特許 6467059 新規ＦＹＮキナーゼ阻害剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6467059

(24)【登録日】2019年1月18日

(45)【発行日】2019年2月6日

(54)【発明の名称】新規ＦＹＮキナーゼ阻害剤

(51)【国際特許分類】

   C07D 401/14 20060101AFI20190128BHJP

   C07D 403/14 20060101ALI20190128BHJP

   C07D 413/14 20060101ALI20190128BHJP

   A61K 31/506 20060101ALI20190128BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20190128BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20190128BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20190128BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20190128BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20190128BHJP

【ＦＩ】

   C07D401/14CSP

   C07D403/14

   C07D413/14

   A61K31/506

   A61P43/00 111

   A61P29/00 101

   A61P19/02

   A61P17/06

   A61P29/00

   A61P35/00

【請求項の数】17

【全頁数】62

(21)【出願番号】特願2017-543827(P2017-543827)

(86)(22)【出願日】2015年12月23日

(65)【公表番号】特表2018-507857(P2018-507857A)

(43)【公表日】2018年3月22日

(86)【国際出願番号】EP2015081124

(87)【国際公開番号】WO2016146220

(87)【国際公開日】20160922

【審査請求日】2017年10月13日

(31)【優先権主張番号】15159604.6

(32)【優先日】2015年3月18日

(33)【優先権主張国】EP

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】508343722

【氏名又は名称】ロッタファーム・バイオテック・エッセ・エッレ・エッレ

(74)【代理人】

【識別番号】100166338

【弁理士】

【氏名又は名称】関口 正夫

(74)【代理人】

【識別番号】100152054

【弁理士】

【氏名又は名称】仲野 孝雅

(72)【発明者】

【氏名】アルトゥーシ ロベルト

(72)【発明者】

【氏名】カセッリ ジャンフランコ

(72)【発明者】

【氏名】ロヴァティ ルシオ

【審査官】 村守 宏文

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第０３／０７８４２６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２００４−５０９１１４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００４−５０９１１６（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）の化合物：

【化1】

（式中、
Ａは、置換されていてもよい、フェニル、Ｎ、ＳおよびＯから選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する５〜６員複素環、ならびに（Ｃ_５−Ｃ_７）シクロアルキルから選択され、
前記フェニルは、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルコキシ、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキルオキシ、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、シアノ、カルボキサミド、スルホンアミド、メタンスルホニルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
前記５〜６員複素環は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルコキシ、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキルオキシ、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、シアノ、カルボキサミド、スルホンアミド、メタンスルホニルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリール、または（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルで置換されていてもよい５員複素環であり、
前記（Ｃ_５−Ｃ_７）シクロアルキルは独立して１つまたは２つの（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキルで置換されていてもよく、
Ｂは、−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、−ＳＯ_２ＮＨ−、−ＮＨＣＯＮＨ−から独立して選択され、
Ｗは、フェニルまたはＮ、ＯおよびＳから選択される１つまたは２つのヘテロ原子を含むヘテロアリール基であり、前記フェニルまたは前記ヘテロアリールは独立して１つまたは２つの（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルコキシ、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキルオキシで置換されていてもよく、
ＲおよびＲ^１は独立してＨ、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルおよび（Ｃ_１−Ｃ_３）アルコキシからなる群から選択され、
ｍは２であり、
ｎは１であり、
ＸはＮであり、
ＹはＨ、ＣＨ_３、ＣＨ_２−ＯＨ、ＣＮから独立して選択され、
Ｇは、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を含み、ハロゲン、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよい、５〜６員ヘテロアリール基である）
またはその塩。

【請求項2】

前記塩が薬学的に許容可能な塩である、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

Ａが、置換されていてもよいフェニルである、請求項１又は２に記載の化合物。

【請求項4】

Ａが、ハロゲン、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルコキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、メタンスルホニルから選択される置換基で置換されているフェニルである、請求項３に記載の化合物。

【請求項5】

Ａが、トリフルオロメチルで置換されているフェニルである、請求項４に記載の化合物。

【請求項6】

Ａが、トリフルオロメチル、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル又はトリフルオロメトキシで置換されていてもよい、オキサゾール、ピリジル、イミダゾール、ピラゾールおよびピラジニルから選択される、請求項１又は２に記載の化合物。

【請求項7】

Ａが、メトキシで置換されていてもよいピロリジンである、請求項１又は２に記載の化合物。

【請求項8】

Ａが、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキルで置換されていてもよいシクロペンチルである、請求項１又は２に記載の化合物。

【請求項9】

Ｇが、１−Ｈ−ピラゾールである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項10】

Ｇが、シクロプロピル基で置換されている１−Ｈピラゾールである、請求項９に記載の化合物。

【請求項11】

Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−フルオロベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−メチルベンズアミド、
２−クロロ−Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−イソプロピルベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−メトキシベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−（トリフルオロメトキシ）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−４−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２，４−ジフルオロベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−メトキシ−４−メチルベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−３−（メチルスルホニル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）−２−メチルフェニル）−２−フルオロベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メチルピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−２−エチルフェニル）−２−フルオロベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メチルピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−３−エチルフェニル）−２−フルオロベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−メチルオキサゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−メチル−５−（トリフルオロメチル）オキサゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−（６−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）ピリジン−３−イル）−２−メチル−５−（トリフルオロメチル）オキサゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−３−メチルイソオキサゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）ピコリンアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−３−メチルピコリンアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ニコチンアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−メトキシニコチンアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−４−（トリフルオロメチル）ニコチンアミド、
（Ｒ）−Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）−２−メチル−ピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ニコチンアミド、
（Ｓ）−Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）−２−メチル−ピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ニコチンアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）イソニコチンアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−１−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボキサミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）ピラジン−２−カルボキサミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）ピラジン−２−カルボキサミド、
４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）ベンズアミド、
４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−Ｎ−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ベンズアミド、
４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−フルオロベンゼンスルホンアミド、
Ｎ−（５−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）ピラジン−２−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（６−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）ピリダジン−３−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（６−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）ピリジン−３−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（４−メトキシピリジン−２−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（３−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ）−６−メチルピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−メチルピロリジン−１−カルボキサミド、
１−シクロペンチル−３−（４−（（４−（４−（（３−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）尿素
からなる群から選択される請求項１又は２に記載の化合物。

【請求項12】

Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミドおよび
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド
からなる群から選択される、請求項１１に記載の化合物。

【請求項13】

請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその塩と、薬学的に許容可能な担体とを含む、医薬組成物。

【請求項14】

ＦＹＮキナーゼを阻害するための医薬を製造するための請求項１〜１２のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩の使用。

【請求項15】

ＦＹＮキナーゼ媒介性疾患または障害の治療における医薬を製造するための請求項１〜１２のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩の使用であって、前記ＦＹＮキナーゼ媒介性疾患または障害が関節炎又は急性及び慢性疼痛である、使用。

【請求項16】

前記関節炎が変形性関節症、関節リウマチ及び乾癬性関節炎を含む請求項１５に記載の使用。

【請求項17】

前記急性及び慢性疼痛が術後疼痛、内臓疼痛、がんに関連する疼痛、三叉神経痛、糖尿病性神経障害急性及び慢性疼痛、及び筋肉疼痛を含む、請求項１５に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、プロテインキナーゼを阻害する新規化合物およびそれを作製し、使用する方法に関する。具体的には、本発明は、ＦＹＮキナーゼ阻害剤としての新規化合物に関する。

【背景技術】

【0002】

変形性関節症（ＯＡ）は、異なる病因であるが、類似の生物学、形態学および臨床転帰を有し得る、重なり合っている異なる疾患の群である。疾患経過は、関節軟骨に影響を与えるだけでなく、軟骨下骨、靱帯、被膜、滑膜、および関節周囲筋を含む全体の関節にも関与する。最終的に、関節軟骨は、フィブリル化、亀裂、潰瘍、および関節面の全層損失と共に退化する。この状態は、滑膜関節内の関節軟骨の損失の焦点領域によって特徴付けられ、骨の肥大（骨棘および軟骨下骨硬化）および被膜肥厚と関連している。それは、損傷に対する滑膜関節の反応と解釈され得る。この現象はいずれかの関節で発生し得るが、手、脊椎、膝、足および臀部の選択された関節において最も一般的である。重度の場合、この病理変化は、異なる関節部位にてＯＡの罹患率を推定するための疫学調査に使用されている放射線変化（関節腔の損失および骨棘）を生じる。ＯＡの発病に基づく分子および細胞機構は現在のところ知られておらず、異常負荷および外傷がある役割を有し得ると仮定されているが、遺伝学および遺伝性要因もまた、関与していることは確かであるように見える。存在する場合、炎症は一次事象に対して二次的のみである。ＯＡは関節炎の最も一般的な形態である。世界保健機構（ＷＨＯ）は、世界中で６０歳以上の男性の９．６％および女性の１８％が、女性における身体障害の４番目の原因および男性における８番目の原因とＯＡを分類しているＯＡの症状を示していると推定している。身体障害の危険性は、心疾患に関するものと股関節ＯＡに関するものとは同じであるとみなされている。最終的に、軟骨基質合成および分解の不均衡からなる根本的プロセスに起因してＯＡは、関節軟骨の破壊を導き、制限された関節運動、関節不安定性、疼痛および慢性障害を生じる。

【0003】

症状、特に疼痛は、一連の鎮痛剤化合物（パラセタモールからＮＳＡＩＤＳまで、アヘン剤からＮＧＦアンタゴニストまで）によって制御され得るが、これらの薬物のどれも疾患進行を遅延させることはできないことが知られている。それどころか、強い鎮痛剤化合物は根本的な病理をさらに悪化させる可能性がある（Ｃａｓｏ ｄｉ ＮＧＦ）。当該分野において必要なことは、最後に外科的関節置換術をもたらす軟骨の進行性破壊を修正できる代替または補充療法である。

【0004】

ＦＹＮは、Ｂｌｋ、Ｂｒｋ、Ｆｇｒ、Ｆｒｋ、Ｈｃｋ、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｃ−Ｓｒｃ、Ｓｒｍおよびｃ−Ｙｅｓを含む、ヒトにおいて１１のメンバーからなるＳｒｃファミリーキナーゼに属する細胞質内チロシンキナーゼである（非特許文献１）。ＦＹＮは、正常および形質転換細胞の両方において１９８８年に同定され、特徴付けられている（非特許文献２）。それは主に細胞膜の細胞質側に局在し、そこでそれは異なるシグナル伝達経路に関与する酵素のチロシン残基をリン酸化し、下流のいくつかの細胞表面受容体を作用させる。

【0005】

ＦＹＮ活性が関与する多くの生物学的機能が報告されており、それらには、最近および完全な概説において広範囲に報告されているように、成長因子およびサイトカイン受容体シグナル伝達、イオンチャネル機能、血小板活性化、Ｔ細胞およびＢ細胞受容体シグナル伝達、軸策誘導、有糸分裂への侵入、ナチュラルキラー細胞の分化が含まれる（非特許文献３）。

【0006】

ＦＹＮは主に、中枢神経系（ＣＮＳ）および末梢免疫系におけるいくつかの変換経路に関与し、この末梢免疫系において、Ｔ細胞発生および活性化の調節および機能において重要な役割を果たす。

