特許 6533813 脂質ベースのナノ粒子

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6533813

(24)【登録日】2019年5月31日

(45)【発行日】2019年6月19日

(54)【発明の名称】脂質ベースのナノ粒子

(51)【国際特許分類】

   A61K 49/00 20060101AFI20190610BHJP

   A61K 47/60 20170101ALI20190610BHJP

   A61K 49/12 20060101ALN20190610BHJP

   A61K 49/18 20060101ALN20190610BHJP

   A61K 9/127 20060101ALN20190610BHJP

   A61K 47/69 20170101ALN20190610BHJP

【ＦＩ】

   A61K49/00

   A61K47/60

   !A61K49/12

   !A61K49/18

   !A61K9/127

   !A61K47/69

【請求項の数】9

【全頁数】29

(21)【出願番号】特願2017-176383(P2017-176383)

(22)【出願日】2017年9月14日

(62)【分割の表示】特願2014-504057(P2014-504057)の分割

【原出願日】2012年4月6日

(65)【公開番号】特開2018-35167(P2018-35167A)

(43)【公開日】2018年3月8日

【審査請求日】2017年9月26日

(31)【優先権主張番号】61/472,605

(32)【優先日】2011年4月6日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】506140479

【氏名又は名称】ボード・オブ・リージェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・テキサス・システム

(73)【特許権者】

【識別番号】513245738

【氏名又は名称】アルゼカ バイオサイエンシズ，エルエルシー

(73)【特許権者】

【識別番号】314008161

【氏名又は名称】ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ ヒューストン システム

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】アナプラガダ，アナント

(72)【発明者】

【氏名】エリックセン，ジェイソン，エル．

(72)【発明者】

【氏名】タニファム，エリック，エー．

(72)【発明者】

【氏名】ダスグプタ，インドラニ

(72)【発明者】

【氏名】クック，スティーブン，シー．

【審査官】 茅根 文子

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１４−５２３８５４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００７−５３３７３７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第０２／０２８４４１（ＷＯ，Ａ２）

【文献】 Journal of Neuropathology and Experimental Neurology，２００２年，Vol.61, No.9，p.797−805

【文献】 J. Photochem. Photobiol. A: Chemistry，１９９６年，Vol. 101，pp. 245-250

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ４９／００−５１／１２

Ａ６１Ｋ ４７／６０

Ａ６１Ｋ ９／１２７

Ａ６１Ｋ ４７／６９

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＷＰＩＤＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（１）１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）及び１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）のいずれか１つを用いて誘導体化された親水性のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマーと、
（２）式ＶＩＩで示される芳香族化合物との結合体を、含有する組成物であって、

式中、Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１´及びＲ_２´はそれぞれ独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＮＨ_２、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、カルボキシル、スルホニル、カルバモイル又はグリコシルであり、かつａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅはそれぞれ炭素原子である、
組成物。

【請求項2】

ＲがＨ、ＯＨ、メチル又はＯ−アルキルである、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

Ｒ_１及びＲ_１´がそれぞれ独立してＨ又はメチルである、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

Ｒ_２´がＨ、Ｏ−アルキル又はＯＨである、請求項１に記載の組成物。

【請求項5】

Ｒ_１及びＲ_２が各々Ｈである、請求項１に記載の組成物。

【請求項6】

Ｒがメトキシであり、Ｒ_１がＨであり、Ｒ_２がＨであり、且つＲ_２´がＯＨである、請求項１に記載の組成物。

【請求項7】

前記芳香族化合物が式ＶＩＩＡで示される、請求項１に記載の組成物。

【請求項8】

以下式で示される結合体であって、ｎは１０〜１００である結合体を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項9】

以下式で示される結合体であって、ｎは３０〜６０である結合体を含む、請求項１に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１１年４月６日に出願された、米国仮特許出願第６１／４７２，６０５号明細書の利益を主張し、その全体が参照により本明細書中に組み込まれる。

【0002】

連邦政府支援の研究又は開発に関する研究
本発明は、米国国防総省によって授与されたＷ８１ＸＷＨ−０９−２−０１３９の下で、政府の支援でなされた。政府は、本発明の特定の権利を有する。

【背景技術】

【0003】

背景
アルツハイマー病（「ＡＤ」）は、記憶喪失及び他の認知障害によって特徴付けられる、神経変性疾患である。ＡＤは、認知症の最も一般的な形態であり、６５歳以上の８人に１人、８５歳以上の２人に１人へ影響を与える。ＡＤは、米国における第６番目の主要な死因である。５５０万人以上のアメリカ人がＡＤに罹患し、年間推定コストは、２０００億米ドルである。２０５０年までに、ＡＤは、１．１兆米ドル（２０１１ドル中）の年間価格で、２０００万人のアメリカ人へ影響することが予測されている。世界中で、２０１１年の推定数字は、６０００億ドル（米ドル）の関連した費用で、３７００万人以上の患者数であった。

【0004】

ＡＤの識別及び治療への著しい支障は、効果的な診断試験の不足である。現時点では、ＡＤは、一般的に、事後病変組織学的解析によって、決定的にのみ診断される。認知障害を検出するために、生存している患者における診断は、主に精神科の試験に依存している。しかしながら、ＡＤの主要な神経病理学的特徴−細胞外アミロイド−β（「Ａβ」）プラーク沈着及び細胞内の神経原繊維変化−は、臨床症状のずっと前にはっきりと識別可能である。Ａβ沈着もまた、出血性脳卒中の主要な危険因子を表している。

【0005】

従って、診断目的、及び、Ａβプラーク沈着を防止することを目標とした療法の有用性を監視するための、脳内Ａβプラーク沈着のｉｎ ｖｉｖｏイメージングに適した組成物及び方法についての必要性が存在する。現在のアプローチは、侵襲性、Ａβ沈着についての造影剤の特異性の欠如、不適切な解像度、イメージング剤が効果的に血液脳関門（「ＢＢＢ」）を横断できないこと、Ａβ沈着の近傍で不適切に高い炎症誘発性応答を誘導する一部のイメージング剤の傾向、及び、不適切な細胞毒性を含む、無数の欠点の内の一つ以上に悩まされている。従って、脳内Ａβプラーク沈着のｉｎ ｖｉｖｏでのイメージングに適しているが、現在のアプローチの欠点の内の一つ以上に影響を受けない、組成物及び方法についての、更なる必要性が存在する。ＡＤの治療又は、治療若しくは予防を援助するのに適した、組成物及び方法についての、更に別の必要性が存在する。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

【課題を解決するための手段】

【0007】

概要
一実施形態において、式Ｉの化合物又は、薬学的に許容可能なその塩若しくはプロドラッグを提供し：

【化1】

式中、Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１’、Ｒ_２’＝Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＮＨ_２、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、カルボキシル、スルホニル、カルバモイル又はグリコシルである。

【0008】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式Ｉのリガンド結合体を形成するために、式Ｉの芳香族複素環を、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）などの親水性ポリマー、及び、１，２−ジパルミトイルル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（「ＤＰＰＣ」）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（「ＤＳＰＥ」）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（「ＤＳＰＣ」）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（「ＤＰＰＥ」）などの脂質と共役させることができる。一実施形態において、脂質−親水性ポリマー式Ｉリガンド結合体は、リポソーム組成物へ組み込むことができる。

【0009】

一実施形態において、患者におけるアミロイド沈着をイメージングする方法を提供し、前記方法は：
脂質−親水性ポリマー式Ｉリガンド結合体を含む、検出可能な量のリポソーム組成物を患者へ導入することと；
リポソーム組成物が一つ以上のアミロイド沈着に関連付けられるのに十分な時間を与えることと；
一つ以上のアミロイド沈着に関連付けられているリポソーム組成物を検出すること；
とを含む。

