特許 6430809 血液検体を判定するための方法、システム及びコンピュータプログラム、並びに血液検体分析装置

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6430809

(24)【登録日】2018年11月9日

(45)【発行日】2018年11月28日

(54)【発明の名称】血液検体を判定するための方法、システム及びコンピュータプログラム、並びに血液検体分析装置

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/86 20060101AFI20181119BHJP

   G01N 33/483 20060101ALI20181119BHJP

   G01N 21/82 20060101ALI20181119BHJP

【ＦＩ】

   G01N33/86

   G01N33/483 C

   G01N21/82

【請求項の数】20

【全頁数】26

(21)【出願番号】特願2014-257531(P2014-257531)

(22)【出願日】2014年12月19日

(65)【公開番号】特開2016-118442(P2016-118442A)

(43)【公開日】2016年6月30日

【審査請求日】2017年12月6日

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用 平成２６年６月２０日 日本検査血液学会発行の「日本検査血液学会雑誌，第１５巻，学術集会号，第Ｓ１５４頁」および 平成２６年７月２１日 仙台国際センター（宮城県仙台市青葉区青葉山無番地）にて開催された「第１５回 日本検査血液学会学術集会」において発表

(73)【特許権者】

【識別番号】507126487

【氏名又は名称】公立大学法人奈良県立医科大学

(73)【特許権者】

【識別番号】390014960

【氏名又は名称】シスメックス株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100065248

【弁理士】

【氏名又は名称】野河 信太郎

(74)【代理人】

【識別番号】100159385

【弁理士】

【氏名又は名称】甲斐 伸二

(74)【代理人】

【識別番号】100163407

【弁理士】

【氏名又は名称】金子 裕輔

(74)【代理人】

【識別番号】100166936

【弁理士】

【氏名又は名称】稲本 潔

(72)【発明者】

【氏名】嶋 緑倫

(72)【発明者】

【氏名】野上 恵嗣

(72)【発明者】

【氏名】田渕 有香

(72)【発明者】

【氏名】黒野 浩司

【審査官】 磯田 真美

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００５−５２０１７０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２０１３／０３４４５１９（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００９／１５３９６４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 米国特許第０４４５４７５２（ＵＳ，Ａ）

【文献】 米国特許第０７０７４５８２（ＵＳ，Ｂ１）

【文献】 米国特許第０６８９８５３２（ＵＳ，Ｂ１）

【文献】 SHIMA, M. et al.，Towards standardization of clot waveform analysis and recommendations for its clinical applications，Journal of Thrombosis and Haemostasis，２０１３年 ５月，Vol. 11，pp. 1417-1420

【文献】 DAVIDSON, S.J. et al.，Abnormal APTT second derivative clot curves on the ACL top analyser and their diagnostic utility，Journal of Thrombosis and Haemostasis，２０１１年 ７月，Vol. 9, Suppl. 2，pp. 124, P-MO-211

【文献】 MATSUMOTO, T. et al.，The measurement of low levels of factor VIII or factor IX in hemophilia A and hemophilia B plasma by clot waveform analysis and thrombin generationn assay，Journal of Thrombosis and Haemostasis，２００６年，Vol. 4，pp. 337-384

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｇ０１Ｎ ３３／４８ − ３３／９８

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ

／ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ループスアンチコアグラント又は凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する疑いのある血液検体と凝固時間測定試薬とが混和されてなる測定試料に光を照射し、前記測定試料から光量に関する光学的情報を取得する工程と、
取得した光学的情報に基づいて、凝固波形の微分に関するパラメータを少なくとも１つ取得する工程と、
取得したパラメータの値に基づいて、前記血液検体が、ループスアンチコアグラントを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるか又は凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるかを判定する工程と
を含む、血液検体の判定方法。

【請求項2】

前記判定工程において、取得した前記パラメータの値と所定の閾値とを比較し、比較結果に基づいて、前記血液検体の判定を行う請求項１に記載の血液検体の判定方法。

【請求項3】

前記光学的情報が、連続的又は断続的に測定された散乱光量、透過度又は吸光度であり、前記凝固波形が、前記散乱光量、透過度又は吸光度の経時的変化を表す波形である請求項１又は２に記載の血液検体の判定方法。

【請求項4】

前記凝固波形の微分に関するパラメータが、最大凝固速度(|min 1|)、最大凝固加速度(|min 2|)、及び最大凝固減速度(max 2)からなる群より選択される少なくとも１つである請求項１〜３のいずれか１項に記載の血液検体の判定方法。

【請求項5】

前記判定工程において、
|min 1|を取得している場合は|min 1|の値と第１の閾値とを比較し、|min 2|を取得している場合は|min 2|の値と第２の閾値とを比較し、max 2を取得している場合はmax 2の値と第３の閾値とを比較して、
|min 1|、|min 2|及びmax 2のうち、取得している値の少なくとも１つが、その値に対応する所定の閾値以上であるとき、前記血液検体が、ループスアンチコアグラントを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定し、
|min 1|、|min 2|及びmax 2のうち、取得している値の全てが、その値に対応する所定の閾値より小さいとき、前記血液検体が、凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定する
請求項４に記載の血液検体の判定方法。

【請求項6】

前記パラメータの取得工程において、|min 1|を取得し、
前記判定工程において、|min 1|の値と第１の閾値とを比較して、|min 1|の値が第１の閾値以上であるとき、前記血液検体が、ループスアンチコアグラントを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定し、|min 1|の値が第１の閾値より小さいとき、前記血液検体が、凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定する
請求項４に記載の血液検体の判定方法。

【請求項7】

前記パラメータの取得工程において、|min 1|、|min 2|及びmax 2を取得し、
前記判定工程において、|min 1|の値と第１の閾値とを比較し、|min 2|の値と第２の閾値とを比較し、max 2の値と第３の閾値とを比較して、
|min 1|、|min 2|及びmax 2の少なくとも１つの値が、その値に対応する閾値以上であるとき、前記血液検体が、ループスアンチコアグラントを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定し、
|min 1|の値が第１の閾値より小さく、且つ、|min 2|の値が第２の閾値より小さく、且つ、max 2の値が第３の閾値より小さいとき、前記血液検体が、凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定する
請求項４に記載の血液検体の判定方法。

【請求項8】

前記凝固時間測定試薬が、プロトロンビン時間、活性化部分トロンボプラスチン時間、希釈プロトロンビン時間、希釈活性化部分トロンボプラスチン時間、カオリン凝固時間、希釈ラッセル蛇毒時間、トロンビン時間、及び希釈トロンビン時間からなる群より選択される少なくとも１種を測定するための試薬である請求項１〜７のいずれか１項に記載の血液検体の判定方法。

【請求項9】

前記血液検体が、全血又は血漿である請求項１〜８のいずれか１項に記載の血液検体の判定方法。

【請求項10】

血液検体と凝固時間測定試薬とが混和されてなる測定試料に光を照射し、前記測定試料から光量に関する光学的情報を取得する工程と、
取得した光学的情報に基づいて、凝固時間を取得するとともに凝固波形の微分に関するパラメータを少なくとも１つ取得する工程と、
凝固時間の延長が認められた血液検体について、取得したパラメータの値に基づいて、前記血液検体が、ループスアンチコアグラントを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるか又は凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるかを判定する工程と
を含む、血液検体の判定方法。

【請求項11】

血液検体と凝固時間測定試薬とが混和されてなる測定試料に光を照射し、前記測定試料から光量に関する光学的情報を取得する光学的情報取得部と、
前記光学的情報に基づいて、最大凝固速度(|min 1|)、最大凝固加速度(|min 2|)、及び最大凝固減速度(max 2)からなる群より選択される少なくとも１つのパラメータを取得する制御部と
を備え、
前記制御部が、取得した前記パラメータの値と所定の閾値とを比較し、比較結果に基づいて、前記血液検体についての参考情報を出力することを特徴とする、血液検体分析装置。

【請求項12】

分析結果を表示する表示部をさらに備え、前記制御部が、前記血液検体についての参考情報を前記表示部に出力することを特徴とする請求項１１に記載の血液検体分析装置。

【請求項13】

前記光学的情報が、連続的又は断続的に測定された散乱光量、透過度又は吸光度である請求項１１又は１２に記載の血液検体分析装置。

【請求項14】

前記制御部は、前記光学的情報に基づいて凝固時間を取得し、取得した凝固時間が、所定の時間より長い場合、前記参考情報を出力する請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の血液検体分析装置。

【請求項15】

前記制御部が、
|min 1|を取得している場合は|min 1|の値と第１の閾値とを比較し、|min 2|を取得している場合は|min 2|の値と第２の閾値とを比較し、max 2を取得している場合はmax 2の値と第３の閾値とを比較して、
|min 1|、|min 2|及びmax 2のうち、取得している値の少なくとも１つが、その値に対応する所定の閾値以上であるとき、前記血液検体が、ループスアンチコアグラントを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるとの参考情報を出力し、
|min 1|、|min 2|及びmax 2のうち、取得している値の全てが、その値に対応する所定の閾値より小さいとき、前記血液検体が、凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるとの参考情報を出力する
請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の血液検体分析装置。

