特許 6487051 ポリマーナノ粒子の凍結乾燥物、及びその製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6487051

(24)【登録日】2019年3月1日

(45)【発行日】2019年3月20日

(54)【発明の名称】ポリマーナノ粒子の凍結乾燥物、及びその製造方法

(51)【国際特許分類】

   C08J 3/12 20060101AFI20190311BHJP

   A61K 9/19 20060101ALI20190311BHJP

   A61K 47/30 20060101ALI20190311BHJP

   A61K 47/34 20170101ALI20190311BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20190311BHJP

   B82Y 5/00 20110101ALI20190311BHJP

【ＦＩ】

   C08J3/12 ZCFD

   A61K9/19

   A61K47/30

   A61K47/34

   A61K47/26

   B82Y5/00

【請求項の数】16

【全頁数】22

(21)【出願番号】特願2017-535447(P2017-535447)

(86)(22)【出願日】2015年12月28日

(65)【公表番号】特表2018-506518(P2018-506518A)

(43)【公表日】2018年3月8日

(86)【国際出願番号】KR2015014318

(87)【国際公開番号】WO2016108534

(87)【国際公開日】20160707

【審査請求日】2017年8月29日

(31)【優先権主張番号】10-2014-0194156

(32)【優先日】2014年12月30日

(33)【優先権主張国】KR

(73)【特許権者】

【識別番号】511285358

【氏名又は名称】サムヤン バイオファーマシューティカルズ コーポレイション

【氏名又は名称原語表記】ＳＡＭＹＡＮＧ ＢＩＯＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ

(74)【代理人】

【識別番号】110002837

【氏名又は名称】特許業務法人アスフィ国際特許事務所

(74)【代理人】

【識別番号】100075409

【弁理士】

【氏名又は名称】植木 久一

(74)【代理人】

【識別番号】100129757

【弁理士】

【氏名又は名称】植木 久彦

(74)【代理人】

【識別番号】100115082

【弁理士】

【氏名又は名称】菅河 忠志

(74)【代理人】

【識別番号】100125243

【弁理士】

【氏名又は名称】伊藤 浩彰

(74)【代理人】

【識別番号】100125173

【弁理士】

【氏名又は名称】竹岡 明美

(72)【発明者】

【氏名】リ，サウォン

(72)【発明者】

【氏名】キム，ギョンヘ

(72)【発明者】

【氏名】ソ，ミンヒョ

【審査官】 芦原 ゆりか

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１２−５１３９８５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００７−５３６２１９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００７／０３７３３０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開２００８−２３１０６７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１２／０４３７００（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２０１５−５１４７１４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００７−５２６３２９（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０８Ｊ ３／００−２８

Ｃ０８Ｌ

Ｃ０８Ｋ

Ａ６１Ｋ ９／００−９／７２，３１／３３−３３／４４，

４７／００−４７／６９

Ｂ８２Ｙ ５／００

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ポリマーナノ粒子の溶液を凍結乾燥処理してポリマーナノ粒子の凍結乾燥物を製造する方法であって、
前記ポリマーナノ粒子の溶液は、親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）を含むＡ−Ｂ、Ａ−Ｂ−Ａ、又はＢ−Ａ−Ｂ型の両親媒性ブロック共重合体、
カルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体、及び
凍結乾燥補助剤を含み、
前記ポリマーナノ粒子の溶液のポリマー濃度は１２０ｍｇ／ｍＬ以下であり、
前記凍結乾燥処理は、
ａ）前記ポリマーナノ粒子の溶液を−１０〜−４５℃の温度範囲内で凍結する第１凍結工程、
ｂ）前記第１凍結工程の生成物を−２５〜０℃の温度範囲まで昇温するアニーリング工程、
ｃ）前記アニーリング工程の生成物を−１０〜−４５℃の温度範囲内で凍結する第２凍結工程、
ｄ）前記第２凍結工程の生成物を０℃未満の温度で、減圧下で乾燥させる第１乾燥工程、及び
ｅ）前記第１乾燥工程の生成物を０℃以上の温度で、減圧下で乾燥させる第２乾燥工程を含み、
前記ポリマーナノ粒子の凍結乾燥物は、大気圧下で水性溶媒を用いて再構成する場合に、５分以内に再構成されるものであるポリマーナノ粒子の凍結乾燥物の製造方法。

【請求項2】

前記凍結乾燥処理において、
前記第１凍結工程は、初期温度０〜３５℃、最終温度−１０〜−４５℃、降温時間０．５〜２４時間、及び降温後の保持時間０．５〜２４時間の条件で行い、
前記アニーリング工程は、初期温度−１０〜−４５℃、最終温度−２５〜０℃、昇温時間０．５〜２４時間、及び昇温後の保持時間０．２〜１２時間の条件で行い、
前記第２凍結工程は、初期温度−２５〜０℃、最終温度−１０〜−４５℃、降温時間０．５〜２４時間、及び降温後の保持時間１〜２４時間の条件で行い、
前記第１乾燥工程は、真空度５０〜５００ミリトール、乾燥温度−４５〜０℃未満、及び乾燥時間２４〜９６時間の条件で行い、
前記第２乾燥工程は、真空度５０〜５００ミリトール、乾燥温度０〜５０℃、及び乾燥時間６〜４８時間の条件で行う請求項１に記載のポリマーナノ粒子の凍結乾燥物の製造方法。

【請求項3】

前記親水性ブロック（Ａ）は、ポリエチレングリコール、モノメトキシポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、及びポリアクリルアミドよりなる群から選ばれ、且つ、
前記疎水性ブロック（Ｂ）は、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリジオキサン−２−オン、ポリカプロラクトン、ポリ乳酸−コ−グリコリド、ポリ乳酸−コ−カプロラクトン、ポリ乳酸−コ−ジオキサン２−オン、ポリグリコール−コ−カプロラクトン、及びカルボン酸末端が脂肪酸基で置換されたこれらの誘導体よりなる群から選ばれるものである請求項１に記載のポリマーナノ粒子の凍結乾燥物の製造方法。

【請求項4】

前記親水性ブロック（Ａ）の数平均分子量は５００〜２０，０００ダルトンであり、
前記疎水性ブロック（Ｂ）の数平均分子量は５００〜２０，０００ダルトンである請求項１に記載のポリマーナノ粒子の凍結乾燥物の製造方法。

【請求項5】

前記両親媒性ブロック共重合体における親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）との重量比は２：８〜８：２である請求項４に記載のポリマーナノ粒子の凍結乾燥物の製造方法。

【請求項6】

前記カルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体は、Ｄ，Ｌ−ポリ乳酸、Ｄ−ポリ乳酸、Ｄ，Ｌ−乳酸とグリコール酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とマンデル酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とカプロラクトンの共重合体、及びＤ，Ｌ−乳酸と１，４−ジオキサン−２−オンの共重合体よりなる群から選ばれる１種以上の末端のカルボン酸基又はカルボキシル基にアルカリ金属イオンが結合したものである請求項１に記載のポリマーナノ粒子の凍結乾燥物の製造方法。

