特許 6474412 免疫調節剤としての環式ペプチドミメティック化合物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6474412

(24)【登録日】2019年2月8日

(45)【発行日】2019年2月27日

(54)【発明の名称】免疫調節剤としての環式ペプチドミメティック化合物

(51)【国際特許分類】

   C07K 7/50 20060101AFI20190218BHJP

   C07K 5/02 20060101ALI20190218BHJP

   A61K 38/12 20060101ALI20190218BHJP

   A61K 38/04 20060101ALI20190218BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20190218BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20190218BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20190218BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20190218BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20190218BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20190218BHJP

   A61P 31/10 20060101ALI20190218BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20190218BHJP

【ＦＩ】

   C07K7/50ZNA

   C07K5/02

   A61K38/12

   A61K38/04

   A61K45/00

   A61P35/00

   A61P31/00

   A61P31/04

   A61P35/02

   A61P31/12

   A61P31/10

   A61P37/02

【請求項の数】69

【全頁数】48

(21)【出願番号】特願2016-539665(P2016-539665)

(86)(22)【出願日】2014年9月5日

(65)【公表番号】特表2016-531922(P2016-531922A)

(43)【公表日】2016年10月13日

(86)【国際出願番号】IB2014064283

(87)【国際公開番号】WO2015033303

(87)【国際公開日】20150312

【審査請求日】2017年9月4日

(31)【優先権主張番号】4010/CHE/2013

(32)【優先日】2013年9月6日

(33)【優先権主張国】IN

(73)【特許権者】

【識別番号】512332149

【氏名又は名称】オーリジーン ディスカバリー テクノロジーズ リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＡＵＲＩＧＥＮＥ ＤＩＳＣＯＶＥＲＹ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ ＬＩＭＩＴＥＤ

(74)【代理人】

【識別番号】100082072

【弁理士】

【氏名又は名称】清原 義博

(72)【発明者】

【氏名】サシクマール，ポッタイル ゴヴィンダン ナイル

(72)【発明者】

【氏名】ラマチャンドラ，ムラリダーラ

(72)【発明者】

【氏名】ナレマッデパッリ，シータラマイア セティー スダルシャン

【審査官】 福澤 洋光

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１１／１６１６９９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１２／１６８９４４（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｋ １／００−１９／００

ＣＡ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＰｕｂＭｅｄ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記化学式（Ｉ）で示される化合物であって、

【化1】

Ｒ_１ は、Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒおよび、Ｌｅｕから選択されるアミノ酸残基の側鎖を表し；
Ｒ_２ は、Ａｓｐ，Ｇｌｕ，Ｇｌｎおよび、Ａｓｎから選択されるアミノ酸残基の側鎖を表し；
［Ａａａ］は、Ｓｅｒ，Ａｓｐ，Ａｌａ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ｔｒｐ，Ｌｙｓ，Ｇｌｕおよび、Ｔｈｒから選択されるアミノ酸残基であり；
Ｒ_３は水素またはアルキルであり；
各Ｒ_４およびＲ_４’はそれぞれ独立して水素またはアルキルを表し；
Ｒ_ａおよびＲ_ａ’の両方は水素を表す；または合わさってオキソ基（＝Ｏ）であり；
Ｒ_ｂおよびＲ_ｂ’の両方は水素を表す；または合わさってオキソ基（＝Ｏ）であり；
Ｌは下記式で表され；

【化2】

ＸはＣＨ_２，ＯまたはＳであり；
Ｒ_５は水素またはアルキルであり；
ｍは１乃至３の整数であり；且つ
ｎは２乃至２０の整数であることを特徴とする化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項2】

ＸはＯである、請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項3】

ｎは２である、請求項１または２に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項4】

下記化学式（ＩＡ）の構造：

【化3】

を有する請求項１乃至３のいずれか１項に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項5】

Ｒ_４がＣ_１−５アルキルである請求項１乃至４のいずれか１項に記載の化合物。

【請求項6】

Ｒ_４’がＣ_１−５アルキルである請求項１乃至４のいずれか１項に記載の化合物。

【請求項7】

下記化学式（ＩＢ）の構造：

【化4】

を有する請求項１乃至３のいずれか１項に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項8】

下記化学式（ＩＣ）の構造：

【化5】

を有する請求項１乃至３のいずれか１項に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項9】

Ｒ_１ は、Ｓｅｒまたは，Ｔｈｒのアミノ酸残基の側鎖を表す、請求項１乃至８のいずれか１項に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項10】

Ｒ_２ は、Ａｓｎ，Ａｓｐおよび，Ｇｌｕ、から選択されるアミノ酸残基の側鎖を表す、請求項１乃至９のいずれか１項に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項11】

［Ａａａ］は、Ｓｅｒ，Ａｓｐ，Ａｌａ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ｔｒｐ，Ｇｌｕおよび、Ｔｈｒから選択されるアミノ酸残基である、請求項１乃至１０のいずれか１項に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項12】

［Ａａａ］は、Ｓｅｒまたは、Ｔｈｒのアミノ酸残基である、請求項１乃至１１のいずれか１項に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項13】

Ｒ_３ は、水素である、請求項１乃至６のいずれか１項に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項14】

Ｒ_４およびＲ_４’の両方は水素である、請求項１乃至４のいずれか１項に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項15】

Ｒ_ａおよびＲ_ａ’の両方は合わさってオキソ基（＝Ｏ）である、請求項１乃至１４のいずれか１項に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項16】

Ｒ_ｂおよびＲ_ｂ’の両方は合わさってオキソ基（＝Ｏ）である、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項17】

請求項１に記載の化合物であって、
Ｒ_１ は、ＳｅｒまたはＴｈｒのアミノ酸残基の側鎖を表し；
Ｒ_２ は、Ａｓｎ，ＡｓｐまたはＧｌｕから選択されるアミノ酸残基の側鎖であり；
［Ａａａ］は、Ｓｅｒまたは、Ｔｈｒのアミノ酸残基であり；
Ｒ_３、Ｒ_４およびＲ_４’は独立して水素であり；
Ｒ_ａおよびＲ_ａ’の両方は合わさってオキソ基 （＝Ｏ）であり；
Ｒ_ｂおよびＲ_ｂ’の両方は合わさってオキソ基 （＝Ｏ）であり；
Ｌは下記式で表され；

【化6】

ＸはＣＨ_２またはＯであり；
ｍは１乃至３から選択された整数であり；
ｎは２乃至２０から選択された整数であることを特徴とする化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項18】

Ｒ_１ は、Ｓｅｒのアミノ酸残基の側鎖を表す、請求項１乃至１７のいずれか１項に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項19】

Ｒ_１ は、Ｔｈｒのアミノ酸残基の側鎖を表す、請求項１乃至１７のいずれか１項に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項20】

Ｒ_２ はＡｓｐのアミノ酸残基の側鎖を表す、請求項１乃至１９のいずれか１項に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項21】

以下の構造：

【化6】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項22】

以下の構造：

【化7】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項23】

以下の構造：

【化8】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項24】

以下の構造：

【化9】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項25】

以下の構造：

【化10】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項26】

以下の構造：

【化11】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項27】

以下の構造：

【化12】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項28】

以下の構造：

【化13】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項29】

以下の構造：

【化14】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項30】

以下の構造：

【化15】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項31】

以下の構造：

【化16】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項32】

以下の構造：

【化17】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項33】

以下の構造：

【化18】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項34】

以下の構造：

【化19】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項35】

以下の構造：

【化20】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項36】

以下の構造：

【化21】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項37】

以下の構造：

【化22】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項38】

以下の構造：

【化23】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項39】

以下の構造：

【化24】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項40】

以下の構造：

【化25】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項41】

以下の構造：

【化26】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項42】

以下の構造：

【化27】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項43】

以下の構造：

【化28】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項44】

以下の構造：

【化29】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項45】

以下の構造：

【化30】

を有する請求項１に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩。

【請求項46】

薬学的に許容可能な担体または賦形剤と、
少なくとも１つの請求項１乃至４５のいずれか１項に記載の化合物、もしくはその薬学的に許容可能な塩と、
を含むことを特徴とする医薬組成物。

【請求項47】

さらに制癌剤、化学療法作用薬および、抗増殖性化合物から選択される少なくとも１つの薬剤を含む請求項４６に記載の医薬組成物。

【請求項48】

ＰＤ−１シグナル経路によってもたらされる免疫反応を調節するための薬剤の製造における、請求項１乃至４５のいずれか１項に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩の使用。

【請求項49】

癌を処置するための薬剤の製造における、請求項１乃至４５のいずれか１項に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩の使用。

【請求項50】

前記癌は、乳癌、結腸癌、肺癌、黒色腫、前立腺癌および腎臓癌、から成る群から選択される、請求項４９に記載の使用。

【請求項51】

前記癌は、骨癌、頭または頚部の癌、膵臓癌、皮膚癌、皮膚か眼内の悪性黒色腫、子宮内膜の癌腫、頚部の癌腫、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟繊維の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、急性骨髄白血病、慢性骨髄白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病を含む、慢性または急性白血病、幼年期の固体の腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓または尿管の癌、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、ＣＮＳの原発リンパ腫、腫瘍血管新生、脊柱の軸椎腫瘍、脳幹部グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞性リンパ腫、石綿によって誘発されたものを含む環境誘発性癌、および前記癌の組み合わせから選択される、請求項４９に記載の使用。

【請求項52】

感染症を処置するための薬剤の製造における、請求項１乃至４５のいずれか１項に記載の化合物または、その薬学的に許容可能な塩の使用。

【請求項53】

前記感染症は、細菌感染症、ウイルス感染症または真菌類感染症である、請求項５２に記載の使用。

【請求項54】

前記感染症は、ＨＩＶ、インフルエンザ、ヘルペス、ジアルジア症、マラリア、リーシュマニア症、肝炎ウイルス（Ａ、ＢおよびＣ）、ヘルペスウィルス（ＶＺＶ、ＨＳＶ−Ｉ、ＨＡＶ−６、ＨＳＶ−ＩＩおよびＣＭＶおよび、エプスタイン−バーウイルスを含む）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウィルス、コロナウイルス、ＲＳウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウィルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デング熱ウイルス、乳頭腫ウイルス、軟疣ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルスおよびアルボウィルス脳炎ウイルスによる病原性の感染、バクテリア・クラミジア、リケッチア属のバクテリア、マイコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺球菌（ｐｎｅｕｍｏｎｏｃｏｃｃｉ）、髄膜炎菌およびコノコッキ（ｃｏｎｏｃｏｃｃｉ）、クレブシェラ、プロテウス、セラチア、シュードモナス、大腸菌、レジオネラ、ジフテリア、サルモネラ菌、バチルス、コレラ菌、破傷風、ボツリヌス菌、炭疽菌、ペスト菌、レプトスピラ、およびライム病原菌による病原性の感染、真菌カンディダ（アルビカンス、クルーセイ、グラブラータ、トロピカリスを含む）、クリプトコックス・ネオフォルマンス、アスペルギルス属（フミガタス（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ニガー（ｎｉｇｅｒ）など）、ケカビ属（ムコール（ｍｕｃｏｒ）、アブシディア（ａｂｓｉｄｉａ）、リゾフス（ｒｈｉｚｏｐｈｕｓ））、スポロトリクスシェンキー、ブラストミセス・デルマティティディス、バラコクシジオイデス・ブラジリエンシス、コクシジオイデス・イミチスおよびヒストプラスマ・カプスラーツムによる病原性の感染、および寄生虫赤痢アメーバ、大腸バランチジウム、髄膜脳炎原因アメーバ、アカントアメーバｓｐ、ジアルジア・ランビア、クリプトスポリジウムｓｐ、ニューモシスティス・カリニ、三日熱マラリア原虫、ネズミバベシア、ブルセイトリパノソーマ、クルーズ・トリパノソーマ、ドノヴァンリーシュマニア、トキソプラズマ原虫、またはブラジル鉤虫による病原性の感染から選択される、請求項５３に記載の使用。

