特許 6522337 細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6522337

(24)【登録日】2019年5月10日

(45)【発行日】2019年5月29日

(54)【発明の名称】細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 7/08 20060101AFI20190520BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20190520BHJP

   A61K 38/10 20060101ALI20190520BHJP

   A61K 47/34 20170101ALI20190520BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20190520BHJP

   A61K 47/50 20170101ALI20190520BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20190520BHJP

   A61P 7/06 20060101ALI20190520BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20190520BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20190520BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20190520BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20190520BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20190520BHJP

   A61P 25/04 20060101ALI20190520BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20190520BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20190520BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20190520BHJP

【ＦＩ】

   C07K7/08ZNA

   A61K9/08

   A61K38/10

   A61K47/34

   A61K47/42

   A61K47/50

   A61P7/00

   A61P7/06

   A61P9/10

   A61P11/00

   A61P11/06

   A61P13/12

   A61P25/00

   A61P25/04

   A61P27/02

   A61P37/06

   A61P43/00 105

   A61P43/00 111

【請求項の数】16

【全頁数】81

(21)【出願番号】特願2014-510520(P2014-510520)

(86)(22)【出願日】2012年5月11日

(65)【公表番号】特表2014-514364(P2014-514364A)

(43)【公表日】2014年6月19日

(86)【国際出願番号】US2012037648

(87)【国際公開番号】WO2012155107

(87)【国際公開日】20121115

【審査請求日】2015年5月11日

【審判番号】不服2017-8120(P2017-8120/J1)

【審判請求日】2017年6月6日

(31)【優先権主張番号】61/484,836

(32)【優先日】2011年5月11日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】513283268

【氏名又は名称】アペリス・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＡＰＥＬＬＩＳ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ，ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100101454

【弁理士】

【氏名又は名称】山田 卓二

(74)【代理人】

【識別番号】100062144

【弁理士】

【氏名又は名称】青山 葆

(74)【代理人】

【識別番号】100106518

【弁理士】

【氏名又は名称】松谷 道子

(74)【代理人】

【識別番号】100156144

【弁理士】

【氏名又は名称】落合 康

(72)【発明者】

【氏名】セドリック・フランソワ

(72)【発明者】

【氏名】パスカル・デシャテレッツ

【合議体】

【審判長】 關 政立

【審判官】 阪野 誠司

【審判官】 大久保 元浩

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１０／１２７３３６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２００９−５１７４７６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００９−５１１４９６（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

A61K38/00-58

A61K9/00-72

A61K47/00-48

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＰｕｂＭｅｄ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

コンプスタチン類似体であって、１つ以上のコンプスタチン類似体部分に結合した１つ以上のクリアランス低減部分を含み、
(ａ)各コンプスタチン類似体部分が、
(ｉ)配列番号８〜２９および３２〜３６のいずれかに示すアミノ酸配列を有し、当該配列番号８〜２９および３２〜３６のいずれかにおける２つのＣｙｓ残基間のジスルフィド結合により形成された環状である、環状ペプチド；および
(ii)該環状ペプチドのＣ末端に結合したＬｙｓ
を含み、
ここで、Ｌｙｓが該環状ペプチドのＣ末端の環状部分と８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＥＥＡｃ）、１１−アミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン酸またはこのいずれかのスクシンイミジルエステル（ＮＨＳエステル）により離されており；そして
(ｂ)ポリエチレングリコール類（ＰＥＧ類）を含むクリアランス低減部分が該Ｌｙｓの側鎖のアミノ基を介して結合した
コンプスタチン類似体。

【請求項2】

該ＰＥＧが約５００、約１，０００、約１，５００、約２，０００、約５，０００、約１０，０００、約２０，０００、約３０，０００、約４０，０００、約５０，０００、約６０，０００、約７０，０００、約８０，０００、約９０，０００、または約１００，０００ダルトンの平均分子量を有する（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ部分を含む、請求項１に記載のコンプスタチン類似体。

【請求項3】

該ＰＥＧが直鎖状ＰＥＧまたは分岐状ＰＥＧである、請求項１または２に記載のコンプスタチン類似体。

【請求項4】

コンプスタチン類似体が反応性官能基を含むＰＥＧ部分の反応により産生された構造を含み、該ＰＥＧ部分が
式Ａ：

【化1】

式Ｂ：

【化2】

式Ｃ：

【化3】

式Ｄ：

【化4】

式Ｅ：

【化5】

式Ｆ：

【化6】

式Ｇ：

【化7】

または式Ｈ：

【化8】

であり、
ここで、「反応性官能基」はＮＨＳエステルを含み；
ｎは約５００、約１，０００、約１，５００、約２，０００、約５，０００、約１０，０００、約２０，０００、約３０，０００、約４０，０００、約５０，０００、約６０，０００、約７０，０００、約８０，０００、約９０，０００、または約１００，０００ダルトンの平均分子量を提供するのに十分な数であり；
Ｒ^１は水素または脂肪族末端基であり；
各Ｔは、独立して、共有結合であるか、あるいはＴの１つ以上の炭素単位が任意選択で独立して−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ^ｘ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ^ｘ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｘ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｎ（Ｒ^ｘ）ＳＯ_２−またはＳＯ_２Ｎ（Ｒ^ｘ）−に置き換わっているＣ_１〜１２の直鎖状または分岐状炭化水素鎖であり；ここで、Ｒ^ｘはそれぞれ独立して、水素またはＣ_１〜６脂肪族であり、そして
各Ｒ^２はそれぞれ独立して、「反応性官能基」またはＲ^１である、
請求項１〜３のいずれかに記載のコンプスタチン類似体。

【請求項5】

式Ａ〜ＨのいずれかのＰＥＧ部分がＮＨＳ活性化ＰＥＧである、請求項４に記載のコンプスタチン類似体。

【請求項6】

各ＴがＰＥＧ部分が対称であるように選択される、請求項５に記載のコンプスタチン類似体。

【請求項7】

コンプスタチン類似部分が配列番号２８のアミノ酸配列を含むコンプスタチン類似体部分と、Ｌｙｓ側鎖のアミノ基を介してＮＨＳエステルの反応に由来する構造によりＰＥＧにコンジュゲートされる配列番号２８のＴｈｒ残基のＣ末端側にＡＥＥＡｃ−Ｌｙｓ部分を含む、請求項１〜６のいずれかに記載のコンプスタチン類似体。

【請求項8】

コンプスタチン類似体の構造がアミン、ヒドロキシルまたはチオール基とＮＨＳエステルとの反応により産生される、請求項４に記載のコンプスタチン類似体。

【請求項9】

請求項１〜８のいずれか１項に記載のコンプスタチン類似体を含む組成物。

【請求項10】

皮下投与用または眼への送達用に製剤化された請求項９に記載の組成物。

【請求項11】

請求項１〜８のいずれか１項に記載のコンプスタチン類似体を少なくとも１つの薬学的に許容される担体または賦形剤と混合することを含む、請求項９の組成物を製造する方法。

【請求項12】

医薬として使用するための、請求項９または１０に記載の組成物。

【請求項13】

皮下投与用または眼への送達に使用するための、請求項９または１０に記載の組成物。

【請求項14】

細胞または臓器の補体依存性障害に対する感受性を低下させるためのまたは体介在性の障害を治療するための、請求項１３に記載の組成物。

【請求項15】

加齢黄斑変性症を有するまたはそのリスクのある対象の硝子体腔に投与するための、請求項１３または１４に記載の組成物。

【請求項16】

硝子体内注射により投与する、請求項１３〜１５の何れかに記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本発明は、２０１１年５月１１日に出願された米国仮特許出願第６１／４８４，８３６号の優先権を主張するものであり、上記出願は参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

補体は、３０種類以上の血漿タンパク質および細胞結合タンパク質からなり、自然免疫および適応免疫の両方において重要な役割を果たす系である。補体系のタンパク質は、様々なタンパク質相互作用および切断事象を介した一連の酵素カスケードの形で働く。補体活性化は３つの主要な経路、すなわち抗体依存性の古典経路、代替経路およびマンノース結合レクチン（ＭＢＬ）経路を介して生じる。不適切なまたは過剰な補体活性化が数多くの重篤な疾患および状態の根本原因または要因となっており、ここ数十年間、治療薬としての様々な補体阻害剤の探索に多大な努力が払われてきた。しかし、様々な治療目的で補体活性化を阻害する革新的な方法が未だ必要とされている。

【発明の概要】

【0003】

いくつかの態様では、本発明は細胞反応性コンプスタチン類似体を提供する。例えば、本発明は、細胞反応性コンプスタチン類似体、細胞反応性コンプスタチン類似体を含む組成物ならびに細胞反応性コンプスタチン類似体を製造する方法、これらを同定する方法、これらを特徴付ける方法および／またはこれらを使用する方法を提供する。いくつかの態様では、本発明は、細胞反応性コンプスタチン類似体を含む生理的に許容される組成物を提供する。いくつかの態様では、本発明は、細胞反応性コンプスタチン類似体を含む医薬品等級の組成物を提供する。

【0004】

いくつかの態様では、本発明は、長時間作用型コンプスタチン類似体を提供する。例えば、本発明は、長時間作用型コンプスタチン類似体、長時間作用型コンプスタチン類似体を含む組成物ならびに長時間作用型コンプスタチン類似体を製造する方法、これらを同定する方法、これらを特徴付ける方法および／またはこれらを使用する方法を提供する。いくつかの態様では、本発明は、長時間作用型コンプスタチン類似体を含む生理的に許容される組成物を提供する。いくつかの態様では、本発明は、長時間作用型コンプスタチン類似体を含む医薬品等級の組成物を提供する。

【0005】

いくつかの態様では、本発明は、標的化コンプスタチン類似体を提供する。例えば、本発明は、標的化コンプスタチン類似体、標的化コンプスタチン類似体を含む組成物ならびに標的化コンプスタチン類似体を製造する方法、これらを同定する方法、これらを特徴付けるおよび／またはこれらを使用する方法を提供する。いくつかの態様では、本発明は、標的化コンプスタチン類似体を含む生理的に許容される組成物を提供する。いくつかの態様では、本発明は、標的化コンプスタチン類似体を含む医薬品等級の組成物を提供する。

【0006】

本発明はさらに、補体介在性の傷害から細胞を保護する方法を提供する。いくつかの実施形態では、この方法は、細胞と細胞反応性コンプスタチン類似体とを接触させることを含む。細胞は様々な実施形態において、任意のタイプの細胞であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、細胞は血液細胞である。いくつかの実施形態では、血液細胞は赤血球（ＲＢＣ（ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ））（「ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ」とも呼ばれる）である。いくつかの実施形態では、細胞は、１種類以上の補体制御タンパク質の発現、表面密度および／または活性が異常に低い。例えば、細胞は、このようなタンパク質をコードする遺伝子に突然変異がみられるものであり得、その突然変異により、コードされているタンパク質の発現が低下しているか、発現がみられず、かつ／または活性が低下している。細胞は様々な実施形態において、任意のタイプまたは種の動物のものであり得る。例えば、細胞は、哺乳動物、例えば、霊長類（ヒトまたは非ヒト霊長類）、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ウサギ）、有蹄類（例えば、ブタ、ヒツジ、ウシ）、イヌまたはネコのものであり得る。多くの実施形態では、保護は霊長類の補体、例えばヒトの補体からの保護である。いくつかの実施形態では、細胞をｅｘ ｖｉｖｏ（対象の体外）で接触させる。いくつかの実施形態では、細胞をｉｎ ｖｉｖｏ（対象、例えばヒトの体内）で接触させる。いくつかの実施形態では、細胞は対象内に移植されるものであるか、既に対象内に移植されているものである。いくつかの態様では、本発明は、コンプスタチン類似体が共有結合した単離細胞を提供する。いくつかの態様では、本発明は、少なくとも一部の細胞にコンプスタチン類似体が結合した単離組織または単離臓器を提供する。

【0007】

本発明は、補体介在性の障害の治療を必要とする対象を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、この方法は、対象に細胞反応性コンプスタチン類似体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、対象に長時間作用型コンプスタチン類似体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、長時間作用型コンプスタチン類似体は細胞反応性コンプスタチン類似体である。いくつかの実施形態では、補体介在性の障害は発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）または補体による溶血が原因の他の障害である。いくつかの実施形態では、障害は虚血／再灌流（Ｉ／Ｒ）傷害（例えば、心筋梗塞、血栓塞栓性卒中または外科手術によるもの）である。いくつかの実施形態では、障害は外傷である。いくつかの実施形態では、障害は移植拒絶反応である。

【0008】

本願で言及される論文、書籍、特許出願、特許、その他の刊行物、ウェブサイトおよびデータベースはすべて、参照により本明細書に組み込まれるものとする。本明細書と、組み込まれるいずれかの参考文献との間に不一致が生じた場合、本明細書（本明細書に対するあらゆる補正を含む）が統制するものとする。特に明示されない限り、本明細書では、当該技術分野で認められている用語および略語の意味を用いる。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1】コンプスタチン類似体ＣＡ２８（配列番号２８）および３種類の長時間作用型コンプスタチン類似体（ＣＡ２８−１、ＣＡ２８−２、ＣＡ２８−３）のパーセント補体活性化阻害活性をペプチド濃度（μＭ）の関数として示したプロットである。古典的補体阻害アッセイを用いて、補体活性化の阻害をｉｎ ｖｉｔｒｏで試験した。プロットは、２セットの測定の結果を平均して得られた値を示している。ＣＡ２８（丸；赤）、ＣＡ２８−１（十字（×）；青）、ＣＡ２８−２（三角；緑）、ＣＡ２８−３（四角；紫）。

【図2】ＣＡ２８ならびに長時間作用型コンプスタチン類似体ＣＡ２８−２およびＣＡ２８−３のパーセント補体活性化阻害活性を化合物濃度（μＭ）の関数として示したプロットである。ＣＡ２８（四角、薄灰色）、ＣＡ２８−２（菱形、黒）、ＣＡ２８−３（丸、濃灰色）。ＣＡ２８−３は複数のペプチド部分を含む化合物である。モル基準で、ペプチド部分１つ当たりの活性は個々のＣＡ２８分子の活性を下回っているが、ＣＡ２８−３全体での活性はＣＡ２８の活性を上回っている。

【図3】単回静脈内注射後のカニクイザルにおけるＣＡ２８ならびに長時間作用型コンプスタチン類似体ＣＡ２８−２およびＣＡ２８−３の時間に対する血漿中濃度を示したプロットである。ＣＡ２８は２００ｍｇ／ｋｇで投与した。ＣＡ２８−２およびＣＡ２８−３はそれぞれ５０ｍｇ／ｋｇで投与した。これらの実験の用量の計算では、投与したＣＡ２８−２およびＣＡ２８−３物質が乾燥重量ベースで活性化合物ｗ／ｗの８０％を占めるものと仮定した。しかし、試料分析時には、標準曲線が、推定で３０％、乾燥重量ベースで１００％の活性化合物ｗ／ｗを仮定するものであった。したがって、Ｃｍａｘの値は実際のＣｍａｘを過大に見積もったものである。ＣＡ２８（四角、薄灰色）、ＣＡ２８−２（三角、黒）、ＣＡ２８−３（丸、濃灰色）。

【図4】ＣＡ２８および長時間作用型コンプスタチン類似体ＣＡ２８−４のパーセント補体活性化阻害活性を化合物濃度（μＭ）の関数として示したプロットである。古典的補体阻害アッセイを用いて、補体活性化の阻害をｉｎ ｖｉｔｒｏで試験した。プロットは、ＣＡ２８−４について４セットの測定の結果を平均して得られた値を示している。ＣＡ２８（四角、薄灰色）、ＣＡ２８−４（十字、黒）。

【図5】単回静脈内注射後のカニクイザルにおけるＣＡ２８ならびに長時間作用型コンプスタチン類似体ＣＡ２８−２、ＣＡ２８−３およびＣＡ２８−４の時間に対する濃度を示したプロットである。ＣＡ２８は２００ｍｇ／ｋｇで投与した。ＣＡ２８−２、ＣＡ２８−３およびＣＡ２８−４はそれぞれ５０ｍｇ／ｋｇで投与した。これらの実験の用量の計算では、投与したＣＡ２８−２およびＣＡ２８−３物質が乾燥重量ベースで活性化合物ｗ／ｗの８０％を占めるものと仮定した。しかし、試料分析時には、標準曲線が乾燥重量ベースで１００％の活性化合物ｗ／ｗを仮定するものであった。したがって、Ｃｍａｘの値は、これらの化合物を乾燥重量ベースで示されている用量で投与した場合に得られるＣｍａｘを、推定で３０％過大に見積もったものである。ＣＡ２８（四角、薄灰色）、ＣＡ２８−２（三角、黒）、ＣＡ２８−３（丸、濃灰色）、ＣＡ２８−４（逆三角、黒）。

【発明を実施するための形態】

【0010】

（本発明の特定の実施形態に関する詳細な説明）
Ｉ．定義
数に関連する「約」という用語は一般に、特に明記されない限り、あるいは文脈上特に明らかでない限り、その数の±１０％以内、いくつかの実施形態では±５％以内、いくつかの実施形態では±１％以内、いくつかの実施形態では±０．５％以内に収まる数を包含する（ただし、その数が許容範囲を超えて、考え得る値の１００％を上回る場合は除く）。

【0011】

「補体成分」または「補体タンパク質」とは、補体系の活性化に関与する、あるいは補体が媒介する１つ以上の作用に関与するタンパク質のことである。古典的補体経路の成分としては、例えばＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９および膜侵襲複合体（ＭＡＣ）とも呼ばれるＣ５ｂ−９複合体ならびに上記のいずれかの活性フラグメントまたは酵素切断産物（例えば、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ４ａ、Ｃ４ｂ、Ｃ５ａなど）が挙げられる。代替経路の成分としては、例えばＢ因子、Ｄ因子およびプロパージンが挙げられる。レクチン経路の成分としては、例えばＭＢＬ２、ＭＡＳＰ−１およびＭＡＳＰ−２が挙げられる。補体成分としてはほかにも、可溶性補体成分に対する細胞結合受容体が挙げられ、この場合、可溶性補体成分が結合すると細胞結合受容体がこの可溶性補体成分の１つ以上の生物活性を媒介する。このような受容体としては、例えばＣ５ａ受容体（Ｃ５ａＲ）、Ｃ３ａ受容体（Ｃ３ａＲ）、補体受容体１（ＣＲ１）、補体受容体２（ＣＲ２）、補体受容体３（ＣＲ３、ＣＤ４５としても知られる）などが挙げられる。「補体成分」という用語は補体活性化の「トリガー」として働く分子および分子構造、例えば、抗原抗体複合体、微生物の表面または人工的な表面上に存在する外来の構造などを包含することを意図するものではないことが理解されよう。

【0012】

「補体介在性の障害」とは、罹患している少なくとも一部の対象において補体活性化が要因および／または少なくとも部分的に原因であることが知られている、あるいはそうであることが疑われるあらゆる障害、例えば、補体活性化により組織損傷を来たす障害のことである。補体介在性の障害の非限定的な例としては、特に限定されないが、（ｉ）溶血または溶血性貧血を特徴とする様々な障害、例えば非定型溶血性尿毒症症候群、寒冷凝集素症、発作性夜間ヘモグロビン尿症、輸血反応など；（ｉｉ）移植拒絶反応（例えば、超急性または急性移植拒絶反応）または移植機能不全；（ｉｉｉ）外傷、外科手術（例えば、動脈瘤修復）、心筋梗塞、虚血性脳卒中などの虚血／再灌流傷害を伴う障害；（ｉｖ）喘息および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの呼吸器系の障害；（ｖ）関節炎、例えば、関節リウマチ；（ｖｉ）加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、糖尿病性網膜症、緑内障およびブドウ膜炎などの眼障害が挙げられる。本明細書では、「障害」は「疾患」、「状態」と互換的に使用され、生物体のあらゆる健康障害または機能異常の状態、例えば、内科的および／または外科的処置が適応とされるあらゆる状態、あるいは対象が適宜に内科的および／または外科的処置を求めるあらゆる状態を指す語とほぼ同じものである。このほか、特定の範疇において特定の障害を挙げるのは便宜上のことであって、本発明を限定することを意図するものではないことが理解されるべきである。特定の疾患が複数の範疇において適宜挙げられ得ることが理解されよう。

【0013】

「補体制御タンパク質」とは、補体活性の制御に関与するタンパク質のことである。補体制御タンパク質は、例えば、補体活性化を阻害することにより、あるいは１種類以上の活性化補体タンパク質の崩壊を不活性化または加速することにより、補体活性をダウンレギュレートし得る。補体制御タンパク質の例としては、Ｃ１阻害因子、Ｃ４結合タンパク質、クラスタリン、ビトロネクチン、ＣＦＨ、Ｉ因子ならびに細胞結合タンパク質ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＲ１、ＣＲ２およびＣＲ３が挙げられる。

【0014】

本明細書において２つ以上の部分に関して使用される「結合している」とは、それらの部分が互いに物理的に結び付いて、あるいは繋がって、好ましくはその新たな分子構造が使用される条件下、例えば生理的条件下でそれらの部分の結び付きが維持されるよう十分に安定な分子構造を形成することを意味するものである。本発明の特定の好ましい実施形態では、結合は共有結合である。他の実施形態では、結合は非共有結合である。部分同士が直接結合していても、間接的に結合していてもよい。２つの部分が直接結合している場合、それらは互いに共有結合しているか、あるいは２つの部分の間の分子間力が部分同士の結び付きを維持するのに十分な程度に接近している。２つの部分が間接的に結合している場合、それらはそれぞれが第三の部分と共有結合または非共有結合し、これにより両部分の間の結び付きが維持される。一般に、「結合部分」または「結合部」により結合しているという場合、両結合部分の間の結合は間接的なものであり、通常は、結合される部分のそれぞれが結合部分と共有結合している。２つの部分を「リンカー」を用いて結合させることができる。リンカーは、実体の安定性を維持できる条件下（条件によっては、必要に応じて実体の一部分を保護することがある）適度な時間内に、適度な収率が得られる量で、結合させる実体と反応する、任意の適切な部分であり得る。リンカーは通常、少なくとも２つの官能基を含み、２つの官能基一方が第一の実体と反応し、他方が第二の実体と反応する。リンカーが結合させる実体と反応した後は、「リンカー」という用語は、得られた構造のリンカーに由来する部分または少なくとも反応した官能基を含まない部分を指し得ることが理解されよう。結合部分は、結合させる実体との結合には関与せずに実体を互いに空間的に分離することを目的とする部分を含み得る。このような部分は「スペーサー」と呼ばれ得る。

【0015】

本明細書で使用される「ポリペプチド」は、任意選択でアミノ酸類似体を１つ以上含むアミノ酸のポリマーを指す。タンパク質とは、１つ以上のポリペプチドからなる分子のことである。ペプチドとは、長さが通常約２〜６０アミノ酸、例えば、長さが８〜４０アミノ酸の比較的短いポリペプチドのことである。「タンパク質」、「ポリペプチド」および「ペプチド」という用語は互換的に使用され得る。本明細書で使用されるポリペプチドは、タンパク質中に本来存在するアミノ酸、タンパク質中に本来存在しないアミノ酸および／またはアミノ酸ではないアミノ酸類似体などのアミノ酸を含み得る。本明細書で使用されるアミノ酸の「類似体」は、アミノ酸と構造が類似している別のアミノ酸またはアミノ酸と構造が類似しているアミノ酸以外の化合物であり得る。タンパク質中に普通にみられる２０種類のアミノ酸（「標準」アミノ酸）の当該技術分野で認められている類似体が多数知られている。例えば、炭水化物基、リン酸基、ファルネシル基、イソファルネシル基、脂肪酸基、コンジュゲーション、官能基化またはその他の修飾のためのリンカーなどの化学的実体を付加することにより、ポリペプチド中の１つ以上のアミノ酸を修飾することができる。特定の非限定的な適切な類似体および修飾が国際公開第２００４０２６３２８号および／または以降に記載されている。ポリペプチドを、例えばＮ末端でアセチル化し、かつ／または例えばＣ末端でアミド化してもよい。

【0016】

本明細書で使用される「反応性官能基」は、特に限定されないが、オレフィン、アセチレン、アルコール、フェノール、エーテル、オキシド、ハロゲン化物、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、エステル、アミド、シアナート、イソシアナート、チオシアナート、イソチオシアナート、アミン、ヒドラジン、ヒドラゾン、ヒドラジド、ジアゾ、ジアゾニウム、ニトロ、ニトリル、メルカプタン、スルフィド、ジスルフィド、スルホキシド、スルホン、スルホン酸、スルフィン酸、アセタール、ケタール、無水物、硫酸、スルフェン酸、イソニトリル、アミジン、イミド、イミダート、ニトロン、ヒドロキシルアミン、オキシム、ヒドロキサム酸、チオヒドロキサム酸、アレン、オルトエステル、亜硫酸、エナミン、イナミン、尿素、イソ尿素、セミカルバジド、カルボジイミド、カルバミン酸、イミン、アジド、アゾ化合物、アゾキシ化合物およびニトロソ化合物、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、マレイミド、スルフィドリルなどを含めた基を指す。上に挙げた各官能基を調製する方法は当該技術分野で周知であり、特定の目的でのその適用または修飾は当業者の能力の範囲内にある（例えば、ＳａｎｄｌｅｒおよびＫａｒｏ編，ＯＲＧＡＮＩＣ ＦＵＮＣＴＩＯＮＡＬ ＧＲＯＵＰ ＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮＳ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，１９８９ならびにＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，第２版，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，２００８を参照されたい）。

【0017】

「特異的結合」は一般に、標的ポリペプチド（またはより一般には標的分子）と、抗体またはリガンドなどの結合分子との間の物理的な結び付きを指す。この結び付きは通常、結合分子によって認識される抗原決定基、エピトープ、結合ポケットまたは間隙などの標的の特定の構造的特徴の存在に依存するものである。例えば、抗体がエピトープＡに対して特異的である場合、遊離の標識されたＡおよびそれと結合する結合分子をともに含有する反応物中に、エピトープＡを含むポリペプチドが存在することまたは遊離の未標識のＡが存在することにより、結合分子と結合する標識されたＡの量が減少する。このほか、特異性は完全なものである必要はなく、一般に結合が起こる状況を指すものであることを理解するべきである。例えば、多くの抗体が、標的分子中に存在するエピトープに加えて他のエピトープと交差反応することが当該技術分野で周知である。このような交差反応性は、抗体を使用する適用によっては許容され得るものである。当業者は、任意の適用において（例えば、標的分子の検出のため、治療目的など）、十分に機能できる程度の特異性を有する抗体またはリガンドを選択することができるであろう。このほか、結合分子と他の標的、例えば競合物質との親和性に対する結合分子と標的分子との親和性などの他の因子の観点から特異性が評価され得ることも理解するべきである。結合分子が検出することを望む標的分子に対して高い親和性を示し、非標的分子に対しては低い親和性を示せば、その抗体は許容される試薬である可能性がある。結合分子の特異性が１つ以上の状況において確認されれば、その特異性を再び評価する必要なしにそれを他の状況、好ましくはほぼ同じ状況で用いることができる。いくつかの実施形態では、特異的結合を示す２分子の親和性（平衡解離定数Ｋｄにより測定される）は、試験条件下、例えば生理的条件下で１０^−３Ｍ以下、例えば１０^−４Ｍ以下、例えば１０^−５Ｍ以下、例えば１０^−６Ｍ以下、１０^−７Ｍ以下、１０^−８Ｍ以下または１０^−９Ｍ以下である。

【0018】

本発明に従って治療する「対象」は通常、少なくとも一部の霊長類（例えば、ヒト）補体成分Ｃ３と、任意選択でさらに１つ以上の霊長類補体成分とを発現するか、これを含むヒト、非ヒト霊長類またはこれより下等な動物（例えば、マウスまたはラット）である。いくつかの実施形態では、対象は雄である。いくつかの実施形態では、対象は雌である。いくつかの実施形態では、対象は成体、例えば最低でも１８歳、例えば１８〜１００歳のヒトである。

【0019】

対象を治療することに関連して本明細書で使用される「治療（すること）」は、治療を提供すること、すなわち、対象の任意のタイプの内科的または外科的処置を提供することを指す。治療は、疾患を正常な状態に戻す、それを軽減する、疾患の進行を抑制する、疾患を予防する、疾患の可能性を低下させるために、あるいは疾患の１つ以上の症状または徴候を正常な状態に戻す、それを軽減する、それを抑制する、疾患の１つ以上の症状または徴候の進行を防ぐ、疾患の１つ以上の症状または徴候を予防する、疾患の１つ以上の症状または徴候の可能性を低下させるために提供され得る。「予防する」とは、少なくとも一部の患者において疾患または疾患の症状もしくは徴候が少なくとも一定期間は生じないようにすることを指すものである。治療には、疾患を示す１つ以上の症状または徴候が発現したときに、例えば、疾患を正常な状態に戻す、それを軽減する、疾患の重症度を軽減するおよび／または疾患の進行を抑制するもしくは防ぐために、ならびに／あるいは疾患の１つ以上の症状もしくは徴候を正常な状態に戻す、それを軽減する、疾患の１つ以上の症状もしく徴候の重症度を軽減するおよび／または抑制するために、対象に化合物または組成物を投与することが含まれ得る。疾患を発症している対象または疾患の発症リスクが一般集団の者より高い対象に化合物または組成物を投与することができる。疾患を発症している対象あるいは疾患の１つ以上の特定の症状もしくは徴候の発現または疾患増悪のリスクが、その疾患を有すると診断されている他の患者に比べて、または増悪に対する対象の典型的または平均的なリスクに比べて高い対象に化合物または組成物を投与することができる。例えば、対象は、対象に増悪が認められるリスクを増大させる（例えば、一時的にリスクを増大させる）「トリガー」に曝露されていてもよい。化合物または組成物を予防的に、すなわち、疾患の症状または徴候が発現する前に投与することができる。通常この場合、対象は、任意選択で年齢、性別および／またはその他の人口統計学的変数（１つまたは複数）の点で一致する一般集団の者に比べて疾患の発症リスクがある。

【0020】

本明細書で使用される「脂肪族」という用語は、直鎖状（すなわち、非分岐）、分岐状または環状（融合多環、架橋多環およびスピロ融合多環を含む）であり得、完全に飽和されているか、不飽和の単位を１つ以上含み得るが、芳香族ではない炭化水素部分を意味する。特に明記されない限り、脂肪族基は１〜３０個の炭素原子を含む。いくつかの実施形態では、脂肪族基は１〜１０個の炭素原子を含む。他の実施形態では、脂肪族基は１〜８個の炭素原子を含む。さらに他の実施形態では、脂肪族基は１〜６個の炭素原子を含み、またさらに他の実施形態では、脂肪族基は１〜４個の炭素原子を含む。適切な脂肪族基としては、特に限定されないが、直鎖状または分岐状のアルキル基、アルケニル基およびアルキニル基ならびに（シクロアルキル）アルキル、（シクロアルケニル）アルキルまたは（シクロアルキル）アルケニルなどの上記基のハイブリッドが挙げられる。

【0021】

本明細書で使用される「アルキル」は、約１個〜約２２個の炭素原子（ならびにその炭素原子の範囲および特定の数のすべての組合せおよび部分的組合せ）を有する飽和の直鎖状、分岐状または環状炭化水素を指し、本発明の特定のある実施形態では、炭素原子の数は約１個〜約１２個または約１個〜約７個が好ましい。アルキル基としては、特に限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、シクロペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、シクロヘキシル、シクロオクチル、アダマンチル、３−メチルペンチル、２，２−ジメチルブチルおよび２，３−ジメチルブチルが挙げられる。

【0022】

本明細書で使用される「ハロ」はＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを指す。

【0023】

本明細書で使用される「アルカノイル」は、約１個〜１０個の炭素原子（ならびにその炭素原子の範囲および特定の数のすべての組合せおよび部分的組合せ）、例えば、理解されるように、末端のＣ＝Ｏ基と単結合で結合した（「アシル基」と呼ばれることもある）約１個〜７個の炭素原子を有し、任意選択で置換されている直鎖状または分岐状の脂肪族非環状残基を指す。アルカノイル基としては、特に限定されないが、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ペンタノイル、イソペンタノイル、２−メチル−ブチリル、２，２−ジメトキシプロピオニル、ヘキサノイル、ヘプタノイル、オクタノイルなどが挙げられ、本発明の目的のためには、ホルミル基はアルカノイル基と見なされる。「低級アルカノイル」は、約１個〜約５個の炭素原子（ならびにその炭素原子の範囲および特定の数のすべての組合せおよび部分的組合せ）を有し、任意選択で置換されている直鎖状または分岐状の脂肪族非環状残基を指す。このような基としては、特に限定されないが、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ペンタノイル、イソペンタノイルなどが挙げられる。

【0024】

本明細書で使用される「アリール」は、約５個〜約１４個の炭素原子（ならびにその炭素原子の範囲および特定の数のすべての組合せおよび部分的組合せ）、好ましくは約６個〜約１０個の炭素原子を有し、任意選択で置換されている単環式または二環式の芳香環系を指す。非限定的な例としては、例えばフェニルおよびナフチルが挙げられる。

【0025】

本明細書で使用される「アラルキル」は、アリール置換基を有し、かつ約６個〜約２２個の炭素原子（ならびにその炭素原子の範囲および特定の数のすべての組合せおよび部分的組合せ）を有するアルキルラジカルを指し、特定の実施形態では、炭素原子の数は約６個〜約１２個が好ましい。アラルキル基は、任意選択で置換されていてもよい。非限定的な例としては、例えば、ベンジル、ナフチルメチル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル、フェニルエチルおよびジフェニルエチルが挙げられる。

【0026】

本明細書で使用される「アルコキシ」および「アルコキシル」という用語は、任意選択で置換されているアルキル−Ｏ−基を指し、ここでは、アルキルは上で定義した通りのものである。アルコキシ基およびアルコキシル基の例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシおよびヘプトキシが挙げられる。

【0027】

本明細書で使用される「カルボキシ」は−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ基を指す。

【0028】

本明細書で使用される「アルコキシカルボニル」は−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル基を指し、ここでは、アルキルは上で定義した通りのものである。

