特許 6427108 凝集塊調節を伴う血小板計数のためのシステム及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6427108

(24)【登録日】2018年11月2日

(45)【発行日】2018年11月21日

(54)【発明の名称】凝集塊調節を伴う血小板計数のためのシステム及び方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/49 20060101AFI20181112BHJP

   G01N 15/14 20060101ALI20181112BHJP

   G01N 15/10 20060101ALI20181112BHJP

   G01N 21/49 20060101ALI20181112BHJP

【ＦＩ】

   G01N33/49 A

   G01N15/14 C

   G01N33/49 X

   G01N15/10 Z

   G01N21/49 A

【請求項の数】30

【全頁数】44

(21)【出願番号】特願2015-551070(P2015-551070)

(86)(22)【出願日】2013年12月31日

(65)【公表番号】特表2016-508224(P2016-508224A)

(43)【公表日】2016年3月17日

(86)【国際出願番号】US2013078543

(87)【国際公開番号】WO2014106270

(87)【国際公開日】20140703

【審査請求日】2016年10月12日

(31)【優先権主張番号】61/747,655

(32)【優先日】2012年12月31日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】14/145,608

(32)【優先日】2013年12月31日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】510005889

【氏名又は名称】ベックマン コールター， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(72)【発明者】

【氏名】ジャン， シュリャン

(72)【発明者】

【氏名】ロスマン， マーク

(72)【発明者】

【氏名】ル， ジウリウ

(72)【発明者】

【氏名】ライリー， ジョン

【審査官】 西浦 昌哉

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００９−５１５１９３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１１−０６９８３９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１１−１６９９１６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００７−５２２４７５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１０−５１３９２９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許第０５５４０４９４（ＵＳ，Ａ）

【文献】 米国特許第０４３２５７０６（ＵＳ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｇ０１Ｎ ３３／４８−３３／９８

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

生体サンプル中の血小板状態を判定するための血液学システムであって、
血小板凝集塊数及び白血球数を判定するように構成される第１のモジュールと、
観察された血小板数及び白血球濃度を判定するように構成される第２のモジュールと、
観察された血小板数、及び前記血小板凝集塊中に存在する血小板数の合計に基づいて、血小板状態を判定するように構成されるデータ処理モジュールであって、前記血小板凝集塊中に存在する血小板数が、第１の因子及び第２の因子の乗算を含み、前記第１の因子が、前記血小板凝集塊数対前記白血球数の比率を含み、前記第２の因子が前記白血球濃度を含む、データ処理モジュールと、を備える、システム。

【請求項2】

前記第１のモジュールが、体積伝導度散乱（ＶＣＳ）モジュールである、請求項１に記載のシステム。

【請求項3】

前記第２のモジュールが、全血算（ＣＢＣ）モジュールである、請求項１又は２に記載のシステム。

【請求項4】

前記血小板状態が、推定される補正血小板数を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項5】

前記第１のモジュールが、
細胞照合ゾーンを有する光学素子と、
前記生体サンプルの流体力学的に集中した流れを前記細胞照合ゾーンに送達するように構成される流路と、
前記細胞照合ゾーンを個々に通過する前記生体サンプルの細胞の直流（ＤＣ）インピーダンスを測定するように構成される電極アセンブリと、
前記細胞照合ゾーンを個々に通過する前記生体サンプルの前記細胞を照射するためにビーム軸に沿って光ビームを方向付けるように配向される光源と、
前記生体サンプルの前記照射された細胞によって散乱し、かつそれを通って透過した光を測定するように、前記細胞照合ゾーンに光学的に結合する光検出アセンブリであって、
前記光ビーム軸に対して第１の範囲内の前記照射された細胞からの第１の伝播光と、
前記光ビーム軸に対する第２の角度範囲内の前記照射された細胞からの第２の伝播光であって、前記第２の範囲が前記第１の範囲とは異なる、第２の伝播光と、
前記照射された細胞から伝播する前記ビーム軸に沿う軸方向光と、を測定するように構成される光検出アセンブリと、を備える、請求項１〜４のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項6】

前記第２のモジュールが、
前記観察された血小板数を判定するように構成される第１の開口槽と、
前記白血球濃度を判定するように構成される第２の開口槽と、を備える、請求項１〜５のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項7】

前記第１の開口槽が、赤血球開口槽を備え、前記第２の開口槽が、白血球開口槽を備える、請求項６に記載のシステム。

【請求項8】

前記第２のモジュールが、第１の開口槽と第２の開口槽とを備え、前記第１の開口槽が赤血球開口槽を備え、前記第２の開口槽が白血球開口槽を備える、請求項１〜５のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項9】

前記第１のモジュールが、有核赤血球モジュールである、請求項１〜８のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項10】

前記生体サンプルが、個体の血液サンプルを含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項11】

前記血小板凝集塊中に存在する血小板数が、前記第１の因子、前記第２の因子、及び第３の因子の乗算を含み、前記第１のモジュールが、血小板凝集塊体積を判定するように構成され、前記第２のモジュールが、単一血小板体積を判定するように構成され、前記第３の因子が、前記血小板凝集塊体積対前記単一血小板体積の比率を含み、前記第１の因子が、前記血小板凝集塊数対前記白血球数の比率を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項12】

前記第１のモジュールが、回転下方角度光散乱（ＲＬＡＬＳ）測定値、拡張下方中角度光散乱（ＥＬＭＡＬＳ）測定値、回転上方中角度光散乱（ＲＵＭＡＬＳ）測定値、及び軸方向光損失（ＡＬＬ）測定値からなる群から選択されるメンバーを含む光測定値に基づいて、前記血小板凝集塊数を判定するように構成される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項13】

前記データ処理モジュールが、確率分布関数に基づいて、各血小板凝集塊数の血小板細胞のそれぞれの数を判定するように、及び各血小板凝集塊の血小板細胞のそれぞれの数の合計に基づいて、血小板凝集塊中で生じる血小板細胞の総数を判定するように構成され、前記第１の因子が、血小板凝集塊中で生じる血小板細胞の総数対前記白血球数の比率を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項14】

各血小板凝集塊数の血小板細胞の前記それぞれの数が、最大尤度推定値に基づく、請求項１３に記載のシステム。

【請求項15】

前記第１のモジュールが、電流（ＤＣ）インピーダンス測定値に基づいて、前記血小板凝集塊数を判定するように構成される、請求項１３又は１４に記載のシステム。

【請求項16】

生体サンプルにおける血小板状態を判定する自動化された方法であって、
第１のモジュールを使用して、血小板凝集塊数及び白血球数を判定することと、
第２のモジュールを使用して、観察された血小板数及び白血球濃度を判定することと、
データ処理モジュールを使用して、前記観察された血小板数、及び前記血小板凝集塊中に存在する血小板数の合計に基づいて、前記血小板状態を判定することであって、前記血小板凝集塊中に存在する血小板数が、第１の因子及び第２の因子の乗算を含み、前記第１の因子が、前記血小板凝集塊数対前記白血球数の比率を含み、前記第２の因子が前記白血球濃度を含む、前記血小板状態を判定することと、を含む自動化された方法。

【請求項17】

前記第１のモジュールが、体積伝導度散乱（ＶＣＳ）モジュールである、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記第２のモジュールが、全血算（ＣＢＣ）モジュールである、請求項１６又は１７に記載の方法。

【請求項19】

前記血小板状態が、推定される補正血小板数を含む、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

前記第１のモジュールを使用して、前記血小板凝集塊数及び前記白血球数を判定することが、
前記生体サンプルの流体力学的に集中した流れを光学素子の細胞照合ゾーンに送達することと、
電極アセンブリで、前記細胞照合ゾーンを個々に通過する前記生体サンプルの細胞の電流（ＤＣ）インピーダンスを測定することと、
軸を有する光ビームで、前記細胞照合ゾーンを個々に通過する前記生体サンプルの細胞を照射することと、
光検出アセンブリで、前記ビーム軸に対して第１の範囲内の前記照射された細胞からの第１の伝播光を測定することと、
前記光検出アセンブリで、前記ビーム軸に対する第２の角度範囲内の前記照射された細胞からの第２の伝播光を測定することであって、前記第２の範囲が前記第１の範囲とは異なる、測定することと、
前記光検出アセンブリで、前記照射された細胞から伝播する前記ビーム軸に沿う軸方向光を測定することと、を含む、請求項１６〜１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記第２のモジュールを使用して前記観察された血小板数及び前記白血球濃度を判定することが、前記観察された血小板数を判定するように構成される第１の開口槽、及び前記白血球濃度を判定するように構成される第２の開口槽で生体サンプルを分析することを含む、請求項１６〜２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記第１の開口槽が、赤血球開口槽を備え、前記第２の開口槽が、白血球開口槽を備える、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

前記第２のモジュールを使用して前記観察された血小板数及び前記白血球濃度を判定することが、第１の開口槽及び第２の開口槽で前記生体サンプルを分析することを含み、前記第１の開口槽が赤血球開口槽を備え、前記第２の開口槽が白血球開口槽を備える、請求項１６〜２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記第１のモジュールが、有核赤血球モジュールである、請求項１６〜２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記生体サンプルが、個体の血液サンプルを含む、請求項１６〜２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記第１のモジュールを使用して、血小板凝集塊体積を判定し、前記第２のモジュールを使用して、単一血小板体積を判定することを更に含み、前記血小板凝集塊中に存在する血小板数が、前記第１の因子、前記第２の因子、及び第３の因子の乗算を含み、前記第３の因子が、前記血小板凝集塊体積対前記単一血小板体積の比率を含み、前記第１の因子が、前記血小板凝集塊数対前記白血球数の比率を含む、請求項１６〜２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記第１のモジュールが、回転下方角度光散乱（ＲＬＡＬＳ）測定値、拡張下方中角度光散乱（ＥＬＭＡＬＳ）測定値、回転上方中角度光散乱（ＲＵＭＡＬＳ）測定値、及び軸方向光損失（ＡＬＬ）測定値からなる群から選択されるメンバーを含む光測定値に基づいて、前記血小板凝集塊数を判定する、請求項１６〜２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記データ処理モジュールが、確率分布関数に基づいて、各血小板凝集塊数の血小板細胞のそれぞれの数を判定し、かつ各血小板凝集塊の血小板細胞のそれぞれの数の合計に基づいて、血小板凝集塊中で生じる血小板細胞の総数を判定し、前記第１の因子が、前記血小板凝集塊中で生じる血小板細胞の総数対前記白血球数の比率を含む、請求項１６〜２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記データ処理モジュールが、各血小板凝集塊数の血小板細胞の前記それぞれの数を判定し、最大尤度推定値に基づく、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

前記第１のモジュールが電流（ＤＣ）インピーダンス測定値に基づいて前記血小板凝集塊数を判定する、請求項２８又は２９に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１２年１２月３１日に出願された米国仮出願第６１／７４７，６５５号、及び２０１３年１２月３１日に出願された米国非仮出願第１４／１４５，６０８号の出願日の利益を請求し、これらの各々は、全ての目的のために、その全てにおいて、参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本発明は、医療診断の分野、より具体的には、患者からの生体サンプル中の血小板を数えるためのシステム及び方法に関する。

【0003】

血小板は、体内で重要な生理学的機能を担う。例えば、血小板活性は、血液凝固及び創傷治癒と関連を持つ。様々な疾患状態は、個体の血液中に存在する血小板の量に影響を及ぼし得る。したがって、血小板計数試験は、患者の健康状態の重要な指標を提供することができる。例えば、血小板数は、過剰な出血又は凝固を伴う疾患を監視又は診断するために使用され得る。

【0004】

時折、サンプルを分析のために血小板計数器具に提出する前に、試験サンプルバイアル瓶中で血小板凝集塊が生じ得る。その結果、得られた血小板（ＰＬＴ）数が、人工的に低くなり得る。この問題に対処するには、凝集塊の結果生じる誤った計数の可能性について使用者に注意を促すためにいくつかの電流解析器が問題点を示し、その使用者が、次に手動スライドレビューでＰＬＴの計数をすることができる。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

したがって、血小板分析システム及び方法が、現在利用可能であり、それらが必要である患者に実益を提供するにもかかわらず、個体中の血小板の状態を評価するための改善された装置及び方法を提供するために多くの進歩が依然として成され得る。本発明の実施形態は、これらの問題に対処する解決策を提供し、そのためこれら未解決のニーズの少なくとも一部に対する答えを提供するものである。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明の実施形態は、個体の血小板の容態又はパラメータを分析するための改善された技術を提供する。例えば、特定の実施形態は、血小板凝集塊への損失を説明するように、血小板数の補正のためのシステム及び方法を包含する。かかる技術は、一般集団における患者又は個体の血小板容態を評価する、信頼できるスクリーニング法を提供するために、体積伝導度散乱（ＶＣＳ）パラメータに加え、様々な組み合わせの全血球計算（ＣＢＣ）パラメータを採用することができる。例えば、診断システム及び方法は、個体の血小板数又はパラメータが正常か異常かどうかについて、早期かつ正確に予測することができる。かかる血小板分析技術は、血小板凝集塊中に含有される血小板数及び血小板の数等の特定の血小板測定値を直接計算することを含み得る。

【0007】

特定の実施形態において、ＣＢＣ及びＮＲＢＣモジュールから得られた出力は、血小板計数イベントを補わなければ血小板凝集塊の存在のため損失し得る血小板数を導出するために組み合わされ得る。例えば、ＣＢＣモジュールにより報告されるような血小板数（例えば、単一非凝集塊血小板の数）は、補正血小板数を提供するためにＮＲＢＣモジュールからのデータに基づいて推定される損失した血小板数（例えば、凝集塊中で生じる血小板の計数）と組み合わされ得る。補正血小板数を得るために使用される様々な技術は、単一凝集塊中で生じる血小板の数を計算するために異なる方法を使用し得る。例えば、いくつかの方法は、凝集塊当たりの血小板の平均数を計算することを含み得る。他の方法は、確率分布に基づく異なる凝集塊寸法の凝集塊中の大体の血小板の数を計算することと、結果を得るために全凝集塊寸法範囲を合計すること、とを含み得る。

【0008】

医師の治療にかかっている患者からの血液サンプルは、血液分析器等の多重光角度検出パラメータを得るために具備されている血液学システムを使用して評価することができる。本明細書に開示される技術を採用することによって、血液病理学者及び臨床医は、各個々の患者の疾患予後の予測、将来的な合併症の可能性の評価、及び患者に提供される治療の素早くかつ的確な調整をより良好に行うことができる。

【0009】

血液分析器は、白血球、赤血球、及び血小板等の血液成分の種類を示す、形態学的特徴を直接認識することができる。本明細書の別の場所に記載されるように、この技術は、細胞形態、又は特定の細胞イベントに直接相関する様々なパラメータに関するデータを同時に収集する。細胞成分が分析されると、それらを、その位置が様々なパラメータによって定義されている、ヒストグラムにプロットすることができる。例えば、血小板凝集塊及び他の細胞粒子が、異なる特徴を有し得るので、それらは、ヒストグラムの異なる領域においてプロット又は分割され得、したがって、細胞集団を形成し得る。各集団におけるイベントの数を使用して、計数値を生成することができる。かかる計数値に加え、様々な形態学的パラメータ（体積、伝導度、及び５つの光散乱角度）の各々の点に対する平均値及び標準偏差値を別々に算出することができる。その結果、細胞イベントと直接相関する大量のデータが生成される。この情報はＶＣＳデータと称され得、機器のスクリーン上に表示し、並びに、エクセルファイルとして自動的にエクスポートすることができる。本発明の実施形態は、任意にＣＢＣデータと共にＶＣＳデータを伴う生体サンプルのプロファイルを得ることによって、個体の生体サンプルを評価することと、そのデータに基づいて、血小板数又は血小板凝集塊計数等の血小板パラメータを生体サンプルに割り当てることと、を含み得る。特定の実施形態はまた、血小板関連計数指標を出力することを含み得る。これらの工程のうちの１つ以上が、血液分析器により実行され得る。

【0010】

本発明の実施形態は、素早くかつ正確な血小板スクリーニング結果を提供する。本明細書に開示される方法を使用し、多重パラメータ細胞分析システムから得られる情報を使用して、個体の血小板容態を評価し、予測することが可能である。本明細書に開示されるように、例示的な細胞分析システムは、体積、伝導度、及び／又は複数の光散乱角度などのパラメータを、同時に測定することができる。かかるシステムは、血球分析技術を実装するため、高度な分離能及び感度をもたらす。場合によっては、細胞分析システムは、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上の角度範囲における光散乱を検出する。更に、細胞分析システムは、軸方向光損失として知られる光減衰パラメータに相当する、入射光から０°〜約１°の角度で信号を検出することもできる。非限定例として、血液分析器は、複数の角度（例えば、ＡＬ２の０°〜０．５°、ＬＡＬＳの約５．１°、ＬＭＡＬＳの９°〜１９°、及びＵＭＡＬＳの２０°〜４３°）の光散乱検出データを提供する。これらの技術により、特により近代的な試験が容易に利用可能でない状況において、異常血小板パラメータを有する患者の迅速で正確な診断及び治療が可能となる。

【0011】

かかる血液分析機器は、８，０００個を超える細胞を数秒の間に評価することができ、細胞体積、細胞質の粒状度、核の複雑さ、及び内部密度の形態学的特徴が定量的に評価され得る。個体の血小板症状又は状態の予測戦略の実行のため、数値的決定基準を生成及び使用することができる。例えば、血小板症状又は状態は、個体の血小板数と関連付けられ得、任意に凝集塊中に存在する血小板の推定計数により調節され得る。場合によっては、血小板容態又は状態は、個体の計算された血小板数又は総血小板数（補正）を指し得る。

