特許 6539268 慢性潰瘍の新規治療

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6539268

(24)【登録日】2019年6月14日

(45)【発行日】2019年7月3日

(54)【発明の名称】慢性潰瘍の新規治療

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/17 20060101AFI20190625BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20190625BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20190625BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20190625BHJP

   A61K 9/10 20060101ALI20190625BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20190625BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20190625BHJP

   A61K 47/34 20170101ALI20190625BHJP

   A61L 15/28 20060101ALI20190625BHJP

   A61L 15/26 20060101ALI20190625BHJP

【ＦＩ】

   A61K38/17ZMD

   A61P17/00 101

   A61P17/02

   A61K9/08

   A61K9/10

   A61K9/107

   A61K9/06

   A61K47/34

   A61L15/28 100

   A61L15/26 100

【請求項の数】9

【全頁数】18

(21)【出願番号】特願2016-532032(P2016-532032)

(86)(22)【出願日】2014年11月19日

(65)【公表番号】特表2016-537373(P2016-537373A)

(43)【公表日】2016年12月1日

(86)【国際出願番号】GB2014053415

(87)【国際公開番号】WO2015075441

(87)【国際公開日】20150528

【審査請求日】2017年11月6日

(31)【優先権主張番号】PCT/GB2013/053053

(32)【優先日】2013年11月19日

(33)【優先権主張国】GB

(73)【特許権者】

【識別番号】505285087

【氏名又は名称】プロモア・ファーマ・アクチエボラーグ

(74)【代理人】

【識別番号】100127926

【弁理士】

【氏名又は名称】結田 純次

(74)【代理人】

【識別番号】100140132

【弁理士】

【氏名又は名称】竹林 則幸

(72)【発明者】

【氏名】アルヴァー・グレンバリ

(72)【発明者】

【氏名】クリスティーネ・ディーテリッヒ

(72)【発明者】

【氏名】マルギット・マフラフォー

【審査官】 石井 裕美子

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１０−５３１１８９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００４−５３２８１５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００９−５２３５９１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 Pergamum Announces Final Data from Phase I/II Study in Patients with Chronic Leg Ulcers，２０１３年１０月１０日，ＵＲＬ，https://www.promorepharma.com/en/pergamum-announces-final-data-from-phase-iii-study-in-patients-with-chronic-leg-ulcers/

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３８／００−３８／５８

Ａ６１Ｋ ９／００− ９／７２

Ａ６１Ｋ ４７／００−４７／６９

Ａ６１Ｌ １５／００−３３／１８

Ａ６１Ｐ １７／００

Ａ６１Ｐ １７／０２

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

慢性潰瘍の局所治療に使用するための、治療有効量の配列番号１のペプチドＬＬ−３７またはその薬学的に許容される塩および１つまたはそれ以上の薬学的に許容される添加剤および／または賦形剤を含む水性医薬製剤であって、
（ｉ）ここで、前記水性医薬製剤は、約１から約２５Ｐａ・ｓの範囲の製剤の粘度を与える増粘剤を含み；
（ｉｉ）ここで、創傷面積１ｃｍ²当たりに局所適用されるＬＬ−３７の用量は、約１μｇ／ｃｍ²から約７０μｇ／ｃｍ²の間であり；および
（ｉｉｉ）ここで、ドレッシングが、前記慢性潰瘍に、前記水性医薬製剤を適用した後に、局所適用される、
前記水性医薬製剤。

【請求項2】

製剤の粘度は、約１から約１０Ｐａ・ｓの範囲である、請求項１に記載の水性医薬製剤。

【請求項3】

緩衝化されている、請求項１または２に記載の水性医薬製剤。

【請求項4】

創傷面積１ｃｍ²当たりに適用されるＬＬ−３７の用量は、約５μｇ／ｃｍ²から約６０μｇ／ｃｍ²の間である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の水性医薬製剤。

【請求項5】

創傷面積１ｃｍ²当たりに適用されるＬＬ−３７の用量は、治療１日につき約０．３μｇ／ｃｍ²から約２３．３μｇ／ｃｍ²の間である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の水性医薬製剤。

【請求項6】

創傷面積１ｃｍ²当たりに局所適用されるＬＬ−３７の用量は、治療１日につき約１．６μｇ／ｃｍ²から約２０μｇ／ｃｍ²の間である、請求項５に記載の水性医薬製剤。

【請求項7】

潰瘍は、静脈性下腿潰瘍である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の水性医薬製剤。

【請求項8】

潰瘍は、糖尿病性足部潰瘍である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の水性医薬製剤。

【請求項9】

ポリビニルアルコールを含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の水性医薬製剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、創傷ケア製品を使用する方法に関する。特に、本発明は、慢性潰瘍の治療を提供する。

【背景技術】

【0002】

創傷治癒は、組織の完全性および機能の回復を最適に導く動的経路である。「慢性」創傷は、治癒過程が長引き、不十分であり、結果的に完全性が回復しない創傷である。慢性創傷は、患者、医療専門家および医療制度にとっては難題であり、何百万もの人々の生活の質を著しく損なう。長期にわたる反復治療が必要とされ、生産性損失および医療費の点で、社会に巨額の負担をかける。

【0003】

治癒困難な（ＨＴＨ）または慢性の潰瘍は、慢性創傷の部類である。下腿および足部のＨＴＨ潰瘍は、多くの場合、疼痛性で、斑点形成され（ｓｔｉｇｍａｔｉｓｉｎｇ）、機能的能力に負の影響を及ぼす。

【0004】

静脈性下腿潰瘍（ＶＬＵ）は、膝から踝までの間の下肢に発生する、慢性の皮膚および皮下潰瘍形成である。Ｓｗｅｄｉｓｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ａｇｅｎｃｙは、ＶＬＵを、膝より下方に静脈不全によって引き起こされ、６週間以内の標準治療（すなわち、低技術の、ガーゼベースのドレッシング、織布および不織布スポンジ、伸縮包帯（ｃｏｎｆｏｒｍｉｎｇ ｂａｎｄａｇｅ）および非付着性包帯のような昔からの創傷ケア製品）で治癒しないものと定義している。

【0005】

慢性静脈不全（ＣＶＩ）は、下腿の静脈が、静脈血を効果的に送り出す能力を失うと生じる。間質腔への体液の漏出により一連の問題が生じ、その後、その領域は潰瘍を形成しやすくなる。

【0006】

ＶＬＵは、すべての下腿潰瘍の大部分を構成しており、下肢の創傷の７０〜９０％を占めている（非特許文献１を参照のこと）。疫学的データは、１，０００人当たり１．５〜３．０人（０．１５〜０．３％）が、活動性下腿潰瘍を有し、８０歳を超える個体では、１，０００人当たりおよそ２０人（２％）に昇ることを示唆している（非特許文献２を参照のこと）。それ故に、ＶＬＵは、大きな経済的負担である。ヨーロッパ単独では、年間コストの総額は６５億ユーロと見積もられる。これは、１エピソード当たりの平均コストが７０００ユーロであることに基づいている（非特許文献３を参照のこと）。損失は、潰瘍ケアの直接コストだけに限定されず、障害および労働日数の減少に関連する間接コストもこれに含まれる。