【0007】

ＦＹＮ過剰発現は、形態形成形質変換、細胞増殖シグナルの変化ならびに細胞成長および増殖の刺激を誘導する。ＦＹＮはまた、インテグリン接着および細胞間相互作用を媒介することが知られている。全てのこれらの理由のために、ＦＹＮはがんの発症に関与する（非特許文献４）。

【0008】

ＦＹＮ活性およびＦＹＮ特異的阻害剤の状況の概要について、非特許文献５による概説が公開されている。

【0009】

非特許文献６において、アミノピリミジンアミドの構造を有するＦｙｎキナーゼ阻害剤が記載されている。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0010】

【非特許文献1】Ｍａｎｎｉｎｇ，Ｇ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２００２、２９８、１９１２

【非特許文献2】Ｋｙｐｔａ，Ｒ．Ｍ．ら、ＥＭＢＯ Ｊ．、１９８８、７、３８３７−３８４４

【非特許文献3】Ｓａｉｔｏ，Ｙ．Ｅｔら、Ｃａｎｃｅｒ、２０１０、１１６、１６２９

【非特許文献4】Ｋａｗａｋａｍｉ Ｔ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、１９８８、８５、３８７０

【非特許文献5】Ｓｃｈｅｎｏｎｅ Ｓ． ｏｎ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１１、１８、２９２１

【非特許文献6】Ｅｒｉｎ Ｆ Ｄｉｍａｒｏら：「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｇｕｉｄｅｄ Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ａｍｉｎｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ Ａｍｉｄｅｓ ａｓ Ｐｏｔｅｎｔ，Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｋｉｎａｓｅ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｖｉｔｙ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ，ａｎｄ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎ Ｖｉｖｏ Ｔ Ｃｅｌｌ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ」 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ、ｖｏｌ５１、ｎｏ．６、２００８年３月１日、１６８１−１６９４頁

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0011】

したがって本発明の目的はＦＹＮキナーゼ阻害剤を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0012】

上記に示した目的は、式（Ｉ）の化合物：

【化1】

（式中、
Ａは、フェニル、Ｎ、ＳおよびＯから選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する５〜６員複素環、ならびに（Ｃ_５−Ｃ_７）シクロアルキルから選択され、
前記フェニルは、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルコキシ、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキルオキシ、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、シアノ、カルボキサミド、スルホンアミド、メタンスルホニルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
前記５〜６員複素環は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルコキシ、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキルオキシ、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、シアノ、カルボキサミド、スルホンアミド、メタンスルホニルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリール、または（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルで置換されていてもよい５員複素環であり、
前記（Ｃ_５−Ｃ_７）シクロアルキルは独立して１つまたは２つの（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキルで置換されていてもよく、
Ｂは独立して−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、−ＳＯ_２ＮＨ−、−ＮＨＣＯＮＨ−から選択され、
Ｗは、フェニルまたはＮ、ＯおよびＳから選択される１つまたは２つのヘテロ原子を含むヘテロアリール基であり、前記フェニルまたは前記ヘテロアリールは独立して１つまたは２つの（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルコキシ、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキルオキシで置換されていてもよく、
ＲおよびＲ^１は独立してＨ、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルおよび（Ｃ_１−Ｃ_３）アルコキシからなる群から選択され、
ｍは１または２であり、
ｎは１または２であり、
ＸはＮまたはＣであり、
Ｙは独立してＨ、ＣＨ_３、ＣＨ_２−ＯＨ、ＣＮから選択され、
Ｇは、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を含み、ハロゲン、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよい、５〜６員ヘテロアリール基である）
またはその塩、特に薬学的に許容可能な塩によって達成される。

【0013】

本発明はさらに、ＦＹＮキナーゼの阻害における化合物または塩、特にその薬学的に許容可能な塩、またはその使用に関する。本発明の化合物はＦＹＮキナーゼの阻害剤であり、ＦＹＮキナーゼ媒介性疾患および障害の治療に有用であり得る。したがって別の態様において、本発明は、ＦＹＮキナーゼ媒介性疾患および障害、特に、変形性関節症、関節リウマチおよび乾癬性関節炎を含む関節炎、変形性関節症疼痛および関節リウマチ疼痛などの急性および慢性疼痛、術後疼痛、内臓疼痛、がんに関連する疼痛、三叉神経痛、糖尿病性神経障害急性および慢性疼痛、術後疼痛、筋肉疼痛の治療における使用のための本発明の化合物に関する。

【0014】

したがって、本発明はさらに、治療有効量の式（Ｉ）による化合物またはその薬学的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、患者におけるＦＹＮキナーゼ媒介性疾患または状態を治療する方法に関する。

【0015】

「治療する」または「治療」とは、患者における疾患状態の少なくとも軽減を意味する。疾患状態の軽減のための治療方法は、例えば、媒介性疾患の阻止、遅延、予防、治療または治癒のための任意の慣例的に許容可能な手段での本発明における化合物の使用を含む。

【0016】

本発明はまた、本発明の化合物またはその塩と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物に関する。本明細書に使用される場合、「薬学的に許容可能な賦形剤」とは、組成物に形態または一貫性を与えることに関与する物質、組成物またはビヒクルを意味する。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】式（Ｉ）の化合物を調製する方法の第１および第２の実施形態を示す。

【図2】式（Ｉ）の化合物を調製する方法の第３および第４の実施形態を示す。

【図3】図２の式（ＸＩＩ）のいくつかの中間体の調製のスキームを示す。

【発明を実施するための形態】

【0018】

本発明は、式（Ｉ）の化合物：

【化2】

（式中、
Ａは、フェニル、Ｎ、ＳおよびＯから選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する５〜６員複素環、ならびに（Ｃ_５−Ｃ_７）シクロアルキルから選択され、
前記フェニルは、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルコキシ、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキルオキシ、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、シアノ、カルボキサミド、スルホンアミド、メタンスルホニルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく、
前記５〜６員複素環は、独立してハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルコキシ、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキルオキシ、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、シアノ、カルボキサミド、スルホンアミド、メタンスルホニルから選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリール、または（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルで置換されていてもよい５員複素環であり、
前記（Ｃ_５−Ｃ_７）シクロアルキルは独立して１つまたは２つの（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキルで置換されていてもよく、
Ｂは独立して−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、−ＳＯ_２ＮＨ−、−ＮＨＣＯＮＨ−から選択され、
Ｗは、フェニルまたはＮ、ＯおよびＳから選択される１つまたは２つのヘテロ原子を含むヘテロアリール基であり、前記フェニルまたは前記ヘテロアリールは独立して１つまたは２つの（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルコキシ、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキルオキシで置換されていてもよく、
ＲおよびＲ^１は独立してＨ、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルおよび（Ｃ_１−Ｃ_３）アルコキシからなる群から選択され、
ｍは１または２であり、
ｎは１または２であり、
ＸはＮまたはＣであり、
Ｙは独立してＨ、ＣＨ_３、ＣＨ_２−ＯＨ、ＣＮから選択され、
Ｇは、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を含み、ハロゲン、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよい、５〜６員ヘテロアリール基である）
またはその塩、特に薬学的に許容可能な塩に関する。

【0019】

本明細書全体を通して提供される式（Ｉ）の種々の基および置換基についての代替の定義は、特に本明細書に開示される各々の化合物種を個々に記載し、同様に１つ以上の化合物種の基を記載することを意図する。本発明の範囲はこれらの基および置換基の定義の任意の組み合わせを含む。

【0020】

式（Ｉ）による化合物は、１つ以上の不斉中心（キラル中心とも称される）を含有してもよく、したがって個々の鏡像異性体、ジアステレオマーもしくは他の立体異性体、またはそれらの混合物として存在してもよい。キラル炭素などのキラル中心もまた、本発明の化合物に存在してもよい。キラル中心の立体化学が本発明の化合物または構造を特定されていない本明細書に例示される任意の化学構造に存在する場合、全ての個々の立体異性体およびそれらの全ての混合物を包含することを意図する。したがって、１つ以上のキラル中心を含有する式（Ｉ）による化合物は、ラセミ体混合物、鏡像異性的に豊富な混合物として、または鏡像異性的に純粋な個々の立体異性体として使用されてもよい。

【0021】

本発明の化合物の固体形態は、結晶形態、非結晶形態またはそれらの混合物で存在してもよいことは理解される。このような結晶形態はまた、多形（すなわち異なる結晶形態で生じる能力）を示し得る。これらの異なる結晶形態は典型的に「多形体」として知られている。多形体は同じ化学組成を有するが、結晶固体状態の充填、幾何学的配置、および他の記述的特性が異なる。したがって、多形は、形状、密度、硬度、変形能、安定性および溶解特性などの異なる物理的特性を有し得る。多形は典型的に、識別のために使用され得る、異なる融点、ＩＲスペクトル、およびＸ線粉末回折パターンを示す。当業者は、異なる多形が、例えば、化合物を結晶化／再結晶化するのに使用される条件の変更または調整によって生成され得ることを理解するであろう。

【0022】

さらに、さらなる置換に依存して本発明の化合物は他の互変異性型で存在してもよい。本明細書に記載される化合物の全ての互変異性型は本発明の範囲内に包含されることを意図する。本発明の命名された化合物に対する任意の参照は、命名された化合物の全ての互変異性体および命名された化合物の互変異性体の任意の混合物を包含することを意図すると理解される。

【0023】

本明細書に使用される場合、「この発明の化合物」または「本発明の化合物」という用語は、任意の形態、すなわち任意の塩または非塩形態（例えば、遊離酸または塩基形態として、または塩、特にその薬学的に許容可能な塩として）およびその任意の物理的形態（例えば、非固体形態（例えば、液体または半固体形態）および固体形態（例えば、水和物形態（例えば、一水和物、二水和物および半水和物）を含む、例えば、非結晶質または結晶形態、特定の多形形態、溶媒和物形態）を含む）ならびに種々の形態の混合物における、上記に定義されている式（Ｉ）の化合物を意味する。

【0024】

本明細書に使用される場合、「置換されていてもよい」という用語は、非置換の基または環（例えば、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルおよびヘテロアリール環）および１つ以上の指定された置換基で置換された基または環を意味する。

【0025】

したがって、本発明の化合物は、式（Ｉ）の化合物またはその塩、特にその薬学的に許容可能な塩を含む。

【0026】

好ましくは、Ａはフェニルである。Ａがフェニルである場合、それは、好ましくは、ハロゲン、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルコキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、メタンスルホニルで置換されていてもよい。

【0027】

Ａが５〜６員ヘテロアリール基である場合、それは、好ましくは、オキサゾール、ピリジル、イミダゾール、ピラゾールであり、それは、好ましくは、トリフルオロメチル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキル、トリフルオロメトキシ、より好ましくは、トリフルオロメトキシで置換されていてもよい。

【0028】

Ａが５員複素環である場合、それは、好ましくはメトキシで置換されていてもよいピロリジンである。

【0029】

Ａが（Ｃ_５−Ｃ_７）シクロアルキルである場合、それは、好ましくは、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキルで置換されていてもよいシクロペンチルである。

