特許 6579960 代謝疾患に係わる嗅覚受容体遺伝子及びその用途

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6579960

(24)【登録日】2019年9月6日

(45)【発行日】2019年9月25日

(54)【発明の名称】代謝疾患に係わる嗅覚受容体遺伝子及びその用途

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/00 20060101AFI20190912BHJP

   C12Q 1/02 20060101ALI20190912BHJP

   C12Q 1/6876 20180101ALI20190912BHJP

【ＦＩ】

   C12N15/00ZNA

   C12Q1/02

   C12Q1/6876

【請求項の数】2

【全頁数】94

(21)【出願番号】特願2016-1423(P2016-1423)

(22)【出願日】2016年1月7日

(62)【分割の表示】特願2013-543086(P2013-543086)の分割

【原出願日】2011年9月30日

(65)【公開番号】特開2016-104025(P2016-104025A)

(43)【公開日】2016年6月9日

【審査請求日】2016年1月27日

【審判番号】不服2017-17805(P2017-17805/J1)

【審判請求日】2017年12月1日

(31)【優先権主張番号】10-2010-0125349

(32)【優先日】2010年12月9日

(33)【優先権主張国】KR

(73)【特許権者】

【識別番号】507175175

【氏名又は名称】インダストリー−アカデミック コーポレーション ファウンデーション，ヨンセイ ユニバーシティ

(74)【代理人】

【識別番号】100107515

【弁理士】

【氏名又は名称】廣田 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100107733

【弁理士】

【氏名又は名称】流 良広

(74)【代理人】

【識別番号】100115347

【弁理士】

【氏名又は名称】松田 奈緒子

(72)【発明者】

【氏名】パク・テ スン

【合議体】

【審判長】 中島 庸子

【審判官】 長井 啓子

【審判官】 高堀 栄二

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００６−５２２５８６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００８−５１７９３１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００７−３０６８０１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００９／１３９４５９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１０／０５２５８１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｊ．，ｖｏｌ．５（９），ｐｐ．９５０−９６０（２０１０）

【文献】 Ｊ．Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｒｅｓ．，ｖｏｌ．９（６），ｐｐ．２９７７−２９８７（２０１０）

【文献】 Ｊ．Ｎｕｔｒｉｇｅｎｅｔ．Ｎｕｔｒｉｇｅｎｏｍｉｃｓ，ｖｏｌ．１（６），ｐ．２９０，ＦＰ１３（２００８）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

C12N 15/00 - 15/90

C12Q 1/68

ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡＰｌｕｓ／ＷＰＩＤＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

嗅覚受容体遺伝子であるＯｌｆｒ１６遺伝子をコードする配列番号：２６のヌクレオチド配列に特異的に結合するプライマーを含み、前記配列番号：２６のヌクレオチド配列は、肥満疾患患者において高発現することを特徴とする内臓脂肪による肥満診断用の遺伝子増幅キット。

【請求項2】

内臓脂肪による肥満の治療剤候補物質のスクリーニング方法であって、
（ａ）配列番号：２６のヌクレオチド配列を含む細胞に、分析しようとする試料を接触させる工程と、
（ｂ）前記ヌクレオチド配列の発現量を測定する工程であって、前記配列番号：２６のヌクレオチド配列の高発現が抑制される場合に、前記試料は、内臓脂肪による肥満の治療剤候補物質と判定される工程と、
を含むことを特徴とする内臓脂肪による肥満の治療剤候補物質のスクリーニング方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、代謝疾患に係わる嗅覚受容体遺伝子及びその代謝疾患診断用のキット、及びスクリーニング方法における用途に関する。

【背景技術】

【0002】

国内市場だけではなく、グローバルな製品化が可能な肥満治療剤を商用化するためには、原料の抗肥満効能に対する作用メカニズム及びターゲットタンパク質に関する研究が切実に要求される。現在までに肥満及び代謝疾患に使用されている治療剤ターゲット（作用点）は、既に開発され又は開発中であり、それらは四つの分類に大別される。第１に、食欲調節に係わるターゲットとして、例えば、ＣＢＲ（カンナビノイド受容体）アンタゴニスト、５−ＨＴ２ｃ（選択的５−ヒドロキシトリプタミン受容体サブタイプ２ｃ）アゴニスト、ＭＣ４Ｒ（メラノコルチン受容体）アゴニスト、ＭＣＨ（メラニン凝集ホルモン）アンタゴニスト及びＮＰＹ（ニューロペプチドＹ）アンタゴニストなどがある。第２に、代謝率又は新陳代謝の調節に係わるターゲットとして、例えば、β３−ＡＲ（β３−アドレナリン受容体）アゴニスト、リパーゼ抑制剤、脂質代謝酵素調節剤（ジアシルグリセロールアシルトラスフェラーゼ、脂肪酸合成酵素、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ、ステアリル−ＣｏＡ不飽和化酵素）などがある。第３に、胃腸管系の作用調節に係わるターゲットとして、例えば、ＧＬＰ−１（グルカゴン様ペプチド−１）受容体アゴニスト、ＣＣＫ−Ａ（コレシストキニン−Ａ）アゴニスト、グレリンアンタゴニストなどがある。最後に、脂肪酸酸化に係わるターゲットとして、例えば、ＰＰＡＲ（ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体）調節剤、ＣＰＡ（カルボキシペプチダーゼ）抑制剤、ＰＴＰ（プロテインチロシンホスファターゼ）抑制剤、そしてＡＭＰＫ（ＡＭＰ活性化タンパク質キナーゼ）調節剤などがある（非特許文献１）。

【0003】

嗅覚受容体は、嗅覚上皮細胞で主に発現することが知られている。空気中の匂い分子が嗅覚上皮細胞の細胞膜に存在する嗅覚受容体と結合すると、Ｇ_ｏｌｆ（嗅覚Ｇタンパク質）を優先的に活性化させて、それからＡＣ_３（嗅覚関連アデニル酸シクラーゼ）を活性化させる。後者は、嗅覚細胞内でＡＴＰからｃＡＭＰ（サイクリックＡＭＰ）の生成を促進させ、カルシウムイオンチャネルを活性化させ、最終的に脳に信号を伝達し、匂い分子を認識する。人間の場合、ほぼ１，２００種類の嗅覚受容体アイソフォームが存在することが報告され、これは、人間が持っている遺伝子の約３％を占めている。単一嗅覚受容体が担当する匂い分子は、約２〜３種であり、約１００余種の嗅覚受容体の組み合わせによって、人間は１万種程度の匂い（又は匂い分子）を区別することができるようになる。嗅覚受容体は、嗅覚上皮細胞で主に発現することが知られているが、最近の研究によると、嗅覚様化学受容性シグナル伝達（ｏｌｆａｃｔｏｒｙ−ｌｉｋｅ ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｏｒｙ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）が嗅覚上皮組織以外の他の生体組織でも起こるという報告がある。即ち、嗅覚受容体、嗅覚関連ＡＣ_３及びＧ_ｏｌｆ遺伝子は、嗅覚上皮細胞だけではなく、腎臓組織でも発現して、レンニン分泌及び糸球体ろ過率の調節に関与することが明らかとなった。しかし、嗅覚受容体の肥満関連機能は、まだ明らかとなっていない。

【0004】

本発明者は、マウスの末梢組織（脂肪組織及び筋肉組織）で多様な種類の嗅覚受容体が発現することを最初に見出し、また、これらの嗅覚受容体の発現が食餌性肥満により調節されることを見出した。したがって、天然物に存在する多様な香り成分が脂肪組織、肝臓組織、筋肉組織などの末梢組織の細胞膜に存在する多数の嗅覚受容体と選択的に結合して、後者が、ＡＣ_３を経由して末梢組織における脂肪蓄積、遊離脂肪酸酸化、熱発生、インシュリン抵抗性調節に関与することを見出した。

【0005】

本明細書全体にかけて多数の論文及び特許文献が参照され、その引用が表示されている。このような特許及び文献の公開は、その全体が本明細書に参照として取り込まれ、本発明の属する技術分野の水準及び本発明の内容がより明確に説明される。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉ Ｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｏｂｅｓｉｔｙ：ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｄｒｕｇｓ ａｎｄ ｔａｒｇｅｔｓ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｔａｒｇｅｔｓ １３：１９５（２００９）

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

本発明者らは、脂質代謝異常により引き起こされる肥満を始めとした多様な代謝性疾患の新しい遺伝子ターゲットを開発するために鋭意研究した。その結果、末梢組織で多様な種類の嗅覚受容体が発現するだけではなく、これらの嗅覚受容体の発現がが食餌性肥満により調節されることを見出した。したがって、これらの発現が肥満などに対する新しい分子的ターゲットになり得ることを見出し、本発明を完成した。

【0008】

したがって、本発明の目的は、ジェンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）アクセッション番号ＮＭ＿１４６４１６のヌクレオチド配列（配列番号：２５）に特異的に結合するプライマー又はプローブを含む、肥満、脂質代謝異常、脂肪肝及びインシュリン抵抗性症候群からなる群から選択される代謝疾患診断用のキットを提供することにある。

【0009】

本発明の他の目的は、肥満、脂質代謝異常、脂肪肝及びインシュリン抵抗性症候群からなる群から選択される代謝疾患の治療用組成物のスクリーニング方法を提供することにある。

【0010】

本発明の他の目的及び利点は、発明の詳細な説明、請求の範囲及び図面により、さらに明確にされる。

【課題を解決するための手段】

【0011】

本発明の一様態によると、本発明は、以下のジェンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）アクセッション番号からなる群から選択されるヌクレオチド配列に特異的に結合するプライマー又はプローブを含む、肥満、脂質代謝異常、脂肪肝及びインシュリン抵抗性症候群からなる群から選択される代謝疾患診断用のキットを提供する。
ジェンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）アクセッション番号ＮＭ＿１４６８３４、ＮＭ＿２０７１４９、ＮＭ＿００１０１１７５８、ＮＭ＿１４７０１５、ＮＭ＿００１０１１７２１、ＮＭ＿１４６５８８、ＮＭ＿２０７１４２、ＮＭ＿１４７０１３、ＮＭ＿００１０１１７８３、ＮＭ＿２０７５６１、ＮＭ＿００１０１１７７７、ＮＭ＿１４６５７７、ＮＭ＿１４７０１０、ＮＭ＿１４６４０８、ＮＭ＿１４６５１１、ＮＭ＿１４６４０７、ＮＭ＿１４６７３０、ＮＭ＿１４６５４２、ＮＭ＿２０７１５４、ＮＭ＿１４６７５２、ＮＭ＿１４６６６１、ＮＭ＿１４６６５８、ＮＭ＿１４６３５１、ＮＭ＿１４６６４２、ＮＭ＿１４６２９３、ＮＭ＿００１０１１７５３、ＮＭ＿１４６８１７、ＮＭ＿１４６６４９、ＮＭ＿１４６５３２、ＮＭ＿００１０１１８６８、ＮＭ＿００１０１１８１６、ＮＭ＿００１０１１５３５、ＮＭ＿１４６８２３、ＮＭ＿１４６４５８、ＮＭ＿００１００１８１０、ＮＭ＿１４６４５９、ＮＭ＿１４６９０１、ＮＭ＿１４６８９９、ＮＭ＿１４６２８８、ＮＭ＿１４６８９１、ＮＭ＿１４６７９０、ＮＭ＿１４６７８８、ＮＭ＿１４６４７６、ＮＭ＿１４６９７７、ＮＭ＿１４６９８１、ＮＭ＿１４６３４２、ＮＭ＿１４６９７５、ＮＭ＿１４６３９４、ＮＭ＿１４６９０８、ＮＭ＿２０７２５４、ＮＭ＿１４６４０４、ＮＭ＿１４６８８５、ＮＭ＿１４６４０３、ＮＭ＿１４６８８４、ＮＭ＿１４６６５２、ＮＭ＿１４６８８７、ＮＭ＿１４６８８９、ＮＭ＿００１０１１７８７、ＮＭ＿２０７１５１、ＮＭ＿１４６４４９、ＮＭ＿１４６２７４、ＮＭ＿１４６２９２、ＮＭ＿２０７５７０、ＮＭ＿００１０１１８７０、ＮＭ＿２０７７０３、ＮＭ＿１４７０７１、ＮＭ＿２０７５７１、ＮＭ＿１４６３０８、ＮＭ＿１４６５４１、ＮＭ＿１４６２８３、ＮＭ＿１４６９１１、ＮＭ＿２０７５７３、ＮＭ＿２０７５７４、ＮＭ＿００１０１１７４１、ＮＭ＿１４６４７３、ＮＭ＿１４７０６５、ＮＭ＿１４６４７１、ＮＭ＿１４６２７６、ＮＭ＿１４６８７７、ＮＭ＿１４６３３７、ＮＭ＿１４６２７５、ＮＭ＿１４６８８１、ＮＭ＿１８１８１８、ＮＭ＿１４６４９１、ＮＭ＿１４６４９０、ＮＭ＿００１０１１５２５、ＮＭ＿１４６９８４、ＮＭ＿００１０１１８５３、ＮＭ＿１４６８０６、ＮＭ＿１４６６８７、ＮＭ＿１４６６８３、ＮＭ＿１４６６９７、ＮＭ＿１４６７４７、ＮＭ＿００１０１１８４１、ＮＭ＿１４６８６９、ＮＭ＿００１０１１８４２、ＮＭ＿１４６３０１、ＮＭ＿１４６６９６、ＮＭ＿０２０５１３、ＮＭ＿１４６２７１、ＮＭ＿２０７５７６、ＮＭ＿２０６８２３、ＮＭ＿１４６４５１、ＮＭ＿１４６４６６、ＮＭ＿１４６９３５、ＮＭ＿１４６３５７、ＮＭ＿１４６３３５、ＮＭ＿１４６４８４、ＮＭ＿００１０１１８０８、ＮＭ＿２０７５５０、ＮＭ＿１４６４２９、ＮＭ＿１４６４０５、ＮＭ＿１４６６０６、ＮＭ＿２０７５５３、ＮＭ＿１４６６８８、ＮＭ＿１４６４８９、ＮＭ＿１４６８２４、ＮＭ＿１４６２８０、ＮＭ＿１４６４５７、ＮＭ＿１４７０３６、ＮＭ＿１４６２８１、ＮＭ＿２０６９０３、ＮＭ＿１４６８７８、ＮＭ＿００１０１１８６６、ＮＭ＿００１０１１７７０、ＮＭ＿１４６９４７、ＮＭ＿１４６９４９、ＮＭ＿１４６６２８、ＮＭ＿１４６９４０、ＮＭ＿１４６９４１、ＮＭ＿１４６６２５、ＮＭ＿１４６６２４、ＮＭ＿２０７２３５、ＮＭ＿１４７０５１、ＮＭ＿２０７５５５、ＮＭ＿１４７０２３、ＮＭ＿２０７２２４、ＮＭ＿１４６８２５、ＮＭ＿１４６３４７、ＮＭ＿１４７００６、ＮＭ＿１４７００８、ＮＭ＿１４６７０６、ＮＭ＿１４６７０９、ＮＭ＿１４６７１５、ＮＭ＿１４６７２２、ＮＭ＿１４６７１７、ＮＭ＿１４６６５５、ＮＭ＿１４６２７３、ＮＭ＿１４６５７６、ＮＭ＿００１００５４８８、ＮＭ＿１４６４２６、ＮＭ＿１４６３７０、ＸＭ＿８９１２８３、ＮＭ＿１４６７７５、ＮＭ＿１４６７３４、ＮＭ＿１４６７３３、ＮＭ＿１４６７３７、ＮＭ＿１４６３０７、ＮＭ＿１４６９５２、ＮＭ＿１４６５１８、ＮＭ＿００１０１１８１４、ＮＭ＿００１０１１８１５、ＮＭ＿１４６９６２、ＮＭ＿００１０１１７８２、ＮＭ＿１４７１０１、ＮＭ＿２０７６２１、ＮＭ＿１４７１０３、ＮＭ＿１４６３５９、ＮＭ＿１４７１０９、ＮＭ＿１４７１１５、ＮＭ＿１４７１１１、ＮＭ＿２０７５５６、ＮＭ＿１４６７３１、ＮＭ＿１４６９５５、ＮＭ＿１４６８４１、ＮＭ＿１４６８１２、ＮＭ＿１４７１１９、ＮＭ＿１４７０７２、ＮＭ＿１４６３２９、ＮＭ＿１４７０７７、ＮＭ＿２０７１４４、ＮＭ＿１４７０５６、ＮＭ＿００１０１１７５７、ＸＭ＿９９３２４２、ＮＭ＿１４７０９６、ＮＭ＿１４７０６０、ＮＭ＿１４７０５９、ＮＭ＿１４７０４３、ＮＭ＿１４６７６０、ＮＭ＿００１０１１８４８、ＮＭ＿１４７０９５、ＮＭ＿１４６３５８、ＮＭ＿０１３６２０、ＮＭ＿１４７０６９、ＮＭ＿１４６５９８、ＮＭ＿１４６５９９、ＮＭ＿００１０１１７４９、ＮＭ＿００１０１１５４２、ＮＭ＿０１９４８６、ＮＭ＿１４７０３３、ＮＭ＿１４６７８０、ＮＭ＿１４６３１６、ＮＭ＿１４６３１９、ＮＭ＿００１０１１８０９、ＮＭ＿１４６４９３、ＮＭ＿１４６３６３、ＮＭ＿１４６６６７、ＮＭ＿２０７１３３、ＮＭ＿１４６２９９、ＮＭ＿２０７１５６、ＮＭ＿００１０１１８２９、ＮＭ＿１４６４２２、ＮＭ＿１４６８６４、ＮＭ＿１４６８６３、ＮＭ＿１４６５４７、ＮＭ＿１４６２６６、ＮＭ＿２０７００８、ＮＭ＿２０７６２０、ＮＭ＿２０７５５９、ＮＭ＿００１０１１８４９、ＮＭ＿１４６５４８、ＮＭ＿００１０１１８２１、ＮＭ＿１４６５５０、ＮＭ＿２０７１５９、ＮＭ＿１４６６７０、ＮＭ＿１４６６７７、ＮＭ＿１４６６７６、ＮＭ＿１４６３００、ＮＭ＿１４６５６７、ＮＭ＿１４６２８２、ＮＭ＿１４６５２５、ＮＭ＿１４６５２４、ＮＭ＿１４６５５８、ＮＭ＿１４６９０３、ＮＭ＿１４６８８２、ＮＭ＿１４６７４９、ＮＭ＿１４６８８３、ＮＭ＿１４６４１７、ＮＭ＿００１０１１７３９、ＮＭ＿１４６３３６、ＮＭ＿１４６８０１、ＮＭ＿１４６８７２、ＮＭ＿１４６８１１、ＮＭ＿１４６８１０、ＮＭ＿００１０１１８６４、ＮＭ＿１４６７８２、ＮＭ＿１４６４４１、ＮＭ＿１４６４４２、ＮＭ＿００１０１１５１８、ＮＭ＿１４６５０３、ＮＭ＿１４６３３０、ＮＭ＿１４６２７９、ＮＭ＿１４６６１２、ＮＭ＿１４６８２６、ＮＭ＿１４７１０７、ＮＭ＿１４７１０５、ＮＭ＿１４６５１０、ＮＭ＿１４６２８６、ＮＭ＿１４６８５５、ＮＭ＿１４６５１５、ＮＭ＿１４６４３７、ＮＭ＿１４６５８９、ＮＭ＿１４６６６０、ＮＭ＿００１０１１８３３、ＮＭ＿１４６６４０、ＮＭ＿１４６５３１、ＮＭ＿００１０１１５１７、ＮＭ＿１４６６３１、ＮＭ＿１４６８９８、ＮＭ＿１４６８９３、ＮＭ＿００１０１１８０３、ＮＭ＿２０７６３１、ＮＭ＿１４６８３２、ＮＭ＿１４６５３４、ＮＭ＿１４７０６６、ＮＭ＿１４６６９２、ＮＭ＿１４６６３４、ＮＭ＿００１０１１８５０、ＮＭ＿０１９４７５、ＮＭ＿０１９４７６、ＮＭ＿１４７００２、ＮＭ＿１４６９９２、ＮＭ＿１４６８７０、ＮＭ＿１４６６２１、ＮＭ＿１４６５３７、ＮＭ＿１４６８５９、ＮＭ＿１４６７２４、ＮＭ＿１４６７２３、ＮＭ＿１４６７５５、ＮＭ＿１４７１１３、ＮＭ＿１４７１１４、ＮＭ＿１４６９６４、ＮＭ＿１４７０８０、ＮＭ＿１４６６６５、ＮＭ＿１４６３７８、ＮＭ＿１４６３２４、ＮＭ＿１４６５５７、ＮＭ＿１４６４１９、ＮＭ＿１４６４８２、ＮＭ＿１４６４７８、ＮＭ＿１４６８６１、ＮＭ＿２０７６７３、ＮＭ＿００１０１１６９５、ＮＭ＿１４６８６６、ＮＭ＿００１０１１８７２、ＮＭ＿１４７０１２、ＮＭ＿１４６３９１、ＮＭ＿００１０１１７３５、ＮＭ＿２０７１３５、ＮＭ＿１４６８４３、ＮＭ＿１４６５９４、ＮＭ＿２０７６３２、ＮＭ＿１４６３４８、ＮＭ＿１４６６４５、ＮＭ＿１４６６４１、ＮＭ＿１４６２９４、ＸＭ＿６２１５５４、ＸＭ＿６２１５５５、ＮＭ＿１４６８９５、ＮＭ＿１４６７７８、ＮＭ＿１４６７８９、ＮＭ＿１４６９７０、ＮＭ＿１４６９８３、ＮＭ＿１４６３４１、ＮＭ＿１４６７９４、ＮＭ＿１４６３７７、ＮＭ＿１４６９８５、ＮＭ＿２０６８１６、ＮＭ＿００１００５５６８、ＮＭ＿１４６４００、ＸＭ＿８８８０６８、ＮＭ＿１４６８８６、ＮＭ＿１４６４５０、ＮＭ＿１４６８３１、ＮＭ＿１４６３８５、ＮＭ＿１４７０４０、ＮＭ＿００１０１１７３７、ＮＭ＿１４６７４４、ＮＭ＿１４６５４０、ＮＭ＿１４６４８８、ＮＭ＿１４６９１０、ＮＭ＿００１０１１７９０、ＮＭ＿１４６４６７、ＮＭ＿１４６４６８、ＮＭ＿１４６４７０、ＮＭ＿１４６６５１、ＮＭ＿１４６８０９、ＮＭ＿００１０１１８３９、ＮＭ＿１４６６８４、ＮＭ＿１４６３７１、ＮＭ＿２０７５７５、ＮＭ＿１４６２９１、ＮＭ＿２０７１３８、ＮＭ＿０２０５１４、ＮＭ＿１４６５８５、ＮＭ＿００８７６３（配列番号：２６）、ＮＭ＿１４７０６８、ＮＭ＿００１０１１８５５、ＮＭ＿１４６９５７、ＮＭ＿１４６９９３、ＮＭ＿１４６９９９、ＮＭ＿１４６９１２、ＮＭ＿０１０９７０、ＮＭ＿０１０９７４、ＮＭ＿００１００５５２０、ＮＭ＿１４６２６９、ＮＭ＿２０７５５２、ＮＭ＿００１００５７８０、ＮＭ＿１４６８２９、ＮＭ＿００１０１１７６７、ＮＭ＿１４６５３６、ＮＭ＿１４６５００、ＮＭ＿１４６９４８、ＮＭ＿１４６９３９、ＮＭ＿１４６６６２、ＸＭ＿６１９７４８、ＮＭ＿１４７００７、ＮＭ＿００１０１１８６３、ＮＭ＿１４６７６１、ＮＭ＿１４６７２１、ＮＭ＿２０７１５８、ＮＭ＿１４６
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７、ＮＭ＿１４６５６９、ＮＭ＿１４７００１、ＮＭ＿１４６３８４、ＮＭ＿１４６９４４、ＮＭ＿１４６６５６、ＮＭ＿１４７０８８、ＮＭ＿００１０１１７９３、ＢＣ０５１４３５、ＮＭ＿１４６６１３、ＮＭ＿１４７０１１、ＮＭ＿１４６８４７、ＮＭ＿１４６３６６ ，ＮＭ＿１４６７６６、ＮＭ＿００１０１１７７５、ＮＭ＿１４７０００、ＮＭ＿１４７００５、ＮＭ＿２０７６２２、ＮＭ＿１４６９３４、ＮＭ＿１４７０３２、ＮＭ＿１４６２７８、ＮＭ＿１４６５２７、ＮＭ＿００１０１１７４８、ＮＭ＿１４６８６５、ＮＭ＿１４６９７１、ＮＭ＿１４６４１０、ＮＭ＿１４６７５１、ＮＭ＿２０７１４５、ＮＭ＿１４６８３３、ＮＭ＿１４６４０６、ＮＭ＿１４６７６５、ＮＭ＿２０７２５３、ＮＭ＿１４６６８０、ＮＭ＿００１００５５２４、ＮＭ＿０１０９８３、ＮＭ＿００１０１１８６１、ＮＭ＿１４６９２２、ＮＭ＿１４７１０４、ＮＭ＿１４６８１３、ＮＭ＿２０７２４９、ＮＭ＿１４６６６３、ＮＭ＿１４６８６２、ＮＭ＿１４６９０５、ＮＭ＿１４６４１８、ＮＭ＿１４７０２８、ＮＭ＿１４６３０３、ＮＭ＿１４６２９５、ＮＭ＿１４７０９８、ＮＭ＿１４６８０３及びＮＭ＿１４６７８４。

