特許 6557240 ヒト免疫不全ウイルス／後天性免疫不全症候群の治療

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6557240

(24)【登録日】2019年7月19日

(45)【発行日】2019年8月7日

(54)【発明の名称】ヒト免疫不全ウイルス／後天性免疫不全症候群の治療

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/17 20150101AFI20190729BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20190729BHJP

   A61K 39/39 20060101ALI20190729BHJP

   A61K 38/19 20060101ALI20190729BHJP

   A61P 31/18 20060101ALI20190729BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20190729BHJP

【ＦＩ】

   A61K35/17 ZZMD

   A61K39/00 Z

   A61K39/39

   A61K38/19

   A61P31/18

   A61P37/04

【請求項の数】24

【全頁数】26

(21)【出願番号】特願2016-545336(P2016-545336)

(86)(22)【出願日】2015年1月8日

(65)【公表番号】特表2017-502058(P2017-502058A)

(43)【公表日】2017年1月19日

(86)【国際出願番号】US2015010658

(87)【国際公開番号】WO2015105999

(87)【国際公開日】20150716

【審査請求日】2017年12月25日

(31)【優先権主張番号】61/924,936

(32)【優先日】2014年1月8日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】513276477

【氏名又は名称】イミュノバティブ セラピーズ，リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100189094

【弁理士】

【氏名又は名称】田邉 陽一

(72)【発明者】

【氏名】ハー−ノイ マイケル

【審査官】 伊藤 基章

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１３−５２３８８６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００７−５２３８８４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００２−５４３１４４（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３５／００

Ａ６１Ｋ ３８／００

Ａ６１Ｋ ３９／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

高免疫原性抗原を含む同種異系活性化Ｔｈ１免疫生細胞又はその構成成分である高免疫原性抗原、；ＣＤ４０表面レセプターとの結合を介してシグナルを伝達する分子、；並びに１型サイトカイン、；を含んでなるａＴｈ１組成物であって、以下の用法にて用いるＨＩＶ患者の治療用組成物：
（Ａ）ＨＩＶに感染している患者に、少なくとも１回の前記ａＴｈ１組成物の皮内投与を行うことによって、ＨＩＶ感染に耐性を有する循環ＣＤ４＋Ｔｈ１記憶細胞の力価を上昇させ、更に、
（Ｂ）少なくとも１回の前記ａＴｈ１組成物の静脈内投与を行うことによって、前記患者における前記ＣＤ４＋Ｔｈ１記憶細胞を増加させ活性化させること、
を含む、用法であって、；
前記用法が、（ａ−１）少なくとも２回の前記ａＴｈ１組成物の皮内投与を行うことによって前記力価を上昇させる用法であって、（ｂ−１）前記ａＴｈ１組成物の静脈内投与を当該皮内投与から７日以内に行うことを含む用法であり、；
前記用法が、（ｂ−２）ａＴｈ１組成物の静脈内投与の後に更にａＴｈ１組成物の静脈内投与を増量して行うことを含む用法であって、当該静脈内投与による前記患者のＨＩＶウイルス量の増加の有無を検査することを含む用法である。

【請求項2】

前記用法が、前記（ｂ−１）に記載の静脈内投与に関して、
（ｂ−１’）前記ａＴｈ１組成物の静脈内投与を当該皮内投与から２４時間以内に行うことを含む用法である、
請求項１に記載の治療用組成物。

【請求項3】

前記用法の（ｂ−２）に記載の静脈内投与に関して、
当該静脈内投与による前記患者のＨＩＶウイルス量の増加が検出されない場合に、又は、当該静脈内投与による前記患者のＨＩＶウイルス量の増加が検出されたが当該ＨＩＶウイルス量が増加前のベースラインに回復した場合に、更なるａＴｈ１組成物の静脈内投与が行われる、
請求項１又は２に記載の治療用組成物。

【請求項4】

前記同種異系活性化Ｔｈ１免疫生細胞が、ＣＤ３／ＣＤ２８モノクローナル抗体被覆マイクロ粒子を付着して備えるものである、請求項１〜３のいずれかに記載の治療用組成物。

【請求項5】

前記用法において、（ａ−１）に記載の少なくとも２回の前記ａＴｈ１組成物の前記皮内投与の間の間隔が３日間から１週間の間である、請求項１〜４のいずれかに記載の治療用組成物。

【請求項6】

前記用法が、（ａ−１）に記載の少なくとも２回の前記ａＴｈ１組成物の皮内投与において、最初の２回の皮内投与の部位とは異なる部位にて更に追加的な少なくとも２回の前記ａＴｈ１組成物の皮内投与を含む用法である、請求項１〜５のいずれかに記載の治療用組成物。

【請求項7】

前記用法において、（ａ−１）に記載の少なくとも２回の前記ａＴｈ１組成物の皮内投与のうちの少なくとも２回が同じ部位である、請求項１〜６のいずれかに記載の治療用組成物。

【請求項8】

前記用法において、前記静脈内投与をａＴｈ１組成物の皮内投与とほぼ同時に行うことを含む、請求項１〜７のいずれかに記載の治療用組成物。

【請求項9】

前記ａＴｈ１組成物が、同種異系活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞を含むものである、請求項１〜８のいずれかに記載の治療用組成物。

【請求項10】

前記用法が、少なくとも１回の前記ａＴｈ１組成物の投与及び少なくとも１回のＨＩＶ抗原の投与を行って、ＨＩＶ患者におけるＨＩＶ感染に耐性を有する循環ＣＤ４＋Ｔｈ１記憶細胞の力価を上昇させ、前記患者におけるＨＩＶウイルス量を減少させることを含む用法である、請求項１〜９のいずれかに記載の治療用組成物。

【請求項11】

前記用法において、前記ａＴｈ１組成物及び前記ＨＩＶ抗原が皮内投与される、請求項１０に記載の治療用組成物。

【請求項12】

前記用法において、２回以上の前記ａＴｈ１組成物及び前記ＨＩＶ抗原の皮内投与が行われる、請求項１０又は１１に記載の治療用組成物。

【請求項13】

前記用法において、前記患者が、高活性抗レトロウイルス療法（ＨＡＡＲＴ）による治療を同時に受けている、請求項１〜１２のいずれかに記載の治療用組成物。

【請求項14】

前記用法において、前記ＨＡＡＲＴを中断し、前記患者のＣＤ４＋細胞及びＨＩＶウイルス量をモニタリングする、請求項１３に記載の治療用組成物。

【請求項15】

前記用法において、前記患者にウイルス急増が検出された場合には前記ＨＡＡＲＴを再開する、請求項１４に記載の治療用組成物。

【請求項16】

前記患者におけるＨＩＶ潜伏ウイルス量を低減又は除去する、請求項１〜１５のいずれかに記載の治療用組成物。

【請求項17】

抗レトロウイルス薬剤を更に含む、請求項１〜１６のいずれかに記載の治療用組成物。

【請求項18】

前記用法において、前記ａＴｈ１組成物及びＨＩＶ抗原が別々に投与される、請求項１０〜１７のいずれかに記載の治療用組成物。

【請求項19】

ＨＩＶ抗原を更に含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の治療用組成物。

【請求項20】

治療用ＨＩＶワクチンの構成成分を含むキットであって、請求項１〜１９のいずれかに記載の治療用組成物を含んでなり、
前記ａＴｈ１組成物の皮内投与分、前記ａＴｈ１組成物の静脈内投与分、及びＨＩＶ抗原、を含んでなるＨＩＶ患者の治療用キットであって、以下の用法で用いるための前記キット：
（Ａ）ＨＩＶに感染している患者に、少なくとも１回の前記ａＴｈ１組成物の皮内投与を行うことによって、ＨＩＶ感染に耐性を有する循環ＣＤ４＋Ｔｈ１記憶細胞の力価を上昇させ、更に、
（Ｂ）少なくとも１回の前記ａＴｈ１組成物の静脈内投与を行うことによって、前記患者における前記ＣＤ４＋Ｔｈ１記憶細胞を増加させ活性化させること、
を含む、用法であって、；
前記用法が、（ａ−１）少なくとも２回の前記ａＴｈ１組成物の皮内投与を行うことによって前記力価を上昇させる用法であって、（ｂ−１）前記ａＴｈ１組成物の静脈内投与を当該皮内投与から７日以内に行うことを含む用法であり、；
前記用法が、（ｂ−２）ａＴｈ１組成物の静脈内投与の後に更にａＴｈ１組成物の静脈内投与を増量して行うことを含む用法であって、当該静脈内投与による前記患者のＨＩＶウイルス量の増加の有無を検査することを含む用法である。

【請求項21】

前記治療用キットが、高活性抗レトロウイルス療法（ＨＡＡＲＴ）の構成成分を更に含むものである、請求項２０に記載の治療用キット。

【請求項22】

前記皮内投与分の組成物が、単回投与分のパッケージに分割されたものであって、各パッケージ中には同量の当該組成物が含まれる、請求項２０又は２１に記載の治療用キット。

【請求項23】

前記静脈内投与分の組成物が、単回投与分のパッケージに分割されたものであって、各パッケージ中には異なる量の当該組成物が含まれる、請求項２０〜２２のいずれかに記載の治療用キット。

【請求項24】

各投与サイクルでの単回投与分のパッケージがラベリングされ、前記組成物の量が増加するように設計されてなる、請求項２０〜２３のいずれかに記載の治療用キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、抗レトロウイルス療法による治療に関し、特にＨＩＶ／ＡＩＤＳの免疫療法による治療に関する。

【背景技術】

【0002】

ＡＩＤＳは、米国において１９８１年に最初に報告され、それ以降主たる世界的流行病となっている。ＡＩＤＳはヒト免疫不全ウイルス、即ちＨＩＶによって発症する。今日において、世界中の三千万を超える人々が当該ウイルスに感染している（Cohen, Hellmann et al. 2008）。ＨＩＶは、人体の免疫系の細胞を致死させる又は損傷させることによって、特に、ＣＤ４＋ヘルパーＴリンパ球（ＣＤ４／ＣＤ８ Ｔ細胞比の反転に繋がる）及び単球／マクロファージ系統の細胞等のようなＣＤ４分子を発現する免疫細胞を除去することによって、感染症及び他の疾患に抗する人体の能力を進行的に崩壊させる（Fauci 1996）。

【0003】

ＣＤ４ Ｔ細胞は成熟すると、Ｔｈ１及びＴｈ２と呼ばれる２つの極化した機能タイプに分化する（Mosmann and Coffman 1989; Mosmann and Sad 1996）。Ｔｈ１ ＣＤ４＋細胞は細胞性免疫の仲介に関与し、Ｔｈ２ ＣＤ４＋細胞は体液性免疫の仲介に関与する（D’Elios and Del Prete 1998）。ＨＩＶ感染はＴｈ１の一部を徐々に喪失させることにより、Ｔｈ１／Ｔｈ２比を反転させ（Becker 2004）、細胞性免疫を喪失させる。ＨＩＶ患者におけるＴｈ１免疫の喪失及びＴｈ２優位である免疫への転換は、重篤な免疫抑制及びＨＩＶ陽性状態からＡＩＤＳへの進行と相関関係がある（Klein, Dobmeyer et al. 1997）。ＡＩＤＳ患者の主たる死因の１つに、細胞性免疫系の抑制による日和見感染がある（Baker and Leigh 1991）。

【0004】

ＨＩＶは、免疫回避のための複数の戦略を有する。これらの戦略には変異による回避、潜伏、ウイルスエンベロープにおける抗体結合部位のマスキング、クラスＩ主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ−Ｉ）の発現低下、感染細胞の表面におけるＦａｓリガンドの上方制御（Piguet and Trono 2001）、及びＩＬ−１０の生成誘導（Leghmari, Bennasser et al. 2008; Brockman, Kwon et al. 2009）が含まれる。更に、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、及びｎｅｆ遺伝子等のいくつかのウイルス遺伝子は、抗ウイルス免疫応答を抑制するように作用するタンパク質を翻訳する（Kirchhoff 2010）。これらのウイルスの回避機構によって、当該ウイルスは免疫学的手法を用いても制御困難なものとなる（Migueles, Tilton et al. 2006; Bansal, Yue et al. 2007; Feinberg and Ahmed 2012; Teshome and Assefa 2014）。