【請求項55】

以下のスキームに従って化合物を調整する方法であって：

【化31】

Ｒ_１ は、アルキルまたはアラルキルで随意に置換されたＡｌａ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒおよび、Ｌｅｕから選択されるアミノ酸の側鎖を表し；
Ｒ_２ は、アルキルまたはアラルキルで随意に置換されたＡｓｐ，Ｇｌｕ，Ｇｌｎおよび、Ａｓｎから選択されるアミノ酸の側鎖を表し；
［Ａａａ］は、アルキルまたはアラルキルで随意に置換されたＳｅｒ，Ａｓｐ，Ａｌａ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ｔｒｐ，Ｌｙｓ，Ｇｌｕおよび、Ｔｈｒから選択されるアミノ酸残基であり、ここでそれらのＣ末端は、自由末端であるか、アミド化または、エステル化されており；
Ｒ_３は水素またはアルキルであり；
各Ｒ_４およびＲ_４’は独立して水素またはアルキルを表し；
Ｒ_ａおよびＲ_ａ’の両方は水素を表す；または合わさってオキソ基（＝Ｏ）であり；
Ｒ_ｂおよびＲ_ｂ’の両方は水素を表す；または合わさってオキソ基（＝Ｏ）であり；
Ｌは下記式で表され；

【化32】

ＸはＣＨ_２，ＯまたはＳであり；
ｎは２乃至２０の整数であり；
Ｚは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（アリールアルキル）または、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（アルキル）である、方法。

【請求項56】

ｎは２である、請求項５５に記載の方法。

【請求項57】

［Ａａａ］は、Ｉｌｅ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，および、Ｔｈｒから選択されるアミノ酸残基であり、それらのＣ末端は、エステル化されている、請求項５５に記載の方法。

【請求項58】

Ｒ_１ は、アルキルで置換されたＳｅｒおよび，Ｔｈｒから選択されるアミノ酸の側鎖を表す、請求項５５に記載の方法。

【請求項59】

Ｒ_２ は、トリチルを含むアラルキルで置換されたＧｌｎおよび、Ａｓｎから選択されるアミノ酸の側鎖を表す、請求項５５に記載の方法。

【請求項60】

Ｒ_２ は、アルキルで随意に置換されたＡｓｐおよび，Ｇｌｕから選択されるアミノ酸の側鎖を表す、請求項５５に記載の方法。

【請求項61】

Ｒ_３は水素である、請求項５５に記載の方法。

【請求項62】

Ｒ_４およびＲ_４’の両方は水素である、請求項５５に記載の方法。

【請求項63】

Ｒ_ａおよびＲ_ａ’の両方は合わさってオキソ基（＝Ｏ）である、請求項５５に記載の方法。

【請求項64】

Ｒ_ｂおよびＲ_ｂ’の両方は合わさってオキソ基（＝Ｏ）である、請求項５５に記載の方法。

【請求項65】

ＸはＯである、請求項５５に記載の方法。

【請求項66】

Ｚは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（アリールアルキル）である、請求項５５に記載の方法。

【請求項67】

Ｚは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（アルキル）である、請求項５５に記載の方法。

【請求項68】

塩基はトリエチルアミンである、請求項５５に記載の方法。

【請求項69】

溶媒は、テトラヒドロフランまたは、ジメチルホルムアミドである、請求項５５に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

この出願は、２０１３年９月６日に出願されたインド仮出願４０１０／ＣＨＥ／２０１３の利益を主張する；参照によって、それは本願に組み込まれる。

【0002】

本発明は、免疫的な調節剤として治療上有用な環式ペプチドミメティック化合物に関する。本発明はさらに、前記環式ペプチドミメティック化合物を治療薬として含む医薬組成物に関する。

【0003】

プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）は、２つのリガンド、ＰＤ−Ｌ１あるいはＰＤ−Ｌ２と相互作用を起こして抑制シグナルを伝える、ＣＤ２８スーパーファミリーのメンバーである。ＰＤ−１とそのリガンドは、他のＣＤ２８メンバーと比較して、Ｔ細胞の活性化および免疫寛容において、広く発現し、より広範囲の免疫調節的役割を果たしている。ＰＤ−１とそのリガンドは、感染免疫および腫瘍免疫の減弱と、慢性感染症および腫瘍成長の促進とに関係している。ＰＤ−１およびそのリガンドの生物学的意義は、様々な人間の疾病に対するＰＤ−１経路の処置の治療上の可能性を示唆する（Ａｒｉｅｌ Ｐｅｄｏｅｅｍほか、Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１１）；３５０：１７−３７）。

【0004】

Ｔ細胞の活性化および機能不全は、直接および調節されたレセプターに依存する。それらの機能的結果に基づいて、共シグナル分子は、共刺激分子と共抑制分子とに分けることができ、それらはＴ細胞反応の初回刺激、増殖、分化および機能的成熟を、積極的および抑制的に制御する。（Ｌｉ Ｓｈｉほか、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ＆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０１３，６：７４）。

【0005】

プログラム細胞死タンパク質−１（ＰＤ−１）の免疫チェックポイント経路をブロックする治療用抗体は、Ｔ細胞の下方調節を防ぐとともに、癌に対する免疫反応を促進する。いくつかのＰＤ−１経路抑制剤は、進行中の治験の様々な様相において、強い活性を示した（ＲＤ Ｈａｒｖｅｙ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（２０１４）；９６ ２，２１４−２２３）。

【0006】

プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）は、Ｔ細胞によって主に発現される共受容体コレセプターである。ＰＤ−１とそのリガンドであるＰＤ−Ｌ１あるいはＰＤ−Ｌ２との結合は、免疫系の生理学的調節において重要である。ＰＤ−１シグナル経路の主たる機能的役割は、自己反応性Ｔ細胞の抑制であり、それは、自己免疫疾患に対して防御する役目を果たしている。したがってＰＤ−１経路の除去は、究極的に病原性自己免疫の進行につながり得る免疫寛容の破壊をもたらす可能性がある。反対に、腫瘍細胞は、免疫監視メカニズムから逃れるために、しばしばＰＤ−１経路を取り込む。したがって、ＰＤ−１経路の遮断は、癌治療における魅力的な目標になった。
現在のアプローチは、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１のいずれかを目標とした中和抗体または融合タンパク質である６つの薬剤を含む。４０を超える治験が、多様な腫瘍タイプにおけるＰＤ−１遮断の役割をより明確にするために進行中である（Ｈｙｕｎ−Ｔａｋ Ｊｉｎほか、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（オランダ、アムステルダム）（２０１４）、１５３（１）、１４５−１５２）。

【0007】

国際出願ＷＯ０１／１４５５７、ＷＯ０２／０７９４９９、ＷＯ２００２／０８６０８３、ＷＯ０３／０４２４０２、ＷＯ２００４／００４７７１、ＷＯ２００４／０５６８７５、ＷＯ２００６／１２１１６８、ＷＯ２００８／１５６７１２、ＷＯ２０１０／０７７６３４、ＷＯ２０１１／０６６３８９、ＷＯ２０１４／０５５８９７、ＷＯ２０１４／０５９１７３、ＷＯ２０１４／１０００７９、および、米国特許ＵＳ０８７３５５５３は、ＰＤ−１あるいはＰＤ−Ｌ１遮断抗体または融合タンパク質について報告している。

【0008】

さらに国際出願ＷＯ２０１１／１６１６９９、ＷＯ２０１２／１６８９４４、ＷＯ２０１３／１４４７０４およびＷＯ２０１３／１３２３１７は、プログラム細胞死１（ＰＤー１）シグナル経路を抑制及び／又は阻害することができるペプチドあるいはペプチドミメティック化合物について報告している。

【0009】

さらに、より高効能、より良質、及び／又はより選択的な、ＰＤ−１経路の免疫的調節剤に対する必要性が存在している。本発明は、プログラム細胞死１（ＰＤ１）シグナル経路を抑制及び／又は阻害することができる環式ペプチドミメティック化合物を提供する。

【0010】

本発明によれば、プログラム細胞死１（ＰＤ１）シグナル経路を抑制及び／又は阻害することが可能である、環式ペプチドミメティック化合物、またはその立体異性体、またはその薬学的に許容可能な塩が提供される。

【0011】

１つの様相では、本発明は、下記化学式（Ｉ）の環式ペプチドミメティック化合物、または、その薬学的に許容可能な塩、またはその立体異性体を提供する；

【0012】

【化1】

【0013】

式中、
Ｒ１は、Ａｌａ，Ｓｅｒ，ＴｈｒまたはＬｅｕの側鎖であり；
Ｒ２は、Ａｓｐ，Ｇｌｕ，ＧｌｎまたはＡｓｎの側鎖であり；
［Ａａａ］は、Ｓｅｒ，Ａｓｐ，Ａｌａ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ｔｒｐ，Ｌｙｓ，ＧｌｕまたはＴｈｒから選択されるアミノ酸残基であり；
Ｒ３は、水素またはアルキルであり；
Ｒ４およびＲ４’は、それぞれ独立して水素またはアルキルを表わし；
ＲａおよびＲａ’の両方は、水素を表わすか；または、ともにオキソ基（＝Ｏ）を表わし；
ＲｂおよびＲｂ’の両方は、水素を表わすか；または、ともにオキソ基（＝Ｏ）を表わし；
Ｌは、下記化合物であり、

【0014】

【化2】

Ｘは、ＣＨ２、ＯまたはＳから成る群から選ばれ；
Ｒ_５は、水素またはアルキルであり；
ｍは、１乃至３から選択された整数であり；
ｎは、２乃至２０から選択された整数であることを特徴とする。

【0015】

本発明の別の様相において、本発明は、化学式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容可能な塩、または立体異性体を含む医薬組成物、およびそれらを調製するための方法に関する。