【0012】

本発明者らは、脂質代謝異常で引き起こされる肥満を始めとした多様な代謝性疾患の新しい遺伝子ターゲットを開発するために鋭意研究した。その結果、末梢組織で多様な種類の嗅覚受容体が発現するだけではなく、これらの嗅覚受容体の発現が食餌性肥満により調節されることを観察した。したがって、これらの発現が肥満などに対する新しい分子的ターゲットになり得ることを見出した。

【0013】

本発明によると、嗅覚器官の他にも、脂肪及び筋肉などの末梢組織で多様な種類の嗅覚受容体が発現する。天然物に存在する多様な香り成分が、脂肪組織、肝臓組織、筋肉組織などの末梢組織の細胞膜に存在する多数の嗅覚受容体と選択的に結合し、これらの嗅覚受容体が、ＡＣ_３を経由して末梢組織における脂肪蓄積、遊離脂肪酸酸化、熱発生、インシュリン抵抗性調節に関与する。

【0014】

このような知見に基づいて、本発明者らは、高脂肪食餌マウスの内臓脂肪、皮下脂肪及び筋肉組織で、正常食餌を摂取する対照群に比べて発現が２倍以上変化する嗅覚受容体遺伝子プロファイル（差次的に発現した遺伝子、ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｇｅｎｅ、ＤＥＧ）を分析した。

【0015】

本明細書で使用される用語‘脂質代謝異常’は、高脂血症を含む概念であって、血液内の脂肪数値増加により現れる高コレステロール血症、高中性脂肪血症、低ＨＤＬ−コレステロール血症の他にも、リポタンパクの代謝異常などに起因する異常な脂質状態を意味する。

【0016】

本明細書で使用される用語‘脂肪肝’は、肝臓の脂肪代謝障害により脂肪が肝細胞に過度なる量で蓄積された状態をいい、これは、狭心症、心筋梗塞、脳卒中、動脈硬化、脂肪肝及び膵臓炎などの多様な疾病の原因になる。

【0017】

本明細書で使用される用語‘糖尿病’は、ブドウ糖不耐性を招くインシュリンの相対的又は絶対的不足で特徴付けられる慢性疾患を意味する。用語‘糖尿病’は、あらゆる種類の糖尿病を含み、例えば、第１型糖尿病、第２型糖尿病及び遺伝性糖尿病を含む。第１型糖尿病は、インシュリン依存性糖尿病であって、主にβ−細胞の破壊により生じる。第２型糖尿病は、インシュリン非依存性糖尿病であって、食事後、不十分なインシュリン分泌により生じるか、あるいはインシュリン抵抗性により生じる。

【0018】

本明細書で使用される用語‘インシュリン抵抗性’は、血糖を下げるインシュリンの機能が低下し、細胞がブドウ糖を効果的に燃焼できないことを意味する。インシュリン抵抗性が高い場合、人体は過多なインシュリンを生産し、これにより、高血圧や脂質代謝異常のみならず、心臓病、糖尿病を発症する可能性がある。

【0019】

特に、第２型糖尿病では、筋肉と脂肪組織でインシュリンの増加に気付かず、インシュリンの作用が起こらない。

【0020】

本明細書で使用される用語‘インシュリン抵抗性症候群’は、前記インシュリン抵抗性により誘発された疾患を総称する概念であって、インシュリン作用に対する細胞の抵抗性、高インシュリン血症、超低密度リポ蛋白（ｖｅｒｙ ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ、ＶＬＤＬ）と中性脂肪の増加、高密度リポ蛋白（ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＨＤＬ）の減少及び高血圧などを特徴とする疾患を意味し、心血管疾患と第２型糖尿病の危険因子と認識されている概念である（Ｒｅａｖｅｎ ＧＭ．，Ｒｏｌｅ ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｄｉｓｅａｓｅ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，３７：１５９５−６０７（１９８８））。また、インシュリン抵抗性は、高血圧、糖尿、喫煙などの危険因子と共に細胞内酸化ストレスを増加させて、シグナル伝達系を変化させて炎症反応を誘発し、アテローム硬化症を進行させることが知られている（Ｆｒｅｅｍａｎ ＢＡ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅ： ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌｓ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｊｕｒｙ，Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．４７：４１２−２６（１９８２）、Ｋａｗａｍｕｒａ Ｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ ｐｒｏｍｏｔｅ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｂｙ ａ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐａｔｈｗａｙ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９４：７７１−８（１９９４））。

【0021】

本明細書で使用される用語‘代謝疾患’は、各種心血管系疾患と第２型糖尿病の危険要因が互いに群集をなす現象を一つの疾患群に概念化させたもので、インシュリン抵抗性及びこれに係わる複雑で多様な代謝異常と臨床的な異常を全て包括して意味する概念である。１９８８年Ｒｅａｖｅｎは、このような症状の共通の原因が、インシュリン抵抗性であることを主張し、インシュリン抵抗性症候群と命名したが、１９９８年世界保健機構（ＷＨＯ）は、インシュリン抵抗性がこれらの症状の全ての要素を全部説明することはできないことから、‘代謝症候群’又は‘代謝疾患’という用語を導入した。

【0022】

本発明の好ましい実施形態によると、本発明のヌクレオチド配列は、ジェンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）アクセッション番号ＮＭ＿１４６６９３、ＮＭ＿１４７０２５、ＮＭ＿１４６６１０、ＮＭ＿１４６３６６、ＮＭ＿１４６６４８、ＮＭ＿１４６６４０、ＮＭ＿１４６６３２、ＮＭ＿１４６４１６、ＮＭ＿１４６９９７、ＮＭ＿１４６７７０、ＮＭ＿１４６８１９、ＮＭ＿００１０１１８７０、ＮＭ＿００８７６３、ＮＭ＿１４６８９３、ＮＭ＿１４７０６９、ＮＭ＿１４６７０３、ＮＭ＿１４７０６３、ＮＭ＿１４６９５０、ＮＭ＿１４６３６４、ＮＭ＿１４６４４８、ＮＭ＿１４６８５８、ＮＭ＿１４６８９７、ＮＭ＿１４６３９１、ＮＭ＿１４６６９７、ＮＭ＿１４７０２８、ＮＭ＿００１０１１７５７、ＮＭ＿１４６８４９、ＮＭ＿２０７１３７、ＮＭ＿１４６７５０及びＮＭ＿１４６３３９からなる群から選択される。前記遺伝子は、高脂肪食餌マウスと正常食餌対照群との間に、発現量に２倍以上差のある遺伝子のうち、抗肥満効能を示す多様な香り成分により発現が調節される遺伝子である。

【0023】

本発明の好ましい実施形態によると、本発明のキットは、マイクロアレイである。

【0024】

本発明の診断用キットで利用されるプローブ又はプライマーは、本発明のヌクレオチド配列に対して相補的な配列を有する。本明細書で用語‘相補的（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ）’は、ある特定なハイブリッド形成又はアニーリング条件下で前記本発明のヌクレオチド配列に選択的にハイブリッド形成できる程度の相補性を有することを意味する。したがって、用語‘相補的’は、用語‘完全相補的（ｐｅｒｆｅｃｔｌｙ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ）’とは異なる意味を有し、本発明のプライマー又はプローブは、前記本発明のヌクレオチド配列に選択的にハイブリッド形成できる程度であれば、一つ又はそれ以上のミスマッチ（ｍｉｓｍａｔｃｈ）塩基配列を有することができる。本明細書で使用される‘プライマー’は、適した温度で適した緩衝液内で適した条件（即ち、４種の異なるヌクレオチドトリホスフェート及び重合反応酵素の存在下）において鋳型依存的ＤＮＡ合成の開始点として作用できる一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。プライマーの適した長さは、多様な要素、例えば、温度とプライマーの用途によって変化があるが、典型的に１５〜３０ヌクレオチドである。短いプライマー分子は、鋳型と十分安定したハイブリッド形成二重鎖を形成するために、一般的により低い温度が必要となる。

【0025】

プライマーの配列は、鋳型の一部配列と完全に相補的な配列を有する必要はなく、鋳型とハイブリッド形成されてプライマー固有の作用ができる範囲内で十分な相補性を有すれば十分である。したがって、本発明におけるプライマーは、鋳型である前記本発明のヌクレオチド配列に完璧に相補的な配列を有する必要はなく、この遺伝子配列にハイブリッド形成されてプライマー作用ができる範囲内で十分な相補性を有すれば十分である。このようなプライマーのデザインは、本発明のヌクレオチド配列を参照して当業者が容易に実施することができ、例えば、プライマーデザイン用プログラム（例えば、ＰＲＩＭＥＲ３プログラム）を利用して実施できる。

【0026】

本明細書で使用された用語‘プローブ’は、天然の又は修飾されたモノマー又は連鎖（ｌｉｎｋａｇｅｓ）の線形オリゴマーを意味し、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドを含み、ターゲットヌクレオチド配列に特異的にハイブリッド形成でき、天然に存在するか或いは人為的に合成されたものである。本発明のプローブは、好ましくは一本鎖であり、オリゴデオキシリボヌクレオチドである。本発明のプローブは、天然（ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ）ｄＮＭＰ（即ち、ｄＡＭＰ、ｄＧＭ、ｄＣＭＰ及びｄＴＭＰ）、ヌクレオチド類似体又は誘導体を含むことができる。また、本発明のプローブは、リボヌクレオチドも含むことができる。例えば、発明のプローブは、骨格修飾されたヌクレオチド〔例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）（Ｍ．Ｅｇｈｏｌｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６５：５６６−５６８（１９９３））、ホスホロチオエートＤＮＡ、ホスホロジチオエートＤＮＡ、ホスホロアミデートＤＮＡ（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ ＤＮＡ）、アミド結合ＤＮＡ、ＭＭＩ結合ＤＮＡ、２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、アルファ−ＤＮＡ及びメチルホスホン酸ＤＮＡ〕、糖修飾されたヌクレオチド（例えば、２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、２’−フルオロＲＮＡ、２’−アミノＲＮＡ、２’−Ｏ−アルキルＤＮＡ、２’−Ｏ−アリルＤＮＡ、２’−Ｏ−アルキニルＤＮＡ、ヘキソースＤＮＡ、ピラノシルＲＮＡ及びアンヒドロヘキシトールＤＮＡ）、及び塩基修飾を有するヌクレオチド〔例えば、Ｃ−５置換されたピリミジン（置換基は、フルオロ基、ブロモ基、クロロ基、ヨード基、メチル基、エチル基、ビニル基、ホルミル基、エチニル基、プロピニル基、アルキニル基、チアゾリル基、イミダゾリル基、ピリジル基を含む）、Ｃ−７置換基を有する７−デアザプリン（置換基は、フルオロ基、ブロモ基、クロロ基、ヨード基、メチル基、エチル基、ビニル基、ホルミル基、アルキニル基、アルケニル基、チアゾリル基、イミダゾリル基、ピリジル基を含む）、イノシン及びジアミノプリン〕を含むことができる。

【0027】

本発明のマイクロアレイにおいて、前記プローブは、ハイブリッド形成可能なアレイ要素（ｈｙｂｒｉｄｉｚａｂｌｅ ａｒｒａｙ ｅｌｅｍｅｎｔ）として利用されて、基体（ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）上に固定化される。

【0028】

好ましい基体は、適した堅固性又は半堅固性の支持体であって、例えば、膜、フィルター、チップ、スライド、ウェハー、ファイバー、磁性又は非磁性ビーズ、ゲル、管、プレート、高分子、極微粒子及び毛細管を含む。上記のハイブリッド形成可能なアレイ要素は、上記の基体上に配列されて固定化される。このような固定化は、化学的結合方法又はＵＶのような共有結合方法により実施される。例えば、前記ハイブリッド形成可能なアレイ要素は、エポキシ化合物又はアルデヒド基を含むように修飾されたグラス表面に結合できて、また、ポリリジンコーティング表面でＵＶにより結合できる。また、前記ハイブリッド形成アレイ要素は、リンカー（例えば、エチレングリコールオリゴマー及びジアミン）を介して基体に結合できる。

【0029】

一方、本発明のマイクロアレイに適用される試料ＤＮＡは、標識でき、マイクロアレイ上のアレイ要素とハイブリッド形成される。ハイブリッド形成条件は、多様である。ハイブリッド形成程度の検出及び分析は、標識物質によって多様である。

【0030】

本発明の代謝疾患診断用のキットは、ハイブリッド形成に基づいて実施できる。この場合、前記本発明のヌクレオチド配列に対して相補的な配列を有するプローブが利用される。前記ヌクレオチド配列にハイブリッド形成されるプローブを利用してハイブリッド形成に基づく分析により、代謝疾患の危険度を判断することができる。プローブの標識は、ハイブリッド形成の有無を検出するシグナルを提供することができ、これは、オリゴヌクレオチドに連結できる。適した標識は、蛍光団（例えば、フルオレセイン、フィコエリトリン、ロダミン、リサミン、Ｃｙ３及びＣｙ５（ファルマシア））、発色団、化学発光団、磁気粒子、放射能同位元素（Ｐ^３２及びＳ^３５）、マス標識、電子密集粒子、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ又はホースラディッシュペルオキシダーゼ）、助因子、酵素に対する基質、重金属（例えば、金）；及び抗体、ストレプトアビジン、ビオチン、ジゴキシゲニンとキレーティング基のような特定結合パートナーを有するハプテンを含むが、これらに限定されるものではない。標識は、当業界で通常的に実施される多様な方法、例えば、ニックトランスレーション（ｎｉｃｋ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）方法、無作為プライミング方法（Ｍｕｌｔｉｐｒｉｍｅ ＤＮＡ ｌａｂｅｌｌｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍｓ ｂｏｏｋｌｅｔ，”Ａｍｅｒｓｈａｍ”（１９８９））及びキネーション方法（Ｍａｘａｍ＆Ｇｉｌｂｅｒｔ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，６５：４９９（１９８６））を通じて実施できる。標識は、蛍光、放射能、発色測定、重量測定、Ｘ線回折又は吸収、磁気、酵素的活性、マス分析、結合親和度、高頻度ハイブリッド形成、ナノクリスタルにより検出できるシグナルを提供する。

【0031】

分析対象になる核酸試料は、多様な生体試料（ｂｉｏｓａｍｐｌｅｓ）から得たｍＲＮＡを利用して製造できる。前記生体試料は、好ましくは脂肪又は筋肉組織細胞である。プローブの代わりに、分析対象となるｃＤＮＡを標識してハイブリッド形成反応に基づく分析を実施することもできる。

【0032】

プローブを利用する場合、プローブをｃＤＮＡ分子とハイブリッド形成させる。本発明において、適したハイブリッド形成条件は、最適化手順によって一連の過程で決定できる。

【0033】

このような手順は、研究室で使用のためのプロトコールを樹立するために、当業者によって一連の過程で実施される。例えば、温度、成分の濃度、ハイブリッド形成及び洗浄時間、緩衝液成分及びこれらのｐＨ及びイオン強度などの条件は、プローブの長さ及びＧＣ量及びターゲットヌクレオチド配列などの多様な因子に依存する。ハイブリッド形成のための詳細な条件は、Ｊｏｓｅｐｈ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（２００１）；及びＭ．Ｌ．Ｍ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｉｎｃ．Ｎ．Ｙ．（１９９９）で確認できる。例えば、前記厳格条件において、高厳格条件は、０．５Ｍ ＮａＨＰＯ_４、７％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）、１ ｍＭ ＥＤＴＡで６５℃条件でハイブリッド形成して、０．１×ＳＳＣ（ｓｔａｎｄａｒｄ ｓａｌｉｎｅ ｃｉｔｒａｔｅ）／０．１％ＳＤＳで６８℃条件で洗浄することを意味する。又は、高厳格条件は、６×ＳＳＣ／０．０５％ピロリン酸ナトリウムで４８℃条件で洗浄することを意味する。低厳格条件は、例えば、０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳで４２℃条件で洗浄することを意味する。

【0034】

ハイブリッド形成反応に次いで、ハイブリッド形成の発生を示すハイブリッド形成シグナルを検出する。ハイブリッド形成シグナルは、例えば、プローブに結合された標識の種類によって多様な方法で実施できる。例えば、プローブが酵素により標識された場合、この酵素の基質をハイブリッド形成結果物と反応させて、ハイブリッド形成の発生の有無を確認することができる。利用できる酵素／基質の組合せは、ペルオキシダーゼ（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ）と、クロロナフトール、アミノエチルカルバゾール、ジミノベンジジン、Ｄ−ルシフェリン、ルシゲニン（ビス−Ｎ−メチルアクリジニウムニトレート）、レゾルフィンベンジルエーテル、ルミノール、アンプレックスレッド試薬（１０−アセチル−３，７−ジヒドロキシフェノキサジン）、ＨＹＲ（ｐ−フェニレンジアミン−ＨＣｌ及びピロカテコール）、ＴＭＢ（テトラメチルベンジジン）、ＡＢＴＳ（２，２’−アジン−ジ［３−エチルベンズチアゾリンスルホネート］）、ｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）及びナフトール／ピロニン；アルカリホスファターゼとブロモクロロインドールイルホスフェート（ＢＣＩＰ）、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）、ナフトール−ＡＳ−Ｂ１−ホスフェート及びＥＣＦ基質との組合せ；グルコースオキシダーゼと、ｔ−ＮＢＴ（ニトロブルーテトラゾリウム）及びｍ−ＰＭＳ（フェナジンメトスルファート）との組合せなどである。プローブが金粒子で標識された場合は、硝酸銀を利用してシルバー染色方法で検出することができる。したがって、本発明の肥満などの代謝性疾患の危険度を予測する方法をハイブリッド形成に基づいて実施する場合は、具体的に（ｉ）本発明のヌクレオチド配列に対して相補的な配列を有するプローブを核酸試料にハイブリッド形成させる工程と、（ｉｉ）前記ハイブリッド形成の発生の有無を検出する工程とを含む。ハイブリッド形成過程によるハイブリッド形成シグナルの強度を分析することにより、肥満などの代謝疾患の危険度を判断することができる。即ち、試料から、本発明によって代謝疾患患者で高発現することが明らかにされた嗅覚受容体遺伝子配列に対するハイブリッド形成シグナルが正常試料（正常細胞）より強く出る場合は、肥満を始めとした代謝疾患の危険度が高いと判断する。加えて、試料から、本発明によって代謝疾患患者で低発現することが明らかにされた嗅覚受容体遺伝子配列に対するハイブリッド形成シグナルが正常試料（正常細胞）より弱く出る場合は、肥満を始めとした代謝疾患の危険度が高いと判断する。