【0012】

したがって、本発明の実施形態は、疾患分類のために多様性パラメータモデルを使用する血小板関連容態の診断又は監視のためのシステム及び方法を包含する。様々な測定パラメータからの情報を組み合わせることによって、形態学的変化のパターンを解析することができる。したがって、本発明の実施形態は、通常より低い血小板数（例えば、血小板減少症）と関連付けられる障害又は容態、例えば、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）、溶性血貧血、脾機能亢進、血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、白血病、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、腹腔疾患及びビタミンＫ不足、並びに、通常より高い血小板数（例えば、血小板増多症）と関連付けられる障害又は容態例えば、貧血、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、真性多血症、及び原発性血小板血症を評価するための血小板パラメータの分析での使用に適切である。本明細書で開示されるような血小板分析システム及び方法はまた、化学療法及び幹細胞移植後の患者の骨髄回復の指標を提供するために使用され得る。

【0013】

一態様において、本発明の実施形態は、個体の血液から得られた生体サンプルに基づいて、個体における血小板状態を推定するためのシステム及び方法を包含する。例示的なシステムは、細胞照合ゾーンを有する光学素子と、生体サンプルの流体力学的に集中した流れを細胞照合ゾーンに向けて送達するように構成される流路と、細胞照合ゾーンを個々に通過する生体サンプルの細胞の直流（ＤＣ）インピーダンスを測定するように構成される電極アセンブリと、ビーム軸に沿って光ビームを方向付け、細胞照合ゾーンを個々に通過する生体サンプルの細胞を照射するように配向される光源と、細胞照合ゾーンと光学的に結合し、生体サンプルの照射された細胞によって散乱され、透過した光を測定する光検出アセンブリと、を含む。いくつかの実施形態によると、光検出アセンブリは、光ビーム軸に対して第１の範囲内の照射された細胞からの第１の伝播光と、光ビーム軸に対する第２の角度範囲内の照射された細胞からの第２の伝播光であって、第２の範囲が第１の範囲とは異なる、第２の伝播光と、ビーム軸に沿う照射された細胞から伝播した軸方向光と、を測定するように構成される。特定の実施形態において、このシステムは、生体サンプルの細胞からのＤＣインピーダンス、第１の伝播光、第２の伝播光、及び軸方向光測定値の部分集合を、個体における血小板状態の推定値と相関させるように構成される。場合によっては、個体における血小板状態の推定値は、観察された血小板数及び計算された損失した凝集塊化血小板数に基づく補正血小板数を含む。計算された損失した凝集塊化血小板数は、測定値の部分集合に基づくことができ、測定値の部分集合は、有核赤血球モジュールを介して得ることができる。場合によっては、観察された血小板数は、全血球計算モジュールから得られたデータに基づく。場合によっては、個体における血小板状態の推定値は、観察された血小板数に基づく推定される血小板数、及び計算された損失した凝集塊化血小板数を含む。場合によっては、ＤＣ測定値は、有核赤血球モジュールを介して得られ、システムは、ＤＣインピーダンス測定値を、個体の白血球状態の推定と相関させるように構成される。場合によっては、個体における血小板状態の推定値は、観察された血小板数に基づく推定される血小板数及び計算された損失した凝集塊化血小板数を含む。観察された血小板数は、全血球計算モジュールから得られたデータに基づき得、計算された損失した凝集塊化血小板数は、有核赤血球モジュールから得られたデータに基づき得る。場合によっては、システムは、全血球計算モジュールを含む。場合によっては、ＤＣインピーダンス測定値は、有核赤血球モジュールを介して得られ、システムは、ＤＣインピーダンス測定値を、個体の血小板状態の推定値と相関させるように構成される。場合によっては、部分集合の光測定値は、有核赤血球モジュールを介して得られ、システムは、有核赤血球モジュールを介して得られた光測定値を個体の血小板状態の推定値と相関させるように構成される。場合によっては、部分集合の光測定値が、有核赤血球モジュールを介して得られ、ＤＣインピーダンス測定値が、有核赤血球モジュールを介して得られ、システムが、有核赤血球モジュールを介して得られたＤＣインピーダンス測定値、有核赤血球モジュールを介して得られた光測定値、及び全血球計算モジュールを介して得られた血小板数を血小板状態が補正血小板数に対応する個体の血小板状態の推定値と相関させるように構成される。場合によっては、有核赤血球モジュールを介して得られた部分集合の光測定値は、回転下方角度光散乱（ＲＬＡＬＳ）測定値、拡張下方中角度光散乱（ＥＬＭＡＬＳ）測定値、回転上方中角度光散乱（ＲＵＭＡＬＳ）測定値、又は軸方向光損失（ＡＬＬ）測定値を含む。場合によっては、生体サンプルは、個体の血液サンプルを含む。

【0014】

別の態様において、本発明の実施形態は、個体の血液から得られた生体サンプルに基づいて、個体における血小板状態を推定するためのシステム及び方法を包含する。例示的な方法は、生体サンプルの流体力学的に集中した流れを光学素子の細胞照合ゾーンに向けて送達することと、電極アセンブリを用いて、細胞照合ゾーンを個々に通過する生体サンプルの細胞の電流（ＤＣ）インピーダンスを測定することと、軸を有する電磁ビームを用いて、細胞照合ゾーンを個々に通過する生体サンプルの細胞を照射することと、光検出アセンブリを用いて、ビーム軸に対して第１の範囲内の照射された細胞からの第１の伝播光を測定することと、光検出アセンブリを用いて、ビーム軸に対して第２の角度範囲内の照射された細胞からの第２の伝播光を測定することであり、第２の範囲が第１の範囲と異なる第２の伝播光を測定することと、光検出アセンブリを用いて、ビーム軸に沿って照射された細胞から伝播された軸方向光を測定することと、生体サンプルの細胞からのＤＣインピーダンス、第１の伝播光、第２の伝播光、及び軸方向光測定値の部分集合を、個体の推定される血小板状態と相関させることと、を含む。特定の実施形態において、個体における推定される血小板状態が、観察された血小板数及び計算された損失した凝集塊化血小板数に基づく補正血小板数を含み、計算された損失した凝集塊化血小板数が、測定値の部分集合に基づき、測定値の部分集合が、有核赤血球モジュールを介して得られる。

【0015】

別の態様において、本発明の実施形態は、個体からの生体サンプルを評価するためのシステム及び方法を包含する。例示的な方法は、生体サンプルの電流光伝播データプロファイルを得ることと、血小板状態指標を電流光伝播データプロファイルに基づいて生体サンプルに割り当てることと、割り当てられた血小板状態指標を出力することと、を含む。特定の実施形態において、血小板状態指標は、観察された血小板数及び計算された損失した凝集塊化血小板数に基づく補正血小板数を含み、計算された損失した凝集塊化血小板数が、電流光伝播データプロファイルに基づき、電流光伝播データプロファイルが有核赤血球モジュールを介して得られる。

【0016】

別の態様において、本発明の実施形態は、個体から得られた生体サンプルに基づいて、個体における血小板状態を推定するための自動化されたシステム及び方法を包含する。例示的なシステムは、開口部を通る（thorough）生体サンプルの動きを受容し、方向付けるように構成される導管と、開口部を通って移動する際に、生体サンプルを通して発光し、光の散乱及び吸収に関するデータを収集するように構成される光散乱及び吸収測定装置と、開口部を通って移動する際に、生体サンプルに電流を通過させ、電流に関するデータを収集するように構成される電流測定装置と、を含む。特定の実施形態において、システムは、光の散乱及び吸収に関するデータ、並びに電流に関するデータを、個体の推定される血小板状態と相関させるように構成される。特定の実施形態において、個体の推定される血小板状態は、観察された血小板数及び計算された損失した凝集塊化血小板数に基づく補正血小板数を含み、計算された損失した凝集塊化血小板数が、光の散乱及び吸収に関するデータ、並びに電流に関するデータに基づき、光の散乱及び吸収に関するデータ、並びに電流に関するデータが有核赤血球モジュールを介して得られる。

【0017】

更に別の態様において、本発明の実施形態は、個体から得られた生体サンプルに基づいて、個体の血小板状態を推定するための自動化されたシステム及び方法を包含する。例示的なシステムは、サンプルが開口部、記憶媒体を通過する際に、生体サンプルの光散乱データ、光吸収データ、及び電流データを得るためのトランスデューサ、プロセッサ、記憶媒体を含む。記憶媒体は、プロセッサによって実行されるとき、システムに、光散乱データ、光吸収データ、電流データ、又はこれらの組み合わせを使用し、個体の推定される血小板状態を判定させ、推定される血小板状態に関するプロセッサ情報から出力させるように構成される、コンピュータアプリケーションを含み得る。特定の実施形態において、個体の推定される血小板状態が、観察された血小板数及び計算された損失した凝集塊化血小板数に基づく補正血小板数を含み、計算された損失した凝集塊化血小板数が、電流データに基づき、電流データが、有核赤血球モジュールを介して得られる。

【0018】

更に別の態様において、本発明の実施形態は、個体から得られた生体サンプルに基づいて、個体の血小板状態を推定するための自動化されたシステム及び方法を包含する。例示的なシステムは、サンプルが開口部を通過する際に、生体サンプルの電流光伝播データを得るためのトランスデューサと、プロセッサと、記憶媒体と、を含む。記憶媒体は、プロセッサによって実行されるとき、システムに、電流光伝播データを使用し、個体の推定される血小板状態を判定させ、推定される血小板状態に関するプロセッサ情報から出力させるように構成される、コンピュータアプリケーションを含み得る。

【0019】

別の態様において、本発明の実施形態は、個体から得られた生体サンプルに基づいて、個体が異常血小板状態を有し得るかどうかを識別するためのシステム及び方法を包含する。例示的なシステムは、サンプルが開口部を通過する際に、生体サンプルの光散乱データ、光吸収データ、及び電流データを得るトランスデューサと、プロセッサと、記憶媒体と、を含む。特定の実施形態において、記憶媒体は、プロセッサによって実行されるとき、システムに、光散乱データ、光吸収データ、又は電流データのうち１つ以上の測定値に基づくパラメータを使用し、個体の推定される血小板状態を判定させ、個体の推定される血小板状態に関する血小板のプロセッサ情報から出力させるように構成される、コンピュータアプリケーションを含む。

【0020】

更に別の態様において、本発明の実施形態は、個体から得られた生体サンプルを評価するためのシステム及び方法を包含する。例示的な方法は、生体サンプルを粒子分析システムの開口部に通過させることと、サンプルが開口部を通過する際に生体サンプルの光散乱データ、光吸収データ、及び電流データを得ることと、光散乱データ、光吸収データ、電流データ、又はそれらの組み合わせに基づいて、生体サンプルの電流光伝播データプロファイルを判定することと、電流光伝播データプロファイルに基づいて、血小板状態指標を生体サンプルに割り当てることと、割り当てられた血小板状態指標を出力することとを含む。

【0021】

別の態様において、本発明の実施形態は、個体からの生体サンプルを評価する自動化されたシステム及び方法を包含する。例示的な方法は、粒子分析計を使用して、サンプルが開口部を通過する際に、生体サンプルの光散乱データ、光吸収データ、及び電流データを得ることと、粒子分析システムから得られたアッセイ結果に基づいて、生体サンプルの電流光伝播データプロファイルを判定することと、コンピュータシステムを使用して、電流光伝播データプロファイルの電流光伝播データ測定値に基づくパラメータに従い個体の推定される血小板状態を判定することと、推定される血小板状態を出力することとを含む。

【0022】

別の態様において、本発明の実施形態は、個体の血小板状態を推定するための自動化されたシステム及び方法を包含する。例示的なシステムは、記憶媒体と、プロセッサと、を含む。記憶媒体は、プロセッサによって実行されるとき、システムにサンプルの軸方向光損失測定値、サンプルの光散乱測定値、サンプルの電流測定値、又はそれらのうちの２つ以上の組み合わせに少なくとも部分的に関する情報を含む、個体の生体サンプルに関する情報にアクセスさせ、軸方向光損失測定値、複数の光散乱測定値、電流測定値、又はそれらの組み合わせに少なくとも部分的に関する情報を使用し、個体の推定される血小板状態を判定させるように構成されるコンピュータアプリケーションを含む。コンピュータアプリケーションはまた、プロセッサによって実行されるとき、システムに、推定される血小板状態に関するプロセッサ情報から出力させるように構成され得る。特定の実施形態において、電流測定値は、サンプルの低周波電流測定値を含む。特定の実施形態において、光散乱測定値は、低角度光散乱測定値、下方中角度光散乱測定値、上方中角度光散乱測定値、又はそれらのうちの２つ以上の組み合わせを含む。特定の実施形態において、システムは、電磁ビーム源及び光センサアセンブリを含み得、光センサは軸方向光損失測定値を得るために使用される。特定の実施形態において、システムは、電磁ビーム源及び光センサアセンブリを含み得、光センサアセンブリが光散乱測定値を得るために使用される。特定の実施形態において、システムは、電磁ビーム源及び電極アセンブリを含み得、電極アセンブリが電流測定値を得るために使用される。

【0023】

更に別の態様において、本発明の実施形態は、個体の血小板状態を推定するための自動化されたシステム及び方法を包含する。例示的なシステムは、記憶媒体と、プロセッサと、を含む。記憶媒体は、プロセッサによって実行されるとき、システムに、個体の生体サンプルに関する電流光伝播データにアクセスさせ、電流光伝播データを使用し、個体の推定される血小板状態を判定させ、推定される血小板状態に関するプロセッサ情報から出力させるように構成される、コンピュータアプリケーションを含み得る。特定の実施形態において、プロセッサは、電流光伝播データを入力として受信するように構成される。特定の実施形態において、プロセッサ、記憶媒体、又は両方は、血液学的機器内に組み込まれる。特定の実施形態において、血液学的機器は、電流光伝播データを生成する。特定の実施形態において、プロセッサ、記憶媒体、又は両方は、コンピュータ内に組み込まれ、そのコンピュータは血液学的機器と通信する。特定の実施形態において、血液学的機器は、電流光伝播を生成する。特定の実施形態において、プロセッサ、記憶媒体、又は両方は、コンピュータ内に組み込まれ、コンピュータはネットワークにより血液学的機器と遠隔通信する。特定の実施形態において、血液学的機器は、電流光伝播データを生成する。特定の実施形態において、電流光伝播データとして、サンプルの軸方向光損失測定値、サンプルの光散乱測定値、又はサンプルの電流測定値、又はそれらの組み合わせが挙げられる。

【0024】

別の態様において、本発明の実施形態は、個体の生理学的状態を評価する自動化されたシステム及び方法を包含する。例示的なシステムは、記憶媒体と、プロセッサと、を含む。記憶媒体は、プロセッサによって実行されるとき、システムを個体の生体サンプルに関する電流光伝播データにアクセスさせ、電流光伝播データの測定値に基づくパラメータを使用して、個体の生理学的状態を判定させるように構成されるコンピュータアプリケーションを含み得、その判定された生理学的状態が、個体が正常な血小板状態を有するかどうかの指標を提供する。またコンピュータアプリケーションは、プロセッサによって実行されるとき、システムに、個体の生理学的状態に関するプロセッサ情報から出力させるように構成されてもよい。

【0025】

更なる態様において、本発明の実施形態は、血液学システムデータから個体が異常な血小板状態を有し得るかどうかを識別するためのシステム及び方法を包含する。例示的なシステムは、記憶媒体と、プロセッサと、を含む。記憶媒体は、プロセッサによって実行されるとき、システムを、個体の血液サンプルに関する電流光伝播データにアクセスさせ、血液学的電流光伝播データの測定値に基づくパラメータを使用し、個体の推定される血小板状態を判定させるように構成される、コンピュータアプリケーションを含み得る。コンピュータアプリケーションはまた、プロセッサによって実行されるとき、システムに、個体の推定される血小板状態に関する血小板のプロセッサ情報から出力させるように構成され得る。

【0026】

別の態様において、本発明の実施形態は、個体からの生体サンプルを評価するための自動化されたシステム及び方法を包含する。例示的な方法は、サンプルを分析する分子分析システムから得られたアッセイ結果に基づいて生体サンプルの電流光伝播データプロファイルを判定することと、コンピュータシステムを使用して、パラメータに従う個体の生理学的状態を判定することであって、該パラメータが、電流光伝播データプロファイルの電流光伝播データ測定値の関数に基づき、該生理学的状態が、個体が正常な血小板状態を有するかどうかという指標を提供する、判定することと、を含む。方法はまた、生理学的状態を出力することを含み得る。

【0027】

更になお別の態様において、本発明の実施形態は、患者の治療レジメンを決定するためのシステム及び方法を包含する。例示的な方法は、患者の生体サンプルに関する電流光伝播データプロファイルにアクセスすることと、コンピュータシステムを使用して、電流光伝播データプロファイルに基づいて患者に対する推定される血小板状態を判定することと、を含む。方法はまた、推定される血小板状態に基づいて患者の治療レジメンを決定することを含み得る。いくつかの方法は、治療レジメンを患者に与えることを含み得る。特定の実施形態において、推定される血小板状態は、血小板関連疾患の陽性指標を含み得る。

【0028】

なお更なる態様において、本発明の実施形態は、個体の治療レジメンを決定するためのシステム及び方法を包含し、例示的な方法は、個体の生体サンプルに関する電流光伝播データプロファイルにアクセスすることと、コンピュータシステムを使用して、パラメータに従う個体の生理学的状態を判定することであって、該パラメータが電流光伝播データプロファイルの電流光伝播データ測定値に基づき、該生理学的状態が推定される血小板状態に対応する、判定することとを含み得る。例示的な方法はまた、個体の生理学的状態に基づいて個体の治療レジメンを決定することを含み得る。