【0005】

ＨＩＶウイルス学は鋭意研究され、ＨＩＶのウイルス構造及びライフサイクルが明らかにされてきた（Pomerantz 2002; Sierra, Kupfer et al. 2005; Li and Craigie 2006; Cohen 2008; Scherer, Douek et al. 2008; Fanales-Belasio, Raimondo et al. 2010）。ＨＩＶ粒子のひとつひとつはビリオンと呼ばれる。当該ビリオンは突起を有する球体形状である。当該球体の中心コアはカプシドと呼ばれる。当該カプシドはウイルスＲＮＡと呼ばれる２つの一本鎖ＨＩＶ ＲＮＡを含む。ウイルスＲＮＡが血清中に検出された場合、当該ウイルスＲＮＡ量はウイルス量とみなすことができる。当該ウイルスＲＮＡは逆転写酵素、インテグラーゼ、及びプロテアーゼと呼ばれるウイルスのライフサイクルにとって重要な３つの酵素をコードする。これらの酵素はヒト免疫系にとって異質であり、ＣＤ８＋ＣＴＬキラー細胞により認識可能である（Haas, Samri et al. 1998）。このようにして、これらのウイルス酵素を発現する細胞は、免疫異物除去における標的となる。しかしながら、当該ウイルスＲＮＡは、当該ウイルスが免疫異物除去を回避するよう補助する役割を果たすウイルスアクセサリータンパク質を生成する指示を更に含む（Seelamgari, Maddukuri et al. 2004; Malim and Emerman 2008）。

【0006】

当該コアの周囲には保護脂質（脂肪）二重層が存在し、カプシドの周りに殻を形成している（Frankel 1996; Bradbury 2013）。当該殻はウイルスエンベロープと呼ばれる。ｅｎｖと称されるＨＩＶタンパク質は、当該ウイルスエンベロープ中に埋め込まれている。ｅｎｖタンパク質はｇｐ１２０及びｇｐ４１という２つの糖タンパク質からなり、これらはビリオンから突出して突起を形成している。当該突起の頂点がｇｐ１２０であり、幹部分がｇｐ４１である。ＨＩＶが宿主細胞に侵入するためには、まずｇｐ１２０を用いてＣＤ４レセプターに付着しなければならない（Pancera, Majeed et al. 2010; Guttman and Lee 2013）。

【0007】

ｇｐ１２０がＣＤ４細胞に成功的に付着した後、当該分子は中和抗体による認識を回避するために形状を変化させる。当該プロセスは立体構造マスキングとして知られる（Kwong, Doyle et al. 2002）。ｇｐ１２０における当該立体構造変化によって、ケモカインレセプターと称されるＣＤ４細胞表面上の第２のレセプターとの結合が可能となる。

【0008】

ＨＩＶビリオンの共受容体として用いられるＣＤ４細胞表面上のケモカインレセプターは、ＣＣＲ５又はＣＸＣＲ４である（Moore, Trkola et al. 1997）。あるケモカイン共受容体に対して他のケモカイン共受容体を用いるようなウイルス側の優先傾向を「ウイルス指向性（viral tropism）」という。ケモカインレセプター５（ＣＣＲ５）は、マクロファージ指向性（Ｍ指向性）のＨＩＶが細胞に結合するのに利用される（Cohen, Kinter et al. 1997）。ＨＩＶ感染全体の約９０％が当該Ｍ指向性ＨＩＶ株に関係するものである。フュージンとも呼ばれるＣＸＣＲ４は、Ｔ指向性ＨＩＶ（ＣＤ４ Ｔ細胞に好んで感染するＨＩＶ）が、宿主細胞に付着するのに利用されるケモカインレセプターである（Hoxie, LaBranche et al. 1998）。ＤＣ−ＳＩＧＮとも呼ばれる別の共受容体は樹状細胞上で発現し、細胞性免疫に関与するこれら重要な細胞へのウイルス感染を促進するために、ｇｐ１２０を結合させる（Cunningham, Harman et al. 2007）。ウイルス感染したマクロファージは、ＣＤ４ Ｔ細胞と相互作用して細胞間接触によってウイルスを伝搬し得る（Martin and Sattentau 2009; Poli 2013）。更に、ＨＩＶはＴ細胞の合胞体形成を誘発して、細胞間ウイルス伝搬を促進する（Emilie, Maillot et al. 1990; Kozal, Ramachandran et al. 1994; Margolis, Glushakova et al. 1995）。

【0009】

一粒のビリオン粒子からであったとしても、ＨＩＶの伝染によって新たな感染が生じることになる。ＨＩＶビリオンは宿主感染細胞内で複製され、血漿中に放出されることによって、人体のリンパ組織の全てにおいてウイルス血症及び免疫細胞の持続感染を引き起こす。ＨＩＶは、高レベルのＣＤ４表面発現を有するＴ細胞及びＣＣＲ５を共発現する一部のＴ細胞に好んで感染する。一部の記憶Ｔ細胞、特にＨＩＶに特異的な記憶Ｔ細胞（Douek, Brenchley et al. 2002）及びＴｈ２／Ｔｈ０細胞（Maggi, Mazzetti et al. 1994）は、標的として好まれる（Helbert, Walter et al. 1997）。

【0010】

免疫不全が発症すると、ウイルスは進化して新たな細胞タイプに感染するようになる。これはＣＣＲ５共受容体への優先傾向からもう１つのＣＸＣＲ４共受容体へと転換することを含む指向性変化に関係する。このような転換は、好適とされていた記憶細胞に加えてナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を含むように感染細胞が拡大することに関連する。同様に、当該ウイルスは表面上のＣＤ４が低レベルである細胞に侵入する能力を進化させ、これにより単球／マクロファージに感染する能力を強化する。ナイーブ細胞はほぼ例外なく二次リンパ器官でみられるが、記憶細胞及びマクロファージは脳、組織、及び器官系を含むより広い組織分布を有する。ナイーブ細胞及びマクロファージへの感染は、人体全体並びに薬剤若しくは免疫療法にて標的化されにくい部位において、ウイルス感染細胞のプールを確立することになる。

【0011】

ＨＩＶのＭ指向性株及びＴ指向性株は人体に共存可能であり、これが当該ウイルス除去を標的化する能力を更に複雑にしている。ある感染段階においては、ｇｐ１２０はＣＲ５又はＣＸＣＲ４のいずれにも付着可能である。このような性質を有するＨＩＶビリオンは、二重指向性ウイルス又はＲ５Ｘ４ ＨＩＶと呼ばれる（Toma, Whitcomb et al. 2010; Loftin, Kienzle et al. 2011; Svicher, Balestra et al. 2011）。マクロファージ及びＴ細胞の両方に存在するＣＸＣＲ４レセプターを利用可能なＨＩＶは、二重指向性Ｘ４ ＨＩＶとも称される（Huang, Eshleman et al. 2009; Gouwy, Struyf et al. 2011; Xiang, Pacheco et al. 2013）。ヒト個体が２つのウイルス集団、即ちＣＤ４ Ｔ細胞と結合するために一方はＣＣＲ５を用いる集団であり他方はＣＸＣＲ４を用いる集団、を有する場合は混合指向性となる。Ｔ指向性ウイルスとＭ指向性ウイルスとではウイルス学的な挙動が異なるため、混合指向性は薬剤設計において困難な問題を引き起こす。

【0012】

ＨＩＶエンベロープがＣＤ４分子に付着して共受容体に結合すると、ｇｐ４１エンベロープタンパク質の構造変化を利用してＨＩＶエンベロープは細胞膜に融合し、中和抗体を回避する（Chen, Kwon et al. 2009）。ＨＩＶビリオンはこれにより当該標的化された細胞膜を透過することが可能となる。

【0013】

宿主細胞に侵入すると、当該ウイルスの酵素である逆転写酵素がウイルスＲＮＡをウイルスＤＮＡへと変換する。逆転写酵素阻害剤は抗ＨＩＶ療法として開発された（Nurutdinova and Overton 2009; Chowers, Gottesman et al. 2010; Zhan and Liu 2011）。当該ウイルスＲＮＡがＤＮＡに転写されると、当該ＤＮＡは宿主細胞の核に侵入可能となる。インテグラーゼと呼ばれる別のウイルス酵素を用いることによって、当該ウイルスＤＮＡは宿主細胞の染色体ＤＮＡに組み込まれることが可能となる。インテグラーゼの阻害は、抗ウイルス薬剤の開発における別の標的である（Geretti, Armenia et al. 2012; Okello, Nishonov et al. 2013）。当該組み込まれたウイルスＤＮＡはプロウイルスと称され、宿主細胞の分裂時に宿主染色体とともに複製される。このプロウイルスの宿主ＤＮＡへの組み込みによって潜伏状態をもたらし、当該ウイルスが宿主免疫応答を効果的に回避することが可能となる。

【0014】

宿主細胞が活性化して分裂する際に、当該プロウイルスが宿主ＤＮＡと伴に転写され、ウイルスタンパク質及びウイルスＲＮＡの生成が起こる。そしてウイルスタンパク質が宿主細胞のタンパク質生成機構を利用して集合し構築される。当該ウイルスのプロテアーゼ酵素により、新たに翻訳されたウイルスポリペプチドを、当該ウイルスを構成するタンパク質へと加工（processing）することが可能となる。これら種々のタンパク質は最終的にはウイルス粒子へと集合構築される。プロテアーゼ阻害剤はＨＩＶ感染治療のための別の種類の抗ウイルス薬剤である（Wattanutchariya, Sirisanthana et al. 2013）。当該集合構築されたウイルスはｇａｇと称される核カプシドタンパク質を用いて宿主タンパク質機構と相互作用し、当該ウイルスの出芽及びウイルス全体の宿主細胞からの放出を引き起こす（Dussupt, Javid et al. 2009）。また、出芽状態のＨＩＶは、細胞間相互作用によって直接に伝搬可能である（Fais, Capobianchi et al. 1995）。多くのウイルス粒子は、時間経過と伴に一つの細胞から出芽することが可能であり、最終的には細胞膜を溶解して細胞を致死させる。

【0015】

ウイルスを活発に生成している細胞は、ＣＤ８細胞（細胞傷害性Ｔリンパ球又はＣＴＬs）による攻撃に脆弱である。ＣＴＬ細胞は、ウイルス生成細胞を致死させるためにＴｈ１ ＣＤ４細胞からの助力が必要である（Wodarz 2001）。ＨＩＶ感染においては、ウイルス量は免疫を介したウイルス生成細胞の破壊速度と感染細胞からのウイルス粒子の放出速度との均衡がとれた定常状態にて維持することが可能である。当該定常状態において、当該ウイルス量がセットポイントのレベルに維持される（Korthals Altes, Ribeiro et al. 2003; Kaul, MacDonald et al. 2010）。ＣＤ４のカウントがＣＴＬに対する当該ヘルパー機能を喪失するまで低下した場合、当該セットポイントでの制御が不能となり、ウイルス量が増加する。結局はこの点がＣＤ４のカウントを低下させ、細胞性免疫の喪失をさせ、そして最終的にはＡＩＤＳに至ることになる。ＨＩＶ感染は、ＡＩＤＳの臨床的な症候群が発症するまで８〜１０年間このような定常状態に留まり得る（Jurriaans and Goudsmit 1996; Callaway and Perelson 2002; Maenetje, Riou et al. 2010）。

【0016】

ＨＩＶ感染における最も明白な実験室での観測は、血液中で見出されるＣＤ４＋Ｔ細胞数の低下及びＣＤ４／ＣＤ８比の低下である。ウイルス量（ウイルスＲＮＡ）の増加は高感度ＰＣＲテストによって検出可能である。