【0035】

本発明の好ましい実施形態によると、本発明のキットは、遺伝子増幅キットである。

【0036】

本明細書に記載された用語‘増幅’は、核酸分子を増幅する反応を意味する。多様な増幅反応が当業界に報告されており、これは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（米国特許第４，６８３，１９５号、第４，６８３，２０２号及び第４，８００，１５９号）、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ．Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（２００１））、Ｍｉｌｌｅｒ，Ｈ．Ｉ．（ＷＯ ８９／０６７００）及びＤａｖｅｙ，Ｃ．ら（ＥＰ３２９，８２２）の方法、リガーゼ連鎖反応（ｌｉｇａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ；ＬＣＲ）、Ｇａｐ−ＬＣＲ（ＷＯ９０／０１０６９）、復旧連鎖反応（ｒｅｐａｉｒ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ；ＥＰ４３９，１８２）、転写介在増幅（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ＴＭＡ）（ＷＯ ８８／１０３１５）、自家持続塩基配列複製（ｓｅｌｆ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）（ＷＯ９０／０６９９５）、ターゲットポリヌクレオチド塩基配列の選択的増幅（米国特許第６，４１０，２７６号）、コンセンサス配列プライミングポリメラーゼ連鎖反応（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｐｒｉｍｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ；ＣＰＰＣＲ）（米国特許第４，４３７，９７５号）、任意的プライミングポリメラーゼ連鎖反応（ａｒｂｉｔｒａｒｉｌｙ ｐｒｉｍｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ；ＡＰ−ＰＣＲ）（米国特許第５，４１３，９０９号及び５，８６１，２４５号）、核酸塩基配列ベース増幅（ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｂａｓｅｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ＮＡＳＢＡ）（米国特許第５，１３０，２３８号、第５，４０９，８１８号、第５，５５４，５１７号及び第６，０６３，６０３号）、鎖置換増幅（ｓｔｒａｎｄ ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（２１、２２）及び環−仲裁恒温性増幅（ｌｏｏｐ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ＬＡＭＰ）（２３）を含むが、これらに限定されない。使用可能な他の増幅方法は、米国特許第５，２４２，７９４、第５，４９４，８１０号、第４，９８８，６１７号及び米国特許第０９／８５４，３１７号に記述されている。ＰＣＲは、最もよく知られた核酸増幅方法であって、そのバリエーションと応用がたくさん開発されている。例えば、ＰＣＲの特異性又は敏感性を増進させるために伝統的なＰＣＲ過程を変形し、タッチダウンＰＣＲ、ホットスタートＰＣＲ、ネステッドＰＣＲ及びブースターＰＣＲが開発された。また、リアルタイムＰＣＲ、ディファレンシャルディスプレイＰＣＲ（ＤＤ−ＰＣＲ）、ｃＤＮＡ末端の迅速増幅（ｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｄｓ：ＲＡＣＥ）、マルチプレックスＰＣＲ、インバースポリメラーゼ連鎖反応（ｉｎｖｅｒｓｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ：ＩＰＣＲ）、ベクトレット（ｖｅｃｔｏｒｅｔｔｅ）ＰＣＲ及びＴＡＩＬ−ＰＣＲ（ｔｈｅｒｍａｌ ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ ｉｎｔｅｒｌａｃｅｄ ＰＣＲ）が特定な応用のために開発された。ＰＣＲに対する詳しい内容は、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ｊ．，及びＭｏｌｌｅｒ，Ｓ．Ｇ．ＰＣＲ．ＢＩＯＳ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｂｅｒｌｉｎ Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｎ．Ｙ．（２０００）に記載されており、その教示事項は、本明細書に参照として取り込まれる。本発明の診断用キットをプライマーを利用して実施する場合は、遺伝子増幅反応を実施して本発明のヌクレオチド配列の発現程度を調べる。本発明は、前記ヌクレオチド配列の発現程度を分析するものであるため、分析対象の試料で本発明のヌクレオチド配列のｍＲＮＡ量を調べて、前記ヌクレオチド配列の発現程度を決定する。したがって、本発明は、原則的に試料内のｍＲＮＡを鋳型として、ｍＲＮＡ又はｃＤＮＡに結合するプライマーを利用して遺伝子増幅反応を行う。ｍＲＮＡを得るために、試料から全ＲＮＡを分離する。全ＲＮＡを分離することは、当業界に公知された通常の方法によって実施できる（参照：Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ．Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（２００１）；Ｔｅｓｎｉｅｒｅ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐ．，９：２４２（１９９１）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７）；及びＣｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６２：１５６（１９８７））。例えば、Ｔｒｉｚｏｌを利用して容易に細胞内の全ＲＮＡを分離することができる。次いで、分離されたｍＲＮＡからｃＤＮＡを合成して、このｃＤＮＡを増幅する。本発明の全ＲＮＡは、人間の試料から分離されるものであるため、ｍＲＮＡの末端にはポリーＡテールを有しており、このような配列特性を利用したオリゴｄＴプライマー及び逆転写酵素を利用してｃＤＮＡを容易に合成することができる（参照：ＰＮＡＳ ＵＳＡ，８５：８９９８（１９８８）；Ｌｉｂｅｒｔ Ｆ，ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：５６９（１９８９）；及びＳａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ．Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（２００１））。次いで、遺伝子増幅反応を通じて、合成されたｃＤＮＡを増幅する。

【0037】

本発明に利用されるプライマーは、鋳型の一部位にハイブリッド形成又はアニーリングされて、二本鎖構造を形成する。このような二本鎖構造を形成するのに適した核酸ハイブリッド形成の条件は、Ｊｏｓｅｐｈ Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（２００１）及びＨａｙｍｅｓ、Ｂ．Ｄ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ、Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｄ．Ｃ．（１９８５）に開示されている。

【0038】

多様なＤＮＡポリメラーゼが本発明の増幅に利用できて、これは、Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＮＡポリメラーゼＩの‘Ｋｌｅｎｏｗ’断片、熱安定性ＤＮＡポリメラーゼ及びバクテリオファージＴ７ ＤＮＡポリメラーゼを含む。好ましくは、ポリメラーゼは、多様なバクテリア種から得られる熱安定性ＤＮＡポリメラーゼであり、Ｔｈｅｒｍｕｓ ａｑｕａｔｉｃｕｓ（Ｔａｑ）、Ｔｈｅｒｍｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（Ｔｔｈ）、Ｔｈｅｒｍｕｓ ｆｉｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔｈｅｒｍｉｓ ｆｌａｖｕｓ、Ｔｈｅｒｍｏｃｏｃｃｕｓ ｌｉｔｅｒａｌｉｓ及びＰｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓ（Ｐｆｕ）を含む。

【0039】

重合反応を実施する場合、反応容器に、このような反応に必要な構成成分の過剰量を提供することが好ましい。増幅反応に必要な成分の過剰量は、増幅反応が各成分の濃度によって実質的に制限されない程度の量を意味する。Ｍｇ^２＋のような助因子、ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ及びｄＴＴＰを、所望の増幅程度が達成できる程度に反応混合物に供給する必要がある。増幅反応に利用される全ての酵素は、同一な反応条件下で活性状態であり得る。実際に、緩衝液は、全ての酵素が最適の反応条件に近接するようにする。したがって、本発明の増幅過程は、反応物の添加のような条件の変化無しに、単一反応物で実施できる。

【0040】

本発明においてアニーリングは、ターゲットヌクレオチド配列とプライマー間での特異的結合を可能にする厳格条件下で実施される。アニーリングのための厳格条件は、配列依存的であり、周囲環境的変数によって多様である。

【0041】

このように増幅された本発明のヌクレオチド配列のｃＤＮＡを適した方法で分析し、前記ヌクレオチド配列の発現程度を調べる。例えば、上述の増幅反応結果物をゲル電気泳動して、その結果形成されるバンドを観察及び分析することにより、本発明のヌクレオチド配列の発現程度を調べる。このような増幅反応を通じて、生体試料（ｂｉｏｓａｍｐｌｅｓ）から、本発明によって代謝疾患患者で高発現することが明らかとなった嗅覚受容体遺伝子配列の発現が正常試料（正常細胞）より高く出るか、代謝疾患患者で低発現することが明らかとなった嗅覚受容体遺伝子配列の発現が正常試料より弱く出る場合は、肥満を始めとした代謝疾患の危険度が高いと判断する。

【0042】

したがって、本発明の代謝疾患マーカーの検出方法をｃＤＮＡを利用する増幅反応に基づいて実施する場合は、具体的に（ｉ）本発明のヌクレオチド配列にアニーリングするプライマーを利用して増幅反応を実施する工程と、（ｉｉ）前記増幅反応の産物を分析して前記ヌクレオチド配列の発現程度を決定する工程とを含む。

【0043】

本発明のキットは、上記の成分の外にも、他の成分を追加的に含むことができる。例えば、本発明のキットがＰＣＲ増幅過程に適用される場合は、本発明のキットは選択的に、ＰＣＲ増幅に必要な試薬、例えば、緩衝液、ＤＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｔｈｅｒｍｕｓ ａｑｕａｔｉｃｕｓ（Ｔａｑ）、Ｔｈｅｒｍｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（Ｔｔｈ）、Ｔｈｅｒｍｕｓ ｆｉｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔｈｅｒｍｉｓ ｆｌａｖｕｓ、Ｔｈｅｒｍｏｃｏｃｃｕｓ ｌｉｔｅｒａｌｉｓ又はＰｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓ（Ｐｆｕ）から収得した熱安定性ＤＮＡポリメラーゼ）、ＤＮＡポリメラーゼ助因子及びｄＮＴＰｓを含むことができる。本発明のキットは、上記の試薬成分を含む多数の別途パッケージング又はコンパートメントとして製作できる。

【0044】

本発明の好ましい実施形態によると、以下のジェンバンクアクセッション番号からなる群から選択されるヌクレオチド配列は、代謝疾患患者において高発現する：
ジェンバンクアクセッション番号ＮＭ＿１４６８３４、ＮＭ＿００１０１１７５８、ＮＭ＿００１０１１７２１、ＮＭ＿１４６５８８、ＮＭ＿２０７１４２、ＮＭ＿１４７０１３、ＮＭ＿００１０１１７８３、ＮＭ＿２０７５６１、ＮＭ＿００１０１１７７７、ＮＭ＿１４６５７７、ＮＭ＿１４６４０７、ＮＭ＿１４６７３０、ＮＭ＿１４６５４２、ＮＭ＿２０７１５４、ＮＭ＿１４６７５２、ＮＭ＿１４６６６１、ＮＭ＿１４６６４２、ＮＭ＿１４６２９３、ＮＭ＿００１０１１７５３、ＮＭ＿１４６８１７、ＮＭ＿１４６６４９、ＮＭ＿００１０１１８１６、ＮＭ＿１４６８２３、ＮＭ＿００１００１８１０、ＮＭ＿１４６４５９、ＮＭ＿１４６９０１、ＮＭ＿１４６８９９、ＮＭ＿１４６２８８、ＮＭ＿１４６７９０、ＮＭ＿１４６４７６、ＮＭ＿１４６９７７、ＮＭ＿１４６９８１、ＮＭ＿１４６３４２、ＮＭ＿１４６９７５、ＮＭ＿１４６３９４、ＮＭ＿１４６９０８、ＮＭ＿２０７２５４、ＮＭ＿１４６８８５、ＮＭ＿１４６４０３、ＮＭ＿１４６８８４、ＮＭ＿１４６８８９、ＮＭ＿００１０１１７８７、ＮＭ＿２０７１５１、ＮＭ＿１４６２７４、ＮＭ＿１４６２９２、ＮＭ＿００１０１１８７０、ＮＭ＿２０７７０３、ＮＭ＿１４７０７１、ＮＭ＿１４６５４１、ＮＭ＿１４６２８３、ＮＭ＿１４６９１１、ＮＭ＿２０７５７３、ＮＭ＿００１０１１７４１、ＮＭ＿１４６４７３、ＮＭ＿１４７０６５、ＮＭ＿１４６２７６、ＮＭ＿１４６８７７、ＮＭ＿１４６２７５、ＮＭ＿１４６８８１、ＮＭ＿１８１８１８、ＮＭ＿１４６４９１、ＮＭ＿００１０１１５２５、ＮＭ＿１４６９８４、ＮＭ＿００１０１１８５３、ＮＭ＿１４６８０６、ＮＭ＿１４６６８７、ＮＭ＿１４６６９７、ＮＭ＿００１０１１８４１、ＮＭ＿１４６８６９、ＮＭ＿１４６６９６、ＮＭ＿２０７５７６、ＮＭ＿２０６８２３、ＮＭ＿１４６４５１、ＮＭ＿１４６４６６、ＮＭ＿１４６９３５、ＮＭ＿１４６３５７、ＮＭ＿００１０１１８０８、ＮＭ＿２０７５５０、ＮＭ＿１４６４２９、ＮＭ＿１４６６０６、ＮＭ＿１４６８２４、ＮＭ＿１４６４５７、ＮＭ＿１４６２８１、ＮＭ＿２０６９０３、ＮＭ＿１４６８７８、ＮＭ＿００１０１１７７０、ＮＭ＿１４６９４７、ＮＭ＿１４６９４９、ＮＭ＿１４６６２８、ＮＭ＿１４６９４０、ＮＭ＿１４６９４１、ＮＭ＿１４６６２５、ＮＭ＿１４６６２４、ＮＭ＿１４７０５１、ＮＭ＿２０７５５５、ＮＭ＿１４６８２５、ＮＭ＿１４７００６、ＮＭ＿１４６７０６、ＮＭ＿１４６７０９、ＮＭ＿１４６７１５、ＮＭ＿１４６７２２、ＮＭ＿００１００５４８８、ＸＭ＿８９１２８３、ＮＭ＿１４６７７５、ＮＭ＿１４６９５２、ＮＭ＿００１０１１８１４、ＮＭ＿００１０１１８１５、ＮＭ＿１４６９６２、ＮＭ＿００１０１１７８２、ＮＭ＿１４７１０１、ＮＭ＿２０７６２１、ＮＭ＿１４７１０３、ＮＭ＿１４７１１５、ＮＭ＿１４７１１１、ＮＭ＿１４６９５５、ＮＭ＿１４６８４１、ＮＭ＿１４６８１２、ＮＭ＿１４７０７７、ＮＭ＿２０７１４４、ＮＭ＿１４７０５６、ＮＭ＿００１０１１７５７、ＮＭ＿１４７０９６、ＮＭ＿１４７０６０、ＮＭ＿１４７０５９、ＮＭ＿００１０１１８４８、ＮＭ＿１４６３５８、ＮＭ＿０１３６２０、ＮＭ＿１４６５９９、ＮＭ＿００１０１１７４９、ＮＭ＿００１０１１５４２、ＮＭ＿１４７０３３、ＮＭ＿１４６３１６、ＮＭ＿００１０１１８０９、ＮＭ＿１４６４９３、ＮＭ＿１４６３６３、ＮＭ＿２０７１３３、ＮＭ＿１４６２９９、ＮＭ＿２０７１５６、ＮＭ＿００１０１１８２９、ＮＭ＿１４６４２２、ＮＭ＿１４６８６３、ＮＭ＿２０７００８、ＮＭ＿２０７６２０、ＮＭ＿２０７５５９、ＮＭ＿００１０１１８４９、ＮＭ＿００１０１１８２１、ＮＭ＿２０７１５９、ＮＭ＿１４６６７７、ＮＭ＿１４６６７６、ＮＭ＿１４６２８２、ＮＭ＿１４６５２４、ＮＭ＿１４６５５８、ＮＭ＿１４６９０３、ＮＭ＿１４６７４９、ＮＭ＿１４６８８３、ＮＭ＿１４６４１７、ＮＭ＿１４６８０１、ＮＭ＿１４６８７２、ＮＭ＿１４６７８２、ＮＭ＿１４６４４１、ＮＭ＿１４６４４２、ＮＭ＿１４６５０３、ＮＭ＿１４６３３０、ＮＭ＿１４６２７９、ＮＭ＿１４６８２６、ＮＭ＿１４７１０７、ＮＭ＿１４７１０５、ＮＭ＿１４６８５５、ＮＭ＿１４６５１５、ＮＭ＿１４６４３７、ＮＭ＿００１０１１６９５、ＮＭ＿１４６８６６、ＮＭ＿００１０１１８７２、ＮＭ＿１４６３９１、ＮＭ＿００１０１１７３５、ＮＭ＿２０７１３５、ＮＭ＿１４６３４８、ＮＭ＿１４６６４５、ＸＭ＿６２１５５４、ＮＭ＿１４６７７８、ＮＭ＿１４６７８９、ＮＭ＿１４６９８３、ＮＭ＿２０６８１６、ＮＭ＿１４６４００、ＮＭ＿１４６４５０、ＮＭ＿１４６８３１、ＮＭ＿００１０１１７３７、ＮＭ＿１４６７４４、ＮＭ＿１４６５４０、ＮＭ＿１４６４８８、ＮＭ＿１４６９１０、ＮＭ＿１４６４６７、ＮＭ＿１４６４６８、ＮＭ＿１４６４７０、ＮＭ＿１４６６５１、ＮＭ＿１４６６８４、ＮＭ＿１４６３７１、ＮＭ＿２０７５７５、ＮＭ＿００８７６３、ＮＭ＿１４７０６８、ＮＭ＿００１０１１８５５、ＮＭ＿１４６９５７、ＮＭ＿１４６９１２、ＮＭ＿０１０９７０、ＮＭ＿０１０９７４、ＮＭ＿００１００５５２０、ＮＭ＿２０７５５２、ＮＭ＿００１００５７８０、ＮＭ＿００１０１１７６７、ＮＭ＿１４６５３６、ＮＭ＿１４６５００、ＮＭ＿１４６９４８、ＮＭ＿１４６６６２、ＸＭ＿６１９７４８、ＮＭ＿１４７００７、ＮＭ＿００１０１１８６３、ＮＭ＿１４６７６１、ＮＭ＿２０７１５８、ＮＭ＿１４６６５３、ＮＭ＿００１０１１８６９、ＮＭ＿００１０１１８１０、ＮＭ＿１４６７３２、ＮＭ＿１４６７３６、ＮＭ＿１４６９１４、ＮＭ＿００１０１１８７１、ＮＭ＿１４６９５６、ＮＭ＿１４６８４０、ＮＭ＿１４６３２５、ＮＭ＿１４７０９１、ＮＭ＿１４７０８５、ＮＭ＿１４７０８９、ＮＭ＿１４７０５２、ＮＭ＿００１０１１８４７、ＮＭ＿１４７０８３、ＮＭ＿００１０１１７５５、ＮＭ＿１４６５９７、ＮＭ＿１４７０３５、ＮＭ＿１４６６０４、ＮＭ＿００１０１１７５４、ＮＭ＿２０７５５８、ＮＭ＿１３０８６６、ＮＭ＿１４６９３３、ＮＭ＿１４６９２９、ＮＭ＿１４６５５２、ＮＭ＿１４６５２６、ＮＭ＿１４６５２８、ＮＭ＿００１０１１８２７、ＮＭ＿１４７１０８、ＮＭ＿１４７１０６、ＮＭ＿００１０１１７８５、ＮＭ＿１４６５７１、ＮＭ＿１４６５８７、ＮＭ＿１４６４０２、ＮＭ＿０２０５１５、ＮＭ＿１４６６３５、ＮＭ＿１４６６４６、ＮＭ＿１４６４８５、ＮＭ＿１４６６２３、ＮＭ＿１４６３３８、ＮＭ＿１４６３０５、ＮＭ＿１４６７７４、ＮＭ＿０１０９９８、ＮＭ＿１４７０９４、ＮＭ＿１４７０７６、ＮＭ＿１４６３１５、ＮＭ＿１４６７５８、ＮＭ＿１４６４７９、ＮＭ＿１４６７８５、ＮＭ＿１４６４５６、ＮＭ＿１４６５７３、ＮＭ＿１４６５７２、ＮＭ＿１４７０１９、ＮＭ＿２０７５６６、ＮＭ＿００１００５２２７、ＮＭ＿１４６９０２、ＮＭ＿１４６４７４、ＮＭ＿１４６８５２、ＮＭ＿１４６６７９、ＮＭ＿２０７６２６、ＮＭ＿１４６７０３、ＮＭ＿１４６６９１、ＮＭ＿１４６６３３、ＮＭ＿１４７０２５、ＮＭ＿１４７０６４、ＮＭ＿１４６３７２、ＮＭ＿１４７０６３、ＮＭ＿１４６３５３、ＮＭ＿１４６５５５、ＮＭ＿１４６３７５、ＮＭ＿１４６４３９、ＮＭ＿１４６５０６、ＮＭ＿１４６４３６、ＸＭ＿６１９７８１、ＮＭ＿１４６６２９、ＮＭ＿１４６９７４、ＮＭ＿１４６４４７、ＮＭ＿１４６４４８、ＮＭ＿１４６６９９、ＮＭ＿１４６６９３、ＮＭ＿１４６９９５、ＮＭ＿２０７１７５、ＮＭ＿１４６６１９、ＮＭ＿１４６５６４、ＮＭ＿１４６５７０、ＮＭ＿１４６５６８、ＮＭ＿２０７５６４、ＮＭ＿１４６８４６、ＮＭ＿１４７０３１、ＮＭ＿１４６６４４、ＮＭ＿２０７１５０、ＮＭ＿２０７１３２、ＮＭ＿０３０５５３、ＮＭ＿１４６７３９、ＮＭ＿１４７０９３、ＮＭ＿０１３６１８、ＮＭ＿１４６７５０、ＮＭ＿１４６３３９、ＮＭ＿１４６５５３、ＮＭ＿１４６４３３、ＮＭ＿１４７０８４、ＮＭ＿１４７０２１、ＮＭ＿１４６２８７、ＮＭ＿１４６８４９、ＮＭ＿１４６８４８、ＮＭ＿１４６７９２、ＮＭ＿１４６３４３、ＮＭ＿１４７０４２、ＮＭ＿００８７６２、ＮＭ＿００１０１１８３１、ＮＭ＿１４６９３８、ＮＭ＿１４６３７４、ＮＭ＿１４６２７０、ＮＭ＿０１０９８４、ＮＭ＿１４６４４５、ＮＭ＿００１０１１５２７、ＮＭ＿００１０１１８４６、ＮＭ＿１４６３０６、ＮＭ＿０１１００２、ＮＭ＿１４６４５３、ＮＭ＿００１０１１７３４、ＮＭ＿１４６４６２、ＮＭ＿２０７１４０、ＮＭ＿１４６８０８、ＮＭ＿２０７２３６、ＮＭ＿１４６８８８、ＮＭ＿１４６９３６、ＮＭ＿００１００１８０９、ＮＭ＿１４６４１１、ＮＭ＿１４６９２４、ＮＭ＿１４６７３５、ＮＭ＿００１０１１８６７、ＮＭ＿１４７１１０、ＮＭ＿１４７１２０、ＮＭ＿１４７０４９、ＮＭ＿０５４０９０、ＮＭ＿１４６９３０、ＮＭ＿１４６９０４、ＮＭ＿１８２７１４、ＮＭ＿１４６６３８、ＮＭ＿２０７５６７、ＮＭ＿２０７２４０、ＮＭ＿２０７６６４、ＮＭ＿１４６９２３、ＮＭ＿００１０１１７８９、ＮＭ＿１４７００９、ＮＭ＿１４７１２２、ＮＭ＿１４６６６６、ＮＭ＿０５４０９１、ＮＭ＿１４６２８５、ＮＭ＿１４６５６６、ＮＭ＿１４７０１４、ＮＭ＿１４７０１８、ＮＭ＿１４６３２０、ＮＭ＿１４６７０５、ＮＭ＿１４６４３１、ＮＭ＿１４６６２２、ＮＭ＿１４６９３２Ｎ、Ｍ＿１４６８２７、ＮＭ＿１４７０１１、ＮＭ＿１４６８４７、ＮＭ＿１４６３６６ ，ＮＭ＿１４６７６６、ＮＭ＿００１０１１７７５、ＮＭ＿１４７０００、ＮＭ＿１４７００５、ＮＭ＿２０７６２２、ＮＭ＿１４６９３４、ＮＭ＿１４７０３２、ＮＭ＿１４６２７８、ＮＭ＿１４６５２７、ＮＭ＿００１０１１７４８、ＮＭ＿１４６８６５、ＮＭ＿１４６８３３、ＮＭ＿１４６４０６、ＮＭ＿１４６７６５、ＮＭ＿２０７２５３、ＮＭ＿１４６６８０、ＮＭ＿００１００５５２４、ＮＭ＿０１０９８３、ＮＭ＿００１０１１８６１、ＮＭ＿１４６９２２、ＮＭ＿１４７１０４、ＮＭ＿１４６８１３、ＮＭ＿２０７２４９、ＮＭ＿１４６６６３、ＮＭ＿１４６８６２、ＮＭ＿１４６９０５及びＮＭ＿１４６４１８。