【請求項7】

前記カルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体の数平均分子量は５００〜５，０００ダルトンである請求項１に記載のポリマーナノ粒子の凍結乾燥物の製造方法。

【請求項8】

前記ポリマーナノ粒子の溶液の２５℃の水に対する溶解度が１００ｍｇ／ｍＬ以下である水難溶性薬物を更に含む請求項１に記載のポリマーナノ粒子の凍結乾燥物の製造方法。

【請求項9】

前記ポリマーナノ粒子の溶液は、二価又は三価の金属イオンの塩を更に含む請求項１に記載のポリマーナノ粒子の凍結乾燥物の製造方法。

【請求項10】

前記二価又は三価の金属イオンは、カルシウム（Ｃａ²⁺）、マグネシウム（Ｍｇ²⁺）、バリウム（Ｂａ²⁺）、クロム（Ｃｒ³⁺）、鉄（Ｆｅ³⁺）、マンガン（Ｍｎ²⁺）、ニッケル（Ｎｉ²⁺）、銅（Ｃｕ²⁺）、亜鉛（Ｚｎ²⁺）、及びアルミニウム（Ａｌ³⁺）よりなる群から選ばれるものである請求項９に記載のポリマーナノ粒子の凍結乾燥物の製造方法。

【請求項11】

前記凍結乾燥補助剤は、糖、糖アルコール、及びこれらの混合物よりなる群から選ばれるものである請求項１に記載のポリマーナノ粒子の凍結乾燥物の製造方法。

【請求項12】

前記糖は、ラクトース、マルトース、スクロース、及びトレハロースよりなる群から選ばれる一つ以上であり、
前記糖アルコールは、マンニトール、ソルビトール、マルチトール、キシリトール、及びラクチトールよりなる群から選ばれる一つ以上である請求項１１に記載のポリマーナノ粒子の凍結乾燥物の製造方法。

【請求項13】

得られた前記ポリマーナノ粒子の凍結乾燥物は、両親媒性ブロック共重合体０．１〜７８．９重量％、カルボキシル末端基に二価又は三価の金属イオンが結合したポリ乳酸誘導体２０．０〜９８．８重量％、水難溶性薬物０．１〜２０．０重量％、及び凍結乾燥補助剤１〜７９．８重量％を含む請求項１に記載のポリマーナノ粒子の凍結乾燥物の製造方法。

【請求項14】

請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法により製造され、大気圧下で水性溶媒を用いて再構成する場合に、５分以内に再構成されるポリマーナノ粒子の凍結乾燥物。

【請求項15】

親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）を含むＡ−Ｂ、Ａ−Ｂ−Ａ、又はＢ−Ａ−Ｂ型の両親媒性ブロック共重合体、
カルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体、及び
凍結乾燥補助剤を含み、
空隙率（％）が７０〜９９．９％であり、平均空隙径が７０μｍ以上であり、大気圧下で水性溶媒を用いて再構成する場合に、５分以内に再構成されるポリマーナノ粒子の凍結乾燥物。

【請求項16】

親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）を含むＡ−Ｂ、Ａ−Ｂ−Ａ、又はＢ−Ａ−Ｂ型の両親媒性ブロック共重合体、
カルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体、及び
凍結乾燥補助剤を含み、
崩壊温度が−２５℃以上であるポリマーナノ粒子の凍結体。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、容易に再構成（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）できるポリマーナノ粒子の凍結乾燥粉末又はケーキ、及びその製造方法に関し、より詳しくは、両親媒性ブロック共重合体、カルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体、及び凍結乾燥補助剤を含むポリマーナノ粒子の水溶液を、アニーリング工程を含む凍結乾燥工程で処理することにより得られ、大気圧下で注射用希釈液を用いて再構成した場合に、５分以内に容易に再構成できるポリマーナノ粒子の凍結乾燥粉末又はケーキ、及びその製造方法に関する。

【背景技術】

【0002】

ポリマーナノ粒子は、患者の病巣部位にだけ特異的に薬物伝達するための有用な手段として知られている。特に生分解性高分子により構成されるナノ粒子は体内で徐々に分解されて消失するため、生体適合性に優れ、実際にナノ医薬品に適用されている。しかし、このような生分解性高分子のナノ粒子は水溶液中で不安定であるため、通常、使用時に再構成が必要な凍結乾燥剤型に製剤化される。そのときポリマーの特性上、一般の凍結乾燥注射剤に比べて、ポリマーナノ粒子を注射用溶媒等で再分散させるためには長時間必要であったため、実用化は困難であった。

【0003】

ポリマーナノ粒子を製造する方法として、透析法、エマルション法、有機溶媒揮発法等の種々の方法が知られている。特許文献１は、有機溶液に溶解させたメトトレキサートをメトキシポリエチレングリコールとキトサンの共重合体水溶液に滴下し、この混合溶液を蒸留水で透析した後、凍結乾燥を行うポリマーミセルの製造方法を開示している。また特許文献２は、両親媒性ブロック共重合体と疎水性薬物を、水の沸点より低い沸点の溶媒（即ちアセトニトリル、メタノール、エタノール、及びアセトン）で溶解し、そこに十分な量の水を一定の速度で加えて、ミセルを形成し、凍結乾燥補助剤を加えた後、有機溶媒を除去し、再び凍結乾燥を行う方法を開示している。また特許文献３は、ａ）親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）からなる両親媒性ブロック共重合体であって、疎水性薬物との親和性を向上させるために疎水性ブロック（Ｂ）の末端が官能基で置換された両親媒性ブロック共重合体と、疎水性薬物とを有機溶媒に溶解させた後、有機溶媒を蒸発させて、薬物−ポリマーマトリックスを製造する工程、ｂ）薬物−ポリマーマトリックスを水に溶解して、薬物が封入されたポリマーミセル水溶液を製造する工程、及びｃ）ポリマーミセル水溶液を凍結乾燥した後、滅菌する工程を含む、薬物含有ポリマーミセル組成物の製造方法を提供している。また特許文献４及び５は、両親媒性ブロック共重合体、ポリ乳酸誘導体の一価の金属塩及び疎水性薬物を揮発性有機溶媒に共に溶解して、均質な溶液を製造した後、有機溶媒を減圧下で蒸留して除去し、そこに再び水を加え、混合ミセルを製造した後、二価の金属カチオンを加え、ポリマーナノ粒子を製造する方法を開示している。しかし、上記特許文献はいずれも特に凍結乾燥方法と凍結乾燥後の再構成時間について言及していない。