【0029】

別の態様において、本発明の実施形態は、個体の血液から得られた生体サンプルに基づいて、個体の血小板状態を推定するための自動化されたシステム及び方法を包含する。例示的なシステムは、細胞照合ゾーンを有する光学素子と、生体サンプルの流体力学的に集中した流れを細胞照合ゾーンに向けて送達するように構成される流路と、細胞照合ゾーンを個々に通過する生体サンプルの細胞の直流（ＤＣ）インピーダンスを測定するように構成される電極アセンブリと、ビーム軸に沿って光ビームを方向付け、細胞照合ゾーンを個々に通過する生体サンプルの細胞を照射するように配向される光源と、細胞照合ゾーンと光学的に結合する光検出アセンブリと、を含み得る。特定の実施形態において、光検出アセンブリは、第１の伝播光を検出する、細胞照合ゾーンに対する第１の位置に配置される第１のセンサゾーンと、第２の伝播光を検出する、細胞照合ゾーンに対する第２の位置に配置される第２のセンサゾーンと、軸方向伝播光を検出する、細胞照合ゾーンに対する第３の位置に配置される第３のセンサゾーンと、を含み得る。特定の実施形態において、システムは、生体サンプルの細胞からのＤＣインピーダンス、第１の伝播光、第２の伝播光、及び軸方向光測定値の部分集合を、個体の推定される血小板状態と相関させるように構成される。

【0030】

更に別の態様において、本発明の実施形態は、個体の血液から得られた生体サンプルに基づいて、個体における血小板状態を推定するための自動化されたシステム及び方法を包含する。例示的なシステムは、細胞照合ゾーンを有する光学素子と、生体サンプルの流体力学的に集中した流れを細胞照合ゾーンに向けて送達するように構成される流路と、細胞照合ゾーンを個々に通過する生体サンプルの細胞の直流（ＤＣ）インピーダンスを測定するように構成される電極アセンブリと、ビーム軸に沿って光ビームを方向付け、細胞照合ゾーンを個々に通過する生体サンプルの細胞を照射するように配向される光源と、細胞照合ゾーンと光学的に結合し、生体サンプルの照射された細胞によって散乱され、透過した光を測定する光検出アセンブリと、を含む。光検出アセンブリは、光ビーム軸に対して第１の範囲内の照射された細胞からの第１の伝播光と、光ビーム軸に対する第２の角度範囲内の照射された細胞からの第２の伝播光であって、第２の範囲が第１の範囲とは異なる、第２の伝播光と、ビーム軸に沿う照射された細胞から伝播した軸方向光とを測定するように構成され得る。特定の実施形態において、システムは、ＤＣインピーダンス、第１の伝播光、第２の伝播光、及び軸方向光測定値の部分集合と組み合わせた、生体サンプルの細胞からの全血球計算血小板測定値の部分集合を、個体における血小板状態の推定値と相関させるように構成される。場合によっては、光検出アセンブリは、第１の伝播光を測定する第１のセンサゾーンと、第２の伝播光を測定する第２のセンサゾーンと、軸方向伝播光を測定する第３のセンサゾーンとを含む。場合によっては、光検出アセンブリは、第１の伝播光を測定する第１センサと、第２の伝播光を測定する第２センサと、軸方向伝播光を測定する第３センサと、を含む。場合によっては、システムは、ＤＣインピーダンス、第１の伝播光、第２の伝播光、及び軸方向光測定値の部分集合と組み合わせた、生体サンプルの細胞からの全血球計算血小板測定値の部分集合を、個体における血小板状態の推定値と相関させるように構成される。場合によっては、生体サンプルは、個体の血液サンプルである。

【0031】

一態様において、本発明の実施形態は、生体サンプルにおける血小板状態を判定する血液学システム及び方法を包含する。例示的なシステムは、血小板凝集塊イベント及び白血球イベントを判定するように構成される第１のモジュールと、観察された血小板数及び白血球濃度を判定するように構成される第２のモジュールと、観察された血小板数及び損失した血小板数の合計に基づいて血小板状態を判定するように構成されるデータ処理モジュールとを含む。損失した血小板数は、第１の因子及び第２の因子の乗算積を含み得、該第１の因子が、血小板凝集塊イベント及び白血球イベントに基づき、該第２の因子が、白血球濃度を含む。

【0032】

別の態様において、本発明の実施形態は、第１のモジュールが、体積伝導度散乱（ＶＣＳ）モジュールである、段落［００３１］に記載のシステムを包含する。

【0033】

別の態様において、本発明の実施形態は、第２のモジュールが全血算（ＣＢＣ）モジュールである、段落［００３１］又は［００３２］に記載のシステムを包含する。

【0034】

別の態様において、本発明の実施形態は、血小板状態が推定される補正血小板数を含む、段落［００３１］〜［００３３］に記載のシステムを包含する。

【0035】

別の態様において、本発明の実施形態は、第１のモジュールが細胞照合ゾーンを有する光学素子と、生体サンプルの流体力学的に集中した流れを細胞照合ゾーンに向けて送達するように構成される流路と、細胞照合ゾーンを個々に通過する生体サンプルの細胞の直流（ＤＣ）インピーダンスを測定するように構成される電極アセンブリと、ビーム軸に沿って光ビームを方向付け、細胞照合ゾーンを個々に通過する生体サンプルの細胞を照射するように配向される光源と、細胞照合ゾーンと光学的に結合し、生体サンプルの照射された細胞によって散乱され、透過した光を測定する光検出アセンブリと、を含む、段落［００３１］〜［００３４］のいずれか１つに記載のシステムを包含する。光検出アセンブリは、光ビーム軸に対して第１範囲内の照射された細胞からの第１の伝播光と、光ビーム軸に対して第２の角度範囲内の照射された細胞からの第２の伝播光であって、第２範囲が第１範囲と異なる伝播光、及び、ビーム軸に沿って照射された細胞から伝播された軸方向光と、を測定するように構成することができる。

【0036】

別の態様において、本発明の実施形態は、第２のモジュールが、観察された血小板数を判定するように構成される第１の開口槽と、白血球濃度を判定するように構成される第２の開口槽とを含む、段落［００３１］〜［００３５］のいずれか１つに記載のシステムを包含する。

【0037】

別の態様において、本発明の実施形態は、第１の開口槽が赤血球開口槽を含み、第２の開口槽が白血球開口槽を含む、段落［００３１］〜［００３６］のいずれか１つに記載のシステムを包含する。

【0038】

別の態様において、本発明の実施形態は、第１のモジュールが有核赤血球モジュールである、段落［００３１］〜［００３７］のいずれか１つに記載のシステムを包含する。

【0039】

別の態様において、本発明の実施形態は、生体サンプルが個体の血液サンプルを含む、段落［００３１］〜［００３８］のいずれか１つに記載のシステムを包含する。

【0040】

別の態様において、本発明の実施形態は、損失した血小板数が、第１の因子、第２の因子、及び第３の因子の乗算積を含み、第１のモジュールが血小板凝集塊体積を判定するように構成され、第２のモジュールが単一血小板体積を判定するように構成され、第３の因子が血小板凝集塊体積対単一血小板体積の比率を含み、第１の因子が血小板凝集塊イベント対白血球イベントの比率を含む、段落［００３１］〜［００３９］のいずれか１つに記載のシステムを包含する。

【0041】

別の態様において、本発明の実施形態は、第１のモジュールが、回転下方角度光散乱（ＲＬＡＬＳ）測定値、拡張下方中角度光散乱（ＥＬＭＡＬＳ）測定値、回転上方中角度光散乱（ＲＵＭＡＬＳ）測定値、軸方向光損失（ＡＬＬ）測定値、又はそれらの任意の組み合わせを含む光測定値に基づいて血小板凝集塊イベントを判定するように構成される、段落［００３１］〜［００４０］のいずれか１つに記載のシステムを包含する。

【0042】

別の態様において、本発明の実施形態は、データ処理モジュールが、確率分布関数に基づいて各血小板凝集塊イベントの血小板細胞のそれぞれの数を判定し、各血小板凝集塊の血小板細胞のそれぞれの数の合計に基づいて血小板凝集塊中で生じる血小板細胞の総数を判定するように構成され、第１の因子が、血小板凝集塊中で生じる血小板細胞の総数対白血球イベントの比率を含む、段落［００３１］〜［００３９］のいずれか１つに記載のシステムを包含する。

【0043】

別の態様において、本発明の実施形態は、各血小板凝集塊イベントの血小板細胞のそれぞれの数が最大尤度推定値に基づく、段落［００４２］に記載のシステムを包含する。

【0044】

別の態様において、本発明の実施形態は、第１のモジュールが、電流（ＤＣ）インピーダンス測定値に基づいて、血小板凝集塊イベントを判定するように構成される［００４１］又は［００４２］に記載のシステムを包含する。

【0045】

一態様において、本発明の実施形態は、生体サンプルにおける血小板状態を判定するための自動化されたシステム及び方法を包含する。例示的な自動化された方法は、第１のモジュールを使用して、血小板凝集塊イベント及び白血球イベントを判定することと、第２のモジュールを使用して、観察された血小板数及び白血球濃度を判定することと、データ処理モジュールを使用して、観察された血小板数及び損失した血小板数の合計に基づいて、血小板状態を判定することとを含む。損失した血小板数は、第１の因子及び第２の因子の乗算積を含み得、該第１の因子が、血小板凝集塊イベント及び白血球イベントに基づき、該第２の因子が、白血球濃度を含む。

【0046】

別の態様において、本発明の実施形態は、第１のモジュールが体積伝導度散乱（ＶＣＳ）モジュールである、段落［００４５］に記載の方法を包含する。

【0047】

別の態様において、本発明の実施形態は、第２のモジュールが全血算（ＣＢＣ）モジュールである、段落［００４５］又は［００４６］に記載の方法を包含する。

【0048】

別の態様において、本発明の実施形態は、血小板状態が推定される補正血小板数を含む、段落［００４５］〜［００４７］のいずれか１つに記載の方法を包含する。

【0049】

別の態様において、本発明の実施形態は、第１のモジュールを使用して血小板凝集塊イベント及び白血球イベントを判定するプロセスが、生体サンプルの流体力学的に集中した流れを光学素子の細胞照合ゾーンに向けて送達することと、電極アセンブリを用いて、細胞照合ゾーンを個々に通過する生体サンプルの細胞の電流（ＤＣ）インピーダンスを測定することと、軸を有する光ビームを用いて、細胞照合ゾーンを個々に通過する生体サンプルの細胞を照射することと、光検出アセンブリを用いて、ビーム軸に対して第１の範囲内の照射された細胞からの第１の伝播光を測定することと、光検出アセンブリを用いて、ビーム軸に対して第２の角度範囲内の照射された細胞からの第２の伝播光であって、第２の範囲が第１範囲と異なる第２の伝播光を測定することと、光検出アセンブリを用いて、ビーム軸に沿って照射された細胞から伝播された軸方向光を測定することと、を含む、段落［００４５］〜［００４８］のいずれか１つに記載の方法を包含する。

【0050】

別の態様において、本発明の実施形態は、第２のモジュールを使用して観察された血小板数及び白血球濃度を判定するプロセスが、観察された血小板数を判定するように構成される第１の開口槽と白血球濃度を判定するように構成される第２の開口槽とを用いて生体サンプルを分析することを含む、段落［００４５］〜［００４９］のいずれか１つに記載の方法を包含する。

【0051】

別の態様において、本発明の実施形態は、第１の開口槽が赤血球開口槽を含み、第２の開口槽が白血球開口槽を含む、段落［００４５］〜［００５０］のいずれか１つに記載の方法を包含する。

【0052】

別の態様において、本発明の実施形態は、第１のモジュールが有核赤血球モジュールである、段落［００４５］〜［００５１］のいずれか１つに記載の方法を包含する。

【0053】

別の態様において、本発明の実施形態は、生体サンプルが個体の血液サンプルを含む、段落［００４５］〜［００５２］のいずれか１つに記載の方法を包含する。

【0054】

別の態様において、本発明の実施形態は、方法が第１のモジュールを使用して血小板凝集塊体積を判定し、第２のモジュールを使用して単一血小板体積を判定することを更に含み、損失した血小板数が第１の因子、第２の因子、及び第３の因子の乗算積を含み、第３の因子が血小板凝集塊体積対単一血小板体積の比率を含み、第１の因子が血小板凝集塊イベント対白血球イベントの比率を含む、段落［００４５］〜［００５３］のいずれか１つに記載の方法を包含する。

【0055】

別の態様において、本発明の実施形態は、第１のモジュールが、回転下方角度光散乱（ＲＬＡＬＳ）測定値、拡張下方中角度光散乱（ＥＬＭＡＬＳ）測定値、回転上方中角度光散乱（ＲＵＭＡＬＳ）測定値、軸方向光損失（ＡＬＬ）測定値、又はそれらの任意の組み合わせを含む光測定値に基づいて血小板凝集塊イベントを判定するように構成される、段落［００４５］〜［００５４］のいずれか１つに記載の方法を包含する。

【0056】

別の態様において、本発明の実施形態は、データ処理モジュールが、確率分布関数に基づいて、各血小板凝集塊イベントの血小板細胞のそれぞれの数を判定し、各血小板凝集塊の血小板細胞のそれぞれの数の合計に基づいて、血小板凝集塊中で生じる血小板細胞の総数を判定し、第１の因子が血小板凝集塊中で生じる血小板細胞の総数対白血球イベントの比率を含む、段落［００４５］〜［００５３］のいずれか１つに記載の方法を包含する。

【0057】

別の態様において、本発明の実施形態は、データ処理モジュールが、最大尤度推定値に基づいて各血小板凝集塊イベントの血小板細胞のそれぞれの数を判定する、段落［００５６］に記載の方法を包含する。

【0058】

別の態様において、本発明の実施形態は、第１のモジュールが、電流（ＤＣ）インピーダンス測定値に基づいて、血小板凝集塊イベントを判定する、段落［００５６］又は［００５７］に記載の方法を包含する。