【0007】

糖尿病性足部潰瘍（ＤＦＵ）は、糖尿病に罹患している患者における、主要な合併症の１つである。糖尿病は、感覚機能障害と創傷を生じるリスクの増加とを伴う、末梢性ニューロパチーを引き起こす。循環障害は、皮膚の自然治癒の過程を妨げ、それによって、結果的にＨＴＨ創傷を生じる。足部潰瘍を発症している糖尿病を有する患者のリスクは、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎによると、およそ２５％である（例えば、非特許文献４および非特許文献５を参照のこと）。糖尿病を有する患者における糖尿病性足部潰瘍の年間発生率および有病率は、それぞれ２〜６％および４〜１０％である（非特許文献６も参照のこと）。加えて、糖尿病患者の１０％は、末梢性ニューロパチーおよび血管合併症のような、足部潰瘍を発症する要因を有する。ＤＦＵは、かなりの罹患率に至る感染症を起こしやすく、この患者集団におけるすべての切断術の２５〜９０％に関連する（非特許文献７も参照のこと）。

【0008】

ＤＦＵも、かなりの経済的負担となる。ヨーロッパでは、１２カ月以内に治癒しないＤＦＵには、患者１人当たり平均２０，０００ユーロのコストがかかる（非特許文献８）。

【0009】

標準的なドレッシング材が、他の標準的な手段（洗浄、デブリードマン、包帯法など）と併せて使用される場合でさえも、前述のＨＴＨ潰瘍を治療する上で何らかの大きな利益をもたらすことを裏付ける科学的根拠はない。ヨーロッパでは、Ｒｅｇｒａｎｅｘ（登録商標）（ベカプレルミン）ゲルが、皮下組織に広がるかまたはその域を超えるが血液の供給は適切な、下肢の糖尿病性神経障害性潰瘍の治療に適応となる。それは、初期のシャープデブリードマン、圧力除去および感染管理を含む、良好な潰瘍ケアの実践に対する補助として使用されるのであって、その代用物ではない。Ｒｅｇｒａｎｅｘは、そのようなＨＴＨ潰瘍の治療に承認された唯一の薬物製品であるが、ＶＬＵに対する効果についての報告はない。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0010】

【非特許文献1】Ｓｎｙｄｅｒ，Ｃｌｉｎ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，２３，３８８頁（２００５）

【非特許文献2】Ｖａｌｅｎｃｉａら，Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，４４，４０１頁（２００１）

【非特許文献3】Ｐｏｓｎｅｔｔら，Ｊ．Ｗｏｕｎｄ Ｃａｒｅ，１８，１５４頁（２００９）

【非特許文献4】Ｂｏｕｌｔｏｎら，Ｌａｎｃｅｔ，３６６，１７１９頁（２００５）

【非特許文献5】Ｓｉｎｇｈら，ＪＡＭＡ，２９３，２１７頁（２００５）

【非特許文献6】Ｒａｍｓｅｙら，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ，２２，３８２頁（１９９９）

【非特許文献7】Ｒａｇｎａｒｓｏｎ−Ｔｅｎｎｖａｌｌら，Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ，４４，２０７７頁（２００１）

【非特許文献8】Ｐｒｏｍｐｅｒｓら，Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ，５１，１８２６頁（２００８）

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0011】

それ故に、慢性創傷、特にＶＬＵおよびＤＦＵのようなＨＴＨ潰瘍の改善された治療が緊急に必要とされている。

【0012】

ＬＬ−３７は、１８−ｋＤａのヒトカテリシジン抗菌タンパク質１８（ｈＣＡＰ１８）に由来する。ＬＬ−３７は、組織の修復および感染に対する防御において重要なメディエーターである。ｈＣＡＰ１８およびＬＬ−３７の両方は、創傷からの滲出液（ｗｏｕｎｄ ｆｌｕｉｄ）を含む種々の体液中に存在する（例えば、Ｍｕｒａｋａｍｉら，Ｊ．Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ．，８１，８４５頁（２００２）、Ｓｃｈａｌｌｅｒ−Ｂａｌｓら，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．，１６５，９９２頁（２００２）およびＳｏｒｅｎｓｅｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７８，２８５４０頁（２００３）を参照のこと）。急性創傷において、ｈＣＡＰ１８／ＬＬ−３７の転写は２、３時間以内に上方調節され、ＬＬ−３７は創縁で基底表皮角化細胞によって発現されるが、慢性創傷は、創縁でＬＬ−３７免疫反応性を有しない（例えば、Ｄｒｅｓｓｅｌら，Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１９，６２８頁（２０１０）およびＲｉｖａｓ−Ｓａｎｔｉａｇｏら，Ｊ．Ｄｅｒｍ．Ｓｃｉ．，６５，１９頁（２０１２）を参照のこと）。

【0013】

合成ＬＬ−３７を用いたｉｎ ｖｉｖｏ研究は、皮下注射が血管形成を刺激することを示しており（Ｋｏｃｚｕｌｌａら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１１１，１６６５頁（２００３））、急性創傷における反復局所投与は、炎症細胞を周囲組織に引き寄せる。ＬＬ−３７に対する抗体は、ヒト急性創傷のｅｘ ｖｉｖｏモデルにおいて、治癒を阻害し（Ｈｅｉｌｂｏｒｎら，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１２０，３７９頁（２００３）；国際特許出願ＷＯ２００４／０６７０２５も参照のこと）、一方、正常治癒を妨げるためにコルチコステロイドで処置されたマウスにおいて、ＬＬ−３７での局所処置は、創傷治癒を刺激した（Ｒａｍｏｓら，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，３２，１４６９頁（２０１１））。創傷治癒が妨げられた糖尿病マウスの急性創傷にＬＬ−３７を投与したところ、１つの研究において有益な効果を示したが（Ｃａｒｒｅｔｅｒｏら，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１２８，２２３頁（２００８））、その他の研究では効果は示されなかった（Ｓｔｅｉｎｓｔｒａｅｓｓｅｒら，ＰＬｏＳ ＯＮＥ，７，ｅ３９３７３（２０１２））。ＥＰ１ ３５８ ８８８は、ＬＬ−３７が血管形成の誘導因子であることを開示している。

【0014】

国際特許出願ＷＯ２００９／００１０８７は、創傷ケア材料を含む固体基質（ドレッシング）中に、ＬＬ−３７が含浸されている創傷ケア製品を開示している。その文書には、創傷を効果的に治療するためには、単位創傷面積当たりある特定の用量の、製剤中のＬＬ−３７を適用する必要があるという示唆は全くない。その用量に上限が有るという示唆、ましてや、その上限がいかなるものであり得るかについての示唆がないことは確かである。

