特許 6585197 グルカゴン及びＧＬＰ−１共アゴニスト化合物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6585197

(24)【登録日】2019年9月13日

(45)【発行日】2019年10月2日

(54)【発明の名称】グルカゴン及びＧＬＰ−１共アゴニスト化合物

(51)【国際特許分類】

   C07K 14/605 20060101AFI20190919BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20190919BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20190919BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20190919BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20190919BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20190919BHJP

   A61K 38/26 20060101ALI20190919BHJP

   A61K 47/54 20170101ALI20190919BHJP

【ＦＩ】

   C07K14/605ZNA

   A61P3/10

   A61P3/04

   A61P3/06

   A61P1/16

   A61P43/00 111

   A61K38/26

   A61K47/54

【請求項の数】30

【全頁数】56

(21)【出願番号】特願2017-566081(P2017-566081)

(86)(22)【出願日】2016年6月16日

(65)【公表番号】特表2018-521043(P2018-521043A)

(43)【公表日】2018年8月2日

(86)【国際出願番号】US2016037818

(87)【国際公開番号】WO2016209707

(87)【国際公開日】20161229

【審査請求日】2017年12月26日

(31)【優先権主張番号】62/182,847

(32)【優先日】2015年6月22日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】594197872

【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100095360

【弁理士】

【氏名又は名称】片山 英二

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100162617

【弁理士】

【氏名又は名称】大賀 沙央里

(74)【代理人】

【識別番号】100104282

【弁理士】

【氏名又は名称】鈴木 康仁

(72)【発明者】

【氏名】チェン，ヤンユン

(72)【発明者】

【氏名】メゾ，アダム ロバート

(72)【発明者】

【氏名】クゥ，ホンチャン

(72)【発明者】

【氏名】ヴァレンズエラ，フランシスコ アルシデス

【審査官】 斉藤 貴子

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１４／０４１３７５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２０１３−５１８１１５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 カナダ国特許出願公開第０２８５２１７７（ＣＡ，Ａ１）

【文献】 特表２０１５−５０４４３１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１４−５２０７８９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１６−５２１２５３（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｋ １４／６０５

Ｃ０７Ｋ １４／５７５

Ａ６１Ｋ ３８／２６

Ａ６１Ｋ ３８／２２

Ａ６１Ｋ ４７／５４

Ａ６１Ｐ １／００

Ａ６１Ｐ ３／００

Ａ６１Ｐ ４３／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下の式の化合物またはその薬学的に許容される塩：
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔ
ｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌ
ｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｇｌｙ
−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｘａａ２８は、ＧｌｕまたはＳｅｒであり、
２０位のＬｙｓは、前記２０位のＬｙｓとＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを
介して、前記Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基と前記Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸との結合によって
化学修飾されており、前記リンカーは、（［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−
アセチル）_２−（γ−Ｇｌｕ）_ｔであり（式中、ｔは１または２である）、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている（配列番号２）］。

【請求項2】

Ｘａａ２８がＧｌｕである、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される
塩。

【請求項3】

Ｘａａ２８がＳｅｒである、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される
塩。

【請求項4】

ｔが１である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容
される塩。

【請求項5】

ｔが２である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容
される塩。

【請求項6】

前記Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸が、飽和一塩基酸または飽和二塩基酸である、請求項１〜５
のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項7】

前記脂肪酸が、ミリスチン酸（テトラデカン酸）（Ｃ１４一塩基酸）、テトラデカン二
酸（Ｃ１４二塩基酸）、パルミチン酸（ヘキサデカン酸）（Ｃ１６一塩基酸）、ヘキサデ
カン二酸（Ｃ１６二塩基酸）、マルガリン酸（ヘプタデカン酸）（Ｃ１７一塩基酸）、ヘ
プタデカン二酸（Ｃ１７二塩基酸）、ステアリン酸（オクタデカン酸）（Ｃ１８一塩基酸
）、オクタデカン二酸（Ｃ１８二塩基酸）、ノナデシル酸（ノナデカン酸）（Ｃ１９一塩
基酸）、ノナデカン二酸（Ｃ１９二塩基酸）、アラカジン酸（ａｒａｃｈａｄｉｃ ａｃ
ｉｄ）（エイコサン酸）（Ｃ２０一塩基酸）、エイコサン二酸（Ｃ２０二塩基酸）、ヘン
イコシル酸（ヘンエイコサン酸）（Ｃ２１一塩基酸）、ヘンエイコサン二酸（Ｃ２１二塩
基酸）、ベヘン酸（ドコサン酸）（Ｃ２２一塩基酸）、ドコサン二酸（Ｃ２２二塩基酸）、リグノセリン酸（テトラコサン酸）（Ｃ２４一塩基酸）、及びテトラコサン二酸（Ｃ２４二塩基酸）からなる群から選択される飽和一塩基酸または飽和二塩基酸である、請求項６に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項8】

前記Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸がオクタデカン二酸である、請求項６もしくは７に記載の化
合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項9】

前記Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸がエイコサン二酸である、請求項６もしくは７に記載の化合
物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項10】

Ｃ末端アミノ酸がアミド化されている、請求項１〜９のいずれかに記載の化合物、また
はその薬学的に許容される塩。

【請求項11】

請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬
学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、医薬組成物。

【請求項12】

治療を必要とする対象において２型糖尿病を治療する方法に用いるための、請求項１１に記載の医薬組成物であって、前記方法が、有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することを含む、医薬組成物。

【請求項13】

治療を必要とする対象において肥満を治療する方法に用いるための、請求項１１に記載の医薬組成物であって、前記方法が、有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することを含む、医薬組成物。

【請求項14】

治療を必要とする対象において非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を治療する方法に用いるための、請求項１１に記載の医薬組成物であって、前記方法が、有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することを含む、医薬組成物。

【請求項15】

治療を必要とする対象において非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を治療する方法に用いるための、請求項１１に記載の医薬組成物であって、前記方法が、有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することを含む、医薬組成物。

【請求項16】

対象において非治療的体重減少を引き起こす方法に用いるための、請求項１１に記載の医薬組成物であって、前記方法が、有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の投与を含む、医薬組成物。

【請求項17】

療法において使用するための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、または
その薬学的に許容される塩。

【請求項18】

２型糖尿病の治療において使用するための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化
合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項19】

肥満の治療において使用するための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、
またはその薬学的に許容される塩。

【請求項20】

非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の治療において使用するための、請求項１
〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項21】

非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療において使用するための、請求項１〜１
０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項22】

以下の式の中間体化合物、またはその薬学的に許容される塩：
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔ
ｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌ
ｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｇｌｙ
−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｘａａ２８は、ＧｌｕまたはＳｅｒであり、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている（配列番号９）］。

【請求項23】

Ｘａａ２８がＧｌｕである、請求項２２に記載の中間体化合物。

【請求項24】

Ｘａａ２８がＳｅｒである、請求項２２に記載の中間体化合物。

【請求項25】

以下の式の化合物を製造する方法であって、
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔ
ｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌ
ｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｇｌｙ
−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｘａａ２８は、ＧｌｕまたはＳｅｒであり、
２０位のＬｙｓは、前記２０位のＬｙｓとＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを介
して、前記Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基と前記Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸との結合によって化
学修飾されており、前記リンカーは、（［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−ア
セチル）_２−（γ−Ｇｌｕ）_ｔであり（式中、ｔは１または２である）、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている（配列番号２）］、前記方法は、
（ｉ）以下の式：
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔ
ｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌ
ｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｇｌｙ
−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｘａａ２８は、ＧｌｕまたはＳｅｒであり、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている（配列番号９）］
の中間体化合物を、リンカーを介して、前記中間体化合物の２０位の前記Ｌｙｓの側鎖
の前記ε−アミノ基をＣ１４−Ｃ２４脂肪酸と結合させることによって修飾するステップ
を含む（ここで、前記リンカーは、（［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−アセ
チル）_２−（γ−Ｇｌｕ）_ｔである（式中、ｔは１または２である））、方法。

【請求項26】

治療を必要とする対象において２型糖尿病を治療する方法に用いる医薬品の製造のための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記方法が、有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することを含む、使用。

【請求項27】

治療を必要とする対象において肥満を治療する方法に用いる医薬品の製造のための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記方法が、有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することを含む、使用。

【請求項28】

治療を必要とする対象において非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を治療する方法に用いる医薬品の製造のための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記方法が、有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することを含む、使用。

【請求項29】

治療を必要とする対象において非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を治療する方法に用いる医薬品の製造のための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記方法が、有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することを含む、使用。

【請求項30】

対象において非治療的体重減少を引き起こす方法に用いる医薬品の製造のための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記方法が、有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の投与を含む、使用。

【発明の詳細な説明】

【発明の概要】

【0001】

本発明は、医学の分野にある。より具体的には、本発明は、糖尿病及び肥満の治療の分野にあり、グルカゴン（Ｇｃｇ）受容体及びグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）受容体の両方を刺激する化合物に関する。Ｇｃｇ受容体及びＧＬＰ−１受容体の両方の活性を調節するようにアミノ酸修飾が導入された、オキシントモジュリン／グルカゴン類似体が、特に提供される。

【0002】

過去数十年間、糖尿病の有病率は上昇し続けている。２型真性糖尿病（Ｔ２Ｄ）は、全ての糖尿病の約９０％を占める糖尿病の最も一般的な形態である。Ｔ２Ｄは、インスリン耐性によって引き起こされる高い血糖値を特徴とする。Ｔ２Ｄの現在の標準治療は、利用可能な経口及び注射用血糖降下薬とともに、食事制限及び運動を含む。それにも関わらず、Ｔ２Ｄを有する多くの患者の制御は依然として不十分なままである。制御されない糖尿病は、患者の罹患率及び死亡率に影響を与えるいくつかの病態をもたらす。糖尿病患者の死亡の主要な原因は、心血管系合併症である。２型糖尿病の主な危険因子のうちの１つは、肥満である。大部分のＴ２Ｄ患者（約９０％）は、過体重または肥満である。体脂肪蓄積の低下は、高血糖症及び心血管事故を含む肥満関連併存症の改善をもたらすことが実証されている。したがって、より良好な疾患管理のために、グルコース制御及び体重減少において有効な療法が必要とされる。

【0003】

プレプログルカゴンに由来するいくつかのペプチド及びその類似体、特に、Ｇｃｇ、ＧＬＰ−１、及びオキシントモジュリン（ＯＸＭ）が、Ｔ２Ｄ及び肥満の治療のための治療薬として提案されている。プレプログルカゴンは、組織中で差次的に処理されて、Ｇｃｇ、ＧＬＰ−１、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、及びオキシントモジュリン（ＯＸＭ）を含む、いくつかの構造的に関連したプログルカゴン由来ペプチドを形成する、１５８アミノ酸長前駆体ポリペプチドである。これらの分子は、グルコース恒常性、インスリン分泌、胃排出、及び腸管成長、ならびに食物摂取の制御を含む、多様な生理学的機能に関与する。

【0004】

Ｇｃｇは、プレプログルカゴンのアミノ酸５３〜８１に対応する２９アミノ酸長ペプチドである。ＯＸＭは、３７アミノ酸長ペプチドであり、オクタペプチドカルボキシ末端伸張を有するＧｃｇの完全な２９アミノ酸配列（プレプログルカゴンのアミノ酸８２〜８９であり、「介在ペプチド１」またはＩＰ−１と呼ばれる）で構成される。ＧＬＰ−１の主要な生物活性断片（ＧＬＰ−１_７−３６）は、プレプログルカゴンのアミノ酸９８〜１２７に対応する、３０アミノ酸長のＣ末端がアミド化されているペプチドとして生成される。

【0005】

Ｇｃｇは、肝細胞上のＧｃｇ受容体に結合し、糖原分解を通して肝臓に（グリコーゲンの形態で貯蔵されている）グルコースを放出させることによって、血糖値の維持を助ける。これらの貯蔵が枯渇するにつれて、Ｇｃｇは肝臓を刺激して、糖新生によって追加のグルコースを合成させる。このグルコースは、血流へと放出され、低血糖症の発症を予防する。

【0006】

ＧＬＰ−１は、Ｇｃｇと比較して異なる生物活性を有する。その作用としては、インスリン合成及び分泌の刺激、Ｇｃｇ分泌の阻害、ならびに食物摂取の阻害が挙げられる。ＧＬＰ−１は、糖尿病患者において高血糖症を減少させることが示されている。エキセナチド、リラグルチド、リキシセナチド、アルビグルチド、及びデュラグルチドを含むいくつかのＧＬＰ−１アゴニストは、ヒトにおけるＴ２Ｄの治療での使用が承認されている。そのようなＧＬＰ−１アゴニストは、体重に対して有利な効果を有し、低血糖症の危険性はなく、糖血症の制御において有効である。しかしながら、用量依存的な胃腸系の副作用ために、体重減少は中程度である。

【0007】

ＯＸＭは、栄養摂取に比例して、小腸のＬ細胞からＧＬＰ−１とともに放出される。ＯＸＭは、Ｇｃｇ受容体及びＧＬＰ−１受容体の両方を活性化し、ＧＬＰ−１受容体よりもＧｃｇ受容体に対してわずかにより高い効力を有する。それらのそれぞれの受容体に対しては、天然Ｇｃｇ及びＧＬＰ−１よりも効力が少ない。ヒトＧｃｇもまた、両方の受容体を活性化することができるが、ＧＬＰ−１受容体よりもＧｃｇ受容体に対して強い優先度を有する。ＧＬＰ−１は、Ｇｃｇ受容体を活性化することができない。ＯＸＭは、食物摂取及び体重の制御に関与する。それは、ヒトにおいて食欲を抑制し、食物摂取を阻害することが示されている。過体重及び肥満対象での４週間の研究において、１日３回のＯＸＭの摂食前皮下投与は、プラセボ群における０．５ｋｇと比較して、２．３ｋｇの体重減少を引き起こした。この試験において、（エキセナチド及びリラグルチドなどの）ＧＬＰ−１系療法に関連する最も一般的な副作用である悪心は、頻度がより低かった。より短い別の研究において、ＯＸＭは、過体重及び肥満対象においてカロリー摂取を低下させ、活性関連エネルギー消費を増加させることが示された。

【0008】

これらのデータは、ＯＸＭが耐容性が良い抗糖尿病／肥満剤であるという潜在性を有することを示唆する。しかしながら、ＯＸＭは、商業的に実行可能な治療剤への開発にとっていくつかの問題を呈する。内在性ＯＸＭは、その小さなサイズのために、急速な腎臓クリアランスに供されるだけでなく、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ及び他のペプチダーゼによってインビボで素早く分解される。したがって、改善された代謝安定性及び減少したクリアランス率で、Ｇｃｇ受容体及びＧＬＰ−１受容体を活性化するペプチドを特定することが望ましい。

【0009】

安定性を改善するためにアミノ酸置換を有し、クリアランスを減速させるために追加の修飾（ペグ化または脂質化など）を有するＯＸＭペプチドが、当該技術分野において開示されている。他のペプチドが、Ｇｃｇ受容体及びＧＬＰ−１受容体に結合し、それらを活性化し、体重増加を抑制すると述べられている（例えば、ＷＯ２０１１／０７５３９３Ａ２及びＷＯ２０１２／１７７４４４Ａ２を参照されたい）。

【0010】

Ｇｃｇ受容体及びＧＬＰ−１受容体の両方を刺激する様々なペプチドの利用可能性にも関わらず、化合物の効力及びインスリン分泌活性が、糖尿病、好ましくはＴ２Ｄ、及び関連する障害に対する有効な治療を提供するように最適化されている、Ｇｃｇ受容体（Ｇｃｇ−Ｒ）／ＧＬＰ−１受容体（ＧＬＰ−１−Ｒ）活性の比率を有する、より強力、安定、長時間作用性、かつ／または耐容性が良い化合物に対する必要性が存在している。特に、体重を減少させる、バランスの取れたＧｃｇ−Ｒ／ＧＬＰ−１−Ｒ共アゴニスト活性の比率を有する化合物に対する必要性が存在している。また、ヒトにおける潜在的な１日１回、隔週、１週間に１回、または１月に１回の投薬を支持する、バランスの取れたＧｃｇ−Ｒ／ＧＬＰ−１−Ｒ共アゴニスト活性の比率を有する化合物を提供する必要性が存在している。したがって、本発明は、糖尿病、肥満、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、及び／または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の有効な治療の提供を探究する。

【0011】

一態様において、本発明は、以下の式の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する：
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｘａａ２８は、ＧｌｕまたはＳｅｒであり、
２０位のＬｙｓは、（ｉ）直接結合または（ｉｉ）２０位のＬｙｓとＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを介して、Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基とＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との結合によって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている（配列番号２））。

