特許 6562631 シリンガレシノールを含む皮膚改善用組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6562631

(24)【登録日】2019年8月2日

(45)【発行日】2019年8月21日

(54)【発明の名称】シリンガレシノールを含む皮膚改善用組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 8/49 20060101AFI20190808BHJP

   A61K 31/357 20060101ALI20190808BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20190808BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20190808BHJP

   A61Q 19/02 20060101ALI20190808BHJP

   A61Q 19/08 20060101ALI20190808BHJP

【ＦＩ】

   A61K8/49

   A61K31/357

   A61P17/00

   A61P43/00 105

   A61Q19/02

   A61Q19/08

【請求項の数】5

【全頁数】27

(21)【出願番号】特願2014-538711(P2014-538711)

(86)(22)【出願日】2012年10月25日

(65)【公表番号】特表2014-530906(P2014-530906A)

(43)【公表日】2014年11月20日

(86)【国際出願番号】KR2012008816

(87)【国際公開番号】WO2013062333

(87)【国際公開日】20130502

【審査請求日】2015年10月7日

【審判番号】不服2018-8086(P2018-8086/J1)

【審判請求日】2018年6月12日

(31)【優先権主張番号】10-2011-0110484

(32)【優先日】2011年10月27日

(33)【優先権主張国】KR

(31)【優先権主張番号】10-2011-0112764

(32)【優先日】2011年11月1日

(33)【優先権主張国】KR

(73)【特許権者】

【識別番号】506213681

【氏名又は名称】アモーレパシフィック コーポレーション

【氏名又は名称原語表記】ＡＭＯＲＥＰＡＣＩＦＩＣ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ

(74)【代理人】

【識別番号】110000556

【氏名又は名称】特許業務法人 有古特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】シン， ヒョン ジョン

(72)【発明者】

【氏名】チョ， シ ヨン

(72)【発明者】

【氏名】ソ， デ バン

(72)【発明者】

【氏名】パク， チャン ウン

(72)【発明者】

【氏名】キム， ワン ギ

(72)【発明者】

【氏名】イ， サン ジュン

【合議体】

【審判長】 岡崎 美穂

【審判官】 田中 耕一郎

【審判官】 田村 聖子

(56)【参考文献】

【文献】 特開２００９−０６７７１８号公報

【文献】 特開２０１１−１５３０９０号公報

【文献】 特開２０１０−１８４９６７号公報

【文献】 国際公開第２０１０／０１１０２０号

【文献】 特開２０１１−１８４３０８号公報

【文献】 特開平１０−２３６９４０号公報

【文献】 特開２００３−２８１９号公報

【文献】 ＷＡＮＧ Ｈｕｉ−ＭＩｎ，外８名，Ｂｉｏｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ｆｒｏｍ ｓｔｅｍｓ ｏｆ Ｓｙｎｓｅｐａｌｕｍ ｄｕｌｃｉｆｉｃｕｍ Ｄａｎｉｅｌｌ （Ｓａｐｏｔａｃｅａｅ） ｉｎｈｉｂｉｔ ｈｕｍａｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ， ｒｅｄｕｃｅ ｍｕｓｈｒｏｏｍ ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｈａｖｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＴＨＥ ＴＡＩＷＡＮ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＯＦ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＥＮＧＩＮＥＥＲＳ，２０１１年，第４２巻，ｐ．２０４−２１１

【文献】 ＹＡＭＡＺＡＫＩ Ｔ．，外５名，（＋）−Ｓｙｒｉｎｇａｒｅｓｉｎｏｌ−ｄｉ−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ， ａ ｐｈｅｎｏｌｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｆｒｏｍ Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ Ｈａｒｍｓ， ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｉｎ ＳＷ９８２ ｈｕｍａｎ ｓｙｎｏｖｉａｌ ｓａｒｃｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ−１ ａｎｄ／ｏｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ−ｋＢ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ，ＴＯＸＩＣＯＬＯＧＹ ＩＮ ＶＩＴＲＯ，２００７年，第２１巻，ｐ．１５３０−１５３７

【文献】 Ｍａｄａｌｅｎｅ Ｃ． Ｙ． Ｈｅｎｇ， Ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｓｋｉｎ： ａｉｍｉｎｇ ｆｏｒ ｐｅｒｆｅｃｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ ５０．９ （２０１１）， ｐ．１０５８−１０６６（初版：２０１１年８月１９日）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

A61K8/00-8/99

A61Q1/00-90/00

CAPLUS/REGISTRY/EMBASE

SCIENCE DIRECT

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

皮膚再生促進用組成物であって、
前記組成物は、シリンガレシノール（ｓｙｒｉｎｇａｒｅｓｉｎｏｌ）または薬学的に許容し得るその塩を有効成分として含み、
前記皮膚再生は、皮膚における線維芽細胞の成長を促進することによる、皮膚における細胞の再生であり、
前記組成物は、皮膚における線維芽細胞の成長の促進を要する対象に投与される、皮膚再生促進用組成物。

【請求項2】

前記シリンガレシノールは、高麗人参の実又は五加皮の抽出物に含まれた、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記組成物は化粧料組成物である、請求項１又は２に記載の組成物。

【請求項4】

前記組成物は薬学組成物である、請求項１又は２に記載の組成物。

【請求項5】

前記組成物は、組成物の全重量に対して０．００１重量％〜２０重量％の有効成分を含む、請求項１又は２に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、一般式１で示される化合物、その誘導体または薬学的に許容し得るその塩を有効成分として含む皮膚改善用組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

ヒトの肌色は、メラニン色素を作るメラノサイト（ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ）の活動性や血管分布、皮膚の厚さ、またはカロチノイドとビリルビンなどを例に挙げられる色素含有の有無などの様々な要因によって決まる。その中でもチロシナーゼを例に挙げられる様々な酵素の作用によってメラノサイトで生成される黒色の色素である、メラニンの形成度合いは、肌色を決める最も重要な要因の一つである。

【0003】

皮膚に存在するメラニンは紫外線などから身体を保護する重要な機能をするが、過剰で存在する場合、シミ、そばかす、ホクロなどの皮膚色素沈着を生じさせるのみならず、皮膚老化を促進し、皮膚癌を誘発する因子としても作用することが知られている。

【0004】

メラニンの過剰産生による皮膚色素沈着を治療または軽減するために、アスコルビン酸、コウジ酸、アルブチン、ハイドロキノン、グルタチオン、またはこれらの誘導体を例に挙げられる皮膚美白効果を示す様々な物質を用いてきたが、これらは完璧な皮膚美白効果を示すことができないとともに、身体の安全性を保証することができず、また化粧料などに含まれて用いられる場合に剤形化が困難であるという不具合があり、剤形化ができたとしても安定性が確保できないことから、その使用に制限があった。

【0005】

皮膚は光に直接露出することから紫外線に最も脆弱な部分である。紫外線に露出した皮膚はその度合いによっては焼けど、色素沈着、ＤＮＡ損傷、結合組織の変化、癌といった生物学的反応を示すようになる。また、紫外線への繰り返し露出は皮膚の早期老化を生じさせるようになり、このような皮膚老化は、しわの生成、色素沈着、結合組織の変異、及び表皮細胞の厚さの変化などで現われる。

【0006】

皮膚の結合組織は、主にコラーゲンとエラスチンとからなる。コラーゲンとエラスチンは皮膚に弾力を与えるものであるので、これらが弱くなると皮膚が損傷され易くなり老化する。前記コラーゲンの分解に関与する酵素がＭＭＰ（Ｍａｔｒｉｘ-Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）である。皮膚老化が進むにつれ、ＭＭＰの発現が増加し、増加したＭＭＰが皮膚のコラーゲンを分解するようになる。このようなメカニズムが繰り返されると、皮膚しわが生成し早期老化が進む。

【0007】

ＴＧＦ−β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ-ｇｒｏｗｔｈ-ｆａｃｔｏｒ−β）は、様々な細胞の成長と分化に関与する物質である。哺乳類においてＴＧＦ−βは３種の異なる異性体（ｉｓｏｆｏｒｍｓ）として存在し、それらのうちのＴＧＦ−β１は真皮層のＥＣＭ（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ-ｍａｔｒｉｘ）形成に最も強い活性を示し、組織の復旧と分化に関与する。ＴＧＦ−β１は、線維芽細胞を刺激してＩ型及びＩＩ型コラーゲン、フィブロネクチン（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）、及びプロテオグリカン（ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎｓ）などの様々なＥＣＭ成分を産生するようにする。よって、ＴＧＦ−β１の生成を促進する物質は、線維芽細胞の成長を促進し皮膚再生を促進することで皮膚老化を防止し且つしわを改善することができるであろう。

