特許 6516092 残留農薬の分析用試料の調製方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6516092

(24)【登録日】2019年4月26日

(45)【発行日】2019年5月22日

(54)【発明の名称】残留農薬の分析用試料の調製方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 27/62 20060101AFI20190513BHJP

   G01N 1/10 20060101ALI20190513BHJP

   G01N 30/06 20060101ALI20190513BHJP

   G01N 33/15 20060101ALI20190513BHJP

【ＦＩ】

   G01N27/62 F

   G01N1/10 F

   G01N30/06 Z

   G01N1/10 C

   G01N1/10 B

   G01N33/15 C

   G01N27/62 V

【請求項の数】12

【全頁数】22

(21)【出願番号】特願2015-61791(P2015-61791)

(22)【出願日】2015年3月24日

(65)【公開番号】特開2016-180710(P2016-180710A)

(43)【公開日】2016年10月13日

【審査請求日】2017年12月21日

(73)【特許権者】

【識別番号】000175272

【氏名又は名称】三浦工業株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100099841

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 恒彦

(72)【発明者】

【氏名】川嶋 文人

【審査官】 佐藤 仁美

(56)【参考文献】

【文献】 特開平０３−１３９５３４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００６−０８４２７６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００４−５１８９４４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０００−０２８５９８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００７−１５５６５７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０１−２２９９７２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 岡尚男，LC/MS/MSによる食肉中のテトラサイクリン系及びペニシリン系抗生物質の同時分析，SCAS News，２００７年，No.25，Pages 3-6

【文献】 畠山えり子, 阿久津千寿子, 梶田弘子，LC/MS/MSを用いた加工食品中のグルホシネート及び代謝物の同時分析，岩手県環境保健研究センター年報，２０１１年，第９号（平成２１年度）

【文献】 [食品に残留する農薬、飼料添加物又は動物用医薬品の成分である物質の試験法]、GC/MSによる農薬等の一斉試験, 平成１７年１月２４日付け食安発第0124001号厚生労働省医薬食品局食品安全部長通知,，２００５年 １月２４日

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｇ０１Ｎ １／００− １／３６、２７／６０−２７／７０、２７／９２、

３０／００−３０／９６、３３／００−３３／４６

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

食品の残留農薬を分析するために用いられる試料の調製方法であって、
水溶性の有機溶媒を用いて前記食品から前記残留農薬を抽出し、得られた抽出液を水と混合して混合液を調製する工程１と、
ナノろ過膜、限外ろ過膜または精密ろ過膜として使用可能な分離膜を用い、前記混合液をろ過してろ液を得る工程２と、
前記ろ液中の前記残留農薬を吸着可能な吸着材に前記ろ液を通過させる工程３と、
工程３の後、前記残留農薬を抽出可能な抽出用溶媒を前記吸着材に通過させる工程４と、
を含む残留農薬の分析用試料の調製方法。

【請求項2】

前記混合液、前記ろ液および前記抽出用溶媒に遠心力を加えることで、それぞれ工程２、工程３および工程４を実行する、請求項１に記載の残留農薬の分析用試料の調製方法。

【請求項3】

前記分離膜は、ポリスルフォン樹脂、ポリエーテルスルフォン樹脂、ポリフッ化ビニリデン樹脂、芳香族ポリアミド樹脂、酢酸セルロース樹脂、ポリテトラフルオロエチレン樹脂、ポリアミド樹脂、ポリアクリロニトリル樹脂、ポリ塩化ビニル−ポリアクリロニトリル共重合体樹脂およびポリカーボネート樹脂からなる群から選択された樹脂材料からなる有機膜またはアルミナ膜である、請求項１または２に記載の残留農薬の分析用試料の調製方法。

【請求項4】

前記有機膜がプラズマ処理またはオゾン処理されている、請求項３に記載の残留農薬の一斉分析用試料の調製方法。

【請求項5】

前記吸着材は、スチレン／ジビニルベンゼン共重合体系樹脂、ジビニルベンゼン共重合体系樹脂、シアノプロピル化シリカゲル、フェニル化シリカゲルおよびオクタデシル化シリカゲルからなる群から選ばれた少なくとも一つである、請求項１から４のいずれかに記載の残留農薬の分析用試料の調製方法。

【請求項6】

前記吸着材を通過した前記抽出用溶媒に含まれる夾雑物質を吸着可能な精製材に前記吸着材を通過した前記抽出用溶媒を通過させる工程５をさらに含む、請求項１から５のいずれかに記載の残留農薬の分析用試料の調製方法。

【請求項7】

前記抽出用溶媒に遠心力を加えることで工程５を実行する、請求項６に記載の残留農薬の分析用試料の調製方法。

【請求項8】

前記精製材は、エチレンジアミン−Ｎ−プロピルシリル化シリカゲル、アミノプロピルシリル化シリカゲル、グラファイトカーボン、オクタデシル化シリカゲルおよびケイ酸マグネシウムからなる群から選ばれた少なくとも一つである、請求項６または７に記載の残留農薬の分析用試料の調製方法。

【請求項9】

工程１において前記有機溶媒としてアセトニトリルまたはメタノールを用い、かつ、工程４において前記抽出用溶媒としてアセトン、トルエン、ジクロロメタンおよびヘキサンからなる群から選ばれた少なくとも一つのものであって工程１で用いる前記有機溶媒よりも低極性のものを用いる、請求項１から８のいずれかに記載の残留農薬の分析用試料の調製方法。

【請求項10】

食品の残留農薬を分析するために用いられる試料を調製するためのキットであって、
底部が閉鎖された遠沈管と、
前記遠沈管の内部に対して挿入・抜取り可能な、前記残留農薬を溶解可能な水溶性の有機溶媒と水との混合液に含まれる前記残留農薬を吸着可能でありかつ通液性を有する吸着層により前記遠沈管の内部を上下に区画可能な第１ユニットと、
前記第１ユニットの内部に対して挿入・抜取り可能な、ナノろ過膜、限外ろ過膜または精密ろ過膜として使用可能な分離膜により前記遠沈管の内部を前記吸着層の上方で上下に区画可能な第２ユニットと、
を備えた残留農薬の分析用試料の調製キット。

【請求項11】

前記遠沈管の内部に対して挿入・抜取り可能でありかつ内部に前記第１ユニットを挿入・抜取り可能な、前記残留農薬に混在する夾雑物質を吸着可能でありかつ通液性を有する精製層により前記遠沈管の内部を前記底部と前記吸着層との間で上下に区画可能な第３ユニットをさらに備えている、請求項１０に記載の残留農薬の分析用試料の調製キット。

【請求項12】

前記遠沈管を二つ備えている、請求項１０または１１に記載の残留農薬の分析用試料の調製キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、残留農薬の分析用試料の調製方法、特に、食品の残留農薬を分析するために用いられる試料の調製方法に関する。

【背景技術】

【0002】

農薬等が規定量を超えて残留する食品の販売を原則禁止するいわゆるポジティブリスト制度が本邦において２００６年に施行され、多数の農薬のうち、人の健康を損なうおそれのないことが明らかな一部の農薬を除く約８００種類の農薬の全てについて残留基準値が設定されるに至っている。そこで、販売される食品については約８００種類の農薬を一斉に分析する必要が生じ、厚生労働省は、そのための分析法を通知している（非特許文献１）。