【0012】

別の態様において、本発明は、以下の式の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する：
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、（ｉ）直接結合または（ｉｉ）２０位のＬｙｓとＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを介して、Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基とＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との結合によって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている（配列番号３））。

【0013】

更に別の態様において、本発明は、以下の式の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する：
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、（ｉ）直接結合または（ｉｉ）２０位のＬｙｓとＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを介して、Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基とＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との結合によって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている（配列番号４））。

【0014】

本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩の好ましい一態様において、２０位のＬｙｓは、２０位のＬｙｓとＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを介して、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸との結合によって化学修飾されている。

【0015】

更に好ましくは、リンカーは、以下からなる群より選択される：
（ａ）以下の式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレート

【化1】

（式中、ｍは、１〜１２の任意の整数であり、ｎは、１〜１２の任意の整数であり、ｐは、１または２である）、
（ｂ）アルギニン（Ａｒｇ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、リジン（Ｌｙｓ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、サルコシン（Ｓａｒ）、グリシン（Ｇｌｙ）、γ−アミノ酪酸（γ−Ａｂｕ）、及びγ−グルタミン酸（γ−Ｇｌｕ）からなる群から選択されるアミノ酸、
（ｃ）Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ、６−アミノヘキサン酸−６−アミノヘキサン酸、５−アミノ吉草酸−５−アミノ吉草酸、７−アミノヘプタン酸−７−アミノヘプタン酸、及び８−アミノオクタン酸−８−アミノオクタン酸からなる群から選択されるジペプチド、
（ｄ）Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、及びγ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕからなる群から選択されるトリペプチド、
（ｅ）（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｑ（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ及び（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ、（６−アミノヘキサン酸）_ｓ、（５−アミノ吉草酸）_ｓ、（７−アミノヘプタン酸）_ｓ、及び（８−アミノオクタン酸）_ｓ（式中、ｑは、２〜５の任意の整数であり、ｒは、１〜３の任意の整数であり、ｓは、４〜１５の任意の整数である）からなる群から選択されるポリペプチド、ならびに
（ｆ）（ａ）で定義される式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートが、以下の（ｉ）〜（ｉｖ）から選択されるポリペプチドと結合している、結合リンカー：
（ｉ）Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｉｔ、Ｏｒｎ、Ｓａｒ、Ｇｌｙ、γ−Ａｂｕ、及びγ−Ｇｌｕからなる群から選択されるアミノ酸、
（ｉｉ）Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ、６−アミノヘキサン酸−６−アミノヘキサン酸、５−アミノ吉草酸−５−アミノ吉草酸、７−アミノヘプタン酸−７−アミノヘプタン酸、及び８−アミノオクタン酸−８−アミノオクタン酸からなる群から選択されるジペプチド、
（ｉｉｉ）Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、及びγ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕからなる群から選択されるトリペプチド、または
（ｉｖ）（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｑ（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ及び（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ、（６−アミノヘキサン酸）_ｓ、（５−アミノ吉草酸）_ｓ、（７−アミノヘプタン酸）_ｓ、及び（８−アミノオクタン酸）_ｓ（式中、ｑは、２〜５の任意の整数であり、ｒは、１〜３の任意の整数であり、ｓは、４〜１５の任意の整数である）からなる群から選択されるポリペプチド。

【0016】

本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩の好ましい一態様において、リンカーは、以下の式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートである

【化2】

（式中、ｍは、１〜１２の任意の整数であり、ｎは、１〜１２の任意の整数であり、ｐは、１または２である）。

【0017】

好ましくは、式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートにおいて、ｎは、１、２、３、４、５、または６であり、ｍは１であり、ｐは１である。

【0018】

更に好ましくは、好ましくは、式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートにおいて、ｎは２であり、ｍは１であり、ｐは１である。

【0019】

本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩の更なる好ましい一態様において、リンカーは、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｉｔ、Ｏｒｎ、Ｓａｒ、Ｇｌｙ、γ−Ａｂｕ、及びγ−Ｇｌｕからなる群から選択されるアミノ酸である。

【0020】

好ましくは、アミノ酸は、γ−Ｇｌｕである。

【0021】

本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩の依然更なる好ましい一態様において、リンカーは、Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ、６−アミノヘキサン酸−６−アミノヘキサン酸、５−アミノ吉草酸−５−アミノ吉草酸、７−アミノヘプタン酸−７−アミノヘプタン酸、及び８−アミノオクタン酸−８−アミノオクタン酸からなる群から選択されるジペプチドである。

【0022】

好ましくは、ジペプチドは、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕである。

【0023】

本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩の依然更なる好ましい一態様において、リンカーは、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、及びγ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕからなる群から選択されるトリペプチドである。

【0024】

本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩の依然更なる好ましい一態様において、リンカーは、（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｑ（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ及び（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ、（６−アミノヘキサン酸）_ｓ、（５−アミノ吉草酸）_ｓ、（７−アミノヘプタン酸）_ｓ、及び（８−アミノオクタン酸）_ｓ（式中、ｑは、２〜５の任意の整数であり、ｒは、１〜３の任意の整数であり、ｓは、４〜１５の任意の整数である）からなる群から選択されるポリペプチドである。

【0025】

本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩の依然更なる好ましい一態様において、リンカーは、以下の式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレート

【化3】

（式中、ｍは、１〜１２の任意の整数であり、ｎは、１〜１２の任意の整数であり、ｐは、１または２である）
が、以下の（ｉ）〜（ｉｖ）のいずれかと結合している結合リンカーである：
（ｉ）Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｉｔ、Ｏｒｎ、Ｓａｒ、Ｇｌｙ、γ−Ａｂｕ、及びγ−Ｇｌｕからなる群から選択されるアミノ酸、
（ｉｉ）Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ、６−アミノヘキサン酸−６−アミノヘキサン酸、５−アミノ吉草酸−５−アミノ吉草酸、７−アミノヘプタン酸−７−アミノヘプタン酸、及び８−アミノオクタン酸−８−アミノオクタン酸からなる群から選択されるジペプチド、
（ｉｉｉ）Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、及びγ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕからなる群から選択されるトリペプチド、または
（ｉｖ）（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｑ（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ及び（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ、（６−アミノヘキサン酸）_ｓ、（５−アミノ吉草酸）_ｓ、（７−アミノヘプタン酸）_ｓ、及び（８−アミノオクタン酸）_ｓ（式中、ｑは、２〜５の任意の整数であり、ｒは、１〜３の任意の整数であり、ｓは、４〜１５の任意の整数である）からなる群から選択されるポリペプチド。

【0026】

好ましくは、式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートにおいて、ｎは、１、２、３、４、５、または６であり、ｍは１であり、ｐは１である。

【0027】

更に好ましくは、好ましくは、式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートにおいて、ｎは２であり、ｍは１であり、ｐは１である。

【0028】

依然更に好ましくは、アミノ酸は、γ−Ｇｌｕである。

【0029】

依然更に好ましくは、ジペプチドは、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕである。

【0030】

本発明の化合物の好ましい一態様において、リンカーは、（［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２−（γ−Ｇｌｕ）_ｔであり、式中、ｔは、１または２である。

【0031】

好ましくは、ｔは１である。

【0032】

更に好ましくは、ｔは２である。

【0033】

本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩の依然更なる好ましい一態様において、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸は、飽和一塩基酸または飽和二塩基酸である。

【0034】

好ましくは、脂肪酸は、ミリスチン酸（テトラデカン酸）（Ｃ１４一塩基酸）、テトラデカン二酸（Ｃ１４二塩基酸）、パルミチン酸（ヘキサデカン酸）（Ｃ１６一塩基酸）、ヘキサデカン二酸（Ｃ１６二塩基酸）、マルガリン酸（ヘプタデカン酸）（Ｃ１７一塩基酸）、ヘプタデカン二酸（Ｃ１７二塩基酸）、ステアリン酸（オクタデカン酸）（Ｃ１８一塩基酸）、オクタデカン二酸（Ｃ１８二塩基酸）、ノナデシル酸（ノナデカン酸）（Ｃ１９一塩基酸）、ノナデカン二酸（Ｃ１９二塩基酸）、アラカジン酸（ａｒａｃｈａｄｉｃ ａｃｉｄ）（エイコサン酸）（Ｃ２０一塩基酸）、エイコサン二酸（Ｃ２０二塩基酸）、ヘンイコシル酸（ヘンエイコサン酸）（Ｃ２１一塩基酸）、ヘンエイコサン二酸（Ｃ２１二塩基酸）、ベヘン酸（ドコサン酸）（Ｃ２２）、ドコサン二酸（Ｃ２２二塩基酸）、リグノセリン酸（テトラコサン酸）（Ｃ２４一塩基酸）、及びテトラコサン二酸（Ｃ２４二塩基酸）からなる群から選択される飽和一塩基酸または飽和二塩基酸である。

【0035】

依然更に好ましくは、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸は、ミリスチン酸である。

【0036】

依然更に好ましくは、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸は、テトラデカン二酸である。

【0037】

依然更に好ましくは、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸は、パルミチン酸である。

【0038】

依然更に好ましくは、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸は、ヘキサデカン二酸である。

【0039】

依然更に好ましくは、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸は、ステアリン酸である。

【0040】

依然更に好ましくは、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸は、オクタデカン二酸である。

【0041】

依然更に好ましくは、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸は、ノナデカン二酸である。

【0042】

依然更に好ましくは、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸は、アラカジン酸である。

【0043】

依然更に好ましくは、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸は、エイコサン二酸である。

【0044】

依然更に好ましくは、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸は、ドコサン二酸である。

【0045】

本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩の依然更なる好ましい一態様において、Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている。

【0046】

更なる一態様において、本発明は、以下の式の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する：
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基と（［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２−（γ−Ｇｌｕ）−ＣＯ−（ＣＨ_２）_１６ＣＯ_２Ｈとの結合によって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている（配列番号５））。

【0047】

更なる一態様において、本発明は、以下の式の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する：
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基と（［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２−（γ−Ｇｌｕ）−ＣＯ−（ＣＨ_２）_１８ＣＯ_２Ｈとの結合によって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている（配列番号６））。

【0048】

更なる一態様において、本発明は、以下の式の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する：
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基と（［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２−（γ−Ｇｌｕ）_２−ＣＯ−（ＣＨ_２）_１６ＣＯ_２Ｈとの結合によって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている（配列番号７））。

【0049】

更なる一態様において、本発明は、以下の式の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する：
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基と（［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２−（γ−Ｇｌｕ）_２−ＣＯ−（ＣＨ_２）_１８ＣＯ_２Ｈとの結合によって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている（配列番号８））。

【0050】

更なる一態様において、本発明は、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む、医薬組成物を提供する。

【0051】

更なる一態様において、本発明は、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩を、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤及び他の治療成分とともに含む、医薬組成物を提供する。

【0052】

依然更なる一態様において、本発明は、治療を必要とする対象において２型糖尿病を治療する方法であって、有効量の本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0053】

依然更なる一態様において、本発明は、治療を必要とする対象において肥満を治療する方法であって、有効量の本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0054】

依然更なる一態様において、本発明は、治療を必要とする対象におおて非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を治療する方法であって、有効量の本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0055】

依然更なる一態様において、本発明は、治療を必要とする対象において非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を治療する方法であって、有効量の本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0056】

依然更なる一態様において、本発明は、対象において非治療的体重減少を引き起こす方法であって、有効量の本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩の投与を含む、方法を提供する。

【0057】

依然更なる一態様において、本発明は、療法において使用するための、本発明の化合物を提供する。

【0058】

依然更なる一態様において、本発明は、２型糖尿病の治療において使用するための、本発明の化合物を提供する。

【0059】

依然更なる一態様において、本発明は、肥満の治療において使用するための、本発明の化合物を提供する。

【0060】

依然更なる一態様において、本発明は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の治療において使用するための、本発明の化合物を提供する。

【0061】

依然更なる一態様において、本発明は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療において使用するための、本発明の化合物を提供する。

【0062】

依然更なる一態様において、本発明は、２型糖尿病の治療用の薬物を製造するための、本発明の化合物の使用を提供する。

【0063】

依然更なる一態様において、本発明は、肥満の治療用の薬物を製造するための、本発明の化合物の使用を提供する。

【0064】

依然更なる一態様において、本発明は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の治療用の薬物を製造するための、本発明の化合物の使用を提供する。

【0065】

依然更なる一態様において、本発明は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療用の薬物を製造するための、本発明の化合物の使用を提供する。

【0066】

依然更なる一態様において、本発明は、以下の式の中間体化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する：
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｘａａ２８は、ＧｌｕまたはＳｅｒ（配列番号９）であり、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている）。

【0067】

好ましくは、本発明は、以下の式の中間体化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する：
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている（配列番号１０））。

【0068】

更に好ましくは、本発明は、以下の式の中間体化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する：
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている（配列番号１１））。

【0069】

依然更なる一態様において、本発明は、以下の式：
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｘａａ２８は、ＧｌｕまたはＳｅｒであり、
２０位のＬｙｓは、（ｉ）直接結合または（ｉｉ）２０位のＬｙｓとＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを介して、Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基とＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との結合によって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている（配列番号２））の化合物、またはその薬学的に許容される塩を製造する方法であって、
（ｉ）以下の式：
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｘａａ２８は、ＧｌｕまたはＳｅｒであり、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている（配列番号９））
の中間体化合物を、任意にリンカーを介して、中間体化合物の２０位のＬｙｓの側鎖のε−アミノ基をＣ１４−Ｃ２４脂肪酸と結合させることによって修飾するステップを含む、方法を提供する。

【0070】

好ましくは、中間体化合物の２０位のＬｙｓは、２０位のＬｙｓとＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを介して、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸との結合によって修飾される。

【0071】

依然更なる一態様において、本発明は、上述の方法によって製造される化合物を提供する。

【0072】

本発明の化合物は、ＧＬＰ−１受容体及びＧｃｇ受容体の両方に結合し、それらを活性化することができる。本発明の化合物は、過体重及び肥満対象において食物摂取の減少を引き起こすことができる。本発明の化合物は、野生型ヒトＯＸＭに対して、優れた体重減少効果を提供する潜在性を有する。

【0073】

本発明の化合物は、Ｔ２Ｄ及び／または関連する代謝障害を有する対象においてグルコース耐性及び脂質プロファイルを改善することができ、野生型ヒトＯＸＭよりも有効に改善することができる。

【0074】

本発明の化合物の具体的な利点は、（エキセナチド及びリラグルチドなどの）ＧＬＰ−１療法に一般的に関連する悪心などの副作用の頻度が、減少または排除され得ることである。したがって、本発明の化合物は、ＧＬＰ−１療法と比較して、減少した副作用を有し得る。

【0075】

本発明の化合物は、脂肪酸と結合したポリペプチドを含む。脂肪酸は、それらのアルブミン結合モチーフを通して、血漿半減期を伸張することによって、ペプチドの薬物動態を改善し、クリアランス率を減少させることができる。本発明の化合物は、野生型ヒトＯＸＭと比較して、改善された薬物動態プロファイルを呈することが予想される一方で、改善の大きさは、予測することができない。本発明者らは、本発明の化合物中の脂肪酸、及び任意にリンカーの、長さ、組成、及び位置が、１日１回、隔週、１週間に１回、または１月に１回の投薬を支持する、望ましい薬物動態プロファイルを有する化合物をもたらすことを発見した。

【0076】

改善された薬物動態プロファイルに加えて、本発明者らはまた、本発明の化合物中の脂肪酸、及び任意にリンカーの、長さ、組成、及び位置が、Ｇｃｇ−Ｒ／ＧＬＰ−１−Ｒ共アゴニスト活性の比率の最適化にとって非常に重要であることも発見した。

【0077】

野生型ヒトＯＸＭは、ＧＬＰ−１−Ｒ及びヒトＧｃｇ−Ｒで全有効性及び効力を有する。野生型ヒトＯＸＭのアミノ酸配列を、以下に提供する。
Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｉｌｅ−Ａｌａ（配列番号１）

【0078】

本発明の特定の化合物は、バランスの取れたＧｃｇ−Ｒ／ＧＬＰ−１−Ｒ共アゴニスト活性の比率を有する。本明細書で使用される場合、バランスの取れたＧｃｇ及びＧＬＰ−１活性とは、１：１のＧＬＰ−１／Ｇｃｇ、２：１のＧＬＰ−１／Ｇｃｇ、３：２のＧＬＰ−１／Ｇｃｇ、１：２のＧＬＰ−１／Ｇｃｇ、または２：３のＧＬＰ−１／Ｇｃｇなどの、１：１に近い、インビトロ結合アッセイにおいてＧｃｇ受容体及びＧＬＰ−１受容体に対する親和性を有する化合物を指す。本発明者らが実行した研究は、脂肪酸の長さ、組成、及び位置が、本発明の化合物の血漿半減期、物理的安定性、溶解度、及びインビボ安定性に影響を与えるだけでなく、本発明の化合物の特徴である、バランスの取れたＧｃｇ−Ｒ／ＧＬＰ−１−Ｒ共アゴニスト活性の比率を達成するためにも非常に重要であることを明らかにした。