【0016】

本発明のさらに別の様相において、本発明は、化学式（Ｉ）の環式ペプチドミメティック化合物、およびその塩、およびその立体異性体の使用を提供する。それらは、プログラム細胞死１（ＰＤ１）シグナル経路を抑制及び／又は阻害することが可能である。

【0017】

本発明は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２、および、それらによって引き起こされる免疫抑制性シグナルの阻害を含む免疫強化による病気の治療に有用な治療薬としての環式ペプチドミメティック化合物、および、それらを使用する治療を提供する。

【0018】

各実施形態はそれぞれ、本発明の限定としてではなく、本発明の説明として提供される。実際、本発明の範囲または精神から外れずに、本発明において、様々な修飾および変更をなすことができることは、当業者に明白である。例えば、一実施形態の一部として図示または記載された特徴は、他の実施形態に使用して、さらに別の実施形態を生成することができる。したがって、本発明は、追加されたクレームおよびそれらの等価物の範囲内に来るように、そのような修飾および変化を含むことが意図される。本発明の他の目的、特徴および様相は、下記の詳細な説明に記載され、または、そこから明白である。ここでの議論は、典型的な実施形態のみの記述であり、本発明のより広い様相を制限するものとして解釈されるものでないことは、当業者によって理解されるであろう。

【0019】

１つの実施形態において、本発明は、下記化学式（Ｉ）の化合物、またはその立体異性体、またはその薬学的に許容可能な塩に関する；

【0020】

【化3】

【0021】

式中、
Ｒ１は、Ａｌａ，Ｓｅｒ，ＴｈｒまたはＬｅｕの側鎖であり；
Ｒ２は、Ａｓｐ，Ｇｌｕ，ＧｌｎまたはＡｓｎの側鎖であり；
［Ａａａ］は、Ｓｅｒ，Ａｓｐ，Ａｌａ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ｔｒｐ，Ｌｙｓ，ＧｌｕまたはＴｈｒから成る群からから選ばれたアミノ酸残基であり；
Ｒ３は、水素またはアルキルであり；
Ｒ４およびＲ４’は、それぞれ独立して水素またはアルキルを表わし；
ＲａおよびＲａ’の両方は、水素を表わすか；または、ともにオキソ基（＝Ｏ）を表わし；
ＲｂおよびＲｂ’の両方は、水素を表わすか；または、ともにオキソ基（＝Ｏ）を表わし
Ｌは、下記化合物であり、

【0022】

【化4】

Ｘは、ＣＨ_２、ＯまたはＳから選択され；
Ｒ_５は、水素またはアルキルであり；
ｍは、１乃至３から選択された整数であり；
ｎは、２乃至２０から選択された整数であることを特徴とする。

【0023】

化学式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態において、本発明は、化学式（ＩＡ）の特定の一連の化合物を含む：

【0024】

【化5】

【0025】

式中、
Ｒ１は、Ａｌａ，Ｓｅｒ，ＴｈｒまたはＬｅｕの側鎖であり；
Ｒ２は、Ａｓｐ，Ｇｌｕ，ＧｌｎまたはＡｓｎの側鎖であり；
［Ａａａ］は、Ｓｅｒ，Ａｓｐ，Ａｌａ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ｔｒｐ，Ｌｙｓ，ＧｌｕまたはＴｈｒから成る群から選ばれたアミノ酸残基であり；
Ｒ３は、水素またはアルキルであり；
各Ｒ４およびＲ４’は、それぞれ独立して水素またはアルキルを表わし；
ＲａおよびＲａ’の両方は、水素を表わすか；または、ともにオキソ基（＝Ｏ）を表わし；
ＲｂおよびＲｂ’の両方は、水素を表わすか；または、ともにオキソ基（＝Ｏ）を表わすことを特徴とする。

【0026】

化学式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態において、本発明は、化学式（ＩＢ）の特定の一連の化合物を含む：

【0027】

【化6】

【0028】

式中、
Ｒ１は、Ａｌａ，Ｓｅｒ，ＴｈｒまたはＬｅｕの側鎖であり；
Ｒ２は、Ａｓｐ，Ｇｌｕ，ＧｌｎまたはＡｓｎの側鎖であり；
［Ａａａ］は、Ｓｅｒ，Ａｓｐ，Ａｌａ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ｔｒｐ，Ｌｙｓ，ＧｌｕまたはＴｈｒから選択されたアミノ酸残基であることを特徴とする。

【0029】

化学式（Ｉ）の化合物のさらに別の実施形態において、本発明は、化学式（ＩＣ）の特定の一連の化合物を含む：

【0030】

【化7】

【0031】

式中、
Ｒ１は、Ａｌａ，Ｓｅｒ，ＴｈｒまたはＬｅｕの側鎖であり；
Ｒ２は、Ａｓｐ，Ｇｌｕ，ＧｌｎまたはＡｓｎの側鎖であり；
［Ａａａ］は、Ｓｅｒ，Ａｓｐ，Ａｌａ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ｔｒｐ，Ｌｙｓ，ＧｌｕまたはＴｈｒから選択されたアミノ酸残基であることを特徴とする。

【0032】

さらに他の実施形態において、本発明は、化学式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、またはその立体異性体を提供し、
式中、
Ｒ１は、ＳｅｒまたはＴｈｒの側鎖であり；
Ｒ２は、Ａｓｐ，ＡｓｎまたはＧｌｕの側鎖であり；
［Ａａａ］は、ＳｅｒまたはＴｈｒから選ばれたアミノ酸残基であり；
Ｒ３、Ｒ４およびＲ４’は、それぞれ独立して水素であり；
ＲａおよびＲａ’の両方は、ともにオキソ基（＝Ｏ）を表わし；
ＲｂおよびＲｂ’の両方は、ともにオキソ基（＝Ｏ）を表わし；
Ｌは、下記化合物であり、

【0033】

【化8】

Ｘは、ＣＨ_２またはＯであり；
ｍは、１から３までのうちから選択された整数であり；
ｎは、２から２０までのうちから選択された整数であることを特徴とする。

【0034】

下記の実施形態は本発明の例証であり、請求範囲を、例示された特定の実施形態に限定することを意図するものではない。

【0035】

一実施形態において、化学式（Ｉ）の化合物が特定的に提供され、式中Ｌが下記化合物であり、

【0036】

【化9】

式中、Ｘ、ｎおよびＲ_５が、化学式（Ｉ）と同様に規定される。

【0037】

他の実施形態において、化学式（Ｉ）の化合物が特定的に提供され、式中Ｌが下記化合物であり、

【0038】

【化10】

式中、ｍ、ｎおよびＲ_５が、化学式（Ｉ）と同様に規定される。

【0039】

さらに他の一実施形態において、化学式（Ｉ）の化合物が特定的に提供され、式中のＬが下記化合物であり、

【0040】

【化11】

式中、ｍ、ｎおよびＸが、化学式（Ｉ）と同様に規定される。

【0041】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）の化合物が特定的に提供され、式中Ｌが下記化合物であり

【0042】

【化12】

式中、ｍ、ＸおよびＲ_５が、化学式（Ｉ）と同様に規定される。

【0043】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）の化合物が特定的に提供され、式中Ｌが、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ_２−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_２−ＮＨ−である。

【0044】

他の実施形態において、化学式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）および（ＩＣ）の化合物が特定的に提供され、式中のＲ_１がＳｅｒの側鎖である。

【0045】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）および（ＩＣ）の化合物が特定的に提供され、式中のＲ_１がＴｈｒの側鎖である。

【0046】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）、（ＩＡ）および（ＩＢ）の化合物が特定的に提供され、式中のＲ_２がＡｓｐの側鎖である。

【0047】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）および（ＩＣ）の化合物が特定的に提供され、式中のＲ_２がＡｓｎの側鎖である。

【0048】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）および（ＩＣ）の化合物が特定的に提供され、式中のＲ_２がＧｌｕの側鎖である。

【0049】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）および（ＩＣ）の化合物が特定的に提供され、式中の［Ａａａ］がＳｅｒである。

【0050】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）および（ＩＣ）の化合物が特定的に提供され、式中の［Ａａａ］がＴｈｒである。

【0051】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）、（ＩＡ）および（ＩＢ）の化合物が特定的に提供され、式中の［Ａａａ］がＡｓｐである。

【0052】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）、（ＩＡ）および（ＩＢ）の化合物が特定的に提供され、式中の［Ａａａ］がＬｙｓまたはＩｌｅである。

【0053】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）、（ＩＡ）および（ＩＢ）の化合物が特定的に提供され、式中の１以上または全てのアミノ酸がＤ−アミノ酸である。

【0054】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）および（ＩＡ）の化合物が特定的に提供され、式中のＲ４’が、メチルのようなＣ_１−５アルキルである。

【0055】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）および（ＩＡ）の化合物が特定的に提供され、式中のＲ４が、メチルのようなＣ_１−５アルキルである。

【0056】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）および（ＩＡ）の化合物が特定的に提供され、式中のＲａおよびＲａ’の両方が水素である。

【0057】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）および（ＩＡ）の化合物が特定的に提供され、式中のＲｂおよびＲｂ’の両方が水素である。

【0058】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）および（ＩＡ）の化合物が特定的に提供され、式中のＲａおよびＲａ’の両方がともにオキソ基（＝Ｏ）を表す。

【0059】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）および（ＩＡ）の化合物が特定的に提供され、式中のＲｂおよびＲｂ’の両方がともにオキソ基（＝Ｏ）を表す。

【0060】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）および（ＩＡ）の化合物が特定的に提供され、式中のＲ４およびＲ４’の両方が水素である。

【0061】

さらに他の実施形態において、化学式（Ｉ）および（ＩＡ）の化合物が特定的に提供され、式中のＲ_３が水素である。

【0062】

実施形態において、限定されることなく、表１に列挙される化学式（Ｉ）の特定の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、またはその立体異性体が提供される。：

【0063】

【表1】

【0064】

【表2】

【0065】

本発明に示されるような化合物は、薬学的投与のために処方される。

【0066】

１つの実施形態において、本発明は、請求項１−８のうちのいずれか１つに従う少なくとも１つの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、またはその立体異性体、および薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む医薬組成物提供する。

【0067】

１つの実施形態において、前記医薬組成物は、さらに制癌剤、化学療法作用薬または抗増殖性化合物のうちの少なくとも１つを含む。

【0068】

１つの実施形態において、本発明は、薬剤として使用するための本発明に示されるような化合物を提供する。

【0069】

１つの実施形態において、本発明は、癌治療用の薬剤として使用するための本発明に示されるような化合物を提供する。

【0070】

１つの実施形態において、本発明は、細菌感染症、ウイルス感染症または真菌類感染症の治療用薬剤として使用するための本発明に示されるような化合物を提供する。

【0071】

１つの実施形態において、本発明は、乳癌、結腸癌、肺癌、黒色腫、前立腺癌および腎臓癌、骨癌、頭または頚部の癌、膵臓癌、皮膚癌、皮膚か眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部の癌、胃癌、睾丸癌、子宮癌、卵管の癌腫、子宮内膜の癌腫、頚部の癌腫、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟繊維の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、急性骨髄白血病、慢性骨髄白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病を含む、慢性または急性白血病、幼年期の固体の腫物、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓または尿管の癌、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、ＣＮＳの原発リンパ腫、腫瘍血管新生、脊柱の軸椎腫瘍、脳幹部グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞性リンパ腫、石綿によって誘発されたものを含む環境誘発性癌、および前記癌の組み合わせの治療用医薬の調製に使用するための本発明に示されるような化合物を提供する、