【請求項16】

前記制御部が、
|min 1|の値と第１の閾値とを比較して、
|min 1|の値が第１の閾値以上であるとき、前記血液検体が、ループスアンチコアグラントを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるとの参考情報を出力し、
|min 1|の値が第１の閾値より小さいとき、前記血液検体が、凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるとの参考情報を出力する
請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の血液検体分析装置。

【請求項17】

前記制御部が、
max 2の値と第３の閾値とを比較して、
max 2の値が第３の閾値以上であるとき、前記血液検体が、ループスアンチコアグラントを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるとの参考情報を出力し、
max 2の値が第３の閾値より小さいとき、前記血液検体が、凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるとの参考情報を出力する、
請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の血液検体分析装置。

【請求項18】

前記制御部が、
|min 1|の値と第１の閾値とを比較し、|min 2|の値と第２の閾値とを比較し、max 2の値と第３の閾値とを比較して、
|min 1|、|min 2|及びmax 2の少なくとも１つの値が、その値に対応する閾値以上であるとき、前記血液検体が、ループスアンチコアグラントを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるとの参考情報を出力し、
|min 1|の値が第１の閾値より小さく、且つ、|min 2|の値が第２の閾値より小さく、且つ、max 2の値が第３の閾値より小さいとき、前記血液検体が、凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるとの参考情報を出力する、
請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の血液検体分析装置。

【請求項19】

プロセッサ及び前記プロセッサの制御下にあるメモリを含むコンピュータを備え、
前記メモリには、下記のステップ：
血液検体と凝固時間測定試薬とが混和されてなる測定試料から光量に関する光学的情報を取得するステップと、
前記光学的情報に基づいて、凝固波形の微分に関するパラメータを少なくとも１つ取得するステップと、
取得したパラメータの値に基づいて、前記血液検体が、ループスアンチコアグラントを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるか又は凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるかを判定するステップと
を前記コンピュータに実行させるためのコンピュータプログラムが記録されている、
血液検体の判定のためのシステム。

【請求項20】

コンピュータが読み取り可能な媒体に記録されているコンピュータプログラムであって、下記のステップ：
血液検体と凝固時間測定試薬とが混和されてなる測定試料から光量に関する光学的情報を取得するステップと、
前記光学的情報に基づいて、凝固波形の微分に関するパラメータを少なくとも１つ取得するステップと、
取得したパラメータの値に基づいて、前記血液検体が、ループスアンチコアグラントを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるか又は凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるかを判定するステップと
を前記コンピュータに実行させる、血液検体の判定のためのコンピュータプログラム。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、血液検体を判定するための方法に関する。また、本発明は、血液検体を判定するためのシステム及びコンピュータプログラムに関する。さらに、本発明は、血液検体分析装置に関する。

【背景技術】

【0002】

血液検査の一つである凝固検査は、止血機構の状態を把握するために、血液の凝固時間を測定することにより行われる。凝固時間の延長が認められる場合、原因として、先天的な血液凝固因子の欠乏もしくは異常による先天性凝固障害、又は、凝固反応を阻害する自己抗体もしくはワーファリンなどの薬剤による後天性凝固阻害が疑われる。先天性凝固障害と後天性凝固阻害とは、凝固時間の延長を示した被検血漿と、正常血漿とを混合して得た試料の凝固時間を測定する試験(クロスミキシングテスト)で鑑別できる。すなわち、先天性凝固障害の場合は、正常血漿との混合により凝固時間の延長が是正されるが、後天性凝固障害の場合は、凝固時間の延長は是正されない。

【0003】

自己抗体を原因とする後天性凝固障害は、その病態が自己抗体の種類によって異なることが知られている。例えば、血液凝固因子に対する自己抗体(凝固因子インヒビターとも呼ばれる)を有する患者は、一般に出血症状を示す。一方、ループスアンチコアグラント(ＬＡ)と呼ばれる自己抗体は、リン脂質依存性の凝固反応に必要なリン脂質を阻害するにもかかわらず、ＬＡを有する患者は血栓症状を示す。したがって、凝固因子インヒビターを含む検体と、ＬＡを含む検体とを鑑別することは、臨床的に重要である。しかし、上記のとおり、どちらの検体でも凝固時間の延長が認められるので、通常の凝固検査で両者を鑑別することは困難である。よって、鑑別のためには、凝固因子インヒビター又はＬＡを検出する検査などを別途行う必要がある。

【0004】

一方、近年では、凝固の開始からフィブリン塊の形成までの全ての過程を評価するために、凝固波形の解析が着目されている。凝固波形とは、血液検体の凝固の進行に伴って生じる、該検体における光の透過性や散乱などの光学的特性の経時的変化を表す波形である。凝固波形の解析により、凝固の速度や加速度などの情報が得られる。例えば、特許文献１には、ワーファリンを投与された抗リン脂質抗体(ＬＡを含む)を保有する患者は、健常者に比べ、最大凝固加速度及び最大凝固減速度が異なっていることが記載されている。非特許文献１には、第VIII因子インヒビターにより該因子の活性が低下する疾患である後天性血友病Ａについて凝固波形解析を行った結果、後天性血友病Ａ由来の検体は、正常検体に比べ、最大凝固速度及び最大凝固加速度が低値を示すことで特徴付けられることが記載されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】特表２００５−５２０１７０号公報

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】Shima M.ら, Towards standardization of clot waveform analysis and recommendations for its clinical applications. J Thromb Haemost, 2013, vol.11, p.1417-1420

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

上記のとおり、通常の凝固検査では、凝固因子インヒビターを含む血液検体と、ＬＡを含む血液検体との鑑別は難しいので、別の検査を行う必要がある。しかし、結果を得るまでに時間を要する。また、測定データの変化のパターンを見分けることで両者を鑑別するような検査では、熟練者でなければ判定が難しい場合がある。そのため、凝固検査に通常用いられる凝固時間測定試薬を用いて、血液検体が、ループスアンチコアグラントを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるか又は凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるかを簡便に判定することを可能にする手段が望まれる。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明の第１の態様は、血液検体の判定方法を提供する。この血液検体の判定方法は、ＬＡ又は凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する疑いのある血液検体と凝固時間測定試薬とが混和されてなる測定試料に光を照射し、この測定試料から光量に関する光学的情報を取得する工程と、取得した光学的情報に基づいて、凝固波形の微分に関するパラメータを少なくとも１つ取得する工程と、取得したパラメータの値に基づいて、上記の血液検体が、ＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるか又は凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるかを判定する工程とを含む。

【0009】

本発明の第２の態様は、血液検体の判定方法を提供する。この血液検体の判定方法は、血液検体と凝固時間測定試薬とが混和されてなる測定試料に光を照射し、この測定試料から光量に関する光学的情報を取得する工程と、取得した光学的情報に基づいて、凝固時間を取得するとともに凝固波形の微分に関するパラメータを少なくとも１つ取得する工程と、凝固時間の延長が認められた血液検体について、取得したパラメータの値に基づいて、上記の血液検体が、ＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるか又は凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるかを判定する工程とを含む。

【0010】

本発明の第３の態様は、血液検体分析装置を提供する。この血液検体分析装置は、血液検体と凝固時間測定試薬とが混和されてなる測定試料に光を照射し、この測定試料から光量に関する光学的情報を取得する光学的情報取得部と、光学的情報に基づいて、最大凝固速度(|min 1|)、最大凝固加速度(|min 2|)、及び最大凝固減速度(max 2)からなる群より選択される少なくとも１つのパラメータを取得する制御部とを備え、この制御部が、取得したパラメータの値と所定の閾値とを比較し、比較結果に基づいて、上記の血液検体についての参考情報を出力することを特徴とする。

【0011】

本発明の第４の態様は、プロセッサ及びこのプロセッサの制御下にあるメモリを含むコンピュータを備える、血液検体の判定のためのシステムを提供する。上記のメモリには、血液検体と凝固時間測定試薬とが混和されてなる測定試料から光量に関する光学的情報を取得するステップと、光学的情報に基づいて、凝固波形の微分に関するパラメータを少なくとも１つ取得するステップと、取得したパラメータの値に基づいて、上記の血液検体が、ＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるか又は凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるかを判定するステップとを、上記のコンピュータに実行させるためのコンピュータプログラムが記録されている。