【0017】

ＨＩＶの複製を長期的に抑制するための高活性抗レトロウイルス療法（ＨＡＡＲＴ）は、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ医学における重要な業績である。ＨＡＡＲＴカクテルは、当該本来のウイルスのライフサイクルを様々なポイントにてブロックするように設計された異なる作用機構を有する薬剤を含む。例えば、ＨＡＡＲＴには、逆転写酵素、インテグラーゼ、プロテアーゼ、及び結合に対する阻害剤を含むことができる（Carter 2003; Laurence 2004; 2007）。現在、多くの患者が１０年以上治療を受けているが、血漿ＨＩＶ ＲＮＡレベル（ウイルス量）が臨床アッセイの検出限界（例えば、＜５０コピー／ｍｌ）を下回る状態となっている。当該ウイルスのライフサイクルを妨害する新たなＨＡＡＲＴ薬剤が開発されている。例えば、ＣＣＲ５は主要なＨＩＶ共受容体と同定されているため、ファースト・イン・クラスの認可を受けた薬剤であるマラビロク（Maraviroc）（Rusconi, Vitiello et al. 2013）を含めた、当該ウイルス−ＣＣＲ５相互作用を標的とした薬剤の開発に繋がっている。

【0018】

ＨＡＡＲＴでは当該ウイルスを完全には除去できないため、ＨＩＶ感染制御のためには、生涯にわたる抗ウイルス療法が必要となる。そのような療法は高い費用を要し、薬剤耐性、累積的な副作用、及び長期治療による未知の作用を引き起こす傾向にある。ＨＡＡＲＴは腎臓、肝臓、及び膵臓の異常を含むいくつかの長期の副作用を生じさせ、脂肪代謝を変化せることによってコレステロール及びトリグリセリドレベルを上昇させ、卒中や心臓発作のリスクを増大させる（Carter 2003; Laurence 2004; 2007）。更には、いくつかのウイルスは、ＨＡＡＲＴに対する耐性を有するように進化している（Fumero and Podzamczer 2003; Tebit, Sangare et al. 2008; Loulergue, Delaugerre et al. 2011）。

【0019】

ＨＡＡＲＴ療法を停止した場合に最も典型的には３〜１０日以内にウイルス血症の迅速なリバウンドが生じることからも明らかであるように、ＨＡＡＲＴ療法は効果的であるのにもかかわらず、ＨＩＶの感染は持続状態にある。（Neumann, Tubiana et al. 1999; VanGulck, Heyndrickx et al. 2011）。この現象は、安定した保有宿主である潜伏感染細胞が初期に確立されていることに起因すると考えられる。ここで潜伏感染細胞は、ＨＡＡＲＴ停止後にビリオン生成を広める元となる組み込まれたウイルスＤＮＡを有している。

【0020】

ＨＩＶ感染患者におけるＨＡＡＲＴ療法の目的は、血漿ＨＩＶウイルス量（ＨＩＶ ＲＮＡ）を検出不能レベルにまで低下させ、ＣＤ４細胞カウントを増加させることにある。当該目的の達成により疾患進行速度及び死亡率が低減する。しかしながら、一時的に検出可能なＨＩＶ ＲＮＡ、即ちウイルスリバウンドという例外を経験する患者も存在する（Staszewski, Miller et al. 1998; Butler, Gavin et al. 2014）。ウイルスリバウンドの原因は未だ不明である。検出不能ＨＩＶ ＲＮＡを達成したＨＡＡＲＴの患者のうち、ウイルスリバウンド率は２５〜５３％であることが報告されている。低レベルウイルス血症（セットポイントレベル）としてその後に持続するウイルスリバウンドは、当該ウイルスにおいて薬剤耐性を引き起こす遺伝子突然変異の原因となることがある。

【0021】

持続的低レベルウイルス血症を有する患者は、ウイルス学的失敗を経験する確率が高くなる。持続的低レベルウイルス血症とは、少なくとも２回の連続した通院において少なくとも３か月の間、血漿ＨＩＶ ＲＮＡレベルが５１〜１０００コピー／ｍＬの範囲にある状態と定義される。ウイルス学的失敗とは、血漿ＨＩＶ ＲＮＡレベルが２回の連続測定において＞１０００コピー／ｍＬである状態と定義される。

【0022】

ＨＡＡＲＴ開始後、ほとんどの患者が免疫機能の向上及びウイルス抑制の維持を経験する。しかしながら、不十分な免疫応答（ＨＡＡＲＴ療法を用いたのにもかかわらず、適切なＣＤ４応答を達成及び維持できない状態と定義される）を有する患者も一部には存在する。ＨＡＡＲＴ療法において不適切なＣＤ４カウントを有する患者は、免疫学的失敗であると呼ばれる。適切なＣＤ４カウントとは、一般的に特定の期間（例えば４〜７年間）において＞５００細胞／ｍｍ^３であると定義される。免疫学的失敗は、ＡＩＤＳ関係及びＡＩＤＳに無関係の罹患率及び死亡率を上昇させる。例えば、＜５００である低ＣＤ４カウントは心臓血管、肝臟、及び腎臓の疾患、並びに癌のリスク増大に関わっている。

【0023】

細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の応答は、急性感染後の最初の数か月間に見られるＨＩＶウイルス量の初期の低減において重要である（Borrow, Lewicki et al. 1997; Fan, Huang et al. 1997; Smalls-Mantey, Connors et al. 2013）。これらの有用な細胞免疫応答は疾患進行に伴って減少し、抗レトロウイルス療法のみでは回復不可能である。ＣＴＬ応答が有効なものとなるために一般的にＣＤ４細胞からの助力を必要とする（Wodarz 2001）。

【0024】

最近の研究では、治療ワクチンは細胞性免疫並びにウイルスへのＣＴＬ及びＮＫ応答を回復させるのに役立ち得ることを示唆している。治療用ＨＩＶワクチンは、人体本来の免疫応答を高めることによって、ＨＩＶ感染を制御するように設計されている。ＨＩＶ特異的なＴ細胞に基づくワクチンは、予防及び治療の両方の状況において鋭意研究されているが、ほとんどの研究は利点を提示することができず、いくつかの研究は有害であることを示唆している（Papagno, Alter et al. 2011）。現在においてＦＤＡの認可を受けた治療用ＨＩＶワクチンは存在しない。

【0025】

ＨＡＡＲＴによる長期間のウイルス抑制にも関わらず、ＨＩＶを治すことは今まで不可能であった。強力なウイルス抑制及びウイルス侵入の閉塞にも関わらず、急速なリバウンドが生じる。これは、ウイルス抑制の影響を受けず、免疫異物除去の標的化が不可能な、保有宿主である潜伏感染細胞の存在、；リンパ節及び組織におけるいくつかの細胞からの継続的で無症状のウイルス生成、；並びに、侵入経路の代替として、細胞間接触を通じてウイルスが拡散する能力、；によるものとも考えられており、これら全てがウイルス持続を維持する役割を果たしている。

【0026】

ＨＡＡＲＴを行うことなくウイルス検出不能状態を維持できる患者に関する記述もあるが、これらの所謂「二次制御者」は低感染性タイプのＨＩＶに感染している患者である（Lobritz, Lassen et al. 2011; VanGulck, Bracke et al. 2012）。患者の大部分にとっては、ＨＡＡＲＴは疾患制御のために生涯にわたって必要とされる。

【0027】

ＨＡＡＲＴ療法停止後における長期間ウイルス抑制の唯一の報告は、所謂「ベルリンの患者」である。当該ベルリンの患者は白血病治療のために同種異系幹細胞移植を受けていた。そのドナーは、特別な遺伝的特性（２コピーの劣性ＣＣＲ５Δ３２対立遺伝子）を有していたため、ＣＤ４細胞表面上にＣＣＲ５レセプターを発現する能力を有しなかった。これにより、当該移植のためのドナー細胞はウイルス侵入に対する耐性を有していた。移植後、当該患者は全てのＨＡＡＲＴ抗レトロウイルス療法を停止することができ、当該移植後３年半の間、検出不能ウイルス量の状態が持続された（Hutter, Nowak et al. 2009）。

【0028】

当該ドナーの免疫系によってもたらされた先天性又は後天性免疫が、活発なＨＩＶ複製を伴う細胞の除去に貢献した可能性がある。当該患者は移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を経験し、宿主リンパ球に対して向けられた同種異系免疫応答が、リンパ球において潜伏していたＨＩＶ保有宿主を一掃する効果を発揮した可能性がある。

【0029】

同種異系幹細胞移植は、治療に関連した死亡率及び罹患率が高く、毒性の高い処置である。その高い毒性は、化学療法による調整療法が必要であること、並びに、時としてＧＶＨＤによる致死的な副作用と関連している。ＧＶＨＤによる当該毒性のため、同種異系移植処置の臨床的な使用は、他に治療の選択肢のない末期患者に制限される。しかしながら、ＨＡＡＲＴ薬物療法中にて安定状態にあるＨＩＶ陽性患者においては、同種異系幹細胞移植による治療は臨床的に適していない。

【0030】

更に、同種異系移植はＨＬＡ組織適合ドナーを必要とする。血縁者にＨＬＡ適合ドナーを有する者は僅か１／３であり、非血縁者のＨＬＡ適合ドナーを見つけられる者は更に少数である。その上、適合ドナーが見つけられた場合であっても当該ドナーはＣＣＲ５Δ３２突然変異に対して同型接合でなくてはならず、これは極めて稀な遺伝子型である（Jiang, Wang et al. 1999; Williamson, Loubser et al. 2000）。このように、適切なドナーの欠乏及び同種異系移植処置の毒性は、当該ベルリンの患者のデータを大多数のＨＩＶ感染患者にとって有益となるようにすることを不可能としている。

【0031】

従って、当該ベルリンの患者において長期間のＨＡＡＲＴ停止を可能とした機構を有効に活用するためには、更なる毒性を有さない治療法が必要となる。更に、ＨＡＡＲＴ治療におけるウイルス学的失敗及び免疫学的失敗に対する治療の選択肢も緊急に必要となる。

【発明の概要】

【0032】

本記載は、ＨＡＡＲＴ薬物療法中においてウイルス学的失敗及び／又は免疫学的失敗を抱えるＨＩＶ感染患者を治療するための免疫療法用薬剤及び治療用ワクチン組成物、並びに、それらの使用方法に関する。更に本記載は、日毎のＨＡＡＲＴ薬物治療の必要において、長期の休薬期間を可能とするのに十分なレベルまでに、ＨＩＶ患者における潜伏ウイルスプールを一掃するための方法を記述する。

【0033】

本記載に係る組成物は、少なくとも１つの高免疫原性抗原を含んでいる生細胞又はその構成成分、；細胞活性化シグナルを伝達する表面ＣＤ４０レセプターに結合する分子、；並びに、同時に又は時間をおいて送達される１つ以上の炎症性１型サイトカイン及び／又はケモカイン、；の組み合わせを含んでなる（以下「ａＴｈ１」と称する）。当該ａＴｈ１組成物は、少なくとも１つの抗レトロウイルス薬剤を更に含んでも良い。抗レトロウイルス薬剤を含む当該ａＴｈ１組成物は、本明細書においてＡＶＩ組成物と称することがある。当該ａＴｈ１組成物及び抗ウイルス薬剤は異なる経路にて送達されても良いが、両者の効果は同時的でなくてはならない。当該ａＴｈ１組成物の構成成分は、投与において溶液中にて混合することが可能であり、生分解性の担体の表面に付着した状態とすることも可能である。例示的な当該ａＴｈ１組成物は「アロスチム（ＡｌｌｏＳｔｉｍ）^ＴＭ」として知られており、イミュノバティブセラピーズリミテッド社（Ｉｍｍｕｎｏｖａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ，Ｌｔｄ．）から入手可能である。