【0008】

皮膚組織が水分を保つためには、皮膚内の天然保湿因子（Ｎａｔｕｒａｌ-Ｍｏｉｓｔｕｒｉｎｇ-Ｆａｃｔｏｒ）が増加することが必要である。天然保湿因子の主な成分としてのアミノ酸は、表皮角質形成細胞が産生するフィラグリン（ｆｉｌａｇｇｒｉｎ）というタンパク質の分解によって供給されるため、フィラグリンの産生が促進すれば保湿効果を示すことができる。また、インボルクリン（ｉｎｖｏｌｕｃｒｉｎ）は、皮膚の喪失を防止する細胞外皮（ｃｅｌｌ-ｅｎｖｅｌｏｐｅ）の形成及び角質層の構造化のうえで極めて重要な役割をする因子であるため、その発現が促進すれば、同じく優れた皮膚保湿効果を示すことができる。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

本発明は、優れた皮膚改善効果を示す組成物を提供することをその目的とする。

【0010】

本発明の他の目的は、優れた皮膚美白効果を示す組成物及び優れた抗老化効果を示す組成物を提供することである。

【0011】

本発明のまた他の目的は、皮膚しわ生成の抑制、皮膚再生能力の強化、皮膚保湿の促進などにより優れた皮膚老化抑制効果を示す組成物を提供することである。本発明の更なる目的は、しわの改善または抑制剤、皮膚再生促進剤及び皮膚保湿剤を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0012】

本発明の一側面は、下記の一般式１で示される化合物、その誘導体または薬学的に許容し得るその塩を有効成分として含む皮膚改善用組成物であって、

【0013】

【化1】

【0014】

前記式中、前記Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、又はＲ_４は、独立して直鎖状若しくは分岐鎖状のＣ_１〜Ｃ_１８のアルキル基、Ｃ_１〜Ｃ_１８のアルコキシ基、Ｃ_１〜Ｃ_１８のアルケニル基、Ｃ_１〜Ｃ_１８のアルキニル基、又はＣ_３〜Ｃ_６の環状アルキル基を表し、
前記Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、又はＲ_１１は、独立して水素または直鎖状若しくは分岐鎖状の_Ｃ１〜Ｃ_１８のアルキル基、Ｃ_１〜Ｃ_１８のアルコキシ基、Ｃ_１〜Ｃ_１８のアルケニル基、Ｃ_１〜Ｃ_１８のアルキニル基、Ｃ_３〜Ｃ_６の環状アルキル基を表す。

【発明の効果】

【0015】

本発明に係る組成物は、一般式１で示される化合物、具体的にシリンガレシノールを有効成分として含むことで、メラニン生成を抑制し、且つチロシナーゼ活性を阻害し、優れた抗酸化効果及び皮膚角質除去能を有して、優れた皮膚美白効果を示すことができる。

【0016】

本発明に係る組成物は、一般式１で示される化合物、具体的にシリンガレシノールを有効成分として含むことで、ＳＩＲＴ-１の発現を増加させ、且つ紫外線によるＭＭＰ−９の発現を抑制し、皮膚の弾力と強度に重要な影響を及ぼすコラーゲンの分解を抑制することで、皮膚しわを改善することができる。また、細胞の再生を促進するＴＧＦ−β１の発現を増加させるので、皮膚細胞の再生促進及び皮膚弾力の増進効果に優れている。さらには、皮膚保湿因子であるフィラグリン及びインボルクリンの発現を促進することで、優れた皮膚保湿効果を示すことができる。このような作用を通じて、一般式１で示される化合物、具体的にシリンガレシノールを含む組成物は、老化、具体的に皮膚老化、さらに具体的には紫外線による皮膚老化を抑制するうえで優れた効果を示すことができる。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】高麗人参の実の抽出物からシリンガレシノールを分離及び精製する方法を示す概路図である。

【図2】シリンガレシノールの自由ラジカル消去能をビタミンＣのそれと比べたグラフである。

【図3】角質形成細胞でシリンガレシノールのＳＩＲＴ-１発現促進効果を示す図である。

【図4】線維芽細胞でシリンガレシノールのＳＩＲＴ-１発現促進効果を示すグラフである。

【図5】シリンガレシノールのフィラグリンとインボルクリンの発現促進効果を示すグラフである。

【図6】シリンガレシノールのＭＭＰ−９発現及びコラーゲン分解抑制効果を示す図である。

【図7】シリンガレシノールを塗布しまたは経口投与した場合の皮膚しわ抑制効果を示すグラフである。

【図8】シリンガレシノールを塗布しまたは経口投与した場合の径皮水分喪失量（ＴＥＷＬ）抑制効果を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0018】

本明細書において「抽出物」とは、抽出方法、抽出溶媒、抽出された成分または抽出物の形態を問わず、天然物の成分を抽出して得られた物質をいずれも含む広義の概念である。

【0019】

本明細書において「誘導体」とは、化合物の置換可能な位置で他の置換基に変更されるすべての化合物を意味する。該置換基の種類には制限がなく、例えば、それぞれ独立してヒドロキシル、フェノキシ、チエニル、フリル、ピリジル、シクロヘキシル、アルキルアルコール、アルキルジアルコール、又は任意置換されたフェニルに置換されていてよいＣ_１−１０の非環状炭化水素基；ヒドロキシル、ヒドロキシルメチル、メチル、又はアミノに置換されていてよいＣ_５−６の環状炭化水素基；又は糖残基を含んでいてよいが、必ずしもこれらに制限されるものではない。本明細書において「糖残基」という用語は、多糖類の分子から１個の水素原子の除去時の基を意味し、したがって、例えば単糖類又はオリゴ糖に由来の残基を意味するものであってよい。

【0020】

本明細書において「薬学的に許容し得る」とは、通常の医薬的服用量（ｍｅｄｉｃｉｎａｌ-ｄｏｓａｇｅ）にて用いる際に相当な毒性効果を避けることにより、動物、より具体的には、ヒトに用いていてよいという政府又はこれに準する規制機構の承認を受けることができるか若しくは承認を受けたか、又は薬局方に列挙されているか、その他一般的な処方として認知されることを意味する。

【0021】

本明細書において「薬学的に許容し得る塩」とは、薬学的に許容し得るものであい且つ親化合物（ｐａｒｅｎｔ-ｃｏｍｐｏｕｎｄ）の好適な薬理活性を有する本発明の一側面に係る塩を意味する。前記塩は、（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等といった無機酸により形成されるか；または、酢酸、プロピオン酸、ヘキサエン酸、シクロペンテンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１,２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、４−メチルビシクロ［２,２,２］−ｏｃｔ−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔｅｒｔ−ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸といった有機酸により形成される酸付加塩（ａｃｉｄ-ａｄｄｉｔｉｏｎ-ｓａｌｔ）；または、（２）親化合物に存在する酸性プロトンが置換される際に形成される塩を含んでいてよい。また、本明細書における化合物は、薬剤学的に許容し得る塩のみならず、通常の方法にて製造され得るあらゆる塩、水和物、溶媒和物をいずれも含むものであってよい。

【0022】

本明細書において「皮膚」とは、動物の体表を覆う組織を意味するものであって、顔やボディなどの体表を覆う組織だけではなく、頭皮や毛髪を含む最広義の概念である。

【0023】

本明細書において「改善」とは、正常でないか又は正常の皮膚の保湿、しわの改善などの肯定的な効果を示すすべての場合のことを意味する。具体的には、本発明の一側面において、皮膚の美白増加又は老化の抑制により皮膚改善効果を示し得るが、必ずしもこれに制限されるものではない。

【0024】

以下、本発明を詳細に説明する。

【0025】

本発明の一側面は、下記の一般式１で示される化合物、その誘導体または薬学的に許容し得るその塩を有効成分として含む皮膚改善用組成物であって、

【0026】

【化2】

【0027】

前記式中、前記Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、又はＲ_４は、独立して直鎖状若しくは分岐鎖状のＣ_１〜Ｃ_１８のアルキル基、Ｃ_１〜Ｃ_１８のアルコキシ基、Ｃ_１〜Ｃ_１８のアルケニル基、Ｃ_１〜Ｃ_１８のアルキニル基、又はＣ_３〜Ｃ_６の環状アルキル基を表し、
前記Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、又はＲ_１１は、独立して水素または直鎖状若しくは分岐鎖状の_Ｃ１〜Ｃ_１８のアルキル基、Ｃ_１〜Ｃ_１８のアルコキシ基、Ｃ_１〜Ｃ_１８のアルケニル基、Ｃ_１〜Ｃ_１８のアルキニル基、Ｃ_３〜Ｃ_６の環状アルキル基を表す。