【0004】

特許文献６は、両親媒性ブロック共重合体からなる薬物含有ポリマーミセルに、糖類とポリエチレングリコールよりなる群から選ばれる１種以上の安定化剤を追加することによって、凍結乾燥後の再溶解性を改善する方法を開示している。しかし、この文献では通常の凍結乾燥化剤である糖類に、追加的な賦形剤であるポリエチレングリコールを添加しなければならないという問題があり、このような追加的な賦形剤を用いずに、特に凍結乾燥条件だけを制御することにより再溶解性を向上できることが好ましい。

【0005】

一方、特許文献７、８、及び９には、凍結乾燥サイクルが凍結乾燥製剤に及ぼす影響が開示されている。しかし、特許文献７は、タンパク質、リン酸ナトリウム、マンニトール、トレハロース、及びポリソルベートからなる製剤を対象にするものであり、特許文献８は、キノロン系抗菌剤とｐＨ調整剤とからなる製剤を対象にするものであり、特許文献９は、タンパク質や核酸、ウイルス含有製剤を対象にしている。このようにこれらの文献は両親媒性ブロック共重合体等を用いるポリマー製剤を対象とするものではない。これまでにポリマー製剤の凍結乾燥方法を改善する方法は知られていない。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【特許文献1】韓国特許出願公開第１０−２００９−００４９２３９号

【特許文献2】米国特許出願公開第２００９／００３６３８９号

【特許文献3】韓国特許第１０−０４２１４５１号

【特許文献4】韓国特許第１０−０５３１２６９号

【特許文献5】米国特許第７，３１１，９０１号

【特許文献6】国際公開第２００３／００５９９２号

【特許文献7】米国特許出願公開第２０１４／０１９９２８６号

【特許文献8】特開２００８−２３１０６７号公報

【特許文献9】特開２００７−５２６３２９号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

本発明は、前述のような従来技術の問題点を解決するためになされたものであり、生体適合性に優れた生分解性ポリマーナノ粒子の凍結乾燥物であって、大気圧下で、注射用希釈液で再構成した場合に、５分以内に容易に再構成されるポリマーナノ粒子の凍結乾燥粉末又はケーキ、及びその製造方法を提供することを技術的課題とする。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明の一態様では、ポリマーナノ粒子の溶液を凍結乾燥処理してポリマーナノ粒子の凍結乾燥物を製造する方法であって、
上記ポリマーナノ粒子の溶液は、親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）を含むＡ−Ｂ、Ａ−Ｂ−Ａ、又はＢ−Ａ−Ｂ型の両親媒性ブロック共重合体、カルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体、及び凍結乾燥補助剤を含み、
上記ポリマーナノ粒子の溶液のポリマー濃度は１２０ｍｇ／ｍＬ以下であり、
上記凍結乾燥処理は、ａ）ポリマーナノ粒子の溶液を−１０〜−４５℃の温度範囲内で凍結する第１凍結工程、ｂ）上記第１凍結工程の生成物を−２５〜０℃の温度範囲まで昇温するアニーリング工程、ｃ）上記アニーリング工程の生成物を−１０〜−４５℃の温度範囲内で凍結する第２凍結工程、ｄ）上記第２凍結工程の生成物を０℃未満の温度で減圧下で乾燥させる第１乾燥工程、及びｅ）上記第１乾燥工程の生成物を０℃以上の温度で減圧下で乾燥させる第２乾燥工程を含み、
上記ポリマーナノ粒子の凍結乾燥物は、大気圧下で水性溶媒を用いて再構成する場合に、５分以内に再構成されるものであるポリマーナノ粒子の凍結乾燥物の製造方法が提供される。

【0009】

本発明の好ましい態様によれば、上記凍結乾燥処理において、
上記第１凍結工程は、初期温度０〜２５℃、最終温度−１０〜−４５℃、降温時間０．５〜２４時間、及び降温後の保持時間０．５〜２４時間の条件で行い、
上記アニーリング工程は初期温度−１０〜−４５℃、最終温度−２５〜０℃、昇温時間０．５〜２４時間、及び昇温後の保持時間０．２〜８時間の条件で行い、
上記第２凍結工程は初期温度−２５〜０℃、最終温度−１０〜−４５℃、降温時間０．５〜２４時間、及び降温後の保持時間１〜２４時間の条件で行い、
上記第１乾燥工程は真空度５０〜５００ミリトール、乾燥温度−４５〜０℃未満、及び乾燥時間２４〜９６時間の条件で行い、
上記第２乾燥工程は真空度５０〜５００ミリトール、乾燥温度０〜５０℃、及び乾燥時間２４〜９６時間の条件で行う。

【0010】

本発明の他の態様によれば、親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）を含むＡ−Ｂ、Ａ−Ｂ−Ａ、又はＢ−Ａ−Ｂ型の両親媒性ブロック共重合体、カルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体、及び凍結乾燥補助剤を含み、空隙率（％）が７０〜９９．９％であり、平均空隙径が７０μｍ以上であり、大気圧下で水性溶媒を用いて再構成する場合に、５分以内に再構成されるポリマーナノ粒子の凍結乾燥物が提供される。

【0011】

本発明の更に他の態様によれば、親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）を含むＡ−Ｂ、Ａ−Ｂ−Ａ、又はＢ−Ａ−Ｂ型の両親媒性ブロック共重合体、カルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体、及び凍結乾燥補助剤を含み、崩壊（ｃｏｌｌａｐｓｅ）温度が−２５℃以上であるポリマーナノ粒子の凍結体が提供される。

【発明の効果】

【0012】

本発明によれば、大気圧下で注射用希釈液を用いて再構成した場合に５分以内、より好ましくは３分以内に容易に再構成することができ、生体適合性に優れた生分解性ポリマーナノ粒子の凍結乾燥物を得ることができ、これには薬物、特に水難溶性薬物が適宜含まれていてもよい。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】図１は、実験例１で測定した実施例１及び比較例１の再構成時間を示すグラフである。

【図2】図２は、実験例２で測定した実施例１及び２と比較例２の再構成時間を示すグラフである。

【図3】図３は、実験例３で測定した実施例１に対する真空下及び大気圧下での再構成時間を示したグラフである。

【図4】図４は、実施例３で得られた凍結乾燥物の電子顕微鏡写真である。

【図5】図５は、比較例１で得られた凍結乾燥物の電子顕微鏡写真である。

【発明を実施するための形態】

【0014】

以下、本発明をより詳細に説明する。

【0015】

本発明に用いられるポリマーナノ粒子の溶液は、親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）を含むＡ−Ｂ、Ａ−Ｂ−Ａ、又はＢ−Ａ−Ｂ型の両親媒性ブロック共重合体、カルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体、及び凍結乾燥補助剤を含み、その溶液中のポリマー濃度は１２０ｍｇ／ｍＬ以下（例えば１ｍｇ／ｍＬ以上、１２０ｍｇ／ｍＬ以下）、より好ましくは１０ｍｇ／ｍＬ以上、１００ｍｇ／ｍＬ以下である。ポリマーナノ粒子の溶液中のポリマー濃度が１２０ｍｇ／ｍＬを超えると、凍結乾燥物の再構成時間が長くなるという問題がある。ポリマー濃度の下限は、再構成時間の観点からは低いほど好ましい。しかし、低過ぎると凍結乾燥後にケーキ形態が維持され難いため、凍結乾燥補助剤を十分に添加しなければならない。

