特許 6412906 化合物、リンカー−薬物およびリガンド−薬物複合体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6412906

(24)【登録日】2018年10月5日

(45)【発行日】2018年10月24日

(54)【発明の名称】化合物、リンカー−薬物およびリガンド−薬物複合体

(51)【国際特許分類】

   C07K 5/02 20060101AFI20181015BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20181015BHJP

   A61K 38/04 20060101ALI20181015BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20181015BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20181015BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20181015BHJP

   C07K 16/00 20060101ALI20181015BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20181015BHJP

【ＦＩ】

   C07K5/02

   C07K19/00

   A61K38/04

   A61K45/00

   A61K39/395 C

   A61P35/00

   A61K39/395 L

   C07K16/00

   C07K16/46

【請求項の数】17

【外国語出願】

【全頁数】91

(21)【出願番号】特願2016-214926(P2016-214926)

(22)【出願日】2016年11月2日

(65)【公開番号】特開2017-114847(P2017-114847A)

(43)【公開日】2017年6月29日

【審査請求日】2017年2月24日

(31)【優先権主張番号】62/250,107

(32)【優先日】2015年11月3日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】390023582

【氏名又は名称】財團法人工業技術研究院

【氏名又は名称原語表記】ＩＮＤＵＳＴＲＩＡＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100102118

【弁理士】

【氏名又は名称】春名 雅夫

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100114889

【弁理士】

【氏名又は名称】五十嵐 義弘

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(72)【発明者】

【氏名】李 昂

(72)【発明者】

【氏名】蔡 ▲メイ▼▲ケン▼

【審査官】 坂崎 恵美子

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１５／１２３６７９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第１９９５／００９８６４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開平０７−１８８２８５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第１９９０／０１４８４４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２０１４−５２１３１９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１５／０５４６５９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２００６−５００３３３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０６−２９３７９５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１５−５０５８５０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００９−５０１８００（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｋ ５／０２

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＷＰＩＤＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物：

【化1】

式中、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立に水素、アミノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、カルボン酸、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル、Ｃ１〜Ｃ６アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アミノカルボニル、直鎖（normal）Ｃ１〜Ｃ６アルキル、分枝（branched）Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６複素環、アリールまたはヘテロアリールであり、ただし、Ｒ１およびＲ３のうちの少なくとも１つはアミノ基である。

【請求項2】

Ｒ１が水素であり、Ｒ２が水素、カルボン酸、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル、Ｃ１〜Ｃ６アミノカルボニルまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ３がアミノである、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

式（ＩＩＩ）のリンカー−薬物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物：

【化3】

式中、
Ｃ−は、

【化4】

からなる群より選ばれた結合ユニット（conjugating unit）であり（式中、Ｒ７は、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ（carbocyclo）−、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−からなる群より選ばれたものであり、かつｒは１から１０までの整数である）；
−ＳＡＡｓ−は、式（ＩＶ）の糖アミノ酸ユニットであり：

【化5】

（式中、ｘは１から８までの整数であり、ｙは１から４までの整数であり、

【化6】

はテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランまたはジヒドロピラン環であり、Ｒ８およびＲ１０はそれぞれ独立に、単結合、メチレン、ヒドロキシメチレン、エチレン、エチリデン、ヒドロキシエチレン、ヒドロキシエチリデン、ジヒドロキシエチレン、ジヒドロキシエチリデン、ビニレン、ビニリデン、プロピレン、プロピリデン、トリメチレン、ヒドロキシプロピレン、ヒドロキシプロピリデン、ヒドロキシトリメチレン、ジヒドロキシプロピレン、ジヒドロキシプロピリデン、ジヒドロキシトリメチレン、トリヒドロキシプロピレン、トリヒドロキシプロピリデンまたはトリヒドロキシトリメチレンであり、各Ｒ９は独立に、ヒドロキシル、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、ジヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ジヒドロキシプロピルもしくはトリヒドロキシプロピルであるか、または同じ環炭素中の任意の２つのＲ９が、それらが結合する炭素と共にカルボニル基を形成するか、または任意の２つのＲ９か、Ｒ８および任意の１つのＲ９か、もしくはＲ１０および任意の１つのＲ９が、元のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環と縮合する第２のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環を形成するか、または任意の２つのＲ９か、Ｒ８および任意の１つのＲ９か、もしくはＲ１０および任意の１つのＲ９が、メチレン、エチリデン、１−プロピリデン、２−プロピリデンもしくはベンジリデン基と共に、元のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環と縮合する環状アセタールもしくはケタール環（ketal ring）を形成する）；
−ＡＡｓ−は、式（Ｖ）のペプチドユニットであり：

【化7】

（式中、ｚは０から１０までの整数であり、Ｒ１１は、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＮＨ_２であり、Ｒ１２は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、フェニルまたはベンジルであり、Ｒ１３は水素、メチル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、シクロヘキシル、フェニル、ベンジル、ｐ−ヒドロキシベンジル、−ＣＨ_２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＯＯＨ、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２ＮＨ_２、２−ピリジルメチル、３−ピリジルメチル、または４−ピリジルメチルである）；かつ
−Ｄは、

【化10】

からなる群より選ばれた前記細胞毒性薬であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立に、水素、アミノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、カルボン酸、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ、１−ピロリジニル、１−ピペリジニル、１−ピペラジニル、アミノカルボニル、メチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、エチルアミノカルボニル、ジエチルアミノカルボニル、１−ピロリジニルカルボニル、１−ピペリジニルカルボニル、１−ピペラジニルカルボニル、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、またはフェニルである。

【請求項4】

Ｃ−が、

【化8】

からなる群より選ばれた前記結合ユニット（conjugating unit）であり、式中、Ｒ７は、−１，５−ペンチレン−、−１，６−ヘキシレン−、−１，４−シクロヘキシレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−ＣＨ２−からなる群より選ばれ、かつｒは２〜５までの整数である、請求項３に記載のリンカー−薬物。

【請求項5】

−ＳＡＡｓ−が、

【化9】

からなる群より選ばれた前記糖アミノ酸ユニットである、請求項３に記載のリンカー−薬物。

【請求項6】

−ＡＡｓ−が、−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、−Ｖａｌ−Ａｒｇ−、−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−および−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−からなる群より選ばれた前記ペプチドユニットである、請求項３に記載のリンカー−薬物。

【請求項7】

式（ＶＩ）のリガンド−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物：

【化11】

式中、
ｐは１から２０までの整数であり；
Ｌ−は、全長抗体、抗体フラグメント、タンパク質、比較的分子量の小さいタンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、アプタマー、レクチン、糖タンパク質、リポタンパク質、糖脂質、ビタミン、栄養輸送分子（nutrient-transport molecule）、ホルモン、単糖類、二糖類、オリゴ糖、多糖類およびその他任意の細胞結合分子または物質からなる群より選ばれたリガンドユニットであり；
Ｃ−は、

【化12】

からなる群より選ばれた結合ユニット（conjugating unit）であり（式中、Ｒ７は、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−からなる群より選ばれ、かつｒは１から１０までの整数である）；
−ＳＡＡｓ−は、式（ＩＶ）の糖アミノ酸ユニットであり：

【化13】

（式中、ｘは１から８までの整数であり、ｙは１から４までの整数であり、

【化14】

はテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランまたはジヒドロピラン環であり、Ｒ８およびＲ１０はそれぞれ独立に、単結合、メチレン、ヒドロキシメチレン、エチレン、エチリデン、ヒドロキシエチレン、ヒドロキシエチリデン、ジヒドロキシエチレン、ジヒドロキシエチリデン、ビニレン、ビニリデン、プロピレン、プロピリデン、トリメチレン、ヒドロキシプロピレン、ヒドロキシプロピリデン、ヒドロキシトリメチレン、ジヒドロキシプロピレン、ジヒドロキシプロピリデン、ジヒドロキシトリメチレン、トリヒドロキシプロピレン、トリヒドロキシプロピリデンまたはトリヒドロキシトリメチレンであり、各Ｒ９は独立に、ヒドロキシル、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、ジヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ジヒドロキシプロピルもしくはトリヒドロキシプロピルであるか、または同じ環炭素中の任意の２つのＲ９が、それらが結合する炭素と共にカルボニル基を形成するか、または任意の２つのＲ９か、Ｒ８および任意の１つのＲ９か、もしくはＲ１０および任意の１つのＲ９が、元のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環と縮合する第２のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環を形成するか、または任意の２つのＲ９か、Ｒ８および任意の１つのＲ９か、もしくはＲ１０および任意の１つのＲ９が、メチレン、エチリデン、１−プロピリデン、２−プロピリデンもしくはベンジリデン基と共に、元のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環と縮合する環状アセタールもしくはケタール環（ketal ring）を形成する）；
−ＡＡｓ−は、式（Ｖ）のペプチドユニットであり：

【化15】

（式中、ｚは０から１０までの整数であり、Ｒ１１は、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＮＨ_２であり、Ｒ１２は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、フェニルまたはベンジルであり、Ｒ１３は水素、メチル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、シクロヘキシル、フェニル、ベンジル、ｐ−ヒドロキシベンジル、−ＣＨ_２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＯＯＨ、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２ＮＨ_２、２−ピリジルメチル、３−ピリジルメチル、または４−ピリジルメチルである）；かつ
−Ｄは、

【化18】

からなる群より選ばれた前記細胞毒性薬であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立に、水素、アミノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、カルボン酸、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ、１−ピロリジニル、１−ピペリジニル、１−ピペラジニル、アミノカルボニル、メチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、エチルアミノカルボニル、ジエチルアミノカルボニル、１−ピロリジニルカルボニル、１−ピペリジニルカルボニル、１−ピペラジニルカルボニル、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、またはフェニルである。

【請求項8】

前記リガンドユニットが抗原に結合する抗体である、請求項７に記載のリガンド−薬物複合体。

【請求項9】

前記抗体が、キメラ抗体、ヒト化抗体またはそれらの機能的に活性なフラグメントである、請求項８に記載のリガンド−薬物複合体。

【請求項10】

前記抗体が、前記抗体のシステイン残基によって結合ユニットに結合する、請求項８に記載のリガンド−薬物複合体。

【請求項11】

pが２から８までの整数である、請求項７に記載のリガンド−薬物複合体。

【請求項12】

ｐが整数４である、請求項１１に記載のリガンド−薬物複合体。

【請求項13】

前記リガンドユニットが、葉酸、メトトレキサート、または葉酸レセプターに結合する葉酸レセプター結合リガンドである、請求項７に記載のリガンド−薬物複合体。

【請求項14】

前記リガンドユニットが黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト、黄体形成ホルモン放出ホルモンアンタゴニスト、または黄体形成ホルモン放出ホルモンレセプターに結合する黄体形成ホルモン放出ホルモンレセプター結合リガンドである、請求項７に記載のリガンド−薬物複合体。

【請求項15】

Ｃ−が、

【化16】

からなる群より選ばれた前記結合ユニットであり、式中、Ｒ７は、−１，５−ペンチレン−、−１，６−へキシレン−，−１，４−シクロへキシレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−ＣＨ２−からなる群より選ばれ、ｒは２〜５までの整数である、請求項７に記載のリガンド−薬物複合体。

【請求項16】

ＳＡＡｓ−が、

【化17】

からなる群より選ばれた前記糖アミノ酸ユニットである、請求項７に記載のリガンド−薬物複合体。

【請求項17】

−ＡＡｓ−が、−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、−Ｖａｌ−Ａｒｇ−、−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−および−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−からなる群より選ばれた前記ペプチドユニットである、請求項７に記載のリガンド−薬物複合体。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年１１月３日に出願された米国仮特許出願第６２／２５０１０７号の利益を主張し、その全体が参照として本明細書に援用される。

【0002】

技術分野
本技術分野は、アウリスタチン（auristatine）誘導体、新規なリンカー、アウリスタチン誘導体を含むリンカー−薬物およびリガンド−薬物複合体（conjugate）に関する。

【背景技術】

【0003】

抗体はそれらの対応する抗原について高度の識別能力を有しており、また多くの細胞毒性薬物の分子は、癌細胞を選択的に殺傷することができないため、癌治療に用いることはできない。よって、抗体と毒性の強い薬物（例えば毒素）との結合は、高度選択的および特異的な複合体薬物（conjugated drug）となる。抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）のコンセプトは３０年以上前に提案された。世界の主要な製薬会社ならびに小型および中型のバイオテクノロジー企業は、多くの資金および材料資源を投じて、または提携により、新規ＡＤＣ薬物の開発を行っている。

【0004】

現在、４０を超えるＡＤＣ薬物が、臨床試験の異なるフェーズで試験されている。臨床試験における各種ＡＤＣ薬物の成功利用は、新規なＡＤＣ薬物の開発が、人の抗癌医療のニーズを満たすことを手助けするという重要な任務であることを示している。

【発明の概要】

【0005】

本開示の１実施形態は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供する：

【化1】

式（Ｉ）中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立に水素、アミノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、カルボン酸、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル、Ｃ１〜Ｃ６アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アミノカルボニル、直鎖（normal）Ｃ１〜Ｃ６アルキル、分枝（branched）Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６複素環、アリールまたはヘテロアリールであり、ただし、Ｒ１およびＲ３のうちの少なくとも１つはアミノ基である。

【0006】

本開示の１実施形態は、式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供する：

【化2】

式（ＩＩ）中、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立に、水素、アミノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、カルボン酸、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル、Ｃ１〜Ｃ６アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アミノカルボニル、直鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、分枝Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６複素環、アリールまたはヘテロアリールである。

【0007】

本開示の１実施形態は、式（ＩＩＩ）のリンカー−薬物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供する：

【化3】

式（ＩＩＩ）中、Ｃ−は、

【化4】

からなる群より選ばれた結合ユニット（conjugating unit）であり、式中、Ｒ７は、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ（carbocyclo）−、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−からなる群より選ばれたものであり、かつｒは１から１０までの整数である。

【0008】

式（ＩＩＩ）中、−ＳＡＡｓ−は、式（ＩＶ）の糖アミノ酸ユニットである：

【化5】

式（ＩＶ）中、ｘは１から８までの整数であり、ｙは１から４までの整数であり、

【化6】

はテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランまたはジヒドロピラン環であり、Ｒ８およびＲ１０はそれぞれ独立に、単結合、メチレン、ヒドロキシメチレン、エチレン、エチリデン、ヒドロキシエチレン、ヒドロキシエチリデン、ジヒドロキシエチレン、ジヒドロキシエチリデン、ビニレン、ビニリデン、プロピレン、プロピリデン、トリメチレン、ヒドロキシプロピレン、ヒドロキシプロピリデン、ヒドロキシトリメチレン、ジヒドロキシプロピレン、ジヒドロキシプロピリデン、ジヒドロキシトリメチレン、トリヒドロキシプロピレン、トリヒドロキシプロピリデンまたはトリヒドロキシトリメチレンであり、各Ｒ９は独立に、ヒドロキシル、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、ジヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ジヒドロキシプロピルもしくはトリヒドロキシプロピルであるか、または同じ環炭素中の任意の２つのＲ９が、それらが結合する炭素と共にカルボニル基を形成するか、または任意の２つのＲ９か、Ｒ８および任意の１つのＲ９か、もしくはＲ１０および任意の１つのＲ９が、元のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環と縮合する第２のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環を形成するか、または任意の２つのＲ９か、Ｒ８および任意の１つのＲ９か、もしくはＲ１０および任意の１つのＲ９が、メチレン、エチリデン、１−プロピリデン、２−プロピリデンもしくはベンジリデン基と共に、元のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環と縮合する環状アセタールもしくはケタール環（ketal ring）を形成する。

【0009】

式（ＩＩＩ）中、−ＡＡｓ−は式（Ｖ）のペプチドユニットである：

【化7】

式（Ｖ）中、ｚは０から１０までの整数であり、Ｒ１１は、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＮＨ_２であり、Ｒ１２は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、フェニルまたはベンジルであり、Ｒ１３は水素、メチル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、シクロヘキシル、フェニル、ベンジル、ｐ−ヒドロキシベンジル、−ＣＨ_２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＯＯＨ、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２ＮＨ_２、２−ピリジルメチル、３−ピリジルメチルまたは４−ピリジルメチルである。

【0010】

式（ＩＩＩ）中、−Ｄは、アマニチン（amanitin）、アントラサイクリン（anthracycline）、アウリスタチン（auristatin）、バッカチン（baccatin）、カリケアマイシン（calicheamicin）、カンプトテシン（camptothecin）、セマドチン（cemadotin）、コルヒチン（colchicine）、コルセミド（colcemid）、コンブレタスタチン（combretastatin）、クリプトフィシン（cryptophysin）、ディスコデルモリド（discodermolide）、デュオカルマイシン（duocarmycin）、エキノマイシン（echinomycin）、エリュテロビン（eleutherobin）、エポチロン（epothilone）、エストラムスチン（estramustine）、レキシトロプシン（lexitropsin）、メイタンシノイド（maytansinoid）、ネトロプシン（netropsin）、ピューロマイシン（puromycin）、ピロロベンゾジアゼピン（pyrrolobenzodiazepine）、リゾキシン（rhizoxin）、タキサン（taxane）、チューブリシン（tubulysin）、およびビンカアルカロイド（vinca alkaloid）からなる群より選ばれた細胞毒性薬である。

【0011】

本開示の１実施形態は、式（ＶＩ）のリガンド−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供する：

【化8】

式（ＶＩ）中、ｐは１から２０までの整数であり、Ｌ−は、全長抗体、抗体フラグメント、タンパク質、比較的分子量の小さいタンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、アプタマー、レクチン、糖タンパク質、リポタンパク質、糖脂質、ビタミン、栄養輸送分子（nutrient-transport molecule）、ホルモン、単糖類、二糖類、オリゴ糖、多糖類およびその他任意の細胞結合分子または物質からなる群より選ばれたリガンドユニットである。この式において、Ｌ−は、開示した

【化9】

にさらに結合する。

【0012】

添付の図面を参照にしながら、下記の実施形態において詳細な説明を行う。

【0013】

より具体的には、本発明は以下を提供する：
［１］
式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物：

【化10】

式中、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立に水素、アミノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、カルボン酸、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル、Ｃ１〜Ｃ６アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アミノカルボニル、直鎖（normal）Ｃ１〜Ｃ６アルキル、分枝（branched）Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６複素環、アリールまたはヘテロアリールであり、ただし、Ｒ１およびＲ３のうちの少なくとも１つはアミノ基である；
［２］
Ｒ１が水素であり、Ｒ２が水素、カルボン酸、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル、Ｃ１〜Ｃ６アミノカルボニルまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ３がアミノである、［１］に記載の化合物；
［３］
式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物：

【化11】

式中、
Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立に、水素、アミノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、カルボン酸、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル、Ｃ１〜Ｃ６アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アミノカルボニル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、分枝Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６複素環、アリールまたはヘテロアリールである；
［４］
Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が水素である、［３］に記載の化合物；
［５］
式（ＩＩＩ）のリンカー−薬物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物：

【化12】

式中、
Ｃ−は、

【化13】

からなる群より選ばれた結合ユニット（conjugating unit）であり（式中、Ｒ７は、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ（carbocyclo）−、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−からなる群より選ばれたものであり、かつｒは１から１０までの整数である）；
−ＳＡＡｓ−は、式（ＩＶ）の糖アミノ酸ユニットであり：

【化14】

（式中、ｘは１から８までの整数であり、ｙは１から４までの整数であり、

【化15】

はテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランまたはジヒドロピラン環であり、Ｒ８およびＲ１０はそれぞれ独立に、単結合、メチレン、ヒドロキシメチレン、エチレン、エチリデン、ヒドロキシエチレン、ヒドロキシエチリデン、ジヒドロキシエチレン、ジヒドロキシエチリデン、ビニレン、ビニリデン、プロピレン、プロピリデン、トリメチレン、ヒドロキシプロピレン、ヒドロキシプロピリデン、ヒドロキシトリメチレン、ジヒドロキシプロピレン、ジヒドロキシプロピリデン、ジヒドロキシトリメチレン、トリヒドロキシプロピレン、トリヒドロキシプロピリデンまたはトリヒドロキシトリメチレンであり、各Ｒ９は独立に、ヒドロキシル、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、ジヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ジヒドロキシプロピルもしくはトリヒドロキシプロピルであるか、または同じ環炭素中の任意の２つのＲ９が、それらが結合する炭素と共にカルボニル基を形成するか、または任意の２つのＲ９か、Ｒ８および任意の１つのＲ９か、もしくはＲ１０および任意の１つのＲ９が、元のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環と縮合する第２のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環を形成するか、または任意の２つのＲ９か、Ｒ８および任意の１つのＲ９か、もしくはＲ１０および任意の１つのＲ９が、メチレン、エチリデン、１−プロピリデン、２−プロピリデンもしくはベンジリデン基と共に、元のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環と縮合する環状アセタールもしくはケタール環（ketal ring）を形成する）；
−ＡＡｓ−は、式（Ｖ）のペプチドユニットであり：

【化16】

（式中、ｚは０から１０までの整数であり、Ｒ１１は、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＮＨ_２であり、Ｒ１２は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、フェニルまたはベンジルであり、Ｒ１３は水素、メチル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、シクロヘキシル、フェニル、ベンジル、ｐ−ヒドロキシベンジル、−ＣＨ_２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＯＯＨ、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２ＮＨ_２、２−ピリジルメチル、３−ピリジルメチル、または４−ピリジルメチルである）；かつ
−Ｄは、アマニチン（amanitin）、アントラサイクリン（anthracycline）、アウリスタチン（auristatin）、バッカチン（baccatin）、カリケアマイシン（calicheamicin）、カンプトテシン（camptothecin）、セマドチン（cemadotin）、コルヒチン（colchicine）、コルセミド（colcemid）、コンブレタスタチン（combretastatin）、クリプトフィシン（cryptophysin）、ディスコデルモリド（discodermolide）、デュオカルマイシン（duocarmycin）、エキノマイシン（echinomycin）、エリュテロビン（eleutherobin）、エポチロン（epothilone）、エストラムスチン（estramustine）、レキシトロプシン（lexitropsin）、メイタンシノイド（maytansinoid）、ネトロプシン（netropsin）、ピューロマイシン（puromycin）、ピロロベンゾジアゼピン（pyrrolobenzodiazepine）、リゾキシン（rhizoxin）、タキサン（taxane）、チューブリシン（tubulysin）、およびビンカアルカロイド（vinca alkaloid）からなる群より選ばれた細胞毒性薬である；
［６］
Ｃ−が、

