特許 6566444 ２−（アシルアミノ）イミダゾールを含む組成物および方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6566444

(24)【登録日】2019年8月9日

(45)【発行日】2019年8月28日

(54)【発明の名称】２−（アシルアミノ）イミダゾールを含む組成物および方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/4174 20060101AFI20190819BHJP

   A61K 31/5377 20060101ALI20190819BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20190819BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20190819BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/4174ZNA

   A61K31/5377

   A61P31/04

   A61P35/00

【請求項の数】32

【全頁数】132

(21)【出願番号】特願2016-558138(P2016-558138)

(86)(22)【出願日】2015年3月19日

(65)【公表番号】特表2017-513819(P2017-513819A)

(43)【公表日】2017年6月1日

(86)【国際出願番号】US2015021602

(87)【国際公開番号】WO2015143240

(87)【国際公開日】20150924

【審査請求日】2018年3月7日

(31)【優先権主張番号】61/955,761

(32)【優先日】2014年3月19日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】62/051,863

(32)【優先日】2014年9月17日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】515324419

【氏名又は名称】カーザ グローバル エルエルシー

【氏名又は名称原語表記】ＣＵＲＺＡ ＧＬＯＢＡＬ， ＬＬＣ

(73)【特許権者】

【識別番号】507012102

【氏名又は名称】ユニバーシティ オブ ユタ リサーチ ファウンデーション

【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＵＴＨＡ ＲＥＳＥＡＲＣＨＦＯＵＮＤＡＴＩＯＮ

(74)【代理人】

【識別番号】100090251

【弁理士】

【氏名又は名称】森田 憲一

(74)【代理人】

【識別番号】100139594

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 健次郎

(74)【代理人】

【識別番号】100185915

【弁理士】

【氏名又は名称】長山 弘典

(74)【代理人】

【識別番号】100194973

【弁理士】

【氏名又は名称】尾崎 祐朗

(72)【発明者】

【氏名】ルーパー ライアン イー．

(72)【発明者】

【氏名】ヴェーデン レイチェル エム．

(72)【発明者】

【氏名】ギボンズ ジョーセフ ビー．

(72)【発明者】

【氏名】サルヴァント ジャスティン エム．

(72)【発明者】

【氏名】エドワーズ アン ヴィー．

(72)【発明者】

【氏名】シグマン マヒュー エス．

(72)【発明者】

【氏名】ウェルム ブライアン イー．

【審査官】 磯部 洋一郎

(56)【参考文献】

【文献】 米国特許出願公開第２００５／００７０５８８（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 SUBSTANCE RECORD FOR SID 171909074; AGN-PC-0DAKUB，PUBCHEM OPEN CHEMISTRY DATABASE，２０１４年 １月 ９日

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／４１７４

Ａ６１Ｋ ３１／５３７７

Ａ６１Ｐ ３１／０４

Ａ６１Ｐ ３５／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

癌を治療するための組成物であって、前記組成物が、

【化1】

およびそれらの塩からなる群からから選択される２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物を含み、
上式で、
Ｒ^１は、アルキル、アリール、アリールアルキル、およびヘテロアリールからなる群から選択されるメンバーであり；
Ｘは、結合であり；
ＹはＯであり；
Ｒ^２は、水素、アルキル、フルオロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アシル、およびカルバモイルからなる群から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ^３は、水素、アルキル、フルオロアルキル、およびアリールアルキルからなる群から独立して選択されるメンバーであり、ただし、Ｒ^２とＲ^３の一方のみが水素である；
Ａ^ｎメンバーの各々のＡ^ｎは、ＣＲ^６ｎから独立して選択され；そして
Ｒ^６ｎメンバーの各々は、水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノアルコキシ、アルキルアミノ、アルキルアミノアルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールオキシ、アリールアミノ、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルコキシ、シクロアルキルアルコキシ、シクロアルキルアミノ、シクロアルキルアルキルアミノ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルオキシ、ヘテロシクリルアミノ、ハロゲン、ハロアルキル、フルオロアルキルオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアミノ、アリールアルキル、アリールアルキルオキシ、アリールアルキルアミノ、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルキルオキシ、およびヘテロアリールアルキルアミノからなる群から独立して選択されるか；または、代わりに、一対の隣接するＲ^６ｎメンバーは、一緒になって、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、およびヘテロシクロアリールからなる群から選択されるさらなる縮合環を形成する、前記組成物。

【請求項2】

前記２−アミノイミダゾール化合物が、位置異性体化合物：

【化3】

またはその塩を実質的に含まない、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

Ｒ^１が、アルキルおよびアリールからなる群から選択されるメンバーである、請求項１または２に記載の組成物。

【請求項4】

Ｒ^１が、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、フェニル、２−フルオロフェニル、２，４−ジクロロフェニル、および２−チアゾリルからなる群から選択されるメンバーである、請求項１または２に記載の組成物。

【請求項5】

前記組成物がＺｎ^２＋を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項6】

Ｒ^２が、水素、アルキル、アシル、およびカルバモイルからなる群から独立して選択されるメンバーである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項7】

Ｒ^２が、水素およびカルバモイルからなる群から独立して選択されるメンバーである、請求項６に記載の組成物。

【請求項8】

Ｒ^２が、水素、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、およびベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）からなる群から独立して選択されるメンバーである、請求項７に記載の組成物。

【請求項9】

Ｒ^３がアルキルである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項10】

Ｒ^３がメチルである、請求項９に記載の組成物。

【請求項11】

前記Ｒ^６ｎメンバーの各々が、水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、シクロアルキル、シクロアルコキシ、シクロアルキルアルコキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルオキシ、ハロゲン、フルオロアルキル、フルオロアルキルオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、アリールアルキル、アリールアルキルオキシ、アリールアルキルアミノ、およびヘテロアリールアルキルオキシからなる群から独立して選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項12】

前記Ｒ^６ｎメンバーの各々が、水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、シクロアルキルアルコキシ、ハロゲン、フルオロアルキル、フルオロアルキルオキシ、およびアリールアルキルオキシからなる群から独立して選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項13】

前記Ｒ^６ｎメンバーの各々が、水素、アルキル、ヒドロキシ、およびアルコキシからなる群から独立して選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項14】

Ａ^８がＣ（ＯＨ）またはＣ（ＯＭｅ）である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項15】

前記Ｒ^６ｎメンバーの少なくとも４つが水素である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項16】

前記Ｒ^６ｎメンバーの少なくとも６つが水素である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項17】

前記Ｒ^６ｎメンバーの少なくとも８つが水素である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項18】

【化9】

が１〜３個のヒドロキシル置換基を有する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項19】

Ａ^３がＣ（ＯＨ）またはＣ（ＯＭｅ）である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項20】

【化10】

が１〜３個のヒドロキシル置換基を有する、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項21】

Ａ^８がＣ（ＯＨ）またはＣ（ＯＭｅ）である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項22】

前記組成物が、２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物

【化11】

またはその塩を含み；
上式で、Ｒ^１およびＺが、それぞれ、フェニル、２−フルオロフェニル、２，４−ジクロロフェニル、２−チアゾリル、イソプロピル、およびｓｅｃ−ブチルからなる群から選択され；そして、
Ａ^８が、ＣＨおよびＣ（ＯＭｅ）からなる群から選択される、
請求項１に記載の組成物。

【請求項23】

前記組成物が、２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物

【化12】

またはその塩を含み；
上式で、Ｒ^１が、フェニル、２−フルオロフェニル、２，４−ジクロロフェニル、２−チアゾリル、イソプロピル、およびｓｅｃ−ブチルからなる群から選択される、
請求項１に記載の組成物。

【請求項24】

前記組成物が、２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物

【化13】

またはその塩を含み；
上式で、Ｒ^１およびＺが、それぞれ、フェニル、２−フルオロフェニル、３−トリフルオロメチルフェニル、４−クロロフェニル、４−メトキシフェニル、およびシクロプロピルを含む群から選択され；そして、
Ａ⁸が、ＣＨ、ＣＣｌ、Ｃ（ＯＭｅ）、および

【化14】

を含む群から選択される、請求項１に記載の組成物。

【請求項25】

前記組成物が、

【化15】

およびそれらの塩からなる群から選択される２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項26】

前記組成物が、２％（ｗ／ｗ）未満のＮ^２，Ｎ^２−ジアシル化を有する、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項27】

前記組成物が、２％（ｗ／ｗ）未満のアシル位置異性体を有する、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項28】

請求項１〜２２のいずれか一項に記載の２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物を含む、金属イオンホメオスタシス不全を誘発するための組成物であって、
前記組成物を金属イオンと接触させ、それによりキレート錯体を形成する工程であって、前記キレート錯体がリソソームの外部に生じる前記工程と；
前記キレート錯体を前記リソソームに侵入させる工程と；
前記キレート錯体を前記リソソームの内部で分離させ、それにより前記金属イオンの前記内部濃度を上昇させる工程と
を含む方法に用いるものとする、前記組成物。

【請求項29】

前記金属イオンがＺｎ^２＋である、請求項２８に記載の組成物。

【請求項30】

前記リソソームが、細菌細胞内にある、請求項２８または２９に記載の組成物。

【請求項31】

前記リソソームが、癌細胞内にある、請求項２８または２９に記載の組成物。

【請求項32】

前記金属イオンホメオスタシス不全が細胞死を引き起こす、請求項２８〜３１のいずれか一項に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【関連出願の相互参照】

【0001】

本願は、米国仮特許出願第６１／９５５，７６１号（２０１４年３月１９日出願）および同第６２／０５１，８６３号（２０１４年９月１７日出願）の優先権を主張するものであり、それらの内容は参照により本明細書に援用される。

【0002】

≪連邦政府資金による研究および開発に基づいてなされた発明に対する権利に関する記載≫
本発明をもたらす研究の一部は、米国国立保健研究所により授与された米国政府支援によって実行された（ＮＩＨ認可番号Ｒ０１−ＲＧＭ０９００８２、Ｐ４１ ＧＭ０８９１５８−０１、Ｒ０１−ＲＧＭ０９００８２−０１Ｓ１、およびＲ０１ ＣＡ１４０２９６）。これにより、米国政府は本発明に一定の権利を有する。

【0003】

≪ＡＳＣＩＩファイルとして提出される「配列リスト」の参照≫
ファイル９６１７５−９３６０２６＿ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴに記載された配列リスト（２０１５年３月１８日作成、２，６０３バイト、マシン形式ＩＢＭ−ＰＣ、ＭＳ−Ｗｉｎｄｏｗｓオペレーティングシステム）は、参照によりその全文が、全ての目的において本明細書に援用される。

【技術分野】

【0004】

一部の実施形態では、本発明は、その位置選択的調製および医学的使用を含む、２−（アシルアミノ）イミダゾールを含む組成物および方法に関する。

【背景技術】

【0005】

結核は、世界的な健康への脅威である。この細菌を効果的に死滅させる一方で適度の細胞毒性を維持することのできる薬剤は、ヒトにおいてこの疾患を治療する見込みがある。多剤耐性（ＭＤＲ）で完全に薬剤抵抗性（ＸＤＲ）のこの病原菌の菌株が出現すれば、この疾患を治療する小分子の「次世代」シリーズの開発は、大きな利益をもたらすことがあり得る。

【0006】

ナアミジンＡは、海洋性海綿動物ルセッタ・チャゴセンシス（Ｌｕｃｅｔｔａ ｃｈａｇｏｓｅｎｓｉｓ）から単離された天然物であり、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（ＩＣ_５０＝０．９４μＭまたは０．４１μｇ／ｍＬ）とカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）（ＭＩＣ_１００＝０．７８μＭ）の両方に増殖抑制作用を示す。関連する天然物ケアリイニンＢおよびＣも抗結核活性を示す（ＩＣ_５０は、それぞれ８．９μＭおよび４２μＭ）。ナアミジンＡは、マウスモデルに関してインビボで比較的耐容性が良いことが示されており、最大耐量は２５ｍｇ／Ｋｇである（Ｉｒｅｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９８，４１，３９０９参照）。さらに、ＣＥＭ−ＴＡＲＴ細胞において、ＩＣ_５０＝３４．８μＭであり、これは３７の選択比を示す。

【化1】

【0007】

ナアミジンＡは、治療対象の選択的抗癌活性も示す。例えば、米国特許第５，５７４，０５７号を参照されたい。多くの癌治療薬は、その細胞毒性ではほとんど区別がつかず、健康な細胞と腫瘍細胞に同程度に影響を及ぼす。結果として生じる狭い治療処置ウィンドウは、患者に投与することのできる薬剤の量と治療期間の両方を制限し、治療の全体的な効力を低下させる。その上、低い治療指数から生じる有害な副作用は、さらなる緩和ケアの努力を必要とし、患者の回復にさらに負担をかけ得る。対照的に、ナアミジンＡは、癌性細胞の増殖を選択的に抑制するので、選択性の低い薬剤よりも潜在的な利点を提供する。

【0008】

ナアミジンＡの活性は、亜鉛と配位結合するその能力から部分的に生じることがある。亜鉛は、重要な微量金属である；プロテオームの１０％は亜鉛と結合することができ、これらのタンパク質の４０％は転写因子として機能し、残りの６０％は酵素またはイオン輸送能力において機能すると推定される。Ａｎｄｒｅｉｎｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｒｅｓ ２００５；５（１）：１９６−２０１。亜鉛ホメオスタシスの混乱は、様々な疾患状態に関連しており、乳癌の例では、非悪性組織と比較して、悪性の胸部組織で亜鉛濃度の増加が観察されている。Ｍａｒｇａｌｉｏｔｈ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ １９８３；５２（５）：８６８−７２；Ｇｅｒａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｈｙｓ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ ２００４；４９（１）：９９。したがって、健康な組織と罹患組織の亜鉛ホメオスタシスの違いを利用することにより、抗癌剤治療の開発の新しい手段を得ることができ得る。

【0009】

ナアミジンＡの治療薬としての将来性にもかかわらず、その１Ｈ−イミダゾール−２，５−ジオン置換基は、可能性のある薬剤としてのその調製および評価を難しくする。治療上興味深い活性、特に抗結核もしくは抗癌活性を有する、より単純で作成の容易なナアミジンＡの類似体は、特に類似体が効率的な合成経路によって利用できるならば、ナアミジンＡ自体に勝る利点を提示するであろう。

【0010】

本発明の２−アミノイミダゾール組成物および方法は、これらおよびその他の利点を持つ実施形態を提示する。

【発明の概要】

【0011】

第１の実施形態では、本発明は、

【化2】

およびその塩を含む群から選択される２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物を提供し；
上式で、
Ｒ^１は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、およびヘテロアリールアルキルを含む群から選択されるメンバーであり；
Ｘは、結合、Ｏ、およびＮＲ^５ａを含む群から選択されるメンバーであり；
Ｙは、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ^５ｂを含む群から選択されるメンバーであり；この際、ＸがＯまたは結合である場合、ＹはＯであり；
Ｒ^２は、水素、アルキル、フルオロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アシル、およびカルバモイルを含む群から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ^３は、水素、アルキル、フルオロアルキル、およびアリールアルキルを含む群から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ^４ａおよびＲ^４ｂは、それぞれ、水素、アルキル、フルオロ、フルオロアルキル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールを含む群から独立して選択されるメンバーであるか；あるいは、前記２つのＲ^４は、一緒になってスピロシクロアルキル環を形成し；
Ｒ^５ａおよびＲ^５ｂは、それぞれ、水素、アルキル、フルオロアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルを含む群から独立して選択されるメンバーであり；
Ａ^ｎメンバーの各々のＡ^ｎは、ＮおよびＣＲ^６ｎを含む群から独立して選択され；
Ｒ^６ｎメンバーの各々は、水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノアルコキシ、アルキルアミノ、アルキルアミノアルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールオキシ、アリールアミノ、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルコキシ、シクロアルキルアルコキシ、シクロアルキルアミノ、シクロアルキルアルキルアミノ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルオキシ（heterocycyloxy）、ヘテロシクリルアミノ（heterocycylamino）、ハロゲン、ハロアルキル、フルオロアルキルオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアミノ、アリールアルキル、アリールアルキルオキシ、アリールアルキルアミノ、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルキルオキシ、およびヘテロアリールアルキルアミノを含む群から独立して選択されるか；または、代わりに、一対の隣接するＲ^６ｎメンバーが、一緒になって、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、およびヘテロシクロアリールを含む群から選択されるさらなる縮合環を形成し；そして
Ｒ^７は、アルキル、アミノアルキル、アルケニル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルを含む群から独立して選択されるメンバーである。第１の実施形態の好ましい態様では、２−（アシルアミド）イミダゾール化合物は天然物ではない。

【0012】

一部の実施形態では、本発明は治療的使用のための組成物を提供し、該組成物は本明細書中の態様の１つの２−（アシルアミノ）イミダゾールを含む。一部の態様では、組成物は製薬上許容される賦形剤をさらに含む。

【0013】

第２の実施形態では、本発明は、インビトロで細菌を死滅させる方法を提供し、該方法は、第１の実施形態またはその態様の１つに記載される組成物で細菌を処置することを含む。

【0014】

第３の実施形態では、本発明は、インビボで細菌を死滅させる方法を提供し、該方法は、第１の実施形態またはその態様の１つに記載される組成物を患者に投与することを含む。

【0015】

第４の実施形態では、本発明は、癌を治療する方法を提供し、該方法は、第１の実施形態またはその態様の１つに記載される組成物を癌患者に投与し、それにより患者を治療することを含む。

【0016】

第５の実施形態では、本発明は、２−アシルアミノイミダゾールを選択的に調製する方法を提供し、該方法は、
Ｎ−一保護α−グアニジニルアルキン反応体を環化して３−Ｎ−保護イミダゾリジン−２−イミン生成物と４−環外オレフィンを形成する工程；および
２−アミノ位置で選択的アシル化して２−アシルアミノ生成物を形成する工程を含み；２−アシルアミノ生成物は、１−アシルおよび３−アシル位置異性体を実質的に含まない。一部の態様では、このサイクリング（ｃｙｃｌｉｎｇ）工程は、πルイス酸触媒を含む。一部の態様では、２−アシルアミノ生成物は、Ｎ^２，Ｎ^２−ジアシル生成物を実質的に含まない。

【0017】

第６の実施形態では、本発明は、２−アシルアミノイミダゾールを選択的に調製する方法を提供し、該方法は、
Ｎ−アシル化α−グアニジニルアルキン反応体を環化して２−アシルアミノイミダゾール生成物を形成する工程を含む。一部の態様では、この方法は強ブレンステッド塩基触媒を含む。一部の態様では、２−アシルアミノ生成物は、Ｎ^２，Ｎ^２−ジアシル生成物を実質的に含まない。

【0018】

第７の実施形態では、本発明は、金属イオンホメオスタシス不全を誘発する方法を提供し、該方法は、
第１の実施形態またはその態様の１つの組成物を金属イオンと接触させ、それによりキレート錯体を形成する工程であって、該キレート錯体がリソソームの外に生じる工程；
キレート錯体をリソソームに進入させる工程；
キレート錯体をリソソームの内部で分離させ、それにより金属イオンの内部濃度を上昇させる工程を含む。一部の態様では、金属イオンはＺｎ^２＋である。一部の態様では、ホメオスタシス不全は細胞死を引き起こす。

【0019】

本発明のさらなる実施形態は、発明を実施するための形態、実施例および特許請求の範囲から明白である。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1A】新規小分子ジナアミドール（ｚｉｎａａｍｉｄｏｌｅ）（ＺＮＡ）の構造を示す図である。

【図1B】正常な乳腺上皮細胞株（ＭＣＦ−１０Ａ）および３つの乳癌細胞株（ＭＣＦ−７、Ｔ４７Ｄ、およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１）における、ジナアミドール（ＺＮＡ）処置（５日）の後の用量反応測定；不死化一次ヒト乳腺上皮細胞（ｈＴＥＲＴ−ＨＭＥＣ）および一次転移性化学療法抵抗性乳癌細胞（ＰＥ１００５３３９）におけるＺＮＡ処置（４日）の後のさらなる用量反応測定を示す図である。

【図1C】３つの乳癌細胞株（ＭＣＦ−７、Ｔ４７Ｄ、およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１）および非形質転換乳腺上皮細胞株（ＭＣＦ−１０Ａ）の用量反応および細胞生存率アッセイを示す図である。

【図1D】２４時間のＺＮＡ曝露の３週間後の増殖への効果を示す図である。

【図1E】ＺＮＡで（３０μＭ、３および１２時間、三連で）処置した後にＭＣＦ−７細胞のＲＮＡ配列によって測定される、最も示差的に発現した遺伝子の分析を示す図である。

【図1F】ＺＮＡでの（３０μＭ、四連での）処置の３時間かまたは３４時間後の金属輸送遺伝子誘導のリアルタイムＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）測定値を示す図である。

【図1G】蛍光指示薬ＦｌｕｏＺｉｎ−３を用いる細胞内亜鉛の定量を示す図である；値は３回の反復実験の平均値およびＳＥＭ値を表す。

【0021】

【図2A】外因的に添加した遷移金属と組み合わせたＺＮＡ処置の細胞生存率への効果を示す図である。細胞生存率は、４８時間の処置の後に細胞のＡＴＰ含有量を測定することによって定量化した。各々の値は、それぞれの対照に正規化した３回の反復実験の平均およびＳＥＭを表す。

【図2B】ＺｎＳＯ_４かまたはＣｕＳＯ_４のいずれかと組み合わせたＺＮＡでの処置の後の細胞生存率の測定値を示す図である。細胞を２４時間処置し、ヨウ化プロピジウムで染色し、その後フローサイトメトリーによって分析した。プロットされた値は、３回の反復実験の平均およびＳＥＭを表す。

【0022】

【図3A】標準培地中のＺＮＡおよびＺｎＳＯ４で（３時間）処置した後の細胞内亜鉛の定量化を示す図である；蛍光指示薬ＦｌｕｏＺｉｎ−３を使用して細胞内亜鉛量と、３回の反復実験の平均およびＳＥＭを表す値を測定した。

【図3B】蛍光指示薬ＦｌｕｏＺｉｎ−３を用いる亜鉛を含まない培地中のＺＮＡおよびＺｎＳＯ_４で処置した（３時間）後の細胞内亜鉛の定量化を示す図である；値は、３回の反復実験の平均およびＳＥＭを表す。

【0023】

【図4A】６時間かまたは２４時間のＺＮＡおよびＺｎＳＯ_４で処置した後の細胞増殖の測定値を示す図である。値は、３回の反復実験の平均ＥｄＵ取り込み率およびＳＥＭを表す。

【図4B】６時間かまたは７２時間、ＺＮＡおよびＺｎＳＯ_４で処置した後のカスパーゼ活性の定量化を示す図である。スタウロスポリン（ＳＴＳ）を陽性対照として用いた。プロットされた値は、３回の反復実験の平均およびＳＥＭを表す。

【0024】

【図5A】ＺｎＳＯ_４および／またはＲＩＰ１キナーゼ阻害剤ネクロスタチン−１（Ｎｅｃ−１）のいずれかと組み合わせてＺＮＡで処置した後の細胞生存率の測定値を示す図である。細胞を２４時間処置し、ヨウ化プロピジウムで染色し、その後フローサイトメトリーによって分析した。プロットされた値は、３回の反復実験の平均およびＳＥＭを表す。

【図5B】ＺＮＡおよびＺｎＳＯ_４で細胞を処置した後のオートファジー関連タンパク質ＬＣ３の免疫ブロット分析を示す図である。クロロキン（ＣＱ）を陽性対照として用いた。

【図5C】ＺＮＡおよびＺｎＳＯ_４での処置後に２’，７’−ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテート（Ｈ２ＤＣＦＤＡ、ＤＣＦ）酸化によって測定される酸化ストレスの分析を示す図である。プロットされた値は、３回の反復実験の平均およびＳＥＭを表す。

【0025】

【図6A】ネズミ腎および肝組織におけるマウスメタロチオネイン発現（ＭＴ１およびＭＴ２）を評価するために使用したＲＴ−ＰＣＲの結果を示す図である。腫瘍を持たないＦＶＢ／ＮＪマウスを、ＺＮＡ（１００ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射により投与）または対照で３時間かまたは２４時間処置した。

【図6B】カプラン−マイヤー生存分析を示す図である。移植されたＰｙＭＴ乳房腫瘍を有するＦＶＢマウスを、次の条件に従って２１日間処置した：対照（１日１回ＰＢＳ腹腔内注射）、ＺＮＡ（１００ｍｇ／ｋｇ、１日１回腹腔内注射）、ＺｎＳＯ_４（飲水経由で研究を通じて連続的に２５ｍＭ投与）、または組合せ処置（１００ｍｇ／ｋｇＺＮＡ、１日１回腹腔内注射および２５ｍＭ ＺｎＳＯ_４、飲水経由で研究を通じて連続的に投与）。統計的有意性：対照とＺＮＡの比較、＊＊（ｐ＝０．０１）；ＺｎＳＯ_４と組合せ処置の比較、＊＊（ｐ＝０．００７）。

【0026】

【図7】ＺＮＡおよび転写阻害剤アクチノマイシンＤ（ＡＣＴＤ）で２４時間処置した後の細胞内亜鉛の定量化を示す図である；蛍光指示薬ＦｌｕｏＺｉｎ−３を使用して細胞内亜鉛と、３回の反復実験の平均およびＳＥＭを表す値を測定した。

【0027】

【図8】高周波誘導結合プラズマ原子発光分析による総細胞亜鉛の定量化を示す図である。値は、総タンパク質に正規化した３つの独立した反復実験の平均および標準偏差を表す。

【0028】

【図9】ＺＮＡおよびＮ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）で４８時間処置した後に２’，７’−ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテート（Ｈ２ＤＣＦＤＡ、ＤＣＦ）酸化によって測定される酸化ストレスの分析を示す図である。プロットされた値は、３回の反復実験の平均およびＳＥＭを表す。

【0029】

【図10A】ＺＮＡ（３０μＭ）かまたは陽性対照としてスタウロスポリン（ＳＴＳ、１μＭ）のいずれかでの処置後の４つの細胞株での、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏによって測定される相対カスパーゼ活性を示す図である。

【図10B】ＺＮＡ（３０μＭ）かまたは陽性対照としてクロロキン（５０μＭ）のいずれかでの処置後の４つの細胞株での、オートファジーマーカーＬＣ３ウエスタンブロット分析を示す図である。

【図10C】ＺＮＡ（３０μＭ）で２４時間処置した後の細胞増殖の測定値を示す図である。

【図10D】ＺＮＡ（３０μＭ）で処置した後の細胞内ＤＣＦ酸化のフローサイトメトリー測定値を示す図である。

【0030】

【図11A】７種の異なる遷移金属と組み合わせてＺＮＡ（３０または１００μＭ）で処置した後の４つの細胞株での細胞生存率の測定値を示す図である。細胞生存率は、４８時間処置した後にＡＴＰｌｉｔｅアッセイを用いて測定した。

【図11B】ＺＮＡ（３０μＭ）およびＣｕＳＯ_４またはＺｎＳＯ_４（３０μＭ）で２４時間処置した後の、ヨウ化プロピジウム染色およびフローサイトメトリーによる細胞死の定量化を示す図である。

【図11C】４つの細胞株をＺＮＡ（３０μＭ）および外因的に添加したＺｎＳＯ_４（３０μＭ）で３時間処置した後の細胞内亜鉛含有量の分析を示す図である。

【0031】

【図12】ナアミジンＡでの処置による、悪性ＭＣＦ−７細胞および非形質転換ＭＣＦ−１０Ａの細胞生存率の測定値を示す図である。

【0032】

【図13A】ジアシルイミダゾール生成物を優先的に生成する問題のある副反応経路を示す図である。

【図13B】選択的Ｎ^２モノアシル化のための合成戦略を示す図である。

【0033】

【図14A】Ｚｎ^２＋ジ（ナアミジンＡ）錯体の沈殿反応を示す図である。

【図14B】Ｚｎ^２＋ジ（ナアミジンＡ）錯体のＸ線構造を示す図である。

【図14C】静脈内１ｍｇ／ｋｇ、経口投与３ｍｇ／ｋｇでのＺＮＡの初期薬物動態分析の結果を示す図である。

【0034】

【図15】Ｚｎ^２＋ホメオスタシス不全および結果として生じる細胞死について提案される機構を示す図である。

【0035】

【図16】ＺｎＳＯ_４を添加した、または添加しないＺＮＡ類似体での処置による、悪性ＭＣＦ−７細胞および非形質転換ＭＣＦ−１０Ａの細胞生存率を示す図である。

【0036】

【図17】ナアミジンＡの抗結核性および抗菌性の測定値を示す図である。

【発明の詳細な説明】

【0037】

定義
特段の定めのない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明の属する分野の当業者が一般に理解する意味と同じ意味を有する。本明細書に記載される方法および材料と類似するかまたは等価であるものが本発明の実行または試験に使用され得るが、適した方法および材料は下に記載される。その上、材料、方法、および実施例は、実例にすぎず、制限を目的とするものではない。本明細書において言及される全ての刊行物、特許出願、特許、およびその他の参考文献は、参照によりその全文が援用され、それには、整理番号９６１７５−８９０６５１−０００８００ＵＳで示される米国仮出願（すなわち米国仮出願第６２／０５１，８３７号）および米国特許出願公開第２０１３／０１９７０４９号が含まれる。矛盾する場合には、これらの定義を含む本明細書が支配する。

【0038】

本明細書において用いられる用語「ａ」、「ａｎ」または「ｔｈｅ」は、１つのメンバーを含む態様を含むだけでなく、複数のメンバーを含む態様も含む。例えば、「２−（アシルアミノ）イミダゾールおよび賦形剤」を含む実施形態は、少なくとも第２の２−（アシルアミノ）イミダゾール、少なくとも第２の賦形剤、または両方を含むある特定の態様を提示すると理解されるべきである。

【0039】

数値を修飾するために本明細書において用いられる用語「約」は、その値の近くの定義された範囲を示す。Ｘ」が値である場合、「約Ｘ」は、通常０．９５Ｘ〜１．０５Ｘまでの値をさす。「約Ｘ」へのどんな言及も、少なくとも値Ｘ、０．９５Ｘ、０．９６Ｘ、０．９７Ｘ、０．９８Ｘ、０．９９Ｘ、１．０１Ｘ、１．０２Ｘ、１．０３Ｘ、１．０４Ｘ、および１．０５Ｘを特に示す。従って、「約Ｘ」は、例えば「０．９８Ｘ」の特許請求の範囲に記載の限定に対する、明細書の記載という裏付けを教示および提供するものである。量「Ｘ」が完全な整数値だけを含む場合（例えば、「Ｘ個の炭素」）、「約Ｘ」は（Ｘ−１）から（Ｘ＋１）までをさす。この場合、「約Ｘ」は、本明細書において、少なくとも値Ｘ、Ｘ−１、およびＸ＋１を具体的に示す。

【0040】

用語「約」が数値範囲の始まりに適用される場合、それはその範囲の両端に適用される。従って、「約５〜２０％」は、「約５％〜約２０％」と等しい。「約」が一組の値の最初の値に適用される場合、それはその組の中の全ての値に適用される。従って、「約７、９、または１１％」は、「約７％、約９％、または約１１％」と等しい。しかし、修飾語「約」が範囲の末端だけか、または一組の値の中の後の値だけを説明するために適用される場合、それはその値だけかまたは範囲のその末端だけに適用される。従って、範囲「約２〜１０」は、「約２〜約１０」と同じであるが、範囲「２〜約１０」はそうではない。

【0041】

本明細書において用いられる用語「アシル」には、本明細書において定義されるアルカノイル、アロイル、ヘテロシクロイル、またはヘテロアロイル基が含まれる。アシル基の例としては、限定されるものではないが、アセチル、ベンゾイル、およびニコチノイルが挙げられる。

【0042】

本明細書において用いられる用語「薬剤」には、組成物に添加されると、組成物の性質に特定の影響を及ぼす傾向がある化合物または化合物の混合物が含まれる。例えば、増粘剤を含む組成物は、増粘剤を含まないこと以外は同一の比較組成物よりも粘稠である可能性がある。

【0043】

本明細書において用いられる用語「アルカノイル」には、アルキル基が本明細書において定義される通りである、アルキル−Ｃ（Ｏ）−基が含まれる。アルカノイル基の例としては、限定されるものではないが、アセチルおよびプロパノイルが挙げられる。

【0044】

本明細書において用いられる用語「アルケニル」には、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する直鎖または分枝鎖炭化水素が含まれる。鎖は、示された数の炭素原子を含むことができる。例えば、「Ｃ_１−Ｃ_１２アルケニル」は、その基が１〜１２（１２を含む）個の炭素原子および少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有し得ることを示す。示された炭素原子の数が１である場合、Ｃ_１アルケニルは、炭素と二重結合している（すなわち、オキソ基に類似した炭素）。特定の態様では、鎖は、１〜１２、約２〜１５、約２〜１２、約２〜８、または約２〜６個の炭素原子を含む。アルケニル基の例としては、限定されるものではないが、エテニル（すなわちビニル）、アリル、プロペニル、ブテニル、クロチル、ペンテニル、ヘキセニル、ヘプテニル、オクテニル、ノネニル、デセニル、ドデセニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、２−イソペンテニル、アレニル、ブタジエニル、ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）、およびヘキサジエニルを挙げることができる。

【0045】

一態様では、アルケニル基は非置換である。一態様では、アルケニル基は、所望により置換されている。所望により置換されている場合、アルケニル基の１または複数の水素原子（例えば、１〜４、１〜２、または１）は、フルオロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、チオ、およびアルキルチオからなる群から独立して選択される部分で置換されてよい、ただし、炭素−炭素二重結合上の水素原子置換基は、ヒドロキシ、アミノ、またはチオ基によって置換されない。

【0046】

本明細書において、用語「アルコキシ」とは、少なくとも１つの酸素原子をエーテル基（例えば、ＥｔＯ−）中に含有する、直鎖または分枝鎖の飽和または不飽和炭化水素をさす。鎖は、示された数の炭素原子を含むことができる。例えば、「Ｃ_１−Ｃ_１２アルコキシ」は、その基が１〜１２（１２を含む）個の炭素原子および少なくとも１つの酸素原子を有し得ることを示す。Ｃ_１−Ｃ_１２アルコキシ基の例としては、限定されるものではないが、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｎ−ペントキシ、イソペントキシ、ネオペントキシ、およびヘキソキシが挙げられる。

【0047】

アルコキシ基は、非置換であってもよいし、所望により置換されていてもよい。所望により置換されている場合、アルコキシ基の１または複数の水素原子（例えば、１〜４、１〜２、または１）は、フルオロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、チオ、およびアルキルチオを含む群から独立して選択される１または複数の部分で置換されてよい、ただし、エーテル酸素に対してアルファ位のいずれの水素原子も、置換される場合、フルオロまたはアルコキシにしか置換されることができない。

【0048】

本明細書において用いられる用語「アルキル」には、直鎖であっても分枝鎖であってもよい、脂肪族炭化水素鎖が含まれる。鎖は、示された数の炭素原子を含んでよい：例えば、Ｃ_１−Ｃ_１２は、その基が１〜１２（１２を含む）個の炭素原子をそれに含み得ることを示す。特段の指示のない限り、アルキル基は約１〜約２０個の炭素原子を含むことができる。一態様では、アルキル基は、１〜約１２個の炭素原子を鎖に有する。別の態様では、アルキル基（「低級アルキル」）は、１〜約６個の炭素原子を鎖に有する。例としては、限定されるものではないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル（ｉＰｒ）、１−ブチル、２−ブチル、イソブチル（ｉＢｕ）、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、２−メチルブチル、１，１−ジメチルプロピル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ドセシル（ｄｏｃｅｃｙｌ）、シクロペンチル、またはシクロヘキシルを挙げることができる。一態様では、アルキル基は、メチル（例えば、鎖中に２〜６個の炭素原子）を除外することができる。

【0049】

アルキル基は、非置換であってもよいし、所望により置換されていてもよい。所望により置換されている場合、アルキル基の１または複数の水素原子（例えば、１〜４、１〜２、または１）は、フルオロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、チオ、およびアルキルチオからなる群から独立して選択される部分で置換されてよい。

【0050】

本明細書において用いられる用語「アルキニル」には、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含有する直鎖、分枝鎖または環状炭化水素が含まれる。例としては、限定されるものではないが、エチニル、プロパルギル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、へプチニル、オクチニル、ノニニル、デシニル、またはデシニルを挙げることができる。

【0051】

アルキニル基は、非置換であってもよいし、所望により置換されていてもよい。所望により置換されている場合、アルケニル基の１または複数の水素原子（例えば、１〜４、１〜２、または１）は、フルオロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、チオ、およびアルキルチオからなる群から独立して選択される部分で置換されてよい、ただし、ｓｐ水素原子置換基は、ヒドロキシ、アミノ、またはチオ基によって置換されない。

【0052】

本明細書において、用語「２−アミノイミダゾール」とは、一般環式：

【化3】

を有する化合物をさす。この式において、「Ｎ^２」または「Ｎ２」は２−アミノ置換基を参照する。これは、可能性のある反応（例えば、アシル化またはジアシル化）の部位である。一部の実施形態では、２−アミノイミダゾールは、一般環式：

【化4】

の互変異性型であってよい。本願の発明の一部の態様では、環置換基は、他の点では本明細書に定義される通りである（例えば、Ｒ基の１つがアシルである；請求項１；など）。

【0053】

本明細書において用いられる用語「アロイル」には、アリールが本明細書において定義される通りである、アリール−ＣＯ−基が含まれる。例としては、限定されるものではないが、ベンゾイル、ナフト−１−オイルおよびナフト−２−オイルが挙げられる。

【0054】

本明細書において用いられる用語「アリール」には、６〜１８個の炭素を含有する環式芳香族炭素環系が含まれる。アリール基の例としては、限定されるものではないが、フェニル、ナフチル、アントラセニル、テトラセニル、ビフェニルおよびフェナントレニルが挙げられる。

【0055】

アリール基は、非置換であってもよいし、所望により置換されていてもよい。所望により置換されている場合、アリール基の１または複数の水素原子（例えば、１〜５、１〜２、または１）は、アルキル、シアノ、アシル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、チオ、およびアルキルチオからなる群から独立して選択される部分で置換されてよい。

【0056】

本明細書において、用語「アリールアルキル」および同義的に使用される「アラルキル」には、少なくとも１つの水素置換基が本明細書において定義されるアリール基で置換された、本明細書において定義されるアルキル基が含まれる。例としては、限定されるものではないが、ベンジル、１−フェニルエチル、４−メチルベンジル、および１，１，−ジメチル−１−フェニルメチルが挙げられる。

【0057】

本明細書において、用語「ブレンステッド塩基」とは、ブレンステッド酸からプロトン（すなわちＨ^＋）を受け取ることのできる化合物をさす。一般に、強ブレンステッド塩基は、約５前後またはそれ以下のｐＫ_ｂ値を特徴とする。強ブレンステッド塩基の例としては、限定されるものではないが、水酸化ナトリウム、水酸化リチウム、炭酸カリウム、ヒューニッヒ塩基（Ｈｕｅｎｉｇ’ｓ ｂａｓｅ）（すなわちＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）、２，６−ルチジン（すなわち２，６−ジメチルピリジン）をはじめとするルチジン、およびトリエチルアミンが挙げられる。

【0058】

本明細書において、用語「触媒」とは、反応の速度を増加させるために化学反応に関与するが、それ自体はその反応において消費されない物質をさす。触媒の例としては、限定されるものではないが、金属、金属酸化物、金属錯体、酸、および塩基が挙げられる。

【0059】

基は、非置換であってもよいし、所望によりその構成基により置換されていてもよい。例えば、限定されるものではないが、アリールアルキル基のアリール基は、アリールアルキル基の４−メチルベンジルのように置換されることができる。一部の好ましい実施形態では、基には多くて３つの独立して選択される随意の置換基が含まれ、これらの置換基はさらなる随意の置換基を含まない。一部の実施形態では、基には多くて３つの独立して選択される随意の置換基が含まれるが、これらの置換基はさらなる随意の置換基を含む。

【0060】

本明細書において用いられるリンキングターム（ｌｉｎｋｉｎｇ ｔｅｒｍ）「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」は、クローズドではない。例えば、「Ａを含む組成物」は、少なくとも成分Ａを含まなければならないが、それは１またはそれ以上のその他の成分（例えば、Ｂ；ＢおよびＣ；Ｂ、Ｃ、およびＤ；など）も含むことがある。

【0061】

本明細書において用いられる用語「シクロアルキル」には、示された数の炭素原子を含み得る環状炭化水素基が含まれる：例えば、Ｃ_３−Ｃ_１２は、その基が３〜１２（１２を含む）個の炭素原子をそれに含み得ることを示す。特段の指示のない限り、シクロアルキル基は約３〜約２０個の炭素原子を含む。一態様では、シクロアルキル基は、３〜約１２個の炭素原子を基に有する。別の態様では、シクロアルキル基は、３〜約７個の炭素原子を基に有する。例としては、限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、４，４−ジメチルシクロヘキシル、およびシクロヘプチルを挙げることができる。

