記補助成分としては、例えば乳糖、ショ糖、液糖、蜂蜜、ステアリン酸マグネシウム、オキシプロピルセルロース、各種ビタミン類、微量元素、クエン酸、リンゴ酸、香料、無機塩などが挙げられる。

【0042】

本発明に係る飲食品組成物の摂取量は、摂取する哺乳動物の生活習慣病の状態、年齢、性別などによって異なるので、一概には言えないが、乳酸菌を、上述した医薬品の場合と同様の量摂取させることが好ましい。

【0043】

本発明は、本発明の効果を奏する限り、本発明の技術的範囲内において、上記の構成を種々組み合わせた態様を含む。

【実施例】

【0044】

次に、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら限定されるものではなく、多くの変形が本発明の技術的思想内で当分野において通常の知識を有する者により可能である。

【0045】

［実施例１］（乳酸菌菌体乾燥物の調製及び該菌体乾燥物中の生菌数の測定）
１．菌（3B：Streptococcus faecalis 129 BIO 3B）の調製方法
３Ｂの菌体乾燥物の調製は以下のように行った。すなわち、試験管に入った３Ｂの凍結保存菌株（ビオフェルミン製薬社保存菌株）を融解した後，３７℃のインキュベーター内に置いて、２４時間静置培養した。その後、ラクトミン試験用液体培地（２）（日本薬局方外医薬品規格「ラクトミン」の項に記載）にこの培養菌液をラクトミン試験用液体培地（２）１００に対して１の割合（容量比）で接種し、３７℃で１８時間静置培養した。得られた培養菌液を遠心分離し、水で３回洗浄後、適量の水を加えて得られる、湿菌体１ｋｇに対し、グルタミン酸ナトリウム塩０．１ｋｇ及びデキストリン０．５ｋｇの割合で加えて噴霧乾燥装置にて菌体乾燥物とした。なお、３Ｂ株は、医療用医薬品のビオフェルミン配合散（商品名、ビオフェルミン製薬社製）等の成分として含まれており、該散剤等から通常行われる方法で精製することによって入手可能である。

【0046】

上記ラクトミン試験用液体培地（２）は、日本薬局方外医薬品規格「ラクトミン」の項に記載された方法に従い、下記の成分を混合し、高圧蒸気滅菌器を用いて１２１℃で１５分間加熱して滅菌して調製した。
酵母エキス ５ｇ
カゼイン製ペプトン ２０ｇ
ブドウ糖 ２０ｇ
肉エキス １５ｇ
トマトジュース＊ ２００ｍＬ
ポリソルベート８０ ３ｇ
Ｌ−塩酸システイン １ｇ
精製水 ８００ｍＬ
ｐＨ ６．８±０．１
トマトジュース＊は、トマトジュースに等量の精製水を加え、時々かき混ぜながら煮沸した後、ｐＨを６．８に調整し、ろ過したものを使用した。

【0047】

２．菌体乾燥物中の生菌数の測定
日本薬局方外医薬品規格「ラクトミン」の項に記載されているラクトミンの定量法に従って測定した。すなわち、菌体乾燥物５ｇを精密に量り、希釈液（２）３０ｍＬ中に加え、強く振り混ぜ、更に同希釈液を加えて正確に５０ｍＬとし、よく振り混ぜ、この菌液１ｍＬを正確に量り、別に正確に分注した同希釈液９ｍＬ中に加える操作（１０倍希釈法）を繰り返し、１ｍＬ中の生菌数が２０〜２００個となるよう希釈した。この液１ｍＬをペトリ皿にとり、ここに５０℃に保ったラクトミン試験用カンテン培地（２）を２０ｍＬ加えてすばやく混和し、固化させた。これを３７℃で２４〜４８時間好気培養し、出現したコロニー数及び希釈倍率から菌体乾燥物中の生菌数を求めた。これにより求めた上記１．で得られた菌体乾燥物の菌数は、生菌数５．７ｘ１０^１１ＣＦＵ／ｇであった。

【0048】

実施例中で用いた希釈液（２）の調製方法を、以下に示す。
希釈液（２）の調製方法
日本薬局方外医薬品規格「ラクトミン」の項に記載された方法に従い、下記の成分を混合し、高圧蒸気滅菌器を用いて１２１℃で１５分間加熱して滅菌して調製した。
無水リン酸一水素ナトリウム ６．０ｇ
リン酸二水素カリウム ４．５ｇ
ポリソルベート８０ ０．５ｇ
Ｌ−塩酸システイン ０．５ｇ
カンテン １．０ｇ
精製水 １０００ｍＬ
ｐＨ ６．８〜７．０