【0012】

本発明の第５の態様は、コンピュータが読み取り可能な媒体に記録されている、血液検体の判定のためのコンピュータプログラムを提供する。このコンピュータプログラムは、血液検体と凝固時間測定試薬とが混和されてなる測定試料から光量に関する光学的情報を取得するステップと、光学的情報に基づいて、凝固波形の微分に関するパラメータを少なくとも１つ取得するステップと、取得したパラメータの値に基づいて、上記の血液検体が、ＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるか又は凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるかを判定するステップとを、上記のコンピュータに実行させる。

【発明の効果】

【0013】

本発明によれば、凝固時間測定試薬を用いて、血液検体が、ＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるか又は凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるかを判定することを可能にする。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1】正常血漿の凝固波形とその１次微分及び２次微分のグラフの一例である。

【図2】血液検体分析装置の外観の構成を示す斜視図である。

【図3】血液検体分析装置の測定部の内部を上側から見た場合の平面図である。

【図4】血液検体分析装置の測定部の構成を示す図である。

【図5】血液検体分析装置の制御装置の機能構成を示す図である。

【図6】血液検体分析装置の制御装置のハードウェア構成を示す図である。

【図7】血液検体分析装置による血液検体の測定処理を示すフローチャートである。

【図8A】血液検体分析装置による血液検体の分析処理を示すフローチャートである。

【図8B】血液検体分析装置による血液検体の分析処理を示すフローチャートである。

【図8C】血液検体分析装置による血液検体の分析処理を示すフローチャートである。

【図8D】血液検体分析装置による血液検体の分析処理を示すフローチャートである。

【図9】血液検体分析装置による分析結果を表示する画面の一例を示す図である。

【図10A】正常血漿の|min 1|の値に対する各被検血漿の|min 1|の割合を示すグラフである。

【図10B】正常血漿の|min 2|の値に対する各被検血漿の|min 2|の割合を示すグラフである。

【図10C】正常血漿のmax 2の値に対する各被検血漿のmax 2の割合を示すグラフである。

【図11A】ＬＡ陽性検体についてクロスミキシングテストを行ったときの即時型及び遅延型の凝固時間を示すグラフである。

【図11B】凝固因子インヒビター陽性検体についてクロスミキシングテストを行ったときの即時型及び遅延型の凝固時間を示すグラフである。

【図12】ＬＡ陽性検体群及び凝固因子インヒビター陽性検体群のＩＣＡ(the index for circulating anticoagulant)の値を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0015】

[１．血液検体の判定方法]
第１の態様に係る血液の判定方法(以下、単に「方法」ともいう)では、まず、ＬＡ又は凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する疑いのある血液検体と凝固時間測定試薬とが混和されてなる測定試料に光を照射し、上記の測定試料から光量に関する光学的情報を取得する。

【0016】

血液検体は、ＬＡ又は凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する疑いのある検体であれば、特に限定されない。そのような検体としては、例えば、ＬＡを保有する者及び／又は凝固因子インヒビターを保有する者を含む複数の被験者から得た検体群などが挙げられる。あるいは、血液検体の一部を凝固検査に付して、凝固時間が延長することが予め確認されている血液検体であってもよい。血液検体の種類としては、全血又は血漿であればよいが、好ましくは血漿である。血液検体には、凝固検査に通常用いられる公知の抗凝固剤が添加されていてもよい。そのような抗凝固剤としては、例えば、クエン酸３ナトリウムが挙げられる。

【0017】

本実施形態において、凝固時間測定試薬(以下、単に「試薬」ともいう)は、当該技術において公知の測定原理に基づく凝固時間を測定するための試薬であればよい。例えば、プロトロンビン時間、活性化部分トロンボプラスチン時間、希釈プロトロンビン時間、希釈活性化部分トロンボプラスチン時間、カオリン凝固時間、希釈ラッセル蛇毒時間、トロンビン時間、及び希釈トロンビン時間の少なくとも１種を測定するための試薬が挙げられる。また、市販の凝固時間測定試薬及び試薬キットを用いてもよい。

【0018】

本実施形態において、測定試料は、用いる試薬の測定原理に応じて公知の手法により、血液検体と試薬とを混和して調製すればよい。血液検体と試薬との反応時間は、通常１分以上10分以下であり、好ましくは３分以上５分以下である。温度条件は、通常25℃以上45℃以下であり、好ましくは35℃以上38℃以下である。測定試料の調製は、用手法で行ってもよいし、全自動測定装置により行ってもよい。そのような装置としては、例えば、全自動血液凝固測定装置のCSシリーズ(シスメックス株式会社)などが挙げられる。

【0019】

本実施形態において、測定試料に照射する光は、凝固時間の測定に通常用いられる光であればよく、例えば、波長が660 nm近傍、好ましくは660 nmの光が挙げられる。光源は特に限定されないが、例えば、発光ダイオード、ハロゲンランプなどが挙げられる。

【0020】

上記の光源から測定試料に光を照射することにより、該測定試料から散乱光及び透過光が生じる。本実施形態では、光量に関する光学的情報として、例えば、散乱光量又は透過光量に関する情報が挙げられ、散乱光強度、透過度、吸光度などが好ましい。

【0021】

本実施形態では、測定条件は特に限定されないが、光の照射と、光量に関する光学的情報の取得は、血液検体と試薬との混和後(測定試料の調製の直後)から凝固反応の終了(フィブリン塊の形成)までの間、連続的又は断続的に行うことが好ましい。このように、凝固の全過程にわたって連続的又は断続的に測定された光量に関する光学的情報(例えば、散乱光強度、透過度又は吸光度)に基づけば、凝固過程の任意の時点又は時間において、後述の凝固波形の微分に関するパラメータを取得することが可能となる。なお、光の照射と、光量に関する光学的情報の取得は、全自動測定装置により行ってもよい。そのような装置としては、例えば、全自動血液凝固測定装置のCSシリーズ(シスメックス株式会社)などが挙げられる。

【0022】

次いで、本実施形態に係る方法では、取得した光学的情報に基づいて、凝固波形の微分に関するパラメータを少なくとも１つ取得する。

【0023】

本実施形態において、凝固波形は、血液検体と凝固時間測定試薬とが混和されてなる測定試料を光学的に測定することにより得られる、該測定試料の凝固過程における光量に関する光学的情報の経時的変化を表す波形である。図１を参照して、凝固波形及びその波形解析について説明する。図１の凝固波形(上段のグラフ)において、a点は測定開始点(測定試料の調製の直後)であり、b点はフィブリン析出(凝固の開始)点であり、a-bは凝固時間を表す。c点は凝固の中点であり、d点は凝固の終点であり、e点は測定の終点である。凝固波形を微分(１次微分)すると、凝固速度が算出される(図１の中段のグラフ参照)。なお、凝固波形のc点は１次微分の最大値に当たる。凝固速度を微分(２次微分)すると、凝固加速度が算出される(図１の下段のグラフ参照)。なお、本実施形態に係る方法では、後述の凝固波形の微分に関するパラメータを用いて判定を行うので、凝固時間及び凝固波形の取得は任意である。

【0024】

本実施形態において、凝固波形の微分に関するパラメータは、取得した光学的情報に基づいて得られる、凝固速度、凝固加速度及び凝固減速度の少なくとも１つを示す値であれば、特に限定されない。ここで、凝固速度を示す値は、凝固波形の一次微分から得ることができる値に相当し、凝固加速度を示す値及び凝固減速度を示す値は、凝固波形の二次微分から得ることができる値に相当する。そのようなパラメータとしては、例えば、|min 1|、|min 2|及びmax 2が挙げられる。|min 1|とは、凝固波形の一次微分の最小値の絶対値であり、最大凝固速度を表す。|min 2|とは、凝固波形の二次微分の最小値の絶対値であり、最大凝固加速度を表す。max 2とは、凝固波形の二次微分の最大値であり、最大凝固減速度を表す。なお、|min 1|、|min 2|及びmax 2という用語自体は、当該技術において公知である。また、凝固波形の微分に関するパラメータは、これらの値を２つ以上組み合わせて得られる値であってもよく、例えば、|min 1|、|min 2|及びmax 2から選択される少なくとも２つの値の和、差、積、比などが挙げられる。

【0025】

凝固時間も取得している場合は、凝固波形の微分に関するパラメータは、凝固波形の一次微分又は二次微分から取得される値と、凝固時間とを組み合わせて得られる値であってもよい。そのような値としては、例えば、|min 1|、|min 2|及びmax 2から選択される少なくとも１つの値と凝固時間の値の和、差、積、比などが挙げられる。

【0026】

そして、本実施形態に係る方法では、取得したパラメータの値に基づいて、上記の血液検体が、ＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるか又は凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるかを判定する。