【0028】

本発明の一側面に係る血管老化抑制用組成物において、前記化合物はシリンガレシノールであってよい。

【0029】

本明細書において「シリンガレシノール（ｓｙｒｉｎｇａｒｅｓｉｎｏｌ）」とは、一般式２で示すような化学構造を有するリグナン系化合物であって、化学合成を通じて得るか、または亜麻仁、黄白、五加皮、胡麻、及び高麗人参の実のうちの一種以上から抽出することができる。前記亜麻仁、黄白、五加皮、及び胡麻は、各植物の葉、幹、根、実、または種を例に挙げられる植物の各部位をいずれも含み、高麗人参の実は、高麗人参の実の果皮または果肉を含む。

【0030】

【化3】

【0031】

本明細書において前記「シリンガレシノール」は、亜麻仁、黄白、五加皮、胡麻、及び高麗人参の実のうちの一種以上を、水、有機溶媒、及び水と有機溶媒との混合物からなる群より選ばれた一つ以上で抽出して収得していてよい。前記有機溶媒は、アルコール、アセトン、エーテル、エチルアセテート、ジエチルエーテル、エチルメチルケトン、及びクロロホルムからなる群より選ばれた一種以上を含むが、必ずしもこれらに制限されるものではない。前記アルコールは、Ｃ_１〜Ｃ_５の低級アルコールを含み、Ｃ_１〜Ｃ_５の低級アルコールは、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、ｎ−ブタノール、及びイソブタノールからなる群より選ばれた一種以上を含むが、必ずしもこれらに制限されるものではない。

【0032】

本発明の一側面において、シリンガレシノールを高麗人参の実から分離及び精製する方法は、次のような段階を含んでいてよい。高麗人参の実の果肉のアルコール抽出物を製造する段階；製造したアルコール抽出物を水とアルコールのうちの一種以上を含む溶媒で溶出させて分画を収得する段階；及び収得した分画に対して有機溶媒を展開溶媒としてクロマトグラフィー、具体的には薄膜クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を行う段階。前記有機溶媒は、アルコール、アセトン、エーテル、エチルアセテート、ジエチルエーテル、エチルメチルケトン、及びクロロホルムからなる群より選ばれた一種以上を含み、アルコールは、Ｃ_１〜Ｃ_５のアルコールを含む。本発明の一側面に係る組成物は、前記のようにして精製されたシリンガレシノールを有効成分として含んでいてよい。

【0033】

本発明の一側面に係る組成物は、組成物の全重量に対して０．００１重量％〜２０重量％、具体的には、０．０１重量％〜１０重量％、より具体的には、０．１重量％〜５重量％の有効成分を含んでいてよい。前記範囲で含む場合、本発明の意図した効果を示す上で好適であるだけでなく、組成物の安定性や安全性をいずれも満足することができ、且つ、コスト対効果の面でも前記範囲で用いることが好適である。具体的に、有効成分が０．０１重量％未満の場合は十分な皮膚美白効果を得ることができず、また、２０重量％を超える場合は安全性や剤形安定性が劣化するおそれがある。

【0034】

本発明の一側面に係る皮膚改善用組成物において、前記皮膚改善は皮膚美白を含む。

【0035】

シミ、そばかす、ホクロなどのような過色素沈着は、皮膚中のメラノサイト及びその周辺環境の異常に起因することがある。本発明者らは、メラノサイトとメラノサイト周辺のマイクロ環境を改善することにより、メラニンの生成を根本的に減少させるとともに生成されたメラニンを速かに排出させ、肌色の明るさや均一性を増加させることで皮膚美白効果を示す物質を開発すべく鋭意研究を重ねた結果、一般式１で示される化合物、具体的にシリンガレシノールを有効成分として含む皮膚美白用組成物を完成するに至った。

【0036】

一般式１で示される化合物、具体的にシリンガレシノールは、皮膚細胞、具体的に皮膚色素細胞の毒性を減少させ、メラノサイトのメラニン生成を抑制し、チロシナーゼ活性を阻害することで優れた皮膚美白効果を示すことができる。さらには、優れた抗酸化効果を有することから、メラノサイトを取り囲んだマイクロ環境の酸化を抑制してメラノサイトを鎮静させることで太陽光線による日焼けなどといった皮膚色素沈着現象を抑制する効果に優れている。そして、角質形成細胞などから分泌されるサイトカインにて肌色や肌のトーンを明るくし、シミや肌のくすみといった皮膚過色素沈着を抑制するインターロイキン−６（ＩＬ−６）の発現を増加させることで、肌色や肌のトーンを元気で明るく且つ均一にさせ、過色素沈着を抑制することができる。さらには、皮膚角質を除去するとともに角質交代周期の角質ターンオーバー（ｔｕｒｎ-ｏｖｅｒ）を促進する効果に優れているため、メラニンを含む古い角質を除去することで皮膚が白くてきれいに見えるようにすることができる。また一般式１で示される化合物、具体的にシリンガレシノールは、メラニンの排出を容易にするのみならず、皮膚の表面を均一にさせて皮膚を滑らか且つ柔らかくすることで、皮膚美白効果を倍加することができる。したがって、このような一般式１で示される化合物、具体的にシリンガレシノールを有効成分として含む本発明に係る組成物は、極めて優れた皮膚美白効果、具体的に肌色の明るさや均一性を高め且つ皮膚過色素沈着を改善し、角質除去及び角質ターンオーバーを促進するといった優れた効果を示すことができる。前記皮膚過色素沈着は、シミ、そばかす、肌のくすみ、老人性色素斑、ホクロ、母斑、及びダークサークルから選ばれた一つ以上を含むが、必ずしもこれらに制限されるものではない。

【0037】

本明細書において、肌色の明るさや均一性が高くなるとは、全般的な肌色の明るさが高くなり、且つまだらが減少し、全体的な肌色の均一性が高くなることを意味する。

【0038】

本発明の他の一側面において、シリンガレシノールは、亜麻仁、黄白、五加皮、胡麻、及び高麗人参の実の抽出物として組成物に含まれていてよく、好ましくは、皮膚美白に特に効果的な分画にて含まれていてよい。

【0039】

本発明の一側面は、前記組成物を有効成分として含む皮膚外用剤組成物を提供する。本発明の他の一側面は、前記組成物を有効成分として含む経口用組成物を提供する。一般式１で示される化合物、具体的にシリンガレシノールを有効成分として含む組成物は皮膚に塗布され、または経口投与される場合のいずれもにおいて優れた皮膚美白効果を示すことができる。

【0040】

サーチュイン１（Ｓｉｒｔｕｉｎ-１、ＳＩＲＴ-１）は、Ｓｉｒ２（ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ-ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ-ｒｅｇｕｌａｔｏｒ-２）の哺乳動物ホモログであってＮＡＤ^＋依存的なヒストン脱アセチル化酵素である。ＳＩＲＴ-１は、ヒストン、転写因子などの様々なタンパク質の脱リン酸化を調節することで、老化、ストレス抵抗性などに関与することが知られており、ヒト真皮細胞及び角質形成細胞でＳＩＲＴ-１が活性化しまたは過発現した場合、紫外線の照射によるＭＭＰ−９の発現を抑制することでコラーゲン分解を防止することが知られている。このような結果は、ＳＩＲＴ-１の活性または発現調節剤が皮膚老化を抑制または予防することができるということを意味する。しかしながら、これまでのところ、ＳＩＲＴ-１の発現を増加させながら安定性があると知られた物質はない。

【0041】

本発明の一側面に係る皮膚改善用組成物において、前記皮膚改善は皮膚老化抑制を含む。

【0042】

本明細書において老化とは、年を取るにつれて生じる生体の衰退的な変化現象を意味し、生理活性の低下、体内代謝の低下、皮膚老化を含む。前記皮膚老化は、紫外線によってしわが生成し、保湿因子が減少し、再生能力が喪失した状態を含む。

【0043】

一般式１で示される化合物、具体的にシリンガレシノールは、ＳＩＲＴ-１の発現を４倍以上増加させることができるだけでなく、皮膚再生能力の指標であるＴＧＦ−β１の発現を増加させることで皮膚再生を促進し、また紫外線によるＭＭＰ−９の発現を抑制することで紫外線を照射されていない程度の低いレベルでＭＭＰ−９を発現させることができる。また、一般式１で示される化合物、具体的にシリンガレシノールは、皮膚の弾力と強度に重要な影響を及ぼすコラーゲンの分解、具体的に紫外線によるコラーゲンの分解を抑制することができる。さらには、一般式１で示される化合物、具体的にシリンガレシノールは、皮膚保湿に重要な因子であるフィラグリン（ｆｉｌａｇｇｒｉｎ）及びインボルクリン（ｉｎｖｏｌｕｃｒｉｎ）の発現を促進させることで皮膚乾燥を防止するとともに、紫外線による皮膚バリアの損傷を防止し、且つ損傷された皮膚バリアを素早く改善して皮膚表皮の水分を保たせることができる。そして、一般式１で示される化合物、具体的にシリンガレシノールは、皮膚結合組織を強固にして皮膚しわの生成を抑制するとともに、皮膚弾力を増進させることができる。すなわち、一般式１で示される化合物、具体的にシリンガレシノールを有効成分として含む組成物は、しわの改善または抑制剤、皮膚再生促進剤及び皮膚保湿剤として用いられていてよい。このように一般式１で示される化合物、具体的にシリンガレシノールは、皮膚しわ生成の抑制、皮膚再生能力の強化、皮膚保湿促進作用をすることで、老化、具体的に皮膚老化、より具体的に紫外線による皮膚老化を抑制または予防する効果に優れている。