【0072】

１つの実施形態において、本発明は、癌の治療に使用するための本発明に示されるような化合物を提供する。

【0073】

１つの実施形態において、本発明は、細菌感染症、ウイルス感染症または真菌類感染症の治療に使用するための本発明に示されるような化合物を提供する。

【0074】

１つの実施形態において、本発明は癌の治療法を提供するものであり、この方法は、有効量の本発明の化合物を必要とする患者へ投与することを含む。

【0075】

１つの実施形態において、本発明は、有効量の本発明の化合物を必要とする患者へ投与することにより、腫瘍細胞の増殖及び／又は転移を阻害する方法を提供する。

【0076】

前記腫瘍細胞は、限定的ではなく、たとえば黒色腫、腎臓癌、前立腺癌、乳癌、結腸癌および肺癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭または頚部の癌、皮膚または眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部の癌、胃癌、睾丸癌、卵管の癌腫、子宮内膜の癌腫、頚部の癌腫、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟繊維の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、急性骨髄白血病、慢性骨髄白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病を含む慢性または急性白血病、幼年期の固体の腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓または尿管の癌、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、ＣＮＳの原発リンパ腫、腫瘍血管新生、脊柱の軸椎腫瘍、脳幹部グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞性リンパ腫、石綿によって誘発されたものを含む環境誘発性癌、および前記癌の組合せのような癌を含む。

【0077】

本発明のさらに他の実施形態は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２によって誘発される免疫抑制性シグナルの阻害により引き起こされる免疫強化による感染の治療方法を提供するものであって、その方法は、有効量の本発明の化合物を必要とする患者へ投与することを含む。

【0078】

感染症は、限定的ではなく、たとえばＨＩＶ、インフルエンザ、ヘルペス、ジアルジア症、マラリア、リーシュマニア症、肝炎ウイルス（Ａ、ＢおよびＣ）、ヘルペスウィルス（例えばＶＺＶ、ＨＳＶ−Ｉ、ＨＡＶ−６、ＨＳＶ−ＩＩおよびＣＭＶ、エプスタイン−バーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウィルス、コロナウイルス、ＲＳウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウィルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デング熱ウイルス、乳頭腫ウイルス、軟疣ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルスおよびアルボウィルス脳炎ウイルスによる病原性の感染、バクテリア・クラミジア、リケッチア属のバクテリア、マイコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺球菌（ｐｎｅｕｍｏｎｏｃｏｃｃｉ）、髄膜炎菌およびコノコッキ（ｃｏｎｏｃｏｃｃｉ）、クレブシェラ、プロテウス、セラチア、シュードモナス、大腸菌、レジオネラ、ジフテリア、サルモネラ菌、バチルス、コレラ菌、破傷風、ボツリヌス菌、炭疽菌、ペスト菌、レプトスピラ、およびライム病原菌による病原性の感染、真菌カンディダ（アルビカンス、クルーセイ、グラブラータ、トロピカリスなど）、クリプトコックス・ネオフォルマンス、アスペルギルス属（フミガタス（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ニガー（ｎｉｇｅｒ）など）、ケカビ属（ムコール（ｍｕｃｏｒ）、アブシディア（ａｂｓｉｄｉａ）、リゾフス（ｒｈｉｚｏｐｈｕｓ））、スポロトリクスシェンキー、ブラストミセス・デルマティティディス、バラコクシジオイデス・ブラジリエンシス、コクシジオイデス・イミチスおよびヒストプラスマ・カプスラーツムによる病原性の感染、および寄生虫赤痢アメーバ、大腸バランチジウム、髄膜脳炎原因アメーバ、アカントアメーバｓｐ、ジアルジア・ランビア、クリプトスポリジウムｓｐ、ニューモシスティス・カリニ、三日熱マラリア原虫、ネズミバベシア、ブルセイトリパノソーマ、クルーズ・トリパノソーマ、ドノヴァンリーシュマニア、トキソプラズマ原虫、ブラジル鉤虫による病原性の感染を含む。

【0079】

本発明の化合物は、単一の薬として、または、前記化合物を様々な薬理学的に許容可能な材料と混合した医薬組成物として、使用してもよい。

【0080】

医薬組成物は通常、経口または吸入によって投与されるが、非経口的投与によって投与してもよい。

【0081】

本発明の実施において、組成物は例えば、経口により、静脈注射により、局所的に、腹腔内で、膀胱内にまたは髄腔内に投与することができる。非経口的投与の例は、限定されることなく、関節内（関節中）、静脈内、筋肉内、皮膚内、腹腔内、および、皮下経路を含み、酸化防止剤、バッファー、静菌剤、および、処方した溶液を予定された受容者の血液と等張にする溶質を含む、水性または非水性の等張無菌注入溶液と、懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤および保存剤を含み得る、水性および非水性の無菌懸濁液とを含む。経口投与、非経口的投与、皮下投与および静脈内投与は、好ましい投与方法である。

【0082】

本発明の化合物の投与量は、年齢、体重、症状、治療上の効能、薬の摂取計画、及び／又は、治療時間に依存して変わる。一般に、それらを経口または吸入によって、１回当たり１ｍｇから１００ｍｇの量を、数日に１度、３日に１度、２日に１度、１日に１度から、１日に数回まで、投与してもよく、成人の場合には、１日につき１−２４時間の範囲で、経口または吸入経路によって、連続的に投与してもよい。投与量は様々な条件によって影響されるので、上記の投与量より少ない量で十分に機能することが時々あり、またあるケースでは、より多量が必要とされることがある。

【0083】

本発明の化合物は、以下の目的のため、他の薬と組み合わせて投与されてもよい。（１）本発明の予防薬及び／又は治療薬の予防効果及び／又は治療効果の補強及び／又は増強、（２）本発明の予防薬及び／又は治療薬の活動力、吸収性向上、投与量低減、及び／又は、（３）本発明の予防薬及び／又は治療薬の副作用の低減。

【0084】

本発明の化合物および他の薬を含む併用薬は、両方の成分が単一の処方に含まれる組合せ製剤として投与されてもよく、または別々の処方として投与されてもよい。別々の処方による投与は、同時投与、および、一定間隔を置いた投与を含む。一定間隔で投与する場合、本発明の化合物を最初に投与し、別の薬を後にすることができ、または、最初に別の薬を投与し、本発明の化合物を後にすることができる。各薬の投与方法は、同じでもよく、異なってもよい。

【0085】

別の薬の投与量は、臨床的に使用される投与量に基づいて、適切に選択することができる。
本発明の化合物と別の薬との配合比は、投与される患者の年齢および体重、投与方法、投与時間、治療される疾患、症状、および、これらの組み合わせに従って、適切に選択することができる。例えば、本発明の化合物の１質量部あたり、別の薬は０．０１〜１００質量部の量で使用されてもよい。別の薬は、適切な比率の２種類以上の任意の薬の組合せでもよい。本発明の化合物の予防効果及び／又は治療効果を補強及び／又は増強する別の薬は、既に発見されたものだけでなく、上記のメカニズムに基づいて、今後発見されるものを含む。

【0086】

この併用が予防効果及び／又は治療効果を及ぼす疾病は、特に限定されない。本発明の化合物の予防効果及び／又は治療効能を補強及び／又は増強する限りにおいて、併用薬はどのような疾病にも使用することができる。

【0087】

本発明の化合物は、既存の化学療法剤と共に、併用的にまたは混合形態で使用することができる。化学療法剤の例は、アルキル化剤、ニトロソ尿素剤、代謝拮抗物質、抗癌抗生物質、植物起源アルカロイド、トポイソメラーゼ抑制剤、ホルモン剤、ホルモン拮抗剤、アロマターゼ阻害薬、Ｐ−糖タンパク質抑制剤、白金錯体誘導体、他の免疫療法薬、および他の抗癌薬を含む。さらに、白血球減少症（好中球減少症）治療薬、血小板減少症治療薬、鎮吐剤および癌性疼痛介入薬のような癌治療補助薬をともに、併用的にまたは混合形態で使用することができる。

【0088】

１つの実施形態において、本発明の化合物は、他の免疫調節薬及び／又は増強剤と共に、併用的にまたは混合形態で使用することができる。
免疫調節薬の例は、様々なサイトカイン、ワクチンおよびアジュバントを含む。免疫反応を刺激するこれらサイトカイン、ワクチンおよびアジュバントの例は、限定的ではなく、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン―α、βまたはγ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−１２、ポリ（Ｉ：Ｃ）およびＣ_ｐＧを含む。

【0089】

他の実施形態において、増強剤は、シクロホスファミドおよびシクロホスファミドの類似物、抗ＴＧＦβ剤およびイマチニブ（グリーベック：登録商標）、パクリタキセル、スニチニブ（スーテント：登録商標）または他の抗血管新生剤のような有糸分裂抑制剤、レトロゾールのようなアロマターゼ阻害薬、Ａ２ａアデノシン受容体（Ａ２ＡＲ）拮抗剤、血管新生阻害剤、アントラサイクリン、オキサリプラチン、アドリアマイシン、ＴＬＲ４拮抗剤およびＩＬ−１８拮抗剤を含む。

【0090】

他の限定がなされない限り、本明細書で使用される技術的および科学的用語はすべて、本発明の主題が属する分野における当業者により共通して理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で使用されるように、以下の定義は、本発明の理解を容易にするために提供される。

【0091】

本明細書で使用されるように、用語「アルキル」は、不飽和結合を含まず、１−２０の炭素原子（すなわちＣ_１−２０アルキル）または１−１０の炭素原子（すなわちＣ_１−１０アルキル）または１−５の炭素原子（すなわちＣ_１−５アルキル）を有するとともに、残余の分子が単結合によって連結されている主鎖において、炭素原子および水素原子のみを含んでいる炭化水素鎖基を指し、例えば、限定されるものではないが、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチルまたはネオペンチルを含む。反対のことが提示されるか、または論述されない限り、本明細書に記述されまたは請求されたすべてのアルキル基は、直鎖でも分枝上でもよく、置換されても置換されなくてもよい。

【0092】

本明細書で使用されるように、用語「アミノ酸」は、アルファ炭素においてＬまたはＤの立体化学を有するアミノ酸を指す。

【0093】

本明細書で使用されるように、用語「化合物」は、本発明で開示される化合物を指す。

【0094】

本明細書で使用されるように、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」または「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は一般に、包含する（ｉｎｃｌｕｄｅ）、すなわち、１つ以上の特徴または構成要素の存在を許容するという意味で使用される。