【0079】

ペプチドと脂肪酸との結合は、薬物動態プロファイルの改善及び／またはバランスの取れたＧｃｇ−Ｒ／ＧＬＰ−１−Ｒ共アゴニスト活性の比率に関して利点を有する一方で、Ｇｃｇ受容体またはＧＬＰ−１受容体のいずれかの結合界面との干渉の潜在性が存在するため、本化合物が、活性を失い得ることもまた予想されるだろう。しかしながら、２０位のリジン残基と脂肪酸との結合が、両方の受容体で、他の位置のアミノ酸が脂肪酸と結合している場合よりも大きな程度まで、インビトロ及びインビボで活性を保持することが見出されている。

【0080】

更に、主張される化合物中、野生型ヒトＯＸＭと比較して、いくつかのアミノ酸置換は、Ｇｃｇ−Ｒ及び／またはＧＬＰ−１−Ｒへの効力を強化し、それにより、Ｇｃｇ−Ｒ／ＧＬＰ−１−Ｒ共アゴニスト活性の適切な比率を維持しながら、脂肪酸との結合による効力減少を相殺することができる。ある特定のタンパク質中の１つのアミノ酸残基の置換は、タンパク質全体の特徴に影響を与える可能性があること、ならびに全体的な効果は、薬理学的効力及び／または薬学的安定性にとって有益または有害であり得ることに留意することが重要である。特定のアミノ酸置換は効力を増加させ得るが、分子の安定性に対して有害な影響を有する可能性があり、逆もまた真である。野生型ヒトＯＸＭ（配列番号１）と比較して、本発明の化合物中のアミノ酸置換は、Ｓ２Ａｉｂ、Ｓ１６Ｅ、Ｒ１７Ｋ、Ｒ１８Ｋ、Ｑ２０Ｋ、Ｄ２１Ｅ、Ｑ２４Ｅ、Ｍ２７Ｌ、Ｎ２８ＥまたはＮ２８Ｓ、及びＴ２９Ｇを含む。加えて、ＯＸＭのＣ末端配列ＫＲＮＲＮＮＩＡは、ＧＰＳＳＧ Ｃ末端配列で置換されている。

【0081】

Ｓ２Ａｉｂ置換は、ペプチダーゼ、特にジペプチジルペプチダーゼＩＶによる分解からペプチドを保護する。Ｓ１６Ｅ、Ｒ１７Ｋ、Ｒ１８Ｋ、及びＱ２０Ｋ置換は、インビトロアッセイ及びインビボ動物モデルにおいて、本発明の化合物の効力を改善することができる。Ｄ２１Ｅ及びＱ２４Ｅ置換は、本発明の化合物の安定性を改善し、インビトロ活性を調節することができる。Ｍ２７Ｌ置換は、メチオニン残基の酸化からペプチドを保護することができる。Ｎ２８Ｅ置換は、その置換を含む化合物の溶解度を改善することができる。Ｎ２８Ｓ置換もまた、その置換を含む化合物の溶解度を改善することができるが、その程度はＮ２８Ｅ置換と同一ではない。しかしながら、Ｎ２８Ｓ置換を含む化合物の溶解度は、適切なリンカーの選択によって改善することができる。２８位のアスパラギン残基の置換は、この位置での脱アミド化の発生の可能性を回避する。

【0082】

ＯＸＭのＣ末端配列ＫＲＮＲＮＮＩＡの残基の除去は、溶解度を改善することができ、これはアルギニン残基の除去に起因するものである。本発明者らは、（ｉ）Ｃ末端配列を有さない化合物、（ｉｉ）ＧＰＳＳＧ Ｃ末端配列を有する化合物、及び（ｉｉｉ）ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ Ｃ末端配列を有する化合物を評価した。驚くべきことに、野生型ヒトＯＸＭ、Ｃ末端配列を有さない化合物、及びＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ Ｃ末端配列を有する化合物と比較して、ＧＰＳＳＧ Ｃ末端配列を有する特定の化合物が、動物モデルにおいて改善されたインビボ効力を呈することが見出された。ＧＰＳＳＧ Ｃ末端配列はまた、野生型ヒトＯＸＭ及びＣ末端配列を有さない化合物と比較して、本発明に従う化合物の安定性及び溶解度を改善した。

【0083】

したがって、本発明の化合物は、別々にまたはともに、効力を改善することができるだけでなく、物理的安定性及び溶解度特徴の改善、ならびにインビボ安定性の増加も提供することができる、アミノ酸置換を含有する。

【0084】

本発明の化合物のいくつかの態様において、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸は、リンカーを介して、リジンの側鎖のε−アミノ基に結合しており、リンカーは、以下からなる群より選択される：
（ａ）以下の式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレート

【化4】

（式中、ｍは、１〜１２の任意の整数であり、ｎは、１〜１２の任意の整数であり、ｐは、１または２である）、
（ｂ）Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｉｔ、Ｏｒｎ、Ｓａｒ、Ｇｌｙ、γ−Ａｂｕ、及びγ−Ｇｌｕからなる群から選択されるアミノ酸、
（ｃ）Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ、６−アミノヘキサン酸−６−アミノヘキサン酸、５−アミノ吉草酸−５−アミノ吉草酸、７−アミノヘプタン酸−７−アミノヘプタン酸、及び８−アミノオクタン酸−８−アミノオクタン酸からなる群から選択されるジペプチド、
（ｄ）Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、及びγ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕからなる群から選択されるトリペプチド、
（ｅ）（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｑ（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ及び（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ、（６−アミノヘキサン酸）_ｓ、（５−アミノ吉草酸）_ｓ、（７−アミノヘプタン酸）_ｓ、及び（８−アミノオクタン酸）_ｓ（式中、ｑは、２〜５の任意の整数であり、ｒは、１〜３の任意の整数であり、ｓは、４〜１５の任意の整数である）からなる群から選択されるポリペプチド、ならびに
（ｆ）（ａ）で定義される式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートが、以下の（ｉ）〜（ｉｖ）のいずれかと結合している結合リンカー：
（ｉ）Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｉｔ、Ｏｒｎ、Ｓａｒ、Ｇｌｙ、γ−Ａｂｕ、及びγ−Ｇｌｕからなる群から選択されるアミノ酸、
（ｉｉ）Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ、６−アミノヘキサン酸−６−アミノヘキサン酸、５−アミノ吉草酸−５−アミノ吉草酸、７−アミノヘプタン酸−７−アミノヘプタン酸、及び８−アミノオクタン酸−８−アミノオクタン酸からなる群から選択されるジペプチド、
（ｉｉｉ）Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、及びγ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕからなる群から選択されるトリペプチド、または
（ｉｖ）（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｑ（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ及び（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ、（６−アミノヘキサン酸）_ｓ、（５−アミノ吉草酸）_ｓ、（７−アミノヘプタン酸）_ｓ、及び（８−アミノオクタン酸）_ｓ（式中、ｑは、２〜５の任意の整数であり、ｒは、１〜３の任意の整数であり、ｓは、４〜１５の任意の整数である）からなる群から選択されるポリペプチド。

【0085】

本発明の化合物の好ましい態様において、リンカーは、式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレート、または結合リンカーであって、式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートが、上記に定義されるアミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、もしくはポリペプチドと結合しており、ｎが、１、２、３、４、５、または６であり、ｍが、１であり、ｐが、１である、結合リンカーである。

【0086】

本発明の化合物のより好ましい態様において、リンカーは、式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレート、または結合リンカーであって、式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートが、上記に定義されるアミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、もしくはポリペプチドと結合しており、ｎが、２であり、ｍが、１であり、ｐが、１である、結合リンカーである。

【0087】

式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートリンカー、または結合リンカーであって、式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートが、上記に定義されるアミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、もしくはポリペプチドと結合している、結合リンカーは、構造［−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−］_ｍ（式中、ｍは、１〜１２の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２））を含む、小ポリエチレングリコール部分（ＰＥＧ）を含む。そのような小ＰＥＧは、本明細書において「ミニＰＥＧ」と呼ばれる。好ましい態様において、ミニＰＥＧは、式Ｉ：

【化5】

（式中、ｍは、１〜１２の任意の整数であり、ｎは、１〜１２の任意の整数であり、ｐは、１または２である）の構造を有する。好ましくは、ミニＰＥＧは、式Ｉ（式中、ｎは、１、２、３、４、５、または６であり、ｍは、１であり、ｐは、１である）の構造を有する。更に好ましくは、ミニＰＥＧは、式Ｉ（式中、ｎは、１であり、ｍは、１であり、ｐは、１である）の構造を有する。ミニＰＥＧでアミノ酸をアシル化で使用するための好適な試薬は、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，ＫＹ）及びＣｈｅｍＰｅｐ，Ｉｎｃ．（Ｗｅｌｌｉｎｇｔｏｎ，ＦＬ）などの販売会社から市販されている。また、ミニＰＥＧでアミノ酸をアシル化するための好適な技術は、本明細書に記載されている（実施例１〜４を参照されたい）。

【0088】

式ＩのミニＰＥＧは、アミン官能基及びカルボキシル官能基を含む官能化ミニＰＥＧである。カルボキシル官能基は、リジンの側鎖のε−アミノ基と反応して、アミド結合を形成する。アミン官能基は、脂肪酸のカルボキシル基と反応する。したがって、配列番号２のペプチドの２０位のリジンは、式ＩのミニＰＥＧを介して、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸に結合されている。

【0089】

あるいは、式ＩのミニＰＥＧが、結合リンカーの一部である（すなわち、式ＩのミニＰＥＧが、上記に定義されるアミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、またはポリペプチドに結合している）場合、式ＩのミニＰＥＧのアミン官能基は、アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、またはポリペプチドの官能基と反応する。アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、またはポリペプチドの更なる官能基は、脂肪酸のカルボキシル基と反応する。したがって、配列番号２のペプチドの２０位のリジンは、上記に定義される結合リンカーを介して、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸に結合されている。

【0090】

式ＩのミニＰＥＧの親水性の性質は、式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレート、または結合リンカーであって、式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートが、上記に定義されるアミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、もしくはポリペプチドと結合している、結合リンカーを含むリンカーを含む、本発明の化合物の溶解度を増加させる役割を果たす。

【0091】

式ＩのミニＰＥＧを含む好ましいリンカーとしては、（［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２及び８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸が挙げられるが、これらに限定されない。

【0092】

リンカーはまた、リジンの側鎖のε−アミノ基とＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との間に位置する単一アミノ酸であってもよい。いくつかの好ましい態様において、アミノ酸は、親水性アミノ酸である。好適なアミノ酸としては、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｉｔ、Ｏｒｎ、Ｓａｒ、Ｇｌｙ、γ−Ａｂｕ、及びγ−Ｇｌｕが挙げられる。

【0093】

より好ましい態様において、アミノ酸は、γ−Ｇｌｕである。

【0094】

あるいは、リンカーは、Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ、６−アミノヘキサン酸−６−アミノヘキサン酸、５−アミノ吉草酸−５−アミノ吉草酸、７−アミノヘプタン酸−７−アミノヘプタン酸、及び８−アミノオクタン酸−８−アミノオクタン酸からなる群から選択されるジペプチドである。

【0095】

更なる代替的な一態様において、ジペプチドの各アミノ酸は、ジペプチドの他のアミノ酸と同一であっても、それとは異なってもよく、Ａｌａ、β−Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、γ−Ｇｌｕ、γ−Ａｂｕ、６−アミノヘキサン酸、５−アミノ吉草酸、７−アミノヘプタン酸、及び８−アミノオクタン酸からなる群から独立して選択され得る。

【0096】

より好ましい態様において、リンカーは、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕである。

【0097】

いくつかの態様において、リンカーは、トリペプチドであり、トリペプチドのアミノ酸は、Ａｌａ、β−Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、γ−アミノ酪酸（γ−Ａｂｕ）、γ−グルタミン酸（γ−Ｇｌｕ）、６−アミノヘキサン酸、５−アミノ吉草酸、７−アミノヘプタン酸、及び８−アミノオクタン酸からなる群から独立して選択される。

【0098】

好ましい態様において、リンカーは、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、及びγ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕからなる群から選択されるトリペプチドである。

【0099】

いくつかの態様において、リンカーは、（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｑ（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ及び（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ、（６−アミノヘキサン酸）_ｓ、（５−アミノ吉草酸）_ｓ、（７−アミノヘプタン酸）_ｓ、及び（８−アミノオクタン酸）_ｓ（式中、ｑは、２〜５の任意の整数であり、ｒは、１〜３の任意の整数であり、ｓは、４〜１５の任意の整数である）からなる群から選択されるポリペプチドである。

【0100】

好ましい一態様において、リンカーは、結合リンカーであり、以下の式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレート

【化6】

（式中、ｍは、１〜１２の任意の整数であり、ｎは、１〜１２の任意の整数であり、ｐは、１または２である）
は、上記に定義されるアミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、もしくはポリペプチドと結合している。

【0101】

好ましい一態様において、結合リンカーのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートは、（［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２または８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸である。

【0102】

より好ましい一態様において、リンカーは、（［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２−（γ−Ｇｌｕ）_ｔ（（ＡＥＥＡ）_２−−（γ−Ｇｌｕ）_ｔとも呼ばれる）（式中、ｔは、１または２である）を含む。リンカー中の脂肪酸及びガンマ−グルタミン酸は、アルブミン結合剤としての役割を果たし、インビボで長時間作用性の化合物を生成する潜在性を提供する。最も好ましい態様において、本発明の化合物は、リジンの側鎖のε−アミノ基と（［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２−（γ−Ｇｌｕ）_ｔ−ＣＯ−（ＣＨ_２）_ｄ−ＣＯ_２Ｈ（式中、ｔは、１または２であり、ｄは、１６または１８である）との結合によって化学修飾されている２０位のリジンを含む。

【0103】

実施例１〜４の化学構造に示されるように、［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチルの第１の単位は、リジンの側鎖のε−アミノ基に連結する。その後、［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチルの第２の単位は、［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチルの第１の単位のアミノ基に結合する。その後、γ−Ｇｌｕの第１の単位が、側鎖のγ−カルボキシル基を通して、［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチルの第２の単位のアミノ基に結合する。ｔ＝２であるとき、γ−Ｇｌｕの第２の単位は、側鎖のγ−カルボキシル基を通して、γ−Ｇｌｕの第１の単位のα−アミノ基に結合する。最後に、脂肪酸が、γ−Ｇｌｕの第１（ｔ＝１であるとき）または第２（ｔ＝２であるとき）の単位のα−アミノ基に結合する。

【0104】

リンカーが、上記に定義されるアミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、またはポリペプチドであるとき、アミノ酸、またはジペプチド、トリペプチド、もしくはポリペプチドの少なくとも１つのアミノ酸が、親水性アミノ酸であることが好ましい。

【0105】

同様に、リンカーが結合リンカーであり、以下の式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレート

【化7】

（式中、ｍは、１〜１２の任意の整数であり、ｎは、１〜１２の任意の整数であり、ｐは、１または２である）
が、上記に定義されるアミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、またはポリペプチドと結合しているとき、アミノ酸またはアミノ酸／ジペプチド／トリペプチド／ポリペプチドの少なくとも１つのアミノ酸が、親水性アミノ酸であることが好ましい。

【0106】

好適なアミノ酸としては、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｉｔ、Ｏｒｎ、Ｓａｒ、Ｇｌｙ、γ−Ａｂｕ、及びγ−Ｇｌｕが挙げられるが、これらに限定されない。

【0107】

本発明者らは、リンカー中の１つ以上の親水性アミノ酸の存在が、配列番号１のペプチドにおけるアミノ酸置換の結果として通常発生が予想され得る、溶解度の減少を補償することを発見した。例えば、リンカーが（［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２−（γ−Ｇｌｕ）_ｔ（式中、ｔは、１または２である）を含む実施形態において、配列番号１のペプチドのＸａａ２８は、セリンまたはグルタミン酸であり得る。配列番号２のペプチドの２８位でのグルタミン酸の選択は、そのような化合物の溶解度を改善する。配列番号２のペプチドの２８位でのセリンの選択は、２８位にグルタミン酸残基を有することによってのみ異なる化合物と比較して、そのような化合物の溶解度を減少させることが予想され得る。しかしながら、上述のリンカー（すなわち、ｔは、２である）中の第２のγ−Ｇｌｕアミノ酸は、この予想される溶解度の減少を補償する。