【課題を解決するための手段】

【0015】

本発明者らは、臨床現場において、ある特定の用量のＬＬ−３７を適用して、ＨＴＨ／慢性下腿潰瘍を効果的に治療することができることを新たに見出した。特に、以下に記載されているように、本発明者らは、驚いたことに、潰瘍／創傷面積１ｃｍ^２当たりに適用される、少なくとも約８０μｇの用量のＬＬ−３７が、ＶＬＵを含む慢性潰瘍を効果的に治療しないことを見出した。

【0016】

したがって、本発明によると、ＶＬＵまたはＤＦＵのような慢性潰瘍を局所治療するための方法であって、
（ａ）ＬＬ−３７またはその薬学的に許容される塩および１つまたはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体系を含む医薬製剤の、前記潰瘍への局所適用；ならびにその後の
（ｂ）ドレッシングの適用
を含み、
前記製剤の前記適用は、前記潰瘍を治療するために創傷面積１ｃｍ^２当たりに適用されるＬＬ−３７が約８０μｇ未満であるＬＬ−３７の用量を創傷部位にもたらす、前記方法が提供される。

【0017】

慢性潰瘍を治療するための前記方法において前記用量で使用するための前記医薬製剤、ならびに慢性潰瘍を治療するための前記方法において前記用量で使用するための医薬製剤の製造のためのＬＬ−３７の使用がさらに提供される。

【図面の簡単な説明】

【0018】

【図1】ＨＴＨ ＶＬＵに異なる濃度のＬＬ−３７を含む製剤を適用することによる、創傷治癒率の「折れ棒」解析からの推定値を示す図であり、実線はプラセボ群を表し、大きい破線は３．２ｍｇ／ｍＬ群を表し、より小さい破線は１．６ｍｇ／ｍＬ群を表し、点線は０．５ｍｇ／ｍＬ群を表す。

【発明を実施するための形態】

【0019】

ヒトＬＬ−３７のアミノ酸配列を、以下の配列番号１に示す。
ＬＬＧＤＦＦＲＫＳＫＥＫＩＧＫＥＦＫＲＩＶＱＲＩＫＤＦＬＲＮＬＶＰＲＴＥＳ ［配列番号１］

【0020】

ＬＬ−３７は、とりわけ、アルカリ金属カチオン（例えばカリウムおよびナトリウム）およびアルカリ土類金属カチオン（例えばカルシウムおよびマグネシウム）の塩、アンモニウム塩またはＮ−メチルグルカミン−（メグルミン）のような水溶性アミン付加塩ならびに低級アルカノールアンモニウム塩および薬学的に許容される有機アミンの他の塩基塩を含む、薬学的に許容される塩基付加塩の形で用いられる。ＬＬ−３７は、酢酸塩の形で使用される。

【0021】

本発明の方法／使用は、ＨＴＨ潰瘍、静脈性潰瘍、糖尿病性潰瘍および圧迫潰瘍を含む慢性潰瘍の治療に特に有用である。特に言及される潰瘍には、ＤＦＵ、特に、ＶＬＵのような下腿潰瘍が含まれる。

【0022】

以下に記載されているように、本明細書に例示されている特定の製剤において、用いられた特定の媒体１ｍＬ当たり０．５ｍｇの濃度のＬＬ−３７は、３日毎に潰瘍に適用される場合に、創傷面積１ｃｍ^２当たり約１３μｇの有効用量のＬＬ−３７をもたらすと算出された。１．６ｍｇ／ｍＬの濃度は、４０μｇ／ｃｍ^２の有効用量を与える。しかし、３．２ｍｇ／ｍＬの濃度は、８０μｇ／ｃｍ^２となり、臨床的利益を全く生み出さなかった。

【0023】

よって、潰瘍を治療するために創傷面積１ｃｍ^２当たりに適用されるＬＬ−３７の用量は、ＬＬ−３７が、約４０μｇから約８０μｇの範囲内の値未満（言い換えれば、ＬＬ−３７が、約４０μｇから約８０μｇの間である値未満）であり得る。潰瘍に適用されるＬＬ−３７の用量の適した上限は、創傷面積１ｃｍ^２当たりに適用されるＬＬ−３７が、約７５μｇであり、約７０μｇ／ｃｍ^２のような値、例えば約６５μｇ／ｃｍ^２または６０μｇ／ｃｍ^２、約５５μｇ／ｃｍ^２など、約５０μｇ／ｃｍ^２または約４５μｇ／ｃｍ^２のような値であり得る。創傷面積１ｃｍ^２当たりに適用されるＬＬ−３７の適した下限は、約１μｇであり、約３μｇのような値、約５μｇなど、約１０μｇ／ｃｍ^２のような値、例えば約１５μｇ／ｃｍ^２または２０μｇ／ｃｍ^２，約２５μｇ／ｃｍ^２など、約３０μｇ／ｃｍ^２または約３５μｇ／ｃｍ^２のような値であり得る。

【0024】

本発明者らは、ＶＬＵおよびＤＦＵのような慢性潰瘍が、３日毎に適用される場合の、創傷面積１ｃｍ^２当たりに適用される約８０μｇ未満の用量のＬＬ−３７によって、効果的に治療されることを見出した。これは、各治療日につき創傷面積１ｃｍ^２当たりに適用される約２６．７μｇのＬＬ−３７に相当する。

【0025】

「治療１日につき創傷面積１ｃｍ^２当たり約２６．７μｇ未満であるＬＬ−３７の用量をもたらす医薬製剤」とは、本発明者らは、
（ｉ）製剤が、以下の性質を有する；および／または
（ｉｉ）製剤の適用頻度が、以下のようなものである
ことを含意または意味する：
潰瘍を治療するために創傷部位において働くＬＬ−３７の量は、各治療日につき創傷面積１ｃｍ^２当たり約２６．７μｇを超えない。

【0026】

明瞭に述べると、以下に例示されている特定の製剤において、用いられた特定の媒体１ｍＬ当たり０．５ｍｇの濃度のＬＬ−３７は（すなわち、以下に記載されている特定の医薬製剤）、３日毎に適用される場合に、創傷面積１ｃｍ^２当たり約１３μｇの有効用量のＬＬ−３７をもたらした。これは、各治療日につき創傷面積１ｃｍ^２当たり約４．３μｇのＬＬ−３７に相当する。同様に、１．６ｍｇ／ｍＬの濃度は、各日につき１３．３μｇ／ｃｍ^２の有効用量を与える。しかし、３．２ｍｇ／ｍＬの濃度は、各日につき２６．７μｇ／ｃｍ^２となるが、臨床的利益を全く生み出さなかった。