【0034】

本記載は当該患者におけるＣＤ４＋Ｔ細胞を増強する方法を含む。このＣＤ４増強方法は、ＨＩＶ患者の循環ＣＤ４＋Ｔｈ１細胞の力価を上昇させるためにａＴｈ１組成物を用いることを含む方法である。ここで循環ＣＤ４＋Ｔｈ１細胞には、記憶表現型を有し、表面ＣＣＲ５発現の下方制御を有すること、又は、ケモカインアゴニストの生成によりＣＣＲ５を阻害すること、又は、その両方、に起因することによって、ＨＩＶ感染に対して耐性を有するＣＤ４＋細胞が含まれる。本方法は、免疫学的失敗を経験しているＨＩＶ感染患者においてＨＡＡＲＴと伴に同時に施用することが可能である。

【0035】

本記載は治療的なワクチン方法を更に含む。本方法は、ａＴｈ１組成物を、治療的ワクチンを形成するＨＩＶ抗原源と伴にアジュバントとして用いることを含む。ここで当該治療的ワクチンは、ＨＩＶ特異的なＴ細胞の力価の上昇及び当該ウイルスの免疫制御という結果をもたらす。本方法は、ＨＩＶ患者において治療的ワクチンとして施用することが可能であり、当該患者にはウイルス学的失敗を抱えるＨＡＡＲＴ薬物療法中の患者が含まれる。

【0036】

本記載はウイルス一掃方法を更に含む。本方法は、ＨＩＶの遺伝的物質に潜伏感染された細胞を活性化させるためのＡＶＩ組成物を用いることを含むため、当該細胞がウイルス粒子を生成し、これにより免疫介在性異物除去の標的となる。ＡＶＩ組成物での当該抗ウイルス薬物療法は、覚醒した潜伏ウイルスプールが、残存するＣＤ４細胞を圧倒して破壊することを防ぐ。本方法は、当該潜伏ウイルスプールを減少又は除去するために施用することが可能である。当該潜伏ウイルスプールの一掃は、最終的な完治のために必要な工程である。

【0037】

本記載の別の局面においては、ＣＤ４増強方法と、ウイルス一掃方法と、を組み合わせたＨＩＶ治療方法（「ＨＡＡＲＴ休薬方法」）が記載される。また、当該ＨＡＡＲＴ休薬方法は、治療的ワクチン方法とも組み合わせることが可能である。当該ＨＡＡＲＴ休薬方法では、日毎のＨＡＡＲＴ薬物治療の必要性において、長期の休薬期間をＨＩＶ患者にもたらす。このような休薬期間としては、好ましくは３０日間より長い期間であり、より好ましくは少なくとも９０日間であり、最も好ましくは１年を超える期間である。

【0038】

一つの局面においては、本記載はＨＩＶ患者を治療する方法を含む。本方法は、ＨＩＶに感染している患者に少なくとも１回のａＴｈ１組成物の皮内投与を行うことによって、ＨＩＶ感染に耐性を有する循環ＣＤ４＋Ｔｈ１記憶細胞の力価を上昇させることを含む。また本方法では、更に、少なくとも１回のａＴｈ１組成物の静脈内投与を行うことによって、前記患者における前記ＣＤ４＋Ｔｈ１記憶細胞を増加させ活性させることを含む。また本方法は、更に、少なくとも２回のａＴｈ１組成物の皮内投与を行うことによって前記力価を上昇させる方法であって、前記投与の両方が同じ部位であり、前記皮内投与の間の間隔が約３日間から約１週間の間であることを含むものであっても良い。また、本方法では、前記最初の２回の皮内投与の部位とは異なる部位において、更に追加的な２回のａＴｈ１組成物の皮内投与を含むものであっても良い。また、本方法では、前記患者が、高活性抗レトロウイルス療法（ＨＡＡＲＴ）による治療を同時に受けていることを含むものであっても良い。

【0039】

別の局面においては、本記載はＨＩＶ患者のＨＩＶウイルス量を低減する方法を更に含む。本方法には、少なくとも１回のａＴｈ１組成物の投与及び少なくとも１回の１つ以上のＨＩＶ抗原の投与を行って、ＨＩＶ患者におけるＨＩＶ感染に耐性を有する循環ＣＤ４＋Ｔｈ１記憶細胞の力価を上昇させ、前記患者におけるＨＩＶウイルス量を減少させることが含まれる。本方法では、ａＴｈ１組成物及びＨＩＶ抗原が別々に投与されることを含んでも良く、またａＴｈ１組成物及び１つ以上のＨＩＶ抗原が皮内投与されることを含んでも良い。

【0040】

更に別の局面においては、本記載は患者からＨＩＶウイルスを低減又は除去する方法を更に含む。本方法は、患者にａＴｈ１組成物の静脈内投与を増量して行うことを含む方法である。ここで前記患者はＨＡＡＲＴによる治療を同時に受けている患者である。また、本方法は、前記ＨＡＡＲＴを中断し、前記患者のＣＤ４＋細胞及びＨＩＶウイルス量をモニタリングし、前記患者にウイルス急増が検出された場合にはＨＡＡＲＴを再開する工程、を更に含むものであっても良い。

【0041】

更なる局面においては、本記載には、治療用ＨＩＶワクチンの構成成分を含むキットであって、ａＴｈ１組成物の皮内投与分、ａＴｈ１組成物の静脈内投与分、及び１つ以上のＨＩＶ抗原、を含んでなるキットが含まれる。当該キットはＨＡＡＲＴの構成成分を更に含むものであっても良い。

【0042】

更に別の局面においては、本記載には、同種異系抗原、ＣＤ４０表面レセプターと相互作用する分子、及びＩ型サイトカインを含むａＴｈ１組成物、；並びに、少なくとも１つ以上のＨＩＶ抗原、；を含有してなる組成物が含まれる。

【0043】

別の更なる局面においては、本記載には、同種異系抗原、ＣＤ４０表面レセプターと相互作用する分子、及びＩ型サイトカインを含むａＴｈ１組成物、；並びに、少なくとも１つ以上の抗レトロウイルス薬剤、；を含んでなるＡＶＩ組成物が含まれる。本組成物は１つ以上のＨＩＶ抗原を更に含むものであっても良い。

【発明を実施するための形態】

【0044】

本記載は、レトロウイルス、特にヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染した患者のための組成物を含む。本組成物は、当該患者による免疫応答を引き出すためのａＴｈ１組成物を含むことができる。本記載は抗ウイルス免疫療法用の薬剤組成物（ａＴｈ１＋抗ウイルス薬剤）及びＨＩＶ感染患者の治療に当該抗ウイルス組成物を用いる方法を含む。
本記載において、本組成物が次のことに使用され得る方法が記載される：（１）ＣＤ４カウントを上昇させることによる免疫学的失敗の治療（ＣＤ４増強方法（CD4 Enhancement Method））、（２）ウイルス量の免疫制御を回復することによる、ウイルス学的失敗の治療（治療的ワクチン方法（Therapeutic Vaccine Method））、及び（３）潜伏ウイルスプールからのウイルスの一掃（ウイルス一掃方法（Viral Purge Method））。これらの方法全ての組み合わせ、又は、ＣＤ４増強方法及びウイルス一掃方法との組み合わせは、長期間に亘り、日毎のＨＡＡＲＴ薬物療法の必要性を除去することを可能とする（ＨＡＡＲＴ休薬方法（HAART Holiday Method））。

【0045】

本明細書においては、ａＴｈ１及び抗ウイルス薬剤を含む抗ウイルス免疫療法用組成物はＡＶＩ組成物と称することがある。

【0046】

ＨＩＶ感染患者は、本明細書に記載の当該組成物及び方法によって治療可能である。当該患者は、ＨＡＡＲＴ治療中に免疫学失敗又はウイルス学的失敗を抱えた状態で、治療を受けるものであっても良い。当該患者は、ＨＡＡＲＴ薬物療法と同時に治療を受けても良く、ＨＡＡＲＴ薬物療法と同時でなく治療を受けても良い。本明細書に記載された当該組成物及び方法による治療成功を示すバイオマーカーは、ＨＩＶ患者の血漿中における血清ＩＬ−１２濃度の増加によって特徴づけられることができる。ＩＬ−１２は、ＨＩＶに特異的な細胞性免疫を増強することが可能である。当該記載の方法は、通常は少なくとも１２０日間、好ましくは９０日間、より好ましくは３０日間、更に好ましくは７日間のａＴｈ１組成物の投与によって、血清中におけるＩＬ−１２の出現を引き起こすことを可能とする。ＩＬ−１２は、抗ＨＩＶ免疫を生成する方法の成功を示す初期バイオマーカーとしての機能を果たすことができる。

【0047】

ａＴｈ１組成物は、ｉ）少なくとも１つの高免疫原性抗原を含む生細胞又はその構成成分、ｉｉ）表面ＣＤ４０レセプターとの結合を介してシグナルを伝達する分子、及びｉｉｉ）１つ以上の炎症性１型サイトカイン及び／又はケモカインを含むことを可能とする。ａＴｈ１組成物におけるこれら全ての成分は、併用又は単独にて、同時に又は時間をおいて送達されることが可能である。

【0048】

ａＴｈ１組成物の高免疫原性抗原成分は、天然の、合成の、若しくは組換え体であるタンパク質又はペプチドであっても良く、ヒト免疫系にとって認識可能である外来性成分を含んでいても良い。当該免疫原性抗原は、例えば、同種異系又は異種タンパク質抗原であっても良い。異物と認識されるように改質された自己タンパク質も本記載の範囲に含まれる。自己タンパク質の改質は、組み換え又は化学的手段によるものであっても良く、自己タンパク質とアジュバントとの混合であっても良い。好適な実施形態としては、当該高免疫原性抗原は生細胞の一部であることが好適であり、好ましくは同種異系生細胞の一部、より好ましくは同種異系免疫生細胞の一部、最も好ましくは同種異系Ｔｈ１免疫生細胞の一部であることが好適である。同種異系抗原はａＴｈ１組成物に含まれる好適な高免疫原性抗原である。

【0049】

本組成物の高免疫原性抗原は、ＭＨＣ Ｉ 及び／又はＭＨＣ ＩＩ 上での提示を行うプロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）にて処理され得る。高免疫原性抗原の例としては、ＫＬＨ、ウイルスタンパク質、細菌タンパク質、酵母タンパク質、真菌タンパク質、又はこれらの組み合わせを含むことができる。

【0050】

自己タンパク質等のタンパク質の免疫原性を向上させることを可能とするアジュバントの例には、未成熟樹状細胞を成熟したＩＬ−１２＋ＤＣ１細胞にする薬剤が含まれる。その例には、ＬＰＳ、ＢＣＧ、及びＴｏｌｌ様レセプターアゴニスト（例えばＴＬＲ４及びＴＬＲ７）等のアジュバント危険信号（danger signal）が含まれる。全ての高免疫原性のペプチド及びタンパク質は本記載の範囲に含まれる。

【0051】

また、当該ａＴｈ１組成物はＩ型サイトカイン及び／又はケモカインを更に含むことができる。ａＴｈ１組成物にとって好適な１型サイトカインは、インターフェロン−γ、ＩＬ−２、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２３、及びＩＬ−１２のそれぞれ単独又はそれらの組み合わせを含むことができる。ａＴｈ１組成物にとって好適なケモカインは、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、及びＭＣＰ−１のそれぞれ単独又はそれらの組み合わせを含むことができる。これらのＩ型サイトカインは、ａＴｈ１組成物の一部であっても良く、ａＴｈ１組成物によって患者の体内にて誘導されるものであっても良い。

【0052】

また、当該ａＴｈ１組成物は、表面ＣＤ４０レセプターを介してシグナル伝達を行う分子を更に含むことができる。ａＴｈ１組成物においてＣＤ４０を介してシグナル伝達を行う好適な分子の１つは、固定化ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）である。ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４としても知られる）はＴＮＦスーパーファミリーに属する。ＣＤ４０Ｌは、ＩＬ−１２＋表現型への成熟を補助するために、樹状細胞（ＤＣ）上に発現したＣＤ４０と相互作用する共刺激分子として作用し得る。ＣＤ４０Ｌは、好ましくは細胞表面上の発現によって固定化され、ＣＤ４０を介して陽性シグナルを供給する。別態様としては、融合タンパク質又は抗ＣＤ４０抗体等のＣＤ４０に対するアゴニストを、ＣＤ４０シグナルを伝達するために使用することも可能である。当該ａＴｈ１組成物の構成成分は、併用又は別々にて、様々な順序及び様々な時点において送達されることが可能であり、これらは本記載の範囲に含まれる。