【化17】

からなる群より選ばれた前記結合ユニット（conjugating unit）であり、式中、Ｒ７は、−１，５−ペンチレン−、−１，６−ヘキシレン−、−１，４−シクロヘキシレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−ＣＨ２−からなる群より選ばれ、かつｒは２〜５までの整数である、［５］に記載のリンカー−薬物；
［７］
−ＳＡＡｓ−が、

【化18】

からなる群より選ばれた前記糖アミノ酸ユニットである、［５］に記載のリンカー−薬物；
［８］
−ＡＡｓ−が、−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、−Ｖａｌ−Ａｒｇ−、−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−および−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−からなる群より選ばれた前記ペプチドユニットである、［５］に記載のリンカー−薬物；
［９］
−Ｄが、

【化19】

からなる群より選ばれた前記細胞毒性薬であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立に、水素、アミノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、カルボン酸、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ、１−ピロリジニル、１−ピペリジニル、１−ピペラジニル、アミノカルボニル、メチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、エチルアミノカルボニル、ジエチルアミノカルボニル、１−ピロリジニルカルボニル、１−ピペリジニルカルボニル、１−ピペラジニルカルボニル、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、またはフェニルである、［５］に記載のリンカー−薬物；
［１０］
式（ＶＩ）のリガンド−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物：

【化20】

式中、
ｐは１から２０までの整数であり；
Ｌ−は、全長抗体、抗体フラグメント、タンパク質、比較的分子量の小さいタンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、アプタマー、レクチン、糖タンパク質、リポタンパク質、糖脂質、ビタミン、栄養輸送分子（nutrient-transport molecule）、ホルモン、単糖類、二糖類、オリゴ糖、多糖類およびその他任意の細胞結合分子または物質からなる群より選ばれたリガンドユニットであり；
Ｃ−は、

【化21】

からなる群より選ばれた結合ユニット（conjugating unit）であり（式中、Ｒ７は、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−からなる群より選ばれ、かつｒは１から１０までの整数である）；
−ＳＡＡｓ−は、式（ＩＶ）の糖アミノ酸ユニットであり：

【化22】

（式中、ｘは１から８までの整数であり、ｙは１から４までの整数であり、

【化23】

はテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランまたはジヒドロピラン環であり、Ｒ８およびＲ１０はそれぞれ独立に、単結合、メチレン、ヒドロキシメチレン、エチレン、エチリデン、ヒドロキシエチレン、ヒドロキシエチリデン、ジヒドロキシエチレン、ジヒドロキシエチリデン、ビニレン、ビニリデン、プロピレン、プロピリデン、トリメチレン、ヒドロキシプロピレン、ヒドロキシプロピリデン、ヒドロキシトリメチレン、ジヒドロキシプロピレン、ジヒドロキシプロピリデン、ジヒドロキシトリメチレン、トリヒドロキシプロピレン、トリヒドロキシプロピリデンまたはトリヒドロキシトリメチレンであり、各Ｒ９は独立に、ヒドロキシル、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、ジヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ジヒドロキシプロピルもしくはトリヒドロキシプロピルであるか、または同じ環炭素中の任意の２つのＲ９が、それらが結合する炭素と共にカルボニル基を形成するか、または任意の２つのＲ９か、Ｒ８および任意の１つのＲ９か、もしくはＲ１０および任意の１つのＲ９が、元のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環と縮合する第２のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環を形成するか、または任意の２つのＲ９か、Ｒ８および任意の１つのＲ９か、もしくはＲ１０および任意の１つのＲ９が、メチレン、エチリデン、１−プロピリデン、２−プロピリデンもしくはベンジリデン基と共に、元のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環と縮合する環状アセタールもしくはケタール環（ketal ring）を形成する）；
−ＡＡｓ−は、式（Ｖ）のペプチドユニットであり：

【化24】

（式中、ｚは０から１０までの整数であり、Ｒ１１は、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＮＨ_２であり、Ｒ１２は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、フェニルまたはベンジルであり、Ｒ１３は水素、メチル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、シクロヘキシル、フェニル、ベンジル、ｐ−ヒドロキシベンジル、−ＣＨ_２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＯＯＨ、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２ＮＨ_２、２−ピリジルメチル、３−ピリジルメチル、または４−ピリジルメチルである）；かつ
−Ｄは、アマニチン（amanitin）、アントラサイクリン（anthracycline）、アウリスタチン（auristatin）、バッカチン（baccatin）、カリケアマイシン（calicheamicin）、カンプトテシン（camptothecin）、セマドチン（cemadotin）、コルヒチン（colchicine）、コルセミド（colcemid）、コンブレタスタチン（combretastatin）、クリプトフィシン（cryptophysin）、ディスコデルモリド（discodermolide）、デュオカルマイシン（duocarmycin）、エキノマイシン（echinomycin）、エリュテロビン（eleutherobin）、エポチロン（epothilone）、エストラムスチン（estramustine）、レキシトロプシン（lexitropsin）、メイタンシノイド（maytansinoid）、ネトロプシン（netropsin）、ピューロマイシン（puromycin）、ピロロベンゾジアゼピン（pyrrolobenzodiazepine）、リゾキシン（rhizoxin）、タキサン（taxane）、チューブリシン（tubulysin）、およびビンカアルカロイド（vinca alkaloid）からなる群より選ばれた細胞毒性薬である；
［１１］
前記リガンドユニットが抗原に結合する抗体である、［１０］に記載のリガンド−薬物複合体；
［１２］
前記抗体が、キメラ抗体、ヒト化抗体またはそれらの機能的に活性なフラグメントである、［１１］に記載のリガンド−薬物複合体；
［１３］
前記抗体が、前記抗体のシステイン残基によって結合ユニットに結合する、［１１］に記載のリガンド−薬物複合体；
［１４］
pが２から８までの整数である、［１０］に記載のリガンド−薬物複合体；
［１５］
ｐが整数４である、［１４］に記載のリガンド−薬物複合体；
［１６］
前記リガンドユニットが、葉酸、メトトレキサート、または葉酸レセプターに結合する葉酸レセプター結合リガンドである、［１０］に記載のリガンド−薬物複合体；
［１７］
前記リガンドユニットが黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト、黄体形成ホルモン放出ホルモンアンタゴニスト、または黄体形成ホルモン放出ホルモンレセプターに結合する黄体形成ホルモン放出ホルモンレセプター結合リガンドである、［１０］に記載のリガンド−薬物複合体；
［１８］
Ｃ−が、

【化25】

からなる群より選ばれた前記結合ユニットであり、式中、Ｒ７は、−１，５−ペンチレン−、−１，６−へキシレン−，−１，４−シクロへキシレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−ＣＨ２−からなる群より選ばれ、ｒは２〜５までの整数である、［１０］に記載のリガンド−薬物複合体；
［１９］
ＳＡＡｓ−が、

【化26】

からなる群より選ばれた前記糖アミノ酸ユニットである、［１０］に記載のリガンド−薬物複合体；
［２０］
−ＡＡｓ−が、−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、−Ｖａｌ−Ａｒｇ−、−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−および−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−からなる群より選ばれた前記ペプチドユニットである、［１０］に記載のリガンド−薬物複合体；ならびに
［２１］
−Ｄが、

【化27】

からなる群より選ばれた前記細胞毒性薬であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立に、水素、アミノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、カルボン酸、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ、１−ピロリジニル、１−ピペリジニル、１−ピペラジニル、アミノカルボニル、メチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、エチルアミノカルボニル、ジエチルアミノカルボニル、１−ピロリジニルカルボニル、１−ピペリジニルカルボニル、１−ピペラジニルカルボニル、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、またはフェニルである、［１０］に記載のリガンド−薬物複合体。

【図面の簡単な説明】

【0014】

添付の図面を参照しながら以下の詳細な説明および実施例を読むことにより、本発明をより十分に理解することができる:

【図1】図１は、Ｅｒｂｉｔｕｘ（アービタックス）−ＭＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡのＨＩＣプロファイルを示している。

【図2】図２は、ＥｒｂｉｔｕｘおよびＥｒｂｉｔｕｘ−ＡＤＣの５０℃における熱ストレス安定性試験の結果を示している。

【発明を実施するための形態】

【0015】

詳細な説明
以下の詳細な説明においては、説明の目的で、開示される実施形態が十分に理解されるように多数の特定の詳細が記載される。しかし、これらの特定の詳細がなくとも、１つまたは複数の実施形態が実施可能であることは明らかであろう。また、図を簡潔とするため、周知の構造および装置は概略的に示される。

【0016】

本開示の化合物
アニリン部分（aniline moiety）を有するアウリスタチン誘導体
本開示は新規なアウリスタチン誘導体を提供し、それは、リンカー、リガンド、または送達分子（delivery molecule）に結合するための連結点（linking point）となるアニリン部分を有することを特徴とし、一連のヒトの癌細胞株に対してより高い抗ガン活性を備える可能性を毒素に与えるものでもある。1実施形態では、アウリスタチン誘導体は、式（Ｉ）のアニリン部分を含む化合物であり、その薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物もまた本開示において提供される。

【0017】

【化28】

式（Ｉ）中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の各々は独立に水素、アミノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、カルボン酸、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル、Ｃ１〜Ｃ６アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アミノカルボニル、直鎖（normal）Ｃ１〜Ｃ６アルキル、分枝（branched）Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６複素環（heterocyclic）、アリールまたはヘテロアリールであり得、ただし、Ｒ１およびＲ３のうちの少なくとも１つはアミノ基である。

【0018】

１実施形態では、Ｒ１は水素であり、Ｒ２は水素、カルボン酸、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル、Ｃ１〜Ｃ６アミノカルボニルまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ３はアミノである。

【0019】

別の実施形態では、アウリスタチンＦ誘導体は、式（ＩＩ）のアニリン部分を含む化合物であり、その薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物もまた本開示において提供される。

【0020】

【化29】

式（ＩＩ）中、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６の各々は独立に水素、アミノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、カルボン酸、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル、Ｃ１〜Ｃ６アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アミノカルボニル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、分枝Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６複素環、アリールまたはヘテロアリールであり得る。

【0021】

１実施形態では、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は水素である。

【0022】

糖アミノ酸を含むリンカー
本開示は、新規な糖アミノ酸含有リンカーであって、そのＣ−末端にカテプシンＢに認識されるジペプチドを有し、そのＮ末端に該リンカーまたはリンカー含有物質の水溶解度を高めるための高親水性糖アミノ酸部分を有することを特徴とするリンカーを提供する。該リンカーのＣ−末端におけるカルボキシル基およびＮ−末端におけるアミノ基はどちらも、スペーサ、リンカー、リガンド、薬物、毒素、イメージング分子（imaging molecule）、抗体、ペプチドまたは送達分子を結合させるための連結点となり得る。

【0023】

本開示のリンカーユニットは、糖アミノ酸ユニット（−ＳＡＡｓ−）およびペプチドユニット（−ＡＡｓ−）を含む。ペプチドユニットは、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、へプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、デカペプチド、ウンデカペプチドまたはドデカペプチドであり得る。

【0024】

１実施形態では、糖アミノ酸ユニット（−ＳＡＡｓ−）は式（ＩＶ）で表されるものである：

【化30】

式（ＩＶ）中、xは１から８までの整数であり、yは１から４までの整数であり、

【化31】

はテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランまたはジヒドロピラン環であってよく、Ｒ８およびＲ１０の各々は独立に、単結合、メチレン、ヒドロキシメチレン、エチレン、エチリデン、ヒドロキシエチレン、ヒドロキシエチリデン、ジヒドロキシエチレン、ジヒドロキシエチリデン、ビニレン、ビニリデン、プロピレン、プロピリデン、トリメチレン、ヒドロキシプロピレン、ヒドロキシプロピリデン、ヒドロキシトリメチレン、ジヒドロキシプロピレン、ジヒドロキシプロピリデン、ジヒドロキシトリメチレン、トリヒドロキシプロピレン、トリヒドロキシプロピリデンまたはトリヒドロキシトリメチレンであってよく、各Ｒ９は独立に、ヒドロキシル、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、ジヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ジヒドロキシプロピルもしくはトリヒドロキシプロピルであり得るか、または同じ環炭素中の任意の２つのＲ９が、それらが結合する炭素と共にカルボニル基を形成するか、または任意の２つのＲ９か、Ｒ８および任意の１つのＲ９か、もしくはＲ１０および任意の１つのＲ９が、元のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環と縮合する第２のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環を形成するか、または任意の２つのＲ９か、Ｒ８および任意の１つのＲ９か、もしくはＲ１０および任意の１つのＲ９が、メチレン、エチリデン、１−プロピリデン、２−プロピリデンまたはベンジリデン基と共に元のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環と縮合する環状アセタールもしくはケタール環を形成する。

【0025】

本開示において、上記糖アミノ酸の例には、限定はされないが

【化32】

が含まれる。

【0026】

１実施形態では、ペプチドユニット（−ＡＡｓ−）は式（Ｖ）により表される：

【化33】

式（Ｖ）中、ｚは０から１０までの整数であり、Ｒ１１は、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＮＨ_２であってよく、Ｒ１２は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、フェニルまたはベンジルであってよく、Ｒ１３は、水素、メチル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、シクロヘキシル、フェニル、ベンジル、ｐ−ヒドロキシベンジル、−ＣＨ_２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＯＯＨ、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２ＮＨ_２、２−ピリジルメチル、３−ピリジルメチルまたは４−ピリジルメチルであり得る。

【0027】

ペプチドユニットは、１つまたは複数の酵素、例えば腫瘍関連プロテアーゼによって酵素的に切断されて薬物ユニット（−Ｄ）を遊離させることができる。

【0028】

リンカー−薬物
本開示の１実施形態は、式（ＩＩＩ）のリンカー−薬物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供する：

【化34】

式（ＩＩＩ）中、Ｃ−は、

【化35】

からなる群より選ばれた結合ユニット（conjugating unit）であり、式中、Ｒ７は、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−からなる群より選ばれ、かつｒは１から１０までの整数である。

【0029】

式（ＩＩＩ）中、−ＳＡＡｓ−は式（ＩＶ）の糖アミノ酸ユニットである：

【化36】

式（ＩＶ）中、ｘは１から８までの整数であり、ｙは１から４までの整数であり、

【化37】

はテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランまたはジヒドロピラン環であってよく、Ｒ８およびＲ１０の各々は独立に、単結合、メチレン、ヒドロキシメチレン、エチレン、エチリデン、ヒドロキシエチレン、ヒドロキシエチリデン、ジヒドロキシエチレン、ジヒドロキシエチリデン、ビニレン、ビニリデン、プロピレン、プロピリデン、トリメチレン、ヒドロキシプロピレン、ヒドロキシプロピリデン、ヒドロキシトリメチレン、ジヒドロキシプロピレン、ジヒドロキシプロピリデン、ジヒドロキシトリメチレン、トリヒドロキシプロピレン、トリヒドロキシプロピリデンまたはトリヒドロキシトリメチレンであってよく、各Ｒ９は独立に、ヒドロキシル、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、ジヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ジヒドロキシプロピルもしくはトリヒドロキシプロピルであり得るか、または同じ環炭素中の任意の２つのＲ９が、それらが結合する炭素と共にカルボニル基を形成するか、または任意の２つのＲ９か、Ｒ８および任意の１つのＲ９か、もしくはＲ１０および任意の１つのＲ９が、元のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環と縮合する第２のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環を形成するか、または任意の２つのＲ９か、Ｒ８および任意の１つのＲ９か、もしくはＲ１０および任意の１つのＲ９が、メチレン、エチリデン、１−プロピリデン、２−プロピリデンもしくはベンジリデン基と共に、元のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環と縮合する環状アセタールもしくはケタール環（ketal ring）を形成する。

【0030】

式（ＩＩＩ）中、−ＡＡｓ−は式（Ｖ）のペプチドユニットである：

【化38】

式（Ｖ）中、ｚは０から１０までの整数であり、Ｒ１１は、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＮＨ_２であってよく、Ｒ１２は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、フェニルまたはベンジルであってよく、Ｒ１３は、水素、メチル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、シクロヘキシル、フェニル、ベンジル、ｐ−ヒドロキシベンジル、−ＣＨ_２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＯＯＨ、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２ＮＨ_２、２−ピリジルメチル、３−ピリジルメチルまたは４−ピリジルメチルであってよい。

【0031】

式（ＩＩＩ）中、−Ｄは、アマニチン（amanitin）、アントラサイクリン（anthracycline）、アウリスタチン（auristatin）、バッカチン（baccatin）、カリケアマイシン（calicheamicin）、カンプトテシン（camptothecin）、セマドチン（cemadotin）、コルヒチン（colchicine）、コルセミド（colcemid）、コンブレタスタチン（combretastatin）、クリプトフィシン（cryptophysin）、ディスコデルモリド（discodermolide）、デュオカルマイシン（duocarmycin）、エキノマイシン（echinomycin）、エリュテロビン（eleutherobin）、エポチロン（epothilone）、エストラムスチン（estramustine）、レキシトロプシン（lexitropsin）、メイタンシノイド（maytansinoid）、ネトロプシン（netropsin）、ピューロマイシン（puromycins、ピロロベンゾジアゼピン（pyrrolobenzodiazepine）、リゾキシン（rhizoxin）、タキサン（taxane）、チューブリシン（tubulysin）、およびビンカアルカロイド（vinca alkaloid）からなる群より選ばれた細胞毒性薬である。

【0032】

１実施形態では、Ｃ−は、

【化39】

からなる群より選ばれた結合ユニット（conjugating unit）であり、式中、Ｒ７は、−１，５−ペンチレン−、−１，６−ヘキシレン−、−１，４−シクロヘキシレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−ＣＨ２−からなる群より選ばれ、かつｒは２から５までの整数である。

【0033】

１実施形態では、−ＳＡＡｓ−は、

【化40】

からなる群より選ばれた糖アミノ酸ユニットである。

【0034】

１実施形態では、−ＡＡｓ−は、−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、−Ｖａｌ−Ａｒｇ−、−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−および−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−からなる群より選ばれたペプチドユニットである。

【0035】

１実施形態では、−Ｄは、

【化41】

からなる群より選ばれた細胞毒性薬であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立に、水素、アミノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、カルボン酸、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ、１−ピロリジニル、１−ピペリジニル、１−ピペラジニル、アミノカルボニル、メチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、エチルアミノカルボニル、ジエチルアミノカルボニル、１−ピロリジニルカルボニル、１−ピペリジニルカルボニル、１−ピペラジニルカルボニル、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、またはフェニルである。

【0036】

リガンド薬物複合体（Ligand drug conjugate）
本開示の１実施形態は、式（ＶＩ）のリガンド−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供する：

【化42】

式（ＶＩ）中、ｐは１から２０までの整数であり、Ｌ−は、全長抗体、抗体フラグメント、タンパク質、比較的分子量の小さいタンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、アプタマー、レクチン、糖タンパク質、リポタンパク質、 糖脂質、ビタミン、栄養輸送分子（nutrient-transport molecule）、ホルモン、単糖類、二糖類、オリゴ糖、多糖類およびその他任意の細胞結合分子または物質からなる群より選ばれたリガンドユニットである。

【0037】

式（ＶＩ）中、Ｃ−は、

【化43】

からなる群より選ばれた結合ユニット（conjugating unit）であり、式中、Ｒ７は、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−からなる群より選ばれ、かつｒは１から１０までの整数である。

【0038】

式（ＶＩ）中、−ＳＡＡｓ−は、式（ＩＶ）の糖アミノ酸ユニットである：

【化44】

式（ＩＶ）中、ｘは１から８までの整数であり、ｙは１から４までの整数であり、

【化45】

はテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランまたはジヒドロピラン環であってよく、Ｒ８およびＲ１０の各々は独立に、単結合、メチレン、ヒドロキシメチレン、エチレン、エチリデン、ヒドロキシエチレン、ヒドロキシエチリデン、ジヒドロキシエチレン、ジヒドロキシエチリデン、ビニレン、ビニリデン、プロピレン、プロピリデン、トリメチレン、ヒドロキシプロピレン、ヒドロキシプロピリデン、ヒドロキシトリメチレン、ジヒドロキシプロピレン、ジヒドロキシプロピリデン、ジヒドロキシトリメチレン、トリヒドロキシプロピレン、トリヒドロキシプロピリデンまたはトリヒドロキシトリメチレンであってよく、各Ｒ９は独立に、ヒドロキシル、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、ジヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ジヒドロキシプロピルもしくはトリヒドロキシプロピルであり得るか、または同じ環炭素中の任意の２つのＲ９が、それらが結合する炭素と共にカルボニル基を形成するか、または任意の２つのＲ９か、Ｒ８および任意の１つのＲ９か、もしくはＲ１０および任意の１つのＲ９が、元のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環と縮合する第２のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環を形成するか、または任意の２つのＲ９か、Ｒ８および任意の１つのＲ９か、もしくはＲ１０および任意の１つのＲ９が、メチレン、エチリデン、１−プロピリデン、２−プロピリデンもしくはベンジリデン基と共に、元のテトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロピランもしくはジヒドロピラン環と縮合する環状アセタールもしくはケタール環（ketal ring）を形成する。

【0039】

式（ＶＩ）中、−ＡＡｓ−は式（Ｖ）のペプチドユニットである：

【化46】

式（Ｖ）中、ｚは０から１０までの整数であり、Ｒ１１は、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２または−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＮＨ_２であってよく、Ｒ１２は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、フェニルまたはベンジルであってよく、Ｒ１３は、水素、メチル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、シクロヘキシル、フェニル、ベンジル、ｐ−ヒドロキシベンジル、−ＣＨ_２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＯＯＨ、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＮＨ_２、−（ＣＨ_２）_４ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２ＮＨ_２、２−ピリジルメチル、３−ピリジルメチル、または４−ピリジルメチルであってよい。