【0027】

この点において、より高い頻度で（例えば毎日）適用される場合には、用いられる同じ特定の媒体１ｍＬ当たり、ＬＬ−３７が約０．５ｍｇ未満である濃度が、創傷部位においてより多くのＬＬ−３７が、潰瘍を治療するために働くので、臨床的利益をもたらすことが予測される。同じことが、同じ特定の媒体からなる約３．２ｍｇ／ｍＬ以上の濃度にも当てはまり、３日毎よりも低頻度で適用される。

【0028】

同様に、異なる製剤（例えば、より長期放出および／または徐放性製剤）が用いられる場合には、いずれの時点においても潰瘍を治療するために働くＬＬ−３７の量は、以下に具体的に例示されている製剤における場合よりも少ない。この結果、創傷部位においてより少ないＬＬ−３７が、いずれの投与時間でも潰瘍を治療するために働くことになる。よって、類似の量のＬＬ−３７が、創傷部位においていずれの投与時間でも潰瘍を治療するために働くことを保証するために、初期にはより高濃度のＬＬ−３７が、そのような製剤中に使用される。そのような製剤も、同じ効果を生み出すために、低頻度で適用される。

【0029】

本発明のさらなる態様によると、慢性潰瘍の治療の方法であって、
（ａ）ＬＬ−３７および１つまたはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体系を含む医薬製剤の、前記潰瘍への局所適用；ならびにその後の
（ｂ）ドレッシングの適用
を含み、
前記製剤の前記適用は、前記潰瘍を治療するために各治療日につき創傷面積１ｃｍ^２当たりに適用されるＬＬ−３７が約２６．７μｇ未満であるＬＬ−３７の用量（例えば、約１３．３μｇから約２６．７μｇの間である値未満である用量）を創傷部位にもたらす、前記方法が提供される。

【0030】

本発明の方法に用いられる医薬製剤を、潰瘍への（本明細書に定義されているような）直接局所適用のために製剤化することができる。そのような製剤の非限定例は、液体または半固形製剤であり、任意の液剤、懸濁剤、乳剤、クリーム剤、ゲル剤またはローション剤を含み、ただし、それを適用した後、密着した状態で、創傷部位に物理的にとどまることができるほど、それは、室温（例えば約２０℃から約２５℃の間）でおよび大気圧（例えば約１気圧）で、十分に粘性である。

【0031】

液体または半固形製剤は、例えば、重力の影響下で、室温でおよび大気圧で、粘性であるべきであり、つまり、完全には自由流動性であるべきではない。しかし、それは、室温および大気圧下で実質的に固体状態であるために、普通のおよび／または適度な指圧で、適切な医療器具を使用して、例えばそれを創傷に塗り広げるなどの取り扱いができないほど粘性であるべきでもない。製剤は、単位創傷面積当たりの規定用量を送達するために、適切なスプレー（例えばポンプ作用またはエアロゾル）デバイスを使用して噴霧することによって、創傷に適用することもできる（例えば、国際特許出願ＷＯ２０１１／０５６１１６を参照のこと）。

【0032】

それ故に、製剤に適した粘度は、用いられる添加剤によって決まるが、約１から約１００Ｐａ・ｓの範囲であり、約５０Ｐａ・ｓのような値、例えば約２５Ｐａ・ｓ、約１５または約１０Ｐａ・ｓなどの値であり得る。前述の粘度値は、標準的な粘度計またはレオメーターによって測定されるような、室温（上記で定義されている）および大気圧（上記で定義されている）における動粘度である。

【0033】

ＬＬ−３７を潰瘍に適用するために使用される医薬製剤は、水性溶液を含む。水性溶液は、（ｐＨ、イオン強度、等張性などに関して）生理学的にまたは薬学的に許容される性質を有する溶液である。例えば、水および他の生体適合性の溶媒を含む等張性溶液、生理食塩水およびグルコース溶液のような水性溶液ならびにハイドロゲル形成材料が用いられる。水性溶液は、例えば、酢酸塩緩衝剤で緩衝化することができる。

【0034】

医薬製剤は、微生物の増殖を防ぐための保存剤、酸化防止剤、張性改変剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ−ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、着色剤などのような、薬学的に許容される添加剤も含み得る。水性懸濁剤において、組成物は、懸濁化剤および安定化剤と組み合わせることができる。

【0035】

本発明の一態様では、ＬＬ−３７を、水性溶媒（例えば、水または酢酸緩衝液）中に溶かし、適切な増粘剤を加えて、粘性の、塗り広げられる水性軟ゲル剤、クリーム剤またはローション製剤を作成する。

【0036】

ＬＬ−３７は、水性溶液中に製剤化される場合、上記のように、十分な粘度を有するクリーム剤、ゲル剤またはローション剤を得るために、増粘剤とともに製剤化することもできる。ハイドロゲル形成材料を含む適した薬剤は、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリル酸、ポリエチレングリコール、ポロキサマーブロックコポリマーなどのような合成ポリマー；カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびエチルヒドロキシエチルセルロースなどを含むセルロースエーテルのような半合成ポリマー；アカシア、カラギーナン、キトサン、ペクチン、デンプン、キサンタンガムなどのような天然ゴムを含む。言及されているそのような材料は、医薬品グレードのポリビニルアルコール（例えば、約７０から約９９％の範囲（例えば、約８５から約８９％の間）の加水分解度および約１５，０００から約１３０，０００の範囲の分子量を有する）を含む。

【0037】

生体付着性および／または粘膜付着性である製剤を使用することは有利であり得る。

【0038】

しかし、当業者は、本明細書に提示されている関連情報を入手すれば、創傷の単位面積当たりに適用されるべきＬＬ−３７の最大量（治療１日についての最大量を含む）に関して、通常の技術を使用して、用いられる添加剤（すなわち賦形剤、担体、増粘剤および他の成分）について、単位創傷面積当たり（１日につき）の用量が適切となり得るように、その特定の製剤中に使用されるＬＬ−３７の正確な濃度について確かめることができることを理解することが重要である。

【0039】

例えば、製剤は、ＬＬ−３７活性について、バイオアッセイを用いて試験し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中のＬＬ−３７と比較することができる。バイオアッセイは、抗菌アッセイまたは真核細胞株の応答に基づいたアッセイであり得る。生物学的効果がＰＢＳ中のＬＬ−３７の特定の濃度（例えば１０μｇ／ｍｌ）の効果に等しい、検討される製剤中のＬＬ−３７の濃度を使用して、用量ファクターを計算することができる。例えば、ＰＢＳ中の約１０μｇ／ｍｌのＬＬ−３７と同じ生物学的効果を達成するために、検討される製剤中で約２０μｇ／ｍｌの濃度のＬＬ−３７が必要とされる場合には、約２という用量ファクターを導くことができ、それを使用して、製剤中のＬＬ−３７の濃度を２倍にすることで、創傷面積当たり、所望の用量のＬＬ−３７を送達することができる。