【0029】

本明細書で使用される「アロイル」は−Ｃ（＝Ｏ）−アリール基を指し、ここでは、アリールは上で定義した通りのものである。アロイル基の例としては、ベンゾイルおよびナフトイルが挙げられる。

【0030】

「環系」という用語は、一部が不飽和であるか完全に飽和されている芳香族または非芳香族の３員〜１０員環系を指し、これには、３〜８個の原子の大きさの単環ならびに非芳香環と融合した芳香族５員もしくは６員アリール基または芳香族複素環基を含み得る二環系および三環系が含まれる。このような複素環には、独立して酸素、硫黄および窒素からなる群より選択されるヘテロ原子を１個〜３個有する複素環が含まれる。特定の実施形態では、複素環という用語は、少なくとも１つの環原子がＯ、ＳおよびＮからなる群より選択されるヘテロ原子である非芳香族５員、６員もしくは７員環基または多環基を指し、これには、特に限定されないが、独立して酸素、硫黄および窒素からなる群より選択されるヘテロ原子を１個〜３個有する融合６員環を含む二環基または三環基が含まれる。いくつかの実施形態では、「環系」はシクロアルキル基を指し、本明細書で使用されるシクロアルキル基は、３個〜１０個、例えば４個〜７個の炭素原子を有する基を指す。シクロアルキルとしては、特に限定されないが、任意選択で置換されているシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、「環系」は、任意選択で置換されているシクロアルケニル部分またはシクロアルキニル部分を指す。

【0031】

置換されている化学的部分には通常、水素に代わる置換基が１つ以上含まれている。置換基の例としては、例えば、ハロ、アルキル、シクロアルキル、アラルキル、アリール、スルフィドリル、ヒドロキシル（−ＯＨ）、アルコキシル、シアノ（−ＣＮ）、カルボキシル（−ＣＯＯＨ）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、アミノカルボニル（−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２）、−Ｎ−置換アミノカルボニル（−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ”）、ＣＦ_３、ＣＦ_２ＣＦ_３などが挙げられる。上記の置換基について、部分Ｒ’’はそれぞれ独立して、例えばＨ、アルキル、シクロアルキル、アリールまたはアラルキルのいずれかであり得る。

【0032】

本明細書で使用される「Ｌ−アミノ酸」は、タンパク質中に普通に存在する天然の左旋性のα−アミノ酸またはこのα−アミノ酸のアルキルエステルのいずれかを指す。「Ｄ−アミノ酸」という用語は右旋性のα−アミノ酸を指す。特に明記されない限り、本明細書で言及されるアミノ酸はすべてＬ−アミノ酸である。

【0033】

本明細書で使用される「芳香族アミノ酸」とは、芳香環を少なくとも１つ含むアミノ酸のことであり、例えば、芳香族アミノ酸はアリール基を含む。

【0034】

本明細書で使用される「芳香族アミノ酸類似体」とは、芳香環を少なくとも１つ含むアミノ酸類似体のことであり、例えば、芳香族アミノ酸類似体はアリール基を含む。

【0035】

ＩＩ．概要
本発明は、細胞反応性コンプスタチン類似体およびそれに関連する方法、例えば、その使用方法を提供する。細胞反応性コンプスタチン類似体とは、コンプスタチン類似体部分と、細胞の表面に露出している官能基と例えば生理的条件下で反応して共有結合を形成することができる細胞反応性の官能基とを含む、化合物のことである。したがって、細胞反応性コンプスタチン類似体は細胞と共有結合する。特定の理論に束縛されることを望むものではないが、細胞に係留されたコンプスタチン類似体が、例えば、細胞表面および／または細胞付近でＣ３（Ｃ３（Ｈ_２Ｏ）の形態であり得る）と結合してＣ３の切断および活性化を阻害することにより、ならびに／あるいはＣ３ｂと結合してその細胞への沈着または補体活性化カスケードへの関与を阻害することにより、補体介在性の傷害から細胞を保護する。本発明のいくつかの態様では、単離細胞と細胞反応性コンプスタチン類似体とをｅｘ ｖｉｖｏ（体外）で接触させる。本発明のいくつかの態様では、細胞は単離された組織または臓器内、例えば、対象に移植する組織または臓器内に存在する。本発明のいくつかの態様では、対象に細胞反応性コンプスタチン類似体を投与することにより、細胞と細胞反応性コンプスタチン類似体とをｉｎ ｖｉｖｏで接触させる。細胞反応性コンプスタチン類似体は、ｉｎ ｖｉｖｏで細胞と共有結合するようになる。いくつかの態様では、本発明の方法は、少なくとも２週間、その期間の間に再び治療を実施する必要なしに、補体活性化の有害な作用から細胞、組織および／または臓器を保護するものである。

【0036】

いくつかの態様では、本発明は、細胞もしくは組織の表面に存在する標的分子または細胞もしくは組織に結合していない細胞外物質と非共有結合する標的化部分を含む、コンプスタチン類似体を提供する。本明細書では、このようなコンプスタチン類似体を「標的化コンプスタチン類似体」と呼ぶ。標的分子は多くの場合、細胞膜に結合して細胞表面に露出しているタンパク質または炭水化物である。標的化部分は、コンプスタチン類似体を補体活性化の影響を受けやすい細胞、組織または部位に対して標的化する。本発明のいくつかの態様では、単離細胞と標的化コンプスタチン類似体とをｅｘ ｖｉｖｏ（体外）で接触させる。本発明のいくつかの態様では、細胞は、単離された組織または臓器内、例えば、対象に移植する組織または臓器内に存在する。本発明のいくつかの態様では、標的化コンプスタチン類似体が対象に投与されて、細胞、組織または細胞外物質とｉｎ ｖｉｖｏで共有結合するようになる。いくつかの態様では、本発明の方法は、少なくとも２週間、その期間の間に再び治療を実施する必要なしに、補体活性化の有害な作用から細胞、組織および／または臓器を保護するものである。いくつかの実施形態では、標的化コンプスタチン類似体は、標的化部分と細胞反応性部分をともに含む。標的化部分は、細胞上の分子と非共有結合することにより、コンプスタチン類似体を例えば特定の細胞タイプに対して標的化する。次いで、細胞反応性部分が細胞または細胞外物質と共有結合する。他の実施形態では、標的化コンプスタチン類似体は細胞反応性部分を含まない。

【0037】

いくつかの態様では、本発明は長時間作用型コンプスタチン類似体を提供し、ここでは、長時間作用型コンプスタチン類似体は、体内での化合物の寿命を（例えば、その血液からのクリアランスを低下させることにより）延ばすポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの部分を含む。いくつかの実施形態では、長時間作用型コンプスタチン類似体は標的化部分も細胞反応性部分も含まない。いくつかの実施形態では、長時間作用型コンプスタチン類似体は標的化部分および／または細胞反応性部分を含む。

【0038】

ＩＩＩ．補体系
本発明の理解を容易にするため、本発明を限定する意図は一切ないが、本節に補体とその活性化経路の概要を記載する。さらに詳細な説明については、例えば、Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第６版，２００６；Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ；第６版，２００８；およびＷａｌｐｏｒｔ ＭＪ．，Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ．Ｆｉｒｓｔ ｏｆ ｔｗｏ ｐａｒｔｓ． Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．，３４４（１４）：１０５８−６６，２００１に記載されている。

【0039】

補体は、感染病原体から体を防御するのにある重要な役割を担う自然免疫系の一部門である。補体系には、古典経路、代替経路およびレクチン経路として知られる３つの主要な経路に関与する３０種類以上の血清タンパク質および細胞タンパク質が含まれる。古典経路は通常、抗原とＩｇＭまたはＩｇＧ抗体との複合体がＣ１と結合することにより誘発される（ただし、ある種の他の活性化因子もこの経路を開始することができる）。活性化したＣ１がＣ４およびＣ２をＣ４ａとＣ４ｂおよびＣ２ａとＣ２ｂに切断する。Ｃ４ｂとＣ２ａが合わさってＣ３転換酵素を形成し、これがＣ３を切断してＣ３ａとＣ３ｂが形成される。Ｃ３ｂとＣ３転換酵素が結合するとＣ５転換酵素が生じ、これがＣ５をＣ５ａとＣ５ｂに切断する。Ｃ３ａ、Ｃ４ａおよびＣ５ａはアナフィロトキシンであり、急性炎症性応答における複数の反応を媒介する。またＣ３ａおよびＣ５ａは、好中球などの免疫系細胞を誘引する走化性因子でもある。

【0040】

代替経路は、例えば、微生物表面および様々な複合多糖類により開始され、またこれらによって増幅される。この経路では、低レベルで自発的に生じるＣ３からＣ３（Ｈ_２Ｏ）への加水分解によりＢ因子との結合が生じ、これがＤ因子により切断されて液相のＣ３転換酵素が生じ、これがＣ３をＣ３ａとＣ３ｂに切断することにより補体を活性化する。Ｃ３ｂが細胞表面などの標的と結合してＢ因子と複合体を形成し、これがのちにＤ因子により切断されてＣ３転換酵素が生じる。表面と結合したＣ３転換酵素がさらに別のＣ３分子を切断して活性化し、活性化部位に近接してＣ３ｂが急速に沈着してさらに別のＣ３転換酵素が形成され、これによりさらに別のＣ３ｂが生じる。このような過程により、反応を大幅に増幅させるＣ３切断およびＣ３転換酵素形成のサイクルが生じる。Ｃ３の切断および別のＣ３ｂ分子とＣ３転換酵素との結合によりＣ５転換酵素が生じる。この経路のＣ３転換酵素とＣ５転換酵素は、宿主細胞分子であるＣＲ１、ＤＡＦ、ＭＣＰ、ＣＤ５９およびｆＨによって制御される。これらのタンパク質の作用機序には、活性促進の低下（すなわち、転換酵素を解離させる能力）、Ｉ因子によるＣ３ｂまたはＣ４ｂの分解において補助因子として働く能力あるいはその両方が含まれる。通常、宿主細胞表面に補体制御タンパク質が存在することにより、細胞表面で著しい補体活性化が生じないようになっている。

【0041】

両経路で生成したＣ５転換酵素はＣ５を分解してＣ５ａとＣ５ｂを生じる。次いで、Ｃ５ｂがＣ６、Ｃ７およびＣ８と結合してＣ５ｂ−８を形成し、これがＣ９の重合を触媒してＣ５ｂ−９膜侵襲複合体（ＭＡＣ）を形成する。ＭＡＣは標的細胞膜に侵入し、細胞溶解を引き起こす。細胞膜上のＭＡＣの量が少ないと、細胞死以外の様々な結果がもたらされ得る。

【0042】

レクチン補体経路は、マンノース結合レクチン（ＭＢＬ）およびＭＢＬ関連セリンプロテアーゼ（ＭＡＳＰ）が炭水化物と結合することにより開始される。ＭＢ１−１遺伝子（ヒトではＬＭＡＮ−１として知られる）は、小胞体とゴルジ体との間の中間領域に存在するＩ型内在性膜タンパク質をコードする。ＭＢＬ−２遺伝子は、血清中に存在する可溶性マンノース結合タンパク質をコードする。ヒトレクチン経路では、ＭＡＳＰ−１およびＭＡＳＰ−２がＣ４とＣ２のタンパク質分解に関与し、上記のＣ３転換酵素が生じる。

【0043】

補体活性は、補体制御タンパク質（ＣＣＰ）または補体活性化制御因子（ＲＣＡ）タンパク質と呼ばれる様々な哺乳動物タンパク質により制御されている（米国特許第６，８９７，２９０号）。これらのタンパク質は、リガンド特異性および補体阻害機序（１つまたは複数）が異なるものである。これらは転換酵素の正常な崩壊を加速し、かつ／またはＩ因子の補助因子として機能して、Ｃ３ｂおよび／またはＣ４ｂを酵素的に切断してさらに小さいフラグメントにする。ＣＣＰは、ジスルフィド結合した４つのシステイン（２つのジスルフィド結合）を有する保存されたモチーフ、プロリン、トリプトファンおよび多数の疎水性残基を含み、ショートコンセンサスリピート（ＳＣＲ）、補体制御タンパク質（ＣＣＰ）モジュールまたはＳＵＳＨＩドメインとして知られる、長さ約５０〜７０アミノ酸の複数（通常、４〜５６個）の相同なモチーフが存在することを特徴とする。ＣＣＰファミリーとしては、補体受容体１（ＣＲ１；Ｃ３ｂ：Ｃ４ｂ受容体）、補体受容体２（ＣＲ２）、膜補因子タンパク質（ＭＣＰ；ＣＤ４６）、崩壊促進因子（ＤＡＦ）、補体Ｈ因子（ｆＨ）およびＣ４ｂ結合タンパク質（Ｃ４ｂｐ）が挙げられる。ＣＤ５９は、構造的にはＣＣＰと関連のない膜結合補体制御タンパク質である。補体制御タンパク質は通常、制限しなければ哺乳動物、例えばヒト宿主の細胞および組織上で生じ得る補体活性化を制限するものである。したがって、「自己」の細胞は通常、これらの細胞上で補体活性化が進行すれば続いて生じる有害な作用から保護されている。補体制御タンパク質（１つまたは複数）の不足または欠損が様々な補体介在性の障害、例えば本明細書で述べるような障害の病理発生に関与している。

【0044】

ＩＶ．コンプスタチン類似体
コンプスタチンは、Ｃ３と結合し補体活性化を阻害する環状ペプチドである。米国特許第６，３１９，８９７号には、配列Ｉｌｅ−［Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ］−Ｔｈｒ（配列番号１）を有するペプチドが記載されており、配列中、２つのシステインの間にあるジスルフィド結合が括弧で表わされている。「コンプスタチン」という名称は米国特許第６，３１９，８９７号では使用されていないが、のちに、米国特許第６，３１９，８９７号に開示されている配列番号２と同じ配列を有するが表１（配列番号８）に示されるようにＣ末端がアミド化されているペプチドを呼ぶのに科学文献および特許文献（例えば、Ｍｏｒｉｋｉｓら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．，７（３）：６１９−２７，１９９８を参照されたい）で採用されたことが理解されよう。本明細書では一貫して、「コンプスタチン」という用語をこのような使用法で（すなわち、配列番号８を呼ぶ場合に）用いる。コンプスタチンより高い補体阻害活性を有するコンプスタチン類似体が開発されている。例えば、国際公開第２００４／０２６３２８号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０２９６５３号）、Ｍｏｒｉｋｉｓ，Ｄ．ら，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓ．３２（Ｐｔ １）：２８−３２，２００４， Ｍａｌｌｉｋ，Ｂ．ら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２７４−２８６，２００５；Ｋａｔｒａｇａｄｄａ，Ｍ．ら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４９：４６１６−４６２２，２００６；国際公開第２００７０６２２４９号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４５５３９号）；国際公開第２００７０４４６６８号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０３９３９７号）、国際公開第２００９／０４６１９８号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７８５９３号）；国際公開第２０１０／１２７３３６号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３３３４５号）および後述の考察を参照されたい。

【0045】

コンプスタチン類似体は、例えばＮ末端および／またはＣ末端でアセチル化またはアミド化されていてよい。例えば、コンプスタチン類似体は、Ｎ末端でアセチル化され、かつＣ末端でアミド化されていてよい。当該技術分野で使用される通り、本明細書で使用される「コンプスタチン」およびコンプスタチンの活性と比較した本明細書に記載のコンプスタチン類似体の活性は、Ｃ末端でアミド化されたコンプスタチンのことを指す（Ｍａｌｌｉｋ，２００５，上記）。

【0046】

ほかにも、コンプスタチンのコンカテマーもしくは多量体またはその補体阻害類似体が本発明で使用される。

【0047】

本明細書で使用される「コンプスタチン類似体」という用語は、コンプスタチンおよびその任意の補体阻害類似体を包含する。「コンプスタチン類似体」という用語は、コンプスタチンおよびコンプスタチンに基づき設計または同定され、その補体阻害活性が、例えば、当該技術分野で認められている任意の補体活性化アッセイまたはこれと実質的にほぼ同じもしくは同等なアッセイを用いて測定されるコンプスタチンの活性の少なくとも５０％の大きさである他の化合物を包含する。特定の適切なアッセイが米国特許第６，３１９，８９７号、国際公開第２００４／０２６３２８号、Ｍｏｒｉｋｉｓ，上記、Ｍａｌｌｉｋ，上記、Ｋａｔｒａｇａｄｄａ ２００６，上記、国際公開第２００７０６２２４９号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４５５３９号）；国際公開第２００７０４４６６８号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０３９３９７号）、国際公開第２００９／０４６１９８号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７８５９３号）；および／または国際公開第２０１０／１２７３３６号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３３３４５号）に記載されている。アッセイは、例えば、代替経路もしくは古典経路に媒介される赤血球溶解を測定するものであっても、ＥＬＩＳＡアッセイであってもよい。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１０／１３５７１７号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３５８７１号）に記載されているアッセイを用いる。

【0048】

コンプスタチン類似体の活性はそのＩＣ_５０（補体活性化を５０％阻害する化合物の濃度）により表すことができ、当該技術分野で認められているように、ＩＣ_５０が低いほど活性が高いことを示す。本発明で使用するのに好ましいコンプスタチン類似体の活性は、少なくともコンプスタチンの活性と同じ大きさである。補体阻害活性を減少させるか打ち消すことが知られている特定の修飾が本発明のいずれの実施形態からも明確に除外され得ることが留意される。コンプスタチンのＩＣ_５０については、代替経路媒介による赤血球溶解アッセイを用いて１２μＭという測定結果が得られている（国際公開第２００４／０２６３２８号）。所与のコンプスタチン類似体で測定される正確なＩＣ_５０値は、実験条件（例えば、アッセイで使用する血清濃度）によって異なることが理解されよう。例えば、実質的に同一の条件下で複数の異なる化合物のＩＣ_５０を決定する実験から得られた値を比較したものが有用である。一実施形態では、コンプスタチン類似体のＩＣ_５０はコンプスタチンのＩＣ_５０以下である。本発明の特定の実施形態では、コンプスタチン類似体の活性はコンプスタチンの活性の２〜９９倍である（すなわち、類似体のＩＣ_５０がコンプスタチンのＩＣ_５０の２〜９９倍低い）。例えば、活性は、コンプスタチンの活性の１０〜５０倍の大きさまたはコンプスタチンの活性の５０〜９９の大きさであり得る。本発明の特定の実施形態では、コンプスタチン類似体の活性はコンプスタチンの活性の９９〜２６４倍である。例えば、活性は、コンプスタチンの活性の１００倍、１１０倍、１２０倍、１３０倍、１４０倍、１５０倍、１６０倍、１７０倍、１８０倍、１９０倍、２００倍、２１０倍、２２０倍、２３０倍、２４０倍、２５０倍、２６０倍または２６４倍の大きさであり得る。特定の実施形態では、活性は、コンプスタチンの活性の２５０〜３００倍、３００〜３５０倍、３５０〜４００倍または４００〜５００倍の大きさである。本発明はさらに、コンプスタチンの活性の５００〜１０００倍またはそれ以上の活性を有するコンプスタチン類似体を考慮する。特定の実施形態では、コンプスタチン類似体のＩＣ_５０は約０．２μＭ〜約０．５μＭである。特定の実施形態では、コンプスタチン類似体のＩＣ_５０は約０．１μＭ〜約０．２μＭである。特定の実施形態では、コンプスタチン類似体のＩＣ_５０は約０．０５μＭ〜約０．１μＭである。特定の実施形態では、コンプスタチン類似体のＩＣ_５０は約０．００１μＭ〜約０．０５μＭである。

【0049】

Ｃ３と結合するコンプスタチンのＫ_ｄは等温滴定熱量測定を用いて測定することができる（Ｋａｔｒａｇａｄｄａら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７９（５３），５４９８７−５４９９５，２００４）。当該技術分野で認められているように、様々なコンプスタチン類似体のＣ３に対する結合親和性とその活性との間には相関がみられ、Ｋ_ｄが低いほど結合親和性が高いことを示す。試験された特定の類似体には結合親和性と活性との間に線形相関が認められている（Ｋａｔｒａｇａｄｄａ，２００４，上記；Ｋａｔｒａｇａｄｄａ ２００６，上記）。本発明の特定の実施形態では、コンプスタチン類似体は０．１μＭ〜１．０μＭ、０．０５μＭ〜０．１μＭ、０．０２５μＭ〜０．０５μＭ、０．０１５μＭ〜０．０２５μＭ、０．０１μＭ〜０．０１５μＭまたは０．００１μＭ〜０．０１μＭのＫ_ｄでＣ３と結合する。

【0050】

「コンプスタチンに基づき設計または同定される」化合物としては、特に限定されないが、（ｉ）コンプスタチンの配列を改変すること（例えば、コンプスタチンの配列の１つ以上のアミノ酸を異なるアミノ酸もしくはアミノ酸類似体に置き換えること、コンプスタチンの配列に１つ以上のアミノ酸もしくはアミノ酸類似体を挿入することまたはコンプスタチンの配列から１つ以上のアミノ酸を削除すること）；（ｉｉ）コンプスタチンの１つ以上のアミノ酸を無作為化し、任意選択で方法（ｉ）に従ってさらに改変するファージディスプレイペプチドライブラリーから選択すること；あるいは（ｉｉｉ）Ｃ３またはそのフラグメントとの結合に関して方法（ｉ）または（ｉｉ）で得られたコンプスタチンまたはその任意の類似体と競合する化合物のスクリーニングにより同定することにより配列が得られるアミノ酸鎖を含む化合物が挙げられる。有用なコンプスタチン類似体の多くが疎水性クラスター、βターンおよびジスルフィド架橋を含むものである。

【0051】

本発明の特定の実施形態では、コンプスタチン類似体の配列は、コンプスタチンの配列に１個、２個、３個または４個の置換を施すことにより、すなわち、コンプスタチンの配列中の１個、２個、３個または４個のアミノ酸を異なる標準アミノ酸にまたは非標準アミノ酸に置き換えることにより得られる配列を含むか、あるいは実質的にこれよりなるものである。本発明の特定の実施形態では、４位のアミノ酸を変化させる。本発明の特定の実施形態では、９位のアミノ酸を変化させる。本発明の特定の実施形態では、４位と９位のアミノ酸を変化させる。本発明の特定の実施形態では、４位と９位のアミノ酸のみを変化させる。本発明の特定の実施形態では、４位または９位のアミノ酸を変化させるか、あるいは特定の実施形態では、４位と９位のアミノ酸をともに変化させ、さらに１位、７位、１０位、１１位および１３位から選択される位置にある２個以下のアミノ酸を変化させる。本発明の特定の実施形態では、４位、７位および９位のアミノ酸を変化させる。本発明の特定の実施形態では、２位、１２位または両方のアミノ酸を変化させるが、この変化は化合物が環状化する能力を保存するものである。２位および／または１２位におけるこのような変化（１つまたは複数）は、１位、４位、７位、９位、１０位、１１位および／または１３位における変化（１つまたは複数）に追加されるものであってもよい。任意選択で、コンプスタチン配列の１個以上のアミノ酸を置き換えることにより得られる任意のコンプスタチン類似体の配列は、Ｃ末端に最大１個、２個または３個の追加のアミノ酸を含む。一実施形態では、追加のアミノ酸はＧｌｙである。任意選択で、コンプスタチン配列の１つ以上のアミノ酸を置き換えることにより得られる任意のコンプスタチン類似体の配列は、Ｃ末端に最大５個または最大１０個の追加のアミノ酸をさらに含む。特に明記されない限り、あるいは文脈から明らかでない限り、コンプスタチン類似体が本明細書に記載の様々な実施形態のいずれか１つ以上の特徴または特性を有し得ること、また任意の実施形態の特徴または特性が本明細書に記載の他の任意の実施形態をさらに特徴付け得ることを理解するべきである。本発明の特定の実施形態では、コンプスタチン類似体の配列は、コンプスタチンの配列の４位および９位に対応する位置に関する以外はコンプスタチンと同一の配列を含むか、あるいは実質的にこれよりなるものである。

【0052】

コンプスタチンおよびコンプスタチンよりもいくぶん活性が大きい特定のコンプスタチン類似体には標準アミノ酸（「標準アミノ酸」とは、グリシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、システイン、メチオニン、アルギニン、リジン、プロリン、セリン、トレオニンおよびヒスチジンである）のみが含まれている。活性が向上した特定のコンプスタチン類似体には非標準アミノ酸が１つ以上組み込まれている。有用な非標準アミノ酸としては、単一のハロゲン化を受けたおよび複数のハロゲン化を受けた（例えば、フッ素化された）アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、ホモアミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、デヒドロアミノ酸、芳香族アミノ酸（フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン以外）、オルト−、メタ−またはパラ−アミノ安息香酸、ホスホ−アミノ酸、メトキシル化アミノ酸およびα，α−二置換アミノ酸が挙げられる。本発明の特定の実施形態では、本明細書の他の箇所の記載されているコンプスタチン類似体の１つ以上のＬ−アミノ酸を対応するＤ−アミノ酸に置き換えることにより、コンプスタチン類似体を設計する。このような化合物およびその使用方法は本発明の態様である。有用な非標準アミノ酸の例としては、２−ナフチルアラニン（２−ＮａＩ）、１−ナフチルアラニン（１−ＮａＩ）、２−インダニルグリシンカルボン酸（２Ｉｇ１）、ジヒドロトリプトファン（Ｄｈｔ）、４−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン（Ｂｐａ）、２−α−アミノ酪酸（２−Ａｂｕ）、３−α−アミノ酪酸（３−Ａｂｕ）、４−α−アミノ酪酸（４−Ａｂｕ）、シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）、ホモシクロヘキシルアラニン（ｈＣｈａ）、４−フルオロ−Ｌ−トリプトファン（４ｆＷ）、５−フルオロ−Ｌ−トリプトファン（５ｆＷ）、６−フルオロ−Ｌ−トリプトファン（６ｆＷ）、４−ヒドロキシ−Ｌ−トリプトファン（４ＯＨ−Ｗ）、５−ヒドロキシ−Ｌ−トリプトファン（５ＯＨ−Ｗ）、６−ヒドロキシ−Ｌ−トリプトファン（６ＯＨ−Ｗ）、１−メチル−Ｌ−トリプトファン（１ＭｅＷ）、４−メチル−Ｌ−トリプトファン（４ＭｅＷ）、５−メチル−Ｌ−トリプトファン（５ＭｅＷ）、７−アザ−Ｌ−トリプトファン（７ａＷ）、α−メチル−Ｌ−トリプトファン（αＭｅＷ）、β−メチル−Ｌ−トリプトファン（βＭｅＷ）、Ｎ−メチル−Ｌ−トリプトファン（ＮＭｅＷ）、オルニチン（ｏｒｎ）、シトルリン、ノルロイシン、γ−グルタミン酸などが挙げられる。

【0053】

本発明の特定の実施形態では、コンプスタチン類似体はＴｒｐ類似体を（例えば、コンプスタチンの配列に対して４位および／または７位に）１つ以上含む。Ｔｒｐ類似体の例は上に記載されている。このほか、Ｂｅｅｎｅら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４１：１０２６２−１０２６９，２００２（特に単一のハロゲン化を受けたＴｒｐ類似体および複数のハロゲン化を受けたＴｒｐ類似体について記載している）；Ｂａｂｉｔｚｋｅ ＆ Ｙａｎｏｆｓｋｙ， Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１２４５２−１２４５６，１９９５（特にメチル化Ｔｒｐ、ハロゲン化Ｔｒｐおよびその他のＴｒｐ類似体ならびにインドール類似体について記載している）；および米国特許第６，２１４，７９０号、同第６，１６９，０５７号、同第５，７７６，９７０号、同第４，８７０，０９７号、同第４，５７６，７５０号および同第４，２９９，８３８号を参照されたい。その他のＴｒｐ類似体としては、インドール環のαまたはβ炭素および任意選択で１つ以上の位置においても（例えば、メチル基により）置換されている変異体が挙げられる。２つ以上の芳香環を含むアミノ酸が、その置換変異体、非置換変異体または別法で置換された変異体を含め、Ｔｒｐ類似体の対象となる。本発明の特定の実施形態では、例えば４位におけるＴｒｐ類似体は５−メトキシ、５−メチル−、１−メチル−または１−ホルミル−トリプトファンである。本発明の特定の実施形態では、１−アルキル置換基、例えば低級アルキル（例えば、Ｃ_１〜Ｃ_５）置換基を含むＴｒｐ類似体（例えば、４位における類似体）を用いる。特定の実施形態では、Ｎ（α）メチルトリプトファンまたは５−メチルトリプトファンを用いる。いくつかの実施形態では、１−アルカニオール（ａｌｋａｎｙｏｌ）置換基、例えば低級アルカノイル（例えば、Ｃ_１〜Ｃ_５）を含む類似体を用いる。例としては、１−アセチル−Ｌ−トリプトファンおよびＬ−β−トリプトファンが挙げられる。

【0054】

特定の実施形態では、Ｔｒｐ類似体は疎水性がＴｒｐに比べて増大している。例えば、インドール環は、１つ以上のアルキル（例えば、メチル）基で置換されたものであり得る。特定の実施形態では、Ｔｒｐ類似体はＣ３との疎水性相互作用に関与する。このようなＴｒｐ類似体は、例えば、コンプスタチンの配列に対して４位に位置し得る。特定の実施形態では、Ｔｒｐ類似体は、置換もしくは非置換二環式芳香環成分または２つ以上の置換もしくは非置換単環式芳香環成分を含む。

【0055】

特定の実施形態では、Ｔｒｐ類似体は、Ｃ３と水素結合を形成する傾向がＴｒｐに比べて増大しているが、疎水性はＴｒｐと比べて増大していない。Ｔｒｐ類似体は、極性がＴｒｐに比べて増大したものであり得、かつ／またはＣ３上での水素結合供与体との静電気的な相互作用に関与する能力が増大したものであり得る。水素結合を形成する性質が増大した特定の例示的なＴｒｐ類似体は、インドール環上に電気陰性置換基を含むものである。このようなＴｒｐ類似体は、例えば、コンプスタチンの配列に対して７位に位置し得る。

【0056】

本発明の特定の実施形態では、コンプスタチン類似体は（例えば、コンプスタチンの配列に対して９位に）Ａｌａ類似体、側鎖にＣＨ_２基を１つ以上含むこと以外はＡｌａと同一であるＡｌａ類似体を１つ以上含む。特定の実施形態では、Ａｌａ類似体は、２−Ａｂｕのような非分岐の単一メチルアミノ酸である。本発明の特定の実施形態では、コンプスタチン類似体は、１つ以上のＴｒｐ類似体（例えば、コンプスタチンの配列に対して４位および／または７位に）と、Ａｌａ類似体（例えば、コンプスタチンの配列に対して９位に）とを含む。

【0057】

本発明の特定の実施形態では、コンプスタチン類似体は、（Ｘ’ａａ）_ｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ｇｌｙ−（Ｘ”ａａ）_ｍの配列（配列番号２）を有するペプチドを含む化合物であり、式中、各Ｘ’ａａおよび各Ｘ”ａａは独立してアミノ酸またはアミノ酸類似体から選択され、ＸａａはＴｒｐまたはＴｒｐの類似体であり、かつｎ＞１、ｍ＞１であり、ｎ＋ｍが５〜２１である。ペプチドはコア配列Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ｇｌｙ（配列番号７０）を有し、式中、ＸａａはＴｒｐまたはＴｒｐの類似体、例えば、Ｈ結合供与体と水素結合を形成する傾向がＴｒｐに比べて増大しているが、特定の実施形態では疎水性がＴｒｐに比べて増大していないＴｒｐの類似体である。例えば、類似体は、Ｔｒｐのインドール環が電気陰性部分、例えば、フッ素などのハロゲンで置換されているものであり得る。一実施形態では、Ｘａａは５−フルオロトリプトファンである。反証がない限り、当業者であれば、配列がこのコア配列を含み、補体活性化を阻害する、かつ／またはＣ３と結合する任意の非天然のペプチドがコンプスタチンの配列に基づき設計されることを認識するであろう。別の実施形態では、Ｘａａは、Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ｇｌｙ（配列番号７０）ペプチドがβターンを形成することが可能なアミノ酸またはＴｒｐ類似体以外のアミノ酸類似体である。

【0058】

本発明の特定の実施形態では、ペプチドはコア配列Ｘ’ａａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ｇｌｙ（配列番号３）を有し、式中、Ｘ’ａａおよびＸａａはＴｒｐおよびＴｒｐの類似体から選択される。本発明の特定の実施形態では、ペプチドはコア配列Ｘ’ａａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ｇｌｙ（配列番号３）を有し、式中、Ｘ’ａａおよびＸａａはＴｒｐ、Ｔｒｐの類似体および芳香環を少なくとも１つ含むその他のアミノ酸またはアミノ酸類似体から選択される。本発明の特定の実施形態では、コア配列は、ペプチドとの関連でβターンを形成する。βターンは、柔軟であり、ペプチドが例えば核磁気共鳴（ＮＭＲ）を用いて評価される２つ以上のコンホメーションをとることを可能にするものであり得る。特定の実施形態では、Ｘ’ａａは、置換もしくは非置換二環式芳香環成分または２つ以上の置換もしくは非置換単環式芳香環成分を含むＴｒｐの類似体である。本発明の特定の実施形態では、Ｘ’ａａは２−ナフチルアラニン、１−ナフチルアラニン、２−インダニルグリシンカルボン酸、ジヒドロトリプトファンおよびベンゾイルフェニルアラニンからなる群より選択される。本発明の特定の実施形態では、Ｘ’ａａは、疎水性がＴｒｐに比べて増大しているＴｒｐの類似体である。例えば、Ｘ’ａａは１−メチルトリプトファンであり得る。本発明の特定の実施形態では、Ｘａａは、水素結合を形成する傾向がＴｒｐに比べて増大しているが、特定の実施形態では疎水性がＴｒｐに比べて増大していないＴｒｐの類似体である。本発明の特定の実施形態では、水素結合を形成する傾向がＴｒｐに比べて増大しているＴｒｐの類似体は、Ｔｒｐのインドール環の例えば５位に、５位のＨ原子のハロゲン原子による置換などの修飾を含む。例えば、Ｘａａは５−フルオロトリプトファンであり得る。