【0016】

本発明の一実施形態において、両親媒性ブロック共重合体は、親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）がＡ−Ｂ型に連結された二重ブロック共重合体であり、非イオン性である。また両親媒性ブロック共重合体は疎水性ブロック（Ｂ）がコアを形成し、親水性ブロック（Ａ）がシェルを形成するコアシェル形態のポリマーミセルを形成する。

【0017】

両親媒性ブロック共重合体における親水性ブロック（Ａ）は、水溶性ポリマーである。具体的には、例えばポリエチレングリコール、ポリエチレン−コ−プロピレングリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ−ｃｏ−ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）等のポリアルキレングリコール；モノメトキシポリアルキレングリコール、モノアセトキシポリエチレングリコール等のポリアルキレングリコール誘導体；ポリビニルアルコール；ポリビニルピロリドン；又はポリアクリルアミド等であっても良く、より具体的には、ポリエチレングリコール、モノメトキシポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、及びポリアクリルアミドよりなる群から選ばれても良い。親水性ブロック（Ａ）は、数平均分子量が好ましくは５００〜５０，０００ダルトン、より具体的には５００〜２０，０００ダルトン、更に具体的には１，０００〜２０，０００ダルトンである。

【0018】

両親媒性ブロック共重合体の疎水性ブロック（Ｂ）は、水に溶解せず、生体適合性に優れる生分解性のポリマーである。具体的には、ポリエステル、ポリ無水物、ポリアミノ酸、ポリオルトエステル、又はポリホスファジン（ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｉｎｅ）等であり、より具体的には、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリジオキサン−２−オン、ポリカプロラクトン、ポリ乳酸−コ−グリコリド（ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）、ポリ乳酸−コ−カプロラクトン（ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ−ｃｏ−ｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ）、ポリ乳酸−コ−ジオキサン２−オン（ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ−ｃｏ−ｄｉｏｘａｎ−２−ｏｎｅ）、及びポリグリコール−コ−カプロラクトン（ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｃ−ｃｏ−ｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ）、及びカルボン酸末端が脂肪酸基で置換されたこれらの誘導体よりなる群から選ばれてもよい。また疎水性ブロック（Ｂ）のカルボン酸末端に置換可能な脂肪酸基としては、酪酸基、プロピオン酸基、酢酸基、ステアリン酸基、又はパルミチン酸基が挙げられる。疎水性ブロック（Ｂ）は、数平均分子量が好ましくは５００〜５０，０００ダルトン、より具体的には５００〜２０，０００ダルトン、更に具体的には１，０００〜２０，０００ダルトンである。

【0019】

本発明の一実施形態によれば、水溶液相中で安定したポリマーミセルを形成するための両親媒性ブロック共重合体における親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）の重量比（親水性ブロック（Ａ）：疎水性ブロック（Ｂ））は２：８〜８：２であり、より具体的には３：７〜７：３であり、更に具体的には４：６〜６：４である。親水性ブロック（Ａ）の比率が低過ぎるとポリマーが水溶液中でポリマーミセルを形成できないおそれがあり、高過ぎると親水性が高くなり過ぎて安定性が低下するおそれがある。

【0020】

本発明の一実施形態において、カルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体は、例えば、ポリ乳酸、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリマンデル酸、ポリカプロラクトン、ポリジオキサン−２−オン、ポリアミノ酸、ポリオルトエステル、ポリアンハイドライド、及びこれらの共重合体よりなる群から選ばれる１種以上、より具体的にはＤ，Ｌ−ポリ乳酸、Ｄ−ポリ乳酸、ポリマンデル酸、Ｄ，Ｌ−乳酸とグリコール酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とマンデル酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とカプロラクトンの共重合体、及びＤ，Ｌ−乳酸と１，４−ジオキサン−２−オンの共重合体よりなる群から選ばれる１種以上の末端のカルボン酸基又はカルボキシル基にアルカリ金属イオンが結合したものであってもよい。

【0021】

一実施形態において、アルカリ金属イオンは、ナトリウム、カリウム、又はリチウムの一価の金属イオンであってもよい。

【0022】

ポリ乳酸誘導体のカルボキシル末端でない方の末端は、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、アセトキシ、ベンゾイルオキシ、デカノイルオキシ、及びパルミトイルオキシよりなる群から選ばれる一つ以上であってもよい。

【0023】

ポリ乳酸誘導体のアルカリ金属イオンが結合したカルボキシル末端基は、ｐＨ４以上の水溶液中で親水基として作用し、水溶液中でポリマーミセルを形成する。またポリ乳酸塩又はその誘導体は、室温で固体状態で存在し、空気中の水分に曝されてもｐＨが中性であるため非常に安定した形態をとる。

【0024】

カルボキシル末端基にアルカリ金属イオンが結合した形態のポリ乳酸誘導体は、両親媒性ブロック共重合体からなるミセルに添加すること、及びミセルのコア内部を硬化することにより、薬物の封入効率を向上する役割を果たす。ポリ乳酸誘導体は、水溶液に溶解して、ポリ乳酸誘導体分子内に存在する親水性の部分と疎水性の部分のバランスを通じてミセルを形成する。従って、疎水性を示すエステルの部分の分子量が大き過ぎると、親水性を示す末端のカルボキシルアニオン同士の会合が難しくなり、ミセルを良好に形成することができなくなり、分子量が小さ過ぎると水に完全に溶解してミセル形成自体が困難になる。一実施形態において、ｐＨ４以上でミセルを形成することができる好適なポリ乳酸誘導体の数平均分子量は５００〜５，０００ダルトンであり、より具体的には５００〜２，５００ダルトンである。分子量が小さ過ぎると、水に完全に溶解してミセル形成自体が困難になる。分子量が大き過ぎると疎水性が高くなり過ぎて、水溶液での溶解が困難となり、ミセルを形成することができなくなる。このようなポリ乳酸誘導体の分子量は、製造時の反応温度や時間などを制御することにより達成することができる。

【0025】

一実施形態では、カルボキシル末端基にアルカリ金属イオンが結合した形態のポリ乳酸誘導体は、下記式（１）で表すことができる。

【0026】

【化1】

【0027】

（式中、Ａは、

【0028】

【化2】

【0029】

であり、
Ｚは水素、メチル基、又はフェニル基であり、
Ｂは、

【0030】

【化3】

【0031】

【化4】

【0032】

又は、

【0033】

【化5】

【0034】

であり、
Ｙは、水素、メチル基、又はフェニル基であり、
Ｒは、水素、アセチル基、ベンゾイル基、デカノイル基、パルミトイル基、メチル基、又はエチル基であり、
Ｍは、ナトリウム、カリウム、又はリチウムであり、
ｎは１〜３０の整数であり、
ｍは０〜２０の整数である。）