【0040】

当業者によって認識されているように、用いられる１つまたはそれ以上の添加剤がＬＬ−３７と相互作用して、ＬＬ−３７を露出させる、製剤から創傷部位へのＬＬ−３７の放出を実質的に防ぐおよび／または相乗効果をもたらす場合には、上記の一般的な通常の技術が適用できないため、結果的に、治療１日につき単位創傷面積当たり、前述の範囲外のＬＬ−３７の用量となる。他方では、添加剤が製剤からのＬＬ−３７の持続放出を可能にする場合には、上記のように、用いる濃度を計算する際に、このことを考慮に入れるべきである。

【0041】

本発明の方法／使用において、本明細書に記載されているようなＬＬ−３７を含む医薬製剤は、上記のように、最初に、潰瘍に直接（すなわち中間工程なしに）および局所適用される。製剤の適用に続いておよびそれに対して別個に、ドレッシングが別個に適用される。その後のおよび別個のドレッシングの適用は、例えば、（創傷組織にＬＬ−３７の結合を可能にするために）ＬＬ−３７を含む医薬製剤の適用を、約１０分のような約５分以上の時間行うことができるが、約３０分のような約２０分以下の時間で行うこともできる。

【0042】

用いられるドレッシング材は、不活性な（すなわち、実質的に非毒性の）材料であり得、創傷ケアにおける使用に適したおよび／または創傷治癒過程を助ける（例えば、加速する）および／または創傷の感染を防ぐことができる材料であり得る。例えば、ドレッシングは、上皮の再生ならびに／または創傷上皮および／もしくは創傷間質の治癒の能力を高めることができる。一実施形態では、創傷ケア製品は、上皮および／または間質細胞の増殖を高めることができる。

【0043】

ドレッシングは、創傷の滲出液を吸収することもできる。

【0044】

それ故に、ドレッシングは、アルギン酸塩、シートハイドロゲル、ハイドロファイバー、フォームおよびそれらの混合物からなる群から選択される材料を含み得る。

【0045】

創傷の滲出液を吸収することができる追加的なドレッシングは、親水コロイド、コラーゲンベースの材料、ヒアルロン酸ベースの材料、デキストリノマー、デキストリノマー／カデキソマーおよび酸化再生セルロースを含む。

【0046】

ドレッシングは、典型的には、固体乾式不織布シート（または「フェルト」）、凍結乾燥シート、リボンまたはロープの形で提供され、滲出液が非常に多い創傷を治療するのに特に適している。

【0047】

例示的な市販のアルギン酸塩ベースの材料は、Ｓｕｐｒａｓｏｒｂ（登録商標）（Ｓａｍｍｏｎｓ Ｐｒｅｓｔｏｎ、ＵＳＡ）およびＫａｌｔｏｓｔａｔ（登録商標）（ＣｏｎｖａＴｅｃ、ＵＫ）を含む。

【0048】

ドレッシングは、シートハイドロゲルを含み得るまたはそれからなり得る。そのような創傷ケア材料は、滲出液がない創傷を治療するのに特に適している。適したシートハイドロゲルは、ポリウレタン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリル酸、ポリエチレングリコール、ポロキサマーブロックコポリマーなどのような合成ポリマー；ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロースおよびエチルヒドロキシエチルセルロースなどを含むセルロースエーテルのような半合成ポリマー；アカシア、カラギーナン、キトサン、ペクチン、デンプン、キサンタンガムなどのような天然ゴムならびにアルギン酸塩からなる群から選択される、１つまたはそれ以上のハイドロゲル形成ポリマーを含み得る。

【0049】

例示的な市販のシートハイドロゲルは、Ｅｌａｓｔｏｇｅｌ（登録商標）（Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．、ＵＳＡ）およびＳｕｐｒａｓｏｒｂ（登録商標）Ｇ（Ｓａｍｍｏｎｓ Ｐｒｅｓｔｏｎ、ＵＳＡ）を含む。

【0050】

さらなる選択肢として、ドレッシングは、ハイドロファイバーを含み得るまたはそれからなり得る。そのようなドレッシングを含む創傷ケア製品は、典型的には、乾式不織布シート、凍結乾燥シートまたはリボンもしくはロープの形で提供され、滲出液が少量から多量の創傷または乾燥域および湿潤域の両方を有する創傷に使用するのに特に適している。

【0051】

適したハイドロファイバーは、カルボキシメチルセルロースを含み得るまたはそれからなり得、Ａｑｕａｃｅｌ（登録商標）およびＶｅｒｓｉｖａ（登録商標）（両方ともＣｏｎｖａＴｅｃ、ＵＫ）ならびにＳｏｌｖａｌｉｎｅ（登録商標）Ｎ（Ａｃｔｉｖａ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＵＫ）を含む。

【0052】

さらなる選択肢として、ドレッシングは、Ａｌｌｅｖｙｎ（登録商標）製品系列（Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｎｅｐｈｅｗ、ＵＫ）、Ｍｅｐｉｌｅｘ（登録商標）、（Ｍｏｅｌｎｌｙｃｋｅ、Ｓｗｅｄｅｎ）およびＴｅｇａｄｅｒｍ（登録商標）（３Ｍ、ＵＫ）のようなポリウレタンフォームを含み得るまたはそれからなり得る。

【0053】

使用の前に、医薬製剤およびドレッシングを滅菌し、微生物不透過性容器の中にパッケージすべきである。滅菌は、無菌製造および／または照射による最終（すなわち、製造後）滅菌のような、当技術分野においてよく知られている技術を使用して達成される。

【0054】

上述のように、ドレッシング材は、不活性であるべきであり、したがって、ＬＬ−３７と何らかの形で相互作用して、例えば、それを化学的にまたは物理的に劣化させるべきではない。

【0055】

それ故に、ドレッシングは、同様にまたはあるいは、合成ポリマー、デンプンおよび／または多糖類を含み得る。例えば、ドレッシングは、水性ポリマーマトリックス、セルロース誘導体、アクリレートコポリマー、ゴム、多糖および／またはポリ乳酸ポリマーを含み得る。そのような材料は、水溶性であり得るおよび／または有孔性であり得る。

【0056】

本発明の方法／使用において、ＬＬ−３７を含む製剤は、上記のように、正確な投与量で潰瘍に直接適用され、その後、治療された創傷領域を覆うためにドレッシングが適用される。

【0057】

場合により、第２の従来のドレッシングが、第１のドレッシングの最上部を覆って適用される。さらに、ある場合には、透過性の非付着性ドレッシングが、潰瘍とドレッシングとの間のいずれかの場所に適用される。