【0040】

式（ＶＩ）中、−Ｄは、アマニチン（amanitin）、アントラサイクリン（anthracycline）、アウリスタチン（auristatin）、バッカチン（baccatin）、カリケアマイシン（calicheamicin）、カンプトテシン（camptothecin）、セマドチン（cemadotin）、コルヒチン（colchicine）、コルセミド（colcemid）、コンブレタスタチン（combretastatin）、クリプトフィシン（cryptophysin）、ディスコデルモリド（discodermolide）、デュオカルマイシン（duocarmycin）、エキノマイシン（echinomycin）、エリュテロビン（eleutherobin）、エポチロン（epothilone）、エストラムスチン（estramustine）、レキシトロプシン（lexitropsin）、メイタンシノイド（maytansinoid）、ネトロプシン（netropsin）、ピューロマイシン（puromycin）、ピロロベンゾジアゼピン（pyrrolobenzodiazepine）、リゾキシン（rhizoxin）、タキサン（taxane）、チューブリシン（tubulysin）、およびビンカアルカロイド（vinca alkaloid）からなる群より選ばれた細胞毒性薬である。

【0041】

1実施形態では、リガンドユニット（Ｌ−）は、抗原に結合する抗体である。

【0042】

1実施形態では、抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体またはそれらの機能的に活性なフラグメントであり得る。

【0043】

1実施形態では、抗体は、抗体のシステイン残基を介してリンカーユニットに結合する。

【0044】

式（ＶＩ）中、ｐは２から８までの整数であるか、または整数４である。

【0045】

1実施形態では、リガンドユニットは葉酸、メトトレキサートまたは葉酸レセプターに結合する葉酸レセプター結合リガンドであり得る。

【0046】

1実施形態では、リガンドユニットは、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト、黄体形成ホルモン放出ホルモンアンタゴニストまたは黄体形成ホルモン放出ホルモンレセプターに結合する黄体形成ホルモン放出ホルモンレセプター結合リガンドであり得る。

【0047】

１実施形態では、式（ＶＩ）中のＣ−は、

【化47】

からなる群より選ばれた結合ユニット（conjugating unit）であり、式中、Ｒ７は、−１，５−ペンチレン−、−１，６−ヘキシレン−、−１，４−シクロヘキシレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−ＣＨ２−からなる群より選ばれ、かつｒは２〜５までの整数である。

【0048】

１実施形態では、式（ＶＩ）中の−ＳＡＡｓ−は、

【化48】

からなる群より選ばれた糖アミノ酸ユニットである。

【0049】

１実施形態では、式（ＶＩ）中の−ＡＡｓ−は、−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、−Ｖａｌ−Ａｒｇ−、−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−および−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−からなる群より選ばれたペプチドユニットである。

【0050】

１実施形態では、式（ＶＩ）中の−Ｄは、

【化49】

からなる群より選ばれた細胞毒性薬であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立に、水素、アミノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、カルボン酸、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ、１−ピロリジニル、１−ピペリジニル、１−ピペラジニル、アミノカルボニル、メチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、エチルアミノカルボニル、ジエチルアミノカルボニル、１−ピロリジニルカルボニル、１−ピペリジニルカルボニル、１−ピペラジニルカルボニル、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、またはフェニルである。

【0051】

本開示は、薬物の標的指向化された送達に用いるリガンド薬物複合体も提供する。リガンド薬物複合体は、少なくとも１つの薬物ユニットに共有結合されたリガンドユニットを含む。薬物ユニットは、リガンドユニットに、直接またはリンカーを介して、共有結合され得る。

【0052】

結合ユニット（Conjugating Unit）
結合ユニットは、リガンドユニットをリンカーユニット、薬物ユニットに連結することができる。天然に（naturally）または化学処理によりリガンド上に存在得る有用な官能基には、限定はされないが、スルフヒドリル、アミノ、ヒドロキシル、カルボニル、ホルミル、およびカルボキシルが含まれる。適した官能基はスルフヒドリルおよびアミノである。1実施形態において、スルフヒドリル基は、リガンドの分子内ジスルフィド結合の減少によって生成され得る。別の実施形態では、スルフヒドリル基は、リガンドのリジンのアミノ基とトラウト試薬（Traut's reagent）または他のスルフヒドリル発生試薬との反応によって生成され得る。ある実施形態では、リガンドは、組換え抗体であり、かつ１つまたは複数のリジンまたはシステインを担持するように操作されている。

【0053】

1実施形態では、結合ユニットは、リガンドユニットの１つの硫黄原子と１つの結合を形成する。硫黄原子は、リガンドのスルフヒドリル基に由来するものであり得る。

【0054】

別の実施形態では、結合ユニットは、リガンドユニットの２つの硫黄原子と２つの結合を形成する。２つの硫黄原子は、リガンドの２つのスルフヒドリル基に由来するものであってよい。２つのスルフヒドリル基は、リガンドのジスルフィド結合に由来するものであり得る。

【0055】

いくつかの実施形態では、薬物ユニットは、カリケアマイシン（calicheamicin）、カンプトテシン（camptothecin）、メイタンシノイド（maytansinoid）またはアントラサイクリン（anthracycline）であり得る。いくつかの実施形態では、薬物ユニットは、タキサン（taxane）、トポイソメラーゼ阻害薬（topoisomerase inhibitor）、ビンカアルカロイド（vinca alkaloid）または同種のものであり得る。いくつか代表的な実施形態では、適した細胞毒性薬には、例えばＤＮＡマイナーグルーブバインダー（minor groove binder）（例えば、エンジイン（enediyne）およびレキシトロプシン（lexitropsin）、ＣＢＩ化合物；米国特許第６１３０２３７号も参照）、デュオカルマイシン（duocarmycin）、タキサン（taxane）（例えばパクリタキセル（paclitaxel）およびドセタキセル（docetaxel））、ピューロマイシン（puromycin）、ならびにビンカアルカロイド（vinca alkaloid）が含まれる。他の細胞毒性薬には、例えば、ＣＣ−１０６５、ＳＮ−３８、トポテカン（topotecan）、ドキソルビシン（doxorubicin）、リゾキシン（rhizoxin）、シアノモルホリノ−ドキソルビシン（cyanomorpholino-doxorubicin）、エキノマイシン（echinomycin）、コンブレタスタチン（combretastatin）、ネトロプシン（netropsin）、エポチロン（epothilone）、エストラムスチン（estramustine）、クリプトフィシン（cryptophysin）、セマドチン（cemadotin）、メイタンシノイド（maytansinoid）、ディスコデルモリド（discodermolide）、エリュテロビン（eleutherobins）またはミトキサントロン（mitoxantrone）が含まれる。

【0056】

薬物ユニット
いくつかの実施形態では、薬物ユニットは抗チューブリン剤であり得る。抗チューブリン剤の例には、アウリスタチン（auristatin）、タキサン（taxane）およびビンカアルカロイド（vinca alkaloid）が含まれる。他の抗チューブリン剤には、例えば、バッカチン誘導体（baccatin derivative）、セマドチン（cemadotin）、コルヒチン（colchicine）、コルセミド（colcemid）、コンブレタスタチン（combretastatin）、クリプトフィシン（cryptophycin）、ディスコデルモリド（discodermolide）、エリュテロビン（eleutherobin）、エストラムスチン（estramustine）、メイタンシノイド（maytansinoid）、ノコダゾール（nocodazole）またはタキサン類似体（taxane analog）が含まれる。

【0057】

ある実施形態では、細胞毒性薬は、メイタンシノイド（maytansinoid）または別のグループの抗チューブリン剤であり得る。例えば、特定の実施形態において、メイタンシノイドはメイタンシン（maytansine）またはＤＭ−１である（ImmunoGen, Inc.; Chari et al., 1992, Cancer Res. 52:127-131も参照）。

【0058】

ある実施形態では、細胞毒性薬または細胞増殖抑制剤はドラスタチン（dolastatin）であり得る。ある実施形態では、細胞毒性薬または細胞増殖抑制剤はアウリスタチン類（auristatin class）のものである。よって、特定の実施形態において、細胞毒性薬または細胞増殖抑制剤はＭＭＡＥである。

【0059】

リガンドユニット
複合体化合物（conjugate compound）のリガンドユニットは、その範囲内に、所定の標的細胞群と関連するレセプター、抗原または他の受容部分（receptive moiety）と結合するか、または反応的に会合するか、または複合するリガンドの任意のユニットを含む。リガンドは、標的にしようとする細胞群の一部分と結合するか、複合するか、または反応する分子である。１態様において、リガンドユニットは、リガンドユニットと反応する特定の標的細胞群に薬物ユニットを送達するように振る舞う。かかるリガンドには、限定はされないが、高分子量タンパク質、例えば全長抗体、抗体フラグメント、タンパク質、比較的分子量の小さいタンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、アプタマー、レクチン、糖タンパク質、非ペプチド（non-peptide）、ビタミン、栄養輸送分子（nutrient-transport molecule）（例えば、限定はされないがトランスフェリン）、またはその他任意の細胞結合分子もしくは物質が含まれる。

【0060】

リガンドユニットは、リンカーユニットまたは薬物ユニットとの結合を形成することができる。リガンドユニットは、リガンドのヘテロ原子を介してリンカーユニットとの結合を形成し得る。リガンドユニット上に存在し得るヘテロ原子には、硫黄（１実施形態では、リガンドのスルフヒドリル基に由来）、酸素（１実施形態では、リガンドのカルボニル、カルボキシルまたはヒドロキシル基に由来）および窒素（１実施形態では、リガンドの第一または第二アミノ基に由来）が含まれる。これらヘテロ原子は、リガンドの自然な状態におけるリガンド、例えば天然型の抗体（naturally-occurring antibody）上に存在し得るか、または化学修飾によりリガンド中に導入され得る。

【0061】

１実施形態では、リガンドはスルフヒドリル基を有し、かつリガンドは、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してリンカーユニットと結合する。別の実施形態では、リガンドは、１つまたは複数のスルフヒドリル基を導入するよう化学的に修飾されていてよい１つまたは複数のリジン残基を有する。リガンドユニットは、スルフヒドリル基を介してリンカーユニットに結合する。リジンを修飾するのに用いることのできる試薬には、限定はされないが、Ｎ−スクシンイミジルＳ−アセチルチオアセタート（N-succinimidyl S-acetylthioacetate,ＳＡＴＡ）および２-イミノチオラン塩酸塩（2-Iminothiolane hydrochloride（トラウト試薬）が含まれる。

【0062】

別の実施形態では、リガンドは、１つまたは複数のスルフヒドリル基を持つように化学修飾されていてよい１つまたは複数の炭水化物基を有する。リガンドユニットは、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してリンカーユニットと結合する。また別の実施形態では、リガンドは、アルデヒド（−ＣＨＯ）基を備えるように酸化されていてよい１つまたは複数の炭水化物基を有する（例えば、Laguzza et al., 1989, J. Med. Chem. 32(3):548-55参照）。対応するアルデヒドは、リンカーユニットの一部における反応部位と結合を形成することができる。リガンド上のカルボニル基と反応できる反応部位には、限定はされないが、ヒドラジンおよびヒドロキシルアミンが含まれる。薬物ユニットの結合または会合のためのタンパク質の修飾の他のプロトコールは、Coligan et al., Current Protocols in Protein Science, vol. 2, John Wiley & Sons（2002)に記載されており、これは参照することにより本明細書に援用される。

【0063】

リガンドユニットには、例えば、 タンパク質、ポリペプチド、またはペプチド、限定はされないが、トランスフェリン、上皮成長因子（“ＥＧＦ”）、ボンベシン（bombesin）、ガストリン（gastrin）、ガストリン放出ペプチド（gastrin-releasing peptide）、血小板由来成長因子（platelet-derived growth factor）、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＴＧＦ−αまたはＴＧＦ−βのようなトランスフォーミング増殖因子（transforming growth factor “ＴＧＦ”）、ワクシニア増殖因子（vaccinia growth factor “ＶＧＦ”）、インスリンおよびインスリン様成長因子（insulin-like growth factors）ＩとＩＩ、レクチン（lectin）ならびに低密度リポタンパク質（low-density lipoprotein）由来のアポタンパク質（apoprotein）が含まれる。

【0064】

リガンドユニットにはまた、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のような抗体も含まれる。抗体は、例えば、癌細胞抗原、ウイルス抗原、微生物抗原、タンパク質、ペプチド、炭水化物、化学薬品、核酸、またはそのフラグメントを含む特定の抗原決定基に対するものであり得る。ポリクローナル抗体を作製する方法は、従来技術において既知である。目的の抗原に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、従来技術において既知である任意の技術を用いて作製され得る。これらには、限定はされないが、元はKohlerおよびMilsteinにより記述された（1975, Nature 256, 495-497）ハイブリドーマ技術（hybridoma technique）、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Kozbor et al., 1983, Immunology Today 4:72）、およびＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Cole et al., 1985, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96）が含まれる。かかる抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、およびＩｇＤを含む任意の免疫グロブリンクラスおよびその任意のサブクラスのものであってよい。本開示で用いるｍＡｂｓを産生するハイブリドーマは、インビトロまたはインビボで培養することができる。

【0065】

モノクローナル抗体は、例えば、ヒトモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、抗体フラグメント、またはキメラ抗体（例えば、ヒト―マウス抗体）であり得る。ヒトモノクローナル抗体は、従来技術において既知である多数の技術のいずれかによって作製することができる（例えば、Teng et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:7308-7312; Kozbor et al., 1983, Immunology Today 4:72-79; and Olsson et al., 1982, Meth. Enzymol. 92:3-16）。

【0066】

抗体はまた二重特異性抗体であってもよい。二重特異性抗体を作製する方法は従来技術において既知である。従来の全長二重特異性抗体の作製は、２つの鎖が異なる特異性を有する、２つの免疫グロブリンの重鎖-軽鎖ペアの共発現に基づくものである（例えばMilstein et al., 1983, Nature 305:537-539; 国際特許公開第ＷＯ９３／０８８２９号公報, Traunecker et al., 1991, EMBO J. 10:3655-3659参照）。

【0067】

異なるアプローチによれば、所望の結合特異性を持つ抗体可変領域（抗体−抗原結合部位）は、免疫グロブリン定常領域配列に融合される。融合は、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域の少なくとも１部分を含む免疫グロブリン重鎖定常領域を用いるものである。融合の少なくとも１つに、軽鎖結合に必要な部位を含む第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）が存在することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合体をコードする配列を持つ核酸と、必要であれば、免疫グロブリン軽鎖が、別々の発現ベクターに挿入され、かつ適した宿主生物にコトランスフェクト（co-transfected）される。このことは、コンストラクションに用いられる３つのポリペプチド鎖の割合が等しくないことで最適な収量が得られる実施形態において、３つのポリペプチドフラグメントの互いの比率の調整に柔軟性を与える。しかしながら、等しい割合での少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が高収量につながる場合、または割合が特に重要なものではない場合には、２つまたは３つすべてのポリペプチド鎖のコード配列を１つの発現ベクターに挿入することが可能である。

【0068】

例えば、二重特異性抗体は、第１の結合特性を持つハイブリッド免疫グロブリン重鎖を一方の腕に、ハイブリッド免疫グロブリン重鎖-軽鎖ペア（第２の結合特性を備えている）を他方の腕に有する。二重特異性分子の半分のみに免疫グロブリン軽鎖が存在することで容易な分離の方法が得られるため、この非対称構造は、望まない免疫グロブリン鎖の組み合わせからの所望の二重特異性化合物の分離を容易にする（国際特許出願号ＷＯ９４／０４６９０号公報、その全体が参照することにより本明細書に援用される）。

【0069】

二重特異性抗体の生成のさらなる詳細については、例えば、Suresh et al., 1986, Methods in Enzymology 121:210; Rodrigues et al., 1993, J. Immunology 151:6954-6961; Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167; Carter et al., 1995, J. Hematotherapy 4:463-470; Merchant et al., 1998, Nature Biotechnology 16:677-681を参照されたい。このような技術を用いることで、本明細書で定義されるような疾病の治療または予防に使用するために二重特異性抗体を作製することができる。

【0070】

二機能性抗体（bifunctional antibody）はまた、欧州特許公開ＥＰＡ ０ １０５ ３６０号公報にも記載されている。この参照文献に開示されているように、ハイブリッドまたは二機能性抗体は、生物学的、つまり細胞融合技術により、または特に架橋剤もしくはジスルフィド架橋形成試薬（disulfide-bridge forming reagents）を用いて化学的に得られ、かつ抗体全体およびそのフラグメントを含み得る。かかるハイブリッド抗体を得る方法が、例えば、国際特許公開ＷＯ８３／０３６７９号公報、および欧州特許公開ＥＰＡ ０ ２１７ ５７７号公報に記載されており、両者は参照することにより本明細書に援用される。

【0071】

抗体はまた、標的抗原（例えば、癌抗原、ウイルス抗原、微生物抗原または細胞もしくはマトリックスに結合したその他の抗体）に免疫特異的に結合する抗体の機能的に活性なフラグメント、誘導体または類似体であってもよい。この点において、「機能的に活性な」とは、フラグメント、誘導体または類似体が、そのフラグメント、誘導体または類似体の由来元の抗体が認識したのと同じ抗原を認識できることを意味する。具体的には、例示的実施形態において、免疫グロブリン分子のイディオタイプの抗原性は、抗原を特異的に認識するＣＤＲに対してＣ末端にあるフレームワークおよびＣＤＲ配列の欠失により高めることができる。どのＣＤＲ配列が抗原に結合するかを判断するのに、従来技術において既知である任意の結合アッセイ法（例えば、ＢＩＡコアアッセイ（BIA core assay））により、ＣＤＲ配列を含有する合成ペプチドを、抗原と共に結合アッセイに使用することができる。例えば、Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, Md.; Kabat et al., 1980, J. Immunology 125(3):961-969参照）。

【0072】

他の有用な抗体には、限定はされないが、抗体のＦ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’、Ｆｖフラグメントならびに重鎖および軽鎖ダイマー、または例えばＦｖｓもしくは単鎖抗体（ＳＣＡ）であるその任意の最小フラグメントのような抗体のフラグメントが含まれる（例えば、米国特許第４９４６７７８号; Bird, 1988, Science 242:423-42; Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; and Ward et al., 1989, Nature 334:544-54に記載されている）。

【0073】

ヒトおよび非ヒト部分の両方を含むキメラおよびヒト化モノクローナル抗体のような組換え抗体であって、標準的な組換えＤＮＡ技術を用いて作製され得る組換え抗体もまた、利用可能である（例えば、米国特許第４８１６５６７号；および米国特許第４８１６３９７号参照）。ヒト化抗体は、ヒト以外の種に由来する１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、ヒト免疫グロブリン分子に由来するフレームワーク領域とを有する、ヒト以外の種に由来する抗体分子である（米国特許第５５８５０８９号参照）。キメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、従来技術において既知である組換えＤＮＡ技術により、例えば、国際特許公開第ＷＯ８７／０２６７１号；欧州特許公開第０ １８４ １８７号；欧州特許公開第０ １７１ ４９６号；欧州特許公開第０ １７３ ４９４号；国際特許公開第ＷＯ８６／０１５３３号；米国特許第４８１６５６７号；欧州特許公開第０１２ ０２３号; Berter et al., 1988, Science 240:1041-1043; Liu et al., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:3439-3443; Liu et al., 1987, J. Immunol. 139:3521-3526; Sun et al., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:214-218; Nishimura et al., 1987, Cancer. Res. 47:999-1005; Wood et al., 1985, Nature 314:446-449; Shaw et al., 1988, J. Natl. Cancer Inst. 80:1553-1559; Morrison, 1985, Science 229:1202-1207; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214; U.S. Pat. No. 5,225,539; Jones et al., 1986, Nature 321:552-525; Verhoeyan et al., 1988, Science 239:1534; and Beidler et al., 1988, J. Immunol. 141:4053-4060に記載された方法を用い、作製することができる。

【0074】

完全ヒト抗体を用いることができる。ヒト抗体は、例えば、内在性免疫グロブリン重鎖および軽鎖遺伝子を発現することができないがヒト重鎖および軽鎖遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを用いて作製され得る。トランスジェニックマウスを、通常の方式により、選択された抗原、例えば、本発明のポリペプチドの全部または一部で免疫する。抗原に対するモノクローナル抗体は従来のハイブリドーマ技術を用いて得ることができる。トランスジェニックマウス内のヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞分化中に再編成し（rearrange）、続いてクラススイッチングおよび体細胞突然変異を起こす。よって、かかる技術を用いると、治療上有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体を作製することができる。ヒト抗体を作製するこの技術の概要については、Lonberg and Huszar（1995, Int. Rev. Immunol. 13:65-93）を参照されたい。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を作製するこの技術の詳細な議論、ならびにかかる抗体を作製するためのプロトコールについては、例えば、米国特許第５６２５１２６号；５６３３４２５号；５５６９８２５号；５６６１０１６号；および５５４５８０６号を参照されたい。他のヒト抗体は、市販品、例えばAbgenix, Inc.（Freemont, Calif.)およびGenpharm(San Jose, Calif.)から入手可能である。

【0075】

選択されたエピトープを認識するヒト抗体はまた、「誘導選択（guided selection）」と称される技術を用いても生成され得る。このアプローチでは、選択された非ヒトモノクローナル抗体、例えばマウス抗体を用いて、同じエピトープを認識する完全ヒト抗体の選別を誘導する（例えば、Jespers et al., 1994, Biotechnology 12:899-903参照）。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリーなどの従来技術において既知である各種技術を用いても生成され得る（例えば、Hoogenboom and Winter, 1991, J. Mol. Biol. 227:381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222:581; Quan and Carter, 2002, “The rise of monoclonal antibodies as therapeutics,” in Anti-IgE and Allergic Disease, Jardieu, P. M. and Fick Jr., R. B, eds., Marcel Dekker, New York, N.Y., Chapter 20, pp. 427-469参照）。

