特許 6509822 細菌性腟症の予防的および／または治療的処置に使用するための乳酸菌含有組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6509822

(24)【登録日】2019年4月12日

(45)【発行日】2019年5月8日

(54)【発明の名称】細菌性腟症の予防的および／または治療的処置に使用するための乳酸菌含有組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/747 20150101AFI20190422BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20190422BHJP

   A61K 47/36 20060101ALI20190422BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20190422BHJP

   A61K 47/46 20060101ALI20190422BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20190422BHJP

   A61P 15/02 20060101ALI20190422BHJP

   C12N 1/20 20060101ALI20190422BHJP

【ＦＩ】

   A61K35/747

   A61K47/42

   A61K47/36

   A61K47/26

   A61K47/46

   A61P31/04

   A61P15/02

   C12N1/20 E

【請求項の数】13

【全頁数】17

(21)【出願番号】特願2016-513455(P2016-513455)

(86)(22)【出願日】2014年5月14日

(65)【公表番号】特表2016-520076(P2016-520076A)

(43)【公表日】2016年7月11日

(86)【国際出願番号】IB2014000739

(87)【国際公開番号】WO2014184643

(87)【国際公開日】20141120

【審査請求日】2017年4月26日

(31)【優先権主張番号】MI2013A000794

(32)【優先日】2013年5月14日

(33)【優先権主張国】IT

【微生物の受託番号】DSMZ  DSM 26955

【微生物の受託番号】DSMZ  DSM 26956

【微生物の受託番号】BCCM/LMG  LMG P-21021

【微生物の受託番号】BCCM/LMG  LMG P-21020

【微生物の受託番号】DSMZ  DSM 18296

【微生物の受託番号】DSMZ  DSM 24439

【微生物の受託番号】DSMZ  DSM 24438

【微生物の受託番号】DSMZ  DSM 21718

【微生物の受託番号】DSMZ  DSM 24440

【微生物の受託番号】DSMZ  DSM 18298

【微生物の受託番号】DSMZ  DSM 18297

(73)【特許権者】

【識別番号】512233329

【氏名又は名称】プロバイオティカル・ソシエタ・ペル・アチオニ

【氏名又は名称原語表記】ＰＲＯＢＩＯＴＩＣＡＬ Ｓ．Ｐ．Ａ．

(74)【代理人】

【識別番号】100101454

【弁理士】

【氏名又は名称】山田 卓二

(74)【代理人】

【識別番号】100062144

【弁理士】

【氏名又は名称】青山 葆

(74)【代理人】

【識別番号】100106518

【弁理士】

【氏名又は名称】松谷 道子

(74)【代理人】

【識別番号】100156144

【弁理士】

【氏名又は名称】落合 康

(72)【発明者】

【氏名】ジョヴァンニ・モーニャ

【審査官】 茅根 文子

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２００８／０６５４９２（ＷＯ，Ａ２）

【文献】 国際公開第２０１３／０３４９７５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１０／１３３７６１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１２／１０１５００（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 欧州特許出願公開第０２０００５３０（ＥＰ，Ａ１）

【文献】 特表２００３−５２２７３１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 7th PROBIOTICS, PREBIOTICS & NEW FOODS PROCEEDINGS AND ABSTRACTS，２０１３年 ９月，p. 206，ＵＲＬ，http://www.probiotics-prebiotics-newfood.com/pdf/7th_Probiotics_Prebiotics_Newfood.pdf

【文献】 STRUS M，EUROPEAN JOURNAL OF OBSTETRICS GYNECOLOGY AND REPRODUCTIVE BIOLOGY，IR，ELSEVIER，２０１２年 ８月，V163 N2，P210-215

【文献】 L. PASCUAL，JOURNAL OF MEDICAL MICROBIOLOGY，２０１０年，V59 N3，P360-364

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３５／００−３５／７６８；３６／０６−３６／０６８

Ａ６１Ｋ ４７／２６

Ａ６１Ｋ ４７／３６

Ａ６１Ｋ ４７／４２

Ａ６１Ｋ ４７／４６

Ａ６１Ｐ １５／０２

Ａ６１Ｐ ３１／０４

Ｃ１２Ｎ １／２０

ＣＡｐｌｕｓ／ＷＰＩＤＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

大腸菌群病原体および／またはガードネレラと関係する細菌性腟症、膣炎および膣感染症の予防的および／または治療的処置において使用するための、
− ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２１(ＬＰ０１)株およびラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２０(ＬＰ０２)株からなる群から選択される少なくとも一細菌株と、
− 細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)および細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５６(ＬＦ１６)からなる群から選択される少なくとも一細菌株の組み合わせを含む、または、代替的に、これら細菌株からなる細菌混合物を含む、組成物。

【請求項2】

反復性または再発性細菌性腟症の処置のための、請求項１に記載の使用のための組成物。

【請求項3】

該細菌混合物が細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２１(ＬＰ０１)と、細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)および細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５６(ＬＦ１６)を含む群から選択される少なくとも一細菌株の組み合わせを含む、または、代替的に、これら細菌株からなる、請求項１または２の使用のための組成物。

【請求項4】

該細菌混合物が細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２１(ＬＰ０１)および細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)の組み合わせを含む、または、代替的に、これら細菌株からなる、請求項３に記載の使用のための組成物。

【請求項5】

該細菌混合物が細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２０(ＬＰ０２)と、細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)および細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５６(ＬＦ１６)を含む群から選択される少なくとも一細菌株の組み合わせを含む、または、代替的に、これら細菌株からなる、請求項１または２に記載の使用のための組成物。

【請求項6】

該細菌混合物が細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２０(ＬＰ０２)および細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５６(ＬＦ１６)を含む、または、代替的に、これら細菌株からなる、請求項５に記載の使用のための組成物。

【請求項7】

該組成物が、さらにタンニン酸塩またはタンニン酸ゼラチン、アルギン酸塩、キシログルカンまたはキシロゲル、グアーゴム、タラゴム、アカシア、イナゴマメ、カラスムギ、竹繊維、柑橘類果実繊維およびグルコマンナン類を含む群から選択される天然ゴムまたは植物ゴムおよび／または植物ゼラチンのような少なくとも１種のゲル化物質を含む、請求項１〜６のいずれかに記載の使用のための組成物。