【0044】

本発明の他の一側面において、シリンガレシノールは、亜麻仁、黄白、五加皮、胡麻、及び高麗人参の実の抽出物として組成物に含まれていてよく、好ましくは、老化の抑制に特に効果的な分画にて含まれていてよい。

【0045】

本発明の一側面に係る前記組成物は、皮膚外用剤組成物を含む。本発明の他の一側面は、シリンガレシノールを有効成分として含む経口用組成物を提供する。シリンガレシノールを有効成分として含む組成物は、皮膚に塗布され、または経口投与された場合のいずれもにおいて優れた老化抑制効果を示すことができる。

【0046】

本発明の一側面に係る組成物は、化粧料組成物を含む。前記化粧料組成物は、皮膚美白効果を示すことができ、具体的にシミ、そばかす、ほくろ、肌のくすみ、皮膚色素沈着を改善または予防することができる。

【0047】

本発明の一側面は、シリンガレシノールを有効成分として含む化粧料組成物を提供する。前記化粧料組成物は老化抑制効果を示すことができ、具体的に皮膚しわ生成の抑制、皮膚再生能力の強化、皮膚バリア機能の強化、皮膚保湿の促進などによって皮膚老化を抑制することができる。

【0048】

本発明に係る化粧料組成物は、局所適用に適したあらゆる剤形で提供されてよい。例えば、溶液、水相に油相を分散させて得たエマルジョン、油相に水相を分散させて得たエマルジョン、懸濁液、固体、ゲル、粉末、ペースト、泡沫（ｆｏａｍ）またはエアロゾル組成物の剤形で提供されてよい。こうした剤形の組成物は、当該分野における通常の方法によって製造されてよい。

【0049】

本発明に係る化粧料組成物は、前記物質以外に、主効果を損傷させない範囲内で、好ましくは、主効果に相乗効果を与え得る他の成分を含んでよい。具体的に、本発明に係る化粧料組成物の皮膚美白効果を上昇させることができるコウジ酸、アルブチン、またはアスコルビン酸誘導体をさらに含んでよい。また、本発明に係る化粧料組成物は、保湿剤、エモリエント剤、界面活性剤、紫外線吸収剤、防腐剤、殺菌剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、有機および無機顔料、香料、冷感剤または制汗剤をさらに含んでよい。前記成分の配合量は、本発明の目的および効果を損なわない範囲内で当業者が容易に選定可能であり、その配合量は、組成物の全重量を基準として、０．０１〜５重量％、具体的に０．０１〜３重量％であってよい。

【0050】

本発明の一側面に係る組成物は薬学組成物であってよい。前記薬学組成物は、皮膚美白効果を示すことができ、具体的にシミ、そばかす、ほくろ、肌のくすみといった皮膚色素沈着を改善または治療することができる。

【0051】

本発明の一側面に係る組成物は薬学組成物であってよい。前記薬学組成物は、老化抑制効果を示すことができ、具体的に皮膚しわの生成抑制、皮膚再生能力の強化、皮膚バリア機能の強化、皮膚保湿の促進などによって皮膚老化を予防または治療することができる。

【0052】

本発明の一側面に係る薬学組成物は、経口、非経口、直腸、局所、経皮、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下などに投与されていてよい。

【0053】

経口投与のための剤形としては、錠剤、丸剤、軟質及び硬質カプセル剤、顆粒剤、散剤、細粒剤、液剤、乳濁剤またはペレット剤であってよいが、必ずしもこれらに制限されるものではない。これらの剤形は、有効成分の他に希釈剤（例：ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースまたはグリシン）、滑沢剤（例：シリカ、タルク、ステアリン酸、またはポリエチレングリコール）、または結合剤（例：マグネシウムアルミニウムシリケート、澱粉ペースト、ゼラチン、トラガカンス、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、またはポリビニルピロリジン）を含有してよい。場合に応じて、崩解剤、吸収剤、着色剤、香味剤、または甘味剤などの薬剤学的添加剤を含有してよい。前記錠剤は、通常的な混合、顆粒化、またはコーティング方法により製造されてよい。

【0054】

非経口投与のための剤形としては、注射剤、点滴剤、ローション、軟膏、ゲル、クリーム、懸濁剤、乳液剤、坐剤、パッチまたは噴霧剤であってよいが、必ずしもこれらに制限されるものではない。

【0055】

本発明の一側面に係る薬学組成物の有効成分は、投与を受ける対象の年齢、性別、体重、病理状態およびその深刻度、投与経路または処方者の判断によって変わり得る。こうした因子に基づいた適用量の決定は当業者の水準内にあり、その１日投与量は、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、より具体的には５ｍｇ／ｋｇ／日〜５０ｍｇ／ｋｇ／日であってよいが、必ずしもこれに限定されるものではない。

【0056】

本発明の一側面に係る前記組成物は食品組成物であってよい。前記食品組成物は、嗜好食品または健康食品組成物を含む。

【0057】

前記食品組成物の剤形は、特に限定されないが、例えば、錠剤、顆粒剤、粉末剤、ドリンク剤のような液剤、キャラメル、ゲル、バーなどに剤形化することができる。各剤形の食品組成物は、有効成分の他に当該分野において通常に用いられる成分を剤形または使用目的に応じて当業者が難なく適宜選定し配合することができ、他の原料と同時に適用する場合、相乗効果が生じることがある。

【0058】

前記有効成分の投与量の決定は当業者の水準内にあり、その１日投与用量は、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜５０００ｍｇ／ｋｇ／日、より具体的には、５０ｍｇ／ｋｇ／日〜５００ｍｇ／ｋｇ／日であってよいが、必ずしもこれに制限されるのではなく、投与しようとする対象の年齢、健康状態、合併症などといった様々な要因によって変わり得る。

【0059】

以下、実施例及び実験例を挙げて本発明の構成及び効果をより具体的に説明する。なお、これらの実施例及び実験例は、本発明に関する理解を助けるための目的にて例示したものに過ぎず、本発明の範疇及び範囲がそれらによって制限されるものではない。

【0060】

［実施例］シリンガレシノールの分離及び分析
１．高麗人参の実の前処理
生高麗人参の実を収穫し、種を分離して除去した後、高麗人参の実の果皮を除去し果肉のみを日光乾燥または熱風乾燥して、高麗人参の実の果肉乾燥物を製造した。

【0061】

２．高麗人参の実の果肉抽出物からシリンガレシノールの分離及び分析
先に製造した高麗人参の実の果肉乾燥物１ｋｇに水または酒精３Ｌを加えて常温または還流抽出しろ過した後、４０〜４５℃で減圧濃縮して、高麗人参の実の果肉抽出物３００ｇを得た。抽出物にエーテル処理を施して脂溶性成分を除去した後、ブタノールで粗サポニンを抽出及び濃縮した。これを分離、精製してシリンガレシノールを得、その具体的な方法は次のとおりである。先ず、試料１９４ｇを逆相コラムクロマトグラフィー（ｒｅｖｅｒｓｅｄ−ｐｈａｓｅ（ＯＤＳ）ｃｏｌｕｍｎ-ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）にて精製し、このとき、溶出溶媒として、最初は１００％水を用い、メタノールを１０％ずつ徐々に増加させて、最終的には１００％メタノール溶媒を用いた。その結果、ＧＢ−１〜ＧＢ−１０分画物を得、これらの分画物のうち、人間の長寿遺伝子とも呼ばれるＳＩＲＴ-１（Ｓｉｒｔｕｉｎ-１）発現活性を示した分画ＧＢ−３を選別し濃縮した後、５０％水溶性メタノール（ａｑｕｅｏｕｓ-ｍｅｔｈａｎｏｌ）を用いてセファデックスＬＨ−２０コラムクロマトグラフィー（Ｓｅｐｈａｄｅｘ-ＬＨ−２０-ｃｏｌｕｍｎ-ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）を行った。得た分画物のうち、ＳＩＲＴ-１発現活性を示したＧＢ−３−６（３Ｆ）を選別し濃縮した後、クロロホルム：メタノール（１０：１）を展開溶媒として予備シリカゲル（ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ-ｓｉｌｉｃａ-ｇｅｌ）ＴＬＣを行い、その結果、Ｒｆ値０．６７の活性分画を精製した。前記分離及び精製方法を図式化して図１に示した。