【0045】

そして、以下のジェンバンクアクセッション番号からなる群から選択されるヌクレオチド配列は、代謝疾患患者において低発現する：
ジェンバンクアクセッション番号ＮＭ＿１４６５８９、ＮＭ＿１４６６６０、ＮＭ＿００１０１１８３３、ＮＭ＿１４６６４０、ＮＭ＿１４６５３１、ＮＭ＿００１０１１５１７、ＮＭ＿１４６６３１、ＮＭ＿１４６８９８、ＮＭ＿１４６８９３、ＮＭ＿００１０１１８０３、ＮＭ＿２０７６３１、ＮＭ＿１４６８３２、ＮＭ＿１４６５３４、ＮＭ＿１４７０６６、ＮＭ＿１４６６９２、ＮＭ＿１４６６３４、ＮＭ＿００１０１１８５０、ＮＭ＿０１９４７５、ＮＭ＿０１９４７６、ＮＭ＿１４７００２、ＮＭ＿１４６９９２、ＮＭ＿１４６８７０、ＮＭ＿１４６６２１、ＮＭ＿１４６５３７、ＮＭ＿１４６８５９、ＮＭ＿１４６７２４、ＮＭ＿１４６７２３、ＮＭ＿１４６７５５、ＮＭ＿１４７１１３、ＮＭ＿１４７１１４、ＮＭ＿１４６９６４、ＮＭ＿１４７０８０、ＮＭ＿１４６６６５、ＮＭ＿１４６３７８、ＮＭ＿１４６３２４、ＮＭ＿１４６５５７、ＮＭ＿１４６４１９、ＮＭ＿１４６４８２、ＮＭ＿１４６４７８、ＮＭ＿１４６８６１、ＮＭ＿１４６４１２、ＮＭ＿１４６３１０、ＮＭ＿１４６７５４、ＮＭ＿１４７０５３、ＮＭ＿１４６３５４、ＮＭ＿１４６８２２、ＮＭ＿１４６４７７、ＮＭ＿１４６５０８、ＮＭ＿１４６８５４、ＮＭ＿１４６７６２、ＮＭ＿２０７１３４、ＮＭ＿１４６８３８、ＮＭ＿１４６６３２、ＮＭ＿００１０１１８３５、ＮＭ＿２０６８９６、ＮＭ＿１４６９６８、ＮＭ＿１４６９６５、ＮＭ＿２０７５７２、ＮＭ＿１４６９４５、ＮＭ＿１４６９６３、ＮＭ＿２０７５６５、ＮＭ＿１４６２９７、ＮＭ＿１４７０２９、ＮＭ＿１４６６４８、ＮＭ＿１４６２９４、ＮＭ＿１４６９１８、ＮＭ＿２０７５６８、ＮＭ＿１４６３３３、ＮＭ＿１４６３９５、ＮＭ＿００１００５５６８、ＮＭ＿１４６４０１、ＮＭ＿１４６８６７、ＮＭ＿１４６３０４、ＮＭ＿１４６９１３、ＮＭ＿２０７１３６、ＮＭ＿１３０８６８、ＮＭ＿１４７００３、ＮＭ＿１４６５８５、ＮＭ＿０１９４７３、ＮＭ＿１４６８６０、ＮＭ＿１４６９５８、ＮＭ＿００１０１１８０１、ＮＭ＿１４６４０５、ＮＭ＿１４６２６９、ＮＭ＿１４６６８８、ＮＭ＿１４７０２２、ＮＭ＿２０７１３７、ＮＭ＿１４６７２１、ＮＭ＿１４６９８８、ＮＭ＿１４６７３４、ＮＭ＿０１０９９１、ＮＭ＿２０７１６０、ＮＭ＿１４６５２０、ＮＭ＿１４７１１２、ＮＭ＿１４６７２７、ＮＭ＿００１０２５３８６、ＮＭ＿１４７０５０、ＮＭ＿１４６４９４、ＮＭ＿１４６６７１、ＮＭ＿１４６３００、ＮＭ＿１４６５２５、ＮＭ＿１４６６１０、ＮＭ＿００１０１１８５２、ＮＭ＿２０７５６３、ＮＭ＿１４７０７８、ＮＭ＿００１００５４８５、ＮＭ＿２０７６３２、ＮＭ＿１４７０３０、ＮＭ＿１４６６３７、ＮＭ＿１４６９０７、ＮＭ＿１４６４０４、ＮＭ＿１４６９１６、ＮＭ＿１４６４６９、ＮＭ＿１４６４７１、ＮＭ＿１４６３３７、ＮＭ＿１４６７０１、ＮＭ＿１４６６３６、ＮＭ＿１４６７９６、ＮＭ＿１４６２６５、ＮＭ＿１４６３２２、ＮＭ＿１４６３３５、ＮＭ＿１４６７５９、ＮＭ＿１４６２８０、ＮＭ＿１４６６１７、ＮＭ＿２０７２３０、ＮＭ＿１４６５０２、ＮＭ＿２０７２３５、ＮＭ＿１４６７１１、ＮＭ＿１４６７３３、ＮＭ＿１４６３１１、ＮＭ＿１４７０７９、ＮＭ＿１４６９５９、ＮＭ＿１４７０７４、ＮＭ＿１４６３９２、ＮＭ＿１４６６６４、ＮＭ＿１４６６８２、ＮＭ＿１４６６７４、ＮＭ＿１４６４２４、ＮＭ＿１４６７８７、ＮＭ＿１４６７４６、ＮＭ＿１４６５０７、ＮＭ＿１４６６１１、ＮＭ＿１４６６１５、ＮＭ＿２０７１４９、ＮＭ＿１４６４０８、ＮＭ＿１４６８４５、ＮＭ＿００１０１１８２５、ＮＭ＿１４６３４９、ＮＭ＿１４６６５８、ＮＭ＿１４６８３６、ＮＭ＿００１０１１８６８、ＮＭ＿１４６４６４、ＮＭ＿００１００５２２５、ＮＭ＿１４６４５８、ＮＭ＿１４６９７３、ＮＭ＿１４６７８８、ＮＭ＿１４６９６６、ＮＭ＿１４６９８２、ＮＭ＿１４６８９０、ＮＭ＿１４６６５２、ＮＭ＿１４６３６２、ＮＭ＿２０７５７０、ＮＭ＿２０７１５２、ＮＭ＿１４６３８９、ＮＭ＿１４７０４０、ＮＭ＿２０７５７１、ＮＭ＿１４６５３５、ＮＭ＿２０７２２７、ＮＭ＿００１０１１７９０、ＮＭ＿２０７５７４、ＮＭ＿１４７０３７、ＮＭ＿１４６６８９、ＮＭ＿１４６６８６、ＮＭ＿２０７５５３、ＮＭ＿１４６９２０、ＮＭ＿００１０１１７５１、ＮＭ＿００１０１１８６６、ＮＭ＿０１０９８０、ＸＭ＿６２０６７４、ＮＭ＿１４７０２３、ＮＭ＿１４６３４７、ＮＭ＿１４６３４６、ＮＭ＿１４６９８７、ＮＭ＿１４６４４４、ＮＭ＿１４６８１９、ＮＭ＿１４６９２５、ＮＭ＿１４６７３７、ＮＭ＿００１０１１８５８、ＮＭ＿１４６７２５、ＮＭ＿１４６９５４、ＮＭ＿０１０９９７、ＮＭ＿１４６７３１、ＮＭ＿１４６３１４、ＮＭ＿１４６８４１、ＮＭ＿２０７１４６、ＮＭ＿１４６７６０、ＮＭ＿１４７０６１、ＮＭ＿１４６３１９、ＮＭ＿１４６６６７、ＮＭ＿１４６４３０、ＮＭ＿００１０１１７３８、ＮＭ＿１４６８６４、ＮＭ＿２０７２０１、ＮＭ＿１４６７７６、ＮＭ＿１４６５６４、ＮＭ＿１４６８８２、ＮＭ＿００１０１１７３９、ＮＭ＿１４６８１１、ＮＭ＿１４６２７２、ＮＭ＿００１０１１５１８、ＮＭ＿２０７１４１、ＮＭ＿１４６５１４、ＮＭ＿１４６５０４、ＮＭ＿１４６８２８、ＮＭ＿１４６２８６、ＮＭ＿２０６８２２、ＮＭ＿１４７０１２、ＮＭ＿１４６４０９、ＮＭ＿１４６５９０、ＮＭ＿１４６８９７、ＮＭ＿１４６６３０、ＮＭ＿１４６９７０、ＮＭ＿１４６４５５、ＮＭ＿１４６３４１、ＮＭ＿１４６３７７、ＮＭ＿１４６９８５、ＮＭ＿１４６７９３、ＮＭ＿１４６９８０、ＸＭ＿８８８０６８、ＮＭ＿１４６８５３、ＮＭ＿１４６７０４、ＮＭ＿１４６３１３、ＮＭ＿００１０１１８４０、ＮＭ＿１４６３０１、ＮＭ＿２０７１３８、ＮＭ＿０２０５１３、ＮＭ＿２０７５５４、ＮＭ＿１４６８２９、ＮＭ＿１４６４１６、ＮＭ＿１４６９５１、ＮＭ＿１４６７０８、ＮＭ＿１４６２７３、ＮＭ＿１４６４１３、ＮＭ＿１４６３７０、ＮＭ＿１４６９２６、ＮＭ＿０１０９９０、ＮＭ＿１４６４９８、ＮＭ＿１４６４９７、ＮＭ＿１４６７４３、ＮＭ＿１４６３５９、ＮＭ＿２０７１４３、ＮＭ＿１４７０８４、ＮＭ＿１４６３２９、ＮＭ＿１４７０５５、ＮＭ＿１４６８１４、ＮＭ＿０１９４８６、ＮＭ＿１４６７８０、ＮＭ＿１４６４９２、ＮＭ＿１４６６６８、ＮＭ＿１４６５５１、ＮＭ＿１４６５５４、ＮＭ＿１４６４２３、ＮＭ＿００１０１１５２３、ＮＭ＿００１０１１８１３、ＮＭ＿１４６５１３、ＮＭ＿１４６６１２、ＮＭ＿１４６５１０、ＮＭ＿１４６４３４、ＮＭ＿１４６５７９、ＮＭ＿２０７５６２、ＮＭ＿１４６５９２、ＮＭ＿１４６３６５、ＮＭ＿１４６５９１、ＮＭ＿１４６３２３、ＮＭ＿１４６６９５、ＮＭ＿０２０５１４、ＮＭ＿１４６９９７、ＮＭ＿１４６４４３、ＮＭ＿１４６５７６、ＮＭ＿１４６４２６、ＮＭ＿１４６４９５、ＮＭ＿０２０２９１、ＮＭ＿１４７０４６、ＮＭ＿１４７０６９、ＮＭ＿１４６５４７、ＮＭ＿１４６５４８、ＮＭ＿１４６５６７、ＮＭ＿１４６５２２、ＮＭ＿１４６８６８、ＮＭ＿１４６７４５、ＮＭ＿１４６９１７、ＮＭ＿１４６８９６、ＮＭ＿１４６７９４、ＮＭ＿０２１３６８、ＮＭ＿１４６３２７、ＮＭ＿１４６３０８、ＮＭ＿１４６４９０、ＮＭ＿００１０１１８３９、ＮＭ＿１４６６８３、ＮＭ＿１４６７０２、ＮＭ＿１４６９９０、ＮＭ＿１４６７７０、ＮＭ＿１４７０３６、ＮＭ＿１４６９５０、ＮＭ＿１４７００４、ＮＭ＿１４６３６４、ＮＭ＿１４７１０９、ＮＭ＿２０７５５６、ＮＭ＿１４７０８１、ＮＭ＿１４７０７２、ＮＭ＿１４６４８１、ＮＭ＿１４６９２１、ＮＭ＿２０７６７３、ＮＭ＿１４６５７８、ＮＭ＿１４６８３５、ＮＭ＿００１０１３５７５、ＮＭ＿１４６８３７、ＮＭ＿１４６６４７、ＮＭ＿００１０１１５３５、ＮＭ＿１４６８９５、ＮＭ＿１４６８９１、ＮＭ＿１４６８８６、ＮＭ＿１４６４４９、ＮＭ＿１４６７１３、ＮＭ＿１４６３８５、ＮＭ＿１４６５４３、ＮＭ＿１４６８０９、ＮＭ＿１４６６９４、ＮＭ＿１４６２７１、ＮＭ＿１４６３２１、ＮＭ＿００１０１１７３６、ＮＭ＿１４６６２７、ＮＭ＿１４６３６８、ＮＭ＿１４６７１８、ＮＭ＿１４６３８３、ＮＭ＿１４６７３８、ＮＭ＿１４７０４１、ＮＭ＿１４６８２０、ＮＭ＿１４６６００、ＮＭ＿００１０１１７９７、ＮＭ＿１４６５５０、ＮＭ＿１４６６７０、ＮＭ＿１４６６７２、ＮＭ＿００１０１２２６６、ＮＭ＿１４６５６１、ＮＭ＿１４６３３６、ＮＭ＿１４６８１０、ＮＭ＿１４６４４０、ＮＭ＿００１０１１８２６、ＮＭ＿１４６５６９、ＮＭ＿１４７０１５、ＮＭ＿１４７０１０、ＸＭ＿６１９７７９、ＮＭ＿１４６５１１、ＮＭ＿１４６５９４、ＮＭ＿１４６２８９、ＮＭ＿１４６３５１、ＮＭ＿１４６６４１、ＮＭ＿１４６５３２、ＮＭ＿１４６８８７、ＮＭ＿１４６２９１、ＮＭ＿１４７００１、ＮＭ＿１４６９９３、ＮＭ＿１４６９９９、ＮＭ＿００１０１１７９１、ＮＭ＿１４６４８４、ＮＭ＿１４６３８４、ＮＭ＿１４６４８９、ＮＭ＿１４６９４４、ＮＭ＿１４６７１７、ＮＭ＿１４６８３０、ＮＭ＿１４６６５５、ＮＭ＿１４６６５６、ＮＭ＿１４６３０７、ＮＭ＿１４６９６０、ＮＭ＿１４７０８８、ＮＭ＿００１０１１７９３、ＮＭ＿１４６５９８、ＮＭ＿００１０１１８６２ＢＣ０５１４３５、ＮＭ＿１４６６１３、ＮＭ＿１４６９７１、ＮＭ＿１４６４１０、ＮＭ＿１４６７４７、ＮＭ＿１４６４４６、ＮＭ＿１４６７５１、ＮＭ＿１４７０４３、ＮＭ＿１４６５９６、ＮＭ＿２０７１４５、ＮＭ＿１４６８４３、ＮＭ＿１４６７６８、ＮＭ＿１４７０２８、ＸＭ＿６２１５５５、ＮＭ＿１４６３０３、ＮＭ＿００１０１１８４２、ＮＭ＿１４６９３９、ＮＭ＿２０７２２４、ＮＭ＿１４７００８、ＮＭ＿１４６２９５、ＮＭ＿１４６５１８、ＮＭ＿１４７０９８、ＮＭ＿１４７１１９、ＮＭ＿１４６３７９、ＸＭ＿９９３２４２、ＮＭ＿１４７０９５、ＮＭ＿１４７０４４、ＮＭ＿１４６２６６、ＮＭ＿１４６８０３、ＮＭ＿１４６７８６、ＮＭ＿１４６７８４及びＮＭ＿００１０１１８６４。

【0046】

本明細書で使用される用語‘高発現’は、調査対象の試料（例えば、肥満患者の脂肪組織細胞）において対象となるヌクレオチド配列の発現程度が正常試料（例えば、正常細胞）と比較して有意に高い場合（好ましくは、２倍以上）を意味する。本明細書で使用される用語‘低発現’は、調査対象の試料において対象となるヌクレオチド配列の発現程度が正常試料と比較して有意に低い場合（好ましくは、２倍以上）を意味する。本発明の代謝疾患診断用のキットは、本発明者らによって開発された新規なターゲットヌクレオチド配列の高発現又は低発現を分析することにより、代謝疾患の危険度を予測することができる。

【0047】

本発明の好ましい実施形態によると、本発明の脂質代謝異常は、高脂血症である。

【0048】

本明細書で使用される用語‘高脂血症’は、中性脂肪とコレステロールなどの脂肪代謝が円滑ではないために、血液中の脂肪量が多いことにより誘発される疾患である。より具体的に、高脂血症とは、血液内の中性脂肪、ＬＤＬコレステロール、リン脂質及び遊離脂肪酸などの脂質成分が増加した状態により特徴付けられ、発生頻度の高い高コレステロール血症又は高中性脂肪血症を含む。