【0108】

本発明の化合物は、直接結合またはリンカーのいずれかによって、リジンの側鎖のε−アミノ基に化学結合しているＣ１４−Ｃ２４脂肪酸を利用する。本明細書で使用される場合、「Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸」という用語は、１４〜２４個の炭素原子を有するカルボン酸を意味する。本明細書での使用に好適なＣ１４−Ｃ２４脂肪酸は、飽和一塩基酸または飽和二塩基酸であり得る。「飽和」によって、脂肪酸が炭素−炭素二重または三重結合を含有しないことが意味される。

【0109】

化合物及び本明細書に開示されるそれらの使用に好適である、具体的な飽和Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸の例としては、ミリスチン酸（テトラデカン酸）（Ｃ１４一塩基酸）、テトラデカン二酸（Ｃ１４二塩基酸）、パルミチン酸（ヘキサデカン酸）（Ｃ１６一塩基酸）、ヘキサデカン二酸（Ｃ１６二塩基酸）、マルガリン酸（ヘプタデカン酸）（Ｃ１７一塩基酸）、ヘプタデカン二酸（Ｃ１７二塩基酸）、ステアリン酸（オクタデカン酸）（Ｃ１８一塩基酸）、オクタデカン二酸（Ｃ１８二塩基酸）、ノナデシル酸（ノナデカン酸）（Ｃ１９一塩基酸）、ノナデカン二酸（Ｃ１９二塩基酸）、アラカジン酸（エイコサン酸）（Ｃ２０一塩基酸）、エイコサン二酸（Ｃ２０二塩基酸）、ヘンイコシル酸（ヘンエイコサン酸）（Ｃ２１一塩基酸）、ヘンエイコサン二酸（Ｃ２１二塩基酸）、ベヘン酸（ドコサン酸）（Ｃ２２）、ドコサン二酸（Ｃ２２二塩基酸）、リグノセリン酸（テトラコサン酸）（Ｃ２４一塩基酸）、及びテトラコサン二酸（Ｃ２４二塩基酸）（これらの分岐または置換誘導体を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0110】

本発明の化合物の好ましい態様において、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸は、飽和Ｃ１４一塩基酸、飽和Ｃ１４二塩基酸、飽和Ｃ１６一塩基酸、飽和Ｃ１６二塩基酸、飽和Ｃ１８一塩基酸、飽和Ｃ１８二塩基酸、飽和Ｃ１９二塩基酸、飽和Ｃ２０一塩基酸、飽和Ｃ２０二塩基酸、飽和Ｃ２２二塩基酸、ならびにこれらの分岐及び置換誘導体からなる群から選択される。

【0111】

本発明の化合物のより好ましい態様において、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸は、ミリスチン酸、テトラデカン二酸、パルミチン酸、ヘキサデカン二酸、ステアリン酸、オクタデカン二酸、ノナデカン二酸、アラカジン酸、エイコサン二酸、及びドコサン二酸からなる群から選択される。

【0112】

好ましくは、Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸は、オクタデカン二酸またはエイコサン二酸である。

【0113】

本発明者らは、脂肪酸の位置が、所望されるＧｃｇ−Ｒ／ＧＬＰ−１−Ｒ共アゴニスト活性の比率を有する化合物を達成する上で非常に重要であることを見出した。脂肪酸の長さ及び組成は、化合物の血漿半減期、インビボ動物モデルにおける化合物の効力に影響を与え、化合物の溶解度及び安定性にもまた影響を与える。配列番号２で定義されるペプチドの、Ｃ１４−Ｃ２４飽和脂肪一塩基酸または二塩基酸への結合は、望ましい血漿半減期、インビボ動物モデルにおける望ましい効力を呈し、所望される溶解度及び安定性特徴も持つ、化合物をもたらす。ミリスチン酸テトラデカン二酸、パルミチン酸、ヘキサデカン二酸、ステアリン酸、オクタデカン二酸、ノナデカン二酸、アラカジン酸、エイコサン二酸、及びドコサン二酸は、特に好ましい脂肪酸である。

【0114】

特に、２０位のリジン残基の配列番号２で定義されるペプチドと、オクタデカン二酸またはエイコサン二酸との結合は、（ｉ）所望されるＧｃｇ−Ｒ／ＧＬＰ−１−Ｒ共アゴニスト活性の比率を達成することができ、（ｉｉ）インビボ動物モデルにおいて効力を改善することができ、かつ／または（ｉｉｉ）物理的安定性及び溶解度特徴を改善することができる、化合物をもたらす。

【0115】

本発明の化合物は、好ましくは、非経口経路（例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、または経皮）によって投与される医薬組成物として製剤化される。

【0116】

本発明の化合物は、典型的には、非経口投与されるだろう。非経口投与としては、例えば、筋肉内、静脈内、皮下、皮内、または腹腔内注射などの全身投与が挙げられる。好ましい投与経路は、皮下注射である。本発明の化合物は、２型糖尿病、肥満、ＮＡＦＬＤ、及び／またはＮＡＳＨを治療するための医薬組成物の一部として、許容される薬学的担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて対象に投与される。医薬組成物は、本発明の化合物が、亜鉛などの二価金属カチオンと錯体化されるものなどの、溶液または懸濁液であってもよい。本発明の化合物はまた、凍結乾燥または噴霧乾燥などによって固体製剤に製剤化されてもよく、これがその後、投与前に好適な希釈剤溶液中で再構成される。好適な薬学的担体は、ペプチドまたはペプチド誘導体と相互作用しない不活性成分を含有し得る。非経口投与に好適な薬学的担体としては、例えば、滅菌水、生理食塩水、静菌食塩水（約０．９％ｍｇ／ｍｌのベンジルアルコールを含有する食塩水）、リン酸緩衝食塩水、ハンクス液、及び乳酸リンゲル液などが挙げられる。好適な賦形剤のいくつかの例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、トレハロース、ソルビトール、及びマンニトール、ならびにフェノール及びｍ−クレゾールなどの保存剤が挙げられる。

【0117】

Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｄ．Ｂ．Ｔｒｏｙ，Ｅｄｉｔｏｒ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００６）に記載されるものなどの標準薬学的製剤技術が、用いられてもよい。あるいは、本発明の化合物は、頬側、経口、経皮、経鼻、または肺を通した投与のために製剤化されてもよい。

【0118】

本発明の化合物は、いくつかの無機及び有機酸のうちのいずれとも反応して、薬学的に許容される酸付加塩を形成し得る。薬学的に許容される塩及びそれらを調製するための一般的な方法論は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌ，ｅｔ ａｌ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ，２ｎｄ Ｒｅｖｉｓｅｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２０１１）を参照されたい。本発明の薬学的に許容される塩としては、トリフルオロ酢酸塩、塩酸塩、及び酢酸塩が挙げられる。

【0119】

本発明の化合物を、糖尿病、特に２型糖尿病の治療に用いてもよい。本発明の化合物による治療から恩恵を受け得る追加の対象としては、耐糖能障害または空腹時血糖異常を有する者、体重がその対象の身長及び体格にとっての標準体重を約２５％以上上回る対象、１人以上の２型糖尿病を有する親を有する対象、妊娠糖尿病を有したことのある対象、ならびに内在性インスリン分泌の低下から生じるものなどの代謝障害を有する対象が挙げられる。本発明の化合物は、耐糖能障害を有する対象が２型糖尿病の発症へと進むのを予防するため、膵臓β細胞変質を予防するため、β細胞増殖を引き起こすため、β細胞機能を改善するため、休止β細胞を活性化するため、β細胞への細胞の分化を促進するため、β細胞複製を刺激するため、及びβ細胞アポトーシスを阻害するために使用することができる。本発明の方法において、本発明の化合物を使用して治療または予防することができる他の疾患及び病態としては、若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）（Ｈｅｒｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ４３：４０，１９９４）、成人潜在性自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）（Ｚｉｍｍｅｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｍｅｄ．１１：２９９，１９９４）、耐糖能障害（ＩＧＴ）（Ｅｘｐｅｒｔ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｍｅｌｌｉｔｕｓ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ２２（Ｓｕｐｐ． １）：Ｓ５，１９９９）、空腹時血糖異常（ＩＦＧ）（Ｃｈａｒｌｅｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ４０：７９６，１９９１）、妊娠糖尿病（Ｍｅｔｚｇｅｒ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，４０：１９７，１９９１）、代謝Ｘ症候群、脂質異常症、高血糖症、高インスリン血症、高トリグリセライド血症、及びインスリン耐性が挙げられる。

【0120】

本発明の化合物はまた、本発明の方法において、糖尿病の二次的原因の治療にも使用することができる（Ｅｘｐｅｒｔ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｍｅｌｌｉｔｕｓ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ２２（Ｓｕｐｐ． ｌ）：Ｓ５，１９９９）。そのような二次的原因としては、グルココルチコイド過多、成長ホルモン過多、褐色細胞腫、及び薬物性糖尿病が挙げられる。糖尿病を引き起こし得る薬物としては、ピリミニル、ニコチン酸、グルココルチコイド、フェニトイン、甲状腺ホルモン、β−アドレナリン系薬剤、α−インターフェロン、及びＨＩＶ感染の治療に使用される薬物が挙げられるが、これらに限定されない。

【0121】

本発明の化合物は、食物摂取の抑制及び肥満の治療に有効であり得る。

【0122】

「有効量」の本発明の化合物は、対象への投与時に許容できない副作用を引き起こすことなく、所望される治療的及び／または予防的効果をもたらす量である。「所望される治療的効果」は、以下、１）疾患または病態に関連する症状（複数可）の寛解、２）疾患または病態に関連する症状の発症の遅延、３）治療不在時と比較した寿命の延長、及び４）治療不在時と比較したより大きな生活の質のうちの１つ以上を含む。例えば、Ｔ２Ｄの治療のための「有効量」の本発明の化合物は、治療不在時よりも大きな血糖濃度の制御をもたらし、それにより、網膜症、神経障害、または腎臓疾患などの糖尿病合併症の発症の遅延をもたらす量である。例えば、耐糖能障害または空腹時血糖異常を有する対象における２型糖尿病の予防のための「有効量」の本発明の化合物は、スルホニル尿素、チアゾリジンジオン、インスリン、及び／またはビスグアニジンなどの抗高血糖薬による治療を必要とする血糖値上昇の発症を、治療不在時と比較して、遅延させる量である。

【0123】

対象に投与される「有効量」の本発明の化合物はまた、疾患の種類及び重症度、ならびに対象の特徴（一般的な健康、年齢、性別、体重、及び薬物に対する耐性など）に依存するだろう。対象の血糖を正常化するのに有効な本発明の化合物の用量は、いくつかの要因に依存し、その中には、対象の性別、体重及び年齢、血糖制御不能の重症度、投与経路及び生物学的利用率、ペプチドの薬物動態プロファイル、効力、ならびに製剤が非限定的に含まれる。

【0124】

本発明の特定の化合物は一般に、幅広い投与量範囲にわたって有効である。例えば、１週間に１回の投薬の投与量は、１人１週間当たり約０．０５〜約３０ｍｇの範囲内であり得る。本発明の特定の化合物は、１日１回投薬されてもよい。加えて、本発明の特定の化合物は、隔週、１週間に１回、または１月に１回投薬されてもよい。

【0125】

「対象」は、哺乳動物、好ましくはヒトであるが、伴侶動物（例えば、イヌ及びネコなど）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、及びウマなど）、ならびに実験動物（例えば、ラット、マウス、及びモルモットなど）を含む動物であってもよい。

【0126】

本明細書で使用される場合、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療すること（ｔｏ ｔｒｅａｔ）」という用語は、既存の症状もしくは障害の進行または重症度を制限、減速、停止、または反転させることを含む。

【0127】

「血漿半減期」という用語は、関連する化合物のうちの半分が血漿から排除されるのに必要とされる時間を指す。代替的に使用される用語は、「排出半減期」である。血漿半減期または排出半減期の文脈において使用される、「伸張した」または「より長い」という用語は、同等の条件下で決定される、基準分子（例えば、ペプチド、野生型ヒトＯＸＭ、またはセマグルチドの非脂肪酸結合形態）の半減期と比較して、本発明の化合物の半減期の有意な増加が存在することを示す。

【0128】

クリアランスは、薬物を循環から排除する身体の能力の尺度である。例えば、薬物に対する修飾のためにクリアランスが低下するにつれて、半減期は増加することが予想されるだろう。しかしながら、この相反関係は、分布容積が変化しない場合にのみ正確である。末端対数−線形半減期（Ｔ_１／２）と、クリアランス（Ｃ）と、分布容積（Ｖ）との間の有用なおよその関係は、等式：Ｔ_１／２≒０．６９３（Ｖ／Ｃ）によって得られる。クリアランスは、どれほどの薬物が除去されているかは示さないが、むしろ、排出を説明するために薬物が完全になくならなくてはならない血液または血漿などの生物流体の容積を示す。クリアランスは、時間単位当たりの容積として表される。

【0129】

本明細書で使用される場合、「親水性」という用語は、水分を容易に吸収し、水と容易に相互作用する強極性基を有することができる特性を指す。

【0130】

本明細書で使用される場合、「セマグルチド」は、ペプチド主鎖及びＣＡＳ登録番号９１０４６３−６８−２に見出される全体的な化合物構造を有する、化学合成されたＧＬＰ−１類似体を指す。

【0131】

本発明のアミノ酸配列は、２０個の天然に存在するアミノ酸の標準的な１文字または３文字のコードを含有する。加えて、「Ａｉｂ」は、アルファアミノイソ酪酸であり、「Ａｂｕ」は、アミノ酪酸であり、「Ｏｒｎ」は、オルニチンであり、「Ｓａｒ」は、サルコシンである。

【0132】

本明細書で使用される場合、「Ｃ末端アミノ酸」という用語は、遊離カルボキシル基を含有するペプチドの配列中の最後のアミノ酸を指す。本発明の化合物のＣ末端アミノ酸は、３４位のＧｌｙである。

【0133】

本発明はまた、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩の合成に有用な、新規の中間体及び方法も包含する。本発明の中間体及び化合物は、当該技術分野において既知である様々な手順によって調製することができる。特に、化学合成を使用する方法が、以下の実施形態で説明される。記載される経路のそれぞれのための具体的な合成ステップが、本発明の化合物、またはその塩を調製するために、異なる方法で組み合わされてもよい。試薬及び出発材料は、当業者にとって容易に入手可能である。これらの実施形態は、決して本発明の範囲を制限することが意図されないことが理解される。

【0134】

実施例１
ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＥＧＧＰＳＳＧ
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＫは、Ｋの側鎖のε−アミノ基と（［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２−（γＧｌｕ）_１−ＣＯ−（ＣＨ_２）_１６−ＣＯ_２Ｈとの結合を通して化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端一級アミドとしてアミド化されている（配列番号５））。

【化8】

【0135】

上記の図は、残基Ａｉｂ２及びＫ２０のアミノ酸の構造が拡張されているこれらの残基を除いて、標準的な１文字のアミノ酸コードを使用して、配列番号５の化合物（以下「化合物１」と呼ぶ）の構造を描写する。

【0136】

化合物１のペプチド構成成分は、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ１２チャネル多重ペプチド合成機（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）によって、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）／ｔｅｒｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）の化学構造を使用して、自動化固相合成によって合成される。

【0137】

合成樹脂は、０．３〜０．４ｍｅｑ／ｇの置換での、１％のＤＶＢ架橋ポリスチレン（Ｆｍｏｃ−Ｒｉｎｋ−ＭＢＨＡ Ｌｏｗ Ｌｏａｄｉｎｇ樹脂、１００−２００メッシュ、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｔｅｍｅｃｕｌａ，ＣＡ）からなる。標準側鎖保護基は、次の通り、Ｔｒｐ及びＬｙｓに関しては、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）；Ａｓｐ及びＧｌｕに関しては、ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＯｔＢｕ）；Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、及びＴｙｒに関しては、ｔＢｕ；ならびにＧｌｎに関しては、トリフェニルメチル（Ｔｒｔ）であり、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−ε−４−メチルトリチル−Ｌ−リジン（Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨ）を、配列番号３の２０位のリジンに使用し、Ｎ_α，Ｎ_（ｉｍ）−ジ−Ｂｏｃ−Ｌ−ヒスチジン（Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ）を、１位のヒスチジンに使用した。各カップリングステップ（２回×７分間）前に、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％のピペリジンを使用して、Ｆｍｏｃ基を除去した。等しいモル比のＦｍｏｃアミノ酸（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｔｅｍｅｃｕｌａ，ＣＡ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、及びＯｘｙｍａ（Ｏｘｙｍａ Ｐｕｒｅ，Ｉｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｍａｒｋｔｒｅｄｗｉｔｚ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、理論的ペプチド負荷を９倍のモル過剰で、かつＤＭＦ中０．１８Ｍの最終濃度で、全ての標準的アミノ酸カップリングを１時間実行した。