【0062】

シクロアルキル基は、非置換であってもよいし、所望により置換されていてもよい。所望により置換されている場合、シクロアルキル基の１または複数の水素原子（例えば、１〜４、１〜２、または１）は、フルオロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、チオ、およびアルキルチオからなる群から独立して選択される部分で置換されてよい。一態様では、置換シクロアルキル基は、環外または環内アルケンを組み込むことができる（例えば、シクロヘキサ−２−エン−１−イル）。

【0063】

用語「障害」、「疾患」、および「状態」は、本明細書において被験者の状態について同義的に使用される。障害は、被験者の身体の正常な機能に影響を及ぼす妨害または撹乱である。疾患は、様々な原因、例えば感染、遺伝子的欠陥、または同定可能な症状群を特徴とする環境ストレスなどから生じる、器官、身体部位、または系の病的な状態である。

【0064】

本明細書において用いられる用語「有効量」または「実効線量」には、望ましい結果を達成するのに十分な量が含まれ、したがって、成分およびその望ましい結果に依存する。それでも、ひとたび望ましい効果が確認されれば、有効量を定量することは当業者の技術の範囲内である。

【0065】

本明細書において、「フルオロアルキル」には、アルキル基が１またはそれ以上のフルオロ置換基を含むアルキル基が含まれる。例としては、限定されるものではないが、トリフルオロメチルが挙げられる。

【0066】

本明細書において、「ジェミナル」置換には、同じ原子に直接結合している２以上の置換基が含まれる。例は、シクロヘキシルまたはスピロシクロヘキシル環上の３，３−ジメチル置換である。

【0067】

本明細書において、「ハロ」または「ハロゲン」には、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードが含まれる。一態様では、「ハロ」には、フルオロまたはクロロが含まれる。

【0068】

本明細書において用いられる用語「ヘテロアリール」には、少なくとも１個のヘテロ原子を含む約４〜約１４個の環原子（例えば、４〜１０個または５〜１０個の原子）からなる単環式および二環式芳香族基が含まれる。用語ヘテロアリールで使用されるヘテロ原子とは、酸素、硫黄および窒素をさす。ヘテロアリールの窒素原子は、所望により、対応するＮ−酸化物に酸化される。例としては、限定されるものではないが、ピラジニル、フラニル、チエニル、ピリジル、ピリミジニル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ピラゾリル、フラザニル、ピロリル、ピラゾリル、トリアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、フタラジニル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン、イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾリル、ベンゾフラザニル、インドリル、アザインドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチエニル、キノリニル、イミダゾリル、チエノピリジル、キナゾリニル、チエノピリミジル、ピロロピリジル、イミダゾピリジル、イソキノリニル、ベンゾアザインドリル、１，２，４−トリアジニル、およびベンゾチアゾリルが挙げられる。

【0069】

ヘテロアリール基は、非置換であってもよいし、所望により置換されていてもよい。所望により置換されている場合、ヘテロアリール基の１または複数の水素原子（例えば、１〜５、１〜２、または１）は、アルキル、シアノ、アシル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、チオ、およびアルキルチオからなる群から独立して選択される部分で置換されてよい。

【0070】

本明細書において用いられる用語「ヘテロアロイル」には、ヘテロアリールが本明細書において定義される通りである、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−基が含まれる。ヘテロアロイル基としては、限定されるものではないが、チオフェノイル、ニコチノイル、ピロール−２−イルカルボニル、およびピリジノイルが挙げられる。

【0071】

本明細書において用いられる用語「ヘテロシクロイル」には、ヘテロシクリルが本明細書において定義される通りである、ヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）−基が含まれる。例としては、限定されるものではないが、Ｎ−メチルプロリノイルおよびテトラヒドロフラノイルが挙げられる。

【0072】

本明細書において、「ヘテロシクリル」には、約４〜約１０個の環原子（例えば、５〜約８個の環原子、または５〜約６個の環原子）からなる非芳香族の飽和単環式もしくは多環式環系が含まれ、その環系中の原子の１または複数は、炭素以外の１または複数の要素、例えば、窒素、酸素または硫黄である。ヘテロシクリル基は、所望により少なくとも１つのｓｐ^２混成原子を含む（例えば、カルボニル、環内オレフィン、または環外オレフィンを組み込んでいる環）。一部の実施形態では、ヘテロシクリルの窒素または硫黄原子は、所望により酸化させて対応するＮ−酸化物、Ｓ−酸化物またはＳ，Ｓ−二酸化物とする。単環式ヘテロシクリル環の例としては、限定されるものではないが、ピペリジル、ピロリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、チアゾリジニル、１，３−ジオキソラニル、１，４−ジオキサニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、およびテトラヒドロチオピラニルが挙げられる。

【0073】

ヘテロシクリル基（heterocycyl group）は、非置換であってもよいし、所望により置換されていてもよい。所望により置換されている場合、基の１または複数の水素原子（例えば、１〜４、１〜２、または１）は、フルオロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、チオ、およびアルキルチオからなる群から独立して選択される部分で置換されてよい。一態様では、置換ヘテロシクリル基は、環外または環内アルケンを組み込むことができる。

【0074】

本明細書において用いられる用語「疎水性部分」または「疎水基」には、水をはじく部分または官能基が含まれる。例としては、限定されるものではないが、無極性部分、例えば５個よりも多くの炭素を有する非置換アルキル基、フェニル基およびアントラセニル基を挙げることができる。

【0075】

本明細書において、用語「親水性部分」または「親水性」には、水に対して強い親和性をもつ部分または官能基が含まれる。例としては、限定されるものではないが、荷電部分、例えばカチオン部およびアニオン部など、または極性非荷電部分、例えばアルコキシ基およびアミン基などを挙げることができる。

【0076】

本明細書において、用語「ヒドロキシアルキル」には、少なくとも１つの水素置換基がアルコール（−ＯＨ）基で置換されているアルキル基が含まれる。特定の態様では、ヒドロキシアルキル基は１つのアルコール基を有する。特定の態様では、ヒドロキシアルキル基は、１つのアルコール基または各々が異なる炭素原子上にある２つのアルコール基を有する。特定の態様では、ヒドロキシアルキル基は、１、２、３、４、５、または６のアルコール基を有する。例としては、限定されるものではないが、ヒドロキシメチル、２−ヒドロキシエチル、および１−ヒドロキシエチルを挙げることができる。

【0077】

任意の２つの置換基または同じ置換基の任意の２つの例が選択肢のリストから「独立して選択される」場合、それらの基は同じであっても異なっていてもよい。例えば、Ｒ^ａおよびＲ^ｂがアルキル、フルオロ、アミノ、およびヒドロキシアルキルからなる群から独立して選択される場合、２つのＲ^ａ基と２つのＲ^ｂ基をもつ分子は、全ての基がアルキル基であり得る（例えば、４つの異なるアルキル基）。あるいは、第１のＲ^ａはアルキルであり得、第２のＲ^ａはフルオロであり得、第１のＲ^ｂはヒドロキシアルキルであり得、第２のＲ^ｂはアミノ（または基から得られる任意のその他の置換基）であり得る。あるいは、両方のＲ^ａと第１のＲ^ｂはフルオロであり得、一方、第２のＲ^ｂはアルキルであり得る（すなわちいくつかの置換基対は同じであってよく、一方、他の対は異なっていてよい）。

【0078】

本明細書において、用語「πルイス酸」とは、電子を供与するルイス塩基から電子を受容し、ルイス塩基によって供与された電子を共有することによってルイス付加物を形成することのできる原子番号１９以上の化合物をさす。πルイス酸の例としては、限定されるものではないが、塩化チタン（ＩＶ）（ＴｉＣｌ_４）、塩化鉄（ＩＩＩ）（ＦｅＣｌ_３）、臭化鉄（ＩＩＩ）（ＦｅＢｒ_３）、塩化スズ（ＩＶ）（ＳｎＣｌ_４）、などが挙げられる。

【0079】

本明細書において、「または」は、一般に非排他的に解釈されるべきである。例えば、「ＡまたはＢを含む組成物」の実施形態は、一般にＡとＢの両方を含む組成物を含む態様を提示する。しかし、「または」、矛盾なく組み合わせることのできない、提示されたそれらの態様（例えば、９〜１０の間または７〜８の間の組成物ｐＨ）を除外すると解釈されるべきである。

【0080】

本明細書において、用語「塩」とは、化合物の酸または塩基塩、例えば、ＺＮＡまたはもう一つの２−（アシルアミノ）イミダゾールをさす。製薬上許容される塩の実例は、カチオン塩、例えばアルカリおよびアルカリ土類金属（例えばナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、およびマグネシウム）塩、アンモニウム（アンモニウム、トリメチルアンモニウム、ジエチルアンモニウム、およびトリス−（ヒドロキシメチル）−メチル−アンモニウム）塩、無機酸（塩酸、臭化水素酸、リン酸、など）塩、有機カルボン酸（酢酸、プロピオン酸、グルタミン酸、クエン酸など）塩、有機スルホン酸（メタンスルホン酸）塩、および第四級アンモニウム（ヨウ化メチル、ヨウ化エチル、など）塩である。適した製薬上許容される塩に関するさらなる情報は、参照により本明細書に援用される、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（現行版），Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡに見出すことができる。

【0081】

用語「その塩（ａ ｓａｌｔ ｔｈｅｒｅｏｆ）」、「その塩（ｓａｌｔ ｔｈｅｒｅｏｆ）」、または「その塩（ｓａｌｔｓ ｔｈｅｒｅｏｆ）」は、関連するマーカッシュ群のいずれの先行するメンバーにも適用することができる。例えば、Ａ、Ｂ、Ｃ、およびそれらの塩からなる群は、その範囲内に、Ａの塩であった実施形態、Ｂの塩であった実施形態、およびＣの塩であった実施形態を含む。

【0082】

本明細書において、本明細書において用いられる「スピロシクロアルキル」には、炭素原子上のジェミナル置換基が置換されて１，１−置換環の形成に加わるシクロアルキルが含まれる。例えば、限定されるものではないが、より長い炭素鎖の部分であった−Ｃ（Ｒ^１）（Ｒ^２）−基について、Ｒ^１およびＲ^２が結合してＲ^１およびＲ^２と結合した炭素を組み込むシクロプロピル環を形成する場合、これはスピロシクロアルキル基（すなわち、スピロシクロプロピル）となり得る。

【0083】

本明細書において、本明細書において用いられる「スピロヘテロシクリル」には、炭素原子上のジェミナル置換基が置換されて１，１−置換環の形成に加わるヘテロシクロアルキルが含まれる。例えば、限定されるものではないが、より長い炭素鎖の部分であった−Ｃ（Ｒ^１）（Ｒ^２）−基について、Ｒ^１およびＲ^２が結合してＲ^１およびＲ^２と結合した炭素を組み込むピロリジン環を形成する場合、これはスピロヘテロシクリル基となり得る。

【0084】

本明細書において、用語「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、または「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、組成物（例えば、本明細書に記載される組成物）を、その障害または症状を改善する、あるいはその障害または症状の進行を防ぐ、遅延させる、または遅くするために効果的な量、方法（例えば、投与スケジュール）、および様式（例えば、投与経路）で投与または適用することを含む。そのような改善には、限定されるものではないが、１またはそれ以上の症状または状態の軽減または寛解、疾患の範囲の減少、疾患の状態の安定化（すなわち悪化していない）、疾患の伝播または拡散の予防、疾患の進行の遅延または緩徐化、疾患状態の寛解または緩和、疾患の再発の減少、および、部分的であろうと全体的であろうと、検出可能であろうと検出不能であろうと、緩解を挙げることができる。

【0085】

本明細書において用いられる「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、および「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」はまた、予防的処置も含む。ある種の実施形態では、処置方法は、被験者に治療上有効な量の活性薬剤を投与することを含む。投与工程は、単回投与で構成されてもよいし、一連の投与を含んでもよい。処置期間の長さは、多様な要素、例えば状態の重症度、患者の年齢、活性薬剤の濃度、処置に使用する組成物の活性、またはそれらの組合せなどに依存する。また、処置または予防に使用される薬剤の効果的な投与量が、特定の処置または予防体制の間に増加または低下することがあることも理解される。投与量の変更は、結果として起こることもあり、当技術分野で公知の標準的な診断アッセイによって明らかになることもある。一態様では、長期投与が必要なことがある。例えば、組成物は、被験者を処置するために十分な量および期間の間、患者に投与される。

【0086】

上記の発明の概要、発明を実施するための形態、および下記の特許請求の範囲において、方法ステップを含む本発明の特定の特徴および態様が参照される。本明細書中の本発明の開示には、開示される本発明の実施形態の範囲内のそのような特定の特徴の全ての可能性のある組合せが、少なくともそのような組合せが矛盾しない程度まで含まれる。例えば、発明を実施するための形態が、実施形態の態様Ａ、Ｂ、およびＣを提示する場合、そのことは態様ＡとＢの両方、態様ＢとＣの両方、および態様ＡとＣの両方、ならびに態様Ａ、Ｂ、およびＣを含む実施形態をはじめとする、特定の実施形態も開示すると理解される。

【0087】

組成物
第１の実施形態では、本発明は、

【化5】

およびその塩を含む群から選択される２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物を提供し；
上式で、
Ｒ^１は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、およびヘテロアリールアルキルを含む群から選択されるメンバーであり；
Ｘは、結合、Ｏ、およびＮＲ^５ａを含む群から選択されるメンバーであり；
Ｙは、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ^５ｂを含む群から選択されるメンバーであり；この際、ＸがＯまたは結合である場合、ＹはＯであり；
Ｒ^２は、水素、アルキル、フルオロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アシル、およびカルバモイルを含む群から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ^３は、水素、アルキル、フルオロアルキル、およびアリールアルキルを含む群から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ^４ａおよびＲ^４ｂは、それぞれ、水素、アルキル、フルオロ、フルオロアルキル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールを含む群から独立して選択されるメンバーであるか；あるいは、これら２つのＲ^４は、一緒になってスピロシクロアルキル環を形成し；
Ｒ^５ａおよびＲ^５ｂは、それぞれ、水素、アルキル、フルオロアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルを含む群から独立して選択されるメンバーであり；
Ａ^ｎメンバーの各々のＡ^ｎは、ＮおよびＣＲ^６ｎを含む群から独立して選択され；
Ｒ^６ｎメンバーの各々は、水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノアルコキシ、アルキルアミノ、アルキルアミノアルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールオキシ、アリールアミノ、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルコキシ、シクロアルキルアルコキシ、シクロアルキルアミノ、シクロアルキルアルキルアミノ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルオキシ、ヘテロシクリルアミノ、ハロゲン、ハロアルキル、フルオロアルキルオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアミノ、アリールアルキル、アリールアルキルオキシ、アリールアルキルアミノ、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルキルオキシ、およびヘテロアリールアルキルアミノを含む群から独立して選択されるか；または、代わりに、一対の隣接するＲ^６ｎメンバーは、一緒になって、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、およびヘテロシクロアリールを含む群から選択されるさらなる縮合環を形成し；かつ
Ｒ^７は、アルキル、アルケニル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルを含む群から独立して選択されるメンバーであり；
２−アミノイミダゾール化合物は、天然物ではない。

【0088】

一態様では、本発明は、上記組成物を記載し、該２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物は、

【化6】

またはその塩である。

【0089】

好ましくは、式Ｉａの２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物は、位置異性体化合物：

【化7】

またはその塩を実質的に含まない。

【0090】

一態様では、本発明は、上記組成物を記載し、該２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物は、

【化8】

またはその塩である。

【0091】

好ましい態様では、式Ｉｂの２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物は、位置異性体化合物：

【化9】

またはその塩を実質的に含まない。

【0092】

一態様では、本発明は、上記組成物を記載し、該２−アミノイミダゾール化合物は、

【化10】

またはその塩である。

【0093】

好ましい態様では、式Ｉｃの２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物は、位置異性体化合物：

【化11】

またはその塩を実質的に含まない。

【0094】

好ましい態様では、式Ｉａ、Ｉｂ、またはＩｃの２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物は、Ｎ^２，Ｎ^２−ジアシル化合物

【化12】

またはその塩を実質的に含まない；
上式で、Ｒ^ＡはＲ^２またはＲ^３である。

【0095】

一態様では、Ｒ^１は、アルキル、アリール、アリールアルキル、およびヘテロアリールを含む群から選択されるメンバーである。より具体的な態様では、Ｒ^１は、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、フェニル、２−フルオロフェニル、２，４−ジクロロフェニル、および２−チアゾリルを含む群から選択されるメンバーである。代わりのより具体的な態様では、Ｒ^１は、フェニル、２−フルオロフェニル、３−トリフルオロメチルフェニル、４−クロロフェニル、４−メトキシフェニル、およびシクロプロピルを含む群から選択されるメンバーである。

【0096】

一態様では、Ｒ^１はアルキルである。より具体的な態様では、Ｒ^１は、メチル、エチル、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、またはｔｅｒｔ−ブチルである。より具体的な態様では、Ｒ^１は、イソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルである。より具体的な態様では、Ｒ^１は、ｔｅｒｔ−ブチルである。

【0097】

一態様では、Ｒ^１はアルケニルである。より具体的な態様では、Ｒ^１は、アリルまたはメタアリルである。

【0098】

一態様では、Ｒ^１はアルキニルである。より具体的な態様では、Ｒ^１は、プロパルギルである。

【0099】

一態様では、Ｒ^１はアリールである。より具体的な態様では、Ｒ^１は、フェニルである。代わりの態様では、Ｒ^１は、ハロフェニルである。より具体的な態様では、Ｒ^１は、２−フルオロフェニルまたは２，４−ジクロロフェニルである。

【0100】

一態様では、Ｒ^１はアリールアルキルである。より具体的な態様では、Ｒ^１は、ベンジルである。

【0101】

一態様では、Ｒ^１はヘテロアリールである。より具体的な態様では、Ｒ^１は、４−、３−、または２−ピリジルである。

【0102】

一態様では、Ｒ^１はヘテロアリールアルキルである。より具体的な態様では、Ｒ^１は、４−、３−、または２−ピリジルメチルである。

【0103】

一態様では、Ｘは、結合である。代わりの態様では、Ｘは、Ｏである。代わりの態様では、Ｘは、ＮＲ^５ａである。

【0104】

一態様では、Ｙは、Ｏである。代わりの態様では、Ｙは、ＮＲ^５ｂである。

【0105】

一態様では、Ｒ^２は、水素、アルキル、アシル、およびカルバモイルを含む群から独立して選択されるメンバーである。より具体的な態様では、Ｒ^２は、水素およびカルバモイルを含む群から独立して選択されるメンバーである。さらにより具体的な態様では、Ｒ^２は、水素、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、およびベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）を含む群から独立して選択されるメンバーである。

【0106】

一態様では、Ｒ^３はアルキルである。より具体的な態様では、Ｒ^３は、メチルである。一態様では、Ｒ^３はアリルである。

【0107】

一態様では、Ｒ^４ａおよびＲ^４ｂは、それぞれ、水素、アルキル、フルオロ、およびフルオロアルキルを含む群から独立して選択されるメンバーである。より具体的な態様では、Ｒ^４ａおよびＲ^４ｂは水素である。

【0108】

一態様では、Ｒ^５ａおよびＲ^５ｂは、それぞれ、水素、アルキル、フルオロアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルを含む群から独立して選択されるメンバーである。

【0109】

一態様では、Ａ^ｎメンバーの各Ａ^ｎは、独立して選択されるＣＲ^６ｎである。代わりの態様では、Ａ^ｎメンバーの中で１つのみがＮである。代わりの態様では、Ａ^ｎメンバーの中で２つのみがＮである。代わりの態様では、Ａ^ｎメンバーの中で３つのみがＮである。

【0110】

一態様では、Ｒ^６ｎメンバーの各々は、水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、シクロアルキル、シクロアルコキシ、シクロアルキルアルコキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルオキシ、ハロゲン、フルオロアルキル、フルオロアルキルオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、アリールアルキル、アリールアルキルオキシ、アリールアルキルアミノ、およびヘテロアリールアルキルオキシを含む群から独立して選択される。より具体的な態様では、Ｒ^６ｎメンバーの各々は、水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、シクロアルキルアルコキシ、ハロゲン、フルオロアルキル、フルオロアルキルオキシ、およびアリールアルキルオキシを含む群から独立して選択される。さらにより具体的な態様では、Ｒ^６ｎメンバーの各々は、水素、アルキル、ヒドロキシ、およびアルコキシを含む群から独立して選択される。

【0111】

一態様では、Ａ^３は、Ｃ（ＯＨ）またはＣ（ＯＭｅ）である。代わりの態様では、Ａ^３は、ＣＨ、ＣＣｌ、Ｃ（ＯＭｅ）、または

【化13】

である。

【0112】

一態様では、Ａ^８は、Ｃ（ＯＨ）またはＣ（ＯＭｅ）である。代わりの態様では、Ａ^８は、ＣＨ、ＣＣｌ、Ｃ（ＯＭｅ）、または

【化14】

である。

【0113】

一態様では、Ｒ^６ｎメンバーの少なくとも４つは水素である。より具体的な態様では、Ｒ^６ｎメンバーの少なくとも６つは水素である。さらにより具体的な態様では、Ｒ^６ｎメンバーの少なくとも８つは水素である。

【0114】

一態様では、Ｒ^７は、アルキルまたはヘテロアリールアルキルである。

【0115】

一態様では、Ｒ^７は、アミノアルキルまたはアルキルアミノアルキルである。より具体的な態様では、Ｒ^７は、モルホリニルメチルである。

【0116】

一態様では、Ｒ^７はシクロアルキルである。より具体的な態様では、Ｒ^７は、シクロプロピルである。

【0117】

より具体的な態様では、本発明は、２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物

【化15】

およびその塩を含む組成物を記載し；
上式で、Ｒ^１およびＺは、それぞれ、フェニル、２−フルオロフェニル、３−トリフルオロメチルフェニル、４−クロロフェニル、４−メトキシフェニル、およびシクロプロピルを含む群から選択され；かつ
Ａ^３は、ＣＨ、ＣＣｌ、Ｃ（ＯＭｅ）、および

【化16】

を含む群から選択される。

【0118】

より具体的な態様では、本発明は、２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物

【化17】

およびその塩を含む組成物を記載し；
上式で、Ｒ^１およびＺは、それぞれ、フェニル、２−フルオロフェニル、２，４−ジクロロフェニル、２−チアゾリル、イソプロピル、およびｓｅｃ−ブチルを含む群から選択され；かつ
Ａ^３は、ＣＨおよびＣ（ＯＭｅ）を含む群から選択される。

【0119】

一態様では、

【化18】

は、フェノールである。より具体的な態様では、

【化19】

は、ｐ−フェノール（例えば、４−ヒドロキシフェニル）である。

【0120】

一態様では、

【化20】

は、フェノールである。より具体的な態様では、

【化21】

は、ｐ−フェノール（例えば、４−ヒドロキシフェニル）である。

【0121】

より具体的な態様では、本発明は、２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物

【化22】

およびその塩を含む組成物を記載し；
上式で、Ｒ^１は、フェニル、２−フルオロフェニル、２，４−ジクロロフェニル、２−チアゾリル、イソプロピル、およびｓｅｃ−ブチルを含む群から選択される。

【0122】

より具体的な態様では、本発明は、

【化23】

を含む群から選択される２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物；およびそれらの塩を含む組成物を記載する。

【0123】

一態様では、本発明は、表Ｉから選択される化合物およびその塩を記載する：

【0124】

構造上の見地から、ナアミジンＡまたは類似の化合物のＮ−Ｍｅ−ヒダントイン由来の頭部基は、標準的な２−ポイントキナーゼ結合剤（２−アミノピリジンに類似）としてよく役立つであろう。Ｙｏｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．２０１０；Ｅｎｚｅｎｍｕｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇｓ ２０１３，２４（１），１４−９；Ｘｕｅ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ２０１４，９（１０），ｅ１０９１８０／１−ｅ１０９１８０／６，６ｐｐ．を参照されたい。ヒダントイン頭部基は、重要な「オフターゲット」作用に寄与する（ロダニンおよびその他のヒダントインと同様に）非常に無差別な結合剤としても役立つであろう。Ｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００５，６５（８），３３８９−３３９５；Ｌｉｎｄ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｒｅｓ．２００９，１５４（３），１５３−１５９；Ｙｕ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２００９，４１７（１），１３３−１３９；Ｔａｋｅｄａ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ２０１１，６（１２），ｅ２８６１５；Ｊｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ．２０１１，３１２（１），１１−１７；Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓ．２０１１，４２（３），２４２−５１；Ｃａｏ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ Ｒｅｐ ２０１４，４．を参照されたい。有利には、これらの作用は、特許請求される本発明のＮ^２−アシル−２−アミノイミダゾールの構造上より簡単な系列において最小化されるかまたは回避されるべきである。
処置方法

【0125】

第２の実施形態では、本発明は、インビトロで細菌を死滅させる方法を提供し、該方法は、第１の実施形態またはその態様の１つに記載される組成物で細菌を処理することを含む。提示される方法の一部の代わりの態様では、本発明は、そのような方法で使用するための化合物または組成物を提供する。

【0126】

第３の実施形態では、本発明は、インビボで細菌を死滅させる方法を提供し、該方法は、第１の実施形態またはその態様の１つに記載される組成物を患者に投与することを含む。提示される方法の一部の代わりの態様では、本発明は、そのような方法で使用するための化合物または組成物を提供する。

【0127】

第４の実施形態では、本発明は、癌を治療する方法を提供し、該方法は、第１の実施形態またはその態様の１つに記載される組成物を癌患者に投与し、それにより患者を治療することを含む。提示される方法の一部の代わりの態様では、本発明は、そのような方法で使用するための化合物または組成物を提供する。

【0128】

理論に縛られることを意図するものではないが、本発明の化合物および組成物の作用の方法には、亜鉛代謝の調節が含まれることがある。亜鉛は重要な微量金属である。生命情報学研究により、プロテオームの１０％が亜鉛と結合することができ、これらのタンパク質の４０％が転写因子として機能し、残りの６０％が酵素またはイオン輸送能力において機能すると推定された（１５）。至る所に存在するイオンの性質と適切な細胞機能に亜鉛が必要であるということを考えると、亜鉛ホメオスタシスの混乱が、様々な疾患状態と相関していることは驚くことではない：亜鉛の蓄積は、アルツハイマー病関連細胞外プラークの形成とともに生じることが見出されており、亜鉛濃度の増加は、非悪性組織と比較して悪性乳房組織で観察されている（１６〜１８）。健康な組織と罹患組織の亜鉛ホメオスタシスの違いを利用することにより、有益な治療用処置ウィンドウを得ることができ得る。

【0129】

一態様では、癌を治療する方法は、化合物ＺＮＡを含む。実施例が示すように、ＺＮＡは、Ｚｎ^２＋と強い相乗作用を示してカスパーゼ非依存的機構による癌選択的細胞死を誘導する。ＺＮＡは、複数の第一線の化学療法薬で処置した乳癌患者に由来する一次転移細胞に対して効果的であることが見出され、小分子のインビボ有効性は、マウス乳房腫瘍モデルを用いて確立された。合わせて考えると、これらの例は、Ｚｎ^２＋輸送経路を不安定化することおよび細胞内Ｚｎ^２＋ホメオスタシス不全を誘発することが、乳癌を選択的に標的化するための実行可能な機構であることを示唆する。さらに、化学療法抵抗性患者由来の腫瘍細胞に対するＺＮＡの活性（これは、患者の処置開始後に乳癌の分子およびゲノムの特徴をモデル化したものである）は、影響を受けた経路がインビボで臨床的に関連していることを示唆する。

【0130】

一部の実施形態では、本発明は治療的使用のための組成物を提供し、該組成物は本明細書中の態様の１つの２−（アシルアミノ）イミダゾールを含む。一部の態様では、組成物は製薬上許容される賦形剤をさらに含む。

【0131】

２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物が被験者に投与される例では、化合物は医薬組成物に組み込まれることができる。２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物は、製薬上許容される塩または誘導体として医薬組成物に組み込むことができる。本発明の２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物の一部の製薬上許容される誘導体には、水溶解度を増加させる化学基が含まれてよい。本明細書において、「製薬上許容される担体」とは、２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物またはその塩とともに（すなわち担体として）、または２−（アシルアミノ）イミダゾール化合物（またはその塩）と別の化合物の組合せとともに被験者に投与することができ、その薬理活性を壊さない物質を意味する。製薬上許容される担体としては、例えば、医薬投与に適合する、溶媒、結合剤、分散媒、コーティング剤、防腐剤、着色剤、等張剤および吸収遅延剤、などが挙げられる。補助活性化合物も組成物に組み込むことができる。

【0132】

使用することのできる製薬上許容される担体の限定されない例としては、ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル）、ＰＶＡ、部分加水分解ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル）、ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル−コ−ビニルアルコール）、架橋ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル）、架橋部分加水分解ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル）、架橋ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル−コ−ビニルアルコール）、ポリ−Ｄ，Ｌ−乳酸、ポリ−Ｌ−乳酸、ポリグリコール酸、ＰＧＡ、乳酸とグリコール酸の共重合体（ＰＬＧＡ）、ポリカプロラクトン、ポリバレロラクトン、ポリ（無水物）、ポリカプロラクトンとポリエチレングリコールの共重合体、ポリ乳酸とポリエチレングリコールの共重合体、ポリエチレングリコール；ならびにその組合せおよびブレンドが挙げられる。

【0133】

その他の担体としては、例えば、水性ゼラチン、水性タンパク質、高分子担体、架橋剤、またはその組合せが挙げられる。その他の例では、担体はマトリックスである。さらに別の例では、担体には、水、製薬上許容される緩衝塩、製薬上許容される緩衝溶液、製薬上許容される抗酸化薬、アスコルビン酸、１または複数の低分子量の製薬上許容されるポリペプチド、約２〜約１０のアミノ酸残基を含むペプチド、１または複数の製薬上許容されるタンパク質、１または複数の製薬上許容されるアミノ酸、ヒト必須アミノ酸、１または複数の製薬上許容される炭水化物、１または複数の製薬上許容される炭水化物から誘導される材料、非還元糖、グルコース、スクロース、ソルビトール、トレハロース、マンニトール、マルトデキストリン、デキストリン、シクロデキストリン、製薬上許容されるキレート剤、ＥＤＴＡ、ＤＴＰ Ａ、二価金属イオンのキレート剤、三価金属イオンのキレート剤、グルタチオン、製薬上許容される非特異的血清アルブミン、またはその組合せが含まれる。

【0134】

治療薬（例えば、治療活性２−（アシルアミノ）イミダゾールまたはその塩）の投与経路は、経口、腹腔内、経皮、皮下、静脈内もしくは筋肉内注射による、吸入による、局所、病巣内、注入；リポソーム媒介送達；局所、くも膜下腔内、歯肉ポケット、直腸、気管支内、経鼻、経粘膜、腸管、眼または耳送達、または任意のその他の当分野で公知の方法であってよい。一態様では、２−（アシルアミノ）イミダゾール治療薬またはその塩は、経口的に、静脈内に、または腹腔内に投与される。

【0135】

一態様では、２−（アシルアミノ）イミダゾール治療薬またはその塩は、治療上有効な量または用量で投与される。約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲の一日量が使用され得る。しかし、投与量は、いくつかの要因に従って変動することがあり、その要因には、選択された投与経路、組成物の処方、患者の応答、状態の重症度、被験者の体重、および処方する医師の判断が含まれる。投与量は、個々の患者の必要に応じて時間とともに増量または減量することができる。特定の例では、患者に最初に低い用量を投与し、その後それを増加させて患者に容認できる効果的な投与量とする。有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。

【0136】

一態様では、２−（アシルアミノ）イミダゾール治療薬またはその塩は、第２の治療薬と組み合わせて投与される。一態様では、第２の治療薬は、化学療法薬である。一態様では、化学療法薬は、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、イホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、メルファラン、メクロレタミン、ウラムスチン、チオテパ、ニトロソウレア、またはテモゾロミド）、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、エピルビシン、またはミトキサントロン）、細胞骨格ディスラプター（例えば、パクリタキセルまたはドセタキセル）、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤（例えば、ボリノスタットまたはロミデプシン）、トポイソメラーゼの阻害剤（例えば、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、またはテニポシド）、キナーゼ阻害剤（例えば、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ベムラフェニブ、またはビスモデギブ）、ヌクレオシド類似体または前駆体類似体（例えば、アザシチジン、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メルカプトプリン、メトトレキサート、またはチオグアニン）、ペプチド抗生物質（例えば、アクチノマイシンまたはブレオマイシン）、白金系薬剤（例えば、シスプラチン、オキサロプラチン（ｏｘａｌｏｐｌａｔｉｎ）、またはカルボプラチン）、または植物アルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ポドフィロトキシン、パクリタキセル、またはドセタキセル）である。一態様では、化学療法薬はゲムシタビンである。

【0137】

同時投与される治療薬（例えば、２−（アシルアミノ）イミダゾール治療薬またはその塩、および本明細書に記載される第２の治療薬）は、一緒にまたは別々に、同時にまたは異なる時に投与することができる。投与される場合、治療薬は、独立して、１日１回、２回、３回、または４回、あるいは必要に応じてより頻繁にまたはより少なく投与することができる。一態様では、投与される治療薬は、１日１回投与される。一態様では、投与される複数の治療薬は、同時に１回または複数回、例えば混合物として投与される。一態様では、治療薬の１または複数は持続放出製剤で投与される。

【0138】

一態様では、２−（アシルアミノ）イミダゾール治療薬またはその塩および第２の治療薬は、同時に投与される。一態様では、２−（アシルアミノ）イミダゾール治療薬またはその塩が、最初に、例えば第２の治療薬（例えば、化学療法薬）を投与するよりも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００日以上前に投与される。一態様では、第２の治療薬（例えば、化学療法薬）が、最初に、例えば２−（アシルアミノ）イミダゾール治療薬またはその塩を投与するよりも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００日以上前に投与される。

【0139】

一態様では、２−（アシルアミノ）イミダゾール治療薬またはその塩（および所望により第２の治療薬、例えば、本明細書に記載される化学療法薬）は、長期間にわたって、例えば、少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０日以上の間、被験者に投与される。

【0140】

別の態様では、被験者において癌を治療または予防する際に使用するための組成物およびキットが提供される。

【0141】

一態様では、癌を治療するための組成物およびキットが提供される。一部の実施形態では、組成物またはキットは、
第１の実施形態またはその態様の１つに記載される組成物
を含む。

【0142】

一態様では、癌を有する被験者に投与する際に使用するための、２−（アシルアミノ）イミダゾール治療薬またはその塩を含む医薬組成物が提供される。一態様では、２−（アシルアミノ）イミダゾール治療薬またはその塩は上記の通りである。一態様では、２−（アシルアミノ）イミダゾール治療薬またはその塩、および第２の治療薬（例えば、本明細書に記載される化学療法薬）は、適切な製薬上許容される担体または希釈剤との調合によって一緒にまたは別々に医薬組成物に配合され、固体、半固体、液体または気体の形態、例えば錠剤、カプセル剤、丸剤、粉末、顆粒剤、糖衣錠、ゲル、スラリー、軟膏、溶液、坐剤、注射液、吸入薬およびエアロゾルなどの調製物に配合されることができる。

【0143】

本発明で使用する製剤を調製するためのガイダンスは、例えば、参照により本明細書に援用されるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１^ｓｔ Ｅｄ．，２００６（前掲）；Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ：Ｔｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｄｒｕｇ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，Ｓｗｅｅｔｍａｎ，２００５，Ｌｏｎｄｏｎ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ；Ｎｉａｚｉ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ，２００４，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；およびＧｉｂｓｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｆｒｏｍ Ｃａｎｄｉｄａｔｅ Ｄｒｕｇ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍ，２００１，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ Ｐｒｅｓｓ、に見出される。本明細書に記載される医薬組成物は、当業者に公知の方法で、すなわち従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠作成、湿式粉砕、乳化、カプセル化、封入または凍結乾燥プロセスを用いて製造することができる。以下の方法および賦形剤は、単なる例示であって決して限定ではない。

【0144】

一態様では、２−（アシルアミノ）イミダゾール治療薬またはその塩（および所望により第２の治療薬、例えば、本明細書に記載される化学療法薬）は、持続放出、制御放出、長期放出、時限放出または遅延放出製剤での送達用に、例えば、治療薬を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスに調製される。様々な種類の持続放出材料がこれまでに確立されており、当業者に周知である。現在の長期放出製剤には、フィルムコーティング錠、多粒子またはペレット系、親水性または親油性材料を用いるマトリックス技術および細孔形成賦形剤を含むワックス系錠剤が含まれる（例えば、Ｈｕａｎｇ，ｅｔ ａｌ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．２９：７９（２００３）；Ｐｅａｒｎｃｈｏｂ，ｅｔ ａｌ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．２９：９２５（２００３）；Ｍａｇｇｉ，ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．５５：９９（２００３）；Ｋｈａｎｖｉｌｋａｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．２２８：６０１（２００２）；およびＳｃｈｍｉｄｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．２１６：９（２００１）参照）。持続放出送達系は、その設計に応じて、化合物を数時間または数日にわたって、例として、４、６、８、１０、１２、１６、２０、２４時間またはそれ以上にわたって放出することができる。通常、持続放出製剤は、天然に存在するポリマーまたは合成ポリマー、例として、重合体ビニルピロリドン、例えばポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）など；カルボキシビニル親水性ポリマー；疎水性および／または親水性の親水コロイド、例えばメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、およびヒドロキシプロピルメチルセルロースなど；ならびにカルボキシポリメチレンを用いて調製することができる。

【0145】

経口投与には、２−（アシルアミノ）イミダゾール治療薬またはその塩（および所望により第２の治療薬、例えば、本明細書に記載される化学療法薬）は、当技術分野で周知の製薬上許容される担体と結合させることによって容易に配合することができる。そのような担体は、処置される患者による経口摂取用の錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、乳濁液、親油性および親水性懸濁液、液体、ゲル、シロップ剤、スラリー、懸濁液などとして化合物を配合することを可能にする。経口使用用の医薬品は、化合物と固体賦形剤を混合し、所望により得られる混合物を磨砕し、必要に応じて錠剤または糖衣錠コアを得るために適した補助剤を添加した後に、顆粒の混合物を加工することによって得ることができる。適した賦形剤としては、例えば、増量剤、例えばラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖など；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などが挙げられる。必要に応じて、崩壊剤、例えば架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸またはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムなどを添加することができる。

【0146】

２−（アシルアミノ）イミダゾール治療薬またはその塩（および所望により第２の治療薬、例えば、本明細書に記載される化学療法薬）は、注射による、例えば、ボーラス注射または持続注入による非経口投与用に配合することができる。注射には、１または複数の化合物は、水性または非水性溶媒、例えば植物油または他の類似した油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステルまたはプロピレングリコールなどにそれらを溶解、懸濁または乳化することによって；さらに必要に応じて、従来の添加剤、例えば可溶化剤、等張剤、沈殿防止剤、乳化剤、安定剤および防腐剤などと共に、調製物に配合することができる。一態様では、化合物は、水溶液中に、好ましくは生理学的に適合する緩衝液、例えばハンクス液、リンゲル液、または生理食塩水緩衝液中に配合することができる。注射用製剤は、単位剤形で、例えば、アンプル中または複数用量容器中に、防腐剤を添加して提示されることができる。組成物は、油性または水性媒体中の懸濁液、溶液または乳濁液のような形をとることができ、懸濁剤、安定化剤および／または分散剤などの配合剤を含むことができる。

【0147】

２−（アシルアミノ）イミダゾール治療薬またはその塩（および所望により第２の治療薬、例えば、本明細書に記載される化学療法薬）は、経粘膜または経皮手段によって全身投与することができる。経粘膜または経皮投与には、浸透させるバリアに対して適切な浸透剤が製剤中に使用される。局所投与には、薬剤は、軟膏、クリーム、膏薬、粉末およびゲルに配合される。一態様では、経皮送達剤は、ＤＭＳＯであり得る。経皮送達系としては、例えば、パッチを挙げることができる。経粘膜投与には、浸透させるバリアに対して適切な浸透剤が製剤中に使用される。そのような浸透剤は、一般に当技術分野で公知である。例となる経皮送達製剤としては、米国特許第６，５８９，５４９号；同第６，５４４，５４８号；同第６，５１７，８６４号；同第６，５１２，０１０号；同第６，４６５，００６号；同第６，３７９，６９６号；同第６，３１２，７１７号および同第６，３１０，１７７号に記載されるものが挙げられ、その各々はここに参照により本明細書に援用される。