【請求項8】

前記ゲル化物質が顕著な粘膜付着特性を有する、請求項７に記載の使用のための組成物。

【請求項9】

前記ゲル化物質が天然ガラクトマンナン類から選択される、請求項７に記載の使用のための組成物。

【請求項10】

前記ゲル化物質がグアーゴム類から選択される、請求項７に記載の使用のための組成物。

【請求項11】

該組成物が、さらにイヌリン、フルクト−オリゴ糖類(ＦＯＳ)、ガラクトおよびｔｒａｎｓ−ガラクト−オリゴ糖類(ＧＯＳおよびＴＯＳ)、グルコ−オリゴ糖類(ＧＯＳα)、キシロ−オリゴ糖類(ＸＯＳ)、キトサン−オリゴ糖類(ＣＯＳ)、ダイズ−オリゴ糖類(ＳＯＳ)、イソマルト−オリゴ糖類(ＩＭＯＳ)、難消化性デンプン、ペクチン類、サイリウム、アラビノ−ガラクタン類、グルコ−マンナン類およびガラクト−マンナン類を含む群から選択されるプレバイオティクス活性を有する少なくとも１種の繊維を含む、請求項１〜１０のいずれかに記載の使用のための組成物。

【請求項12】

前記プレバイオティクス活性を有する少なくとも１種の繊維がフルクト−オリゴ糖類(ＦＯＳ)、アラビノガラクタン類またはこれらの混合物から選択される、請求項１１に記載の使用のための組成物。

【請求項13】

病原性大腸菌群および／またはガードネレラと関係する細菌性腟症、膣炎および膣感染症の予防的および／または治療的処置、好ましくは反復性または再発性細菌性腟症の処置において使用するための、ＤＳＭＺセンターに２０１３年３月１日にプロバイオティカル・ソシエタ・ペル・アチオニ社により寄託され、寄託番号ＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)を有するラクトバチルス・ファーメンタム種に属する細菌株およびＤＳＭＺセンターに２０１３年３月１日にプロバイオティカル・ソシエタ・ペル・アチオニ社により寄託され、寄託番号ＤＳＭ ２６９５６(ＬＦ１６)を有するラクトバチルス・ファーメンタム種に属する細菌株。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、局所膣使用のための乳酸菌含有組成物に関する。本発明の組成物は、細菌性腟症の原因となる、特にガードネレラ・バジナリスおよび／または大腸菌群に関係する、膣病原体が原因である膣感染症に、反復性または再発性を含めて、予防的および／または治療的処置に有効に適用可能である。

【背景技術】

【0002】

膣微生物叢が、生態学的環境(eco-environment)でコロニー形成する共生生物として生理学的に生存し、それゆえに、定義上、その生態系を形成する、多様なサイズおよび性質の内在性微生物のプールからなることは知られている。このような生態系は、全体として、適切な生理的状態を維持するために共生的に相互作用する膣および子宮の内膜の上皮細胞、臓器内腔の腺性の分泌性細胞および複雑な細菌叢により代表される。こうして得られた平衡状態は、環境が微生物叢に影響を与える生理病理学的事象を変化させるダイナミズムを支持し、微生物は、次に、主として上行性の増殖により細胞介在免疫防御の反応性に影響を与える。膣微生物集団は混在性であり、好気性および嫌気性両者の約５０種の細菌からなる。通常、微生物成分の９５％は、“デーデルライン・コンプレックス”の一部を形成する乳酸桿菌であり、残り５％は共生細菌および日和見病原体、中でもストレプトコッカス・エピデルミディス、ジフテロイド菌、ペプトストレプトコッカス属、バクテロイデス属、大腸菌、ガードネレラ・バジナリスおよびカンジダ属を含む。

【0003】

それゆえに、通常の生物学的および分子生物学的方法の両者によれば、乳酸桿菌属に属する菌株が主成分であることが示される。この微生物の濃度は約１×１０^９ＣＦＵ／mlであり、腸内容物の１グラムあたりの同細菌群の濃度と比較して約１００倍高い値である。乳酸桿菌の最も代表的な種は、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・ファーメンタム、ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・ブレビス、ラクトバチルス・ジェンセニー、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・セロビオスス、ラクトバチルス・ライヒマニ、ラクトバチルス・デルブリュッキおよびラクトバチルス・サリヴァリゥスである。

【0004】

膣微生物叢に関するいくつかの研究は、通常優勢に存在する乳酸桿菌が、望まれない微生物、特に、細菌性腟症、真菌感染症、性行為感染症および尿路感染症(ＵＴＩ)の原因菌によるコロニー形成の阻止に重要な役割を果たしていることを示している。

【0005】

膣壁細胞は、特に増殖および成熟がホルモンと関係する上皮の上層および中層のこのような均衡の維持に主要な役割を有する。実際、エストロゲンレベルが膣上皮細胞のグリコーゲン含量に影響し、膣上皮細胞の代謝が有機酸類の合成に関与し、本臓器の管腔のｐＨを、３.５から４.５にまで下げる。この機構により、外来性病原体の侵襲または通常膣レベルでは低量で存在する無害微生物の複製は妨害される。思春期前の対象では、膣上皮のグリコーゲン含量は低く、ｐＨは約７である。

【0006】

しかしながら、抗生物質摂取、ストレス状態、妊娠、月経周期または高エストロゲン濃縮物の摂取と関係するホルモン変調のような種々の外来性および内在性因子により、この複雑かつ均衡化した生態系の不均衡が生じることは非常に頻繁にある。

【0007】

それゆえに、微生物叢平衡状態の変化が日和見病原菌の蔓延を生じ、これが、“デーデルライン・コンプレックス”の作用によりもはや妨害されず、日和見病原菌、中でもガードネレラおよび／または大腸菌群が原因である膣炎または細菌性腟症を起こし得ることを避けるために、膣生態系を再均衡化し、平衡を保つために、有効に介入する必要がある。

【0008】

閉経後の女性においては、エストロゲンレベルの低下により膣グリコーゲン濃度が低下し、膣ｐＨが上昇し、嫌気性細菌が優勢となり、腸内細菌科細菌の顕著な増殖が起こる。

【0009】

細菌性腟症は、生殖可能年齢の女性で最も一般的な膣感染であり、妊婦でも高頻度である。細菌性腟症は、全膣感染症の６０％を超える。米国において、国立健康統計センター−国民健康栄養調査(ＮＨＡＮＥＳ)により１２,０００名を超える女性に対して２００１〜２００４年に実施された調査では、細菌性腟症の有病率は２９.２％であったが、１５.７％のみが症候性であったことが示された。細菌性腟症の相当な割合がこのように無症候性であり、掻痒感、灼熱感および性行為中の疼痛のような膣炎症に典型的な症状に至らない。その多くは、特に、過敏症、発赤または腫脹を起こさないが、いずれの場合も、悪臭を特徴とする、白色または灰色がかった分泌物を伴う腟分泌物の増加を起こす。腟分泌物が月経周期により実質的に変わるとの事実から、女性は、進行中の感染があることをしばしば理解できず、細菌性腟症は診断されない。細菌性腟症の放置は、主として感受性の患者において、より重度の膣炎および感染症の発症に至り得る。さらに、性行為を通じて感染症の伝染に繋がり得る。