【0010】

一実施形態において、式ＩＩの化合物又は、薬学的に許容可能なその塩若しくはプロドラッグを提供し：

【化2】

式中、Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１’、Ｒ_２’＝Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＮＨ_２、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、カルボキシル、スルホニル、カルバモイル又はグリコシルである。

【0011】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＩＩリガンド結合体を形成するために、式ＩＩの芳香族複素環を、ＰＥＧなどの親水性ポリマー及び、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＥなどの脂質と共役させることができる。一実施形態において、リン脂質−親水性ポリマー式ＩＩリガンド結合体を、リポソーム組成物へ組み込むことができる。

【0012】

一実施形態において、患者におけるアミロイド沈着をイメージングする方法を提供し、前記方法は：
脂質−親水性ポリマー−式ＩＩリガンド結合体を含む、検出可能な量のリポソーム組成物を患者へ導入することと；
リポソーム組成物が、一つ以上のアミロイド沈着と関連付けられるのに十分な時間を与えることと；
一つ以上のアミロイド沈着へ関連したリポソーム組成物を検出すること；
とを含む。

【0013】

一実施形態において、式ＩＩＩの化合物又は、薬学的に許容可能なその塩若しくはプロドラッグを提供し：

【化3】

式中、Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１’、Ｒ_２’＝Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＮＨ_２、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、カルボキシル、スルホニル、カルバモイル又はグリコシルである。

【0014】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＩＩＩリガンド結合体を形成するために、式ＩＩＩの芳香族複素環を、ＰＥＧなどの親水性ポリマー及び、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＥなどの脂質と共役させることができる。一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＩＩＩリガンド結合体を、リポソーム組成物へ組み込むことができる。

【0015】

一実施形態において、患者におけるアミロイド沈着をイメージングするための方法を提供し、前記方法は：
脂質−親水性ポリマー−式ＩＩＩリガンド結合体を含む、検出可能な量のリポソーム組成物を患者へ導入することと；
リポソーム組成物が、一つ以上のアミロイド沈着と関連付けられるのに十分な時間を与えることと；
一つ以上のアミロイド沈着へ関連したリポソーム組成物を検出すること；
とを含む。

【0016】

一実施形態において、式ＩＶの化合物又は、薬学的に許容可能なその塩若しくはプロドラッグを提供し：

【化4】

式中、Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１’、Ｒ_２’＝Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＮＨ_２、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、カルボキシル、スルホニル、カルバモイル又はグリコシルである。

【0017】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＩＶリガンド結合体を形成するために、式ＩＶの芳香族複素環を、ＰＥＧなどの親水性ポリマー及び、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＥなどの脂質と共役させることができる。一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＩＶリガンド結合体を、リポソーム組成物へ組み込むことができる。

【0018】

一実施形態において、患者におけるアミロイド沈着をイメージングするための方法を提供し、前記方法は：
脂質−親水性ポリマー−式ＩＶリガンド結合体を含む、検出可能な量のリポソーム組成物を患者へ導入することと；
リポソーム組成物が、一つ以上のアミロイド沈着と関連付けられるのに十分な時間を与えることと；
一つ以上のアミロイド沈着へ関連したリポソーム組成物を検出すること；
とを含む。

【0019】

一実施形態において、式Ｖの化合物又は、薬学的に許容可能なその塩若しくはプロドラッグを提供し：

【化5】

式中、Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１’、Ｒ_２’＝Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＮＨ_２、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、カルボキシル、スルホニル、カルバモイル又はグリコシルである。

【0020】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式Ｖリガンド結合体を形成するために、式Ｖの芳香族複素環を、ＰＥＧなどの親水性ポリマー及び、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＥなどの脂質と共役させることができる。一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式Ｖリガンド結合体を、リポソーム組成物へ組み込むことができる。

【0021】

一実施形態において、患者におけるアミロイド沈着をイメージングするための方法を提供し、前記方法は：
脂質−親水性ポリマー−式Ｖリガンド結合体を含む、検出可能な量のリポソーム組成物を患者へ導入することと；
リポソーム組成物が、一つ以上のアミロイド沈着と関連付けられるのに十分な時間を与えることと；
一つ以上のアミロイド沈着へ関連したリポソーム組成物を検出すること；
とを含む。

【0022】

一実施形態において、式ＶＩの化合物又は、薬学的に許容可能なその塩若しくはプロドラッグを提供し：

【化6】

式中、Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１’、Ｒ_２’＝Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＮＨ_２、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、カルボキシル、スルホニル、カルバモイル又はグリコシルである。

【0023】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＶＩリガンド結合体を形成するために、式ＶＩの芳香族複素環を、ＰＥＧなどの親水性ポリマー及び、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＥなどの脂質と共役させることができる。一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＶＩリガンド結合体を、リポソーム組成物へ組み込むことができる。

【0024】

一実施形態において、患者におけるアミロイド沈着をイメージングするための方法を提供し、前記方法は：
脂質−親水性ポリマー−式ＶＩリガンド結合体を含む、検出可能な量のリポソーム組成物を患者へ導入することと；
リポソーム組成物が、一つ以上のアミロイド沈着と関連付けられるのに十分な時間を与えることと；
一つ以上のアミロイド沈着へ関連したリポソーム組成物を検出すること；
とを含む。

【0025】

一実施形態において、式ＶＩＩの化合物又は、薬学的に許容可能なその塩若しくはプロドラッグを提供し：

【化7】

式中、Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１’、Ｒ_２’＝Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＮＨ_２、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、カルボキシル、スルホニル、カルバモイル又はグリコシルであり；式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ＝Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳである。

【0026】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＶＩＩリガンド結合体を形成するために、式ＶＩＩの芳香族複素環を、ＰＥＧなどの親水性ポリマー及び、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＥなどの脂質と共役させることができる。一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＶＩＩリガンド結合体を、リポソーム組成物へ組み込むことができる。

【0027】

一実施形態において、患者におけるアミロイド沈着をイメージングするための方法を提供し、前記方法は：
脂質−親水性ポリマー−式ＶＩＩリガンド結合体を含む、検出可能な量のリポソーム組成物を患者へ導入することと；
リポソーム組成物が、一つ以上のアミロイド沈着と関連付けられるのに十分な時間を与えることと；
一つ以上のアミロイド沈着へ関連したリポソーム組成物を検出すること；
とを含む。

【0028】

一実施形態において、リポソーム組成物を提供し、前記リポソーム組成物は：
リン脂質；
コレステロール、又は、別のステロール若しくは脂肪酸などの別の安定化賦形剤；
非放射性ガドリニウム含有コントラスト強調剤；
ポリマーで誘導体化されたリン脂質；及び、
本明細書に記載される脂質−親水性ポリマー−芳香族結合体の形態の結合体などの、式Ｉ〜ＶＩＩの内の任意の一つを有する、芳香族化合物を含む結合体；
を含む。

【0029】

一実施形態において、リポソーム組成物は；
ＤＰＰＣ；
コレステロール；
（ジエチレントリアミンペンタ酢酸）−ビス（ステリアルアミド）、ガドリニウム塩（「Ｇｄ−ＤＴＰＡ−ＢＳＡ」）；
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（「ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−２０００」、ＣＡＳ番号 １４７８６７−６５−０）；及び、
式中ｎ（即ち、エチレングリコール反復単位の数）＝約１０〜約１００又は約３０〜約６０である、ＤＳＰＥ−ＰＥＧｎ−メトキシ−ＸＯ４；
を含む。