【0049】

本発明の好ましい実施形態によると、本発明のインシュリン抵抗性症候群は、インシュリン抵抗性による肥満、高血圧、動脈硬化、高脂血症、高インシュリン血症、非アルコール性脂肪肝及び第２型糖尿病からなる群から選択される一つ又はそれ以上の疾患を含む。

【0050】

本発明の他の様態によると、本発明は、下記工程（ａ）及び（ｂ）を含む、肥満、脂質代謝異常、脂肪肝及びインシュリン抵抗性症候群からなる群から選択される代謝疾患治療用組成物のスクリーニング方法を提供する。

【0051】

（ａ）以下のジェンバンクアクセッション番号からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む細胞に、分析しようとする試料を接触させる工程：
ジェンバンクアクセッション番号ＮＭ＿１４６８３４、ＮＭ＿２０７１４９、ＮＭ＿００１０１１７５８、ＮＭ＿１４７０１５、ＮＭ＿００１０１１７２１、ＮＭ＿１４６５８８、ＮＭ＿２０７１４２、ＮＭ＿１４７０１３、ＮＭ＿００１０１１７８３、ＮＭ＿２０７５６１、ＮＭ＿００１０１１７７７、ＮＭ＿１４６５７７、ＮＭ＿１４７０１０、ＮＭ＿１４６４０８、ＮＭ＿１４６５１１、ＮＭ＿１４６４０７、ＮＭ＿１４６７３０、ＮＭ＿１４６５４２、ＮＭ＿２０７１５４、ＮＭ＿１４６７５２、ＮＭ＿１４６６６１、ＮＭ＿１４６６５８、ＮＭ＿１４６３５１、ＮＭ＿１４６６４２、ＮＭ＿１４６２９３、ＮＭ＿００１０１１７５３、ＮＭ＿１４６８１７、ＮＭ＿１４６６４９、ＮＭ＿１４６５３２、ＮＭ＿００１０１１８６８、ＮＭ＿００１０１１８１６、ＮＭ＿００１０１１５３５、ＮＭ＿１４６８２３、ＮＭ＿１４６４５８、ＮＭ＿００１００１８１０、ＮＭ＿１４６４５９、ＮＭ＿１４６９０１、ＮＭ＿１４６８９９、ＮＭ＿１４６２８８、ＮＭ＿１４６８９１、ＮＭ＿１４６７９０、ＮＭ＿１４６７８８、ＮＭ＿１４６４７６、ＮＭ＿１４６９７７、ＮＭ＿１４６９８１、ＮＭ＿１４６３４２、ＮＭ＿１４６９７５、ＮＭ＿１４６３９４、ＮＭ＿１４６９０８、ＮＭ＿２０７２５４、ＮＭ＿１４６４０４、ＮＭ＿１４６８８５、ＮＭ＿１４６４０３、ＮＭ＿１４６８８４、ＮＭ＿１４６６５２、ＮＭ＿１４６８８７、ＮＭ＿１４６８８９、ＮＭ＿００１０１１７８７、ＮＭ＿２０７１５１、ＮＭ＿１４６４４９、ＮＭ＿１４６２７４、ＮＭ＿１４６２９２、ＮＭ＿２０７５７０、ＮＭ＿００１０１１８７０、ＮＭ＿２０７７０３、ＮＭ＿１４７０７１、ＮＭ＿２０７５７１、ＮＭ＿１４６３０８、ＮＭ＿１４６５４１、ＮＭ＿１４６２８３、ＮＭ＿１４６９１１、ＮＭ＿２０７５７３、ＮＭ＿２０７５７４、ＮＭ＿００１０１１７４１、ＮＭ＿１４６４７３、ＮＭ＿１４７０６５、ＮＭ＿１４６４７１、ＮＭ＿１４６２７６、ＮＭ＿１４６８７７、ＮＭ＿１４６３３７、ＮＭ＿１４６２７５、ＮＭ＿１４６８８１、ＮＭ＿１８１８１８、ＮＭ＿１４６４９１、ＮＭ＿１４６４９０、ＮＭ＿００１０１１５２５、ＮＭ＿１４６９８４、ＮＭ＿００１０１１８５３、ＮＭ＿１４６８０６、ＮＭ＿１４６６８７、ＮＭ＿１４６６８３、ＮＭ＿１４６６９７、ＮＭ＿１４６７４７、ＮＭ＿００１０１１８４１、ＮＭ＿１４６８６９、ＮＭ＿００１０１１８４２、ＮＭ＿１４６３０１、ＮＭ＿１４６６９６、ＮＭ＿０２０５１３、ＮＭ＿１４６２７１、ＮＭ＿２０７５７６、ＮＭ＿２０６８２３、ＮＭ＿１４６４５１、ＮＭ＿１４６４６６、ＮＭ＿１４６９３５、ＮＭ＿１４６３５７、ＮＭ＿１４６３３５、ＮＭ＿１４６４８４、ＮＭ＿００１０１１８０８、ＮＭ＿２０７５５０、ＮＭ＿１４６４２９、ＮＭ＿１４６４０５、ＮＭ＿１４６６０６、ＮＭ＿２０７５５３、ＮＭ＿１４６６８８、ＮＭ＿１４６４８９、ＮＭ＿１４６８２４、ＮＭ＿１４６２８０、ＮＭ＿１４６４５７、ＮＭ＿１４７０３６、ＮＭ＿１４６２８１、ＮＭ＿２０６９０３、ＮＭ＿１４６８７８、ＮＭ＿００１０１１８６６、ＮＭ＿００１０１１７７０、ＮＭ＿１４６９４７、ＮＭ＿１４６９４９、ＮＭ＿１４６６２８、ＮＭ＿１４６９４０、ＮＭ＿１４６９４１、ＮＭ＿１４６６２５、ＮＭ＿１４６６２４、ＮＭ＿２０７２３５、ＮＭ＿１４７０５１、ＮＭ＿２０７５５５、ＮＭ＿１４７０２３、ＮＭ＿２０７２２４、ＮＭ＿１４６８２５、ＮＭ＿１４６３４７、ＮＭ＿１４７００６、ＮＭ＿１４７００８、ＮＭ＿１４６７０６、ＮＭ＿１４６７０９、ＮＭ＿１４６７１５、ＮＭ＿１４６７２２、ＮＭ＿１４６７１７、ＮＭ＿１４６６５５、ＮＭ＿１４６２７３、ＮＭ＿１４６５７６、ＮＭ＿００１００５４８８、ＮＭ＿１４６４２６、ＮＭ＿１４６３７０、ＸＭ＿８９１２８３、ＮＭ＿１４６７７５、ＮＭ＿１４６７３４、ＮＭ＿１４６７３３、ＮＭ＿１４６７３７、ＮＭ＿１４６３０７、ＮＭ＿１４６９５２、ＮＭ＿１４６５１８、ＮＭ＿００１０１１８１４、ＮＭ＿００１０１１８１５、ＮＭ＿１４６９６２、ＮＭ＿００１０１１７８２、ＮＭ＿１４７１０１、ＮＭ＿２０７６２１、ＮＭ＿１４７１０３、ＮＭ＿１４６３５９、ＮＭ＿１４７１０９、ＮＭ＿１４７１１５、ＮＭ＿１４７１１１、ＮＭ＿２０７５５６、ＮＭ＿１４６７３１、ＮＭ＿１４６９５５、ＮＭ＿１４６８４１、ＮＭ＿１４６８１２、ＮＭ＿１４７１１９、ＮＭ＿１４７０７２、ＮＭ＿１４６３２９、ＮＭ＿１４７０７７、ＮＭ＿２０７１４４、ＮＭ＿１４７０５６、ＮＭ＿００１０１１７５７、ＸＭ＿９９３２４２、ＮＭ＿１４７０９６、ＮＭ＿１４７０６０、ＮＭ＿１４７０５９、ＮＭ＿１４７０４３、ＮＭ＿１４６７６０、ＮＭ＿００１０１１８４８、ＮＭ＿１４７０９５、ＮＭ＿１４６３５８、ＮＭ＿０１３６２０、ＮＭ＿１４７０６９、ＮＭ＿１４６５９８、ＮＭ＿１４６５９９、ＮＭ＿００１０１１７４９、ＮＭ＿００１０１１５４２、ＮＭ＿０１９４８６、ＮＭ＿１４７０３３、ＮＭ＿１４６７８０、ＮＭ＿１４６３１６、ＮＭ＿１４６３１９、ＮＭ＿００１０１１８０９、ＮＭ＿１４６４９３、ＮＭ＿１４６３６３、ＮＭ＿１４６６６７、ＮＭ＿２０７１３３、ＮＭ＿１４６２９９、ＮＭ＿２０７１５６、ＮＭ＿００１０１１８２９、ＮＭ＿１４６４２２、ＮＭ＿１４６８６４、ＮＭ＿１４６８６３、ＮＭ＿１４６５４７、ＮＭ＿１４６２６６、ＮＭ＿２０７００８、ＮＭ＿２０７６２０、ＮＭ＿２０７５５９、ＮＭ＿００１０１１８４９、ＮＭ＿１４６５４８、ＮＭ＿００１０１１８２１、ＮＭ＿１４６５５０、ＮＭ＿２０７１５９、ＮＭ＿１４６６７０、ＮＭ＿１４６６７７、ＮＭ＿１４６６７６、ＮＭ＿１４６３００、ＮＭ＿１４６５６７、ＮＭ＿１４６２８２、ＮＭ＿１４６５２５、ＮＭ＿１４６５２４、ＮＭ＿１４６５５８、ＮＭ＿１４６９０３、ＮＭ＿１４６８８２、ＮＭ＿１４６７４９、ＮＭ＿１４６８８３、ＮＭ＿１４６４１７、ＮＭ＿００１０１１７３９、ＮＭ＿１４６３３６、ＮＭ＿１４６８０１、ＮＭ＿１４６８７２、ＮＭ＿１４６８１１、ＮＭ＿１４６８１０、ＮＭ＿００１０１１８６４、ＮＭ＿１４６７８２、ＮＭ＿１４６４４１、ＮＭ＿１４６４４２、ＮＭ＿００１０１１５１８、ＮＭ＿１４６５０３、ＮＭ＿１４６３３０、ＮＭ＿１４６２７９、ＮＭ＿１４６６１２、ＮＭ＿１４６８２６、ＮＭ＿１４７１０７、ＮＭ＿１４７１０５、ＮＭ＿１４６５１０、ＮＭ＿１４６２８６、ＮＭ＿１４６８５５、ＮＭ＿１４６５１５、ＮＭ＿１４６４３７、ＮＭ＿１４６５８９、ＮＭ＿１４６６６０、ＮＭ＿００１０１１８３３、ＮＭ＿１４６６４０、ＮＭ＿１４６５３１、ＮＭ＿００１０１１５１７、ＮＭ＿１４６６３１、ＮＭ＿１４６８９８、ＮＭ＿１４６８９３、ＮＭ＿００１０１１８０３、ＮＭ＿２０７６３１、ＮＭ＿１４６８３２、ＮＭ＿１４６５３４、ＮＭ＿１４７０６６、ＮＭ＿１４６６９２、ＮＭ＿１４６６３４、ＮＭ＿００１０１１８５０、ＮＭ＿０１９４７５、ＮＭ＿０１９４７６、ＮＭ＿１４７００２、ＮＭ＿１４６９９２、ＮＭ＿１４６８７０、ＮＭ＿１４６６２１、ＮＭ＿１４６５３７、ＮＭ＿１４６８５９、ＮＭ＿１４６７２４、ＮＭ＿１４６７２３、ＮＭ＿１４６７５５、ＮＭ＿１４７１１３、ＮＭ＿１４７１１４、ＮＭ＿１４６９６４、ＮＭ＿１４７０８０、ＮＭ＿１４６６６５、ＮＭ＿１４６３７８、ＮＭ＿１４６３２４、ＮＭ＿１４６５５７、ＮＭ＿１４６４１９、ＮＭ＿１４６４８２、ＮＭ＿１４６４７８、ＮＭ＿１４６８６１、ＮＭ＿２０７６７３、ＮＭ＿００１０１１６９５、ＮＭ＿１４６８６６、ＮＭ＿００１０１１８７２、ＮＭ＿１４７０１２、ＮＭ＿１４６３９１、ＮＭ＿００１０１１７３５、ＮＭ＿２０７１３５、ＮＭ＿１４６８４３、ＮＭ＿１４６５９４、ＮＭ＿２０７６３２、ＮＭ＿１４６３４８、ＮＭ＿１４６６４５、ＮＭ＿１４６６４１、ＮＭ＿１４６２９４、ＸＭ＿６２１５５４、ＸＭ＿６２１５５５、ＮＭ＿１４６８９５、ＮＭ＿１４６７７８、ＮＭ＿１４６７８９、ＮＭ＿１４６９７０、ＮＭ＿１４６９８３、ＮＭ＿１４６３４１、ＮＭ＿１４６７９４、ＮＭ＿１４６３７７、ＮＭ＿１４６９８５、ＮＭ＿２０６８１６、ＮＭ＿００１００５５６８、ＮＭ＿１４６４００、ＸＭ＿８８８０６８、ＮＭ＿１４６８８６、ＮＭ＿１４６４５０、ＮＭ＿１４６８３１、ＮＭ＿１４６３８５、ＮＭ＿１４７０４０、ＮＭ＿００１０１１７３７、ＮＭ＿１４６７４４、ＮＭ＿１４６５４０、ＮＭ＿１４６４８８、ＮＭ＿１４６９１０、ＮＭ＿００１０１１７９０、ＮＭ＿１４６４６７、ＮＭ＿１４６４６８、ＮＭ＿１４６４７０、ＮＭ＿１４６６５１、ＮＭ＿１４６８０９、ＮＭ＿００１０１１８３９、ＮＭ＿１４６６８４、ＮＭ＿１４６３７１、ＮＭ＿２０７５７５、ＮＭ＿１４６２９１、ＮＭ＿２０７１３８、ＮＭ＿０２０５１４、ＮＭ＿１４６５８５、ＮＭ＿００８７６３、ＮＭ＿１４７０６８、ＮＭ＿００１０１１８５５、ＮＭ＿１４６９５７、ＮＭ＿１４６９９３、ＮＭ＿１４６９９９、ＮＭ＿１４６９１２、ＮＭ＿０１０９７０、ＮＭ＿０１０９７４、ＮＭ＿００１００５５２０、ＮＭ＿１４６２６９、ＮＭ＿２０７５５２、ＮＭ＿００１００５７８０、ＮＭ＿１４６８２９、ＮＭ＿００１０１１７６７、ＮＭ＿１４６５３６、ＮＭ＿１４６５００、ＮＭ＿１４６９４８、ＮＭ＿１４６９３９、ＮＭ＿１４６６６２、ＸＭ＿６１９７４８、ＮＭ＿１４７００７、ＮＭ＿００１０１１８６３、ＮＭ＿１４６７６１、ＮＭ＿１４６７２１、ＮＭ＿２０７１５８、ＮＭ＿１４６６５３、ＮＭ＿００１０１１８６９、ＮＭ＿００１０１１８１０、ＮＭ＿１４６７３２、ＮＭ＿１４６７３６、ＮＭ＿１４６７３８、ＮＭ＿１４６９１４、ＮＭ＿００１０１１８７１、ＮＭ＿１４６７２５、ＮＭ＿１４６９５６、ＮＭ＿１４６９６０、ＮＭ＿０１０９９７、ＮＭ＿１４６８４０、ＮＭ＿１４６３２５、ＮＭ＿１４７０９１、ＮＭ＿１４７０８５、ＮＭ＿１４７０８９、ＮＭ＿１４７０５２、ＮＭ＿００１０１１８４７、ＮＭ＿１４６７２７、ＮＭ＿１４７０８３、ＮＭ＿１４７０５５、ＮＭ＿１４６３７９、ＮＭ＿００１０１１７５５、ＮＭ＿１４７０４４、ＮＭ＿００１０１１８６２、ＮＭ＿１４６５９７、ＮＭ＿１４７０３５、ＮＭ＿１４６６０４、ＮＭ＿１４６６６４、ＮＭ＿００１０１１７５４、ＮＭ＿１４６４３０、ＮＭ＿２０７５５８、ＮＭ＿１３０８６６、ＮＭ＿１４６９３３、ＮＭ＿１４６５５４、ＮＭ＿１４６９２９、ＮＭ＿１４６５５２、ＮＭ＿１４６７７６、ＮＭ＿１４６５２６、ＮＭ＿１４６５２８、ＮＭ＿１４６４１２、ＮＭ＿１４６３１０、ＮＭ＿１４６７５４、ＮＭ＿１４７０５３、ＮＭ＿１４６３５４、ＮＭ＿１４６８２２、ＮＭ＿１４６４７７、ＮＭ＿１４６５０８、ＮＭ＿１４６８５４、ＮＭ＿００１０１１８２７、ＮＭ＿１４７１０８、
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【0052】

（ｂ）前記ヌクレオチド配列の発現量を測定する工程であって、下記（ｉ）のジェンバンクアクセッション番号からなる群から選択されるヌクレオチド配列の高発現が抑制されるか、下記（ｉｉ）のジェンバンクアクセッション番号からなる群から選択されるヌクレオチド配列の低発現が抑制される場合は、前記試料は、肥満治療用組成物と判定される工程：