【0076】

他の実施形態において、抗体は、抗体の融合タンパク質またはその機能的に活性なフラグメントである。例えば、抗体は、Ｎ−末端またはＣ−末端いずれかにおける共有結合（例えばペプチド結合）により、抗体ではない他のタンパク質のアミノ酸配列（またはその一部、例えばタンパク質の少なくとも１０、２０または５０アミノ酸部分）と融合され得る。

【0077】

抗体には類似体および誘導体も含まれ、それらはつまり、共有結合が抗体にその抗原結合免疫特異性（antigen binding immunospecificity）を保持させ得るものであるならば、任意のタイプの分子の共有結合によって修飾される。例えば、それらに限定するものではないが、抗体の誘導体および類似体には、例えばグリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護基（protecting/blocking group）による誘導体化（derivatization）、タンパク質切断（proteolytic cleavage）、細胞性抗体ユニットまたは他のタンパク質との結合などによってさらに修飾されているものが含まれる。多くの化学修飾のいずれもが、限定はされないが、特異的な化学的切断（specific chemical cleavage）、アセチル化、ホルミル化、チュニカマイシン存在下での代謝合成（metabolic synthesis）などが含まれる公知の技術によって実施され得る。加えて、類似体または誘導体は、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含んでいてよい。

【0078】

抗体は、Ｆｃレセプターと相互作用するアミノ酸残基に修飾（例えば置換、欠失または付加）を有していてよい。詳細には、抗体には、抗ＦｃドメインとＦｃＲｎレセプター間の相互作用に関与すると確認されたアミノ酸残基に修飾を有する抗体が含まれる（例えば、国際特許公開ＷＯ９７／３４６３１号参照、その全体が参照することにより本明細書に援用される）。標的抗原に免疫特異的な抗体は、市販品もしくはその他のソースから得るか、または例えば化学合成もしくは組換え発現技術のような当業者に知られた任意の方法により作製することが可能である。癌細胞抗原に免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋデータベースもしくはそれに類似するデータベース、文献刊行物から、または通常のクローニングおよびシークエンシングにより得ることができる。

【0079】

癌の治療に用いることのできる抗体の例には、限定はされないが、ヒト化抗ＨＥＲ２ モノクローナル抗体、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；非ホジキンリンパ腫患者の治療に用いるキメラ抗ＣＤ２０モノクローナル抗体であるＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標（リツキシマブ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；卵巣癌の治療に用いるマウス抗体であるＯｖａＲｅｘ（ＡｌｔａＲｅｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＭＡ）；大腸癌の治療に用いるマウスＩｇＧ２ａ抗体であるＰａｎｏｒｅｘ（Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ，ＮＣ）；頭頸部癌のような上皮成長因子陽性癌（epidermal growth factor positive cancer）の治療に用いる抗−ＥＧＦＲ ＩｇＧキメラ抗体であるＣｅｔｕｘｉｍａｂ Ｅｒｂｉｔｕｘ（Ｉｍｃｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．，ＮＹ）；肉腫の治療に用いるヒト化抗体であるＶｉｔａｘｉｎ（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ，Ｉｎｃ．，ＭＤ）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の治療に用いるヒト化ＩｇＧ１抗体であるＣａｍｐａｔｈ Ｉ／Ｈ（Ｌｅｕｋｏｓｉｔｅ，ＭＡ）;急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療に用いるヒト化抗ＣＤ３３ ＩｇＧ抗体であるＳｍａｒｔ ＭＩ９５（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）；非ホジキンリンパ腫の治療に用いるヒト化抗ＣＤ２２ ＩｇＧ抗体であるＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．，ＮＪ）；非ホジキンリンパ腫の治療に用いるヒト化抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体であるＳｍａｒｔ ＩＤ１０（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）;非ホジキンリンパ腫の治療に用いる放射標識マウス抗−ＨＬＡ−Ｄｒ１０抗体であるＯｎｃｏｌｙｍ（Ｔｅｃｈｎｉｃｌｏｎｅ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）；ホジキン病または非ホジキンリンパ腫の治療に用いるヒト化抗−ＣＤ２ ｍＡｂであるＡｌｌｏｍｕｎｅ（ＢｉｏＴｒａｎｓｐｌａｎｔ，ＣＡ）；肺および大腸癌の治療に用いる抗−ＶＥＧＦヒト化抗体であるＡｖａｓｔｉｎ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）；非ホジキンリンパ腫の治療に用いる抗−ＣＤ２２抗体であるＥｐｒａｔｕｚａｍａｂ（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．，ＮＪ ａｎｄ Ａｍｇｅｎ，ＣＡ）；ならびに大腸癌の治療に用いるヒト化抗−ＣＥＡ抗体であるＣＥＡｃｉｄｅ（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，ＮＪ）が含まれる。

【0080】

癌の治療に有用な他の抗体には、限定はされないが、以下の抗原（括弧内に例示の癌が示されている）:ＣＡ１２５（卵巣癌）、ＣＡ１５−３（癌種（carcinoma））、ＣＡ１９−９（癌種）、Ｌ６（癌種）、Ｌｅｗｉｓ Ｙ（癌種）、Ｌｅｗｉｓ Ｘ（癌種）、α−フェトプロテイン（癌種）、ＣＡ ２４２（大腸癌）、胎盤性アルカリフォスファターゼ（placental alkaline phosphatase）（癌種）、前立腺特異的膜抗原（prostate specific membrane antigen）（前立腺癌）、前立腺酸性フォスファターゼ（prostatic acid phosphatase）（前立腺癌）、上皮成長因子（癌種）、ＭＡＧＥ−１（癌種）、ＭＡＧＥ−２（癌種）、ＭＡＧＥ−３（癌種）、ＭＡＧＥ−４（癌種）、抗トランスフェリンレセプター（癌種）、ｐ９７（メラノーマ）、ＭＵＣ１−ＫＬＨ（乳癌）、ＣＥＡ（大腸癌）、ｇｐ１００（メラノーマ）、ＭＡＲＴ１（メラノーマ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）（前立腺癌）、ＩＬ−２レセプター（Ｔ細胞白血病およびリンパ種）、ＣＤ２０（非ホジキンリンパ腫）、ＣＤ５２（白血病）、ＣＤ３３（白血病）、ＣＤ２２（リンパ種）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（癌種）、ＣＤ３８（多発性骨髄腫）、ＣＤ４０（リンパ種）、ムチン（癌種）、Ｐ２１（癌種）、ＭＰＧ（メラノーマ）、およびＮｅｕ癌遺伝子産物（oncogene product）（癌種）に対する抗体が含まれる。ある特定の有用な抗体には、限定はされないが、ＢＲ９６ ｍＡｂ（Trail et al., 1993, Science 261:212-215）、ＢＲ６４（Trail et al., 1997, Cancer Research 57:100-105）、Ｓ２Ｃ６ｍＡｂのようなＣＤ４０抗原に対するｍＡｂｓ（Francisco et al., 2000, Cancer Res. 60:3225-3231）とそのキメラ型およびヒト化変異体、ｃＤ３３抗原に対するｍＡｂｓ；ＥｐｈＡ２抗原に対するｍａｂｓ；１Ｆ６ ｍＡｂおよび２Ｆ２ｍＡｂのようなＣＤ７０抗原に対するｍＡｂｓとそのキメラ型およびヒト化変異体、ＡＣ１０のようなＣＤ３０抗原に対するｍＡｂｓ（Bowen et al., 1993, J. Immunol. 151:5896-5906; Wahl et al., 2002, Cancer Res. 62(13):3736-42）とそのキメラ型およびヒト化変異体が含まれる。その他多くの腫瘍関連抗原に結合するインターナライジング抗体が利用可能であり、かつすでに評価されている（例えばFranke et al., 2000, Cancer Biother. Radiopharm. 15:459 76; Murray, 2000, Semin. Oncol. 27:64 70; Breitling et al., Recombinant Antibodies, John Wiley, and Sons, New York, 1998参照）。

【0081】

いくつかの実施形態では、自己免疫疾患の治療または予防に用いられる公知の抗体が、本発明の組成および方法に基づいて用いられる。自己免疫性抗体の産生を担う細胞の抗原に免疫特異的な抗体は、市販品もしくはその他のソースから得るか、または例えば化学合成もしくは組換え発現技術のような当業者に知られた任意の方法により作製することが可能である。

【0082】

いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、抗核抗体；抗−ｄｓ ＤＮＡ；抗−ｓｓ ＤＮＡ、抗−カルジオリピン抗体ＩｇＭ、ＩｇＧ；抗−リン脂質抗体ＩｇＭ、ＩｇＧ；抗−ＳＭ抗体；抗−ミトコンドリア抗体；甲状腺抗体；ミクロソーム抗体；サイログロブリン抗体；抗−ＳＣＬ７０；抗−Ｊｏ；抗−Ｕ１ ＲＮＰ；抗−Ｌａ／ＳＳＢ；抗−ＳＳＡ；抗−ＳＳＢ；抗−壁細胞（perital cell）抗体；抗−ヒストン；抗−ＲＮＰ；Ｃ ＡＮＣＡ；Ｐ ＡＮＣＡ；抗セントロメア；抗フィブリラリン、および抗−ＧＢＭ抗体のような、自己免疫疾患の治療に対して免疫特異的なものである。１実施形態において、リガンドは、自己免疫疾患に関連する活性化リンパ球に結合する。

【0083】

ある実施形態では、抗体は、標的細胞（例えば、活性化リンパ球）で発現するレセプターまたはレセプター複合体に結合することができる。レセプターまたはレセプター複合体は、免疫グロブリン遺伝子スーパーファミリーメンバー、ＴＮＦレセプタースーパーファミリーメンバー、インテグリン、サイトカインレセプター、ケモカインレセプター、主要組織適合タンパク質（major histocompatibility protein）、レクチンまたは補体制御タンパク質（complement control protein）を含み得る。適した免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーの限定されない例は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ７９、ＣＤ９０、ＣＤ１５２／ＣＴＬＡ ４、ＰＤ １、およびＩＣＯＳである。適したＴＮＦレセプタースーパーファミリーメンバーの限定されない例は、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ９５／Ｆａｓ、ＣＤ１３４／ＯＸ４０、ＣＤ１３７／４ １ＢＢ、ＴＮＦ Ｒ１、ＴＮＦＲ２、ＲＡＮＫ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、オステオプロテグリン、Ａｐｏ２／ＴＲＡＩＬ Ｒ１、ＴＲＡＩＬ Ｒ２、ＴＲＡＩＬ Ｒ３、ＴＲＡＩＬ Ｒ４、およびＡＰＯ ３である。適したインテグリンの限定されない例は、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１８、ＣＤ２９、ＣＤ４１、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ１０３、およびＣＤ１０４である。適したレクチンの限定されない例は、Ｃ型、Ｓ型、およびＩ型レクチンである。

【0084】

別の特定な実施形態において、ウイルスまたは微生物抗原に免疫特異的な有用なリガンドはモノクローナル抗体である。抗体は、キメラ、ヒト化またはヒトモノクローナル抗体であり得る。本明細書で使用される場合に、用語「ウイルス抗原」には、限定されないが、免疫応答を引き出し得る任意のウイルスペプチド、ポリペプチドタンパク質（例えば、ＨＩＶ ｇｐ１２０、ＨＩＶ ｎｅｆ、ＲＳＶ Ｆ糖タンパク質、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ、インフルエンザウイルスヘマグルチニン、ＨＴＬＶ ｔａｘ、単純ヘルペスウイルス糖タンパク質（例えば、ｇＢ、ｇＣ、ｇＤおよびｇＥ）ならびにＢ型肝炎表面抗原）が含まれる。本明細書で使用される場合に、用語「微生物抗原」には、限定はされないが、免疫応答を引き出し得る任意の微生物ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、単糖類、多糖類または脂質分子（例として、微生物、真菌、病原性原生動物、または酵母ポリペプチド、例えばＬＰＳおよび莢膜多糖類５／８など）が含まれる。

【0085】

ウイルスまたは微生物抗原に免疫特異的な抗体は、市販品、例えばＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（San Francisco, Calif.）、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（Temecula, Calif.）、もしくはＶｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Burlingame, Calif.）から入手するか、または例えば化学合成もしくは組換え発現技術のような当業者に知られた任意の方法により作製することが可能である。ウイルスまたは微生物抗原に免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋデータベースもしくはそれに類似するデータベース、文献刊行物から、または通常のクローニングおよびシークエンシングによって得ることができる。

【0086】

特定の実施形態において、有用なリガンドは、本明細書に開示された方法によるウイルスまたは微生物感染の治療または予防に有用なものである。ウイルス感染または微生物感染の治療に有用である利用可能な抗体の例には、限定されないが、ＲＳＶ感染患者の治療に有用なヒト化抗−呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）モノクローナル抗体であるＳＹＮＡＧＩＳ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ，Ｉｎｃ．，ＭＤ）；ＨＩＶ感染の治療に有用なＣＤ４融合抗体であるＰＲＯ５４２（Ｐｒｏｇｅｎｉｃｓ）；Ｂ型肝炎ウイルスの治療に有用なヒト抗体であるＯＳＴＡＶＩＲ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）；サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の治療に有用なヒト化ＩｇＧ１抗体であるＰＲＯＴＯＶＩＲ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）；および抗−ＬＰＳ抗体が含まれる。

【0087】

感染症の治療に有用な他の抗体には、限定されないが、細菌（例えば、化膿レンサ球菌（Streptococcus pyogenes）、肺炎レンサ球菌（Streptococcus pneumoniae）、淋菌（Neisseria gonorrheae）、髄膜炎菌（Neisseria meningitidis）、ジフテリア菌（Corynebacterium diphtheriae）、ボツリヌス菌（Clostridium botulinum）、ウェルシュ菌（Clostridium perfringens）、破傷風菌（Clostridium tetani）、インフルエンザ菌（Hemophilus influenzae）、クレブシエラ肺炎桿菌（Klebsiella pneumoniae）、クレブシエラオツェーナ（Klebsiella ozaenas）、クレブシエラリノシェレロモーティス（Klebsiella rhinoscleromotis）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、コレラ菌（Vibrio colerae）、大腸菌（Escherichia coil）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、カンピロバクター（ビブリオ）フィータス（Campylobacter（Vibrio）fetus）、アエロモナスハイドロフィラ（Aeromonas hydrophila）、セレウス菌（Bacillus cereus）、エドワードシエラタルダ（Edwardsiella tarda）、エンテロコリチカ菌（Yersinia enterocolitica）、ペスト菌（Yersinia pestis）、仮性結核菌（Yersinia pseudotuberculosis）、志賀赤痢菌（Shigella dysenteriae）、フレキシネル菌（Shigella flexneri）、ソンネ赤痢菌（Shigella sonnei）、ネズミチフス菌（Salmonella typhimurium）、梅毒トレポネーマ（Treponema pallidum）、フランベジアトレポネーマ（Treponema pertenue）、トレポネーマカラテネウム（Treponema carateneum）、ヴァンサンボレリア（Borrelia vincentii）、ボレリアブルグドルフェリ（Borrelia burgdorferi）、黄疸出血病レプトスピラ（Leptospira icterohemorrhagiae）、結核菌（Mycobacterium tuberculosis）、ニューモシスチスカリニ（Pneumocystis carinii）、野兎病菌（Francisella tularensis）、ウシ流産菌（Brucella abortus）、ブタ流産菌（Brucella suis）、マルタ熱菌（Brucella melitensis）、マイコプラズマ属の種（Mycoplasma spp.）、発疹チフスリケッチア（Rickettsia prowazeki）、リケッチアツツグムシ（Rickettsia tsutsugumushi）、クラミジア属の種（Chlamydia spp.））;病原菌（例えばコクシジオイデスイミチス（Coccidioides immitis）、アスペルギルスフミガーツフ（Aspergillus fumigatus）、カンジダアルビカンス（Candida albicans）、ブラストミセスデルマティティディス（Blastomyces dermatitidis）、クリプトコッカスネオフォルマンス（Cryptococcus neoformans）、ヒストプラズマカプスラーツム（Histoplasma capsulatum））;原生動物（赤痢アメーバ（Entomoeba histolytica）、トキソプラズマ原虫（Toxoplasma gondii）、口腔トリコモナス（Trichomonas tenas）、腸トリコモナス（Trichomonas hominis）、膣トリコモナス（Trichomonas vaginalis）、ガンビアトリパノソーマ（Tryoanosoma gambiense）、ローデシアトリパノソーマ（Trypanosoma rhodesiense）、クルーズトリパノソーマ（Trypanosoma cruzi）、ドノバンリーシュマニア（Leishmania donovani）、熱帯リーシュマニア（Leishmania tropica）、ブラジルリーシュマニア（Leishmania braziliensis）、ニューモシスティス性肺炎（Pneumocystis pneumonia）、三日熱マラリア原虫（Plasmodium vivax）、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）、四日熱マラリア原虫（Plasmodium malaria））;または蠕虫（蟯虫（Enterobius vermicularis）、ヒト鞭虫（Trichuris trichiura）、回虫（Ascaris lumbricoides）、トリヒナ（Trichinella spiralis）、糞線虫（Strongyloides stercoralis）、日本住血吸虫（Schistosoma japonicum）、マンソン住血吸虫（Schistosoma mansoni）、ビルハルツ住血吸虫（Schistosoma haematobium）、および十二指腸虫（hookworms））の病原株に由来する抗原に対する抗体が含まれる。

【0088】

ウイルス性疾患の治療のための本発明における有用な他の抗体には、限定されないが、限定しない例として：ポックスウイルス科（Poxyiridae）、ヘルペスウイルス科（Herpesviridae）、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、アデノウイルス科（Adenoviridae）、パポバウイルス科（Papovaviridae）、エンテロウイルス科（Enteroviridae）、ピコルナウイルス科（Picornaviridae）、パルボウイルス科（Parvoviridae）、レオウイルス科（Reoviridae）、レトロウイルス科（Retroviridae）、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎、はしか、呼吸器合胞体ウイルス、風疹、アルボウイルス科（Arboviridae）、ラブドウイルス科（Rhabdoviridae）、アレナウイルス科（Arenaviridae）、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、非Ａ／非Ｂ型肝炎ウイルス、ライノウイルス科（Rhinoviridae）、コロナウイルス科（Coronaviridae）、ロタウイルス科（Rotoviridae）、およびヒト免疫不全ウイルスを含む病原性ウイルスの抗原に対する抗体が含まれる。

【0089】

抗体はまた、標的細胞または標的細胞群上に存在する抗体であってもよい。例えば、膜貫通ポリペプチドおよび他のマーカーは、１つまたは複数の正常細胞（例えば非癌性細胞）に比べ、１つまたは複数の特定のタイプの標的細胞（例えば癌細胞）の表面で特異的に発現し得る。しばしば、かかるマーカーは、正常細胞の表面におけるそれらに比べ、標的細胞の表面でより多量に発現するか、またはより優れた免疫原性を示す。かかる細胞表面抗原ポリペプチドの同定は、抗体に基づく療法（antibody-based therapy）による破壊（destruction）のための、細胞に特異的にターゲティングする能力を生みだしてきた。よって、いくつかの実施形態では、抗体には、限定はされないが、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に対する抗体が含まれる。かかる腫瘍関連抗原は、従来技術において公知であり、かつ従来技術で周知である方法および情報を用いて作製し、抗体の生成に使用することができる。

【実施例】

【0090】

以下の実施例により本開示が詳細に説明される。実施例のうち、ＭＭＡＥ（周知の毒素）、アウリスタチンＦ（ＡＦ，周知の毒素）およびベドチン（vedotin）（周知のリンカー-毒素）は、Ｃｏｎｃｏｒｔｉｓ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓから購入した。Ｚ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＯＨ、Ｚ−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＯＨおよび各種糖アミノ酸は文献に基づいて合成した。

【0091】

リンカー、毒素、およびリンカー−毒素に用いた略語ならびにそれらの対応する化学構造が表１に挙げられている。

【0092】

【表1】

【0093】

＜毒素＞
実施例１
ＮＰＥＡ−ＡＦおよびＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化50】

【0094】

ＨＡＴＵ（１０１ｍｇ，０．２６５４ｍｍｏｌ）を、ＡＦ（１６５ｍｇ，０．２２１２ｍｍｏｌ）、４−ニトロフェネチルアミン塩酸塩（4-nitrophenethylamine hydrochloride）（４５ｍｇ，０．２２１２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．１５５ｍＬ，０．８８４７ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（０．１００ｍＬ）およびジクロロメタン（１ｍＬ）の撹拌溶液に加えた。室温で１２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取逆相（preparative reverse phase）ＨＰＬＣにより精製してから、凍結乾燥して、ＮＰＥＡ−ＡＦを白色粉末として得た（１８８ｍｇ，９５％）。ＬＣ−ＭＳ：ＮＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_４８Ｈ_７５Ｎ_７Ｏ_９） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝８９４．６，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝８９５．６。

【0095】

ＮＰＥＡ−ＡＦ（１８８ｍｇ，０．２１０３ｍｍｏｌ）をエタノール（５０ｍＬ）に溶解してから、ＨＣｌ（０．４２０６ｍｍｏｌ）およびパラジウム触媒（２２ｍｇ）と混合した。その混合物を水素雰囲気下で１６時間撹拌した。触媒を濾別し、２０ｍＬのエタノールで洗浄した。溶媒を減圧下で除去した。残留物を水（１０ｍＬ）と混合してから、凍結乾燥し、ＡＰＥＡ−ＡＦを白色粉末として得た（１７８ｍｇ，９８％）。ＬＣ−ＭＳ：ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_４８Ｈ_７７Ｎ_７Ｏ_９） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝８６４．６，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝８６５．５。

【0096】

実施例２
ＮＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦおよびＮＰＥＡ（ＣＯＯＨ）−ＡＦの合成

【化51】

【0097】

アウリスタチンＦ（２００ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ）を少量のＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解してから、ＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈した。その溶液を氷浴中に浸漬してから、Ｌ−（４−ニトロ）フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（６７ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１１７ｍｇ，０．３１ｍｍｏｌ）を入れた。ＤＩＰＥＡ（０．１８ｍＬ）を加えた後、その反応混合物を氷浴から取り出し、次いで室温で終夜撹拌した。減圧下で溶媒を蒸発させ、残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ入りの水中に４６％アセトニトリル）により精製し；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２５ｍＬ／ｍｉｎ）、ＮＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦを白色の固体として得た（１７５ｍｇ，７２％）。ＬＣ−ＭＳ：ＮＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦ（Ｃ_５０Ｈ_７７Ｎ_７Ｏ_１１） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝９５２．６，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝９５２．５。