【0030】

ＲおよびＲ^１は、好ましくはおよび独立してＨおよびＣＨ_３から選択されてもよい。

【0031】

ｍは、好ましくは２であり、ｎは、好ましくは１である。

【0032】

Ｘは、好ましくはＮである。

【0033】

本発明によれば、Ｇは、好ましくは１−Ｈ−ピラゾールであり、より好ましくはシクロプロピル基で置換されている１−Ｈ−ピラゾールである。

【0034】

より好ましくは、本発明の化合物は、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−フルオロベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−メチルベンズアミド、
２−クロロ−Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−イソプロピルベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−メトキシベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−（トリフルオロメトキシ）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−４−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２，４−ジフルオロベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−メトキシ−４−メチルベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−３−（メチルスルホニル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）−２−メチルフェニル）−２−フルオロベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メチルピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−２−エチルフェニル）−２−フルオロベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メチルピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−３−エチルフェニル）−２−フルオロベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−メチルオキサゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−メチル−５−（トリフルオロメチル）オキサゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−（６−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）ピリジン−３−イル）−２−メチル−５−（トリフルオロメチル）オキサゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−３−メチルイソオキサゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）ピコリンアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−３−メチルピコリンアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ニコチンアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−メトキシニコチンアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−４−（トリフルオロメチル）ニコチンアミド、
（Ｒ）−Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）−２−メチル−ピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ニコチンアミド、
（Ｓ）−Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）−２−メチル−ピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ニコチンアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）イソニコチンアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−１−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボキサミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）ピラジン−２−カルボキサミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）ピラジン−２−カルボキサミド、
４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）ベンズアミド、
４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−Ｎ−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ベンズアミド、
４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−フルオロベンゼンスルホンアミド、
Ｎ−（５−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）ピラジン−２−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（６−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）ピリダジン−３−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（６−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）ピリジン−３−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（４−メトキシピリジン−２−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（３−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ）−６−メチルピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−メチルピロリジン−１−カルボキサミド、
１−シクロペンチル−３−（４−（（４−（４−（（３−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）尿素
からなる群から選択される。

【0035】

さらにより好ましくは、本発明の化合物は、
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、および
Ｎ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−メチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド
から選択される。

【0036】

本発明の化合物は塩基性部分を含有するので、所望の塩形態は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などからなる群から選択される無機酸、またはマレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、サリチル酸、クエン酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸からなる群から選択される有機酸での遊離塩基の処理を含む、当該分野において公知の任意の適切な方法によって調製され得る。

【0037】

それらの医薬における可能な使用のために、式（Ｉ）の化合物の塩は、好ましくは、薬学的に許容可能な塩である。「薬学的に許容可能な塩」という用語に包含される塩は、本発明の化合物の非毒性塩を指す。

【0038】

本発明はまた、本発明の化合物またはその塩と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物に関する。

【0039】

本発明はまた、医薬として使用するための式（Ｉ）の薬学的化合物またはその塩に関する。

【0040】

本発明の化合物は、全身投与および局所投与の両方を含む、任意の適切な投与経路によって投与され得る。全身投与としては、経口投与、非経口投与、経皮投与、直腸投与および吸入による投与が挙げられる。本発明の化合物は、１回または投薬レジメンに従って投与されてもよく、用量の回数は、所与の時間の間、様々な時間間隔で決定される。例えば、用量は、１日に１回、２回、３回または４回投与されてもよい。所望の治療効果が達成されるまで、または所望の治療効果を無期限に維持するために用量は投与されてもよい。本発明の化合物についての適切な投薬レジメンは、吸収、分散、および半減期などの、その化合物の薬物速度論的特性に依存し、当業者によって決定され得る。さらに、本発明の化合物に関して、このようなレジメンが投与される期間を含む適切な投薬レジメンは、治療される状態、治療される状態の重症度、治療される患者の年齢および健康状態、治療される患者の病歴、併用療法の性質、所望の治療効果、ならびに当業者の知識および見解の範囲内の同様の要因に依存する。

【0041】

本発明の化合物は、通常、しかし必ずではないが、患者への投与の前に医薬組成物に製剤化される。本発明の医薬組成物は当業者に公知の技術および方法を使用して調製される。

【0042】

本発明の医薬組成物は、バルク形態で調製され、パッケージ化されてもよく、本発明の有効量の化合物は抽出され、次いで、粉末、シロップ、および注射用溶液などで患者に与えられてもよい。あるいは、本発明の医薬組成物は、単位剤形で調製され、パッケージ化されてもよい。１回用量の医薬組成物は、少なくとも治療有効量の本発明の化合物（すなわち、式（Ｉ）の化合物、またはその塩、特にその薬学的に許容可能な塩）を含有する。単位剤形で調製される場合、医薬組成物は１ｍｇ〜１０００ｍｇの本発明の化合物を含有してもよい。

【0043】

本発明の化合物および薬学的に許容可能な賦形剤（複数も含む）は、典型的に、所望の投与経路によって患者への投与に適した剤形に製剤化される。

【0044】

従来の剤形は、（１）錠剤、カプセル剤、カプレット、丸剤、トローチ、粉剤、シロップ、エリキシル剤、懸濁剤、液剤、エマルション、サシェ剤、およびカシェ剤などの経口投与；（２）再構成のための滅菌溶液、懸濁剤、および粉剤などの非経口投与；（３）経皮パッチなどの経皮投与；（４）座剤などの直腸投与；（５）エアロゾルおよび溶液などの吸入；ならびに（６）クリーム、軟膏、ローション、ペースト、スプレーおよびゲルなどの局所投与に適した剤形を含む。

【0045】

適切な薬学的に許容可能な賦形剤としては、以下の種類の賦形剤：希釈剤、充填剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、造粒剤、コーティング剤、湿潤剤、懸濁化剤、乳化剤、甘味剤、フレーバーマスキング剤、着色剤、凝固防止剤、保湿剤、可塑剤、増粘剤、酸化防止剤、防腐剤、安定剤、界面活性剤および緩衝剤が挙げられる。適切な希釈剤および充填剤としては、ラクトース、スクロース、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、デンプン、セルロース、硫酸カルシウム、およびリン酸水素カルシウムが挙げられる。経口固体剤形は結合剤を更に含んでもよい。適切な結合剤としては、デンプン、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、グアーガム、ポビドン、ならびにセルロースおよびその誘導体（例えば、微結晶性セルロース）が挙げられる。経口固体剤形は崩壊剤を更に含んでもよい。適切な崩壊剤としては、クロスポビドン、デンプングリコール酸ナトリウム、アルギン酸、およびカルボキシメチルセルロースナトリウムが挙げられる。経口固体剤形は滑沢剤を更に含んでもよい。適切な滑沢剤としては、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、およびタルクが挙げられる。経口剤形用の適切な担体としては、限定されないが、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどが挙げられる。経口製剤を調製するために使用される技術は、従来の混合、造粒、および圧縮またはカプセル充填である。

【0046】

本発明の組成物はまた、水性ビヒクル溶液（すなわち、生理食塩水、デキストロース）および／または油性エマルションを含む適切な担体と共に非経口投与のために製剤化されてもよい。

【0047】

なおさらなる態様において、本発明は、ＦＹＮキナーゼの阻害における使用のための化合物または塩、特に薬学的に許容可能な塩に関する。本発明の化合物はＦＹＮキナーゼの阻害剤であり、ＦＹＮキナーゼ媒介性疾患および障害の治療に有用であり得る。

【0048】

したがって、別の態様において、本発明は、ＦＹＮキナーゼ媒介性疾患および障害、特に変形性関節症、関節リウマチおよび乾癬性関節炎を含む関節炎、変形性関節症疼痛および関節リウマチ疼痛などの急性および慢性疼痛、術後疼痛、内臓痛、がんに関連する疼痛、三叉神経痛、糖尿病性神経障害急性および慢性疼痛、筋肉痛の治療における使用のための本発明の化合物に関する。

【0049】

したがって、本発明はさらに、治療有効量の式（Ｉ）による化合物またはその薬学的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、患者におけるＦＹＮキナーゼ媒介性疾患または状態を治療する方法に関する。

【0050】

治療「有効量」は、このような治療を必要とする患者に投与される場合、化合物の量が、本明細書に定義されている治療をもたらすのに十分であることを意味することを意図する。したがって、例えば、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の治療有効量は、それを必要とするヒトに投与される場合、その活性によって媒介される疾患状態が低減、軽減または予防されるようにＦＹＮキナーゼの活性を調節または阻害するのに十分である本発明の薬剤の量である。このような量に対応する所与の化合物の量は、特定の化合物（例えば、特定の化合物の効力（ＩＣ_５０）、有効性（ＥＣ_５０）、および生物学的半減期）、疾患状態およびその重症度、治療を必要とする患者の識別（例えば、年齢、大きさおよび体重）などの要因に応じて変化するが、それにも関わらず、当業者により慣例的に決定され得る。同様に、化合物の治療期間および投与時間（投薬の間の時間および投薬のタイミング、例えば、食事の前／中／後）は、治療を必要とするヒトの識別（例えば、体重）、特定の化合物およびその特性（例えば、薬剤特性）、疾患または状態およびその重症度ならびに使用される特定の組成物および方法に従って変化するが、それにも関わらず、当業者により決定され得る。

【0051】

上記のように、本発明の化合物は、薬学的に有効な量で、経口または非経口で投与され得る。式（Ｉ）の化合物について本明細書に説明されている治療方法の全てに関して、１日の経口投薬レジメンは、好ましくは、約０．０５〜約２０ｍｇ／Ｋｇ全体重である。また、式（Ｉ）の化合物の個々の投薬の最適量および間隔は、治療される状態の性質および程度によって決定されることは当業者により認識されるであろう。

【0052】

したがって、任意に薬学的に許容可能な担体と併せた、式（Ｉ）の化合物またはそれらの薬学的に許容可能な塩の適切な医薬組成物は、外傷性の関節損傷などの関節軟骨の破壊、変形性関節症、関節リウマチおよび乾癬性関節炎を含む関節炎を含む疾患の治療のために使用され得る。さらに、式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学的に許容可能な塩の適切な医薬組成物は、異なる形態のがん、特に結腸、前立腺および肺がんの治療のために使用され得る。

【0053】

さらに、式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学的に許容可能な塩の適切な医薬組成物は、限定されないが、炎症性疼痛ならびに関連する痛覚過敏および異痛、変形性関節症疼痛、術後疼痛、内臓痛、がんに関連する疼痛、三叉神経痛、急性ヘルペスおよびヘルペス後神経痛、神経因性疼痛、糖尿病性神経障害を含む、急性および慢性疼痛の治療のために使用され得る。

【0054】

式（Ｉ）の化合物は合成法を使用することによって得られ得る。

【0055】

さらなる態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物を調製する方法に関する。

【0056】

式（Ｉ）の化合物を調製する方法は、以下の工程を含む：
ａ）塩基の存在下で化合物（ＳＴ）を式（ＩＩ）の化合物に加えて式（ＩＩＩ）の化合物を得る工程、

【化3】

（ここで、ＳはＮＯ_２またはＣＯＯＲ^２であり、前記Ｒ^２は（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルである）
ｂ）式（ＩＩＩ）の化合物から保護基を除去して式（ＩＶ）の化合物を得る工程、