【0148】

一態様では、医薬組成物は、許容される担体および／または賦形剤を含む。製薬上許容される担体には、生理学的に適合性であり、好ましくは治療薬の活性を干渉しないか、または別の場合には治療薬の活性を阻害しない任意の溶媒、分散媒、または被膜が含まれる。一態様では、担体は、静脈内、筋肉内、経口、腹腔内、経皮、局所、または皮下投与に適している。製薬上許容される担体は、例えば、組成物を安定化させるために、あるいは１または複数の活性薬剤の吸収を増加または低下させるために作用する１または複数の生理学的に許容される化合物を含むことができる。生理学的に許容される化合物は、例えば、炭水化物、例えばグルコース、スクロース、またはデキストランなど、抗酸化薬、例えばアスコルビン酸またはグルタチオンなど、キレート剤、低分子量タンパク質、活性薬剤のクリアランスまたは加水分解を低下させる組成物、あるいは賦形剤またはその他の安定剤および／または緩衝液を含むことができる。その他の製薬上許容される担体およびそれらの製剤は周知であり、一般に、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５に記載されている。様々な製薬上許容される賦形剤が当技術分野で周知であり、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（５^ｔｈ ｅｄ．，Ｅｄ．Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）に見出すことができる。

【0149】

一態様では、癌を有する被験者に投与する際に使用するためのキットが提供される。一態様では、キットは：
２−（アシルアミノ）イミダゾール治療薬またはその塩；および
第２の治療薬
を含む。

【0150】

一態様では、２−（アシルアミノ）イミダゾール治療薬またはその塩は上記の通りである。一態様では、第２の治療薬は、化学療法薬である。一態様では、化学療法薬は、アルキル化剤、アントラサイクリン、細胞骨格ディスラプター、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、トポイソメラーゼの阻害剤、キナーゼ阻害剤、ヌクレオシド類似体または前駆体類似体、ペプチド抗生物質、白金系薬剤、または植物アルカロイドである。一態様では、化学療法薬はヌクレオシド類似体である。

【0151】

一態様では、キットは、本発明の方法の実行のための指示（すなわちプロトコール）を含有する教材をさらに含むことができる。教材は一般に書面のまたは印刷された材料を含むが、それらはそれに限定されない。そのような指示を格納し、それらをエンドユーザーに伝えることのできるあらゆる媒体が本発明で企図される。そのような媒体としては、限定されるものではないが、電子記憶媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学式媒体（例えば、ＣＤ ＲＯＭ）などが挙げられる。そのような媒体には、そのような教材を提供するインターネットサイトのアドレスが含まれてよい。

【0152】

生物学的方法には、抗体のタンパク質との特異的免疫学的結合は、直接的または間接的に検出されることができる。直接標識としては、抗体と結合した蛍光または発行タグ、金属、染料、放射性核種などが挙げられる。ヨウ素−１２５（^１２５Ｉ）で標識した抗体を使用することができる。タンパク質マーカーに特異的な化学発光抗体を使用する化学発光アッセイは、タンパク質濃度の感受性の高い非放射性検出に適している。蛍光色素で標識した抗体も適している。蛍光色素の例としては、限定されるものではないが、ＤＡＰＩ、フルオレセイン、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８、Ｒ−フィコシアニン、Ｂ−フィコエリトリン、Ｒ−フィコエリトリン、ローダミン、テキサスレッド、およびリサミンが挙げられる。間接標識としては、当技術分野で周知の様々な酵素、例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、β−ガラクトシダーゼ、ウレアーゼなどが挙げられる。セイヨウワサビ−ペルオキシダーゼ検出系は、例えば、発色基質テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）とともに使用することができ、これは４５０ｎｍで検出可能な過酸化水素の存在下で可溶性生成物を生じる。アルカリホスファターゼ検出系は、例えば、発色基質ｐ−ニトロフェニルリン酸とともに使用することができ、これは４０５ｎｍで容易に検出可能な可溶性生成物を生じる。同様に、β−ガラクトシダーゼ検出系は、発色基質ｏ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＯＮＰＧ）とともに使用することができ、これは４１０ｎｍで検出可能な可溶性生成物を生じる。ウレアーゼ検出系は、尿素−ブロモクレゾールパープル（Ｓｉｇｍａ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ；ミズーリ州セントルイス）などの物質とともに使用することができる。

【0153】

直接または間接標識からのシグナルは、例えば、発色基質から色を検出する分光光度計；^１２５Ｉの検出のためのγカウンターなどの放射線を検出するための放射線カウンター；またはある特定の波長の光の存在下で蛍光を検出する蛍光光度計を用いて分析することができる。酵素結合抗体の検出には、ＥＭＡＸマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ；カリフォルニア州メンローパーク）などの分光光度計を製造業者の使用説明書に従って使用して定量分析を行うことができる。必要に応じて、本発明のアッセイは、自動化するかまたはロボットにより実施することができ、複数のサンプルからのシグナルを同時に検出することができる。一態様では、シグナルの量は、オートメーション化されたハイコンテンツな画像形成システムを用いて定量化することができる。ハイコンテンツな画像形成システムは、市販されている（例えば、ＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｉｎｃ．，カリフォルニア州サニーベール）。

【0154】

抗体は、多様な固相支持体、例えば磁気マトリックス粒子またはクロマトグラフィーマトリックス粒子など、アッセイプレート（例えば、マイクロタイターウェル）の表面、固体状の基板材料または膜（例えば、プラスチック、ナイロン、紙）の部分などの上に固定化することができる。アッセイストリップは、固相支持体上のアレイの１または複数の抗体をコーティングすることによって調製することができる。次に、このストリップを試験試料に浸漬し、洗浄および検出工程によって素早く処理して、測定可能なシグナル、例えば着色されたスポットなどを作成することができる。

【0155】

核酸発現レベルまたは遺伝子型の分析は、サザン分析、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、または、目的のコード配列の部分と相補的な核酸配列へのハイブリダイゼーションに基づく任意のその他の方法（例えば、スロットブロットハイブリダイゼーション）などの日常的な技術を用いて達成することができ、それらも本発明の範囲内である。適用できるＰＣＲ増幅技術は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．ａｎｄ Ｉｎｎｉｓ ｅｔ ａｌ．（前掲）に記載されている。一般的な核酸ハイブリダイゼーション方法は、Ａｎｄｅｒｓｏｎ，「Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ」，ＢＩＯＳ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９９に記載されている。複数の核酸配列（例えば、ゲノムＤＮＡ、ｍＲＮＡまたはｃＤＮＡ）の増幅またはハイブリダイゼーションも、マイクロアレイに配置されたｍＲＮＡまたはｃＤＮＡ配列から実施することができる。マイクロアレイ法は、一般に、Ｈａｒｄｉｍａｎ，「Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：Ｎｕｔｓ ＆ Ｂｏｌｔｓ」，ＤＮＡ Ｐｒｅｓｓ，２００３；およびＢａｌｄｉ ｅｔ ａｌ．，「ＤＮＡ Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ ａｎｄ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：Ｆｒｏｍ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｔｏ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ」，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２００２に記載されている。

【0156】

核酸発現レベルまたは遺伝子型の分析はまた、当技術分野で公知の技法を用いて実施することもでき、それには、限定されるものではないが、マイクロアレイ、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に基づく分析、配列分析、および電気泳動分析が含まれる。ＰＣＲに基づく分析の限定されない例としては、アプライドバイオシステムズより入手可能なＴａｑｍａｎ（登録商標）対立遺伝子識別アッセイが挙げられる。配列分析の限定されない例としては、マクサム−ギルバートシーケンシング、サンガーシーケンシング、毛細血管アレイＤＮＡシーケンシング、熱サイクルシーケンシング（Ｓｅａｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１３：６２６−６３３（１９９２））、固相シーケンシング（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，３：３９−４２（１９９２））、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間型質量分析などの質量分析を用いるシーケンシング（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ；Ｆｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１６：３８１−３８４（１９９８））、パイロシーケンシング（Ｒｏｎａｇｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８１：３６３−３６５（１９９８））、およびハイブリダイゼーションによるシーケンシング Ｃｈｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７４：６１０−６１４（１９９６）；Ｄｒｍａｎａｃ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６０：１６４９−１６５２（１９９３）；Ｄｒｍａｎａｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１６：５４−５８（１９９８）が挙げられる。電気泳動分析の限定されない例としては、アガロースまたはポリアクリルアミドゲル電気泳動などのスラブゲル電気泳動、キャピラリー電気泳動、および変性勾配ゲル電気泳動が挙げられる。一態様では、核酸変異体を検出するための方法としては、例えば、Ｔｈｉｒｄ Ｗａｖｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．製のＩＮＶＡＤＥＲ（登録商標）アッセイ、制限酵素断片長多型（ＲＦＬＰ）分析、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーション、ヘテロ二本鎖移動度分析、一本鎖コンフォメーション多型（ＳＳＣＰ）分析、一本鎖ヌクレオチドプライマー伸長（ＳＮＵＰＥ）、およびパイロシーケンシングが挙げられる。

【0157】

検出可能な部分は、本明細書に記載されるアッセイで使用することができる。幅広い種類の検出可能な部分は、必要とされる感受性、抗体との結合し易さ、安定性要件、ならびに利用可能な計測手段および処分規定に応じて標識を選択して、使用することができる。適した検出可能な部分の例としては、限定されるものではないが、放射性核種、蛍光色素（例えば、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、オレゴングリーン（商標）、ローダミン、テキサスレッド、テトラローダミンイソチオシアネート（ｔｅｔｒａｒｈｏｄｉｍｉｎｅ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙｎａｔｅ）（ＴＲＩＴＣ）、Ｃｙ３、Ｃｙ５など）、蛍光マーカー（例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、フィコエリトリンなど）、腫瘍関連プロテアーゼにより活性化される自己消光蛍光化合物、酵素（例えば、ルシフェラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼなど）、ナノ粒子、ビオチン、ジゴキシゲニン、および同類のものが挙げられる。

【0158】

分析は、多様な物理的形式で実行することができる。例えば、マイクロタイタープレートまたはオートメーションの使用を用いて、大量の試験試料の処理を促進することができ得る。

【0159】

あるいは、タンパク質または核酸発現のレベルを検出するために、抗体または核酸プローブを顕微鏡のスライドに固定化した被験試料に適用することができる。得られる抗体染色またはインサイツハイブリダイゼーションパターンは、当分野で公知の多様な光学顕微鏡または蛍光顕微鏡による方法のいずれかを用いて視覚化することができる。

【0160】

タンパク質または核酸の分析は、例えば、単独でまたは質量分析（例えば、ＭＡＬＤＩ／ＭＳ、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ、タンデムＭＳなど）と組み合わせて、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によっても実現することができる。

【0161】

合成方法
第５の実施形態では、本発明は、２−アシルアミノイミダゾールを選択的に調製する方法を提供し、該方法は、
Ｎ−一保護α−グアニジニルアルキン反応体を環化して３−Ｎ−保護イミダゾリジン−２−イミン生成物と４−環外オレフィンを形成する工程；および
２−アミノ位置で選択的アシル化して２−アシルアミノ生成物を形成する工程を含み；２−アシルアミノ生成物は、１−アシルおよび３−アシル位置異性体を実質的に含まない。一部の態様では、このサイクリング（ｃｙｃｌｉｎｇ）工程は、πルイス酸触媒を含む。

【0162】

第６の実施形態では、本発明は、２−アシルアミノイミダゾールを選択的に調製する方法を提供し、該方法は、
Ｎ−アシル化α−グアニジニルアルキン反応体を環化して２−アシルアミノイミダゾール生成物を形成する工程を含む。一部の態様では、この方法は強ブレンステッド塩基触媒を含む。

【0163】

第５または第６の実施形態の一態様では、方法は、３−Ｎ−保護２−アシルイミダゾリジン−２−イミンを脱保護して２−アシルイミダゾリジン−２−イミンを生成する工程をさらに含む。第５の実施形態のより具体的な態様では、方法は、２−アシルイミダゾリジン−２−イミンを異性化して２−アシルアミノイミダゾールを生成する工程をさらに含む。

【0164】

第５の実施形態の一態様では、方法は、３−Ｎ−保護イミダゾリジン−２−イミンを異性化して３−Ｎ−保護２−アミノイミダゾールを生成する工程をさらに含む。

【0165】

第５または第６の実施形態の一態様では、方法は、３−Ｎ−保護２−アシルアミノイミダゾールを脱保護して２−アシルアミノイミダゾールを生成する工程をさらに含む。

【0166】

第５または第６の実施形態の一態様では、３−Ｎ−保護基は、カルバメート系保護基である。より具体的な態様では、３−Ｎ−保護基はＣｂｚ基である。

【0167】

第５または第６の実施形態の一態様では、２−アシルアミノイミダゾールは、第１の実施形態またはその態様のいずれかの化合物である。

【0168】

任意の適したπルイス酸触媒を本発明の方法で使用することができる。一部の実施形態では、πルイス酸触媒は、遷移金属塩であり、該遷移金属は、銀、白金、パラジウム、ロジウム、水銀、およびガドリニウムを含む群から独立して選択される。

【0169】

適した銀塩の例としては、限定されるものではないが、酢酸銀；ビス（トリフルオロメタンスルホニル）イミド銀；臭化銀；炭酸銀；塩化銀；ジエチルジチオカルバミン酸銀；ヘキサフルオロアンチモン（Ｖ）酸銀；ヘキサフルオロリン酸銀；メタンスルホン酸銀；硝酸銀；過塩素酸銀；ｐ−トルエンスルホン酸銀；硫酸銀；テトラフルオロホウ酸銀；トリフルオロ酢酸銀；トリフルオロメタンスルホン酸銀（銀トリフラート）；フッ化銀（Ｉ）；酸化銀（Ｉ）；テトラキス（アセトニトリル）銀（Ｉ）テトラフルオロボレート；（１，５−シクロオクタジエン）（ヘキサフルオロアセチルアセトナト）銀（Ｉ）；２，６−ビス［（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）メチル］ピリジン銀（Ｉ）テトラフルオロボレート；ジシアノ銀酸カリウム；その水和物；およびその混合物が挙げられる。

【0170】

適したロジウム触媒の例としては、限定されるものではないが、（１，５−シクロオクタジエン）（８−キノリノラト）ロジウム（Ｉ）；（アセチルアセトナト）（１，５−シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）；（アセチルアセトナト）（ノルボルナジエン）ロジウム（Ｉ）；（アセチルアセトナト）ジカルボニルロジウム（Ｉ）；ヘキサフルオロアンチモン酸［（ビスアセトニトリル）（ノルボルナジエン）］ロジウム（Ｉ）；アセチルアセトナトビス（エチレン）ロジウム（Ｉ）；ビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２，５−ジエン−ロジウム（Ｉ）塩化物二量体；ヘキサフルオロアンチモン酸ビス（１，５−シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）；テトラフルオロホウ酸ビス（１，５−シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）；トリフルオロメタンスルホン酸ビス（１，５−シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）；テトラフルオロホウ酸ビス（ノルボルナジエン）ロジウム（Ｉ）；ビス（トリフェニルホスフィン）ロジウム（Ｉ）カルボニルクロライド；クロロ（１，５−シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）二量体；ペンタメチルシクロペンタジエニルロジウム（ＩＩＩ）塩化物二量体；ペンタメチルシクロペンタジエニルロジウム（ＩＩＩ）塩化物二量体；酢酸ロジウム（ＩＩ）；ヘプタフルオロ酪酸ロジウム（ＩＩ）二量体；ヘキサン酸ロジウム（ＩＩ）；オクタン酸ロジウム（ＩＩ）、二量体；トリフルオロ酢酸ロジウム（ＩＩ）二量体；トリメチル酢酸ロジウム（ＩＩ）、二量体；トリフェニル酢酸ロジウム（ＩＩ）二量体；ロジウム（ＩＩＩ）アセチルアセトナート；塩化ロジウム（ＩＩＩ）；酸化ロジウム（ＩＩＩ）；テトラロジウムドデカカルボニル；トリス（トリフェニルホスフィン）ロジウム（Ｉ）カルボニルヒドリド；塩化トリス（トリフェニルホスフィン）ロジウム（Ｉ）；その水和物；およびその混合物が挙げられる。

【0171】

適した白金触媒の例としては、限定されるものではないが、（１，５−シクロオクタジエン）ジメチル白金（ＩＩ）；（２，２’−ビピリジン）ジクロロ白金（ＩＩ）；二硝酸（エチレンジアミン）ヨード白金（ＩＩ）二量体；ビス（トリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィン）白金（０）；シス−ビス（アセトニトリル）ジクロロ白金（ＩＩ）；シス−ジクロロビス（ジエチルスルフィド）白金（ＩＩ）；シス−ジクロロビス（ジメチルスルホキシド）白金（ＩＩ）；シス−ジクロロビス（ピリジン）白金（ＩＩ）；シス−ジクロロビス（トリエチルホスフィン）白金（ＩＩ）；シス−ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）白金（ＩＩ）；ジクロロ（１，１０−フェナントロリン）白金（ＩＩ）；ジクロロ（１，２−ジアミノシクロヘキサン）白金（ＩＩ）；ジクロロ（１，５−シクロオクタジエン）白金（ＩＩ）；ジクロロ（ジシクロペンタジエニル）白金（ＩＩ）；ジクロロ（エチレンジアミン）白金（ＩＩ）；ジクロロ（ノルボルナジエン）白金（ＩＩ）；ジクロロビス（ジメチルスルフィド）白金（ＩＩ）；エチレンビス（トリフェニルホスフィン）白金（０）；アセチルアセトン酸白金（ＩＩ）；臭化白金（ＩＩ）；塩化白金（ＩＩ）；ヨウ化白金（ＩＩ）；塩化白金（ＩＶ）；酸化白金（ＩＶ）；ヘキサクロロ白金（ＩＶ）酸カリウム；トリクロロ（エチレン）白金（ＩＩ）酸カリウム；ヘキサヒドロキシ白金（ＩＶ）酸ナトリウム；塩化テトラアンミン白金（ＩＩ）；硝酸テトラアンミン白金（ＩＩ）；ヘキサクロロ白金（ＩＶ）酸テトラブチルアンモニウム；テトラキス（トリフェニルホスフィン）白金（０）；およびトランス−ジクロロビス（トリエチルホスフィン）白金（ＩＩ）；その水和物；およびその混合物が挙げられる。

【0172】

適したパラジウム触媒の例としては、限定されるものではないが、塩化アリルパラジウム（ＩＩ）二量体；トリフルオロ酢酸アリルパラジウム（ＩＩ）二量体；ビス（トリシクロヘキシルホスフィン）パラジウム（０）；ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロライド；クロロ（１，５−シクロオクタジエン）メチルパラジウム（ＩＩ）；ジブロモ（１，５−シクロオクタジエン）パラジウム（ＩＩ）；ジクロロビス（メチルジフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）；ピバル酸パラジウム；酢酸パラジウム（ＩＩ）；パラジウム（ＩＩ）アセチルアセトナート；臭化パラジウム（ＩＩ）；塩化パラジウム（ＩＩ）；シアン化物パラジウム（ＩＩ）；パラジウム（ＩＩ）ヘキサフルオロアセチルアセトナート；ヨウ化パラジウム（ＩＩ）；硝酸パラジウム（ＩＩ）；酸化パラジウム（ＩＩ）；プロピオン酸パラジウム（ＩＩ）；硫酸パラジウム（ＩＩ）；硫化パラジウム（ＩＩ）；トリフルオロ酢酸パラジウム（ＩＩ）；酢酸テトラアンミンパラジウム（ＩＩ）；テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）；トランス−ベンジル（クロロ）ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）；トランス−ジブロモビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）；トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）；その水和物；およびその混合物が挙げられる。

【0173】

適した水銀触媒の例としては、限定されるものではないが、塩化水銀（Ｉ）；硝酸水銀（Ｉ）；酢酸水銀（ＩＩ）；アミド塩化水銀（ＩＩ）；臭化水銀（ＩＩ）；塩化水銀（ＩＩ）；フッ化水銀（ＩＩ）；ヨウ素酸水銀（ＩＩ）；ヨウ化水銀（ＩＩ）；硝酸水銀（ＩＩ）；酸化水銀（ＩＩ）；硫酸水銀（ＩＩ）塩；チオシアン酸水銀（ＩＩ）；トリフルオロ酢酸水銀（ＩＩ）；トリフルオロメタンスルホン酸水銀（ＩＩ）；その水和物；およびその混合物が挙げられる。

【0174】

適したガドリニウム触媒の例としては、限定されるものではないが、酢酸ガドリニウム（ＩＩＩ）；ガドリニウム（ＩＩＩ）アセチルアセトナート；臭化ガドリニウム（ＩＩＩ）；炭酸ガドリニウム（ＩＩＩ）；塩化ガドリニウム（ＩＩＩ）；フッ化ガドリニウム（ＩＩＩ）；水酸化ガドリニウム（ＩＩＩ）；ヨウ化ガドリニウム（ＩＩＩ）；硝酸ガドリニウム（ＩＩＩ）；シュウ酸ガドリニウム（ＩＩＩ）；酸化ガドリニウム（ＩＩＩ）；硫酸ガドリニウム（ＩＩＩ）；トリフルオロメタンスルホン酸ガドリニウム（ＩＩＩ）；ガドリニウム（ＩＩＩ）トリス（イソプロポキシド）；トリス（シクロペンタジエニル）ガドリニウム（ＩＩＩ）；トリス（テトラメチルシクロペンタジエニル）ガドリニウム（ＩＩＩ）；トリス［Ｎ，Ｎ−ビス（トリメチルシリル）アミド］ガドリニウム（ＩＩＩ）；その水和物；およびその混合物が挙げられる。

【0175】

適した触媒はまた、四塩化チタン；二塩化亜鉛；五フッ化アンチモン；ならびに二塩化および四塩化スズも含む。その他の触媒を本発明の方法で使用することができ、それには、ＩｒＨＣｌ_２（Ｍｅ_２ＳＯ）_３；ＩｒＨＣｌ_２（ＣＯ）（ＰＰｈ_３）_２；ＩｒＨ_２Ｃｌ（ＰＰｈ_３）_３；ＩｒＨＣｌ_２（ＰＰｈ_３）_３；ＩｒＨ_３（ＰＰｈ_３）_２；ＩｒＨ_５（ＰＰｈ_３）_３；ＩｒＣｌ（ＣＯ）（ＰＰｈ_３）_２；ＩｒＢｒ（ＣＯ）（ＰＰｈ_３）_２；ＩｒＩ（ＣＯ）（ＰＰｈ_３）_２；ＩｒＨ（ＣＯ）（ＰＰｈ_３）_３；ＩｒＨ（ＣＯＭＰＰｈ_３）_２；ＩｒＣｌ（Ｃ_８Ｈ_１２）ＰＰｈ_３；ＩｒＨ［Ｐ（ＯＰｈ）_３］_４；Ｏｓ（ＣＦ_３ＣＯ_２）（ＣＯ）（ＰＰｈ_３）_２；ＯｓＨＣｌ（ＰＰｈ_３）_３；ＯｓＨ（ＣＯ）Ｃｌ（ＰＰｈ_３）_３；ＦｅＣｌ_２（ＰＰｈ_３）_２；ＣｏＣｌ_２（ＰＰｈ_３）_２；ＮｉＣｌ_２（Ｐｎ−Ｂｕ_３）_２；ＲｅＣｌ_５；およびＣｏＨ［Ｐ（ＯＰｈ）_３］_３；ＲｕＣｌ_２（ＰＰｈ_３）_４；ＲｕＨ_２（ＰＰｈ_３）_４；ＲｕＨ_２（ＣＯ）（ＰＰｈ_３）_３；ＲｕＨ（ＣＯ）Ｃｌ（ＰＰｈ_３）_３；ＲｕＨ（ＣＦ_３ＣＯ_２）（ＣＯ）（ＰＰｈ_３）_２；ＲｕＣｌ_２（ＰＰｈ_３）_４；ＲｕＣｌ_３；などが挙げられる。

【0176】

一部の実施形態では、πルイス酸触媒は、塩化銀、硝酸銀、銀トリフラート、およびヘキサフルオロリン酸（ｈｅｘａｆｌｕｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）銀を含む群から選択される。一部の実施形態では、ルイス酸触媒は硝酸銀である。

【0177】

任意の適した塩基を本発明の方法で使用することができる。適した塩基の例としては、金属ハロゲン化物（例えば、水素化ナトリウムまたはカリウム）が挙げられる。その他の塩基も発明の方法において適し得、それには、ナトリウムヘキサメチルジシラジド（ＮａＨＭＤＳ）またはその他の強塩基（すなわち、ｐＫ_ａ１５またはそれよりも大きい、ｐＫ_ａ１８またはそれよりも大きい、ｐＫ_ａ２５またはそれよりも大きい、あるいはｐＫ_ａ３０またはそれよりも大きい共役酸をもつ塩基、ここで「より大きい」ことは、より弱い共役酸であることを示す）、特に非求核性の塩基が含まれる。２以上の塩基の組合せを使用することができる。

【0178】

任意の適した量の触媒を本発明の方法で使用することができる。一般に、式ＩＩの出発物質に関して準化学量論量の触媒を反応に使用する。つまり、反応混合物中の触媒のモル数は、反応混合物中の出発物質のモル数よりも少ない。触媒と出発物質のモル比は、通常、１：１未満、例えば０．９：１、０．８：１、０．７：１、０．６：１、０．５：１、０．４：１、０．３５：１、０．３：１、０．２５：１、０．２：１、０．１５：１、または０．１：１などである。一部の実施形態では、触媒と出発物質のモル比は、０．１：１未満、例えば０．０９：１、０．０８：１、０．０７：１、０．０６：１、０．０５：１、０．０４：１、０．０３：１、０．０２：１、または０．０１：１などである。一部の実施形態では、触媒と出発物質のモル比は、０．０１：１未満、例えば０．００９：１、０．００８：１、０．００７：１、０．００６：１、０．００５：１、０．００４：１、０．００３：１、０．００２：１、または０．００１：１などである。当業者は、本明細書に記載されるモル比が、モル％の値として表されることもでき、モル比からモル％の値を導く方法を知っていることを認めるであろう。

【0179】

環化反応は、本発明の方法において任意の適した温度で実行することができる。一般に、反応は約１０℃〜約２００℃の間の範囲の温度で実行される。反応は、例えば、約１０℃〜約１００℃、または約１０℃〜約４０℃、または約１５℃〜約１５０℃、または約１５℃〜約３５℃、または約１５℃〜約２５℃で実行されることができる。反応は、約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、または１５５℃未満の温度で実行されることができる。その他の反応温度を本発明の方法で使用することができ、それは環化反応に使用される特定の化合物に一部依存する。

【0180】

任意の適した溶媒または溶媒の組合せを本発明の方法で使用することができる。適した溶媒の例としては、限定されるものではないが、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、酢酸エチル、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタン、１，１−ジクロロエタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチル ２−ピロリドン、酢酸、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、アセトニトリル、プロピオニトリル、１，４−ジオキサン、スルホラン、１，２−ジメチオキシエタン、およびその組合せが挙げられる。一部の実施形態では、反応混合物は、アセトニトリルを含む。

【0181】

任意の適した反応時間を本発明の方法で使用することができる。一般に、反応は、出発物質の消費および目的生成物への変換に十分な時間、または出発物質の変換が停止するまで（例えば、反応触媒の分解のために）実行させる。反応は一般に、２、３分から数時間に及ぶ任意の時間実行させる。反応は、例えば、５分〜４８時間の間のどこかの時間実行することができる。反応は、約２０分間、または約４０分間、または約６０分間実行することができる。反応は、約１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、３０、３６、４２、または４８時間実行することができる。一部の実施形態では、反応は２４時間未満実行される。一部の実施形態では、反応は１２時間未満実行される。一部の実施形態では、反応は１０時間未満実行される。使用する特定の触媒または式ＩＩの化合物によって、その他の反応時間が本発明の方法で使用され得る。

【0182】

設計は単純であるが、２−アミノイミダゾールを選択的にアシル化することは非常に困難である。Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２０１４，８３，７４−８３。イミノ−互変異性体が優勢であることにより、予期されるＮ^３−アシル化よりもＮ^２−アシル化が開始され、アシル基により酸性化される生成物によって、２回目のアシル化イベントは容易であり、ジアシル化生成物をもたらす。本発明の一態様では、モノ−Ｎ−アシルプロパルギルグアニジンの位置選択的環化を用いて選択性を実現した。モノ−Ｃｂｚグアニジンを使用する場合、Ａｇ（Ｉ）に媒介される環化は、専らイミノ窒素によって進行して、Ｎ^３−アシル−２−アミノイミダゾールを得る。Ｃｂｚ基のアシル化および還元切断により、Ｎ^２−アシル−２−アミノイミダゾールを独占的な生成物として良好な収量で得た。

【0183】

下の表中の化合物は、本明細書に記載される方法を用いて作成した：

【表1】

【表2】

【0184】

本明細書に記載される実施例および実施形態は、説明目的だけのためのものであり、それを考慮して様々な修正または変更が当業者に示唆され、本願の精神および範囲ならびに添付される特許請求の範囲内に含まれることは当然理解される。本明細書に引用される全ての刊行物、特許、および特許出願は、あらゆる目的においてその全文が参照により本明細書に援用される。

【実施例】

【0185】

実施例１：Ｎ−アリル−１−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−４−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−メチルブタ−３−イン−２−アミン（２）の調製

【化24】

撹拌棒を装備した５００ｍＬ圧力フラスコに、４−メトキシフェニルアセチレン（５．３５ｍＬ、４０．５ｍｍｏｌ）、Ｎ−アリルメチルアミン（３．４６ｍＬ、３６．４ｍｍｏｌ）、ｐ−ベンジルオキシ−フェニルアセトアルデヒド（９．１６ｇ、４０．５ｍｍｏｌ）、ＣｕＢｒ（０．５２ｇ、３．６４ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（１４０ｍＬ）および１ｇのオーブン乾燥させた４Åモレキュラーシーブスを添加した。フラスコを８０℃で２４時間加熱した後、室温まで放冷した。混合物をセライト珪藻土で濾過し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）ですすいだ。有機層を飽和ＮａＨＣＯ_３（５００ｍＬ）およびブライン（５００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。濾過後、有機層を濃縮し、４：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、２を暗赤色の油状物質として得た（１０．８ｇ、６５％）。Ｒ_ｆ＝０．３５（４：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ７．３７−７．２７（ｍ，４Ｈ），７．２４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，３Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．７３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），５．７８（ｄｄｔ，Ｊ＝６．４，１０．７，１７．１Ｈｚ，１Ｈ），５．１４（ｄｄ，Ｊ＝１．５，１７．１Ｈｚ，１Ｈ），５．０５（ｄｄ，Ｊ＝２．０，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｓ，２Ｈ），３．７２（ｄｄ，Ｊ＝６．３，８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），３．１５（ｄｄ，Ｊ＝５．９，１３．７Ｈｚ，１Ｈ），３．０３（ｄｄ，Ｊ＝７．３，１３．５Ｈｚ，１Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）：δ１５９．２，１５７．４，１３７．２，１３６．０，１３３．０ １３１．２，１３０．４，１２８．５，１２７．８，１２７．４，１１７．６，１１５．５，１１４．５，１１３．８，８８．５，８５．０，６９．９，６５．８，５８．４，５８．２，５５．２，３９．５，３７．７，１５．２ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）２９５４、１６０６、１５０８、１４５４、１４２０、１３８１、１２８９、１２４３、１１７３、１１０６、１０２６、９２１、８３１、８０７、７９１、７３２、６９６ｃｍ^−１。

【0186】

実施例２：１−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−４−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−メチルブタ−３−イン−２−アミン（３）の調製

【化25】

撹拌棒を装備した５００ｍＬ丸底フラスコに、２（１０．７ｇ、２６．０ｍｍｏｌ）、チオサリチル酸（８．０ｇ、５２．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（０．６ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）、およびＣＨ_２Ｃｌ_２（２６０ｍＬ）を添加した。反応物をＮ_２下、室温で一晩撹拌させた。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に再溶解した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ_３（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。濾過後、有機層を濃縮し、１００％ＥｔＯＡｃ（０．５％ＮＥｔ_３を含む）を用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、３を橙色の油状物質として得た（６．６ｇ、９１％）。
Ｒ_ｆ＝０．３５（１００％ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．４５（ｄ，Ｊ＝７．３，２Ｈ），７．４０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，３Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），５．０６（ｓ，２Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．７２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），２．９８（ｄｄ，Ｊ＝２．４，９．４Ｈｚ，２Ｈ），２．５５（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１２５ＭＨｚ）：δ１５９．４，１５７．７，１３７．２，１３３．０，１３０．８，１２８．７，１２８．０，１２７．６，１１５．５，１１４．７，８８．７，８４．６，７０．１，５５．３，５３．９，４１．３，３４．２ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）２９３３、１６０６、１５０８、１４５４、１４４１、１３８０、１２８９、１２４４、１１７３、１１０７、１０２７、８３１、７３７、６９７、６６８ｃｍ^−１。計算値Ｃ_２５Ｈ_２６ＮＯ_２ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）３７２．１９６４、測定値３７２．１９６６。

【0187】

実施例３：Ｃｂｚ−保護グアニジン４の調製

【化26】

撹拌棒を装備した２５０ｍＬ丸底フラスコに、ＴＭＳＣｌ（１．６５ｍＬ、１３．０ｍｍｏｌ）、ベンジルオキシカルボニルシアナミドカリウム塩（２．５８ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）および５０ｍＬアセトニトリルを添加した。反応混合物を、Ｎ_２下で１０分間撹拌させた。３（４．８ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１５ｍｏｌ）の溶液を懸濁液に添加し、反応物を１時間撹拌させた。反応混合物を元の体積のほぼ４分の１に濃縮した後、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈した。有機層を飽和Ｎａ_２ＣＯ_３（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。濾過後、有機層を濃縮し、１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、４を黄色の泡沫として得た（５．９１ｇ、９０％）。Ｒ_ｆ＝０．４２（１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．４４（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，４Ｈ），７．４２−７．２７（ｍ，８Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．０２（ｂｓ，２Ｈ），５．１６（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，２Ｈ），５．０３（ｓ，２Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．０４（ｄｄ，Ｊ＝７．３，１３．２Ｈｚ，１Ｈ），２．９５（ｄｄ，Ｊ＝６．４，１３．２Ｈｚ，１Ｈ），２．９０（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１２５ＭＨｚ）：δ１７３．１，１６４．０，１６０．７，１５９．８，１５７．９，１３７．８，１３７．１，１３３．２，１３０．７，１２９．１，１２８．７，１２８．４，１２８．０，１２７．９，１２７．７，１１４．８，１１４．０，８６．１，８４．９，７０．１，６６．８，５５．４，５０．２，３９．７ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）２９３４、１６４２、１５８９、１５３６、１５０８、１４４０、１３７８、１２８０、１２４４、１１７２、１１５２、１１０７、１０２６、９０９、８３１、７９９、７３２、６９６ｃｍ^−１。計算値Ｃ_３４Ｈ_３４Ｎ_３Ｏ_４ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）５４８．２５４９、測定値５４８．２５５６。

【0188】

実施例４：（Ｚ）−ベンジル ４−（４−（ベンジルオキシ）ベンジル）−２−イミノ−５−（４−メトキシベンジリデン）−３−メチルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（５）の調製

【化27】

撹拌棒を装備した２５ｍＬ丸底フラスコに、４（０．５１ｇ、０．９１ｍｍｏｌ）、ＡｇＮＯ_３（０．０１６ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（９．１ｍＬ）を添加した。フラスコをアルミニウム箔で包み、反応物をＮ_２下、室温で一晩撹拌させた。反応混合物を濃縮し、ＣＨ_２Ｃｌ_２中５％ＭｅＯＨを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、５を淡黄色の泡沫として得た（０．４３ｇ、８７％）。Ｒ_ｆ＝０．２８（ＣＨ_２Ｃｌ_２中５％ＭｅＯＨ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ７．４６−７．２０（ｍ，８Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．９４−６．８７（ｍ，４Ｈ），６．７４（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，２Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），５．３９（ｓ，１Ｈ），４．９９（ｓ，２Ｈ），４．９１（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．２９（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｄｄ，Ｊ＝３．６，４．１，６．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．０８（ｓ，３Ｈ），２．９９（ｄｄ，Ｊ＝４．２，１３．７Ｈｚ，１Ｈ），２．７３（ｄｄ，Ｊ＝７．３，１３．６Ｈｚ，１Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１２５ＭＨｚ）：δ１５８．７，１５７．９，１５４．０，１５１．２，１３７．１，１３４．２，１３１．１，１２９．５，１２８．８，１２８．７，１２８．５，１２８．４，１２８．３，１２８．１，１２７．５，１１４．８，１１３．８，１１３．４，７０．０，６８．６，６５．０，５５．４，３７．８ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）２９２３、２８５１、１７３４、１６０７、１５１０、１４５４、１３８２、１２９９、１２４７、１１７８、１０３３、８３０、７３８、６９８ｃｍ^−１。計算値Ｃ_３４Ｈ_３４Ｎ_３Ｏ_４ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）５４８．２５４９、測定値５４８．２５５５。

【0189】

実施例５：ナアミンＡ（６）の調製

【化28】

撹拌棒を装備した１０ｍＬ丸底フラスコに、５（０．２５ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＨ）_２炭素（２０重量％、０．０３２ｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）およびＭｅＯＨ（４．６ｍＬ）を添加した。Ｈ_２バルーンを取り付け、反応物を一晩撹拌させた。反応混合物をセライト珪藻土で濾過し、ジクロロメタンですすいだ。反応混合物を淡黄色の固体（０．１２３ｇ、８４％）に濃縮し、ナアミンＡ（６）を得、さらなる精製を行わずに使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，５００ＭＨｚ）：δ７．０８（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），６．６４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．６９（ｓ，２Ｈ），３．０８（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，１２５ＭＨｚ）：δ１６８．５，１５７．８，１５６．２，１４８．９，１３４．５，１３２．４，１３０．６，１３０．１，１２９．５，１２０．３，１１５．８，１１４．０，５５．６，３２．７，２９．４，２８．６ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）２９２３、２８５２、１６１０、１５１１、１４５７、１３６９、１２４５、１１７５、１０３５、８１４、７７３、６６８、６５２ｃｍ^−１。計算値Ｃ_１９Ｈ_２２Ｎ_３Ｏ_２ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）３２４．１７１２、測定値３２４．１７１４。

【0190】

実施例６：ナアミジンＡ（７）の調製

【化29】

ナアミジンＡ（１）を、Ｏｈｔａ ｅｔ ａｌ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ ２０００，５３（９），１９３９−１９５５の手順に従って調製した。撹拌棒および還流冷却器を装備した５０ｍＬ丸底二口フラスコに、１−メチルパラバン酸（２．０４ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（１４．５ｍＬ）を添加した。ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（４．９ｍＬ、１９．９ｍｍｏｌ）をシリンジを介して添加し、反応混合物を２時間還流させた。反応フラスコを開放された大気にさらすことなく、溶媒を減圧下で除去した。反応混合物をＮ_２下に置き、トルエン（１０．５ｍＬ）で希釈した。撹拌棒および還流冷却器を装備した、６（１．０３ｇ、３．２ｍｍｏｌ）を含有する５０ｍＬ丸底二口フラスコに溶液をＮ_２雰囲気下で移した。反応混合物を１６時間還流させた。反応物を室温まで放冷し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈した後、濃縮させるための１００ｍＬ丸底フラスコに移した。混合物を、８５：１５ ＰｈＭｅ／ＭｅＯＨと１％ＮＥｔ_３を用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、７を明るい黄色の固体として得た（１．０５ｇ、７６％）。Ｒ_ｆ＝０．４（８５：１５ ＰｈＭｅ／ＭｅＯＨ＋１％ＮＥｔ_３）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．１１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．７３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．８７（ｓ，４Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．４０（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１２５ＭＨｚ）：δ１６３．３，１５８．５，１５７．０，１５５．２，１４６．７，１３４．７，１３１．３，１２９．５，１２９．３，１２８．７，１２７．０，１１５．０，１１４．３，５５．５，３２．１，３０．０，２８．８，２５．０ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３３３５、１７８９、１７３６、１６６５、１６１２、１５６９、１５１２、１４８６、１４４５、１３９２、１３０３、１２４７、１１７４、１１５３、１０３５、８２１、７７６、７２７、６０６ｃｍ^−１。計算値Ｃ_２３Ｈ_２４Ｎ_５Ｏ_４ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）４３４．１８２８、測定値４３４．１８４０。

【0191】

実施例７：（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル ２−（ベンゾイルイミノ）−４−（４−（ベンジルオキシ）ベンジル）−５−（４−メトキシベンジリデン）−３−メチルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（８）の調製