【0098】

ＮＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦ（２０ｍｇ）をＴＨＦおよび水（１：１，１０ｍＬ）の混合物中に溶解してから、水酸化ナトリウム（２．５ｍｇ）で処理した。２時間後、減圧下でＴＨＦを蒸発させた。その水溶液を２Ｎ塩酸で酸性化してから、凍結乾燥させた。その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ入りの水中に４６％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）により精製して、ＮＰＥＡ（ＣＯＯＨ）−ＡＦを白色の固体として得た（１５ｍｇ，７５％）。ＬＣ−ＭＳ：ＮＰＥＡ（ＣＯＯＨ）−ＡＦ（Ｃ_４９Ｈ_７５Ｎ_７Ｏ_１１） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝９３８．６，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝９３９．３。

【0099】

実施例３
ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦおよびＡＰＥＡ（ＣＯＯＨ）−ＡＦの合成

【化52】

【0100】

ＮＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦ（１００ｍｇ，０．１０５ｍｍｏｌ）を２Ｎ塩酸（１５μＬ）を含有するエタノール（１０ｍＬ）中に溶解した。Ｐｄ／Ｃ（１０％，１７ｍｇ）を入れた後、その反応物に水素バルーンを適用し、終夜撹拌した。触媒Ｐｄ／Ｃをセライトのパッドで濾別してから、濾液を減圧下で蒸発させた。その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ入りの水中に３３％ＡＣＮ；ＵＶ ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製し、ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭＥ）−ＡＦを白色の固体として得た（３６ｍｇ）。ＬＣ−ＭＳ：ＮＰＥＡ（ＣＯＯＨ）−ＡＦ（Ｃ_５０Ｈ_７９Ｎ_７Ｏ_９） ｒｅｑｕｉｒｅｄ［ＭＨ^＋］＝９２２．６，ｆｏｕｎｄ［ＭＨ^＋］＝９２３．５。

【0101】

ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦ（２５ｍｇ）をＴＨＦおよび水の混合物（１：１，１０ｍＬ）中に溶解してから、水酸化ナトリウム（２．１ｍｇ）で処理した。２時間後、減圧下でＴＨＦを蒸発させた。その水溶液を２Ｎ塩酸で酸性化してから、凍結乾燥させた。その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ入りの水中に２９％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）により精製して、ＡＰＥＡ（ＣＯＯＨ）−ＡＦを白色の固体として得た（１４ｍｇ，５８％）。ＬＣ−ＭＳ：ＡＰＥＡ（ＣＯＯＨ）−ＡＦ（Ｃ_４９Ｈ_７７Ｎ_７Ｏ_９） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝９０８．６，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝９０９．５。

【0102】

実施例４
ＰＥＡ−ＡＮＦおよびＰＥＡ−ＡＡＦの合成

【化53】

【0103】

ジクロロメタン（２００ｍＬ）の入ったフラスコに、Ｂｏｃ−Ｌ−ｐ−ニトロフェニルアラニン（４．６６ｇ，１５ｍｍｏｌ）およびフェニルエチルアミン（１．９４ｇ，１６ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、カップリング剤Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ，１７ｇ，１７ｍｍｏｌ）をその溶液中に加え、その混合液を室温で終夜撹拌した。その反応をＴＬＣで確認した（ＥｔＯＡｃ／ｎ−Ｈｅｘ＝１：１、生成物のＲｆ＝０．５）。ＤＣＭを減圧下で蒸発させた。その固体生成物をｈ−ヘキサン（２００ｍＬ）で煮沸し、熱いうちに濾過した。その固体生成物を熱いｈ−ヘキサン（５０ｍＬ，２回）で洗浄し、吸引し乾燥させて、Ｂｏｃ−（ニトロ）Ｐｈｅ−ＰＥＡを灰色がかった白色の粉末として得た（４．８１ｇ，７７．６％）。

【0104】

Ｂｏｃ−（ニトロ）Ｐｈｅ−ＰＥＡ（４．８０ｇ，１１．６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５０ｍＬ）中に溶解してから、トリフルオロ酢酸（６．８４ｇ，４．６ｍＬ，６０ｍｍｏｌ）と混合した。その溶液を室温で終夜静置した。減圧下でジクロロメタンを蒸発させた。残留物をＴＨＦ（５０ｍＬ）と混合し、再び蒸発させた。その残留物を１Ｎ炭酸ナトリウム溶液（２５０ｍＬ）で処理してから、ジクロロメタン（１００ｍＬ，２回）で抽出した。その有機溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾別した。その濾液を減圧下で蒸発させ、淡黄色の残留物を、固体が形成されるまでｎ−ヘキサン（５０ｍＬ）と共に撹拌した。減圧下でｎ−ヘキサンを蒸発させ、最後に高真空下で生成物を乾燥させて、定量的な（quantitative）（ニトロ）Ｐｈｅ−ＰＥＡを得た。

【0105】

ドラプロリン（Dolaproline）カリウム塩（３２５ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中に溶解してから、テトラエチルアンモニウムブロミド（２３２ｍｇ，１．１ｍｍｏｌ）で処理した。３時間後、減圧下でＭｅＯＨを蒸発させた。残留物をジクロロメタン（１０ｍＬ）で処理してから、濾過してＫＢｒを取り除いた。その濾液を（ニトロ）Ｐｈｅ−ＰＥＡ（４２２ｍｇ，１．１ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（４５６ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）と混合した。室温で終夜撹拌した後、減圧下でジクロロメタンを蒸発させ、残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ入りの水中に７０％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２５ｍＬ／ｍｉｎ）で精製して、Ｂｏｃ−Ｄａｐ−（ニトロ）Ｐｈｅ−ＰＥＡを白色の固体として得た（５２７ｍｇ，収率９０％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｂｏｃ−Ｄａｐ−（Ｎｉｔｒｏ）Ｐｈｅ−ＰＥＡ（Ｃ_３１Ｈ_４２Ｎ_４Ｏ_７） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝５８３．３，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝５８４．４。

【0106】

Ｂｏｃ−Ｄａｐ−（ニトロ）Ｐｈｅ−ＰＥＡ（５２７ｍｇ，０．９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）中に溶解し、トリフルオロ酢酸（７ｍＬ）で処理した。４時間後、溶媒を減圧下で除去した。残留物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で処理し、再び蒸発させた。その残留物を水（２０ｍＬ）と混合し、凍結乾燥してＤａｐ−（ニトロ）Ｐｈｅ−ＰＥＡを白色粉末として得た（４２６ｍｇ，９８％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｄａｐ−（Ｎｉｔｒｏ）Ｐｈｅ−ＰＥＡ（Ｃ_２６Ｈ_３４Ｎ_４Ｏ_５） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝４８３．３，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝４８４．３。

【0107】

Ｄｏｖ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ（６４．５ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）、Ｄａｐ−（ニトロ）Ｐｈｅ−ＰＥＡ（７２ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（６８ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）中に溶解してから、ＤＩＰＥＡ（８６ｍｇ，０．６６ｍｍｏｌ）で処理した。室温で終夜撹拌した後、ジクロロメタンを減圧下で蒸発させ、残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ入りの水中に４３％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２５ｍＬ／ｍｉｎ）により精製し、ＰＥＡ−ＡＮＦを白色の固体として得た（９６．７ｍｇ，収率７２％）。ＬＣ−ＭＳ：ＰＥＡ−ＡＮＦ（Ｃ_４８Ｈ_７５Ｎ_７Ｏ_９） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝８９４．６，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝８９５．６。

【0108】

ＰＥＡ−ＡＮＦ（２０ｍｇ，０．０２２ｍｍｏｌ）をエタノール（３０ｍＬ）中に溶解してから、ＨＣｌ（０．０６７ｍｍｏｌ）と混合した。触媒量の１０％Ｐｄ／Ｃ（１６ｍｇ）を加えた後、その反応混合物に水素バルーンを適用し、終夜撹拌した。触媒をセライトのパッドで濾別してから、濾液を減圧下で蒸発させて、ＰＥＡ−ＡＡＦを白色の固体として得た（２４．２ｍｇ，５１％）。ＬＣ−ＭＳ：ＰＥＡ−ＡＡＦ（Ｃ_４８Ｈ_７７Ｎ_７Ｏ_７） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝８６４．６，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝８６５．６。

【0109】

実施例５
３ＡＱ−ＡＮＦおよび３ＡＱ−ＡＡＦの合成

【化54】

【0110】

Ｂｏｃ−（ニトロ）Ｐｈｅ（４６．５５ｇ，０．１５ｍｏｌ）をジクロロメタン（１Ｌ）中に溶解してから、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１７．２６ｇ，０．１５ｍｏｌ）およびＥＤＣＩ（２８．７６ｇ，０．１５ｍｏｌ）をそのジクロロメタン溶液中に入れた。４時間後、３ＡＱ（２１．６３ｇ，０．１５ｍｏｌ）およびエチルモルホリン（１７．２８ｇ，０．１５ｍｏｌ）をそのジクロロメタン溶液に入れ、室温で３日間撹拌した。減圧下でジクロロメタンを蒸発させた。その残留物をクエン酸溶液（１Ｍ，５００ｍＬ）および酢酸エチル（５００ｍＬ）と共に３０分撹拌した。その固体生成物を濾別し、水（２００ｍＬ，２回）で洗浄した。その湿った粗生成物を熱いアセトン（１．５Ｌ）中に溶解し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。その濾液を減圧下で蒸発させて、Ｂｏｃ−（ニトロ）Ｐｈｅ−３ＡＱ（３１．５２，４８．１％）を得た。

【0111】

Ｂｏｃ−（ニトロ）Ｐｈｅ−３ＡＱ（３０．５５ｇ，０．０７ｍｏｌ）をジクロロメタン（３００ｍＬ）中に溶解してから、トリフルオロ酢酸（５０ｍＬ，７４．４５ｇ，６５３ｍｍｏｌ）で処理した。室温で終夜撹拌した後、その反応混合物を減圧下で蒸発させた。酢酸エチル（１００ｍＬ）をその油状の残留物に加えてから、減圧下で蒸発させた。この手順をさらに２回繰り返してから、ジエチルエーテル（３００ｍＬ）をその油状生成物に加えて、トリフルオロ酢酸塩を析出させた（crash out）。その固体生成物を炭酸ナトリウム溶液（１Ｍ，５００ｍＬ）とメタノール（５００ｍＬ）の混合物中に懸濁させ、十分に懸濁するまで撹拌した。減圧下でメタノールを蒸発させてから、その固体生成物を濾別し、水（２００ｍＬ、２回）で洗浄した。次いで、その湿った生成物を凍結乾燥し、（ニトロ）Ｐｈｅ−３ＡＱ（２０．３５ｇ，８６．４％）を得た。

【0112】

ドラプロリン（Dolaproline）カリウム塩（４８７．５ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中に溶解してから、テトラエチルアンモニウムブロミド（３１６．４ｍｇ，１．４ｍｍｏｌ）で処理した。４時間後、ＭｅＯＨを減圧下で蒸発させた。その残留物をジクロロメタン（１０ｍＬ）で処理してから、濾過してＫＢｒを取り除いた。その濾液を（ニトロ）Ｐｈｅ−３ＡＱ（５５６ｍｇ，１．６５ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（６８５ｍｇ，１．８ｍｍｏｌ）と混合した。室温で終夜撹拌した後、減圧下でジクロロメタンを蒸発させ、残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ入りの水中に４２％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製し、Ｂｏｃ−Ｄａｐ−（ニトロ）Ｐｈｅ−３ＡＱを白色の固体として得た（７８１ｍｇ，収率８６％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｂｏｃ−Ｄａｐ−（Ｎｉｔｒｏ）Ｐｈｅ−３ＡＱ（Ｃ_３２Ｈ_３９Ｎ_５Ｏ_７） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝６０６．３，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝６０７．４。

【0113】

Ｂｏｃ−Ｄａｐ−（ニトロ）Ｐｈｅ−３ＡＱ（６０６ｍｇ，１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）中に溶解し、トリフルオロ酢酸（６ｍＬ）で処理した。２時間後、減圧下で溶媒を蒸発させた。その残留物を酢酸エチル（５０ｍＬ）と混合し、再び蒸発させた。その残留物を水（２０ｍＬ）と混合し、冷凍乾燥してＤａｐ−（ニトロ）Ｐｈｅ−３ＡＱを白色粉末として得た（５００ｍｇ，９９％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｄａｐ−（Ｎｉｔｒｏ）Ｐｈｅ−３ＡＱ（Ｃ_２７Ｈ_３１Ｎ_５Ｏ_５） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝５０６．２，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝５０７．１。

【0114】

Ｄｏｖ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ（２００ｍｇ，０．４６６ｍｍｏｌ）、Ｄａｐ−（ニトロ）Ｐｈｅ−３ＡＱ（２３６ｍｇ，０．４６６ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２１３ｍｇ，０．５６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍＬ）中に溶解してから、ＤＩＰＥＡ（２６７ｍｇ，２．０５ｍｍｏｌ）で処理した。室温で終夜撹拌した後、ジクロロメタンを減圧下で蒸発させ、その残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ入りの水中に４３％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２５ｍＬ／ｍｉｎ）で精製し、３ＡＱ−ＡＮＦを白色の固体として得た（３４５．２ｍｇ，収率８２％）。ＬＣ−ＭＳ：３ＡＱ−ＡＮＦ（Ｃ_４９Ｈ_７２Ｎ_８Ｏ_９） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝９１７．５，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝９１８．５。

【0115】

３ＡＱ−ＡＮＦ（１０５ｍｇ，０．１１４ｍｍｏｌ）をエタノール（３０ｍＬ）中に溶解した。触媒量の１０％Ｐｄ／Ｃ（１０ｍｇ）を加えた後、その反応混合物に水素バルーンを適用し、４時間撹拌した。触媒をセライトのパッドで濾別した後、その濾液を減圧下で蒸発させた。次いで、その残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ入りの水中に３６％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３ラム３０＊２５０ｍｍ；流量２５ｍＬ／ｍｉｎ）で精製した。３ＡＱ−ＡＮＦを含有するそのフラクションを減圧下で蒸発させてアセトニトリルを取り除いた。その酸性水溶液を炭酸ナトリウムで塩基性化してから、濾過して３ＡＱ−ＡＮＦ（８０ｍｇ，７９％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：３ＡＱ−ＡＮＦ（Ｃ_４９Ｈ_７４Ｎ_８Ｏ_７） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝８８７．６，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝８８８．５。

【0116】

＜糖アミノ酸＞
実施例６
糖アミノ酸１（ＳＡＡ１）および糖アミノ酸２（ＳＡＡ２）の誘導体の合成

【化55】

【0117】

リボース（ribose）誘導体Ｎ３−ＳＡＡ１（Ｘ）−ＯＭｅ（３．６ｇ）をメタノール中に溶解した。触媒量のＰｄ／Ｃを加えた後、水素バルーンをその反応混合物に適用し、終夜撹拌した。その触媒をセライトのパッドで濾別し、メタノールを減圧下で蒸発させて、ＳＡＡ１（Ｘ）−ＯＭｅを淡黄色の液体として得た（３．１４ｇ）。

【0118】

ＳＡＡ１（Ｘ）−ＯＭｅ（８．７２ｇ）の入ったＤＣＭ（３００ｍＬ）の溶液にＺ−ＯＳｕ（９．７５ｇ）およびＤＩＰＥＡ（６．８ｍＬ）を加えた。１７時間後、その反応混合物を１Ｎ 炭酸ナトリウムで洗浄した。その有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下でジクロロメタンを蒸発させて、粗生成物Ｚ−ＳＡＡ１（Ｘ）−ＯＭｅを茶色の液体として得た（１３．６ｇ）。

【0119】

その粗生成物Ｚ−ＳＡＡ１（Ｘ）−ＯＭｅ（１ｇ）をＴＨＦ（５０ｍＬ）中に溶解してから、１Ｎ ＫＯＨ（６ｍＬ）で処理した。３時間後、減圧下でＴＨＦを蒸発させた。その粗生成物水溶液をＤＣＭ（１００ｍＬ）と混合してから、ｐＨが約３〜４に達するまでクエン酸溶液で注意深く酸性化した。その有機溶液を水で数回洗浄してから、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ジクロロメタンの除去後、その粗生成物液体を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ入りの水中に４５％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ５００ｍｍ；流量５５ｍＬ／ｍｉｎ；Ｚ−ＳＡＡ１（Ｘ）−ＯＨ ＲＴ １１ｍｉｎ；Ｚ−ＳＡＡ２（Ｘ）−ＯＨ ＲＴ １２ｍｉｎ）で精製した。Ｚ−ＳＡＡ１（Ｘ）−ＯＨおよびＺ−ＳＡＡ２（Ｘ）−ＯＨ溶液を収集した後、速やかに塩基性化した。アセトニトリルの除去後、Ｚ−ＳＡＡ１（Ｘ）−ＯＨおよびＺ−ＳＡＡ２（Ｘ）−ＯＨの水溶液をジクロロメタンと混合し、次いでクエン酸溶液でｐＨが約３〜４に達するまで注意深く酸性化した。Ｚ−ＳＡＡ１（Ｘ）−ＯＨおよびＺ−ＳＡＡ２（Ｘ）−ＯＨ溶液の両方をジクロロメタンで抽出し、その有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ジクロロメタンの除去後、４１６ｍｇのＺ−ＳＡＡ１（Ｘ）−ＯＨおよび１０４ｍｇのＺ−ＳＡＡ２（Ｘ）−ＯＨを半固体として得た。

【0120】

＜中間体＞
実施例７
Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化56】

【0121】

Ｚ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ（１６．３４ｇ，４０ｍｍｏｌ）およびＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（５．９１ｇ，２５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１．５Ｌ）およびイソプロパノール（０．５Ｌ）の混合物中に入れ、３時間撹拌し、続いてＥＥＤＱ（９．８９ｇ，４０ｍｍｏｌ）を加えた。その混濁液を室温で撹拌した。その生成物の析出のために、未溶解のＺ−Ｖａｌ−Ｃｉｔが徐々になくなっていき、１日後、溶液は次第に濁った。４８時間後、ＨＰＬＣでチェックすると、反応は完了していた。厚いペーストが形成されるまでその反応混合物を減圧下で蒸発させた。その混合物を濾別し、イソプロパノール（４００ｍＬ，２回）および水（４００ｍＬ，２回）で洗浄した。その固体生成物を水（８００ｍＬ）中に懸濁させ、凍結乾燥してＺ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃを白色粉末として得た（１６．６２ｇ．６１％）。

【0122】

Ｚ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（１８．８０ｇ，３０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２００ｍＬ）中に入れ、トリフルオロ酢酸（１５ｍＬ）で終夜処理した。減圧下でジクロロメタンを蒸発させた。酢酸エチル（１００ｍＬ）をその油状残留物に加えてから、減圧下で蒸発させた。この手順をさらに２回繰り返し、次いでジエチルエーテル（３００ｍＬ）をその油状生成物に加えて、トリフルオロ酢酸塩を析出させた。ジエチルエーテル溶液を捨てた。固体生成物を酢酸エチル（５００ｍＬ）と共に撹拌してから、濾過した。その固体生成物を炭酸ナトリウム溶液（１Ｍ，５００ｍＬ）中に懸濁させ、十分に懸濁するまでそれを撹拌した。その混合物を遠心分離してから、その上澄み液を捨てた。その固体を水（５００ｍＬ）中に再懸濁させて、遠心分離した。このプロセスを２回行った。その灰色がかった白色の湿った固体生成物を水（５００ｍＬ）中に再懸濁させて、凍結乾燥し、Ｚ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（９．８７ｇ，６３％）を得た。

【0123】

アウリスタチンＦ塩酸塩（６２６ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）およびジクロロメタン（１０ｍＬ）の混合物中に溶解した。Ｚ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（５０６ｍｇ，０．９６ｍｍｏｌ，１．２ｅｑ）およびＨＡＴＵ（３６５ｍｇ，０．９６ｍｍｏｌ，１．２ｅｑ）を加えた後、その反応混合物を氷浴中に浸漬し、続いてＤＩＰＥＡ（３５１ｍｇ，２．７２ｍｍｏｌ，３．４ｅｑ）を加えた。３０分後、氷浴を除き、その反応混合物を室温で終夜撹拌した。次いで、溶媒を減圧下で蒸発させ、その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ入りの水中４５％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２５ｍＬ／ｍｉｎ）で精製し、Ｚ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（５７４ｍｇ；５１％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｚ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_６７Ｈ_１０３Ｎ_１１Ｏ_１２）ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１２５４．８，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１２５６．１。

【0124】

Ｚ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（５０２ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）を、２Ｎ塩酸（６３０μＬ）を含有するエタノール（３０ｍＬ）中に溶解した。Ｐｄ／Ｃ（１０％，３０ｍｇ）を入れた後、その反応混合物に水素バルーンを適用し、終夜撹拌した。触媒Ｐｄ／Ｃをセライトのパッドで濾別し、その濾液を減圧下で蒸発させた。その生成物を水（１０ｍＬ）と混合し、凍結乾燥して、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（４２０ｍｇ，８３％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_５９Ｈ_９７Ｎ_１１Ｏ_１０） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１１２１．５，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１１２１．５。

【0125】

＜リンカー−毒素＞
実施例８
ＭＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化57】

【0126】

Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（６５ｍｇ）およびＭＣ−ＯＰＦＰ（５０ｍｇ）をＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解してから、ＤＩＰＥＡ（０．０２３ｍＬ）を加えた。５時間後、ＤＭＦおよびＤＩＰＥＡを減圧下で除去した。次いで、その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ入りの水中に５０％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム５０ｘ５００ｍｍ；流量８０ｍＬ／ｍｉｎ；ＲＴ１３．６０ｍｉｎ）で精製し、ＭＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃを白色の固体として得た（４０ｍｇ）。ＬＣ−ＭＳ：８８（Ｃ_３４Ｈ_５１Ｎ_７Ｏ_８） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝６８６．４，
ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝６８７．３。