【0053】

好適な実施形態においては、当該ａＴｈ１組成物は、活性化された同種異系ＣＤ４＋Ｔ細胞を含むことができる。更により好適な実施形態においては、表面においてＣＤ４０Ｌの高発現を伴い、インターフェロン−γを生成する活性化同種異系記憶ＣＤ４＋Ｔ細胞が用いられる。

【0054】

ＨＩＶに感染した（ＨＩＶ陽性）のヒト個体では、ＩＬ−１２生成及びＣＤ４０Ｌ発現が著しく損なわれ得る。ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌとの間の相互作用は、ＩＬ−１２を生成するためのＤＣ等の抗原提示細胞（ＡＰＣ）のＴ細胞依存活性化に関与する主要な機構である。ＣＤ４０Ｌに対する受容体（counter-receptor）であるＣＤ４０は、ＨＩＶ陽性のヒト個体での単球（monocytes）上において発現するところ、一方、ＩＬ−１２の生成は抑制され続け得る。当該ａＴｈ１組成物投与後における血漿中でのＩＬ−１２の出現は、本方法での当該免疫機構が成功的に開始されたことを示すことができる。

【0055】

また、ＣＤ４０Ｌの様々な形態（different forms of CD40L）についても、ＣＤ４０を介したシグナル伝達をすることが可能である。例えば、可溶性三量体ＣＤ４０Ｌアゴニストタンパク質（ＣＤ４０ＬＴ）、可溶性ＣＤ４０Ｌ、及びＨＩＶウイルスに挿入されたＣＤ４０Ｌも上記と同様のシグナル及び同様の効果を提供することが可能である。ＣＤ４０アゴニストのすべての形態が、本記載の範囲に含まれる。

【0056】

いくつかの好適な実施形態においては、当該ａＴｈ１組成物はアロスチム^ＴＭであっても良い。アロスチム^ＴＭは、正常ドナーの血液に由来する生物工学処理したＣＤ４免疫細胞である。アロスチム^ＴＭは、活性化Ｔｈ１記憶表現型であるＣＤ４＋、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏ、ＣＤ４０Ｌ^ｈｉ、ＣＤ２５＋、インターフェロン−γ＋、及びＩＬ−４−を有する。アロスチム^ＴＭは、ＣＤ３／ＣＤ２８モノクローナル抗体被覆マイクロ粒子との継続的な付着によって活性化状態を維持することが可能である。アロスチム^ＴＭのキーエフェクター分子は、ＣＤ４０Ｌの高い表面発現、並びに、インターフェロン−γ、腫瘍壊死因子−α、及び顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）等の炎症性サイトカインの大量生成である。アロスチム^ＴＭ及びアロスチム^ＴＭの製造方法は、例えば、米国特許第７，４３５，５９２号、米国特許第７，６７８，５７２号、及び米国特許第７，４０２，４３１号に記載されており、これらの全てが参照により本明細書に組み込まれる。他の同種異系である又は異種である免疫細胞も当該ａＴｈ１組成物の構成成分として用いることが可能である。本開示のいくつかの方法はアロスチム^ＴＭを参照して記載されるが、これは当該方法をアロスチム^ＴＭの使用のみに限定することを意味するものではなく、本記載の方法においては他の組成物を使用するものであっても良い。

【0057】

本明細書に記載のａＴｈ１組成物は、抗ウイルス薬剤又は抗レトロウイルス薬剤（ＡＶＩ組成物）を更に含んでも良い。ａＴｈ１組成物の必要な構成成分を含むアロスチム^ＴＭ等の組成物がこれまでに開示されている。いくつかの実施形態においては、アロスチム^ＴＭの単独使用又はａＴｈ１組成物の使用は、ＨＩＶ感染の治療に対して十分ではない可能性がある。当該ＡＶＩ組成物は、ａＴｈ１組成物と伴に抗レトロウイルス薬剤を含むものである。

【0058】

当該ａＴｈ１組成物は、癌治療においては有益であり得るところであるが、一方、ＨＩＶ患者には害を与える可能性がある。これはＨＩＶライフサイクルに特有の性質に起因するものである。例えば、アロスチム^ＴＭをａＴｈ１組成物として用いた場合、アロスチム^ＴＭの皮内注入は、同種異系抗原に対して特異的な記憶ＣＤ４＋細胞の力価を上昇させることを可能とする。ＨＩＶ感染においては、ＣＤ４＋記憶細胞のみの当該増加は、当該ウイルスの感染の標的となるＣＤ４＋の数を増加させるだけとなる。検出限界を下回るウイルス量となるようにウイルス抑制がされていない患者の場合、循環ビリオンが新たに形成されたＣＤ４細胞に感染し、潜伏ウイルスプールを増加させることになる。このように、皮内へのアロスチム^ＴＭ注入のみでは、潜伏ウイルスプールを増加させることになる。これらの新たに形成されたＣＤ４＋細胞をウイルス侵入から保護することを可能とする本方法に係る特徴は、静脈内注入を用いることによって、これらの細胞の活性化を行うことを可能とする工程にある。活性化記憶細胞はＣＣＲ５アゴニストサイトカインの上方制御及びＣＣＲ５レセプターの下方制御によってウイルス侵入に対して耐性を有し得る。しかしながら、当該記憶細胞の大量の活性化は、潜伏感染細胞における当該ウイルス生成を呼び起こし得る。アロスチム^ＴＭの静脈内注入はＴ細胞及び単球の活性化を引き起こし、その結果、潜伏感染細胞におけるウイルス生成の開始が起こりうる。これにより血漿中ウイルス量が増加し、最終的にＣＤ４＋細胞カウントが減少する可能性がある。更に、静脈内アロスチム^ＴＭ注入後の潜伏ウイルスプールの活性化及びそれに続くウイルス複製の増加は、ＨＡＡＲＴ薬剤カクテルに耐性を有するようになるウイルスエスケープ変異体への発達リスクを、増大させる可能性がある。ＨＡＡＲＴにおいて用いられるような抗レトロウイルス薬剤と組み合わされる際には、アロスチム^ＴＭ等のａＴｈ１組成物を用いてＨＩＶ治療を行うために慎重に順序構成された用量及び経路での投与が要求され得る。これはウイルス生成を鈍化させ、当該ウイルスに対する免疫制御の確立を可能とする。ＣＤ４カウント及びＨＩＶ ＲＮＡウイルス量の頻繁なモニタリングは、適切な平衡状態が維持されることを確実にするために実行することが可能である。細胞及び血漿両方のウイルスＤＮＡレベルをモニタリングすることによって、当該潜伏ウイルス量をモニタリングすることが可能である。

【0059】

アロスチム^ＴＭ又は他のａＴｈ１組成物は、健常細胞へのウイルス拡散を鈍化させ、ウイルス突然変異を防ぐために、初期段階においてはウイルス抑制薬剤と伴に用いることができる。

【0060】

ＡＶＩ組成物には、種々の抗レトロウイルス薬剤や薬物を含ませることが可能である。ＡＶＩ組成物には、例えば、抗レトロウイルス薬剤のどの種類の薬剤でも１つ以上含むことが可能である。抗レトロウイルス薬剤には、例えば以下の種類の薬剤を含むことが可能である。他の種類の薬剤も本記載の範囲に含まれる。

【0061】

ヌクレオシド／ヌクレオチド系逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩｓ）：
「ニューク（ｎｕｋｅｓ）」と呼ばれることもある。これらの抗ＨＩＶ薬剤は、ウイルスＲＮＡをＤＮＡへ正しく変化するように逆転写酵素を用いるＨＩＶの能力を、阻害するように作用し得る。宿主細胞では当該ウイルスが自身を複製するために必要なタンパク質を生成するためにＤＮＡを用い得る。

【0062】

非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤（ＮＮＲＴＩｓ）：
「非ニューク（ｎｏｎ−ｎｕｋｅｓ）」と呼ばれることもある。これらは「ニューク」と非常によく似た機序で作用し得る。非ニュークも酵素、即ち逆転写酵素を阻害して、ＨＩＶが自身のＤＮＡの複製を作成することを妨げ得る。しかしニューク（遺伝物質に作用する）とは異なり、非ニュークは酵素が正しく機能しないようにするために酵素自体に直接作用し得る。

【0063】

プロテアーゼ阻害剤（ＰＩｓ）：
ＨＩＶが細胞内にて複製を行う際には、自身のＲＮＡ遺伝物質の長鎖を生成し得る。ＨＩＶが自身の複製をより多く生成するためには、これらの長鎖はより短い鎖に切断される必要がある。これらの長鎖を切断するよう作用する酵素は、プロテアーゼと呼ばれる。プロテアーゼ阻害剤は当該酵素を阻害して、遺伝物質である長鎖が機能片に切断されることを妨げ得る。

【0064】

侵入／融合阻害剤：
これらの薬剤は、ウイルスが細胞へ侵入することを阻害するように作用し得る。ＨＩＶはレセプター部位を介してＣＤ４細胞に付着及び結合する。レセプター部位は、ＨＩＶ及びＣＤ４細胞の両方にみられる（他の種類の細胞にもみられる）。融合阻害剤は、ＨＩＶ及びＣＤ４細胞のいずれかにおけるこれらの部位を標的化し、ＨＩＶが健常細胞に「ドッキング」しないように妨げ得る。ＣＣＲ５は、ＨＩＶに対するレセプター部位の一例である。

【0065】

ＡＶＩ組成物に含まれ得る抗ＨＩＶ薬剤の例としては、次に示す複数クラスの組み合わせを含み得る、：アトリプラ（エファビレンツ＋テノホビルＤＦ＋エムトリシタビン）、コンプレラ（エビプレラ、リルピビリン＋テノホビルＤＦ＋エムトリシタビン）、スタリビルド（旧称クアッド）（エルビテグラビル＋コビシスタット＋テノホビルＤＦ＋エムトリシタビン）、並びにトリーメク（旧称トリイ）（ドルテグラビル＋アバカビル＋ラミブジン）。

【0066】

抗ＨＩＶ薬剤の例としては、次に示すＮＮＲＴｓを含む、：エジュラント（リルピビリン、ＲＰＶ、ＴＭＣ−２７８）、インテレンス（エトラビリン、ＥＴＲ、ＴＭＣ−１２５）、レスクリプター（デラビルジン、ＤＬＶ）、サスティバ（ストックリン、エファビレンツ、ＥＦＶ）、ビラミューン及びビラミューンＸＲ（ネビラピン、ＮＶＰ）、並びにレルシビリン（ＵＫ−４５３０６１）。

【0067】

抗ＨＩＶ薬剤の例としては、次に示すＮＲＴＩｓを含む、：コンビビル（ジドブジン＋ラミブジン、ＡＺＴ＋３ＴＣ）、エムトリバ（エムトリシタビン、ＦＴＣ）、エピビル（ラミブジン、３ＴＣ）、エプジコム（カイベクサ、アバカビル＋ラミブジン、ＡＢＣ＋３ＴＣ）、レトロビル（ジドブジン、ＡＺＴ、ＺＤＶ）、トリジビル（アバカビル＋ジドブジン＋ラミブジン、ＡＢＣ＋ＡＺＴ＋３ＴＣ）、ツルバダ（テノホビルＤＦ＋エムトリシタビン、ＴＤＦ＋ＦＴＣ）、ヴァイデックスＥＣ及びヴァイデックス（ジダノシン、ｄｄＩ）、ビリアード（テノホビルジソプロキシルフマル酸塩、ＴＤＦ）、ゼリット（スタブジン、ｄ４Ｔ）、ザイアジェン（アバカビル、ＡＢＣ）、アムドキソビル（ＡＭＤＸ、ＤＡＰＤ）、並びにテノホビルアラフェナミドフマル酸塩、即ちＴＡＦ。