【0059】

特定の態様において、例えば以下の項目が提供される：
（項目１）
生体サンプル中の血小板状態を判定するための血液学システムであって、
血小板凝集塊イベント及び白血球イベントを判定するように構成される第１のモジュールと、
観察された血小板数及び白血球濃度を判定するように構成される第２のモジュールと、
観察された血小板数及び損失した血小板数の合計に基づいて、血小板状態を判定するように構成されるデータ処理モジュールであって、前記損失した血小板数が、第１の因子及び第２の因子の乗算積を含み、前記第１の因子が、前記血小板凝集塊イベント及び前記白血球イベントに基づき、前記第２の因子が前記白血球濃度を含む、データ処理モジュールと、を備える、システム。
（項目２）
前記第１のモジュールが、体積伝導度散乱（ＶＣＳ）モジュールである、項目１に記載のシステム。
（項目３）
前記第２のモジュールが、全血算（ＣＢＣ）モジュールである、項目１又は２に記載のシステム。
（項目４）
前記血小板状態が、推定される補正血小板数を含む、項目１〜３のいずれか一項に記載のシステム。
（項目５）
前記第１のモジュールが、
細胞照合ゾーンを有する光学素子と、
前記生体サンプルの流体力学的に集中した流れを前記細胞照合ゾーンに送達するように構成される流路と、
前記細胞照合ゾーンを個々に通過する前記生体サンプルの細胞の直流（ＤＣ）インピーダンスを測定するように構成される電極アセンブリと、
前記細胞照合ゾーンを個々に通過する前記生体サンプルの前記細胞を照射するためにビーム軸に沿って光ビームを方向付けるように配向される光源と、
前記生体サンプルの前記照射された細胞によって散乱し、かつそれを通って透過した光を測定するように、前記細胞照合ゾーンに光学的に結合する光検出アセンブリであって、
前記光ビーム軸に対して第１の範囲内の前記照射された細胞からの第１の伝播光と、
前記光ビーム軸に対する第２の角度範囲内の前記照射された細胞からの第２の伝播光であって、前記第２の範囲が前記第１の範囲とは異なる、第２の伝播光と、
前記照射された細胞から伝播する前記ビーム軸に沿う軸方向光と、を測定するように構成される光検出アセンブリと、を備える、項目１〜４のいずれか一項に記載のシステム。
（項目６）
前記第２のモジュールが、
前記観察された血小板数を判定するように構成される第１の開口槽と、
前記白血球濃度を判定するように構成される第２の開口槽と、を備える、項目１〜５のいずれか一項に記載のシステム。
（項目７）
前記第１の開口槽が、赤血球開口槽を備え、前記第２の開口槽が、白血球開口槽を備える、項目１〜６のいずれか一項に記載のシステム。
（項目８）
前記第１のモジュールが、有核赤血球モジュールである、項目１〜７のいずれか一項に記載のシステム。
（項目９）
前記生体サンプルが、個体の血液サンプルを含む、項目１〜８のいずれか一項に記載のシステム。
（項目１０）
前記損失した血小板数が、前記第１の因子、前記第２の因子、及び第３の因子の乗算積を含み、前記第１のモジュールが、血小板凝集塊体積を判定するように構成され、前記第２のモジュールが、単一血小板体積を判定するように構成され、前記第３の因子が、前記血小板凝集塊体積対前記単一血小板体積の比率を含み、前記第１の因子が、前記血小板凝集塊イベント対前記白血球イベントの比率を含む、項目１〜９のいずれか一項に記載のシステム。
（項目１１）
前記第１のモジュールが、回転下方角度光散乱（ＲＬＡＬＳ）測定値、拡張下方中角度光散乱（ＥＬＭＡＬＳ）測定値、回転上方中角度光散乱（ＲＵＭＡＬＳ）測定値、及び軸方向光損失（ＡＬＬ）測定値からなる群から選択されるメンバーを含む光測定値に基づいて、前記血小板凝集塊イベントを判定するように構成される、項目１〜１０のいずれか一項に記載のシステム。
（項目１２）
前記データ処理モジュールが、確率分布関数に基づいて、各血小板凝集塊イベントの血小板細胞のそれぞれの数を判定するように、及び各血小板凝集塊の血小板細胞のそれぞれの数の合計に基づいて、血小板凝集塊中で生じる血小板細胞の総数を判定するように構成され、前記第１の因子が、血小板凝集塊中で生じる血小板細胞の総数対前記白血球イベントの比率を含む、項目１〜９のいずれか一項に記載のシステム。
（項目１３）
各血小板凝集塊イベントの血小板細胞の前記それぞれの数が、最大尤度推定値に基づく、項目１２に記載のシステム。
（項目１４）
前記第１のモジュールが、電流（ＤＣ）インピーダンス測定値に基づいて、前記血小板凝集塊イベントを判定するように構成される、項目１２又は１３に記載のシステム。
（項目１５）
生体サンプルにおける血小板状態を判定する自動化された方法であって、
第１のモジュールを使用して、血小板凝集塊イベント及び白血球イベントを判定することと、
第２のモジュールを使用して、観察された血小板数及び白血球濃度を判定することと、
データ処理モジュールを使用して、血小板数及び損失した血小板数の合計に基づいて、前記血小板状態を判定することであって、前記損失した血小板数が、第１の因子及び第２の因子の乗算積を含み、前記第１の因子が、前記血小板凝集塊イベント及び前記白血球イベントに基づき、前記第２の因子が前記白血球濃度を含む、前記血小板状態を判定することと、を含む自動化された方法。
（項目１６）
前記第１のモジュールが、体積伝導度散乱（ＶＣＳ）モジュールである、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記第２のモジュールが、全血算（ＣＢＣ）モジュールである、項目１５又は１６に記載の方法。
（項目１８）
前記血小板状態が、推定される補正血小板数を含む、項目１５〜１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記第１のモジュールを使用して、前記血小板凝集塊イベント及び前記白血球イベントを判定することが、
前記生体サンプルの流体力学的に集中した流れを光学素子の細胞照合ゾーンに送達することと、
電極アセンブリで、前記細胞照合ゾーンを個々に通過する前記生体サンプルの細胞の電流（ＤＣ）インピーダンスを測定することと、
軸を有する光ビームで、前記細胞照合ゾーンを個々に通過する前記生体サンプルの細胞を照射することと、
光検出アセンブリで、前記ビーム軸に対して第１の範囲内の前記照射された細胞からの第１の伝播光を測定することと、
前記光検出アセンブリで、前記ビーム軸に対する第２の角度範囲内の前記照射された細胞からの第２の伝播光を測定することであって、前記第２の範囲が前記第１の範囲とは異なる、測定することと、
前記光検出アセンブリで、前記照射された細胞から伝播する前記ビーム軸に沿う軸方向光を測定することと、を含む、項目１５〜１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記第２のモジュールを使用して前記観察された血小板数及び前記白血球濃度を判定することが、前記観察された血小板数を判定するように構成される第１の開口槽、及び前記白血球濃度を判定するように構成される第２の開口槽で生体サンプルを分析することを含む、項目１５〜１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記第１の開口槽が、赤血球開口槽を備え、前記第２の開口槽が、白血球開口槽を備える、項目１５〜２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記第１のモジュールが、有核赤血球モジュールである、項目１５〜２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記生体サンプルが、個体の血液サンプルを含む、項目１５〜２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
前記第１のモジュールを使用して、血小板凝集塊体積を判定し、前記第２のモジュールを使用して、単一血小板体積を判定することを更に含み、前記損失した血小板数が、前記第１の因子、前記第２の因子、及び第３の因子の乗算積を含み、前記第３の因子が、前記血小板凝集塊体積対前記単一血小板体積の比率を含み、前記第１の因子が、前記血小板凝集塊イベント対前記白血球イベントの比率を含む、項目１５〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記第１のモジュールが、回転下方角度光散乱（ＲＬＡＬＳ）測定値、拡張下方中角度光散乱（ＥＬＭＡＬＳ）測定値、回転上方中角度光散乱（ＲＵＭＡＬＳ）測定値、及び軸方向光損失（ＡＬＬ）測定値からなる群から選択されるメンバーを含む光測定値に基づいて、前記血小板凝集塊イベントを判定する、項目１５〜２４のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記データ処理モジュールが、確率分布関数に基づいて、各血小板凝集塊イベントの血小板細胞のそれぞれの数を判定し、かつ各血小板凝集塊の血小板細胞のそれぞれの数の合計に基づいて、血小板凝集塊中で生じる血小板細胞の総数を判定し、前記第１の因子が、前記血小板凝集塊中で生じる血小板細胞の総数対前記白血球イベントの比率を含む、項目１５〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記データ処理モジュールが、各血小板凝集塊イベントの血小板細胞の前記それぞれの数を判定し、最大尤度推定値に基づく、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記第１のモジュールが電流（ＤＣ）インピーダンス測定値に基づいて前記血小板凝集塊イベントを判定する、項目２６又は２７に記載の方法。
上記したもの及び本発明の実施形態の多くの他の特徴及び付随する利点は、下記の実施形態への参照により、付随の図と共に考慮されると、明らかとなりより理解されるだろう。

【図面の簡単な説明】

【0060】

【図1A】本発明の実施形態による血小板計数及び分析の態様を示す。

【図1B】本発明の実施形態による血小板計数及び分析の態様を示す。

【図1C】本発明の実施形態による血小板計数及び分析の態様を示す。

【図2】本発明の実施形態による細胞分析システムの態様を概略的に示す。

【図3】本発明の実施形態による細胞分析システムの態様を示す、システムブロック図を示す。

【図4】本発明の実施形態による個体の血小板状態を評価するための自動化された細胞分析システムの態様を示す。

【図4A】本発明の実施形態による細胞分析システムの光学素子の態様を示す。

【図5】本発明の実施形態による、個体の血小板状態を評価するための例示的な方法の態様を示す。

【図6】本発明の実施形態による例示的なモジュールシステムの、簡略ブロック図を示す。

【図7】本発明の実施形態による計数分析技術のスクリーンショットを示す。

【図7A】本発明の実施形態による血球パラメータを得るための技術の態様を概略的に示す。

【図7B】本発明の実施形態による血球パラメータを得るための技術の態様を概略的に示す。

【図7C】本発明の実施形態による血球パラメータを得るための技術の態様を概略的に示す。

【図7D】本発明の実施形態による血球パラメータを得るための技術の態様を概略的に示す。

【図7E】本発明の実施形態による血球パラメータを得るための技術の態様を概略的に示す。

【図7F】本発明の実施形態による血球パラメータを得るための技術の態様を概略的に示す。

【図7G】本発明の実施形態による血球パラメータを得るための技術の態様を概略的に示す。

【図7H】本発明の実施形態による血球パラメータを得るための技術の態様を概略的に示す。

【図7I】本発明の実施形態による血球パラメータを得るための技術の態様を概略的に示す。

【図7J】本発明の実施形態による血球パラメータを得るための技術の態様を概略的に示す。

【図8】本発明の実施形態による個体から得られた生体サンプルに基づいて血小板状態を判定するための方法の態様を示す。

【図9】本発明の実施形態による血球分析システム及び方法の態様を示す。

【図10A】本発明の実施形態による血球分析システム及び方法の態様を示す。

【図10B】本発明の実施形態による血球分析システム及び方法の態様を示す。

【発明を実施するための形態】

【0061】

説明の目的上、及び概要において、本発明の実施形態は、血小板凝集塊化に対して補正される血小板数を得るための血液分析器中の有核赤血球（ＮＲＢＣ）モジュールの使用を含むシステム及び方法を包含する。例示的な血球分析器は、フローセル中のウィンドウに向けて方向付けられた細い光ビームを生じさせる、光源を含んでもよい。様々な非限定実施形態において、光源はレーザー又はレーザーダイオードであり、キャリア流体は、血液サンプルの個々の細胞をフローセルを通して運ぶことによって、個々の各細胞の光ビームとの相互作用を可能にする。フローセルに隣接して位置する複数の光センサを使用して、フローセルを通過する細胞によって様々な角度で散乱する光の強度を記録することができる。特定の実施形態において、１つの光センサは光ビームの経路中にじかに置かれ、３つの光センサのグループは、光ビームの経路から測定された、所定の角度範囲内の細胞によって散乱された光を集めるために位置される。信号は、これらの検出器からプロセッサに伝送され、デジタル化、解析を経て、結果を表示することができる。

【0062】

いくつかの実施形態によると、ＮＲＢＣモジュールは、個体から得られた生体サンプルの血球を分析するために使用され得る。特定のＮＲＢＣ処理技術は、ＮＲＢＣ、ＷＢＣ、及び任意の血小板又は存在し得る細胞残屑の一体性保持物を維持しながら、全血液サンプルの一部を希釈することと、希釈物を無核赤血球を選択的に除去した溶解試薬で処理することと、を含む。例示的なＮＲＢＣ処理技術はまた、米国特許第７，２０８，３１９号に記載されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0063】

したがって、本明細書に記載されるのは、個体から得られた生体サンプルに基づいて、個体の血小板状態を評価するように構成される血液学システム及び方法である。図１Ａは、赤血球（左、ヒト赤血球）、血小板（中央、栓球）、及び白血球（右、白血球）を含む血球の走査型電子顕微鏡写真を提供する。これらの３つの血球型の各々は、骨髄中で生成される。血小板は、骨髄中の大きい細胞である巨核球から生じる。巨核球は骨髄の小さい血管中に延在し、巨核球細胞質の断片は、未熟血小板を形成するために放出される。血液循環中への放出後に血小板は成熟する。血小板は、約７〜１０日のライフサイクルを有し、血小板形成及び交換は、持続的なサイクルである。血小板は、止血及び血餅形成において重要な役割を果たす。

【0064】

図１Ｂは、凝集塊が生体サンプル中にどのように存在し得る又は存在し得ないかの概略図を提供する。例えば、サンプルＩは、血小板凝集塊を含有しないが、サンプルＩＩでは血小板の凝集塊化がある。ここで示されるように、血小板測定における凝集塊人工物は、自動化されたシステムで血液を分析するときに損失し得るので（例えば、凝集塊化してない血小板のみが機械によってそのように検出される）、正確でない計数を提供するか、又は真の血小板数を得るために時間のかかる手動測定を必要とする。

【0065】

図１Ｃで示されるように、様々な血小板パラメータは、個体の血小板状態を評価するために評価され得る。例えば、例示的な評価技術は、血小板の観察された計数、並びに、サンプル内の凝集塊中に含有される血小板の推定される数を得ることを含み得る。したがって、本発明の実施形態は、粒子分析器を使用して血液サンプル中の血小板を数え、区別するためのシステム及び方法を包含する。特定の分析技術は、血小板凝集塊中に含有される血小板数を推定し、次にこの推定される値を、総血小板数（補正）に到達するために血小板の実際の数に加えることによって補正血小板数を推定するために使用され得る。関連して、本明細書に記載の血液学システム及び方法は、個体の生体サンプルの特定のインピーダンス、伝導度、及び角度付き光伝播測定値に関するデータに基づいて、個体が正常又は異常な血小板パラメータを示しているのかどうかを評価することができる。

【0066】

複数の角度における光散乱を検出する細胞分析システムは、生体サンプル（例えば、血液サンプル）を分析し、個体の予測される血小板状態を出力するために使用され得る。例示的なシステムは、３つ以上の角度範囲について光散乱データに加えて、吸光、又は軸方向光損失測定値に関連する光透過データを得るセンサアセンブリを具備し、このため、特定の染料、抗体、又は蛍光技術を必要とせずに、正確で、感度が高く、かつ分離能が高い結果をもたらす。一例において、血液分析器は、複数の光散乱角度に基づいて生体サンプル（例えば、血液サンプル）を分析し、個体の予測される血小板状態を出力するように構成される。血液分析器は、血液内の細胞成分を示す形態学的特徴を認識するように構成される、様々なチャネル処理モジュールを含む。例えば、血液分析器は、特定の血球成分を分析するように構成されるＮＲＢＣチャネル処理モジュールを含む。血液分析器は、サンプルの分析に基づいて膨大な量のデータを生成するように構成され、本明細書において詳細に記載されるこのかかるデータは、ＣＢＣデータ又はＶＣＳデータと称され得る。

【0067】

いくつかの実施形態において、ＶＣＳデータは、分析したサンプルの各細胞に対する異なるパラメータの判定に基づいており、かかるパラメータは、各細胞の形態と相関する。具体的には、細胞の大きさに対応する体積パラメータは、インピーダンスによって直接測定することができる。更に、内部細胞密度に対応する伝導度パラメータは、細胞を横切る高周波の伝導によって直接測定することができる。その上、細胞質の粒状度及び核の複雑さに対応する５つの異なる光散乱の角度（又は角度範囲）は、例えば、様々な光検出機構を用いて測定することができる。

【0068】

図２は、細胞分析システム２００を概略的に示す。ここに示されるように、システム２００は、調製システム２１０と、トランスデューサモジュール２２０と、分析システム２３０と、を含む。システム２００は、本明細書において３つのコアシステムブロック（２１０、２２０、及び２３０）に関して非常に詳しく説明されるが、当業者は、システム２００が、中央制御プロセッサ（１つ又は複数）、ディスプレイシステム（１つ又は複数）、流体系（１つ又は複数）、温度制御システム（１つ又は複数）、ユーザー安全制御システム（１つ又は複数）などといった、多くの他のシステム構成要素を含むことを、容易に理解するであろう。操作中、全血サンプル（ＷＢＳ）２４０は、分析のためにシステム２００に提示されてよい。場合によっては、ＷＢＳ ２４０はシステム２００内に吸引される。例示的な吸引技術は、当業者には既知である。吸引後、ＷＢＳ ２４０は調製システム２１０に送達されてよい。調製システム２１０はＷＢＳ ２４０を受信し、更に測定かつ分析するために、ＷＢＳ ２４０の調製に関する操作を実行することができる。例えば、調製システム２１０は、トランスデューサモジュール２２０に提示するため、ＷＢＳ ２４０を所定の一定分量に分割してよい。また調製システム２１０は、混合チャンバを含んでもよく、適当な試薬をその一定分量に加えることができる。例えば、部分標本が白血球サブセット集団の鑑別について試験される場合、ＲＢＣを破壊し除去するために、溶解試薬（例えば、赤血球溶解緩衝剤であるＥＲＹＴＨＲＯＬＹＳＥ）が、当該部分標本に加えられてもよい。また、調製システム２１０は温度制御要素を含み、試薬及び／又は混合チャンバの温度を制御してもよい。適当な温度制御によって、調製システム２１０の操作の一貫性を改善することができる。

【0069】

場合によっては、所定の一定分量を、調製システム２１０からトランスデューサモジュール２２０に移してよい。以下で詳述するように、トランスデューサモジュール２２０は、その中を個々に通過するＷＢＳの細胞の、直流（ＤＣ）インピーダンス、高周波（ＲＦ）伝導度、光透過、及び／又は光散乱の測定を実行することができる。測定されたＤＣインピーダンス、ＲＦ伝導度、及び光伝播（例えば、光透過、光散乱）パラメータを、データ処理のために分析システム２３０に提供又は伝送することができる。場合によっては、分析システム２３０は、コンピュータ処理機能、及び／又は、図６に示され、かつ以下に詳しく述べられるシステムに関して本明細書で記載されるものなどの１つ以上のモジュール若しくは構成要素を含み得、これによって、測定されたパラメータを評価し、血球成分を識別して数え、ＷＢＳの要素の特徴を示すデータの部分集合を個体の血小板状態と相関させることができる。本明細書に示されるように、細胞分析システム２００は、予測される血小板状態及び／又は個体に対して処方される治療レジメンを含む、報告２５０を生成又は出力し得る。場合によっては、余剰の生体サンプルを、トランスデューサモジュール２２０から外部（あるいは内部）廃棄システム２６０に方向付けてよい。

【0070】

治療レジメンには、患者の状態に対処する目的で、１種以上の医薬品、又は治療薬を、個体に投与することを含んでよい。本明細書に記載されるように、異常血小板数を有すると識別された個体の治療のため、様々な治療法のうちのいずれも使用することができる。

【0071】

図３は、トランスデューサモジュールをより詳細に、及び付属要素をより詳細に示す。ここに示されるように、システム３００は、ビーム３１４を放出するレーザー３１０などの光源又は照射源を有する、トランスデューサモジュール３１０を含む。レーザー３１２は、例えば、６３５ｎｍ、５ｍＷの固体レーザーであってよい。場合によっては、システム３００は、ビーム３１４を調節して、得られるビーム３２２がフローセル３３０の細胞照合ゾーン３３２に焦点が合い、位置付けられるような、焦点調整システム３２０を含んでもよい。場合によっては、フローセル３３０は、調製システム３０２からサンプルの一定分量を受け取る。本明細書の別の場所で記載されるように、フローセル３３０内のサンプルの一定分量の流体力学的焦点調節のため、様々な流体装置及び技術を採用することができる。

【0072】

場合によっては、一定分量は、一般に細胞照合ゾーン３３２を通って流れ、その成分が細胞照合ゾーン３３２を１つずつ通過するようにする。場合によっては、システム３００は、米国特許第５，１２５，７３７号、同第６，２２８，６５２号、同第７，３９０，６６２号、同第８，０９４，２９９号、及び同第８，１８９，１８７号（これらの内容は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものなどの、トランスデューサモジュール又は血液分析機器の細胞照合ゾーン又は他の特徴を含んでもよい。例えば、細胞照合ゾーン３３２は、約５０×５０マイクロメートルの正方形の横断面で画定され、長さ（流れの方向に測定）が約６５マイクロメートルであってよい。フローセル３３０は、細胞照合ゾーン３３２を通過する細胞のＤＣインピーダンス及びＲＦ伝導度測定を行うため、第１及び第２電極３３４、３３６を有する電極アセンブリを含んでもよい。信号を、電極３３４、３３６から分析システム３０４に伝送することができる。電極アセンブリは、低周波電流及び高周波電流をそれぞれ使用して、細胞の体積及び伝導度の特徴を分析することができる。例えば、低周波ＤＣインピーダンス測定値を使用して、細胞照合ゾーンを通過する各個々の細胞の体積を分析することができる。関連して、高周波ＲＦ電流測定値を使用して、細胞照合ゾーンを通過する細胞の伝導度を判定することができる。細胞壁は、高周波電流に対して伝導体の機能を果たすため、高周波電流を使用して、電流が細胞壁及び各細胞内部を通過する際の細胞成分の絶縁特性の違いを検出することができる。高周波電流を使用して、細胞内部の核性及び顆粒性成分、並びに化学組成の特徴を確認することができる。