【0062】

ＮＭＲ分光分析とデータベース検索を行って、分離及び精製した活性化合物をシリンガレシノール（ｓｙｒｉｎｇａｒｅｓｉｎｏｌ）と同定することができた。これを再確認するために質量（ｍａｓｓ）分析を行い、ＥＳＩ−ｍａｓｓをｐｏｓｉｔｉｖｅ-ｍｏｄｅで測定した結果、[Ｍ＋Ｎａ]＋がｍ／ｚ-４４０．９、[２Ｍ＋Ｎａ]＋がｍ／ｚ-８５８．９とそれぞれ観察され、分子量が４１８であることが分かった。また、ＮＭＲ分光分析を行った結果、一般式３で示すような結果が得られた。これによって、前記分離・精製した活性化合物は、シリンガレシノールであることが確認された。

【0063】

【化4】

【0064】

このように高麗人参の実の果肉からシリンガレシノールを分離した。

【0065】

［実験例１］細胞毒性程度の確認
シリンガレシノールに対し、ねずみの色素細胞における細胞毒性程度について、以下のような方法にて確認した。

【0066】

Ｃ５７ＢＬ／６マウス由来のねずみの色素細胞（Ｍｅｌ−Ａｂ-ｃｅｌｌ）（Ｄｏｏｌｅｙなどの方法にて処理）を、ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏｓ-ｍｏｄｉｆｉｅｄ-Ｅａｇｌｅｓ-ｍｅｄｉａ）に、１０％牛胎盤血清、１００ｎＭの１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール（ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｒｂｏｌ）−１３−アセテート、１ｎＭコレラ毒素（ｃｈｏｌｅｒａ-ｔｏｘｉｎ）を添加した培地で、３７℃、５％ＣＯ_２の条件下で培養した。培養したＭｅｌ−Ａｂ細胞を０.２５％トリプシン−ＥＤＴＡで取り外し、２４−ウェルプレートに１０^５細胞／ウェル（ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）の濃度で細胞を培養した後、前記実施例のシリンガレシノールに対して処理を施した。２４時間培養を行い、リン酸塩緩衝溶液（ｐＨ７．２）で洗浄し、０．１％クリスタルバイオレット（ｃｒｙｓｔａｌ-ｖｉｏｌｅｔ、シグマ）、１０％エタノール（Ｅｔ−ＯＨ）を用いて５分間常温で染色を行った。染色されていないクリスタルバイオレット（ｃｒｙｓｔａｌ-ｖｉｏｌｅｔ）を完全に除去した後、リン酸塩緩衝溶液（ｐＨ７．２）で３回洗浄した。染色された細胞からクリスタルバイオレットを抽出するために、９５％エタノール（Ｅｔ−ＯＨ）を１時間常温で処理し、抽出液をパーキンエルマー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）（Ｌａｍｂｄａ-２５-ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ）にて５４０ｎｍの波長で測定した吸光度に基づき、次式１で細胞の生存率（％）を計算した。その結果を下表１に表した。

【0067】

【数1】

【0068】

【表1】

【0069】

前記結果に見られるように、シリンガレシノールは皮膚細胞の毒性を格段に減少させ、細胞の生存率を高めることができる。

【0070】

[実験例２]メラニン生成抑制効果の評価
実施例で得たシリンガレシノールのメラニン色素生成抑制効果を調べるために、ねずみの色素細胞を利用した。

【0071】

先ず、５７ＢＬ／６マウス由来のねずみ色素細胞（Ｍｅｌ−Ａｂ-ｃｅｌｌ）（Ｄｏｏｌｅｙなどの方法で処理）をＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏｓ-ｍｏｄｉｆｉｅｄ-Ｅａｇｌｅｓ-ｍｅｄｉａ）に１０％牛胎盤血清、１００ｎＭの１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール（ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｒｂｏｌ）−１３−アセテート、１ｎＭのコレラ毒素（ｃｈｏｌｅｒａ-ｔｏｘｉｎ）を添加した培地で、３７℃、５％ＣＯ_２の条件下で培養した。培養したＭｅｌ−Ａｂ細胞を０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡで取り外し、２４−ウェルプレートに１０^５細胞／ウェル（ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）の濃度で細胞を培養した後、二日間から３日連続でそれぞれ陽性対照群として１０ｐｐｍのハイドロキノン及び実施例で収得したシリンガレシノールを加えて培養した。次いで、培養液を除去し、ＰＢＳで洗浄した後、１Ｎ水酸化ナトリウムで細胞を溶かし、４００ｎｍで吸光度を測定した。測定した吸光度に基づいて、次式２でメラニン生成抑制率（％）を計算し、その結果を下記の表２に表した。

【0072】

【数2】

【0073】

【表2】

【0074】

前記結果に見られるように、シリンガレシノールは、優れたメラニン生成抑制率（％）を示し、その効果は陽性対照群であるハイドロキノンよりも遥かに優れている。すなわち、シリンガレシノールは、メラニン生成を抑制し、優れた皮膚美白効果を有することが分かる。

【0075】

［実験例３］チロシナーゼ活性抑制効果の評価
シリンガレシノールがメラニン合成に最も重要な酵素であるチロシナーゼの活性を抑制するか否かを調べるために、次のような実験を実施した。

【0076】

０．１Ｍのリン酸カリウム（Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ-Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）緩衝液（ｐＨ６．８）、０．０３％のＬ−チロシン基質溶液（０．３ｍｇ／ｍｌ-ｉｎ-Ｄ.Ｗ）、１．４２-ｕｎｉｔｓ／μｌのチロシナーゼ酵素溶液（リン酸塩緩衝液）を反応液の製造に用いた。反応液は０．１Ｍのリン酸塩緩衝液５００μｌ、Ｌ−チロシン１５μｇ、シリンガレシノール５０μｌを入れた後、最終体積が１５００μｌになるように蒸留水を添加して製造した。また実質的に等しい過程を通じて、シリンガレシノールの代わりにコウジ酸を含むように製造し、これを陽性対照群とした。実験に用いたすべての試料の濃度は１０ｐｐｍとした。前記反応液にキノコ由来の１０ｕｎｉｔｓのチロシナーゼを入れ、３７℃で１０分間反応させた後、速やかに氷で５分間放置して反応を中断させた。４７５ｎｍで吸光度を測定して反応生成物であるドーパクロム（ｄｏｐａｃｈｒｏｍｅ）の合成率を求め、これに基づき、チロシナーゼ活性抑制率（％）を計算した。その結果を下記の表３に表した。

【0077】

【表3】

【0078】

前記結果に見られるように、シリンガレシノールは優れたチロシナーゼ活性抑制効果を示した。すなわち、シリンガレシノールは、メラノサイトのメラニン色素形成を根本的に遮断することで優れた美白効果を示し得ることが分かる。

【0079】

［実験例４］自由ラジカル消去能の測定
それ自体がラジカル形態をなしている１００Ｍ濃度のＤＰＰＨ（Ｄｉｐｈｅｎｙｌ-Ｐｉｃｒｙｌ-Ｈｙｄｒａｚｉｌｅ）を９９％エタノールに溶かしてラジカル溶液を用意した。シリンガレシノールを濃度（μｇ／ｍｌ）別に蒸留水に溶かして用意した後、ラジカル溶液とシリンガレシノールとを混合して反応液を製造した。また、シリンガレシノールを含まない反応液を製造し、これを陰性対照群とし、ビタミンＣ（Ｖｉｔ-Ｃ）を入れて反応液を製造し、これを陽性対照群とした。反応液を３７℃で３０分間十分に反応させた後、５１５ｎｍで吸光度を測定してラジカルの消失を評価した。陰性対照群を１００にして換算した各試験物質の消去能を図２に示した。

【0080】

図２に示すように、シリンガレシノールは、濃度依存的に自由ラジカルを消去することができ、この効果は、ビタミンＣよりも優れている。すなわち、シリンガレシノールは、極めて優れた抗酸化効果を有することが分かる。

【0081】

［実験例５］インターロイキン−６の遺伝子発現増加効能の評価
インターロイキン−６（ＩＬ−６）は、角質形成細胞などから分泌するサイトカインの一種であって、ＩＬ−６遺伝子が活性化して分泌量が多くなると、肌色と皮膚のトーンが明るくなるとともにシミや肌のくすみの生成が抑制され、皮膚色素沈着が抑制される。本実験では、シリンガレシノールが皮膚角質形成細胞のＩＬ−６遺伝子発現を増加させることができるか否かを評価した。