【0030】

一実施形態において、患者におけるアミロイド沈着をイメージングする方法を提供し、前記方法は：
リン脂質；コレステロール；又は、別のステロール若しくは脂肪酸などの別の安定化賦形剤；非放射性ガドリニウム含有コントラスト強調剤；ポリマーで誘導体化されたリン脂質；及び、本明細書に記載される脂質−親水性ポリマー−芳香族化合物結合体の形態での結合体などの、式Ｉ〜ＶＩＩの内の任意の一つを有する芳香族化合物を含む結合体；を含む、検出可能な量のリポソーム組成物を患者へ導入することと；
リポソーム組成物が、一つ以上のアミロイド沈着と関連付けられるのに十分な時間を与えることと；
一つ以上のアミロイド沈着へ関連したリポソーム組成物を検出すること；
とを含む。

【0031】

一実施形態において、検出は、蛍光イメージング（ＦＩ）により検出することを含む。別の実施形態において、検出は、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）により検出することを含む。一実施形態において、検出は、ＳＰＥＣＴイメージング、及び／又はＰＥＴイメージングにより検出することを含み、非放射性コントラスト強調剤は、例えば、健康の分子イメージングの国立研究所及び、コントラスト剤データベース（「ＭＩＣＡＤ」）におけるＳＰＥＣＴイメージング、及び／又は、ＰＥＴイメージングで使用するために適切であるとみなされたそれらの剤などを含む、放射性コントラスト強調剤で置換される。

【0032】

一実施形態において、検出はＦＩにより検出することを含む。一実施形態において、検出は、ＳＰＥＣＴイメージング及び／又はＰＥＴイメージングを含み、非放射性コントラスト強調剤は、例えば、健康の分子イメージングの国立研究所及び、コントラスト剤データベース（「ＭＩＣＡＤ」）におけるＳＰＥＣＴイメージング、及び／又は、ＰＥＴイメージングで使用するために適切であるとみなされたそれらの剤などを含む、放射性コントラスト強調剤で置換される。

【0033】

図面の簡単な説明
添付図面において、化学式、化学構造及び実験データは、以下の詳細な説明とともに与えられ、特許請求された本発明の例示的な実施形態を説明する。

【図面の簡単な説明】

【0034】

【図1】図１は、脂質−親水性ポリマー−芳香族リガンド結合体、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ_ｎ−メトキシ−ＸＯ４（「Ｍｅ−ＸＯ４」）の合成のための例示的な概略図を示す。

【図1A】図１Ａは、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ_{Ｍｗ＝３４００}−メトキシ−ＸＯ４の例示的な透過型電子顕微鏡（「ＴＥＭ」）画像を示す。

【図1B】図１Ｂは、リポソームＤＳＰＥ−ＰＥＧ_{Ｍｗ＝３４００}−メトキシ−ＸＯ４の、例示的なＴＥＭ画像を更に示す。

【図2A】図２Ａは、合成Ａβ（１〜４０）フィブリルへのＭｅ−ＸＯ４−ラベルしたリポソームの結合親和性を示す。

【図2B】図２Ｂは、合成Ａβ（１〜４０）フィブリル上の結合部位についての、Ｍｅ−ＸＯ４−ラベルしたリポソーム、クリサミンＧ（「ＣＧ」）、及び遊離メトキシ−ＸＯ４−リガンドの間の競合の例示的な結果を示す。

【図3】図３は、Ｍｅ−ＸＯ４−ラベルしたリポソームを用いた、マウスの脳組織のｅｘ ｖｉｖｏでの染色の例示的な結果を示す。

【図4】図４は、マウスの脳組織におけるｅｘ ｖｉｖｏのＡβプラーク沈着上の結合部位についての、Ｍｅ−ＸＯ４−ラベルしたリポソーム及びＣＧの間の、競合の例示的な結果を示す。

【図5】図５は、Ｍｅ−ＸＯ４−ラベルしたリポソーム及び、遊離メトキシ−ＸＯ４リガンドを用いた、マウス脳組織のｉｎ ｖｉｖｏでの染色の例示的な結果を示す。

【図6】図６は、Ｍｅ−ＸＯ４−ラベルしたリポソームを注入したマウスの脳の矢状切片からの、例示的な共焦点顕微鏡画像の光再構成を示す。

【図7】図７は、遊離メトキシ−ＸＯ４リガンド及び、Ｍｅ−ＸＯ４結合体の間の炎症可能性の例示的な比較を示す。

【図8】図８は、遊離メトキシ−ＸＯ４リガンド及び、Ｍｅ−ＸＯ４結合体の間の細胞毒性の例示的な比較を示す。

【図9A】図９Ａは、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−３−フルオロ−４−アミノメチルフェニルボロン酸結合体及び、遊離リガンド、３−フルオロ−４−アミノメチルフェニルボロン酸の間の、細胞毒性の比較を示す。

【図9B】ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−４−アミノピリミジンボロン酸結合体及び遊離リガンド、４−アミノピリミジンボロン酸の間の、炎症可能性の比較を示す。

【発明を実施するための形態】

【0035】

詳細な説明
一実施形態において、式Ｉの化合物又は、薬学的に許容可能なその塩若しくはプロドラッグを提供し：

【化8】

式中、Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１’、Ｒ_２’＝Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＮＨ_２、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、カルボキシル、スルホニル、カルバモイル又はグリコシルである。

【0036】

39
一実施形態において、Ｒ＝Ｈであり、Ｒ_１＝Ｈであり、Ｒ_２＝Ｈであり、Ｒ_１’及びＲ_２’は一緒に、１，３−ベンゾジオキソールを形成するために、リンカー−Ｏ−ＣＨ_２−Ｏ−を形成する。従って、式Ｉの化合物の一例は、１，４−キノキサリンフェニル１，３−ベンゾジオキソ化合物ＩＡ：

【化9】

である。

【0037】

別の実施形態において、Ｒ＝Ｈであり、Ｒ_１＝Ｈであり、Ｒ_２＝Ｈであり、Ｒ_１’＝Ｈであり、Ｒ_２’＝ＮＭ_ｅ２である。従って、式Ｉの化合物の別の例は、１，４−キノキサリンビフェニル化合物ＩＢ：

【化10】

である。

【0038】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式Ｉリガンド結合体を形成するために、式Ｉの芳香族複素環を、ＰＥＧ（例えば、５００〜１０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する）などの親水性ポリマー及び、例えば、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、ＤＰＰＥなどの脂質と共役させることができる。

【0039】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式Ｉリガンド結合体は；

【化11】

を含み、
式中、ｎは約１０〜約１００又は、約３０〜約６０である。

【0040】

別の実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式Ｉリガンド結合体は：

【化12】

を含み、式中、ｎは約１０〜約１００又は約３０〜約６０である。

【0041】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式Ｉリガンド結合体は、リポソーム組成物中へ組み込むことができる。

【0042】

一実施形態において、患者におけるアミロイド沈着をイメージングするための方法を提供し、前記方法は：
脂質−親水性ポリマー−式Ｉリガンド結合体を含む、検出可能な量のリポソーム組成物を患者へ導入することと；
リポソーム組成物が、一つ以上のアミロイド沈着と関連付けられるのに十分な時間を与えることと；
一つ以上のアミロイド沈着へ関連したリポソーム組成物を検出すること；
とを含む。

【0043】

一実施形態において、検出はＦＩにより検出することを含む。別の実施形態において、この検出は、ＭＲイメージングによる検出を含む。一実施形態において、検出は、ＳＰＥＣＴイメージング及び／又はＰＥＴイメージングを含み、非放射性コントラスト強調剤は、例えば、健康の分子イメージングの国立研究所及び、コントラスト剤データベース（「ＭＩＣＡＤ」）におけるＳＰＥＣＴイメージング、及び／又は、ＰＥＴイメージングで使用するために適切であるとみなされたそれらの剤などを含む、放射性コントラスト強調剤で置換される。

【0044】

一実施形態において、式ＩＩの化合物又は、薬学的に許容可能なその塩若しくはプロドラッグを提供し：

【化13】

式中、Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１’、Ｒ_２’＝Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＮＨ_２、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、カルボキシル、スルホニル、カルバモイル又はグリコシルである。