【0053】

（ｉ）ジェンバンクアクセッション番号ＮＭ＿１４６８３４、ＮＭ＿００１０１１７５８、ＮＭ＿００１０１１７２１、ＮＭ＿１４６５８８、ＮＭ＿２０７１４２、ＮＭ＿１４７０１３、ＮＭ＿００１０１１７８３、ＮＭ＿２０７５６１、ＮＭ＿００１０１１７７７、ＮＭ＿１４６５７７、ＮＭ＿１４６４０７、ＮＭ＿１４６７３０、ＮＭ＿１４６５４２、ＮＭ＿２０７１５４、ＮＭ＿１４６７５２、ＮＭ＿１４６６６１、ＮＭ＿１４６６４２、ＮＭ＿１４６２９３、ＮＭ＿００１０１１７５３、ＮＭ＿１４６８１７、ＮＭ＿１４６６４９、ＮＭ＿００１０１１８１６、ＮＭ＿１４６８２３、ＮＭ＿００１００１８１０、ＮＭ＿１４６４５９、ＮＭ＿１４６９０１、ＮＭ＿１４６８９９、ＮＭ＿１４６２８８、ＮＭ＿１４６７９０、ＮＭ＿１４６４７６、ＮＭ＿１４６９７７、ＮＭ＿１４６９８１、ＮＭ＿１４６３４２、ＮＭ＿１４６９７５、ＮＭ＿１４６３９４、ＮＭ＿１４６９０８、ＮＭ＿２０７２５４、ＮＭ＿１４６８８５、ＮＭ＿１４６４０３、ＮＭ＿１４６８８４、ＮＭ＿１４６８８９、ＮＭ＿００１０１１７８７、ＮＭ＿２０７１５１、ＮＭ＿１４６２７４、ＮＭ＿１４６２９２、ＮＭ＿００１０１１８７０、ＮＭ＿２０７７０３、ＮＭ＿１４７０７１、ＮＭ＿１４６５４１、ＮＭ＿１４６２８３、ＮＭ＿１４６９１１、ＮＭ＿２０７５７３、ＮＭ＿００１０１１７４１、ＮＭ＿１４６４７３、ＮＭ＿１４７０６５、ＮＭ＿１４６２７６、ＮＭ＿１４６８７７、ＮＭ＿１４６２７５、ＮＭ＿１４６８８１、ＮＭ＿１８１８１８、ＮＭ＿１４６４９１、ＮＭ＿００１０１１５２５、ＮＭ＿１４６９８４、ＮＭ＿００１０１１８５３、ＮＭ＿１４６８０６、ＮＭ＿１４６６８７、ＮＭ＿１４６６９７、ＮＭ＿００１０１１８４１、ＮＭ＿１４６８６９、ＮＭ＿１４６６９６、ＮＭ＿２０７５７６、ＮＭ＿２０６８２３、ＮＭ＿１４６４５１、ＮＭ＿１４６４６６、ＮＭ＿１４６９３５、ＮＭ＿１４６３５７、ＮＭ＿００１０１１８０８、ＮＭ＿２０７５５０、ＮＭ＿１４６４２９、ＮＭ＿１４６６０６、ＮＭ＿１４６８２４、ＮＭ＿１４６４５７、ＮＭ＿１４６２８１、ＮＭ＿２０６９０３、ＮＭ＿１４６８７８、ＮＭ＿００１０１１７７０、ＮＭ＿１４６９４７、ＮＭ＿１４６９４９、ＮＭ＿１４６６２８、ＮＭ＿１４６９４０、ＮＭ＿１４６９４１、ＮＭ＿１４６６２５、ＮＭ＿１４６６２４、ＮＭ＿１４７０５１、ＮＭ＿２０７５５５、ＮＭ＿１４６８２５、ＮＭ＿１４７００６、ＮＭ＿１４６７０６、ＮＭ＿１４６７０９、ＮＭ＿１４６７１５、ＮＭ＿１４６７２２、ＮＭ＿００１００５４８８、ＸＭ＿８９１２８３、ＮＭ＿１４６７７５、ＮＭ＿１４６９５２、ＮＭ＿００１０１１８１４、ＮＭ＿００１０１１８１５、ＮＭ＿１４６９６２、ＮＭ＿００１０１１７８２、ＮＭ＿１４７１０１、ＮＭ＿２０７６２１、ＮＭ＿１４７１０３、ＮＭ＿１４７１１５、ＮＭ＿１４７１１１、ＮＭ＿１４６９５５、ＮＭ＿１４６８４１、ＮＭ＿１４６８１２、ＮＭ＿１４７０７７、ＮＭ＿２０７１４４、ＮＭ＿１４７０５６、ＮＭ＿００１０１１７５７、ＮＭ＿１４７０９６、ＮＭ＿１４７０６０、ＮＭ＿１４７０５９、ＮＭ＿００１０１１８４８、ＮＭ＿１４６３５８、ＮＭ＿０１３６２０、ＮＭ＿１４６５９９、ＮＭ＿００１０１１７４９、ＮＭ＿００１０１１５４２、ＮＭ＿１４７０３３、ＮＭ＿１４６３１６、ＮＭ＿００１０１１８０９、ＮＭ＿１４６４９３、ＮＭ＿１４６３６３、ＮＭ＿２０７１３３、ＮＭ＿１４６２９９、ＮＭ＿２０７１５６、ＮＭ＿００１０１１８２９、ＮＭ＿１４６４２２、ＮＭ＿１４６８６３、ＮＭ＿２０７００８、ＮＭ＿２０７６２０、ＮＭ＿２０７５５９、ＮＭ＿００１０１１８４９、ＮＭ＿００１０１１８２１、ＮＭ＿２０７１５９、ＮＭ＿１４６６７７、ＮＭ＿１４６６７６、ＮＭ＿１４６２８２、ＮＭ＿１４６５２４、ＮＭ＿１４６５５８、ＮＭ＿１４６９０３、ＮＭ＿１４６７４９、ＮＭ＿１４６８８３、ＮＭ＿１４６４１７、ＮＭ＿１４６８０１、ＮＭ＿１４６８７２、ＮＭ＿１４６７８２、ＮＭ＿１４６４４１、ＮＭ＿１４６４４２、ＮＭ＿１４６５０３、ＮＭ＿１４６３３０、ＮＭ＿１４６２７９、ＮＭ＿１４６８２６、ＮＭ＿１４７１０７、ＮＭ＿１４７１０５、ＮＭ＿１４６８５５、ＮＭ＿１４６５１５、ＮＭ＿１４６４３７、ＮＭ＿００１０１１６９５、ＮＭ＿１４６８６６、ＮＭ＿００１０１１８７２、ＮＭ＿１４６３９１、ＮＭ＿００１０１１７３５、ＮＭ＿２０７１３５、ＮＭ＿１４６３４８、ＮＭ＿１４６６４５、ＸＭ＿６２１５５４、ＮＭ＿１４６７７８、ＮＭ＿１４６７８９、ＮＭ＿１４６９８３、ＮＭ＿２０６８１６、ＮＭ＿１４６４００、ＮＭ＿１４６４５０、ＮＭ＿１４６８３１、ＮＭ＿００１０１１７３７、ＮＭ＿１４６７４４、ＮＭ＿１４６５４０、ＮＭ＿１４６４８８、ＮＭ＿１４６９１０、ＮＭ＿１４６４６７、ＮＭ＿１４６４６８、ＮＭ＿１４６４７０、ＮＭ＿１４６６５１、ＮＭ＿１４６６８４、ＮＭ＿１４６３７１、ＮＭ＿２０７５７５、ＮＭ＿００８７６３、ＮＭ＿１４７０６８、ＮＭ＿００１０１１８５５、ＮＭ＿１４６９５７、ＮＭ＿１４６９１２、ＮＭ＿０１０９７０、ＮＭ＿０１０９７４、ＮＭ＿００１００５５２０、ＮＭ＿２０７５５２、ＮＭ＿００１００５７８０、ＮＭ＿００１０１１７６７、ＮＭ＿１４６５３６、ＮＭ＿１４６５００、ＮＭ＿１４６９４８、ＮＭ＿１４６６６２、ＸＭ＿６１９７４８、ＮＭ＿１４７００７、ＮＭ＿００１０１１８６３、ＮＭ＿１４６７６１、ＮＭ＿２０７１５８、ＮＭ＿１４６６５３、ＮＭ＿００１０１１８６９、ＮＭ＿００１０１１８１０、ＮＭ＿１４６７３２、ＮＭ＿１４６７３６、ＮＭ＿１４６９１４、ＮＭ＿００１０１１８７１、ＮＭ＿１４６９５６、ＮＭ＿１４６８４０、ＮＭ＿１４６３２５、ＮＭ＿１４７０９１、ＮＭ＿１４７０８５、ＮＭ＿１４７０８９、ＮＭ＿１４７０５２、ＮＭ＿００１０１１８４７、ＮＭ＿１４７０８３、ＮＭ＿００１０１１７５５、ＮＭ＿１４６５９７、ＮＭ＿１４７０３５、ＮＭ＿１４６６０４、ＮＭ＿００１０１１７５４、ＮＭ＿２０７５５８、ＮＭ＿１３０８６６、ＮＭ＿１４６９３３、ＮＭ＿１４６９２９、ＮＭ＿１４６５５２、ＮＭ＿１４６５２６、ＮＭ＿１４６５２８、ＮＭ＿００１０１１８２７、ＮＭ＿１４７１０８、ＮＭ＿１４７１０６、ＮＭ＿００１０１１７８５、ＮＭ＿１４６５７１、ＮＭ＿１４６５８７、ＮＭ＿１４６４０２、ＮＭ＿０２０５１５、ＮＭ＿１４６６３５、ＮＭ＿１４６６４６、ＮＭ＿１４６４８５、ＮＭ＿１４６６２３、ＮＭ＿１４６３３８、ＮＭ＿１４６３０５、ＮＭ＿１４６７７４、ＮＭ＿０１０９９８、ＮＭ＿１４７０９４、ＮＭ＿１４７０７６、ＮＭ＿１４６３１５、ＮＭ＿１４６７５８、ＮＭ＿１４６４７９、ＮＭ＿１４６７８５、ＮＭ＿１４６４５６、ＮＭ＿１４６５７３、ＮＭ＿１４６５７２、ＮＭ＿１４７０１９、ＮＭ＿２０７５６６、ＮＭ＿００１００５２２７、ＮＭ＿１４６９０２、ＮＭ＿１４６４７４、ＮＭ＿１４６８５２、ＮＭ＿１４６６７９、ＮＭ＿２０７６２６、ＮＭ＿１４６７０３、ＮＭ＿１４６６９１、ＮＭ＿１４６６３３、ＮＭ＿１４７０２５、ＮＭ＿１４７０６４、ＮＭ＿１４６３７２、ＮＭ＿１４７０６３、ＮＭ＿１４６３５３、ＮＭ＿１４６５５５、ＮＭ＿１４６３７５、ＮＭ＿１４６４３９、ＮＭ＿１４６５０６、ＮＭ＿１４６４３６、ＸＭ＿６１９７８１、ＮＭ＿１４６６２９、ＮＭ＿１４６９７４、ＮＭ＿１４６４４７、ＮＭ＿１４６４４８、ＮＭ＿１４６６９９、ＮＭ＿１４６６９３、ＮＭ＿１４６９９５、ＮＭ＿２０７１７５、ＮＭ＿１４６６１９、ＮＭ＿１４６５６４、ＮＭ＿１４６５７０、ＮＭ＿１４６５６８、ＮＭ＿２０７５６４、ＮＭ＿１４６８４６、ＮＭ＿１４７０３１、ＮＭ＿１４６６４４、ＮＭ＿２０７１５０、ＮＭ＿２０７１３２、ＮＭ＿０３０５５３、ＮＭ＿１４６７３９、ＮＭ＿１４７０９３、ＮＭ＿０１３６１８、ＮＭ＿１４６７５０、ＮＭ＿１４６３３９、ＮＭ＿１４６５５３、ＮＭ＿１４６４３３、ＮＭ＿１４７０８４、ＮＭ＿１４７０２１、ＮＭ＿１４６２８７、ＮＭ＿１４６８４９、ＮＭ＿１４６８４８、ＮＭ＿１４６７９２、ＮＭ＿１４６３４３、ＮＭ＿１４７０４２、ＮＭ＿００８７６２、ＮＭ＿００１０１１８３１、ＮＭ＿１４６９３８、ＮＭ＿１４６３７４、ＮＭ＿１４６２７０、ＮＭ＿０１０９８４、ＮＭ＿１４６４４５、ＮＭ＿００１０１１５２７、ＮＭ＿００１０１１８４６、ＮＭ＿１４６３０６、ＮＭ＿０１１００２、ＮＭ＿１４６４５３、ＮＭ＿００１０１１７３４、ＮＭ＿１４６４６２、ＮＭ＿２０７１４０、ＮＭ＿１４６８０８、ＮＭ＿２０７２３６、ＮＭ＿１４６８８８、ＮＭ＿１４６９３６、ＮＭ＿００１００１８０９、ＮＭ＿１４６４１１、ＮＭ＿１４６９２４、ＮＭ＿１４６７３５、ＮＭ＿００１０１１８６７、ＮＭ＿１４７１１０、ＮＭ＿１４７１２０、ＮＭ＿１４７０４９、ＮＭ＿０５４０９０、ＮＭ＿１４６９３０、ＮＭ＿１４６９０４、ＮＭ＿１８２７１４、ＮＭ＿１４６６３８、ＮＭ＿２０７５６７、ＮＭ＿２０７２４０、ＮＭ＿２０７６６４、ＮＭ＿１４６９２３、ＮＭ＿００１０１１７８９、ＮＭ＿１４７００９、ＮＭ＿１４７１２２、ＮＭ＿１４６６６６、ＮＭ＿０５４０９１、ＮＭ＿１４６２８５、ＮＭ＿１４６５６６、ＮＭ＿１４７０１４、ＮＭ＿１４７０１８、ＮＭ＿１４６３２０、ＮＭ＿１４６７０５、ＮＭ＿１４６４３１、ＮＭ＿１４６６２２、ＮＭ＿１４６９３２Ｎ、Ｍ＿１４６８２７、ＮＭ＿１４７０１１、ＮＭ＿１４６８４７、ＮＭ＿１４６３６６ ，ＮＭ＿１４６７６６、ＮＭ＿００１０１１７７５、ＮＭ＿１４７０００、ＮＭ＿１４７００５、ＮＭ＿２０７６２２、ＮＭ＿１４６９３４、ＮＭ＿１４７０３２、ＮＭ＿１４６２７８、ＮＭ＿１４６５２７、ＮＭ＿００１０１１７４８、ＮＭ＿１４６８６５、ＮＭ＿１４６８３３、ＮＭ＿１４６４０６、ＮＭ＿１４６７６５、ＮＭ＿２０７２５３、ＮＭ＿１４６６８０、ＮＭ＿００１００５５２４、ＮＭ＿０１０９８３、ＮＭ＿００１０１１８６１、ＮＭ＿１４６９２２、ＮＭ＿１４７１０４、ＮＭ＿１４６８１３、ＮＭ＿２０７２４９、ＮＭ＿１４６６６３、ＮＭ＿１４６８６２、ＮＭ＿１４６９０５及びＮＭ＿１４６４１８。

【0054】

（ｉｉ）ジェンバンクアクセッション番号ＮＭ＿１４６５８９、ＮＭ＿１４６６６０、ＮＭ＿００１０１１８３３、ＮＭ＿１４６６４０、ＮＭ＿１４６５３１、ＮＭ＿００１０１１５１７、ＮＭ＿１４６６３１、ＮＭ＿１４６８９８、ＮＭ＿１４６８９３、ＮＭ＿００１０１１８０３、ＮＭ＿２０７６３１、ＮＭ＿１４６８３２、ＮＭ＿１４６５３４、ＮＭ＿１４７０６６、ＮＭ＿１４６６９２、ＮＭ＿１４６６３４、ＮＭ＿００１０１１８５０、ＮＭ＿０１９４７５、ＮＭ＿０１９４７６、ＮＭ＿１４７００２、ＮＭ＿１４６９９２、ＮＭ＿１４６８７０、ＮＭ＿１４６６２１、ＮＭ＿１４６５３７、ＮＭ＿１４６８５９、ＮＭ＿１４６７２４、ＮＭ＿１４６７２３、ＮＭ＿１４６７５５、ＮＭ＿１４７１１３、ＮＭ＿１４７１１４、ＮＭ＿１４６９６４、ＮＭ＿１４７０８０、ＮＭ＿１４６６６５、ＮＭ＿１４６３７８、ＮＭ＿１４６３２４、ＮＭ＿１４６５５７、ＮＭ＿１４６４１９、ＮＭ＿１４６４８２、ＮＭ＿１４６４７８、ＮＭ＿１４６８６１、ＮＭ＿１４６４１２、ＮＭ＿１４６３１０、ＮＭ＿１４６７５４、ＮＭ＿１４７０５３、ＮＭ＿１４６３５４、ＮＭ＿１４６８２２、ＮＭ＿１４６４７７、ＮＭ＿１４６５０８、ＮＭ＿１４６８５４、ＮＭ＿１４６７６２、ＮＭ＿２０７１３４、ＮＭ＿１４６８３８、ＮＭ＿１４６６３２、ＮＭ＿００１０１１８３５、ＮＭ＿２０６８９６、ＮＭ＿１４６９６８、ＮＭ＿１４６９６５、ＮＭ＿２０７５７２、ＮＭ＿１４６９４５、ＮＭ＿１４６９６３、ＮＭ＿２０７５６５、ＮＭ＿１４６２９７、ＮＭ＿１４７０２９、ＮＭ＿１４６６４８、ＮＭ＿１４６２９４、ＮＭ＿１４６９１８、ＮＭ＿２０７５６８、ＮＭ＿１４６３３３、ＮＭ＿１４６３９５、ＮＭ＿００１００５５６８、ＮＭ＿１４６４０１、ＮＭ＿１４６８６７、ＮＭ＿１４６３０４、ＮＭ＿１４６９１３、ＮＭ＿２０７１３６、ＮＭ＿１３０８６８、ＮＭ＿１４７００３、ＮＭ＿１４６５８５、ＮＭ＿０１９４７３、ＮＭ＿１４６８６０、ＮＭ＿１４６９５８、ＮＭ＿００１０１１８０１、ＮＭ＿１４６４０５、ＮＭ＿１４６２６９、ＮＭ＿１４６６８８、ＮＭ＿１４７０２２、ＮＭ＿２０７１３７、ＮＭ＿１４６７２１、ＮＭ＿１４６９８８、ＮＭ＿１４６７３４、ＮＭ＿０１０９９１、ＮＭ＿２０７１６０、ＮＭ＿１４６５２０、ＮＭ＿１４７１１２、ＮＭ＿１４６７２７、ＮＭ＿００１０２５３８６、ＮＭ＿１４７０５０、ＮＭ＿１４６４９４、ＮＭ＿１４６６７１、ＮＭ＿１４６３００、ＮＭ＿１４６５２５、ＮＭ＿１４６６１０、ＮＭ＿００１０１１８５２、ＮＭ＿２０７５６３、ＮＭ＿１４７０７８、ＮＭ＿００１００５４８５、ＮＭ＿２０７６３２、ＮＭ＿１４７０３０、ＮＭ＿１４６６３７、ＮＭ＿１４６９０７、ＮＭ＿１４６４０４、ＮＭ＿１４６９１６、ＮＭ＿１４６４６９、ＮＭ＿１４６４７１、ＮＭ＿１４６３３７、ＮＭ＿１４６７０１、ＮＭ＿１４６６３６、ＮＭ＿１４６７９６、ＮＭ＿１４６２６５、ＮＭ＿１４６３２２、ＮＭ＿１４６３３５、ＮＭ＿１４６７５９、ＮＭ＿１４６２８０、ＮＭ＿１４６６１７、ＮＭ＿２０７２３０、ＮＭ＿１４６５０２、ＮＭ＿２０７２３５、ＮＭ＿１４６７１１、ＮＭ＿１４６７３３、ＮＭ＿１４６３１１、ＮＭ＿１４７０７９、ＮＭ＿１４６９５９、ＮＭ＿１４７０７４、ＮＭ＿１４６３９２、ＮＭ＿１４６６６４、ＮＭ＿１４６６８２、ＮＭ＿１４６６７４、ＮＭ＿１４６４２４、ＮＭ＿１４６７８７、ＮＭ＿１４６７４６、ＮＭ＿１４６５０７、ＮＭ＿１４６６１１、ＮＭ＿１４６６１５、ＮＭ＿２０７１４９、ＮＭ＿１４６４０８、ＮＭ＿１４６８４５、ＮＭ＿００１０１１８２５、ＮＭ＿１４６３４９、ＮＭ＿１４６６５８、ＮＭ＿１４６８３６、ＮＭ＿００１０１１８６８、ＮＭ＿１４６４６４、ＮＭ＿００１００５２２５、ＮＭ＿１４６４５８、ＮＭ＿１４６９７３、ＮＭ＿１４６７８８、ＮＭ＿１４６９６６、ＮＭ＿１４６９８２、ＮＭ＿１４６８９０、ＮＭ＿１４６６５２、ＮＭ＿１４６３６２、ＮＭ＿２０７５７０、ＮＭ＿２０７１５２、ＮＭ＿１４６３８９、ＮＭ＿１４７０４０、ＮＭ＿２０７５７１、ＮＭ＿１４６５３５、ＮＭ＿２０７２２７、ＮＭ＿００１０１１７９０、ＮＭ＿２０７５７４、ＮＭ＿１４７０３７、ＮＭ＿１４６６８９、ＮＭ＿１４６６８６、ＮＭ＿２０７５５３、ＮＭ＿１４６９２０、ＮＭ＿００１０１１７５１、ＮＭ＿００１０１１８６６、ＮＭ＿０１０９８０、ＸＭ＿６２０６７４、ＮＭ＿１４７０２３、ＮＭ＿１４６３４７、ＮＭ＿１４６３４６、ＮＭ＿１４６９８７、ＮＭ＿１４６４４４、ＮＭ＿１４６８１９、ＮＭ＿１４６９２５、ＮＭ＿１４６７３７、ＮＭ＿００１０１１８５８、ＮＭ＿１４６７２５、ＮＭ＿１４６９５４、ＮＭ＿０１０９９７、ＮＭ＿１４６７３１、ＮＭ＿１４６３１４、ＮＭ＿１４６８４１、ＮＭ＿２０７１４６、ＮＭ＿１４６７６０、ＮＭ＿１４７０６１、ＮＭ＿１４６３１９、ＮＭ＿１４６６６７、ＮＭ＿１４６４３０、ＮＭ＿００１０１１７３８、ＮＭ＿１４６８６４、ＮＭ＿２０７２０１、ＮＭ＿１４６７７６、ＮＭ＿１４６５６４、ＮＭ＿１４６８８２、ＮＭ＿００１０１１７３９、ＮＭ＿１４６８１１、ＮＭ＿１４６２７２、ＮＭ＿００１０１１５１８、ＮＭ＿２０７１４１、ＮＭ＿１４６５１４、ＮＭ＿１４６５０４、ＮＭ＿１４６８２８、ＮＭ＿１４６２８６、ＮＭ＿２０６８２２、ＮＭ＿１４７０１２、ＮＭ＿１４６４０９、ＮＭ＿１４６５９０、ＮＭ＿１４６８９７、ＮＭ＿１４６６３０、ＮＭ＿１４６９７０、ＮＭ＿１４６４５５、ＮＭ＿１４６３４１、ＮＭ＿１４６３７７、ＮＭ＿１４６９８５、ＮＭ＿１４６７９３、ＮＭ＿１４６９８０、ＸＭ＿８８８０６８、ＮＭ＿１４６８５３、ＮＭ＿１４６７０４、ＮＭ＿１４６３１３、ＮＭ＿００１０１１８４０、ＮＭ＿１４６３０１、ＮＭ＿２０７１３８、ＮＭ＿０２０５１３、ＮＭ＿２０７５５４、ＮＭ＿１４６８２９、ＮＭ＿１４６４１６、ＮＭ＿１４６９５１、ＮＭ＿１４６７０８、ＮＭ＿１４６２７３、ＮＭ＿１４６４１３、ＮＭ＿１４６３７０、ＮＭ＿１４６９２６、ＮＭ＿０１０９９０、ＮＭ＿１４６４９８、ＮＭ＿１４６４９７、ＮＭ＿１４６７４３、ＮＭ＿１４６３５９、ＮＭ＿２０７１４３、ＮＭ＿１４７０８４、ＮＭ＿１４６３２９、ＮＭ＿１４７０５５、ＮＭ＿１４６８１４、ＮＭ＿０１９４８６、ＮＭ＿１４６７８０、ＮＭ＿１４６４９２、ＮＭ＿１４６６６８、ＮＭ＿１４６５５１、ＮＭ＿１４６５５４、ＮＭ＿１４６４２３、ＮＭ＿００１０１１５２３、ＮＭ＿００１０１１８１３、ＮＭ＿１４６５１３、ＮＭ＿１４６６１２、ＮＭ＿１４６５１０、ＮＭ＿１４６４３４、ＮＭ＿１４６５７９、ＮＭ＿２０７５６２、ＮＭ＿１４６５９２、ＮＭ＿１４６３６５、ＮＭ＿１４６５９１、ＮＭ＿１４６３２３、ＮＭ＿１４６６９５、ＮＭ＿０２０５１４、ＮＭ＿１４６９９７、ＮＭ＿１４６４４３、ＮＭ＿１４６５７６、ＮＭ＿１４６４２６、ＮＭ＿１４６４９５、ＮＭ＿０２０２９１、ＮＭ＿１４７０４６、ＮＭ＿１４７０６９、ＮＭ＿１４６５４７、ＮＭ＿１４６５４８、ＮＭ＿１４６５６７、ＮＭ＿１４６５２２、ＮＭ＿１４６８６８、ＮＭ＿１４６７４５、ＮＭ＿１４６９１７、ＮＭ＿１４６８９６、ＮＭ＿１４６７９４、ＮＭ＿０２１３６８、ＮＭ＿１４６３２７、ＮＭ＿１４６３０８、ＮＭ＿１４６４９０、ＮＭ＿００１０１１８３９、ＮＭ＿１４６６８３、ＮＭ＿１４６７０２、ＮＭ＿１４６９９０、ＮＭ＿１４６７７０、ＮＭ＿１４７０３６、ＮＭ＿１４６９５０、ＮＭ＿１４７００４、ＮＭ＿１４６３６４、ＮＭ＿１４７１０９、ＮＭ＿２０７５５６、ＮＭ＿１４７０８１、ＮＭ＿１４７０７２、ＮＭ＿１４６４８１、ＮＭ＿１４６９２１、ＮＭ＿２０７６７３、ＮＭ＿１４６５７８、ＮＭ＿１４６８３５、ＮＭ＿００１０１３５７５、ＮＭ＿１４６８３７、ＮＭ＿１４６６４７、ＮＭ＿００１０１１５３５、ＮＭ＿１４６８９５、ＮＭ＿１４６８９１、ＮＭ＿１４６８８６、ＮＭ＿１４６４４９、ＮＭ＿１４６７１３、ＮＭ＿１４６３８５、ＮＭ＿１４６５４３、ＮＭ＿１４６８０９、ＮＭ＿１４６６９４、ＮＭ＿１４６２７１、ＮＭ＿１４６３２１、ＮＭ＿００１０１１７３６、ＮＭ＿１４６６２７、ＮＭ＿１４６３６８、ＮＭ＿１４６７１８、ＮＭ＿１４６３８３、ＮＭ＿１４６７３８、ＮＭ＿１４７０４１、ＮＭ＿１４６８２０、ＮＭ＿１４６６００、ＮＭ＿００１０１１７９７、ＮＭ＿１４６５５０、ＮＭ＿１４６６７０、ＮＭ＿１４６６７２、ＮＭ＿００１０１２２６６、ＮＭ＿１４６５６１、ＮＭ＿１４６３３６、ＮＭ＿１４６８１０、ＮＭ＿１４６４４０、ＮＭ＿００１０１１８２６、ＮＭ＿１４６５６９、ＮＭ＿１４７０１５、ＮＭ＿１４７０１０、ＸＭ＿６１９７７９、ＮＭ＿１４６５１１、ＮＭ＿１４６５９４、ＮＭ＿１４６２８９、ＮＭ＿１４６３５１、ＮＭ＿１４６６４１、ＮＭ＿１４６５３２、ＮＭ＿１４６８８７、ＮＭ＿１４６２９１、ＮＭ＿１４７００１、ＮＭ＿１４６９９３、ＮＭ＿１４６９９９、ＮＭ＿００１０１１７９１、ＮＭ＿１４６４８４、ＮＭ＿１４６３８４、ＮＭ＿１４６４８９、ＮＭ＿１４６９４４、ＮＭ＿１４６７１７、ＮＭ＿１４６８３０、ＮＭ＿１４６６５５、ＮＭ＿１４６６５６、ＮＭ＿１４６３０７、ＮＭ＿１４６９６０、ＮＭ＿１４７０８８、ＮＭ＿００１０１１７９３、ＮＭ＿１４６５９８、ＮＭ＿００１０１１８６２ＢＣ０５１４３５、ＮＭ＿１４６６１３、ＮＭ＿１４６９７１、ＮＭ＿１４６４１０、ＮＭ＿１４６７４７、ＮＭ＿１４６４４６、ＮＭ＿１４６７５１、ＮＭ＿１４７０４３、ＮＭ＿１４６５９６、ＮＭ＿２０７１４５、ＮＭ＿１４６８４３、ＮＭ＿１４６７６８、ＮＭ＿１４７０２８、ＸＭ＿６２１５５５、ＮＭ＿１４６３０３、ＮＭ＿００１０１１８４２、ＮＭ＿１４６９３９、ＮＭ＿２０７２２４、ＮＭ＿１４７００８、ＮＭ＿１４６２９５、ＮＭ＿１４６５１８、ＮＭ＿１４７０９８、ＮＭ＿１４７１１９、ＮＭ＿１４６３７９、ＸＭ＿９９３２４２、ＮＭ＿１４７０９５、ＮＭ＿１４７０４４、ＮＭ＿１４６２６６、ＮＭ＿１４６８０３、ＮＭ＿１４６７８６、ＮＭ＿１４６７８４及びＮＭ＿００１０１１８６４。