【0127】

ＭＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（４０ｍｇ）の入ったＤＣＭ（５ｍＬ）を室温下ＴＦＡ（３００Ｌ）で処理した。１７時間後、ＤＣＭおよびＴＦＡを減圧下で除去し、ＭＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡを淡黄色の固体として得た（４６ｍｇ）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（Ｃ_２９Ｈ_４３Ｎ_７Ｏ_６） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝５８６．３，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝５８６．７。

【0128】

ＭＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（３７ｍｇ）およびアウリスタチンＦ（４７ｍｇ）をＤＣＭおよびＤＭＦの混合物（１０：１，３．７ｍＬ）中に溶解した。次いで、ＨＢＴＵ（３７ｍｇ）およびＤＩＰＥＡ（０．０３７ｍＬ）を加えた。１７時間後、ＤＣＭおよびＤＭＦを減圧下で除去し、その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ入りの水中に４０％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２５ｍＬ／ｍｉｎ；ＲＴ１４ｍｉｎ）により精製して、ＭＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（９ｍｇ）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_７０Ｈ_１０９Ｎ_１１Ｏ_１３） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１３１２．８，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１３１５．２。

【0129】

実施例９
ＭＣ−ＳＡＡ１−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化58】

【0130】

Ｚ−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ（９．１３ｇ，２０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（７５０ｍＬ）およびイソプロパノール（２５０ｍＬ）の混合物中に入れてから、ジペプチドが完全に溶解するまで撹拌した。次いで、ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（７．０９ｇ，３０ｍｍｏｌ）およびＥＥＤＱ（７．４２ｇ，３０ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を室温で３日間撹拌した。減圧下で溶媒を除去してから、ジエチルエーテル（３００ｍＬ）をその残留物に加えた。その混合物を濾別し、その粗生成物をジエチルエーテル（３００ｍＬ）中に再懸濁させた。この手順を３回繰り返した。最後に、収集された固体生成物を真空下で乾燥し、Ｚ−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃを得た（９．５３ｇ、収率７０．６％）。その生成物をＰＭＲにより特性決定した。

【0131】

Ｚ−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（２．０２ｇ，３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２５０ｍＬ）およびメタノール（５０ｍＬ）の混合物中に溶解した。触媒量のＰｄ／Ｃ（１０％）を加えた後、その反応混合物に水素バルーンを適用し、終夜撹拌した。触媒をセライトのパッドで濾別した後、その濾液を減圧下で蒸発させ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃを白色の固体として得た（１．６１ｇ，９９％）。

【0132】

Ｎ３−ＳＡＡ１（Ｘ）−ＯＨ（６３３ｍｇ）およびＰｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（１．３３ｇ）の入ったＤＣＭおよびＤＭＦの混合物（１０：１，１１０ｍＬ）の溶液に、ＨＢＴＵ（１．１１８ｇ）およびＤＩＰＥＡ（１．０２ｍＬ）を加えた。１７時間後、減圧下でＤＣＭを除去した。水およびジエチルエーテルを残っている粗生成物ＤＭＦ溶液に加え、濾過した後にベージュ色の固体を得た。その固体を濃クエン酸水溶液で数回洗浄し、大部分のＨＯＢｔおよびＤＭＦを除去した。最後に、Ｎ３−ＳＡＡ１（Ｘ）−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃを分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ入りの水中に５０％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ）で精製した。アセトニトリルを減圧下で蒸発させ、残りの水溶液を凍結乾燥した。Ｎ３−ＳＡＡ１（Ｘ）−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＢｏｃおよびＮ３−ＳＡＡ１−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃからなる白色の固体を得た（１ｇ）。ＬＣ−ＭＳ：Ｎ３−ＳＡＡ１（Ｘ）−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（Ｃ_３８Ｈ_５３Ｎ_９Ｏ_９） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝７８０．９，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝７８１．８； Ｎ３−ＳＡＡ１−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（Ｃ_３５Ｈ_４９Ｎ_９Ｏ_９） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝７４０．８，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝７４１．７。

【0133】

Ｎ３−ＳＡＡ１（Ｘ）−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＢｏｃおよびＮ３−ＳＡＡ１−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃの混合物（１００ｍｇ）をメタノール（５０ｍＬ）中に溶解した。触媒量のＰｄ／Ｃ（１０％）を加えた後、その反応混合物に水素バルーンを適用し、終夜撹拌した。触媒をセライトのパッドで濾別した後、減圧下でメタノールを除去し、ＳＡＡ１（Ｘ）−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＢｏｃおよびＳＡＡ１−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃからなる白色の固体を得た（７８ｍｇ）。

【0134】

ＳＡＡ１（Ｘ）−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＢｏｃおよびＳＡＡ１−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（２１０ｍｇ）の入ったＭｅＯＨ（５０ｍＬ）の溶液にＭＣ−ＯＰＦＰ（１０３ｍｇ）を加え、続いてＤＩＰＥＡ（０．０４７ｍＬ）を加えた。１７時間後、その反応混合物を濃縮した。その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ入りの水中に５０％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ５００ｍｍ；流量４０ｍＬ／ｍｉｎ）により精製し、ＭＣ−ＳＡＡ１（Ｘ）−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＢｏｃおよびＭＣ−ＳＡＡ１−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃの溶液を得た。

【0135】

ＭＣ−ＳＡＡ１（Ｘ）−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＢｏｃおよびＭＣ−ＳＡＡ１−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃの溶液を濃塩酸（１０ｅｑ．）で処理した。その反応を、加水分解が完了するまで分析ＨＰＬＣで観察した。アセトニトリルを減圧下で除去し、水溶液を凍結乾燥した後に、固体のＭＣ−ＳＡＡ１−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡを得た。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−ＳＡＡ１−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（Ｃ_４０Ｈ_５４Ｎ_８Ｏ_１０） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝８０７．４，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝８０９．１。

【0136】

ＭＣ−ＳＡＡ１−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（１１０ｍｇ）をＤＣＭおよびＤＭＦの混合物（１０：１，１０ｍＬ）中に溶解してから、アウリスタチンＦ（９３ｍｇ）、ＨＢＴＵ（５５ｍｇ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０７７ｍＬ）をそれぞれ加えた。１７時間後、ＤＣＭ、ＤＭＦおよびＤＩＰＥＡを減圧下で除去した。その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３５％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ；流量４０ｍＬ／ｍｉｎ）で精製した。目的のフラクション中のアセトニトリルを減圧下で除去し、残りの水溶液を凍結乾燥して、ＭＨＴ−４７を白色の固体として得た（２０ｍｇ）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−ＳＡＡ１−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_８０Ｈ_１１９Ｎ_１３Ｏ_１７） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１５３４．９，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１５３８．０。

【0137】

実施例１０
ＭＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化59】

【0138】

Ｚ−ＳＡＡ１（Ｘ）−ＯＨ（２６．１ｍｇ）およびＶａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（８０ｍｇ）の入ったＤＣＭおよびＤＭＦの混合物（１０：１，４．４ｍＬ）の溶液に、ＨＢＴＵ（３２．５ｍｇ）およびＤＩＰＥＡ（０．０２９ｍＬ）をそれぞれ加えた。１８時間後、減圧下で溶媒を除去し、その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に４５％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ５００ｍｍ；流量６５ｍＬ／ｍｉｎ；ＲＴ１１ｍｉｎ）で精製した。アセトニトリルの除去後、その水溶液を、Ｚ−ＳＡＡ１（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦが完全にＺ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦに変わるまで終夜冷蔵庫に入れて置いた。次いで、その水溶液を凍結乾燥しＺ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（６３ｍｇ，２工程で収率６３％）。

【0139】

Ｚ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（６３ｍｇ）をメタノール（５ｍＬ）中に溶解し、続いてＰｄ／Ｃ触媒を加えた。次いで、その反応混合物に水素バルーンを適用し、３時間撹拌した。そのＰｄ／Ｃをセライトのパッドで濾別してから、その濾液を減圧下で蒸発させて、ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（５２．５ｍｇ）。

【0140】

ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（４０ｍｇ）およびＭＣ−ＯＰＦＰ（１１．６ｍｇ）の入ったメタノール（４ｍＬ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．００５６ｍＬ）を加えた。その反応物を終夜撹拌してから、減圧下で蒸発させた。その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３５％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ５００ｍｍ；流量７０ｍＬ／ｍｉｎ；ＲＴ１８ｍｉｎ）で精製して、ＭＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（ＭＨＴ−７１）を白色の固体として得た（２７ｍｇ；４７％）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_７６Ｈ_１２０Ｎ_１３Ｏ_１７） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１４８６．９，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１４８７．２。

【0141】

実施例１１
Ｃｌ２ＭＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化60】

【0142】

３，４−ジクロロ−フラン−２，５−ジオン（１０．３４ｇ，０．０６１９ｍｏｌ）を６−アミノカプロン酸（８．１３ｇ，０．０６１９）の入った氷酢酸（５０ｍＬ）と混合した。その混合物を１２時間還流させた。減圧下で溶媒を蒸発させた後、その残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥＡ／ヘキサン＝２／３）で精製し、Ｃｌ２ＭＣを白色粉末として得た（１２．４８ｇ，７２％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｃｌ２ＭＣ（Ｃ_１０Ｈ_１１Ｃｌ_２ＮＯ_４） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［Ｍ−ＣＯ２］＋ ＝２３５．０，ｆｏｕｎｄ ［Ｍ−ＣＯ２］＋ ＝２３５．０。

【0143】

Ｃｌ２ＭＣ（１．０６ｇ，３．８ｍｍｏｌ）およびペンタフルオロフェノール（０．８４ｇ，４．５ｍｍｏｌ）の入ったジクロロメタン（２５ｍＬ）の溶液にＤＣＣ（０．８３ｇ，４．０ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を室温で１２時間撹拌してから、濾過して不溶性のＤＣＵを除去した。その反応混合物を、体積が約１０ｍｌになるまで減圧下で蒸発させた。その溶液を４度の冷蔵庫に２時間保管した。その不溶性物質を濾別し、その濾液をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥＡ／ヘキサン＝１／３０から１／２０）で精製し、Ｃｌ２ＭＣ−ＯＰＦＰを白色の固体として得た（１．３９ｇ，８２％）。

【0144】

ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（５．０ｍｇ，０．００３９ｍｍｏｌ）およびＣｌ２ＭＣ−ＯＰＦＰ（２．０ｍｇ，０．００４６ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（１ｍＬ）の溶液にＤＩＰＥＡ（０．００２ｍＬ，０．０１１６ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を室温で１時間撹拌してから、減圧下で蒸発させた。その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３５％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ；流量２５ｍＬ／ｍｉｎ）で精製し、Ｃｌ２ＭＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（３．０ｍｇ；５０％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｃｌ２ＭＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_７６Ｈ_１１７Ｃｌ_２Ｎ_１３Ｏ_１７） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ ＝７７７．９，ｆｏｕｎｄ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ ＝７７９．４。

【0145】

実施例１２
Ｂｒ２ＭＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化61】

【0146】

３，４−ジブロモ−ピロール−２，５−ジオン（１．００ｇ，３．９２ｍｍｏｌ）およびＮ−メチルモルホリン（０．４３１ｍＬ，３．９２ｍｍｏｌ）の入ったＴＨＦ（３５ｍＬ）の溶液に、クロロギ酸メチル（０．３０３ｍＬ，３．９２ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を室温で３時間撹拌した。次いで、ジクロロメタン（４０ｍＬ）を加え、その有機相を水（４０ｍＬ，３回）で洗浄した。その有機溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥してから、減圧下で蒸発させ、３，４−ジブロモ−２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−カルボン酸メチルエステルをピンク色の粉末として得た（１．１３ｇ，９３％）。

【0147】

６−アミノカプロン酸（４７６．０ｍｇ，３．６ｍｍｏｌ）をアセトニトリルおよび水の混合液（３：２，５０ｍＬ）中に溶解した。その溶液を氷浴中で冷却してから、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（１ｍＬ）で処理し、続いて３，４−ジブロモ−２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−カルボン酸メチルエステル（１．１３ｇ，３．６ｍｍｏｌ）で処理した。その混合物を室温で１２時間撹拌した。次いで、クエン酸溶液でそのｐＨを３〜４に調整し、その混合物を減圧下で蒸発させてアセトニトリルを除去した。その残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥＡ／ヘキサン，２／３）で精製し、Ｂｒ２ＭＣを白色粉末として得た（１．３３ｇ，９９％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｂｒ２ＭＣ（Ｃ_１０Ｈ_１１Ｂｒ_２ＮＯ_４） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ＝３６９．９，ｆｏｕｎｄ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ＝３７１．０。

【0148】

Ｂｒ２ＭＣ（１．３３ｇ，３．８６ｍｍｏｌ）およびペンタフルオロフェノール（０．８０ｇ，４．３ｍｍｏｌ）の入ったジクロロメタン（４０ｍＬ）の溶液に、ＤＣＣ（０．７９ｇ，３．８ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を室温で１２時間撹拌してから、濾過して不溶性のＤＣＵを除去した。その反応混合物を、体積が約１０ｍｌになるまで減圧下で蒸発させた。その溶液を冷蔵庫に４度で２時間保管した。不溶性の物質を濾別し、その濾液をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥＡ／ヘキサン＝１／３０から１／２０）で精製して、Ｂｒ２ＭＣ−ＯＰＦＰを白色の固体として得た（１．５０ｇ，７８％）。

【0149】

ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（８．９ｍｇ，０．００６９ｍｍｏｌ）およびＢｒ２ＭＣ−ＯＰＦＰ（４．５ｍｇ，０．００８３ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（１ｍＬ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．００３６ｍＬ，０．０２０６ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を室温で１時間撹拌してから、減圧下で蒸発させた。その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３５％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ；流量２５ｍＬ／ｍｉｎ）で精製し、Ｂｒ２ＭＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（５．６ｍｇ；５０％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｂｒ２ＭＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_７６Ｈ_１１７Ｂｒ_２Ｎ_１３Ｏ_１７） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ＝１６４４．７，ｆｏｕｎｄ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ＝１６４５．１。

【0150】

実施例１３
ＭＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦの合成

【化62】

【0151】

Ｚ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＯＨ（３．２４ｇ，７．９３ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタンおよびメタノールの混合物（３：１，８０ｍＬ）中に加えた。ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−Ｂｏｃ（２．８ｇ，９．５２ｍｍｏｌ）を加えた後、カップリング試薬ＥＥＤＱ（２．４７ｇ，９．５２ｍｍｏｌ）を入れた。その混濁液を室温で撹拌した。未溶解のＺ−Ｖａｌ−Ｃｉｔが徐々に見えなくなり、溶液が次第に澄んできた。４８時間後、ＨＰＬＣで調べたときに反応は完全に完了していた。その反応混合物を、厚いペーストが形成されるまで減圧下で蒸発させた。その混合物を濾別し、ｎ−ヘキサン（５０ｍＬ，２回）、水（５０ｍＬ，２回）およびジエチルエーテル（５０ｍＬ，２回）で洗浄した。最後に、その固体生成物を真空下で乾燥しＺ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−Ｂｏｃを茶色の粉末として得た（７５．０ｍｇ，１．４％）。

【0152】

Ｚ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−Ｂｏｃ（７５．０ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（８ｍＬ）中に加えてから、室温下トリフルオロ酢酸（０．０９ｍＬ）で処理した。４時間後、減圧下で溶媒を蒸発させた。その残留物を水（１０ｍＬ）と混合し、凍結乾燥して、Ｚ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）を白色粉末として得た（９６．０ｍｇ）。

【0153】

アウリスタチンＦ（８０．０ｍｇ，０．１０２ｍｍｏｌ）を少量のＤＭＦ（１ｍＬ）中に溶解してから、ＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈した。その溶液を氷浴中に浸漬してから、Ｚ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）（７１．４ｍｇ，０．１０２ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（４３．０ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ）を入れた。ＤＩＰＥＡ（０．０７１ｍＬ）を加えた後、氷浴を取り除いた。その混合物を室温で４時間撹拌した後、減圧下で溶媒を蒸発させ、その残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に４３％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製して、Ｚ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦを白色の固体として得た（８２．０ｍｇ，６１％）。

【0154】

Ｚ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦ（８２．０ｍｇ，０．０６２ｍｍｏｌ）を、塩酸（０．２４ｍｍｏｌ）を含有するエタノール（１０ｍＬ）中に溶解した。Ｐｄ／Ｃ（１０％，１０ｍｇ）を入れた後、その反応混合物に水素バルーンを適用し、終夜撹拌した。触媒Ｐｄ／Ｃをセライトのパッドで濾別してから、その濾液を減圧下で蒸発させた。その残留物を水（１０ｍＬ）と混合し、凍結乾燥して、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦを白色粉末として得た（７２．８ｍｇ，９６％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦ（Ｃ_６１Ｈ_９９Ｎ_１１Ｏ_１２） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１１７８．８，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１１７９．７。

【0155】

Ｚ−ＳＡＡ１（Ｘ）−ＯＨ（２２．０ｍｇ，０．０６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）中に溶解した。ＨＡＴＵ（２５．３ｍｇ，０．０６６ｍｍｏｌ）を加えた後、その反応混合物を氷浴中に浸漬し、続いてＤＩＰＥＡ（０．０３２ｍＬ，０．０６ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、氷浴を取り除き、室温でＶａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦ（７２．８ｍｇ，０．０６ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（３ｍＬ）の溶液をその反応混合物に加えた。３時間後、減圧下で溶媒を蒸発させ、その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に４５％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製した。アセトニトリルの除去後、その水溶液を室温で終夜置いて、Ｚ−ＳＡＡ１（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦを完全に加水分解させた。次いで、その水溶液を凍結乾燥し、Ｚ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦを白色の固体として得た（４３．５ｍｇ，２工程で収率４９％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｚ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦ（Ｃ_７９Ｈ_１２０Ｎ_１２Ｏ_１８） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１５２５．９，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１５２６．８。

【0156】

Ｚ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦ（４３．５ｍｇ，０．０２９ｍｍｏｌ）を、塩酸（０．０６ｍｍｏｌ）を含有するエタノール（５ｍＬ）中に溶解した。Ｐｄ／Ｃ（１０％，４．７ｍｇ）を入れた後、その反応混合物に水素バルーンを適用し、終夜撹拌した。触媒Ｐｄ／Ｃをセライトのパッドで濾別してから、その濾液を減圧下で蒸発させた。その残留物を水（５ｍＬ）と混合し、凍結乾燥してＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦを白色粉末として得た（３８．４ｍｇ，９４％）。

【0157】

ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦ（１５．０ｍｇ，０．０１１ｍｍｏｌ）およびＭＣ−ＯＰＦＰ（４．５ｍｇ，０．０１２ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（４ｍＬ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．００４ｍＬ）を加えた。その混合物を室温で１時間撹拌してから、減圧下で蒸発させた。その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３６％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）により精製して、ＭＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦを白色の固体として得た（１０．０ｍｇ；６０％）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦ（Ｃ_７８Ｈ_１２１Ｎ_１３Ｏ_１９） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１５４４．９，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１５４５．８。

【0158】

実施例１４
ＭＣ−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化63】

【0159】

Ｚ−ＳＡＡ１（Ｘ）−ＯＨ（２８．０ｍｇ，０．０７６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１ｍＬ）中に溶解した。ＨＡＴＵ（２３．４ｍｇ，０．０６１ｍｍｏｌ）を加えた後、その反応混合物を氷浴中に浸漬し、続いてＤＩＰＥＡ（７．９ｍｇ，０．０６１ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、氷浴を取り除き、室温でＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（７０．０ｍｇ，０．０５１ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（３ｍＬ）の溶液をその反応混合物に加えた。１時間後、減圧下で溶媒を蒸発させ、その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３９％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ；流量２５ｍＬ／ｍｉｎ）で精製した。アセトニトリルの除去後、その水溶液を室温で終夜置いて、Ｚ−ＳＡＡ１（Ｘ）−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを完全に加水分解させた。次いで、その水溶液を凍結乾燥し、Ｚ−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（６４ｍｇ，２工程で収率７８％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｚ−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_８１Ｈ_１２５Ｎ_１３Ｏ_２０） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１６０２．０，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１６０１．５。

【0160】

Ｚ−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（６４．０ｍｇ，０．０４２ｍｍｏｌ）を、塩酸（０．１３６ｍｍｏｌ）を含有するエタノール（２０ｍＬ）中に溶解した。Ｐｄ／Ｃ（１０％，６．５ｍｇ）を入れた後、その反応混合物に水素バルーンを適用し、終夜撹拌した。触媒Ｐｄ／Ｃをセライトのパッドで濾別してから、その濾液を減圧下で蒸発させた。その生成物を水（１０ｍＬ）と混合し、凍結乾燥してＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（６０．０ｍｇ，９７％）。ＬＣ−ＭＳ：ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_７３Ｈ_１１９Ｎ_１３Ｏ_１８） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１４６６．９，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１４６７．５。

【0161】

ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（３０．０ｍｇ，０．０１９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（７．４ｍｇ，０．０５７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍＬ）中に溶解した。その反応混合物を氷浴中に浸漬した後、ＭＣ−ＯＰＦＰ（９．０ｍｇ，０．０２３ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、氷浴を取り除き、その混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３３％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ；流量２５ｍＬ／ｍｉｎ）で精製し、ＭＣ−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（１８．５ｍｇ，５３％）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_８３Ｈ_１３０Ｎ_１４Ｏ_２１） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１６６０．０，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１６６０．７。

【0162】

実施例１５
Ｃｌ２ＭＣ−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化64】

【0163】

ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（３．０ｍｇ，０．０００６５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．００３ｍＬ，０．０１６４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）中に溶解した。その反応混合物を氷浴中に浸漬した後、Ｃｌ２ＭＣ−ＯＰＦＰ（３．０ｍｇ，０．００６５ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、氷浴を取り除き、その混合物を室温で１時間撹拌した。減圧下で溶媒を蒸発させ、その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３３％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ；流量２５ｍＬ／ｍｉｎ）で精製して、Ｃｌ２ＭＣ−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（２．８ｍｇ，３０％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｃｌ２ＭＣ−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_８３Ｈ_１２８Ｃｌ_２Ｎ_１４Ｏ_２１） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ＝１７２７．９，ｆｏｕｎｄ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ＝１７２９．６。