【0010】

それゆえに、細菌性腟症、および結果的に膣炎および細菌感染症の発症の予防および／または治癒のために有効に介入する必要性がある。

【0011】

細菌性腟症の真の原因は現在なお調査および研究の対象となっている。症例のほとんどの原因となる主病原体は、ガードネレラ属で唯一知られる種であるグラム染色不定の細菌ガードネレラ・バジナリス(８０〜８５％)およびグラム陰性細菌大腸菌(１０〜１５％)である。さらに、病原性細菌大腸菌はまた早産のリスクを引き起こす好気性細菌性腟症の原因となる。

【0012】

それでもなお、細菌性腟症発症は、他の危険因子と同時的に相関する。最も顕著な危険因子の中では、例えば、不適切な個人的衛生行為(例えば膣洗浄の過度の使用)、抗生物質またはコイルのような子宮内用機械的避妊具の使用、過去の妊娠およびある遺伝的素因を挙げなければならない。

【0013】

細菌性腟症の女性は、不快な匂いを伴う異常腟分泌がある。可能性のある分泌物は、通常白色または灰色であり、かなり流動性であり得る。さらに、罹患女性は、排尿時の灼熱感および／または外性器掻痒感を経験する。しかしながら、既に説明したように、罹患女性のかなりの割合が、何の症状も有しない。

【0014】

症例の大部分で、細菌性腟症は何ら深刻な問題を起こさない。それでもなお、例えば、ウイルスへの暴露の場合のＨＩＶ感染リスクの増大、または他の性行為感染症の病原体、とりわけ性器ウイルス単純ヘルペス、クラミジアおよび淋病の感染のリスクのような、いくつかのかなり重度な合併症の可能性を考慮しなければならない。

【0015】

細菌性腟症の原因細菌はまた子宮およびファロピウス管にも感染し得る。この種の感染は骨盤内炎症性疾患と呼ばれ、不妊症に至り得るし、または該管を障害し、子宮外妊娠および不妊症のリスクを高め得る。

【0016】

細菌性腟症を、抗生物活性を有する分子で処置できることは知られ、その中でメトロニダゾールまたはクリンダマイシンは極めて一般的である。これらはいずれも、推奨投与量は変わるが、妊娠中でも使用できる。これらの作用は一般に急性感染症の処置に有効であると見なされているが、治療終了後に種々の時点で生じ得る再発に対する有意な保護はしばしば提供し得ない。さらに、現在利用可能な抗生物質分子は、なお有機合成薬物に基づくものであり、従って、これらは膣の生理的生息環境(physiological habitat)と明らかに無関係である。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0017】

それゆえに、細菌性腟症、そして結果的に膣炎および細菌感染症の発症の予防および／または治癒のために、合成分子の使用を避け、膣の生理的生息環境に適合するような処置を採用することにより、これに効果的に介入する必要がある。

【0018】

さらに、急性エピソードおよび可能性がある再発の両者に対して、長期保護を確実にし、かつ持続性の有効な予防的および／または治療的処置を保証するために、長時間続く、天然かつ有効なバリア効果を有する必要がある。

【発明の効果】

【0019】

出願人は、広範かつ集中的研究活動の後、上記要請に対する回答を得た。実際、出願人は、多数の乳酸菌を試験し、研究した結果、膣粘膜でコロニー形成し、静菌的および殺菌的分子を産生する特異的活性に基いて、そのうちの僅か数種を選択することに成功した。選択された株は、インターロイキン１０(ＩＬ−１０)およびインターロイキン４(ＩＬ−４)を産生する株であるため、抗大腸菌活性であり、同時に、抗炎症活性を有する。これらの特異な性質(抗大腸菌および抗炎症)を有する選択株は、細菌性腟症、膣炎および関連する感染症に対して有効である。

【0020】

本発明の目的の一つは、後記特許請求の範囲に記載する特徴を有する、細菌性腟症、好ましくは反復性または再発性細菌性腟症の予防的および／または治療的処置に使用するための組成物である。

【0021】

本発明の好ましい態様は、次の詳細な記載において検討される。
本発明の状況において、組成物は、医薬組成物またはサプリメント製品または医療機器または食品組成物を意図する。

【0022】

本発明の目的の一つは、大腸菌群病原性細菌および／またはガードネレラと関係する細菌性腟症、膣炎および膣感染症の予防的および／または治療的処置において使用するための、ラクトバチルス・ファーメンタム種に属し、プロバイオティカル・ソシエタ・ペル・アチオニ社により２０１３年３月１日にＤＳＭＺセンターに寄託され、寄託番号ＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)を有する細菌株およびラクトバチルス・ファーメンタム種に属し、プロバイオティカル・ソシエタ・ペル・アチオニ社により２０１３年３月１日にＤＳＭＺセンターに寄託され、寄託番号ＤＳＭ ２６９５６(ＬＦ１６)を有する細菌株である。

【0023】

本発明の目的の一つは、インターロイキンＩＬ−４およびインターロイキンＩＬ−１０産生の刺激を伴い、ガードネレラ・バジナリスおよび大腸菌に対する特異的抗細菌活性ならびに抗炎症活性の両者を有する複数細菌種を含む、または、代替的に、該複数細菌種からなる細菌混合物を含む組成物である。

【0024】

本発明の目的の一つは、該混合物がガードネレラ・バジナリスに対する特異的抗細菌活性を有する少なくとも一細菌株と、インターロイキンＩＬ−４およびインターロイキンＩＬ−１０産生の刺激を伴う抗細菌大腸菌活性および抗炎症活性を有する少なくとも一細菌株の組み合わせを含む、または、代替的に、これら細菌株からなる組成物である。

【0025】

本発明の目的の一つは、大腸菌群病原体および／またはガードネレラと関係する細菌性腟症において使用するための、膣炎および膣感染症の予防的および／または治療的処置、好ましくは反復性または再発性細菌性腟症の処置のための、ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２１−ＬＰ０１株およびラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２０−ＬＰ０２株からなる群から選択される少なくとも一細菌株と、細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)および細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５６(ＬＦ１６)からなる群から選択される少なくとも一細菌株を含む、または、代替的に、これら細菌株からなる細菌混合物を含む、または、代替的に、該混合物からなる組成物である。