【0003】

厚生労働省が通知する一斉分析法（以下、「通知法」と称する。）は、基本的に、食品試料を粉砕することで均一化するための試料調製工程、調製された試料から残留農薬を抽出するための抽出工程、抽出工程で得られた抽出液から夾雑物質を除去するための精製工程および精製工程により得られた試験溶液を分析するための測定・解析工程からなる。抽出工程では、試料調製工程において均一化された試料に溶媒（アセトニトリル）を加えてホモジナイズした後に吸引ろ過する。そして、このろ液を塩析した後に溶媒を除去して得られた残留物を混合溶媒（アセトニトリルとトルエンとの混合溶媒）に溶解し、抽出液を調製する。精製工程では、グラファイトカーボン／アミノプロピルシリル化シリカゲル積層ミニカラムに対して抽出工程で得られた抽出液およびアセトニトリルとトルエンとの混合溶媒をこの順に注入し、ミニカラムからの溶出液を得る。そして、この溶出液から溶媒を除去して得られた残留物を所定の溶媒に溶解することで所定量の試験溶液を調製する。測定・解析工程では、調製された試験溶液をＧＣ／ＭＳ若しくはＧＣ／ＭＳ／ＭＳまたはＬＣ／ＭＳ若しくはＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析することで食品試料に含まれる農薬を一斉に評価する。

【0004】

しかし、通知法は、ミニカラムを用いることから多量の有機溶媒を必要とし、また、溶媒の除去操作が何度か必要になるなど、操作工程が多く煩雑であることから、測定・解析工程に適用可能な試験溶液を調製するのに長時間を要する。

【0005】

そこで、簡単な操作により短時間で分析用の試料が得られるＱｕＥＣｈＥＲＳ法（キャッチャーズ法）が提案されている（非特許文献２）。ＱｕＥＣｈＥＲＳ法は、ＥＵ規格においても採用されており、通知法に替わる残留農薬の一斉分析法として本邦でも食品事業者等において採用されつつある。

【0006】

ＱｕＥＣｈＥＲＳ法は、食品試料から残留農薬を抽出するための抽出工程、抽出工程で得られた抽出液の塩析工程、塩析工程を経た抽出液の精製工程および精製工程を経た抽出液を分析するための測定・解析工程からなる。抽出工程では、食品試料にアセトニトリルを加え、残留農薬を振とう抽出する。塩析工程では、抽出工程で得られた抽出液に塩を加えて振とうすることで水とアセトニトリルとを分離させ、抽出液に含まれている残留農薬をアセトニトリル層へ移行させるとともに、高極性の夾雑物質を水層へ移行させる。精製工程では、塩析工程を経た抽出液に含まれる夾雑物質を吸着可能なエチレンジアミン−Ｎ−プロピルシリル化シリカゲルやグラファイトカーボンなどの粉末状または粒状の固相を抽出液に添加・分散して振とうした後に遠心分離する。そして、測定・解析工程では、精製工程での遠心分離により得られた上澄み溶液をＧＣ／ＭＳまたはＬＣ／ＭＳ若しくはＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析することで食品試料に含まれる農薬を一斉に評価する。

【0007】

ＱｕＥＣｈＥＲＳ法は、抽出液に対して固相を添加することで抽出液に含まれる夾雑物質を除去していることから、ミニカラムを用いる通知法に比べて操作が簡単であり、短時間で分析用の試料（試験溶液）を調製することができるが、その精製工程は分散固相抽出であることから試験溶液中に食品マトリックス等の夾雑物質が残留しやすく、それが分析結果に影響する可能性がある。また、得られた試験溶液は、夾雑物質のためにＧＣ／ＭＳ等の分析機器やそのカラムを著しく汚染する可能性がある。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0008】

【非特許文献1】厚生労働省、「食品に残留する農薬、飼料添加物又は動物用医薬品の成分である物質の試験法」、［平成２７年３月９日検索］、インターネット（URL：http://www.mhlw.go.jp/stf/seisakunitsuite/bunya/kenkou_iryou/shokuhin/zanryu/zanryu3/siken.html）

【0009】

【非特許文献2】一般財団法人 食品分析開発センターＳＵＮＡＴＥＣ、「ＱｕＥＣｈＥＲＳ法について」、［平成２７年３月９日検索］、インターネット（URL： http://www.mac.or.jp/mail/140401/03.shtml）

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0010】

本発明は、食品の残留農薬を簡単にかつ短時間で、しかも高精度に分析できるようにしようとするものである。

【課題を解決するための手段】

【0011】

本発明は、食品の残留農薬を分析するために用いられる試料の調製方法に関するものである。この調製方法は、水溶性の有機溶媒を用いて食品から残留農薬を抽出し、得られた抽出液を水と混合して混合液を調製する工程１と、ナノろ過膜、限外ろ過膜または精密ろ過膜として使用可能な分離膜を用い、混合液をろ過してろ液を得る工程２と、ろ液中の残留農薬を吸着可能な吸着材にろ液を通過させる工程３と、工程３の後、残留農薬を抽出可能な抽出用溶媒を吸着材に通過させる工程４とを含む。

【0012】

工程１で調製された混合液を工程２においてろ過すると、抽出液に含まれる固形物が分離された混合液がろ液として得られる。工程２では所定の分離膜を用いることから、混合液に含まれる残留農薬は分離膜を通過し、ろ液中に残留する。このろ液を工程３において吸着材に通過させると、ろ液に含まれる残留農薬が吸着材に吸着され、ろ液に含まれる夾雑物質はろ液とともに吸着材を通過する。そして、工程４において吸着材に抽出用溶媒を通過させると、吸着材に吸着された残留農薬が抽出用溶媒により抽出される。したがって、吸着材を通過した抽出用溶媒は、食品の残留農薬を分析するための試料として用いることができる。

【0013】

本発明の調製方法は、例えば、混合液、ろ液および抽出用溶媒に遠心力を加えることで、それぞれ工程２、工程３および工程４を実行することができる。

【0014】

この場合、工程２、工程３および工程４を効率的に実行することができ、目的の分析用試料をより簡単にかつ速やかに調製することができる。

【0015】

工程２において用いられる分離膜は、例えば、ポリスルフォン樹脂、ポリエーテルスルフォン樹脂、ポリフッ化ビニリデン樹脂、芳香族ポリアミド樹脂、酢酸セルロース樹脂、ポリテトラフルオロエチレン樹脂、ポリアミド樹脂、ポリアクリロニトリル樹脂、ポリ塩化ビニル−ポリアクリロニトリル共重合体樹脂およびポリカーボネート樹脂からなる群から選択された樹脂材料からなる有機膜またはアルミナ膜である。

【0016】

分離膜として用いられる有機膜は、プラズマ処理またはオゾン処理されているのが好ましい。プラズマ処理またはオゾン処理された有機膜は、親水性が高まることから残留農薬が付着しにくく、混合液に含まれる残留農薬を円滑に通過させることができる。

【0017】

工程３において用いられる吸着材は、例えば、スチレン／ジビニルベンゼン共重合体系樹脂、ジビニルベンゼン共重合体系樹脂、シアノプロピル化シリカゲル、フェニル化シリカゲルおよびオクタデシル化シリカゲルからなる群から選ばれた少なくとも一つである。

