【図1】図１は、野生型第ＶＩＩＩ因子に対する活性倍数として示された、種々の第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドおよび変異体のａＰＴＴ比活性を示す。記号は以下の意味を有する：「Ａ」は、該ポリペプチドがトロンビン切断部位内にＩ３７１ＰおよびＶ３７４Ｆのアミノ酸置換を有していたことを示す；「Ｂ」は、該ポリペプチドが活性化部位内にＶ５５９Ｌ、Ｒ５６２ＷおよびＱ５６５Ｅのアミノ酸置換を有していたことを示す；「Ｃ」は、該ポリペプチドがＤ５１９ＶおよびＥ６６５Ｖのアミノ酸置換を有していたことを示す。全てのアミノ酸位置の表示は野生型（ｗｔ）ＦＶＩＩＩ（配列番号１）における位置番号に基づくものである。

【図2】図２は、発色性アッセイにより測定された場合の、野生型第ＶＩＩＩ因子に対する活性倍数として示された、種々の第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドおよび変異体の比活性を示す。記号は図１の場合と同じ意味を有する。

【図3】図３は、ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ（配列番号３）、Ｄ５１９ＶＥ６６５Ｖ−ＦＶＩＩＩ（配列番号５）およびＶａｒ９７（アミノ酸置換Ｉ３７１Ｐ、Ｖ３７４Ｆ、Ｖ５５９Ｌ、Ｒ５６２ＷおよびＱ５６５Ｅを有するＤ５１９ＶＥ６６５Ｖ−ＦＶＩＩＩの変異体）（配列番号５３）に関するトロンビン産生プロファイルを示す。

【図4】図４は、一定量のピークトロンビンを惹起するのに必要な種々の第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドおよび変異体の濃度を示すデータを示す。調べた第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドはＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ（配列番号３）、Ｄ５１９ＶＥ６６５Ｖ−ＦＶＩＩＩ（配列番号５）（Ｄ５１９ＶおよびＥ６６５Ｖのアミノ酸置換を有する修飾ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ）およびＶａｒ９７（アミノ酸置換Ｉ３７１Ｐ、Ｖ３７４Ｆ、Ｖ５５９Ｌ、Ｒ５６２ＷおよびＱ５６５Ｅを有するＤ５１９ＶＥ６６５Ｖ−ＦＶＩＩＩの変異体）（配列番号５３）である。

【図5】図５はＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ（配列番号３）、Ｄ５１９ＶＥ６６５Ｖ−ＦＶＩＩＩ（配列番号５）およびＶａｒ９７（追加的アミノ酸置換Ｉ３７１Ｐ、Ｖ３７４Ｆ、Ｖ５５９Ｌ、Ｒ５６２ＷおよびＱ５６５Ｅを有するＤ５１９ＶＥ６６５Ｖ−ＦＶＩＩＩの変異体）（配列番号５３）に関する血餅形成速度の動力学的プロファイルを示す。血餅形成の最大速度を達成するのに必要な時間において、ＢＤＤおよびＤ５１９ＶＥ６６５Ｖより約１０倍大きなＶａｒ９７の活性が明らかである。

【図6】図６はＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ（配列番号３）、Ｄ５１９ＶＥ６６５Ｖ−ＦＶＩＩＩ（配列番号５）およびＶａｒ９７（追加的アミノ酸置換Ｉ３７１Ｐ、Ｖ３７４Ｆ、Ｖ５５９Ｌ、Ｒ５６２ＷおよびＱ５６５Ｅを有するＤ５１９ＶＥ６６５Ｖ−ＦＶＩＩＩの変異体）（配列番号５３）に関する結合アフィニティの結果を示す。

【図7】図７は、正常血漿、ＦＶＩＩＩ欠乏血漿またはＦＶＩＩＩ変異体ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ、Ｄ５１９ＶＥ６６５Ｖ−ＦＶＩＩＩ、Ｖａｒ９７もしくはＶａｒ９７−Ｒ３３６Ｉの１つの５０ｍＵ／ｍＬ（５％）を含有するＦＶＩＩＩ欠乏血漿を使用した場合の血餅形成に関する濁度プロファイル（吸光度単位対時間）を示す。

【図8】図８は、ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ（灰色の円）またはＶａｒ９７（黒色の三角形）の、質量（左パネル）または単位（右パネル）により測定された種々の投与量の投与の後の血管損傷後のＨｅｍＡマウスの２４時間生存率（％）のプロットを示す。

【図9】図９は過剰なＦＩＸａの存在下（＋）または非存在下（−）のＦＸａｓｅ反応からの変異体第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルのイメージを示す。調べたＦＶＩＩＩポリペプチドはＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ（レーン２および３）、Ｄ５１９ＶＥ６６５Ｖ−ＦＶＩＩＩ（レーン４および５）、Ｖａｒ９７（レーン６および７）またはＶａｒ９７−Ｒ３３６Ｉ（レーン８および９）であり、質量マーカーがレーン１に示されている。

【図10】図１０は、ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ（配列番号３）、Ｄ５１９ＶＥ６６５Ｖ−ＦＶＩＩＩ（配列番号５）、Ｖａｒ９７（配列番号５３）およびＶａｒ９７−Ｒ３３６Ｉ（配列番号５５）に関するトロンビン産生プロファイルを示す。

【図11】図１１は、一定量のピークトロンビンを惹起するのに必要な種々の第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドおよび変異体の濃度を示すデータを示す。調べた第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドはＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ（配列番号３）、Ｄ５１９ＶＥ６６５Ｖ−ＦＶＩＩＩ（配列番号５）、Ｖａｒ９７（配列番号５３）およびＶａｒ９７−Ｒ３３６Ｉ（配列番号５５）である。