【0027】

本実施形態において、判定は、取得したパラメータの値と、そのパラメータに対応する所定の閾値とを比較し、その比較結果に基づいて行うことが好ましい。例えば、|min 1|を取得している場合は|min 1|の値と第１の閾値とを比較し、|min 2|を取得している場合は|min 2|の値と第２の閾値とを比較し、max 2を取得している場合はmax 2の値と第３の閾値とを比較して、その比較結果に基づいて判定することができる。例えば、|min 1|、|min 2|及びmax 2のうち、取得している値の少なくとも１つが、その値に対応する所定の閾値以上であるとき、血液検体は、ＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定できる。一方、|min 1|、|min 2|及びmax 2のうち、取得している値の全てが、その値に対応する所定の閾値より小さいとき、血液検体は、凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定できる。

【0028】

凝固波形の微分に関するパラメータとして、|min 1|、|min 2|及びmax 2のいずれか１つを取得している場合、例えば、以下のようにして判定できる：
・|min 1|の値と第１の閾値とを比較して、|min 1|の値が第１の閾値以上であるとき、血液検体は、ＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定する。一方、|min 1|の値が第１の閾値より小さいとき、血液検体が、凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定する。
・|min 2|の値と第２の閾値とを比較して、|min 2|の値が第２の閾値以上であるとき、血液検体は、ＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定する。一方、|min 2|の値が第２の閾値より小さいとき、血液検体が、凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定する。
・max 2の値と第３の閾値とを比較して、max 2の値が第３の閾値以上であるとき、血液検体は、ＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定する。一方、max 2の値が第３の閾値より小さいとき、血液検体が、凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定する。

【0029】

凝固波形の微分に関するパラメータとして、|min 1|、|min 2|及びmax 2のいずれか２つを取得している場合、例えば、以下のようにして判定できる：
・|min 1|の値と第１の閾値とを比較し、|min 2|の値と第２の閾値とを比較して、|min 1|の値が第１の閾値以上であるか、又は、|min 2|の値が第２の閾値以上であるとき、血液検体は、ＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定する。一方、|min 1|の値が第１の閾値より小さく、且つ、|min 2|の値が第２の閾値より小さいとき、血液検体が、凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定する。
・|min 1|の値と第１の閾値とを比較し、max 2の値と第３の閾値とを比較して、|min 1|の値が第１の閾値以上であるか、又は、max 2の値が第３の閾値以上であるとき、血液検体は、ＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定する。一方、|min 1|の値が第１の閾値より小さく、且つ、max 2の値が第３の閾値より小さいとき、血液検体が、凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定する。
・|min 2|の値と第２の閾値とを比較し、max 2の値と第３の閾値とを比較して、|min 2|の値が第２の閾値以上であるか、又は、max 2の値が第３の閾値以上であるとき、血液検体は、ＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定する。一方、|min 2|の値が第２の閾値より小さく、且つ、max 2の値が第３の閾値より小さいとき、血液検体が、凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定する。

【0030】

凝固波形の微分に関するパラメータとして、|min 1|、|min 2|及びmax 2の３つを取得している場合、例えば、以下のようにして判定できる：
|min 1|の値と第１の閾値とを比較し、|min 2|の値と第２の閾値とを比較し、max 2の値と第３の閾値とを比較して、|min 1|の値が第１の閾値以上であるか、又は、|min 2|の値が第２の閾値以上であるか、又は、max 2の値が第３の閾値以上であるとき、血液検体が、ＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定する。一方、|min 1|の値が第１の閾値より小さく、且つ、|min 2|の値が第２の閾値より小さく、且つ、max 2の値が第３の閾値より小さいとき、血液検体が、凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあると判定する。

【0031】

本実施形態では、所定の閾値は特に限定されない。例えば、ＬＡ陽性検体及び凝固因子インヒビター陽性検体について、凝固波形の微分に関する種々のパラメータのデータを蓄積することにより、各パラメータに対応する所定の閾値を経験的に設定できる。あるいは、ＬＡ陽性検体群と凝固因子インヒビター陽性検体群のそれぞれについて、凝固波形の微分に関する種々のパラメータの値を取得し、両群を明確に区別可能な値を所定の閾値として設定してもよい。

【0032】

別の実施形態においては、血液検体について、凝固波形の微分に関するパラメータに加えて、凝固時間を取得し、凝固時間の延長が認められる血液検体について上記の判定を行うことができる。この実施形態では、凝固時間に基づいて、ＬＡ又は凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する疑いのある血液検体を選別して判定することができる。以下に、この実施形態(第２の態様)に係る血液検体の判定方法について説明する。

【0033】

本実施形態では、血液検体は、血液又は血漿であれば特に限定されない。なお、本実施形態において、凝固時間測定試薬、測定試料の調製、及び光量に関する光学的情報の取得に関する詳細は、第１の態様に係る方法について述べたことと同様である。

【0034】

本実施形態では、取得した光学的情報に基づいて、凝固時間を取得するとともに凝固波形の微分に関するパラメータを少なくとも１つ取得する。凝固波形の微分に関するパラメータの取得に関する詳細は、第１の態様に係る方法について述べたことと同様である。凝固時間を取得する方法自体は、当該技術において公知である。よって、当業者は、用いる凝固時間測定試薬の測定原理に応じて、血液検体の凝固時間を適宜取得できる。

【0035】

本実施形態では、凝固時間の延長が認められた血液検体について、取得したパラメータの値に基づいて、この血液検体が、ＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるか又は凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるかを判定する。なお、判定の手順及び各パラメータに対応する所定の閾値などに関する詳細は、第１の態様に係る方法について述べたことと同様である。

【0036】

本実施形態において、血液検体の凝固時間が延長しているか否かは、取得した凝固時間と、所定の凝固時間とを比較し、比較結果に基づいて決定することが好ましい。例えば、取得した凝固時間が所定の凝固時間よりも長いとき、血液検体は、凝固時間の延長が認められる検体であると決定できる。一方、取得した凝固時間が所定の凝固時間以下のとき、血液検体は、凝固時間の延長が認められない検体であると決定できる。

【0037】

所定の凝固時間は、正常検体の凝固時間が好ましい。正常検体としては、例えば、健常者に由来する血液又は血漿が挙げられる。また、市販の正常血漿などであってもよい。そのような正常検体の凝固時間は、血液検体と同様にして、正常検体について実際に測定した凝固時間であってもよいし、用いる凝固時間測定試薬の測定原理において正常値又は基準値として知られている凝固時間であってもよい。

【0038】

なお、本実施形態において、凝固時間の延長が認められなかった血液検体は、ＬＡ又は凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する疑いはないと考えられる。

【0039】

[２．血液検体分析装置、システム及びコンピュータプログラム]
以下に、本実施形態の血液検体分析装置の一例を、図面を参照して説明する。しかし、本実施形態はこの例のみに限定されない。図２に示されるように、血液検体分析装置１０は、測定試料からの光量に関する光学的情報を取得する測定部２０と、測定部２０の前方に配置された検体搬送部３０と、測定部２０により取得された測定データを分析すると共に測定部２０に指示を与える制御装置４０を備えている。なお、測定部２０と検体搬送部３０とは、光学的情報取得部５０を構成している。

【0040】

測定部２０には、蓋２ａ及び２ｂと、カバー２ｃと、電源ボタン２ｄが設けられている。ユーザは、蓋２ａを開けて、試薬テーブル１１及び１２(図３参照)に設置されている試薬容器１０３を新たな試薬容器１０３と交換したり、また、別の試薬容器１０３を新たに追加したりすることができる。試薬容器１０３には、収容する試薬の種類と、試薬に付与されたシリアルナンバーからなる試薬ＩＤとを含むバーコードが印刷されたバーコードラベル１０３ａが貼付されている。

【0041】

ユーザは、蓋２ｂを開けて、ランプユニット２７(図３参照)を交換できる。また、ユーザは、カバー２ｃを開けて、ピアサ１７ａ(図３参照)を交換できる。検体搬送部３０は、検体ラック１０２に支持された検体容器１０１を、ピアサ１７ａによる吸引位置まで搬送する。検体容器１０１は、ゴム製の蓋１０１ａにより密封されている。

【0042】

血液検体分析装置１０を使用する場合、ユーザは、まず、測定部２０の電源ボタン２ｄを押して測定部２０を起動させ、制御装置４０の電源ボタン４３９を押して制御装置４０を起動させる。制御装置４０が起動すると、表示部４１にログオン画面が表示される。ユーザは、ログオン画面にユーザ名及びパスワードを入力して制御装置４０にログオンし、血液検体分析装置１０の使用を開始する。

【0043】

図３に示されるように、測定部２０は、試薬テーブル１１及び１２と、キュベットテーブル１３と、バーコードリーダ１４と、キュベット供給部１５と、キャッチャ１６と、検体分注アーム１７と、試薬分注アーム１８と、緊急検体セット部１９と、光ファイバ２１と、検出部２２と、キュベット移送部２３と、加温部２４と、廃棄口２５と、流体部２６と、ランプユニット２７とを備えている。