【0068】

抗ＨＩＶ薬剤の例としては、次に示すプロテアーゼ阻害剤を含む、：アプティバス（チプラナビル、ＴＰＶ）、クリキシバン（インジナビル、ＩＤＶ）、インビラーゼ（サキナビル、ＳＱＶ）、カレトラ（アルビア、ロピナビル／リトナビル、ＬＰＶ／ｒ）、レクシヴァ（テルジア、ホスアンプレナビル、ＦＰＶ）、ノービア（リトナビル、ＲＴＶ）、プリジスタ（ダルナビル、ＤＲＶ）、レイアタッツ（アタザナビル、ＡＴＶ）、ビラセプト（ネルフィナビル、ＮＦＶ）、Ｐｒｅｚｃｏｂｉｘ（Ｒｅｚｏｌｓｔａ、ダルナビル／コビシスタット）、並びにアタザナビル＋コビシスタット。

【0069】

抗ＨＩＶ薬剤の例としては、次に示すインテグラーゼ阻害剤を含む、：アイセントレス（ラルテグラビル、ＭＫ−０５１８）、テビケイ（ドルテグラビル、Ｓ／ＧＳＫ−７２）、並びにビテクタ（エルビテグラビル、ＧＳ−９１３７）。

【0070】

抗ＨＩＶ薬剤の例としては、次に示す融合阻害剤を含む、：フューゼオン（エンフビルチド、ＥＮＦ、Ｔ−２０）、並びセルゼントリ（セルセントリ、マラビロク、ＵＫ−４２７，８５７）。

【0071】

上記した抗ＨＩＶ薬剤は例示であり、他の抗ＨＩＶ薬剤も本記載の範囲に含まれる。

【0072】

本明細書にて記載されたａＴｈ１組成物及び／又はＡＶＩ組成物は、患者からＨＩＶを低減及び／又は除去する方法において使用することが可能である。本明細書にて記載された方法は、当該患者におけるＣＤ４＋細胞を増強することを可能とする。また、本方法はウイルス量を低減させる及び／又は当該患者から当該ウイルスを一掃することも可能とする。

ＣＤ４増強方法

【0073】

本記載に含まれる方法にはＣＤ４を増強する方法が含まれ得る。当該ＣＤ４増強方法は、抗ウイルス薬物療法を受けているＨＩＶ患者におけるａＴｈ１組成物の使用を可能とする。これは、ＨＩＶ患者のＣＤ４＋細胞カウント、好ましくはＴｈ１記憶（ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋）細胞カウントを増加させることを可能とする。本方法によって生成された新たなＣＤ４＋細胞は、ウイルス複製及びウイルス侵入に対して耐性を有し得る。当該ＣＤ４増強方法は、ＨＡＡＲＴ薬物療法中に免疫学的失敗を抱えた患者において用いることが可能である。

【0074】

当該ＣＤ４増強方法は、循環中の活性化ＣＤ４＋Ｔｈ１記憶細胞を生成することによって、ＣＤ４＋細胞カウントを増加させることを可能とする。活性化ＣＤ４＋Ｔｈ１記憶細胞は、ＨＩＶ複製に対して耐性を有し得る。このようなＨＩＶ耐性の状態は、活性化記憶細胞から放出されてＣＣＲ５レセプター（例えば、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、及びＭＩＰ−１β）と相互作用するケモカインの生成の増加、並びに、活性化ＣＤ４記憶細胞上でのＣＣＲ５発現の下方制御、に起因し得る。

【0075】

ウイルス耐性ＣＤ４＋細胞の生成は、当該ＣＤ４増強方法の重要な局面となり得る。ナイーブＣＤ４細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ０細胞、又は休止ＣＤ４記憶細胞の数を増加させる方法は、単に「火に油」を注ぐことになりかねない。これらの好適でないＣＤ４サブタイプはウイルス複製を許容する。「火に油」とは、ウイルス侵入の標的となるより多くのＣＤ４が存在することとなり、これにより更に多くの細胞が血漿中にビリオンを生成し、潜伏感染を伴った細胞がより多くなり、ウイルス量が増加し、ついにはＣＤ４細胞死を増加させる結果となり得ることを意味する。最終的には、ＣＤ４細胞の喪失によりＣＤ４カウントが元々のベースラインを下回るまで低減され、当該患者を当該療法の前よりも悪化させることになり得る。

【0076】

当該ＣＤ４増強方法は、ウイルス侵入及び複製に対して耐性を有する高力価の活性化Ｔｈ１記憶細胞を生成することを可能とする。ここで当該ウイルス侵入及び複製は、天然のＣＣＲ５リガンドの発現上昇及び付随する表面ＣＣＲ５発現の下方制御を引き起こすことを可能とするＣＤ２８の共刺激（ＡＰＣ上での共刺激リガンドであるＣＤ８０及びＣＤ８６リガンドの上方制御を介して）による活性化に起因するものである。これらのＨＩＶ耐性細胞を生成するために、当該方法ではａＴｈ１組成物（プライミング投与（priming doses））の複数回の注入、並びに、ＣＤ８０及びＣＤ８６の共刺激性分子を発現させるためにＡＰＣを活性化させること、を含み得る。ａＴｈ１組成物のプライミング投与は皮内に、皮下に、筋肉内に、又は静脈内に投与可能である。また、ａＴｈ１組成物はこれらの経路を組み合わせて投与し得る。

【0077】

実施形態の一つとしては、ａＴｈ１組成物のプライミング投与は複数回にわたり皮内投与にて行われる。記憶細胞を発達させるためには、最低でも２回の皮内注入又は投与が必要であり、例えば約４回以上の投与が行われる。当該投与は通常は頻回にて行われ得る。当該投与は約２週間の間隔で又は約１週間の間隔で、更には約３〜４日間の間隔であっても良い。約２日間より短い間隔での投与は統合して１回の投与とみなされる。循環中のＣＤ４＋記憶細胞が検出されるようになると、当該患者は「プライミングされた」（即ち、ａＴｈ１組成物における抗原に対して免疫がある）ということができる。

【0078】

当該ＣＤ４増強方法では、絶対的なＣＤ４＋細胞カウントを増加させることになり得る。ＣＤ４／ＣＤ８比は上昇し得える、又は、これに付随するＣＤ８細胞の増加によりベースラインに近い付近に留まり得る。これに加えて本方法では、Ｔｈ１／Ｔｈ２平衡をＴｈ１が増大する方向にシフトする結果となり得る。ＨＩＶ感染はＴｈ１細胞の喪失を引き起し、循環中の免疫細胞がＴｈ２優勢となる結果となる。本明細書に記載の方法は、Ｔｈ１細胞成分を増加させることによって当該不平衡状態を補正することを可能とする。

【0079】

実施形態の一つとしては、少なくとも２回のａＴｈ１組成物の投与が同じ部位に行われる。当該同じ部位における少なくとも２回の投与の後、それに続く次の投与のための新たな部位が選択され得る。また別の態様としては、全ての投与を同じ部位にて行うことも可能である。新たな部位が選択された場合、新たな部位のそれぞれにおいて少なくとも２回の投与を行うと良い。当該ａＴｈ１組成物の投与サイクルは、所望のＣＤ４＋細胞カウントが得られるまで継続して行うことが可能である。

【0080】

同じ部位におけるａＴｈ１組成物の皮内投与は、当該注入部位にアクセスするランゲルハンス細胞（ＬＣ）、マクロファージ（Ｍ）、および未成熟樹状細胞（ＤＣ）等のプロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）が、高免疫原性抗原を取り込んだ時にａＴｈ１組成物中の１型サイトカイン及びＣＤ４０Ｌに曝された状態になることを確実にするために、行われ得る。これらのＡＰＣが投与部位にアクセスするのに２〜３日間を要することがある。皮内投与の後、当該皮膚のＬＣがａＴｈ１組成物からの当該抗原を取り入れて処理することにより、抗原に特異的なＴ細胞の活性化及びプライミングが生じる結果となる。

【0081】

ａＴｈ１組成物における１型サイトカイン及びＣＤ４０Ｌは、ａＴｈ１抗原を処理するプロフェッショナルＡＰＣを成熟させ、ＭＨＣ Ｉ／ＩＩ、ＣＤ８０／８６、及びＩＬ−１２を発現させることを引き起こすことを可能とする。これらの成熟したＡＰＣは、次いでナイーブＴ細胞と相互作用するために流入領域リンパ節にアクセスして、ａＴｈ１組成物中の当該抗原に特異的な新たなエフェクターＣＤ４＋Ｔｈ１細胞及びＣＤ８＋ＣＴＬ（Ｔｃ１）キラー細胞の活性化、分化、及び増殖を起こし得る。複数回の投与は、当該エフェクターＴｈ１／Ｔｃ１細胞を記憶細胞へと変換することを可能とする。抗レトロウイルス薬剤の存在下において、ａＴｈ１組成物の投与回数を増加するのに従って、最終的に新たなより高いＣＤ４セットポイントを実現することが可能となる。ａＴｈ１注入の過程においては、ＣＤ４カウント及びウイルス量をモニタリングすることが可能である。

【0082】

当該ＣＤ４増強方法は、当該患者を「プライミングされた」状態にし、ａＴｈ１組成物中の当該抗原に免疫を有する状態にすることを可能とする。これにより、活性化によりウイルス侵入に対して耐性を有する記憶ＣＤ４細胞が増加することになり得る。ａＴｈ１組成物のプライミング注射は複数回にて行うことが好適である。このような、免疫系への抗原の「反復的な（pulsed）」導入は、注入部位における遅延型過敏反応（ＤＴＨ）を増大させ得る。当該ＤＴＨ反応は記憶Ｔｈ１細胞によって仲介される。そして、当該注入部位におけるＤＴＨ反応の出現は、ａＴｈ１抗原に特異的なＣＤ４記憶細胞の存在を確認することを可能とする。また、増大したＤＴＨ皮膚反応は、ＨＩＶ陽性患者にて循環中ＣＤ４記憶細胞の上昇した力価とも関係し得る。

【0083】

ａＴｈ１組成物中のＣＤ４０Ｌ及び１型サイトカインは、非特異的に（ポリクローナルに）記憶Ｔ細胞を活性化することが可能である。記憶Ｔｈ１細胞がポリクローナルに活性化されると、これらはＨＩＶへの耐性記憶、ＣＣＲ５フェノタイプ、を増加及び維持することを可能とする。ＨＩＶ耐性を有するＣＤ４記憶細胞の増加は、有益で持続的なＣＤ４カウントの増加を引き起こすことを可能とする。循環ＣＤ４記憶細胞をポリクローナルに活性化させるためには、ａＴｈ１組成物が静脈内に注入され得る。

【0084】

また、ａＴｈ１組成物の静脈内注入は潜伏感染した記憶細胞を活性化させ得る。これらの活性化細胞は、ポリクローナルに活性化されるとウイルス生成を開始し得る。本明細書に記載の方法はウイルスに耐性を有する記憶ＣＤ４細胞のプールを生成することを可能とし、これらの細胞は、ＨＩＶ特異的ＣＴＬキラー細胞がウイルスを活発に生成している細胞を除去するために、補助を行うことを可能とする。当該患者がＨＡＡＲＴ薬物療法を継続中の場合、当該ウイルス生成を鈍化させることが可能となるため、抗ＨＩＶ免疫応答を補助するのに十分な程度にＣＤ４カウントを高く維持することが可能となる。このようにして、常在性の抗ＨＩＶ免疫応答はウイルスを生成している当該活性化記憶細胞を識別して致死させることを可能とする一方、新たなウイルス耐性記憶細胞がこれらの細胞と置き換わっていく。ウイルス生成をしている活性化細胞の免疫異物除去とウイルス耐性記憶細胞の上昇との間での当該平衡状態は、最終的には絶対的なＣＤ４カウントの増加及び当該潜伏ウイルス負荷量の減少へと繋がる。ＣＤ４カウントの揺らぎ的変動は、より高いＣＤ４＋細胞のセットポイントレベルに到達することに先行して生じ得る。