【0026】

ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２１−ＬＰ０１株は、モフィン・ソチエタ・レスポンサビリタ・リミタータ社により２００１年１０月１６日にＢＣＣＭ ＬＭＧセンターに寄託された。

【0027】

ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２０−ＬＰ０２株は、モフィン・ソチエタ・レスポンサビリタ・リミタータ社により２００１年１０月１６日にＢＣＣＭ ＬＭＧセンターに寄託された。

【0028】

好ましい態様において、本発明の組成物は、膣炎および膣感染症の予防的および／または治療的処置、好ましくは反復性または再発性細菌性腟症の処置のための、細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２１−ＬＰ０１と、大腸菌群病原体および／またはガードネレラと関係する細菌性腟症において使用するための細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)および細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５６(ＬＦ１６)からなる群から選択される少なくとも一細菌株の組み合わせを含む、または、代替的に、これら細菌株からなる細菌混合物を含む、または、代替的に、該混合物からなる。

【0029】

好ましくは、該組成物は、細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２１−ＬＰ０１および細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)を含む、または、代替的に、これら細菌株からなる細菌混合物を含む、または、代替的に、該混合物からなる。

【0030】

他の好ましい態様において、本発明の組成物は、細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２０−ＬＰ０２と、大腸菌群病原体および／またはガードネレラと関係する細菌性腟症において使用するための、膣炎および膣感染症の予防的および／または治療的処置、好ましくは反復性または再発性細菌性腟症の処置のための細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)および細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５６(ＬＦ１６)からなる群から選択される少なくとも一細菌株の組み合わせを含む、または、代替的に、該組み合わせからなる細菌混合物を含む、または、代替的に、該混合物からなる。

【0031】

好ましくは、該組成物は、細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２０−ＬＰ０２および細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５６(ＬＦ１６)を含む、または、代替的に、これら細菌株からなる細菌混合物を含む、または、代替的に、該混合物からなる。

【0032】

他の態様において、本発明の組成物は、さらに、プロバイオティカル・ソシエタ・ペル・アチオニ社により２００６年５月２４日に寄託されたラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ １８２９６(ＬＦ０７)株を含む、または、代替的に、これからなる群から選択される細菌株を含む。

【0033】

本発明の組成物は、天然ゴムまたは植物ゴムおよび／または植物ゼラチンのような、好ましくは顕著な粘膜付着特性を有する、少なくとも１種のゲル化物質をさらに含む。植物ゴムおよび／または植物ゼラチンは、好ましくはタンニン酸塩またはタンニン酸ゼラチン、アルギン酸塩、キシログルカンまたはキシロゲル、グアーゴム、タラゴム、アカシア、イナゴマメ、カラスムギ、竹繊維、柑橘類果実繊維およびグルコマンナン類を含む群から選択される。好ましくは、該ゲル化物質は天然起源のガラクトマンナン類から選択される。好ましい態様において、ゲル化物質はグアーゴム類から選択される。

【0034】

さらに、本発明の組成物は、イヌリン、フルクト−オリゴ糖類(ＦＯＳ)、ガラクト−およびｔｒａｎｓ−ガラクト−オリゴ糖類(ＧＯＳおよびＴＯＳ)、グルコ−オリゴ糖類(ＧＯＳα)、キシロ−オリゴ糖類(ＸＯＳ)、キトサン−オリゴ糖類(ＣＯＳ)、ダイズ−オリゴ糖類(ＳＯＳ)、イソマルト−オリゴ糖類(ＩＭＯＳ)、難消化性デンプン、ペクチン類、サイリウム、アラビノ−ガラクタン類、グルコ−マンナン類およびガラクト−マンナン類を含む群から選択される、プレバイオティクス活性を有する少なくとも１種の繊維をさらに含む。一つの態様において、プレバイオティクス活性を有する該繊維は、フルクト−オリゴ糖類(ＦＯＳ)、アラビノガラクタン類またはこれらの混合物から選択される。本発明の一つの態様は、細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)、細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２１(ＬＰ０１)および／またはグアーゴムおよび／またはアラビノガラクタンおよびフルクト−オリゴ糖(ＦＯＳ)から選択されるプレバイオティクス繊維またはこれらの混合物を含む、または、代替的に、これらからなる組成物である。

【0035】

本発明の他の態様は、細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５６(ＬＦ１６)、細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２０(ＬＰ０２)および／またはグアーゴムおよび／またはアラビノガラクタンおよびフルクト−オリゴ糖(ＦＯＳ)から選択されるプレバイオティクス繊維またはこれらの混合物を含む、または、代替的に、これらからなる組成物である。

【0036】

本発明の組成物は、錠剤、カプセル剤、坐剤、ロゼンジ剤または顆粒剤または散剤としての、局所膣使用用固体形態でも、溶液剤、液体膣洗浄剤、懸濁液剤またはゲル剤としての、局所膣使用用液体形態でもよい。

【0037】

本発明の組成物は、膣内使用のための固体形態の製造に適する、当分野で知られる添加物および技術的添加物を含み、これは、該固体形態が膣腔内で水和した後、崩壊し、細菌株を遊離できる。

【0038】

さらに、本発明の組成物は、膣内使用のための固体形態、例えば錠剤または坐剤に含まれる細菌含有量が時間と共に劇的に減少することを避けるおよび／または細菌細胞がその健康状態および生存能を損なうような製造工程を経ることを避けるために、使用される種々の添加物の圧縮性、温度および濃度パラメータを適切に選択することを可能にする、当分野で知られる技術および機器により製造する。

【0039】

錠剤または坐剤の形態の本発明の組成物は、圧縮工程の間および２５℃を超えない保存温度での製品の販売上の有効期間の何れにおいても、２種の乳酸桿菌の最適生存を保持し得る。局所膣使用用固体形態の本発明の組成物は、錠剤または坐剤あたり、そこに含まれる各細菌株について、少なくとも４００×１０^６個の生存可能細胞の最小細菌含有量を確保しながら、室温で２年の有効期間を有する。

【0040】

本発明の細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１５およびラクトバチルス・プランタルムＬＰ０１またはラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１６およびラクトバチルス・プランタルムＬＰ０２と一緒にゲル化剤グアーゴムが存在することにより、可能性のある膣病原体、特に細菌性腟症の周知の原因菌であるガードネレラ・バジナリスおよび／または大腸菌群に関係する病原菌に対する有効なバリア効果を、再発性の場合であっても、急速に確立できる。有効性は、主にガードネレラ・バジナリスおよび／または大腸菌群が原因であるときの、細菌性腟症に対するものである。