【0044】

試薬テーブル１１及び１２とキュベットテーブル１３は、それぞれ、円環形状を有し、回転可能に構成されている。試薬テーブル１１及び１２には、試薬容器１０３が載せ置かれる。試薬テーブル１１及び１２に載せ置かれた試薬容器１０３のバーコードは、バーコードリーダ１４により読み取られる。バーコードから読み取られた情報(試薬の種類、試薬ＩＤ)は、制御装置４０に入力され、ハードディスク４３４(図６参照)に格納される。

【0045】

キュベットテーブル１３には、キュベット１０４を支持可能な複数の孔からなる支持部１３ａが形成されている。ユーザによってキュベット供給部１５に投入された新しいキュベット１０４は、キュベット供給部１５により順次移送され、キャッチャ１６によりキュベットテーブル１３の支持部１３ａに設置される。

【0046】

検体分注アーム１７と試薬分注アーム１８には、それぞれ、上下移動及び回転移動できるようステッピングモータが接続されている。検体分注アーム１７の先端には、検体容器１０１の蓋１０１ａを穿刺できるよう先端が鋭利に形成されたピアサ１７ａが設置されている。試薬分注アーム１８の先端にはピペット１８ａが設置されている。ピペット１８ａの先端は、ピアサ１７ａと異なり平坦に形成されている。また、ピペット１８ａには、静電容量式の液面検知センサ２１３(図４参照)が接続されている。

【0047】

ランプユニット２７は、検出部２２による光学的信号の検出に用いられる複数種類の波長の光を供給する。ランプユニット２７からの光は、光ファイバ２１を介して、検出部２２に供給される。検出部２２には、穴状の支持部２２ａが複数設けられており、各支持部２２ａには、キュベット１０４が挿入可能となっている。各支持部２２ａには、それぞれ、光ファイバ２１の端部が装着され、支持部２２ａに支持されたキュベット１０４に光ファイバ２１からの光が照射可能となっている。検出部２２は、光ファイバ２１を介して、ランプユニット２７から供給される光をキュベット１０４に照射し、キュベット１０４を透過する光(又はキュベット１０４からの散乱光)の光量を検出する。

【0048】

検体搬送部３０(図２参照)によって検体容器１０１が所定位置に搬送されると、ピアサ１７ａが、検体分注アーム１７の回転移動により検体容器１０１の真上に位置付けられる。そして、検体分注アーム１７が下方向に移動され、ピアサ１７ａが検体容器１０１の蓋１０１ａを貫通し、検体容器１０１に収容されている血液検体が、ピアサ１７ａにより吸引される。緊急を要する血液検体が緊急検体セット部１９にセットされている場合、ピアサ１７ａは、検体搬送部３０から供給される検体に割り込んで、緊急を要する血液検体を吸引する。ピアサ１７ａにより吸引された血液検体は、キュベットテーブル１３上の空のキュベット１０４に吐出される。

【0049】

血液検体が吐出されたキュベット１０４は、キュベット移送部２３のキャッチャ２３ａにより、キュベットテーブル１３の支持部１３ａから、加温部２４の支持部２４ａに移送される。加温部２４は、支持部２４ａに設置されたキュベット１０４に収容されている血液検体を、所定の温度(例えば37℃)に加温する。加温部２４による血液検体の加温が終了すると、このキュベット１０４は、キャッチャ２３ａによって再び把持される。そして、このキュベット１０４は、キャッチャ２３ａにより把持されたまま所定位置に位置付けられ、この状態で、ピペット１８ａにより吸引された試薬がキュベット１０４内に吐出される。

【0050】

ピペット１８ａによる試薬の分注では、まず、試薬テーブル１１及び１２が回転され、測定項目に対応する試薬を収容する試薬容器１０３が、ピペット１８ａによる吸引位置に搬送される。そして、原点位置を検知するためのセンサに基づいて、ピペット１８ａの上下方向の位置が原点位置に位置付けられた後、液面検知センサ２１３によりピペット１８ａの下端が試薬の液面に接触するまで、ピペット１８ａが下降される。ピペット１８ａの下端が試薬の液面に接触すると、必要な量の試薬を吸引できる程度に、さらにピペット１８ａが下降される。そして、ピペット１８ａの下降が停止され、ピペット１８ａにより試薬が吸引される。ピペット１８ａにより吸引された試薬は、キャッチャ２３ａによって把持されたキュベット１０４に吐出される。そして、キャッチャ２３ａの振動機能により、キュベット１０４内の血液検体と試薬が攪拌される。これにより、測定試料の調製が行われる。

【0051】

その後、測定試料を収容するキュベット１０４は、キャッチャ２３ａにより、検出部２２の支持部２２ａに移送される。上記のように、検出部２２は、ランプユニット２７から供給される光をキュベット１０４に照射し、測定試料からの光学的情報を取得する。取得された光学的情報は、制御装置４０に送信される。制御装置４０は、光学的情報に基づいて分析を行い、分析結果を表示部４１に表示する。

【0052】

測定終了後、不要となったキュベット１０４は、キュベットテーブル１３により搬送され、キャッチャ１６により廃棄口２５に廃棄される。なお、測定動作の際に、ピアサ１７ａとピペット１８ａは、流体部２６から供給される洗浄液などの液体により、適宜洗浄される。

【0053】

図５に示されるように、測定部２０は、制御部２００と、ステッピングモータ部２１１と、ロータリーエンコーダ部２１２と、液面検知センサ２１３と、センサ部２１４と、機構部２１５と、取得部２１６と、バーコードリーダ１４と、ランプユニット２７を含んでいる。また、制御部２００は、ＣＰＵ２０１と、メモリ２０２と、通信インターフェース２０３と、Ｉ／Ｏインターフェース２０４を含んでいる。

【0054】

ＣＰＵ２０１は、メモリ２０２に記憶されているコンピュータプログラムを実行する。メモリ２０２は、ＲＯＭ、ＲＡＭ、ハードディスクなどからなる。また、ＣＰＵ２０１は、通信インターフェース２０３を介して、検体搬送部３０を駆動させると共に、制御装置４０との間で指示信号及びデータの送受信を行う。また、ＣＰＵ２０１は、Ｉ／Ｏインターフェース２０４を介して、測定部２０内の各部を制御すると共に、各部から出力された信号を受信する。

【0055】

ステッピングモータ部２１１は、試薬テーブル１１及び１２と、キュベットテーブル１３と、キャッチャ１６と、検体分注アーム１７と、試薬分注アーム１８と、キュベット移送部２３を、それぞれ駆動するためのステッピングモータを含んでいる。ロータリーエンコーダ部２１２は、ステッピングモータ部２１１に含まれる各ステッピングモータの回転変位量に応じたパルス信号を出力するロータリーエンコーダを含んでいる。

【0056】

液面検知センサ２１３は、試薬分注アーム１８の先端に設置されたピペット１８ａに接続されており、ピペット１８ａの下端が試薬の液面に接触したことを検知する。センサ部２１４は、ピペット１８ａの上下方向の位置が原点位置に位置付けられたことを検知するセンサと、電源ボタン２ｄが押されたことを検知するセンサを含んでいる。機構部２１５は、キュベット供給部１５と、緊急検体セット部１９と、加温部２４と、流体部２６を駆動するための機構と、ピアサ１７ａとピペット１８ａによる分注動作が可能となるようピアサ１７ａとピペット１８ａに圧力を供給する空圧源を含んでいる。取得部２１６は、検出部２２を含んでいる。

【0057】

図２に示されるように、制御装置４０は、表示部４１と、入力部４２と、コンピュータ本体４３とから構成されている。制御装置４０は、測定部２０から光学的情報を受信する。そして、制御装置４０のプロセッサは、光学的情報に基づいて、血液検体の判定のためのコンピュータプログラムを実行する。

【0058】

図５は、制御装置４０の機能構成を示す図である。図５に示されるように、制御装置４０は、取得部４０１と、記憶部４０２と、算出部４０３と、判定部４０４と、出力部４０５とを備える。取得部４０１は、測定部２０と、ネットワークを介して通信可能に接続されている。

【0059】

取得部４０１は、測定部２０から送信された光学的情報を取得する。記憶部４０２は、判定に必要な所定の閾値及び凝固波形の微分に関する各種パラメータの値を算出するための式などを記憶する。また、記憶部４０２は、凝固時間を算出するための式も記憶していてもよい。算出部４０３は、取得部４０１で取得された情報を用い、記憶部４０２に記憶された式にしたがって、各種パラメータの値を算出する。判定部４０４は、算出部４０３によって算出されたパラメータの値が、記憶部４０２に記憶された所定の閾値よりも小さいか否かを判定する。出力部４０５は、判定部４０４による判定結果を、血液検体についての参考情報として出力する。