【0073】

入射ビーム３２２は、ビーム軸ＡＸに沿って進み、細胞照合ゾーン３３２を通過する細胞を照射して、その結果、ゾーン３３２から放射する角度範囲α（例えば、散乱、透過）内の光伝播が得られる。例示的なシステムは、本明細書の別の場所で記載されるような吸光、又は軸方向光損失測定値に関連する光を含む、角度範囲α内の３つ、４つ、５つ、又はそれ以上の角度範囲内の光を検出することができるセンサアセンブリを具備する。ここに示されるように、光伝播３４０は、光散乱検出器ユニット３５０Ａ、並びに、光散乱及び透過検出器ユニット３５０Ｂを任意に有する、光検出アセンブリ３５０によって検出することができる。場合によっては、光散乱検出器ユニット３５０Ａは、上方中角度光散乱（ＵＭＡＬＳ）、例えば、光ビーム軸に対して約２０〜約４２度の範囲内の角度で散乱、ないしは別の方法で伝播される光を検出し、測定するための光活性領域又はセンサゾーンを含む。場合によっては、ＵＭＡＬＳは、照合ゾーンを通過して流れる細胞を照射する入射ビーム軸に対して、約２０〜約４３度の角度範囲内で伝播する光に相当する。また、光散乱検出器ユニット３５０Ａは、下方中角度光散乱（ＬＭＡＬＳ）、例えば、光ビーム軸に対して約１０〜約２０度の範囲内の角度で散乱、ないしは別の方法で伝播される光を検出し、測定するための光活性領域又はセンサゾーンを含んでもよい。場合によっては、ＬＭＡＬＳは、照合ゾーンを通過して流れる細胞を照射する入射ビーム軸に対して、約９〜約１９度の角度範囲内で伝播する光に相当する。

【0074】

ＵＭＡＬＳ及びＬＭＡＬＳの組み合わせは、中角度光散乱（ＭＡＬＳ）と定義され、これは、照合ゾーンを通過して流れる細胞を照射する入射ビーム軸に対して、約９度〜約４３度の角度における光散乱、又は伝播である。

【0075】

図３に示されるように、光散乱検出器ユニット３５０Ａは、低角度光散乱、又は伝播３４０が、光散乱検出器ユニット３５０Ａを超えて通過し、その結果光散乱及び透過検出器ユニット３５０Ｂに到達し、これによって検出されるのを可能にする、開口部３５１を含んでもよい。いくつかの実施形態によると、光散乱及び透過検出器ユニット３５０Ｂは、低角度光散乱（ＬＡＬＳ）、例えば、照射している光ビーム軸に対して約５．１度の角度で散乱又は伝播される光を検出し、測定するための光活性領域又はセンサゾーンを含んでもよい。場合によっては、ＬＡＬＳは、照合ゾーンを通過して流れる細胞を照射する入射ビーム軸に対して、約９度未満の角度で伝播する光に相当する。場合によっては、ＬＡＬＳは、照合ゾーンを通過して流れる細胞を照射する入射ビーム軸に対して、約１０度未満の角度で伝播する光に相当する。場合によっては、ＬＡＬＳは、照合ゾーンを通過して流れる細胞を照射する入射ビーム軸に対して、約１．９度±０．５度の角度で伝播する光に相当する。場合によっては、ＬＡＬＳは、照合ゾーンを通過して流れる細胞を照射する入射ビーム軸に対して、約３．０度±０．５度の角度で伝播する光に相当する。場合によっては、ＬＡＬＳは、照合ゾーンを通過して流れる細胞を照射する入射ビーム軸に対して、約３．７度±０．５度の角度で伝播する光に相当する。場合によっては、ＬＡＬＳは、照合ゾーンを通過して流れる細胞を照射する入射ビーム軸に対して、約５．１度±０．５度の角度で伝播する光に相当する。場合によっては、ＬＡＬＳは、照合ゾーンを通過して流れる細胞を照射する入射ビーム軸に対して、約７．０度±０．５度の角度で伝播する光に相当する。

【0076】

いくつかの実施形態によると、光散乱及び透過検出器ユニット３５０Ｂは、細胞を軸方向に透過した、又は、入射光ビーム軸に対して０度の角度で照射された細胞から伝播される光を検出し、測定するための光活性領域又はセンサゾーンを含んでもよい。場合によっては、光活性領域又はセンサゾーンは、入射光ビーム軸に対して約１度未満の角度で細胞から軸方向に伝播される光を検出し、測定することができる。場合によっては、光活性領域又はセンサゾーンは、入射光ビーム軸に対して約０．５度未満の角度で細胞から軸方向に伝播される光を検出し、測定することができる。かかる軸方向に透過した、又は伝播した光測定値は、軸方向光損失（ＡＬＬ又はＡＬ２）に相当する。米国特許第７，３９０，６６２号に組み込まれて左記に記載されるように、光が粒子と相互作用するとき、入射光の一部は散乱過程を経て方向を変え（すなわち、光散乱）、光の一部は粒子に吸収される。これらの過程は両方とも、入射ビームからエネルギーを抜き去る。ビームの入射軸に沿って見るとき、光損失は、前方吸光、又は軸方向光損失と称することができる。軸方向光損失測定技術の更なる態様は、米国特許第７，３９０，６６２号（５段５８行〜６段４行）に記載されている。

【0077】

このように細胞分析システム３００は、生体サンプルの、ＡＬＬ及び複数の別々の光散乱角度、又は伝播角度などの様々な角度のうちのいずれか、又は様々な角度範囲のうちのいずれかにおいて照射された細胞から放射する光について、光散乱及び／又は光透過を含む光伝播測定値を得る手段を提供する。例えば、適当な回路機構及び／又は処理装置を含む光検出アセンブリ３５０は、ＵＭＡＬＳ、ＬＭＡＬＳ、ＬＡＬＳ、ＭＡＬＳ、及びＡＬＬを検出し、測定する手段を提供する。

【0078】

導線又は他の伝送若しくは接続機構は、電極アセンブリ（例えば、電極３３４、３３６）、光散乱検出器ユニット３５０Ａ、及び／又は光散乱及び透過検出器ユニット３５０Ｂから、分析システム３０４へ、処理のために信号を伝送することができる。例えば、測定されたＤＣインピーダンス、ＲＦ伝導度、及び光透過、及び／又は光散乱パラメータを、データ処理のために分析システム３０４に提供又は伝送することができる。場合によっては、分析システム３０４は、コンピュータ処理機能、及び／又は、図６に示すシステムに関して本明細書で記載されるものなどの１つ以上のモジュール若しくは構成要素を含み得、これによって、測定されたパラメータを評価し、生体サンプル成分を識別して数え、生体サンプルの要素の特徴を示すデータの部分集合を個体の血小板状態と相関させることができる。本明細書に示されるように、細胞分析システム３００は、予測される血小板状態及び／又は個体に対して処方される治療レジメンを含む、報告３０６を生成又は出力し得る。場合によっては、余剰の生体サンプルを、トランスデューサモジュール３１０から外部（あるいは内部）廃棄システム３０８に方向付けてよい。場合によっては、細胞分析システム３００は、既に組み込まれている米国特許第５，１２５，７３７号、同第６，２２８，６５２号、同第８，０９４，２９９号、及び同第８，１８９，１８７号に記載されるものなどの、トランスデューサモジュール又は血液分析機器の１つ以上の特徴を含んでもよい。

【0079】

図４は、本発明の実施形態による、個体の血小板状態を予測し、又は評価する自動化された細胞分析システムの態様を示す。具体的には、血小板状態は、個体の血液から得られた生体サンプルに基づいて予測することができる。ここに示されるように、分析システム、又はトランスデューサ４００は、細胞照合ゾーン４１２を有する光学素子４１０を含んでもよい。また、トランスデューサは流路４２０も提供し、生体サンプルの流体力学的に集中した流れ４２２を、細胞照合ゾーン４１２に向けて送達する。例えば、サンプル流４２２が細胞照合ゾーン４１２に向けて発射されると、ある体積のシース流体４２４も加圧下で光学素子４１０に入り、サンプル流４２２を均一に取り巻いて、サンプル流４２２が細胞照合ゾーン４１２の中心を通過して流れるようにでき、それによって、サンプル流の流体力学的焦点調節が実現する。このように、細胞照合ゾーンを１つずつ通過する生体サンプルの個々の細胞を正確に分析することができる。

【0080】

トランスデューサモジュール、又はシステム４００は、細胞照合ゾーン４１２を個々に通過する生体サンプルの細胞１０の直流（ＤＣ）インピーダンス及び高周波（ＲＦ）伝導度を測定する、電極アセンブリ４３０も含む。電極アセンブリ４３０は、第１電極機構４３２と、第２電極機構４３４と、を含んでもよい。本明細書の別の場所で記載されるように、低周波ＤＣ測定値を使用して、細胞照合ゾーンを通過する各個々の細胞の体積を分析することができる。関連して、高周波ＲＦ電流測定値を使用して、細胞照合ゾーンを通過する細胞の伝導度を判定することができる。かかる伝導度測定値は、細胞内部の細胞内含有量に関する情報を提供することができる。例えば、高周波ＲＦ電流を使用して、核及び顆粒性成分、並びに、細胞照合ゾーンを通過する個々の細胞における細胞内部の化学組成を分析することができる。

【0081】

また、システム４００は、ビーム軸４４４に沿って光ビーム４４２を方向付けるよう配向される光源４４０も含み、細胞照合ゾーン４１２を個々に通過する生体サンプルの細胞１０を照射する。関連して、システム４００は、細胞照合ゾーンと光学的に結合された光検出アセンブリ４５０を含み、生体サンプルの照射された細胞１０によって散乱され、細胞を透過した光を測定する。光検出アセンブリ４５０は、細胞照合ゾーン４１２から伝播する光を検出し、測定する複数の光センサゾーンを含むことができる。場合によっては、光検出アセンブリは、照射しているビーム軸に対して様々な角度又は角度範囲で、細胞照合ゾーンから伝播された光を検出する。例えば、光検出アセンブリ４５０は、細胞によって様々な角度で散乱する光、並びにビーム軸に沿って細胞によって軸方向に透過する光を検出し、測定することができる。光検出アセンブリ４５０は、光ビーム軸４４４に対して第１の角度範囲内の第１の散乱又は伝播光４５２ｓを測定する第１センサゾーン４５２を含むことができる。また、光検出アセンブリ４５０は、光ビーム軸４４４に対して第２の角度範囲内の第２の散乱又は伝播光４５４ｓを測定する第２センサゾーン４５４を含むことができる。ここに示されるように、散乱又は伝播光４５４ｓに対する第２の角度範囲は、散乱又は伝播光４５２ｓに対する第１の角度範囲と異なる。更に、光検出アセンブリ４５０は、光ビーム軸４４４に対して第３の角度範囲内の第３の散乱又は伝播光４５６ｓを測定する第３センサゾーン４５６を含むことができる。ここに示されるように、散乱又は伝播光４５６ｓに対する第３の角度範囲は、散乱又は伝播光４５２ｓに対する第１の角度範囲、及び、散乱又は伝播光４５４ｓに対する第２の角度範囲の両方と異なる。また、光検出アセンブリ４５０は、細胞照合ゾーン４１２を個々に通過する生体サンプルの細胞を透過する、又は、軸ビームに沿って細胞照合ゾーンから伝播する、軸方向光４５８ｔを測定する第４センサゾーン４５８も含む。場合によっては、センサゾーン４５２、４５４、４５６、及び４５８の各々は、特定のセンサゾーンと関連する個別のセンサに配置される。場合によっては、センサゾーン４５２、４５４、４５６、及び４５８の１つ以上は、光検出アセンブリ４５０の共通のセンサに配置される。例えば、光検出アセンブリは、第１センサゾーン４５２及び第２センサゾーン４５４を含む第１センサ４５１を含んでもよい。したがって、２つ以上の種類（例えば、低角度、中角度、又は高角度）の光散乱又は伝播を検出し、又は測定するために単一のセンサを使用してよい。

【0082】

自動化細胞分析システムは、様々な光学素子又はトランスデューサ機構のうちのいずれも含んでよい。例えば、図４Ａに示されるように、細胞分析システムトランスデューサの光学素子４１０ａは、４つの方形で光学的に平坦な側面４５０ａと、対向する端部壁４３６ａと、を有する正四角柱形状を有してよい。場合によっては、各側面４５０ａのそれぞれの幅Ｗは同一であり、各測定値は、例えば、約４．２ｍｍである。場合によっては、各側面４５０ａのそれぞれの長さＬは同一であり、各測定値は、例えば、約６．３ｍｍである。場合によっては、光学素子４１０ａの全部又は一部は、融解シリカ、又は石英から作られてよい。光学素子４１０ａの中央領域を貫いて形成される流路４３２ａは、素子４１０ａの中心部を通り、矢印ＳＦで示されるサンプルが流れる方向に平行な、長手方向軸Ａに対して同心円状に構成されてよい。流路４３２ａは、細胞照合ゾーンＺと、細胞照合ゾーンと流体連通するそれらのそれぞれの基部の付近に開口部を有する、１対の対向するテーパ形状のボアホール４５４ａと、を含む。場合によっては、細胞照合ゾーンＺの横断面の形状は正方形であり、各側面の幅Ｗ’は公称５０マイクロメートル±１０マイクロメートルである。場合によっては、軸Ａに沿って測定した細胞照合ゾーンＺの長さＬ’は、照合ゾーンの幅Ｗ’の約１．２〜１．４倍である。例えば、長さＬ’は、約６５マイクロメートル±１０マイクロメートルであってよい。本明細書の別の場所に記載されるように、細胞照合ゾーンを通過する細胞において、ＤＣ及びＲＦを測定することができる。場合によっては、端部壁４３６ａで測定される、テーパ形状のボアホール４５４ａの最大直径は、約１．２ｍｍである。記載される種類の光学構造体４１０ａは、例えば、連通ボアホール４５４ａの画定のため機械加工された、５０×５０マイクロメートルの毛管開口部を含有する、石英の正方形角柱から形成されてよい。レーザー又は他の照射源は、細胞照合ゾーンを通って方向付けられる、又はそこに像を結ぶビームＢを生成することができる。例えば、ビームは、細胞が通過させられる場所において、照合ゾーンＺ内に位置する楕円形の腰部に像を結ぶことができる。細胞分析システムは、光学素子４１０ａから放射される光、例えば、内部を流れる、照明された、若しくは照射された細胞を含有する細胞照合ゾーンＺから伝播される光Ｐを検出するように構成される、光検出アセンブリを含んでもよい。ここに記載されるように、光Ｐは、角度範囲α内で細胞照合ゾーンＺから伝播、又は放射することができ、そのため、ビーム軸ＡＸに対して選択した角度位置、又は角度範囲において、測定又は検出することができる。関連して、光検出アセンブリは、ビームＢの軸ＡＸに対して様々な角度範囲内の前方の面において、散乱した光、又は軸方向に透過した光を検出することができる。本明細書の別の場所で記載されるように、細胞照合ゾーンを１つずつ通過する個々の細胞について、１つ以上の光伝播測定値を得ることができる。場合によっては、細胞分析システムは、米国特許第５，１２５，７３７号、同第６，２２８，６５２号、同第８，０９４，２９９号、及び同第８，１８９，１８７号（これらの内容は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものなどの、トランスデューサ又は細胞照合ゾーンの１つ以上の特徴を含んでもよい。

【0083】

図５は、個体の血小板状態を予測する、又は評価する例示的な方法５００の態様を示す。方法５００は、工程５１０に示されるように、血液分析システム内に血液サンプルを導入する工程を含む。工程５２０に示されるように、本方法は、サンプルを一定分量に分け、その一定分量のサンプルを適当な試薬と混合することによって、血液サンプルを調製する工程も含んでよい。工程５３０では、サンプルがトランスデューサシステム内のフローセルを通過し、サンプル成分（例えば、血球）が細胞照合ゾーンを１つずつ通過することができるようにする。これらの成分を、レーザーなどの光源によって照射することができる。工程５４０では、任意の組み合わせＲＦ伝導度５４１、ＤＣインピーダンス５４２、第１の角度付き光伝播５４３（例えば、ＬＡＬＳ）、第２の角度付き光伝播５４４（例えば、ＡＬ２）、第３の角度付き光伝播５４５（例えば、ＵＭＡＬ）、及び／又は第４の角度付き光伝播５４６（例えば、ＬＭＡＬＳ）が測定され得る。工程５４７によって示されるように、第３及び第４角度付き光伝播測定値は、第５角度付き光伝播測定値（例えば、ＭＡＬＳ）を判定するために使用され得る。あるいは、ＭＡＬＳを直接測定することができる。本明細書の別の場所で記載されるが、工程５５０によって示されるように、特定の測定値又は測定値の組み合わせが処理され、血小板状態の予測を提供することができる。任意に、方法はまた、予測される血小板状態に基づいて治療レジメンを決定することを含み得る。