【0138】

２つの例外は、二重カップリング（２回×１時間）されている配列番号５の３位のグルタミン残基、及びＯｘｙｍａの代わりに１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）を使用して、６倍のモル過剰で１８時間カップリングした配列番号５の１位のヒスチジン残基である。直鎖ペプチドの合成の完了後、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）コック（Ｂｉｏｔａｇｅ，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅ，ＮＣ）を備えた、２５ｍＬの使い捨てフリット状ポリプロピレンシリンジ（Ｔｏｒｖｉｑ，Ｎｉｌｅｓ，ＭＩ）に樹脂を移し、ＤＣＭ中の２０％のヘキサフルオロイソプロパノール（Ｏａｋｗｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｗｅｓｔ Ｃｏｌｕｍｂｉａ，ＳＣ）による３回（２回×１０分間及び１回×４５分間）の処理を使用して、配列番号５の２０位のリジン上の４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）保護基をペプチド樹脂から選択的に除去して、２０位のリジンの遊離εアミンを曝露し、それを更なる反応に利用可能にした。

【0139】

［２−（２−（Ｆｍｏｃ−アミノ）エトキシ）エトキシ］酢酸（Ｆｍｏｃ−ＡＥＥＡ−ＯＨ）（ＣｈｅｍＰｅｐ，Ｉｎｃ．Ｗｅｌｌｉｎｇｔｏｎ，ＦＬ、３時間のカップリング時間について、３倍の過剰のアミノ酸（ＡＡ）：１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム−３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）［１：１：５ｍｏｌ／ｍｏｌ］）の２回の連続カップリングを実行し、その後、Ｆｍｏｃ−グルタミン酸α−ｔ−ブチルエステル（Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ）（Ａｒｋ Ｐｈａｒｍ，Ｉｎｃ．Ｌｉｂｅｒｔｙｖｉｌｌｅ ＩＬ、３時間のカップリング時間について、３倍の過剰のＡＡ：ＨＡＴＵ：ＤＩＰＥＡ［１：１：５ｍｏｌ／ｍｏｌ］）をカップリングすることによって、脂肪酸−リンカー部分の後続の結合を達成する。いずれの場合も、Ｆｍｏｃ部分は、上述のように除去される。最後に、モノ−ＯｔＢｕ−オクタデカン二酸（ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃ，Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）を、３倍の過剰の酸：ＨＡＴＵ：ＤＩＰＥＡ（１：１：５ｍｏｌ／ｍｏｌ）を使用して、樹脂に１８時間にわたってカップリングする。

【0140】

合成が完了した後、ペプチド樹脂を、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ジエチルエーテルで洗浄し、シリンジに５分間真空吸引を適用することによって完全に空気乾燥させる。乾燥樹脂を、切断カクテル（トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）：アニソール：水：トリイソプロピルシラン、８８：５：５：２ｖ／ｖ）によって室温で２時間処理して、ペプチドを固体支持体から遊離させ、全ての側鎖保護基を除去する。樹脂を濾過して取り除き、未希釈のＴＦＡで２回洗浄し、合わせた濾液を低温ジエチルエーテルで処理して、粗ペプチドを沈殿させる。その後、ペプチド／エーテル懸濁液を４０００ｒｐｍで遠心分離して固体ペレットを形成し、上清を傾瀉し、固体ペレットをエーテルで更に２回粉砕し、真空中で乾燥させる。粗ペプチドを２０％のアセトニトリル／水中で可溶化し、３つの異なる緩衝系を使用して、アセトニトリル及び水の直線勾配を有するＣ８分取カラム（Ｌｕｎａ２１×２５０ｍｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）により、ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製する。
１）水中０．１Ｍの酢酸アンモニウム、ｐＨ５．０、
２）水中０．１％のＴＦＡ、及び
３）水中５％の酢酸

【0141】

最終主要生成物プールの後続の凍結乾燥は、凍結乾燥されたペプチド酢酸塩をもたらす。

【0142】

本質的に上述のように実行した合成において、化合物１の純度は、分析的ＲＰ−ＨＰＬＣを使用して評価され、９７％超であると見出される。

【0143】

分析的エレクトロスプレーＭＳによって、分子量を決定する。化合物１の分子量は、４５３５．０ダルトンであると計算される一方で、観察された畳み込みを解いた平均分子量は、４５３５．０ダルトンであると決定され、以下のイオンが観察された。１５１２．３（Ｍ＋３Ｈ）、１１３４．３（Ｍ＋４Ｈ）、９０８（Ｍ＋５Ｈ）。

【0144】

実施例２
ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＥＧＧＰＳＳＧ
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＫは、Ｋの側鎖のε−アミノ基と（［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２−（γＧｌｕ）_１−ＣＯ−（ＣＨ_２）_１８−ＣＯ_２Ｈとの結合を通して化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端一級アミドとしてアミド化されている（配列番号６））。

【化9】

【0145】

上記の図は、残基Ａｉｂ２及びＫ２０のアミノ酸の構造が拡張されているこれらの残基を除いて、標準的な１文字のアミノ酸コードを使用して、配列番号６の化合物（以下「化合物２」と呼ぶ）の構造を描写する。

【0146】

実施例１のようにモノ−ＯｔＢｕ−オクタデカン二酸ではなく、３倍の過剰のＡＡ：ＨＡＴＵ：ＤＩＰＥＡ（１：１：５ｍｏｌ／ｍｏｌ）を使用して、モノ−ＯｔＢｕ−エイコサン二酸（ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃ，Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）が樹脂に１８時間にわたってカップリングされることを除いて、実施例１にあるように化合物２を合成する。

【0147】

化合物２の分子量は、４５６３．１ダルトンであると計算される一方で、観察された畳み込みを解いた平均分子量は、４５６２．９ダルトンであると決定され、以下のイオンが観察された。１５２１．７（Ｍ＋３Ｈ）、１１４１．３（Ｍ＋４Ｈ）、９１３．５（Ｍ＋５Ｈ）。

【0148】

実施例３
ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＳＧＧＰＳＳＧ
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＫは、Ｋの側鎖のε−アミノ基と（［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２−（γＧｌｕ）_２−ＣＯ−（ＣＨ_２）_１６−ＣＯ_２Ｈとの結合を通して化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端一級アミドとしてアミド化されている（配列番号７））。

【化10】

【0149】

上記の図は、残基Ａｉｂ２及びＫ２０のアミノ酸の構造が拡張されているこれらの残基を除いて、標準的な１文字のアミノ酸コードを使用して、配列番号７の化合物（以下「化合物３」と呼ぶ）の構造を描写する。

【0150】

追加のＦｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ部分がリンカー合成サイクルに追加されることを除いて、実施例１にあるように化合物３を合成する。

【0151】

化合物３の分子量は、４６２２．１ダルトンであると計算される一方で、観察された畳み込みを解いた平均分子量は、４６２１．９ダルトンであると決定され、以下のイオンが観察された。１５４１．３（Ｍ＋３Ｈ）、１１５６．２（Ｍ＋４Ｈ）、９２５．２（Ｍ＋５Ｈ）。

【0152】

実施例４
ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＳＧＧＰＳＳＧ
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＫは、Ｋの側鎖のε−アミノ基と（［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２−（γＧｌｕ）_２−ＣＯ−（ＣＨ_２）_１８−ＣＯ_２Ｈとの結合を通して化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端一級アミドとしてアミド化されている（配列番号８））。

【化11】

【0153】

上記の図は、残基Ａｉｂ２及びＫ２０のアミノ酸の構造が拡張されているこれらの残基を除いて、標準的な１文字のアミノ酸コードを使用して、配列番号８の化合物（以下「化合物４」と呼ぶ）の構造を描写する。

【0154】

実施例１で使用されるモノ−ＯｔＢｕ−オクタデカン二酸ではなく、３倍の過剰のＡＡ：ＨＡＴＵ：ＤＩＰＥＡ（１：１：５ｍｏｌ／ｍｏｌ）を使用して、モノ−ＯｔＢｕ−エイコサン二酸（ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃ，Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）が樹脂に１８時間にわたってカップリングされることを除いて、実施例１にあるように化合物４を合成する。加えて、追加のアミノ酸Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ部分がリンカー合成サイクルに追加される。

【0155】

ペプチドの分子量は、４６５０．１ダルトンであると計算される一方で、観察された畳み込みを解いた平均分子量は、４６５０．１ダルトンであると決定され、以下のイオンが観察された。１５５０．７（Ｍ＋３Ｈ）、１１６３．３（Ｍ＋４Ｈ）、９３０．８（Ｍ＋５Ｈ）。

【0156】

物理的特徴
粘度
本発明の化合物の粘度を、以下の設定を有するＲｈｅｏｓｅｎｓｅ ｍＶｒｏｃ Ｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒにおいて測定する。
（ａ）シリンジサイズ： ５００μＬのシリンジ
（ｂ）流量： １００μＬ／分の流量
（ｃ）平均温度： ２５℃
（ｄ）せん断速度： １９３４ｓ−１

【0157】

乾燥粉末（化合物）を量り分け、濁った沈殿物として水に溶解させ、１ＮのＮａＯＨで約ｐＨ８．０に滴定する。溶液を超音波処理し、ペプチドが溶解するまで手でかき混ぜる。試料を滅菌濾過する（０．２２μｍのＰＶＤＦフィルタ）。その後、試料をＵＶ−Ｖｉｓによって分析して、原液濃度を評価する。３回×１０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ８．０）緩衝液中ｍ−クレゾールを使用して、１０ｍＭのＴｒｉｓ＋３ｍｇ／ｍＬのｍ−クレゾール（ｐＨ８．０）中約１０重量ｍｇ／ｍＬのペプチドの最終濃度まで、溶液を最終濃度に希釈する。粘度分析の直前に、試料を０．２２μｍのフィルタを通して濾過した。２５μＬの試料を除去して、分析の前後の濃度をＲＰ−ＨＰＬＣによって検証する。

【0158】

水及び緩衝液対照試料は、各試料が分析される前後に測定する。各試料の分析の間に、機器を（３回×）緩衝液で洗浄する。試料を個々のシリンジに充填し、分析する。システムとの平衡化を可能にするために、第１の測定は最終計算には含めない。その後、試料を３連で分析する（ｎ＝３）。

【0159】

化合物１〜４の粘度を、本質的にこのアッセイに記載されるように測定した。化合物１〜４の粘度データを、表１にまとめる。

【表1】

【0160】

溶解度
本発明の化合物の溶解度を、Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＨＰＬＣ、Ａｇｉｌｅｎｔ１２００ＨＰＬＣ、及びＮａｎｏｄｒｏｐ２０００において測定する。以下のＨＰＬＣカラムを使用する。
（ａ）ＲＰ−ＨＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｓｈｉｅｌｄ Ｃ１８、３．６ｕｍ、４．６×１００ｍｍ
（ｂ）ＨＰＬＣ−ＳＥＣ：Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＴＳＫ２０００_ＳＷＸＬ７．８ｃｍ×３０ｍｍ

【0161】

全てのペプチド濃度を、以下において１０ｍｇ／ｍＬにする。
（ａ）１０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ８．０）＋３ｍｇ／ｍＬのｍ−クレゾール
（ｂ）１０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ８．０）＋３ｍｇ／ｍＬのｍ−クレゾール＋１５０ｍＭのＮａＣｌ
（ｃ）１０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ８．０）＋３ｍｇ／ｍＬの（ｍ−クレゾール）＋０．０２％のＴｗｅｅｎ−２０
（ｄ）ＰＢＳ（ｐＨ７．４）

【0162】

１０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ８．０）中に溶解した５ｍＬの１０ｍｇ／ｍＬのペプチドを、Ａｍｉｃｏｎ−ｕｌｔｒａ３ｋＤａ ＭＷＣＯデバイスを使用して約２０ｍｇ／ｍＬに濃縮する。Ｍｉｌｌｉｖｅｘ０．２２μＭフィルタ（ＰＶＤＦ膜）を使用して、溶液を濾過し、ＮａｎｏＤｒｏｐ分光計によって最終濃度を測定する。この原液を使用して、３×ｍ−クレゾール、１０×ＮａＣｌ、及び１００×Ｔｗｅｅｎ−２０原液を使用して上述の最終状態を製剤化する。５ｍｇ／ｍＬで直接溶解させ、Ａｍｉｃｏｎ−ｕｌｔｒａ３ｋＤａ ＭＷＣＯデバイスを使用して濃縮することによって、１０ｍｇ／ｍＬのＰＢＳ溶液もまた調製する。

【0163】

各溶液を４℃の冷蔵庫内に１週間置き、ＲＰ−ＨＰＬＣによる分析をして濃度を評価し、ＨＰＬＣ−ＳＥＣによる分析をしてＨＭＷ種形成を評価する。分析は、Ｔ−０週目及びＴ−１週目に完了した。

【0164】

化合物１〜４の溶解度を、本質的にこのアッセイに記載されるように測定した。化合物１〜４の溶解度データを、表２（ａ）〜（ｄ）にまとめる。

【表2a】

【表2b】

【表2c】

【表2d】

【0165】

インビトロ機能
組み換えヒトＧｃｇ受容体（ｈＧｃｇ−Ｒ）及びヒトＧＬＰ−１受容体（ｈＧＬＰ−１−Ｒ）への、化合物１〜４の結合親和性
シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）法、及びｈＧｃｇ−ＲまたはｈＧＬＰ−１−Ｒを過剰発現する、２９３ＨＥＫ安定トランスフェクト細胞から調製された膜を使用する、放射性リガンド競合結合アッセイを実行して、化合物１〜４の平衡解離定数（Ｋ_ｉ）を決定した。実験プロトコル及び結果を、以下に記載する。

【0166】

ｈＧＬＰ−１Ｒ結合アッセイ
ＧＬＰ−１受容体結合アッセイは、組み換えｈＧＬＰ−１Ｒを過剰発現する２９３ＨＥＫ細胞から単離した、クローン化ｈＧＬＰ−１−Ｒ（Ｇｒａｚｉａｎｏ ＭＰ，Ｈｅｙ ＰＪ，Ｂｏｒｋｏｗｓｋｉ Ｄ，Ｃｈｉｃｃｈｉ ＧＧ，Ｓｔｒａｄｅｒ ＣＤ，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．１９６（１）：１４１−６，１９９３）を使用する。ｈＧＬＰ−１Ｒ ｃＤＮＡを、発現プラスミドｐｈＤ（Ｔｒａｎｓ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｆｕｌｌｙ ｇａｍｍａ−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ，ａｎ ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ｆａｃｔｏｒ．Ｇｒｉｎｎｅｌｌ，Ｂ．Ｗ．，Ｂｅｒｇ，Ｄ．Ｔ．，Ｗａｌｌｓ，Ｊ．ａｎｄ Ｙａｎ，Ｓ．Ｂ．Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ５：１１８９−１１９２，１９８７）へとサブクローニングする。このプラスミドＤＮＡを、２９３ＨＥＫ細胞へとトランスフェクトし、２００μｇ／ｍＬのハイグロマイシンで選択する。

【0167】

接着培養物に由来する細胞を使用して、粗血漿膜を調製する。５０ｍＭのＴｒｉｓ ＨＣｌ（ｐＨ７．５）及びＲｏｃｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（商標）プロテアーゼ阻害剤（ＥＤＴＡ含有）を含有する低張緩衝液中、細胞を氷上で溶解させる。Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）内筒を備えた、ガラス製Ｐｏｔｔｅｒ−Ｅｌｖｅｈｊｅｍホモジナイザーを使用して、細胞懸濁液を２５回撹乱する。ホモジネートを４℃、１１００×ｇで１０分間遠心分離する。上清を回収し、氷上で貯蔵する一方で、ペレットを低張緩衝液中に再懸濁し、再ホモジナイズする。混合物を１１００×ｇで１０分間遠心分離する。第２の上清を第１の上清と合わせ、３５０００×ｇ、４℃で１時間遠心分離する。プロテアーゼ阻害剤を含有する均質化緩衝液中に膜ペレットを再懸濁し、液体窒素中で急速凍結し、使用するまで−８０℃の冷凍庫内でアリコートとして貯蔵する。