【0059】

本発明の特定の実施形態では、ペプチドはコア配列Ｘ’ａａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ｇｌｙ−Ｘ”ａａ（配列番号４）を有し、式中、Ｘ’ａａおよびＸａａはそれぞれ独立して、ＴｒｐおよびＴｒｐの類似体から選択され、Ｘ”ａａはＨｉｓ、Ａｌａ、Ａｌａの類似体、Ｐｈｅの類似体およびＴｒｐの類似体から選択される。本発明の特定の実施形態では、Ｘ’ａａは、疎水性がＴｒｐに比べて増大している、１−メチルトリプトファンまたはインドール環上（例えば、１位、４位、５位または６位）にアルキル置換基を有する別のＴｒｐ類似体である。特定の実施形態では、Ｘ’ａａは、置換もしくは非置換二環式芳香環成分または２つ以上の置換もしくは非置換単環式芳香環成分を含むＴｒｐの類似体である。本発明の特定の実施形態では、Ｘ’ａａは２−ナフチルアラニン、１−ナフチルアラニン、２−インダニルグリシンカルボン酸、ジヒドロトリプトファンおよびベンゾイルフェニルアラニンからなる群より選択される。本発明の特定の実施形態では、Ｘａａは、Ｃ３と水素結合を形成する傾向がＴｒｐに比べて増大しているが、特定の実施形態では疎水性がＴｒｐに比べて増大していないＴｒｐの類似体である。本発明の特定の実施形態では、水素結合を形成する傾向がＴｒｐに比べて増大しているＴｒｐの類似体は、Ｔｒｐのインドール環の例えば５位に、５位のＨ原子のハロゲン原子による置換などの修飾を含む。例えば、Ｘａａは５−フルオロトリプトファンであり得る。特定の実施形態では、Ｘ”ａａは、ＡｌａもしくはＡｂｕなどのＡｌａの類似体または別の非分岐の単一メチルアミノ酸である。本発明の特定の実施形態では、ペプチドはコア配列Ｘ’ａａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ｇｌｙ−Ｘ”ａａ（配列番号４）を有し、式中、Ｘ’ａａおよびＸａａはそれぞれ独立して、Ｔｒｐ、Ｔｒｐの類似体および芳香族側鎖を少なくとも１つ含むアミノ酸またはアミノ酸類似体から選択され、Ｘ”ａａはＨｉｓ、Ａｌａ、Ａｌａの類似体、ＰｈｅおよびＴｒｐから選択される。特定の実施形態では、Ｘ”ａａはＴｒｐの類似体、芳香族アミノ酸および芳香族アミノ酸類似体から選択される。

【0060】

本発明の特定の好ましい実施形態では、ペプチドは環状である。ペプチドは、一方が（Ｘ’ａａ）_ｎであり他方が（Ｘ”ａａ）_ｍ内に位置する２つの任意のアミノ酸の間の結合により環状化され得る。特定の実施形態では、ペプチドの環状部分は長さが９〜１５アミノ酸、例えば、長さが１０〜１２アミノ酸である。特定の実施形態では、ペプチドの環状部分は、長さが１１アミノ酸であり、２位と１２位のアミノ酸の間に結合（例えば、ジスルフィド結合）を有する。例えば、ペプチドは、長さが１３アミノ酸であり、２位と１２位のアミノ酸の間の結合により長さが１１アミノ酸の環状部分が生じたものであり得る。

【0061】

特定の実施形態では、ペプチドは、配列Ｘ’ａａ１−Ｘ’ａａ２−Ｘ’ａａ３−Ｘ’ａａ４−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ｇｌｙ−Ｘ”ａａ１−Ｘ”ａａ２−Ｘ”ａａ３−Ｘ”ａａ４−Ｘ”ａａ５（配列番号５）を含むか、あるいはこれよりなるものである。特定の実施形態では、Ｘ’ａａ４およびＸａａはＴｒｐおよびＴｒｐの類似体から選択され、Ｘ’ａａ１、Ｘ’ａａ２、Ｘ’ａａ３、Ｘ”ａａ１、Ｘ”ａａ２、Ｘ”ａａ３、Ｘ”ａａ４およびＸ”ａａ５は独立してアミノ酸およびアミノ酸類似体から選択される。特定の実施形態では、Ｘ’ａａ４およびＸａａは芳香族アミノ酸および芳香族アミノ酸類似体から選択される。Ｘ’ａａ１、Ｘ’ａａ２、Ｘ’ａａ３、Ｘ”ａａ１、Ｘ”ａａ２、Ｘ”ａａ３、Ｘ”ａａ４およびＸ”ａａ５のうち任意の１つ以上のものが、コンプスタチンの対応する位置にあるアミノ酸と一致し得る。一実施形態では、Ｘ”ａａ１はＡｌａまたは単一メチル非分岐アミノ酸である。ペプチドは、（ｉ）Ｘ’ａａ１、Ｘ’ａａ２またはＸ’ａａ３と（ｉｉ）Ｘ”ａａ２、Ｘ”ａａ３、Ｘ”ａａ４またはＸ”ａａ５との間の共有結合により環状化され得る。一実施形態では、ペプチドは、Ｘ’ａａ２とＸ”ａａ４との間の共有結合により環状化されている。一実施形態では、共有結合しているアミノ酸がそれぞれＣｙｓであり、共有結合がジスルフィド（Ｓ−Ｓ）結合である。他の実施形態では、共有結合がＣ−Ｃ、Ｃ−Ｏ、Ｃ−ＳまたはＣ−Ｎ結合である。特定の実施形態では、一方の共有結合している残基が、第一級または第二級アミンを含む側鎖を有するアミノ酸またはアミノ酸類似体であり、他方の共有結合している残基が、カルボン酸基を含む側鎖を有するアミノ酸またはアミノ酸類似体であり、かつ共有結合がアミド結合である。第一級または第二級アミンを含む側鎖を有するアミノ酸またはアミノ酸類似体としては、リジンならびに一般構造がＮＨ_２（ＣＨ_２）_ｎＣＨ（ＮＨ_２）ＣＯＯＨのジアミノカルボン酸、例えば２，３−ジアミノプロピオン酸（ｄａｐａ）、２，４−ジアミノ酪酸（ｄａｂａ）およびオルニチン（ｏｒｎ）（式中、それぞれｎ＝１（ｄａｐａ）、２（ｄａｂａ）および３（ｏｒｎ）である）などが挙げられる。カルボン酸基を含む側鎖を有するアミノ酸の例としては、グルタミン酸およびアスパラギン酸などのジカルボキシルアミノ酸が挙げられる。このほか、β−ヒドロキシ−Ｌ‐グルタミン酸などの類似体を使用し得る。いくつかの実施形態では、例えば国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０５２４４２号（国際公開第２０１２／０４０２５９号）に記載されているように、チオエーテル結合によりペプチドを環状化する。例えば、いくつかの実施形態では、いずれかのペプチドのジスルフィド結合をチオエーテル結合に置き換える。いくつかの実施形態では、シスタチオニンが形成される。いくつかの実施形態では、シスタチオニンはδ−シスタチオニンまたはγ−シスタチオニンである。いくつかの実施形態では、修飾は、配列番号５のＸ’ａａ２とＸ”ａａ４（または他の配列の対応する位置）のシステイン間のＣｙｓ−Ｃｙｓジスルフィド結合をＣＨ_２の付加により置き換えてＸ’ａａ２またはＸ”ａａ４にホモシステインを形成することと、チオエーテル結合を導入してシスタチオニンを形成することとを含む。一実施形態では、シスタチオニンはγ−シスタチオニンである。別の実施形態では、シスタチオニンはδ−シスタチオニンである。本発明による別の修飾は、ＣＨ_２を付加せずにジスルフィド結合をチオエーテル結合に置き換えてランチチオニン（ｌａｎｔｉｔｈｉｏｎｉｎｅ）を形成することを含む。いくつかの実施形態では、ジスルフィド結合の代わりにチオエーテルを有するコンプスタチン類似体は、少なくとも一部の条件下で、ジスルフィド結合を有するコンプスタチン類似体に比べて安定性が増大している。

【0062】

特定の実施形態では、コンプスタチン類似体は、配列：
Ｘａａ１−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｘａａ２^＊−Ｇｌｙ−Ｘａａ３−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｘａａ４（配列番号６）
［式中、
Ｘａａ１はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｂ^１−Ｉｌｅ、Ｂ^１−Ｖａｌ、Ｂ^１−ＬｅｕまたはＧｌｙ−ＩｌｅもしくはＢ^１−Ｇｌｙ−Ｉｌｅを含むジペプチドであり、Ｂ^１は第一のブロック部分を表し；
Ｘａａ２およびＸａａ２^＊は独立して、ＴｒｐおよびＴｒｐの類似体から選択され；
Ｘａａ３はＨｉｓ、ＡｌａまたはＡｌａの類似体、Ｐｈｅ、ＴｒｐまたはＴｒｐの類似体であり；
Ｘａａ４はＬ−Ｔｈｒ、Ｄ−Ｔｈｒ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ−ＡｌａおよびＴｈｒ−Ａｓｎから選択されるジペプチドまたはＴｈｒ−Ａｌａ−Ａｓｎを含むトリペプチドであり、Ｌ−Ｔｈｒ、Ｄ−Ｔｈｒ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、ＡｌａまたはＡｓｎのいずれかのカルボキシ末端−ＯＨが任意選択で第二のブロック部分Ｂ^２に置き換わっており；
２つのＣｙｓ残基はジスルフィド結合により結合している］
を有するペプチドを含む化合物である。いくつかの実施形態では、Ｘａａ４はＬｅｕ、Ｎｌｅ、ＨｉｓもしくはＰｈｅまたはＸａａ５−ＡｌａおよびＸａａ５−Ａｓｎから選択されるデペプチド（ｄｅｐｅｐｔｉｄｅ）またはトリペプチドＸａａ５−Ａｌａ−Ａｓｎであり、式中、Ｘａａ５はＬｅｕ、Ｎｌｅ、ＨｉｓまたはＰｈｅから選択され、Ｌ−Ｔｈｒ、Ｄ−Ｔｈｒ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、ＡｌａまたはＡｓｎのいずれかのカルボキシ末端−ＯＨが任意選択で第二のブロック部分Ｂ^２に置き換わっており：２つのＣｙｓ残基はジスルフィド結合により結合している。

【0063】

他の実施形態では、Ｘａａ１は存在しないか、あるいは任意のアミノ酸またはアミノ酸類似体であり、Ｘａａ２、Ｘａａ２^＊、Ｘａａ３およびＸａａ４は上で定義した通りのものである。Ｘａａ１が存在しない場合、Ｎ末端Ｃｙｓ残基は、それに結合したブロック部分Ｂ^１を有する。

【0064】

別の実施形態では、Ｘａａ４は任意のアミノ酸またはアミノ酸類似体であり、Ｘａａ１、Ｘａａ２、Ｘａａ２^＊およびＸａａ３は上で定義した通りのものである。別の実施形態では、Ｘａａ４は、Ｔｈｒ−ＡｌａおよびＴｈｒ−Ａｓｎからなる群より選択されるジペプチドであり、式中、カルボキシ末端−ＯＨまたはＡｌａもしくはＡｓｎが任意選択で第二のブロック部分Ｂ^２に置き換わっている。

【0065】

配列番号６のコンプスタチン類似体のいずれかの実施形態では、Ｘａａ２はＴｒｐであり得る。

【0066】

配列番号６のコンプスタチン類似体のいずれかの実施形態では、Ｘａａ２は、置換もしくは非置換二環式芳香環成分または２つ以上の置換もしくは非置換単環式芳香環成分を含むＴｒｐの類似体であり得る。例えば、Ｔｒｐの類似体は２−ナフチルアラニン（２−ＮａＩ）、１−ナフチルアラニン（１−ＮａＩ）、２−インダニルグリシンカルボン酸（Ｉｇ１）、ジヒドロトリプトファン（Ｄｈｔ）および４−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニンから選択され得る。

【0067】

配列番号６のコンプスタチン類似体のいずれかの実施形態では、Ｘａａ２は、疎水性がＴｒｐに比べて増大しているＴｒｐの類似体であり得る。例えば、Ｔｒｐの類似体は１−メチルトリプトファン、４−メチルトリプトファン、５−メチルトリプトファンおよび６−メチルトリプトファンから選択され得る。一実施形態では、Ｔｒｐの類似体は１−メチルトリプトファンである。一実施形態では、Ｘａａ２は１−メチルトリプトファンであり、Ｘａａ２^＊はＴｒｐであり、Ｘａａ３はＡｌａであり、その他のアミノ酸はコンプスタチンのものと一致している。

【0068】

配列番号６のコンプスタチン類似体のいずれかの実施形態では、Ｘａａ２^＊はＴｒｐの類似体、例えばＣ３と水素結合を形成する傾向がＴｒｐに比べて増大しているが、特定の実施形態では疎水性がＴｒｐに比べて増大していないＴｒｐの類似体などであり得る。特定の実施形態では、Ｔｒｐの類似体はインドール環上に電気陰性置換基を含む。例えば、Ｔｒｐの類似体は、５−フルオロトリプトファンおよび６−フルオロトリプトファンから選択され得る。

【0069】

本発明の特定の実施形態では、Ｘａａ２はＴｒｐであり、Ｘａａ２^＊は、Ｃ３と水素結合を形成する傾向がＴｒｐに比べて増大しているが、特定の実施形態では疎水性がＴｒｐに比べて増大していないＴｒｐの類似体である。配列番号６のコンプスタチン類似体の特定の実施形態では、Ｘａａ２は、疎水性がＴｒｐに比べて増大しているＴｒｐの類似体、例えば１−メチルトリプトファン、４−メチルトリプトファン、５−メチルトリプトファンおよび６−メチルトリプトファンから選択されるＴｒｐの類似体などであり、Ｘａａ２^＊は、Ｃ３と水素結合を形成する傾向がＴｒｐに比べて増大しているが、特定の実施形態では疎水性がＴｒｐに比べて増大していないＴｒｐの類似体である。例えば、一実施形態では、Ｘａａ２はメチルトリプトファンであり、Ｘａａ２^＊は５−フルオロトリプトファンである。

【0070】

上記実施形態のうち特定の実施形態では、Ｘａａ３はＡｌａである。上記実施形態のうち特定の実施形態では、Ｘａａ３は単一メチル非分岐アミノ酸、例えばＡｂｕである。

【0071】

本発明はさらに、上記の配列番号６のコンプスタチン類似体であって、Ｘａａ２およびＸａａ２^＊が独立して、Ｔｒｐ、Ｔｒｐの類似体および芳香環を少なくとも１つ含むその他のアミノ酸またはアミノ酸類似体から選択され、Ｘａａ３がＨｉｓ、ＡｌａもしくはＡｌａの類似体、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｒｐの類似体または別の芳香族アミノ酸もしくは芳香族アミノ酸類似体であるコンプスタチン類似体を提供する。

【0072】

本発明の特定の実施形態では、本明細書に記載のいずれかのコンプスタチン類似体のＮ末端またはＣ末端に存在するブロック部分は、哺乳動物（例えばヒトまたは非ヒト霊長類）の血液中または間質液中で生じ得る分解に対してペプチドを安定化させる任意の部分である。例えば、ブロック部分Ｂ^１は、ペプチドのＮ末端アミノ酸とそれに隣接するアミノ酸との間のペプチド結合の切断が阻害されるようペプチドのＮ末端の構造を変化させる任意の部分であり得る。ブロック部分Ｂ^２は、ペプチドのＣ末端アミノ酸とそれに隣接するアミノ酸との間のペプチド結合の切断が阻害されるようペプチドのＣ末端の構造を変化させる任意の部分であり得る。当該技術分野で公知の任意の適切なブロック部分を用いることができる。本発明の特定の実施形態では、ブロック部分Ｂ^１はアシル基（すなわち、カルボン酸から−ＯＨ基を除去して残った部分）を含む。アシル基は通常、１〜１２個の炭素、例えば１〜６個の炭素を含む。例えば、本発明の特定の実施形態では、ブロック部分Ｂ^１は、ホルミル、アセチル、プロプリオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、イソバレリルなどからなる群より選択される。一実施形態では、ブロック部分Ｂ^１はアセチル基である、すなわち、Ｘａａ１はＡｃ−Ｉｌｅ、Ａｃ−Ｖａｌ、Ａｃ−ＬｅｕまたはＡｃ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅである。

【0073】

本発明の特定の実施形態では、ブロック部分Ｂ^２は第一級または第二級アミン（Ｒがアルキル基などの有機部分である−ＮＨ_２または−ＮＨＲ^１）である。

【0074】

本発明の特定の実施形態では、ブロック部分Ｂ^１は、生理的ｐＨにおいてＮ末端に存在し得る負電荷を中和する、あるいは減少させる任意の部分である。本発明の特定の実施形態では、ブロック部分Ｂ^２は、生理的ｐＨにおいてＣ末端に存在し得る負電荷を中和する、あるいは減少させる任意の部分である。

【0075】

本発明の特定の実施形態では、コンプスタチン類似体は、Ｎ末端および／またはＣ末端でそれぞれアセチル化またはアミド化されている。コンプスタチン類似体は、Ｎ末端でアセチル化されていても、あるいはＣ末端でアミド化されていても、あるいはＮ末端でアセチル化されかつＣ末端でアミド化されていてもよい。本発明の特定の実施形態では、コンプスタチン類似体は、Ｎ末端にアセチル基ではなくアルキル基またはアリール基を含む。

【0076】

特定の実施形態では、コンプスタチン類似体は、配列：
Ｘａａ１−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｘａａ２^＊−Ｇｌｙ−Ｘａａ３−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｘａａ４（配列番号７）
［式中、
Ｘａａ１はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｃ−Ｉｌｅ、Ａｃ−Ｖａｌ、Ａｃ−ＬｅｕまたはＧｌｙ−ＩｌｅもしくはＡｃ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅを含むジペプチドであり；
Ｘａａ２およびＸａａ２^＊は独立して、ＴｒｐおよびＴｒｐの類似体から選択され；
Ｘａａ３はＨｉｓ、ＡｌａまたはＡｌａの類似体、Ｐｈｅ、ＴｒｐまたはＴｒｐの類似体であり；
Ｘａａ４はＬ−Ｔｈｒ、Ｄ−Ｔｈｒ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ−ＡｌａおよびＴｈｒ−Ａｓｎから選択されるジペプチドまたはＴｈｒ−Ａｌａ−Ａｓｎを含むトリペプチドであり、式中、Ｌ−Ｔｈｒ、Ｄ−Ｔｈｒ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、ＡｌａまたはＡｓｎのいずれかのカルボキシ末端−ＯＨが任意選択で−ＮＨ_２に置き換わっており；
２つのＣｙｓ残基はジスルフィド結合により結合している］
を有するペプチドを含む化合物である。いくつかの実施形態では、Ｘａａ４はＬｅｕ、Ｎｌｅ、ＨｉｓもしくはＰｈｅまたはＸａａ５−ＡｌａおよびＸａａ５−Ａｓｎから選択されるデペプチド（ｄｅｐｅｐｔｉｄｅ）またはトリペプチドＸａａ５−Ａｌａ−Ａｓｎであり、式中、Ｘａａ５はＬｅｕ、Ｎｌｅ、ＨｉｓまたはＰｈｅから選択され、Ｌ−Ｔｈｒ、Ｄ−Ｔｈｒ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、ＡｌａまたはＡｓｎのいずれかのカルボキシ末端−ＯＨが任意選択で第二のブロック部分Ｂ^２に置き換わっており；
２つのＣｙｓ残基はジスルフィド結合により結合している。

【0077】

いくつかの実施形態では、Ｘａａ１、Ｘａａ２、Ｘａａ２^＊、Ｘａａ３およびＸａａ４は、配列番号６の各種実施形態について上で述べた通りのものである。例えば、特定の実施形態では、Ｘａａ２^＊はＴｒｐである。特定の実施形態では、Ｘａａ２は、疎水性がＴｒｐに比べて増大しているＴｒｐの類似体、例えば１−メチルトリプトファンである。特定の実施形態では、Ｘａａ３はＡｌａである。特定の実施形態では、Ｘａａ３は単一メチル非分岐アミノ酸である。

【0078】

本発明の特定の実施形態では、Ｘａａ１はＩｌｅであり、Ｘａａ４はＬ−Ｔｈｒである。

【0079】

本発明の特定の実施形態では、Ｘａａ１はＩｌｅであり、Ｘａａ２^＊はＴｒｐであり、Ｘａａ４はＬ−Ｔｈｒである。

【0080】

本発明はさらに、上記の配列番号７のコンプスタチン類似体であって、Ｘａａ２およびＸａａ２^＊が独立して、Ｔｒｐ、Ｔｒｐの類似体、その他のアミノ酸または芳香族アミノ酸類似体から選択され、Ｘａａ３がＨｉｓ、ＡｌａもしくはＡｌａの類似体、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｒｐの類似体または別の芳香族アミノ酸もしくは芳香族アミノ酸類似体であるコンプスタチン類似体を提供する。

【0081】

本明細書に記載のいずれかのコンプスタチン類似体の特定の実施形態では、ＰｈｅではなくＰｈｅの類似体を用いる。

【0082】

表１は、本発明に有用なコンプスタチン類似体の非限定的なリストを記載したものである。各類似体は、親ペプチドであるコンプスタチンと比較して、指定された位置（１〜１３位）における具体的な修飾を示すことにより左側の列に省略形で記されている。当該技術分野で使用される通り、本明細書で使用される「コンプスタチン」およびコンプスタチンの活性と比較した本明細書に記載のコンプスタチン類似体の活性は、Ｃ末端でアミド化されたコンプスタチンペプチドのことを指す。特に明示されない限り、表１のペプチドはＣ末端でアミド化されている。太字を用いて特定の修飾を示した。コンプスタチンと比較した活性は、公開されているデータおよびそこに記載されているアッセイに基づくものである（国際公開第２００４／０２６３２８号，同第２００７０４４６６８号，Ｍａｌｌｉｋ，２００５；Ｋａｔｒａｇａｄｄａ，２００６）。１つの活性について報告している刊行物を複数参照する場合、最近公開された方の値を用いたが、アッセイ間に相違がある場合は値を調整し得ることが認識されよう。また、本発明の特定の実施形態では、表１に挙げられたペプチドが本発明の治療用組成物および方法で使用される場合、これらは２つのＣｙｓ残基の間のジスルフィド結合を介して環状化されることも理解されよう。ペプチドを環状化する別の手段も本発明の範囲内にある。上記のように、本発明の様々な実施形態では、コンプスタチン類似体（例えば、本明細書に開示されるコンプスタチン類似体のいずれか）の１つ以上のアミノ酸がＮ−アルキルアミノ酸（例えば、Ｎ−メチルアミノ酸）であり得る。例えば、特に限定されないが、ペプチドの環状部分の内側にある少なくとも１つのアミノ酸、環状部分のＮ末端にある少なくとも１つのアミノ酸および／または環状部分のＣ末端にある少なくとも１つのアミノ酸がＮ−アルキルアミノ酸、例えばＮ−メチルアミノ酸であり得る。本発明のいくつかの実施形態では、例えば、コンプスタチン類似体は、例えばコンプスタチンの８位に対応する位置および／またはコンプスタチンの１３位に対応する位置に、Ｎ−メチルグリシンを含む。いくつかの実施形態では、表１の１つ以上のコンプスタチン類似体が、例えばコンプスタチンの８位に対応する位置および／またはコンプスタチンの１３位に対応する位置に、Ｎ−メチルグリシンを１つ以上含む。

【0083】

ＮＡ＝該当データなし
表１

【0084】

本発明の組成物および方法の特定の実施形態では、コンプスタチン類似体は、配列９〜３６から選択される配列を有する。本発明の組成物および方法の特定の実施形態では、コンプスタチン類似体は、配列番号１４、２１、２８、２９、３２、３３、３４および３６から選択される配列を有する。本発明の組成物および／または方法の特定の実施形態では、コンプスタチン類似体は、配列番号３０および３１から選択される配列を有する。本発明の組成物および方法の一実施形態では、コンプスタチン類似体は配列番号２８の配列を有する。本発明の組成物および方法の一実施形態では、コンプスタチン類似体は配列番号３２の配列を有する。本発明の組成物および方法の一実施形態では、コンプスタチン類似体は配列番号３４の配列を有する。本発明の組成物および方法の一実施形態では、コンプスタチン類似体は配列番号３６の配列を有する。

【0085】

本発明の組成物および方法の特定の実施形態では、コンプスタチン類似体は表１に記載の配列を有するが、上記にようにＡｃ基が代わりのブロック部分Ｂ^１に置き換わっている。いくつかの実施形態では、−ＮＨ_２基は上記のように代わりのブロック部分Ｂ^２に置き換わっている。

【0086】

一実施形態では、コンプスタチン類似体は、ヒトＣ３のβ鎖のうちコンプスタチンが結合する領域と実質的に同じ領域と結合する。一実施形態では、コンプスタチン類似体は、ヒトＣ３のβ鎖のうちコンプスタチンが結合する分子量が約４０ｋＤａのＣ末端部分のフラグメントと結合する化合物である（Ｓｏｕｌｉｋａ，Ａ．Ｍ．ら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３５：１６０，１９９８；Ｓｏｕｌｉｋａ，Ａ．Ｍ．ら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４３（１２）：２０２３−９，２００６）。特定の実施形態では、コンプスタチン類似体は、コンプスタチン−Ｃ３構造、例えば、結晶構造またはＮＭＲによる３Ｄ構造で決定されるコンプスタチンの結合部位と結合する化合物である。特定の実施形態では、コンプスタチン類似体は、コンプスタチン−Ｃ３構造内のコンプスタチンと置き換わることが可能であり、実質的にコンプスタチンと同じＣ３との分子間の接触を形成し得る化合物である。特定の実施形態では、コンプスタチン類似体は、ペプチド−Ｃ３構造内、例えば結晶構造内の表１に記載の配列、例えば配列番号１４、２１、２８、２９、３２、３３、３４または３６を有するペプチドの結合部位と結合する化合物である。特定の実施形態では、コンプスタチン類似体は、ペプチド−Ｃ３構造内、例えば結晶構造内の配列番号３０または３１を有するペプチドの結合部位と結合する化合物である。特定の実施形態では、コンプスタチン類似体は、配列番号９〜３６のペプチドと置き換わることが可能な化合物、例えば、ペプチド−Ｃ３構造内の配列番号１４、２１、２８、２９、３２、３３、３４または３６のペプチドと置き換わることが可能であり、実質的にそのペプチドと同じＣ３との分子間の接触を形成し得る化合物である。特定の実施形態では、コンプスタチン類似体は、ペプチド−Ｃ３構造内の配列番号３０または３１のペプチドと置き換わることが可能であり、実質的にそのペプチドと同じＣ３との分子間の接触を形成し得る化合物である。

【0087】

当業者は、日常的な実験方法を用いて、コンプスタチン類似体がＣ３のβ鎖のＣ末端部分のフラグメントと結合するかどうかを容易に判定することができるであろう。例えば、当業者であれば、化合物中の例えば、配列のＣ末端にｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン（Ｂｐａ）などの光架橋アミノ酸を含ませることにより、光架橋性のコンプスタチン類似体合成することが可能であろう（Ｓｏｕｌｉｋａ，Ａ．Ｍ．ら，上記）。任意選択で、追加のアミノ酸、例えば、ＦＬＡＧタグまたはＨＡタグなどのエピトープタグを含ませて、例えばウエスタンブロット法による化合物の検出を容易にすることが可能である。コンプスタチン類似体をフラグメントとインキュベートして架橋を開始する。コンプスタチン類似体とＣ３フラグメントの共局在が結合を示す。このほか、表面プラズモン共鳴を用いて、コンプスタチン類似体がＣ３のコンプスタチン結合部位またはそのフラグメントと結合するかどうかを判定してもよい。当業者であれば分子モデリングソフトウェアプログラムを用いて、化合物がコンプスタチンあるいは表１に記載のいずれかのペプチドの配列、例えば、配列番号１４、２１、２８、２９、３２、３３、３４もしくは３６またはいくつかの実施形態では配列番号３０もしくは３１の配列を有するペプチドと実質的に同じＣ３との分子間の接触を形成するかどうかを予測することが可能であろう。

【0088】

アミノ酸残基の縮合を介した当該技術分野で公知のペプチド合成の様々な合成方法によりコンプスタチン類似体を調製することができ、例えば、従来のペプチド合成法に従い、当該技術分野で公知の方法を用いて、それをコードする適切な核酸配列からｉｎ ｖｉｔｒｏまたは生きた細胞内で発現させることにより、コンプスタチン類似体を調製することができる。例えば、Ｍａｌｉｋ，上記，Ｋａｔｒａｇａｄｄａ，上記，国際公開第２００４０２６３２８号および／または国際公開第２００７０６２２４９号に記載されている標準的な固相法を用いて、ペプチドを合成することができる。当該技術分野で公知の様々な保護基および方法論を用いて、アミノ基およびカルボキシル基、反応性官能基などのような潜在的に反応性の部分を保護し、次いで脱保護することができる。例えば、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，第３版（Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．およびＷｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．編，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：１９９９）を参照されたい。逆相ＨＰＬＣなどの標準的な方法を用いて、ペプチドを精製することができる。必要に応じて、逆相ＨＰＬＣなどの既知の方法を用いて、ジアステレオマーペプチドペプチドの分離を行ってもよい。所望に応じて、調製物を凍結乾燥させ、次いで適切な溶媒、例えば水に溶解させてもよい。得られた溶液のｐＨは、ＮａＯＨなどの塩基を用いて、例えば生理的ｐＨに調整することができる。必要に応じて、質量分析によってペプチド調製物の特徴付けを行い、質量および／またはジスルフィド結合形成を確認してもよい。例えば、Ｍａｌｌｉｋ，２００５およびＫａｔｒａｇａｄｄａ，２００６を参照されたい。

【0089】

任意選択で細胞反応性部分または標的化部分と結合させたコンプスタチン類似体を、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはこれと同様の分子などの分子の付加により修飾して、化合物を安定化させる、その免疫原性を低減する、その体内での寿命を延ばす、その溶解性を増大または低減する、および／または分解に対するその耐性を増大させることができる。ＰＥＧ化の方法は当該技術分野で周知である（Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，Ｆ．Ｍ．およびＨａｒｒｉｓ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５４，４５３−４５６，２００２；Ｄａｖｉｓ，Ｆ．Ｆ．，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５４，４５７−４５８，２００２）；Ｈｉｎｄｓ，Ｋ．Ｄ．およびＫｉｍ，Ｓ．Ｗ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５４，５０５−５３０（２００２；Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｍ．Ｊ．，Ｂｅｎｔｌｅｙ，Ｍ．Ｄ．およびＨａｒｒｉｓ，Ｊ．Ｍ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５４，４５９−４７６；２００２）；Ｗａｎｇ，Ｙ．Ｓ．ら，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５４，５４７−５７０，２００２）。ポリペプチドを適宜結合させることができるＰＥＧおよび誘導体化されたＰＥＧを含めた修飾ＰＥＧなどの多種多様なポリマーがＮｅｋｔａｒ Ａｄｖａｎｃｅｄ ＰＥＧ化 ２００５−２００６ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｃａｔａｌｏｇ，Ｎｅｋｔａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｓａｎ Ｃａｒｌｏｓ，ＣＡに記載されており、この文献からほかにも、適切なコンジュゲーション法の詳細を知ることができる。別の実施形態では、コンプスタチン類似体を免疫グロブリンのＦｃドメインまたはその一部分と融合させる。他のいくつかの実施形態では、コンプスタチン類似体をアルブミン部分またはアルブミン結合ペプチドとコンジュゲートする。したがって、いくつかの実施形態では、コンプスタチン類似体を１つ以上のポリペプチド成分または非ポリペプチド成分で修飾する、例えば、コンプスタチン類似体をペグ化するか、別の部分とコンジュゲートする。いくつかの実施形態では、成分は免疫グロブリンのＦｃドメインでもその一部分でもない。コンプスタチン類似体を単一の分子種または複数の異なる分子種（例えば、複数の異なる類似体）を含み得る多量体として、あるいは超分子複合体の一部として得ることができる。

【0090】

いくつかの実施形態では、コンプスタチン類似体は、ポリマー骨格またはポリマー足場と共有結合または非共有結合した複数のコンプスタチン類似体部分を含む多価化合物である。コンプスタチン類似体部分は同一のものでも異なるものでもよい。本発明の特定の実施形態では、多価化合物は、複数例または複数コピーの単一のコンプスタチン類似体部分を含む。本発明の他の実施形態では、多価化合物は、２種類以上の異なるコンプスタチン類似体部分、例えば、３種類、４種類、５種類またはそれ以上の異なるコンプスタチン類似体部分のそれぞれの例を１つ以上含む。本発明の特定の実施形態では、コンプスタチン類似体部分の個数（「ｎ」）は２〜６である。本発明の他の実施形態では、ｎは７〜２０である。本発明の他の実施形態では、ｎは２０〜１００である。他の実施形態では、ｎは１００および１，０００である。本発明の他の実施形態では、ｎは１，０００〜１０，０００である。他の実施形態では、ｎは１０，０００〜５０，０００である。他の実施形態では、ｎは５０，０００〜１００，０００である。他の実施形態では、ｎは１００，０００〜１，０００，０００である。

【0091】

コンプスタチン類似体部分は、ポリマー足場と直接結合させても、あるいはコンプスタチン類似体部分とポリマー足場とを接続する結合部分を介して結合させてもよい。結合部分は単一のコンプスタチン類似体部分およびポリマー足場と結合させることができる。あるいは、結合部分が複数のコンプスタチン類似体部分をポリマー足場と結合させるよう、結合部分がそれと結合した複数のコンプスタチン類似体部分を有していてもよい。