【化4】

ｃ）塩基の存在下で式Ｇ−ＮＨ_２の化合物を式（Ｖ）の化合物に加えて式（ＶＩ）の化合物を得る工程、

【化5】

ｄ）塩基の存在下で化合物（ＩＶ）を式（ＶＩ）の化合物に加えて式（ＶＩＩ）の化合物を得る工程、

【化6】

ｅ）化合物（ＶＩＩ）を式（ＶＩＩＩ）の化合物に変換する工程、

【化7】

（ここで、ＺはＮＨ_２またはＣＯＯＨである）
ｇ）任意に縮合剤の存在下で式（ＶＩＩＩ）の化合物を
− ＺがＮＨ_２である場合、Ａ−ＣＯＣｌ、Ａ−ＣＯＯＨ、Ａ−ＳＯ_２Ｃｌ、Ａ−ＮＨＣＯＸから選択される化合物（ここで、Ｘは適切な脱離基であり）と、または
− ＳがＣＯＯＲ^２であり、ＺがＣＯＯＨである場合、Ａ−ＮＨ_２と
反応させて式（Ｉ）の化合物を得る工程、

【化8】

（ここで、Ｒ、Ｒ^１、Ｘ、Ｙ、Ｗ、ＧおよびＡは、式（Ｉ）におけるものと同じ意味を有し、Ｐｒは保護基である）。

【0057】

第１の実施形態において、式（ＶＩＩ）におけるＳがＮＯ_２である場合、工程ｅ）は、好ましくは鉄のような適切な試薬によるＮＨ_２基への還元であり、それによりＺがＮＨ_２である化合物（ＶＩＩＩ）を得る。

【0058】

この第１の実施形態において、工程ｇ）は、ＺがＮＨ_２である式（ＶＩＩＩ）の化合物を、
− 好ましくは縮合剤の存在下でＡ−ＣＯＣｌまたはＡ−ＣＯＯＨと反応させて式（Ｉａ）の化合物を得ること、

【化9】

− 好ましくは縮合剤の存在下でＡ−ＳＯ_２Ｃｌと反応させて式（Ｉｂ）の化合物を得ること、

【化10】

− 好ましくは縮合剤の存在下でＸが適切な脱離基であるＡ−ＮＨＣＯＸと反応させて式（Ｉｃ）の化合物を得ること

【化11】

を含む。

【0059】

第２の実施形態において、式（ＶＩＩ）におけるＳがＣＯＯＲ^２である場合、工程ｅ）は、式（ＶＩＩ）の化合物を加水分解して、ＺがＣＯＯＨである化合物（ＶＩＩＩ）を得ることである。この第２の実施形態において、工程ｇ）は、縮合剤の存在下で、ＺがＣＯＯＨである式（ＶＩＩＩ）の化合物をＡ−ＮＨ_２と反応させて式（Ｉｄ）の化合物を得ることを含む。

【化12】

【0060】

本発明の方法の第１の実施形態および第２の実施形態についての一般的な完全なスキームを図１に報告する。

【0061】

本発明のさらなる態様は、一般式の化合物を調製するさらなる方法であって、以下の工程：
ａ）塩基の存在下で化合物（ＳＴ）を式（ＩＩ）の化合物に加えて式（ＩＩＩ）の化合物を得る工程、

【化13】

（ここで、ＳはＮＯ_２またはＣＯＯＲ^２であり、前記Ｒ^２は（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルである）
ｉ）式（ＩＩＩ）の化合物を式（Ｘ）の化合物に変換する工程、

【化14】

（ここで、ＺはＮＨ_２またはＣＯＯＨである）
ｍ）式（Ｘ）の化合物を、ＺがＮＨ_２である場合、Ａ−ＣＯＣｌ、Ａ−ＣＯＯＨ、Ａ−ＳＯ_２Ｃｌ、Ａ−ＮＨＣＯＸから選択される化合物（式中、Ｘは適切な脱離基である）と、またはＺがＣＯＯＨである場合、Ａ−ＮＨ_２と反応させて式（ＸＩＩ）の化合物を得る工程、

【化15】

ｎ）保護基を除去して式（ＸＩＩＩ）の化合物を得る工程、

【化16】

ｒ）塩基の存在下で式（ＸＩＩＩ）の化合物を式（ＶＩ）の化合物と反応させて式（Ｉ）の化合物を得る工程

【化17】

（ここで、Ｒ、Ｒ^１、Ｘ、Ｙ、Ｗ、ＧおよびＡは、式（Ｉ）におけるものと同じ意味を有し、Ｐｒは保護基である）
を含む、方法に関する。

【0062】

第３の実施形態において、式（ＩＩＩ）におけるＳがＮＯ_２である場合、工程Ｉ）は、好ましくは鉄のような適切な試薬によるＮＨ_２基への還元であり、それによりＺがＮＨ_２である化合物（Ｘ）を得る。

【0063】

この第３の実施形態において、工程ｍ）は、ＺがＮＨ_２である式（Ｘ）の化合物を、
− 好ましくは縮合剤の存在下でＡ−ＣＯＣｌまたはＡ−ＣＯＯＨと反応させて式（Ｉａ）の化合物を得ること、

【化18】

− 好ましくは縮合剤の存在下でＡ−ＳＯ_２Ｃｌと反応させて式（Ｉｂ）の化合物を得ること、

【化19】

− 好ましくは縮合剤の存在下でＡ−ＮＨＣＯＸ（式中、Ｘは適切な脱離基である）と反応させて式（Ｉｃ）の化合物を得ること

【化20】

を含む。

【0064】

第４の実施形態において、式（ＩＩＩ）におけるＳがＣＯＯＲ^２である場合、工程Ｉ）は、式（ＩＩＩ）の化合物を加水分解して、ＺがＣＯＯＨである化合物（Ｘ）を得ることである。この第４の実施形態において、工程ｍ）は、好ましくは縮合剤の存在下で、ＺがＣＯＯＨである式（Ｘ）の化合物をＡ−ＮＨ_２と反応させて式（Ｉｄ）の化合物を得ることを含む。

【化21】

【0065】

本発明の方法の第１および第２の実施形態は図１に報告され、第３および第４の実施形態は図２に報告されている。ここで本発明を本発明のポリマーの調製例および吸収例を参照して記載する。

【実施例】

【0066】

実験部
以下の実施例に使用される試薬は種々の供給源から市販されており、さらに精製せずに使用される。溶媒は乾燥形態で使用した。無水環境における反応は乾燥Ｎ_２の陽圧下で実施した。プロトン核磁気共鳴（^１Ｈ ＮＭＲ）スペクトルはＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ４００ＭＨｚ機器で記録した。化学シフトは、内部標準として残留溶媒ラインを使用してｐｐｍ（δ）で報告する。分裂パターンは、ｓ、一重項；ｄ、二重項；ｔ、三重項；ｑ、四重項；ｍ、多重項；ｂ、ブロードシグナルと指定する。

【0067】

質量スペクトル（ＭＳ）は、ポジティブＥＳ（＋）およびネガティブＥＳ（−）イオン化モードで作動するイオントラップＴｈｅｒｍｏ ＬＣＱ古典的分光計で実施した。

【0068】

ＵＰＬＣスペクトルは、Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ−ＢＥＨ Ｃ１８カラム（１．７μＭ、５０×２．１ｍｍ）を使用してＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ−ＳＱＤ機器で実施した。

【0069】

ＨＰＬＣスペクトルは、Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ２９６５装置およびＵＶ−Ｖｉｓ検出器Ｗａｔｅｒｓ ２９９６を使用して実施した。クロマトグラフ法（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８、１５０^＊４．６、５μを使用する）は以下のように行った：３０℃で３５分の溶出、異なるアセトニトリル／メタノール／ＫＨ_２ＰＯ_４（２０ｍＭ ｐＨ２．５）混合物から構成される移動相、０．６ｍｌ／分の流速。

【0070】

フラッシュシリカゲルクロマトグラフィーは、Ｂｉｏｔａｇｅ ＳＮＡＰ ＨＰシリカカートリッジまたはＢｉｏｔａｇｅ ＳＮＡＰ ＫＰ−ＮＨカートリッジを使用してＢｉｏｔａｇｅ自動フラッシュクロマトグラフィーシステム（Ｓｐ１およびＩｓｏｌｅｒａシステム）で実施した。

【0071】

逆相クロマトグラフィーは、ＲｅｄｉＳｅｐ Ｇｏｌｄ Ｃ−１８Ａｑカートリッジを使用してＢｉｏｔａｇｅ自動フラッシュクロマトグラフィーシステム（Ｉｓｏｌｅｒａシステム）で実施した。いくつかの基礎化合物の精製は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｔｒａｔａ ＳＣＸカートリッジ（５５μｍ、７０Ａ）を使用して実施した。

【0072】

薄層クロマトグラフィーは、ＵＶ光で可視化したＭｅｒｃｋ ＴＬＣプレートＫｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０Ｆ−２５４、過マンガン酸塩水溶液、ヨウ素蒸気を使用して実施した。

【0073】

以下の略語を本明細書において使用する：ＤＥＡＤ：ジエチルアゾジカルボキシレート；Ｂｏｃ：ｔｅｒブチルオキシカルボニル；ＤＣＭ：ジクロロメタン；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド；ＴＨＦ：テトラヒドロフラン；ＲＴ：室温；ＤＭＡＰ：ジメチルアミノピリジン；ＡｃＯＥｔ：酢酸エチル；ＮａＯＨ：水酸化ナトリウム；ＫＯＨ：水酸化カリウム；ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン；ＴＥＡ：トリエチルアミン；ＮａＨＣＯ_３：炭酸水素ナトリウム；Ｎａ_２ＳＯ_４：硫酸ナトリウム；Ｂｏｃ：ｔｅｒブチルオキシカルボニル；Ｅｔ_２Ｏ：ジエチルエーテル；ＣＣｌ_４：四塩化炭素；ＤＣＥ：ジクロロエタン；ＭｅＯＨ：メタノール；ＥＤＣ ＨＣｌ：Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ−エチルカルボジイミド塩酸塩；ＣＤＩ：ジ−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メタノン；ＨＯＢｔ：１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−オール；Ｐｄ２（ｄｂａ）３：９，９−ジメチル−４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）キサンテン；キサントホス（Ｘａｎｔｐｈｏｓ）：トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）；ＡＩＢＮ：アゾビスイソブチロニトリル；１−プロパンホスホン酸環状無水物（Ｔ３Ｐ）。

【0074】

一般手順１
実施例１〜３
図１の手順による式（ＩＩＩ）の中間体の調製
１−（ブロモメチル）−４−ニトロベンゼン（１ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ中のｔｅｒ−ブチルピペラジン−１−カルボキシレート誘導体（１．２ｍｍｏｌ）（適切な置換を有する化合物（ＳＴ））およびトリエチルアミン（２ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応物はわずかに発熱した。得られた混合物を室温にて３時間撹拌させて置いておいた。反応物をＤＣＭで希釈し、水および希釈クエン酸で洗浄し、乾燥させ、蒸発させて、実施例１、２、３の化合物を得た。