【0168】

ＧＬＰ−１を、Ｉ−１２５−ラクトペルオキシダーゼ手順によって放射ヨウ素標識し、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ（ＮＥＸ３０８）で逆相ＨＰＬＣによって精製する。特異的活性は、２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌである。Ｉ−１２５ ＧＬＰ−１材料中の高プロパノール含有量のために、飽和結合の代わりに相同競合によって、Ｋ_Ｄ決定を実行する。Ｋ_Ｄを１．２４ｎＭであると推定し、試験した全ての化合物のＫ_ｉ値の計算に使用する。

【0169】

小麦胚芽凝集素（ＷＧＡ）ビーズ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を有するシンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）形式を使用して、受容体結合アッセイを実行する。結合緩衝液は、２５ｍＭの４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）（ｐＨ７．４）、２．５ｍＭのＣａＣｌ_２、１ｍＭのＭｇＣｌ_２、０．１％（ｗ／ｖ）のバシトラシン（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）、０．００３％（ｗ／ｖ）のポリエチレンソルビタンモノラウレート（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０）、及びＲｏｃｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（商標）プロテアーゼ阻害剤（無ＥＤＴＡ）を含有する。ＧＬＰ−１をＤＭＳＯ中に０．３３９ｍｇ／ｍＬ（０．１ｍＭ）で溶解させ、１００μＬのアリコートで、−２０℃の凍結状態で貯蔵する。ＧＬＰ−１アリコートを希釈し、１時間以内に結合アッセイに使用する。ペプチド類似体をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解させ、１００％のＤＭＳＯ中で３倍に段階希釈する。次に、４５μＬのアッセイ結合緩衝液または未標識のＧＬＰ−１対照（０．２５μＭ最終で非特異的結合（ＮＳＢ））を含有する、Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）３６３２底部透明アッセイプレートに、５μＬの段階希釈した化合物またはＤＭＳＯを移す。その後、５０μＬのｈＧＬＰ−１Ｒ膜（０．５μｇ／ウェル）、５０μＬのＩ−１２５ ＧＬＰ−１（０．１５ｎＭ最終）、及び５０μＬのＷＧＡビーズ（１５０μｇ／ウェル）を添加し、プレートを密封し、プレートシェーカー（設定６）で１分間混合する。室温で１２時間の設定時間後、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｔｒｉｌｕｘ ＭｉｃｒｏＢｅｔａ（登録商標）シンチレーション計数器でプレートを読み取る。

【0170】

結果を、化合物の存在下での特異的Ｉ−１２５−ＧＬＰ−１結合のパーセントとして計算する。Ｉ−１２５−ＧＬＰ−１の特異的結合パーセント対添加した化合物の濃度の非線形回帰によって、化合物の絶対ＩＣ_５０濃度を導出する。チェン−プルソフ等式（Ｃｈｅｎｇ，Ｙ．，Ｐｒｕｓｏｆｆ，Ｗ．Ｈ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２，３０９９−３１０８，（１９７３））を使用して、ＩＣ_５０濃度をＫ_ｉに変換する。

【0171】

ｈＧＬＰ−１−Ｒでの、化合物１〜４、ヒトＧｃｇ、及びヒトＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ_２のＫ_ｉを、以下の表３に示す。複製の数（ｎ）を括弧内に示す。（＞）の修飾語は、阻害％が５０％に到達せず、Ｋ_ｉの計算値を試験した最高濃度を使用して得ていることを示す。ｎ＝１／ｎは、全ての値が＞の符号を有する場合、平均が計算されず、示される値が最高の計算値であることを示す。

【表3】

【0172】

ｈＧｃｇ−Ｒ結合アッセイ
Ｇｃｇ受容体結合アッセイは、組み換えｈＧｃｇ−Ｒを過剰発現する２９３ＨＥＫ細胞から単離した、クローン化ｈＧｃｇ−Ｒ（Ｌｏｋ，Ｓ，ｅｔ． ａｌ．，Ｇｅｎｅ１４０（２），２０３−２０９（１９９４））を利用する。ｈＧｃｇ−Ｒ ｃＤＮＡを、発現プラスミドｐｈＤ（Ｔｒａｎｓ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｆｕｌｌｙ ｇａｍｍａ−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ，ａｎ ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ｆａｃｔｏｒ．Ｇｒｉｎｎｅｌｌ，Ｂ．Ｗ．，ｅｔ． ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ５：１１８９−１１９２（１９８７））へとサブクローニングする。このプラスミドＤＮＡを、２９３ＨＥＫ細胞へとトランスフェクトし、２００μｇ／ｍＬのハイグロマイシンで選択する。

【0173】

接着培養物に由来する細胞を使用して、粗血漿膜を調製する。５０ｍＭのＴｒｉｓ ＨＣｌ（ｐＨ７．５）及びＲｏｃｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（商標）プロテアーゼ阻害剤（ＥＤＴＡ含有）を含有する低張緩衝液中、細胞を氷上で溶解させる。Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）内筒を備えた、ガラス製Ｐｏｔｔｅｒ−Ｅｌｖｅｈｊｅｍホモジナイザーを使用して、細胞懸濁液を２５回撹乱する。ホモジネートを４℃、１１００×ｇで１０分間遠心分離する。上清を回収し、氷上で貯蔵する一方で、ペレットを低張緩衝液中に再懸濁し、再ホモジナイズする。混合物を１１００×ｇで１０分間遠心分離する。第２の上清を第１の上清と合わせ、３５０００×ｇ、４℃で１時間遠心分離する。プロテアーゼ阻害剤を含有する均質化緩衝液中に膜ペレットを再懸濁し、液体窒素中で急速凍結し、使用するまで−８０℃の冷凍庫内でアリコートとして貯蔵する。

【0174】

Ｇｃｇを、Ｉ−１２５−ラクトペルオキシダーゼ手順によって放射ヨウ素標識し、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ（ＮＥＸ２０７）で逆相ＨＰＬＣによって精製する。特異的活性は、２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌである。Ｉ−１２５ Ｇｃｇ材料中の高プロパノール含有量のために、飽和結合の代わりに相同競合によって、Ｋ_Ｄ決定を実行する。Ｋ_Ｄを３．９２ｎＭであると推定し、試験した全ての化合物のＫ_ｉ値の計算に使用する。

【0175】

小麦胚芽凝集素（ＷＧＡ）ビーズ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を有するシンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）形式を使用して、受容体結合アッセイを実行する。結合緩衝液は、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、２．５ｍＭのＣａＣｌ_２、１ｍＭのＭｇＣｌ_２、０．１％（ｗ／ｖ）のバシトラシン（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）、０．００３％（ｗ／ｖ）のポリエチレンソルビタンモノラウレート（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０）、及びＲｏｃｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（商標）プロテアーゼ阻害剤（無ＥＤＴＡ）を含有する。ＧｃｇをＤＭＳＯ中に３．４８ｍｇ／ｍＬ（１ｍＭ）で溶解させ、１００μＬのアリコートで、−２０℃の凍結状態で貯蔵する。Ｇｃｇアリコートを希釈し、１時間以内に結合アッセイに使用する。ペプチド類似体をＤＭＳＯ中に溶解させ、１００％のＤＭＳＯ中で３倍に段階希釈する。次に、４５μＬのアッセイ結合緩衝液または未標識のＧｃｇ対照（１μＭ最終でＮＳＢ）を含有する、Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）３６３２底部透明アッセイプレートに、５μＬの段階希釈した化合物またはＤＭＳＯを移す。その後、５０μＬのｈＧｃｇ−Ｒ膜（０．５μｇ／ウェル）、５０μＬのＩ−１２５ Ｇｃｇ（反応中０．１５ｎＭ最終）、及び５０μＬのＷＧＡビーズ（１５０μｇ／ウェル）を添加し、プレートを密封し、プレートシェーカー（設定６）で１分間混合する。室温で１２時間の設定時間後、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｔｒｉｌｕｘ ＭｉｃｒｏＢｅｔａ（登録商標）シンチレーション計数器でプレートを読み取る。

【0176】

結果を、化合物の存在下での特異的Ｉ−１２５−Ｇｃｇ結合のパーセントとして計算する。Ｉ−１２５−Ｇｃｇの特異的結合パーセント対添加した化合物の濃度の非線形回帰によって、化合物の絶対ＩＣ_５０濃度を導出する。チェン−プルソフ等式）Ｃｈｅｎｇ，Ｙ．，Ｐｒｕｓｏｆｆ，Ｗ．Ｈ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２，３０９９−３１０８，（１９７３））を使用して、ＩＣ_５０濃度をＫ_ｉに変換する。 ｈＧｃｇ−Ｒでの、化合物１〜４、ヒトＧｃｇ、及びヒトＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ_２のＫ_ｉを、以下の表４に示す。複製の数（ｎ）を括弧内に示す。（＞）の修飾語は、阻害％が５０％に到達せず、Ｋ_ｉの計算値を試験した最高濃度を使用して得ていることを示す。ｎ＝１／２は、全ての値が＞の符号を有する場合、平均が計算されず、示される結果値が最高の計算値であることを示す。

【表4】

【0177】

機能的ｈＧＬＰ−１−Ｒ及びｈＧｃｇ−Ｒアッセイ
ＨＥＫ−２９３クローン細胞株を発現するｈＧＬＰ−１−Ｒ及びｈＧｃｇ−Ｒにおける、機能的活性を決定する。実験プロトコル及び結果を、以下に記載する。

【0178】

４０μｌのアッセイ容積中、１×ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）（０．８５％のＮａＣｌ中のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンジペプチド、Ｇｉｂｃｏカタログ番号３５０５０）、０．２５％のＦＢＳ（透析ウシ胎仔血清、Ｇｉｂｃｏカタログ番号２６４００）、０．０５％のＦｒａｃｔｉｏｎ Ｖ ＢＳＡ（ウシアルブミンＦｒａｃｔｉｏｎ Ｖ、Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５２６０）、２５０μＭのＩＢＭＸ（３−イソブチル−１−メチルキサンチン）、及び２０ｍＭのＨＥＰＥＳ［Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ′−（２−エタンスルホン酸）、ＨｙＣｌｏｎｅカタログ番号ＳＨ３０２３７．０１］で補助した、ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ、Ｇｉｂｃｏカタログ番号３１０５３）中のペプチドで、細胞株を過剰発現する各受容体を処理する。室温で６０分間のインキュベーション後、結果として得られる細胞内ｃＡＭＰ（アデノシン３’，５’−環状一リン酸）の増加を、ＣｉｓＢｉｏ ｃＡＭＰ Ｄｙｎａｍｉｃ２ＨＴＲＦ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（６２ＡＭ４ＰＥＪ）を使用して定量的に決定する。細胞溶解緩衝液（２０μｌ）中のｃＡＭＰ−ｄ２結合体、その後、これもまた細胞溶解緩衝液（２０μｌ）中の抗体抗ｃＡＭＰ−Ｅｕ^３＋−クリプテートを添加することによって、細胞内のｃＡＭＰレベルを検出する。結果として得られる競合アッセイを、室温で少なくとも６０分間インキュベートし、その後、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（登録商標）機器（３２０ｎｍでの励起ならびに６６５ｎｍ及び６２０ｎｍでの発光）を使用して検出する。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ単位（６６５ｎｍ／６２０ｎｍでの発光＊１０，０００）は存在するｃＡＭＰの量に反比例し、ｃＡＭＰ標準曲線を使用して、これを１ウェル当たりのｎＭ ｃＡＭＰに変換する。各ウェル内で生成したｃＡＭＰの量（ｎＭ）を、１０ｎＭのヒトＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ_２または１０ｎＭのヒトＧｃｇのいずれかについて観察された最大反応のパーセントに変換する。

【0179】

４パラメータロジスティック方程式（Ｇｅｎｅｄａｔａ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ（登録商標））に当てはめた、最大反応パーセント対添加したペプチドの濃度を使用して、非線形回帰分析によって、相対ＥＣ_５０値及び最高パーセント（Ｅ_ｍａｘ）を導出する。

【0180】

化合物１〜４、ヒトＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ_２、ヒトＧｃｇ、及び野生型ヒトＯＸＭの機能的データを、以下の表５に示す。ＥＣ_５０の平均を幾何平均±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表し、複製の数（ｎ）を括弧内に示す。Ｅ_ｍａｘの平均を、加算平均±標準誤差として表す。ＮＤは、アゴニスト活性が検出されなかったことを示す。示される全ての値は、三（３）桁の有効数字までである。

【表5】

【0181】

膵島細胞腺腫細胞株ＩＮＳ１ ８３２−３内のラットＧＬＰ−１−Ｒの機能的活性化
ラット膵臓ベータ細胞株ＩＮＳ１ ８３２−３細胞を使用して、内在性ＧＬＰ−１受容体でｃＡＭＰ生成を刺激することに対する化合物１〜４の機能的活性を決定する。３７℃、５％のＣＯ_２のインキュベーター内で、１０％のウシ胎仔血清、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、２ｍＭのＬ−グルタミン、５０μＭの２−メルカプトエタノール、及び１００Ｕ／ｍｌのペニシリン／１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンで補助した、ＲＰＭＩ１６４０培地（ＨｙＣｌｏｎｅ、カタログ番号ＳＨ３００２７）中で細胞を維持し、１週間に２回通過させる。

【0182】

アッセイの実行には、Ｅｎｚｙｍｅ Ｆｒｅｅ Ｃｅｌｌ Ｓｔｒｉｐｐｅｒを使用して培養フラスコから細胞を脱離させることが必要であり、室温、１０００ｒｐｍで５分間の遠心分離によって、ペレット化する。細胞ペレットを、１１．２ｍＭのグルコース及び０．１％のＢＳＡで補助したアール平衡塩類溶液（ＥＢＳＳ）中に再懸濁する。密度１×１０^６／ｍｌの４０μｌの細胞懸濁液を、９６ウェルの半面積黒色プレート（Ｃｏｓｔａｒ３８７５）上に置き、回収及び飢餓のために、３７℃、５％のＣＯ_２のインキュベーター内で２時間インキュベートする。１００％のＤＭＳＯ中、１００倍の最終試験濃度で試験化合物の段階希釈物を調製し、１１．２ｍＭのグルコース、０．１％のＢＳＡ、及び１．２５ｍＭのＩＢＭＸ（Ｓｉｇｍａ Ｉ−７８１６）で補助したＥＢＳＳ中で、更に２０倍に希釈する。２時間の飢餓の後、１０μｌの５×化合物希釈物を細胞プレート（ｎ＝２）に添加することによって細胞を化合物で処理し、３７℃、５％のＣＯ_２のインキュベーター内で３０分間インキュベートする。

【0183】

ＨＴＲＦ ｃＡＭＰアッセイキット（Ｃｉｓｂｉｏ）を使用してｃＡＭＰ濃度を測定し、細胞溶解緩衝液（２０μｌ）中のｃＡＭＰ−ｄ２結合体、その後、これもまた細胞溶解緩衝液（２０μｌ）中の抗体抗ｃＡＭＰ−Ｅｕ^３＋−クリプテートを、プレートの細胞に添加する。結果として得られる競合アッセイを、室温で少なくとも６０分間インキュベートし、後続して、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（登録商標）機器（３２０ｎｍでの励起ならびに６６５ｎｍ及び６２０ｎｍでの発光）を使用して検出する。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ単位（６６５ｎｍ／６２０ｎｍでの発光＊１０，０００）は存在するｃＡＭＰの量に反比例し、ｃＡＭＰ標準曲線を使用して、これを１ウェル当たりのｎＭ ｃＡＭＰに変換する。

【0184】

ｃＡＭＰ標準曲線を使用して、各ウェル内のｃＡＭＰの濃度（ｎＭ）を計算し、曲線当てはめのために、３００ｎＭで天然ＧＬＰ−１ペプチドについて観察された最大反応のパーセントに変換した。

【0185】

４パラメータロジスティック方程式（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン６．０５）ソフトウェア）に当てはめた、最大反応パーセント対添加したペプチドの濃度を使用して、非線形回帰分析によって、相対ＥＣ_５０値及び最高パーセント（％Ｅ_ｍａｘ）を導出する。アッセイを２連のプレートで実行する。複製の数（ｎ）を括弧内に示す。

【0186】

野生型ヒトＯＸＭ、セマグルチド、ならびに化合物１及び２のＥＣ_５０及び％Ｅ_ｍａｘを、本質的に上述のように計算した。これらの化合物のＥＣ_５０及び％Ｅ_ｍａｘデータを、表６に提供する。更に、化合物１及び２は、用量依存的様式でｃＡＭＰ生成を増加させた（データ示さず）。