【0018】

本発明の調製方法の一形態は、吸着材を通過した抽出用溶媒に含まれる夾雑物質を吸着可能な精製材に吸着材を通過した抽出用溶媒を通過させる工程５をさらに含む。工程５を含む場合、吸着材を通過した抽出用溶媒に残留している夾雑物質が精製材に捕捉されるため、夾雑物質の影響をより受けにくい分析用試料を調製することができる。

【0019】

工程５は、例えば、抽出用溶媒に遠心力を加えることで実行することができる。この場合、工程５を効率的に実行することができ、目的の分析用試料をより簡単にかつ速やかに調製することができる。

【0020】

工程５において用いられる精製材は、例えば、エチレンジアミン−Ｎ−プロピルシリル化シリカゲル、アミノプロピルシリル化シリカゲル、グラファイトカーボン、オクタデシル化シリカゲルおよびケイ酸マグネシウムからなる群から選ばれた少なくとも一つである。

【0021】

本発明の調製方法では、例えば、工程１において有機溶媒としてアセトニトリルまたはメタノールを用い、かつ、工程４において抽出用溶媒としてアセトン、トルエン、ジクロロメタンおよびヘキサンからなる群から選ばれた少なくとも一つのものであって工程１で用いる有機溶媒よりも低極性のものを用いる。

【0022】

他の観点に係る本発明は、本発明の調製方法により食品の残留農薬を分析するために用いられる試料を調製するためのキットに関するものである。この調製キットは、底部が閉鎖された遠沈管と、遠沈管の内部に対して挿入・抜取り可能な、残留農薬を溶解可能な水溶性の有機溶媒と水との混合液に含まれる残留農薬を吸着可能でありかつ通液性を有する吸着層により遠沈管の内部を上下に区画可能な第１ユニットと、第１ユニットの内部に対して挿入・抜取り可能な、ナノろ過膜、限外ろ過膜または精密ろ過膜として使用可能な分離膜により遠沈管の内部を第１ユニットの吸着層の上方で上下に区画可能な第２ユニットとを備えている。

【0023】

遠沈管に第１ユニットを挿入し、この第１ユニットに第２ユニットを挿入した状態の調製キットの第２ユニット内に残留農薬を含む混合液を注入し、遠沈管を遠心分離器に適用すると、混合液は遠心力を受けて第２ユニットの分離膜および第１ユニットの吸着層をこの順に通過する。このとき、混合液に含まれる固形分は分離膜により分離され、また、混合液とともに分離膜を通過した残留農薬は吸着層に吸着される。

【0024】

次に、遠沈管から第２ユニットとともに第１ユニットを抜取り、遠沈管の底部に溜まった混合液を廃棄する。この遠沈管を洗浄後、抜取った第１ユニットのみを遠沈管内に再度挿入し、この第１ユニット内に残留農薬の抽出用溶媒を注入する。そして、遠沈管を遠心分離器に適用すると、抽出用溶媒は遠心力を受けて第１ユニットの吸着層を通過する。このとき、吸着層に吸着された残留農薬は、吸着層を通過する抽出用溶媒により抽出される。したがって、遠沈管の底部には、抽出用溶媒による残留農薬の抽出液が溜まる。遠沈管から第１ユニットを再度抜出すと、遠沈管の底部に溜まった抽出液を取り出すことができ、この抽出液は残留農薬の分析用試料として用いることができる。

【0025】

本発明に係る調製用キットの一形態は、遠沈管の内部に対して挿入・抜取り可能でありかつ内部に第１ユニットを挿入・抜取り可能な、残留農薬に混在する夾雑物質を吸着可能でありかつ通液性を有する精製層により遠沈管の内部をその底部と第１ユニットの吸着層との間で上下に区画可能な第３ユニットをさらに備えている。

【0026】

第３ユニットは洗浄後の遠沈管に挿入することができ、遠沈管に挿入した第３ユニットには第１ユニットを挿入することができる。第３ユニットおよび第１ユニットをこのように挿入した遠沈管の第１ユニット内に残留農薬の抽出用溶媒を注入し、遠沈管を遠心分離器に適用すると、抽出用溶媒が遠心力を受けて第１ユニットの吸着層および第３ユニットの精製層をこの順に通過する。このとき、吸着層に吸着された残留農薬は、吸着層を通過する抽出用溶媒により抽出され、また、残留農薬を抽出した抽出用溶媒に含まれる夾雑物質は、抽出用溶媒が精製層を通過するときに精製層に吸着される。したがって、遠沈管の底部には、抽出用溶媒による残留農薬の抽出液が溜まる。遠沈管から第３ユニットおよび第１ユニットを抜出すと、遠沈管の底部に溜まった抽出液を取り出すことができ、この抽出液は残留農薬の分析用試料として用いることができる。この分析用試料は、精製層により夾雑成分が除去されたものであるため残留農薬の分析精度を高めることができる。

【0027】

本発明に係る調製用キットは、同じ遠沈管を二つ備えていてもよい。この場合、底部に混合液が溜まった遠沈管から第２ユニットとともに第１ユニットを抜取り、抜取った第２ユニットを別の遠沈管に挿入して次の工程を実行することができるため、残留農薬の分析用試料の調製過程において遠沈管の洗浄が不要になる。

【発明の効果】

【0028】

本発明に係る残留農薬の分析用試料の調製方法は、上述の工程を含むものであることから、食品の残留農薬を高精度に分析可能な分析用試料を簡単にかつ短時間で調製することができる。

【0029】

本発明に係る残留農薬の分析用試料の調製キットは、遠沈管に対して吸着層を有する第１ユニットおよび分離膜を有する第２ユニットを組み合わせたものであるため、食品の残留農薬を高精度に分析可能な分析用試料を簡単にかつ短時間で効率的に調製することができる。

【図面の簡単な説明】

【0030】

【図1】本発明に係る分析用試料の調製キットの一形態の縦断面図。

【図2】前記調製キットを要素毎に分離した状態の縦断面図。

【図3】前記調製キットを用いた分析用試料の調製方法の一工程を示す図。

【図4】前記調製キットを用いた分析用試料の調製方法の他の工程を示す図。

【図5】前記調製キットを用いた分析用試料の調製方法のさらに他の工程を示す図。

【図6】前記調製キットを用いた分析用試料の調製方法のさらに他の工程を示す図。

【図7】実施例において用いたプラズマ処理装置の断面図。

【図8】実施例１および比較例１で得られた分析用試料のＧＣ／ＭＳ ＳＣＡＮクロマトグラム。

【図9】実施例２および比較例２で得られた分析試用料のＧＣ／ＭＳ ＳＣＡＮクロマトグラム。

【図10】実施例２および比較例３で得られた分析用試料のＧＣ／ＭＳ ＳＣＡＮクロマトグラム。

【発明を実施するための形態】

【0031】

図１および図２を参照し、本発明に係る分析用試料調製キットの一形態を説明する。この分析用試料調製キット１は、多成分含有試料を同時分析可能なガスクロマトグラフ質量分析計（ＧＣ／ＭＳ）や液体クロマトグラフ質量分析計（ＬＣ／ＭＳ）等の分析機器を用い、食品から残留農薬を抽出することで得られる抽出液から調製される、後記の混合液から食品の残留農薬を分析するのに適した分析用試料、特に、一斉分析するのに適した分析用試料を調製するためのものであり、遠沈管１０、第１ユニット１００、第２ユニット２００および第３ユニット３００を主に備えている。