【0092】

いくつかの実施形態では、コンプスタチン類似体は、第一級または第二級アミンを含む側鎖を有するアミノ酸、例えばＬｙｓ残基を含む。例えば、コンプスタチン類似体のＮ末端および／またＣ末端にＬｙｓ残基またはＬｙｓ残基を含む配列が付加されている。いくつかの実施形態では、Ｌｙｓ残基は、堅いスペーサーまたは柔軟なスペーサーによりコンプスタチン類似体の環状部分と分離されている。スペーサーは、例えば、置換または非置換の飽和または不飽和アルキル鎖、オリゴ（エチレングリコール）鎖および／またはその他の部分、例えば、リンカーに関して第ＶＩ節に記載されているものを含み得る。鎖の長さは、例えば、炭素原子２〜２０個であり得る。他の実施形態では、スペーサーはペプチドである。ペプチドスペーサーは、例えば、長さが１〜２０アミノ酸、例えば、長さが４〜２０アミノ酸であり得る。適切なスペーサーは、例えば、複数のＧｌｙ残基、Ｓｅｒ残基またはその両方を含むか、あるいはこれよりなるものであり得る。任意選択で、第一級もしくは第二級アミンを含む側鎖を有するアミノ酸および／またはスペーサー内の少なくとも１つのアミノ酸はＤ−アミノ酸である。任意の各種ポリマー骨格またはポリマー足場を用いることができる。例えば、ポリマー骨格またはポリマー足場はポリアミド、多糖、ポリ酸無水物、ポリアクリルアミド、ポリメタクリル酸、ポリペプチド、ポリエチレンオキシドまたはデンドリマーであり得る。例えば、国際公開第９８／４６２７０号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９８／０７１７１号）または国際公開第９８／４７００２号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９８／０６９６３号）に適切な方法およびポリマー骨格が記載されている。一実施形態では、ポリマー骨格またはポリマー足場は、カルボン酸基、無水物基またはスクシンイミド基などの複数の反応性官能基を含む。ポリマー骨格またはポリマー足場をコンプスタチン類似体と反応させる。一実施形態では、コンプスタチン類似体は、カルボン酸、無水物基またはスクシンイミド基などの多数の異なる反応性官能基のいずれかを含み、これらをポリマー骨格のしかるべき基と反応させる。あるいは、互いに結合してポリマー骨格またはポリマー足場を形成し得るモノマー単位を最初にコンプスタチン類似体と反応させ、得られたモノマーを重合させる。別の実施形態では、短鎖を重合し、官能化した後、異なる組成の短鎖の混合物を長いポリマーに組み立てる。

【0093】

Ｖ．コンプスタチン模倣物
コンプスタチンの構造は当該技術分野で公知であり、またコンプスタチンより高い活性を有する数多くのコンプスタチン類似体のＮＭＲ構造も知られている（Ｍａｌｉｋ，上記）。構造に関する情報を用いてコンプスタチン模倣物を設計することができる。

【0094】

一実施形態では、コンプスタチン模倣物は、Ｃ３またはそのフラグメント（コンプスタチンが結合するβ鎖の４０ｋＤフラグメントなど）との結合に関してコンプスタチンまたは任意のコンプスタチン類似体（例えば、表１に記載されている配列のコンプスタチン類似体）と競合する任意の化合物である。いくつかの実施形態では、コンプスタチン模倣物は、コンプスタチンの活性と同等かそれを上回る活性を有する。いくつかの実施形態では、コンプスタチン模倣物は、コンプスタチンより安定であるか、経口使用しやすいか、バイオアベイラビリティが高い。コンプスタチン模倣物はペプチド、核酸または小分子であり得る。特定の実施形態では、コンプスタチン模倣物は、コンプスタチン−Ｃ３構造、例えば、結晶構造またはＮＭＲ実験で得られる３−Ｄ構造において決定されるコンプスタチンの結合部位に結合する化合物である。特定の実施形態では、コンプスタチン模倣物は、コンプスタチン−Ｃ３構造内のコンプスタチンと置き換わることが可能で、コンプスタチンと実質的に同じＣ３との分子間の接触を形成し得る化合物である。特定の実施形態では、コンプスタチン模倣物は、ペプチド−Ｃ３構造内の表１に記載の配列、例えば、配列番号１４、２１、２８、２９、３２、３３、３４もしくは３６または特定の実施形態では配列番号３０もしくは３１を有するペプチドの結合部位と結合する化合物である。特定の実施形態では、コンプスタチン模倣物は、ペプチド−Ｃ３構造内の表１に記載の配列、例えば、配列番号１４、２１、２８、２９、３２、３３、３４もしくは３６または特定の実施形態では配列番号３０もしくは３１を有するペプチドと置き換わることが可能で、そのペプチドと実質的に同じＣ３との分子間の接触を形成し得る化合物である。特定の実施形態では、コンプスタチン模倣物は非ペプチド骨格を有するが、コンプスタチンの配列に基づき設計された配列で配置された側鎖を有する。

【0095】

短いペプチドの具体的な所望のコンホメーションが確認されれば、そのコンホメーションに適合するペプチドまたはペプチド模倣物を設計する方法がよく知られていることを当業者は理解するであろう。例えば、Ｇ．Ｒ．Ｍａｒｓｈａｌｌ（１９９３），Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，４９：３５４７−３５５８；ＨｒｕｂｙおよびＮｉｋｉｆｏｒｏｖｉｃｈ（１９９１）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，Ｐ．Ｂａｌａｒａｍ ＆ Ｓ．Ｒａｍａｓｅｈａｎ編，Ｉｎｄｉａｎ Ａｃａｄ．ｏｆ Ｓｃｉ．，Ｂａｎｇａｌｏｒｅ，ＰＰ．４２９−４５５）、Ｅｇｕｃｈｉ Ｍ，Ｋａｈｎ Ｍ．，Ｍｉｎｉ Ｒｅｖ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．，２（５）：４４７−６２，２００２を参照されたい。本発明に特に関連して、例えば、とりわけ、コンプスタチンおよびその類似体に関して当該技術分野で報告されているように、官能基の作用または立体構造上の考慮事項へのアミノ酸残基の様々な側鎖の関与を考慮に入れることにより、ペプチド類似体の設計をさらに精緻化することができる。

【0096】

Ｃ３と結合して補体活性化を阻害するのに必要な特定の骨格コンホメーションおよび側鎖官能基をもたらすという目的に、ペプチド模倣物がペプチドと等しく十分に役立ち得ることが当業者に理解されよう。したがって、結合して適切な骨格コンホメーションを形成することができる天然のアミノ酸、アミノ酸誘導体、アミノ酸類似体または非アミノ酸分子のいずれかを使用ことにより、Ｃ３と結合し補体を阻害する化合物を作製し使用することが本発明の範囲内にあるものとして考慮される。本明細書では、例示のペプチドと類似するようにそれとほぼ同じ骨格コンホメーション特性および／またはその他の機能性を有し補体活性化を阻害することができるペプチドの置換体または誘導体を表すために、非ペプチド類似体またはペプチド成分と非ペプチド成分とを含む類似体を「ペプチド模倣物」または「アイソスター模倣物」と呼ぶことがある。より一般的には、コンプスタチン模倣物とは、骨格が異なっていてもファルマコフォアがそのコンプスタチンにおける位置付けと同様に位置付けされ得る任意の化合物のことである。

【0097】

高親和性のペプチド類似体開発のためにペプチド模倣物を使用することは、当該技術分野で周知である。ペプチド内のアミノ酸残基とほぼ同じ回転束縛を仮定し、既知の技術の中でも特にＲａｍａｃｈａｎｄｒａｎプロットを用いて、非アミノ酸部分を含む類似体を分析し、コンホメーションモチーフを検証することができる（ＨｒｕｂｙおよびＮｉｋｉｆｏｒｏｖｉｃｈ １９９１）。

【0098】

当業者は、容易に適切なスクリーニングアッセイを確立して、さらなるコンプスタチン模倣物を同定し、所望の阻害活性を有するものを選択することができるであろう。例えば、コンプスタチンまたはその類似体を（例えば、放射性標識または蛍光標識で）標識し、様々な濃度の試験化合物の存在下でＣ３と接触させることができる。試験化合物がコンプスタチン類似体とＣ３の結合を減少させる能力を評価する。コンプスタチン類似体とＣ３との結合を有意に減少させる試験化合物をコンプスタチン模倣物の候補とする。例えば、コンプスタチン類似体−Ｃ３複合体の定常状態濃度を減少させる試験化合物またはコンプスタチン類似体−Ｃ３複合体の形成率を少なくとも２５％または少なくとも５０％減少させる試験化合物をコンプスタチン模倣物候補とする。当業者には、このスクリーニングアッセイの数多くの変形物を用い得ることが認識されるであろう。スクリーニングの対象となる化合物としては、天然の生成物、アプタマーのライブラリー、ファージディスプレイライブラリー、コンビナトリアル化学を用いて合成された化合物ライブラリーなどが挙げられる。本発明は、上記コア配列に基づいて化合物のコンビナトリアルライブラリーを合成し、そのライブラリーをスクリーニングしてコンプスタチン模倣物を同定することを包含する。このほか、ここに挙げたいずれかの方法を用いて、それまでに試験したコンプスタチン類似体よりも阻害活性が高い新たなコンプスタチン類似体を同定することができる。本発明の細胞反応性化合物にコンプスタチン模倣物を使用し得ること、また本発明がこのような細胞反応性コンプスタチン模倣物を提供することが理解されよう。

【0099】

ＶＩ．細胞反応性または長時間作用型コンプスタチン類似体
本発明は様々な細胞反応性コンプスタチン類似体を提供する。いくつかの態様では、細胞反応性コンプスタチン類似体は式Ａ−Ｌ−Ｍの化合物を含み、式中、Ａは細胞反応性官能基Ｊを含む部分であり、Ｌは任意選択で存在する結合部であり、Ｍはコンプスタチン類似体部分を含む。コンプスタチン類似体部分は、様々な実施形態において任意のコンプスタチン類似体、例えば、上記の任意のコンプスタチン類似体を含み得る。式Ａ−Ｌ−Ｍは、Ａ−Ｌがコンプスタチン類似体部分のＮ末端に存在する実施形態、Ａ−Ｌがコンプスタチン類似体部分のＣ末端に存在する実施形態、Ａ−Ｌがコンプスタチン類似体部分のアミノ酸の側鎖に結合している実施形態および同じまたは異なるＡ−ＬがＭの両端に存在する実施形態を包含する。特定のコンプスタチン類似体（１つまたは複数）が式Ａ−Ｌ−Ｍの化合物中のコンプスタチン類似体部分として存在する場合、コンプスタチン類似体の官能基はＬの官能基と反応してＡまたはＬと共有結合を形成していることが理解されよう。例えば、コンプスタチン類似体部分が第一級アミン（ＮＨ_２）基を含む側鎖を有するアミノ酸を含むコンプスタチン類似体（そのコンプスタチン類似体は式Ｒ^１−（ＮＨ_２）で表すことができる）を含む細胞反応性コンプスタチン類似体は、Ｌとの新たな共有結合（例えば、Ｎ−Ｃ）が形成されて水素が失われた式Ｒ^１−ＮＨ−Ｌ−Ａを有し得る。したがって、「コンプスタチン類似体部分」という用語は、コンプスタチン類似体の少なくとも１個の原子が第二の部分との共有結合に関与する（例えば、側鎖の修飾となり得る）分子構造を包含する。同様のことが上記多価化合物中に存在するコンプスタチン類似体部分でも考慮される。いくつかの実施形態では、コンプスタチン類似体、例えば、上の第ＩＶ節に記載のコンプスタチン類似体のＮ末端またはＣ末端にあるブロック部分を、細胞反応性コンプスタチン類似体の構造内のＡ−Ｌに置き換える。いくつかの実施形態では、ＡまたはＬはブロック部分を含む。いくつかの実施形態では、細胞反応性コンプスタチン類似体は、同じアミノ酸配列（および該当する場合は１つ以上のブロック部分）を有するが細胞反応性部分を含まない対応するコンプスタチン類似体の活性の少なくとも約１０％、２０％または３０％、例えば、３０％〜４０％、３０％〜５０％、３０％〜６０％、３０％〜７０％、３０％〜８０％、３０％〜９０％またはそれ以上のモル活性を有する。細胞反応性コンプスタチン類似体が複数のコンプスタチン類似体部分を含むいくつかの実施形態では、細胞反応性コンプスタチン類似体のモル活性は、前記コンプスタチン類似体部分の活性の合計の少なくとも約１０％、２０％または３０％、例えば、３０％〜４０％、３０％〜５０％、３０％〜６０％、３０％〜７０％、３０％〜８０％、３０％〜９０％またはそれ以上である。

【0100】

細胞反応性部分Ａは、様々な実施形態において様々な異なる細胞反応性官能基Ｊのいずれかを含み得る。一般に、少なくとも部分的には、例えば、（ａ）標的とする特定の官能基；（ｂ）反応性官能基が生理的に許容されるｅｘ ｖｉｖｏ条件下（例えば、生理的に許容されるｐＨおよびモル浸透圧濃度）および／またはｉｎ ｖｉｖｏ条件下（例えば、血液中）で標的官能基と反応する能力；（ｃ）生理的に許容されるｅｘ ｖｉｖｏ条件下および／またはｉｎ ｖｉｖｏ条件下で反応性官能基と標的官能基との間で生じる反応の特異性；（ｄ）反応性官能基とその標的官能基との反応により生じ得る共有結合の（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ条件下での）安定性；（ｅ）反応性官能基を含む細胞反応性コンプスタチン類似体の合成が容易であるかどうかなど因子に基づき細胞反応性官能基を選択し得る。いくつかの実施形態では、脱離基を解離せずに標的化学基と反応する反応性官能基を選択する。いくつかの実施形態では、標的との反応時に脱離基の解離を生じる反応性官能基を選択する。このような基を含む化合物は、例えば、反応の進行および／または程度をモニターするのに有用であり得る。いくつかの実施形態では、脱離基は、生じた量（例えば、生じた濃度および／または絶対量に基づく量）において細胞、組織または臓器に生理的に許容されるものおよび／または生じた量（例えば、関連する血液などの体液中の濃度に基づく量および／または生じた絶対量に基づく量）において対象に医学的に許容されるものである。いくつかの実施形態では、ｅｘ ｖｉｖｏで生じた脱離基の少なくとも一部を、例えば生理食塩水を用いて、例えば、細胞を洗浄することにより、あるいは組織または臓器を洗浄または灌流することにより除去する。

【0101】

多くの実施形態では、本発明で使用する細胞反応性官能基がアミノ酸残基の側鎖および／またはタンパク質のＮ末端アミノ基もしくはＣ末端カルボキシル基と反応する。いくつかの実施形態では、細胞反応性官能基は、システイン残基の側鎖に存在するスルフィドリル（−ＳＨ）基と反応する。いくつかの実施形態では、マレイミド基を用いる。マレイミド基は、生理的ｐＨでタンパク質のシステイン残基のスルフィドリル基と反応して、安定なチオエーテル結合を形成する。いくつかの実施形態では、ヨードアセチル基またはブロモアセチル基などのハロアセチル基を用いる。ハロアセチル基は、生理的ｐＨでスルフィドリル基と反応する。ヨードアセチル基の反応は、ヨウ素とスルフィドリル基の硫黄原子との求核性置換により進行し、安定なチオエーテル結合を生じるものである。他の実施形態では、ヨードアセトアミド基を用いる。いくつかの実施形態では、細胞反応性官能基は、タンパク質のＮ末端に存在するアミノ（−ＮＨ_２）基およびリジン残基の側鎖に存在するアミノ基（ε−アミノ基）と反応する。いくつかの実施形態では、活性エステル、例えばスクシンイミジルエステル（すなわち、ＮＨＳエステル）を用いる。例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）またはその水溶性類似体（スルホ−ＮＨＳ）を合成に使用し、得られた細胞反応性コンプスタチン類似体はＮＨＳエステルを含むものとなる。いくつかの実施形態では、細胞反応性官能基は、タンパク質のＣ末端および様々なアミノ酸残基の側鎖に存在するカルボキシル（−ＣＯＯＨ）基と反応する。いくつかの実施形態では、細胞反応性コンプスタチン類似体は、様々なアミノ酸の側鎖およびグリコシル化タンパク質の炭水化物部分に存在するヒドロキシル（−ＯＨ）基と反応する。

【0102】

一般に結合部Ｌは、結合される部分を結合する安定な化合物の形成と合致する任意の１つ以上の脂肪族部分および／または芳香族部分を含み得る。本明細書で使用される「安定な」という用語は、好ましくは、製造が可能な程度の安定性を有し、例えば、本明細書に記載の１つ以上の目的に有用な程度の期間、化合物の完全性を維持する化合物を指す。いくつかの実施形態では、Ｌは炭素原子１〜３０個、１〜２０個、１〜１０個、１〜６個または５個以下の長さを有する飽和または不飽和、置換または非置換、分岐または非分岐の脂肪族鎖を含み、ここでは長さは、主鎖（最長鎖）のＣ原子の数を指す。いくつかの実施形態では、脂肪族鎖はヘテロ原子（Ｏ、Ｎ、Ｓ）を１つ以上含み、これらのヘテロ原子は独立して選択され得る。いくつかの実施形態では、Ｌの主鎖の原子の少なくとも５０％が炭素原子である。いくつかの実施形態では、Ｌは飽和アルキル部分（ＣＨ_２）_ｎを含み、式中、ｎは１〜３０である。

【0103】

いくつかの実施形態では、Ｌはヘテロ原子を１つ以上含み、鎖中の総炭素原子数１〜１０００個、１〜８００個、１〜６００個、１〜４００個、１〜３００個、１〜２００個、１〜１００個、１〜５０個、１〜３０個または１〜１０個の長さを有する。いくつかの実施形態では、Ｌはオリゴ（エチレングリコール）部分（−（Ｏ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−）_ｎ）を含み、式中、ｎは１〜５００、１〜４００、１〜３００、１〜２００、１〜１００、１０〜２００、２００〜３００、１００〜２００、４０〜５００、３０〜５００、２０〜５００、１０〜５００、１〜４０、１〜３０、１〜２０または１〜１０である。

【0104】

いくつかの実施形態では、Ｌは、−ＣＨ＝ＣＨ−もしくは−ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ−などの不飽和部分；非芳香族環系を含む部分（例えば、シクロヘキシル部分）；芳香族部分（例えば、フェニル部分などの芳香族環系）；エーテル部分（−Ｃ−Ｏ−Ｃ−）；アミド部分（−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ−）；エステル部分（−ＣＯ−Ｏ−）；カルボニル部分（−Ｃ（＝Ｏ）−）；イミン部分（−Ｃ＝Ｎ−）；チオエーテル部分（−Ｃ−Ｓ−Ｃ−）；アミノ酸残基；および／または適合性のある２つの反応性官能基の反応により形成され得る任意の部分を含む。特定の実施形態では、結合部または細胞反応性部分の１つ以上の部分が、その部分上の１つ以上の水素（またはその他の）原子が独立して、特に限定されないが、脂肪性；芳香族、アリール；アルキル、アラルキル、アルカノイル、アロイル、アルコキシ；チオ；Ｆ；Ｃｌ；Ｂｒ；Ｉ；−ＮＯ２；−ＣＮ；−ＣＦ３；−ＣＨ２ＣＦ３；−ＣＨＣｌ２；−ＣＨ２ＯＨ；−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ；−ＣＨ２ＮＨ２；−ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３；−または−ＧＲＧ１を含めた１つ以上の部分に置き換わることにより置換されており、式中、Ｇは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲＧ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＧ２−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−ＮＲＧ２Ｃ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲＧ２−、−ＮＲＧ２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＮＲＧ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＧ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（＝Ｓ）−、−ＳＣ（＝Ｓ）Ｓ−、−Ｃ（＝ＮＲＧ２）−、−Ｃ（＝ＮＲＧ２）Ｏ−、−Ｃ（＝ＮＲＧ２）ＮＲＧ３−、−ＯＣ（＝ＮＲＧ２）−、−ＮＲＧ２Ｃ（＝ＮＲＧ３）−、−ＮＲＧ２ＳＯ２−、−ＮＲＧ２ＳＯ２ＮＲＧ３−または−ＳＯ２ＮＲＧ２−であり、ＲＧ１、ＲＧ２およびＲＧ３はそれぞれ独立して、特に限定されないが、水素、ハロゲンまたは任意選択で置換されている脂肪族部分、芳香族部分またはアリール部分を含む。環系が置換基として存在する場合、それは任意選択で直鎖状部分を介して結合していてもよいことが理解されよう。本発明により構想される置換基と可変物の組合せは、好ましくは、本明細書に記載の方法のいずれか１つ以上において有用な、例えば、本明細書に記載の１つ以上の障害の治療および／または細胞、組織もしくは臓器との接触に有用な、ならびに／あるいは１つ以上のこのような化合物の製造の中間体として有用な安定な化合物をもたらすである。

【0105】

Ｌは様々な実施形態において、前段落に記載されている部分のいずれか１つ以上を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｌは、互いに結合して通常は１〜約６０個の原子、１〜約５０個の原子、例えば、１〜４０個、１〜３０個、１〜２０個、１〜１０個または１〜６個の原子の長さを有する構造を形成する２つ以上の異なる部分を含み、ここでは長さは、主鎖（最長鎖）の原子の数を指す。いくつかの実施形態では、Ｌは、互いに結合して通常は主鎖（最長鎖）の炭素原子が１〜約４０個、例えば１〜３０個、例えば、１〜２０個、１〜１０個または１〜６個である構造を形成する２つ以上の異なる部分を含む。このような細胞反応性コンプスタチン類似体の構造は一般に、式Ａ−（Ｌ^Ｐｊ）ｊ−Ｍにより表すことができ、式中、ｊは通常１〜１０であり、Ｌ^Ｐｊはそれぞれ独立して、前段落に記載されている部分から選択される。多くの実施形態では、Ｌは−（ＣＨ_２）ｎ−および／または−（Ｏ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−）ｎなどの炭素含有鎖を１つ以上含み、これらは、例えば適合性のある２つの反応性官能基の反応により生じた部分（例えば、アミド部分、エステル部分またはエーテル部分）により、互いに共有結合し、かつ／または細胞反応性官能基もしくはコンプスタチン類似体と共有結合している。いくつかの実施形態では、Ｌはオリゴ（エチレングリコール）部分および／または飽和アルキル鎖を含む。いくつかの実施形態では、Ｌは−（ＣＨ_２）_ｍ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｐＣ（＝Ｏ）−または−（ＣＨ_２）_ｍ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｐ（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎＣ（＝Ｏ）−を含む。いくつかの実施形態では、ｍ、ｎおよびｐは、鎖の炭素数が１〜５００個、例えば、２〜４００個、２〜３００個、２〜２００個、２〜１００個、２〜５０個、４〜４０個、６〜３０個または８〜２０個になるように選択される。いくつかの実施形態では、ｍが２〜１０であり、ｎが１〜５００であり、かつ／またはｐが２〜１０である。いくつかの実施形態では、ｍが２〜１０であり、ｎが１〜４００であり、かつ／またはｐが２〜１０である。いくつかの実施形態では、ｍが２〜１０であり、ｎが１〜３００であり、かつ／またはｐが２〜１０である。いくつかの実施形態では、ｍが２〜１０であり、ｎが１〜２００であり、かつ／またはｐが２〜１０である。いくつかの実施形態では、ｍが２〜１０であり、ｎが１〜１００であり、かつ／またはｐが２〜１０である。いくつかの実施形態では、ｍが２〜１０であり、ｎが１〜５０であり、かつ／またはｐが２〜１０である。いくつかの実施形態では、ｍが２〜１０であり、ｎが１〜２５であり、かつ／またはｐが２〜１０である。いくつかの実施形態では、ｍが２〜１０であり、ｎが１〜８であり、かつ／またはｐが２〜１０である。任意選択で、少なくとも１つの−ＣＨ_２−がＣＨ−Ｒに置き換わっており、式中、Ｒは任意の置換基であり得る。任意選択で、少なくとも１つの−ＣＨ_２−がヘテロ原子、環系、アミド部分、エステル部分またはエーテル部分に置き換わっている。いくつかの実施形態では、Ｌは、最長鎖の炭素原子が３個より多いアルキル基を含まない。いくつかの実施形態では、Ｌは、最長鎖の炭素原子が４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個または１１個であるアルキル基を含まない。

【0106】

本発明のいくつかの実施形態では、Ａは細胞反応性官能基Ｊと、結合部Ｌ^Ｐ１を含むリンカーＬ^１と、コンプスタチン類似体と反応してＡ−Ｍを生じる反応性官能基とを含む。いくつかの実施形態では、２つの反応性官能基と、結合部Ｌ^Ｐ２をを含む二官能性リンカーＬ^２ととを用いる。Ｌの反応性官能基がＡおよびＭのしかるべき反応性官能基と反応して、細胞反応性コンプスタチン類似体Ａ−Ｌ−Ｍが生成する。いくつかの実施形態では、コンプスタチン類似体は、結合部Ｌ^Ｐ３を含むリンカーＬ^３を含む。例えば、後述するように、反応性官能基を含むリンカーがＮ末端またはＣ末端に存在していても、反応性官能基を含む部分がリンカーを介してＮ末端またはＣ末端に結合していてもよい。したがって、Ｌは、例えば、Ａ、ＡとＭを結合するのに用いられるリンカー（１つまたは複数）および／またはコンプスタチン類似体により与えられる複数の結合部Ｌ^Ｐを含み得る。構造Ａ−Ｌ−Ｍ内に存在する場合、反応前にＬ^１、Ｌ^２、Ｌ^３などに存在する特定の反応性官能基（１つまたは複数）が反応を受け、前記反応性官能基（１つまたは複数）の一部分のみが最終的な構造Ａ−Ｌ−Ｍ内に存在し、化合物は前記官能基の反応により形成された部分を含むことが理解されよう。一般に、化合物が結合部を２つ以上含む場合、その結合部は同じものであっても異なるものであってもよく、また様々な実施形態において独立して選択され得るものである。複数の結合部Ｌ^Ｐを互いに結合させてより大きな結合部Ｌを形成させることができ、そのような結合部の少なくとも一部は、それと結合したコンプスタチン類似体（１つまたは複数）および／または細胞反応性官能基（１つまたは複数）を１つ以上有し得る。複数のコンプスタチン類似体を含む分子では、コンプスタチン類似体は同じものであっても異なるものであってもよく、異なるものである場合、それは独立して選択され得る。同じことが結合部および反応性官能基にも当てはまる。本発明は、細胞反応性官能基を１つ以上含む多価のコンプスタチン類似体の使用および細胞反応性官能基を１つ以上含むコンプスタチン類似体のコンカテマーの使用を包含する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの結合が、ビオチン／（ストレプト）アビジン結合またはこれとほぼ同じ強さの他の非共有結合などの安定な非共有結合である。

【0107】

いくつかの実施形態では、細胞反応性コンプスタチン類似体は、配列番号３〜３６のいずれかがＮ末端、Ｃ末端または両末端においてアミノ酸１つ分以上延長されたコンプスタチン類似体を含み、そのアミノ酸のうち少なくとも１つが、第一級もしくは第二級アミン、スルフィドリル基、カルボキシル基（カルボン酸基として存在し得る）、グアニジノ基、フェノール基、インドール環、チオエーテルまたはイミダゾール環などの反応性官能基を含む側鎖を有するものである。いくつかの実施形態では、アミノ酸（１つまたは複数）はＬ−アミノ酸である。いくつかの実施形態では、任意の１つ以上のアミノ酸（１つまたは複数）がＤ−アミノ酸である。複数のアミノ酸が付加される場合、アミノ酸は独立して選択され得る。いくつかの実施形態では、細胞反応性官能基を含む部分を付加するための標的として反応性官能基（例えば、第一級または第二級アミン）を用いる。第一級または第二級アミンを含む側鎖を有するアミノ酸としては、リジン（Ｌｙｓ）ならびに一般構造ＮＨ_２（ＣＨ_２）_ｎＣＨ（ＮＨ_２）ＣＯＯＨのジアミノカルボン酸、例えば２，３−ジアミノプロピオン酸（ｄａｐａ）、２，４−ジアミノ酪酸（ｄａｂａ）およびオルニチン（ｏｒｎ）（それぞれｎ＝１（ｄａｐａ）、２（ｄａｂａ）および３（ｏｒｎ）の場合）などが挙げられる。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸がシステイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、チロシン、トリプトファン、メチオニンまたはヒスチジンである。システインはスルフィドリル基を含む側鎖を有する。アスパラギン酸およびグルタミン酸はカルボキシル基（イオン化されるとカルボン酸基になる）を含む側鎖を有する。アルギニンはグアニジノ基を含む側鎖を有する。チロシンはフェノール基（イオン化されるとフェノラート基になる）を含む側鎖を有する。トリプトファンは、例えばトリプトファンを含むインドール環を含む側鎖を有する。メチオニンは、例えばメチオニンを含むチオエーテル基を含む側鎖を有する。ヒスチジンはイミダゾール環を含む側鎖を有する。天然のアミノ酸および天然に存在しないアミノ酸を含め、このような反応性官能基を１つ以上含む側鎖を有する多種多様な非標準アミノ酸が利用可能である。例えば、Ｈｕｇｈｅｓ，Ｂ．（編），Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ １−４，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ（２００９−２０１１）；Ｂｌａｓｋｏｖｉｃｈ，Ｍ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｎ Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ ｏｆ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｒｏｕｔｅｓ ｔｏ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０１０を参照されたい。本発明は、非標準アミノ酸を１つ以上用いて、細胞反応性官能基を含む部分を付加するための標的とする実施形態を包含する。必要に応じて、化合物の合成時に任意の１つ以上のアミノ酸を保護してもよい。例えば、標的アミノ酸側鎖が含まれる反応（１つまたは複数）時に１つ以上のアミノ酸を保護してもよい。細胞反応性官能基を含む部分を付加するための標的としてスルフィドリル含有アミノ酸を用いるいくつかの実施形態では、システインなどの他のアミノ酸との間で分子内ジスルフィド結合を形成することより化合物を環状化する間、スルフィドリルを保護する。

【0108】

本段落の考察では、アミン基を含む側鎖を有するアミノ酸を例として用いる。本発明は、異なる反応性官能基を含む側鎖を有するアミノ酸を用いる類似した実施形態を包含する。いくつかの実施形態では、第一級または第二級アミンを含む側鎖を有するアミノ酸が、ペプチド結合を介して配列番号３〜３６のいずれかのＮ末端またはＣ末端に直接結合している。いくつかの実施形態では、第一級または第二級アミンを含む側鎖を有するアミノ酸が、上記結合部分のいずれか１つ以上を含み得る結合部を介して配列番号３〜３６のいずれかのＮ末端またはＣ末端と結合している。いくつかの実施形態では、少なくとも２つのアミノ酸が一端または両端に付加されている。この２つ以上の付加されているアミノ酸はペプチド結合により互いに結合していてもよく、また付加されているアミノ酸の少なくとも一部が、本明細書に記載の結合部分のいずれか１つ以上を含み得る結合部を介して互いに結合していてもよい。したがって、いくつかの実施形態では、細胞反応性コンプスタチン類似体は、式Ｂ１−Ｒ１−Ｍ_１−Ｒ２−Ｂ２のコンプスタチン類似体部分Ｍを含み、式中、Ｍ_１は配列番号３〜３６のいずれかを表し、Ｒ１またはＲ２のいずれかは存在しなくてもよく、Ｒ１およびＲ２のうち少なくとも１つが第一級または第二級アミンを含む側鎖を有するアミノ酸を含み、Ｂ１およびＢ２は任意選択で存在するブロック部分である。Ｒ１および／またはＲ２はＭ１と、ペプチド結合により結合していても、非ペプチド結合により結合していてもよい。Ｒ１および／またはＲ２は結合部Ｌ^Ｐ３を含み得る。例えば、Ｒ１が式Ｍ_２−Ｌ^Ｐ３を有し、かつ／またはＲ２が式Ｌ^Ｐ３−Ｍ_２を有していてもよく、式中、Ｌ^Ｐ３は結合部であり、Ｍ_２は、第一級または第二級アミンを含む側鎖を有するアミノ酸を少なくとも１つ含む。例えば、Ｍ_２はＬｙｓであっても、Ｌｙｓを含むアミノ酸鎖であってもよい。いくつかの実施形態では、Ｌ^Ｐ３は１つ以上のアミノ酸を含むか、あるいはこれよりなるものである。例えば、Ｌ^Ｐ３は、長さが１〜約２０アミノ酸、例えば、長さが４〜２０アミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｌ^Ｐ３は複数のＧｌｙ、Ｓｅｒおよび／またはＡｌａ残基を含むか、あるいはこれよりなるものである。いくつかの実施形態では、Ｌ^Ｐ３は、Ｃｙｓなどの反応性ＳＨ基を含むアミノ酸を含まない。いくつかの実施形態では、Ｌ^Ｐ３はオリゴ（エチレングリコール）部分および／または飽和アルキル鎖を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ^Ｐ３は、Ｍ_１のＮ末端アミノ酸とアミド結合を介して結合している。いくつかの実施形態では、Ｌ^Ｐ３は、Ｍ_１のＣ末端アミノ酸とアミド結合を介して結合している。化合物は、さらなる結合部（１つまたは複数）および／またはアミノ酸（１つまたは複数）の付加により、一端または両端がさらに延長されていてもよい。アミノ酸は同じものであっても異なるものであってもよく、異なるものである場合、それは独立して選択され得る。いくつかの実施形態では、反応性官能基を含む側鎖を有するアミノ酸を２つ以上使用し、反応性官能基は同じものであっても異なるものであってもよい。２つ以上の反応性官能基は、２つ以上の部分を付加するための標的として用いることができる。いくつかの実施形態では、２つ以上の細胞反応性部分を付加する。いくつかの実施形態では、細胞反応性部分および標的化部分を付加する。いくつかの実施形態では、アミノ酸をペプチド鎖内に組み込んだ後にリンカーおよび／または細胞反応性部分をアミノ酸側鎖に結合させる。いくつかの実施形態では、細胞反応性コンプスタチン類似体の合成において、アミノ酸を用いる前にリンカーおよび／または細胞反応性部分が既にアミノ酸側鎖と結合している。例えば、側鎖にリンカーが結合したＬｙｓ誘導体を用い得る。リンカーは細胞反応性官能基を含むものであってもよく、あるいは細胞反応性官能基を含むよう後に修飾してもよい。