【化30】

撹拌棒を装備した２５ｍＬ丸底フラスコに、５（０．５ｇ、０．９１ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ_３（０．２５ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ）、塩化ベンゾイル（０．１６ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（９．１ｍＬ）を添加した。反応物を１時間撹拌させた。反応混合物を濃縮し、１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、８を淡黄色の泡沫として得た（０．５４ｇ、９２％）。Ｒ_ｆ＝０．４３（１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ８．１２（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），７．５１−７．１１（ｍ，１３Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．７５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），５．４５（ｓ，１Ｈ），５．０１（ｓ，２Ｈ），４．８０（ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ），４．４２（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｄｄ，Ｊ＝４．１，６．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．１４（ｓ，３Ｈ），３．０３（ｄｄ，Ｊ＝４．３，１３．５Ｈｚ，１Ｈ），２．７８（ｄｄ，Ｊ＝７．６，１３．５Ｈｚ，１Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）：δ１７５，６，１５８．７，１５７．９，１５１．９，１４９．１，１３７．３，１３７．０，１３４．５，１３１．４，１３１．１，１２９．７，１２９．３，１２８，７，１２８．６，１２８．２，１２８．１，１２８．０，１２７．８，１２７．５，１２７．１，１１７．４，１１４．８，１１３．７，７０．０，６８．７，６４．６，５５．３，３７．９，３１．０ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３０３３、２９３３、１７４６、１６４７、１６０７、１５１１、１４５５、１３７９、１３１５、１２８２、１２４８、１１７８、１０７５、１０３７、１０２４、８６６、８２６、７３９、７１３、６９７ｃｍ^−１。計算値Ｃ_４１Ｈ_３７Ｎ_３Ｏ_５ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）６７４．２６３１、測定値６７４．２６３２。

【0192】

実施例８：（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル ４−（４−（ベンジルオキシ）ベンジル）−２−（（２−フルオロ−ベンゾイル）イミノ）−５−（４−メトキシベンジリデン）−３−メチルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（９）の調製

【化31】

撹拌棒を装備した２５ｍＬ丸底フラスコに、５（０．６４ｇ、１．２ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ_３（０．３３ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）、２−フルオロベンゾイルクロライド（０．１６ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（１２ｍＬ）を添加した。反応物を１時間撹拌させた。反応混合物を濃縮し、１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、９を黄色の油状物質として得た（０．７１ｇ、８９％）。Ｒ_ｆ＝０．４２（１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ７．９１（ｄｔ，Ｊ＝２．０，７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４４−７．０１（ｍ，１１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，４Ｈ），６．８５（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．７７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．６６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），５．４６（ｓ，１Ｈ），５．００（ｓ，２Ｈ），４．８３（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．４６（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），４．１１（ｄｄ，Ｊ＝３．４，７．３Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．１５（ｓ，３Ｈ），３．００（ｄｄ，Ｊ＝４．４，１３．７Ｈｚ，１Ｈ），２．７８（ｄｄ，Ｊ＝７．７，１３．７Ｈｚ，１Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）：δ１７２．７，１６３．０，１５９．７，１５８．８，１５８．０，１５１．９，１４９．１，１３７．０，１３４．４，１３２．６，１３２．４，１３２．３，１３１．１，１２９．５，１２８．７，１２８．３，１２８．２，１２７．７，１２７．５，１２７．０，１２３．７，１１７．４，１１６．６，１１６．３，１１４．９，１１３．７，７０．１，６８．９，６４．６，５５．３，３７．９，３１．０ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３０３３、２９３０、１７４３、１５９８、１５１０、１４８３、１４５２、１４０７、１３７９、１３１４、１２８２、１２４６、１１７７、１１１６、１０２９、９０９、８６２、８１７、７５６、７３３、６９６ｃｍ^−１。
計算値Ｃ_４１Ｈ_３６Ｎ_３Ｏ_５Ｆ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）６９２．２５３７、測定値６９２．２５４５。

【0193】

実施例９：（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル ４−（４−（ベンジルオキシ）ベンジル）−２−（（２，４−ジクロロ−ベンゾイル）イミノ）−５−（４−メトキシベンジリデン）−３−メチルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（１０）の調製

【化32】

撹拌棒を装備した５ｍＬ丸底フラスコに、５（０．０５ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ_３（０．０２５ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）、２，４−ジクロロベンゾイルクロライド（０．０１７ｍＬ、０．１４ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（０．９ｍＬ）を添加した。反応物を１時間撹拌させた。反応混合物を濃縮し、２：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、１０を黄色の油状物質として得た（０．０５４ｇ、８６％）。Ｒ_ｆ＝０．２６（２：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ７．７６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４４−７．１４（ｍ，１０Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），６．７７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），５．５４（ｓ，１Ｈ），５．００（ｓ，２Ｈ），４．７０（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．４８（ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１５（ｄｄ，Ｊ＝３．９，６．３Ｈｚ，１Ｈ），３．３８（ｓ，３Ｈ），３．１６（ｓ，３Ｈ），３．００（ｄｄ，Ｊ＝３．９，１３．７Ｈｚ，１Ｈ），２．８２（ｄｄ，Ｊ＝６．８，１３．７Ｈｚ，１Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）：δ１７３．３，１５８．９，１５８．０，１５２．７，１３７．０，１３５．９，１３５．７，１３４．２，１３３．４，１３３．２，１３１．０，１３０．１，１２９．５，１２９．１，１２８．８，１２８．７，１２８．３，１２８．２，１２８．１，１２７．５，１２６．７，１２６．６，１１７．６，１１４．９，１１３．７，７０．０，６９．０，６４．７，５５．２，３７．８，３１．１ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３０３２、２９３１、１７４３、１５８２、１５１０、１４５５、１３７５、１２８４、１２４７、１１７７、１１００、１０３０、９０９、８６２、８３１、７５７、７３４、６９６ｃｍ^−１。計算値Ｃ_４１Ｈ_３５Ｎ_３Ｏ_５Ｃｌ_２ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）７４２．１８５１、測定値７４２．１８６８。

【0194】

実施例１０：（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル ４−（４−（ベンジルオキシ）ベンジル）−５−（４−メトキシ−ベンジリデン）−３−メチル−２−（（チアゾール−２−カルボニル）イミノ）イミダゾリジン−１−カルボキシレート（１１）の調製

【化33】

撹拌棒を装備した５ｍＬ丸底フラスコに、５（０．０５ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ_３（０．０２５ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）、１，３−チアゾールベンゾイルクロライド（０．０２ｇ、０．１４ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（０．９ｍＬ）を添加した。反応物を１時間撹拌させた。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ中５％ＭｅＯＨを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、１１を黄色の油状物質として得た（０．０５４ｇ、９２％）。Ｒ_ｆ＝０．５８（ＥｔＯＡｃ中５％ＭｅＯＨ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．９１（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝２．９，１Ｈ），７．４４−７．２９（ｍ，５Ｈ），７．２１（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．９６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２Ｈ），６．７７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），５．３８（ｓ，１Ｈ），５．００（ｓ，２Ｈ），４．８７（ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３９（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．１２（ｄｄ，Ｊ＝４．４，７．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），３．０４（ｄｄ，Ｊ＝４．９，１３．７Ｈｚ，１Ｈ），２．７３（ｄｄ，Ｊ＝８．８，１３．７Ｈｚ，１Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１２５ＭＨｚ）：δ１７３．１，１６７．４，１６７．１，１５８．８，１５８．０，１５３．６，１４９．０，１４４．２，１３７．０，１３４．２，１３１．１，１２９．５，１２８．９，１２８．７，１２８．３，１２８．２，１２８．１，１２７．７，１２７．５，１２６．９，１２４．１，１１７．６，１１４．９，１１３．７，７０．０，６９．０，６５．０，５５．３，３７．７，３１．２ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３０３２、２９３２、１７４１、１５９４、１５１０、１４８９、１４５４、１３９７、１３８０、１２８１、１２３６、１１７６、１０７６、１０２６、９０８、８６３、８４７、８２１、７２７、６９６、６４４、６０９ｃｍ^−１。

【0195】

実施例１１：（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル ４−（４−（ベンジルオキシ）ベンジル）−２−（イソブチリルイミノ）−５−（４−メトキシベンジリデン）−３−メチルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（１２）の調製

【化34】

撹拌棒を装備した５ｍＬ丸底フラスコに、５（０．０５ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ_３（０．０２５ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）、イソブチリルクロライド（０．０１４ｍＬ、０．１４ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（０．９ｍＬ）を添加した。反応物を１時間撹拌させた。反応混合物を濃縮し、１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、１２を黄色の油状物質として得た（０．０４４ｇ、８７％）。Ｒ_ｆ＝０．３２（１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．６４−７．３７（ｍ，１０Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），６．９６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），５．６０（ｓ，１Ｈ），５．２１（ｓ，２Ｈ），５．０８（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．７１（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．２０（ｄｄ，Ｊ＝３．９，６．８Ｈｚ，１Ｈ），３．９７（ｓ，３Ｈ），３．２４（ｓ，３Ｈ），３．１８（ｄｄ，Ｊ＝４．４，１３．７Ｈｚ，１Ｈ），２．９３（ｄｄ，Ｊ＝７．３，１３．２Ｈｚ，１Ｈ），２．８４（ｓｅｐ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），１．４４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．３９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）：δ１８８．０，１５８．７，１５７．９，１５０．３，１４９．２，１３７．０，１３４．．６，１３１．０，１２９．５，１２９．４，１２８．７，１２８．６，１２８．２，１２８．０，１２７．９，１２７．４，１２７．２，１１７．０，１１４．８，１１３．７，７０．０，６８．６，６４．６，５５．２，３８．６，３７．９，３０．８，２０．１ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３０３３、２９６４、２９２９、１７４５、１６６３、１６０７、１４５５、１３７９、１２７３、１２４９、１１７９、１１２３、１０７７、１０３７、９２３、８６４、８２６、７３８、６９７ｃｍ^−１。
計算値Ｃ_３８Ｈ_３９Ｎ_３Ｏ_５ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）６４０．２７８７、測定値６４０．２７７５。

【0196】

実施例１２：（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル ４−（４−（ベンジルオキシ）ベンジル）−５−（４−メトキシ−ベンジリデン）−３−メチル−２−（（２−メチルブタノイル）イミノ）イミダゾリジン−１−カルボキシレート（１３）の調製

【化35】

撹拌棒を装備した５ｍＬ丸底フラスコに、５（０．０５ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ_３（０．０２５ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）、２−メチルブチリルクロライド（０．０１７ｍＬ、０．１４ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（０．９ｍＬ）を添加した。反応物を１時間撹拌させた。反応混合物を濃縮し、１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、１３を黄色の油状物質として得た（０．０４９ｇ、８５％）。Ｒ_ｆ＝０．４４（１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．４４−７．１７（ｍ，８Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．９４（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），６．７５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），５．３９（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），５．００（ｓ，２Ｈ），４．８７（ｄｄ，Ｊ＝２．３，１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．５１（ｄｄ，Ｊ＝３．８，１２．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９９（ｐ，Ｊ＝３．７，１Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．０３（ｓ，３Ｈ），２．９７（ｄｄ，Ｊ＝４．４，１３．５Ｈｚ，１Ｈ），２．７２（ｍ，１Ｈ），２．４６（ｄｄｑ，Ｊ＝６．９，６．８，５．６，７．０Ｈｚ，１Ｈ），１．８３（ｍ，１Ｈ），１．５１（ｍ，１Ｈ），１．１８（ｄｄ，Ｊ＝６．９，７．０，３Ｈ），０．９７（ｄｔ，Ｊ＝４．０，７．４，７．６Ｈｚ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）：δ１８７．５，１５８．９，１５８．０，１５１．１，１５０．７，１４９．４，１３７．２，１３４．７，１３１．２，１２９．７，１２８．８，１２８．７，１２８．４，１２８．２，１２８．０，１２７．６，１２７．４，１２７．３，１１７．２，１１４．９，１１３．８，７０．１，６８．８，６４．８，５５．４，４５．９，４５．５，３８．１，３１．１，２７．７，２７．５，１７．２，１６．４，１２．２，１２．０。ＩＲ（薄膜）２９６３、２９３１、２８７３、１７４６、１６５３、１６０７、１５１１、１４５６、１３７８、１２４９、１１７９、１１１９、１０７７、１０３９、８２７、７４１、６９６ｃｍ^−１。計算値Ｃ_３９Ｈ_４１Ｎ_３Ｏ_５ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）６５４．２９４４、測定値６５４．２９４１。

【0197】

実施例１３：（Ｅ）−Ｎ−（５−（４−ヒドロキシベンジル）−４−（４−メトキシベンジル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）イソブチルアミド（１４）

【化36】

撹拌棒を装備した５ｍＬ丸底フラスコに、１２（０．０５ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ_２（０．０２５ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）およびメタノール（０．９ｍＬ）を添加した。反応物をＨ２雰囲気バルーン下で一晩撹拌させた。反応混合物をセライト珪藻土で濾過し、さらなるメタノールですすいだ。溶媒を除去し、混合物をジクロロメタンに溶かした。有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３、次いでブラインで洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させた後、濃縮した。粗生成物をメタノールでトリチュレートすることにより精製し、メタノールに溶かし、生成物をトリチュレーションによって単離して灰白色の固体を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，３００ＭＨｚ）：δ７．０９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），６．７５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．６４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），３．８６（ｓ，２Ｈ），３．８０（ｓ，２Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．１６（ｓ，３Ｈ），２．６３（ｓｅｐ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）ｐｐｍ；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，７５ＭＨｚ）：δ１７０．５，１５７．１，１３０．５，１３０．１，１１６．４，１１４．７，５５．７，３６．１，３２．９，３０．６，２９．３，１９．７ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３２７４、２９８６、２４７２、１６７０、１６１１、１５１０、１４６５、１４０４、１３０１、１２５５、１１７５、１１０２、１０３２、９７３、８１６ｃｍ^−１。

【0198】

実施例１４：（Ｅ）−Ｎ−（５−（４−ヒドロキシベンジル）−４−（４−メトキシベンジル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−メチルブタンアミド（１５）の調製

【化37】

撹拌棒を装備した５ｍＬ丸底フラスコに、１２（０．０５ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ_２（０．０２５ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）およびメタノール（０．９ｍＬ）を添加した。反応物をＨ２雰囲気バルーン下で一晩撹拌させた。反応混合物をセライトで濾過し、さらなるメタノールですすいだ。溶媒を除去し、混合物をクロロホルムに溶かした。有機層を、１０％ＮａＨＣＯ_３、次いでブラインで洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させた後、濃縮した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させた後、濃縮して、１５を黄色の油状物質として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，３００ＭＨｚ）：δ７．０９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．６４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），４．５９（ｓ，１Ｈ），３．８７（ｓ，２Ｈ），３．８１（ｓ，２Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．１８（ｓ，３Ｈ），２．４４（ｓｅｘｔｅｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），１．７１（ｍ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），１．４８（ｍ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．９７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，７５ＭＨｚ）：δ１７０．５，１５９．５，１５７．０，１３０．５，１３０．１，１１６．４，１１４．７，５５．７，４３．６，３２．９，３０．８，２９．３，２８．２，１７．９，１２．３ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３３５７、２９６５、２４８６、２０７６、１６７０、１６５３、１６３５、１６１２、１５５８、１５１０、１４５８、１４０５、１３０１、１２４５、１１７５、１１１８、１０３３、９７１、８１６ｃｍ^−１。

【0199】

実施例１５：３成分カップリングの一般手順

【化38】

磁気撹拌子を含有する２５０ｍＬ高圧フラスコ内に、ベンズアルデヒド（３．１ｇ、２８．９ｍｍｏｌ）、フェニルアセチレン（２．９５ｇ、２８．９ｍｍｏｌ）、Ｎ−アリルメチルアミン（１．８８ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）、オーブン乾燥したモレキュラーシーブス（グレード５６４、３Å、８〜１２メッシュ）（約２ｇ）およびアセトニトリル（２００ｍＬ）を添加した。フラスコを密封し、８０℃に予熱した油浴に２４時間入れた。反応フラスコを油浴から取り出し、室温まで放冷した。次に、ＣｕＢｒ（０．３８ｇ、２．６３ｍｍｏｌ）を添加し、フラスコを密封し、８０℃に予熱した油浴に戻して４８時間置いた。反応管を油浴から取り出し、室温まで放冷した。混合物をセライトで濾過し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）ですすいだ。濾液を減圧下で濃縮した。粗生成物を、９：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−（１，３−ジフェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルプロパ−２−エン−１−アミン（１６）を暗橙色の油状物質として得た（５．３２ｇ、８８％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：
δ７．６５（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），δ７．５６−７．５３（ｍ，２Ｈ），δ７．４０−７．２６（ｍ，６Ｈ），δ５．９３（ｄｄｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１０．５Ｈｚ，１７．１Ｈｚ，１Ｈ），δ５．３２（ｄｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ，１．５Ｈｚ，１Ｈ），δ５．１８（ｄｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１．２Ｈｚ，１Ｈ），δ４．９９（ｓ，１Ｈ），δ３．８９（ｓ，３Ｈ），δ３．１９（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ），δ２．２３（ｓ，３Ｈ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ１３８．９，δ１３６．３，δ１３１．９，δ１２８．５，δ１２８．４，δ１２８．３，δ１２７．７，δ１２３．４，δ１１７．８，δ８８．５，δ８４．９，δ５９．８，δ５７．９ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）：３０６１、３０３０、２９７８、２９４５、２８４４、２７８８、１５９８、１４８９、１４４８、１３２４、１２７３、１１９６、１１５５、１１２７、１０７０、１０２３、９９４、９６３、９１７、７５４、７２６、６８９ｃｍ^−１。

【0200】

実施例１６：Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルプロパ−２−エン−１−アミン（１７）の調製

【化39】

磁気撹拌子を含有する２５０ｍＬ高圧フラスコ内に、ｐ−アニスアルデヒド（１０ｇ、７３．４ｍｍｏｌ）、フェニルアセチレン（７．５ｇ、７３．４ｍｍｏｌ）、Ｎ−アリルメチルアミン（４．７５ｇ、６６．７ｍｍｏｌ）、オーブン乾燥させたモレキュラーシーブス（グレード５６４、３Å、８〜１２メッシュ）（約２ｇ）およびアセトニトリル（２００ｍＬ）を添加した。フラスコを密封し、８０℃に予熱した油浴に２４時間入れた。反応フラスコを油浴から取り出し、室温まで放冷した。次に、ＣｕＢｒ（０．９５ｇ、６．６７ｍｍｏｌ）を添加し、フラスコを密封し、８０℃に予熱した油浴に戻して４８時間置いた。反応管を油浴から取り出し、室温まで放冷した。混合物をセライト珪藻土で濾過し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）ですすいだ。濾液を減圧下で濃縮した。粗生成物を、９：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルプロパ−２−エン−１−アミン（１７）を、暗橙色の油状物質として得た。Ｒ_ｆ＝０．７８（２：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ７．５９−７．５３（ｍ，４Ｈ），δ７．３７−７．２６（ｍ，３Ｈ），δ６．４９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），δ５．９２（ｄｄｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１０．５Ｈｚ，１７．１Ｈｚ，１Ｈ），δ５．３３（ｄｄ，Ｊ＝１７．７Ｈｚ，２．１Ｈｚ，１Ｈ），δ５．１９（ｄｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１．９Ｈｚ，１Ｈ），δ４．９４（ｓ，１Ｈ），δ３．８３（ｓ，３Ｈ），δ３．１９（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），δ２．２４（ｓ，３Ｈ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ１５９．１，δ１３６．３，δ１３１．９，δ１３１．１，δ１２９．７，δ１２８．４，δ１２８．２，δ１２３．４，δ１１７．７，δ１１３．６，δ８８．３，δ８５．３，δ５９．３，δ５７．８，δ５５．４，δ３７．８ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）２９４８、２８３４、２７８６、１６４２、１６０９、１５８３、１５０７、１４８８、１４４１、１３０１、１２４４、１１６９、１１２６、１１０７、１０３３、９９４、９６２、９１６、８５０、８０７、７７８、７５４、６８９、５８３、５２４ｃｍ^−１。計算値Ｃ_２０Ｈ_２１ＮＯ ｍ／ｚ ２９１．１６２３、測定値２９２．１６９９（Ｍ＋Ｈ）。

【0201】

実施例１７：アリルアミンの脱アリル化の一般手順

【化40】

磁気撹拌子を含有する２５０ｍＬ丸底フラスコ内に、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（１．３１ｇ、１．１４ｍｍｏｌ）、チオサリチル酸（７．０ｇ、４５．４ｍｍｏｌ）およびＣＨ_２Ｃｌ_２（１００ｍＬ）を添加した。＄＄＄（５．２５ｇ、２２．７ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２中１５ｍＬの溶液を添加し、反応混合物をＮ２下、室温で１２時間撹拌させた。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔ_２Ｏ（１０ｍＬ）に再溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で濾過した。粗生成物を、８：２ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−メチル−１，３−ジフェニルプロパ−２−イン−１−アミン（１８）を暗橙色の油状物質として得た（３．１２ｇ、７３％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ７．６１−７．３１（ｍ，１０Ｈ），δ４．７６（ｓ，１Ｈ），δ２．５７（ｓ，３Ｈ），δ１．４７（ｓ，１Ｈ）ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３０６０、３０２９、２９３３、２８５０、２７９３、１６５３、１５９８、１５５９、１５４０、１４８９、１４７３、１４４９、１３０６、１２１４、１１７７、１０９８、１０７１、１０２７、９１５、７５５、６９１ｃｍ^−１。

【0202】

実施例１８：１−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−メチル−３−フェニルプロパ−２−イン−１−アミン（１９）の調製

【化41】

磁気撹拌子を含有する２５０ｍＬ丸底フラスコ内に、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（０．２２ｇ、０．１９２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルバルビツール酸（９ｇ、５７．６９ｍｍｏｌ）およびＣＨ_２Ｃｌ_２（１００ｍＬ）を添加した。＄＄＄（５．６ｇ、１９．２３ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２中２５ｍＬの溶液を添加し、反応混合物をＮ２下、室温で１２時間撹拌させた。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔ_２Ｏ（１０ｍＬ）に再溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で濾過した。粗生成物を、８：２ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、１−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−メチル−３−フェニルプロパ−２−イン−１−アミン（１９）を暗橙色の油状物質として得た（２．１３ｇ、４４％）。Ｒ_ｆ＝０．２２（２：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ７．５４−７．４８（ｍ，４Ｈ），δ７．３３−７．３１（ｍ，３Ｈ），δ６．９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），δ５．１８（ｓ，１Ｈ），δ３．８１（ｓ，３Ｈ），δ２．５６（ｓ，３Ｈ），δ１．８１（ｓ，１Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ１５９．２，δ１３２．４，δ１３１．７，δ１２８．８，１２８．３，１２８．１，δ１２３．１，δ１１３．８，δ８９．２，δ８５．５，δ５５．６，δ５５．３，δ３３．７ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）２９５３、２８３４、２７９０、１６０９、１５８４、１５０８、１４８８、１４６２、１４４０、１３０１、１２４３、１１７１、１０９５、１０３１、９５６、９１３、８２９、７５４、７２７、７０３、６８９、５７３、５４７、５２４ｃｍ^−１。計算値Ｃ_１７Ｈ_１７ＮＯ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）２５１．１３１０、測定値２７４．１２１３（Ｍ＋Ｎａ）。

【0203】

実施例１９：プロパルギルアミンのグアニル化の一般手順

【化42】

磁気撹拌子を含有する１００ｍＬ丸底フラスコの中に、カリウムベンジルオキシカルボニルシアナミド（０．６５ｇ、３．０ｍｍｏｌ）、ＴＭＳＣｌ（０．３４ｇ、３．１ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（１５ｍＬ）を添加した。溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、１８（０．４６ｇ、２．４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３．５ｍＬ）中の溶液を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌させた。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）に再溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で濾過した。粗生成物を、１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、２０を暗褐色の油状物質として得た（０．７５ｇ、８５％）。ＩＲ（薄膜）３３３１、３０３１、２９３９、１７３６、１６４６、１５９６、１５３４、１４９１、１４５０、１３７９、１１５３、１０５０、１０２８、８０１、７５７、６９６ｃｍ^−１。

【0204】

実施例２０：Ｃｂｚ−保護グアニジン２１の調製

【化43】

磁気撹拌子を含有する１００ｍＬ丸底フラスコの中に、カリウムベンジルオキシカルボニルシアナミド（２．１７６ｇ、１０．１６ｍｍｏｌ）、ＴＭＳＣｌ（１．１５ｇ、１０．５９ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（４５ｍＬ）を添加した。溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、１９のアセトニトリル（１０ｍＬ）中の溶液を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌させた。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）に再溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で濾過した。粗生成物を、１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、２１を暗褐色の油状物質として得た（２．９７ｇ、８２％）。Ｒ_ｆ＝０．４８（１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ７．５１−７．４３（ｍ，６Ｈ），δ７．３６−７．２５（ｍ，７Ｈ），δ６．９（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），δ５．１８（ｓ，２Ｈ），δ３．８０（ｓ，３Ｈ），δ２．８０（ｓ，３Ｈ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ１６４．１，δ１６０．９，δ１５９．４，δ１３７．６，δ１３１．９，δ１２９．０，δ１２８．７，δ１２８．６，δ１２８．４，δ１２８．０，δ１２７．７，δ１２２．２，δ１１３．９，δ８６．６，δ８５．２，δ６６．９，δ５５．３，δ５０．６，δ２９．７ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３４０３、２９３２、１６４６、１５８４、１５３２、１５０８、１４８８、１４４０、１３７６、１２７３、１２４６、１１２１、１１５０、１１１０、１０２７、９０８、８４５、７９９、７７５、７５５、７２９、６９０、６４７、５８６、５５２ｃｍ^−１。計算値Ｃ_２６Ｈ_２５Ｎ_３Ｏ_３ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）４２７．１８９６、測定値４２８．１９７９（Ｍ＋Ｈ）。

【0205】

実施例２１：プロパルギルグアニジンの環化の一般手順

【化44】

磁気撹拌子を含有する、箔で包んだ５０ｍＬ丸底フラスコ内に、２０（０．７５、２．０４ｍｍｏｌ）、ＡｇＮＯ_３（３５ｍｇ、０．２０４ｍｍｏｌ）、およびＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）の溶液を添加した。溶液を室温で６時間撹拌した。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に再溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（１５ｍＬ）およびブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で濾過した。粗生成物を、１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、（Ｚ）−ベンジル ５−ベンジリデン−２−イミノ−３−メチル−４−フェニルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（２２）を暗褐色の油状物質として得た（０．５３ｇ、７１％）。Ｒ_ｆ＝０．３１（１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）。ＩＲ（薄膜）３３４６、３０３１、１７３４、１６８４、１６５２、１４９５、１４２６、１３８６、１３０３、１２４９、１１９７、１１６１、１０４７、１０２６、９５７、７９７、６９６ｃｍ^−１。

【0206】

実施例２２：（Ｚ）−ベンジル ５−ベンジリデン−２−イミノ−４−（４−メトキシフェニル）−３−メチルイミダゾリジン−１−カルボキシレートの調製

【化45】

磁気撹拌子を含有する箔で包んだ５０ｍＬ丸底フラスコ内に、２１（１．３７ｇ、３．２７ｍｍｏｌ）、ＡｇＮＯ_３（５５．５ｍｇ、０．３２７ｍｍｏｌ）、およびＣＨ_２Ｃｌ_２（２５ｍＬ）の溶液を添加した。溶液を室温で６時間撹拌した。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に再溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（１５ｍＬ）およびブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で濾過した。粗生成物を、２：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、（Ｚ）−ベンジル ５−ベンジリデン−２−イミノ−４−（４−メトキシフェニル）−３−メチルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（２３）を暗褐色の油状物質として得た（１．２１ｇ、８７％）。Ｒ_ｆ＝０．１８（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ７．２８−７．１６（ｍ，９Ｈ），δ７．１０−７．０８（ｍ，２Ｈ），δ６．９２−６．８８（ｍ，４Ｈ），δ５．４７（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），δ４．９２（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），δδ４．５８（ＡＢｑ，１３６．２，１１．７Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８１（ｓ，３Ｈ），δ２．７５（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。
^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ１０６．１，δ１５３．５，δ１５１．４，δ１３６．５，δ１３５．１，δ１３４．４，δ１２９．７，δ１２９．６，δ１２８．７，δ１２８．４，δ１２７．４，δ１２７．０，δ１１４．５，δ１１３．０，δ６２．２，δ６７．０，δ５５．４，δ３０．１ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３４０４、２９３２、１６４６、１５４８、１５３２、１５０８、１４８８、１４４０、１３７６、１２７３、１２４６、１１７１、１１５０、１１１０、１０２７、９０８、８４５、７９９、７７９、７５５、７２８、６９０、６４７、５８６、５５２ｃｍ^−１。計算値Ｃ_２６Ｈ_２５Ｎ_３Ｏ_３ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）４２７．１８９６、測定値４２８．１９７９（Ｍ＋Ｈ）。

【0207】

実施例２３：一保護環状グアニジンのアシル化の一般手順

【化46】

磁気撹拌子を含有する１０ｍＬ丸底フラスコの中に、２２（７３．１ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、ベンゾイルクロライド（０．０３２ｍＬ、０．２７６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０５１ｍＬ、０．３７ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（２ｍＬ）をＮ_２下で添加した。反応物を室温で２時間撹拌した。溶液を減圧下、回転蒸発によって濃縮し、粗材料を２０ｍＬ ＥｔＯＡｃに溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（１５ｍＬ）およびブライン（１５ｍＬ）で洗浄した。有機物をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、得られる材料をフラッシュクロマトグラフィー（６：４ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）によって精製して、（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル ２−（ベンゾイルイミノ）−５−ベンジリデン−３−メチル−４−フェニルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（２４）を淡褐色の泡沫として得た（８５．７ｍｇ、９２．８％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ８．２１−８．１８（ｍ，２Ｈ），δ７．５１−７．３２（ｍ，８Ｈ），δ７．２５−７．１１（ｍ，８Ｈ），δ６．８−６．７８（ｍ，２Ｈ），δ５．７７（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），δ５．１６（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），δ４．６７（ｑ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，２Ｈ），δ２．９３（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ１７８．８，δ１５１．８，δ１４９．３，δ１３７．１，δ１３６．８，δ１３５．４，δ１３４．５，δ１３３．９，δ１３１．６，δ１２９．７，δ１２９．４，δ１２９．３，δ１２７．８，δ１２７．５，δ１１６．９，δ６８．８，δ６７．０，δ３０．６ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３０６０、３０２９、１７４４、１５５７、１４９４、１４４８、１４０４、１３７７、１３１５、１２７７、１２２６、１１７３、１１４４、１０８０、１０３６、１０２０、９７６、９０９、８５６、７９４、７５２、７２７、６９６、６６８ｃｍ^−１。計算値ｍ／ｚ Ｃ_３２Ｈ_２７Ｎ_３Ｏ_３（Ｍ＋Ｈ）５０１．２０５２、測定値５２４．１９６３（Ｍ＋Ｎａ）。

【0208】

実施例２４：（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル ５−ベンジリデン−２−（（２−フルオロベンゾイル）イミノ）−３−メチル−４−フェニルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（２５）の調製

【化47】

２−フルオロベンゾイルクロライド（０．０４３ｍＬ、０．３６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０６７ｍＬ、０．４８ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（２ｍＬ）を用いる２２（９５．５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）のアシル化により、（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル ５−ベンジリデン−２−（（２−フルオロベンゾイル）イミノ）−３−メチル−４−フェニルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（２５）を淡褐色の泡沫として得た（１１９．８ｍｇ、９５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．９９（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），δ７．５０−７．３４（ｍ，４Ｈ），δ７．３４−７．２９（ｍ，２Ｈ），δ７．２１−７．０７（ｍ，８Ｈ），δ６．９９（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），δ６．８４（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ）δ５．７１（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），δ５．１７（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），δ４．７４（ｑ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），δ２．９３（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ１７２．３，δ１６３．０，δ１５９．５，δ１５１．４，δ１４９．３，δ１３６．６，δ１３５．２，δ１３４．４，δ１３３．９，δ１３２．６，δ１３２．５，δ１３４．４，δ１２９．４，δ１２８．７，δ１２８．４，δ１２８．３，δ１２８．０，δ１２７．９，δ１２７．５，δ１２３．８，δ１２３．７，δ１１７．２，δ１１６．７，δ１１６．４，δ６９．０，δ６７．９，δ３０．５ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３０３１、１７４５、１５９６、１４８３、１４０４、１３７８、１３１６、１２８０、１２６３、１２２３、１１７９、１１５７、１１１１、１０８１、１０２３、９７４、９０９、８６６、７８２、７５５、７３２、６９６、６５５ｃｍ^−１。計算値ｍ／ｚ Ｃ_３２Ｈ_２６Ｎ_３Ｏ_３（Ｍ＋Ｈ）５１９．１９５８、測定値５４２．１８６５（Ｍ＋Ｎａ）。

【0209】

実施例２５：（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル−５−ベンジリデン−２−（（２，４−ジクロロベンゾイル）イミノ）−３−メチル−４−フェニルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（２６）の調製

【化48】

２，４−ジクロロベンゾイルクロライド（０．０２３ｍＬ、０．１６１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０３０ｍＬ、０．２１ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（２ｍＬ）を用いる２２（４２．６ｍｇ、１０７ｍｍｏｌ）のアシル化により、（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル−５−ベンジリデン−２−（（２，４−ジクロロベンゾイル）イミノ）−３−メチル−４−フェニルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（２６）を淡褐色の泡沫として得た（５４．７ｍｇ、８９．６％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．８６（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），δ７．５２−７．３９（ｍ，４Ｈ），δ７．３２−７．２９（ｍ，２Ｈ），δ７．０２（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），δ６．８４（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），δ５．７１（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），δ５．１７（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），δ４．６９（ｑ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），δ２．９３（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７３．０，δ１５３，δ１４９，δ１３６．５，δ１３６．３，δ１３５．９，δ１３５．３，δ１３４．４，δ１３０．４，δ１２９．６，δ１２８．８，δ１２８．５，δ１２８．４，δ１２８．１，δ１２７．９，δ１２７．８，δ１２６．９，δ１１７．５，δ６９．３，δ６７．４，δ３０．９ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３０６３、３０３１、１７４４、１５８０、１４５４、１４５６、１４０４、１３７３、１２７７、１２２２、１１７７、１１３８、１０９９、１０５５、１０２１、９７３、９０８、８６５、８３３、７９２、７５８、７２８、６９５ｃｍ^−１。計算値ｍ／ｚ Ｃ_３２Ｈ_２５Ｃｌ_２Ｏ_３（Ｍ＋Ｈ）５６９．１２７３、測定値５９２．１１８３（Ｍ＋Ｎａ）。

【0210】

実施例２６：（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル−５−ベンジリデン−３−メチル−４−フェニル−２−（（チアゾール−２−カルボニル）イミノ）イミダゾリジン−１−カルボキシレート（２７）の調製

【化49】

チアゾール−２−カルボニルクロライド（２０ｍｇ、０．１３３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０２５ｍＬ、０．１７７ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（２ｍＬ）を用いる２２（３５．２ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）のアシル化により、（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル−５−ベンジリデン−３−メチル−４−フェニル−２−（（チアゾール−２−カルボニル）イミノ）イミダゾリジン−１−カルボキシレート（２７）を淡褐色の泡沫として得た（１９．８ｍｇ、４３．９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．９４（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），δ７．５２（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），δ７．４０−７．１３（ｍ，１３Ｈ），δ６．８２（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），δ５．７６（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），δ５．２１（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），δ４．６９（ｑ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），δ２．９６（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１６２．１，δ１５３．８，δ１４９．１，δ１４４．２，δ１３６．５，δ１３５．４，δ１３４．２，δ１３３．９，δ１２９．７，δ１２９．６，δ１２８．８，δ１２８．６，δ１２８．５，δ１２８．４，δ１２８．２，δ１２８．１，δ１２７．７，δ１２４．４，δ１１７．２，δ６９．２，δ６７．４，δ３０．８ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３０３１、１７４４、１５９５、１４８９、１４５６、１３９６、１３２８、１２７８、１２２８、１１７７、１１３３、１０８０、１０５７、１０１９、９７１、９０６、８４３、８２１、７２４、６９４、６４４、６０６ｃｍ^−１。計算値ｍ／ｚ Ｃ_２９Ｈ_２４Ｎ_４Ｏ_３Ｓ（Ｍ＋Ｈ）５０８．１５６９、測定値５３１．１４６２（Ｍ＋Ｎａ）。

【0211】

実施例２７：（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル−５−ベンジリデン−２−（イソブチリルイミノ）−３−メチル−４−フェニルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（２８）の調製

【化50】

イソブチリルクロライド（ｉｓｏｂｕｔｒｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）（０．０１３ｍＬ、０．１３４ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０２５ｍＬ、０．１７９ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（２ｍＬ）を用いる２２（３５．５ｍｇ、０．０８９３ｍｍｏｌ）のアシル化により、（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル−５−ベンジリデン−２−（イソブチリルイミノ）−３−メチル−４−フェニルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（２８）を淡褐色の泡沫として得た（３８．２ｍｇ、９１．５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．４２−７．３５（ｍ，３Ｈ），δ７．２９−７．１５（ｍ，１０Ｈ），δ６．８６（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），δ５．７２（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），δ５．０７（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），δ４．７１（ｑ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，２Ｈ），δ２．８１（ｓ，３Ｈ），δ２．７１（ｍ，１Ｈ），δ１．２６（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１８７．６，δ１５０．２，δ１４９．５，δ１３７．１，δ１３５．６，δ１３４．７，δ１３４．１，δ１２９．５，δ１２８．６，δ１２８．４，δ１２８．３，δ１２７．８，δ１２７．６，δ１１６．６，δ６８．８，δ６７．１，δ３８．８，δ３０．６，δ２０．０ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３０３０、２９６６、２３６０、２３４０、１７４３、１６５３、１５９８、１４９４、１４５５、１４０３、１３７８、１３４５、１２６１、１１７５、１１２１、１０８０、１０２３、９７７、９１９、８４７、８２０、７５２、７３０、６９５、６６８、６３４、５９８、５５７ｃｍ^−１。計算値ｍ／ｚ Ｃ_２９Ｈ_２９Ｎ_３Ｏ_３（Ｍ＋Ｈ）４６７．２２０９、測定値４９０．２１０３（Ｍ＋Ｎａ）。

【0212】

実施例２８：（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル−５−ベンジリデン−３−メチル−２−（（２−メチルブタノイル）イミノ）−４−フェニルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（２９）の調製

【化51】

２−メチルブチリルクロライド（ｍｅｔｈｙｌｂｕｔｒｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）（０．０３７ｍＬ、０．２５６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０４８ｍＬ、０．３４１ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（２ｍＬ）を用いる２２（５６．９ｍｇ、０．１７１ｍｍｏｌ）のアシル化により、（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル−５−ベンジリデン−３−メチル−２−（（２−メチルブタノイル）イミノ）−４−フェニルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（２９）を淡褐色の泡沫として得た（５６．９ｍｇ、６９．５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．４２−７．１２（ｍ，１３Ｈ），δ６．８６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），δ５．７２（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），δ５．０８（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），δ４．７１（ｑ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，２Ｈ），δ２．８１（ｓ，３Ｈ），δ２．５３（ｍ，１Ｈ），δ１．８７（ｍ，１Ｈ），δ１．５５（ｍ，１Ｈ），δ１．２３（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），δ１．０１（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１８６．８，δ１５０．６，δ１４９．６，δ１３７．３，δ１３７．１，δ１３５．６，δ１３４．７，δ１３４．３，δ１３４．１，δ１２９．５，δ１２９．４，δ１２８．５，δ１２８．４，δ１２８．３，δ１２７．９，δ１２７．８，δ１２７．５，δ１１６．４，δ６８．８，δ４５．８，δ４５．８，δ３０．７，δ２７．６，δ１６．８，δ１２．１ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３０３１、２９６３、２９３１、２８７３、１７４４、１６５３、１５９７、１４９４、１４５６、１４０３、１３７５、１２６４、１１７５、１１１３、１０８０、１０３９、９７８、９０８、７５２、７３０、６９５、６６８、６３３、５８８ｃｍ^−１。計算値ｍ／ｚ Ｃ_３０Ｈ_３１Ｎ_３Ｏ_３（Ｍ＋Ｈ）４８１．２３６５、測定値５０４．２２７５（Ｍ＋Ｎａ）。

【0213】

実施例２９：（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル−２−（ベンゾイルイミノ）−５−ベンジリデン−４−（４−メトキシフェニル）−３−メチルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（３０）の調製

【化52】

ベンゾイルクロライド（０．０４０ｍＬ、０．３４１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０６３ｍＬ、０．４５４ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（２ｍＬ）を用いる２３（９７ｍｇ、０．２２７ｍｍｏｌ）のアシル化により、（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル−２−（ベンゾイルイミノ）−５−ベンジリデン−４−（４−メトキシフェニル）−３−メチルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（３０）を淡褐色の泡沫として得た（９６．９ｍｇ、８０．３％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．１８（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），δ７．５０−７．２１（ｍ，１４Ｈ），δ６．９１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ６．８０（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），δ５．７４（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），δ５．１３（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），δ４．６７（ｑ，Ｊ＝２２．５，１１．５，２Ｈ），δ３．８２（ｓ，３Ｈ），δ２．９０（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７５．２，δ１６０．５，δ１５１．９，δ１４９．４，δ１３７．３，δ１３５．６，δ１３４．７，δ１３４．６，δ１３４．４，δ１３１．７，δ１２９．８，δ１２９．４，δ１２８．７，δ１２８．５，δ１２８．４，δ１２８．３，δ１２８．２，δ１２７．６，δ１１６．８，δ１１４．９，δ６９．０，δ６６．８，δ５５．６，δ３０．７１ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３０３０、２９２９、１７４６、１６２、１６０７、１５１０、１４４７、１３７８、１３１７、１２４４、１１７３、１１３１、１０８１、１０２１、９７２、９０８、８３２、７２７、６９４、６６７２、６４６、６１２ｃｍ^−１。計算値 ｍ／ｚ Ｃ_３３Ｈ_２９Ｎ_３Ｏ_４（Ｍ＋Ｈ）５３１．２１５８、測定値５５４．２０６６（Ｍ＋Ｎａ）。