【0095】

本明細書で使用されるように、用語「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、別の形式、たとえば「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｅ）」「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含んでいた（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」と同様に、限定的ではない。

【0096】

「薬学的に許容可能な塩」とは、化学式（Ｉ）の化合物をその１つの塩の形態で含み、特に、有効成分の遊離形態または従前に使用された有効成分の他の塩形態と比較して、この塩形態が、向上した薬物動態学的特性を有効成分に与える場合に、その有効成分を意味するものとして捉えられる。有効成分の薬学的に許容可能な塩形態は、この有効成分に初めて、それが以前には有していなかった所望の薬物動態学的特性を与えることが可能であるとともに、身体におけるその治療上の効果に関し、この有効成分の薬力学に対し肯定的な影響を与えることさえ可能になる。

【0097】

「薬学的に許容可能」とは、一般に安全で、無毒で、生物学にも他の面でも有害ではない薬学的組成物の調製において有用であるものを意味するとともに、人間の薬学的使用と同様に、獣医学的にも許容可能なものを含む。

【0098】

用語「立体異性体」は、化学式（Ｉ）の化合物が、キラルである場合は常に、または、それらが１つ以上の二重結合を持つ場合は、それらの任意の鏡像体、ジアステレオマーまたは幾何異性体を指す。化学式（Ｉ）および関連する化学式の化合物がキラルの場合、それらはラセミ体、または光学的に活性な形態で存在する。本発明による化合物のラセミ体または立体異性体の薬学的活性は異なるかもしれないので、鏡像体を使用することが望ましい可能性がある。このような場合において、最終生産物またはその中間生成物でさえも、当業者に知られている化学的または物理的手段によって鏡像異性体化合物に分離するか、または、合成においてそのように使用することさえもできる。ラセミ体のアミンの場合、ジアステレオマーが、光学的に活性な分割剤を用いた反応によって、混合物から形成される。適切な分割剤の例は、光学活性な酸であり、たとえば、ＲおよびＳ形態の酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸、適切なＮ保護アミノ酸（例えばＮ−ベンゾイルプロリンまたはＮ−ベンゼンスルホニルプロリン）、または様々な光学活性なカンファースルホン酸である。同様に有利な点が、光学活性な分割剤の補助を用いた、クロマトグラフィによる鏡像体の分離である（例えばジニトロベンゾイルフェニルグリシン、三酢酸セルロース、または炭水化物の他の誘導体、または、シリカゲル上で固定されたキラル誘導されたメタクリル酸塩ポリマー）。

【0099】

用語「被験体」は、哺乳動物（特に人間）および他の動物を含み、たとえば家庭動物（例えば猫と犬を含む家庭のペット）および非家庭動物（野生生物のような）である。

【0100】

「治療上効果的な量」または「有効な量」は、本発明の化合物の以下の目的のために十分である量を指す。（ｉ）特定の疾病、障害または症候群を治療または予防する。（ｉｉ）特定の疾病、障害または症候群の１つ以上の症状を軽減、改善または除去する。または（ｉｉｉ）本明細書に記載された特定の疾病、障害または症候群の１つ以上の症状の発症を防止または遅延させる。
癌の場合、治療上有効な薬物量が、癌細胞の数を減少させ；癌サイズを減少させ；抹消器官への癌細胞浸潤を阻害し（すなわち、ある程度まで遅延させ、あるいは停止させる）；
腫瘍転移を抑制し（すなわち、ある程度まで遅延させ、あるいは停止させる）；ある程度まで、腫瘍成長を阻害し；及び／又は、癌に関連した症状の１つ以上をある程度まで緩和する。
感染症状態の場合、治療上有効な量は、伝染病や、バクテリア、ウイルスまたは真菌によって引き起こされる感染の症状を低減しまたは緩和するのに十分な量である。

【0101】

天然のアミノ酸は、下記の表２において示される従来の３文字の略語によって、明細書の全体にわたり、特定される：

【0102】

【表3】

【0103】

全明細書中で使用される略語を、下記に、それらの特定の意味とともに概説する。
℃（摂氏温度）；δ（デルタ）；％（パーセンテージ）；ブライン（ＮａＣｌ溶液）；ｂｓまたはｂｒｓ（幅広シングレット：Ｂｒｏａｄ ｓｉｎｇｌｅｔ）；Ｂｚｌ（ベンジル）；Ｃｂｚ（カルボキシベンジル）；Ｃｂｚ−Ｃｌ（クロロギ酸ベンジル）；ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＤＣＭ（ジクロロメタン）；Ｃｓ_２ＣＯ_３（炭酸セシウム）；ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）；ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）；ＤＩＰＥＡ／ＤＩＥＡ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）；ＤＭＳＯ−ｄ_６（重水素を含んだＤＭＳＯ）；ｄ（二重）；ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）；Ｅｔ_２ＮＨ（ジエチルアミン）；Ｆｍｏｃ（フルオレニルメチルオキシカルボニル）；Ｆｍｏｃ−Ｃｌ（塩化フルオレニルメチルオキシカルボニル）ｇまたはｇｒ（グラム）；ＨまたはＨ_２（水素）；Ｈ_２Ｏ（水）；ＨＯＢｔ／ＨＯＢＴ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）；ＨＣｌ（塩酸）；ｈまたはｈｒ（時間）；ＨＡＴＵ（２−（１Ｈ−７−アザベンゾトリアゾル−１−イル）−１、１、３、３−テトラメチルウランヘキサフルオロリン酸メタンアミニウム）；Ｈｚ（ヘルツ）；ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィ）；ＬＣＭＳ（液体クロマトグラフィ質量分光法）；ＭｅＯＨ／ＣＨ_３ＯＨ（メタノール）；ｍｍｏｌ（ミリモル）；Ｍ（モル濃度）；μｌ／μＬ（マイクロリットル）；ｍＬ（ミリリットル）；ｍｇ（ミリグラム）；ｍｉｎ（分）；ｍ（多重）；ｍｍ（ミリメートル）；ＭＨｚ（メガヘルツ）；ＭＳ（ＥＳ）（質量分析−エレクトロスプレー）；ｍｉｎ（分）；Ｎａ（ナトリウム）；ＮａＯＢｕ^ｔ（ナトリウムターシャリブトキシド）；ＮＨ_２ＮＨ_２．Ｈ_２Ｏ（ヒドラジン水和物）；Ｎａ_２ＳＯ_４（硫酸ナトリウム）；Ｎ_２（窒素）；ＮＭＲ（核磁気共鳴分光法）；ＮａＨＣＯ_３（重炭酸ナトリウム）；ＰｄＣ（パラジウム炭素）；１０％Ｐｄ／Ｃ（１０％パラジウム活性炭素）；Ｐｄ（ＯＨ）_２（水酸化パラジウム）；ＰＤ−Ｌ１（プログラム死リガンド１）；ＰＤ−Ｌ２（プログラム細胞死１リガンド２）；ｐｒｅｐ ＨＰＬＣ／ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（分取高速液体クロマトグラフィ）；ＰｙＢＯＰ（（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロリン酸）；ＲＴ／ｒｔ（室温）；Ｓ（一重）；^ｔＢｕ／ｔＢｕ（ターシャリブチル）ＴＥＡ／Ｅｔ_３Ｎ（トリエチルアミン）；ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）；ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィ）；ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）；ＴＦＡ／ＣＦ_３ＣＯＯＨ（トリフルオロ酢酸）；ｔ（三重）；ｔ_Ｒ（保持時間）、など

【0104】

［試験］
本発明の実施形態は、適切な材料を使用し、以下の例の手順にしたがって、化学式（Ｉ）の化合物の調製方法を提供する。当業者は、これらの化合物を調製するために、下記の調製方法の条件および工程の公知の変更を使用することができることを理解するであろう。
さらに、詳細に記載された手順を利用することよって、当業者は、本発明の追加的な化合物を調製することができる。

【0105】

出発物質は、たとえばシグマアルドリッチ社（米国またはドイツ）；ケムインペックス社（アメリカ）；Ｇ．Ｌ．バイオケム社（中国）およびスペクトロケム社（インド）のような商用供給源から、一般に入手可能である。

【0106】

化合物の精製および特性評価
分析的ＨＰＬＣ法：分析的ＨＰＬＣ法は、ＺＩＣ ＨＩＬＩＣ ２００Åカラム（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍ）、流速：１．０ｍＬ／分で行われた。使用された溶離条件は次のとおりである：バッファーＡ：５ｍｍｏｌ酢酸アンモニウム、バッファーＢ：アセトニトリル、カラム平衡化には９０％バッファーＢを用い、溶離は、３０分間で、９０％から４０％までのバッファーＢのグラジエント法により行った。

【0107】

分取ＨＰＬＣ法Ａ：
未精製物は、ＺＩＣ ＨＩＬＩＣ ２００Åカラム（２１．２ｍｍ×１５０ｍｍ、５μｍ）を使用した分取ＨＰＬＣ法によって精製された。使用した溶離条件は、以下のとおりである。溶離剤：Ａ：５ｍｍｏｌ酢酸アンモニウム、Ｂ：アセトニトリル、流速：１８ｍＬ／分。化合物は、グラジエント溶離法によって溶離され、０−３分＝９０％バッファーＢ、３−２０分＝９０−４０％バッファーＢであり、流速は２０ｍＬ／分であった。

【0108】

分取ＨＰＬＣ法Ｂ：
分取ＨＰＬＣ法は、ＺＩＣ ＨＩＬＩＣ ２００Åカラム（１０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍ）上で、流速５．０ｍＬ／分で行われた。使用した溶離条件は、以下のとおりである：バッファーＡ：５ｍｍｏｌ酢酸アンモニウム、バッファーＢ：アセトニトリル、カラム平衡化には９０％バッファーＢを用い、溶離は、２０分間で、９０％から４０％までのバッファーＢのグラジエント法により行った。ＬＣＭＳは、Ｇ１３１５Ｂ ＤＡＤを有するアジレント１１００シリーズＨＰＬＣを備えたＡＰ１ ２０００ＬＣＭＳ／ＭＳトリプル四重極システム（アプライドバイオシステムズ社）上で、マーキュリーＭＳカラムを使用して、またはＧ１３１５Ｂ ＤＡＤを有するアジレント１１００シリーズＨＰＬＣを備えたアジレントＬＣＭＳＤ ＶＬ シングル四重極システムを用い、マーキュリーＭＳカラムを使用して、またはＳＰＤ−２０Ａ ＤＡＤを有するプロミネンスＵＦＬＣシステムを備えた島津製作所ＬＣＭＳ２０２０シングル四重極システムを使用して、実施された。