【0060】

図６に示されるように、制御装置４０のコンピュータ本体４３は、ＣＰＵ４３１と、ＲＯＭ４３２と、ＲＡＭ４３３と、ハードディスク４３４と、読出装置４３５と、入出力インターフェース４３６と、通信インターフェース４３７と、画像出力インターフェース４３８と、電源ボタン４３９とを備える。ＣＰＵ４３１、ＲＯＭ４３２、ＲＡＭ４３３、ハードディスク４３４、読出装置４３５、入出力インターフェース４３６、通信インターフェース４３７、画像出力インターフェース４３８及び電源ボタン４３９は、バス４４０によって通信可能に接続されている。

【0061】

ＣＰＵ４３１は、ＲＯＭ４３２に記憶されているコンピュータプログラム及びＲＡＭ４３３にロードされたコンピュータプログラムを実行する。ＣＰＵ４３１がアプリケーションプログラムを実行することにより、上述した各機能ブロックが実現される。これにより、コンピュータシステムが、血液検体を判定するための判定装置としての端末として機能する。

【0062】

ＲＯＭ４３２は、マスクＲＯＭ、ＰＲＯＭ、ＥＰＲＯＭ、ＥＥＰＲＯＭなどによって構成されている。ＲＯＭ４３２には、ＣＰＵ４３１によって実行されるコンピュータプログラム及びこれに用いるデータが記録されている。

【0063】

ＲＡＭ４３３は、ＳＲＡＭ、ＤＲＡＭなどによって構成されている。ＲＡＭ４３３は、ＲＯＭ４３２及びハードディスク４３４に記録されているコンピュータプログラムの読み出しに用いられる。また、ＲＡＭ４３３はこれらのコンピュータプログラムを実行するときに、ＣＰＵ４３１の作業領域としても利用される。

【0064】

ハードディスク４３４は、オペレーティングシステム、ＣＰＵ４３１に実行させるためのアプリケーションプログラム(血液検体の判定のためのコンピュータプログラム)などのコンピュータプログラム、当該コンピュータプログラムの実行に用いるデータ、及び制御装置４０の設定内容がインストールされている。

【0065】

読出装置４３５は、フレキシブルディスクドライブ、ＣＤ−ＲＯＭドライブ、ＤＶＤ−ＲＯＭドライブなどによって構成されている。読出装置４３５は、ＣＤ、ＤＶＤなどの可搬型記録媒体４４１に記録されたコンピュータプログラムまたはデータを読み出すことができる。

【0066】

入出力インターフェース４３６は、例えば、ＵＳＢ、ＩＥＥＥ１３９４、ＲＳ−２３２Ｃなどのシリアルインターフェイスと、ＳＣＳＩ、ＩＤＥ、ＩＥＥＥ１２８４などのパラレルインターフェイスと、Ｄ／Ａ変換器、Ａ／Ｄ変換器などからなるアナログインターフェイスとから構成されている。入出力インターフェース４３６には、キーボード、マウスなどの入力部４２が接続されている。ユーザは入力部４２を介して指示を入力し、入出力インターフェース４３６は、入力部４２を介して入力された信号を受け付ける。

【0067】

通信インターフェース４３７は、例えば、Ethernet(登録商標)インターフェースなどである。制御装置４０は、通信インターフェース４３７により、プリンタへの印刷データの送信が可能である。通信インターフェース４３７は測定部２０に接続されており、ＣＰＵ４４１は、通信インターフェース４３７を介して、測定部２０との間で指示信号及びデータの送受信を行う。

【0068】

画像出力インターフェース４３８は、ＬＣＤ、ＣＲＴなどで構成される表示部４１に接続されている。画像出力インターフェース４３８は、画像データに応じた映像信号を表示部４１に出力し、表示部４１は、画像出力インターフェース４３８から出力された映像信号に基づいて画像を表示する。

【0069】

図４を参照して、測定動作の際、測定部２０のＣＰＵ２０１は、検出部２２(図３参照)から出力された検出信号をデジタル化したデータ(光学的情報)を、メモリ２０２に一時格納する。メモリ２０２の記憶領域は、支持部２２ａ毎にエリア分割される。各エリアには、対応する支持部２２ａに支持されたキュベット１０４に対して所定波長の光を照射したときに取得されるデータ(光学的情報)が、順次格納される。こうして、所定の測定時間にわたって順次、データがメモリ２０２に格納される。測定時間が経過すると、ＣＰＵ２０１は、メモリ２０２に対するデータの格納を中止し、格納したデータを、通信インターフェース２０３を介して制御装置４０に送信する。制御装置４０は、受信したデータを処理して解析を行い、解析結果を表示部４１に表示する。

【0070】

測定部２０における処理は、主として測定部２０のＣＰＵ２０１の制御のもとで行われ、制御装置４０における処理は、主として制御装置４０のＣＰＵ４３１の制御のもとで行われる。図７を参照して、測定処理が開始されると、測定部２０は、上記のように、検体容器１０１から血液検体(血漿)を吸引し、吸引した血液検体を、キュベットテーブル１３上の空のキュベット１０４に分注する。次いで、測定部２０は、血液検体が分注されたキュベット１０４を加温部２４に移送して、キュベット１０４内の血液検体を所定温度(例えば37℃)に加温し、その後、キュベット１０４に試薬を添加して、測定試料を調製する(ステップＳ１１)。測定部２０は、キュベット１０４に試薬を添加した時点から時間の計測を開始する。

【0071】

その後、測定部２０は、試薬が添加されたキュベット１０４を検出部２２に移送し、キュベット１０４に光を照射して測定試料を測定する(ステップＳ１２)。この測定では、波長660 nmの光に基づくデータ(散乱光量又は透過光量)が、測定時間の間、順次、メモリ２０２に格納される。このとき、データは、試薬添加時点からの経過時間に対応付けられた状態でメモリ２０２に格納される。そして、測定時間が経過すると、測定部２０は、測定を中止し、メモリ２０２に格納された測定結果(データ)を制御装置４０に送信する(ステップＳ１３)。これにより、制御装置４０が測定部２０から測定結果(データ)を受信すると(ステップＳ２１：ＹＥＳ）、制御装置４０は、受信した測定結果に対して分析処理を実行する(ステップＳ２２)。すなわち、制御装置４０は、測定試料について、凝固波形の微分に関するパラメータ(|min 1|、|min 2|及びmax 2)の算出と、該パラメータに基づく判定とを行う。なお、制御装置４０は、測定試料について、凝固時間及び凝固波形も算出してもよい。また、制御装置４０は、凝固時間に基づいて、測定試料が、凝固時間の延長が認められるか否かの判定を行ってもよい。

【0072】

図８Ａを参照して、凝固波形の微分に関するパラメータを１つ用いる場合の処理のフローを説明する。ここでは、測定試料からの光量に関する光学的情報から、凝固波形の微分に関するパラメータの値として|min 1|の値取得し、取得した値と、対応する所定の閾値とを比較して血液検体の判定を行なう場合を例として説明する。しかし、本実施形態は、この例のみに限定されるものではない。この例においては、|min 1|に代えて、|min 2|又はmax 2の値を取得して判定を行ってもよい。

【0073】

まず、ステップＳ１−１において、制御装置４０の取得部４０１は、測定部２０から受信したデータ(散乱光量又は透過光量)に基づいて、光学的情報(散乱光強度、又は透過度もしくは吸光度)を取得する。次に、ステップＳ１−２において、算出部４０３は、取得部４０１が取得した光学的情報から、記憶部４０２に記憶された凝固波形の微分に関するパラメータを算出するための式にしたがって、|min 1|の値を算出する。なお、凝固時間及び凝固波形は後述の判定の処理には利用されないが、算出部４０３は、取得部４０１が取得した光学的情報から凝固時間及び凝固波形をさらに算出してもよい。

【0074】

ステップＳ１−３において、判定部４０４は、算出部４０３で算出された|min 1|の値と、記憶部４０２に記憶された所定の閾値とを用いて、血液検体が、凝固因子インヒビター及びＬＡのいずれを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるかを判定する。ここで、|min 1|の値が第１の閾値よりも小さいとき、処理はステップＳ１−４に進行する。ステップＳ１−４において、判定部４０４は、血液検体が凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるとの判定結果を出力部４０５に送信する。一方、|min 1|の値が第１の閾値よりも小さくないとき(すなわち、|min 1|の値が第１の閾値以上であるとき)、処理はステップＳ１−５に進行する。ステップＳ１−５において、判定部４０４は、血液検体がＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるとの判定結果を出力部４０５に送信する。なお、|min 2|の値を用いる場合は|min 2|の値と第２の閾値とを比較し、max 2の値を用いる場合はmax 2の値と第３の閾値とを比較する。

【0075】

ステップＳ１−６において、出力部４０５は、判定結果を出力し、表示部４１に表示させたり、プリンタに印刷させたりする。あるいは、音声で出力してもよい。これにより、判定結果を、血液検体についての参考情報としてユーザに提供できる。