【0084】

細胞分析システムは、生体サンプルの細胞からのＤＣインピーダンス、ＲＦ伝導度、角度光測定値（例えば、第１の散乱光、第２の散乱光）、及び軸方向光測定値の部分集合を、個体の血小板状態と相関させるように構成され得る。本明細書の別の場所で記載されるように、場合によっては、この相関の少なくとも一部は、１つ以上のプロセッサ、１つ以上のハードウェアモジュール、又はこれらの任意の組み合わせによって実行可能な１つ以上のソフトウェアモジュールを使用して実施することができる。プロセッサ又は他コンピュータ又はモジュールシステムは、様々な測定値又はパラメータの入力値として受信し、個体の予測される血小板状態を自動的に出力するように構成され得る。場合によっては、１つ以上のソフトウェアモジュール、プロセッサ、及び／又はハードウェアモジュールは、血液分析器等の多重光角度検出パラメータを得るために具備される血液学システムの構成要素として含まれ得る。場合によっては、１つ以上のソフトウェアモジュール、プロセッサ、及び／又はハードウェアモジュールは、血液分析器等の多重光角度検出パラメータを得るために具備される血液学システムと、動作可能に通信される、又は接続されているスタンドアローン型コンピュータの構成要素として含まれ得る。場合によっては、少なくとも一部の相関は、血液分析器等の多重光角度検出パラメータを得るために具備される血液学システムから、遠隔でインターネット又は任意の他の有線及び／若しくは無線通信ネットワークを介してデータを受信する、１つ以上のソフトウェアモジュール、プロセッサ、及び／又はハードウェアモジュールを介して実施することができる。関連して、本発明の実施形態による装置又はモジュールの各々は、プロセッサ若しくはハードウェアモジュール、又はこれらの任意の組み合わせによって処理される、コンピュータ可読媒体上の１つ以上のソフトウェアモジュールを含むことができる。

【0085】

図６は、例示的なモジュールシステムの簡略ブロック図であり、モジュールシステム６００の個々のシステム要素が、別々に、又はより一体的に実行され得る方法について、大まかに示している。モジュールシステム６００は、本発明の実施形態による、個体の血小板状態を予測するための細胞分析システムの一部であってよく、又はこのシステムと接続されてよい。モジュールシステム６００は、データを作成し、又は血小板分析に関する入力値を受信するのに非常に適している。場合によっては、モジュールシステム６００は、１つ以上のプロセッサ６０４、ユーザーインターフェース入力装置などの１つ以上の入力装置６０６、及び／又はユーザーインターフェース出力装置などの１つ以上の出力装置６０８を含む、バスサブシステム６０２を介して電気的に接続されるハードウェア要素を含む。場合によっては、システム６００は、ネットワークインターフェース６１０、並びに／又は、診断システム６４２から信号を受信し、及び／若しくはシステムへ信号を伝送することができる、診断システムインターフェース６４０を含む。場合によっては、システム６００は、ソフトウェア要素、例えば、ここでは、メモリ６１４のワーキングメモリ６１２内に現在位置するように示されるもの、オペレーティングシステム６１６、及び／又は他のコード６１８、例えば、本明細書に開示される技術の１つ以上の態様を実行するように構成されるプログラムを含む。

【0086】

いくつかの実施形態において、モジュールシステム６００は、本明細書に開示される様々な技術の機能をもたらす、基本プログラム及びデータ構造を記憶することができる、記憶サブシステム６２０を含んでもよい。例えば、本明細書に記載されるような方法の態様の機能を実行するソフトウェアモジュールは、記憶サブシステム６２０に記憶されてよい。これらのソフトウェアモジュールは、１つ以上のプロセッサ６０４によって実行されてよい。分散型環境では、ソフトウェアモジュールは、複数のコンピュータシステムに記憶され、複数のコンピュータシステムのプロセッサによって実行されてよい。記憶サブシステム６２０は、メモリサブシステム６２２と、ファイル記憶サブシステム６２８と、を含むことができる。メモリサブシステム６２２は、プログラム実行中に命令及びデータを記憶するメインランダムアクセスメモリ（ＲＡＭ）６２６、及び固定命令を記憶する読み出し専用メモリ（ＲＯＭ）６２４などの、多くのメモリを含んでもよい。ファイル記憶サブシステム６２８は、プログラム及びデータファイルに対する固定（不揮発性）記憶装置をもたらすことができ、任意に、患者、治療、評価、又は他のデータを組み入れることができる有形記憶媒体を含んでもよい。ファイル記憶サブシステム６２８は、ハードディスクドライブ、フロッピー（登録商標）ディスクドライブ並びに関連リムーバブルメディア、コンパクトデジタル読み出し専用メモリ（ＣＤ−ＲＯＭ）ドライブ、光学式ドライブ、ＤＶＤ、ＣＤ−Ｒ、ＣＤ ＲＷ、固体リムーバブルメモリ、他のリムーバブルメディアカートリッジ又はディスク、及び他の同種のものを含んでもよい。１つ以上のドライブは、モジュールシステム６００に接続される、別の場所の別の接続されたコンピュータの遠隔位置に位置してよい。いくつかの例において、システムは、１つ以上のプロセッサによって実行されると、１つ以上のプロセッサに、本明細書に開示する技術又は方法の任意の態様を実施させることができる、１つ以上の一連の命令を記憶する、コンピュータ可読記憶媒体又は他の有形記憶媒体を含んでもよい。本明細書に開示される技術の機能を実行する１つ以上のモジュールは、ファイル記憶サブシステム６２８によって記憶されてよい。いくつかの実施形態において、ソフトウェア又はコードは、プロトコルを提供し、モジュールシステム６００が通信ネットワーク６３０と通信することができるようにする。任意に、かかる通信には、ダイヤルアップ又はインターネット接続通信を含んでよい。

【0087】

システム６００は、本発明の方法の様々な態様を実施するように構成することができると理解される。例えば、プロセッサ要素若しくはモジュール６０４は、センサ入力装置若しくはモジュール６３２から、ユーザーインターフェース入力装置若しくはモジュール６０６から、及び／又は診断システム６４２から、任意に診断システムインターフェース６４０及び／又はネットワークインターフェース６１０、並びに通信ネットワーク６３０を介して、細胞のパラメータ信号を受信するように構成されるマイクロプロセッサ制御モジュールであってよい。場合によっては、センサ入力装置（複数を含む）は、血液分析器等の多重光角度検出パラメータを得るために具備されている細胞分析システムを含み得、又はその一部であり得る。場合によっては、ユーザーインターフェース入力装置（複数を含む）６０６及び／又はネットワークインターフェース６１０は、血液分析器等の多重光角度検出パラメータを得るために具備される細胞分析システムによって生成される細胞のパラメータ信号を受信するように構成され得る。場合によっては、診断システム６４２は、血液分析器等の多重光角度検出パラメータを得るために具備される細胞分析システムを含み得、又はその一部であり得る。

【0088】

また、プロセッサ要素、又はモジュール６０４は、細胞のパラメータ信号を、本明細書に開示される技術のうちのいずれかによって任意に処理して、センサ出力装置、又はモジュール６３６に、ユーザーインターフェース出力装置、又はモジュール６０８、ネットワークインターフェース装置、又はモジュール６１０に、診断システムインターフェース６４０に、又はこれらの任意の組み合わせに伝送するように構成することもできる。本発明の実施形態による装置又はモジュールの各々は、プロセッサ若しくはハードウェアモジュール、又はこれらの任意の組み合わせによって処理される、コンピュータ可読媒体上の１つ以上のソフトウェアモジュールを含むことができる。様々な一般的に使用されるプラットフォーム、例えば、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）、ＭａｃＩｎｔｏｓｈ、及びＵｎｉｘ（登録商標）のうちのいずれも、様々な一般的に使用されるプログラミング言語のうちのいずれかと共に使用して、本発明の実施形態を実行してよい。

【0089】

ユーザーインターフェース入力装置６０６は、例えば、タッチパッド、キーボード、マウスなどのポインティングデバイス、トラックボール、グラフィックスタブレット、スキャナー、ジョイスティック、ディスプレイに組み込まれるタッチスクリーン、音声認識システムなどの音声入力装置、マイクロホン、及び他の種類の入力装置を含んでよい。ユーザー入力装置６０６は、有形記憶媒体から、又は通信ネットワーク６３０からコンピュータ実行可能コードをダウンロードしてもよく、このコードは、本明細書に開示される方法又はその態様のうちのいずれも具現化するものである。端末ソフトウェアは時々アップデートされ、必要に応じて端末にダウンロードすることができることが理解されるであろう。一般に、用語「入力装置」の使用は、モジュールシステム６００へ情報を入力するための様々な従来かつ専用の装置及び方法を含むことが意図される。

【0090】

ユーザーインターフェース出力装置６０６は、例えば、ディスプレイサブシステム、プリンタ、ファクス、又は音声出力装置などの非視覚的ディスプレイを含んでよい。ディスプレイサブシステムは、陰極管（ＣＲＴ）、液晶ディスプレイ（ＬＣＤ）などのフラットパネル装置、投射装置などであってよい。ディスプレイサブシステムは、音声出力装置を介するものなど非視覚的表示を提供してもよい。一般に、用語「出力装置」の使用は、モジュールシステム６００からユーザーへ情報を出力するための様々な従来かつ専用の装置及び方法を含むことが意図される。

【0091】

バスサブシステム６０２は、モジュールシステム６００の様々な構成要素及びサブシステムが、意図される通り、又は所望される通りに互いに通信させる機構を提供する。モジュールシステム６００の様々なサブシステム及び構成要素は、物理的に同じ位置にいる必要はないが、分散型ネットワーク内の様々な位置に分散されてよい。バスサブシステム６０２は、概略的に単一バスとして示されるが、バスサブシステムの別の実施形態において、多重バスを利用してもよい。

【0092】

ネットワークインターフェース６１０は、外部ネットワーク６３０又は他の装置へのインターフェースを提供することができる。外部通信ネットワーク６３０は、必要に応じて、又は所望に応じて他と通信することができるように構成されてよい。したがって、モジュールシステム６００から電子的パケットを受信し、必要に応じて、又は所望に応じてモジュールシステム６００に任意の情報を伝送し戻すことができる。本明細書で示すように、通信ネットワーク６３０及び／又は診断システムインターフェース６４２は、血液分析器等の多重光角度検出パラメータを得るために具備される診断システム６４２に情報を伝送する又はそこから情報を受信し得る。

【0093】

システム内にかかるインフラストラクチャ通信リンクを提供することに加え、通信ネットワークシステム６３０は、インターネットなどの別のネットワークへの接続を提供することもでき、有線、無線、モデム、及び／又は別の種類のインターフェース通信を含んでよい。

【0094】

特定の要件に従って大幅に変更され得ることが、当業者には明らかであろう。例えば、カスタマイズされたハードウェアも使用され、及び／又は、特定の要素が、ハードウェア、ソフトウェア（アプレット等の高移植性ソフトウェアを含む）、若しくは両方で実装され得る。更に、ネットワーク入力／出力装置などの他のコンピュータデバイスへの接続が採用され得る。モジュール端末システム６００自体は、コンピュータ端末、パーソナルコンピュータ、ポータブルコンピュータ、ワークステーション、ネットワークコンピュータ、又は任意の他のデータ処理システムなどの、様々な種類のものであってよい。コンピュータ及びネットワークの特性上変化が激しいため、図６に記載するモジュールシステム６００の説明は、１つ以上の本発明の実施形態を例示する目的の具体例としてのみ意図される。図６に記載するモジュールシステムよりも、多い又は少ない構成要素を有する、モジュールシステム６００の多くの他の構成が可能である。モジュールシステム６００のモジュール若しくは構成要素のうちのいずれも、又はかかるモジュール若しくは構成要素のいずれの組み合わせも、本明細書に開示される細胞分析システムの実施形態のいずれとも結合することができるか、又はシステムに組み込むことができるか、ないしは別の方法でシステムと接続するように構成することができる。関連して、上記のハードウェア及びソフトウェア構成要素のいつのいずれも、他の医学的評価、又は他の場所で使用される治療システムと一体化することができるか、又はそれらとインターフェース接続されるように構成することができる。

【0095】

いくつかの実施形態において、モジュールシステム６００は、入力モジュールにおいて、１つ以上の患者の細胞分析パラメータを受信するように構成することができる。細胞分析パラメータデータは、血小板状態が予測又は判定される評価モジュールに伝送することができる。予測される血小板状態は、出力モジュールを介して、システムのユーザーに対して出力することができる。場合によっては、モジュールシステム６００は、例えば、治療モジュールを使用することによって、１つ以上の細胞分析パラメータ及び／又は予測される血小板状態に基づいて、患者の初期治療若しくは導入時プロトコル、又は調整済みの治療プロトコルを決定することができる。治療法は、出力モジュールを介して、システムのユーザーに対して出力することができる。任意に、治療の特定の態様を出力装置によって決定し、治療システム又は治療システムの二次装置に伝送することができる。年齢、体重、性別、治療歴、病歴などを含む患者に関する様々なデータのうちのいずれも、モジュールシステムに入力してよい。治療レジメン又は診断的評価のパラメータは、かかるデータに基づいて決定してよい。

【0096】

関連して、場合によっては、システムは、ＶＣＳデータを入力値として受信するように構成されるプロセッサを含む。また、プロセッサは、ＣＢＣデータを入力値として受信するように構成されてもよい。任意に、プロセッサ、記憶媒体、又は両方は、血液学的機器、又は細胞分析機器内に組み込まれてよい。場合によっては、血液学的機器は、プロセッサに入力するため、ＶＣＳデータ、ＣＢＣデータ、又は他の情報を生成し得る。場合によっては、プロセッサ、記憶媒体、又は両方は、コンピュータ内に組み込まれてよく、コンピュータは血液学的機器と通信してよい。場合によっては、プロセッサ、記憶媒体、又は両方は、コンピュータ内に組み込まれてよく、コンピュータはネットワークを介して血液学的機器と遠隔通信してよい。

【0097】

体積伝導度散乱（ＶＣＳ）データ
ＣＢＣモジュールから得られ得るＣＢＣデータに加え、ＶＣＳデータをＶＣＳモジュールから得ることができる。例示的なＶＣＳパラメータは以下を含む。
１．細胞伝導度（Ｃ）［高周波電流］
２．細胞体積（Ｖ）［低周波電流］
３．軸方向光損失、又は吸収された光（ＡＬ２又はＡＬＬ）
４．低角度光散乱（ＬＡＬＳ）
５．上方中角度光散乱（ＵＭＡＬＳ）
６．下方中角度光散乱（ＬＭＡＬＳ）
７．中角度光散乱（ＭＡＬＳ）［ＵＭＡＬＳ＋ＬＭＡＬＳ］

【0098】

このように、様々なパラメータ（例えば、体積、伝導度、及び光散乱、又は伝播角度）を、白血球、赤血球、及び血小板といった血球について別々に計算することができる。このデータは、個体の生体サンプルに基づいて得ることができる。その上、ＣＢＣ及びＶＣＳデータは、図７に示される等の器具のスクリーン上で見ることができ、並びに、エクセルファイルとして自動的にエクスポートすることができる。したがって、血球（例えば、ＲＢＣ、血小板、及びＷＢＣ）を分析し、３次元ヒストグラム中に別々にプロットされ、ヒストグラム上の各細胞の位置は、本明細書に記載される特定のパラメータによって判定されている。

【0099】

細胞又は粒子の亜集団は、ヒストグラム上の異なる場所において、異なる種類に分けることができる。例えば、血小板凝集塊及び白血球は、ヒストグラムの異なる領域においてクラスター化し得るので細胞集団を形成する。図７は、計数分析の態様の例示的なスクリーンショットを示す。ここで示すように、血小板凝集塊イベントは、ヒストグラム上に円で囲まれる。一般的に、かかるヒストグラムは、本明細書の別の場所で記載されるように有核赤血球（ＮＲＢＣ）チャネル（又はＷＢＣ分化チャネル又は網赤血球チャネル）から得ることができる。

【0100】

かかるＶＣＳ値は、ヒストグラム中の集団の位置及び顕微鏡下での血球の形態に対応させることができる。図７Ｄ〜７Ｆに示されるように、特定のチャネルモジュールは、様々な粒子又は血小板凝集塊、血球、又は存在し得る細胞残屑等の血液成分の測定値を提供することができる。

【0101】

ＶＣＳパラメータを使用して、主観的で、更には非常に時間がかかり、高価で、かつ再現性が制限される人による解釈を用いずに、定量的、客観的、かつ自動的な方法で細胞イベントを分析することができる。特定の実施形態において、ＶＣＳパラメータは、個体から得られた生体サンプルに基づいて個体中の血小板数を推定することにおいてかつ血小板数を変える様々な病状の診断において使用され得る。ＶＣＳパラメータ、又は体積伝導度散乱データプロファイルを参照するとき、この特徴は、個体のＶＣＳデータの特徴の部分集合を含み得ると理解される。例えば、ＶＣＳパラメータデータは、体積及び伝導度の測定値の組み合わせ、体積及び散乱の測定値の組み合わせ、又は、伝導度及び散乱の測定値の組み合わせを含んでよい。同様に、ＶＣＳパラメータデータは、体積測定値のみ、伝導度測定値のみ、又は散乱測定値のみを含んでよい。場合によっては、ＶＣＳパラメータデータは、光伝播及び電流データの集合又は部分集合を含むと見なされてよい。例えば、光伝播測定値は、第１の角度における第１の伝播光、第１の角度とは異なる第２の角度における第２の伝播光、軸方向伝播光、又はこれらの任意の組み合わせを含んでよい。関連して、電流測定値は、低周波電流（例えば、体積に対応するＤＣインピーダンス）、高周波電流（例えば、内部細胞密度に対応するＲＦ伝導度）、又はこれらの組み合わせを含んでよい。この意味で、ＶＣＳパラメータデータ又は体積伝導度散乱データプロファイルは、電流光伝播パラメータ又はデータプロファイルと称され得る。