【0041】

選択株ラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１５およびラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１６はガードネレラ・バジナリスに対して有効であり、一方で選択株ラクトバチルス・プランタルムＬＰ０１およびラクトバチルス・プランタルムＬＰ０２は、これらがインターロイキン１０(ＩＬ−１０)およびインターロイキン４(ＩＬ−４)産生株であるために大腸菌に対して有効であり、同時に抗炎症活性を発揮する。

【0042】

例えばグアーゴム(天然ガラクトマンナン)のような、上に記載したものから選択される粘膜付着性ゲル化剤の使用は、膣における直接的ヒドロゲル形成を介して、錠剤または坐剤の脱凝集の僅か数分後に、可能性のある膣病原体に対する機械的バリア効果を急速に確立できる。かかる病原菌としてガードネレラ・バジナリスおよび大腸菌群を具体的に挙げることができ、その中で、大腸菌は特に重要である。

【0043】

粘膜付着性ゲル化剤、例えばグアーゴムが、膣環境における水和後直ちに、最適粘性を有するゲルの形成を仲介し、粘膜中に均一に分散することにより、上記共生生物または病原性細菌の付着に対する物理的−機械的バリヤー作用を形成する。

【0044】

グアーゴムの主成分はマンノース単位とガラクトース単位からなる三糖であるガラクトマンナンであり、重合してガラクトースの短側鎖１−６分枝鎖を有する直鎖状１−４鎖を形成し、β−Ｄ−(１−４)グリコシド結合により結合した約２００〜３００kDaの分子量を有するα−Ｄ−マンノピラノシル鎖を形成する。

【0045】

本発明の組成物は、ゲル化剤、例えばグアーゴムに加えて、二種の特異的微生物ラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１５およびラクトバチルス・プランタルムＬＰ０１またはラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１６およびラクトバチルス・プランタルムＬＰ０２を、１×１０^７〜１×１０^１０、好ましくは１×１０^８〜１×１０^９ＣＦＵ／ｇの範囲内の濃度で含み(そして、いずれの場合でも錠剤または坐剤あたりの生存可能細胞が株あたり４００×１０^６を超える)、これらは、膣微生物叢に急速に取り込まれ、“デーデルライン・コンプレックス”を回復させ、結果的に、バリア効果を増強する。

【0046】

本発明の組成物は、二種の特異的微生物ラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１５およびラクトバチルス・プランタルムＬＰ０１またはラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１６およびラクトバチルス・プランタルムＬＰ０２を、３：１〜１：３、好ましくは２：１〜２：１に含まれる範囲の、さらに好ましくは１：１の比で含み、ゲル化物質を１〜５０重量％、好ましくは５〜３５重量％、さらに好ましくは１０〜２０重量％の範囲内の量で含み、プレバイオティクス繊維を１〜５０重量％、好ましくは５〜３５重量％、さらに好ましくは１０〜２０重量％の範囲内の量で含む。

【0047】

実際、本発明の細菌は、膣粘膜のコロニー形成により、長期間有効なバリア効果を確立することができ、これにより、有機酸類、主に乳酸および酢酸の産生が自己制御される。これらの細菌は、有機酸類(乳酸および酢酸)に加えて、２種の乳酸桿菌による、特異的活性を有する分子、主に溶菌素類およびバクテリオシン類の合成および遊離を介して、細菌性腟症の原因となる共生生物または病原性細菌に対するバリア効果を増強する。

【0048】

ラクトバチルス・プランタルムＬＰ０１株およびラクトバチルス・プランタルムＬＰ０２株の拮抗活性を、インビトロで４種の大腸菌株(ＡＴＣＣ ８７３９、ＡＴＣＣ １０５３６、ＡＴＣＣ ３５２１８およびＡＴＣＣ ２５９２２)に対して試験した。ラクトバチルス・プランタルムＬＰ０１株に関する結果(図１)のみを提示しているが、これは両者が同等な結果を示したためである。

【0049】

図１に結果を示す。結果を、大腸菌の各株に対する乳酸桿菌が関与する阻止円直径(mm)として示す。結果の有意性閾値を２mmに等しいとした。阻止円は、ラクトバチルス・プランタルムＬＰ０１が発揮するバリア効果のために、大腸菌が増殖できなかった皿内の領域である。結果を、３回の独立した実験の平均±標準偏差(ＳＤ)として開示する。

【0050】

ヒストグラム(図１)から明らかなとおり、ラクトバチルス・プランタルムＬＰ０１株は、４mmを超える阻止円直径で、試験した大腸菌の４株全てを有意に阻止できる。

【0051】

他方で、細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１５およびラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１６は、桿菌様、グラム染色不定細菌ガードネレラ・バジナリスを有意に阻止できる。特に、該乳酸桿菌の拮抗活性を、微好気性増殖２４時間後および４８時間後の６００nm波長で検出する光学密度(ＯＤ_６００)の定量により、ガードネレラの株に対して試験した。ガードネレラを液体ＴＨ培地で増殖させ、一方、本実験で試験する各乳酸桿菌を液体ＭＲＳ培地で培養した。増殖の最後に、各乳酸桿菌の培養由来の中和上清を、種々のパーセンテージで、２％ガードネレラ・バジナリスを接種した新鮮ＭＲＳに添加した。２４時間および４８時間後の新鮮ＭＲＳ中ガードネレラ単独の増殖(陽性対照)および０.５％〜４％の間の量の中和上清を添加したときの増殖を比較した。ラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１５株に関する結果(２４時間目は表１および４８時間目は表２)しか示していないが、これはラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１６株でも同様な結果が得られたからである。

【0052】

【表1】

【0053】

【表2】

【0054】

表１および表２に記載した細菌の全ての株は出願人により寄託されており、ブダペスト条約により確立された規定に従い、公的に入手可能である。予想通り、新鮮ＭＲＳ培地でガードネレラ・バジナリス単独の増殖は、該細菌が利用可能な培地自体のパーセンテージに比例した。中和上清のパーセンテージを上げると、すなわち乳酸桿菌により産生される有機酸類が介在する非特異的阻止効果を排除するために中性ｐＨにすると、ガードネレラ・バジナリスの増殖は、主に完全特異的阻止作用を仲介できるラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１５の場合に減少する。他方で、ラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ０８およびラクトバチルス・パラカゼイＩＤ １６０８では、ガードネレラ・バジナリスの増殖は、新鮮ＭＲＳで得られたものに実質的に類似する値であり、これら２種の乳酸桿菌が阻止作用を発揮しないことを示唆する。残りの５種の株、主にラクトバチルス・クリスパータスＩＤ １６０５およびラクトバチルス・ファーメンタムＩＤ １４５９は拮抗作用を仲介するが、ラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１５より程度が弱い。ラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１６株にも同様のことが言える。