【0032】

遠沈管１０および各ユニット１００、２００、３００は、耐溶媒性を有する樹脂、例えば、ポリプロピレン樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリテトラフルオロエチレン樹脂、パーフルオロアルコキシアルカン樹脂またはポリアミド樹脂を用いて形成されたものである。また、遠沈管１０は、ガラス製のものであってもよい。

【0033】

遠沈管１０は、実験室で使用可能な遠心分離器に適用可能な円筒状の容器であり、上端部の全体が開口するとともに底部が円錐状に形成されることで閉鎖されている。

【0034】

第１ユニット１００は、遠沈管１０の内部に対して挿入・抜取り可能な円筒状の容器であり、上部の全体が開口するとともに、底部の中心に第１通液孔１０１を有している。第１ユニット１００の上部は、水平方向に突出した第１フランジ部１０２を有している。また、第１ユニット１００の底部の全体に吸着層１０３が配置されている。

【0035】

吸着層１０３は、第１ユニット１００の底部において、混合液に含まれる残留農薬を吸着可能な粉末状、粒子状または顆粒状の吸着材を一定の厚さに充填することで形成されたものであり、混合液が通過可能な通液性を有している。

【0036】

吸着層１０３において用いられる吸着材は、混合液に含まれる残留農薬を吸着可能である一方、低極性の溶媒と触れたときに吸着した農薬を脱着可能なものである。このような機能を有する吸着材として、例えば、塩基性、中性若しくは酸性のアルミナ、シリカ、活性炭、グラファイトカーボン、メソポーラスカーボン若しくは活性炭素繊維等の各種の炭素系材料、または、スチレン／ジビニルベンゼン共重合体系樹脂若しくはジビニルベンゼン共重合体系樹脂等の樹脂材料を用いて形成された樹脂多孔質体などを用いることができる。スチレン／ジビニルベンゼン共重合体系樹脂としては、スチレンおよびジビニルベンゼンを構成単位として含むものであれば各種のものを用いることができ、例えば、スチレン／ジビニルベンゼン共重合体樹脂やスチレン／ジビニルベンゼン／メタクリレート共重合体樹脂を用いることができる。また、ジビニルベンゼン共重合体系樹脂としては、ジビニルベンゼンを構成単位として含むものであれば各種のものを用いることができ、例えば、ジビニルベンゼン／メタクリレート共重合体樹脂やジビニルベンゼン／ビニルピロリドン共重合体樹脂を用いることができる。

【0037】

吸着材は、混合液に含まれる農薬の吸着性を高めるために、化学修飾により官能基を導入したものを用いることもできる。例えば、吸着材として用いられる各種アルミナおよびシリカは、シアノプロピル基、フェニル基またはオクタデシル基などの芳香環やアルキル鎖を導入したものであってもよい。また、樹脂材料は、例えば、カルボキシジビニルベンゼンビニルピロリドン共重合体樹脂やピペラジンジビニルベンゼンビニルピロリドン共重合体樹脂等、カルボキシ基やピペラジン基を導入したものであってもよい。

【0038】

吸着材として特に好ましいものは、スチレン／ジビニルベンゼン共重合体系樹脂、ジビニルベンゼン共重合体系樹脂、シアノプロピル化シリカゲル、フェニル化シリカゲルまたはオクタデシル化シリカゲルである。

【0039】

吸着材は、目的の分析用試料の調製において用いる溶媒の種類に応じて適宜選択することができる。この際、二種以上のものを混合または積層することで併用することもできる。また、吸着材は、混合液に含まれる残留農薬の吸着性および低極性の溶媒と触れたときの残留農薬の脱着性を損なわない程度において、他の材料と混合して用いられてもよい。

【0040】

第１ユニット１００の底面は、第１通液孔１０１からの吸着材の漏出を防止するための通液性のネットまたはシート（図示省略）が配置されている。

【0041】

第２ユニット２００は、遠沈管１０の内部に対して挿入・抜取り可能な円筒状の容器であり、上部の全体が開口するとともに、底部の中心に第１通液孔２０１を有している。第２ユニット２００の上部は、水平方向に突出した第２フランジ部２０２を有している。第２ユニット２００は、第１ユニット１００内に挿入できるよう容器部分の外径が第１ユニット１００の内径と略同じに設定されており、また、第２フランジ部２０２の外径が第１フランジ部１０２と同じに設定されている。

【0042】

第２ユニット２００は、底部の全体に分離膜２０３が配置されている。分離膜２０３は、混合液から残留農薬および溶媒以外の夾雑物質を分離可能なナノろ過膜、限外ろ過膜または精密ろ過膜としての機能を有するものであり、残留農薬の非吸着性および通過性を有し、しかも耐溶媒性を有する素材からなるものである。

【0043】

このような分離膜２０３としては、有機膜または無機膜を用いることができる。有機膜は、有機質材料を用いて形成された膜であり、例えば、ポリスルフォン樹脂、ポリエーテルスルフォン樹脂、フッ化ビニリデン樹脂、芳香族ポリアミド樹脂、酢酸セルロース樹脂、ポリテトラフルオロエチレン樹脂、ポリアミド樹脂、ポリアクリロニトリル樹脂、ポリ塩化ビニル−ポリアクリロニトリル共重合体樹脂またはポリカーボネート樹脂などの樹脂材料からなるものが挙げられる。このうち、耐溶媒性の点において、ポリスルフォン樹脂、ポリエーテルスルフォン樹脂、フッ化ビニリデン樹脂、芳香族ポリアミド樹脂、ポリテトラフルオロエチレン樹脂またはポリアミド樹脂が特に好ましい。

【0044】

一方、無機膜は、無機質材料を用いて形成された膜であり、例えば、アルミナ、酸化チタンまたはジルコニアなどからなるものが挙げられる。このうち、アルミナ膜が好ましい。

【0045】

分離膜２０３としてナノろ過膜または限外ろ過膜を用いる場合、少なくとも１，０００分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）の孔径を有するもの、特に、少なくとも３，０００ＭＷＣＯの孔径を有するものを用いるのが好ましい。１，０００ＭＷＣＯ未満の孔径のナノろ過膜および限外ろ過膜は、残留農薬と夾雑物質との分離効果が高いが、混合液をろ過するためにより高い圧力を加える必要があることから、圧力調整を誤ると一部の固形状の夾雑物質が残留農薬とともに分離膜２０３を通過してしまう可能性がある。

【0046】

また、分離膜２０３として精密ろ過膜を用いる場合、その孔径は０．１μｍ以下のものが好ましい。孔径が０．１μｍを超える精密ろ過膜は、残留農薬とともに固形状の夾雑物質を通過させてしまう可能性がある。