【0035】

より具体的に、カルボキシル末端基にアルカリ金属イオンが結合したポリ乳酸塩又はその誘導体は下記式（２）で表すことができる。

【0036】

【化6】

【0037】

（式中、Ｚ、Ｒ、及びＭは、式（１）で定義されたものと同義であり、
Ｘは、メチル基であり、
Ｙ’は、水素又はフェニル基であり、
ｐは、０〜２５の整数であり、
ｑは、０〜２５の整数であり、
但し、ｐ＋ｑは、５〜２５の整数である。）

【0038】

また他の一実施形態において、カルボキシル末端基にアルカリ金属イオンが結合した形態のポリ乳酸誘導体は、下記式（３）又は式（４）で表すことができ、

【0039】

【化7】

【0040】

（式中、Ｗ−Ｍは、

【0041】

【化8】

【0042】

又は、

【0043】

【化9】

【0044】

であり、
ＰＬＡは、Ｄ，Ｌ−ポリ乳酸、Ｄ−ポリ乳酸、ポリマンデル酸、Ｄ，Ｌ−乳酸とグリコール酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とマンデル酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とカプロラクトンの共重合体、又はＤ，Ｌ−乳酸と１，４−ジオキサン−２−オンの共重合体である。）

【0045】

【化10】

【0046】

（式中、Ｓは、

【0047】

【化11】

【0048】

であり、Ｌは、−ＮＲ₁−（式中、Ｒ₁は水素又はＣ₁〜Ｃ₁₀のアルキルである。）又は−Ｏ−であり、ａは０〜４の整数であり、ｂは１〜１０の整数であり、Ｍは、ナトリウム、カリウム、又はリチウムであり、
Ｑは、ＣＨ₃、ＣＨ₂ＣＨ₃、ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃、ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃、又はＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅であり、
ＰＬＡは、Ｄ，Ｌ−ポリ乳酸、Ｄ−ポリ乳酸、ポリマンデル酸、Ｄ，Ｌ−乳酸とグリコール酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とマンデル酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とカプロラクトンの共重合体、又はＤ，Ｌ−乳酸と１，４−ジオキサン−２−オンの共重合体である。）で表すことができる。

【0049】

両親媒性ブロック共重合体とカルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体とを水中で混合して、混合ミセル水溶液を形成していてもよい。

【0050】

一実施形態において、ポリマーナノ粒子の溶液は、水難溶性薬物を更に含むことができ、その結果、混合ミセル内に水難溶性薬物を含有させることができる。混合ミセル中に水難溶性薬物を含ませる方法は、例えば以下の通りである。水難溶性薬物、両親媒性ブロック共重合体及びカルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体を有機溶媒に溶解し、有機溶媒を除去した後、水を加えて混合ミセルを得るか、又は水難溶性薬物とカルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体を有機溶媒に溶解し、有機溶媒を除去した後、その乾燥物に、両親媒性ブロック共重合体を水に加えて溶解させた水溶液を加えることにより、混合ミセルを得ることができる。

【0051】

一実施形態において、有機溶媒は、具体的には、アルコール、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトン、テトラヒドロフラン、酢酸、アセトニトリル、及びジオキサンよりなる群から選ばれる一つ以上であってもよい。一実施形態において、有機溶媒の含量は、組成物全重量に対して、０．５〜３０重量％、具体的には０．５〜１５重量％、より具体的には１〜１０重量％であってもよい。有機溶媒の含量が０．５重量％未満のときには、薬物を溶解し難くなる。３０重量％を超えると、再構成時に、薬物が沈殿するおそれがある。水難溶性薬物とポリマーは、有機溶媒に同時に又は連続して溶解させてもよい。薬物とポリマーを有機溶媒に同時に添加して溶解させてもよく、ポリマーをまず有機溶媒に溶解させて、そこに薬物を溶解させてもよく、又は薬物をまず有機溶媒に溶解させた後、ポリマーをそこに添加して溶解させてもよい。水難溶性薬物を有機溶媒に溶解させる温度は、薬物の分解を防止するために０〜６０℃、より具体的には１０〜５０℃、更に具体的には１０〜４０℃であってもよいがこれらに制限されない。有機溶媒の除去は、減圧蒸留法、気流乾燥法、加熱乾燥法などによって行うことができる。また、有機溶媒を少量使用する場合には、有機溶媒除去工程を省略することができる。水溶液としては、水、蒸留水、注射用蒸留水、生理食塩水、５％グルコース、緩衝液等を用いることができる。ミセル化工程は０〜８０℃、より具体的には１０〜６０℃、更に具体的には１０〜４０℃の温度で水溶液を加え、ポリマーミセルを形成させることにより行う。

【0052】

水難溶性薬物は、水に対する溶解度（２５℃）が１００ｍｇ／ｍＬ以下の薬物から選ぶことができる。また、抗癌剤、抗真菌剤、免疫抑制剤、鎮痛剤、消炎鎮痛剤、抗ウイルス剤、抗不安鎮静剤、造影剤、コルチコステロイド、診断薬、診断造影剤、利尿剤、プロスタグランジン、放射性医薬品、ステロイドを含む性ホルモン剤、及びこれらの組み合わせから選ばれてもよいが、これらに限定されない。

【0053】

一実施形態において、水難溶性薬物は、抗癌剤から選ばれてもよく、具体的には、タキサン抗癌剤であってもよい。例えば、タキサン抗癌剤は、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル、７−エピパクリタキセル、ｔ−アセチルパクリタキセル、１０−デスアセチル−パクリタキセル、１０−デスアセチル−７−エピパクリタキセル、７−キシロシルパクリタキセル、１０−デスアセチル−７−グルタリルパクリタキセル、７−Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシルパクリタキセル、及び７−Ｌ−アラニルパクリタキセルよりなる群から選ばれる一又は二以上の混合物であってもよい。より具体的にはパクリタキセル又はドセタキセルである。

【0054】

他の一実施形態において、水難溶性薬物は、抗真菌剤から選ばれてもよく、具体的には、アゾール系抗真菌剤であってもよい。例えば、アゾール系抗真菌剤は、ボリコナゾール、ポサコナゾール、ラブコナゾール、フルコナゾール、エコナゾール、ケトコナゾール、及びイトラコナゾールよりなる群から選ばれる一又は二以上の混合物であってもよい。より具体的にはボリコナゾールである。