【表6】

【0187】

初代ヒト肝細胞内のｈＧｃｇ−Ｒの機能的活性化
初代ヒト肝細胞を使用して、内在性Ｇｃｇ受容体でｃＡＭＰ生成を刺激することに対する化合物の機能的活性を決定する。
ヒト初代肝細胞のバイアルを、液体窒素タンク内で凍結する。取り外し時、３７℃の温度を有する水浴中で直ちにバイアルを解凍する。その後、細胞懸濁液を、５０ｍｌのＣＨＲＭ（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号ＣＭ７０００Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ Ｒｅｃｏｖｅｒｙ Ｍｅｄｉｕｍ）に移す。

【0188】

細胞懸濁液を１，０００×ｇで１０分間遠心分離する。吸引によってＣＨＲＭを除去した後、細胞ペレットを５ｍｌのプレーティング培地中に再懸濁する。ＣＭ３０００Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ Ｐａｃｋｓの全含有物を５００ｍｌのＷｉｌｌｉａｍｓ Ｍｅｄｉａ（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に添加し、その後、０．２２μｍの膜を通して滅菌濾過することによって、プレーティング培地を調製する。

【0189】

細胞密度を血球計数器で計数し、１００μｌの細胞懸濁液を１００μｌのトリパンブルー（ＨｙＣｌｏｎｅ Ｔｒｙｐａｎ Ｂｌｕｅ０．０４％、カタログ番号ＳＶ３００８４．０１）に添加する。細胞懸濁液をプレーティング培地中に更に希釈して、１ｍｌ当たり０．８×１０^６個の細胞の最終細胞密度にする。６５ｍｌのプレーティング培地を、コラーゲンコーティングされた９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ ＢｉｏＣｏａｔ、カタログ番号３５４６４９、ロット番号２２３１４０３３）の各ウェルに添加する。その後、６５ｍｌの細胞懸濁液を、コラーゲンコーティングされた９６ウェルプレートの各ウェルに添加して、１ウェル当たり５０，０００個の細胞の最終細胞密度にする。細胞プレートを、３７℃、５％のＣＯ_２のインキュベーター内で３〜４時間インキュベートする。

【0190】

３〜４時間のインキュベーションの後、培地を吸引し、１００ｍｌの維持培地と交換する。ＣＭ４０００Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ Ｐａｃｋｓの全含有物を５００ｍｌのＷｉｌｌｉａｍｓ Ｍｅｄｉａ（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に添加し、その後、０．２２μｍの膜を通して滅菌濾過することによって、維持培地を調製する。細胞プレートを、ｃＡＭＰアッセイの準備のために、３７℃、５％のＣＯ_２インキュベーターに一晩戻す。

【0191】

アッセイの準備のために、化合物１及び２ならびに野生型ヒトＯＸＭを、１０個の濃度のために、化合物アッセイ緩衝液（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ及び１％の熱失活ＦＢＳを含有するＨＢＳＳ）中で３倍の段階希釈に供する。

【0192】

細胞プレートをインキュベーターから取り外し、穏やかな吸引によって、細胞単層を撹乱することなく培地を除去する。４０μｌの細胞アッセイ緩衝液及び４０μｌの試験溶液（すなわち、化合物アッセイ緩衝液中に希釈された、化合物１、化合物２、または野生型ヒトＯＸＭ）を細胞プレートに添加し、穏やかに撹拌しながら室温で１時間インキュベートすることによって、細胞を処理する。

【0193】

ＨＴＲＦ ｃＡＭＰアッセイキット（Ｃｉｓｂｉｏ）を使用してｃＡＭＰ濃度を測定し、細胞溶解緩衝液（４０μｌ）中のｃＡＭＰ−ｄ２結合体、その後、これもまた細胞溶解緩衝液（４０μｌ）中の抗体抗ｃＡＭＰ−Ｅｕ^３＋−クリプテートを、プレートの細胞に添加する。結果として得られる競合アッセイを、室温で少なくとも６０分間インキュベートし、その後、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（登録商標）機器（３２０ｎｍでの励起ならびに６６５ｎｍ及び６２０ｎｍでの発光）を使用して検出する。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ単位（６６５ｎｍ／６２０ｎｍでの発光＊１０，０００）は存在するｃＡＭＰの量に反比例し、ｃＡＭＰ標準曲線を使用して、これを１ウェル当たりのｎＭ ｃＡＭＰに変換する。

【0194】

ｃＡＭＰ標準曲線を使用して、各ウェル内のｃＡＭＰの濃度（ｎＭ）を計算し、曲線当てはめのために、飽和Ｃ１８脂肪酸（二塩基酸）に結合しているＧｃｇ類似体について観察された最大反応のパーセントに変換する。

【0195】

４パラメータロジスティック方程式（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン６．０５）ソフトウェア）に当てはめた、最大反応パーセント対添加したペプチドの濃度を使用して、非線形回帰分析によって、相対ＥＣ_５０値及び最高パーセント（％Ｅ_ｍａｘ）を導出する。

【0196】

化合物１及び２、ならびに野生型ヒトＯＸＭのＥＣ_５０及び％Ｅ_ｍａｘを、本質的に上述のように計算した。これらの化合物のＥＣ_５０及び％Ｅ_ｍａｘデータを、表７に提供する。更に、化合物１及び２は、用量依存的様式でｃＡＭＰ生成を増加させた（データ示さず）。複製の数（ｎ）を括弧内に示す。

【表7】

【0197】

薬物動態
カニクイザルにおける薬物動態
本発明の化合物のインビボ薬物動態特性を、カニクイザルを使用して実証する。

【0198】

５０ｎｍｏｌｅ／ｋｇまたは２５０ｎｍｏｌｅ／ｋｇの単回静脈内または皮下用量によって、化合物を投与する。投与量の４、８、１２、２４、４８、７２、９６、１２０、１４４、１６８、１９２、２４０、２８８、２０８、４８０、５７６、及び６７２時間後に、各動物から血液を回収する。

【0199】

ＬＣ／ＭＳ法によって、化合物の血漿濃度を決定する。簡潔には、アセトニトリルを使用して、１００％のサル血漿（２５μｌ）から本発明の化合物を抽出する。化合物を液体層内に配置して遠心分離すると、２つの異なる層が形成される。８０μｌのアリコートの上清を９６ウェルプレートに移し、１５０μｌの水及び２５μｌのギ酸で希釈した。希釈した試料（１０μｌ）を、Ｓｕｐｅｌｃｏ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＢＩＯ Ｗｉｄｅ Ｐｏｒｅ Ｃ５−３（５ｃｍ×１ｍｍ、３μｍカラム）上に注射した。カラム流出液を、検出及び定量化のためにＴｈｅｒｍｏ Ｑ−Ｅｘａｃｔｉｖｅ質量分析計へと配向する。

【0200】

このアッセイについて本質的に上述のように実行した実験において、カニクイザルに、０．２０ｍＬ／ｋｇの容積で、４０ｍＭのＴｒｉｓ ＨＣｌ（ｐＨ８．０）中の単回皮下（５０ｎｍｏｌｅ／ｋｇ）用量の化合物１を投与した。用量の２（静脈内のみ）、７、１２、２４、４８、７２、９６、１２０、１６８、１９２、２４０、３３６、４８０、５７６、及び６７２時間後に、各動物から血液を回収した。

【0201】

他のカニクイザルに、０．２０ｍＬ／ｋｇの容積で、４０ｍＭのＴｒｉｓ ＨＣｌ（ｐＨ８．０）中の単回静脈内（５０ｎｍｏｌｅ／ｋｇ）または皮下（５０もしくは２５０ｎｍｏｌｅ／ｋｇ）用量の化合物２を投与した。用量の２（静脈内のみ）、７、１２、２４、４８、７２、９６、１２０、１６８、１９２、２４０、３３６、４８０、５７６、及び６７２時間後に、各動物から血液を回収した。

【0202】

化合物１のデータを表９に提供し、化合物２のデータを表１０に提供する。

【0203】

化合物１は、５０ｎｍｏｌ／ｋｇの皮下用量の約１２時間後に、平均最高血漿濃度に到達した。平均半減期は５７時間であり、平均クリアランスは２．１６ｍＬ／時／ｋｇである（表８）。

【0204】

化合物２は、５０ｎｍｏｌ／ｋｇの皮下用量の約２４時間後に、平均最高血漿濃度に到達した。平均半減期は１２２時間であり、平均クリアランスは０．５５ｍＬ／時／ｋｇである（表９）。

【表8】

【表9】

【0205】

インビボ研究
ＤＩＯマウスにおける経口グルコース耐性試験（ＯＧＴＴ）
食事性肥満（ＤＩＯ）マウスモデルは、インスリン耐性のモデルである。Ｔａｃｏｎｉｃ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓからの生後５〜６ヶ月の雄のＤＩＯマウス（Ｃ５７ＢＬ／６）を、この研究に使用する。１２時間の明／暗サイクル（光は０６：００点灯）ならびに食餌及び水の自由摂取を有する、温度制御（２４℃）した施設内に、動物を個々に収容する。施設に対する順化期間は、２週間である。研究の前日、動物を、それらの体重に基づいて無作為に群に分ける。同日の午後、清潔なケージ内で動物を絶食させ、ビヒクル（４０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０）または試験物品を皮下注射によって投薬する。翌朝、ペプチド注射の１６時間後、絶食体重を得て、グルコース用量を計算する。血液試料を取得して、ゼログルコース時間を測定する。その後、動物にグルコースの経口胃管栄養（２ｇ／ｋｇ）を与える。経口グルコースの１５、３０、６０、及び１２０分後、血糖計を介して２回のグルコース読み取りを得た。２回のグルコース読み取りの平均を各時点で報告し、曲線下面積を計算する。ＪＭＰ６によるダネット比較を有するＡＮＯＶＡを使用して、統計を分析し、有意性をｐ≦０．０５でビヒクルに対して表す。

【0206】

このアッセイにおいて本質的に上述のように実行した実験において、化合物２は、耐性試験中、グルコースの用量依存的低下を示し、グルコースＡＵＣは、試験した３つ全ての用量（１、３、及び１０ｎｍｏｌ／ｋｇ）で低下した（表１０）。

【表10】

【0207】

ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）で治療したＤＩＯマウスにおけるＯＧＴＴ
ＳＴＺで治療したマウスモデルは、初期糖尿病のモデルである。Ｔａｃｏｎｉｃ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓからの生後５〜６ヶ月の雄のＤＩＯマウス（Ｃ５７ＢＬ／６）を、この研究に使用する。１２時間の明／暗サイクル（光は６：００点灯）ならびに食餌及び水の自由摂取を有する、温度制御（２４℃）した施設内に、動物を個々に収容する。２週間の施設に対する順化後、火曜日及び金曜日に、マウスに５０ｍｇ／ｋｇのＳＴＺを腹腔内注射する。注射の２週間後、０９：００に１８０〜３００ｍｇ／ｄＬのグルコースレベルを有する動物を、ＯＧＴＴ研究のために選択する。研究の前日、動物を、体重及びそれらのグルコースレベルに基づいて無作為に群に分ける。食餌除去の直前（１６：００）に、動物にビヒクルまたは試験物品を皮下注射によって注射する。翌朝０８：００に、化合物注射の１６時間後、血液試料を取得して、ゼログルコース時間を測定する。動物に２ｇ／ｋｇのグルコースの経口用量を与える。経口グルコース負荷の１５、３０、６０、及び１２０分後、グルコースを測定する。ＪＭＰ６によるダネット比較を有するＡＮＯＶＡを使用して、統計を分析する。有意性をｐ≦０．０５でビヒクルに対して表す。

【0208】

このアッセイにおいて本質的に上述のように実行した実験において、化合物２は、耐性試験中、グルコース変動の用量依存的低下を示した。グルコースＡＵＣは、試験した３つ全ての用量（１、３、及び１０ｎｍｏｌ／ｋｇ）で低下した（表１１）。

【表11】

【0209】

ＤＩＯマウスにおける血糖制御
Ｔａｃｏｎｉｃ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓからの生後５〜６ヶ月の雄のＤＩＯマウス（Ｃ５７ＢＬ／６）を、この研究に使用する。１２時間の明／暗サイクル（光は６：００点灯）ならびに食餌及び水の自由摂取を有する、温度制御（２４℃）した施設内に、動物を個々に収容する。２週間の施設に対する順化後、マウスを、それらの体重及び血糖に基づいて無作為に治療群に分ける（ｎ＝７／群）。マウスに、ビヒクルまたは化合物（２５ｎｍｏｌ／ｋｇ）を一度皮下注射する。注射の２及び８時間後、ならびにその後４日間、１日１回０８：００に血糖を監視する。ペプチド注射の４４及び７８時間後、ＯＧＴＴを実行する。ＪＭＰ６によるダネット比較を有するＡＮＯＶＡを使用して、統計を分析する。有意性をｐ≦０．０５でビヒクルに対して表す。

【0210】

このアッセイにおいて本質的に上述のように実行した実験において、化合物２及び化合物４で治療したマウスは、最大注射の９６時間後まで、ビヒクル対照よりも低いグルコースを有した。化合物２及び化合物４で治療したマウスは、ＯＧＴＴを実行した場合、経口グルコース負荷後の両方の時点で、より低いグルコース変動を有した。

【0211】

化合物１及び化合物３は、最大７２時間血糖を低下させた（表１２）。化合物１及び化合物３で治療したマウスは、経口グルコース負荷後、ペプチド注射の４４時間後に、より低いグルコース変動を有した（表１３）。

【表12】

【表13】

【0212】

ＤＩＯマウスにおける慢性治療
ＤＩＯマウスにおいて、食物摂取及び体重／体脂肪に対する影響を評価する。Ｔａｃｏｎｉｃ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓからの生後５〜６ヶ月のＤＩＯマウス（Ｃ５７ＢＬ／６）を、この研究に使用する。１２時間の明／暗サイクル（光は６：００点灯）ならびに食餌及び水の自由摂取を有する、温度制御（２４℃）した施設内に、動物を個々に収容する。マウスを施設に２週間順化させる。研究開始の前日、Ｅｃｈｏ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）機器を使用して、核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって体脂肪量を測定する。マウスを、それらの体重及び体脂肪量に基づいて無作為に治療群に分けて、各群が類似した開始平均体重及び体脂肪量を有するようにする（Ｎ＝７／群）。１５日間３日に１回、８〜１０ａｍの間に、自由摂取マウスに、ビヒクル（４０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０）、試験化合物、または陽性対照セマグルチドを皮下（ＳＣ）注射によって投与する。１、４、７、１０、及び１３日目に皮下注射を行う。研究を通して、各注射の直前に体重及び食物摂取を測定する。体重の変化パーセントを以下のように計算する。

【数1】

【0213】

研究の完了時、ＮＭＲによって総体脂肪量を再度測定する。ＪＭＰ６によるダネット比較を有するＡＮＯＶＡを使用して、統計を分析する。有意性をｐ≦０．０５でビヒクルに対して表す。

【0214】

このアッセイにおいて本質的に上述のように実行した実験において、以下の表１４に示されるように、化合物１〜４は、食物摂取及び体重／体脂肪を減少させる。

【表14】

【0215】

ＤＩＯマウスにおける急性治療
体重減少とは独立して、本発明の化合物の治療に関与する代謝経路を調査するために、ＤＩＯマウス（Ｃ５７ＢＬ／６）において化合物を急性的に試験する。使用したマウスは、生後３〜４ヶ月であり、少なくとも４週間高脂肪食を与えている。１２時間の明／暗サイクル（光は６：００点灯）ならびに食餌及び水の自由摂取を有する、温度制御（２４℃）した施設内に、動物を個々に収容する。研究の前日の１６：００に、マウスにビヒクルまたは試験化合物を皮下注射によって投与した。１６時間後に動物を屠殺して、心臓穿刺を介して血液を回収した。ＪＭＰ６のダネット比較を有するＡＮＯＶＡを使用して、統計を分析する。有意性をｐ≦０．０５でビヒクルに対して表す。

【0216】

このアッセイにおいて本質的に上述のように実行した実験において、化合物１〜３は、表１５に示されるように、血清コレステロール及びＰＣＳＫ９レベルを低下させ、ＦＧＦ−２１レベルを増加させる。対照的に、セマグルチドでの治療は、血清コレステロール及びＰＣＳＫ９レベルを低下させず、ＦＧＦ−２１レベルを増加させる。食物摂取は、全ての治療群において類似したレベルまで低下し、これは、コレステロール、ＰＣＳＫ９、及びＦＧＦ−２１の変化が食物摂取とは独立していることを示し得る。