【0047】

分離膜２０３として有機膜を用いる場合、その有機膜、特に、ナノろ過膜としての機能を有する有機膜は、プラズマ処理またはオゾン処理されているのが好ましい。プラズマ処理またはオゾン処理された有機膜は、親水性が高まることから残留農薬が付着しにくく、混合液に含まれる残留農薬を円滑に通過させることができる。なお、ナノろ過膜は、孔径が１，０００ＭＷＣＯ未満のものであっても、プラズマ処理またはオゾン処理をすることで残留農薬を円滑に通過させることができることから、混合液をろ過するために高い圧力を加えなくても、残留農薬と夾雑物質とを高精度に分離することができる。

【0048】

第３ユニット３００は、遠沈管１０の内部に対して挿入・抜取り可能な円筒状の容器であり、上部の全体が開口するとともに、底部の中心に第３通液孔３０１を有している。第３ユニット３００の上部は、水平方向に突出した第３フランジ部３０２を有している。第３ユニット３００は、その容器部分の外径が遠沈管１０の内径と略同じに設定されており、また、その内部に第１ユニット１００を挿入できるよう容器部分の内径が第１ユニット１００の外径と略同じに設定されている。第３フランジ部３０２の外径は、第１フランジ部１０２と同じに設定されている。

【0049】

第３ユニット３００は、底部の全体に精製層３０３が配置されている。精製層３０３は、第３ユニット３００の底部において、後記する低極性の抽出用溶媒に含まれる残留農薬以外の夾雑物質を吸着可能な粉末状、粒子状または顆粒状の精製材を一定の厚さに充填することで形成されたものであり、抽出用溶媒が通過可能な通液性を有している。

【0050】

精製層３０３において用いられる精製材は、抽出用溶媒に含まれる夾雑物質を吸着可能である一方、当該抽出用溶媒に含まれる残留農薬を吸着しにくいもの、すなわち、夾雑物質を吸着することで、夾雑物質と残留農薬とを分離可能なものである。このような機能を有する精製材として、例えば、塩基性、中性若しくは酸性のアルミナ、シリカ、ケイ酸マグネシウム、活性炭、グラファイトカーボン若しくは活性炭素繊維等の各種の炭素系材料、または、スチレン／ジビニルベンゼン共重合体系樹脂若しくはジビニルベンゼン共重合体系樹脂等の樹脂材料を用いて形成された樹脂多孔質体などを用いることができる。スチレン／ジビニルベンゼン共重合体系樹脂およびジビニルベンゼン共重合体系樹脂としては、吸着層１０３において用いられる吸着材として利用可能なものと同様のものを用いることができる。

【0051】

上述の精製材は、抽出用溶媒に含まれる夾雑物質の吸着性を高めるために、化学修飾によりエチレンジアミンＮ−プロピル基、プロピルアミノ基、オクタデシル基、オクチル基、トリメチルアミノプロピル基、シアノプロピル基、フェニル基、ジオール基またはアミノ基などの官能基を導入したものであってもよい。

【0052】

精製材として特に好ましいものは、エチレンジアミン−Ｎ−プロピルシリル化シリカゲル、アミノプロピルシリル化シリカゲル、グラファイトカーボン、オクタデシル化シリカゲルまたはケイ酸マグネシウムである。

【0053】

精製材は、目的の分析用試料の調製において用いる抽出用溶媒の種類に応じて適宜選択することができる。この際、二種以上のものを混合または積層することで併用することもできる。また、精製材は、夾雑物質と残留農薬との分離性を損なわない程度において、他の材料と混合して用いられてもよい。

【0054】

第３ユニット３００の底面は、第３通液孔３０１からの精製材の漏出を防止するための通液性のネットまたはシート（図示省略）が配置されている。

【0055】

分析用試料調製キット１は、通常、図１に示すように、遠沈管１０内に第３ユニット３００、第１ユニット１００および第２ユニット２００をこの順に挿入することで一体化し、この状態で販売したり、輸送したりすることができる。遠沈管１０内に各ユニット１００、２００、３００を挿入することで一体化したとき、第１ユニット１００の吸着層１０３は、遠沈管１０の内部を上下に区画する。また、第２ユニット２００の分離膜２０３は、遠沈管１０の内部を吸着層１０３の上方で上下に区画する。さらに、第３ユニット３００の精製層３０３は、遠沈管１０の内部をその底部と吸着層１０３との間で上下に区画する。

【0056】

一体化された分析用試料調製キット１は、分離膜２０３等が汚染されるのを防止するために、第２ユニット２００の開口部を閉鎖する蓋が装着されていてもよい。この蓋としては、例えば、第２フランジ部２０２、第１フランジ部１０２および第３フランジ部３０２のフランジ部全体を覆うよう、遠沈管１０の外周面に螺旋止め可能なものや、フランジ部全体を覆うよう嵌め込み可能な柔軟性を有するものなどが用いられる。

【0057】

分析用試料調製キット１は、目的の分析用試料を調製する場合において、図２に示すように遠沈管１０から各ユニット１００、２００、３００を個々に分離し、次に説明する分析用試料の調製方法の各工程において、ユニット１００、２００、３００のうちの必要なものを選択して遠沈管１０内に挿入することで用いられる。

【0058】

次に、上述の分析用試料調製キット１を用い、食品の残留農薬を一斉分析するために用いられる分析用試料を調製するための方法を説明する。分析用試料の調製方法は、主に、残留農薬の抽出工程、抽出工程により得られた残留農薬含有液から残留農薬を分離するための精製工程および精製工程において分離された残留農薬の分析用試料を調製するための調製工程の３段階の工程を含む。

【0059】

（抽出工程）
この工程では、残留農薬の一斉分析対象となる食品から残留農薬を抽出し、所定の残留農薬含有液、すなわち混合液を調製する（工程１）。残留農薬の抽出対象となる食品は、各種の農作物、食肉、魚介類またはこれらの加工品など、種類が特に限定されるものではなく、通常、所要量を残留農薬の抽出のために微細な状態に粉砕するか、或いは切り刻むことで均一化する。

【0060】

食品からの残留農薬の抽出は、通知法またはＱｕＥＣｈＥＲＳ法において採用されている方法に従って実行することができる。すなわち、均一化された所要量の食品試料に残留農薬の抽出用溶媒（第１溶媒）を加えてホモジナイズし、これを吸引ろ過する。ここで用いられる抽出用溶媒は、通常、アセトニトリル、メタノールまたはアセトン等の、残留農薬を溶解可能であるとともに水に溶解しやすい高極性の有機溶媒である。

【0061】

吸引ろ過により得られたろ液、すなわち残留農薬の抽出液は、通常、塩を添加して塩析することで夾雑物質を析出させるのが好ましい。ここで用いられる塩は、塩化ナトリウム、クエン酸三ナトリウム若しくはその水和物、クエン酸水素二ナトリウム若しくはその水和物、無水硫酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、無水硫酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、無水酢酸ナトリウムまたは酢酸ナトリウム等である。これらの塩は、適宜併用されてもよい。

【0062】

次に、抽出液を遠心分離し、固形分と抽出液とに分離する。そして、抽出液に水を加え、抽出液と水との混合液Ｌを調製する。

【0063】

（精製工程）
この工程では、分析用試料調製キット１を用い、抽出工程において調製された混合液Ｌを分離膜２０３を用いてろ過することでろ液を得（工程２）、このろ液を吸着層１０３に通過させる（工程３）。