【0109】

以下に特定の細胞反応性コンプスタチン類似体についてさらに詳細に記載する。以下の考察では、コンプスタチン類似体部分の例として、アミノ酸配列Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ（配列番号３７）（配列番号２８のコンプスタチン類似体に対応するものであり、配列番号３７の配列中、アスタリスクは活性化合物中でジスルフィド結合により結合したシステインを表し、（１Ｍｅ）Ｔｒｐは１−メチル−トリプトファンを表す）を有するペプチドを使用し；細胞反応性官能基の例としてマレイミド（略号Ｍａｌ）を使用し；結合部分の例として（ＣＨ２）_ｎおよび（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）_ｎを使用し；反応性官能基を含むアミノ酸の例としてリジンを使用し（一部の化合物）、一部の化合物に任意選択で存在するブロック部分の例として、Ｎ末端およびＣ末端のそれぞれアセチル化およびアミド化（イタリック体でそれぞれＡｃおよびＮＨ_２と表す）を使用する。化合物は様々な合成方法および様々な前駆体を用いて調製され得ることが理解されよう。以下の様々な合成方法および前駆体に関する記述は、本発明を限定することを意図するものではない。一般に、以下に記載されるいずれの化合物のいずれの特徴も、以下に記載される、あるいは本明細書の他の箇所に記載されている他の化合物の特徴（１つまたは複数）と自由に組み合わせることが可能であり、本発明はこのような実施形態を包含する。

【0110】

いくつかの実施形態では、細胞反応性部分は、マレイミド基（細胞反応性官能基として）を含む細胞反応性化合物とアルカン酸（ＲＣＯＯＨ）とによって与えられ、式中、Ｒはアルキル基である。例えば、下に示す６−マレメイドカプロン酸（６−ｍａｌｅｍｅｉｄｏｃａｐｒｏｉｃ ａｃｉｄ）（Ｍａｌ−（ＣＨ_２）_５−ＣＯＯＨ）：

【化1】

を用いることができる。

【0111】

いくつかの実施形態では、細胞反応性部分は、カルボン酸部分が活性化されている、例えば、ＯＨ部分がより好ましい脱離基に変換されているアルカン酸の誘導体によって与えられる。例えば、化合物Ｉのカルボキシル基をＥＤＣと反応させた後、ＮＨＳ（任意選択で水溶性スルホ−ＮＨＳとして提供され得る）反応させて、６−マレメイドカプロン酸（６−ｍａｌｅｍｅｉｄｏｃａｐｒｏｉｃ ａｃｉｄ）のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル誘導体、すなわち、６−マレイミドヘキサン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル（下図）：

【化2】

を得てもよい。

【0112】

配列番号３７の化合物のＮ末端および／またはＣ末端を修飾して細胞反応性コンプスタチン類似体を得ることができる。例えば、化合物ＩＩを用いて、ＩｌｅのＮ末端アミノ基との反応により、次に挙げる細胞反応性コンプスタチン類似体：
マレイミド−（ＣＨ_２）_５−Ｃ（＝Ｏ）−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＮＨ_２（配列番号３８）
を得ることができる。配列番号３８では、−Ｃ（＝Ｏ）部分がＣ−Ｎ結合（式中、Ｎはアミノ酸の一部分であり、示されていない）を介して、隣接するＣ末端アミノ酸（Ｉｌｅ）と結合していることが理解されよう。

【0113】

他の実施形態では、マレイミド基がＣ末端のＴｈｒと結合して、次に挙げる細胞反応性コンプスタチン類似体：
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_５−マレイミド（配列番号３９）
が得られる。

【0114】

いくつかの実施形態では、二官能性リンカー（例えば、ヘテロ二官能性リンカー）を用いて細胞反応性コンプスタチン類似体を合成することができる。（ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ）_ｎ部分と（ＣＨ_２）_ｍ部分（式中、ｍ＝２）とを含むヘテロ二官能性リンカーの例を下に示す。

【化3】

【0115】

化合物ＩＩＩは、細胞反応性官能基としてのマレイミド基と、アミノ基（例えば、Ｎ末端アミノ基またはアミノ酸側鎖のアミノ基）と容易に反応するＮＨＳエステル部分とを含む。

【0116】

ｎ＝２である化合物ＩＩＩの実施形態を用いて、配列番号３７のコンプスタチン類似体を使用し、次に挙げる細胞反応性コンプスタチン類似体：

【0117】

マレイミド−（ＣＨ_２）_２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＮＨ_２（配列番号４０）
を得ることができる。

【0118】

配列番号４０の化合物では、−Ｃ（＝Ｏ）部分がＣ−Ｎ結合（式中、Ｎはアミノ酸の一部分であり、示されていない）を介して、Ｎ末端アミノ酸（Ｉｌｅ残基）と結合していることが理解されよう。いくつかの実施形態では、リンカーは、ｎが１以上である化合物ＩＩＩの式を有する。（ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ）_ｎ部分のｎの値の例が本明細書に記載されている。

【0119】

いくつかの実施形態では、配列番号３９または配列番号４０の化合物と比較して、マレイミド部分と分子の残りの部分とを結合させているアルキル鎖がそれより多いもしくは少ないメチレン単位を含み、オリゴ（エチレングリコール）部分がそれより多いもしくは少ないエチレングリコール単位を含み、かつ／またはそれより多いもしくは少ないメチレン単位がオリゴ（エチレングリコール）部分の一端または両端に隣接して存在する。このような変形物を説明するための細胞反応性コンプスタチン類似体の例を以下に示す（配列番号４１〜４６）：
マレイミド−（ＣＨ_２）_２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＮＨ_２（配列番号４１）
マレイミド−（ＣＨ_２）_３−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＮＨ_２（配列番号４２）
マレイミド−（ＣＨ_２）_５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＮＨ_２（配列番号４３）
マレイミド−（ＣＨ_２）_４−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＮＨ_２（配列番号４４）
マレイミド−（ＣＨ_２）_２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＮＨ_２（配列番号４５）
マレイミド−（ＣＨ_２）_５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＮＨ_２（配列番号４６）。

【0120】

いくつかの実施形態では、配列番号３７が、例えばＣ末端結合について以下に示すように、延長されてペプチドのＮ末端またはＣ末端にＬｙｓ残基を含む：
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−ＮＨ_２（配列番号４７）。

【0121】

いくつかの実施形態では、Ｌｙｓ残基が、例えばＣ末端結合について以下に示すように、ペプチドリンカーを介して配列番号３７のＮ末端またはＣ末端に結合している：
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−（Ｇｌｙ）_５−Ｌｙｓ−ＮＨ_２（配列番号４８）。

【0122】

いくつかの実施形態では、第一級または第二級アミンを含むリンカーがコンプスタチン類似体のＮ末端またはＣ末端に付加されている。いくつかの実施形態では、リンカーはアルキル鎖および／またはオリゴ（エチレングリコール）部分を含む。例えば、ＮＨ_２（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ（例えば、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＥＥＡｃ）または１１−アミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン酸）またはそのＮＨＳエステル（例えば、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸または１１−アミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン酸のＮＨＳエステル）を用いることができる。いくつかの実施形態では、得られる化合物は次のようなものである（式中、リンカーによって与えられる部分が太字で示されている）：
ＮＨ_２（ＣＨ_２）_５Ｃ（＝Ｏ）−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ_２（配列番号４９）
ＮＨ_２（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ_２（配列番号５０）。

【0123】

いくつかの実施形態では、Ｌｙｓ残基が、非ペプチド部分を含むリンカーを介して配列番号３７のＮ末端またはＣ末端に結合している。例えば、リンカーは、アルキル鎖、オリゴ（エチレングリコール）鎖および／または環系を含み得る。いくつかの実施形態では、８−ＡＥＥＡｃまたはそのＮＨＳエステルを用いて、次のような化合物（式中、８−ＡＥＥＡｃによって与えられる部分が太字で示されている）が得られる（ＬｙｓがＣ末端で結合する場合）：
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｌｙｓ−ＮＨ_２（配列番号５１）。

【0124】

配列番号４９および５０では、−Ｃ（＝Ｏ）部分がＣ−Ｎ結合（式中、Ｎはアミノ酸の一部分であり、示されていない）を介して、隣接するＩｌｅ残基と結合していることが理解されよう。同様に配列番号５１では、−Ｃ（＝Ｏ）部分がＣ−Ｎ結合（式中、Ｎはアミノ酸の一部分であり、示されていない）を介して、隣接するＬｙｓ残基と結合している。また、配列番号５１では、ＮＨ部分がＣ−Ｎ結合（式中、Ｃはアミノ酸のカルボニル炭素であり、示されていない）を介して、隣接するＮ末端アミノ酸（Ｔｈｒ）と結合していることも理解されよう。

【0125】

配列番号４７〜５１の化合物の第一級アミン基を修飾して細胞反応性コンプスタチン類似体を得ることは容易である。例えば、配列番号４７〜５１の化合物（または第一級もしくは第二級アミンとコンプスタチン類似体部分とを含む他の化合物）を６−マレイミドカプロン酸Ｎ−スクシンイミジルエステルを反応させて、次に挙げる細胞反応性コンプスタチン類似体を得ることができる：
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−（Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_５−Ｍａｌ）−ＮＨ_２（配列番号５２）
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−（Ｇｌｙ）_５−Ｌｙｓ−（Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_５−Ｍａｌ）−ＮＨ_２（配列番号５３）
Ｍａｌ−（ＣＨ_２）_５−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ（ＣＨ_２）_５Ｃ（＝Ｏ）−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ_２（配列番号５４）
Ｍａｌ−（ＣＨ_２）_５−（Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ_２（配列番号５５）
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｌｙｓ−（Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_５−Ｍａｌ）−ＮＨ_２（配列番号５６）。

【0126】

別の実施形態では、細胞反応性コンプスタチン類似体が次のように表される：Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨ（Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_５−Ｍａｌ）−ＮＨ_２（配列番号５７）。

【0127】

本発明は配列番号３８〜５７のバリアントを提供し、このバリアントは−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−（配列番号７１）が、他の任意のコンプスタチン類似体、例えば、配列番号３〜２７または２９〜３６のいずれかのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列に置き換わったものであるが、ただし、コンプスタチン類似体のＮ末端および／またはＣ末端に存在するブロック部分（１つまたは複数）が存在しないもの、リンカー（ブロック部分を含み得る）に置き換わったものあるいは対応するバリアント（１つまたは複数）内に存在する異なるＮ末端またはＣ末端アミノ酸に結合したものであり得る。

【0128】

本発明の様々な実施形態で有用であり、細胞反応性部分としてのマレイミドと、アミン反応性部分としてのＮＨＳエステルとを含む他の二官能性架橋剤としては、例えば、スクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチラート（ＳＭＰＢ）；スクシンイミジル ４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ＳＭＣＣ）；Ｎ−γ−マレイミドブチリル−オキシスクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）が挙げられる。ＮＨＳ環にスルホン酸を付加すると、スルホ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）−アミノベンゾアート（スルホ−ＳＩＡＢ）、スルホ−スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシラート（スルホ−ＳＭＣＣ）、スルホ−スクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチラート（スルホ−ＳＭＰＢ）、スルホ−Ｎ−γ−マレイミドブチリル−オキシスクシンイミドエステル（スルホ−ＧＭＢＳ）などの水溶性の類似体が得られ、有機溶媒の必要性がなくなる。いくつかの実施形態では、ＮＨＳエステル部分と分子の残りの部分との間にスペーサーアームを含む上記のいずれかの長鎖型を用いる。スペーサーは、例えばアルキル鎖を含み得る。その具体例にはスクシンイミジル−４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシ−［６−アミドカプロアート］がある。

【0129】

いくつかの実施形態では、ＮＨＳエステル（アミン反応性部分として）とヨードアセチル基（スルフィドリル基と反応する）とを含む二官能性リンカーを用いる。このようなリンカーとしては、例えば、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）−アミノベンゾアート（ＳＩＡＢ）；スクシンイミジル６−［（ヨードアセチル）−アミノ］ヘキサノアート（ＳＩＡＸ）；スクシンイミジル６−［６−（（（ヨードアセチル）アミノ）−ヘキサノイル）アミノ］ヘキサノアート（ＳＩＡＸＸ）；スクシンイミジル４−（（ヨードアセチル）アミノ）メチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ＳＩＡＣ）；スクシンイミジル６−（（（（４−（ヨードアセチル）アミノ）メチル−シクロヘキサン−１−カルボニル）アミノ）ヘキサノアート（ＳＩＡＣＸ）が挙げられる。

【0130】

いくつかの実施形態ではＮＨＳエステル（アミン反応性部分として）とピリジジスルフィド（ｐｙｒｉｄｙ ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ）基（スルフィドリル基と反応する細胞反応性部分として）とを含む二官能性リンカーを用いる。その例としては、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）；スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルエン（ＳＭＰＴ）ならびにＮＨＳ環上にスルホン酸を含み、かつ／またはＮＨＳエステル部分と分子の残りの部分との間にアルキル鎖を含むスペーサーを含む型のもの（例えば、スクシンイミジル６−（３−［２−ピリジルジチオ］−プロピオンアミド）ヘキサノアート）（ＬＣ−ＳＰＤＰ）が挙げられる。追加の部分または異なる部分を含むこのようなリンカーの変形物を用いることができる。例えば、スペーサー内に比較的長いまたは短いアルキル鎖を用いる、あるいはアルキル鎖の代わりにオリゴ（エチレングリコール）部分を用いることができる。

【0131】

細胞反応性コンプスタチン類似体は一般に、様々な方法を用いて合成することができる。多くの場合、細胞反応性官能基とリンカーとを含む細胞反応性の化合物を予め形成された基礎的要素として購入することができる。例えば、６−マレメイドカプロン酸（６−ｍａｌｅｍｅｉｄｏｃａｐｒｏｉｃ ａｃｉｄ）および６−マレイミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルは各種供給業者から購入することが可能である。あるいは、当該技術分野で公知の方法を用いて、このような化合物を合成することができる。例えば、Ｋｅｌｌｅｒ Ｏ，Ｒｕｄｉｎｇｅｒ Ｊ．Ｈｅｌｖ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ．５８（２）：５３１−４１，１９７５およびＨａｓｈｉｄａ Ｓ．ら，Ｊ Ａｐｐｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６（１−２）：５６−６３，１９８４を参照されたい。このほか、コンジュゲート合成に有用な方法および試薬に関する考察については、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．，上記およびその参考文献を参照されたい。本発明は一般に、コンプスタチン類似体部分と細胞反応性官能基とを含む化合物を作製する任意の方法およびそれによって得られる化合物を包含する。

【0132】

いくつかの実施形態では、側鎖に結合したリンカーを有するアミノ酸を直鎖状ペプチドの合成に用いる。直鎖状ペプチドは、当該技術分野で公知であるペプチド合成の標準的な方法、例えば標準的な固相ペプチド合成を用いて合成することができる。次いで、直鎖状ペプチドを（例えば、Ｃｙｓ残基を酸化して分子内ジスルフィドを形成することにより）環状化する。次いで、この環状化合物を細胞反応性官能基を含むリンカーと反応させ得る。他の実施形態では、直鎖状化合物を環状化する前に細胞反応性官能基を含む部分をこれと反応させる。一般に、細胞反応性コンプスタチン類似体の合成時に反応性官能基同士が望ましくない反応を起こさないよう適宜これを保護することができる。細胞反応性官能基、いずれかのアミノ酸側鎖および／またはペプチドの一端もしくは両端を反応時に保護し、その後それを脱保護することができる。例えば、Ｃｙｓ残基のＳＨ基および／またはマレイミドなどのＳＨ反応性部分の間で反応が起こらないよう、これを環化後まで保護することができる。適度な時間内に適度な収率が得られるように、少なくとも部分的には特定の反応性官能基（１つまたは複数）の必要性を踏まえて反応条件を選択する。反応の所望の程度または速度が得られるように、温度、ｐＨおよび試薬の濃度を調整することができる。例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ（上記）を参照されたい。所望の生成物を精製して、例えば、細胞反応性官能基を含む未反応の化合物、未反応のコンプスタチン類似体、リンカー（１つまたは複数）、反応で生じた所望の細胞反応性コンプスタチン類似体以外の生成物、反応混合物中に存在するその他の物質などを除去することができる。細胞反応性コンプスタチン類似体を作製するための組成物および方法ならびに合成における中間体は本発明の態様である。

【0133】

本発明のいくつかの態様では、例えば化合物を安定化させる、その体内での寿命を延ばす、その溶解性を増大させる、その免疫原性を低減する、および／または分解に対するその耐性を増大させるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖またはその他のポリマー（１つまたは複数）などの部分を含むコンプスタチン類似体の作製に上記のリンカー（１つまたは複数）を用いる。決して本発明を限定するものではないが、本明細書では、このような部分を「クリアランス低減部分」（ＣＲＭ）と呼ぶことがあり、このような部分を含むコンプスタチン類似体を「長時間作用型コンプスタチン類似体」と呼ぶことがある。いくつかの実施形態では、長時間作用型コンプスタチン類似体は、ヒトまたは非ヒト霊長類に１０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＶ投与した場合、平均血漿中半減期が少なくとも１日、例えば、１〜３日、３〜７日、７〜１４日または１４〜２８日である。いくつかの実施形態では、長時間作用型コンプスタチン類似体をヒトまたは非ヒト霊長類に１０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＶ投与した後のその平均血漿中半減期は、同じアミノ酸配列（および該当する場合は１つ以上のブロック部分）を有するがＣＲＭを含まない対応するコンプスタチン類似体より少なくとも２倍、例えば、２〜５倍、５〜１０倍、１０〜５０倍または５０〜１００倍低い。上記のように、いくつかの実施形態では、配列番号３〜３６のいずれかのコンプスタチン類似体は、Ｎ末端、Ｃ末端または両末端においてアミノ酸１つ分以上延長されており、そのアミノ酸のうち少なくとも１つが、第一級もしくは第二級アミン、スルフィドリル基、カルボキシル基（カルボン酸基として存在し得る）、グアニジノ基、フェノール基、インドール環、チオエーテルまたはイミダゾール環などの反応性官能基を含む側鎖を有するものであり、これにより、ＣＲＭとコンプスタチン類似体とを結合させる反応性官能基とのコンジュゲーションが促進される。ＣＲＭを含まない対応するコンプスタチン類似体が、それが対応する長時間作用型コンプスタチン類似体中に存在する１つ以上のこのようなアミノ酸を欠くものであってもよいことが理解されよう。したがって、配列番号３〜３６のいずれかを含み、ＣＲＭを欠く対応するコンプスタチン類似体は、それぞれ配列番号３〜３６と「同じアミノ酸配列を有する」ことが理解されよう。例えば、配列番号１４、２１、２８、２９、３２、３３、３４または３６のアミノ酸配列を含み、ＣＲＭを欠く対応するコンプスタチン類似体は、それぞれ配列番号１４、２１、２８、２９、３２、３３、３４または３６と「同じアミノ酸配列を有する」ことが理解されよう。いくつかの実施形態では、血漿中半減期とは単回ＩＶ用量投与後の終末相半減期のことである。いくつかの実施形態では、血漿中半減期とは、複数回ＩＶ用量投与後に定常状態に達した後の終末相半減期のことである。いくつかの実施形態では、長時間作用型コンプスタチン類似体は、霊長類に単回ＩＶ用量を投与した後または複数回ＩＶ用量を投与した後、その血漿中ＣｍａｘがＣＲＭを含まない対応するコンプスタチン類似体の血漿中Ｃｍａｘの少なくとも５倍、例えば、５〜５０倍に達する。いくつかの実施形態では、長時間作用型コンプスタチン類似体は、霊長類に単回ＩＶ用量を投与した後または複数回ＩＶ用量を投与した後、その血漿中ＣｍａｘがＣＲＭを含まない対応するコンプスタチン類似体の血漿中Ｃｍａｘの１０〜２０倍に達する。いくつかの実施形態では、霊長類はヒトである。いくつかの実施形態では、霊長類は非ヒト霊長類、例えば、カニクイザルまたはアカゲザルなどのサルである。いくつかの実施形態では、１０ｍｇ／ｋｇの用量でヒトまたは非ヒト霊長類にＩＶ投与した直後２４時間の長時間作用型コンプスタチン類似体の腎クリアランスは、対応するコンプスタチン類似体の腎クリアランスより少なくとも２倍、例えば、２〜５倍、５〜１０倍、１０〜５０倍または５０〜１００倍低い。コンプスタチン類似体の濃度は、例えば、ＵＶ、ＨＰＬＣ、質量分析（ＭＳ）もしくはＣＲＭに対する抗体またはＬＣ／ＭＳもしくはＬＣ／ＭＳ／ＭＳなどのこのような方法の組合せを用いて、血液試料および／または尿試料中で測定することができる。半減期およびクリアランスなどの薬物動態パラメータは、当業者に公知の方法を用いて明らかにすることができる。例えばＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェアｖ５．２（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ社、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を用いて、薬物動態分析を実施することができる。

【0134】

いくつかの実施形態では、長時間作用型コンプスタチン類似体は、同じアミノ酸配列（および該当する場合は１つ以上のブロック部分）を有するがＣＲＭを含まない対応するコンプスタチン類似体の活性の少なくとも約１０％、２０％、３０％、例えば、３０％〜４０％、３０％〜５０％、３０％〜６０％、３０％〜７０％、３０％〜８０％、３０％〜９０％またはそれ以上のモル活性を有する。長時間作用型コンプスタチン類似体が複数のコンプスタチン類似体部分を含むいくつかの実施形態では、長時間作用型コンプスタチン類似体のモル活性は、前記コンプスタチン類似体部分の活性の合計の少なくとも約１０％、２０％または３０％、例えば、３０％〜４０％、３０％〜５０％、３０％〜６０％、３０％〜７０％、３０％〜８０％、３０％〜９０％またはそれ以上である。いくつかの実施形態では、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、分子量が少なくとも５００ダルトンの（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ部分を含む。いくつかの実施形態では、上記リンカーは、平均分子量が約５００；１，０００；１，５００；２，０００；５，０００；１０，０００；２０，０００；３０，０００；４０，０００；５０，０００；６０，０００；７０，０００；８０，０００；９０，０００；〜１００，０００ダルトンの（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ部分を含む。「平均分子量」は数平均分子量を指す。いくつかの実施形態では、（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｎ部分の多分散度Ｄが１．０００５〜１．５０、例えば、１．００５〜１．１０、１．１５、１．２０、１．２５、１．３０、１．４０もしくは１．５０であるか、１．０００５〜１．５０の任意の値をとる。

【0135】

いくつかの実施形態では、（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｎ部分が単分散であり、（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｎ部分の多分散度は１．０である。このような単分散の（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｎ部分は当該技術分野において公知で、Ｑｕａｎｔａ ＢｉｏＤｅｓｉｇｎ社（Ｐｏｗｅｌｌ、ＯＨ）から購入可能であり、またその非限定的な例として、ｎが２、４、６、８、１２、１６、２０または２４である単分散部分が挙げられる。

【0136】

いくつかの実施形態では、化合物は複数の（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ部分を含み、前記（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ部分の総分子量が約１，０００；５，０００；１０，０００；２０，０００；３０，０００；４０，０００；５０，０００；６０，０００；７０，０００；８０，０００；９０，０００；〜１００，０００ダルトンである。いくつかの実施形態では、化合物は、定められた長さ、例えば、ｎ＝４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８もしくは３０またはそれ以上の長さの（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ部分を複数含む。いくつかの実施形態では、化合物は、定められた長さの（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ部分を、前記（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ部分の総分子量が約１，０００；５，０００；１０，０００；２０，０００；３０，０００；４０，０００；５０，０００；６０，０００；７０，０００；８０，０００；９０，０００；〜１００，０００ダルトンになる程度の数だけ含む。いくつかの実施形態では、ｎが約３０〜約３０００である。いくつかの実施形態では、コンプスタチン類似体部分が直鎖状ＰＥＧの各末端に結合している。例えば上記のように、鎖の各末端に反応性官能基を有する二官能性ＰＥＧを用いることができる。いくつかの実施形態では、反応性官能基が同じものであるが、いくつかの実施形態では、各末端に異なる反応性官能基が存在する。いくつかの実施形態では、複数の（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ部分が分岐構造で与えられる。分岐枝は直鎖状ポリマー骨格に付加されているもの（例えば、櫛形構造）であっても、１つ以上の中核となる基から生じているもの（例えば、星形構造）であってもよい。いくつかの実施形態では、分岐状分子が（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ鎖を３〜１０本有する。いくつかの実施形態では、分岐状分子が（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ鎖を４〜８本有する。いくつかの実施形態では、分岐状分子が（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ鎖を１０本、９本、８本、７本、６本、５本、４本または３本有する。いくつかの実施形態では、星形分子が、中核となる基から生じている（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ鎖を１０〜１００本、１０〜５０本、１０〜３０本または１０〜２０本有する。したがって、いくつかの実施形態では、長時間作用型コンプスタチン類似体は、それぞれが鎖末端の官能基を介して（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ鎖と結合したコンプスタチン類似体部分を、例えば、３〜１０個、例えば４〜８個含み得る。いくつかの実施形態では、長時間作用型コンプスタチン類似体は、それぞれが鎖末端の官能基を介して（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ鎖と結合したコンプスタチン類似体部分を、１０〜１００個含み得る。いくつかの実施形態では、分岐状または星形のＰＥＧの分岐枝（「アーム」と呼ばれることもある）が（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）部分をほぼ同数含む。いくつかの実施形態では、少なくとも一部の分岐枝の長さが異なっていてもよい。いくつかの実施形態では、１つ以上の（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ鎖がそれと結合したコンプスタチン類似体部分を有さないことが理解されよう。いくつかの実施形態では、鎖の少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または１００％がそれと結合したコンプスタチン類似体部分を有する。

【0137】

本明細書に図示される属および化合物では、酸素原子を反復単位の右側または反復単位の左側にしてポリエチレングリコール部分が描かれている。一方向のみが描かれる場合でも、本発明は所与の化合物または属の両方向のポリエチレングリコール部分（すなわち、（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎおよび（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ）を包含し、また化合物または属が複数のポリエチレングリコール部分を含む場合、あらゆる組合せの方向が本開示に包含される。

【0138】

反応性官能基を含む単官能性ＰＥＧの例の式を以下にいくつか図示する。例示を目的に、反応性官能基（１つまたは複数）がＮＨＳエステルを含む式が図示されているが、例えば上記のような他の反応性官能基を用いることも可能である。いくつかの実施形態では、（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎは、左端がメトキシ基（ＯＣＨ_３）で終わるように図示されているが、以下または本明細書の他の箇所に図示される鎖が異なるＯＲ部分（例えば、脂肪族基、アルキル基、低級アルキル基または他の任意の適度なＰＥＧ末端基）またはＯＨ基で終わっていてもよいことが理解されよう。また、様々な実施形態において、図示されているもの以外の部分が（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ部分とＮＨＳ基を接続し得ることも理解されよう。

【0139】

いくつかの実施形態では、単官能性ＰＥＧは式Ａ：

【化4】

のＰＥＧであり、式中、
「反応性官能基」およびｎは上で定義され、本明細書のクラスおよびサブクラスに記載されている通りのものであり；
Ｒ^１は水素、脂肪族または任意の適切な末端基であり；
Ｔは、共有結合であるか、あるいはＴの１つ以上の炭素単位が任意選択で独立して−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ^ｘ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ^ｘ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｘ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｎ（Ｒ^ｘ）ＳＯ_２−またはＳＯ_２Ｎ（Ｒ^ｘ）−に置き換わっているＣ_１〜１２の直鎖状または分岐状炭化水素鎖であり；
Ｒ^ｘはそれぞれ独立して、水素またはＣ_１〜６脂肪族である。

【0140】

式Ａの単官能性ＰＥＧの例としては：

【化5】

が挙げられる。

【0141】

式Ｉでは、反応性官能基を含む部分は、ｍ＝２である一般構造−ＣＯ−（ＣＨ_２）_ｍ−ＣＯＯ−ＮＨＳを有する。いくつかの実施形態では、単官能性ＰＥＧが式Ｉの構造を有し、式中、ｍは１〜１０、例えば１〜５である。例えば、いくつかの実施形態では、下に示すようにｍが３である。

【化6】

【0142】

【化7】

【0143】

式ＩＩでは、反応性官能基を含む部分は、ｍ＝１である一般構造−（ＣＨ_２）_ｍ−ＣＯＯ−ＮＨＳを有する。いくつかの実施形態では、単官能性ＰＥＧが式ＩＩの構造を有し、式中、ｍは１〜１０であるか（例えば、下の式ＩＩＩに示すようにｍが５である）、ｍが０である（下の式ＩＩＩａに示す）。

【化8】

【化9】

【0144】

いくつかの実施形態では、二官能性の直鎖状ＰＥＧが、反応性官能基を含む部分をその両端に含む。反応性官能基は同じもの（ホモ二官能性）であっても、異なるもの（ヘテロ二官能性）であってもよい。いくつかの実施形態では、二官能性ＰＥＧの構造は対称性のものであり得、この構造では、反応性官能基と−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ鎖の各末端にある酸素原子とが同じ部分を用いて接続されている。いくつかの実施形態では、２つの反応性官能基と分子のＰＥＧ部分とが異なる部分を用いて接続されている。例となる二官能性ＰＥＧの構造を下に図示する。例示を目的に、反応性官能基（１つまたは複数）がＮＨＳエステルを含む式が図示されているが、他の反応性官能基を用いることも可能である。

【0145】

いくつかの実施形態では、二官能性直鎖状ＰＥＧは式Ｂ：

【化10】

のＰＥＧであり、式中、Ｔおよび「反応性官能基」はそれぞれ独立して、上で定義され、本明細書のクラスおよびサブクラスに記載されている通りのものであり、ｎは上で定義され、本明細書のクラスおよびサブクラスに記載されている通りのものである。

【0146】

式Ｂの二官能性ＰＥＧの例としては：

【化11】

が挙げられる。

【0147】

式ＩＶでは、反応性官能基を含む部分は、ｍ＝１である一般構造−（ＣＨ_２）_ｍ−ＣＯＯ−ＮＨＳを有する。いくつかの実施形態では、二官能性ＰＥＧが式ＩＶの構造を有し、式中、ｍは１〜１０、例えば１〜５である。

【0148】

【化12】

【0149】

式Ｖでは、反応性官能基を含む部分は、ｍ＝２である一般構造−ＣＯ−（ＣＨ_２）_ｍ−ＣＯＯ−ＮＨＳを有する。いくつかの実施形態では、二官能性ＰＥＧが式Ｖの構造を有し、式中、ｍは１〜１０、例えば１〜５である。

【0150】

特定の実施形態では、本発明は、本明細書に図示されるＰＥＧ含有化合物および属のコンプスタチン類似体コンジュゲートを提供する。いくつかの実施形態では、コンプスタチン類似体上の官能基（例えば、アミン基、ヒドロキシル基またはチオール基）と本明細書に記載の「反応性官能基」を有するＰＥＧ含有化合物とを反応させて、このようなコンジュゲートを作製する。例として、式ＩＩＩおよびＩＶはそれぞれ、次の構造：

【化13】

を有するコンプスタチン類似体コンジュゲートを形成することができ、式中、

【化14】

はコンプスタチン類似体上のアミン基の結合点を表す。特定の実施形態では、アミン基はリジン側鎖基である。本明細書に図示されるＰＥＧ含有化合物および属のいずれかを用いて、反応性官能基および／またはコンプスタチン官能基の選択に応じ、それに対応するコンジュゲートを形成し得ることが理解されよう。

【0151】

いくつかの実施形態では、分岐した櫛形または星形のＰＥＧは、反応性官能基を含む部分を複数の各−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ鎖の末端に含む。反応性官能基は同じものであってもよく、あるいは少なくとも２つの異なる基が存在してもよい。いくつかの実施形態では、分岐した櫛形または星形のＰＥＧは、下式：

【化15】

【化16】

【化17】

【化18】

【化19】

【化20】

式Ｈ
のＰＥＧであり、式中、Ｒ^２はそれぞれ独立して、「反応性官能基」またはＲ^１であり、Ｔ、ｎおよび「反応性官能基」はそれぞれ独立して、上で定義され、本明細書のクラスおよびサブクラスに記載されている通りのものである。反応性官能基としてＮＨＳ部分を含む分岐状ＰＥＧ（アーム、すなわち分岐枝を８本有する）の例の構造を下に図示する。

【化21】

【化22】

【0152】

反応性官能基としてＮＨＳ部分を含む分岐状ＰＥＧ（アーム、すなわち分岐枝を４本有する）の例の構造を下に図示する：

【化23】

【化24】

【0153】

骨格から生じる分岐枝の数は様々であり得る。例えば、上式ＶＩおよびＶＩＩの分岐枝数４を様々な実施形態において、０〜１０の他の任意の整数に変化させてもよい。特定の実施形態では、１つ以上の分岐枝が反応性官能基を含まず、その分岐枝は上記のような−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ基または−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＲ基で終わっている。

【0154】

いくつかの実施形態では、分岐状ＰＥＧが式ＶＩＩ、ＶＩＩＩまたはＩＸ（または分岐枝の数が異なるそのバリアント）の構造を有し、かつｘが

【化25】

である。

【0155】

いくつかの実施形態では、分岐状ＰＥＧが式ＶＩＩ、ＶＩＩＩまたはＩＸ（または分岐枝の数が異なるそのバリアント）の構造を有し、かつｘが

【化26】

である。

【0156】

当然のことながら、上記ｘ部分のメチレン（ＣＨ_２）基が代わりにこれより長いアルキル鎖（ＣＨ_２）_ｍ（ｍは２、３、４、５、６、８、１０、２０または３０以下である）を含んでもよく、あるいは本明細書に記載の他の部分を１つ以上含んでもよい。