【0045】

一実施形態において、Ｒ＝Ｈであり、Ｒ_１＝Ｈであり、Ｒ_２＝Ｈであり、Ｒ_１’＝Ｈであり、Ｒ_２’＝ＯＭｅである。従って、式ＩＩの化合物の一例は、１，４−キノキサリンフェンピリジニル化合物ＩＩＡ：

【化14】

である。

【0046】

式ＩＩの化合物の別の例は、１，４−キノキサリンフェニルピリジニル化合物ＩＩＢ：

【化15】

である。

【0047】

一実施形態において、式ＩＩの芳香族複素環を、脂質−親水性ポリマー−式ＩＩリガンド結合体を形成するために、ＰＥＧ（例えば、５００〜１０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する）などの親水性ポリマー及び、例えば、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、ＤＰＰＥなどの脂質と共役させることができる。

【0048】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＩＩリガンド結合体は：

【化16】

を含み、
式中、ｎは約１０〜約１００又は約３０〜約６０である。

【0049】

別の実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＩＩリガンド結合体は：

【化17】

を含み、
式中、ｎは約１０〜約１００又は約３０〜約６０である。

【0050】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＩＩリガンド結合体を、リポソーム組成物中へ組み込むことができる。

【0051】

一実施形態において、患者におけるアミロイド沈着をイメージングするための方法を提供し、前記方法は：
脂質−親水性ポリマー−式ＩＩリガンド結合体を含む、検出可能な量のリポソーム組成物を患者へ導入することと：
リポソーム組成物が、一つ以上のアミロイド沈着と関連付けられるのに十分な時間を与えることと；
一つ以上のアミロイド沈着へ関連したリポソーム組成物を検出すること；
とを含む。

【0052】

一実施形態において、検出はＦＩにより検出することを含む。別の実施形態において、この検出は、ＭＲイメージングにより検出することを含む。一実施形態において、検出は、ＳＰＥＣＴイメージング及び／又はＰＥＴイメージングを含み、非放射性コントラスト強調剤は、例えば、健康の分子イメージングの国立研究所及び、コントラスト剤データベース（「ＭＩＣＡＤ」）におけるＳＰＥＣＴイメージング、及び／又は、ＰＥＴイメージングで使用するために適切であるとみなされたそれらの剤などを含む、放射性コントラスト強調剤で置換される。

【0053】

一実施形態において、式ＩＩＩの化合物又は、薬学的に許容可能なその塩若しくはプロドラッグを提供し、

【化18】

式中、Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１’、Ｒ_２’＝Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＮＨ_２、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、カルボキシル、スルホニル、カルバモイル又はグリコシルである。

【0054】

一実施形態において、Ｒ＝Ｈであり、Ｒ_１＝Ｈであり、Ｒ_２＝Ｈであり、Ｒ_１’＝ＯＭｅであり、Ｒ_２’＝ＯＭｅである。従って、式ＩＩＩの化合物の一例は、１，４−キノキサリンフェニルピリジニル化合物ＩＩＩＡ：

【化19】

である。

【0055】

一実施形態において、式ＩＩＩの芳香族複素環を、脂質−親水性ポリマー−式ＩＩＩリガンド結合体を形成するために、ＰＥＧ（例えば、５００〜１０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する）などの親水性ポリマー及び、例えば、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、ＤＰＰＥなどの脂質と共役させることができる。

【0056】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＩＩＩリガンド結合体は：

【化20】

を含み、
式中、ｎは約１０〜約１００又は約３０〜約６０である。

【0057】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＩＩＩリガンド結合体を、リポソーム組成物中へ組み込むことができる。

【0058】

一実施形態において、患者におけるアミロイド沈着をイメージングするための方法を提供し、前記方法は：
脂質−親水性ポリマー−式ＩＩＩリガンド結合体を含む、検出可能な量のリポソーム組成物を患者へ導入することと：
リポソーム組成物が、一つ以上のアミロイド沈着と関連付けられるのに十分な時間を与えることと；
一つ以上のアミロイド沈着へ関連したリポソーム組成物を検出すること；
とを含む。

【0059】

一実施形態において、検出はＦＩにより検出することを含む。別の実施形態において、この検出は、ＭＲイメージングによる検出を含む。一実施形態において、検出は、ＳＰＥＣＴイメージング及び／又はＰＥＴイメージングを含み、非放射性コントラスト強調剤は、例えば、健康の分子イメージングの国立研究所及び、コントラスト剤データベース（「ＭＩＣＡＤ」）におけるＳＰＥＣＴイメージング、及び／又は、ＰＥＴイメージングで使用するために適切であるとみなされたそれらの剤などを含む、放射性コントラスト強調剤で置換される。

【0060】

一実施形態において、式ＩＶの化合物又は、薬学的に許容可能なその塩若しくはプロドラッグを提供し、

【化21】

式中、Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１’、Ｒ_２’＝Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＮＨ_２、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、カルボキシル、スルホニル、カルバモイル又はグリコシルである。

【0061】

一実施形態において、Ｒ＝Ｈであり、Ｒ_１＝Ｈであり、Ｒ_２＝Ｈであり、Ｒ_１’及びＲ_２’は一緒に、１，３−ベンゾジオキソールを形成するために、結合−Ｏ−ＣＨ_２−Ｏ−を形成する。従って、式ＩＶの化合物の一例は、１，４−ベンゾオキサジンフェニル１，３−ベンゾジオキソリル化合物ＩＶＡ：

【化22】

である。

【0062】

別の実施形態において、Ｒ＝Ｈであり、Ｒ_１＝Ｍｅであり、Ｒ_２＝Ｈであり、Ｒ_１’＝Ｈであり、Ｒ_２’＝ＮＭｅ_２である。従って、式ＩＶの化合物の別の例は、１，４−ベンゾオキサジンビフェニル化合物ＩＶＢ：

【化23】

である。

【0063】

一実施形態において、式ＩＶの芳香族複素環を、脂質−親水性ポリマー−式ＩＶリガンド結合体を形成するために、ＰＥＧ（例えば、５００〜１０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する）などの親水性ポリマー及び、例えば、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、ＤＰＰＥなどの脂質と共役させることができる。

【0064】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＩＶリガンド結合体は：

【化24】

を含み、
式中、ｎは約１０〜約１００又は約３０〜約６０である。

【0065】

別の実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＩＶリガンド結合体は：

【化25】

を含み、
式中、ｎは約１０〜約１００又は約３０〜約６０である。

【0066】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＩＶリガンド結合体をリポソーム組成物へ組み込むことができる。

【0067】

一実施形態において、患者におけるアミロイド沈着をイメージングするための方法を提供し、前記方法は：
脂質−親水性ポリマー−式ＩＶリガンド結合体を含む、検出可能な量のリポソーム組成物を患者へ導入することと：
リポソーム組成物が、一つ以上のアミロイド沈着と関連付けられるのに十分な時間を与えることと；
一つ以上のアミロイド沈着へ関連したリポソーム組成物を検出すること；
とを含む。

【0068】

一実施形態において、検出はＦＩにより検出することを含む。別の実施形態において、検出は、ＭＲイメージングによる検出を含む。一実施形態において、検出は、ＳＰＥＣＴイメージング及び／又はＰＥＴイメージングを含み、非放射性コントラスト強調剤は、例えば、健康の分子イメージングの国立研究所及び、コントラスト剤データベース（「ＭＩＣＡＤ」）におけるＳＰＥＣＴイメージング、及び／又は、ＰＥＴイメージングで使用するために適切であるとみなされたそれらの剤などを含む、放射性コントラスト強調剤で置換される。

【0069】

一実施形態において、式ＩＶの化合物又は、薬学的に許容可能なその塩若しくはプロドラッグを提供し、

【化26】

式中、Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１’、Ｒ_２’＝Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＮＨ_２、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、カルボキシル、スルホニル、カルバモイル又はグリコシルである。