【0064】

ここでは、遠沈管１０から各ユニット１００、２００、３００を分離した分析用試料調製キット１において、図３に示すように、遠沈管１０内に第１ユニット１００を挿入し、また、第１ユニット１００内に第２ユニット２００を挿入する。そして、図４に示すように、第２ユニット２００内に混合液Ｌを注入し、遠沈管１０を遠心分離器により遠心分離処理する。この処理により、混合液Ｌは、遠心力が加わり、図４に矢印で示すように第２ユニット２００の分離膜２０３を通過する。分離膜２０３を通過したろ液は、第２通液孔２０１を通じて第１ユニット１００内に飛散し、遠心力が加わることで吸着層１０３を通過して第１通液孔１０１を通じて遠沈管１０の底部に溜まる。この際、混合液Ｌに含まれる主に固形状の夾雑物質は分離膜２０３により混合液Ｌから分離される。また、分離膜２０３を通過したろ液に含まれる残留農薬は吸着層１０３の吸着材に吸着し、当該ろ液に溶解している夾雑物質はろ液とともに吸着層１０３を通過する。結果的に、混合液Ｌ中の残留農薬は、混合液Ｌに含まれる夾雑物質、抽出用溶媒および水から分離され、精製される。

【0065】

精製工程を実行後の分析用試料調製キット１は、遠沈管１０から第２ユニット２００および第１ユニット１００をこの順にまたは同時に抜出す。そして、第２ユニット２００および遠沈管１０の底部に溜まった混合液Ｌを廃棄し、次の工程のために遠沈管１０を洗浄する。

【0066】

（調製工程）
この工程では、残留農薬を抽出可能な抽出用溶媒（第２溶媒）を吸着層１０３に通過させ（工程４）、また、吸着層１０３を通過した抽出用溶媒（第２溶媒）を精製層３０３に通過させ（工程５）、目的の分析用試料を調製する。

【0067】

ここでは、図５に示すように、精製工程後に洗浄した遠沈管１０内に第３ユニット３００を挿入し、また、第３ユニット３００内に精製工程を経た第１ユニット１００を挿入する。そして、図６に示すように、第１ユニット１００内に抽出用溶媒Ｓを注入し、遠沈管１０を遠心分離器により遠心分離処理する。この処理により、抽出用溶媒Ｓは、遠心力が加わることで図６に矢印で示すように第１ユニット１００の吸着層１０３を通過し、その際に吸着材に吸着した残留農薬を抽出する。また、吸着層１０３を通過した抽出用溶媒Ｓは、第１通液孔１０１を通じて第３ユニット３００内に飛散し、遠心力が加わることで精製層３０３を通過して第３通液孔３０１を通じて遠沈管１０の底部に溜まる。この際、抽出用溶媒Ｓにより残留農薬とともに吸着層１０３から抽出された夾雑物質は、精製材に吸着し、抽出用溶媒Ｓから分離される。

【0068】

この工程において用いられる抽出用溶媒Ｓは、通常、抽出工程において用いる抽出用溶媒（第１溶媒）よりも相対的に極性の低い有機溶媒であり、例えば、アセトン、トルエン、ヘキサン若しくはジクロロメタンまたはこれらの溶媒から適宜選択したものの混合物などを用いることができる。

【0069】

この工程において遠沈管１０の底部に溜まった抽出用溶媒Ｓは、遠沈管１０から第１ユニット１００および第３ユニット３００をこの順にまたは同時に抜出すと、遠沈管１０から採取することができる。この抽出用溶媒Ｓは、吸着層１０３から残留農薬を抽出したものであることから、そのままで、或いは、必要により適宜濃縮し、ＧＣ／ＭＳやＬＣ／ＭＳ等に適用するための残留農薬の一斉分析用試料として用いることができる。

【0070】

上述の実施の形態に係る分析用試料調製キット１およびそれを用いた分析用試料の調製方法は、精製層３０３を備えた第３ユニット３００を用いるが、残留農薬とともに食品から抽出される夾雑成分の種類や量により、分離膜２０３で夾雑成分を十分に除去可能な場合や、吸着層１０３に残留農薬とともに吸着された夾雑成分が調製工程において吸着層１０３へ適用する抽出用溶媒Ｓにより抽出されにくいような場合などにおいては、第３ユニット３００を省くことができ、それによって工程５を省略することができる。

【0071】

分析用試料調製キット１は、同じ遠沈管１０を二つ有するものであってもよい。この場合、精製工程から調製工程へ移るときに遠沈管１０を洗浄する必要がなく、精製工程で用いる遠沈管１０と、調製工程で用いる遠沈管１０とを使い分けることができる。

【0072】

分析用試料の調製において、第１ユニット１００の吸着層１０３に混合液Ｌの水分が吸着されやすい場合、吸着層１０３に吸着した残留農薬を抽出用溶媒Ｓにより抽出する場合において、吸着層１０３に吸着した水分が抽出用溶媒Ｓに混入し、結果的に分析用試料が水分を含むことになる場合がある。この場合、分析用試料調製キット１は、遠沈管１０内において吸着層１０３の下方に（分析用試料調製キット１が第３ユニット３００を含む場合は、吸着層１０３と精製層３０３との間に）脱水材を含む脱水層を配置可能な第４ユニットを要素としてさらに含めることができる。この場合、調製工程において、吸着層１０３の下方に脱水層を配置することができ、吸着層１０３を通過した抽出用溶媒Ｓは当該脱水層を通過するときに水分が除去されるため、水分の混入が少ない分析用試料を調製することができる。

【0073】

脱水材としては、抽出用溶媒Ｓの種類等に応じて、無水硫酸ナトリウム、無水炭酸カリウム、塩化カルシウム、フッ化カリウム、シリカゲル、モレキュラーシーブまたはゼオライトなどの各種のものを用いることができる。これらの脱水材は、それぞれ単独で用いられてもよいし、二種以上のものを混合または積層することで併用されてもよい。なお、分析用試料調製キット１が第３ユニット３００を含む場合、第４ユニットを用いずに、精製層３０３の上に脱水層を積層して配置することもできる。

【0074】

分析用試料調製キット１を用いた上述の分析用試料の調製方法は、遠沈管１０を遠心分離器により遠心分離処理することで工程２、３、４および５を実行しているが、これらの工程は遠心分離器を用いずに実行することもできる。例えば、遠沈管１０に挿入した所定のユニット内に混合液や溶媒等を注入した後、当該ユニットの開口側から窒素ガスや空気などを気密に導入することで内圧を高め、それによって混合液や溶媒等を分離膜２０３や吸着層１０３などに通過させることもできる。

【0075】

本発明に係る分析用試料の調製方法は、分析用試料調製キット１を用いて実行したとき、残留農薬の一斉分析用試料を効率的に調製することができるが、分析用試料調製キット１を用いずに、工程毎に汎用の器具や装置を用いることで実行することもできる。