【0109】

実施例１：
化合物１の合成
ステップ１ａ

【0110】

【化13】

【0111】

水酸化ナトリウム（１２．２ｇ、３０５ｍｍｏｌ）およびＣｂｚ−Ｃｌ（１２．５ｇ、７３ｍｍｏｌ）が、水（１００ｍＬ）に対し化合物１ａ（１０．０ｇ、６１ｍｍｏｌ）の溶液に加えられ、室温で３時間撹拌された。反応の完了はＴＬＣ分析によって確認された。反応質量はクエン酸溶液と酢酸エチルとの間で分割された。有機質層は、水、ブラインで洗浄され、Ｎａ_２ＳＯ_４の上で乾燥され、さらに減圧下で蒸発させて、１１ｇの化合物１ｂを産生した（収率：６１．１％）。ＬＣＭＳ：２９８．０（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0112】

ステップ１ｂ：

【0113】

【化14】

【0114】

ＤＩＰＥＡ（３．５ｇ、２６．８ｍｍｏｌ）が、ＤＭＦ（５０ｍＬ）に対し化合物１ｂ（４．０ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（５．６ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液にゆっくり加えられ、さらに室温で５分間撹拌された。上記反応液に、Ｌ−Ｓｅｒ（^ｔＢｕ）−ＯＭｅ・ＨＣｌ（３．５ｇ、２０．１ｍｍｏｌ）がゆっくり加えられ、室温で１２時間撹拌された。反応の完了はＴＬＣ分析によって確認された。反応混合液は氷で急冷され、沈澱した固体は濾過され、ＣＨ_２Ｃｌ_２で再結晶化され、化合物１ｃを６ｇ産生した：ＬＣＭＳ：４５４．８（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0115】

ステップ１ｃ：

【0116】

【化15】

【0117】

９９％ヒドラジン水和物溶液（１０ｍＬ）が、メタノール（５０ｍＬ）に対し化合物１ｃ（６ｇ）の撹拌された溶液にゆっくり加えられ、さらに室温で２時間撹拌された。反応の完了は、ＴＬＣによって確認された。反応混合物は減圧下で蒸発させ、５．８ｇの化合物１ｄを産生した。ＬＣＭＳ：４５５．０（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0118】

ステップ１ｄ：

【0119】

【化16】

【0120】

ＤＩＰＥＡ（３．３ｇ、２５．４ｍｍｏｌ）が、ＤＭＦ（５０ｍＬ）に対し化合物１ｄ（５．８ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（５．８ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液にゆっくり加えられ、さらに室温で５分間撹拌された。Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｓｎ−ＯＨ（４．９ｇ、１４．０ｍｍｏｌ）がさらに反応混合物に加えられ、室温で１２時間撹拌された。反応の完了はＴＬＣ分析によって確認された。その後、反応液は氷で急冷され、沈澱した固体は濾過され、さらにＣＨ_２Ｃｌ_２で再結晶化され、５．９ｇの化合物１ｅを産生した。ＬＣＭＳ：７９１．０（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0121】

ステップ１ｅ：

【0122】

【化17】

【0123】

化合物１ｅのＦｍｏｃ基［ＣＨ_２Ｃｌ_２（６０ ｍＬ）に対し５．９ｇ］が、ジエチルアミン（６０ｍＬ）を使用して脱保護され、反応の完了はＴＬＣ分析によって確認された。反応混合物は減圧下で蒸発させ、１．６ｇの化合物１ｆを産生した。ＬＣＭＳ：５６８．８（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0124】

ステップ１ｆ：

【0125】

【化18】

【0126】

化合物１ｌ（１．３ｇ、３．０ｍｍｏｌ）および化合物１ｆ（１．６０ｇ、２．８ｍｍｏｌ）が、ＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解され、室温で撹拌された。カップリングが、上記反応液にトリエチルアミン（０．５７ｇ、５．６ｍｍｏｌ）の追加によって開始され、この反応は、室温で１２時間撹拌して続けられた。反応の完了はＴＬＣ分析によって確認された。有機質層はＮａＨＣＯ_３、クエン酸溶液、ブラインで洗浄され、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥され、減圧下で蒸発させ、０．４５ｇの化合物１ｇを産生した。

【0127】

ステップ１ｇ：

【0128】

【化19】

【0129】

Ｃｂｚ基とベンジルエステルの脱保護が、メタノール中の化合物１ｇ（０．４５ｇ）上で、パラジウムヒドロキシド（０．５ｇ）を使用し、室温で１時間実行された。反応の完了はＴＬＣ分析によって確認された。パラジウムヒドロキシドはセライト（登録商標）ベッド濾過によって除去され、濾液が減圧下で蒸発され、０．３４ｇの化合物１ｈを産生した。ＬＣＭＳ：６３６．０（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0130】

ステップ１ｈ：

【0131】

【化20】

【0132】

化合物１ｈ（０．１ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）の環化が、ＴＨＦ（５０ｍＬ）中で、ＨＯＢＴ（０．０６ｇ、０．４７ｍｍｏｌ）およびＰｙＢＯＰ（０．２４ｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を使用して行なわれた。この反応は、ＤＩＰＥＡ（０．０６ｇ、０．４７ｍｍｏｌ）をゆっくり加えることによって開始され、さらに室温で１２時間撹拌された。反応混合物は、ジエチルエーテルで蒸発および洗浄され、０．０５ｇの化合物１ｉを産生した。ＬＣＭＳ：６１７．９（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0133】

ステップ１ｉ：

【0134】

【化21】

【0135】

化合物１ｉ［ＣＨ_２Ｃｌ_２（０．９ ｍＬ）中、０．０８ｇ］上の酸感応性保護基が、ＴＦＡ（０．９ｍＬ）を使用して除去された。反応混合物は室温で４時間で撹拌され、引き続きジエチルエーテルで蒸発および洗浄して、０．０５ｇの未精製化合物１が産生された。未精製の固体材料は、下記の実験条件に述べる分取ＨＰＬＣ法Ａを使用して精製された（収量：９ｍｇ）。ＬＣＭＳ：５０６．４（Ｍ＋Ｈ）⁺；ＨＰＬＣ：ｔ_Ｒ＝１２．３分。

【0136】

化合物１ｌ（ＮＯ_２−Ｃ_６Ｈ_４−ＯＣＯ−Ｔｈｒ（^ｔＢｕ）−ＯＢｚｌ）の合成：

【0137】

【化22】

【0138】

ＤＭＦ１００．０ｍＬに対しＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（^ｔＢｕ）−ＯＨ（１５．０ｇ、３７．７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｃｓ_２ＣＯ_３（１４．８ｇ、４５．２ｍｍｏｌ）が加えられ、得られた混合物は０℃まで冷却された。冷却された反応混合物に対し臭化ベンジル（７．７４ｇ、３４５．２ｍｍｏｌ）が加えられ、この溶液は、氷温で３０分間撹拌されたのち、室温で１２時間撹拌された。反応混合物はさらに減圧下で濃縮され、酢酸エチル（１５０ｍＬ）で希釈された。有機質層は、水（２×１００ｍＬ）、ブライン（１×１００ｍＬ））で洗浄され、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥された。ろ過された溶液は、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離剤：０−３０％酢酸エチルのヘキサン溶液）によって濃縮および精製され、１８．５ｇの中間体１ｊを白色固形物として産生した。
ＬＣＭＳ：４３３．１（Ｍ−Ｏ^ｔＢｕ＋Ｈ）⁺。ＣＨ_２Ｃｌ_２（４０．０ｍＬ）中の化合物１ｊ（１０．０ｇ、２０．５ｍｍｏｌ）上のＦｍｏｃ基は、室温で１時間、ジエチルアミン（４０．０ｍＬ）とともに撹拌することによって脱保護された。得られた溶液は真空中で濃縮され、厚みのある残渣は、中性アルミナ上のカラムクロマトグラフィ（溶離剤：０−５０％酢酸エチルのヘキサン溶液、次いで０−５％メタノールのクロロホルム溶液）によって精製され、３．５ｇの中間体１ｋ（収率：７０％）を産生した。ＬＣＭＳ：２６６．５（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0139】

【化23】

【0140】

ＴＥＡ（１．２ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）が、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３０ｍＬ）に対し中間体１ｋ（１．６ｇ、６．０ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液に加えられた。ＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍＬ）に対し４ニトロフェニルクロロホルメート（１．３ｇ、６．６ｍｍｏｌ）の溶液が、上記の撹拌された溶液に加えられ、反応は室温で１２時間継続された。反応の完了はＴＬＣ分析によって確認された。反応の完了後、反応混合物は、ＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ）で希釈され、１．０Ｍの重硫酸ナトリウム（５０ｍＬ×２）および１．０Ｍの炭酸ナトリウム（５０ｍＬ×２）で洗浄され、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥され、減圧下で蒸発させて未精製化合物１ｌを産生し、これは、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離剤：０−２０％酢酸エチルのヘキサン溶液）によってさらに精製され、０．８ｇの化合物１ｌを産生した。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６、３００ＭＨｚ）：δ１．０４（ｓ、９Ｈ）、１．１６（ｄ、３Ｈ）、４．１１（ｍ、１Ｈ）、５．１１（ｍ、３Ｈ）、６．９１（ｄ、２Ｈ）、７．４０（ｍ、５Ｈ）、８．１０（ｄ、２Ｈ）および８．２６（ｂｒｓ、１Ｈ）。

【0141】

実施例２：化合物２の合成
ステップ２ａ：

【0142】

【化24】

【0143】

ＤＩＰＥＡ（２．７１ｇ、２１ｍｍｏｌ）が、ＤＭＦ（３０ｍＬ）に対し、化合物１ｂ（３．１２ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（４．４１ｇ、１１．６ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液にゆっくり加えられ、室温で５分間撹拌された。上記反応混合物に対し、Ｄ−Ｔｈｒ（^ｔＢｕ）−ＯＭｅ・ＨＣｌ（２．０ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）がゆっくり加えられ、室温で１２時間撹拌された。反応の完了はＴＬＣ分析によって確認された。その後、反応混合物は氷で急冷され、沈殿が濾過され、ＣＨ_２Ｃｌ_２で再結晶化されて、４．２ｇの化合物２ａを産生した。ＬＣＭＳ：４９１．２（Ｍ＋Ｎａ）⁺。

【0144】

ステップ２ｂ：

【0145】

【化25】

【0146】

９９％のヒドラジン水和物溶液（５ｍＬ）が、メタノール（４０ｍＬ）に対し化合物２ａ（４．２ｇ）の撹拌された溶液にゆっくり加えられ、反応の完了はＴＬＣ分析によって確認された。反応混合物は減圧下で蒸発され、４．２ｇの化合物２ｂを産生した（収量：９０％）。ＬＣＭＳ：４６９．４（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0147】