【0058】

ドレッシングの適用後、有利には、Ｃｅｌｌｏｎａ（登録商標）（Ａｃｔｉｖａ、ＵＫ）またはＳｏｆｆｂａｎ（登録商標）（Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｎｅｐｈｅｗ、ＵＫ）のような延性、柔軟性および吸収性のクッション、Ｃｏｍｐｒｉｌａｎ（登録商標）（Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｎｅｐｈｅｗ）のような圧縮包帯および／またはＺｉｐＺｏｃ（登録商標）（Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｎｅｐｈｅｗ）のような医療用ストッキングを含む、適切な圧迫手段が適用される。

【0059】

当業者であれば、本発明の方法／使用を実施する前に、死滅、損傷または感染した組織を除去し（デブリードマン）、適切な医療処置（消毒薬）を使用して、いずれの感染組織も治療し、適切な洗浄剤（例えば、水）を使用して、創傷領域を洗浄し、例えばガーゼを使用して、それを乾燥させることが必要であり得ることを認識している。掻爬術を前もって行うことも有り得る。

【0060】

その上、および有利には、製剤および／またはドレッシングはまた、創傷環境における微生物の増殖を防ぐ、停止する、減じる、またはそれ以外の場合、減少させることができる。それ故に、本発明の方法／使用において使用される製剤は、抗菌物質、例えば、デフェンシン、グラミシジンＳ、マゲイニン、セクロピン、ヒスタチン、ヒファンシン（ｈｙｐｈａｎｃｉｎ）、シンナマイシン、ブルホリン１（ｂｕｒｆｏｒｉｎ １）、パラシン１、プロタミンならびに親タンパク質の抗菌活性の少なくとも一部を保持するその断片、変異体および融合体からなる群から選択されるポリペプチド；ならびに銀、スルファジアジン銀、ポリヘキシニド、ヨウ素またはメトロニダゾールをさらに含み得る。

【0061】

本発明の方法／使用において、製剤、ドレッシングおよび／または圧迫手段は、治癒過程を助けるためおよび感染を防ぐために、一定の間隔で、創傷上で取り換えられるべきであることが認識される。

【0062】

「約」という語が本明細書において用いられる場合はいつでも、特に、製剤中のＬＬ−３７の用量および濃度、タイミング、粘度、用量ファクター、加水分解度、分子量などを含む量に関する状況では、そのような変数は、近似であり、したがって、本明細書において明記されている数から±１０％、例えば±５％、好ましくは±２％（例えば±１％）変化し得ることが認識される。

【0063】

本発明の方法／使用は、製造するのが容易で安価であり、ＶＬＵ、ＤＦＵなどを含む慢性創傷の効果的な治療を可能にする創傷ケア手段を提供する。

【0064】

本発明の方法／使用はまた、確立された医薬加工処理方法の使用を利用し、食品もしくは医薬品、医療用デバイス製品における使用を承認されている材料または同等の規制状態の材料を利用するという利点を有する。

【0065】

本発明の方法／使用はまた、ＶＬＵ、ＤＦＵのような慢性創傷の治療のためであろうと、そうでなかろうと、先行技術において知られている類似の方法と比較して、より有効であり、発生する副作用がより少なく、より良好な患者許容性を有し、より良好な薬物動態プロフィールを有し、および／または他の有用な薬理学的、物理的または化学的性質を有することがあるという利点を有し得る。

【0066】

本発明は、以下の実施例によって、添付の図１を参照して説明される。図１は、ＨＴＨ ＶＬＵに異なる濃度のＬＬ−３７を含む製剤を適用することによる、創傷治癒率の「折れ棒」解析からの推定値を示す図であり、実線はプラセボ群を表し、大きい破線は３．２ｍｇ／ｍＬ群を表し、より小さい破線は１．６ｍｇ／ｍＬ群を表し、点線は０．５ｍｇ／ｍＬ群を表す。

【実施例】

【0067】

ＨＴＨ ＶＬＵを対象としたＬＬ−３７の二重盲検、無作為化、プラセボ対照、安全性およびパイロット用量反応試験
二重盲検、無作為化、プラセボ対照、第Ｉ／ＩＩ相安全性およびパイロット用量反応試験を、ヒト対象について行った。最初の対象は２０１２年８月に登録され、最後の対象は２０１３年４月に完了した。

【0068】

本試験は、日米ＥＵ医薬品規制調和国際会議（ＩＣＨ）における、医薬品の臨床試験の実施に関する基準（ＧＣＰ）の三極合意事項に基づくガイドライン、適用される現地規制およびヘルシンキ宣言において策定された倫理的原則に従って、デザイン、実施および報告され、スウェーデンの３施設にわたって行われた。

【0069】

選択基準
試験対象は、ＶＬＵまたは静脈成分優位性の静脈性−動脈性混合型潰瘍を有する、少なくとも１８歳の男性対象または閉経後もしくは臨床的不妊症の女性を含んだ。

【0070】

除外基準は、５年以上寛解状態にあるのでない限り、対象が、標的潰瘍内にＶＬＵ以外の既知の主要病因を有する場合および悪性疾患（基底細胞癌を除く）を有する場合を含んだ。

【0071】

必要な規制当局（Ｓｗｅｄｉｓｈ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ａｇｅｎｃｙ（ＭＰＡ）の承認および倫理的な（地域の倫理委員会）承認ならびに文書によるインフォームドコンセントを得た後、合計５６名の対象がスクリーニングのために来院し、その後、３週間の非盲検導入期に参加した。

【0072】

３０ｃｍ^２を超えるおよび２ｃｍ^２未満の面積を有する標的創傷を、当初は除外した。しかし、含有率を増加させ、総試験時間を減じるために、対象２１名の無作為化後に基準を修正し、４０ｃｍ^２を超えるおよび１ｃｍ^２未満の面積を除外した。適格な対象が、参加基準を満たす２つ以上の創傷を有した場合には、試験責任医師が、標的創傷として最も適切なサイズ、形状および位置を有する創傷を特定した。対象１名につき創傷１つのみを、この試験で治療した。

【0073】

３週間の導入期間中、対象は、３（±１）日毎および週２回以下、プラセボ調製物（以下を参照のこと）の適用を６回（合計で）、創傷滲出液を管理するために、伸縮包帯法および適切なドレッシングを含む標準的な圧縮包帯法（スウェーデンのＭＰＡによって定義されている）と組み合わせて受けた。

【0074】

潰瘍性面積の減少が、導入期の開始時と比較して１週当たり７％から１３％の間を超えた（サイズによって）場合には、その潰瘍は、本試験の目的のためのＨＴＨとは定義されなかった。そのような場合には、対象を本試験から除外し、転帰をスクリーニング失敗と記録した。

【0075】

導入期後、適格な対象３４名は、ベースライン評価を受けた後、無作為化され、実薬治療（３つの治療含量のうちの１つ）またはプラセボを受けた。

【0076】

製剤および治療
上記の導入期後、４週間の治療期間が開始され、これには、８回の来院、最後の治療から３日（±１日）後の治療終了時の来院およびさらなる４週（±１〜７日）後の追跡来院が含まれた。