【0055】

一実施形態において、両親媒性ブロック共重合体及びカルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体の全重量に対して、０．１〜９９．９重量％の両親媒性ブロック共重合体及び０．１〜９９．９重量％のポリ乳酸誘導体を用いることができ、好ましくは２０〜９５重量％の両親媒性ブロック共重合体及び５〜８０重量％のポリ乳酸誘導体を用いることができ、より好ましくは５０〜９０重量％の両親媒性ブロック共重合体及び１０〜５０重量％のポリ乳酸誘導体を用いることができる。他の実施形態において、両親媒性ブロック共重合体、カルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体、及び水難溶性薬物の全重量に対して、０．１〜２０重量％の難溶性薬物を用いることができる。

【0056】

一実施形態において、ポリマーナノ粒子の溶液は、二価又は三価の金属イオンの塩を更に含むことができ、その結果、混合ミセル水溶液に二価又は三価の金属イオンの塩を添加することができる。このような二価又は三価の金属イオンは、両親媒性ブロック共重合体及びカルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体を混合して形成されたポリマーミセルの安定性を更に向上させるために添加される。二価又は三価の金属イオンがポリ乳酸誘導体の末端のカルボキシル基と結合し、二価又は三価の金属イオンが結合したポリマーミセルを形成する。例えば、一価アルカリ金属イオンがカルボキシル末端基に結合したポリ乳酸塩又はその誘導体において、カルボキシル末端基の一価の金属カチオンと二価又は三価の金属イオンが置換反応してイオン結合を形成した場合、このイオン結合はイオン強度によってポリマーミセルの安定性を更に向上させる役割を果たす。

【0057】

一実施形態において、二価又は三価の金属イオンは、カルシウム（Ｃａ²⁺）、マグネシウム（Ｍｇ²⁺）、バリウム（Ｂａ²⁺）、クロム（Ｃｒ³⁺）、鉄（Ｆｅ³⁺）、マンガン（Ｍｎ²⁺）、ニッケル（Ｎｉ²⁺）、銅（Ｃｕ²⁺）、亜鉛（Ｚｎ²⁺）、及びアルミニウム（Ａｌ³⁺）よりなる群から選ぶことができる。他の一実施形態において、二価又は三価の金属イオンは、硫酸塩、塩酸塩、炭酸塩、リン酸塩又は水酸化物の形態のポリ乳酸誘導体及び両親媒性ブロック共重合体の混合ポリマー組成物に添加される。具体的には、塩化カルシウム（ＣａＣｌ₂）、塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ₂）、塩化亜鉛（ＺｎＣｌ₂）、塩化アルミニウム（ＡｌＣｌ₃）、塩化鉄（ＦｅＣｌ₃）、炭酸カルシウム（ＣａＣＯ₃）、炭酸マグネシウム（ＭｇＣＯ₃）、リン酸カルシウム（Ｃａ₃（ＰＯ₄）₂）、リン酸マグネシウム（Ｍｇ₃（ＰＯ₄）₂）、リン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ₄）、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ₄）、水酸化カルシウム（Ｃａ（ＯＨ）₂）、水酸化マグネシウム（Ｍｇ（ＯＨ）₂）、水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）₃）、又は水酸化亜鉛（Ｚｎ（ＯＨ）₂）の形態で添加される。また二価又は三価の金属イオンは、ポリ乳酸誘導体のカルボキシル末端基の当量に対して、０．００１〜１０当量、具体的には０．５〜２．０当量の量で添加することができる。

【0058】

一実施形態において、凍結乾燥補助剤（凍結乾燥化剤ともいう）は、糖、糖アルコール、及びこれらの混合物よりなる群から選ぶことができる。糖は、ラクトース、マルトース、スクロース、及びトレハロースよりなる群から選ばれる一つ以上であってもよく、糖アルコールは、マンニトール、ソルビトール、マルチトール、キシリトール、及びラクチトールよりなる群から選ばれる一つ以上であってもよい。凍結乾燥補助剤は、凍結乾燥した組成物がケーキ形態を維持できるようにするために添加される。また、凍結乾燥補助剤は、ポリマーナノ粒子組成物の凍結乾燥後、再構成する工程で、短時間で均一な溶解を補助する役割を果たす。一実施形態において、凍結乾燥補助剤の含量は、凍結乾燥組成物の全乾燥重量に対して、１〜９０重量％、より具体的には１０〜６０重量％である。

【0059】

一実施形態において、凍結乾燥処理されるポリマーナノ粒子の溶液原液のポリマー濃度（即ち、両親媒性ブロック共重合体及びカルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体を含むポリマーの濃度）は１ｍｇ／ｍＬ以上、より好ましくは１０ｍｇ／ｍＬ以上であり、また１２０ｍｇ／ｍＬ以下、より好ましくは１００ｍｇ／ｍＬ以下、更に好ましくは５０ｍｇ／ｍＬ以下である。溶液内ポリマーの濃度が高過ぎると、凍結乾燥後、再構成時、ポリマーが凝集する可能性があり、それによって完全な溶解には長時間を要する。ポリマー濃度が低過ぎると用いる溶液の量が多くなり過ぎて使用するのに不便である。

【0060】

ポリマーナノ粒子の溶液の凍結乾燥処理は、
ａ）ポリマーナノ粒子の溶液を−１０〜−４５℃の温度範囲内で凍結する第１凍結工程、
ｂ）第１凍結工程の生成物を−２５〜０℃の温度範囲まで昇温するアニーリング工程、
ｃ）アニーリング工程の生成物を−１０〜−４５℃の温度範囲内で凍結する第２凍結工程、
ｄ）第２凍結工程の生成物を０℃未満の温度で減圧下で乾燥させる第１乾燥工程、及び
ｅ）第１乾燥工程の生成物を０℃以上の温度で減圧下で乾燥させる第２乾燥工程を含む。