【0214】

実施例３０：（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル−５−ベンジリデン−２−（（２−フルオロベンゾイル）イミノ）−４−（４−メトキシフェニル）−３−メチルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（３１）の調製

【化53】

２−フルオロベンゾイルクロライド（０．３８ｍＬ、３．２１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．６ｍＬ、４．２８ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（２０ｍＬ）を用いる２３（０．９１５６ｇ、２．１４ｍｍｏｌ）のアシル化により、（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル−５−ベンジリデン−２−（（２−フルオロベンゾイル）イミノ）−４−（４−メトキシフェニル）−３−メチルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（３１）を淡褐色の泡沫として得た（０．９７９５ｇ、８３．０％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ７．９９（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），δ７．４４（ｍ，１Ｈ），δ７．２４−７．０５（ｍ，１０Ｈ），δ６．９９−６．８３（ｍ，５Ｈ）δ５．６９（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），δ５．１５（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），δ４．７１（ｑ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８２（ｓ，３Ｈ），δ２．８９（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ１６４．１，δ１６０．５，δ１５２．６，δ１４９．６，δ１３５．３，δ１３４．４，δ１３４．３，δ１３２．７，δ１３２．６，δ１２９．４，δ１２８．８，δ１２８．４，δ１２８．３，δ１２８．０，δ１２７．５，δ１２３．８，δ１１７．１，δ１１６．７，δ１１６．６，δ１１４．８，δ６９．０，δ６６．６，δ５５．４，δ３０．４ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）２９３３、２８３４、２７９０、１０９、１５８４、１５０８、１４８８、１４６２、１４４０、１３０１、１２４３、１１７１、１０９５、１０３１、９５６、９１３、８２９、７８３、７５４、７２７、６８９、６６０、６３４、６１８、５７３、５４７、５２４ｃｍ^−１。計算値ｍ／ｚ Ｃ_３３Ｈ_２８Ｎ_３Ｏ_４（Ｍ＋Ｈ）５４９．２０６４、測定値５５４．２０５６（Ｍ＋Ｎａ）。

【0215】

実施例３１：アシル化された保護環状グアニジンの水素化の一般手順

【化54】

磁気撹拌子を含有する５ｍＬ試験管の中に、２４（８４．４ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（１０％ ｗ／ｗ、９ｍｇ）、および蒸留したＭｅＯＨ（２ｍＬ）をＮ_２の蒸気下で添加した。次に、反応管を圧力容器内で密封し、Ｈ_２で３回パージした。次に、圧力容器にＨ_２を装入し、反応物を室温で２４時間撹拌した。Ｈ_２を圧力容器から放出した後、溶液を濾過し、それに続いて５ｍＬの熱メタノールを添加してフィルターを洗浄した。濾液を減圧下で回転蒸発により濃縮し、得られる材料をフラッシュクロマトグラフィー（６：４ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）により精製して、（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）ベンズアミド（３２）を淡褐色の泡沫として得た（４４．４ｍｇ、７２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．２８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ７．５１−７．４６（ｍ，８Ｈ），δ７．３６−７．２６（ｍ，２Ｈ），δ７．１８−７．０９（ｍ，３Ｈ），δ３．８０（ｓ，２Ｈ），δ３．５０（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７０．９，δ１３７．９，δ１３７．２，δ１３２．８，δ１３２．６，δ１３０．６，δ１３０．２，δ１２９．７，δ１２９．４，δ１２９．２，δ１２８．９，δ１２８．６，δ１２８．５，δ１２７，δ３４．６，δ３１ｐｐｍ。計算値ｍ／ｚ Ｃ_２４Ｈ_２１Ｎ_３Ｏ（Ｍ＋Ｈ）３６７．１６８５、測定値３６８．１７６８（Ｍ＋Ｈ）。

【0216】

実施例３２：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（３３）の調製

【化55】

Ｐｄ／Ｃ（１０％ ｗ／ｗ、２ｍｇ）および蒸留したＭｅＯＨ（２ｍＬ）を用いる２５（１０．８ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）の水素化により、（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（３３）を淡褐色の泡沫として得た（７．１ｍｇ、８９％）。ＩＲ（薄膜）３０２９、１６８３、１５６０、１４９４、１４５２、１３５０、１２８６、１２５０、１２２２、１１５５、１１２７、１０７５、１０５４、１０３０、１０１４、９６７、８１７、７５５、７２５、６９６、６４３、５５８、５３９ｃｍ^−１。

【0217】

実施例３３：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２，４−ジクロロベンズアミド（３４）の調製の調製

【化56】

Ｐｄ／Ｃ（１０％ ｗ／ｗ、４ｍｇ）および蒸留したＭｅＯＨ（２ｍＬ）を用いる２６（３４．５ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）の水素化により、（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２，４−ジクロロベンズアミド（３４）を淡褐色の泡沫として得た（２０．８ｍｇ、７９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．２７（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），δ７．６２−７．５１（ｍ，４Ｈ），δ７．４７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ ２Ｈ），δ７．３６−７．３２（ｍ，２Ｈ），δ７．２９−７．２０（ｍ，４Ｈ）δ３．９５（ｓ，２Ｈ），δ３．６２（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１６２．１，δ１３６．２，δ１３５．９，δ１３０．８，δ１２９．７，δ１２９．４，δ１２９．３，δ１２９．０，δ１２８．７，δ１２７．６，δ１２６．５，δ１２５．５，δ３４．６，δ３０．６ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）２９３４、２８３５、２３５９、２３４０、１６５２、１６０９、１５８５、１５５８、１５４０、１５０９、１４８９、１４７２、１４５７、１４４１、１３０２、１２４６、１１７２、１０９７、１０３４、８３１、７８４、７５５、６９１、６６７ｃｍ^−１。

【0218】

実施例３４：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）イソブチルアミド（３５）の調製

【化57】

Ｐｄ／Ｃ（１０％ ｗ／ｗ、５ｍｇ）および蒸留したＭｅＯＨ（２ｍＬ）を用いる２８（４５．１ｍｇ、０．０９６ｍｍｏｌ）の水素化により、（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）イソブチルアミド（３５）を淡褐色の泡沫として得た（２３．８ｍｇ、７４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．４２−７．３９（ｍ，３Ｈ），δ７．３３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），δ７．２４−７．２０（ｍ，３Ｈ），δ７．１３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ ２Ｈ），δ３．８３（ｓ，２Ｈ），δ３．３１（ｓ，３Ｈ），δ２．４９（ｍ，１Ｈ），δ１．１３（ｄ，７Ｈｚ，６Ｈ）ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３０２８、２９６８、２８７３、１６９５、１６５３、１６０２、１５４０、１５０６、１４９４、１４６６、１４５６、１４３７、１３９９、１３８３、１３１２、１２２１、１１９０、１１５６、１０９８、１０１４、９５０、９１０、８６７、７２５、６９７ｃｍ^−１。計算値ｍ／ｚ Ｃ_２１Ｈ_２３Ｎ_３Ｏ（Ｍ＋Ｈ）３３３．１８４１、測定値３３４．１９１９（Ｍ＋Ｈ）。

【0219】

実施例３５：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−メチルブタンアミド（３６）の調製

【化58】

Ｐｄ／Ｃ（１０％ ｗ／ｗ、６ｍｇ）および蒸留したＭｅＯＨ（２ｍＬ）を用いる２９（５６．９ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）の水素化により、（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−メチルブタンアミド（３６）を淡褐色の泡沫として得た（３２．８ｍｇ、８０％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．４２−７．３９（ｍ，３Ｈ），δ７．２９（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），δ７．２４−７．２０（ｍ，３Ｈ），δ７．０５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ ２Ｈ），δ３．７７（ｓ，２Ｈ），δ３．３０（ｓ，３Ｈ），δ２．４３（ｍ，１Ｈ），δ１．６９（ｍ，１Ｈ），δ１．４１（ｍ，１Ｈ），δ１．１０（ｄ，７Ｈｚ，３Ｈ），δ０．８７（ｔ，７Ｈｚ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１３９．９，δ１３０．３，δ１２９．１，δ１２８．８，δ１２８．６，δ１２８．５，δ４２．８，δ３２．３，δ２７．２，δ１７．７，δ１１．１ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）２８３５、１６０９、１５８３、１５０８、１４８８、１４４２、１４１９、１３０１、１２４４、１１６９、１１２６、１１０７、１０６９、１０３３、９９４、９６２、９１７、８５０、８０７、７７８、７５４、６９０、５８４ｃｍ^−１。計算値ｍ／ｚ Ｃ２２Ｈ２５Ｎ３Ｏ（Ｍ＋Ｈ）３４７．１９９８、測定値３４８．２０８２（Ｍ＋Ｈ）。

【0220】

実施例３６：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）ベンズアミド（３７）の調製

【化59】

Ｐｄ／Ｃ（１０％ ｗ／ｗ、２ｍｇ）および蒸留したＭｅＯＨ（２ｍＬ）を用いる３０（１５．４ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ）の水素化により、（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）ベンズアミド（３７）を淡褐色の泡沫として得た（９．７ｍｇ、８４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．２７（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４５−７．４０（ｍ，３Ｈ），δ７．３２−７．２７（ｍ，４Ｈ），δ７．２２（ｍ，１Ｈ），δ７．１５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），δ７．０１（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８６（ｓ，３Ｈ），δ３．８３（ｓ，２Ｈ），δ３．４９（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１６０．５，δ１３８．７，δ１３１．９，δ１３０．８，δ１２９．２，δ１２８．９，δ１２８．４，δ１２８．１，δ１２７．２，δ１２４．５，δ１２０．０，δ１１４．８，δ５５．７，δ３２．４，δ３１．０ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３０６１、２９３３、１６７５、１６３６、１５６６、１５４１、１４９４、１４６４、１４５３、１９９、１３５０、１２８８、１２４６、１１７４、１１０８、１０２５、１００４、９０６、８３２、７１８、７０９、６４５、５９３ｃｍ^−１。計算値ｍ／ｚ Ｃ_２２Ｈ_２５Ｎ_３Ｏ（Ｍ＋Ｈ）３９７．１７９０、測定値４２０．１６９８（Ｍ＋Ｎａ）。

【0221】

実施例３７：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（３８）（ジナアミドール、ＺＮＡ）の調製

【化60】

Ｐｄ／Ｃ（１０％ ｗ／ｗ、３ｍｇ）および蒸留したＭｅＯＨ（２ｍＬ）を用いる３１（２０．８ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）の水素化により、（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（３８）を淡褐色の泡沫として得た（１２．７ｍｇ、８１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．０７（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），δ７．３４（ｍ，１Ｈ），δ７．３２−７．２７（ｍ，４Ｈ），δ７．２１（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），δ７．１９−７．１６（ｍ，３Ｈ），δ７．０８（ｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），δ７．００（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８６（ｓ，３Ｈ），δ３．８１（ｓ，２Ｈ），δ３．４４（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１６２．９，δ１６０．９，δ１３２．０，δ１２９．１，δ１２８．４，δ１２７．１，δ１２３．９，δ１２０．１，δ１１６．６，δ１１６．８，δ１１４．７，δ５５．７，δ３２．４，δ３０．４ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）２９２９、２３６０、２３４０、１６８４、１５６９、１５１１、１４９４、１４５５、１４０１、１３３９、１２９０、１２４８、１１７６、１０３２、８３４、８１５、７５７、７３１、６９６、６６７ｃｍ^−１。計算値ｍ／ｚ Ｃ_２２Ｈ_２５Ｎ_３Ｏ（Ｍ＋Ｈ）３４７．１９９８、測定値４３８．１５９４（Ｍ＋Ｎａ）。

【0222】

実施例３８：ＮａＨ介在性環化の一般手順

【化61】

磁気撹拌子を含有する２５ｍＬ丸底フラスコの中に、（Ｅ）−Ｎ−（アミノ（（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）（メチル）アミノ）メチレン）−２−フルオロベンズアミド（４４．５ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）、ＮａＨ（３ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１０ｍＬ）をＮ_２下で添加した。溶液を室温で３０分間撹拌し、その後、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）に再溶解した。有機層を飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られる黄色の固体（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（３８）はさらなる精製を必要としなかった（３３．８ｍｇ、７５．９％）。

【0223】

実施例３９：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−４−クロロベンズアミド（３９）の調製

【化62】

（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−４−クロロベンズアミド（３９）を、ＴＨＦ中、（Ｅ）−Ｎ−（アミノ（（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）（メチル）アミノ）メチレン）−４−クロロベンズアミドのＮａＨ介在性環化によって収量８１．６％で黄色の油状物質として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．１９（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），δ７．３４（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），δ７．３０−７．２１（ｍ，５Ｈ），δ７．１２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），δ７．０１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８６（ｓ，３Ｈ），δ３．８２（ｓ，２Ｈ），δ３．４７（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。

【0224】

実施例４０：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）ベンズアミド（３７）の調製

【化63】

（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）ベンズアミド（３７）を、ＴＨＦ中、（Ｅ）−Ｎ−（アミノ（（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）（メチル）アミノ）メチレン）ベンズアミドのＮａＨ介在性環化によって収量６３．２％で白色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．２６（ｄｄ，Ｊ＝０．６Ｈｚ，６Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４４−７．３９（ｍ，３Ｈ），δ７．２９−７．２６（ｍ，５Ｈ），δ７．１４（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），δ７．００（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８６（ｓ，３Ｈ），δ３．８２（ｓ，２Ｈ），δ３．４８（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。

【0225】

実施例４１：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−４−メトキシベンズアミド（４０）の調製

【化64】

（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−４−メトキシベンズアミド（４０）を、ＴＨＦ中、（Ｅ）−Ｎ−（アミノ（（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）（メチル）アミノ）メチレン）−４−メトキシベンズアミドのＮａＨ介在性環化によって収量８４．１％で黄色の油状物質として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ８．０８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），δ７．３０−７．２１（ｍ，５Ｈ），δ７．１４（ｄ，Ｊ＝８．７，２Ｈ），δ７．０１（ｄ，Ｊ＝９，２Ｈ），δ６．９０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８７（ｓ，３Ｈ），δ３．８５（ｓ，３Ｈ），δ３．８２（ｓ，２Ｈ），δ３．４７（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。

【0226】

実施例４２：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（４１）の調製

【化65】

（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（４１）を、ＴＨＦ中、（Ｅ）−Ｎ−（アミノ（（１−（４−クロロフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）（メチル）アミノ）メチレン）−２−フルオロベンズアミドのＮａＨ介在性環化によって収量６２％で黄色の油状物質として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．０８（ｔ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），δ７．４６（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４０（ｍ，１Ｈ），δ７．３０−７．２５（ｍ，４Ｈ），δ７．２２−７．１０（ｍ，５Ｈ），δ３．８４（ｓ，２Ｈ），δ３．４３（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。

【0227】

実施例４３：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−４−クロロベンズアミド（４２）の調製

【化66】

（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−４−クロロベンズアミド（４２）を、ＴＨＦ中、（Ｅ）−Ｎ−（アミノ（（１−（４−クロロフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）（メチル）アミノ）メチレン）−４−クロロベンズアミドのＮａＨ介在性環化によって収量６４％で黄色の油状物質として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．１８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），δ７．３５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），δ７．３０−７．２５（ｍ，５Ｈ），δ７．１２（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８３（ｓ，２Ｈ），δ３．４８（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。

【0228】

実施例４４：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）ベンズアミド（４３）の調製

【化67】

（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）ベンズアミド（４３）を、ＴＨＦ中、（Ｅ）−Ｎ−（アミノ（（１−（４−クロロフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）（メチル）アミノ）メチレン）ベンズアミドのＮａＨ介在性環化によって収量７７％で白色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．２４（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４６（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４５−７．３９（ｍ，３Ｈ），δ７．３０−７．２０（ｍ，５Ｈ），δ７．１２（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８３（ｓ，２Ｈ），δ３．４８（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。

【0229】

実施例４５：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−４−メトキシベンズアミド（４４）の調製

【化68】

（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−４−メトキシベンズアミド（４４）を、ＴＨＦ中、（Ｅ）−Ｎ−（アミノ（（１−（４−クロロフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）（メチル）アミノ）メチレン）−４−メトキシベンズアミドの環化によって得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ８．１９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），δ７．３０−７．２３（ｍ，５Ｈ），δ７．１３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），δ６．９０（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８４（ｓ，２Ｈ），δ３．８３（ｓ，２Ｈ），δ３．４８（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。

【0230】

実施例４６：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−１−メチル−５−（４−（２−モルホリノエトキシ）フェニル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（４５）の調製

【化69】

（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−１−メチル−５−（４−（２−モルホリノエトキシ）フェニル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（４５）を、ＴＨＦ中、（Ｅ）−Ｎ−（アミノ（（１−（４−クロロフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）（メチル）アミノ）メチレン）−４−メトキシベンズアミドの環化によって得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ８．１９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），δ７．３０−７．２３（ｍ，５Ｈ），δ７．１３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），δ６．９０（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８４（ｓ，２Ｈ），δ３．８３（ｓ，２Ｈ），δ３．４８（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。

【0231】

実施例４７：（Ｅ）−Ｎ−（５−（４−クロロフェニル）−１−メチル−４−（２−モルホリノエチル）−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（４６）の調製

【化70】

（Ｅ）−Ｎ−（５−（４−クロロフェニル）−１−メチル−４−（２−モルホリノエチル）−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（４６）を、ＴＨＦ中、（Ｅ）−Ｎ−（アミノ（（１−（４−クロロフェニル）−４−モルホリノブタ−２−イン−１−イル）（メチル）アミノ）メチレン）−２−フルオロベンズアミドのＮａＨ介在性環化によって収量５０％で黄色の油状物質として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．０５（ｄｔ，Ｊ＝３Ｈｚ，１２．５Ｈｚ，１Ｈ），δ７．４６（ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４２−７．３４（ｍ，１Ｈ），δ７．２８−７．２４（ｍ，２Ｈ），δ７．１７（ｄｔ，Ｊ＝２Ｈｚ，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），δ７．１３−７．０６（ｍ，１Ｈ），δ３．８２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），δ３．４４（ｓ，３Ｈ），２．６８−２．５８（ｍ，４Ｈ），２．５３−２．４６（ｍ，４Ｈ）ｐｐｍ。計算値Ｃ_２３Ｈ_２４Ｎ_４Ｏ_２ＦＮａＣｌ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）４６５．１４７０、測定値４６５．１４６９（Ｍ＋Ｎａ）。

【0232】

実施例４８：（Ｅ）−Ｎ−（４−（シクロプロピルメチル）−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）ベンズアミド（４７）の調製

【化71】

（Ｅ）−Ｎ−（４−（シクロプロピルメチル）−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）ベンズアミド（４７）を、ＴＨＦ中、Ｎ−（Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミドのＮａＨ介在性環化によって収量９１％で黄色の油状物質として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．３１（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４７−７．３９（ｍ，４Ｈ），δ７．２４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，３Ｈ），δ７．０１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８７（ｓ，３Ｈ），δ３．４７（ｓ，３Ｈ），δ２．４１（ｄ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ，２Ｈ），δ０．９７−０．８９（ｍ，１Ｈ），δ０．５８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），δ０．１９（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７４．９，１７３．２，１６０．２，１３８．８，１３０．７，１２８．９，１２８．０，１２３．１，１２０．２，１１４．５，５５．６，２９．９，２９．３，１０．３，４．７ｐｐｍ。

【0233】

実施例４９：（Ｅ）−Ｎ−（４−（シクロプロピルメチル）−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−４−メトキシベンズアミド（４８）の調製

【化72】

（Ｅ）−Ｎ−（４−（シクロプロピルメチル）−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−４−メトキシベンズアミド（４８）を、ＴＨＦ中、Ｎ−（Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）−４−メトキシベンズアミドのＮａＨ介在性環化によって収量８４％で黄色の油状物質として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．２７（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），δ７．２４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），δ７．００（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），δ６．９２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８６（ｓ，３Ｈ），δ３．８５（ｓ，３Ｈ），δ３．４５（ｓ，３Ｈ），δ２．３９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），δ０．９７−０．８８ （ｍ，１Ｈ），δ０．５７（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），δ０．１７（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，２Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７４．６，１７３．１，１６１．９，１６０．２，１３１．８，１３０．６，１２２．９，１２０．９，１１４．５，１１３．２，９５．１，５５．７，２９．９，２９．３，１０．３，４．７ｐｐｍ。

【0234】

実施例５０：（Ｅ）−４−クロロ−Ｎ−（４−（シクロプロピルメチル）−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）ベンズアミド（４９）の調製

【化73】

（Ｅ）−４−クロロ−Ｎ−（４−（シクロプロピルメチル）−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）ベンズアミド（４９）を、ＴＨＦ中、４−クロロ−Ｎ−（Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミドのＮａＨ介在性環化によって収量８７％で白色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．２４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），δ７．３７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ７．２３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），δ７．００（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８６（ｓ，３Ｈ），δ３．４５（ｓ，３Ｈ），δ２．４０（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），δ０．９７−０．８８（ｍ，１Ｈ），δ０．５７（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），δ０．１８（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７３．８，１７３．２，１６０．３，１５０．３，１３７．３，１３６．７，１３１．８，１３０．３，１２８．１，１２３．２，１２１．７，１２０．０，１１４．５，５５．６，２９．９，２９．３，１０．２，４．７ｐｐｍ。

【0235】

実施例５１：（Ｅ）−Ｎ−（４−（シクロプロピルメチル）−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（５０）の調製

【化74】

（Ｅ）−Ｎ−（４−（シクロプロピルメチル）−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（５０）を、ＴＨＦ中、Ｎ−（Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）−２−フルオロベンズアミドのＮａＨ介在性環化によって収量８６％で黄色の油状物質として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．０９（ｄｔ，Ｊ＝１．７，６．１Ｈｚ，１Ｈ），δ７．４０−７．３４（ｍ，２Ｈ），δ７．２３（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），δ７．１６（ｔ，Ｊ＝８．４，１Ｈ），δ７．０９（ｄｄ，Ｊ＝３．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），δ６．９９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８６（ｓ，３Ｈ），δ３．４２（ｓ，３Ｈ），δ２．４０（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），δ０．９７−０．８８（ｍ，１Ｈ），δ０．５６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），δ０．１７（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ）ｐｐｍ。

【0236】

実施例５２：（Ｅ）−Ｎ−（４−（シクロプロピルメチル）−５−イソプロピル−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）ベンズアミド（５１）の調製

【化75】

（Ｅ）−Ｎ−（４−（シクロプロピルメチル）−５−イソプロピル−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）ベンズアミド（５１）を、ＴＨＦ中、Ｎ−（Ｎ−（１−シクロプロピル−４−メチルペンタ−１−イン−３−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミドのＮａＨ介在性環化によって収量４７％で無色の油状物質として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．２９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４３−７．３８（ｍ，３Ｈ），δ３．６３（ｓ，３Ｈ），δ３．０２（ｓｐ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），δ２．４９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），δ１．３３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ），δ０．９９−０．９０（ｍ，１Ｈ），δ０．６３（ｑ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），δ０．２６（ｑ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７４．７，１７３．２，１３８．７，１３０．５，１２８．７，１２７．９，１２６．４，１１８．９，２９．４，２４．５，２１．８，１０．３，４．７ｐｐｍ。

【0237】

実施例５３：生物学的実験のための一般的方法
組織培養：自発的な乳房縮小術を受ける、同意した患者から採取したヒト正常乳腺上皮細胞を、レンチウイルスに誘導されるヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ−ＨＭＥＣ）の発現によって不死化させ、すでにＧｌｉｇｏｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１３；１５（４）：Ｒ５８に記載されるように改変Ｍ８７培地で培養した。化学療法抵抗性乳癌患者の胸水から生じる一次転移性腫瘍組織を特徴づけ、Ｇｌｉｇｏｒｉｃｈ ｅｔ ａｌに既に記載されているように培養した。ＭＣＦ−１０ＡおよびＭＣＦ−７細胞は、ＤＭＥＭ／Ｆ−１２（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、米国ニューヨーク州グランドアイランド）、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、ＨｙＣｌｏｎｅ、米国ユタ州ローガン）、５．０μｇ／ｍＬインスリン−トランスフェリン−セレン−Ｘ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ペニシリン−ストレプトマイシン−グルタミン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および２．５ｎＭヒト組換え型上皮細胞増殖因子（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、米国カリフォルニア州サンノゼ）からなる増殖培地で培養した。Ｔ４７ＤおよびＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞は、ＲＰＭＩ−１６４０（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、ＨｙＣｌｏｎｅ、米国ユタ州ローガン）、５．０μｇ／ｍＬインスリン−トランスフェリン−セレン−Ｘ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ペニシリン−ストレプトマイシン−グルタミン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および２．５ｎＭヒト組換え型上皮細胞増殖因子（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、米国カリフォルニア州サンノゼ）からなる増殖培地で培養した。全ての細胞は、加湿したインキュベーター中５％ＣＯ_２で３７℃で培養した。全ての細胞株は、ショートタンデムリピート分析を用いてＰｒｏｍｅｇａと合同してＡＴＣＣによって認証された。

【0238】

試薬および抗体：ヨウ化プロピジウムは、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ（米国マサチューセッツ州ダンバース）より入手した。Ｚｎ^２＋指示薬ＦｌｕｏＺｉｎ−３は、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓより入手した。アクチノマイシンＤは、Ｓｉｇｍａ（米国ミズーリ州セントルイス）より入手した。ＬＣ３Ａ／Ｂ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）およびα−チューブリン（Ｓｉｇｍａ）に対する抗体は、１：１０００の濃度で使用した。ＩＲ８００ＣＷおよびＩＲ６８０二次抗体は、ＬＩ−ＣＯＲ（米国ネブラスカ州リンカーン）より入手し、１：７５００の濃度で使用した。

【0239】

用量反応アッセイ：ｈＴＥＲＴ−ＨＭＥＣおよび胸水細胞を９６穴プレートに播種し、および一晩回復させた。次に、細胞を、ＤＭＳＯに溶解した化合物または対応させたＤＭＳＯ溶媒対照群で三連で処理した；次に、細胞を薬剤中で９６時間培養した後、ルシフェラーゼに基づくＡＴＰ定量アッセイ（ＡＴＰｌｉｔｅ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、米国マサチューセッツ州ウォルサム）を用いて細胞生存率を測定した。発光を、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ ２１０４ ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で測定し、生データを平均し、対応する溶媒対照に正規化した。ＭＣＦ−１０Ａ細胞は、標準培地中の９６穴プレートに８，０００細胞／穴で播種した；ＭＣＦ−７、Ｔ４７Ｄ、およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞は、標準培地中の９６穴プレートに１，５００細胞／穴で播種した。細胞を一晩回復させた後、培地を、化合物または溶媒対照としてＤＭＳＯを含有する、血清を減少させた（２％ＦＢＳ）培地と交換した。処置の開始以降、培地は４８および９６時間に新鮮な薬剤含有培地と交換した。細胞生存率は、処置の開始から１２０時間後にＡＴＰｌｉｔｅアッセイ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて測定した；生データを平均し、対応する溶媒対照に正規化した。全ての用量反応アッセイに関して、正規化した値を、３回の反復実験の平均±標準偏差としてプロットした後、Ｐｒｉｓｍ６．０（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、米国カリフォルニア州サンディエゴ）から用量反応非線形曲線フィッティング機能を用いて分析してＥＣ_５０を算出した。クローン形成性細胞生存アッセイを、Ｆｒａｎｋｅｎ ＮＡＰ，Ｒｏｄｅｒｍｏｎｄ ＨＭ，Ｓｔａｐ Ｊ，Ｈａｖｅｍａｎ Ｊ，ｖａｎ Ｂｒｅｅ Ｃ．Ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ ａｓｓａｙ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ２００６；１（５）：２３１５−１９に記載されるように実施した。

【0240】

トランスクリプトームシーケンシング：トランスクリプトームシーケンシングの準備において、ＭＣＦ−７細胞を、１０ｃｍの組織培養処理プレートにプレートが薬剤処理の時点で８０％コンフルエントとなるように三連で播種した。細胞を、３０μＭ ＺＮＡかまたは溶媒対照としてＤＭＳＯのいずれかを含有する１０ｍＬの低血清培地で３時間または１２時間処理した。処置の終了後、ＲＮｅａｓｙ ＲＮＡ単離および精製キット（Ｑｉａｇｅｎ、ドイツ、ヒルデン）を製造業者のプロトコールに従って用いてＲＮＡを単離した。

【0241】

ライブラリー構築は、本明細書に記載されるＩｌｌｕｍｉｎａ ＴｒｕＳｅｑ Ｓｔｒａｎｄｅｄ ｍＲＮＡ試料調製キットを用いて実施した。手短に言えば、全ＲＮＡ（１００ｎｇ〜４μｇ）を、ポリＴオリゴに結合した磁性ビーズを用いてポリＡ選択させた。磁性ビーズから溶離したポリＡ ＲＮＡを断片化し、ｃＤＮＡ合成の準備のためにランダムヘキサマーでプライムした。第１の鎖の逆転写は、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ逆転写酵素（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて達成した。第２の鎖のｃＤＮＡ合成は、ｄＵＴＰをｄＴＴＰに対して置換する条件下で、ＤＮＡポリメラーゼＩおよびＲＮアーゼＨを用いて達成して、平滑末端ｃＤＮＡ断片を得た。アダプター連結の準備のために、かつコンカテマー形成を防ぐために、Ａ塩基を平滑末端に付加した。Ｔ塩基のオーバーハングを含むアダプターを、Ａ尾部ＤＮＡ断片に連結した。連結した断片を、第１の鎖のｃＤＮＡ生成物の増幅だけを可能にする条件下でＰＣＲ増幅させた（１２〜１５サイクル）。ＰＣＲ増幅させたライブラリーは、Ａｇｅｎｃｏｕｒｔ ＡＭＰｕｒｅ ＸＰビーズ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ）を用いて精製した。増幅させたライブラリーの濃度をＮａｎｏＤｒｏｐ分光光度計で測定し、ライブラリーのアリコートを、Ｄ１ＫまたはＨｉｇｈ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ Ｄ１Ｋアッセイを用いてＡｇｉｌｅｎｔ ２２００ Ｔａｐｅ Ｓｔａｔｉｏｎで分離して、シーケンシングライブラリーのサイズ分布を明確にした。ライブラリーを１０ｎＭの濃度に調節し、Ｋａｐａライブラリー定量キット（Ｋａｐａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、米国マサチューセッツ州ボストン）で定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を実施して、アダプター連結ライブラリー分子のモル濃度を算出した。濃度をｑＰＣＲの後にさらに調節してＩｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑ計測器での配列分析用のライブラリーを準備した。シーケンシングの終了後、ＮＣＢＩの構築したＧＲｃｈ３７を用いてゲノムアラインメントを実行し、差次的発現分析を、ＤＥＳｅｑ Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒパッケージを含むＲＮＡｓｅｑアプリケーション（ｈｔｔｐ：／／ｕｓｅｑ．ｓｏｕｒｃｅｆｏｒｇｅ．ｎｅｔ／ｃｍｄＬｎＭｅｎｕｓ．ｈｔｍｌ＃ＲＮＡＳｅｑ）を用いて実施した；統計的有意性は、ＡｎｄｅｒｓおよびＨｕｂｅｒに記載される通り算出した。Ａｎｄｅｒｓ Ｓ，Ｈｕｂｅｒ Ｗ．Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌ ２０１０；１１（１０）：Ｒ１０６。シーケンシングデータは、Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｏｍｎｉｂｕｓ（受託番号ＧＳＥ５９２５１）に寄託した。

【0242】

リアルタイムＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）：遺伝子発現を測定するよう設計されている実験には、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ４８０（Ｒｏｃｈｅ、スイス、バーゼル）およびＫＡＰＡ ＳＹＢＲ ＦＡＳＴ ｑＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｋａｐａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、米国マサチューセッツ州ボストン）を用いてリアルタイムＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）を実施した。薬剤処置の後、ＲＮｅａｓｙ ＲＮＡ単離および精製キット（Ｑｉａｇｅｎ）を製造業者のプロトコールに従って用いてＲＮＡを単離した。ゲノムＤＮＡをＤＮアーゼ消化によって除去し、１μｇのＲＮＡを使用して、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩＩ逆転写酵素キットを製造業者のプロトコールに従って用いてｃＤＮＡを合成した；ＲＮアーゼＨ消化の後、ＫＡＰＡ ＳＹＢＲ ＦＡＳＴ ｑＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｋａｐａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、米国マサチューセッツ州ボストン）を用いてＲＴ−ＰＣＲを５μＬの反応物で実施した。以下のプライマーセットを使用した：ＭＴ１Ｆ ５’−ＡＧＴＣＴＣＴＣＣＴＣＧＧＣＴＴＧＣ−３’および５’−ＡＣＡＴＣＴＧＧＧＡＧＡＡＡＧＧＴＴＧＴＣ−３’；ＭＴ１Ｘ ５’−ＴＣＴＣＣＴＴＧＣＣＴＣＧＡＡＡＴＧＧＡＣ−３’および５’−ＧＧＧＣＡＣＡＣＴＴＧＧＣＡＣＡＧＣ−３’；ＭＴ２Ａ ５’−ＣＣＧＡＣＴＣＴＡＧＣＣＧＣＣＴＣＴＴ−３’および５’−ＧＴＧＧＡＡＧＴＣＧＣＧＴＴＣＴＴＴＡＣＡ−３’；ＳＬＣ３０Ａ２ ５’−ＡＣＡＧＣＡＧＣＡＧＡＴＣＡＣＧＡＡＣＡ−３’および５’−ＧＧＡＣＡＡＣＣＴＴＧＡＣＣＡＴＣＣＴＧ−３’；ＳＬＣ３０Ａ１ ５’−ＴＣＡＣＣＡＣＴＴＣＴＧＧＧＧＴＴＴＴＣ−３’および５’−ＡＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＣＣＡＡＣＡＣＣ−３’（３）。データを内部対照遺伝子（ＧＡＰＤＨ ５’−ＡＡＡＴＴＣＣＡＴＧＧＣＡＣＣＧＴＣ−３’および５’−ＧＡＴＧＧＴＧＡＴＧＧＧＡＴＴＴＣＣＡ−３’）に対して正規化し、Ｓｃｈｍｉｔｔｇｅｎ ＴＤ、Ｌｉｖａｋ ＫＪ．Ａｎａｌｙｚｉｎｇ ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｄａｔａ ｂｙ ｔｈｅ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ＣＴ ｍｅｔｈｏｄ．Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ２００８；３（６）：１１０１−０８に記載される比較ＣＴ法を用いて相対遺伝子発現を評価した。マウスインビボ実験由来の組織には、ＲＮＡを単離する前にＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒ ＩＩを用いて３０Ｈｚで３分間、新鮮な組織をホモジナイズした。

【0243】

ＦｌｕｏＺｉｎ−３染色による細胞内Ｚｎ^２＋の測定：細胞を、分析の時点で穴が７０〜８０％コンフルエントになるような密度で６穴プレートに播種した。処置の終了後、薬剤を含有する培地を除去し、２．５μＭ ＦｌｕｏＺｉｎ−３を含有するハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と交換した。細胞を、暗所で室温で３０分間、指示薬とともにインキュベートした。染色後、細胞をトリプシン処理し、２％ＦＢＳを含有するＨＢＳＳに再懸濁し、相対平均蛍光を、フローサイトメトリー（ＦＡＣｓｃａｎ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、米国カリフォルニア州サンノゼ）によって測定した。

【0244】

ヨウ化プロピジウム染色による細胞死の測定：細胞を８０％コンフルエントになるまで６穴プレートで培養し、その後、増殖培地を低血清（２％ＦＢＳ）薬剤含有培地と交換した。各条件は三連で評価した。処置の終了後、培地および浮遊細胞を回収し、トリプシン処理した付着細胞と合した。細胞を２％ＦＢＳ／ＨＢＳＳで洗浄し、フローサイトメトリーによる分析のためにヨウ化プロピジウム溶液（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）に再懸濁した。各処置のヨウ化プロピジウム陽性細胞の百分率を平均し、溶媒処置対照に正規化した。正規化したデータを、３回の反復実験の平均±標準誤差としてプロットした。

【0245】

誘導結合プラズマ−原子発光分析（ＩＣＰ−ＡＥＳ）分析：細胞を８０％コンフルエントになるまで１０ｃｍプレートで培養し、その後、増殖培地を低血清（２％ＦＢＳ）薬剤含有培地と交換した。３時間の処置後、培地を廃棄し、細胞を１ｘＰＢＳで洗浄した。各々の１０ｃｍプレートに対し、１ｍＬの硝酸（追跡分析用ＴｒａｃｅＳＥＬＥＣＴ Ｕｌｔｒａ、Ｓｉｇｍａ）を、直接プレートに添加した。硝酸混合物は、米国環境保護局によって確立された方法に従う誘導結合プラズマ−原子発光分析（ＩＣＰ−ＡＥＳ）分析に提出された。Ｍａｒｔｉｎ ＴＤ，Ｂｒｏｃｋｈｏｆｆ ＣＡ，Ｃｒｅｅｄ ＪＴ．Ｍｅｔｈｏｄ ２００．７ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｅｔａｌｓ ａｎｄ Ｔｒａｃｅ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｉｎ Ｗａｔｅｒ ａｎｄ Ｗａｓｔｅｓ ｂｙ Ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙ Ｃｏｕｐｌｅｄ Ｐｌａｓｍａ−Ａｔｏｍｉｃ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．米国環境保護局環境モニタリングシステム研究所、１９９４。実験は、各細胞株について三連で実施され、第４の細胞プレートを使用して総タンパク質を測定した（ＢＣＡアッセイ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、米国マサチューセッツ州ウォルサム）。次に、ＩＣＰ−ＡＥＳデータを、使用した各細胞株の総タンパク質に正規化した。

【0246】

カスパーゼ活性の測定：カスパーゼ３／７、８、および９の活性を、Ｐｒｏｍｅｇａ（米国ウィスコンシン州マディソン）Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏアッセイを用いて測定した。手短に言えば、細胞を、分析の時点で穴が８０％コンフルエントになるような密度で９６穴の白底白壁プレートに播種した。処置の終了後、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏアッセイを製造業者のプロトコールに従って実施し、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ ２１０４ ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で発光を測定した。生データを平均し、対応する溶媒対照に正規化した；その後、正規化した値を平均±標準偏差としてプロットした。

【0247】

ウエスタンブロット解析：ウエスタンブロット解析によるタンパク質発現の解析には、Ｇｌｉｇｏｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ．に記載の手順を使用した。Ｇｌｉｇｏｒｉｃｈ Ｋ，Ｖａｄｅｎ Ｒ，Ｓｈｅｌｔｏｎ Ｄ，Ｗａｎｇ Ｇ，Ｍａｔｓｅｎ Ｃ，Ｌｏｏｐｅｒ Ｒ，ｅｔ ａｌ．「患者由来の転移性および化学療法抵抗性乳癌細胞に対して活性な選択的小分子を同定するためのスクリーニングの開発（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｓｃｒｅｅｎ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｃｔｉｖｅ ａｇａｉｎｓｔ ｐａｔｉｅｎｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ）」。Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１３；１５（４）：Ｒ５８。細胞を培養し、１０ｃｍプレート中で処置した。細胞を、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ）を添加した、非放射性の放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、および１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）中で収集した。タンパク質濃度を、ＢＣＡアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて測定し、ＳＤＳポリアクリルアミドゲルを用いるゲル電気泳動によって５０μｇのタンパク質を分離した。タンパク質をＩｍｍｏｂｉｌｏｎ−ＦＬ ＰＶＤＦ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、米国マサチューセッツ州ビレリカ）に移し、Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファー（Ｌｉ−ＣＯＲ）を用いて室温で１時間、膜をブロッキングした。Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファーに希釈した一次抗体とともに膜を４℃で一晩インキュベートした後、トリス緩衝生理食塩水で洗浄した。Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファーに希釈した二次抗体を用いる室温で１時間のインキュベーションの後、Ｏｄｙｓｓｅｙ Ｉｎｆｒａｒｅｄ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（ＬＩ−ＣＯＲ）でブロットを画像化した。

【0248】

細胞増殖の測定：細胞を、処置の終わりに穴が約８０％コンフルエントとなるような密度で６穴プレートに播種した。細胞を、低血清（２％ＦＢＳ）培地に希釈した薬剤で適切な時間の間処置した後、５−エチニル−２’−デオキシウリジン（ＥｄＵ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を直接培地に添加して、１０μＭ ＥｄＵの終濃度を達成した；次に、細胞を３７℃で３０分間インキュベートした。ＥｄＵ取り込みおよびヨウ化プロピジウム染色は、製造業者のプロトコールに従ってフローサイトメトリー（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって評価し、Ｇｌｉｇｏｒｉｃｈ ｅｔ ａｌに記載されるように分析した。