【0075】

【表1】

【0076】

一般手順２
実施例４〜６
図２の手順による式（Ｘ）の中間体の調製
酢酸エチル（０．１２Ｍ ｍｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（４−ニトロベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート誘導体（１ｍｍｏｌ）（適切な置換を有する化合物（ＳＴ））の溶液に塩化スズ（ｉｉ）二水和物（５ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温にて一晩撹拌して置いておいた。次いで、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）を加え、激しく１時間撹拌した。固体をセライトパッドによる濾過によって除去し、濾液の有機層を分離し、水（２０ｍＬ）で洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮して以下の式（Ｘ）の化合物を得た。

【0077】

【表2】

【0078】

一般手順３
実施例７〜１４
図２の手順による式（ＸＩＩ）の中間体の調製
３ａ：窒素雰囲気下で丸底フラスコ中で、市販の安息香酸（１．１ｍｍｏｌ）またはスルホニルクロリドを７５ｍｌの無水ＤＣＭ中に懸濁した。次いでＨＯＢｔ（１．４ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ ＨＣｌ（１．１ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温にて２時間撹拌した。次いで７５ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の中間体（Ｘ）（表２の実施例４〜６の化合物）（１．１ｍｍｏｌ）の溶液を加え、完了時に混合物を４０℃にて撹拌した。反応混合物を室温まで冷却しておき、飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液、次いでＨＣｌ水溶液０．５Ｍ、ＮａＯＨ水溶液１Ｍおよび最終的に飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させた。得られた粗生成物を、シクロヘキサン／ＡｃＯＥｔ１／１から１００％ＡｃＯＥｔまでの勾配で溶出するシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。回収した画分を蒸発させて実施例７〜１０、１４の化合物を得た。

【0079】

３ｂ：市販の安息香酸（１．３ｍｍｏｌ）をトルエン（０．０１Ｍ）中で懸濁し、塩化チオニル（１２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１１０℃にて１時間加熱した。揮発性物質を蒸発させ、残渣をピリジン（４０ｍｍｏｌ）中の式（Ｘ）の中間体（表２の実施例４〜６の化合物）（１ｍｍｏｌ）の溶液に加え、得られた混合物を室温にて１時間撹拌した。ピリジンを蒸発させ、次いでＮａＯＭｅ（２ｍｍｏｌ）およびＭｅＯＨを加えた。３０分後、溶媒を蒸発させ、ＤＣＭおよび水を加えた。分離した有機相を濃縮し、残渣をＤＣＭ／ＭｅＯＨで溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、実施例１１、１２、１３の化合物を得た。

【0080】

３ｃ：式（Ｘ）の中間体（表２の実施例４〜６の化合物）（１ｍｍｏｌ）およびＣＤＩ（１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（割合：１．０００、０．０４Ｍ）およびＤＣＭ（割合：０．５、０．０４Ｍ）中に溶解した。室温にて２時間後、溶媒を蒸発させ、残渣をＤＭＦ（割合：０．５、０．０４Ｍ）中に溶解し、対応するアミン（１ｍｍｏｌ）を加え、完了時に混合物を６０℃で置いておいた。次いで反応物を水に注ぎ、ＡｃＯＥｔ（３×）で抽出し、有機相を回収し、水で洗浄し、乾燥させ、蒸発させて標題の尿素（実施例１５の化合物）を得た。

【0081】

【表3】

【0082】

一般手順４
図２の式（ＸＩＩ）の中間体のいくつかを図３に報告されている手順によって調製した。

【0083】

実施例１６〜２２
図３の手順による式（１）の中間体の調製
４ａ：ＴＥＡ（１．２ｍｍｏｌ）および市販の塩化ベンゾイル（１．１ｍｍｏｌ）を０℃にてＤＣＭ（０．１６Ｍ）中の対応するアニリン（１ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合物を室温にて２時間撹拌して置いておいた。飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（５００ｍｌ）を加えた。相を分離し、水層をＤＣＭ（３回）で抽出した。合わせた有機層を蒸発させ、ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃで溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、表４に報告されている実施例１６〜１８、２０、２１の化合物を得た。

【0084】

４ｂ：対応するアニリン（１ｍｍｏｌ）、市販のカルボン酸（１ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１．２ｍｍｏｌ）中の（Ｔ_３Ｐ）およびＤＭＦ（０．５Ｍ）中のＤＩＰＥＡ（２ｍｍｏｌ）の混合物を完了時に４５℃にて撹拌した。その後、混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、水で２回洗浄した。有機層を乾燥させ、蒸発させ、残渣をジエチルエーテル中で粉砕して、表４に報告されている実施例１９、２２の化合物を得た。

【0085】

【表4】

【0086】

一般手順５
実施例２３〜２８
図３の手順による式（２）の中間体の調製
ＴＨＦ（体積：０．５Ｍ）中の表４に示されるエステル（１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ（２．５ｍｍｏｌ）中の水素化ホウ素リチウム４Ｍを滴下して加えた。完了時に反応混合物を５０℃にて撹拌させて置いておいた。その後、ＨＣｌ２Ｎを加え、混合物をさらに１時間、８０℃にて撹拌させて置いておいた。反応物を室温に冷却し、ｐＨが８の値に到達するまで飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を加えた。有機相を分離し、水相をＡｃＯＥｔ（３回）で抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、蒸発させて粗製物を得、それをＤＣＭ／ＭｅＯＨで溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、これにより実施例２３〜２８の化合物を得た。

【0087】

【表5】

【0088】

一般手順６
実施例２９〜３５
図２の手順による式（ＸＩＩ）の中間体の調製
６ａ：表５に表されているアルコール（１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（０．１Ｍ）中に溶解し、トリ−ブロモ−ホスフィン（１．１ｍｍｏｌ）を添加する前に溶液を冷却した。完了時に得られた混合物を０℃にて撹拌した。その後、溶媒を蒸発させ、残渣を少量のＤＭＦ中に溶解し、撹拌し、冷却したＤＭＦ（０．１Ｍ）中の市販のｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシレート（１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。次いでこの混合物を０℃にて２時間撹拌し、次いで完了時に室温にて撹拌した。反応物を水とＥｔＯＡＣとの間に分配し、有機相を分離し、水（３回）で洗浄し、乾燥させ、粗製物に濃縮し、それをフラッシュクロマトグラフィー（溶出液：シクロヘキサン／ＡｃＯＥｔ）によって精製した。

【0089】

６ｂ：ＡＩＢＮ（０．３ｍｍｏｌ）をＣＣｌ_４（０．７Ｍ）中の実施例２０（１ｍｍｏｌ）およびＮ−ブロモスクシンイミド（１．１ｍｍｏｌ）の懸濁液に加えた。完了時に反応混合物を８０℃にて撹拌させて置いておいた。反応混合物をＤＣＭ／水の混合物中に取った。相を分離し、水層をＤＣＭ（２回）で抽出した。合わせた有機層を蒸発させて油を得、それを少量のＤＭＦ中に溶解し、撹拌し、冷却したＤＭＦ（０．１Ｍ）中の市販のｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシレート（１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。次いでこの混合物を０℃にて２時間撹拌し、次いで完了時に室温にて撹拌した。反応物を水とＥｔＯＡＣとの間に分配し、有機相を分離し、水（３回）で洗浄し、乾燥させ、濃縮して粗製物を得、それをフラッシュクロマトグラフィー（溶出液：シクロヘキサン／ＡｃＯＥｔ）によって精製した。

【0090】

上記の手順６ａおよび６ｂに従って、表６に報告されている化合物を得た。

【0091】

【表6】

【0092】

一般手順７
実施例３６〜５２
図１の手順による式（ＩＶ）の中間体の調製および図２の手順による式（ＸＩＩＩ）の中間体の調製
ＤＣＭ（２Ｍ）中の中間体（ＸＩＩ）（図２）および中間体（ＩＩＩ）（図１）（１ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（１０ｍｍｏｌ）を加え、完了時に得られた混合物を室温にて撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をＳＰＥ−ＳＣＸによって精製して表７に報告されている化合物を得た。

【0093】

【表7-1】

【0094】

【表7-2】

【0095】

実施例５３〜５７
図１および２の式（ＶＩ）の中間体の調製
一般手順８
ＧＮＨ２誘導体（図１）（１ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１ｍｌ／ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２ｍｍｏｌ）中に溶解し、反応物を０℃に冷却し、次いで２，４−ジクロロピリミジン誘導体（０．９８ｍｍｏｌ）を一部ずつ加えた。室温にて２時間後、反応物を冷水に注ぎ、固体を、
８ａ：濾過し、水（３×１００ｍｌ）で洗浄し、真空中で７０℃にて乾燥させて所望の化合物を得た。
８ｂ：ＥｔＯＡｃ中に溶解し、有機相を水で洗浄し、乾燥させ、蒸発させた。残渣を、ＤＣＭ／ＡｃＯＥｔで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。

【0096】

一般手順９
２，４−ジクロロピリミジン誘導体（１ｍｍｏｌ）、ＧＮＨ２（１ｍｍｏｌ）、Ｃｓ_２ＣＯ_３（４ｍｍｏｌ）および市販のＰｄ２（ｄｂａ）３（０．０２ｍｍｏｌ）を、マイクロ波管内で窒素下でＤＭＥ（０．４Ｍ）中に懸濁した。キサントホス（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、管に蓋をして、３サイクルの窒素による排出−埋め戻し（ｅｖａｃｕａｔｉｏｎ−ｂａｃｋｆｉｌｌｉｎｇ）に供した。反応物を１０５℃にて１時間加熱し、次いで室温に冷却し、濾過し、ＡｃＯＥｔおよびＤＣＭで洗浄した。溶媒を蒸発させ、残渣を、シクロヘキサン／ＡｃＯＥｔで溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。

【0097】

【表8】

【0098】

実施例５８
図１の式（ＩＩＩ）の中間体
ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（メトキシカルボニル）ベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレートの調製（Ｗ＝フェニル、Ｓ＝ＣＯＯＣＨ_３、ｍ＝２、ｎ＝１、Ｐｒ＝ｔｅｒｚ−ブチルカルボキシレート、Ｒ＝Ｈ、Ｒ^１＝Ｈである場合の中間体ＩＩＩ）
乾燥した２首丸底フラスコにおいて、ＤＣＭ（体積：２０ｍｌ）中のＮ−（ｔ−Ｂｏｃ）ピペラジン（１．５６１ｇ、８．３８ｍｍｏｌ）および市販のメチル４−（ブロモメチル）ベンゾエート（１．６ｇ、６．９８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジエチルエタンアミン（２．９２ｍｌ、２０．９５ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温にて２時間撹拌して置いておいた。この時間の後、混合物を水および飽和ＮａＣｌで洗浄し、その後、得られた水層をＤＣＭで一度抽出した。合わせた有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮して無色の油を得、それを、シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃの勾配で溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。関連画分を回収し、減圧下で濃縮して標題化合物（１．３ｇ；５５．７％収率）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ８．００（１Ｈ，ｓ），７．９６（１Ｈ，ｄ），７．５６（１Ｈ，ｄ），７．４２（１Ｈ，ｔ），３．９４（３Ｈ，ｓ），３．５７（２Ｈ，ｓ），３．４０−３．４９（４Ｈ，ｍ），２．４１（４Ｈ，ｔ），１．４８（９Ｈ，ｓ）；ＥＳＩ＋ｍ／ｚ ３３５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0099】