【0077】

対象は、４治療群に無作為化され、ＬＬ−３７（選択すべき３つの含量のうちの１つ）またはプラセボを受けた。

【0078】

治療前の創面環境調整は、生育不可能な組織のデブリードマン、臨床感染症の治療および最も適切なドレッシングの選択を含んだ（以下を参照のこと）。創傷は、水道水を使用して洗浄され、ガーゼパッドで優しく乾燥させ、必要ならば、試験製品またはプラセボの適用前に、掻爬術が適用された。

【0079】

ＬＬ−３７の滅菌濃縮物０．７ｍＬを水に溶かし、１ｍＬ当たり２．５、８または１６ｍｇの濃度のＬＬ−３７にし、密閉ガラス製バイアル（ＡＰＬ、Ｕｍｅａ、Ｓｗｅｄｅｎ）中に入れて提供し、それらは試験前に２から８℃の間で保管された。創傷への適用直前に、これを、酢酸緩衝生理食塩水（ＡＰＬ ＡＢ）中ポリビニルアルコール１３．１％（ｗ／ｗ）を含む粘性の賦形剤溶液５ｍＬで希釈して、それぞれ０．５、１．６または３．２ｍｇ／ｍＬの最終濃度とした。プラセボは、ＬＬ−３７を含まない点以外は同じ溶液を正確に含んでいた。

【0080】

実薬治療またはプラセボの希釈された粘性の液剤を、浄化および乾燥させた潰瘍の中央に、１ｍＬグレードの（１ｍＬ ｇｒａｄｅｄ）シリンジを用いて、２５μＬ／ｃｍ^２の量で局所適用し、試験薬を混合する際に使用されたシリンジプランジャーの丸みを帯びた頭部を使用して、潰瘍領域の全体一面に均一に広げた。

【0081】

５分間待機後（ＬＬ−３７またはプラセボが、ドレッシング材によって吸収されるのを防ぐため）、上記の手順に続いてドレッシングおよび圧縮包帯を適用した。

【0082】

滲出液が中程度から多量の創傷には、Ｍｅｐｉｌｅｘ（登録商標）、Ａｌｌｅｖｙｎ（登録商標）およびＴｅｇａｄｅｒｍ（登録商標）のようなポリウレタンフォームで作られる吸収性の高いドレッシングを使用した。あるいは、吸収性のハイドロファイバードレッシングＡｑｕａｃｅｌ（登録商標）を使用した。滲出液が軽度から中程度の創傷には、付着性の端を有するまたは有しない非付着性ドレッシングを使用した。使用したドレッシングは、Ｓｏｌｖａｌｉｎｅ（登録商標）Ｎまたは組み合わされたポリウレタン／ハイドロファイバードレッシングＶｅｒｓｉｖａ（登録商標）であった。乾燥した創傷には、Ａｑｕａｃｅｌ（登録商標）ハイドロファイバードレッシングを使用した。

【0083】

これらの他のドレッシングと組み合わせてガーゼパッドを使用して、圧縮中に感受性部分の荷重をなくした。Ｃｅｌｌｏｎａ（登録商標）またはＳｏｆｆｂａｎ（登録商標）を含む、１００％ビスコース、延性、柔軟性および吸収性のクッションを使用した。Ｃｏｍｐｒｉｌａｎ（登録商標）は、最も一般的に使用されている圧縮包帯であり、本試験で使用した。２種の包帯（８および１０ｃｍ幅）を、足指の付け根から螺旋状に膝のちょうど真下まで、およそ５０％伸ばして結んだ。あるいは、上述の創傷ドレッシングのいくつかと組み合わせて、ＺｉｐＺｏｃ（登録商標）医療用ストッキングおよびＣｏｐｌｕｓ（登録商標）もしくは類似の自己付着性包帯またはＰｒｏｆｏｒｅ Ｌｉｔｅ（登録商標）を許可した。Ｄａｕｅｒタイプの長く伸びる包帯も、使用することができた。このタイプの包帯が有する高い静止圧のために、それは、夜間にまたは対象が長期間安静位であった場合には、一時的に取り外された。

【0084】

追加的な治療は、皮膚の問題の治療のための特定の局所クリーム剤を含んだ。創縁近くの皮膚を浸軟から保護するために、亜鉛ペーストまたはＣａｖｉｌｏｎ（登録商標）を、潰瘍周囲の皮膚に使用した。ヒドロコルチゾンクリーム剤または軟膏剤（局所ステロイド群Ｉまたはヒドロコルチゾン−イミダゾールクリーム剤）を、潰瘍周囲の湿疹に使用した。皮膚が乾燥し、うろこ状であった場合には、ＣａｎｏｄｅｒｍまたはＰｒｏｐｙｄｅｒｍクリーム剤を許可した。

【0085】

上記の手順を、３（±１）日毎に、４週間の治療期間にわたって、週２回以下で繰り返した。これは合計８回の適用に相当した。

【0086】

治療に続いて、対象を４週間（±１〜７日）追跡した。

【0087】

試験は、創傷治癒率、ドレッシング時およびその前の２４時間の両方での創傷部位における疼痛を、視覚的アナログ尺度（ＶＡＳ）を使用して評価した。試験が短期間であり、標本数が少ないことに基づくと統計学的に有意な結果は期待されなかったが、完全治癒の発生率を全て記録した。創傷治癒の程度を示すために、創傷サイズ測定を、試験期間にわたって繰り返し行った。１回おきの来院時に、Ｖｉｓｉｔｒａｋ（商標）面積測定器を使用して、創傷面積を測定し、創傷部位における疼痛および創傷の特徴（臭気、スラフ、肉芽形成および壊死組織）を記録した。創傷状態は、創傷の写真を使用して記載することとした。

【0088】

有害事象（ＡＥ）および局所忍容性を、すべての来院時に評価した。対象には、いずれのＡＥも報告するように忠告し、いずれかの重要なＡＥが起こった場合に、連絡するための電話番号を書いた緊急連絡先カードを渡した。臨床検査による安全性評価およびＬＬ−３７に対する抗体の発現の検討のために、血液を採取した。臨床検査値およびバイタルサインの変化を評価し、ＬＬ−３７に対する自己抗体形成についての分析を行った。

【0089】

安全性評価項目は、
・ 炎症の臨床的徴候（浮腫、発赤、臭気および温度上昇）または皮膚の刺激状態（落屑、発赤、丘疹、小水疱、膿疱）によって例示されるような、創傷および隣接皮膚における重症の局所反応の発生率；いずれの局所反応も、等級化した尺度（０〜３）で記録された；
・ ベースライン（無作為化来院）と比較して、創傷面積の３０％を超える増加の発生率；
・ ベースラインからの臨床検査値およびバイタルサインの変化；
・ ＡＥの全発生率
を含んだ。