【0249】

酸化ストレスの測定：薬剤処置により誘発される酸化ストレスを、２’，７’−ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテート（Ｈ２ＤＣＦＤＡ）の酸化を測定することにより評価した。手短に言えば、細胞を６穴プレートに播種し、低血清（２％ＦＢＳ）培地に希釈した薬剤で適切な時間の間処置した。次に、３０μＭ Ｈ２ＤＣＦＤＡを含有するＨＢＳＳと培地を交換し、プレートを室温で３０分間インキュベートした。次に、細胞をトリプシン処理し、２％ ＦＢＳ／ＨＢＳＳで洗浄し、フローサイトメトリーによる分析のために２％ ＦＢＳ／ＨＢＳＳに再懸濁した。各条件の相対平均蛍光を対応する溶媒処理対照に正規化し、その後、値を平均±標準誤差としてプロットした。

【0250】

インビボＺＮＡ研究：マウス研究は、施設の実験動物委員会の認可を得て実施した。ＦＶＢ／ＮＪマウスは、Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（米国メイン州バーハーバー）より入手した。インビボ研究の準備のために、ＥＦ１α−ＰｙＭＴマウス乳房腫瘍をドナーマウスにおいて作成し、腫瘍を切除し、Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ（６）によって既に記載されているように単細胞として調製した。これらの細胞をマトリゲル（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に懸濁し、３週齢の雌レシピエントＦＶＢ／ＮＪマウスの取り除かれていない乳房の脂肪パッドに注射した（注射１０μＬあたり細胞５０，０００個）。移植の２１日後に、マウスを無作為化し、薬剤処置を開始した；マウスは２１日間１日１回処置され、腫瘍直径≧２ｃｍをエンドポイントとして定めた。ＤＭＳＯに希釈し、次にリン酸緩衝生理食塩水に希釈して最終ＤＭＳＯ濃度が５％のＺＮＡを２００μＬ腹腔内注射によって、ＺＮＡ（１００ｍｇ／ｋｇ）またはマッチさせた溶媒対照を各々のマウスに投与した。ＺｎＳＯ_４を、２１日の処置期間の間、適切な群に飲水（２５ｍＭ ＺｎＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ）経由で連続的に投与した。

【0251】

統計：スチューデントｔ検定（独立標本）を使用して統計的有意性を評価し、ｐ≦０．０５を統計学的に有意であるとした。カプラン−マイヤー生存曲線間の統計的有意性は、Ｐｒｉｓｍ６．０（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いるマンテル・コックス検定により測定した。統計的有意性に注釈を施すために以下のＰ値を使用した：ｐ≦０．０５＝＊；ｐ≦０．０１＝＊＊；ｐ≦０．００１＝＊＊＊。
実施例５４：癌細胞に対するジナアミドール（ＺＮＡ）の選択的細胞毒性

【0252】

患者由来の転移性癌細胞を選択的に死滅させることのできる新規な小分子を同定するため、検査（ｓｃｒｅｅｎ）を、５６０の化合物を用いて設計した。Ｇｌｉｇｏｒｉｃｈ Ｋ．，Ｖａｄｅｎ Ｒ．，Ｓｈｅｌｔｏｎ Ｄ．，Ｗａｎｇ Ｇ．，Ｍａｔｓｅｎ Ｃ．，Ｌｏｏｐｅｒ Ｒ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１３；１５（４）：Ｒ５８。ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ−ＨＭＥＣｓ）のレンチウイルス誘導性発現によって不死化させた正常なヒト乳腺上皮細胞を、化学療法抵抗性乳癌患者の胸水から得た一次転移細胞（ＰＥ１００７０７０）とともに使用して、化合物選択性をモデル化した。ｈＴＥＲＴ−ＨＭＥＣおよびＰＥ１００７０７０細胞を、ライブラリーからの各化合物２０μＭで４日間処理し、ＡＴＰ定量アッセイを用いてその後に細胞生存率を測定した；次に、データを溶媒処理対照に正規化した。

【0253】

この検査から、環式グアニジンコアを含有する小分子が、転移性腫瘍細胞を死滅させる一方で、正常な乳房上皮細胞を温存するその能力について特定された。異なる化学療法抵抗性乳癌患者から得た第２の胸水（ＰＥ１１０００２５）に対する１２ポイントの用量反応アッセイおける初期結果の検証により、小分子のジナアミドール（ＺＮＡ）が、腫瘍細胞に対して低いマイクロモル濃度で有効であり、高濃度でさえも比較的大きな治療処置ウィンドウを維持することが明らかになった（図１Ａおよび１Ｂ）。ＺＮＡは、一次転移性乳癌細胞を選択的に死滅させる一方で、正常な乳腺上皮細胞の大部分に影響を及ぼさなかった。

【0254】

ＺＮＡの乳癌選択性および細胞毒性の普遍性をさらに評価するために、３つの乳癌細胞株（ＭＣＦ−７、Ｔ４７Ｄ、およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１）および正常な乳腺上皮細胞株（ＭＣＦ−１０Ａ）を用いて用量反応アッセイを実施した；細胞生存率を、ＺＮＡかまたは溶媒対照の何れかによる処置の５日後に、ルシフェラーゼに基づくＡＴＰアッセイを用いて再び測定した。不死化ヒト乳腺上皮細胞および一次患者由来癌細胞と同様に、ＺＮＡによる処置の結果、調査した悪性細胞株において細胞生存率が低下したが、正常な乳腺上皮細胞の大部分は影響を受けなかった（図１Ｃ）。

【0255】

また、長期の細胞生存および増殖への短期のＺＮＡ処置の効果を評価するために、さらなる実験を実施した。細胞を２４時間ＺＮＡで処置した後、小分子の不在下で培養した；３週間の増殖の後、クリスタルバイオレットでコロニーを染色し、定量した（図１Ｄ）。このアッセイから、短期の曝露は、たとえ通常致死量以下の濃度でさえも、癌細胞での長期の増殖ポテンシャルに大きな影響を及ぼしたことが見出された；この場合も、用量反応アッセイと同様に、非形質転換ＭＣＦ−１０Ａ細胞への効果は、試験した悪性細胞種と比較して大きく弱められた。

【0256】

ＺＮＡが、３つの乳癌細胞株に加えて、悪性度の高い転移性患者由来の癌細胞に対して細胞障害性であったことを確立すると、トランスクリプトームシーケンシング実験を実施して、ＺＮＡの有効性および癌選択性の基本機構を研究した。ＭＣＦ−７乳癌細胞を、３０μＭ ＺＮＡまたはマッチさせた溶媒対照で３時間かまたは１２時間処置した；次に、ＲＮＡを単離し、次世代シーケンシングによってトランスクリプトームの特性を明らかにした。ＺＮＡによる処置の３時間後に最もアップレギュレートされた３つの遺伝子は、メタロチオネイン遺伝子ＭＴ１Ｆ、ＭＴ１Ｘ、およびＭＴ２Ａであった；この増加したメタロチオネイン遺伝子発現は、ＺＮＡ処置の１２時間後に維持されていた（図１Ｅ）。

【0257】

メタロチオネインファミリーのメンバーは、銅および亜鉛などの遷移金属を直接結合することが公知の、システインに富むレドックス活性タンパク質である（Ｔｈｉｒｕｍｏｏｒｔｈｙ ｅｔ ａｌ．に総説されている通り）。Ｔｈｉｒｕｍｏｏｒｔｈｙ Ｎ，Ｓｈｙａｍ Ｓｕｎｄｅｒ Ａ，Ｍａｎｉｓｅｎｔｈｉｌ Ｋｕｍａｒ ＫＴ，Ｓｅｎｔｈｉｌ ｋｕｍａｒ Ｍ，Ｇａｎｅｓｈ ＧＮＫ，Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅ Ｍ．「Ａ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ Ｉｓｏｆｏｒｍｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ Ｒｏｌｅ ｉｎ Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ」。Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ ２０１１；９（１）：５４。さらに、メタロチオネインは、細胞内金属分布および金属イオン封鎖に関与し、適切な細胞の酸化還元状態の維持に役割を果たすと考えられる。Ｔｈｏｒｎａｌｌｅｙ ＰＪ，Ｖａｓａｋ Ｍ．Ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ ｉｎ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ｒａｄｉａｔｉｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ．Ｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｉｔｓ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ａｎｄ ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ−Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １９８５；８２７（１）：３６−４４。Ｃｈｉａｖｅｒｉｎｉ Ｎ，Ｄｅ Ｌｅｙ Ｍ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ ｏｎ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ．ＦＲＡ ２０１０；４４（６）：６０５−１３。

【0258】

トランスクリプトームのプロファイリングはまた、ＺＮＡ処置の結果、亜鉛輸送タンパク質ＳＬＣ３０Ａ１およびＳＬＣ３０Ａ２をコードする２つの転写物の発現の増加も明らかにした。しかし、この効果は３時間の処置の後にのみ明らかであり、転写の増加はＺＮＡによる処置の１２時間後に維持されなかった。ＳＬＣ３０Ａ２およびＳＬＣ３０Ａ１は、Ｚｎ^２＋輸送体のＺｎＴファミリーの２つのメンバーをコードする遺伝子である。

【0259】

ＭＴタンパク質は細胞内金属輸送および金属イオン封鎖に関与していることが公知であり、ＺｎＴタンパク質はＺｎ^２＋輸送能力において機能することが示されているので、処置の後に観察される遺伝子発現の変化が、ＺＮＡ誘発性金属ホメオスタシス不全、特にＺｎ^２＋不均衡に応答して起こることは納得できる。Ｐａｌｍｉｔｅｒ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ Ｊ １９９６；１５（８）：１７８４−９１；Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ ２００９；４５０（２）：２０６−１０を参照されたい。

【0260】

その他の細胞株での転写へのＺＮＡの効果の程度を評価するために、リアルタイムＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）実験を、トランスクリプトームシーケンシング分析から同定した５つの金属輸送遺伝子に対するプライマーを用いて実施した。３つの乳癌細胞株（ＭＣＦ−７、Ｔ４７Ｄ、およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１）および正常な乳腺上皮細胞株（ＭＣＦ−１０Ａ）を、３０μＭのＺＮＡまたはマッチさせた溶媒対照で３時間かまたは２４時間処理し、遺伝子発現をＲＴ−ＰＣＲにより測定した（図１Ｆ）。ＺＮＡによる処置は、調査した４つの細胞株において金属輸送遺伝子の転写の増加を刺激したが、これらの変化は細胞株によって規模も一時的誘導も異なった。まとめると、トランスクリプトームのプロファイリングおよびＲＴ−ＰＣＲの結果は、ＺＮＡ処置が細胞内金属輸送に影響を及ぼすことを示唆し、一方でＳＬＣ３０Ａ１およびＳＬＣ３０Ａ２に関連する転写の変化は、亜鉛ホメオスタシス不全の特別な役割を示唆する。ＭＴタンパク質は細胞内金属輸送および金属イオン封鎖に関与していることが公知であり、ＺｎＴタンパク質はＺｎ^２＋輸送能力において機能を果たすことが示されているので、遺伝子発現の変化が、ＺＮＡに誘導されたＺｎ^２＋不均衡の結果であると仮定した。Ｐａｌｍｉｔｅｒ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ Ｊ １９９６；１５（８）：１７８４−９１；Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ ２００９；４５０（２）：２０６−１０を参照されたい。

【0261】

金属輸送遺伝子の転写の変化がＺＮＡの作用機構に機能的に関連しているかどうかを判断するために、蛍光指示薬ＦｌｕｏＺｉｎ−３を用い、それに続いてフローサイトメトリー分析によって細胞内Ｚｎ^２＋を定量した（図１Ｇ）。４つの細胞株を、３０μＭ ＺＮＡまたはマッチさせた溶媒対照で１、３、２４または４８時間処理した後、Ｚｎ^２＋指示薬で染色し、それらの蛍光を測定した。ＭＣＦ−７乳癌細胞で、ＺＮＡは４８時間の処置後にＦｌｕｏＺｉｎ−３蛍光が１３倍増加した。しかし、ＭＣＦ−７細胞でのこの結果は、調査したその他の３つの細胞株の細胞内亜鉛のあまり多くない増加を上回ったにすぎない。

【0262】

メタロチオネイン遺伝子発現の増加が細胞内亜鉛の上昇を弱めることに関与する可能性を考慮して、細胞を転写阻害剤（アクチノマイシンＤ、ＡＣＴＤ）とともに２４時間ＺＮＡに曝露し、その後に細胞内亜鉛をＦｌｕｏＺｉｎ−３染色によって測定した（図７）。ＺＮＡ非感受性のＭＣＦ−１０Ａ細胞を除いて、全ての細胞をＺＮＡおよびＡＣＴＤで同時に処置することにより、ＺＮＡ単独と比較して、細胞内Ｚｎ^２＋に統計学的に有意な増加がもたらされ、ＭＣＦ−７およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞が最も劇的に反応した。これらのデータは、ＺＮＡが細胞内Ｚｎ^２＋の増加を刺激するので、金属輸送遺伝子転写の同時増加が細胞内Ｚｎ^２＋の蓄積を弱める働きをすることを示唆する。
実施例５５：ＺＮＡとのＣｕ^２＋およびＺｎ^２＋の相乗作用

【0263】

細胞内亜鉛の増加を刺激するＺＮＡの能力および金属輸送遺伝子の転写へのその影響を考慮して、研究を次に開始して、外因的に添加した遷移金属と組み合わせて処置される細胞へのＺＮＡの影響を判断した。３つの乳癌細胞株（ＭＣＦ−７、Ｔ４７Ｄ、およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１）と正常な乳腺上皮細胞株（ＭＣＦ−１０Ａ）を、３０μＭ ＺＮＡで、３０μＭ ＣｕＳＯ_４、ＺｎＳＯ_４、Ｆｅ（ＩＩＩ）Ｃｌ_３、Ｆｅ（ＩＩ）ＳＯ_４、ＮｉＳＯ_４、ＭｎＣｌ_２、またはＣｏＣｌ_２とともに、４８時間処置した；処置の終了後、ＡＴＰ定量化アッセイを用いて細胞生存率を測定した（図２Ａ）。驚くべきことに、ＺＮＡとＣｕ^２＋の間に相乗作用が見出され、細胞生存率のかなりの低下が、処置後のあらゆる細胞株で観察された。同様の著しい相乗作用は、ＺＮＡとＺｎ^２＋の間にも観察されたが、この例では、乳癌細胞株だけが併用療法の結果として細胞生存率の低下を経験した；正常な乳腺上皮細胞は、細胞数の部分的減少だけを示した。対照的に、残留する５つの遷移金属との組合せ処置は、ＺＮＡ単独による処置と比較して、細胞生存率に重要な変化をもたらさなかった。

【0264】

遷移金属検査を第２の細胞生存率アッセイで検証するために、ヨウ化プロピジウム取り込みを、単独かまたは３０μＭ ＣｕＳＯ_４もしくは３０μＭ ＺｎＳＯ_４と組み合わせた３０μＭ ＺＮＡによる２４時間処置後に、フローサイトメトリーによって４つの細胞株で測定した（図２Ｂ）。ＡＴＰ定量化アッセイを用いて４８時間で得た測定値に一致して、ヨウ化プロピジウム染色実験は、ＺＮＡはＣｕ^２＋とＺｎ^２＋の両方と相乗的であり、組合せはＺＮＡ単独よりも急速に癌細胞において細胞死を誘発することを明らかにした。しかし最も特に、正常な乳腺上皮細胞株はＺＮＡおよびＺｎ^２＋の組合せによる影響を受けなかった。実施例５６：細胞外Ｚｎ^２＋取り込みのＺＮＡの促進

【0265】

ＺＮＡとＺｎ^２＋の間に観察される癌選択的相乗作用をより理解するために、蛍光Ｚｎ^２＋指示薬ＦｌｕｏＺｉｎ−３を用いて細胞内Ｚｎ^２＋を測定する実験を行った。ＭＣＦ−１０Ａ、ＭＣＦ−７、Ｔ４７Ｄ、およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、３０μＭ ＺＮＡ単独かまたは３０μＭ ＺｎＳＯ_４と併せた３０μＭ ＺＮＡのいずれかで３時間処理した後、ＦｌｕｏＺｉｎ−３で染色し、その後フローサイトメトリーにより分析した（図３Ａ）。調査した３つの乳癌細胞株は、ＺＮＡとＺｎ^２＋の組合せ処置の結果としてＦｌｕｏＺｉｎ−３蛍光の３４倍以上の増加を経験し、一方、ＺＮＡ非感受性の正常な乳腺上皮細胞株では、ＦｌｕｏＺｉｎ−３蛍光の９倍の増加しか観察されなかった。

【0266】

ＺＮＡが細胞内Ｚｎ^２＋の増加を刺激する能力をさらに調査し、ＭＣＦ−１０ＡおよびＭＣＦ−７細胞を、亜鉛を含まない培地中で３０μＭ ＺＮＡ（外因性のＺｎＳＯ_４を含むものと含まないもの）で３時間処置した；その後、細胞内亜鉛をＦｌｕｏＺｉｎ−３染色により定量した（図３Ｂ）。この実験から、いずれの細胞株においてもＺＮＡ単独による処置の後に、ＦｌｕｏＺｉｎ−３蛍光の有意な増加は観察されなかった。しかし、ＺＮＡとＺｎＳＯ_４による組合せ処置は、ＭＣＦ−７細胞でＺｎＳＯ_４単独と比較して蛍光の４．３倍の増加をもたらし、一方ＭＣＦ−１０Ａ細胞は、同じ条件下で蛍光の低下を経験した。この結果は、ＭＣＦ−７細胞において、ＺＮＡが主に細胞膜を横切るＺｎ^２＋輸送を調節することを示唆する。

【0267】

ＺＮＡとＺｎ^２＋の組合せ効果をさらに検証するために、高周波誘導結合プラズマ−原子発光分析（ＩＣＰ−ＡＥＳ）を用いて、処置後の細胞のＺｎ^２＋の絶対レベルを定量化した。４つの細胞株を、回収の前に、３０μＭ ＺＮＡ単独かまたは３０μＭ ＺｎＳＯ_４と併せた３０μＭ ＺＮＡのいずれかで３時間処置した。次に、試料をＩＣＰ−ＡＥＳにより分析し、得られるデータを総タンパク質に正規化した（図８）。ＭＣＦ−７、Ｔ４７Ｄ、およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞中のＺｎ^２＋の濃度は、ＺＮＡとＺｎＳＯ_４による組合せ処置の後に、タンパク質１マイクログラムあたり、それぞれ、１．３５、０．５２、および０．８２ｎｇ Ｚｎ^２＋であることが分かった。対照的に、イオンは、他の細胞種に類似するタンパク質濃度の分析にもかかわらず、同じ処置の後にＺＮＡ非感受性のＭＣＦ−１０Ａ細胞において、ＩＣＰ−ＡＥＳによって検出不能であった（すなわちレベルが１．００μｇ／Ｌの検出限界よりも低かった）。ＩＣＰ−ＡＥＳ実験から得た値は、Ｚｎ^２＋のＦｌｕｏＺｉｎ−３測定の後に観察される傾向に相関し、フルオロフォアの他のイオンよりもＺｎ^２＋に対する特異性が確認される。まとめると、これらの研究の結果は、ＺＮＡが、細胞膜を横切る輸送によって細胞内Ｚｎ^２＋の増加を促進することを実証する。しかし特に注目されるのは、ＺＮＡ非感受性のＭＣＦ−１０Ａ細胞が、調査した３つの乳癌細胞株よりも処置後の細胞内Ｚｎ^２＋の変動が小さく、ＺＮＡの癌選択性の原理が示唆されることである。

【0268】

実施例５７：選択的増殖抑制およびカスパーゼ非依存性細胞死誘導
ＺＮＡが外因的に付加されたＺｎ^２＋と強く協同して急速かつ癌特異的な細胞死を促進することを見出したので、処置の細胞増殖への影響を判定し、組合せ処置によって誘導された細胞死を特徴づけるための実験を実施した。最初に、５−エチニル−２’−デオキシウリジン（ＥｄＵ）取り込みアッセイを利用して、ＺＮＡおよびＺＮＡ／ＺｎＳＯ_４処置の細胞増殖への影響を評価した。組合せ処置は、ＺＮＡ単独での処置よりも急速に細胞死をもたらし、これは単一の時点で検証する単一処置と組合せ処置の比較を行うものであるので、２つの時点を増殖アッセイに選択した；細胞を小分子とともに６時間（組合せ処置用）または２４時間（ＺＮＡ単独処置の場合）培養し、その後にＥｄＵとともにインキュベートした。ＭＣＦ−１０Ａ、ＭＣＦ−７、Ｔ４７Ｄ、およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、小分子とともに６時間培養し、その後にＥｄＵとともにインキュベートした；その後、ＥｄＵ取り込みをフローサイトメトリーによって測定した（図４Ａ）ＺＮＡ単独での処置は、ＭＣＦ−７およびＴ４７Ｄ細胞においてＥｄＵ取り込みの統計学的に有意な低下をもたらしたが、ＭＣＦ−１０ＡおよびＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞ではそうではなかった。しかし、最も興味深いことは、ＺＮＡ／ＺｎＳＯ_４の増殖への組合せ効果であった：たった６時間の処置の後に、正常な乳腺上皮細胞株も多少影響を受けたものの、調査した３つの癌細胞株は、増殖の完全な遮断を提示した。これらの著しい結果は、Ｚｎ^２＋ホメオスタシス不全が、ＺＮＡ処置によって観察される癌選択的表現型に直接寄与するという考えを再び裏付ける。

【0269】

ＺＮＡ処置細胞がアポトーシスを受けるかどうかを確立するため、カスパーゼ３／７、８および９の活性を、ルシフェラーゼに基づくカスパーゼ−Ｇｌｏアッセイを用いて測定した。ＭＣＦ−１０Ａ、Ｔ４７Ｄ、およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、３０μＭ ＺＮＡ、３０μＭ ＺｎＳＯ_４と組み合わせた３０μＭ ＺＮＡ、または適切な対照で６時間処理した；ＭＣＦ−７細胞は、これらの細胞が機能性カスパーゼ３を欠くために実験に含めなかった。Ｊａｎｉｃｋｅ ＲＵ，Ｓｐｒｅｎｇａｒｔ ＭＬ，Ｗａｔｉ ＭＲ，Ｐｏｒｔｅｒ ＡＧ．Ｃａｓｐａｓｅ−３ Ｉｓ Ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ＤＮＡ Ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈａｎｇｅｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９９８；２７３（１６）：９３５７−６０。次に、カスパーゼ活性を各条件について測定し、溶媒処理対照に正規化した（図４Ｂ）。驚くことに、カスパーゼ ３／７、８、または９活性は、陽性対照（１μＭスタウロスポリン、ＳＴＳ）を除いて、調査した４つの細胞株において何れの処置条件についても観察されなかった。さらに、４つの細胞種の長期間（７２時間）の３０μＭ ＺＮＡによる処置も、カスパーゼ３／７、８または９を活性化しなかった。これらのデータは、単独のＺＮＡまたはＺｎＳＯ_４と組み合わせたＺＮＡが、従来のカスパーゼ媒介アポトーシス細胞死を促進しないことを示唆する。

【0270】

ＺＮＡ処置により癌細胞で誘導される細胞死の種類をさらに解明するため、次の実験は、ＺＮＡが受容体相互作用プロテインキナーゼ１（ＲＩＰ１）を伴う機構によって細胞死を媒介するかどうかを調査した。ＲＩＰ１は、ネクロトーシス（壊死の形態学的特徴を提示し、カスパーゼ活性化とは独立して起こり、ＲＩＰ１抑制により阻止することのできるプログラム細胞死の一形態）に直接関与することが示されている。Ｄｅｇｔｅｒｅｖ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ ２００５；１（２）：１１２−１９。

【0271】

したがって、ＭＣＦ−７細胞を、単独でもしくはＺｎＳＯ_４と組み合わせた３０μＭ ＺＮＡおよび／あるいはＲＩＰ１阻害剤ネクロスタチン−１で２４時間処理した；陽性対照である小分子シコニンもアッセイに含めた。Ｈａｎ Ｗ ｅｔ ａｌ．Ｓｈｉｋｏｎｉｎ ｃｉｒｃｕｍｖｅｎｔｓ ｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｂｙ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｅｃｒｏｐｔｏｔｉｃ ｄｅａｔｈ．Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ ２００７；６（５）：１６４１−４９。細胞を、その後にヨウ化プロピジウムで染色し、蛍光をフローサイトメトリーによって測定して細胞死を定量した（図５Ａ）。ＺＮＡおよびＺｎＳＯ_４の相乗的な組合せの結果、ＺＮＡ単独よりも大幅に高いレベルの細胞死がもたらされたが、ネクロスタチン−１を添加しても細胞死の救済は観察されなかった。これらのデータは、ＲＩＰ１がＺＮＡに促進されるＭＣＦ−７細胞死を媒介しないことを示唆する；そのため、ＺＮＡの作用機構はネクロトーシスの誘導によって起こりそうにない。

【0272】

さらなる細胞死の特徴づけ研究も実施して、ＺＮＡに媒介される細胞死におけるオートファジーの役割を確立した。ＺＮＡによる処置の後のオートファジー誘導のレベルを評価するために、オートファゴソーム関連タンパク質ＬＣ３Ａ／Ｂのレベルをウエスタンブロット分析により測定した。ＬＣ３の発現の増加と１６ｋＤａ ＬＣ３−Ｉアイソフォームの加工された１４ｋＤａ ＬＣ３−ＩＩアイソフォームへの変換の両方が、オートファジープロセスの指示役として使用されている。Ｋａｂｅｙａ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ Ｊ ２０００；１９（２１）：５７２０−２８。ＭＣＦ−１０Ａ、ＭＣＦ−７、Ｔ４７Ｄ、およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、３０μＭ ＺＮＡ、３０μＭ ＺｎＳＯ_４と組み合わせた３０μＭ ＺＮＡ、または適切な対照で６時間処理した後、ウエスタンブロットによる分析のために細胞を回収した（図５Ｂ）。ＺＮＡ処置の４８時間および７２時間後にＬＣ３の増加を観察したが、癌細胞株においてのみであった。ＺＮＡとＺｎＳＯ_４の組合せによって誘導される急速な細胞死を考慮して、より早い時点（６時間）を選択して組合せ処置条件のＬＣ３レベルを評価した。組合せ処置の結果、Ｔ４７Ｄ細胞のＬＣ３タンパク質の明らかな増加がもたらされたが、著しい増加は試験したその他の３つの細胞株で観察されなかった。

【0273】

オートファジーは、プロ死経路とプロ生存経路の両方を刺激することができるので、オートファジー阻害剤がどのようにＺＮＡの細胞死プロフィールに影響するのかを評価する実験を次に実施した。オートファジーがＺＮＡ誘導性の細胞死の一因となるならば、オートファジープロセスの阻害剤は、ＺＮＡに促進される細胞死を減らすものと期待される。Ｄａｌｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｕｔｏｐｈａｇｙ ２０１０；６（３）：３２２−２９を参照されたい。したがって、オートファゴソーム機能の阻害剤であるクロロキンと組み合わせたＺＮＡで細胞を処置し、７２時間の処置後にヨウ化プロピジウム染色によって細胞死を評価した。Ｋｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１３；７３（１）：３−７。これらの実験から、クロロキン処置はＴ４７Ｄ細胞においてＺＮＡ誘導性細胞死を減少させたが、評価した他の３つの細胞種において細胞死にあまり影響を及ぼさなかったことが見出された（図５Ｃ）。

【0274】

まとめると、これらの実験の結果は、ＺＮＡ処置だけでも、癌細胞においてオートファジープロセスを刺激することができ、少なくともＴ４７Ｄ細胞の場合、これらのプロセスが細胞死表現型に寄与することを示唆する。ＺＮＡおよびＺｎＳＯ_４による組合せ処置がＺＮＡ単独と同じレベルのＬＣ３を誘導しないことは、２つの処置条件の異なる細胞死速度を反映する可能性がある；組合せ処置は、細胞のオートファジー応答の開始よりも迅速に傷害を誘導する可能性がある。ＺＮＡは、リソソームを破裂させ、それによりカテプシンおよびその他の加水分解酵素（迅速な壊死性細胞死をもたらす）を放出することによって細胞死を引き起こす可能性がある。

【0275】

ＺＮＡによって誘導されるカスパーゼ非依存性細胞死をさらに調査し、細胞死プロセス中の酸化ストレスの程度を特徴づける実験を次に実施した。そのため、ＭＣＦ−１０Ａ、ＭＣＦ−７、Ｔ４７Ｄ、およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、３０μＭ ＺＮＡ、３０μＭ ＺｎＳＯ_４と組み合わせた３０μＭ ＺＮＡ、または適切な対照で最大４８時間処置し、２’，７’−ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテート（Ｈ２ＤＣＦＤＡ、ＤＣＦ）の酸化を酸化不均衡の指示薬として使用した；ＤＣＦ蛍光をフローサイトメトリーにより測定し、その後に適切な溶媒処理対照に正規化した（図５Ｃ）。これらの結果により、ＺＮＡは単独でＤＣＦ蛍光のわずかな増加を刺激し；対照的に、ＺＮＡおよびＺｎＳＯ_４の組合せ処置は、結果としてそれらのそれぞれの対照と比較して３つの癌細胞株においてＨ２ＤＣＦＤＡ酸化の統計学的に有意な減少をもたらしたことが明らかになった。ＺＮＡとＺｎＳＯ_４の組合せ処置で観察されたＨ２ＤＣＦＤＡ酸化のレベルの低下は、細胞内Ｚｎ^２＋の増加と酸化ストレスの低下との間の関連を詳しく述べる文献報告と一致している。例えば、Ｈｏ Ｅ，Ａｍｅｓ ＢＮ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２００２；９９（２６）：１６７７０−７５。抗酸化薬Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）によるこの増加を抑制する試みはＴ４７Ｄ細胞でのみ成功した；しかし、付随する細胞死の減少は観察されなかった（図９）。まとめてこれらは酸化ストレスのＺＮＡに媒介される細胞死における重要な役割を裏付けることはできない。

【0276】

要するに、ＺＮＡ処置の結果、乳癌細胞の迅速な増殖停止およびカスパーゼ非依存性細胞死がもたらされた。アポトーシスの代わりの細胞死経路を考慮して、ネクロトーシスまたはオートファジーがＺＮＡに媒介される細胞死に役割を果たすのかどうかを確証するためのさらなる研究を実施した。これらの実験の結果は、ネクロトーシスに対して示唆されたが、オートファジー関連タンパク質ＬＣ３の誘導を測定するウエスタンブロット実験により、ＺＮＡ単独の処置がＬＣ３の癌細胞特異的増加を刺激した；しかし、ＺｎＳＯ_４と組み合わせたＺＮＡによる処置は、Ｔ４７Ｄ細胞においてのみＬＣ３の増加をもたらしたことが明らかになった。組合せ処置がＺＮＡ単独処置よりもはるかに急速に癌細胞死をもたらしたので、２つの処置条件は異なる細胞死経路を惹起すると思われる。ＺＮＡ単独による処置はオートファジーを誘導すると思われるが、組合せ処置は、オートファジー開始が起こり得る前に大きな損傷を誘導する可能性がある。この場合、ヨウ化プロピジウム染色によって識別される膜の完全性の急速な喪失は壊死と一致し、それは単独で、あるいは調査した細胞種に依存するオートファジーと併せて起こることがある。壊死は、ＬＣ３誘導が観察される場合でも、ＺＮＡ処置によってＭＣＦ−７およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞により惹起される細胞死の一形態であり得る。

【0277】

ネクロトーシスまたはオートファジーがＺＮＡに媒介される細胞死に役割を果たすのかどうかを確証するためのさらなる研究を実施した。これらの実験の結果は、ネクロトーシスに対して示唆されたが、オートファジー関連タンパク質ＬＣ３の測定により、ＺＮＡの処置がＬＣ３の癌細胞特異的増加を刺激した；しかし、ＺｎＳＯ_４と組み合わせたＺＮＡによる処置は、Ｔ４７Ｄ細胞においてのみＬＣ３の増加をもたらしたことが明らかとなった。興味深いことに、細胞をＺＮＡとオートファジーの阻害剤であるクロロキンで同時に処置すると、細胞死はＴ４７Ｄ細胞においてのみ低下し、オートファジーがＴ４７Ｄ細胞死の一部の成分を媒介することを示唆する結果となる。試験した他の３つの細胞種での細胞死を抑制（または促進）する際のクロロキンの相対的な無効性は、オートファジープロセスがＺＮＡによる処置後の細胞の結果にあまり影響を及ぼさないことを示唆する。したがって、

【0278】

ＺＮＡ処置が金属輸送遺伝子の誘導を刺激したという知見は、培養細胞に外因的に付加された生体関連遷移金属と組み合わせて使用された場合の小分子の影響の評価を促した。興味深いことに、試験した７つの遷移金属のうち２つだけが、ＺＮＡだけの処置と比較して、ＺＮＡと同時に添加された場合に、細胞生存率に影響を及ぼした。Ｃｕ^２＋は相乗的であるが非選択的であり、おそらく銅の一般的な毒性のためにＭＣＦ１０ＡとＭＣＦ７を死滅させる。しかし、Ｚｎ^２＋は選択的に相乗的であり、ＭＣＦ７の死滅に効果的であるが、非形質転換１０Ａには効果的でない。細胞をＺＮＡとＺｎＳＯ_４で同時に処置することにより、相乗的かつ癌選択的細胞毒性がもたらされ、一方、ＺＮＡとＣｕＳＯ_４で同時に処置することにより、正常な細胞と癌細胞の両方が死滅する。これは、ＺＮＡの癌選択的細胞毒性が細胞内Ｚｎ^２＋のホメオスタシス不全を伴う機構に基づくという仮説に一致する知見である。小分子と亜鉛かまたは銅のいずれかとの間の直接相互作用を試験するよう設計された等温滴定熱量測定研究は、直接結合を示唆する証拠をもたらさなかった（データは示さず）。正常な乳腺上皮細胞においてＺＮＡと組み合わせて使用した場合に亜鉛および銅によって誘発される反応差の説明を考える場合、ＺＮＡは、Ｚｎ^２＋とＣｕ^２＋の取り込みを等しく促進することができるが、非形質転換細胞は形質転換細胞よりも効率的にＺｎ^２＋を輸送および排出する能力を有すると仮定することが合理的である。

【0279】

実施例５８：インビボ腫瘍増殖の抑制−マウス乳房腫瘍モデル
次の実験は、生物腫瘍モデル全体におけるＺＮＡにより標的化された生物学的経路の関連性を確立した。生物活性を確立するため、ＺＮＡに対する正常組織の応答を評価した。腫瘍を持たないＦＶＢ／ＮＪマウスを、ＺＮＡ（１００ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射により投与）または対照で３時間かまたは２４時間処置した。ＲＴ−ＰＣＲを使用して、処置マウス由来の腎および肝組織のマウスメタロチオネイン発現（ＭＴ１およびＭＴ２）を評価した。結果から、ＭＴ１およびＭＴ２発現は、対照処理マウスと比較して３時間のＺＮＡ処置後に増加したが、２４時間後に低下したことが明らかになった。この傾向は乳癌細胞株で実施した類似するインビトロＲＴ−ＰＣＲ実験の結果に一致する（図６Ａおよび図１Ｆ）。これらの予備実験は、ＺＮＡがインビボモデルおよびインビトロモデル間で同様に金属輸送経路を調節することを示唆した。

【0280】

次に、化合物の有効性をインビボ腫瘍モデルで試験した。マウス乳房腫瘍を３週齢の雌レシピエントＦＶＢ／ＮＪマウスの脂肪パッドにＳｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅｓ Ｃａｎｃｅｒ ２０１２；３（９−１０）：５５０−６３の手順に従って移植した。処置を開始する前に腫瘍を３週間増殖させた。マウスは２１日間１日１回処置し、４つの処置条件を評価した：ＺＮＡ（１００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内投与による）、ＺｎＳＯ_４（２５ｍＭ、飲水経由で処置期間の間連続的に投与）、ＺＮＡとＺｎＳＯ_４の組合せ、および対照群（ＰＢＳ、腹腔内注射により投与）；２ｃｍよりも大きい腫瘍直径をエンドポイントとして定めた。２１日の薬剤処置の終了後、ＺＮＡだけか、またはＺｎＳＯ_４と組み合わせて投与されたＺＮＡによる処置は、対照処置群またはＺｎＳＯ_４のみの群と比較して、それぞれ、統計学的に有意な生存優位性をもたらした（図６Ｂ）。その上、一般的な毒性、有害反応、または体重の減少は、ＺＮＡまたはＺＮＡとＺｎＳＯ_４の組合せで処置したマウスにおいて観察されなかった。

【0281】

要するに、ＺＮＡは、Ｚｎ^２＋と強い相乗作用を示してカスパーゼ非依存的機構による癌選択的細胞死を誘導する。ＺＮＡは、複数の第一線の化学療法薬で処置した乳癌患者に由来する一次転移細胞に対して効果的であることが見出され、小分子のインビボ有効性は、マウス乳房腫瘍モデルを用いて確立された。ＺＮＡとＺｎＳＯ_４の同時処置は、ＺＮＡかまたはＺｎＳＯ_４のいずれかのみでの処置と比較して、細胞内Ｚｎ^２＋の著しい増加を誘導し（イオノフォアの明確な特徴）、急速な癌細胞死をもたらした。

【0282】

合わせて考えると、本明細書に提示されるデータは、Ｚｎ^２＋輸送経路を不安定化することおよび細胞内Ｚｎ^２＋ホメオスタシス不全を誘発することが、乳癌を選択的に標的化するための実行可能な機構であることを示唆する。さらに、化学療法抵抗性患者由来の腫瘍細胞に対するＺＮＡの活性（これは、患者の処置開始後に乳癌の分子およびゲノムの特徴をモデル化したものである）は、影響を受けた経路が臨床的に関連することを示唆し、将来の治療学の開発戦略への洞察をもたらす。

【0283】

実施例５９：ベンジル（Ｅ）−４−（４−（ベンジルオキシ）ベンジル）−２−（（４−メトキシベンゾイル）イミノ）−５−（（Ｚ）−４−メトキシベンジリデン）−３−メチルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（５２）の調製

【化76】

撹拌棒を装備した５ｍＬ丸底フラスコに、（Ｚ）−ベンジル ４−（４−（ベンジルオキシ）ベンジル）−２−イミノ−５−（４−メトキシベンジリデン）−３−メチルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（０．０５ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ_３（０．０２５ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）、４−メトキシベンゾイルクロライド（０．０２３ｇ、０．１４ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（０．９ｍＬ）を添加した。反応物を１時間撹拌させた。反応混合物を濃縮し、２：１ ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、化合物５２を黄色の油状物質として得た（０．０５４ｇ、８８％）。Ｒ_ｆ＝０．４８（２：１ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ８．０８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．４４−７．２８（ｍ，５Ｈ），７．２４−７．０４（ｍ，５Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），６．８３−６．７１（ｍ，６Ｈ），５．４４（ｓ，１Ｈ），５．００（ｓ，２Ｈ），４．８０（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｄｄ，Ｊ＝３．９，６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ），３．０２（ｄｄ，Ｊ＝４．２，１３．５Ｈｚ，１Ｈ），２．７７（ｄｄ，Ｊ＝７．２，１３．５Ｈｚ，１Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）：δ１７５．３，１６２．５，１５８．９，１５８．０，１５１．６，１４９．３，１３７．１，１３４．７，１３３．７，１３１．８，１３１．２，１３０．２，１２９．８，１２９．５，１２８．８，１２８．７，１２８．３，１２８．２，１２８．０，１２７．６，１２７．４，１１７．４，１１４．９，１１３．８，７０．１，６８．６，６４．７，５５．６，５５．４，３８．１，３１．１；ＩＲ（薄膜）３０３３、２９３３、２８３７、１７４３、１５９８、１５０９、１４５４、１３７８、１２８１、１２３６、１１７６、１１６３、１１１０、１０７４、１０２７、９０７、８６１、８４４、８２６、７２６、６９６ｃｍ^−１。計算値Ｃ_４２Ｈ_３９Ｎ_３Ｏ_６ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）７０４．２７３７、測定値７０４．２７４２。

【0284】

実施例６０：ベンジル（Ｅ）−４−（４−（ベンジルオキシ）ベンジル）−５−（（Ｚ）−４−メトキシベンジリデン）−３−メチル−２−（（３−（トリフルオロメチル）ベンゾイル）イミノ）イミダゾリジン−１−カルボキシレート（５３）の調製