【0055】

上記特異的阻止機構に加えて、両乳酸桿菌とも、条件的ヘテロ発酵代謝により大量の乳酸および酢酸を産生でき、膣内ｐＨの急速かつ大幅な低下に貢献する。

【0056】

さらに、例えばアラビノガラクタンおよび短鎖フルクト−オリゴ糖類(ＦＯＳｓｃ)のような２種の繊維の存在が、“デーデルライン・コンプレックス”の微生物および製剤に存在する乳酸桿菌の選択的栄養物を提供し、それにより膣生態系がコロニー形成する能力と、続く進展(development)を促進する。

【0057】

これらの特定の炭素源を発酵させる能力に起因する競合的利点は、ラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１５、ラクトバチルス・プランタルムＬＰ０１、ラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１６およびラクトバチルス・プランタルムＬＰ０２および他の自発性乳酸桿菌集団の急速な増加と、その後の抗菌作用を有するペプチド類および病原菌種のほとんどに不適合な値まで膣ｐＨを低下できる有機酸類の相当量の合成をもたらす。

【0058】

有利には、本発明の局所膣使用用組成物は：
− 全生態系の速いコロニー形成のための、高細菌集団、
− 速い増殖のための、良好な生理的状態の複数細菌株、
− 有効期間の最後まで有効性を確実にするための、最終製品の保存条件下の適正な安定性
からなる。

【0059】

本発明の組成物は、反復性または再発性細菌性腟症の処置において有効に適用可能である。

【0060】

免疫調節作用を有するサイトカイン類
この研究は、免疫調節作用を有する主要なサイトカイン類の代表であるサイトカイン類ＩＬ−４およびＩＬ−１０の誘導を評価した。図Ａに示すとおり、試験した複数細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２１−ＬＰ０１およびラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２０−ＬＰ０２は、両方のサイトカイン類について、基底条件と比較して、統計的に有意な増加を誘導できる。

【図面の簡単な説明】

【0061】

【図A】サイトカインプロファイル。１０回の実験の平均±Ｓ.Ｅ.Ｍ. 統計的意羲を、ステューデントのｔ検定を使用して計算する。基底条件(非刺激ＰＢＭＣ)に対して計算するとき、値ｐ＜０.０５を統計的有意と見なす。ＩＬ−１０産生を、１日間刺激後の培養上清で評価した。ＩＬ−４産生を、５日間刺激後の培養上清で評価した。ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２０−ＬＰ０２株で同等な結果が得られた。

【図1】ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２１−ＬＰ０１株による大腸菌(ＡＴＣＣ ８７３９、ＡＴＣＣ １０５３６、ＡＴＣＣ ３５２１８、ＡＴＣＣ ２５９２２)阻止の定量に関する。

【図B】ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２０−ＬＰ０２株による大腸菌(ＡＴＣＣ ８７３９、ＡＴＣＣ １０５３６、ＡＴＣＣ ３５２１８、ＡＴＣＣ ２５９２２)阻止の定量に関する。

【発明を実施するための形態】

【0062】

本発明の目的の一つは、大腸菌群病原体および／またはガードネレラと関係する細菌性腟症、膣炎および膣感染症の予防的および／または治療的処置において使用するための；および反復性または再発性細菌性腟症に対して使用するための、
− 細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２１(ＬＰ０１)および／または
− 細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)および
− タラゴムおよび
− アラビノガラクタン繊維および
− フルクト−オリゴ糖繊維
を含む、または、代替的に、これらからなる、組成物である。

【0063】

細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２１(ＬＰ０１)および細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)は、いずれも１×１０^７〜１×１０^１０、好ましくは１×１０^８〜１×１０^９ＣＦＵ／ｇの範囲内の濃度で存在する(そして、いずれの場合でも錠剤または坐剤あたりの株あたりの生存可能細胞が４００×１０^６を超える)。この２種の乳酸桿菌細菌株は、組成物中に、１：３〜３：１、好ましくは１：２〜２：１に含まれる範囲の、例えば１：１の重量比で含まれる。

【0064】

タラゴムは、組成物の重量に対して１〜１０重量％、好ましくは３〜８％の範囲内の量、例えば５％の量である。
アラビノガラクタン繊維は、組成物の重量に対して１０〜４５重量％、好ましくは２５〜４０％の範囲内の量、例えば３５％の量である。

【0065】

フルクト−オリゴ糖繊維は、組成物の重量に対して１０〜４０重量％、好ましくは１５〜３５％の範囲内の量、例えば２５％の量である。
アラビノガラクタン繊維対フルクト−オリゴ糖繊維の重量比は、１：２〜２：１、好ましくは１：１.５〜１.５：１の範囲内である。

【0066】

例えば、１ｇの組成物は、各４×１０^６ＣＦＵ／ｇ濃度(３７０mg重量)のこの２種の乳酸桿菌細菌株、５０mgのタラゴム、アラビノガラクタン３４０mgおよびフルクト−オリゴ糖２４０mgを含んでよく、該組成物は徐放性膣錠剤(組成物)の形であり得る。

【実施例】

【0067】

出願人は、この２種の乳酸桿菌細菌株の両者を、インビトロでおよび組成物でインビボ(研究)で試験した。

【0068】

ｉ)インビトロで、乳酸桿菌の該細菌株を、２％(ｗ／ｗ)ゼラチン、０.５％酵母抽出物、０.１％デンプンおよび０.１％グルコース含有ＢＨＩ(脳心臓浸出物ブロス)で増殖させたガードネレラ・バジナリスＡＴＣＣ １０２３１株に対して試験した。各株を培養ＭＲＳ培地で培養した。全皿を３７℃で、４８時間、嫌気性条件下(GasPak System)インキュベートした。

【0069】

各株の中和上清を、種々のパーセンテージで新鮮ＢＨＩに添加し、ガードネレラ・バジナリスＡＴＣＣ １０２３１を接種した。ガードネレラ・バジナリス株の、単独および０.５％〜４％の種々の濃度の中和上清の存在下の増殖を、微好気性条件下、３７℃で２４時間および４８時間インキュベーション後、６００nmの光学密度(ＯＤ_６００)により定量した。

【0070】

ii)インビボで、該組成物を、２４名の対象のグループＡおよび１１名の対象のグループＢ(プラセボ)に分けた３５名の患者で試験した。プラセボは、排他的に微結晶セルロースおよび無水リン酸水素カルシウム(不活性成分)を含む等重量の膣錠剤からなる。組成物およびプラセボの膣錠剤を、１日１回、連続７夜、就寝前にグループＡおよびグループＢ(プラセボ)の対象に投与した。その後、１錠を、３週間、３日毎に投与した。処置完了は、両群とも４週間であった。