【0090】

有効性評価項目は、
・ 試験期間内の創傷治癒率；
・ 無作為化時のベースラインからの３０％を超える面積縮小を達成している潰瘍の数；および
・ ＶＡＳスコア（０〜１０）を使用した局所疼痛の変化
・ ベースラインからの創傷の特徴：（スラフ、滲出液、肉芽形成組織、壊死のスコア）の変化（尺度０〜３）
を含んだ。

【0091】

解析
統計解析は、ＳＡＳ（登録商標）ソフトウェア（バージョン９．２以上；ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃａｒｙ、ＮＣ、ＵＳ）を使用して実施した。

【0092】

治療期間にわたる治癒率を推定するために、創傷面積を各対象について経時的にモデリングし、治癒率と用量との間の関係性を検討した。

【0093】

治癒率定数（すなわち、創傷面積の変化または数学的に変換された創傷面積／日）の推定値を、４つの各治療群について導き、９５％信頼区間（ＣＩ）を求めた。初期の創傷面積および治癒率を表す２つのパラメータを有するデータに、指数関数的減衰モデルを当てはめた。モデルは、
Ｙ＝α×ｅ^−βｔ
［式中、αは、初期の創傷面積（すなわち無作為化来院時）を意味し、βは、１日当たりの治癒率として表されるサイズの縮小を意味し、Ｙは、創傷面積を意味し、ｔは、無作為化来院からの時間（日）を意味する］という形を有した。

【0094】

試験治療の適用が治癒過程にどのように影響を及ぼしたかについて評価するために、すべての導入期のデータを組み込んだ追加的な解析を行った。これは、「折れ棒」アプローチを使用し、適したデータ変換後（例えばｌｏｇ、平方根）、経時的な線形応答によって、無作為化前および無作為化後のデータを概算して評価した。

【0095】

適切な場合には、治療間の全差異を経時的に評価するために、繰り返し行った測定値の解析を使用して、疼痛スコアを解析した。モデルは、治療および時間ならびに２つの間の相互作用の項を含んだ。

【0096】

少なくとも１つのＡＥを経験した、各治療群における対象の割合を使用して、いずれかのＡＥの発生率を推定し、関連する９５％ＣＩを求めた。ＣＩは、Ａｌｔｍａｎら，Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｗｉｔｈ Ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅ，ＢＭＪ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｇｒｏｕｐ（２０００）に詳述されている方法を使用して算出した。この方法は、標本数が少ないまたは発生率が低い場合に適切であった。適切な場合には、ＡＥの発生率と用量との関係性を検討した。グレード３（重症の）局所反応の全発生率を、ＬＬ−３７で治療した対象について、９５％ＣＩとともに示した。臨床検査値は、参照範囲とともに、治療後の値対ベースラインのプロットで示すこととした。

【0097】

結果
合計３１名の対象が、８回の治療適用の全クールを受けた。残りの３名の対象のうち、２名（０．５ｍｇ／ｍＬ治療群）は、７回の適用を受け、１名の対象（プラセボ群）は、３回の適用を受けた。

【0098】

指数関数的減衰モデルを創傷面積に当てはめたところ、データへの適合は良好であった。

【0099】

ＬＬ−３７の０．５ｍｇ／ｍＬ用量の治癒率定数（０．０３９）は、プラセボ（０．００７、ｐ＝０．００３）についての治癒率定数とは有意に異なり、創傷面積のより速い縮小（すなわち改善された治癒）を示した。非線形混合効果モデルを使用し、差の推定値を得、それの標準誤差で割ることによって、パラメータ間の差の有意性を算出し、結果をｔ分布と比較した。

【0100】

ＬＬ−３７の１．６ｍｇ／ｍＬ用量の推定治癒率定数である０．０１９も、５％の水準で統計学的に有意ではなかった（ｐ＝０．０９）ものの、プラセボと比較して、創傷面積のより速い縮小を示した。ＬＬ−３７の高用量（治癒率定数０．００４）群とプラセボ群との間の統計学的有意差はなかった。低用量群および中用量群は、統計学的に区別できなかった。創傷面積の平均縮小の測定を用いた、各治療についての推定治癒率定数を、以下の表１に示した。

【0101】

【表1】

【0102】

全体的に見て、創傷面積の最も高度な縮小は、すべての来院にわたって、ＬＬ−３７の１．６ｍｇ／ｍＬ用量について認められた。ＬＬ−３７の１．６ｍｇ／ｍＬ用量についての創傷面積の平均縮小は、無作為化から試験の終了までで５．２９ｃｍ^２であった（以下の表２を参照のこと）。

【0103】

【表2】

【0104】

指数関数的減衰モデルの治癒率定数は、プラセボ群に対して、低用量（０．５ｍｇ／ｍＬ）群については６倍の差、中用量（１．６ｍｇ／ｍＬ）群については３倍の差を示した（０．５ｍｇ／ｍＬについてはｐ＝０．００３および１．６ｍｇ／ｍＬについてはｐ＝０．０８８）。それ故に、これらの製剤は、創傷面積のより速い縮小を生じ、ひいては改善された治癒応答を起こした。しかし、ＬＬ−３７の高用量（３．２ｍｇ／ｍＬ）群とプラセボ群との間に、推定治癒率定数の差はなかった。

【0105】

導入期からのデータを組み込むためにおよび治療の追加が治癒率に影響を及ぼしたかどうかを評価するために、折れ棒解析を行ったところ、前の解析と一致した。図１に示すように、より低い２通りの用量のＬＬ−３７はいずれも、導入期中よりも無作為化後に、創傷面積のより大きい縮小を有しており、これは、治療前の値と比較して、統計学的に有意な、改善された治癒を示していた（０．５ｍｇ／ｍＬおよび１．６ｍｇ／ｍＬのそれぞれについて、ｐ＜０．００１およびｐ＝０．０１１）。無作為化後の治癒率と導入期との間の統計学的有意差は、高用量についてもプラセボについても見られなかった。導入期中の変化率はゼロに非常に近かった。これは、応答者が試験から除外されたため、予期されたことであった。

【0106】

結論
より低い２つの用量（０．５および１．６ｍｇ／ｍＬ）のＬＬ−３７の投与に応答した創傷治癒が、顕著にかつ有意に改善されていることが観察された。この試験の結果は、３日毎の０．５（創傷面積１ｃｍ^２当たり１３μｇのＬＬ−３７に等しい）および１．６ｍｇ／ｍＬ（創傷面積１ｃｍ^２当たり４０μｇのＬＬ−３７に等しい）の用量が、創傷治癒の有意な刺激をもたらすことを示唆している。あるいは、より高用量をより低頻度で適用することが適切な可能性もある。

【図1】