【0076】

本発明に係る分析用試料の調製方法および調製キットは、食品の残留農薬を個別に分析するために用いられる試料を調製するために用いることもできる。

【実施例】

【0077】

［分離膜のプラズマ処理］
図７に示したプラズマ処理装置４００を用い、分離膜をプラズマ処理した。プラズマ処理装置４００は、銅棒４１０と、この銅棒４１０と同軸に順に配置された第１ガラス管４２０、第２ガラス管４３０および第３ガラス管４４０と、第１ガラス管４２０と第２ガラス管４３０との間に配置された第１銅板４２１並びに第３ガラス管４４０の外周面に巻き付けられた第２銅板４４１を備えており、第２ガラス管４３０と第３ガラス管４４０との空間にアルゴンガスを流しながら銅棒４１０と第２銅販４４１との間に交流電圧を印加すると、第２ガラス管４３０と第３ガラス管４４０との間にプラズマを発生させることができるものである。

【0078】

第２ガラス管４３０の外周面に分離膜５００を一重に巻き付けた状態でプラズマ処理装置４００に微量の水分を含むアルゴンガスを流し、銅棒４１０と第２銅板４４１との間に交流電圧を印加した。これにより発生するプラズマにより分離膜５００の表面を２分間プラズマ処理した。アルゴンガスの流量は２５０ｍＬ／分とした。

【0079】

ここで処理した分離膜は、ポリピペラジンアミド製のナノろ過膜（ＴｒｉＳｅｐ社の商品名「ＸＮ４５」：分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）５００）である。

【0080】

［食品試料の調製］
食品試料Ａ：
市販のきゅうりを微細に切り刻むことで均一化し、食品試料Ａを作成した。
食品試料Ｂ：
市版のほうれん草を微細に切り刻むことで均一化し、食品試料Ｂを作成した。

【0081】

実施例１
食品試料Ａの１０．０ｇと農薬標準液（関東化学株式会社の商品名「農薬標準混合液３１」）とを容量５０ｍＬの遠沈管に量り採り、攪拌・混合後に暫時静置した。農薬標準液は、食品試料Ａでの濃度が２００ｐｐｂとなるよう添加した。

【0082】

食品試料Ａ等を量り採った遠沈管にアセトニトリル１０ｍＬを加えて手作業で１分間振とうした。これにクエン酸三ナトリウム二水和物１ｇ、クエン酸水素二ナトリウム１．５水和物０．５ｇ、塩化ナトリウム１ｇおよび無水硫酸マグネシウム４ｇを加えて手作業でさらに１分間激しく振とうし、塩析した。続いて、遠沈管を遠心分離器に装着して３，５００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、遠沈管内の液層（４．０ｍＬ）に水６．０ｍＬを加え、混合液を調製した。

【0083】

プラズマ処理したナノろ過膜にアセトニトリルと水とを２：３の体積割合で混合した溶媒２０ｍＬを通過させ、ナノろ過膜を洗浄した。そして、このナノろ過膜を装着したろ過セル（ＳＴＥＲＬＩＴＥＣ社の商品名「ＨＰ４７５０ Ｓｔｉｒｒｅｄ Ｃｅｌｌ」）を用い、窒素ガスにより加圧することで混合液の全量（１０ｍＬ）をろ過し、第１のろ液を得た。また、第１のろ液を得た後のナノろ過膜によりアセトニトリルと水とを２：３の体積割合で混合した溶媒５ｍＬを同じ要領でろ過し、第２のろ液を得た。

【0084】

高分子系吸着材（ジーエルサイエンス株式会社の商品名「ＩｎｅｒｔＳｅｐ ＲＰ−１」：スチレン／ジビニルベンゼン／メタクリレート共重合体）を７５０ｍｇ充填した吸着カラムにアセトニトリルと水とを２：３の体積割合で混合した溶媒６ｍＬを注入し、吸着カラムにシリンジから空気圧を加えた。これにより、吸着カラムに溶媒を通過させ、溶出液を廃棄した。次に、第１のろ液と第２のろ液との混合ろ液から５ｍＬを分取し、この混合ろ液を上記吸着カラムに注入して同じ要領で通過させ、溶出液を廃棄した。

【0085】

混合ろ液が通過後の吸着カラムにアセトン５ｍＬを注入し、このアセトンを同じ要領で通過させて溶出液を確保した。この溶出液を無水硫酸ナトリウムで脱水処理した後に適宜濃縮することで、試料濃度が１ｇ／ｍＬの分析用試料とした。ここで、試料濃度とは、分析用試料１ｍＬがどれだけの重量の食品試料の抽出物から得られたものかを表す濃度をいう。例えば、試料濃度が１ｇ／ｍＬの場合、これは、食品試料１ｇ分相当の抽出液を最終的に濃縮することで１ｍＬの溶液に調整したことを意味する。試料濃度は、抽出液の濃縮の程度により調整可能である。

【0086】

分析用試料の調製に要した時間は、食品試料Ａ等を量り採った遠沈管にアセトニトリルを加える作業を開始した時点から５５分であった。

【0087】

比較例１（欧州規格ＥＮ１５６６２に従ったＱｕＥＣｈＥＲＳ法による分析用試料の調製）
食品試料Ａの１０．０ｇと農薬標準液（関東化学株式会社の商品名「農薬標準混合液３１」）とを容量５０ｍＬの第１遠沈管に量り採り、攪拌・混合後に暫時静置した。農薬標準液は、食品試料Ａでの濃度が２００ｐｐｂとなるよう添加した。

【0088】

食品試料Ａ等を量り採った第１遠沈管にアセトニトリル１０ｍＬを加えて手作業で１分間振とうした。これにクエン酸三ナトリウム二水和物１ｇ、クエン酸水素二ナトリウム１．５水和物０．５ｇ、塩化ナトリウム１ｇ、無水硫酸マグネシウム４ｇを加えて手作業で１分間激しく振とうし、塩析した。続いて、第１遠沈管を遠心分離器に装着して３，５００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。

【0089】

別の第２遠沈管に硫酸マグネシウム１５０ｍｇとエチレンジアミン−Ｎ−プロピルシリル化シリカゲル（ジーエルサイエンス株式会社の商品名「ＩｎｅｒｔＳｅｐ ＰＳＡ」）２５ｍｇとを加え、これに第１遠沈管から分取した液層１ｍＬを加えてボルテックスミキサーで３０秒間振とうすることで攪拌した。そして、第２遠沈管を遠心分離器に装着して１３，０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、第２遠沈管内の上澄み液５００μＬを採取した。この上澄み液にインジェクションスパイクとしてフェナントレンｄ−１０、アントラセンｄ−１０および９−ブロモアントラセンの３種類をそれぞれ濃度が１００ｐｐｂとなるように添加し、試料濃度が１ｇ／ｍＬの分析試料とした。この分析試料の調製に要した時間は、食品試料Ａ等を量り採った第１遠沈管にアセトニトリルを加える作業を開始した時点から３０分であった。

【0090】

実施例２
プラズマ処理されたナノろ過膜をプラズマ処理していない精密ろ過膜であるポリテトラフルオロエチレン膜（フロン工業株式会社の商品名「ポアフロンメンブレン」：孔径０．１μｍ）に変更した点を除いて実施例１と同様に操作し、食品試料Ｂから分析用試料を調製した。また、この分析用試料をさらに精製処理した。