【化77】

撹拌棒を装備した５ｍＬ丸底フラスコに、（Ｚ）−ベンジル ４−（４−（ベンジルオキシ）ベンジル）−２−イミノ−５−（４−メトキシベンジリデン）−３−メチルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（０．０５ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ_３（０．０２５ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）、３−（トリフルオロメチル）ベンゾイルクロライド（０．０２０ｍＬ、０．１４ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（０．９ｍＬ）を添加した。反応物を１時間撹拌させた。反応混合物を濃縮し、２：１ ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、化合物５３を黄色の油状物質として得た（０．０６０ｇ、９４％）。Ｒ_ｆ＝０．６６（２：１ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ８．４１（ｓ，２Ｈ），８．３５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．５０（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４２−７．２９（ｍ，４Ｈ），７．２２−７．１１（ｍ，４Ｈ），７．００（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），６．７７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），５．５３（ｓ，１Ｈ），５．００（ｓ，２Ｈ），４．７９（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４２（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１３（ｄｄ，Ｊ＝４．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．１８（ｓ，３Ｈ），３．０４（ｄｄ，Ｊ＝４．５，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．８４（ｄｄ，Ｊ＝７．０，１３．５Ｈｚ，１Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）：δ１７３．９，１６０．９，１５８．９，１５８．０，１５２．９，１４９．０，１３８．０，１３７．０，１３４．２，１３３．８，１３２．９，１３２．０，１３１．８，１３１．４，１３１．１，１３０．４，１２９．９，１２９．５，１２９．２，１２８．５，１２８．２，１２７．５，１２６．８，１２５．４，１２４．４，１２３．３，１２２．３，１１７．７，１１４．８，１１３．７，７０．０，６８．９，６４．６，５５．２，３７．８，３０．９；ＩＲ（薄膜）２９３５．１７９７、１７４３、１６０６、１５１１、１４５５、１３７９、１３３２、１３１３、１３００、１２７５、１２４９、１２２６、１１６７、１１２４、１０７０、１０３３、９９６、９０８、８５８、８１８、７８９、７２９、６９３ｃｍ^−１。計算値Ｃ_４２Ｈ_３７Ｎ_３Ｏ_５Ｆ_３ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）７２０．２６８５、測定値７２０．２６８９。

【0285】

実施例６１：（Ｅ）−Ｎ−（５−（４−ヒドロキシベンジル）−４−（４−メトキシベンジル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）ベンズアミド（５４）の調製

【化78】

撹拌棒を装備した５ｍＬ丸底フラスコに、（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル ２−（ベンゾイルイミノ）−４−（４−（ベンジルオキシ）ベンジル）−５−（４−メトキシベンジリデン）−３−メチルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（０．０５ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ_２（０．０２５ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）およびメタノール（０．９ｍＬ）を添加した。反応物をＨ_２雰囲気バルーン下で完了するまで撹拌させた。反応混合物を、Ｗａｔｅｒｓ０．４５μＭ ＰＴＦＥ アクロディスクシリンジフィルターで重力濾過し、さらなるメタノールおよびＣＨ_２Ｃｌ_２ですすいだ。溶媒を除去し、生成物をジエチルエーテルでトリチュレートした。固体を単離して、化合物５４を灰白色固体として得た。Ｒ_ｆ＝０．４０（ＣＨ_２Ｃｌ_２中５％ＭｅＯＨ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，５００ＭＨｚ）：δ９．４１（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），７．６３（ｔ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ）６．８６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．６９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）４．０３（ｓ，２Ｈ），４．００（ｓ，２Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），３．１５（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，１２５ＭＨｚ）：δ１５８．５，１５６．７，１３３．３，１３０．４，１３０．０，１２９．５，１２９．０，１２８．９，１２７．０，１１６．０，１１４．４，５５．６，４９．０，３１．７，２８．７，２７．４ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３９２６、２９３２、１６８８ １６１２、１５１０、１４７４、１４５３、１４０８、１３６３、１３０１、１２４６、１１７４、１１０４、１０３３、９０８、８１８、７３１、７０６ｃｍ^−１。計算値Ｃ_２６Ｈ_２６Ｎ_３Ｏ_３ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）４２８．１９７４、測定値４２８．１９７３。

【0286】

実施例６２：（Ｅ）−２−フルオロ−Ｎ−（５−（４−ヒドロキシベンジル）−４−（４−メトキシベンジル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）ベンズアミド（５５）の調製

【化79】

撹拌棒を装備した５ｍＬ丸底フラスコに、（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル ４−（４−（ベンジルオキシ）ベンジル）−２−（（２−フルオロ−ベンゾイル）イミノ）−５−（４−メトキシベンジリデン）−３−メチルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（０．０５ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ_２（０．０２５ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）およびメタノール（０．９ｍＬ）を添加した。反応物をＨ_２雰囲気バルーン下で一晩撹拌させた。反応混合物をセライトで濾過し、さらなるメタノールですすいだ。一滴の（ｉＰｒ）_２ＮＨを溶液に添加し、混合させた。溶媒を除去し、１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃに溶かした。固体を濾過によって単離し、ジクロロメタンですすいで、化合物５５を灰白色固体として得た。Ｒ_ｆ＝０．３０（１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：δ９．２９（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｓ，１Ｈ），７．４３（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，４Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．６７（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），３．８９（ｓ，４Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），３．２０（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，１２５ＭＨｚ）：δ１５７．８，１５５．９，１３１．３，１２９．９，１２９．７，１２９．４，１２８．３，１１６．８，１１６．６，１１５．８，１１４．２，５５．４，２９．５，２７．７ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）１６８６、１５８１、１５１２、１４７８、１４４１、１３０５、１２４７、１１７３、１１５６、１１０５、９０４ｃｍ^−１。計算値Ｃ_２６Ｈ_２４Ｎ_３Ｏ_３Ｆ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）４６８．１６９９、測定値４６８．１７００。

【0287】

実施例６３：（Ｅ）−Ｎ−（５−（４−ヒドロキシベンジル）−４−（４−メトキシベンジル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−４−メトキシベンズアミド（５６）の調製

【化80】

撹拌棒を装備した５ｍＬ丸底フラスコに、ベンジル（Ｅ）−４−（４−（ベンジルオキシ）ベンジル）−２−（（４−メトキシベンゾイル）イミノ）−５−（（Ｚ）−４−メトキシベンジリデン）−３−メチルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（０．０５ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ_２（０．０２５ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）およびメタノール（０．９ｍＬ）を添加した。反応物をＨ_２雰囲気バルーン下で一晩撹拌させた。反応混合物をセライトで濾過し、さらなるメタノールですすいだ。一滴の（ｉＰｒ）_２ＮＨを溶液に添加し、混合させた。溶媒を除去し、１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃに溶かした。固体を濾過によって単離し、ジクロロメタンですすいで、化合物５６を灰白色固体として得た。Ｒ_ｆ＝０．３０（１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：δ９．４４（ｓ，１Ｈ），８．０７（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），６．６９（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），４．０６（ｓ，２Ｈ），４．０１（ｓ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，７５ＭＨｚ）：δ１６２．８，１５７．８，１５５．９，１３０．４，１２９．６，１２９．２，１２８．８，１２６．２，１１５．２，１１３．７，６４．６，５５．３，５４．８，３１．５，２７．８，２６．６，１４．９ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）２９２９、１６０５、１５８５、１５６９、１５１０、１４６５、１３６７、１３０３、１２４８、１１６６、１１０１、１０３０、９０６、８４３、８１５、７７０、７２８、６９２、６６８ｃｍ^−１。計算値Ｃ_２７Ｈ_２８Ｎ_３Ｏ_４ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）４５８．２０８０、測定値４５８．２０８３。

【0288】

実施例６４：（Ｅ）−Ｎ−（５−（４−ヒドロキシベンジル）−４−（４−メトキシベンジル）−１−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（５７）の調製

【化81】

撹拌棒を装備した５ｍＬ丸底フラスコに、ベンジル（Ｅ）−４−（４−（ベンジルオキシ）ベンジル）−５−（（Ｚ）−４−メトキシベンジリデン）−３−メチル−２−（（３−（トリフルオロメチル）ベンゾイル）イミノ）イミダゾリジン−１−カルボキシレート（０．０５ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ_２（０．０２５ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）およびメタノール（０．９ｍＬ）を添加した。反応物をＨ_２雰囲気バルーン下で一晩撹拌させた。反応混合物をセライトで濾過し、さらなるメタノールですすいだ。一滴の（ｉＰｒ）_２ＮＨを溶液に添加し、混合させた。溶媒を除去し、１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃに溶かした。固体を濾過によって単離し、ジクロロメタンですすいで、化合物５７を灰白色固体として得た。Ｒ_ｆ＝０．４０（２：１ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：δ９．３２（ｓ，２Ｈ），８．３８（ｓ，２Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．６９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），３．９３（ｓ，４Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），３．２９（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，７５ＭＨｚ）：δ１５７．８，１５５．９，１３２．２，１２９．５，１２９．０，１２４．５，１１５．４，１１３．９，５５．１，２８．９，２７．１ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）１５６４、１５３２、１５１２、１４８３、１３８３、１３２２、１２７７、１２４８、１１７０、１１５３、１１１３、９１６ｃｍ^−１。計算値Ｃ_２７Ｈ_２５Ｎ_３Ｏ_３Ｆ_３ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）４９６．１８４８、測定値４９６．１８５０。

【0289】

実施例６５：Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルプロパ−２−エン−１−アミン（５８）の調製

【化82】

磁気撹拌子を含有する２５０ｍＬ高圧フラスコ内に、４−クロロベンズアルデヒド（５ｇ、３５．５７ｍｍｏｌ）、フェニルアセチレン（３．９ｍＬ、３５．５７ｍｍｏｌ）、Ｎ−アリルメチルアミン（３．０７ｍＬ、３２．３４ｍｍｏｌ）、オーブン乾燥させたモレキュラーシーブス（グレード５６４、３Å、８〜１２メッシュ）（約２ｇ）およびアセトニトリル（２００ｍＬ）を添加した。フラスコを密封し、８０℃に予熱した油浴に２４時間入れた。反応フラスコを油浴から取り出し、室温まで放冷した。次に、ＣｕＢｒ（０．４６ｇ、３．２３ｍｍｏｌ）を添加し、フラスコを密封し、８０℃に予熱した油浴に戻して４８時間置いた。反応管を油浴から取り出し、室温まで放冷した。混合物をセライトで濾過し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）ですすいだ。濾液を減圧下で濃縮した。粗生成物を、９５：５ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルプロパ−２−エン−１−アミン（５８）を暗橙色の油状物質として得た（５．８４ｇ、６１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．６５−７．６１（ｍ，２Ｈ），δ７．５９−７．５６（ｍ，２Ｈ），δ７．４０−７．３４（ｍ，５Ｈ），δ５．９０−５．９１（ｍ，１Ｈ），δ５．３５（ｄｄ，Ｊ＝１７Ｈｚ，２Ｈｚ，１Ｈ），δ５．２３（ｄｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，２Ｈｚ，１Ｈ），δ４．９８（ｓ，１Ｈ），δ３．２１（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），δ２．２６（ｓ，３Ｈ）。ＩＲ（薄膜）：１４８７、１４４２、１４０２、１０８９、１０１４、９９４、９６２、９２０、８５３、７９６、６８９、５９２、５８２ｃｍ^−１。

【0290】

実施例６６：Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルプロパ−２−エン−１−アミン（５９）の調製

【化83】

磁気撹拌子を含有する２５０ｍＬ高圧フラスコ内に、ｐ−アニスアルデヒド（５００ｍｇ、４．１２ｍｍｏｌ）、シクロプロピルアセチレン（０．３５ｍＬ、４．１２ｍｍｏｌ）、Ｎ−アリルメチルアミン（０．３６ｍＬ、．３８ｍｍｏｌ）、オーブン乾燥させたモレキュラーシーブス（グレード５６４、３Å、８〜１２メッシュ）（約２ｇ）およびアセトニトリル（１００ｍＬ）を添加した。フラスコを密封し、８０℃に予熱した油浴に２４時間入れた。反応フラスコを油浴から取り出し、室温まで放冷した。次に、ＣｕＢｒ（０．４６ｇ、３．２３ｍｍｏｌ）を添加し、フラスコを密封し、８０℃に予熱した油浴に戻して４８時間置いた。反応管を油浴から取り出し、室温まで放冷した。混合物をセライトで濾過し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）ですすいだ。濾液を減圧下で濃縮した。粗生成物を、９５：５ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルプロパ−２−エン−１−アミン（５９）を暗橙色の油状物質として得た（２２６ｍｇ、２２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．４３（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ６．８６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），５．８４−５．８１（ｍ，１Ｈ），δ５．２３（ｄｄ，Ｊ＝１７Ｈｚ，１．５Ｈｚ，１Ｈ），δ５．１２（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），δ４．６２（ｓ，１Ｈ），δ３．０４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），δ２．１０（ｓ，３Ｈ），δ１．４０−１．３２（ｍ，１Ｈ），δ０．８４−０．８０（ｍ，２Ｈ），δ０．７５−０．７１（ｍ，２Ｈ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１５９．１，δ１３６．６，δ１３１．７，δ１２９．７，δ１１７．５，δ１１３．５，δ９１．７，δ７７．５，δ５９．０，δ５７．７，δ５５．５，δ３７．８，δ８．８，δ０．２ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）：１６１０、１５０７、１３６１、１２４３、１１０９、１０３５、１０１６、９９９、９１８、９８２、８５０、８０８、７７７、５８４ｃｍ^−１。

【0291】

実施例６７：Ｎ−メチル−Ｎ−（１−（４−（２−モルホリノエトキシ）フェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）プロパ−２−エン−１−アミン（６０）の調製

【化84】

磁気撹拌子を含有する２５０ｍＬ高圧フラスコ内に、４−（２−モルホリノエトキシ）ベンズアルデヒド（５００ｍｇ、２．１３ｍｍｏｌ）、フェニルアセチレン（０．２３３ｍＬ、２．１３ｍｍｏｌ）、ｎ−アリルメチルアミン（０．１８４ｍＬ、１．９４ｍｍｏｌ）、ＣｕＢｒ（３８ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、オーブン乾燥させたモレキュラーシーブス（グレード５６４、３Å、８〜１２メッシュ）（約０．５ｇ）およびアセトニトリル（５０ｍＬ）を添加した。フラスコを密封し、８０℃に予熱した油浴に２４時間入れた。反応フラスコを油浴から取り出し、室温まで放冷した。混合物をセライトで濾過し、ＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）ですすいだ。濾液を減圧下で濃縮した。粗生成物を、ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−メチル−Ｎ−（１−（４−（２−モルホリノエトキシ）フェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）プロパ−２−エン−１−アミン（６０）を暗橙色の油状物質として得た（０．３９４ｇ、５２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．５８−７．５１（ｍ，４Ｈ），δ７．３５−７．３２（ｍ，２Ｈ），δ６．８９（ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ），５．９０−５．８５（ｍ，１Ｈ），δ５．２７（ｄ，Ｊ＝２１．５Ｈｚ，１Ｈ），δ５．１６（ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ，１Ｈ），δ４．９２（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２ Ｈ），δ３．７３（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，４Ｈ），δ３．１７−３．１５（ｍ，２Ｈ），δ２．８０（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），δ２．５８（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，３Ｈ），δ２．２１（ｓ，３Ｈ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１５８．２，δ１３６．２，δ１３１．８，δ１３１，２，δ１２９．６，δ１２８．５，δ１２８．１，δ１２３．２，δ１１７．６，δ１１４．１，δ８８．１，δ８８．０，δ８５．１，δ６６．９，δ５９．２，δ５７．６，δ５４．１，δ３７．７ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）：２８５２、２７９８、１６０９、１５０７、１４８９、１４５２、１２９８、１２４３、１１７０、１１４４、１１１６、１０８７、１０２５、１０１１、９６０、９１６、８５３、８０９、７５６、６９１ｃｍ^−１。

【0292】

実施例６８：Ｎ−アリル−１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−メチル−４−モルホリノブタ−２−イン−１−アミン（６１）の調製

【化85】

磁気撹拌子を含有する２５０ｍＬ高圧フラスコ内に、４−クロロベンズアルデヒド（２．７ｇ、１９．２７ｍｍｏｌ）、４−（プロパ−２−イン−１−イル）モルホリン（２．６３ｇ、２１．２ｍｍｏｌ）、ｎ−アリルメチルアミン（２．２ｍＬ、２３．１２ｍｍｏｌ）、ＣｕＢｒ（２７２ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）、オーブン乾燥させたモレキュラーシーブス（グレード５６４、３Å、８〜１２メッシュ）（約１ｇ）およびアセトニトリル（１００ｍＬ）を添加した。フラスコを密封し、８０℃に予熱した油浴に２４時間入れた。反応フラスコを油浴から取り出し、室温まで放冷した。混合物をセライトで濾過し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）ですすいだ。濾液を減圧下で濃縮した。粗生成物を、６：４ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−アリル−１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−メチル−４−モルホリノブタ−２−イン−１−アミン（６１）を暗橙色の油状物質として得た（２．２１７ｇ、３６％）。Ｒ_ｆ＝０．１２（６：４ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．４４（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），δ７．２４（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），５．８１−５．７６（ｍ，１Ｈ），δ５．１７（ｄ，Ｊ＝１７Ｈｚ，１Ｈ），δ５．０８（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，１Ｈ），δ４．６９（ｓ，１Ｈ），δ３．７０−３．６６（ｍ，４Ｈ），δ３．４３−３．３１（ｍ，２Ｈ），δ３．０３−３．００（ｍ，２Ｈ），δ２．５７−２．５５（ｍ，４Ｈ），δ２．０７（ｓ，３Ｈ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１５８．２，δ１３６．２，δ１３１．８，δ１３１．２，δ１２９．６，δ１２８．３，δ１２３．２，δ１１７．６，δ１１４．１，δ８８．１，δ８８．０，δ８５．１，δ６６．９，δ６５．８，δ５９．２，δ５７．６，δ５４．１，δ３７．７ｐｐｍ。

【0293】

実施例６９：Ｎ−アリル−Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）プロパ−２−エン−１−アミン（６２）の調製

【化86】

２５０ｍＬ高圧フラスコ内に、ｐ−アニスアルデヒド（４ｍＬ、３３ｍｍｏｌ）、フェニルアセチレン（３．５５ｍＬ、３３ｍｍｏｌ）、ｎ−ジアリルアミン（３．７ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）、ＣｕＢｒ（４３０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）、オーブン乾燥させたモレキュラーシーブス（グレード５６４、３Å、８〜１２メッシュ）（約１ｇ）およびアセトニトリル（１００ｍＬ）。フラスコを密封し、８０℃に予熱した油浴に２４時間入れた。反応フラスコを油浴から取り出し、室温まで放冷した。混合物をセライトで濾過し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）ですすいだ。濾液を減圧下で濃縮した。粗生成物を、９５：５ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−アリル−Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）プロパ−２−エン−１−アミン（６２）を暗橙色の油状物質として得た（３．５５ｇ、３８％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．５９（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ７．５５−７．５４（ｍ，２Ｈ），７．５３−７．５１（ｍ，３Ｈ），δ６．８９（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ５．９０−５．８３（ｍ，１Ｈ），δ５．２７（ｄ，Ｊ＝１７Ｈｚ，１Ｈ），δ５．１４（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，１Ｈ），δ５．０５（ｓ，１Ｈ），δ３．８２（ｓ，３Ｈ），δ３．２８（ｄｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，２Ｈｚ，２Ｈ），δ３．０４（ｄｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，８Ｈｚ，２Ｈ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１５９．１，δ１３６．８，δ１３２．１，δ１３２．０，δ１３１．６，δ１２９．６，δ１２８．５，δ１２８．３，δ１２３．６，δ１１７．５，δ１１３．７，δ８８．９，δ８５．９，δ５６．２，δ５５．５，δ５３．７ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）：１６０９、１５０８、１４８９、１４４７、１３０１、１２４６、１１７０、１１０８、１０３６、９９５、９７１、９１９、８４８、８１１、７５９、６９１ｃｍ^−１。

【0294】

実施例７０：１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−メチル−３−フェニルプロパ−２−イン−１−アミン（６３）の調製

【化87】

磁気撹拌子を含有する２５０ｍＬ丸底フラスコ内に、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（３１０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）、チオサリチル酸（１２．４ｇ、８０．３７ｍｍｏｌ）およびＣＨ_２Ｃｌ_２（１００ｍＬ）を添加した。Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルプロパ−２−エン−１−アミン（８．０ｇ、２６．２９ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２中１５ｍＬの溶液を添加し、反応混合物をＮ_２下、室温で１２時間撹拌させた。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔ_２Ｏ（１０ｍＬ）に再溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で濾過した。粗生成物を、８：２ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−メチル−３−フェニルプロパ−２−イン−１−アミン（６３）を暗橙色の油状物質として得た（３．２９ｇ、４９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．５４−７．６１（ｍ，２Ｈ），δ７．５０−７．４８（ｍ，２Ｈ），δ７．３６−７．２９（ｍ，５Ｈ），δ４．７２（ｓ，１Ｈ），δ２．５４（ｓ，３Ｈ），δ１．４３（ｓ，１Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１３９．９，δ１３３．４，δ１３２．０，δ１２９．３，δ１２８．８，δ１２８．６，δ１２８．５，δ１２３．１，δ８８．７，δ８６．３，δ５５．８，δ３３．９ｐｐｍ。

【0295】

実施例７１：３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−メチルプロパ−２−イン−１−アミン（６４）の調製

【化88】

磁気撹拌子を含有する１００ｍＬ丸底フラスコ内に、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（１３７ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、１，３−ジメチルバルビツール酸（５．５４ｇ、３５．５ｍｍｏｌ）およびＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ）を添加した。（８．０ｇ、２６．２９ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２中１５ｍＬの溶液を添加し、反応混合物をＮ_２下、室温で１２時間撹拌させた。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔ_２Ｏ（１０ｍＬ）に再溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で濾過した。粗生成物を、８：２ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルプロパ−２−エン−１−アミン（６４）を暗橙色の油状物質として得た（１．０７ｇ、４２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．３８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ６．８５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ４．４０（ｓ，１Ｈ），δ２．４２（ｓ，３Ｈ），δ１．３１−１．２５（ｍ，１Ｈ），δ０．７９−０．７３（ｍ，２Ｈ），δ０．７０−０．６６（ｍ，２Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１５９．３，δ１３３．０，δ１３２．３，１２８．９，δ１１３．９，δ８９．２，δ７５．０，δ５５．５，δ３３．７，δ８．５，δ０．２ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）１６０９、１５０８、１４６３、１４４０、１３０１、１２４３、１１７１、１０２９、８９２、８３１、８１０、７７９、７２２、５８５、５４１ｃｍ^−１。

【0296】

実施例７２：Ｎ−メチル−１−（４−（２−モルホリノエトキシ）フェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−アミン（６５）の調製

【化89】

磁気撹拌子を含有する１５ｍＬ丸底フラスコ内に、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（１１ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）、１，３−ジメチルバルビツール酸（８８ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）およびＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍＬ）を添加した。Ｎ−メチル−Ｎ−（１−（４−（２−モルホリノエトキシ）フェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）プロパ−２−エン−１−アミン（７４ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２中２ｍＬの溶液を添加し、反応混合物をＮ_２下、室温で１２時間撹拌させた。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔ_２Ｏ（１０ｍＬ）に再溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（２５ｍＬ）およびブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で濾過した。粗生成物を、ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−メチル−１−（４−（２−モルホリノエトキシ）フェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−アミン（６５）を暗橙色の油状物質として得た（２５ｍｇ、３４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．５１（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４８−７．４４（ｍ，２Ｈ），δ７．３２−７．３０（ｍ，３Ｈ），δ６．９０（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，２Ｈ），δ４．７５（ｓ，１Ｈ），δ４．１１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），δ３．７３（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，４Ｈ），δ３．２０（ｓ，１Ｈ），δ２．８０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），δ２．５７（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，４Ｈ），δ２．５４（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１５８．５，δ１３１，７，δ１３１．６，δ１２８．９，δ１２８．５，δ１２８．２，δ１２２．９，δ１１４．６，δ８８．２，δ８６．０，δ６６．９，δ６５．９，δ５７．６，δ５５．４，δ３３．１ｐｐｍ。

【0297】

実施例７３：１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−メチル−４−モルホリノブタ−２−イン−１−アミン（６６）の調製

【化90】

磁気撹拌子を含有する１００ｍＬ丸底フラスコ内に、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（２４１ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、１，３−ジメチルバルビツール酸（３．２５ｇ、２０．８５ｍｍｏｌ）およびＣＨ_２Ｃｌ_２（２５ｍＬ）を添加した。Ｎ−アリル−１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−メチル−４−モルホリノブタ−２−イン−１−アミン（２．２２ｇ、６．９５ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２中５ｍＬの溶液を添加し、反応混合物をＮ_２下、室温で１２時間撹拌させた。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔ_２Ｏ（５０ｍＬ）に再溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（５０ｍＬ）およびブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で濾過した。粗生成物を、ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−メチル−４−モルホリノブタ−２−イン−１−アミン（６６）を暗橙色の油状物質として得た（１．１０ｇ、５７％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．４２（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），δ７．２９（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），δ４．５０（ｓ，１Ｈ），δ３．７２−３．７０（ｍ，４Ｈ），δ３．３６（ｓ，２Ｈ），δ２．５５−２．５４（ｍ，４Ｈ），δ２．４３（ｓ，３Ｈ），δ１．２９（ｓ，１Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１３８．９，δ１３３．７，δ１２９．１，δ１２８．８，δ８４．８，δ８０．５，δ６７．０，δ５５．４，δ５２．６，δ４７．８，δ３３．９ｐｐｍ。

【0298】

実施例７４：Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）プロパ−２−エン−１−アミン（６７）の調製

【化91】

磁気撹拌子を含有する１００ｍＬ丸底フラスコ内に、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（１３０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、１，３−ジメチルバルビツール酸（３．５０ｇ、２２．４ｍｍｏｌ）およびＣＨ_２Ｃｌ_２（２５ｍＬ）を添加した。Ｎ−アリル−Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）プロパ−２−エン−１−アミン（３．５５ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２中５ｍＬの溶液を添加し、反応混合物をＮ_２下、室温で１２時間撹拌させた。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔ_２Ｏ（５０ｍＬ）に再溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（５０ｍＬ）およびブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で濾過した。粗生成物を、ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）プロパ−２−エン−１−アミン（６７）を暗橙色の油状物質として得た（０．９６ｇ、３１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．５２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４９−７．４７（ｍ，２Ｈ），δ７．３３−７．３１（ｍ，３Ｈ），δ６．９２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ５．９７（ｄｄｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，１０．５Ｈｚ，６．５Ｈｚ，１Ｈ），δ５．２７（ｄｄ，Ｊ＝１７Ｈｚ，１．５Ｈｚ），δ５．１４（ｄｄ，１０．５Ｈｚ，１．５Ｈｚ），δ４．７０（ｓ，１Ｈ），δ３．８２（ｓ，３Ｈ），δ３．４４（ｄｑｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１３．５Ｈｚ，１．５Ｈｚ，２Ｈ），δ１．６７（ｓ，１Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１５９．４，δ１３６．６，δ１３２．８，δ１３１．９，δ１２９．０，δ１２８．５，δ１２８．４，δ１１６．７，δ１１４．１，δ８９．７，δ８５．６，δ５５．６，δ５３．５，δ３０．１ｐｐｍ。

【0299】

実施例７５：２−フルオロ−Ｎ−（Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（６８）の調製

【化92】

磁気撹拌子を含有する５０ｍＬ丸底フラスコの中に、カリウム Ｎ−シアノ−２−フルオロベンズアミド（８９ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）、ＴＭＳＣｌ（０．０６４ｍＬ、０．５０ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（１０ｍＬ）を添加した。溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、１−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−メチル−３−フェニルプロパ−２−イン−１−アミンのアセトニトリル（１０ｍＬ）中の溶液を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌させた。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に再溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で濾過した。粗生成物を、１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、２−フルオロ−Ｎ−（Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（６８）を白色の泡沫として得た（１３４ｍｇ、７５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．０６（ｔ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ），δ７．６５（ｓ，１Ｈ），δ７．５８−７．５１（ｍ，４Ｈ），δ７．３８−７．３２（ｍ，４Ｈ），δ７．１８（ｔ，Ｊ＝１３Ｈｚ，１Ｈ），δ７．０７（ｔ，Ｊ＝１３Ｈｚ，１Ｈ），δ６．９２（ｄ，Ｊ＝１４．５Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８１（ｓ，３Ｈ），δ２．８６（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７５．６，δ１７４．３，δ１６３．０，δ１６０．７，δ１５９．７，δ１３２．１，δ１２９．８，δ１２９．０，δ１２８．６，δ１２７．９，δ１２３．６，δ１２２．７，δ１１６．９，δ１１４．２，δ８７．０，δ７５．４，δ５５．６，δ５０．９，δ２９．３ｐｐｍ。

【0300】

実施例７６：４−クロロ−Ｎ−（Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（６９）の調製

【化93】

磁気撹拌子を含有する５０ｍＬ丸底フラスコの中に、カリウム Ｎ−シアノ−４−クロロベンズアミド（１０５ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）、ＴＭＳＣｌ（０．０６４ｍＬ、０．５０ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（１０ｍＬ）を添加した。溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、１−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−メチル−３−フェニルプロパ−２−イン−１−アミンのアセトニトリル（１０ｍＬ）中の溶液を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌させた。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に再溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で濾過した。粗生成物を、１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、４−クロロ−Ｎ−（Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（６９）を白色の泡沫として得た（１４０ｍｇ、８１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．２０（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ７．６５（ｓ，１Ｈ），δ７．５７−７．５１（ｍ，４Ｈ），δ７．３８−７．３３（ｍ，５Ｈ），δ６．９２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８２（ｓ，３Ｈ），δ２．８９（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７６．１，δ１６０．９，δ１５９．８，δ１３７．５，δ１３７．４，δ１３２．１，δ１３０．８，δ１２９．４，δ１２９．０，δ１２８．９，δ１２８．６，δ１２８．３，δ１２２．６，δ１１４．３，δ８７．２，δ８５．２，δ５５．６，δ５０．９，δ２９．５ｐｐｍ。

【0301】

実施例７７：Ｎ−（Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（７０）の調製

【化94】

Ｎ−（Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（７０）を、１−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−メチル−３−フェニルプロパ−２−イン−１−アミンとカリウム Ｎ−シアノベンズアミドのグアニル化によって、泡沫状の白色の油状物質として調製した（収率７６％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．２８（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），δ７．７１（ｓ，１Ｈ），δ７．５８（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，２Ｈ），δ７．５５−７．５２（ｍ，２Ｈ），δ７．４７−７．３３（ｍ，７Ｈ），δ６．９２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８２（ｓ，３Ｈ），δ２．８９（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７７．２，δ１６０．９，δ１５９．７，δ１３９．０，δ１３２．１，δ１３１．３，δ１２９．６，δ１２９．４，δ１２９．０，δ１２８．９，δ１２８．６，δ１２８．１，δ１２２．６，δ１１４．２，δ８７．１，δ８５．４，δ５５．６，δ５０．９，δ２９．４ｐｐｍ。

【0302】

実施例７８：４−メトキシ−Ｎ−（Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（７１）の調製

【化95】

４−メトキシ−Ｎ−（Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（７１）を、１−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−メチル−３−フェニルプロパ−２−イン−１−アミンとカリウム Ｎ−シアノ−４−メトキシベンズアミドのグアニル化によって、泡沫状の白色の油状物質として調製した（収率７０％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．２５（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，２Ｈ），δ７．６５（ｓ，１Ｈ），δ７．５８（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，２Ｈ），δ７．５５−７．５２（ｍ，２Ｈ），δ７．３７−７．３５（ｍ，３Ｈ），δ６．９２−６．９１（ｍ，２Ｈ），δ３．８４（ｓ，３Ｈ），δ３．８１（ｓ，３Ｈ），δ２．８７（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７６．９，δ１６２．３，δ１６０．７，δ１５９．７，δ１３２．１，δ１３１．８，δ１３１．３，δ１２９．０，δ１２８．６，δ１２２．７，δ１１４．３，δ１１３．３，δ８７．０，δ８５．５，δ５５．６，δ５５．５，δ５０．８，δ２９．４ｐｐｍ。

【0303】

実施例７９：４−フルオロ−Ｎ−（Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（７２）の調製

【化96】

４−フルオロ−Ｎ−（Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（７２）を、１−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−メチル−３−フェニルプロパ−２−イン−１−アミンとカリウム Ｎ−シアノ−４−フルオロベンズアミドのグアニル化によって、泡沫状の白色の油状物質として調製した。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．２７（ｄｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，６Ｈｚ，２Ｈ），δ７．５９（ｓ，１Ｈ），δ７．５８−７．５２（ｍ，４Ｈ），δ７．３７−７．３５（ｍ，４Ｈ），δ７．０６（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ６．９１（ｄ，Ｊ＝８．５，２Ｈ），δ３．８１（ｓ，３Ｈ），δ２．８８（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７６．１，δ１６６．１，δ１６４．１，δ１６０．９，δ１５９．８，δ１３５．２，δ１３２．１，δ１３１．７，δ１２９．４，δ１２８．９，δ１２８．７，δ１２２．６，δ１１５．０，δ１１４．８，δ８７．１，δ８５．３，δ５５．６，δ２９．４ｐｐｍ。

【0304】

実施例８０：Ｎ−（Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）−２−フルオロベンズアミド（７３）の調製

【化97】

Ｎ−（Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）−２−フルオロベンズアミド（７３）を、１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−メチル−３−フェニルプロパ−２−イン−１−アミンとカリウム Ｎ−シアノ−２−フルオロベンズアミドのグアニル化によって、泡沫状の白色の油状物質として調製した（収率６２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．０３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），δ７．６９（ｓ，１Ｈ），δ７．５８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ７．５３−７．５１（ｍ，２Ｈ），δ７．３９−７．３３（ｍ，６Ｈ），δ７．１４（ｔ，Ｊ＝８，１Ｈ），δ７．１３−７．０５（ｍ，１Ｈ），δ２．８７（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７５．７，δ１６３．０，δ１６１．０，δ１６０．７，δ１３６．１，δ１３４．４，δ１３２．３，δ１３２．２，δ１３２．１，δ１３２．０，δ１２９．１，δ１２８．７，δ１２７．７，δ１２３．７，δ１２２．４，δ１１７．０，δ１１６．８，δ８７．５，δ８４．５，δ５０．９，δ２９．４ｐｐｍ。

【0305】

実施例８１：４−クロロ−Ｎ−（Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（７４）の調製

【化98】

４−クロロ−Ｎ−（Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（７４）を、１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−メチル−３−フェニルプロパ−２−イン−１−アミンとカリウム Ｎ−シアノ−４−クロロベンズアミドのグアニル化によって、泡沫状の白色の油状物質として調製した（収率４７％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．１７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ７．６８（ｓ，１Ｈ），δ７．５７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ７．５４−７．５２（ｍ，２Ｈ），δ７．３９−７．３５（ｍ，７Ｈ），δ２．８９（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７６．２，δ１７３．２，δ１６０．９，δ１３７．５，δ１３７．３，δ１３６．０，δ１３４．５，δ１３２．１，δ１３０．８，δ１２９．２，δ１２９．１，δ１２９．０，δ１２８．７，δ１２８．３，δ１２２．３，δ８７．７，δ８４．４，δ５１．０，δ２９．６ｐｐｍ。

【0306】

実施例８２：Ｎ−（Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（７５）の調製

【化99】

Ｎ−（Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（７５）を、１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−メチル−３−フェニルプロパ−２−イン−１−アミンとカリウム Ｎ−シアノベンズアミドのグアニル化によって、泡沫状の白色の油状物質として調製した（収率５７％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．２６（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），δ７．５５（ｓ，１Ｈ），δ７．６０（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ７．５８−７．５２（ｍ，２Ｈ），δ７．４８−７．３３（ｍ，８Ｈ），δ２．８８（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７７．３，δ１６０．９，δ１３８．８，δ１３６．２，δ１３４．４，δ１３２．１，δ１３１．４，δ１２９．４，δ１２９．１，δ１２８．７，δ１２８．１，δ１２２．３，δ８７．６，δ８４．６，δ５０．９，δ２９．５ｐｐｍ。

【0307】

実施例８３：Ｎ−（Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）−４−メトキシベンズアミド（７６）の調製

【化100】

Ｎ−（Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）−４−メトキシベンズアミド（７６）を、１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−メチル−３−フェニルプロパ−２−イン−１−アミンとカリウム Ｎ−シアノ−４−メトキシベンズアミドのグアニル化によって、泡沫状の白色の油状物質として調製した（収率５６％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．２１（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，２Ｈ），δ７．７３（ｓ，１Ｈ），δ７．５９（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ７．５３−７．５１（ｍ，２Ｈ），δ７．３６−７．３３（ｍ，５Ｈ），δ６．８９（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８３（ｓ，３Ｈ），δ２．８６（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７７．０，δ１６２．４，δ１６０．７，δ１３６．３，δ１３４．３，δ１３２．１，δ１３１．６，δ１３１．３，δ１２９．１，δ１２８．７，δ１２２．４，δ１１３．３，δ８７．５，δ８４．７，δ５０．６，δ５０．８，δ２９．５ｐｐｍ。

【0308】

実施例８４：Ｎ−（Ｎ−（１−シクロプロピル−４−メチルペンタ−１−イン−３−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（７７）の調製

【化101】

磁気撹拌子を含有する５０ｍＬ丸底フラスコの中に、カリウム Ｎ−シアノベンズアミド（１００ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）、ＴＭＳＣｌ（０．０８ｍＬ、０．６６ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（５ｍＬ）を添加した。溶液を室温で１０分間撹拌した。Ｎ−アリル−１−シクロプロピル−Ｎ，４−ジメチルペンタ−１−イン−３−アミン（１１１ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）中の溶液を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌させた。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に再溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で濾過した。粗生成物を、１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−（Ｎ−（１−シクロプロピル−４−メチルペンタ−１−イン−３−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（７７）を白色の泡沫として得た（収率７８％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．１８（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），δ７．４６−７．３５（ｍ，２Ｈ），δ５．５１（ｂｓ，２Ｈ），δ２．９７（ｓ，３Ｈ），δ１．９６（ｓｅｘｔｅｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），δ１．３−１．２２（ｍ，１Ｈ），δ１．０９（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，３Ｈ），δ０．９１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），δ０．８−０．７５（ｍ，２Ｈ），δ０．７−０．６５（ｍ，２Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７６．７，１３９．１，１３１．０，１２９．１，１２７．８，８９．２，７７．４，５４．８，３３．０，１９．６，１９．３，８．５，８．４ｐｐｍ。

【0309】

実施例８５：４−クロロ−Ｎ−（Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（７８）の調製

【化102】

磁気撹拌子を含有する５０ｍＬ丸底フラスコの中に、カリウム Ｎ−シアノ−４−クロロベンズアミド（１００ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、ＴＭＳＣｌ（０．０７ｍＬ、０．４６ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（５ｍＬ）を添加した。溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルプロパ−２−エン−１−アミン（１００ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）中の溶液を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌させた。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に再溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で濾過した。粗生成物を、１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、４−クロロ−Ｎ−（Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（７８）を白色の泡沫として得た（収率８０％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．１７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４３（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），δ６．８７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），δ３．７９（ｓ，３Ｈ），δ２．７８（ｓ，３Ｈ），１．４０−１．３３（ｍ，１Ｈ），０．８６−０．８２（ｍ，２Ｈ），０．７９−０．７４（ｍ，２Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７５．９，１６０．８，１５９．５，１３７．６，１３７．３，１３０．７，１２８．７，１２８．１，１１４．２，９１．０，７１．１，５５．８，５０．５，８．６，８．５ｐｐｍ。

【0310】

実施例８６：Ｎ−（Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（７９）の調製

【化103】

磁気撹拌子を含有する５０ｍＬ丸底フラスコの中に、カリウム Ｎ−シアノベンズアミド（８５ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、ＴＭＳＣｌ（０．０７ｍＬ、０．４６ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（５ｍＬ）を添加した。溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルプロパ−２−エン−１−アミン（１００ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）中の溶液を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌させた。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に再溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で濾過した。粗生成物を、１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−（Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミド（７９）を白色の泡沫として得た（収率６５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．２５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４８（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４４（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），δ７．３９（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），δ６．８７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），δ３．７９（ｓ，３Ｈ），δ２．７８（ｓ，３Ｈ），δ１．４−１．３３（ｍ，１Ｈ），δ０．８６−０．８１（ｍ，２Ｈ），δ０．７９−０．７５（ｍ，２Ｈ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７６．９，１６０．８，１５９．４，１３９．１，１３１．２，１２９．３，１２８．８，１２７．９，１１４．０，９０．７，７７．４，７１．２，５５．４１，５５．４，８．６，８．５ｐｐｍ。

【0311】

実施例８７：Ｎ−（Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）−２−フルオロベンズアミド（８０）の調製

【化104】

磁気撹拌子を含有する５０ｍＬ丸底フラスコの中に、カリウム Ｎ−シアノ−２−フルオロベンズアミド（９３ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、ＴＭＳＣｌ（０．０７ｍＬ、０．４６ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（５ｍＬ）を添加した。溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルプロパ−２−エン−１−アミン（１００ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）中の溶液を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌させた。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に再溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で濾過した。粗生成物を、１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−（Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）−２−フルオロベンズアミド（８０）を白色の泡沫として得た（収率７４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．０２（ｄｔ，Ｊ＝１．８，７．９Ｈｚ，１Ｈ），δ７．４５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ７．３８−７．３３（ｍ，１Ｈ），δ７．１８（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），δ７．０６（ｄｄ，Ｊ＝１．０，８．３Ｈｚ，１Ｈ），δ６．８７（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），δ３．７９（ｓ，３Ｈ），δ２．７６（ｓ，３Ｈ），δ１．３９−１．３１（ｍ，１Ｈ），δ０．８５−０．８０（ｍ，２Ｈ），δ０．７８−０．７３（ｍ，２Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７５．４，１６２．８，１６０．９，１６０．４，１５９．５，１３１．９，１２８．８，１２３．５，１１６．８，１１６．６，１１３．９，９０．７，７１．２，５５．５，５０．４，８．５，８．４８ｐｐｍ。