【0070】

一実施形態において、Ｒ＝Ｈであり、Ｒ_１＝Ｍｅであり、Ｒ_２＝Ｈであり、Ｒ_１’＝Ｈであり、Ｒ_２’＝ＯＭｅである。従って、式Ｖの化合物の一例は、１，４−ベンゾオキサジンフェニルピリジニル化合物ＶＡ：

【化27】

である。

【0071】

一実施形態において、式Ｖの芳香族複素環を、脂質−親水性ポリマー−式Ｖリガンド結合体を形成するために、ＰＥＧ（例えば、５００〜１０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する）などの親水性ポリマー及び、例えば、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＥなどの脂質と共役させることができる。

【0072】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式Ｖリガンド結合体は：

【化28】

を含み、
式中、ｎは約１０〜約１００又は約３０〜約６０である。

【0073】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式Ｖリガンド結合体をリポソーム組成物へ組み込むことができる。

【0074】

一実施形態において、患者におけるアミロイド沈着をイメージングするための方法を提供し、前記方法は：
脂質−親水性ポリマー−式Ｖリガンド結合体を含む、検出可能な量のリポソーム組成物を患者へ導入することと：
リポソーム組成物が、一つ以上のアミロイド沈着と関連付けられるのに十分な時間を与えることと；
一つ以上のアミロイド沈着へ関連したリポソーム組成物を検出すること；
とを含む。

【0075】

一実施形態において、検出はＦＩにより検出することを含む。別の実施形態において、検出は、ＭＲイメージングによる検出を含む。一実施形態において、検出は、ＳＰＥＣＴイメージング及び／又はＰＥＴイメージングを含み、非放射性コントラスト強調剤は、例えば、健康の分子イメージングの国立研究所及び、コントラスト剤データベース（「ＭＩＣＡＤ」）におけるＳＰＥＣＴイメージング、及び／又は、ＰＥＴイメージングで使用するために適切であるとみなされたそれらの剤などを含む、放射性コントラスト強調剤で置換される。

【0076】

一実施形態において、式ＶＩの化合物又は、薬学的に許容可能なその塩若しくはプロドラッグを提供し、

【化29】

式中、Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１’、Ｒ_２’＝Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＮＨ_２、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、カルボキシル、スルホニル、カルバモイル又はグリコシルである。

【0077】

一実施形態において、Ｒ＝Ｈであり、Ｒ_１＝Ｍｅであり、Ｒ_２＝Ｈであり、Ｒ_１’＝ＯＭｅであり、Ｒ_２’＝ＯＭｅである。従って、式ＶＩの化合物の一例は、１，４−キノキサリンフェニルピリミジニル化合物ＶＩＡ：

【化30】

である。

【0078】

一実施形態において、式ＶＩの芳香族複素環を、脂質−親水性ポリマー−式ＶＩリガンド結合体を形成するために、ＰＥＧ（例えば、５００〜１０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する）などの親水性ポリマー及び、例えば、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＥなどの脂質と共役させることができる。

【0079】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＶＩリガンド結合体は：

【化31】

を含み、
式中、ｎは約１０〜約１００又は約３０〜約６０である。

【0080】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−式ＶＩリガンド結合体をリポソーム組成物へ組み込むことができる。

【0081】

一実施形態において、患者におけるアミロイド沈着をイメージングするための方法を提供し、前記方法は：
脂質−親水性ポリマー−式ＶＩリガンド結合体を含む、検出可能な量のリポソーム組成物を患者へ導入することと：
リポソーム組成物が、一つ以上のアミロイド沈着と関連付けられるのに十分な時間を与えることと；
一つ以上のアミロイド沈着へ関連したリポソーム組成物を検出すること；
とを含む。

【0082】

一実施形態において、検出はＦＩにより検出することを含む。別の実施形態において、検出は、ＭＲイメージングによる検出を含む。一実施形態において、検出は、ＳＰＥＣＴイメージング及び／又はＰＥＴイメージングを含み、非放射性コントラスト強調剤は、例えば、健康の分子イメージングの国立研究所及び、コントラスト剤データベース（「ＭＩＣＡＤ」）におけるＳＰＥＣＴイメージング、及び／又は、ＰＥＴイメージングで使用するために適切であるとみなされたそれらの剤などを含む、放射性コントラスト強調剤で置換される。

【0083】

一実施形態において、式ＶＩＩの化合物又は、薬学的に許容可能なその塩若しくはプロドラッグを提供し、

【化32】

式中、Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_１’、Ｒ_２’＝Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＮＨ_２、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、カルボキシル、スルホニル、カルバモイル又はグリコシルであり、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ＝Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳである。

【0084】

一実施形態において、Ｒ＝ＯＭｅであり、Ｒ_１＝Ｈであり、Ｒ_２＝Ｏ−アルキルであり、Ｒ_１’＝ＯＨであり、Ｒ_２’＝Ｈである。従って、式ＶＩＩの化合物の一例は、ジビニルベンゼン化合物ＶＩＩＡ（「メトキシ−ＸＯ４」）：

【化33】

である。

【0085】

一実施形態において、式ＶＩＩの芳香族化合物を、脂質−親水性ポリマー−式ＶＩＩリガンド結合体を形成するために、ＰＥＧ（例えば、５００〜１０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する）などの親水性ポリマー及び、例えば、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＥなどの脂質と共役させることができる。例えば、一実施形態において、図１中で「１」として示されている（時には、以下で「Ｍｅ−ＸＯ４」と記される）ＤＳＰＥ−ＰＥＧ_ｎ−メトキシ−ＸＯ４結合体を形成するために、メトキシ−ＸＯ４−リガンドをＰＥＧ及びＤＳＰＥと結合することができる。

【化34】

【0086】

一実施形態において、Ｍｅ−ＸＯ４、より具体的には、ＤＰＳＥ−ＰＥＧ_３４００−メトキシ−ＸＯ４（３４００は、ポリエチレングリコールの分子量を示す）などの脂質−親水性ポリマー−式ＶＩＩリガンド結合体を、リポソーム組成物へ組み込むことができる。

【0087】

一実施形態において、患者におけるアミロイド沈着をイメージングするための方法を提供し、前記方法は：
脂質−親水性ポリマー−式ＶＩＩリガンド結合体を含む、検出可能な量のリポソーム組成物を患者へ導入することと：
リポソーム組成物が、一つ以上のアミロイド沈着と関連付けられるのに十分な時間を与えることと；
一つ以上のアミロイド沈着へ関連したリポソーム組成物を検出すること；
とを含む。

【0088】

一実施形態において、検出はＦＩにより検出することを含む。別の実施形態において、検出は、ＭＲイメージングによる検出を含む。一実施形態において、検出は、ＳＰＥＣＴイメージング及び／又はＰＥＴイメージングを含み、非放射性コントラスト強調剤は、例えば、健康の分子イメージングの国立研究所及び、コントラスト剤データベース（「ＭＩＣＡＤ」）におけるＳＰＥＣＴイメージング、及び／又は、ＰＥＴイメージングで使用するために適切であるとみなされたそれらの剤などを含む、放射性コントラスト強調剤で置換される。

【0089】

一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−アミロイドリガンド結合体を形成するために、コンゴーレッド及びその誘導体、チオフラビンＴ及びその誘導体、及び、ＣＧ及びその誘導体を含むがそれらに限定されない、ひとつ以上の代替的なアミロイドリガンド（即ち、上記に開示されたアミロイド結合リガンドを除く）を、ＰＥＧ（例えば、５００〜１０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する）などの親水性ポリマー、及び、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＥなどの脂質を、共役させることができる。一実施形態において、脂質−親水性ポリマー−アミロイドリガンド結合体を、リポソーム組成物へ組み込むことができる。