【0055】

本発明の方法によると、まず本発明の代謝疾患ターゲットである嗅覚受容体遺伝子ヌクレオチド配列を含む細胞に、分析しようとする試料を接触させる。好ましくは、前記ヌクレオチド配列を含む細胞は、脂肪又は筋肉組織の細胞である。本発明のスクリーニング方法を言及しながら使用される用語‘試料’は、本発明のヌクレオチド配列の発現量に影響を及ぼすかどうか検査するためにスクリーニングで試験される物質を意味する。前記試料は、化学物質、ヌクレオチド、アンチセンス−ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ＲＮＡ）及び天然物抽出物を含むが、これらに限定されるものではない。次いで、試料の処理された細胞で前記ヌクレオチド配列の発現量を測定する。発現量の測定は、前記記載した通りであり、測定結果、前記ヌクレオチド配列のうち、本発明によって代謝疾患患者で高発現することが明らかとなった嗅覚受容体遺伝子配列の高発現が抑制されるか、又は代謝疾患患者で低発現することが明らかとなった嗅覚受容体遺伝子配列の低発現が抑制される場合は、前記試料は、代謝疾患治療用組成物と判定できる。

【発明の効果】

【0056】

本発明の特徴及び利点を要約すると、以下の通りである：
（ａ）本発明は、肥満、脂質代謝異常、脂肪肝及びインシュリン抵抗性症候群からなる群から選択される代謝疾患診断用のキット及びこれらの疾患に対する治療用組成物のスクリーニング方法を提供する。
（ｂ）本発明は、肥満などの代謝疾患に対する多量の新しい遺伝子ターゲットを提示することにより、より信頼度の高い肥満などの遺伝子診断及びこれに基づいた治療剤候補物質のスクリーニングに有用に利用できる。

【図面の簡単な説明】

【0057】

【図1】図１は、高脂肪食餌をしたマウスの体重増加、食餌摂取及び食餌効率比率（ｆｏｏｄ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｒａｔｉｏ）を示す図である。それぞれの値は、平均±標準誤差値である（ｎ＝１０、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１）。

【図2】図２は、高脂肪食餌をしたマウスの内臓脂肪組織重量を示す図である。それぞれの値は、平均±標準誤差値である（ｎ＝１０、^＊ｐ＜０．０５）。

【図3】図３は、嗅覚受容体により媒介される脂肪酸酸化、熱発生、脂肪蓄積、インシュリン抵抗性関連信号伝達体系を示す図である。ＡＣ（アデニル酸シクラーゼ）；ＡＭＰＫ（ＡＭＰ活性化タンパク質キナーゼ）；ＡＫＴ（ｖ−ａｋｔマウス胸腺腫ウイルス癌遺伝子）；ＣＰＴ１（カルニチンパルミトイル基転移酵素１）；ＣＲＥＢ（ｃＡＭＰ応答配列結合タンパク質）；Ｄ２（ＩＩ型チロキシン脱ヨード酵素）；Ｅｐａｃ（Ｒａｐグアニンヌクレオチド交換因子３）；ＥＲＫ（細胞外シグナル制御キナーゼ）；ＧＲＢ２（増殖因子受容体結合タンパク質２）；ＨＳＬ（ホルモン感受性リパーゼ）；ＩＲ（インスリン受容体）；ＩＲＳ（インスリン受容体基質）；ＬＫＢ（ＳＴＫ１１、セリンスレオニンキナーゼ１１）；ＭＡＰＫ（マイトジェン活性化プロテインキナーゼ）；Ｏｌｆｒ（嗅覚受容体）；ＰＤＫ（ピルビン酸脱水素酵素キナーゼ、アイソザイム１）；ＰＫＡ（プロテインキナーゼＡ）；ＰＧＣ−１（ＰＰＡＲγコアクチベーター１）；ＲＡＲ（レチノイン酸受容体）；ＲＡＦ（ＲＡＦ癌原遺伝子セリンスレオニンプロテインキナーゼ）；ＲＯＣＫ（Ｒｈｏ結合キナーゼ）；ＲＸＲ（レチノイン酸受容体）；Ｔ３（トリヨードチロニン）；ｍＴＯＲＣ１（哺乳類ラパマイシン標的タンパク質複合体１、ｍａｍｍａｌｉａｎ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ １）；ＴＲ（甲状腺ホルモン受容体）；ＴＳＣ２（結節性硬化症複合体２）；ＵＣＰ（脱共役タンパク質）

【発明を実施するための形態】

【0058】

以下、実施例を通じて本発明をさらに詳細に説明するが、これら実施例は、本発明をより具体的に説明するためのものであって、本発明の範囲がこれら実施例に限定されないことは、本発明の属する技術分野で通常の知識を有する者にとっては自明なことであろう。

【実施例】

【0059】

実施例１：マウスの内臓脂肪組織、皮下脂肪組織、及び筋肉組織における、食餌性肥満誘導期間に基づいて発現が変化する嗅覚受容体の発現変化プロファイル
１）食餌性肥満動物モデルの飼育
５週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｎマウス計８０匹を高脂肪食餌（ｈｉｇｈ−ｆａｔ ｄｉｅｔ、ＨＦＤ、脂肪エネルギー２０％）又は正常食餌（ｎｏｒｍａｌ ｄｉｅｔ、ＮＤ）で飼育しながら、２週目、４週目、８週目及び１２週目にそれぞれ２０匹ずつ（正常食餌１０匹；高脂肪食餌１０匹）のマウスを解剖して、試料を採取した。正常食餌（ＮＤ）は、ＡＩＮ−７６げっ歯類食餌組成（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ａｄ ｈｏｃ ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｆｏｒ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ．Ｊ．Ｎｕｔｒ．１０７：１３４０−１３４８（１９７７））に準じて調製した。実験食餌の組成は、表１に提示した。

【0060】

【表1】

【0061】

食餌は、毎日午前１０時〜１１時の間に水と共に供給して、食餌摂取量は毎日、そして体重は毎週測定した。飼料摂取による急速な体重変化を防ぐために飼料容器を除去して、２時間後に体重を測定した。実験動物を１２時間以上断食させた後、ジエチルエーテルで麻酔した状態で血液、肝臓、部位別内臓脂肪組織（副睾丸脂肪、腎臓周辺脂肪、腸間膜脂肪及び後腹腔脂肪）、皮下脂肪組織及び筋肉組織を採取して、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で洗浄した後、重量を測定した。腹部大動脈から採血した血液は、１，０００×ｇで１５分間遠心分離し、血漿を分離した。

【0062】

２）体重及び内臓脂肪量の変化
高脂肪食餌摂取による肥満誘導期間（２週間、４週間、８週間及び１２週間）別に測定された食餌摂取量、体重増加量及び食餌効率結果は、図１に示した通りである。実験食餌を２週間、４週間、８週間及び１２週間摂取させた結果、ＨＦＤ群の累積体重増加量は、それぞれ２４．６±０．２ｇ／２週間、２８．２±０．８ｇ／４週間、３６．１±０．５ｇ／８週間、４１．５±０．６ｇ／１２週間であった。これらの値は、ＮＤ群（２１．２±０．１ｇ／２週間、２３．６±０．３ｇ／４週間、２９．７±０．４ｇ／８週間、３４．３±０．３ｇ／１２週間）に比べ、それぞれ１４％（ｐ＜０．００１）、１６％（ｐ＜０．０１）、１８％（ｐ＜０．００１）及び１７％（ｐ＜０．００１）有意に増加した。

【0063】

高脂肪食餌による内臓脂肪組織量の増加を肥満誘導期間（２週間、４週間、８週間及び１２週間）別に測定した結果を図２に示した。副睾丸、腸間膜、後腹腔及び腎臓周辺の脂肪量を全部足した総内臓脂肪量は、肥満誘導期間（２週間、４週間、８週間及び１２週間）別に、ＨＦＤ群がＮＤ群に比べて１５１％（２週間）、１３３％（４週間）、８３％（８週間）及び３３．６％（１２週間）有意に増加した（ｐ＜０．０５）。

【0064】

３）ＲＮＡ分離及び確認
一定量の内臓及び皮下脂肪又は筋肉組織をＴｒｉｚｏｌ溶液に入れて、ホモジナイザーを利用してホモジナイズし、１２，０００×ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。上層液を新しいチューブに移した後、脂肪層を除去した。下層液を新しいチューブに移した後、クロロホルム２００μＬを添加してボルテックスした。この過程を２回繰り返した後、上層液を新しいチューブに移した後、イソプロパノールと上層液を１：１比率で添加した。１０回逆にして振り、室温で１０分間放置した後、１３，０００×ｇ、４℃で１０分間遠心分離して上層液を除去した。沈殿物に７０％エタノール１ｍＬを添加した後、１２，０００×ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。エタノールを除去した後、ＲＮＡ沈殿物の入ったチューブを室温で５分間乾燥させて、ＤＥＰＣで処理された蒸留水を使用してＲＮＡ沈殿物を溶解させた。ＵＶ／ＶＩＳ分光光度計（ベックマンコールター、ＤＵ７３０）を利用して、２６０ｎｍ、２８０ｎｍ波長でＲＮＡ濃度を測定し、アガロースゲル電気泳動を実施して、抽出されたＲＮＡ試料の完全性を確認した。

【0065】

４）オリゴＤＮＡマイクロアレイ分析
内臓、皮下脂肪及び筋肉組織ＲＮＡを使用したオリゴＤＮＡマイクロアレイ分析は、（株）ジェノチェックに依頼して行った。ＲＮＡ試料は、各群別に１０匹ずつ貯蔵して使用し、オリゴＤＮＡマイクロアレイ分析は、三回反復実験をして再現性を確認した。本実験で使用したＮｉｍｂｌｅＧｅｎ Ｍｏｕｓｅ Ｗｈｏｌｅ Ｏｌｉｇｏ １２−ｐｌｅｘ ｃｈｉｐは、Ｍｏｕｓｅ Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｕｉｌｄ ８をデータベースにして、マウス遺伝子４２，５７６個を三回繰り返して合成、製作した。ＮｉｍｂｌｅＧｅｎ ｍｏｕｓｅ Ｗｈｏｌｅ Ｏｌｉｇｏ １２−ｐｌｅｘ ｃｈｉｐには、対照群遺伝子を除いて総１３７，０９０個のスポットが１６μｍ×１６μｍの大きさで１７．４ｍｍ×１３ｍｍの大きさに合成されており、４２，５７６個のオリゴには、１３７，１４５個の機能の知られた遺伝子と、まだ機能が明かされていない転写物及びＥＳＴ配列などが５，４３１個含まれている。全ＲＮＡ１０μｇ〜５０μｇにオリゴ−ｄＴプライマー、逆転者酵素、ｄＮＴＰ、Ｃｙ３−ｄＵＴＰ及びＣｙ５−ｄＵＴＰなどを加えて、キット製作会社の指示にしたがって逆転写させた。この反応物をカートリッジを利用して精製した後、乾燥させてハイブリッド形成緩衝液（３０μＬ）に溶解させた。ハイブリッド形成カセット（Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｃａｓｓｅｔｔｅ）にマイクロアレイを入れて、９５℃〜１００℃で５分間加熱した後、Ｃｙ３及びＣｙ５で標識されたＲＮＡをそれぞれ混合し、４５℃で１８時間ハイブリッド形成させた。スライドを室温の１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ溶液で５分間２回洗浄し、０．１×ＳＳＣで５分間洗浄した後、乾燥して分析した。

【0066】

５）内臓脂肪、皮下脂肪組織及び筋肉組織で発現する嗅覚受容体の種類
本研究でマイクロアレイ分析に使用されたＮｉｍｂｌｅＧｅｎ Ｍｏｕｓｅ Ｗｈｏｌｅ Ｏｌｉｇｏ １２−ｐｌｅｘ ｃｈｉｐには、総１，１１３種の嗅覚受容体遺伝子が含まれており、本研究でマウスの内臓脂肪、皮下脂肪組織及び筋肉組織でこの１，１１３種の嗅覚受容体が全部発現することを最初に確認した。よって、今まで嗅覚上皮組織に存在することが知られてきた嗅覚受容体が末梢組織でも発現することが見出された。

【0067】

６）食餌性肥満が誘導されることにより発現が変化した嗅覚受容体プロファイル
Ａ．食餌性肥満により発現が２倍以上変化した嗅覚受容体遺伝子数の確認
マイクロアレイ分析結果、内臓脂肪組織において高脂肪食餌により２倍以上増加又は減少した遺伝子の数は、３，８１２個（２週間）、３，２９６個（４週間）、２，０９８個（８週間）、１，９１７個（１２週間）であり、そのうち、２倍以上増加又は減少した嗅覚受容体遺伝子の数は、４７２個（２週間）、６０４個（４週間）、３６６個（８週間）、５４９個（１２週間）であった。

【0068】

皮下脂肪組織において高脂肪食餌により２倍以上増加又は減少した遺伝子の数は、１８９６個（２週間）、２２３５個（４週間）、１６４９個（８週間）、１３１６個（１２週間）であり、そのうち、２倍以上増加又は減少した嗅覚受容体遺伝子の数は、１２９個（２週間）、１３３個（４週間）、１２８個（８週間）、１２４個（１２週間）であった。

【0069】

筋肉脂肪組織において高脂肪食餌により２倍以上増加又は減少した遺伝子の数は、８８５個（２週間）、１１６３個（４週間）、８３０個（８週間）、１１１５個（１２週間）であり、そのうち、２倍以上増加又は減少した嗅覚受容体遺伝子の数は、７９個（２週間）、９６個（４週間）、７２個（８週間）及び９４個（１２週間）であった（表２）。

【0070】

【表2】

【0071】

Ｂ．ＤＥＧ分析法を利用して、食餌性肥満により発現が調節される嗅覚受容体遺伝子プロファイル究明
２週間、４週間、８週間及び１２週間高脂肪食餌を摂取させたマウスの内臓脂肪、皮下脂肪組織及び筋肉組織において、正常食餌を摂取する対照群に比べて発現が２倍以上調節される嗅覚受容体遺伝子プロファイル（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｇｅｎｅ、ＤＥＧ）を表３〜１４に示した。

【0072】

【表3-1】

【0073】

【表3-2】

【0074】

【表3-3】

【0075】

【表3-4】

【0076】

【表3-5】

【0077】

【表3-6】

【0078】

【表3-7】

【0079】

【表4-1】

【0080】

【表4-2】

【0081】

【表4-3】

【0082】

【表4-4】

【0083】

【表4-5】

【0084】

【表4-6】

【0085】

【表4-7】

【0086】

【表5-1】

【0087】

【表5-2】

【0088】

【表5-3】

【0089】

【表5-4】

【0090】

【表5-5】

【0091】

【表6-1】

【0092】

【表6-2】

【0093】

【表6-3】

【0094】

【表6-4】

【0095】

【表6-5】

【0096】

【表7-1】

【0097】

【表7-2】

【0098】

【表7-3】

【0099】

【表7-4】

【0100】

【表8-1】

【0101】

【表8-2】

【0102】

【表8-3】

【0103】

【表8-4】

【0104】

【表9-1】

【0105】

【表9-2】

【0106】

【表9-3】

【0107】

【表9-4】

【0108】

【表10-1】

【0109】

【表10-2】

【0110】

【表10-3】

【0111】

【表10-4】

【0112】

【表11-1】

【0113】

【表11-2】

【0114】

【表12-1】

【0115】

【表12-2】

【0116】

【表12-3】

【0117】

【表13-1】

【0118】

【表13-2】

【0119】

【表14-1】

【0120】

【表14-2】

【0121】

【表14-3】

【0122】

Ｃ．ＭＮＩ分析法による食餌性肥満に反応する嗅覚受容体プロファイルの確認
現在までマイクロアレイデータを分析する方法として、特定条件により発現が変化された遺伝子を明かすＤＥＧ（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｇｅｎｅ）分析法が主に利用されてきたが、ＤＥＧ分析法は、特定条件により発現が変化された数千個の遺伝子に対するプロファイルを確立することはできるが、ターゲット遺伝子（作用点）を明かすことができないという限界点を有している。したがって、これを補完するための分析方法として、最近ＭＮＩ（ｍｏｄｅ−ｏｆ−ａｃｔｉｏｎ ｂｙ ｎｅｔｗｏｒｋ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ）分析法が新しく開発されて（Ｂｅｒｎａｒｄｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍｏｇｅｎｏｍｉｃ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ｏｎ ａ ｇｅｎｏｍｅ−ｗｉｄｅ ｓｃａｌｅ ｕｓｉｎｇ ｒｅｖｅｒｓｅ−ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｇｅｎｅ ｎｅｔｗｏｒｋｓ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：３７７，２００５）、これを利用して様々な疾病及び薬物に対するターゲット遺伝子を明らかにする研究が報告されている。