実施例５９
図１の式（ＩＶ）の中間体
メチル４−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンゾエートの調製（ＳがＣＯＯＣＨ_３、Ｒ＝Ｈ、Ｒ^１＝Ｈ、Ｗ＝フェニル、ｍ＝２、ｎ＝１である場合の中間体（ＩＶ））
１首丸底フラスコにおいて、−１５℃に冷却したＤＣＭ（体積：５ｍｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（メトキシカルボニル）ベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１．３ｇ、３．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、ペルフルオロ酢酸（ｐｅｒｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）（５ｍｌ、６５．３ｍｍｏｌ）を加え、１５分、−１５℃にて撹拌した後、混合物を室温にさせた。室温にて２時間撹拌した後、溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をＭｅＯＨ中に溶解し、ＳＰＥ−ＳＣＸ（１０ｇ）カラム上に充填した。ＭｅＯＨでカラム体積を２回洗浄した後、所望の化合物（８４７ｍｇ；９３％収率）をＭｅＯＨ中のＮＨ_３の２Ｍ溶液で溶出した。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ８．００（１Ｈ，ｓ），７．９５（１Ｈ，ｄ），７．５７（１Ｈ，ｄ），７．４１（１Ｈ，ｔ），３．９４（３Ｈ，ｓ），３．５５（２Ｈ，ｓ），２．９１（４Ｈ，ｔ），２．４３（４Ｈ，ｂｒ．ｓ．）；ＥＳＩ＋ｍ／ｚ ２３６［Ｍ＋Ｈ］＋。

【0100】

実施例６０
図１の式（ＶＩＩ）の中間体
メチル４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンゾエートの調製（ＳがＣＯＯＣＨ_３、Ｒ＝Ｈ、Ｒ^１＝Ｈ、Ｗ＝フェニル、ｍ＝２、ｎ＝１、ＸがＮであり、Ｇが５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾールであり、ＹがＨである場合の中間体（ＶＩＩ））
ＤＭＳＯ（１５ｍｌ）中の２−クロロ−Ｎ−（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−４−アミン（１．２６ｇ；５．３７ｍｍｏｌ）およびメチル４−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンゾエート（１．９ｇ；８．５９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（２．８１ｍｌ；１６．１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を８０℃にて１８時間加熱した。この時間の後、ＤＩＰＥＡを蒸発させ、得られた混合物をＡｃＯＨ（１ｍｌ）で酸性化し、水＋０．１％ＡｃＯＨのみからアセトニトリル＋０．１％ＡｃＯＨのみで溶出する逆相クロマトグラフィーによって精製した。関連画分を回収し、十分に蒸発させた。残渣を乾燥させ、順相カラム上に充填し、勾配シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶出して標題化合物（ＶＩＩ）（２．１ｇ；９３％収率）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１１．９１（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），９．３２（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），７．９５（１Ｈ，ｓ），７．８２−７．９１（２Ｈ，ｍ），７．６３（１Ｈ，ｄ），７．５１（１Ｈ，ｔ），６．３０（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），６．０３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），３．８７（３Ｈ，ｓ），３．６６−３．７３（４Ｈ，ｍ），３．５９（２Ｈ，ｓ），２．４３（３Ｈ，ｔ），１．８２−１．９１（１Ｈ，ｍ），０．８６−０．９３（２Ｈ，ｍ），０．６１−０．６７（２Ｈ，ｍ）；ＥＳＩ＋ｍ／ｚ ４３４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0101】

実施例６１
図１の式（ＶＩＩＩ）の中間体
４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）安息香酸の調製（ＺがＣＯＯＨであり、Ｒ＝Ｈ、Ｒ^１＝Ｈ、Ｗ＝フェニル、ｍ＝２、ｎ＝１、ＸがＮであり、Ｇが５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾールであり、ＹがＨである場合の中間体（ＶＩＩＩ））
１，４−ジオキサン（３ｍｌ）および水（１ｍｌ）中の実施例６０（３３１ｍｇ；０．７６１ｍｍｏｌ）の化合物の溶液に、リチウム水和物（８０ｍｇ；１．９ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温にて６時間撹拌した。次いで溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をＤＭＳＯ（２ｍｌ）中に溶解し、ＡｃＯＨ（１ｍｌ）で酸性化し、水／アセトニトリルで溶出する逆相クロマトグラフィーによって精製した。関連画分を回収し、蒸発させて標題化合物（４４ｍｇ；７６％収率）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δｐｐｍ１２．３４（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），９．３１（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），７．９２（２Ｈ，ｄ），７．８８（１Ｈ，ｄ），７．４８（２Ｈ，ｄ），６．３０（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），６．０３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），３．７０（４Ｈ，ｂｒ．ｓ．），３．５９（２Ｈ，ｓ），２．４３（４Ｈ，ｔ），１．８１−１．９０（１Ｈ，ｍ），０．８６−０．９３（２Ｈ，ｍ），０．６１−０．６７（２Ｈ，ｍ）；ＥＳＩ＋ｍ／ｚ ４２０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0102】

実施例６２
図１の式（ＶＩＩ）の中間体
Ｎ−（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−２−（４−（４−ニトロベンジル）ピペラジン−１−イル）ピリミジン−４−アミンの調製（ＳがＮＯ_２であり、Ｒ＝Ｈ、Ｒ^１＝Ｈ、Ｗ＝フェニル、ｍ＝２、ｎ＝１、ＸがＮであり、Ｇが５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾールであり、ＹがＨである場合の中間体（ＶＩＩ））
ＤＭＳＯ中の２−クロロ−Ｎ−（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−４−アミン（７．５ｇ、３１．８ｍｍｏｌ）、１−（４−ニトロベンジル）−ピペラジン（実施例３６）（１０．５６ｇ、４７．７ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１６．７ｍｌ、９５ｍｍｏｌ）の溶液を１００℃にて一晩加熱した。

【0103】

反応混合物を冷却し、水に注ぎ、濾過した。固体をＭｅＯＨ／水 １／１で２回洗浄し、真空下で６０℃にて乾燥させて１４ｇ（９１％純度、茶色の固体、収率９５％）の標題化合物を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１１．９０（１Ｈ，ｓ），８．２１（２Ｈ，ｓ），８．１０（１Ｈ，ｓ），７．６４（２Ｈ，ｄ），６．６９（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），５．８３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），３．６７（２Ｈ，ｓ），３．５１（４Ｈ，ｂｒ．ｓ．），２．４７（４Ｈ，ｂｒ．ｓ．），１．８５（１Ｈ，ｓ），０．９１（３Ｈ，ｂｒ．ｓ．），０．６７（２Ｈ，ｂｒ．ｓ．）；ＥＳＩ＋ｍ／ｚ ４２１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0104】

実施例６３
図１の式（ＶＩＩＩ）の中間体
２−（４−（４−アミノベンジル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−４−アミンの調製（ＺがＮＨ_２であり、Ｒ＝Ｈ、Ｒ^１＝Ｈ、Ｗ＝フェニル、ｍ＝２、ｎ＝１、ＸがＮであり、Ｇが５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾールであり、ＹがＨである場合の中間体（ＶＩＩＩ））
水およびメタノール中の塩化アンモニウム（１５．８ｇ、２９５ｍｍｏｌ）の溶液に、鉄（９．１６ｇ、１６４ｍｍｏｌ）、続いて実施例６２（１３．８ｇ、３２．８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を７０℃にて１時間加熱した。高温の懸濁液をセライトパッドで濾過し、濃縮した。水およびＥｔ_２Ｏを加え、分離した水相をＮａＯＨ３２％で塩基性化し、生成物をＤＣＭで２回抽出した。有機層を乾燥させ、濃縮して９．６４ｇ（９６％純度、茶色の固体、収率７５％）の標題化合物を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δｐｐｍ１１．９１（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），９．１１（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），８．１０（１Ｈ，ｓ），６．８６−７．００（２Ｈ，ｍ），６．５９−６．７７（１Ｈ，ｍ），６．５２（２Ｈ，ｄ），５．８３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），４．９４（２Ｈ，ｓ），３．４６（４Ｈ，ｂｒ．ｓ．），２．２５−２．４５（４Ｈ，ｍ），１．７８−１．９１（１Ｈ，ｍ），０．９０（２Ｈ，ｄ），０．６６（２Ｈ，ｑ）；ＥＳＩ＋ｍ／ｚ ３９１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0105】

実施例６４
表８の化合物２の調製
２−（トリフルオロメチル）安息香酸（０．９７４ｇ、５．１２ｍｍｏｌ）をトルエン（割合：１．０００、体積：２０ｍｌ）中に懸濁し、塩化チオニル（１．８６９ｍｌ、２５．６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を９０℃にて１時間加熱した。溶媒を蒸発させ、残渣をピリジン（１５ｍｌ、１８５ｍｍｏｌ）中の２−（４−（４−アミノベンジル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−４−アミン（１ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）の溶液に加え、得られた混合物を３時間撹拌した。ピリジンを蒸発させ、次いでナトリウムメトキシド（２ｇ、３７．０ｍｍｏｌ）およびメタノール（割合：１．５００、体積：３０ｍｌ）を加えた。２時間後、溶媒を蒸発させ、ＤＣＭおよび水を加えた。分離した有機相を濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭからＤＣＭ／ＭｅＯＨ９／１）によって精製して標題化合物（０．９ｇ；６２．５％収率）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１１．９１（１Ｈ，ｓ），１０．５３（１Ｈ，ｓ），９．３１（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），７．８７（２Ｈ，ｓ），７．８０（１Ｈ，ｓ），７．５４−７．７６（４Ｈ，ｍ），７．３２（２Ｈ，ｄ），６．３１（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），６．０４（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），３．６９（４Ｈ，ｂｒ．ｓ．），３．４８（２Ｈ，ｓ），２．４２（４Ｈ，ｂｒ．ｓ．），１．８７（１Ｈ，ｓ），０．９１（２Ｈ，ｄ），０．６５（２Ｈ，ｄ）；ＥＳＩ＋ｍ／ｚ ５６３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0106】

実施例６５
化合物２のＨＣｌ塩の調製
化合物２のＮ−（４−（（４−（４−（（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１０ｇ）をＭｅＯＨ（２００ｍｌ）中に懸濁し、ＨＣｌ／ＭｅＯＨ ３Ｎ（７０ｍｌ）を加えた。それを１５分間撹拌し（沈殿物は溶解した）、次いでそれを濃縮し、残渣（５０ｍｌ）をアセトン（５００ｍｌ）に滴下して加えた。沈殿物を濾過し、アセトン（２×１００ｍｌ）で洗浄し、最終的に６０℃にて２時間、高真空下で乾燥させた。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１１．５９（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），１１．１２（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），１０．７６（１Ｈ，ｓ），７．９３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），７．７７−７．９０（４Ｈ，ｍ），７．７２（２Ｈ，ｔ），７．６１（２Ｈ，ｄ），６．４７（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），６．２３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），４．６０（２Ｈ，ｄ），４．３３（２Ｈ，ｂｒ．ｓ．），３．５９−３．７６（２Ｈ，ｍ），３．５１（２Ｈ，ｄ），３．０８−３．２７（２Ｈ，ｍ），１．９５（１Ｈ，ｔ），０．９２−０．９９（２Ｈ，ｍ），０．６９−０．７６（２Ｈ，ｍ）；ＥＳＩ＋ｍ／ｚ ５６３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0107】