【0076】

図８Ａに示される処理において、凝固時間と所定の時間とを比較するステップをさらに含む場合のフローを、図８Ｂを参照して説明する。ここでは、測定試料からの光量に関する光学的情報から凝固時間及び|min 1|の値を取得し、凝固時間が所定の時間より長い場合に、取得したパラメータの値と、対応する所定の閾値とを比較して血液検体の判定を行なう場合を例として説明する。しかし、本実施形態は、この例のみに限定されるものではない。この例においては、|min 1|に代えて、|min 2|又はmax 2の値を取得して判定を行ってもよい。

【0077】

まず、ステップＳ２−１において、制御装置４０の取得部４０１は、測定部２０から受信したデータに基づいて、光学的情報を取得する。次に、ステップＳ２−２において、算出部４０３は、取得部４０１が取得した光学的情報から、記憶部４０２に記憶された凝固時間を算出するための式及び凝固波形の微分に関するパラメータを算出するための式にしたがって、凝固時間(Clotting Time：以下、「ＣＴ」ともいう)及び|min 1|の値を算出する。算出部４０３は、取得部４０１が取得した光学的情報から凝固波形をさらに算出してもよい。

【0078】

ステップＳ２−３において、判定部４０４は、算出部４０３で算出されたＣＴと、所定の時間とを比較する。ここで、所定の時間は、記憶部４０２に予め記憶された正常検体の凝固時間であってもよいし、正常検体について血液検体と同様に測定して算出された凝固時間であってもよい。ステップＳ２−３において、ＣＴが所定の時間よりも長いとき、処理はステップＳ２−４に進行する。一方、ＣＴが所定の時間よりも長くないとき(すなわち、ＣＴが所定の時間以下であるとき)、処理はステップＳ２−５に進行する。ステップＳ２−５において、判定部４０４は、血液検体は凝固時間の延長が認められない検体であるとの判定結果を出力部４０５に送信する。

【0079】

ステップＳ２−４において、判定部４０４は、算出部４０３で算出された|min 1|の値と、記憶部４０２に記憶された第１の閾値と比較する。ここで、|min 1|の値が第１の閾値よりも小さいとき、処理はステップＳ２−６に進行する。ステップＳ２−６において、判定部４０４は、血液検体が凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるとの判定結果を出力部４０５に送信する。

【0080】

一方、ステップＳ２−４において、|min 1|の値が第１の閾値よりも小さくないとき(すなわち、|min 1|の値が第１の閾値以上であるとき)、処理はステップＳ２−７に進行する。ステップＳ２−７において、判定部４０４は、血液検体がＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるとの判定結果を出力部４０５に送信する。

【0081】

ステップＳ２−８において、出力部４０５は、判定結果を出力し、表示部４１に表示させたり、プリンタに印刷させたりする。あるいは、音声で出力してもよい。これにより、判定結果を、血液検体についての参考情報としてユーザに提供できる。

【0082】

図８Ｃを参照して、凝固波形の微分に関するパラメータを２つ用いる場合の処理のフローを説明する。ここでは、測定試料からの光量に関する光学的情報から、|min 1|及び|min 2|の値を取得し、取得した値と、対応する所定の閾値とを比較して血液検体の判定を行なう場合を例として説明する。しかし、本実施形態は、この例のみに限定されるものではない。この例においては、|min 1|及び|min 2|のいずれか一方に代えて、max 2の値を取得して判定を行ってもよい。また、この例においては、凝固時間と所定の時間とを比較する工程をさらに含み、凝固時間が所定の時間より長い場合に、取得したパラメータの値と、対応する所定の閾値とを比較して血液検体の判定を行ない、凝固時間が所定の時間以下である場合に、血液検体は凝固時間の延長が認められない検体であるとの判定結果を出力してもよい。

【0083】

まず、ステップＳ３−１において、制御装置４０の取得部４０１は、測定部２０から受信したデータに基づいて、光学的情報を取得する。次に、ステップＳ３−２において、算出部４０３は、取得部４０１が取得した光学的情報から、記憶部４０２に記憶された凝固波形の微分に関するパラメータを算出するための式にしたがって、|min 1|及び|min 2|の値を算出する。算出部４０３は、取得部４０１が取得した光学的情報から凝固時間及び凝固波形をさらに算出してもよい。

【0084】

ステップＳ３−３において、判定部４０４は、算出部４０３で算出された|min 1|の値と、記憶部４０２に記憶された第１の閾値とを比較する。ここで、|min 1|の値が第１の閾値よりも小さいとき、処理はステップＳ３−４に進行する。ステップＳ３−４において、判定部４０４は、算出部４０３で算出された|min 2|の値と、記憶部４０２に記憶された第２の閾値と比較する。ここで、|min 2|の値が第２の閾値よりも小さいとき、処理はステップＳ３−５に進行する。ステップＳ３−５において、判定部４０４は、血液検体が凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるとの判定結果を出力部４０５に送信する。

【0085】

一方、ステップＳ３−３において、|min 1|の値が第１の閾値よりも小さくないとき(すなわち、|min 1|の値が第１の閾値以上であるとき)、処理はステップＳ３−６に進行する。また、ステップＳ３−４において、|min 2|の値が第２の閾値よりも小さくないとき(すなわち、|min 2|の値が第２の閾値以上であるとき)、処理はステップＳ３−６に進行する。ステップＳ３−６において、判定部４０４は、血液検体がＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるとの判定結果を出力部４０５に送信する。なお、本実施形態においては、ステップＳ３−３とステップＳ３−４との処理は順番を任意に入れ替えることができる。

【0086】

ステップＳ３−７において、出力部４０５は、判定結果を出力し、表示部４１に表示させたり、プリンタに印刷させたりする。あるいは、音声で出力してもよい。これにより、判定結果を、血液検体についての参考情報としてユーザに提供できる。

【0087】

図８Ｄを参照して、凝固波形の微分に関するパラメータを３つ用いる場合の処理のフローを説明する。ここでは、測定試料からの光量に関する光学的情報から、|min 1|、|min 2|及びmax 2の値を取得し、取得した値と、対応する所定の閾値とを比較して血液検体の判定を行なう場合を例として説明する。しかし、本実施形態は、この例のみに限定されるものではない。また、この例においては、凝固時間と所定の時間とを比較する工程をさらに含み、凝固時間が所定の時間より長い場合に、取得したパラメータの値と、対応する所定の閾値とを比較して血液検体の判定を行ない、凝固時間が所定の時間以下である場合に、血液検体は凝固時間の延長が認められない検体であるとの判定結果を出力してもよい。

【0088】

まず、ステップＳ４−１において、制御装置４０の取得部４０１は、測定部２０から受信したデータに基づいて、光学的情報を取得する。次に、ステップＳ４−２において、算出部４０３は、取得部４０１が取得した光学的情報から、記憶部４０２に記憶された凝固波形の微分に関するパラメータを算出するための式にしたがって、|min 1|、|min 2|及びmax 2の値を算出する。算出部４０３は、取得部４０１が取得した光学的情報から凝固時間及び凝固波形をさらに算出してもよい。

【0089】

ステップＳ４−３において、判定部４０４は、算出部４０３で算出された|min 1|の値と、記憶部４０２に記憶された第１の閾値とを比較する。ここで、|min 1|の値が第１の閾値よりも小さいとき、処理はステップＳ４−４に進行する。ステップＳ４−４において、判定部４０４は、算出部４０３で算出された|min 2|の値と、記憶部４０２に記憶された第２の閾値と比較する。ここで、|min 2|の値が第２の閾値よりも小さいとき、処理はステップＳ４−５に進行する。ステップＳ４−５において、判定部４０４は、算出部４０３で算出されたmax 2の値と、記憶部４０２に記憶された第３の閾値と比較する。ここで、max 2の値が第３の閾値よりも小さいとき、処理はステップＳ４−６に進行する。ステップＳ４−６において、判定部４０４は、血液検体が凝固因子インヒビターを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるとの判定結果を出力部４０５に送信する。

【0090】

一方、ステップＳ４−３において、|min 1|の値が第１の閾値よりも小さくないとき(すなわち、|min 1|の値が第１の閾値以上であるとき)、処理はステップＳ４−７に進行する。また、ステップＳ４−４において、|min 2|の値が第２の閾値よりも小さくないとき(すなわち、|min 2|の値が第２の閾値以上であるとき)、処理はステップＳ４−７に進行する。また、ステップＳ４−５において、max 2の値が第３の閾値よりも小さくないとき(すなわち、max 2の値が第３の閾値以上であるとき)、処理はステップＳ４−７に進行する。ステップＳ４−７において、判定部４０４は、血液検体がＬＡを保有する被験者に由来する検体の疑いがあるとの判定結果を出力部４０５に送信する。なお、本実施形態においては、ステップＳ４−３と、ステップＳ４−４と、ステップＳ４−５との処理は順番を任意に入れ替えることができる。