【0091】

分析用試料の精製処理では、グラファイトカーボン（ジーエルサイエンス株式会社の商品名「ＩｎｅｒｔＳｅｐ ＧＣ」）３０ｍｇとアミノプロピルシリル化シリカゲル（ジーエルサイエンス株式会社の商品名「ＩｎｅｒｔＳｅｐ ＮＨ_２」）２５０ｍｇとの混合物を充填したカラムに分析用試料を注入し、このカラムにシリンジから空気圧を加えた。これによりカラムを通過した分析用試料の全量を４０℃に加熱して適宜濃縮した後、インジェクションスパイクとして、フェナントレンｄ−１０、アントラセンｄ−１０および９−ブロモアントラセンの３種類をそれぞれ濃度が１００ｐｐｂとなるように添加した。これにより、試料濃度が１ｇ／ｍＬのものと４ｇ／ｍＬのものとの二種類の分析用試料を調製した。分析用試料の調製とその精製処理の全体に要した時間は、食品試料Ｂ等を量り採った遠沈管にアセトニトリルを加える作業を開始した時点から７０分であった。

【0092】

比較例２（通知法による分析試料の調製）
食品試料Ｂの２０．０ｇを量り採り、これに５０ｐｐｂとなるように農薬標準液（関東化学株式会社の商品名「農薬標準混合液３１」）を添加し、攪拌・混合後に暫時静置した。これにアセトニトリル５０ｍＬを加えてホモジナイズした後、吸引ろ過し、第１のろ液を得た。また、ろ紙上の残留物にアセトニトリル２０ｍＬを加えてホモジナイズした後、吸引ろ過し、第２のろ液を得た。第１のろ液と第２のろ液とを合わせ、これにアセトニトリルを加えて正確に１００ｍＬに調整することで抽出液を調製した。

【0093】

分取した２０ｍＬの抽出液に塩化ナトリウム１０ｇおよび０．５ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）２０ｍＬを加え、これを振とう機で振とうした後に静置し、分離した水層を廃棄した。一方、アセトニトリル層は、無水硫酸ナトリウムを加えて脱水し、無水硫酸ナトリウムをろ別した後に４０℃以下で溶媒を除去した。この残留物にアセトニトリルとトルエンとを３：１の体積割合で混合した溶媒２ｍＬを加え、試料溶液を得た。

【0094】

次に、グラファイトカーボン５００ｍｇとアミノプロピルシリル化シリカゲル５００ｍｇとを積層充填したミニカラム（ジーエルサイエンス株式会社の商品名「ＩｎｅｒｔＳｅｐ ＧＣ／ＮＨ_２」）のグラファイトカーボン側からアセトニトリルとトルエンとを３：１の体積割合で混合した溶媒１０ｍＬを注入し、流出液を廃棄した。そして、このミニカラムのグラファイトカーボン側から試料溶液を注入した後、アセトニトリルとトルエンとを３：１の体積割合で混合した溶媒２０ｍＬを注入し、溶出液の全てを確保した。この溶出液を４０℃以下で１ｍＬ以下に濃縮し、これにアセトン１０ｍＬを加えて４０℃以下で再度１ｍＬ以下に濃縮した。この濃縮物に再度アセトン５ｍＬを加えて溶解した後、溶媒を除去した。このときの残留物を体積が正確に１ｍＬになるようアセトンに溶かし、試料濃度が４ｇ／ｍＬの分析用試料とした。分析用試料の調製に要した時間は、食品材料Ｂと農薬標準液との混合後にアセトニトリルを加える作業を開始した時点から１１０分であった。この分析用試料は、インジェクションスパイクとして、フェナントレンｄ−１０、アントラセンｄ−１０および９−ブロモアントラセンの３種類をそれぞれ濃度が１００ｐｐｂとなるように添加した。

【0095】

比較例３（欧州規格ＥＮ１５６６２に従ったＱｕＥＣｈＥＲＳ法による分析試料の調製）
第２遠沈管に硫酸マグネシウム１５０ｍｇ、エチレンジアミン−Ｎ−プロピルシリル化シリカゲル（ジーエルサイエンス株式会社の商品名「ＩｎｅｒｔＳｅｐ ＰＳＡ」）２５ｍｇおよびグラファイトカーボン（Ｗａｔｅｒｓ社の商品名「Ｇｒａｐｈｉｔｉｚｅｄ Ｃａｒｂｏｎ Ｂｌａｃｋ」）７．５ｍｇを加え、これに第１遠沈管から分取した液層１ｍＬを加えた点を除いて比較例１と同様に操作し、食品試料Ｂから試料濃度１ｇ／ｍＬの分析用試料を調製した。この分析用試料の調製に要した時間は、食品試料Ｂ等を量り採った第１遠沈管にアセトニトリルを加える作業を開始した時点から３０分であった。

【0096】

評価
ＧＣ／ＭＳ（サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社の商品名「Ｔｒａｃｅ ＧＣ／ＰｏｌａｒｉｓＱ」）を用いて下記の条件で各実施例および各比較例で調製した分析用試料を分析し、添加した農薬の回収率を求めた。結果を表１Ａ、表１Ｂおよび表１Ｃに示す。また、図８に実施例１および比較例１で得られた分析用試料のＧＣ／ＭＳ ＳＣＡＮクロマトグラム、図９に実施例２および比較例２で得られた分析用試料のＧＣ／ＭＳ ＳＣＡＮクロマトグラム、図１０に実施例２および比較例３で得られた分析用試料のＧＣ／ＭＳ ＳＣＡＮクロマトグラムをそれぞれ示す。

【0097】

カラム：
５％フェニル−メチルシリコン 内径０．２５ｍｍ、長さ３０ｍ、膜厚０．２５μｍ
カラム温度：
５０℃（１分）−３０℃／分−１２５℃（０分）−５℃／分−２００℃（０分）−１０℃／分−３００℃（１１分３０秒）
注入口温度：２２０℃
キャリヤーガス：ヘリウム
イオン化モード（電圧）：ＥＩ（７０ｅＶ）

【0098】

【表1A】

【0099】

【表1B】

【0100】

【表1C】

【0101】

回収率が７０〜１２０％の農薬ピーク数と、農薬の全ピーク数に対する回収率が７０〜１２０％の農薬ピーク数の割合を求めた結果を表２に示す。

【0102】

【表2】

【0103】

実施例１と比較例１とを対比すると、７０〜１２０％の回収率が得られた農薬はほぼ同数であった。但し、図８によると、実施例１の方が比較例１よりも夾雑ピークが少なく、精製効果が高い。

【0104】

実施例２と比較例２とを対比すると、７０〜１２０％の回収率が得られた農薬数はほぼ同数であった。但し、図９によると、実施例２の方が比較例２よりも夾雑ピークが少なく、精製効果が高い。

【0105】

実施例２と比較例３とを対比すると、７０〜１２０％の回収率が得られた農薬数は実施例２の方が多かった。また、図１０によると、実施例２の方が比較例３よりもが夾雑ピークが少なく、精製効果が高い。

【符号の説明】

【0106】

１ 分析用試料調製キット
１０ 遠沈管
１００ 第１ユニット
１０３ 吸着層
２００ 第２ユニット
２０３ 分離膜
３００ 第３ユニット
３０３ 精製層
Ｌ 混合液
Ｓ 抽出用溶媒

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】