【0090】

一実施形態において、患者におけるアミロイド病変をイメージングするための方法を提供し、前記方法は：
脂質−親水性ポリマー−アミロイドリガンド結合体を含む、検出可能な量のリポソーム組成物を導入することと、
リポソーム組成物が、一つ以上のアミロイド沈着と関連付けられるのに十分な時間を与えることと；
一つ以上のアミロイド沈着へ関連したリポソーム組成物を検出すること；
とを含む。

【0091】

本明細書に記載のリポソーム組成物は、更に、アミロイド病変への治療分子の送達を可能にし、それによって病変の治療を可能にすることができる。

【0092】

一実施形態において、リポソーム組成物を提供し、前記リポソーム組成物は：リン脂質；コレステロール；又は、別のステロール又は脂肪酸などの別の安定化賦形剤；非放射性ガドリニウム含有コントラスト強調剤；ポリマーで誘導体化されたリン脂質；及び、本明細書に記載の脂質−親水性ポリマー−芳香族化合物などの式Ｉ〜ＶＩＩの内の任意のひとつを有する芳香族化合物を含む結合体を含む。

【0093】

一実施形態において、リポソーム組成物は：ＤＰＰＣ；コレステロール；Ｇｄ−ＤＴＰＡ−ＢＳＡ；ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−２０００；及び、式中ｎ＝約１０〜約１００又は約３０〜約６０である、ＤＳＰＥ−ＰＥＧｎ−メトキシ−ＸＯ４を含む。

【0094】

一実施形態において、患者におけるアミドイド沈着をイメージングするための方法を提供し、前記方法は：
リン脂質；コレステロール；又は、別のステロール又は脂肪酸などの別の安定化賦形剤；非放射性ガドリニウム含有コントラスト強調剤；ポリマーで誘導体化されたリン脂質；及び、本明細書に記載のリン脂質−親水性ポリマー−芳香族化合物などの式Ｉ〜ＶＩＩの内の任意の一つを有する芳香族化合物を含む結合体を含む、検出可能な量のリポソーム組成物を患者へ導入することと；
リポソーム組成物が、一つ以上のアミロイド沈着と関連付けられるのに十分な時間を与えることと；
一つ以上のアミロイド沈着へ関連したリポソーム組成物を検出すること；
とを含む。

【0095】

一実施形態において、検出はＦＩにより検出することを含む。別の実施形態において、検出は、ＭＲＩにより検出することを含む。確かに、ＧｄＤＴＰＡ、ＧｄＤＯＴＡ、ＧｄＨＰＤ０３Ａ、ＧｄＤＴＰＡ−ＢＭＡ及びＧｄＤＴＰＡ−ＢＳＡなどの親水性の常磁性キレートは、既知のＭＲＩコントラスト剤である。Ｋｌａｖｅｎｅｓｓらにより発行された米国特許第５，６７６，９２８号明細書を参照されたく、参照によりその全体は本明細書中に組み込まれる。一実施形態において、検出は、ＳＰＥＣＴイメージング及び／又はＰＥＴイメージンにより検出することを含み、非放射性コントラスト強調剤は、例えば、健康の分子イメージングの国立研究所及び、コントラスト剤データベース（「ＭＩＣＡＤ」）におけるＳＰＥＣＴイメージング、及び／又は、ＰＥＴイメージングで使用するために適切であるとみなされたそれらの剤などを含む、放射性コントラスト強調剤で置換される。

【0096】

適切なリン脂質は、本明細書中に開示のものを含み得、更に、参照により全体が本明細書中に組み込まれる、Ａｎｎａｐｒａｇａｄａらにより発行された米国特許第７，７８５，５６８号明細書に開示されたものを含み得る。適切なポリマー誘導体化リン脂質は、本明細書中に開示されたものを含み得、更に、米国特許第７，７８５，５６８号明細書に開示されたものを含み得る。

【0097】

一実施形態において、検出はＦＩにより検出することを含む。一実施形態において、検出は、ＳＰＥＣＴイメージング及び／又はＰＥＴイメージングにより検出することを含み、非放射性コントラスト強調剤は、例えば、健康の分子イメージングの国立研究所及び、コントラスト剤データベース（「ＭＩＣＡＤ」）におけるＳＰＥＣＴイメージング、及び／又は、ＰＥＴイメージングで使用するために適切であるとみなされたそれらの剤などを含む、放射性コントラスト強調剤で置換される。ＰＥＴイメージングを含むがそれに限定されない、当業者に公知な任意の他の適切な種類のイメージング方法が企図されている。

【0098】

実施例
特定の実施形態を、実施例の形態で以下に説明する。本発明の全ての適用可能性を表現することは不可能である。従って、実施形態はかなり詳細に記載されているが、添付の特許請求項の範囲を、そのような詳細又は、任意の特定の実施形態へ、制限も任意の方法で限定することも意図しない。

【0099】

実施例１：ＤＳＰＥ−ＰＥＧ３４００−メトキシ−ＸＯ４結合体１の調製

【0100】

ＤＳＰＥ−ＰＥＧ_{Ｍｗ＝３４００}−メトキシ−ＸＯ４結合体１を、標的種として合成した（図１）後、リポソーム製剤中へ組み込む。

【0101】

図１を参照すると、化合物１４、リンカー−メトキシ−ＸＯ４部分の合成は、一連のタカイ、スズキ、及びＪｕｌｉａ−Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉオレフィン合成反応を介して行った。Ｂｏｃ保護された３単位ＰＥＧリンカー前駆体臭化物３は、良い収率で、対応する市販のアルコール２から調製した。Ｊｕｌｉａ−Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉオレフィン合成工程のための中間体７、スルホンもまた、４−ヒドロキシベンズアルデヒドから優れた収率で調製した。４−ヒドロキシベンズアルデヒドもまた、ヨウ化ビニル９を得るために、別々に、標準的なタカイプロトコルへ供した。スズキ条件下、９を市販のボロン酸１０と反応させることにより、良い収率で化合物１１を得た。リンカー部分を、アルデヒド１２を与えるために、定量的に導入し、これを、カラムクロマトグラフィー精製の後、６９％の収率で所望のＥ、Ｅ−異性体１３を得るために、最適化されたＪｕｌｉａ−Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉ条件下で、スルホン７へ暴露した。ＨＣｌを用いたＭＯＭ及びＢｏｃ基の脱保護によって、塩酸塩としてリンカー−メトキシ−ＸＯ４部分１４を得た。

【0102】

ＤＳＰＥ−ＰＥＧ_{Ｍｗ＝３４００}−ＭｅＸＯ４結合体１（Ｍｅ−ＸＯ４のサブセット）を得るために、１４及びＤＳＰＥ−ＰＥＧ_{Ｍｗ＝３４００}−ＣＯＯＨを標準的なカルボイミド条件へ供することによって、脂質−ＰＥＧ部分への結合を進行した。