【0091】

ステップＳ４−８において、出力部４０５は、判定結果を出力し、表示部４１に表示させたり、プリンタに印刷させたりする。あるいは、音声で出力してもよい。これにより、判定結果を、血液検体についての参考情報としてユーザに提供できる。

【0092】

分析結果を表示する画面の一例として、図９を参照して、プロトロンビン時間測定試薬を用いて血液検体の凝固過程を分析した結果を表示する画面について説明する。画面Ｄ１は、検体番号を表示する領域Ｄ１１と、測定項目名を表示する領域Ｄ１２と、詳細画面を表示させるためのボタンＤ１３と、測定日時を表示するための領域Ｄ１４と、測定結果を表示する領域Ｄ１５と、解析情報を表示する領域Ｄ１６と、凝固波形及びそれを微分したグラフを表示する領域Ｄ１７を含む。

【0093】

領域Ｄ１５には、測定項目と測定値が表示される。領域Ｄ１５において、「PT sec」は、プロトロンビン時間である。領域Ｄ１５には、プロトロンビン時間(PT sec)の他、プロトロンビン時間を所定のパラメータ値に変換した値(PT %、PT R、PT INR)が表示されてもよい。

【0094】

領域Ｄ１６には、解析項目と参考情報が表示される。領域Ｄ１６において、「Index」は、判定に用いた凝固波形の微分に関するパラメータの値である。「Cutoff(参考)」は、判定に用いたパラメータ値に対応する所定の閾値である。「判定(参考)」は、血液分析装置による判定結果であり、血液検体が、凝固因子インヒビター及びＬＡのいずれかを保有する被験者に由来する検体の疑いがあることを示す。なお、疾患の診断は、この判定結果だけでなく、他の検査結果などの情報も考慮して行われることが望ましい。よって、本実施形態に係る血液分析装置による判定結果及び所定の閾値が参考情報であることを示すために、「(参考)」と表示している。図９では、判定結果を「ＬＡ疑い」という文字で表示しているが、フラグなどの記号や図形標識で表示してもよい。あるいは、判定結果を音声で出力してもよい。

【0095】

以下に実施例を説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

【実施例】

【0096】

実施例１： 凝固波形解析による血液検体の判定
凝固波形の微分に関するパラメータに基づいて、ＬＡ陽性検体と凝固因子インヒビター陽性検体とを鑑別することが可能であるか否かを検討した。

【0097】

(１)試薬及び検体
凝固時間測定試薬として、APTT試薬のトロンボチェックAPTT-SLA(シスメックス株式会社)及びトロンボチェック20 mM塩化カルシウム液(シスメックス株式会社)を用いた。被検血漿として、ＬＡ陽性患者の血漿(８例)及び第VIII因子インヒビター陽性患者の血漿(５例)を用いた。また、正常血漿として、クロスミキシングテスト用正常血漿のCRYOcheck Pooled Normal Plasma(Precision BioLogic Inc社)を用い、精度管理用コントロール試料として、コアグトロールIX及びコアグトロールIIX(シスメックス株式会社)を用いた。

【0098】

(２)検体の測定
各検体(50μL)を反応キュベットに分注し、37℃で１分間加温した。ここに、予め37℃で加温した上記のAPTT試薬(50μL)を添加して、37℃で３分間反応させた。そして、20 mM塩化カルシウム液(50μL)を混合して、透過度を420秒間連続的に測定した。なお、測定には、全自動血液凝固測定装置CS-2400(シスメックス株式会社)を用いた。

【0099】

(３)解析結果
得られた透過度の経時的変化に基づいて、凝固波形の微分に関するパラメータとして|min 1|、|min 2|及びmax 2を算出した。正常血漿の|min 1|、|min 2|及びmax 2の値に対する各被検血漿の|min 1|、|min 2|及びmax 2の割合を算出し、グラフにプロットした。得られたグラフを図１０Ａ〜１０Ｃに示す。

【0100】

図１０Ａ〜１０Ｃに示されるように、|min 1|、|min 2|及びmax 2はいずれも、ＬＡ陽性検体群の方が凝固因子インヒビター陽性検体群よりも高いことがわかる。また、|min 1|、|min 2|及びmax 2のいずれにおいても、ＬＡ陽性検体群の最低値と、凝固因子インヒビター陽性検体群の最高値との間には隔たりが認められたことから、各パラメータについて、ＬＡ陽性検体と凝固因子インヒビター陽性検体とを切り分ける閾値の設定が可能であることが示唆される。これらのことから、凝固波形の微分に関するパラメータに基づいて、ＬＡ陽性検体と凝固因子インヒビター陽性検体とを明確に鑑別できることが示された。これらのパラメータは定量的指標であるので、熟練者でなくても検体の明確な判定が可能と考えられる。

【0101】

参考例１： クロスミキシングテストのグラフパターンによる検体の判定
クロスミキシングテストにおいて、即時型(正常血漿と被検血漿との混合直後に凝固時間を測定する方法)のグラフパターンと、遅延型(正常血漿と被検血漿とを混合して、２時間37℃で加温後に凝固時間を測定する方法)グラフパターンとのグラフ変化度合いを比較することにより、ＬＡ陽性検体と凝固因子インヒビター陽性検体とを鑑別し得るとの情報に基づき、実際に検討を行った。

【0102】

(１)試薬及び検体
この参考例で用いた試薬、被検血漿、正常血漿及び精度管理用コントロール試料は、実施例１と同じである。

【0103】

(２)検体の測定
正常血漿と被検血漿とを10：０、９：１、８：２、５：５、２：８、１：９、及び、０：10の各比率で混合し、得られた各検体の凝固時間を測定した。なお、即時型のグラフパターンを得る測定では、正常血漿と被検血漿との混合及び凝固時間の測定をCS-2400(シスメックス株式会社)により行った。遅延型のグラフパターンを得る測定では、正常血漿と被検血漿との混合を用手法で行い、得られた各検体を37℃で２時間加温した後、凝固時間の測定をCS-2400(シスメックス株式会社)により行った。各検体について得られた凝固時間を、検体中の被検血漿の割合をＸ軸とし、凝固時間をＹ軸とするグラフにプロットした。

【0104】

(３)解析結果
ＬＡ陽性検体群の一部について、即時型及び遅延型のグラフパターンを図１１Ａに示した。また、凝固因子インヒビター陽性検体群の一部について、即時型及び遅延型のグラフパターンを図１１Ｂに示した。これらの図に示されるように、ＬＡ陽性検体及び凝固因子インヒビター陽性検体のグラフパターンの変化は類似していた。よって、グラフパターンの変化による両者の鑑別は定性的評価にならざるを得ず、熟練者でない場合は判定が困難であることがわかる。

【0105】

参考例２： ＩＣＡによる検体の判定
近年、クロスミキシングテストの定量化指標としてＩＣＡが考案され、ＬＡの診断方法として推奨されている。ＩＣＡによりＬＡ陽性検体と凝固因子インヒビター陽性検体とを鑑別できるか否かを検討した。

【0106】

(１)試薬及び検体
この参考例で用いた試薬、被検血漿、正常血漿及び精度管理用コントロール試料は、実施例１と同じである。

【0107】

(２)検体の測定
正常血漿と被検血漿とを10：０、５：５、及び、０：10の各比率で混合し、得られた各検体の凝固時間を測定した。なお、即時型のグラフパターンを得る測定では、正常血漿と被検血漿との混合及び凝固時間の測定をCS-2400(シスメックス株式会社)により行った。遅延型のグラフパターンを得る測定では、正常血漿と被検血漿との混合を用手法で行い、得られた各検体を37℃で２時間加温した後、凝固時間の測定をCS-2400(シスメックス株式会社)により行った。各検体について得られた凝固時間を、下記の式に当てはめてＩＣＡを算出し、グラフにプロットした。得られたグラフを図１２に示す。

【0108】

ＩＣＡ ＝ (Ｂ−Ａ)／Ｃ×100
(式中、Ａは、正常血漿の凝固時間を表し、Ｂは、正常血漿と被検血漿とを混合して得た検体の凝固時間を表し、Ｃは、被検血漿の凝固時間を表す。)

【0109】

(３)解析結果
図１２に示されるように、ＩＣＡの値は、ＬＡ陽性検体群と凝固因子インヒビター陽性検体群との間に明確な差は認められなかった。よって、ＩＣＡによって、ＬＡ陽性検体と凝固因子インヒビター陽性検体とを鑑別することは困難である。

【符号の説明】

【0110】

１０ 血液検体分析装置
２０ 測定部
３０ 検体搬送部
４０ 制御装置(制御部)
４１ 表示部
４２ 入力部
４３ コンピュータ本体
５０ 光学的情報取得部

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11A】

【図11B】

【図12】