【0157】

いくつかの実施形態では、ＮＨＳ反応基またはマレイミド反応基を有する分岐状ＰＥＧの例が次のように図示される：

【化27】

【化28】

【0158】

いくつかの実施形態では、４本の分岐枝のうちの３本または各分岐枝が反応性官能基を含む式ＸまたはＸＩのバリアントを用いる。

【0159】

ＰＥＧのさらに別の例が次のように表される。

【化29】

【化30】

【0160】

上で述べたことであるが、本明細書に記載のように、様々な実施形態において、長時間作用型コンプスタチン類似体のペプチド成分と（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｒ部分との間に、直鎖状アルキル、エステル、アミド、芳香環（例えば、置換もしくは非置換フェニル）、置換もしくは非置換シクロアルキル構造またはこれらの組合せなどの各種部分のいずれかを組み込み得ることが理解されよう。いくつかの実施形態では、このような部分（１つまたは複数）が化合物の加水分解に対する感受性を高め、これにより化合物のペプチド部分がＣＲＭから解離し得る。いくつかの実施形態では、このような解離がｉｎ ｖｉｖｏでの組織への浸透性および／または化合物の活性を増大させ得る。いくつかの実施形態では、加水分解は一般的な（例えば、酸−塩基）加水分解である。いくつかの実施形態では、加水分解は酵素触媒によるもの、例えばエステラーゼ触媒によるものである。当然のことながら、加水分解が２種類とも生じる場合がある。１つ以上のこのような部分と反応性官能基としてのＮＨＳエステルとを含むＰＥＧの例には以下のものがある。

【化31】

式ＸＩＶ

【化32】

【化33】

【0161】

いくつかの実施形態では、分岐状（複数のアームを有する）のＰＥＧまたは星形のＰＥＧは、ペンタエリスリトール核、ヘキサグリセリン核またはトリペンタエリトリトール核を含む。特定の実施形態では、分岐枝がすべて単一の点から生じているとは限らないことが理解されよう。

【0162】

反応性官能基を１つ以上含む一官能性、二官能性、分岐状およびその他のＰＥＧは、いくつかの実施形態では、例えば、特にＮＯＦ Ａｍｅｒｉｃａ社（Ｗｈｉｔｅ Ｐｌａｉｎｓ、ＮＹ）またはＢＯＣ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社（４５−１６ Ｒａｍｓｅｙ Ｒｏａｄ Ｓｈｉｒｌｅｙ、ＮＹ １１９６７、ＵＳＡ）から入手するか、当該技術分野で公知の方法を用いて調製することができる。

【0163】

本発明のいくつかの実施形態では、コンプスタチン類似体は細胞反応性官能基とＣＲＭをともに含む。いくつかの態様では、本発明は、細胞反応性の官能基または部分が、分子量が少なくとも５００ダルトン、例えば、少なくとも１，５００ダルトンから最大約１００，０００ダルトンまで（例えば、平均分子量が約２０，０００；３０，０００；４０，０００；５０，０００；６０，０００；７０，０００；８０，０００；９０，０００；または１００，０００ダルトン）の（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ部分に置き換わっている、上記の細胞反応性コンプスタチン類似体のいずれかの分子のバリアントを提供する。

【0164】

ｎが約５００；１，０００；１，５００；２，０００；５，０００；１０，０００；２０，０００；３０，０００；４０，０００；５０，０００；６０，０００；７０，０００；８０，０００；９０，０００；〜１００，０００ダルトンの平均分子量を得るのに十分な値となっている長時間作用型コンプスタチン類似体の例を以下に記載する。

【0165】

（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＣ（＝Ｏ）−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ_２）（配列番号５８）

【0166】

Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｌｙｓ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−ＮＨ_２（配列番号５９）

【0167】

Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｎ−ＮＨ_２（配列番号６０）

【0168】

Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−（Ｇｌｙ）_５−Ｌｙｓ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｎ−ＮＨ_２（配列番号６１）

【0169】

Ａｃ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｎＣ（＝Ｏ）Ｌｙｓ−（Ｇｌｙ）_５−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＮＨ_２）（配列番号６２）
Ａｃ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｎＣ（＝Ｏ）Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＮＨ_２）（配列番号６３）

【0170】

配列番号５８では、（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｎがアミド結合を介してＮ末端アミノ酸と結合している。配列番号５９〜６３では、（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｎ部分がアミド結合を介してＬｙｓ側鎖と結合している。したがって、上記のように、配列番号５９、６０および６１のＣ末端のＮＨ_２はペプチドのＣ末端のアミド化を表していることが理解され、また配列番号６２および６３では、Ｎ末端のＡｃはペプチドのＮ末端のアセチル化を表していることが理解されよう。ほかにも、（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ部分の遊離末端が通常、下線を施したＯが末端（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）基のＯ原子を表す（ＯＲ）で終わることが当業者には理解されよう。（ＯＲ（Ｏに下線））は多くの場合、ヒドロキシル（ＯＨ）基またはメトキシ（−ＯＣＨ_３）基などの部分であるが、他の基（例えば、他のアルコキシ基）を用いることも可能である。したがって、例えば、配列番号５９は、Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｌｙｓ−（Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｒ）−ＮＨ２（配列番号６４）（式中、Ｒは、例えば直鎖状ＰＥＧの場合、ＨまたはＣＨ_３である）のように表すことができる。二官能性、分岐状または星形のＰＥＧの場合、Ｒは分子の残りの部分を表す。さらに、反応性官能基を含む部分は本明細書に記載されるように（例えば、本明細書に記載の式のいずれかに従って）変化し得ることが理解されよう。例えば、反応性官能基を含む部分がエステルおよび／またはアルキル鎖を含み、配列番号６４と同じペプチド配列を含む長時間作用型コンプスタチン類似体は、次のように表すことができる：
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｌｙｓ−（Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｍ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｒ）−ＮＨ２（配列番号６５）；
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｌｙｓ−（Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｍ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｒ）−ＮＨ２（配列番号６６）
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｌｙｓ−（Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｍ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｊ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｒ）−ＮＨ２（配列番号６７）。
配列番号６５〜６７では、ｍは様々な実施形態において、１から最大約２、３、４、５、６、７、８、１０、１５、２０または３０までの範囲に収まり得る。配列番号６７では、ｊは様々な実施形態において、１から最大約２、３、４、５、６、７、８、１０、１５、２０または３０までの範囲に収まり得る。また、本明細書に記載のように、様々な実施形態において、Ｌｙｓ−（Ｃ（＝Ｏ）−と（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−Ｒとの間に、アミド、芳香環（例えば、置換もしくは非置換フェニル）または置換もしくは非置換シクロアルキル構造などの他の部分を組み込み得ることも理解されよう。

【0171】

本発明は、配列番号５８〜６７のバリアントを提供し、このバリアントは−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−（配列番号７１）が、他の任意のコンプスタチン類似体、例えば、配列番号３〜２７または２９−３６のいずれかのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列に置き換わったものであるが、ただし、コンプスタチン類似体のＮ末端および／またはＣ末端に存在するブロック部分（１つまたは複数）が存在しないもの、リンカー（ブロック部分を含み得る）に置き換わったものあるいは対応するバリアント（１つまたは複数）内に存在する異なるＮ末端またはＣ末端アミノ酸に結合したものであり得る。

【0172】

任意のコンプスタチン類似体、例えば、配列番号３〜３７のいずれかを含む任意の化合物が様々な実施形態において、そのＮ末端またはＣ末端を介して、あるいはその付近で（例えば、そのＮ末端またはＣ末端アミノ酸のあるいはその付近のアミノ酸の側鎖を介して）、反応性官能基を含む任意の部分、例えば、式Ｉ〜ＸＶＩまたは式Ａ〜Ｈの任意の化合物と直接的にあるいは間接的に結合し得る。

【0173】

いくつかの実施形態では、ＣＲＭは、ヒト血清中にみられるポリペプチドもしくはそのフラグメントまたは上記ポリペプチドもしくはそのフラグメントと実質的に類似したバリアントを含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド、フラグメントまたはバリアントは分子量が５ｋＤ〜１５０ｋＤ、例えば、少なくとも５ｋｄ、１０ｋｄ、２０ｋｄ、３０ｋｄ、４０ｋｄ、５０ｋｄ、６０ｋｄ、７０ｋｄ、８０ｋｄ、９０ｋｄ、１００ｋｄまたはそれ以上、例えば、１００〜１２０ｋＤまたは１２０〜１５０ｋＤである。いくつかの実施形態では、長時間作用型コンプスタチン類似体の作製は、反応性官能基を含むコンプスタチン類似体とポリペプチドの１つ以上のアミノ酸側鎖とを反応させることを含み、この側鎖は適合性のある官能基を含むものである。いくつかの実施形態では、長時間作用型コンプスタチン類似体の作製は、反応性官能基を含むコンプスタチン類似体とポリペプチドのＮ末端アミンおよび／またはＣ末端カルボキシル基とを反応させることを含む。いくつかの実施形態では、長時間作用型コンプスタチン類似体の作製は、アミン反応性官能基を含むコンプスタチン類似体と、第一級アミン（例えば、リジン）を含む側鎖を有するアミノ酸および／またはポリペプチドのＮ末端アミンとを反応させることを含む。いくつかの実施形態では、長時間作用型コンプスタチン類似体の作製は、カルボキシル反応性官能基を含むコンプスタチン類似体とポリペプチドのＣ末端カルボキシル基とを反応させることを含む。いくつかの実施形態では、コンプスタチン類似体部分をポリペプチドの各末端に結合させ、任意選択で、１つ以上の内部アミノ酸の側鎖と結合させる。いくつかの実施形態では、長時間作用型コンプスタチン類似体の作製は、スルフィドリル反応性官能基を含むコンプスタチン類似体とポリペプチドの１つ以上のスルフィドリル基とを反応させることを含む。

【0174】

いくつかの実施形態では、ポリペプチド内に反応性官能基を少なくとも１つ導入する。例えば、いくつかの実施形態では、コンプスタチン類似体と反応させる前に、ポリペプチドの側鎖を少なくとも１つ修飾して、第一の反応性官能基を異なる反応性官能基に変換する。いくつかの実施形態では、チオールを導入する。生体分子内にチオールを導入するには、内在性ジスルフィドの還元およびアミン基、アルデヒド基またはカルボン酸基のチオール基への変換を含めた複数の方法を用いることができる。ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、トリス−（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）またはトリス−（２−シアノエチル）ホスフィンにより、タンパク質中のシスチンのジスルフィド架橋をシステイン残基に還元することができる。スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）と反応させた後、ＤＴＴまたはＴＣＥＰにより３−（２−ピリジルジチオ）プロピオニルコンジュゲートを還元することにより、アミンを間接的にチオラート化することができる。スクシンイミジルアセチルチオアセタートと反応させた後、ほぼ中性ｐＨで５０ｍＭのヒドロキシルアミンまたはヒドラジンを用いてアセチル基を除去することにより、アミンを間接的にチオラート化することができる。２−イミノチオランと反応させ、分子全体の電荷を保持して遊離チオールを導入することにより、アミンを直接チオラート化することができる。チオールを含まないタンパク質中のトリプトファン残基をメルカプトトリプトファン残基に酸化し、次いで、これをヨードアセトアミドまたはマレイミドにより修飾することができる。チオールを１つ以上含むポリペプチドと、Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−Ｔｒｐ（１−Ｍｅ）−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＡＥＥＡｃ−Ｌｙｓ−（Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_５−Ｍａｌ）−ＮＨ_２（配列番号６８）などのマレイミド基を含むコンプスタチン類似体とを反応させて、長時間作用型コンプスタチン類似体を作製してもよい。

【0175】

いくつかの実施形態では、ポリペプチドは組換えにより作製されたものである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、少なくとも一部が組換えにより作製されたものであり（例えば、細菌内で、あるいは真菌、昆虫、植物または脊椎動物などの真核宿主の細胞内で）および／または少なくとも一部が化学合成を用いて作製されたものである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドはｐｕｆである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドがグリコシル化されている。いくつかの実施形態では、ポリペプチドはグリコシル化されていない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドと実質的に類似したバリアントが、対象、例えばヒト対象の正常な免疫系によって異物として認識されない程度にそのポリペプチドと類似している。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩエピトープが生じないよう、バリアントの元となるポリペプチドと比較したときの実質的に類似したバリアントの配列の変化を選択する。当該技術分野で公知の様々な方法を用いて、配列がＭＨＣクラスＩエピトープを含むかどうかを予測することができる。

【0176】

本発明はさらに、ＣＲＭを含むコンプスタチン類似体を２つ以上（例えば、２〜１０）含む多量体、例えばコンカテマーを提供し、ここでは、得られる分子（またはそのＣＲＭ成分）の平均分子量が２０，０００；３０，０００；４０，０００；５０，０００；６０，０００；７０，０００；８０，０００；９０，０００；〜１００，０００ダルトンである。いくつかの実施形態では、上記結合部分のいずれかを用いて、ＣＲＭを含むコンプスタチン類似体を結合させることができる。

【0177】

ＶＩＩ．標的化コンプスタチン類似体
本発明は、標的化部分とコンプスタチン類似体部分とを含み、標的化部分が標的分子と非共有結合する、標的化コンプスタチン類似体を提供する。いくつかの態様では、本発明は、第ＶＩ節に記載されている細胞反応性コンプスタチン類似体に類似した標的化コンプスタチン類似体を提供し、ここでは、この化合物は細胞反応性部分に加えて、あるいは細胞反応性部分の代わりに標的化部分を含む。標的化部分は、標的分子と特異的に結合する、例えば抗体、ポリペプチド、ペプチド、核酸（例えば、アプタマー）、炭水化物、小分子または超分子複合体を含み得る。いくつかの実施形態では、標的分子（平衡解離定数Ｋｄにより測定されるもの）に対する標的化部分の親和性（平衡解離定数Ｋｄにより測定されるもの）が試験条件下、例えば生理的条件下で１０^−３Ｍ以下、例えば１０^−４Ｍ以下、例えば１０^−５Ｍ以下、例えば１０^−６Ｍ以下、１０^−７Ｍ以下、１０^−８Ｍ以下または１０^−９Ｍ以下である。

【0178】

標的化部分が抗体である本発明の実施形態では、抗体は、結合能を保持する任意の免疫グロブリンもしくはその誘導体または免疫グロブリン結合ドメインと相同なもしくはほぼ相同な結合ドメインを有する任意のタンパク質であり得る。このようなタンパク質は、天然源に由来するものであっても、一部分または全体が（例えば、組換えＤＮＡ技術、化学合成などを用いて）合成により作製されたものであってもよい。抗体は任意の種、例えば、ヒト、げっ歯類、ウサギ、ヤギ、ニワトリなどのものであり得る。抗体は、ヒトのクラス：ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥのいずれも含めた任意の免疫グロブリンクラスのメンバーであり得る。本発明の様々な実施形態において、抗体は、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ｓｃＦｖ（単鎖可変部）もしくは抗原結合部位を保持する他のフラグメントなどの抗体フラグメントまたは組換えにより作製したフラグメントを含めた組換えにより作製したｓｃＦｖフラグメントであり得る。例えば、Ａｌｌｅｎ，Ｔ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ，Ｖｏｌ．２，７５０−７６５，２００２およびその参考文献を参照されたい。一価、二価または多価の抗体を用いることができる。抗体は、例えばげっ歯類由来の可変ドメインとヒト由来の定常ドメインが融合され、げっ歯類抗体の特異性を保持する、キメラ抗体であり得る。いくつかの実施形態では、ファージディスプレイなどのディスプレイ技術を用いて、例えば、ゲノムにヒト免疫グロブリン遺伝子が組み込まれたげっ歯類で、ヒト抗体またはその一部分を作製する。いくつかの実施形態では、ヒト抗体配列内に非ヒト種（例えば、マウス）由来の相補性決定領域を１つ以上移植することによりヒト化抗体を作製する。抗体は一部分がヒト化されていても、全体がヒト化されていてもよい。例えば、本発明に有用な標的化部分を得るのに使用し得るヒト化抗体を入手する様々な方法を概説したものとして、Ａｌｍａｇｒｏ ＪＣ，Ｆｒａｎｓｓｏｎ Ｊ．，Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−３３（２００８）を参照されたい。本発明の目的のためには一般にモノクローナル抗体が好ましいが、抗体はポリクローナルであってもモノクローナルであってもよい。本発明の特定の実施形態ではＦ（ａｂ’）２またはＦ（ａｂ’）フラグメントを使用し、他の実施形態ではＦｃドメインを含む抗体を使用する。ほぼあらゆる目的の分子と特異的に結合する抗体を作製する方法が当該技術分野で公知である。例えば、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を天然源から、例えば、（例えば、分子またはその抗原性のフラグメントによる免疫感作後に）その抗体を産生する動物の血液または腹水液から精製する、あるいは細胞培養で組換えにより作製することができる。例えば消化、ジスルフィド還元または合成により抗体フラグメントを作製する方法が当該技術分野で公知である。

【0179】

本発明の様々な実施形態において、標的化部分は、抗原抗体相互作用以外の機序で標的分子と特異的に結合する任意の分子であり得る。このような標的化部分は「リガンド」と呼ばれる。例えば、本発明の様々な実施形態において、リガンドはポリペプチド、ペプチド、核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）、炭水化物、脂質もしくはリン脂質または小分子であり得る。いくつかの実施形態では、小分子は、天然のものまたは人工的に作製されたものに関係なく、比較的低分子量で、タンパク質、ポリペプチド、核酸および脂質ではない、通常は分子量が約１５００ｇ／ｍｏｌ未満であり、かつ通常は複数の炭素−炭素結合を有する有機化合物である。一般にアプタマーとは、特定のタンパク質と結合するオリゴヌクレオチド（例えば分子を、例えばヌクレアーゼによる分解に対する耐性を高めることにより安定化させる、修飾ヌクレオシド（例えば、ＲＮＡおよびＤＮＡに最もよくみられる５種類の標準的な塩基（Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ、Ｕ）または糖（リボースおよびデオキシリボース）以外の塩基または糖）または修飾されたヌクレオシド間結合（例えば、非ホスホジエステル結合）を任意選択で含む、ＲＮＡまたはＤＮＡなど）のことである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが最大約１００ヌクレオシド、例えば、長さが１２〜１００ヌクレオシドである。アプタマーはＳＥＬＥＸと呼ばれるｉｎ ｖｉｔｒｏ進化法を用いて得ることができ、また目的とするタンパク質に特異的なアプタマーを得る方法が当該技術分野で公知である。例えば、Ｂｒｏｄｙ Ｅ Ｎ，Ｇｏｌｄ Ｌ．Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０００ Ｍａｒｃｈ；７４（１）：５−１３を参照されたい。いくつかの実施形態では、ペプチド核酸またはロックト核酸を用いる。

【0180】

本発明の特定の実施形態では、標的化部分はペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ファージディスプレイ、リボソームディスプレイ、酵母ディスプレイなどのディスプレイ技術を用いて、目的とする標的分子と結合するペプチドを同定する。

【0181】

小分子をリガンドとして用いることができる。このようなリガンドを同定する方法は当該技術分野で公知である。例えば、タンパク質の凹面（ポケット）と結合する低分子量有機化合物を同定するための、コンビナトリアルライブラリーを含めた小分子ライブラリーのｉｎ ｖｉｔｒｏスクリーニングやコンピュータを用いたスクリーニングなどでは、多数の目的とするタンパク質に対する小分子リガンドを同定することができる（Ｈｕａｎｇ，Ｚ．，Ｐｈａｒｍ．＆ Ｔｈｅｒ．８６：２０１−２１５，２０００）。

【0182】

本発明の特定の実施形態では、標的化部分は、通常は担体として用いたり、抗体作製を目的に抗原とコンジュゲートしたりするタンパク質でも分子でもない。その例には、ウシ血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシガンマグロブリンおよびジフテリア毒素などの担体タンパク質または分子がある。本発明の特定の実施形態では、標的化部分は免疫グロブリン分子のＦｃ部分ではない。いくつかの実施形態では、標的化部分は、それが共有結合または非共有結合する追加の部分を１つ以上含む複合体の一部となっている。

【0183】

本発明の様々な実施形態において、標的分子は、細胞により産生される任意の分子（細胞表面に発現される任意の形態または少なくとも一部が細胞外修飾によるものであるその修飾形態を含む）であり得る。いくつかの実施形態では、標的分子は、組織内または組織上に存在する細胞外物質である。いくつかの実施形態では、標的分子は、特定の疾患または生理的状態の特徴を示す、あるいは１種類以上の細胞タイプまたは組織タイプの特徴を示すものである。標的分子は多くの場合、分子の少なくとも一部分が抗体などの細胞外結合物質による結合を受けやすいように、少なくとも部分的に細胞表面に存在する分子（例えば、膜貫通型タンパク質または膜結合型タンパク質）である。標的分子は細胞タイプ特異的であり得るが、そうである必要もない。例えば、細胞タイプ特異的標的分子は多くの場合、１つまたは複数の特定のタイプの細胞上または細胞内に他の多くのタイプの細胞上または細胞内よりも高レベルで存在するタンパク質、ペプチド、ｍＲＮＡ、脂質または炭水化物である。いくつかの場合、細胞タイプ特異的標的分子が、目的とする特定のタイプの細胞内または細胞上のみに検出可能なレベルで存在する。しかし、有用な細胞タイプ特異的標的分子が細胞タイプ特異的であるとみなされるのに、目的とする細胞タイプに対して完全に特異的である必要はないことが理解されよう。いくつかの実施形態では、特定の細胞タイプの細胞タイプ特異的標的分子がその細胞タイプ内で、例えば複数（例えば、５〜１０種類以上）の異なる組織または臓器に由来する細胞をほぼ同量含む混合物からなる参照細胞集団の少なくとも３倍のレベルで発現される。いくつかの実施形態では、細胞タイプ特異的標的分子は、参照集団でのその平均発現量の少なくとも４〜５倍、５〜１０倍または１０倍以上のレベルで存在する。いくつかの実施形態では、当業者が細胞タイプ特異的標的分子を検出するか測定することにより、目的とする１つまたは複数の細胞タイプを他の多くのタイプ、ほとんどのタイプまたはすべてのタイプの細胞から識別することが可能である。一般に、ほとんどの標的分子の有無および／または量は、ノーザンブロット法、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ＲＴ−ＰＣＲ、配列決定、免疫学的方法（イムノブロッティング、免疫検出（例えば、免疫組織化学によるもの）または蛍光標識抗体で染色後の蛍光検出（例えば、ＦＡＣＳを用いるもの）など）、オリゴヌクレオチドマイクロアレイ、ｃＤＮＡマイクロアレイ、膜アレイ、タンパク質マイクロアレイ分析、質量分析など標準的な技術を１つ以上用いて明らかにすることができる。

【0184】

いくつかの実施形態では、標的分子はチャネル、輸送体、受容体または少なくとも一部分が細胞表面に露出しているその他の分子である。いくつかの実施形態では、標的分子は陰イオン輸送体または水チャネル（例えば、アクアポリンタンパク質）である。

【0185】

いくつかの実施形態では、標的分子は、グリコホリン（例えば、グリコホリンＡ、Ｂ、ＣまたはＤ）またはバンド３などの少なくとも一部分が赤血球表面に露出しているタンパク質である。

【0186】

いくつかの実施形態では、標的分子は、少なくとも一部分が内皮細胞表面に露出しているタンパク質である。いくつかの実施形態では、標的分子は、通常の健常な血管系の表面に存在する。いくつかの実施形態では、標的分子は、活性化された内皮細胞の表面に存在する。いくつかの実施形態では、標的分子は、活性化された内皮細胞の表面に存在するが、活性化されていない内皮細胞の表面には存在しない。いくつかの実施形態では、標的分子は、傷害または炎症などの刺激により発現または露出が誘発される分子である。いくつかの実施形態では、標的分子が、標的分子を発現する細胞を含む移植片を受けたレシピエントにより「非自己」として認識され得る。いくつかの実施形態では、標的分子は、それに対する抗体がヒトによくみられる炭水化物異種抗原である。いくつかの実施形態では、炭水化物は血液型抗原を含む。いくつかの実施形態では、炭水化物は異種抗原を含む。例えば、アルファ−ｇａｌエピトープ（Ｇａｌａｌｐｈａ１−３Ｇａｌｂｅｔａ１−（３）４ＧｌｃＮＡｃ−Ｒ）（例えば、Ｍａｃｈｅｒ ＢＡおよびＧａｌｉｌｉ Ｕ．Ｔｈｅ Ｇａｌａｌｐｈａ１，３Ｇａｌｂｅｔａ１，４ＧｌｃＮＡｃ−Ｒ（ａｌｐｈａ−Ｇａｌ）ｅｐｉｔｏｐｅ：ａ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｏｆ ｕｎｉｑｕｅ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｒｅｌｅｖａｎｃｅ． Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ．１７８０（２）：７５−８８（２００８）を参照されたい。

【0187】

本発明のいくつかの実施形態では、コンプスタチン類似体は標的化部分とＣＲＭをともに含む。

【0188】

いくつかの実施形態では、標的化コンプスタチン類似体は複数の標的化部分を含み、これらは同じものまたは異なるものであり得る。異なる標的化部分は、同じ標的分子とも異なる標的分子とも結合し得る。本発明は、標的化部分、コンプスタチン類似体またはその両方に関して多価である標的化コンプスタチン類似体を提供する。

【0189】

本発明は一般に、コンプスタチン類似体部分と標的化部分とを含む化合物を作製する任意の方法およびそれにより得られる化合物を包含する。いくつかの実施形態では、一般的に第ＶＩ節に記載されているものとほぼ同じ方法を用いて標的化コンプスタチン類似体を作製し得るが、ここでは細胞反応性部分の代わりに、あるいは細胞反応性部分に加えて標的化部分を用いる。いくつかの実施形態では、標的化部分としてペプチドを含む標的化コンプスタチン類似体を、コンプスタチン類似体部分とペプチド標的化部分とを含むポリペプチド鎖として合成する。任意選択で、ポリペプチド鎖はコンプスタチン類似体部分と標的化部分との間にスペーサーペプチドを１つ以上含む。

【0190】

いくつかの実施形態では、標的化コンプスタチン類似体は、同じアミノ酸配列（および該当する場合は１つ以上のブロック部分）を有するが標的化部分を含まない対応するコンプスタチン類似体の活性の少なくとも約１０％，２０％または３０％、例えば、３０％〜４０％、３０％〜５０％、３０％〜６０％、３０％〜７０％、３０％〜８０％、３０％〜９０％またはそれ以上のモル活性を有する。標的化コンプスタチン類似体が複数のコンプスタチン類似体部分を含むいくつかの実施形態では、標的化コンプスタチン類似体のモル活性は、前記コンプスタチン類似体部分の活性の合計の少なくとも約１０％，２０％または３０％、例えば、３０％〜４０％、３０％〜５０％、３０％〜６０％、３０％〜７０％、３０％〜８０％、３０％〜９０％またはそれ以上である。

【0191】

ＶＩＩＩ．用途
細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体には多種多様な用途がある。決して本発明を限定するものではないが、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体の特定の用途および関連する本発明の態様を本明細書に記載する。いくつかの実施形態では、臓器、組織または細胞への補体介在性の傷害に罹患している対象またはそのリスクのある対象に細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を投与する。いくつかの実施形態では、細胞反応性コンプスタチン類似体がｅｘ ｖｉｖｏで臓器、組織または細胞と接触し、それと共有結合する。その臓器、組織または細胞が対象内に導入され、レシピエントの補体系によって惹き起こされ得る傷害から保護される。

【0192】

本明細書に記載の目的のために、細胞と共有結合しないコンプスタチン類似体を使用することができる。例えば、体内での化合物の寿命を延ばす部分により修飾したコンプスタチン類似体および／または補体活性化の影響を受けやすい細胞タイプもしくは部位に対してコンプスタチン類似体を標的化する部位を含むコンプスタチン類似体を使用することができ、本発明はこのような用途を包含する。いくつかの実施形態では、長時間作用型コンプスタチン類似体を使用する。いくつかの実施形態では、標的化部分を含むコンプスタチン類似体を使用する。いくつかの実施形態では、体内での化合物の寿命を延ばす部分と標的化部分をともに含むコンプスタチン類似体を使用する。以下の考察で細胞反応性コンプスタチン類似体に言及する場合、本発明は、標的化コンプスタチン類似体に関連する類似した組成物および方法ならびに（少なくともコンプスタチン類似体を対象に投与することに関する態様では）細胞反応性コンプスタチン類似体の代わりに、あるいは細胞反応性コンプスタチン類似体に加えて、標的化部分も細胞反応性部分も含まないコンプスタチン類似体、任意選択で長時間作用型コンプスタチン類似体を使用する実施形態を提供する。

【0193】

対象となる特定の用途としては、次のものが挙げられる：（１）発作性夜間ヘモグロビン尿症もしくは非定型溶血性尿毒症症候群などの障害または補体介在性のＲＢＣ溶解を特徴とするその他の障害の患者において、補体介在性の傷害から赤血球（ＲＢＣ）を保護すること；（２）移植された臓器、組織および細胞を補体介在性の傷害から保護すること；（３）（例えば、外傷、血管閉塞、心筋梗塞またはその他のＩ／Ｒ傷害が起こり得る状況にある患者において）虚血／再灌流（Ｉ／Ｒ）傷害を軽減すること；ならびに（４）様々な異なる補体介在性の障害のいずれかにおいて、補体成分に曝され得る様々な身体構造（例えば、網膜）または膜（例えば、滑膜）を補体介在性の傷害から保護すること。細胞またはその他の身体構造の表面で補体活性化を阻害して得られる有益な効果は、補体介在性の傷害から細胞または構造自体を保護すること（例えば、細胞溶解の防止）により直接もたらされるものに限定されない。例えば、細胞反応性コンプスタチン類似体を用いて補体活性化を阻害すれば、アナフィロトキシンの生成とそれによる好中球の流入／活性化およびその他の炎症誘発事象が軽減し、かつ／または傷害を与える得る細胞内容物の放出が軽減することにより、離れたところにある臓器系または全身に有益な効果がもたらされる可能性がある。

【0194】

Ａ．血液細胞の保護
本発明のいくつかの実施形態では、細胞反応性コンプスタチン類似体、細胞標的化コンプスタチン類似体および／または非標的化コンプスタチン類似体（例えば、長時間作用型の非標的化コンプスタチン類似体）を用いて、補体介在性の傷害から血液細胞を保護する。血液細胞は血液の任意の細胞成分、例えば赤血球（ＲＢＣ）、白血球（ＷＢＣ）および／または血小板であり得る。いくつかの実施形態では、ＲＢＣの細胞表面に露出しているグリコホリンまたはバンド３などの標的分子に対して細胞標的化コンプスタチン類似体を標的化する。様々な障害が血液細胞への補体介在性の傷害によるものである。このような障害は、例えば、患者の１つ以上の細胞内ＣＲＰまたは可溶性ＣＲＰにみられる欠損または欠陥、例えば、（ａ）このようなタンパク質をコードする遺伝子（１つまたは複数）の突然変異（１つまたは複数）；（ｂ）１つ以上のＣＲＰの産生もしくは適切な機能に必要な遺伝子の突然変異（１つまたは複数）および／または（ｃ）１つ以上のＣＲＰに対する自己抗体の存在に起因するこのような欠損または欠陥により生じ得る。補体介在性のＲＢＣ溶解は、一連の多様な原因によって生じ得るＲＢＣ抗原に対する自己抗体の存在に起因し得る（多くの場合、特発性である）。ＣＲＰをコードする遺伝子のこのような変異（１つまたは複数）および／またはＣＲＰに対する抗体もしくは自身のＲＢＣに対する抗体を有する患者では、補体介在性のＲＢＣ傷害を伴う障害のリスクが高くなる。障害に特徴的な症状が１回以上発現したことのある患者では再発のリスクが高くなる。

【0195】

発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）は、補体介在性の血管内溶血、ヘモグロビン尿、骨髄不全および血栓形成傾向（血餅を形成する傾向）を特徴とする後天性溶血性貧血を含む、比較的まれな障害である。この障害は世界で１００万人に１６人が罹患していると推定され、性別および年齢を問わず発症し得るが、若年成人によくみられるものである（Ｂｅｓｓｌｅｒ，Ｍ．およびＨｉｋｅｎ，Ｊ．，Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ａｍ Ｓｏｃ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｅｄｕｃ Ｐｒｏｇｒａｍ，１０４−１１０（２００８）；Ｈｉｌｌｍｅｎ，Ｐ．Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ａｍ Ｓｏｃ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｅｄｕｃ Ｐｒｏｇｒａｍ，１１６−１２３（２００８））。ＰＮＨは急性の溶血により中断される慢性消耗性疾患であり、著しい病的状態をもたらし、平均余命の短い疾患である。患者の多くが貧血のほかにも腹痛、嚥下障害、勃起不全および肺高血圧症を訴え、腎不全および血栓塞栓症のリスクが高くなる。

【0196】

ＰＮＨは１８００年代に初めて明確な疾患として記載されたが、ＰＮＨの溶血の原因が確固として確立されたのは、補体活性化の代替経路が発見された１９５０年代のことである（Ｐａｒｋｅｒ ＣＪ．Ｐａｒｏｘｙｓｍａｌ ｎｏｃｔｕｒｎａｌ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｕｒｉａ：ａｎ ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ ｏｖｅｒｖｉｅｗ．Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ａｍ Ｓｏｃ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｅｄｕｃ Ｐｒｏｇｒａｍ．９３−１０３（２００８））。ＣＤ５５およびＣＤ５９は通常、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー（細胞膜に特定のタンパク質を係留する糖脂質構造）を介して細胞膜と結合している。ＰＮＨは、ＧＰＩアンカーの合成に関与するタンパク質をコードするＰＩＧＡ遺伝子に体細胞変異を生じた造血幹細胞（１つまたは複数）の非悪性クローン増殖の結果生じるものである（Ｔａｋｅｄａ Ｊら，Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｔｈｅ ＧＰＩ ａｎｃｈｏｒ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ａ ｓｏｍａｔｉｃ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＰＩＧ−Ａ ｇｅｎｅ ｉｎ ｐａｒｏｘｙｓｍａｌ ｎｏｃｔｕｒｎａｌ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｕｒｉａ．Ｃｅｌｌ．７３：７０３−７１１（１９９３））。このような幹細胞の子孫は、ＣＤ５５およびＣＤ５９を含めたＧＰＩ係留タンパク質が欠損している。この欠陥により細胞が補体介在性のＲＢＣ溶解を受けやすくなる。診断にはＧＰＩ係留タンパク質に対する抗体を用いたフローサイトメトリー分析がよく用いられる。この分析法では細胞表面のＧＰＩ係留タンパク質の欠損が検出され、欠損の程度および罹患細胞の割合を明らかにすることができる（Ｂｒｏｄｓｋｙ ＲＡ．Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｐａｒｏｘｙｓｍａｌ ｎｏｃｔｕｒｎａｌ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｕｒｉａ．Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｖ．２２（２）：６５−７４（２００８））。ＰＮＨＩＩＩ型ＲＢＣではＧＰＩ結合タンパク質が完全に欠損し、補体に対する感受性が高くなっているのに対し、ＰＮＨＩＩ型ＲＢＣではＧＰＩ結合タンパク質の一部が欠損し、補体に対する感受性が比較的低くなっている。ＦＬＡＥＲはプロアエロリジン（ＧＰＩアンカーと結合する細菌毒素）の不活性なバリアントを蛍光標識したものであり、ＰＮＨの診断にフローサイトメトリーとともに用いられることが多くなっている。ＦＬＡＥＲと顆粒球の結合が確認されなければＰＮＨと診断される。いくつかの実施形態では、細胞反応性コンプスタチン類似体がＣ３ｂの沈着からＰＮＨ ＲＢＣを保護する。