【0049】

上記ラクトミン試験用カンテン培地（２）は、上記ラクトミン試験用液体培地（２）にカンテン２０ｇを加え、高圧蒸気滅菌器を用いて１２１℃で１５分間加熱して滅菌して調製した。

【0050】

［実施例２］
（乳酸菌の摂取）
雄性Ｗｉｓｔａｒラットを８〜９週齢で購入後（日本ＳＬＣより購入）、室温２２±５℃、湿度５５±５％、１２時間周期の照明（７：００〜１９：００）条件下で、固形飼料（ＣＥ−２：日本クレア社製）及び上水道を自由に摂取させ飼育した。１週間馴化飼育した後、ラットを試験に使用した。２４時間絶食し、ＴＮＢＳ（２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸、１ｍｇ／Ｂｏｄｙ）４０％エタノール溶液を経腸投与（肛門から８ｃｍの位置）し、遠位結腸に大腸炎を誘発させた。

【0051】

ＴＮＢＳ投与直後から，（１）対照群（デキストリンを１０％配合したＣＥ−２粉末飼料を摂取させた群；ｎ＝５）及び（２）３Ｂ菌群（Streptococcus faecalis 129 BIO 3B乾燥菌体（5.7x10¹¹cfu/g）を１０％配合したＣＥ−２粉末飼料を摂取させた群；ｎ＝４）の２群に群分けした。実験プロトコルを図２に示す。

【0052】

［実施例３］
（自発運動及び電気刺激での大腸運動）
大腸炎誘発から２週間後に、ラットを安楽死させて、直ちに開腹し大腸標本を摘出した。腸内容物、周囲に付着している脂肪等を除去し１．５ｃｍの管状大腸標本を作製した。
２０ｍＬ容量のマグヌス槽に予め３７℃に加温したＴｙｒｏｄｅ液（ＮａＣｌ（８．０ｇ／Ｌ）、ＫＣｌ（０．２ｇ／Ｌ）、ＭｇＣｌ_２（０．１ｇ／Ｌ）、ＣａＣｌ_２（０．２ｇ／Ｌ）、ＮａＨＣＯ_３（１．０ｇ／Ｌ）、ＮａＨ_２ＰＯ_４（０．０５ｇ／Ｌ）、ｇｌｕｃｏｓｅ（１．０ｇ／Ｌ））２０ｍＬを充填し、これに大腸標本を１ｇの負荷のもとに等尺性トランスデューサー（Ｔ７−８−２４０、Ｏｒｉｅｎｔｅｃ製）に図２に示すように縦走方向に懸垂した。標本の腸管運動はアンプ（ＡＳ１２０２、ＮＥＣ製）を介してレコーダー（ＰｏｗｅｒＬａｂ ｓｙｓｔｅｍ、ＡＤ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ製）で記録した。標本は、３７℃、酸素及び二酸化炭素通気下で３０分以上平衡化を行った。

【0053】

実施例で用いたマグヌス槽の構造を示す模式図を、図３（＊厳密には私が使用したものと異なるイラストですが、結果には影響しないものと思われます。）に示す。マグヌス槽１１は、気体供給部１２、環流水供給口１４及び環流水排出口１９、並びに、輸液注入口１６及び輸液排出口２１を備える。
気体供給部１２から空気１３がマグヌス槽中のＴｙｒｏｄｅ液２３に供給される。環流水供給口１４から、マグヌス槽内の温度を保つための環流水１５が供給され、マグヌス槽を環流した水２０は、環流水排出口１９から排出される。実施例においては、環流水供給口１４から３７℃の水１５を供給した。輸液注入口１６からＴｙｒｏｄｅ液１７が管内に注入される。輸液排出口２１から、実験に使用されたＴｙｒｏｄｅ液（ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｔｙｒｏｄｅ液）２２が排出される。Ｔｙｒｏｄｅ液２３内に懸垂した管状標本２４が収縮すると、矢印１８の方向に設置されたアイソメトリックトランスデューサー（Ｔ７−８−２４０、Ｏｒｉｅｎｔｅｃ製）によって収縮の強度が検出される。

【0054】

標本の平衡化後、安定したところで経壁電気刺激（ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｆｉｅｌｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ（ＥＦＳ）;８０Ｖ、０．５ｍ秒の矩形波電流を２０Ｈｚの頻度で１秒間刺激）し、これによって誘発される収縮反応を評価の対象とした。
［実施例４］
（乳酸菌による神経機能改善作用確認試験）