【0103】

実施例２：Ｇｄ−含有Ｍｅ−ＸＯ４−ラベルしたリポソームの調製及び特性評価

【0104】

ＤＰＰＣ、コレステロール、Ｇｄ−ＤＴＰＡ−ＢＳＡ、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−２０００、Ｍｅ−ＸＯ４及びローダミンＤＨＰＥ（光検出用）を、それぞれ約３２．４：４０：２５：２：０．５：０．１のモル比で含む脂質混合物（５０ｍＭ）を用いた。ＤＰＰＣ、コレステロール、Ｇｄ−ＤＴＰＡ−ＢＳＡ、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−２０００及びＭｅ−ＸＯ４を約３２．５：４０：２５：２：０．５のモル比で含む脂質混合物を含む、他の比率も企図されている。更に、３２．５：４０：２５：２．５の比率で、ＤＰＰＣ、コレステロール、Ｇｄ−ＤＴＰＡ−ＢＳＡ、Ｍｅ−ＸＯ４結合体について、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−２０００を、Ｍｅ−ＸＯ４結合体で完全に置換することができる。ＰＥＧ含有分子の上限は、１５〜２５％であり得、コレステロールの下限は、約１５〜２０％であり得る。１．５時間のＰＲＯＨＡＮＣＥ（登録商標）溶液（Ｂｒａｃｃｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社製、ニュージャージー州モンロータウンシップ）中の水和時に、この混合物を、６５℃で、ＬＩＰＥＸ（商標）ＴＨＥＲＭＯＬＩＮＥ押出機（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｌｉｐｉｄｓ社製、バーナビー（Ｂ．Ｃ．）、カナダ）用いて、２００ｎｍのＮＵＣＬＥＰＯＲＥ（商標）膜（シグマアルドリッチ社製、ミズーリ州セントルイス）を介して５回通過させ、かつ、１００ｎｍの膜を介して１０回通過させることにより、連続的に押し出した。粒度分布は、ＴＥＭによって決定し（図１Ａ及び１Ｂ）、それにより、約１００．８ｎｍの平均直径及び、約０．０５のＰＤＩを確認した。

【0105】

粒子中のＭｅ−ＸＯ４リガンドの濃度は、ＭＥ−ＸＯ４リガンドを２６μＭにするために生成された蛍光標準曲線を用いて決定した。上記プロトコルの結果は、脂質二重奏の内側及び外側の間の、ほぼ等しい標的リガンドの分布をもたらす。これは、ナノ粒子におけるＭｅ−ＸＯ４リガンドのそれぞれの報告された濃度について、総ＭＥ−ＸＯ４リガンドの約５０％は、結合のために利用可能であることを意味する。Ｍｅ−ＸＯ４リガンドは、高度に本質的に蛍光性であり、そして、ナノ粒子はＭｅ−ＸＯ４リガンドを冠している。この特性は、実験の全ての過程において、ナノ粒子の位置のレポーターとして使用した。

【0106】

実施例３：合成Ａβ繊維についての、Ｇｄ−含有Ｍｅ−ＸＯ４−ラベルされたリポソームのｉｎ ｖｉｔｒｏ結合親和性

【0107】

実施例２のＭｅ−ＸＯ４−ラベルしたリポソーム及び、Ｍｅ−ＸＯ４リガンドの原液を、５００ｎＭまで、１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌを用いて希釈した。少量の１００μＭＡβ原液を、２０μＭの最終フィブリル濃度を達成するために、試験化合物へ加えた。これは、適切な濃度の非蛍光コンペティター、ＣＧを加えることにより従った。結合混合物を、１時間室温でインキュベートし、次に、フィブリルを分離するために、１６，４００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。沈殿を、トリス−ＨＣｌで二回洗浄した。蛍光度は、それぞれ、３６８ｎｍ及び４５０ｎｍの励起波長および蛍光波長を用いて、スペクトラマックス３８４プレート（モレキュラーデバイス社製、カルフォルニア州サニーベール）リーダで測定した。

【0108】

図２Ａは、合成Ａβ（１〜４０）凝集体への、実施例２のＧｄ含有Ｍｅ−ＸＯ４ラベルしたリポソームの結合親和性を示す。図２Ｂは、遊離Ｍｅ−ＸＯ４リガンドを用いた結合部位と競合するための、Ｇｄ−含有Ｍｅ−ＸＯ４−ラベルしたリポソームの能力を示す。

【0109】

実施例４：マウス脳組織のｅｘ ｖｉｖｏの染色

【0110】

ＡＰＰ／ＰＳＥＮ１遺伝子導入マウスラインから脳断片を染色することによって、Ａβプラークを結合するための、実施例２のＧｄ−含有Ｍｅ−ＸＯ４−ラベルしたリポソームの能力を評価した。マウスを、ヒトＡＤ病理学において観察されたものと同様の、年齢に関連した方法で、進行的に、大脳皮質及び海馬のＡβプラークを開発するように設計した。安楽死させた非遺伝子導入（対照）の月齢５ヶ月及び７ヶ月のＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスからの矢状切片を、室温で２時間、３ｍＭのリポソーム溶液（溶液中のＭｅ−ＸＯ４濃度は、１μＭであった）インキュベートした。これを、その後、結合していないリポソームを取り除くために、ＰＢＳで十分に洗浄した。染色された組織を、バックグラウンドの蛍光を低減するために、ＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ（登録商標）搭載メディア（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製、カリフォルニア州バーリンゲーム）を用いて搭載し、共焦点顕微鏡で観察した。

【0111】

図３に示すように、非組換えマウスからのスライド（パネルＩ）は、プラークの欠如に起因する明確な蛍光スポットを示さなかった。明瞭なプラーク沈着（パネルＩＩ及びＩＩＩ）並びに、脳アミロイド血管症（パネルＩＶ）を、月齢５ヶ月ではないが、月齢７ヶ月のマウスからの脳断片上の剤によってハイライトした。同様の断片を、遊離メトキシ−ＸＯ４リガンドを用いて同じプロトコルへ供した場合、同一のプラーク沈着パターンを観察した。

【0112】

選択的に脳組織中のＡβプラーク沈着を結合するための、Ｇｄ−含有Ｍｅ−ＸＯ４−ラベルしたリポソームの能力を更に確認するために、染色プロトコルを１μＭのＭｅ−ＸＯ４を用いて繰り返し、ＣＧの濃度を増加させる。結果（図４）は、ＣＧ濃度の増加に伴う、大脳皮質（Ａ）及び海馬（Ｂ）の両方における、蛍光強度及びラベルされたプラークの数の減少を示す。

【0113】

実施例５：月齢７ヶ月のＡＰＰ／ＰＳＥＮ１遺伝子導入マウスラインにおける、大脳皮質及び海馬プラークへの、Ｇｄ−含有Ｍｅ−ＸＯ４−ラベルしたリポソームのｉｎ ｖｉｖｏの送達

【0114】

Ｇｄ−含有Ｍｅ−ＸＯ４−ラベルしたリポソームを、尾静脈注射により、月齢５ヶ月及び７ヶ月のＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスへ投与した。注射の４８時間後、マウスを安楽死させ、共焦点光学顕微鏡研究のために、それらの脳断片を用いた。同じマウスは、陽性対照として機能するように、分子／遊離メトキシ−ＸＯ４リガンドを注射し、陰性対照として非標的リポソーム及び生理食塩水を注射した。

【0115】

月齢５ヶ月のマウスのいずれかから脳組織断片をイメージングした場合、特筆すべき蛍光は無かった（プラークの不存在を示す）。非標的リポソーム（パネルＩ）及び生理食塩水を注射した月齢７ヶ月のマウスからの断片もまた、蛍光を示さなかった。遊離メトキシ−ＸＯ４リガンド（パネルＩＩ及びＩＩＩ）を注射した同じマウスは、大脳皮質及び海馬プラークの両方を、明るく染色することを明らかにした。Ｇｄ−含有Ｍｅ−ＸＯ４リポソーム（パネルＩＶ、Ｖ及びＶＩ）を注射した動物は、類似のプラーク沈着及び血管病変を明らかにした。

【0116】

本研究におけるナノ粒子処置したマウスの内の一匹由来のスライド上の画像の光再構成（図６）は、大脳皮質（セクションＡにおける、一番上の矢印）及び海馬（セクションＢにおける、一番下の四つの矢印）中の、蛍光局在を主に示す。Ｇｄ−含有Ｍｅ−ＸＯ４リポソームは、ＢＢＢバリアを貫通し、脳を介して普遍的に移行する。