実施例６６
本発明の化合物（式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄ）を調製するために使用した一般手順：一般手順１０（図１）
１０ａ：市販の安息香酸（１．３ｍｍｏｌ）をトルエン（０．０１Ｍ）中に懸濁し、塩化チオニル（１０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１１０℃にて１時間加熱した。揮発性物質を蒸発させ、残渣をピリジン（４０ｍｍｏｌ）中の実施例６３（１ｍｍｏｌ）の中間体（ＶＩＩＩ）の溶液に加え、得られた混合物を室温にて１時間撹拌した。ピリジンを蒸発させ、次いでＮａＯＭｅ（２ｍｍｏｌ）およびＭｅＯＨを加えた。３０分後、溶媒を蒸発させ、ＤＣＭおよび水を加えた。分離した有機相を濃縮し、残渣を、勾配ＤＣＭ／ＭｅＯＨで溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、表８に報告されている式（Ｉａ）の化合物を得た。

【0108】

１０ｂ：実施例６３の中間体ＶＩＩＩ（１ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１．１ｍｍｏｌ）およびＥＤＣＩ（１．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．１Ｍ）中に溶解し、室温にて３０分間撹拌した。この時間の後、対応する安息香酸（市販）（１．１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温にて一晩撹拌して置いておいた。夜の後、混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで数回抽出した。合わせた有機相をＮａＨＣＯ_３飽和溶液で１回洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を、勾配ＤＣＭ：ＭｅＯＨで溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、表８に報告されている式（Ｉｂ）の化合物を得た。

【0109】

１０ｃ：実施例６３の中間体ＶＩＩＩ（１ｍｍｏｌ）およびＣＤＩ（１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（割合：１．０００、０．０４Ｍ）およびＤＣＭ（割合：０．５、０．０４Ｍ）中に溶解した。室温にて２時間後、溶媒を蒸発させ、残渣をＤＭＦ（割合：０．５、０．０４Ｍ）中に溶解し、対応するアミン（１ｍｍｏｌ）を加え、完了時に混合物を６０℃にて置いておいた。次いで反応物を水に注ぎ、ＡｃＯＥｔ（３×）で抽出し、有機相を回収し、水で洗浄し、乾燥させ、蒸発させて、表８に報告されている式（Ｉｃ）の尿素化合物を得た。

【0110】

１０ｄ：実施例６１の中間体（ＶＩＩＩ）（１ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（１．１ｍｍｏｌ）およびＮ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ−エチルカルボジイミド塩酸塩（１．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．１Ｍ）中に溶解し、完了時に室温にて撹拌した（約３０分）。この時間の後、対応するアニリン（１．１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温にて一晩撹拌させて置いておいた。夜の後、混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで数回抽出した。合わせた有機相をＮａＨＣＯ_３飽和溶液で１回洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をＤＣＭ中に溶解し、勾配ＤＣＭ：ＭｅＯＨで溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、表８に報告されている式（Ｉｄ）の化合物を得た。

【0111】

実施例６７
一般手順１１（図２）
ＤＭＳＯ（０．２Ｍ）中の中間体（ＶＩ）（１ｍｍｏｌ）、中間体（ＸＩＩＩ）（１．５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３ｍｍｏｌ）の溶液を１００℃にて６時間加熱した。ＤＩＰＥＡを蒸発させ、残渣を、水＋０．１％ＡｃＯＨのみからアセトニトリル＋０．１％ＡｃＯＨのみで溶出する逆相クロマトグラフィーによって精製した。関連画分を回収し、有機溶媒を十分に蒸発させ、ＮａＯＨ １Ｎを加え、生成物をＤＣＭで抽出し、水で洗浄し、乾燥させ、蒸発させて、表８に報告されている式の化合物を得た。

【0112】

したがって、表は全てＮＭＲデータと共に本発明の調製した化合物を報告した。

【0113】

【表9-1】

【0114】

【表9-2】

【0115】

【表9-3】

【0116】

【表9-4】

【0117】

【表9-5】

【0118】

【表9-6】

【0119】

【表9-7】

【0120】

【表9-8】

【0121】

【表9-9】

【0122】

【表9-10】

【0123】

【表9-11】

【0124】

【表9-12】

【0125】

【表9-13】

【0126】

本発明の化合物の薬理学的評価
本発明による式（Ｉ）の化合物を、キナーゼ阻害を試験するための細胞モデルにおけるそれらの潜在的なＦＹＮキナーゼ阻害活性およびそれらの有効性を立証するため、ならびにラットの変形性関節症のモデルにおける誘発性痛覚過敏および疼痛行動の実験においてインビトロでのスクリーニングから得られた最適な化合物の有効性を立証するためにインビトロで研究した。ＳＲＣ−ファミリーキナーゼのメンバーを選択的に阻害できる薬理学的手段である、ＰＰ２、４−アミノ−５−（４−クロロフェニル）−７−（ジメチルエチル）ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（Ｈａｎｋｅら、Ｊ．ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７１（２）：６９５−７０１）を比較薬物として使用した。

【0127】

得られた結果を以下の表９〜１２にまとめる。

【0128】

実施例６８
インビトロキナーゼアッセイ
化合物のキナーゼ阻害活性を決定するアッセイを、自動液体処理装置（Ｍｉｃｒｏｌａｂ ＳＴＡＲ Ｈａｍｉｌｔｏｎ）およびＺ’−ＬＹＴＥ（商標）キナーゼアッセイプラットフォーム、ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）用途に適合する蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）ベースのアッセイプラットフォームを使用して実施した。このアッセイは、蛍光ベースの共役酵素フォーマットを利用し、タンパク質分解的切断に対するリン酸化および非リン酸化ペプチドの異なる感度を利用する。試験化合物を活性ＦＹＮ（ヒト組換え、６２．７ｋＤａ）に対するスクリーニング試験において評価した。所望の酵素を、１０−１０Ｍから１０−５Ｍまでの最終濃度の範囲の合成ペプチド基質、ＡＴＰおよび異なる阻害剤濃度を有する３８４少量マイクロプレート中でインキュベートした。０％阻害（または全酵素活性）を表す試料は、反応緩衝液（５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ ＥＧＴＡ、０．０１％ Ｂｒｉｊ−３５、ｐＨ７．５）中の化合物希釈剤（最終１％のＤＭＳＯ）の存在下であった。

【0129】

キナーゼについてほぼＫｍのＡＴＰ濃度および１時間のインキュベーションで２０〜４０％のＺ’−ＬＹＴＥ（商標）Ｔｙｒ２ペプチドをリン酸化する最適酵素濃度を選択した。全ての試薬を反応緩衝液中で希釈し、キナーゼ反応を２５℃にて６０分間、全量１０μｌで実施した。各プレートに含まれる０％のリン酸化（すなわちＡＴＰなし）および１００％のリン酸化（すなわち供給された合成的にリン酸化したペプチド）アッセイ対照により、特定の反応ウェルにおいて達成したリン酸化パーセントを算出することができた。０％の阻害および０％のリン酸化（すなわち１００％の阻害）対照はスクリーニングにおけるダイナミックレンジを定義している。インキュベーションの終わりに、非リン酸化ペプチドを認識し、切断する部位特異的プロテアーゼを含有する５μｌの発生試薬の添加によって開始した二次反応（発生反応）を、５μｌ／試料の停止試薬を用いて６０分後に中断した。クマリン（Ｅｘ．４００ｎｍ、Ｅｍ．４６０ｎｍ）およびフルオレセイン（Ｅｘ．４００ｎｍ、Ｅｍ．５３５ｎｍ）エミッション信号の測定を、蛍光プレートリーダー（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって実施した。化合物を１０−６〜１０−９Ｍの濃度範囲で試験した。結果を阻害パーセントとして表し、ＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄＴＭ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して非線形曲線フィッティングによって算出した。

【0130】

式（Ｉ）の化合物の代表的な例のＦＹＮキナーゼ阻害活性を以下の表に報告する。

【0131】

【表10】

【0132】

表９に示すように、式（Ｉ）のより有効なＦｙｎキナーゼ阻害剤は、化合物２、１１、１４、２６、２９、３６および４１である結果となった。したがって有益な化合物は、Ａが、好ましくは、−ＣＦ_３置換基でアミド基Ｂにオルト置換されたフェニルまたはピリジルまたはピラジニル基である、化合物である。

【0133】

さらに、結果として得られた好ましい化合物は、上記に示した同じ化合物によって示されるように、Ｇが、より好ましくは５位においてシクロプロピル基で置換された１−Ｈ−ピラゾール−３−イルである。

【0134】

表９から証明されるように、ＰＰ２は効果が低かった。

【0135】

実施例６９
キナーゼ阻害を試験するための細胞モデル：遺伝子レポーター（ＧＲ）アッセイ
本発明の化合物が、細胞モデルにおいても活性であるか否かを決定するために、遺伝子レポーターアッセイを、炎症性刺激（ＴＮＦα）を介してＦｙｎキナーゼを活性化することが知られている細胞株（ＪＢ６ Ｃｌ ４１−５ａ（Ｐ＋））において立証した。ＧＲアッセイは、Ｆｙｎ活性化経路の下流にある核内転写因子ＮＦ−ｋＢの活性化を測定する。この分析における生成物の活動は細胞内に浸透し、ＮＦ−ｋＢの活性化経路を阻害しなければならない。

【0136】

遺伝子レポーターアッセイ
マウス上皮細胞株ＪＢ６ Ｃｌ ４１−５ａ（Ｐ＋）（ＡＴＣＣ（登録商標）カタログ番号ＣＲＬ−２０１０）を、ｐＧＬ４．３２［ｌｕｃ２Ｐ／ＮＦｋＢ−ＲＥ／Ｈｙｇｒｏ］ベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）で安定にトランスフェクトした。クローン選択を、ＭＥＭ（＋Ｅａｒｌｅ’ｓ ＢＳＳ＋１，５ｇ／ｌ炭酸水素ナトリウム＋０，１ｍＭ ＮＥＡＡ）＋ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）−Ｉ＋１ｍＭピルビン酸ナトリウム＋５％ＦＢＳ＋８０μｇ／ｍｌハイグロマイシンＢ中で限界希釈によって達成した。クローンをＴＮＦα刺激に対するそれらの反応について試験した。

【0137】

得られたトランスフェクト細胞（ＪＢ６（Ｐ＋）ＮＦｋＢ−ＲＥ−ｌｕｃ２Ｐ Ｔ３−Ｃ１０）は、複数の核因子−ｋＢ反応エレメント（ＮＦｋＢ−ＲＥ）を有する最小ＴＡＴＡプロモーターの制御下でホタルルシフェラーゼ遺伝子（ｌｕｃ２Ｐ）を含有した。これらのＮＦｋＢ−ＲＥはＮＦ−ｋＢ転写因子についてのＤＮＡ結合配列である。

【0138】

ＪＢ６（Ｐ＋）ＮＦｋＢ−ＲＥ−ｌｕｃ２Ｐ Ｔ３−Ｃ１０細胞を、ＴＮＦα刺激後、Ｆｙｎ阻害剤によるＮＦ−ｋＢ活性調節の分析のために使用した（Ｈｗａｎｇら、；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００９、７７（７）：１２１３−２２）。