【0164】

実施例１６
Ｃｌ２ＭＣ−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化65】

【0165】

Ｚ−ＳＡＡ１（Ｘ）−ＯＨ（０．２２１ｇ，０．６０４８ｍｍｏｌ）およびペンタフルオロフェノール（０．１３４ｇ，０．７２５８ｍｍｏｌ）の入ったジクロロメタン（２０ｍＬ）の溶液に、ＤＣＣ（０．１３３ｇ，０．６４１１ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を室温で１２時間撹拌してから、濾過して不溶性のＤＣＵを除去した。その反応混合物を、体積が約１０ｍｌになるまで減圧下で蒸発させた。その溶液を冷蔵庫に４度で２時間保管した。不溶性の物質を濾別し、その濾液をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥＡ／ヘキサン＝１／４から１／２）により精製して、Ｚ−ＳＡＡ１（Ｘ）−ＯＰＦＰを白色の固体として得た（０．２０１ｇ，６３％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｚ−ＳＡＡ１（Ｘ）−ＯＰＦＰ（Ｃ_２４Ｈ_２２Ｆ_５ＮＯ_７） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ＝５３２．１，ｆｏｕｎｄ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ＝５３３．１。

【0166】

ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（４．８ｍｇ，０．００９０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．００４ｍＬ，０．０２２５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）中に溶解した。その反応混合物を氷浴中に浸漬した後、Ｚ−ＳＡＡ１（Ｘ）−ＯＰＦＰ（４．８ｍｇ，０．００９ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、氷浴を取り除き、その混合物を室温で３時間撹拌した。減圧下で溶媒を蒸発させ、その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３３％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ；流量２５ｍＬ／ｍｉｎ）により精製した。アセトニトリルの除去後、その水溶液を室温で終夜置き、アセトニド基を加水分解した。その水溶液を凍結乾燥して、Ｚ−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（１３．０ｍｇ，２工程で収率９７％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｚ−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_８８Ｈ_１３６Ｎ_１４Ｏ_２４） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ＝１７７４．０，ｆｏｕｎｄ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ＝１７７４．９。

【0167】

Ｚ−ＳＡＡ１−ＳＡＡ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ［ＦＣＷ−０４３］（１３．０ｍｇ，０．００７５ｍｍｏｌ）を、塩酸（０．０１２６ｍｍｏｌ）を含有したエタノール（１０ｍＬ）中に溶解した。Ｐｄ／Ｃ（１０％，０．８ｍｇ）を入れた後、その反応混合物に水素バルーンを適用し、終夜撹拌した。触媒Ｐｄ／Ｃをセライトのパッドで濾別してから、その濾液を減圧下で蒸発させた。その生成物を水（５ｍＬ）と混合し、凍結乾燥して、ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（９．０ｍｇ，７５％）。ＬＣ−ＭＳ：ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_８０Ｈ_１３０Ｎ_１４Ｏ_２２） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ＝１６４０．０，ｆｏｕｎｄ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ＝１６４０．９。

【0168】

ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（５．０ｍｇ，０．００３１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．００２ｍＬ，０．００９２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）中に溶解した。その反応混合物を氷浴中に浸漬した後、Ｃｌ２ＭＣ−ＯＰＦＰ（２．０ｍｇ，０．００３７ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、氷浴を取り除き、その混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３３％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ；流量２５ｍＬ／ｍｉｎ）により精製して、Ｃｌ２ＭＣ−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（１．０ｍｇ，１７％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｃｌ２ＭＣ−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_９０Ｈ_１３９Ｃｌ_２Ｎ_１５Ｏ_２５） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ＝１９０１．０，ｆｏｕｎｄ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ＝１９０２．８。

【0169】

実施例１７
ＭＣ−ＳＡＡ３−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化66】

【0170】

Ｚ−ＳＡＡ３（Ｘ）−ＯＨ（１８．２ｍｇ，０．０５２ｍｍｏｌ）およびＶａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（６０．０ｍｇ，０．０５２ｍｍｏｌ）の入ったＤＣＭおよびＤＭＦの混合物（１０：１，６ｍＬ）の溶液に、ＨＡＴＵ（２２．０ｍｇ，０．０５７２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０２７ｍＬ，０．１５６ｍｍｏｌ）をそれぞれ加えた。１８時間後、溶媒を減圧下で除去し、その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に４３％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製した。アセトニトリルの除去後、アセトニド基が完全に除去されるまでその水溶液を室温で終夜静置した。その水溶液を凍結乾燥し、Ｚ−ＳＡＡ３−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（４８．０ｍｇ，２工程で収率６５％）。

【0171】

Ｚ−ＳＡＡ３−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（４８．０ｍｇ，０．０３４ｍｍｏｌ）を、塩酸（０．０１４ｍＬ）を含有するエタノール（５ｍＬ）中に溶解した。Ｐｄ／Ｃ（１０％，４．７ｍｇ）を入れた後、その反応混合物に水素バルーンを適用し、５時間撹拌した。触媒Ｐｄ／Ｃをセライトのパッドで濾別してから、その濾液を減圧下で蒸発させた。その生成物を水（５ｍＬ）と混合し、凍結乾燥して、ＳＡＡ３−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（４２．０ｍｇ，９４％）。

【0172】

ＳＡＡ３−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（２０．０ｍｇ，０．０１５ｍｍｏｌ）およびＭＣ−ＯＰＦＰ（６．３ｍｇ，０．０１６５ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（４ｍＬ）の溶液にＤＩＰＥＡ（０．００６ｍＬ）を加えた。その反応物を室温で１時間撹拌してから、減圧下で蒸発させた。その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３６％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）により精製し、ＭＣ−ＳＡＡ３−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（１２．２ｍｇ；５５％）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−ＳＡＡ３−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_７５Ｈ_１１７Ｎ_１３Ｏ_１７） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１４７３．８，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１４７３．６。

【0173】

実施例１８
ＭＣ−ＳＡＡ３−ＳＡＡ３−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化67】

【0174】

Ｚ−ＳＡＡ３（Ｘ）−ＯＨ（１４．５ｍｇ，０．０４１ｍｍｏｌ）およびＳＡＡ３−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（５４．５ｍｇ，０．０４１ｍｍｏｌ）の入ったＤＣＭおよびＤＭＦの混合物（１０：１，６ｍＬ）の溶液に、ＨＡＴＵ（１７．３ｍｇ，０．０４５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０２ｍＬ，０．１２３ｍｍｏｌ）をそれぞれ加えた。１８時間後、減圧下で溶媒を蒸発させ、その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に４１％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）により精製した。アセトニトリルの除去後、その水溶液を、ケタール基が完全に加水分解されるまで、室温で終夜静置した。その水溶液を凍結乾燥し、Ｚ−ＳＡＡ３−ＳＡＡ３−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（２１．３ｍｇ，２工程で収率３３％）。

【0175】

Ｚ−ＳＡＡ３−ＳＡＡ３−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（２１．３ｍｇ，０．０１３５ｍｍｏｌ）を、塩酸（０．０５２ｍｍｏｌ）を含有するエタノール（５ｍＬ）中に溶解した。Ｐｄ／Ｃ（１０％，２．５ｍｇ）を入れた後、その反応混合物に水素バルーンを適用し、５時間撹拌した。触媒Ｐｄ／Ｃをセライトのパッドで濾別してから、その濾液を減圧下で蒸発させた。その生成物を水（５ｍＬ）と混合し、凍結乾燥して、ＳＡＡ３−ＳＡＡ３−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（１６．１ｍｇ，８１％）。

【0176】

ＳＡＡ３−ＳＡＡ３−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（１６．１ｍｇ，０．０１０９ｍｍｏｌ）およびＭＣ−ＯＰＦＰ（４．５ｍｇ，０．０１２ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（５ｍＬ）の溶液にＤＩＰＥＡ（０．００４ｍＬ）を加えた。その反応混合物を室温で１時間撹拌してから減圧下で蒸発させた。その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３３％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製しＭＣ−ＳＡＡ３−ＳＡＡ３−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（９．２ｍｇ；５２％）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−ＳＡＡ３−ＳＡＡ３−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_８１Ｈ_１２６Ｎ_１４Ｏ_２１） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１６３３．０，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１６３３．２。

【0177】

実施例１９
ＭＣ−ＳＡＡ４−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化68】

【0178】

Ｚ−ＳＡＡ４（Ｘ）−ＯＨ（１５．２ｍｇ，０．０４３ｍｍｏｌ）およびＶａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（５０．０ｍｇ，０．０４３ｍｍｏｌ）の入ったＤＣＭおよびＤＭＦの混合物（１０：１，６ｍＬ）の溶液に、ＨＡＴＵ（１８．１ｍｇ，０．０４７３ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０２３ｍＬ，０．１２９ｍｍｏｌ）をそれぞれ加えた。１８時間後、溶媒を減圧下で除去し、その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に４３％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製した。アセトニトリルの除去後、その水溶液を、アセトニドが完全に除去されるまで室温で終夜静置した。その水溶液を凍結乾燥し、Ｚ−ＳＡＡ３−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（３２．４ｍｇ，２工程で収率５３％）。

【0179】

Ｚ−ＳＡＡ３−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（３２．４ｍｇ，０．０２２９ｍｍｏｌ）を、塩酸（０．０９ｍｍｏｌ）を含有するエタノール（５ｍＬ）中に溶解した。Ｐｄ／Ｃ（１０％，４．０ｍｇ）を入れた後、その反応混合物に水素バルーンを適用し、５時間撹拌した。触媒Ｐｄ／Ｃをセライトのパッドで濾別してから、その濾液を減圧下で蒸発させた。その生成物を水（５ｍＬ）と混合し、凍結乾燥して、ＳＡＡ４−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（３０．０ｍｇ，９８％）。

【0180】

ＳＡＡ４−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（２０．０ｍｇ，０．０１５ｍｍｏｌ）およびＭＣ−ＯＰＦＰ（６．３ｍｇ，０．０１６５ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（４ｍＬ） の溶液にＤＩＰＥＡ（０．００６ｍＬ）を加えた。その反応物を室温で１時間撹拌してから、減圧下で蒸発させた。その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３６％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製し、ＭＣ−ＳＡＡ４−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（１５．６ｍｇ；７０％）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−ＳＡＡ４−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_７５Ｈ_１１７Ｎ_１３Ｏ_１７） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１４７３．８，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１４７３．６。

【0181】

実施例２０
ＭＣ−ＳＡＡ５−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化69】

【0182】

ＨＡＴＵ（４０ｍｇ，０．１０６０ｍｍｏｌ）を、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（９９ｍｇ，０．０８８４ｍｍｏｌ）、Ｚ−ＳＡＡ５−ＯＨ（３６ｍｇ，０．１０６０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０４６ｍＬ，０．２６５１ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（２ｍＬ）およびジクロロメタン（２０ｍＬ）の混合物の撹拌溶液に加えた。室温で１２時間撹拌した後、溶媒を蒸発させ、その残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に４３％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製し、Ｚ−ＳＡＡ５−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色粉末として得た（３３ｍｇ，２６％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｚ−ＳＡＡ５−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_７５Ｈ_１１５Ｎ_１１Ｏ_１７） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ ＝７２１．９，ｆｏｕｎｄ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ ＝７２３．６。

【0183】

Ｚ−ＳＡＡ５−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（３５．０ｍｇ，０．０２４ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（０．０４８ｍｍｏｌ）を含有するエタノール（８ｍＬ）中に溶解した。Ｐｄ／Ｃ（１０％，２．６ｍｇ）を入れた後、その反応混合物に水素バルーンを適用し、１６時間撹拌した。触媒Ｐｄ／Ｃをセライトのパッドで濾別してから、その濾液を減圧下で蒸発させた。その生成物を水（１０ｍＬ）と混合し、凍結乾燥して、ＳＡＡ５−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（３０．０ｍｇ，９５％）。ＬＣ−ＭＳ：ＳＡＡ５−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ６７Ｈ_１０９Ｎ_１１Ｏ_１５） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ ＝６５４．９，ｆｏｕｎｄ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ ＝６５６．６。

【0184】

ＳＡＡ５−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（１６．５ｍｇ，０．０１２６ｍｍｏｌ）およびＭＣ−ＯＰＦＰ（５．７ｍｇ，０．０１５１ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（３ｍＬ）の溶液にＤＩＰＥＡ（０．００６６ｍＬ，０．０３７８ｍｍｏｌ）を加えた。その反応物を室温で３時間撹拌してから減圧下で蒸発させた。その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３６％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０ｘ２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製し、ＭＣ−ＳＡＡ５−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（１２．０ｍｇ；６３％）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−ＳＡＡ５−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_７７Ｈ_１２０Ｎ_１２Ｏ_１８） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ ＝７５１．４，ｆｏｕｎｄ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ ＝７５３．１。

【0185】

実施例２１
ＭＣ−ＳＡＡ６−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化70】

【0186】

Ｚ−ＳＡＡ６（Ｘ）−ＯＨ（１００ｍｇ）の入ったジクロロメタン（１０ｍＬ）の溶液に、プロトンスポンジ（６３ｍｇ）およびＨＢＴＵ（１７０ｍｇ）を加えた。次いで、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（１５０ｍｇ）の入ったＤＭＦ（１ｍＬ）の溶液を加え、終夜置いた。溶媒の除去後、その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に５０％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊５００ｍｍ；流量７０ｍＬ／ｍｉｎ；ＲＴ１５ｍｉｎ）で精製し、Ｚ−ＳＡＡ６（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃを白色の固体として得た（１２２．１ｍｇ）。ＬＣ−ＭＳ：Ｚ−ＳＡＡ６（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（Ｃ_４０Ｈ_５７Ｎ_７Ｏ_１１） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝８１２．４２，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝８１３．２。

【0187】

Ｚ−ＳＡＡ６（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（５０ｍｇ）をメタノール（２ｍＬ）中に溶解し、続いて触媒Ｐｄ／Ｃを加えた。次いで、その反応混合物に水素バルーンを適用し、１７時間置いた。触媒Ｐｄ／Ｃをセライトのパッドで濾別し、メタノール減圧下で蒸発させ、ＳＡＡ６（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃを白色の固体として得た（３７．４ｍｇ）。

【0188】

ＳＡＡ６（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（４７ｍｇ）およびＭＣ−ＯＰＦＰ（２８ｍｇ）をＤＭＦ（４ｍＬ）中に溶解した。ＤＩＰＥＡ（０．０１４１ｍＬ）をその反応混合物に加えた。５時間後、ＤＭＦおよびＤＩＰＥＡを減圧下で除去した。その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に５０％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊５００ｍｍ；流量４５−５０ｍＬ／ｍｉｎ；ＲＴ １０．８ｍｉｎ）で精製して、ＭＣ−ＳＡＡ６（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃを白色の固体として得た（４２．５ｍｇ）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−ＳＡＡ６（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（Ｃ_４２Ｈ_６２Ｎ_８Ｏ_１２） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝８７１．４６，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝８７１．５。

【0189】

ＭＣ−ＳＡＡ６（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（４２．５ｍｇ）の入ったＤＣＭ（１０ｍＬ）を室温下ＴＦＡ（０．１ｍＬ）で処理した。１７時間後、ＤＣＭおよびＴＦＡを減圧下で除去し、淡黄色の固体［００３５８］ＭＣ−ＳＡＡ６（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡを得た（４０ｍｇ）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−ＳＡＡ６（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（Ｃ_３７Ｈ_５４Ｎ_８Ｏ_１０） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝７７１．４０，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝７７１．９。

【0190】

ＭＣ−ＳＡＡ６（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（３２ｍｇ）およびアウリスタチンＦ（２７ｍｇ）をＤＣＭおよびＤＭＦの混合物（１０：１，１２ｍＬ）中に溶解した。次いで、ＨＢＴＵ（２０．５ｍｇ）およびＤＩＰＥＡ（０．０２２ｍＬ）をそれぞれ加えた。１７時間後、ＤＣＭおよびＤＭＦを減圧下で除去した。その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に４０％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊５００ｍｍ；流量３０ｍＬ／ｍｉｎ）で精製し、ＭＣ−ＳＡＡ６（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（１５ｍｇ）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−ＳＡＡ６（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ７７Ｈ１１９Ｎ１３Ｏ１７） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１４９８．８９，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１５００．７。

【0191】

実施例２２
ＭＣ−ＳＡＡ７−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化71】

【0192】

Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（２．４６ｇ，５ｍｍｏｌ）およびＺ−ＳＡＡ７−ＯＨ（１．７１ｇ，５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１００ｍＬ）中に溶解した。次いで、ＤＩＰＥＡ（６４６．２ｍｇ，５ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１．９０ｇ，５ｍｍｏｌ）をその反応混合物に加えた。その混合物を室温で１６時間撹拌した後、溶媒を減圧下で蒸発させた。その残留物を、白色微粉末が形成されるまで、酢酸エチル（２００ｍＬ）と共に数時間撹拌した。その固体生成物を濾別した。その白色粉末を水（２００ｍＬ）で１５分煮沸してから、熱いうちに濾過した。その生成物を熱水（５０ｍＬ，２回）で洗浄し、最後に真空下で乾燥してＺ−ＳＡＡ７−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃを得た。

【0193】

Ｚ−ＳＡＡ７−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（２００ｍｇ）をメタノール（５０ｍＬ）中に溶解し、続いて触媒Ｐｄ／Ｃを加えた。次いで、その反応物に水素バルーンを適用し、１７時間置いた。触媒をセライトのパッドで濾別した。メタノールを減圧下で蒸発させ、ＳＡＡ７−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃを白色の固体として得た（１４８ｍｇ）。

【0194】

ＳＡＡ７−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（２４０ｍｇ）、ＭＣ−ＯＰＦＰ（１４４ｍｇ）およびＤＩＰＥＡ（０．０７２ｍＬ）をＤＭＦ（２０ｍＬ）中に溶解した。５時間後、ＤＭＦおよびＤＩＰＥＡを減圧下で除去した。その残留物を、４５％アセトニトリルの入ったＨ_２Ｏ（２０ｍＬ）と混合してから、遠心分離した。液体部分の除去後、ＭＣ−ＳＡＡ７−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃを白色の固体として得た（２００ｍｇ）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−ＳＡＡ７−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（Ｃ_４１Ｈ_６２Ｎ_８Ｏ_１３） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝８７５．５，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝８７５．８。

【0195】

ＭＣ−ＳＡＡ７−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（２００ｍｇ）の入ったＤＣＭ（３０ｍＬ）を室温下ＴＦＡ（０．５ｍＬ）で処理した。１７時間後、ＤＣＭおよびＴＦＡを減圧下で除去し、淡黄色の固体ＭＣ−ＳＡＡ７−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡを得た（１８０ｍｇ）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−ＳＡＡ７−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（Ｃ_３６Ｈ_５４Ｎ_８Ｏ_１１） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝７７５．４，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝７７６．０。

【0196】

ＭＣ−ＳＡＡ７−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（８０ｍｇ）およびアウリスタチンＦ（７７ｍｇ）をＤＣＭおよびＤＭＦの混合物（１０：１，１６．６ｍＬ）中に溶解した。次いで、ＨＢＴＵ（６４ｍｇ）およびＤＩＰＥＡ（０．０６４ｍＬ）をそれぞれ加えた。１７時間後、ＤＣＭおよびＤＭＦを減圧下で除去した。その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に４０％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２５ｍＬ／ｍｉｎ；ＲＴ１０．４２ｍｉｎ）で精製し、ＭＣ−ＳＡＡ７−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（５０．９ｍｇ）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−ＳＡＡ７−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_７７Ｈ_１２０Ｎ_１２Ｏ_１８） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１５０３．０，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１５０４．１。

【0197】

実施例２３
ＭＣ−ＳＡＡ８−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化72】

【0198】

Ｚ−ＳＡＡ８（Ｘ）−ＯＨ（１００ｍｇ）の入ったＤＣＭ（１０ｍＬ）の溶液にプロトンスポンジ（６３ｍｇ）およびＨＢＴＵ（１７０ｍｇ）を加えた。次いで、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（１５０ｍｇ）の入ったＤＭＦ（１ｍＬ）の溶液を加え、その反応混合物を終夜置いた。溶媒の除去後、その残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に５５％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊５００ ｍｍ；流量６０ｍＬ／ｍｉｎ；ＲＴ１３ｍｉｎ）で精製し、Ｚ−ＳＡＡ８（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃを白色の固体として得た（１４４．６ｍｇ）。ＬＣ−ＭＳ：Ｚ−ＳＡＡ８（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（Ｃ_４０Ｈ_５７Ｎ_７Ｏ_１１） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝８１２．４，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝８１３．４。

【0199】

Ｚ−ＳＡＡ８（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（７０ｍｇ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中に溶解し、続いて触媒Ｐｄ／Ｃを加えた。次いで、その反応物に水素バルーンを適用し、１７時間置いた。次いで、触媒をセライトのパッドで濾過した。その濾液を減圧下で蒸発させて、ＳＡＡ８（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃを白色の固体として得た（５４ｍｇ）。

【0200】

ＳＡＡ８（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（４４ｍｇ）およびＭＣ−ＯＰＦＰ（２４．２ｍｇ）をＤＭＦ（４ｍＬ）中に溶解してから、ＤＩＰＥＡ（０．０１４１ｍＬ）を加えた。５時間後、ＤＭＦおよびＤＩＰＥＡを減圧下で除去し、その残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に４５％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量３５〜４０ｍＬ／ｍｉｎ；ＲＴ１３ｍｉｎ）で精製し、ＭＣ−ＳＡＡ８（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃを白色の固体として得た（４０ｍｇ）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−ＳＡＡ８（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（Ｃ_４２Ｈ_６２Ｎ_８Ｏ_１２） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝８７１．５，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝８７２．０。