【0071】

本研究を、第一に、選択乳酸桿菌が、大腸菌を阻止できる株と組み合わせ、そうして、好気性膣炎(ＡＶ)であってさえ、潜在的使用可能性を発揮するために、インビトロでガードネレラ・バジナリスと拮抗する能力を評価するために実施した。本研究の第二段階は、最も有望かつ活性な細菌の組み合わせの使用による、ＢＶの女性でのヒトパイロット試験であった。

【0072】

実施方法。この目的のために、各乳酸桿菌の中和上清を、ガードネレラ・バジナリスＡＴＣＣ １０２３１の増殖を妨害する能力について、０.５％〜４％の範囲のパーセンテージで評価した。
最大阻止を発揮する細菌を、次に、プラセボ対照パイロット試験でヒト干渉についてラクトバチルス・プランタルムＬＰ０１と共に試験し、これは、ＢＶと診断された３４名の女性対象(年齢１８〜５０歳、平均３４.７±８.９歳、閉経期女性不在)を含んだ。２種の微生物ラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１５(ＤＳＭ ２６９５５)およびラクトバチルス・プランタルムＬＰ０１(ＬＭＧ Ｐ−２１０２１)を、５０mgのタラゴムも含む徐放性膣錠剤として膣に投与した。各株の量は、投与量あたり４億の生存可能細胞であった。被験女性に、膣錠剤１錠を連続７夜、１日１回、その後、１錠を３週間３夜毎(急性段階)、最後に、可能性がある再発に対する長期膣コロニー形成の維持のために１週間に１錠適用するよう指示した。臨床検査を行い、ニュージェント・スコアを、各患者で開始時(ｄ０)、２８日後(ｄ２８)および再発を予防するための２ヶ月目の最後(ｄ５６)に定量した。ｄ２８またはｄ５６とｄ０ならびにｄ５６とｄ２８の統計的比較を、可能性がある再発に対する有効性を定量するために実施した。

【0073】

実施結果。ラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１５は、インビトロで２４時間後および４８時間後にガードネレラ・バジナリスＡＴＣＣ １０２３１に対して最大阻止活性を示した。
ヒト試験において、２株の選択乳酸桿菌、すなわちラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１５およびラクトバチルス・プランタルムＬＰ０１は、活性剤の群における２４名の患者中２２名で、２８日後にニュージェント・スコアを７の閾値未満に有意に低下させた(９１.７％、ｐ＜０.００１)。８名の女性(３３.３％)のニュージェント・スコアは、中間群の証拠である４〜６であり、一方残りの１４名(５８.３％)は４未満の評価値を示し、それゆえに生理学的膣微生物叢の回復が示唆された。二ヶ月目の最後に、７を超えるニュージェント・スコアを記録し、ＢＶとして定義され得る女性は４名しかいなかった(１６.７％、ｄ２８に対してｐ＝０.０６５)。プラセボでは、あらゆる時点で有意差は記録されなかった。

【0074】

本研究は、ラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１５およびラクトバチルス・プランタルムＬＰ０１の２株の、ガードネレラによる急性感染症を有効に妨害し、かつ極めて高い割合の女性で関係する不快症状を顕著に軽減する能力を示唆する。
この結果はまた、主要機構として膣粘膜の表面上にガードネレラに対する機械的バリアを形成できる、タラゴムの存在にも起因し得る。

【0075】

さらに、膣微生物叢への２種の乳酸桿菌の補充および粘膜上皮細胞へのそれらの付着により、長期生理学的保護が確立される。
大腸菌に対するさらなるインビトロ阻止活性に鑑みて、好気性膣炎(ＡＶ)におけるそれらの使用は極めて有用である。

【0076】

本研究は、ラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１５(ＤＳＭ ２６９５５)およびラクトバチルス・プランタルムＬＰ０１(ＬＭＧ Ｐ−２１０２１)が、ガードネレラによる急性感染症を有効に阻止し、かつＢＶの女性により報告される悩ましい症状を有意に軽減する能力を示す。この証拠は、膣粘膜の表面にガードネレラおよび他の可能性がある有害微生物の付着に対する機械的バリアを作ることが可能な成分である、タラゴムの存在に起因する。全体的順応および耐容性は、プラセボでプロトコル逸脱により１例の除外が報告されたのみであり、有害事象は起こらなかったため、極めて良好であった。

【0077】

プロトコルの２ヶ月目での活性剤使用群での極めて低い再発パーセンテージが報告されたため、膣微生物叢への２種の乳酸桿菌の補充および粘膜上皮細胞への付着による長期生理学的保護も示された。この点に関し、２種の乳酸桿菌による膣コロニー形成を改善できる２種の繊維であるアラビノガラクタンおよびフルクト−オリゴ糖類(ＦＯＳ)の使用が、本研究プロトコルの２ヶ月目に報告される再感染に対する長期バリアにおいて役割を有する。

【0078】

プラセボ群に含まれる対象数は、活性剤群に比して少ないが、２８日後(ｐ＝０.６１９)もプロトコル終了後(ｐ＝０.８２３)も有意差が報告されなかったためプラセボ効果は極めて低く、それゆえに、２種の乳酸桿菌を投与された対象において報告された改善が特異的であり、試験した組成物の全体的効果に起因し得ることが示唆される。

【0079】

特異的作用機序によるガードネレラ増殖の阻止のような、選択した乳酸桿菌により発揮されるインビトロ機能が、ＢＶと診断された女性対象におけるこのパイロット試験中に有利に確認されたとの事実を強調することも興味深い。これは、ガードネレラ・バジナリスに対するインビトロ拮抗作用が、急性処置および再発の長期予防の両者に関して、ＢＶの場合には保護作用を有する乳酸桿菌の有効な選択のための基準である証明であり得ることを示唆する。本研究のインビトロ段階で、ガードネレラ阻止試験に適する適正な増殖培地の選択は、乳酸桿菌を阻止評価の前に増殖させるのに一般的に使用される培地であるＭＲＳに存在するある種の成分が、恐らく、ガードネレラ増殖を促進し得るために、もう一つの重要な点であった。実際、ＢＨＩ単独でのガードネレラの増殖は、特に４８時間後、極めて乏しかった。