【0082】

角質形成細胞に１０ｐｐｍ及び１００ｐｐｍのシリンガレシノールを処置し、２４時間後に細胞を収去して、１０ｍｌのリン酸塩緩衝液（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ-Ｂｕｆｆｅｒｅｄ-Ｓａｌｉｎｅ、ＰＢＳ）で細胞を２回洗浄し、次いで、トリゾール試薬（Ｔｒｉｚｏｌ-ｒｅａｇｅｎｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いて細胞内の全ＲＮＡを分離した。分離したＲＮＡをキアゲン社製のＲＮＡキット（Ｑｉａｇｅｎ-ＲＮｅａｓｙ-ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）を用いてもう１回精製した後、分離したＲＮＡからインビトロジェン社製の逆転写キット（Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ-Ｒｅｖｅｒｓｅ-Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（ＲＴ）ＩＩ-ｋｉｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を用いてｃＤＮＡを合成した。次いで、逆転写重合酵素連鎖反応（ｒｅａｌ-ｔｉｍｅ−ｒｅｖｅｒｓｅ-ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ-ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ-ｃｈａｉｎ-ｒｅａｃｔｉｏｎ、Ｑ−ＲＴ−ＰＣＲ）にてインターロイキン−６の遺伝子発現の変化を定量的に分析した。遺伝子発現パターンの変化はアプライドバイオシステムズ社製のタックマン遺伝子発現分析キット（ＴａｑＭａｎ-ｇｅｎｅ-ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ-ａｓｓａｙ-ｋｉｔ、Ａｐｐｌｉｅｄ-Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＦｏｒｓｔｅｒＣｉｔｙ、ＣＡ）を用いて評価した。用いたプライマーはインターロイキン−６：Ｈｓ００１７４３６０＿ｍ１であった。各細胞からインターロイキン−６が発現した量をリアルタイムＰＣＲ（Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ-ＰＣＲ）で確認し、何の処理も施していない対照群を基準とした結果は、下記の表４のとおりである。

【0083】

【表4】

【0084】

前記結果に見られるように、シリンガレシノールは、濃度依存的に角質形成細胞でインターロイキン−６の発現を増加させることができる。すなわち、シリンガレシノールは、インターロイキン−６をメラノサイトに分泌させてメラノサイトの周辺環境を変えることでメラニン色素を少なく産生するように誘導することができ、これは、シリンガレシノールが優れた皮膚美白効果を有することを意味する。

【0085】

［実験例６］外用剤としての美白効果の評価
シリンガレシノールのヒト皮膚に対する美白効果を調べるために、次のような実験を行った。

【0086】

先ず、健康な１２人の男性を対象に被検者の上膊部位に直径１．５ｃｍの穴があいた不透明テープを貼り付けた後、各被検者の最小紅斑量（Ｍｉｎｉｍａｌ-Ｅｒｙｔｈｅｍａ-Ｄｏｓｅ）の１．５〜２倍程度の紫外線（ＵＶＢ）を照射して皮膚の黒化を誘導した。-紫外線（ＵＶＢ）を照射して後、試験物質としてそれぞれ実施例で得たシリンガレシノール１％（溶媒は１,３−ブチレングリコール：エタノール＝７：３）、ハイドロキノン（陽性対照群）１％、溶媒（ｖｅｈｉｃｌｅ）（陰性対照群）１％だけを塗布し、一箇所には何も塗布しないまま、１０週間にわたり状態変化を観察した。１週単位で肌色を色差計ＣＲ２００２（日本、ミノルタ社製）で測定した。各試験物質の塗布開始時点と塗布完了時点での色差（ΔＬ^＊）を次式３で計算し、これを下記の表５に表した。一方、美白効果は試験物質塗布部位と対照群部位のΔＬ^＊の比較で判定し、ΔＬ^＊値が２程度である場合は沈着した色素の美白化が明らかであると見ることができ、１．５以上の程度である場合は美白効果があると判定することができる。

【0087】

【数3】

【0088】

【表5】

【0089】

前記結果に見られるように、シリンガレシノールは、陰性対照群だけでなく、陽性対照群であるハイドロキノンよりも優れた肌色の明るさを示した。この結果、シリンガレシノールが皮膚細胞の死滅を抑制するとともに、紫外線によって生成された色素沈着を改善して肌色を明るくすることで優れた皮膚美白効果を有することが分かる。

【0090】

［実験例７］外用剤としての肌色の均一性の評価
シリンガレシノールのヒト皮膚に対する肌色の均一性の増進効果を調べるために、次のような実験を行った。

【0091】

先ず、前記実験例６と実質的に等しい方法にて募集した被検者に対して皮膚塗布を実施した。肌色の均一性を評価する方法は、皮膚から任意に選定した三箇所の部位に対する肌色の明るさを測定した後、該三箇所の測定値の標準偏差を求め、標準偏差が小さいほど肌色の明るさが均一であると判定した。測定機器と方法は実験例６と同一のものとした。

【0092】

【表6】

【0093】

前記結果に見られるように、シリンガレシノールは、陰性対照群だけでなく、陽性対照群であるハイドロキノンよりも優れた肌色の均一性を示した。この結果から、シリンガレシノールが皮膚を均一にすることで均一な肌色に改善させる効果に優れていることが分かる。

【0094】

［実験例８］角質量減少効果の評価
シリンガレシノールが皮膚角質量を減少させることができるか否かを調べるために、皮膚疾患のない２０〜３０代の成人男女５０人に対し、実験例６と同じ濃度のシリンガレシノール溶液を下膊内側に塗布し、２４時間経過後にチャームビュー（Ｃｈａｒｍ-ｖｉｅｗ；Ｍｏｒｉｔｅｘ、Ｊａｐａｎ）を利用して角質減少量を測定した。塗布開始前の恒温、恒湿条件（２４℃、湿度４０％）でチャームビューを利用して測定した初期皮膚角質量値を基本値として、２４時間経過後の皮膚角質量の変化を測定し、その結果を下記の表７に表した。

【0095】

【表7】

【0096】

前記結果に見られるように、シリンガレシノールは、対照群に比べて遥かに優れた皮膚角質の減少効果を示している。この結果から、シリンガレシノールはメラニンを含む古い角質を除去することで、優れた皮膚美白効果を有し得ることが分かる。

【0097】

［実験例９］経口摂取時の美白効果及び肌色の均一性増加試験
シリンガレシノールが経口摂取時でも美白効果を示すかを調べるために、茶色-ギニー・ピッグ（ｇｉｎｅａ-ｐｉｇ）を動物モデルと選定した。全ギニーピッグに紫外線を照射して最小紅斑量を測定し、それぞれ１０匹ずつ群分けした後、最小紅斑量の紫外線を１日１回ずつ総３回照射した。ギニーピッグの食餌は飼料を５週間自由給食して行われ、飼料中にシリンガレシノール１％と陽性対照群としてのビタミンＣ（Ｖｉｔ-Ｃ）１％を含ませた。色素沈着は色差計を利用して実験例６と実質的に等しい方法にて測定し、その結果を下記の表８に表した。

【0098】

【表8】

【0099】

前記結果に見られるように、経口摂取時にシリンガレシノールはビタミンＣよりも優れた美白効能を示した。これはシリンガレシノールが外用剤として塗布する場合だけはなく、経口摂取の場合でも優れた皮膚美白効果を示し得ることを意味する。

【0100】

また、肌色の均一性の評価を実験例７と実質的に等しい方法にて行い、その結果を下記の表９に表した。

【0101】

【表9】

【0102】

前記結果に見られるように、シリンガレシノールは陰性対照群だけでなく陽性対照群であるビタミンＣよりも優れた肌色の均一性を示した。この結果から、経口摂取したシリンガレシノールが皮膚を均一にすることで均一な肌色に改善させる効果に優れていることが分かる。

【0103】

［実験例１０］ヒト角質形成細胞と線維芽細胞でのＳＩＲＴ-１発現促進効果の評価
ヒト角質形成細胞及び線維芽細胞でのシリンガレシノールのＳＩＲＴ-１遺伝子発現促進効果を評価するために、次のような実験を行った。

【0104】

１．細胞株と細胞培養
ヒト角質形成細胞株（ｈｕｍａｎ-ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ）であるＨａＣａＴ若しくはヒト線維芽細胞株（ｈｕｍａｎ-ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ）であるＨＤＦを１０％ウシ胎仔血清（ｆｅｔａｌ-ｂｏｖｉｎ-ｓｅｒｕｍ）を含むＤＭＥＭ培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ-Ｍｏｄｉｆｉｅｄ-Ｅａｇｌｅ'ｓ-Ｍｅｄｉｕｍ、Ｇｉｂｃｏ、１２１０−００３８）で３７℃、５％ＣＯ_２の条件下で培養した。