【0312】

実施例８８：Ｎ−（Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）−４−メトキシベンズアミド（８１）の調製

【化105】

磁気撹拌子を含有する５０ｍＬ丸底フラスコの中に、カリウム Ｎ−シアノ−４−メトキシベンズアミド（１００ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、ＴＭＳＣｌ（０．０７ｍＬ、０．４６ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（５ｍＬ）を添加した。溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルプロパ−２−エン−１−アミン（１００ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）中の溶液を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌させた。次に、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に再溶解した。有機層をＮａＨＣＯ_３（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、Ｎａ_２ＳＯ_４で濾過した。粗生成物を、１：１ ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−（Ｎ−（３−シクロプロピル−１−（４−メトキシフェニル）プロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）−４−メトキシベンズアミド（８１）を白色の泡沫として得た（収率８３％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．２（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），δ６．８７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，４Ｈ），δ３．８３（ｓ，３Ｈ），δ３．７８（ｓ，３Ｈ），δ２．７７（ｓ，３Ｈ），δ１．４０−１．３２（ｍ，１Ｈ），δ０．８６−０．８０（ｍ，２Ｈ），δ０．７９−０．７３（ｍ，２Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７６．７，１６２．０，１６０．５，１５９．５，１３１．１，１２８．７，１１３．９，１１３．０，９０．６７，７１．２，５５．４，８．６，８．５ｐｐｍ。

【0313】

実施例８９：２−フルオロ−Ｎ−（Ｎ−メチル−Ｎ−（１−（４−（２−モルホリノエトキシ）フェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）カルバムイミドイル）ベンズアミド（８２）の調製

【化106】

２−フルオロ−Ｎ−（Ｎ−メチル−Ｎ−（１−（４−（２−モルホリノエトキシ）フェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）カルバムイミドイル）ベンズアミド（８２）を、Ｎ−メチル−１−（４−（２−モルホリノエトキシ）フェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−アミンとカリウム Ｎ−シアノ−２−フルオロベンズアミドのグアニル化によって、泡沫状の白色の油状物質として調製した（収率４５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．０５（ｄｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈｚ，２Ｈ），δ７．５７（ｓ，１Ｈ），δ７．５６−７．５０（ｍ，４Ｈ），δ７．３８−７．３３（ｍ，３Ｈ），δ７．１４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），δ７．１０−７．０５（ｍ，１Ｈ），δ６．９１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），δ４．１２（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），δ３．７３（ｔ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，４Ｈ），δ２．８６（ｓ，３Ｈ），δ３．８３（ｓ，３Ｈ），δ２．８６（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７５．４，δ１６７．８，δ１６０．４，δ１５８．６，δ１３１．８，δ１２９．５，δ１２８．４，δ１２７．５，δ１２３．４，δ１２２．４，δ１１６．７，δ１１４．６，δ８６．８，δ８５．１，δ６６．９，δ６５．９，δ５７．６，δ５４．０，δ５０．６ｐｐｍ。

【0314】

実施例９０：Ｎ−（Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）−４−モルホリノブタ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）−２−フルオロベンズアミド（８３）の調製

【化107】

Ｎ−（Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）−４−モルホリノブタ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）−２−フルオロベンズアミド（８３）を、１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−メチル−４−モルホリノブタ−２−イン−１−アミンとカリウム Ｎ−シアノ−２−フルオロベンズアミドのグアニル化によって調製して、泡沫状の白色の油状物質として得た（収率４４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．９６（ｄｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈｚ，１Ｈ），δ７．４７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），δ７．３６−７．２８（ｍ，３Ｈ），δ７．１０（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），δ７．０３（ｄｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，８Ｈｚ，１Ｈ），δ３．７２（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，４Ｈ），δ３．４２（ｓ，２Ｈ），δ２．７７（ｓ，３Ｈ），δ２．５７（ｔ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，４Ｈ）ｐｐｍ。計算値Ｃ_２３Ｈ_２４Ｎ_４Ｏ_２ＦＮａＣｌ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）４６５．１４７０、測定値４６５．１４７６（Ｍ＋Ｎａ）。

【0315】

実施例９１：Ｎ−（Ｎ−アリル−Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）カルバムイミドイル）−２−フルオロベンズアミド（８４）の調製

【化108】

Ｎ−（Ｎ−アリル−Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）カルバムイミドイル）−２−フルオロベンズアミド（８４）を、Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）プロパ−２−エン−１−アミンとカリウム Ｎ−シアノ−２−フルオロベンズアミドのグアニル化によって調製して、泡沫状の白色の油状物質として得た（収率５４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．０８（ｄｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈｚ，１Ｈ），δ７．６４（ｓ，１Ｈ），δ７．６１（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４０−７．３（ｍ，２Ｈ），δ７．１５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），δ７．０８（ｄｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，８．５Ｈｚ，１Ｈ），δ６．９１（ｄ，９Ｈｚ，２Ｈ），δ５．７７−５．７２（ｍ，１Ｈ），δ５．３２（ｄ，Ｊ＝１７Ｈｚ，１Ｈ），δ５．２５（ｄｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，１．５Ｈｚ，１Ｈ），δ３．９５（ＡＢｑ，Ｊ＝１５Ｈｚ，３８Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８２（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７５．８，δ１６３．０，δ１６１．１，δ１５９．８，δ１３４．０，δ１３２．０，δ１２９．７，δ１２９．２，δ１２８．７，δ１２７．９，δ１２３．７，δ１２１．７，δ１１８．５，δ１１７．０，δ１１４．２，δ８７．１，δ８５．７，δ５５．６，δ５０．８，δ４７．１ｐｐｍ。

【0316】

実施例９２：ベンジル（Ｅ）−５−（（Ｚ）−ベンジリデン）−２−（（４−メトキシベンゾイル）イミノ）−３−メチル−４−フェニルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（８５）の調製

【化109】

ベンジル（Ｅ）−５−（（Ｚ）−ベンジリデン）−２−（（４−メトキシベンゾイル）イミノ）−３−メチル−４−フェニルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（８５）は、４−メトキシベンゾイルクロライド（０．０４３ｍＬ、０．３６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０６７ｍＬ、０．４８ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（２ｍＬ）を用い、（Ｚ）−ベンジル ５−ベンジリデン−２−イミノ−３−メチル−４−フェニルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（９５．５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）のアシル化から得、化合物８５を淡褐色の泡沫として得た（１１９．８ｍｇ、９５％）。Ｒ_ｆ＝０．１９（３：２ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．１６（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．４１−７．３７（ｍ，３Ｈ），７．３３−７．３０（ｍ，２Ｈ），７．２６−７．１２（ｍ，８Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），５．７２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．１３（ｓ，１Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），２．９２（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ１７５．０，１６２．６，１５１．５，１４９．５，１３７．１，１３５．６，１３４．８，１３４．２，１３１．８，１３０．１，１２９．５，１２９．４，１２８３，１２７．９，１２７．６，１１６．９，１１３．４，６８．９，６７．２，５５．６，３０．８ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３０５８、２９５１、１７４５、１６５２、１５９７、１５０７、１４５６、１４２７、１２４９、１２２７、１１７７、１１６２、１０２２、９７４、８６３、８４３、７３１、６９３ｃｍ^−１。計算値ｍ／ｚ Ｃ_３３Ｈ_２９Ｎ_３Ｏ_４（Ｍ＋Ｎａ）５５４．２０５６、測定値５５４．２０６１（Ｍ＋Ｎａ）。

【0317】

実施例９３：ベンジル（Ｅ）−５−（（Ｚ）−ベンジリデン）−３−メチル−４−フェニル−２−（（３−（トリフルオロメチル）ベンゾイル）イミノ）イミダゾリジン−１−カルボキシレート（８６）の調製

【化110】

ベンジル（Ｅ）−５−（（Ｚ）−ベンジリデン）−３−メチル−４−フェニル−２−（（３−（トリフルオロメチル）ベンゾイル）イミノ）イミダゾリジン−１−カルボキシレート（８６）は、３−トリフルオロメチルベンゾイルクロライド（０．０４３ｍＬ、０．３６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０６７ｍＬ、０．４８ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（２ｍＬ）を用い、（Ｚ）−ベンジル ５−ベンジリデン−２−イミノ−３−メチル−４−フェニルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（９５．５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）のアシル化から得、化合物８６を淡褐色の泡沫として得た（１１９．８ｍｇ、９５％）。Ｒ_ｆ＝０．３１（３：２ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．４７（ｓ，１Ｈ），８．３７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｍ，４Ｈ），７．３４（ｍ，２Ｈ），７．２６（ｍ，３Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），７．１５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），５．８０（ｓ，１Ｈ），５．２０（ｓ，１Ｈ），４．６６（ＡＢｑ，Ｊ＝１２．０，１５．５Ｈｚ，２Ｈ），２．９５（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ１７３．５，１５５．１，１４４．３，１３８．１，１３６．７，１３５．４，１３４．４，１３３．９，１３３．１，１２９．６，１２８．８，１２８．７，１２８．５，１２８．４，１２８．３，１２８．２，１２８．０，１２７．７，１２６．８，１１７．４，６９．２，６７．３，３０．８ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）１６９９、１６５２、１６１６、１３２５、１２５９、１１６６、１１２１、１０７０、９９８、９２０、８５５、８１７、７５８、６９２ｃｍ^−１。計算値ｍ／ｚ Ｃ_３３Ｈ_２６Ｎ_３Ｏ_３Ｆ_３（Ｍ＋Ｎａ）５９２．１８２４、測定値５９２．１８２１（Ｍ＋Ｎａ）。

【0318】

実施例９４：（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル ５−ベンジリデン−４−（４−メトキシフェニル）−３−メチル−２−（（フェニルカルバモイル）イミノ）イミダゾリジン−１−カルボキシレート（８７）の調製

【化111】

（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル ５−ベンジリデン−４−（４−メトキシフェニル）−３−メチル−２−（（フェニルカルバモイル）イミノ）イミダゾリジン−１−カルボキシレート（８７）は、フェニルイソシアネート（０．０２６ｍＬ、０．２４ｍｍｏｌ）、およびＴＨＦ（２ｍＬ）を用い、（Ｚ）−ベンジル ５−ベンジリデン−２−イミノ−４−（４−メトキシフェニル）−３−メチルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（１００ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）のアシル化から得、化合物８７を淡褐色の泡沫として得た（収率２６％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．５２−７．４８（ｍ，２Ｈ），７．３４−７．１３（ｍ，６Ｈ），７．１１−７．０９（ｍ，５Ｈ），７．０９−７．０１（ｍ，２Ｈ），６．９０−６．８７（ｍ，４Ｈ），５．７７（ｓ，１Ｈ），５．０２（ｓ，１Ｈ），４．６９（ｓ，２Ｈ），３．８９＝１（ｓ，３Ｈ），２．８３（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１６０．４，１５１．６，１５０．１，１３９．８，１３５．６，１３４．９，１３４．４，１２９．１，１２９．０，１２８．７，１２８．６，１２８．４，１２８．３，１２７．６，１２２．８，１１９．２，１１７．３，１１４．９，６９．０，６６．５，５５．６，３０．３ｐｐｍ。

【0319】

実施例９５：（Ｅ）−１−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−３−フェニルウレア（８８）の調製

【化112】

（Ｅ）−１−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−３−フェニルウレア（８８）は、Ｐｄ／Ｃ（１０％ ｗ／ｗ、１２ｍｇ）および蒸留したＭｅＯＨ（２ｍＬ）を用い、（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル ５−ベンジリデン−４−（４−メトキシフェニル）−３−メチル−２−（（フェニルカルバモイル）イミノ）イミダゾリジン−１−カルボキシレート（１３１ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）の水素化から得、化合物８８を淡褐色の泡沫として得た（収率３９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．４８−７．４３（ｍ，２Ｈ），７．３３−７．２０（ｍ，９Ｈ），７．０３−６．９８（ｍ，３Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｓ，２Ｈ），３．３６（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。計算値Ｃ_２５Ｈ_２４Ｎ_４Ｏ_２Ｎａ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）４３５．１７９７、測定値４３５．１７９７（Ｍ＋Ｎａ）。

【0320】

実施例９６：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−１−メチル−５−フェニル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−４−メトキシベンズアミド（８９）の調製

【化113】

（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−１−メチル−５−フェニル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−４−メトキシベンズアミド（８９）は、Ｐｄ／Ｃ（１０％ ｗ／ｗ、５ｍｇ）および蒸留したＭｅＯＨ（２ｍＬ）を用い、ベンジル（Ｅ）−５−（（Ｚ）−ベンジリデン）−２−（（４−メトキシベンゾイル）イミノ）−３−メチル−４−フェニルイミダゾリジン−１−カルボキシレート（４５．１ｍｇ、０．０９６ｍｍｏｌ）の水素化から得、化合物８９を淡褐色の泡沫として得た（２３．８ｍｇ、７４％）。Ｒ_ｆ＝０．２９（３：２ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．３０（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．４８−７．４４（ｍ，３Ｈ），７．３１−７．２７（ｍ，２Ｈ），７．１０−７．０２（ｍ，３Ｈ），７．００−６．９５（ｍ，４Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．６０（ｓ，２Ｈ），３．４８（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１６３．３ １３７．８，１３１．４，１３０．５，１２９．７，１２９．３，１２８．９，１２８．４，１２７．３，１２６．９，１１３．９，５５．７，３２．９，３０．８ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）２８５８、１６７８、１６０３、１５７３、１５１４、１４９４、１４５３、１４０１、１３４８、１３１１、１１７６、１０２７、８４６、７６６ｃｍ^−１。計算値ｍ／ｚ Ｃ_２５Ｈ_２３Ｎ_３Ｏ_２（Ｍ＋Ｎａ）４２０．１６８８、測定値４２０．１６８８（Ｍ＋Ｎａ）。

【0321】

実施例９７：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−１−メチル−５−フェニル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（９０）の調製

【化114】

（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−１−メチル−５−フェニル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（９０）は、Ｐｄ／Ｃ（１０％ ｗ／ｗ、５ｍｇ）および蒸留したＭｅＯＨ（２ｍＬ）を用い、ベンジル （Ｅ）−５−（（Ｚ）−ベンジリデン）−３−メチル−４−フェニル−２−（（３−（トリフルオロメチル）ベンゾイル）イミノ）イミダゾリジン−１−カルボキシレート（４５．１ｍｇ、０．０９６ｍｍｏｌ）の水素化から得、化合物９０を淡褐色の泡沫として得た（２３．８ｍｇ、７４％）。Ｒ_ｆ＝０．７６（３：２ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．５５（ｓ，１Ｈ），８．４３（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５３−７．４８（ｍ，４Ｈ），７．４０−７．３７（ｍ，２Ｈ），７．３２−７．２９（ｍ，２Ｈ），７．２６−７．２４（ｍ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８７（ｓ，２Ｈ），３．５４（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７３．３，１５０．８，１３９．５，１３７．３，１３２．１，１２０．５，１２９．５，１２９．３，１２９．２，１２８．５，１２８．４，１２７．７，１２７．３，１２７．２，１２５．９，１２４．８，１２０．６，９５．０，３０．８，３０．３ｐｐｍ。ＩＲ（薄膜）３０６２、１５９８、１５６８、１４７１、１３６２、１３１５、１２７６、１２１６、１１６２、１１１７、１０８４、１０６７、９０７、７９５、７６３、７２６ｃｍ^−１。計算値ｍ／ｚ Ｃ_２５Ｈ_２１Ｎ_３Ｏ_２Ｆ_３（Ｍ＋Ｈ）４３６．１６３７、測定値４３６．１６３９（Ｍ＋Ｈ）。

【0322】

実施例９８：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（９１）の調製

【化115】

（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（９１）は、Ｐｄ／Ｃ（１０％ ｗ／ｗ、２５ｍｇ）および蒸留したＭｅＯＨ（２ｍＬ）を用い、（２Ｚ，５Ｚ）−ベンジル ５−ベンジリデン−４−（４−メトキシフェニル）−３−メチル−２−（（３−（トリフルオロメチル）ベンゾイル）イミノ）イミダゾリジン−１−カルボキシレート（２４０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）の水素化から得、化合物９１を淡褐色の泡沫として得た（収率５３％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ８．５４（ｓ，１Ｈ），８．４２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３２−７．２３（ｍ，５Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．０３（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，２Ｈ），３．５０（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７３．０，１６０．４，１５０．５，１３９．５，１３７．３，１３２．０，１３１．６，１３０．３，１３０．０，１２８．９，１２８．７，１２８．３，１２８．１，１２７．０，１２６．９，１２５．６，１２５．４，１２４．３，１２０．１，１１９．５，１１４．６，５５．４，３０．５，２９．９ｐｐｍ。

【0323】

実施例９９：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−４−フルオロベンズアミド（９２）の調製

【化116】

（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−４−フルオロベンズアミド（９２）は、ＴＨＦ中の４−フルオロ−Ｎ−（Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニルプロパ−２−イン−１−イル）−Ｎ−メチルカルバムイミドイル）ベンズアミドのＮａＨ介在性環化によって収率８４．１％で褐色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．２８−８．２５（ｍ，２Ｈ），δ７．３２−７．２５（ｍ，４Ｈ），δ７．２３−７．２０（ｍ，１Ｈ），δ７．１７−７．１４（ｍ，２Ｈ），δ７．０６−７．００（ｍ，４Ｈ），δ３．８６（ｓ，３Ｈ），δ３．８２（ｓ，２Ｈ），δ３．４６（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７３．８，１６５．８，１６３．８，１６０．５，１５０．７，１３７．６，１３４．９，１３１．８，１３１．２，１３１．１，１２９．２，１２８．４，１２７．２，１２４．５，１１９．８，１１４．９，１１４．７，５５．６，３０．８，３０．１ｐｐｍ。

【0324】

実施例１００：（Ｅ）−ベンジル（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）カルバメート（９３）の調製

【化117】

（Ｅ）−ベンジル（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）カルバメート（９３）は、ＴＨＦ中のＮａＨ介在性環化によって収率８４．１％で褐色の固体として得た。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１６０．４，１３８．０，１３７．８，１３１．８，１２９．１，１２８．５，１２８．４，１２８．１，１２７．８，１２７．１，１２４．７，１２０．１，１１４．７，６６．９，５５．６，３０．９，３０．２ｐｐｍ。

【0325】

実施例１０１：Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミド（９４）の調製

【化118】

磁気撹拌子を含有する２５ｍＬフラスコの中に、（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（１００ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、ＮａＨ（１２ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）、ＭｅＩ（０．０１５ｍＬ、０．２４ｍｍｏｌ）、および蒸留したＤＭＦ（５ｍＬ）をＮ_２の蒸気下で添加し、反応物を室温で２４時間撹拌した。得られる溶液をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）に溶かし、ブライン（３ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次に、ＥｔＯＡｃを溶出剤として用いるフラッシュクロマトグラフィーにより粗混合物を精製して、無色の油状物質を得た（収率３４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．３７（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３２−７．２８（ｍ，１Ｈ），７．２６−７．２２（ｍ，１Ｈ），７．１６−７．１１（ｍ，３Ｈ），７．００−６．８８（ｍ，５Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．７０（ｓ，２Ｈ），３．４７（ｓ，３Ｈ），３．２６（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１６７．３，１５９．８，１５７．７，１４１．９，１４０．９，１３５．６，１３１．６，１３１．５，１３１．３，１３０．２，１２９．２，１２８．３，１２５．５，１２４．４，１２４．２，１２４．１，１２１．８，１１５．７，１１５．６，１１４．４，５５．５，２５．９，３３．２，３１．１ｐｐｍ。

【0326】

実施例１０２：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−フルオロベンズアミドのＺｎに結合した二量体（９５）の調製

【化119】

磁気撹拌子を含有する２５ｍＬフラスコの中に、（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（１００ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、ＺｎＳＯ_４（３４５．９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、および蒸留したＭｅＯＨ（５ｍＬ）をＮ_２の蒸気下で添加し、反応物を室温で２４時間撹拌した。得られる白色の沈殿物をＺｎに結合した二量体９５として回収した。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ７．８５（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），δ７．３４−７．３０（ｍ，２Ｈ），δ７．２２（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，４Ｈ），δ７．１２−７．０３（ｍ，４Ｈ），δ６．９６−６．９１（ｍ，８Ｈ），６．９０−６．８４（ｍ，６Ｈ），３．８５（ｓ，６Ｈ），３．５９（ＡＢｑ，Ｊ＝１６Ｈｚ，９．５Ｈｚ，４Ｈ），δ３．５１（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１７４．５，１６６．０，１６０．３，１５９．８，１５０．４，１３９．３，１３２．０，１３１．６，１３１．０，１３０．０，１２８．５，１２８．２，１２８．１，１２６．１，１２５．８，１２３．５，１２１．９，１１６．６，１１６．５，１１４．４，５５．６，３２．７，３０．５ｐｐｍ。

【0327】

実施例１０３：ジナアミドール（ＺＮＡ）の提案される作用機構
ナアミジンＡ（ＮＡ）は、ＥＲＫキナーゼを誘導する能力を示した最初の小分子であり、化学療法薬の新しいクラスを提示する。しかし、最初にあまり評価されなかったＮＡの活性の一側面は、それがＺｎ^２＋と結合する能力であった。いくつかの天然物がその由来する海洋性海綿動物からＺｎ^２＋二量体として単離されている（図６Ｂ）。Ｍａｎｃｉｎｉ ｅｔ ａｌ．Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ １９９５，７８，１１７８−１１８４。これらの海綿体は、生き残るために、通常海洋環境では制限される十分な亜鉛を得たことを確実にするために、これらの天然物をＺｎ^２＋シデロホアとして進化させたのかもしれない。

【0328】

豊富な天然物を掌中にして、本発明者らはＩＴＣ実験を実施し、ＮＡとＺｎＣｌ_２の結合が、約２：１の化学量論とＫ_ｄ約０．３５μＭでは起こらないことを見出した（図６Ｃ）。これはこの結合の妥当な近似と考えられるが、これらのＩＴＣ実験は異なる種の溶解度の問題に巻き込まれ、ＩＴＣ実験の正確さに影響を及ぼし得るかなりの量のＭｅＯＨを必要とした。Ｆｉｓｉｃａｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅｒｍｏｃｈｉｍ．Ａｃｔａ ２０１４，５８６（０），４０−４４。Ｚｎ^２＋結合親和性が高いナノモル範囲にあるので、ＮＡの表現型の活性は、おそらくキナーゼ調節と亜鉛結合の両方の結果である。

【0329】

ＺＮＡは、Ｚｎ^２＋とｐＨ依存的に結合する。ＺＮＡは、ナアミジンＡに類似のＺｎ^２＋と結合する。ＭｅＯＨ中ＺＮＡとＭｅＯＨ中ＺｎＳＯ_４の溶液を混合すると、（ＺＮＡ）_２Ｚｎ二量体が素早く沈殿する（図１４Ａ）。固体生成物の構造は、Ｘ線結晶解析によって確認した（図１４Ｂ）。（ＺＮＡ）_２Ｚｎは、ＤＭＳＯ−ｄ_６に自由に溶解できるが、二量体におけるジアステレオトピックなベンジルのＡＢ四重線の消失およびモノマーの一重線としてのその消失から明らかなように、Ｄ_２Ｏ中２当量のＨＣｌの添加は、金属中心から離れてリガンドをプロトン化する。

【0330】

ＺＮＡ類似体は、電子的性質のチューニングへの反応を示唆する。これらの化合物の活性がｐＫ_ａおよびＺｎ^２＋結合親和性を支配する要素の複雑な相互作用から生じることを考慮して、最初の結果は、意味のある能力の増加が達成可能であることを示唆する（図９Ｃ）。Ｎ^２メチル化誘導体は、Ｚｎ^２＋と結合することができず、活性でない。評価した類似体のうち、Ｃ５またはＮ^２−カルボニルに多くの電子供与基を持つ類似体は、活性を改善するようである。ＺＮＡ（ＩＣ５０＝８．８μＭ、２４時間処置）と比較すると、シングルポイントデータは、ＭＣＦ−７に対する能力の４〜１０倍の増加を示唆する。

【0331】

ＺＮＡは、有望なＰＫＰＤパラメータを有する。ＺＮＡの初期薬物動態（ＰＫ）分析を、静脈内１ｍｇ／ｋｇ、経口投与５ｍｇ／ｋｇで実施した。ＺＮＡを雌スプラーグドーリーラットに静脈内に１ｍｇ／ｋｇかまたは経口的に５ｍｇ／ｋｇ投与した。血漿をＫ２ＥＤＴＡと共に回収し、分析まで−８０℃で貯蔵した。ＺＮＡの定量化は、タンパク質沈殿と、それに続いてエレクトロスプレーイオン化法四重極飛行時間型質量分析（ＥＳＩ−ＱＴＯＦ）にインターフェースされた超高速液体クロマトグラフィー（ＵＨＰＬＣ）によって実施した。血漿濃度は、内部標準としてＺＮＡを用い、検量線から求めた。求めた値をＰｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎにフィットさせ、薬物動態値を報告した。

【表3】

【表4】

【0332】

ＺＮＡの血漿中濃度は非常に低く、大部分の試料がアッセイの定量下限値（１０．０ｎｇ／ｍＬ）を下回った。このことが、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎでのフィッティングに利用できるデータを制限した。フィッティングのためのデータ量を増加させるために、曲線よりも低い値をＬＬＯＱの約４０％と推定し、ＰＫフィッティングに使用した。ＰＯ ＰＫ動物で推定された面積の百分率は、３４〜７０％に及び、これは非常に高いと考えられた。より妥当な値は、ＡＵＣの１５〜２０％である。求めた経口バイオアベイラビリティは約６％であった。この値は、求めた推定面積と異常に高いクリアランスに基づく大まかな見積もりとみなされる。静脈内データは、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎでの妥当なフィットを可能にし、ＺＮＡが非常に高い分布容積と、肝血流（２３５％）を凌ぐクリアランスを有することを示唆した。高いクリアランスの可能性のある説明は、化合物と赤血球の結合、より正確なＣ０を確立するためにより早い時点の収集を必要とする非常に急速なクリアランス、および肝外排出である。

【0333】

これらの結果は、ＺＮＡが速いクリアランス速度および比較的短い半減期（Ｔ_１／２＝１．９時間）を有すると思われることを示す。（図１４Ｃ）（これらの結果は、主な循環代謝産物がＺＮＡと１：１の比で現れることによって複雑化し、それは脱メチル化誘導体であり、活性もある。）ＺＮＡは、既に説明したマウス腫瘍移植片研究においてマウスの体重および健康に有害作用なく１００ｍｇ／ｋｇで投与することができたので、それはおそらく忍容性が高い化合物である。

【0334】

上記およびこれまでの実施例に提示されるデータは、以下のＺＮＡの作用機構に一致する（図１５）：

【0335】

１）ＺＮＡは、そのモノマー形態で細胞に進入する。中性の細胞質（ｐＨ＝７．２）でのプロトンの損失と同時に、ＺＮＡ−Ｚｎ^２＋錯体が形成される。Ｊｏｂの分析の結果を考慮すると、おそらく２：１錯体（ＺＮＡ）_２Ｚｎは、優先的に溶液中で形成されるであろう。Ｊｏｂ，Ｐ．，Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｉｎｏｒｇａｎｉｃ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ｉｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ａｎｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｐｐｌ．１９２８，９，１１３−２０３。

【0336】

２）（ＺＮＡ）_２Ｚｎ錯体は、リソソームに進入し、リソソームのｐＨの増加（ｐＨ約４．８）に遭遇する。酸性環境は、ＺＮＡリガンドのプロトン化を引き起こし、Ｚｎ^２＋をリソソームの内部に放出する。

【0337】

３）その後、ＺＮＡはリソソームから自由に出ることができ、Ｚｎ^２＋取り込みサイクルを４）（ＺＮＡ）_２Ｚｎ錯体を再形成するための錯化および脱プロトン化の後に繰り返す。

【0338】

５）細胞は、金属ハウスキーピング遺伝子、例えばメタロチオネイン（ＭＴ１Ｆ、ＭＴ１ＸおよびＭＴ２Ａ）などの発現を増加させ、亜鉛輸送タンパク質（ＳＬＣ３０Ａ１およびＳＬＣ３０Ａ２）の発現を増加させることによってＺｎ^２＋流入を止めようと試みる。

【0339】

６）最終的にこの試みは失敗する。浸透圧の不均衡がリソソーム膜透過処理（ＬＭＰ）を開始させ、オルガネラに含まれていたカテプシンおよびその他の加水分解酵素の放出を導き、最終的に細胞死を導く。

【0340】

文献に記されているように、クロロキンおよびクリキノール（これらも亜鉛イオノフォアとして作用すると考えられている）は、リソソームにおけるＺｎ^２＋蓄積を引き起こし、最終的にカスパーゼ依存性細胞死を導く。対照的に、ＺＮＡは、カスパーゼ非依存性細胞死（この例では、壊死）を誘導する。これは、ＬＭＰの速度論に関連すると思われる、それは、ＺＮＡで処置した場合、細胞死は非常に急速であるためである。ＬＭＰは、この例では破滅的であるかもしれないが、従来のアポトーシス機構を迂回する細胞質カテプシン活性の重要な増加を生じる。

【0341】

実施例１０４：カリウム Ｎ−シアノベンズアミド（９６）の調製

【化120】

大気に解放され、電磁撹拌棒を装備した一口５００ｍＬ丸底フラスコに、シアナミド（６．３ｇ、０．１５ｍｏｌ）および蒸留水（２００ｍＬ）を装入した。次に、水酸化ナトリウムペレット（１２．３ｇ、０．３０８ｍｏｌ）を少量ずつ（約３ｘ４ｇ）１５分間にわたって添加した。混合物を室温で３０分間撹拌した後、０℃に冷却した。フラスコに、１０００ｍＬ付加漏斗を取り付け、付加漏斗にベンゾイルクロライド（２１．１ｇ、１７．４ｍＬ、０．１５ｍｏｌ）を装入した。次に、ベンゾイルクロライド溶液を２０分にわたって滴下した。ベンゾイルクロライドを添加した後、反応物をさらに３時間室温で撹拌した。次に、混合物を５００ｍＬ分液漏斗に移し、ジエチルエーテルで洗浄した（１ｘ５０ＭＬ）。水層を、電磁撹拌棒を装備した１Ｌエルレンマイヤーフラスコに移し、濃ＨＣｌ水溶液（約１５ｍＬ）でｐＨ２に酸性化した。次に、ジクロロメタン（２００ｍＬ）を添加して固体を溶解し、混合物を５００ｍＬ分液漏斗に移した。層を分離した後、水性の画分をジクロロメタン（ｄｉｃｈｌｏｒｍｅｔｈａｎｅ）で抽出し（２ｘ１００ｍＬ）、合した有機物を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。有機物を焼結ガラス漏斗で濾過し、得られる硫酸ナトリウムをジクロロメタン（２ｘ５０ｍＬ）で洗浄した。溶媒をロータリーエバポレーターで除去した後、フラスコを高真空ライン３時間移した。得られる白色の固体を次にＭｅＯＨ（５０ｍＬ）に溶解し、０℃で、ＭｅＯＨ（２００ｍＬ）に溶解した水酸化カリウム（８．０ｇ、０．１４３ｍｏｌ）を含有する撹拌棒を装備した５００ｍＬ丸底フラスコに溶液を滴下した。フラスコに栓をして、−２０℃の冷凍庫の中に一晩置いた。粗固体をブフナー漏斗で回収し、冷ＭｅＯＨで洗浄して（２ｘ５０ｍＬ）、十分に真空乾燥した後、カリウム Ｎ−シアノベンズアミドを微細な白色粉末として得た（１７．９ｇ、６５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＨ_３ＯＤ，４００ＭＨｚ）：δ７．９５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），δ７．４４（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），δ７．３５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）ｐｐｍ。計算値Ｃ_８Ｈ_５Ｎ_２Ｏ ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）１４５．０４０２、測定値１４５．０３９８（Ｍ−Ｈ）。

【0342】

実施例１０５：カリウム Ｎ−シアノ−４−メトキシベンズアミド（９７）の調製

【化121】

カリウム Ｎ−シアノ−４−メトキシベンズアミドを、実施例１０４と同様の方法で調製して、白色の固体を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＨ_３ＯＤ，５００ＭＨｚ）：δ７．９１（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），δ６．８８（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２Ｈ），δ３．８１（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。計算値Ｃ_９Ｈ_７Ｎ_２Ｏ_２ ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）１７５．０５０８、測定値１７５．０５１３（Ｍ−Ｈ）。

【0343】

実施例１０６：カリウム Ｎ−シアノ−２−フルオロベンズアミド（９８）の調製

【化122】

カリウム Ｎ−シアノ−２−フルオロベンズアミドを、実施例１０４と同様の方法で調製して、白色の固体を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＨ_３ＯＤ，５００ＭＨｚ）：δ７．６８（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），δ７．４３−７．３７（ｍ，１Ｈ），δ７．１４（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），δ７．０８（ｄｄ，Ｊ＝２，８．４Ｈｚ，１Ｈ）ｐｐｍ。計算値Ｃ_８Ｈ_４Ｎ_２ＯＦ ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）１６３．０３０８、測定値１６３．０３０８（Ｍ−Ｈ）。

【0344】

実施例１０７：カリウム Ｎ−シアノ−４−クロロベンズアミド（９９）の調製

【化123】

カリウム Ｎ−シアノ−４−フルオロベンズアミドを、実施例１０４と同様の方法で調製して、白色の固体を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＨ_３ＯＤ，５００ＭＨｚ）：δ８．００（ｄｄ，Ｊ＝３．４，６．１Ｈｚ，２Ｈ），δ７．０６（ｔ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ）ｐｐｍ。計算値Ｃ_８Ｈ_４Ｎ_２ＯＦ ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）１６３．０３０８、測定値１６３．０３１７（Ｍ−Ｈ）。

【0345】

実施例１０８：カリウム Ｎ−シアノ−４−フルオロベンズアミド（１００）の調製

【化124】

カリウム Ｎ−シアノ−４−フルオロベンズアミドを、実施例１０４と同様の方法で調製して、白色の固体を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＨ_３ＯＤ，５００ＭＨｚ）：δ８．００（ｄｄ，Ｊ＝３．４，６．１Ｈｚ，２Ｈ），δ７．０６（ｔ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ）ｐｐｍ。計算値Ｃ_８Ｈ_４Ｎ_２ＯＦ ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）１６３．０３０８、測定値１６３．０３１７（Ｍ−Ｈ）。

【0346】

実施例１０９：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（１０１）の調製

【化125】

磁気撹拌子を含有する２５ｍＬフラスコの中に、（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（５０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、ＢＢｒ_３（０．０１２ｍＬ、０．１２ｍｍｏｌ）、および蒸留したＤＣＭ（５ｍＬ）をＮ_２の蒸気下で添加し、反応物を室温で２４時間撹拌した。得られる溶液をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）に溶かし、飽和ＮａＨＣＯ_３（１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。次に、粗混合物をＥｔ_２Ｏでトリチュレートすることにより精製して、化合物１０１を白色固体として得た（収率５８％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．０４（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３８−７．３５（ｍ，１Ｈ），７．３５−７．０５（ｍ，９Ｈ），６．９２−６．８９（ｍ，２Ｈ），３．８０（ｓ，２Ｈ），３．４２（ｓ，３Ｈ），３．２６（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。計算値Ｃ_２４Ｈ_２０Ｎ_３Ｏ_２ＦＮａ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）４２４．１４３７、測定値４２４．１４３９（Ｍ＋Ｎａ）。

【0347】

実施例１１０：（Ｅ）−Ｎ−（４−ベンジル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（１０２）の調製

【化126】

（Ｅ）−Ｎ−（１−アリル−４−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）−２−フルオロベンズアミド（１０２）を、ＴＨＦ中の化合物８４のＮａＨ介在性環化によって得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ８．０６（ｄｔ，Ｊ＝１．５，８．０Ｈｚ，１Ｈ），δ７．５６−７．５３（ｍ，１Ｈ），δ７．２９−７．２６（ｍ，４Ｈ），δ７．２３−７．２０（ｍ，１Ｈ），δ７．１５−７．１２（ｍ，２Ｈ），δ７．０９−７．０５（ｍ，１Ｈ），δ６．９８（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，２Ｈ），δ５．９１−５．８３（ｍ，１Ｈ），δ５．１２（ｄｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，１０Ｈｚ，１Ｈ），δ４．９６（ｄｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，１７．５Ｈｚ，１Ｈ），δ３．８６（ｓ，３Ｈ），δ３．８０（ｓ，２Ｈ）ｐｐｍ。^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）：δ１６２．９，１６０．９，１６０．５，１３７．９，１３２．９，１３２．２，１３２．８，１３２．０，１２９．１，１２８．４，１２７．１，１２３．７，１２０．０，１１７．８，１１６．８，１１６．６，１１４．５，５５．６，４５．５，３１．１ｐｐｍ。

【0348】

実施例１１１：ナアミジンＡ、ケアリイニンＢ、およびケアリイニンＣの抗菌活性
本明細書に記載される類似体の抗癌活性に加えて、ナアミジンＡは、ＭＴＴアッセイによって示されるように、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（ＩＣ_５０＝０．９４μＭまたは０．４１μｇ／ｍＬ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）（ＭＩＣ_１００＝０．７８μＭおよびＡ．バウマニ（Ａ．ｂａｕｍａｎｉｉ）ＭＩＣ_１００＝７９μＭ）に対する増殖抑制作用を有することも示された（詳細は下記；図１７）。関連する天然物ケアリイニンＢおよびＣも抗結核活性を示す（それぞれ、ＩＣ_５０＝８．９μＭおよび４２μＭ）。

【0349】

化合物のライブラリースクリーニングおよびＭＩＣ定量を、Ｋｏｃｈ ｅｔ ａｌ．Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄ ２００９；７５（１２）：１３２６−１３３０に既に記載されているように９６穴プレートで実施した。それぞれの試験生物には異なる培地を使用した。ミュラー−ヒントンＩＩ培地（Ｄｉｆｃｏ ＢＤ、米国ニュージャージー州フランクリンレイクス）を大腸菌に使用した（ＡＴＣＣ ２５９２２）。アシネトバクター・バウマンニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ）（ＡＴＣＣ １９６０６）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）（ＡＴＣＣ ６６３３）、カンジダ・アルビカンス（ＡＴＣＣ ９００２８）は、全てＭＯＰＳ緩衝ＲＰＭＩ−１６４０（ＮＣＣＬＳ ２００７）で増殖させた。結核菌Ｈ３７Ｒａ（ＡＴＣＣ ２５１７７）は、ＡＤＣを補充した７Ｈ９培地（Ｒｅｍｅｌ、米国カンザス州レネックサ）で増殖させた。最終の穴容積は２００μＬであった。各プレートは、未接種非増殖対照の４つの穴、増殖対照（ＤＭＳＯ）の４つの穴および陽性対照（枯草菌用のゲンタマイシン、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）およびＡ・バウマンニ用のカナマイシン、カンジダ・アルビカンス用のイトラコナゾールならびに結核菌用のリファンピシン）として適切な抗生物質の８つの穴［Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、米国ミズーリ州セントルイス）を有した。残りのウェルには、１μＬのＤＭＳＯ中試験化合物を、ＭＩＣ定量のために三連で入れた。インキュベーションは、５日インキュベートされた結核菌を除いて、他の生物には３７℃で一晩であった。枯草菌および結核菌には、それぞれ、１日目または４日目に１１μＬの無菌のＰＢＳ中５ｍｇ／ｍＬの３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を与えた。ホルマザン沈殿物を５０μＬの可溶化試薬（５０％ＤＭＦ、５％ＳＤＳ、４５％水）で溶かした。プレートを、Ｍｕｌｉｓｋａｎ ＦＣプレートリーダー（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、米国マサチューセッツ州ウォルサム）で評価した。Ｎｏｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．２００８，７１，１６２３−１６２４に既に記載されるように、Ｅｘｃｅｌ（商標）スプレッドシートを用いて抑制率を算出した。

【0350】

特許および特許出願を含む全ての刊行物は、本願において、それらがはっきりと本願に矛盾しない限り（例えば、同じ用語についての２つの矛盾する定義）、その全文が参照により本明細書に援用される。

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【図1A-1G】

【図2A】

【図2B】

【図3A-3B】

【図4A-4B】

【図5A-5C】

【図6A-6B】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10A】

【図10B-10D】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図12】

【図13A-13B】

【図14A-14C】

【図15】

【図16】

【図17】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]