【0139】

６０００細胞／ウェルを９６Ｘウェルプレートに播種した。２４時間後、抗生物質を有さない新たな培地を与えた。さらに２４時間後、細胞を異なる化合物で１時間前処理し、次いで２ｎｇ／ｍｌのＴＮＦαで４時間刺激した。各実験において、２つの陽性標準を常に使用し、各試験条件を４連で分析した。

【0140】

ルシフェラーゼ分析をＯＮＥ−Ｇｌｏ（商標）＋ＴｏｘＬｕｃｉｆｅｒａｓｅレポーターおよび細胞生存アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）で実施した。このアッセイは、細胞健康の文脈においてレポーター遺伝子発現をより良く理解するために細胞生存マーカーを用いたルシフェラーゼアッセイ化学を組み合わせた。アッセイは２工程プロセスを使用する。アッセイの第１の部分は、培養集団中で生細胞の相対数を測定した非溶解蛍光アッセイ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｆｌｕｏｒ（商標）細胞生存アッセイ）であった。なぜならそれは生細胞内の保存され、構成的なプロテアーゼ活性を測定するからである。生細胞プロテアーゼ活性はインタクトな生存細胞に制限され、蛍光細胞透過ペプチド基質（グリシル−フェニルアラニル−アミノフルオロクマリン；ＧＦ−ＡＦＣ）を使用して測定した。生細胞の数に比例する、生成した蛍光信号を、４００ｎｍの励起波長および５００ｎｍの発光波長を使用してＥｎＶｉｓｉｏｎマイクロプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で測定した。

【0141】

アッセイの第２の部分は、ホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子発現を定量するためにＯＮＥ−Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイシステムを使用する。ＯＮＥ−Ｇｌｏ（商標）アッセイは、標準的なルシフェラーゼアッセイ試薬より試料成分に対して耐性がある、フルオロ−ルシフェリン基質を含有した。発光をＥｎＶｉｓｉｏｎマイクロプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で測定した。

【0142】

式（Ｉ）の化合物を、細胞内に浸透し、ＮＦ−ｋＢの活性化経路を阻害するそれらの能力について試験した。

【0143】

得られた結果を以下の表１０にまとめる。

【0144】

【表11】

【0145】

表１０に示すように、本発明のいくつかの化合物、特に実施例２および２６の化合物は、細胞内に浸透でき、ＴＮＦ−α刺激を介して、μｍｏｌ以下の濃度にてＦＹＮキナーゼ活性化を阻害できることを実証した。また、標準的な比較物ＰＰ２は、細胞内に侵入でき、このモデルにおいて有効であることを実証した。

【0146】

実施例７０
ＪＢ６細胞における毒性
ＪＢ６ Ｃｌ ４１−５ａ（Ｐ＋）における細胞毒性分析は、ＧＲアッセイにおいて得られた結果が、生成物の薬理効果または毒性効果に起因するか否かを決定するために重要である。

【0147】

この研究は以下の方法により実施した：
マウス上皮細胞株ＪＢ６ Ｃｌ ４１−５ａ（Ｐ＋）（ＡＴＣＣ（登録商標）カタログ番号ＣＲＬ−２０１０）を使用して、ＭＴＴ法によって生成物の細胞毒性を分析した。１０^４細胞／ウェルを９６ＸウェルプレートＭＥＭ５％中に播種した。播種の４８時間後、細胞を異なる化合物および陽性標準物で１時間、前処理し、次いで（遺伝子レポーターアッセイにおいて使用した同じ実験条件を模倣するために）ＴＮＦαで４時間および２４時間刺激した。インキュベーション時間の終わりに、培地を除去し、細胞インキュベータ内で３７℃にて１時間、ＭＥＭ ５％ＭＴＴ（２ｍｇ／ｍｌ）の混合物１０：１と置き換えた。ＭＴＴは、特に生きている代謝的に活性な細胞の定量化をアッセイするのに有用なテトラゾリウム塩であり、それは、ホルマザン色素（塩）を形成するためにミトコンドリアデヒドロゲナーゼによって代謝されることによって作用する。このインキュベーション後、上清を除去し、沈殿した塩を１００μｌのＤＭＳＯで溶解した。次いでプレートを５４０ｎｍにて読み取った。１００μｌのＤＭＳＯ単独（細胞を有さない）をブランクとして使用し、それを各試料の測定から差し引いた。

【0148】

本発明の化合物は、インキュベーションの２４時間後、ＪＢ６細胞株において低い細胞毒性を実証した。本発明の式（Ｉ）の代表的な化合物として、化合物２、２１および２６は、３μｍｏｌにて５０％超の残留細胞生存率を示したのに対して、推定標準基準物ＰＰ２は、同じ濃度にて１８％のみの残留細胞生存率を示し、非常に高い毒性であった。

【0149】

実施例７１
キナーゼ選択性
本発明の代表的な化合物として、化合物２をキナーゼ選択性について試験した。

【0150】

その潜在的キナーゼ阻害活性を、Ｃｅｒｅｐによる約１００人のヒトキナーゼアッセイの標準的なパネルにおいて研究した。既に表２に示されるように、それは１０^−９ＭのＦＹＮキナーゼ阻害を示す。ＳＲＣファミリーの試験した他のキナーゼの中で、化合物２は、１０^−７Ｍ濃度より高いＩＣ_５０および約１００の平均効力比でそれらの全てを阻害した。化合物２は、試験した残りのキナーゼ、部分ＲＥＴ、ＣＤＫ２、ＦＬＴ−３およびＦＬＴ−４の７０％より多くについて実際には効果がなく、１０^−７Ｍ濃度にて５０％より多くを阻害した。反対に、ＰＰ２は、ＳＲＣファミリーのキナーゼに対して選択性は非常に低かった。実際に、それらのキナーゼについてのそれらのＩＣ_５０阻害（１０^−９Ｍ）は以下の通りであった：
ａ）化合物２：ＦＹＮ（９）、ＳＲＣ（７３０）、ＬＹＮ（１４００）、ＹＥＳ（２７０）、ＢＬＫ（４８０）、ＬＣＫ（４５０）およびＨＣＫ（３２００）；
ｂ）ＰＰ２：ＦＹＮ（４４）、ＳＲＣ（７０）、ＬＹＮ（６４）、ＹＥＳ（６１）、ＢＬＫ（１３２）、ＬＣＫ（６７）およびＨＣＫ（６１）。

【0151】

実施例７２
本発明の化合物のイン「ビボ」での薬理活性の詳細
式（Ｉ）の化合物は、炎症性、慢性および神経障害性疼痛のいくつかのモデルにおいて有効な鎮痛剤であることが証明されている。

【0152】

したがって、本発明の化合物は、限定されないが、術後疼痛、筋肉痛、外傷の種々の形態から生じる疼痛、および慢性疼痛、神経障害性疼痛、がん性疼痛、関節炎によって引き起こされる疼痛を含む、急性および慢性疼痛の両方の治療に有用である。

【0153】

炎症性および神経障害性の疼痛を治療するための式（Ｉ）の化合物の有効性は、以下のインビボ動物モデルを使用して実証されている。

【0154】

ラットにおけるＣＦＡ誘発炎症性疼痛
オスのＷｉｓｔａｒラットの右後足の足蹠に、１００μＬの流動パラフィン（完全フロイントアジュバント；ＣＦＡ）中の３００μｇの結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）を注射した。７２時間後、化合物２および２６を皮下投与し、投与の２４時間後、有害な機械的刺激に対する反応を、Ｒａｎｄａｌｌ−Ｓｅｌｉｔｔｏタイプの無痛覚計を用いて足引っ込め閾値（ｐａｗ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）（ＰＷＴ）を測定することによって評価した。動物を穏やかに押さえて動かないようにし、着実に増加させた圧力を、ドーム形のプラスチックチップを介して同側（ＣＦＡ処置した）および対側の両方の足の背面に与えた。

【0155】

１００％の保護は、化合物およびＣＦＡで処置した動物が、ＣＦＡ処置を受けていない対照動物と同じ刺激（重量）に耐性があり得ることを意味する。

【0156】

表１１は、ＰＰ２と比較して式（Ｉ）の２つの代表的な化合物について、ＣＦＡモデルにおいて得られた結果を示す。

【0157】

【表12】

【0158】

表１１に示された結果は、局所（ｉ．ｄ．）投与によって与えられた本発明の２つの代表的な化合物である化合物２および２６の両方がＣＦＡ誘発痛覚過敏の非常に有効な阻害剤であったことを実証したが、２つの比較物は、この実験実例において効果が低いことが実証された。

【0159】

実施例７３
薬物動態
１ｍｇ／ｋｇにてラットに経口で与えた化合物２は、５１％の経口バイオアベイラビリティおよび８７７ｎｇ^＊ｈ／ｍｌのＡＵＣ（０〜２４時間）を示した。

【0160】

比較として、同じ実験条件下では、ＰＰ２は、非常に低い経口バイオアベイラビリティ：ＡＵＣ１６０ｎｇ^＊ｈ／ｍｌを示した。

【0161】

したがって、実施例２の経口活性を、次の実験に記載したラットにおける誘発変形性関節症のモデルにおいて試験した。

【0162】

実施例７４
ラットにおける外科的に誘発した半月板断裂変形性関節症（ＭＭＴ）
約３５０ｇの体重のオスのＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）を使用した。１ｌ／分の流速で酸素中の２．５％のイソフルランを使用してラットを麻酔した。右後足を剃り、外科処置の準備をした。内側側副靱帯を露出し、切断した。半月板を止血鉗子で把持し、大腿骨に対して近くに表した。半月板を最も狭い点でその全層を通して切断した。結合組織層および皮膚のそれぞれを、被覆したＶｉｃｒｙｌ ８−０および４−０絹縫合糸で閉じた。偽手術した動物は、内側側副靱帯を露出したが、切断していないことを除いて同一の処置を受けた。２週間回復させた後、機械的痛覚過敏を次の４週間にわたって週に１回、薬物投与の前および９０分後に評価した。薬理学的経口処置を、手術の１４日後から開始して２８日間実施した。手術から６週間後、ラット（１０匹の動物／群）を屠殺し、同側の膝を病理組織学的分析のために除去した。１０および３０ｍｇ／ｋｇの本発明の化合物２および１０ｍｇ／ｋｇのＰＰ２を、５ｍｌ／ｋｇの生理食塩水に溶解して経口により毎日与えた。

【0163】

最大許容効果（ＭＰＥ％）を以下の式によって算出した：
１００＊（化合物−ビヒクル）／（偽−ビヒクル）
結果を以下の表１２に示す。

【0164】

【表13】

【0165】

表１２は、本発明の式（Ｉ）の好ましい化合物である化合物２が、外科手術ＭＭＴの２週後に開始して、その処置期間の５週の間、変形性関節症のラットモデルにおいて疼痛行動を用量依存的に減少させることができることを示す。対照的に、標準的なＦＹＮキナーゼ比較物であるＰＰ２は１０ｍｇ／ｋｇにて効果がなかったが、そのより高い用量は許容されなかった。このＰＰ２の不活性は、上記の薬物動態の段落において示されるように、その不十分な経口吸収に起因する可能性もある。

【図1】

【図2】

【図3】