【0197】

いくつかの実施形態では、非定型溶血症候群（ａＨＵＳ）に罹患している対象に細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を投与する。ａＨＵＳは、微小血管症性溶血性貧血、血小板減少症および急性腎不全を特徴とする慢性障害であり、多くは補体制御タンパク質をコードする遺伝子の突然変異による、異常な補体活性化を原因とする（Ｗａｒｗｉｃｋｅｒ，Ｐ．ら，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ ５３，８３６−８４４（１９９８）；Ｋａｖａｎａｇｈ，Ｄ．およびＧｏｏｄｓｈｉｐ，Ｔ．Ｐｅｄｉａｔｒ Ｎｅｐｈｒｏｌ ２５，２４３１−２４４２（２０１０）。補体Ｈ因子（ＣＦＨ）遺伝子の突然変異がａＨＵＳ患者に最もよくみられる遺伝子異常であり、この患者の６０〜７０％が疾患発症後１年以内に死亡するか、末期腎不全に至る（ＫａｖａｎａｇｈおよびＧｏｏｄｓｈｉｐ，上記）。ほかにもＩ因子、Ｂ因子、Ｃ３、Ｈ因子関連タンパク質１〜５およびトロンボモジュリンの突然変異が記載されている。ａＨＵＳの他の原因としては、ＣＦＨなどの補体制御タンパク質に対する自己抗体が挙げられる。いくつかの実施形態では、Ｉ因子、Ｂ因子、Ｃ３、Ｈ因子関連タンパク質１〜５もしくはトロンボモジュリンの変異を有することが確認されている対象または補体制御タンパク質、例えばＣＦＨに対する抗体を有することが確認されている対象に細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を対象に投与する。

【0198】

補体介在性の溶血は、ＲＢＣと結合して補体介在性の溶血を惹き起こす抗体に関連する自己免疫性溶血性貧血を含めた多様なグループの他の状態にみられる。例えば、原発性慢性寒冷凝集素症ならびに薬物およびその他の外来物質に対するある種の反応にこのような溶血がみられることがある（Ｂｅｒｅｎｔｓｅｎ，Ｓ．ら，Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ １２，３６１−３７０（２００７）；Ｒｏｓｓｅ，Ｗ．Ｆ．，Ｈｉｌｌｍｅｎ，Ｐ．およびＳｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ａ．Ｄ．Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ａｍ Ｓｏｃ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｅｄｕｃ Ｐｒｏｇｒａｍ，４８−６２（２００４））。本発明のいくつかの実施形態では、慢性 寒冷凝集素症に罹患している、あるいはそのリスクのある対象に細胞反応性コンプスタチン類似体を投与する。別の実施形態では、細胞反応性コンプスタチン類似体を用いて、ＨＥＬＬＰ症候群に罹患している、あるいはそのリスクのある対象を治療し、この疾患は溶血、肝臓酵素の上昇および血小板数の減少がみられることにより定義され、少なくとも一部の患者では補体制御タンパク質（１つまたは複数）の突然変異を原因とするものである（Ｆａｋｈｏｕｒｉ，Ｆ．ら，１１２：４５４２−４５４５（２００８））。

【0199】

他の実施形態では、細胞反応性コンプスタチン類似体を用いて、対象に輸血する血液のＲＢＣまたはその他の細胞成分を保護する。このような用途の特定の例については以下でさらに考察する。上記のように、上に挙げた補体介在性の溶血および／またはＲＢＣ傷害を阻害する方法に標的化コンプスタチン類似体および／または長時間作用型コンプスタチン類似体を用いることができる。いくつかの実施形態では、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）部分を含む長時間作用型コンプスタチン類似体を用いてＰＮＨまたはａＨＵＳを治療する。

【0200】

Ｂ．移植
移植は、外傷、疾患またはその他の状態により損傷を受けた臓器および組織を取り換える手段となる治療法であり、その重要性は増しつつある。移植が成功し得る臓器には腎臓、肝臓、肺、膵臓および心臓がある。頻繁に移植が行われる組織としては、骨、軟骨、腱、角膜、皮膚、心臓弁および血管が挙げられる。膵島または島細胞移植は糖尿病、例えばＩ型糖尿病の有望な治療法である。本発明の目的のために、移植される、移植されている、あるいは既に移植された臓器、組織または細胞（または細胞の集団）を「移植片」と呼ぶことがある。本明細書の目的のために、輸血を「移植片」とみなす。

【0201】

移植では、移植片が、移植片機能不全および潜在的に移植不全の一因となり得る傷害を与える様々な事象および刺激に曝される。例えば、虚血−再灌流（Ｉ／Ｒ）傷害は、多くの移植片（特に固形臓器）の場合において罹病および死亡のよくみられる重要な原因になっており、移植片生着の可能性の主要な決定因子となり得るものである。移植拒絶反応は、遺伝的に異なる個体間での移植による主要なリスクの１つであり、移植不全を惹き起こし、レシピエントから移植片を除去する必要性をもたらす可能性がある。

【0202】

本発明のいくつかの実施形態では、細胞反応性コンプスタチン類似体、細胞標的化コンプスタチン類似体および／または長時間作用型コンプスタチン類似体を用いて、補体介在性の傷害から移植片を保護する。細胞反応性コンプスタチン類似体は移植片の細胞と反応してそれに共有結合し、補体活性化を阻害する。細胞標的化コンプスタチン類似体は移植片の標的分子（例えば、移植片の内皮細胞またはその他の細胞により発現されるもの）と結合し、補体活性化を阻害する。標的分子は、例えば、傷害または炎症などの刺激により発現が誘発または刺激される分子、レシピエントにより「非自己」として認識され得る分子、血液型抗原または異種抗原などのそれに対する抗体がヒトによくみられる炭水化物異種抗原、例えばアルファ−ｇａｌエピトープを含む分子であり得る。いくつかの実施形態では、コンプスタチン類似体、例えば細胞反応性コンプスタチン類似体と接触させた移植片の血管へのＣ４ｄ沈着の平均値が、コンプスタチン類似体と接触させなかった移植片でのＣ４ｄ沈着レベルの平均値（例えば、移植片および受ける他の治療法が一致する対象のもの）と比較して減少していることにより、補体活性化の減少が示され得る。

【0203】

本発明の様々な実施形態において、移植前、移植時および／または移植後に移植片に細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を接触させることができる。例えば、移植前に、ドナーから取り出した移植片に細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を含む液体を接触させることができる。例えば、移植片をその溶液に浸漬し、かつ／または移植片にその溶液を灌流することができる。別の実施形態では、移植片と取り出す前に細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体をドナーに投与する。いくつかの実施形態では、移植片の導入時および／または導入後に細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体をレシピエントに投与する。いくつかの実施形態では、移植された移植片に細胞反応性コンプスタチン、長時間作用型または標的化類似体を局所送達する。いくつかの実施形態では、例えば静脈内投与により、細胞反応性コンプスタチン類似体を全身投与する。

【0204】

本発明は、単離移植片（ａ）と、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体（ｂ）とを含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、組成物は、ドナーから取り出され、レシピエントへの移植を待機中の単離移植片などの移植片（例えば、臓器）に接触させるのに適した（例えば、すすぎ、洗浄、浸漬、灌流、維持または保管に適した）溶液をさらに含む。いくつかの実施形態では、本発明は、移植片（例えば、臓器）に接触させるのに適した溶液（ａ）と、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体（ｂ）とを含む組成物を提供する。溶液は、移植片に生理的に許容され（例えば、適切な浸透圧組成であり、非細胞毒性である）、かつのちに移植片をレシピエントに導入するという点で医学的に許容され（例えば、好ましくは無菌である、あるいは少なくとも妥当な程度に微生物またはその他の汚染物を含まない）、かつ細胞反応性コンプスタチン類似体と適合性がある（すなわち、コンプスタチン類似体の反応性を損なわない）あるいは長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体と適合性がある、任意の溶液であり得る。いくつかの実施形態では、溶液は、任意のこのような目的のための当該技術分野で公知の任意の溶液である。いくつかの実施形態では、溶液はＭａｒｓｈａｌｌの溶液または高浸透圧クエン酸溶液（Ｓｏｌｔｒａｎ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）、ウィスコンシン大学（ＵＷ）溶液（ＶｉａＳｐａｎ（商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ社）、ヒスチジン−トリプトファン−ケトグルタル酸（ＨＴＫ）溶液（Ｃｕｓｔｏｄｉａｌ（登録商標）、Ｋｏｈｌｅｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｍｉｔｅｄ社）、ＥｕｒｏＣｏｌｌｉｎｓ（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ社）およびＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）（Ｓａｎｇｓｔａｔ Ｍｅｄｉｃａｌ社）、Ｐｏｌｙｓｏｌ、ＩＧＬ−１またはＡＱＩＸ（登録商標） ＲＳ−１である。当然のことながら、生理的に許容される組成物の範囲内で他の溶液、例えば、同じまたはほぼ同じ成分を同じまたは異なる濃度で含有する溶液を使用することも可能である。いくつかの実施形態では、溶液は、細胞反応性コンプスタチン類似体が著しい反応を生じることが予想される成分（１つまたは複数）を含有せず、またいずれかの溶液も、このような成分を含まないよう改変または設計することができる。いくつかの実施形態では、細胞反応性コンプスタチン類似体は、移植片に適合性のある溶液中に、例えば０．０１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在するか、あるいはこのような濃度になるまでこの溶液に加えてもよい。

【0205】

いくつかの実施形態では、本発明は、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体（ａ）と、移植片に適合性のある溶液またはその固体（例えば、粉末）成分（ｂ）とを含むキットを提供する。細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体は、固体の形態（例えば、粉末）で提供しても、あるいは少なくとも部分的に溶液に溶解させて提供してもよい。いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体および／または移植片に適合性のある溶液を組み合わせると、移植片に細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を接触させるのに適した濃度の溶液が得られるよう、これらを所定量で提供する。多くの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体および移植片に適合性のある溶液またはその固体（例えば、粉末）成分がキット内で個別の容器に収納されている。いくつかの実施形態では、細胞反応性コンプスタチン類似体と移植片に適合性のある溶液の成分がともに、個別の容器に収納されて、あるいは混合されて、固体（例えば、粉末）の形態で提供される。いくつかの実施形態では、キットは、使用上の指示、例えば、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を移植片に適合性のある溶液に加えるための指示および／または移植片に細胞反応性コンプスタチン類似体を接触させるための指示を含む。任意選択で、キットは、移植、細胞療法および／または輸血で使用する製品の規制に関わる政府機関により承認を受けたラベルを含む。

【0206】

本発明はさらに、単離移植片に細胞反応性コンプスタチン類似体を接触させることを含む、コンプスタチン類似体と単離移植片とを共有結合させる方法を提供する。本発明はさらに、コンプスタチン類似体が共有結合した単離移植片を提供する。単離移植片には通常、コンプスタチン類似体分子が多数結合している。いくつかの実施形態では、移植片は腎臓、肝臓、肺、膵臓または心臓などの固形臓器であるか、あるいはこれを含むものである。いくつかの実施形態では、移植片は骨、軟骨、筋膜、腱、靭帯、角膜、強膜、心膜、皮膚、心臓弁、血管、羊膜または硬膜であるか、あるいはこれを含むものである。いくつかの実施形態では、移植片は心肺または膵腎移植片などの多臓器を含む。いくつかの実施形態では、移植片は、臓器または組織全体に満たないものを含む。例えば、移植片は臓器または組織の一部分、例えば、肝葉、血管の一部、皮弁または心臓弁を含み得る。いくつかの実施形態では、移植片は、元の組織から単離されているが組織構造の少なくとも一部を保持する単離細胞または単離組織片、例えば膵島を含む調製物を含む。いくつかの実施形態では、調製物は、結合組織を介して互いに結合していない単離細胞、例えば、末梢血および／または臍帯血または全血に由来する造血幹細胞または前駆細胞あるいは赤血球（ＲＢＣ）または血小板などの任意の細胞含有血液製剤を含む。いくつかの実施形態では、死亡したドナー（例えば、「脳死後に提供する」（ＤＢＤ）ドナーまたは「心臓死後に提供する」ドナー）から移植片を得る。いくつかの実施形態では、移植片の特定のタイプに応じて、生存しているドナーから移植片を得る。ドナーに過度のリスクを負わせず、正当な医療行為を逸脱せずに生存しているドナーから入手できることが多い移植片のタイプには、例えば腎臓、肝臓の一部、血液細胞がある。

【0207】

いくつかの実施形態では、移植は異種移植である（すなわち、ドナーとレシピエントの種が異なっている）。いくつかの実施形態では、移植は自家移植（すなわち、同一個体内で体の一部分から別の部分へ移植すること）である。いくつかの実施形態では、移植は同系移植である（すなわち、ドナーとレシピエントが遺伝的に一致する）。ほとんどの実施形態では、移植は同種移植である（すなわち、ドナーとレシピエントが同じ種に属するが遺伝的に異なる）。同種移植の場合、ドナーとレシピエントは遺伝的に関係がある（例えば、家族の一員同士である）者であっても、そうでなくてもよい。通常、ドナーとレシピエントは血液型が適合する（少なくともＡＢＯ適合性があり、任意選択でＲｈ、Ｋｅｌｌおよび／またはその他の血液細胞抗原で適合性がある）。同種抗体が存在すると超急性拒絶反応（すなわち、移植片がレシピエントの血液と接触するのとほぼ同時に、例えば数分以内に始まる拒絶反応）が生じる可能性があるため、レシピエントの血液は、移植片および／またはレシピエントとドナーに対する同種抗体に関してスクリーニングされたものであり得る。補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）試験を用いて、対象の血清の抗ＨＬＡ抗体をスクリーニングすることができる。血清を一群の既知のＨＬＡ表現型のリンパ球とインキュベートする。血清中に標的細胞上のＨＬＡ分子に対する抗体が含まれていれば、補体介在性の溶解による細胞死がみられる。選択された一群の標的細胞を用いれば、検出された抗体に対する特異性を決定することが可能である。抗ＨＬＡ抗体の有無を判定し、任意選択でそのＨＬＡ特異性を決定するのに有用なその他の技術としては、ＥＬＩＳＡアッセイ、フローサイトメトリーアッセイ、マイクロビーズアレイ技術（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ技術）が挙げられる。ここに挙げたアッセイを実施するための方法論はよく知られており、それを実施するためのキットが各種市販されている。

【0208】

いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体が補体介在性の拒絶反応を抑制する。例えば、いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体が超急性拒絶反応を抑制する。超急性拒絶反応は少なくとも部分的には、古典経路を介したレシピエント補体系の抗体媒介性の活性化とそれにより生じる移植片へのＭＡＣ沈着によって惹き起こされる。超急性拒絶反応は通常、移植片と反応する既存の抗体がレシピエントに存在することに起因する。移植前の十分なマッチングにより超急性拒絶反応を回避するよう努めるのが望ましいが、例えば時間および／または供給源の制約により、常にそれを実施できるとは限らない。さらに、一部のレシピエント（例えば、輸血を何回か受けた患者、これまでに移植を受けたことがある患者、何度か妊娠したことのある女性）では、通常は試験対象にならない抗原に対する抗体を含む可能性の予め形成された抗体を多数もつため、時宜に即し適合する移植片を確信をもって入手することが困難であるか、あるいはほぼ不可能な場合がある。このような患者では超急性拒絶反応のリスクが高くなる。

【0209】

いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体が急性拒絶反応または移植不全を抑制する。本明細書で使用される「急性拒絶反応」は、移植後少なくとも２４時間、通常少なくとも数日から１週間の間、最大で移植の６か月後に生じる拒絶反応を指す。急性の抗体媒介性拒絶反応（ＡＭＲ）では、移植後最初の数週間にドナー特異的同種抗体（ＤＳＡ）の急激な増加がみられることが多い。いかなる理論にも束縛されることを望むものではないが、既存の形質細胞および／また記憶Ｂ細胞から新たに変換された形質細胞がＤＳＡの産生増大に何らかの役割を演じている可能性が考えられる。このような抗体により移植片に補体介在性の傷害が生じ得るが、移植片に細胞反応性コンプスタチン類似体を接触させることによりこれが阻害され得る。いかなる理論にも束縛されることを望むものではないが、移植片での補体活性化を阻害することにより、急性移植不全の別の原因である白血球（例えば、好中球）浸潤が低減され得る。

【0210】

いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体が移植片に対する補体介在性のＩ／Ｒ傷害を阻害する。以下さらに考察するように、Ｉ／Ｒ傷害は、移植臓器にみられるように、血液供給が一時的に妨げられた組織の再灌流の際に生じ得る。Ｉ／Ｒ傷害の軽減が急性移植片機能不全の可能性を低下させ、あるいはその重症度を低下させ、急性移植不全の可能性を低下させ得る。

【0211】

いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体が慢性拒絶反応および／または慢性移植不全を抑制する。本明細書で使用される「慢性拒絶反応または慢性移植不全」は、移植後少なくとも６か月後、例えば、移植後６か月から１年、２年、３年、４年、５年またはそれ以上で、多くの場合、移植片が数か月から数年間正常に機能した後に生じる拒絶反応または不全を指す。これは移植片に対する慢性の炎症性免疫応答によるものである。本明細書の目的のために、慢性拒絶反応には、移植組織の内部血管の線維症を指すのに用いられる用語である慢性同種移植血管症が含まれ得る。免疫抑制療法により急性拒絶反応の発現率が低下しているため、慢性拒絶反応が移植片機能不全および移植不全の原因として一層目立つようになっている。Ｂ細胞の同種抗体産生が慢性拒絶反応および慢性移植不全の発生における重要な要素であるという証拠がある（Ｋｗｕｎ Ｊ．およびＫｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，８８（８）：９５５−６１（２００９））。移植片に対する初期の傷害が、最終的に慢性拒絶反応を来たし得る線維症などの慢性過程をもたらす要因となり得る。したがって、細胞反応性コンプスタチン類似体を用いてこのような初期の傷害を抑制することにより、慢性移植片拒絶反応の発現を遅らせ、かつ／または慢性移植片拒絶反応の可能性もしくは重症度を低下させ得る。

【0212】

いくつかの実施形態では、移植片のレシピエントに長時間作用型コンプスタチン類似体を投与して、移植片拒絶反応および／または移植不全を抑制する。

【0213】

Ｃ．虚血／再灌流傷害
虚血−再灌流（Ｉ／Ｒ）傷害は、外傷後および心筋梗塞、脳卒中、重症感染症、血管疾患、動脈瘤修復、心肺バイパス術および移植など一時的な血流途絶を伴う他の状態における組織傷害の重要な原因である。

【0214】

外傷の場合、挫傷、コンパートメント症候群および血管損傷による全身低酸素血症、低血圧症および局所的な血液供給の遮断が、代謝の活発な組織に損傷を与える虚血を惹き起こす。血液供給の回復が、虚血自体よりも有害なことが多い強い全身炎症性反応を誘発する。虚血部位に再灌流が生じると、局所的に産生され放出された因子が循環系に入って離れた位置にある部位に到達し、場合によっては、元の虚血性損傷を受けることのない肺および腸などの臓器に重大な傷害を惹き起こし、単一臓器および多臓器の機能不全を来たす。補体活性化は再灌流直後に発生し、直接的に、またその好中球に対する走化性および刺激性作用を介して、虚血後傷害の重要なメディエーターとなる。主要な補体経路は３種類とも活性化されて協同的にあるいは独立して作用し、多数の臓器系に影響を及ぼすＩ／Ｒ関連の有害事象に関与する。本発明のいくつかの実施形態では、最近（例えば、過去２時間、４時間、８時間、１２時間、２４時間または４８時間以内）に外傷、例えば、全身低酸素血症、低血圧症および／または局所的な血液供給の遮断などにより対象にＩ／Ｒ傷害のリスクが生じる外傷を受けた対象に細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を投与する。いくつかの実施形態では、細胞反応性コンプスタチン類似体を血管内に、任意選択で、受傷した身体部位に供給されている血管内に、あるいは直接その身体部位に投与する。いくつかの実施形態では、対象は脊髄損傷、外傷性脳損傷、熱傷および／または出血性ショックの患者である。

【0215】

いくつかの実施形態では、外科的処置、例えば、組織、臓器または体の一部への血流を一時的に遮断すると予想される外科的処置の実施前、実施時または実施後に細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を対象に投与する。このような処置の例としては、心肺バイパス術、血管形成術、心臓弁修復術／置換術、動脈瘤修復術またはその他の血管外科術が挙げられる。外科的処置と重なる時間の前、後および／またはその時間中に細胞反応性コンプスタチン類似体を投与し得る。

【0216】

いくつかの実施形態では、ＭＩ、血栓塞栓性卒中、深部静脈血栓症または肺塞栓症に罹患している対象に細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を投与する。細胞反応性コンプスタチン類似体を組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）（例えば、アルテプラーゼ（Ａｃｔｉｖａｓｅ）、レテプラーゼ（Ｒｅｔａｖａｓｅ）、テネクテプラーゼ（ＴＮＫａｓｅ））、アニストレプラーゼ（Ｅｍｉｎａｓｅ）、ストレプトキナーゼ（Ｋａｂｉｋｉｎａｓｅ、Ｓｔｒｅｐｔａｓｅ）またはウロキナーゼ（Ａｂｂｏｋｉｎａｓｅ）などの血栓溶解剤と併用投与してもよい。血栓溶解剤と重なる時間の前、後および／またはその時間中に細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を投与し得る。

【0217】

いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を対象に投与してＩ／Ｒ傷害を治療する。

【0218】

Ｄ．その他の補体介在性の障害
いくつかの実施形態では、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、糖尿病性網膜症、緑内障またはブドウ膜炎などの眼障害を治療するために細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を眼内に導入する。例えば、ＡＭＤに罹患している、あるいはＡＭＤのリスクのある対象を治療するために細胞反応性コンプスタチン類似体を（例えば、硝子体内注射により）硝子体腔内に導入する。いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を前眼房内に導入して、例えば前部ブドウ膜炎を治療する。

【0219】

いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を用いて、自己免疫疾患、例えば少なくとも部分的には１つ以上の自己抗原に対する抗体により媒介される自己免疫疾患に罹患している、あるいは自己免疫疾患のリスクのある対象を治療する。

【0220】

細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を、例えば、関節炎（例えば、関節リウマチ）に罹患している対象の滑液腔内に導入し得る。当然のことながら、これらをさらに全身に投与してもよい。

【0221】

いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を用いて、脳内出血に罹患している、あるいは脳内出血のリスクのある対象を治療する。

【0222】

いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を用いて、重症筋無力症に罹患している、あるいは重症筋無力症のリスクのある対象を治療する。

【0223】

いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を用いて、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）に罹患している、あるいは視神経脊髄炎のリスクのある対象を治療する。

【0224】

いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を用いて、膜性増殖性糸球体炎（ＭＰＧＮ）、例えば、Ｉ型ＭＰＧＮ、ＩＩ型ＭＰＧＮまたはＩＩＩ型ＭＰＧＨに罹患している、あるいは膜性増殖性糸球体炎のリスクのある対象を治療する。

【0225】

いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を用いて、神経変性疾患に罹患している、あるいは神経変性疾患のリスクのある対象を治療する。いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を用いて、神経障害性疼痛に罹患している、あるいは神経障害性疼痛を発症するリスクのある対象を治療する。いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を用いて、鼻副鼻腔炎または鼻ポリープに罹患している、あるいは鼻副鼻腔炎または鼻ポリープのリスクのある対象を治療する。いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を用いて、癌に罹患している、あるいは癌のリスクのある対象を治療する。いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を用いて、敗血症に罹患している、あるいは敗血症のリスクのある対象を治療する。いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を用いて、成人呼吸窮迫症候群に罹患している、あるいは成人呼吸窮迫症候群のリスクのある対象を治療する。

【0226】

いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を用いて、アナフィラキシー反応または注入反応のある、あるいはアナフィラキシーまたは注入反応のリスクのある対象を治療する。例えば、いくつかの実施形態では、アナフィラキシーまたは注入反応を惹き起こし得る薬物または溶媒の投与前、投与時または投与後に対象に前処置を実施してもよい。いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体により、食物（例えば、ピーナッツ、甲殻類またはその他の食物アレルゲン）、昆虫刺傷（例えば、ミツバチ、スズメバチ）によるアナフィラキシーのリスクのある、あるいはアナフィラキシーを起こしている対象を治療する。

【0227】

本発明の様々な実施形態において、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を局所投与しても、全身投与してもよい。

【0228】

いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を用いて、呼吸器疾患、例えば、喘息または慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を治療する。様々な実施形態において、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を、例えば、乾燥粉末として、あるいは噴霧による吸入により気道に投与してもよく、あるいは注射により、例えば静脈内に投与してもよい。いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を用いて、重症の喘息、例えば、気管支拡張剤および／または吸入副腎皮質ステロイド剤によっても十分に抑制されない喘息を治療する。

【0229】

ＩＸ．組成物および投与
本発明は、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を含む各種組成物を提供する。組成物は様々な実施形態において、互いに排他的でない限り、本明細書で考察されている任意の特徴または特徴の組合せを有し得る。本発明は、コンプスタチン類似体を任意のコンプスタチン類似体とするこのような組成物およびその使用方法の実施形態を提供する。

【0230】

いくつかの実施形態では、組成物は精製された細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を含む。精製は、精製前の組成物中に存在する様々な成分について所望の純度が得られるよう当業者が選択可能な様々な方法を用いて実施することができる。例えば、ろ過、高速液体クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィーおよび／またはその他の方法ならびにこれらの組合せを用いることができる。いくつかの実施形態では、組成物は、重量による総コンプスタチン類似体の百分率で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％またはそれ以上の細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、モル基準での総コンプスタチン類似体の百分率で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％またはそれ以上の細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体からなるか、あるいは実質的にこれよりなるものである。

【0231】

いくつかの実施形態では、細胞反応性コンプスタチン類似体と、細胞反応性官能基を含む化合物とを含む組成物は、細胞反応性コンプスタチン類似体と細胞反応性官能基を含む化合物との比が、モルベースで少なくとも１０：１、２０：１、５０：１、１００：１、５００：１、１，０００：１またはそれ以上であることを特徴とする。いくつかの実施形態では、組成物は、重量による総コンプスタチン類似体の百分率で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％またはそれ以上の細胞反応性コンプスタチン類似体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくともモルベースの総コンプスタチン類似体の百分率で８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％またはそれ以上の細胞反応性コンプスタチン類似体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも８０重量％、８５重量％、９０重量％、９５重量％、９８重量％、９９重量％またそれ以上の細胞反応性コンプスタチン類似体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも８０重量％、８５重量％、９０重量％、９５重量％、９８重量％、９９重量％またはそれ以上の長時間作用型コンプスタチン類似体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも８０重量％、８５重量％、９０重量％、９５重量％、９８重量％、９９重量％またはそれ以上の標的化コンプスタチン類似体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも８０重量％、８５重量％、９０重量％、９５重量％、９８重量％、９９重量％またはそれ以上の標的化コンプスタチン類似体を含む。いくつかの実施形態では、重量は乾燥重量である。

【0232】

いくつかの態様では、本発明は、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を含む医薬品等級の組成物を提供する。医薬品等級の組成物は、様々な実施形態において、純度の点で上に挙げたいずれかの特徴を有し得る。医薬品等級の組成物は、それ以上精製せず、ヒト対象への投与またはヒト対象に投与する医薬組成物の製造に適した医薬組成物として許容される程度に内毒素、重金属ならびに未確認のおよび／または特徴不明の物質を含まないものである。いくつかの実施形態では、医薬品等級の組成物は無菌である。

【0233】

適切な調製物、例えば、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体またはその他の活性物質の実質的に純粋な調製物と、薬学的に許容される担体または溶媒などとを組み合わせて、しかるべき医薬組成物を作製し得る。「薬学的に許容される担体または溶媒」という用語は、一緒に製剤化する化合物の薬理活性を打ち消さない非毒性の担体または溶媒を指す。担体または溶媒が、過度の中毒を惹き起こすことなく化合物を送達するのに適した量において対象への投与に適合する場合、その担体または溶媒は「非毒性」であることを当業者は理解するであろう。本発明の組成物で使用し得る薬学的に許容される担体または溶媒としては、特に限定されないが、水、生理食塩水、リンガー液、酢酸ナトリウムまたは酢酸カリウム溶液、５％ブドウ糖などが挙げられる。組成物は、例えば本明細書で考察しているように、所望の製剤に適した他の成分を含み得る。このほか補助的な活性化合物、例えば、補体介在性の障害に罹患している対象を治療するのに独立して有用な化合物を組成物に組み込んでもよい。本発明は、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体と、任意選択で、補体介在性の障害に罹患している対象を治療するのに有用な第二の活性物質とを含む、このような医薬組成物を提供する。

【0234】

いくつかの実施形態では、本発明は、医薬品の規制に関わる政府機関、例えば米国食品医薬品局により認可を受けたラベルとともに包装された、ヒトへの投与に適した薬学的に許容される組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、固体形態の薬学的に許容される細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体（ａ）と、薬学的に許容される担体または溶媒（ｂ）とを含む、医薬品キットまたは医薬品パックを提供する。任意選択で、キットまたはパックは細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を担体に溶解するための指示書を含む。いくつかの実施形態では、医薬品キットまたは医薬品パックが提供される。パックまたはキットは、少なくとも１用量、例えば１〜２００用量またはその間にある任意の数もしくは部分範囲の用量に十分な量の医薬組成物を含む。いくつかの実施形態では、医薬品パックまたは医薬品キットは、１つ以上の針および任意選択で１つ以上のシリンジを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの充填済みのシリンジが提供される。いくつかの実施形態では、１つ以上の単位投与剤形または計量済みのアリコートが提供される。いくつかの実施形態では、投与のための指示書であって、いくつかの実施形態では自己投与のための指示書を含む指示書が提供される。

【0235】

医薬組成物は、特に限定されないが、静脈内、筋肉内、皮下、吸入、経鼻送達、髄腔内、頭蓋内、動脈内、経口、直腸内、経皮、皮内、皮下などの経路を含めた任意の適切な投与経路により、対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を含む組成物を静脈内に投与する。いくつかの実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を含む組成物を動脈内に投与する。組成物は、臓器または組織に供給されている脈管系内に、あるいは臓器または組織付近の血管外に局所的に投与することができる。「投与」は、対象に化合物または組成物を直接投与すること、対象に化合物または組成物を投与するよう第三者に指示すること、（例えば、自己投与のために）対象に化合物または組成物を処方するまたは提案すること、自己投与および必要に応じて、対象に利用可能な化合物または組成物を作製する他の手段を包含することが理解されよう。

【0236】

注射での使用（例えば、静脈内投与）またはポンプもしくはカテーテルによる使用に適した医薬組成物は通常、無菌注射用液剤または無菌注射用分散剤の即時調製のための無菌水溶液（水溶性の場合）または分散液と無菌粉末とを含む。無菌溶液は、必要量の化合物をしかるべき溶媒に組み込み、任意選択で、フィルターによる滅菌後に１つの成分または成分の組合せ、例えば、酢酸塩、クエン酸、乳酸塩またはリン酸塩などの緩衝剤；張性を調節する塩化ナトリウムまたはブドウ糖などの物質；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸、グルタチオンまたは亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤；およびその他の適切な成分などを必要に応じて一緒に組み込むことにより調製することができる。当業者には、医薬組成物中に含まれ得る生理的に許容される化合物が多数認識されよう。その他の有用な化合物としては、例えば、グルコース、スクロース、ラクトースなどの炭水化物；デキストラン；グリシンなどのアミノ酸；マンニトールなどのポリオールが挙げられる。上に挙げた化合物は、例えば、粉末中で、および／または製造もしくは保管の工程に凍結乾燥が含まれる場合に、例えば増量剤および／または安定化剤として働き得る。Ｔｗｅｅｎ−８０、プルロニック−Ｆ１０８／Ｆ６８、デオキシコール酸、ホスファチジルコリンなどの界面活性剤（１つまたは複数）を組成物中に含ませて、例えば、溶解性を増大させる、あるいは疎水性薬物を送達するマイクロエマルション剤を得ることができる。必要に応じて、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基によりｐＨを調整することができる。非経口製剤は、アンプル、使い捨てのシリンジもしくは注入バッグまたはガラス製もしくはプラスチック製の複数回用量バイアルに封入することができる。注射用の液剤は無菌で、毒素を許容される程度に含まないことが好ましい。

【0237】

分散液剤は一般に、基礎となる分散媒と、上に挙げた他の成分のうち適切なものとを含有する無菌溶媒に、活性化合物を組み込むことにより調製される。無菌注射用液剤の調製のための無菌粉末の場合、調製方法は、有効成分と、例えば予め滅菌ろ過されたその溶液に由来する、任意の他の所望の成分との粉末が得られる、真空乾燥および凍結乾燥を含み得る。