【0055】

一酸化窒素作動性神経（ＮＯ作動性神経）については、一酸化窒素合成酵素阻害薬Ｌ−ＮＡＭＥ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）２００μＭをＴｙｒｏｄｅ液に添加し自発運動での平滑筋収縮反応及びＥＦＳによる平滑筋収縮機能亢進作用の変化により評価した。

【0056】

非アセチルコリン及びタキキニン作動性神経（非ＡＣｈ及びＴＫ作動性神経）については、タキキニン受容体阻害薬Ｌ−７３２，１３８（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ｃｏｍｐａｎｙ）及びＳＲ４８９６８各２μＭ並びにムスカリン受容体阻害薬アトロピン５μＭをＴｙｒｏｄｅ液に添加し、ＥＦＳによる平滑筋収縮機能亢進作用の変化により評価した。

【0057】

［実施例５］
（結果）
一酸化窒素作動性神経（ＮＯ作動性神経）の動態について、ＮＯ合成酵素阻害薬の影響の有無で評価した。正常大腸標本の機械的反応を図４に、炎症後の大腸標本の機械的反応を図５に示す。図４より、正常大腸標本では、ＮＯ合成酵素阻害薬の添加により、自発運動での平滑筋収縮反応の増強及びＥＦＳによる平滑筋収縮機能亢進作用の増強が認められた。図５より、炎症後の大腸標本では、ＮＯ合成酵素阻害薬の添加により、自発運動での平滑筋収縮反応及びＥＦＳによる平滑筋収縮機能亢進作用に何らの影響も認められなかった。図４のような機械的反応を示した場合、ＮＯ作動性神経が正常であるものとし、図５のような機械的反応を示した場合、炎症によりＮＯ作動性神経による反応が減弱した（異常）と判断した。

【0058】

対照群では５匹中２匹（４０％）が図５のような機械的反応を示し、ＮＯ作動性神経が異常であると認められた。一方、３Ｂ群ではいずれも図５のような機械的反応を示さなかった。

【0059】

非ＡＣｈ及びＴＫ作動性神経の動態について、ＡＣｈ及びＴＫ阻害薬の影響の有無で評価した。正常大腸標本の機械的反応を図６に、炎症後の大腸標本の機械的反応を図７に示す。図６より、正常大腸標本では、ムスカリン受容体阻害薬及びタキキニン受容体阻害薬の添加により、ＥＦＳによる平滑筋収縮機能亢進作用が認められなくなることが確認された。図７より、炎症後の大腸標本では、ムスカリン受容体阻害薬及びタキキニン受容体阻害薬の添加によっても、ＥＦＳによる平滑筋収縮機能亢進作用が確認されたため（図７矢印）、非ＡＣｈ及びＴＫ作動性神経が顕在化することが認められた。図６のような機械的反応を示した場合、ＡＣｈ及びＴＫ作動性神経が正常であるものとし、図７のような機械的反応を示した場合、炎症により非ＡＣｈ及びＴＫ作動性神経が出現し、平滑筋の収縮に関与すると判断した。

【0060】

対照群では３匹中３匹（１００％）、３Ｂ菌群では４匹中２匹（５０％）が、図７のような機械的反応を示し、非ＡＣｈ及びＴＫ作動性神経の出現とそれによる平滑筋の収縮が認められた。

【0061】

以上の結果を表１にまとめた。

【0062】

【表1】

【0063】

表１の結果から、３Ｂ菌投与により、ＴＮＢＳ誘発性大腸炎によって生じるこれらの神経変化（ＮＯ作動性神経反応の減弱及び非ＡＣｈ及びＴＫ作動性神経反応の出現）を抑制し、神経機能が改善されることが示唆された。

【産業上の利用可能性】

【0064】

本発明の剤は、神経機能の改善に有用である。

【符号の説明】

【0065】

１、２ 圧縮気体が供給される気体流路
３、４ 被乾燥体を含む液体が供給される液体流路
５ 流体流動面
６ 衝突焦点
７ 噴霧液滴
１１ マグヌス槽
１２ 気体供給部
１３ 空気
１４ 環流水供給口
１５ 水（環流水）
１６ 輸液注入口
１７ Ｔｙｒｏｄｅ液
１８ 矢印
１９ 環流水排出口
２０ 水（環流水）
２１ 輸液排出口
２２ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｔｙｒｏｄｅ液
２３ Ｔｙｒｏｄｅ液
２４ 管状標本

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】