【0102】

本明細書に更に説明されるように、特定のＶＣＳパラメータ値は、個体における血小板状態の評価に非常に有用であることが分かっている。結果的に、これらのパラメータは、個体中の血小板数の推定値及び血小板関連容態の診断のためのシステム及び方法に実装され得る。

【0103】

補正血小板数（方法Ｉ）
図７Ａは、本発明の実施形態に従う補正血小板数を判定するための例示的な方法７００ａの態様を示す。ここで示されるように、該方法は、工程７１０ａで示されるような血小板凝集塊体積パラメータを判定する又は得ることと、工程７２０ａで示されるような単一血小板体積パラメータを判定する又は得ることと、工程７３０ａで示されるような凝集塊当たりの血小板パラメータを判定する又は得ることと、を含み得る。凝集塊当たりの血小板パラメータは、血小板凝集塊体積パラメータ及び単一血小板体積パラメータに基づき得る。

【0104】

更に、該方法は、工程７４０ａで示されるような血小板凝集塊対ＷＢＣ比率パラメータを判定する又は得ることと、工程７５０ａで示されるようなＷＢＣ濃度パラメータを判定する又は得ることと、工程７６０ａで示されるような凝集塊中に含有される血小板の数（例えば、損失した血小板数）を判定する又は得ることと、を含み得る。凝集塊中に含有される血小板の数の推定値は、血小板凝集塊対ＷＢＣパラメータ、凝集塊当たりの血小板パラメータ、及びＷＢＣ濃度パラメータに基づき得る。

【0105】

その上、該方法は、工程７７０ａで示されるような観察された血小板数を判定する又は得ることと、工程７８０ａで示されるような補正血小板数を判定する又は推定することと、を含み得る。補正血小板数の計算は、観察された血小板数及び損失した血小板数に基づき得る。例えば、推定される補正血小板数は、観察された血小板イベント及び凝集塊中に含有される血小板の推定される数の合計に基づき得る。

【0106】

血小板凝集塊体積パラメータの判定
図７Ｂは、本発明の実施形態に従う血小板凝集塊体積パラメータを判定するための技術の態様を示す。ここで示されるように、該方法は、工程７１０ｂで示されるようなＮＲＢＣモジュールを使用して既知の体積のラテックスビーズを分析することによってチャネル−体積関連性を判定することを含む。典型的には、ＮＲＢＣモジュールにおいて、直流（ＤＣ）は粒径と正比例する。したがって、より大きいＤＣパルスはより大きい粒径に対応する。このように、ＮＲＢＣチャネル値を粒子体積値と相関させる基準又は標準を得ることが可能である。

【0107】

更に、該方法は、工程７２０ｂで示されるようなＮＲＢＣモジュールを使用して血小板凝集塊を含有するサンプルを処理することを含む。例えば、血小板凝集塊集団の１−Ｄヒストグラムからの平均値チャネルが計算され得る。

【0108】

血小板凝集塊のＮＲＢＣモジュール出力データは、血小板凝集塊集団の平均値体積等の血小板凝集塊体積パラメータを得るために粒径基準と相関し得る。例えば、チャネル−体積関連性（例えば、工程７１０ｂから）及び平均値チャネル（例えば、工程７２０ｂから）は、血小板凝集塊集団の平均値体積（例えば、フェムトリットルにおいて）、Ｖ（例えば、工程７３０ｂ）を判定するために使用され得る。場合によっては、サンプル中に存在する血小板凝集塊は異なる凝集塊が異なる数の血小板を含むように集団分布を示す。例えば、集団のいくつかの凝集塊は、５個の血小板を含み得、いくつかの凝集塊は、１０個の血小板を含み得、いくつかの凝集塊は、２０個の血小板等を含み得る。

【0109】

血小板凝集塊体積パラメータを判定するための例示的な手法が図７Ａの工程７１０ａのように示される。

【0110】

単一血小板体積パラメータの判定
図７Ｃは、本発明の実施形態に従う単一血小板体積パラメータ判定するための技術の態様を示す。ここで示されるように、血小板集団ヒストグラム７００ｃは、ＣＢＣモジュールから得られ得る。曲線は、フェムトリットルにおける単一血小板体積分布を示す。この分布の平均又は平均値血小板体積は、ＭＰＶとして表され得る。平均値の計算は、各チャネルに対して、チャネル中のイベントの数を、チャネルに対応する体積で乗算することを含み得る。その結果は、全てのチャネルにわたって合計され得、次いで、各イベントの平均体積（ＭＰＶ）を得るために観察されたイベントの総数で除算され得る。

【0111】

単一血小板体積パラメータを判定するための例示的な手法が図７Ａの工程７２０ａのように示される。

【0112】

凝集塊当たりの血小板パラメータの判定
血小板凝集塊体積パラメータ（例えば、Ｖ）を単一血小板体積パラメータ（例えば、ＭＰＶ）で除算することによってサンプルの各血小板凝集塊中に含有される血小板の平均数を得ることが可能である。そのような測定値は、概して、１個の血小板凝集塊中に含有される血小板の数を示し得る。凝集塊当たりの血小板パラメータを推定するための例示的な方法は、以下の等式に基づき得る。α＝Ｖ／ＭＰＶ。

【0113】

したがって、血小板凝集塊体積パラメータ及び単一血小板体積パラメータは、各血小板凝集塊中に含有される血小板の平均数を得るために使用され得る。関連して、各血小板凝集塊中に含有される血小板の平均数は、血小板凝集塊集団の平均値体積（Ｖ）を平均値血小板体積（ＭＰＶ）で除算することによって計算することができる。このように、本発明の実施形態は、単一凝集塊中の血小板の数を、例えば、平均して凝集塊当たりの血小板の数を計算することによって、推定するためにＮＲＢＣ及びＣＢＣモジュールからの情報を使用するための技術を包含する。

【0114】

凝集塊当たりの血小板パラメータを判定するための例示的な手法が、図７Ａの工程７３０ａのように示される。

【0115】

血小板凝集塊対白血球比率パラメータの判定
血小板凝集塊イベントは、血液分析器のＮＲＢＣモジュール等のＮＲＢＣモジュールにおける特定の分析技術を実施することによって他のイベント（例えば、ＮＲＢＣ、ＷＢＣ、血小板、及び様々な形態の残屑）から区別又は分割され得る。例えば、血小板凝集塊の存在の有無は、図７Ｄ（右パネル、少しの血小板凝集塊化又は血小板凝集塊化なし）及び図７Ｅ（右パネル、著しい血小板凝集塊化）によって示されるようにＮＲＢＣモジュールからのＲＬＡＬＳ−対−ＡＬ２プロット図で見ることができる。図７Ｄ及び７Ｅの左パネルは、右パネルに示されるこれらに対応する白血球（ＷＢＣ）及び血小板（ＰＬＴ）イベントのＣＢＣモジュール体積分布ヒストグラムを提供する。図７Ｅに示されるように、両方のＷＢＣ及びＰＬＴパラメータのＣＢＣモジュールヒストグラムは、血小板凝集塊イベントを含む。例えば、ＷＢＣヒストグラムは、血小板凝集塊及びＷＢＣ集団の組み合わせを含み、ＰＬＴヒストグラムは、血小板凝集塊及び単一血小板集団の組み合わせを含む。

【0116】

血液分析器等の細胞分析システムのモジュールが、サンプル中に含有される細胞、細胞の凝集塊、細胞の部分、及び他の粒子を含む個体から得られた生体サンプル中の様々な粒子のうちのいずれも評価するために使用され得ることが分かる。本開示はときに単一細胞に対応するイベントを分析するための血液分析器等の細胞分析システム（及びそれらのモジュール）の使用を指すが、本開示は、個体から得られた生体サンプル中に含有され得る、任意の種類の粒子、又は粒子の凝集塊（例えば、血小板凝集塊）に対応するイベントを分析するための血液分析器等の細胞分析システム（及びそれらのモジュール）の使用も包含することを理解されたい。

【0117】

図７Ｄ及び７Ｅに示されるように、低角度光散乱（ＬＡＬＳ）測定値は、ＡＲＣＴＡＮ関数を使用して変換され得、回転ＬＡＬＳ（ＲＬＡＬＳ）パラメータとして示され得る。ＲＬＡＬＳは、ｆ（ＤＣ、ＬＡＬＳ）の関数によって提供され得る。一実施形態において、ＲＬＡＬＳパラメータは、等式ＲＬＡＬＳ＝（Ｃ）ＡＲＣＴＡＮ（ＤＣ／ＬＡＬＳ）によって提供され、式中、（Ｃ）は比例定数であり、（ＤＣ）はＤＣ電流値である。

【0118】

図７Ｄ及び７ＥのＲＬＡＬＳ−対−ＡＬ２図に加えて、図７Ｆに示されるもの等のＮＲＢＣチャネルによって示されるＲＵＭＡＬＳ−対−ＥＬＭＡＬＳプロットが他の種類のイベントからの血小板凝集塊イベントの信頼性の高い分割を提供することが発見されている。

【0119】

図７Ｆに示されるように、上方中角度光散乱（ＵＭＡＬＳ）測定値は、ＡＲＣＴＡＮ関数を使用して変換され得、回転ＵＭＡＬＳ（ＲＵＭＡＬＳ）パラメータとして示され得る。ＲＵＭＡＬＳは、ｆ（ＤＣ、ＵＭＡＬＳ）の関数によって提供され得る。一実施形態において、ＲＵＭＡＬＳパラメータは、等式ＲＵＭＡＬＳ＝（Ｃ）ＡＲＣＴＡＮ（ＤＣ／ＵＭＡＬＳ）によって提供され、式中、（Ｃ）が倍率であり、（ＤＣ）がＤＣ電流値である。

【0120】

したがって、図７Ｅ及び７Ｆに示されるもの等のＮＲＢＣプロット図を使用して、様々な粒子集団を簡便に見て、白血球イベントに対して血小板凝集塊イベントを識別し、分割することが可能である。

【0121】

ＥＬＭＡＬＳパラメータはまた、拡張下方中角度光散乱パラメータとして表され得、ＬＭＡＬＳ／２として計算され得る。

【0122】

図７Ｅ及び７Ｆに示されるように、２次元パラメータ組み合わせを使用して、ＮＲＢＣモジュールにおける他の種類のイベントから血小板凝集塊を分離し、識別するために非線形境界線を使用して、分割を行うことができる。分水界画像処理（Watershed image processing）手法は、２次元空間上に境界線を引くために適用され得る。かかる画像処理技術は、特定の細胞集団探索プロトコルを実施することを含む。例えば、該技術は、データプロットをデジタル式でフラッディングすることと、特定の集団を強調することと、さもなければ認識され得ない集団を曝露することとを含み得る。より小さい亜集団を曝露することによって、この手法は、どこに亜集団が属するか、及び適切なゲーティング技術をどのように適用するかを判定し得る。このように、分割プロセスにおいて血小板凝集塊イベントを識別することが可能である。

【0123】

血液学的評価は、流体の流れ中に細胞を懸濁し、電子検出装置を通過させることによる、１秒当たり数千個の粒子の同時多重パラメータ分析を含むことができる。生成されたデータは、ヒストグラムにプロットされ、領域に分類することができる。領域とは、１つ又は２つのパラメータヒストグラム上の目的とする集団の周囲に描かれる、又は位置付けられる形状である。例示的な領域形状として、２次元多角形、円形、楕円形、不規則形状などが挙げられる。データ中に例示される個体のイベントは、特有のパラメータの組み合わせに相当し、かかる組み合わせについて複数の実例が存在する場合に蓄積される。いくつかの実施形態によると、ヒストグラムに蓄積されたデータは、１つ以上の領域を伴う「ゲーティング」として知られる工程において、ＶＣＳパラメータに基づいて分離又はクラスター化することができる。様々な手動、自動、及び他のゲーティング、境界線決定、領域配置、又はヒストグラム分割技術はまた、図７Ｅ及び７Ｆに示されるもの等の血小板凝集塊データを識別及び／又は分割するために使用され得、例示的な技術は、米国特許公報第２０１０／０１１１４００号（「Ｎｏｎ−Ｌｉｎｅａｒ Ｈｉｓｔｏｇｒａｍ Ｓｅｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ（粒子分析のための非線形ヒストグラム分割）」）に記載され、その内容は参照によって本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態によると、様々なヒストグラム分析工程は、血液分析器等のシステムを使用するＮＲＢＣモジュール及びチャネル処理技術に基づいて、実施され得る。

【0124】

したがって、図７Ｄ〜７Ｆに示されるように、本発明の実施形態は、ＮＲＢＣモジュールチャネル出力データを生体サンプル中の血小板凝集塊イベントの識別と相関させるための様々な技術を包含する。このように、血小板凝集塊対ＷＢＣ比率を得る、又はさもなければ他のイベント（例えば、ＷＢＣ）から血小板凝集塊集団を分離することが可能である。例えば、この技術は、１００個の白血球イベント当たりの血小板凝集塊イベントの数の測定値を提供し得る。

【0125】

血小板凝集塊対ＷＢＣパラメータを判定するための例示的な手法は、図７Ａの工程７４０ａとして示される。

【0126】

白血球パラメータの判定
いくつかの実施形態によると、白血球濃度パラメータは、ＣＢＣモジュールを介して得ることができる。このように、サンプルの単位体積に対応する白血球イベントの数を評価することが可能である。

【0127】

ＷＢＣ濃度パラメータを判定するための例示的な手法は、図７Ａの工程７５０ａのように示される。

【0128】

凝集塊化のための血小板喪失の数の判定
血小板凝集塊対ＷＢＣ比率パラメータ、血小板凝集塊パラメータ、及びＷＢＣ濃度パラメータ（例えば、図７Ａの工程７４０ａ、７３０ａ、及び７５０ａそれぞれ）が一旦得られると、血小板数中に損失した凝集塊中に含有される血小板の数を判定又は推定することが可能である。

【0129】

いくつかの実施形態によると、凝集塊で損失した血小板数、又はＰＬＴ_Ｃは、以下の等式で計算され得る。ＰＬＴ_Ｃ＝α^＊（Ｅ_Ｃ／Ｅ_Ｗ）^＊ＷＢＣ、式中、Ｅ_Ｃ及びＥ_Ｗが、ＮＲＢＣモジュール中の血小板凝集塊及び白血球のイベントそれぞれの総数である。ここでは、ＷＢＣはＣＢＣモジュールからの白血球濃度である。

【0130】

凝集塊中に含有される血小板の数を判定するための例示的な手法は、図７Ａの工程７６０ａのように示される。

【0131】

観察された血小板数の判定
いくつかの実施形態によると、観察された血小板数は、ＣＢＣモジュールを介して得ることができる。しかしながら、かかるＣＢＣ血小板数は、凝集塊中で生じる血小板の計数を含み得ないので、人工的に低い血小板数をもたらす。言い換えると、観察された血小板数は、サンプル中の凝集塊化してない血小板の数を指し得る。

【0132】

観察された血小板数パラメータを判定するための例示的な手法は、図７Ａの工程７７０ａのように示される。

【0133】

補正血小板数の判定
いくつかの実施形態によると、補正血小板数は、観察された血小板数パラメータを損失した血小板数パラメータと組わせることによって判定され得る。例えば、補正血小板数は、以下の等式で計算することができる。ＰＬＴ_ＣＯＲ＝ＰＬＴ_Ｃ＋ＰＬＴ、式中、ＰＬＴがＣＢＣモジュールからの観察された血小板数である。

【0134】

補正血小板数パラメータを判定するための例示的な手法は、図７Ａの工程７８０ａのように示される。

【0135】

図７Ｇは、本発明の実施形態による生体サンプル分析システムの態様を示す。ここで示されるように、血小板分析技術は、ＶＣＳモジュールからのＮＲＢＣチャネル出力を使用して血小板凝集塊体積及び血小板凝集塊対ＷＢＣ比率パラメータを判定することを含み得る。更に、技術は、ＣＢＣモジュールを使用して観察された血小板数、単一血小板体積、及びＷＢＣ濃度パラメータを判定することを含み得る。その上、技術は、ＮＲＢＣ及びＣＢＣモジュールからの様々な組み合わせのパラメータを使用して損失した血小板数及び補正血小板数パラメータを判定することを含み得る。

【0136】

図７Ａ〜７Ｇに関して上述される血小板数補正技術に基づいて、本発明の実施形態が、粒子分析器を使用して血液サンプル中の血小板を数え、区別するための有効なシステム及び方法を包含することが分かる。例示的な技術は、血小板凝集塊中に含有される血小板数を推定し、次にこの推定される値を、総血小板数（補正）に到達するために血小板の実際の数に加えることによって補正血小板数を推定することを含む。このように、さもなければ自動化されたシステムにおいて損失し得る（それにより、不正確な計数を提供するか、又は時間のかかる手動測定を必要とする）、血小板測定値における凝集塊人工物が説明され得、血小板数は適切に調節された。例えば、血小板及び血小板凝集塊は、前方励起に対する回転低角度光散乱（例えば、図７Ｅ）をプロットすることによって、又は低中角度光散乱に対する回転上方中角度光散乱（例えば、図７Ｆ）をプロットすることによって検出され得る。上述のように総血小板数を概算するための技術は、血小板凝集塊の平均値体積（例えば、血小板凝集塊集団の全体平均値体積）を判定することと、体積値を血小板の平均値体積で除算することによって推定される血小板数を導出することと、この数を白血球数を考慮する凝集塊の推定される数で乗算することと、を含む。この推定される数は、次いで、補正血小板数に到達するように検出された血小板の実際の数に加えられ得る。