【0061】

このような凍結乾燥処理を通じて氷晶が大きくなり、その結果、凍結乾燥ケーキの空隙が大きくなって再構成時に水が透過し易くなるため、再構成時間が短くなる。

【0062】

より具体的に凍結乾燥処理において、
第１凍結工程は、初期温度０〜３５℃（より好ましくは０〜２５℃、最も好ましくは０〜１５℃）、最終温度−１０〜−４５℃（より好ましくは−２０〜−４０℃、最も好ましくは−３０〜−４０℃）、降温時間０．５〜２４時間（より好ましくは０．５〜１２時間、最も好ましくは０．５〜６時間）、及び降温後の保持時間０．５〜２４時間（より好ましくは０．５〜１２時間、最も好ましくは０．５〜６時間）の条件で行い、
アニーリング工程は、初期温度−１０〜−４５℃（より好ましくは−２０〜−４０℃、最も好ましくは−３０〜−４０℃）、最終温度−２５〜０℃（より好ましくは−２５〜−１０℃、最も好ましくは−２５〜−１５℃）、昇温時間０．５〜２４時間（より好ましくは０．５〜１２時間、最も好ましくは０．５〜６時間）、及び昇温後の保持時間０．２〜１２時間（より好ましくは０．５〜８時間、最も好ましくは０．５時間〜４時間）の条件で行い、
第２凍結工程は、初期温度−２５〜０℃（より好ましくは−２５〜−１０℃、最も好ましくは−２５〜−１５℃）、最終温度−１０〜−４５℃（より好ましくは−２０〜−４０℃、最も好ましくは−３０〜−４０℃）、降温時間０．５〜２４時間（より好ましくは０．５〜１２時間、最も好ましくは０．５〜６時間）、及び降温後の保持時間０．５〜２４時間（より好ましくは０．５〜１２時間、最も好ましくは０．５〜６時間）の条件で行い、
第１乾燥工程は、真空度５０〜５００ミリトール（より好ましくは５０〜１５０ミリトール、最も好ましくは５０〜１００ミリトール）、乾燥温度−４５〜０℃未満（より好ましくは−５〜−４０℃、最も好ましくは−１０〜−３０℃）、及び乾燥時間２４〜９６時間（より好ましくは２４〜７２時間、最も好ましくは４８〜７２時間）の条件で行い、
第２乾燥工程は、真空度５０〜５００ミリトール（より好ましくは５０〜１５０ミリトール、最も好ましくは５０〜１００ミリトール）、乾燥温度０〜５０℃（より好ましくは５〜４０℃、最も好ましくは１５〜３５℃）、及び乾燥時間６〜４８時間（より好ましくは６〜２４時間、最も好ましくは１２〜２４時間）の条件で行う。

【0063】

一実施形態において、第１乾燥工程は、−４５〜−２０℃未満で１〜５時間保持、−４５〜−２０℃未満から−２０〜−１０℃未満まで２〜６時間昇温、−２０〜−１０℃未満で１０〜４０時間保持、−２０〜−１０℃未満から−１０〜０℃未満まで１〜５時間昇温、及び−１０〜０℃未満で１０〜４０時間保持する工程を含むことができる。

【0064】

一実施形態において、第２乾燥工程は、−１０〜０℃未満から０〜２０℃まで０．５〜３時間昇温、０〜２０℃未満で０．５〜６時間保持、０〜２０℃未満から２０〜５０℃まで２〜９時間昇温、及び２０〜５０℃で３〜３０時間保持する工程を含むことができる。

【0065】

本発明のポリマーナノ粒子の凍結乾燥物の製造方法は、前述のように凍結乾燥処理した生成物をバイアルに投入した後に窒素を充填して密封する工程、又はバイアルを真空状態で密封する工程を更に含むことができる。

【0066】

一実施形態において、前記のようにして得られたポリマーナノ粒子の凍結乾燥物は、両親媒性ブロック共重合体０．１〜７８．９重量％、カルボキシル末端に二価又は三価の金属イオンが結合したポリ乳酸誘導体２０．０〜９８．８重量％、水難溶性薬物０．１〜２０．０重量％、及び凍結乾燥補助剤１〜７９．８重量％を含む。

【0067】

本発明のポリマーナノ粒子の凍結乾燥物の製造方法で得られたポリマーナノ粒子の凍結乾燥物は、大気圧下で水性溶媒を用いて再構成する場合に５分以内に、より好ましくは３分以内に再構成されることを特徴とする。

【0068】

一方、本発明の他の態様によれば、親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）を含むＡ−Ｂ、Ａ−Ｂ−Ａ、又はＢ−Ａ−Ｂ型の両親媒性ブロック共重合体、カルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体、及び凍結乾燥補助剤を含み、空隙率（％）が７０〜９９．９％であり、平均空隙径（μｍ）が７０μｍ以上（例えば、７０〜２００μｍ）、より好ましくは９０μｍ以上（例えば、９０〜２００μｍ）、最も好ましくは１００μｍ以上（例えば、１００〜２００μｍ）であり、大気圧下で水性溶媒を用いて再構成する場合に、５分以内に、より好ましくは３分以内に再構成されるポリマーナノ粒子の凍結乾燥物が提供される。空隙率が低過ぎるか、又は空隙が小さすぎると、再構成時に水溶液の透過が遅くなり再構成時間が長くなる。

【0069】

一実施形態において、空隙率ｎ（％）は、下記数式（１）に従って計算することができる。

【0070】

【数1】

【0071】

（式中、Ｖｓは、固体の部分のみの体積（凍結乾燥ケーキの体積−水の体積）であり、Ｖは、空隙を含む全体積（凍結乾燥ケーキの体積）である。）

【0072】

本発明のまた他の態様によれば、親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）を含むＡ−Ｂ、Ａ−Ｂ−Ａ、又はＢ−Ａ−Ｂ型の両親媒性ブロック共重合体、カルボキシル末端基を有するポリ乳酸誘導体、及び凍結乾燥補助剤を含み、崩壊温度が、好ましくは−２５〜−５℃、より好ましくは−２０〜−５℃、最も好ましくは−１５〜−５℃であるポリマーナノ粒子の凍結体が提供される。

【0073】

崩壊温度は、第１乾燥工程中で許容される試料の最高温度を意味し、この温度以上の温度で第１乾燥工程を行うとケーキの形状が歪んだり崩壊したりすることを意味する。崩壊温度は凍結乾燥顕微鏡を用いて測定する。

【0074】

崩壊温度が高いほど、凍結乾燥ケーキの性状に影響を与えることなく、第１乾燥工程をより高い温度で行うことができるため、凍結乾燥時間を短縮することができる。

【実施例】

【0075】

以下の実施例により本発明を具体的に説明する。しかしながら、これらの実施例は本発明の説明だけを目的としており、本発明の範囲は実施例によって何ら限定されない。

【0076】

以下の実施例で使用した両親媒性ブロック共重合体及びカルボキシル末端にアルカリ金属イオンが結合したポリ乳酸塩又はその誘導体は、国際公開第０３／０３３５９２号に開示された方法により製造され、その全内容は本明細書の参照として援用される。

【0077】

実施例１、２、及び比較例２：ポリマーナノ粒子の凍結乾燥ケーキの製造
両親媒性ブロック共重合体として、数平均分子量が２，０００〜１，７６６ダルトンのモノメトキシポリエチレングリコール−ポリラクチドを合成した。また数平均分子量１，８００ダルトンのＤ，Ｌ−ＰＬＡ−ＣＯＯＮａを合成した。

【0078】

下記表１に示される量で、ポリ乳酸塩にジクロロメタン３．０ｍＬを加え、４０℃で透明な溶液になるまで撹拌した。真空ポンプが連結された回転式減圧蒸留器を用いて、約３時間、ジクロロメタンを減圧下蒸留して除去し、白色の泡沫固体を生成させた。これとは別に、両親媒性ブロック共重合体に６０℃の水を加えて、ポリマー塊が完全に溶解するまで撹拌し、その後に室温まで冷却した。室温の両親媒性ブロック共重合体溶液を上記白色の泡沫固体に加え、約３５℃の温度に保持しながら溶液が青色に透明になるまでミセル化を行った。ここに塩化カルシウムを加えてポリマーナノ粒子を形成させた。ポリマーナノ粒子の溶液に、凍結乾燥化剤としてＤ−マンニトールを加えて完全に溶解させた後、孔径２００ｎｍのフィルターでろ過し、以下の凍結乾燥条件で凍結乾燥して、ポリマーナノ粒子の凍結乾燥ケーキを製造した。