【0105】

２．ＳＩＲＴ-１発現増加効果の評価
先に培養した細胞にシリンガレシノールをＤＭＳＯに溶かし、２０、５０、１００μＭの濃度で２４時間処理した。別途に培地体積１／１０００のＤＭＳＯを処理した細胞を陰性対照群とした。各試料を処理した細胞を冷たいＰＢＳで２回洗浄した後、トリゾール試薬（ＴＲＩｚｏｌ-ａｇｅｎｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でＲＮＡを抽出した。前記抽出して定量した１μｇ／μｌのＲＮＡと逆転写システム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてｃＤＮＡを合成した。合成したｃＤＮＡ及びＳＩＲＴ-１とＧＡＰＤＨの各遺伝子に対し、予めデザインされたプライマー（Ｐｒｉｍｅｒ）とプローブ（ｐｒｏｂｅ）（Ａｐｐｌｉｅｄ-ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；ＳＩＲＴ-１、Ｈｓ０１００９００６＿ｍ１；ＧＡＰＤＨ、Ｈｓ９９９９９９０５＿ｍ１）を利用して各遺伝子の発現様相を測定した。ＰＣＲ反応と分析は、Ｒｏｔｏｒ−Ｇｅｎｅ-３０００システム（Ｃｏｒｂｅｔｔ-Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｓｙｄｎｅｙ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）を利用した。結果を図３（角質形成細胞）及び図４（線維芽細胞）に示した。

【0106】

図３及び図４に示すように、シリンガレシノールは、濃度依存的にヒト角質形成細胞と線維芽細胞でのＳＩＲＴ-１の発現を４倍以上増加させることができる。

【0107】

［実験例１１］ヒト角質形成細胞でのフィラグリンとインボルクリンの発現促進効果の評価
ヒト角質形成細胞でのシリンガレシノールのフィラグリン（ｆｉｌａｇｇｒｉｎ）とインボルクリン発現促進効果を評価するために、次のような実験を行った。

【0108】

１．細胞株と細胞培養
ヒト角質形成細胞株（ｈｕｍａｎ-ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ）であるＨａＣａＴ細胞を実験例１0と実質的に等しい方法にて培養した。

【0109】

２．フィラグリンとインボルクリンの発現増進効果の評価
実験例１０と実質的に等しい方法にてｃＤＮＡを合成し、合成したｃＤＮＡ及びフィラグリン、インボルクリンとＧＡＰＤＨの各遺伝子に対し、予めデザインされたプライマー（Ｐｒｉｍｅｒ）とプローブ（ｐｒｏｂｅ）（Ａｐｐｌｉｅｄ-ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；ＳＩＲＴ-１、Ｈｓ０１００９００６＿ｍ１；ＧＡＰＤＨ、Ｈｓ９９９９９９０５＿ｍ１）を利用して各遺伝子の発現様相を実験例１と実質的に等しい方法にて測定した。その結果を図５に示した。

【0110】

図５に示すように、シリンガレシノールは、濃度依存的にヒト角質形成細胞でフィラグリンとインボルクリンの発現を増加させた。この結果から、シリンガレシノールは、皮膚バリア機能を強化することで皮膚保湿効果を有することが分かる。

【0111】

［実験例１２］ヒト角質形成細胞でのＭＭＰ−９の発現及びコラーゲン分解抑制効果の評価
ヒト角質形成細胞でのシリンガレシノールのＭＭＰ−９の発現及びコラーゲン分解抑制効果を評価するために、次のような実験を行った。

【0112】

１．細胞株と細胞培養
ヒト角質形成細胞株（ｈｕｍａｎ-ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ）であるＨａＣａＴ細胞を実験例１0と実質的に等しい方法にて培養した。

【0113】

２．紫外線の照射によって増加されたＭＭＰ−９発現及びコラーゲン分解の抑制効果の評価
前記培養した細胞株をトリプシン処理して単一細胞懸濁液を調製し、６−ウェルに２×１０^５個ずつ分注し、２４時間培養した。その後、ウシ胎仔血清が含まれていないＤＭＥＭ培地に交換し、さらに２４時間培養した後、ＤＭＳＯに溶かした。５０μＭ濃度のシリンガレシノールを処理した。２４時間処理した後、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）で洗浄し、リン酸緩衝溶液を入れた状態で３０ｍＪ／ｃｍ^２濃度のＵＶＢを照射した。リン酸緩衝溶液を捨てて、再び同じ濃度のシリンガレシノールが含まれた培地に交換した。対照群として、シリンガレシノールを処理していない細胞を同法にて培養した。紫外線の照射２４時間後に、シリンガレシノールを処理した細胞と処理していない細胞をリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）で洗浄し、トリプシンを処理して細胞を収去し、これに８Ｍのウレア、２％のＣＨＡＰＳ、５０ｍＭのＤＴＴ、２Ｍのチオウレア（ｔｈｉｏｕｒｅａ）、２ｍＭのＰＭＳＦ、１００ｍｇ／ｍｌのロイペプチン（ｌｅｕｐｅｐｔｉｎｅ）のタンパク質抽出緩衝溶液５００ｍｌを処理した後、１０分間常温で放置した。その後、４℃で１０分間、１５,０００ｇの重力加速度で遠心分離し、上層液を収去してから、バイオラッドタンパク質染色剤^TM（ＢＩＯ−Ｒａｄ-Ｐｒｏｔｅｉｎ-Ｄｙｅ-Ｒｅａｇｅｎｔ^TM）を利用してタンパク質を定量した。２０ｍｇのタンパク質を８％のＳＤＳ−ＰＡＧＥを利用して大きさ別に分離し、５０Ｖで１２時間ＰＤＦ（ＢｉｏＲａｄ）膜にブロッティング（ｂｌｏｔｔｉｎｇ）した。このブロットを５％無脂肪牛乳溶液で１時間ブロッキングした後、一次抗体としては単一抗体の抗ＭＭＰ−９（Ｓａｎｔａ-Ｃｒｕｚ、ＣＡ、ＵＳＡ）と単一抗体の抗コラーゲンＩＶ（Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ、ＵＳＡ）を、二次抗体としては、 ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ｈｏｒｓｅ-ｒａｄｉｓｈ-ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）が結合された抗マウスＩｇＧ（ａｍｅｒｓｈａｍ）を利用し、アマシャム社製のｅｎｈａｎｃｅｄ-ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ（ＥＣＬ）キットを利用して反応させた。反応させたブロットは、Ｘ線富士フィルムに感光させてから現像し、タンパク質発現程度を確認した。フィルム上のバンドはパワールック（ＰｏｗｅｒＬｏｏｋ）２１００-ＸＬ（ｕｍａｘ）を利用してスキャンした後、イメージマスター２Ｄエリート（Ａｍｅｒｓｈａｍ-Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）のイメージ分析プログラムを利用して分析し、その結果を図６に示した。

【0114】

図６に示すように、紫外線の照射によって角質形成細胞のＭＭＰ−９発現が増加し、且つコラーゲン分解が促進され、コラーゲンの量が減少している。しかし、シリンガレシノールを処理した場合、紫外線の照射によるＭＭＰ−９発現の増加が抑制されてコラーゲン分解を防止するので、紫外線によるコラーゲン生成減少を防止することができる。すなわち、シリンガレシノールは、ＭＭＰ−９の発現を抑制し、また、コラーゲンの分解を抑制して皮膚しわを予防及び改善し、さらには、皮膚老化を抑制することができることを確認することができる。

【0115】

［実験例１３］線維芽細胞でのＴＧＦ−β１発現促進効果の評価
線維芽細胞でシリンガレシノールのＴＧＦ−β１発現促進効果を評価するために、次のような実験を行った。

【0116】

１．細胞株と細胞培養
ヒト線維芽細胞株（ｈｕｍａｎ-ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ）であるＨＤＦを実験例１0と実質的に等しい方法にて培養した。

【0117】

２．ＴＧＦ−β１発現増加効果の評価
先に培養した細胞にシリンガレシノールをＤＭＳＯに溶かし、２０、５０、１００μＭの濃度で２４時間処理した。培養後、２４時間目に細胞培養液を採取した。