【0137】

上述の補正血小板数技術に加えて、本発明の実施形態は、血小板凝集塊中に含有される血小板数を推定し、次に、総血小板数（補正）に到達するためにこの推定される値を血小板の実際の数に加えることによって補正血小板数を推定することもまた含む、他の技術の使用を包含する。例えば、後述される血小板数補正技術は、有核赤血球モジュールからのパラメータ、及び確率分布関数に加えて、上述のような血小板凝集塊計算を使用することを含む。結果的に、本発明の実施形態は、凝集塊内の血小板を定量化するための特有の技術、及び補正血小板数を提供するための手段を含む、補正血小板数に到達するための手法を提供する。同様に、本発明の実施形態は、ＮＲＢＣモジュールから血小板凝集塊を識別し、凝集塊で損失した血小板数を計算し、この損失した計数を報告された又は観察された血小板数に加え、補正血小板数を得るために血液分析器等の細胞分析システムの使用を包含する。

【0138】

補正血小板数（方法ＩＩ）
図７Ｈ〜７Ｊは、本発明の実施形態に従う補正血小板数を判定するための例示的な方法の態様を示す。図７Ｈに示されるように、該方法は、例えば、ＣＢＣ及びＮＲＢＣモジュールそれぞれによって既知の体積のラテックスビーズ又は特性７０６を処理することによってＣＢＣモジュール血小板ヒストグラム７０２とＮＲＢＣ ＤＣヒストグラム７０４との間の関連性を確立することを含み得る。ここで示されるように、ＣＢＣ血小板ヒストグラム中のチャネル（例えば、フェムトリットル単位における）は、工程７１０に示されるようにＣＢＣ血小板出力をＮＲＢＣ ＤＣ出力に変換するのに使用され得る相関を判定するためにＮＲＢＣモジュール中のＤＣチャネルにマッピングされ得る。

【0139】

集団寸法分布を有する単一血小板７１２のサンプルは、工程７１４に示されるように単一血小板集団に対応するＣＢＣモジュール出力を得るためにＣＢＣモジュールで処理され得る。工程７１０で得られた相関を使用して、工程７１４で得られたＣＢＣモジュール出力を、工程７１６に示されるようにＮＲＢＣ ＤＣ空間にマッピングすることが可能である。工程７１６で得られた変換されたＮＲＢＣ出力は、工程７１８に示されるように正常化され得、グラフ７２０に示されるように単一血小板細胞のＤＣ測定値の確率分布関数として表され得る。

【0140】

図７Ｉに示されるように、集団寸法分布を有する凝集塊化血小板７２２のサンプルは、工程７２４に示されるように血小板凝集塊の集団に対応するＮＲＢＣモジュール出力を得るためにＮＲＢＣモジュールで処理され得る。生体サンプルは、より小さい凝集塊がより少ない数の血小板を含有し（例えば、ｎ＝２）、より大きい凝集塊がより多い数の血小板（例えば、ｎ＝１３）を含有するように、血小板凝集塊の集団を含有し得る。場合によっては、サンプル中に存在する血小板凝集塊は異なる凝集塊が異なる数の血小板を含むように集団分布を示す。例えば、集団のいくつかの凝集塊は、５個の血小板を含み得、いくつかの凝集塊は、１０個の血小板を含み得、いくつかの凝集塊は、２０個の血小板等を含み得る。工程７２４に示されるように、血小板凝集塊イベントの総数はｉとして表され得る。グラフ７２６は、ＤＣ測定値がｘ_ｉとして表される例示的なＮＲＢＣ ＤＣヒストグラムを示す。ＮＲＢＣモジュールで識別された各凝集塊イベントに関して（例えば、工程７２４によって）、工程７３０に示されるように最大尤度手法を使用して凝集塊中で生じる血小板細胞の数を推定することが可能である。

【0141】

グラフ７２０に示されるように、正常化後、その結果生じたヒストグラムは、ｐ_１（ｘ）（ｘが、ＤＣチャネル数である）として示され得るので、単一血小板細胞のＤＣ測定値の確率分布関数を表す。その確率分布関数ｐ_１（ｘ）は、多数の血小板細胞を含有する血小板凝集塊のＤＣ測定値の確率分布関数を得るために工程７２８に示されるように畳み込まれ得る。より具体的には、多数の血小板細胞を含有する血小板凝集塊のＤＣ測定値の確率分布関数を計算することが可能である。２個の血小板細胞を含有する血小板凝集塊のＤＣ測定値の確率分布関数は、ｐ_２（ｘ）によって示され得、それはｐ_１（ｘ）及びｐ_１（ｘ）の畳み込みと等しい。ｎ血小板細胞を含有する血小板凝集塊のＤＣ測定値の確率分布関数は、ｐ_ｎ（ｘ）によって示され、それはｐ_ｎ−１（ｘ）及びｐ_１（ｘ）の畳み込みと等しい。

【0142】

工程７３０に示されるように、ＮＲＢＣモジュールで識別された各血小板凝集塊イベント（ｉ）に関して、クラスター中の血小板細胞の数をｎ血小板細胞を含有する血小板凝集塊のＤＣ測定値の確率分布関数に基づいて最大尤度手法で計算することが可能である。より具体的に言うと、血小板凝集塊イベントｉ中の血小板細胞の推定される数（ＤＣ測定値ｘ_ｉを用いて）は、以下の等式で判定され得る。

【0143】

【数1】

【0144】

このように、確率論は、血小板凝集塊の集団中の各凝集塊の寸法に対して、凝集塊中の血小板の最も可能性の高い数を判定するために使用され得る。例えば、体積の分布における各観察された体積（例えば、既知の体積を有する血小板凝集塊）に関して、その体積中の血小板の数を推定することが可能である（例えば、凝集塊の単位体積当たりの血小板の最も可能性の高い数を使用して）。工程７３２に示されるように、血小板凝集塊中で生じる血小板の総数を得るために全凝集塊寸法範囲を合計することが可能である。ここで示されるように、総数は、以下の等式を使用して計算され得る。

【0145】

【数2】

【0146】

図７Ｊに示されるように、工程７３２で得られた血小板凝集塊中で生じる血小板細胞の総数（Ｅ_Ｃ）７４２、ＮＲＢＣモジュールから得られたＷＢＣ計数（Ｅ_Ｗ）７４４、及びＣＢＣモジュールから得られたＷＢＣ濃度（ＷＢＣ）７４６を知ることによって、工程７４８に示されるように血小板凝集塊で損失した血小板数を推定又は計算することが可能である。例えば、血小板凝集塊で損失した血小板数は、ＰＬＴ_ｃとして表され得、ＰＬＴ_ｃ＝（Ｅ_ｃ／Ｅ_Ｗ）^＊ＷＢＣとして計算され得、式中、Ｅ_Ｗが、ＮＲＢＣモジュール中の白血球のイベントの数であり、ＷＢＣが、ＣＢＣモジュールからの白血球濃度である。

【0147】

観察された血小板数（ＰＬＴ）は、工程７５２に示されるようにＣＢＣモジュールを介して判定され得、補正血小板数は、工程７５４に示されるように損失した血小板数及び観察された血小板数に基づいて判定され得る。例えば、補正血小板数は、ＰＬＴ_ｃｏｒとして表され得、ＰＬＴ_ｃｏｒ＝ＰＬＴ_ｃ＋ＰＬＴとして計算され得る。

【0148】

図８は、本発明の実施形態による血小板パラメータ（例えば、補正血小板数）を得る方法８００を概略的に示す。ここに記載されるように、本方法は、工程８１０に示されるように、個体から血液サンプルを得る（例えば、定期健診時）工程を含む。工程８２０に示されるように、血液分析器等の細胞イベントパラメータを得るために具備される細胞分析システムを使用して、全血算（ＣＢＣ）データ、体積伝導度散乱（ＶＣＳ）データ、又はそれらの組み合わせを、これらの生体サンプルから得ることができる。工程８３０に示されるように、分析サンプルからのＣＢＣパラメータ、ＶＣＳパラメータ、又はそれらの組み合わせを使用して、血小板パラメータを判定することができる。また工程８４０に示されるように、方法は、血小板状態の情報を出力することを含んでもよい。

【0149】

分析システム
本発明の実施形態は、本明細書に開示される技術によって、血小板状態の予測又は識別方法を実施するようにプログラムされた、細胞分析システム及び他の自動化された生物学的検査装置を包含する。例えば、多重光角度検出パラメータを得る及び／又は処理するために具備されるシステム、例えば、血液分析器、又は、これらに付随する若しくはこれらに組み込まれるプロセッサ若しくは他のコンピュータ若しくはモジュールシステムは、本明細書に記載の様々な測定値又はパラメータを入力値として受信し、予測される血小板状態を自動的に出力するように構成され得る。予測される状態は、個体が、例えば、正常な血小板水準、増加した血小板水準、又は減少した血小板水準を有していることの指標を提供し得る。場合によっては、血液分析器等の多重光角度検出パラメータを得る及び／又は処理するために具備されるシステムは、血小板数分析を自動的に実行するように構成されるプロセッサ又は記憶媒体を含み得、それによって、血液分析器等の多重光角度検出パラメータを得るために具備されるシステムによって分析された生体サンプルから得られたデータは、血液分析器等の多重光角度検出パラメータを得る及び／又は処理するために具備されるシステムによっても処理され、分析データに基づいて、血小板の予測又は指標が、血液分析器等の多重光角度検出パラメータを得る及び／又は処理するために具備されるシステムによって提供又は出力される。

【0150】

図９は、本発明の実施形態による例示的なＣＢＣモジュール９００の態様を示す。血液分析器等のシステムの一部であり得るそのようなＣＢＣモジュールは、ＷＢＣ、ＲＢＣ、及びＰＬＴ細胞計数又はヘモグロビン測定に対する、様々な機械的機能、並びに電子的及び光度的測定機能を制御し、又は実行するように操作することができる。例示的なＣＢＣモジュールを使用して、ＣＢＣ分析用にサンプルを調製し、開口槽アセンブリ（例えば、ＷＢＣ槽９１０及びＲＢＣ槽９２０）を介して、ＣＢＣパラメータ測定値を生成することができる。

【0151】

血液の細胞成分（例えば、赤血球、白血球、及び血小板）は、電気インピーダンス法を使用して数えることができる。例えば、吸引された全血サンプルを２つの一定分量に分け、等張性希釈剤と混合することができる。第１希釈液をＲＢＣ開口槽９２０に送達してよく、第２液をＷＢＣ開口槽９１０に送達してよい。ＲＢＣチャンバでは、ＲＢＣ及び血小板の両方を数え、細胞が検出開口部を通過する際の電気インピーダンスによって区別することができる。例えば、２〜２０ｆＬの粒子は血小板として計数され、３６ｆＬを超えるものはＲＢＣとして計数することができる。ＷＢＣチャンバ処理において、ＲＢＣ溶解試薬をＷＢＣ希釈一定分量に加え、ＲＢＣを溶解してヘモグロビンを遊離することができ、その後、ＷＢＣ槽の検出開口部のインピーダンスによってＷＢＣを計数することができる。いくつかの例において、槽は、多数の開口部を含み得る。したがって、例えば、血小板算出技術で使用される血小板イベント計数は、ＲＢＣ３口開口槽を使用して得ることができる。同様に、血小板算出技術で使用されるＷＢＣイベント分析（ＷＢＣ濃度等）は、ＷＢＣ３口開口槽を使用して得ることができる。

【0152】

例示的なＣＢＣサンプル調製技術は、サンプル収集及びサンプル送達の２つのプロセスを含んでよい。サンプル収集は、例えば、図７Ｇに示されるように、１６５μＬの患者サンプルを吸引し、血液サンプリング弁（ＢＳＶ）に方向付けるときに生じ得る。ＢＳＶを操作して、２つの三口開口槽に送達するために、血液分析器試薬と共に患者サンプルの一定量を方向付けてよい。患者サンプル及び血液分析器試薬を所定の角度で開口槽の底部に送達することができ、円形デザインであることから、これによって気泡を混入せずにサンプル及び試薬を十分に混合することができる。続いて、サンプルを測定及び分析用に調製することができる。いくつかの実施形態によると、ＷＢＣ槽では、６．０ｍＬ（±１．０％）の血液分析器希釈剤及び２８μＬのサンプルを、１：２５１の最終希釈のために１．０８ｍＬ（±１．０％）の血液分析器細胞溶解液と合わせ得る。いくつかの実施形態によると、ＲＢＣ槽では、１０ｍＬ（±１．０％）の血液分析器希釈剤及び１．６μＬのサンプルを、１：６２５０の最終希釈のために合わせ得る。患者サンプル及び血液分析器試薬を混合した後、細胞計数及び細胞体積の測定のため、開口部に真空及び開口部電流を印加し得る。ＲＢＣ及びＰＬＴの計数には、開口部付近の細胞の再循環を防ぐため、スイープフローの適用を含んでもよい。特定の実施形態において、ＲＢＣ及びＰＬＴのデータ収集は、最大２０秒まで、ＷＢＣについては最大１０秒までであってよい。特定の実施形態において、開口部アセンブリによって生成される全アナログパルスは、プリアンプカードによって増幅され、その後Ａ−Ｄ変換とパラメータ抽出のため、ＣＢＣ信号調整分析器カードに送信されてよい。いくつかの実施形態によると、血液分析器等のシステムを使用して、各細胞イベントの多数のパラメータを測定することができ、デジタルパラメータ抽出プロセスを使用して、時間、体積（振幅及びパルス幅を含むパルス属性）、計数及び計数率、並びに待ち時間等のデジタル測定値を提供することができる。任意に血液分析器等のシステムによって、パルス編集、同時通過補正、計数決定、ＷＢＣ、ＲＢＣ及びＰＬＴのヒストグラムの生成、ヒストグラム決定、パターン分析、及び干渉補正等において、そのような測定値を使用することができる。

【0153】

図１０Ａは、本発明の実施形態による例示的なＮＲＢＣ処理チャンバの態様を示す。関連して、図１０Ｂは、本発明の実施形態による例示的なＮＲＢＣ処理サイクルの態様を示す。ここに示されるように、血液サンプルの一部を希釈し、溶解試薬で処理をして、予測可能な状態で存在し得るＮＲＢＣ、ＷＢＣ、及び任意の血小板又は細胞デブリを保持しながら、非有核赤血球を選択的に除去することができる。例示的なＮＲＢＣ分析プロトコルは、血液をＮＲＢＣチャンバに送達することと、その量の血液を細胞溶解剤と接触させることと（例えば、血液と溶解剤を混合することによって）、その混合物を分析のため流れ細胞に移送することと、その結果を表示することと、を含み得る。

【0154】

本明細書に記載される計算又は演算の各々は、ハードウェア、ソフトウェア、及び／又はファームウェアを有するコンピュータ又は他のプロセッサを使用して実行されてよい。様々な方法工程はモジュールを介して実行されてよく、モジュールは、本明細書に記載される方法工程を実行するために配置される、広範なデジタル及び／又はアナログデータ処理ハードウェア及び／又はソフトウェアのうちのいずれをも備えてよい。データ処理ハードウェアを任意に備えるモジュールは、これらに伴って適当な機械プログラミングコードを有することによって、これらの工程のうち１つ以上を実行するのに適しており、２つ以上の工程（又は２つ以上の工程の部分）に対するモジュールは、広範な統合処理及び／又は分散処理アーキテクチャのうちのいずれにおいても、単一のプロセッサボードに組み込まれている、又は、異なるプロセッサボードに分かれている。これらの方法及びシステムは、多くの場合、上記方法工程を実行するための命令を伴う、コンピュータ可読コードを組み込む有形媒体を採用するだろう。好適な有形媒体は、メモリ（揮発性メモリ及び／又は不揮発性メモリを含む）、記憶媒体（例えば、フロッピー（登録商標）ディスク、ハードディスク、テープなどへの磁気記録、ＣＤ、ＣＤ−Ｒ／Ｗ、ＣＤ−ＲＯＭ、ＤＶＤなどといった光学式メモリ、又は任意の他のデジタル若しくはアナログ記憶媒体）などを含んでよい。

【0155】

図面中に示し、上記で説明したものと異なる構成要素の配置、並びに、示されていない、すなわち説明されていない構成要素及び工程は可能である。同様に、一部の特徴及びサブコンビネーションは有用なものであり、他の特徴及びサブコンビネーションに関係なく採され得る。本発明の実施形態は、限定目的ではなく例示目的で説明しており、本発明の読者には、別の実施形態が明らかになるであろう。特定の場合では、方法工程又は操作が異なる順序で実施又は実行されてよく、あるいは、操作を追加、削除、又は変更してもよい。本発明の特定の態様において、ある要素若しくは構造を提供するため、又は、ある機能を実行するために、単一の構成要素を複数の構成要素と置き換えてよく、複数の構成要素を単一の構成要素と置き換えてよいことが理解され得る。かかる置換が本発明の特定の実施形態の実行に有効でない場合を除き、かかる置換は本発明の範囲内であると見なされる。

【0156】

本開示で論じた全ての特許、特許公開、特許出願、雑誌論文、書籍、技術文献などは、それらの全体があらゆる目的で参照により本明細書に組み込まれる。

【0157】

図面中に示し、上記で説明したものと異なる構成要素の配置、並びに、示されていない、すなわち説明されていない構成要素及び工程は可能である。同様に、一部の特徴及びサブコンビネーションは有用なものであり、他の特徴及びサブコンビネーションに関係なく採用され得る。本発明の実施形態は、限定目的ではなく例示目的で説明しており、本発明の読者には、別の実施形態が明らかになるであろう。したがって、本発明は、上記の、又は図に示した実施形態に限定されず、以下の特許請求の範囲から逸脱することなく、様々な実施形態及び変更がなされてよい。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図2】

【図3】

【図4】

【図4A】

【図5】

【図6】

【図7】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図7E】

【図7F】

【図7G】

【図7H】

【図7I】

【図7J】

【図8】

【図9】

【図10A】

【図10B】