ステップ２ｃ：

【0148】

【化26】

【0149】

ＤＩＰＥＡ（２．７ ｍＬ、２０．９ｍｍｏｌ）が、ＤＭＦ（５０ｍＬ）に対し化合物２ｂ（４．９ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（４．８ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液にゆっくり加えられた。上記の撹拌された溶液に対し、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（６．２ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）が加えられ、さらに室温で１２時間撹拌された。反応の完了はＴＬＣ分析によって確認された。反応混合物は、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈され、１．０Ｍ炭酸ナトリウム（２０ｍＬ×２）、１０％クエン酸（２０ｍＬ×２）、水（２０ｍＬ×２）で洗浄され、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥され、さらに減圧下で蒸発されて１０ｇの未精製中間体２ｃが産生され、さらにシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離剤：０−５％ＭｅＯＨのＥｔＯＡｃ溶液）によって精製され、５ｇの化合物２ｃを産生した。ＬＣＭＳ：１０４７．７（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0150】

ステップ２ｄ：

【0151】

【化27】

【0152】

化合物２ｃ［（３．２ｇ）ＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍＬ）中］のＦｍｏｃ脱保護が、ジエチルアミン（１０ｍＬ）を使用して実行された。反応の完了はＴＬＣ分析によって確認された。得られた溶液は、減圧下で蒸発させ、１．２ｇの化合物２ｄを産生した。

【0153】

ステップ２ｅ：

【0154】

【化28】

【0155】

トリエチルアミン（０．３２ｇ、３．２ｍｍｏｌ）が、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中で、化合物２ｄ（１．３ｇ、１．６ｍｍｏｌ）および化合物２ｈ（０．７９ｇ、１．９ｍｍｏｌ）のカップリングを開始させるために、ゆっくり加えられた。得られた溶液は、さらに室温で１２時間撹拌され、反応の完了はＴＬＣ分析によって確認された。有機質層は、ＮａＨＣＯ_３、クエン酸溶液、ブラインで洗浄され、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥され、減圧下で蒸発させ、１．３ｇの化合物２ｅを産生した。

【0156】

ステップ２ｆ：

【0157】

【化29】

【0158】

化合物２ｅ（１．３ｇ）に対するＣｂｚ基とベンジルエステルの脱保護が、メタノール中で、パラジウムヒドロキシド（１．０ｇ）を使用して、室温で１時間実行された。反応の完了はＴＬＣ分析によって確認された。パラジウムヒドロキシドは、セライト（登録商標）ベッド濾過によって除去され、濾液は減圧下で蒸発させて０．４５ｇの化合物２ｆを産生した。ＬＣＭＳ：８７８．４（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0159】

ステップ２ｇ：

【0160】

【化30】

【0161】

ＤＩＰＥＡ（０．２ｇ、１．５ｍｍｏｌ）が、ＴＨＦ（２００ｍＬ）に対し、化合物２ｆ（０．４５ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（０．２１ｇ、１．５３ｍｍｏｌ）およびＰｙＢＯＰ（０．８ｇ、１．５３ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液にゆっくり加えられた。反応混合物は、さらに室温で１２時間撹拌された。反応の完了はＴＬＣ分析によって確認された。反応混合物は蒸発させ、ジエチルエーテルで洗浄され、０．４１ｇの中間体２ｇを産生した。ＬＣＭＳ：８６０．７（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0162】

ステップ２ｈ：

【0163】

【化31】

ＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍＬ）に対し化合物２ｇ（０．４ｇ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（５ｍＬ）および触媒量のトリイソプロピルシランが加えられ、室温で３時間撹拌された。得られた溶液は真空中で濃縮され、０．２ｇの未精製化合物２を産生した。未精製の固形物質は、下記実験条件に記載した分取ＨＰＬＣ方−Ｂを使用して、精製された（収量：１０ｍｇ）ＬＣＭＳ：５０６．６（Ｍ＋Ｈ）⁺；ｔ_Ｒ＝１２．４分。

【0164】

２ｈ（ＮＯ_２−Ｃ_６Ｈ_４−ＯＣＯ−Ｄ−Ｓｅｒ（^ｔＢｕ）−ＯＢｚｌ）の合成：
化合物が、実施例１、化合物１ｌに例示したのと同様の方法を使用し、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（^ｔＢｕ）−ＯＨの代わりに、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｓｅｒ（^ｔＢｕ）−ＯＨを使用して合成され、１ｇの未精製物質２ｈを産生した。

【0165】

実施例３：
化合物３の合成
ステップ３ａ：

【0166】

【化32】

【0167】

１，４−ジオキサン（５０ｍＬ）に対し化合物１ａ（５．０ｇ、３０．６ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液に、炭酸ナトリウム（１０ｍＬ水に対し８．１２ｇ、７６．５ｍｍｏｌの水溶液）および（Ｂｏｃ）_２Ｏ（９．９８ ｍＬ、４５．７ｍｍｏｌ）が加えられ、室温で１２時間撹拌された。
反応の進行はＴＬＣによってモニターされた。反応質量はジエチルエーテルおよび水との間で分割された。その後、水層は、３Ｎ ＨＣｌ溶液によって酸性化（ｐＨ＝３）され、ＤＣＭ（２×２００ｍＬ）で抽出された。有機質層は、水、ブラインで洗浄され、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾され、減圧下で蒸発させて、５０ｇの純粋な３ａ（収率：６２．１％）を産生した。ＬＣＭＳ：２６３．０（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0168】

ステップ３ｂ：

【0169】

【化33】

ＤＩＰＥＡ（６．５ ｍＬ、３７．８ｍｍｏｌ）が、ＤＭＦ（７５ｍＬ）に対し、化合物３ｂ（５ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）化合物３ｃ（２．７２ｇ、１５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（２．５５ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ．ＨＣｌ（３．６２ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液に、ゆっくりと加えられた。反応混合物は、さらに室温で１２時間撹拌された。反応の進行はＴＬＣ分析によって確認された。反応質量は酢酸エチルと水との間で分割された。有機質層は水、ブラインで洗浄され、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥され、減圧下で蒸発させて、未精製物を産生した。未精製化合物は、溶離液としてヘキサン／酢酸エチル（４０：６０）を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィ（６０−１２０メッシュ）によって精製され、５．２ｇの化合物３ｄを産生した（収率：７１．０％）。ＬＣＭＳ：５６０．６（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0170】

ステップ３ｃ：

【0171】

【化34】

【0172】

乾燥ＤＣＭ中における化合物３ｄ（５ｇ、８．９ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液に、ジエチルアミン（５０ｍＬ）が−１０℃で滴下的に加えられ、室温で１時間撹拌された。反応の完了後、混合物は減圧下で蒸発させて、未精製化合物を得た。未精製物は、ｎ−ペンタン／ジエチルエーテル（１：１）で精製され、洗浄され、高真空下で乾燥され、３．５ｇの化合物３ｅを産生した。ＬＣＭＳ：３３８．５８（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0173】

ステップ３ｄ：

【0174】

【化35】

【0175】

ＮＭＭ（１．４ ｍＬ、１４．０ｍｍｏｌ））が、０℃で、ＤＭＦ（７５ｍＬ）に対し化合物３ａ（３ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）、化合物３ｅ（４．３ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（６．５ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液にゆっくり加えられた。反応混合物は、さらに室温で６時間撹拌された。反応の進行はＴＬＣによってモニターされた。完了後、反応質量は酢酸エチルと水との間で分割された。有機質層は、水、ブラインで洗浄され、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥され、減圧下で蒸発させて、未精製化合物を得た。未精製物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離剤：５０％ヘキサンの酢酸エチル溶液）によって精製され、４．８ｇの化合物３ｆを産生した。ＬＣＭＳ：５８３．７（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0176】

ステップ３ｅ：

【0177】

【化36】

【0178】

ＭｅＯＨ中、化合物３ｆ（４．５ｇ、７．７ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液に、Ｐｄ／Ｃ（２．０ｇ）がゆっくり加えられ、水素雰囲気下、室温で４時間撹拌された。反応の進行はＴＬＣによってモニターされた。完了後、反応物は、セライト（登録商標）によって濾過され、ＭｅＯＨ（２×１５０ｍＬ）で洗浄された。得られた濾液は、減圧下で蒸発させ、３ｇの化合物３ｇを産生した。ＬＣＭＳ：４４８．６（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0179】

ステップ３ｆ：

【0180】

【化37】

【0181】

ＤＭＦ（７５ｍＬ）に対し、Ｃｂｚ−Ｄ−Ａｓｎ−ＯＨ（１．７８ｇ、６．７ｍｍｏｌ）および化合物３ｇ（３．０ｇ、６．８ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液に、ＤＣＣ（４．１２ｇ、２０．３ｍｍｏｌ）およびＨＯＢＴ（１．８ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）が、０℃でゆっくり加えられた。反応混合物は室温で４８時間撹拌された。反応の進行はＴＬＣによってモニターされた。完了後、反応質量は酢酸エチルと水との間で分割された。有機質層は水、ブラインで洗浄され、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥され、減圧下で蒸発させて、未精製物を産生した。未精製化合物は、シリカゲル（６０−１２０メッシュ）カラムクロマトグラフィ（溶離剤：４％ＭｅＯＨのＤＣＭ溶液）によって精製され、２．５ｇの化合物３ｈを産生した。ＬＣＭＳ：６９７．５０（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0182】

ステップ３ｇ：

【0183】

【化38】

【0184】

ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）に対し化合物３ｈ（２．５ｇ、３．６ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１．２ｇ）が加えられ、水素雰囲気下、室温で４時間撹拌された。反応の進行はＴＬＣによってモニターされた。完了後、反応物はセライト（登録商標）によってろ過され、ＭｅＯＨ（２×１５０ｍＬ）で洗浄された。得られた濾液は、減圧下で蒸発させて、１．５ｇの化合物３ｉを産生した。ＬＣＭＳ：５６３．６（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0185】

ステップ３ｈ：

【0186】

【化39】

【0187】

化合物３ｉ（１．３ｇ、２．３ｍｍｏｌ）と、ＤＭＦ（２５ｍＬ）中ＴＥＡ（０．４３ｍＬ、３．５ｍｍｏｌ）が、−１０℃で、３ｊ（１．１ｇ、２．６ｍｍｏｌ）の溶液にゆっくり滴下的に加えられた。この混合物は、さらに室温で２時間撹拌された。反応の進行はＴＬＣによってモニターされた。完了後、反応質量は酢酸エチルと水との間で分割された。有機質層は、ＮａＨＣＯ_３、クエン酸溶液およびブラインで洗浄され、次いでこの有機質層は、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥され、減圧下で蒸発させて、未精製物を得た。未精製物は、シリカゲル（６０−１２０メッシュ）カラムクロマトグラフィ（溶離液として、ヘキサン／酢酸エチル（１０：９０））によって精製され、１．２ｇの化合物３ｋを産生した。ＬＣＭＳ：８４０．６（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0188】

ステップ３ｉ：

【0189】

【化40】

【0190】

ＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍＬ）に対し化合物３ｋ（１．０ｇ、１．２ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）と触媒量のトリイソプロピルシランとが加えられ、室温で３時間撹拌されて、酸感応性保護基を除去した。得られた溶液は真空中で濃縮され、ジエチルエーテルで洗浄して、１．０ｇの未精製化合物３ｌを産生した。ＬＣＭＳ：６２８．６５（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0191】