【0118】

Ｒ＆Ｄシステム（Ｒ＆Ｄ-ｓｙｓｔｅｍ、アメリカ）のＥＬＩＳＡキット（ＱｕａｎｔｉｋｉｎｅＴＭ-ｈｉｇｈ-ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ-ＥＬＩＳＡ-ｋｉｔ）を使用して製造メーカの指針に従い、採取した細胞培養液で生成されたＴＧＦ−β１の量を測定した。ＴＧＦ−β１の量の測定に必要な試料は、いずれも前記キットから提供するものを使用した。先ず、ＴＧＦ−β１抗体が均一に塗布された９６−ウェルマイクロプレートに採取した細胞培養液を添加し、３７℃で１時間抗原−抗体反応が生じるようにした。ウェル内の細胞培養液を除去し、ＰＢＳ緩衝溶液で３回洗浄した。各ウェルに発色酵素のホースラディッシュペルオキシダーゼ（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ-ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）が結合された二次抗体を添加し、１時間にわたって抗原−抗体反応が生じるようにした。次いで、各ウェルに発色誘発物質のテトラメチルベンジジン（ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｉｄｉｎｅ）を入れ、常温で１５分間反応させた後、１Ｎの硫酸溶液を添加して反応を止めさせた。分光光度計で４５０ｎｍの波長での吸光度を測定した。標準溶液を利用して標準曲線を作成し、測定した吸光度を標準曲線に代入して各試料が添加された細胞培養液のＴＧＦ−β１生成量を計算した。その結果は下記の表１０のとおりである。

【0119】

【表10】

【0120】

前記結果に見られるように、シリンガレシノールは、濃度依存的に線維芽細胞のＴＧＦ−β１生成を増加させた。この結果から、シリンガレシノールは、ＴＧＦ−β１生成を増加させることで皮膚再生を促進し、さらには、皮膚老化を防止し且つしわ生成の抑制効果を改善することができることが分かる。

【0121】

［実験例１４］無毛マウスの皮膚でのしわ生成抑制及び経皮水分喪失量抑制の効果の評価
シリンガレシノールのしわ生成抑制の効果及び経皮水分喪失量の抑制を評価するために、次のような実験を行った。

【0122】

１．無毛マウスの処理
体重が２５〜３９ｇ程度の３０週齢の雌無毛マウス（Ｓｋｈ：ＨＲ−１）をＣｈａｒｌｅｓ-Ｒｉｖｅｒ-Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ、Ｕ.Ｓ.Ａ.）から購入して使用した。実験に供されるマウスを一週間動物飼育室で適応させた後、正常群、試料処置群とに群当たり５匹ずつ分けて実験期間の間飼育した。飼育は１２時間周期で照明する明暗条件、２３．２℃の温度、及び５５．１０％の湿度条件下、餌と水は自由に摂取させながら行った。

【0123】

２．シリンガレシノールの皮膚塗布または経口投与による皮膚しわ生成抑制の効果の評価
試料処置群には、１％濃度で溶媒（１,３−ブチレングリコール：エタノール＝７：３）に溶かしたシリンガレシノールをパッチの形態で２日間２回処置するか、２００ｍｇ／ｋｇ濃度のシリンガレシノールを４週間経口投与した。対照群には、シリンガレシノールの代わりに同じ量の溶媒を同じ方法にて措置した。シリンガレシノールを塗布した群及びその対照群、シリンガレシノールを経口投与した群及びその対照群に対し、それぞれ１８０ｍＪ／ｃｍ^２のＵＶＢを照射した。紫外線を照射する前のしわ状態と紫外線の照射後の同じ部位に対するしわ状態をレプリカ（ｒｅｐｌｉｃａ）で写してビシオメーターシステム（Ｖｉｓｉｏｍｅｔｅｒ-ｓｙｓｔｅｍ；Ｃ＋Ｋ社製）で皮膚しわを測定した。皮膚しわの変化量を次式４で計算し、その結果を図７に示した。

【0124】

【数4】

【0125】

図７に見られるように、塗布及び経口投与対照群の皮膚しわは、それぞれ２３０±３５％、２２４±４５％と増加したのに対し、シリンガレシノールを塗布した群及び経口投与した群の皮膚しわは、それぞれ１２１±３５％、１２３±２５％と極めて僅かな増加のみを示した。この結果から、シリンガレシノールは、優れたしわ防止抑制効果を有することを確認することができる。

【0126】

３．経皮水分喪失量（ＴＥＷＬ、ｔｒａｎｓｅｐｉｄｅｒｍａｌ-ｗａｔｅｒ-ｌｏｓｓ）の測定
実験開始３週後にＤｅｌｆｉｎ-ｖａｐｏｍｅｔｅｒ-ｗｉｒｅｌｅｓｓ（Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ-ｌｔｄ．ＳＷＬ-４１０２）を利用して各群の無毛マウスの背部位の皮膚から経皮水分喪失量を測定し、その結果を図８に示した。測定当時の環境条件は、相対湿度６０±５％、温度２５．５±０．５℃であった。

【0127】

経皮水分喪失量は、皮膚から発散する水分量であって、この数値が高いほど皮膚の保湿機能が落ち、皮膚固有のバリア機能が損傷されたことを意味する。したがって、経皮水分喪失量は、皮膚バリア機能、皮膚バリア損傷後の回復度合い、紫外線のような刺激に対する皮膚保護効果などを判定する際に指標として用いることができる。

【0128】

図８に示すように、ＵＶを照射した場合に皮膚バリアが損傷されて皮膚保湿機能が落ち、また、シリンガレシノールを経口摂取または塗布した場合に紫外線によって誘発される経皮水分喪失量が減少している。この結果から、シリンガレシノールは、紫外線による皮膚水分喪失を抑えて優れた皮膚バリア機能の回復、外部刺激に対する皮膚保護、及び皮膚保湿効果を有することが分かる。

【0129】

本発明の一側面に係る組成物の剤形例を以下で説明するが、他の種々の剤形としても応用可能であり、これらは、本発明を限定するためのものではなく、本発明を具体的に説明するためのものに過ぎない。

【0130】

［剤形例１］ローション
下記の表１１に表した組成で通常の方法にてローションを製造する。

【0131】

【表11】

【0132】

［剤形例２］クリーム
下記の表１２に表した組成で通常の方法にてクリームを製造する。

【0133】

【表12】

【0134】

［剤形例３］パック
下記の表１３に表した組成で通常の方法にてパックを製造する。

【0135】

【表13】

【0136】

［剤形例４］軟質カプセル剤
シリンガレシノール１００ｍｇ、大豆抽出物５０ｍｇ、大豆油１８０ｍｇ、紅参抽出物５０ｍｇ、パーム油２ｍｇ、パーム硬化油８ｍｇ、黄蝋４ｍｇ、及びレシチン６ｍｇを混合し、通常の方法にて軟質カプセル剤を製造する。

【0137】

［剤形例５]錠剤
シリンガレシノール１００ｍｇ、大豆抽出物５０ｍｇ、葡萄糖１００ｍｇ、紅参抽出物５０ｍｇ、澱粉９６ｍｇ、及びマグネシウムステアレート４ｍｇを混合し、３０％エタノールを４０ｍｇ添加して顆粒を形成した後、乾燥し、打錠して錠剤を製造する。

【0138】

［剤形例６］健康食品
シリンガレシノール................... １０００ｍｇ
ビタミン混合物
ビタミンＡアセテート................. ７０μｇ
ビタミンＥ........................... １．０ｍｇ
ビタミンＢ１......................... ０．１３ｍｇ
ビタミンＢ２......................... ０．１５ｍｇ
ビタミンＢ６......................... ０．５ｍｇ
ビタミンＢ１２....................... ０．２μｇ
ビタミンＣ........................... １０ｍｇ
ビオチン............................. １０μｇ
ニコチン酸アミド..................... １．７ｍｇ
葉酸................................. ５０μｇ
パントテン酸カルシウム............... ０．５ｍｇ
無機質混合物
硫酸第一鉄...........................１．７５ｍｇ
酸化亜鉛.............................０．８２ｍｇ
炭酸マグネシウム..................... ２５．３ｍｇ
第一リン酸カリウム................... １５ｍｇ
第二リン酸カルシウム................. ５５ｍｇ
クエン酸カリウム..................... ９０ｍｇ
炭酸カルシウム....................... １００ｍｇ
塩化マグネシウム..................... ２４．８ｍｇ
前記ビタミン及びミネラル混合物の組成比は、比較的健康食品に適合した成分を好適な実施例に従い混合組成したが、その配合比を任意に変形実施してもよい。

【0139】

［剤形例７］健康飲料
シリンガレシノール.................... １０００ｍｇ
クエン酸.............................. １０００ｍｇ
オリゴ糖.............................. １００ｇ
タウリン.............................. １ｇ
精製水................................ 残量
通常の健康飲料の製造方法にて前記成分を混合した後、約１時間にわたって約８５℃で撹拌加熱して得た溶液をろ過し、滅菌して得る。

【産業上の利用可能性】

【0140】

本発明に係る組成物は、優れた抗酸化効果及び皮膚角質除去能を有し且つ優れた皮膚美白効果を示すことができる。

【0141】

本発明に係る組成物は、老化、具体的に皮膚老化、より具体的に紫外線による皮膚老化を抑制する上で優れた効果を奏し得る。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】