【0117】

実施例６：Ｍｅ−ＸＯ４の炎症の可能性

【0118】

アミロイド沈着の周りの炎症は、ＡＤの進行の主な危険因子であると考えられる。従って、イメージング剤は、低いか又は低減された炎症のリスクを示すことが非常に望ましい。脂質−ＰＥＧ−リガンド結合体は、一般的に、性質上炎症性になる傾向がある。確かに、構造中の脂質−ＰＥＧ−リガンド結合体に類似しているリポ多糖類（「ＬＰＳ」）は、既知の最も炎症性な組成物の一つである。

【0119】

Ｍｅ−ＸＯ４の炎症可能性を、遊離（即ち、結合されていない）メトキシ−ＸＯ４リガンド、ＬＰＳ、及び未処理対照（「ＵＴＣ」）と比較した。細胞質から核へのＮＦ−ｋｂの転位は、炎症反応の初期段階における事象である。炎症可能性を受けると、ＮＦ−ｋｂは、細胞質から核へ移動し、遺伝子転写を誘発する。従って、ＮＦ−ｋｂの転位は、炎症について広く使用されているマーカーである。簡単に言えば、プロトコルは以下の通りである。

【0120】

１５，０００のＨｅＬａ細胞を、９６ウェルプレートのそれぞれに播種し、一晩放置した。細胞を、３７℃のインキュベータの中で２時間、異なる濃度の試験化合物で処置した。正の対照を１ｍｇ／ｍＬ ＬＰＳで処置した。インキュベーション期間の最後に、培地を吸引し、細胞をＰＢＳにより洗浄した。細胞を、室温で１０分間４％のパラホルムアルデヒドを用いて（細胞を固定するために）処置した。細胞を、氷冷したＰＢＳで二回洗浄した。細胞を室温で１０分間、ＰＢＳ中の０．２５％トリトン−Ｘ−１００を用いてインキュベートし、再び、ＰＢＳを用いて三回（それぞれ５分）洗浄した。細胞を、室温で４５分間、ＰＢＳ−Ｔ（０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ）中の１％ＢＳＡを用いてインキュベートした。インキュベーション期間の最後に、細胞を更に、室温で１時間、ＰＢＳＴ中で１：５０に希釈したＮＦ−ｋＢに対する一次抗体を用いてインキュベートした。細胞を再びＰＢＳを用いて三回（それぞれ５分）洗浄した。細胞を、室温で１時間ＰＢＳＴ中の二次抗体を用いてインキュベートし、再び、ＰＢＳを用いて三回（それぞれ５分）洗浄した。１００μＬのＤＡＰＩ（１μｇ／ｍＬ）を、それぞれのウェルへ配置し、更なる分析まで４℃に維持した。細胞を、Ｃｅｌｌ Ｌａｂ ＩＣ−１００画像サイトメーター（Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒ社製、カリフォルニア州フラートン）を用いて更に分析した。データを更に、ＣｙｔｅＳｅｅｒソフトウェア（Ｖａｌａ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社製、カリフォルニア州サンディエゴ）を用いて分析し、核マスク全体のタンパク質強度存在を、ピアソンの相関関数（ＰＣＣ）で表した。

【0121】

驚くべきことに、Ｍｅ−ＸＯ４は、試験した最高濃度（５００ｎＭ）を除く全ての濃度で、遊離メトキシ−ＸＯ４リガンドよりも、炎症性が少ないことが分かった。結果を図７に示す。

【0122】

従って、共役及び／又はリポソームアミロイド結合リガンド結合は、遊離リガンドよりも、炎症性が少ない（又は、少なくともそれ以上ではない）ことは、本明細書の少なくとも一つの実施形態の特定の教示である。

【0123】

実施例７：Ｍｅ−ＸＯ４の細胞毒性

【0124】

Ｍｅ−ＸＯ４の細胞毒性を、遊離（即ち、結合されていない）メトキシ−ＸＯ４リガンド及び未処理の対照と比較した。試験化合物の毒性を、標準ＭＴＴアッセイを用いて評価した。１５，０００のＨｅＬａ細胞を各９６ウェルプレートへ播種し、一晩放置した。細胞を、三つの異なる濃度の試験化合物を用いて、３７℃のインキュベータ中で２時間処置した。正の対照を、１ｍｇ／ｍＬを用いて処置した。インキュベーション期間の最後に、ＭＴＳ細胞毒性アッセイキット（ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ ９６（登録商標）水性アッセイキット、プロメガ社製、ウィスコンシン州マディソン）を、製造業者のプロトコルに従って使用した。インキュベーション期間の最後に、細胞を、３７℃で３時間、１５μＬＭＴＳ試薬／１００μＬ培地を用いて処置した。３時間のインキュベーション後、吸光度を、プレートリーダーを用いて４９０ｎｍで記録した。

【0125】

驚くべきことに、Ｍｅ−ＸＯ４は、遊離メトキシ−ＸＯ４リガンドよりも細胞毒性が少ないことが分かった。結果を、図８に示す。従って、共役及び／又はリポソームアミロイド結合リガンドは、遊離リガンドよりも毒性が少ない（又は、少なくともそれ以上ではない）ことは、本明細書の少なくとも一つの実施形態の特定の教示である。

【0126】

（比較）実施例８：脂質−ＰＥＧアンカーへの結合時における、ボロン酸リガンドの細胞毒性及び炎症可能性

【0127】

３−フルオロ−４−アミノメチルフェニルボロン酸を、実施例７において上述したのと同じプロトコルに従って、共役リガンド、即ち、ＤＡＰＥ−ＰＥＧ−３−フルオロ−４−アミノメチルフェニルボロン酸、ＬＰＳ及び未処理の対照と比較した。図９Ａは、細胞の生存画分を示す。予測した通り、共役リガンドは、遊離リガンドよりも顕著に細胞毒性が高い。

【0128】

４−アミノピリミジンボロン酸の炎症可能性を、実施例６において上述したのと同じプロトコルに従って、共役リガンド、即ち、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−４−アミノピリミジンボロン酸、ＬＰＳ、及び未処理の対照と比較した。図９Ｂは、Ｈｅｌａ細胞におけるＮＦＫＢ分子の核及び細胞質画分の間のＰＣＣを示す。予測した通り、共役リガンドは、遊離リガンドよりも顕著に細胞毒性が高い。

【0129】

用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」又は「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、明細書又は特許請求の範囲で使用される程度に、その用語が請求項における転換語として使用される場合に解釈されるように、用語「備える（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と同様に包括的であることを意図している。更に、用語「又は（ｏｒ）」が用いられる程度に（例えば、Ａ又はＢ）、それは、「Ａ又はＢ又はその両方」を意味することを意図している。「Ａ又はＢのみであるが両方ではない（ｏｎｌｙ Ａ ｏｒ Ｂ ｂｕｔ ｎｏｔ ｂｏｔｈ）」ことを意図する場合、用語「Ａ又はＢのみであるが両方ではない（ｏｎｌｙ Ａ ｏｒ Ｂ ｂｕｔ ｎｏｔ ｂｏｔｈ）」を用いる。従って、本明細書中における用語「又は」の使用は包括的であり、排他的ではない。明細書及び請求項において使用するように、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、複数を含む。最後に、用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、数字と組み合わせて使用する場合、それは、その数の±１０％を含むことを意図している。例えば、「約１０」は、９〜１１を意味し得る。

【0130】

上述のように、本出願は実施形態の説明によって例示し、実施形態はかなり詳細に説明してきたが、添付の特許請求の範囲を、そのような詳細へ制限又は何ら限定することを意図するものではない。更なる利点及び変更は、良いに当業者に明らかになるであろうし、これは本出願の利益を有する。従って、本出願は、そのより広い態様において、示された特的の詳細及び例示的な実施例に限定されるものではない。発展形は、一般的な本発明の概念の精神又は範囲から逸脱することなく、そのような詳細及び実施例から成され得る。

【図1】

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9A】

【図9B】