ステップ３ｊ：

【0192】

【化41】

【0193】

ＴＨＦ中、化合物３ｌ（１．０ｇ、１．５ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液に、ＰｙＢＯＰ（２．４ｇ、４．７ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（０．６および４．７ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．８ｍＬ、４．７ｍｍｏｌ）がゆっくり加えられ、室温で１２時間撹拌された。反応質量は水と酢酸エチルとの間で分割された。有機質層は水、ブラインで洗浄され、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥され、減圧下で蒸発させて、未精製物を得た。未精製化合物は、ジエチルエーテルで洗浄され、０．８ｇの化合物３ｍを産生した。ＬＣＭＳ：６１０．５（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0194】

ステップ３ｋ：

【0195】

【化42】

【0196】

ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）に対し化合物３ｍ（０．８ｇ、１．３ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液に、Ｐｄ（ＯＨ）_２（０．４ｇ）が加えられ、水素雰囲気下、室温で４時間撹拌された。反応の進行はＴＬＣによってモニターされた。完了後、反応質量はセライト（登録商標）によって濾過され、ＭｅＯＨ（２×１５０ｍＬ）で洗浄された。得られた濾液は、減圧下で蒸発させ、０．７ｇの化合物３を産生した。ＬＣＭＳ：５２０．５（Ｍ＋Ｈ）⁺；ＨＰＬＣ：ｔ_Ｒ＝９．９分、

【0197】

中間体３ｃの合成：

【0198】

【化43】

【0199】

ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中、化合物３ｎ（４ｇ、８８．３ｍｍｏｌ）および化合物３ｏ（１０．２ｍＬ、７１．２ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液に、ＴＥＡ（１４．４ｍＬ、１０５ｍｍｏｌ）が−７８℃で滴下的に加えられた。反応混合物は、室温に到達させて、１２時間撹拌された。反応の進行はＴＬＣによってモニターされた。完了後、反応質量は水とＤＣＭとの間で分割された。有機質層は、水、ブラインで洗浄され、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥され、減圧下で蒸発させて未精製化合物を産生し、シリカゲル（６０−１２０メッシュ）カラムクロマトグラフィ（溶離剤：８０％酢酸エチルのヘキサン溶液）によって精製され、１０ｇの化合物３ｃを産生した。ＬＣＭＳ：１８１．１（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0200】

３ｊ（ＮＯ_２−Ｃ_６Ｈ_４−ＯＣＯ−Ｄ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）―Ｏ^ｔＢｕ）の合成：
この化合物は、実施例１（化合物１ｋ）に例示されるのと同様の方法を用い、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（^ｔＢｕ）−（ＯＨ）の代わりにＦｍｏｃ−Ｄ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）Ｏ^ｔＢｕを使用して合成され、１．５ｇの化合物３ｊを産生した。

【0201】

実施例４：
化合物４の合成

【0202】

【化44】

【0203】

この化合物は、実施例２（化合物２）に示されるのと同様の方法を用い、化合物１ａの代わりに７−アミノヘプタン酸を使用して合成され、表題化合物の０．３ｇの未精製物を産生した。精製固形物は、下記実験条件で記述する分取ＨＰＬＣを使用して精製された。ＬＣＭＳ：４８８．２（Ｍ＋Ｈ）⁺；ＨＰＬＣ：ｔ_Ｒ＝１１．９分。

【0204】

下記表３中の化合物は、前述の実験方法に基づいて、調整された。

【0205】

【表4】

【0206】

【表5】

【0207】

下記表４に示される化合物は、前述したのと同様の次の方法により、当業者に公知の適切な変更を用いて、調整することができ、本出願の範囲に含まれる。

【0208】

【表6】

【0209】

【表7】

【0210】

実施例５：
組換えＰＤ−Ｌ１存在下でのマウス脾細胞増殖のレスキュー
組換えマウスＰＤ−Ｌ１（ｒｍ−ＰＤＬ−１、カタログ番号：１０１９−Ｂ７−１００；Ｒ＆Ｄシステムズ）が、ＰＤ−Ｌ１源として使用された。

【0211】

要件：
生後６−８週のＣ５７ＢＬ６マウスから採取したマウス脾細胞；ＲＰＭＩ １６４０（ＧＩＢＣＯ、Ｃａｔ＃１１８７５）；高濃度グルコースのＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ、Ｃａｔ＃Ｄ６４２９）；ウシ胎児血清［Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｃａｔ＃ＳＨ３００７１．０３］；ペニシリン（１００００ユニット／ｍｌ）−ストレプトマイシン（１０，０００μｇ／ｍｌ）液（ＧＩＢＣＯ、Ｃａｔ＃１５１４０−１２２）；ＭＥＭナトリウムピルベート溶液１００ｍＭ（１００×）液（ＧＩＢＣＯ Ｃａｔ＃１１３６０）；非必須アミノ酸（ＧＩＢＣＯ Ｃａｔ＃１１１４０）；Ｌ−グルタミン（ＧＩＢＣＯ、Ｃａｔ＃２５０３０）；抗−ＣＤ３抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ−１６−００３２）；抗−ＣＤ２８抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ−１６−０２８１）；ＡＣＫ溶解バッファー（１ｍＬ）（ＧＩＢＣＯ、Ｃａｔ＃−Ａ１０４９２）；ヒストパック（密度−１．０８３ｇｍ／ｍＬ）（ＳＩＧＭＡ １０８３１）；トリパンブルー溶液（ＳＩＧＭＡ−Ｔ８１５４）；２ｍＬＮｏｒｍＪｅｃｔルアーロック注射器―（Ｓｉｇｍａ２０１４−１２）；４０μｍナイロンセルストレーナ（ＢＤ ＦＡＳＬＣＯＮ３５２３０）；血球計（Ｂｒｉｇｈｔ ｌｉｎｅ−ＳＩＧＭＡ Ｚ３５９６２９）；ＦＡＣＳバッファ−（ＰＢＳ／０．１％ＢＳＡ）：０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（ＳＩＧＭＡ Ａ７０５０）およびアジ化ナトリウム（ＳＩＧＭＡ ０８５９１）を含む、燐酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）ｐＨ７．２（ＨｉＭｅｄｉａ ＴＳ１００６）；ＣＦＳＥの５ｍＭ貯蔵液：ＣＦＳＥ貯蔵液は、凍結乾燥されたＣＦＳＥを、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ Ｃ_２Ｈ_６ＳＯ、ＳＩＧＭＡ−Ｄ−５８７９）の１８０μＬで希釈することにより調製され、後の使用のために、チューブへ等分された。作用濃度が１０μｍから１μｍまで滴定された。（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ−６５０８５０−８５）；０．０５％トリプシンおよび０．０２％ＥＤＴＡ（ＳＩＧＭＡ ５９４１７Ｃ）；９６−ウェルフォーマットＥＬＩＳＡプレート（コーニングＣＬＳ３３９０）；ＢＤファクスカリバー（Ｅ６０１６）；組換えマウスＢ７−Ｈ１／ＰＤＬ１ Ｆｃキメラ（ｒｍ−ＰＤ−Ｌ１Ｃａｔ番号：１０１９−Ｂ７−１００）。

【0212】

プロトコル
脾細胞の調整および培養：
４０μｍセルストレーナ内でマウス脾臓を擦り潰すことにより、５０ｍＬファルコンチューブ内で培養された脾細胞は、さらに１ｍｌのＡＣＫ溶解バッファーを用いて室温で５分間処理された。９ｍＬのＲＰＭＩ完全培地で洗浄した後、細胞は、１５ｍＬチューブ中で、３ｍｌの１×ＰＢＳ中で再懸濁化された。３ｍＬのヒストパックが、チューブの底に、上層の脾細胞懸濁液を乱さないように注意深く加えられた。室温で２０分間８００×ｇで遠心分離された後、脾細胞の不透明な層が、層を乱したり／混じり合ったりしないよう、注意深く集められた。脾細胞は、冷えた１×ＰＢＳで２度洗浄され、その後、トリパンブルー除去法を使用して、全細胞数計測が行われ、さらに、細胞に基づいた分析にさらに使用された。

【0213】

脾細胞はＲＰＭＩ完全培地（ＲＰＭＩ＋１０％ウシ胎児血清＋１ｍＭナトリウムピルベート＋１０，０００ユニット／ｍＬペニシリンおよび１０，０００μｇ／ｍＬストレプトマイシン）において培養され、３７℃で５％炭酸ガスのＣＯ_２インキュベータ中に保持された。

【0214】

ＣＦＳＥ増殖反応測定：
ＣＦＳＥは、細胞内へ受動的に拡散し、細胞内のタンパク質に結合する染料である。採取された脾細胞の１×１０^６細胞／ｍｌが、あらかじめ暖められた１×ＰＢＳ／０．１％ＢＳＡ溶液中の、５μｍのＣＦＳＥで、３７℃で１０分間処置された。超過ＣＦＳＥは、細胞に対し５倍量の氷冷培地を用いて急冷し、さらに５分間氷温に保持した。ＣＦＳＥのラベルが付された脾細胞は、氷冷した完全ＲＰＭＩ培地でさらに３回洗浄した。ＣＦＳＥラベルの１×１０^５脾細胞は、ＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞（高濃度グルコースＤＭＥＭ培地で培養された１×１０^５細胞）を含むウェルまたは組換えのヒトＰＤ-Ｌ１（１００ｎｇ／ｍＬ）、および試験化合物に加えられた。脾細胞は、抗マウスＣＤ３および抗マウスＣＤ２８抗体（各１μｇ／ｍＬ）で刺激され、さらに培養物は、５％炭酸ガスの条件で、３７℃７２時間保温された。細胞は、採取され、氷冷したＦＡＣＳバッファーで３回洗浄した。そして％増殖が、流動細胞計測法により、４８８ｎｍの励起、５２１ｎｍ放射フィルタを用いて、分析された。

【0215】

データ編集、処理および推論：
パーセント脾細胞増殖は、細胞クエストＦＡＣＳプログラムを使用して分析され、化合物による脾細胞増殖のレスキュー率は、％バックグラウンド増殖値の控除後、（陽性対照）を１００％として、刺激された脾細胞増殖％の標準化後に評価された。
バックグラウンド増殖：脾細胞＋抗ＣＤ３／ＣＤ２８＋ＰＤ−Ｌ１
刺激脾細胞：脾細胞＋抗ＣＤ３／ＣＤ２８刺激
化合物増殖：脾細胞＋抗ＣＤ３／ＣＤ２８＋ＰＤ−Ｌ１＋化合物
化合物効果は、リガンドの存在下で抗ＣＤ３／ＣＤ２８に刺激された脾細胞に対し、化合物の必要な濃度を加えることにより検査された。（ＰＤ−Ｌ１）（表５）

【0216】

表：５
ＣＦＳＥに基づいた分析を使用して、組換えマウスＰＤＬ１によって抑制されたマウス脾細胞増殖のレスキュー：

【0217】

【表8】