【0123】

したがって、本研究でも内臓脂肪、皮下脂肪組織及び筋肉組織において、それぞれ食餌性肥満に反応する遺伝子発現プロファイルを、ＭＮＩ法を利用して分析した。その結果、特定薬物によりＭＮＩ遺伝子ネットワークアルゴリズム上で外れる程度を基準として薬物ターゲットのランキングを評価した。前記薬物ターゲット順位が上位２００位内に入る遺伝子リストと、これらの上位遺伝子のＤＥＧ値とを表１５及び表１６に示した。

【0124】

内臓脂肪組織において、高脂肪食餌摂取に反応する遺伝子のうち、ＭＮＩ順位が２００位内に入る嗅覚受容体数は、１０個（２週間）、７個（４週間）、１１個（８週間）及び１０個（１２週間）であって、皮下脂肪組織において、高脂肪食餌摂取に反応する遺伝子のうち、上位２００位内に入る嗅覚受容体数は、８個（２週間）、９個（４週間）、１１個（８週間）、８個（１２週間）であった。また、筋肉組織において、高脂肪食餌摂取に反応する遺伝子のうち、上位２００位内に入る嗅覚受容体数は、１２個（２週間）、１１個（４週間）、１５個（８週間）、１２個（１２週間）であった。さらに、これらＭＮＩ順位の高い嗅覚受容体遺伝子は、ほとんどがＤＥＧにおける発現の変化倍率も高いことが分かった（表１５及び１６）。

【0125】

【表15】

【0126】

【表16】

【0127】

実施例２：抗肥満効能を示す多様な種類の匂い成分により発現が変化する嗅覚受容体のプロファイル
１）実験食餌の製造及び実験動物の飼育
本実験で使用した肥満誘導食餌は、高脂肪対照食餌（ＨＦＤ：脂肪エネルギー４０％、１７ｇラード＋３％トウモロコシ油／食餌１００ｇ）であった。匂い成分が補充された食餌は、多様な種類の抗肥満効能を示す匂い成分［インドール−３−カルビノール、オレウロペイン、セドリルアセテート、α−セドレン、ピペリン］を、匂い成分の種類に応じて０．０２〜０．０５％の濃度で含有させたこと以外は、ＨＦＤと組成が同一であった。インドール−３−カルビノール、オレウロペイン、セドリルアセテート、α−セドレン、ピペリンは、シグマ−アルドリッチから購入した。

【0128】

本実験で使用された匂い成分は、多様な種類の食用植物に存在するフィトケミカルであって、国内外で食品添加物（着料添加物）として利用されてきた物質であり、本研究者により体重及び内臓脂肪の低下効果、高脂血症改善効能、及び非アルコール性脂肪肝改善効能、そして第２型糖尿（インシュリン抵抗性）改善効能などが観察された。

【0129】

３）内臓脂肪及び肝臓組織を対象としたオリゴＤＮＡマイクロアレイ分析
Ａ．ＲＮＡ分離及び確認
一定量の内臓脂肪又は肝臓組織をＴｒｉｚｏｌ溶液に入れて、ホモジナイザーを利用してホモジナイズし、１２，０００×ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。上層液を新しいチューブに移した後、脂肪層を除去した。下層液を新しいチューブに移した後、クロロホルム２００μＬを添加してボルテックスした。この過程を２回繰り返した後、上層液を新しいチューブに移し、イソプロパノールと上層液を１：１比率で添加した。１０回逆にして振り、室温で１０分間放置した後、１３，０００×ｇ、４℃で１０分間遠心分離し、上層液を除去した。ペレットに７０％エタノール１ｍＬを添加した後、１２，０００×ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。エタノールを除去した後、ＲＮＡ沈殿物の入ったチューブを室温で５分間乾燥させて、ＤＥＰＣで処理された蒸留水を使用してＲＮＡペレットを溶解させた。ＵＶ／ＶＩＳ分光光度計（ベックマンコールター、ＤＵ７３０）を利用して、２６０ｎｍ、２８０ｎｍ波長でＲＮＡ濃度を測定し、アガロースゲル電気泳動を実施して、抽出したＲＮＡ試料の完全性を確認した。

【0130】

Ｂ．オリゴＤＮＡマイクロアレイ分析
内臓脂肪及び肝臓組織のＲＮＡを使用したオリゴＤＮＡマイクロアレイ分析は、（株）ジェノチェックに依頼して行った。ＲＮＡ試料は、各群別に１０匹ずつ貯蔵して使用し、オリゴＤＮＡマイクロアレイ分析は、三回反復実験をして再現性を確認した。本実験で使用されたＮｉｍｂｌｅＧｅｎ Ｍｏｕｓｅ Ｗｈｏｌｅ Ｏｌｉｇｏ １２−ｐｌｅｘ ｃｈｉｐは、Ｍｏｕｓｅ Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｕｉｌｄ ８をデータベースにして、マウス遺伝子４２，５７６個を三回繰り返して合成、製作した。ＮｉｍｂｌｅＧｅｎ ｍｏｕｓｅ Ｗｈｏｌｅ Ｏｌｉｇｏ １２−ｐｌｅｘ ｃｈｉｐには、対照群遺伝子を除いて総１３７，０９０個のスポットが１６μｍ×１６μｍの大きさで１７．４ｍｍ×１３ｍｍの大きさに合成されており、４２，５７６個のオリゴには、１３７，１４５個の機能の知られた公知遺伝子と、まだ機能の明かされていない転写体及びＥＳＴ配列などが５，４３１個含まれている。全ＲＮＡ１０μｇ〜５０μｇにオリゴ−ｄＴプライマー、逆転者酵素、ｄＮＴＰ、Ｃｙ３−ｄＵＴＰ及びＣｙ５−ｄＵＴＰなどを加えて、キット製作社の指示にしたがって逆転写させた。この反応物をカートリッジを利用して精製した後、ｓｐｅｅｄ−ｖｅｃで乾燥させて、再びハイブリッド形成緩衝液（３０μＬ）に溶解させた。ハイブリッド形成カセット（Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｃａｓｓｅｔｔｅ）にマイクロアレイを入れて、９５℃〜１００℃で５分間加熱した後、Ｃｙ３及びＣｙ５で標識されたＲＮＡをそれぞれ混合し、４５℃で１８時間ハイブリッド形成させた。スライドを室温の１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ溶液で５分間２回洗浄し、０．１×ＳＳＣで５分間洗浄した後、乾燥して分析した。

【0131】

Ｃ．抗肥満効能を示す匂い成分により発現が変化する嗅覚受容体のプロファイル
高脂肪食餌に多様な種類の匂い成分を補充した食餌を１０週間摂取させて、体重及び内臓脂肪低下効果があらわれたマウスを対象に、内臓脂肪及び肝臓組織でオリゴＤＮＡマイクロアレイ分析を実施した。匂い成分の摂取により組織別に２倍以上発現が調節された嗅覚受容体プロファイルを、表５に示した。結果的に抗肥満効能を示す多様な種類の匂い成分は、末梢組織で多数の嗅覚受容体発現を調節することが確認された。

【0132】

高脂肪食餌を摂取するマウスを対象に、インドール−３−カルビノールを１０週間補充摂取させた結果、内臓脂肪及び肝臓組織でｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ９０９、１４６２、３８０、１１５３、１１６、２９０及び１７８の発現は２倍以上増加し、ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ９７２、１０９３、１１６５，２５９、１３３７、４６６、１３２９、１６、１０４５、１９６、１２１６及び６８６の発現は、２倍以上減少した。

【0133】

高脂肪食餌を摂取するマウスを対象に、オレウロペインを１０週間補充摂取させた結果、内臓脂肪及び肝臓組織でｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １１０４、９７１、１４４７、２９０、５２０、１０４６、１３１７、２７５、３８、１２０４及び１２１４の発現は２倍以上増加し、ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ９０７、３４１、４９５及び１１３６の発現は、２倍以上減少した。

【0134】

高脂肪食餌を摂取するマウスを対象に、セドリルアセテートを１０週間補充摂取させた結果、内臓脂肪及び肝臓組織でｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １１０４、１１２３、２９０、１０５８、１４４２、３８０、１１２５、６６３、８７８，２７５、３８及び３０５の発現は２倍以上増加し、ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １１５７、６１８、１１３６、４１７、１１６５、３４１及び７７の発現は、２倍以上減少した。

【0135】

高脂肪食餌を摂取するマウスを対象に、ピペリンを１０週間補充摂取させた結果、内臓脂肪でｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ８７８、３８及び５２０の発現は２倍以上増加し、ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １４６２及び７７の発現は、２倍以上減少した。

【0136】

高脂肪食餌を摂取するマウスを対象に、α−セドレンを１０週間補充摂取させた結果、肝臓組織でｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ８７８、３８及び１２２２の発現は２倍以上増加し、ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １０４５の発現は、２倍以上減少した。

【0137】

このように、抗肥満効能を示す多様な種類の匂い成分が末梢組織で多数の嗅覚受容体発現を調節する一方、ある特定の嗅覚受容体は、様々な匂い成分により共通的に発現が増加又は減少したことを観察した。即ち、ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ８７８と３８の発現は、ピペリン、セドリルアセテート、α−セドレン、オレウロペインにより共通的に肝臓で発現が増加し、ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２７５は、オレウロペインとセドリルアセテートにより共通的に肝臓で発現が増加した。一方、ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ７７は、ピペリンとセドリルアセテートにより、そして、ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １０４５は、インドール−３−カルビノールとα−セドレン摂取により共通的に肝臓で発現が減少した（表１７）。一方、内臓脂肪組織では、ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ３８０がインドール−３−カルビノールとセドリルアセテートにより発現が共通的に増加して、ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２９０と１１０４は、オレウロペインとセドリルアセテートにより共通的に発現が増加した。ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ３４１は、オレウロペインとセドリルアセテートにより、そしてｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １１６５は、インドール−３−カルビノールとセドリルアセテートにより共通的に内臓脂肪組織で発現が２倍以上減少した（表１８）。

【0138】

脂肪細胞、筋肉細胞、肝細胞膜などに存在する嗅覚受容体は、遺伝子発現の調節がない状況でも、抗肥満効能を示す匂い成分と結合すると、ＡＣ_３に信号を伝達して脂肪蓄積を抑制し、脂肪酸酸化及び熱発生を促進させて、インシュリン抵抗性を改善する効果を示すことができる。したがって、これら匂い成分の摂取により末梢組織で嗅覚受容体遺伝子発現が調節されることは、嗅覚受容体がこれら抗肥満匂い成分の直接的な新しいターゲットになり得る必要条件ではないが、十分条件である。

【0139】

【表17-1】

【0140】

【表17-2】

【0141】

【表17-3】

【0142】

【表18】

【0143】

実施例３：抗肥満効能のある匂い成分摂取による肥満及び代謝疾患関連遺伝子の発現変化
１）Ｔｒｉｚｏｌ法を利用したＲＮＡ分離及びＲＴ−ＰＣＲ方法
内臓脂肪又は肝臓組織０．１ｇ当りＴｒｉｚｏｌ溶液１ｍＬを添加して組織を粉砕した後、４℃、１２，０００×ｇで１０分間遠心分離した。上層液を新しいチューブに移した後、クロロホルム２００μＬを添加して、ボルテックスした。この過程を２回繰り返した後、上層液を新しいチューブに移した後、イソプロパノールと上層液を１：１比率で添加した。１０回強く振り、室温で１０分間放置した後、１２，０００×ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。そして、上層液を除去して、残りの沈殿物に７０％エタノール１ｍＬを加えた後、７，５００×ｇ、４℃で５分間遠心分離した。エタノールを除去した後、ＲＮＡ沈殿物を入れたチューブを室温で５分間乾燥して、無核酸分解酵素水（ｎｕｃｌｅａｓｅ ｆｒｅｅ ｗａｔｅｒ）を使用して、ＲＮＡペレットを溶解させた。ＵＶ／ＶＩＳ分光光度計（ベックマンコールター、ＤＵ７３０）を利用して２６０ｎｍ及び２８０ｎｍ波長で抽出されたＲＮＡ試料の濃度を測定して、アガロースゲル電気泳動を行い、ＲＮＡ試料の完全性を確認した。

【0144】

内臓脂肪又は肝臓組織から抽出されたＲＮＡ試料を対象に、オリゴｄＴプライマーとＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ逆転写酵素（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、ＵＳＡ）を利用して逆転写を行うことによりｃＤＮＡを合成した。逆転写を通じて得たｃＤＮＡを鋳型として、増幅しようとする遺伝子ｃＤＮＡの５’と３’両側配列（ｆｌａｎｋｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）をプライマーとして使用してＰＣＲを行った。この際使用されたプライマー配列は、表１９に示した通りである。増幅されたＰＣＲ産物１μＬを１％アガロースゲルに電気泳動してＤＮＡバンドを確認した。

【0145】

【表19】

【0146】

２）タンパク質抽出及びウェスタンプロッティング
乳鉢に一定量の内臓脂肪又は肝臓組織を液体窒素及び溶解緩衝液と共に均質化させた後、組織液を新しいチューブに移してボルテックスした。１３，０００ｒｐｍ、４℃で２０分間遠心分離した後、中間層を取って、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法によりタンパク質を定量した。５０μｇのタンパク質量をＳＤＳポリアクリルアミドゲルに電気泳動した後、ＰＶＤＦハイパーフィルムに電気ブロッティングした。タンパク質に対する該当抗体を使用して反応させて、ＥＣＬで検出してフィトケミカル成分のインシュリン抵抗性、脂肪細胞分化、脂質代謝又はエネルギー消費関連作用メカニズムをタンパク質レベルで精査した。

【0147】

３）匂い成分による肥満及び代謝疾患関連遺伝子の発現、及びタンパク質リン酸化の変化
ミトコンドリアの機能障害は、老化、心臓病、胃腸障害、内分泌障害、神経障害と関連がある。ミトコンドリアにおける酸化過程の損傷は、肝臓組織のグルコース生産を増加させ、高血糖症を誘発し、脂肪肝を招くことが知られている。ミトコンドリアは、電子伝達系を利用してミトコンドリア内膜と外膜間のプロトン濃度勾配を形成し、これを駆動力としてＦ０Ｆ１−ＡＴＰａｓｅを通じてＡＴＰを形成するようになる。しかし、Ｆ０Ｆ１−ＡＴＰａｓｅが正常的に作動しない場合、ＵＣＰ（脱共役タンパク質）を通じてプロトン濃度勾配を解消して、この過程で熱が発生するようになる。最近、このようなエネルギー消散メカニズムを通じて、脂肪組織でＵＣＰが酸化還元均衡を維持して熱発生を促進する。食餌性肥満が誘導されたマウスの場合、正常対照群に比べ、ＵＣＰ１とＵＣＰ３遺伝子発現が内臓脂肪組織で両方とも有意に減少することが知られている。

【0148】

脂肪組織の生成は、脂肪前駆細胞が増殖及び分化過程を経て成熟した脂肪細胞に変化する過程であり、細胞の形態学的変化及び遺伝子発現様相の変化などを伴う。即ち、この過程で脂質が蓄積されて、ａＰ２（脂肪酸結合タンパク質２）、ＬＰＬ（リポタンパク質リパーゼ）、そしてＦＡＳ（脂肪酸合成酵素）のような脂肪組織に特異的な遺伝子が発現するが、このような遺伝子の発現調節には、ＰＰＡＲγ（ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体ｇａｍｍａ）、Ｃ／ＥＢＰ（ＣＣＡＡＴエンハンサー結合タンパク質）、ＳＲＥＢＰ−１ｃ（ステロール調節エレメント結合タンパク質−１ｃ）と呼ばれる３種の転写因子が中枢的な役割を担当している。したがって、食餌性肥満が誘導されると、内臓脂肪組織及び肝臓組織において、これら脂肪生成転写因子とターゲット遺伝子の発現が有意に増加することが知られている。さらに、肥満が進行されると、内臓脂肪組織でレプチンだけではなく、ＴＮＦα及びＩＬ−６などの炎症促進サイトカインの分泌が増加しつつ、代謝性炎症（ｍｅｔａｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）が進行する。

【0149】

非アルコール性脂肪肝疾患（ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ、以下、ＮＡＦＬＤ）は、飲酒と関係なく、肝臓内に中性脂肪が蓄積される疾患を意味し、これには、単純脂肪肝（ｓｉｍｐｌｅ ｓｔｅａｔｏｓｉｓ）と非アルコール性脂肪肝炎（ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ、ＮＡＳＨ）が含まれる。単純脂肪肝は、臨床的に予後の良好な陽性疾患と思われているが、脂肪肝と共に炎症あるいは繊維化を伴うＮＡＳＨは、進行性肝臓疾患であって、肝硬変又は肝臓癌を誘発する前駆疾患であることが認知されている。肥満とインシュリン抵抗性は、代表的な非アルコール性脂肪肝疾患の危険因子である。非アルコール性脂肪肝の発病原因は、二つのメカニズムで説明できる。その一つは、遊離脂肪酸の増加が肝細胞内脂肪酸酸化を抑制することにより、脂肪酸が肝細胞内に蓄積されて発病するものであり、二つ目は、炎症及び繊維症進行に係わる全ての体内作用メカニズムにより発生することが知られている。即ち、脂肪酸の増加は、ＣＹＰ２Ｅ１（チトクロムペルオキシダーゼ２Ｅ１）の発現を増加させて、活性酸素種を生成して、肝細胞膜の脂質過酸化を誘導し、酸化ストレスの増加は、ＴＮＦ−αを増加させて、肝細胞のアポトーシスを誘導し、肝臓損傷を進行させる。

【0150】

本発明でＲＴ−ＰＣＲを利用して内臓脂肪及び肝臓組織の遺伝子発現を分析した結果、抗肥満効能を示す前記匂い成分を摂取させたマウスの場合、高脂肪食餌を摂取させた対照群に比べ、内臓脂肪組織で核転写因子（Ｃ／ＥＢＰαとＰＰＡＲγ２）及びそのターゲット遺伝子（ａＰ２、ＦＡＳ）の発現が減少した。また、匂い成分の補充摂取は、内臓脂肪組織において、代謝性炎症反応を招くＴＮＦα及びＩＬ−６遺伝子発現を減少させる一方、脂肪酸酸化に関与するＣＰＴ１発現、そして熱発生に関与するＵＣＰ１とＵＣＰ３遺伝子の発現及びこれらターゲット遺伝子の発現を調節するＳＩＲＴ１及びＰＧＣ１αの発現を増加させる効果があることが観察された（表８）。したがって、抗肥満効能を示す匂い成分の補充摂取は、内臓脂肪組織において、脂肪生成に中枢的役割をする核転写因子及びそのターゲット遺伝子発現を減少させて、熱発生及び脂肪酸酸化を促進させ、体重を低下させて、肥満により誘導された慢性的炎症活性化を著しく改善することにより、代謝疾患を総体的に改善する効果があることが分かる。

【0151】

また、本発明でＲＴ−ＰＣＲを利用して肝臓組織の遺伝子発現を分析した結果、抗肥満効能を示す前記匂い成分を摂取させたマウスの場合、高脂肪食餌を摂取させた対照群に比べ、脂肪合成に関与する核転写因子（Ｃ／ＥＢＰαとＰＰＡＲγ２）及びそのターゲット遺伝子（ａＰ２、ＦＡＳ）及び単純脂肪肝が脂肪肝炎に進行する過程に中枢的な役割をするＴＮＦα及びＩＬ−６遺伝子発現が減少して、脂肪酸酸化を促進させるＣＰＴ１発現は、有意に増加した（表２０）。したがって、体重低下効能を有する匂い成分の補充摂取は、肝臓組織において脂質生成に関与する核転写因子及びそのターゲット遺伝子発現を減少させて脂肪酸酸化を促進することにより、脂肪肝生成を予防して肝臓組織において炎症活性化を著しく改善し、非アルコール性脂肪肝炎を改善する効果があることが分かる。

【0152】

【表20】

【0153】

上述した多様な肥満及び代謝疾患関連遺伝子は、結局のところ上流で嗅覚受容体／ＡＣ_３により媒介されることが分かる（図３）。これを証明するために、内臓脂肪組織において嗅覚受容体により媒介されるＨＳＬ（ホルモン感受性リパーゼ）、ＣＲＥＢ（ｃＡＭＰ応答配列結合タンパク質）、そしてＡＫＴ（ｖ−ａｋｔマウス胸腺腫ウイルス癌遺伝子）タンパク質リン酸化をウェスタンブロット分析により評価した結果、匂い成分（インドール−３−カルビノール、オレウロペイン、セドリルアセテート、ピペリン）を補充摂取させたマウスにおいて、高脂肪食餌対照群に比べ、上記３種のタンパク質のリン酸化が全て有意に増加したことが観察された（表２１）。したがって、ＡＣ_３は、肥満に係わる脂肪生成、遊離脂肪酸酸化、熱生成及びインシュリン抵抗性に係わるＧＬＵＴ４転座を調節する上流分子であり、信号が同時に嗅覚受容体により伝達されるため、嗅覚受容体は、肥満及び代謝疾患治療剤の新規なターゲットであることが分かる。

【0154】

【表21】

【0155】

以上、本発明の望ましい実施形態を詳細に記述したが、当業界の通常の知識を有する者にとっては、このような具体的な記述はただ望ましい実施形態に過ぎなく、これに本発明の範囲が限定されないことは明らかである。従って、本発明の実質的な範囲は、添付の請求項とその等価物により定義されると言える。

【図1】

【図2】

【図3】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]