【0238】

特定の実施形態では、経口投与を用い得る。一般に経口組成物は不活性希釈剤または食用担体を含む。経口治療投与の目的には、活性化合物を賦形剤と組み合わせて錠剤、トローチ剤またはカプセル剤、例えばゼラチンカプセル剤の形態で使用し得る。組成物の一部として、薬学的に適合する結合剤および／または補助剤が含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、次に挙げるいずれかの成分またはこれとほぼ同じ性質の化合物を含有し得る：微結晶性セルロース、トラガントゴムもしくはゼラチンなどの結合剤；デンプンもしくはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌもしくはコーンスターチなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムもしくはＳｔｅｒｏｔｅなどの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの滑剤；スクロースもしくはサッカリンなどの甘味剤；ペパーミント、サリチル酸メチルもしくはオレンジ香味料などのまたは香味剤。ほかにも液体組成物を経口投与することができる。経口送達用の製剤に消化管内での安定性を向上させる物質および／または吸収を促進する物質を組み込んでもよい。

【0239】

吸入による投与では、適切な噴射剤、例えば二酸化炭素などのガスを含む加圧容器またはディスペンサによるエアロゾルスプレーの形態で、コンプスタチン類似体を送達し得る。用量が計量される吸入器または噴霧器を使用し得る。エアロゾルは、液体粒子または乾燥エアロゾル（例えば、乾燥粉末、大粒径の多孔性粒子など）を含み得る。

【0240】

局所適用では、コンプスタチン類似体を、１種類以上の担体に懸濁または溶解させた有効成分を含有する適切な軟膏に製剤化し得る。局所投与用の担体としては、特に限定されないが、鉱油、液体ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ロウおよび水が挙げられる。あるいは、薬学的に許容される組成物を、１種類以上の薬学的に許容される担体に懸濁または溶解させたコンプスタチン類似体を含有する適切なローションまたはクリームとして製剤化してもよい。適切な担体としては、特に限定されないが、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水が挙げられる。

【0241】

全身投与はほかにも、経粘膜的手段または経皮的手段によるものであってもよい。経粘膜投与または経皮投与では、バリアを通過させるのに適した浸透剤を製剤に使用し得る。このような浸透剤は一般に、当該技術分野で公知であり、例えば経粘膜的投与用に界面活性剤、胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体が挙げられる。例えば、鼻噴霧剤または坐剤の使用により経粘膜投与を実施することができる。経皮投与では、活性化合物を通常、一般に当該技術分野で公知のように軟膏剤、塗布剤、ゲル剤またはクリーム剤に製剤化する。

【0242】

このほか、化合物を直腸送達用の坐剤（例えば、カカオ脂およびその他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤を用いたもの）または停留浣腸の形態に調製してもよい。

【0243】

本発明の特定の実施形態では、例えばインプラントおよびマイクロカプセル送達システムを含めた徐放製剤などのように、体内からの迅速な除去から化合物を保護する担体とともにコンプスタチン類似体またはその他の活性化合物を調製する。例えば、コンプスタチン類似体を微粒子製剤またはナノ粒子製剤中に組み込むか、あるいは微粒子製剤またはナノ粒子製剤中に封入し得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリエーテル、ポリ乳酸、ＰＬＧＡなどの生分解性生体適合性ポリマーを使用することができる。リポソームまたはその他の脂質ベースの粒子を薬学的に許容される担体として使用することができる。ここに挙げたものは当業者に公知の方法、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号および／または同明細書中に挙げられている他の参考文献に記載されている方法に従って調製することができる。コンプスタチン類似体を含有するデポ製剤を用いてもよい。コンプスタチン類似体は、治療濃度が化合物を静脈内投与した場合よりも長時間得られるように、デポ剤から徐々に放出される。当業者は、徐放製剤、インプラントなどの調製に選択される材料および方法が、化合物の活性を保持するものであるべきであることを理解するであろう。

【0244】

コンプスタチン類似体および／または追加の活性物質（１つまたは複数）が薬学的に許容される塩として提供され得ることが理解されよう。薬学的に許容される塩としては、薬学的に許容される無機および有機の酸および塩基から得られるものが挙げられる。適切な酸性塩の例としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、グリコール酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩（ｐａｌｍｏａｔｅ）、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩およびウンデカン酸塩が挙げられる。このほか、活性物質の性質によっては必要に応じて、薬学的に許容される塩をナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩などのアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩から調製することができる。

【0245】

本明細書に挙げられている薬学的に許容される担体、化合物および調製方法は例示的なものであり、非限定的なものであることが理解されよう。薬学的に許容される化合物および様々なタイプの医薬組成物の調製方法に関するさらなる記述については、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ．第２１版．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５を参照されたい。

【0246】

医薬組成物を所望の有益な効果を得るのに有効な量で投与することができる。いくつかの実施形態では、有効量とは、次に挙げる利益の１つ以上を得るのに十分な量のことである：

【0247】

本発明の特定の実施形態では、細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を含む医薬組成物を非経口的に投与する。いくつかの実施形態では、組成物を静脈内に投与する。いくつかの実施形態では、組成物を静脈内注射により投与する。いくつかの実施形態では、組成物をＩＶボーラスまたはＩＶ注入として投与する。いくつかの実施形態では、組成物をＩＶ点滴として投与する。いくつかの実施形態では、組成物をＩＶボーラスとして、次いでＩＶ注入またはＩＶ点滴として投与する。いくつかの実施形態では、ＩＶ注入を約１分，２分，３分，４分，５分，１５分，２０分，３０分，６０分または１２０分間にわたり実施する。いくつかの実施形態では、ＩＶ点滴を約６０分以上、例えば、約１時間、２時間、３時間またはそれ以上にわたり実施する。いくつかの実施形態では、計約０．１ｍｇ／（ｋｇ・日）〜約２，０００ｍｇ／（ｋｇ・日）、例えば約１ｍｇ／（ｋｇ・日）〜約１，０００ｍｇ／（ｋｇ・日）、例えば約５ｍｇ／（ｋｇ・日）〜約５００ｍｇ／（ｋｇ・日）の量のコンプスタチン類似体を投与する。いくつかの実施形態では、計約１０ｍｇ／（ｋｇ・日）〜約１００ｍｇ／（ｋｇ・日）、例えば約１０ｍｇ／（ｋｇ・日）〜約５０ｍｇ／（ｋｇ・日）、例えば約１０ｍｇ／（ｋｇ・日）〜約２０ｍｇ／（ｋｇ・日）の量のコンプスタチン類似体を投与する。様々な異なる投与レジメンを用いて所望の合計１日量を投与し得ることが理解されよう。例えば、２４時間に１回の投与または複数回の投与で所望の量のコンプスタチン類似体を投与し得る。例えば、２４時間以内に２用量以上を対象に投与することが可能であり、それぞれの用量を同じ長さの時間にわたり投与することも、異なる長さの時間にわたり投与することも可能である。いくつかの実施形態では、２４時間を超える間隔で細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体を投与する。例えば、様々な実施形態において、平均して隔日、３〜４日毎、毎週、隔週などで投与することができる。いくつかの実施形態では、共有結合した長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体が、数週間または数か月間、再治療を必要とせずに細胞、組織、器官を保護する。例えば、１〜２週間、２〜４週間、４〜６週間、６〜８週間またはそれ以上長い間隔の再治療で対象を維持し得る。いくつかの実施形態では、皮下投与を用いて少なくとも一部の用量を投与する。例えば、いくつかの実施形態では、例えば、約０．２５ｍｌ〜２ｍＬの体積、例えば約１ｍｌの体積で約０．１〜５ｍｇ／（ｋｇ・日）、例えば約０．５〜２ｍｇ／（ｋｇ・日）の投与が企図される。いくつかの実施形態では、濃度は約５０ｍｇ／ｍｌ〜約３００ｍｇ／ｍｌ、例えば、約５０ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌまたは約１００ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌである。いくつかの実施形態では、投与を毎日実施する。いくつかの実施形態では、ほぼ同じ量の化合物を送達するのに筋肉内投与を用いる。これより高い頻度で治療を実施し、かつ／またはこれより高い用量を投与する初期治療段階が存在し得ることが理解されよう。例えば、ＰＮＨまたはａＨＵＳの対象では、対象の多くの割合のＲＢＣを保護するのに複数回の投与が必要となる。こののち、これより低い用量および／または低い頻度の投与を用いて、例えば、新たに形成されたＲＢＣを保護し、かつ／または既存のＲＢＣの保護を補充する。当然のことながら、必要に応じて、ほぼ同じ方法に従って任意の疾患の治療を実施することができる。いくつかの実施形態では、ＩＶ投与を用いて治療を開始したのち、維持療法として皮下投与、筋肉内投与または真皮内投与に切り替える。疾患に応じて、治療を例えば、数か月、数年の間隔で、あるいは無期限に継続してもよい。適切な用量および投与レジメンは、少なくとも部分的にはコンプスタチン類似体（またはその他の活性物質）の効力および半減期によって決まるが、任意選択で、例えば、補体阻害および／または細胞保護の所望の程度などの予め選択された所望の応答が得られるまで用量を漸増させて投与することにより、特定のレシピエントに合わせて調整することができる。必要に応じて、特定の任意の対象に対する具体的な用量レベルを少なくとも部分的には、使用する具体的な化合物の活性、治療する特定の状態、年齢、体重、全般的健康状態、投与経路、排泄速度、任意の薬物の組合せおよび／または対象から得られた１つ以上の試料で測定される補体タンパク質の発現もしくは活性の程度を含めた様々な因子に基づいて選択することができる。

【0248】

本発明は、追加の治療法と併用したコンプスタチン類似体の投与を包含する。このような追加の治療法は、当該技術分野で使用されている、あるいは疾患に罹患している対象の治療に有用であると考えられる任意の薬剤（１つまたは複数）の投与を含み得る。

【0249】

２種類以上の治療法（例えば、化合物または組成物）を互いに「併用して」用いる、あるいは投与する場合、これらの治療法は本発明の様々な実施形態において、重なる時間内に同時に実施しても、逐次的に（例えば、最大２週間の時間をあけて）実施してもよい。これらを同じ経路で投与しても、異なる経路で投与してもよい。いくつかの実施形態では、化合物または組成物を互い４８時間以内に投与する。いくつかの実施形態では、追加の化合物（１つまたは複数）を投与する前または後に、例えば、コンプスタチン類似体と追加の化合物（１つまたは複数）が少なくとも１回は有効なレベルで体内に存在する程度の近い時間でコンプスタチン類似体を投与することができる。いくつかの実施形態では、第二の化合物または組成物が投与される時点で、その前に投与された組成物の９０％以下が代謝されて不活性な代謝産物になっている、あるいは体内から除去されている、例えば排泄されている程度の近い時間で、化合物または組成物を投与する。

【0250】

いくつかの実施形態では、細胞反応性コンプスタチン類似体と追加の化合物（１つまたは複数）をともに含む組成物を投与する。

【実施例】

【0251】

実施例１：実質的な補体阻害活性を保持するペグ化コンプスタチン類似体の開発
配列番号２８のコンプスタチン類似体のアミノ酸配列を有するが、のちにＮＨＳエステルにより活性化されたＰＥＧをＬｙｓ側鎖のアミノ基にコンジュゲートすることを目的に、配列番号２８のＴｈｒ残基のＣ末端側にＡＥＥＡｃ−Ｌｙｓ部分が組み込まれたコンプスタチン類似体。この化合物を標準的な方法を用いて合成した。簡潔に述べれば、各アミノ酸のα−アミノ基がＦｍｏｃで保護されたＦｍｏｃ保護アミノ酸としてアミノ酸（ＡＥＥＡｃを含む）を得た。側鎖官能基も種々のしかるべき保護基でブロックした。Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５，２１４９（１９６３））により記載されている固相法に従って合成を行った。固相上で鎖の組立てを行い、その結果Ｎ末端がアセチル化された。次いで、ペプチドを固相から切断し、同時にＴＦＡおよびアミド化を用いた酸加水分解により脱保護した。次いで、直鎖状のペプチドを酸化し精製した。得られたコンプスタチン類似体はＡｃ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−（１Ｍｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＡＥＥＡｃ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（配列番号５１）で表され、ＣＡ２８−ＡＥＥＡｃ−Ｌｙｓと略記される。簡潔にするため、この略記ではＮ末端アセチル基とＣ末端アミノ基が省略されていることに留意されたい。ＮＨＳエステルにより活性化され、分子量が３０ｋＤおよび４０ｋＤの単官能性、直鎖状のＰＥＧ（ＮＯＦ Ａｍｅｒｉｃａ社、Ｗｈｉｔｅ Ｐｌａｉｎｓ、ＮＹ、カタログ番号ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ（登録商標）ＭＥ−４００ＧＳ）をそれぞれＣＡ２８−ＡＥＥＡｃ−Ｌｙｓのリジン側鎖に結合させ、ＣＡ２８−ＡＥＥＡｃ−Ｌｙｓ−（ＰＥＧ３０ｋ）およびＣＡ２８−ＡＥＥＡｃ−Ｌｙｓ−（ＰＥＧ４０ｋ）で表される長時間作用型コンプスタチン類似体を得、これを精製した。「ＰＥＧ」の語の後ろ、「ｋ」の文字の前に書かれている数字はＰＥＧ部分のキロダルトンでの分子量を表し、「ｋ」はｋＤの略記であることに留意されたい。ＣＡ２８−ＡＥＥＡｃ−Ｌｙｓ−（ＰＥＧ３０ｋ）はＣＡ２８−１とも呼ばれる。ＣＡ２８−ＡＥＥＡｃ−Ｌｙｓ−（ＰＥＧ４０ｋ）はＣＡ２８−２とも呼ばれる。

【0252】

標準的な補体阻害アッセイを用いて、古典経路を介した補体活性化に対する合成された化合物の効果を測定することにより、化合物の阻害活性を評価した。このプロトコルは、ＥＬＩＳＡフォーマットでＣ３ｂ沈着を測定するものである。この方法を用いてモニターされるＣ３ｂ沈着は、古典経路により活性化された補体から生じるものである。簡潔に述べれば、９６ウェルプレートをＢＳＡでコーティングする。ヒト血漿、ニワトリオボアルブミン（ＯＶＡ）、ポリクローナル抗ＯＶＡ抗体および被験化合物（「薬物」と呼ぶ）を加えてインキュベートした後、抗ヒトＣ３ ＨＲＰコンジュゲート抗体を加えた。さらにインキュベートした後、基質を加え、シグナルを検出した。プロトコルの詳細を以下に示す。

【0253】

古典的補体阻害アッセイのプロトコル
材料：
・９６ウェルプレート（ポリスチレンプレート、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、９２０５）
・ニワトリＯＶＡ（Ｓｉｇｍａ社、Ａ５５０３−５Ｇ）
・ウサギ抗ニワトリＯＶＡ（Ａｂｃａｍ社、ａｂ１２２１）
・ブロッキング緩衝液（Ｓｔａｒｔｉｎｇｂｌｏｃｋ緩衝液、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、３７５３８）
・ベロナール緩衝液（５倍濃度、Ｌｏｎｚａ社、１２−６２４Ｅ）
・ヒト血漿（レピルジンを用いて最終濃度５０μｇ／ｍｌで採取）
・ヤギ抗ヒトＣ３ ＨＲＰコンジュゲートＡｂ（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社、５５２３７）
・Ｔｗｅｅｎ−２０洗浄緩衝液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳ緩衝液）
・ＴＭＢ（ペルオキシダーゼ基質、ＢＤ社、５５５２１４）−ＢＤ社製５１−２６０７ＫＣと５１−２６０６ＫＣの１：１混合物。
・１Ｍ Ｈ_２ＳＯ_４

プロトコル：
１．１００μｌ／ウェルの１％ニワトリＯＶＡ（ＰＢＳ中）を加える。
２．４℃で一晩または室温で１〜２時間、インキュベートする。
３．プレートを振盪しタッピングすることにより除去を行う。
４．ブロッキング緩衝液２００μｌを加えてブロッキングを行う。
５．室温で１時間インキュベートする。
６．プレートを振盪しタッピングすることにより除去を行う。
７．ポリクローナル抗ニワトリＯＶＡをブロッキング緩衝液で１：１０００に希釈した溶液１００μｌを加える。
８．室温で１時間インキュベートする。
９．洗浄緩衝液で２回洗浄する。
１０．ウェル番号２〜１２にＶＢ^＋＋５０μｌを加える。
１１．ウェル１に薬物の開始希釈液（ＶＢ^＋＋で２倍希釈）１００μｌを加える。
１２．薬物をウェル１〜１０まで次のように連続希釈（１：２）する：
ａ．出発点となるウェルから溶液５０μｌを取り出す。
ｂ．これを次のウェルに加える。
ｃ．ピペッティングを数回行ってかき混ぜる。
ｄ．以上の操作をウェル番号１０まで繰り返す。
注：ウェル番号１０から５０μｌを取り出して捨てること。
１３．ウェル１〜１１に血漿の２倍希釈液（元の血漿の１：３７．５希釈）５０μｌを加える。
１４．１時間インキュベートする。
１５．洗浄緩衝液で洗浄する。
１６．抗Ｃ３−ＨＲＰ Ａｂをブロッキング緩衝液で１／１０００に希釈した溶液１００μｌを加える。
１７．１時間インキュベートする。
１８．洗浄緩衝液で洗浄する。
１９．全ウェルにＴＭＢを１００μｌ加える。
２０．暗所で５〜１０分間インキュベートする。
２１．１Ｍ Ｈ_２ＳＯ_４を５０μｌ加える。
２２．４５０ｎｍでプレートを読み取る。

ＶＢ^＋＋
調合：

ストック溶液：

Ｖｅｒｏｎａｌ緩衝液（５倍）

Ｍｇ−Ｃｌ２（２００倍）

ＣａＣｌ_２（５００倍）

作業緩衝液５０ｍｌの調製：
・ＮａＣｌを２１０ｍｇ計量する
・５倍ＶＢを１０ｍｌ加える。
・ＣａＣｌ_２（５００倍）を１００μｌ加える。
・ＭｇＣｌ（２００倍）を２５０μｌ加える。
・Ｈ_２Ｏで体積を５０ｍｌに調整する。
・ｐＨを７．４に調整する。

【0254】

ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５ソフトウェアを用いてデータを分析した。各実験から得られたデータセットを、化合物を加えなかったウェルに対応する１００％活性化対照に対するパーセント活性化に正規化した。薬物濃度の値（Ｘの値）を対数に変換し、パーセント活性化（Ｐａ）（Ｙの値）を式Ｐｉ＝１００−Ｐａ（Ｙｉ＝１００−Ｙａ）を用いてパーセント阻害（Ｐｉ）に変換した。パーセント阻害を薬物濃度に対してプロットし、得られたデータセットをシグモイド曲線の用量反応関数［Ｙ＝最低値＋（最高値−最低値）／（１＋１０（（ＬｏｇＥＣ−Ｘ）））］に適合させた。適合パラメータからＩＣ_５０値を求めた。

【0255】

図１に結果を示し、表２（実施例２）にＩＣ_５０値を示す。図のように、ＣＡ２８−１およびＣＡ２８−２はモル基準でＣＡ２８の約３０％の活性を示した。

【0256】

実施例２：増加したモル活性を示す長時間作用型コンプスタチン類似体の開発
アームを８本有する分子量４０ｋＤのＮＨＳエステル活性化ＰＥＧ（ＮＯＦ Ａｍｅｒｉｃａ社、Ｗｈｉｔｅ Ｐｌａｉｎｓ、ＮＹ、カタログ番号ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ（登録商標）ＨＧＥＯ−４００ＧＳ；化学式：ヘキサグリセロールオクタ（スクシンイミジルオキシグルタリル）ポリオキシエチレン）をＣＡ２８−ＡＥＥＡｃ−Ｌｙｓのリジン側鎖に結合させて、（ＣＡ２８−ＡＥＥＡｃ）_８−ＰＥＧ４０ｋで表され、ＣＡ２８−３とも呼ばれる長時間作用型コンプスタチン類似体を得た。

【0257】

実施例１に記載のアッセイを用いて、ＣＡ２８−３の補体阻害活性を試験した。図１に結果をプロットし、表２にＩＣ５０値を記載するが、ともにＣＡ２８濃度の関数として表したものである。ＣＡ２８濃度は、２８３ｎｍにおけるＣＡ２８の吸光係数（１０２０８．１４Ｌ・ｍｏｌ−１・ｃｍ−１）を用いて計算したものである。他の分析（ＵＶ吸収対物質の質量および元素ＣＨＮ％分析）に基づき、１分子のＣＡ２８−３当たり７．５個のＣＡ２８部分が存在すると結論付けられた。したがって、モル基準でのＣＡ２８−３の活性は図１および表２に示される活性の７．５倍になる。したがって、表２のＩＣ５０値は、モル基準でのＣＡ２８−３の実際のＩＣ５０の７．５倍になる。モル基準でのＣＡ２８−３のＩＣ５０は約０．２６と計算される（親化合物ＣＡ２８より低い値である）。図２は、ＣＡ２８ならびに長時間作用型コンプスタチン類似体ＣＡ２８−２およびＣＡ２８−３のパーセント補体活性化阻害活性をＣＡ２８−３濃度（μＭ）の関数として示したものである、すなわち、ＣＡ２８−３の活性を補正して、この化合物が７．５個のＣＡ２８部分を含むことを説明したものである。モル基準では、ＣＡ２８−３の補体阻害活性はＣＡ２８を上回っている。

表２

【0258】

各種緩衝物質および／または賦形剤を含む水またはこれを含まない水へのＣＡ２８−１、ＣＤ２８−２およびＣＡ２８−３の溶解度が親化合物ＣＡ２８を上回ることが観察された。

【0259】

実施例３：著しく増大した血漿中半減期およびＣｍａｘを示す長時間作用型コンプスタチン類似体
この実施例は、カニクイザルに投与したときの長時間作用型コンプスタチン類似体ＣＡ２８−２およびＣＡ２８−３の薬物動態パラメータの測定について記載するものである。

【0260】

投与および試料採取
時間０の時点で、雌カニクイザル（１群当たり３匹、２〜５歳、２．９〜３．５ｋｇ）に静脈内注射によりＣＡ２８−２およびＣＡ２８−３を投与した。化合物を濃度２５ｍｇ／ｍｌの５％ブドウ糖水溶液として５０ｍｇ／ｋｇで投与した。投与前、投与の５分後、１５分後、３０分後、１時間後、４時間後、８時間後、２４時間後、４８時間後、９６時間（４日）後および１９２時間（８日）後の各時点で、大腿静脈から血液試料（それぞれ約１ｍＬ）を採取した。直接静脈穿刺により試料を採取し、抗凝固剤を含む赤い栓の血清チューブに入れて、室温で少なくとも３０分間保管した。血液試料を温度４℃、３０００×ｇで５分間、遠心分離した。処理中は試料を冷却状態で維持した。遠心分離後、血清試料を収集し、試料チューブに入れた。−６０℃〜−８０℃を維持するよう設定された冷凍庫で試料を保管した。試験期間中、全個体とも正常な活動を示した。試験期間中、いずれの個体にも化合物に関連する異常は認められなかった。

【0261】

試料分析
上記のように得られた血漿試料を、次のような方法に従ってＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析し、化合物の濃度を決定した：試料５０μＬを社内の標準物質（ＣＡ２８−ＡＥＥＡｃ−Ａｒｇ）と混合し、次いで、ＨＯＡｃでｐＨ３．５にした１Ｍ ＮＨ_４ＯＡｃを１００μＬ加えて混合した。次いで、アセトニトリル２５０μＬを加えて混合した。試料を遠心分離し、上清を別のチューブに入れて乾燥させた。試料を元に戻し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳシステムに注入した。移動相Ａは０．１％ＦＡを含む５ｍＭ ＮＨ_４ＯＡｃ、移動相Ｂは０．１％ＦＡを含む９０：１０（ＡＣＮ：５０ｍＭ ＮＨ_４ＯＡｃ）とした。ＬＣカラムはＩｎｔｒａｄａ ＷＰ−ＲＰ ２×１５０ｍｍ、３μであった。陽イオンモードで作動させたＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社のＡＰＩ−４０００三連四重極質量分析計により定量を行った。質量分析計のイオン源でインソース衝突誘起解離（ＣＩＤ）を用いて化合物を断片化し、Ｑ１でｍ／ｚ１４４イオンを質量選択して断片化し、Ｑ３でｍ／ｚ７７イオンを質量選択して検出した。Ａｎａｌｙｓｔ１．４．２ソフトウェアを用いてデータを処理した。

【0262】

結果
各時点におけるＣＡ２８−２およびＣＡ２８−３の血清中濃度（μｇ／ｍｌ）を下の表３に示す。示される化合物を投与したサル３個体それぞれのデータが示されている。平均値および標準偏差は容易に計算される。個体間に際立った一致がみられた。ＣＡ２８は、カニクイザルにＣＡ２８を静脈内投与した以前の試験で得られた過去のデータである。その試験では、ＨＰＬＣを用いて試料中のＣＡ２８を検出した。

表３

【0263】

各化合物の結果の平均値を求め、図３にプロットした。ＣＡ２８−２、ＣＡ２８−３ともに、ＣＡ２８に比べて半減期およびＣｍａｘの著明な増加がみられた。ＣＡ２８−２およびＣＡ２８−３の終末相半減期はともに４〜４．５日前後であった。ここに挙げたデータを踏まえれば、ヒト対象では、約１〜２週間の投与間隔で静脈内投与すれば化合物のレベルが維持され、補体活性化が効果的に阻害されることが予想されるが、これよりも短い、あるいは長い投与間隔を用いてもよい。

【0264】

実施例４：クリアランス低減部分としてＨＳＡを含む長時間作用型コンプスタチン類似体
２−イミノチオランを用いてヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の側鎖リジンをチオールに変換し、反応性官能基としてマレイミドを含むコンプスタチン類似体：Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ^＊−Ｖａｌ−Ｔｒｐ（１−Ｍｅ）−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ^＊−Ｔｈｒ−ＡＥＥＡｃ−Ｌｙｓ−（Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_５−Ｍａｌ）−ＮＨ_２（配列番号６８）と反応させた。得られた長時間作用型コンプスタチン類似体（ＣＡ２８−４）について、補体阻害活性（図４）を実施例１に記載されている通りにｉｎ ｖｉｔｒｏで試験し、薬物動態特性を実施例３に記載されている通りにｉｎ ｖｉｖｏで試験した。カニクイザルに投与したときのＣＡ２８−４の薬物動態パラメータを、上の実施形態に記載されている通りに測定した。結果を図５に示す（ＣＡ２８、ＣＡ２８−１、ＣＡ２８−２およびＣＡ２８−３の結果も一緒に示す）。ＣＡ２８−４のＰＫデータを表４に示す。

表４

【0265】

実施例５：ＰＮＨ患者における長時間作用型コンプスタチン類似体
ＰＮＨと診断された被験者のコホートを４つのグループに分ける。グループ１とグループ２の被験者には用量５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、時間間隔１〜２週間で、それぞれＣＡ２８−２またはＣＡ２８−３の静脈内投与による治療を実施する。任意選択で、これより頻度が高くなる時間間隔で治療を開始したのち、維持療法で頻度を減らす。グループ３の被験者には、推奨される投与レジメンに従ってエクリズマブによる治療を実施する。血管内溶血（ＬＤＨ測定および／またはＲＢＣの（５１）Ｃｒ標識に基づくもの）、網状赤血球増加症（貧血の指標）、ヘマトクリット値、血中ヘモグロビン濃度、赤血球のオプソニン化（フローサイトメトリーを用いて検出することができる、Ｃ３ｂなどのＣ３活性化産物の赤血球への沈着）、ＰＮＨの症状、輸血の必要性、血栓塞栓症、生活の質および生存期間を経時的にモニターする。得られた結果について、群間での比較およびエクリズマブの臨床試験で得られた対照ＰＮＨ患者の過去のデータとの比較を実施する。グループ４の被験者と比較してＣＡ２８−２（グループ１）またはＣＡ２８−３（グループ２）を投与した被験者にみられる持続性貧血の改善（例えば、網状赤血球増加症の軽減、溶血の徴候の軽減、ヘマトクリット値の増加、ヘモグロビンの増加を根拠とする）、生活の質の改善、ＰＮＨ症状の軽減、輸血の必要性の減少、血栓塞栓症の軽減、生活の質の向上および／または生存期間の増大を有効性の指標とする。

【0266】

実施例６：ＰＮＨ患者における長時間作用型コンプスタチン類似体
エクリズマブによる治療を実施したが、依然として輸血に依存し、かつ／またはがカットオフ値（９．０ｇ／ｄＬなど）より低いヘモグロビン値が継続する患者を被験者に変更して、実施例４を再び実施する。得られた結果を群間で比較する。

【0267】

実施例７：ａＨＵＳ患者における長時間作用型コンプスタチン類似体
ａＨＵＳと診断された被験者のコホートを４つのグループに分ける。グループ１とグループ２の被験者には用量５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、時間間隔１〜２週間で、それぞれＣＡ２８−２またはＣＡ２８−３の静脈内投与による治療を実施する。任意選択で、これより頻度が高くなる時間間隔で治療を開始したのち、維持療法で頻度を減らす。グループ３の被験者には、推奨される投与レジメンに従ってエクリズマブによる治療を実施する。血管内溶血（ＬＤＨ測定に基づくもの）、赤血球のオプソニン化（Ｃ３ｂなどのＣ３活性化産物の赤血球への沈着）、ａＨＵＳの症状、腎機能、血漿交換または透析の必要性、生活の質および生存期間を経時的にモニターする。得られた結果について、群間での比較およびエクリズマブの臨床試験で得られた対照ａＨＵＳ患者の過去のデータとの比較を実施する。グループ４の被験者と比較してＣＡ２８−２またはＣＡ２８−３を投与した被験者にみられる溶血の徴候の軽減、生活の質の改善、ａＨＵＳ症状の軽減、血漿交換または透析の必要性の減少、生活の質の向上および／または生存期間の増大を有効性の指標とする。

【0268】

実施例８：ほかの長時間作用型コンプスタチン類似体を用いて実施例５〜７を再び実施する。

【0269】

実施例９：細胞反応性コンプスタチン類似体を用いて実施例５〜７を再び実施する。

【0270】

当業者は日常的な実験のみを用いて、本明細書に記載されている本発明の具体的な実施形態の均等物を多数認識する、あるいは確認することが可能であろう。本発明の範囲は上記「説明」に限定されることが意図されるものではなく、添付の「特許請求の範囲」に記載されている通りのものである。本発明は、任意の具体的な実施例または任意の具体的な実施形態で得られる特定の結果に依存するものでは決してないことが理解されよう。別途明示されない限り、あるいは文脈から特に明らかでない限り、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」などの冠詞は１つを意味することも２つ以上を意味することもある。別途明示されない限り、あるいは文脈から特に明らかでない限り、あるグループの１つ以上の要素間に「または（もしくは、あるいは）」を含む請求項または記載は、そのグループの１つ、２つ以上またはすべての要素が所与の製造物または工程に存在する、用いられる、あるいは関連する場合に満たされるものする。本発明は、所与の製造物または工程にグループのちょうど１つの要素が存在する、用いられる、あるいは関連する実施形態を包含する。例えば、特に限定されないが、請求項または記載が、特定の位置にある残基が特定のグループのアミノ酸またはアミノ酸類似体から選択され得ることを表している場合、本発明は、その位置にある残基が、挙げられているアミノ酸またはアミノ酸類似体のいずれかである個々の実施形態を包含することが理解される。また本発明は、所与の製造物または工程にグループの２つ以上またはすべての要素が存在する、用いられる、あるいは関連する実施形態も包含する。さらに、本発明は、記載されている請求項の１つ以上または上の記述による１つ以上の制限、構成要素、条項、記述用語などが別の請求項に導入されているあらゆる変更、組合せおよび置換を包含することを理解するべきである。例えば、別の請求項に従属する任意の請求項が、同じ基本請求項に従属する他のすべての請求項に記載されている１つ以上の構成要素、制限、条項または記述用語が含まれるよう改変され得る。さらに、請求項に組成物が引用されている場合、特に明示されない限り、あるいは矛盾または不一致が生じることが当業者に明らかでない限り、本明細書に開示されているいずれかの方法に従って組成物を投与する方法および本明細書に開示されているいずれかの目的で組成物を使用する方法が本発明の範囲内にあること、また本明細書に開示されているいずれかの製造方法に従って組成物を製造する方法が本発明の範囲内にあることを理解するべきである。対象を治療する方法は、そのような治療を必要とする対象（例えば、疾患に罹患したことがある対象または疾患に罹患するリスクの高い対象）を準備する段階、対象が疾患に罹患していると診断する段階および／または細胞反応性コンプスタチン類似体による治療を実施する対象を選択する段階を含み得る。

【0271】

構成要素がリストで示されている場合、構成要素の各サブグループも開示されることになり、また任意の構成要素（１つまたは複数）がそのグループから除去され得ることを理解するべきである。簡潔にするため、本明細書にはここに挙げた実施形態のうち一部のみが具体的に引用されているが、本発明はここに挙げた実施形態をすべて包含するものである。一般に、本発明または本発明の態様が特定の構成要素、特徴などを含むものとして記載されている場合、本発明の特定の実施形態または本発明の特定の態様は、そのような構成要素、特徴などからなる、あるいは実質的にそれよりなるものであることも理解するべきである。本明細書の様々な表題の下で様々な疾患、障害および状態について述べられているが、これは便宜的なものであって、本発明を限定することを意図するものではない。

【0272】

範囲が記載されている場合、その終点も含まれる。さらに、特に明示されない限り、あるいは文脈および当業者の理解から特に明らかでない限り、範囲として表されている値が、文脈上明らかに他の意味に解すべき場合を除き、本発明の様々な実施形態で記載されている範囲内にある任意の具体的な値または部分範囲が、その範囲の下限の１０分の１の単位まで想定され得るものであることを理解するべきである。本発明の任意の特定の実施形態、態様、構成要素、特徴などは、本明細書に明確に記載されていない場合であっても、請求項から明確に除外され得る。例えば、任意のコンプスタチン類似体、官能基、結合部分、疾患または適応が明確に除外され得る。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]