【0085】

患者がプライミング状態となりＣＤ４カウントが増加した後、併発的に行われるａＴｈ１組成物の皮内注入並びにａＴｈ１組成物の静脈内注入によって、当該ＣＤ４カウントを更に増加させることが可能となり、ＨＩＶの排出から当該記憶細胞を継続的に保護することが可能となる。循環中のＴｈ１記憶細胞における当該ポリクローナルな活性化は、持続的な１型サイトカインストームの確立を引き起こし得る。当該静脈内注入は、ＨＩＶ患者の血液中の記憶ＣＤ４細胞の活性化を引き起こし得る。それにより１型炎症性サイトカインの生成の増大を引き起こすことが可能となり、１型サイトカインストームが引き起こされる。１型サイトカインは、周囲の記憶細胞をポリクローナリーに活性化することを可能とし、これにより活性化記憶細胞を維持するための正のフィードバックのループが創出される。

【0086】

活性化された記憶細胞は１型サイトカイン存在下で増加し得、これにより循環ＣＤ４カウントの増加が加速する。突発的で激しい免疫反応が、ＴＮＦ−α及びＩＦＮ−γ等の１型サイトカインを含むサイトカインストームと伴に発生することが知られている。このようなサイトカインストームはＨＩＶ患者にとって有益であり得る。また、ＩＦＮ−γ及びＩＬ−１２等のＩ型サイトカインは、当該記憶細胞の機能及び先天的な免疫活性を増強することを可能とする。

【0087】

当該使用に供されるａＴｈ１組成物がアロスチム^ＴＭである好適な実施形態においては、本組成物中における当該細胞に付着させたＣＤ３／ＣＤ２８被覆マイクロビーズによって、静脈内注入はＨＩＶに耐性を有する記憶細胞のＣＤ４カウントを更に増強させる。また、これらのマイクロビーズは相互作用して宿主記憶細胞を活性化させ、これらの細胞を増殖させ得る。ＣＤ３／ＣＤ２８被覆マイクロビーズで活性化された記憶細胞は、ＨＩＶ感染に耐性を有し得る。

【0088】

実施形態の一つとしては、アロスチム^ＴＭ細胞がａＴｈ１組成物として用いられる。アロスチム^ＴＭ細胞は、約０．２×１０^６細胞〜約２×１０^６細胞、好ましくは約１×１０^６細胞となる投与量にて皮内に注入される。ＣＤ４カウントを加速させるための静脈内への好適な投与量は、約１×１０^７〜約３×１０^７細胞（低い投与量）である。アロスチム^ＴＭ細胞は、約１×１０^７細胞／ｍＬの濃度にて緩衝液（例えば１％ヒト血清アルブミンを含むＰｌａｓｍａＬｙｔｅＡ）中に懸濁される。

【0089】

ＣＤ４カウント増強を加速する方法の１つには、皮内プライミングの間に１回以上の低投与量での静脈内アロスチム^ＴＭ注入を含み得る。当該低投与量での静脈内注入は、最後の皮内注射から７日以内又は２４時間以内に行うことができる。または皮内注入と同時に行うことができる。当該静脈内投与は、少なくとも２回の皮内プライミング投与が行われるまでは開始されない。または４回の皮内プライミング投与又は４回を超える皮内プライミング投与が行われるまでは開始されない。

【0090】

投与のタイミング、投与用量、及び投与経路のバリエーションは変更可能であり、これらは全て本記載の範囲に含まれる。

ウイルス量低減方法

【0091】

当該ウイルス量低減方法では、当該ウイルスに対する細胞性免疫制御の増強を介して、ウイルス量を低減することが可能である。本方法は、ＨＡＡＲＴ薬物療法中のウイルス学的失敗を抱えた患者にとって有用となり得る。また、当該ＣＤ４増強方法及び本方法の加速はウイルス量の低減を達成可能である。しかしながら、当該構築された方法は、当該増加したＣＤ４カウントにより覚醒可能である常在性抗ＨＩＶ免疫応答の存在を必要とし得る。ある患者では有効な常在性抗ＨＩＶ免疫応答を有しない場合があり、この場合これにより、ウイルスを生成するように活性化された細胞に対する免疫異物除去を媒介することができない。当該状況においては、当該ウイルス量低減方法は、欠損した抗ＨＩＶ免疫応答を刷り込み、ＣＤ４カウントを増加させウイルス量を減少させることが可能であるため、有用である。

【0092】

当該ウイルス量低減方法は、ａＴｈ１組成物と伴に投与される１つ以上のＨＩＶ抗原成分を含むものであっても良い。当該ＨＩＶ抗原成分としては、例えば、天然の又は組換えＨＩＶウイルスタンパク質に加え、弱毒化したウイルス全体を含み得る。これらのＨＩＶ抗原は、ａＴｈ１組成物と伴に同一の投与経路及び投与頻度にて投与される。

【0093】

当該ＨＩＶ抗原及びａＴｈ１組成物は、事前にプライミングされた患者に、同時に又はお互いの間隔をあけずに即座に皮内投与される。当該ａＴｈ１抗原は、事前のプライミングによって激しい記憶応答を引き起こし得る。次いで、当該ウイルス抗原及びａＴｈ１抗原は、ＬＣ又はＤＣ等のスカベンジャーであるＡＰＣによって取り込まれ得る。これらの細胞は、ＨＩＶ抗原に特異的なＴ細胞を活性化させるために、当該抗原を処理して提示を行い得る。本方法によって、ａＴｈ１組成物と、事前のプライミングにより注入部位に到達しているＴｈ１記憶細胞とは伴に、両方がＴｈ１／Ｔｃ１抗ＨＩＶ免疫の発達を導くアジュバントとして作用し得る。

【0094】

当該ウイルス量低減方法は、通常はａＴｈ１組成物と伴に用いられるＨＩＶ抗原を含む。これらのＨＩＶ抗原は、天然の又は組換えウイルスタンパク質であってもよく、ｔａｔ、ｅｎｖ、及びｇｐ１２０が含まれる。また、弱毒化ウイルス全体又はｎｅｆ置換による弱毒化ウイルスを用いることもできる。当該タンパク質は、ポックスウイルス等のキャリアにおいて発現させることが可能である。好適な実施形態の一つとしては、当該ＨＩＶウイルスタンパク質はｇａｇタンパク質である。ａＴｈ１組成物と伴にＨＩＶ抗原を反復的に投与することは、ＨＩＶに特異的なＣＤ４ Ｔｈ１記憶細胞及びＣＤ８記憶ＣＴＬの高い力価を確立させることを可能とする。これらの記憶細胞は、ａＴｈ１組成物を静脈内に注入することによって活性化状態が維持され得る。

ウイルス一掃方法

【0095】

当該ウイルス一掃方法では、抗ウイルス薬物療法中の患者においてａＴｈ１組成物の静脈内投与の用量を増量させることを含むことが可能である。本方法はＣＤ４増強方法及び／又はウイルス量低減方法を最初に受けた患者を対象としている。当該ウイルス一掃方法は、ウイルス耐性記憶細胞からなる増加したＣＤ４セットポイントを達成した患者に対して施される。当該患者が高い潜伏ウイルス量を有する場合、静脈内への注入によるこれらの細胞の活性化は、ウイルスの爆発的放出を引き起こしてＣＤ４カウントの即時低下という結果になり得る。従って、可能な限り高いＣＤ４セットポイントから本方法を開始した方が安全である。例として挙げると、当該患者としては、ＣＤ４セットポイントが＞３００細胞／ｍＬ、＞５００細胞／ｍＬ、又は＞７００細胞／ｍＬである。

【0096】

ある実施形態においては、事前にプライミングされて少なくとも６か月の間ウイルス量が検出限界を下回った状態にある患者が、活発な抗ウイルス抑制を維持しつつ、投与用量を増加させながらａＴｈ１組成物の静脈内投与を受ける。当該静脈内注入は少なくとも約３日間の間隔を空けて行うことが可能である。各注入後においては、ウイルスの急増が生じたかを判定するために当該ウイルス量を検査することが可能である。急増とは当該検出限界を超える如何なる測定値をも指す。当該ａＴｈ１の投与用量は、ウイルス急増が生じるまで各注入時において増加することが可能である。当該ウイルス急増の出現は、当該潜伏プールの細胞が活性化されたことを示し得る。ウイルス急増の発生後においては、当該ウイルス量が検出不能レベルに回復するまでの間、ＣＤ４カウント及びウイルス量について経過観察を行っても良い。当該ウイルス量が検出不能となった場合、ウイルス急増を引き起こした投与量と同じ投与量にて、更なるＩＶ注入を施すことが可能である。ウイルス急増が再び検出された場合、当該ウイルス量がベースラインに回復するまで当該患者は経過観察され、そして当該処理は静脈内注入後にウイルス急増が発生しなくなるまで反復して行うことができる。ウイルス急増が検出されない如何なる時点においても、当該静脈内投与量を再び増量することが可能である。当該増された投与量がウイルス急増を引き起こす場合、急増が引き起こされなくなるまで当該処理は反復して行われる。増量された静脈内投与量がウイルス急増を引き起こさない時点にて、当該静脈内投与は中断することが可能である。

【0097】

当該静脈内投与が中断された後、当該患者のＣＤ４及びウイルス量は継続してモニタリングを行っても良い。１週間を空けて少なくとも２回のカウントにおいてＣＤ４が当該ベースラインＣＤ４値を超えて安定しており且つ当該ウイルス量が検出不能である場合、当該患者の当該抗ウイルス薬物療法を終了することが可能となる。抗ウイルス薬物療法の休薬中の間、当該患者はＣＤ４カウント及びウイルス量をモニタリングされる。当該ウイルス量が急増するまでの間は、当該患者は抗ウイルス薬剤を用いないままが望ましい。当該ウイルス量の急増が発生した場合は、当該抗ウイルス薬物療法を直ちに再開することが望ましい。
抗ウイルス薬剤の休薬中でのウイルス量の急増後は、当該静脈内投与の用量を増量する処理が再開される。当該患者は抗ウイルス薬物療法からの休薬状態に置かれる度ごとに、ウイルス急増の発生に要する時間が増加することになるであろう。

【0098】

アロスチム^ＴＭがａＴｈ１組成物として用いられる実施形態においては、当該増量された静脈内投与は約３×１０^７細胞から開始することが可能であり、約５×１０^７細胞へ、約１０×１０^７細胞へ、約１５×１０^７細胞へ、約２０×１０^７細胞へと増量することが可能である。投与用量の増量は、５×１０^７細胞の間隔で最大１００×１０^７細胞まで継続して行うことが可能である。

【0099】

上記されたように、ＣＤ４増強方法、ウイルス量低減方法、及びウイルス一掃方法の組み合わせを施すことが可能である。いくつかの実施形態においては、当該患者はａＴｈ１組成物と併用して必要に応じてＨＡＡＲＴ薬物療法が施される。

【実施例】

【0100】

実施例１

【0101】

当該初期治療プロトコールの段階において患者に対するＨＡＡＲＴ療法を継続した。潜伏ウイルスの活性化に成功したこと示すウイルス負荷量の急増、並びに、それに続く免疫制御を示すベースラインへのウイルス負荷量の減少、を検出の後、患者はＨＡＡＲＴ中断段階に適した状態となり得る。