【0079】

【表1】

【0080】

【表2】

【0081】

【表3】

【0082】

比較例１：アニーリング工程なしのポリマーナノ粒子の凍結乾燥ケーキの製造
アニーリング工程と第２凍結工程を行わなかったこと以外は、実施例１と同様の方法で行った。即ち下記の表４の凍結条件で行った。

【0083】

【表4】

【0084】

実験例１：凍結条件がポリマーナノ粒子ケーキの再構成時間に及ぼす影響
実施例１と比較例１でそれぞれ得られたポリマーナノ粒子の凍結乾燥ケーキを下記方法で再構成し、再構成時間を測定した。

【0085】

再構成方法
約２０℃の注射用蒸留水３６ｍＬを、凍結乾燥ケーキ４，７８８ｍｇが入っているバイアルに入れ、１分間手で激しく振った後、バイアル中の全ての固形成分が溶解するまで手で軽く振った。再構成時間を確認した。測定結果を図１に示す。

【0086】

図１の再構成時間の測定結果から分かるように、第１凍結後、融点以下の温度範囲内で昇温し、一定時間保持するアニーリング工程を経て、再び第２凍結を行った凍結条件の場合（実施例１：３．７分）は、直ちに温度を低くして凍結だけさせた場合（比較例１：５．９分）の再構成時間より有意に短かった。

【0087】

実験例２：凍結乾燥用の原液濃度がポリマーナノ粒子ケーキの再構成時間に及ぼす影響
実施例１、２、及び比較例２でそれぞれ得られたポリマーナノ粒子の凍結乾燥ケーキを実験例１と同じ方法で再構成し、再構成時間を測定した。測定結果を図２に示す。

【0088】

図２の再構成時間の測定結果から分かるように、凍結乾燥に使用した原液の濃度が高くなると、再構成時間が長くなる傾向を示した。特に１．２ｍｇ／ｍＬ（ポリマー濃度で約１２０ｍｇ／ｍＬ）を超える場合、再構成時間が急激に長くなる傾向を示した。

【0089】

実験例３：再構成時のバイアル内の真空度がポリマーナノ粒子ケーキの再構成時間に及ぼす影響
実施例１で得られたポリマーナノ粒子の凍結乾燥ケーキを実験例１と同様の方法で再構成し、再構成時バイアル内の真空度（真空状態：大気圧）を変えて再構成時間を測定した。測定結果を図３に示す。

【0090】

図３の再構成時間の測定結果から分かるように、再構成時にバイアル内を真空状態に保持した状態で水を加えた場合、再構成時間が顕著に長くなっており、バイアル間の再構成時間のバラツキも非常に大きかった。

【0091】

実験例４：凍結条件がポリマーナノ粒子の凍結乾燥原液の崩壊温度に及ぼす影響
実施例１の組成のポリマーナノ粒子の凍結乾燥用原液を下記の表５の凍結条件下で凍結させた後、得られた凍結体の崩壊温度を凍結乾燥顕微鏡で測定した。

【0092】

【表5】

【0093】

表５の結果から分かるように、実施例１の組成のポリマーナノ粒子の凍結乾燥用原液をアニーリングを含む凍結工程を通じて凍結した場合の崩壊温度が、アニーリングを含まない単純凍結工程を通じて凍結した場合よりも高かった。従って、凍結時にアニーリングを行う場合は、より効率的な凍結乾燥ができることが確認された。

【0094】

実施例３：ドセタキセル含有ポリマーナノ粒子の凍結乾燥ケーキの製造
下記表６に示される使用量のドセタキセルとポリ乳酸塩にジクロロメタン３．０ｍＬを加えて４０℃で透明な溶液になるまで撹拌したことを除いて、実施例１と同様の工程を行った。

【0095】

【表6】

【0096】

得られたドセタキセル含有ポリマーナノ粒子の凍結乾燥ケーキ４，８２８ｍｇが入っているバイアルに約２０℃の注射用蒸留水３６ｍＬを添加し、１分間、手で激しく振った後、バイアル中の全ての固形成分が溶解するまで手で軽く振った。バイアル中の全ての固形成分が溶解するまでかかった再構成時間は４．２分であった。

【0097】

一方、得られたドセタキセル含有ポリマーナノ粒子の凍結乾燥物（ドセタキセル−ＰＮＰ）の空隙率は９０．０％（凍結乾燥原液のドセタキセル濃度で１．０ｍｇ／ｍＬ）であった。

【0098】

実施例３の凍結乾燥物を電子顕微鏡で５０倍拡大して観察した結果を図４に示す。図４に示すように、本発明に係る凍結乾燥物は、無定形の大きな空隙を有することが分かった。比較のために、比較例１で得られた凍結乾燥物を電子顕微鏡で５０倍拡大して観察した結果を図５に示す。図４、図５、及び表７から分かるように、本発明により得られた凍結乾燥物は、通常の方法により得られた凍結乾燥物に比べて更に大きい空隙を有することを確認することができた。

【0099】

【表7】

【0100】

実施例４：パクリタキセル含有ポリマーナノ粒子の凍結乾燥ケーキの製造
下記表８に示した使用量のパクリタキセルとポリ乳酸塩にジクロロメタン３．０ｍＬを加えて４５℃で透明な溶液になるまで撹拌したことを除いて、実施例１と同様の工程を行った。

【0101】

【表8】

【0102】

得られたパクリタキセル含有ポリマーナノ粒子の凍結乾燥ケーキ３，５７４．５ｍｇが入っているバイアルに約２５℃の注射用蒸留水２６．４ｍＬを添加し、１分間、手で激しく振った後、バイアル中の全ての固形成分が溶解するまで手で軽く振った。バイアル中の全ての固形成分が溶解するまでかかった再構成時間は１．６分であった。

【0103】

実施例５：ボリコナゾール含有ポリマーナノ粒子の凍結乾燥ケーキの製造
下記表９に示した使用量のボリコナゾールとポリ乳酸塩にジクロロメタン３．０ｍＬを加えて、４０℃で透明な溶液になるまで撹拌したことを除いて、実施例１と同様の工程を行った。

【0104】

【表9】

【0105】

得られたボリコナゾール含有ポリマーナノ粒子の凍結乾燥ケーキ３，４１０ｍｇが入っているバイアルに約２５℃の注射用蒸留水３６．０ｍＬを添加し、１分間、手で激しく振った後、バイアル中の全ての固形成分が溶解するまで手で軽く振った。バイアル中の全ての固形成分が溶解するまでかかった再構成時間は２．９分であった。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】