【表15】

【0217】

ＤＩＯマウスにおけるエネルギー消費に対する影響
この研究において、４５〜５０ｇの体重の、生後７〜８ヶ月の雄のＤＩＯマウス（Ｃ５７ＢＬ／６）を使用して、エネルギー代謝に対する本発明の化合物の影響を評価する。１２時間の明／暗サイクル（光は２２：００点灯）ならびに食餌（ＴＤ９５２１７）（Ｔｅｋｌａｄ）及び水の自由摂取を有する、温度制御（２４℃）した施設内に、動物を個々に収容する。２週間の施設に対する順化後、マウスを、体重に基づいて無作為に治療群に分けて、各群が類似した開始平均体重を有するようにする（Ｎ＝６／群）。８日間の順化の間、動物をＰｈｅｎｏＭａｓｔｅｒ／ＬａｂＭａｓｔｅｒ熱量計（ＴＳＥ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｃｈｅｓｔｅｒｆｉｅｌｄ，ＭＯ）内に置く。１５日間３日に１回、暗サイクルの開始の３０〜９０分前に、ビヒクル（４０ｍＭのＴｒｉｓ ＨＣｌ緩衝液、ｐＨ８．０、１０ｍｌ／ｋｇ）、試験物品（１５ｎｍｏｌ／ｋｇ）、またはセマグルチド（６０ｎｍｏｌ／ｋｇ）を、自由摂食ＤＩＯマウスに皮下投与する。

【0218】

記載される間接熱量測定によって、開回路熱量測定システムを使用して熱及び呼吸商（ＲＥＲ）を測定する。ＲＥＲは、生成したＣＯ_２の容積（ＶＣＯ_２）対消費されたＯ_２（ＶＯ_２）の容積の比率である。除脂肪体重を考慮して、熱を計算する。エネルギー消費は、ｋｃａｌ／ｋｇ／３日であり、１群当たり６匹のマウスの平均±平均値の標準誤差として表される。二元配置ＡＮＯＶＡ、その後、チューキー多重比較試験によって、統計学的有意性を評価する。

【0219】

このアッセイにおいて本質的に上述のように実行した実験において、化合物１及び２で治療したマウスは、２週目からそれらの代謝率が増加し始め、表１６に示される治療期間を通して効果を維持した。しかしながら、セマグルチドは、代謝率には影響を有さなかった。この代謝率の増加は、セマグルチドの投与と比較して、化合物１及び２の投与に伴って観察される追加の体重減少に寄与し得る。

【表16】

【0220】

アミノ酸配列

配列番号１（ヒトＯＸＭ）
Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｉｌｅ−Ａｌａ
（ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＫＲＮＲＮＮＩＡ）

配列番号２（人工配列）
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＸａａ２８ＧＧＰＳＳＧ）
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｘａａ２８は、Ｇｌｕ（Ｅ）またはＳｅｒ（Ｓ）であり、
２０位のＬｙｓは、（ｉ）直接結合または（ｉｉ）２０位のＬｙｓとＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを介して、Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基とＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との結合によって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている）。

配列番号３（人工配列）
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＥＧＧＰＳＳＧ）
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、（ｉ）直接結合または（ｉｉ）２０位のＬｙｓとＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを介して、Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基とＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との結合によって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている）。

配列番号４（人工配列）
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＳＧＧＰＳＳＧ）
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、（ｉ）直接結合または（ｉｉ）２０位のＬｙｓとＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを介して、Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基とＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との結合によって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている）。

配列番号５（人工配列）
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＥＧＧＰＳＳＧ）
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基と（［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２−（γ−Ｇｌｕ）−ＣＯ−（ＣＨ_２）_１６ＣＯ_２Ｈとの結合によって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている）。

配列番号６（人工配列）
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＥＧＧＰＳＳＧ）
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基と（［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２−（γ−Ｇｌｕ）−ＣＯ−（ＣＨ_２）_１８ＣＯ_２Ｈとの結合によって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている）。

配列番号７（人工配列）
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＳＧＧＰＳＳＧ）
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基と（［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２−（γ−Ｇｌｕ）_２−ＣＯ−（ＣＨ_２）_１６ＣＯ_２Ｈとの結合によって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている）。

配列番号８（人工配列）
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＳＧＧＰＳＳＧ）
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
２０位のＬｙｓは、Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基と（［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２−（γ−Ｇｌｕ）_２−ＣＯ−（ＣＨ_２）_１８ＣＯ_２Ｈとの結合によって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、アミド化されている）。

配列番号９（人工配列）
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＸａａ２８ＧＧＰＳＳＧ）
（式中、Ｘａａ２は）、Ａｉｂであり、
Ｘａａ２８は、Ｇｌｕ（Ｅ）またはＳｅｒ（Ｓ）であり、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている）。

配列番号１０（人工配列）
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＥＧＧＰＳＳＧ）
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている）。

配列番号１１（人工配列）
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
（ＨＸａａ２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫＥＦＶＥＷＬＬＳＧＧＰＳＳＧ）
（式中、Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている）。

以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］ 以下の式の化合物またはその薬学的に許容される塩：
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｘａａ２８は、ＧｌｕまたはＳｅｒであり、
２０位のＬｙｓは、（ｉ）直接結合または（ｉｉ）前記２０位のＬｙｓとＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを介して、前記Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基と前記Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸との結合によって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている（配列番号２）］。
［２］ Ｘａａ２８がＧｌｕである、［１］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［３］ Ｘａａ２８がＳｅｒである、［１］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［４］ 前記２０位のＬｙｓが、前記２０位のＬｙｓとＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを介して、前記Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸との結合によって化学修飾されている、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［５］ 前記リンカーが、以下からなる群から選択される、［１］〜［４］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩：
（ａ）以下の式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレート

【化12】

（式中、ｍは、１〜１２の任意の整数であり、ｎは、１〜１２の任意の整数であり、ｐは、１または２である）、
（ｂ）アルギニン（Ａｒｇ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、リジン（Ｌｙｓ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、サルコシン（Ｓａｒ）、グリシン（Ｇｌｙ）、γ−アミノ酪酸（γ−Ａｂｕ）、及びγ−グルタミン酸（γ−Ｇｌｕ）からなる群から選択されるアミノ酸、
（ｃ）Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、γ−グルタミン酸（γ−Ｇｌｕ）−γ−グルタミン酸（γ−Ｇｌｕ）、Ｇｌｕ−γ−グルタミン酸（γ−Ｇｌｕ）、γ−グルタミン酸（γ−Ｇｌｕ）−Ｇｌｕ、γ−アミノ酪酸（γ−Ａｂｕ）−γ−アミノ酪酸（γ−Ａｂｕ）、６−アミノヘキサン酸−６−アミノヘキサン酸、５−アミノ吉草酸−５−アミノ吉草酸、７−アミノヘプタン酸−７−アミノヘプタン酸、及び８−アミノオクタン酸−８−アミノオクタン酸からなる群から選択されるジペプチド、
（ｄ）Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、及びγ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕからなる群から選択されるトリペプチド、
（ｅ）（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｑ（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ及び（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ、（６−アミノヘキサン酸）_ｓ、（５−アミノ吉草酸）_ｓ、（７−アミノヘプタン酸）_ｓ、及び（８−アミノオクタン酸）_ｓ（式中、ｑは、２〜５の任意の整数であり、ｒは、１〜３の任意の整数であり、ｓは、４〜１５の任意の整数である）からなる群から選択されるポリペプチド、ならびに
（ｆ）前記（ａ）で定義される式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートが、以下の（ｉ）〜（ｉｖ）のいずれかと結合している結合リンカー：
（ｉ）Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｉｔ、Ｏｒｎ、Ｓａｒ、Ｇｌｙ、γ−Ａｂｕ、及びγ−Ｇｌｕからなる群から選択されるアミノ酸、
（ｉｉ）Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ、６−アミノヘキサン酸−６−アミノヘキサン酸、５−アミノ吉草酸−５−アミノ吉草酸、７−アミノヘプタン酸−７−アミノヘプタン酸及び８−アミノオクタン酸−８−アミノオクタン酸からなる群から選択されるジペプチド、
（ｉｉｉ）Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、及びγ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕからなる群から選択されるトリペプチド、または
（ｉｖ）（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｑ（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ及び（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ、（６−アミノヘキサン酸）_ｓ、（５−アミノ吉草酸）_ｓ、（７−アミノヘプタン酸）_ｓ、及び（８−アミノオクタン酸）_ｓ（式中、ｑは、２〜５の任意の整数であり、ｒは、１〜３の任意の整数であり、ｓは、４〜１５の任意の整数である）からなる群から選択されるポリペプチド。
［６］ 前記リンカーが、以下の式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートである

【化13】

（式中、ｍは、１〜１２の任意の整数であり、ｎは、１〜１２の任意の整数であり、ｐは、１または２である）、［５］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［７］ 前記式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートにおいて、ｎが、１、２、３、４、５、または６であり、ｍが１であり、ｐが１である、［６］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［８］ 前記式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートにおいて、ｎが２であり、ｍが１であり、ｐが１である、［６］もしくは［７］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［９］ 前記リンカーが、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｉｔ、Ｏｒｎ、Ｓａｒ、Ｇｌｙ、γ−Ａｂｕ、及びγ−Ｇｌｕからなる群から選択されるアミノ酸である、［５］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［１０］ 前記アミノ酸が、γ−Ｇｌｕである、［９］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［１１］ 前記リンカーが、Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ、６−アミノヘキサン酸−６−アミノヘキサン酸、５−アミノ吉草酸−５−アミノ吉草酸、７−アミノヘプタン酸−７−アミノヘプタン酸、及び８−アミノオクタン酸−８−アミノオクタン酸からなる群から選択されるジペプチドである、［５］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［１２］ 前記ジペプチドが、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕである、［１１］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［１３］ 前記リンカーが、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、及びγ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕからなる群から選択されるトリペプチドである、［５］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［１４］ 前記リンカーが、（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｑ（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ及び（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ、（６−アミノヘキサン酸）_ｓ、（５−アミノ吉草酸）_ｓ、（７−アミノヘプタン酸）_ｓ、及び（８−アミノオクタン酸）_ｓ（式中、ｑは２〜５の任意の整数であり、ｒは１〜３の任意の整数であり、ｓは４〜１５の任意の整数である）からなる群から選択されるポリペプチドである、［５］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［１５］ 前記リンカーが、以下の式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレート

【化14】

（式中、ｍは１〜１２の任意の整数であり、ｎは１〜１２の任意の整数であり、ｐは１または２である）が、以下の（ｉ）〜（ｉｖ）のいずれかと結合している結合リンカーである、［５］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩：
（ｉ）Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｉｔ、Ｏｒｎ、Ｓａｒ、Ｇｌｙ、γ−Ａｂｕ、及びγ−Ｇｌｕからなる群から選択されるアミノ酸、
（ｉｉ）Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ、６−アミノヘキサン酸−６−アミノヘキサン酸、５−アミノ吉草酸−５−アミノ吉草酸、７−アミノヘプタン酸−７−アミノヘプタン酸、及び８−アミノオクタン酸−８−アミノオクタン酸からなる群から選択されるジペプチド、
（ｉｉｉ）Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−γ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、及びγ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕ−γ−Ａｂｕからなる群から選択されるトリペプチド、または
（ｉｖ）（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｑ（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ及び（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）_ｒ、（６−アミノヘキサン酸）_ｓ、（５−アミノ吉草酸）_ｓ、（７−アミノヘプタン酸）_ｓ、及び（８−アミノオクタン酸）_ｓ（式中、ｑは２〜５の任意の整数であり、ｒは１〜３の任意の整数であり、ｓは４〜１５の任意の整数である）からなる群から選択されるポリペプチド。
［１６］ 式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートにおいて、ｎが、１、２、３、４、５、または６であり、ｍが１であり、ｐが１である、［１５］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［１７］ 前記式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートにおいて、ｎが２であり、ｍが１であり、ｐが１である、［１５］もしくは［１６］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［１８］ 前記式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートがアミノ酸と結合しており、前記アミノ酸がγ−Ｇｌｕである、［１５］〜［１７］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［１９］ 前記式Ｉのアミノポリエチレングリコールカルボキシレートがジペプチドと結合しており、前記ジペプチドがγ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕである、［１５］〜［１７］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［２０］ 前記リンカーが、（［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−アセチル）_２−（γ−Ｇｌｕ）_ｔである（式中、ｔは１または２である）、［１５］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［２１］ ｔが１である、［２０］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［２２］ ｔが２である、［２０］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［２３］ 前記Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸が、飽和一塩基酸または飽和二塩基酸である、［１］〜［２２］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［２４］ 前記脂肪酸が、ミリスチン酸（テトラデカン酸）（Ｃ１４一塩基酸）、テトラデカン二酸（Ｃ１４二塩基酸）、パルミチン酸（ヘキサデカン酸）（Ｃ１６一塩基酸）、ヘキサデカン二酸（Ｃ１６二塩基酸）、マルガリン酸（ヘプタデカン酸）（Ｃ１７一塩基酸）、ヘプタデカン二酸（Ｃ１７二塩基酸）、ステアリン酸（オクタデカン酸）（Ｃ１８一塩基酸）、オクタデカン二酸（Ｃ１８二塩基酸）、ノナデシル酸（ノナデカン酸）（Ｃ１９一塩基酸）、ノナデカン二酸（Ｃ１９二塩基酸）、アラカジン酸（ａｒａｃｈａｄｉｃ ａｃｉｄ）（エイコサン酸）（Ｃ２０一塩基酸）、エイコサン二酸（Ｃ２０二塩基酸）、ヘンイコシル酸（ヘンエイコサン酸）（Ｃ２１一塩基酸）、ヘンエイコサン二酸（Ｃ２１二塩基酸）、ベヘン酸（ドコサン酸）（Ｃ２２）、ドコサン二酸（Ｃ２２二塩基酸）、リグノセリン酸（テトラコサン酸）（Ｃ２４一塩基酸）、及びテトラコサン二酸（Ｃ２４二塩基酸）からなる群から選択される飽和一塩基酸または飽和二塩基酸である、［２３］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［２５］ 前記Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸がオクタデカン二酸である、［２３］もしくは［２４］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［２６］ 前記Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸がエイコサン二酸である、［２３］もしくは［２４］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［２７］ Ｃ末端アミノ酸がアミド化されている、［１］〜［２６］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［２８］ ［１］〜［２７］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、医薬組成物。
［２９］ 治療を必要とする対象において２型糖尿病を治療する方法であって、有効量の［１］〜［２７］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することを含む、方法。
［３０］ 治療を必要とする対象において肥満を治療する方法であって、有効量の［１］〜［２７］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することを含む、方法。
［３１］ 治療を必要とする対象において非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を治療する方法であって、有効量の［１］〜［２７］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することを含む、方法。
［３２］ 治療を必要とする対象において非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を治療する方法であって、有効量の［１］〜［２７］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することを含む、方法。
［３３］ 対象において非治療的体重減少を引き起こす方法であって、有効量の［１］〜［２７］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の投与を含む、方法。
［３４］ 療法において使用するための、［１］〜［２７］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［３５］ ２型糖尿病の治療において使用するための、［１］〜［２７］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［３６］ 肥満の治療において使用するための、［１］〜［２７］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［３７］ 非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の治療において使用するための、［１］〜［２７］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［３８］ 非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療において使用するための、［１］〜［２７］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［３９］ 以下の式の中間体化合物、またはその薬学的に許容される塩：
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｘａａ２８は、ＧｌｕまたはＳｅｒであり、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている（配列番号９）］。
［４０］ Ｘａａ２８がＧｌｕである、［３９］に記載の中間体化合物。
［４１］ Ｘａａ２８がＳｅｒである、［３９］に記載の中間体化合物。
［４２］ 以下の式の化合物を製造する方法であって、
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｘａａ２８は、ＧｌｕまたはＳｅｒであり、
２０位のＬｙｓは、（ｉ）直接結合または（ｉｉ）前記２０位のＬｙｓとＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを介して、前記Ｌｙｓの側鎖のε−アミノ基と前記Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸との結合によって化学修飾されており、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている（配列番号２）］、前記方法は、
（ｉ）以下の式：
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２８−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
［式中、
Ｘａａ２は、Ａｉｂであり、
Ｘａａ２８は、ＧｌｕまたはＳｅｒであり、
Ｃ末端アミノ酸は、任意にアミド化されている（配列番号９）］
の中間体化合物を、任意にリンカーを介して、前記中間体化合物の２０位の前記Ｌｙｓの側鎖の前記ε−アミノ基をＣ１４−Ｃ２４脂肪酸と結合させることによって修飾するステップを含む、方法。
［４３］ 前記中間体化合物の前記２０位のＬｙｓが、前記２０位のＬｙｓとＣ１４−Ｃ２４脂肪酸との間のリンカーを介して、前記Ｃ１４−Ｃ２４脂肪酸との結合によって化学修飾される、［４２］に記載の方法。
［４４］ ［４２］または［４３］に記載の方法によって製造される化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]