【0102】

治療中断におけるリスクを最小限にするために、当該患者は厳密にモニタリングされ、ウイルス複製が検出されると治療が再開されることになる。

【0103】

当該プロトコールは、ＨＡＡＲＴ中の患者に対してアロスチム^ＴＭの皮内投与と増量した静脈内投与との間で変更可能である。当該皮内投与は、ＨＩＶ感染に対して耐性を有する循環ＣＤ４＋Ｔｈ１記憶細胞の力価を上昇させるように設計されている。当該静脈内注入は、炎症性サイトカインストームを引き起こし、記憶ＣＤ４細胞及びマクロファージ（ＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌを介して）を活性化させるように設計されている。活性化により保有宿主における潜伏ウイルス複製が刺激されることになる。更に、当該静脈内注入は、ウイルス抗原源を提供するウイルス複製細胞を標的化し致死させるＮＫ細胞を活性化させることになる。樹状細胞はｓｈｅｄウイルス抗原を処理し、炎症性環境において抗ＨＩＶ特異的免疫を刺激することになる。当該継続的な炎症性ストームは、ウイルス免疫回避機構を無能力化し、ウイルス複製細胞を一掃することになる。ＣＤ４細胞を増加させるための皮内注射、及び、潜伏ウイルスを活性化し抗ＨＩＶ免疫を刺激するための静脈内注入、との間の当該サイクルによって、潜伏ウイルスを消滅できることが期待される。各ＩＶ注入によって、ウイルス量の急増が引き起こされることになる。そしてそれに続く免疫制御によって、ウイルス量が徐々に減少することになる。ウイルス量をベースラインにまで回復させることが困難である場合、ウイルス遮断薬（例えばマラビロク及び／又はフューゼオン）が添加されることになる。

【0104】

治療計画

【0105】

初期プロトコールは２８日間である。

【0106】

０日目：皮内アロスチム^ＴＭ

【0107】

３日目：皮内アロスチム^ＴＭ

【0108】

７日目：静脈内アロスチム^ＴＭ（１ｍＬ）

【0109】

１０日目：皮内アロスチム^ＴＭ

【0110】

１４日目：皮内アロスチム^ＴＭ

【0111】

１７日目：静脈内アロスチム^ＴＭ（３ｍＬ）

【0112】

２１日目：皮内アロスチム^ＴＭ

【0113】

２４日目：皮内アロスチム^ＴＭ

【0114】

２８日目：静脈内アロスチム^ＴＭ（５ｍＬ）

【0115】

ウイルス量およびＣＤ４／ＣＤ８比をベースライン（０日目）、１０日目、２１日目、及び２９日目にて、並びにその後２８〜３２日ごとに６か月間測定する。

【0116】

検査用の血液（４５ｍＬ）をベースライン（０日目）にて又はその前に、並びに７日目、１７日目、及び２７日目のＩＶ注入前に採取する。ＰＢＭＣ及び血漿は、Ｔｈ１／Ｔｈ２平衡（ＥＬＩＳＰＯＴ）、ＨＩＶ特異的免疫（ＥＬＩＳＰＯＴ）、サイトカインビーズアレイでの分析を行うまで冷凍保存される。

【0117】

以下に記載のものを含む表現型解析がベースライン前及び６０（±２）日目に行われる：

【0118】

ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ２５

【0119】

ＣＤ１４、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１６、ＣＤ３８、ＣＤ１１７

【0120】

ＣＢＣ、ＣＭＰ、ＣＲＰ実験室試験を念のため、ベースライン、７日目、１４日目、２１日目、及び２８日目にて行う。

【0121】

ＨＡＡＲＴ中断

【0122】

潜伏感染レベルを測定するために、健康なＨＩＶの感染対象部位であるリンパ系組織又はほとんどの解剖学上部位へアクセスすることは困難である。更に、そのような調査にて感染した保有宿主を検出できなかったとしても、これらのことによって潜伏ウイルスの根絶を証明することはできない。当該有効性の最終的な検査は、ＨＡＡＲＴの休薬のみであり得る。

【0123】

ウイルス量の急増を経験し、その後にベースライン以下にまで回復し、少なくとも６０日間ベースライン以下を維持した患者は、当該プロトコールにおけるＨＡＡＲＴ中断段階に移行する選択が与えられる。当該段階においては、すべてのウイルス抑制薬が休薬され、最初の７日間はウイルス量が毎日測定される。ウイルス量の増加が検出された場合、ＨＡＡＲＴが再開されることになる。ウイルス量の増加が検出されない場合、ウイルス量を７週間毎週測定しながら当該ＨＡＡＲＴ中断は継続される。ウイルス量の増加が検出されない場合、ウイルス負荷量検査がＨＡＡＲＴ中断から１年経過するまで毎月実施される。ウイルス負荷量の増加が検出されたいかなる時点でも、ＨＡＡＲＴは再開される。

【0124】

主要評価項目：

【0125】

ベースライン及びＨＡＡＲＴを継続しながらの２８日間のプロトコール完了後６か月間毎月での定常状態ウイルス血症（所謂ウイルスセットポイント）の変化

【0126】

安全性及び耐性

【0127】

ＣＤ４及びＣＤ８ナイーブ並びに記憶Ｔ細胞のベースラインからの変化、絶対的カウント、及び活性化状態

【0128】

単球／マクロファージの絶対的カウント及び活性化状態における変化

【0129】

細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）又はＥＬＩＳＰＯＴにより測定されたインターフェロン（ＩＦＮ）−γ生成（ＨＩＶ抗原に反応して）ＣＤ４ Ｔ細胞の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）１００万細胞に対する細胞数の変化

【0130】

二次評価項目：

【0131】

ＨＡＡＲＴ中断後にベースラインからウイルス負荷量が増加する時間

【0132】

試験対象患者基準：

【0133】

ＨＩＶ−１に感染している

【0134】

治験前少なくとも１２週間の間、変化又は中断なくＨＡＡＲＴ治療計画を安定して継続中である。患者は現時点において少なくとも異なる２種類の薬剤を含む治療計画を受けていなくてはならない。

【0135】

治験前３０日以内において血漿中ＨＩＶ−１ウイルス量を２回測定した値が５０コピー／ｍＬ未満である。

【0136】

治験前１２週間以内においてＣＤ４カウントが３５０細胞／ｍｍ^３を超える値である。

【0137】

治験前のいかなる時点においてもＣＤ４カウントの最小値が２５０細胞／ｍｍ^３を超える値である。

【0138】

避妊のために許容可能な形態のものを利用する意思がある。

【0139】

治験前３０日以内において得られたカルノフスキー指数（Karnofsky performance score）が９０以上である。

【0140】

除外基準：

【0141】

年齢が１８歳未満である。

【0142】

ＨＡＡＲＴに失敗した患者である。

【0143】

治験前２４週間以内においてＨＩＶ−１ウイルス量が５００コピー／ｍＬを超える量である。

【0144】

何等かの慢性自己免疫疾患（例えばバセドウ病）の病歴を有する。治験前２週間以内に、日光（例えば日光浴、日焼けマシーン）に過剰に曝されている。

【0145】

以前のＣＤＣカテゴリーでＢ又はＣであった。

【0146】

治験前６か月以内において、サイクロスポリン、ＩｇＧ含有製品、インターロイキン、インターフェロン、又は全身性のグルココルチコステロイド（吸入によるものを含む）を含む、免疫調節療法を受けている。

【0147】

実験的なＨＩＶワクチンに曝されている。

【0148】

治験前３０日以内において何等かのワクチンを用いている。

【0149】

治験前１２週間以内において臨床試験用医薬品を用いている。

【0150】

調査員の意見において、本治験を妨げる程度のドラッグ又はアルコールの現時点での使用又は依存状態にある。

【0151】

全身治療及び／又は入院治療を必要とする深刻な疾患である。治療を完了した参加者、又は、治療中であり治験前少なくとも１４日間臨床的に安定状態にある参加者、は除外されない。

【0152】

スクリーニングにおいてＢ型肝炎表面抗原陽性又は抗Ｃ型肝炎抗体陽性である。

【0153】

妊娠中又は授乳中である。

【0154】

以下に記載のものを含む適切な臓器機能を有する：

【0155】

骨髄：

【0156】

ＷＢＣ＞３０００／ｍｍ^３

【0157】

血小板＞１００，０００／ｍｍ^３

【0158】

好中球絶対数カウント≧１，５００／ｍｍ^３

【0159】

ヘモグロビン≧１０．０ｇ／ｄＬ（輸血可能）

【0160】

肝臟：

【0161】

血清総ビリルビン＜１．５×ＵＬＮ ｍｇ／ｄＬ

【0162】

ＡＬＴ（ＳＧＰＴ）／ＡＳＴ（ＳＧＯＴ）≦１×正常上限（ＵＬＮ）

【0163】

腎臓：

【0164】

血清クレアチニン（ＳＣＲ）＜１．０×ＵＬＮまたは

【0165】

クレアチニンクリアランス（ＣＣＲ）＞３０ｍＬ／分

【0166】

心臓、肺、胃腸、肝臟、腎臓、膵臓、又は神経の疾患に関する病歴を有するが、本治験役員の意見により参加が許容される。

実施例＃１

【0167】

１９年間のＨＡＡＲＴ薬物療法中であり、ウイルス量が常に検出可能限界を下回っているＨＩＶ陽性の男性に当該ウイルス増強プロトコールを実施した。

【0168】

当該患者は、２５０〜３５０の絶対的なＣＤ４細胞カウントをベースラインにて有していた。

【0169】

当該患者のＨＡＡＲＴ薬物療法を継続しながら、０日目及び３日目に同一部位に１×１０^７のアロスチム^ＴＭの皮内投与が施された。その後、７日目及び１０日目において別の部位に再び投与を行った。この期間を通して、当該患者の絶対的なＣＤ４カウントは３５０細胞から４５０細胞に増加した。

【0170】

１４日目から増量した静脈内投与用量のアロスチム^ＴＭが投与された。１４日目には１×１０^７細胞を注入された。検出可能なウイルス量はなかった。１７日目には５×１０^７細胞が注入された。検出可能なウイルス量はなかった。２１日目には１０×１０^７細胞が注入された。当該ウイルス量は６６に急増し１０日間検出状態が維持され、再び検出不能にまで回復した。この期間中ＣＤ４カウントは５００を超えて増加し、次の６０日間を通して増加し続けて６００を超えて安定した。

実施例＃１

【0171】

少なくとも６年間ＨＡＡＲＴ薬物療法中であり検出不能なウイルス量を維持しているＨＩＶ陽性の男性である。当該患者の絶対的なＣＤ４カウントは２年間を通して１００〜２３０の範囲内であった。

【0172】

当該患者は、ベースラインにおいてＣＤ４カウント２５０を有している。

【0173】

当該患者には、０日目、３日目、１０日目、及び１４日目に１×１０^７のアロスチム^ＴＭの皮内投与が施された。当該患者のＣＤ４カウントは２９３に増加した。当該患者は１７日目に１×１０^７の皮内注射及び３×１０^７の静脈内注入を受けた。当該患者は２１日目に１×１０^７の皮内注射及び１０×１０^７の静脈内注入を受けた。当該患者は２４日目に１０×１０^７の静脈内注入を受けた。当該患者は２８日目及び３１日目に１０×１０^７の静脈内注入を受けた。当該患者のウイルス量は３１日目に３００に急増し、４２日目までにベースラインに回復した。この期間中、当該患者のＣＤ４カウントはゆっくりと低下し、４２日目までに２００未満になった。

【0174】

４９日目から６３日目まで、当該患者は３〜４日間毎に１×１０^７のアロスチム^ＴＭの皮内注射を受けた。当該患者のＣＤ４カウントは２００未満から３００を超えるまで徐々に増加した。当該患者のウイルスは検出不能の状態で維持された。

【0175】

８４日目、８７日目、９１日目、及び９４日目に当該患者は１０×１０^７の静脈内アロスチム^ＴＭ注入を受けた。９７日目に当該患者のウイルス量は８６に急増した。１０１日目までに当該患者のウイルス量はベースラインへと回復し、当該患者のＣＤ４カウントは３００を超えた状態で維持された。当該患者のＨＡＡＲＴ薬物治療を休止した。
当該患者はＨＡＡＲＴ薬物療法なしで、ウイルス量が検出不能である状態を３１日間維持した。３２日目には当該ウイルス量は３００であり、ＣＤ４は２３０であった。ＨＡＡＲＴは再開され、そして当該ウイルスは検出不能レベルに戻りＣＤ４は２５０付近にて安定した。

【0176】

本記載は好適な実施形態を参照して記載されたものであるが、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく形態及び詳細における変更が可能であることが、当業者には理解されよう。