【0201】

ＭＣ−ＳＡＡ８（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−Ｂｏｃ（４０ｍｇ）の入ったＤＣＭ（２ｍＬ）を室温下ＴＦＡ（０．１ｍＬ）で処理した。１７時間後、減圧下でＤＣＭおよびＴＦＡを除去し、淡黄色の固体ＭＣ−ＳＡＡ８（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡを得た（４０ｍｇ）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−ＳＡＡ８（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（Ｃ_３７Ｈ_５４Ｎ_８Ｏ_１０） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝７７１．４，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝７７１．９。

【0202】

ＭＣ−ＳＡＡ８（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ（２５．６ｍｇ）およびアウリスタチンＦ（２４．５ｍｇ）をＤＣＭおよびＤＭＦの混合物（１０：１，５．５ｍＬ）中に溶解した。次いで、ＨＢＴＵ（２０．５ｍｇ）およびＤＩＰＥＡ（０．０２２ｍＬ）をそれぞれ加えた。１７時間後、ＤＣＭおよびＤＭＦを減圧下で除去した。その残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に４０％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量３５〜４０ｍＬ／ｍｉｎ）で精製して、化合物ＭＣ−ＳＡＡ８（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（３．３ｍｇ）。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−ＳＡＡ８（Ｘ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_７８Ｈ_１２０Ｎ_１２Ｏ_１７） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１４９７．９，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１５００．５。

【0203】

実施例２４
ＭＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＡＦ−３ＡＱの合成

【化73】

【0204】

ＡＡＦ−３ＡＱ（３０．８ｍｇ，０．０３５ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（１０ｍＬ）およびＤＣＭ（１０ｍＬ）の混合物中に溶解した。Ｚ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ（１５．７ｍｇ，０．０３８ｍｍｏｌ）およびＥＥＤＱ（１３ｍｇ，０．０５２ｍｍｏｌ）を加えた後、その混合物を室温で７日間撹拌した。その反応混合物を減圧下で蒸発させてから、分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３４％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製し、Ｚ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＡＦ−３ＡＱを白色の固体として得た（４．８３ｍｇ，１０．７％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｚ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＡＦ−３ＡＱ（Ｃ_６９Ｈ_１０１Ｎ_１１Ｏ_１２） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１２７７．６，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１２７８．９。

【0205】

Ｚ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＡＦ−３ＡＱ（４．８ｍｇ，０．００３７６ｍｍｏｌ）をエタノール（１０ｍＬ）中に溶解した。Ｐｄ／Ｃ（１０％，１６ｍｇ）を入れた後、その反応混合物に水素バルーンを適用し、４時間撹拌した。触媒Ｐｄ／Ｃをセライトのパッドで濾別してから、その濾液を減圧下で蒸発させた。その生成物を水（５ｍＬ）と混合し、凍結乾燥してＶａｌ−Ｃｉｔ−ＡＡＦ−３ＡＱを白色の固体として得た（４．２ｍｇ，９８％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＡＦ−３ＡＱ（Ｃ_６１Ｈ_９５Ｎ_１１Ｏ_１０） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１１４３．５，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１１４４．７。

【0206】

Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＡＦ−３ＡＱ（４．８ｍｇ，０．００３６７ｍｍｏｌ）およびＭＣ−ＯＰＦＰ（１．６７ｍｇ，０．００４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．５ｍＬ）中に溶解した。ＤＩＰＥＡ（１．９ｍｇ，０．０１４７ｍＬ）をその反応混合物に加えた。３時間後、ＤＭＦおよびＤＩＰＥＡを減圧下で除去した。その粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３２％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製し、ＭＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＡＦ−３ＡＱを白色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：ＭＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＡＦ−３ＡＱ（Ｃ_７１Ｈ_１０６Ｎ_１２Ｏ_１３） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１３３６．７，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１３３７．７。

【0207】

＜力価試験＞
実施例２５
ＡＦ誘導体の力価
ＦａＤｕ細胞を２５００細胞/ウェルの密度でＣｏｒｎｉｎｇ ＣｅｌｌＢＩＮＤ ９６ウェルプレート内に播種した。２４時間インキュベートした後、古い培地を除き、細胞をＭＭＡＥ、ＡＦ、またはＡＦ−誘導体含有培地中で、１ｅ−１２Ｍから１ｅ−６Ｍまでの濃度（対数連続希釈）で１２０時間インキュベートした。次いで、細胞を一度リンスし、ＭＴＴ法で細胞生存率をアッセイした。その古い培地を吸引し、１００μＬの０．５ｍｇ／ｍＬ ＭＴＴ含有培地を各ウェル中に加えた。４時間インキュベートした後、ＭＴＴ試薬を除去し、その沈殿をＤＭＳＯ中に溶解した。細胞の測光強度（photometry intensity）を吸収波長 ５７０ｎｍのマイクロプレートリーダー（Multiskan Ascent, Thermo Labsystems）で測定した。細胞生存率は次の等式により計算した。

【数1】

この等式中、「Ｉｎｓ」は所定の毒素とインキュベートした細胞の測光強度であり、「Ｉｎｂ」は細胞が播種されていないブランクウェルの強度であり、「Ｉｎｃ」は培地のみでインキュベートした細胞の強度である（陽性対照）。

【0208】

各薬物濃度（ｎ＝６）で１２０時間毒素に曝した後のＦａＤｕ細胞のインビトロ生存率を記録し、Ｏｒｉｇｉｎ ｓｏｆｔｗａｒｅのＳｉｇｍｏｉｄａｌ ｍｏｄｅｌを用いて、データをフィットさせてＩＣ_５０値を得た。

【0209】

表２は、ＦａＤｕ細胞中のＡＰＥＡ−ＡＦ、ＰＥＡ−ＡＦ、ＰＥＡ−ＡＮＦ、ＰＥＡ−ＡＡＦ、３ＡＱ−ＡＮＦ、３ＡＱ−ＡＡＦ、ＮＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦ、およびＡＰＥＡ（ＣＯＯＭｅ）−ＡＦの力価が、周知の毒素ＭＭＡＥに匹敵し、かつ別の周知の毒素アウリスタチンＦ（ＡＦ）よりも著しく強いことを示している。それは、本開示の新規なＡＦ誘導体が細胞膜への透過性を改善するだけでなく、チューブリン重合に対する阻害効果も維持することを示す。さらに、ＮＰＥＡ（ＣＯＯＨ）−ＡＦはＡＦと類似する力価を有し、かつＡＰＥＡ（ＣＯＯＨ）−ＡＦは最低の力価を示しており、これらの結果は、ＣＯＯＨ基が、細胞膜を通る毒素の透過性を阻害する可能性があることを示している。本開示の新規毒素のこの振る舞いは、バイスタンダー効果なしに、新規な薬物を構築するのにさらに利用される。

【0210】

【表2】

【0211】

＜抗体薬物複合体（ＡＤＣ）＞
実施例２６
Ｅｒｂｉｔｕｘ由来ＡＤＣの作製
Ｅｒｂｉｔｕｘを、２．４モル当量のＴＣＥＰの入った０．０２５Ｍのホウ酸ナトリウム、０．０２５ＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＤＴＰＡ（ｐＨ＝８）で、２時間、３７℃で処理した。次いで、さらなる精製はせずに、その反応混合物を０℃まで冷却させた。次いで、部分的に還元されたＥｒｂｉｔｕｘを、５．５モル当量のリンカー−毒素で０℃下３０分アルキル化させた。システイン（１ｍＭ 最終）を用い、すべての未反応の過剰なリンカー−毒素をクエンチした。そのＡＤＣを脱塩カラム（desalting column）（ThermoFisher Scientific, MWCO: 40K）により精製した。溶離時に、バッファーをダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ThermoFisher Scientific, ＰＢＳ）に入れた。ＡＤＣを、結合分布（conjugates distribution）についてＨＩＣにより分析し、平均ＤＡＲ（薬物−抗体比）を計算した。

【0212】

図１は、本開示の新規リンカー−毒素であるＭＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦがＥｒｂｉｔｕｘへうまく結合されたことを示しており、ＨＩＣによって決定された平均ＤＡＲは３．８であった。

【0213】

＜熱ストレス試験＞
実施例２７
ＡＤＣの熱ストレス試験
５００μＬのＰＢＳ中３ｍｇ／ｍＬのＥｒｂｉｔｕｘおよびＡＤＣを、５０℃の水浴でインキュベートした。次いで、抗体およびＡＤＣを０、４、７および２４時間の時点でサンプリングし、ＳＥＣ分析を行った。Ｙａｒｒａ ３μｍ ＳＥＣ−３０００（３００ｘ７．８ｍｍ）カラムを備えるＷａｔｅｒｓ ＰＤＡ ９９６ ＨＰＬＣを使用し、抗体モノマーと凝集生成物をサイズによって分離した。０．０２０Ｍリン酸カリウム、０．０２５Ｍ塩化カリウム、およびイソプロパノール５％（ｖ／ｖ）で移動相を構成し、ｐＨ６．９５とした。３０μＬの試料を流量０．５ｍＬ／ｍｉｎでカラムに注入し、イソクラティック条件下で分離した。２８０ｎｍに吸光が検出された。メインピークより前に溶出したすべての種（species）をまとめて、高分子量種（high molecular weight species：ＨＭＷＳ）と記載する。

【0214】

図２は、そのリンカーが糖アミノ酸ユニットを含むＥｒｂｉｔｕｘ−ＭＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦおよびＥｒｂｉｔｕｘ−ＭＣ−ＳＡＡ１−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦが、そのリンカーがいかなる糖アミノ酸ユニットも含まないＥｒｂｉｔｕｘ−ＶｅｄｏｔｉｎおよびＥｒｂｉｔｕｘ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦに比べ、ＨＭＷＳの割合が低いことを示している。よって、この実験により、糖アミノ酸ユニットを有するリンカーは、親水性を高めるのみならず、ＡＤＣの熱安定性を著しく高めるということが実証された。

【0215】

＜ペプチド薬物複合体（ＰＤＣ）＞
実施例２８
Ｚｏｐｔａｒｅｌｉｎ−ＧＡ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化74】

【0216】

ＤＩＰＥＡ（０．０７１ｍＬ，０．４０７０ｍｍｏｌ）を、ゾプタレリン（ｚｏｐｔａｒｅｌｉｎ）（１７０ｍｇ，０．１３５６ｍｍｏｌ）およびグルタル酸無水物（１７ｍｇ，０．１４９２ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（４ｍＬ）の撹拌溶液に加えた。室温で１２時間撹拌した後、溶媒を除去し、その残留物を分取ＨＰＬＣで精製してＺｏｐｔａｒｅｌｉｎ−ＧＡを白色粉末として得た（１００ｍｇ，５４％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｚｏｐｔａｒｅｌｉｎ−ＧＡ（Ｃ６４Ｈ９０Ｎ１８Ｏ１６），ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１３６７．７，［Ｍ＋２Ｈ^＋］＝６８４．４；ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１３６８．７，［Ｍ＋２Ｈ^＋］＝６８５．５。

【0217】

Ｚｏｐｔａｒｅｌｉｎ−ＧＡ（１０ｍｇ，０．００７３ｍｍｏｌ）およびペンタフルオロフェノール（１．６ｍｇ，０．００８８ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（１ｍＬ）の溶液にＤＣＣ（１．８ｍｇ，０．００８８ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を室温で１２時間撹拌してから、ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（９ｍｇ，０．００７２）およびＤＩＰＥＡ（０．００３８ｍＬ，０．０２１６ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（１ｍＬ）を加えた。さらに１２時間経った後、溶媒を除去して、その残留物を分取ＨＰＬＣで精製し、Ｚｏｐｔａｒｅｌｉｎ−ＧＡ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色粉末として得た（８ｍｇ，４３％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｚｏｐｔａｒｅｌｉｎ−ＧＡ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_１３０Ｈ_１９６Ｎ_３０Ｏ_２９），ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［Ｍ＋２Ｈ^＋］＝１３２２．６，［Ｍ＋３Ｈ^＋］＝８８２．１，［Ｍ＋４Ｈ^＋］＝６６１．８；ｆｏｕｎｄ ［Ｍ＋２Ｈ^＋］＝１３２３．７，［Ｍ＋３Ｈ^＋］＝８８２．７，［Ｍ＋４Ｈ^＋］＝６６２．６。

【0218】

＜小分子薬物複合体（ＳＭＤＣ）＞
実施例２９
ＦＡ−Ｃ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化75】

【0219】

ＡＦ（２０．８ｍｇ，０．０２７ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（０．５ｍｌ）およびＤＣＭ（１ｍｌ）の溶液に、ＺＣ−ＡＰＥＡ（１０．２ｍｇ，０．０２７ｍｍｏｌ）を加えた。さらなるＤＭＦ（１ｍｌ）およびＨＡＴＵ（１０．７ｍｇ，０．０２８ｍｍｏｌ）をその反応混合物に加えた。その混合物を氷浴で冷却し、ＤＩＰＥＡ（８．０３ｍｇ，０．０６２ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２時間反応させた後、その混合物を減圧下で蒸発させた。その残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に４５％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製し、ＺＣ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（１８．２ｍｇ，５１．１％）。ＬＣ−ＭＳ：ＺＣ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_６２Ｈ_９４Ｎ_８Ｏ_１０） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１１１１．７，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１１１２．５。

【0220】

ＺＣ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（１８．２ｍｇ，０．０１４ｍｍｏｌ）の入ったＥｔＯＨ（５ｍＬ）の溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（３ｍｇ）および２Ｍ ＨＣｌ（０．０１６ｍＬ，０．０３２ｍｍｏｌ）を加えた。系中の空気を水素ガスで置換した。周囲雰囲気下で反応を行った。ＺＣ−ＡＰＥＡ−ＡＦが完全に消費されたら、触媒を濾紙で反応混合物から除去し、その濾液を濃縮し、続いて水（５ｍＬ）と混合し、凍結乾燥してＣ−ＡＰＥＡ−ＡＦを得た（１４．５ｍｇ，９９％）。

【0221】

葉酸（８．０ｍｇ，０．０１８ｍｍｏｌ）を氷浴中で、ＤＭＦ（２ｍｌ）中のＥＤＣＩ（６．２ｍｇ，０．０４０ｍｍｏｌ）およびＮＨＳ（２．６ｍｇ，０．０２６ｍｍｏｌ）と反応させた。次いで、３０分後にＣ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（１７．４ｍｇ，０．０１７ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（８．８ｍｇ，０．０６８ｍｍｏｌ）を加えた。Ｃ−ＡＰＥＡ−ＡＦが大部分消費されたことをＨＰＬＣが示した後、その混合物からＤＭＦを除去し、その残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３６％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製した。特定のフラクションを濃縮および凍結乾燥し、ＦＡ−Ｃ−ＡＰＥＡ−ＡＦを黄色の固体として得た（５．４ｍｇ，２３．３％）。ＬＣ−ＭＳ：ＦＡ−Ｃ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_７３Ｈ_１０５Ｎ_１５Ｏ_１３） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１４００．８，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１４０１．８。

【0222】

実施例３０
ＦＡ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化76】

【0223】

葉酸（１１．５ｍｇ，０．０２６ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（１．５ｍｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（６．５ｍｇ，０．０５０ｍｍｏｌ）、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（２０．９ｍｇ，０．０１８ｍｍｏｌ）、ＮＨＳ（３．０ｍｇ，０．０２６ｍｍｏｌ）およびＥＤＣＩ（４．０ｍｇ，０．０２６ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を終夜撹拌した。その反応混合物からＤＭＦを除去した後、その残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３３％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製した。特定のフラクションを濃縮、凍結乾燥し、ＦＡ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを黄色の固体として得た（１１．６ｍｇ，３７．４％）。ＬＣ−ＭＳ：ＦＡ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_７８Ｈ_１１４Ｎ_１８Ｏ_１４） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１５４３．９，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１５４４．８。

【0224】

実施例３１
ＦＡ−Ｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化77】

【0225】

Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（３５．６ｍｇ，０．０２９ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（１ｍＬ）およびＤＣＭ（３ｍｌ）の溶液に、ＺＣ（９．２ｍｇ，０．０３７ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１６．０ｍｇ，０．０４２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（９．０ｍｇ，０．０６９ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を室温で終夜撹拌した。溶媒を除去し、その残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に４３％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製した。特定のフラクションを濃縮、凍結乾燥し、ＺＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを黄色の固体として得た（１９．０ｍｇ，４２．９％）。ＬＣ−ＭＳ：ＺＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_７３Ｈ_１１４Ｎ_１２Ｏ_１３） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１３６７．９，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１３６８．９。

【0226】

ＺＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（１９．０ｍｇ，０．０１４ｍｍｏｌ）の入ったＥｔＯＨ（５ｍＬ）の溶液に、５％Ｐｄ／Ｃ（４．４ｍｇ）および２Ｍ ＨＣｌ（０．０１５ｍＬ，０．０３０ｍｍｏｌ）を加えた。系中の空気を水素ガスで置換した。周囲雰囲気下で終夜反応を行った。ＺＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦが完全に消費されたら、濾紙で反応混合物から触媒を取り除き、その濾液をロータリーベイパー（rotary vapor）上で濃縮し、続いて凍結乾燥し、Ｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを得た（１７．７ｍｇ，９９％）。

【0227】

ＦＡ（５．０ｍｇ，０．０１１ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（０．７５ｍｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（２．７ｍｇ，０．０２１ｍｍｏｌ）、Ｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（９．０ｍｇ，０．０６９ｍｍｏｌ）、ＮＨＳ（１．２ｍｇ，０．０１０ｍｍｏｌ）およびＥＤＣＩ（１．６ｍｇ，０．０１０ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を終夜撹拌した。反応の進行をＨＰＬＣで観察した。その反応混合物からＤＭＦを除去した後、その残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３３％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製した。特定のフラクションを濃縮、凍結乾燥し、ＦＡ−Ｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを黄色の固体として得た（４．５ｍｇ，３４．７％）。ＬＣ−ＭＳ：ＦＡ−Ｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_８４Ｈ_１２５Ｎ_１９Ｏ_１６） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１６５７．０，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１６５７．９。

【0228】

実施例３２
ＦＡ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化78】

【0229】

葉酸（１１．２ｍｇ，０．０２５ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（１．５ｍｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（５．８ｍｇ，０．０ ４５ｍｍｏｌ）、ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（２２．３ｍｇ，０．０１８ｍｍｏｌ）、ＮＨＳ（３．０ｍｇ，０．０２６ｍｍｏｌ）およびＥＤＣＩ（４．０ｍｇ，０．０２６ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を終夜撹拌した。反応の進行をＨＰＬＣで観察した。その反応混合物からＤＭＦを除去した後、その残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３３％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製した。特定のフラクションを濃縮、凍結乾燥し、ＦＡ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを黄色の固体として得た（１１．８ｍｇ，３７．４％）。ＬＣ−ＭＳ：ＦＡ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_８５Ｈ_１２５Ｎ_１９Ｏ_１９） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１７１６．９，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１７１７．９（Ｍ＋Ｈ）。

【0230】

実施例３３
ＦＡ−Ｃ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦの合成

【化79】

【0231】

ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（４４．０ｍｇ，０．０２９ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（１ｍＬ）およびＤＣＭ（３ｍｌ）の溶液に、ＺＣ（１５．０ｍｇ，０．０５７ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１６．８ｍｇ，０．０４４ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１１．５ｍｇ，０．０８９ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を終夜撹拌した。溶媒をロータリーベイパー上で除去し、その残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に４３％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製した。フラクションを収集、濃縮、凍結乾燥して、ＺＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを白色の固体として得た（３０．０ｍｇ，６２．５％）。ＬＣ−ＭＳ：ＺＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_８０Ｈ_１２５Ｎ_１３Ｏ_１７） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１５４０．９，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１５４１．８。

【0232】

ＺＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（３０．０ｍｇ，０．０１８ｍｍｏｌ）の入ったＥｔＯＨの溶液に、５％Ｐｄ／Ｃ（５．２ｍｇ）および２Ｍ ＨＣｌ（０．０１９ｍＬ，０．０３８ｍｍｏｌ）を加えた。系中の空気を水素ガスで置換した。周囲雰囲気下で終夜反応を行った。ＺＣ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦが完全に消費されたら、濾紙でその反応混合物から触媒を取り除き、その濾液をロータリーベイパー上で濃縮し、続いて凍結乾燥し、Ｃ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを得た（２４．９ｍｇ，９２．８％）。ＬＣ−ＭＳ：Ｃ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ７２Ｈ_１１９Ｎ_１３Ｏ_１５） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝７０４．０，ｆｏｕｎｄ ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ ＝７０５．１。

【0233】

葉酸（４．５ｍｇ，０．０１３ｍｍｏｌ）の入ったＤＭＦ（０．７ｍＬ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（２．７０ｍｇ，０．０２１ｍｍｏｌ）、Ｃ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（１１．０ｍｇ，０．００７ｍｍｏｌ）、ＮＨＳ（１．２ｍｇ，０．０１０ｍｍｏｌ）およびＥＤＣＩ（１．６ｍｇ，０．０１０ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を終夜撹拌した。反応の進行をＨＰＬＣで観察した。その反応混合物からＤＭＦを除去した後、その残留物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中に３１％アセトニトリル；ＵＶ２１０ｎｍ；ＯＤＳ−３カラム３０＊２５０ｍｍ；流量２４ｍＬ／ｍｉｎ）で精製した。特定のフラクションを濃縮、凍結乾燥し、ＦＡ−Ｃ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦを黄色の固体として得た（３．９ｍｇ，２５．５％）。ＬＣ−ＭＳ：ＦＡ−Ｃ−ＳＡＡ１−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＰＥＡ−ＡＦ（Ｃ_９１Ｈ_１３６Ｎ_２０Ｏ_２０） ｒｅｑｕｉｒｅｄ ［ＭＨ^＋］＝１８３０．１，ｆｏｕｎｄ ［ＭＨ^＋］＝１８３１．０。

【0234】

本開示の実施形態に様々な改変および変更を加え得るということは、当業者には明らかであろう。明細書および実施例は単に例示として見なされるように意図されており、本発明の真の範囲は、以下の特許請求の範囲およびそれらの同等物によって示される。

【図1】

【図2】