【0080】

ラクトバチルス・プランタルムＬＰ０１(２９)により主に発揮される大腸菌に対するインビトロ阻止活性の観点から、好気性膣炎(ＡＶ)におけるラクトバチルス・ファーメンタムＬＦ１５との組み合わせでのその潜在的使用は、極めて有用であり、興味深いことが証明され得る。実際、ＡＶは、主に大腸菌と関係するが、またストレプトコッカス・アガラクチアおよびスタフィロコッカス・アウレウスも含まれる。標準的ＡＶ処置は経口または膣抗生物質からなるが、高濃度の乳酸桿菌により特徴付けられる正常細菌叢を自動的に回復することは不可能であり、それゆえに再発および再感染しやすい。結論として、本研究はまたガードネレラ・バジナリス(細菌性腟症)または大腸菌(好気性膣炎)による可能性がある再発を予防するための有効な方法でもある。
さらに、本願発明は次の態様を含む。
項１．大腸菌群病原体および／またはガードネレラと関係する細菌性腟症、膣炎および膣感染症の予防的および／または治療的処置において使用するための、
− ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２１(ＬＰ０１)株およびラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２０(ＬＰ０２)株からなる群から選択される少なくとも一細菌株と、
− 細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)および細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５６(ＬＦ１６)からなる群から選択される少なくとも一細菌株の組み合わせを含む、または、代替的に、これら細菌株からなる細菌混合物を含む、組成物。
項２．反復性または再発性細菌性腟症の処置のための、項１に記載の使用のための組成物。
項３．該細菌混合物が細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２１(ＬＰ０１)と、細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)および細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５６(ＬＦ１６)を含む群から選択される少なくとも一細菌株の組み合わせを含む、または、代替的に、これら細菌株からなる、項１または２の使用のための組成物。
項４．該細菌混合物が細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２１(ＬＰ０１)および細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)の組み合わせを含む、または、代替的に、これら細菌株からなる、項３に記載の使用のための組成物。
項５．該細菌混合物が細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２０(ＬＰ０２)と、細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)および細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５６(ＬＦ１６)を含む群から選択される少なくとも一細菌株の組み合わせを含む、または、代替的に、これら細菌株からなる、項１または２に記載の使用のための組成物。
項６．該細菌混合物が細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２０(ＬＰ０２)および細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５６(ＬＦ１６)を含む、または、代替的に、これら細菌株からなる、項５に記載の使用のための組成物。
項７．該組成物が、さらにタンニン酸塩またはタンニン酸ゼラチン、アルギン酸塩、キシログルカンまたはキシロゲル、グアーゴム、タラゴム、アカシア、イナゴマメ、カラスムギ、竹繊維、柑橘類果実繊維およびグルコマンナン類を含む群から選択される天然ゴムまたは植物ゴムおよび／または植物ゼラチンのような、好ましくは顕著な粘膜付着特性を有する少なくとも１種のゲル化物質を含む、項１〜６のいずれかに記載の使用のための組成物。好ましくは該ゲル化物質は天然ガラクトマンナン類から選択され、好ましくは、ゲル化物質はグアーゴム類から選択される。
項８．該組成物が、さらにイヌリン、フルクト−オリゴ糖類(ＦＯＳ)、ガラクトおよびｔｒａｎｓ−ガラクト−オリゴ糖類(ＧＯＳおよびＴＯＳ)、グルコ−オリゴ糖類(ＧＯＳα)、キシロ−オリゴ糖類(ＸＯＳ)、キトサン−オリゴ糖類(ＣＯＳ)、ダイズ−オリゴ糖類(ＳＯＳ)、イソマルト−オリゴ糖類(ＩＭＯＳ)、難消化性デンプン、ペクチン類、サイリウム、アラビノ−ガラクタン類、グルコ−マンナン類およびガラクト−マンナン類を含む群から選択されるプレバイオティクス活性を有する少なくとも１種の繊維を含み、好ましくはプレバイオティクス活性を有する該繊維がフルクト−オリゴ糖類(ＦＯＳ)、アラビノガラクタン類またはこれらの混合物から選択される、項１〜７のいずれかに記載の使用のための組成物。
項９．− 細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２１(ＬＰ０１)および／または
− 細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)を含む、または、代替的に、これら細菌株からなる混合物、さらに
− タラゴムおよび
− アラビノガラクタン繊維および
− フルクト−オリゴ糖繊維
を含む、項１〜８のいずれかに記載の使用のための組成物。
項１０．細菌株ラクトバチルス・プランタルムＬＭＧ Ｐ−２１０２１(ＬＰ０１)および細菌株ラクトバチルス・ファーメンタムＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)が各々１×１０７〜１×１０１０ＣＦＵ／ｇ組成物、好ましくは１×１０８〜１×１０９ＣＦＵ／ｇ組成物の範囲の濃度で存在する、項９に記載の使用のための組成物。
項１１．該２種の細菌株が１：３〜３：１、好ましくは１：２〜２：１に含まれる、例えば１：１の重量比で組成物中に存在する、項９または１０に記載の使用のための組成物。
項１２．タラゴムが組成物の重量に対して１〜１０重量％、好ましくは３〜８％の範囲内の、例えば５％の量で存在する、項９〜１１のいずれかに記載の使用のための組成物。
項１３．該アラビノガラクタン繊維が組成物の重量に対して１０〜４５重量％、好ましくは２５〜４０％の範囲内の、例えば３５％の量で存在し、該フルクト−オリゴ糖繊維が組成物の重量に対して１０〜４０重量％、好ましくは１５〜３５％の範囲内の、例えば２５％の量で存在する、項９〜１２のいずれかに記載の使用のための組成物。
項１４．アラビノガラクタン繊維対フルクト−オリゴ糖繊維の重量比が１：２〜２：１に含まれる、好ましくは１：１.５〜１.５：１に含まれる範囲内である、項９〜１３のいずれかに記載の使用のための組成物。
項１５．病原性大腸菌群および／またはガードネレラと関係する細菌性腟症、膣炎および膣感染症の予防的および／または治療的処置、好ましくは反復性または再発性細菌性腟症の処置において使用するための、ＤＳＭＺセンターに２０１３年３月１日にプロバイオティカル・ソシエタ・ペル・アチオニ社により寄託され、寄託番号ＤＳＭ ２６９５５(ＬＦ１５)を有するラクトバチルス・ファーメンタム種に属する細菌株およびＤＳＭＺセンターに２０１３年３月１日にプロバイオティカル・ソシエタ・ペル・アチオニ社により寄託され、寄託番号ＤＳＭ ２６９５６(ＬＦ１６)を有するラクトバチルス・ファーメンタム種に属する細菌株。

【図1】

【図A】

【図B】